KR870700092A - D-아미노산옥시다아제와 그의 단리방법 - Google Patents
D-아미노산옥시다아제와 그의 단리방법Info
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Abstract
내용 없음.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명에 따른 정제된 D―아미노산옥시다아제의 폴리아크릴겔 전기영동을 나타낸 도면.
Claims (28)
- 세팔로스포린 C에 대하여 활성이고 대체적으로 순수형태로 된 것임을 특징으로 하느 트리고놉시스 버리어빌리스 D―아미노산 옥시다아제.
- 제1항에 있어서, D―아미노산옥시다아제는 트리고놉시스 버리어빌리스로부터 단리되어진 것임을 특징으로 하는 것.
- 제1항에 있어서, D―아미노산옥시다아제는 등전점이 약 4.6이고, 분자량이 86,000이고 두 개의 소단위를 갖는 이합체로서 활성상태로 존재하는 것임을 특징으로 하는 것.
- 제1항에 있어서, D―아미노산옥시다아제는 부동성인 것.
- 제4항에 있어서, D―아미노산옥시다아제는 시아노겐―브로마이드―활성화된 세팔로스와 접합되어진 것.
- D―아미노산옥시다아제를 단리시키는데 있어서, (a) 트리고놉시스 버리어빌리스의 조세포 추출물을 침전물과 상청액으로 분획시키기 위하여 산성화하고 가열시키는 단계와, (b) D―아미노산옥시다아제를 포함하고 있는 제2침전물을 제조하기 위하여 상기 (a)단계에서 얻어진 상청액분획을 황산암모늄으로 충분히 처리하는 단계와, (c) 상기 (b)단계에서 얻어진 침전물을 재현탁시키고 등전침전으로 분취하는 단계를 포함하여서 되는 D―아미노산 옥시다아제를 단리방법.
- 제6항에 있어서, 조세포추출물은 아세트산에 의하여 산성화되는 방법.
- 제7항에 있어서, 조세포추출물은 pH가 약 4내지 6으로 되는 방법.
- 제8항에 있어서, pH는 약 5.1내지 5.3인 방법.
- 제9항에 있어서, pH는 약 5.3인 방법.
- 제6항에 있어서, 가열과정은 전단계로서 산성화시킬 때 형성된 어떤 침전물을 제거시킨후 실시하는 방법.
- 제6항에 있어서, 가열과정은 전단계로서 조세포추출물에 D.L―메티오닌을 첨가시킨후 실시하는 방법.
- 제12항에 있어서, D.L―메티오닌은 최종농도가 약 25mM가 되도록 충분한 양을 첨가시켜서 되는 방법.
- 제6항에 있어서, 가열과정은 약 40내지 60℃의 온도에서 실시하는 방법.
- 제14항에 있어서, 온도는 40내지 50℃인 방법.
- 제15항에 있어서, 온도는 50℃인 방법.
- 제6항에 있어서, 암모늄처리과정은 전단계로서 상청물을 투석시킨후 실시하는 방법.
- 제17항에 있어서, 투석은 pH가 8.3이고 20mM의 피로인산 나트륨이 포함되어 있는 버퍼에서 실시하는 방법.
- 제17항에 있어서, 암모늄처리과정은 전단계로서 상청물을 투석시킨후 다시 농축시킨 다음 실시하는 방법.
- 제19항에 있어서, 농축은 증발과정을 실시하여서 되는 방법.
- 제6항에 있어서, 황산암모늄 처리과정은 (a) 황산암모늄농도가 약 30중량%로 되도록 상청액분획물에 황산암모늄을 첨가하고, 여기서 생성된 침전물은 제거하는 단계와, (b) 황산암모늄의 농도가 55중량%로 되도록 상기 (a)단계에서 얻어진 상청액에 황산암모늄을 첨가하고, 여기서 생성된 침전물을 분취하는 단계를 포함하여서 되는 방법.
- 제6항에 있어서, 등전침전분취과정은 제2침전물에 함유되어 있는 D―아미노산옥시디아제를 투석시킨 후 실시하는 방법.
- 제22항에 있어서, 투석은 pH가 8.3인 20mM의 피로인산 나트륨이 함유되어 있는 버퍼에서 실시하는 방법.
- 제6항에 있어서 등전침전은 (a) 제2침전물을 pH가 5.1인 25mM아세트산나트륨이 함유된 버퍼에서 투석시키고, 여기서 잔존하는 침전물은 제거시키는 단계와, (b) 상기 (a) 단계에서 얻어진 용액을 pH가 4.6인 100mM의 아세트산나트륨이 함유된 버퍼에 다시 투석시키고, 정제된 D―아미노산옥시다아제 침전물을 분취하는 단계를 포함하여서 되는 방법.
- 제24항에 있어서, D―아미노산옥시다아제침전물을 겔전기 영동으로 정제시켜서 되는 방법.
- 트리고놉시스 버리어빌리스를 배양하는데 있어서, 상기 D―아미노산옥시다아제의 생체수준을 향상시키기 위하여 생장기에 약 0.2%의 D.L―메티오닌을 첨가시켜서 되는 트리고놉시스 버리어빌리스의 배양방법.
- 트리고놉시스 버리어빌리스에서 D―아미노산옥시다아제를 단리시키는데 있어서, (a)조추출물을 산성화하기 위하여 트리고놉시스버 리어빌리스 세포를 붕해시키는 단계와, (b) 상기의 산성화된 조추출물을 50℃로 가열한 다음 이때 형성된 침전물을 제거하고 상청액은 투석시키는 단계와, (c) 상기 (b)단계에 의한 생성물을 황산나트륨으로 침전시키고 투석시키는 단계와, (d) D―아미노산 옥시다아제를 등전침전으로 단리시키는 단계로 이루어지는 D―아미노산옥시다아제의 단리방법.
- 트리고높시스 버리어빌리스에서 D―아미노산옥시다아제를 단리시키는데 있어서, (a) 추출물을 침전물과 상청액으로 분획시키기 위하여 pH가 약 5.3정도가 될 때까지 아세트산을 첨가하여 트리고놉시스 버리어빌리스의 조세포추출물을 산성화시키는 단계와, (b) 상기의 상청액의 최종농도가 25mM로 되도록 D.L메티오닌을 첨가하는 단계와, (c) 상기의 상청액을 50℃의 온도로 가열한 다음 가열된 상청액은 제2침전물과 제2상청액 분획물 형태로 50℃의 온도에서 10분동안 그대로 방치시켜두는 단계와, (d) 상기 (c)단계에서 얻어진 상청액을 pH가 8.3인 20mM피로인산나트륨버퍼에서 투석시키는 단계와, (e) 최종농도가 30%가 되도록 상기 (d)단계에서 제조된 용액에 황산암모늄나트륨을 첨가하고 아에따라 생성된 침전물을 제거하는 단계와, (f) 최종농도가 55%되 도록 상기 (e)단계에서 제조된 용액에 황산 암모늄나트륨을 다시 첨가하고 여기서 생성된 침전물을 분취하는 단계와, (g) 상기 (f)단계에서 제조된 침전물을 먼저 pH가 8.3인 20mM피로인산나트륨버퍼에서 투석시키고, 다음에 pH가 5.1인 25mM 아세트산나트륨 버퍼에서 투석시킨 다음에 잔존하는 불용성침전물을 제거시키는 단계와, (h) 상기 (g)단계에서 얻어진 용액을 pH가 4.6인 100mM아세트산나트륨버퍼에서 투석시키고 D―아미노산옥시다아제를 함유하고 있는 침전물을 분취하는 단계로 이루어지는 D―아미노산옥시다아제의 단리방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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