KR870011247A - 합성유전자에 의한 효모세포로부터 r-인터페론의 제조방법 - Google Patents

합성유전자에 의한 효모세포로부터 r-인터페론의 제조방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

합성유전자에 의한 효모세포로부터 인간 r-인터페론의 제조방법.
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 전체 r-인터페론[시스테인(Cys), 티로신(Tyr), 시스레인(Cys), 포함]에 해당하는 30종류의 올리고 뉴클리오티드의 염기순서와 올리고 뉴클리오티드의 접합전략을 도시한 것이며,
제2도는 합성 올리고 뉴클리오티드의 접합을 위해서 플라스미드pAB112에의 전체 r-인터페론 유전자 재조합과정을 도시한 것이며,
제3도는 자연상태의 r-인터페론(시스테인, 티로신, 시스테인 제거됨)의 효모내생성을 위한 프로모터 및 터미네이터에의 접합 및 효모발현 운반체로의 재조합과정을 나타낸 것이며,
제4도는 r-인터페론이 발현된 효모세포의 전체 단백질을 소티움도데실 설페이트 아크릴 아마이드겔(SDS-Poly acrylamide gel) 전기 영동후 쿠우마시(Coomassie) 염색을 시킨 r-인터페론밴드를 나타낸 것으로, 레인1은 단백질 표준분자이고, 레인 2,3,4는 2% 포도당배지에서 배양한 자발유도된 시료이고 레인 5,6은 3% 에탄올 배양액에서 r-인터페론을 강제유도(Forced induction)시킨 시료이다.

Claims (8)

  1. 인간 r-인터페론 유전자 염기서열을 효모세포에서 선택적으로 사용되는 아미노산 코돈으로 변경화학합성하여 올리고 뉴클리오티드의 접합전략에 따라 박테리아 운반체에 클로닝 한 후 아미노말단의 3개의 아미노산인 시스테인, 티로신, 시스테인을 제거시키고 이를 합성연결체와 함께 운반체(pBS 100)에 클로닝하고 여기서 프로모터 r-인터페론-종료유전자의 카세트를 제조한 다음 효모발현운반체(pYLBC105)에 클로닝시켜 최종 효모발현운반체(pYLBC-rIFN-4)를 제조한 후 이를 유도발현 시킴을 특징으로 하는 r-인간 인터페론의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 올리고 뉴클리오티드의 접합전략이 다음과 같이 표시됨을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
    여기서,
    gIFN-1 (24) CTAGATAAAAGATGTTCTGTCAG
    gIFN-2 (30) GATCCATACGTTAAGGAAGCTGAAAACCTA
    gIFN-3 (30) AAGAAATACTTCAACGCTGGTCACTCTGAC
    glFN-4 (30) GTTGCTGACAACGGTACCTTGTTCTTGGGT
    gIFN-5 (30) ATCTTGAAAAACTGGAAGGAAGAATCTGAC
    gIFN-6 (32) AGAAAGATCATGCAATCCCAAATCGTTTCTTT
    gIFN-7 (32) CTACTTCAAGTTGTTCAAGAACTTCAAGGACG
    gIFN-8 (32) ACCAATCTATCCAAAAGTCTGTTGAAACCATC
    gIFN-g (33) AAGGAAGACATGAACGTTAAGTTCTTCAACTCT
    gIFN-10 (32) AACAAGAAGAAGAGAGACGACTTCGAAAAGCT
    gIFN-11 (32) TACCAACTACTCTGTTAACGACTTGAACGTTC
    gIFN-12 (32) AAAGAAAGGCTATCCACGAATTGATCCAAGTT
    gIFN-13 (31) ATGGCTGAATTGTCTCCAGCTGCTAAGACCG
    gIFN-14 (31) GTAAGAGAAAGAGATCTCAAATGTTGTTCAG
    gIFN-15 (30) AGGTAGAAGAGCTTCTCAATAATAGCGTCG
    gIFN-16*(34) TTACGTATGGATCCTGACAGTAACATCTTTTAT
    gIFN-17*(31) GTTGAAGTATTTCTTTAGGTTTTCAGCTTCC
    gIFN-18*(32) GTACCGTTGTCAGCAACGTCAGASTGACCAGC
    gIFN-19*(32) CCTTCCAGTTTTTCAAGATACCCAAGAACAAG
    gIFN-20*(30) GGGATTGCATGATCTTTCTGTCASATTCTT
    gIFN-21*(30) TGAACAACTTGAAGTAGAAAGAAACGATTT
    glFN-22*(33) ACTTTTGGATAGATTGGTCGTCCTTGAAGTTCT
    gIFN-23*(32) AACGTTCATGTCTTCCTTGATGGTTTCAACAG
    gIFN-24*(31) CTCTCTTCTTCTTGTTAGAGTTGAAAGACTT
    gIFN-25*(32) AACAGAGTAGTTGGTAAGCTTTTCGAAGTCGT
    gIFN-26*(31) GGATAGCCTTTCTTTGAACGTTCAAGTCGGT
    gIFN-27*(32) AGACAATTCAGCCATAACTTGGATCAATTCGT
    gIFN-28*(31) ATCTCTTTCTCTTACCGGTCTTAGCAGCTGG
    gIFN-29*(32) AGAAGCTCTTCTACCTCTGAACAACATTTGAG
    gIFN-30*(18) TCGACGACGCTATTATTG
  3. 제1항에 있어서, 박테리아 운반체에 클로닝은 접합전략에 따라 결합요소로 결합시킨 올리고 뉴클리오티드중 우선 제한효소 Hind III와 Sal I의 절편을 박테리아 운반체에 클로닝한후 이어서 제한효소 Xba-1과 Hind III의 절편을 클로닝 시켜 행함을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 아미노말단의 3개의 아미노산인 시스테인, 티로신, 시스테인의 제거는 운반체(pr-IFN)를 제한효소 BamHl과 Sal I으로 처리하여 행함을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서, 운반체(pBS-100)에 클로닝은 운반체(pBS-100)을 제한효소 Sal I과 Nco I로 처리한 후 여기에 시스테인, 티로신, 시스테인이 제거된 r-인터페론 유전자가 결합된 합성연결체를 클로닝시킴을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
  6. 제1항 또는 제5항에 있어서, 합성연결체는
    임을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
  7. 제1항에 있어서 프로모터-r-인터페론-종료유전자의 카세트는 운반체(pBS-rIFN)을 제한효소 BamHl으로 처리하여 제조한 것임을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
  8. 제1항에 있어서, 최종 효모발현운반체(pYLBC-rIFN4)는 운반체(pYLBC105)를 제한효소 BamHl 및 포스파타제로 처리한후 프로모터-r-인터페론-종료유전자의 카세트를 결합시켜 제조한 것임을 특징으로 하는 인간 r-인터페론의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019860003822A 1986-05-15 1986-05-15 합성유전자에 의한 효모세포로부터 인간 γ-인터페론의 제조방법 KR900007867B1 (ko)

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