KR860008284A - 재결합성 dna 기술에 의해 형성된 b형 간염 표면항원, 왁진, 진단법, 세포선 및 이것들의 형성방법 - Google Patents
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Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드(plasmid) pBPV342-12의 부분적인 제한 효소 절단지도를 나타내고 있고 또한 플라스미드 pBPV342-12 상에 Plasmid pML2에서 유도된 DNA, 소과의 유두종의바이러스 (BPU) DNA, MMT-전사개시부위, SV-PAS-t 전사말단 부위의 위치를 설명하고 있다. 또한 제1도는 플라스미드 pBPV342-12를 제한효소 밤 에이취 원(Bam HI)으로 처리하여 잘라진 형태를 설명하고 있다.
제2도는 직선 형태에서 완전한 B형 간염 바이러스 유전자를 함유하고 있는 플라스미드 pA의 부분적인 제한 효소절단 지도를 나타내고 있다. 또한 제2도는 pA01을 제한효소 Eco RI으로 처리하여 잘라진 형태와 콘 카타머를 만들기 위해 Eco RI으로 잘라서 직선화된 HBV 산물을 T4-DNA ligase로 접합시키고 유전 정보 배열 PreS1-PreS2-S 단백질 코딩 부위에 대한 본래의 DNA 전정보배열을 간직하고 있는 특정의 DNA 단편을 조제하기 위해 제한효소 비지엘 투 (BgI Ⅱ)로 처리하여 얻어진 콘 카타머 산물의 잘라진 형태를 보여주고 있다.
제3도는 플라스미드 pDMI의 부분 제한 효소 절단지도를 나타내고 있고 밤에이취 원(Bam HI)으로 처리하여 얻은 플라스미드 pMMT-neo을 포함하고 있는 DNA 단편과 비지엘투(Bgl Ⅱ)로 처리하여 PreS1-PreS2단백질을 생성하을 유전 정보를 갖고 있는 B형 간염 바이러스의 단편을 접합시켜서 플라스미드 pDMl이 생성되는 것을 설명해 주고 있다.
제11도는 플라스미드 pENDO-0의 부격제한효소 절단지도와 pENDO-0의 제조를 설명하고 있다.
Claims (41)
- PreS1-PreS2-S 부호화 영역을 암호화 하는 DNA 시켄스(속발물)과 메탈로티오네인(금속티오네인) 유전자의 촉진제로 구성되는 재결합 DNA 벡타.
- 메탈로티오네인 유전자 촉진제를, 자연적인 촉진적를 제외하거나 대신하여, 바람직하기는 PreS1- PreS2-S 단백질 부호와 영역의 바로 상부 흐름에서 DNA 속발물로 구성되는 벡타에 결합시키는 제 1항의 벡타.
- 선택메이커, 바람직하기는 네오마이신 저항 유전자와 같은 약제 저항 메이커와 또는 SV4O 종단 부위나 생쥐구로빈 유전자의 DEF 영역과 같이 전이 종단 부위도 포함하는 제1항의 벡타.
- 벡타가 어떤 비루스에 의해 생성되는 DNA 단편을 포함하지 않으며 또는 종양원성이 아닌 제1항의 벡타.
- 제1의 벡타로서 제1항의 벡타로 구성되는 재결합 DNA 콘카타머와 다음 부호화 영역 : PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역, PreS2-S 단백질 부호와 영역이나 S 단백질 부호하 영역중의 하나로 구성되는 적어도 한개의 추가 벡타와 메탈로티오네인 유전자의 촉진제.
- 메탈로티오네인 유전자 촉진제를 추아 벡타와 결합시키고 바람직하기는 PreS2-S 단백질 부호화 영영의 바로 상부 흐름에 위치되는 제5항의 콘카타머.
- 제1과 또는 추가 벡타가 전이 종말부위, 이를테면, 생쥐들 글로빈 유전자의 DEF 영역과 또는 선택메이커와 같은 부위를 포함하는 제5항의 콘카타머.
- DNA 벡타들이 어떤 비루성의 DNA 단편들도 함유하지 않는 제5항의 콘카타머.
- 1항 내지 4항의 어느 것중의 재결합성 DNA 벡타로나 또는 5항 내지 8항의 어느 것중의 콘카타머로 핵세포 감염이 되는 성숙핵세포.
- 제1의 재결합성 DNA 벡타로 정의되는 1항 내지 4항의 재결합성 DNA 벡타와 PreS2-S 단백질 부호화 영역이나 S 단백질 부호화 영역 및 메탈로티오네인 유전자의 촉진제를 포함하는 제2의 재결합성 DNA 벡타로 공동 감염되는 성숙핵 세포.
- 제1의 재결합성 DNA 벡타로서 정의되는 제1항 내지 제4항의 재결합성 벡타와, PreS2-S 단백질 부호화 영역을 포함하는 제2의 재결합성 DNA 벡타 및 메탈로티오네인 유전자의 촉진제와 선택 메이커로 구성되는 제3의 재결합성 DNA 벡타와 공동 세포 감염되는 성숙 핵세포로서, 제3의 벡타에 있는 메탈로티오네인 유전자 촉진제는 선택 메이커의 바로 상부 흐름에 바람직하게 위치하는 것.
- 메탈로티오네인 유전자 촉진제를 제2의 벡타에 결합시키고 PreS2-S 단백질 부호화 영역의 바로 상부 흐름에 바람직하게 위치시키는 제10항이나 제11항의 세포.
- 제2와 또는 제3의 벡타가 생쥐 글로빈 유전자의 DEF 영역과 같은 전이 말단 부위를 포함하고 또는 제2벡타가 선택 메이커를 포함하는 제10항이나 11항의 세포.
- 제2와 또는 제3의 DNA 벡타가 어떤 비루스성의 DNA 단편도 포함하지 않는 제10항이나 제11항의 세포.
- DNA 벡타가 서로 다른 선택 메이커를 포함하는 10항이나 11항의 세포.
- 제1, 제2 및 또는 제3벡타가 레프리콘(replicon)을 포함하는 제11항의 세포.
- 성숙핵 세포가 차이니스 햄스터 난소세포, 배로세포, L-세포, 생쥐들의 섬유 아세포 또는 쥐의 섬유 아세포와 같은 포유동물 세포인 제9항 내지 16항의 어느 중의 세포.
- 제1항 내지 4항의 어느 것중에 따로 재결합성 DNA 벡타나 5항 내지 8항의 어느 것중에 따른 콘카타머로 성숙핵세포를 세포감염시키는 것으로 구성되는 제9항의 성숙핵 세포를 제조하는 방법.
- 제1항 내지 4항의 중 어느 것의 재결합성 DNA 벡타와 제10과 12내지 15항의 어느 것에서 정의한 것과 같은 제2의 재결합성 DNA 벡타로 성숙핵 세포를 공동감염시키는 것으로 구성되는 제10항의 성숙 핵 세포를 제조하는 방법.
- 제1항 내지 4항 중 어느 것의 재결합성 DNA 벡타와 제11항 내지 16항 중 어느 것에서 정의한 것과 같은 제2 및 제3의 재결합성 DNA 벡타로 성숙핵 세포를 공동감염시키는 것으로 구성되는 제11항의 성숙핵 세포를 제조하는 방법.
- DNA 벡타가 쌍으로 결합하여 공동 감염되거나 함께 감염되거나, 또는 일련의 연속단계로 감염되는 제20항의 방법.
- 적어도 한개의 단백질이 완전한 PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역까지에 대하여 부호화 되는 것으로 구성되는 재결항성 DNA 기술에 의하여 제조한 입자.
- 단백질 중 적어도 하나가 PreS2-PreS2-S 부호화 영역까지에 대하여 부호화된 폴리펩타이드에 상응하며, 그 폴리펩타이드는 글리코실화되는 것이 바람직하고 어떤 비루스성 요소들도 포함하지 않는 22항의 입자.
- 입자가 혈청-유리 근원으로부터 유도된 제22항의 입자.
- a. 숙주세포가 입자를 표시하도록 배양기 조건하에 제9항 내지 17항의 어느 것에 따라 감염되거나 공동 감염된 숙주 세포를 배양하고 ;b. 그 입자를 단리시키는 것으로 구성되는 ; 그 단백질 중의 적어도 하나가 완전한 PreS1-PreS2-S 부호화 영역까지에 대하여 부호화한 폴리펩타이드에 상응하는 B형 간염 표면 항원의 PreS1-PreS2-S 부호화 영역까지에 대해 암호화한 단백질로 이루어지는 입자를 제조하는 방법.
- 카드뮴이나 아연과 같은 중금속, 또는 덱사메타손과 같은 스테로이드 호르몬들을 메탈로티오네인 유전자 촉진제를 유도하기 위하여 배양기에 첨가하는 제25항의 방법.
- 입자들을 숙주세포의 배양 용해물로부터 단리시키는 제25항의 방법.
- 제22항 내지 24항 중 어느 것 중의 입자를 이용하여 거기에 존재하는 항체양을 결정하기 위해서 인간으로 부터 취한 혈청 시료에 의하여 효과적인 정량적 면역분석과 공지된 표준 값과 비교하는 것으로 이루어지는 B형 비루스 감염의 존재를 검출하는 방법.
- 22항 내지 24항 중 어느 것의 입자의 면역적 보호량으로 구성되는 B형 비루스로 감염되는 데 대한 인간을 보호하는 왁진.
- 제22 내지 24항의 어느 것의 면역적 보호량의 입자를 보통의 남체물질과 혼합하는 것으로 구성되는 B형 간염 B비루스로 감염되는 인간을 보호하기 위한 왁진의 제조 방법.
- 22항 내지 24항 중 어느 것의 입자에서 플리펩타이드를 분리하고 액체 소수포에플리펩타이드를 재결합시키는 것으로 구성되는 B형 간염으로 감염되는 것에 대하여 인간을 보호하기 위한 왁진의 제조하는 방법.
- a. 제22항 내지 제24항의 어느 것중 라벨 부착되지 않은 입자들, 입자들로 피복한 고체 기질과 시료를 접촉시키는 것.b. 상기 접촉시킨 시료를 배양하여 세척하는 것 ;c. 상기 접촉시킨 시료를 제22항 내지 24항의 어느 것 중의 라벨 부착입자와 접촉시켜서 라벨 부착되고 접촉시킨 시료를 형성하는 것 ;d. 상기 라벨 부착시킨 입자의 범위를 라벨 부착시켜 접촉시킨 시료에서 결정하는 것 ;e. 라벨 부착시켜 접촉시킨 시료에서 라벨 부착시킨 입자의 범위를 결정하는 것으로 이루어지는, 포유동물 혈액혈청 시료 중의 B형 간염 표면 항원의 PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역까지에 대하여 부호화한 단백질로 항체들의 존재를 검출하는 방법.
- a. 제22항 내지 24항 중 어느 것의 입자들을 포함하는 면역원에 의해 생성된 항체를 함유하는 조성물을 생성하고 ;b. 라벨이 붙여진 면역원과 제1부분의 조성물로 그 시료를 접촉시켜서 그 제1부위를 배양시켜 세척하고 ;c. 라벨이 붙여진 면역원과 제2부분의 조성물로 항원이 없는 대조물과 접촉시켜서 그 제2부분을 배양 시켜서 세척하며 ;d. 상기 b 및 c 단계의 조성물에 단백질 A를 포함하고 있는 동일량의 포도상 구균을 가하여, 조성물과 고체로 부터 분리하는 액체를 배양하며 ;e. 상기 d단계에서 생긴 조성물 각각에 있는 라벨붙은 면역원의 범위를 결정하는 것으로, 이루어지는 포유동물 혈액 혈청의 시료에 PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역에 대하여 부호를 붙인 단백질의 존재를 검출하는 방법.
- a. 고체 지지물에 부착된 제22 내지 24항의 어느 것 중의 입자중의 라벨을 붙이지 않은 단백질 ;과b. 인간 IgG나 IgM에 라벨을 붙인 항체로 이루어지는 포유동물 혈액 혈청의 시료중의 PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역까지에 대하여 부호화시킨 단백질에서 항체의 존재를 검출하기 위한 진단용기(Kit)로 구성되는 포유동물 혈액 혈청의 시료에 있는 PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역까지에 대하여 부호화시킨 단백질에서 항체의 존재를 검출하기 위한 진단 컷트.
- a. 고체 지지체에 부착시킨 제22 내지 24항의 어느 것 중의 입자에 의하여 생성된 항체,b. 제22 내지 24항 중 어느 것의 입자들에 의하여 생성된 라벨 부착 항체로 이루어지는 포유동물 혈액 혈청 시료에 있는 PreS1-PreS2-S 단백질 부호화 영역까지에 대하여 부호화시킨 단백질의 존재를 검출 하기 위한 진단 컷트.
- a. 제22 내지 24항 중 어느 것의 입자에 대한 항체를 거기에 결합하는 부위를 포함하고 있는 고체 기질에 제공하고 ;b. 과잉의항체를 제거하기 위하여서 피복된 구슬을 세척하여 ;c. 비-특성 결합에 단백질을 함유하는 용액과 구슬을 접촉시켜서 ;d. 과잉의 단백질-함유하는 용액을 제거하기 위해 구슬들을 세척하고 ;e. HBV나 HBV 표면 항원을 함유하도록 하기 위해서 현탁시킨 혈청 시료로 구슬을 배양시키며 ;f. 라벨 부착된 항체와 혼합된 용액으로 구슬들을 세척하며 ;g. 라벨 부착된 항체의 범위를 결정하는 것으로 구성되는 HBV 감염된 동물의 혈청이 있는 PreS1-PreS2-S 단백질까지에 대하여 부호화시킨 단백질을 함유하는 HBV 항원들을 검출하는 방법.
- 그 기질에 결합부위를 함유하는 고체기질에 의하여 제22 내지 24항 중 어느 일자들을 흡수하고 ; 그 비특성의 결합부위를 포화시키기 위해서 그 기질을 조직과 접촉시키며 ; 완충된 용액으로 기질을 세척하고, 그 완충액을 제거하며 ; 그 시료를 기질에 첨가하며 ; 기질-함유 시료를 배양시켜 세척하고 ; 라벨 부착된 항체를 기질에 대한 인간 IgG나 IgM에 첨가하고 ; 기질을 배양하여 세척하는 것과 ; 라벨 부착된 항체의 범위를 결정하는 것으로, 구성되는 주어진 시료에 있는 HBV 표면 항원 단백질의 PreS1-PreS2-S 영역에서 항체를 검출하는 방법.
- 메탈로티오닌 유전자의 촉진제와, PreS1-PreS2-S 부호화 영역을 암호화하는 DNA속발물 대신에, 서로 다른 유용한 인자 생성물과 비루스성 DNA 외의 추가 DNA로 이루어지는 제1항 내지 4항에 따른 재결합성 DNA 벡타.
- DNA 속발물이 성장 호르몬에 대하여 암호된 제38항의 벡타.
- 제38항 및 제39항 중 어느 것의 재결합성 벡타를 핵세포 감염시킨 성숙핵 세포.
- a. 숙주 세포가 입자를 표시하도륵 배양기 조건하에 유익한 DNA 속발물을 가지는 감염된 숙주 세포를 배양시 키고 ;b. 그 입자를 단리시키는 것으로 이루어지는 제38항 내지 40항 중 어느 기능성 있는 DNA 속발물까지에 대하여 부호화한 단백질을 제조하는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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