KR860000998B1 - Process for the preparation of 4-(n-(3',4'-dihydroxybenzilidene)aminomethyl) cyclohexane-1-carboxylic acid - Google Patents

Abstract

4-(N-(3',4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl) cyclohexane-1- carboxylic acid or its salts or esters having the formula(I) are prepd. bfy reacting 3,4-dihydroxybenzaldehyde of formula (II) with 4- aminomethyl-cyclohexane-1-carboxylic acid or its esters of formula (III). The cyclohexane ring includes the trans- and cis-forms. (I) are effective against inflammation, thrombosis, hypertension, asthma, cancer, etc.

Description

4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴)아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산 유도체의 제조방법Method for preparing 4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid derivative

제1도는 본 발명 화합물(산형태)의 KBr 정제법에 의한 적외부 흡수 스펙트럼(IR)을 나타내며,1 shows the infrared absorption spectrum (IR) by the KBr purification method of the compound (acid form) of the present invention,

제2도는 본 발명 화합물(나트륨염)의 IR 스펙트럼을 나타내며,2 shows the IR spectrum of the compound (sodium salt) of the present invention,

제3도는 본 발며의 화합물(에틸 에스 테르)의 IR 스펙트럼을 나타내며,3 shows the IR spectrum of the compound of the present invention (ethyl ester),

제4도는 시간 경과에 따라 낭속으로 삼출된 다핵 백혈구의 수를 나타내며,4 shows the number of multinuclear leukocytes exuded into the capsule over time,

제5도는 시간 경과에 따른 보조액 관절염(adjuvant arthritis)에 기인된 뒷발 부피의 변화를 나타내며,5 shows the change in hind paw volume due to adjuvant arthritis over time,

제6도는 시간 경과에 따른 보조액 관절염에 기인된 체중의 변화를 나타낸다.6 shows the change in body weight due to adjuvant arthritis over time.

본 발명은 다음 구조식(Ⅰ)의 4-[N-(3',4'-디하드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산의 새로운 유도체를 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a process for the preparation of new derivatives of 4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid of the following formula (I).

상기식에서In the above formula

사이클로헥산 환에는 트란스 및 시스형이 포함된다.Cyclohexane rings include trans and cis forms.

본 발명의 목적은 4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산의 신규 화합물 또는 그의 염 또는 에스테르 및 그의 제조방법을 제공하는 것이다. 더우기 본 발명의 또 다른 목적은 신규 화합물의 약제학적 유효량을 활성 성분으로서 함유하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide novel compounds or salts or esters thereof of 4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid and methods for their preparation. Moreover, another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing as an active ingredient a pharmaceutically effective amount of a novel compound.

본 발명의 화합물에는 4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산의 염 또한 에스테르도 포함된다.Compounds of the present invention also include salts or esters of 4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid.

염은 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 또는 알카리 토금속염이나 치환 또는 비치환된 암모늄염 등이다. 에스테르는 알킬 그룹이 메틸-, 에틸-, 또는 n-또는 이소프로필 그룹과 같이 탄소수 1 내지 3을 가지는 저급알킬 에스테르이다.The salts are alkali or alkaline earth metal salts such as sodium salts, potassium salts, calcium salts, magnesium salts, and substituted or unsubstituted ammonium salts. Esters are lower alkyl esters in which the alkyl group has 1 to 3 carbon atoms, such as methyl-, ethyl-, or n- or isopropyl groups.

본 발명 화합물은 통상적 방법에 의해 제조될 수 있기는 하나 아래 기술된 방법에 따라 바람직하게 제조된다. 즉 다음 구조식(Ⅱ)의 3,4-디하이드록시 벤조알데하이드를 다음 구조식(Ⅲ)의 4-아미노메틸-사이클로헥산-1-카복실산 또는 그의 저급알킬 에스테르와 반응시켜 제조하며 탈수-축합에 의해 본 발명의 화합물(산 또는 에스테르형)이 수득된다.The compounds of the present invention may be prepared by conventional methods, but are preferably prepared according to the methods described below. Namely, it is prepared by reacting 3,4-dihydroxy benzoaldehyde of the following structural formula (II) with 4-aminomethyl-cyclohexane-1-carboxylic acid of the following structural formula (III) or a lower alkyl ester thereof, by dehydration-condensation. The compound of the invention (acid or ester type) is obtained.

상기식에서 사이클로헥산환은 트란스-및 시스형을 포함한다.In the above formula, the cyclohexane ring includes a trans- and cis type.

구조식(Ⅱ)의 화합물과 구조식(Ⅲ)의 화합물 또는 그의 에스테르와의 반응은 유기용매중에서 대기 불활성 개스하 150℃ 이하, 바람직하게는 0 내지 120℃에서 수행된다. 150℃ 이상에서는 여러가지 부반응으로 인하여 원하는 생성물의 수율이 감소된다. 반응에 관여하지 않는 용매는 어떠한 용매라도 반응에 사용될 수 있다.The reaction of the compound of formula (II) with the compound of formula (III) or its ester is carried out at 150 ° C. or lower, preferably 0 to 120 ° C. under an atmospheric inert gas in an organic solvent. Above 150 ° C., various side reactions reduce the yield of the desired product. Any solvent that does not participate in the reaction may be used for the reaction.

메탄올 또는 에탄올과 같은 저급알콜, 벤젠, 톨루엔, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴등이 통상용매로 사용된다.Lower alcohols such as methanol or ethanol, benzene, toluene, dimethylformamide, acetonitrile and the like are used as common solvents.

반응은 탈수를 수반하므로 반응은 탈수제 존재하에 수행되거나 용매환류하 반응에 의해 생성된 물을 제거시키며 수행된다. 무수 메탄올 또는 에탄올과 같은 저급 알콜의 무수물이 용매로 사용될 수 있으며 동시에 탈수제로 사용될 수 있다.Since the reaction involves dehydration, the reaction is carried out in the presence of a dehydrating agent or by removing the water produced by the reaction under solvent reflux. Anhydrides of lower alcohols such as anhydrous methanol or ethanol may be used as the solvent and at the same time as the dehydrating agent.

본 발명의 화합물 반응 혼합물을 공지된 방법으로 처리함으로써 분리된다.The compound reaction mixture of the present invention is isolated by treatment in a known manner.

염형태인 본발명의 화합물은 예를들면 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘 등의 알칼리 또는 알칼리 토금속의 수산화물, 탄산염 또는 중탄산염, 암모니아 또는 1급, 2급 또는 3급 아민등의 염기를 사용하는 통상의 중화법에 의해 제조된다.Compounds of the present invention in salt form are usually neutralized using, for example, hydroxides, carbonates or bicarbonates of alkali or alkaline earth metals such as sodium, potassium, calcium or magnesium, ammonia or bases such as primary, secondary or tertiary amines. Manufactured by law.

예를들면, 나트륨염은 수득된 본 발명의 화합물 (산형태)을 위에 언급된 바와같이 대기 불활성 개스하 100℃ 이하보통 0 내지 50℃에서 수산화나트륨의 알콜성 또는 수성용액과 반응시켜 중화시킴으로써 수득된다.For example, sodium salts are obtained by neutralizing the obtained compound (acid form) of the present invention by reaction with an alcoholic or aqueous solution of sodium hydroxide at 100 ° C. or below, usually 0 to 50 ° C. under an atmospheric inert gas as mentioned above. do.

위에 언급된 방법은 본 발명 화합물 제조방법의 태양(態樣)일 뿐이며 본 발명이 이 방법에 한정되는 것은 아니다.The above-mentioned method is only an aspect of the method for preparing the compound of the present invention, and the present invention is not limited to this method.

본 발명의 화합물은 실시예에 나타난 바와같이 혈소판응집, 다핵 백혈구 유주, 다핵 백혈구의 염증 부위로의 삼출 및 염증성 육아종의 증식에 대한 역제효과, 보조액 관절염(adjuvant arthritis)에 대한 예방효과, 항종양효과 낮은 급성 독성을 나타내며 위점막에 대한 장해 및 변이 유발원 형성을 전혀 나타내지 않는다.The compounds of the present invention, as shown in the examples, platelet aggregation, multinucleated leukocytes, effusion of multinuclear leukocytes into the inflammatory site and anti-inhibitory effect on proliferation of inflammatory granulomas, preventive effect against adjuvant arthritis, antitumor effect It has low acute toxicity and shows no disturbance or mutagen formation on gastric mucosa.

따라서, 본 발명의 화합물은 염증, 혈전증, 뇌출혈, 고혈압, 천식 또는 암 등과 같은 여러 질환 특히 류마티즘 또는 전신 낭창홍반(SLE)등이 치료에 유용하다.Accordingly, the compounds of the present invention are useful for the treatment of various diseases such as inflammation, thrombosis, cerebral hemorrhage, high blood pressure, asthma or cancer, especially rheumatoid or systemic lupus erythema (SLE).

본 발명의 화합물이 약물에 사용될 때 염 또는 에스테르는 약제학적으로 무독해야 한다.When the compounds of the present invention are used in drugs, the salts or esters must be pharmaceutically nontoxic.

더우기, 본 발명의 화합물은 위에 언급된 질병 치료용 약제학적 조성물의 활성성분으로 사용될 수 있다.Furthermore, the compounds of the present invention can be used as active ingredients of the pharmaceutical compositions for treating diseases mentioned above.

본 발명의 화합물은 약제학적으로 무독한 담체 및 또는 보조제와 함께 조성물로서 경구, 직장 또는 주사등 여러용량 형태로 투여될 수 있다.The compounds of the present invention can be administered in a multidose form such as oral, rectal or injection as a composition together with a pharmaceutically toxic carrier and / or adjuvant.

이들 경우에, 본발명의 화합물 들 또는 그 이상의 종류의 혼합물이나 기타 약제학적 활성물질과의 혼합물이 약제학적 조성물의 활성 성분으로 사용될 수 있다.In these cases, mixtures of compounds of the present invention or mixtures of more than one kind or with other pharmaceutically active substances can be used as the active ingredient of the pharmaceutical composition.

조성물의 용량 형태는 정제, 설하정제, 산제, 캅셀제, 트로키제, 수제 쏘는 유제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 수성주사제 또는 유성주사제일 수 있다. 위에 언급된 담체의 예로는 물, 젤라틴, 유당, 전분, 펙틴, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산, 탈크, 식물유, 아라비아거, 폴리알킬렌글리콜, 바세린, 솔비탄트리올레이트, 폴리옥시에틸렌솔비탄 모노올레이트, 알킬페놀, 지방족알콜, 폴리비닐 피롤리돈 등이다. 필요하다면 조성물에, 감미제, 방향제, 착색제, 보존제, 삼투조절용염 또는 완충제 등 즉 통상의 약제학적 보조제가 함께 사용될 수 있다.Dosage forms of the composition may be tablets, sublingual tablets, powders, capsules, troches, homemade sting emulsions, suspensions, emulsifiers, syrups, aqueous injections or oily injections. Examples of the above-mentioned carriers include water, gelatin, lactose, starch, pectin, magnesium stearate, stearic acid, talc, vegetable oil, arabic, polyalkylene glycol, petrolatum, sorbitan trioleate, polyoxyethylene sorbitan mono Oleates, alkylphenols, aliphatic alcohols, polyvinyl pyrrolidone and the like. If desired, sweeteners, fragrances, colorants, preservatives, osmotic salts or buffers and the like may be used in combination with the usual pharmaceutical auxiliaries.

약제학적 조성물중 본발명 화합물의 함량은 적절히 변화될 수 있으나 조성물중량당 0.01% 내지 100% 바람직하게는 0.05 내지 80%이다.The content of the present invention compound in the pharmaceutical composition may be changed as appropriate, but is 0.01% to 100% preferably 0.05 to 80% by weight of the composition.

본 발명의 약제학적 조성물은 인체 또는 동물에 비경구로 예를들면, 직장, 주사(피하, 근육내 또는 정맥내 또는 적주(drip)로 투여되며 바람직하게는 경구(예를들면 설하)로 투여된다.The pharmaceutical compositions of the present invention are administered parenterally, for example, rectally, by injection (subcutaneously, intramuscularly or intravenously or by drip) to the human body or animal and preferably orally (eg sublingually).

본 발명의 약제학적 조성물의 용량은 인체에 경구 투여하는 경우 체중 kg 당 1일 0.1 내지 500mg 바람직하게는 0.5 내지 200mg이며 비경구 투여의 경우에는 0.1 내지 100mg이며 약물은 하루 1 내지 4회 투여 된다.The dose of the pharmaceutical composition of the present invention is 0.1 to 500 mg / kg preferably 0.5 to 200 mg / kg body weight per day when administered orally to the human body, 0.1 to 100 mg for parenteral administration and the drug is administered 1 to 4 times a day.

그러나, 약제학적 조성물의 용량은 인체 또는 동물의 연령, 특질, 질병의 상태 등에 따라 다르며 위에 언급된 범위밖의 용량도 사용될 수 있다.However, the dosage of the pharmaceutical composition depends on the age, characteristics, disease state, etc. of the human body or animal, and dosages outside the above-mentioned ranges may be used.

본 발명 화합물의 성질, 제조방법 및 약물학적 효과는 다음 실시예에서 구체적으로 기술된다.The properties, preparation methods and pharmacological effects of the compounds of the invention are described in detail in the following examples.

[실시예 1]Example 1

트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산의 제조Preparation of trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid

30ml의 탈수 정제된 메탄올에 1.753g(12.7밀리몰)의 3,4-디하이드록시벤즈알데하이드를 용해시킨다.Dissolve 1.753 g (12.7 mmol) of 3,4-dihydroxybenzaldehyde in 30 ml of dehydrated purified methanol.

결과의 용액을 대기질소하 1.994g(12.7밀리몰)의 트란스-4-아미노메틸-사이클로헥산-1-카복실산에 적하시키고 혼합용액을 교반하며 3시간 동안 환류시킨다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시킨 후 침전된 등황색 결정을 여과해서 메탄올로 세척하고 진공 중 건조시킨다.The resulting solution was added dropwise to 1.994 g (12.7 mmol) of trans-4-aminomethyl-cyclohexane-1-carboxylic acid under atmospheric nitrogen and refluxed for 3 hours with stirring of the mixed solution. After cooling the reaction mixture to room temperature, the precipitated iso yellow crystals are filtered off, washed with methanol and dried in vacuo.

2.9g의 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산이 82.7%의 수율로 수득된다.2.9 g of trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid is obtained in a yield of 82.7%.

이와같이 수득된 본 발명 화합물(산형태)의 특성은 다음과 같다.The properties of the compound (acid form) of the present invention thus obtained are as follows.

(1) 융점 : 222℃(분해)(모세관법에 의해 측정)(1) Melting point: 222 ° C (decomposition) (measured by capillary method)

(2) 원소분석 :(2) Elemental Analysis

(3) 핵자기 공명(NMR) 스펙트럼(디에틸 설폭사이드)(3) nuclear magnetic resonance (NMR) spectra (diethyl sulfoxide)

δ=0.9-2.0(9H,m), 2.1-2.2(1H), 3.33(2H,d), 6.73(1H,d), 6.97(1H,d), 7.19(1H,s) 8.03(1H,s)δ = 0.9-2.0 (9H, m), 2.1-2.2 (1H), 3.33 (2H, d), 6.73 (1H, d), 6.97 (1H, d), 7.19 (1H, s) 8.03 (1H, s )

(4) KBr정제법에 의한 적외부 흡수(IR) 스펙트럼이 도면 1에 나타나 있다.(4) The infrared absorption (IR) spectrum by KBr purification method is shown in FIG.

[실시예 2]Example 2

나트륨 트란스-4-[N-(3',4'-디하이트록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트의 제조Preparation of Sodium Trans-4- [N- (3 ', 4'-Dihydroxyoxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate

3.6ml의 1N 메탄올성 수산화나트륨 용액에, 실시예 1에서 수득된 1.00g(3.61밀리몰)의 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산을 가하고 대기 질소하 실온에서 20내지 30분간 교반하면서 용해시킨다. 여과후 메탄올을 증발시키면 1.121g의 나트륨 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트가 수득된다.In 3.6 ml of 1N methanolic sodium hydroxide solution, 1.00 g (3.61 mmol) of trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane- obtained in Example 1 was obtained. 1-carboxylic acid is added and dissolved with stirring for 20-30 minutes at room temperature under atmospheric nitrogen. Evaporation of methanol after filtration yields 1.121 g of sodium trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate.

이와 같이 수득된 본발명 화합물 (나트륨염)의 IR스펙트럼(KBr정제법)이 도면 2에 나타나 있다. 메탄올중 자외부(UV) 흡수 스펙트럼에서 다음 두 개의 최대치가 관찰된다.The IR spectrum (KBr purification method) of the present invention compound (sodium salt) thus obtained is shown in FIG. Two maximums are observed in the ultraviolet (UV) absorption spectrum in methanol.

λ_max: 271.5mu 및 309muλ _max : 271.5mu and 309mu

[실시예 3]Example 3

에틸 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸]사이클로헥산-1-카복실레이트의 제조 20ml의 메탄올에, 0.835g의 3,4-디하이드록시벤즈 알데하이드 및 1.2g의 에틸 트란스-4-아미노-메틸-사이클로헥산-1-카복실레이트를 용해시킨다.Preparation of ethyl trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate 0.835 g of 3,4-dihydroxybenz aldehyde in 20 ml of methanol And 1.2 g of ethyl trans-4-amino-methyl-cyclohexane-1-carboxylate.

결과의 용액을 대기 질소하 1시간동안 환류반응시킨다.The resulting solution is refluxed under atmospheric nitrogen for 1 hour.

반응 혼합물을 0℃에서 밤새 방치한후 침전된 심홍색 판상 결정을 여과하고 건조하여 본 발명의 화합물(에틸 에스테르) 1.525g을 수득한다.The reaction mixture was left at 0 ° C. overnight, after which the precipitated magenta plate crystals were filtered and dried to yield 1.525 g of the compound (ethyl ester) of the present invention.

이와 같이 수득된 에틸 에스테르의 특성은 다음과 같다.The properties of the ethyl ester thus obtained are as follows.

(1) 융점 : 50 내지 62℃(모세관법에 의해 측정)(1) Melting point: 50-62 ° C. (measured by capillary method)

(2) 원소분석 :(2) Elemental Analysis

(3) IR스펙트럼 : 도면 3(3) IR spectrum: Drawing 3

[실시예 4]Example 4

시스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이크로헥산-1-카복실산의 제조Preparation of cis-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid

탈수 정제된 메탄올 중에서, 0.395g(2.86밀리몰)의 3,4-디하이드록시벤즈알데하이드를 환류시키며 0.450g(2.86밀리몰)의 시스-4-아미노메틸-사이크로헥산-1-카복실산과 1시간 동안 반응시킨다. 균질한 등적색 반응 혼합물로 부터 메타올을 감압하 증발시킨 두 0.7910g의 시스-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산의 황색분말을 얻는다.In dehydrated methanol, 0.395 g (2.86 mmol) of 3,4-dihydroxybenzaldehyde was refluxed and 0.450 g (2.86 mmol) of cis-4-aminomethyl-cyclohexane-1-carboxylic acid for 1 hour. React. From the homogeneous iso-red reaction mixture, two 0.7910 g of cis- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid are obtained by evaporation of the metaol under reduced pressure. .

이와 같이 수득된 본발명 화합물(시스형)의 특성은 다음과 같다 :The properties of the present invention compound (cis type) thus obtained are as follows:

(1) 융점 : 121 내지 129℃(핫플레이트(Hot-plate) 법에 의해 측정(1) Melting point: 121-129 ° C. (measured by hot-plate method

(2) NMR(디메틸설폭사이드중)(2) NMR (in dimethyl sulfoxide)

δ=1.02-1.84(9H,m), 2.0-2.1(1H), 3.35(2H,d) 6.82(1H,d), 6.97(1H,d), 7.20(1H,s) 8.04(1H,s)δ = 1.02-1.84 (9H, m), 2.0-2.1 (1H), 3.35 (2H, d) 6.82 (1H, d), 6.97 (1H, d), 7.20 (1H, s) 8.04 (1H, s)

[실시예 5]Example 5

혈소판응집 및 다핵백혈구 유주에 대한 억제효과 및 급성독성Inhibitory effect and acute toxicity on platelet aggregation and multinucleated leukocytes

본 발명의 화합물의 약물학적 활성 및 급성독성이 시험되었다.The pharmacological activity and acute toxicity of the compounds of the present invention were tested.

시험된 종은 다음과 같다 :Species tested were as follows:

종 Ⅰ : 나트륨 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트(실시예 2에서 수득)Species I: Sodium trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate (obtained in Example 2)

Ⅱ : 실시예 4에서 수독된 시스-[N-(3',4'-디하이드록시 벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산의 나트륨염.II: Sodium salt of cis- [N- (3 ', 4'-dihydroxy benzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid detoxified in Example 4.

비교종 Ⅲ : 인도메타신Comparative species Ⅲ: Indomethacin

Ⅳ : 호모클로르 사이클리진Ⅳ: Homochlor Cyclinine

본 발명의 화합물과 유사한 약물학적 활성을 가지는 비교종 Ⅲ 및 Ⅳ는 일본에서 시판용으로 구입될 수 있다.Comparative species III and IV having similar pharmacological activity to the compounds of the present invention can be purchased commercially from Japan.

시험은 아래 기술된 방법에 따라 수행 되었다.The test was performed according to the method described below.

(1) 혈소판 응집에 대한 억제 효과의 시험(1) Test of Inhibitory Effect on Platelet Aggregation

토끼 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)이 응집 시험에 사용되었다. PRP는 토끼 귀정맥으로 부터 채혈된 혈액의 원심 분리에 의해 제조되어 혈소판이 빈약한 혈장을 가지는 수-농도 300,000/㎕로 희석되었다.Rabbit platelet-rich plasma (PRP) was used for the aggregation test. PRP was prepared by centrifugation of blood drawn from rabbit veins and diluted to 300,000 / μl with a platelet-poor plasma.

혈소판 응집은 나트륨 아라키도 네이트에 의해 유도되었으며 230㎕ PRP를 함유하는 4개의 혈소판 응집추적자 PAT-4A(Niko Bioscience Co., Japan)를 사용하여 측정되었다. 230㎕PRP를 함유하는 응집 추적자튜브를 각종과 함께 37℃에서 5분간 미리 배양시켰다.Platelet aggregation was induced by sodium arachidonate and measured using four platelet aggregation tracers PAT-4A (Niko Bioscience Co., Japan) containing 230 μl PRP. Aggregated tracer tubes containing 230 μl PRP were pre-incubated for 5 min at 37 ° C with various kinds.

(2) 다핵 백혈구 유주에 대한 억제효과의 시험 방법(2) Test method of inhibitory effect on multinucleated leukocytes

쥐의 다핵 백혈구 유주는 보이든 법(Japanese J. Clin. Med, 27(9), 172(1969) 참조)에 의해 다음과 같이 시험하였다. 10용량부의 대장균(E. coli) 배양 여액 및 1용량부의 혈청 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 배양시키고 생리식염수를 사용하여 5배로 희석시켰으며 결과의 혼합물은 친화제로 사용되었다. 다핵 백혈구 현탁액을 각종과 함께 10분간 미리 배양시킨후 다핵 백혈구의 유주가 시험되었다.Rat multinucleated leukocytes were tested by the Boyden method (see Japanese J. Clin. Med, 27 (9), 172 (1969)) as follows. 10 parts of E. coli culture filtrate and 1 part of serum mixture were incubated at 37 ° C. for 1 hour and diluted 5 times with physiological saline and the resulting mixture was used as affinity agent. The multinucleated leukocyte suspension was pre-incubated with various kinds for 10 minutes before testing the multinucleated leukocytes.

(3) 급성 독성에 대한 시험 방법(3) Test method for acute toxicity

급성 독성은 각종의 수성용액을 생후 5 내지 6주된 암 JCL-ICR마우스에 경구 투여함으로써 시험되었다. 결과는 표 1에 나타나 있다.Acute toxicity was tested by oral administration of various aqueous solutions to cancer JCL-ICR mice 5-6 weeks of age. The results are shown in Table 1.

[표 1]TABLE 1

주 : 1) 나트륨 아라키도네이트(400μM)의 혈소판 응집효과를 완전히(100%)억제하는 각종의 최소농도(μM)Note: 1) Various minimum concentrations (μM) to completely inhibit (100%) the platelet aggregation effect of sodium arachidonate (400μM)

2) 각종의 각농도(μM)에서 다핵 백혈구 유주의 억제율의 평균치(5%)2) Mean value (5%) of inhibition rate of multinucleated leukocytes in various concentration (μM)

3) 중앙값 치사용량(LD₅₀) 즉 마우스 체중 kg당 mg단위로 나타 내지는 50%의마우스를 치사케하는 용량3) Median lethal dose (LD ₅₀ ), that is, the dose that kills 50% of mice expressed in mg per kg body weight of the mouse.

표 1에 나타난 바와같이 본 발명은 혈소판 응집 및 다핵 백혈구 유주에 대한 억제 효과 및 낮은 급성독성을 가진다. 따라서, 본 발명의 화합물은 기타 여러 질환에 항염증 치료제로 사용될 수 있다.As shown in Table 1, the present invention has low acute toxicity and inhibitory effect on platelet aggregation and multinucleated leukocytes. Thus, the compounds of the present invention can be used as anti-inflammatory agents in many other diseases.

[실시예 6]Example 6

다핵 백혈구 삼출에 대한 억제 효과Inhibitory Effect on Multinuclear Leukocyte Effusion

다핵 백혈구의 염증 부위도의 삼출에 대한 나트륨 트탄스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트의 억제효과는 체중 약 150g인 숫쥐(Donryu) 및 육아종CMC낭법(Granuloma CMC pouch method) (Yakugaku Zasshi 88,1472(1968) 참조)을 사용하여 시험되었다.Inhibitory effect of sodium ttans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate on exudation of inflammation site of multinucleated leukocytes was about 150 g in weight Tested using a Donryu and Granuloma CMC pouch method (see Yakugaku Zasshi 88,1472 (1968)).

쥐의 등을 약 5cm 직경으로 털을 깎아낸후, 5ml의 공기를 그 부위에 피하 주사하여 낭을 형성시킨다. 24시간후, 5ml의 수성 2%(w/v)의 CMC 나트륨염 용액을 낭에 주사시키고 동시에 본 발명 화합물의 수성용액을 쥐에 50, 100 및 200mg/kg의 용량으로 경구 투여한다. 비교하기 위하여 인도 메타신을 쥐에 수성 현탁액의 형태로 10mg/kg의 용량으로 경구 투여한다.The rat's back is shaved about 5 cm in diameter, and 5 ml of air is subcutaneously injected into the area to form a sac. After 24 hours, 5 ml of aqueous 2% (w / v) CMC sodium salt solution is injected into the sac and at the same time an aqueous solution of the compound of the invention is administered orally to mice at doses of 50, 100 and 200 mg / kg. For comparison, indomethacin is administered orally to rats at a dose of 10 mg / kg in the form of an aqueous suspension.

CMC 주사후, 낭에 있는 액체를 0.5ml의 양으로 경과된 시간에 따라 모으고 염색시킨다. 다음 시간 경과에 따라 낭속으로 삼출된 다핵 백혈구의 수를 센다.After CMC injection, the liquid in the sac is collected and stained with elapsed time in an amount of 0.5 ml. Count the number of multinucleated white blood cells exuded into the capsule over time.

결과가 제4도에 나타나 있다.The results are shown in FIG.

제4도에 나타난 바와같이, 본발명의 화함물은 그의 용량에 따라 다핵 백혈구의 삼출을 조절할 수 있다.As shown in FIG. 4, the compound of the present invention can regulate the exudation of multinuclear leukocytes according to its dose.

그외에도, 에틸 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트가 동일한 방법으로 시험되었으며 이 에스테르 또한 다핵 백혈구의 삼출을 억제한다.In addition, ethyl trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate was tested in the same manner and this ester also inhibits the exudation of multinuclear leukocytes. .

[실시예 7]Example 7

염증성 육아종의 증식에 대한 억제효과Inhibitory effect on proliferation of inflammatory granulomas

나트륨 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트의 염증성육아종의 증식에 대한 억제효과는 생후 5주된 숫쥐(Donryu) 및 후지무라 등의 방법(Pharmacometrics 19(3), 329(1980) 참조)을 사용하여 시험되었다.Inhibitory effect of sodium trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate on the proliferation of inflammatory granulomas was 5 week old male (Donryu) and Fujimura And the like (see Pharmacometrics 19 (3), 329 (1980)).

직경 13mm이고 두께 0.26mm인 여지를 0.1mg/ml의 디하이드록시 스트렙토마이신 및 페니실린(밀리온 단위)을 함유하는 2% 수성 CMC 용액에 담근다. 이렇게 처리된 종이를 에테르 마취된 쥐의 등에 피하 삽입시킨다.13 mm in diameter and 0.26 mm thick were immersed in a 2% aqueous CMC solution containing 0.1 mg / ml of dihydroxy streptomycin and penicillin (million units). The paper thus treated is inserted subcutaneously in the back of the ether anesthetized rat.

각성후, 본발명의 화합물을 8일간 매일 1회, 25, 50 및 100mg/kg일의 용량으로 경구 투여하며 비교하기 위하여 인도 메타신을 동일 방법으로 3mg/kg/일의 용량으로 투여한다. 체중증가, 육아종의 중량 및 위점막에 대한 장해가 제9일째에 시험되었다.After awakening, the compounds of the present invention are administered orally at doses of 25, 50 and 100 mg / kg once daily for 8 days and compared to indomethacin at the dose of 3 mg / kg / day in the same manner. Weight gain, weight of granulomas and disorders of the gastric mucosa were tested on day 9.

결과가 표 2에 나타나 있다.The results are shown in Table 2.

[표 2]TABLE 2

주 : 1) 본발명의 화합물은 투여되지 않는다.Note: 1) The compound of the present invention is not administered.

2) p<0.01, p는 통계적 신뢰도의 한계를 나타낸다.2) p <0.01, p represents the limit of statistical reliability.

3) p<0.053) p <0.05

4) 두 마리의쥐에서 점상 출혈이 관찰되었다.4) Spot bleeding was observed in two rats.

표 2에 나타난 바와같이, 본발명의 화합물은 투여 용량에 따라 염증성 육아종의 증식을 효과적으로 억제하며 투여에 의해 체중증가를 억제하지는 않는다. 더우기, 통상의 비스테로이드성 항염제 사용시 관찰된 위점막 장해와 같이 어떠한 부작용도 관찰되지 않았다.As shown in Table 2, the compounds of the present invention effectively inhibit the proliferation of inflammatory granulomas according to the dose administered and do not inhibit weight gain by administration. Moreover, no side effects were observed, such as gastric mucosal obstruction observed with conventional nonsteroidal anti-inflammatory agents.

[실시예 8]Example 8

위점막에 대한 장해Obstruction to the gastric mucosa

통상의 항염제는 종종 부작용으로서 위점막에 대한 장해를 야기시킬 수 있다. 본발명 화합물의 장해 야기 가능성은 실시예 7에서와 같이 후지무라등의 방법을 사용함으로써 시험되었다.Conventional anti-inflammatory agents can often cause harm to the gastric mucosa as a side effect. The possibility of causing trouble of the compound of the present invention was tested by using the method of Fujimura et al. As in Example 7.

JCL-SD 암쥐를 24시간 굶긴후, 쥐에 나트륨 트란스-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸]사이클로헥산-1-카복실레이트를 경구 투여한다. 3시간 후 쥐를 죽 인후 위를 적출하고 위점막에 대한 장해의 정도(mm)를 오까베등의 방법(Pharmacometrics 18(1), 1(1979) 참조)에 의해 측정한다. 정도의 총합이 궤양 지수로 사용된다. 비교하기 위하여 인도 메타신을 30mg/kg의 용량으로 경구 투여한다.After 24 hours of starvation of the JCL-SD mice, the mice are orally administered sodium trans- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate. After 3 hours, the rats are killed, the stomach is removed, and the degree of obstruction to the gastric mucosa (mm) is measured by Okabe et al. (See Pharmacometrics 18 (1), 1 (1979)). The sum of the degrees is used as the ulcer index. For comparison, indomethacin is administered orally at a dose of 30 mg / kg.

결과는 표 3에 나타나있다.The results are shown in Table 3.

[표 3]TABLE 3

주 : 1) 본 발명 화합물은 투여되지 않는다.Note: 1) The compound of the present invention is not administered.

2) 수성액체 형태로 경구 투여된다.2) administered orally in the form of an aqueous liquid.

3) 수성현탁제 형태로 경구 투여된다.3) administered orally in the form of an aqueous suspension.

표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 화합물은 500mg/kg과 같은 높은 용량에서 조차도 위점막에 대한 장애를 일으키지 않는다.As shown in Table 3, the compounds of the present invention do not cause disorders on the gastric mucosa even at high doses such as 500 mg / kg.

[실시예 9]Example 9

보조액관절염(adjuvant arthritis)에 대한 예방효과Preventive effect against adjuvant arthritis

본 발명 화합물의 보조액 관절염에 대한 예방효과를 생후 7주된 6마리의 암 JCL-SD 쥐를 1그룹으로 사용하고 통상의 방법(Fujihira et al., Pharmacometrics 5(2), 169-183(1971) 참조)을 사용하여 시험되었다.The prophylactic effect of the compound of the present invention against adjuvant arthritis was used as a group of 6 cancer JCL-SD mice at 7 weeks of age, and the conventional method (Fujihira et al. Was tested using).

프로인트 완전 보조액(0.6mg/0.1ml)을 에테르 마취된 쥐의 오른쪽 뒷발에 접종한다.Freund's complete supplement (0.6 mg / 0.1 ml) is inoculated into the right hind paw of ether anesthetized mice.

각성후, 나트륨 트란스-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산레이트를 매일 1회 24일 연속하여 경구 투여한다. 보조액 관절염에 기인된 뒷발 부피와 체중의 변화가 시간경과에 따라 시험되었다. 비교 하기위하여 스테로이드(프레드니솔론)을 동일한 방법으로 경구 투여한다.After awakening, sodium trans- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid is orally administered once daily for 24 consecutive days. Changes in hind paw volume and body weight due to auxiliary arthritis were tested over time. For comparison, steroids (prednisolone) are administered orally in the same manner.

결과가 도면 제5와 제6에 나타나 있다. 제5도에서 "공백"은 보조약에 대한 어떠한 접종도 하지 않았음을 나타낸다. 제5도 및 제6도에 나타난 바와 같이 본 발명의 화합물은 스테로이드를 투여한 쥐에서 종종 볼 수 있는 쥐의 체중감소를 전혀 나타내지 않고 보조액 관절염을 효과적으로 예방했다.The results are shown in FIGS. 5 and 6. “Blank” in FIG. 5 indicates no inoculation of the supplement. As shown in FIGS. 5 and 6, the compounds of the present invention effectively prevented auxiliary arthritis without showing any weight loss in rats often seen in steroid-administered mice.

그외에도, 보조약을 접종한지 제25일째에 쥐를 죽여서 쥐의 각 장기의 중량을 측정했다. 본발명의 화합물을 투여한 쥐에서는 어떠한 흉선의 쇠퇴도 관찰되지 않은 반면 스테로이드(프레드니솔론)를 투여한 쥐에서는 유의적인 흉선의 쇠퇴가 관찰되었다. 따라서, 본발명의 화합물은 류마티즘과 같은 만성 질환 치료제로서 이용될 수 있다.In addition, the rats were killed on the 25th day of inoculation of the supplement, and the weight of each organ of the rat was measured. No thymus decline was observed in rats administered with the compound of the present invention, while a significant thymus decline was observed in rats administered steroid (prednisolone). Thus, the compounds of the present invention can be used as therapeutic agents for chronic diseases such as rheumatism.

[실시예 10]Example 10

항종양효과Antitumor effect

본 발명의 화합물의 항종양 효과가 시험되었다.The antitumor effect of the compounds of the invention was tested.

ICR-JCL마우스의 액하부위(infra-axillary site)에 육종-180의 1×10⁶개의 세포를 이식했다.1 × 10 ⁶ cells of sarcoma-180 were implanted into the infra-axillary site of the ICR-JCL mouse.

이식 24시간 후, 나트륨, 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴)아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실레이트를 주사용 멸균 정제수에 용해시킨 용액을 100 내지 500mg/kg의 용량으로 매일 일회 21일 연속하여 경구 투여한다. 이식후 22일째에 종양성결정을 적출해내고 다음식에 따라 억제율(I.R%)을 계산한다.24 hours after transplantation, 100 to 500 mg of a solution of sodium, trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate dissolved in sterile purified water for injection A dose of / kg is administered orally once daily for 21 consecutive days. On day 22 after transplantation, the tumorous crystals are removed and the inhibition rate (I.R%) is calculated according to the following equation.

(1-T/e)×100=I.R.(%)(1-T / e) × 100 = I.R. (%)

이때 T와 e는 각각 투여군 및 대조군의 신생물의 평균 중량을 나타낸다.In this case, T and e represent the average weight of neoplasms of the administration group and the control group, respectively.

I.R치는 본 발명 화합물의 100mg 용량 및 500mg용 량에서 각각 55.8 및 45.3%였다.The I.R values were 55.8 and 45.3% at the 100 mg and 500 mg doses of the compounds of the present invention, respectively.

[실시예 11]Example 11

변이유발원형성Mutagenic Formation

본 발명 화합물의 변이 유발원형성은 Rec분석에 의해 시험되었다.Mutagenesis of the compounds of the invention was tested by Rec assay.

바실루스 서브틸리스 M₄₅(제조합 회복시 결핍된 균주) 및 바실루스 서브틸리스 H₁₇(제조합 회복시 남아있는 균주)을 B-Ⅱ 한천 배지상에 도말하여 두개의 도말의 출발점이 함께 겹치지지 않게했다.Bacillus subtilis M ₄₅ (strain deficient in combination recovery) and Bacillus subtilis H ₁₇ (restrain remaining in combination recovery) are plated on B-II agar medium so that the starting points of the two smears do not overlap together Not let.

B-Ⅱ한천 배지는 10g의 육류 추출물, 10g의 폴리펩톤, 5g의 염화나트륨 및 15g의 한천을 1000ml의 증류수에 용해시키고 pH를 7.0으로 조정함으로써 제조된다.B-II agar medium is prepared by dissolving 10 g of meat extract, 10 g of polypeptone, 5 g of sodium chloride and 15 g of agar in 1000 ml of distilled water and adjusting the pH to 7.0.

나트륨 트란스-4-[N-(3',4'-디하이드록시벤질리덴) 아미노메틸]사이클로헥산-1-카복실레이트 용액을 직경 8mm인원형 여지(디스크)에 흡수 시키자 마자, 두도말의 출발점을 여지로 덮는다. 균주를 37℃에서 밤새 배양시킨 후 성장 억제대의 길이를 측정한다. 음성 대조군으로서 카나마이신 및 양성 대조군으로서 마토마이신이 사용되었다. 결과가 표 4에 나타나 있다.As soon as the sodium trans-4- [N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylate solution was absorbed into an 8 mm diameter circular dome (disk), Cover the starting point with room. The strain is incubated overnight at 37 ° C. and then the length of the growth inhibitor is measured. Kanamycin as a negative control and matomycin as a positive control were used. The results are shown in Table 4.

[표 4]TABLE 4

표 4에 나타난 바와 같이, 본발명의 화합물은 변이 유발원형성을 전혀 나타내지 않았으며 고도의 안정성을 가짐이 발견되었다.As shown in Table 4, the compounds of the present invention showed no mutagenicity and were found to have high stability.

실시예 5에서 11의 결과로 부터, 본 발명의 화합물은 매우 특이적인 약물학적 활성을 나타냈으며 어떠한 독성도 부작용도 나타내지 않음이 발견되었다.From the results of Examples 5 to 11, it was found that the compounds of the present invention showed very specific pharmacological activity and no toxicity and no side effects.

따라서 본발명의 화합물은 고도의 안정성을 가지며 여러 가지 질환의 치료 또는 예방제인 약제학적 조성물에 사용될 수 있다.Accordingly, the compounds of the present invention can be used in pharmaceutical compositions which have a high degree of stability and which are for the treatment or prevention of various diseases.

Claims (1)

다음 구조식(Ⅱ)의 3,4-디하이드록시벤즈알데하이드를 다음 구조식(Ⅲ)의 4-아미노메틸-사이클로헥산-1-카복실산 또는 그의 에스테르와 반응시킴을 특징으로 하여 다음 구조식(Ⅰ)의 4-[N-(3',4'-디하이록시벤질리덴) 아미노메틸] 사이클로헥산-1-카복실산 또는 그의 염 또는 에스테르를 제조하는 방법.3,4-dihydroxybenzaldehyde of the following formula (II) is reacted with 4-aminomethyl-cyclohexane-1-carboxylic acid or its ester of the following formula (III) -[N- (3 ', 4'-dihydroxybenzylidene) aminomethyl] cyclohexane-1-carboxylic acid or a salt or ester thereof.

상기식에서In the above formula 사이클로헥산환은 트란스 및 시스형을 포함한다.Cyclohexane ring includes a trans and cis form.

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