KR810001235B1 - Process for preparing lyophilized native gamma globulin for intravenous administration - Google Patents

Abstract

The title γ-globulin injections for intraverous administration are prepd. by mixing 1 part of natural γ-globulin soln. from human body with 0.06-0.26 part of neutral salts and freeze-drying. The compds. are stable and produce no adverse reactions in the event of i.v. administration. Thus, γ-globulins(15g) obtained by the polyethylene glycol fractionation method were mixed with human serum albumins (2. 3 g), NaCl(1.3 g) and mannitol (5.3 g) in 0.025 M acetate buffer, filtered, distributed and freeze-dried.

Description

정맥주사용 동결 건조 천연 감마 글로블린제의 제조방법Method for preparing lyophilized natural gamma globulin for intravenous injection

본 발명은 정맥내로 투약했을 경우 부작용이 없는 감마 글로블린제의 제조방법에 관한 것이다. 더 구체적으로 본 발명은 항보체 활성의 증가를 억제하기 위해 천연염 존재하에 인체의 감마글로블린의 수용액을 동결 건조하여 정맥내 주사에 적합한 동결건조 감마 글로블린제의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing gamma globulin without side effects when administered intravenously. More specifically, the present invention relates to a method for preparing a lyophilized gamma globulin agent suitable for intravenous injection by freeze-drying an aqueous solution of gamma globulin in a human body in the presence of natural salts in order to suppress an increase in anticomplement activity.

혈장 단백질의 면역 글로블린 중에서 주성분으로 IgG를 함유하는 감마 글로블리제는 다수의 화농증의 예방 및 치료에 광범위하게 사용되고 있다. 그러나 이 제제물을 정맥내로 투약하면 혈압의 급격한 감소를 수반하는 아나필락시 부작용을 심하게 일으킨다. 이러한 이유로, 종래 감마 글로블린제의 투약은 근육내 주사로 투약했다. 근육내 주사는 일반적으로 다음과 같은 결점을 갖는다.Among immunoglobulins of plasma proteins, gamma globules containing IgG as a main component have been widely used for the prevention and treatment of many purulent diseases. However, intravenous administration of this preparation causes severe anaphylactic side effects that involve a sharp decrease in blood pressure. For this reason, conventional gamma globulin dosing was administered by intramuscular injection. Intramuscular injection generally has the following drawbacks.

(1) 환자가 주사시에 고통을 받는다.(1) The patient suffers at the time of injection.

(2) 약용량이 한정된다.(2) The dosage is limited.

(3) 단백질 분해로 주사시에 약용량의 액 절반이 손실된다.(3) Proteolysis results in the loss of half the dose of the drug at injection.

(4) 주사부분으로부터 혈액까지의 약제까지의 전달이 1∼2일 걸린다.(4) Delivery from the injection part to the blood takes about 1 to 2 days.

상기의 결점을 해결하기 위해, 종래 정맥내로 투약할 수 있는 감마 글로블린제의 개발이 시도되어 다수의 제조방법이 제안되었다. 감마 글로블린제를 정맥내로 투약하기 위해, 상기한 아나필락시 반응을 억제할 필요가 있다. 이와같은 반응의 발생은 아나필라톡소이드 물질등의 생리학적으로 활성인 인자와 면역 글로블린의 중합에 의해 형성되고 인체의 혈장분류에 의해 모여지는 대부분의 면역 글로블린 분류물중에 존재하는 미세분자 응집물과 혼합의 결과로서 혈액중에 보체의 활성화에 의해 유발되는 혈관벽-침투인자의 유리에 기초한 것으로 해석된다.In order to solve the above drawbacks, attempts have been made to develop gamma globulins that can be conventionally administered intravenously, and a number of manufacturing methods have been proposed. In order to administer gamma globulin intravenously, it is necessary to suppress the anaphylactic reaction described above. Occurrence of this reaction may be due to the mixing of micromolecule aggregates present in most immunoglobulin fractions formed by the polymerization of physiologically active factors such as anaphylatoxoids and immunoglobulins and collected by human plasma classification. As a result it is interpreted as based on the release of the vascular wall-penetrating factor caused by the activation of complement in the blood.

그리하여, 응집된 미세분자의 보체-고정력(항보체 활성)을 저하시켜, 감마 글로블린제를 정맥내로 투약할 수 있는 방법에 대하여 연구를 행한 결과, 감마 글로블린을 산 또는 β-푸로피오락톤으로 처리하거나 또는 감마 글로블린 분자를 펩신 및 플라스민 등의 효소에 의해 소화시켜 Fab.F(ab')2, 및 Fc편으로 분리시켜 제조한 정맥내 주사용으로 화학적으로 변조한 소위 감마 글로블린제를 얻었다. 그러나, 산처리의 경우에, 투약시에 감마 글로블린 분자는 재응집하는 경향이 있어 항보체 활성이 증가되고, 한편 효소에 의한 소화는 감마 글로블린 분자를 심하게 분열시켜 생화학적 반감기를 단축시킬 뿐만 아니라 감마 글로블린의 가장 중요한 항체가 및 항체 스펙트럼을 저하시키는 경향이 있다.Thus, studies have been conducted on the method of lowering the complement-fixing force (anti-complement activity) of agglomerated micromolecules and administering gamma globulin intravenously, thereby treating gamma globulin with acid or β-propiolactone. Alternatively, gamma globulin molecules were digested with enzymes such as pepsin and plasmin to yield so-called gamma globulins chemically modulated for intravenous injection prepared by separating Fab.F (ab ') 2 and Fc fragments. However, in the case of acid treatment, gamma globulin molecules tend to reaggregate at the time of dosing, increasing anticomplement activity, while digestion with enzymes severely cleaves gamma globulin molecules to shorten biochemical half-life as well as gamma The most important antibodies of globulin and tend to lower the antibody spectrum.

본 발명자등은 화학적 구조를 변경하지 않고 천연활성 반감기와 항체활성을 갖는 천연감마 글로블린을 정맥내로 투약하기 위한 약제를 얻기 위해 완전히 상이한 관점에서 상기한 종래의 문제점을 검토했다. 다음과 같은 성상을 갖는 제제를 개발하려고 했다.The present inventors have examined the above-mentioned conventional problems from completely different viewpoints in order to obtain a medicament for intravenously administering a natural gamma globulin having a naturally active half-life and antibody activity without changing its chemical structure. An attempt was made to develop a formulation with the following properties.

(1) 감마 글로블린은 천연성을 갖고 변형되지 않으므로, 이 제제는 Fab,F (뮤')2, 또는 Fc와 같은 단편을 전혀 함유하지 않는다.(1) Since gamma globulin is natural and unmodified, this agent does not contain any fragments such as Fab, F (mu ') 2, or Fc.

(2) 항체가를 저하시키지도 않고 항체 스펙트럼을 저하시키지도 않는다.(2) The antibody value is not lowered or the antibody spectrum is not lowered.

(3) 항체활성(보체 고정력)이 일반적으로 허용되는 안전 한계치 20유니트(C'H 50치)보다 훨씬 적다.(3) Antibody activity (complement fixation force) is much less than the generally accepted safety limit of 20 units (50 C'H).

상기의 감마 글로블린제를 개발하기 위한 노력으로, 본 발명자 등은 폴리에틸렌글리코올 분류법(일본특허출원공개 제20.415호 78, 독일특허출원 DT2606118호 참조)에 의해 용매중에서 혈장 단백질의 용해도 차이를 이용하여, 항보체 활성을 일으키는 감마글로블린 응집물을 침전물로서 제거하는 방법을 개발했다.In an effort to develop the gamma globulin agent described above, the present inventors have made use of the difference in solubility of plasma proteins in a solvent by polyethylene glycol classification (see Japanese Patent Application Laid-Open No. 20.415 78 and German Patent Application DT2606118). A method was developed to remove gamma globulin aggregates causing anticomplement activity as precipitates.

정맥주사로 사용한 직후에, 상기의 방법으로 수득한 액상형의 감마글로블린제가 부작용없이 안전함을 발견했다. 본 발명자 등은 액제의 항보체 활성의 증가를 억제할 수 있는 안정제를 검토한 결과 천연 소금, 글리신, 시카라이드 및 고분자량 비이온성 계면활성제가 액상 감마 글로블린제를 안정화하는데 상당히 효과적임을 발견했다.(일본특허 출원공개 제20,415호 78참조). 그러나, 액상형의 감마 글로블린제를 저장할 경우, 보체 프라스미노겐 등은 활성화되고, 감마 글로블린을 서서히 분해시켜 항체역가를 저하시킨다. 또한, 액상 단백질제는 저장 및 운반하기에 부적합하다. 저항보체 활성을 갖는 천연 감마 글로블린의 액제를 종래의 방법대로 동결 건조시키는 경우, 생성되는 동결 건조제의 항보체 활성은 안전한 정맥주사용 레벨이상으로 너무 크게 증가한다. 이러한 이유로, 동결 건조된 천연 감마 글로블린제는 아직까지 개발되지 않았다.Immediately after use by intravenous injection, it was found that the liquid gamma globulin agent obtained by the above method was safe without side effects. The inventors of the present invention have examined stabilizers capable of inhibiting the increase in anticomplement activity of liquid solutions and found that natural salts, glycine, saccharides and high molecular weight nonionic surfactants are quite effective in stabilizing liquid gamma globulins. See Japanese Patent Application Laid-Open No. 20,415, 78). However, when the liquid gamma globulin agent is stored, complement prasminogen and the like are activated, and the gamma globulin is gradually degraded to lower antibody titers. Liquid protein agents are also unsuitable for storage and transportation. When lyophilizing liquid gamma globulin solution having resistance complement activity according to the conventional method, the anti-complement activity of the resulting lyophilizer increases too much above the safe intravenous level. For this reason, lyophilized natural gamma globulin agents have not yet been developed.

본 발명자동은 정맥 주사용으로 적합한 동결 건조한 천연 감마 글로블린제를 제노하는 방법을 연구한 결과, 항보체 활성의 증가를 특별히 억제하는 억제제의 발견에 기초하여 본 발명을 성취했다.As a result of studying the method of genotyping a freeze-dried natural gamma globulin agent suitable for intravenous injection, the present invention has achieved this invention based on the discovery of an inhibitor that specifically inhibits the increase in anticomplement activity.

본 발명의 목적은 (1) 천연상태에서 어떤 변형이나 변화를 행하지 않고 Fab,F(ab')2 및 Fc와 같은 감마 글로블린의 단편을 전혀 함유하지 않는 성상을 가지며, (2) 항체 스펙럼을 저하시키지 않으며, (3) 일반적으로 허용되는 안전한 한계치 20유니트(C'H50치)보다 훨씬 낮은 항보체 활성(보체 고정력)을 갖는 감마 글로블린제를 건조 및 안정한 상태로 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to (1) have no properties of any modifications or changes in its natural state and contain no fragments of gamma globulin such as Fab, F (ab ') 2 and Fc, and (2) the antibody spectrum (3) to provide a gamma globulin agent in a dry and stable state with anti-complement activity (complement retention) much lower than the generally accepted safe limit of 20 units (C'H50).

본 발명에 의해, 상기의 목적은 20(C'H50) 또는 그 이하의 항보체 활성을 갖는 인체의 천연 감마 글로블린과 이 감마글로블린 1중량부에 대해 0.06내지 0.26중량부의 천연 무기염을 함유하는 정맥 주사용 동열 건조 천연감마 글로블린제에 의해 성취되었다.According to the present invention, the above object is a vein containing natural gamma globulin of human body having anti-complement activity of 20 (C'H50) or less and 0.06 to 0.26 parts by weight of natural inorganic salt per 1 part by weight of this gamma globulin. Achieved by injectable copper heat dried natural gamma globulin agent.

본 발명에서 원료로서 사용한 인체의 감마글로블린은 이 제품이 20(C'H50) 또는 그 이하의 항보체 활성을 갖는한 어떠한 방법으로든지 제조할 수 있으나, 바람직한 것은 본래 또는 천연상태이고 Fab,F(ab')₂, 또는 Fc를 전혀 함유하지 않는 것이다. 약제로서 사용할 수 있는 근육내 주사용 감마 글로블린 수용액을 사용하기 전에 산처리하여 응집물을 파괴할 수 있는 방법을 사용하는 것이 가장 효과적이다. 이러한 물질은 푤리에틸렌글리코올 등의 비이온성 계면활성제를 사용하는 분류법에 의해 인체의 혈장으로부터 수득하여(F.R. 독일특허출원 제DT 2,606,118호 참조), 항보체 활성을 일으키는 감마글로블린의 응집체를 제거하여 20 또는 그 이하의 항보체 활성을 갖는 물질을 생성한다.The gamma globulin of the human body used as a raw material in the present invention may be prepared by any method as long as the product has anti-complement activity of 20 (C'H50) or less, but it is preferred in nature or natural state and Fab, F (ab ') ₂ or does not contain Fc at all. It is most effective to use a method of destroying aggregates by acid treatment before using an aqueous solution of intramuscular injection of gamma globulin that can be used as a medicament. These substances are obtained from human plasma by fractionation using nonionic surfactants such as polyethylene glycol (see FR German Patent Application No. DT 2,606,118) to remove the aggregates of gamma globulin that cause anticomplement activity. Or a substance with anticomplementary activity below it.

항보체 활성의 증가를 억제하기 위해 사용하는 중성 무기염의 예로 염화나트륨, 염화칼륨 및 염화마그네슘을 들 수가 있다. 이들 중에서, 염화나트륨이 제약상 적합하다. 중성염의 사용량은 감마 글로블린의 1중량부에 대해 0.06내지 0.26중량부이다. 이 제제물에 중성염을 첨가해서 단백질 안정제로서 감마 글로블린의 1중량부에 대해 인체의 혈청 알부민에 0.1 내지 0.3중량부 및 비이온성 계면 활성제와 혼합해도 좋다. 만니톨과 같은 희석제를 0내지 0.5중량부 부가해도 좋다.Examples of neutral inorganic salts used to inhibit the increase in anticomplement activity include sodium chloride, potassium chloride and magnesium chloride. Among them, sodium chloride is pharmaceutically suitable. The amount of the neutral salt used is 0.06 to 0.26 parts by weight based on 1 part by weight of gamma globulin. You may add neutral salt to this formulation, and mix it with 0.1-0.3 weight part and nonionic surfactant with human serum albumin with respect to 1 weight part of gamma globulin as a protein stabilizer. 0 to 0.5 parts by weight of a diluent such as mannitol may be added.

상기한 첨가제의 전술한 양을 적당한 완충용액에 용해시켜 감마 글로블린 수용액과 혼합한다. 생성되는 용액을 pH 6.4내지 7.4로 조정하고, 살균여과지에 통과시킨 뒤 포장크기에 따라 각각 250내지 10,000mg의 감마 글로블린을 함유하는 부분으로 분할했다. 이 용액의 각 부분을 통상의 방법대로 신속히 동결 건조하여 동결 건조된 분말제를 생성하며, 그의 조성은 감마글로블린 1중량부에 대해 적어도 0.06내지 0.26중량부의 천연염을 함유한다. 이 생성물은 정맥내 주사용으로 안전한 인체의 천연 감마 글로블린제이며, 이것은 항체 역가를 저하시키지도 않고 동결 건조후에 항보체 활성을 증가시키지도 않으며, 안전하게 자장할 수 있다.The above-mentioned amounts of the above additives are dissolved in a suitable buffer solution and mixed with the gamma globulin aqueous solution. The resulting solution was adjusted to pH 6.4-7.4, passed through sterile filtration paper and partitioned into portions containing 250 to 10,000 mg of gamma globulin, respectively, depending on the packaging size. Each part of this solution is lyophilized rapidly in the usual manner to yield a lyophilized powder, the composition of which contains at least 0.06 to 0.26 parts by weight of natural salt relative to 1 part by weight of gamma globulin. This product is a natural human gamma globulin agent that is safe for intravenous injection, which does not lower antibody titers, does not increase anticomplement activity after lyophilization, and can safely grow.

정맥내 주사전에, 본 발명의 제제물을 주사용으로 물에 용해시켜 약 4-7%(W/V)의 감마 글모블린을 함유하고 생리학적 등장염 농도를 갖는 액체를 제제했다. 일반적인 약용량은 성인용 1회 약용량당 1,000 내지 4,000mg (약 50 내지 60중량%의 감마 글로블린 함유)이며, 어린이용 1회 약용량당 25-300mg며, 이 혀용량은 평균치이다.Prior to intravenous injection, the formulations of the present invention were dissolved in water for injection to prepare liquids containing about 4-7% (W / V) gamma glycoline and having a physiological isotonic concentration. Typical dosages range from 1,000 to 4,000 mg (containing about 50 to 60% by weight of gamma globulin) per adult dose, 25-300 mg per dose for children, and this tongue dose is average.

독성시험(부작용 시험):Toxicity Test (Side Test):

본 발명의 제제를 급성득성(새앙쥐 및 쥐, 200mg/kg)과 아급성독성(쥐, 2주일동안 50-200mg/kg/일)에 대해 시험했다. 독성의 비정상적 징후가 전혀 발견되지 않았다.The formulations of the invention were tested for acute uptake (chicken and rat, 200 mg / kg) and subacute toxicity (rat, 50-200 mg / kg / day for 2 weeks). No abnormal signs of toxicity were found.

독성시험 다음에, 본 발명 제제의 안전도 시험을 내과의사의 엄격한 감독하에 환자당 2500mg을 정맥내로 적주하여 10명의 정상적인 지원피험자에 대해서 행했다. 시험은 투약전, 투약중 및 투약후 두통, 안면발적, 발한, 구토와 같은 자각적인 징후와 혈압, 호흡을, 맥박수, 체온 및 일반상태를 조심스럽게 시험했다. 또한, 투약전후에 적혈구침강속도, 헤마토크리트치, 헤모글로빈함량, 적혈구수, 백혈구수, 혈청단백질, 감마글로블린 단편 및 뇨를 시험했다. 각 경우에 이상성이 전혀 발견되지 않으므로 본 발명 제제의 안전성이 충분함을 나타냈다.Toxicity Tests Following the safety test of the formulations of the present invention, 10 mg of normal support subjects were administered intravenously at 2500 mg per patient under the strict supervision of a physician. The trial carefully examined subjective symptoms such as headache, facial redness, sweating, vomiting, blood pressure, respiration, pulse rate, body temperature and general status before, during and after dosing. In addition, erythrocyte sedimentation rate, hematocrit, hemoglobin content, erythrocyte count, leukocyte count, serum protein, gamma globulin fragment, and urine were tested before and after dosing. In each case no abnormality was found, indicating the safety of the formulations of the present invention.

안정성 시험:Stability test:

동결 건조 전후에 본 발명 제제의 안정성 시험의 결과를 아래에 나타냈다. 이 시험에 사용한 시료는 F.R. 독일특허출원 제 DT 2,606,118호의 실시예에 기재된 폴리에틸렌 글리코올 분류법으로 수득한 17유니트의 항보체 활성을 갖는 감마 글로블린 침전물의 분류물이다. 안정제 및 중량제로서 알부민 0.2중량부와 만니톨 0.4중량부를 함유하는 0.025몰 초산염 완충액(pH5.1)을 상기의 감마 글로블린 분류물 1중량부에 부가했다. 이 혼합물에 항보체 활성의 증가를 억제하기 위해 염화나트륨 0.02내지 0.30중량부를 부가했다. 감마글로블린을 이 감마 글로블린 용액 중 5중량%를 형성하는 혼합물에 용해시켰다. 분해 종료후, pH를 6.5로 조정하고, 이 용액을 살균 휠터(밀리포어 휠터)를 통과시켰다. 여액을 ＂전-동결 건조 용액＂(또는 표 1에서 간단히 ＂전-용액＂)으로 명명했다. 종래의 방법으로 동결 건조시켜 수득한 분말을 증류수에 다시 용해시키고, 이 용액을 ＂후-동결 건조 용액＂(또는 표 1에서 간단히 ＂후-용액＂)으로 명명했다.The results of the stability test of the formulation of the present invention before and after freeze drying are shown below. Samples used for this test were F.R. It is a fraction of a gamma globulin precipitate having an anticomplement activity of 17 units obtained by the polyethylene glycol classification method described in the example of German patent application DT 2,606,118. 0.025 mole acetate buffer (pH5.1) containing 0.2 parts by weight of albumin and 0.4 parts by weight of mannitol as a stabilizer and a weighting agent was added to 1 part by weight of the gamma globulin fraction. To this mixture, 0.02 to 0.30 parts by weight of sodium chloride was added to suppress the increase in anticomplement activity. Gamma globulin was dissolved in a mixture that formed 5% by weight in this gamma globulin solution. After the end of digestion, the pH was adjusted to 6.5 and the solution passed through a sterile filter (Millipore filter). The filtrate was termed pre-freeze dry solution (or simply pre-solution in Table 1). The powder obtained by lyophilization by the conventional method was again dissolved in distilled water, and this solution was named as post-freeze drying solution (or simply post-solution in Table 1).

전-용액 및 후-용액의 항보체 활성과 항마진 항체역가를 측정하여 제조한 샘플과 염화나트륨 대신에 글리신을 사용하여 제조한 샘플과 염화나트륨이나 글리신을 첨가하지 않고 제조한 샘플을 대조용으로 사용했다. 중성염의 양이 0.03부를 초과할 경우, 감마 글로블린이 용해하기 때문에 동결건조가 실질적으로 불가했다.Samples prepared by measuring anti-complement activity and anti-margin antibody titers of pre- and post-solutions, samples prepared using glycine instead of sodium chloride, and samples prepared without addition of sodium chloride or glycine were used as controls. . When the amount of neutral salt exceeded 0.03 parts, lyophilization was practically impossible because gamma globulin dissolved.

항보체 활성의 효력 검정을 카바트 및 메이어법〔실험 면역화학, 225(1961)〕에 의해 행했다. 샘플 감마 글로블린을 부가하여 생성되는 보체의 단위수의 감소를 유니트의 초기 수효를 100으로 취하여 측정했다. 항보체 활성을 감소된 유니트의 수효로 표시했다. 항-마진 항체 역가를 혈구 응집 억제시험으로 평가하여 국제 단위(IU/100mg)로 나타냈다.Assay of potency of anticomplement activity was carried out by Kabat and Meyer method (experimental immunochemistry, 225 (1961)). The reduction in the number of units of complement produced by adding sample gamma globulin was measured by taking the initial number of units as 100. Anticomplement activity is indicated by the reduced number of units. Anti-margin antibody titers were evaluated by hemagglutination inhibition test and expressed in international units (IU / 100mg).

[표 1]TABLE 1

주: 1) 샘플은 달리 지적하지 않는한 감마 글로블린 1중량부에 대해서 알부민 0.2중량부를 함유한다.Note: 1) Samples contain 0.2 parts by weight of albumin per 1 part by weight of gamma globulin unless otherwise indicated.

2) ＂불가＂는 ＂동결건조가 불가하다＂를 의미한다.2) “Impossible” means “Freeze drying is impossible”.

안정성 시험의 상기의 결과는 동결 건조중 항보체 활성의 증가에 대해 염화나트륨의 특정 억제 효과를 나타낸다. 이와같은 특정 효과는 감마 글로블린의 중량부당 염화나트륨을 0.06중량부 내지 동결 제제를 제조하기에 충분한 양으로 부가함으로써 나타남을 발견했다.The above results of the stability test show a specific inhibitory effect of sodium chloride on the increase in anticomplement activity during lyophilization. This particular effect was found to be manifested by adding sodium chloride per part by weight of gamma globulin to an amount sufficient to prepare a frozen formulation.

본 발명에 의한 감마 글로블린제는 약 20(C'H50)또는 그 이하로 낮은 항보체 활성을 갖는 동결제이다. 제제물중 주성분인 감마 글로블린 분자 변화를 행함이 없이 천연성을 유지하므로, 혈액중 그의 생리학적 반감기는 천연 감마 글로블린의 것과 같으며, 정맥 주사용 기타 감마 글로블린제보다 2내지 4주정도를 훨씬 능가하는 반감기를 갖는다. 펩신-처리제의 반감기는 1.25일이고, 플라스민-처리제의 반감기는 16.5이다. 또한, 본 발명의 제제는 후천적인 항원성을 가지지 않으므로, 정맥 주사용으로 매우 효과적이다. 본 발명의 제제는 원료로서 변형을 일으키지 않는 감마글로블린을 천연형으로 사용함으로써 유리하게 제조할 수 있다. 이하에 본 발명의 실시예를 기재한다.Gamma globulins according to the present invention are freezing agents having low anticomplement activity of about 20 (C'H50) or less. Since the main component of the formulation maintains its naturalness without changing the gamma globulin molecule, its physiological half-life in the blood is the same as that of the natural gamma globulin, far surpassing 2 to 4 weeks than other gamma globulins for intravenous injection. Have a half-life. The half life of the pepsin-treating agent is 1.25 days and the half life of the plasmin-treating agent is 16.5. In addition, the preparations of the present invention do not have acquired antigenicity and are therefore very effective for intravenous injection. The formulation of the present invention can be advantageously produced by using, as a raw material, gamma globulin that does not cause deformation in its natural form. Examples of the present invention are described below.

[실시예 1]Example 1

F.R. 독일 특허출원 제DT 2,606,118호(4%(W/V), 5%(W/V) 및 12%(W/V)농도로 폴리에틸렌글리코올을 사용하는 분류법)에 기재된 폴리에틸렌 글리코올 분류법에 의해, 18유니트의 항보체 활성을 갖는 감마 글로블린 15g을 혈장 단백질 분류물 Ⅱ+Ⅲ으로부터 수득했다. 감마 글로블린을 최종적으로 인체의 혈청 알부민 2.8g, 염화나트륨 1.39 및 만니톨 5.3g을 함유하는 0.025몰 초산염 완충액을 용해시켰다. 생성되는 용액의 pH를 약 6.7로 조정하고, 밀리포어 휠터로 살균 여과했다. 여액을 여러개의 부분으로 나눠서 각 부분을 동결-건조했다.F.R. By the polyethylene glycol classification method described in German Patent Application No. DT 2,606,118 (classification method using polyethylene glycol at 4% (W / V), 5% (W / V) and 12% (W / V) concentration), 15 g of gamma globulin with 18 units of anticomplement activity was obtained from plasma protein sort II + III. Gamma globulin was finally dissolved in 0.025 mol acetate buffer containing 2.8 g of human serum albumin, 1.39 sodium chloride and 5.3 g of mannitol. The pH of the resulting solution was adjusted to about 6.7 and sterile filtered with Millipore filter. The filtrate was divided into several portions and each portion was freeze-dried.

동결 건조한 감마-글로블린은 18(C'H 50)의 항보체 활성을 가졌다. 항체 역가는 유행성 이하 선염에 대해×16마진에 대해 10.1 IU/100mg, 풍진에 대해×1024, 두진에 대해 144IU/ml 및 디프테리아에 대해 2.0IU/ml이였다. 이 실시예의 제제는 폴리에틸렌 글리코올 분류법으로 수득한 감마 글로블린 분류물로 제조하므로, 폴리에틸렌 글리코올로 오염될 가능성이 있다. 폴리에틸렌글리코올이 제약상 특정 부각용이 없다 하더라도, 제제물로부터 폴리에틸렌 글리코올 오염물을 제거하는 것이 적합하다.Freeze dried gamma-globulin had an anticomplement activity of 18 (C′H 50). Antibody titers were 10.1 IU / 100 mg for the x16 margin for mumps, x1024 for the rubella, 144 IU / ml for the rash and 2.0 IU / ml for the diphtheria. The formulations of this example are prepared from gamma globulin fraction obtained by polyethylene glycol classification, which is likely to be contaminated with polyethylene glycol. Although polyethyleneglycool is not pharmaceutically specific, it is suitable to remove polyethylene glycol contaminants from the formulation.

[실시예 2]Example 2

16(C'H50)의 항보체 활성을 갖는 감마글로블린제를 실시예 1에서 사용한 폴리에틸렌글리코올 분류법대신에 폴리옥시에틸렌-폴리옥시푸로필렌 공중합체를 사용하는 분류법(6∼8.5%(W/V), 8.5∼10%(W/V) 및 14∼16%(W/V)농도로 공중합체를 사용하는 분류)으로 수득했다. 감마 글로블린제를 실시예 1과 동일한 방법으로 처리하여 실시예 1의 것과 유사한 결과를 얻었다.Classification using 6-8.5% (W / V) polyoxyethylene-polyoxyfuropropylene copolymer instead of polyethyleneglycol fractionation using the gamma globulin agent having anti-complement activity of 16 (C'H50) in Example 1 ), 8.5 to 10% (W / V) and 14 to 16% (W / V) in concentrations using the copolymer). The gamma globulin agent was treated in the same manner as in Example 1 to obtain similar results as in Example 1.

[실시예 3]Example 3

77IU/100mg의 항-마진 항체역가와 69(C'H50)의 항보체 활성을 갖는 정맥 주사용 시판 감마 글로블린 15%(W/V) 수용액 100ml를 48시간동안 0.10몰 글리신 완충액(pH3.1)을 투석하여 산처리했다. 이와같이 처리한 감마 글로블린 용액을 24시간동안 0.05몰 인산염 완충액(pH7.0)을 투석하여 중성으로 만들었다. 첨가제를 부가하여 최종용액이 감마 글로블린 1중량부에 대해 인체의 혈청알부민 0.20중량부, 염화나트륨 0.10중량부 및 만니톨 0.40중량부를 함유하도록 한다. 생성되는 용액에 0.025몰 초산염 완충액으로 pHFMF 6.5로 조정하고, 밀리포어 휠터를 통해 살균-여과했다. 여액을 여러개의 부분으로 나눠서 각 부분을 신속하게 동결 건조했다. 동결 건조된 감마 글로빈은 12(CH'50)의 항보체 활성과 7IU/100mg의 항-마진 항체 역가를 나타냈다. 이들 역가는 24시간 후에 변하지 않았다.100 ml of a commercially available gamma globulin 15% (W / V) aqueous solution for intravenous injection with 77 IU / 100 mg anti-margin antibody titer and 69 (C'H50) anticomplement activity was added for 0.10 mole glycine buffer (pH3.1) for 48 hours. Was subjected to acid treatment by dialysis. The gamma globulin solution thus treated was neutralized by dialysis of 0.05 mole phosphate buffer (pH 7.0) for 24 hours. Additives are added so that the final solution contains 0.20 parts by weight of human serum albumin, 0.10 parts by weight of sodium chloride and 0.40 parts by weight of mannitol, relative to 1 part by weight of gamma globulin. The resulting solution was adjusted to pHFMF 6.5 with 0.025 molar acetate buffer and sterilized by filtration through Millipore filter. The filtrate was divided into several portions and each portion was lyophilized quickly. Lyophilized gamma globin showed an anticomplement activity of 12 (CH'50) and an anti-margin antibody titer of 7 IU / 100 mg. These titers did not change after 24 hours.

[실시예 4]Example 4

정제에 의해 태반 추출로부터 수득한 태반 글로블린을 실시예 1에서 산용한 폴리에틸렌 글리코올로 분류 처리법과 동일한 방법으로 처리하여 17(C'H50)의 항보체 활성을 갖는 감마 글로빈 10g을 수득했다. 이 감마 글로블린을 첨가제를 함유하는 0.025몰 초산염 완충액을 부가하여 용해시켜 최종 용액이 인체의 혈청 알부민 2g과 염화나트륨 2.5g을 함유하도록 했다. 생성되는 용액을 실시예 1과 동일한 방법으로 처리하였으며, 수득된 결과들은 실시예 1에서 수득한 결과와 비슷하였다.Placental globulin obtained from placental extraction by purification was treated with polyethylene glycool soluble in Example 1 in the same manner as the classification treatment to obtain 10 g of gamma globin having an anticomplement activity of 17 (C'H50). This gamma globulin was dissolved by addition of 0.025 mol acetate buffer containing additives so that the final solution contained 2 g of human serum albumin and 2.5 g of sodium chloride. The resulting solution was treated in the same manner as in Example 1, and the results obtained were similar to those obtained in Example 1.

Claims (1)

20(C'H50) 또는 그 이하의 항보체 활성을 갖는 인체의 천연 감마글로블린의 수용액을 이 감마 글로블린 1중량부당 중성무기염 0.06내지 0.26중량부 존재하에 동결 건조시켜 정맥주사용 동결 건조 천연 감마 글로블린제를 제조하는 방법.Freeze-dried natural gamma globulin for intravenous use by lyophilizing an aqueous solution of human natural gamma globulin having an anti-complement activity of 20 (C'H50) or less in the presence of 0.06 to 0.26 parts by weight of neutral inorganic salt per 1 part by weight of gamma globulin. How to prepare the agent.