KR800001002B1 - 잠혈용시험편 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

잠혈용 시험핀

본 발명은 색원체, 하이드로퍼옥사이드 및 증감제로서 티아졸화합물을 함유하는 배설물 중의 잠혈 검출용 시험편에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 색원체, 하이드로퍼옥사이드 및 증감제로서 일반식

(식중, R₁은 알킬, 치환 또는 비치환아랄케닐, 또는 치환 또는 비치환아랄킬이고; R₂및 R₃는 각각 수소 또는 알킬이고; 그리고 R₂및 R₃가 인접 탄소원자에 서로 결합할 때에 벤젠환을 형성해도 좋다.)

으로 표시되는 티아졸화합물(I)을 함유하는 뇨 또는 분변과 같은 배설물 중의 잠혈검출용 시험편에 관한 것이다.

본 발명에 의한 시험편은 배설물(예, 뇨, 분변), 구토물, 위내용물, 또는 척수액 중의 잠혈을 검출하는데 사용될 수 있다. 상기한 바와 같은 출혈은 암, 궤양, 치질, 발진티푸스, 괴혈병, 자반병, 신장부전증, 방광결석, 신장결석 등에 의해 생김을 알 수 있다. 이와 같은 질환으로부터 생기는 출혈은 통상으로 경미한 양이므로, 육안으로 또는 현미경을 통해 시험될 수 없다.

본 발명의 시험편에 의해, 잠혈은 용이하게 그리고 신뢰성 있게 높은 감도로 검출될 수 있다. 그리하여, 본 발명의 시험편은 상기한 바와 같은 질환의 조기진단에 유용하다.

잠혈검출법의 원리 자체는 공지이며, 즉 혈중 헤모글로빈을 촉매로서 과산화물로 산화하여 발생하는 산소를 색 원체에 보내 이 색원체를 산화시켜 착색물로 얻고 이것이 잠혈의 존재를 나타내도록 하는 방법이다. 그러나, 이 원리를 직접 사용하여 제조한 시험편은 미량의 잠혈검출에 있어서 만족할만한 결과를 주지 못한다. 또한 이와 같이 제조한 시험편은 임상중 그의 안정성이 부족한 결점을 갖는다.

잠혈검출용 색원체에 첨가해서 증감제를 사용하는 시험편으로서, 퀴닌을 사용하는 시험편(일본국 특허 제478,815호) 및 페난트리딘을 사용하는 시험지(미국특허 제3,853,472호)가 알려져 있다. 그러나, 전자는 충분한 감도를 갖지 못하며, 후자는 증감제가 발암물질을 함유하는 결점을 갖는다.

잠혈을 신속하게 시험하기에 충분한 감도가 극히 중요하며, 그의 취급에 있어서 안전이 반드시 고려되어야 한다. 본 기술계에서 실제적인 임상시험결과, 잠혈을 검출하기 위한 감도에 있어서 1:200,000 이상으로 희석한 농도가 요구된다. 또한 사계의 내과의사들은 이와 같은 시험편에 있어서 과잉감도가 바람직하지 못하다는 것을 지적하였는데, 그 이유는 허위양성증색반응이 일어나기 때문이다.

종래의 기술외에, 최근에 피리딘유도체의 사용이 예를 들면 미국특허 제3,917,452호에 기재된 바와 같이 제안되었다. 비록 이 제안은 시험편이 1:1,000,000배로 희석한 잠혈을 검출할 수 있다고 하지만, 상업적으로 아직까지 개발되지 않고 있으며, 그리하여 진단감도의 증대에 있어서 실제적인 이점이 아직까지 이뤄지지 않고 있다.

본 발명자 등은 잠혈용시험편의 감도를 증대시키기 위해 장기간에 걸쳐 예의연구한 결과, 상기한 바와 같은 티아졸화합물(I)이 잠혈검출응용의 감도를 증대시키는 증감작용을 갖는 것을 발견하고, 본 발명을 완성했다.

그리하여, 본 발명의 주목적은 잠혈의 존재를 용이하게 그리고 신뢰성있게 검출하기 위한 시험편을 제공하는 것이다.

본 발명의 기타 목적은 배설물 또는 체액, 특히 뇨중의 잠혈을 검출하기 위한 간편하고도 신속하고 편리한 방법을 제공하는 것이다.

본 발명에 의해, 증감제로서 다음과 같은 일반식

(식중, R₁은 알킬, 치환 또는 비치환아랄케닐, 또는 치환 또는 비치환아랄킬이고; R₂및 R₃는 각각 수소 또는 알킬이고; 그리고 R₂및 R₃가 인접탄소원자에 결합할 때에 벤젠환을 형성해도 좋다.)

으로 표시되는 티아졸화합물(I)을 함유하는 잠혈검출용시험편이 제공된다.

티아졸화합물(I)에 있어서, R₁, R₂및 R₃용 알킬기로서 C_1-3알킬(예, 메틸, 에틸 또는 프로필)이 적합하다. 또한 R₁용 치환기로서 다음 식으로 나타낸 바와 같이 치환 또는 비치환아랄케닐(II)과 치환 또는 비치환 아랄킬이 적합하다.

및

[식중, n는 1 또는 2이고; R′는 수소, 할로겐(예, 옥소, 염소, 취소, 불소), C_1-3알킬(예, 메틸, 에틸, 프로필), 또는 C_1-3알콕시(예, 메톡시, 에톡시, 프로폭시)이다.]

일반식(I)의 범위내에 해당되는 티아졸화합물의 대표적인 예로서 2-스티릴-4-메틸-티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-티아졸, 2-(p-에톡시스티릴) 티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-4-메틸티아졸, 2-스티릴티아졸, 1-페닐-4-티아졸릴-(2)-부타디엔, 2-(p-메틸스티릴)-티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-벤조티아졸, 2-(p-스티릴)-벤조티아졸, 2-(p-클로로스티릴)-티아졸, 2-(p-브로모스티릴)-티아졸, 2-(p-플루오로스티릴)-티아졸, 2,4-디메틸-티아졸, 1-페닐-2-(2-티아졸) 에탄 등을 들 수 있다.

물론, 일반식(I)의 범위내에 해당하는 화합물이 모두 동일한 정도의 증감성을 갖지 않는다는 것은 명백하다. 그리하여, 실제적인 요구에 따라 시험편의 감도를 조정할 수 있다. 예를 들면, 증감성이증대된 시험편은 증감제로서 다음과 같은 화합물들을 일정한 순서로 사용함으로써 얻어진다 :

2-스티릴-4-메틸-티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-4-메틸티아졸＞2-스티릴티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-티아졸, 1-페닐-4-티아졸릴-(2)-부타디엔, 2-(p-메톡시스티릴)-벤조티아졸＞2,4-디메틸티아졸, 1-페닐-2-(2-티아졸)-에탄, 2-(p-클로로스티릴)-티아졸, (2-스티릴)-벤조티아졸.

본 발명의 시험편은 예를 들면 흡수성담체를 증색반응에 필요한 시약전체로 함침시켜 제조할 수 있다. 이 함침법은 2단계로 하는 것이 적합하다. 처음에, 흡수성담체를 하이드로퍼옥사이드, 유화제, 점착제, 완충제, 색도 및 하이드로퍼옥사이드의 안정제를 함유하는 유화액에 함침시킨다. 그 다음에 함침된 물질을 건조시키고, 증감제(I) 및 색원체의 용액으로 함침시킨다.

이와 같이 수득된 흡수성담체를 건조시켜 목적하는 시험편을 제조한다. 상기한 방법이 적합한 방법이긴 하지만, 함침법이 있어서 흡수성 담체를 함침시키는 순서는 중요하지 않으며 적당히 변경할 수 있다.

증감제(I)는 전기한 것중 어느 것이라도 사용될 수 있지만, 이 증감제는 사용한 색원체, 중량에 약 0.5~10배의 양으로 사용하는 것이 바람직하다.

흡수성담체의 예로 여과지, 이온-교환셀룰로오스지, 섬유류 및 이들과 동등한 흡수성을 갖는 것을 예시할 수 있다.

하이드로퍼옥사이드로서 예를 들면 큐멘하이드로퍼옥사이드, p-메탄하이드로퍼옥사이드, 테트랄린하이드로퍼옥사이드, 삼급-부틸하이드로퍼옥사이드, 2,5-디메틸헥산-2,5-디하이드로퍼옥사이드 및 디이소프로필-벤젠하이드로퍼옥사이드를 들 수가 있다. 그 외에도, 혈액의 존재하에 산소를 유리하고, 색원체를 산화시켜 검지할 수 있는 증색반응을 일으킬 수 있는 기타의 하이드로퍼옥사이드도 동일하게 사용할 수 있다. 이들의 하이드로퍼옥사이드는 혈액의 존재하에 색원체를 산화시켜 착색물질을 제조할 수 있는 양이면 충분하지만, 통상은 과잉량으로 사용된다.

유화제로서는 아라비아고무 및 폴리비닐알코올을 들 수 있으며, 이들은 통상으로 12.5~25%(W/V)의 농도로 사용된다. 또한 하이드로퍼옥사이드의 안정제로서 약 5%(W/V)의 소디움 라우릴설페이트가 적합하게 사용된다.

젤라틴은 사용된 하이드로퍼옥사이드의 마이크로캡슐화에 유효하다. 젤라틴은 약 10%(W/V) 농도로 사용하는 것이 적합하다.

완충제의 예로서 귤산염, 인산염, 프탈레이트옥살레이트, 탄산염 및 유기 또는 무기산-모르폴린(또는 그의 유도체, 예, N-에틸모르폴린)을 들 수 있다. 이들 완충제들은 함침용액의 PH를 5~7, 바람직하기로는 5~6으로 유지하는데 사용된다.

색원체로에, 디아미노디페닐유도체 중에서 벤지딘, O-톨리딘, m-톨리딘, 디아니시딘, 3,3′,5,5′-테트라메틸벤지딘 및 광산(예, 염산, 취화수소산, 질산 또는 황산)과의 염류를 예시할 수 있다. 여기에 첨가해서 그의 클로로포름추출물인 구아작크(guajac)가 또한 유용하다. 이들 중에서, O-톨리딘 또는 그의 N-알킬유도체가 실용면에서 특히 바람직하다. 증백반응을 용이하게 관찰할 수 있도록 배색용염료로서 타아트라진과 같은 색소를 부가할 수 있다. 함침용액 제조시에, 용매로서 물, 에탄올, 클로로포름 및 톨루엔이 사용된다.

본 발명에 의한 시험편은 1:5,00,000~1:1,000,000배로 희석한 농도의 혈액을 검출할 수 있다. 증감제를 전혀 함유하지 않는 시험편의 감도는 1:10,000~1:30,000배로 희석한 농도의 혈액만을 검출할 수 있다. 그리하여, 저감도를 갖는 시험편은 임상시험에 사용될 수 없다. 본 발명의 시험편은 배설물 또는 체액, 특히 뇨중의 잠혈을 측정할 수 있다.

본 발명의 개념은 조성물과 시험편에 사용될 수 있다. 이 조성물은 제약분야에 적합한 상용법으로 제제할 수 있다. 그러나, 이들의 안정성 및 취급면에서, 이 조성물은 시험편형으로 사용하는 것이 바람직하다.

티아졸화합물(I)은 다음 식으로 제조할 수 있다.

(식중, R₂, R₃및 R′는 각각 전기한 것과 동일한 의미를 갖는다.)

즉, 화합물(I)은 상응하는 2-메틸티아졸을 루이스산(예, 염화아연) 존재하에 가열시키면서 상응하는 알데히드와 반응시켜 제조할 수 있다.

다음에 기술하는 실시예들은 본 발명의 태양을 구체적으로 설명하는 것이며, 본 발명의 범위는 이 실시예들에 의해 제한되는 것은 아니다.

[실시예 1]

여과지(도요여과지 제131호)를 다음과 같은 성분들을 함유하는 유화액으로 합침시켰다 :

[제1용액]

25%(W/V) 아라비아고무 10㎖

5%(W/V) 소디움라우릴설페이트 2㎖

큐멘하이드로퍼옥사이드 1㎖

10%(W/V) 젤라틴-0.2M 귤산염완충제(pH5.0) 5㎖

1%(W/V) 타아트라진/에탄올수용액 0.5㎖

2M 귤산-N-에틸모르폴린(pH5.5) 20㎖

여과지를 이 용액으로부터 꺼내서 60~80℃에서 5~10시간동안 건조시켰다. 그 다음에, 이 여과지를 다음과 같은 성분들을 함유하는 제2용액으로 합침시켰다 :

[제2용액]

0-톨리딘 50㎎

2-스티릴-4-메틸티아졸 50㎎

클로로포름 10㎖

여과지를 꺼내서 30분 동안 암소에서 감압하여 건조시켰다. 그 다음에, 이 여과지를 적당한 크기로 절단하여 폴리비닐클로라이드시이트상에 부착시켜 편리하게 사용할 수 있다. 인체의 혈액과 쥐의 혈액을 사용한 예비증색반응에 있어서 차이는 없었으므로, 쥐의 혈액을 사용하여 시험증색 반응을 행했다. 혈액을 물로 100배까지 희석한 다음에 정상인뇨로 희석했다. 본 발명의 시험편을 여러가지 희석농도의 혈액시료에 침지했을 때에, 증색반응은 약간 약하지만 1:1,000,000배의 희석혈액을 검출할 수 있다. 함침시킨 후, 30초동안 판정했다. 본 발명의 시험편(황색)은 혈액의 희석농도에 따라 녹황색~녹색~암청색으로 변색했다.

상기에서 수득한 시험편은 잠혈에 대해 양호한 결과를 나타내며, 그 시험결과를 다음 표에 나타냈으며, 여기에서 랩스틱스(Labstix)는 비교용으로 사용했다. 랩스틱스는 상업용 참혈검출용 시험편이며, 큐멘하이드로퍼옥사이드, 0-톨리딘 및 귤산염완충제를 사용한다.

[표 1]

주 : H-L/S^*는 각각 색조-명도/포화를 나타내고, 증색반응은 스탠다드칼러칩[JIS(Japanese Industrial Standard) Z 8721-1964]으로 표현했다. 랩스틱스의 증색반응은 다음과 같은 스탠다드 칼러칩의 용어로 표현했는데; 즉 - : 음성반응, ± : 극히 약한 반응, +,

: 양성증색반응. 이 증색반응은 시험편을 시료로 함침시킨 후 30초동안 판정했다. Y=황색, GY=녹황색, G=녹색, BG=청녹색, B=청색.

상기의 표로 부터 명백한 바와 같이, 본 발명의 시험편은 1:400,000배로 희석시킨 뇨중 감혈을 용이하게 검출할 수 있다. 본 발명의 시험편에 의해 1:1,000,000배로 희석한 혈액을 검출할 수 있으나 색도는 약간 약하다.

그러나, 1:400,000배로 희석한 혈액의 검출이 임상용으로 충분하다.

여러가지의 조건하에서 임상중 여러가지의 증감제를 함유하는 시험편의 감도 및 안정도를 시험하여, 그 결과를 다음 표에 나타냈다.

[표 2]

주 : 모든 기호는 각각 표 1에서 정의한 것과 동일한 의미를 갖는다. *, ** : 이들 증감제를 함유하는 시험편은 실시예 2에서 기술한 방법에 의해 제조했다.

상기의 표로부터, 본 발명의 티아졸화합물을 함유하는 시험편이 4℃에서 1개월간 보관중 양호한 안정성을 갖는 것이 명백하다. 특히, 2-(스티릴)-4-메틸티아졸을 함유하는 시험편은 양호한 안정성을 갖는다. 그러나, 본 발명의 시험편의 안정성은 이것을 실온에서 보관할 때에 약간 저하된다.

여러가지의 색원체를 함유하는 시험편의 안정도시험을 행하여 그 결과를 다음 표에 나타냈다.

[표 3]

주 : *, ** : 제조 I은 색원체로서 0-톨리딘을 함유하고, 제조 II는 3,5,3′,5′-데트라메틸벤지딘을 함유한다. 제II조는 전기한 것과 동일한 방법으로 얻는다.

환자의 잠혈을 용혈혈액과 무병의 비-용혈 혈액을 함유하지만, 뇨중에서 이들 양자의 비율은 일정하지 않다. 일반적으로 뇨시료중의 용혈혈액의 비율은 시간이 경과함에 따라 증가한다. 그러므로 뇨시료양자를 사용하여 증색반응을 시험하는 것이 의미있다. 시험 결과를 다음 표에 나타냈다.

[표 4]

주 : I : 증류수로 희석(용혈혈액)

II : 등장용액으로 희석(무병혈액)

III : 1:100배의 물로 희석한 다음 또 뇨로 희석(용혈혈액)

IV : 뇨로 희석(무병혈액)

쥐의 혈액을 등장용액으로 세척하여 적혈구 현퀴액을 제조했다. 증색반응은 실시예 1에서 수득한 시험편을 함침시킨 후 30 또는 60초동안 판정했다.

상기의 표로부터 본 발명의 시험편이 뇨중의 용혈혈액에 대해서 비-용혈혈액보다 감도성이 높음을 알 수 있다.

[실시예 2]

실시예 1의 2-스티릴-4-메틸티아졸의 대체물로서, 2-(p-메톡시스티릴)-티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-4-메틸티아졸, 2-스티릴티아졸, 1-페닐-4-티아졸릴-(2)-부타디엔, 2-(p-메틸스티릴)-티아졸, 2-(p-메톡시스티릴)-벤조티아졸, 2-(스티릴)-벤조티아졸, 2-(p-클로로스티릴)-티아졸, 2,4-디메틸티아졸 또는 1-페닐-2-(2-티아졸) 에탄을 사용했다.

실시예 1에 기술한 것들과 유사한 과정을 반복하여 시험편을 제조한 결과, 이들은 실시예 1에서 수득한 것과 동일한 증색반응을 나타냈다.

[실시예 13]

디에티아미노 에틸셀룰로오스지(DE-81, 화트만회사(whatman Co.의 제품)를 다음과 같은 용액(제1용액)에 침지하였다 :

[제1용액]

10%( w/y) 폴리비닐알코올 500 10㎖

5%(w/v) 소디움라우릴설페이트 4㎖

큐멘하이드로퍼옥사이드 3㎖

10% 알부민-0.2 귤산염완충제(pH5.0) 10㎖

1%(w/v) 타아트라진-에탄올 수용액 0.5㎖

2M 귤산-모르폴린혼합물(pH5.5) 20㎖

함침지를 꺼내서 60~80℃에서 5~10시간 동안 건조시키고, 다음과 같은 제2용액에 함침시켰다 :

[제2용액]

0-톨리딘 100㎎

2-(p-메톡시스티릴)-티아졸 50㎎

톨루엔 10㎖

함침지를 꺼내서 암소에서 30분동안 감압하에 건조시켜 목적하는 시험편을 제조했다. 이 시험편은 뇨중 혈액시험에 대해서 실시예 1의 시험편과 동일한 감도를 나타냈다.

귤산-N-에틸모르폴린을 귤산-모르폴린으로 변경하고 0-톨리딘의 양을 실시예 1에서와 같이 100㎎으로 증량하여, 동일한 과정을 행하여 높은 감도를 갖는 시험편을 얻었다.

Claims (1)

1. 배설물 또는 체액중의 잠혈을 검출하기 위한 시험편에 있어서, 색원체, 하이드로퍼옥사이드 및 증감제로서 일반식,

   

   (식중, R₁은 저급알킬, 치환 또는 비치환아랄케닐, 또는 치환 또는 비치환아랄킬이고, R₂및 R₃는 각각 수소 또는 저급알킬이고, 그리고 R₂및 R₃가 인접탄소원자에 서로 결합할 때에 벤젠환을 형성해도 좋음.) 으로 표시되는 티아졸 화합물(I)로 함침시킨 다공정 또는 흡습성 흡수담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 잠혈용 시험편.