KR800000966B1 - Process for preparation of 31559 rp antibiotic - Google Patents

Abstract

Title compd. and its salts, effective against coccidia and bacteria, were prepd. by fermentation. Thus, streptomyces hygroscopicus DS24367 was grown in a medium contg. sol. distillates, bean oil, glycerin, glucose monohydrate, NaCl, CoCl36H2O and tap water. The fermn. brew was filtered, extd. with CH2Cl2 and concd. under reduced press. For purifn. hexan was slowly poured into the CH2Cl2 conc. at roon temp. and filtrate. The filtrsate was concd under reduced press., stirred for 2 hr at 0≰C and held at 4≰C for 24 hr for crystallization. The final products were obtained by purifying with active carbon.

Description

항생물질 31559 RP의 제조방법Method for preparing antibiotic 31559 RP

도면은 본 발명의 항생물질의 적외선 스펙트럼을 찍은 그라프.Figure is a graph of the infrared spectrum of the antibiotic of the present invention.

본 발명은 항생물질 및 이들을 함유하는 조성물의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to methods for preparing antibiotics and compositions containing them.

본 발명은 항-코디시아 활성과 항-박테리아 활성에 유용한 신규 항생물질인 31559RP와 그의 금속염 및 질소함유 염기성염을 제공한다. 본 발명의 화합물은 또한 반추동물의 성장인자와 돼지의 세균성 적리증의 억제제로서도 유용하다.The present invention provides a novel antibiotic 31559RP and its metal salts and nitrogen-containing basic salts which are useful for anti-cordicia activity and anti-bacterial activity. The compounds of the invention are also useful as inhibitors of growth factors in ruminants and bacterial etiosis in pigs.

본 발명의 31559RP는 스트렙토마이세스속(屬)에 속하는 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24367(NRRL5787)로 불리우는 신규한 미생물을 배양하여 얻을 수 있다.The 31559RP of the present invention can be obtained by culturing a novel microorganism called Streptomyces hygroscopic picose DS 24367 (NRRL5787) belonging to the genus Streptomyces.

본 발명의 31559RP는 탄소, 수소 및 산소를 함유하며 그의 소다움염의 원소조성은 C=63.2%, H=8.8%, O=24.3% Na=2.9%이다.31559RP of the present invention contains carbon, hydrogen and oxygen, and the elemental composition of the soda salt thereof is C = 63.2%, H = 8.8%, O = 24.3% Na = 2.9%.

본 발명의 항생물질의 중화당량은 빙초산내에서 과염소산으로 소디움염을 적정하여 측정하여 836이다. 원소분석과 양자의 탄소 13c의 NMR스펙트라로부터, 본 발명의 31559R.P의 소디움염의 실험식은 C₄₄H_73-75O₁₄Na로 판명되었다. 더우기 양자와 탄소 13c의 NMR스펙트라는 그의 분자내에 4개의 메톡시기의 존재를 나타내고 있다.The neutralization equivalent of the antibiotic of the present invention is 836 by titration of sodium salt with perchloric acid in glacial acetic acid. From the elemental analysis and the NMR spectra of both carbon 13c, the empirical formula of the sodium salt of 31559R.P of the present invention was found to be C ₄₄ H _73-75 O ₁₄ Na. Furthermore, the NMR spectra of both protons and carbon 13c indicate the presence of four methoxy groups in their molecules.

본 발명의 31,559RP의 소디움염은 하기의 성질을 갖고 있다.The sodium salt of 31,559RP of the present invention has the following properties.

형태 : 결정형 백색분말Form: Crystalline White Powder

용해도 : 수불용성이며, 헥산과 같은 탄화수소용제에 특히 잘녹고 메탄올과 같은 알콜류, 아세톤과 같은 케톤류 디메틸포름아미드 및 에틸아세테이트에 용해되며 메틸렌크로라이드와 크로로포름과 같은 염소화된 용제류에 용이하게 용해됨.Solubility: Water insoluble, especially soluble in hydrocarbon solvents such as hexane, soluble in alcohols such as methanol, ketones such as acetone, dimethylformamide and ethyl acetate, and easily soluble in chlorinated solvents such as methylene chloride and chloroform. being.

융점 : 220℃(분해온도)Melting Point: 220 ℃ (Decomposition Temperature)

선광도(C=1.050메탄올 내에서) :Beneficiation (in C = 1.050 methanol):

임.

being.

자외선 스펙트럼 : 210㎜까지 흡수특성을 나타내지 않음(에탄올 내에서 0.950㎎/㏄의 용액농도에서 측정한 것임)Ultraviolet spectrum: Absorption characteristic up to 210 mm (measured at a solution concentration of 0.950 mg / dl in ethanol)

적외선 스펙트럼 : 포타시움 브로마이드와 혼합하여 만든 정제(錠製)로 측정한 것으로서 그 결과는 도면과 같음(단, 파장은 미크론의 단위로 그라프의 상부 눈금이 표시되어 있고, 파수는 ㎝^-1의 단위로 그라프의 하부 눈금에 횡좌표로 표시되어 있으며 광학농도는 종좌표로 표시되어 있다.Infrared spectra: Measured with tablets made by mixing with potassium potassium bromide, the results are as shown in the figure (However, the wavelength is indicated in microns and the upper scale of the graph is indicated, and the wave number is in cm- ¹ . The lower scale of the graph is indicated by the abscissa and the optical density is indicated by the ordinate.

본 발명의 생성물의 적외선 흡수의 주요밴드를 주파수(㎝^-1)로 표시하여 하기표 1에 나타내었다.The main band of the infrared absorption of the product of the present invention is shown in Table 1 by the frequency (cm ^-1 ).

[표 1]TABLE 1

단,only,

31,559RP의 소디움염은 두개의 용제시스템을 사용한 실리카겔의 박층크로마토그라피의 상승 곡선으로 특성을 표시할 수도 있다.Sodium salt of 31,559 RP may be characterized by an upward curve of thin layer chromatography of silica gel using two solvent systems.

1) 에틸아세테이트, 싸이클로헥산, 물 및 부타놀(50-50-25-5용적비) : 본 시스템에서의 31,559RP의 소디움염의 Rf는 0.5임.1) Ethyl acetate, cyclohexane, water and butanol (50-50-25-5 volume ratio): The Rf of the sodium salt of 31,559RP in this system is 0.5.

2) 메틸렌크로라이드와 메탄올(94-6용적비) : 본 시스템에서의 31,559RP의 소디움염의 Rf는 0.7임. 항생제 31,559RP의 소디움염의 구조식을 표시하면 다음과 같다2) Methylene chloride and methanol (94-6 volume ratio): The Rf of the sodium salt of 31,559RP in this system is 0.7. The structural formula of the sodium salt of antibiotic 31,559RP is as follows.

[생체외에서의 제균(制菌)활성][Ebacterial Activity in Vitro]

31,559RP는 혹종(或種)의 그람-양성 박테리아에 대하여 특별한 제균활성을 나타낸다.31,559RP has a particular bactericidal activity against some Gram-positive bacteria.

31,559RP의 소디움염의 혹종의 미생물에 대한 제균성은 이들 목적에 통상으로 사용되는 희석법의 하나에 의하여 측정된다. 각계의 미생물에 대하여 제한된 조건하에서 가시적(可視的)인 발육을 방해하는 작용물질의 최저농도를 측정하고, 이들의 측정결과를 하기표 II에 나타내었다.The bactericidal activity of the sodium salt of 31,559 RP against some microorganisms is measured by one of the dilution methods commonly used for these purposes. The minimum concentrations of agonists that interfere with the visible growth of the microorganisms under various conditions were measured, and their measurement results are shown in Table II below.

표 II에서 최소한의 제균농도를 시험배지 1㏄당 작용물질의 미생물로 나타내었다.In Table II, the minimum bactericidal concentrations are shown as microorganisms of agonists per test medium.

[표 II]TABLE II

[독성][toxicity]

병아리에게 1회 복용시켜서되는 31,559RP의 소디움 염의 50%치사량(LD₅₀)은 150㎎/㎏이다.The 50% lethal dose (LD ₅₀ ) of 31,559 RP of sodium salt in a single dose of chick is 150 mg / kg.

[항코디시아 활성][Anticodicia activity]

에이메리아 테넬라 또는 에이메리아 아세부리나에 감염된 병아리에서 31,559RP의 소디움염의 항코디시아활성을 측정 하였다. 31,559RP의 실질적인 항코디시아 활성은 31,559RP의 소디움염을 사료에 대해 0.0005-0.04 wt%의 비독성 농도로 사료에 배합하였을때에 나타난다.Anticodicia activity of 31,559 RP sodium salt was measured in chicks infected with either Emerian Tenella or Emeria aseburina. Substantial anticordician activity of 31,559RP is obtained when 31,559RP of sodium salt is formulated into the feed at a nontoxic concentration of 0.0005-0.04 wt% relative to the feed.

31,559RP를 생성하는 미생물은 인도의 토양에서 채취한 샘플로부터 분리한 스트렙토마이세스 균주인데 이것은 넘버 DS 24367로 주워졌다. 이것의 샘플은 미국 일리노이스, 페오리아에 있는 농무성소속의 노던리조날 리서치 래보래이토리에 NRRL 5787로 등록되었다.The microorganism producing 31,559 RP is a Streptomyces strain isolated from a sample taken from soil in India, which was given number DS 24367. A sample of this was registered as NRRL 5787 in the Northern Research Research Laboratories of USDA in Peoria, Illinois, USA.

상기의 균주는 소량의 토양을 멸균 증류수에 현탁시키고 이것은 각종 농도로 희석한후 영양 한천배지를 함유한 페트리 접시 표면에 각개의 희석 액을 소량씩 분무하는 일반적인 방법에 의하여 단리한다.The strain is suspended in a small amount of soil in sterile distilled water, which is diluted by various concentrations and isolated by a general method of spraying a small amount of each diluent on the surface of the petri dish containing nutrient agar medium.

25℃에서 수일간 배양한후 미생물을 발육시키고, 세균집락(集落)을 조사하기 위하여 이들을 분리하고, 이들이 충분히 배양되도록 사면영양 한천상에 이식시켰다.After culturing for several days at 25 ° C., the microorganisms were grown, these were isolated to examine bacterial colonies, and transplanted onto a tetratrophic agar so that they were sufficiently cultured.

스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 균종에 속하는 스트렙토마이세스 균주 DS 24367의 본질적인 특성은 H, D 트래스너와 E, J 백커스 저 응용미생물학 4,243-250, 1956 및 S, A 웨이크스만 저방선균류 II 1961, 230-231면에 의하여 정의되었고, 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 균주 DS 24367로 명명되었다.Intrinsic properties of the Streptomyces strain DS 24367 belonging to the Streptomyces hygroscopicus strain are characterized by H, D Trasner and E, J Backcus Low Applied Microbiology 4,243-250, 1956 and S, A Wakesman Low Actinomycetes II 1961 , P. 230-231, and was designated Streptomyces hygroscopicus strain DS 24367.

H. D 트래스너와 E. J 백커스 및 S.A 웨이크스만에 의하여 균종 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스로 정의된 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24367은 다음에 해당되는 3개의 특성을 갖고 있다.The Streptomyces hygroscophysics DS 24367, defined as the strain Streptomyces hygroscophytes by H. D. Trasner, E. J. Backcus and S.A Wakeman, has three characteristics:

ㄱ) 이들의 포자체의 첨단은 수회의 나선체를 함유하는 단단한 나선형이고, 이들의 나선형 포자체는 좀 더 많거나 적은 집락을 형성할 수 있도록 필라멘트를 따라 집속되어 있다.A) The tips of their spores are solid spirals containing several helices, whose spiral spores are concentrated along the filaments to form more or fewer colonies.

ㄴ) 이것의 포자형성 기중(氣中)균사체가 발육의 양호단계에 다달으면 이것은 균종 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스의 독특한 암회색으로 보인다.B) When its spore-forming aerial mycelium reaches the developmental stage of development, it appears to be a unique dark gray color of the strain Streptomyces hygroscopyus.

ㄷ) 어떤 배지는 기중 균사체의 양호한 발육을 나타내는 습한 외관을 가진 흑색영역에 시간이 경과 함에 따라 포자형성 표면에 나타난다.C) Some media appear on the spore-forming surface over time in a black area with a wet appearance that shows good development of airborne mycelium.

스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24367의 경우 기중균사체의 형성은 자주 일어나지만 어떤 배지상에서는 전혀 일어나지 않는다. 회색 포자형성 기중 균사체가 나타나면 시간이 경과함에 따라 흑색 영역이 형성되고 이것이 발생하면 이것은 각양 각색의 형태를 가지며 이것은 기중균사체의 전체에 걸쳐 일어나는 것이 아니라 국부적으로 협소한 지역에서 일어난다. 이것은 프리담 이스트 추출 한천, 프리담귀리와 토마토 교질 한천 및 글루코즈-아스파라진 한천 상에서 특히 현저하다.In the case of Streptomyces hygroscopyus DS 24367, the formation of airborne mycelium occurs frequently but not on any medium. When the gray spore forming aerial mycelium appears, a black region is formed over time, and when it occurs, it has a variety of forms, and it occurs in a local narrow area rather than the whole of the aerial mycelium. This is particularly noticeable on Freedham East Extract Agar, Freetham Oat and Tomato Colloidal Agar, and on Glucose-asparagine Agar.

S.A 웨이크만에 의하여 저술된 몇몇 배지상에서의 형태학적 외관을 기속한 ''방선균류''에 기술된 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스의 균주는 균주 DS 24,367와 비교하여 볼때 근소한 차이가 있다.The strains of Streptomyces hygroscophytes described in `` Radiation Fungi '', which bound the morphological appearance on some mediums authored by S.A Wakeman, differed slightly compared to strain DS 24,367.

즉 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스의 균주는 슈크로즈 함유질산염 한천과 영양 천상에서 기중 균사체를 형성하지만 균주 24,367은 이두 배지상이서 어떠한 기중 균사체도 형성하지 않는다. 더우기 탄소원으로서 슈크로즈를 함유하는 배지 상에서 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스는 질산염을 감소시키지 않으나 동일 조건하에서 균주 DS 24,367은 질산염이 다량으로 감소하여 아질산염으로 변한다. 그렇지만, 이러한 근소한 차이점은 균주 DS 24,367과 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 균종을 구별하는데 충분하지 못하다. 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24,367은 첨단에 제한된 수의 선회 즉 3 또는 4의 선회를 갖인 단단한 나선을 갖인 포자 사슬을 형성하여, 경우에 따라서는 이보다 더 많은 수의 선회를 함유하거나 완전한 선회를 형성하지 않고 단순히 말려있는 소수의 포자 사슬이나 이보다 많거나 적은 수의 풀려있는 나선이 관측 되기도 한다. 포자발생기에는 집락조직, 나선형포자가 함유되어 있으며, 이들은 기본 필라멘트를 따라 삽입된 소수의 분지를 갖고 있으며 이들 분지의 길이는 아주 일정하다. 포자는 난형내지 원주형으로 0.8-1.0μ/0.6-0.8μ이다. 베네트 한천과 프리담 귀리-토마토 한천상에서의 포자발생기의 조직화는 현미경으로 관찰하면 동일한 결과를 나타낸다. 포자형성법에 의하여 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24,367은 프리담 분류의 스피라섹숀에 속한다.In other words, strains of Streptomyces hygroscophycus form aerial mycelium on sucrose-containing nitrate agar and nutrient agar, but strain 24,367 is biphasic and does not form any aerial mycelium. Moreover, on medium containing sucrose as a carbon source, Streptomyces hygroscopycus does not reduce nitrate, but under the same conditions strain DS 24,367 turns to nitrite with a large decrease in nitrate. However, these minor differences are not sufficient to distinguish between strains DS 24,367 and Streptomyces hygroscopicus species. Streptomyces hygroscopic picospheres DS 24,367 form spore chains with rigid helix with a limited number of turns at the tip, i.e. 3 or 4 turns, which in some cases may contain more or more turns. A few spore chains that are not formed but simply curled up, or more or fewer loose spirals, are observed. The spore generator contains colony tissue and spiral spores, which have a small number of branches inserted along the basic filament, and the length of these branches is very constant. Spores are ovoid to columnar, 0.8-1.0μ / 0.6-0.8μ. The organization of spore generators on Bennett agar and Freedam oat-tomato agar showed the same results when viewed under a microscope. By the sporulation method, Streptomyces hygroscopic picose DS 24,367 belongs to the spiraxanthone of the Freedam classification.

스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24,367은 25℃에서는 매우 잘 발육되고 37℃에서는 보통으로 발육되고 50℃에서는 발육되지 않는다. 이것을 25℃에서 배양하면 하기와 같은 생화학적 성질을 갖는다.Streptomyces hygroscopic picose DS 24,367 develops very well at 25 ° C., moderately at 37 ° C. and not at 50 ° C. When cultured at 25 ℃ it has the following biochemical properties.

멜라닌의 생성 : 음성Production of melanin: negative

유화수소의 생성 : 음성Generation of hydrogen sulfide: negative

타이로시나제 : 음성Tyrosinase: Voice

젤라틴의 액화 : 양성Liquefaction of gelatin: positive

셀룰로즈의 이용 : 양성Use of cellulose: positive

질산염으로부터 아질산염의 생성 : 현저한 양성Production of nitrite from nitrates: marked positive

전분의 가수분해 : 양성Hydrolysis of Starch: Positive

밀크상의 배양 : 응고하지 않고 펩톤화함.Culture on milk: peptonized without coagulation.

1개월동안에 pH는 약간변함PH changes slightly during 1 month

스트렙토 마이세스 하이그로스코피커스 DS 24,367의 배양특성을 하기표에 나타내었다.The culture characteristics of Streptococcus hygroscopicus DS 24,367 are shown in the table below.

이들은 양호한 단계의 발육과정에 도달 하였을 때 즉, 별다른 언급이 없는 한 25℃에서 2-3주 경과 하였을 때의 배양상태를 나타낸 것이다. 이들의 특성은 스트렙토마이세스의 형태학적 특성을 결정하는데 사용하는 영양 한천과 고기즙 상에서 관찰된 것이며 한천 배양은 사면 한천상에서 수행된 것이다. 사용된 배양액중의 어떤 것은 ''방선균류''(S. A 웨이크스만, 페이지 193-197, 크로니카 보타니카 캄파니, 왈람, 매스, 미국, 1950):에수록된 처방에 따라 제조한 것으로서 이것을 상기 문헌에 주워진 숫자를 따라 문자 W로 표시하였다. 그외의 배양액 또는 그들의 구성요소의 참고 기호는 다음과 같다.These show the cultures when they have reached a good stage of development, ie 2-3 weeks at 25 ° C unless otherwise noted. Their properties were observed on nutrient agar and meat juice used to determine the morphological characteristics of Streptomyces and agar cultures were performed on sloped agar. Some of the cultures used were prepared according to the prescriptions listed in `` Radiation Fungi '' (S. A. Wakesman, pages 193-197, Chronica Botanica Campani, Wallam, Mass, USA, 1950). This is indicated by the letter W along the numbers given in this document. Reference symbols of other cultures or their components are as follows.

A-''베네트씨 한천''-S.A. 웨이크만-방선균류-제2권-331페이지-30호-윌리암스 앤드 윌킨스 컴파니, 발티모어 1961A-'' Bennet's agar ''-S.A. Wakeman-Actinomycetes-Volume 2-Page 331-30-Williams & Wilkins Company, Baltimore 1961

B-''히케이 및 트레스너씨 한천-TG.프리담 및 공동연구자 항생제 연감, 1956-1957, 950페이지B-'' Hike and Tresner Agar-TG.Freedam and Co-Investigators Antibiotic Yearbook, pp. 1956-1957, 950

C-처방 W-23,에 2%의 한천을 첨가 하였다.To C-prescription W-23, 2% agar was added.

D-''이이스트 추출 한천''-T.G프리담 및 공동연구자 항생제 연감 1956-1957, 950페이지D-'' Yeast Extract Agar ''-T.G Freedam and Co-Investigators Antibiotic Yearbook 1956-1957, p. 950

F-''멜라닌 형성 배지''-S.A웨이크만-방선균류, 제2권, 333페이지, -42호-윌리암스 앤드 윌킨스 컴파니, 발티모어, 1961F-'' Melanin Formation Medium ''-S.A Wakeman-Radiant Fungi, Vol. 2, p. 333, -42-Williams & Wilkins Company, Baltimore, 1961

G-W. E 그룬디 및 공동연구자, 항생제 및 화학, 2,401, 1952,G-W. E Grundi and Collaborators, Antibiotics and Chemistry, 2,401, 1952,

H-''무기염류 전분 한천''-T. G프리담 및 공동연구자, 항생제연감, 1956-1957, 951페이지H-'' Inorganic Salt Starch Agar ''-T. G Freedam and Co-Investigators, Antibiotic Yearbook, 1956-1957, pages 951

I-처방 W-1에 해당하는 것으로서 30g의 수크로즈를 15g의 글루코즈로 대치 하였음30g sucrose was replaced by 15g glucose, corresponding to I-prescription W-1

J-처방 W-1에 해당하는 것으로서 30g의 수크로즈를 15g의 글리세린으로 대치하였음Equivalent to J-prescription W-1, 30 g sucrose was replaced with 15 g glycerin

K-처방 W-18에 해당하는 것으로서 30g 수크로즈를 15g의 글루코즈로 대치하였음30 g sucrose was replaced with 15 g of glucose, corresponding to K-prescription W-18

L-처방 W-18에 해당하는 것으로서 수크로즈를 제거하고 용액에 부분 함침 시킨 여과지의 세편을 넣었다.Sucrose was removed as corresponding to L-prescription W-18 and three pieces of filter paper partially impregnated with the solution were added.

M-''박테리아의 순수배양 연구 편람'' 미국 박테리아 협회-제네바, N.Y., II₅₀-18M-'' Manual of Pure Culture Research in Bacteria '' American Bacterial Association-Geneva, NY, II ₅₀ -18

N-''플레인 젤라틴''-박테리아의 순수 배양 연구 편람에 따라 제조하였음-미국 박테리아 협회, 제네바, N.Y., II₅₀-18N- '' plain gelatin '- hayeoteum prepared according to the study of pure cultures of bacteria Handbook - American Association of bacteria, Geneva, NY, II ₅₀ -18

P-상업적으로 사용되는 유피제거 우유분말을 제조자의 지시에 따라 제조제 한것임.P-derived milk powder prepared commercially according to manufacturer's instructions.

Q-H,D, 트레스너 및 F. 단가에 의하여 시험배지를 유화수소 발생배지를 전환 시킨것임-박테리아 학회 잡지. 76, 239-244, 1958.Q-H, D, Tressner and F. Units converted test medium to hydrogenated medium-Bacterial Society magazine. 76, 239-244, 1958.

상기표에서, 발육정도는 매우양호, 양호, 약간 양호, 알맞음, 아주 알맞음, 불량, 매우불량, 무의 순으로 분류하였다. 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS24,367가 그 발육을 위해 각종의 탄소와 질소원을 이용할 수 있는 능력을 프리담 및 고틀리브법(항생제잡지, 56, 107-114, 1948)에 의하여 측정하였다. 각종 시험 탄소원의 하나를 글루코즈로 또는 각종 시험 질소원의 하나를 황산암모늄으로 대치하고 25℃에서 적당한 기간동안 배양한후 저자에 의해 표시된 기본 배지상에서 발육정도를 관찰하여 그 결과를 하기표에 나타내었다.In the table, the degree of development was classified in the order of very good, good, slightly good, moderate, very moderate, poor, very poor, nothing. The ability of Streptomyces hygroscopic picosphere DS24,367 to utilize various carbon and nitrogen sources for its development was measured by the Freedam and Gotliv method (Antibiotics Magazine, 56, 107-114, 1948). One of the various test carbon sources was replaced with glucose or one of the various test nitrogen sources with ammonium sulfate and incubated at 25 ° C. for a suitable period, and the degree of development was observed on the basic medium indicated by the authors and the results are shown in the following table.

본 발명에 의하면 31,559RP는 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24,367이나 또는 돌연변이체(31,559) RP를 생성할 수 있는 돌연변이체)를 배지내에서 호기성으로 배양하고, 배양시에 형성된 31,559 RP를 그 자체나 그의 염의 형태로 단리함으로서 제조할 수 있다.According to the present invention, 31,559 RP is an aerobic incubation of Streptomyces hygroscopic picose DS 24,367 or a mutant (31,559) RP) in the medium, and the 31,559 RP formed during the culture itself It can be prepared by isolating in the form of a salt thereof.

스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS24,367의 배양은 호기성 표면 배양이나 함침배양의 모든 방법으로 수행할수 있지만 함침배양이 편리하기 때문에 바람직하다. 이러한 목적으로, 발효공업에서 보통 사용하는 각종 형태의 배양기를 사용할 수 있다.Incubation of Streptomyces hygroscopic picose DS24,367 can be performed by any method of aerobic surface culture or impregnation culture, but is preferable because of the convenience of impregnation culture. For this purpose, various types of incubators commonly used in the fermentation industry can be used.

특히, 하기의 순서로 배양을 진행시키는 것이 좋다.In particular, it is good to advance the culture in the following order.

발효 매질은 반드시 동화성 탄소원과 동화성 질소원, 무기원소, 특히 염화물 및 적당한 성장인자를 함유하여야 하며, 이들 물질은 잘 알려진 생성물이나 각종 생물학적인 복합제제 형태로 도입시킬 수 있다.Fermentation media must contain anabolic carbon sources, anabolic nitrogen sources, inorganic elements, in particular chlorides and suitable growth factors, which can be introduced in the form of well-known products or in various biological co-formulations.

적당한 동화성 탄소원은 글루코즈, 덱스트린, 전분과 같은 탄수화물, 당알콜과 같은 그 외의 탄수화물(글리세린포함) 및 젖산이나 구연산과 같은 혹종의 유기산류이다.Suitable assimilar carbon sources are glucose, dextrins, carbohydrates such as starch, other carbohydrates such as sugar alcohols (including glycerin) and some organic acids such as lactic acid or citric acid.

돈유나 콩기름과 같은 혹종의 식물성유나 동물성유를 각종의 탄수화물원과 대치시킬 수도 있고 이들에 첨가할 수도 있다.Some vegetable or animal oils, such as pig oil and soybean oil, may be substituted for or added to various carbohydrate sources.

적당한 동화성 질소원은 매우 광범위하다. 이들은 아주 간단한 화학물질 즉 무기나 유기암모늄염, 뇨소 및 혹종의 아미노산류이다. 질소는 주로 단백질의 형태로 질소를 함유하는 복합물질 즉, 카제인, 락트알브민, 글루텐, 및 그들의 가수분해 생성물, 콩가루, 땅콩가루, 어분(魚粉), 고기추출물, 이이스트 추출물 용해성 종류물 및 옥수수 스팁의 형태로 도입시킬 수가 있다.Suitable sources of assimilation nitrogen are very wide. These are very simple chemicals-inorganic or organoammonium salts, urine and other amino acids. Nitrogen is primarily a complex of nitrogen-containing compounds in the form of proteins, namely casein, lact Almin, gluten, and their hydrolysates, soy flour, peanut flour, fish meal, meat extracts, yeast extract soluble varieties and corn. Can be introduced in the form of a tip.

첨가되는 무기원소 중에는 알카리금속이나 알카리토금속 인산염 또는 칼슘이나 마그네슘 탄산염과 같이 완충작용이나 중화작용을 하는 수도 있다. 그외의 알카리 첨금속과 알카리토금속의 염화물과 황화물과 같은 첨가물은 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS24,367의 발육과 31,559RP의 생성에 필요한 이온 평형을 제공한다. 마지막으로, 어떤 것은 스트렙토 마이세스 하이그로스코피커스 DS24,367의 대사반응의 활성화제 역할을 하는데 이러한 예로는 아연, 코발트, 철, 동 및 마그네슘염이 있다. 적당한 성장인자는 리보훌라빈, 염산(folic acid) 및 판토텐산과 같은 비타민 형의 천연물이다.Among the inorganic elements to be added, they may be buffered or neutralized, such as alkali metal or alkaline earth metal phosphate or calcium or magnesium carbonate. Other additives, such as chlorides and sulfides of alkali and alkali metals, provide the ionic equilibrium required for the development of Streptomyces hygroscopic picos DS24,367 and the production of 31,559RP. Finally, some act as activators of the metabolic reactions of Streptococcus hygroscopicus DS24,367, such as zinc, cobalt, iron, copper and magnesium salts. Suitable growth factors are vitamin-type natural products such as ribohulabin, folic acid and pantothenic acid.

배양 초기시의 발효배지의 PH는 반드시 5.8-7.8 사이이어야 하며 엄격히 말하면 6.2-7.4 사이이다. 발효에 필요한 최적의 온도는 25-30℃이지만 23-33℃ 사이의 온도에서도 만족할만한 결과가 얻어진다. 발효의 통기량은 매우 광범위하다. 그렇지만 1분당 고기즙 1ℓ에 대하여 0.3-3ℓ의 공기를 통과시키는 통기율이 매우 적합하다. 31,559RP의 최고 수율은 배양 2-8일 후에 얻어지며 이러한 기간은 사용한 배지에 따라 다르다.The pH of the fermentation broth at the beginning of the culture must be between 5.8-7.8 and strictly between 6.2-7.4. The optimum temperature for fermentation is 25-30 ° C, but satisfactory results are obtained even at temperatures between 23-33 ° C. Aeration volume of fermentation is very wide. However, aeration rate of 0.3-3 liters of air per minute per liter of meat juice is very suitable. The highest yield of 31,559 RP is obtained after 2-8 days of culture, depending on the medium used.

이러한 사실로부터, 31,559RP를 생성하기 위한 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS24,367의 배양의 일반조건은 매우 광범위하다는 것을 추리할 수가 있다.From these facts, it can be inferred that the general conditions of culturing Streptomyces hygroscopic picose DS24,367 to produce 31,559 RP are very extensive.

31,559RP는 하기의 방법으로 배양 생성물로부터 단리시킬 수가 있다.31,559 RP can be isolated from the culture product by the following method.

배지를 산성의 PH 즉, 일반적으로는 3-6 사이좋게는 5에서 여과한다. 여과 케이크에 잔류하는 활성물질은 저급알콜 즉, 메타놀이나 염소화된 용제 즉 메틸렌크로라이드와 같은 적당한 용제로 그들로부터 추출할 수 있다. 적당한 알카리 처리를 행한 후에 31,559RP를 감압하에서, 비용체 또는 염에 용제로 적당한 농도로 희석한 후에 정출에 의하여 상기에 언급한 용액으로부터 소디움염의 형태로 단리하여 냉소에 저장한다.The medium is filtered at an acidic pH, generally between 3-6 and preferably 5. The active substance remaining in the filter cake can be extracted from them with a lower alcohol, i.e., a metasol or a chlorinated solvent, a suitable solvent such as methylene chloride. After a suitable alkali treatment, 31,559 RP is diluted under reduced pressure to a suitable concentration in solvent or salt, and then isolated from the above-mentioned solution in the form of sodium salt by crystallization and stored in a cold place.

31,559RP 또는 그의 소디움염은 정출, 각종 흡착제상의 크로마토그라피와 같은 공지의 방법 또는 향류 분배에 의하여 정제할 수 있다.31,559RP or its sodium salt can be purified by known methods such as crystallization, chromatography on various adsorbents or by countercurrent distribution.

이하, 본 발명을 실시예를 통해 더욱 상술하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following Examples.

[실시예 1]Example 1

A) 발효A) fermentation

하기의 성분을 170ℓ 발효기에 주입하였다.The following ingredients were injected into a 170 L fermentor.

펩 톤 1,200g1,200 g peptone

이이스트 추출물 600gYeast extract 600g

글루코즈 탄수화물 1,200gGlucose Carbohydrate 1,200g

한 천 240g240g agar

수도물, 충분량 110ℓTap water, enough 110ℓ

PH를 10N가성소다 용액(70CC)을 가하여 7.5으로 조절하였다. 배질을 40분간 122℃의 과열수증기로 멸균하였다. 냉각하면 고기즙의 용적은 120ℓ로 감소한다. 그 이유는 멸균 공정시에 스팀의 응축때문이다. 이때의 PH는 6.85이다. 그 다음에 고기즙을 교반한 삼각 플라스크내에서 생성시킨 스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS24,367의 배양액(200CC)으로 접종하였다. 배양액을 27℃에서 25시간동안 발육시키면서 멸균공기로 통기 진탕하면 접종에 적합한 배양액이 생성된다.The pH was adjusted to 7.5 by adding 10N caustic soda solution (70CC). The embryo was sterilized with superheated steam at 122 ° C. for 40 minutes. On cooling, the volume of meat juice is reduced to 120 l. This is due to the condensation of steam in the sterilization process. At this time, the pH is 6.85. Meat juice was then inoculated with a culture solution (200CC) of Streptomyces hygroscopic picus DS24,367 produced in a stirred Erlenmeyer flask. If the culture solution is grown at 27 ° C. for 25 hours and aerated with sterile air, a culture medium suitable for inoculation is produced.

생성배양액을 800ℓ 발효기에서 배양시키고 하기의 물질을 주입하였다.The resulting culture was incubated in an 800 L fermentor and the following materials were injected.

가용성분 2㎏Soluble 2 kg

콩기름 10㎏Soybean oil 10㎏

글리세린 6㎏Glycerin 6 kg

식 염 2㎏2 kg of salt

코발트 크로라이드 6수화물Cobalt Chloride Heptahydrate

용액(20g/ℓ의 농도) 0.4ℓ0.4 l solution (concentration of 20 g / l)

수도물 q.s.p 365ℓTap water q.s.p 365ℓ

배지의 PH를 10N 가성소다 용액 200CC를 가하여 7.50으로 조절하고 40분간 122℃의 과열수증기로 멸균한후 냉각시키면 멸균처리시 스팀의 응축으로 인하여 고기즙의 용적은 390ℓ로 감소하는데 글루코스 1수화물 4㎏을 함유하는 멸균 수용액 10ℓ를 첨가하여 이것을 400ℓ가 되게 한다.The pH of the medium is adjusted to 7.50 by adding 10N caustic soda solution 200CC, sterilized with superheated steam at 122 ° C for 40 minutes, and cooled.The volume of meat juice is reduced to 390ℓ due to condensation of steam during sterilization. 10 liters of sterile aqueous solution is added to make 400 liters.

배지의 PH는 6.65이다. 상기에 언급한 170ℓ 발효기로부터 접종 배양액 40ℓ를 접종한다. 배양액을 205r.p.m의 터빈으로 교반함과 동시에 멸균공기를 20㎥/hr의 속도로 통기시키면서 113시간동안 27℃에서 발육시킨다. 조작의 종말에서 배양액의 PH는 7.65이며 용적은 380ℓ이다.The pH of the medium is 6.65. Inoculate 40 liters of inoculum culture from the above-mentioned 170 liter fermenter. The culture solution is stirred at a turbine of 205 r.p.m while being grown at 27 ° C. for 113 hours while ventilating sterile air at a rate of 20 m 3 / hr. At the end of the operation, the pH of the culture is 7.65 and the volume is 380 liters.

B) 추출B) extraction

상기에 언급한 방법으로 얻은 배지(400ℓ)을 6N염산 2.8ℓ를 주가하여 PH를 5로 조절하고 30분간 교반한다. 여과 보조제(20㎏)을 주가한 후에 휠터프레스로 배지를 여과하고 여과케이크는 여과기 상에서 물 9(100ℓ)로 세척한 다음 PH를 6N염산으로 5로 조절한다. 여액과 세척액을 제거한다.The medium (400 L) obtained by the above-mentioned method was added with 2.8 L of 6N hydrochloric acid to adjust the pH to 5 and stirred for 30 minutes. After adding the filter aid (20 kg), the medium is filtered with a filter press, and the filter cake is washed with water (100 l) on a filter and then the pH is adjusted to 5 with 6N hydrochloric acid. Remove filtrate and wash.

여과 케이크를 메타놀(300ℓ)내에서 분쇄하고, 이렇게하여 얻은 혼합물을 6N 염산을 주가하여 pH7로 조절하고 30분간 교반한다. 혼합물을 휠터 프레스로 여과하고 여과케이크는 메타놀(80ℓ)로 여과기상에서 세척한다. 여액과 세액을 혼합하고 수성농축액(30ℓ)이 생성되도록 감압하에서 (5-10㎜Hg) 농축시킨다. 이 농축액을 6N 염산(290㏄)를 주가하여 pH3으로 조절하고 메틸렌크로라이드(30ℓ)존재하에 10분간 교반하면 두층이 분리된다. 수성층을 이러한 방법으로 메틸렌크로라이드(30ℓ)를 사용하여 두번이상 추출한다. 3번 추출한 메틸렌크로라이드 추출물을 한대 합하여 물(9ℓ)과 함께 교반하면서 6N 염산 20㏄를 가하여 수상의 pH를 3으로 조절한다. 유기층을 분리하여 물로 세척한 다음 수상(6N 가성소다 20㏄)의 pH가 9.5가 될때까지 가성소다를 주가한다. 메틸렌크로라이드층을 감압(5-10㎜Hg) 하에서 1ℓ가 될때까지 농축한다.The filter cake is triturated in methanol (300 L), and the resulting mixture is adjusted to pH 7 with 6 N hydrochloric acid and stirred for 30 minutes. The mixture is filtered through a filter press and the filter cake is washed on the filter with methanol (80 L). The filtrate and the liquor are mixed and concentrated under reduced pressure (5-10 mmHg) to produce an aqueous concentrate (30 L). The concentrate was adjusted to pH 3 by adding 6N hydrochloric acid (290 kPa) and stirred for 10 minutes in the presence of methylene chloride (30 L) to separate the two layers. The aqueous layer is extracted two more times using methylene chloride (30 L) in this way. The methylene chloride extract extracted three times was combined, and 20 N of 6N hydrochloric acid was added while stirring with water (9 L) to adjust the pH of the aqueous phase to 3. The organic layer is separated, washed with water, and caustic soda is added until the pH of the aqueous phase (20N of 6N sodium hydroxide) reaches 9.5. The methylene chloride layer is concentrated under reduced pressure (5-10 mmHg) until 1 l.

c) 정제c) tablets

이렇게하여 얻은 메틸렌크로라이드 농축액을 실온에서 헥산(10ℓ)에 서서히 주가한다. 상기 용액을 여과하여 불활성 불용성물질(63g)을 제거한다. 영액을 감압(5-10㎜Hg)하에서 약 0.5ℓ가 될때까지 농축한다. 상기용액을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음 4℃에서 24시간 동안 방치한다. 이렇게하여 얻은 결정을 원심분리하여 용액으로부터 분리시킨다음 4℃에서 헥산(250㏄)로 세척하여 감압 건조한다. 이렇게 하면 31,559RP의 소디움 염(103g)이 단리된다.The methylene chloride concentrate thus obtained is slowly added to hexane (10 L) at room temperature. The solution is filtered to remove inert insoluble matter (63 g). The stock solution is concentrated under reduced pressure (5-10 mmHg) until it is about 0.5 L. The solution is stirred at 0 ° C. for 2 hours and then left at 4 ° C. for 24 hours. The crystals thus obtained are separated from the solution by centrifugation, washed with hexane (250 Pa) at 4 ° C, and dried under reduced pressure. This isolates 31,559 RP of sodium salt (103 g).

D) 재결정D) recrystallization

상기의 방법으로 얻은 31,559 RP의 소디움(57g)을 아세톤 1.2ℓ에 용해시키고 15분간 교반한다. 염산으로 세척한 활성탄(2.5g)을 주가하고, 이들 혼합물은 다시 30분간 교반한후 탈색활성탄을 여별한다. 여액에 증류수(750㏄)를 주가하고 서서히 교반한다. 31,559 RP의 소디움염이 0℃에서 서서히 정출한다. 결정을 여별하고 아세톤과 물의 1:1용액 150㏄로 세척한후 35℃에서 감압하에 건조하면 31,559 RP의 순수한 소디움염(35g)이 얻어진다.31,559 RP of sodium (57 g) obtained by the above method is dissolved in 1.2 L of acetone and stirred for 15 minutes. Activated carbon washed with hydrochloric acid (2.5 g) was added thereto, and the mixture was stirred for another 30 minutes, followed by filtration of decolorized activated carbon. Distilled water (750 cc) was added to the filtrate, and the mixture was slowly stirred. Sodium salt of 31,559 RP slowly crystallizes at 0 ° C. The crystals were filtered off, washed with 150 1: 1 of a 1: 1 solution of acetone and water, and dried under reduced pressure at 35 ° C. to obtain 31,559 RP of pure sodium salt (35 g).

모액을 원액의 반이 될때까지 농축한 다음 4℃로 냉각하면 31,559 RP의 소디움 염(13.2g)이 더욱 얻어진다.The mother liquor is concentrated to half of the stock and then cooled to 4 ° C. to further yield 31,559 RP of sodium salt (13.2 g).

본 발명은 본 발명의 범위내에 31,559 RP 또는 그의 염이 금속 또는 질소 함유 염기 및 동물에 의해 소모될 수 있는 물질에 0.0001-99.9% 함유된 동물사육용 조성물을 포함한다. (물론, 사용된 모든 염은 농축시 및 경구투여시 비독성인 양이온을 함유 하여야한다).The present invention includes animal-raising compositions in which 31,559 RP or its salts are contained within 0.0001-99.9% of the metal or nitrogen-containing base and materials that can be consumed by the animal. (Of course, all salts used should contain cations which are non-toxic during concentration and oral administration).

이러한 조성물은 31,559 RP 또는 그의 염과 금속 또는 질소 함유-염기 및 적당한 그외의 항코시디아제와 함께 동물의 복합사료를 구성할 수도 있다.Such compositions may constitute a combined feed of animals with 31,559 RP or its salts and metal or nitrogen containing-bases and other suitable anticosidia.

물론 적당한 효과를 나타내는데 필요한 복용량은 사료에 따라 다르지만 매우 광범위하다. 일반적인 동물사료의 함유량은 31,559 RP 또는 그의 염의 중량에 대해 0.005-0.04%이다.Of course, the dosage required to achieve a moderate effect depends on the feed, but is very wide. Typical animal feed content is 0.005-0.04% by weight of 31,559 RP or its salts.

31,559 RP 또는 그의 염은 상기의 농도로 사료에 균일분산 형태로 분배시킬 수 있다. 이것은 비타민과 무기 염류와 같은 첨가제와 함께 0.025-1%의 투여량으로 보충사료에 분산시킬수도 있다. 이들 보충사료는 기본사료에 대해 5-20% 정도로 혼합한다.31,559 RP or its salts may be distributed in the form of a homogeneous dispersion in the feed at the above concentrations. It can also be dispersed in supplements at a dosage of 0.025-1% with additives such as vitamins and mineral salts. These supplements are mixed 5-20% of the base feed.

보충사료를 제조하는데 사용되는 ''예비혼합물''에는 대개 희석된 사료내에 31,559 R.P 또는 그의 염을 0.05-20%함유 시킨다. 이들은 활성 생성물을 사료전체에 균일하게 분포시킬수 있는 적당한 중간사료로 구성되어 있다. 예비혼합물 자체는 31,559 RP 또는 그의 염을 99.9-20% 함유하며 여기에는 식용사료, 기호제, 분산제 또는 응집 방해제 및 사료 희석제가 첨가되어 있다.`` Premixes '' used to make supplemental feeds typically contain 0.05-20% of 31,559 R.P or salts thereof in diluted feed. These consist of suitable intermediate feeds that can distribute the active product evenly throughout the feed. The premix itself contains 99.9-20% of 31,559 RP or salts thereof, with the addition of food, flavor, dispersing or flocculant and feed diluent.

일반적으로, 농축물과 예비혼합물은 분말로 되어있다.Generally, the concentrate and the premix are in powder.

보충사료와 완전사료는 통상의 방법으로 분말이나 과립형으로 제조할 수가 있다.Supplementary feeds and complete feeds may be prepared in powder or granular form by conventional methods.

다음의 실시예는 본 발명의 조성물을 설명하는 것이며 별다른 언급이 없는한 백분율은 중량 백분율을 의미한다.The following examples illustrate the compositions of the present invention and percentages refer to weight percentages unless otherwise indicated.

[실시예 2]Example 2

다음의 조성을 갖인 기본사료를 조제한다.Prepare basic feed having the following composition.

곡물중간 가루 13.41%Medium grain 13.41%

보리 가루 13.41%Barley Flour 13.41%

옥수수 가루 13.41%Corn flour 13.41%

밀가루 31.32%31.32% flour

어분(魚粉) 8.92%Fish meal 8.92%

콩가루 8.92%Soy flour 8.92%

탈수된 사료가루 4.56%Dehydrated Feed Powder 4.56%

아이스트 추출물 2.33%Iced Extract 2.33%

건조한 분유 2.68%Dry milk powder 2.68%

식염 0.09%Salt 0.09%

염화칼슘 0.89%Calcium Chloride 0.89%

무기원소 0.06%Inorganic element 0.06%

비타민-형복합물Vitamin-Compound

비타민 A 4.000 I.U/㎏Vitamin A 4.000 I.U / kg

비타민 D₃1.000 I.U/㎏Vitamin D ₃ 1.000 IU / kg

염화 콜린 11.5㎎/㎏Choline chloride 11.5 mg / kg

리보훌라빈 2.24㎎/㎏Ribohulabin 2.24mg / kg

31,559 RP의 소디움 염을 이들 사료에 0.02%첨가하고 균일하게 분포시킨다.31,559 RP of sodium salt is added to these feeds 0.02% and distributed evenly.

본 발명은 또한 반추동물(소, 양, 염소)용 성장 인자와 돼지의 세균성 적리증 박멸제로 사용할 수 있는 31,559 RP 또는 그의 염의 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition of 31,559 RP or salts thereof, which can be used as a growth factor for ruminants (bovine, sheep, goat) and as a bactericidal agent in pigs.

31,559 RP또는 그의 염을 함유하는 이들 조성물은 반추동물이나 돼지의 혼합사료와 동물 사육용 농축사료를 구성한다.These compositions containing 31,559 RP or salts thereof constitute a mixed feed of ruminant or swine and concentrated feed for animal breeding.

물론 적당한 효과를 발생하는데 필요한 투여량은 제한된 것이 아니고 동물의 종류와 사료의 영양가에 따라 다르다.Of course, the dosage required to produce a moderate effect is not limited and depends on the type of animal and the nutritional value of the feed.

동물 한마리당 하루에 50-250㎎의 31,559 RP를 투여하는 것이 좋다.It is recommended to administer 50,250 mg of 31,559 RP per animal per day.

31,559 RP는 항생제와 그리고, 비타민류 무기염류와 같은 그외의 식품 첨가제를 0.01-0.1%함유하는 보충사료 전체에 균일하게 분포시키는 것이 좋다. 이들 보충사료는 1일당 기본사료에 대하여 1-10%혼합하는 것이 보통이므로 1일당 투여되는 31,559 RP의 양은 결국 0.0001-0.01%가 된다.31,559 RP should be evenly distributed throughout the supplement containing 0.01–0.1% of antibiotics and other food additives such as vitamins and inorganic salts. Since these supplements are usually mixed 1-10% of the basic feed per day, the amount of 31,559 RP administered per day will eventually be 0.0001-0.01%.

완전사료나 보충사료의 조제에 사용되는 ''예비혼합물''에는 희석사료량에 대하여 31,559 RP가 0.1-5%로 함유되어 있다.The `` premix '' used to prepare complete or supplemental feeds contains 0.1-5% 31,559 RP of the diluted feed.

이들은 사료전체에 제균생성물을 균일하게 분포 시킬수 있는 적당한 중간사료로 구성되어 있다. 예비혼합물 자체는 31,559 RP를 99.9-5%함유하며 여기에는 식용사료, 기호제, 분산제 또는 응집 방지제 및 사료 희석제가 첨가되어 있다.These consist of suitable intermediate feeds that can evenly distribute sterile products throughout the feed. The premix itself contains 99.9-5% of 31,559 RP with the addition of edible feed, flavors, dispersants or anticoagulants and feed diluents.

일반적으로, 농축물과 예비혼합물은 분말로 되어 있다. 보충사료와 완전사료는 통상의 방법으로 분말이나 과립상으로 제조할 수가 있다. 상기 조성물에서 31,559 RP 또는 그의 염은 당의정으로 된 미세입자일 수도 있다.In general, the concentrate and the premix are in powder form. Supplementary feeds and complete feeds may be prepared in powder or granular form by conventional methods. 31,559 RP or salts thereof in the composition may be dragee microparticles.

다음의 실시예는 31,559 RP의 성장인자로서의 용도를 설명하는 것이다.The following example illustrates the use of 31,559 RP as a growth factor.

[실시예 3]Example 3

12마리의 홀스타인종 송아지를 표면적이 48㎡인 독립된 우리에 넣고 몸무게를 달았다. 조사대상의 사료소비량은 시험시작일을 0으로 하였다. 28일과 56일이 경과한 후에 송아지의 무게를 달고 이기간에 소비된사료의 양을 측정하였다. 0-28과 28-56일의 시간 간격으로 늘어난 평균 체중과 사료의 평균전환도를 조사하였다.Twelve Holstein calves were placed in separate cages with a surface area of 48 m2 and weighed. The feed consumption of the survey subjects was zero. After 28 and 56 days the calf was weighed and the amount of feed consumed during this period was measured. The average body weights and the average conversions of the feeds were increased at time intervals of 0-28 and 28-56 days.

하루에 사료를 두번 공급하였다. 하루 배급량을 송아지가 남김없이 하루에 섭취할 수 있는 최대량의 사료로 결정하였다. 실험기간 동안에 송아지를 3개의 군으로 분류 하였다.Feed was fed twice a day. The daily ration was determined to be the maximum amount of food that can be consumed per day with no calf left. During the experiment, calves were divided into three groups.

각개군의 송아지에 옥수수, 건초 및 단백질로 구성된 기본사료를 섭취시켰다.Each group of calf was fed a basic diet consisting of corn, hay and protein.

제1군의 동물은 기본사료를 섭취시켰고 제2군의 동물은 항생제 31,559RP 100㎎을 함유하는 단백질의 기본 사료를 섭취시켰으며, 제3군의 동물은 항생제31,559RP 200㎎을 함유하는 단백질의 기본사료를 섭취시켰다.Animals of group 1 were fed basic diets, and animals of group 2 were fed basic diets of protein containing 100 mg of antibiotics 31,559 RP, and animals of group 3 were fed protein containing 200 mg of antibiotics 31,559 RP. Basic feed was taken.

동물 한마리당 하루에 섭취된 사료는 다음의 조성을 갖는다.The feed consumed per day per animal has the following composition:

단백질 보충사료는 메써스 랜드마크회사에서 공급되는 ''프로 브랜드 50''을 사용한 것이며 이것의 조성은 다음과 같다.Protein supplements use `` Pro Brand 50 '' from Methus Landmark Company, whose composition is as follows:

총 단백질 당량 〉50%Total protein equivalent〉 50%

지방질 〉 1%Fat〉 1%

식물성 섬유 ≤ 9%Vegetable fiber ≤ 9%

비타민 A 〉65.000 유니트/㎏Vitamin A〉 65.000 units / ㎏

여기서 얻은 결과를 다음표에 기재 하였다.The results obtained here are described in the following table.

따라서, 처음, 28일 동안에는 한마리당 하루에 31,559 RP를 100㎎ 섭취한 동물은 대조동물에 비하여 체중 증가율이 3%이상이며, 전환도가 1.3%이하이며 이들 백분율은 하루에 마리당 31,559 RP를 200㎎ 섭취한 동물의 경우에는 각각 15.3%와 13.4%에 해당한다.Therefore, animals that consumed 31,559 RP per day for 28 days for the first 28 days had a weight gain of 3% or more, a conversion of less than 1.3%, and a percentage of 31,559 RP per day for 200 mg per day compared to the control animals. Intake of animals corresponds to 15.3% and 13.4%, respectively.

두번째 기간(28-56일) 동안에는 하루에 31,559RP를 100㎎씩 섭취한 동물이 더 많은 양을 섭취한 동물을 압도 하였다. 100㎎/day의 투여량에서 대조한동물보다 높은 체중 증가율(13.4%)과 낮은 전환도(9.8%)를 나타내며 이들 백분율은 200㎎/day의 투여량으로 조절한 동물에서는 각각 9.6%와 7.6%에 해당한다.During the second period (28-56 days), animals who consumed 100 mg of 31,559 RP a day overwhelmed those who ate more. Higher weight gain (13.4%) and lower degree of conversion (9.8%) than control animals at the 100 mg / day dose, these percentages were 9.6% and 7.6% for the animals adjusted to the 200 mg / day dose, respectively. Corresponds to

전체 시험기간(56일) 동안에는 하루에 31,559 RP를 100㎎ 및 200㎎ 섭취한 동물은 대조 동물에 비하여 각각 7.8%와 12.2%의 평균 체중 증가율과 6.4%와 10.2%의 사료전환도를 나타낸다.During the entire test period (56 days), animals fed 31,559 RP 100 mg and 200 mg per day had average weight gain rates of 7.8% and 12.2% and feed conversions of 6.4% and 10.2%, respectively, compared to control animals.

Claims (1)

스트렙토마이세스 하이그로스코피커스 DS 24367(NRRL 5787)을 호기성배지내에서 배양시켜 다음 구조식의 항생제 31559 RP를 생성시키고 이를 분리함을 특징으로 하는 항생제 31559 RP 및 그의 염의 제조 방법.A method for preparing antibiotic 31559 RP and its salts, characterized by incubating Streptomyces hygroscopicus DS 24367 (NRRL 5787) in aerobic media to produce and isolate antibiotic 31559 RP.

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