KR20240008336A - 치환된 헤테로시클릭 화합물 - Google Patents

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KR20240008336A
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스티븐 에이치. 스페르겔
라이언 엠. 모슬린
마이클 에드워드 메르츠만
조셉 에이. 티노
쇼샤나 엘. 포시
시리쉬 카우시크 라카라주
질리 샤오
제임스 켐슨
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브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
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Abstract

Tyk-2에 작용하여 신호 전달 억제를 유발함으로써 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα의 조정에 유용한, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염 (여기서 모든 치환기는 본원에 정의된 바와 같음)이 개시된다:
Figure pct00196

본 발명의 화합물은 신경변성 질환 또는 장애를 치료하는 데 유용할 수 있다.

Description

치환된 헤테로시클릭 화합물
<관련 출원에 대한 상호 참조>
본 출원은 2021년 5월 14일에 출원된 미국 가출원 번호 63/188,498 및 2022년 3월 9일에 출원된 미국 가출원 번호 63/318,149를 우선권 주장하며, 이들의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
<기술분야>
본 발명은 Tyk-2에 작용하여 신호 전달 억제를 유발함으로써 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα의 조정에 유용한 화합물에 관한 것이다. 치환된 헤테로시클릭 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다. 본 발명은 추가로 포유동물에서 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα의 조정과 관련된 상태의 치료에 유용한 본 발명에 따른 적어도 1종의 화합물을 함유하는 제약 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 신경변성 질환에 대해 유용성을 나타내는 화합물에 관한 것이다.
공통의 p40 서브유닛을 공유하는 이종이량체 시토카인 인터류킨 (IL)-12 및 IL-23은 활성화된 항원-제시 세포에 의해 생산되고, 자가면역에서 주요 역할을 하는 2종의 이펙터 T 세포 계통인 Th1 및 Th17 세포의 분화 및 증식에 있어서 중요하다. IL-23은 고유한 p19 서브유닛과 함께 p40 서브유닛으로 구성된다. IL-23R 및 IL-12Rβ1로 구성된 이종이량체 수용체를 통해 작용하는 IL-23은 염증유발 시토카인, 예컨대 IL-17A, IL-17F, IL-6 및 TNF-α를 생산하는 Th17 세포의 생존 및 확장에 필수적이다 (문헌 [McGeachy, M.J. et al., "The link between IL-23 and Th17 cell-mediated immune pathologies", Semin. Immunol., 19:372-376 (2007)]). 이들 시토카인은 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 염증성 장 질환 및 루푸스를 비롯한 다수의 자가면역 질환의 병리생물학을 매개하는 데 중요하다. IL-12는 IL-23과 공통적인 p40 서브유닛 이외에도 p35 서브유닛을 함유하고, IL-12Rβ1 및 IL-12Rβ2로 구성된 이종이량체 수용체를 통해 작용한다. IL-12는 MHC 발현, B 세포의 IgG 하위부류로의 부류 전환, 및 대식세포의 활성화를 자극함으로써 면역에서 중요한 역할을 하는 시토카인인 IFNγ의 분비 및 Th1 세포 발생에 필수적이다 (문헌 [Gracie, J.A. et al., "Interleukin-12 induces interferon-gamma-dependent switching of IgG alloantibody subclass", Eur. J. Immunol., 26:1217-1221 (1996); Schroder, K. et al., "Interferon-gamma: an overview of signals, mechanisms and functions", J. Leukoc. Biol., 75(2):163-189 (2004)]).
자가면역에서 p40-함유 시토카인의 중요성은 p40, p19, 또는 IL-23R이 결핍된 마우스가 특히 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 루푸스 및 건선 모델에서 질환으로부터 보호된다는 발견에 의해 입증된다 (문헌 [Kyttaris, V.C. et al., "Cutting edge: IL-23 receptor deficiency prevents the development of lupus nephritis in C57BL/6-lpr/lpr mice", J. Immunol., 184:4605-4609 (2010); Hong, K. et al., "IL-12, independently of IFN-gamma, plays a crucial role in the pathogenesis of a murine psoriasis like skin disorder", J. Immunol., 162:7480-7491 (1999); Hue, S. et al., "Interleukin-23 drives innate and T cell-mediated intestinal inflammation", J. Exp. Med., 203:2473-2483 (2006); Cua, D.J. et al., "Interleukin-23 rather than interleukin-12 is the critical cytokine for autoimmune inflammation of the brain", Nature, 421:744-748 (2003); Murphy, C.A. et al., "Divergent pro- and anti-inflammatory roles for IL-23 and IL-12 in joint autoimmune inflammation", J. Exp. Med., 198:1951-1957 (2003)]).
인간 질환에서, p40 및 p19의 높은 발현은 건선성 병변에서 측정되었고, Th17 세포는 MS 환자로부터의 뇌 및 활성 크론병을 갖는 환자의 장 점막 내 활성 병변에서 확인되었다 (문헌 [Lee, E. et al., "Increased expression of interleukin 23 p19 and p40 in lesional skin of patients with psoriasis vulgaris", J. Exp. Med., 199:125-130 (2004); Tzartos, J.S. et al., "Interleukin-17 production in central nervous system infiltrating T cells and glial cells is associated with active disease in multiple sclerosis", Am. J. Pathol., 172:146-155 (2008)]). 활성 SLE 환자에서의 p19, p40, 및 p35의 mRNA 수준은 또한 불활성 SLE 환자에서의 것과 비교하여 유의하게 더 높은 것으로 나타났고 (문헌 [Huang, X. et al., "Dysregulated expression of interleukin-23 and interleukin-12 subunits in systemic lupus erythematosus patients", Mod. Rheumatol., 17:220-223 (2007)]), 루푸스 환자로부터의 T 세포는 우세한 Th1 표현형을 갖는다 (문헌 [Tucci, M. et al., "Overexpression of interleukin-12 and T helper 1 predominance in lupus nephritis", Clin. Exp. Immunol., 154:247-254 (2008)]).
더욱이, 게놈전반 연관 연구는 IL-23 및 IL-12 경로에서 기능하는 인자를 코딩하는, 만성 염증성 및 자가면역 질환과 연관된 다수의 유전자좌를 확인하였다. 이들 유전자는 IL23A, IL12A, IL12B, IL12RB1, IL12RB2, IL23R, JAK2, TYK2, STAT3, 및 STAT4를 포함한다 (문헌 [Lees, C.W. et al., "New IBD genetics: common pathways with other diseases", Gut, 60:1739-1753 (2011); Tao, J.H. et al., "Meta-analysis of TYK2 gene polymorphisms association with susceptibility to autoimmune and inflammatory diseases", Mol. Biol. Rep., 38:4663-4672 (2011); Cho, J.H. et al., "Recent insights into the genetics of inflammatory bowel disease", Gastroenterology, 140:1704-1712 (2011)]).
실제로, IL-12 및 IL-23 둘 다를 억제하는 항-p40 치료, 뿐만 아니라 IL-23-특이적 항-p19 요법은 건선, 크론병 및 건선성 관절염을 포함한 질환에서 자가면역의 치료에 효과적인 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Leonardi, C.L. et al., "PHOENIX 1 study investigators. Efficacy and safety of ustekinumab, a human interleukin-12/23 monoclonal antibody, in patients with psoriasis: 76-week results from a randomized, double-blind, placebo-controlled trial (PHOENIX 1)", Lancet, 371:1665-1674 (2008); Sandborn, W.J. et al., "Ustekinumab Crohn's Disease Study Group. A randomized trial of Ustekinumab, a human interleukin-12/23 monoclonal antibody, in patients with moderate-to-severe Crohn's disease", Gastroenterology, 135:1130-1141 (2008); Gottlieb, A. et al., "Ustekinumab, a human interleukin 12/23 monoclonal antibody, for psoriatic arthritis: randomized, double-blind, placebo-controlled, crossover trial", Lancet, 373:633-640 (2009)]). 따라서, IL-12 및 IL-23의 작용을 억제하는 작용제는 인간 자가면역 장애에서 치료 이익을 가질 것으로 예상될 수 있다.
인터페론 (IFN)α 구성원 뿐만 아니라 IFNβ, IFNε, IFNκ 및 IFNω를 포함하는 IFN의 제I형 군은 이종이량체 IFNα/β수용체 (IFNAR)를 통해 작용한다. 제I형 IFN은 세포성 및 체액성 면역 반응 둘 다의 활성화 뿐만 아니라 자가항원의 발현 및 방출을 증진시키는 것을 포함하는 선천성 및 적응성 면역계 둘 다에서 다중 효과를 갖는다 (문헌 [Hall, J.C. et al., "Type I interferons: crucial participants in disease amplification in autoimmunity", Nat. Rev. Rheumatol., 6:40-49 (2010)]).
잠재적으로 치명적인 자가면역 질환인 전신 홍반성 루푸스 (SLE)를 갖는 환자에서, 인터페론 (IFN)α (제I형 인터페론)의 증가된 혈청 수준 또는 말초 혈액 단핵 세포 및 이환된 기관에서의 제I형 IFN-조절된 유전자 (소위 IFNα 서명)의 증가된 발현이 대다수의 환자에서 입증되었고 (문헌 [Bennett, L. et al., "Interferon and granulopoiesis signatures in systemic lupus erythematosus blood", J. Exp. Med., 197:711-723 (2003); Peterson, K.S. et al., "Characterization of heterogeneity in the molecular pathogenesis of lupus nephritis from transcriptional profiles of laser-captured glomeruli", J. Clin. Invest., 113:1722-1733 (2004)]), 여러 연구는 혈청 IFNα 수준이 질환 활성 및 중증도 둘 다와 상관관계가 있다는 것을 나타낸 바 있다 (문헌 [Bengtsson, A.A. et al., "Activation of type I interferon system in systemic lupus erythematosus correlates with disease activity but not with antiretroviral antibodies", Lupus, 9:664-671 (2000)]). 루푸스의 병리생물학에서 IFNα의 직접적인 역할은 악성 또는 바이러스성 질환을 갖는 환자에 대한 IFNα의 투여가 루푸스-유사 증후군을 유도할 수 있다는 관찰에 의해 입증된다. 또한, 루푸스-경향 마우스에서의 IFNAR의 결실은 자가면역, 질환 중증도 및 사망률로부터의 높은 보호를 제공하고 (문헌 [Santiago-Raber, M.L. et al., "Type-I interferon receptor deficiency reduces lupus-like disease in NZB mice", J. Exp. Med., 197:777-788 (2003)]), 게놈전반 연관 연구는 IRF5, IKBKE, TYK2 및 STAT4를 비롯한 제I형 인터페론 경로에서 기능하는 인자를 코딩하는 루푸스와 연관된 유전자좌를 확인하였다 (문헌 [Deng, Y. et al., "Genetic susceptibility to systemic lupus erythematosus in the genomic era", Nat. Rev. Rheumatol., 6:683-692 (2010); Sandling, J.K. et al., "A candidate gene study of the type I interferon pathway implicates IKBKE and IL8 as risk loci for SLE", Eur. J. Hum. Genet., 19:479-484 (2011)]). 루푸스 이외에도, 제I형 인터페론-매개 경로의 이상 활성화가 다른 자가면역 질환, 예컨대 쇼그렌 증후군 및 경피증의 병리생물학에서 중요하다는 증거가 존재한다 (문헌 [Bave, U. et al., "Activation of the type I interferon system in primary Sjoegren's syndrome: a possible etiopathogenic mechanism", Arthritis Rheum., 52:1185-1195 (2005); Kim, D. et al., "Induction of interferon-alpha by scleroderma sera containing autoantibodies to topoisomerase I: association of higher interferon-alpha activity with lung fibrosis", Arthritis Rheum., 58:2163-2173 (2008)]). 따라서, 제I형 인터페론 반응의 작용을 억제하는 작용제는 인간 자가면역 장애에서 치료 이익을 가질 것으로 예상될 수 있다.
티로신 키나제 2 (Tyk2)는 비수용체 티로신 키나제의 야누스 키나제 (JAK) 패밀리의 구성원이고, 마우스 (문헌 [Ishizaki, M. et al., "Involvement of Tyrosine Kinase-2 in Both the IL-12/Th1 and IL-23/Th17 Axes In vivo", J. Immunol., 187:181-189 (2011); Prchal-Murphy, M. et al., "TYK2 kinase activity is required for functional type I interferon responses in vivo", PLoS One, 7:e39141 (2012)]) 및 인간 (문헌 [Minegishi, Y. et al., "Human tyrosine kinase 2 deficiency reveals its requisite roles in multiple cytokine signals involved in innate and acquired immunity", Immunity, 25:745-755 (2006)]) 둘 다에서 IL-12, IL-23 및 제I형 인터페론에 대한 수용체의 신호 전달 캐스케이드 하류를 조정하는 데 중요한 것으로 밝혀졌다. Tyk2는 STAT 단백질의 이량체화 및 STAT-의존성 염증유발 유전자의 전사로 이어지는 필수 신호인 전사 인자의 STAT 패밀리의 구성원의 수용체-유도된 인산화를 매개한다. Tyk2-결핍 마우스는 결장염, 건선 및 다발성 경화증의 실험 모델에 저항성이며, 이는 자가면역 및 관련 장애에서의 Tyk2-매개 신호전달의 중요성을 입증한다 (문헌 [Ishizaki, M. et al., "Involvement of Tyrosine Kinase-2 in Both the IL-12/Th1 and IL-23/Th17 Axes In vivo", J. Immunol., 187:181-189 (2011); Oyamada, A. et al., "Tyrosine kinase 2 plays critical roles in the pathogenic CD4 T cell responses for the development of experimental autoimmune encephalomyelitis", J. Immunol., 183:7539-7546 (2009)]).
인간에서, Tyk2의 불활성 변이체를 발현하는 개체는 다발성 경화증 및 가능하게는 다른 자가면역 장애로부터 보호된다 (문헌 [Couturier, N. et al., "Tyrosine kinase 2 variant influences T lymphocyte polarization and multiple sclerosis susceptibility", Brain, 134:693-703 (2011)]). 게놈전반 연관 연구는 Tyk2의 다른 변이체가 자가면역 장애, 예컨대 크론병, 건선, 전신 홍반성 루푸스 및 류마티스 관절염과 연관된 것으로 나타냈으며, 이는 자가면역에서 Tyk2의 중요성을 추가로 입증한다 (문헌 [Ellinghaus, D. et al., "Combined Analysis of Genome-wide Association Studies for Crohn Disease and Psoriasis Identifies Seven Shared Susceptibility Loci", Am. J. Hum. Genet., 90:636-647 (2012); Graham, D. et al., "Association of polymorphisms across the tyrosine kinase gene, TYK2 in UK SLE families", Rheumatology (Oxford), 46:927-930 (2007); Eyre, S. et al., "High-density genetic mapping identifies new susceptibility loci for rheumatoid arthritis", Nat. Genet., 44:1336-1340 (2012)]).
TYK2 억제는 또한 고형 종양 및 혈액 악성종양 둘 다에서 단독요법으로서 및 면역요법을 포함한 기존의 표준 관리와 조합하여 이용될 수 있다.
T-세포 급성 림프모구성 백혈병 (T-ALL)에서의 생체외 연구는 TYK2가 T-ALL의 생존에 필요하다는 것을 나타냈으며, 이는 이 적응증에서 TYK2 억제제에 대한 잠재적 직접 암 사멸 메카니즘을 시사한다 (문헌 [Sanda, T. et al. TYK2-STAT1-BCL2 Pathway Dependence in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia. Cancer Discov. 3, 564-577 (2013)]). T-ALL 세포주에서 다중 TYK2 활성화 돌연변이가 검출되고 특징화되었다. NPM1-TYK2 유전자 융합체는 또한 피부 T-세포 림프종 (CTCL)의 하위세트에서 확인되었고, TYK2는 형질전환의 종양원성 구동자인 것으로 나타났다 (문헌 [Kuravi, S. et al. Functional characterization of NPM1-TYK2 fusion oncogene. Npj Precis. Oncol. 6, 3 (2022)]). TYK2 신호전달의 상실은 이러한 형질전환 잠재력을 억제할 수 있다.
효과적인 TYK2 억제제가 기재되어 있으나; 이들 화합물은 표준 유출 모델에서 높은 유출 비에 적용되는 고도로 극성인 화합물인 경향이 있다 (문헌 [Wrobleski, S. T. et al. Highly selective inhibition of Tyrosine Kinase 2 (TYK2) for the treatment of autoimmune diseases: Discovery of the allosteric inhibitor BMS-986165. J. Med. Chem. 62, 8973-8995 (2019)]). 다중약물 내성에 대한 하나의 경로는 유출 수송체의 증가된 발현임이 널리 확립되어 있다 (문헌 [Gottesman, M. M. et al. Multidrug Resistance in Cancer: Role of ATP-Dependent Transporters. Nature Rev. Cancer 2, 48-58 (2002), Fletcher, J. I. et al. ABC transporters in cancer: more than just drug efflux pumps. Nature Rev. Cancer 10, 147-156 (2010)]).
따라서, 시험관내 모델에서 보다 낮은 유출 비를 갖는 화합물이 일부 종양원성 적응증을 효과적으로 치료할 가능성이 보다 클 수 있다.
시토카인 및/또는 인터페론의 조정을 수반하는 치료에 의해 이익을 얻을 수 있는 상태의 관점에서, 시토카인 및/또는 인터페론, 예컨대 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα를 조정할 수 있는 신규 화합물, 및 이들 화합물을 사용하는 방법은 그를 필요로 하는 매우 다양한 환자에게 실질적인 치료 이익을 제공할 수 있다.
본 발명은 Tyk2-매개 신호 전달을 억제함으로써 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα의 조정제로서 유용한 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 제조하기 위한 방법 및 중간체를 제공한다.
본 발명은 또한 제약상 허용되는 담체 및 본 발명의 화합물 중 적어도 1종을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 Tyk-2-매개 신호 전달을 억제함으로써 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα를 조정하는 방법을 제공하며, 이는 이러한 치료를 필요로 하는 숙주에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물 중 적어도 1종을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 신경변성 질환의 치료를 필요로 하는 숙주에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물 중 적어도 1종을 투여하는 것을 포함하는, 신경변성 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
본 발명의 이들 및 다른 특징은 본 개시내용이 계속됨에 따라 확장된 형태로 제시될 것이다.
본 발명의 제1 측면에서, 하기 화학식의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00001
여기서
X는 -N- 또는 -CH-이고;
R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
R2는 OMe 또는 OCHF2이고;
R3은 CD3, C1-3 알킬, C3-6 시클로알킬 또는 (CH2)F이고;
R4는 수소, 할로, C1-4 알킬, C1-4 알콕시 또는 C3-6 시클로알킬이다.
본 발명의 제2 측면에서, 하기 화학식 II의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00002
여기서
R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
R2는 OMe 또는 OCHF2이고;
R3은 CD3, C1-3 알킬, C3-6 시클로알킬 또는 (CH2)F이고;
R4는 수소, 할로, C1-4 알킬, C1-4 알콕시 또는 C3-6 시클로알킬이다.
본 발명의 제3 측면에서, 하기 화학식 II의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00003
여기서
R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
R4는 수소, F 또는 CH3이다.
본 발명의 제4 측면에서, 하기 화학식 III의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00004
여기서
R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
R2는 OMe 또는 OCHF2이고;
R3은 CD3, C1-3 알킬, C3-6 시클로알킬 또는 (CH2)F이고;
R4는 수소, 할로, C1-4 알킬, C1-4 알콕시 또는 C3-6 시클로알킬이다.
본 발명의 제5 측면에서, 하기 화학식의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염이 제공된다:
Figure pct00005
여기서
R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
R4는 수소, F 또는 CH3이다.
또 다른 측면에서, 제1 측면의 범주 내에 예시된 실시예로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다.
또 다른 측면에서, 임의의 상기 측면의 범주 내의 화합물의 임의의 하위세트 목록으로부터 선택된 화합물이 제공된다.
또 다른 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 (IUPAC 명명 규정) 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공된다:
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-6-[(6-메톡시피리다진-3-일)아미노]-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[5-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(피리딘-2-일)아미노]피리다진-3-카르복스아미드,
메틸 N-(5-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-6-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-3-일)카르바메이트,
6-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R)-스피로[2.2]펜탄-1-아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-5-플루오로-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-4-플루오로-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-({3-[2-(2-플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]-2-메톡시페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-({3-[2-(2,2-디플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]-2-메톡시페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[2-메톡시-5-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시-5-메틸페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[5-클로로-3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-6-시클로프로판아미도-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-4-플루오로-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[4-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
메틸 3-({6-시클로프로판아미도-3-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-4-일}아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트,
6-시클로프로판아미도-4-({2-메톡시-3-[2-(2H3)메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[2-옥소-3-(프로판-2-일)이미다졸리딘-1-일]피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
에틸 N-(5-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-6-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-3-일)카르바메이트,
6-[(1S,2R)-2-플루오로시클로프로판아미도]-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
6-[(1S,2S)-2-플루오로시클로프로판아미도]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[4-시클로프로필-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-(2,2-디플루오로시클로프로판아미도)-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-[(아제티딘-1-카르보닐)아미노]-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-({2-메톡시-3-[2-(옥세탄-3-일)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-(2-시클로부틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-6-시클로프로판아미도-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-(2,2-디메틸시클로프로판아미도)-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[2-(디플루오로메톡시)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-[(디메틸카르바모일)아미노]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
6-(4-플루오로부탄아미도)-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[3-(디플루오로메톡시)-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
{[(6E)-6-(시클로프로판카르보닐이미노)-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-3-[(2H3)메틸카르바모일]-1,6-디히드로피리다진-1-일]메톡시}포스폰산,
4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
6-[(1R,2R)-2-에틸시클로프로판아미도]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일]아미노}-6-[(1S,2S)-2-플루오로시클로프로판아미도]-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-{[메틸(프로판-2-일)카르바모일]아미노}피리다진-3-카르복스아미드,
6-{[에틸(메틸)카르바모일]아미노}-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일]아미노}-6-[(디메틸카르바모일)아미노]-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
프로판-2-일 3-({6-시클로프로판아미도-3-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-4-일}아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트,
6-시클로프로판아미도-4-{[2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-{[6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-시클로프로판아미도-4-({3-메톡시-4-[2-(2H3)메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]피리딘-2-일}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(피리딘-2-일)아미노]피리다진-3-카르복스아미드,
6-[(2,6-디메틸피리미딘-4-일)아미노]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
6-{[5-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]아미노}-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-{[5-(모르폴린-4-일)피리딘-2-일]아미노}피리다진-3-카르복스아미드,
6-{[4-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]아미노}-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드, 및
6-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드, 및
6-((1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 1종 이상의 화합물, 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는, Tyk-2에 작용하여 신호 전달 억제를 유발함으로써 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα의 조정과 연관된 질환을 치료하는 데 유용한 제약 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα의 조정과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 제조하기 위한 방법 및 중간체를 제공한다.
본 발명은 또한 증식성, 대사성, 알레르기성, 자가면역 및 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 숙주에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물 중 적어도 1종을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법 (또는 이들 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공한다.
본 발명은 또한 염증성 또는 자가면역 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법 (또는 이들 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공한다.
본 발명은 또한 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 질환을 치료하는 방법 (또는 이들 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공하며, 여기서 질환은 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 루푸스 신염, 피부 루푸스, 염증성 장 질환, 건선, 크론병, 건선성 관절염, 쇼그렌 증후군, 전신 경피증, 궤양성 결장염, 그레이브스병, 원판상 홍반성 루푸스, 성인 발병 스틸병, 전신 발병 소아 특발성 관절염, 통풍, 통풍성 관절염, 제1형 당뇨병, 인슐린 의존성 당뇨병, 패혈증, 패혈성 쇼크, 시겔라증, 췌장염 (급성 또는 만성), 사구체신염, 자가면역 위염, 당뇨병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 호중구감소증, 혈소판감소증, 아토피성 피부염, 중증 근무력증, 췌장염 (급성 또는 만성), 강직성 척추염, 심상성 천포창, 굿패스쳐병, 항인지질 증후군, 특발성 혈소판감소증, ANCA-연관 혈관염, 천포창, 가와사키병, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증 (CIDP), 피부근염, 다발근염, 포도막염, 길랑-바레 증후군, 자가면역 폐 염증, 자가면역 갑상선염, 자가면역 염증성 안질환 및 만성 탈수초성 다발신경병증이다.
본 발명은 또한 신경변성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법 (또는 상기 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공하며, 여기서 질환은 알츠하이머병, 파킨슨병, ALS, 다발성 경화증 (CIS, 시신경염, 시신경척수염을 포함한 RMS 및/또는 진행성 MS)으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 류마티스 관절염의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 류마티스 관절염을 치료하는 방법 (또는 류마티스 관절염의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공한다.
또한, 본 발명은 상태의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상태를 치료하는 방법 (또는 이들 상태의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공하며, 여기서 상태는 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 전이성 흑색종, 카포시 육종, 다발성 골수종, 고형 종양, 안구 신생혈관화, 및 영아 혈관종, B 세포 림프종, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 다발성 혈관염, 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 중증 근무력증, 알레르기성 비염, 다발성 경화증 (MS), 이식 거부, 제I형 당뇨병, 막성 신염, 염증성 장 질환, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 갑상선염, 한랭 및 온난 응집소 질환, 에반스 증후군, 용혈성 요독성 증후군/혈전성 혈소판감소성 자반증 (HUS/TTP), 사르코이드증, 쇼그렌 증후군, 말초 신경병증, 심상성 천포창 및 천식으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα 매개 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법 (또는 이들 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공한다.
본 발명은 또한 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα 매개 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법 (또는 이들 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도)을 제공하며, 여기서 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα 매개 질환은 IL-12, IL-23 및/또는 IFNα에 의해 조정되는 질환이다.
본 발명은 또한 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물을 다른 치료제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 예시된 화합물 또는 예시된 화합물의 조합 또는 본원의 다른 실시양태로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 화합물은 하기 기재된 검정 중 적어도 하나에서 IC50 < 1000 nM을 갖는다.
본 발명은 그의 취지 또는 본질적인 속성으로부터 벗어나지 않으면서 다른 구체적 형태로 구현될 수 있다. 본 발명은 본원에 언급된 본 발명의 바람직한 측면 및/또는 실시양태의 모든 조합을 포괄한다. 본 발명의 임의의 및 모든 실시양태는 임의의 다른 실시양태 또는 실시양태들과 함께 추가의 보다 바람직한 실시양태를 기재할 수 있는 것으로 이해된다. 또한, 바람직한 실시양태의 각각의 개별 요소는 그 자체의 독립적인 바람직한 실시양태인 것으로 이해되어야 한다. 게다가, 한 실시양태의 임의의 요소는 임의의 실시양태로부터의 임의의 및 모든 다른 요소와 조합하여 추가의 실시양태를 기재하는 것으로 의도된다.
유용성
본 발명의 화합물은 IL-23-자극된 및 IFNα-자극된 세포 기능, 예컨대 유전자 전사를 조정한다. 본 발명의 화합물에 의해 조정될 수 있는 다른 유형의 세포 기능은 IL-12-자극된 반응을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
따라서, 화학식 I의 화합물은 Tyk2에 작용하여 신호 전달을 매개함으로써 IL-23 및/또는 IFNα의 기능의 조정과 연관된 상태를 치료하는 데, 특히 IL-23, IL-12 및/또는 IFNα의 기능의 선택적 억제에 유용성을 갖는다. 이러한 상태는 병원성 메카니즘이 이들 시토카인에 의해 매개되는 IL-23-, IL-12- 또는 IFNα-연관 질환, 및 말초 및/또는 중심 구획에서 발생할 수 있는 후속 염증유발 반응을 갖는 Tyk2 경로의 후속 활성화를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서의 질환 상태의 치료를 포괄하며, (a) 포유동물에서, 특히 이러한 포유동물이 질환 상태에 대한 소인이 있지만 아직 이를 갖는 것으로 진단되지는 않은 경우에 질환 상태의 발생을 예방 또는 지연시키는 것; (b) 질환 상태를 억제하는 것, 즉 그의 발병을 정지 또는 둔화시키는 것; 및/또는 (c) 증상 또는 질환 상태의 완전 또는 부분 감소를 달성하는 것, 및/또는 질환 또는 장애 및/또는 그의 증상을 완화, 개선, 경감 또는 치유하는 것을 포함한다.
IL-23-, IL-12 및/또는 IFNα-자극된 세포성 반응의 조정제로서의 그의 활성의 관점에서, 화학식 I의 화합물은 염증성 질환, 예컨대 크론병, 궤양성 결장염, 천식, 이식편 대 숙주 질환, 동종이식편 거부, 만성 폐쇄성 폐 질환; 자가면역 질환, 예컨대 그레이브스병, 류마티스 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 피부 루푸스, 루푸스 신염, 원판상 홍반성 루푸스, 건선; 자가-염증성 질환, 예컨대 CAPS, TRAPS, FMF, 성인 발병 스틸병, 전신 발병 소아 특발성 관절염, 통풍, 통풍성 관절염; 제2형 당뇨병, 아테롬성동맥경화증, 심근경색을 포함한 대사 질환; 파괴성 골 장애, 예컨대 골 흡수 질환, 골관절염, 골다공증, 다발성 골수종-관련 골 장애; 증식성 장애, 예컨대 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병; 혈관신생 장애, 예컨대 고형 종양, 안구 신생혈관화 및 영아 혈관종을 포함한 혈관신생 장애; 감염성 질환, 예컨대 패혈증, 패혈성 쇼크 및 시겔라증; 신경변성 질환, 예컨대 알츠하이머병, 파킨슨병, ALS, 다발성 경화증 (CIS, 시신경염, 시신경척수염을 포함한 RMS 및/또는 진행성 MS), 뇌 허혈 또는 외상성 손상에 의해 유발된 신경변성 질환, 종양성 및 바이러스성 질환, 예컨대 각각 전이성 흑색종, 카포시 육종, 다발성 골수종 및 HIV 감염 및 CMV 망막염, AIDS를 포함하나 이에 제한되지는 않는 IL-23-, IL-12- 및/또는 IFNα-연관 질환을 치료하는 데 유용하다.
보다 특히, 본 발명의 화합물로 치료될 수 있는 구체적 상태 또는 질환은 비제한적으로 췌장염 (급성 또는 만성), 천식, 알레르기, 성인 호흡 곤란 증후군, 만성 폐쇄성 폐 질환, 사구체신염, 류마티스 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 피부 루푸스, 루푸스 신염, 원판상 홍반성 루푸스, 경피증, 만성 갑상선염, 그레이브스병, 자가면역 위염, 당뇨병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 호중구감소증, 혈소판감소증, 아토피성 피부염, 만성 활성 간염, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 크론병, 건선, 이식편 대 숙주 질환, 내독소에 의해 유발된 염증 반응, 결핵, 아테롬성동맥경화증, 근육 변성, 악액질, 건선성 관절염, 라이터 증후군, 통풍, 외상성 관절염, 풍진성 관절염, 급성 활막염, 췌장 β-세포 질환; 광범성 호중구 침윤을 특징으로 하는 질환; 류마티스 척추염, 통풍성 관절염 및 다른 관절염성 상태, 뇌 말라리아, 만성 폐 염증성 질환, 규폐증, 폐 사르코이드증, 골 흡수 질환, 동종이식편 거부, 감염으로 인한 열 및 근육통, 감염에 속발성인 악액질, 켈로이드 형성, 반흔 조직 형성, 궤양성 결장염, 발열, 인플루엔자, 골다공증, 골관절염, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 전이성 흑색종, 카포시 육종, 다발성 골수종, 패혈증, 패혈성 쇼크 및 시겔라증; 알츠하이머병, 파킨슨병, 다발성 경화증 (CIS, 시신경염, 시신경척수염을 포함한 RMS 및/또는 진행성 MS), 외상성 손상으로 인한 뇌 허혈 또는 신경변성 질환; 고형 종양, 안구 신생혈관화, 및 영아 혈관종을 포함한 혈관신생 장애; 급성 간염 감염 (A형 간염, B형 간염 및 C형 간염 포함), HIV 감염 및 CMV 망막염, AIDS, ARC 또는 악성종양, 및 포진을 포함한 바이러스성 질환; 졸중, 심근 허혈, 졸중 심장 발작에서의 허혈, 기관 저산소증, 혈관 증식증, 심장 및 신장 재관류 손상, 혈전증, 심장 비대, 트롬빈-유발 혈소판 응집, 내독소혈증 및/또는 독성 쇼크 증후군, 프로스타글란딘 엔도퍼옥시다제 신다제-2와 연관된 상태, 및 심상성 천포창을 포함한다. 바람직한 치료 방법은 상태가 알츠하이머병, 파킨슨병, ALS, 다발성 경화증 (CIS, 시신경염, 시신경척수염을 포함한 RMS 및/또는 진행성 MS)인 것들이다.
용어 "IL-23-, IL-12- 및/또는 IFNα-연관 상태" 또는 "IL-23-, IL-12- 및/또는 IFNα-연관 질환 또는 장애"가 본원에 사용된 경우, 각각은 상세하게 반복된 바와 같은 상기 확인된 모든 상태, 뿐만 아니라 IL-23, IL-12 및/또는 IFNα에 의해 영향을 받는 임의의 다른 상태를 포괄하는 것으로 의도된다.
따라서, 본 발명은 이러한 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 적어도 1종의 화합물 또는 그의 염을 투여하는 것을 포함하는, 이러한 상태를 치료하는 방법을 제공한다. "치료 유효량"은 단독으로 또는 조합하여 투여되는 경우 IL-23, IL-12 및/또는 IFNα 기능을 억제하고/거나 질환을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다.
IL-23-, IL-12 및/또는 IFNα-연관 상태를 치료하는 방법은 화학식 I의 화합물을 단독으로 또는 서로 및/또는 이러한 상태를 치료하는 데 유용한 다른 적합한 치료제와 조합하여 투여하는 것을 포함할 수 있다. 따라서, "치료 유효량"은 또한 IL-23, IL-12 및/또는 IFNα 기능을 억제하고/거나 IL-23, IL-12 및/또는 IFNα와 연관된 질환을 치료하는 데 효과적인 청구된 화합물의 조합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다.
예시적인 이러한 다른 치료제는 코르티코스테로이드, 롤리프람, 칼포스틴, 시토카인-억제성 항염증 약물 (CSAID), 인터류킨-10, 글루코코르티코이드, 살리실레이트, 산화질소 및 다른 면역억제제; 핵 전위 억제제, 예컨대 데옥시스페르구알린 (DSG); 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID), 예컨대 이부프로펜, 셀레콕시브 및 로페콕시브; 스테로이드, 예컨대 프레드니손 또는 덱사메타손; 항바이러스제, 예컨대 아바카비르; 항증식제, 예컨대 메토트렉세이트, 레플루노미드, FK506 (타크롤리무스, 프로그라프(PROGRAF)®); 항말라리아제, 예컨대 히드록시클로로퀸; 세포독성 약물, 예컨대 아자티프린 및 시클로포스파미드; TNF-α 억제제, 예컨대 테니답, 항-TNF 항체 또는 가용성 TNF 수용체, 및 라파마이신 (시롤리무스 또는 라파뮨(RAPAMUNE)®) 또는 그의 유도체를 포함한다.
상기 다른 치료제는, 본 발명의 화합물과 조합하여 사용되는 경우, 예를 들어 문헌 [Physicians' Desk Reference (PDR)]에 지시된 양으로 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 달리 결정된 바와 같이 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에서, 이러한 다른 치료제(들)는 본 발명의 화합물의 투여 전에, 그와 동시에 또는 그 후에 투여될 수 있다. 본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 IL-23-, IL-12- 및/또는 IFNα-매개 질환을 비롯한 Tyk2-매개 신호 전달을 억제함으로써 IL-23-, IL-12- 또는 IFNα-연관 상태를 치료할 수 있는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 상기 기재된 바와 같은 다른 치료제를 함유할 수 있고, 예를 들어 제약 제제 기술분야에 널리 공지된 것들과 같은 기술에 따라 통상적인 고체 또는 액체 비히클 또는 희석제, 뿐만 아니라 목적하는 투여 방식에 적절한 유형의 제약 첨가제 (예를 들어, 부형제, 결합제, 보존제, 안정화제, 향미제 등)를 사용함으로써 제제화될 수 있다.
따라서, 본 발명은 화학식 I의 1종 이상의 화합물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 포함한다.
"제약상 허용되는 담체"는 생물학적 활성제를 동물, 특히 포유동물에게 전달하기 위해 관련 기술분야에서 일반적으로 허용되는 매질을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 이해 범위 내에서 다수의 인자에 따라 잘 제제화된다. 이들은 비제한적으로 제제화되는 활성제의 유형 및 성질; 작용제-함유 조성물이 투여될 대상체; 조성물의 의도된 투여 경로; 및 표적화될 치료 적응증을 포함한다. 제약상 허용되는 담체는 수성 및 비-수성 액체 매질 둘 다, 뿐만 아니라 다양한 고체 및 반고체 투여 형태를 포함한다. 이러한 담체는 활성제 이외에도 다수의 상이한 성분 및 첨가제를 포함할 수 있으며, 이러한 추가의 성분은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 다양한 이유, 예를 들어 활성제, 결합제 등의 안정화를 위해 제제에 포함된다. 적합한 제약상 허용되는 담체, 및 그의 선택에 수반되는 인자에 대한 설명은 용이하게 입수가능한 다양한 출처, 예컨대, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition (1985)]에서 발견되며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
화학식 I의 화합물은 치료될 상태에 적합한 임의의 수단에 의해 투여될 수 있으며, 이는 부위-특이적 치료에 대한 필요 또는 전달될 약물의 양에 따라 달라질 수 있다. 다른 전달 방식이 고려될지라도, 국소 투여가 일반적으로 피부-관련 질환에 바람직하고, 전신 치료가 암성 또는 전암성 상태에 바람직하다. 예를 들어, 화합물은 경구로, 예컨대 정제, 캡슐, 과립, 분말, 또는 시럽을 포함한 액체 제제의 형태로; 국소로, 예컨대 용액, 현탁액, 겔 또는 연고의 형태로; 설하로; 협측으로; 비경구로, 예컨대 피하, 정맥내, 근육내 또는 흉골내 주사 또는 주입 기술에 의해 (예를 들어, 멸균 주사가능한 수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액으로서); 비강으로, 예컨대 흡입 스프레이에 의해; 국소로, 예컨대 크림 또는 연고의 형태로; 직장으로, 예컨대 좌제의 형태로; 또는 리포솜으로 전달될 수 있다. 비-독성의 제약상 허용되는 비히클 또는 희석제를 함유하는 투여 단위 제제가 투여될 수 있다. 화합물은 즉시 방출 또는 연장 방출에 적합한 형태로 투여될 수 있다. 즉시 방출 또는 연장 방출은 적합한 제약 조성물로, 또는 특히 연장 방출의 경우에 피하 이식물 또는 삼투 펌프와 같은 장치로 달성될 수 있다.
국소 투여를 위한 예시적인 조성물은 국소 담체, 예컨대 플라스티베이스(PLASTIBASE)® (폴리에틸렌으로 겔화된 미네랄 오일)를 포함한다.
경구 투여를 위한 예시적인 조성물은, 예를 들어 벌크를 부여하기 위한 미세결정질 셀룰로스, 현탁화제로서의 알긴산 또는 알긴산나트륨, 점도 증진제로서의 메틸셀룰로스, 및 감미제 또는 향미제, 예컨대 관련 기술분야에 공지된 것들을 함유할 수 있는 현탁액; 및 예를 들어 미세결정질 셀룰로스, 인산이칼슘, 전분, 스테아르산마그네슘 및/또는 락토스 및/또는 다른 부형제, 결합제, 증량제, 붕해제, 희석제 및 윤활제, 예컨대 관련 기술분야에 공지된 것들을 함유할 수 있는 즉시 방출 정제를 포함한다. 본 발명의 화합물은 또한 설하 및/또는 협측 투여에 의해, 예를 들어 성형, 압축 또는 동결-건조된 정제로 경구로 전달될 수 있다. 예시적인 조성물은 신속-용해 희석제, 예컨대 만니톨, 락토스, 수크로스 및/또는 시클로덱스트린을 포함할 수 있다. 또한, 고분자량 부형제, 예컨대 셀룰로스 (아비셀(AVICEL)®) 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 점막 부착을 보조하는 부형제, 예컨대 히드록시프로필 셀룰로스 (HPC), 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC), 소듐 카르복시메틸 셀룰로스 (SCMC), 및/또는 말레산 무수물 공중합체 (예를 들어, 간트레즈(GANTREZ)®); 및 방출을 제어하는 작용제, 예컨대 폴리아크릴 공중합체 (예를 들어, 카르보폴(CARBOPOL) 934®)가 이러한 제제에 포함될 수 있다. 윤활제, 활택제, 향미제, 착색제 및 안정화제가 또한 제조 및 사용의 용이성을 위해 첨가될 수 있다.
비강 에어로졸 또는 흡입 투여를 위한 예시적인 조성물은, 예를 들어 벤질 알콜 또는 다른 적합한 보존제, 흡수 및/또는 생체이용률을 증진시키기 위한 흡수 촉진제, 및/또는 다른 가용화제 또는 분산제, 예컨대 관련 기술분야에 공지된 것들을 함유할 수 있는 용액을 포함한다.
비경구 투여를 위한 예시적인 조성물은, 예를 들어 적합한 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매, 예컨대 만니톨, 1,3-부탄디올, 물, 링거액, 등장성 염화나트륨 용액, 또는 다른 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제, 예컨대 합성 모노- 또는 디글리세리드, 및 지방산, 예컨대 올레산을 함유할 수 있는 주사가능한 용액 또는 현탁액을 포함한다.
직장 투여를 위한 예시적인 조성물은, 예를 들어 적합한 비-자극성 부형제, 예컨대 코코아 버터, 합성 글리세리드 에스테르 또는 폴리에틸렌 글리콜을 함유할 수 있는 좌제를 포함하며, 이는 통상의 온도에서는 고체이지만 직장강에서는 액화 및/또는 용해되어 약물을 방출한다.
본 발명의 화합물의 치료 유효량은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있고, 포유동물에 대해 1일에 약 0.05 내지 1000 mg/kg; 1-1000 mg/kg; 1-50 mg/kg; 5-250 mg/kg; 250-1000 mg/kg 체중의 활성 화합물의 예시적인 투여량을 포함하며, 이는 단일 용량으로 또는 개별 분할 용량의 형태로, 예컨대 1일에 1 내지 4회 투여될 수 있다. 임의의 특정한 대상체에 대한 구체적 용량 수준 및 투여 빈도는 달라질 수 있고, 사용되는 구체적 화합물의 활성, 그 화합물의 대사 안정성 및 작용 기간, 대상체의 종, 연령, 체중, 전반적 건강, 성별 및 식이, 투여 방식 및 시간, 배출 속도, 약물 조합, 및 특정한 상태의 중증도를 포함한 다양한 인자에 따라 달라질 것임이 이해될 것이다. 바람직한 치료 대상체는 동물, 가장 바람직하게는 포유동물 종, 예컨대 인간, 및 가축, 예컨대 개, 고양이, 말 등을 포함한다. 따라서, 용어 "환자"가 본원에 사용되는 경우, 이 용어는 IL-23, IL-12 및/또는 IFNα-매개된 기능의 조정에 의해 영향을 받는 모든 대상체, 가장 바람직하게는 포유동물 종을 포함하는 것으로 의도된다.
제조 방법
본 발명의 화합물은 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있는 다수의 방식으로 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물은 합성 유기 화학 기술분야에 공지된 합성 방법과 함께 하기 기재된 방법, 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지되는 바와 같은 그에 대한 변형을 사용하여 합성될 수 있다. 바람직한 방법은 하기 기재된 것들을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 화합물은 본 섹션에 기재된 반응 및 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 반응은 사용된 시약 및 물질에 적절한 용매 중에서 수행되고, 변환이 수행되기에 적합하다. 또한, 하기 기재된 합성 방법의 기재에서, 용매, 반응 분위기, 반응 온도, 실험 지속기간 및 후처리 절차의 선택을 포함한 모든 제안된 반응 조건은 그 반응에 대한 표준 조건이 되도록 선택되며, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인지되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 분자의 다양한 부분에 존재하는 관능기가 제안된 시약 및 반응과 상용성이어야 한다는 것이 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해된다. 반응 조건과 상용성인 치환기에 대한 이러한 제한은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이고, 이어서 대안적 방법이 사용되어야 한다. 이는 때때로 본 발명의 목적 화합물을 수득하기 위해 합성 단계의 순서를 변형하거나 또는 또 다른 것에 비해 하나의 특정한 공정 반응식을 선택하기 위한 판단을 필요로 할 것이다. 또한, 이 분야의 임의의 합성 경로의 계획에서 또 다른 주요 고려사항은 본 발명에 기재된 화합물에 존재하는 반응성 관능기의 보호에 사용되는 보호기의 신중한 선택임이 인식될 것이다. 숙련된 진료의에게 많은 대안을 기재하고 있는 권위있는 설명은 문헌 [Greene and Wuts (Protective Groups In Organic Synthesis, Third Edition, Wiley and Sons, 1999)]이다.
도 1에 도시된 주요 중간체는 합성 유기 화학 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방식으로 조립되어 화합물 1을 제공할 수 있다.
도 1
Figure pct00006
반응식 1은 R = 단순 알킬 (메틸, 에틸 등)인 경우에 X = 할로겐, 예컨대 아이오다이드인 중간체 Ia, 및 중간체 Ib를 적절한 용매, 바람직하게는 DMF 중에서 적절한 염기, 바람직하게는 탄산칼륨의 존재 하에 합하여 화학식 II의 중간체를 수득할 수 있는 방법을 나타낸다. R = 시클로프로필인 경우, Ib는 승온에서 디클로로에탄 중 아세트산구리(II), 2,2'-비피리딘 및 탄산나트륨의 존재 하에 시클로프로필보론산으로 처리될 수 있다. 이어서, II를 에테르 중 강한 환원 염기, 특히 이소프로필마그네슘 브로마이드, THF 용액의 존재 하에 저온에서 모노-탈브로민화시켜 화학식 IIa의 중간체를 수득할 수 있다. II는 또한 보다 고도로 치환된 1,2,3-트리아졸을 제조하기 위해 그대로 사용될 수 있다. IIa는 그대로 사용될 수 있거나, 또는 금속 할로겐 교환 후 트리알킬보레이트, 구체적으로 트리메틸보레이트 또는 트리이소프로필보레이트로의 켄칭에 의해 상응하는 보론산 (IIb)으로 전환될 수 있다. 금속 할로겐 교환을 위한 바람직한 염기는 저온에서 THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드-리튬 클로라이드 착물일 수 있다.
반응식 1
Figure pct00007
반응식 2는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 중간체 IIa 또는 IIb를 중간체 Ic (여기서, IIa와의 반응의 경우에 Y = 보로네이트, 또는 IIb와의 반응의 경우에 할라이드임)와 합하여 화학식 III의 중간체를 제공할 수 있는 방법을 나타낸다. (화학식 Ic의 중간체는 상업적으로 입수가능하거나, 또는 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있음). 변환은 적절한 보로네이트와 적절한 할라이드의 전이 금속 촉매된 커플링을 사용하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 달성될 수 있다. 보다 구체적으로, 이러한 변환은 승온에서 1,4-디옥산과 같은 용매 중에서 촉매로서의 PdCl2(dppf)[DCM] 및 염기로서의 수성 삼염기성 인산칼륨과의 스즈키 유형 커플링을 사용하여 달성될 수 있다. 유사한 화학을 중간체 II를 사용하여 수행하여 완전 치환된 1,2,3-트리아졸 (화학식 IIa의 중간체)을 제조할 수 있다. 이들 경우에 상응하는 브로모-트리아졸을 취하고, 이를 알킬 또는 알케닐 보로네이트와의 추가의 팔라듐 촉매된 커플링 (이 경우에 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용한 올레핀 환원, 즉 촉매 수소화)에 적용하는 것이 필요하다.
반응식 2
Figure pct00008
반응식 3은 유기 합성 분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자가 화학식 Id (문헌 [Moslin, et al., J. Med. Chem 2019, 62, 8953-8972] 또는 US 9,505,748 참조) 및 Ie (특허: US 10,899,745 참조)의 중간체를 화학식 III의 중간체와 커플링시켜 화학식 IV 또는 IVa의 중간체를 제공할 수 있는 방법을 나타낸다. 반응은 2종의 시약을 적절한 비양성자성 용매, 특히 THF 또는 2-메틸-THF 중에서 특정한 III에 따라 0℃ 내지 50℃에서 혼합하고, 적절한 염기, 특히 리튬 헥사메틸디실라지드, 소듐 헥사메틸디실라지드, 포타슘 헥사메틸디실라지드 또는 수소화나트륨을 첨가하는 것을 포함한다. IVa의 경우, 트리듀테로메틸아미드가 후속 단계에서 도입될 수 있다.
반응식 3
Figure pct00009
반응식 4는 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자가 화합물 IV를 적절한 기질에 하나 이상의 단계로 커플링시켜 화학식 1의 화합물을 생성할 수 있는 방법을 나타낸다. 1 단계 방법은 화학식 IV의 화합물을 전이 금속 촉매된 조건 하에 화학식 Ig의 1급 아미드 또는 화학식 Ih의 방향족 아민과 커플링시키는 것을 포함한다. 특히, 이 반응에 유리한 조건은 승온에서 용매로서 1,4-디옥산 중 촉매로서 Pd2(dba)3, 리간드로서 xantphos 및 염기로서 Cs2CO3을 사용하는 부흐발트 유형 커플링을 사용하는 것을 포함한다. 이러한 촉매/리간드/염기 시스템은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방식으로 변경될 수 있다. 대안적으로, 화학식 IV의 화합물은 1급 아민으로 처리될 수 있으며, 이는 적절한 용매, 특히 4-메톡시벤질아민 중에서 승온에서 탈보호되어 화학식 V의 상응하는 1급 아민을 제공할 수 있는 생성물을 제공할 수 있다. 이 반응의 생성물을 승온에서 TFA를 사용하여 탈보호하여 V를 수득할 수 있다. 후속적으로, 화학식 I의 화합물은 V로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 아미드 커플링 조건 하에 적절한 카르복실산과의 커플링에 의해 제조될 수 있다.
반응식 4
Figure pct00010
반응식 5는 A = 질소인 화학식 I의 화합물의 대안적 합성을 나타낸다. 화합물 Ie를 상기 기재된 바와 같이 A = 질소인 화학식 III의 화합물에 커플링시켜 화학식 IVa의 화합물을 수득할 수 있다. 이어서, 이들 화합물을 사용하여 화학식 1f의 적절한 1급 아미드와의 부흐발트 유형 커플링 (상기 기재된 바와 같음)을 이용하여 화학식 VI의 화합물을 제조할 수 있다. 이어서, 화학식 VI의 화합물을 합성 유기 화학 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 아미드 결합 커플링 시약 시스템, 특히 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 및 HOBT로 적절한 용매, 특히 NMP/AcCN 중에서 승온에서 처리하여 화학식 VII의 화합물을 생성할 수 있다. 이어서, 이들 화합물을 적절한 용매, 특히 DMSO 중에서 염기, 특히 디이소프로필에틸아민의 존재 하에 승온에서 트리듀테로메틸아민 히드로클로라이드로 처리할 수 있다.
Figure pct00011
제조
상업적 공급원으로부터 구입한 모든 시약은 달리 나타내지 않는 한 추가 정제 없이 사용하였다. 공기 또는 수분 민감성 시약을 포함하는 모든 반응은 불활성 분위기 하에 수행하였다. 양성자 및 탄소 자기 공명 (1H 및 13C NMR) 스펙트럼을 브루커 아반스(Bruker Avance) 400 또는 제올 이클립스 (JEOL Eclipse) 500 분광계 상에서 기록하고, 이들이 실행된 샘플의 참조 용매에 대해 ppm으로 기록하였다. HPLC 및 LCMS 분석은 시마즈 LC-10AS 액체 크로마토그래프 및 SPDUV-vis 검출기를 사용하여 220 또는 254 nm에서 수행하였고, MS 검출은 마이크로매스 플랫폼 LC 분광계를 사용하여 수행하였다. 애질런트 테크놀로지스로부터의 GC (7890B)-MS (5977B)를 사용하여 GCMS 분석을 수행하였다.
방법 A:
4분에 걸쳐 20%에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.6-분 유지 및
이어서 20% B로의 0.1-분 구배 및 20% B에서 0.3-분 유지
용매 A: 5 mm 포름산암모늄 pH 3.3:ACN (98:02)
용매: B: ACN:완충제 (98:02)
유량: 1.0 ml/분
칼럼: 키네텍스 XB - C18 (75 x 3.0) mm, 2.6 μm
220 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화.
방법 B:
2.5분에 걸쳐 5%에서 95% 용매 B의 선형 구배, 95% B에서 1.5-분 유지 및
이어서 5% B로의 0.5-분 구배 및 5% B에서 1.5-분 유지
용매 A: H2O 중 0.1% TFA
용매: B: ACN 중 0.1% TFA
유량: 1.5 ml/분
칼럼: 엑스브리지 C8 (50 x 4.6) mm, 3.5 μm
220 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화.
방법 C:
2분 ("min")에 걸쳐 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.5분 ("min") 유지
254 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 액퀴티 UPLC® BEH C18 1.7 μM
유량: 1 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 0.05% 트리플루오로아세트산, 95% 물, 5% 아세토니트릴
용매 B: 0.05% 트리플루오로아세트산, 5% 물, 95% 아세토니트릴
방법 D:
1분 ("min")에 걸쳐 2에서 98% 용매 B의 선형 구배, 98% B에서 0.5분 ("min") 유지
254 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 액퀴티 UPLC® BEH C18 1.7 μM
유량: 0.8 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 물
용매 B: 아세토니트릴
방법 E:
1분 ("min")에 걸쳐 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.5분 ("min") 유지
254 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 액퀴티 UPLC® BEH C18 1.7 μM
유량: 1 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 0.05% 트리플루오로아세트산, 95% 물, 5% 아세토니트릴
용매 B: 0.05% 트리플루오로아세트산, 5% 물, 95% 아세토니트릴
방법 F:
2.5분 ("min")에 걸쳐 5%에서 95% 용매 B의 선형 구배, 95% B에서 1.5분 ("min") 유지, 이어서 5% B로의 0.5분 구배 및 5% B에서 1분 유지.
220 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 조르박스 XDB C-18 (50x4.6 mm) 3.5 μM
유량: 1.5 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 0.1% 포름산, 95% 물, 5% 아세토니트릴
용매 B: 아세토니트릴
방법 G:
3분 ("min")에 걸쳐 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.5분 ("min") 유지
220 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 워터스 엑스브리지 C18 (2.1 mm x 50 mm) 1.7 μM
유량: 1 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 95% 10 mM 아세트산암모늄 (물 중) 5% 아세토니트릴
용매 B: 5% 10 mM 아세트산암모늄 (물 중), 95% 아세토니트릴
방법 H:
1분 ("min")에 걸쳐 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.5분 ("min") 유지
254 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 액퀴티 UPLC® BEH C18 1.7 μM
유량: 1 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 0.1% 트리플루오로아세트산, 95% 물, 5% 아세토니트릴
용매 B: 0.1% 트리플루오로아세트산, 5% 물, 95% 아세토니트릴
방법 I:
3분 ("min")에 걸쳐 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.5분 ("min") 유지
254 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화
칼럼: 액퀴티 UPLC® BEH C18 1.7 μM (2.1 x 50 mm)
유량: 1 밀리리터 ("mL")/분
용매 A: 0.05% 트리플루오로아세트산, 95% 물, 5% 아세토니트릴
용매 B: 0.05% 트리플루오로아세트산, 5% 물, 95% 아세토니트릴
방법 J:
1.5분에 걸쳐 20%에서 98% 용매 B의 선형 구배, 98% B에서 0.5-분 유지, 이어서 20% B로의 0.1-분 구배 및 20% B에서 0.5-분 유지
용매 A: 5 mm 포름산암모늄 pH 3.3:ACN (98:02)
용매: B: ACN:완충제 (98:02)
유량: 0.7 ml/분
칼럼: 키네텍스 XB - C18 (75 x 3.0) mm, 2.6 μm
220 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화.
방법 K:
4분에 걸쳐 2%에서 40% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 0.6-분 유지, 이어서 20% B로의 0.1-분 구배 및 20% B에서 0.3-분 유지.
용매 A: 5 mM 포름산암모늄 pH 3.3:ACN (98:02)
용매: B: ACN:완충제 (98:02)
유량: 1.0 ml/분
칼럼: 키네텍스 XB - C18 (75 x 3.0) mm, 2.6 μm
220 나노미터 ("nm")에서의 자외선 ("UV") 가시화.
GCMS 방법
크로마토그래피 칼럼: HP-5 (30 m x 320 μm x 0.25 μm)
칼럼 길이 30 m, 내부 직경 0.32 mm, 두께 0.25 μm
입구 온도: 250℃; 운반 기체: He; 검출기 온도: 300℃; 칼럼 유량 2 mL/분; 기류 400 mL/분; H2 유량 40 mL/분; 가열 스케줄: 120℃ 유지 시간 3분; 이어서 40℃/분 속도로 300℃로 상승시키고, 2분 동안 유지, 소스 온도: 230℃.
Figure pct00012
Figure pct00013
중간체 1
Figure pct00014
단계 1:
에탄올 (20 mL) 및 물 (5 mL) 중 1-브로모-2-메톡시-3-니트로벤젠 (2.0 g, 8.62 mmol)의 용액에 철 (3.37 g, 60.3 mmol) 및 염화암모늄 (2.3 g, 43.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 3시간 동안 교반하고, 에탄올 (50 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물 (2.5 g)을 수득하였다. 조 잔류물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 물 (2 X 20 mL) 및 염수 (2 X 20 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 3-브로모-2-메톡시아닐린 (1.8 g, 8.55 mmol, 99% 수율)을 갈색 액체로서 수득하였다.
MS (M+1) m/z: 202.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.84 [A].
단계 2:
밀봉된 튜브에서 디옥산 (15 mL) 중 3-브로모-2-메톡시아닐린 (1.80 g, 8.91 mmol)의 교반 용액에 비스(피나콜레이토)디보론 (3.39 g, 13.36 mmol) 및 아세트산칼륨 (2.62 g, 26.7 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 질소 기체로 5분 동안 퍼징한 다음, PdCl2(dppf).[DCM] (0.73 g, 0.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 물 (2 X 50 mL) 및 염수 (2 X 50 mL)로 세척하였다. 수집된 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-메톡시-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (1.8 g, 6.88 mmol, 77% 수율)을 연갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 250.4 (M+H)+. LC 체류 시간 2.11 [A].
중간체 2
Figure pct00015
단계 1:
0℃에서 H2O (150 mL) 중 1,3-디브로모-5,5-디메틸이미다졸리딘-2,4-디온 (53.8 g, 188 mmol)의 교반 용액에 2H-1,2,3-트리아졸 (10 g, 145 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 잔류물을 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4,5-디브로모-2H-1,2,3-트리아졸 (26 g, 115 mmol, 79% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다.
GCMS: 226.8 [M], 체류 시간 = 3.40.
단계 2:
THF (8 mL) 중 트리페닐포스핀 (1.52 g, 5.78 mmol)의 용액에 -10℃에서 DIAD (0.95 mL, 4.89 mmol)를 첨가하였다. 10분 후, 4,5-디브로모-2H-1,2,3-트리아졸 (1 g, 4.45 mmol)을 조금씩 첨가하고, 이어서 2-플루오로에탄-1-올 (0.4 g, 6.23 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에 도달하도록 하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 디에틸 에테르 (2 X 40 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4,5-디브로모-2-(2-플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸 (730 mg, 2.69 mmol, 60.6% 수율)을 황색 액체로서 수득하였다.
GCMS: = 272.9 [M], 체류 시간 = 3.63.
단계 3
THF (10 mL) 중 4,5-디브로모-2-(2-플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸 (0.7 g, 2.57 mmol)의 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 (3.85 mL, 7.70 mmol)를 0℃에서 적가하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl 용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 디에틸 에테르 (2 X 30 ml)로 추출하였다. 수집된 유기 추출물을 무수 Na2SO4 하에 건조시키고, 저진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 갈색 액체로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 그대로 사용하였다. GCMS: 193.0, 체류 시간 = 5.84.
중간체 3
Figure pct00016
단계 1
2,2-디플루오로에탄-1-올 (2.0 g, 24.38 mmol)을 밀봉된 튜브에서 0℃에서 냉각시키고, Tf2O (5.77 ml, 34.1 mmol)를 적가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 냉각된 10% NaHCO3 용액 (50 mL)에 부었다. 수성 층을 디에틸 에테르 (2 X 50 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 2,2-디플루오로에틸 트리플루오로메탄술포네이트 (5.1 g, 23.82 mmol, 98% 수율)를 추가 정제 없이 그대로 사용하였다.
1H NMR(CDCl3): 6.22 - 5.92 (m, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 2H).
단계 2
DMF (20 mL) 중 2,2-디플루오로에틸 트리플루오로메탄술포네이트 (5.0 g, 23.35 mmol) 및 4,5-디브로모-2H-1,2,3-트리아졸 (6.36 g, 28.0 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 K2CO3 (6.45 g, 46.7 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에 도달하도록 하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (100 mL)로 켄칭하고, DCM (2 X 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트)를 사용하여 정제하여 4,5-디브로모-2-(2,2-디플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸 (2.3 g, 7.91 mmol, 33.9% 수율)을 무색 액체로서 수득하였다.
1H NMR (CDCl3): 6.36 - 6.06 (m, 1H), 4.78 - 4.71 (m, 2H).
단계 3
THF (20 mL) 중 4,5-디브로모-2-(2,2-디플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸 (1.5 g, 5.16 mmol)의 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 (9 ml, 18.00 mmol, THF 중 2 M 용액)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, 디에틸 에테르 (2 X 50 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 저진공 하에 농축시켜 조 4-브로모-2-(2,2-디플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸 (1.05 g)을 진적색 오일로서 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 그대로 사용하였다. GCMS: 210.9, 체류 시간 = 5.37.
중간체 4
Figure pct00017
단계 1:
DME (15 mL) 및 물 (5 mL) 중 2-메톡시-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (2.31 g, 9.26 mmol) 및 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.50 g, 9.26 mmol)의 교반 용액에 탄산나트륨 (2.45 mg, 23.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 5분 동안 퍼징하고, Pd(Ph3P)4 (1.07 g, 0.93 mmol)를 질소 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 메탄올 (50 mL)로 세척하였다. 이어서, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 물 (150 mL) 사이에 분배하였다. 수집된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (1.70 g, 7.67 mmol, 83% 수율)을 갈색 결정질 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 205.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.20 [A]
단계 2:
0℃에서 THF (10 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (문헌 [Moslin, et al., J. Med. Chem 2019, 62, 8953-8972] 참조) (0.35 g, 1.67 mmol) 및 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (0.41 g, 2.01 mmol)의 용액에 LiHMDS (6.70 mL, 6.70 mmol, THF 중 1 M 용액)를 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, EtOAc (2 X 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (0.37 g, 0.97 mmol, 58.2% 수율)를 담갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 377.2 (M+H)+. LC 체류 시간 2.167 [A].
하기 중간체 (4a-4e)를 중간체 4의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00018
Figure pct00019
실시예 1
Figure pct00020
디옥산 (2.5 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (101 mg, 0.26 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (110 mg, 1.29 mmol)의 용액에 반응 혼합물을 N2 하에 5분 동안 퍼징하였다. 이 용액에 xantphos (30 mg, 0.052 mmol), Pd2dba3 (24 mg, 0.026 mmol) 및 탄산세슘 (337 mg, 1.03 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 45분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 12 gm 이스코 실리카 겔 카트리지를 사용하여 0-10% MeOH/DCM 구배로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((2-메톡시-3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (79 mg, 66%)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 440.2 [M+H]+, LC 체류 시간 1.53분 [I]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.33 (s, 1H), 11.01 (s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.14 (d, J=7.9 Hz, 2H), 7.72 (dd, J=7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.47 (dd, J=8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.30 (t, J=8.0 Hz, 1H), 4.52 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 2.13 - 2.05 (m, 1H), 1.52 (t, J=7.3 Hz, 3H), 0.87 - 0.78 (m, 4H).
하기 실시예 2-8을 실시예 1의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00021
Figure pct00022
a = dcpf 리간드, 100℃, 2h, MW. b = 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제함.
중간체 5
Figure pct00023
단계 1
50℃에서 물 (5 mL) 중 1H-1,2,3-트리아졸 (0.52 mL, 9 mmol)의 용액에 브로민 (0.62 mL, 12 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 90분 동안 교반한 후, 침전된 생성물을 여과를 통해 단리시켰다. 침전물을 필터 상에서 공기-건조시켰다. 여과물에 추가의 브로민 (0.62 mL, 12 mmol)을 첨가한 다음, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 후속 슬러리를 여과하고, 고체를 이전에 수득된 침전물과 합하여 4,5-디브로모-1H-1,2,3-트리아졸 (1.83 g, 87% 수율)을 수득하였다.
단계 2 (문헌 [Org. Lett. 2010, 12, 4632-4635])
DMF (23 mL) 중 4,5-디브로모-1H-1,2,3-트리아졸 (2.3 g, 10 mmol)의 냉각된 (-10℃) 용액에 탄산칼륨 (2.80 g, 20.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 아이오도에탄 (1.2 mL, 15 mmol)을 적가하였다. 교반을 30분 동안 유지한 다음, 물 10 mL를 첨가하였다. 조 생성물을 EtOAc (2x 50 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 10% (수성) LiCl 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 자동화 크로마토그래피를 사용하여 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 4,5-디브로모-2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.1 g, 46% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 생성물은 LCMS 조건 하에 이온화되지 않았다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 4.43 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.60 - 1.54 (m, 3H).
단계 3 (문헌 [Org. Lett. 2010, 12, 4632-4635])
THF (6 mL) 중 4,5-디브로모-2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.11 g, 4.35 mmol)의 냉각된 (-20℃) 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 (THF 중 2 M, 6.5 mL, 13 mmol)를 천천히 첨가하였다. -20℃냉각 조를 유지하면서 반응물을 30분 동안 교반한 다음, 2시간에 걸쳐 0℃로 가온되도록 하였다. 반응물을 포화 (수성) 염화암모늄의 첨가를 통해 켄칭하였다. 생성물을 EtOAc (2x 50 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 EtOAc 층을 염수 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 중간체 5를 황색 오일 (627 mg, 82% 수율)로서 수득하였다. 생성물은 LCMS 조건 하에 이온화되지 않았다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.53 (s, 1H), 4.46 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.56 (t, J=7.4 Hz, 3H).
중간체 6
Figure pct00024
디옥산 (22 mL) 중 3-브로모-4-플루오로-2-메톡시아닐린 (1.0 g, 4.5 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (1.50 g, 5.91 mmol), PdCl2(dppf)·DCM (0.186 g, 0.227 mmol) 및 아세트산칼륨 (1.34 g, 13.6 mmol)을 함유하는 밀봉된 용기를 105℃로 가열하였다. 가열을 밤새 계속하고, 이 시점에 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트® 상에 흡수시키고, 감압 하에 건조시켰다. 이어서, 조 물질을 자동화 크로마토그래피 (고체 로딩)를 사용하여 0-50% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 6을 연황색 고체 (244 mg, 20% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 268.3 (MH+). LC 체류 시간 1.05분 [C].
중간체 7
Figure pct00025
디옥산 (4 mL) 중 중간체 5 (241 mg, 1.37 mmol), 중간체 6 (244 mg, 0.91 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM (37 mg, 0.046 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 후속적으로, K3PO4의 수용액 (2 M, 1.4 mL, 2.8 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 15분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 합한 순수한 분획을 농축시켜 중간체 7 (124 mg, 56% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 237.3 (MH+). LC 체류 시간 1.04분 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.88 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.85 - 6.77 (m, 1H), 6.75 - 6.67 (m, 1H), 4.58 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.77 (br s, 2H), 3.62 (s, 3H), 1.63 (t, J=7.3 Hz, 3H).
중간체 8
Figure pct00026
단계 1
디클로로에탄 (40 mL) 중 4,5-디브로모-1H-1,2,3-트리아졸 (3.0 g, 13 mmol), 아세트산구리(II) (2.88 g, 15.9 mmol), 2,2'-비피리딘 (2.48 g, 15.9 mmol) 및 탄산나트륨 (2.80 g, 26.4 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 반응 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 탈기된 혼합물에 시클로프로필보론산 (3.41 g, 39.7 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 85℃로 밤새 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 다음, 200 mL EtOAc와 포화 (수성) 염화암모늄 및 진한 수산화암모늄의 100 mL 혼합물 (1:1) 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc 2x 75 mL로 추출하였다. 이어서, 합한 EtOAc 층을 포화 (수성) 염화암모늄 및 염수로 세척하였다. 이어서, EtOAc 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-70% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 4,5-디브로모-2-시클로프로필-2-H-1,2,3-트리아졸 (979 mg, 28% 수율)을 수득하였다. 생성물은 LCMS 조건 하에 이온화되지 않았다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 4.03 - 3.95 (m, 1H), 1.38 - 1.32 (m, 2H), 1.16 - 1.09 (m, 2H)
단계 2
THF (5 mL) 중 4,5-디브로모-2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸 (0.950 g, 3.56 mmol)의 냉각된 (-20℃) 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 (THF 중 2 M, 5.3 mL, 10.7 mmol)를 천천히 첨가하였다. -20℃냉각 조를 유지하면서 반응물을 30분 동안 교반한 다음, 2시간에 걸쳐 0℃로 가온되도록 하였다. 반응물을 포화 (수성) 염화암모늄의 첨가를 통해 켄칭하였다. 생성물을 EtOAc (2x 50 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 EtOAc 층을 염수 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과를 통해 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 중간체 8을 황색 오일 (605 mg, 81% 수율)로서 수득하였다. 생성물은 LCMS 조건 하에 이온화되지 않았다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.51 (s, 1H), 3.99 (tt, J=7.5, 3.8 Hz, 1H), 1.39 - 1.32 (m, 2H), 1.15 - 1.07 (m, 2H).
중간체 9
Figure pct00027
디옥산 (4 mL) 중 중간체 8 (249 mg, 1.32 mmol), 중간체 3 (220 mg, 0.88 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM (36 mg, 0.044 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 후속적으로, K3PO4의 수용액 (2 M, 1.3 mL, 2.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 30분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 합한 순수한 분획을 농축시켜 중간체 9를 무색 오일 (153 mg, 71% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 231.1 (MH+). LC 체류 시간 1.07분 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.01 (s, 1H), 7.31 - 7.27 (m, 1H), 6.99 (t, J=7.9 Hz, 1H), 6.76 (dd, J=7.9, 1.6 Hz, 1H), 4.05 (tt, J=7.5, 3.9 Hz, 1H), 3.94 - 3.79 (m, 2H), 3.73 - 3.61 (m, 3H), 1.45 - 1.39 (m, 2H), 1.17 - 1.09 (m, 2H).
중간체 10
Figure pct00028
디옥산 (100 mL) 중 3-브로모-5-플루오로-2-메톡시아닐린 (히드로클로라이드 염) (4.5 g, 17.5 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (5.79 g, 22.8 mmol), PdCl2(dppf)·DCM (0.716 g, 0.877 mmol) 및 아세트산칼륨 (6.03 g, 61.4 mmol)을 함유하는 밀봉된 용기를 105℃로 가열하였다. 가열을 밤새 계속하고, 이 시점에 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트® 상에 흡수시키고, 감압 하에 건조시켰다. 이어서, 조 물질을 자동화 크로마토그래피 (고체 로딩)를 사용하여 0-50% EtOAc/헥산으로 용리시키면서 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 10을 연황색 고체 (2.55 g, 54% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 268.3 (MH+). LC 체류 시간 1.50분 [C].
중간체 11
Figure pct00029
디옥산 (6 mL) 중 중간체 8 (348 mg, 1.85 mmol), 중간체 10 (330 mg, 1.24 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM (50.4 mg, 0.062 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 후속적으로, K3PO4의 수용액 (2 M, 1.85 mL, 3.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 11을 무색 오일 (188 mg, 61% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 249.2 (MH+). LC 체류 시간 1.40분 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.03 (s, 1H), 7.00 (dd, J=9.6, 3.0 Hz, 1H), 6.46 (dd, J=9.5, 3.0 Hz, 1H), 4.11 - 4.04 (m, 1H), 4.04 - 3.97 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 1.47 - 1.40 (m, 2H), 1.19 - 1.12 (m, 2H).
중간체 12
Figure pct00030
단계 1
2-브로모-4-메틸-6-니트로페놀 (1.00 g, 4.31 mmol)을 DMF (15 mL) 중 탄산칼륨 (1.19 g, 8.62 mmol) 및 아이오도메탄 (0.40 mL, 6.5 mmol)과 합하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (50 mL)을 반응물에 첨가하고, 2개의 층을 분리하였다. EtOAc 층을 1 N NaOH (수성), 10% LiCl (수성) 및 염수 용액으로 세척하였다. 이어서, EtOAc 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-30% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하여 1-브로모-2-메톡시-5-메틸-3-니트로벤젠을 수득하였다. 생성물은 이온화되지 않았다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.61 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J=1.5 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.37 (s, 3H).
단계 2
1-브로모-2-메톡시-5-메틸-3-니트로벤젠 (0.979 g, 3.98 mmol)을 에탄올 (21 mL) 및 물 (3 mL) 중 염화암모늄 (2.13 g, 39.8 mmol)과 합하였다. 여기에 아연 (2.60 g, 39.8 mmol)을 10분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 생성된 불균질 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 디클로로메탄 (200 mL)을 반응물에 첨가한 다음, 이를 셀라이트를 통해 여과하여 여과물을 수집하였다. 여과물을 물 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과를 통해 제거하고, 조 생성물을 감압 하에 농축시켰다. 자동화 크로마토그래피 (0-50% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제를 달성하여 3-브로모-2-메톡시-5-메틸아닐린 (0.763 g, 89% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 216.1 (MH+). LC 체류 시간 0.90분 [E]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ 6.64 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.30 (dt, J=8.0, 1.1 Hz, 1H), 4.56 (bs, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.31 (s, 3H).
단계 3
디옥산 (4 mL) 중 3-브로모-2-메톡시-5-메틸아닐린 (150 mg, 0.694 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (229 mg, 0.90 mmol), PdCl2(dppf)·DCM (28 mg, 0.035 mmol) 및 아세트산칼륨 (204 mg, 2.08 mmol)을 함유하는 밀봉된 용기를 100℃로 가열하였다. 가열을 밤새 계속하였고, 이 시점에서 부분 전환이 관찰되었다. 추가의 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (229 mg, 0.90 mmol), PdCl2(dppf)·DCM (28 mg, 0.035 mmol) 및 아세트산칼륨 (204 mg, 2.08 mmol)을 첨가하고, 가열을 2시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 그대로 사용하였다. MS (M+1) m/z: 264.1 (MH+). LC 체류 시간 0.82분 [E].
단계 4
단계 3으로부터의 반응 혼합물에 중간체 8 (170 mg, 0.904 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 질소를 통해 버블링함으로써 탈기시켰다. 여기에 K3PO4(2 M 수성 1.04 mL, 2.09 mmol)를 급속하게 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 EtOAc (30 mL)와 염수 용액 (20 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-70% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 농축시켜 중간체 12를 황색 오일 (87 mg, 51% 수율, 2 단계에 걸침)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 245.1 (MH+). LC 체류 시간 0.80분 [E].
중간체 13
Figure pct00031
THF (10 mL) 중 중간체 8 (712 mg, 3.79 mmol)의 냉각된 (10℃) 교반 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 염화리튬 착물 (THF 중 1.3 M, 3.5 mL, 4.5 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 10℃에서 2시간 동안 교반한 다음, -20℃로 추가로 냉각시켰다. 이어서, 이 용액에 트리메틸 보레이트 (0.64 mL, 5.7 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 -20℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 1 N (수성) HCl의 첨가를 통해 켄칭하였다. 생성물을 EtOAc (x2)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 고체 중간체 13 (499 mg, 73% 수율)을 수득하였다. 물질을 회수된 그대로 사용하였다.
중간체 14
Figure pct00032
디옥산 (3 mL) 중 중간체 13 (245 mg, 1.60 mmol), 4-브로모-3-메톡시피리딘-2-아민 (250 mg, 1.23 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM (50.3 mg, 0.062 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 후속적으로, K3PO4의 수용액 (2 M, 1.85 mL, 3.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 45분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 14를 회백색 결정질 고체 (155 mg, 54% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 232.3 (MH+). LC 체류 시간 0.83분 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.08 (s, 1H), 7.87 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.19 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.71 (br s, 2H), 4.09 (dt, J=7.5, 3.7 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 1.49 - 1.39 (m, 2H), 1.21 - 1.12 (m, 2H).
중간체 15
Figure pct00033
THF (3.3 mL) 중 중간체 5 (244 mg, 1.39 mmol)의 냉각된 (10℃) 교반 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 염화리튬 착물 (THF 중 1.3 M, 1.3 mL, 1.7 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 10℃에서 2시간 동안 교반한 다음, -20℃로 추가로 냉각시켰다. 이어서, 이 용액에 트리메틸 보레이트 (0.23 mL, 2.1 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 -20℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 1 N (수성) HCl의 첨가를 통해 켄칭하였다. 생성물을 EtOAc (x2)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과를 통해 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 고체 중간체 15 (115 mg, 50% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 142.3 (MH+). LC 체류 시간 0.37분 [C]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.92 (s, 1H), 4.45 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.44 (t, J=7.3 Hz, 3H).
중간체 16
Figure pct00034
디옥산 (1.5 mL) 중 중간체 15 (99 mg, 0.23 mmol), 3-브로모-5-클로로-2-메톡시아닐린 (50 mg, 0.21 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM (8.6 mg, 0.010 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. K3PO4의 수용액 (2 M, 0.32 mL, 0.63 mmol)을 후속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반한 다음, 50℃에서 30분 동안 가열하고, 이어서 실온에서 밤새 가열하였다. 반응물을 EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 16을 황색 오일 (23 mg, 43% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 253.1 (MH+). LC 체류 시간 1.34분 [C].
중간체 17
Figure pct00035
디옥산 (5 mL) 중 중간체 13 (60.3 mg, 0.394 mmol), 3-브로모-4-플루오로-2-메톡시아닐린 (62 mg, 0.28 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM (11.5 mg, 0.014 mmol)의 교반 용액을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 후속적으로, K3PO4의 수용액 (2 M, 0.42 mL, 0.84 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 30분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 생성된 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 17을 황색 오일 (35 mg, 50% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 249.1 (MH+). LC 체류 시간 1.01분 [C].
중간체 18
Figure pct00036
단계 1
DMF (20 mL) 중 4,5-디브로모-1H-1,2,3-트리아졸 (2.0 g, 8.8 mmol)의 냉각된 (-10℃) 용액에 탄산칼륨 (2.68 g, 19.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (1.10 mL, 17.6 mmol)을 적가하였다. 교반을 밤새 유지한 다음, 물 10 mL를 첨가하였다. 조 생성물을 EtOAc (2x 50 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 10% (수성) LiCl 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 자동화 크로마토그래피를 사용하여 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 4,5-디브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.33 g, 63% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 생성물은 LCMS 조건 하에 이온화되지 않았다. LC 체류 시간 1.26분 [C].
단계 2
디에틸 에테르 (6 mL) 중 4,5-디브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.33 g, 5.52 mmol)의 냉각된 (-20℃) 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 (THF 중 2 M, 8.28 mL, 16.6 mmol)를 천천히 첨가하였다. -20℃냉각 조를 유지하면서 반응물을 30분 동안 교반한 다음, 2시간에 걸쳐 0℃로 가온되도록 하였다. 반응물을 포화 (수성) 염화암모늄의 첨가를 통해 켄칭하였다. 생성물을 EtOAc (2x 50 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 EtOAc 층을 염수 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 중간체 18 (31)을 무색 오일 (627 mg, 82% 수율)로서 수득하였다. 생성물은 LCMS 조건 하에 이온화되지 않았다. LC 체류 시간 0.81분 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.54 (s, 1H), 4.19 (s, 3H).
중간체 19
Figure pct00037
10℃로 냉각시킨 THF (12 mL) 중 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (0.896 g, 5.53 mmol)의 용액에 THF 중 이소프로필마그네슘 클로라이드 염화리튬 착물, 1.3 (8.51 mL, 11.06 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 이어서, -20℃로 냉각시켰다. 트리메틸 보레이트 (1.854 mL, 16.59 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 이 때, 반응 혼합물을 1 N HCl로 켄칭하고, 분리 깔때기로 옮기고, EtOAc (2x)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 농축시켜 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (533 mg, 3.78 mmol, 68.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (br s, 2H), 7.89 (s, 1H), 4.16 (s, 3H).
중간체 20
Figure pct00038
단계 1
디옥산 (4 mL) 중 3-브로모-2-메톡시-5-메틸아닐린 (150 mg, 0.694 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (229 mg, 0.90 mmol), PdCl2(dppf)·DCM (28 mg, 0.035 mmol) 및 아세트산칼륨 (204 mg, 2.08 mmol)을 함유하는 밀봉된 용기를 100℃로 8시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 그대로 사용하였다. MS (M+1) m/z: 264.1 (MH+). LC 체류 시간 0.82분 [E].
단계 2
단계 1로부터의 반응 혼합물에 중간체 18 (146 mg, 0.904 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 질소를 통해 버블링하여 탈기시켰다. 여기에 K3PO4(2 M 수성 1.04 mL, 2.09 mmol)를 급속하게 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 EtOAc (30 mL)와 염수 용액 (20 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 자동화 크로마토그래피 (0-70% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 농축시켜 중간체 20을 황색 오일 (120 mg, 79% 수율, 2 단계에 걸침)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 219.3 (MH+). LC 체류 시간 0.71분 [E].
중간체 21
Figure pct00039
디옥산 (3 mL) 중 중간체 18 (100 mg, 0.62 mmol)의 교반 용액에 중간체 3 (185 mg, 0.74 mmol) 및 탄산칼륨 (256 mg, 1.85 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, PdCl2(dppf)·DCM (25 mg, 0.031 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링하여 다시 탈기시켰다. 반응물을 마이크로웨이브에서 2시간 동안 110℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 역상 크로마토그래피 (A: 물 중 0.1% 포름산; B: 100% 아세토니트릴)를 사용하여 정제하여 중간체 21을 갈색 무정형 고체 (70 mg, 55% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 205.1 (MH+). LC 체류 시간 1.25분 [F]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ 8.02 (s, 1H), 7.02 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 6.89 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.70 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 5.06 (br s, 2H), 4.19 (s, 3H), 3.59 (s, 3H).
실시예 9
Figure pct00040
단계 1
4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (73 mg, 0.35 mmol) 및 중간체 22 (96 mg, 0.35 mmol)를 실온에서 THF (3 mL) 중에서 합하였다. 여기에 LiHMDS (THF 중 1 M, 1.2 mL, 1.2 mmol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 수성 염화암모늄 용액 2 mL의 첨가를 통해 켄칭하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)와 포화 수성 염화암모늄 용액 (20 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 용액 (20 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 갈색 고체를 수득하였다. 이를 자동화 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 합하여 6-클로로-4-((3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시-5-메틸페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (72 mg, 50% 수율)를 담황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 417.1 (MH+). LC 체류 시간 1.09분 [E].
단계 2
디옥산 (0.7 mL) 중 6-클로로-4-((3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시-5-메틸페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (72 mg, 0.17 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (29 mg, 0.34 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) 클로로포름 부가물 (17.8 mg, 0.017 mmol), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9'-디메틸크산텐 (Xantphos) (20 mg, 0.035 mmol) 및 탄산세슘 (225 mg, 0.69 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 45분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, DMF로 희석하고, 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과한 다음, 정제용 HPLC 정제를 사용하여 정제하여 47 (26.7 mg, 33% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 466.2 (MH+). LC 체류 시간 1.94분 [G]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.27 (s, 1H), 10.89 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.07 (d, J=1.4 Hz, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 4.18 (dt, J=7.5, 3.8 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.17 - 2.00 (m, 1H), 1.35 - 1.18 (m, 2H), 1.18 - 1.06 (m, 2H), 0.88 - 0.73 (m, 4H).
하기 실시예를 용매, 반응 시간 등에 대한 약간의 사소한 변형을 허용하면서 기재된 중간체 및 상업용 시약을 사용하여 실시예 9의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00041
표 1
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
실시예 19
Figure pct00046
단계 1:
DMF (4 ml) 중 2-브로모-4-플루오로-3-메틸-6-니트로페놀 (266 mg, 1.064 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (441 mg, 3.19 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (0.133 ml, 2.128 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 생성물로의 완전한 전환을 나타냈다. 냉수 (75 mL)를 첨가하고, 혼합물을 교반한 다음, 초음파처리한 후, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 이어서, 이 물질을 EtOAc (150 mL) 중에 용해시켰다. 이 용액을 1x 10% LiCl, 1x 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 12 g 실리카 겔 칼럼 상에 로딩하고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 연황색 고체, 3-브로모-1-플루오로-4-메톡시-2-메틸-5-니트로벤젠 (231 mg, 0.875 mmol, 82% 수율)을 수득하였다.
MS (M+1) m/z: n/a (M+H)+. LC 체류 시간 1.572 [C] [니트로 생성물은 이온화되지 않음]
Figure pct00047
단계 2:
에틸 아세테이트 (8.5 mL) 중 3-브로모-1-플루오로-4-메톡시-2-메틸-5-니트로벤젠 (230 mg, 0.871 mmol) 및 염화주석(II), 2수화물 (786 mg, 3.48 mmol)의 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 이어서 반응물을 에틸 아세테이트 (100 ml)로 희석하였다. 용액을 2.5 N NaOH로 3x, 1x 물 및 1x 염수로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-브로모-5-플루오로-2-메톡시-4-메틸아닐린 (136 mg, 0.581 mmol, 66.7% 수율)을 담갈색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 235.9 (M+H)+. LC 체류 시간 1.37 [C].
Figure pct00048
단계 3:
디옥산 (3 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (65.1 mg, 0.513 mmol), 3-브로모-5-플루오로-2-메톡시-4-메틸아닐린 (60 mg, 0.256 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (10.47 mg, 0.013 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (0.385 mL, 0.769 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃로 30분 동안 가열하였다. 반응물은 거의 즉시 암색으로 변하였다. LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (44 mg, 0.186 mmol, 72.7% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 237.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.08 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.69 (s, 1H), 6.52 (d, J=10.6 Hz, 1H), 4.28 (s, 3H), 3.84 (br s, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.05 (d, J=2.3 Hz, 3H).
Figure pct00049
단계 4:
테트라히드로푸란 (1.5 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (38 mg, 0.182 mmol) 및 5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (42.9 mg, 0.182 mmol)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (THF 중 1 M, 0.454 mL, 0.454 mmol)를 시린지를 사용하여 적가 방식으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 수성 염화암모늄을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 용액으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 이어서, 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 물질을 후속 단계에 직접 그대로 사용하였다. 6-클로로-4-((5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (56 mg, 0.137 mmol, 75% 수율). MS (M+1) m/z: 409.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.35 [C]
Figure pct00050
단계 5:
디옥산 (1.5 mL) 중 6-클로로-4-((5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (37 mg, 0.091 mmol), xantphos (10.47 mg, 0.018 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (38.5 mg, 0.453 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 N2를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, Cs2CO3 (118 mg, 0.362 mmol) 및 Pd2(dba)3 (8.29 mg, 9.05 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, DMF를 사용하여 2 mL로 희석한 다음, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (17.8 mg, 0.039 mmol, 43.0% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 458.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.25 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.35 (s, 1H), 10.97 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.40 (d, J=10.7 Hz, 1H), 4.25 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.09 (br d, J=1.8 Hz, 4H), 0.85 (br d, J=6.1 Hz, 4H).
실시예 20
Figure pct00051
단계 1:
디옥산 (8 mL) 중 4,5-디브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (0.273 g, 1.133 mmol), 2-메톡시-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (0.268 g, 1.077 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (0.046 g, 0.057 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (1.700 mL, 3.40 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 25분 동안 가열하였다. LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 3-(5-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (144 mg, 0.509 mmol, 44.9% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 282.8 /284.8 (M+H)+. LC 체류 시간 1.05 [C]
Figure pct00052
단계 2:
디옥산 (3 mL) 중 3-(5-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (144 mg, 0.509 mmol), 디시클로헥실 (2',6'-디메톡시-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 [S-Phos] (22.97 mg, 0.056 mmol), 아세트산팔라듐(II) (5.71 mg, 0.025 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (196 mg, 1.272 mmol)의 혼합물을 질소로 1분 동안 퍼징하였다. 2 M K3PO4 (수성) (1.399 mL, 2.80 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃로 1시간 동안 가열하였다. LCMS는 SM이 소모되었음을 나타냈다. 혼합물을 농축시킨 다음, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 24 g 실리카 겔 칼럼을 사용하여 헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 2-메톡시-3-(2-메틸-5-비닐-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (111 mg, 0.434 mmol, 85% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 231.0 (M+H)+. LC 체류 시간 0.93 [C]
Figure pct00053
단계 3:
탄소 상 팔라듐, 10% (5.13 mg, 0.048 mmol)를 에탄올 (5 ml) 중 2-메톡시-3-(2-메틸-5-비닐-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (111 mg, 0.482 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 진공에 의해 탈기한 다음, 수소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (115 mg, 0.446 mmol, 92% 수율)을 왁스상 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.01 - 6.94 (m, 1H), 6.80 (dd, J=7.9, 1.6 Hz, 1H), 6.75 (dd, J=7.6, 1.6 Hz, 1H), 4.20 (s, 3H), 3.91 (br s, 2H), 3.50 (s, 3H), 2.71 (q, J=7.6 Hz, 2H), 1.21 (t, J=7.6 Hz, 3H).
Figure pct00054
단계 4:
THF (4 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (113 mg, 0.542 mmol) 및 3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (105 mg, 0.452 mmol) (재정제됨)의 용액에 THF 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 1 M (1.582 mL, 1.582 mmol)을 시린지를 사용하여 적가 방식 (<5분)으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 이어서, 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 12 g 이스코 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하여 6-클로로-4-((3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (122 mg, 0.301 mmol, 66.7% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다.
MS (M+1) m/z: 405.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.43 [C]
Figure pct00055
단계 5:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.099 mmol), xantphos (11.43 mg, 0.020 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (42.0 mg, 0.494 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (129 mg, 0.395 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.05 mg, 9.88 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, 이를 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (17.8 mg, 0.039 mmol, 39.7% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 454.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.23 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.31 (s, 1H), 10.95 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.51 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.28 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.42 (s, 3H), 2.60 (q, J=7.4 Hz, 2H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.12 (t, J=7.6 Hz, 3H), 0.88 - 0.80 (m, 4H).
실시예 21
Figure pct00056
단계 1:
디옥산 (3 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (209 mg, 1.649 mmol), 3-브로모-5-클로로-2-메톡시아닐린 (300 mg, 1.269 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (51.8 mg, 0.063 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (1.903 mL, 3.81 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하였다. LC-MS는 출발 물질의 불완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 5-클로로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (101 mg, 0.423 mmol, 33.4% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 239.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.20 [C].
Figure pct00057
단계 2:
디옥산 (3 mL) 중 5-클로로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (101 mg, 0.423 mmol), 디시클로헥실 (2',6'-디메톡시-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 [S-Phos] (19.11 mg, 0.047 mmol), 아세트산팔라듐(II) (4.75 mg, 0.021 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (163 mg, 1.058 mmol)의 혼합물을 질소로 1분 동안 퍼징하였다. 2 M K3PO4 (수성) (1.164 mL, 2.327 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. LC-MS는 SM이 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-5-비닐아닐린 (100 mg, 0.391 mmol, 92% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 231.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.04 [C].
Figure pct00058
단계 3:
탄소 상 Pd, 10% (4.62 mg, 0.043 mmol)를 에탄올 (5 ml) 중 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-5-비닐아닐린 (100 mg, 0.434 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 진공에 의해 탈기한 다음, 수소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 생성물로의 완전한 전환을 나타냈다. 여과하고 농축시켜 5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (100 mg, 0.387 mmol, 89% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 233.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.06 [C].
Figure pct00059
단계 4:
THF (4 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (108 mg, 0.517 mmol) 및 5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (100 mg, 0.431 mmol)의 혼합물에 THF 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 1 M (1.507 mL, 1.507 mmol)을 시린지를 사용하여 적가 방식 (<5분)으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 이어서, 이를 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 잔류물로 농축시키고, 이를 12 g 실리카 겔 카트리지 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하여 6-클로로-4-((5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (94 mg, 0.232 mmol, 53.9% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 405.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.54 [C].
Figure pct00060
단계 5:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.099 mmol), xantphos (11.43 mg, 0.020 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (42.0 mg, 0.494 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (129 mg, 0.395 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.05 mg, 9.88 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, 이를 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (9.7 mg, 0.021 mmol, 21.65% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 454.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.25 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H), 10.95 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 4.23 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 2.62 (q, J=7.6 Hz, 2H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.22 (t, J=7.6 Hz, 3H), 0.88 - 0.77 (m, 4H).
실시예 22
Figure pct00061
단계 1:
DMF (3 ml) 중 6-브로모-3-플루오로-2-니트로페놀 (262 mg, 1.110 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (460 mg, 3.33 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (0.193 ml, 2.20 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 생성물로의 완전한 전환을 나타냈다. 냉수 (75 mL)를 첨가하고, 혼합물을 교반한 다음, 초음파처리한 후, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 이어서, 물질을 EtOAc (150 mL) 중에 용해시키고, 분리 깔때기로 옮기고, 10% LiCl로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 칼럼 상에서 헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 1-브로모-4-플루오로-2-메톡시-3-니트로벤젠 (278 mg, 1.001 mmol, 90% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: n/a (M+H)+. LC 체류 시간 1.54 [C].
Figure pct00062
단계 2:
EtOAc (10 mL) 중 1-브로모-4-플루오로-2-메톡시-3-니트로벤젠 (278 mg, 1.112 mmol) 및 염화주석(II) 2수화물 (1004 mg, 4.45 mmol)의 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 에틸 아세테이트 (100 ml)로 희석하고, 2.5 N NaOH (3 x 50 ml), 물 (50 ml) 및 염수 (50 ml)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-브로모-6-플루오로-2-메톡시아닐린 (149 mg, 0.677 mmol, 60.9% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 219.9 / 221.9 (M+H)+. LC 체류 시간 1.276 [C].
Figure pct00063
단계 3:
디옥산 (3 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (59.6 mg, 0.470 mmol), 3-브로모-6-플루오로-2-메톡시아닐린 (94 mg, 0.427 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (17.44 mg, 0.021 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (0.641 mL, 1.282 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하였다. LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (52 mg, 0.234 mmol, 54.8% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 223.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.02 [C].
Figure pct00064
단계 4:
THF (2 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (51.4 mg, 0.246 mmol) 및 6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (52 mg, 0.234 mmol)의 용액에 THF 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 1 M (0.585 mL, 0.585 mmol)을 시린지를 사용하여 적가 방식으로 첨가하였다 (<5분). LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하여 6-클로로-4-((6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (67 mg, 0.170 mmol, 72.5% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 395.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.29 [C].
Figure pct00065
단계 5:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.101 mmol), xantphos (11.72 mg, 0.020 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (43.1 mg, 0.507 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (132 mg, 0.405 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.28 mg, 10.13 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, 이를 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (6.6 mg, 0.015 mmol, 14.69% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 444.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.195 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 - 11.25 (m, 1H), 10.55 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.85 (dd, J=8.9, 6.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J=3.4 Hz, 1H), 7.30 (t, J=9.3 Hz, 1H), 4.23 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 0.84 - 0.71 (m, 4H).
실시예 23
Figure pct00066
단계 1:
톨루엔 (3 mL) 중 3-(5-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (180 mg, 0.636 mmol), 트리시클로헥실포스핀 (19.61 mg, 0.070 mmol), 아세트산팔라듐(II) (7.14 mg, 0.032 mmol) 및 2,4,4,5,5-펜타메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (253 mg, 1.780 mmol)의 혼합물을 질소로 1분 동안 퍼징하였다. 2 M K3PO4 (수성) (1.748 mL, 3.50 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃로 밤새 가열하였다. LCMS는 SM이 소모되었음을 나타냈다. 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 칼럼 상에서 헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (124 mg, 0.511 mmol, 80% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 219.2 (M+H)+. LC 체류 시간 0.91 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.99 (t, J=7.4 Hz, 1H), 6.81 (t, J=9.0 Hz, 2H), 4.31 - 4.20 (m, 3H), 3.93 (br s, 2H), 3.55 - 3.49 (m, 3H), 2.32 (s, 3H).
Figure pct00067
단계 2:
THF (3 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (130 mg, 0.620 mmol) 및 3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (123 mg, 0.564 mmol)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (1.578 mL, 1.578 mmol)를 시린지를 사용하여 적가 방식 (<5분)으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하여 6-클로로-4-((3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (109 mg, 0.251 mmol, 44.5% 수율). MS (M+1) m/z: 391.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.24 [C].
Figure pct00068
단계 3:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.102 mmol), xantphos (11.84 mg, 0.020 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (43.5 mg, 0.512 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (133 mg, 0.409 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.37 mg, 10.23 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, DMF를 사용하여 2 mL로 희석한 다음, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 6-(시클로프로판-카르복스아미도)-4-((3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (34.9 mg, 0.079 mmol, 78% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 440.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.17 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H), 10.94 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.51 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 4.14 (s, 3H), 3.42 (s, 3H), 2.23 - 2.14 (m, 3H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 0.88 - 0.79 (m, 4H).
실시예 24
Figure pct00069
단계 1:
디옥산 (2.5 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (48.1 mg, 0.379 mmol), 3-브로모-2,5-디메톡시아닐린 (80 mg, 0.345 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (14.08 mg, 0.017 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (0.517 mL, 1.034 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하였다. LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (63 mg, 0.269 mmol, 78% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
MS (M+1) m/z: 235.2 (M+H)+. LC 체류 시간 0.99 [C].
Figure pct00070
단계 2:
실온에서 THF (1.3 mL) 중 2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (63 mg, 0.269 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (59.0 mg, 0.282 mmol)의 용액에 THF 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 1 M (0.807 mL, 0.807 mmol)을 천천히 첨가하였다. 15분 후, LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄으로 켄칭한 다음, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 1x 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 농축시켜 6-클로로-4-((2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (101 mg, 0.223 mmol, 83% 수율)를 황갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 407.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.296 [C].
Figure pct00071
단계 3:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.098 mmol), xantphos (11.38 mg, 0.020 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (41.8 mg, 0.492 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (128 mg, 0.393 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.00 mg, 9.83 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, 이를 DMF를 사용하여 2 mL로 희석한 다음, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 6-(시클로프로판-카르복스아미도)-4-((2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (16.1 mg, 0.035 mmol, 35.4% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 456.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.13 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.35 (s, 1H), 11.08 (s, 1H), 9.15 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.18 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.08 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.16 - 2.03 (m, 1H), 0.84 (br s, 4H).
실시예 25
Figure pct00072
단계 1:
디옥산 (5 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (182 mg, 1.437 mmol), 3-브로모-2-메톡시아닐린 (264 mg, 1.307 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (53.4 mg, 0.065 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (1.960 mL, 3.92 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하였다. LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하여 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (211 mg, 1.033 mmol, 79% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 205.2 (M+H)+. LC 체류 시간 0.93 [C].
Figure pct00073
단계 2:
THF (7 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (238 mg, 1.136 mmol) 및 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (211 mg, 1.033 mmol)의 용액에 THF 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 1 M (2.58 mL, 2.58 mmol)을 시린지를 사용하여 적가 방식 (<5분)으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출하고, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하여 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (420 mg, 1.003 mmol, 97% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 377.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.33 [C].
Figure pct00074
단계 3:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.106 mmol), xantphos (12.28 mg, 0.021 mmol), 및 1-메틸-1H-피라졸-3-아민, HCl (35.4 mg, 0.265 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (138 mg, 0.425 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.72 mg, 10.62 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 6시간 동안 교반하였다. LC-MS는 완전한 반응을 나타냈다. 반응 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노)피리다진-3-카르복스아미드 (7.7 mg, 0.016 mmol, 14.87% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 438.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.05 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.04 (s, 1H), 10.18 (br s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.72 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 7.64 - 7.54 (m, 3H), 7.35 (t, J=7.8 Hz, 1H), 6.14 (br s, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.69 (s, 3H).
실시예 26
Figure pct00075
단계 1:
NMP (2.5 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (420 mg, 1.115 mmol), (4-메톡시페닐)메탄-아민 (765 mg, 5.57 mmol), 및 플루오린화칼륨 (194 mg, 3.34 mmol)의 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었고, 에틸 아세테이트를 사용하여 150 mL로 희석하고, 물로 1x, 10% 수성 LiCl로 2x 및 염수로 1x 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 여과하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 40 g 이스코 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-6-((4-메톡시벤질)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (265 mg, 0.555 mmol, 49.8% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 478.4 (M+H)+. LC 체류 시간 1.10 [C]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 10.84 - 10.67 (m, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.72 (dd, J=6.7, 2.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.25 (m, 1H), 7.25 - 7.22 (m, 1H), 7.13 - 7.06 (m, 2H), 6.88 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.09 (s, 1H), 5.24 (br s, 1H), 4.43 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.85 - 3.81 (m, 3H), 3.70 (s, 3H).
Figure pct00076
단계 2:
1,2-디클로로에탄 (3 mL) 및 트리플루오로아세트산 (1.5 mL) 중 4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-6-((4-메톡시벤질)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (265 mg, 0.555 mmol)의 혼합물을 60℃로 가온하고, 120분 동안 교반하였다. 혼합물을 고체로 농축시키고, 디클로로에탄으로부터 3x 공증발시켰다. 잔류물을 150 mL DCM 중에 용해시키고, 용액을 분리 깔때기로 옮기고, 1.5 M 인산칼륨 용액으로 2x 및 염수로 1x 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 6-아미노-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (169 mg, 0.449 mmol, 81% 수율)를 담황갈색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. MS (M+1) m/z: 358.2 (M+H)+. LC 체류 시간 0.92 [C].
Figure pct00077
단계 3:
6-아미노-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (26 mg, 0.073 mmol), 시스-2-메틸시클로프로판-카르복실산 (9.47 mg, 0.095 mmol), 및 DMF (1 mL) 중 50% DMF 용액의 1-프로판포스폰산 무수물 (139 mg, 0.218 mmol) 및 TEA (0.051 mL, 0.364 mmol)의 용액을 40℃에서 밤새 교반하였으며, 이 때 LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하여 4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1R,2S)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)피리다진-3-카르복스아미드 (3.5 mg, 7.96 μmol, 10.95% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 440.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.16[C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.20 (s, 1H), 11.02 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.70 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.31 (t, J=8.1 Hz, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.35 - 1.27 (m, 1H), 1.07 (d, J=6.4 Hz, 3H), 0.99 (td, J=8.0, 3.8 Hz, 1H), 0.81 - 0.76 (m, 1H).
실시예 27
Figure pct00078
Figure pct00079
단계 1:
디옥산 (12 mL) 중 4,5-디브로모-2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸, 중간체 8, 단계 1 (545 mg, 2.043 mmol), 2-메톡시-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (509 mg, 2.043 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (83 mg, 0.102 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (3.06 mL, 6.13 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 120분 동안 가열하였다. 2시간 후, LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 3-(5-브로모-2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린을 황색 오일로서 수득하였다. 물질을 후속 단계에 직접 사용하였다. MS (M+1) m/z: 309.0 / 311.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.19 [C]
Figure pct00080
단계 2:
톨루엔 (3 mL) 중 3-(5-브로모-2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (126 mg, 0.408 mmol), 트리시클로헥실포스판 (12.57 mg, 0.045 mmol), 아세트산팔라듐(II) (4.57 mg, 0.020 mmol) 및 2,4,4,5,5-펜타메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (162 mg, 1.141 mmol)의 혼합물을 질소로 1분 동안 퍼징하였다. 2 M K3PO4 (수성)(1.121 mL, 2.242 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃로 36시간 동안 가열하였다. 유기 층을 셀라이트 상에서 농축시키고, 12 g 이스코 칼럼을 사용하여 헥산 중 0-50% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (51 mg, 0.209 mmol, 51.2% 수율, 2 단계)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 245.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.01 [C]
Figure pct00081
단계 3:
THF (2.3 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (48.0 mg, 0.230 mmol) 및 3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시아닐린 (51 mg, 0.209 mmol)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (0.626 mL, 0.626 mmol)를 시린지를 사용하여 적가 방식 (<5분)으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 (~15분) 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시킨 후, 잔류물을 12 g 이스코 칼럼 상에서 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-클로로-4-((3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (27 mg, 0.065 mmol, 31.0% 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 417.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.510 [C]
Figure pct00082
단계 4:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (27 mg, 0.065 mmol), xantphos (7.49 mg, 0.013 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (27.6 mg, 0.324 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 N2를 버블링함으로써 탈기시켰다. 탄산세슘 (84 mg, 0.259 mmol) 및 Pd2(dba)3 (5.93 mg, 6.48 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었다. 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (6.7 mg, 0.014 mmol, 22.22% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 466.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.19 [C] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H), 10.93 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.51 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.30 - 7.25 (m, 1H), 7.23 - 7.20 (m, 1H), 4.11 - 4.06 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.23 - 1.18 (m, 2H), 1.11 - 1.05 (m, 2H), 0.82 (br d, J=5.5 Hz, 4H).
실시예 28
Figure pct00083
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (44 mg, 0.117 mmol), xantphos (13.51 mg, 0.023 mmol), 및 에틸 카르바메이트 (52.0 mg, 0.584 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (152 mg, 0.467 mmol) 및 Pd2(dba)3 (10.69 mg, 0.012 mmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었다. 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석한 다음, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 에틸 (5-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-6-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-3-일)카르바메이트 (9.2 mg, 0.021 mmol, 18.35% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 430.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.11 [C] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.99 (s, 1H), 10.72 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.50 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 7.31 (t, J=7.9 Hz, 1H), 4.24 (s, 3H), 4.13 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.67 (s, 3H), 1.22 (t, J=7.0 Hz, 3H).
실시예 29
Figure pct00084
DMF (1 mL) 및 TEA (0.039 mL, 0.280 mmol) 중 6-아미노-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.056 mmol), 및 50% DMF 용액의 1-프로판포스폰산 무수물 (107 mg, 0.168 mmol)의 용액에 (1S,2R)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복실산 (11.65 mg, 0.112 mmol)을 첨가한 다음, 60℃에서 2시간 동안 교반하였으며, 이 때 LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 농축시켜 6-((1S,2R)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (7.7 mg, 0.017 mmol, 29.6% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 444.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.22 [C] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.48 (br s, 1H), 11.01 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.71 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.46 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.29 (t, J=7.9 Hz, 1H), 5.00 - 4.80 (m, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.68 - 2.58 (m, 1H), 1.61 - 1.48 (m, 1H), 1.25 (dq, J=13.3, 6.4 Hz, 1H).
실시예 30
Figure pct00085
DMF (1 mL) 및 TEA (0.059 mL, 0.420 mmol) 중 6-아미노-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (30 mg, 0.084 mmol), 및 50% DMF 용액의 1-프로판포스폰산 무수물 (160 mg, 0.252 mmol)의 용액에 (1S,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복실산 (21.01 mg, 0.210 mmol)을 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였으며, 이 때 LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. DMF를 사용하여 2 mL로 희석한 다음, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1S,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)-피리다진-3-카르복스아미드 (12.8 mg, 0.029 mmol, 34.7% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 440.4 (M+H)+. LC 체류 시간 1.20 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (s, 1H), 11.02 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.70 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.49 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 7.31 (t, J=7.8 Hz, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.36 - 1.27 (m, 1H), 1.07 (d, J=6.1 Hz, 3H), 0.99 (td, J=7.8, 3.7 Hz, 1H), 0.78 (br d, J=5.5 Hz, 1H).
실시예 31
Figure pct00086
DMF (1 mL) 및 TEA (0.059 mL, 0.420 mmol) 중 6-아미노-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (30 mg, 0.084 mmol), 및 50% DMF 용액의 1-프로판포스폰산 무수물 (160 mg, 0.252 mmol)의 용액에 2,2-디플루오로시클로프로판-1-카르복실산 (15.37 mg, 0.126 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였으며, 이 때 LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-(2,2-디플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (10.3 mg, 0.022 mmol, 26.3% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 462.4 (M+H)+. LC 체류 시간 1.28 [C] 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.53 (s, 1H), 11.02 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.72 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.48 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.32 (t, J=7.9 Hz, 1H), 4.24 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.07 - 2.99 (m, 1H), 2.07 - 1.97 (m, 2H).
실시예 32
Figure pct00087
단계 1: 3-아미노-5-브로모-4-메톡시벤조에이트
EtOAc 35 ml 중 메틸 3-브로모-4-메톡시-5-니트로벤조에이트 (1000 mg, 3.45 mmol) 및 염화주석(II) 2수화물 (3112 mg, 13.79 mmol)의 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 35 ml로 희석하고, 분리 깔때기로 옮기고, 이 때 이를 2.5 N NaOH (3 x 50 ml), 물 (50 ml) 및 염수 (25 ml)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시켜 메틸 3-아미노-5-브로모-4-메톡시벤조에이트 (823 mg, 3.16 mmol, 92% 수율)를 회백색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 260.4/262.4 (M+H)+. LC 체류 시간 0.96 [E]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.32 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.58 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.71 (s, 3H).
Figure pct00088
단계 2: 메틸 3-아미노-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트
디옥산 (2 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (73.2 mg, 0.577 mmol), 메틸 3-아미노-5-브로모-4-메톡시벤조에이트 (100 mg, 0.384 mmol) 및 PdCl2(dppf)-CH2Cl2-부가물 (15.70 mg, 0.019 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (0.577 mL, 1.153 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc (30 ml)와 염수 (20 ml) 사이에 분배하였다. 무수 황산나트륨 용액 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 12 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-70% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 메틸 3-아미노-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (66 mg, 0.252 mmol, 65.5% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 263.5 (M+H)+. LC 체류 시간 0.82 [E].
Figure pct00089
단계 3: 메틸 3-((6-클로로-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트
실온에서 THF (1.5 mL) 중 메틸 3-아미노-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (66 mg, 0.252 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (52.6 mg, 0.252 mmol)의 용액에 THF 중 LiHMDS, 1 M (0.755 mL, 0.755 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. 포화 염화암모늄 용액 2 ml로 켄칭한 후, 유기부를 제거하였다. 추가의 물 (~5 ml)을 첨가하고, 현탁액을 30분 동안 정치하였다. 여과하고, 필터 케이크를 물 및 에틸 에테르로 헹구고, 건조시켜 메틸 3-((6-클로로-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (95 mg, 0.218 mmol, 87% 수율)를 황갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 435.6 (M+H)+. LC 체류 시간 0.98 [E].
실시예 32:
디옥산 (1.5 mL) 중 메틸 3-((6-클로로-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (95 mg, 0.218 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (93 mg, 1.092 mmol), Pd2(dba)3, 클로로포름 부가물 (22.57 mg, 0.022 mmol), xantphos (25.3 mg, 0.044 mmol) 및 Cs2CO3 (285 mg, 0.874 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 N2를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 잔류물을 물 중에 현탁시켰다. 1 N HCl을 사용하여 pH를 ~2로 조정하였다. 현탁액을 여과하고, 물, 및 이어서 에틸 에테르로 세척하였다. 건조시켜 101 mg의 잔류물을 수득하였으며, 이 중 20 mg을 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 아세트산암모늄 포함; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 아세트산암모늄 포함; 구배: 11% B에서 0-분 유지, 20분에 걸쳐 11-61% B, 이어서 100% B에서 0-분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 신호에 의해 촉발시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 메틸 3-((6-(시클로프로판카르복스아미도)-3-((메틸-d3)카르바모일)-피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (6.2 mg, 28.1% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 484.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.56 [I]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.33 (br s, 1H), 11.06 (br s, 1H), 9.15 (br s, 1H), 8.32 (br s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.08 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 4.25 (br s, 3H), 3.86 (br s, 3H), 3.73 (br s, 3H), 2.06 (br d, J=1.2 Hz, 1H), 0.90 - 0.71 (m, 4H).
실시예 33
Figure pct00090
단계 1: 4-브로모-2-클로로-3-메틸-6-니트로페놀
모든 작업을 블라스트 쉴드 뒤에서 수행하였다: 빙조에서 아세트산 (7 mL) 중 4-브로모-2-클로로-3-메틸페놀 (500 mg, 2.258 mmol)의 용액에 AcOH (빙조에서 제조됨) 1.5 ml 중 질산, 70% (0.216 mL, 3.39 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 실온으로 가온한 후, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50) ml와 1.5 M 이염기성 인산칼륨 용액 (50 ml) 사이에 분배하였다. 염기성 층을 1 N HCl을 사용하여 pH<1로 산성화시키고, EtOAc (150 ml)로 추출하였다. 이 유기 층을 염수 (50 ml)로 세척하였다. 합한 유기부를 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-브로모-2-클로로-3-메틸-6-니트로페놀 (602 mg, 99% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 11.03 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 2.62 (s, 3H).
Figure pct00091
단계 2: 1-브로모-3-클로로-4-메톡시-2-메틸-5-니트로벤젠
실온에서 DMF (10 mL) 중 4-브로모-2-클로로-3-메틸-6-니트로페놀 (597 mg, 2.240 mmol), 탄산칼륨 (1548 mg, 11.20 mmol) 및 MeI (0.700 mL, 11.20 mmol)의 혼합물을 대략 60시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 ml)와 물 (50 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 10%LiCl 용액 (2 x 50 ml) 및 염수 (50 ml)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 24 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-40% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 1-브로모-3-클로로-4-메톡시-2-메틸-5-니트로벤젠 (510 mg, 81% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.00 (s, 1H), 4.01 (s, 3H), 2.59 (s, 3H).
Figure pct00092
단계 3: 5-브로모-3-클로로-2-메톡시-4-메틸아닐린
실온에서 EtOH (10 mL) 및 물 (1.5 mL) 중 1-브로모-3-클로로-4-메톡시-2-메틸-5-니트로벤젠 (405 mg, 1.444 mmol) 및 염화암모늄 (772 mg, 14.44 mmol)의 혼합물에 아연 (944 mg, 14.44 mmol)을 10분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 생성된 불균질 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (200 ml)으로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (100 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 5-브로모-3-클로로-2-메톡시-4-메틸아닐린 (354 mg, 98% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.90 (s, 1H), 3.81 (s, 5H), 2.39 (s, 3H).
Figure pct00093
단계 4: 3-클로로-2-메톡시-4-메틸아닐린
-78℃에서 THF (10 mL) 중 5-브로모-3-클로로-2-메톡시-4-메틸아닐린 (283 mg, 1.130 mmol)의 용액에 n-BuLi, 2.5 M (0.994 mL, 2.485 mmol)을 5분에 걸쳐 적가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하였다. 추가 분취량의 n-BuLi, 2.5 M (0.994 mL, 2.485 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온으로 천천히 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액 (40 ml)과 EtOAc (40 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 (40 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 복합 혼합물로 농축시켰다. 잔류물을 12 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-50% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 가장 순수한 분획을 농축시켜 3-클로로-2-메톡시-4-메틸아닐린 (45 mg, 0.262 mmol, 23.21% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. 이 물질은 매우 불순하고 그대로 사용된다. MS (M+1) m/z: 172.0 (174.0 염소 패턴) (M+H)+. LC 체류 시간 0.76 [E].
Figure pct00094
단계 5: 2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린
디옥산 (2 mL) 중 3-클로로-2-메톡시-4-메틸아닐린 (45 mg, 0.262 mmol), (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (66.6 mg, 0.524 mmol), 1,1'-비스(디-t-부틸포스피노)페로센 (12.44 mg, 0.026 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨, 2 M (0.393 mL, 0.787 mmol)의 탈기된 혼합물을 100℃에서 90분 동안 교반하였다. 이 때, 반응 혼합물을 냉각시키고, 추가 1/2분취량의 보론산, 촉매 및 염기를 첨가하고, 반응물을 탈기시키고, 100℃로 추가로 30분 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc (30 ml)와 염수 (30 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 잔류물로 농축시키고, 이를 4 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (14 mg, 0.064 mmol, 24.46% 수율)을 황색 오일 (불순함)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 219.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.61 [E].
Figure pct00095
단계 6: 6-클로로-4-((2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드
실온에서 THF (0.75 mL) 중 2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (14 mg, 0.064 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20.11 mg, 0.096 mmol)의 용액에 THF 중 LiHMDS, 1 M (0.289 mL, 0.289 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. 포화 염화암모늄 용액 2 ml로 켄칭한 후, 반응 혼합물을 EtOAc (30 ml)와 포화 염화암모늄 용액 (20 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 (20 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 갈색 고체를 수득하고, 이를 4 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-클로로-4-((2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.051 mmol, 80% 수율)를 담황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 391.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.00 [E].
실시예 33: 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드
디옥산 (0.5 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.051 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (8.71 mg, 0.102 mmol), Pd2(dba)3, 클로로포름 부가물 (5.29 mg, 5.12 μmol), xantphos (5.92 mg, 10.23 μmol) 및 Cs2CO3 (66.7 mg, 0.205 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 N2를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 45분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMF로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 LC/MS에 의해 다음 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5-μm
입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 포함; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 포함; 구배: 13% B에서 0-분 유지, 20분에 걸쳐 13-53% B, 이어서 100% B에서 0-분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 신호에 의해 촉발시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (8.4 mg, 37.4%)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 440.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.48 [I]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.28 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.39 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.16 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.22 (s, 3H), 3.41 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.12 - 2.04 (m, 1H), 0.87 - 0.77 (m, 4H).
실시예 34
Figure pct00096
단계 1: 이소프로필 3-브로모-4-메톡시-5-니트로벤조에이트
0℃에서 THF (5 mL) 중 3-브로모-4-메톡시-5-니트로벤조산 (236 mg, 0.855 mmol), 2-프로판올 (0.198 mL, 2.56 mmol) 및 트리페닐포스핀 (336 mg, 1.282 mmol)의 용액에 DIAD (0.249 mL, 1.282 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 24 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-40% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 이소프로필 3-브로모-4-메톡시-5-니트로벤조에이트 (272 mg, 0.855 mmol, 99% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. 생성물은 NMR에 의해 일부 환원된 DIAD를 함유하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.43 (d, J=2.1 Hz, 1H), 8.37 (d, J=2.1 Hz, 1H), 5.25 (m, J=10.3, 6.3 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 1.38 (d, J=6.2 Hz, 6H).
Figure pct00097
단계 2: 이소프로필 3-아미노-5-브로모-4-메톡시벤조에이트
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 이소프로필 3-브로모-4-메톡시-5-니트로벤조에이트 (272 mg, 0.855 mmol) 및 염화주석(II) 2수화물 (772 mg, 3.42 mmol)의 혼합물을 90분 동안 환류하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 25 ml로 희석하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 층을 2.5 N NaOH (3 x 30 ml), 물 (30 ml) 및 염수 (30 ml)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 오일을 수득하고, 이를 12 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-70% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 이소프로필 3-아미노-5-브로모-4-메톡시벤조에이트를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.59 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.20 (dt, J=12.5, 6.2 Hz, 1H), 4.01 (br s, 2H), 3.86 (s, 3H), 1.34 (d, J=6.2 Hz, 6H).
Figure pct00098
단계 3: 이소프로필 3-아미노-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트
디옥산 (4 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (94 mg, 0.743 mmol), 이소프로필 3-아미노-5-브로모-4-메톡시벤조에이트 (153 mg, 0.531 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (21.68 mg, 0.027 mmol) 및 2 M K3PO4 (수성) (0.796 mL, 1.593 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 혼합물을 100℃로 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc (50 ml)와 염수 (20 ml) 사이에 분배하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 24 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 이소프로필 3-아미노-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (57 mg, 0.196 mmol, 37.0% 수율)를 황갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 291.0 (M+H)+. LC 체류 시간 0.84 [E].
Figure pct00099
단계 4: 이소프로필 3-((6-클로로-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트
실온에서 THF (2 mL) 중 이소프로필 3-아미노-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (57 mg, 0.196 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (65.7 mg, 0.314 mmol)의 용액에 THF 중 LiHMDS, 1 M (0.785 mL, 0.785 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. 포화 염화암모늄 용액 2 ml로 켄칭한 후, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액 (20 ml)과 EtOAc (20 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 (20 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 12 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-70% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 이소프로필 3-((6-클로로-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (71 mg, 78% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 463.1 (465.1 염소 패턴) (M+H)+. LC 체류 시간 0.97 [E].
실시예 34: 3-((6-(시클로프로판카르복스아미도)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트
디옥산 (0.6 mL) 중 이소프로필 3-((6-클로로-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (40 mg, 0.086 mmol), 시클로프로판-카르복스아미드 (36.8 mg, 0.432 mmol), Pd2(dba)3, 클로로포름 부가물 (8.93 mg, 8.64 μmol), xantphos (10.00 mg, 0.017 mmol) 및 Cs2CO3 (113 mg, 0.346 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 N2를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMSO로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 이소프로필 3-((6-(시클로프로판카르복스아미도)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-4-일)아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트 (17.5 mg; 39.6%)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 512.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.83 [I]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.36 (s, 1H), 11.22 (s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.27 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.03 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.15 (quin, J=6.2 Hz, 1H), 4.26 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 2.15 - 2.01 (m, 1H), 1.32 (d, J=6.2 Hz, 6H), 0.89 - 0.74 (m, 4H).
실시예 35
Figure pct00100
단계 1: (3-브로모-4-메톡시-5-니트로페닐)메탄올
실온에서 디옥산 (18 mL) 및 물 (7.5 mL) 중 메틸 3-브로모-4-메톡시-5-니트로벤조에이트 (1000 mg, 3.45 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨 (913 mg, 24.13 mmol)을 10분에 걸쳐 조금씩 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반되도록 하였다.
반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1 N HCl을 천천히 첨가하여 기체 발생을 최소화하였다. 기체 발생이 중지되면, 혼합물을 EtOAc (50 ml)와 물 (50 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 (50 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 24 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 (3-브로모-4-메톡시-5-니트로페닐)메탄올 (406 mg, 1.549 mmol, 44.9% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.83 - 7.79 (m, 1H), 7.78 - 7.74 (m, 1H), 4.72 (d, J=5.8 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 1.90 (t, J=5.8 Hz, 1H).
Figure pct00101
단계 2: 1-브로모-2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-니트로벤젠
0℃에서 THF 중 (3-브로모-4-메톡시-5-니트로페닐)메탄올 (200 mg, 0.763 mmol)의 용액에 수소화나트륨, 미네랄 오일 중 60% (61.0 mg, 1.526 mmol)를 5분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 반응물은 암갈색이 되었다. 30분 동안 교반한 후, MeI (0.095 mL, 1.526 mmol)를 첨가하고, 90분 동안 실온으로 가온하면서 교반을 계속하였다. 이 때, 반응물을 물로 켄칭하고, 물 (40 ml)과 EtOAc (40 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 (25 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 잔류물로 농축시키고, 이를 24 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 1-브로모-2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-니트로벤젠 (83 mg, 39.4% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.77 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.44 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.43 (s, 3H).
Figure pct00102
단계 3: 3-브로모-2-메톡시-5-(메톡시메틸)아닐린
에틸 아세테이트 (3 mL) 중 1-브로모-2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-니트로벤젠 (82 mg, 0.297 mmol) 및 염화주석(II) 2수화물 (268 mg, 1.188 mmol)의 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc 20 ml로 희석하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 층을 2.5 M NaOH (2 x 25 ml), 물 (25 ml) 및 염수 (25 ml)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 4 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-70% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 3-브로모-2-메톡시-5-(메톡시메틸)아닐린 (36 mg, 49.3% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 245.9/247.9 (M+H)+. LC 체류 시간 0.83 [E].
Figure pct00103
단계 4: 2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린
디옥산 (1 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (36.1 mg, 0.284 mmol), 3-브로모-2-메톡시-5-(메톡시메틸)아닐린 (35 mg, 0.142 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (5.81 mg, 7.11 μmol) 및 2 M K3PO4 (수성) (0.213 mL, 0.427 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 혼합물을 100℃에서 0.75시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc (50 ml)와 염수 (20 ml) 사이에 분배하였다. 무수 황산나트륨 용액 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 4 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (22 mg, 62.3% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 249.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.69 [E].
Figure pct00104
단계 5: 6-클로로-4-((2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드
실온에서 THF (1 mL) 중 2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (22 mg, 0.089 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (37.0 mg, 0.177 mmol)의 용액에 THF 중 LiHMDS, 1 M (0.354 mL, 0.354 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. 포화 염화암모늄 용액 2 ml로 켄칭한 후, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액 (20 ml)과 EtOAc (20 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수 (20 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 4 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-클로로-4-((2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (25 mg, 0.059 mmol, 67.0% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 421.0 (M+H)+. LC 체류 시간 0.89 [E].
실시예 35: 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드
디옥산 (0.5 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (25 mg, 0.059 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (25.3 mg, 0.297 mmol), Pd2(dba)3, 클로로포름 부가물 (6.14 mg, 5.94 μmol), xantphos (6.87 mg, 0.012 mmol) 및 Cs2CO3 (77 mg, 0.238 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 N2를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMSO로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 분획을 농축시켜 6-(시클로프로판-카르복스아미도)-4-((2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (16.3 mg; 57.7%)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 470.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.46 [I]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.29 (s, 1H), 10.95 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.10 (d, J=9.0 Hz, 2H), 7.67 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J=1.7 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 2.14 - 2.00 (m, 1H), 0.87 - 0.73 (m, 4H).
실시예 36
Figure pct00105
단계 1: (또한 중간체 19 참조)
-10℃ (빙수조 중)에서 DMF (40 mL) 중 4,5-디브로모-1H-1,2,3-트리아졸 (3.5 g, 15.43 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (4.69 g, 33.9 mmol)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 아이오도메탄 (1.929 mL, 30.9 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하면서 밤새 교반하였으며, 이 때 이를 10 mL 물로 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc (2 x 50 ml)로 추출한 후, 합한 유기 층을 10% 수성 LiCl 및 염수로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 여과하고, 잔류물로 농축시키고, 이를 40 g 실리카 겔 칼럼 상에 로딩하고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4,5-디브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (2.17 g, 58.4% 수율)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다. LC 체류 시간 1.24 [C] [목적 디브로모 생성물은 이온화하지 않음].
Figure pct00106
단계 2: (또한 중간체 19 참조)
-20℃로 냉각시킨 에테르 (18 mL) 중 4,5-디브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (2.55 g, 10.59 mmol)의 용액에 THF 중 이소프로필 염화마그네슘, 2 M (17.47 mL, 34.9 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 2시간에 걸쳐 가온되도록 하였다. 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭한 후, 혼합물을 에테르 (2 x 50 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1x)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.13 g, 65.9% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 188.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.87 [C].
Figure pct00107
단계 3: (또한 중간체 19 참조)
10℃로 냉각시킨 THF (20 mL) 중 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.59 g, 9.82 mmol)의 용액에 THF 중 이소프로필 염화마그네슘-염화리튬 착물, 1.3 (15.10 mL, 19.63 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반한 다음, -20℃로 냉각시켰다. 트리메틸 보레이트 (3.29 mL, 29.4 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 1 N HCl로 켄칭한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (1x)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (1x)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (899 mg, 72.2% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC 체류 시간 0.95 [C]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (br s, 2H), 7.89 (s, 1H), 4.16 (s, 3H).
Figure pct00108
단계 4:
디옥산 (2 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (100 mg, 0.788 mmol), 4-브로모-3-메톡시피리딘-2-아민 (80 mg, 0.394 mmol) 및 PdCl2(dppf)-디클로로메탄 부가물 (16.09 mg, 0.020 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (0.591 mL, 1.182 mmol)을 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 30분 동안 가열하였다. 반응물은 거의 즉시 암색으로 변하였다. LC-MS는 출발 물질의 완전한 소모를 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc (75 mL)로 희석하였다. 이어서, 이 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% EtOAc로 용리시키면서 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (45 mg, 54.5% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 206.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.60 [C].
Figure pct00109
단계 5:
THF (2 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (48.1 mg, 0.230 mmol) 및 3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (45 mg, 0.219 mmol) (재정제됨)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (0.548 mL, 0.548 mmol)를 시린지를 사용하여 적가 방식 (<5분)으로 첨가하고, LCMS에 의해 반응이 완결될 때까지 교반하였다. 포화 염화암모늄 (수성)을 첨가하여 잔류 염기를 켄칭하였으며, 이 때 고체가 용액으로부터 침전되었고, 이를 여과 제거하였다. 고체는 목적 생성물이었다. 반응 용액을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 1x 추출한 다음, 합한 유기 층을 포화 염화암모늄 (수성)으로 1x 및 염수로 1x 세척하였다. 이어서, 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 목적 생성물은 잔류물에서 발견되지 않았다. 여과 및 건조된 고체만이 생성물이었다. 고체를 건조시켜 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (37 mg, 44.7% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 378.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.445 [C].
Figure pct00110
단계 6:
디옥산 (1.5 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (37 mg, 0.098 mmol), xantphos (11.33 mg, 0.020 mmol), 및 시클로프로판카르복스아미드 (41.7 mg, 0.490 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 탄산세슘 (128 mg, 0.392 mmol) 및 Pd2(dba)3 (8.97 mg, 9.79 μmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었다. 반응 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (11.5 mg, 27.3% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 427.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.16 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.41 (s, 1H), 11.33 (s, 1H), 9.85 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.15 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.19 - 2.09 (m, 1H), 0.97 - 0.83 (m, 4H).
실시예 36: 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드의 대안적 합성
Figure pct00111
실시예 36
Figure pct00112
단계 1: 2-플루오로-3-메톡시피리딘-4-일)보론산:
-78℃에서 THF 중 2-플루오로-3-메톡시피리딘 (0.5 g, 3.93 mmol)의 용액에 TMEDA (1.25 ml, 8.26 mmol) 및 n-BuLi (1.88 ml, 4.72 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 -55℃로 가온하면서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 -78℃로 재냉각시키고, 트리이소프로필 보레이트 (1.370 ml, 5.90 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 -55℃로 가온하면서 2시간 동안 교반하였으며, 이 때 이를 물 (2 ml)로 켄칭하고, 실온으로 가온되도록 하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 추가의 물 (20 ml)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 에테르 (20 ml)로 세척하고, 분리된 수성 층을 AcOH를 사용하여 pH로 산성화시켰다. 수성 층을 EtOAc (2 x 20 ml)로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 2-플루오로-3-메톡시피리딘-4-일)보론산 (650 mg; 97% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 172.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.66분 [H]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.93 (dd, J=4.7, 1.7 Hz, 1H), 7.55 (dd, J=4.7, 1.4 Hz, 1H), 6.25 - 5.41 (m, 2H), 4.09 (d, J=3.3 Hz, 3H).
Figure pct00113
단계 2: 2-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘:
디옥산 (6.9 ml) 중 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (중간체 19 및 제1 방법에 나타냄) (281 mg, 1.738 mmol), (2-플루오로-3-메톡시피리딘-4-일)보론산 (270 mg, 1.580 mmol) 및 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (64.5 mg, 0.079 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (2.4 ml, 4.74 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응물은 거의 즉시 암색으로 변하였다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 EtOAc (2 x)로 세척하고, 합한 유기 층을 염수 20 ml로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 이스코 칼럼 (24g, AcOEt/헥산 =0-50%, 구배 시간 = 15분 유량 = 35 ml/분)에 의해 정제하고, 순수한 분획을 농축시키고, 건조시켜 2-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘 (245 mg; 74.5% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 209.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.81분 [H]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.15 (s, 1H), 7.91 (dd, J=5.2, 1.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 4.02 (d, J=2.6 Hz, 3H).
Figure pct00114
단계 3: 3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민:
n-BuOH (1044 μl) 중 2-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘 (50 mg, 0.240 mmol), O-메틸히드록실아민, HCl (80 mg, 0.961 mmol)의 교반 혼합물을 N2 하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 고체는 MeONH2였으며, HCl을 여과 제거하고, EtOAc (2 x 1 ml)로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 합하고, 1 N HCl (2 x 2 ml)로 추출하고, 산성 층을 EtOAc (2 x 1 ml)로 세척하고, Na2CO3으로 염기성화시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (2 x 3 ml)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (2 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 잔류물로 농축시키고, 이를 그대로 사용하였다. 에탄올 (1.5 ml) 및 AcOH (0.2 ml) 중 잔류물의 혼합물에 아연 (62.8 mg, 0.961 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈고, 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 EtOAc (10 ml) 중에 용해시키고, 반포화 NaHCO3 (10 ml) 및 염수 (5 ml)로 세척하였다. 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (45 mg; 80% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 206.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.69분 [H]. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.09 (s, 1H), 7.87 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.17 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.74 (br s, 2H), 4.27 (s, 3H), 3.73 (s, 3H).
Figure pct00115
단계 4: 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)피리다진-3-카르복실산:
실온에서 2-Me-THF (227 ml) (새로운 병) 중 3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (7 g, 34.1 mmol) 및 리튬 4,6-디클로로피리다진-3-카르복실레이트, 리튬 염, H2O (특허 참조: US 10,899,745) (12.22 g, 54.6 mmol)의 용액에 THF 중 1 M LiHMDS (153 ml, 153 mmol)를 30분에 걸쳐 적가하였다. 내부 온도를 34℃로 상승시키고, 반응 혼합물을 45℃의 오일 조를 사용하여 2시간 동안 가열한 다음 (내부 온도가 43℃로 서서히 상승함), 30분 동안 교반하면서 50℃로 가열하였다. 냉각 후, 혼합물을 10-15℃에서 물 (50 ml)로 켄칭한 다음, 진공 하에 농축시켜 대부분의 용매를 제거하였다. 잔류물에 물 800 ml 및 시트르산 (16.38 g, 85 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 물 (3x)로 세척하고 (느린 여과), 밤새 공기 건조시킨 다음, 진공 하에 50℃에서 6시간 동안 세척하여 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)피리다진-3-카르복실산 (10.7 g; 87% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 362.0 (364.0, 클로로 패턴) (M+H)+. LC 체류 시간 0.89분 [H].
Figure pct00116
단계 5: 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)피리다진-3-카르복실산:
2000 ml 4구 플라스크에서, 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)피리다진-3-카르복실산 (31 g, 86 mmol) 및 시클로프로판카르복스아미드 (21.88 g, 257 mmol)를 2-Me-THF (714 ml) 중에 현탁시켰다. DBU (19.38 ml, 129 mmol) 및 소듐 트리플루오로아세테이트 98% (17.48 g, 129 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 N2로 5분 동안 퍼징하였다. 이어서, (R)-(-)-1-[(S)-2-(디시클로헥실포스피노)페로세닐]에틸디-t-부틸포스핀 (2.091 g, 3.77 mmol) 및 알릴팔라듐 클로라이드 이량체, min. 98% (0.627 g, 1.714 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N2로 추가로 5분 동안 퍼징한 다음, N2 하에 기계적 교반 하에 80-82℃ (내부 온도)로 18시간 동안 가열하였다. LC-MS는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, ACN 300 ml 및 물 600 ml 중 시트르산 (52.7 g, 274 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 1시간 동안 정치하였다. 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 ACN (2x), 물 (3x), 및 ACN (2x)으로 세척하였다. 45℃에서 밤새 진공 건조시켜 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)피리다진-3-카르복실산 (31.3 g; 89% 수율)을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 411.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.76분 [H].
Figure pct00117
단계 6: N-(6-메톡시-7-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-11-옥소-11H-피리도[1',2':1,2]피리미도[5,4-c]피리다진-3-일)시클로프로판카르복스아미드:
NMP/ACN (202 ml) (146/56 ml) 중 1-메틸이미다졸 (1.259 ml, 15.79 mmol) 및 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)피리다진-3-카르복실산 (10.8 g, 26.3 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 14 중량% 이상의 물 97%로 습윤시킨 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (2.252 g, 13.16 mmol) 및 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (7.06 g, 36.8 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 오일조를 이용하여 65℃에서 1.5시간 동안 가열하였다 (내부 온도는 한 시점에서 74.5℃로 상승하였고, 70℃ 초과로 유지됨). 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 30분 동안 교반한 후, 이를 내부 온도가 6℃가 될 때까지 빙수조로 냉각시켰다. 30분 동안 정치시킨 후, 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 세척액에서 더 이상의 색상이 발생하지 않을 때까지 아세토니트릴로 세척하였다. 45℃에서 대략 60시간 동안 건조시켜 N-(6-메톡시-7-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-11-옥소-11H-피리도[1',2':1,2]피리미도[5,4-c]피리다진-3-일)시클로프로판카르복스아미드 (8.78 g; 85% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 393.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.82분 [H]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.95 (s, 1H), 8.75 (d, J=7.7 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.60 (d, J=7.7 Hz, 1H), 4.31 (s, 3H), 4.14 (s, 3H), 2.24 - 2.12 (m, 1H), 0.94 (d, J=6.1 Hz, 4H).
Figure pct00118
단계 7: 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드:
N-(6-메톡시-7-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-11-옥소-11H-피리도[1',2':1,2]피리미도[5,4-c]피리다진-3-일)시클로프로판카르복스아미드 (8.77g, 22.35 mmol), 무수 DMSO (160 ml), DIEA (17.57 ml, 101 mmol) 및 메탄-d3-아민, HCl (6.31 g, 89 mmol)의 혼합물을 압력 용기 중에서 100℃ (오일 조)에서 15시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 유리 여과지를 통해 2회 여과하고, 용기를 DMSO (2 x 5 ml 및 3 ml)로 세척하였다. 투명한 여과물을 60℃로 가열하고, 물을 교반하면서 천천히 첨가하였다. 총 21 ml의 물을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 천천히 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 DMSO (2 x 6 ml) 및 ACN (3 x 15 ml)으로 세척하였다. 건조시킨 후, 조 생성물을 무수 DMSO 75 ml와 혼합하고, N2 하에 95℃에서 1시간 동안 교반하였다. 60℃로 냉각시킨 후, 물 10 ml를 교반하면서 천천히 첨가하였다. 물을 첨가한 후, 혼합물을 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 고체를 DMSO (5 ml) 및 아세토니트릴 (3 x 20 ml)로 세척하였다. 진공 하에 45℃에서 대략 60시간 동안 건조시켜 N-(6-메톡시-7-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-11-옥소-11H-피리도[1',2':1,2]피리미도[5,4-c]피리다진-3-일)시클로프로판카르복스아미드 (7.8 g; 82%)를 수득하였다. 분석 데이터에 대해서는 상기 다른 합성을 참조한다.
실시예 37
Figure pct00119
단계 1:
디옥산 (1.3 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (60 mg, 0.159 mmol), xantphos (18.38 mg, 0.032 mmol), 및 tert-부틸 카르바메이트 (74.4 mg, 0.635 mmol)의 혼합물을 5분 동안 이를 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 이어서, 탄산세슘 (207 mg, 0.635 mmol) 및 Pd2(dba)3 (14.54 mg, 0.016 mmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하고, 반응물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS에 의해 반응이 완결되었다. 반응 혼합물을 DCM 중 0-15% MeOH로 용리시키면서 작은 카트리지 및 실리카 겔 칼럼을 사용하여 직접 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-아미노-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (23 mg, 0.064 mmol, 40.4% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 359.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.99 [C].
Figure pct00120
단계 2:
DMF (1 mL) 및 TEA (0.045 mL, 0.321 mmol) 중 (1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복실산 (8.02 mg, 0.077 mmol), 및 50% DMF 용액의 1-프로판포스폰산 무수물 (123 mg, 0.193 mmol)의 용액을 6-아미노-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (23 mg, 0.064 mmol)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 순수한 분획의 정제용 HPLC 농축에 의해 정제하여 6-((1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (4.6 mg, 15.47% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 445.1 (M+H)+. LC 체류 시간 1.078 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.43 (s, 1H), 11.38 (s, 1H), 9.86 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.18 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.11 - 4.90 (m, 1H), 4.28 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.40 - 2.30 (m, 1H), 1.81 - 1.67 (m, 1H), 1.37 - 1.16 (m, 1H).
실시예 38
Figure pct00121
단계 1:
실온에서 DCM (5 mL) 중 2,2-디메틸시클로프로판-1-카르복실산 (65 mg, 0.569 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (0.065 mL, 0.740 mmol)의 용액에 3 방울의 DMF를 첨가하였다. 기체 발생이 관찰되었다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 조 산 클로라이드를 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 (7.12 mL, 2.85 mmol) 및 디이소프로필에틸-아민 (0.298 mL, 1.708 mmol) 중 암모니아, 0.5 M의 용액에 천천히 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 고체로 농축시켰다. 밤새 건조시켜 불순한 2,2-디메틸시클로프로판-1-카르복스아미드 (55 mg, 85% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 후속 단계에 그대로 사용하였다.
Figure pct00122
단계 2:
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.053 mmol), 2,2-디메틸-시클로프로판-1-카르복스아미드 (23.96 mg, 0.212 mmol), Pd2(dba)3, (5.47 mg, 5.29 μmol), xantphos (6.13 mg, 10.59 μmol) 및 탄산세슘 (69.0 mg, 0.212 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 90분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMF로 희석하고, 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-(2,2-디메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (4.2 mg, 17.46% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 455.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.29 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.38 (s, 1H), 11.14 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.16 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.87 - 3.79 (m, 3H), 2.00 (br t, J=6.4 Hz, 1H), 1.17 (br d, J=10.7 Hz, 6H), 1.07 (br t, J=3.8 Hz, 1H), 0.87 (br dd, J=7.5, 3.5 Hz, 1H).
실시예 39
Figure pct00123
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.053 mmol), 1,1-디메틸우레아 (23.32 mg, 0.265 mmol), Pd2(dba)3 (5.47 mg, 5.29 μmol), xantphos (6.13 mg, 10.59 μmol) 및 탄산세슘 (69.0 mg, 0.212 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 90분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMF로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-(3,3-디메틸우레이도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (4 mg, 16.98% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 430.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.07 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.34 (br s, 1H), 9.49 (s, 1H), 9.14 (br s, 1H), 8.30 (br d, J=0.8 Hz, 1H), 8.15 (br d, J=5.2 Hz, 1H), 7.46 (br d, J=5.2 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.50 (m, 1H), 3.00 (s, 6H).
실시예 40
Figure pct00124
단계 1:
THF (2 mL) 중 (1S,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복실산 (82 mg, 0.819 mmol)의 용액에 먼저 TEA (0.171 mL, 1.229 mmol) 및 에틸 클로로포르메이트 (0.087 mL, 0.901 mmol)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 백색 침전물이 형성되었다. 이 침전물을 여과 제거하고, 후속적으로 THF 5 mL 중에 현탁시켰다. 현탁액에 THF 중 암모니아, 0.4 M (10.24 mL, 4.10 mmol)을 첨가하고, 25℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하여 백색 고체를 수득하고, 이를 그대로 사용하였다.
이 방법을 이용하여 하기 열거된 각각의 유사체의 제조에 사용된 카르복스아미드를 제조하였다.
Figure pct00125
단계 2:
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.053 mmol), (1S,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미드 (20.99 mg, 0.212 mmol), Pd2(dba)3 (5.47 mg, 5.29 μmol), xantphos (6.13 mg, 10.59 μmol) 및 탄산세슘 (69.0 mg, 0.212 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 20분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMF로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1S,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)피리다진-3-카르복스아미드 (3.1 mg, 13.29% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 441.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.21 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.41 (s, 1H), 11.22 (s, 1H), 9.85 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.17 (br d, J=4.9 Hz, 1H), 7.48 (br d, J=4.9 Hz, 1H), 4.36 - 4.31 (m, 1H), 4.28 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.15 (br d, J=6.1 Hz, 1H), 1.39 - 1.29 (m, 1H), 1.15 (br d, J=5.8 Hz, 3H), 1.07 - 0.83 (m, 1H).
실시예 41
Figure pct00126
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (20 mg, 0.053 mmol), (1R,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미드 (20.99 mg, 0.212 mmol), Pd2(dba)3 (5.47 mg, 5.29 μmol), xantphos (6.13 mg, 10.59 μmol) 및 탄산세슘 (69.0 mg, 0.212 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 90분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMF로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1R,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)피리다진-3-카르복스아미드 (4.6 mg, 18.86% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 441.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.25 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.35 (s, 1H), 11.21 (s, 1H), 9.81 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.14 (br d, J=5.5 Hz, 1H), 7.46 (br d, J=4.9 Hz, 1H), 4.25 (s, 3H), 3.84 - 3.77 (m, 1H), 3.62 - 3.54 (m, 3H), 1.84 (br dd, J=8.1, 4.4 Hz, 1H), 1.40 - 1.27 (m, 1H), 1.11 (br d, J=5.8 Hz, 3H), 0.74 (br s, 1H).
실시예 42
Figure pct00127
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (50 mg, 0.132 mmol), (1S,2S)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미드 (52.5 mg, 0.529 mmol), Pd2(dba)3 (13.67 mg, 0.013 mmol), xantphos (15.32 mg, 0.026 mmol) 및 탄산세슘 (172 mg, 0.529 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMSO로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1S,2S)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)피리다진-3-카르복스아미드 (6.7 mg, 10.92% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 441.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.22 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.39 (s, 1H), 11.23 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.14 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.46 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 1.88 (dt, J=7.9, 4.2 Hz, 1H), 1.37 - 1.28 (m, 1H), 1.12 (d, J=6.0 Hz, 3H), 1.10 (br s, 1H), 0.73 (br dd, J=6.1, 4.3 Hz, 1H).
실시예 43
Figure pct00128
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (50 mg, 0.132 mmol), (1R,2R)-2-에틸시클로프로판-1-카르복스아미드 (59.9 mg, 0.529 mmol), Pd2(dba)3 (13.67 mg, 0.013 mmol), xantphos (15.32 mg, 0.026 mmol) 및 탄산세슘 (172 mg, 0.529 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 15분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMSO로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-((1R,2R)-2-에틸시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (14.2 mg, 0.031 mmol, 23.61% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 455.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.33 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.40 (s, 1H), 11.25 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.15 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 1.93 (dt, J=7.8, 3.7 Hz, 1H), 1.45 - 1.38 (m, 1H), 1.33 - 1.26 (m, 2H), 1.12 - 1.05 (m, 1H), 0.97 (t, J=7.1 Hz, 3H), 0.80 - 0.73 (m, 1H).
실시예 44
Figure pct00129
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.099 mmol), (1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미드 (40.8 mg, 0.396 mmol), Pd2(dba)3 (10.23 mg, 9.90 μmol), xantphos (11.46 mg, 0.020 mmol) 및 탄산세슘 (129 mg, 0.396 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 20분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMSO로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일)아미노)-6-((1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (8.2 mg, 0.016 mmol, 16.01% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 471.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.31 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.43 (s, 1H), 11.38 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.17 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.48 (d, J=5.3 Hz, 1H), 5.10 - 4.89 (m, 1H), 4.26 (dt, J=7.4, 3.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.39 - 2.29 (m, 1H), 1.78 - 1.67 (m, 1H), 1.33 - 1.28 (m, 2H), 1.27 - 1.21 (m, 1H), 1.17 (dd, J=7.4, 2.2 Hz, 2H).
실시예 45
Figure pct00130
DMF (0.5 mL) 중 4-플루오로부탄산 (8.88 mg, 0.084 mmol), 및 50% DMF 용액의 1-프로판포스폰산 무수물 (80 mg, 0.126 mmol)의 용액을 20분 동안 교반한 다음, 0.5 mL DMF 중 6-아미노-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (15 mg, 0.042 mmol) 및 DIEA (0.037 mL, 0.209 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응은 불완전하였다. DMF 중 10 mg 4-플루오로부탄산 및 200 uL 50% 1-프로판포스폰산 무수물의 용액을 제조하고, 20분 동안 교반한 다음, 반응 용액에 첨가하고, 교반을 50℃에서 추가로 밤새 계속하였다. 두번째 밤에 교반한 후, LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 DMF를 사용하여 2 mL로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 6-((1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (2.9 mg, 6.50 μmol, 15.52% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 447.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.08 [C]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.38 (s, 1H), 11.04 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.17 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.55 (t, J=6.1 Hz, 1H), 4.45 (br t, J=5.9 Hz, 1H), 4.26 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.66 - 2.59 (m, 2H), 2.07 - 1.93 (m, 2H).
실시예 46
Figure pct00131
단계 1: 4-브로모-6-메틸-2-니트로피리딘-3-올
진한 황산 (1 mL)을 플라스크 내 고체 4-브로모-6-메틸피리딘-3-올 (0.267 g, 1.420 mmol)에 -10℃에서 [염 및 빙조에서] 적가하였다. 후속적으로, 발연 질산 (0.063 mL, 1.420 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하면서 반응물을 실온으로 천천히 가온하였다. 반응 혼합물을 얼음 ~50 gm에 부었다. 얼음이 녹은 후, 혼합물을 분리 깔때기로 옮기고, DCM (3 x 50 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-브로모-6-메틸-2-니트로피리딘-3-올 (165 mg, 0.708 mmol, 49.9% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 10.63 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 2.57 (s, 3H).
Figure pct00132
단계 2: 4-브로모-3-메톡시-6-메틸-2-니트로피리딘
DMF 중 4-브로모-6-메틸-2-니트로피리딘-3-올 (160 mg, 0.687 mmol), 탄산칼륨 (474 mg, 3.43 mmol) 및 MeI (0.215 mL, 3.43 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 ml)와 물 (30 ml) 사이에 분배하였다. 유기 층을 10%LiCl (2 x 30 ml) 및 염수 (30 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-브로모-3-메톡시-6-메틸-2-니트로피리딘 (133 mg, 0.538 mmol, 78% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 247.0 (249.0) (M+H)+. LC 체류 시간 1.02 [E].
Figure pct00133
단계 3: 4-브로모-3-메톡시-6-메틸피리딘-2-아민
0℃에서 교반하는 에탄올 (0.6 mL), 아세트산 (0.3 mL) 및 물 (0.6 mL) 중 4-브로모-3-메톡시-6-메틸-2-니트로피리딘 (133 mg, 0.538 mmol)의 용액에 철 분말 (210 mg, 3.77 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 총 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트®를 통해 여과하고, 필터 케이크를 EtOAc 및 물로 헹구었다. 여과물을 분리 깔때기로 옮기고, 1.5 M 이염기성 인산칼륨 50 ml를 첨가하였다. 진탕시킨 후, 층을 분리하고, 유기 층을 염수 (50 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-브로모-3-메톡시-6-메틸피리딘-2-아민 (101 mg, 0.465 mmol, 86% 수율)을 크림색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 217.0 (219.0) (M+H)+. LC 체류 시간 0.64 [E].
Figure pct00134
단계 4: 3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민
디옥산 (3.5 mL) 중 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (중간체 19) (89 mg, 0.698 mmol), 4-브로모-3-메톡시-6-메틸피리딘-2-아민 (101 mg, 0.465 mmol) 및 PdCl2(dppf)-CH2Cl2부가물 (19.00 mg, 0.023 mmol)의 교반 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 2 M K3PO4 (수성) (0.698 mL, 1.396 mmol)를 신속하게 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 0.75시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc (30 ml)와 염수 (20 ml) 사이에 분배하였다. 무수 황산나트륨 용액 상에서 건조시킨 후, 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 12 gm 이스코 실리카 겔 카트리지 상에서 0-100% EtOAc/Hex 구배로 용리시키면서 크로마토그래피하였다. 순수한 분획을 농축시켜 3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (75 mg, 0.342 mmol, 73.5% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 220.2 (M+H)+. LC 체류 시간 0.68 [E].
Figure pct00135
단계 5: 6-클로로-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드
실온에서 THF (3 mL) 중 3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (75 mg, 0.342 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (143 mg, 0.684 mmol)의 용액에 THF 중 KHMDS, 1 M (1.539 mL, 1.539 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. 포화 염화암모늄 용액 2 ml로 켄칭한 후, 유기부를 회전증발기로 제거하고, 잔류물을 물로 희석하였다. 여과하고, 필터 케이크를 에틸 에테르로 헹구고, 건조시켜 6-클로로-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (40 mg, 0.102 mmol, 29.8% 수율)를 황갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 392.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.13 [E].
실시예 46: 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드
디옥산 (0.5 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (25 mg, 0.059 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (25.3 mg, 0.297 mmol), Pd2(dba)3, 클로로포름 부가물 (6.14 mg, 5.94 μmol), xantphos (6.87 mg, 0.012 mmol) 및 Cs2CO3 (77 mg, 0.238 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 N2를 버블링하여 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 DMSO로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건을 사용하여 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 포함; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 포함; 구배: 15% B에서 0-분 유지, 20분에 걸쳐 15-55% B, 이어서 100% B에서 0-분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집은 MS 신호에 의해 촉발되었다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (18.3 mg; 40.7% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 441.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.77 [G]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.33 (s, 1H), 11.31 (s, 1H), 10.10 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.28 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.53 (br s, 3H), 2.22 - 1.96 (m, 1H), 1.19 - 0.84 (m, 4H).
하기 실시예를 실시예 46과 동일한 방법을 사용하여 제조하였다.
실시예 47
Figure pct00136
실시예 47: 4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1R,2R)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)피리다진-3-카르복스아미드. MS (M+1) m/z: 455.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.69 [I]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.31 (s, 1H), 11.21 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 4.26 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 1.90 (dt, J=8.0, 4.2 Hz, 1H), 1.38 - 1.25 (m, 1H), 1.19 - 1.04 (m, 4H), 0.72 (ddd, J=7.8, 6.2, 3.7 Hz, 1H).
실시예 48
Figure pct00137
실시예 48: 4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)-6-((1S,2S)-2-메틸시클로프로판-1-카르복스아미도)피리다진-3-카르복스아미드. MS (M+1) m/z: 455.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.69 [I]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.31 (s, 1H), 11.21 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 4.26 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 1.95 - 1.86 (m, 1H), 1.40 - 1.25 (m, 1H), 1.18 - 1.05 (m, 4H), 0.77 - 0.68 (m, 1H).
실시예 49
Figure pct00138
단계 1: (E)-디-tert-부틸 ((6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸) 포스페이트:
DMF (7 mL) 중 6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (550 mg, 1.290 mmol)의 현탁액에 Cs2CO3 (2521 mg, 7.74 mmol)을 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 후, 디-tert-부틸 (클로로메틸) 포스페이트 (1668 mg, 6.45 mmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 24시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 빙냉수 (100 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수 용액 (100 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 후속 단계에 혼합물로서 사용하였다.
Figure pct00139
단계 2: (E)-tert-부틸 ((6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸) 히드로겐 포스페이트:
아세톤 32 ml 및 AcOH 8 ml 중 (E)-디-tert-부틸 ((6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸) 포스페이트 (2.1g, 3.24 mmol)의 용액을 30℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 빙수 (100 ml)로 희석하고, pH가 5 내지 6으로 조정될 때까지 NaHCO3을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 분리 깔때기로 옮기고, EtOAc (4 x 80 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 반포화 NaCl (100 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 이스코 칼럼 (40g, 고체 로드, MeOH/DCM = 0-10%, 구배 시간 = 20분, 유량 = 40 ml/분)을 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 (E)-tert-부틸 ((6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸) 히드로겐 포스페이트 (1.15 g; 50.2% 수율, 2 단계에 걸침)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 593.2 (M+H)+. LC 체류 시간 0.79분 [H].
Figure pct00140
단계 3: (E)-(6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸 디히드로겐 포스페이트:
AcOH 5.6 ml 및 물 5.6 ml 중 (E)-tert-부틸 ((6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸) 히드로겐 포스페이트 (0.88 g, 1.485 mmol)의 용액을 45℃에서 5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 1시간 동안 정치시키고, 여과하였다. 고체를 물 (3x)로 세척하고, 진공 건조시켜 (E)-(6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸 디히드로겐 포스페이트 (680 mg; 85% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 537.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.71분 [H].
Figure pct00141
실시예 48: (E)-(6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸 디히드로겐 포스페이트, 이나트륨 염:
탈이온수 (7 ml) 및 아세토니트릴 (2 ml) 중 (E)-(6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸 디히드로겐 포스페이트 (680 mg, 1.268 mmol)의 용액에 NaOH (1 N, 2535 μl, 2.54 mmol)를 실온에서 교반하면서 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, 투명한 미황색 용액을 시린지가 구비된 아크로디스크 (0.45 um) 필터를 통해 여과하였다. 이에 따라 수득한 용액을 밤새 동결건조시켜 (E)-(6-((시클로프로판카르보닐)이미노)-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-3-((메틸-d3)카르바모일)피리다진-1(6H)-일)메틸 디히드로겐 포스페이트, 이나트륨 염 (735 mg; 100% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 537.1 (M+H)+. LC 체류 시간 0.71분 [H]. 1H NMR (400 MHz, 산화중수소) δ 9.26 (br s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.11 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.41 (d, J=5.3 Hz, 1H), 5.89 (d, J=8.3 Hz, 2H), 4.28 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 2.07 - 1.74 (m, 1H), 1.16 - 0.91 (m, 4H).
중간체-22:
Figure pct00142
단계-1:
DMF (3 mL) 중 4,5-디브로모-2H-1,2,3-트리아졸 (0.5 g, 2.204 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.217 g, 8.82 mmol) 및 3-브로모옥세탄 (0.302 g, 2.204 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 수득하고, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0에서 10% EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 4,5-디브로모-2-(옥세탄-3-일)-2H-1,2,3-트리아졸 (0.40 g, 1.414 mmol, 64.1% 수율)을 오일로서 수득하였다.
GCMS-EI [M] m/z: 282.9 (M)+; GC 체류 시간 7.57분.
단계-2:
-78℃에서 THF (3 mL) 중 4,5-디브로모-2-(옥세탄-3-일)-2H-1,2,3-트리아졸 (0.35 g, 1.237 mmol)의 용액에 n-BuLi (0.773 mL, 1.237 mmol)를 적가하고, 1시간 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하고, 포화 NH4Cl (10 mL)로 켄칭하고, 디에틸 에테르 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 실온에서 농축시켜 조 4-브로모-2-(옥세탄-3-일)-2H-1,2,3-트리아졸 (0.235 g, 1.152 mmol, 93% 수율)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 그대로 사용하였다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.66 (s, 1H), 5.80-5.71 (m, 1H), 5.21-5.01 (m, 4H).
하기 중간체 (22a-22b)를 중간체 22의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00143
Figure pct00144
중간체 23
Figure pct00145
단계 1:
에탄올 (20 mL) 및 물 (5 mL) 중 1-브로모-2-메톡시-3-니트로벤젠 (2.0 g, 8.62 mmol)의 용액에 철 분말 (3.37 g, 60.3 mmol) 및 염화암모늄 (2.3 g, 43.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 3시간 동안 교반하고, 에탄올 (50 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 잔류물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 물 (2 x 20 mL) 및 염수 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 3-브로모-2-메톡시아닐린 (1.8 g, 8.55 mmol, 99% 수율)을 갈색 액체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 202.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.84분 [방법 A].
단계 2:
밀봉된 튜브에서 1,4-디옥산 (15 mL) 중 3-브로모-2-메톡시아닐린 (1.80 g, 8.91 mmol)의 교반 용액에 비스(피나콜레이토)디보론 (3.39 g, 13.36 mmol) 및 KOAc (2.62 g, 26.7 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 N2 기체로 5분 동안 퍼징한 다음, PdCl2(dppf).[DCM] (0.73 g, 0.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 물 (2 x 50 mL) 및 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 수집된 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 25% EtOAc)에 의해 정제하여 2-메톡시-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (1.8 g, 6.88 mmol, 77% 수율)을 연갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 250.4 (M+H)+. LC 체류 시간 2.11분 [방법 A].
단계 3:
DME (15 mL) 및 물 (5 mL) 중 2-메톡시-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (2.31 g, 9.26 mmol) 및 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (1.50 g, 9.26 mmol)의 교반 용액에 Na2CO3 (2.45 mg, 23.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2로 5분 동안 퍼징하고, Pd(Ph3P)4 (1.07 g, 0.93 mmol)를 N2 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 메탄올 (50 mL)로 세척하였다. 이어서, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 물 (150 mL) 사이에 분배하였다. 수집된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 50% EtOAc)에 의해 정제하여 목적 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (1.70 g, 7.67 mmol, 83% 수율)을 갈색 결정질 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 205.2 (M+H)+. LC 체류 시간 1.20분 [방법 A].
하기 중간체 (23a-23c)를 중간체 23의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00146
Figure pct00147
중간체-24:
Figure pct00148
단계-1
-10℃로 냉각된 250 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모피리딘-3-올 (1.70 g, 9.77 mmol)을 첨가하였다. 진한 황산 (5 mL)을 N2 분위기 하에 천천히 교반하면서 -10℃에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 동일한 온도에서 10분 동안 계속 교반하고, 4-브로모피리딘-3-올을 완전히 용해시켜 투명한 용액을 형성하였다. 질산 (발연, 437 μL, 9.77 mmol)을 -10℃에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 서서히 실온이 되도록 하고 (~1.5시간), 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분쇄된 얼음 (~150 g)에 조심스럽게 부었다. 켄칭이 완결된 후, 반응 혼합물을 CH2Cl2 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 생성된 유기 층을 포화 염수 용액 (30 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 4-브로모-2-니트로피리딘-3-올 (조 물질로서 1.01 g)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. GCMS (M) m/z: 218.0 [M]+. GC 체류 시간 7.36분. 1H-NMR (400 MHz, MeOH-d4): δ 8.00 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 4.8 Hz, 1H).
단계-2
교반 막대가 구비된 250 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-2-니트로피리딘-3-올 (6 g, 27.4 mmol) 및 DMF (100 mL)를 충전하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하여 투명한 용액을 형성하였다 (~5분). K2CO3 (7.57 g, 54.8 mmol)을 이 용액에 조금씩 첨가하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 메틸 아이오다이드 (3.43 mL, 54.8 mmol)를 5분에 걸쳐 적가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (60 mL)로 켄칭하고, EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 빙냉수 (2 x 100 mL) 및 포화 염수 용액 (100 mL)으로 연속적으로 세척하였다. 생성된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 이를 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0-25% EtOAc를 사용하여 정제하여 4-브로모-3-메톡시-2-니트로피리딘을 회백색 고체 (4.61 g, 71% 수율)로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 234.9 [M+H]+. LC 체류 시간 0.66분 [방법 B].
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.25 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H).
단계-3
교반 막대가 구비된 250 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-3-메톡시-2-니트로피리딘 (4.70 g, 21.5 mmol), AcOH (20 mL), EtOH (20 mL) 및 물 (10 mL)을 충전하였다. 혼합물을 실온에서 교반하여 투명한 용액을 형성하였다 (~5분). 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 철 분말 (12.0 g, 151 mmol)을 0℃에서 10분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 순차적으로 포화 수성 NaHCO3 (100 mL) 및 포화 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 칼럼 크로마토그래피 (230-400 메쉬)에 의해 석유 에테르 중 0%에서 60% EtOAc를 사용하여 정제하여 4-브로모-3-메톡시피리딘-2-아민 (3.5 g, 80% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 205.0 [M+H]+. LC 체류 시간 0.66분 [방법 B].
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.54 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H).
중간체-24
Figure pct00149
단계-1
THF (50 mL) 중 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (5.0 g, 30.9 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 이소프로필 염화마그네슘 염화리튬 착물 (3.17 g, 30.9 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 이 온도에서 2시간 동안 교반한 다음, -20℃로 추가로 냉각시켰다. 이어서, 이 용액에 트리메틸 보레이트 (0.64 mL, 5.7 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응물을 -20℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 수성 1 N HCl을 사용하여 pH ~5까지 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 수집하고, 수성 층을 EtOAc (2 x 100 mL)로 다시 추출하고, 합한 유기 층을 염수 용액 (50 mL)으로 세척한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하였다. 생성된 조 생성물을 n-펜탄 20 mL로 세척하여 목적 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (2.6 g, 66.3% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 128.0 [M+H]+. LC 체류 시간 0.66분 [방법 B]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.34 (s, 2H), 7.89 (s, 1H), 4.12 (S, 3H).
단계-2
1,4-디옥산 (3 mL) 및 물 (0.5 ml) 중 4-브로모-3-메톡시피리딘-2-아민 (0.3 g, 1.478 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (0.963 g, 2.96 mmol), (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (0.281 g, 2.216 mmol)을 첨가하고, N2 기체 하에 5분 동안 퍼징하고, 이어서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.085 g, 0.074 mmol)을 첨가한 다음, 밀봉된 튜브에서 120℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸아세테이트 (25 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸아세테이트 (25 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (25 mL) 및 포화 염수 용액 (20 mL)으로 순차적으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0에서 30% EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 생성물 3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (0.22 g, 72.6% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 206.2 [M+1]+. LC 체류 시간 0.36분 [방법 A].
중간체 25
Figure pct00150
단계 1
THF (50 mL) 중 2-플루오로-3-메톡시피리딘 (5.0 g, 39.3 mmol) 및 TMEDA (11.87 mL, 79 mmol)의 교반 용액에 -78℃에서 n-부틸리튬 (29.5 mL, 47.2 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 이를 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 트리이소프로필 보레이트 (13.70 mL, 59.0 mmol)를 -78℃에서 반응 혼합물에 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 켄칭한 다음, 이를 디에틸 에테르 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 수성 층을 AcOH를 사용하여 산성화시키고 (Ph~4), 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 목적 생성물 (2-플루오로-3-메톡시피리딘-4-일)보론산 (6 g, 33.7 mmol, 86% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 172.2 [M+1]+. LC 체류 시간 0.63분 [방법 J].
단계 2
40 mL 밀봉된 용기에서 1,4-디옥산 : 물 (8 mL : 2 mL) 중 (2-플루오로-3-메톡시피리딘-4-일)보론산 (0.35 g, 2.048 mmol) 및 4-브로모-2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸 (0.399 g, 2.416 mmol)의 교반 용액에 K3PO4 (1.304 g, 6.14 mmol) 및 PdCl2(dppf).[DCM] (0.167 g, 0.205 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N2로 10분 동안 탈기시켰다. 생성된 반응 혼합물을 110℃로 4시간 동안 가열하였다. 4시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (100 mL), 및 이어서 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 조 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피 (c18 칼럼, 포름산암모늄 방법)에 의해 정제하여 2-플루오로-3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘 (0.25 g, 1.095 mmol, 53.5% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 212.0 [M+1]+. LC 체류 시간 1.50분 [방법 J].
단계 3
8 mL 압력 방출 바이알 중 2-플루오로-3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘 (0.2 g, 0.947 mmol)에 (2,4-디메톡시페닐)메탄아민 (1.583 g, 9.47 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 130℃로 16시간 동안 가열하였다. 16시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하고, 물 (2 x 10 mL), 및 이어서 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 수득한 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 30-40% EtOAc를 사용하여 정제하여 N-(2,4-디메톡시벤질)-3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (220 mg, 0.528 mmol, 55.8% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 359.2 [M+1]+. LC 체류 시간 1.41분 [방법 J].
단계 4
20 mL DCM 중 N-(2,4-디메톡시벤질)-3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (0.22 g, 0.614 mmol)의 교반 용액에 질소 하에 0℃에서 TFA (0.142 mL, 1.841 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 조 물질을 DCM (100 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액 (50 mL), 및 이어서 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 수득된 조 혼합물을 n-펜탄 (25 mL)으로 세척하여 3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (100 mg, 0.437 mmol, 71.1% 수율)을 연갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 209.2 [M+1]+. LC 체류 시간 1.44분 [방법 B].
중간체-26
Figure pct00151
단계 1
아세토니트릴 (15 mL) 및 물 (5 mL) 중 2-브로모-6-니트로페놀 (1 g, 4.59 mmol) 및 KOH (3.86 g, 68.8 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 디에틸(브로모디플루오로-메틸)포스포네이트 (1.47 g, 5.50 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 수집하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 석유 에테르 중 25% EtOAc를 사용하여 정제하여 목적 1-브로모-2-(디플루오로메톡시)-3-니트로벤젠 (1.1 g, 3.86 mmol, 84% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 269.0 [M+1]+; LC 체류 시간: 2.58분 [방법 A].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.16 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 1.4, 8.2 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 71.6 Hz, 1H).
단계 2
메탄올 (10 mL) 및 THF (5 mL) 중 1-브로모-2-(디플루오로메톡시)-3-니트로벤젠 (1.0 g, 3.73 mmol)의 교반 용액에 주위 온도에서 염화암모늄 (1.397 g, 26.1 mmol) 및 아연 분말 (3.66 g, 56.0 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 이를 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 수집된 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 헥산으로 세척하고, 건조시켜 3-브로모-2-(디플루오로메톡시)아닐린 (900 mg, 3.14 mmol, 84% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 239.9 [M+1]+; LC 체류 시간: 2.35분 [방법 A].
단계 3
1,4-디옥산 (15 mL) 중 3-브로모-2-(디플루오로메톡시)아닐린 (0.8 g, 3.36 mmol)의 교반 용액에 주위 온도에서 비스(피나콜레이토)디보론 (1.71 g, 6.72 mmol) 및 KOAc (0.82 g, 8.40 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 5분 하에 탈기시켰다. PdCl2(dppf).[DCM] (549 mg, 0.672 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 5분 동안 탈기시켰다. 생성된 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 조 물질을 감압 하에 농축시키고, 추가 정제 없이 그대로 사용하였다. MS (M+1) m/z: 286.2 [M+1]+; LC 체류 시간: 2.83분 [방법 A]
단계 4
DMA (10 mL) 및 물 (1.0 mL) 중 4-브로모-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸 (0.70 g, 4.32 mmol)의 교반 용액에 Na2CO3 (1.14 g, 10.80 mmol) 및 2-(디플루오로메톡시)-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아닐린 (1.85 g, 6.48 mmol)을 실온에서 첨가한 다음, 이를 N2 하에 10분 동안 탈기시켰다. 테트라키스(트리페닐-포스핀)팔라듐(0) (1.0 g, 0.864 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 5분 동안 탈기시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 수집된 여과물을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 40% EtOAc를 사용하여 정제하여 2-(디플루오로메톡시)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (400 mg, 1.332 mmol, 30.8% 수율)을 연갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 241.1 [M+1]+. LC 체류 시간 1.45분 [방법 B].
중간체-27
Figure pct00152
단계 1
DCM (80 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 2-아미노-4-브로모피리딘-3-올 (5 g, 26.5 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민 (22.12 mL, 159 mmol), 및 이어서 피발로일 클로라이드 (6.38 g, 52.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭한 다음, 이를 DCM (2 x 200 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 25% EtOAc를 사용하여 정제하여 4-브로모-2-피발아미도피리딘-3-일 피발레이트 (2.7 g, 34.0% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 357.2 [M+1]+. LC 체류 시간 2.27분 [방법 A].
단계 2
아세토니트릴 (30 mL) 및 물 (6 mL) 중 4-브로모-2-피발아미도피리딘-3-일 피발레이트 (2.7 g, 7.56 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 KOH (6.36 g, 113 mmol), 및 이어서 디에틸 (브로모디플루오로메틸)포스포네이트 (8.07 g, 30.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 (100 mL)와 물 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 수집하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 35% 에틸 아세테이트를 사용하여 용리시키면서 정제하여 N-(4-브로모-3-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)피발아미드 (580 mg, 21.37% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
MS (M+1) m/z: 323.0; LC 체류 시간: 1.98분 [방법 A].
단계 3
1,4-디옥산 (8 mL) 및 물 (2 mL) 중 N-(4-브로모-3-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)피발아미드 (640 mg, 1.981 mmol) 및 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (302 mg, 2.377 mmol)의 교반 용액에 주위 온도에서 K3PO4 (862 mg, 4.95 mmol)를 첨가한 다음, 이를 N2 하에 10분 동안 탈기시켰다. PdCl2(dppf).[DCM] (323 mg, 0.396 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 추가로 5분 동안 탈기한 다음, 밀봉된 튜브에서 100℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 수집된 여과물을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 농축된 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 40% EtOAc를 사용하여 정제하여 N-(3-(디플루오로메톡시)-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)피발아미드 (450 mg, 65.7% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 326.2; LC 체류 시간 1.71분 [방법 A] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.71 (s, 1H), 8.44 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.85 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.87 (t, J = 73.2 Hz, 1H), 4.28 (s, 3H), 1.24 (s, 9H).
단계 4
수성 2 N HCl (8 mL, 16.00 mmol) 중 N-(3-(디플루오로메톡시)-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)피발아미드 (460 mg, 1.414 mmol)의 교반 용액을 100℃로 6시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 풍부화된 조 생성물을 10% NaHCO3 용액으로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 70% EtOAc를 사용하여 정제하여 3-(디플루오로메톡시)-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (260 mg, 69.4% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 242.0; LC 체류 시간 0.77분 [방법 A].
중간체-28
Figure pct00153
단계 1
250 mL 밀봉된 튜브에서 1,4-디옥산 (60 mL), 물 (10 mL) 중 3-클로로-4-아이오도-2-메톡시아닐린 (3 g, 10.58 mmol)의 교반 용액에 시클로프로필보론산 (1.091 g, 12.70 mmol) 및 K3PO4 (2.246 g, 10.58 mmol), 및 이어서 PdCl2(dppf)[DCM] (8.64 g, 10.58 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2로 10분 동안 탈기시켰다. 생성된 반응 혼합물을 100°C로 3시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (200 mL), 및 이어서 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 조 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피 (c18 칼럼)에 의해 0.1% 수성 포름산암모늄 용액 중 60% 아세토니트릴을 사용하여 정제하여 3-클로로-4-시클로프로필-2-메톡시아닐린 (400 mg, 1.922 mmol, 18.17% 수율)을 갈색 액체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 198.0 [M+H]+, LC 체류 시간 2.21분 [방법 A].
단계 2
50 mL 밀봉된 튜브에서 1,4-디옥산 (15 mL), 물 (3 mL) 중 3-클로로-4-시클로프로필-2-메톡시아닐린 (0.2 g, 1.012 mmol)의 교반 용액에 (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (0.257 g, 2.024 mmol) 및 K2CO3 (0.280 g, 2.024 mmol), 및 이어서 PdCl2(dtbpf) (0.033 g, 0.051 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 10분 동안 탈기시켰다. 생성된 반응 혼합물을 120℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (2 x 100 mL), 및 이어서 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (230-400 메쉬) 상에서 석유 에테르 중 12에서 20% EtOAc를 사용하여 정제하여 4-시클로프로필-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (50 mg, 0.164 mmol, 16.18% 수율)을 연갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 245.1 [M+H]+, LC 체류 시간 1.43분 [방법 B].
중간체 29
Figure pct00154
단계 1
0℃에서 THF (10 mL) 중 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (0.35 g, 1.67 mmol) 및 2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)아닐린 (0.41 g, 2.01 mmol)의 용액에 LiHMDS (6.70 mL, 6.70 mmol, THF 중 1 M 용액)를 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 X 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 40% EtOAc)에 의해 정제하여 목적 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (0.37 g, 0.97 mmol, 58.2% 수율)를 담갈색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 377.2 (M+H)+. LC 체류 시간 2.16분 [방법 A].
하기 중간체 (29a-29e)를 중간체 29의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00155
Figure pct00156
실시예-50
Figure pct00157
50 mL 밀봉된 튜브에서 1,4-디옥산 (10 mL) 중 6-클로로-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (150 mg, 0.398 mmol)의 교반 용액에 1-이소프로필이미다졸리딘-2-온 (61.2 mg, 0.478 mmol), Cs2CO3 (130 mg, 0.398 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 N2로 10분 동안 퍼징한 다음, 1,1-비스(디시클로헥실포스피노)페로센 (23.01 mg, 0.040 mmol), Pd2(dba)3 (18.23 mg, 0.020 mmol)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 130℃에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 조 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피 (c18 칼럼)에 의해 0.1% 수성 아세트산암모늄 용액 중 70% 아세토니트릴을 사용하여 정제하여 6-(3-이소프로필-2-옥소이미다졸리딘-1-일)-4-((2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (100 mg, 52.1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 469.2 [M+H]+, LC 체류 시간 2.194분 [방법 A]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6): δ 10.93 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 1.60, 7.80 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 1.20, 7.80 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 7.60 Hz, 1H), 4.24 (s, 3H), 4.13-4.02 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.46 (t, J = 7.60 Hz, 2H), 1.12 (d, J = 6.80 Hz, 6H).
하기 실시예 (51-56)를 실시예 50의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00158
Figure pct00159
실시예-57
Figure pct00160
20 mL 압력 방출 바이알에서 1,4-디옥산 (5 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (0.15 g, 0.150 mmol)의 교반 용액에 시클로프로판카르복스아미드 (0.013 g, 0.150 mmol) 및 Pd2(dba)3 (6.85 mg, 7.48 μmol), 1,1'-비스(디시클로헥실포스피노)-페로센 (4.33 mg, 7.48 μmol), 및 이어서 Cs2CO3 (0.098 g, 0.299 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2로 5분 동안 탈기시켰다. 생성된 반응 혼합물을 110℃로 3시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (2 x 50 mL), 및 이어서 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 조 잔류물을 역상 칼럼 (C18) 크로마토그래피에 의해 아세토니트릴 중 45-50% 물 (0.1% 포름산암모늄)을 사용하여 정제하여 6-(시클로프로판-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-4-(2-(메틸-d3)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (21 mg, 0.046 mmol, 30.7% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS (M+1) m/z: 430.2 [M+H]+, LC 체류 시간 2.18분 [방법 A]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.43 (s, 1H), 11.35 (s, 1H), 9.86 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.15 (d, J = 5.20 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 5.20 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.17-2.09 (m, 1H), 0.90-0.87 (m, 4H).
하기 실시예 (58-60)를 실시예 57의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
실시예 61
Figure pct00165
디옥산 (1.0 mL) 중 6-클로로-4-((4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (44 mg, 0.109 mmol), 1,1-디메틸우레아 (38.4 mg, 0.436 mmol), Pd2(dba)3 (11.26 mg, 10.90 μmol), 1,1'-비스(디시클로헥실포스피노)페로센 (12.61 mg, 0.022 mmol) 및 탄산세슘 (142 mg, 0.426 mmol)의 혼합물을 5분 동안 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 130℃로 30분 동안 가열하였다. LCMS에 의해 반응이 검출되지 않았다. 메탄술포네이토(2-디시클로헥실-포스피노-2',4',6'-트리-i-프로필-1,1'-비페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(II) (X-phos, gen 4) (12 mg, 0.014 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 재탈기한 다음, 125℃로 30분 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 DMSO로 희석하였다. 혼합물을 0.45 마이크로미터 나일론 필터를 통해 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시켜 4-((4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일)아미노)-6-(3,3-디메틸우레이도)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (7.7 mg, 14.17% 수율)를 수득하였다. MS (M+1) m/z: 456.0 (M+H)+. LC 체류 시간 1.40 [I]. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.34 (s, 1H), 9.48 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.14 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.45 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.25 (tt, J=7.5, 3.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.00 (s, 6H), 1.33 - 1.25 (m, 2H), 1.19 - 1.11 (m, 2H).
실시예 62
Figure pct00166
6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드.
6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민
Figure pct00167
6-플루오로-4-아이오도피리딘-3-올의 합성 (단계 1).
100 mL 둥근 바닥 플라스크에서, HCl (H2O 중 1.5 M, 15 mL)을 THF (40 mL) 중 2-플루오로-4-아이오도-5-메톡시메톡시-피리딘 (5 g, 17.67 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액을 천천히 첨가하여 pH를 7로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수 용액으로 세척하였다. 생성된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (4.15 g 조 물질)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. MS (EI) m/z 240 [M+1]+.
6-플루오로-4-아이오도-2-니트로피리딘-3-올의 합성 (단계 2).
아세토니트릴 (20 mL) 중 6-플루오로-4-아이오도피리딘-3-올 (500 mg, 2.09 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 니트로늄 테트라플루오로보레이트 (1.10 g, 8.37 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 빙냉수 (50 mL)를 반응물에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물 (700 mg)을 수득하였다. GC-MS (EI) m/z 283 [M+].
6-플루오로-4-아이오도-3-메톡시-2-니트로피리딘 (단계 3).
DMF (10 mL) 중 6-플루오로-4-아이오도-2-니트로피리딘-3-올 (2.8 g, 9.86 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 K2CO3 (4.09 g, 29.6 mmol) 및 메틸 아이오다이드 (1.850 mL, 29.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 빙냉수 (100 mL)를 첨가하고, EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 중성 알루미나 칼럼 상에서 석유 중 EtOAc를 이동상 (0-30%)으로서 사용하여 정제하여 6-플루오로-4-아이오도-3-메톡시-2-니트로피리딘 (650 mg, 1.963 mmol, 19.91% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
6-플루오로-4-아이오도-3-메톡시피리딘-2-아민 (단계 4).
EtOH (4 mL), AcOH (4 mL) 및 H2O (2 mL) 중 6-플루오로-4-아이오도-3-메톡시-2-니트로피리딘 (650 mg, 2.181 mmol)의 교반 용액에 철 분말 (853 mg, 15.27 mmol)을 0℃에서 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 완전히 사라진 후 (TLC에 의해 모니터링됨), 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 점착성 조 물질을 수득하였다. 이 점착성 물질을 EtOAc (150 mL) 및 물 (50 mL)로 용해시킨 다음, 고체 NaHCO3을 사용하여 pH를 9로 조정하였다. 유기 층을 분리하고, 염수 (40 mL)로 세척하였다. 생성된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (550 mg 조 물질)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다. LCMS (EI) m/z = 269 [M+1].
6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (단계 5).
50 mL 밀봉된 튜브에서, 1,4-디옥산 (8 mL) 중 6-플루오로-4-아이오도-3-메톡시피리딘-2-아민 (550 mg, 2.05 mmol), (2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)보론산 (260 mg, 2.05 mmol) (중간체 19)의 용액에 PdCl2(dppf)-CH2Cl2-부가물 (168 mg, 0.21 mmol), K3PO4 (1.31 g, 6.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 5분 동안 탈기시켰다. 밀봉된 튜브를 마개를 막고, 혼합물을 110℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트 패드를 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 중성 알루미나 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0-50% EtOAc) 하에 정제하여 목적 생성물 6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (450 mg, 1.855 mmol, 90% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: (EI) m/z = 224 [M+1]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.18 (s, 1H), 6.48 (m, 3H), 4.23 (s, 3H), 3.61 (s, 3H).
6-클로로-4-((6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (단계 6).
Figure pct00168
50 mL 둥근 바닥 플라스크에서, THF (10 mL) 중 6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-아민 (200 mg, 0.90 mmol) 및 4,6-디클로로-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (281 mg, 1.34 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 LiHMDS (600 mg, 3.58 mmol, THF 중 1 M)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 빙냉수 (60 mL)를 첨가하고, EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 용액 (100 mL)으로 세척하였다. 생성된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 불순물을 제거하기 위해, 반응물을 석유 에테르 중 50% EtOAc로 3회 (각각 60 mL), 석유 에테르 (20 mL) 및 최종적으로 Et2O (20 mL)로 연화처리하여 갈색 고체 250 mg (LCMS에 의해 72% 목적 생성물)을 수득하였다.
6-(시클로프로판카르복스아미도)-4-((6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드.
Figure pct00169
1,4-디옥산 (10 mL) 및 DMA (1 mL) 중 6-클로로-4-((6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (100 mg, 0.253 mmol), 시클로프로판카르복스아미드 (64.55 mg, 0.758 mmol)의 용액을 함유하는 50 mL 밀봉된 튜브에서 밀봉된 튜브 내 Cs2CO3 (247 mg, 0.758 mmol) 및 1,1-비스(디시클로헥실포스피노)페로센 (29.3 mg, 0.051 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 5분 동안 탈기시키고, Pd2(dba)3 (23.15 mg, 0.025 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고; 셀라이트 패드를 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다.
생성물의 수율: 19% (RP 정제용 HPLC 정제 후). LCMS: (EI) m/z = 445.2 [M+1]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.64 (s, 1H), 11.43 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.09 (m, 1H), 4.29 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.18-2.08 (m, 1H), 0.92-0.87 (m, 4H).
RP 정제용 HPLC 정제 방법:
칼럼: 선 파이어 C18 (19*150 mm*5 μ)
이동상 A: 물 중 0.1% TFA
이동상 B: ACN
LCMS: m/z: [M+1]: 445.2, RT: 2.421분
칼럼: 엑스브리지 C18 (50 X 4.6 mm) 5 μm
이동상: A: H2O 중 0.1% TFA
이동상: B: ACN 중 0.1% TFA, 유량: 1.0 ml/분.
순도: 94.55%.
HPLC:
HPLC 방법 1:
칼럼: 키네텍스 비페닐 (100 X 4.6) mm, 2.6 μm
이동상: A: H2O 중 0.05% TFA:ACN (95:5),
이동상: B: ACN:H2O 중 0.05% TFA (95:5)
유량: 1.0 mL/분.
순도: 97.76%.
HPLC 방법 2:
칼럼: 키네텍스 EVO C18 (100 X 4.6) mm, 2.6 μm
이동상: A: 물 중 0.05% TFA:ACN
이동상: B: ACN 중 0.05% TFA:물
유량: 1.0 mL/분
순도: 97.30%.
실시예 63
Figure pct00170
1,4-디옥산 (15 mL) 및 DMA (1.5 mL) 중 6-클로로-4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드 (100 mg, 0.265 mmol)의 교반 용액에 주위 온도에서 Cs2CO3 (216 mg, 0.662 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 5분 동안 탈기시켰다. 피리딘-2-아민 (29.9 mg, 0.318 mmol) 및 Pd2dba3 (36.4 mg, 0.040 mmol) 및 1,1'-비스(디시클로헥실포스피노)페로센 (22.96 mg, 0.040 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 5분 동안 탈기시켰다. 생성된 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조건 하에 110℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (230-400 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 DCM 중 2-3% MeOH를 사용하여 정제하여 4-((3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)-6-(피리딘-2-일아미노)피리다진-3-카르복스아미드 (26.98 mg, 0.061 mmol, 23.17% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
MS (M+1) m/z: 436.0 [M+H]+, LC 체류 시간 1.34분 [방법 A].
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.35 (s, 1H), 10.28 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.34 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.73-7.75 (m, 1H), 7.65-7.71 (m, 1H), 7.46-7.47 (m, 1H), 6.99-6.97 (m, 1H) 4.28 (s, 3H), 3.83 (s, 3H).
하기 실시예를 실시예 63의 제조와 유사한 방식으로 제조하였다.
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
실시예 69
Figure pct00174
실시예 69를, 실시예 40에 기재된 것과 동일한 방식으로 적절한, 상업적으로 입수가능한 카르복실산으로부터 제조된 아미드로부터 실시예 46과 동일한 방식으로 제조하여 6-((1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드, 12 mg, 18.46% 수율을 수득하였다. MS (M+1) m/z: 459.3 (M+H)+. LC 체류 시간 1.20 [C]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.34 (s, 1H), 11.35 (s, 1H), 10.10 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.29 - 4.65 (m, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 1.83 - 1.61 (m, 1H), 1.34 - 1.15 (m, 1H) 1개의 메틸 피크는 용매 아래에 숨겨짐.
하기 표는 실시예 36의 특정 특성을 잠재적으로 증진시키도록 제조될 수 있는 추가의 전구약물 (A-I)을 나타낸다.
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
생물학적 검정
본 발명의 화합물에 대한 활성을 나타내기 위해 하기 검정을 사용한다.
뇌 침투 생체내 검정
약동학적 연구를 C57BL6 야생형 마우스 (실험당 n=3)를 사용하여 수행하여 본 발명의 화합물의 뇌 및 혈장 노출을 결정하였다. 화합물을 10 mg/kg의 최종 농도를 위해 5% 에탄올; 90% PEG 300; 5% TPGS의 용액 중에서 5 mL/kg으로 경구로 투여하였다. 마우스를 투여 1시간 후에 안락사시키고, 혈장 및 뇌를 수집하고, 분석을 위해 동결시켰다. 뇌 조직을 1:1 부피의 블랭크 C57BL6 마우스 혈장에서 균질화하였다. 혈장 및 뇌 균질물 중 화합물의 농도를 LC-MS 분석에 의해 결정하였다.
다발성 경화증의 MOG1-125 EAE 모델: 생체내 및 생체외
암컷 C57BL/6J 마우스 (잭슨 랩스(Jackson Labs) #000664)는 연구 개시에서 대략 10 - 11주령이었다. 적어도 1주의 순응 후에, 완전 프로인트 아주반트 중 인간 재조합 미엘린 핍지교세포 당단백질 1 - 125 (MOG1-125)를 함유하는 에멀젼을 사용한 피하 (SC) 면역화에 의해 질환을 유도하였다 (부위당 0.1 mL 에멀젼을 2개의 배측 부위에 주사함). 이어서, 백일해 독소 (PTX)를 복강내로 주사하였고 (SC 에멀젼 주사 후 대략 4 및 24시간), 각각의 주사는 동일한 용량의 PTX를 함유하였다. 이어서, 마우스를 표준 임상 질환 점수를 사용하여 질환의 발생에 대해 모니터링하고, 대략 11일 후에, 질환의 발병 후 시작하는 비히클 또는 시험 화합물의 1일 1회 치료를 갖는 치료군 (N = 12)으로 무작위화하였다. 치료 지속기간은 21일이었고, 매일 체중 및 임상 질환 점수를 측정하였다. 혈장 및 뇌에서의 화합물 수준의 약동학적 평가를 위해 마지막 투여 후 다양한 시점에 조직 샘플을 수집하였다. 또한, 염증성 및 표적-관련 파라미터의 평가를 위해 유동 세포측정 분석, 웨스턴 블롯팅 및 다른 실험실 기술에 의해 최종 투여 후 다양한 시점에 척수를 수집하였다. 척수를 하기와 같이 생체외 분석하였다:
ㆍ JESS 웨스턴 블롯: 순간-동결된 조직을 프로테아제/포스파타제 억제제를 갖는 RIPA 중에서 균질화하고, 원심분리하여 파편을 제거하였다. 단백질 농도를 BCA 검정을 사용하여 측정하고, 용해물을 0.5 mg/mL로 정규화하고, 로딩 완충제와 혼합하고, 변성시켰다. 이어서, 이들을 염증 및 경로 활성화의 마커에 대해 JESS 상에서 실행하였다. pStat1에 대한 항체를 대조군 단백질 (통상적으로 알파/베타 튜불린 1:1500 희석)과 함께 1:50 희석으로 사용하였다.
ㆍ FACS 분석: 단세포 현탁액을 밀테니(Miltenyi) ABDK 프로토콜을 사용하여 제조하고, 패널의 수에 따라 나누었다. 표면 마커 및 전사 인자를 평가하는 FACS 패널은 표준 프로토콜 (이바이오사이언스(eBioscience) 프로토콜 B: 1-단계 프로토콜: 세포내 (핵) 단백질)을 사용하였고, pStat1 또는 다른 인단백질을 평가하는 패널 또한 표준 프로토콜 (바이오레전드(BioLegend)의 트루-포스(True-Phos) 프로토콜)을 사용하였다. 세포를 소교세포 배지 + 브레펠린-A + P/S에서 18시간 동안 배양함으로써 FACS에 의한 시토카인의 평가를 수행한 다음, 염색에 대한 표준 프로토콜 (바이오레전드 시토픽스/펌(CytoFix/Perm) 또는 시토라스트(CytoLast))을 사용하여 염색을 수행하였다.
도 1: 실시예 36에 대한 EAE MOG1-125 모델에서의 질환 점수
Figure pct00180
인간 전혈에서의 IFNα-유도된 STAT 인산화
화합물과 함께 1시간 동안 인큐베이션한 후, 인간 전혈 (항응고제로서 ACD-A를 사용하여 채혈함)을 1000 U/mL 재조합 인간 IFNα A/D (알앤디 시스템즈 11200-2)로 15분 동안 자극하였다. 고정/용해 완충제 (BD 558049)를 첨가함으로써 자극을 정지시켰다. 세포를 CD3 FITC 항체 (BD 555916)로 염색하고, 세척하고, 펌 III 완충제 (BD 558050)를 사용하여 얼음 상에서 투과화하였다. 이어서, 세포를 알렉사-플루오르 647 pSTAT5 (pY694) 항체 (BD 612599)로 60분 동안 염색한 후, iQue 플러스 상에서 분석하였다. pSTAT5 발현의 양을 CD3 양성 집단에 대해 게이팅한 후 중앙 형광 강도에 의해 정량화하였다.
Caco-2 세포에서의 양방향 투과성 검정
개관
기재된 화합물을 Caco-2 양방향 투과성 검정에서 시험하여 그의 투과성 및 유출 기질 잠재력을 평가하였다. 화합물 (3 μM에서 삼중으로)을 37℃에서 2시간 동안 pH 7.4 (0.5% 소 혈청 알부민 [BSA]함유)의 검정 완충제 중에서 Caco-2 세포와 함께 인큐베이션한 다음, LC-MS 분석을 위해 추출하여 반응 혼합물 중 그의 농도를 결정하고, 투과 계수, 유출 비 및 회수를 계산하였다.
물질 및 방법
Caco-2 (백인 결장 선암종) 세포를 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (버지니아주 마나사스)으로부터 입수하였다. 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM), N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄술폰산 (HEPES) 완충제, 비필수 아미노산, L-글루타민, 페니실린-G-스트렙토마이신, 및 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS)을 깁코/인비트로젠 (캘리포니아주 칼스배드)으로부터 구입하였다. 0.4-μm 세공 크기 폴리카르보네이트 막을 갖는 96 웰 (표면적: 0.11 cm2) 트랜스웰 플레이트 및 저-결합 트랜스웰 클러스터 플레이트를 시그마 알드리치 (미주리주 세인트 루이스)로부터 구입하였다. 저결합 96-웰 플레이트를 코닝 (뉴욕주 코닝)으로부터 구입하였다. HEPES를 사용하여 행크 평형 염 용액 (HBSS)을 pH 7.4로 조정함으로써 변형된 행크 평형 염 용액 (MHBSS)을 제조하였다. HBSS, 디곡신, 및 소 혈청 알부민 (BSA)을 시그마 (미주리주 세인트 루이스)로부터 구입하였다. 여과 블록 (2 mL, 96 웰)을 와트만 (독일 프라이부르크)으로부터 구입하였다. 모든 용매는 분석 등급이었다.
세포 제조
검정 14 내지 28일 전에, Caco-2 세포를 96-웰 트랜스웰 플레이트에서 웰당 1.8 x 105개 세포/cm2, 대략 2.0 x 104개 세포의 밀도로 폴리카르보네이트 필터 막 상에 시딩하였다. 세포를 10% 태아 소 혈청, 10 mM HEPES, 1% 비필수 아미노산, 2 mM L-글루타민, 100 U/mL 페니실린-G, 및 100 μg/mL 스트렙토마이신으로 보충된 DMEM으로 이루어진 배양 배지에서 성장시켰다. 배양 배지를 3일마다 교체하고, 세포를 95% 상대 습도 및 5% CO2 분위기에서 37℃에서 유지하였다. 세포를 검정 직전에 치밀 접합부 형성에 대해 평가하였다 (하기 품질 관리 섹션 참조).
화합물 제조
화합물을 100% DMSO 중 10 mM로 가용화시켰다. 완전한 가용화의 육안 확인 후에, 화합물의 10 mM 원액을 96-웰 플레이트에 플레이팅하고, 100% DMSO 중에 추가로 연속 희석하여 0.3 mM의 100x 원액 농도를 생성하였다. 4종의 대조군 화합물을 기재된 화합물과 함께 시험하고, 이들을 0.3 mM의 100x 농도로 사중으로 플레이팅하였다.
투과성 평가
기재된 화합물을 3 μM의 최종 농도에서의 단일 실험에서 삼중으로 시험하였다. 검정에 사용된 세포 계대는 QC 기준을 통과하였다 (하기 품질 관리 섹션 참조). 연구는 14 내지 28일 동안 배양된 Caco-2 세포 단층을 사용하여 20 내지 80의 세포 계대수로 수행하였다. 검정 (수송) 완충제는 pH 7.4로 조정된 MHBSS 및 0.5% BSA로 이루어졌다. 100x 화합물 플레이트로부터, 화합물의 100% DMSO 원액 8 μL를 검정 완충제 800 μL에 첨가하고, 잘 혼합하고, 여과하여 검정 인큐베이션 전에 최종 제조 단계로서 임의의 침전물을 제거하였다. 기재된 화합물 및 대조군 화합물의 표적화된 최종 시험 농도는 3 μM이었다. 여과물은 검정을 위한 공여 용액으로서 (양쪽 방향으로) 사용된 초기 원액 화합물 용액을 나타냈다. 수용 용액은 단지 검정 완충제였다.
검정 실행 직전에, 각각의 세포 단층을 검정 완충제로 3회 세척하여 모든 미량의 배양 배지를 제거하였다. 96-웰 트랜스웰 저-결합 클러스터 플레이트의 정단 트랜스웰 구획에 100 μL 검정 완충제 ± 화합물을 첨가하고 기저측 구획에 200 μL 검정 완충제 ± 화합물을 첨가하여 투과성 연구를 개시하였다. 정단-대-기저측 (A→B) 투과성 (흡수 방향)의 경우, 화합물 또는 대조군 화합물 (1x 공여 용액)을 함유하는 완충제를 정단 구획 (공여 웰)에 넣은 한편, 완충제 단독을 상응하는 기저측 구획 (수용 웰)에 넣었다. 기저측-대-정단 (B→A) 투과성 (분비 방향)의 경우, 화합물 또는 대조군 화합물 (1x 공여 용액)을 함유하는 완충제를 기저측 구획 (공여 웰)에 넣은 한편, 완충제 단독을 상응하는 정단 구획 (수용 웰)에 넣었다. 이어서, 트랜스웰을 95% 상대 습도 및 5% CO2 분위기에서 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 75 μL를 각각의 정단 및 기저측 구획으로부터 제거하고, 내부 표준으로서 250 nM 프로프라놀롤, 250 nM 디클로페낙 및 500 nM 톨부타미드를 함유하는 75 μL/웰의 아세토니트릴로 사전에 로딩된 96-웰 저-결합 플레이트로 옮겼다. 샘플을 후속적으로 LC-MS/MS에 의해 분석하여 기재된 화합물 및 대조군 화합물의 농도를 결정하였다.
검정 샘플의 분석
검정 샘플 중 기재된 화합물 및 대조군 화합물의 농도를 LC-MS/MS에 의해 결정하였다. AB 사이엑스 4500/5500/6500 멀티플렉스 시스템은 구배 용리를 위한 SCL-20Avp 제어기를 갖는 2원 시마즈 20ADvp 펌프, 및 LS1 오토샘플러, 및 전기분무 이온화 (ESI) 모드 하에 작동되는 AB 사이엑스 4500/5500/6500 삼중 사중극자 질량 분광계의 2 세트로 이루어졌다. 샘플 분석을 위한 최적 SRM 조건을 얻기 위해, 화합물 원액으로부터 제조된 메탄올 및 물의 혼합물 (1:1, v/v) 중 5 μM 표준 용액으로의 포화 제어를 특색으로 하는 디스커버리퀀트(DiscoveryQuant)™ (AB 사이엑스)를 사용하여 각각의 화합물에 대한 MS/MS 최적화를 수행하였다. 75%의 이동상 B (아세토니트릴 중 0.2% 포름산) 및 25% 이동상 A (물 중 0.2% 포름산)의 등용매 용리 하에 40 μL의 주입 부피로 유동 주입 분석을 사용하여 최적화를 수행하였다.
샘플의 5-μL 분취물을 주입한 다음, A (물 중 0.2% 포름산) 및 B (아세토니트릴 중 0.2% 포름산)로 이루어진 이동상을 사용하는 구배 용리 하에 키네텍스 XB-C18, 2.6 μm, 2.1 x 30 mm 칼럼 상에서 분리하였다.
Figure pct00181
A = 물 중 0.2% 포름산; B = 아세토니트릴 중 0.2% 포름산
디스커버리퀀트™는 기재된 화합물 및 참조 화합물에 대한 최적의 이온화 극성 (양성 또는 음성), 전구체 및 생성물 이온, 디클러스터링 전위, 및 충돌 에너지를 자동으로 결정하였다. 최적화된 SRM MS/MS 조건을 샘플 분석에 사용하였다. 기재된 화합물 또는 대조군 화합물 대 내부 표준의 피크 면적 비를 정량화에 사용하였다. 투여 용액 중 화합물의 피크 면적 비를 사용하여 샘플 중 화합물 농도를 결정하였다.
데이터 분석
하기 결과를 기재된 화합물에 대해 기록하였다: 투과 계수 (Pc [초당 나노미터]), 유출 비 및 퍼센트 회수.
Pc 값은 하기 방정식을 사용하여 계산하였다:
Figure pct00182
여기서:
CAt = 시간 t 후 수용 웰 중 시험 화합물의 농도,
VA = 수용 웰에서의 부피,
S = 막의 표면적 (0.11 cm2),
CD0 = 공여 웰에서의 시험 화합물의 초기 농도,
t = 인큐베이션 시간.
유출 비를 하기와 같이 계산하였다:
Figure pct00183
회수 (%)는 (합한) 인큐베이션 시간의 종료 시 공여 및 수용 검정 구획에 존재하는 시험 화합물의 총량 (nmol)을 검정 인큐베이션 전 공여 구획에 첨가된 시험 화합물의 총량 (nmol)의 분율 (백분율)로 표현함으로써 계산하였다. 이는 하기 방정식을 사용하여 계산하였다:
Figure pct00184
여기서:
CD0 = 공여 웰에서의 시험 화합물의 초기 농도,
VD = 공여 웰에서의 부피,
CDt = 시간 t 후 공여 웰에서의 농도,
CAt = 시간 t 후 수용 웰에서의 농도,
VA = 수용 웰에서의 부피.
품질 관리
검정일에 사용된 트랜스웰 플레이트 중 하나에서의 Caco-2 세포를 경상피 전기 저항 (TEER) 측정을 사용하여 치밀 접합부 형성에 대해 평가하였다. TEER 평가를 EVOM 저항성 측정기 (월드 프리시젼 인스트루먼츠, 플로리다주 사라소타)를 사용하여 수행하였다. 트랜스웰 플레이트의 각각의 웰은 TEER 값 > 600 Ωㆍcm2를 나타냈고, 세포 계대배양 및 상기 플레이팅 배치의 모든 플레이트는 검정에 허용되었다.
투과성 범위를 포괄하는 Pc 값을 갖는 4종의 대조군 화합물을 각각의 실험에 기재된 화합물과 함께 시험하였다. 본 검정에 대한 수용 기준은 3 μM에서의 대조군 화합물에 대한 결과가 허용되는 이력 범위 내에 있을 것을 요구한다. 이들 4종의 대조군에 대해 역사적으로 관찰된 Pc 값 및 유출 비의 허용되는 범위를 표 B에 나타낸다.
이들 연구에서, 모든 대조군 화합물에 대한 결과는 그의 각각의 이력 범위 내에 있었다. 따라서, 검정 데이터는 Caco-2 세포에서의 양방향 투과성에 대한 기재된 화합물의 데이터 분석 및 평가를 위해 수용되었다.
Figure pct00185
값은 평균 ± 표준 편차임.
Pc = 투과 계수. A→B= 정단-에서-기저측. B→A = 기저측-에서-정단.
표 2: 인간 전혈 검정 및 CACO2 투과성 검정에서 예시된 화합물의 효력 및 투과성 데이터.
Figure pct00186
Figure pct00187
표 3: 10 mpk 화합물의 경구 투여 1시간 후 뇌 및 혈장 균질물 중 실시예 화합물의 측정된 농도의 비
Figure pct00188
*실시예 화합물을 2 mpk iv 용액 용량으로서 투여하였음.
**실시예 화합물을 2 mpk iv 용액 용량으로서 투여하고, 노출을 40분에 측정하였음.
***실시예 화합물을 0.5% 메토셀 A4 M; 0.1% 트윈 80; 99.4% 물의 비히클 중 나노현탁액으로서 투여하였음.
****실시예 49는 실시예 36의 전구약물이고; 따라서, 노출은 관찰된 실시예 36의 농도로서 측정하였음. 투여는 5 mpk의 모 당량으로 수행하였고, 비히클: 0.5% 메토셀; 0.1% 트윈 80; 99.4% 물 중 용액으로서 수행하였음.
*****실시예 화합물을 2 mpk iv 용액 용량으로서 투여하고, 노출을 90분에 측정하였음.
표 4: 실시예 36 및 11 및 선행 기술의 CNS 침투 프로파일의 비교:
Figure pct00189
Figure pct00190
놀랍게도, 본 발명의 1,2,3-치환된 트리아졸 화합물은 구조적으로 유사한 1,2,4-치환된 트리아졸 화합물보다 유의하게 더 높은 뇌 대 혈장 비를 갖는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 화합물은 혈액-뇌 장벽을 침투할 수 있고, 특정 신경계 장애의 치료에 유용할 수 있다.

Claims (11)

  1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00191

    여기서
    X는 -N- 또는 -CH-이고;
    R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
    R2는 OMe 또는 OCHF2이고;
    R3은 CD3, C1-3 알킬, C3-6 시클로알킬 또는 (CH2)F이고;
    R4는 수소, 할로, C1-4 알킬, C1-4 알콕시 또는 C3-6 시클로알킬이다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00192

    여기서
    R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
    R2는 OMe 또는 OCHF2이고;
    R3은 CD3, C1-3 알킬, C3-6 시클로알킬 또는 (CH2)F이고;
    R4는 수소, 할로, C1-4 알킬, C1-4 알콕시 또는 C3-6 시클로알킬이다.
  3. 제2항에 있어서, 하기 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00193

    여기서
    R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
    R4는 수소, F 또는 CH3이다.
  4. 제2항에 있어서, 하기 화학식 III의 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00194

    여기서
    R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
    R2는 OMe 또는 OCHF2이고;
    R3은 CD3, C1-3 알킬, C3-6 시클로알킬 또는 (CH2)F이고;
    R4는 수소, 할로, C1-4 알킬, C1-4 알콕시 또는 C3-6 시클로알킬이다.
  5. 제4항에 있어서, 하기 화합물, 또는 그의 입체이성질체 또는 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00195

    여기서
    R1은 -C(O)R1a; 또는 N, O 및 S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 5-8원 헤테로사이클이고, 각각의 헤테로사이클은 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1a는 COOC1-3 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 상기 시클로알킬 기는 0-2개의 R1b로 치환되고;
    R1b는 각 경우에 독립적으로 F 또는 C1-3 알킬이고;
    R4는 수소, F 또는 CH3이다.
  6. 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-6-[(6-메톡시피리다진-3-일)아미노]-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[5-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(피리딘-2-일)아미노]피리다진-3-카르복스아미드,
    메틸 N-(5-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-6-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-3-일)카르바메이트,
    6-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R)-스피로[2.2]펜탄-1-아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-5-플루오로-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-4-플루오로-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-({3-[2-(2-플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]-2-메톡시페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-({3-[2-(2,2-디플루오로에틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]-2-메톡시페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[2-메톡시-5-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시-5-메틸페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[5-클로로-3-(2-에틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-6-시클로프로판아미도-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-4-플루오로-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[4-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[5-플루오로-2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(5-에틸-2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[5-에틸-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[6-플루오로-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    메틸 3-({6-시클로프로판아미도-3-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-4-일}아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트,
    6-시클로프로판아미도-4-({2-메톡시-3-[2-(2H3)메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[2,5-디메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1-메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(2-시클로프로필-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[2-옥소-3-(프로판-2-일)이미다졸리딘-1-일]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[2-메톡시-4-메틸-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    에틸 N-(5-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-6-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-3-일)카르바메이트,
    6-[(1S,2R)-2-플루오로시클로프로판아미도]-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-[(1S,2S)-2-플루오로시클로프로판아미도]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[4-시클로프로필-2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-(2,2-디플루오로시클로프로판아미도)-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-[(아제티딘-1-카르보닐)아미노]-4-{[2-메톡시-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-({2-메톡시-3-[2-(옥세탄-3-일)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]페닐}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-(2-시클로부틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-메톡시페닐]아미노}-6-시클로프로판아미도-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-(2,2-디메틸시클로프로판아미도)-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[2-(디플루오로메톡시)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-[(디메틸카르바모일)아미노]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-(4-플루오로부탄아미도)-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[3-(디플루오로메톡시)-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    {[(6E)-6-(시클로프로판카르보닐이미노)-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-3-[(2H3)메틸카르바모일]-1,6-디히드로피리다진-1-일]메톡시}포스폰산,
    4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-[(1R,2R)-2-에틸시클로프로판아미도]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일]아미노}-6-[(1S,2S)-2-플루오로시클로프로판아미도]-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-{[메틸(프로판-2-일)카르바모일]아미노}피리다진-3-카르복스아미드,
    6-{[에틸(메틸)카르바모일]아미노}-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[4-(2-시클로프로필-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-메톡시피리딘-2-일]아미노}-6-[(디메틸카르바모일)아미노]-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    프로판-2-일 3-({6-시클로프로판아미도-3-[(2H3)메틸카르바모일]피리다진-4-일}아미노)-4-메톡시-5-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)벤조에이트,
    6-시클로프로판아미도-4-{[2-메톡시-5-(메톡시메틸)-3-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)페닐]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-{[6-플루오로-3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-시클로프로판아미도-4-({3-메톡시-4-[2-(2H3)메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일]피리딘-2-일}아미노)-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1R,2R)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(1S,2S)-2-메틸시클로프로판아미도]피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-[(피리딘-2-일)아미노]피리다진-3-카르복스아미드,
    6-[(2,6-디메틸피리미딘-4-일)아미노]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-{[5-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]아미노}-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸-6-{[5-(모르폴린-4-일)피리딘-2-일]아미노}피리다진-3-카르복스아미드,
    6-{[4-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]아미노}-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드,
    6-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-3-일)아미노]-4-{[3-메톡시-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일]아미노}-N-(2H3)메틸피리다진-3-카르복스아미드, 및
    6-((1S,2S)-2-플루오로시클로프로판-1-카르복스아미도)-4-((3-메톡시-6-메틸-4-(2-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-2-일)아미노)-N-(메틸-d3)피리다진-3-카르복스아미드.
  7. 제1항에 따른 1종 이상의 화합물, 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
  8. 제6항에 따른 1종 이상의 화합물, 및 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
  9. 질환을 치료하는 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제1항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 질환은 신경변성 질환인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 신경변성 질환이 알츠하이머병, 파킨슨병, ALS 또는 다발성 경화증인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 다발성 경화증이 CIS, 시신경염 또는 시신경척수염을 포함한 RMS 및/또는 진행성 MS인 방법.
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