KR20240005764A - 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 질환을 치료하는 방법 - Google Patents

아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 질환을 치료하는 방법 Download PDF

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스콧 휘트컵
아담 터프쿠
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애드베룸 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드
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Abstract

개체의 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여 하는 것을 포함하며, 여기서 rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하 고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질 을 포함하는 것인, 개체에서 안구 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

Description

아플리베르셉트를 코딩하는 AAV2 변이체를 사용하여 안구 질환을 치료하는 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 특허 가출원 번호 제63/180,646호（2021년 4월 27일 출원）에 대한 우선권 및 이의 이익을 주장하며，이의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일의 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일의 하기 제출 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태(CRF)(파일명: 627002001340SEQLIST.TXT, 기록된 날짜: 2022년 4월 26일, 크기: 41,493바이트).
분야
본 개시내용은 개체의 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르 셉트）를 코딩하는 재조합 아데노 연관 바이러스(rAAV） 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는，개체에서 안구 질환 및 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
아플리베르셉트는 혈관 내피 성장 인자 하위유형 A 및 B(VEGF-A 및 VEGF-B) 및 태반 성장 인자(PGF)에 대한 디코이 수용체로서 작용하는 재조합 융합 단백질이다. 아플리베르셉트는 이들 리간드에 결합함으로써，이들이 혈관 내피 성 장 인자 수용체(VEGFR)인 VEGFR-1 및 VEGFR-2에 결합하는 것을 방지하여，특히, 신생혈 관화를 억제하고 혈관 투과성을 감소시킬 수 있다. 아플리베르셉트는 IgG1의 Fc 단편과 융합된 VEGFR-1의 도메인 2 및 VEGFR-2의 도메인 3으로 이루어진다.
현행 표준 관리 항-VEGF 작용제，예컨대 아플리베르셉트는 최적 치료 결과를 달성하고 시력을 유지하기 위해 4 내지 8주마다 유리체내(IVT) 주사를 통해 재투여될 필요가 있다. 이러한 요법의 준수는 환자，그의 보호자 및 건강관 리 시스템에 부담이 되고，대부분의 환자는 시간 경과에 따라 최적 요법의 준수에서 벗어나게 되며，이는 시각 상실과 상관관계가 있다(Khanani AM，et al.). 추가로，안내염，망막 박리，외상성 백내장 및 상승된 안내압(IOP)을 포함한 합병증 이 존재하며; 이들 합병증의 위험은 반복된 IVT 주사로 증가할 가능성이 있다(Falavarjani et al.， (2013) Eye (Lond)， 27(7):787-794).
따라서，효과적이고，부작용의 위험을 감소시키며，매우 장기간 환 자가 준수할 수 있는 안구 질환의 요법에 대 한 필요가 관련 기술분야에 존재한다.
눈 장애를 치료하기 위한 아플리베르셉트를 코딩하는 AAV의 용도는 미국 특허 출원 제17/017,469호, WO 2021/050094 및 WO 2021/050649에서 발견할 수 있으며, 이들은 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 측면에서，본 발명은 개체의 한쪽 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며， 여기서 개체는 인간이고，여기서 rAAV 입자는 a) 서열식별번호(SEQ ID NO): 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴 리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함하는 것인，개체에서 녹내장을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서，녹내장은 신생혈관 녹내장이다. 일부 측면에서, 본 발명은 개체의 안내압을 감소시키는 방법을 제공하며, 방법은 개체의 한쪽 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포 함하며，여기서 개체는 인간이고，여기서 rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아 미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리 펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및 b) 아미노산아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함하는 것인， 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체는 녹내장을 갖는다. 일부 실시양태에서， 녹내장은 신생혈관 녹내장이다.
본 발명의 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 6 x 1011 벡터 게놈（vg/눈） 이하이다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 6 x 1010 내지 약 6 x 1011 벡터 게놈(vg/ 눈）이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 6 x 1010 내지 약 2 x 1011 벡터 게놈(vg/ 눈）이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 2 x 1011 내지 약 6 x 1011 벡터 게놈（vg/눈）이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 2 x 1011 또는 약 6 x 1011 벡터 게놈（vg/눈）이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 2 x 1011 벡터 게놈(vg/ 눈)이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 6 x 1011 벡터 게놈(vg/눈)이다.
일부 실시양태에서, 방법은 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후이다. 일부 실시양태에서，방법은 (a) 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것과 동일한 날인 것; 또는 (b) 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 약 1일 내지 약 14일 후인 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서，개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 동일하거나 그보다 적은 눈당 벡터 게놈（vg/눈）을 포함한다. 일부 실시양태에서，반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후이다. 일부 실시양태에서， 개체의 반대쪽 눈에 투 여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보 다 더 많은 눈당 벡터 게놈(vg/눈)을 포함한다.
본 발명의 일부 실시양태에서，핵산은 서열식별번호: 40의 핵산 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서， 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서， 폴리펩티드는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서， 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다.
본 발명의 일부 실시양태에서， 핵산은 제1 인핸서 영역，프로모터 영역，5'UTR 영역，제2 인핸서 영역 및 폴리아데 닐화 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서，핵산은 5'에서 3' 순서로 (a) 제1 인핸서 영역; (b) 프로모터 영역; (c) 5'UTR 영역; (d) 서열식별번호: 35의 아 미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리 펩티드를 코딩하는 핵산; (e) 제2 인핸서 영역; 및 (f) 폴리아데닐화 부위를 포함하고; AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된다. 일부 실시양태에서，제1 인핸서 영역은 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서， 프로모터 영역은 서열 식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서， 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식 별번호: 40의 핵산 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서，폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서，폴리펩 티드는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서， 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다. 일 부 실시양태에서，5'UTR 영역은 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서，제2 인핸서 영역은 서열식별번호: 26의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서，폴리아데닐화 부위는 서열식별번호: 27의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서， 핵산은 (a) 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 제1 인핸서 영역; (b) 서 열식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서 열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식 별번호: 25의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 서열식별번호: 26의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 (e) 서열식별번호: 27의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서，핵산은 서열식별번호: 39의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본 발명의 일부 실시양태에서, AAV2 캡시드 단백질은 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는， 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입 된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함한다. 일부 실시양태에서, AAV2 캡시드 단백질은 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함한다. 일부 실시양태에서， AAV2 캡시드 단백질은 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함한다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 38과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 GH루프를 포함하는 AAV2 VP1 캡시드 단백질을 포함한다.
본 발명의 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 투여에 의한 것이다.
본 발명의 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 제약 제제 중에 있다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 rAAV 입자，염화나트륨，인산나트륨 및 계면활성제를 포함한다. 일부 실시양태에 서，제약 제제는 약 150 내지 약 200 mM 염화나트륨，약 1 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨，약 1 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨，약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188 및 mL당 약 6 x 1013 내지 약 6 x 1010 벡터 게놈(vg)(vg/mL)의 rAAV 입자를 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 180 mM 염화나트륨，약 5 mM 일염기 성 인산나트륨，약 5 mM 이염기성 인산나트륨，약 6 x 1012 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖 는다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 약 180 mM 염화나트륨， 약 5 mM 일염기성 인산나트륨，약 5 mM 이염기성 인산나트륨，약 2 x 1012 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 약 180 mM 염화나트륨， 약 5 mM 일염기 성 인산나트륨，약 5 mM 이염기성 인산나트륨，약 6 x 1011 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다.
본 발명의 일부 실시양태에서， 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 약 25 μL 내지 약 250 μL의 부피이다. 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 약 100 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 약 30 μL의 부피를 포함한다.
본 발명의 일부 실시양태에서，개체는 항-VEGF 작용제를 사용한 안구 질환에 대한 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 rAAV 입자의 투여 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제의 1 또는 2회 주사를 받았다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트이다.
본 발명의 일부 실시양태에서，개체는 항- VEGF 작용제를 사용한 안구 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 항-VEGF 작용제의 투여와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 rAAV 입자의 단위 용량을 항 VEGF 작용제의 투여 약 1주 또는 약 7일 후에 개체의 한쪽 눈에 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항 VEGF 작용제를 1일차에 개체의 한쪽 눈에 투여하는 것 및 rAAV 입자의 단위 용량을 8일차에 개체의 한쪽 눈에 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항 VEGF 작용제는 아플리베르셉트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트가 유리체내 주사를 통해 약 2 mg의 용량으로 투여된다.
본 발명의 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 스테로이드 치료와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에 서，스테로이드 치료는 코르티코스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로 이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료이다. 일부 실시 양태에서，스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전，투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드는 약 1 μg 내지 약 3 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드는 약 2.5 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 개체에서 녹내장을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약 6 x 1011 벡터 게놈(vg) 이하의 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 제공하며, 방법은 개체의 한쪽 눈에 상기 단위 용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는 a)서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 b)아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 측면에서, 본 발명은 필요로 하는 개체의 눈에서 안내압을 감소시키기 위한 방법에 사용하기 위한 rAAV 입자의 단위 용량을 제공하며, 방법은 개체의 한쪽 눈에 상기 단위 용량을 투여하는 것을 포함하고， 여기서 개체는 인간이고， 여기서 rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체가 녹내장을 갖는다. 일부 실시양태에서, 녹내장은 신생혈관 녹내장이다.
참조로 포함됨
특허 출원 및 공개를 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.
도1은 아플리베르셉트의 핵산 서열(서열식별번호: 36)을 제공한다.
여러 측면이 예시를 위해 예시적인 적용을 참조하여 하기 기재된다. 본원에 기재된 특색의 완전한 이해를 제공하기 위해 수많은 구체적 세부사항, 관계 및 방법이 제시된다는 것이 이해되어야 한다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기 술자는 본원에 기재된 특색이 구체적 세부사항 중 하나 이상 없이 또는 다른 방법으로 실시될 수 있다는 것을 용이하게 인식할 것이다. 일부 행위가 상이한 순서로 및/또는 다른 행위 또는 사건과 공동으로 발생할 수 있기 때문에, 본원에 기재된 특색은 행위 또는 사건의 예시된 순서에 의해 제한되지는 않는다. 추가로， 모든 예시된 행위 또는 사건이 본원에 기재된 특색에 따른 방법론을 실행하는데 요구되 는 것은 아니다.
정의
달리 정의되지 않는 한，본원에 사용된 모든 기술 용어는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해된 바와 동일한 의미를 갖는다.
본원에 사용된 용어는 단지 특정한 예를 기재하려는 목적을 위한 것 이며，제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 나타내지 않는 한 복수 형태를 또한 포함하는 것으로 의도된다. 추가로， 용어 "포함한"，"포함한다"，"갖는"，"갖는다"，"가진" 또는 그의 변형어가 상세한 설명 및/또는 청구범위에 사용되는 경우에，이러한 용어는 용어 "포함하는"과 유사 한 방식으로 포괄적인 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "포함하는"은 "포함 한" 또는 "함유하는"과 동의어이고，포괄적이거나 개방형이다.
본원에서 "또는"에 대한 임의의 언급은 달리 언급되지 않는 한 "및/ 또는"을 포괄하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "약" 숫자는 그 숫자의 플러스 또는 마이너스 10%의 숫자를 지칭한다. 용어 "약" 범위는 그 범위 마이너 스 그의 최저 값의 10% 및 플러스 그의 최대 값의 10%를 지칭한다. 본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 관한 실시양태를 포 함(및 기재）한다.
용어 "대상체"，"환자" 또는 "개체"는 영장류，예컨대 인간 및 비-인간 영장류，예를 들어 아프리카 녹색 원숭이 및 레서스 원숭이를 지칭한다. 일 부 실시양태에서，대상체는 인간이다.
본원에 사용된 용어 "치료하다"，"치료하는"，"치료"，"호전시키다" 또는 "호전시키는" 및 다른 문법적 등가물은 안구 질환 또는 장애 또는 안구 질환 또는 장애의 증상을 완화，약화 또는 호전시키는 것，안구 질환 또는 장애의 추가의 증상을 예방하는 것，증상의 기저 대사 원인을 호전 또는 예방하는 것，안구 질환 또는 장애를 억제하는 것，예를 들어 안구 질환 또는 장애의 발생을 중지시키는 것，안구 질환 또는 장애를 경감시키는 것，안구 질환 또는 장애의 퇴행을 유발하는 것，또는 안구 질환 또는 장애의 증상을 정지시키는 것을 지칭하며，예방을 포함하는 것으로 의도된다. 상기 용어는 치료적 이익 및/또는 예방적 이익을 달성하는 것을 추가로 포함한다. 용어 "치료적 이익"은 치료될 안구 질환 또는 장애의 근절 또는 호전을 지칭한다. 또한，치료적 이익은，일부 실시양태에서 대상체가 여전히 안구 질환 또는 장애를 앓고 있음에도 불구하고 대상체에서 개선이 관찰되도록 하는 안구 질환 또는 장애와 연관된 생리학적 증상 중 1종 이상의 근절 또는 호전에 의해 달성된다. 예방적 이익을 위해，제약 조성물은 안구 질환 또는 장애가 발생할 위험이 있는 대상체에게 또는 안구 질환 또는 장애의 생리학적 증상 중 1종 이상을 보고하는 대상체에게 이러한 질환 또는 장애의 진단이 이루어지지 않은 경우에도，투여된다.
본원에 사용된 용어 "투여하다"，"투여하는"，"투여" 등은 치료제 또는 제약 조성물을 목적하는 생물학적 작용 부위에 전달할 수 있게 하는데 사용되 는 방법을 지칭할 수 있다. 이들 방법은 눈에 대한 유리체내 또는 망막하 주사를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "유효량", "치료 유효량" 또는 "제약 유효량"은 치료될 안구 질환 또는 장애의 증상 중 1종 이상을 어느 정도까지 경감시킬, 투여 될 적어도 1종의 제약 조성물 또는 화합물의 충분한 양을 지칭할 수 있다. 제약 조성물의 "유효량", "치료 유효량" 또는 "제약 유효량"은 그를 필요로 하는 대상체 에게 단위 용량(본원 다른 곳에 추가로 상세히 기재된 바와 같음）으로서 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는"은 본원에 개시된 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 제거하지 않고 비교적 비독성인 물질, 예컨대 담체 또는 희석제를 지칭할 수 있다(즉, 물질이 개체에게 투여되는 경우에, 이는 바람직 하지 않은 생물학적 효과를 유발하지도 않고, 이것이 함유되어 있는 조성물의 성분 중 어떠한 것과도 유해한 방식으로 상호작용하지 않음）.
본원에 사용된 용어 "제약 조성물" 또는 간단히 "조성물"은 적어도 1종의 제약상 허용되는 화학적 성분, 예컨대 비제한적으로 담체, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁화제, 증점제, 부형제 등과 임의로 혼합된 생물학적 활성 화 합물을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "AAV 벡터" 또는 "rAAV 벡터"는 표적 세포 또는 표적 조직 내로의 형질도입을 위한, AAV 기원이 아닌 폴리뉴클레오티드 서열(예를 들어, AAV에 대해 이종인 폴리뉴클레오티드, 예컨대 치료 트랜스진, 예를 들어 아 플리베르셉트를 코딩하는 핵산 서열）을 포함하는 아데노-연관 바이러스(AAV） 벡터 또는 재조합 AAV(rAAV) 벡터를 지칭한다. 일반적으로，이종 폴리뉴클레오티드는 적어도 1개，일반적으로 2개의 AAV 역전된 말단 반복 서열(ITR)이 플랭킹된다. 용어 rAAV 벡터는 rAAV 벡터 입자 및 rAAV 벡터 플라스미드 둘 다를 포괄한다. rAAV 벡터는 단일-가닥(ssAAV) 또는 자기-상보적(scAAV)일 수 있다.
"AAV 바이러스" 또는 "AAV 바이러스 입자" 또는 "rAAV 벡터 입자" 또는 "rAAV 입자"는 적어도 1종의 AAV 캡시드 단백질 및 폴리뉴클레오티드 rAAV 벡 터를 포함하는 바이러스 입자를 지칭한다. 일부 경우어 L 적어도 1종의 AAV 캡시드 단백질은 야생형 AAV로부터의 것이거나 또는 변이체 AAV 캡시드 단백질(예를 들어，삽입，예를 들어 하기 제시된 바와 같은 7m8 아미노산 서열의 삽입을 갖는 AAV 캡시드 단백질)이다. 입자가 이종 폴리뉴클레오티드(예를 들어， 야생형 AAV 게놈 이외의 다른 폴리뉴클레오티드，예컨대 표적 세포 또는 표적 조직에 전달될 트랜스진)를 포함하는 경우에，이는 "rAAV 입자"，"rAAV 벡터 입자" 또는 "rAAV 벡 터"로 지칭된다. 따라서，rAAV 입자의 생산은 rAAV 벡터의 생산을 반드시 포함하 며， 이는 이러한 벡터가 rAAV 입자 내에 함유되기 때문이다.
본원에 사용된 용어 "패키징"은 rAAV 입자의 어셈블리 및 캡시드화 를 유발할 수 있는 일련의 세포내 사건을 지칭할 수 있다.
AAV "rep" 및 "cap" 유전자는 아데노-연관 바이러스의 복제 및 캡시 드화 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다. AAV rep 및 cap는 본 원에서 AAV "패키징 유전자"로 지칭된다.
용어 "폴리펩티드"는 그의 자연 발생 및 비-자연 발생 단백질(예를 들어, 융합 단백질）, 펩티드, 단편, 돌연변이체, 유도체 및 유사체 둘 다를 포괄할 수 있다. 폴리펩티드는 단량체 이량체, 삼량체 또는 중합체일 수 있다. 추가로, 폴리펩티드는 각각 1종 이상의 별개의 활성을 갖는 다수의 상이한 도메인을 포함할 수 있다. 의심을 피하기 위해, "폴리펩티드"는 2개 초과의 아미노산의 임의의 길 이일 수 있다.
본원에 사용된 "폴리펩티드 변이체" 또는 간단히 "변이체"는 그의 서열이 아미노산 변형을 함유하는 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변 형은 참조 단백질 또는 폴리펩티드, 예컨대 천연 또는 야생형 단백질의 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상의 아미노산의 삽입, 중복, 결실, 재배열 또는 치환이다. 변이체는 한 위치에서의 단일 아미노산이 또 다른 아미노산으로 변화된 1개 이상의 아미노산 점 치환， 참조 단백질의 서열에서 1개 이상의 아미노산이 각각 삽입 또는 결실된 1개 이상의 삽입 및/또는 결실, 및/또는 아미노 또는 카르복시 말단 중 어 느 하나 또는 둘 다에서의 아미노산 서열의 말단절단을 가질 수 있다. 변이체는 참조 단백질 또는 비변형 단백질과 비교하여 동일하거나 상이한 생물학적 활성을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 변이체는, 예를 들어 그의 대응 참조 단백질에 대해 적어도 약 80%， 85%， 90%， 91%， 92%， 93%， 94%， 95%， 96%， 97%， 98% 또는 99% 전체 서열 상동성을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서， 변이체는 야생형 단백질에 대해 적어도 약 90% 전체 서열 상동성을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서， 변이 체는 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 적어도 약 99.9% 전체 서열 동일성을 나타낸다.
본원에 사용된 "재조합"은 (1) 그의 자연 발생 환경으로부터 제거되었거나， (2) 자연에서 유전자가 발견되는 폴리뉴클레오티드의 모두 또는 부분과 회합되지 않거나， (3) 자연에서는 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되거나，또는 (4) 자연에서는 발생하지 않는 생체분자，예를 들어 유전자 또는 단백질을 지칭할 수 있다. 용어 "재조합"은 클로닝된 DNA 단리물，화학적으로 합 성된 폴리뉴클레오티드 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 폴리 뉴클레오티드 유사체 뿐만 아니라 이러한 핵산에 의해 코딩된 단백질 및/또는 mRNA와 관련하여 사용될 수 있다. 따라서，예를 들어 미생물에 의해 합성된 단백 질은，예를 들어 세포에 존재하는 재조합 유전자로부터 합성된 mRNA로부터 합성되 는 경우에 재조합이다.
용어 "항-VEGF 작용저는 내인성 VEGF 및/또는 내인성 VEGF 수용체(VEGFR)의 활성 또는 기능 또는 생체내 VEGF-VEGFR 상호작용 또는 경로를 감소，방 해，파괴，차단 및/또는 억제할 수 있는，단백질，폴리펩티드，펩티드，융합 단백 질，다량체 단백질，유전자 생성물，항체，인간 모노클로날 항체，항체 단편，압타 머，소분자，키나제 억제제，수용체 또는 수용체 단편，또는 핵산 분자를 포함한 임의의 치료제를 포함한다. 항-VEGF 작용제는 생체내에서 세포，조직 또는 대상체 내로 전달되는 경우에 새로운 혈관 성장 또는 형성 및/또는 부종 또는 팽윤을 감소 시킬 수 있는 공지된 치료제，예를 들어 라니비주맙，브를루시주맙 또는 베바시주 맙 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제는 자연 발생，비 -자연 발생 또는 합성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 항-VEGF 활성을 부여하기 위해 후속적으로 변형 또는 돌연변이된 자연 발생 분자로부터 유 래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 융합 또는 키메라 단백질이 다. 이러한 단백질에서, 기능적 도메인 또는 폴리펩티드는 모이어티 또는 폴리펩 티드에 인공적으로 융합되어 생체내에서 VEGF를 격리하거나 VEGFR 디코이로서 기능 할 수 있는 융합 또는 키메라 단백질을 만든다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용 제는 내인성 VEGFR이 그의 리간드와 상호작용하는 것을 차단하는 융합 또는 키메라 단백질이다.
본원에 사용된 "VEGF"는 달리 요구되지 않는 한, VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 또는 그의 임의의 조합 또는 임의의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 VEGF의 임의의 이소형을 지칭할 수 있다. 달리 요구되지 않는 한, "VEGF"는 VEGF-A, 태반 성장 인자(PGF）, VEGF-B, VEGF-C 및 VEGF-D 또는 그의 임의의 조합, 기능적 단편 또는 변이체의 구성원을 포 함한 VEGF 패밀리의 임의의 구성원을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 "VEGF 수용 체" 또는 "VEGFR" 또는 "VEGF-R"은 VEGFR-1(또는 Flt-1）, VEGFR-2(또는 Flk- 1/KDR） 및 VEGFR-3(또는 Flt-4）을 포함하나 이에 제한되지는 않는 VEGF의 수용체 중 어느 하나를 지칭하는 것으로 사용될 수 있다. VEGFR은 막 결합 또는 가용성 형태 또는 수용체의 기능적 단편 또는 말단절단물일 수 있다. 항-VEGF 작용제의 예는 라니비주맙, 베바시주맙, 브를루시주맙 또는 그의 임의의 조합, 변이체 또는 기능적 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"작동가능하게 연결된" 또는 "작동가능하도록 연결된" 또는 "커플링 된"은 유전적 요소의 병치를 지칭할 수 있으며，여기서 요소는 이들이 예상된 방식으로 작동하는 것을 허용하는 관계로 존재한다. 예를 들어，프로모터가 코딩 서열 의 전사를 개시하는 것을 돕는 경우에 프로모터는 코딩 영역에 작동가능하게 연결 될 수 있다. 이러한 기능적 관계가 유지되는 한，프로모터와 코딩 영역 사이에 개 재 잔기가 존재할 수 있다.
용어 "발현 벡터" 또는 "발현 구축물" 또는 "카세트" 또는 "플라스 미드" 또는 간단히 "벡터"는 핵산 코딩 서열의 일부 또는 모두가 전사될 수 있고 유전자 요법을 위해 적합화된 유전자 생성물을 코딩하는 핵산 또는 폴리뉴클레오티 드를 함유하는，AAV 또는 rAAV 벡터를 포함한 임의의 유형의 유전자 구축물을 포함 할 수 있다. 전사체는 단백질로 번역될 수 있다. 일부 실시양태에서，전사체는 부분적으로 번역되거나 또는 번역되지 않는다. 특정 측면에서，발현은 유전자의 전사 및 mRNA의 유전자 생성물로의 번역 둘 다를 포함한다. 다른 측면에서，발현 은 관심 유전자를 코딩하는 핵산의 전사만을 포함한다. 발현 벡터는 또한 표적 세 포에서 단백질의 발현을 용이하게 하기 위해 코딩 영역에 작동가능하게 연결된 제 어 요소를 포함할 수 있다. 제어 요소 및 발현을 위해 작동가능하게 연결된 유전 자 또는 유전자들의 조합은 때때로 "발현 카세트"로 지칭될 수 있으며，이들 중 다 수는 관련 기술분야에 공지되어 있고 이용가능하거나 또는 관련 기술분야에서 이용 가능한 성분으로부터 용이하게 구축될 수 있다.
용어 "이종"은 비교될 나머지 개체의 것과 유전자형적으로 별개인 개체를 지칭할 수 있다. 예를 들어, 상이한 종으로부터 유래된 플라스미드 또는 벡터 내로 유전자 조작 기술에 의해 도입된 폴리뉴클레오티드는 이종 폴리뉴클레오 티드일 수 있다. 천연 코딩 서열로부터 제거되고 자연적으로 연결된 것으로 발견 되지 않는 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터는 이종 프로모터일 수 있다.
본원에 사용된 "7m8"은 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 지칭한다.
"7m8 변이처1"는 캡시드 단백질의 용매 노출된 GH 루프에 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）가 삽입된, 임의의 혈청형의 것일 수 있는 rAAV 를 지칭한다.
7m8이 rAAV2에 삽입되는 경우(AAV2.7m8로도 지칭됨）, 아미노산 서 열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV2 캡시드 단백질의 아미노산 570-611 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV2 캡시드 단백질 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 다. 일부 경우에, 7m8이 rAAV2에 삽입되는 경우(AAV2.7m8로도 지칭됨）, 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV2 캡시드 단백질의 GH 루프 내로, 예를 들어 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입 된다. 7m8이 rAAV1에 삽입되는 경우(AAV1.7m8로도 지칭됨）, 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV1 캡시드 단백질의 아미노산 571-612 내의 GH 루프 내로， 예를 들어 AAV1 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV5에 삽입되는 경우(AAV5.7m8로도 지칭됨）, 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV5 캡시드 단백질의 아미노산 560-601 내의 GH 루프 내로， 예를 들어 AAV5 캡시드 단백질의 아미노산 575와 576 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV6에 삽입되는 경우(AAV6.7m8로도 지칭됨），아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식 별번호: 1）는 AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 571 내지 612 내의 GH 루프 내로，예 를 들어 AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV7 에 삽입되는 경우(AAV7.7m8로도 지칭됨），아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번 호: 1）는 AAV7 캡시드 단백질의 아미노산 572 내지 613 내의 GH 루프 내로，예를 들어 AAV7 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV8에 삽입되는 경우(AAV8.7m8로도 지칭됨），아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 573 내지 614 내의 GH 루프 내로，예를 들어 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV9에 삽입 되는 경우(AAV9.7m8로도 지칭됨），아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV9 캡시드 단백질의 GH 루프 내로，예를 들어 AAV9 캡시드 단백질의 아미노산 588과 589 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV10에 삽입되는 경우(AAV10.7m8로도 지칭됨），아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）는 AAV10 캡시드 단백질의 아미노산 573 내지 614 내의 GH 루프 내로，예를 들어 AAV10 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이에 삽입된다.
개관
안구 질환에 대한 현행 요법（예를 들어，아 플리베르셉트 재조합 단백질，라니비주맙 재조합 단백질）은 대략 4-8주마다 평생 치료, 예컨대, IVT 투여를 필요로 한다. 이는 일부 환자에서 염증, 감염 및 다른 부작용의 위험을 증가시킬 수 있다. 추가로, 현행 요법은 요법의 투여를 위한 진료소로의 반복적 및/또는 빈번한 방문으로 인해 준수라는 난제를 야기한다. 투여 빈도의 감소는 시각 상실 및 눈 질환 또는 상태의 악화와 연관된다. IVT 주사 후 표적 망막 세포에 효율적으로 형질도입하는 AAV 벡터의 능력은 치료 유전자를 광수용체, 망막 색소 상피 및 내부 망막 내로 성 공적으로 전달하여 다양한 망막 질환을 치료하기 위해 이용되어 왔다. 따라서, 항 -VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르셉트）를 코딩하는 rAAV 입자의 투여는 생체내 에서 항-VEGF 작용제의 연장 및/또는 지속 방출을 제공할 수 있다.
따라서，본 개시내용은 6 x 1011 vg/눈 이하의 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여함으로써 개 체에서 안구 질환(예를 들어, 녹내장)을 치료하는 방법을 제공한다. 추가로， 본 개시내용은 항-VEGF 작용제（예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여함으로써 안구 질환(예를 들어, 녹내장)을 갖는 개체의 눈에서 안내압(IOP)을 감소시키는 방법을 제공한다. 본원에 개시된 방법은 장기간 효능을 제공하면서 반복된 IVT 주사에 대한 필요를 감소시키거나 제거함으로써 비-준수 및 비-고수 문제를 해결한다. 추가로，본원에 제공된 방법은 다중 IVT 주사와 연관된 부작용을 감소시킨다.
치료 방법
개체의 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV） 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는，개체에서 안구 질환(예를 들어, 녹내장)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
또한，개체의 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는，(예를 들어, 안구 질환(예를 들어, 녹내장)을 갖는 개체의 눈에서) 개체의 안내압을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
또한，개체의 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 투여하고，항-VEGF 작용제의 투여 후에 개체의 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV） 입자의 치료(예를 들어, 적어도 1, 적어도 2의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는， 개체에서 안구 질환(예를 들어, 녹내장)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 안구 질환은 녹내장이다. 일부 실시양태에서, 녹내장은 신생혈관 녹내장이다.
일부 실시양태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 개체는 안구 질환에 대한 적어도 1회의 선행, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회 또는 그 초과의 치료)를 받았다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 선행 치료(예를 들어, 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회 또는 그 이상의 치료)는 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102), PAN-90806(판옵티카(PanOptica)) 및/또는 아플리베르셉트)를 포함하였다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 마지막 8주, 약 마지막 9주, 약 마지막 10주, 약 마지막 11주, 약 마지막 12주, 약 마지막 13주, 약 마지막 14주, 약 마지막 15 주 또는 약 마지막 16주 내에 적어도 1회(예를 들어, 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회 또는 그 이상)의 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 나타냈다. 일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102), PAN-90806(판옵티카) 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 나타냈다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트，그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제는 아플 리베르셉트， 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다. 일부 실시양태에서， 항-VEGF 작용제는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서，개체는 시각 장애를 갖는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 약 78 내지 50개 ETDRS 문자(예를 들어，50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66， 67， 68， 69， 70， 71， 72， 73， 74， 75， 76， 77 또는 78개 중 어느 것의 ETDRS 문자)의 시력(BCVA)을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 약 20/32 내지 약 20/100의 시력(스넬렌(Snellen) 대응치)을 갖는다.
일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 중심-침범 IRF(중심 1 mm)의 존재 하에 하이델베르크 스펙트랄리스(Heidelberg Spectralis)® 사용시 ≥ 325 μm의 중심 서브필드 두께(CST)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단 위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 주로 녹내장(예를 들어, 신생혈관 녹내장)으로 인한 시각의 감소를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 6개월 이하 전, 예를 들어 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 6개월, 약 5 개월, 약 4개월, 약 3개월, 약 2개월, 약 1개월 또는 그 미만 중 어느 것 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 녹내장(예를 들어, 신생혈관 녹내장)으로 진단되었다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 적어도 약 60일(즉, 약 2개월) 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료에 대해 중심 서브필드 두께의 의미있는 반응, 예를 들어 중심 서브필드 두께의 적어도 10% 감소를 나타냈다. 일부 실시양 태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료에 대해 유해 반응을 경험하지 않았다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자 의 단위 용량의 투여 전에 AAV2.7m8에 대한 중화 항체를 갖지 않는다. 일부 실시 양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에，예를 들어 rAAV 입자의 단 위 용량의 투여 전 약 6개월 내에 1:125 초과의 항-AAV2.7m8 중화 항체 역가를 갖 지 않는다.
일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 아플 리베르셉트，코르티코스테로이드 또는 플루오레세인 염료 또는 소듐 플루오레세인(예를 들어，혈관조영술에 사용됨）에 대한 알레르기의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 아플리베르셉트，코르티 코스테로이드 또는 플루오레세인 염료 또는 소듐 플루오레세인(예를 들어， 혈관조 영술에 사용됨）에 대한 경도 알레르기의 병력을 가지며， 여기서 알레르기는 치료가 가능하다.
일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 비제어 된 당뇨병，예를 들어 10% 초과의 HbA1C를 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체 는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 3개월 내에 당뇨병성 케톤산증의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에，예 를 들어 인슐린 펌프 또는 다중 1일 인슐린 주사를 사용한 집중 인슐린 치료를 개 시하지 않았다.
일부 실시양태에서， 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 약 3개월 내에， 예를 들어 인슐린 펌프 또는 다중 1일 인슐린 주사를 사용한 집중 인 슐린 치료를 개시할 계획이 없다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 전신 스테로이드로의 치료 또는 면역억제 치료，예를 들어 메토 트렉세이트 또는 아달리무맙을 필요로 하는 전신 자가면역 질환의 병력을 갖지 않 는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 황반 부종 을 유발하는 것으로 공지된 전신성 약물, 예컨대 핑골리모드, 타목시펜, 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸을 투여받고 있지 않다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 전신 항-VEGF 치료를 투여받고 있지 않다. 일부 실 시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈 에서 고위험 증식성 당뇨병성 망막병증(PDR）을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, PDR은 임의의 유리체 또는 망막전 출혈, 임상 검사시 표준 ETDRS 7-필드와 등가인 영역 내 >1/2-디스크 영역의 다른 곳의 신생혈관화, 또는 임상 검사시 >1/3-디스크 영역의 디스크의 신생혈관화로 정의된다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 국소 또는 격자 레이저 광응 고술을 받지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 어떠한 선행 범 망막 광응고술(PRP）도 받지 않 는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자 가 투여되는 눈에서 항-VEGF 요법(예를 들어, 아플리베르셉트 IVT 주사）을 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 적어도 60 일 동안 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 항-VEGF 요법(예를 들어, 아플리베르셉트 IVT 주사）을 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 2회 초과의 항-VEGF 치료(예를 들어, 아 플리베르셉트 IVT 주사）를 받지 않았다.
일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 전안부 신생혈관화(예를 들어，홍채의 신생혈관화 [NVI] 또는 신생혈관 녹내장 [NVG]），유의한 유리체 출혈， 섬유혈관 증식 또는 견인성 망막 박리 중 어느 것의 병력도 갖지 않는다. 일부 실 시양태에서， 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈 에서 황반 부종 또는 시각 장애에 기여하는 중심와에서의 구조적 이상(예를 들어， 조밀한 경질 삼출물，색소 이상，중심와 위축，유리체황반 견인 또는 망막전막 중 어느 것）을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，중심와에서의 구조적 이상은 임상 검사 또는 OCT에서 평가된다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량 의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 당뇨병성 망막병증 이외의 다른 망막 질환(예를 들어，연령-관련 황반 변성(어느 한쪽 눈에서），망막 정맥 폐쇄，망막 동맥 폐쇄 또는 병리학적 근시）의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 당뇨병성 황반 부종 이외의 다른 안구 질환의 병력， 예를 들어 유의한 백내장 또는 황반 견인 또는 후낭하 백내장의 증거를 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 적어도 약 3개월 내에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 백내장 적출 또는 이트륨 알루미늄 가넷(YAG） 낭절개술의 이력을 갖지 않는다. 일부실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 망막 박리(복구가 있거나 없음）의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에 서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 섬유 주절제술，녹내장 단락술 또는 최소 침습성 녹내장 수술(MIGS） 중 어느 것의 이력 도 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 유리체절제술 또는 다른 여과 수술의 이력을 갖지 않 는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자 가 투여되는 눈에서 무수정체 또는 전방 안내 렌즈의 존재를 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에, 항녹내장 의약으로의 치료 또는 >2종의 IOP 저하 의약의 현재 사용에도 불구하고, rAAV 입자가 투여되는 눈에서 비제어된 고안압증 또는 녹내장(예를 들어, IOP >22 mmHg）을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여 되는 눈에서 임의의 안구 상태에 대한 안내 또는 안구주위 스테로이드 치료(예를 들어, IVT 트리에센스, 일루비엔 또는 오주르텍스）의 이력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 적어도 약 90일 내에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 굴절 교정 수술을 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체 는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 이전 관통 각 막성형술, 내피 각막성형술 또는 안구 방사선을 받지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 rAAV 입자가 투여되는 눈에서 어떠한 선행 유리체망막 수술도 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단 위 용량의 투여 전에 해소된 경도의 예상 수술후 염증을 제외하고는, 예를 들어 등 급 트레이스 이상의 포도막염 또는 안내 염증의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양 태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 국소 스테로이드 투여와 관련 된 IOP 상승의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 바이러스성 포도막염, 망막염 또는 각막염을 포함한 안구 단순 포진 바이러스(HSV), 바리셀라-조스터 바이러스(VZV) 또는 시토메갈로바이러스(CMV)의 병력을 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량 의 투여 전에 결막염，산립종 또는 유의한 안검염을 포함한 외부 안구 감염 중 어 느 것의 증거도 갖지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 rAAV 입자의 단위 용량 의 투여 전에 안구 록소플라스마증의 병력을 갖지 않는다.
일부 실시양태에서， 단위 용량은 벡터 게놈의 수(vg)로서 표현된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6 x 1011 벡터 게놈(vg) 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서， 단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수(vg)(vg/ 눈)로서 표현된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1010 내지 약 2 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 2 x 1011 또 는 약 6 x 1010 vg/눈이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투 여된다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈은 우안 또는 좌안이다. 일부 실시양 태에서，개체의 한쪽 눈은 우안이다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈은 좌안 이다. 일부 실시양태에서，본원에 제공된 방법은 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈은 우안이고， 반대쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈은 좌안이고， 반대쪽 눈은 우안이다.
일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주(예를 들 어, 약 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13 일 또는 14일） 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자 의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 거의 동일하거 나(예를 들어, 1% 미만 더 높거나 더 낮거나, 5% 미만 더 높거나 더 낮거나, 10% 미만 더 높거나 더 낮거나 또는 20% 미만 더 높거나 더 낮음） 또는 더 낮다(예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90% 더 낮음）.
일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주(예를 들어, 적 어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 4주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년 또는 그 초과） 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투 여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보 다 더 높다(예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것 더 높음）.
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95%， 적어도 약 96%， 적어도 약 97%， 적어도 약 98%， 적어 도 약 99%， 적어도 약 99.99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및 b) 아 미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 서열식별번호: 35의 서열은 하기에 제공된다:
(서열식별번호: 35)
일부 실시양태에서， rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는， 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사 이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서， rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 에 대해 적어도 약 80%， 적어도 약 85%， 적어도 약 90%， 적어도 약 95%， 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열 식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트 또는 그의 기 능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 코돈-최적화된 서열을 포함하고 AAV2 역 전된 말단 반복부(ITR))가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아 미노산 서열을 코딩하는 코돈-최적화된 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번 호: 35의 아미노산 서열에 대해 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 코 돈-최적화된 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편의 cDNA 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르 셉트 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편의 코돈-최적화된 cDNA 서열 을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 36의 핵산 서열을 포함하는 핵산을 포함 한다.
일부 실시양태에서, 핵산은 (a) CMV 서열을 포함하는 제1 인핸서 영 역; (b) CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 TPL 서열 및 eMLP 서열을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 (e) HGH 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, CMV 서열을 포함하는 인핸서 영역은 서열식별번호: 22의 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역은 서열식별번호: 23의 서열을 포함 한다. 일부 실시양태에서, TPL 서열은 서열식별번호: 24의 서열을 포함한다. 일 부 실시양태에서, eMLP 서열은 서열식별번호: 25의 서열을 포함한다. 일부 실시양 태에서, 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역은 서열식별번호: 26의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HGH 폴리아데닐화 부위는 서열식별번호: 27의 서열 을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하 는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14）를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 서열식별번호: 13의 서열은 하기에 제공된다:
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노 산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서， rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는， 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 하기 아미노산 서열 중 어느 것을 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다: LALGETTRPA（서열식별번호: 1）; LANETITRPA(서열식별번호: 2）, LAKAGQANNA(서열식별번호: 3）, LAKDPKTTNA(서열식별번호: 4）, KDTDTTR(서열식별번호: 5）, RAGGSVG(서열식별번호: 6）, AVDTTKF(서열식별번호: 7）, STGKVPN(서열식별번호: 8）, LAKDTDTTRA(서열식별번호: 9）, LARAGGSVGA(서열식별번호: 10）, LAAVDTTKFA(서열식별번호: 11）, LASTGKVPNA(서열식별번호: 12）, LGETTRP(서열식별번호: 14）, NETITRP(서열식별번호: 15）, KAGQANN(서열식 별번호: 16）, KDPKTTN(서열식 별번호: 17）, KDTDTTR(서열식별번호: 18）, RAGGSVG(서열식별번호: 19）, AVDTTKF（서열식별번호: 20） 및 STGKVPN(서열식별번호: 21）. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입 된 하기 아미노산 서열 중 어느 것을 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다: LALGETTRPA(서열식별번호: 1）; LANETITRPA(서열식별번호: 2）, LAKAGQANNA(서열 식별번호: 3）, LAKDPKTTNA(서열식별번호: 4）, KDTDTTR(서열식별번호: 5）, RAGGSVG(서열식별번호: 6）, AVDTTKF(서열식별번호: 7）, STGKVPN(서열식별번호: 8）, LAKDTDTTRA(서열식별번호: 9）, LARAGGSVGA(서열식별번호: 10）, LAAVDTTKFA(서열식별번호: 11）, LASTGKVPNA(서열식별번호: 12）, LGETTRP(서열식별번호: 14）, NETITRP(서열식별번호: 15）, KAGQANN(서열식별번호: 16）, KDPKTTN(서열식 별번호: 17）, KDTDTTR(서열식별번호: 18）, RAGGSVG(서열식별번호: 19）, AVDTTKF(서열식별번호: 20） 및 STGKVPN(서열식별번호: 21）.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내(IVT） 주사, 안내 투여 또는 망막내 주사 에 의한 것이다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내(IVT） 주사에 의한 것이다.
일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 제약 제제 중에 있다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 rAAV 입자，1종 이상의 삼투 또는 이온 강도 작용 제，1종 이상의 완충제，1종 이상의 계면활성제 및 1종 이상의 용매를 포함한다. 일부 실시양태에서， 삼투 또는 이온 강도 작용제는 염화나트륨이다. 일부 실시양 태에서， 1종 이상의 완충제는 일염기성 인산나트륨 및/또는 이염기성 인산나트륨이 다. 일부 실시양태에서，계면활성제는 폴록사머 188이다. 일부 실시양태에서，용 매는 물이다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 rAAV 입자， 염화나트륨， 인산나트 륨 및 계면활성제를 포함한다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 약 1x1010 vg/mL 내지 약 1x1013 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨(예를 들어， 약 150 mM， 약 160 mM， 약 170 mM， 약 180 mM， 약 190 mM 또는 약 200 mM 중 어느 것）을 포함한다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기 성 인산나트륨(예를 들어， 약 1mM， 약 2 mM， 약 3 mM， 약 4 mM， 약 5 mM， 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM 또는 약 10 mM）을 포함한다. 일부 실시양태에서， 제약 제제는 약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨(예를 들어， 약 1mM， 약 2 mM， 약 3 mM， 약 4 mM， 약 5 mM， 약 6 mM， 약 7 mM， 약 8 mM， 약 9 mM 또는 약 10 mM）을 포함한다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 0.0005% （w/v） 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188(예를 들어, 약 0.0005% (w/v), 0.0006% (w/v), 0.0007% (w/v), 0.0008% (w/v), 0.0009% (w/v), 0.001% (w/v), 0.002% (w/v), 0.003% (w/v), 0.004% (w/v) 또는 약 0.005% (w/v) 중 어느 것)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5(예를 들어, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4 또는 약 7.5 중 어느 것)의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시 양태에서, 제약 제제는 약 6X1011 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사 머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 25 μL 내지 약 250 μL (예를 들어, 약 25 μL, 약 30 μL, 약 40 μL, 약 50 μL, 약 60 μL, 약 70 μL, 약 80 μL, 약 90 μL, 약 100 μL, 약 110 μL, 약 120 μL, 약 130 μL, 약 140 μL, 약 150 μL, 약 160 μL, 약 170 μL, 약 180 μL, 약 190 μL, 약 200 μL, 약 210 μL, 약 220 μL, 약 230 μL, 약 240 μL 또는 약 250 μL 중 어느 것)의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자의 농도는 개체의 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량의 부피가 약 25 μL 내지 약 250 μL가 되도록 조정된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 100 μL의 부 피를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 30 μL의 부피를 포함한다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 스테로이드 치료와 조 합되어 투여된다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 코르티코스테로이드 치 료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，안과용 스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료(예를 들어，점안제），안구주위 스테로이드 치료(예를 들어，테 논낭하，결막하），유리체내 스테로이드 치료 또는 맥락막상 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료，메드리손 치료，로테프레드놀 치료，프레드니솔론 치료，플루오시놀론 치료，트리암시놀론 치료，리멕솔론 치료，텍사메타손 치료，플루오로메톨론 치료，플루오시놀론 치료， 리멕솔론 치료 또는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전， 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 투여된 다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료(예 를 들어, 디플루프레드네이트）이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료(예를 들어, 디플루프레드네이트）는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 4 주, 약 6주 또는 약 8주 동안의 매일 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 약 제1주에 안과용 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 안과용 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 안과용 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 안과용 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 약 0.005% 내지 약 0.5% 디플루프레드네이트이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 약 0.005%, 약 0.006%, 약 0.007%, 약 0.008%, 약 0.009%, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.4%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09% 또는 약 0.1% 디플루프레드네이트 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 디플루프레드네이트 0.05%이다. 일부 실시양태에서, 디플루 프레드네이트 0.05%의 용량은 안과용 용액 한 방울이다. 일부 실시양태에서, 한 방울은 약 50 μl(예를 들어, 약 25 μl 내지 약 50 μl, 약 50 μl 내지 약 100 μl）이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 1 μg 내지 약 5 μg 또는 약 2 μg 내지 약 3 μg 또는 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서，디플루프레드네이트의 용량은 약 2.5 μg 디플루프 레드네이트를 포함한다.
일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료(예를 들어， 디플루프레드네이트）이다. 일부 실시양태에서， 안과용 스테로이드 치료(예를 들어，디플루프레드네이트）는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 4 주， 약 6주 또는 약 8주 동안의 매일 국소 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에 서，국소 스테로이드 치료는 약 제1주에 국소 스테로이드의 약 4회 투여，약 제2주에 국소 스테로이드의 약 3회 투여，약 제3주에 국소 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 국소 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치 료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 약 3주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉，TID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉，BID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포함한다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드는 약 1 μg 내지 약 3 μg의 용량의 디를루프레드네이트 0.05%를 포함한다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드는 약 2.5 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다. 일부 실시양태에서，국소 스테 로이드는 약 0.005% 내지 약 0.5% 디플루프레드네이트이다. 일부 실시양태에서， 국소 스테로이드는 약 0.005%，약 0.006%，약 0.007%，약 0.008%，약 0.009%，약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.04%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09% 또는 약 0.1% 디플루프레드네이트 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 디플루프레드네이트 0.05%이다. 일부 실시양태에서, 디를루프 레드네이트 0.05%의 용량은 안과용 용액 한 방울이다. 일부 실시양태에서, 한 방 울은 약 50 μl(예를 들어, 약 25 μl 내지 약 50 μl, 약 50 μl 내지 약 100 μl）이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 1 μg 내지 약 5 μg 또는 약 2 μg 내지 약 3 μg 또는 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 디플루프레드네 이트의 용량은 약 2.5 μg 디플루프레드네 이트 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교 하여 황반 부피의 유지 또는 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양 태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 약 5%， 약 10%， 약 15%， 약 20%， 약 25%， 약 30%， 약 35%， 약 40%， 약 45% 또는 약 50% 중 어느 것 초 과의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투 여 전 황반 부피와 비교하여 적어도 약 10%의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서， 황반 부피는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여 하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 적어도 약 10% 의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반 대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 약 15% 이상의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시 양태에서，황반 부피는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교한 황반 부피의 유지 또는 감소는 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 약 30주 이상 후에 존재한다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교한 황반 부피의 유지 또는 감소 는 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 약 30 주，약 34주，약 44주，약 6개월，약 1년，약 1.5년，약 2년，약 3년，약 5년，약10년 또는 그 초과 중 어느 것 후에 존재한다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투 여 전 시력과 비교하여 시력의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 많은 시력의 개 선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 시력은 최대 교정 시력(BCVA)이다. 일부 실 시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하 는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 BCVA의 개선을 유발한 다. 일부 실시양태에서, BCVA는 정확하게 읽힌 문자의 개수에 상응하는 ETDRS 점 수로서 표현된다(Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047).
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 적어도 15개 ETDRS 문자(Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134 (9):1041:1047)(예를 들어, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 30개, 적 어도 약 40개, 적어도 약 50개, 적어도 약 60개 또는 약 70개 문자)의 BCVA의 개선 을 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 1 내지 약 15개(예를 들어，약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10，약 11，약 12，약 13，약 14 또는 약 15개 중 어느 것）의 ETDRS 문자 의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 5개 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6 또는 약 7개 중 어느 것의 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시 양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 3개 이상의 ETDRS 문자 의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 4개 이상의 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시 양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 5.1개 이상의 ETDRS 문 자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 6.4개 이상의 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하 는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 6.8개 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA 와 비교하여 약 8.8개 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2.3개 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자 의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 15개 미만의 ETDRS 문자(Vitale et al.， (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047)(예를 들어, 15개 이하, 14개 이하, 13 개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 1개 또는 0개 문자 중 어느 것)를 상실한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2개 문자를 상실한다. 일부 실시양태에 서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8 또는 약 9개 중 어느 것의 ETDRS 문자를 상실한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개 체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 0개 문자를 상실한다. 일 부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 1개 문자를 상실한다. 일부 실시양태에서，개체의 한 쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2.7개 문자를 상실한다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2.8개 문자를 상실한다. 일 부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2개 이하의 문자를 상실한다. 일부 실시양태에서，개 체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하 여 약 3.2개 이하의 문자를 상실한다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며， 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 15 내지 약 0 개 문자(예를 들어，약 15，약 14，약 13，약 12，약 11，약 10，약 9, 약 8, 약 7, 약 6, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1 또는 0개 문자 중 어느 것）를 상실한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 10 내지 약 0개 문자(예를 들어, 약 10, 약 9, 약 8, 약 7, 약 6, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1 또는 0개 문자 중 어느 것）를 상실한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 5 내지 약 0개 문자(예를 들어, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1 또는 0개 문자 중 어느 것）를 상실한다. 일부 실시양태에 서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 4 내지 약 0개 문자(예를 들어, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1 또는 0개 문 자 중 어느 것）를 상실한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개 체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 3 내지 약 0개 문자(예를 들어, 약 3, 약 2, 약 1 또는 0개 문자 중 어느 것）를 상실한다. 일부 실시 양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2 내지 약 0개 문자(예를 들어, 약 2, 약 1 또는 0개 문자 중 어느 것）를 상실한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며，여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 1 내지 약 0개 문자를 상실 한다.
일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -20 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어，-20, -19, -18, -17, -16，-15，-14, -13， -12， -11， -10， -9， -8， -7， -6， -5， -4， -3， -2， -1， 0， +1， +2， +3， +4， +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18， +19， +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양 태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 16，7 또는 5개 중 어 느 것의 ETDRS 문자의 BCVA의 증가를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 19，14, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 중 어느 것의 ETDRS 문자의 BCVA의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 4.8 또는 약 0.8개 ETDRS 문자의 BCVA의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2개 이하의 ETDRS 문자의 BCVA의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한 쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 3.2개 이하의 ETDRS 문자의 BCVA의 감소를 유발한다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -15 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, -15, -14, -13, -12, -11, -10, -9, -8, -7, -6, -5, -4, -3, -2, -1, 0, +1, +2, +3, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15, +16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것)의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -10 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, -10, -9, -8, -7, -6, -5, -4, -3, -2, -1, 0, +1, +2, +3, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15, +16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것)의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의투여 전 BCVA와 비교하여 약 -5 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, -5, -4, -3,-2, -1, 0, +1, +2, +3, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15,+16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것)의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -4 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어，-4，-3, -2, -1, 0, +1, +2, +3, +4, +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18， +19， +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양 태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -3 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어， -3， -2， -1， 0， +1， +2， +3， +4， +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18， +19， +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -2 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어，-2，-1, 0, +1， +2， +3， +4， +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18，+19，+20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한 다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 -1 내 지 +7개 또는 그 초과(예를 들어， -1， 0， +1， +2， +3， +4， +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18， +19， +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 0 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어，0, +1, +2， +3， +4， +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18， +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 +1 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, +1, +2, +3, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15, +16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문 자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 +2 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, +2, +3, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15, +16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 +3 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, +3, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15, +16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한 다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 +4 내 지 +7개 또는 그 초과(예를 들어, +4, +5, +6, +7, +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, +15, +16, +17, +18, +19, +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA 와 비교하여 약 +5 내지 +7개 또는 그 초과(예를 들어， +5， +6， +7， +8， +9， +10， +11， +12， +13， +14， +15， +16， +17， +18， +19， +20개 또는 그 초과 중 어느 것）의 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 +6 또는 약 +7개 ETDRS 문자의 BCVA의 변화를 유발한 다.
일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는 것은 일과성 염증(예를 들어，방수 세포 및/또는 유리체 세포에 의해 유도된 염증，방수 흐림，후유착，불량한 동공 확장）을 유발한다. 일 부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 염증(예를 들어，방수 세포 및/또는 유리체 세포에 의해 유도된 염 증，방수 흐림，후유착，불량한 동공 확장）을 유발하며，이는 경구 및/또는 국소 스테로이드 치료 및/또는 동공확대제의 투여 후에 개선된다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 염증(예를 들어， 방수 세포 및/또는 유리체 세포에 의해 유도된 염증）을 유발하며， 이 는 경구 및/또는 국소 스테로이드 치료의 투여 후에 해소된다. 염증(예를 들어， 방수 세포 및/또는 유리체 세포에 의해 유도된 염증， 방수 흐림， 후유착， 불량한 동공 확장）은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법，예컨대 슬릿 램프 검사를 사용 하여 측정될 수 있다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력(예를 들어, BCVA)과 비교한 시력의 유지 또는 개선은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 약 1일, 약 1주, 약 2주, 약 4주, 약 8주, 약 12주, 약 16주, 약 20주, 약 24주, 약 28주, 약 32주, 약 36주, 약 40주, 약 44 주, 약 48주, 약 52주, 약 56주, 약 60주, 약 64주, 약 68주, 약 72주, 약 76주, 약 80주, 약 84주, 약 88주, 약 92주, 약 96주, 약 100주, 약 104주, 약 108주 또 는 그 초과 중 어느 것 후에 존재한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 전 시력(예를 들어, BCVA)과 비교한 시력의 유지 또는 개선은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 약 30주 이상 후 에 존재한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력(예를 들어, BCVA)과 비교한 시력의 유지 또는 개선은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 약 30주, 약 34주, 약 44주, 약 6개월, 약 1 년, 약 1.5년, 약 2년, 약 3년, 약 5년, 약 10년 또는 그 초과 중 어느 것 후에 존 재한다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에서의 최대 교정 시력(BCVA)에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, BCVA는 정확하게 읽힌 문자의 개수에 상응하는 ETDRS 점수로서 표현된다(Vitale et al.，(2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047). 일부 실시양태에서, 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 ETDRS 점수에서의 15개 미만의 문자(예를 들어，15개 이하，14개 이하，13개 이하， 12개 이하， 11개 이하， 10개 이하， 9개 이하， 8개 이하， 7개 이하， 6개 이하， 5개 이하， 4개 이하， 3개 이하， 2개 이하， 1개 또는 0개 문자 중 어느 것)를 상실하는 경우에，개체는 시각 및/또는 시력의 유지를 갖는 것으로 결정된다. 일 부 실시양태에서，개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 적어도 15개 문자(예를 들어， 적어도 약 15개， 적어도 약 20개， 적어도 약 30개， 적어도 약 40개， 적어도 약 50개， 적어도 약 60개 또는 약 70개 문자 중 어느 것)를 획득하는 경우에，개체는 시각 및/또는 시력의 개선을 갖 는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서， 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에서의 황반 부피에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 황반 부피는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 SD-OCT에 의해 평가된 황반 부피가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투 여한 후 감소되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 SD-OCT에 의해 평가된 황반 부피가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용 량을 투여한 후 유지되는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에서의 홍채 홍색증의 감소에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 홍채 홍색증의 감소는 플루오레세인 혈관조영(FA)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 (예를 들어, FA에 의해 평가된) 홍채 홍색증이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 감소되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 (예를 들어, FA에 의해 평가된) 홍채 홍색증이 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 유지되는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 안내압(IOP)의 감소에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, IOP의 감소는 골드만(Goldmann) 압평 안압측정계 시험에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 (예를 들어, 골드만 압평 안압측정계 시험에 의해 결정되는) IOP가 감소되는 경우 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 (예를 들어, 골드만 압평 안압측정계 시험에 의해 결정되는) IOP가 유지되는 경우 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 전방 각도 또는 전방 깊이의 증가에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 전방 각도 또는 전방 깊이의 증가는 전방각경검사, 초음파 생체현미경(UBM) 또는 전안부 광 간섭 단층촬영(OCT)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 (예를 들어, 전방각경검사, UBM, 또는 OCT에 의해 결정되는) 전방 각도 또는 전방 깊이가 증가되는 경우 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 (예를 들어, 전방각경검사, UBM, 또는 OCT에 의해 결정되는) 전방 각도 또는 전방 깊이가 유지되는 경우 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체가 필요로 하는 구제 요법 치료（예를 들어，아플리베르셉트 주사）의 횟수에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단 위 용량을 투여한 후 4주마다，5주마다，6주마다，7주마다，8주마다，9주마다，10 주마다 또는 그 초과 중 어느 것에서 1회 미만의 구제 요법 치료（예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 개체가 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 1주，적어도 2주，적어 도 3주，적어도 4주，적어도 5주，적어도 6주，적어도 7주，적어도 8주，적어도 9 주, 적어도 10주, 적어도 15주, 적어도 20주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 80주, 적어도 90주, 적어도 100주, 적어 도 110주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어, 아플 리베르셉트 주사）도 필요로 하지 않는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여한 후 적어도 약 24개월, 적어도 약 23개월, 적어도 약 22개월, 적어도 약 21개월, 적어도 약 20개월, 적어도 약 19개월, 적어도 약 18개 월, 적어도 약 17개월, 적어도 약 16개월, 적어도 약 15개월, 적어도 약 14개월, 적어도 약 13개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 11개월, 적어도 약 10개월, 적어 도 약 9개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 5개 월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 1개월, 적어 도 약 3주, 적어도 약 2주 또는 적어도 약 1주 중 어느 것 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）도 필요로 하지 않는다. 일부 실시양태에 서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어 도 약 12개월 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）도 필 요로 하지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 약 10개월 동안 어떠한 구제 요법 치료(예 를 들어, 아플리베르셉트 주사）도 필요로 하지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체 는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 약 7 개월 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）도 필요로 하 지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 약 6개월 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어， 아플리베르셉트 주사）도 필요로 하지 않는다. 일부 실시양태에서， 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 약 2개월 동안 어 떠한 구제 요법 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）도 필요로 하지 않는다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 약 1개월 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어， 아플리베르셉 트 주사）도 필요로 하지 않는다.
일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 50%(예를 들어，적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%， 적어도 약 75%， 적어도 약 80%， 적어도 약 85%， 적어도 약 90%， 적어도 약 95%, 적어도 약 99% 또는 100% 중 어느 것）의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들 어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서，복수 의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 67%(예를 들어， 적어도 약 67%， 적어도 약 70%， 적어도 약 75%， 적어도 약 80%， 적어도 약 85%， 적어도 약 90%， 적어도 약 95%， 적 어도 약 99% 또는 100% 중 어느 것）의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들어，아플 리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서， 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 50%의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및 /또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 78%의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반 대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 80%의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 82%의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자 의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 100%의 개체가 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다.
일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 50%(예를 들어, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99% 또는 100% 중 어느 것）의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주, 예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주, 적어도 약 8주, 적어도 약 12주, 적어도 약 16주, 적어도 약 20주, 적어도 약 24주, 적어도 약 28주, 적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44주， 적어도 약 48주， 적어 도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주， 적어도 약 68주， 적어도 약 72주， 적어도 약 76주， 적어도 약 80주， 적어도 약 84주， 적어도 약 88 주，적어도 약 92주，적어도 약 96주，적어도 약 100주，적어도 약 104주，적어도 약 108주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어，아를리베 르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서， 복수의 개체의 한 쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 50%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 약 52주 이상 또는 약 56주 이상 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않 도록 한다. 일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 67%(예를 들어， 적어도 약 67%， 적어도 약 70%， 적어도 약 75%， 적어도 약 80%， 적어도 약 85%， 적어도 약 90%， 적어도 약 95%， 적어도 약 99% 또는 100% 중 어느 것）의 개체 가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주， 적어도 약 24주， 적어도 약 28주， 적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어 도 약 40주， 적어도 약 44주， 적어도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주， 적어도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 78%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주, 예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주, 적어도 약 8주, 적어도 약 12주, 적어도 약 16주, 적어도 약 20주, 적어도 약 24주, 적어도 약 28주, 적어도 약 32주, 적어도 약 36주, 적어도 약 40주, 적어도 약 44주, 적어 도 약 48주, 적어도 약 52주, 적어도 약 56주, 적어도 약 60주, 적어도 약 64주, 적어도 약 68주, 적어도 약 72주, 적어도 약 76주, 적어도 약 80주, 적어도 약 84 주, 적어도 약 88주, 적어도 약 92주, 적어도 약 96주, 적어도 약 100주, 적어도 약 104주, 적어도 약 108주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예 를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하 는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 78%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 약 20주 이 상 또는 약 36주 이상 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 80%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주, 예를 들어 rAAV 입자의 투 여 후 적어도 약 20주, 적어도 약 24주, 적어도 약 28주, 적어도 약 32주, 적어도 약 36주, 적어도 약 40주, 적어도 약 44주, 적어도 약 48주, 적어도 약 52주, 적어 도 약 56주, 적어도 약 60주, 적어도 약 64주, 적어도 약 66주 또는 그 초과 중 어 느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 적어도 약 82%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주， 적어도 약 24주， 적어도 약 28주， 적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44주，적어도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주，적어도 약 64주， 적어도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 100%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，적어도 약 24주， 적어도 약 28주， 적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44 주， 적어도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주，적어도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들 어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서，복수 의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 100%의 개체가 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주，예를 들 어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주，적어도 약 8주，적어도 약 12주，적어도 약 16주，적어도 약 20주，적어도 약 24주，적어도 약 28주，적어도 약 32주，적어 도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44주， 적어도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주， 적어도 약 68주， 적어도 약 72 주， 적어도 약 76주， 적어도 약 80주， 적어도 약 84주， 적어도 약 88주， 적어도 약 92주，적어도 약 96주，적어도 약 100주，적어도 약 104주，적어도 약 108주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반 대쪽 눈에 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것은 복수의 개체 중 100%의 개 체가 rAAV 입자의 투여 후 약 64주 이상, 72주 이상 또는 84주 이상 중 어느 것 동 안 항-VEGF 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하지 않도록 한 다.
일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구 제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 78% 이하(예를 들어, 약 78% 이하, 약 75% 이하, 약 70% 이하, 약 65% 이하, 약 60% 이하, 약 55% 이하, 약 50% 이하, 약 45% 이하, 약 40% 이하, 약 35% 이하, 약 30% 이하, 약 25% 이하, 약 20% 이하, 약 15% 이하, 약 10% 이하, 약 5% 이하, 약 2.5% 이하, 약 1% 이하 또는 약 0.5% 이하 중 어느 것）이도록 한다. 일부 실시 양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구제 치료(예를 들어, 아플 리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 50% 이하(예를 들어, 약 50% 이하, 약 45% 이하, 약 40% 이하, 약 35% 이하, 약 30% 이하, 약 25% 이하, 약 20% 이하, 약 15% 이하, 약 10% 이하, 약 5% 이하, 약 2.5% 이하, 약 1% 이하 또는 약 0.5% 이하 중 어느 것）이도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈 및/ 또는 반대쪽 눈에서 임의의 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 30% 미만(예를 들어，약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 약 2.5%, 약 1% 또는 약 0.5% 중 어느 것 미만）이도록 한다. 일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구제 치료(예를 들 어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 30% 미만이도 록 한다. 일부 실시양태에서， 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구제 치 료(예를 들어， 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 20% 미만이도록 한다. 일부 실시양태에서， 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의 의 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개 체 중 0%이도록 한다.
일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주，적어도 약 8주，적어도 약 12주，적어도 약 16주，적어도 약 20주，적어도 약 24주，적어도 약 28주，적어도 약 32주，적어 도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44주， 적어도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주， 적어도 약 68주， 적어도 약 72 주， 적어도 약 76주， 적어도 약 80주， 적어도 약 84주， 적어도 약 88주， 적어도 약92주, 적어도 약 96주, 적어도 약 100주, 적어도 약 104주, 적어도 약 108주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 임의의 구제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 78% 이하（예를 들어, 약 78% 이하, 약 75% 이하, 약 70% 이하, 약 65% 이하, 약 60% 이하, 약 55% 이하, 약 50% 이하, 약 45% 이하, 약 40% 이하, 약 35% 이하, 약 30% 이하, 약 25% 이하, 약 20% 이하, 약 15% 이하, 약 10% 이하, 약 5% 이하, 약 2.5% 이하, 약 1% 이하 또는 약 0.5% 이하 중 어느 것）이도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주, 예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주, 적어도 약 24주, 적어도 약 28주, 적어도 약 32주, 적어도 약 36주, 적어도 약 40주, 적어도 약 44주, 적어도 약 48주, 적어도 약 52주, 적어도 약 56주, 적어도 약 60주, 적어도 약 64주, 적어 도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 임의의 구제 치료(예를 들어, 아플리베 르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 30% 미만(예를 들어, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 약 2.5%, 약 1% 또는 약 0.5% 중 어 느 것 미만）이도록 한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반 대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주, 예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주, 적어도 약 24주, 적어도 약 28주, 적어도 약 32주, 적어도 약 36주, 적어도 약 40주, 적어도 약 44주, 적어도 약 48주, 적어도 약 52주, 적어도 약 56주, 적어도 약 60주, 적어도 약 64주, 적어 도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 30% 미만이도록 한다. 일부 실시양태에서， 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，적어도 약 24주，적어도 약 28주， 적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44주， 적어 도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주， 적어도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 약 20% 미만이도록 한다. 일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/ 또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 투여 후 적 어도 약 20주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 20주，적어도 약 24주， 적어도 약 28주， 적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44 주， 적어도 약 48주， 적어도 약 52주， 적어도 약 56주， 적어도 약 60주， 적어도 약 64주， 적어도 약 66주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 서 임의의 구제 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복 수의 개체 중 0%이도록 한다. 일부 실시양태에서，복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주，예를 들어 rAAV 입자의 투여 후 적어도 약 4주，적어도 약 8주，적어도 약 12주，적어도 약 16주，적어도 약 20주，적어도 약 24주，적어도 약 28주，적어도 약 32주， 적어도 약 36주， 적어도 약 40주， 적어도 약 44주， 적어도 약 48주， 적어 도 약 52주, 적어도 약 56주, 적어도 약 60주, 적어도 약 64주, 적어도 약 68주, 적어도 약 72주, 적어도 약 76주, 적어도 약 80주, 적어도 약 84주, 적어도 약 88 주, 적어도 약 92주, 적어도 약 96주, 적어도 약 100주, 적어도 약 104주, 적어도 약 108주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 임의의 구 제 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 개체가 복수의 개체 중 0%이도록 한다.
일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 평균 연 간 항-VEGF 주사 비율과 비교하여 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 87%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99% 또는 100% 중 어느 것의 평균 연간 항-VEGF 주사 비율의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 평균 연간 항-VEGF 주사 비율과 비교하여 약 87% 이상의 평균 연간 항-VEGF 주사 비율의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 복수의 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 평균 연간 항-VEGF 주사 비율과 비교하여 100%의 평균 연간 항- VEGF 주사 비율의 감소를 유발한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 평균 연간 항 -VEGF 주사 비율은 하기 식에 따라 계산된다:
rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 연간 비율 = （rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 12개월 내 항-VEGF 주사 횟수） / （rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 지난 12개월 내 제1 항-VEGF 주사로부터 rAAV 입자의 단위 용량의 투여까지의 일수 / 365.25）
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 평균 연간 항 -VEGF 주사 비율은 하기 식에 따라 계산된다:
rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 연간 비율 = （rAAV 입자의 단위 용량의 투여 이후 항-VEGF 주사 횟수） / （rAAV 입자의 단위 용량의 투여로부터의 일수 / 365.25）.
일부 실시양태에서， 개체가 rAAV 입자의 투여 전에 rAAV 입자가 투 여되는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 BCVA(예를 들어，ETDRS 프로토콜을 사용 함）와 비교하여，rAAV 입자가 투여된 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 BCVA의 10개 이상의 문 자의 상실을 나타내는 경우에，개체는 rAAV 입자의 투여 후에 구제 치료(예를 들 어，항-VEGF 유리체내 주사，예컨대 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서， 개체가， rAAV 입자가 투여된 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 AMD로 인해 시각-위협 출혈을 나타내는 경우, 개체는 rAAV 입자의 투여 후에 구제 치료（예를 들어, 항-VEGF 유리체내 주사, 예컨대 아플리베르셉트 주사）를 필요로 하는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서, 구제 치료는 표준 관리 항-VEGF 요법의 투여를 포함한다. 이러한 표준 관리 항-VEGF 요법은 1회 이상의 항-VEGF 치료(예를 들어, 항-VEGF 유리체내 주사）를 포함한다. 일부 실시양태에서, 구제 치료는 1회 이상의 아플리베르셉트 IVT 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 구제 치료는 약 2 mg의 아플리베르셉트를 포함하는 1회 이상의 아플리베르셉트 IVT 주사를 포함한다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 색소 상피 박리(PED)와 비교한 PED 의 해소에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 PED와 비교하여 한 쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 PED의 해소가 관찰 되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서，안구 질환은 녹내장(예를 들어, 신생혈관 녹내장)이다.
일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환(예컨대, 치료의 진행)의 치료는 플루오레세인 혈관조영에 의해 결정된 맥락막 신생혈관화(CNV) 병변 성장에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료는 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 한쪽 눈 및/ 또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 (예를 들어，약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 100% 중 어느 것 초과만큼) 수축하는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서，한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료는 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후에 성장하지 않는 （예를 들어, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 15% 또는 약 20% 중 어느 것 미만으 로 성장하는） 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 질환은 녹내장(예를 들어, 신생혈관 녹내장)이다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 관련 기술분야에 공지 된 임의의 방법（예를 들어, SD-OCT, OCT, 플루오레세인 혈관조영, 디지털 컬러 안 저 촬영 등）에 기초한 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색에 기초하여 평 가된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특 색의 개선이 관찰되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 질환은 녹내장(예를 들어, 신생혈관 녹내장)이다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 질환의 치료(예컨대, 치료의 진행)는 안과 검사, 안내압(예 를 들어, 골드만（Goldmann） 압평 안압측정계 또는 토노-펜（Tono-pen）을 사용함）, 간접 검안경검사, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 및 부속기의 검사, 안검 및/또는 동 공 반응성, 안검하수, 비정상적 동공 형상, 불균등 동공, 광에 대한 비정상적 반응, 구심신경 동공 결손, 슬릿-램프 검사(안검, 결막, 각막, 수정체, 홍채 및 전방에 대한 것 포함）, 유리체, 시신경, 주변 망막 및 망막 혈관계의 후안부 이상, SD-OCT, 플루오레세인 혈관조영，디지털 컬러 안저 촬영(망막，시신경 유두 및/또 는 황반의 영상 포함)，방수 샘플링，유리체액 샘플링，OCT-혈관조영(OCT-A), 굴절 및/또는 시력(BCVA)에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서，안구 질환은 녹내장(예를 들어, 신생혈관 녹내장)이다.
rAAV 입자의 단위 용량은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의 해 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여될 수 있다. 예를 들어，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 안내로 또는 유리체내 주사에 의 해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 안내 투여이다. 일부 실시양태에서， 개체 의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 주사(IVT) 또는 망막하 주사에 의한 것이다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 IVT 주사에 의한 것 이다. 일부 실시양태에서，유리체내 주사에 의해 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하 는데 무균 기술이 사용된다. 일부 실시양태에서，유리체내 주사에 의해 rAAV 입자 의 단위 용량을 투여하는데 프로비돈-아이오딘을 사용한 무균 기술이 사용된다.
일부 실시양태에서，개체는 안구 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 안구 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서，개체는 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN- 90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 선행 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다. 일부 실시 양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 선행 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다.
스테로이드 치료
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 스테로이드 치료와 조 합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 코르티코스테로이드 치 료이 다. 예시적인 코르티코스테로이드는 비제한적으로 알클로메타손, 암시 노니 드, 베 클로메 타손 , 베 타메 타손 , 부데 소니 드 , 시 클레 소니 드 , 클로베 타솔 , 클로베 타손 , 클로코르톨론 , 클로프레 드놀 , 코르티 바졸 , 데 플라자코르트 , 데옥시 코르티 코스테 론 , 데 소니 드 데 스옥시 메 타손 , 텍사메 타손 , 디 플로라손 , 디 플루코르톨론 , 디 플루프레 드 네 이트, 플루클로를론 , 플루드로코르티손 , 플루드록시코르티드 , 플루메타손 , 플루 니 솔리 드 , 플루오시 놀론 아세토니 드 , 플루오시 노니 드 , 플루오코르틴 , 플루오코르톨 론 , 플루오로메톨론 , 플루페를론 , 플루티 카손 , 푸프레드니 덴 , 포르모코르탈 , 할시 노니드，할로메타손，히드로코르티 손 아세포네 이트，히드로코르티 손 부테프레 이트， 히드로코르티 손 부티 레 이트，로테프레드놀，메드리손，메프레드니손，메 틸프레드니 솔론，메틸프레드니 솔론 아세포네 이트，모메타손 푸로에 이트，파라메타손，프레드 니 카르베이트，프레드니손，프레드니솔론，프레드닐리 덴，리 멕솔론，틱소코르톨， 트리암시놀론 및 울로베타솔을 포함한다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 경구 스테로이 드 치료이다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서，안과용 스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료(예를 들어，점안제），안구주위 스테로이드 치료(예를 들어，테논낭하，결막하）， 유리체내 스테로이드 치료 또는 맥락막상 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에 서， 국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료， 메드리손 치료， 로테프레드 놀 치료， 프레드니솔론 치료， 플루오시놀론 치료， 트리암시놀론 치료， 리멕솔론 치 료，텍사메타손 치료，플루오로메톨론 치료，플루오시놀론 치료，리멕솔론 치료 또 는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서，안과용 스테로이드 치료는 디를루프 레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서，스테로이드 치료는 프레드니손 치료이 다. 일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다.
일부 실시양태에서， 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료 및 국 소 스테로이드 치료를 포함한다. 일부 실시양태에서， 전신 스테로이드 치료는 경 구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서， 전신 스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서， 국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료 이다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료 및 국소 스테로이드 치료는 동시 에(예를 들어, 동일한 날에） 투여된다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치 료 및 국소 스테로이드 치료는 개별적으로（예를 들어, 상이한 날에） 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 경구 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 경구 프레드니손 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 개시된다. 일부 실시양태에서, 초기 경구 프레드니손 치료는 rAAV 입자의 단위 용 량을 투여하기 약 7일，약 6일，약 5일，약 4일，약 3일，약 2일，약 1일 또는 0일 중 어느 것 전 1일에 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg 또는 약 70 mg의 프레드니손 중 어느 것의 용량으로 투여되고，약 3일，약 4일， 약 5일，약 6일，약 7일，약 8일，약 9일 또는 약 10일 또는 그 초과 중 어느 것 동안 계속된다. 일부 실시양태에서，초기 경구 프레드니손 치료는 rAAV의 단위 용 량을 투여하기 약 3일 전 1일에 약 60 mg의 프레드니손의 용량으로 투여되고，약 3 일 동안 계속된다.
일부 실시양태에서，초기 경구 프레드니손 치료 후에 경구 프레드니 손 치료 용량 점감이 이어진다. 일부 실시양태에서，경구 프레드니손 치료 용량 점감은 총 약 1일，약 2일，약 3일，약 4일，약 5일，약 6일 또는 약 7일 중 어느 것 동안 1일에 약 20 mg， 약 25 mg， 약 30 mg， 약 35 mg， 약 40 mg， 약 45 mg 또는 약 50 mg의 프레드니손 중 어느 것의 용량으로 투여되고，이어서 약 1일，약 2일， 약 3일 또는 약 4일 중 어느 것 동안 1일에 약 10 mg， 약 15 mg， 약 20 mg 또는 약 25 mg의 프레드니손의 용량으로 투여되고，이어서 약 1일，약 2일，약 3일 또는 약 4일 동안 1일에 약 5 mg，약 10 mg 또는 약 15 mg의 프레드니손의 용량으로 투여된 다. 일부 실시양태에서，프레드니손 용량 점감은 3일 동안 1일에 약 40 mg의 프레 드니손의 용량，이어서 2일 동안 1일에 약 20 mg의 프레드니손의 용량，이어서 2일 동안 1일에 약 10 mg의 프레드니손의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서，초기 경구 프레드니손 치료는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 3일 전에 총 6일 동안 1일에 60 mg의 프레드니손 용량，이어서 총3일 동안 1일에 40 mg의 프레드니손 용량, 이어서 2일 동안 1일에 20 mg의 프레드 니손 용량, 이어서 2일 동안 1일에 10 mg의 프레드니손 용량으로 개시된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치 료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료 는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로 이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 동안 투여된다. 일 부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 후 에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투 여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입 자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료, 예를 들어 국소 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료, 예를 들어 국소 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 최대 4주, 최 대 6주, 최대 8주, 최대 3개월, 최대 4개월, 최대 5개월 또는 최대 6개월 동안의 매일 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 제1주 에 국소 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 국소 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 국소 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 국소 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후 이다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 약 3주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉，TID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉，BID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로 이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포함한다. 일부 실시양태에서，안과용 스테로이드 치료는 치료 의사의 판단에 따라 연장된다.
일부 실시양태에서，안과용 스테로이드는 약 0.005% 내지 약 0.5% 디플루프레드네이트이다. 일부 실시양태에서，안과용 스테로이드는 약 0.005%，약 0.006%, 약 0.007%， 약 0.008%， 약 0.009%， 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.4%， 약 0.05%， 약 0.06%， 약 0.07%， 약 0.08%， 약 0.09% 또는 약 0.1% 디플루프 레드네이트 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서，안과용 스테로이드는 디를루프레 드네이트 0.05%이다. 일부 실시양태에서，디플루프레드네이트 0.05%의 용량은 안 과용 용액 한 방울이다. 일부 실시양태에서，한 방울은 약 50 μl(예를 들어，약 25 μl 내지 약 50 μl 또는 약 50 μl 내지 약 100 μl）이다. 일부 실시양태에서，디플루프레드네이트의 용량은 약 1 μg 내지 약 5 μg 또는 약 2 μg 내지 약 3 μg 또는 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태 에서，디플루프레드네 이트의 용량은 약 2.5 μg 디플루프레드네 이트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 7주 국소 스테로이드 치료, 예를 들어 0.05% 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 4주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉, QID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉, TID）, 이어서 약 1 주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID）, 이어서 약 1주 동안 1일 에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉, QD）를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 1주 전에 시작한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 28일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉, QID）, 이어서 약 7일 동 안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉, TID）, 이어서 약 7일 동안 1일에 국 소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID）, 이어서 약 7일 동안 1일에 국소 스테로이 드의 약 1회 투여(즉, QD）를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 7일 전에 시작한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 제1일 내지 약 제28일에 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉, QID）, 이어서 약 제29일 내지 약 제35일에 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉, TID）, 이어서 약 제36일 내지 약 제42일에 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID）, 이어서 약 제 43일 내지 약 제49일에 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉, QD）를 포함하며; 시기는 제1일에 시작한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 염증이 존재하는 경우에 계속된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 치료 방법은 개체의 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전에 개체의 한쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르셉트 IVT 주사）를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 7일 또는 약 1주 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 약 제1일에 투여되고, rAAV 입자의 단 위 용량은 약 제8일에 투여된다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 7주 국소 스테로이드 치료, 예를 들어 0.05% 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실 시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 4주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉, QID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉, TID）, 이어서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID）, 이어 서 약 1주 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉, QD）를 포함하며; 시기 는 항-VEGF 작용제의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 28일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉, QID）, 이어서 약 7일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉, TID）, 이어서 약 7 일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID）, 이어서 약 7일 동안 1일 에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉, QD）를 포함하며; 시기는 항-VEGF 작용제의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 제 1일 내지 약 제28일에 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉, QID）, 이어서 약 제29일 내지 약 제35일에 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉, TID）, 이어서 약 제36일 내지 약 제42일에 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID）, 이 어서 약 제43일 내지 약 제49일에 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉, QD） 를 포함하며; 시기는 제1일에 시작한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치 료는 염증이 존재하는 경우에 계속된다.
일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 4개월 국소 스테로이드 치료，예를 들어 0.05% 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉， QID）, 이어서 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉，TID）, 이 어서 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉，BID）, 이어서 약 1 개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 1주 전에 시작한다. 일부 실시양태에서， 국소 스테로이드 치료는 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉，TID）, 이어서 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉，BID）, 이어서 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 7일 전에 시작한다. 일부 실시양태에서， 국소 스테로이드 치 료는 제1일 내지 약 제30일에 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 제31일 내지 약 제60일에 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉， TID）, 이어서 약 제61일 내지 약 제90일에 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉，BID）, 이어서 약 제91일 내지 약 재120일에 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포함하며; 시기는 제1일에 시작한다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 염증이 존재하는 경우에 계속된다.
일부 실시양태에서，본원에 제공된 치료 방법은 개체의 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전에 개체의 한쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트 IVT 주사）를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서， 항-VEGF 작용제는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 7일 또는 약 1주 전에 투여된 다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제는 약 제1일에 투여되고，rAAV 입자의 단 위 용량은 약 제8일에 투여된다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 4개 월 국소 스테로이드 치료，예를 들어 0.05% 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉，TID）, 이어서 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉， BID）, 이어서 약 1개월 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포 함하며; 시기는 항-VEGF 작용제의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양 태에서， 국소 스테로이드 치료는 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉， TID）， 이어서 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉， BID）， 이어서 약 30일 동안 1일에 국소 스테로이드의 약 1회 투여(즉，QD）를 포함하며; 시기는 항-VEGF 작용제의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서，국소 스테로이드 치료는 제1일 내지 약 제30일에 1일에 국소 스테로이드의 약 4회 투여(즉，QID）, 이어서 약 제31일 내지 약 제60일에 1일에 국소 스테로이드의 약 3회 투여(즉，TID）, 이어서 약 제61일 내지 약 제90일에 1일에 국소 스테로이드의 약 2회 투여(즉, BID), 이어서 약 제91일 내지 약 제120일에 1일에 국소 스테로이드 의 약 1회 투여(즉, QD)를 포함하며; 시기는 제1일에 시작한다. 일부 실시양태에 서, 국소 스테로이드 치료는 염증이 존재하는 경우에 계속된다.
트랜스진을 표적 세포에 전달하기 위한 벡터
일부 실시양태에서, 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자는 대 상체(예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류)에서 복제-결손이도록 변경된 아데노- 연관 바이러스(AAV)로부터 유래된 재조합 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 아데노-연관 바이러스(AAV)는 재조합 AAV(rAAV)이다.
AAV 또는 rAAV는 작은 비-외피보유 단일-가닥 DNA 바이러스이다. rAAV는 비-병원성 인간 파르보바이러스이고, 복제를 위해 아데노바이러스, 단순 포 진 바이러스, 백시니아 바이러스 및 CMV를 포함한 헬퍼 바이러스에 의존성이도록 제조될 수 있다.
야생형(wt) AAV에 대한 노출은 임의의 인간 병리상태를 유발하는 것과 연관되지 않거나 유발하는 것으로 공지되어 있지 않고, 일반적 집단에서 통상 적이므로, AAV 또는 rAAV는 유전자 요법에 적합한 전달 시스템이다. 항-VEGF 작용 제, 예를 들어 아플리베르셉트의 전달을 위한 유전자 요법에 사용된 AAV 및 rAAV는 임의의 혈청형의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은 AAV1, AAV2, AAV2.5, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, rh10, AAV-DJ 및 그의 임의의 하이브리드 또는 키메라 AAV를 포함한 임의의 적합한 AAV 혈청형의 사용을 제공한다. 일부 실시양태에서, 사용된 혈청형은 바이러스의 향성 또는 관심 표적 세포의 감염성에 기초한다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작 용제 트랜스진(예를 들어，아플리베르셉트 트랜스진）과 함께 사용하기 위한 가장 최적의 혈청형의 선택을 가능하게 하는 여러 AAV 벡터가 생성될 수 있다.
일부 실시양태에서，본 개시내용의 방법은 위형화 AAV의 사용을 제 공한다. 위형화 AAV 입자는 하나의 AAV 혈청형의 AAV 게놈 역전된 말단 반복부(ITR）가 또 다른 AAV 혈청형의 AAV 캡시드에 의해 캡시드화된 것을 포함한다. 전 형적으로，위형화 AAV는 "AAV#/#"로 지정되며，여기서 첫번째 은 AAV ITR 혈청 형을 나타내고，두번째 은 캡시드 혈청형을 나타낸다. 예를 들어，AAV2 ITR 및 AAV1 캡시드를 포함하는 AAV 입자는 "AAV2/1"로 지정될 것이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 핵산，예를 들어 이종 핵산을 포함 한다. 일부 실시양태에서，핵산은 트랜스진，예를 들어 항-VEGF 작용제(예를 들 어，아플리베르셉트）를 코딩한다. 일부 실시양태에서，코딩된 트랜스진，예를 들 어 항-VEGF 작용제는 핵산의 전사를 개시하는 프로모터의 전사 제어 하에 있다. 일부 실시양태에서，프로모터는 ''편재성'' 프로모터이다. 일부 실시양태에서，프로 모터는 ''강한'' 또는 구성적으로 활성인 프로모터，예를 들어 시토메갈로바이러스(CMV） 프로모터，신장 인자 1 알파(EFla） 프로모터，글리세르알데히드 3-포스페이 트 데히드로게나제(GAPDH） 프로모터 또는 코넥신36(또는 "Cx36"） 프로모터이다. 일부 실시양태에서，프로모터는 특이적 조직 또는 세포，예컨대 망막 세포에서 활 성화되어 비-표적화 세포에 대한 잠재적 독성 또는 바람직하지 않은 효과를 감소시 키는 조직-특이적 프로모터이다. 일부 측면에서，항-VEGF 작용제 트랜스진(예를 들어, 아플리베르셉트 트랜스진）과 함께 사용하기 위한 가장 최적의 혈청형 및 프 로모터의 선택을 가능하게 하는 여러 AAV 벡터가 생성될 수 있다. 일부 실시양태 에서, 핵산에 AAV 역전된 말단 반복부(ITR）가 플랭킹된다. 일부 실시양태에서, 핵산에 AAV2 ITR가 플랭킹된다.
일부 실시양태에서, AAV 벡터는 표적 세포(예를 들어, 망막 세포） 에서의 트랜스진(예를 들어, 항-VEGF 작용저예컨대 아플리베르셉트）의 증진된 발현을 위한 폴리뉴클레오티드 카세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클 레오티드 카세트는 5'에서 3' 순서로 （a） CMV 서열(서열식별번호: 22）을 포함하는 제1 인핸서 영역; （b） CMV 서열(서열식별번호: 23）을 포함하는 프로모터 영역; （c） 5'에서 3' 순서로 TPL 및 eMLP 서열(각각 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 25）을 포함하는 5'UTR 영역; （d） 펩티드 또는 폴리펩티드(예를 들어, 항-VEGF 작 용제, 예컨대 아플리베르셉트）를 코딩하는 코딩 서열; （e） 전체 EES 서열(서열식 별번호: 26）을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 （f） HGH 폴리아데닐화 부위(서열식 별번호: 27）를 포함한다. 이들 중 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세트는 서열식별번호: 28-32 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열로부터 선택된 1개 이상의 서열을 포함한다. 이들 중 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세 트의 5' 아암은 서열식별번호: 33 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 그로 이루어진다. 이들 중 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세트의 3' 아암은 서열식별번호: 34 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 그로 이루어진다. 서열식별번호: 22 내지 34의 핵산 서열은 하기에 제공된다.
일부 실시양태에서，폴리뉴클레오티드 카세트는 서열식별번호: 39 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 그로 이루어진다.
상기 제시된 서열식별번호: 39는 5'에서 3' 방향으로， 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 1-145를 포함하는 AAV 혈청형 2의 역전된 말단 반복부(ITR); 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 180-693을 포함하는 CMV 프로모터; 아데노바이러스 3부 리더 서열 및 합성 인트론을 포함하고 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 694-1314를 포함하는 5' 비번역 영역(UTR); 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 1329-1340을 포함하는 코작 서열; 서열식별번호:39의 뉴클레오티드 1338-2714를 포함하는 코돈-최적화된 아플리베르셉트 cDNA 서열; 인간 스캐폴드 부착 영역을 포함하고 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 2717-3527을 포함하는 3' UTR; 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 3546-3748을 포함 하는 인간 성장 호르몬 폴리아데닐화/전사 정지 신호; 및 서열식별번호: 39의 뉴클레오티드 3772-3916을 포함하는 AAV 혈청형 2의 역전된 말단 반복부(ITR)를 포함한다.
표적 세포(예컨대 망막 세포)에서 트랜스진(예를 들어，항-VEGF 작용제，예컨대 아플리베르셉트를 코딩하는 트랜스진)의 증진된 발현을 위한 추가 의 폴리뉴클레오티드 카세트는 WO2018/170473에 개시되어 있으며，표적 세포에서 트랜스진의 증진된 발현을 위한 폴리뉴클레오티드 카세트에 관한 그의 내용은 본원 에 참조로 포함된다.
일부 측면에서, 본 발명은 개체에서 녹내장을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 개체의 한쪽 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 측면에서, 본 발명은 개체의 안내압을 감소시키기 위한 방법을 제공하며, 방법은 개체의 한쪽 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은 AAV1, AAV2, AAV2.5, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, rh10, AAV-DJ 및 그의 임의의 하이브리드 또는 키메라 AAV를 포함한 임의의 적합한 AAV 혈청형의 사용을 제공한다.
일부 실시양태에서， rAAV 입자는 표적 세포， 예를 들어 망막 세포의 증가된 감염성을 갖는 변이체 캡시드 단백질을 포함하고，개체에서 망막 세포의 형 질도입을 증가시키거나 또는 망막 세포로의 유전자 전달의 표적화를 증가시키는데 사용된다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 AAV 캡시드 단백질의 캡시드 단백질 GH 루프/루프 IV에 아미노산 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서，변형 부위는 AAV 캡시드 단백질의 GH 루프/루프 IV의 용매-접근가능한 부분이다. AAV 캡시드의 GH 루프/루프 IV의 설명에 대해서는，예를 들어 문헌 [van Vliet et al. (2006) Mol. Ther. 14:809; Padron et al. (2005) J. Virol. 79:5047; 및 Shen et al. (2007) Mol. Ther. 15:1955]을 참조한다. 7m8 변이체를 포함한 여러 AAV 캡시드 변이체가 공지되어 있다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 상응하는 모 AAV 캡시 드 단백질에 비해 캡시드 단백질의 GH 루프에 5개 아미노산 내지 11개 아미노산， 예를 들어 7개 아미노산 서열의 삽입을 포함하는 변이체 AAV 캡시드 단백질을 포함 하고，여기서 변이체 캡시드 단백질은 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자에 의한 망막 세포의 감염성과 비교하여 망막 세포의 증가된 감염성을 부여한다. 일부 실시양태에서, 하기 아미노산 서열 중 어느 하나가 캡시 드 단백질의 GH 루프에 삽입될 수 있다: LALGETTRPA（서열식별번호: 1）; LANETITRPA（서열식별번호: 2）, LAKAGQANNA(서열식별번호: 3）, LAKDPKTTNA(서열 식 별번호: 4）, KDTDTTR(서 열식 별번호: 5）, RAGGSVG(서 열식 별번호: 6）, AVDTTKF(서열식별번호: 7）, STGKVPN(서열식별번호: 8）, LAKDTDTTRA(서열식별번호: 9）, LARAGGSVGA(서열식별번호: 10）, LAAVDTTKFA(서열식별번호: 11） 및 LASTGKVPNA(서열식별번호: 12）, LGETTRP(서열식별번호: 14）, NETITRP(서열식별번호: 15）, KAGQANN(서열식별번호: 16）, KDPKTTN(서열식별번호: 17）, KDTDTTR（서열식별번호: 18）, RAGGSVG(서열식별번호: 19）, AVDTTKF(서열식별번호: 20） 및 STGKVPN(서열식별번호: 21）. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 1-12 및 14-21에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나가 rAAV 중 VP1 캡시드 단백질의 용매-노출된 GH 루프에 삽입된다. 예를 들어, IVT 주사 후 관심 핵산의 망막 세포로의 형질도 입을 용이하게 하기 위해 캡시드 단백질의 GH 루프 내로 삽입될 수 있는 아미노산 서열에 관한 추가의 세부사항은 WO2012145601, US9587282, US10202657 및US10214785에 제공되어 있으며, 캡시드 단백질의 GH 루프 내로 삽입될 수 있는 아미노산 서열에 관한 그의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 하기 위치: AAV2 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이; AAV1 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이; AAV5 캡시드 단백질의 아미노산 575와 576 사이; AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이; AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이; AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이; AAV9 캡시드 단백질의 아미노산 588과 589 사이; 또는 AAV10 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이에 삽입된 하기 아미노산 서열: LALGETTRPA(서열식별번호: 1）; LANETITRPA(서열식별번호: 2）, LAKAGQANNA(서열 식별번호: 3）, LAKDPKTTNA(서열식별번호: 4）, KDTDTTR(서 열식별번호: 5）, RAGGSVG(서열식별번호: 6）， AVDTTKF(서열식별번호: 7）， STGKVPN(서열식별번호: 8）， LAKDTDTTRA(서열식별번호: 9）， LARAGGSVGA(서열식별번호: 10）， LAAVDTTKFA(서열식별번호: 11） 및 LASTGKVPNA(서열식별번호: 12）， LGETTRP(서열식별번호: 14）, NETITRP(서열식별번호: 15）, KAGQANN(서열식별번호: 16）, KDPKTTN(서열식 별번호: 17）， KDTDTTR(서열식별번호: 18）， RAGGSVG(서열식별번호: 19）， AVDTTKF(서열식별번호: 20） 및 STGKVPN(서열식별번호: 21） 중 어느 하나를 포함하는 AAV 캡시드 단백질， 예를 들어 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아 미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이의 AAV2 VP1 단백질의 GH 루프에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2로부터의 7m8 변이체 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양 태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 38에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 GH 루프를 포함 하는 AAV2 VP1 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열 식별번호: 38에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성 중 어느 것을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 GH 루프를 포함하는 AAV2 VP1 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2로부터의 7m8 변이체 캡시드 단백질을 포함한다. AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아 미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 AAV2로부터의 7m8 변이체 캡시드 단백질의 서열은 하기에 제공된다:
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는， 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노 산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14）를 포함하는 캡시드 단백질 VP1을 포함한다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질 에 상응하는， 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14）를 포함하는 캡시드 단백질 VP2를 포함한다. 일부 실 시양태에서， rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응 하는， 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서 열식별번호: 14）를 포함하는 캡시드 단백질 VP3을 포함한다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자는 캡시드 단백질 VP1, VP2 및 VP3을 포함하며，여기서 각각의 VP1, VP2 및 VP3은 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14）를 포함하고， 여기서 아미노산 잔기 넘버링은 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노 산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 캡시드 단백질 VP1을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질 에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 캡시드 단백질 VP2를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상 응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 캡시드 단백질 VP3을 포함한다. 일부실시양태에서, rAAV 입자는 캡시드 단백질 VP1, VP2 및 VP3을 포함하며, 여기서 각 각의 VP1, VP2 및 VP3은 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하고, 여기서 아미노산 잔기 넘버링은 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응한다.
일부 실시양태에서, rAAV 바이러스를 생성하는데 사용된 재조합 바 이러스 및/또는 플라스미드는 다른 전사 또는 조절 요소, 예컨대 폴리 A(폴리아데 닐화） 서열, 비번역 영역(UTR）, 3' UTR 또는 종결 서열을 포함한다. 일부 실시양 태에서, 1개 초과의 유전자는 내부 리보솜 진입 부위(IRES） 또는 2개 이상의 단백 질의 공동-발현을 가능하게 하거나 다유전자 또는 폴리시스트론 mRNA를 생성하는 유사한 요소를 사용하여 벡터 또는 플라스미드로부터 발현된다.
일부 실시양태에서，rAAV 및/또는 rAAV를 생성하는데 사용된 플라스 미드는 하기 핵산 요소 중 1종 이상을 포함한다: 제1 ITR 서열; 프로모터 서열; 인트론 서열; 제1 UTR 서열; 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 이종 핵산; 제2 UTR 서열; 폴리A 서열; 및 제2 ITR 서열. 일부 실시양태에서， 링커 서열（들）은 핵산 요소들 중 2종 이상 사이에 삽입된다. 일부 실시양태에서， 이종 핵산은 치료 폴리펩티드를 코딩하며，예를 들어 아플리베르셉트(또는 그의 기능적 단편 또는 기능적 변이체）를 코딩한다.
일부 실시양태에서，벡터는 표적화 벡터，특히 특이적 세포，예컨대 망막 세포(예를 들어，광수용처L 망막 신경절 세포，뭘러 세포，양극성 세포，무 축삭 세포，수평 세포 또는 망막 색소 상피 세포）의 보다 높은 감염성을 나타내는 표적화 rAAV(예를 들어，AAV2.7m8）이다. 본 개시내용에 사용하기 위한 바이러스 벡터는 개체에서 낮은 독성 및/또는 낮은 면역원성을 나타내고 개체，예를 들어 인 간에서 치료 유효량의 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 발현하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어 본원 다른 곳에 기재된 제약 조성물의 제조를 위한 재조합 바이러스(예를 들어，rAAV）의 생화학적 정제에 관련 기술분야에 공지된 임 의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 재조합 AAV 바이러스는 세포로부터 또는 세 포를 포함하는 배양 배지로부터 직접 수거될 수 있다. 바이러스는 다양한 생화학적 수단，예컨대 겔 여과，여과，크로마토그래피，친화도 정제，구배 초원심분리 또는 크기 배제 방법을 사용하여 정제될 수 있다. 일부 실시양태에서，바이러스는 동결건조된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 7m8 변이체 캡시드 단백질, 예를 들어 rAAV2.7m8 및 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 기능적 변이체）를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자(예를 들어, 7m8 변이체）는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질 을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100% 중 어느 것의 망막 세포 감염성의 증가를 갖는다. 일부 실시양 태에서, 망막 세포의 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질 을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 5% 내지 100%, 5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내 지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15% 또는 5% 내지 10% 중 어느 것의 증가이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 망막 세포 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자 와 비교하여 적어도 1배, 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.3배, 적어도 1.4 배, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배 또는 적어도 2배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 감염성의 증가는 상응하는 모 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 2배, 적어도 3배, 적어 도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 또는 적어 도 10배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 15배，적어도 20배，적어도 25배，적어도 30배，적어도 35배，적어도 40배，적어도 45배，적어도 50배， 적어도 55배， 적어도 60배， 적어도 65배， 적어도 70배， 적어도 75배， 적어도 80배，적어도 85배，적어도 90배 또는 적어도 100배 중 어느 것이다.
일부 실시양태에서，rAAV 변이체，예를 들어 rAAV2.7m8의 망막 세포 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자 와 비교하여 10배 내지 100배， 10배 내지 95배， 10배 내지 90배， 10배 내지 85배， 10배 내지 80배， 10배 내지 75배， 10배 내지 70배， 10배 내지 65배， 10배 내지 60 배， 10배 내지 55배， 10배 내지 50배， 10배 내지 45배， 10배 내지 40배， 10배 내지 35배，10배 내지 30배，10배 내지 25배，10배 내지 20배 또는 10배 내지 15배이다.
일부 실시양태에서，망막 세포 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 2배 내지 20배，2배 내 지 19배， 2배 내지 18배， 2배 내지 17배， 2배 내지 16배， 2배 내지 15배， 2배 내지 14배， 2배 내지 13배， 2배 내지 12배， 2배 내지 11배， 2배 내지 10배， 2배 내지 9 배， 2배 내지 8배， 2배 내지 7배， 2배 내지 6배， 2배 내지 5배， 2배 내지 4배 또는 2배 내지 3배이다.
일부 실시양태에서， 본원에 기재된 캡시드 단백질의 아미노산 변형은 대상체의 눈에서 내경계막(ILM)을 횡단하는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자의 능력과 비교하여，개체，예를 들어 인간의 눈에서 ILM을 횡단하는 능력의 증가를 부여할 수 있다. 일부 실시양태에서，rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100% 중 어느 것의 증가이다. 일부 실시양태에서, ILM 횡단 능력의 증가는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질과 비교하여 5% 내지 100%, 5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15%, 또는 5% 내지 10%의 증가이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 1배, 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.3배, 적어도 1.4배, 적어도 1.5 배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배 또는 적어도 2배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 AAV 캡시 드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 또는 적어도 10배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 적어도 30배, 적어도 35배, 적어도 40배, 적어도 45배, 적어도 50배, 적어도 55배, 적어도 60배, 적어도 65배, 적어도 70배, 적어도 75배, 적어도 80배，적어도 85배，적어도 90배 또는 적어도 100배 중 어느 것이다.
일부 실시양태에서，rAAV 변이체，예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 10배 내지 100배，10배 내지 95배，10배 내지 90배，10배 내지 85배，10배 내지 80배， 10배 내지 75배， 10배 내지 70배， 10배 내지 65배， 10배 내지 60배， 10배 내지 55배， 10배 내지 50배， 10배 내지 45배， 10배 내지 40배， 10배 내지 35 배， 10배 내지 30배， 10배 내지 25배， 10배 내지 20배 또는 10배 내지 15배이다.
일부 실시양태에서，rAAV 변이체，예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 2배 내지 20배， 2배 내지 19배， 2배 내지 18배， 2배 내지 17배， 2배 내지 16배， 2배 내지 15배， 2배 내지 14배， 2배 내지 13배， 2배 내지 12배， 2배 내지 11 배， 2배 내지 10배， 2배 내지 9배， 2배 내지 8배， 2배 내지 7배， 2배 내지 6배， 2 배 내지 5배，2배 내지 4배 또는 2배 내지 3배이다.
일부 실시양태에서，아플리베르셉트를 코딩하는 핵산을 포함하는 rAAV.7m8이 유전자 요법에 사용된다. 일부 실시양태에서，AAV2 또는 rAAV2는 항- VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 핵산 서열을 유리체내 또는 망막하 주사를 통해 대상체의 눈 또는 망막 세포 내로 전달하는데 사용된다. 일부 실시양태에서，AAV2 또는 rAAV2는 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 핵산 서열을 유리체내 주사를 통해 대상체의 눈 또는 망막 세포 내로 전 달하는데 사용된다. 일부 실시양태에서，rAAV2.7m8은 항-VEGF 작용제(예를 들어， 아플리베르셉트）의 핵산 서열을 대상체의 망막 세포 내로 전달하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 이종 핵산(예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산）은 표적 세포 게놈(예를 들어, 망막 세포 게놈） 내로 통합되 어, 표적 세포에서, 예를 들어 항-VEGF 작용제(예컨대 아플리베르셉트）의 장기간 발현을 유발한다. 일부 실시양태에서, 바이러스 벡터는 이종 핵산(예를 들어, 항 -VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산）을 포함하는 플라스미드 또 는 다른 염색체의 유전 요소를 표적 세포(예를 들어, 망막 세포）에 전달한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 에 대해 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 적어도 약 100% 중 어느 것의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR）가 플랭킹된 핵산을 포함한 다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR）가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR）가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR）가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 서열식별번호: 35의 서열은 하기에 제공된다:
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 서열식별번호: 36의 핵산 서열에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.9%, 또는 적어도 약 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 갖는 핵산을 포함하고, 여기서 핵산에 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된다. 서열식별번호: 36의 서열은 도 1에 제공된다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 아플리베르셉트의 핵산 서열(예를 들어，서열식별번호: 36)에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%， 적어도 약 95%， 적어도 약 96%， 적어도 약 97%， 적어도 약 98%， 적어도 약 99%, 적어도 약 99.9% 또는 적어도 약 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 갖는 핵산을 포함하고，여기서 핵산에 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 그의 아미노산 서열로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 대상체에서 그의 발현을 개선시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 40의 핵산 서열에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.9% 또는 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 갖는 핵산을 포함하고, 여기서 핵산에 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 40의 핵산 서열을 포함하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 40의 핵산 서열을 포함하는 핵산을 포함하고, 여기서 핵산에 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 100% 중 어느 것의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다.
일부 실시양태에서，아플리베르셉트의 핵산 서열은 영장류 또는 인 간 대상체에서의 발현을 위해 코돈-최적화된다. 아플리베르셉트 아미노산 서열에 상응하는 합성 유전자의 구축은 문헌，예를 들어 [Kanda A, Noda K, Saito W, Ishida S. Aflibercept Traps Galectin-1, an Angiogenic Factor Associated with Diabetic Retinopathy. Scientific Reports 5:17946 （2015）] （"VEGF-TrapR1R2 （아플 리베르셉트에 상응함） cDNA를 IDT （아이오와주 코랄빌）가 합성 유전자로서 생성하 였다''는 것을 기재함）에 기재되었다. 아플리베르셉트의 이용가능한 아미노산 서열을 고려하면서，관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 본원에 기재된 유 전자 요법 또는 rAAV에 사용하기 위한 아플리베르셉트의 cDNA를 생성할 수 있다.
코돈 최적화는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법으로 달성될 수 있다. 코돈 최적화는 천연 서열의 적어도 1개의 코돈(예를 들어，약 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100개 또는 그 초과의 코돈 또는 이보다 많음）을，천연 아 미노산 서열을 유지하면서 숙주 세포에서 보다 빈번하게 사용되거나 또는 가장 빈 번하게 사용되는 코돈으로 대체함으로써, 관심 표적 또는 숙주 세포, 예를 들어 인 간 망막 세포에서의 유전자의 증진된 발현을 위해 핵산 서열을 변형시키는 과정을 지칭한다. 예를 들어, 하기를 포함한 코돈 용법 표가 용이하게 이용가능하다: www(dot)genscript(dot)com/tools/codon-frequency-table 하의 진스크립트(GenScript) 코돈 용법 빈도 표 도구; www(dot)kazusa(dot)or(dot)jp/codon/ 하의 코돈 용법 데이터베이스; 및 문헌 [Nakamura, Y., et al. "Codon usage tabulated from the international DNA sequence databases: status for the year 2000" Nucl. Acids Res. 28:292 (2000)].
상동성은 기능적 단편, 삽입, 결실, 치환을 포함하는 서열, 위단편, 위유전자, 스플라이스 변이체 또는 인공적으로 최적화된 서열을 포함하나 이에 제 한되지는 않는 2개의 서열 사이의 정렬 잔기의 퍼센트 보존을 지칭한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다.
본원에 사용된 "아플리베르셉트"는 상기 확인된 아플리베르셉트 아 미노산 서열(서열식별번호: 35)에 대해 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또 는 그 초과 또는 100% 중 어느 것의 상동성을 갖는 폴리펩티드 또는 단백질 서열 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체 또는 돌연변이체를 지칭한다. 상동성은 기능 적 단편, 삽입, 결실, 치환을 포함하는 서열, 위단편, 위유전자, 스플라이스 변이체 또는 인공적으로 최적화된 서열을 포함하나 이에 제한되지는 않는 2개의 서열 사이의 정렬 잔기의 퍼센트 보존을 지칭한다.
일부 실시양태에서，아플리베르셉트의 아미노산 서열은 서열식별번 호: 35의 아플리베르셉트 아미노산 서열에 대해 적어도 75%， 80%， 81%， 82%， 83%， 84%， 85%， 86%， 87%， 88%， 89%， 90%， 91%， 92%， 93%， 94%， 95%， 96%， 97%， 98%， 99%， 99.9% 또는 100% 중 어느 것 상동이다. 일부 실시양태에서， 본원에 개시된 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산 서열은 상기 확인된 아플리베르셉트 아미노산 서열의 상응하는 cDNA 서열과 비교되고，아플리베르셉트의 핵산 서열(예를 들어，서열식별번호: 36） 사이에 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%， 89%， 90%， 91%， 92%， 93%， 94%， 95%， 96%， 97%， 98%， 99%， 99.9% 또는 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 나타낸다. 일부 실시양태에서，아플리베르셉트는 아플리베르셉트에 대해 (예를 들어，그의 2차，3차 및 4차 구조 또는 입체형태의 관점에서） 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9% 또는 100% 중 어느 것 공간적으로 상동이다. 일부 실시양태에서， 아플리베르셉트는 표준 관리에 사용된 아플리베르셉트에 대해 （예를 들어，2차， 3차 및 4차 구조 또는 입체형태에서） 최대 80%， 85%， 90%， 91%， 92%， 93%， 94%， 95%， 96%， 97%， 98%， 99%， 99.9% 또는 100% 중 어느 것 공간적으로 상동이다.
일부 실시양태에서，본원에 개시된 바와 같은 캡시드 변이체(예를 들어，7m8 변이처1）를 포함하는 rAAV에 기초한 유전자 요법에 포함된 바와 같은 아 플리베르셉트 유전자 생성물 또는 아플리베르셉트 트랜스진은 상기 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 또는 아플리베르셉트의 상응하는 cDNA 서열(예를들어, 서열식별번호: 36과 비교하여 유전자 요법에 사용된 아플리베르셉트 서열의 cDNA) 사이에 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어 도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 100% 중 어느 것의 상동성을 갖 는 단백질, 융합 단백질 또는 폴리펩티드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물은 아플리베르셉트의 기능적 단편 또는 그의 변이체 또는 돌 연변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 그의 생 체내 활성, 발현, 안정성 및/또는 용해도를 증진시키도록 변형되거나 또는 코돈 최 적화된다.
아플리베르셉트는 글리코실화될 수 있는 115 kDa 융합 단백질이다. 아플리베르셉트는 인간 VEGFR-1 및 VEGFR-2의 세포의 VEGF 수용체 서열에 융합된 IgG 백본을 포함하고, 그의 천연 또는 내인성 수용체보다 더 큰 친화도로 VEGF-A에 결합함으로써 가용성 디코이 수용체와 같이 기능한다. 예를 들어, 문헌 [Stewart MW. Aflibercept (VEGF Trap-eye): the newest anti-VEGF drug. Br. J. Ophthalmol. 2012 Sep;96(9):1157-8]을 참조한다. VEGF에 대한 아플리베르셉트의 고친화도는 천연 또는 내인성 VEGF 수용체의 후속 결합 및 활성화를 방해하거나 파 괴한다. 감소된 VEGF 활성은 감소된 혈관신생 및 혈관 투과성으로 이어질 수 있다. 아플리베르셉트에 의한 태반 성장 인자 PIGF 및 VEGF-B의 억제는 또한 비정 상적(예를 들어, 과도한) 혈관신생 및/또는 신생혈관화를 특징으로 하는 안구 질 환 또는 장애의 치료에 기여할 수 있다. PIGF는 혈관신생과 연관되었고，특정 안 구 질환 또는 장애，예컨대 습성 AMD는 상승된 수준의 PIGF와 연관될 수 있다. VEGF-B 과다발현은 혈액-망막 장벽 및 망막 혈관신생의 붕괴와 연관될 수 있다. 따라서，VEGF-A, VEGF-B 및 PIGF의 억제는 모두 아플리베르셉트의 효능에 기여할 수 있다.
트랜스진을 표적 세포에 전달하기 위한 벡터의 제조 방법
일부 실시양태에서，rAAV 입자는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 제조된다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 Sf9 세포에서 바큘로바이러스 발현 벡터 시스템을 사용하여 제조된다. Sf9 세포는 바큘로바이러스를 사용한 재조합 단백질 생산에 통상적으로 사용되는 곤충 세포 배양 세포주이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조된다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조되며，여기서 제1 바큘로바이러스는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백 질에 대한 유전자를 코딩하고，제2 바큘로바이러스는 항-VEGF 작용제를 코딩한다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조되며，여기서 제1 바큘로바이러스는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백질에 대한 유전자를 코딩하고， 제2 바큘로바이러스는 아플리베르셉트(예를 들어， 인간 아플리베르셉트） cDNA 발현 카세트를 코딩한다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조되며， 여기서 제1 바큘로바이러스는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백질에 대한 유전자를 코딩하고， 제2 바큘로바이러스는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는아플리베르셉트이다.
용량
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안 또는 좌안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안이고, 반대쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 좌안이고, 반대쪽 눈은 우안이다.
일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주(예를 들어, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 4주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년 또는 그 초과) 후이다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후이고，개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한 쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 높다(예를 들어，약 5%, 약 10%, 약 20%， 약 30%， 약 40%， 약 50%， 약 60%， 약 70%， 약 80%， 약 90%， 약 100%， 약 125%， 약 150%， 약 175%， 약 200%， 약 225%， 약 250%， 약 275%， 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것 더 높음）.
일부 실시양태에서，개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 1주，최대 약 2주， 최대 약 3주 또는 최대 약 4주 후이다. 일부 실시양태에서， 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주(예를 들어，약 0일，1일，2일，3일，4일，5일，6일，7일，8 일，9일，10일，11일，12일，13일 또는 14일） 후이다. 일부 실시양태에서，개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주(예를 들어， 약 0일， 1일， 2일， 3일， 4일， 5일， 6일， 7일，8일，9일，10일，11일，12일，13일 또는 14일） 후이고，개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량 과 거의 동일하거나(예를 들어，1% 미만 더 높거나 더 낮거나，5% 미만 더 높거나 더 낮거나，10% 미만 더 높거나 더 낮거나 또는 20% 미만 더 높거나 더 낮음） 또는 더 낮다(예를 들어，약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%， 약 80% 또는 약 90% 더 낮음）. 일부 실시양태에서， 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후이고, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 거의 동일하다(예를 들어, 1% 미만 더 높거나 더 낮거나, 5% 미만 더 높거나 더 낮거나, 10% 미만 더 높거나 더 낮거나 또는 20% 미만 더 높거나 더 낮음). 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후이고, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 낮다(예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90% 더 낮음).
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 벡터 게 놈의 수(vg)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 벡터 게 놈(vg) 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1x1010 내지 약 2x1010, 약 2x1010 내지 약 3x1010, 약 3x1010 내지 약 4x1010, 약 4x1010 내지 약 5x1010, 약 5x1010 내지 약 6x1010, 약 6x1010 내지 약 7x1010, 약 7x1010 내지 약 8x1010, 약 8x1010 내지 약 9x1010, 약 9x1010 내지 약 10x1010, 약 1x1011 내지 약 2x1011, 약 2x1011 내지 약 3x1011, 약 3x1011 내지 약 4x1011, 약 4x1011 내지 약 5X1011 또는 약 5X1011 내지 약 6X1011 vg의 rAAV 입자(이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1Х1011 내지 약 5Х1011, 약 5Х1011 내지 약 1Х1012, 약 1Х1012 내지 약 5Х1012, 약 5Х1012 내지 약 1Х1013, 약 1Х1013 내지 약 5Х1013, 약 5Х1013 내지 약 1Х1014 vg의 rAA 입자(이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 벡터 게놈(vg) 내지 약 2X1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg 내지 약 2X1011 vg, 약 7x1010 vg 내지 약 2X1011 vg, 약 8x1010 vg 내지 약 2x1011 vg, 약 9x1010 vg 내지 약 2X1011 vg, 약 10x1010 vg 내지 약 2X1011 vg 또는 약 1X1011 vg 내지 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6x1010 vg 내지 약 2X1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6x1010 vg 내지 약 7x1010 vg， 약 7x1010 vg 내지 약 8x1010 vg， 약 8x1010 vg 내지 약 9x1010 vg， 약 9x1010 vg 내지 약 10x1010 vg， 약 10x1010 vg 내지 약 1x1011 vg 또는 약 1X1011 vg 내지 약 2X1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6x1010 vg， 약 7x1010 vg， 약 8x1010 vg， 약 9x1010 vg， 약 10x1010 vg， 약 1x1011 vg 또는 약 2X1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6x1010 vg 또는 약 2X1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6x1010 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6 x 1010 vg，약 2 x 1011 vg 또는 약 6 x 1011 vg이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6 x 1010 vg이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 2 x 1011 vg이다. 일부 실시양태에서，단위 용 량은 약 6 x 1011 vg이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수(vg)(vg/눈)로서 표현된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서， 단위 용량은 약 1x1010 내지 약 2x1010， 약 2x1010 내지 약 3x1010， 약 3x1010 내지 약 4x1010， 약 4x1010 내지 약 5x1010， 약 5x1010 내지 약 6x1010， 약 6x1010 내지 약 7x1010， 약 7x1010 내지 약 8x1010， 약8x1010 내지 약 9x1010, 약 9x1010 내지 약 10x1010, 약 1x1011 내지 약 2x1011, 약 2x1011 내지 약 3x1011, 약 3x1011 내지 약 4x1011, 약 4x1011 내지 약 5x1011 또는 약 5x1011 내지 약 6x1011 vg/눈의 rAAV 입자(이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함）이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1Х1011 내지 약 5Х1011, 약 5Х1011 내지 약 1Х1012, 약 1Х1012 내지 약 5Х1012, 약 5Х1012 내지 약 1Х1013, 약 1Х1013 내지 약 5Х1013, 약 5Х1013 내지 약 1Х1014 vg의 rAA 입자(이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다.
일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈 또는 약 1x1011 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 7x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 8x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 9x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/ 눈 내지 약 10x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 1x1011 vg/눈 또는 약 1x10n vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈, 약 1x1011 vg/눈 또는 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 또는 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태 에서, 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈, 약 2 x 1011 vg/눈 또는 약 6 x 1011 vg/눈이 다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 2 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서，E는 지수화에 대한 밑수 10의 약칭이고， xEy는 x 곱하기 밑수 10의 y 거듭제곱/지수를 지칭한다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 벡터 게놈의 수(vg)로서 표현된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E11 벡터 게놈(vg) 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서， 단위 용량은 약 1E10 내지 약 2E10， 약 2E10 내지 약 3E10， 약 3E10 내지 약 4E10， 약 4E10 내지 약 5E10， 약 5E10 내지 약 6E10， 약 6E10 내지 약 7E10， 약 7E10 내지 약 8E10， 약 8E10 내지 약 9E10， 약 9E10 내지 약 10E10， 약 1E11 내지 약 2E11， 약 2E11 내지 약 3E11， 약 3E11 내지 약 4E11， 약 4E11 내지 약 5E11 또는 약 5E11 내지 약 6E11 vg 의 rAAV 입자(이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 벡터 게놈(vg) 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서， 단위 용량은 약 6E10 vg 내지 약 2E11 vg， 약 7E10 vg 내지 약 2E11 vg， 약 8E10 vg 내지 약 2E11 vg， 약 9E10 vg 내지 약 2E11 vg， 약 10E10 vg 내지 약 2E11 vg 또는 약 1E11 vg 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg 내지 약 7E10 vg， 약 7E10 vg 내지 약 8E10 vg， 약 8E10 vg 내지 약 9E10 vg， 약 9E10 vg 내지 약 10E10 vg， 약 10E10 vg 내지 약 1E11 vg 또는 약 1E11 vg 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg，약 7E10 vg， 약 8E10 vg， 약 9E10 vg， 약 10E10 vg， 약 1E11 vg 또는 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg 또는 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg，약 2E11 vg 또는 약 6E11 vg이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 2E11 vg이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E11 vg이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수(vg）(vg/눈）로서 표현된다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E11 vg/눈 이하 의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서， 단위 용량은 약 1E10 내지 약 2E10， 약 2E10 내지 약 3E10， 약 3E10 내지 약 4E10， 약 4E10 내지 약 5E10， 약 5E10 내지 약 6E10， 약 6E10 내지 약 7E10， 약 7E10 내지 약 8E10， 약 8E10 내지 약 9E10， 약 9E10 내지 약 10E10， 약 1E11 내지 약 2E11， 약 2E11 내지 약 3E11， 약 3E11 내지 약 4E11， 약 4E11 내지 약 5E11 또는 약 5E11 내지 약 6E11 vg/눈의 rAAV 입자(이들 범위 내의 임의의 값 의 rAAV 입자 포함）이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈，약 7E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈，약 8E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈，약 9E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈，약 10E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈 또는 약 1E11 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량 은 약 6E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 7E10 vg/눈，약 7E10 vg/눈 내지 약 8E10 vg/눈，약 8E10 vg/눈 내지 약 9E10 vg/눈, 약 9E10 vg/눈 내지 약 10E10 vg/눈, 약 10E10 vg/눈 내지 약 1E11 vg/눈 또는 약 1E11 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈, 약 7E10 vg/눈, 약 8E10 vg/눈, 약 9E10 vg/눈, 약 10E10 vg/눈, 약 1E11 vg/눈 또는 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈 또는 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일 부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈, 약 2E11 vg/눈 또는 약 6E11 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용 량은 약 2E11 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E11 vg/눈이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액 에서 치료 단백질(예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트）의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/ml 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함） 중 어느 하나의 치료 단백 질(예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트）의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/ml 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함） 중 어느 하나의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 방수액에서 치료 단백질(예를 들어，항-VEGF 작용제，예컨대 아플리베르셉트）의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 방수액 중 적어도 약 0.5， 0.55， 0.6， 0.65， 0.7， 0.75, 0.8，0.85, 0.9，0.95, 1.0 μg/ml 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범 위 포함）의 치료 단백질(예를 들어，항-VEGF 작용제，예컨대 아플리베르셉트）의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 방수액에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 방수액 중 적어도 약 0.5，0.55, 0.6，0.65, 0.7，0.75, 0.8，0.85, 0.9，0.95, 1.0 μg/ml 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함）의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 망막에서 치료 단백질(예를 들어，항-VEGF 작용제，예컨대 아플리베르셉트）의 발현을 유발 하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 망막 중 적어도 약 3, 3.5，4, 4.5，5, 5.5，6, 6.5，7, 7.5，8, 8.5，9, 9.5，10 μg/g 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함）의 치료 단백질(예를 들어，항- VEGF 작용제，예컨대 아플리베르셉트）의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 망막에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 망막 중 적어도 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함）의 아플리베르셉트의 농도 를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막에서 치료 단백질(예를 들어, 항-VEGF 작용저 예컨대 아플리베르셉트）의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함） 중 어느 하나의 치료 단백질(예 를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트）의 농도를 달성하기에 충분한 단 위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막에서 아를리베 르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입 자의 단위 용량은 맥락막 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과(이들 값 사이의 임의의 범위 포함） 중 어느 하나 의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입 자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 개선을 유 발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 많은 시력의 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, 시력은 최대 교정 시력(BCVA)이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 BCVA의 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, BCVA는 정확하게 읽힌 문자의 개수에 상응하는 ETDRS 점수로서 표현된다(Vitale et al.，(2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047). 일부 실시 양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 적어도 15개 ETDRS 문자(Vitale et al.，(2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047)(예를 들어, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 30개, 적어도 약 40개, 적어도 약 50개, 적어도 약 60개 또는 약 70개 문자)의 BCVA의 개 선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입 자의 단위 용량은, 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 15개 미만의 ETDRS 문자(Vitale et al.，(2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047)(예 를 들어, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9 개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 1개 또는 0개 문자)를 상실하는, 단위 용량이 BCVA의 유지를 유발하기에 충 분한 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 후 개체가 시각의 유지를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 시각의 개선을 갖는 것으로 결정되는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여 한 후 약 4주마다，5주마다，6주마다，7주마다，8주마다，9주마다，10주마다 또는 그 초과 중 어느 것에서 1회 미만의 구제 요법 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사)를 필요로 하는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 적어도 약 1주， 적어도 2 주， 적어도 3주， 적어도 4주， 적어도 5주， 적어도 6주， 적어도 7주， 적어도 8주， 적어도 9주， 적어도 10주， 적어도 15주， 적어도 20주， 적어도 30주， 적어도 40주， 적어도 50주， 적어도 60주， 적어도 70주， 적어도 80주， 적어도 90주， 적어도 100주，적어도 110주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 어떠한 구제 요법 치료(예를 들어，아플리베르셉트 주사)도 필요로 하지 않는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여 하기 전 색소 상피 박리(PED)와 비교하여 PED의 해소를 갖는 것으로 결정된 경우 에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 수축하는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존 재하는 CNV 병변과 비교하여 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 중 어느 것 초과만큼 수죽하는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시 양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 성장하지 않는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및 /또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비 교하여 약 1%， 2%， 3%， 4%， 5%， 6%， 7%， 8%， 9%， 10%， 15% 또는 20% 중 약 어느 것 초과만큼 성장하지 않는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용 량의 투여 후 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색과 비교하여 해부학적 특색의 개선을 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색과 비교하여 해부학적 특색의 안정화 및/또는 유지를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 안구 질환 또는 장애의 적어도 1종의 증 상을 감소，정지 또는 예방하는 경우에 치료상 유효하다. 일부 실시양태에서, 이러한 증상은，예를 들어 시각 왜곡(예컨대 색각 장애，흐린 시각，중심 시각의 악화), 시각 상실, 홍채 홍색증 정도의 변화, 안내압(IOP)의 변화, 추가 항녹내장 중재(항녹내장 의약, 수술 등) 횟수의 변화 및/또는 전방 각도의 전방각경검사의 변화를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 개 체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 단위 용량의 투여가 안구 질환(예를 들어, 녹내장, 예컨대, 신생혈관 녹내장)의 1종 이상의 임상 특색의 유지, 부분 해소 또는 완전 해소를 유발하는 경우에 치료 유효 용량이다. 예를 들어, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 측정시 안구 질환(예를 들어, 녹내장, 예컨대, 신생혈관 녹내장)의 완전 해소, 부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및 /또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에의 용량의 투여가 최대 교정 시력(BCVA)(예를 들어, ETDRS 점수에 기초함; 문헌 [Vitale et al.，(2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047])， 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체가 필요로 하는 구제 요법 치료(예를 들어, 아플리베르셉트 주사)의 횟수, 색소 상피 박리(PED)의 해소, 맥락막 신생혈관화(CNV) 병변 성장, 홍채 홍색증, 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법(예를 들어, SD-OCT, OCT, 플루오레세인 혈관조영, 디지털 컬러 안저 촬영 등)에 기초한 해부학적 특색에 의해 평가시 안구 질환의 완전 해소, 부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/ 또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 안과 검사, 안내압(예를 들어, 골드만 압평 안 압측정계 또는 토노-펜을 사용함），간접 검안경검사，한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 및 부속기의 검사，안검 및/또는 동공 반응성，안검하수，비정상적 동공 형상，불 균등 동공，광에 대한 비정상적 반응，구심신경 동공 결손，슬릿-램프 검사(안검， 결막，각막，수정체，홍채 및 전방에 대한 것 포함），유리체，시신경，주변 망막 및 망막 혈관계의 후안부 이상，SD-OCT, 플루오레세인 혈관조영，디지털 컬러 안저 촬영(망막，시신경 유두 및/또는 황반의 영상 포함），방수 샘플링，유리체액 샘플 링，OCT-혈관조영(OCT-A）, 굴절 및 시력(BCVA）에 의해 평가시 안구 질환의 완전 해소，부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및 /또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에의 용량의 투여가 전방 각도의 전방각경검사에 의해 평가시 안구 질환(예를 들어, 녹내장 또는 신생혈관 녹내장)의 완전 해소, 부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다. 전방각경검사는 전형적으로 눈 검사 동안 전방 각도라고도 지칭되는 눈의 내부 배수 시스템을 평가하기 위해 수행된다. "각도"는 각막과 홍채가 만나는 위치이다. 이 위치는 눈 내부의 체액(방수)이 눈에서 정맥계로 배출되는 위치이다.
일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 동일하다. 일부 실시양 태에서，개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 반대쪽 눈에 투 여된 rAAV 입자의 단위 용량과 상이하다. 일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용 량보다 더 높고，예를 들어 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%， 약 80%， 약 90%， 약 100%， 약 125%， 약 150%， 약 175%， 약 200%， 약 225%， 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많다. 일부 실시양태에서，개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 높고，예를 들어 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%， 약 60%， 약 70%， 약 80%， 약 90%， 약 100%， 약 125%， 약 150%， 약 175%， 약 200%， 약 225%， 약 250%， 약 275%， 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수(vg）(vg/ 눈）로서 표현된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/ 눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 1x1010 내지 약 2x1010, 약 2x1010 내지 약 3x1010, 약 3x1010 내지 약 4x1010, 약 4x1010 내지 약 5x1010, 약 5x1010 내지 약 6x1010, 약 6x1010 내지 약 7x1010, 약 7x1010 내지 약 8x1010, 약 8x1010 내지 약 9x1010, 약 9x1010 내지 약 10x1010, 약 1x1011 내지 약 2x1011, 약 2x1011 내지 약 3x1011, 약 3x1011 내지 약 4x1011, 약 4x1011 내지 약 5X1011 또는 약 5X1011 내지 약 6X1011 vg/눈의 rAAV 입자(이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함）이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x10n vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/ 눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈 또는 약 1X1011 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단 위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 7x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 8x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 9x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 10x1010 vg/ 눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 1X1011 vg/눈 또는 약 1X1011 vg/눈 내지 약 2X1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈, 약 1X1011 vg/눈 또는 약 2X1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입 자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 또는 약 2X1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실 시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실 시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈，약 2 x 1011 vg/눈 또는 약 6 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 2 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈이다.
일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량 및 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서，개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량 및 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 상이한 시간에 투여된다. 일부 실시양태에서， 반대쪽 눈에 투여되는 단위 용량은 한쪽 눈에 단위 용량을 투여한지 적어도 약 1시간， 적어도 약 2시간， 적어도 약 4시간， 적어도 약 8시간， 적어도 약 12시간，적어도 약 24시간，적어도 약 1일，적어도 약 2일，적어도 약 3일，적어도 약 4일，적어도 약 5일，적어도 약 6일，적어도 약 7일，적어도 약 1주，적어도 약 2주， 적어도 약 3주， 적어도 약 4주 또는 그 초과 중 어느 것 후에 투여된다. 일부 실시양태에서，반대쪽 눈에 투여되는 단위 용량은 한쪽 눈에 단위 용량을 투여 한지 적어도 약 2주 후에 투여된다.
일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단일 단위 용량이 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서， 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단일 단위 용량은 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 1회 초과의 용량(예를 들어, 약 2, 3, 4, 5회 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많은 단위 용량）이 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일 부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 1회 초과의 용 량은 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, 항-VEGF 치료, 예를 들어 항-VEGF 작용제, 예컨 대 아플리베르셉트를 사용한 IVT 주사는 rAAV 입자의 단위 용량(예를 들어, 약 2 x 1011 vg/눈 내지 약 6 x 1011 vg/눈의 rAAV 입자의 단위 용량）의 투여 적어도 약 1 주, 예를 들어 적어도 약 7일 전에 rAAV 입자가 투여되는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 치료, 예를 들어 항-VEGF 작용제, 예 컨대 아플리베르셉트를 사용한 IVT 주사는 약 제1일에 눈에 투여되고, rAAV 입자의 단위 용량, 예를 들어 약 2 x 1011 vg/눈 내지 약 6 x 1011 vg/눈의 rAAV 입자의 단 위 용량은 약 제8일에 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량 은 약 2 x 1011 vg/눈 또는 약 6 x 1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 안구 질환은 당뇨병성 황반 부종이다.
제약 제제
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 제약 제제 중에 있다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 rAAV 입자, 1종 이상의 삼투 또는 이온 강도 작용 제, 1종 이상의 완충제, 1종 이상의 계면활성제 및 1종 이상의 용매를 포함한다. 일부 실시양태에서, 삼투 또는 이온 강도 작용제는 염화나트륨이다. 일부 실시양 태에서，1종 이상의 완충제는 일염기성 인산나트륨 및/또는 이염기성 인산나트륨이 다. 일부 실시양태에서，계면활성제는 폴록사머 188이다. 일부 실시양태에서，용 매는 물이다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 rAAV 입자，염화나트륨，일염기성 인산나트륨， 이염기성 인산나트륨 및 계면활성제를 포함한다.
일부 실시양태에서，제약 제제는 약 1x1010 vg/mL 내지 약 1x1013 vg/mL의 rAAV 입자，약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내 지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자，약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자，약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제 는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자，약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨，약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.0내지 약 7.5의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자는 약 1x1010 vg/ml 내지 약 1x1013 vg/ml의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자는 약 1x1009 vg/ml 내지 약 6x1014 vg/ml의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자는 약 1x1009 vg/ml 내지 약 2x1009 vg/ml, 약 2x1009 vg/ml 내지 약 3x1009, 약 3x1009 vg/ml 내지 약 4x1009, 약 4x1009 vg/ml 내지 약 5x1009, 약 5x1009 vg/ml 내지 약 6x1009, 약 6x1009 vg/ml 내지 약 7x1009, 약 7x1009 vg/ml 내지 약 8x1009, 약 8x1009 vg/ml 내지 약 9x1009, 약 9x1009 vg/ml 내지 약 10x1009, 약 10x1009 vg/ml 내지 약 1x1010, 약 1x1010 vg/ml 내지 약 2x1010, 약 2x1010 vg/ml 내지 약 3x1010, 약 3x1010 vg/ml 내지 약 4x1010, 약 4x1010 vg/ml 내지 약 5x1010, 약 5x1010 vg/ml 내지 약 6x1010, 약 6x1010 vg/ml 내지 약 7x1010, 약 7x1010 vg/ml 내지 약 8x1010, 약 8x1010 vg/ml 내지 약 9x1010, 약 9x1010 vg/ml 내지 약 10x1010, 약 10x1010 vg/ml 내지 약 1x1011, 약 1x1011 vg/ml 내지 약 2x1011, 약 2x1011 vg/ml 내지 약 3x1011, 약 3x1011 vg/ml 내지 약 4x1011, 약 4x1011 vg/ml 내지 약 5x1011, 약 5x1011 vg/ml 내지 약 6x1011, 약 6x1011 vg/ml 내지 약 7x1011, 약 7x1011 vg/ml 내지 약 8x1011, 약 8x1011 vg/ml 내지 약 9x1011, 약 9x1011 vg/ml 내지 약 10x1011, 약 9Х1011 vg/ml 내지 약 10Х1011, 약 1Х1012 vg/ml 내지 약 2Х1012, 약 2Х1012 vg/ml 내지 약 3Х1012, 약 3Х1012 vg/ml 내지 약 4Х1012, 약 4Х1012 vg/ml 내지 약 5Х1012, 약 5Х1012 vg/ml 내지 약 6Х1012, 약 6Х1012 vg/ml 내지 약 7Х1012, 약 7Х1012 vg/ml 내지 약 8Х1012, 약 8Х1012 vg/ml 내지 약 9Х1012, 약 9Х1012 vg/ml 내지 약 10Х1012, 약 1Х1013 vg/ml 내지 약 2Х1013, 약 2Х1013 vg/ml 내지 약 3Х1013, 약 3Х1013 vg/ml 내지 약 4Х1013, 약 4Х1013 vg/ml 내지 약 5Х1013, 약 5Х1013 vg/ml 내지 약 6Х1013, 약 6Х1013 vg/ml 내지 약 7Х1013, 약 7Х1013 vg/ml 내지 약 8Х1013, 약 8Х1013 vg/ml 내지 약 9Х1013, 약 9Х1013 vg/ml 내지 약 10Х1013, 약 1Х1014 vg/ml 내지 약 2Х1014, 약 2Х1014 vg/ml 내지 약 3Х1014, 약 3Х1014 vg/ml 내지 약 4Х1014, 약 4Х1014 vg/ml 내지 약 5Х1014, 또는 약 5Х1014 vg/ml 내지 약 6Х1014 vg/mL의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다.
일부 실시양태에서， 제약 제제 중 염화나트륨은 약 150 mM 내지 약 200 mM의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서，제약 제제 중 염화나트륨은 약 150 mM，약 160 mM，약 170 mM，약 180 mM，약 190 mM 또는 약 200 mM의 농도로 존 재한다. 특정 실시양태에서，제약 제제 중 염화나트륨은 약 180 mM의 농도로 존재 한다.
일부 실시양태에서， 일염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 1 mM 내지 약 10 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서，일염기성 인산나트륨은 제 약 제제 중에 약 1 mM， 약 2 mM， 약 3 mM， 약 4 mM， 약 5 mM， 약 6 mM， 약 7 mM， 약 8 mM，약 9 mM 또는 약 10 mM 중 어느 것의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에 서，일염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 5 mM의 농도로 존재한다.
일부 실시양태에서, 이염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 1 mM 내지 약 10 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 이염기성 인산나트륨은 제 약 제제 중에 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM 또는 약 10 mM 중 어느 것의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에 서, 이염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 5 mM의 농도로 존재한다.
일부 실시양태에서, 폴록사머 188은 제약 제제 중에 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v)의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머 188은 제약 제제 중에 약 0.0005% (w/v), 약 0.0006% (w/v), 약 0.0007% (w/v), 약 0.0008% (w/v), 약 0.0009% (w/v), 약 0.001% (w/v), 약 0.002% (w/v), 약 0.003% (w/v), 약 0.004% (w/v) 또는 약 0.005% (w/v) 중 어느 것의 농도로 존재한다. 특 정 실시양태에서, 폴록사머 188은 제약 제제 중에 약 0.001% (w/v)의 농도로 존재 한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4 또는 약 7.5의 pH를 갖는다. 특정 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 염산 및 수산화나트륨이 제약 제제의 pH를 조정하는 데 사용된다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자，약 180 mM 염화나트륨， 약 5 mM 일염기성 인산나트륨， 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% （w/v） 폴록사머 188을 포함하며，여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서，제약 제제는 목적하는 치료적 또는 예방적 효과를 달성하기 위해 유리체내(IVT） 주사를 통해 개체，예를 들어 인간 환자의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기에 적합하다. 일부 실시양태에서，제약 제제는 재구성된 균질 용액으로서 공급된다. 일부 실시양태에서，용액은 현탁액이다. 일 부 실시양태에서，제약 제제는 동결 현탁액으로서 공급되고，개체의 한쪽 눈 및/또 는 반대쪽 눈에 투여하기 전에 해동된다. 일부 실시양태에서，용액은 등장성이다.
다른 실시양태에서，예를 들어 항-VEGF 작용제(예를 들어，아를리 베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체）를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV2.7m8 벡터를 포함하는 제약 조성물은 동결건조 형태로 공급되고，개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에 재구성된다. 일부 실시양태에서，본원에 제공된 방법은 대상체로의 투여 전에，항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체）를 코딩하고 rAAV(예를 들어，AAV2.7m8）를 포 함하는 동결건조 제약 조성물을 완충제 중에 재구성，용해 또는 가용화시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서，이러한 동결건조 제약 조성물은 하기: 동결보호제，계면활성제，염，안정화제 또는 그의 임의의 조합 중 1종 이상을 포함 한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 균질 용액이다. 일부 실시양태에서, 균질 용액은 사전-충전 시린지에 공급된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 현탁액으로서 공급된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 용액이다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 냉장된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 동결된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 （예를 들어, IVT 주사를 통해） 개체의 한쪽 눈 및/ 또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에, 활성 성분（들）이 용액 중에 용해 및/또는 고르게 분포되도록 보장하기 위해 냉장 현탁액을 실온으로 가온하고/거나 현탁액을 교반하 는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 （예를 들어, IVT 주사를 통해） 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에, 활성 성분（들）이 용액 중에 용해되고/거나 고르게 분포되는 것을 보장하기 위해 동결 현 탁액을 해동시키고 현탁액을 실온으로 가온하고/거나 교반하는 단계를 추가로 포함 한다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 （예를 들어, IVT 주사를 통해） 대상체에게 투 여하기 전에 희석된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 사전-충전 시린지로서 공급 된다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 동결 현탁액으로서 제공된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 제약상 허용되는 부형저L 예를 들어 계면활성제, 글리세를, 비-이온성 계면활성제, 완충제, 글리콜, 염 및 그의 임의의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 현탁액은 용액이다. 일부 실시양태에서, 현탁 액은 미셀을 포함한다.
일부 실시양태에서，저장 안정성 및 취급 편의성을 위해，항-VEGF 작용제(예를 들어， 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체）를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV(예를 들어，AAV2.7m8）를 포함하는 제약 제제는 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에 염수， 완충제 또는 물로 재구성되는 동결건 조，동결 건조 또는 진공 건조 분말로서 제제화된다. 대안적으로，제약 제제는 수용액，예컨대 현탁액 또는 균질 용액으로서 제제화된다. 제약 제제는 아플리베르 셉트를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV 입자를 함유할 수 있다. 다양한 부형제，예컨대 포스페이트，PBS 또는 트리스 완충저L 글리콜，글리세롤，염수，계면활 성제(예를 들어，플루로닉 또는 폴리소르베이트） 또는 그의 임의의 조합이 제약 제제를 안정화시키는데 사용될 수 있다. 추가적으로，동결보호저L 예컨대 알콜은 동결 또는 건조 조건 하에 안정화제로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서，유전자 요법은 현탁액，냉장 현탁액 또는 동결 현탁액으로서 제공된다.
일부 실시양태에서，본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 약 20 μL， 30 μL， 40 μL， 50 μL， 60 μL， 70 μL， 80 μL， 90 μL， 100 μL， 200 μL, 300 μL, 400 μL, 500 μL, 600 μL, 700 μL, 800 μL, 900 μL 또는 1000 μL 중 어느 것의 부피를 갖는다. 일부 실시양태에서，본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 약 250 μL 의 부피를 갖는다. 일부 실시양태에서，본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 0.1 내지 0.5 mL，0.1 내지 0.2 mL， 0.3 내지 0.5 mL，0.5 내지 1.0 mL，0.5 내지 0.7 mL，0.6 내지 0.8 mL，0.8 내지 1 mL，0.9 내지 1.1 mL，1.0 내지 1.2 mL 또는 1.0 내지 1.5 mL의 부피를 갖는다. 다른 실시양태에서, 부피는 0.1 mL, 0.2 mL, 0.3 mL, 0.4 mL, 0.5 mL, 0.6 mL, 0.7 mL, 0.8 mL, 0.9 mL, 1.0 mL, 1.1 mL, 1.2 mL, 1.3 mL, 1.4 mL 또는 1.5 mL 이하이 다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 약 0.25 mL의 부피를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 즉석-사용 마개(예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개）가 구비되고(예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로） 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알(예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스（Crystal Zenith）® 바이알） 내에 멸균 -여과된 동결 현탁액으로서 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같 은 제약 제제의 현탁액은 즉석-사용 마개(예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개） 가 구비되고(예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로） 밀봉된 멸균 즉석-사 용 바이알(예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알） 내 에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되며, 여기서 바이알은 0.1 내지 0.5 mL, 0.1 내지 0.2 mL, 0.2 내지 0.3 mL, 0.3 내지 0.4 mL 또는 0.4 mL 내지 0.5 mL 부 피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같 은 제약 제제의 현탁액은 즉석-사용 마개(예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개） 가 구비되고(예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로） 밀봉된 멸균 즉석-사 용 바이알(예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알） 내 에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되며, 여기서 바이알은 약 0.25 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다.
일부 실시양태에서，본원에 개시된 제약 제제는 유리체내 또는 망막 하 주사를 통해 영장류(예를 들어，비-인간 영장류 및 인간 대상체）에게 투여하기 위해 설계，조작 또는 적합화된다. 일부 실시양태에서，항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제는 개체의 눈 내로의 유리체내 주사를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서， 제약 조성물은 약 25 μL， 30 μL， 35 μL， 40 μL， 45 μL， 50 μL， 55 μL， 60 μL， 65 μL， 70 μL， 75 μL， 80 μL， 85 μL， 90 μL， 95 μL， 100 μL， 110 μl， 120 μL， 130 μL， 140 μL， 150 μL， 160 μL， 170 μL， 180 μL， 190 μL， 200 μL，210 μL，220 μL，230 μL，240 μL 또는 250 μL 중 어느 것 이하 또는 정확히 상기 수치들 중 어느 것 이하의 부피의 유리체내 주사를 가능하게 하는 농 도로 제제화되거나 재구성된다. 일부 실시양태에서，제약 제제의 단위 용량은 약 25 μL， 30 μL， 35 μL， 40 μL， 45 μL， 50 μL， 55 μL， 60 μL， 65 μL， 70 μL， 75 μL， 80 μL， 85 μL， 90 μL， 95 μL， 100 μL， 110 μL， 120 μL， 130 μL， 140 μL， 150 μL， 160 μL， 170 μL， 180 μL， 190 μL， 200 μL， 210 μL， 220 μL， 230 μL， 240 μL 또는 250 μL 중 어느 것 이하 또는 정확히 상기 수치 들 중 어느 것 이하의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서，본원에 개시된 방법 은 항-VEGF 작용제(예를 들어，아플리베르셉트）를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV(예를 들어，AAV2.7m8）를 포함하는 제약 제제의 용액 또는 현탁액 약 25 μL， 30 μL， 35 μL， 40 μL， 45 μL， 50 μL， 55 μL， 60 μL， 65 μL， 70 μL， 75 μL， 80 μL， 85 μL， 90 μL， 95 μL， 100 μL， 110 μL， 120 μL， 130 μL， 140 μL， 150 μL, 160 μL, 170 μL, 180 μL, 190 μL, 200 μL, 210 μL, 220 μL, 230 μL, 240 μL 또는 250 μL 중 어느 것의 부피의 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르셉 트）를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV(예를 들어, AAV2.7m8）를 포함하는 제약 제제의 용액 또는 현탁액 약 30 μL 또는 약 100 μL 부피의 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르 셉트）를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV(예를 들어, AAV2.7m8）를 포함하는 제약 제제 의 용액 또는 현탁액 약 30 μL의 부피의 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양 태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르셉트）를 코 딩하는 핵산 서열 및 rAAV(예를 들어, AAV2.7m8）를 포함하는 제약 제제의 용액 또 는 현탁액 약 100 μL의 부피의 유리체내 주사를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아 플리베르셉트） 트랜스진의 핵산 서열을 포함하는 AAV2.7m8 입자는 유전자 요법 제 약 제제의 성분이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 7m8 변이체 캡 시드 단백질을 포함하는 임의의 혈청형의 rAAV 입자는 동결 현탁액 또는 동결-건조 또는 동결건조 제제 조성물을 제조하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 유전자 요법은 냉장 또는 동결 현탁액으로서 제제화된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 rAAV2이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제의 동결건조물 또는 현탁액은 항-VEGF 작용제(예를 들어, 아플리베르셉트）를 코딩하는 DNA 서열 및 7m8 변이체 캡시드 단백질을 포함하는 rAAV2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 냉장 또는 동결된다.
일부 실시양태에서， 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내(IVT） 주사에 의한 것이다. IVT 주사를 위해，rAAV 입자는 제약 제제(예를 들어，본원에 기재된 바와 같음）의 현탁액 형 태로 전달될 수 있다. 초기에，국소 마취제를 눈의 표면에 적용하고，이어서 안과용 방부 용액을 적용한다. 눈을 기기에 의해 또는 기기 없이 개방한 채로 유지하고，rAAV 입자를 직접 관찰 하에 짧고 좁은 바늘，예를 들어 30-게이지 바늘에 의해 공막을 통해 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 유리체강 내로 주사한다. 전형적으로，약 25 μL 내지 약 250 μL(예를 들어，약 25 μL，약 30 μL，약 40 μL， 약 50 μL， 약 60 μL， 약 70 μL， 약 80 μL， 약 90 μL， 약 100 μL， 약 110 μL， 약 120 μL， 약 130 μL， 약 140 μL， 약 150 μL， 약 160 μL， 약 170 μL， 약 180 μL， 약 190 μL， 약 200 μL， 약 210 μL， 약 220 μL， 약 230 μL， 약 240 μL 또는 약 250 μL 중 어느 것） 부피의 rAAV 입자 현탁액이 IVT 주사에 의해 눈에 전달될 수 있다. 일부 실시양태에서， rAAV 입자의 단위 용량은 약 100 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서，rAAV 입자의 단위 용량은 약 30 μL 의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서，IVT 주사는 유리체액의 저L거와 조합되어 수행된다. 일부 실시양태에서，유리체절제술이 수행될 수 있고，유리체 겔의 전체 부피가 rAAV 입자 현탁액(예를 들어，약 4 mL의 rAAV 입자 현탁액）의 주입에 의해 대체된다. 유리체절제술은 적절한 구멍 크기(예를 들어，20 게이지 내지 27 게이 지）의 캐뉼라를 사용하여 수행되며，여기서 제거되는 유리체 겔의 부피는 주입 캐 뉼라로부터의 유체, 예를 들어 염수, 등장성 용액, rAAV 입자 현탁액의 주입에 의 해 대체된다. IVT 투여는 일반적으로 잘 허용된다. 절차의 종결시어 L 때때로 주 사 부위에 경도 발적이 존재한다. 가끔 압통이 있지만, 대부분의 환자는 어떠한 통증도 보고하지 않는다. 이 절차 후에 아이 패치 또는 아이 쉴드는 필요하지 않 고, 활동도 제한되지 않는다. 때때로, 감염 예방을 돕기 위해 항생제 점안제가 수 일 동안 처방된다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 비정상적(예를 들어, 과도한） 혈 관신생 또는 신생혈관화를 특징으로 하는 안구 질환 또는 장애의 치료를 위해 IVT 주사를 통해 개체(예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류）의 한쪽 눈 및/또는 반대 쪽 눈에 투여될 단위 용량(예를 들어, 치료 유효 용량）이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 본원 다른 곳에 추가로 상세히 기재된 바와 같은 단위 용량(예를 들어, 치료 유효 용량）을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에게 투여되는 바이러스 벡터(예를 들어, 본원에 개시된 rAAV 벡터）의 단위 용량(예를 들어, 치료 유효 용량）의 부피는 약 25 μL, 30 μL, 35 μL, 40 μL, 45 μL, 50 μL, 55 μL, 60 μL, 65 μL, 70 μL, 75 μL, 80 μL, 85 μL, 90 μL, 95 μL, 100 μL, 110 μL, 120 μL, 130 μL, 140 μL, 150 μL, 160 μL, 170 μL, 180 μL, 190 μL, 200 μL, 210 μL, 220 μL, 230 μL, 240 μL 또는 250 μL 중 어느 하나 이 하(이들 값 사이의 임의의 범위 포함）이다. 대상체에게 투여될 단위 용량의 부피를 최소화하는 것은 안압의 변화 및 IVT 주사와 연관된 다른 부작용(예를 들어, 상승된 안내압, 염증, 자극 또는 통증）을 제거하거나 완화시킬 수 있다.
안구 사용에 적합한 제약 제제는 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 주사가능한 용액，현탁액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 유리체내 투여를 위해，적합한 담체는 생리 염수，정균수，포스페이트 완충 염수(PBS) 및/또는 등장화제，예를 들어 글리세롤글리세롤을 포함한다. 특정 실시양태에서，제 약 제제는 멸균되고，용이한 시린지성 또는 주사성이 존재하는 정도로의 유체이다. 특정 실시양태에서，제약 제제는 제조 및 저장 조건 하에 안정하고，미생물，예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존된다. 일부 실시양태에서，제약 조성물은 등장화제， 예컨대 염 또는 글리세롤을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서，계면활성제 또는 안정화제가 제약 조성물에 첨가되어 응집을 방지한다.
일부 실시양태에서， 제약 제제는 부형제 또는 담체를 함유한다. 담체는，예를 들어 물，염수，에탄올，폴리올(예를 들어，글리세롤，프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 그의 임의의 조합을 함유하는 용매 또는 분산 매질이다. 적절한 유동성은，예를 들어 코팅，예컨대 레시틴의 사용에 의해， 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제，예컨대 폴리소르 베이트(예를 들어，트윈(Tween)™，폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80), 소듐 도데실 술페이트(소듐 라우릴 술페이트)，라우릴 디메틸 아민 옥시드，세틸트리메 틸암모늄 브로마이드(CTAB)，폴리에록실화 알콜，폴리옥시에틸렌 소르비탄，옥록 시놀(트리톤(Triton) X100™), N，N-디메틸도데실아민-N-옥시드，핵사데실트리 메틸 암모늄 브로마이드(HTAB)，폴리옥실 10 라우릴 에테르，브리즈(Brij) 721™, 담즙 염(데옥시콜산나트륨, 콜산나트륨）, 플루론산(F-68, F-127）, 폴리옥실 피마자 오 일(크레모포르（Cremophor™）, 노닐페놀 에톡실레이트(테르기톨（Tergitol™）, 시클로텍스트린 및 에틸벤제토늄 클로라이드(히아민（Hyamine™）의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 크레졸, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 실시양태에서, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 및/또는 염화나트륨이 제약 제제에 포함된다. 내부 조성물의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 담체는 인산나트륨, 염화나트륨, 폴리소르베이트 및 수크로스를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제약 제제는 계면활성제, 예를 들어 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리 소르베이트, 폴록사머 또는 플루로닉을 포함한다. 일부 실시양태에서, 비-이온성 계면활성제의 첨가는 제약 조성물에서의 응집을 감소시킨다.
또한, 본원에 기재된 적어도 1종의 제약 제제를 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 제약 제제의 동결 현탁액(예를 들어, 바이알 내의 1 단위 용량）을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 개시된 동결건조 또는 동결-건조 제약 제제(예를 들어, 바이알 내의 1 단위 용량） 및 동결건조 제약 조성물을 용해, 희석 및/또는 재구성하기 위한 용액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 재구성 또는 희석을 위한 용액은 사전-충전 시린지로서 공급된다. 일부 실시양태에서, 키트는 rAAV(예를 들어, AAV2.7m8）를 포함하는 동결-건조 또는 동결건조 제약 조성물 및 제약 조성물을 목적하는 농도 또는 부피로 재구성하기 위한 용액을 포함한다. 일부 실시양태에서，키트는 본원에 개시된 제약 조성물의 재구성시 응집을 방지하는 것을 돕는 완충제를 포함한다. 일부 실시양태에서，제약 조성물은 사전-충전 시린지에 제공된다. 일부 실시양태에서，키트는 이중-챔버 시린지 또는 용기를 포함하며，여기서 챔버 중 하나는 제약 조성물을 용해 또는 희석하기 위한 완충제를 함유한다. 일부 실시양태에서，키트는 주사용 시린지를 포함한다. 일부 실시양태에서， 재구성된 용액은 투여 전에 여과된다. 일부 실시양태에서， 키트는 환자에게 투여하기 전에 재구성된 제약 조성물을 여과하기 위한 필터 또는 필터 시린지를 포함한다. 일부 실시양태에서， 키트는 즉석 사용 마개(예를 들어，클로로부틸로 제조된 마개）가 구비되고 （예를 들어，멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로） 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알（예를 들어，0.5 mL 바이알; 예를 들어，크리스탈 제니스® 바이알） 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되는 본원에 개시된 바와 같은 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제의 현탁액을 포함한다. 일부 실시양태에서，키트는 즉석-사용 마개(예를 들어，클로로부틸로 제조된 마개）가 구비되고 （예를 들어， 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로） 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알(예를 들어，0.5 mL 바이알; 예를 들어，크리스탈 제니스® 바이알） 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되는 본원에 개시된 바와 같은 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제의 현탁액을 포함하며，여기서 바이알은 0.1 내지 0.5 mL，0.1 내지 0.2 mL，0.2 내지 0.3 mL，0.3 내지 0.4 mL 또는 0.4 mL 내지 0.5 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다. 일부 실시양태에서，키트는 즉석-사용 마개(예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알(예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로 서 제공되는 본원에 개시된 바와 같은 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제의 현탁액을 포함하며, 여기서 바이알은 약 0.25 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다. 일부 실시양태에서, 키트는 사용에 대한 지침서; 예를 들어 본원에 개시된 rAAV 입자를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 것에 대한 지침서를 추가로 포함한다.
안구 질환
한 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 안구 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 안구 질환을 갖는 개체의 눈에서 안내압(IOP)을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 안구 질환은 녹내장이다. 본원에서 사용되는 "녹내장"은 시신경을 손상시키고 시각 상실을 야기하는 눈 상태를 지칭한다. 전형적으로, 이러한 손상은 눈 안의 비정상적으로 높은 압력에 의해 야기된다. 녹내장은 60세 이상의 사람들에게 실명의 주요 원인 중 하나이다. 이는 어떤 나이에도 발생할 수 있지만 노년층에서 더 통상적이다. 일부 실시양태에서 녹내장은 만성 녹내장으로도 공지된 원발성 녹내장이다. 원발성 녹내장은 안내압(IOP)으로 알려진 눈 안의 과도한 압력에 의해 야기된다. 이러한 압력의 증가는 일반적으로 눈 안의 부적절한 배액으로 인한 것이다. 일부 실시양태에서, 녹내장은 속발성 녹내장이다. 속발성 녹내장은 안압 증가의 식별가능한 원인이 있는 임의의 형태의 녹내장을 지칭하며, 이로 인해 시신경 손상 및 시각 상실이 발생한다. 일부 실시양태에서, 녹내장은 전형적으로 홍채 및 눈의 배출 채널에 새로운 혈관이 비정상적으로 형성되어 야기된다. 새로운 혈관은 눈의 유체가 섬유주대를 통해 빠져나가는 것을 차단하며, 이는 안압의 증가를 야기한다. 신생혈관 녹내장은 항상 다른 이상, 대부분 자주 당뇨병과 연관되어 있다. 일부 실시양태에서, 녹내장은 눈 안의 유체에 대한 배출 각도가 열린 상태로 유지되는 개방 각도(광각, 만성 단순) 녹내장이며, 덜 일반적인 유형은 폐쇄 각도(협각, 급성 울혈성) 녹내장 및 정상 안압 녹내장을 포함한다. 개방 각도 녹내장은 시간 경과에 따라 천천히 발생하고 통증이 없다. 주변 시각이 감소하기 시작하고 그 후 중심 시각이 감소하여 치료하지 않으면 실명할 수 있다. 일부 실시양태에서, 녹내장은 폐쇄 각도 녹내장이다. 폐쇄 각도 녹내장은 점진적으로 또는 급작스럽게 나타날 수 있다. 폐쇄 각도 녹내장이 급작스럽게 나타나게 되면 심한 눈 통증, 흐린 시각, 동공 경도 확장, 눈의 발적, 메스꺼움을 수반할 수 있다. 녹내장으로 인한 시각 상실은 일단 발생하면 영구적이다. 조기에 치료하면 의약, 레이저 치료, 수술 등으로 질병의 진행을 늦추거나 정지시킬 수 있다. 치료 목표는 안압 감소이다
일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 마 지막 12주(예를 들어, 약 3 또는 약 4개월） 내에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베 바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티 카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 적어도 1회의 선행 치료(예를 들어, 적어 도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회 또는 그 초과의 치료）를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 약 마지막 12주(예를 들어, 약 3 또는 약 4개월） 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 2 또는 3회의 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 적어도 약 1회，적어도 약 5회，적어도 약 10회，적어도 약 20회，적어도 약 30회，적어도 약 40회，적어도 약 50회，적어도 약 60회， 적어도 약 70회， 적어도 약 80회， 적어도 약 90회， 적어도 약 100회， 적어도 약 110회，적어도 약 120회 또는 그 초과의 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서， 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 계산된 항-VEGF 작용제(예를 들어，베바 시주맙，브를루시주맙，라니비주맙 및/또는 아플리베르셉트） 주사 간격이 약 2주， 약 3주， 4주， 약 5주， 약 6주， 약 7주， 약 8주， 약 9주， 약 10주， 약 11주， 약 12 주 또는 그 초과였다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 의 계산된 항-VEGF(예를 들어，베바시주맙，브를루시주맙，라니비주맙 및/또는 아 플리베르셉트） 주사 간격이 약 5-7주， 약 4-10주， 약 4-7주 또는 약 4-6주였다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 적어도 약 5일， 적어도 약 6일， 적어도 약 7일， 적어도 약 8일， 적어도 약 9일， 적어도 약 10일， 적어도 약 11일， 적어도 약 12일， 적어도 약 13일， 적어 도 약 14일， 적어도 약 15일， 적어도 약 16일， 적어도 약 17일， 적어도 약 18일， 적어도 약 19일 또는 적어도 약 20일 중 어느 것 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 에 항-VEGF 작용제(예를 들어，베바시주맙，브를루시주맙，라니비주맙，파리시맙， 아비시파르 페골，콘베르셉트，OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단 위 용량을 투여하기 약 7일， 약 10일 또는 약 14일 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시 맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에 이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 선행 치 료를 받았다. 일부 실시양태에서, 선행 치료는 항-VEGF 작용제를 사용한 안내, 망 막하 또는 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 베바 시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT- 302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉 트이다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단 위 용량을 투여하기 전 마지막 약 12개월 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항- VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비 시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르셉트）를 사용한 1 내지 20회(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20회 중 어느 것）의 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 마지막 약 12개월 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제(예를 들어, 베바시주맙, 브를 루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI- 301, 주사가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아 플리베르셉트）를 사용한 약 9 또는 약 10회의 선행 치료를 받았다.
일부 실시양태에서，개체는 안구 질환에 대한 사전 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 안구 질환에 대해 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 사전 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 사전 항-VEGF 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 사전 항-VEGF 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 사전 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다. 일부 구현예에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 사전 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 베바시주맙, 브를루시주 맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골, 콘베르셉트, OPT-302, KSI-301, 주사 가능한 수니티닙 말레에이트(GB-102）, PAN-90806(판옵티카） 및/또는 아플리베르 셉트를 사용한 선행 치료를 받은 대상체에서 안구 질환 또는 장애를 예방 또는 치 료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 베바시주맙, 브를 루시주맙，라니비주맙 및/또는 아플리베르셉트를 사용한 치료에 대해 반응성인 안 구 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는데 사용된다.
일부 실시양태에서，개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 적어도 1일，적어도 1주，적어도 1개월，적어도 2개월， 적어도 4개월，적어도 6개월，적어도 12개월，적어도 18개월，적어도 24개월，적어 도 30개월，적어도 36개월，적어도 42개월，적어도 48개월，적어도 54개월，적어도 60개월，적어도 66개월，적어도 72개월，적어도 78개월，적어도 84개월，적어도 90 개월，96개월，적어도 102개월，적어도 108개월，적어도 114개월，적어도 120개월， 적어도 126개월，적어도 132개월 또는 그 초과 전에 안구 질환으로 진단 되었다.
하기 설명은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 다양한 실시양태를 만들고 사용할 수 있게 하기 위해 제시된다. 특정 장치，기술 및 적용의 설명은 단지 예로서 제공된다. 본원에 기재된 실시예에 대한 다양한 변형은 관련 기술분 야의 통상의 기술자에게 자명할 것이고， 본원에 정의된 일반적 원리는 다양한 실시 양태의 취지 및 범위를 벗어나지 않으면서 다른 실시예 및 적용에 적용될 수 있다. 따라서， 다양한 실시양태는 본원에 기재되고 제시된 실시예에 제한되는 것으로 의 도되지 않으며，청구범위와 일치하는 범주에 따라야 한다.
실시예
실시예 1： 당뇨병성 황반 부종이 있는 대상체에서의 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 2상, 다기관, 무작위, 이중맹검, 활성 대조군 연구
본 실시예는 당뇨병성 황반 부종을 갖는 대상체에서 AAV2.7m8-아플 리베르셉트의 단일 유리체내(IVT) 주사의 지속성을 평가하기 위해 설계된 2상， 다기관， 무작위화，이중-차폐，활성 대조 연구를 기재한다.
I. 연구 목적 및 종점
A. 1차 목적
이 연구의 1차 목적은 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사의 지속성을 평가하는 것이었다.
B. 2차 목적
이 연구의 2차 목적은 하기를 포함하였다:
● AAV2.7m8-아플리베르셉트의 안전성 및 내약성의 평가.
● 황반 부종에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과의 평가.
● 최대 교정 시력(BCVA)에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과 의 평가.
● 당뇨병성 망막병증 중증도 척도(DRSS) 점수에 대한 AAV2.7m8-아 플리베르셉트의 효과의 평가.
● 구제 아플리베르셉트(2 mg IVT)에 대한 필요의 평가.
● AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 전 아플리베르셉트의 이전 용량(2 mg IVT)의 효과의 평가.
● 시각 위협 합병증(전안부 신생혈관화, 유리체 출혈 또는 견인성 망막 박리)의 발생에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과의 평가.
C. 1차 종점
이 연구의 1차 종점은 연구 눈에서 당뇨병성 황반 부종(DME) 질환 활성의 악화까지의 시간이었으며, 하기 중 어느 것의 발생에 의해 정의된다:
● SD-OCT에 의해 평가시 중심 서브필드 두께(CST)가 제1일 또는 제4주에 기록된 2개의 CST 측정치 중 더 낮은 것과 비교하여 > 50 μm의 증가.
● DME 질환 활성의 악화로 인한 BCVA가 제1일 또는 제4주에 기록된 2개의 BCVA 측정치 중 더 높은 것과 비교하여 > 5개 문자의 상실.
D. 2차 종점
이 연구에 대한 2차 종점은 (달리 명시되지 않는 한) 연구 눈에 대 한 결과 척도에 기초하였으며, 하기를 포함하였다:
● 안구 및 비-안구 유해 사건(AE)의 발생률 및 중증도.
● 제48주까지 시간 경과에 따른 기준선으로부터의 CST 및 황반 부 피의 변화.
● 제48주까지 시간 경과에 따른 기준선으로부터의 BCVA의 변화.
● 연구 동안 시간 경과에 따른 연구 눈에서의 구제 아플리베르셉트(2 mg IVT)의 빈도.
● 제48주까지 시간 경과에 따른 DRSS 점수의 2-단계 및 3-단계 개 선의 발생률.
● 제48주까지 시간 경과에 따른 DRSS 점수의 2-단계 및 3-단계 악 화의 발생률.
● 제48주까지 시간 경과에 따른 시각 위협 합병증(전안부 신생혈 관화，유리체 출혈 또는 임의의 다른 고위험 증식성 당뇨병성 망막병증(DR） 또는 견인성 망막 박리）의 발생.
● 제48주까지 시간 경과에 따른 CST <300 μm의 발생률.
● 제48주까지 시간 경과에 따른，신체 검사，안구 검사，영상화 및 실험실 평가를 통한 임상적으로 유의한 소견의 발생률.
II. 연구 집단
A. 포함 기준
연구 눈에 항-VEGF 요법의 2회 이하의 선행 주사를 받았던，새로 진단 된 DME(즉，스크리닝 6개월 내 DME 진단）를 갖는 대상체는，이들이 하기 포함 기 준을 충족하였던 경우에 이 연구에 포함되었다:
● 연령 ≥ 18세.
● 제1형 또는 제2형 당뇨병.
● 중심 침범 당뇨병성 황반 부종으로 인한 시각 장애.
● 스크리닝시의 시각:
○ 연구 눈: BCVA 78 내지 50개 ETDRS 문자(포함적）(대략적 스넬렌 대응치 20/32 내지 20/100）.
○ 비-연구 눈: BCVA 35개 이상의 ETDRS 문자(대략 20/200 이상의 스넬렌 대응치.
● 중심-침범 IRF(중심 1 mm）의 존재 하에 하이델베르크 스펙트랄 리스®를 사용시 스크리닝 방문에서의 연구 눈의 ≥ 325 μm의 CST.
● 주로 DME로 인한 것으로 결정된 연구 눈에서의 시각 감소.
● 스크리닝으로부터 6개월 내 초기 DME 진단.
● 연구 눈에서의 항-VEGF의 2회 이하의 선행 주사(0，1 또는 2회）.
○ 선행 항-VEGF가 연구 눈에 투여된 경우에, 의미있는 CST 반 응(예를 들어, ≥ 10% 감소）이 있어야 하고, 항-VEGF에 대한 유해 반응(예를 들 어, 염증）은 없어야 한다.
● 연구 눈에서의 마지막 항-VEGF 주사와 제1일 무작위화 사이의 최 소 60일 간격.
B. 배제 기준
하기 기준 중 어느 것을 충족하는 대상체는 이 연구로부터 배제되었다:
● 무작위화 전 6개월 내에 기록된 항-AAV2.7m8 중화 항체 역가 > 1:125.
● 선행 안구 유전자 요법.
● 혈관조영에 사용된 아플리베르셉트，코르티코스테로이드 또는 플 루오레세인 염료 또는 소듐 플루오레세인에 대한 알레르기의 병력(치료가 가능한 경도 알레르기는 허용되었음).
● 투여 6개월 내에 하기 심혈관 질환 중 어느 것의 병력 또는 증거:
○ 중증 심장 질환(예를 들어，뉴욕 심장 학회 [NYHA] 기능적 부류 III 또는 IV) 또는 불안정형 협심증의 임상 증거.
○ 급성 관상동맥 증후군，심근경색 또는 관상 동맥 재혈관화， 뇌혈관 사고(CVA), 일과성 허혈 발작(TIA).
○ 진행중인 치료를 필요로 하는 심실성 부정빈맥 또는 비제어 된 부정맥.
○ 스크리닝 기간 내에 BP-저하 의약을 사용함에도 불구하고， 수축기 혈압(SBP) >160 mmHg 또는 확장기 혈압(DBP) >100 mmHg으로 정의되는 비 제어된 고혈압. BP-저하 의약이 요구되었던 경우에，대상체는 무작위화 전 30일 동 안 연속적으로 동일한 의약의 안정한 용량을 받아야 했다.
● 진행중인 출혈 장애의 임의의 병력. 아스피린 또는 다른 항응고 제(예를 들어, 인자 Xa 억제제）의 사용은 배제 기준이 아니었다.
● HbA1C >10%로 정의되는 비제어된 당뇨병; 또는 무작위화 전 3개 월 내에 당뇨병성 케톤산증의 병력; 또는 마지막 3개월 내에 집중 인슐린 치료(펌 프 또는 다중 1일 주사）를 개시하거나 또는 다음 3개월 내에 그렇게 계획되었던 대상 체.
● 전신 스테로이드로의 치료 또는 면역억제 치료(예를 들어 메토 트렉세이트, 아달리무맙）를 필요로 하는 전신 자가면역 질환의 병력.
● 황반 부종을 유발하는 것으로 알려진 전신 약물(예를 들어, 핑 골리모드, 타목시펜, 클로로퀸/히드록시클로로퀸） 또는 임의의 선행 전신 항-VEGF 요법.
● HIV 또는 활성 바이러스성 간염에 대해 양성인 것으로 알려짐(C 형 간염에 대한 치료 후 치유가 기록되지 않는 한）; 알려진 매독 병력.
● 추정 CrCl <30 mL/분(콕크로프트-가울트 계산에 의함）에 의해 나타난 바와 같은 알려진 중증 신장애; 연구 기간 동안 혈액투석에 대한 필요 또는 예상된 필요.
● 무작위화 전 1주 내의 임의의 열성 질병.
추가로, 연구 눈에서의 하기 안구 배제 기준 중 어느 것을 충족하는 대상체는 이 연구로부터 배제되었다:
● 임의의 유리체 또는 망막전 출혈，임상 검사시 표준 ETDRS 7-필 드와 등가인 영역 내 >1/2-디스크 영역의 다른 곳의 신생혈관화，또는 임상 검사시 >1/3-디스크 영역의 디스크의 신생혈관화로 정의되는，스크리닝 시점에서의 고위험 증식성 당뇨병성 망막병증(PDR）.
● 연구 눈에서의 임의의 선행 국소 또는 격자 레이저 광응고술 또 는 임의의 선행 범 망막 광응고술(PRP）.
● 무작위화 전 이전 60일에서의 임의의 항-VEGF 요법(2회 이하의 선행 항-VEGF 주사는 허용되었지만，이전 60일에서는 이루어질 수 없었음）.
● 전안부 신생혈관화(예를 들어，홍채의 신생혈관화 [NVI] 또는 신생혈관 녹내장 [NVG]），유의한 유리체 출혈，섬유혈관 증식 또는 견인성 망막 박 리의 병력.
● 임상 검사 또는 OCT에서，황반 부종 또는 시각 장애에 기여하는 것으로 생각되는，중심와에서의 구조적 이상(예를 들어，조밀한 경질 삼출물，색 소 이상， 중심와 위축， 유리체황반 견인 또는 망막전막）의 검사 증거.
● 연구 눈에서 연령-관련 황반 변성(어느 한쪽 눈에서），망막 정 맥 폐쇄，망막 동맥 폐쇄，병리학적 근시 등을 포함한，당뇨병성 망막병증 이외의 다른 망막 질환의 병력.
● 시각 개선에 대한 잠재력을 감소시키거나，황반의 평가를 혼동시 키거나 또는 연구 동안 의학적 또는 외과적 개입을 필요로 할 수 있는 DME 이외의 다른 임의의 현재 안구 질환 또는 이러한 안구 질환의 병력(예를 들어 유의한 백 내장, 황반 견인） 또는 후낭하 백내장의 임의의 증거.
● 제일 전 3개월 내의 백내장 적출 또는 이트륨 알루미늄 가넷(YAG） 낭절개술의 이력.
● 연구 눈에서의 망막 박리(복구가 있거나 없음）의 병력.
● 섬유주절제술 또는 녹내장 단락술 또는 최소 침습성 녹내장 수술(MIGS）의 이력.
● 유리체절제술 또는 다른 여과 수술의 이력.
● 무수정체 또는 전방 안내 렌즈의 존재.
● 무작위화 시점에 연구 눈에서의 비제어된 고안압증 또는 녹내장(항녹내장 의약으로의 치료에도 불구하고 IOP >22 mmHg로 정의됨） 또는 >2종의 IOP 저하 의약의 현재 사용.
● 임의의 안구 상태에 대한 안내 또는 안구주위 스테로이드 치료의 임의의 이력(예를 들어, IVT 트리에센스, 일루비엔 또는 오주르텍스）.
● 스크리닝 전 90일 기간 내의 굴절 교정 수술.
● 이전 관통 각막성형술, 내피 각막성형술 또는 안구 방사선.
● 임의의 선행 유리체망막 수술.
추가로, 연구 눈 또는 비-연구 눈(즉, "타안"）에서의 하기 안구 배 제 기준 중 어느 것을 충족하는 대상체는 이 연구로부터 배제되었다:
● 해소된 경도의 예상된 수술후 염증을 제외한，포도막염 또는 안 내 염증(등급 트레이스 이상)의 임의의 병력.
● 국소 스테로이드 투여와 관련된 IOP 상승의 병력.
● 바이러스성 포도막염，망막염 또는 각막염을 포함한 안구 단순 포진 바이러스(HSV), 바리셀라-조스터 바이러스(VZV) 또는 시토메갈로바이러스(CMV)의 알려진 병력.
● 결막염，산립종 또는 유의한 안검염을 포함한 외부 안구 감염의 증거.
● 안구 록소플라스마증의 병력.
III. 연구 설계
A. 연구 치료
이것은 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 0.10 mL IVT 주사의 효능， 안전성 및 내약성을 평가하기 위한 다기관，무작위，이중-차폐，대조，병행-군 연 구였다. 2회 용량의 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 임상연구하였다.
스크리닝 6개월 내에 DME의 초기 진단을 갖고 항-VEGF 요법의 2회 이하의 선행 주사를 받은 대상체가 등록에 적격이었다.
대략 33명의 적격 대상체를 2가지 용량의 AAV2.7m8-아플리베르셉트(6 x 1011 vg/눈 또는 2 x 1011 vg/눈) 중 하나를 받도록 또는 이전 아플리베르셉트 주사에 의한 모의 안구 주사를 받는 대조군 부문으로 무작위화하였다. AAV2.7m8- 아플리베르셉트를 받도록 배정되었던 대상체는 이전 아플리베르셉트 또는 모의 안구 주 사를 받도록 추가로 무작위화되었다. 연구 부문은 하기에 요약된다:
● 부문 1(n=6): 대상체는 이전 아플리베르셉트 용량과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 6 x 1011 vg/눈의 용량으로 받는다.
● 부문 2(n=6): 대상체는 이전 아플리베르셉트 용량 없이 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 6 x 1011 vg/눈의 용량으로 받는다.
● 부문 3(n=6): 대상체는 이전 아플리베르셉트 용량과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 2 x 1011 vg/눈의 용량으로 받는다.
● 부문 4(n=6): 대상체는 이전 아플리베르셉트 용량 없이 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 2 x 1011 vg/눈의 용량으로 받는다.
● 부문 5(n=9): 대상체는 아플리베르셉트만을 받는다(활성 대조 군).
치료 배정의 차폐를 유지하기 위해, 제1일에 이전 아플리베르셉트가 없는 부문에 또는 제8일에 AAV2.7m8-아플리베르셉트가 없는 부문에 배정된 대상체 는 상응하는 방문시에 모의 안구 주사를 받았다. 대상체당 단지 한쪽 눈만을 연구 눈으로서 선택하였다. 양쪽 눈이 적격인 경우에, BCVA가 더 악화된 눈을 연구 눈으 로서 선택하였다.
AAV2.7m8-아플리베르셉트 및 아플리베르셉트 둘 다를 IVT 주사를 통 해 투여하였다. 활성 염증이 존재하는 경우에는 IVT 주사를 수행하지 않았다. 국소 또는 결막하 마취 하에 포비돈-아이오딘에 의한 무균 기술을 사용하였다. 모의 안구 주사 절차는 주사를 모방하기 위해 동일한 조건 하이지만 눈에 대해 누르는 바늘이 없는(평활 말단을 사용함） 비어있는 시린지를 사용하여 수행하였다.
이 연구에서의 부문의 요약이 표 17에 제공된다.
[표 17]
연구 부문.
제1일 및 제8일에 배정된 IVT 주사 후에，모든 대상체를 제1일 후 제2주， 제4주， 이어서 제48주까지 4주마다(예를 들어， 제8주， 제12주， 제16주 등） 추적하였다. 차폐를 유지하기 위해，대상체 및 평가 수행 인력 둘 다를 연구 전반에 걸쳐 치료 배정에 대해 차폐하였다.
모든 대상체를 무작위화 후 48주 동안 추적하였다.
B. 예방적 국소 스테로이드 요법
모든 대상체에게 제1일에 시작하여 디플루프레드네이트(0.05%; 예 를 들어, 두레졸)의 예방적 7주 국소 코르티코스테로이드 요법을 투여하였다. 대상체는 디플루프레드네이트를 4주 동안(즉, 제1일에 내지 제28일) 1일에 4회(QID), 이어서 1주 동안(즉, 7일 동안) 1일에 3회(TID), 이어서 1주 동안(즉, 7일 동안) 1일에 2회(BID) 및 마지막으로 1주 동안(즉, 7일 동안) 1일에 1회(QD) 자 기-투여하도록 지시받았다. 점감은 활성 염증의 존재 하에서는 시작하지 않았다. 염증의 징후가 발생하였으면 이 요법을 연장하였다. 디플루프레드네이트 요법의 요약이 표 2에 제공된다.
[표 2]
디플루프레드네이트 요법.
C. 구제 치료
제8주에 시작하여, 대상체가 하기 중 어느 것을 충족한 경우에 구제 아플리베르셉트(2 mg IVT)를 받았다:
● SD-OCT에 의해 평가시 CST가 제1일 또는 제4주에 기록된 2개의 CST 측정치 중 더 낮은 것과 비교하여 > 50 μm의 증가.
● DME 질환 활성의 악화로 인한 BCVA가 제1일 또는 제4주에 기록된 2개의 BCVA 측정치 중 더 높은 것과 비교하여 > 5개 문자의 상실.
활성 염증이 있는 눈에는 아플리베르셉트를 주사하지 않았다. 구제 아플리베르셉트 주사들 사이에 최소 21일이 요구되었다.
D. 의약 및 치료
하기 의약은 연구 동안 금지되었다:
● 베바시주맙을 포함한 임의의 전신 항-VEGF 작용제.
● 황반 부종을 유발하는 것으로 알려진 전신 약물(예를 들어，핑 골리 모드，타목시 펜，클로로퀸/히 드록시 클로로퀸）.
● 연구 눈에서의 연구 약물 또는 아플리베르셉트 IVT 2 mg 이외의 다른 임의의 항-VEGF 작용제.
● 연구 눈에서의 IVT 스테로이드(예를 들어，오주르텍스 또는 일루비엔 또는 트리에센스）.
● 전신 면역억제 약물(예를 들어，정맥내 스테로이드，메토트텍세 이트，아자티오프린，시클로스포린，아달리무맙，인를릭시맙，에타네르셉트）. 흡 입 또는 국소 스테로이드 및 NSAID는 허용되었다.
연구 눈에서 고위험 PDR이 발생하였던 대상체는 구제 아플리베르셉트를 받은 후에 범 망막 광응고술(PRP）을 받았다.
시각적으로 유의한 백내장을 갖는 대상체는 연구에 등록되지 않았지만，백내장이 연구 동안 발생하였던 경우에，연구 눈에서의 백내장 수술은 임상 적으로 나타나고 AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 > 90일 후 및/또는 아플리베르셉트 의 마지막 주사 > 7일 후로 스케줄링되었던 경우에 수행될 수 있었다.
타안(비-연구 눈)에서 DME가 발생한 대상체는 표준 관리 요법을 받 을 수 있었다.
IV. 연구 평가
A. 일반 신체 검사 및 활력 징후
스크리닝 및 연구 종료(EOS) 또는 조기 종결 방문시에 일반 신체 검사(PE)를 수행하였다. PE는 전반적 외관，신경계，HEENT(두부，눈，귀，코 및 인후)，경부，심혈관，호흡기，복부，사지，피부，체중 및 신장에 대한 신체 계통 검사로 이루어졌다. EOS 또는 조기 종결 방문시에， 신체 검사는 스크리닝 검사 이 후 대상체의 신체 상태에 임의의 변화가 발생하였는지를 평가하였다. AE의 평가를 위해 필요에 따라 표적화된 신체 검사를 수행하였다.
활력 징후는 혈압，맥박수，체온 및 호흡률로 이루어졌다. 스크리 닝 및 EOS 또는 조기 종결 방문시에 각각의 대상체에 대해 12-리드 심전도(ECG)를 수행하였다.
B. 실험실 시험，벡터 발현 및 면역 반응
연구를 위해 하기 임상 실험실 시험을 수행하였다: 화학, 전혈구 계수, HbA1C, 요분석 및 HLA-B27 유전자형결정.
대상체의 샘플(혈액 및/또는 방수 둘 다）을 수집하여 하기를 측정 하였다:
● AAV2.7m8에 대한 총 항체: 총 항-AAV2.7m8 항체에 대한 혈청을 ELISA 검정에서 측정하였다.
● AAV2.7m8에 대한 중화 항체: 중화 항-AAV2.7m8 항체에 대한 혈청을 세포-기반 검정에서 측정하였다.
● 항-아플리베르셉트 항체: 아플리베르셉트에 대한 체액성 면역 반응에 대한 혈청을 ELISA 검정에서 측정하였다.
● 아플리베르셉트 단백질 발현: 혈청 및 방수 샘플을 수집하였으며 아플리베르셉트 단백질의 존재에 대해 메소스케일 디스커버리 검정에서 측정하였다.
● 세포-매개 면역 반응: AAV2.7m8 캡시드 및 아플리베르셉트 단백 질에 대한 세포성 면역을 ELISPOT 검정에서 측정하였다.
C. 전체 안과 검사
연구 평가는 안과 검사, 안내압(IOP） 및 간접 검안경검사를 포함하였다.
안과 검사는 눈 및 부속기의 외부 검사, 안검/동공 반응성(안검하 수, 비정상적 동공 형상, 불균등 동공, 광에 대한 비정상적 반응 및 구심신경 동공 결손을 포함하나 이에 제한되지는 않음）에 대한 상용 스크리닝 및 슬릿-램프 검사(안검，결막，각막，수정체，홍채，전방）로 이루어졌다. 슬릿-램프 검사는 전안구 구조를 검사하였고，임의의 소견을 등급화하는데 사용되었다. 슬릿-램프 검사 동안 임 의의 소견이 주목되었던 경우에， 임의의 방문시에， 중증도를 등급화하였고， 소견을 임상 적으로 유의한 것으로 또는 임상적으로 유의하지 않은 것으로 기재하였다.
골드만 압평 안압측정계 또는 토노-펜tm을 사용하여 IOP 측정을 수 행하였다. 동일한 IOP 측정 방법을 각각의 개별 대상체에 대해 연구 전반에 걸쳐 사 용하였다. IOP 측정은 연구 전반에 걸쳐 동일한 방법을 사용하여 임의의 IVT 주사 전 및 눈 확장 전에 수행하였다. 제1일 및 제8일 방문은 주사전 및 주사후(주사 30 분 후） IOP 측정을 필요로 하였다.
확장 간접 검안경검사는 유리체 시신경，주변 망막 및 망막 혈관계 의 후안부 이상의 평가를 포함하였다. 검안경검사 동안 임의의 소견이 주목되었던 경우 에，임의의 방문시에，중증도를 등급화하였고，소견을 임상적으로 유의한 것으로 또 는 임상적으로 유의하지 않은 것으로 기재하였다. 제1일 및 제8일 방문은 주사전 및 주사후 간접 검안경검사 평가를 필요로 하였다.
D. 굴절 및 시력
굴절 및 BCVA를 측정하였다. 눈을 확장시키기 전에 4 미터의 출발 거 리에서 시력 측정치를 측정하였다.
E. 영상화
스펙트럼 도메인 광 간섭 단층촬영(SD-OCT)은 간섭 프린지 패턴의 스펙트럼 분석에 의해 후방-산란 광의 크기 및 지연으로 부호화된 깊이-분해 조직 구조 정보를 제공하는 간섭측정 기술이다. 대상체가 연구 무작위화 전 방문시에 항-VEGF 주사를 받은 경우에, 이들 방문으로부터의 OCT를 수집하고, 중앙 판독 센 터로 전달하였다.
광 간섭 단층촬영 혈관조영(OCT-A)은 망막 및 맥락막의 용적 3차원 맵뿐만 아니라 혈류에 대한 정보를 제공하는 영상화 기술이다. 2가지 유형의 OCT- A인 스웹트-소스 및 스펙트럼-도메인이 존재한다. 이용가능한 경우 스웹트-소스 영상화를 사용하였다. 스웹트-소스 기기는 이용가능하지 않았고 스펙트럼-도메인 기기 는 이용가능하였던 경우에, 스펙트럼 도메인 기기를 사용하였다.
망막, 시신경 유두 및 황반의 초광각 안저 디지털 사진 영상의 수집을 위한 표준화된 절차를 따랐다. 추가로, 확장 전에 홍채의 사진을 찍었다.
염료-트레이싱 방법을 사용하여 망막 순환 및 혈관 투과성을 검사하기 위한 표준화된 절차를 따랐다. 이는 체순환 내로의 소듐 플루오레세인의 주사를 수반하였으며, 그 후에 490 nm의 파장에서의 청색 광으로의 망막의 조명 후에 방출된 형광을 디지털 사진촬영함으로써 혈관조영상을 수득하였다.
F. 실험실, 바이오마커 및 다른 생물학적 시편
방수 샘플을 수집하고, 아플리베르셉트, VEGF-A, 중화 항체(NAb) 및 추가의 바이오마커의 수준에 대해 분석하였다. 유리체액 샘플을 수득하고, 아플 리베르셉트 농도 및 다른 바이오마커에 대해 분석하였다.
G. 안전성
연구 치료 투여 후，모든 임상적으로 유의한 유해 사건(AE)을 보고하였다. 각각의 대상체를 a) 마지막 연구 방문 30일 후에 AE 보고 기간의 종료까지 또는 b) 해소되거나 안정할 때까지 임의의 진행중인 연구 치료 관련 AE 및/또는 심 각한 AE(SAE)에 대해 추적하였다. DME와 연관되었던 임의의 임상적으로 유의한 안전성 평가는，대상체의 상태에 대해 예상되는 것보다 더 중증인 것으로 판단되지 않는 한，AE 또는 SAE로서 보고하지 않았다. 연구 하에서의 질환의 진행은 효능 결과로 서 포착하였다.
이 연구에 대한 특별 관심 유해 사건은 다음을 포함하였다:
● 시력-위협 유해 사건: 유해 사건은 하기 기준 중 1종 이상을 충 족하는 경우에 시력-위협인 것으로 간주하였다:
○ 이전 방문과 비교하여 BCVA에서 ≥ 30개 문자의 감소를 유발하였다.
○ 영구적인 시력 상실을 예방하기 위해 외과적 또는 의학적 개 입(즉，통상적인 수술，유리체절제술)을 필요로 하였다.
○ 중증 안내 염증(즉，안내염，4+ 전방 세포/흐림 또는 4+ 유 리체 세포)을 유발하였다.
모든 상기-열거된 시력-위협 유해 사건을 심각한 유해 사건으로서 보고하였으며, 주요 사건 용어로서 사건의 기저 원인(알려진 경우）을 열거하였다.
H. 효능
DME의 치료에서의 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효능을 하기 척도에 의해 평가하였다. BCVA 및 SD-OCT 종점에 대한 기준선 값은 아플리베르셉트 IVT 또 는 모의 안구 주사를 투여한 경우에 제1일 방문시에 취한 치료전 측정치를 지칭하였다.
● BCVA: 시각은 주로 ETDRS 점수(정확하게 읽힌 문자의 개수）로서 표현되는 BCVA를 통해 평가하였다. 대상체가 기준선과 비교하여 ETDRS 점수에서 15 개 미만의 문자를 상실한 경우에 시각 유지로 분류하였다. 계산된 종점은 기준선으 로부터의 평균 변화, 기준선과 비교하여 적어도 15개 문자의 획득 퍼센트 및 기준 선과 비교하여 15개 이상의 문자의 상실 퍼센트를 포함하였다.
● 중심 서브필드 두께: 승인된 장비 및 표준 기술을 사용하여 SD- OCT를 수행함으로써 기준선 값과 비교하여 두께 및 유체를 평가하였다. 종점은 CST 및 황반 부피를 포함하였다.
● 아플리베르셉트 재치료: 시간 경과에 따른 AAV2.7m8-아플리베르 셉트 치료 후 제공된 아플리베르셉트 주사의 발생률 및 시기.
● 각각의 시점에 대해, 당뇨병성 망막병증 중증도 척도(DRSS）를 초광각 컬러 안저 촬영을 사용하여 결정하고, 제1일과 비교하였다.
● 초광각 영상화 및 임상 검사에 의해 결정시 시각 위협 합병증(전안부 신생혈관화，당뇨병성 황반 부종，고위험 PDR 발생，유리체 출혈 또는 견 인성 망막 박리).
I. 통계적 분석
주요 분석 집단은 저化일에 연구 치료(AAV2.7m8-아플리베르셉트 IVT 또는 모의 안구 주사)를 받았던 모든 무작위화된 대상체를 포함하였다. 모든 안전성 및 효능 변수는 치료 부문별로 기술적으로 요약되었다. 평균，표준 편차(SD)，중앙 값 및 범위는 연속 변수에 대해 제공되고; 빈도 수 및 백분율은 범주형 변수에 대 해 제공되었다. 평균 및 백분율의 신뢰 구간은 90% 및 95% 수준 둘 다에서 제공되었다. 카플란-마이어 생존 분석을 이용하여 DME 질환 악화의 처음 발생까지의 중앙 시간을 유도하였다. 연구 동안 각각의 대상체가 받은 모든 구제 아플리베르셉 트(2 mg IVT)는 재발성 사건에 대한 통계적 모델을 사용하여 요약되었다. 시간 경 과에 따른 평균 누적 함수(MCF) 곡선은 평균 누적 주사 횟수에 대해 플롯팅되었다. 반복 측정을 위한 혼합-효과 모델(MMRM)을 사용하여 시간 경과에 따른 BCVA 및 CST의 변화에 대한 치료 효과를 조사하였다. 범주형 결과에 대한 일반화된 혼합 모 델을 사용하여 시간 경과에 따른 DRSS 변화에 대한 치료 효과를 조사하였다. 중간 분석(IA)은 모든 대상체가 24주 동안 추적된 후에 이루어졌다.
V. 결과
부문 1에서 당뇨병성 황반 부종이 있었던 56세의 미국 인디언 또는 알래스카 원주민 여성인 한 대상체(예를 들어, AAV2.7m8-아플리베르셉트의 6E11 벡터 게놈의 용량으로 치료를 받은 사람)는 이 연구에서 연구 약물 대 모의로 무작위화된 후 약 30주 후에 저안압증의 심각한 유해 사건을 경험하였다. 현재 임상시험자 자료집(4.0판)에 따르면, 저안압증은 이 연구 약물에 대해 예상치 못한 것이었다. 환자는 연구에 남아 있었고 계속 치료를 받았고 면밀히 추적되었다. 임상적 염증의 징후가 없더라도 ≤ 10 mmHg의 IOP가 관찰된 경우 스테로이드 치료를 개시하는 것이 권장되었다.
본 개시내용이 이해의 명확성을 목적으로 예시 및 실시예에 의해 어 느 정도 상세히 기재되었지만，설명 및 실시예는 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용 은 명백하게 그 전문이 참조로 포함된다.
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Synthetic Construct <400> 31 cccaggtcca agtttaaacg cc 22 <210> 32 <211> 77 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 tctttgggct ttctatatac attttgaaat gaggttgaca agttacctag gaaaactgtc 60 ttcctgcccg ggtggca 77 <210> 33 <211> 1172 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 ctctggagac gacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 60 ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 120 caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 180 ccaagtccgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 240 tacatgacct tacgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 300 accatgctga tgcggttttg gcagtacacc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg 360 ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa 420 cgggactttc caaaatgtcg taataacccc gccccgttga cgcaaatggg cggtaggcgt 480 gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat cgcctggaga 540 ggccatccac gctgttttga 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agtttctctt tcatctgttc aaatttttgt 180 ctagttttat tttttactga tttgtaagac ttctttttat aatctgcata ttacaattct 240 ctttactggg gtgttgcaaa tattttctgt cattctatgg cctgactttt cttaatggtt 300 ttttaatttt aaaaataagt cttaatattc atgcaatcta attaacaatc ttttctttgt 360 ggttaggact ttgagtcata agaaattttt ctctacactg aagtcatgat ggcatgcttc 420 tatattattt tctaaaagat ttaaagtttt gccttctcca tttagactta taattcactg 480 gaattttttt gtgtgtatgg tatgacatat gggttccctt ttatttttta catataaata 540 tatttccctg tttttctaaa aaagaaaaag atcatcattt tcccattgta aaatgccata 600 tttttttcat aggtcactta catatatcaa tgggtctgtt tctgagctct actctatttt 660 atcagcctca ctgtctatcc ccacacatct catgctttgc tctaaatctt gatatttagt 720 ggaacattct ttcccatttt gttctacaag aatatttttg ttattgtctt tgggctttct 780 atatacattt tgaaatgagg ttgacaagtt acctaggaaa actgtcttcc tgcccgggtg 840 gcatccctgt gacccctccc cagtgcctct cctggccctg gaagttgcca ctccagtgcc 900 caccagcctt gtcctaataa aattaagttg catcattttg tctgactagg tgtccttcta 960 taatattatg gggtggaggg gggtggtatg gagcaagggg 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cgcacgggat cgagctctcg gtgggagaga agttggtgct taactgcacc gcccggacgg 1800 aactgaatgt gggaatcgac ttcaactggg aatacccgtc cagcaagcat cagcataaga 1860 agctggtgaa ccgggacctc aagactcagt ccggcagcga aatgaagaag ttcctgtcga 1920 ccctcactat tgacggagtg accagatccg accagggcct ctacacttgc gccgcttcca 1980 gcggactcat gaccaagaag aacagcactt tcgtgagggt gcatgagaag gacaagaccc 2040 acacgtgtcc gccgtgccca gccccagagc tgctgggagg cccttccgtg ttcctgtttc 2100 cgcccaagcc aaaggatacc ctgatgatct caaggacccc tgaggtcaca tgcgtcgtgg 2160 tggatgtgtc gcacgaggac cctgaagtca aattcaattg gtatgtggac ggagtggaag 2220 tccacaacgc gaaaaccaag ccgagagaag aacagtacaa ttccacctac cgggtggtgt 2280 cggtgctgac tgtgctgcac caggactggc tcaacggaaa ggagtacaag tgcaaggtgt 2340 ccaacaaggc tctgcccgca cctattgaaa agaccatctc caaggccaag ggtcaacctc 2400 gcgagcctca ggtgtacact ctgcctccaa gccgggacga actgactaag aaccaagtct 2460 ctctgacctg tttggtgaag ggcttctacc cgtcagacat cgcagtggag tgggagtcaa 2520 acggtcagcc ggagaacaac tacaaaacaa ccccccccgt gctggactcc gacggctcct 2580 tcttcctgta ctccaagctt accgtggata agagccgctg gcaacagggc aacgtgtttt 2640 cctgctccgt catgcacgaa gccctgcaca accattatac ccagaagtcc ctgtcgctgt 2700 cccccgggaa atagtgactg ttctcatcac atcatatcaa ggttatatac catcaatatt 2760 gccacagatg ttacttagcc ttttaatatt tctctaattt agtgtatatg caatgatagt 2820 tctctgattt ctgagattga gtttctcatg tgtaatgatt atttagagtt tctctttcat 2880 ctgttcaaat ttttgtctag ttttattttt tactgatttg taagacttct ttttataatc 2940 tgcatattac aattctcttt actggggtgt tgcaaatatt ttctgtcatt ctatggcctg 3000 acttttctta atggtttttt aattttaaaa ataagtctta atattcatgc aatctaatta 3060 acaatctttt ctttgtggtt aggactttga gtcataagaa atttttctct acactgaagt 3120 catgatggca tgcttctata ttattttcta aaagatttaa agttttgcct tctccattta 3180 gacttataat tcactggaat ttttttgtgt gtatggtatg acatatgggt tcccttttat 3240 tttttacata taaatatatt tccctgtttt tctaaaaaag aaaaagatca tcattttccc 3300 attgtaaaat gccatatttt tttcataggt cacttacata tatcaatggg tctgtttctg 3360 agctctactc tattttatca gcctcactgt ctatccccac acatctcatg ctttgctcta 3420 aatcttgata tttagtggaa cattctttcc cattttgttc tacaagaata tttttgttat 3480 tgtctttggg ctttctatat acattttgaa atgaggttga caagttacct aggaaaactg 3540 tcttcctgcc cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag 3600 ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg 3660 actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggccca 3720 agttgggaag aaacctgtag ggcctgcgta cgtagataag tagcatggcg ggttaatcat 3780 taactacaag gaacccctag tgatggagtt ggccactccc tctctgcgcg ctcgctcgct 3840 cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc tttgcccggg cggcctcagt 3900 gagcgagcga gcgcgc 3916 <210> 40 <211> 1377 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 atggtgtcat actgggatac tggagtcttg ctttgtgccc tgctgtcctg cctcctcctg 60 actggctcca gctcgggctc agataccggt cgccccttcg tggagatgta ctccgagatc 120 ccggaaatta tccacatgac tgaggggcgc gaacttgtga tcccctgccg ggtcaccagc 180 ccgaacatta ctgtgacttt gaagaagttc cccctggaca ccctgattcc ggatgggaag 240 agaattatct gggattcacg gaagggattc atcatcagca acgcgaccta caaggaaatt 300 ggcctcctca cttgcgaagc cactgtgaac ggacacttgt acaagaccaa ctacctgacc 360 caccgccaga ccaacaccat catcgacgtc gtcctgtccc cttcgcacgg gatcgagctc 420 tcggtgggag agaagttggt gcttaactgc accgcccgga cggaactgaa tgtgggaatc 480 gacttcaact gggaataccc gtccagcaag catcagcata agaagctggt gaaccgggac 540 ctcaagactc agtccggcag cgaaatgaag aagttcctgt cgaccctcac tattgacgga 600 gtgaccagat ccgaccaggg cctctacact tgcgccgctt ccagcggact catgaccaag 660 aagaacagca ctttcgtgag ggtgcatgag aaggacaaga cccacacgtg tccgccgtgc 720 ccagccccag agctgctggg aggcccttcc gtgttcctgt ttccgcccaa gccaaaggat 780 accctgatga tctcaaggac ccctgaggtc acatgcgtcg tggtggatgt gtcgcacgag 840 gaccctgaag tcaaattcaa ttggtatgtg gacggagtgg aagtccacaa cgcgaaaacc 900 aagccgagag aagaacagta caattccacc taccgggtgg tgtcggtgct gactgtgctg 960 caccaggact ggctcaacgg aaaggagtac aagtgcaagg tgtccaacaa ggctctgccc 1020 gcacctattg aaaagaccat ctccaaggcc aagggtcaac ctcgcgagcc tcaggtgtac 1080 actctgcctc caagccggga cgaactgact aagaaccaag tctctctgac ctgtttggtg 1140 aagggcttct acccgtcaga catcgcagtg gagtgggagt caaacggtca gccggagaac 1200 aactacaaaa caaccccccc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct gtactccaag 1260 cttaccgtgg ataagagccg ctggcaacag ggcaacgtgt tttcctgctc cgtcatgcac 1320 gaagccctgc acaaccatta tacccagaag tccctgtcgc tgtcccccgg gaaatag 1377 <210> 41 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 41 Met Val Ser Tyr Trp Asp Thr Gly Val Leu Leu Cys Ala Leu Leu Ser 1 5 10 15 Cys Leu Leu Leu Thr Gly Ser Ser Ser Gly Ser Asp Thr Gly Arg Pro 20 25 30 Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu 35 40 45 Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr 50 55 60 Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys 65 70 75 80 Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr 85 90 95 Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His 100 105 110 Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile 115 120 125 Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu 130 135 140 Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile 145 150 155 160 Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu 165 170 175 Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe 180 185 190 Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu 195 200 205 Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr 210 215 220 Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 225 230 235 240 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 245 250 255 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 260 265 270 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 275 280 285 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 290 295 300 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 305 310 315 320 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 325 330 335 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 340 345 350 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 355 360 365 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 370 375 380 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 385 390 395 400 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 405 410 415 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 420 425 430 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 435 440 445 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455

Claims (72)

  1. 개체의 한쪽 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며，여기서 개체는 인간이고，여기서 rAAV 입자는
    a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단 백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인，개체에서 녹내장을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서，녹내장은 신생혈관 녹내장인 방법.
  3. 개체의 안내압을 감소시키기 위한 방법으로서, 개체의 한쪽 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며， 여기서 개체는 인간이고，여기서 rAAV 입자는
    a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산, 및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인 방법.
    [청구항 3.a]
    개체의 안내압을 감소시키기 위한 방법으로서, 개체의 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고，여기서 rAAV 입자는
    a) 모양체에서 활성인 강력한 프로모터의 제어 하에서 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산, 및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 개체는 녹내장이 있는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 녹내장은 신생혈관 녹내장인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 6 X 1011 벡터 게놈(vg/눈) 이하인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 6 Х 1010 내지 약 6 Х 1011 벡터 게놈(vg/눈)인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 6 x 1010 내지 약 2 x 1011 벡터 게놈（vg/눈）인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 2 x 1011 내지 약 6 x 1011 벡터 게놈（vg/눈）인 방법.
  10. 제9항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 2 x 1011 또는 약 6 x 1011 벡터 게놈（vg/눈）인 방법.
  11. 제10항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 2 x 1011 벡터 게놈（vg/ 눈）인 방법.
  12. 제11항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 6 x 1011 벡터 게놈（vg/ 눈）인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후인 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    (a) 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 한쪽 눈에 rAAV 입 자의 단위 용량을 투여하는 것과 동일한 날이거나; 또는
    (b) 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 한쪽 눈에 rAAV 입 자의 단위 용량을 투여한지 약 1일 내지 약 14일 후인
    방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량이 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 동일하거나 그보다 적은 눈당 벡터 게놈(vg/눈)을 포함하는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후인 방법.
  18. 제15항에 있어서， 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량이 개체 의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 많은 눈당 벡터 게놈（vg/눈）을 포함하는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서， 핵산이 서열식별번호: 40의 핵산 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서， 폴리펩티드가 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서， 폴리펩티드가 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서， 폴리펩티드가 아플리베르셉트인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서， 핵산이 제1 인핸서 영역，프로모터 영역，5'UTR 영역，제2 인핸서 영역 및 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함하는 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서， 핵산이 5'에서 3' 순서로
    (a) 제1 인핸서 영역;
    (b) 프로모터 영역;
    (c) 5'UTR 영역;
    (d) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산;
    (e) 제2 인핸서 영역; 및
    (f) 폴리아데닐화 부위
    를 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 것인 방법.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서， 제1 인핸서 영역이 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 것인 방법.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서， 프로모터 영역이 서열식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 것인 방법.
  27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드를 코딩하는 핵산이 서열식별번호: 40의 핵산 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 방법.
  28. 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 방법.
  29. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 41의 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 방법.
  30. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 아플리베르셉트인 방법.
  31. 제23항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 5'UTR 영역이 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함하는 것인 방법.
  32. 제23항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 인핸서 영역이 서열식별번호: 26의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함하는 것인 방법.
  33. 제23항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리아데닐화 부위가 서열식별번호: 27의 서열 또는 이에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 포함하는 것인 방법.
  34. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 (a) 서열식별번호: 22의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함 하는 제1 인핸서 영역; (b) 서열식별번호: 23의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 서열식별번호: 26의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 （e） 서열식별번호: 27의 서열 또는 이에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함하는 것인 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서， 핵산이 서열식별번호: 39의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서， AAV2 캡시드 단백질이 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하고，여기서 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는 것인 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서， AAV2 캡시드 단백질이 서열식별 번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP（서열식별번호: 14）를 포함하는 것인 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서， AAV2 캡시드 단백질이 서열식별 번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA(서열식별번호: 1）를 포함하는 것인 방법.
  39. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서， rAAV 입자가 서열식별번호: 38의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 38에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 GH 루프를 포함하는 AAV2 VP1 캡시드 단백질을 포함하는 것인 방법.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서， 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 유리체내 투여에 의한 것인 방법.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량이 제약 제제 중에 있는 것인 방법.
  42. 제41항에 있어서， 제약 제제가 rAAV 입자，염화나트륨，인산나트륨 및 계면 활성제를 포함하는 것인 방법.
  43. 제42항에 있어서， 제약 제제가 약 150 내지 약 200 mM 염화나트륨，약 1 내 지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨，약 1 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨，약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188 및 mL당 약 6 x 1013 내지 약 6 x 1010 벡터 게놈 (vg) (vg/mL)의 rAAV 입자를 포함하며，여기서 제약 제제가 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는 것인 방법.
  44. 제43항에 있어서, 제약 제제가 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인 산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 6 x 1012 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제가 약 7.3의 pH를 갖는 것인 방법.
  45. 제43항에 있어서, 제약 제제가 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인 산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 2 x 1012 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제가 약 7.3의 pH를 갖는 것인 방법.
  46. 제43항에 있어서, 제약 제제가 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인 산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 6 x 1011 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제가 약 7.3의 pH를 갖는 것인 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 약 25 μL 내지 약 250 μL 부피로 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여되는 것인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용 량이 약 100 μL의 부피를 포함하는 것인 방법.
  49. 제48항에 있어서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용 량이 약 30 μL 부피를 포함하는 것인 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 항-VEGF 작용제를 사용 한 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받은 것인 방법.
  51. 제50항에 있어서, 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 rAAV 입자의 투여 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제의 1 또는 2회 주사를 받은 것인 방법.
  52. 제50항 또는 제51항에 있어서, 항-VEGF작용제가 아플리베르셉트(aflibercept)인 방법.
  53. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 항 -VEGF 작용제를 사용한 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받지 않은 것인 방법.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 항 VEGF 작용제의 투여와 조합되어 투여되는 방법.
  55. 제54항에 있어서， rAAV 입자의 단위 용량을 항 VEGF 작용제의 투여 약 1주 또는 약 7일 후에 개체의 한쪽 눈에 투여하는 것을 포함하는 방법.
  56. 제54항 또는 제55항에 있어서, 항 VEGF 작용제를 1일차에 개체의 한쪽 눈에 투여하는 것 및 rAAV 입자의 단위 용량을 8일차에 개체의 한쪽 눈에 투여하는 것을 포함하는 방법.
  57. 제54항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서， 항 VEGF 작용제가 아플리베르셉트를 포함하는 방법.
  58. 제57항에 있어서, 아플리베르셉트가 유리체내 주사를 통해 약 2 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 스테로이드 치료와 조합되어 투여되는 것인 방법.
  60. 제59항에 있어서， 스테로이드 치료가 코르티코스테로이드 치료인 방법.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서， 스테로이드 치료가 전신 스테로이드 치료인 방법.
  62. 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서，스테로이드 치료가 경구 스테 로이드 치료인 방법.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서， 스테로이드 치료가 프레드니손 치료인 방법.
  64. 제59항 또는 제60항에 있어서， 스테로이드 치료가 국소 스테로이드 치료인 방법.
  65. 제64항에 있어서， 스테로이드 치료가 디플루프레드네이트 치료인 방법.
  66. 제59항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서， 스테로이드가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전，투여 동안 및/또는 투여 후에 투여되는 것인 방법.
  67. 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서， 국소 스테로이드가 약 1 μg 내지 약 3 μg 의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함하는 것인 방법.
  68. 제64항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서， 국소 스테로이드가 약 2.5 μg 의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함하는 것인 방법.
  69. 개체에서 녹내장을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약 6 x 1011 벡터 게놈(vg) 이하의 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV) 입자의 단위 용량이며, 상기 방법은 개체의 한쪽 눈에 상기 단위 용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는
    a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산, 및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단 백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인， 단위 용량.
  70. 필요로 하는 개체의 눈에서 안내압을 감소시키는 방법에 사용하기 위한 rAAV 입자의 단위 용량이며，상기 방법은 개체의 한쪽 눈에 상기 단위 용량을 투여하는 것을 포함하고，여기서 개체는 인간이고，여기서 rAAV 입자는
    a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부(ITR)가 플랭킹된 핵산，및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는，캡시드 단 백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP(서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인， 단위 용량.
  71. 제70항에 있어서， 개체가 녹내장을 갖는 단위 용량.
  72. 제69항 또는 제71항에 있어서, 녹내장은 신생혈관 녹내장인 단위 용량.
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