KR20240005720A - Adgre2 및/또는 clec12a를 표적으로 하는 키메라 수용체 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 개시된 주제는 ADGRE2를 표적으로 하는 키메라 수용체 및 CLEC12A를 표적으로 하는 키메라 수용체를 제공한다. 또한, 본 개시된 주제는 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포, CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포, 및 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포를 제공한다. 본 개시된 주제는 종양, 예를 들어, AML을 치료하기 위한 이러한 세포의 용도를 추가로 제공한다.
Description
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2021년 4월 26일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/179,799 및 2021년 12월 9일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/287,655를 우선권 주장하며, 이들 각각의 내용은 전체가 참고로 포함되며 그 각각이 우선권으로 주장된다.
서열 목록
본 출원에는 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되었으며 전체가 참고로 포함된 서열 목록이 함유되어 있다. 2022년 4월 21일에 생성된 상기 ASCII 복사본의 명칭은 087108_0110_SL.txt이고 크기는 150,762바이트이다.
1.
도입
본 개시된 주제는 면역요법을 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 이는 ADGRE2를 표적으로 하는 키메라 수용체 및 CLEC12A를 표적으로 하는 키메라 수용체, 이러한 키메라 수용체를 포함하는 세포, 및 치료, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML)의 치료를 위한 이러한 세포의 사용 방법에 관한 것이다.
2.
발명의 배경
세포 기반 면역요법은 암 치료에 있어 치료 가능성이 있는 치료이다. T 세포 및 다른 면역 세포는 선택된 항원에 특이적인, 키메라 항원 수용체(CAR)라고 불리는, 항원에 대한 인공 또는 합성 수용체를 코딩(coding)하는 유전 물질의 도입을 통해 종양 항원을 표적화하기 위해 변형될 수 있다. CAR을 사용한 표적화 T 세포 치료는 최근 혈액학적 악성 종양 치료에 임상적으로 성공을 거두었다.
재발성/불응성 급성 골수성 백혈병(relapsed/refractory acute myeloid leukemia, R/R AML)은 예후가 매우 좋지 않다. 유일한 치료 옵션은 동종 조혈 줄기세포 이식(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation)인데, 이는 종종 치료 실패와 심각한 치료 관련 독성 및 사망률과 관련이 있다. 따라서, R/R AML에는 새로운 치료 접근법이 절실히 필요하다. 지난 몇 년 동안 CD19를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 유전적으로 변형된 자가(autologous) T 세포는 R/R B 세포 혈액학적 악성 종양 환자의 치료에 혁명을 일으키고 결과를 개선하여 R/R 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia) 및/또는 특정 B 세포 비호지킨 림프종(B-cell non-Hodgkin lymphoma)에 대한 3개의 CD19 CAR(티사젠렉류셀(tisagenlecleucel), 악시캅타진 실로류셀(axicabtagene ciloleucel) 및 브렉수캅타진 오토류셀(brexucabtagene autoleucel))의 FDA의 승인을 받았다. AML의 경우, CAR T 세포 치료에 대한 임상 연구는 아직 초기 단계에 있으며, 주로 CD33 및 CD123 CAR T 세포를 대상으로 한 임상 결과는 AML 종양 세포의 정상적인 조혈(hematopoiesis) 및 표현형 이질성(phenotypic heterogeneity)에서 CD33 및 CD123의 풍부한 발현으로 인한 안전성과 효능 측면에서의 과제를 시사한다. 따라서, 현재 임상 조사 중인 대체 CAR 치료에 비해 향상된 안전성과 효능을 제공하는 잠재력이 있는 R/R AML에 대한 새로운 조합 CAR 형식이 필요하다.
3.
발명의 요약
본 개시된 주제는 ADGRE2를 표적으로 하는 키메라 수용체 및 CLEC12A를 표적으로 하는 키메라 수용체, 이러한 키메라 수용체를 포함하는 세포, 및 치료, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료를 위한 이러한 세포의 사용 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시된 주제는 ADGRE2를 표적으로 하는 키메라 수용체를 제공한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 ADGRE2에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인(extracellular antigen-binding domain), 막관통 도메인(transmembrane domain) 및 세포 내 도메인(intracellular domain)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 다음을 포함한다: a) 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 b) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv), Fab 또는 F(ab)2를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, scFv는 인간화 scFv이다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46, 서열번호 49, 서열번호 52, 서열번호 55 또는 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46 또는 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47, 서열번호 50, 서열번호 53, 서열번호 56 또는 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47 또는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46, 서열번호 49, 서열번호 52 또는 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47, 서열번호 50, 서열번호 53 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46 또는 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47 또는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서,
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역은 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역은 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
e) 중쇄 가변 영역은 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
f) 중쇄 가변 영역은 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
g) 중쇄 가변 영역은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서,
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역은 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역은 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이에 링커를 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 또는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 41, 서열번호 45, 서열번호 48, 서열번호 51, 서열번호 54, 서열번호 57, 서열번호 148에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 41, 서열번호 45, 서열번호 48 또는 서열번호 51에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 약 10-8M 미만, 약 10-9M 미만, 약 10-10M 미만, 약 10-11M 미만, 약 10-12M 미만 또는 약 10-13M 미만의 해리 상수(KD)로 ADGRE2에 결합한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 약 1 내지 약 100nM의 EC50으로 ADGRE2에 결합한다. 특정 실시양태에서, EC50은 약 10 내지 약 95nM이다. 특정 실시양태에서, EC50은 약 25 내지 약 75nM이다.
특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드, CD28 폴리펩티드, CD3ζ 폴리펩티드, CD4 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, CTLA-4 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드, LAG-3 폴리펩티드, 2B4 폴리펩티드 또는 BTLA 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 CD28 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포 내 도메인은 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD3ζ 폴리펩티드는 변형된 CD3ζ 폴리펩티드이다. 특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 천연 ITAM1, 2개의 기능상실 돌연변이(loss-of-function mutation)로 이루어진 ITAM2 변이체 및 2개의 기능상실 돌연변이로 이루어진 ITAM3 변이체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 천연 ITAM1은 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ITAM2 변이체는 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ITAM3 변이체는 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 서열번호 27에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 세포 내 도메인은 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역(co-stimulatory signaling region)을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역은 CD28 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, DAP-10 폴리펩티드 또는 이들의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 동시자극 신호전달 영역은 CD28 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR), 키메라 공동자극 수용체(CCR) 또는 TCR 유사 융합 분자이다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 CAR이다.
한 측면에서, 본 개시된 주제는 CLEC12A를 표적으로 하는 키메라 수용체를 제공한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은:
ⅰ) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅱ) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅲ) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅳ) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅴ) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅵ) 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅶ) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅷ) 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3; 또는
ⅸ) 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
ⅰ) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅱ) 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅲ) 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅳ) 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅴ) 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅵ) 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅶ) 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅷ) 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3; 또는
ⅸ) 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv), Fab 또는 F(ab)2를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, scFv는 인간 scFv이다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
d) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
e) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
f) 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
g) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
h) 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
i) 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
d) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
d) 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
e) 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
f) 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
g) 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
h) 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
i) 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3.
특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
d) 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3.
특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 다음을 포함한다:
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
e) 중쇄 가변 영역은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
f) 중쇄 가변 영역은 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
g) 중쇄 가변 영역은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
h) 중쇄 가변 영역은 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
i) 중쇄 가변 영역은 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서,
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 75, 서열번호 86, 서열번호 95, 서열번호 100, 서열번호 106, 서열번호 111, 서열번호 117, 서열번호 126 또는 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 75, 서열번호 86, 서열번호 95, 서열번호 100, 서열번호 106, 서열번호 111, 서열번호 117, 서열번호 126 또는 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 75, 서열번호 86, 서열번호 95 또는 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 76, 서열번호 87, 서열번호 96, 서열번호 101, 서열번호 107, 서열번호 112, 서열번호 118, 서열번호 127 또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 76, 서열번호 87, 서열번호 96, 서열번호 101, 서열번호 107, 서열번호 112, 서열번호 118, 서열번호 127 또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 76, 서열번호 87, 서열번호 96 또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서,
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역은 서열번호 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
e) 중쇄 가변 영역은 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 107에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
f) 중쇄 가변 영역은 서열번호 111에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 112에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
g) 중쇄 가변 영역은 서열번호 117에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 118에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
h) 중쇄 가변 영역은 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 127에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
i) 중쇄 가변 영역은 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 다음을 포함한다:
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역은 서열번호 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이에 링커를 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 또는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단까지 위치한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 79, 서열번호 88, 서열번호 97, 서열번호 102, 서열번호 108, 서열번호 113, 서열번호 119, 서열번호 128 또는 서열번호 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 79, 서열번호 88, 서열번호 97 또는 서열번호 102에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 약 10-8M 미만, 약 10-9M 미만, 약 10-10M 미만, 약 10-11M 미만, 약 10-12M 미만 또는 약 10-13M 미만의 해리 상수(KD)로 CLEC12A에 결합하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, KD는 약 0.1pM 이하이다. 특정 실시양태에서, KD는 약 0.05pM 내지 약 0.5pM이다. 특정 실시양태에서, KD는 약 0.1nM 내지 약 5.0nM이다. 특정 실시양태에서, KD는 약 0.3nM 내지 약 3.5nM이다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 약 1nM 내지 약 100nM의 EC50으로 CLEC12A에 결합한다.
특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드, CD28 폴리펩티드, CD3ζ 폴리펩티드, CD4 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, CTLA-4 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드, LAG-3 폴리펩티드, 2B4 폴리펩티드 또는 BTLA 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR), 키메라 공동자극 수용체(CCR) 또는 TCR 유사 융합 분자이다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 키메라 공동자극 수용체(CCR)이다.
특정 실시양태에서, 세포 내 도메인은 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 세포 내 도메인은 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역은 CD28 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, DAP-10 폴리펩티드 또는 이들의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역은 4-1BB 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 벡터로부터 발현된다. 특정 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터(viral vector)이다. 특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터(retroviral vector)이다.
본 개시된 주제는 본원에 개시된 키메라 수용체를 포함하는 세포를 추가로 제공한다. 특정 실시양태에서, 세포는 본원에 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포는 본원에 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포는 a) 본원에 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 b) 본원에 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이고 CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 키메라 공동자극 수용체(CCR)이다.
특정 실시양태에서, CAR은 ADGRE2에 결합하고 다음을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다:
a) 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
b) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서,
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 경쇄 가변 영역은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CCR은 CLEC12A에 결합하고 다음을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다:
a) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
b) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서,
a) 중쇄 가변 영역은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 경쇄 가변 영역은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포는 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및/또는 CLEC12A-표적화 키메라 수용체로 형질도입된다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및/또는 CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 세포 표면에서 상시 발현된다(constitutively expressed). 특정 실시양태에서, 세포는 면역반응성 세포(immunoresponsive cell)이다. 특정 실시양태에서, 세포는 림프계(lymphoid lineage) 세포 또는 골수계(myeloid lineage) 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 림프 세포가 분화될 수 있는 줄기세포 및 골수 세포가 분화될 수 있는 줄기세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 세포는 T 세포이다. 특정 실시양태에서, T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포, 조절 T 세포, 종양 침윤 림프구(TIL), 자연 살해 T 세포, 점막 관련 불변(mucosal associated invariant) T 세포 및 γδ T 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 자연 살해(NK) 세포이다. 특정 실시양태에서, NK 세포는 줄기세포로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 줄기세포는 다능성 줄기세포(pluripotent stem cell)이다. 특정 실시양태에서, 만능 줄기세포는 배아 줄기세포(embryoid stem cell) 또는 유도 만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell)이다.
더욱이, 본 개시된 주제는 본원에 개시된 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 핵산 분자는 본원에 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 암호화한다. 특정 실시양태에서, 핵산 분자는 본원에 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 암호화한다.
특정 실시양태에서, 핵산 분자는 키메라 수용체에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 내인성(endogenous) 또는 외인성(exogenous)이다. 특정 실시양태에서, 외인성 프로모터는 연장 인자(elongation factor, EF)-1 프로모터, 거대세포바이러스 즉시-초기 프로모터(cytomegalovirus immediate-early promoter)(CMV) 프로모터, 유인원 바이러스 40 초기 프로모터(simian virus 40 early promoter)(SV40) 프로모터, 포스포글리세레이트 키나제(phosphoglycerate kinase, PGK) 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터(metallothionein promoter) 및 유비퀴틴 C 프로모터(Ubiquitin C promoter)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터(inducible promoter)이다. 특정 실시양태에서, 유도성 프로모터는 NFAT 전사 반응 요소(transcriptional response element, TRE) 프로모터, CD69 프로모터, CD25 프로모터, IL-2 프로모터, 4-1BB 프로모터, PD1 프로모터 및 LAG3 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 내인성 프로모터이다. 특정 실시양태에서, 내인성 프로모터는 TCR 알파 프로모터(alpha promoter), TCR 베타 프로모터(beta promoter) 및 베타 2-마이크로글로불린 프로모터(beta 2-microglobulin promoter)로부터 선택된다.
본 개시된 주제는 또한 본원에 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 암호화하는 제1 핵산 분자 및 본원에 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 암호화하는 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 조성물을 제공한다.
본 개시된 주제는 또한 본원에 개시된 핵산 분자 또는 본원에 개시된 핵산 조성물을 포함하는 벡터를 제공한다. 특정 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터이다.
본 개시된 주제는 본원에 개시된 핵산 분자 또는 본원에 개시된 핵산 조성물을 발현하는 세포를 추가로 제공한다. 특정 실시양태에서, 세포는 T 세포이다.
본 개시된 주제는 본원에 개시된 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물이다. 특정 실시양태에서, 조성물은 약 25×106 내지 약 150×106개의 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 약 25×106 내지 약 50×106개의 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 약 2.5×106개의 세포를 포함한다.
본 개시된 주제는 본 개시된 세포를 사용하는 다양한 방법을 추가로 제공한다. 본 개시된 주제는 대상체의 종양 부담(tumor burden)을 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 개시된 세포 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 대상체의 종양 세포의 수를 감소시키고/거나 종양 크기를 감소시키고/거나 종양을 근절시킨다.
본 개시된 주제는 종양이 있는 대상체의 생존을 증가시키거나 연장시키는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 개시된 세포 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 개시된 주제는 대상체의 종양을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 개시된 세포 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
특정 실시양태에서, 종양은 ADGRE2 및/또는 CLEC12A를 발현한다. 특정 실시양태에서, 종양은 암이다. 특정 실시양태에서, 종양은 혈액암(blood cancer)이다. 특정 실시양태에서, 종양은 다발성 골수종(multiple myeloma), 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma) 및 골수 악성 종양(myeloid malignancies)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 만성 골수성 백혈병(chronic myeloid leukemia, CML), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 전골수구성 백혈병(acute promyelocytic leukemia, APL), 혼합 표현형 급성 백혈병(mixed-phenotype acute leukemia, MLL), 털세포 백혈병(hairy cell leukemia) 및 B 세포 전림프구성 백혈병(B cell prolymphocytic leukemia)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML)이다. 특정 실시양태에서, AML은 재발성/불응성 급성 골수성 백혈병(R/R AML)이다. 특정 실시양태에서, 골수 악성 종양은 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome, MDS), 골수증식성 신생물(myeloproliferative neoplasm, MPN), 골수/림프 신생물(myeloid/lymphoid neoplasm)(예를 들어, 호산구 증가증(eosinophilia) 및 혈소판 유래 성장 인자 수용체 알파(Platelet Derived Growth Factor Receptor Alpha, PDGFRA), 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(Platelet Derived Growth Factor Receptor Beta, PDGFRB) 또는 섬유아세포 성장 인자 수용체 1(Fibroblast Growth Factor Receptor 1, FGFR1)의 재배열을 동반하거나 PCM1-JAK2를 동반한 골수/림프 신생물), 급성 골수성 백혈병(AML), 모세포 형질세포양 수지상 세포 종양(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm), B 림프모구성 백혈병(B-lymphoblastic leukemia)/림프종 및 T-림프모구성 백혈병(T-lymphoblastic leukemia)/림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 골수성 악성 종양은 골수이형성 증후군(MDS)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간 대상체이다.
또한, 본 개시된 주제는 본원에 개시된 키메라 수용체를 포함하는 세포를 생성하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 개시된 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 세포 내로 도입하는 것을 포함한다.
또한, 본 개시된 주제는 본원에 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 본원에 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포를 생성하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자 및 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 세포 내로 도입하는 것을 포함한다.
4. 도면의 간단한 설명
다음의 상세한 설명은 예시로서 주어지고 기술된 특정 실시양태로 본 발명을 제한하려는 의도는 아니며 첨부 도면과 함께 이해될 수 있다.
도 1a 및 1b는 신선한 AML 환자 샘플(말초 혈액 또는 골수)의 유세포분석을 통해 평가된 ADGRE2, CD33 및 CD123의 표적 항원 발현 프로필을 예시한다; n= 형태학적 질환이 있는 16명의 r/r 성인 AML 환자. 벌크 AML 세포(CD45dim/SSClow 게이트)와 백혈병 줄기세포[leukemic stem cell, LSC; 벌크 AML 세포 게이트 내 Lin-CD34+CD38-(CD45RA+)] 간에 표적 발현을 비교하였다. 표적 양성에 대한 게이트는 동일 샘플 음성 대조군 집단(T 또는 B 세포)을 기반으로 설정되었다. 도 1a는 각 점으로 표시된 개별 환자 샘플의 벌크 또는 LSC 집단 내 표적 양성 AML 세포의 백분율을 보여준다. 평가된 AML 환자의 대다수에서 AML 세포의 90% 초과가 벌크 및 LSC 모두에서 ADGRE2에 대해 양성이었다. 도 1b는 표적 양성 AML 세포가 70% 초과인 평가된 AML 환자 집단의 백분율을 보여준다. 평가된 모든 AML 환자는 벌크 및 LSC 모두에서 ADGRE2 양성 AML 세포가 70% 초과였다.
도 2는 CAR, CCR 및 CAR+CCR의 개략도를 보여준다.
도 3은 CD33 및 CD123-CAR에 비해 향상된 항백혈병 효능에 대한 ADCLEC.syn1 접근법의 이론적 근거를 보여준다. ADGRE2-CAR 단독은 일부 항백혈병 활성을 제공하지만 ADGRE2가 낮은 탈출 메커니즘(ADGRE2-low escape mechanism)으로 인해 제한될 수 있다. CLEC12A-CCR 단독으로는 어떠한 세포 용해도 중재하지 않는다. ADCLEC.syn1은 낮은 친화도 ADGRE2-CAR과 높은 친화도 CLEC12A-CCR을 결합하여 AML 지정 결합활성(AML-directed avidity)을 높이고 ADGRE2가 낮은 AML 탈출 위험을 줄인다. 또한, 4-1BB를 통한 CLEC12A-CCR 의존성 트랜스-공동자극(CLEC12A-CCR-dependent trans-co-stimulation)은 T 세포 기능을 더욱 향상시킨다. 이에 비해, 단일-표적화 CD33-CAR 또는 CD123-CAR 접근법은 항원이 낮은 탈출(antigen-low escape) 및 표현형 이질성으로 인해 효능이 제한될 수 있다(도 1의 표적 프로필 참조).
도 4a-4c는 정상 조혈 조직 및 비조혈 조직에서 ADGRE2, CLEC12A(CD371), CD33 및 CD123의 단백질 발현 프로필을 도시하며, ADGRE2 및 CLEC12A의 발현 프로필은 대체로 겹치지 않음을 보여준다. 도 4a 및 4b는 대표적인 성인 정상 공여 골수 세포 집단(게이팅: 단핵구 - CD45hi/SSCmed/CD14+, 과립구 - CD45dim/SSChi, HSC - CD45dim/SSClow/CD34+/CD38-/CD45RA-/CD90+, T 세포 - CD45hi/SSClow/CD3+, B 세포 - CD45hi/SSClow/CD19+)에서 ADGRE2/CLEC12A 대 CD33/CD123의 유세포분석 동시 발현 프로필을 보여준다. 도 4c는 포르말린 고정된 파라핀 포매 정상 인간 조직(formalin-fixed paraffin-embedded normal human tissue)에서 ADGRE2 및 CLEC12A에 대한 면역조직화학 공동염색(immunohistochemistry co-staining)의 요약을 묘사하는 히트맵(heatmap)을 보여준다. 염색 강도는 비특이적 염색 가능성이 높은 체액을 제외하고 세포 양성을 가리킨다. ADGRE2/CLEC12A는 면역 관련 조직(주로 단핵구 계통)의 골수 세포에서 공동발현이 예상되었지만 다른 평가 조직에서는 중첩 발현이 없거나 제한적으로 발견되었다.
도 5는 CD33- 및 CD123-CAR에 비해 향상된 안전성 프로필을 위한 ADCLEC.syn1 접근법의 이론적 근거를 묘사한다. 최적화된 친화도와 미세 조정된 CD3ζ 신호 강도를 갖춘 ADGRE2-CAR 단독으로 ADGRE2 수준이 낮거나 매우 낮은 세포(각각 HSC 또는 과립구)를 보존할 수 있다. 높은 친화도 CLEC12A-CCR 단독으로는 어떠한 세포 용해도 중재하지 않는다. ADCLEC.syn1은 낮은 친화도 ADGRE2-CAR과 높은 친화도 CLEC12A-CCR을 결합한다. 정상 조혈 세포는 ADGRE2와 CLEC12A의 발현 프로필이 대체로 겹치지 않으며 CLEC12A는 HSC에서 음성이다. 따라서, CLEC12A-CCR을 추가해도 HSC 독성 위험이 증가하지 않는다.
도 6은 ADGRE2 scFv 바인더 선택 계획(binder selection scheme)을 예시한다.
도 7a-7c는 다양한 ADGRE2 표적 발현 수준과 관련하여 시험관 내 18시간 CAR 세포독성 검정을 예시한다. 높은 ADGRE2 수준에서 최대 세포독성을 나타내고 매우 낮은 ADGRE2 수준에서 최소 세포독성을 나타내는 주요 인간화 ADGRE2 scFv에 대한 유리한 프로필이 관찰되었다. 다양한 인간화 ADGRE2 scFv 후보와 원래의 2A1 scFv를 SFG-레트로바이러스 28z1XX CAR 벡터 백본에서 테스트하였다; 각 ADGRE2 scFv에 대해 2개의 신호 펩티드를 연구했는데, 하나는 확립된 CD8α 신호 펩티드를 함유하고 다른 하나는 대체 IgHV1-4 신호 펩티드를 함유한다. 컬러 라인으로 표시된 것은 세포독성 특징을 지닌 6개의 scFv이다. 나머지 scFv 후보(범례에 포함되지 않음)는 회색으로 표시되어 있다. CAR T 세포는 다양한 수준의 ADGRE2를 발현하는 MOLM13 AML 세포주와 18시간 동안 공동 배양하였다: 높음(WT, 도 7a), 낮음(클론 1E8, 도 7b) 및 매우 낮음(클론 9D6, 도 7c). MOLM13 세포에서 방출되는 루시퍼라제 신호(Luciferase signal)를 기반으로 세포독성을 측정하였다.
도 8은 다양한 ADGRE2 표적 발현 수준과 관련하여 6개의 인간화 ADGRE2 scFv의 생체 내 항종양 CAR 효능을 예시한다. 높은 ADGRE2 수준에서 효능이 강력하고, 낮은 ADGRE2 수준에서 세포독성이 감소하며 매우 낮은 ADGRE2 수준에서 세포독성이 없는 주요 인간화 ADGRE2 scFv에 유리한 프로필을 보여주는 생체 내 항종양 CAR 효능 모델. 6개의 다양한 인간화 ADGRE2 scFv 후보와 원래의 2A1 scFv를 SFG 기반 레트로바이러스 28z1XX CAR 백본에서 테스트하였다. 6-8주령 NSG 마우스를 이용한 생체 내 MOLM13 AML 세포주 이종이식(xenograft) 실험. -5일차에, 명시된 MOLM13 세포주 클론(용량: 마우스당 1E6개의 세포)을 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. -1일차에, AML 생착(engraftment)이 ffLuc 기반 생체 내 생물발광 이미징을 통해 확인되었다. 0일차에, 마우스에 CAR T 세포(용량: 마우스당 3E5개의 CAR 양성 세포)를 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 후속적으로, 생물발광 이미징을 통해 AML 부담을 정량화하였으며 총 플럭스(p/s)를 통해 표시된다.
도 9는 CLEC12A scFv 바인더 선택 계획을 예시한다.
도 10a 및 10b는 AML 세포주 U937 및 MOLM13과 관련하여 TRAC CAR-28z1XX 형식의 CLEC12A scFv의 시험관 내 CAR 세포독성을 예시한다. 높은 CLEC12A 및 낮은 CLEC12A 수준에서 효능이 강력한 주요 CLEC12A scFv에 대한 유리한 프로필을 보여주는 시험관 내 18시간 CAR 세포독성 검정. 다양한 CLEC12A scFv 후보를 TRAC-AAV 28z1XX CAR 백본에서 테스트하였다. 컬러 라인으로 표시된 것은 다양한 CLEC12A 수준과 관련하여 가장 높은 효능을 보이는 9개의 scFv이다. 도 10a는 CLEC12A가 높은 세포주 U937의 세포독성을 보여준다. 도 10b는 CLEC12A가 낮은 세포주 MOLM13의 세포독성을 보여준다. 나머지 scFv 후보는 회색으로 표시되어 있다. T 세포를 AML 세포주와 18시간 동안 공동배양하였다. AML 세포주의 루시퍼라제 신호를 기반으로 세포독성을 측정하였다.
도 11은 주요 CLEC12A scFv에 대해 높은 효능을 보여주는 생체 내 항종양 CAR 효능 모델을 예시한다. 9개의 다양한 CLEC12A scFv 후보를 TRAC-AAV 28z1XX CAR 백본에서 테스트하였다. 6-8주령 NSG 마우스를 이용한 생체 내 U937 AML 세포주 이종이식 실험. -4일차에, 명시된 U937 세포주 클론(용량: 마우스당 1E6개의 세포)을 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. -1일차에, AML 생착이 ffLuc 기반 생체 내 생물발광 이미징을 통해 확인되었다. 0일차에, CAR T 세포(용량: 마우스당 4E5개의 CAR 양성 세포)를 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 후속적으로, 생물발광 이미징을 통해 AML 부담을 정량화하였으며 총 플럭스(p/s)를 통해 표시된다.
도 12a-12c는 (도 3에 개략적으로 설명된 바와 같은) ADCLEC.syn1 개념을 검증하는 시험관 내 및 생체 내 CAR 효능 검정을 예시한다. 도 12a는 시험관 내 18시간 CAR 세포독성 검정을 보여준다. ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포를 표적을 발현하지 않거나(ADGRE2-/CLEC12A-) CAR 표적 단독(ADGRE2+/CLEC12A-), CCR 표적 단독(ADGRE2-/CLEC12A+) 또는 CAR 및 CCR 표적 둘 다(ADGRE2+/CLEC12A+)를 과발현하는 EL4 뮤린 림프종 세포주와 공동배양하였다. CD19-표적화 1928z1XX CAR 작제물을 음성 대조군으로 사용하였다. 세포독성 %는 주어진 이펙터(effector):표적(E:T) 비율에서 표적 특이적 사멸 효능(target-specific killing efficacy)을 나타낸다. 도 12b 및 12c는 6-8주령 NSG 마우스를 이용한 생체 내 MOLM13 AML 세포주 이종이식 실험을 보여준다. -5일차에, 명시된 MOLM13 세포주 클론(용량: 마우스당 1×106개의 세포)을 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. -1일차에, AML 생착이 ffLuc 기반 생체 내 생물발광 이미징을 통해 확인되었다. 0일차에, CAR T 세포(용량: 마우스당 5×105개의 CAR 양성 세포)를 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 후속적으로, 생물발광 이미징을 통해 AML 부담을 정량화하였으며 총 플럭스(p/s)를 통해 표시된다.
도 13은 pSFG-ADCLEC.syn1 제한 지도(restriction map)(8940bp)을 예시한다.
도 14는 ADGRE2ADGRE2-A-CAR 및 CLEC12ACLEC12A-A-CCR을 포함하는 ADCLEC.syn1 바이시스트론 작제물(bicistronic construct)에 대한 감마레트로바이러스 벡터 디자인(gammaretroviral vector design)을 예시한다. 약어: LTR = 긴 말단 반복(long terminal repeat), SD = 스플라이스 공여 부위(splice donor site), SA = 스플라이스 수용자 부위(splice acceptor site), SP = 신호 펩티드, scFv = 단일쇄 가변 단편, H = 힌지, TM = 막관통, C = 공동자극 도메인, S = 자극 도메인.
도 15는 대표적인 ADCLEC.syn1 CAR T 세포 제조 계획을 예시한다.
도 16은 D30 질병 평가 후 치료 과정을 안내하는 알고리즘을 예시한다.
도 17a 및 17b는 가용화된 막 단백질(solubilized membrane protein, SMP) 검정을 예시한다.
도 18a 및 18b는 조합 게이팅(combinatorial gating) 전략을 예시한다. 도 18a는 이전에 설명한 조합 CAR 게이팅 전략을 보여준다. 도 18b는 "IF-BETTER" 게이팅 전략을 보여준다.
도 19a 및 19b는 ADCLEC.syn1을 통한 ADGRE2/CLEC12A 공동표적화와 관련하여 "IF-BETTER" 게이팅 전략을 검증하는 시험관 내 CAR 효능 검정을 예시한다. 도 19a는 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포에 의해 유도되고 표적을 발현하지 않거나(ADGRE2-/CLEC12A-) CAR 표적 단독(ADGRE2+/CLEC12A-), CCR 표적 단독(ADGRE2-/CLEC12A+) 또는 CAR 및 CCR 표적 모두(ADGRE2+/CLEC12A+)를 과발현하는 EL4 뮤린 림프종 세포주와 공동배양된 세포독성을 보여준다. 1928z1XX CAR을 음성 대조군으로 사용하였다. 도 19b는 다양한 ADGRE2 수준(즉, ADGRE2-높음(WT), ADGRE2-낮음 및 ADGRE2-매우 낮음)을 발현하도록 변형된 MOLM13 표적 세포와 공동배양된 비형질도입, ADGRE2-CAR-, CLEC12A-CCR- 또는 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포에 의해 유도된 세포독성을 보여준다.
도 20은 ADCLEC.syn1 T 세포를 이용한 "IF-BETTER" 게이팅 전략의 생체 내 검증을 예시한다. 종양 성장 및 생존은 비형질도입, ADGRE2-CAR-, ADGRE2-CAR +CLEC12A-CAR-, CLEC12A-CCR- 또는 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포 주사를 받은 NSG AML 이종이식 모델에서 결정되었다.
도 21은 T 세포 용량-적정 및 AML 재도전(re-challenge)을 통한 ADCLEC.syn1의 생체 내 스트레스 테스트를 예시한다. 종양 성장 및 생존은 다양한 용량의 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포 주사를 받은 NSG AML 이종이식 모델에서 결정되었다.
다음의 상세한 설명은 예시로서 주어지고 기술된 특정 실시양태로 본 발명을 제한하려는 의도는 아니며 첨부 도면과 함께 이해될 수 있다.
도 1a 및 1b는 신선한 AML 환자 샘플(말초 혈액 또는 골수)의 유세포분석을 통해 평가된 ADGRE2, CD33 및 CD123의 표적 항원 발현 프로필을 예시한다; n= 형태학적 질환이 있는 16명의 r/r 성인 AML 환자. 벌크 AML 세포(CD45dim/SSClow 게이트)와 백혈병 줄기세포[leukemic stem cell, LSC; 벌크 AML 세포 게이트 내 Lin-CD34+CD38-(CD45RA+)] 간에 표적 발현을 비교하였다. 표적 양성에 대한 게이트는 동일 샘플 음성 대조군 집단(T 또는 B 세포)을 기반으로 설정되었다. 도 1a는 각 점으로 표시된 개별 환자 샘플의 벌크 또는 LSC 집단 내 표적 양성 AML 세포의 백분율을 보여준다. 평가된 AML 환자의 대다수에서 AML 세포의 90% 초과가 벌크 및 LSC 모두에서 ADGRE2에 대해 양성이었다. 도 1b는 표적 양성 AML 세포가 70% 초과인 평가된 AML 환자 집단의 백분율을 보여준다. 평가된 모든 AML 환자는 벌크 및 LSC 모두에서 ADGRE2 양성 AML 세포가 70% 초과였다.
도 2는 CAR, CCR 및 CAR+CCR의 개략도를 보여준다.
도 3은 CD33 및 CD123-CAR에 비해 향상된 항백혈병 효능에 대한 ADCLEC.syn1 접근법의 이론적 근거를 보여준다. ADGRE2-CAR 단독은 일부 항백혈병 활성을 제공하지만 ADGRE2가 낮은 탈출 메커니즘(ADGRE2-low escape mechanism)으로 인해 제한될 수 있다. CLEC12A-CCR 단독으로는 어떠한 세포 용해도 중재하지 않는다. ADCLEC.syn1은 낮은 친화도 ADGRE2-CAR과 높은 친화도 CLEC12A-CCR을 결합하여 AML 지정 결합활성(AML-directed avidity)을 높이고 ADGRE2가 낮은 AML 탈출 위험을 줄인다. 또한, 4-1BB를 통한 CLEC12A-CCR 의존성 트랜스-공동자극(CLEC12A-CCR-dependent trans-co-stimulation)은 T 세포 기능을 더욱 향상시킨다. 이에 비해, 단일-표적화 CD33-CAR 또는 CD123-CAR 접근법은 항원이 낮은 탈출(antigen-low escape) 및 표현형 이질성으로 인해 효능이 제한될 수 있다(도 1의 표적 프로필 참조).
도 4a-4c는 정상 조혈 조직 및 비조혈 조직에서 ADGRE2, CLEC12A(CD371), CD33 및 CD123의 단백질 발현 프로필을 도시하며, ADGRE2 및 CLEC12A의 발현 프로필은 대체로 겹치지 않음을 보여준다. 도 4a 및 4b는 대표적인 성인 정상 공여 골수 세포 집단(게이팅: 단핵구 - CD45hi/SSCmed/CD14+, 과립구 - CD45dim/SSChi, HSC - CD45dim/SSClow/CD34+/CD38-/CD45RA-/CD90+, T 세포 - CD45hi/SSClow/CD3+, B 세포 - CD45hi/SSClow/CD19+)에서 ADGRE2/CLEC12A 대 CD33/CD123의 유세포분석 동시 발현 프로필을 보여준다. 도 4c는 포르말린 고정된 파라핀 포매 정상 인간 조직(formalin-fixed paraffin-embedded normal human tissue)에서 ADGRE2 및 CLEC12A에 대한 면역조직화학 공동염색(immunohistochemistry co-staining)의 요약을 묘사하는 히트맵(heatmap)을 보여준다. 염색 강도는 비특이적 염색 가능성이 높은 체액을 제외하고 세포 양성을 가리킨다. ADGRE2/CLEC12A는 면역 관련 조직(주로 단핵구 계통)의 골수 세포에서 공동발현이 예상되었지만 다른 평가 조직에서는 중첩 발현이 없거나 제한적으로 발견되었다.
도 5는 CD33- 및 CD123-CAR에 비해 향상된 안전성 프로필을 위한 ADCLEC.syn1 접근법의 이론적 근거를 묘사한다. 최적화된 친화도와 미세 조정된 CD3ζ 신호 강도를 갖춘 ADGRE2-CAR 단독으로 ADGRE2 수준이 낮거나 매우 낮은 세포(각각 HSC 또는 과립구)를 보존할 수 있다. 높은 친화도 CLEC12A-CCR 단독으로는 어떠한 세포 용해도 중재하지 않는다. ADCLEC.syn1은 낮은 친화도 ADGRE2-CAR과 높은 친화도 CLEC12A-CCR을 결합한다. 정상 조혈 세포는 ADGRE2와 CLEC12A의 발현 프로필이 대체로 겹치지 않으며 CLEC12A는 HSC에서 음성이다. 따라서, CLEC12A-CCR을 추가해도 HSC 독성 위험이 증가하지 않는다.
도 6은 ADGRE2 scFv 바인더 선택 계획(binder selection scheme)을 예시한다.
도 7a-7c는 다양한 ADGRE2 표적 발현 수준과 관련하여 시험관 내 18시간 CAR 세포독성 검정을 예시한다. 높은 ADGRE2 수준에서 최대 세포독성을 나타내고 매우 낮은 ADGRE2 수준에서 최소 세포독성을 나타내는 주요 인간화 ADGRE2 scFv에 대한 유리한 프로필이 관찰되었다. 다양한 인간화 ADGRE2 scFv 후보와 원래의 2A1 scFv를 SFG-레트로바이러스 28z1XX CAR 벡터 백본에서 테스트하였다; 각 ADGRE2 scFv에 대해 2개의 신호 펩티드를 연구했는데, 하나는 확립된 CD8α 신호 펩티드를 함유하고 다른 하나는 대체 IgHV1-4 신호 펩티드를 함유한다. 컬러 라인으로 표시된 것은 세포독성 특징을 지닌 6개의 scFv이다. 나머지 scFv 후보(범례에 포함되지 않음)는 회색으로 표시되어 있다. CAR T 세포는 다양한 수준의 ADGRE2를 발현하는 MOLM13 AML 세포주와 18시간 동안 공동 배양하였다: 높음(WT, 도 7a), 낮음(클론 1E8, 도 7b) 및 매우 낮음(클론 9D6, 도 7c). MOLM13 세포에서 방출되는 루시퍼라제 신호(Luciferase signal)를 기반으로 세포독성을 측정하였다.
도 8은 다양한 ADGRE2 표적 발현 수준과 관련하여 6개의 인간화 ADGRE2 scFv의 생체 내 항종양 CAR 효능을 예시한다. 높은 ADGRE2 수준에서 효능이 강력하고, 낮은 ADGRE2 수준에서 세포독성이 감소하며 매우 낮은 ADGRE2 수준에서 세포독성이 없는 주요 인간화 ADGRE2 scFv에 유리한 프로필을 보여주는 생체 내 항종양 CAR 효능 모델. 6개의 다양한 인간화 ADGRE2 scFv 후보와 원래의 2A1 scFv를 SFG 기반 레트로바이러스 28z1XX CAR 백본에서 테스트하였다. 6-8주령 NSG 마우스를 이용한 생체 내 MOLM13 AML 세포주 이종이식(xenograft) 실험. -5일차에, 명시된 MOLM13 세포주 클론(용량: 마우스당 1E6개의 세포)을 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. -1일차에, AML 생착(engraftment)이 ffLuc 기반 생체 내 생물발광 이미징을 통해 확인되었다. 0일차에, 마우스에 CAR T 세포(용량: 마우스당 3E5개의 CAR 양성 세포)를 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 후속적으로, 생물발광 이미징을 통해 AML 부담을 정량화하였으며 총 플럭스(p/s)를 통해 표시된다.
도 9는 CLEC12A scFv 바인더 선택 계획을 예시한다.
도 10a 및 10b는 AML 세포주 U937 및 MOLM13과 관련하여 TRAC CAR-28z1XX 형식의 CLEC12A scFv의 시험관 내 CAR 세포독성을 예시한다. 높은 CLEC12A 및 낮은 CLEC12A 수준에서 효능이 강력한 주요 CLEC12A scFv에 대한 유리한 프로필을 보여주는 시험관 내 18시간 CAR 세포독성 검정. 다양한 CLEC12A scFv 후보를 TRAC-AAV 28z1XX CAR 백본에서 테스트하였다. 컬러 라인으로 표시된 것은 다양한 CLEC12A 수준과 관련하여 가장 높은 효능을 보이는 9개의 scFv이다. 도 10a는 CLEC12A가 높은 세포주 U937의 세포독성을 보여준다. 도 10b는 CLEC12A가 낮은 세포주 MOLM13의 세포독성을 보여준다. 나머지 scFv 후보는 회색으로 표시되어 있다. T 세포를 AML 세포주와 18시간 동안 공동배양하였다. AML 세포주의 루시퍼라제 신호를 기반으로 세포독성을 측정하였다.
도 11은 주요 CLEC12A scFv에 대해 높은 효능을 보여주는 생체 내 항종양 CAR 효능 모델을 예시한다. 9개의 다양한 CLEC12A scFv 후보를 TRAC-AAV 28z1XX CAR 백본에서 테스트하였다. 6-8주령 NSG 마우스를 이용한 생체 내 U937 AML 세포주 이종이식 실험. -4일차에, 명시된 U937 세포주 클론(용량: 마우스당 1E6개의 세포)을 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. -1일차에, AML 생착이 ffLuc 기반 생체 내 생물발광 이미징을 통해 확인되었다. 0일차에, CAR T 세포(용량: 마우스당 4E5개의 CAR 양성 세포)를 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 후속적으로, 생물발광 이미징을 통해 AML 부담을 정량화하였으며 총 플럭스(p/s)를 통해 표시된다.
도 12a-12c는 (도 3에 개략적으로 설명된 바와 같은) ADCLEC.syn1 개념을 검증하는 시험관 내 및 생체 내 CAR 효능 검정을 예시한다. 도 12a는 시험관 내 18시간 CAR 세포독성 검정을 보여준다. ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포를 표적을 발현하지 않거나(ADGRE2-/CLEC12A-) CAR 표적 단독(ADGRE2+/CLEC12A-), CCR 표적 단독(ADGRE2-/CLEC12A+) 또는 CAR 및 CCR 표적 둘 다(ADGRE2+/CLEC12A+)를 과발현하는 EL4 뮤린 림프종 세포주와 공동배양하였다. CD19-표적화 1928z1XX CAR 작제물을 음성 대조군으로 사용하였다. 세포독성 %는 주어진 이펙터(effector):표적(E:T) 비율에서 표적 특이적 사멸 효능(target-specific killing efficacy)을 나타낸다. 도 12b 및 12c는 6-8주령 NSG 마우스를 이용한 생체 내 MOLM13 AML 세포주 이종이식 실험을 보여준다. -5일차에, 명시된 MOLM13 세포주 클론(용량: 마우스당 1×106개의 세포)을 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. -1일차에, AML 생착이 ffLuc 기반 생체 내 생물발광 이미징을 통해 확인되었다. 0일차에, CAR T 세포(용량: 마우스당 5×105개의 CAR 양성 세포)를 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 후속적으로, 생물발광 이미징을 통해 AML 부담을 정량화하였으며 총 플럭스(p/s)를 통해 표시된다.
도 13은 pSFG-ADCLEC.syn1 제한 지도(restriction map)(8940bp)을 예시한다.
도 14는 ADGRE2ADGRE2-A-CAR 및 CLEC12ACLEC12A-A-CCR을 포함하는 ADCLEC.syn1 바이시스트론 작제물(bicistronic construct)에 대한 감마레트로바이러스 벡터 디자인(gammaretroviral vector design)을 예시한다. 약어: LTR = 긴 말단 반복(long terminal repeat), SD = 스플라이스 공여 부위(splice donor site), SA = 스플라이스 수용자 부위(splice acceptor site), SP = 신호 펩티드, scFv = 단일쇄 가변 단편, H = 힌지, TM = 막관통, C = 공동자극 도메인, S = 자극 도메인.
도 15는 대표적인 ADCLEC.syn1 CAR T 세포 제조 계획을 예시한다.
도 16은 D30 질병 평가 후 치료 과정을 안내하는 알고리즘을 예시한다.
도 17a 및 17b는 가용화된 막 단백질(solubilized membrane protein, SMP) 검정을 예시한다.
도 18a 및 18b는 조합 게이팅(combinatorial gating) 전략을 예시한다. 도 18a는 이전에 설명한 조합 CAR 게이팅 전략을 보여준다. 도 18b는 "IF-BETTER" 게이팅 전략을 보여준다.
도 19a 및 19b는 ADCLEC.syn1을 통한 ADGRE2/CLEC12A 공동표적화와 관련하여 "IF-BETTER" 게이팅 전략을 검증하는 시험관 내 CAR 효능 검정을 예시한다. 도 19a는 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포에 의해 유도되고 표적을 발현하지 않거나(ADGRE2-/CLEC12A-) CAR 표적 단독(ADGRE2+/CLEC12A-), CCR 표적 단독(ADGRE2-/CLEC12A+) 또는 CAR 및 CCR 표적 모두(ADGRE2+/CLEC12A+)를 과발현하는 EL4 뮤린 림프종 세포주와 공동배양된 세포독성을 보여준다. 1928z1XX CAR을 음성 대조군으로 사용하였다. 도 19b는 다양한 ADGRE2 수준(즉, ADGRE2-높음(WT), ADGRE2-낮음 및 ADGRE2-매우 낮음)을 발현하도록 변형된 MOLM13 표적 세포와 공동배양된 비형질도입, ADGRE2-CAR-, CLEC12A-CCR- 또는 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포에 의해 유도된 세포독성을 보여준다.
도 20은 ADCLEC.syn1 T 세포를 이용한 "IF-BETTER" 게이팅 전략의 생체 내 검증을 예시한다. 종양 성장 및 생존은 비형질도입, ADGRE2-CAR-, ADGRE2-CAR +CLEC12A-CAR-, CLEC12A-CCR- 또는 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포 주사를 받은 NSG AML 이종이식 모델에서 결정되었다.
도 21은 T 세포 용량-적정 및 AML 재도전(re-challenge)을 통한 ADCLEC.syn1의 생체 내 스트레스 테스트를 예시한다. 종양 성장 및 생존은 다양한 용량의 ADCLEC.syn1-형질도입 T 세포 주사를 받은 NSG AML 이종이식 모델에서 결정되었다.
5.
발명의 상세한 설명
본 개시된 주제는 ADGRE2를 표적으로 하는 키메라 수용체 및 CLEC12A를 표적으로 하는 키메라 수용체를 제공한다. 본 개시된 주제는 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포 및 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체와 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 포함하는 세포를 추가로 제공한다. 상기 세포는 면역반응성 세포, 예를 들어, 유전적으로 변형된 면역반응성 세포(예를 들어, T 세포 또는 NK 세포)일 수 있다. 본 개시된 주제는 또한 치료, 예를 들어, ADGRE2 및/또는 CLEC12A와 관련된 종양(예를 들어, AML)의 치료 및/또는 예방을 위한 이러한 세포의 사용 방법을 제공한다.
본 개시된 주제의 비제한적 실시양태는 본 명세서 및 실시예에 의해 기술된다.
제한 없이 개시내용의 명확성을 위해, 상세한 설명은 다음 하위섹션으로 나누어진다:
5.1. 정의;
5.2. 키메라 수용체;
5.3. ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인;
5.4. 예시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체;
5.5. CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인;
5.6. 예시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체;
5.7. 세포;
5.8. 핵산 분자, 벡터 및 유전자 변형;
5.9. 제형 및 투여; 및
5.10. 치료 방법.
5.1. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시된 주제가 속하는 기술 분야의 숙련자에 의해 일반적으로 이해되는 의미이다. 다음 참고문헌은 본 개시된 주제에 사용된 많은 용어의 일반적인 정의를 당업자에게 제공한다: Singleton 등, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger 등 (eds.), Springer Verlag (1991); 및 Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). 본원에서 사용되는 다음 용어는 달리 명시하지 않는 한 아래에 부여된 의미가 있다.
본원에서 사용되는 용어 "약" 또는 "대략"은 당업자에 의해 결정된 특정 값에 대해 허용 가능한 오차 범위 내를 의미하며, 이는 부분적으로 해당 값이 측정 또는 결정되는 방법에 따라, 즉 측정 시스템의 한계에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, "약"은 당업계 관행에 따라 3 또는 3 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약"은 주어진 값의 최대 20%, 바람직하게는 최대 10%, 더 바람직하게는 최대 5%, 더욱 더 바람직하게는 최대 1%의 범위를 의미할 수 있다. 대안적으로, 특히 생물학적 시스템 또는 프로세스와 관련하여, 이 용어는 값의 10배 이내, 바람직하게는 5배 이내, 더 바람직하게는 2배 이내를 의미할 수 있다.
"면역반응성 세포"란 면역 반응에서 기능하는 세포 또는 이의 전구세포(progenitor) 또는 자손(progeny)을 의미한다. 특정 실시양태에서, 면역반응성 세포는 림프계 세포이다. 림프계 세포의 비제한적인 예는 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, B 세포 및 림프 세포가 분화될 수 있는 줄기세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 면역반응성 세포는 골수계 세포이다.
"면역반응성 세포를 활성화한다"는 것은 세포 내 신호 전달의 유도 또는 단백질 발현의 변화를 초래하여 면역 반응이 개시되는 것을 의미한다. 예를 들어, CD3 쇄가 리간드 결합 및 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프(immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif, ITAM)에 반응하여 클러스터(cluster)되면 신호 전달 캐스캐이드(signal transduction cascade)가 생성된다. 특정 실시양태에서, 내인성 TCR 또는 외인성 CAR이 항원에 결합하면, 결합된 수용체(예를 들어, CD4 또는 CD8, CD3γ/δ/ε/ζ 등) 근처에 많은 분자의 클러스터링을 포함하는 면역학적 시냅스의 형성이 발생한다. 이러한 막 결합 신호 분자의 클러스터링은 CD3 쇄 내에 포함된 ITAM 모티프가 인산화되도록 한다. 이러한 인산화는 차례로 NF-κB 및 AP-1과 같은 전사 인자를 궁극적으로 활성화시키는 T 세포 활성화 경로를 개시한다. 이들 전사 인자는 T 세포 매개된 면역 반응을 개시하기 위해 마스터 조절자 T 세포 단백질의 증식 및 발현을 위한 IL-2 생성을 증가시키기 위해 T 세포의 전반적인 유전자 발현을 유도한다.
"면역반응성 세포를 자극한다"는 것은 강력하고 지속적인 면역 반응을 초래하는 신호를 의미한다. 다양한 실시양태에서, 이는 면역 세포(예를 들어, T-세포) 활성화 후에 발생하거나 CD28, CD137(4-1BB), OX40, CD40 및 ICOS를 포함하지만 이에 제한되지 않는 수용체를 통해 동시에 매개된다. 강력하고 장기적인 T 세포 매개된 면역 반응을 시작하려면 여러 자극 신호를 수신하는 것이 중요할 수 있다. T 세포는 빠르게 억제되어 항원에 반응하지 않게 될 수 있다. 이러한 공동자극 신호의 효과는 다양할 수 있지만, 일반적으로 완전하고 지속적인 근절을 위해 항원에 강력하게 반응하는 수명이 길고 증식하며 항아폽토시스성(anti-apoptotic) T 세포를 생성하기 위해 유전자 발현을 증가시킨다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 온전한 항체 분자뿐만 아니라 면역원-결합 능력을 보유하는 항체 분자의 단편도 의미한다. 이러한 단편도 당업계에 잘 알려져 있으며 시험관 내 및 생체 내 모두에서 자주 사용된다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 온전한 면역글로불린 분자뿐만 아니라 잘 알려진 활성 단편인 F(ab')2 및 Fab도 의미한다. 온전한 항체의 Fe 단편이 결여된 F(ab')2 및 Fab 단편은 순환계로부터 더욱 빠르게 제거되며 온전한 항체의 비특이적 조직 결합이 덜 있을 수 있다(Wahl 등, Nucl Med (1983);24:316-325). 본원에서 사용되는 바와 같이, 전체 천연 항체, 이중특이성 항체; 키메라 항체; Fab, Fab', 단일쇄 V 영역 단편(scFv), 융합 폴리펩티드 및 비통상적 항체가 포함된다. 특정 실시양태에서, 항체는 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서는 VH로 약칭함)과 중쇄 불변(CH) 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3의 3개의 도메인으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서는 VL로 약칭함)과 경쇄 불변 CL 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 CL이라는 하나의 도메인으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 더 세분될 수 있으며, 여기에는 프레임워크 영역(framework region, FR)으로 불리는 더욱 보존된 영역이 섞여 있다. 각각의 VH 및 VL은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 아미노 말단에서 카복시 말단으로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다. 중쇄와 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적 보체 시스템의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
본원에서 사용되는 "CDR"은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역인, 항체의 상보성 결정 영역 아미노산 서열로 정의된다. 예를 들어, Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health(1987) 또는 IMGT 넘버링 시스템(Lefranc, The Immunologist (1999);7:132-136; Lefranc 등, Dev. Comp. Immunol. (2003);27:55-77) 참조. 일반적으로, 항체는 가변 영역에 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR 또는 CDR 영역을 포함한다. CDR은 항원 또는 에피토프에 대한 항체의 결합을 위한 대부분의 접촉 잔기를 제공한다. 특정 실시양태에서, CDR 영역은 IMGT 넘버링 시스템을 사용하여 기술된다. 특정 실시양태에서, CDR 영역은 http://www.imgt.org/IMGT_vquest/input에서 접근 가능한 IMGT 넘버링 시스템을 사용하여 기술된다.
본원에서 사용되는 용어 "단일쇄 가변 단편" 또는 "scFv"는 공유결합으로 연결되어 VH::VL 이종이량체를 형성하는, 면역글로불린(예를 들어, 마우스 또는 인간)의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질이다. 중쇄(VH)와 경쇄(VL)는 직접 연결되거나 VH의 N-말단과 VL의 C-말단을 연결하거나 VH의 C-말단과 VL의 N-말단을 연결하는 펩티드 암호화 링커(예를 들어, 10, 15, 20, 25개의 아미노산)에 의해 연결된다. 링커에는 보통 유연성을 위한 글리신과 용해성을 위한 세린 또는 트레오닌이 풍부하다. 링커는 세포 외 항원-결합 도메인의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 연결할 수 있다. 링커의 비제한적인 예는 Shen 등, Anal. Chem. 80(6):1910-1917 (2008) 및 WO 2014/087010에 기재되어 있으며, 이의 내용은 전체가 본원에 참고로 포함된다. 특정 실시양태에서, 링커는 G4S 링커이다.
특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GGGGSGGGGSGGGSGGGGS [서열번호 1]
특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GGGGSGGGGSGGGGS [서열번호 2]
특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS [서열번호 3]
특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS [서열번호 4]
특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GGGGS [서열번호 5]
특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GGGGSGGGGS [서열번호 6]
특정 실시양태에서, 링커는 중쇄 불변 영역의 처음 3개의 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 아래에 제공된 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
ASTGGGGSGGGGSGGGGS [서열번호 149]
불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고, scFv 단백질은 원래의 면역글로불린의 특이성을 유지한다. 단일쇄 Fv 폴리펩티드 항체는 Huston, 등, Proc. Nat. Acad. Sci. USA, (1988);85:5879-5883; 미국 특허 제5,091,513호, 제5,132,405호 및 제4,956,778호; 및 미국 특허 공개공보 제20050196754호 및 제20050196754호에 기술된 바와 같이 VH- 및 VL-암호화 서열을 포함하는 핵산으로부터 발현될 수 있다. 억제 활성이 있는 길항(atagonistic) scFv가 기술되어 있다(예를 들어, Zhao 등 Hybridoma (Larchmt) (2008);27(6):445-51; Peter 등, J Cachexia Sarcopenia Muscle (2012);August 12; Shieh 등, J Imunol (2009);183(4):2277-85; Giomarelli 등, Thromb Haemost (2007);97(6):955-63; Fife eta., J Clin Invst (2006);116(8):2252-61; Brocks 등, Immunotechnology 1997 3(3):173-84; Moosmayer 등, Ther Immunol 1995 2(10:31-40 참조). 자극 활성이 있는 작용(agonistic) scFv가 기술되어 있다(Peter 등, J Biol Chem (2003);25278(38):36740-7; Xie 등, Nat Biotech 1997 15(8):768-71; Ledbetter 등, Crit Rev Immunol (1997);17(5-6):427-55; Ho 등, BioChim Biophys Acta (2003);1638(3):257-66 참조).
본원에서 사용되는 용어 "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 면역반응성 세포를 활성화하거나 자극할 수 있는 세포 내 신호전달 도메인에 융합되는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 분자를 가리킨다. 특정 실시양태에서, CAR은 또한 막관통 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 외 항원-결합 도메인은 scFv를 포함한다. scFv는 항체의 가변 중쇄 및 경쇄 영역의 융합으로부터 유래될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, scFv는 (예를 들어, Fab 라이브러리로부터 수득되는 항체로부터 유래되는 대신에) Fab로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, scFv는 막관통 도메인에 융합된 다음 세포 내 신호전달 도메인에 융합된다.
용어 "키메라 공동자극 수용체" 또는 "CCR"은 항원에 결합하고 공동자극 신호를 제공하지만 단독으로는 활성화 신호를 제공하지 않는 키메라 수용체를 가리킨다. CCR은 Krause, 등, J. Exp. Med. (1998);188(4):619-626 및 US20020018783에 기술되어 있으며, 이의 내용은 전체가 참고로 포함된다. CCR은 공동자극 신호를 모방하지만 CAR과 달리 단독으로는 활성화 신호를 제공하지 않으며, 예를 들어, CCR에는 CD3ζ 폴리펩티드가 결여되어 있다.
"실질적으로 동일한" 또는 "실질적으로 상동성"이란 기준 아미노산 서열(예를 들어, 본원에 기술된 임의의 아미노산 서열) 또는 기준 핵산 서열(예를 들어, 본원에 기술된 임의의 핵산 서열)과 적어도 약 50% 상동성이거나 동일한 폴리펩티드 또는 핵산 분자를 의미한다. 특정 실시양태에서, 이러한 서열은 비교를 위해 사용된 아미노산 또는 핵산의 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99% 또는 적어도 약 100% 상동성이거나 동일하다.
서열 동일성은 서열 분석 소프트웨어(예를 들어, Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705, BLAST, BESTFIT, GAP 또는 PILEUP/PRETTYBOX 프로그램)를 사용하여 측정할 수 있다. 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결실 및/또는 기타 변형에 대한 상동성 정도를 할당하여 동일하거나 유사한 서열을 일치시킨다. 보존적 치환에는 전형적으로 다음 그룹 내의 치환이 포함된다: 글리신, 알라닌; 발린, 이소류신, 류신; 아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민; 세린, 트레오닌; 라이신, 아르기닌; 및 페닐알라닌, 티로신. 동일성 정도를 결정하기 위한 예시적인 접근법에서, e-3과 e-100 사이의 확률 점수가 밀접하게 관련된 서열을 나타내는 BLAST 프로그램이 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 2개의 아미노산 서열 사이의 상동성 백분율은 두 서열 사이의 동일성 백분율과 동일하다. 두 서열 사이의 동일성 백분율은 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 간격(gap)의 수와 각 간격의 길이를 고려하여 서열이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 상동성 % = 동일한 위치의 수/위치의 총 수 × 100). 두 서열 사이의 서열 비교 및 동일성 백분율 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
두 아미노산 서열 사이의 상동성 백분율은 PAM120 가중 잔기 표, 간격 길이 페널티 12 및 간격 페널티 4를 사용하여 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller의 알고리즘(Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988))을 사용하여 알아낼 수 있다. 또한, 두 아미노산 서열 간의 상동성 백분율은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스와 간격 가중치 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5 또는 6을 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지(www.gcg.com에서 사용 가능)의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman 및 Wunsch(J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)) 알고리즘을 사용하여 알아낼 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 개시된 주제의 아미노산 서열은, 예를 들어, 관련 서열을 확인하기 위해 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한 "질의 서열(query sequence)"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 Altschul 등 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10의 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 수행할 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 단어 길이(wordlength) = 3으로 수행하여 본원에 개시된 지정된 서열과 상동성인 아미노산 서열(예를 들어, scFv m903, m904, m905, m906 및 m900의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열)을 수득할 수 있다. 비교 목적으로 간격이 있는 정렬(gapped alignment)을 수득하기 위해, Altschul 등, (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402에 기술된 바와 같이 Gapped BLAST를 이용할 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용하는 경우 각각의 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 매개변수(default parameter)를 사용할 수 있다. "유효량"은 치료 시 유익하거나 원하는 임상 결과에 영향을 미치기에 충분한 양이다. 유효량은 1회 이상의 용량으로 대상체에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 유효량은 질환의 진행을 완화, 개선, 안정화, 반전 또는 지연시키거나, 그렇지 않으면 질환의 병리학적 결과를 감소시키기에 충분한 양일 수 있다. 유효량은 사례별로 의사에 의해 결정될 수 있으며 당업자의 기술 범위 내에 있다. 유효량을 달성하기 위해 적절한 투여량을 결정할 때 전형적으로 여러 가지 요인이 고려된다. 이러한 요인에는 대상체의 연령, 성별 및 체중, 치료할 병태, 병태의 중증도 및 투여된 세포의 형태와 유효 농도가 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "내인성"은 세포 또는 조직에서 정상적으로 발현되는 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 가리킨다.
본원에서 사용되는 용어 "외인성"은 세포에 내인성으로 존재하지 않는 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 가리킨다. 따라서, 용어 "외인성"은 세포에서 발현되는 임의의 재조합 핵산 분자 또는 폴리펩티드, 예컨대 외래, 이종 및 과발현된 핵산 분자 및 폴리펩티드를 포함할 것이다. "외인성" 핵산이란 천연 야생형 세포에 존재하지 않는 핵산을 의미하며; 예를 들어, 외인성 핵산은 서열, 위치(position/location) 또는 둘 모두에 따라 내인성 대응물과 다를 수 있다. 명확하게 하기 위해, 외인성 핵산은 천연 내인성 대응물에 비해 동일하거나 상이한 서열을 가질 수 있다; 이는 유전 공학에 의해 세포 자체 또는 이의 전구세포에 도입될 수 있으며, 선택적으로 비천연 프로모터 또는 분비 서열과 같은 대체 대조군 서열에 연결될 수 있다.
"이종 핵산 분자 또는 폴리펩티드"란 보통은 세포 또는 세포로부터 수득한 샘플에 존재하지 않는 핵산 분자(예를 들어, cDNA, DNA 또는 RNA 분자) 또는 폴리펩티드를 의미한다. 이 핵산은 다른 유기체로부터 유래될 수도 있고, 예를 들어, 보통은 세포 또는 샘플에서 발현되지 않는 mRNA 분자일 수도 있다.
"조절하다(modulate)"란 긍정적 또는 부정적 변화를 의미한다. 예시적인 조절은 약 1%, 약 2%, 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 50%, 약 75% 또는 약 100% 변화를 포함한다.
"증가하다(increase)"란 적어도 약 5%의 긍정적인 변동을 의미한다. 변동은 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 100% 이상일 수 있다.
"감소하다(reduce)"란 적어도 약 5%의 부정적인 변동을 의미한다. 변동은 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 30%, 약 50%, 약 75% 또는 심지어 약 100%일 수 있다.
"단리된(isolated)", "정제된(purified)" 또는 "생물학적으로 순수한(biologically pure)"이라는 용어는 보통은 원래 상태에서 발견되는 수반되는 구성요소와는 다른 정도로 자유로운 물질을 가리킨다. "단리하다"는 원래 공급원이나 주변 환경으로부터 분리된 정도를 나타낸다. "정화하다"는 단리보다 높은 분리 정도를 나타낸다. "정제된" 또는 "생물학적으로 순수한" 단백질은 어떠한 불순물도 단백질의 생물학적 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않거나 다른 부정적인 결과를 일으키지 않도록 다른 물질이 충분히 없는 것이다. 즉, 핵산 또는 펩티드는 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 때 세포 물질, 바이러스 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 없거나 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 기타 화학물질이 실질적으로 없는 경우 정제된 것이다. 순도와 균질성은 전형적으로 분석 화학 기술, 예를 들어, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 결정한다. "정제된"이라는 용어는 핵산 또는 단백질이 전기영동 겔에서 본질적으로 하나의 밴드를 생성한다는 것을 의미할 수 있다. 변형, 예를 들어, 인산화 또는 글리코실화가 적용될 수 있는 단백질의 경우, 다양한 변형으로 인해 개별적으로 정제될 수 있는 다양한 단리된 단백질이 생성될 수 있다.
"단리된 세포(isolated cell)"란 세포에 자연적으로 수반되는 분자 및/또는 세포 구성요소로부터 분리된 세포를 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "항원-결합 도메인"은 세포 상에 존재하는 특정 항원 결정인자(antigenic determinant) 또는 항원 결정인자 세트에 특이적으로 결합할 수 있는 도메인을 가리킨다.
"수용체(receptor)"란 하나 이상의 리간드에 선택적으로 결합하는 세포막에 존재하는 폴리펩티드 또는 이의 일부를 의미한다.
"신호 서열(signal sequence)" 또는 "리더 서열(leader sequence)"이란 분비 경로로의 진입을 지시하는 새로 합성된 단백질의 N-말단에 존재하는 펩티드 서열(예를 들어, 5, 10, 15, 20, 25 또는 30개의 아미노산)을 의미한다.
"포함하다(comprises)", "포함하는(comprising)"이라는 용어는 미국 특허법에서 부여된 넓은 의미이며 "포함하다(includes)", "포함하는(including)" 등을 의미할 수 있다.
본원에서 사용되는 "치료"는 치료되는 개체 또는 세포의 질환 과정을 변경하려는 시도에서의 임상적 개입을 가리키며, 예방을 위해 또는 임상 병리학 과정 중에 수행될 수 있다. 치료의 치료적 효과에는 질환의 발생 또는 재발 예방, 증상 완화, 질환의 임의의 직간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 예방, 질환 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 관해 또는 예후 개선이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 질환 또는 장애의 진행을 예방함으로써, 치료는 이환된 또는 진단된 대상체 또는 해당 장애가 의심되는 대상체에서의 장애로 인한 악화를 예방할 수 있을 뿐만 아니라 장애 위험이 있거나 장애가 있는 것으로 의심되는 대상체에서 장애의 시작 또는 장애 증상을 예방할 수도 있다.
본 명세서에서 "개체(individual)" 또는 "대상체(subject)"는 인간 또는 인간이 아닌 동물, 예를 들어, 포유동물과 같은 척추동물이다. 포유동물에는 인간, 영장류, 농장 동물, 스포츠 동물, 설치류 및 애완동물이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 인간이 아닌 동물 대상체의 비제한적 예에는 마우스, 래트, 햄스터 및 기니 피그(guinea pig)와 같은 설치류; 토끼; 개; 고양이; 양; 돼지; 염소; 소; 말; 및 유인원 및 원숭이와 같은 인간이 아닌 영장류가 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 포함하는 본 개시된 키메라 수용체의 결합 특성에 유의미한 영향을 미치지 않거나 변경시키지 않는 아미노산 변형을 가리킨다. 보존적 변형에는 아미노산 치환, 첨가 및 결실이 포함될 수 있다. 변형은 부위 지정 돌연변이유발 및 PCR 매개된 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 본 개시된 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인에 도입될 수 있다. 아미노산은 전하 및 극성과 같은 물리화학적 특성에 따라 여러 그룹으로 분류될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 동일한 그룹 내의 아미노산으로 대체되는 것이다. 예를 들어, 아미노산은 전하에 따라 분류될 수 있다: 양전하를 띤 아미노산에는 라이신, 아르기닌, 히스티딘이 포함되고, 음전하를 띤 아미노산에는 아스파르트산, 글루탐산이 포함되고, 중성 전하를 띤 아미노산에는 알라닌, 아스파라긴, 시스테인, 글루타민, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린이 포함된다. 또한, 아미노산은 극성에 따라 분류될 수 있다: 극성 아미노산에는 아르기닌(염기성 극성), 아스파라긴, 아스파르트산(산성 극성), 글루탐산(산성 극성), 글루타민, 히스티딘(염기성 극성), 라이신(염기성 극성), 세린, 트레오닌 및 티로신이 포함되고; 비극성 아미노산에는 알라닌, 시스테인, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판 및 발린이 포함된다. 따라서, CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 그룹으로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고 변경된 항체는 본원에 기술된 기능 검정을 사용하여 유지된 기능(즉, 상기 (c) 내지 (l)에 제시된 기능)에 대해 테스트할 수 있다. 특정 실시양태에서, 특정 서열 또는 CDR 영역 내의 1개 이하, 2개 이하, 3개 이하, 4개 이하, 5개 이하의 잔기가 변경된다.
본 개시된 주제의 다른 측면은 다음 개시내용에 기술되며 본 개시된 주제의 범위 내에 있다.
5.2. 키메라 수용체
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 ADGRE2 또는 CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다. 세포 외 항원-결합 도메인은 항체의 항원 결합 단편, 항체의 중쇄 가변 영역(VH)의 항원 결합 단편, 항체의 경쇄 가변 영역(VL)의 항원 결합 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), Fab 또는 F(ab)2일 수 있다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 단편은 단일쇄 가변 단편(scFv)이다. 특정 실시양태에서, scFv는 인간 scFv이다. 특정 실시양태에서, scFv는 인간화 scFv이다. 특정 실시양태에서, scFv는 뮤린 scFv이다. 특정 실시양태에서, Fab는 가교결합된다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 키메라 공동자극 수용체(CCR)이다. 특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 TCR 유사 융합 분자이다.
5.2.1. 키메라 항원 수용체(CAR)
특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 CAR이다. CAR은 면역 이펙터 세포에 관심 있는 특이성을 이식하거나 부여하는 조작된 수용체이다. CAR은 단클론 항체의 특이성을 레트로바이러스 벡터에 의해 촉진된 코딩 서열의 전달을 통해 T 세포에 이식하는 데 사용될 수 있다.
CAR에는 3세대가 있다. "1세대" CAR은 전형적으로 세포질/세포 내 신호전달 도메인에 융합된, 막관통 도메인에 융합된 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)으로 구성된다. "1세대" CAR은 새로운 항원 인식을 제공하고 HLA 매개된 항원 제시와 관계없이 단일 융합 분자의 CD3ζ 쇄 신호전달 도메인을 통해 CD4+ 및 CD8+ T 세포 모두의 활성화를 유발할 수 있다. "2세대" CAR은 다양한 공동자극 분자(예를 들어, CD28, 4-1BB, ICOS, OX40)로부터의 세포 내 신호전달 도메인을 CAR의 세포질 테일에 추가하여 T 세포에 추가 신호를 제공한다. "2세대" CAR은 공동자극(예를 들어, CD28 또는 4-1BB)과 활성화(CD3ζ)를 모두 제공하는 CAR을 포함한다. "3세대" CAR은 다중 공동자극(예를 들어, CD28 및 4-1BB)과 활성화(CD3ζ)를 제공하는 CAR을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 2세대 CAR이다. 특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 공동자극 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함하는 CAR이다.
5.2.1.1. CAR의 세포 외 항원-결합 도메인
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 단일쇄 가변 단편(scFv)이다. 특정 실시양태에서, scFv는 인간 scFv이다. 특정 실시양태에서, scFv는 인간화 scFv이다. 특정 실시양태에서, scFv는 뮤린 scFv이다. 특정 실시양태에서, scFv는 항원-Fc 융합 단백질을 사용하여 scFv 파지 라이브러리를 선별함으로써 확인된다.
특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 Fab이다. 특정 실시양태에서, Fab는 가교결합된다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 F(ab)2이다. 임의의 전술한 분자는 이종 서열을 갖는 융합 단백질에 포함될 수 있어 세포 외 항원-결합 도메인을 형성할 수 있다.
키메라 수용체, 예를 들어, CAR의 세포 외 항원-결합 도메인의 결합은, 예를 들어, 효소 결합 면역흡착 검정(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 방사성면역측정법(radioimmunoassay, RIA), FACS 분석, 생물검정(bioassay)(예를 들어, 성장 억제) 또는 웨스턴 블롯 검정(Western Blot assay)으로 확인할 수 있다. 이러한 검정 각각은 일반적으로 관심 단백질-항체 복합체에 특이적인 표지된 시약(예를 들어, 항체 또는 scFv)을 사용하여 특별한 관심 단백질-항체 복합체의 존재를 검출한다. 예를 들어, scFv는 방사성 표지되어 방사성면역측정법(RIA)에 사용될 수 있다(예를 들어, 본원에 참고로 포함된 Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassay, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986 참조). 방사성 동위원소는 γ 계수기나 신틸레이션 계수기(scintillation counter)의 사용과 같은 수단 또는 자기방사법(autoradiography)을 사용하여 검출할 수 있다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 외 항원-결합 도메인은 형광 마커로 표지된다. 형광 마커의 비제한적 예에는 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP), 청색 형광 단백질(blue fluorescent protein)(예를 들어, EBFP, EBFP2, Azurite 및 mKalama1), 시안 형광 단백질(cyan fluorescent protein)(예를 들어, ECFP, Cerulean 및 CyPet) 및 황색 형광 단백질(yellow fluorescent protein)(예를 들어, YFP, Citrine, Venus 및 YPet)이 포함된다.
5.2.1.2. CAR의 막관통 도메인
특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 해당 막의 적어도 일부에 걸쳐 있는 소수성 알파 나선(hydrophobic alpha helix)을 포함한다. 상이한 막관통 도메인은 상이한 수용체 안정성을 초래한다. 항원 인식 후, 수용체 클러스터와 신호가 세포로 전달된다. 본 개시된 주제에 따르면, CAR의 막관통 도메인은 CD8의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD28의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD3ζ의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD4의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, 4-1BB의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, OX40의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, ICOS의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD84의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD166의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD8a의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD8b의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, ICAM-1의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CTLA-4의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD27의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, CD40의 천연 또는 변형된 막관통 도메인 또는 이의 단편, NKGD2 또는 이의 단편, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드(예를 들어, CD8의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다.
특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드(예를 들어, CD8의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드(예를 들어, 인간 CD8의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD8 폴리펩티드는 NCBI 참조 번호: NP_001139345.1(서열번호 7)의 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD8 폴리펩티드는 서열번호 7의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개, 적어도 약 60개, 적어도 약 70개 및 최대 약 235개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, CD8 폴리펩티드는 서열번호 7의 아미노산 1 내지 235, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 137 내지 207 또는 200 내지 235를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 서열번호 7의 아미노산 137 내지 207을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함한다. 서열번호 7은 아래에 제공되어 있다.
서열번호 7의 아미노산 137 내지 207을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 서열번호 8에 제시되어 있으며, 이는 아래에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 CD8 폴리펩티드(예를 들어, 마우스 CD8의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD8 폴리펩티드는 NCBI 참조 번호: AAA92533.1(서열번호 9)의 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD8 폴리펩티드는 서열번호 9의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개, 또는 적어도 약 60개, 또는 적어도 약 70개, 또는 적어도 약 100개 또는 적어도 약 200개 및 최대 약 247개 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, CD8 폴리펩티드는 서열번호 9의 아미노산 1 내지 247, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 151 내지 219 또는 200 내지 247을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 서열번호 9의 아미노산 151 내지 219를 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함한다. 서열번호 9는 아래에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CAR의 막관통 도메인은 CD28 폴리펩티드(예를 들어, CD28의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다.
특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 CD28 폴리펩티드(예를 들어, 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 NCBI 참조 번호: NP_006130(서열번호 10)의 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 10의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개 및 최대 약 220개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 9의 아미노산 1 내지 220, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 153 내지 179 또는 200 내지 220을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 서열번호 10의 아미노산 153 내지 179를 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 서열번호 10은 아래에 제공되어 있다:
서열번호 10의 아미노산 153 내지 179를 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 11에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 CD28 폴리펩티드(예를 들어, 마우스 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 단편)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 NCBI 참조 번호: NP_031668.3(서열번호 12)의 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 12의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개 및 최대 약 218개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 220, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 151 내지 177 또는 200 내지 218을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 서열번호 12의 아미노산 151 내지 177을 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 서열번호 12는 아래에 제공되어 있다:
특정 실시양태에서, CAR은 세포 외 항원-결합 도메인을 막관통 도메인에 연결하는 스페이서 영역을 추가로 포함한다. 스페이서 영역은 CAR의 활성화 활성을 보존하면서 항원 인식을 용이하게 하기 위해 항원-결합 도메인이 서로 다른 방향으로 배향되도록 허용할 만큼 충분히 유연할 수 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 힌지/스페이서 영역은 CD8의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD28의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD3ζ의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD40의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, 4-1BB의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, OX40의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD84의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD166의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD8a의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD8b의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, ICOS의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, ICAM-1의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CTLA-4의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD27의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, CD40의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, NKGD2의 천연 또는 변형된 힌지 영역 또는 이의 단편, 합성 폴리펩티드(면역 반응과 관련된 단백질을 기반으로 하지 않음) 또는 이들의 조합을 포함한다. 힌지/스페이서 영역은 IgG1로부터의 힌지 영역, 또는 면역글로불린의 CH2CH3 영역 및 CD3의 일부, CD28 폴리펩티드의 일부(예를 들어, 서열번호 10 또는 12의 일부), CD8 폴리펩티드의 일부(예를 들어, 서열번호 7 또는 9의 일부), 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100% 상동성이거나 동일한 전술한 것 중 임의의 것의 변이체, 또는 합성 스페이서 서열일 수 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 힌지/스페이서 영역은 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR의 힌지/스페이서 영역은 서열번호 10의 아미노산 114 내지 152를 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다.
서열번호 10의 아미노산 114 내지 152를 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 13에 제시되어 있다.
5.2.1.3. CAR의 세포 내 신호전달 도메인
특정 실시양태에서, CAR은 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. CD3ζ는 세포(예를 들어, 림프계 세포, 예를 들어, T 세포)를 활성화하거나 자극할 수 있다. 야생형("천연") CD3ζ는 3개의 기능성 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM), 3개의 기능성 염기 풍부 스트레치(basic-rich stretch, BRS) 영역(BRS1, BRS2 및 BRS3)을 포함한다. CD3ζ는 항원이 결합된 후 세포(예를 들어, 림프계 세포, 예를 들어, T 세포)에 활성화 신호를 전달한다. CD3ζ-쇄의 세포 내 신호전달 도메인은 내인성 TCR로부터의 신호의 주요 전달자이다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 천연 CD3ζ를 포함한다. 특정 실시양태에서, 천연 CD3ζ 폴리펩티드는 NCBI 참조 번호: NP_932170(서열번호 14)의 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 천연 CD3ζ 폴리펩티드는 서열번호 14의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개, 적어도 약 100개, 적어도 약 110개 및 최대 약 164개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, 천연 CD3ζ 폴리펩티드는 서열번호 14의 아미노산 1 내지 164, 1 내지 50, 50 내지 100, 52 내지 164, 100 내지 150 또는 150 내지 164를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 서열번호 14의 아미노산 52 내지 164를 포함하거나 이로 이루어진 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. 서열번호 14는 아래에 제공되어 있다:
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 변형된 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개의 ITAM을 포함한다. 특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 천연 ITAM1을 포함한다. 특정 실시양태에서, 천연 ITAM1은 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
QNQLYNELNLGRREEYDVLDKR [서열번호 15]
서열번호 15의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 16에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 하나 이상의 기능상실 돌연변이를 포함하는 ITAM1 변이체를 포함한다. 특정 실시양태에서, ITAM1 변이체는 2개의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 하나 이상(예를 들어, 2개)의 기능상실 돌연변이 각각은 ITAM1의 티로신 잔기의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, ITAM1 변이체는 2개의 기능상실 돌연변이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ITAM1 변이체는 아래에 제공된 서열번호 17에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
QNQLFNELNLGRREEFDVLDKR [서열번호 17]
서열번호 17의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 18에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 천연 ITAM2를 포함한다. 특정 실시양태에서, 천연 ITAM2는 아래에 제공된 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
QEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMK [서열번호 19]
서열번호 19의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 20에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 ITAM2 변이체를 포함한다. 특정 실시양태에서, ITAM2 변이체는 하나 이상의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ITAM2 변이체는 2개의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 하나 이상(예를 들어, 2개)의 기능상실 돌연변이 각각은 ITAM2의 티로신 잔기의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, ITAM2 변이체는 2개의 기능상실 돌연변이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ITAM2 변이체는 아래에 제공된 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
QEGLFNELQKDKMAEAFSEIGMK [서열번호 21]
서열번호 21의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 22에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 천연 ITAM3을 포함한다. 특정 실시양태에서, 천연 ITAM3은 아래에 제공된 서열번호 23에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
HDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ [서열번호 23]
서열번호 23의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 24에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 ITAM3 변이체를 포함한다. 특정 실시양태에서, ITAM3 변이체는 2개의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 하나 이상(예를 들어, 2개)의 기능상실 돌연변이 각각은 ITAM3의 티로신 잔기의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, ITAM3 변이체는 2개의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ITAM3 변이체는 아래에 제공된 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
HDGLFQGLSTATKDTFDALHMQ [서열번호 25]
서열번호 25의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 26에 제시되어 있다.
다양한 변형된 CD3ζ 폴리펩티드 및 변형된 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하는 CAR은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2019/133969에 개시되어 있으며, 이는 전체가 본원에 참고로 포함된다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 천연 ITAM1, 하나 이상(예를 들어, 2개)의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진 ITAM2 변이체 및 하나 이상(예를 들어, 2개)의 기능상실 돌연변이를 포함하거나 이로 이루어진 ITAM3 변이체를 포함하는 변형된 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 천연 ITAM1, 2개의 기능상실 돌연변이로 이루어진 ITAM2 변이체 및 2개의 기능상실 돌연변이로 이루어진 ITAM3 변이체를 포함하는 변형된 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 천연 ITAM1, 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 ITAM2 변이체 및 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 ITAM3 변이체를 포함하는 변형된 CD3ζ 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 "1XX"로 지정된다. 특정 실시양태에서, 변형된 CD3ζ 폴리펩티드는 서열번호 27에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 서열번호 27은 아래에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 서열번호 27 또는 이의 단편과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%, 적어도 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 변형된 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하고/하거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
서열번호 27의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 서열번호 28에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, CAR은 2세대 CAR이다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 적어도 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 공동자극 신호전달 영역은 적어도 하나의 공동자극 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함한다.
본원에 사용된 "공동자극 분자"는 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응을 제공할 수 있는 항원 수용체 또는 이의 리간드 이외의 세포 표면 분자를 가리킨다. 특정 실시양태에서, 공동자극 분자는 최적의 림프구 활성화를 제공할 수 있다. 공동자극 분자의 비제한적인 예에는 CD28, 4-1BB, OX40, ICOS, DAP-10, CD27, CD40 및 NKGD2가 포함된다. 공동자극 분자는 수용체에 결합할 때 공동자극 반응, 즉 키메라 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체(CAR))가 표적 항원에 결합할 때 제공되는 자극에 영향을 미치는 세포 내 반응을 생성하는 세포 표면에 발현되는 단백질인 공동자극 리간드에 결합할 수 있다. 한 예로서, 4-1BB 리간드(즉, 4-1BBL)는 CAR 신호와 조합하여 CAR+ T 세포의 이펙터 세포 기능을 유도하는 세포 내 신호를 제공하기 위해 4-1BB에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 CD28 폴리펩티드, 예를 들어, CD28의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함하는 공동자극 신호전달 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%, 적어도 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 10의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개 및 최대 약 220개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 10의 아미노산 1 내지 220, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 114 내지 220, 150 내지 200, 180 내지 220 또는 200 내지 220을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 서열번호 10의 아미노산 180 내지 220을 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함하는 공동자극 신호전달 영역을 포함한다.
서열번호 10의 아미노산 180 내지 220을 암호화하는 예시적인 핵산 서열은 아래에 제공된 서열번호 29에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%, 적어도 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 12의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개 및 최대 218개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, CD28 폴리펩티드는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 218, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 218, 178 내지 218 또는 200 내지 218을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 CAR의 공동자극 신호전달 영역은 서열번호 12의 아미노산 178 내지 218을 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 4-1BB 폴리펩티드, 예를 들어, 4-1BB의 세포 내 도메인 또는 이의 단편(예를 들어, 인간 4-1BB의 세포 내 도메인 또는 이의 단편)을 포함하는 공동자극 신호전달 영역을 포함한다. 4-1BB 폴리펩티드는 NCBI 참조 번호: NP_001552(서열번호 30)의 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%, 적어도 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고/거나 선택적으로 최대 1개 또는 최대 2개 또는 최대 3개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 4-1BB 폴리펩티드는 서열번호 30의 연속 부분인 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 이는 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 30개, 또는 적어도 약 40개, 또는 적어도 약 50개, 또는 적어도 약 100개, 또는 적어도 약 150개, 또는 적어도 약 150개 및 최대 약 255개의 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, 4-1BB 폴리펩티드는 서열번호 30의 아미노산 1 내지 255, 1 내지 50, 50 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 200 내지 255 또는 214 내지 255를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 서열번호 30의 아미노산 214 내지 255를 포함하거나 이로 이루어진 4-1BB 폴리펩티드를 포함하는 공동자극 신호전달 영역을 포함한다. 서열번호 30은 아래에 제공되어 있다.
서열번호 30의 아미노산 214 내지 255를 암호화하는 예시적인 핵산 서열은 아래에 제공된 서열번호 31에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포 내 신호전달 도메인은 2개 이상의 공동자극 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 일부, 예를 들어, CD28의 세포 내 도메인 또는 이의 단편 및 4-1BB의 세포 내 도메인 또는 이의 단편, 또는 CD28의 세포 내 도메인 또는 이의 단편 및 OX40의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함하는 공동자극 신호전달 영역을 포함한다.
5.2.2. 키메라 공동자극 수용체(CCR)
특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 CCR이다. 본 개시된 CCR은 항원(예를 들어, ADGRE2 또는 CLEC12A)에 결합하여 공동자극 신호를 제공하지만, 단독으로 활성화 신호를 제공하지는 않는다. 특정 실시양태에서, CCR은 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하지 않는다. CCR은 항원 제시 세포에 천연 공동자극 리간드가 없을 때 공동자극, 예를 들어, CD28 유사 신호를 제공한다. 조합 항원 인식, 즉 CAR과 CCR의 조합 사용은 이중-항원 발현 T 세포에 대한 T 세포 반응성을 증가시켜 선택적 종양 표적화를 향상시킬 수 있다. Kloss 등은 조합 항원 인식, 분할 신호전달, 및 결정적으로 T 세포 활성화와 공동자극의 균형 잡힌 강도를 통합하여 각 항원을 개별적으로 발현하는 세포를 보존하면서 항원 조합을 발현하는 표적 세포를 제거하는 T 세포를 생성하는 전략을 설명한다(Kloss 등, Nature Biotechnology (2013);31(1):71-75, 이의 내용은 전체가 참고로 포함됨). 이 접근법을 사용하면 T 세포 활성화에 하나의 항원에 대한 CAR 매개된 인식이 필요한 반면, 공동자극은 두 번째 항원에 특이적인 CCR에 의해 독립적으로 매개된다. 종양 선택성을 달성하기 위해, 조합 항원 인식 접근법은 두 번째 항원의 동시 CCR 인식에 의해 제공되는 구조(rescue) 없이는 효과가 없는 수준까지 T 세포 활성화의 효율성을 감소시킨다.
특정 실시양태에서, CCR은 항원(예를 들어, ADGRE2 또는 CLEC12A)에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인, 및 적어도 하나의 공동자극 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함하는 공동자극 신호전달 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CCR은 면역반응성 세포에 활성화 신호를 단독으로 전달하지 않는다. 공동자극 분자의 비제한적인 예에는 CD28, 4-1BB, OX40, ICOS, DAP-10, CD27, CD40 및 NKGD2가 포함된다. 특정 실시양태에서, CCR의 공동자극 신호전달 영역은 공동자극 신호전달 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 하나의 공동자극 신호전달 분자는 CD28이다. 특정 실시양태에서, 하나의 공동자극 신호전달 분자는 4-1BB이다. 특정 실시양태에서, CCR의 공동자극 신호전달 영역은 제1 공동자극 신호전달 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 단편 및 제2 공동자극 신호전달 분자의 세포 내 도메인 또는 이의 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 공동자극 신호전달 분자는 CD28 및 4-1BB이다.
CAR과 유사하게, CCR의 세포 외 항원-결합 도메인은 scFv, Fab, F(ab)2, 또는 CCR의 세포 외 항원-결합 도메인을 형성하는 이종 서열을 갖는 융합 단백질일 수 있다.
5.2.3. TCR 유사 융합 분자
특정 실시양태에서, 키메라 수용체는 TCR 유사 융합 분자이다. TCR 융합 분자의 비제한적 예에는 HLA-독립적 TCR 기반 키메라 항원 수용체("HIT-CAR"로도 알려져 있음, 예를 들어, 전체가 참고로 포함된 국제 특허 출원 번호 PCT/US19/017525에 개시된 것), T 세포 수용체 융합 작제물(TRuC)(예를 들어, 전체가 참고로 포함된 Baeuerle 등, "Synthetic TRuC receptors engaging the complete T cell receptor for potent anti-tumor response," Nature Communications volume 10, Article number: 2087 (2019)에 개시된 것), 합성 T 세포 수용체 및 항원 수용체(STAR)(예를 들어, 전체가 참고로 포함된 Liu 등, Science Translational Medicine (2021);13(586):eabb5191에 개시된 것), 항체-T 세포 수용체(AbTCR)(예를 들어, 전체가 참고로 포함된 Xu 등, Cell Discovery (2018) 4:62에 개시된 것) 및 T 세포 항원 커플러(TAC)(예를 들어, 전체가 참고로 포함된 Helsen 등, Nature Communications (2018);9:3049에 개시된 것)가 포함된다.
특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자는 세포 외 항원-결합 도메인 및 불변 도메인을 포함하는 항원 결합 쇄를 포함하며, TCR 유사 융합 분자는 HLA-독립적 방식으로 항원에 결합한다. 특정 실시양태에서, 불변 도메인은 천연 또는 변형된 TRAC 폴리펩티드, 천연 또는 변형된 TRBC 폴리펩티드, 천연 또는 변형된 TRDC 폴리펩티드, 천연 또는 변형된 TRGC 폴리펩티드 및 이의 임의의 변이체 또는 기능적 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 T 세포 수용체 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 불변 도메인은 천연 또는 변형된 TRAC 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 불변 도메인은 천연 또는 변형된 TRBC 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 불변 도메인은 동종이량체를 형성할 수 있거나 또 다른 불변 도메인과 이종이량체를 형성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 쇄는 CD3ζ 폴리펩티드와 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 쇄는 항원(예를 들어, ADGRE2 또는 CLEC12A)에 결합 시 항원 결합 쇄와 연관된 CD3ζ 폴리펩티드를 활성화할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD3ζ 폴리펩티드의 활성화는 면역반응성 세포를 활성화할 수 있다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자는 CD3 복합체와 통합될 수 있고 HLA-독립적 항원 인식을 제공할 수 있다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자는 CD3/TCR 복합체에서 내인성 TCR을 대체한다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 또 다른 세포 외 항원-결합 도메인과 이량체화할 수 있다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 세포 표면 수용체에 대한 리간드, 세포 표면 리간드에 대한 수용체, 항체의 항원 결합 부분 또는 이의 단편, 또는 TCR의 항원 결합 부분을 포함한다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 1개 또는 2개의 면역글로불린 가변 영역(들)을 포함한다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 항체의 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 항체의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 또 다른 세포 외 항원-결합 도메인과 이량체화할 수 있다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 항체의 VH를 포함하며, VH는 항체의 VL을 포함하는 또 다른 세포 외 항원-결합 도메인과 이량체화하여 가변 단편(Fv)을 형성할 수 있다. 특정 실시양태에서, TCR 유사 융합 분자의 세포 외 항원-결합 도메인은 항체의 VL을 포함하고, VL은 항체의 VH를 포함하는 또 다른 세포 외 항원-결합 도메인과 이량체화하여 가변 단편(Fv)을 형성할 수 있다.
5.3. ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 ADGRE2를 표적으로 한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 ADGRE2에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다.
EMR2, CD312, VBU 또는 CD97로도 알려진 접착 G 단백질 연결 수용체 E2(Adhesion G Protein-Coupled Receptor E2, ADGRE2)는 접착 GPCR 계열의 구성원이다. 이는 단핵구/대식세포, 수지상 세포 및 모든 유형의 과립구에 의해 발현된다. ADGRE2는 글리코사미노글리칸 쇄의 콘드로이틴 설페이트 모이어티에 결합하여 세포 부착을 촉진하는 세포 표면 수용체이다. 이는 과립구 화학주성, 탈과립 및 접착을 촉진한다. 대식세포에서 ADGRE2는 IL8 및 TNF를 포함한 염증성 사이토카인의 방출을 촉진한다. 아마도 G-단백질을 통해 신호를 보낼 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 인간 ADGRE2를 표적으로 한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 인간 ADGRE2에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 ADGRE2는 Uniprot 참조 번호: Q9UHX3-1(서열번호 32)의 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함하거나 이로 이루어진다. 서열번호 32는 아래에 제공되어 있다:
인간 ADGRE2는 EGF 유사 1 도메인, EGF 유사 2 도메인, EGF 유사 3 도메인, EGF 유사 4 도메인, EGF 유사 5 도메인 및 GPS 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, EGF 유사 1 도메인은 서열번호 32의 아미노산 25 내지 66을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, EGF 유사 2 도메인은 서열번호 32의 아미노산 67 내지 118을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, EGF 유사 3 도메인은 서열번호 32의 아미노산 119 내지 162를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, EGF 유사 4 도메인은 서열번호 32의 아미노산 163 내지 211을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, EGF 유사 5 도메인은 서열번호 32의 아미노산 212 내지 260을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, GPS 도메인은 서열번호 32의 아미노산 479 내지 529를 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 서열번호 32에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 ADGRE2 폴리펩티드를 표적으로 한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 ADGRE2의 스톡(stalk) 영역에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 ADGRE2의 GPS 도메인에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 ADGRE2의 EGF 유사 5 도메인에 결합한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 섹션 5.2.1에 개시된 구조를 갖는다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 ADGRE2에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 키메라 공동자극 수용체(CCR)이다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CCR은 섹션 5.2.2에 개시된 구조를 갖는다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CCR은 ADGRE2에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인 및 면역반응성 세포에 활성화 신호를 제공하지 않는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하며, 예를 들어, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 TCR 유사 융합 분자이다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 TCR 유사 융합 분자는 섹션 5.2.3에 개시된 구조를 갖는다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용의 세포 외 항원-결합 도메인체(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 적어도 약 1×10-6M, 적어도 약 1×10-7M, 적어도 약 1×10-8M, 적어도 약 1×10-9M 또는 적어도 약 1×10-10M의 해리 상수(KD)로 ADGRE2(예를 들어, 인간 ADGRE2)에 결합한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 적어도 약 2×10-8M의 해리 상수(KD)로 ADGRE2(예를 들어, 인간 ADGRE2)에 결합한다. 특정 실시양태에서, 약 2×10-8M 내지 약 8×10-9M의 해리 상수(KD)로 ADGRE2(예를 들어, 인간 ADGRE2)에 대한 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv).
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 약 1nM 내지 약 50nM, 약 5nM 내지 약 30nM, 약 5nM 내지 약 25nM 또는 약 8nM 내지 약 20nM의 해리 상수(KD)로 ADGRE2(예를 들어, 인간 ADGRE2)에 결합한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 적어도 약 50nM, 적어도 약 40nM, 적어도 약 35nM, 적어도 약 30nM, 적어도 약 25nM, 적어도 약 20nM, 적어도 약 19nM, 적어도 약 18nM, 적어도 약 17nM, 적어도 약 16nM, 적어도 약 15nM, 적어도 약 14nM, 적어도 약 13nM, 적어도 약 12nM, 적어도 약 11nM, 적어도 약 10nM, 적어도 약 9nM, 적어도 약 8nM, 적어도 약 7nM, 적어도 약 6nM 또는 적어도 약 5nM의 해리 상수(KD)로 ADGRE2(예를 들어, 인간 ADGRE2)에 결합한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 33-35는 표 1에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 39와 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 39는 아래 표 1에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 40과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 40은 아래 표 1에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 서열번호 41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-A"로 지정된다. 서열번호 41의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 서열번호 42에 제시되어 있다. 서열번호 41 및 42는 표 1에 제공되어 있다. 표 1에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 33-35는 표 1 및 2에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1 및 2에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 43은 아래 표 2에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 44는 아래 표 2에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 표 2에 제공되어 있는 서열번호 45에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-B"로 지정된다. 표 2에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 345에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 33-35는 표 1-3에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용의 세포 외 항원-결합 도메인체(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1-3에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 46은 아래 표 3에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 47은 아래 표 3에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 표 3에 제공된 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-C"로 지정된다. 표 3에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 33-35는 표 1-4에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1-4에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 49는 아래 표 4에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 50은 아래 표 4에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 표 4에 제공된 서열번호 51에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-D"로 지정된다. 표 4에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 34-36은 표 1-5에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1-5에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 52는 아래 표 5에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 53은 아래 표 5에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 표 5에 제공된 EQ 번호 54에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-E"로 지정된다. 표 5에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 33-35는 표 1-6에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1-6에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 55는 아래 표 6에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 56은 아래 표 6에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 표 6에 제공된 서열번호 57에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-F"로 지정된다. 표 6에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 33-35는 표 1-7에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 36-38은 표 1-7에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 146은 아래 표 7에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 147은 아래 표 7에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, ADGRE2-표적화 scFv)은 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 표 7에 제공된 서열번호 148에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 scFv는 "ADGRE2-G"로 지정된다. 표 7에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 서열(예를 들어, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 146 또는 서열번호 147)과 적어도 약 80%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%(예를 들어, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%) 상동성 또는 동일성을 포함하거나 이로 이루어진 VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 특정된 서열(들)과 관련된 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유할 수 있지만 표적 항원(예를 들어, ADGRE2)에 결합하는 능력은 유지한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 특정 서열(예를 들어, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 146 또는 서열번호 147)에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 세포 외 항원-결합 도메인의 CDR 외부 영역(예를 들어, FR)에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열(서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 146 또는 서열번호 147)의 번역 후 변형을 포함하여, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 146 또는 서열번호 147로부터 선택된 VH 및/또는 VL 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 ADGRE2에 대한 결합에 대해 교차 경쟁한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은, 예를 들어, 본 개시된 scFv(예를 들어, ADGRE2-A, ADGRE2-B, ADGRE2-C, ADGRE2-D, ADGRE2-E, ADGRE2-F 및 ADGRE2-G) 중 어느 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 ADGRE2에 대한 결합에 대해 교차 경쟁한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 33에 제시된 아미노산을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 ADGRE2에서 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프 영역에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은, 예를 들어, 본 개시된 scFv(예를 들어, ADGRE2-A, ADGRE2-B, ADGRE2-C, ADGRE2-D, ADGRE2-E, ADGRE2-F 및 ADGRE2-G) 중 어느 하나의 VH 및 VL 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 ADGRE2에서 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프 영역에 결합한다.
ADGRE2에 대한 결합에 대해 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 교차 경쟁하거나 경쟁하는 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 ELISA, 방사성면역측정법(RIA), Biacore, 유세포분석, 웨스턴 블롯팅 및 임의의 기타 적합한 정량적 또는 정성적 항체-결합 검정을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 일상적인 방법을 사용하여 확인할 수 있다. 경쟁 ELISA는 J. Walker가 편집한 Morris, "Epitope Mapping of Protein Antigens by Competition ELISA", The Protein Protocols Handbook (1996), pp 595-600에 기술되어 있으며, 이는 전체가 참고로 포함되어 있다. 특정 실시양태에서, 항체-결합 검정은 ADGRE2에 대한 기준 항체의 초기 결합을 측정하고, 기준 항체를 테스트 세포 외 항원-결합 도메인과 혼합하고, 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 존재하에 ADGRE2에 대한 기준 항체의 두 번째 결합을 측정하고, 초기 결합을 기준 항체의 두 번째 결합과 비교하는 것을 포함하며, 초기 결합과 비교하여 ADGRE2에 대한 기준 항체의 두 번째 결합의 감소는 테스트 세포 외 항원-결합 도메인이 ADGRE2에 대한 결합에 대해 기준 항체, 예를 들어, 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프, 중첩되는 에피토프 또는 인접한 에피토프를 인식하는 항체와 교차경쟁하는 것을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 기준 항체는, 예를 들어, 형광색소(fluorochrome), 비오틴(biotin) 또는 퍼옥시다제(peroxidase)로 표지된다. 특정 실시양태에서, ADGRE2는, 예를 들어, 유세포분석 테스트에서 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, ADGRE2는 Biacore ship(예를 들어, Biacore 테스트에서)을 포함하는 표면, 또는 표면 플라즈몬 공명 분석에 적합한 다른 매질 상에 고정된다. 전혀 관련이 없는 항체(ADGRE2에 결합하지 않음)의 존재하에 기준 항체의 결합은 높은 제어값으로 작용할 수 있다. 낮은 제어값은 표지된 기준 항체를 표지되지 않은 기준 항체와 함께 인큐베이션하여 얻을 수 있으며, 표지된 기준 항체의 경쟁 및 감소된 결합이 발생할 수 있다. 특정 실시양태에서, ADGRE2에 대한 기준 항체의 결합을 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 감소시키는 테스트 세포 외 항원-결합 도메인은 ADGRE2에 대한 결합에 대해 기준 항체와 교차경쟁하는 세포 외 항원-결합 도메인인 것으로 간주된다. 특정 실시양태에서, 검정은 실온에서 수행된다.
특정 실시양태에서, 항체-결합 검정은 ADGRE2에 대한 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 초기 결합을 측정하고, 테스트 세포 외 항원-결합 도메인을 기준 항체와 혼합하고, 기준 항체의 존재하에 ADGRE2에 대한 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 두 번째 결합을 측정하고, 초기 결합을 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 두 번째 결합과 비교하는 것을 포함하며, 초기 결합과 비교하여 ADGRE2에 대한 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 두 번째 결합의 감소는 테스트 세포 외 항원-결합 도메인이 ADGRE2에 대한 결합에 대해 기준 항체, 예를 들어, 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프, 중첩되는 에피토프 또는 인접한 에피토프를 인식하는 항체와 교차경쟁하는 것을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 테스트 세포 외 항원-결합 도메인은, 예를 들어, 형광색소, 비오틴 또는 퍼옥시다제로 표지된다. 특정 실시양태에서, ADGRE2는, 예를 들어, 유세포분석 테스트에서 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, ADGRE2는 Biacore ship(예를 들어, Biacore 테스트에서)을 포함하는 표면, 또는 표면 플라즈몬 공명 분석에 적합한 다른 매질 상에 고정된다. 전혀 관련이 없는 항체(ADGRE2에 결합하지 않음)의 존재하에 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 결합은 높은 제어값으로 작용할 수 있다. 낮은 제어값은 표지된 테스트 세포 외 항원-결합 도메인을 표지되지 않은 테스트 세포 외 항원-결합 도메인과 함께 인큐베이션하여 얻을 수 있으며, 표지된 테스트 세포 외 항원-결합 도메인의 경쟁 및 감소된 결합이 발생할 수 있다. 특정 실시양태에서, 기준 항체의 존재하에 ADGRE2에 대한 결합이 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 감소되는 테스트 세포 외 항원-결합 도메인은 ADGRE2에 대한 결합에 대해 기준 항체와 교차경쟁하는 세포 외 항원-결합 도메인인 것으로 간주된다. 특정 실시양태에서, 검정은 실온에서 수행된다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 세포 외 항원-결합 도메인의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 연결하는 링커를 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 경쇄 가변 영역(VL)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VL-VH로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다.
또한, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 초기 단백질(nascent protein)을 소포체(endoplasmic reticulum) 내로 유도하는 리더 또는 신호 펩티드를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 리더 또는 신호 펩티드는 ADGRE2-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 위치한다(예를 들어, N-말단에 공유 결합됨). 키메라 수용체가 글리코실화되어 세포막에 고정되어야 한다면 신호 펩티드 또는 리더가 필수적일 수 있다. 신호 서열 또는 리더는 새로 합성된 단백질의 N-말단에 존재하는 펩티드 서열(약 5개, 약 10개, 약 15개, 약 20개, 약 25개 또는 약 30개 아미노산 길이)일 수 있으며, 이는 분비 경로(secretory pathway)로의 진입을 지시한다. 신호 펩티드 또는 리더 서열의 비제한적인 예에는 IL-2 신호 서열, CD8 리더 서열, 카파(kappa) 리더 서열, 알부민(albumin) 리더 서열 및 프로락틴(prolactin) 리더 서열이 포함된다. 특정 실시양태에서, IL-2 신호 서열은 서열번호 58 또는 서열번호 59에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 카파 리더 서열은 서열번호 60 또는 서열번호 61에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CD8 신호 서열은 서열번호 62 또는 서열번호 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 알부민 리더 서열은 서열번호 64에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 프로락틴 리더 서열은 서열번호 65에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 CD8 폴리펩티드를 포함하는 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 서열번호 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함하는 신호 펩티드를 포함한다.
MYRMQLLSCIALSLALVTNS [서열번호 58]
MYSMQLASCVTLTLVLLVNS [서열번호 59]
METPAQLLFLLLLWLPDTTG [서열번호 60]
METDTLLLWVLLLWVPGSTG [서열번호 61]
MALPVTALLLPLALLLHAARP [서열번호 62]
MALPVTALLLPLALLLHA [서열번호 63]
MKWVTFISLLFSSAYS [서열번호 64]
MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS [서열번호 65]
5.4. 예시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 ADGRE2-표적화 CAR이다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 (a) (ⅰ) 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3 포함하는 VH, 및 (ⅱ) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 VL을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인; (b) CD28 폴리펩티드를 포함하는 힌지/스페이서 영역, (c) CD28 폴리펩티드를 포함하는 막관통 도메인(예를 들어, 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 단편) 및 (d) (ⅰ) CD3ζ 폴리펩티드 및 (ⅱ) CD28 폴리펩티드를 포함하는 공동자극 신호전달 영역(예를 들어, 인간 CD28의 세포 내 도메인 또는 이의 단편)을 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, VH 및 VL은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 서열번호 10의 아미노산 153 내지 179를 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 공동자극 신호전달 영역은 서열번호 10의 아미노산 180 내지 220을 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 힌지/스페이서 영역은 서열번호 10의 아미노산 114 내지 152를 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인과 막관통 도메인은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 150에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 서열번호 150은 아래에 제공되어 있다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 아래에 제공된 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
RAAA [서열번호 150]
서열번호 66의 아미노산 서열인 예시적인 핵산 서열은 아래에 제공된 서열번호 67에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열번호 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함한다.
5.5. CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 CLEC12A를 표적으로 한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다.
CLL-1, CLL1, DCAL-2, MICL, CD371로도 알려진 C형 렉틴 도메인 계열 12 구성원 A(C-type lectin domain family 12 member A, CLEC12A)는 30kD C형 렉틴 막관통 당단백질이다. 이는 단핵구, 과립구, 자연 살해(NK) 세포 및 호염기구에서 발현된다. CLEC12A는 Src 상동성 포스파타제 SHP-1 및 SHP-2를 인산화된 세포질 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif, ITIM)에 동원하는 면역억제 수용체이다(Sancho 등, Annu Rev. Immunol (2012); 30:491-529; Yan 등, Front Immunol (2015);6:408; Lahoud 등, J Immunol (2011);187:842). CLEC12A는 자가면역 및 염증성 질환을 조절하는 음성 조절 요산 결정(negative regulatory uric acid crystal)(요산나트륨(monosodium urate), MSU) 수용체와 관련이 있는 것으로 나타났다(Neumann 등, Immunity (2014);40:389-99). CLEC12A는 과립구 및 단핵구 기능의 음성 조절인자이다(Marshall 등, J Biol Chem (2004);279(15):14792-802; Pyz 등, Eur J Immunol (2008);38(4):1157-63).
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 인간 CLEC12A를 표적으로 한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 인간 CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 CLEC12A는 UniProt 참조 번호: Q5QGZ9-2(서열번호 68)의 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함하거나 이로 이루어진다. 서열번호 68은 아래에 제공되어 있다:
인간 CLEC12A는 세포질 도메인, 막관통 도메인 및 세포 외 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포질 도메인은 서열번호 68의 아미노산 1 내지 43을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 서열번호 68의 아미노산 44 내지 64를 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 세포 외 도메인은 서열번호 68의 아미노산 65 내지 265를 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체는 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%, 적어도 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CLECL12A 폴리펩타이드를 표적으로 한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A의 세포 외 도메인에 결합한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CAR은 섹션 5.2.1에 개시된 구조를 갖는다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CAR은 CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 키메라 공동자극 수용체(CCR)이다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 섹션 5.2.2에 개시된 구조를 갖는다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인 및 면역반응성 세포에 활성화 신호를 제공하지 않는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하며, 예를 들어, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 TCR 유사 융합 분자이다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 TCR 유사 융합 분자는 섹션 5.2.3에 개시된 구조를 갖는다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 적어도 약 1×10-6 M, 적어도 약 1×10-7M, 적어도 약 1×10-8M, 적어도 약 1×10-9M 또는 적어도 약 1×10-10M의 해리 상수(KD)로 CLEC12A(예를 들어, 인간 CLEC12A)에 결합한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 적어도 약 2×10-8M의 해리 상수(KD)로 CLEC12A(예를 들어, 인간 CLEC12A)에 결합한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)의 세포 외 항원-결합 도메인은 약 2×10-8M 내지 약 8×10-9M의 해리 상수(KD)로 CLEC12A(예를 들어, 인간 CLEC12A)에 결합한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 약 1nM 내지 약 50nM, 약 5nM 내지 30nM, 약 5nM 내지 약 25nM 또는 약 8nM 내지 약 20nM의 해리 상수(KD)로 CLEC12A(예를 들어, 인간 CLEC12A)에 결합한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 적어도 약 50nM, 적어도 약 40nM, 적어도 약 35nM, 적어도 약 30nM, 적어도 약 25nM, 적어도 약 20nM, 적어도 약 19nM, 적어도 약 18nM, 적어도 약 17nM, 적어도 약 16nM, 적어도 약 15nM, 적어도 약 14nM, 적어도 약 13nM, 적어도 약 12nM, 적어도 약 11nM, 적어도 약 10nM, 적어도 약 9nM, 적어도 약 8nM, 적어도 약 7nM, 적어도 약 6nM, 적어도 약 5nM의 해리 상수(KD)로 CLEC12A(예를 들어, 인간 CLEC12A)에 결합한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 69-71은 표 8에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 72-74는 표 8에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)는 서열번호 108과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 75는 아래 표 8에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)는 서열번호 109와 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 76은 아래 표 8에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 서열번호 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-A"로 지정된다. 서열번호 79의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 예는 서열번호 80에 제시되어 있다. 서열번호 79 및 80은 표 8에 제공되어 있다. 표 8에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 81-83은 표 9에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 73, 84 및 85는 표 9에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 86과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 86은 아래 표 9에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 87과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 87은 아래 표 9에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 9에 제공된 서열번호 88에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-B"로 지정된다. 표 9에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 89-91은 표 10에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 92-94는 표 10에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 95에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 95와 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 95는 아래 표 10에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 96과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 96은 아래 표 10에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 10에 제공된 서열번호 97에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-C"로 지정된다. 표 10에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 89, 90 및 98은 표 11에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 93, 99 및 151은 표 11에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 100과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 100은 아래 표 11에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 101과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 101은 아래 표 11에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 11에 제공된 서열번호 102에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-D"로 지정된다. 표 11에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 81, 83 및 103은 표 12에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 73, 104 및 105는 표 12에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 106과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 106은 아래 표 12에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 107에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 107과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 107에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 107은 아래 표 12에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 107에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 12에 제공된 서열번호 108에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-E"로 지정된다. 표 12에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 83, 103 및 109는 표 13에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 73, 85 및 110은 표 13에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 111에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 111과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 111에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 111은 아래 표 13에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 112에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 112와 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 112에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 112는 아래 표 13에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 111에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 112에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 13에 제공된 서열번호 113에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-F"로 지정된다. 표 13에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 89, 90 및 114는 표 14에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 93, 115 및 116은 표 14에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 117에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 117과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 117에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 117은 아래 표 14에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 118에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 118과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 118에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 118은 아래 표 14에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 117에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 118에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 14에 제공된 서열번호 119에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-G"로 지정된다. 표 14에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 120-122는 표 15에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 123-125는 표 15에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열 또는 그의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열 또는 그의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 126과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 126은 아래 표 15에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 127에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열번호 127과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 127에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 127은 아래 표 15에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 127에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 표 15에 제공된 서열번호 128에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-H"로 지정된다. 표 15에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3를 포함한다. 서열번호 129-131은 표 16에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다. 서열번호 132-134는 표 16에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 135와 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 서열번호 135는 아래 표 16에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%) 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 136과 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 상동성이거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 서열번호 136은 아래 표 16에 제공되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인(예를 들어, CLEC12A-표적화 scFv)은 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, scFv는 표 16에 제공된 서열번호 137에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 scFv는 "CLEC12A-J"로 지정된다. 표 16에 제공된 CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인된다.
특정 서열(예를 들어, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 86, 서열번호 87, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 117, 서열번호 118, 서열번호 126, 서열번호 127, 서열번호 135 또는 서열번호 136)과 적어도 약 80%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95%(예를 들어, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%) 상동성이거나 동일한 VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 상기 특정된 서열(들)에 비해 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유할 수 있지만, 표적 항원(예를 들어, CLEC12A)에 결합하는 능력은 유지된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 특정 서열(예를 들어, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 86, 서열번호 87, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 117, 서열번호 118, 서열번호 126, 서열번호 127, 서열번호 135 또는 서열번호 136)에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 세포 외 항원-결합 도메인의 CDR 외부 영역(예를 들어, FR)에서 발생한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인은 서열(서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 86, 서열번호 87, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 117, 서열번호 118, 서열번호 126, 서열번호 127, 서열번호 135 또는 서열번호 136)의 번역 후 변형을 포함하여 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 86, 서열번호 87, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 117, 서열번호 118, 서열번호 126, 서열번호 127, 서열번호 135 또는 서열번호 136으로부터 선택된 VH 및/또는 VL을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A에 대한 결합에 대해, 예를 들어, 본 개시된 scFv(예를 들어, CLEC12A-A, CLEC12A-B, CLEC12A-C, CLEC12A-D, CLEC12A-E, CLEC12A-F, CLEC12A-G, CLEC12A-H 및 CLEC12A-J) 중 어느 하나의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열과 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 교차경쟁한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A에 대한 결합에 대해, 예를 들어, 본 개시된 scFv(예를 들어, CLEC12A-A, CLEC12A-B, CLEC12A-C, CLEC12A-D, CLEC12A-E, CLEC12A-F, CLEC12A-G, CLEC12A-H 및 CLEC12A-J) 중 어느 하나의 VH 및 VL을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 교차경쟁한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A에 대한 결합을 대해 scFv CLEC12A-A의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열과 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 교차경쟁한다. 예를 들어, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A에 대한 결합에 대해 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 교차 경쟁한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A에 대한 결합에 대해 scFv CLEC12A-A의 VH 및 VL 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 교차경쟁한다. 예를 들어, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 CLEC12A에 대한 결합에 대해 서열번호 75에 제시된 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 VH 및 서열번호 76에 제시된 서열을 갖는 아미노산을 포함하는 VL을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 교차경쟁한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 CLEC12A의 동일한 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은, 예를 들어, 본 개시된 scFv(예를 들어, CLEC12A-A, CLEC12A-B, CLEC12A-C, CLEC12A-D, CLEC12A-E, CLEC12A-F, CLEC12A-G, CLEC12A-H 및 CLEC12A-J) 중 어느 하나의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열과 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 CLEC12A의 동일한 에피토프에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은, 예를 들어, 본 개시된 scFv(예를 들어, CLEC12A-A, CLEC12A-B, CLEC12A-C, CLEC12A-D, CLEC12A-E, CLEC12A-F, CLEC12A-G, CLEC12A-H 및 CLEC12A-J) 중 어느 하나의 VH 및 VL을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 CLEC12A의 동일한 에피토프에 결합한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 scFv CLEC12A-A의 VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLEC12A의 동일한 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLEC12A의 동일한 에피토프에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 scFv CLEC12A-A의 VH 및 VL 서열을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLEC12A의 동일한 에피토프 또는 실질적으로 동일한 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLEC12A의 동일한 에피토프에 결합한다.
CLEC12A에 대한 결합에 대해 기준 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 교차 경쟁하거나 경쟁하는 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인은 당업계에 공지된 일상적인 방법, 예를 들어, 섹션 5.3에 개시된 방법을 사용하여 확인할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라의 세포 외 항원-결합 도메인은 세포 외 항원-결합 도메인의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 연결하는 링커를 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 중쇄 가변 영역(VH)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인 내의 가변 영역은 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 경쇄 가변 영역(VL)이 위치하도록 차례로 연결되어야 한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인이 scFv인 경우, 가변 영역은 VL-VH로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다.
또한, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 초기 단백질을 소포체 내로 유도하는 리더 또는 신호 펩티드를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 리더 또는 신호 펩티드는 CLEC12A-표적화 키메라 수용체의 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 위치(예를 들어, 이에 공유 결합)한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 섹션 5.3에 개시된 리더 또는 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 CD8 폴리펩티드를 포함하는 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 서열번호 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함하는 신호 펩티드를 포함한다.
5.6. 예시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 CCR이다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 (a) (ⅰ) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3를 포함하는 VH, 및 (ⅱ) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함하는 VL을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인; (b) 4-1BB 폴리펩티드(예를 들어, 인간 4-1BB 폴리펩티드, 예를 들어, 이의 일부의 4-1BB(예를 들어, 인간 4-1BB)의 세포 내 도메인)를 포함하는 세포 내 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 CD8 폴리펩티드를 포함하는 막관통 도메인(예를 들어, 인간 CD8 폴리펩티드, 예를 들어, CD8(예를 들어, 인간 CD8)의 막관통 도메인 또는 이의 일부)을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 내 도메인은 서열번호 30의 아미노산 214 내지 255를 포함하거나 이로 이루어진 4-1BB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 서열번호 7의 아미노산 137 내지 207을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, VH 및 VL은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, 세포 외 항원-결합 도메인과 막관통 도메인은 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 링커는 서열번호 150에 제시된 아미노산 서열로 이루어진다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 아래에 제공된 서열번호 138에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
서열번호 138의 아미노산 서열인 예시적인 핵산 서열은 아래에 제공된 서열번호 139에 제시되어 있다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 키메라 수용체는 세포 외 항원-결합 도메인의 N-말단에 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열번호 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함한다.
5.7. 세포
본 개시된 주제는 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체(예를 들어, 섹션 5.3 및 5.4에 개시된 것)를 포함하는 세포를 제공한다. 또한, 본 개시된 주제는 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체(예를 들어, 섹션 5.5 및 5.6에 개시된 것)를 포함하는 세포를 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 림프계 세포 및 골수계 계통의 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 세포는 면역반응성 세포이다. 특정 실시양태에서, 면역반응성 세포는 림프계 세포이다.
특정 실시양태에서, 세포는 림프계 세포이다. 림프계 세포는 항체 생성, 세포 면역 체계 조절, 혈액 내 외부 물질 검출, 숙주에 이질적인 세포 검출 등을 제공할 수 있다. 림프계 세포의 비제한적인 예에는 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, B 세포, 수지상 세포, 림프 세포가 분화될 수 있는 줄기세포가 포함된다. 특정 실시양태에서, 줄기세포는 다능성 줄기세포이다. 특정 실시양태에서, 다능성 줄기세포는 배아 줄기세포(ESC) 또는 유도 만능 줄기세포(iPSC)이다.
특정 실시양태에서, 세포는 T 세포이다. T 세포는 흉선에서 성숙되는 림프구일 수 있으며 주로 세포 매개된 면역을 담당한다. T 세포는 적응 면역 체계(adaptive immune system)에 관여한다. 본 개시된 주제의 T 세포는 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포(중추 기억 T 세포, 줄기세포 유사 기억 T 세포(또는 줄기 유사 기억 T 세포) 및 두 가지 유형의 이펙터 기억 T 세포: 예를 들어, TEM 세포 및 TEMRA 세포), 조절 T 세포(억제 T 세포라고도 함), 종양 침윤 림프구(TIL), 자연 살해 T 세포, 점막 관련 불변 T 세포 및 γδ T 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 유형의 T 세포일 수 있다. 세포독성 T 세포(CTL 또는 킬러 T 세포)는 감염된 체세포 또는 종양 세포의 사멸을 유도할 수 있는 T 림프구의 하위세트이다. 환자 자신의 T 세포는 유전적으로 변형되어 키메라 수용체, 예를 들어, CAR 또는 CCR의 도입을 통해 특정 항원을 표적화할 수 있다. 특정 실시양태에서, 면역반응성 세포는 T 세포이다. T 세포는 CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포일 수 있다. T 세포는 CD4+ T 세포이다. 특정 실시양태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다.
특정 실시양태에서, 세포는 NK 세포이다. 자연 살해(NK) 세포는 세포 매개된 면역의 일부이며 선천성 면역 반응 중에 작용하는 림프구일 수 있다. NK 세포는 표적 세포에 대한 세포독성 효과를 수행하기 위해 사전 활성화가 필요하지 않다. 특정 실시양태에서, 세포는 유전적으로 변형된 NK 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 편집된 NK 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 줄기세포로부터 유래된 NK 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 다능성 줄기세포로부터 유래된 NK 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 유도 만능 줄기세포(iPSC) 유래 NK 세포이다.
본 개시된 주제의 인간 림프구의 유형에는 말초 공여 림프구, 예를 들어, Sadelain 등, Nat Rev Cancer (2003); 3:35-45(CAR을 발현하도록 유전적으로 변형된 말초 공여 림프구를 개시함), Morgan, R.A., 등, 2006 Science 314:126-129(α 및 β 이종이량체를 포함하는 전장 종양 항원 인식 T 세포 수용체 복합체를 발현하도록 유전적으로 변형된 말초 공여 림프구를 개시함), Panelli 등, J Immunol (2000);164:495-504; Panelli 등, J Immunol (2000);164:4382-4392(종양 생검에서 종양 침윤 림프구(TIL)로부터 유래된 림프구 배양물을 개시함) 및 Dupont 등, Cancer Res (2005);65:5417-5427; Papanicolaou 등, Blood (2003);102:2498-2505(인공 항원 제시 세포(AAPC) 또는 펄스 수지상 세포를 사용하는 선택적으로 시험관 내에서 확장된 항원 특이적 말초 혈액 백혈구를 개시함)에 개시된 것이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
세포(예를 들어, T 세포 또는 NK 세포)는 자가 유래, 비자가 유래(예를 들어, 동종이계)이거나 조작된 전구세포 또는 줄기세포로부터 시험관 내에서 유래될 수 있다.
본 개시된 주제의 세포는 골수계 세포일 수 있다. 골수계 세포의 비제한적 예에는 단핵구, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호중구, 호산구, 거핵구(megakaryocyte), 비만 세포, 적혈구, 혈소판, 및 골수 세포가 분화될 수 있는 줄기세포가 포함된다. 특정 실시양태에서, 줄기세포는 다능성 줄기세포(예를 들어, 배아 줄기세포 또는 유도 만능 줄기세포)이다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 세포는 종양 미세환경을 조절할 수 있다. 종양은 면역 인식 및 제거로부터 자신을 보호하기 위해 악성 세포에 의한 일련의 메커니즘을 포함하는 숙주 면역 반응에 적대적인 미세환경을 가지고 있다. 이 "적대적인 종양 미세환경"은 침윤 조절 CD4+ T 세포(Treg), 골수 유래 억제 세포(myeloid derived suppressor cell, MDSC), 종양 관련 대식세포(tumor associated macrophage, TAM), TGF-β를 포함한 면역 억제 사이토카인, 및 활성화된 T 세포(CTLA-4 및 PD-1)에 의해 발현되는 면역 억제 수용체를 표적으로 하는 리간드의 발현을 포함한 다양한 면역 억제 인자를 포함한다. 이러한 면역 억제 메커니즘은 내성을 유지하고 부적절한 면역 반응을 억제하는 역할을 하지만 종양 미세환경 내에서는 이러한 메커니즘이 효과적인 항종양 면역 반응을 방해한다. 종합적으로 이러한 면역 억제 인자는 표적화 종양 세포와 만날 때 입양 전달된 변형 T 세포의 현저한 무반응(anergy) 또는 아폽토시스를 유도할 수 있다.
특정 실시양태에서, 세포는 세포가 키메라 수용체(들)를 발현하도록 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및/또는 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체로 형질도입될 수 있다.
또한, 본 개시된 주제는 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체(예를 들어, 섹션 5.3에 개시된 것) 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체(예를 들어, 섹션 5.4에 개시된 것)를 포함하는 세포를 제공한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 키메라 수용체는 CAR이다. 특정 실시양태에서, CLEC12-표적화 키메라 수용체는 CCR이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 개시된 주제는 본 개시된 CLEC12A-표적화 CAR 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 CCR을 포함하는 세포를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 개시된 세포는 ADGRE2에 대해 단독으로 양성인 세포에 비해 ADGRE2 및 CLEC12A 둘 다에 대해 양성인 세포에 대해 더 큰 정도의 세포용해 활성을 나타낸다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 낮은 결합 친화도 또는 낮은 결합활성으로 ADGRE2에 결합한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 접근성이 낮은 에피토프에서 ADGRE2에 결합한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 CLEC12A-표적화 CCR이 CLEC12A에 결합하는 결합 친화도와 비교하여 더 낮은 결합 친화도로 ADGRE2에 결합한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 CLEC12A-표적화 CCR이 CLEC12A에 결합하는 결합 친화도와 비교하여 적어도 5배 더 낮은 결합 친화도로 ADGRE2에 결합한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 CLEC12A-표적화 CCR이 CLEC12A에 결합하는 결합 친화도에 비해 적어도 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배, 200배, 5000배, 1000배, 5000배 또는 10000배 더 낮은 결합 친화도로 ADGRE2에 결합한다
5.5.1. 예시된 세포
특정 실시양태에서, 세포는 ADGRE2-표적화 CAR 및 CLEC12A-표적화 CCR을 포함한다.
특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 (a) (ⅰ) 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3를 포함하는 VH, 및 (ⅱ) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 VL을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인; (b) CD28 폴리펩티드를 포함하는 힌지/스페이서 영역, (c) CD28 폴리펩티드를 포함하는 막관통 도메인(예를 들어, 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 단편) 및 (d) (ⅰ) CD3ζ 폴리펩티드 및 (ⅱ) CD28 폴리펩티드를 포함하는 공동자극 신호전달 영역(예를 들어, 인간 CD28의 세포 내 도메인 또는 이의 단편)을 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, VH 및 VL은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 서열번호 10의 아미노산 153 내지 179를 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 공동자극 신호전달 영역은 서열번호 10의 아미노산 180 내지 220을 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 힌지/스페이서 영역은 서열번호 10의 아미노산 114 내지 152를 포함하거나 이로 이루어진 CD28 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, ADGRE2-표적화 CAR은 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 (a) (ⅰ) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3를 포함하는 VH, 및 (ⅱ) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3를 포함하는 VL을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인; (b) 4-1BB 폴리펩티드(예를 들어, 인간 4-1BB 폴리펩티드, 예를 들어, 이의 일부의 4-1BB(예를 들어, 인간 4-1BB)의 세포 내 도메인)를 포함하는 세포 내 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 CD8 폴리펩티드를 포함하는 막관통 도메인(예를 들어, 인간 CD8 폴리펩티드, 예를 들어, CD8(예를 들어, 인간 CD8)의 막관통 도메인 또는 이의 일부)을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 내 도메인은 서열번호 30의 아미노산 214 내지 255를 포함하거나 이로 이루어진 4-1BB 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 막관통 도메인은 서열번호 7의 아미노산 137 내지 207을 포함하거나 이로 이루어진 CD8 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, VH와 VL은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 링커를 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, VH 및 VL은 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치한다. 특정 실시양태에서, CLEC12A-표적화 CCR은 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
5.8. 핵산 분자, 벡터 및 유전자 변형
본 개시된 주제는 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체(예를 들어, 섹션 5.3 및 5.4에 개시된 것)를 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 핵산 분자는 본 개시된 ADGRE2-표적화 CAR에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함한다. 이러한 핵산 분자를 포함하는 세포도 제공된다.
또한, 본 개시된 주제는 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체(예를 들어, 섹션 5.5 및 5.6에 개시된 것)를 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 실시양태에서, 핵산 분자는 본 개시된 CLEC12A-표적화 CAR에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함한다. 이러한 핵산 분자를 포함하는 세포도 제공된다.
더욱이, 본 개시된 주제는 ADGRE2-표적화 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자 및 CLEC12A-표적화 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 핵산 조성물을 제공한다. 이러한 핵산 조성물을 포함하는 세포도 제공된다.
특정 실시양태에서, 프로모터는 내인성 또는 외인성이다. 특정 실시양태에서, 외인성 프로모터는 연장 인자(EF)-1 프로모터, 거대세포바이러스 즉시-초기 프로모터(CMV) 프로모터, 유인원 바이러스 40 초기 프로모터(SV40) 프로모터, 포스포글리세레이트 키나제(PGK) 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터 및 유비퀴틴 C 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 내인성 프로모터는 TCR 알파 프로모터, TCR 베타 프로모터 및 베타 2-마이크로글로불린 프로모터로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터이다. 특정 실시양태에서, 유도성 프로모터는 NFAT 전사 반응 요소(TRE) 프로모터, CD69 프로모터, CD25 프로모터, IL-2 프로모터, 4-1BB 프로모터, PD1 프로모터 및 LAG3 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시된 주제는 본 개시된 핵산 분자를 포함하는 벡터도 제공한다. 특정 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터이다. 특정 실시양태에서, 레트로바이러스 벡터는 감마 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다.
특정 실시양태에서, 벡터는 본 개시된 ADGRE2-표적화 CAR 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 CCR을 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 특정 실시양태에서, 핵산 분자는 서열번호 140에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 특정 실시양태에서, 핵산 분자는 서열번호 141에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 서열번호 140 및 141은 아래에 제공되어 있다.
핵산 분자는 당업계에 공지된 방법에 의해 또는 본원에 기술된 바와 같이 세포 내로 전달될 수 있다. 세포의 유전적 변형은 재조합 DNA 작제물을 사용하여 실질적으로 균질한 세포 조성을 형질도입함으로써 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 레트로바이러스 벡터(예를 들어, 감마레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터)는 DNA 작제물을 세포 내로 도입하기 위해 사용된다. 예를 들어, 본 개시된 키메라 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 레트로바이러스 벡터에 클로닝될 수 있고 발현은 그의 내인성 프로모터, 레트로바이러스 긴 말단 반복 또는 관심 표적 세포 유형에 특이적인 프로모터로부터 구동될 수 있다. 비바이러스 벡터도 사용될 수 있다.
적어도 하나의 본 개시된 키메라 수용체(예를 들어, 본 개시된 2개의 키메라 수용체, 예를 들어, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체)를 포함하도록 세포의 초기 유전적 변형을 위해, 레트로바이러스 벡터는 형질도입에 사용될 수 있지만 임의의 다른 적합한 바이러스 벡터 또는 비바이러스 전달 시스템이 사용될 수 있다. 키메라 수용체(들)는 단일 멀티시스트론 발현 카세트, 단일 벡터의 다중 발현 카세트 또는 다중 벡터에 작제될 수 있다. 폴리시스트론 발현 카세트를 생성하는 요소의 예에는 다양한 바이러스 및 비바이러스 내부 리보솜 진입 부위(IRES, 예를 들어, FGF-1 IRES, FGF-2 IRES, VEGF IRES, IGF-II IRES, NF-κB IRES, RUNX1 IRES, p53 IRES, A형 간염 IRES, C형 간염 IRES, 페스티바이러스(pestivirus) IRES, 아프토바이러스(aphthovirus) IRES, 피코나바이러스(picornavirus) IRES, 소아마비바이러스(poliovirus) IRES 및 뇌심근염 바이러스(encephalomyocarditis virus) IRES) 및 절단 가능한 링커(예를 들어, 2A 펩티드, 예를 들어, P2A, T2A, E2A 및 F2A 펩티드)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, P2A 펩티드는 아래에 제공된 서열번호 142에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다:
GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP [서열번호 142]
서열번호 142의 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 아래에 제공된 143에 제시되어 있다:
레트로바이러스 벡터와 적절한 패키징 라인의 조합도 적합하며, 캡시드(capsid) 단백질이 인간 세포를 감염시키는 데 기능할 것이다. PA12(Miller 등, (1985) Mol Cell Biol (1985);5:431-437); PA317(Miller., 등, Mol Cell Biol (1986); 6:2895-2902); 및 CRIP(Danos 등, Proc Natl Acad Sci USA (1988);85:6460-6464)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다수의 암포트로픽(amphotropic) 바이러스 생성 세포주가 알려져 있다. 비암포트로픽 입자, 예를 들어, VSVG, RD114 또는 GALV 외피 및 당업계에 공지된 임의의 다른 것으로 슈도타이핑된(pseudotyped) 입자도 적합하다.
가능한 형질도입 방법에는 세포를 생성자 세포와 직접 공동 배양하거나(Bregni 등, Blood (1992);80:1418-1422), 바이러스 상청액 단독으로 배양하거나 적절한 성장 인자 및 다중양이온이 있거나 없는 농축된 벡터 스톡과 함께 배양하는 것도 포함된다(Xu 등, EExp Hemat (1994); 22:223-230; 및 Hughes 등, J Clin Invest (1992); 89:1817).
다른 형질도입 바이러스 벡터를 사용하여 세포를 변형할 수 있다. 특정 실시양태에서, 선택된 벡터는 높은 감염 효율과 안정적인 통합 및 발현을 나타낸다(예를 들어, Cayouette 등, Human Gene Therapy 8:423-430, 1997; Kido 등, Current Eye Research 15:833-844, 1996; Bloomer 등, Journal of Virology 71:6641-6649, 1997; Naldini 등, Science 272:263-267, 1996; 및 Miyoshi 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:10319, 1997 참조). 사용될 수 있는 다른 바이러스 벡터에는, 예를 들어, 아데노바이러스, 렌티바이러스 및 아데나 관련 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스, 소 유두종 바이러스(bovine papilloma virus), 또는 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr Virus)와 같은 헤르페스 바이러스(herpes virus)가 포함된다(예를 들어, Miller, Human Gene Thera (1990);15-14; Friedman, Science 244:1275-1281, 1989; Eglitis 등, BioTechniques (1988);6:608-614; Tolstoshev 등, Cur Opin Biotechnol (1990);1:55-61; Sharp, The Lancet (1991);337:1277-78; Cornetta 등, Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36:311-22, 1987; Anderson, Science (1984);226:401-409; Moen, Blood Cells 17:407-16, 1991; Miller 등, Biotechnol (1989);7:980-90; LeGal La Salle 등, Science (1993);259:988-90; and Johnson, Chest (1995)107:77S- 83S의 벡터도 참조). 레트로바이러스 벡터는 특히 잘 개발되어 임상 환경에서 사용되어 왔다(Rosenberg 등, N Engl J Med (1990);323:370, 1990; Anderson 등, 미국 특허 제5,399,346호).
비바이러스 접근법은 세포의 유전적 변형에도 사용될 수 있다. 예를 들어, 핵산 분자는 리포펙션(lipofection)의 존재하에 핵산을 투여함으로써(Feigner 등, Proc Natl Acad Sci U.S.A. (1987);84:7413; Ono 등, Neurosci Lett (1990);17:259; Brigham 등, Am J Med Sci (1989);298:278; Staubinger 등, Methods in Enzymol (1983);101:512, Wu 등, J Biol Chem (1988);263:14621; Wu 등, J Biol Chem (1989);264:16985) 또는 수술 상황 하에서 미세 주입에 의해(Wolff 등, Science (1990);247:1465) 세포 내로 도입될 수 있다. 유전자 전달을 위한 다른 비바이러스 수단에는 인산칼슘, DEAE 덱스트란, 전기천공 및 원형질체 융합(protoplast fusion)을 사용한 시험관 내 형질감염이 포함된다. 또한, 리포솜(liposome)은 DNA를 세포 내로 전달하는 데 잠재적으로 유익할 수 있다. 또한, 대상체의 이환된 조직으로의 정상 유전자의 이식은 정상 핵산을 생체 외 배양 가능한 세포 유형(예를 들어, 자가 또는 이종 일차 세포 또는 이의 자손)으로 전달함으로써 달성될 수 있으며, 그 후 세포(또는 이의 후손)는 표적 조직에 주입되거나 전신 주입된다. 또한, 재조합 수용체는 트랜스포사제(transposase) 또는 표적화 뉴클레아제(예를 들어, 아연 핑거 뉴클레아제(Zinc finger nuclease), 메가뉴클레아제(meganuclease) 또는 TALEN, CRISPR)의 사용으로 유래되거나 수득될 수 있다. 일과성 발현(transient expression)은 RNA 전기천공으로 수득될 수 있다.
또한, 임의의 표적화 게놈 편집 방법은 적어도 하나의 본 개시된 키메라 수용체(예를 들어, 본 개시된 2개의 키메라 수용체, 예를 들어, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체)를 세포에 전달하는 데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, CRISPR 시스템은 적어도 하나의 본 개시된 키메라 수용체(예를 들어, 본 개시된 2개의 키메라 수용체, 예를 들어, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체)를 전달하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, 아연-핑거 뉴클레아제는 본 개시된 하나 이상의 키메라 수용체(예를 들어, 본 개시된 2개의 키메라 수용체, 예를 들어, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체)를 전달하는 데 사용된다. 특정 실시양태에서, TALEN 시스템은 적어도 하나의 본 개시된 키메라 수용체(예를 들어, 본 개시된 2개의 키메라 수용체, 예를 들어, 본 개시된 ADGRE2-표적화 키메라 수용체 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 키메라 수용체)를 전달하는데 사용된다.
CRISPR(clustered regularly-interspaced short palindromic repeats) 시스템은 원핵 세포에서 발견된 게놈 편집 도구이다. 게놈 편집에 사용되는 경우 상기 시스템에는 Cas9(crRNA를 가이드로 사용하여 DNA를 변형할 수 있는 단백질), CRISPR RNA(crRNA, Cas9가 Cas9와 활성 복합체를 형성하는 tracrRNA(일반적으로 헤어핀 루프 형태)에 결합하는 영역과 함께 숙주 DNA의 올바른 섹션으로 안내하기 위해 사용하는 RNA 함유), 트랜스 활성화 crRNA(tracrRNA, crRNA에 결합하여 Cas9와 활성 복합체를 형성) 및 DNA 복구 주형(특정 DNA 서열의 삽입을 허용하는 세포 복구 과정을 안내하는 DNA)의 선택적 섹션이 포함된다. CRISPR/Cas9는 종종 플라스미드를 사용하여 표적 세포를 형질감염시킨다. crRNA는 Cas9가 세포의 표적 DNA를 확인하고 직접 결합하는 데 사용하는 서열이므로 각 적용 분야에 맞게 설계해야 한다. CAR 발현 카세트를 운반하는 복구 주형은 삽입 서열에 대한 컷 및 코드 양쪽의 서열과 겹쳐야 하므로 각 적용 분야에 맞게 설계해야 한다. 다중 crRNA와 tracrRNA는 함께 패키징되어 단일 가이드 RNA(sgRNA)를 형성할 수 있다. 이 sgRNA는 Cas9 유전자와 결합하여 플라스미드로 만들어져 세포 내로 형질감염될 수 있다.
아연-핑거 뉴클레아제(ZFN)는 아연-핑거 DNA-결합 도메인과 DNA-절단 도메인을 결합하여 생성되는 인공 제한 효소이다. 아연 핑거 도메인은 아연-핑거 뉴클레아제가 게놈 내의 원하는 서열을 표적화할 수 있도록 하는 특정 DNA 서열을 표적화하도록 조작될 수 있다. 개별 ZFN의 DNA-결합 도메인은 전형적으로 복수의 개별 징크 핑거 반복을 함유하며 각각 복수의 염기쌍을 인식할 수 있다. 새로운 아연-핑거 도메인을 생성하는 가장 흔한 방법은 특이성이 알려진 더 작은 아연-핑거 "모듈"을 결합하는 것이다. ZFN에서 가장 흔한 절단 도메인은 Ⅱ형 제한 엔도뉴클레아제 FokI의 비특이적 절단 도메인이다. 내인성 상동 재조합(homologous recombination, HR) 기계와 CAR 발현 카세트를 운반하는 상동 DNA 주형을 사용하여 CAR 발현 카세트를 게놈 내로 삽입하기 위해 ZFN을 사용할 수 있다. 표적화 서열이 ZFN에 의해 절단되면 HR 기계는 손상된 염색체와 상동성 DNA 주형 사이의 상동성을 검색한 다음, 염색체의 두 파손된 말단 사이의 주형 서열을 복사하여 상동성 DNA 주형이 게놈에 통합된다.
전사 활성화인자 유사 이펙터 뉴클레아제(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)는 DNA의 특정 서열을 절단하도록 조작할 수 있는 제한 효소이다. TALEN 시스템은 ZFN과 거의 동일한 원리로 작동한다. 이는 전사 활성화인자 유사 이펙터 DNA-결합 도메인과 DNA 절단 도메인을 결합하여 생성된다. 전사 활성화인자 유사 이펙터(transcription activator-like effector, TALE)는 특정 뉴클레오티드를 강력히 인식하는 2개의 가변 위치가 있는 33-34개의 아미노산 반복 모티프로 구성된다. 이러한 TALE의 어레이를 조립함으로써, TALE DNA-결합 도메인은 원하는 DNA 서열에 결합하도록 조작될 수 있고, 이로써 뉴클레아제가 게놈의 특정 위치에서 절단되도록 안내할 수 있다. 폴리뉴클레오티드 치료 방법에 사용하기 위한 cDNA 발현은 임의의 적합한 프로모터(예를 들어, 인간 거대세포바이러스(CMV), 유인원 바이러스 40(SV40), 메탈로티오네인 프로모터 또는 유비퀴틴 C 프로모터)로부터 지시될 수 있고 임의의 적절한 포유동물 조절 요소 또는 인트론(예를 들어, 연장 인자 1a 인핸서/프로모터/인트론 구조)에 의해 조절될 수 있다. 예를 들어, 원하는 경우, 특정 세포 유형에서 유전자 발현을 우선적으로 지시하는 것으로 알려진 인핸서를 사용하여 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 사용되는 인핸서는 조직 또는 세포 특이적 인핸서로서 특성화되는 인핸서를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 대안적으로, 게놈 클론이 치료 작제물로서 사용되는 경우, 조절은 동족 조절 서열(cognate regulatory sequence)에 의해 매개될 수 있거나, 원하는 경우, 상술된 임의의 프로모터 또는 조절 요소를 포함하는 이종 공급원으로부터 유래된 조절 서열에 의해 매개될 수 있다.
게놈 편집 작용제/시스템을 전달하는 방법은 필요에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시양태에서, 선택된 게놈 편집 방법의 구성요소는 하나 이상의 플라스미드에서 DNA 작제물로서 전달된다. 특정 실시양태에서, 구성요소는 바이러스 벡터를 통해 전달된다. 일반적인 전달 방법에는 전기 천공, 미세주입, 유전자 총(gene gun), 임패일펙션(impalefection), 정수압(hydrostatic pressure), 연속 주입, 초음파, 마그네토펙션(magnetofection), 아데노 관련 바이러스, 바이러스 벡터의 외피 단백질 슈도타이핑, 복제 가능 벡터 시스 및 트랜스 작용 요소, 단순 포진 바이러스 및 화학 비히클(예를 들어, 올리고뉴클레오티드, 리포플렉스(lipoplex), 폴리머좀(polymersome), 폴리플렉스(polyplex), 덴드리머(dendrimer), 무기 나노입자 및 세포-침투 펩티드)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
5.9. 제형 및 투여
본 개시된 주제는 본 개시된 세포(예를 들어, 섹션 5.5에 개시된 것)를 포함하는 조성물도 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 개시된 세포를 포함하는 조성물은 선택된 pH로 완충될 수 있는 멸균 액체 제제, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀젼, 분산액 또는 점성 조성물로 편리하게 제공될 수 있다. 액체 제제는 보통 젤, 기타 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조하기가 더 쉽다. 추가로, 액체 조성물은 특히 주사를 통해 투여하기가 다소 더 편리하다. 반면, 점성 조성물은 특정 조직과의 더 긴 접촉 기간을 제공하기 위해 적절한 점도 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어, 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
본 개시된 세포를 포함하는 조성물은 항원에 대한 면역 반응을 유도 및/또는 강화하고/하거나 신생물을 치료 및/또는 예방하기 위해 대상체에게 전신적으로 또는 직접적으로 제공될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 개시된 세포 또는 이를 포함하는 조성물은 관심 기관(예를 들어, 신생물에 의해 영향을 받은 기관)에 직접 주사된다. 대안적으로, 본 개시된 세포 또는 이를 포함하는 조성물은, 예를 들어, 순환계(예를 들어, 종양 혈관계)로의 투여에 의해 관심 기관에 간접적으로 제공된다. 시험관 내 또는 생체 내에서 세포 생성을 증가시키기 위해 상기 세포 또는 조성물의 투여 전, 도중 또는 후에 확장제 및 분화제가 제공될 수 있다.
투여될 세포의 양은 치료될 대상체에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시양태에서, 약 104 내지 약 1010개, 약 104 내지 약 107개, 약 105 내지 약 107개, 약 105 내지 약 109개 또는 약 106 내지 약 108개의 본 개시된 세포가 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 약 10×106 내지 약 150×106개의 본 개시된 세포가 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 약 25×106 내지 약 150×106개의 본 개시된 세포가 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 약 25×106 내지 약 50×106개의 본 개시된 세포가 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 적어도 약 10×106개, 약 25×106개, 약 50×106개, 약 100×106개 또는 약 150×106개의 본 개시된 세포가 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 약 25×106개의 본 개시된 세포가 대상체에게 투여된다. 유효 용량으로 간주되는 정확한 결정은 특정 대상체의 체격, 연령, 성별, 체중 및 병태를 포함하여 각 대상체에 대한 개별 요인을 기반으로 할 수 있다. 투여량은 본 개시내용 및 해당 분야의 지식으로부터 당업자에 의해 쉽게 확인될 수 있다.
본 개시된 세포 및 조성물은 정맥 내 투여, 피하 투여, 결절 내 투여, 종양 내 투여, 척추강 내 투여, 흉막 내 투여, 골 내 투여, 복강 내 투여, 흉막 투여, 및 대상체에 대한 직접 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 공지된 방법으로 투여할 수 있다. 본 개시된 세포는 임의의 생리학적으로 허용되는 비히클로, 보통 혈관 내로 투여될 수 있지만, 상기 세포가 재생 및 분화를 위해 적절할 수 있는 부위를 찾을 수 있는 뼈나 다른 편리한 부위(예를 들어, 흉선)로 도입될 수도 있다.
5.10. 치료 방법
본 개시된 주제는 본 개시된 세포 또는 이를 포함하는 조성물을 사용하는 다양한 방법을 제공한다. 본 개시된 세포 및 이를 포함하는 조성물은 치료 또는 약제에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시된 주제는 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유도 및/또는 증가시키는 방법을 제공한다. 본 개시된 세포 및 이를 포함하는 조성물은 대상체의 종양 부담을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 본 개시된 세포 및 이를 포함하는 조성물은 대상체에서 종양 세포의 수를 감소시키고/거나 종양 크기를 감소시키고/거나 종양을 근절시킬 수 있다. 본 개시된 세포 및 이를 포함하는 조성물은 대상체의 종양을 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다. 본 개시된 세포 및 이를 포함하는 조성물은 종양을 앓고 있는 대상체의 생존을 연장하는데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 언급된 방법 각각은 원하는 효과, 예를 들어, 기존 질환의 완화 또는 재발 예방을 달성하기 위해 본 개시된 세포 또는 이를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 투여하는 단계를 포함한다. 치료를 위해 투여되는 양은 원하는 효과를 생성하는 데 효과적인 양이다. 유효량은 1회 또는 일련의 투여로 제공될 수 있다. 유효량은 볼루스(bolus) 또는 연속 관류로 제공될 수 있다.
특정 실시양태에서, 종양은 ADGRE2 및/또는 CLEC12A와 연관되어 있다. 특정 실시양태에서, 종양 세포는 ADGRE2 및 CLEC12A 둘 다를 발현한다. 특정 실시양태에서, 종양 세포는 ADGRE2 및 CLEC12A 둘 다를 과발현한다.
특정 실시양태에서, 종양은 암이다. 특정 실시양태에서, 종양은 혈액암이다. 특정 실시양태에서, 종양은 다발성 골수종, 백혈병, 림프종 및 골수 악성 종양으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 백혈병의 비제한적 예에는 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 전골수구성 백혈병(APL), 혼합 표현형 급성 백혈병(MLL), 털세포 백혈병 및 B 세포 전림프구성 백혈병이 포함된다. 림프종의 비제한적 예에는 AIDS 관련 림프종(AIDS-related lymphoma), ALK 양성 거대 B 세포 림프종(ALK- positive large B-cell lymphoma), 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 미만성 거대 B 세포 림프종(Diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL), 여포성 림프종(Follicular lymphoma), 혈관 내 거대 B 세포 림프종(Intravascular large B-cell lymphoma), HHV8 관련 다중심성 캐슬만병(multicentric Castleman's disease)에서 발생한 거대 B 세포 림프종, 림프종 육아종증(Lymphomatoid granulomatosis), 림프형질세포성 림프종(Lymphoplasmacytic lymphoma), 외투세포 림프종(Mantle cell lymphoma, MCL), 변연부 B 세포 림프종(Marginal zone B-cell lymphoma, MZL), 점막 관련 림프 조직 림프종(Mucosa-Associated Lymphatic Tissue lymphoma, MALT), 결절 변연부 B 세포 림프종(Nodal marginal zone B cell lymphoma, NMZL), 결절성 림프구 우세형 호지킨 림프종(Nodular lymphocyte predominant Hodgkin's lymphoma), 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma), 형질모세포 림프종(Plasmablastic lymphoma), 원발성 중추신경계 림프종(Primary central nervous system lymphoma), 원발성 삼출성 림프종(Primary effusion lymphoma), 비장 변연부 림프종(Splenic marginal zone lymphoma, SMZL) 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia)이 포함된다. 림프종은 호지킨 림프종 또는 비호지킨 림프종일 수 있다. 골수성 악성 종양의 비제한적인 예에는 골수이형성 증후군(MDS), 골수증식성 신생물(MPN), 골수/림프 신생물(예를 들어, 호산구 증가증 및 혈소판 유래 성장 인자 수용체 알파(PDGFRA), 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFRB) 또는 섬유아세포 성장 인자 수용체 1(FGFR1)의 재배열을 동반하거나 PCM1-JAK2를 동반한 골수/림프 신생물), 급성 골수성 백혈병(AML), 모세포 형질세포양 수지상 세포 종양, B 림프모구성 백혈병/림프종 및 T-림프모구성 백혈병/림프종이 포함된다. 특정 실시양태에서, 골수성 악성 종양은 골수이형성 증후군을 포함한다.
특정 실시양태에서, 종양은 급성 골수성 백혈병(AML)이다. 특정 실시양태에서, 종양은 재발성/불응성 급성 골수성 백혈병(R/R AML)이다.
특정 실시양태에서, 대상체는 인간 대상체이다. 대상체는 진행형 질환이 있을 수 있으며, 이 경우 치료 목적은 질환 진행의 완화 또는 역전 및/또는 부작용의 개선을 포함할 수 있다. 대상체는 이미 치료를 받은 병력이 있을 수 있으며, 이 경우 치료 목적은 전형적으로 재발 위험의 감소 또는 지연을 포함한다.
적어도 하나의 본 개시된 키메라 수용체(예를 들어, 본 개시된 2개의 키메라 수용체, 예를 들어, 본 개시된 ADGRE2-표적화 CAR 및 본 개시된 CLEC12A-표적화 CCR)의 표면 발현의 결과로서, 입양 전달된 세포에는 종양 부위에서 증강되는 선택적인 세포 용해 활성이 부여된다. 또한, 상기 세포는 종양에 대한 국소화 및 증식에 이어 생리학적 항종양 반응에 관여하는 광범위한 세포를 위해 종양 부위를 전도성이 높은 환경으로 바꾼다.
면역학적 합병증("악성 T 세포 형질전환"으로 알려짐), 예를 들어, 이식편 대 숙주병(GvHD)의 위험을 피하거나 최소화하기 위해 또는 건강한 조직이 종양 세포로서 동일한 표적화 항원을 발현하여 GvHD와 유사한 결과를 초래할 때 본 개시된 세포에 추가 변형이 도입될 수 있다. 이 문제에 대한 잠재적인 방안은 본 개시된 세포 내로 자살 유전자(suicide gene)를 조작하는 것이다. 적합한 자살 유전자에는 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제(Herpes simplex virus thymidine kinase, hsv-tk), 유도성 카스파제 9(inducible Caspase 9, iCasp-9) 자살 유전자 및 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFRt) 폴리펩티드가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 자살 유전자는 EGFRt 폴리펩티드이다. EGFRt 폴리펩티드는 항-EGFR 단클론 항체(예를 들어, 세툭시맙)를 투여함으로써 T 세포 제거를 가능하게 할 수 있다. EGFRt는 본 개시된 키메라 수용체(들)의 업스트림에 공유 결합될 수 있다. 자살 유전자는 본 개시된 키메라 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터 내에 포함될 수 있다. 이러한 방식으로, 악성 T 세포 형질전환(예를 들어, GVHD) 동안 자살 유전자를 활성화하도록 설계된 전구약물(예를 들어, 전구약물(예를 들어, iCasp-9를 활성화할 수 있는 AP1903)의 투여는 본 개시된 키메라 수용체를 발현하는 자살 유전자 활성화 세포에서 아폽토시스를 촉발한다. 본 개시된 키메라 수용체로의 자살 유전자의 통합은 매우 짧은 시간 내에 수용체-발현 세포의 대부분을 제거하는 능력과 함께 추가적인 안전성 수준을 제공한다. 자살 유전자가 있는 바이러스는 세포 주입 후 특정 시점에 선제적으로 제거되거나 독성의 초기 징후에서 근절될 수 있다.
6.
실시예
본 개시내용의 실시는 달리 명시되지 않는 한, 당업자의 권한 내에 있는 분자 생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 사용한다. 이러한 기술은 "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", second edition (Sambrook, 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (Gait, 1984); "Animal Cell Culture" (Freshney, 1987); "Methods in Enzymology" "Handbook of Experimental Immunology" (Weir, 1996); "Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells" (Miller and Calos, 1987); "Current Protocols in Molecular Biology" (Ausubel, 1987); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis, 1994); "Current Protocols in Immunology" (Coligan, 1991)과 같은 문헌에 완전히 설명되어 있다. 이러한 기술은 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 생성에 적용 가능하며, 따라서 본 개시된 주제를 제조하고 실시하는 데 고려될 수 있다. 특정 실시양태에 특히 유용한 기술은 다음 섹션에서 논의될 것이다.
다음 실시예는 당업자에게 본 개시된 세포 및 조성물을 제조하고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시되며, 본 발명자가 자신의 발명으로 간주하는 범위를 제한하려는 의도는 없다.
실시예 1 - ADGRE2 및 CLEC12A 표적화
본 개시된 주제는 현재 임상 조사 중인 대체 CAR 치료에 비해 개선된 안전성 및 효능을 제공할 가능성이 있는 R/R AML에 대한 신규 조합 CAR 형식을 평가한다.
AML에 CAR 치료를 적용하는 것은 개체 내 및 개체 간 표현형 이질성으로 인해 어려움을 겪고 있으며 이상적인 CAR 표적을 검증해야 한다. 잠재적인 CAR 표적을 확인하기 위해, 악성 및 정상 조직의 이용 가능한 전사체학(transcriptomics) 및 프로테오믹스(proteomics) 데이터 세트를 분석하고 원발성 AML 환자 샘플, 건강한 골수 조혈 줄기/전구 세포(hematopoietic stem/progenitor cell, HSPC) 및 건강한 원발성 T 세포의 유세포분석을 수행하였다(Perna 등, Cancer Cell 2(4): 506-519.e5.(2017)). 사실상 모든 B 세포 백혈병 세포에서 높은 수준으로 발현되었고 HSPC 및 T 세포에는 전혀 존재하지 않았으며 B 세포 영역 외부에서는 체계적으로 검출할 수 없었던 CD19에 필적하는 표면 발현 프로필을 어떤 표적도 나타내지 않았다. 그러나 분석을 통해 AML에 대한 새로운 잠재적인 CAR 표적인 접착 G 단백질 연결 수용체 E2(adhesion G protein-coupled receptor E2, ADGRE2)가 확인되었다. 잠재적인 CAR 표적에 대한 한 쌍 분석(pair-wise analysis)은 AML 클론 이질성과 일치하여 조합 CAR 표적화 접근법이 독성을 최소화하면서 AML 종양을 근절하는 데 잠재적으로 효과적일 수 있음을 시사하였다.
ADGRE2(EMR2)는 표피 성장 인자(EGF)-TM7 단백질 계열의 구성원이다(Lin 등, Genomics 41.3 (1997): 301-308). 이의 발현은 단핵구/대식세포로 제한되며 활성화된 T 및 B 세포에서는 상향조절되지 않다(Lin 등, Genomics 67.2 (2000): 188-200). 유세포분석 결과, 분석된 대부분의 R/R AML 환자 집단에서 AML 세포의 90% 초과에서 ADGRE2 양성이 나타났다(도 1). ADGRE2는 전체 AML 벌크 집단과 가장 중요하게는 백혈병 줄기세포(leukemic stem cell, LSC)의 치료 관련 분획 모두에서 양성인 것으로 밝혀졌다. CD33 및 CD123과 같은 다른 후보 표적도 대부분의 환자에서 양성인 것으로 밝혀졌지만, 특히 LSC에서는 ADGRE2만큼 일관되지는 않았다. 따라서, ADGRE2는 R/R AML 환자에서 완전 관해를 달성할 가능성이 더 높기 때문에 CAR 표적으로 선택되었다.
C형 렉틴 도메인 계열 12 구성원 A(CLEC12A/CD371)는 AML에서 잘 설명되는 후보 표적이며, 이는 대부분의 AML 환자에서 발현된다(Perna 등, Cancer cell 32.4 (2017): 506-519; Haubner 등, Leukemia 33.1 (2019): 64-74; Bakker 등, Cancer research 64.22 (2004): 8443-8450). 다른 그룹은 이미 미국에서 진행 중인 1상 임상 테스트에서 이를 CAR 표적으로 밀고 있다(Tashiro 등, Molecular Therapy 25.9 (2017): 2202-2213).
본 개시된 주제는 R/R AML을 치료하기 위해 ADGRE2에 특이적인 CAR 및 CLEC12A에 특이적인 CCR을 암호화하는 ADCLEC.syn1(도 2)로 명명된 조합 CAR-CCR 벡터를 사용하는 것을 제안한다. CAR은 CD28 공동자극 도메인과 약독화된 CD3ζ1XX 활성화 도메인을 포함한다. CD3ζ 신호전달 도메인의 ITAM 모티프의 유전적 변형이 이펙터와 기억 시그니처의 유리한 균형을 달성하여 강화된 치료 이점을 제공함으로써 전 B 세포 급성 림프구성 백혈병(pre-B acute lymphoblastic leukemia) NALM6 마우스 모델에서 기능적 CAR T 세포의 지속성을 강화한다는 것이 이전에 입증되었다(Feucht 등, Nature medicine 25.1 (2019): 82-88). CCR은 4-1BB 공동자극을 제공하여 T 세포 지속성을 향상시키고 항원이 낮은 AML 탈출을 방지하며; CD3ζ 도메인을 포함하지 않으므로 CAR처럼 세포 사멸을 중재하지 않는다.
ADGRE2 발현은 비악성 세포와 비교하여 AML 세포에서 보통 상향조절된다. HSC를 포함한 일부 정상 세포 유형의 ADGRE2 발현을 고려하여 AML 세포를 우선적으로 표적으로 삼는 표적화 전략이 설계되었다. 이 접근법에서 첫 번째 단계는 CAR 치료의 안전성을 향상시키기 위해 ADGRE2 CAR의 친화도 및 활성화 잠재력을 감소시키는 것이었고, 두 번째 단계는 AML 탈출을 방지하기 위해 HSC가 아닌 LSC에서 발현된 두 번째 분자인 CLEC12A(CD371)를 공동표적화하여 LSC에 대한 ADGRE2 CAR 참여를 구하는 것이었다. CLEC12A는 증가된 결합활성과 공동자극을 제공하지만 세포용해 활성을 개시하지 않는 키메라 보조자극 수용체(CCR)를 통해 표적화되었다. 따라서, CCR은 CAR이 AML 세포에서 ADGRE2를 검출하도록 지원한다.
CAR 신호전달은 CAR scFv 친화도 및 CAR 표적 항원 밀도에 따라 달라지는 CAR의 scFv 부분의 표적 결합 시 촉발된다. ADGRE2 CAR scFv 친화도는 AML 종양 세포보다 ADGRE2 항원 수준이 낮은 건강한 세포가 CAR 활성화를 유발하지 않아 보존되도록 최적화되어 중요한 안전 기능을 추가하는 동시에 ADGRE2 항원 수준의 하향조절을 통해 AML 탈출 위험을 증가시켰다(도 3). ADGRE2가 낮은 AML 탈출 위험을 완화하기 위해, CLEC12A CCR을 추가하면 AML 세포에 대한 전반적인 결합활성이 증가하여 낮은 친화도 ADGRE2 CAR에 대해 "보상"되지만 ADGRE2 음성/CLEC12a 양성 세포의 제거는 개시되지 않는다. CLEC12A CCR에는 CD3ζ 도메인이 없기 때문에 CAR로 기능하지 않았다. 동시 CAR 활성화 없이 단리된 CCR 활성화는 T 세포 활성화 또는 세포독성을 유발하지 않았다(도 3).
표적의 선택과 키메라 수용체 설계는 정상 조직에서의 표적 발현 및 정상적인 조혈과 연관된 안전성 특징을 고려하여 이루어졌다. ADGRE2 및 CLEC12A의 공동발현은 단핵구 하위세트로 제한되는 반면, 다른 모든 주요 계통에서는 유세포분석에 의하면 ADGRE2의 발현이 낮거나 감지할 수 없었는데(도 4a) 이는 ADCLEC.syn1이 HSC 및 과립구에 대해 감소된 활성을 나타낼 것임을 시사한다(도 5). 이에 비해, HSC에서 공동발현된 대체 표적 CD33 및 CD123은 CAR 매개된 혈액학적 독성이 더 커졌다(도 4b 및 5). IHC를 위한 ADGRE2 및 CLEC12A에 대한 상업적으로 이용 가능한 항체를 사용하여, 본 개시된 주제는 비조혈 조직이 대식세포와 같은 조직 상주 골수 유래 세포와 연관된 대부분의 검출된 신호와 대체로 겹치지 않는 발현 프로필을 지님을 입증하였다(도 4c). 종합해 보면, 이러한 표적 발현 데이터는 ADCLEC.syn1 벡터를 통해 CAR을 사용한 ADGRE2 및 CCR을 사용한 CLEC12A의 조합 표적화가 ADGRE2 표적화 단독에 비해 정상 조혈 및 비조혈 조직에 대한 CAR-CCR T 세포의 독성을 최소화할 수 있고 CD33 또는 CD123 CAR T 세포에 비해 HSC를 보존할 더 높은 가능성을 제공함을 나타낸다.
요약하면, ADCLEC.syn1 벡터에 결합된 ADGRE2 CAR 및 CLEC12A CCR은 2개의 CAR을 결합함으로써 발생할 수 있는 잠재적인 대상 표적/표적 외(on-target/off-target) 종양 독성의 누적 없이 미세 조정된 CD3ζ1XX CAR 신호전달의 맥락에서 CD28 및 4-1BB 공동자극 신호전달의 최적화된 전달을 통해 ADGRE2 항원 탈출 위험을 완화하고 전반적인 CAR T 세포 효능을 향상시켰다. 표적과 키메라 수용체 설계의 이러한 합리적인 조합 선택은 원치 않는 독성의 위험을 줄이는 동시에 LSC를 포함한 R/R AML의 표적화를 강화할 수 있다.
실시예 2 - ADGRE2 scFv
단클론 항-인간 ADGRE2 클론 2A1 항체의 펩티드 서열을 사용하여 생성된 인간화 재조합 항체의 24가지 버전으로부터 ADCLEC.syn1 벡터의 ADGRE2 단일쇄 가변 단편(scFv)을 선택하였다. 바인더 선택 계획은 도 6에 제시되어 있다. 마우스 단클론 항-인간 ADGRE2 클론 2A1은 인간 샘플에서 ADGRE2 발현을 검출하기 위해 널리 사용되는 항체이다(Boyden 등, N Engl J Med. 374(7):656-63. (2016)). (1) 인간화 2A1 항체 변이체의 발현, (2) 유세포분석으로 측정되는 ADGRE2-과발현 뮤린 림프종 EL4 세포에 대한 재조합 항체의 결합 및 (3) 면역원성 점수를 기반으로, 18개의 인간화 재조합 항체를 후보자 풀로부터 선택하였다. 다음으로, VH 및 VL 도메인을 확인하여 18개의 scFv 후보를 생성하였으며, 이를 SFG 기반 감마레트로바이러스 CAR 벡터에 후속적으로 통합하고 기능적 CAR 검정에서 테스트하였다(도 7a-7c 및 8).
CAR 카세트에서 인간화 2A1 scFv를 각각 발현하는 SFG-감마레트로바이러스 벡터를 T 세포에 형질도입하여 ADGRE2 특이적 CAR T 세포를 생성하고, AML 세포주 MOLM13을 이용하여 CAR T 세포 세포독성을 측정하였다. AML 세포보다 낮은 수준의 ADGRE2를 발현하는 HSC를 포함한 일부 정상 세포 유형에서 ADGRE2 발현을 인지한 MOLM13 세포주는 낮은 수준(WT) 또는 높은 수준의 CLEC12A를 동시발현하여 높은 수준(WT), 낮은 수준 또는 매우 낮은 수준의 ADGRE2 발현을 위해 유전적으로 변형되었다(아래 표 17 참조).
이러한 변형된 MOLM13 세포주로 ADGRE2가 높은 AML 세포를 효율적으로 고갈시키는 동시에 ADGRE2이 낮은 정상 세포를 보존함으로써 유리한 안전성 프로필을 유지할 수 있는 잠재력이 가장 높은 인간화 ADGRE2 scFv를 확인할 수 있었다(도 7a-7c 및 8). 시험관 내 CAR 선별에는 2개의 상이한 신호 펩티드(CD8a 또는 IgHV1-4)와 관련하여 18개의 다양한 ADGRE2 scFv 후보가 포함되었다. 시험관 내 표적 세포 용해의 가장 적합한 패턴(ADGRE2가 높은 세포의 최대 용해 및 ADGRE2가 매우 낮은 세포의 최소 용해)을 매개하는 6개의 scFv 세트는 테스트된 두 신호 펩티드 사이의 유사성이 높은 것으로 확인되었다(도 7a-7c). 이어서, 이러한 6개의 scFv를 ADGRE2 수준이 높거나(WT), 낮거나 매우 낮은 동일한 AML 세포주 MOLM13을 사용하여 생체 내 모델에서 테스트하였다. 여기서 ADGRE2 scFv ADGRE2-A는 ADGRE2 수준이 높은 표적 세포에 대해 최대 효능을 나타내고 ADGRE2 수준이 낮은/매우 낮은 표적 세포에 대해 효능이 각각 감소/부재하는 가장 적합한 생체 내 반응 패턴을 보여주었다. 따라서, ADGRE2-A는 CD8a 신호 펩티드와 함께 ADGRE2 scFv로 선택되었다.
실시예 3 - CLEC12A scFv
인간 CLEC12A scFv를 재조합 인간 CLEC12A 단백질로 면역화된 마우스로부터 단리된 림프구와 P3X63Ag8U.1 세포를 융합하여 만들어진 하이브리도마에 의해 생성된 74개의 고유 인간 항체로부터 선택하였다. CLEC12A 발현 CHO-S 세포에 대한 세포 상 결합 및 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 양성 클론을 선택하였다. scFv 선택의 선택 계획은 도 9에 나와 있다.
16개의 다양한 인간 CLEC12A scFv 후보를 시험관 내 18h CAR 세포독성 검정 및 생체 내 이종이식 모델을 사용하여 28z1XX TRAC-CAR 형식으로 테스트하였다. ADGRE2 scFv 확인을 위한 전략과 달리, 여기에서는 scFv의 최종 적용이 CAR이 아닌 CCR에 있을 것이라는 점과 이에 따라 CLEC12A scFv의 높은 표적 민감도는 독성 증가와 관련이 없다는 점을 감안하여 효과적인 scFv를 높은 표적 항원 수준과 낮은 표적 항원 수준 모두의 맥락에서 우선순위를 지정하였다. U937(CLEC12A-높음) 및 MOLM13(CLEC12A-낮음) 세포주와 관련하여 16개 scFv의 시험관 내 선별을 통해 9개의 매우 강력한 CLEC12A scFv가 확인되었다(도 10a 및 10b). 이들 9개 scFv의 후속 생체 내 선별로 리드(lead) CLEC12A scFv(CLEC12A-A)가 확인되었다(도 11).
실시예 4 - ADGRE2 scFv 및 CLEC12A scFv의 표적 외 결합
인간 원형질막 단백질에 대한 ADGRE2 scFv(ADGRE2-A) 및 CLEC12A scFv(CLEC12A-A)의 표적 외 결합 상호작용은 4단계 접근법으로 수행되었다: (1) 선별을 위해 재조합 ADGRE2 scFv-Fc 및 CLEC12A scFv-Fc 테스트 단백질의 최적 농도를 결정하기 위한 사전 선별; (2) 5,474개의 전장 인간 원형질막 단백질과 세포 표면에 묶인(tethered) 인간 분비 단백질 및 371개의 인간 세포 표면 이종이량체를 과발현하는 고정된 HEK293 세포에 대한 테스트 단백질의 결합을 선별하여 라이브러리 히트(library hit)를 확인; (3) 고정된 세포 및 살아있는 세포 마이크로어레이를 사용한 확증적/특이적 선별; (4) 살아있는 세포에서 추가로 확인된 테스트 단백질 특이적 상호작용을 조사하기 위한 유세포분석 기반 후속 연구; 및 (5) 양성 히트를 확인하기 위한 세포 간 결합 검정. 아래 표에는 ADGRE2 scFv 및 CLEC12A scFv에 대한 결합 데이터가 요약되어 있다.
테스트된 5,845개의 원형질막 단백질 중에서 정제된 ADGRE2-scFv-Fc 단백질은 고정된 세포 및 살아있는 세포 마이크로어레이 모두에서 1차 표적 세포 표면 단백질인 ADGRE2에만 결합하였다. 또한, ADGRE2-scFv-Fc는 다른 ADGRE 단백질인 ADGRE1, ADGRE3 및 ADGRE5와 결합하지 않았다.
CLEC12A scFv-Fc는 1차 표적인 CLEC12A와 강력한 특이적 상호작용을 보여주었다. 또한, 고정된 세포 및 살아있는 세포 마이크로어레이 모두에서 SECTM1과, 그리고 살아있는 세포 마이크로어레이에서만 RTN3R과 낮지만 검출 가능한 상호작용을 하였다. 정제된 CLEC12A scFv-Fc를 사용한 용량 적정 및 유세포분석 실험을 사용한 후속 연구에서는 SECTM1 및 RTN4R에 대한 CLEC12A scFv EC50이 1차 표적 CLEC12A에 비해 각각 800배 및 >3,700배 더 컸다는 것을 입증하였다. 또한, CLEC12A CCR 발현 Jurkat 세포는 CLEC12A 과발현 HEK293 세포에 결합했지만, CLEC12A CCR 발현 Jurkat 세포는 SECTM1 과발현 HEK293 세포에 대한 결합이 매우 약하거나 약했다. 종합해 보면, 이러한 데이터는 CLEC12A scFv-Fc의 SECTM1 및 RTN4R에 대한 결합이 생리학적으로 관련이 없을 수 있음을 시사한다. CLEC12A CCR의 잠재적인 표적 외 결합은 동시 ADGRE2 CAR 활성화 없이 세포독성을 유발하지 않으므로 또 다른 안전 층이 추가된다(도 12).
실시예 5 - ADCLEC.syn1의 조합 CAR+CCR 표적화 개념 검증
도 3 및 5에 도시된 개략도에 개괄된 바와 같이, 본 개시된 주제는 ADCLEC.syn1의 조합 CAR+CCR 설계가 CAR 표적 수준이 낮은 정상 세포를 보존하면서 AML을 효율적으로 제거할 것이라는 가설을 세웠다. 중요한 것은, CCR 단독이 CAR 매개된 세포용해를 보조하고 강화해야 하지만, 독립적으로 세포용해를 유발하지는 않는다는 것이다. 이 접근법은 시험관 내 및 생체 내 모델에서 검증되었다(도 12). 먼저, 표적 없음(ADGRE2-/CLEC12A-), CAR 표적 단독(ADGRE2+/CLEC12A-), CCR 표적 단독(ADGRE2-/CLEC12A+) 또는 CAR 및 CCR 표적 모두(ADGRE2+/CLEC12A+)를 발현하는 표적 세포주를 사용하여 시험관 내 모델을 확립하였다. CCR 표적 단독은 시험관 내 사멸을 유발하지 않았지만, CAR 표적 단독은 사멸을 유발했으며, 이는 CCR 표적이 표적 세포주에서 공동 발현될 때 더욱 강화되었다(도 12a). 다음으로, ADGRE2 CAR 신호전달만으로는 ADGRE2가 낮은 세포를 완전히 근절하는 데 충분하지 않지만(정상 세포 모델링), ADGRE2 CAR과 CLEC12A CCR 신호전달을 결합하면 완전하고 지속적인 AML 완화가 가능하다는 것이 생체 내에서 입증되었다(도 12b 및 12c). 전반적으로, 이러한 결과는 ADCLEC.syn1이 AML을 효율적으로 근절하면서 낮은 수준의 CAR 표적으로 정상 세포를 보호할 수 있는 잠재력을 나타낸다.
실시예 6 - SFG-ADCLEC.syn1 레트로바이러스 벡터
감마레트로바이러스 플라스미드 SFG-ADCLEC.syn1(도 13)을 작제하고 플라스미드의 동일성을 Sanger 시퀀싱 분석으로 검증하였다. 감마레트로바이러스 벡터 SFG-ADCLEC.syn1은 도 14에 나타낸 것처럼 P2A 요소를 통해 연결된 ADGRE2 특이적 CAR과 CLEC12A 특이적 CCR을 모두 발현한다.
SFG 플라스미드를 사용하여 고양이(feline) RD114 외피로 슈도타이핑된 레트로바이러스 벡터를 생성하는 HEK 293 기반 패키징 세포주인 293Vec-RD114 세포를 일시적으로 형질감염시킨다. 293Vec-RD114™ 패키징 세포에서 수확된 벡터 상청액을 후속적으로 사용하여 긴팔원숭이 백혈병 바이러스(gibbon ape leukemia virus) 외피 단백질로 슈도타이핑된 두 번째 HEK 293 기반 패키징 세포주인 293Vec-GalV™을 형질도입하여 293Vec-GalV-SFG-ADCLEC.syn1을 발현하는 안정적인 생성자 세포 집단을 생성한다. 단일 클론을 293Vec-GalV™ SFG-ADCLEC.syn1 벡터 생성자 집단으로부터 단리하고 여러 종자 은행을 생성하며 최고의 역가 클론을 특성화한다. 최상의 생성자 세포주인 리드 클론을 사용하여 종자 은행으로부터 마스터 세포 은행(Master Cell Bank, MCB)을 생성한다. 레트로바이러스 벡터 스톡(VS)을 MCB의 한 바이알에서 제조한다.
실시예 7 - SFG-ADCLEC.syn1을 사용한 자가 T 세포의 생체 외 형질도입
활성화된 자가 환자 유래 말초 혈액 T 세포를 GaLV 슈도타이핑된 SFG-ADCLEC.syn1 레트로바이러스 벡터 스톡을 사용하여 생체 외에서 형질도입한다. CD8+ 및 CD4+ T 세포는 Prodigy CliniMACS plus 기기(Miltenyi Biotec)를 사용하여 CD8 및 CD4 마이크로비드를 사용하여 양성 단리하고 Dynabead(ThermoFisher)로 활성화한다. CD8+ 및 CD4+ T 세포의 초기 양성 선택은 주로 형질도입된 T 세포 산물에서 B 림프구, 형질 세포(plasma cell) 및 단핵구의 수를 최소화한다. 염료 표지 정제된 ADGRE2 또는 CLEC12A 폴리펩티드를 사용하는 형광 활성화 세포 분류(FACS) 검정을 수행하여 ADGRE2 CAR 및 CLEC12A CCR의 발현을 측정하여 형질도입 효율을 결정한다. 환자 투여용 제품의 형질도입 효율은 4% 이상이다.
실시예 8 - 투여형, 투여 경로 및 투여 요법(빈도 및 기간)
냉동보존된 백에 제공된 ADCLEC.syn1 CAR T 세포를 병원 시설과 같은 시설에서 해동시키고 중력을 통해 정맥(IV) 주입으로 투여한다. 용량 증량 동안 평가할 계획된 용량 수준은 아래 표 19에 기술되어 있다.
ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 시작 용량은 25×106개의 CAR T 세포이다. 이 용량은 승인된 CD19 CAR 용량(악시캅타젠(axicabtagene)의 경우 2×106개의 CAR T 세포/kg, 티사젠렉류셀(tisagenlecleucel)의 경우 6-60×107개의 CAR T 세포)보다 상당히 낮으며, 현재 다발성 골수종에서 연구 중인 BCMA CAR의 용량보다 낮다(50-800×106개의 CAR T 세포). 용량 증량은 표준 3+3 설계를 따른다. RP2D를 확인한 후 RP2D 용량 코호트를 확장할 수 있다.
실시예 9 - 임상 연구
본 실시예는 성인 R/R AML 환자에서 본원에 개시된 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 안전성 및 활성을 평가하기 위한 1상 공개 용량 증량 연구이다. 최대 허용 용량(maximum tolerated dose, MTD) 또는 MTD에 도달하지 못한 경우 최대 투여 용량(maximal administered dose, MAD)을 결정하기 위해 표준 3+3 용량 증량 계획을 사용한다. MTD 또는 MAD가 확인되면 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 안전성과 활성을 추가로 평가하기 위해 추가 환자를 포함하도록 코호트를 확장한다.
3-6명의 환자로 구성된 코호트에 ADCLEC.syn1 CAR T 세포 용량을 증량하면서 주입하여 MTD를 확립한다. 계획된 4가지의 용량 수준은 다음과 같다: 25×106개, 50×106개, 100×106개, 150×106개의 CAR T 세포. 표준 3+3 용량 증량 설계는 용량 25×106부터 시작된다. 3-6명의 환자를 각 코호트에서 치료하고, 코호트 내 환자의 33% 미만이 예상치 못한 용량 제한 독성(dose-limiting toxicity, DLT)을 경험하는 경우 용량 증량은 다음 코호트로 진행한다. 임의의 특정 코호트에서 3명의 환자 중 1명에서 허용할 수 없는 독성이 나타나는 경우, 최대 6명의 환자를 해당 코호트에서 기존 용량 증량 계획을 사용하여 치료한다. 임의의 특정 코호트에서 환자 6명 중 2명이 허용할 수 없는 독성을 경험하는 경우, T 세포의 MTD는 초과된 것이며 이전 코호트 용량 수준에서 확립하였다. 제1 용량 수준이 MTD를 초과하는 경우, 3-6명의 환자로 구성된 후속 코호트를 10×106개의 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 -1 용량 수준에서 치료한다.
컨디셔닝 또는 림프고갈 화학요법. 환자는 -4, -3, -2일에 플루다라빈(fludarabine) 25mg/㎡, -3, -2일에 사이클로포스파미드(cyclophosphamide) 500mg/㎡로 이루어진 컨디셔닝 화학요법을 받은 후 0일에 CAR T 세포 주입을 받은다.
브리징 치료(bridging therapy). 담당 의사의 판단에 따라 브리징 치료를 고려할 수 있다. 브리징 치료는 백혈구성분채집술(leukapheresis) 후에 실시할 수 있고 컨디셔닝 화학요법을 시작하기 최소 1주일 전에 중단해야 하며, 단 하이드록시요소(hydroxyurea)는 컨디셔닝 화학요법 시작 최소 24시간 전까지 계속할 수 있다. 브리징 치료 종료 후 및 컨디셔닝 화학요법 시작 전 또는 컨디셔닝 화학요법 투여 전 48시간 이내에 대상체를 재조정해야 한다.
질환 반응 평가. 반응 평가를 위해 CAR T 세포 주입 28-35일차에 골수 생검을 실시하고 ELN 기준에 따라 평가한다.
28-35일 질환 반응 평가 후 치료 과정. 질환 반응 평가 후, 도 16에 나타낸 대로 제안된 알고리즘에 따라 후속 치료가 안내된다.
독성 평가. 각 연구 방문 시, 국립 암 연구소(National Cancer Institute, NCI)의 부작용에 대한 공통 용어 기준(Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 버전 5.0 및 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS) 및 면역 이펙터 세포 관련 신경독성 증후군(immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome, ICANS)에 대한 ASTCT 합의 등급에 따라 독성 등급을 지정한다.
약동학적 평가. 약동학 측정을 위한 혈액 검사는 투여 전, 1일차, 3일차, 5일차, 7일차, 14일차, 21일차 및 28-30일차에 수행한다. 후속 혈액 샘플은 2개월차, 3개월차, 6개월차, 9개월차, 12개월차 및 24개월차에 수집한다.
ADCLEC.syn1 CAR T 세포 용량 수준. ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 시작 용량은 25×106개의 CAR T 세포이다. 이 용량은 승인된 CD19 CAR 용량(악시캅타젠의 경우 2×106개의 CAR T 세포/kg, 티사젠렉류셀의 경우 6-60×107개의 CAR T 세포)보다 상당히 낮으며, 현재 다발성 골수종에서 연구 중인 BCMA CAR의 용량보다 낮다(50-800×106개의 CAR T 세포). 체중이 70kg이라고 가정할 때, 제안된 시작 용량은 2×105개의 CAR T 세포/kg으로 해석되며 기타 자가 AML CAR 시작 용량과 비교할 때 비슷하(거나 약간 낮)다.
용량 제한 독성(DLT). DLT는 부작용에 대한 공통 용어 기준(CTCAE) v5.0 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 면역 이펙터 세포 관련 신경독성 증후군(ICANS)에 대한 ASTCT 합의 등급 지침을 기반으로 ADCLEC.syn1 CAR T 세포 주입 후 28일 이내에 발생하는 다음과 같은 부작용(AE)으로 정의된다: (a) 7일 이내에 2등급 이하로 해결하지 못한 필수 기관(vital organ)에 대한 임의의 3등급 이상의 비혈액학적 AE(CRS 및 ICANS 제외); (b) 4등급 호중구감소증 또는 혈소판감소증 및 지속적인 AML 없이 28일차 골수 세포밀도(cellularity) <5%. 활성 질환 없이 30일까지 지속되는 기준선(사전 컨디셔닝 화학요법 및 T 세포 주입)에 존재했던 지속적인 혈구 감소증은 DLT로 간주되지 않는다; (c) 3등급 이상의 주입 반응; (d) 임의의 기간의 3등급 또는 4등급 ICANS; (e) 임의의 기간의 4등급 CRS; (f) 4등급 종양 용해 증후군(tumor lysis syndrome); (g) 4등급 모세혈관 누출 증후군(capillary leak syndrome); 및 (h) ADCLEC.syn1 CAR T 세포와 관련된 임의의 5등급 이벤트.
용량 증량. 용량 증량의 목적은 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 MTD/MAD를 결정하는 것이다. 용량 증량은 다음과 같이 3+3 용량 증량 규칙을 따른다: (a) 대상체는 코호트 내 첫 번째 대상체와 두 번째 대상체의 ADCLEC.syn1 CAR T 세포 투여 사이에 최소 10일의 간격을 두고 용량 수준당 3명의 대상체로 구성된 코호트에 등록된다; (b) 3명의 대상체로 구성된 초기 코호트에서 DLT가 보고되지 않은 경우, 용량 증량은 다음의 더 높은 용량 수준으로 진행될 수 있다; (c) 한 명의 대상체에게 DLT가 있는 경우, 코호트는 최대 6명의 대상체로 확장된다. 추가 DLT가 관찰되지 않으면 해당 용량 수준은 허용 가능한 것으로 간주되며 용량 증량은 다음의 더 높은 용량 수준으로 진행될 수 있다; (d) DLT 이외의 이유로 DLT 관찰 기간이 종료되기 전에 연구 치료를 중단하거나 연구를 중단한 대상체는 DLT에 대해 평가할 수 없는 것으로 간주되어 교체된다; (e) 동일한 용량 수준 코호트에 등록된 6명의 등록 대상체 중 1명 초과의 대상체에게 DLT가 있는 경우, MTD가 초과된 것이다. 해당 용량 코호트에 대한 추가 등록이 중단되고; 더 낮은 용량 수준으로 6명의 대상체를 등록하여 3+3 용량 증량 규칙에 따른 MTD를 결정한다; (f) MTD를 초과한 용량 수준이 이전에 허용 가능한 가장 높은 용량 수준보다 2배 이상 높은 경우, 이 두 수준 사이의 대략 중간의 또 다른 용량 수준을 등록하여 3+3 용량 증량 규칙에 따라 MTD를 결정할 수 있다; (g) MTD는 6명의 평가 가능한 대상체에서 최대 1개의 DLT가 있는 최고 용량 수준 코호트이다.
용량 확장. 용량 확장의 목적은 안전성과 내약성을 추가로 평가하고 향후 개발을 안내하고 지원하기 위한 활성 신호를 확인하는 것이다. 용량 확장에서 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 용량은 용량 증량 중에 확립되었던 MTD/MAD이다. 용량 확장 단계 동안 R/R AML 환자는 용량 증량 단계와 동일한 방식으로 치료되며 최대 약 12명의 환자가 포함된다.
조사용 의약품. ADCLEC.syn1 CAR T 세포는 냉동보존 백으로 제공되어 시설에서 해동되고 중력을 통해 정맥(IV) 주입으로 투여된다. 계획된 용량 수준은 본원에 기술된 용량 증량 동안 평가된다. ADCLEC.syn1 CAR T 세포는 0일차에 투여된다.
비조사용 의약품. 컨디셔닝 화학요법은 (a) 각 치료 주기의 -3일차 및 -2일차의 사이클로포스파미드(CY), 500mg/m2 IV; 및 (b) 각 치료 주기의 -4일차, -3일차 및 -2일차의 플루다라빈(FLU), 25mg/m2 IV를 포함한다. CY 및 FLU의 용량과 일정은 혈구감소증(cytopenia) 및 의학적 동반 질환을 기반으로 수정될 수 있다.
연구 엔드포인트. 1차 엔드포인트에는 R/R AML 환자에게 ADCLEC.syn1 CAR T 세포를 투여할 때 DLT의 발생률과 특성이 포함된다. 2차 엔드포인트에는 (a) ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 부작용의 발생률, 성질 및 중증도; (b) ELN 응답 기준에 따라 완전 반응(Complete Response, CR), 불완전 혈액학적 회복이 있는 CR(CRi), 형태학적 백혈병이 없는 상태(morphologic leukemia free state, MLFS) 및 부분 반응(partial response, PR)을 달성한 대상체의 비율로 정의되는 조사자 평가 객관적 반응률(objective-response rate, ORR); (c) ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 첫 번째 투여(0일)부터 진행성 질환(PD)까지 또는 어떤 이유로든 사망일 중 더 빠른 날짜까지의 기간으로 정의되는 무진행 생존율(progression-free survival, PFS); (d) 연구 치료 시작 후 1년 동안 생존한 대상체의 비율로 정의되는 1년 전체 생존율(overall survival, OS); 및 (e) ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 세포 동역학, PCR 및 유세포분석으로 평가되는, 1일차부터 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 검출 가능한 수준의 마지막 평가까지의 기간으로 정의되는 피크 확장 및 지속성이 포함된다. 탐색적 엔드포인트에는 (a) ORR 및/또는 PFS와 ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 확장 및 지속 기간, ADGRE2 및 CLEC12A 항원 발현, 및 CAR T 세포 표현형의 연관성; (b) 다중 매개변수 유세포분석 및/또는 NGS로 평가되는 CR 또는 CRi를 달성한 환자의 MRD 평가; (c) CAR T 세포 주입 후 혈청 사이토카인 분석; (d) CAR-CCR 작제물에 대한 면역원성 분석; 및 (e) ADGRE2 및 CLEC12A 발현 수준, ADCLEC.syn1 CAR T 세포 지속성 및 표현형과 종양 미세환경의 변화와의 재발 연관성이 포함된다.
종양 반응 평가 기준. 항종양 반응은 AML의 ELN 반응 기준에 따라 평가된다. 적격성/포함 기준에는 다음이 포함된다: (a) ICF 서명 당시 18세 이상; (b) 표준 치료 옵션에 지쳤거나 부적격이거나 불내성인 불응성 또는 재발성 AML이었음(다음 질환 상태가 연구에 적격이다: (1) 2회의 유도 화학요법 과정 후 또는 ELN 기준에 따라 CR/CRi 또는 MLFS를 달성하지 못한 베네토클락스(venetoclax)와 병용한 1회의 저메틸화제(hypomethylating agent) 또는 저용량 시타라빈(cytarabine)의 과정 후 원발성 불응성 질환; 또는 (2) HSCT를 포함하여 치료 과정 중 또는 치료 과정 후에 반응(CR 또는 CRi)을 달성한 후 임의의 시점의 재발성 AML); (c) 적격인 임의의 정도의 검출 가능한 질병; (d) 0 또는 1의 ECOG 활동도(performance status); (e) 대상체가 장기간의 골수 무형성증(marrow aplasia)으로부터 구제받기 위해 동종이계 HSCT를 받아야 하는 경우 세포를 기증할 수 있는 적합한 줄기세포 공여자가 확인되었음(공여자는 관련되거나 관련되지 않은 일치 소스(matched source), 일배체(haplo) 또는 탯줄에서 나올 수 있으며, 표준 기준에 따라 적합해야 함); 및 (f) 백혈병 장기 침범(leukemic organ involvement)으로 인해 고려되지 않는 한, 혈청 크레아티닌 <2.0mg/100ml, 직접 빌리루빈 <2.0mg/100ml, AST 및/또는 ALT ≤5×ULN으로 정의되는 적절한 기관 기능을 가짐. 배제 기준에는 다음이 포함된다: (a) 급성 전골수성 백혈병 진단; (b) 방사선학적으로 검출되거나 증상이 있는 CNS 질환 또는 CNS 3 질환, 즉 CSF 중 5/ul 초과의 WBC의 존재(적절하게 치료된 CNS 백혈병을 앓는 대상체는 적격임); (c) 실내 공기 중 산소 포화도 <90%; (d) ICF 서명 후 3개월 이내의 또는 전신 이식편 대 숙주 요법에 대한 지속적인 요구사항이 있는 사전 동종이계 HSCT; (e) 첫 번째 연구 약물 치료 전 6개월 이내의 뇌졸중(stroke) 또는 심근경색(myocardial infarction)을 포함한 임상적으로 유의한 심혈관 질환; 또는 뉴욕 심장 협회(New York Heart Association) 2등급 이상의 불안정 협심증(unstable angina) 또는 울혈성 심부전(congestive heart failure)의 존재, 또는 40% 미만의 심장 박출률; (f) 통제되지 않은 임상적으로 중요한 감염; (g) HIV에 대한 양성 혈청학적 검사 결과; (h) 혈청학적(HBVsAg 또는 HCV ab) 또는 PCR 결과로 평가한 급성 또는 만성 HBV 또는 HCV 감염; 및 (i) 선별 전 2년 넘게 질환의 증거 없이 완치 목적으로 치료된 악성 종양을 제외하고, 전신 치료가 필요한 활동성 2차 악성 종양. 중지 규칙에는 다음이 포함된다: (a) 용량 증가의 경우, 중지 규칙은 용량 증가 규칙에 따름; (b) 용량 확장의 경우, ADCLEC.syn1 CAR T 세포와 아마도 관련이 있거나 관련이 있을 것으로 간주되는 임의의 환자 사망 또는 최소 6명의 대상체가 등록된 확장 코호트에서 30% 이상의 대상체가 DLT 자격을 얻었을 연구에서 언제든지 ADCLEC.syn1 CAR T 세포 치료 관련 독성을 경험하는 경우 연구 등록이 일시적으로 중단됨.
통계적 방법. 일반적으로, 임상 데이터는 기술 통계(n, 평균, 표준 편차, 표준 오차, 중앙값, 1분위수(Q1), 3분위수(Q3), 연속 변수에 대한 최소값 및 최대값, 및 범주형 변수의 빈도 및 백분율)를 사용하여 각 요법별로 요약하고 코호트별로 분리한다. 범주형 데이터를 표시하는 경우, 빈도 수가 0이면 백분율을 표시하지 않는다. 0이 아닌 백분율은 소수점 이하 한 자리로 반올림하며, 단 100%는 소수점 없이 표시한다. 선택한 평가에 대해 신뢰 구간(CI)을 표시한다. 시간 대 이벤트 변수는 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법을 사용하여 요약한다.
실시예 10 - 항-ADGRE2 항체 및 scFv의 확인과 특성분석
본 실시예는 항-ADGRE2 항체 및 scFv의 결합 친화도의 유래와 특성분석을 입증한다. 항체는 하이브리도마 기술을 사용하여 만들었으며 마우스 참조 1 클론의 24개 인간화 서열을 포함한다. 항체는 재조합 단백질 변이체로서의 발현, FACS로 측정되는 ADGRE2-과발현 뮤린 림프종 EL4 세포에 대한 결합 및 면역원성 점수를 기반으로 선택하였으며, ADGRE2 결합 친화도 범위를 나타내는 18개의 인간화 재조합 항체를 선택하였다. 참조 1 항-ADGRE2 항체의 아미노산 서열은 엔도프로테아제 분해 및 LC-MS/MS에 의한 펩티드 풀의 후속 분석으로 결정하였다. 간단히 말하면, 항체의 중쇄 및 경쇄를 환원 조건 하에서 SDS-PAGE로 분리하였다. 쿠마시 블루(Coomassie Blue)로 염색한 후, 각각의 밴드를 겔에서 잘라내고 Asp N, 키모트립신(chymotrypsin), 트립신(trypsin) 및 엘라스타제 엔도펩티다제(elastase endopeptidase)로 분해하였다. 또한, 항체를 용액에서 펩신으로 분해하였다. 분해로 생성된 펩티드 풀을 Orbitrap 분석기(LC-MS/MS Q-Exactive, ThermoFisher)에서 분석하였다. LC-MS/MS 데이터는 PEAKS AB 항체 시퀀싱 소프트웨어를 사용하여 처리하였다. 참조 1 항-ADGRE2 VH 및 VL 코딩 서열을 각각의 항체 쇄 서열로부터 도출하였고, IgG2 불변 영역과 함께 클로닝하였다. 재조합 참조 1 항체를 HEK293 세포에서 발현시키고, 정제된 항체를 ADGRE2의 세포 외 도메인을 포함하는 재조합 생성된 단백질을 이용한 표면 플라즈몬 공명(SPR) KD 분석을 통해 상업적으로 이용 가능한 참조 1 항체와 비교하고 ADGRE2를 발현하는 세포에 대한 결합에 대해 EC50 측정을 수행하였다. 후속 항체 선별 작업을 위해 정제된 재조합 참조 1 항체를 기준 항체로 사용하였다.
실시예 11 - 항-ADGRE2 scFv의 세포 상 결합
본 실시예는 유세포분석으로 측정되는 항-ADGRE2 scFv에 대한 세포 상 결합을 예시한다. 항-ADGRE2 scFv에 대한 세포 상 결합은 ADGRE2를 과발현하는 E4 세포에 대한 유세포분석으로 평가하였다. 각각의 scFv를 ADGRE2에 대한 결합에 대해 테스트하고 참조 1 mAb와 비교하였다. 간단히 말하면, 웰당 100,000개의 세포를 96웰 V자 바닥 플레이트에 플레이팅하고, scFv를 200nMscFv로 희석한 다음 1:4로 연속적으로 0.01nM까지 희석하였다. scFv의 용량 의존적 적정은 재조합 scFv의 폴딩 및 ADGRE2에 대한 결합을 검증하였다. 인간화 과정으로 인한 친화도의 변화로 인해 발생할 수 있는 생체 내에서 관찰되는 임의의 차이를 더 잘 해석하기 위해 EC50 친화도를 비교하였다. 데이터는 4개 매개변수 회귀를 사용하여 Prism 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 대략적인 EC50 값은 다음 방정식을 사용하여 결정하였다: Y=하단 + (상단-하단)/(1+10^((LogEC50-X)*Hill 기울기)), 여기서 피팅된 매개변수는 다음과 같이 정의된다: 하단, 달성 가능한 최소 결합을 설명하는 하단 평부(plateau); 상단, 달성 가능한 최대 결합을 설명하는 상단 평부; LogEC50, 최대 반응의 절반을 생성하는 농도라고도 알려진 용량 반응 곡선의 변곡점; 및 Hill-기울기, 용량 반응 곡선의 기울기.
표 20에 나타낸 바와 같이, 곡선으로부터 계산된 EC50 값은 각각의 항체가 10.2에서 93.8의 친화도로 세포에 결합함을 보여준다. 전반적으로, 결과는 테스트된 인간화 scFv가 참조 1 표준에 필적하는 EC50 값을 가짐을 보여주었다.
실시예 12 - 항-ADGRE2 scFv의 인실리코(in silico) 면역원성 분석
본 실시예는 인실리코 면역원성 분석을 예시한다. 간단히 말하면, 마우스 참조 1 scFv 서열을 다양한 예측 데이터베이스 IEDB, SMN-Align, NN-Align을 기반으로 인간 MHCⅠ 및 MHCⅡ 제시 예측 소프트웨어로 인간화 scFv를 사용하여 분석하였다.
표 21에 나타낸 바와 같이, 항체의 면역원성은 MHCⅠ 또는 MHCⅡ 결합 또는 MHCⅠ 및 MHCⅡ 둘 다에 대한 결합을 기반으로 특성을 분석하였다. 전반적으로, 데이터는 테스트된 모든 인간화 항체에 대해 낮은 면역원성을 예측한다.
실시예 13 - 항-ADGRE2 scFv의 표적 외 선별 패널 검정
본 실시예는 표적 외 결합 검정에서 항-ADGRE2 scFv의 특이성을 보여준다. 간단히 말하면, 인간화 scFv 변이체를 표적 외 결합에 대해 테스트하였다. 3개의 예시적인 ADGRE2 scFv 클론을 "컷다운 검정(Cut-down Assay)"에서 실행하여 3000개가 넘는 인간 수용체에 대한 결합을 선별하였다. 컷다운 검정에서는 결합이 높을수록 상호작용이 실제일 가능성이 높아진다. 일반적으로 "V. 약함"은 실제 상호작용이 아닐 가능성이 높다. 결과는 테스트된 모든 클론이 어떠한 표적 외 결합도 나타내지 않음을 보여주었다. 따라서, 이들 클론은 ADGRE2에 매우 특이적인 것으로 밝혀졌다.
실시예 14 - 항-CLEC12A scFv의 Clec12A 결합의 특성분석
본 실시예는 항-CLEC12A 항체의 결합 친화도의 유도 및 특성분석을 입증한다. Clec12A 항체를 선택하고 선별하기 위해 하이브리도마 기술을 사용하였다. 선택은 CHO-S 세포를 과발현하는 Clec12A에 대해 수행하였다. 서열의 다양성을 위해 항체를 선택하였다. 다양한 가용성 및 세포 상 Clec12A 결합 친화도에 대해 74개 항체 중에서 16개 항체를 선택하였다. Clec12A 항체의 결합 친화도는 Biacore 분석으로 결정하였다.
또한, 본 실시예에서는 항-CLEC12A 항체의 비특이적 결합을 평가한다. 항-CLEC12A 항체가 비특이적 막 단백질에 결합할 가능성을 평가하기 위해, 4개의 리드 항체로부터 유래된 scFv를 표면 막 단백질(surface membrane protein, SMP) 검정으로 평가하였다(도 17a). 사용된 SMP 검정은 테스트 항체에 의한 해당 막에 대한 비특이적 결합을 테스트하기 위해 플레이트에 코팅된 인간 HEK-293 또는 곤충 SF9 세포막을 사용한 ELISA 기반 검정이었다. 내부 대조군으로 높은 비특이적 결합 항체 및 낮은 비특이적 결합 항체가 포함되었다. 사용된 높은 비특이적 결합 대조군인 sc209는 임상에서 표적 외 독(tox)이 있는 항체인 반면, 낮은 비특이적 결합 대조군인 5f9는 임상에서 표적 외 독이 있는 것으로 입증되지 않았다(도 17b).
전반적으로, 결과는 항-CLEC12A 항체 CLEC12-C, CLEC12-D 및 CLEC12A에 의한 낮은 비특이적 결합을 보여주었다(도 17b).
실시예 15 - 항-CLEC12A scFv의 표적 외 선별 패널 검정
본 실시예는 표적 외 결합 검정에서 항-CLEC12A scFv의 특이성을 보여준다. 간단히 말하면, Clec12A 및 기타 막 단백질에 대한 특이성에 대해 항-CLEC12A scFv를 테스트하기 위해 표적 외 결합 검정을 수행하였다. 선택된 2개의 Clec12A scFv 클론을 "컷다운 검정"으로 실행하여 3000개 초과의 인간 수용체의 결합을 선별하였다. 컷다운 검정에서는 결합이 높을수록 상호작용이 실제일 가능성이 높아진다. 일반적으로 "V. 약함"은 실제 상호작용이 아닐 가능성이 높다. scFvCLEC12A-A는 Clec12A 이외의 임의의 수용체 또는 이 검정에서 아티팩트(artifact)로 나타나는 수용체에 대한 어떠한 비특이적 상호작용도 나타내지 않았다. 컷다운 검정을 사용하여 표적 외 검정을 위한 클론을 선별하였다. 선택된 scFv-Fc 클론은 추가 선별 및 확인 검정을 통해 더욱 포괄적으로 테스트되고 있다.
실시예 16 - 전임상 연구
CAR T 세포 치료는 다양한 B 세포 관련 혈액학적 악성 종양에서 강력한 치료 옵션을 제공한다. 주요 효능 과제 중 하나는 항원 밀도가 낮은 종양 세포의 탈출인데, 이는 CAR 치료로 치료된 여러 악성 종양에서 임상적으로 관찰되었다. 표적 항원 발현의 클론 변이성을 포함한 표현형 이질성을 다루기 위해서는 CAR 설계의 새로운 개념이 필요하다. 도 18a는 불 논리(Boolean-logic) OR 및 AND 게이트 개념은 물론 IF-THEN 게이트 CAR 발현을 포함하여 이전에 보고된 조합 CAR 개념을 보여준다.
본 발명자들은 표적 이질성 및 항원이 낮은 탈출로 인한 AML 내성을 극복할 수 있는 조합 CAR 개념을 개발하였다. 항원이 낮은 재발은 시너지 효과가 있고 각 표적 선택에 맞게 조정되는 조합 신호전달을 갖춘 새로운 키메라 수용체 설계를 통해 예방할 수 있다.
AML 대 정상 조혈에서의 유세포분석 항원 발현 프로파일링을 AML에서 이전에 발견된 여러 CAR 표적 후보에 대해 수행하였다. 이상적인 조합 CAR 설계의 확인을 위한 플랫폼을 제공하기 위해, ADGRE2 및 CLEC12A의 항원 수준이 상향 또는 하향 조절된 인간 AML 세포주를 기반으로 하는 시험관 내 및 생체 내 모델을 확립하여 AML 표적 이질성 및 항원이 낮은 탈출을 모방하였다. 바이시스트론 γ-레트로바이러스 벡터를 사용하여 ADGRE2 및 CLEC12A를 표적으로 하는 다양한 조합 CAR 형식을 선별하였다.
ADGRE2는 분자적으로 이질적인 AML 환자 집단에서 AML 벌크 및 백혈병 줄기세포(LSC)에 대한 높은 양성률로 인해 CAR 표적으로 선택되었다(도 1a 및 1b). ADGRE2-A scFv를 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 ADGRE2-표적화 CAR의 친화도를 측정하고 CD3제타 신호전달을 미세 조정하여 ADGRE2가 낮은 정상 세포를 보존할 수 있는 이상적인 사멸 역치를 달성하였다. 다음으로, 본 발명자들은 잠재적인 CAR 표적 항원이 낮은 AML 탈출을 완화하기 위해 두 번째 AML 관련 항원의 공동 표적화 가능성을 조사하였다. CLEC12A는 정상적인 조혈 및 기타 필수 조직에서 발현 프로필이 겹치지 않기 때문에 적합한 공동표적으로 확인되었다(도 4a-4c).
ADGRE2-A scFv를 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 ADGRE2-표적화 28z1XX-CAR 및 CLEC12A-A scFv를 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 CLEC12A-표적화 키메라 공동자극 수용체(CCR)를 포함하는 신규 조합 CAR 작제물인 ADCLEC.syn1이 개발되었다. 또한, ADGRE2-A scFv를 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 ADGRE2-표적화 28z1XX-CAR 및 CLEC12A-A scFv를 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 CLEC12A-표적화 BBz-CAR을 포함하는 작제물도 개발되었다.
ADCLEC.syn1은 "IF-BETTER"(도 18b)로 설명되는 게이팅 전략을 기반으로 작동한다: 높은 CAR 표적 발현만으로도 사멸을 유발하는 반면, CCR 표적이 존재하지 않는 한 낮은 CAR 표적 발현은 그렇지 않다. 추가 CCR 상호작용은 증가된 결합활성 및 공동자극을 통해 CAR 매개된 사멸에 대한 역치를 낮추어 두 항원을 모두 발현하는 표적 세포로 의도적으로 제한되는 더 높은 CAR 민감도를 가능케 한다.
ADCLEC.syn1의 맥락에서, ADGRE2 양성/CLEC12A 음성 및 ADGRE2 양성/CLEC12A 양성 세포는 세포 용해를 유발한 반면, ADGRE2 음성/CLEC12A 양성 세포 및 ADGRE2 음성/CLEC12A 음성 세포는 살아남았다. 중요하게도, ADCLEC.syn1은 ADGRE2 양성/CLEC12A 음성 세포와 비교하여 ADGRE2 양성/CLEC12A 양성 세포의 더 효율적인 사멸을 매개하였다(도 19a).
항원 탈출을 모델링하기 위해 ADGRE2 수준이 다양한 AML 세포주를 사용하여, ADCLEC.syn1은 ADGRE2-CAR에 비해 ADGRE2가 낮은/CLEC12A가 낮은 AML 표적 세포 및 ADGRE2가 매우 낮은/CLEC12A가 낮은 AML 표적 세포에 대해 탁월한 사멸 능력을 보였다(도 19b).
항원 탈출을 모델링하기 위해 ADGRE2 수준이 낮은 조작된 MOLM13 AML 세포주 변이체의 NSG 생체 내 이종이식 모델을 사용하여, ADCLEC.syn1이 CLEC12A-CCR을 통한 지원이 결여된 CLEC12A-표적화 CCR 없이 ADGRE2-A scFv만 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 ADGRE2-표적화 CAR보다 성능이 뛰어난 것으로 밝혀졌다. 중요한 것은 ADCLEC.syn1이 ADGRE2가 낮은 MOLM13 설정에서 다른 동일한 대체 이중-CAR 버전(OR 게이트 ADGRE2-CAR+CLEC12A-CAR)보다 성능이 뛰어났으며, 이는 미세 조정된 전체 신호전달의 중요성을 더욱 강조한다(도 20). 집단 전체의 AML 이질성을 반영하는 ADGRE2 및 CLEC12A 수준이 광범위한 다양한 AML 세포주에 대해서도 높은 생체 내 효능이 확인되었다(도 20).
임상적으로 관련된 CAR T 세포 용량에서 ADCLEC.syn1은 MOLM13(ADGRE2-높음/CLEC12A-낮음) 및 U937(ADGRE2-낮음/CLEC12A-높음)의 이종이식 모델에서 완전하고 지속적인 관해를 유도하였다. 구체적으로, ADGRE2가 높은 항원 수준(WT) 및 CLEC12A가 높은 항원 수준을 갖는 MOLM13 AML 세포주 변이체를 사용하는 NSG 이종이식 모델에서 ADCLEC.syn1 CAR T 세포는 저용량으로 적정되어 1×105개의 ADCLEC.syn1 T 세포를 완전하고 지속적인 관해를 유도하기 위한 최소 유효 용량으로 확립하였다(도 20). ADCLEC.syn1 CAR T 세포는 70일 넘게 기능적으로 지속되는 것으로 밝혀졌으며, 단일 CAR T 세포 용량은 AML 재도전을 통해 모델링된 재발을 강력하게 방지한다(도 21).
요약하면, 이러한 데이터는 "IF-BETTER" 게이트 CAR+CCR T 세포(ADCLEC.syn1)가 단일 CAR T 세포(ADGRE2-CAR) 및 이중 CAR T 세포(ADGRE2-CAR+CLEC12A-CAR)보다 성능이 우수할 수 있다는 전임상 증거를 제공한다. ADCLEC.syn1은 AML에서 흔히 발견되지만 중요한 정상 세포에서는 제한되는 합리적으로 선택된 조합 표적 항원 시그니처의 검출을 통해 항백혈병 효능을 강화하고 항원이 낮은 AML 탈출을 예방하였다. 표현형적으로 대표적인 AML 이종이식 모델과 임상적으로 관련된 T 세포 용량을 사용하여, ADCLEC.syn1 CAR T 세포의 높은 치료 잠재력이 입증되었으며, 이는 "IF-BETTER" 게이트 CAR 개념의 1상 시험으로의 임상적 전환을 추가로 뒷받침한다.
본 개시된 주제와 그 장점 중 일부를 상세히 기술하였지만, 본 개시내용의 정신과 범위를 벗어나지 않고 다양한 변경, 대체 및 변화가 본원에서 이루어질 수 있다는 것을 이해해야 한다. 더욱이, 본 출원의 범위를 본 명세서에 기술된 공정, 기계, 제조, 및 물질의 구성 및 방법의 특정 실시양태로 제한하려고 하는 것은 아니다. 당업자는 본 개시된 주제, 공정, 기계, 제조, 물질의 구성 또는 방법의 개시로부터 본원에 기술된 상응하는 실시양태와 실질적으로 동일한 기능을 수행하거나 실질적으로 동일한 결과를 달성하는 현재 존재하거나 향후 개발될 것이 본 개시된 주제에 따라 활용될 수 있음을 쉽게 이해할 수 있을 것이다. 따라서, 첨부된 청구범위의 범위 내에 이러한 공정, 기계, 제조, 물질의 구성 또는 방법을 포함시키고자 한다.
다양한 특허, 특허 출원, 간행물, 제품 설명, 프로토콜 및 서열 등록 번호가 본 출원 전체에 걸쳐 인용되어 있으며, 그 개시 내용은 모든 목적을 위해 전체가 본원에 참고로 포함된다.
<110> MEMORIAL SLOAN-KETTERING CANCER CENTER
SLOAN-KETTERING INSTITUTE FOR CANCER RESEARCH
MEMORIAL HOSPITAL FOR CANCER AND ALLIED DISEASES
MILLENNIUM PHARMACEUTICALS, INC
<120> CHIMERIC RECEPTORS TARGETING ADGRE2 AND/OR CLEC12A AND USES
THEREOF
<130> 2023-FPA-2287
<150> 63/287,655
<151> 2021-12-09
<150> 63/179,799
<151> 2021-04-26
<160> 151
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 1
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 2
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 3
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 3
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20
<210> 4
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 4
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 5
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 6
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 235
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 8
<211> 213
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
cccaccacga cgccagcgcc gcgaccacca accccggcgc ccacgatcgc gtcgcagccc 60
ctgtccctgc gcccagaggc gtgccggcca gcggcggggg gcgcagtgca cacgaggggg 120
ctggacttcg cctgtgatat ctacatctgg gcgcccctgg ccgggacttg tggggtcctt 180
ctcctgtcac tggttatcac cctttactgc aac 213
<210> 9
<211> 247
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 9
Met Ala Ser Pro Leu Thr Arg Phe Leu Ser Leu Asn Leu Leu Leu Met
1 5 10 15
Gly Glu Ser Ile Ile Leu Gly Ser Gly Glu Ala Lys Pro Gln Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Arg Ile Phe Pro Lys Lys Met Asp Ala Glu Leu Gly Gln Lys
35 40 45
Val Asp Leu Val Cys Glu Val Leu Gly Ser Val Ser Gln Gly Cys Ser
50 55 60
Trp Leu Phe Gln Asn Ser Ser Ser Lys Leu Pro Gln Pro Thr Phe Val
65 70 75 80
Val Tyr Met Ala Ser Ser His Asn Lys Ile Thr Trp Asp Glu Lys Leu
85 90 95
Asn Ser Ser Lys Leu Phe Ser Ala Val Arg Asp Thr Asn Asn Lys Tyr
100 105 110
Val Leu Thr Leu Asn Lys Phe Ser Lys Glu Asn Glu Gly Tyr Tyr Phe
115 120 125
Cys Ser Val Ile Ser Asn Ser Val Met Tyr Phe Ser Ser Val Val Pro
130 135 140
Val Leu Gln Lys Val Asn Ser Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr
145 150 155 160
Pro Ser Pro Val His Pro Thr Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu
165 170 175
Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala
180 185 190
Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Pro
195 200 205
Leu Leu Ser Leu Ile Ile Thr Leu Ile Cys Tyr His Arg Ser Arg Lys
210 215 220
Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Leu Val Arg Gln Glu Gly Lys Pro
225 230 235 240
Arg Pro Ser Glu Lys Ile Val
245
<210> 10
<211> 220
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 11
<211> 81
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60
gcctttatta ttttctgggt g 81
<210> 12
<211> 218
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 12
Met Thr Leu Arg Leu Leu Phe Leu Ala Leu Asn Phe Phe Ser Val Gln
1 5 10 15
Val Thr Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Leu Leu Val Val
20 25 30
Asp Ser Asn Glu Val Ser Leu Ser Cys Arg Tyr Ser Tyr Asn Leu Leu
35 40 45
Ala Lys Glu Phe Arg Ala Ser Leu Tyr Lys Gly Val Asn Ser Asp Val
50 55 60
Glu Val Cys Val Gly Asn Gly Asn Phe Thr Tyr Gln Pro Gln Phe Arg
65 70 75 80
Ser Asn Ala Glu Phe Asn Cys Asp Gly Asp Phe Asp Asn Glu Thr Val
85 90 95
Thr Phe Arg Leu Trp Asn Leu His Val Asn His Thr Asp Ile Tyr Phe
100 105 110
Cys Lys Ile Glu Phe Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Arg
115 120 125
Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Ile Lys Glu Lys His Leu Cys His Thr
130 135 140
Gln Ser Ser Pro Lys Leu Phe Trp Ala Leu Val Val Val Ala Gly Val
145 150 155 160
Leu Phe Cys Tyr Gly Leu Leu Val Thr Val Ala Leu Cys Val Ile Trp
165 170 175
Thr Asn Ser Arg Arg Asn Arg Leu Leu Gln Ser Asp Tyr Met Asn Met
180 185 190
Thr Pro Arg Arg Pro Gly Leu Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Pro Tyr Ala
195 200 205
Pro Ala Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Pro
210 215
<210> 13
<211> 117
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 13
attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc 60
catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagccc 117
<210> 14
<211> 164
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
100 105 110
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
145 150 155 160
Leu Pro Pro Arg
<210> 15
<211> 22
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
1 5 10 15
Asp Val Leu Asp Lys Arg
20
<210> 16
<211> 66
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 60
aagaga 66
<210> 17
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 17
Gln Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe
1 5 10 15
Asp Val Leu Asp Lys Arg
20
<210> 18
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 18
cagaaccagc tctttaacga gctcaatcta ggacgaagag aggagttcga tgttttggac 60
aagaga 66
<210> 19
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 19
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
20
<210> 20
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 20
caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggccta cagtgagatt 60
gggatgaaa 69
<210> 21
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 21
Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
1 5 10 15
Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys
20
<210> 22
<211> 69
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 22
caggaaggcc tgttcaatga actgcagaaa gataagatgg cggaggcctt cagtgagatt 60
gggatgaaa 69
<210> 23
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 23
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
1 5 10 15
Asp Ala Leu His Met Gln
20
<210> 24
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 24
cacgatggcc tttaccaggg tctcagtaca gccaccaagg acacctacga cgcccttcac 60
atgcag 66
<210> 25
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 25
His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe
1 5 10 15
Asp Ala Leu His Met Gln
20
<210> 26
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 26
cacgatggcc ttttccaggg tctcagtaca gccaccaagg acaccttcga cgcccttcac 60
atgcag 66
<210> 27
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 27
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 28
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 28
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgttcaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc ttcagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggccttttc cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
ttcgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336
<210> 29
<211> 123
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 29
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 30
<211> 255
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 30
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 31
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 31
aaacggggca gaaagaagct cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 32
<211> 823
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 32
Met Gly Gly Arg Val Phe Leu Val Phe Leu Ala Phe Cys Val Trp Leu
1 5 10 15
Thr Leu Pro Gly Ala Glu Thr Gln Asp Ser Arg Gly Cys Ala Arg Trp
20 25 30
Cys Pro Gln Asp Ser Ser Cys Val Asn Ala Thr Ala Cys Arg Cys Asn
35 40 45
Pro Gly Phe Ser Ser Phe Ser Glu Ile Ile Thr Thr Pro Met Glu Thr
50 55 60
Cys Asp Asp Ile Asn Glu Cys Ala Thr Leu Ser Lys Val Ser Cys Gly
65 70 75 80
Lys Phe Ser Asp Cys Trp Asn Thr Glu Gly Ser Tyr Asp Cys Val Cys
85 90 95
Ser Pro Gly Tyr Glu Pro Val Ser Gly Ala Lys Thr Phe Lys Asn Glu
100 105 110
Ser Glu Asn Thr Cys Gln Asp Val Asp Glu Cys Gln Gln Asn Pro Arg
115 120 125
Leu Cys Lys Ser Tyr Gly Thr Cys Val Asn Thr Leu Gly Ser Tyr Thr
130 135 140
Cys Gln Cys Leu Pro Gly Phe Lys Leu Lys Pro Glu Asp Pro Lys Leu
145 150 155 160
Cys Thr Asp Val Asn Glu Cys Thr Ser Gly Gln Asn Pro Cys His Ser
165 170 175
Ser Thr His Cys Leu Asn Asn Val Gly Ser Tyr Gln Cys Arg Cys Arg
180 185 190
Pro Gly Trp Gln Pro Ile Pro Gly Ser Pro Asn Gly Pro Asn Asn Thr
195 200 205
Val Cys Glu Asp Val Asp Glu Cys Ser Ser Gly Gln His Gln Cys Asp
210 215 220
Ser Ser Thr Val Cys Phe Asn Thr Val Gly Ser Tyr Ser Cys Arg Cys
225 230 235 240
Arg Pro Gly Trp Lys Pro Arg His Gly Ile Pro Asn Asn Gln Lys Asp
245 250 255
Thr Val Cys Glu Asp Met Thr Phe Ser Thr Trp Thr Pro Pro Pro Gly
260 265 270
Val His Ser Gln Thr Leu Ser Arg Phe Phe Asp Lys Val Gln Asp Leu
275 280 285
Gly Arg Asp Tyr Lys Pro Gly Leu Ala Asn Asn Thr Ile Gln Ser Ile
290 295 300
Leu Gln Ala Leu Asp Glu Leu Leu Glu Ala Pro Gly Asp Leu Glu Thr
305 310 315 320
Leu Pro Arg Leu Gln Gln His Cys Val Ala Ser His Leu Leu Asp Gly
325 330 335
Leu Glu Asp Val Leu Arg Gly Leu Ser Lys Asn Leu Ser Asn Gly Leu
340 345 350
Leu Asn Phe Ser Tyr Pro Ala Gly Thr Glu Leu Ser Leu Glu Val Gln
355 360 365
Lys Gln Val Asp Arg Ser Val Thr Leu Arg Gln Asn Gln Ala Val Met
370 375 380
Gln Leu Asp Trp Asn Gln Ala Gln Lys Ser Gly Asp Pro Gly Pro Ser
385 390 395 400
Val Val Gly Leu Val Ser Ile Pro Gly Met Gly Lys Leu Leu Ala Glu
405 410 415
Ala Pro Leu Val Leu Glu Pro Glu Lys Gln Met Leu Leu His Glu Thr
420 425 430
His Gln Gly Leu Leu Gln Asp Gly Ser Pro Ile Leu Leu Ser Asp Val
435 440 445
Ile Ser Ala Phe Leu Ser Asn Asn Asp Thr Gln Asn Leu Ser Ser Pro
450 455 460
Val Thr Phe Thr Phe Ser His Arg Ser Val Ile Pro Arg Gln Lys Val
465 470 475 480
Leu Cys Val Phe Trp Glu His Gly Gln Asn Gly Cys Gly His Trp Ala
485 490 495
Thr Thr Gly Cys Ser Thr Ile Gly Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ile Cys
500 505 510
Arg Cys Thr His Leu Ser Ser Phe Ala Val Leu Met Ala His Tyr Asp
515 520 525
Val Gln Glu Glu Asp Pro Val Leu Thr Val Ile Thr Tyr Met Gly Leu
530 535 540
Ser Val Ser Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ala Ala Leu Thr Phe Leu Leu
545 550 555 560
Cys Lys Ala Ile Gln Asn Thr Ser Thr Ser Leu His Leu Gln Leu Ser
565 570 575
Leu Cys Leu Phe Leu Ala His Leu Leu Phe Leu Val Ala Ile Asp Gln
580 585 590
Thr Gly His Lys Val Leu Cys Ser Ile Ile Ala Gly Thr Leu His Tyr
595 600 605
Leu Tyr Leu Ala Thr Leu Thr Trp Met Leu Leu Glu Ala Leu Tyr Leu
610 615 620
Phe Leu Thr Ala Arg Asn Leu Thr Val Val Asn Tyr Ser Ser Ile Asn
625 630 635 640
Arg Phe Met Lys Lys Leu Met Phe Pro Val Gly Tyr Gly Val Pro Ala
645 650 655
Val Thr Val Ala Ile Ser Ala Ala Ser Arg Pro His Leu Tyr Gly Thr
660 665 670
Pro Ser Arg Cys Trp Leu Gln Pro Glu Lys Gly Phe Ile Trp Gly Phe
675 680 685
Leu Gly Pro Val Cys Ala Ile Phe Ser Val Asn Leu Val Leu Phe Leu
690 695 700
Val Thr Leu Trp Ile Leu Lys Asn Arg Leu Ser Ser Leu Asn Ser Glu
705 710 715 720
Val Ser Thr Leu Arg Asn Thr Arg Met Leu Ala Phe Lys Ala Thr Ala
725 730 735
Gln Leu Phe Ile Leu Gly Cys Thr Trp Cys Leu Gly Ile Leu Gln Val
740 745 750
Gly Pro Ala Ala Arg Val Met Ala Tyr Leu Phe Thr Ile Ile Asn Ser
755 760 765
Leu Gln Gly Val Phe Ile Phe Leu Val Tyr Cys Leu Leu Ser Gln Gln
770 775 780
Val Arg Glu Gln Tyr Gly Lys Trp Ser Lys Gly Ile Arg Lys Leu Lys
785 790 795 800
Thr Glu Ser Glu Met His Thr Leu Ser Ser Ser Ala Lys Ala Asp Thr
805 810 815
Ser Lys Pro Ser Thr Val Asn
820
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 33
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 34
Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr
1 5
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 35
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr
1 5 10
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<211> 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 36
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 37
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 37
Asp Thr Ser
1
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 38
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
1 5
<210> 39
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 39
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 40
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 41
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met
130 135 140
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser
145 150 155 160
Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro
165 170 175
Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
195 200 205
Ser Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 42
<211> 717
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 42
caagttcagc tccagcagag cggcgccgaa gtggcaaagc ctggagcgtc agtcaagctg 60
tcctgcaaag cgagtggcta tacgttcacg aactactgga tgcagtggat aaagcaggct 120
cccgggcagg gtctggagtg gattggagcc gtctacccag gggacggcga cacccggcac 180
actcaaaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgctgaca agagcacaag cacagcgtac 240
atggaggtgt cctctttgag atccgaagat accgctgtgt attattgtgc ccggggcttc 300
actgcatacg ggatggatta ctggggacaa ggcactaccg tgactgtcag ctccgggggt 360
ggaggctcag gcgggggggg ttcaggaggg gggggatctg aaattgtgct gacacagagc 420
cctgccacaa tgtctgctag ccctggcgag cgcgtgacca tgtcttgtag cgccagcagc 480
agcgtgtcct acatgcattg gtatcaacag aagtccggcc agtctcccaa gcggtggatc 540
tacgatacaa gcaagctggc ctccggcgtg cccgccagat tttctggcag cggctctgga 600
acagattaca ccttcaccat ctctagcatg gaacctgagg attttgccac ctactattgc 660
cagcagtggt ccagcaatcc cctgacattt ggaggaggca ccaagctgga aattaag 717
<210> 43
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 44
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Arg Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met
130 135 140
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser
145 150 155 160
Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ser Pro
165 170 175
Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
195 200 205
Arg Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 46
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 46
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 47
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 47
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Arg Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 48
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met
130 135 140
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser
145 150 155 160
Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ser Pro
165 170 175
Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
195 200 205
Arg Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 49
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 49
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 50
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 242
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 51
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser
145 150 155 160
Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Leu Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly
180 185 190
Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
225 230 235 240
Ile Lys
<210> 52
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 52
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 53
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Arg Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 54
<211> 242
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 54
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Ser
145 150 155 160
Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Leu Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly
180 185 190
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe
195 200 205
Thr Ile Arg Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
225 230 235 240
Ile Lys
<210> 55
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 55
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 56
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Arg Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Arg Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 57
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser
145 150 155 160
Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro
165 170 175
Arg Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
195 200 205
Arg Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 58
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 58
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser
20
<210> 59
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 59
Met Tyr Ser Met Gln Leu Ala Ser Cys Val Thr Leu Thr Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Val Asn Ser
20
<210> 60
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 60
Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly
20
<210> 61
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 61
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 62
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 62
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 63
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 63
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 64
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Ser Ser Ala Tyr Ser
1 5 10 15
<210> 65
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 65
Met Asp Ser Lys Gly Ser Ser Gln Lys Gly Ser Arg Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Val Ser Asn Leu Leu Leu Cys Gln Gly Val Val Ser
20 25 30
<210> 66
<211> 462
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 66
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met
130 135 140
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser
145 150 155 160
Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro
165 170 175
Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
195 200 205
Ser Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
225 230 235 240
Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu
245 250 255
Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro
260 265 270
Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val
275 280 285
Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe
290 295 300
Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp
305 310 315 320
Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr
325 330 335
Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val
340 345 350
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
355 360 365
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
370 375 380
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
385 390 395 400
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
405 410 415
Met Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
420 425 430
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
435 440 445
Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
450 455 460
<210> 67
<211> 1386
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 67
caagttcagc tccagcagag cggcgccgaa gtggcaaagc ctggagcgtc agtcaagctg 60
tcctgcaaag cgagtggcta tacgttcacg aactactgga tgcagtggat aaagcaggct 120
cccgggcagg gtctggagtg gattggagcc gtctacccag gggacggcga cacccggcac 180
actcaaaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgctgaca agagcacaag cacagcgtac 240
atggaggtgt cctctttgag atccgaagat accgctgtgt attattgtgc ccggggcttc 300
actgcatacg ggatggatta ctggggacaa ggcactaccg tgactgtcag ctccgggggt 360
ggaggctcag gcgggggggg ttcaggaggg gggggatctg aaattgtgct gacacagagc 420
cctgccacaa tgtctgctag ccctggcgag cgcgtgacca tgtcttgtag cgccagcagc 480
agcgtgtcct acatgcattg gtatcaacag aagtccggcc agtctcccaa gcggtggatc 540
tacgatacaa gcaagctggc ctccggcgtg cccgccagat tttctggcag cggctctgga 600
acagattaca ccttcaccat ctctagcatg gaacctgagg attttgccac ctactattgc 660
cagcagtggt ccagcaatcc cctgacattt ggaggaggca ccaagctgga aattaagaga 720
gcggccgcaa ttgaagttat gtatcctcct ccttacctag acaatgagaa gagcaatgga 780
accattatcc atgtgaaagg gaaacacctt tgtccaagtc ccctatttcc cggaccttct 840
aagccctttt gggtgctggt ggtggttggt ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta 900
acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg agtaagagga gcaggctcct gcacagtgac 960
tacatgaaca tgactccccg ccgccccggg cccacccgca agcattacca gccctatgcc 1020
ccaccacgcg acttcgcagc ctatcgctcc agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc 1080
cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc tataacgagc tcaatctagg acgaagagag 1140
gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga 1200
aggaagaacc ctcaggaagg cctgttcaat gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc 1260
ttcagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc cggaggggca aggggcacga tggccttttc 1320
cagggtctca gtacagccac caaggacacc ttcgacgccc ttcacatgca ggccctgccc 1380
cctcgc 1386
<210> 68
<211> 265
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 68
Met Ser Glu Glu Val Thr Tyr Ala Asp Leu Gln Phe Gln Asn Ser Ser
1 5 10 15
Glu Met Glu Lys Ile Pro Glu Ile Gly Lys Phe Gly Glu Lys Ala Pro
20 25 30
Pro Ala Pro Ser His Val Trp Arg Pro Ala Ala Leu Phe Leu Thr Leu
35 40 45
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Ile Gly Leu Gly Val Leu Ala Ser Met Phe
50 55 60
His Val Thr Leu Lys Ile Glu Met Lys Lys Met Asn Lys Leu Gln Asn
65 70 75 80
Ile Ser Glu Glu Leu Gln Arg Asn Ile Ser Leu Gln Leu Met Ser Asn
85 90 95
Met Asn Ile Ser Asn Lys Ile Arg Asn Leu Ser Thr Thr Leu Gln Thr
100 105 110
Ile Ala Thr Lys Leu Cys Arg Glu Leu Tyr Ser Lys Glu Gln Glu His
115 120 125
Lys Cys Lys Pro Cys Pro Arg Arg Trp Ile Trp His Lys Asp Ser Cys
130 135 140
Tyr Phe Leu Ser Asp Asp Val Gln Thr Trp Gln Glu Ser Lys Met Ala
145 150 155 160
Cys Ala Ala Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Ile Asn Asn Lys Asn Ala
165 170 175
Leu Glu Phe Ile Lys Ser Gln Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Trp Leu Gly
180 185 190
Leu Ser Pro Glu Glu Asp Ser Thr Arg Gly Met Arg Val Asp Asn Ile
195 200 205
Ile Asn Ser Ser Ala Trp Val Ile Arg Asn Ala Pro Asp Leu Asn Asn
210 215 220
Met Tyr Cys Gly Tyr Ile Asn Arg Leu Tyr Val Gln Tyr Tyr His Cys
225 230 235 240
Thr Tyr Lys Lys Arg Met Ile Cys Glu Lys Met Ala Asn Pro Val Gln
245 250 255
Leu Gly Ser Thr Tyr Phe Arg Glu Ala
260 265
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 69
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 70
Thr His Tyr Arg Gly Ser Thr
1 5
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 71
Ala Arg Glu Leu Thr Gly Glu Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 72
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 72
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 73
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 73
Ala Ala Ser
1
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 74
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 75
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 75
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Thr His Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Val Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Glu Leu Thr Gly Glu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 77
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 77
cagctccagc tccaagagtc agggccaggt ctcgtgaaac cgagtgagac cctgtccctg 60
acctgcacag tgagtggtgg atcaatctca agctctacct actattgggg gtggattcgg 120
cagcccccta gaaaggggct tgagtggatt ggcagcactc attatcgagg atctacctat 180
tataatcctt ctctgaaaag cagagttacc atctctgtgg atacgtccaa aaatcagttc 240
agtctgaagg tatcatccgt gactgctgcc gacacggccg tgtactattg cgcgagggag 300
ctgacaggtg aggtctttga ctactggggc cagggcacac tcgtgaccgt gtcttct 357
<210> 78
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 78
gacatccaga tgacgcagtc cccttccagc ttgtccgcat ctgtgggtga tagggtcacg 60
attacatgta gggctagtca gagtatttct agttacctga attggtacca gcagaaacca 120
ggcaaggcac caaagttgct catctatgcg gcctcctctc tgcaatctgg cgtgccgtcc 180
agatttagtg gatcaggctc cggaaccgat ttcaccctta cgatctcctc acttcaaccc 240
gaggatttcg ccacatatta ctgtcaacaa agctattcta caccgttcac cttcggaccg 300
gggacaaaag tggatattaa a 321
<210> 79
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 79
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Thr His Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Val Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Glu Leu Thr Gly Glu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Ile Lys
<210> 80
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 80
cagctccagc tccaagagtc agggccaggt ctcgtgaaac cgagtgagac cctgtccctg 60
acctgcacag tgagtggtgg atcaatctca agctctacct actattgggg gtggattcgg 120
cagcccccta gaaaggggct tgagtggatt ggcagcactc attatcgagg atctacctat 180
tataatcctt ctctgaaaag cagagttacc atctctgtgg atacgtccaa aaatcagttc 240
agtctgaagg tatcatccgt gactgctgcc gacacggccg tgtactattg cgcgagggag 300
ctgacaggtg aggtctttga ctactggggc cagggcacac tcgtgaccgt gtcttctgcc 360
tcaacaggag ggggtgggag tggaggcggt ggatcagggg gaggagggag tgacatccag 420
atgacgcagt ccccttccag cttgtccgca tctgtgggtg atagggtcac gattacatgt 480
agggctagtc agagtatttc tagttacctg aattggtacc agcagaaacc aggcaaggca 540
ccaaagttgc tcatctatgc ggcctcctct ctgcaatctg gcgtgccgtc cagatttagt 600
ggatcaggct ccggaaccga tttcaccctt acgatctcct cacttcaacc cgaggatttc 660
gccacatatt actgtcaaca aagctattct acaccgttca ccttcggacc ggggacaaaa 720
gtggatatta aa 732
<210> 81
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 81
Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr Tyr
1 5
<210> 82
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 82
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 83
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 83
Ala Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 84
Gln Gly Ile Arg Tyr Asp
1 5
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 85
Leu Gln Asp Tyr Asn Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 86
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 86
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 87
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 87
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Tyr Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 88
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 88
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Tyr Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu
180 185 190
Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
210 215 220
Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 89
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 90
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys
1 5
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 91
Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 92
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 92
Gln Ser Val Gly Asn Arg Tyr
1 5
<210> 93
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 93
Gly Ala Ser
1
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 94
Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 95
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 95
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 96
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 96
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Asn Arg
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 97
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 97
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val Gly Asn Arg Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 98
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 98
Ala Arg Asp Gly Ser Arg Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 99
Gln Ser Val His Ser Lys Tyr
1 5
<210> 100
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Ser Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Asn Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ser Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 101
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 101
Glu Ile Phe Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val His Ser Lys
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 102
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 102
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Ser Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Asn Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ser Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Phe Met Thr Gln Ser Pro Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val His Ser Lys Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 103
Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 104
Gln Gly Ile Arg Asn Asp
1 5
<210> 105
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 105
Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr
1 5
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<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 106
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Ala Ala Ser Lys Ser Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 107
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 108
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Ala Ala Ser Lys Ser Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln
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Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
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Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Phe Gln Gln
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Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu
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Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr
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Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
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Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr
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Lys Val Glu Ile Lys
245
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 109
Gly Gly Ser Ile Ser Thr Asp Tyr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 110
Gln Asp Ile Arg Asn Asp
1 5
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<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 111
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Asp
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Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 112
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 112
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Phe Pro Arg
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 113
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Asp
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Phe Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Glu Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
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Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Phe Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu
180 185 190
Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
210 215 220
Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 114
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 114
Ala Arg Asp Gly Gln Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 115
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 115
Gln Ser Val Thr Ser Arg Tyr
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 116
Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 117
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 117
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Gly Gln Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 118
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 118
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Arg
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Pro Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro
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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 119
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 119
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gln Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val Thr Ser Arg Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Pro Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 120
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 121
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 121
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys
1 5
<210> 122
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 122
Ala Arg Asp Ser Gly Arg Tyr Phe Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 123
Gln Ser Val Ser Ser Arg Ser
1 5
<210> 124
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 124
Gly Pro Ser
1
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 125
His Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 126
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 126
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Ser Tyr Lys Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Ser Gly Arg Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 127
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 127
Glu Ile Ile Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Arg
20 25 30
Ser Leu Ser Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Pro Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Asp Tyr Asn Leu Pro
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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 128
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 128
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Ser Tyr Lys Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Ser Gly Arg Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Ile Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Arg Ser Leu Ser Trp Tyr Gln His Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Pro Ser Thr Arg Ala
180 185 190
Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys His Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys
<210> 129
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 129
Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Gly
1 5
<210> 130
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 130
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys
1 5
<210> 131
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 131
Ala Arg Gly Ser Leu Trp Phe Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 132
Gln Gly Ile Ser Ser Ala
1 5
<210> 133
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 133
Asp Ala Ser
1
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 134
Gln Gln Phe Asn Asn Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 135
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 135
Gln Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Phe Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Ser Leu Trp Phe Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 136
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 136
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 137
<211> 246
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 137
Gln Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Leu Trp Phe Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Leu Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Thr Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser
180 185 190
Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 138
<211> 361
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 138
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Thr His Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Val Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Glu Leu Thr Gly Glu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
245 250 255
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
260 265 270
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
275 280 285
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
290 295 300
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys
305 310 315 320
Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
325 330 335
Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
340 345 350
Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
355 360
<210> 139
<211> 1083
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 139
cagctccagc tccaagagtc agggccaggt ctcgtgaaac cgagtgagac cctgtccctg 60
acctgcacag tgagtggtgg atcaatctca agctctacct actattgggg gtggattcgg 120
cagcccccta gaaaggggct tgagtggatt ggcagcactc attatcgagg atctacctat 180
tataatcctt ctctgaaaag cagagttacc atctctgtgg atacgtccaa aaatcagttc 240
agtctgaagg tatcatccgt gactgctgcc gacacggccg tgtactattg cgcgagggag 300
ctgacaggtg aggtctttga ctactggggc cagggcacac tcgtgaccgt gtcttctgcc 360
tcaacaggag ggggtgggag tggaggcggt ggatcagggg gaggagggag tgacatccag 420
atgacgcagt ccccttccag cttgtccgca tctgtgggtg atagggtcac gattacatgt 480
agggctagtc agagtatttc tagttacctg aattggtacc agcagaaacc aggcaaggca 540
ccaaagttgc tcatctatgc ggcctcctct ctgcaatctg gcgtgccgtc cagatttagt 600
ggatcaggct ccggaaccga tttcaccctt acgatctcct cacttcaacc cgaggatttc 660
gccacatatt actgtcaaca aagctattct acaccgttca ccttcggacc ggggacaaaa 720
gtggatatta aacgggcggc cgcccccacc acgacgccag cgccgcgacc accaaccccg 780
gcgcccacga tcgcgtcgca gcccctgtcc ctgcgcccag aggcgtgccg gccagcggcg 840
gggggcgcag tgcacacgag ggggctggac ttcgcctgtg atatctacat ctgggcgccc 900
ctggccggga cttgtggggt ccttctcctg tcactggtta tcacccttta ctgcaacaaa 960
cggggcagaa agaagctcct gtatatattc aaacaaccat ttatgagacc agtacaaact 1020
actcaagagg aagatggctg tagctgccga tttccagaag aagaagaagg aggatgtgaa 1080
ctg 1083
<210> 140
<211> 881
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 140
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro
20 25 30
Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
35 40 45
Asn Tyr Trp Met Gln Trp Ile Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Ile Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln
65 70 75 80
Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr
85 90 95
Ala Tyr Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala
145 150 155 160
Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala
165 170 175
Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln
180 185 190
Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val
195 200 205
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr
210 215 220
Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
225 230 235 240
Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
245 250 255
Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp
260 265 270
Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu
275 280 285
Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu
290 295 300
Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val
305 310 315 320
Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His
325 330 335
Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys
340 345 350
His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
355 360 365
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
370 375 380
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
385 390 395 400
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
405 410 415
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys
420 425 430
Asp Lys Met Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
435 440 445
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala
450 455 460
Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
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Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
485 490 495
Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu
500 505 510
Pro Leu Ala Leu Leu Leu His Ala Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly
515 520 525
Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val
530 535 540
Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg
545 550 555 560
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Thr His Tyr Arg
565 570 575
Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser
580 585 590
Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Val Ser Ser Val Thr
595 600 605
Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Leu Thr Gly Glu
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Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
625 630 635 640
Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
645 650 655
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
660 665 670
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
675 680 685
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
690 695 700
Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
705 710 715 720
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Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro
740 745 750
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala Ala
755 760 765
Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
770 775 780
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
785 790 795 800
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr
805 810 815
Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu
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Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
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Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
850 855 860
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
865 870 875 880
Leu
<210> 141
<211> 8940
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 141
ggattagtcc aatttgttaa agacaggata tcagtggtcc aggctctagt tttgactcaa 60
caatatcacc agctgaagcc tatagagtac gagccataga taaaataaaa gattttattt 120
agtctccaga aaaagggggg aatgaaagac cccacctgta ggtttggcaa gctagcttaa 180
gtaacgccat tttgcaaggc atggaaaaat acataactga gaatagagaa gttcagatca 240
aggtcaggaa cagatggaac agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt ggtaagcagt 300
tcctgccccg gctcagggcc aagaacagat ggaacagctg aatatgggcc aaacaggata 360
tctgtggtaa gcagttcctg ccccggctca gggccaagaa cagatggtcc ccagatgcgg 420
tccagccctc agcagtttct agagaaccat cagatgtttc cagggtgccc caaggacctg 480
aaatgaccct gtgccttatt tgaactaacc aatcagttcg cttctcgctt ctgttcgcgc 540
gcttctgctc cccgagctca ataaaagagc ccacaacccc tcactcgggg cgccagtcct 600
ccgattgact gagtcgcccg ggtacccgtg tatccaataa accctcttgc agttgcatcc 660
gacttgtggt ctcgctgttc cttgggaggg tctcctctga gtgattgact acccgtcagc 720
gggggtcttt cacatgcagc atgtatcaaa attaatttgg ttttttttct taagtattta 780
cattaaatgg ccatagtact taaagttaca ttggcttcct tgaaataaac atggagtatt 840
cagaatgtgt cataaatatt tctaatttta agatagtatc tccattggct ttctactttt 900
tcttttattt ttttttgtcc tctgtcttcc atttgttgtt gttgttgttt gtttgtttgt 960
ttgttggttg gttggttaat ttttttttaa agatcctaca ctatagttca agctagacta 1020
ttagctactc tgtaacccag ggtgaccttg aagtcatggg tagcctgctg ttttagcctt 1080
cccacatcta agattacagg tatgagctat catttttggt atattgattg attgattgat 1140
tgatgtgtgt gtgtgtgatt gtgtttgtgt gtgtgattgt gtatatgtgt gtatggttgt 1200
gtgtgattgt gtgtatgtat gtttgtgtgt gattgtgtgt gtgtgattgt gcatgtgtgt 1260
gtgtgtgatt gtgtttatgt gtatgattgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 1320
gtgtgtgtgt gtgttgtgta tatatattta tggtagtgag aggcaacgct ccggctcagg 1380
tgtcaggttg gtttttgaga cagagtcttt cacttagctt ggaattcact ggccgtcgtt 1440
ttacaacgtc gtgactggga aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat 1500
ccccctttcg ccagctggcg taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag 1560
ttgcgcagcc tgaatggcga atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc 1620
ggtatttcac accgcatatg gtgcactctc agtacaatct gctctgatgc cgcatagtta 1680
agccagcccc gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg 1740
gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca 1800
ccgtcatcac cgaaacgcgc gagacgaaag ggcctcgtga tacgcctatt tttataggtt 1860
aatgtcatga taataatggt ttcttagacg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc 1920
ggaaccccta tttgtttatt tttttaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa 1980
taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtatgagcca tattcaacgg 2040
gaaacgtcga ggccgcgatt aaattccaac atggatgctg atttatatgg gtataaatgg 2100
gctcgcgata atgtcgggca atcaggtgcg acaatctatc gcttgtatgg gaagcccgat 2160
gcgccagagt tgtttctgaa acatggcaaa ggtagcgttg ccaatgatgt tacagatgag 2220
atggtcagac taaactggct gacggaattt atgcctcttc cgaccatcaa gcattttatc 2280
cgtactcctg atgatgcatg gttactcacc actgcgatcc ccggaaaaac agcattccag 2340
gtattagaag aatatcctga ttcaggtgaa aatattgttg atgcgctggc agtgttcctg 2400
cgccggttgc attcgattcc tgtttgtaat tgtcctttta acagcgatcg cgtatttcgt 2460
ctcgctcagg cgcaatcacg aatgaataac ggtttggttg atgcgagtga ttttgatgac 2520
gagcgtaatg gctggcctgt tgaacaagtc tggaaagaaa tgcataaact tttgccattc 2580
tcaccggatt cagtcgtcac tcatggtgat ttctcacttg ataaccttat ttttgacgag 2640
gggaaattaa taggttgtat tgatgttgga cgagtcggaa tcgcagaccg ataccaggat 2700
cttgccatcc tatggaactg cctcggtgag ttttctcctt cattacagaa acggcttttt 2760
caaaaatatg gtattgataa tcctgatatg aataaattgc agtttcattt gatgctcgat 2820
gagtttttct aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac tttagattga tttaaaactt 2880
catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc 2940
ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct 3000
tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta 3060
ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc 3120
ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtt cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac 3180
ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct 3240
gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat 3300
aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg 3360
acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa 3420
gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg 3480
gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga 3540
cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc 3600
aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct 3660
gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct 3720
cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgccca 3780
atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg gcacgacagg 3840
tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat 3900
taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc 3960
ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt acgccaagct ttgctcttag 4020
gagtttccta atacatccca aactcaaata tataaagcat ttgacttgtt ctatgcccta 4080
gggggcgggg ggaagctaag ccagcttttt ttaacattta aaatgttaat tccattttaa 4140
atgcacagat gtttttattt cataagggtt tcaatgtgca tgaatgctgc aatattcctg 4200
ttaccaaagc tagtataaat aaaaatagat aaacgtggaa attacttaga gtttctgtca 4260
ttaacgtttc cttcctcagt tgacaacata aatgcgctgc tgagaagcca gtttgcatct 4320
gtcaggatca atttcccatt atgccagtca tattaattac tagtcaatta gttgattttt 4380
atttttgaca tatacatgtg aaagacccca cctgtaggtt tggcaagcta gcttaagtaa 4440
cgccattttg caaggcatgg aaaaatacat aactgagaat agaaaagttc agatcaaggt 4500
caggaacaga tggaacagct gaatatgggc caaacaggat atctgtggta agcagttcct 4560
gccccggctc agggccaaga acagatggaa cagctgaata tgggccaaac aggatatctg 4620
tggtaagcag ttcctgcccc ggctcagggc caagaacaga tggtccccag atgcggtcca 4680
gccctcagca gtttctagag aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag gacctgaaat 4740
gaccctgtgc cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt tcgcgcgctt 4800
ctgctccccg agctcaataa aagagcccac aacccctcac tcggcgcgcc agtcctccga 4860
ttgactgagt cgcccgggta cccgtgtatc caataaaccc tcttgcagtt gcatccgact 4920
tgtggtctcg ctgttccttg ggagggtctc ctctgagtga ttgactaccc gtcagcgggg 4980
gtctttcatt tgggggctcg tccgggatcg ggagacccct gcccagggac caccgaccca 5040
ccaccgggag gtaagctggc cagcaactta tctgtgtctg tccgattgtc tagtgtctat 5100
gactgatttt atgcgcctgc gtcggtacta gttagctaac tagctctgta tctggcggac 5160
ccgtggtgga actgacgagt tcggaacacc cggccgcaac cctgggagac gtcccaggga 5220
cttcgggggc cgtttttgtg gcccgacctg agtcctaaaa tcccgatcgt ttaggactct 5280
ttggtgcacc ccccttagag gagggatatg tggttctggt aggagacgag aacctaaaac 5340
agttcccgcc tccgtctgaa tttttgcttt cggtttggga ccgaagccgc gccgcgcgtc 5400
ttgtctgctg cagcatcgtt ctgtgttgtc tctgtctgac tgtgtttctg tatttgtctg 5460
aaaatatggg cccgggctag actgttacca ctcccttaag tttgacctta ggtcactgga 5520
aagatgtcga gcggatcgct cacaaccagt cggtagatgt caagaagaga cgttgggtta 5580
ccttctgctc tgcagaatgg ccaaccttta acgtcggatg gccgcgagac ggcaccttta 5640
accgagacct catcacccag gttaagatca aggtcttttc acctggcccg catggacacc 5700
cagaccaggt cccctacatc gtgacctggg aagccttggc ttttgacccc cctccctggg 5760
tcaagccctt tgtacaccct aagcctccgc ctcctcttcc tccatccgcc ccgtctctcc 5820
cccttgaacc tcctcgttcg accccgcctc gatcctccct ttatccagcc ctcactcctt 5880
ctctaggcgc ccccatatgg ccatatgaga tcttatatgg ggcacccccg ccccttgtaa 5940
acttccctga ccctgacatg acaagagtta ctaacagccc ctctctccaa gctcacttac 6000
aggctctcta cttagtccag cacgaagtct ggagacctct ggcggcagcc taccaagaac 6060
aactggaccg accggtggta cctcaccctt accgagtcgg cgacacagtg tgggtccgcc 6120
gacaccagac taagaaccta gaacctcgct ggaaaggacc ttacacagtc ctgctgacca 6180
cccccaccgc cctcaaagta gacggcatcg cagcttggat acacgccgcc cacgtgaagg 6240
ctgccgaccc cgggggtgga ccatcctcta gactgccatg gctctcccag tgactgccct 6300
actgcttccc ctagcgcttc tcctgcatgc acaagttcag ctccagcaga gcggcgccga 6360
agtggcaaag cctggagcgt cagtcaagct gtcctgcaaa gcgagtggct atacgttcac 6420
gaactactgg atgcagtgga taaagcaggc tcccgggcag ggtctggagt ggattggagc 6480
cgtctaccca ggggacggcg acacccggca cactcaaaag ttcaagggca aggccaccct 6540
gaccgctgac aagagcacaa gcacagcgta catggaggtg tcctctttga gatccgaaga 6600
taccgctgtg tattattgtg cccggggctt cactgcatac gggatggatt actggggaca 6660
aggcactacc gtgactgtca gctccggggg tggaggctca ggcggggggg gttcaggagg 6720
ggggggatct gaaattgtgc tgacacagag ccctgccaca atgtctgcta gccctggcga 6780
gcgcgtgacc atgtcttgta gcgccagcag cagcgtgtcc tacatgcatt ggtatcaaca 6840
gaagtccggc cagtctccca agcggtggat ctacgataca agcaagctgg cctccggcgt 6900
gcccgccaga ttttctggca gcggctctgg aacagattac accttcacca tctctagcat 6960
ggaacctgag gattttgcca cctactattg ccagcagtgg tccagcaatc ccctgacatt 7020
tggaggaggc accaagctgg aaattaagag agcggccgca attgaagtta tgtatcctcc 7080
tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc catgtgaaag ggaaacacct 7140
ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagcccttt tgggtgctgg tggtggttgg 7200
tggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc tttattattt tctgggtgag 7260
gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac atgactcccc gccgccccgg 7320
gcccacccgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc gacttcgcag cctatcgctc 7380
cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct 7440
ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg 7500
ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgttcaa 7560
tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc cttcagtgag attgggatga aaggcgagcg 7620
ccggaggggc aaggggcacg atggcctttt ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac 7680
cttcgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgcgga agcggagcta ctaacttcag 7740
cctgctgaag caggctggag acgtggagga gaaccctgga cccatggccc tgcccgtcac 7800
cgctttgctt ctgccactgg ccttgctgct ccacgctcag ctccagctcc aagagtcagg 7860
gccaggtctc gtgaaaccga gtgagaccct gtccctgacc tgcacagtga gtggtggatc 7920
aatctcaagc tctacctact attgggggtg gattcggcag ccccctagaa aggggcttga 7980
gtggattggc agcactcatt atcgaggatc tacctattat aatccttctc tgaaaagcag 8040
agttaccatc tctgtggata cgtccaaaaa tcagttcagt ctgaaggtat catccgtgac 8100
tgctgccgac acggccgtgt actattgcgc gagggagctg acaggtgagg tctttgacta 8160
ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc ttctgcctca acaggagggg gtgggagtgg 8220
aggcggtgga tcagggggag gagggagtga catccagatg acgcagtccc cttccagctt 8280
gtccgcatct gtgggtgata gggtcacgat tacatgtagg gctagtcaga gtatttctag 8340
ttacctgaat tggtaccagc agaaaccagg caaggcacca aagttgctca tctatgcggc 8400
ctcctctctg caatctggcg tgccgtccag atttagtgga tcaggctccg gaaccgattt 8460
cacccttacg atctcctcac ttcaacccga ggatttcgcc acatattact gtcaacaaag 8520
ctattctaca ccgttcacct tcggaccggg gacaaaagtg gatattaaac gggcggccgc 8580
ccccaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aaccccggcg cccacgatcg cgtcgcagcc 8640
cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg 8700
gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccctg gccgggactt gtggggtcct 8760
tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caacaaacgg ggcagaaaga agctcctgta 8820
tatattcaaa caaccattta tgagaccagt acaaactact caagaggaag atggctgtag 8880
ctgccgattt ccagaagaag aagaaggagg atgtgaactg taacagccac tcgaggatcc 8940
8940
<210> 142
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 142
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 143
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 143
ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60
ggaccc 66
<210> 144
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 144
caagttcagc tccagcagag cggcgccgaa gtggcaaagc ctggagcgtc agtcaagctg 60
tcctgcaaag cgagtggcta tacgttcacg aactactgga tgcagtggat aaagcaggct 120
cccgggcagg gtctggagtg gattggagcc gtctacccag gggacggcga cacccggcac 180
actcaaaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgctgaca agagcacaag cacagcgtac 240
atggaggtgt cctctttgag atccgaagat accgctgtgt attattgtgc ccggggcttc 300
actgcatacg ggatggatta ctggggacaa ggcactaccg tgactgtcag ctcc 354
<210> 145
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 145
gaaattgtgc tgacacagag ccctgccaca atgtctgcta gccctggcga gcgcgtgacc 60
atgtcttgta gcgccagcag cagcgtgtcc tacatgcatt ggtatcaaca gaagtccggc 120
cagtctccca agcggtggat ctacgataca agcaagctgg cctccggcgt gcccgccaga 180
ttttctggca gcggctctgg aacagattac accttcacca tctctagcat ggaacctgag 240
gattttgcca cctactattg ccagcagtgg tccagcaatc ccctgacatt tggaggaggc 300
accaagctgg aaattaag 318
<210> 146
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 147
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 148
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Ile Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Val Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg His Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Thr Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met
130 135 140
Ser Ala Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Ala Ser Ser
145 150 155 160
Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro
165 170 175
Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser
195 200 205
Ser Met Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 149
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 149
Ala Ser Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser
<210> 150
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 150
Arg Ala Ala Ala
1
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 151
Gln Gln Asp Tyr Asn Leu Pro Ile Thr
1 5
Claims (153)
- ADGRE2에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인(extracellular antigen-binding domain), 막관통 도메인(transmembrane domain) 및 세포 내 도메인(intracellular domain)을 포함하는 키메라 수용체(chimeric receptor)로서, 상기 세포 외 항원-결합 도메인이 다음을 포함하는 키메라 수용체:
a) 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형(conservative modification)을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
b) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역. - 청구항 1에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 단일쇄 가변 단편(scFv), Fab 또는 F(ab)2를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 2에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 3에 있어서,
scFv가 인간화 scFv인 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46, 서열번호 49, 서열번호 52, 서열번호 55 또는 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46 또는 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47, 서열번호 50, 서열번호 53, 서열번호 56 또는 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47 또는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 12 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46, 서열번호 49, 서열번호 52, 서열번호 55 또는 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47, 서열번호 50, 서열번호 53, 서열번호 56 또는 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 14 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39, 서열번호 43, 서열번호 46 또는 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 40, 서열번호 44, 서열번호 47 또는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역이 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역이 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역이 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
e) 중쇄 가변 영역이 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
f) 중쇄 가변 영역이 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
g) 중쇄 가변 영역이 서열번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 147에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역이 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역이 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역이 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 18 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이에 링커를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 19에 있어서,
링커가 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 또는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 20 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치하는 키메라 수용체.
- 청구항 1 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 서열번호 41, 서열번호 45, 서열번호 48, 서열번호 51, 서열번호 54, 서열번호 57 또는 서열번호 148에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 22 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 서열번호 41, 서열번호 45, 서열번호 48 또는 서열번호 51에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 23 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 서열번호 41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 24 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 약 10-8M 미만, 약 10-9M 미만, 약 10-10M 미만, 약 10-11M 미만, 약 10-12M 미만 또는 약 10-13M 미만의 해리 상수(KD)로 ADGRE2에 결합하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 25 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 약 1nM 내지 약 100nM의 EC50으로 ADGRE2에 결합하는 키메라 수용체. - 청구항 26에 있어서,
EC50이 약 10nM 내지 약 95nM인 키메라 수용체. - 청구항 26에 있어서,
EC50이 약 25nM 내지 약 75nM인 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 28 중 어느 한 항에 있어서,
막관통 도메인이 CD8 폴리펩티드, CD28 폴리펩티드, CD3ζ 폴리펩티드, CD4 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, CTLA-4 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드, LAG-3 폴리펩티드, 2B4 폴리펩티드 또는 BTLA 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 29에 있어서,
막관통 도메인이 CD28 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 30 중 어느 한 항에 있어서,
세포 내 도메인이 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 31에 있어서,
CD3ζ 폴리펩티드가 변형된 CD3ζ 폴리펩티드인 키메라 수용체. - 청구항 32에 있어서,
변형된 CD3ζ 폴리펩티드가 천연 ITAM1, 2개의 기능상실 돌연변이(loss-of-function mutation)로 이루어진 ITAM2 변이체 및 2개의 기능상실 돌연변이로 이루어진 ITAM3 변이체를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 33에 있어서,
천연 ITAM1이 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 키메라 수용체. - 청구항 33 또는 청구항 34에 있어서,
ITAM2 변이체가 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 키메라 수용체. - 청구항 33 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 있어서,
ITAM3 변이체가 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 키메라 수용체. - 청구항 32 내지 청구항 36 중 어느 한 항에 있어서,
변형된 CD3ζ 폴리펩티드가 서열번호 27에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는 키메라 수용체. - 청구항 31 내지 청구항 37 중 어느 한 항에 있어서,
세포 내 도메인이 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역(co-stimulatory signaling region)을 추가로 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 38에 있어서,
적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역이 CD28 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, DAP-10 폴리펩티드 또는 이들의 조합을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 39에 있어서,
적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역이 CD28 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 40 중 어느 한 항에 있어서,
키메라 수용체가 키메라 항원 수용체(CAR), 키메라 공동자극 수용체(CCR) 또는 TCR 유사 융합 분자인 키메라 수용체. - 청구항 41에 있어서,
키메라 수용체가 CAR인 키메라 수용체. - CLEC12A에 결합하는 세포 외 항원-결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 도메인을 포함하는 키메라 수용체로서, 상기 세포 외 항원-결합 도메인이 다음을 포함하는 키메라 수용체:
a) ⅰ) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅱ) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅲ) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅳ) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅴ) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅵ) 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅶ) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅷ) 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3; 또는
ⅸ) 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
b) ⅰ) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅱ) 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅲ) 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅳ) 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅴ) 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅵ) 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅶ) 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3;
ⅷ) 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3; 또는
ⅸ) 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역. - 청구항 43에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 단일쇄 가변 단편(scFv), Fab 또는 F(ab)2를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 44에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 45에 있어서,
scFv가 인간 scFv인 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 46 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 다음을 포함하는 키메라 수용체:
a) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
d) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
e) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
f) 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
g) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
h) 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
i) 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3. - 청구항 43 내지 청구항 47 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 다음을 포함하는 키메라 수용체:
a) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
d) 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3. - 청구항 43 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 49 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 다음을 포함하는 키메라 수용체:
a) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
d) 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
e) 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
f) 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
g) 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
h) 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
i) 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3. - 청구항 43 내지 청구항 50 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 다음을 포함하는 키메라 수용체:
a) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
b) 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
c) 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
d) 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3. - 청구항 43 내지 청구항 51 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 52 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역이 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역이 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역이 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
e) 중쇄 가변 영역이 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
f) 중쇄 가변 영역이 서열번호 109에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
g) 중쇄 가변 영역이 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 114에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 115에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
h) 중쇄 가변 영역이 서열번호 120에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 121에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 123에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 124에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 125에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
i) 중쇄 가변 영역이 서열번호 129에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 130에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 132에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 133에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 53 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역이 서열번호 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역이 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역이 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 151에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 54 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 55 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 75, 서열번호 86, 서열번호 95, 서열번호 100, 서열번호 106, 서열번호 111, 서열번호 117, 서열번호 126 또는 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 56 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 75, 서열번호 86, 서열번호 95, 서열번호 100, 서열번호 106, 서열번호 111, 서열번호 117, 서열번호 126 또는 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 57 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 75, 서열번호 86, 서열번호 95 또는 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 58 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 76, 서열번호 87, 서열번호 96, 서열번호 101, 서열번호 107, 서열번호 112, 서열번호 118, 서열번호 127 또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 60 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 76, 서열번호 87, 서열번호 96, 서열번호 101, 서열번호 107, 서열번호 112, 서열번호 118, 서열번호 127 또는 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 61 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 76, 서열번호 87, 서열번호 96 또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 63 내지 청구항 62 중 어느 한 항에 있어서,
경쇄 가변 영역이 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 63 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역이 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역이 서열번호 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역이 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
e) 중쇄 가변 영역이 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 107에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
f) 중쇄 가변 영역이 서열번호 111에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 112에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
g) 중쇄 가변 영역이 서열번호 117에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 118에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
h) 중쇄 가변 영역이 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 127에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
i) 중쇄 가변 영역이 서열번호 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 136에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 64 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
b) 중쇄 가변 영역이 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
c) 중쇄 가변 영역이 서열번호 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
d) 중쇄 가변 영역이 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 65 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 66 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이에 링커를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 67에 있어서,
링커가 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 또는 서열번호 149에 제시된 아미노산 서열로 이루어지는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 68 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 VH-VL로 N-말단에서 C-말단으로 위치하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 69 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 서열번호 79, 서열번호 88, 서열번호 97, 서열번호 102, 서열번호 108, 서열번호 113, 서열번호 119, 서열번호 128 또는 서열번호 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 70 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 서열번호 79, 서열번호 88, 서열번호 97 또는 서열번호 102에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 71 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 서열번호 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 72 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 약 10-8M 미만, 약 10-9M 미만, 약 10-10M 미만, 약 10-11M 미만, 약 10-12M 미만 또는 약 10-13M 미만의 해리 상수(KD)로 CLEC12A에 결합하는 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 73에 있어서,
KD가 약 0.1pM 이하인 키메라 수용체. - 청구항 73에 있어서,
KD가 약 0.05pM 내지 약 0.5pM인 키메라 수용체. - 청구항 73에 있어서,
KD가 약 0.1nM 내지 약 5.0nM인 키메라 수용체. - 청구항 76에 있어서,
KD가 약 0.3nM 내지 약 3.5nM인 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 77 중 어느 한 항에 있어서,
세포 외 항원-결합 도메인이 약 1nM 내지 약 100nM의 EC50으로 CLEC12A에 결합하는 scFv이거나 이를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 78 중 어느 한 항에 있어서,
막관통 도메인이 CD8 폴리펩티드, CD28 폴리펩티드, CD3ζ 폴리펩티드, CD4 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, CTLA-4 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드, LAG-3 폴리펩티드, 2B4 폴리펩티드 또는 BTLA 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 79에 있어서,
막관통 도메인이 CD8 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 80 중 어느 한 항에 있어서,
키메라 수용체가 키메라 항원 수용체(CAR), 키메라 공동자극 수용체(CCR) 또는 TCR 유사 융합 분자인 키메라 수용체. - 청구항 81에 있어서,
키메라 수용체가 키메라 공동자극 수용체(CCR)인 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 82 중 어느 한 항에 있어서,
세포 내 도메인이 CD3ζ 폴리펩티드를 포함하지 않는 키메라 수용체. - 청구항 43 내지 청구항 83 중 어느 한 항에 있어서,
세포 내 도메인이 적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 84에 있어서,
적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역이 CD28 폴리펩티드, 4-1BB 폴리펩티드, OX40 폴리펩티드, ICOS 폴리펩티드, DAP-10 폴리펩티드 또는 이들의 조합을 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 85에 있어서,
적어도 하나의 공동자극 신호전달 영역이 4-1BB 폴리펩티드를 포함하는 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 86 중 어느 한 항에 있어서,
키메라 수용체가 벡터로부터 발현되는 키메라 수용체. - 청구항 87에 있어서,
벡터가 바이러스 벡터(viral vector)인 키메라 수용체. - 청구항 88에 있어서,
바이러스 벡터가 레트로바이러스 벡터(retroviral vector)인 키메라 수용체. - 청구항 1 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 포함하는 세포.
- a) 청구항 1 내지 청구항 42 및 청구항 87 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체인 제1 키메라 수용체 및 b) 청구항 43 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체인 제2 키메라 수용체를 포함하는 세포.
- 청구항 91에 있어서,
제1 키메라 수용체가 키메라 항원 수용체(CAR)이고, b) 제2 키메라 수용체가 키메라 공동자극 수용체(CCR)인 세포. - 청구항 92에 있어서,
CAR이 ADGRE2에 결합하고 다음을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 세포:
a) 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
b) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역. - 청구항 93에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 33에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 세포. - 청구항 93 또는 청구항 94에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 경쇄 가변 영역이 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 세포. - 청구항 95에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 세포. - 청구항 92 내지 청구항 96 중 어느 한 항에 있어서,
CCR이 CLEC12A에 결합하고 다음을 포함하는 세포 외 항원-결합 도메인을 포함하는 세포:
a) 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
b) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 보존적 변형을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역. - 청구항 97에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 71에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 및 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3를 포함하는 세포. - 청구항 97 또는 청구항 98에 있어서,
a) 중쇄 가변 영역이 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
b) 경쇄 가변 영역이 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 세포. - 청구항 95에 있어서,
중쇄 가변 영역이 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역이 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 세포. - 청구항 90 내지 청구항 100 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 키메라 수용체로 형질도입되는 세포. - 청구항 90 내지 청구항 101 중 어느 한 항에 있어서,
키메라 수용체가 세포 표면에서 상시 발현되는(constitutively expressed) 세포. - 청구항 90 내지 청구항 102 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 면역반응성 세포(immunoresponsive cell)인 세포. - 청구항 90 내지 청구항 103 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 림프계(lymphoid lineage) 세포 또는 골수계(myeloid lineage) 세포인 세포. - 청구항 90 내지 청구항 104 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 림프 세포가 분화될 수 있는 줄기세포 및 골수 세포가 분화될 수 있는 줄기세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포. - 청구항 90 내지 청구항 105 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 T 세포인 세포. - 청구항 105 또는 청구항 106에 있어서,
T 세포가 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포, 조절 T 세포, 종양 침윤 림프구(TIL), 자연 살해 T 세포, 점막 관련 불변(mucosal associated invariant) T 세포 및 γδ T 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포. - 청구항 90 내지 청구항 105 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 자연 살해(NK) 세포인 세포. - 청구항 108에 있어서,
NK 세포가 줄기세포로부터 유래된 세포. - 청구항 105 또는 청구항 109에 있어서,
줄기세포가 다능성 줄기세포(pluripotent stem cell)인 세포. - 청구항 110에 있어서,
다능성 줄기세포가 배아 줄기세포(embryoid stem cell) 또는 유도 만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell)인 세포. - 청구항 1 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자.
- 청구항 1 내지 청구항 42 및 청구항 87 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자.
- 청구항 43 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자.
- 청구항 112 내지 청구항 114 중 어느 한 항에 있어서,
키메라 수용체에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 핵산 분자. - 청구항 115에 있어서,
프로모터가 내인성(endogenous) 또는 외인성(exogenous)인 핵산 분자. - 청구항 116에 있어서,
외인성 프로모터가 연장 인자(elongation factor, EF)-1 프로모터, 거대세포바이러스 즉시-초기 프로모터(cytomegalovirus immediate-early promoter)(CMV) 프로모터, 유인원 바이러스 40 초기 프로모터(simian virus 40 early promoter)(SV40) 프로모터, 포스포글리세레이트 키나제(phosphoglycerate kinase, PGK) 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터(metallothionein promoter) 및 유비퀴틴 C 프로모터(Ubiquitin C promoter)로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 분자. - 청구항 117에 있어서,
프로모터가 유도성 프로모터(inducible promoter)인 핵산 분자. - 청구항 118에 있어서,
유도성 프로모터가 NFAT 전사 반응 요소(transcriptional response element, TRE) 프로모터, CD69 프로모터, CD25 프로모터, IL-2 프로모터, 4-1BB 프로모터, PD1 프로모터 및 LAG3 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택되는 핵산 분자. - 청구항 116에 있어서,
프로모터가 내인성 프로모터인 핵산 분자. - 청구항 120에 있어서,
내인성 프로모터가 TCR 알파 프로모터(alpha promoter), TCR 베타 프로모터(beta promoter) 및 베타 2-마이크로글로불린 프로모터(beta 2-microglobulin promoter)로부터 선택되는 핵산 분자. - 청구항 113 및 청구항 114 내지 청구항 121 중 어느 한 항의 핵산 분자인 제1 핵산 분자 및 청구항 114 내지 청구항 121 중 어느 한 항의 핵산 분자인 제2 핵산 분자를 포함하는 핵산 조성물.
- 청구항 112 내지 청구항 121 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
- 청구항 122의 핵산 조성물을 포함하는 벡터.
- 청구항 123 또는 청구항 124에 있어서,
벡터가 바이러스 벡터인 벡터. - 청구항 125에 있어서,
바이러스 벡터가 레트로바이러스 벡터인 벡터. - 청구항 112 내지 청구항 121 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 세포.
- 청구항 122의 핵산 조성물을 포함하는 세포.
- 청구항 123 내지 청구항 126 중 어느 한 항의 벡터를 포함하는 세포.
- 청구항 127 내지 청구항 129 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 T 세포인 세포. - 청구항 127 내지 청구항 129 중 어느 한 항에 있어서,
세포가 자연 살해(NK) 세포인 세포. - 청구항 131에 있어서,
NK 세포가 줄기세포로부터 유래된 세포. - 청구항 90 내지 청구항 111 및 청구항 127 내지 청구항 132 중 어느 한 항의 세포를 포함하는 조성물.
- 청구항 133에 있어서,
약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물인 조성물. - 청구항 133 또는 청구항 134에 있어서,
약 25×106 내지 약 150×106개의 세포를 포함하는 조성물. - 청구항 133 내지 청구항 135 중 어느 한 항에 있어서,
약 25×106 내지 약 50×106개의 세포를 포함하는 조성물. - 청구항 133 내지 청구항 136 중 어느 한 항에 있어서,
약 2.5×106개의 세포를 포함하는 조성물. - 청구항 90 내지 청구항 111 및 청구항 127 내지 청구항 132 중 어느 한 항의 세포 또는 청구항 133 내지 청구항 137 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 종양 부담(tumor burden)을 감소시키는 방법.
- 청구항 138에 있어서,
대상체에서 종양 세포의 수를 감소시키고/거나 종양 크기를 감소시키고/거나 종양을 근절시키는 방법. - 청구항 90 내지 청구항 111 및 청구항 127 내지 청구항 132 중 어느 한 항의 세포 또는 청구항 133 내지 청구항 137 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 종양이 있는 대상체의 생존을 증가시키거나 연장시키는 방법.
- 청구항 90 내지 청구항 111 및 청구항 127 내지 청구항 132 중 어느 한 항의 세포 또는 청구항 133 내지 청구항 137 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 종양을 치료 및/또는 예방하는 방법.
- 청구항 138 내지 청구항 141 중 어느 한 항에 있어서,
종양이 ADGRE2 및/또는 CLEC12A를 발현하는 방법. - 청구항 138 내지 청구항 142 중 어느 한 항에 있어서,
종양이 암인 방법. - 청구항 138 내지 청구항 143 중 어느 한 항에 있어서,
종양이 혈액암(blood cancer)인 방법. - 청구항 144에 있어서,
종양이 다발성 골수종(multiple myeloma), 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma) 및 골수성 악성 종양(myeloid malignancies)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법. - 청구항 145에 있어서,
백혈병이 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 만성 골수성 백혈병(chronic myeloid leukemia, CML), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 전골수구성 백혈병(acute promyelocytic leukemia, APL), 혼합 표현형 급성 백혈병(mixed-phenotype acute leukemia, MLL), 털세포 백혈병(hairy cell leukemia) 및 B 세포 전림프구성 백혈병(B cell prolymphocytic leukemia)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법. - 청구항 146에 있어서,
백혈병이 급성 골수성 백혈병(AML)인 방법. - 청구항 147에 있어서,
AML이 재발성/불응성 급성 골수성 백혈병(relapsed/refractory acute myeloid leukemia, R/R AML)인 방법. - 청구항 145에 있어서,
골수성 악성 종양이 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome, MDS), 골수증식성 신생물(myeloproliferative neoplasm, MPN), 골수/림프 신생물(myeloid/lymphoid neoplasm)(예를 들어, 호산구 증가증(eosinophilia) 및 혈소판 유래 성장 인자 수용체 알파(Platelet Derived Growth Factor Receptor Alpha, PDGFRA), 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(Platelet Derived Growth Factor Receptor Beta, PDGFRB) 또는 섬유아세포 성장 인자 수용체 1(Fibroblast Growth Factor Receptor 1, FGFR1)의 재배열을 동반하거나 PCM1-JAK2를 동반한 골수/림프 신생물), 급성 골수성 백혈병(AML), 모세포 형질세포양 수지상 세포 종양(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm), B 림프모구성 백혈병(B-lymphoblastic leukemia)/림프종 및 T-림프모구성 백혈병(T-lymphoblastic leukemia)/림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법. - 청구항 149에 있어서,
골수성 악성 종양이 골수이형성 증후군(MDS)을 포함하는 방법. - 청구항 138 내지 청구항 150 중 어느 한 항에 있어서,
대상체가 인간 대상체인 방법. - 청구항 1 내지 청구항 90 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 청구항 1 내지 청구항 90 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 포함하는 세포를 생성하는 방법.
- 청구항 1 내지 청구항 42 및 청구항 87 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체 및 청구항 43 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 청구항 1 내지 청구항 42 및 청구항 87 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체 및 청구항 43 내지 청구항 89 중 어느 한 항의 키메라 수용체를 포함하는 세포를 생성하는 방법.
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