KR20230165911A - 항-tigit 항체를 사용한 암의 치료 방법 - Google Patents

항-tigit 항체를 사용한 암의 치료 방법 Download PDF

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앨리슨 스미스
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Abstract

항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 항-TIGIT 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

항-TIGIT 항체를 사용한 암의 치료 방법
관련 출원에 대한 교차 참조
본원은 2021년 4월 9일에 출원된 미국 가출원 제63/173,216호의 우선권을 주장하며, 이는 어떤 목적으로든 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.
분야
항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 항-TIGIT 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
TIGIT("Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체")는 활성화된 T 세포, 기억 T 세포, 조절 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포와 같은 T 세포의 서브세트에서 발현되는 면역 세포 연관체이다. TIGIT는 Ig 슈퍼패밀리 단백질 내 CD28 패밀리의 구성원이며 T 세포 증식 및 활성화와 NK 세포 기능을 제한하는 공동 억제 분자 역할을 한다. TIGIT는 동일한 리간드 세트: CD155(폴리오바이러스 수용체 또는 "PVR"로도 알려짐) 및 CD112(폴리오바이러스 수용체 관련 2 또는 "PVRL2"로도 알려짐)에 대해 CD226(DNAX 액세서리 분자-1 또는 "DNAM-1"이라고도 함)과 경쟁하여 면역억제 효과를 매개한다. Levin 등, Eur. Immunol., 2011, 41:902-915. TIGIT에 대한 CD155의 친화력은 CD226에 대한 친화력보다 높기 때문에 TIGIT 존재 시 CD226 신호 전달이 억제되어 T 세포 증식 및 활성화가 제한된다.
흑색종과 같은 특정 암이 있는 환자의 경우, TIGIT 발현은 종양 항원(TA) 특이적 CD8+ T 세포 및 CD8+ 종양 침윤 림프구(TIL)에서 상향조절된다. TIGIT 리간드(CD155) 발현 세포의 존재 하에서 TIGIT를 차단하면 TA 특이적 CD8+ T 세포와 CD8+ TIL 모두의 증식, 사이토카인 생산 및 탈과립화가 증가한다. Chauvin 등, J Clin Invest., 2015, 125:2046-2058. 따라서, TIGIT는, 단일요법이든 다른 제제(예를 들어, 항체)와 병용하여 TIGIT를 차단하고 항종양 반응을 촉진하는 개선된 방법에 대한 필요성과 항-TIGIT를 사용하여 암을 치료하는 개선된 방법에 대한 필요성이 남아 있지만, 환자의 항종양 T 세포 반응을 자극하기 위한 잠재적인 치료 표적을 나타낸다.
항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 항-TIGIT 항체를 사용하여 암을 치료하는 개선된 방법이 제공된다.
구현예 1. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 암 샘플 내 PD-L1의 수준은 복합 양성 점수(CPS)로 측정 시 10 미만, 또는 총 비율 점수(TPS)로 측정 시 50% 미만, 또는 종양 세포 점수(TC)로 측정 시 50% 미만, 또는 종양 침윤 면역 세포 염색(IC)로 측정 시 10% 미만이고, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
구현예 2. 구현예 1의 방법에 있어서, 암은 CPS로 측정 시 5 미만, 3 미만, 또는 1 미만인 PD-L1의 수준을 발현한다.
구현예 3. 구현예 1 또는 구현예 2의 방법에 있어서, 암은 TPS로 측정 시 40% 미만, 또는 30% 미만, 또는 20% 미만, 또는 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 발현한다.
구현예 4. 구현예 1 내지 3 중 어느 하나의 방법에 있어서, 암은 TC로 측정 시 40% 미만, 또는 30% 미만, 또는 20% 미만, 또는 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 발현한다.
구현예 5. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 방법에 있어서, 암은 IC로 측정 시 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 발현한다.
구현예 6. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에 있어서,
a) 암은 비소세포 폐암이고 TPS는 < 1%이거나;
b) 암은 두경부 편평 세포 암(HNSCC)이고 CPS는 < 1%이거나;
c) 암은 요로상피 암종이고 CPS는 < 10이거나;
d) 암은 위암이고 CPS는 < 1이거나;
e) 암은 식도암이고 CPS는 < 10이거나;
f) 암은 자궁경부암이고 CPS는 < 1이거나; 또는
g) 암은 삼중 음성 유방암이고, CPS는 < 10이다.
구현예 7. 구현예 6의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
구현예 8. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에 있어서, 암은 비소세포 폐암이고, TPS는 < 50%이다.
구현예 9. 구현예 8의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이다.
구현예 10. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에 있어서,
a) 암은 요로상피 암종이고 IC는 < 5%이거나;
b) 암은 삼중 음성 유방암이고 IC는 < 1%이거나; 또는
c) 암은 비소세포 폐암이고 IC는 < 10%이거나; 또는
d) 암은 비소세포 폐암이고 TC < 50%이다.
구현예 11. 구현예 10의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 아테졸리주맙이다.
구현예 12. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
구현예 13. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
구현예 14. 구현예 12 또는 구현예 13의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다.
구현예 15. 구현예 12 내지 14 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항체의 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮은 용량을 포함한다.
구현예 16. 구현예 15의 방법에 있어서, 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 단일요법 용량의 5% 내지 90%, 또는 5% 내지 80%, 또는 5% 내지 70%, 또는 5% 내지 60%, 또는 5% 내지 50%, 또는 5% 내지 40%, 또는 5% 내지 30%인 항체의 용량이다.
구현예 17. 구현예 14 내지 16 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 단일요법 용량은 200 mg 또는 400 mg이다.
구현예 18. 구현예 14 내지 16 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 단일요법 용량은 240 mg, 360 mg, 또는 480 mg이다.
구현예 19. 구현예 14 내지 16 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이고, 단일요법 용량은 350 mg이다.
구현예 20. 구현예 14 내지 16 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이고, 단일요법 용량은 800 mg이다.
구현예 21. 구현예 14 내지 16 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 단일요법 용량은 10 mg/kg 또는 1500 mg이다.
구현예 22. 구현예 14 내지 16 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 단일요법 용량은 840 mg, 1200 mg, 또는 1680 mg이다.
구현예 23. 구현예 12 내지 22 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항체의 적정치료 이하 용량이 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다.
구현예 24. 구현예 23의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 단일요법 투여 빈도는 3주마다 또는 6주마다이다.
구현예 25. 구현예 24의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 단일요법 용량은 3주마다 200 mg 또는 6주마다 400 mg이다.
구현예 26. 구현예 23의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다 또는 3주마다 또는 4주마다이다.
구현예 27. 구현예 26의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 단일요법 용량은 2주마다 240 mg, 3주마다 360 mg, 또는 4주마다 480 mg이다.
구현예 28. 구현예 23의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이고, 단일요법 투여 빈도는 3주마다이다.
구현예 29. 구현예 23의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다이다.
구현예 30. 구현예 23의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다 또는 4주마다이다.
구현예 31. 구현예 30의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 단일요법 용량은 2주마다 10 mg/kg mg 또는 4주마다 1500 mg이다.
구현예 32. 구현예 23의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다, 3주마다 또는 4주마다이다.
구현예 33. 구현예 32의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 단일요법 용량은 2주마다 840 mg, 3주마다 1200 mg, 또는 4주마다 1680 mg이다.
구현예 34. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 방법에 있어서, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택된다.
구현예 35. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택된다.
구현예 36. 구현예 34 또는 구현예 35의 방법에 있어서, 요로상피암의 일차 치료이다.
구현예 37. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나의 방법에 있어서, 암은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다.
구현예 38. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다.
구현예 39. 구현예 37 또는 구현예 38의 방법에 있어서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및/또는 ALK 유전자의 돌연변이 및/또는 ROS1 유전자의 돌연변이를 포함한다.
구현예 40. 구현예 37 내지 39 중 어느 한 구현예의 방법에 있어서, 암은 비소세포 폐암이고, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및/또는 ALK 유전자의 돌연변이를 포함한다.
구현예 41. 구현예 40의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이거나; 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다.
구현예 42. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 중 적어도 하나에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
구현예 43. 구현예 42의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
구현예 44. 구현예 42의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
구현예 45. 구현예 42의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
구현예 46. 구현예 42의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
구현예 47. 구현예 42 내지 46 중 어느 한 항의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 FcγRIIb에 대한 결합이 감소된다.
구현예 48. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 중쇄 불변 영역에서 치환 S293D, A330L 및 I332E를 포함한다.
구현예 49. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 푸코실화되지 않는다.
구현예 50. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 조성물에서 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 푸코실화되지 않는다.
구현예 51. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 ADCC 및/또는 ADCP 활성이 향상된 Fc를 포함한다.
구현예 52. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다:
a) 서열번호: 7-9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
b) 서열번호: 10-13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
c) 서열번호: 14-16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
d) 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
e) 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
f) 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
구현예 53. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 다음의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR, 및 CDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18 및 19; 또는
b) 각각 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18 및 19; 또는
c) 각각 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18 및 19; 또는
d) 각각 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18 및 19; 또는
e) 각각 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18 및 19.
구현예 54. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1-5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
구현예 55. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 20-24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
구현예 56. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
구현예 57. 구현예 56의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항-TIGIT 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다.
구현예 58. 구현예 56 또는 구현예 57의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮은 용량을 포함한다.
구현예 59. 구현예 56 내지 58 중 어느 하나의 방법에 있어서, 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 단일요법 용량의 5% 내지 90%, 또는 5% 내지 80%, 또는 5% 내지 70%, 또는 5% 내지 60%, 또는 5% 내지 50%, 또는 5% 내지 40%, 또는 5% 내지 30%인 항-TIGIT 항체의 용량이다.
구현예 60. 구현예 56 내지 59 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량이 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항-TIGIT 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다.
구현예 61. 이전 구현예 중 어느 하나의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함한다.
구현예 62. 구현예 61의 방법에 있어서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, CT-011, BGB-A317, 세미플리맙, 신틸리맙, 티슬레리주맙, TSR-042, PDR001 또는 토리팔리맙으로부터 선택된다.
구현예 63. 구현예 1 내지 60 중 어느 한 구현예의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함한다.
구현예 64. 구현예 63의 방법에 있어서, 항-PD-L1 항체는 더발루맙, BMS-936559, 아테졸리주맙 또는 아벨루맙으로부터 선택된다.
도 1a 내지 도 1c는 완전 면역적격 마우스에서 성장한 100 mm3의 Renca 종양(도 1a), CT26 종양(도 1b) 및 MC38 종양(도 1c)의 면역 세포의 조성물을 보여준다.
도 2a 및 도 2b는 이들 종양에서의 PD-1(도 2a) 및 PD-L1(도 2b)의 mRNA 발현 수준을 보여준다.
도 3은 피하 동계 MC38 종양에 대한 적정치료 이하 용량의 항-PD-1 항체와 조합하여 뚜렷한 이펙터 기능을 갖는 Fc-백본을 갖는 적정치료 이하 용량의 항-TIGIT 항체를 사용한 치료에 대한 생체내 데이터를 보여준다.
도 4a 및 4b는 피하 동계 CT26 종양(도 4a) 또는 Renca 종양(도 4b)에 대해 적정치료 이하 용량의 항-PD-1 항체 또는 두 가지의 조합을 사용하여 푸코실화되지 않은 이펙터 기능이 향상된 항-TIGIT 항체인 적정치료 이하 용량의 SEA-TGT mIgG2a 항체(즉, 푸코실화되지 않은 인간 IgG1 백본에 해당하는 푸코실화되지 않은 마우스 IgG2a로 재포맷된 SEA-TGT 항체)를 사용한 치료에 대한 생체내 데이터를 보여준다.
도 5a 내지 도 5c는 피하 동계 MC38 종양(도 5a), CT26 종양(도 5b) 또는 Renca 종양(도 5c)에 대한 치료 용량의 상이한 항-TIGIT 항체를 사용한 단일 제제 치료에 대한 생체내 반응 데이터를 보여준다. 도 5d 내지 도 5f는 다양한 동계 피하 종양 MC38(도 5d), CT26(도 5e) 또는 Renca(도 5f)에서 치료 용량의 항-PD-1 항체를 사용한 단일 제제 치료에 대한 생체내 반응 데이터를 보여준다.
I. 소개
본 발명은 부분적으로 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 암이 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합된 항-TIGIT 항체로 치료될 수 있다는 놀라운 발견에 기초한다. 이는 특히 향상된 Fc 결합 특징 및 이펙터 기능을 갖는 항-TIGIT 항체의 경우인 것으로 밝혀졌다. 원하는 Fc 결합 특징은 활성 예컨대 활성화 FcγR에 향상된 결합, 억제성 FcγR에 축소된 결합, 향상된 ADCC 활성, 및/또는 향상된 ADCP 활성을 포함하였다. 원하는 활성을 가진 이러한 특정 항체는 비푸코실화되었다.
이들 발견에 기초하여, 본 발명자들은, 암이 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 대상체에게 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 항-TIGIT 항체를 투여하면 종양 크기 및/또는 성장률의 감소를 초래한다는 것을 입증하였다. 일부 구현예에서, 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여될 수 있다. 다양한 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 향상된 Fc 결합 특징 및/또는 이펙터 기능을 갖는다.
따라서, 본원에 제공된 일부 구현예는 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법이고; 암은 복합 양성 점수 (CPS)으로 측정 시 10 미만 또는 총 비율 점수(TPS)로 측정 시 50% 미만인 PD-L1의 수준을 발현하고, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 항-TIGIT 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 항-TIGIT 항체 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 모두는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다.
II. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 및 과학 용어들은 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들면, Lackie, Dictionary of Cell and Molecular Biology, Elsevier (제4판. 2007); Sambrook 등, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989)를 참조한다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법, 장치 및 물질은 본 발명의 실시에서 사용될 수 있다.
본원에 사용된 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 2개 이상의 이러한 분자들의 조합 등을 임의로 포함한다.
본원에 사용된, 용어 "약"은 이 기술 분야에서 숙련가에게 쉽게 알려진 각각의 값에 대하여 일반적인 오차 범위를 지칭한다.
용어 "항체"는 온전한 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서 항원-결합 단편은 항원-결합 영역 및, CH2에 자리잡은, 아스파라긴 (N) 297을 포함하는 중쇄 불변 영역의 적어도 한 부분을 포함한다. 전형적으로, "가변 영역"은 항체의 항원-결합 영역을 함유하고 결합의 특이성 및 친화성에 연루된다. 문헌[Fundamental Immunology 제7판, Paul, ed., Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins (2013)]를 참조한다. 어느 한쪽 카파 또는 람다로서 전형적으로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로서 전형적으로 분류되고, 이는 차례로 면역글로불린 클래스, 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 정의한다.
용어 "항체"는 또한 2가 또는 이중특이적 분자, 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디를 포함한다. 2가 및 이중특이적 분자는 예를 들어 문헌[Kostelny 등 (1992) J. Immunol. 148:1547, Pack 및 Pluckthun (1992) Biochemistry 31:1579, Hollinger 등 (1993), PNAS. USA 90:6444, Gruber 등 (1994) J Immunol. 152:5368, Zhu 등 (1997) Protein Sci. 6:781, Hu 등 (1996) Cancer Res. 56:3055, Adams 등 (1993) Cancer Res. 53:4026, 및 McCartney, 등 (1995) Protein Eng. 8:301]에 기재된다.
"단클론성 항체"는 실질적으로 동질 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단클론성"은 항체의 실질적으로 동질 집단으로부터 수득되는 경우 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의해 항체의 생산을 요구하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되어야 하는 단클론성 항체는 Kohler 등 (1975) Nature 256:495에 의해 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 만들어질 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4816567, 참조)에 의해 만들어질 수 있다. "단클론성 항체"는 또한 문헌[Clackson 등 (1991) Nature, 352:624-628 및 Marks 등 (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기재된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 또한 단리될 수 있거나, 예를 들어 다른 방법에 의해 만들어질 수 있다. 본원에 기재된 항체는 단클론성 항체이다.
단클론성 항체의 이의 표적 항원에의 특이적 결합은 적어도 106, 107, 108, 109, 또는 1010 M-1의 친화성을 의미한다. 특이적 결합은 크기가 검출가능하게 더 크고 적어도 하나의 관련없는 표적에 발생하는 비-특이적 결합과 구별할 수 있다. 특이적 결합은 특정한 작용기 또는 특정한 공간적 적합성 (예를 들면, 잠금 및 키 유형) 사이 결합의 형성의 결과일 수 있는 반면 비특이적 결합은 보통 반 데르 발스 힘의 결과이다.
기본적 항체 구조적 단위는 서브유닛의 사량체이다. 각 사량체는, 각 쌍이 1개의 "경"쇄 (약 25 kDa) 및 1개의 "중"쇄 (약 50-70 kDa)를 갖는, 폴리펩티드 쇄의 2개 동일 쌍을 포함한다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 이 가변 영역은 절단가능한 신호 펩티드에 연결되어 초기에 발현된다. 신호 펩티드가 없는 가변 영역은 때때로 성숙한 가변 영역으로서 지칭된다. 따라서, 예를 들어, 경쇄 성숙한 가변 영역은 경쇄 신호 펩티드 없는 경쇄 가변 영역을 의미한다. 각 쇄의 카복시-말단 부분은 이펙터 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 정의한다.
어느 한쪽 카파 또는 람다로서 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로서 분류되고, 항체의 아이소타입을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로서 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 결합되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. (일반적으로, Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 제2판 Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7, 참조, 모든 목적을 위하여 이 전체가 참조로 편입됨).
각 경쇄/중쇄 쌍의 성숙한 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서 온전한 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 이작용적 또는 이중특이적 항체를 제외하고, 2개의 결합 부위는 동일하다. 쇄들은 모두, 상보성 결정 영역 또는 CDR이라고 하는, 3개의 초가변 영역에 의해 결합된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각 쌍의 2개 쇄로부터 CDR은 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프에 결합을 가능하게 한다. N-말단부터 C-말단까지, 양쪽 경쇄 및 중쇄는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에 아미노산의 할당은 Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 및 1991), 또는 Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia 등, Nature 342:878-883 (1989), 또는 카밧 및 초티아의 복합물, 또는 IMGT (ImMunoGeneTics 정보 시스템), AbM 또는 Contact의 정의나 CDR의 다른 종래 정의에 따른다. 카밧은 상이한 중쇄들 사이 또는 상이한 경쇄들 사이 상응하는 잔기들이 동일한 번호로 할당되는 널리 사용된 넘버링 규정 (카밧 넘버링)을 또한 제공한다. 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, 카밧 넘버링은 가변 영역에서 아미노산의 위치를 지정하는데 사용된다. 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한 EU 넘버링은 불변 영역에서 지정된 위치에 사용된다.
"인간화된" 항체는 인간에서 덜 면역원성이면서 비-인간 항체의 반응성을 유지하는 항체이다. 이는 예를 들어 비-인간 CDR 영역을 유지하고 항체의 나머지 부분을 인간 대응물으로 대체함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Morrison 등, PNAS USA, 81:6851-6855 (1984); Morrison 및 Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen 등, Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)]를 참조한다.
본원에 사용된 용어 "키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위 (가변 영역, CDR, 또는 이의 부분)가 상이한 종의 불변 영역에 연결되도록 불변 영역, 또는 이의 한 부분이 대체되는 항체 분자를 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상에서 한 부위를 지칭한다. 에피토프는 하나 이상의 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 연속 아미노산 또는 비연속 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 변성 용매에 노출시 전형적으로 유지되는 반면 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 변성 용매를 이용한 치료시 전형적으로 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 형태에서 적어도 3, 및 더욱 보통, 적어도 5 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 형태를 결정하는 방법은, 예를 들어, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)]를 참조한다.
동일한 또는 중첩 에피토프를 인식하는 항체는 표적 항원에 또 다른 항체의 결합과 경쟁하는 하나의 항체의 능력을 보여주는 단순 면역검정에서 식별될 수 있다. 항체의 에피토프는 접촉 잔기들을 식별하기 위해 이의 항원에 결합된 항체의 X-선 결정학에 의해 또한 정의될 수 있다. 대안적으로, 1개 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원에서 모든 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거한다면 2개 항체는 동일한 에피토프를 갖는다. 1개 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 것의 결합을 감소시키거나 제거한다면 2개 항체는 중첩 에피토프를 갖는다.
항체들 사이 경쟁은 시험 중인 항체가 공통 항원에 참조 항체의 특이적 결합을 억제시키는 검정에 의해 결정된다 (예를 들면 문헌[Junghans 등, Cancer Res. 50:1495, 1990] 참조). 과량의 시험 항체 (예를 들면, 적어도 2x, 5x, 10x, 20x 또는 100x)가 경쟁적 결합 검정에서 측정된 경우에 적어도 50% 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 99%만큼 참조 항체의 결합을 억제시킨다면 시험 항체는 참조 항체와 경쟁한다. 경쟁 검정에 의해 식별된 항체 (경쟁 항체)는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 그리고 입체 장애가 발생하도록 참조 항체에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근접하는 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
어구 "특이적으로 결합하다"는 비-표적 화합물에 결합하는 것보다 샘플에서 그 표적에 대한 더 큰 친화성, 결합력, 더욱 용이하게, 및/또는 더 긴 지속기간으로 표적에 결합하는 분자 (예를 들면, 항체 또는 항체 단편)를 지칭한다. 일부 구현예에서, 표적을 특이적으로 결합시키는 항체는 비-표적 화합물보다 적어도 2-배 더 큰 친화성, 예컨대, 예를 들어, 적어도 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 20-배, 25-배, 50-배, 또는 100-배 더 큰 친화성으로서 표적에 결합하는 항체이다. 예를 들어, TIGIT를 특이적으로 결합시키는 항체는 비-TIGIT 표적보다 적어도 2-배 더 큰 친화성으로서 TIGIT에 전형적으로 결합할 것이다. 예를 들어, 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)가 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있거나 그렇지 않을 수 있음이 이 정의를 읽는 당업자에 의해 이해될 것이다. 이와 같이, "특이적 결합"은 배타적 결합을 (포함할 수 있어도) 반드시 필요로 하지 않는다.
용어 "결합 친화성"은 2개 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 단편, 및 항원 사이 비-공유 상호작용의 강도의 척도로서 본원에 사용된다. 용어 "결합 친화성"은 1가 상호작용 (내재적 활성)을 설명하는데 사용된다.
2개 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 단편, 및 항원 사이 결합 친화성은, 1가 상호작용을 통해서 해리 상수 (KD)의 결정에 의해 정량화될 수 있다. 결과적으로, KD는, 비제한 예로서, 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 방법 (BiacoreTM)을 사용하여 복합체 형성 및 해리의 동역학의 측정에 의해 결정될 수 있다. 1가 복합체의 결합 및 해리에 상응하는 속도 상수는 각각 결합 속도 상수 k a (또는 k on ) 및 해리 속도 상수 k d (또는 k off )로서 지칭된다. KD는 방정식 KD = k d / k a 를 통해서 k a 및 k d 에 관련된다. 해리 상수의 값은 잘-알려진 방법에 의해 직접적으로 결정될 수 있고, 방법 예컨대, 예를 들어, 문헌[Caceci 등 (1984, Byte 9: 340-362)]에서 제시된 것들에 의해 복잡한 혼합물에 대하여 조차 컴퓨팅될 수 있다. 예를 들어, KD는 이중-필터 니트로셀룰로스 필터 결합 검정 예컨대 문헌[Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)]에 의해 개시된 것을 사용하여 확립될 수 있다. 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯, RIA, 및 유동 세포측정 분석, 그리고 본원에 다른 곳에 예시된 다른 검정을 포함하는, 표적 항원에 대한 리간드 예컨대 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 다른 표준 검정은 당업계에 알려진다. 항체의 결합 동역학 및 결합 친화성은 또한 당업계에서 알려진 또는 아래 실시예 섹션에서 기재된 대로 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해, 예를 들면 BiacoreTM 시스템; 동역학 배제 검정 예컨대 KinExA®; 및 BioLayer 간섭법 사용 (예를 들면, ForteBio® Octet 플랫폼 사용)에 의해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 친화성은 BioLayer 간섭법 검정을 사용하여 결정된다. 예를 들어, 문헌[Wilson 등, Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger 등, J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012); 및 Estep 등, Mabs, 2013, 5:270-278]를 참조한다.
본원에 사용된 용어 "교차-반응하다"는 항체가 길러진 항원 이외의 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 일부 구현예에서, 교차-반응성은 항체가 길러진 항원 이외의 또 다른 종으로부터 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 비-제한 예로서, 인간 TIGIT 항원에 대해 길러지는 항-TIGIT 항체는 본원에 기재된 경우에 상이한 종 (예를 들면, 마우스 또는 원숭이)으로부터 TIGIT와 교차-반응성을 나타낼 수 있다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 구성요소들로부터 식별되고 분리되고/거나 회수된 항체 및/또는 재조합적으로 생산되는 항체를 지칭한다. "정제된 항체"는 이의 생산 또는 정제에서 발생하는 방해 단백질 및 기타 오염물질의 적어도 50% w/w 순수하지만 단클론성 항체가 과량의 약학적으로 허용가능한 담체(들) 또는 이의 사용을 용이하게 하기 위한 기타 비히클과 조합되는 가능성을 배제하지 않는 항체이다. 방해 단백질 및 기타 오염물질은, 예를 들어, 항체가 단리되거나 재조합적으로 생산되는 세포의 세포성 구성요소를 포함할 수 있다. 때때로 단클론성 항체는 생산 또는 정제로부터 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95 또는 99% w/w 순수한 방해 단백질 및 오염물질이다. 랫트, 키메라, 베니어 및 인간화된 항체를 포함하는, 본원에 기재된 항체는 단리된 및/또는 정제된 형태로 제공될 수 있다.
"복합 양성 점수" 또는 "CPS"는 암, 예를 들어 암의 종양 샘플에서 PD-L1 발현을 측정하는 면역조직화학적 방법이다. CPS는 PD-L1 염색 세포(종양 세포, 림프구, 대식세포)의 수를 생존 가능한 종양 세포의 총 수로 나눈 값에 100을 곱한 값이다. 일부 요법적 치료의 경우, CPS ≥ 1인 경우 종양 샘플에서 PD-L1 발현이 있는 것으로 간주된다. 예를 들어, 위암, 자궁경부암, 두경부 편평 세포 암이 있는 대상체와 같은 특정 PD-1 또는 PD-L1 억제제 요법에 적격인 대상체에게 CPS ≥ 1이 필요하다. 일부 경우에, 펨브롤리주맙으로 치료되는 요로상피암(방광암), 식도 편평 세포 암종(ESCC) 또는 삼중 음성 유방암이 있는 대상체와 같은 특정 PD-1 또는 PD-L1 억제제 요법에 적격인 대상체에게 CPS ≥ 10이 필요하다.
"종양 비율 점수" 또는 "TPS"는 암, 예를 들어 암의 종양 샘플에서 PD-L1 발현을 측정하는 면역조직화학적 방법이다. TPS는 어떤 강도에서든 부분적 또는 완전한 막 염색을 보이는 생존 가능한 종양 세포의 백분율이다. 일부 요법적 치료의 경우, 종양 샘플은 TPS ≥ 1%이면 PD-L1 발현이 있고 TPS ≥ 50%이면 높은 PD-L1 발현이 있는 것으로 간주된다. 예를 들어, 비소세포 폐암이 있는 대상체와 같은 특정 PD-1 또는 PD-L1 억제제 요법(예를 들어, 펨브롤리주맙)에 적격인 대상체에게 TPS ≥ 1%가 필요하다. 일부 사례에서, 특정 PD-1 또는 PD-L1 억제제 요법 (예를 들어, 세미플리맙)에 적격인 대상체에게 TPS ≥ 50%가 필요하다.
종양 침윤 면역 세포(IC) 염색 또는 "IC"는 예를 들어 암의 종양 샘플에서 PD-L1 발현을 측정하는 면역조직화학적 방법이다. 발현은 임의의 강도의 PD-L1 염색 IC가 차지하는 종양 면적의 비율로 측정된다. 시편에 종양 면적의 ≥ 5%를 차지하는 종양 침윤 면역 세포에서 임의의 강도의 PD-L1 염색이 함유되어 있는 경우, 시편에는 ≥ 5% IC의 PD-L1 발현 수준이 지정된다. 시편에 종양 면적의 < 5%를 포함하는 종양 침윤 면역 세포에서 임의의 강도의 PD-L1 염색이 함유되어 있는 경우, 시편에는 < 5% IC의 PD-L1 발현 수준이 지정된다. 일부 요법적 치료의 경우, IC는 요로상피 암종 조직에서 PD-L1 발현을 점수화하는 데 사용된다. 절제술, 방광 종양의 경요도 절제술(TURBT), 원발성 부위와 전이성 부위 모두의 중심 바늘 생검에서 얻은 요로상피 암종 조직 샘플을 IC 검정에 사용할 수 있다. 상업적으로 입수 가능한 IC 검정에는 Ventana PD-L1(SP142) AssayTM이 포함된다.
종양 세포 또는 "TC" 점수는 모든 강도의 PD-L1 발현 종양 세포의 백분율(%TC)을 나타내며 TPS와 유사하다. 일부 구현예에서, TC 점수는 Ventana PD-L1(SP142) 검정을 사용하여 획득된다. 예를 들어 NSCLC 환자가 아테졸리주맙(TECENTRIQ)으로 치료를 받을 때 TC 점수가 사용된다. 이 적응증에서, 치료 역치는 TC 점수 ≥50%이다. TC 평점에 대한 추가 정보는 다음에서 이용가능할 수 있다: 1) Physician Labeling: Ventana PD-L1 (SP142) Assay (2020) Ventana Medical Systems, Inc. 및 Roche Diagnostics International, Inc.; 및 2) Ventana PD-L1 (SP142) Assay: Interpretation Guide (2019) Ventana Medical Systems, Inc. 및 Roche Diagnostics International, Inc.
"대상체", "환자", "개체" 및 유사 용어는 교환가능하게 사용되고, 표시된 경우를 제외하고, 포유동물 예컨대 인간 및 비-인간 영장류, 뿐만 아니라 토끼, 랫트, 마우스, 염소, 돼지 및 기타 포유류 종을 지칭한다. 본 용어는 대상체가 특정한 질환으로 진단된 것을 반드시 나타내지 않지만, 전형적으로 의료 감독 중인 개체를 지칭한다.
용어들 "요법", "치료", 및 "호전"은 증상들의 중증도에서 임의의 감소를 지칭한다. 암을 치료하는 경우에서, 치료는, 예를 들면, 종양 크기, 암 세포의 수, 성장 속도, 전이성 활성, 비-암 세포의 세포사, 등을 감소시키는 것을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 용어들 "치료하다" 및 "예방하다"는 절대 용어이도록 의도되지 않는다. 치료 및 예방은 발병에서의 임의의 지연, 증상의 호전, 환자 생존에서의 개선, 생존 시간 또는 속도에서의 증가, 등을 지칭할 수 있다. 치료 및 예방은, 증상이 본원에 기재된 치료 없이 환자에서 보다 덜 빈번하거나 중증이도록, 완전하거나 (감지할 수 있는 증상이 남지 않음) 부분적일 수 있다. 치료의 효과는 치료를 받지 않은 개체 또는 개체들의 풀과, 또는 치료에 앞서 또는 치료 동안 상이한 시간에 동일한 환자와 비교될 수 있다. 일부 양태에서, 질환의 중증도는, 예를 들면, 투여전 개체와 또는 치료를 받지 않은 대조군 개체와 비교해서 적어도 10%만큼 감소된다. 일부 양태에서, 질환의 중증도는 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 또는 90%만큼 감소되거나, 일부 경우에, 표준 진단적 기법을 사용하여 더 이상 검출할 수 없다.
본원에 사용된, 제제 (예를 들면, 본원에 기재된 경우에 항체)의 "치료적 양" 또는 "치료적으로 유효량"은 대상체에서 질환 (예를 들면, 암)의 증상의 중증도를 예방, 경감, 완화, 호전, 또는 감소시키는 제제의 양이다.
본원에 사용된 바와 같이, 제제(예를 들어, 본원에 기재된 항체)의 "적정치료 이하 양" 또는 "적정치료 이하 용량"은 제제가 동일한 유형 또는 하위 유형의 암과 같은 동일한 적응증을 치료하기 위해 단일요법으로 사용될 때 투여되는 용량보다 적은 제제의 용량이다. 적정치료 이하 용량은 단일요법 용량의 덜 빈번한 투여를 포함할 수 있어, 대상체가 전체적으로 더 낮은 용량의 제제를 받게 된다.
용어들 "투여하다", "투여된", 또는 "투여하기"는 제제, 화합물, 또는 조성물을 생물학적 작용의 원하는 부위에 전달하는 방법을 지칭한다. 이들 방법은, 비제한적으로, 국부 전달, 비경구 전달, 정맥내 전달, 진피내 전달, 근육내 전달, 결장 전달, 직장 전달, 또는 복강내 전달을 포함한다. 본원에 기재된 제제 및 방법과 임의로 이용되는 투여 기법은, 예를 들면, Goodman 및 Gilman에 논의된 대로, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; 및 Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, PA를 포함한다.
III. PD-L1의 발현 수준
대상체의 암에서 PD-L1의 발현 수준은 임의의 조성물을 투여하기 전에 또는 본원에 개시된 임의의 방법을 활용하기 전에 측정될 수 있다. 발현 수준은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다.
PD-L1의 발현 수준을 평가하기 위해, 일부 구현예에서, 암 조직 샘플은 요법이 필요한 대상체로부터 얻어질 수 있다. 다른 구현예에서, PD-L1의 발현 수준의 평가는 암 조직 샘플을 획득하지 않고도 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 적합한 대상체를 선택하는 것은 (i) 선택적으로 대상체로부터 얻은 암 조직 샘플을 제공하는 단계로서, 암 조직 샘플은 암 세포 및/또는 암 침윤성 염증 세포를 포함하는 단계; 및 (ii) 세포 표면에서 PD-L1을 발현하는 암 조직 샘플 내 세포의 비율을 평가하는 단계를 포함한다.
그러나 암 조직 샘플에서 PD-L1 발현의 측정을 포함하는 임의의 방법에서, 대상체로부터 얻은 암 조직 샘플의 제공을 포함하는 단계는 선택적인 단계라는 것이 이해되어야 한다. 특정 구현예에서 세포 표면에서 PD-L1을 발현하는 암 조직 샘플 내 세포의 수 또는 비율을 확인하거나 결정하기 위한 "측정" 또는 "평가" 단계가 예를 들어 역전사효소-중합효소 연쇄 반응 (RT-PCR) 검정 또는 면역조직화학 (IHC) 검정을 수행함으로써 PD-L1 발현에 대한 검정의 변환적 방법에 의해 수행된다는 것도 이해해야 한다. 일부 구현예에서, 변환적 단계는 수반되지 않으며 PD-L1 발현은 예를 들어 실험실의 시험 결과 보고서를 검토함으로써 평가된다. 특정 구현예에서, PD-L1 발현 평가를 포함하는 방법의 단계는 치료를 위한 적합한 대상체를 선택하는 데 사용하기 위해 의사 또는 다른 건강관리 제공자에게 제공될 수 있는 중간 결과를 제공한다. 특정 구현예에서, 중간 결과를 제공하는 단계는 의료 종사자 또는 의료 종사자의 지시에 따라 행동하는 누군가에 의해 수행된다. 다른 구현에서, 이러한 단계는 독립적인 실험실 또는 실험실 기술자와 같은 독립적인 사람에 의해 수행된다.
일부 구현예에서, PD-L1을 발현하는 세포의 비율은 PD-L1 RNA의 존재를 결정하는 검정을 수행함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, PD-L1 RNA의 존재는 RT-PCR, 제자리 혼성화 또는 RNase 보호에 의해 결정된다. 다른 구현예에서, PD-L1을 발현하는 세포의 비율은 PD-L1 폴리펩티드의 존재를 결정하는 검정을 수행함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, PD-L1 폴리펩티드의 존재는 IHC 검정, 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 생체내 영상화 또는 유동 세포측정에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, PD-L1 발현은 IHC 검정에 의해 결정된다. 문헌[Chen 등, (2013) Clin. Cancer Res. 19(13): 3462-3473] 참조.
영상화 기술은 암 연구 및 치료에 중요한 도구를 제공하였다. 양전자 방출 단층촬영 (PET), 단일-광자 배출 전산화단층촬영법 (SPECT), 형광 반사율 영상화 (FRI), 형광 매개 단층촬영 (FMT), 생물발광 영상화 (BLI), 레이저-스캐닝 공초점 현미경검사 (LSCM) 및 다광자 현미경검사 (MPM)을 포함한 분자 영상화 시스템의 최근 개발은 암 연구에서 이러한 기술을 훨씬 더 많이 사용할 수 있음을 예고할 수 있다. 이러한 분자 영상화 시스템 중 일부를 사용하면 임상의는 암이 신체 어디에 있는지 확인할 수 있을 뿐만 아니라 암 행동 및/또는 치료 약물에 대한 반응에 영향을 미치는 특정 분자, 세포 및 생물학적 과정의 발현과 활동을 시각화할 수 있다 (Condeelis 및 Weissleder, In vivo imaging in cancer, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2(12): a003848 (2010)). PET의 민감도 및 해상도와 커플링된 항체 특이성은 조직 샘플에서 항원의 발현을 모니터링하고 검정하는 데 특히 immunoPET 이미징을 매력적으로 만든다(McCabe 및 Wu, Positive Progress inimmunoPET―단지 우연이 아님, Cancer Biother. Radiopharm. 25(3):253-61 (2010); Olafsen 등, ImmunoPET imaging of B-cell lymphoma using 124I-anti-CD20 scFv dimers (diabodies), Protein Eng. Des. Sel. 23(4):243-9 (2010)). 특정 구현예에서, PD-L1 발현은 immunoPET 영상화에 의해 검정된다. 특정 구현예에서, 암 조직 샘플 중 PD-L1을 발현하는 세포의 비율은 암 조직 샘플 중 세포 표면 상의 PD-L1 폴리펩티드의 존재를 결정하는 검정을 수행함으로써 평가된다. 특정 구현예에서, 암 조직 샘플은 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직 샘플이다. 다른 구현예에서, PD-L1 폴리펩티드의 존재는 IHC 검정에 의해 결정된다. 추가 구현예에서, IHC 검정은 자동화 프로세스를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, IHC 검정은 PD-L1 폴리펩티드에 결합하는 항-PD-L1 단클론성 항체를 사용하여 수행된다.
일부 구현예에서, 자동화 IHC 방법을 사용하여 FFPE 조직 시편의 세포 표면에서 PD-L1의 발현을 검정한다. 본 개시내용은 암 조직 샘플에서 인간 PD-L1 항원의 존재를 검출하거나, 인간 PD-L1 항원의 수준 또는 항원을 발현하는 샘플에서 세포의 비율을 정량화하는 방법을 제공하며, 이 방법은 항체 또는 이의 일부와 인간 PD-L1 사이에 복합체가 형성될 수 있는 조건 하에서 테스트 샘플 및 음성 대조군 샘플을 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 시험 및 대조 조직 샘플은 FFPE 샘플이다. 이어서, 복합체 형성이 검출되는데, 여기서 테스트 샘플과 음성 대조군 샘플 사이의 복합체 형성의 차이는 샘플 내 인간 PD-L1 항원의 존재를 나타낸다. PD-L1 발현을 정량화하기 위해 다양한 방법이 사용된다.
일부 구현예에서, 자동화 IHC 방법은 (a) 자동염색기에서 장착된 조직 절편을 탈파라핀화하고 재수화시키는 단계; (b) 10분 동안 110℃로 가열된 클로킹 해제 챔버 및 pH 6 완충액을 사용하여 항원을 회수하는 단계; (c) 자동 염색기에 시약을 설정하는 단계; (d) 자동염색기를 작동하여 조직 시편의 내인성 퍼옥시다제를 중화시키는 단계; 슬라이드의 비특이적 단백질 결합 부위를 차단하는 단계; 슬라이드를 일차 항체와 함께 인큐베이팅하는 단계; 일차 후 차단제와 함께 인큐베이팅하는 단계; NovoLink Polymer와 함께 인큐베이팅하는 단계; 색원체 기질을 첨가하고 현상하는 단계; 그리고 헤마톡실린으로 대조염색을 수행하는 단계를 포함한다.
암 조직 샘플에서 PD-L1 발현을 평가하기 위해, 병리학자는 각 분야의 막 PD-L1+ 암 세포 수를 현미경으로 조사하고 양성인 세포의 백분율을 정신적으로 추정한 다음, 평균을 내어 최종 백분율에 도달할 수 있다. 다양한 염색 강도는 0/음성, 1+/약함, 2+/중간, 3+/강함으로 정의될 수 있다. 백분율 값은 먼저 0과 3+ 버킷에 할당된 다음, 중간 1+ 및 2+ 강도를 고려할 수 있다. 매우 이종인 조직의 경우, 시편을 구역으로 나눌 수 있으며, 각 구역은 별도로 점수를 매긴 다음, 단일 백분율 값 세트로 결합할 수 있다. 상이한 염색 강도에 대한 음성 및 양성 세포의 백분율은 각 영역에서 결정되고 중앙값은 각 구역에 제공된다. 최종 백분율 값은 각 염색 강도 범주: 음성, 1+, 2+ 및 3+에 대해 조직에 제공될 수 있다. 모든 염색 강도의 합은 100%일 수 있다.
염색은 또한 대식세포 및 림프구와 같은 암 침윤 염증 세포에서도 평가된다. 대부분의 경우 대식세포는 많은 비율의 대식세포에서 염색이 관찰되므로 대식세포는 내부 양성 대조군 역할을 한다. 3+ 강도로 염색할 필요는 없지만, 임의의 기술적 오류를 배제하기 위해 대식세포 염색이 없는 것을 고려할 수 있다. 대식세포와 림프구는 원형질 막 염색에 대해 평가될 수 있으며 모든 샘플에 대해서만 각 세포 범주에 대해 양성 또는 음성으로 기록된다. 염색은 또한 외부/내부 암 면역 세포 지정에 따라 특성화된다. "내부"는 면역 세포가 암 조직 내에 및/또는 암 세포 사이에 물리적으로 삽입되지 않고 암 영역의 경계에 있음을 의미한다. "외부"는 암과 물리적 연관성이 없으며 면역 세포가 결합 또는 임의의 연관된 인접 조직과 연관된 주변에서 발견됨을 의미한다.
이러한 평점 방법의 특정 구현예에서, 샘플은 독립적으로 작동하는 2명의 병리학자에 의해 평점되고, 이어서 점수가 통합된다. 특정한 다른 구현예에서, 양성 세포와 음성 세포의 식별은 적절한 소프트웨어를 사용하여 점수가 매겨진다.
히스토스코어는 IHC 데이터를 보다 정량적으로 측정하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 히스토스코어는 다음과 같이 계산될 수 있다: 히스토스코어 = [(% 암 Х 1(낮은 강도)) + (% 암 Х 2(중간 강도)) + (% 암 Х 3(높은 강도)]
일부 구현예에서, 히스토스코어를 결정하기 위해, 병리학자는 시편 내의 각 강도 범주에서 염색된 세포의 백분율을 추정할 수 있다. 대부분의 바이오마커의 발현은 이질적이므로 히스토스코어는 전체 발현을 더욱 정확하게 표현할 수 있다. 최종 히스토스코어 범위는 0(발현 없음)부터 300(최대 발현)까지이다.
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 염증 밀도에 암 침윤 염증 세포에 의한 PD-L1 발현 백분율을 곱하여 정의되는 조정 염증 점수(AIS) 점수를 결정하는 것이다. 문헌[Taube 등, Colocalization of inflammatory response with B7-hl expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape, Sci. Transl. Med. 4(127):127ra37 (2012))].
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 복합 양성 점수(CPS)를 결정하는 것이며, 이는 전술한 바와 같이 PD-L1 염색 세포(종양 세포, 림프구, 대식세포)의 수를 생존 가능한 종양 세포의 총 수로 나눈 후 100을 곱한 값이다. 일부 요법적 치료의 경우, CPS ≥ 1인 경우 종양 샘플에서 PD-L1 발현이 있는 것으로 간주된다. 예를 들어, 펨브롤리주맙으로 치료되는 요로상피암(방광암), 식도 편평 세포 암종(ESCC) 또는 삼중 음성 유방암이 있는 대상체와 같은 특정 PD-1 또는 PD-L1 억제제 요법에 적격인 대상체에게 CPS ≥ 10이 필요하다.
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 전술한 바와 같이 임의의 강도에서 부분적 또는 완전한 막 염색을 나타내는 생존 종양 세포의 백분율인 종양 비율 점수(TPS)를 결정하는 것이다. 일부 요법적 치료의 경우, 종양 샘플은 TPS ≥ 1%이면 PD-L1 발현이 있고 TPS ≥ 50%이면 높은 PD-L1 발현이 있는 것으로 간주된다.
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하기 위한 수단은 종양 세포(TC) 점수를 결정하는 것이다. 일부 요법적 치료의 경우, TC ≥50%인 경우 종양 샘플에서 PD-L1 발현이 있는 것으로 간주된다.
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하기 위한 수단은 종양 침윤 면역 세포(IC) 점수를 결정하는 것이다. 일부 요법적 치료의 경우, 시편에 종양 면적의 ≥ 5%를 차지하는 종양 침윤 면역 세포에서 임의의 강도의 PD-L1 염색이 함유되어 있는 경우 종양 샘플에 PD-L1 발현이 있는 것으로 간주된다.
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 Agilent(Dako) PD-L1 IHC 223 pharmDx AssayTM이며, 이에 대한 설명은 다음 중 적어도 하나에서 찾을 수 있다: 1) Physician Labeling, Dako PD-L1 IHC 22C3 pharmDx, Dako North America, Inc., Carpinteria, CA; 2) Keytruda package insert (2021) Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ; 3) PD-L1 IHC 22C3 pharmDx Instructions for Use (2020) Dako, Agilent Pathology Solutions, Carpinteria, CA; 4) Garon EB, Rizvi NA, Hui R, 등 Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer, N. Engl. J. Med. 372(21):2018-2028 (2015); 및 5) Roach C, Zhang N, Corigliano E, 등 Development of a companion diagnostic PD-L1 immunohistochemistry assay for pembrolizumab therapy in non-small-cell lung cancer, Appl Immunohistochem Mol. Morphol. 24:392-397 (2016).
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 Agilent(Dako) PD-L1 IHC 28-8 pharmDx AssayTM이며, 이에 대한 설명은 다음 중 적어도 하나에서 찾을 수 있다: 1) Physician Labeling, Dako PD-L1 IHC 28-8 pharmDx (2020) Dako North America, Inc., Carpinteria, CA; 2) OPDIVO package insert (2021) Bristol Myers Squibb, New York, NY; 3) PD-L1 IHC 28-8 pharm Dx: Interpretation Manual (2021), Dako, Agilent Pathology Solutions, Carpinteria, CA; 및 4) Phillips T, Simmons P, Inzunza HD, Cogswell J, Novotny J Jr, Taylor C, 등 Development of an automated PD-L1 immunohistochemistry (IHC) assay for non-small cell lung cancer, Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. 23:541-9 (2015).
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 Agilent(Dako) PD-L1 IHC 73-10 AssayTM이며, 이에 대한 설명은 다음 중 적어도 하나에서 찾을 수 있다: 1) Hans, J.G. 등 PD-L1 Immunohistochemistry Assay Comparison Studies in Non-Small Cell Lung Cancer: Characterization of the 73-10 Assay, J. Thoracic Oncology 15:1306-1316 (2020); 및 2) Bavencio package insert (2021) EMD Serono, Inc. Rockland, MA 및 Pfizer Inc., New York, NY.
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 Ventana PD-L1 (SP142) AssayTM이며, 이에 대한 설명은 다음 중 적어도 하나에서 찾을 수 있다: 1) Physician Labeling: Ventana PD-L1 (SP142) Assay (2020) Ventana Medical Systems, Inc. 및 Roche Diagnostics International, Inc.; 2) Tecentriq package insert (2021) Genentech, Inc., South San Francisco, CA; 3) Ventana PD-L1 (SP142) Assay: Interpretation Guide (2019) Ventana Medical Systems, Inc. 및 Roche Diagnostics International, Inc.; 및 4) Vennapusa 등, Development of a PD-L1 Complementary Diagnostic Immunochemistry Assay (SP142) for Atezolizumab, Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. 27:92-100 (2019).
일부 구현예에서, 암에서 PD-L1 발현을 정량화하는 수단은 Ventana PD-L1 (SP263) AssayTM이며, 이에 대한 설명은 다음 중 적어도 하나에서 찾을 수 있다: 1) Physician Labeling: Ventana PD-L1 (SP263) Assay (2017) Ventana Medical Systems, Inc., Tucson, AZ; 2) Imfinzi package insert (2021), AstraZeneca Pharmaceuticals LP, Wilmington, DE; 및 3) Ventana PD-L1 (SP263) Assay Staining: Interpretation Guide (2019) Roche Diagnostics GmbH, Munich, DE.
아래 표 1은 상기 검정, 이를 사용할 수 있는 약물, 및 현재 미국에서 승인된 치료법에 대한 적응증을 요약한 것이다. 본원에 제공된 병용 요법 중 일부는 PD-L1 발현 수준을 결정하기 위한 해당 검정과 함께 표 1에 나열된 적응증의 약물을 활용한다.
또한, 문헌[O'Malley 등, Immunohistochemical detection of PD-L1 among diverse human neoplasms in a reference laboratory: observations based upon 62,896 cases, Modern Pathology 32:929-942 (2019)]은 다양한 유형의 암에서 항체 클론 22C3, 28-8, SP142 또는 SP263을 사용하여 PD-L1 발현을 평가하는 설명을 제공한다.
IV. 예시적인 항체
예시적인 PD-1 억제제 및 PD-L1 억제제
특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 PD-1/PD-L1 억제제를 투여하는 것을 포함한다. PD-l/PD-L1 억제제의 예는, 비제한적으로, 미국 특허 번호 7,488,802; 7,943,743; 8,008,449; 8,168,757; 8,217,149, 및 PCT 특허 출원 번호 WO2003042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400, 및 WO2011161699에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 모두는 본원에 그들 전체가 편입된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 PD-1 억제제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 AMP-224, CT-011, 세미플리맙, 캄렐리주맙, 신틸리맙, 티슬레리주맙, TSR-042, PDR001, 토리팔리맙, BGB-A317, 니볼루맙(ONO-4538, BMS-936558, 또는 MDX1106로도 알려짐), 펨브롤리주맙(MK-3475, SCH 900475 또는 람롤리주맙으로도 알려짐)이다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 니볼루맙은 인간 IgG4 항-PD-1 단클론성 항체이며 OpdivoTM라는 상표명으로 시판된다. 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙은 인간화 단클론성 IgG4 항체이며 KeytrudaTM라는 상표명으로 시판된다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간화 항체인 CT-011이다. 또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 융합 단백질인 AMP-224이다. 다른 구현예에서, PD-1 항체는 BGB-A317이다. BGB-A317은 Fc 감마 수용체 I에 결합하는 능력이 특이적으로 설계된 단클론성 항체로, 높은 친화력과 우수한 표적 특이성을 통해 PD-1에 대한 독특한 결합 서명을 가지고 있다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 세미플리맙이다. 다른 구현예에서, PD-1 항체는 캄렐리주맙이다. 추가 구현예에서, PD-1 항체는 신틸리맙이다. 일부 구현예에서, PD-1 항체는 티슬레리주맙이다. 특정 구현예에서, PD-1 항체는 TSR-042이다. 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 PDR001이다. 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 토리팔리맙이다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 PD-L1 억제제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736(더발루맙 또는 IMFINZI®로도 알려짐), BMS-936559(MDX-1105-01로도 알려짐), 아테졸리주맙(MPDL3280A 및 Tecentriq®로도 알려짐), 또는 아벨루맙(BAVENCIO®라고도 함)이다. 일 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736(더발루맙)이다. 다른 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-936559이다. 또 다른 구현예에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙이다. 추가 구현예에서, PD-L1 억제제는 아벨루맙이다.
예시적인 항-TIGIT 항체
본원에 기재된 특정 치료 방법에 사용되는 항-TIGIT 항체는 다양한 활성을 갖는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 및 CD112 중 하나 또는 둘 다 사이의 상호작용을 억제한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 기능적 생물검정에서 TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제하여 CD155-CD226 신호전달이 발생하도록 허용한다.
본 발명자들은 놀랍게도 항-TIGIT 항체가 PD-L1이 낮은 암에서도 PD-1/PD-L1 차단과 시너지 효과를 나타낸다는 것을 발견하였다. 본원에서 입증된 바와 같이, 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 암을 포함하는 마우스 모델에 항-TIGIT 항체를 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 투여하면 종양 크기 및/또는 성장률이 감소한다.
특정 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 MTIG7192A 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 다른 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 BMS-986207 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 또 다른 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 OMP-313M32 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 한 구현예에서, TIGIT 억제제는 MK-7684 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 다른 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 AB154 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 또 다른 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 CGEN-15137 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 한 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 SEA-TGT이다. 다른 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 ASP8374 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다. 또 다른 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 AJUD008 또는 그의 푸코실화되지 않은 버전이다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체, 예컨대 비푸코실화된 항-TIGIT 항체는 높은 친화성으로 인간 TIGIT 단백질 또는 이의 한 부분에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 5 nM 미만, 1 nM 미만, 500 pM 미만, 250 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 40 pM 미만, 30 pM 미만, 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 50 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 5 nM, 예를 들면, 약 1 pM 내지 약 1 nM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 5 pM 내지 약 250 pM, 또는 약 10 pM 내지 약 100 pM의 범위에서 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는다.
일부 구현예에서, 높은 친화성으로 인간 TIGIT에 결합하는 것 이외에도, 비푸코실화된 항-TIGIT 항체는 사이노몰구스 원숭이 ("사이노") TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와 교차-반응성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 100 nM 이하의 결합 친화성 (KD)으로 마우스 TIGIT에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 5 nM 이하의 KD로 인간 TIGIT에 결합하고, 100 nM 이하의 KD로 마우스 TIGIT와 교차-반응한다. 일부 구현예에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체는 양쪽 사이노몰구스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT와 교차-반응성을 또한 나타낸다.
일부 구현예에서, 항체 교차-반응성은 세포 (예를 들면, 인간 TIGIT, 사이노몰구스 원숭이 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 발현시키는 세포주, 또는 TIGIT를 내인성으로 발현시키는 일차 세포, 예를 들면, 인간 TIGIT, 사이노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 내인성으로 발현시키는 일차 T 세포) 상에서 발현되는 TIGIT에 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 항체 결합 및 항체 교차-반응성은 정제된 또는 재조합 TIGIT (예를 들면, 정제된 또는 재조합 인간 TIGIT, 정제된 또는 재조합 사이노 TIGIT, 또는 정제된 또는 재조합 마우스 TIGIT) 또는 TIGIT를 포함하는 키메라 단백질 (예를 들면, 인간 TIGIT, 사이노몰구스 원숭이 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 포함하는 Fc-융합 단백질, 또는 인간 TIGIT, 사이노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 포함하는 His-태깅된 단백질)에 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 사이 상호작용을 억제시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD112 사이 상호작용을 억제시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 및 CD112의 양쪽 사이 상호작용을 억제시킨다.
일부 구현예에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체는 본원에 기재된 하기 항체들 중 임의의 것으로부터 유래된 경쇄 가변 영역 서열, 또는 이의 한 부분, 및/또는 중쇄 가변 영역 서열, 또는 이의 한 부분을 포함한다: 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C 또는 클론 13D. 항-TIGIT 항체 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 및 클론 13D의 CDR, 경쇄 가변 도메인 (VL), 및 중쇄 가변 도메인 (VH)의 아미노산 서열은 아래 서열의 표에서 제시된다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음 중 하나 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 포함한다:
서열번호: 7, 서열번호: 8, 및 서열번호: 9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열번호: 10, 서열번호: 11, 서열번호: 12, 및 서열번호: 13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열번호: 14, 서열번호: 15 및 16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 7, 서열번호: 8, 또는 서열번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호: 10, 서열번호: 11, 서열번호: 12, 또는 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열번호: 14, 서열번호: 15, 또는 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 7, 서열번호: 8, 또는 서열번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열번호: 10, 서열번호: 11, 서열번호: 12, 또는 서열번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 서열번호: 14, 서열번호: 15, 또는 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다:
(a) 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(b) 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(c) 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(d) 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18, 및 19, 각각; 또는
(e) 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18, 및 19, 각각.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 또는 서열번호: 5에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 또는 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 또는 서열번호: 5)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고 임의로, TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 6에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 서열 (예를 들면, 서열번호: 6)에 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 치환 (예를 들면, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고 임의로, TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 또는 서열번호: 5에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호: 6에 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 또는 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음을 포함한다:
(a) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(b) 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(c) 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(d) 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(f) 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 20, 21, 22, 23, 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 각각 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18, 및 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 푸코실화되지 않은 IgG1 항체인 SEA-TGT이다. 상응하는 VH 및 VL은 각각 서열번호: 1 및 6의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어 PCT 공개 번호 WO 2020/041541을 참조한다.
일부 구현예에서, 본 방법에서 사용을 위한 항-TIGIT 항체는 US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365, 또는 WO 2016/028656에 개시된 항-TIGIT 항체의 비푸코실화된 버전이다.
향상된 이펙터 기능을 갖는 예시적인 Fc 영역
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 사용되는 항체는 임의의 조합으로 다음 특징 중 하나 이상 또는 모두를 갖는 Fc를 포함한다: 1) 하나 이상의 활성화 FcγR에 대한 결합이 향상됨, 2) 억제성 FcγR에 대한 결합이 감소함, 3) 푸코실화되지 않음, 4) ADCC 활성이 향상됨, 5) ADCP 활성이 향상됨, 6) 항원 제시 세포(APC)가 활성화됨, 7) CD8 T 세포 반응을 향상시킴, 8) 공동 자극 수용체를 상향 조절함, 9) 선천적 세포 면역 반응을 활성화함 및/또는 10) NK 세포와 관련됨. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 사용되는 항-TIGIT 항체는 전술한 특징 중 하나 이상을 갖는 Fc를 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 하나 이상의 활성화 FcγR에 대한 결합이 향상되고/되거나 하나 이상의 억제성 FcγR에 대한 결합이 감소된 Fc를 포함하여 원하는 향상된 FcγR 결합 프로파일을 얻는다. 활성화 FcγR에는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및/또는 FcγRI 중 하나 이상이 포함된다. 억제성 FcγR에는 예를 들어 FcγRIIb가 포함된다.
특정 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 다른 구현예에서, 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 활성화 FcγR에 대한 향상된 결합에 더하여 또는 이와 별개로 하나 이상의 억제성 FcγR에 대한 감소된 결합을 갖는다. 따라서, 일부 구현예에서, 항체는 FcγRIIa 및/또는 FcγRIIb에 대한 감소된 결합을 갖는다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 푸코실화되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 상기 기재된 FcγR 결합 프로파일 중 하나를 추가로 갖는다.
특정 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 야생형 Fc에 비해 아미노산 변화를 포함하여 활성화 FcγR에 대한 결합을 향상시키고/시키거나 하나 이상의 억제성 FcγR에 대한 결합을 감소시켜 상기에 기재된 바와 같은 FcγR 결합 프로파일을 얻는다. 예를 들어, 일부 구현예에서 항체의 Fc는 중쇄 불변 영역에 S293D, A330L 및/또는 I332E 치환을 포함한다.
따라서, 본원에 제공된 방법에 사용되는 항-TIGIT 항체는 다음 활성 중 하나 이상을 갖는 Fc를 포함할 수 있다: 하나 이상의 활성화 FcγR에 대한 향상된 결합; 억제성 FcγR에 대한 결합 감소; 향상된 ADCC 활성; 및/또는 향상된 ADCP 활성. 이러한 활성 및 원하는 활성 프로파일을 갖는 Fc를 갖는 항체는 푸코실화되지 않은 단백질을 생성하고/하거나 원하는 활성을 생성하는 특정 돌연변이를 함유하도록 Fc를 조작하는 것을 포함하여 다양한 방식으로 생성될 수 있다. 푸코실화되지 않은 항체를 생성하는 방법 및 예시적인 공학적 접근법에 대한 특정 추가 세부사항이 본원에 제공된다.
항체는 그들의 불변 영역에서 보존된 위치에 글리코실화될 수 있다(Jefferis 및 Lund, (1997) Chem. Immunol. 65:111-128; Wright 및 Morrison, (1997) TibTECH 15:26-32). 면역글로불린의 올리고당 측쇄는 단백질의 기능 (Boyd 등, (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe 및 Howard, (1990) Biochem. 29:4175-4180), 그리고 당단백질의 형태 및 제시된 3차원 표면에 영향을 줄 수 있는 당단백질의 부분들 사이 분자내 상호작용 (Jefferis 및 Lund, 상기; Wyss 및 Wagner, (1996) Current Opin. Biotech. 7:409-416)에 영향을 준다. 올리고당은 특이적 인식 구조에 기반된 특정 분자에 주어진 당단백질을 표적하는 역할을 또한 할 수 있다. 예를 들어, 아갈락토실화된 IgG에서, 올리고당 모이어티가 CH2간 공간 밖으로 '플립'하고 말단 N-아세틸글루코사민 잔기들이 만노스 결합 단백질에 결합할 수 있게 되는 것으로 보고되었다 (Malhotra 등, (1995) Nature Med. 1:237-243). 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 생산된 CAMPATH-1H (인간 림프구의 CDw52 항원을 인식하는 재조합 인간화된 뮤린 단클론성 IgG1 항체)로부터 올리고당의 글리코펩티다제에 의한 제거는 보체 매개된 용해 (CMCL)에서 완전한 감소를 초래하였고 (Boyd 등, (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318), 한편 뉴라미니다제를 사용하는 시알산 잔기들의 선택적 제거는 DMCL의 손실 없음을 초래하였다. 항체의 글리코실화는 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC)에 영향을 주는 것으로 또한 보고되었다. 특히, 이등분 GlcNAc의 형성을 촉매작용하는 글리코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII)의 테트라사이클린-조절 발현을 가진 CHO 세포는 개선된 ADCC 활성을 갖는 것으로 보고되었다 (Umana 등. (1999) Nature Biotech. 17:176-180).
항체의 글리코실화는 전형적으로 어느 한쪽 N-연결 또는 O-연결된다. N-연결은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. X가 프롤린을 제외하고 임의의 아미노산인, 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌은 아스파라긴 측쇄에 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드에서 이들 트리펩티드 서열들 중 어느 한쪽의 존재는 잠재적 글리코실화 부위를 창출한다. O-연결 글리코실화는, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신이 또한 사용될 수 있어도, 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의 부착을 지칭한다.
항체의 글리코실화 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변경되는 변이체이다. 변경은 항체에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 모이어티 고갈시키는 것, 항체에 하나 이상의 탄수화물 모이어티 부가하는 것, 글리코실화의 조성 (글리코실화 패턴), 글리코실화의 정도를 변화시키는 것 등을 의미한다.
항체에 글리코실화 부위의 부가는 (N-연결 글리코실화 부위의 경우) 상기-기재된 트리펩티드 서열들 중 하나 이상을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 성취될 수 있다. 변경은 (O-연결 글리코실화 부위의 경우) 원래 항체의 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기들의 부가, 또는 이들에 의한 치환으로 또한 이루어질 수 있다. 유사하게, 글리코실화 부위의 제거는 항체의 천연 글리코실화 부위 내에서 아미노산 변경에 의해 성취될 수 있다.
아미노산 서열은 기저 핵산 서열을 변경시킴으로써 보통 변경된다. 이들 방법은 (자연-발생 아미노산 서열 변이체의 경우에서) 자연 공급원으로부터 단리 또는 올리고뉴클레오티드-매개된 (또는 부위-지시된) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 이전에 준비된 변이체 또는 항체의 비-변이체 버전의 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함한다.
항체의 글리코실화 (글리코실화 패턴 포함)는 아미노산 서열 또는 기저 뉴클레오티드 서열 변경 없이도 변경될 수 있다. 예를 들어 문헌[Pereira 등, 2018, MAbs, 10(5): 693-711]를 참조한다. 글리코실화는 항체를 발현시키는데 사용된 숙주 세포에 크게 의존한다. 잠재적 치료제로서 재조합 당단백질, 예를 들면, 항체의 발현에 사용된 세포 유형이 천연 세포가 거의 없기 때문에, 항체의 글리코실화 패턴에서의 상당한 변동이 예상될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Hse 등, (1997) J. Biol. Chem. 272:9062-9070]를 참조한다. 주 세포의 선정 이외에도, 항체의 재조합 생산 동안 글리코실화에 영향을 주는 인자는 성장 모드, 배지 제형, 배양 밀도, 산소화, pH, 정제 체계 및 기타 등등을 포함한다. 올리고당 생산에 연루된 특정 효소를 도입하거나 과발현시키는 것을 포함하는 특정한 숙주 유기체에서 달성된 글리코실화 패턴을 변경하기 위한 다양한 방법이 제안되었다 (미국 특허 번호 5047335; 5510261; 5278299). 글리코실화, 또는 글리코실화의 특정 유형들은 당단백질로부터, 예를 들어 엔도글리코시다제 H (엔도 H)를 사용하여 효소적으로 제거될 수 있다. 이외에도, 재조합 숙주 세포는 유전적으로 조작될 수 있고, 예를 들면, 특정 유형들의 다당류를 처리하는데 결함이 있을 수 있다. 이들 및 유사한 기법은 당업계에 알려진다.
항체의 글리코실화 구조는, 전하에 기반하여 올리고당을 분리하기 위해 높은 pH 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하는, 렉틴 크로마토그래피, NMR, 질량 분석법, HPLC, GPC, 단당류 조성적 분석, 순차적 효소적 분해, 및 HPAEC-PAD를 포함하는, 탄수화물 분석의 종래 기법에 의해 용이하게 분석될 수 있다. 분석적 목적을 위하여 올리고당을 방출하는 방법은 또한 알려지고, 제한 없이, (펩티드-N-글리코시다제 F/엔도-β-갈락토시다제를 사용하여 일반적으로 수행된) 효소적 치료, 주로 O-연결 구조를 방출하기 위해 가혹한 알칼리성 환경을 사용한 제거, 그리고 양쪽 N- 및 O-연결 올리고당을 방출하기 위해 무수 하이드라진을 사용한 화학적 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 글리코실화의 변형 형태는 환원된 코어 푸코실화이다. "코어 푸코실화"는 N-연결 글리칸의 환원 말단에서 N-아세틸글루코사민 ("GlcNAc")에 푸코스의 부가 ("푸코실화")를 지칭한다.
"복합 N-글리코시드-연결 당 쇄"는 (카밧의 번호에 따라) 아스파라긴 297에 전형적으로 결합된다. 본원에 사용된, 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄는 다음 구조를 주로 갖는, 2분기 복합 당 쇄를 갖는다:
여기서, ±는 당 분자가 당 분자가 존재하거나 부재할 수 있음을 나타내고, 번호는 당 분자들 사이 연결기의 위치를 나타낸다. 상기 구조에서, 아스파라긴에 결합하는 당 쇄 말단은 (오른쪽에) 환원 말단이라고 하고, 반대 측은 비-환원 말단이라고 한다. 푸코스는 환원 말단의 N-아세틸글루코사민 ("GlcNAc")에, 전형적으로 α1,6 결합에 의해 보통 결합된다 (GlcNAc의 6-위치는 푸코스의 1-위치에 연결된다). "Gal"은 갈락토스를 지칭하고, "Man"은 만노스를 지칭한다.
"복합 N-글리코시드-연결 당 쇄"는 1) 코어 구조의 비-환원 말단 측이 갈락토스-N-아세틸글루코사민 ("gal-GlcNAc"로도 지칭됨)의 0, 1개 또는 그 이상 분지를 갖고 gal-GlcNAc의 비-환원 말단 측이 시알산, 이등분 N-아세틸글루코사민 또는 기타 등등을 임의로 갖는 복합 유형; 및 2) 코어 구조의 비-환원 말단 측이 높은 만노스 N-글리코시드-연결 당 쇄 및 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄의 양쪽 분지를 갖는 하이브리드 유형을 포함한다.
본원에 제공된 일부 방법에서, 소량의 푸코스만이 항-TIGIT 항체의 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄(들)에 편입된다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만은 푸코스에 의한 코어 푸코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 약 2%는 푸코스에 의한 코어 푸코실화를 갖는다. 다양한 구현예에서, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 60% 미만이 푸코스에 의한 코어 푸코실화를 갖는 때, 조성물의 항체는 "비푸코실화된" 또는 "아푸코실화된"으로서 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 비푸코실화된다.
특정 구현예에서, 소량의 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 대사산물 또는 생산물)만이 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄(들)에 편입된다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만은 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 대사산물 또는 생산물에 의한 코어 푸코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 약 2%는 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 대사산물 또는 생산물에 의한 코어 푸코실화를 갖는다.
일부 구현예에서, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만은 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스 잔기를 갖는다. (예를 들면, Raju 등, 2012, MAbs 4: 385-391, 도 3. 참조) 일부 구현예에서, 조성물 중 항-TIGIT 항체의 약 2%는 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스 잔기를 갖는다. 다양한 구현예에서, 조성물 중 항-TIGIT 항체의 60% 미만이 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스 잔기를 갖는 때, 조성물의 항체는 "비푸코실화된"으로서 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스가 결여된다. G0 글리칸이 G0-GN 글리칸을 포함하는 것이 유의되어야 한다. G0-GN 글리칸은 하나의 말단 GlcNAc 잔기를 가진 1분기 글리칸이다. G1 글리칸은 G1-GN 글리칸을 포함한다. G1-GN 글리칸은 하나의 말단 갈락토스 잔기를 가진 1분기 글리칸이다. G0-GN 및 G1-GN 글리칸은 푸코실화 또는 비푸코실화될 수 있다.
비푸코실화된 항체를 생성하는 다양한 방법은 활용될 수 있다. 예시적 전략은 푸코실화 경로에 연루된 특정 생합성 효소가 결여된 세포주의 사용 또는 푸코실화 경로에 연루된 특정 유전자의 억제 또는 녹아웃을 포함한다. 이러한 접근법의 검토는 이 전체가 참조로 본원에 편입되는 Pereira, 등 (2018) mAbs 10:693-711에 의해 제공된다.
예를 들어, 항체 생산 세포를 푸코스 유사체와 인큐베이션함으로써 푸코실화되지 않은 항체, 예컨대 본원에 개시된 푸코실화되지 않은 항-TIGIT 항체를 제조하는 방법은 예를 들면, WO2009/135181 및 US 8,163,551에 기재된다. 간략히, 항체를 발현시키도록 조작된 세포는 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물의 존재 하에서 인큐베이션된다. 세포내 대사산물은, 예를 들어, GDP-변형 유사체 또는 완전히 또는 부분적으로 탈-에스테르화된 유사체일 수 있다. 생산물은, 예를 들어, 완전히 또는 부분적으로 탈-에스테르화된 유사체일 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체는 푸코스 회수 경로에서 효소(들)를 억제시킬 수 있다. 예를 들어, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코키나아제, 또는 GDP-푸코스-피로포스포릴라아제의 활성을 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코실트랜스퍼라제 (바람직하게는 1,6-푸코실트랜스퍼라제, 예를 들면, FUT8 단백질)를 억제시킨다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코스에 대하여 드 노보 합성 경로에서 효소의 활성을 억제시킬 수 있다. 예를 들어, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 GDP-만노스 4,6-탈수효소 또는/또는 GDP-푸코스 합성효소의 활성을 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사산물 또는 생산물)는 푸코스 수송체 (예를 들면, GDP-푸코스 수송체)를 억제시킬 수 있다.
일 구현예에서, 푸코스 유사체는 2-플루로푸코스이다. 성장 배지에서 푸코스 유사체 및 다른 푸코스 유사체를 사용하는 방법은, 예를 들면, 참조로 본원에 편입되는 WO 2009/135181에 개시된다.
코어 푸코실화를 감소시키기 위해 세포주를 조작하는 다른 방법은 유전자 녹-아웃, 유전자 녹-인 및 RNA 간섭 (RNAi)을 포함하였다. 예를 들어 문헌[Pereira 등, 2018, mAbs, 10(5): 693-711]를 참조한다. 유전자 녹-아웃에서, 유전자 인코딩 FUT8 (알파 1,6-푸코실트랜스퍼라제 효소)은 비활성화된다. FUT8은 GDP-푸코스로부터 N-글리칸의 Asn-연결 (N-연결) GlcNac의 위치 6으로 푸코실 잔기의 전이를 촉매작용한다. FUT8은 Asn297에서 N-연결 2분기 탄수화물에 푸코스 부가하는 것을 담당하는 유일한 효소인 것으로 보고된다. 유전자 녹-인은 효소 예컨대 GNTIII 또는 골지 알파 만노시다제 II를 인코딩하는 유전자를 부가한다. 세포에서 이러한 효소의 수준에서의 증가는 푸코실화 경로로부터 단클론성 항체를 전환시키고 (축소된 코어 푸코실화로 이어짐), 이등분 N-아세틸글루코사민의 증가된 양을 갖는다. RNAi는 전형적으로 또한 FUT8 유전자 발현을 표적화하여, 축소된 mRNA 전사 수준을 초래하거나 유전자 발현을 완전히 녹아웃시킨다.
사용될 수 있는 다른 전략은 GlycoMAb® (미국 특허 번호 6,602,684) 및 Potelligent® (BioWa)를 포함한다.
이들 방법들 중 임의의 것은 비푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주를 생성하는데 사용될 수 있다.
다양한 조작 접근법은 원하는 FcγR 활성 및 이펙터 기능을 가진 Fc 영역을 수득하는데 또한 활용될 수 있다. 일부 구현예에서, Fc는, FcγRIIIA에 대하여 Fc 도메인의 친화성을 증가시키고 후속적으로 ADCC를 증가시키는, 돌연변이들의 하기 조합: S239D, A330L 및 I332E을 갖도록 조작된다. FcγRIIIa에 대하여 친화성을 향상시키는 추가의 치환은, 예를 들어, T256A, K290A, S298A, E333A, 및 K334A를 포함한다. 활성화 FcγRIIIa에 결합을 향상시키고 억제성 FcγRIIIb에 결합을 감소시킨 치환은, 예를 들어, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L 및 F243L/R292P/Y300L/L235V/P396L을 포함한다. 일부 구현예에서, 치환은 IgG1 Fc 백본에 있다.
보존된 Asn297에 공유적으로 부착된 올리고당은 FcγR을 결합시키는 IgG의 Fc 영역의 능력에 연루된다 (Lund 등, 1996, J. Immunol. 157:4963-69; Wright 및 Morrison, 1997, Trends Biotechnol. 15:26-31). IgG에 관한 이 글리코폼의 조작은 IgG-매개된 ADCC를 상당히 개선할 수 있다. 이 글리코폼에 이등분 N-아세틸글루코사민 변형의 부가 (Umana 등, 1999, Nat. Biotechnol. 17:176-180; Davies 등, 2001, Biotech. Bioeng. 74:288-94) 또는 이 글리코폼으로부터 푸코스의 제거 (Shields 등, 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-40; Shinkawa 등, 2003, J. Biol. Chem. 278:6591-604; Niwa 등, 2004, Cancer Res. 64:2127-33)는 IgG Fc와 FcγR 사이 결합을 개선하고, 이로써 Ig-매개된 ADCC 활성을 향상시키는 IgG Fc 조작의 2개 예이다.
인간 IgG1 Fc 영역의 용매-노출 아미노산의 체계적 치환은 변경된 FcγR 결합 친화성을 가진 IgG 변이체를 생성하였다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 친계 IgG1과 비교된 때, Thr256/Ser298, Ser298/Glu333, Ser298/Lys334, 또는 Ser298/Glu333/Lys334에서 Ala로의 치환을 포함하는 이들 변이체의 서브세트는 FcγR에 대한 결합 친화성 및 ADCC 활성 양쪽에서 증가된 것으로 입증한다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604; Okazaki 등, 2004, J. Mol. Biol. 336:1239-49).
많은 방법은 항체 상에서 푸코실화의 양을 결정하는데 이용가능하다. 방법은, 예를 들면, PLRP-S 크로마토그래피를 통한 LC-MS, 전자분무 이온화 사중극자 TOF MS, 레이저-유도 형광을 사용한 모세관 전기영동 (CE-LIF), 및 형광 검출을 사용한 친수성 상호작용 크로마토그래피 (HILIC)를 포함한다.
항체의 제조
항체를 제조하기 위하여, 당업계에서 알려진 많은 기법들은 사용될 수 있다. 예를 들면, 문헌[Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor 등, Immunology Today 4: 72 (1983); Cole 등, pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985); Coligan, Current Protocols in Immunology (1991); Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988); 및 Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed. 1986))]를 참조한다.
관심의 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자는 세포로부터 클로닝될 수 있다, 예를 들면, 단클론성 항체를 인코딩하는 유전자는 항체를 발현시키는 하이브리도마로부터 클로닝될 수 있고 재조합 단클론성 항체를 생산하는데 사용될 수 있다. 단클론성 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자 라이브러리는 하이브리도마 또는 형질 세포로부터 또한 만들어질 수 있다. 추가적으로, 파지 또는 효모 디스플레이 기술은 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 및 헤테로머성 Fab 단편을 식별하는데 사용될 수 있다 (예를 들면, 문헌[McCafferty 등, Nature 348:552-554 (1990); Marks 등, Biotechnology 10:779-783 (1992); Lou 등 (2010) PEDS 23:311; 및 Chao 등, Nature Protocols, 1:755-768 (2006)] 참조). 대안적으로, 항체 및 항체 서열은 예를 들면, Xu 등, Protein Eng Des Sel, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568에 개시된 것과 같은 효모-기반 항체 제시 시스템을 사용하여 단리 및/또는 식별될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 유전자 산물의 무작위 조합은 상이한 항원성 특이성을 가진 항체들의 대형 풀을 생성한다 (예를 들면, Kuby, Immunology (제3판 1997) 참조). 단일 쇄 항체 또는 재조합 항체의 생산을 위한 기법 (미국 특허 4,946,778, 미국 특허 번호 4,816,567)은 항체를 생산하기 위해 또한 개조될 수 있다. 항체는 또한 이중특이적일 수, 즉, 2개의 상이한 항원을 인식할 수 있다 (예를 들면, WO 93/08829, Traunecker 등, EMBO J. 10:3655-3659 (1991); 및 Suresh 등, Methods in Enzymology 121:210 (1986) 참조). 항체는 또한 헤테로접합체, 예를 들면, 2개의 공유적으로 결합된 항체, 또는 면역독소에 공유적으로 결합된 항체일 수 있다 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980, WO 91/00360; 및 WO 92/200373 참조).
항체는 원핵 및 진핵 발현 시스템을 포함하는 임의의 수의 발현 시스템을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 발현 시스템은 포유류 세포, 예컨대 하이브리도마, 또는 CHO 세포이다. 많은 이러한 시스템은 상업적 공급체로부터 널리 이용가능하다. 항체가 양쪽 중쇄 및 경쇄를 포함하는 구현예에서, 중쇄 및 중쇄 및 경쇄는, 예를 들면, 디-시스트론성 발현 단위에서 단일 벡터를 사용하여 발현될 수 있거나, 상이한 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 다른 구현예에서, 중쇄 및 경쇄 영역은 별도 벡터를 사용하여 발현될 수 있다. 본원에 기재된 경우에 중쇄 및 경쇄는 N-말단에서 메티오닌을 임의로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디)는 생성된다. 다양한 기법은 항체 단편의 생산을 위하여 개발되었다. 통상적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질분해성 소화를 통해 유래되었다 (예를 들면, Morimoto 등, J. Biochem. Biophys. Meth., 24:107-117 (1992); 및 Brennan 등, Science, 229:81 (1985) 참조). 하지만, 이들 단편은 재조합 숙주 세포를 사용하여 이제 직접적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 대장균 세포로부터 직접적으로 회수될 수 있고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (예를 들면, Carter 등, BioTechnology, 10:163-167 (1992) 참조). 또 다른 접근법에 따라, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기법은 당업자에게 명백할 것이다. 다른 구현예에서, 선정된 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. 예를 들면, PCT 공개 번호 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 항체 단편은, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,641,870에 기재된 대로 또한 선형 항체일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은, 생체내 연장된 반감기를 제공하기 위해, 또 다른 분자, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG화) 또는 혈청 알부민에 접합될 수 있다. 항체 단편의 PEG화의 예는 Knight 등 Platelets 15:409, 2004 (압식시맙의 경우); Pedley 등, Br. J. Cancer 70:1126, 1994 (항-CEA 항체의 경우); Chapman 등, Nature Biotech. 17:780, 1999; 및 Humphreys, 등, Protein Eng. Des. 20: 227, 2007)에 제공된다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체가 제공된다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대하여 또는 동일한 항원의 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 항체이다. 다중특이적 항체를 만드는 방법은, 비제한적으로, 숙주 세포에서 중쇄 및 경쇄의 2개 쌍의 재조합 공-발현 (예를 들면, Zuo 등, Protein Eng Des Sel, 2000, 13:361-367 참조); "놉-인투-홀" 조작 (예를 들면, Ridgway 등, Protein Eng Des Sel, 1996, 9:617-721 참조); "디아바디" 기술 (예를 들면, Hollinger 등, PNAS (USA), 1993, 90:6444-6448 참조); 및 분자내 삼량체화 (예를 들면, Alvarez-Cienfuegos 등, Scientific Reports, 2016, doi:/10.1038/srep28643 참조)를 포함하고; 또한, Spiess 등, Molecular Immunology, 2015, 67(2), Part A:95-106을 참조한다.
불변 영역의 선택
본원에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 인간 불변 영역의 적어도 한 부분에 연결될 수 있다. 불변 영역의 선정은, 부분적으로, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성, 항체 의존적 세포성 식세포작용 및/또는 보체 의존적 세포독성이 요구되는지 여부에 의존한다. 예를 들어, 인간 동위원소 IgG1 및 IgG3은 강한 보체-의존적 세포독성을 갖고, 인간 아이소타입 IgG2는 약한 보체-의존적 세포독성을 갖고 인간 IgG4는 보체-의존적 세포독성이 결여된다. 인간 IgG1 및 IgG3은 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개된 이펙터 기능을 또한 유도한다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 항체는 별도 중쇄, 경쇄, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 스페이서를 통해서 연결되는 단일 쇄 항체로서 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로서 발현될 수 있다.
인간 불변 영역은 상이한 개체들 사이 알로타이프성 변이 및 아이소알로타이프성 변이를 보여준다, 즉, 불변 영역은 하나 이상의 다형성 위치에 상이한 개체에서 상이할 수 있다. 아이소알로타입은 아이소알로타입을 인식하는 혈청이 하나 이상의 다른 아이소타입의 비-다형성 영역에 결합한다는 점에서 알로타입과 상이하다.
경쇄 및/또는 중쇄의 아미노 또는 카복시 말단, 예컨대 중쇄의 C-말단 리신에서 하나 또는 여러 아미노산은 일부 또는 모든 분자에서 누락 또는 유도체화될 수 있다. 치환은 이펙터 기능 예컨대 보체-매개된 세포독성 또는 ADCC를 감소 또는 증가시키기 위해 (예를 들면, Winter 등, 미국 특허 번호 5,624,821; Tso 등, 미국 특허 번호 5,834,597; 및 Lazar 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006 참조), 또는 인간에서 반감기를 연장하기 위해 (예를 들면, Hinton 등, J. Biol. Chem. 279:6213, 2004 참조) 불변 영역에서 이루어질 수 있다.
원하는 항체를 작제하기 위하여, 일부 구현예에서, 예시적 치환은 아미노산 위치 234, 235, 237, 239, 267, 298, 299, 326, 330, 또는 332에 도입된 시스테인 잔기로의 천연 아미노산의 아미노산 치환, 바람직하게는 인간 IgG1 아이소타입에서 S239C 돌연변이를 포함한다 (넘버링은 EU 지수에 따른다 (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 및 1991); 본원에 참조 편입되는 US 20100158909 참조). 추가의 시스테인 잔기의 존재는 쇄간 디설파이드 결합 형성을 허용할 수 있다. 이러한 쇄간 디설파이드 결합 형성은 입체 장애를 야기시켜, 이로써 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화성을 감소시킬 수 있다. 위치 234, 235, 236 및/또는 237 중 임의의 것에서 다른 치환은 Fcγ 수용체, 특히 FcγRI 수용체에 대한 친화성을 감소시킨다 (예를 들면, US 6,624,821, US 5,624,821 참조).
항체의 생체내 반감기는 이의 이펙터 기능에 또한 영향을 줄 수 있다. 항체의 반감기는 이의 치료적 활성을 변형시키기 위해 증가 또는 축소될 수 있다. FcRn은 β2-마이크로글로불린과 비-공유적으로 결합하는 MHC 클래스 I 항원과 구조적으로 유사한 수용체이다. FcRn은 IgG의 이화작용 및 조직에 걸쳐 그들의 통과세포외배출을 조절한다(Ghetie 및 Ward, 2000, Annu. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie 및 Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). IgG-FcRn 상호작용은 pH 6.0 (세포내 소포의 pH)에서 발생하지만 pH 7.4 (혈액의 pH)에서는 아니고; 이 상호작용은 IgG가 다시 순환으로 재순환되도록 한다 (Ghetie 및 Ward, 2000, Ann. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie 및 Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). FcRn 결합에 연루된 인간 IgG1 상의 영역은 맵핑되었다 (Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604) 인간 IgG1의 위치 Pro238, Thr256, Thr307, Gln311, Asp312, Glu380, Glu382, 또는 Asn434에서 알라닌 치환은 FcRn 결합을 향상시킨다(Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 이들 치환을 갖는 IgG1 분자는 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 결과적으로, 이들 변형된 IgG1 분자는 그들의 이펙터 기능을 실시할 수 있고, 따라서 미변형된 IgG1과 비교하여 더 오랜 시기 동안 그들의 치료적 효능을 발휘할 수 있다. FcRn에 증가하는 결합을 위하여 다른 예시적 치환은 위치 250에서 Gln 및/또는 위치 428에서 Leu를 포함한다. EU 넘버링은 불변 영역에서 모든 위치에 사용된다.
항체의 보체 고정 활성 (양쪽 C1q 결합 및 CDC 활성)은 Lys326 및 Glu333에서 치환에 의해 개선될 수 있다 (Idusogie 등, 2001, J. Immunol. 166:2571-2575). 인간 IgG2 백본 상에서 동일한 치환은 C1q에 불량하게 결합하고 보체 활성화 활성이 심각하게 결핍되는 항체 아이소타입을 양쪽 C1q에 결합할 수 있고 CDC를 매개할 수 있는 것으로 전환시킬 수 있다 (Idusogie 등, 2001, J. Immunol. 166:2571-75). 몇몇 다른 방법은 항체의 보체 고정 활성을 개선하기 위해 또한 적용되었다. 예를 들어, IgM의 18-아미노산 카르복실-말단 꼬리 조각의 IgG의 카르복실-말단에의 그래프팅은 그들의 CDC 활성을 크게 향상시킨다. 이것은 검출가능한 CDC 활성을 정상적으로 갖지 않는 심지어 IgG4로 관찰된다 (Smith 등, 1995, J. Immunol. 154:2226-36). 또한, IgG1 중쇄의 카복시-말단 가까이 자리잡은 Ser444를 Cys로 치환하는 것은 단량체성 IgG1보다 CDC 활성의 200-배 증가를 가진 IgG1의 꼬리-대-꼬리 이량체화를 유도하였다 (Shopes 등, 1992, J. Immunol. 148:2918-22). 이외에도, C1q에 대하여 특이성을 가진 이중특이적 디아바디 작제물은 또한 CDC 활성을 부여한다 (Kontermann 등, 1997, Nat. Biotech. 15:629-31).
보체 활성은 중쇄의 아미노산 잔기들 318, 320, 및 322 중 적어도 하나를 상이한 측쇄를 가진 잔기, 예컨대 Ala로 돌연변이시킴으로써 감소될 수 있다. 다른 알킬-치환된 비-이온성 잔기들, 예컨대 Gly, Ile, Leu, 또는 Val, 또는 3개의 잔기들 중 어느 하나 대신 Phe, Tyr, Trp 및 Pro와 같은 방향족 비-극성 잔기들은 또한 C1q 결합을 감소 또는 폐기시킨다. Ser, Thr, Cys, 및 Met는 C1q 결합 활성을 감소 또는 폐기하기 위해, 318이 아닌, 잔기들 320 및 322에서 사용될 수 있다. 극성 잔기에 의한 318 (Glu) 잔기의 대체는 C1q 결합 활성을 변형시킬 수 있지만 폐지하지는 않는다. 잔기 297 (Asn)을 Ala로 대체하는 것은 용해적 활성의 제거를 초래하지만 C1q에 대하여 (약 3 배 더 약한) 친화성을 단지 약간 감소시킨다. 이 변경은 보체 활성화에 요구되는 탄수화물의 존재 및 글리코실화 부위를 파괴한다. 이 부위에서 임의의 다른 치환은 글리코실화 부위를 또한 파괴한다. 다음 돌연변이 및 이의 임의의 조합은 또한 C1q 결합을 감소시킨다: D270A, K322a, P329A, 및 P311S (WO 06/036291 참조).
인간 불변 영역 지칭은 임의의 자연 알로타이프 또는 자연 알로타이프에서 다형성 위치를 차지하는 잔기들의 임의의 순열을 가진 불변 영역을 포함한다. 또한, 최대 1, 2, 5, 또는 10개의 돌연변이는 Fcγ 수용체 결합을 감소시키기 또는 FcRN에 결합을 증가시키기 위해 자연 인간 불변 영역, 예컨대 상기 표시된 것들에 비해 존재할 수 있다.
핵산, 벡터 및 숙주 세포
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체는 재조합 방법을 사용하여 제조된다. 일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체들 중 임의의 것 (예를 들면, 본원에 기재된 CDR 중 임의의 하나 이상)을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산; 이러한 핵산을 포함하는 벡터; 그리고 항체-인코딩 핵산을 복제하는데 및/또는 항체를 발현시키는데 사용되는 핵산이 도입되는 숙주 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들면, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포; 또는 인간 세포이다
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드 (예를 들면, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에 기재된 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 하나 이상의 아미노산 서열 (예를 들면, CDR, 중쇄, 경쇄, 및/또는 프레임워크 영역)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 서열 (예를 들면, CDR, 중쇄, 경쇄, 또는 프레임워크 영역 서열)에 적어도 85% 서열 동일성 (예를 들면, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
추가 양태에서, 본원에 기재된 항체를 만드는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본원에 기재된 경우에 숙주 세포 (예를 들면, 본원에 기재된 경우에 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 발현시키는 숙주 세포)를 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 배양하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 후속적으로 회수된다.
본 개시내용의 항체, 또는 이의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 적합한 벡터는 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 선택된 클로닝 벡터가 사용되기 위한 숙주 세포에 따라 다양할 수 있는 한편, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자가-복제하는 능력을 갖고/거나, 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대하여 단일 표적을 보유할 수 있고/거나, 벡터를 함유하는 클론 선택하기에서 사용될 수 있는 마커를 위한 유전자를 가질 수 있다. 예는 플라스미드 및 박테리아성 바이러스, 예를 들면, pUC18, pUC19, 블루스크립트 (예를 들면, pBS SK+) 및 이의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNAs, 및 셔틀 벡터 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 클로닝 벡터는 상업적 공급업체 예컨대 BioRad, Stratagene, 및 Invitrogen으로부터 이용가능하다.
발현 벡터는 일반적으로 본 개시내용의 핵산을 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 작제물이다. 발현 벡터는 숙주 세포에서 어느 한쪽 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 필수 부분으로서 복제할 수 있다. 적합한 발현 벡터는 비제한적으로 플라스미드, 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스, 레트로바이러스를 포함하는 바이러스성 벡터, 및 임의의 다른 벡터를 포함한다.
재조합 항체의 발현
항체는 재조합 발현에 의해 전형적으로 생산된다. 재조합 폴리뉴클레오티드 작제물은 전형적으로, 자연적으로-연관된 또는 이종 프로모터 영역을 포함하는, 항체 쇄의 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 포함한다. 바람직하게는, 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터내 진핵 프로모터 시스템이다. 일단 벡터가 적절한 숙주에 편입되었다면, 숙주는 뉴클레오티드 서열의 높은 수준 발현, 그리고 교차-반응하는 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건 하에서 유지된다.
포유류 세포는 면역글로불린 또는 이의 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 세그먼트를 발현시키기 위한 바람직한 숙주이다. 문헌[Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)]를 참조한다. 온전한 이종 단백질을 선택할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주는 당업계에서 개발되었고, CHO 세포주 (예를 들면, DG44), 다양한 COS 세포주, HeLa 세포, HEK293 세포, L 세포, 및 Sp2/0 및 NS0를 포함하는 비-항체-생산 골수종을 포함한다. 바람직하게는, 세포는 비인간이다. 이들 세포에 대한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제의 기원, 프로모터, 인핸서 (Queen 등, Immunol. Rev. 89:49 (1986)), 및 필요한 처리 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사적 종결자 서열을 포함할 수 있다. 바람직한 발현 제어 서열은 내인성 유전자, 사이토메갈로바이러스, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종바이러스, 및 기타 등등으로부터 유래된 프로모터이다. 문헌[Co 등, J. Immunol. 148:1149 (1992)]를 참조한다.
일단 발현되면, 항체는 HPLC 정제, 칼럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 및 기타 등등을 포함하는 당업계의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다 (일반적으로, Scopes, Protein Purification(Springer-Verlag, NY, 1982) 참조).
항체 특성규명
결합 친화성, 결합 동역학, 및 교차-반응성을 분석하는 방법은 당업계에 알려진다. 예를 들어, 문헌[Ernst 등, Determination of Equilibrium Dissociation Constants, Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley & Sons ed. 2009)]를 참조한다. 이들 방법은, 비제한적으로, 고상 결합 검정 (예를 들면, ELISA 검정), 면역침전, 표면 플라즈몬 공명 (SPR, 예를 들면, BiacoreTM (GE Healthcare, Piscataway, NJ)), 동역학 배제 검정 (예를 들면 KinExA®), 유세포 검정, 형광-활성화 세포 분류 (FACS), BioLayer 간섭법 (예를 들면, OctetTM (ForteBio, Inc., Menlo Park, CA)), 및 웨스턴 블롯 검정을 포함한다. SPR 기법은, 예를 들면, 문헌[Hahnfeld 등 Determination of Kinetic Data Using SPR Biosensors, Molecular Diagnosis of Infectious Diseases (2004)]에서 검토된다. 전형적 SPR 실험에서, 하나의 반응체 (표적 또는 표적화 제제)는 유동 셀에서 SPR-활성, 금-코팅된 유리 슬라이드 상에 고정화되고, 다른 반응체를 함유하는 샘플은 표면을 가로질러 유동하도록 도입된다. 주어진 파장의 광이 표면에 비추어지는 때, 금의 광학 반사율에 대한 변화는 결합, 및 결합의 동역학을 나타낸다. 일부 구현예에서, 동역학 배제 검정은 친화성을 결정하는데 사용된다. 이 기법은, 예를 들면, 문헌[Darling 등, Assay and Drug Development Technologies Vol. 2, number 6 647-657 (2004)]에 기재된다. 일부 구현예에서, BioLayer 간섭법 검정은 친화성을 결정하는데 사용된다. 이 기법은, 예를 들면, 문헌[Wilson 등, Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger 등, J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)]에 기재된다.
V. 치료 방법
일부 구현예에서, 대상체의 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 부분적으로 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 암이 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합된 항-TIGIT 항체로 치료될 수 있다는 놀라운 발견에 기초한다. 항-TIGIT 항체와 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 사이의 이러한 시너지 효과는 현재 항-PD1 항체 또는 PD-L1 항체를 사용하는 승인된 단일요법이 없는 암의 치료를 가능하게 한다.
예를 들어, 표 2는 특정 항-PD-1 항체를 사용한 특정 암 치료에 대한 요법 투여 수준, PD-L1 발현 수준 및 돌연변이 상태를 보여준다. 표 3은 특정 항-PD-L1 항체를 사용한 특정 암 치료에 대한 요법 투여 수준, PD-L1 발현 수준 및 돌연변이 상태를 보여준다. 이들 표에서 알 수 있는 바와 같이, 이러한 많은 항체는 특정 역치 미만의 PD-L1의 수준을 발현하는 암이 있는 대상체에 대해 승인되지 않았고, 특정 돌연변이를 포함하는 암이 있는 대상체에 대해 승인되지 않았다. 아래에 더 자세히 기재된 바와 같이, 본원에 제공된 방법은 승인된 기준치 또는 역치 수준 미만의 수준으로 PD-L1을 발현하는 종양이 있는 환자, 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체의 치료에 덜 반응하게 만드는 표에 나열된 것과 같은 돌연변이가 있는 환자를 치료하고/하거나 및/또는 표에 나열된 승인 용량 미만의 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체의 용량으로 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체가 치료 용량, 예컨대 표 2 및/또는 표 3에 기재된 용량으로 투여되는 반면, 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량, 예를 들어 표 2 및/또는 표 3에 기재된 용량보다 낮고/거나 덜 자주 투여되는 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 표 2 및/또는 표 3에 기재된 치료와 같은 특정 치료로부터 대상체를 제외시키는 돌연변이를 포함하는 암이 있는 대상체를 치료한다.
따라서, 일부 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 표 2 및/또는 표 3에 기재된 치료가 이용가능하지 않은 암이 있는 대상체의 치료를 제공한다. 이러한 방법은 PD-L1의 수준 및 투여에 대한 역치와 관련하여 아래에서 더 자세히 논의된다.
일부 구현예에서, 대상체의 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 암 샘플 내 PD-L1의 수준은 복합 양성 점수(CPS)로 측정 시 10 미만, 또는 총 비율 점수(TPS)로 측정 시 50% 미만, 또는 총 비율 점수(TPS)로 측정 시 50% 미만, 또는 종양 세포 점수(TC)로 측정 시 50% 미만 또는 종양 침윤 면역 세포 염색(IC)로 측정 시 10% 미만이고, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 방법은 요로상피암에 대한 일차 치료법다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 항-PD-1 항체 및 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 항-PD-1 항체를 투여하지만 항-PD-L1 항체를 투여하지 않는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 암이 있는 대상체에게 항-PD-L1 항체를 투여하지만 항-PD-1 항체를 투여하지 않는 것을 포함한다.
PD-L1 역치 수준
일부 구현예에서, 암은 CPS로 측정 시 10 미만, 5 미만, 3 미만, 또는 1 미만인 PD-L1의 수준을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 CPS로 측정 시 0 내지 10, 또는 1 내지 10, 또는 3 내지 10, 또는 5 내지 10, 또는 0 내지 7, 또는 1 내지 7, 또는 3 내지 7, 또는 0 내지 5, 또는 1 내지 5, 또는 3 내지 5, 또는 0 내지 3, 또는 1 내지 3인 PD-L1의 수준을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 TPS로 측정 시 50% 미만, 또는 40% 미만, 또는 30% 미만, 또는 20% 미만, 또는 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 TPS로 측정 시 0% 내지 50%, 또는 1% 내지 50%, 또는 3% 내지 50%, 또는 5% 내지 50%, 또는 10% 내지 50%, 또는 20% 내지 50%, 또는 0% 내지 30%, 또는 1% 내지 30%, 또는 3% 내지 30%, 또는 5% 내지 30%, 또는 10% 내지 30%, 또는 0% 내지 20%, 또는 3% 내지 20%, 또는 5% 내지 20%인 PD-L1의 수준을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 TC로 측정 시 50% 미만, 또는 40% 미만, 또는 30% 미만, 또는 20% 미만, 또는 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 TC로 측정 시 0% 내지 50%, 또는 1% 내지 50%, 또는 3% 내지 50%, 또는 5% 내지 50%, 또는 10% 내지 50%, 또는 20% 내지 50%, 또는 0% 내지 30%, 또는 1% 내지 30%, 또는 3% 내지 30%, 또는 5% 내지 30%, 또는 10% 내지 30%, 또는 0% 내지 20%, 또는 3% 내지 20%, 또는 5% 내지 20%인 PD-L1의 수준을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 IC로 측정 시 10% 미만, 5% 미만, 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 IC로 측정 시 0% 내지 10%, 또는 1% 내지 10%, 또는 3% 내지 10%, 또는 5% 내지 10%, 또는 0% 내지 7%, 또는 1% 내지 7%, 또는 3% 내지 7%, 또는 0% 내지 5%, 또는 1% 내지 5%, 또는 3% 내지 5%, 또는 0% 내지 3%, 또는 1% 내지 3%인 PD-L1의 수준을 포함한다.
항-TIGIT 항체 및 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 투여
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여되지만 항-PD-L1 항체는 투여되지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여되지만 항-PD-1 항체는 투여되지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 및 항-PD-1 항체는 각각 적정치료 이하 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항-TIGIT 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항체의 덜 빈번한 투여를 포함하고; 그리고 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항-TIGIT 항체의 덜 빈번한 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체의 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮은 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 단일요법 용량의 5% 내지 90%, 또는 5% 내지 80%, 또는 5% 내지 70%, 또는 5% 내지 60%, 또는 5% 내지 50%, 또는 5% 내지 40%, 또는 5% 내지 30%, 또는 10% 내지 90%, 또는 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 70%, 또는 10% 내지 60%, 또는 10% 내지 50%, 또는 10% 내지 40%, 또는 10% 내지 30%, 또는 20% 내지 90%, 또는 20% 내지 80%, 또는 20% 내지 70%, 또는 20% 내지 60%, 또는 20% 내지 50%, 또는 20% 내지 40%, 또는 20% 내지 30%, 또는 30% 내지 90%, 또는 50% 내지 80%, 또는 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 60%, 또는 30% 내지 50%, 또는 30% 내지 40%, 또는 40% 내지 90%, 또는 40% 내지 80%, 또는 40% 내지 70%, 또는 40% 내지 60%, 또는 40% 내지 50%, 또는 50% 내지 90%, 또는 50% 내지 80%, 또는 50% 내지 70%, 또는 50% 내지 60%인 항체의 용량이다.
일부 구현예에서, 적정치료 이하 용량은 항체의 단일요법 투여보다 덜 빈번한 항체의 투여이다. 일부 구현예에서, 단일요법 투여가 매주일 때, 적정치료 이하 투여에 대해 항체는 10일마다, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 매월, 또는 훨씬 덜 빈번하게 투여된다. 일부 구현예에서, 단일요법 투여가 2주마다일 때, 적정치료 이하 투여에 대해 항체는 3주마다, 또는 4주마다, 또는 매월, 또는 5주마다, 또는 6주마다, 또는 심지어 더 덜 빈번하게 투여된다. 일부 구현예에서, 단일요법 투여가 3주마다인 경우, 적정치료 이하 투여에 대해 항체는 4주마다, 또는 매월, 또는 5주마다, 또는 6주마다, 또는 8주마다, 또는 2개월마다, 또는 10주마다, 또는 12주마다, 또는 3개월마다, 또는 훨씬 덜 빈번하게 투여된다. 일부 구현예에서, 단일요법 투여가 4주마다인 경우, 적정치료 이하 투여에 대해 항체는 5주마다, 또는 6주마다, 또는 8주마다, 또는 2개월마다, 또는 10주마다, 또는 12주마다, 또는 3개월마다, 또는 14주마다, 또는 16주마다, 또는 4개월마다, 또는 훨씬 덜 빈번하게 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 240 mg 미만, 3주마다 200 mg 미만, 3주마다 350 mg 미만, 3주마다 360 mg 미만, 4주마다 480 mg 미만, 또는 6주마다 400 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 200 mg 미만, 3주마다 150 mg 미만, 3주마다 300 mg 미만, 3주마다 320 mg 미만, 4주마다 420 mg 미만, 또는 6주마다 350 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 150 mg 미만, 3주마다 120 mg 미만, 3주마다 250 mg 미만, 3주마다 280 mg 미만, 4주마다 360 mg 미만, 또는 6주마다 300 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 100 mg 미만, 3주마다 80 mg 미만, 3주마다 200 mg 미만, 3주마다 240 mg 미만, 4주마다 320 mg 미만, 또는 6주마다 250 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 50 mg 미만, 3주마다 60 mg 미만, 3주마다 150 mg 미만, 3주마다 200 mg 미만, 4주마다 240 mg 미만, 또는 6주마다 200 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 25 mg 미만, 3주마다 20 mg 미만, 3주마다 100 mg 미만, 3주마다 120 mg 미만, 4주마다 180 mg 미만, 또는 6주마다 160 mg 미만이다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 펨브롤리주맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 200 mg 또는 400 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 니볼루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 240 mg, 360 mg, 또는 480 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이고, 세미플리맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 350 mg이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 2주마다 240 mg 미만, 3주마다 200 mg 미만, 3주마다 350 mg 미만, 3주마다 360 mg 미만, 4주마다 480 mg 미만, 또는 6주마다 400 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 4주마다 240 mg 미만, 6주마다 200 mg 미만, 6주마다 350 mg 미만, 6주마다 360 mg 미만, 8주마다 480 mg 미만, 또는 12주마다 400 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 6주마다 240 mg 미만, 9주마다 200 mg 미만, 9주마다 350 mg 미만, 9주마다 360 mg 미만, 12주마다 480 mg 미만, 또는 18주마다 400 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 8주마다 240 mg 미만, 12주마다 200 mg 미만, 12주마다 350 mg 미만, 12주마다 360 mg 미만, 16주마다 480 mg 미만, 또는 24주마다 400 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 10주마다 240 mg 미만, 15주마다 200 mg 미만, 15주마다 350 mg 미만, 15주마다 360 mg 미만, 20주마다 480 mg 미만, 또는 30주마다 400 mg 미만이다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 펨브롤리주맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 투여 빈도는 3주마다 또는 6주마다이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 펨브롤리주맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 3주마다 200 mg 또는 6주마다 400 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 니볼루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다, 3주마다 또는 4주마다이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 니볼루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 2주마다 240 mg, 3주마다 360 mg, 또는 4주마다 480 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이고, 세미플리맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 투여 빈도는 3주마다이다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 800 mg 미만, 2주마다 840 mg 미만, 3주마다 1,200 mg 미만, 3주마다 1,500 mg 미만, 또는 4주마다 1,680 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 600 mg 미만, 2주마다 620 mg 미만, 3주마다 800 mg 미만, 3주마다 1,000 mg 미만, 또는 4주마다 1,240 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 400 mg 미만, 2주마다 410 mg 미만, 3주마다 400 mg 미만, 3주마다 500 mg 미만, 또는 4주마다 820 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량은 2주마다 200 mg 미만, 3주마다 200 mg 미만, 3주마다 250 mg 미만, 또는 4주마다 410 mg 미만이다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이고, 아벨루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 800 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 더발루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 10 mg/kg 또는 1,500 mg이다. 20.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 2주마다 800 mg 미만, 2주마다 840 mg 미만, 3주마다 1,200 mg 미만, 3주마다 1,500 mg 미만, 또는 4주마다 1,680 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 4주마다 800 mg 미만, 4주마다 840 mg 미만, 6주마다 1,200 mg 미만, 6주마다 1,500 mg 미만, 또는 8주마다 1,680 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 6주마다 800 mg 미만, 6주마다 840 mg 미만, 9주마다 1,200 mg 미만, 9주마다 1,500 mg 미만, 또는 12주마다 1,680 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 8주마다 800 mg 미만, 8주마다 840 mg 미만, 12주마다 1,200 mg 미만, 12주마다 1,500 mg 미만, 또는 16주마다 1,680 mg 미만이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체에 대한 적정치료 이하 용량의 빈도는 10주마다 800 mg 미만, 10주마다 840 mg 미만, 15주마다 1,200 mg 미만, 15주마다 1,500 mg 미만, 또는 20주마다 1,680 mg 미만이다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 아테졸리주맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 840 mg, 1,200 mg, 또는 1,680 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이고, 아벨루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 더발루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다 또는 4주마다이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 더발루맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 2주마다 10 mg/kg mg 또는 4주마다 1,500 mg이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 아테졸리주맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다, 3주마다 또는 4주마다이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 아테졸리주맙은 단일요법 용량 또는 단일요법 용량보다 낮은 적정치료 이하 용량으로(예컨대 백분율 내에서 또는 본원에 제공된 감소된 용량 또는 빈도로) 투여되고, 단일요법 용량은 2주마다 840 mg, 3주마다 1,200 mg, 또는 4주마다 1,680 mg이다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮은 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 단일요법 용량의 5% 내지 90%, 또는 5% 내지 80%, 또는 5% 내지 70%, 또는 5% 내지 60%, 또는 5% 내지 50%, 또는 5% 내지 40%, 또는 5% 내지 30%, 또는 10% 내지 90%, 또는 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 70%, 또는 10% 내지 60%, 또는 10% 내지 50%, 또는 10% 내지 40%, 또는 10% 내지 30%, 또는 20% 내지 90%, 또는 20% 내지 80%, 또는 20% 내지 70%, 또는 20% 내지 60%, 또는 20% 내지 50%, 또는 20% 내지 40%, 또는 20% 내지 30%, 또는 30% 내지 90%, 또는 50% 내지 80%, 또는 30% 내지 70%, 또는 30% 내지 60%, 또는 30% 내지 50%, 또는 30% 내지 40%, 또는 40% 내지 90%, 또는 40% 내지 80%, 또는 40% 내지 70%, 또는 40% 내지 60%, 또는 40% 내지 50%, 또는 50% 내지 90%, 또는 50% 내지 80%, 또는 50% 내지 70%, 또는 50% 내지 60%인 항-TIGIT 항체의 용량이다.
그러나 복용량은 선택된 투여 경로, 조성물의 제형, 환자 반응, 병태의 중증도, 대상체의 체중 및 처방의의 판단을 포함한 몇 개의 인자에 따라 달라질 수 있다. 개별 환자의 필요에 따라 시간이 지남에 따라 복용량을 늘리거나 줄일 수 있다. 일부 구현예에서, 환자에게는 초기에 더 낮은 용량이 제공되고, 이후 환자가 견딜 수 있는 더 높은 용량으로 증가된다. 일부 구현예에서, 환자에게는 초기에 더 높은 용량이 제공되고, 이후 더 낮은 용량으로 감소된다.
예시적인 징후
일부 구현예에서, 암은 방광암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암, 결장암, 신장암, 신장 세포 암종, 투명 세포 신장 암종, 두경부암, 교모세포종, 폐암, 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식 세포 암, 골암, 간암, 간세포 암종, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 호지킨 림프종, 골수종, 또는 육종이다. 일부 구현예에서, 암은 위암, 고환암, 췌장암, 폐 선암종, 방광암, 요로상피암, 두경부암, 두경부 편평 세포 암종, 전립선암, 중피종 및 투명 세포 신장 암종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 급성 골수성, 만성 골수성, 급성 림프구성 또는 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 소림프구성 림프종, 원발성 종격동 큰 B-세포 림프종, 비장 변연부 B-세포 림프종, 또는 결절외 변연부 B-세포 림프종을 포함하나 이에 제한되지 않는 림프종 또는 백혈병이다. 일부 구현예에서, 암은 결장직장암, 결장암, 신장암 또는 투명 세포 신장 암종이다. 일부 구현예에서, 암은 전이성 암이다.
일부 구현예에서, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 암은 비소세포 폐암이다.
일부 구현예에서, 암은 종종 T 세포 반응을 유도하기 위해 더 많은 항원을 갖기 때문에 종양 돌연변이 부담이 높은 암이다. 따라서, 일부 구현예에서, 암은 폐암, 흑색종, 방광암 또는 위암과 같은 돌연변이 부담이 높은 암이다. 일부 구현예에서, 암은 현미부수체 불안정성을 갖는다.
일부 구현예에서,
a) 암은 비소세포 폐암이고 TPS는 < 1%이거나;
b) 암은 두경부 편평 세포 암(HNSCC)이고 CPS는 < 1%이거나;
c) 암은 요로상피 암종이고 CPS는 < 10이거나;
d) 암은 위암이고 CPS는 < 1이거나;
e) 암은 식도암이고 CPS는 < 10이거나;
f) 암은 자궁경부암이고 CPS는 < 1이거나; 또는
g) 암은 삼중 음성 유방암이고, CPS는 < 10이다.
일부 구현예에서,
a) 암은 요로상피 암종이고, IC는 < 5%이거나;
b) 암은 삼중 음성 유방암이고 IC는 < 1%이거나; 또는
c) 암은 비소세포 폐암이고 IC는 < 10%이다.
일부 구현예에서, 암은 비소세포 폐암이고, TPS는 < 50%이다.
일부 구현예에서, 방법은 요로상피암의 일차 치료이다.
일부 구현예에서, 암은 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 항-PD-1 항체 및 항-PD-L1 항체 각각의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 항-PD-1 항체의 효능을 감소시키지만 항-PD-L1 항체는 감소시키지 않는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키지만 항-PD-L1 항체는 감소시키지 않는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 항-TIGIT 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및/또는 ALK 유전자의 돌연변이 및/또는 ROS1 유전자의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및/또는 ALK 유전자의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및 ALK 유전자의 돌연변이를 포함하지만 ROS1 유전자의 돌연변이는 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및 ROS1 유전자의 돌연변이를 포함하지만 ALK 유전자의 돌연변이는 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 암은 ALK 유전자의 돌연변이 및 ROS1 유전자의 돌연변이를 포함하지만 EGFR 유전자의 돌연변이는 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이를 포함하지만 ALK 유전자의 돌연변이 또는 ROS1 유전자의 돌연변이는 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 암은 ALK 유전자의 돌연변이를 포함하지만 EGFR 유전자의 돌연변이 또는 ROS1 유전자의 돌연변이는 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 암은 ROS1 유전자의 돌연변이를 포함하지만 ALK 유전자의 돌연변이 또는 EGFR 유전자의 돌연변이는 포함하지 않는다.
추가적인 예시적인 구현예
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 중 적어도 하나에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 각각에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIa 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 1개 이상의 억제성 FcγR에 대한 감소된 결합을 갖는다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 FcγRIIb에 대한 감소된 결합을 갖는다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 중쇄 불변 영역에 치환 S293D, A330L 및 I332E를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 푸코실화되지 않는다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 항-TIGIT 항체의 조성물에 포함되며, 조성물에서 항-TIGIT 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 푸코실화되지 않는다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 ADCC 및/또는 ADCP 활성이 향상된 Fc를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음을 포함한다:
a) 서열번호: 7-9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
b) 서열번호: 10-13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
c) 서열번호: 14-16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
d) 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
e) 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
f) 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 다음의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR, 및 CDR3을 포함한다:
a) 각각 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18 및 19; 또는
b) 각각 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18 및 19; 또는
c) 각각 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18 및 19; 또는
d) 각각 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18 및 19; 또는
e) 각각 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18 및 19.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1-5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 20-24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체 또는 다중 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, CT-011, BGB-A317, 세미플리맙, 신틸리맙, 티슬레리주맙, TSR-042, PDR001, 또는 토리팔리맙으로부터 선택되거나 다중 항-PD-1 항체 각각은 상기로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이다. 일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-L1 항체 또는 다중 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 더발루맙, BMS-936559, 아테졸리주맙, 또는 아벨루맙으로부터 선택되거나 다중 항-PD-L1 항체 각각은 상기로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이거나; 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다.
다양한 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 T 조절성 (Treg) 세포를 고갈시키고/거나, 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시키고/거나, CD8 T 세포 반응을 향상시키고/거나, 공-자극성 수용체를 상향조절하고/거나, 면역 활성화 사이토카인 (예컨대 CXCL10 및/또는 IFNγ)의 방출을 촉진시킨다. 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체는 면역 억압적 사이토카인 (예컨대 IL10 및/또는 MDC)보다 더 큰 정도로 면역 활성화 사이토카인의 방출을 촉진시킨다.
항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여의 경우, 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체 및 항-PD-L1 항체 중 하나의 적어도 첫 번째 용량은 다른 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 및 항-PD-L1 항체의 적어도 첫 번째 용량 전에 투여될 수 있다. 동시 투여를 위해, 일부 구현예에서, 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체 및 항-PD-L1 항체 중 하나의 적어도 첫 번째 용량 및 또 다른 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 및 항-PD-L1 항체의 적어도 첫 번째 용량은 별도의 약제학적 조성물로 투여되거나 동일한 약제학적 조성물로 투여될 수 있다.
약학적 조성물의 투여의 경로는 경구, 복강내, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 흡입, 국부, 병변내, 직장, 기관지내, 비강, 경점막, 장, 안구 또는 귀 전달, 또는 당 업계에 알려진 임의의 다른 방법일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제는 경구로, 정맥내로, 또는 복강내로 투여된다.
임의의 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체와 같은 공동 투여된 치료제는 함께 또는 별도로, 동시에 또는 상이한 시기에 투여될 수 있다. 투여된 때, 치료제는 독립적으로 1일 1회, 2회, 3회, 4회 또는 필요에 따라 다소 자주 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여된 치료제는 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 투여된 치료제는 동일한 시간 또는 시간들에, 가령 혼합물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 치료제들 중 하나 이상은 지속된-방출 제형으로 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 임의의 병용 요법은 장시간에 걸쳐, 예를 들어 적어도 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350일 또는 그 초과 동안 대상체에게 투여된다.
예시적인 효능 결과
일부 구현예에서, 본원에 기재된 병용 요법 중 적어도 일부에서 관찰된 향상된 활성은 상응하는 단일요법 치료와 비교하여 특정 이점을 갖는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 병용 요법은 단일 요법으로 투여될 때 임의의 성분 항체의 독성 프로파일과 비슷한 독성 프로파일을 갖는다. 일부 구현예에서, 병용 요법의 투여는 단일 요법으로 투여될 때 임의의 성분 항체의 반응 기간과 비교하여 더 긴 반응 기간을 제공한다. 일부 구현예에서, 병용 요법의 투여는 단일 요법으로 투여될 때 임의의 성분 항체의 것과 비교하여 더 긴 무진행 생존을 초래한다. 일부 구현예에서, 병용 요법의 투여는 임의의 병용 요법의 성분 항체를 사용한 단일요법 치료 후에 재발하는 재발성 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
VI. 조성물 및 키트
또 다른 양태에서, 대상체의 암을 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 조성물 및 키트가 제공된다.
약제학적 조성물
일부 구현예에서, 본 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, (1) 항-TIGIT 항체 및 (2) 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 중 적어도 하나는 제1 약제학적 조성물로 투여되고, 1) 항-TIGIT 항체 및 (2) 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 중 적어도 다른 것은 제2 약제학적 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, (1) 항-TIGIT 항체 및 (2) 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체는 단일 약제학적 조성물로 투여된다.
본 발명에서 사용을 위하여 제형을 제조하기 위한 지침은, 예를 들어, 참조로 본원에 이로써 편입되는, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., 2006, supra; Martindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, London: Pharmaceutical Press; Niazi, Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations, 2004, CRC Press; 및 Gibson, Pharmaceutical Preformulation and Formulation: A Practical Guide from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form, 2001, Interpharm Press]에서 찾아진다. 본원에 기재된 약학적 조성물은 당업자에 알려지는 방식으로, 즉, 종래 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조, 유화, 캡슐화, 포획 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다. 다음 방법 및 부형제는 단순히 예시적이고 결코 제한적이지 않다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제는, 예를 들어, 치료제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 절반-투과성 매트릭스에서 지속된-방출, 제어된 방출, 연장된-방출, 시간조정된-방출 또는 지연된-방출 제형으로 전달을 위하여 제조된다. 지속된-방출 물질들의 다양한 유형들은 확립되었고 당업자에 의해 잘 알려진다. 지속된-방출 물질들의 다양한 유형들은 확립되었고 당업자에 의해 잘 알려진다. 현행 연장된-방출 제형은 필름-코팅된 정제, 다중미립자 또는 펠렛 시스템, 친수성 또는 친유성 물질을 사용하는 매트릭스 기술 및 기공 형성 부형제가 있는 왁스-기반 정제를 포함한다(예를 들어 문헌[Huang, 등 Drug Dev. Ind. Pharm. 29:79 (2003); Pearnchob, 등 Drug Dev. Ind. Pharm. 29:925 (2003); Maggi, 등 Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003); Khanvilkar, 등, Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002); 및 Schmidt, 등, Int. J. Pharm. 216:9 (2001)] 참조). 지속된-방출 전달 시스템은, 그들의 설계에 따라, 화합물을 수시간 또는 수일 동안, 가령, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24 시간 또는 그 이상 동안 방출시킬 수 있다. 보통, 지속된 방출 제형은 자연-발생 또는 합성 중합체, 가령, 중합체성 비닐 피롤리돈, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈 (PVP); 카복시비닐 친수성 중합체; 소수성 및/또는 친수성 하이드로콜로이드, 예컨대 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 및 하이드록시프로필메틸셀룰로스; 및 카복시폴리메틸렌을 사용하여 제조될 수 있다.
경구 투여의 경우, 치료제는 당업계에서 잘 알려지는 약학적으로 허용가능한 담체와 조합함으로써 용이하게 제형화될 수 있다. 이러한 담체는, 치료되어야 하는 환자에 의한 경구 섭취를 위하여, 화합물이 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 에멀젼, 친유성 및 친수성 현탁액, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 및 기타 등등으로서 제형화되도록 한다. 경구 사용을 위한 약학적 제조물은 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 생성된 혼합물을 임의로 분쇄하고, 원하는 경우, 적합한 보조제를 첨가한 후, 과립들의 혼합물을 처리하여, 정제 또는 당의정 코어를 수득함으로써 수득될 수 있다. 적합한 부형제는, 예를 들어, 충전제 예컨대 락토스, 수크로스, 만니톨, 또는 소르비톨을 포함하는 당; 셀룰로스 제조물 예컨대, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트래거캔스검, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP)을 포함한다. 원하는 경우, 붕해 제제, 예컨대 가교 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 이의 염 예컨대 알긴산나트륨이 첨가될 수 있다.
치료제는 주사에 의해, 예를 들면, 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의해 비경구 투여를 위하여 제형화될 수 있다. 주사의 경우, 화합물 또는 화합물들은 이들을 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 또는 기타 유사한 오일, 합성 지방족 산 글리세리드, 고급 지방족 산의 에스테르 또는 프로필렌 글리콜에서; 그리고 필요한 경우, 종래 첨가제 예컨대 가용화제, 등장성 제제, 현탁화 제제, 유화 제제, 안정제 및 방부제로 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조물로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 수용액에서, 바람직하게는 생리학적으로 적합한 완충액 예컨대 행크스 용액, 링거 용액, 또는 생리학적 식염수 완충액에서 제형화될 수 있다. 주사를 위한 제형은 방부제가 첨가된 단위 투약량 형태로, 예를 들면, 앰풀로 또는 다중-용량 용기에 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클에서 현탁액, 용액 또는 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있고, 제형성 제제 예컨대 현탁화, 안정화 및/또는 분산화 제제를 함유할 수 있다.
치료제는 경점막 또는 경피 수단에 의해 전신적으로 투여될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여의 경우, 침투되어야 하는 장벽에 적합한 침투제가 제형에서 사용된다. 국부 투여의 경우, 제제는 연고, 크림, 고약, 분말 및 젤로 제형화된다. 일 구현예에서, 경피 전달 제제는 DMSO일 수 있다. 경피 전달 시스템은, 예를 들면, 패치를 포함할 수 있다. 경점막 투여의 경우, 침투되는 장벽에 적합한 침투제가 제형에 사용된다. 이러한 침투제는 당업계에서 일반적으로 알려진다. 예시적 경피 전달 제형은 미국 특허 번호 6,589,549; 6,544,548; 6,517,864; 6,512,010; 6,465,006; 6,379,696; 6,312,717 및 6,310,177에 기재된 것들을 포함하고, 이들의 각각은 참조로 본원에 이로써 편입된다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 생리학적으로 적합하고 바람직하게는 치료제의 활성을 방해하지 않거나 달리 억제시키지 않는 임의의 용매, 분산 매질, 또는 코팅물을 포함한다. 일부 구현예에서, 담체는 정맥내, 근육내, 경구, 복강내, 경피, 국부, 또는 피하 투여에 적합하다. 약학적으로 허용가능한 담체는, 예를 들어, 조성물을 안정화시키는 또는 활성 제제(들)의 흡수를 증가 또는 축소시키는 작용을 하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 화합물(들)을 함유할 수 있다. 생리학적으로 허용가능한 화합물은, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스, 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트화 제제, 저분자량 단백질, 활성 제제의 소거 또는 가수분해를 감소시키는 조성물, 또는 부형제나 기타 안정제 및/또는 완충액을 포함할 수 있다. 기타 약학적으로 허용가능한 담체 및 그들의 제형은 잘-알려지고 일반적으로, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Philadelphia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005]에 기재된다. 다양한 약학적으로 허용가능한 부형제는 당업계에서 잘-알려지고, 예를 들어, 문헌[Handbook of Pharmaceutical Excipients (제5판, Ed. Rowe 등, Pharmaceutical Press, Washington, D.C.)]에서 찾아질 수 있다.
본 개시내용의 약학적 조성물의 투약량 및 원하는 약물 농도는 계획된 특정한 용도에 따라 다양할 수 있다. 적절한 투약량 또는 투여의 경로의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 적합한 투약량은 또한 본원에 기재된다.
키트
일부 구현예에서, 암이 있는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 키트는 다음을 포함한다:
본원에 제공된 항-TIGIT 항체; 및
본원에 제공된 바와 같은 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체.
일부 구현예에서, 키트는 본 발명의 방법의 실시를 위한 지령 (즉, 프로토콜)이 들어있는 지시 자료 (예를 들면, 암을 치료하기 위한 키트 사용을 위한 지침)를 추가로 포함할 수 있다. 지시 자료가 서면 또는 인쇄 자료를 전형적으로 포함하여도, 이들은 이에 제한되지는 않는다. 이러한 지침을 보관할 수 있고 이들을 최종 사용자에게 통신할 수 있는 임의의 매체는 본 발명에 의해 고려된다. 이러한 매체는, 비제한적으로 전자적 저장 매체 (예를 들면, 자기 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체 (예를 들면, CD ROM), 및 기타 등등을 포함한다. 이러한 매체는 이러한 지시 자료를 제공하는 인터넷 사이트에 대한 주소를 포함할 수 있다.
VII. 실시예
아래 논의된 실시예는 본 발명을 단순히 예시하도록 의도되고 어떤 식으로든 본 발명을 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 실시예는 아래 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험임을 나타내도록 의도되지 않는다. 사용된 숫자 (예를 들어, 양, 온도, 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력이 이루어졌지만 일부 실험적 오차 및 편차는 고려되어야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨이고, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다.
실시예 1: 상이한 동계 모델의 종양 미세환경
1.1 물질 및 방법
Renca, CT26 및 MC38 종양 세포를 Balb/c 또는 C57BL/6 마우스에 피하 이식하여 100 mm3까지 성장시켰다. 동물로부터 종양을 절제하고, 제조업체(Millipore)의 지침에 따라 효소 해리 키트를 사용하여 단일 세포 현탁액을 생성하였다. 종양을 항체로 염색하여 B 세포 (CD19+), CD4+ T 세포 (CD3+CD8-CD4+FoxP3-), NK 세포 (CD3-NKp46+), mMDSC (CD11b+Ly6G-Ly6C+), DCs (CD11c+MHCII+), gMDSC (CD11b+Ly6G+Ly6C-), 대식세포 (CD11b+F4/80+Ly6c-Ly6G-), 조절 T 세포 (CD3+CD8-CD4+FoxP3+CD25+CD127-), CD8+ T 세포 (CD3+CD4-CD8+), 및 활성화된 CD8+ T 세포 (CD3+CD4-CD8+Eomes+PD-1+Ki67+)를 식별하고 Attuen 유동 세포측정기를 사용하여 분석하였다.
1.2 결과
종양 내 각 세포 유형의 백분율을 결정하고 플롯팅하였다(도 1a 내지 도 1c). 처리 시작 전 100 mm3 기준선에서 각 종양은 종양 미세환경에서 각 면역 세포 서브세트의 뚜렷하고 상이한 수준을 보여주었다. 예를 들어, MC38은 T 세포에 비해 선천성 면역 세포의 증가된 풍부화를 보여주었다(도 1c). 이러한 결과는 본 발명자의 시설에서 분석할 때 이러한 종양 유형의 기준 면역 미세환경이지만, 이러한 종양 유형을 다른 시설에서 평가할 때 결과가 상이할 가능성이 있다(Mosely, 2017, Cancer Immunology Res. 5(1): 29-41).
실시예 2: 종양 PD-1 및 PD-L1 발현 수준
1.1 물질 및 방법
다양한 크기(100 mm3, 300 mm3, 및 1,000 mm3))의 Renca, CT26 및 MC38 종양에 대해 대량 종양 RNAseq를 수행하였다. 상이한 요법에 대한 반응성의 기초가 될 수 있는 다양한 동계 종양 모델의 기준 면역 체크포인트 특성을 조사하기 위해, 다양한 면역 체크포인트 분자의 전사 수준을 분석하였다.
1.2 결과
이 분석은 상이한 종양 모델 간에 PD-1 및 PD-L1 발현의 수준이 상이한 것으로 나타났으며(도 2a 및 도 2b), MC38 종양은 두 분자 모두의 가장 낮은 평균 수준을 나타내었고, Renca 종양이 그 뒤를 이었다. CT26 종양은 두 분자 모두 가장 높은 수준을 나타내었다.
실시예 3: 항-TIGIT 및 항-PD-1 항체에 대한 MC38 종양의 반응성
1.1 물질 및 방법
상이한 Fc 백본을 갖는 다양한 항-TIGIT 항체와 항-PD-1 항체의 조합에 대한 MC38 종양의 반응성을 C57BL/6 마우스에 MC38 동계 종양 세포주를 이식함으로써 테스트하였다. 종양을 피하로 이식하였고, 100 mm3에 도달했을 때 동물은 0.1mg/kg의 SEA-TGT mIgG2a 항체(즉, 푸코실화되지 않은 인간 IgG1 백본에 해당하는 푸코실화되지 않은 마우스 IgG2a로 재구성된 SEA-TGT 항체), 야생형 mIgG2a 항-TIGIT 항체, Fc-널(null) 항-TIGIT LALA mIgG2a 항체, 항-마우스 PD-1 항체, 또는 두 제제의 조합(예를 들어, SEA-TGT 및 항-마우스 PD-1)로 3일 간격으로 3회 용량으로(q3dx3) 처리하였다. 각각의 상이한 항-TIGIT 항체는 동일한 가변 도메인을 갖고 Fc 백본 및 향상된 이펙터 기능의 관련 수준과 관련해서만 달랐다(푸코실화되지 않음 > 야생형 > LALA Fc-널). 종양 크기를 측정하고 시간 경과에 따라 성장을 플롯팅하였다.
1.2 결과
준최적 용량(0.1 mg/kg) 또는 더 낮은 용량의 두 제제 단독으로 처리한 동물은 최소한의 반응성과 종양 성장 지연을 입증하였다(도 3)(TIGIT 단독의 경우 표시되지 않음). PD-1 처리에 Fc-널 항-TIGIT LALA 항체를 첨가하면 항종양 활성이 향상되지 않았다. PD-1 처리에 mIgG2a 백본(IgG1 인간 백본의 FcγR 결합과 동등한 FcγR 결합)에 대한 표준 항-TIGIT를 첨가하면 종양 성장이 지연되는 정도가 실질적으로 증가하고 치유 속도가 2배 증가하였다(도 3).
그러나 이 Fc 상호작용이 푸코실화되지 않은 항-TIGIT 항체(SEA-TGT mIgG2a)의 SEA 백본으로 더욱 향상되었을 때, 항종양 활성은 더욱 향상되었고 완전 반응이 2배 더 증가하였다(도 3). 이들 데이터는 항-TIGIT 항체에 의한 Fc 관여가 항-TIGIT 처리와 항-PD-1 차단 사이의 시너지 효과를 촉진하는 데 도움이 된다는 것을 입증한다. 또한, 특히 SEA-TGT mIgG2a와의 이러한 시너지 활성은 PD-1과 PD-L1 발현 수준이 모두 가장 낮은 MC38 모델에서 나타났다(도 2).
실시예 4: 항-TIGIT 및 항-PD-1 항체에 대한 CT26 및 Renca 종양의 반응성
1.1 물질 및 방법
SEA-TGT mIgG2a(추가 세부사항은 실시예 3 참조)와 항-PD-1 항체의 조합에 대한 반응성을 CT26 및 Renca 모델에서 추가로 테스트하였다. Balb/c 마우스에 CT26 또는 Renca 동계 종양 세포주를 이식하였다. 종양을 피하로 이식하고 종양이 100 mm3에 도달하면, 동물을 준최적 농도의 (0.1 mg/kg)의 SEA-TGT mIgG2a, 항-마우스 PD-1, 또는 두 제제의 조합의 조합으로 q3dx3으로 처리하였다. 종양 크기를 측정하고 시간 경과에 따라 성장을 플롯팅하였다.
1.2 결과
0.1 mg/kg의 SEA-TGT 단독으로 준최적 용량으로 처리된 동물은 CT26 모델(도 4a) 및 Renca 모델(도 4b) 모두에서 최소한의 반응성 및 종양 성장 지연을 입증하였고; 마찬가지로, 저용량 항-PD-1 치료에서도 최소한의 항종양 활성이 나타났다. 그러나 SEA-TGT mIgG2a와 항-PD-1 항체의 두 준최적 용량을 첨가하면 항종양 활성이 크게 향상되었다. CT26 모델(도 4a) 및 Renca 모델(도 4b) 모두에서 종양 성장 지연 및 병용 치료에 대한 완전 반응 모두의 증가가 나타났다. 조합 활성의 정도는 Renca 모델(도 4b)에 비해 CT26 모델(도 4a)에서 더 컸으며, MC38 모델(도 3)은 여전히 조합에 대해 가장 큰 민감성을 나타내었다.
1.3 실시예 2 내지 4의 요약
이들 모델에서 PD-L1 발현의 상이한 수준을 고려하여(도 2a 및 도 2b), 실시예 2-4의 데이터는 SEA-TGT mIgG2a와 항-마우스 PD-1 항체의 시너지 효과가 놀랍게도 기본 PD-L1 발현 수준과 상관되지 않음을 입증한다. PD-L1 발현 수준이 가장 낮은 MC38 모델은 SEA-TGT mIgG2a와 항-PD-1 항체를 병용 처리했을 때 가장 큰 효과를 나타내었다(도 3).
이펙터 기능이 향상된 Fc 영역을 포함하는 항-TIGIT 항체(예를 들어, SEA-TGT와 같은 푸코실화되지 않은 항체)가 더 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 종양 모델에서도 항-PD-1 항체와 시너지 효과를 나타낼 수 있다는 발견은 놀라운 일이었다. 이는 다른 Fc 백본(예를 들어, 야생형 또는 IgG1-이펙터 널)을 갖는 항-TIGIT 항체에 대한 연구에서 조합이 상대적으로 높은 수준의 PD-L1 발현에 의존한다는 사실이 밝혀졌기 때문이다. 이와 같이, 통상적으로 이러한 항-TIGIT 항체를 사용하여 수행된 임상 시험은 종종 PD-L1을 특정 역치 한계 초과로 발현하는 환자에게만 병용을 테스트하도록 설계되었다.
실시예 5: 단일 제제를 사용한 MC38, CT26 및 Renca 종양 처리
1.1 물질 및 방법
상이한 Fc 백본을 갖는 항-TIGIT 항체에 대한 MC38, CT26 및 Renca 종양의 반응성을 C57BL/6 또는 Balb/c 마우스에 표시된 동계 종양 세포주를 이식하여 테스트하였다(도 5a 내지 도 5f). 종양을 피하로 이식하고 종양이 100 mm3에 도달하면, 동물을 표시된 용량(도 5a 내지 도 5f)의 야생형 푸코실화된 mIgG2a 버전의 SEA-TGT(mAb13) 또는 SEA-TGT mIgG2a(푸코실화되지 않은 인간 IgG1 백본에 해당하는 푸코실화되지 않은 마우스 IgG2a로 재구성된 SEA-TGT 항체)로 q3dx3로 처리하였다. 종양 크기를 측정하고 시간 경과에 따라 성장을 플롯팅하였다. 각 그룹의 동물에서 완전한 종양 절제는 완전 반응(CR)으로 표시되었다. 백본 이펙터 기능과 관계없이, 더 높은 용량의 클론 13 또는 SEA-TGT mIgG2a는 항종양 반응을 유도했지만, 항-PD-1과 병용했을 때 나타나는 것과 동일한 치유적 반응을 항상 유도할 수는 없었다.
1.2 결과
MC38 모델에서, 5 mg/kg의 항-TIGIT 처리 단독의 용량에서도 완전 반응 치유율은 1/6에 불과했고(도 5a), 단지 0.1 mg/kg의 SEA-TGT mIgG2a가 0.1 mg/kg의 용량의 항-PD-1 항체의 용량과 조합되었을 때의 4/5와는 대조적이었다(도 3). 따라서 MC38 모델에서는 단일요법으로 SEA-TGT mIgG2a의 용량 수준을 50배 증가시켰음에도 불구하고 병용요법의 완전반응률이 더 우수하였다.
CT26 모델에서, SEA-TGT mIgG2a의 5 mg/kg 용량은 MC38 모델에서 달성된 것과 비교하여 향상된 수준의 치유적 반응을 유도했지만(도 5b), 항-PD-1 항체(도 4a)와 함께 투여했을 때 0.1 mg/kg 용량에서 유사한 수준의 치유적 반응이 나타났다(즉, 동일한 반응률을 유도하기 위해 SEA-TGT 항체 수준을 50배 감소시킴).
대조적으로, Renca 모델에서는 SEA-TGT mIgG2a의 1 mg/kg 용량이 치유적 반응을 유도한 반면(도 5c), 항-PD-1 항체와 함께 투여된 경우 0.1 mg/kg 용량에서 유사한 반응이 나타났다(도 4b).
항-PD-1 항체 치료 단독으로, 5 mg/kg의 용량은 MC38 모델에서 종양 성장을 감소시켰고(도 5d), 10 mg/kg의 용량은 CT26 모델에서 종양 성장을 적당히 감소시켰고(도 5e), 그리고 1 mg/kg의 용량은 Renca 모델에서 종양 성장을 감소시키지 못하였다(도 5f). 매우 최소한의 단일 제제 활성에도 불구하고, 이들 모델 모두에서 항-PD-1 치료에 SEA-TGT를 실질적으로 더 낮은 용량으로 첨가하면 항종양 활성이 크게 증가할 수 있었다.
종합적으로, 앞선 실시예에 제시된 결과는 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 암이 항-TIGIT 항체, 및 PD-1/PD-L1 억제제와 조합된 항-TIGIT 항체에 의해 치료될 수 있다는 놀라운 발견을 뒷받침한다. 전술한 실시예에 의해 입증된 바와 같이, 이는 향상된 Fc 결합 특성 및 이펙터 기능을 갖는 항체(예를 들어 SEA-TGT)를 사용할 때 특히 그렇다. 원하는 Fc 결합 특징은 활성 예컨대 활성화 FcγR에 향상된 결합, 억제성 FcγR에 축소된 결합, 향상된 ADCC 활성, 및/또는 향상된 ADCP 활성을 포함하였다. SEA-TGT와 같이 원하는 활성을 가진 이러한 특정 항체는 비푸코실화되었다. 예를 들어, 본원에 제공된 데이터는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체를 사용하여 현재 승인된 요법에서 PD-L1을 컷오프 수준 미만으로 발현하는 종양이 있는 환자를 치료하기 위해 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 향상된 Fc 백본을 갖는 항-TIGIT 항체(예를 들어, SEA-TGT)의 사용을 뒷받침한다. 데이터는 본원에 기재된 것과 같은 종양의 돌연변이로 인해 항-PD1 또는 항-PDL1 항체 치료를 이용한 표준 치료에 상대적으로 반응하지 않는 환자의 이러한 병용 요법을 추가로 뒷받침한다.
본원에 제공된 데이터는 또한 항-TIGIT 항체, 예를 들어 SEA-TGT와 같은 향상된 이펙터 기능을 갖는 항-TIGIT 항체 및 적정치료 이하 용량의 PD-L1 억제제를 사용한 치료가 효능의 상승적 개선을 나타냄을 입증한다. 데이터는 또한 이러한 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량이 낮은 수준의 PD-L1을 발현하는 암을 치료하기 위해 PD-1/PD-L1 억제제와 병용하여 사용될 수 있음을 나타낸다. 더 낮은 수준의 항-PD1(또는 항-PD-L1) 항체 및/또는 항-TIGIT 항체를 투여하는 능력은 잠재적으로 독성을 줄일 수 있다.
이론에 얽매이려는 의도 없이, TIGIT의 경우, 푸코실화되지 않은 항-TIGIT 항체는 항원 (+) T 세포와 항원 제시 세포 사이의 면역 시냅스의 강도를 증가시키는 것으로 여겨진다. 선천적 세포에 대한 FcγRIIIa의 관여는 항원 특이적 T 세포 반응을 향상시킬 수 있는 인자의 활성화 및 생산을 증가시킨다. 비푸코실화된 백본은, 표적 항원과 독립적으로, 2차 항원 특이적 T 세포 반응을 유도하는데 도움이 될 수 있는 활성화 상태를 유도하기 위해 선천적 면역 세포 또는 다른 FcγRIIIa 발현 세포 예컨대 감마 델타 T 세포에 결합할 수 있다. 비푸코실화된 항체가 작업하는 모든 이들 기전은 항-종양 활성 및 장수 면역 보호를 구동시키는 T 세포 반응으로 이어질 수 있다. FcγRIIb에 결합의 축소 또는 결여는 비푸코실화된 항체에 의해 구동된 면역 활성화를 감소시키는 카운터 또는 억제성 신호가 없음을 의미한다.
본원에 인용된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 또는 기타 문헌은 각 개별 간행물, 특허, 특허 출원, 또는 기타 문헌이 모든 목적을 위하여 참조로 편입되는 것으로 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위하여 그들 전체가 참조로 편입된다.
SEQUENCE LISTING <110> Seagen Inc. <120> METHODS OF TREATING CANCER WITH ANTI-TIGIT ANTIBODIES <130> 01218-0028-00PCT <150> US 63/173,216 <151> 2021-04-09 <160> 25 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TIGIT antibody Clone 13 VH Protein <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 2 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-TIGIT antibody Clone 13A VH <400> 2 Gln 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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 23 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 13C heavy chain hIgG1 (and hIgG1 nonfucosylated) amino acid sequence <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 24 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 13D heavy chain hIgG1 (and hIgG1 nonfucosylated) amino acid sequence <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 25 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 13, 13A, 13B, 13C, and 13D light chain hkappa (and nonfucosylated) amino acid sequence; SEA-TGT <400> 25 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Arg Ile Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (64)

  1. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 암 샘플 내 PD-L1의 수준은 복합 양성 점수(CPS)로 측정 시 10 미만, 또는 총 비율 점수(TPS)로 측정 시 50% 미만, 또는 종양 세포 점수(TC)로 측정 시 50% 미만, 또는 종양 침윤 면역 세포 염색(IC)로 측정 시 10% 미만이고, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 암은 CPS로 측정 시 5 미만, 3 미만, 또는 1 미만인 PD-L1의 수준을 발현하는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암은 TPS로 측정 시 40% 미만, 또는 30% 미만, 또는 20% 미만, 또는 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 발현하는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 TC로 측정 시 40% 미만, 또는 30% 미만, 또는 20% 미만, 또는 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 발현하는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 IC로 측정 시 5% 미만, 또는 3% 미만, 또는 1% 미만인 PD-L1의 수준을 발현하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 암은 비소 폐암이고 TPS는 < 1%이거나;
    b) 암은 두경부 편평 세포 암(HNSCC)이고 CPS는 < 1%이거나;
    c) 암은 요로상피 암종이고 CPS는 < 10이거나;
    d) 암은 위암이고 CPS는 < 1이거나;
    e) 암은 식도암이고 CPS는 < 10이거나;
    f) 암은 자궁경부암이고 CPS는 < 1이거나; 또는
    g) 암은 삼중 음성 유방암이고, CPS는 < 10인, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인, 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 비소세포 폐암이고, TPS는 < 50%인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙인, 방법.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 암은 요로상피 암종이고 IC는 < 5%이거나;
    b) 암은 삼중 음성 유방암이고 IC는 < 1%이거나; 또는
    c) 암은 비소세포 폐암이고 IC는 < 10%이거나; 또는
    d) 암은 비소세포 폐암이고 TC < 50%인, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여되는, 방법.
  13. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여되는, 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항체의 덜 빈번한 투여를 포함하는, 방법.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 항체의 단일요법 용량보다 낮은 용량을 포함하는, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 단일요법 용량의 5% 내지 90%, 또는 5% 내지 80%, 또는 5% 내지 70%, 또는 5% 내지 60%, 또는 5% 내지 50%, 또는 5% 내지 40%, 또는 5% 내지 30%인 항체의 용량인, 방법.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 단일요법 용량은 200 mg 또는 400 mg인, 방법.
  18. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 단일요법 용량은 240 mg, 360 mg, 또는 480 mg인, 방법.
  19. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이고, 단일요법 용량은 350 mg인, 방법.
  20. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이고, 단일요법 용량은 800 mg인, 방법.
  21. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 단일요법 용량은 10 mg/kg 또는 1500 mg인, 방법.
  22. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 단일요법 용량은 840 mg, 1200 mg, 또는 1680 mg인, 방법.
  23. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 적정치료 이하 용량이 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항체의 덜 빈번한 투여를 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 단일요법 투여 빈도는 3주마다 또는 6주마다인 것인, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이고, 단일요법 용량은 3주마다 200 mg 또는 6주마다 400 mg인, 방법.
  26. 제23항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다 또는 3주마다 또는 4주마다인 것인, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이고, 단일요법 용량은 2주마다 240 mg, 3주마다 360 mg, 또는 4주마다 480 mg인, 방법.
  28. 제23항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이고, 단일요법 투여 빈도는 3주마다인 것인, 방법.
  29. 제23항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다인 것인, 방법.
  30. 제23항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다 또는 4주마다인 것인, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이고, 단일요법 용량은 2주마다 10 mg/kg mg 또는 4주마다 1500 mg인, 방법.
  32. 제23항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 단일요법 투여 빈도는 2주마다, 3주마다 또는 4주마다인 것인, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이고, 단일요법 용량은 2주마다 840 mg, 3주마다 1200 mg, 또는 4주마다 1680 mg인, 방법.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택되는, 방법.
  35. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 소세포 폐암, 초기 단계 소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피암, 삼중 음성 유방암, 위암, 간세포 암종, 교모세포종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종 (ESCC), 및 비-현미부수체 불안정성 높은 (비-MSI 높은) 결장직장암으로부터 선택되는, 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 요로상피암의 일차 치료인, 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함하는, 방법.
  38. 암을 치료하는 방법으로서, 암이 있는 대상체에게 (1) 항-TIGIT 항체, 및 (2) 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-TIGIT 항체는 향상된 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하고, 암은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 효능을 감소시키는 돌연변이를 포함하는, 방법.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및/또는 ALK 유전자의 돌연변이 및/또는 ROS1 유전자의 돌연변이를 포함하는, 방법.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 비소세포 폐암이고, 암은 EGFR 유전자의 돌연변이 및/또는 ALK 유전자의 돌연변이를 포함하는, 방법.
  41. 제40항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이거나; 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하되, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 중 적어도 하나에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함하는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함하는, 방법.
  44. 제42항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRIIa에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함하는, 방법.
  45. 제42항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적어도 FcγRIIIa 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함하는, 방법.
  46. 제42항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 FcγRIIIa, FcγRIIa, 및 FcγRI에 대한 결합이 향상된 Fc를 포함하는, 방법.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 FcγRIIb에 대한 결합이 감소된 것인, 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 중쇄 불변 영역에서 치환 S293D, A330L 및 I332E를 포함하는, 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 푸코실화되지 않은 것인, 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 조성물에서 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%는 푸코실화되지 않는 것인, 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체의 Fc는 동일한 아이소타입의 상응하는 야생형 Fc에 비해 ADCC 및/또는 ADCP 활성이 향상된 Fc를 포함하는, 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함하는, 방법:
    a) 서열번호: 7-9로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    b) 서열번호: 10-13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    c) 서열번호: 14-16으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    d) 서열번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    e) 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및
    f) 서열번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 하기 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는, 방법:
    a) 각각 서열번호: 7, 10, 14, 17, 18 및 19; 또는
    b) 각각 서열번호: 8, 11, 14, 17, 18 및 19; 또는
    c) 각각 서열번호: 9, 12, 15, 17, 18 및 19; 또는
    d) 각각 서열번호: 8, 13, 16, 17, 18 및 19; 또는
    e) 각각 서열번호: 8, 12, 16, 17, 18 및 19.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 1-5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 서열번호: 20-24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체는 적정치료 이하 용량으로 투여되는, 방법.
  57. 제56항에 있어서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 a) 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮고/거나 b) 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항-TIGIT 항체의 덜 빈번한 투여를 포함하는, 방법.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 항-TIGIT 항체의 단일요법 용량보다 낮은 용량을 포함하는, 방법.
  59. 제56항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 적정치료 이하 용량은 치료되는 암에 대한 단일요법 용량의 5% 내지 90%, 또는 5% 내지 80%, 또는 5% 내지 70%, 또는 5% 내지 60%, 또는 5% 내지 50%, 또는 5% 내지 40%, 또는 5% 내지 30%인 항-TIGIT 항체의 용량인, 방법.
  60. 제56항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체의 적정치료 이하 용량이 치료되는 암에 대한 단일요법 투여 빈도보다 항-TIGIT 항체의 덜 빈번한 투여를 포함하는, 방법.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  62. 제61항에 있어서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, CT-011, BGB-A317, 세미플리맙, 신틸리맙, 티슬레리주맙, TSR-042, PDR001 또는 토리팔리맙으로부터 선택되는, 방법.
  63. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  64. 제63항에 있어서, 항-PD-L1 항체는 더발루맙, BMS-936559, 아테졸리주맙 또는 아벨루맙으로부터 선택되는, 방법.
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