KR20230138462A - 암 치료를 위한 템플릿 지시된 면역조절 - Google Patents

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KR20230138462A
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tumor
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로버트 마이클 더들리
치용 피터 리우
수브라타 쿠마르 고쉬
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트랜스코드 테라퓨틱스, 인크.
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Abstract

비종양 환경에 비해 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적인 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 암 치료용 조성물 및 치료 방법이 본원에 기재되어 있다.

Description

암 치료를 위한 템플릿 지시된 면역조절
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 2020년 12월 30일 출원된 미국 가특허출원 제 63/132,315의 우선권의 이익을 주장한다. 전술한 출원의 내용은 전부 본 출원에 참고문헌으로 포함된다.
발명의 배경
암은 전 세계 인류의 건강을 지속적이고 중대하게 위협하고 있다. 암 치료를 위한 새로운 메커니즘을 활용하는 것은 효과적인 암 치료에 대한 지속적이고 긴급한 수요를 충족시키는 치료제를 전달하는 유망한 수단을 나타낸다. 최근 연구에 따르면 합성 RIG-I(레티노산 유도성 유전자 I) 작용제의 전신 전달이 종양 성장을 억제하는 것으로 나타났다. RIG-I는 바이러스 RNA에서 일반적으로 발견되는 일반적인 모티프인 언캡핑(uncapped) 5'-트리포스페이트 모이어티가 있는 짧은 이중 가닥 RNA를 감지한다. RIG-I는 종양 세포를 포함한 다양한 세포 유형에서 발현되며 암 치료의 유망한 표적으로 작용한다. 따라서, 본 발명의 목적은 암을 치료하기 위해 종양 미세환경에서 RIG-I을 선택적으로 활성화하기 위한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다. RIG-I 활성화 수단으로 내인성 miRNA를 활용하는 치료 방법론은 종양 미세 환경을 표적으로 하여 다양한 관련 암을 치료하는 매우 유망한 접근 방식을 제공한다.
본 발명의 조성물 및 방법은 비종양 환경에 비해 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적인 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 활용하여 종양 미세환경에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 제공한다.
발명의 요약
특정 양상들에서 본 발명은 암 치료 방법에 관한 것으로, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 또는 비종양 미세환경에 비해 종양 또는 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적이다.
특정 양상들에서, 본 발명은 종양 또는 종양 미세환경에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법에 관한 것으로, 이 방법은 대상체에게 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 종양 또는 종양 미세환경에서 발현된 miRNA에 상보적인 서열을 포함하며, 이 때 RIG-I는 miRNA를 발현하는 종양 또는 종양 미세환경에서 선택적으로 활성화된다.
일부 실시형태에서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA와 이중체를 형성한다. 일부 실시형태에서, miRNA는 발암성 miRNA이다. 일부 실시형태에서, miRNA는 종양 관련 miRNA이다. 일부 실시형태에서, 이중체는 AGO2에 의해 절단되지 않는다. 일부 실시형태에서, 이중체는 RIG-I을 활성화한다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 5%, 10%, 15% 또는 20% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 종양 특이적 면역 반응을 유도한다. 일부 실시형태에서, 종양 특이적 면역 반응은 I형 IFN, DAMP(위험 관련 분자 패턴) 및/또는 종양 항원의 방출을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 상기 종양 또는 종양 미세환경에 대한 면역학적 기억을 유도한다.
일부 실시형태에서, 암은 고형 종양이다. 일부 실시형태에서, 고형 종양은 육종, 암종 및 림프종으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 방광암, 혈액암, 뼈암, 뇌암, 유방암, 결장암, 자궁경부암, 신장암, 식도암, 간암, 폐암, 갑상선암, 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 직장암, 위암, 자궁암, 교모세포종 또는 두경부암으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 임의의 다른 변형을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 2개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 3개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 4개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 5개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-플루오로(2'-F) 리보스 변형을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 2'-F 리보스 변형은 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 5'-말단으로부터 10번째 또는 11번째 뉴클레오티드에 존재한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-6-메틸아데노신(m6A) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-1-메틸슈도우리딘(mΨ) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메틸-시티딘(5mC) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메톡시시티딘(5moC) 변형을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 19개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 30개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 27개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 완전히 상보적이다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 결합하기 위해 내인성 mRNA와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 이중체를 0 내지 5개의 불일치 염기쌍을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 서열 번호 6의 핵산 서열을 갖는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 서열 번호 6의 핵산은 miR-21에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 암은 유방암, 난소암, 자궁경부암, 결장암, 폐암, 간암, 뇌암, 식도암, 전립선암, 췌장암 및 갑상선암으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 서열 번호 1의 핵산 서열을 갖는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 서열 번호 1의 핵산은 miR-10b에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 암은 비소세포 폐암 또는 자궁경부암이다. 일부 실시형태에서, 암은 전이성 암이다. 일부 실시형태에서, 시토신 및 우라실은 AGO2 절단 부위에 존재한다. 일부 실시형태에서, 전이성 암은 유방, 림프절, 폐, 뼈, 뇌, 간, 난소, 복막, 근육 조직, 췌장, 전립선, 식도, 결장, 직장, 위, 비인두 또는 피부에 국재화된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 사용한 치료는 단일요법이다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 정맥내 투여, 피하, 동맥내, 근육내, 복강내 또는 국소 투여에 의해 투여된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 200 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 1.0 mg/kg 내지 약 10.0 mg/kg의 용량으로 투여된다.
특정 양상들에서 본 발명은 암 치료 방법에 관한 것으로, 이 방법은 대상체에게 염화제2철, 염화제1철, 또는 이들의 조합; 덱스트란 코팅; 및 단일 가닥 5' 언캡핑(uncapped) 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 치료 유효량의 자성 나노입자를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 또는 비종양 미세환경에 비해 종양 또는 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 6 내지 약 40 범위의 비선형성 지수를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8 내지 약 14 범위의 비선형성 지수를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 0.54 g의 염화제2철 및 약 0.2 g의 염화제1철을 포함한다. 일부 실시형태에서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, miRNA는 발암성 miRNA이다. 일부 실시형태에서, miRNA는 종양 관련 miRNA이다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 지지 또는 보조 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 보조 요법은 방사선 요법, 냉동 요법 및 초음파 요법을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가 요법제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 추가 요법제는 miRNA를 포함한다. 일부 실시형태에서, miRNA는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 추가 요법제는 표적 요법, 화학요법제, 면역요법제, 면역원성 세포사멸 유도제(ICDi) 및 siRNA 요법으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 수술을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 화학요법제는 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 발루비신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포시드, 테니포시드, 타플루포시드, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 독시플루리딘, 플루오로우라실, 젬시타빈, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 블레오마이신, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 올트랜스 레티노산, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 베바시주맙으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 표적 요법은 트라스투주맙, 길로트리프, 프로류킨, 알렉티닙, 캄패스, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 악시티닙, 벨리무맙, 벨리노스타트, 베바시주맙, 벨케이드, 카나키누맙, 세리티닙, 세툭시맙, 크리조티닙, 다브라페닙, 다라투무맙, 다사티닙, 데노수맙, 엘로투주맙, 에나시데닙, 에를로티닙, 게피티닙, 이브루티닙, 자이델리그, 이마티닙, 렌바티닙, 미도스타우린, 네시투무맙, 니라파립, 오비누투주맙, 오시머티닙, 파니투무맙, 레고라페닙, 리툭시맙, 룩솔리티닙, 소라페닙, 토실리주맙, 트라스투주맙으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 면역치료제는 면역 체크포인트 억제제이다. 일부 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙(Keytruda®), 니볼루맙(Opdivo®), 아테졸리주맙(Tecentriq®), 이필리무맙(Yervoy®), 아벨루맙(Bavencio®) 및 더발루맙(Imfinzi®)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 보조 요법은 miRNA의 발현을 유도한다. 일부 실시형태에서, 추가 요법제는 miRNA의 발현을 유도한다. 일부 실시형태에서, ICDi는 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 미톡산트론, 옥살리플라틴 및 파클리탁셀로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, siRNA 요법은 PD-L1, CTLA-4, TGF-β 및/또는 VEGF를 표적한다. 일부 실시형태에서, 지지 또는 보조 요법은 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 투여 전, 투여와 동시에 또는 투여 후에 투여된다.
특정 양상들에서, 본 발명은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 조직에 비해 종양 조직에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적이다. 일부 실시형태에서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 상기 miRNA와 이중체를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이중체는 AGO2에 의해 절단되지 않는다. 일부 실시형태에서, 이중체는 RIG-I을 활성화한다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 5%, 10%, 15% 또는 20% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 종양 특이적 면역 반응을 유도한다. 일부 실시형태에서, 종양 특이적 면역 반응은 I형 IFN, DAMP(위험 관련 분자 패턴) 및/또는 종양 항원의 방출을 포함한다.
일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 임의의 다른 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-플루오로(2'-F) 리보스 변형을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-6-메틸아데노신(m6A) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-1-메틸슈도우리딘(mΨ) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메틸-시티딘(5mC) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메톡시시티딘(5moC) 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 완전히 상보적이다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 결합하기 위해 내인성 mRNA와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 이중체를 0 내지 5개의 불일치 염기쌍을 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1-13 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 나노입자에 추가로 연결된다. 일부 실시형태에서, 나노입자는 자성 나노입자이다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 중합체 코팅으로 코팅된다. 일부 실시형태에서, 중합체 코팅은 덱스트란이다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 산화철을 포함하고; 하나 이상의 아민 기로 작용기화 된 덱스트란 코팅을 포함하며, 이 때 하나 이상의 아민 기의 수는 약 5 내지 약 1000이다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자의 철 함량은 약 50중량(wt)% 내지 약 100wt%의 철(III) 및 약 0wt% 내지 약 50wt%의 철(II)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 5 내지 약 150개 아미노기를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 하나 이상의 이러한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
특정 양상들에서 본 발명은 염화제2철, 염화제1철, 또는 이들의 조합; 덱스트란 코팅; 및 단일 가닥 5' 언캡핑(uncapped) 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 자성 나노입자를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 이 때, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 또는 비종양 미세환경에 비해 종양 또는 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 6 내지 약 40 범위의 비선형성 지수를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8 내지 약 14 범위의 비선형성 지수를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 0.54 g의 염화제2철 및 약 0.2 g의 염화제1철을 포함한다. 일부 실시형태에서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, miRNA는 발암성 miRNA이다. 일부 실시형태에서, miRNA는 종양 관련 miRNA이다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 2개 이상의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 2개 이상의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 상이한 miRNA들에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 2개 이상의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 동일한 miRNA에 상보적이다.
특정 양상들에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드 또는 자성 나노입자를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 전달제를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 전달제는 미셀, 지질 나노입자(LNP), 구형 핵산(SNA), 세포외 소포, 합성 소포, 엑소좀, 리피도이드, 리포솜 및 리포플렉스로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 리포솜은 지질 이중층으로부터 형성된다. 일부 실시형태에서, 지질 이중층은 포스페이트 지질, 포스포글리세롤 지질, 포스포콜린 지질 및 포스포에탄올아민 지질로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인지질은 페길화된다. 일부 실시형태에서, 전달제는 리포솜 또는 지질 나노입자이다. 일부 실시형태에서, 리포솜 또는 지질 나노입자는 추가 요법제를 추가로 전달한다. 일부 실시형태에서, 추가 요법제는 ICDi(예를 들어, 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 미톡산트론, 옥살리플라틴 및 파클리탁셀)이다. 일부 실시형태에서, 추가 요법제는 siRNA(예를 들어, 암과 관련된 유전자를 표적으로 하는 siRNA)이다. 일부 실시형태에서, 추가 요법제는 화학요법제이다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 적어도 하나의 추가의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 200 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 1.0 mg/kg 내지 약 10.0 mg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 본원은 5' 바이포스페이트(5'pp 항-miRNA 또는 -mRNA) 또는 5' 트리포스페이트 변형(5'ppp 항-mRNA 또는 -mRNA)을 갖는 miRNA 또는 mRNA에 상보적인 서열을 포함하는 단일 가닥 안티센스 RNA를 제공하며, 바람직하게는 miRNA 또는 mRNA는 각각 표 1, 표 2 또는 표 3에 나열되어 있다. 또한 내인성(바람직하게는 종양 특이적) RNA 서열에 상보적인 적어도 10개 뉴클레오티드 길이의 5' 바이포스페이트(5'pp) 또는 5' 트리포스페이트(5'ppp) 변형된 RNA를 포함하는 RIG-I 작용제도 제공된다. 일부 실시형태에서, 핵산은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드는 잠금 뉴클레오티드이다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, 암을 치료하고 암 발병 위험을 감소시키기 위해, 특정 RNA, 예를 들어, 내인성 RNA 서열에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 5'pp 또는 5'ppp 항-miRNA/mRNA를 포함하는 조성물 및 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시형태에서, 단일 가닥 안티센스 RNA는 나노입자에 연결되며, 이 때 상기 나노입자는 10 nm 내지 30 nm의 직경을 갖고; 중합체 코팅을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단일 가닥 안티센스 RNA는 나노입자에 연결되며, 이 때 상기 나노입자는 10 nm 내지 30 nm의 직경을 갖고; 중합체 코팅을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중합체 코팅은 덱스트란을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단일 가닥 안티센스 RNA는 3' 말단에서 다이설파이드 결합 또는 티오에테르 결합을 포함하는 화학적 모이어티를 통해 나노입자에 공유적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 나노입자는 자성이다.
또한, 본원에 기재된 바와 같은 단일 가닥 안티센스 RNA를 포함하는 약학 조성물이 본원에 제공된다. 추가로, 대상체에서 암을 치료하거나 암이 발생할 위험을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 상기 방법은 암에 걸렸거나 암이 발병할 위험이 있는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 치료 유효량의 단일 가닥 안티센스 RNA를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 암은 방광암, 혈액암, 뼈암, 뇌암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 폐암, 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 직장암, 위암, 갑상선암 및 자궁암으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 투여는 종양 크기의 감소 또는 안정화, 또는 대상체의 림프절에서의 전이성 종양 성장 속도의 감소를 초래한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 안티센스 RNA는 대상체에게 2회 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 안티센스 RNA는 대상체에게 적어도 주 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 안티센스 RNA는 정맥내, 피하, 동맥내, 근육내 또는 복강내 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상체에게는 화학요법제가 추가로 투여된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 해당 분야의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 같은 동일한 의미를 가진다. 본 발명에서 사용하기 위한 방법 및 물질들이 본원에 기재되어 있으며; 당업계에 공지된 다른 적합한 방법 및 물질 또한 사용될 수 있다. 재료, 방법 및 실시예들은 단지 설명을 위한 것이며 제한을 하고자 하는 것이 아니다. 본원에서 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허, 서열, 데이터베이스 항목, 및 기타 참조문헌은 그 전체가 원용된다. 상충되는 경우, 정의를 비롯하여 본원의 내용이 우선한다. 본 발명의 그 외 다른 특징 및 이점들은 하기 상세한 설명 및 도면, 그리고 청구범위로부터 명확해 질 것이다.
도면의 간단한 설명
도 1은 본원에 기재된 나노입자 전달 시스템을 사용하여 종양 및 전이로 전달되는 5' 삼인산화 안티센스 tsRNA 전달의 개략도이다. 안티센스 tsRNA와 종양 특이적 tsRNA는 혼성화를 통해 강력한 RIG-I 작용제인 5'ppp-dsRNA를 생성한다. RIG-I 신호전달 경로의 활성화는 종양 미세환경에 특이적인 I형 IFN 유발 면역 반응을 유도한다. 이 면역 반응은 수지상 세포(DC), 자연 살해 세포(NK) 및 대식세포의 활성화를 특징으로 한다. 이 과정은 활성화된 DC 및 대식세포에 의한 효과적인 종양 항원 제시와 T 세포 성숙, 활성화 및 종양 세포 사멸을 동반한다. 동시에 조절 T 세포(Treg)는 억제되어 항종양 면역 반응에 대한 면역억제 작용을 감소시킨다. 중요한 것은 재공격 시 종양을 이물질로 간주하여 완전한 면역 거부를 유발하는 기억 T 세포 하위 집단이 생성된다는 것이다. 이러한 과정들이 결합되어 암 재발의 완전한 완화 및 이에 대한 저항력을 갖게 된다.
도 2는 인간 RIG-I 루시퍼라제 리포터 세포주 HEK-Lucia™ RIG-I에서 RIG-I 활성화를 유도하는 ss-ppp-miRNA-21의 능력을 입증하는 요약 데이터를 제공한다. 웨스턴 블롯을 이용하여 세포 내 RIG-I의 높은 발현을 확인하였다(도 2A). 널 세포와 비교하여, RIG-I 과발현 세포에서 루시퍼라제 활성의 매우 유의한 증가가 관찰되었다(도 2B). ss-ppp-miRNA-21의 2 μg/mL, 4 μg/mL 및 8 μg/mL 용량 수준이 HEK-Lucia™ RIG-I에서 평가되었다. 테스트된 ss-ppp-miRNA-21의 세 가지 용량 수준 모두에서 유의한 RIG-I 활성화가 관찰되었다(도 2C). 용량 의존적 카스파제 3/7 활성화가 5'-ppp의 존재 하에서 더욱 두드러지는 것으로 관찰되었다(도 2D). ss-ppp-miRNA-21 RIG-I 작용제를 사용할 때 종양 세포 생존력의 용량 의존적 감소도 관찰되었다(도 2E).
도 3은 증가하는 농도의 합성 성숙 miRNA-21 모방체로 일시적으로 형질감염된 HEK-Lucia™ RIG-I 세포에서 ss-ppp-miRNA-21 작용제에 의한 RIG-I 신호전달의 유도를 입증하는 요약 데이터를 제공한다. 세포를 0ng/mL, 0.3ng/mL, 3ng/mL, 30ng/mL 및 300ng/mL 농도의 합성 성숙 miRNA-21 모방체로 형질감염시키고; 매우 유의한, ss-ppp-miRNA-21 작용제에 의한 RIG-I 신호전달의 유도가 30 및 300ng/ml의 합성 성숙 miRNA-21 모방체로 형질감염된 세포에서 관찰되었으며; 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21은 검출 가능한 RIG-I 활성화를 유발하지 못했다(도 3A). miRNA-21 모방체 농도의 함수로서 RIG-I 활성화의 용량 의존성을 분석한 결과 ss-ppp-miRNA-21을 사용할 때 miRNA-21 모방체의 EC50이 83.4ng/ml로 결정되었으며; 대조적으로, 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21을 사용할 때 계산된 EC50은 357.9ng/ml였다(도 3B). 증가하는 농도의 RIG-I 작용제를 사용하여 B16-F10 뮤린 흑색종 세포를 처리하면 IFN-β 분비의 용량 의존적 증가가 발생하였으며; 대조적으로, 시판되는 ds-ppp-RNA 작용제는 IFN-β 분비를 자극하지 못했다(도 3C). 카스파제 3/7 활성화는 B16-F10 뮤린 흑색종 세포에서 miRNA-21 모방체 농도의 함수로서 측정되었으며; 카스파제 3/7 활성화의 용량 의존적 증가가 관찰되었고, 그 효과는 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21에 비해 ss-ppp-miRNA-21로 처리된 세포에서 유의하게 높았으며 ds-ppp-RNA 양성 대조군과 비등하였다(도 3D). 도 3E는 miR-21로 형질감염되고 ss-ppp-miRNA-21로 처리된 세포가 ds-ppp-RNA 양성 대조군 올리고뉴클레오티드에서 관찰된 수준을 초과하는 RIG-I의 현저한 상향조절을 나타낸 웨스턴 블롯이다. 도 3F는 miR-21로 형질감염되고 ss-ppp-miRNA-21로 처리된 세포에서 증가된 반응성을 보여주는 웨스턴 블롯이며, 이는 p65의 발현 증가와 관련되지 않았는데, 이는 반응성 증가가 표적 인산화를 특이적으로 반영함을 나타낸다.
상세한 설명
1. 개요
암의 miRNA
miRNA와 같은 소형 RNA는 RISC(RNA 유도 침묵 복합체)라고 불리는 리보핵단백질 복합체 내에서 조절 기능을 발휘한다. RISC의 핵심 소단위는 아르고노트(Argonaute) 계열 단백질의 구성원에 결합된 소형 RNA이다. 아르고노트는 소형 RNA를 가이드로 사용하여 다양한 메커니즘을 통해 침묵시키기 위한 상보적인 표적 전사체를 식별한다. MiRNA는 일반적으로 인간 아르고노트 2 단백질(AGO2)에 의해 포획되며 AGO2와 결합되어 있는 동안 상보적인 mRNA 표적에 염기쌍을 형성하여 유전자 발현을 조절할 수 있다. AGO2에 의해 포획된 miRNA는 가이드 RNA 역할을 하여 상보적인 RNA 표적을 수용하고 혼성화하여 이중 가닥 RNA 이중체를 형성한다. 매우 상보적인 RNA 표적은 AGO2로부터 가이드 RNA:표적 RNA 이중체의 방출을 촉진하는 것으로 나타났다.
레티노산-유도성 유전자 I(RIG-I) 유사 수용체(RLR)는 I형 인터페론 및 항바이러스 숙주 반응을 집합적으로 확립하는 기타 유전자의 전사 유도를 매개하는 핵심 RNA 센서이다(Yong HY, Luo D. 2018;9:1379). RIG-I은 종양 세포를 포함한 사실상 모든 세포 유형에서 발현되며, ICI(면역 관문 억제제) 효능을 향상시키는 유망한 대안이다(Heidegger S. 외, 2019. EBioMedicine. 41:146. Poeck H., 외, 2008. Nat. Med. 14:1256). 전임상 연구에서는 합성 RIG-I 작용제의 전신 전달이 바이러스 감염 세포 제거를 위해 유발된 메커니즘과 유사한 메커니즘을 통해 종양 성장을 억제한다는 사실을 보여주었다(Poeck H., 외, 2008. 5'-triphosphate-siRNA: turning gene silencing and Rig-I activation against melanoma. Nat. Med. 14:1256). RIG-I 관여는 우선적인 종양 세포 사멸(내인성 또는 외인성 세포사멸 및 염증복합체(inflammasome)에 의한 발열증을 통해)과 선천 및 적응 면역계의 IFN-I 매개 활성화를 유도한다(Elion DL., 외, 2018. Oncotarget. 9:29007의 도 1 참조). 특정 RIG-I 작용제인 RGT100은 현재 진행성 고형 종양 및 림프종 치료를 위한 I/II상 임상 시험 중이다(NCT03065023)(Elion DL., 외, 2018. Oncotarget. 9:29007).
이론에 제한되지 않고, RIG-I 경로는 본 발명의 방법 및 조성물에 따라 miRNA(5'ppp 항-miRNA)에 또는 암 세포에서 특이적으로 발현되는 mRNA에 상보적인 5'ppp RNA의 도입 후 5'ppp-dsRNA의 현장 생성에 의해 암 세포에서 선택적으로 활성화될 수 있다(도 1). 5'pp-dsRNA로부터 RIG-I 경로의 동일하거나 유사한 선택적 활성화가 예상된다. 결과적으로, 종양 미세환경(TME)의 항종양 면역 잠재력은 간단히 단일 가닥 RNA를 사용하여 특정 종양 억제 유전자(들)를 동시 활성화시키면서 RIG-I 신호전달 경로를 활성화시킴에 의해 밝혀질 수 있다.
흑색종 치료를 위한 RIG-I 작용제 트리포스페이트 RNA의 유용성이 최근 검증되었다(Helms MW. 외, 2019. Utility of the RIG-I Agonist Triphosphate RNA for Melanoma Therapy. Mol Cancer Ther. 2019;18(12):2343-2356). 또한 RIG-I의 천연 리간드인 트리포스페이트 RNA(5'ppp-dsRNA)(및 5'pp)와 작은 간섭 RNA(siRNA)의 유사성으로 인해 발암성 또는 면역억제성 표적들의 동시 침묵 및 RIG-I 신호 전달 경로의 활성화를 위한 이작용기성 siRNA가 개발되었다는 점도 주목된다(Poeck H., 외, 2008. Nat. Med. 14:1256. Ellermeier J. 외, 2013. 2013;73(6):1709-1720). 결합된 접근법들은 종양 세포 상의 2-표적화 공격을 가해 고무적인 결과를 가져온다.
마이크로RNA(miRNA)는 다양한 표적 유전자를 조절할 수 있는, 코딩되지 않은 소형 RNA이다. miRNA는 메신저 RNA(mRNA)의 상보적 서열들과의 염기쌍형성을 통해 전사 후 수준에서 유전자 발현을 조절한다. 이러한 상호작용은 mRNA 가닥의 절단에 의한 유전자 침묵, 폴리A 꼬리의 단축을 통한 mRNA의 불안정화 또는 mRNA의 단백질로의 번역 억제를 초래한다. miRNA는 단백질 코딩 유전자의 약 60% 발현을 제어하고 세포 대사, 증식, 분화 및 세포사멸을 조절한다(Huang Z, Shi J, Gao Y, 외, HMDD v3.0: a database for experimentally supported human microRNA-disease associations. Nucleic Acids Res. 2019;47(D1):D1013-D1017).
정상적인 생리학적 조건에서 miRNA는 세포 증식, 분화 및 아폽토시스를 포함한 주요 생물학적 과정을 보호함으로써 피드백 메커니즘에서 기능한다(Reddy, KB, Cancer Cell International, 2015, 15:38). miRNA는 다양한 장기와 세포에서 발현되며 염증 촉진 및 항염증 작용을 모두 조절한다. miRNA는 광범위한 인간 질병에서 염증 반응의 주요 조절인자로 부상하였다(Tahamtan, A., 외, Front Immunol. 2018; 9: 1377).
miRNA 발현 조절장애는 암과 같은 다양한 질병 징후와 연관되어 있다. miRNA 유전자의 50% 이상이 암 관련 게놈 영역에 위치하는 것으로 밝혀졌다(Di Leva, G., 외, Annu Rev Pathol. 2014; 9():287-314.). miRNA의 조절장애는 다양한 유형의 암의 발병, 진행 및 전파에 근본적인 역할을 수행하는 것으로 나타났다. 예를 들어, miRNA 조절장애는 만성 림프구성 백혈병과 연관되어 있는 것으로 알려져 있는데, 여기서 miR-15a 및 miR-16-1은 만성 림프구성 백혈병을 앓는 대다수의 환자에서 하향조절되거나 결실되는 것으로 나타났다(Calin GA, 외, Proc Natl Acad Sci USA, 2002, pp. 15524-15529). miR-21, miR-26 및 miR-29a와 같은 다른 miRNA는 암세포 및/또는 종양 세포 미세환경에서 우선적으로 발현되는 것으로 나타났다(Chakraborty, C., 외, Mol Ther Nucleic Acids. 2020년 6월 5일, 20: 606-620). 따라서 내인성 miRNA에 대한 치료 방법은 종양 미세 환경을 표적하고 조절 장애가 있는 miRNA와 관련된 다양한 암을 치료하는 매우 유망한 접근 방식을 제공한다.
RIG-I 매개 RNA-유도된 면역원성 세포 사멸
패턴 인식 수용체인 레티노산-유도성 유전자 I(RIG-I)은 I형 인터페론을 유도하기 위한 바이러스 RNA의 특정 분자 패턴을 인식한다. RIG-I는 2개의 N 말단 카스파제 모집 도메인(CARD), 중앙 RNA 헬리카제 도메인, 및 C 말단 RNA 결합 도메인으로 구성된다. RIG-I의 C-말단 도메인(CTD)은 비-자기(non-self) RNA의 5'-ppp 그룹을 인식하고 형태 변화를 거쳐 IFN-β 생산을 유도한다(Lee, M., 외, Nucleic Acids Research, 2016, Vol. 44, No. 17). 구조적 및 생화학적 연구를 통해 RIG-I CTD가 5'-ppp를 포함하는 평활 말단 dsRNA에 결합할 수 있음이 입증되었다. 연구에 따르면 5'-ppp dsRNA는 RIG-I CTD에 강력하게 결합하고 5'-OH dsRNA에 비해 인터페론 생산을 더 효과적으로 자극하는 것으로 나타났다(Pichlmair, A., 외, 2006, Science, 314, 997-1001; Vela, A., 외, 2012, J. Biol. Chem., 287, 42564-42573).
RIG-I 유사 수용체 리간드는 전임상 모델에서 흑색종, 췌장암 및 유방암을 포함한 고형 악성 종양의 치료를 위한 유망한 전략으로 사용되어 왔다. RIG-I의 주요 특징은 유비쿼터스 발현 및 신호 전달 결과, 특히, 강력한 T 세포 반응의 두 가지 핵심 요소인 IFN-I 생산 및 우선적인 종양 세포 사멸이다. RIG-I 접근 방식의 성공 가능성에도 불구하고 면역계는 강력하고 완전히 이해되어 있지 않으므로, 조심스러운 낙관론 그리고 환자의 안전을 위협할 수 있는 자가면역의 표적 유도 가능성 또는 사이토카인 '폭풍' 유도를 비롯한 선천 면역 활성화와 관련된 주의 사항에 대한 철저한 조사가 필요하다. RIG-I는 인체의 대부분의 세포에서 발현되므로 RIG-I 활성화가 널리 전파되어 피로, 우울증, 인지 장애와 같은 증상을 유발할 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요하다.
본 발명은 RIG-I 활성화를 종양 미세환경에 제한함으로써 RIG-I 치료와 연관된 잠재적인 부작용을 완화시키는 전략을 제시한다. 구체적으로, 종양 특이적 miRNA는 5'ppp-dsRNA RIG-I 작용제 조립을 위한 템플릿으로 사용된다. 이를 달성하기 위해, 본 방법은 miRNA에 상보적인 외부에서 공급된 5'ppp 단일 가닥 올리고뉴클레오티드(예를 들어, RNA)를 도입한다. 상보적 miRNA(내인성) 및 단일 가닥 5'ppp 올리고뉴클레오티드(예를 들어, RNA)(외인성)는 혼성화하여 5'ppp-dsRNA를 형성하고 이는 AGO2로부터의 방출을 촉진한다. 방출된 5'ppp-dsRNA는 RIG-I 신호 전달의 강력한 활성화를 촉진한다. 이 과정을 통해, RIG-I 활성화는 암세포에 제한될 것이며, 본질적으로 신체 다른 곳이 비특이적 면역계 활성화 되지 않게 한다. 외인성 단일 가닥 5'ppp 올리고뉴클레오티드를 종양 미세환경에 우선적으로 국재화시키는 나노입자 운반체에 커플링 시킴으로써 추가적인 수준의 특이성을 달성할 수 있다. 도 1에 도시된 바와 같이, 표적 miRNA 또는 mRNA를 침묵시키기 위한 표준 RNAi 기술을 본원에 기재된 5(p)pp-항-mRNA 또는-miRNA 접근법으로 대체하면, RIG-I 신호 전달 및 세포 사멸을 유발하는 RIG-I 활성화를 촉진하여 치료 결과를 개선할 수 있다. 생체 내에서 5'(p)pp-항-mRNA/miRNA는 표적 mRNA 또는 miRNA와 혼성화하여 표적 mRNA 또는 miRNA를 침묵시켜 5'(p)pp-ds-mRNAs/-miRNA를 형성하고, 이는 RIG-I 단백질에 결합하고 이를 활성화시켜, RIG-I 신호 전달 및 암세포 사멸을 가져온다.
2. 정의
본원에서 사용된 용어는 일반적으로 본 발명의 내용에서 그리고 각 용어가 사용되는 특정 내용에서 당해 분야의 통상적인 의미를 갖는다. 본원의 구성 및 방법을 설명하고, 이를 제조하고 사용하는 방법에 대해 숙련된 기술자에게 추가 지침을 제공하기 위해 특정 용어들을 아래 또는 다른 부분에서 논의한다. 용어의 사용 범위나 의미는 해당 용어가 사용되는 특정 맥락에서 명백해질 것이다.
“약” 및 “대략”은 일반적으로 측정치의 특성 또는 정확도를 고려할 때 측정된 양에 대한 허용 가능한 오차 정도를 의미한다. 전형적으로, 예시적인 오류 정도는 주어진 값 또는 범위의 20%(%) 이내, 바람직하게는 10% 이내, 보다 바람직하게는 5% 이내이다.
대안적으로, 특히 생물학적 시스템에서, 용어 “약” 및 “대략”은 주어진 값의 한 자릿수 이내, 바람직하게는 5배 이내, 더욱 바람직하게는 2배 이내인 값을 의미할 수 있다. 본 명세서에 제공된 수치는 달리 명시되지 않는 한 대략적인 수치이며, 이는 용어 “약” 또는 “대략”이 명시적으로 언급되지 않은 경우에도 추론될 수 있음을 의미한다.
“하나”라는 용어는 해당 용어가 사용된 문맥에서 달리 명시하지 않는 한 복수형을 포함한다. 용어 “하나”, 뿐만 아니라 용어 “하나 이상” 및 “적어도 하나”는 본 출원에서 호환적으로 사용된다. 또한, 본 출원에서 사용되는 “및/또는”은 둘 이상의 구체적인 특징들 또는 구성요소들 각각에 다른 특징이나 구성요소가 있거나 없는 것을 구체적으로 개시하기위해 사용되는 것이다. 그러므로, 가령, 본 출원에서 “A 및/또는 B”의 어구에서 사용시 용어 “및/또는”은 “A 및 B,” “A 또는 B,” “A” (단독), 및 “B” (단독)을 포함하는 것으로 한다. 마찬가지로, 가령, “A, B, 및 / 또는 C”의 어구에서 사용시 “및/또는”이라는 용어는 다음 각 양상들을 포함하는 것으로 한다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본원에 개시된 수치 범위는 범위를 정의하는 숫자를 포함한다.
“핵산”이라는 용어는 임의의 단일 또는 이중 가닥 폴리뉴클레오티드(예를 들어, DNA 또는 RNA, cDNA, 반합성 또는 합성 기원)를 의미한다. 핵산이라는 용어는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드(예를 들어, 염기의 변형 및/또는 당의 변형을 포함) 및/또는 두 뉴클레오티드를 연결하는 포스포디에스테르 결합의 변형을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 2'-플루오로(2'-F)와 같은 적어도 하나의 변형된 리보스를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 핵산은 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트을 함유할 수 있다. 핵산의 비제한적인 예가 본 명세서에 설명되어 있다. 핵산의 추가적인 예는 당업계에 공지되어 있다.
본 명세서에 개시된 핵산은 자연적으로 발생하지 않는 올리고뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 이러한 변이체는 필연적으로 출발 분자와의 서열 동일성 또는 유사성이 100% 미만이다. 특정 실시형태들에서, 이러한 변이체는, 예를 들어, 변이체 분자의 길이 전체에 걸쳐 출발(예를 들어, 자연 발생 또는 야생형) 올리고뉴클레오티드의 핵산 서열과 약 75% 내지 100% 미만, 더욱 바람직하게는 약 80% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 85% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 90% 내지 100% 미만(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%), 그리고 가장 바람직하게는, 약 95% 내지 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 핵산 서열을 가질 것이다. 특정 양상에서, 올리고뉴클레오티드 서열은 표적 서열에 완전히 상보적일 것이다. 즉, 올리고뉴클레오티드와 이의 표적에 의해 형성된 이중체 영역은 오버행을 고려하지 않고 완전히 상보적인 서열을 나타낼 것이다(즉, 염기쌍 불일치 또는 갭을 포함하지 않음). 특정 양상에서, 올리고뉴클레오티드 및 표적 서열은 이중체 영역에서 0-5개 이상의 염기쌍 불일치를 포함하지 않는다.
본 발명의 종양-특이적 RNA는 마이크로 RNA(miRNA) 또는 메신저 RNA(mRNA)를 포함할 수 있다. 본 발명의 miRNA 또는 mRNA는 발암성 miRNA 또는 mRNA를 포함할 수 있다. 발암성 miRNA 또는 mRNA는 종양/종양들 및/또는 암과 관련되거나 연관된 것으로 여겨지는 miRNA 또는 mRNA이다.
“반자성”이라는 용어는 1 이하의 상대 투자율을 가지며 자기장에 의해 반발되는 조성물을 설명하는 데 사용된다.
“상자성”이라는 용어는 외부에서 인가된 자기장이 있을 때만 자기 모멘트를 발생시키는 조성물을 설명하는 데 사용된다.
“강자성”이라는 용어는 자기장에 매우 민감하고 외부에서 인가된 자기장이 제거된 후에도 자성(자기 모멘트)을 유지할 수 있는 조성물을 설명하는 데 사용된다.
“나노입자”라는 용어는 약 2 nm 내지 약 200 nm(예를 들어, 10 nm 내지 200 nm, 2 nm 내지 100 nm, 2 nm 내지 40 nm, 2 nm 내지 30 nm, 2nm~20nm, 2nm~15nm, 100nm~200nm, 150nm~200nm)의 직경을 갖는 물체를 의미한다. 나노입자의 비제한적인 예에는 본원에 기재된 나노입자가 포함된다.
“자성 나노입자”라는 용어는 자성(본원에 정의된 바와 같음)인 나노입자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 임의의 나노입자)를 의미한다. 자성 나노입자의 비제한적인 예가 본 명세서에 기술되어 있다. 추가적인 자성 나노입자가 해당 분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 “대상체” 또는 “환자”는, 본 발명의 조성물 또는 방법이 예를 들어, 실험적, 진단적, 예방적 및/또는 치료적 목적을 위해 투여될 수 있는 임의의 포유동물(예를 들어, 인간 또는 수의학적 대상체, 예를 들어, 개, 고양이, 말, 소, 염소, 양, 마우스, 래트 또는 토끼)을 지칭한다. 대상체는 치료를 원하거나 필요로 할 수도 있고, 치료가 요구될 수도 있고, 치료를 받고 있거나, 치료를 받을 예정이거나, 특정 질병이나 병태에 대해 훈련받은 전문가의 캐어를 받고 있을 수도 있다.
본원에 사용된 용어 “종양”은 고형 종괴(예를 들어, 고형 종양에서) 또는 체액 종괴(예를 들어, 혈액암에서) 또는 종양 내에서 발견되는 모든 암세포를 비롯하여, 종괴의 성장이 정상 조직의 성장을 능가하고 정상 조직과 조화되지 않는 조직 및/또는 세포의 비정상적인 종괴를 의미한다. 종양은 고형(예를 들어, 림프종, 육종 또는 암종)이거나 비고형(예를 들어, 혈액 종양, 골수 종양 또는 백혈병과 같은 림프절 종양)일 수 있다. 종양은 형태와 기능을 비롯한 세포 분화 정도, 성장 속도, 국소 침윤 및 전이와 같은 특성에 따라 “양성” 또는 “악성”으로 정의될 수 있다. “양성” 종양은 잘 분화될 수 있고, 악성 종양보다 성장이 느린 것이 특징이며, 발생 부위에 국재화 된 채 남아 있다. 또한, 어떤 경우에는 양성 종양이 먼 부위로 침윤, 침입 또는 전이할 수 있는 능력이 없다. “악성” 종양은 잘 분화되지 않은(역형성) 종양일 수 있으며 특징적으로 빠른 성장을 보이며 주변 조직의 점진적인 침윤, 침습 및 파괴를 동반한다. 게다가, 악성종양은 먼 부위로 전이될 수도 있다. 따라서, 암세포는 그 성장이 정상 조직의 성장과 조화되지 않는 비정상적인 조직 종괴 내에서 발견되는 세포이다.
본원에 사용된 용어 “미세환경”은 조직의 다른 영역들 또는 신체의 다른 영역들과 일정하거나 일시적인, 시간적, 물리적 또는 화학적 차이를 갖는 조직 또는 신체의 임의의 부분 또는 영역을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 “종양 미세환경”은 종양이 존재하는 환경을 의미하며, 이는 종양 내의 비세포 영역이면서 종양 조직 바로 외부의 영역이지만 암세포 자체의 세포내 구획에는 속하지 않는 영역이다. 이는 또한 종양 미세환경 내에서 발견되는 세포, 예를 들어, 섬유아세포, 내피 세포, 지방세포, 혈관주위세포, 신경내분비 세포 또는 종양 미세환경 내 면역 세포(대식세포, B 세포, T 세포 등)를 의미한다. 종양과 종양 미세환경은 밀접하게 관련되어 있으며 지속적으로 상호작용한다. 종양은 미세환경을 변화시킬 수 있으며, 미세환경은 종양이 성장하고 확산되는 방식에 영향을 미칠 수 있다. 전형적으로, 종양 미세환경은 5.0 내지 7.0 범위, 또는 5.0 내지 6.8 범위, 또는 5.8 내지 6.8 범위, 또는 6.2-6.8 범위의 낮은 pH를 갖는다. 반면, 정상적인 생리학적 pH는 7.2~7.8 범위이다. 종양 미세환경은 혈장에 비해 포도당과 기타 영양소의 농도는 낮지만 젖산의 농도는 더 높은 것으로 알려져 있다. 더욱이, 종양 미세환경은 정상적인 생리적 온도보다 0.3 내지 1℃ 더 높은 온도를 가질 수 있다.
“비종양 미세환경”이라는 용어는 종양 이외의 부위의 미세환경을 의미한다.
“전이”라는 용어는 대상체에서 원발성 종양에 존재하는 암 세포가 인접하지 않은 이차 조직으로 이동하는 것을 의미한다. 전이의 비제한적인 예에는 원발성 종양에서 림프절(예를 들어, 국소 림프절), 뼈 조직, 폐 조직, 간 조직 및/또는 뇌 조직으로의 전이가 포함된다. 전이라는 용어에는 림프절에서 발견된 전이성 암세포가 2차 조직(예를 들어, 뼈 조직, 간 조직 또는 뇌 조직)으로 이동하는 것도 포함된다. 일부 비제한적 실시형태에서, 원발성 종양에 존재하는 암 세포는 유방암 세포, 결장암 세포, 신장암 세포, 폐암 세포, 피부암 세포, 난소암 세포, 췌장암 세포, 전립선암 세포, 직장암 세포, 위암 세포, 갑상선암 세포, 또는 자궁암 세포이다. 또 다른 전이의 양상 및 예는 당업계에 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있다.
“원발성 종양”이라는 용어는 종양 진행이 시작되고 진행되어 암성 종괴를 생성하는 해부학적 부위에 존재하는 종양을 의미한다. 일부 실시형태에서, 의사는 대상체에서 원발성 종양의 부위를 명확하게 식별하지 못할 수도 있다.
“전이성 종양”이라는 용어는 대상체의 원발성 종양에서 전이된 종양 세포로부터 유래된 대상체의 종양을 의미한다. 일부 실시형태에서, 의사는 대상체에서 원발성 종양의 부위를 명확하게 식별하지 못할 수도 있다.
바람직한 방법 및 재료가 본원에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 또한 본원에 개시된 방법 및 조성물의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 다른 참조문헌들은 그 전문이 참조문헌으로 포함된다.
3. 내인성 종양 특이적 RNA
내인성 종양 특이적 RNA를 통해 면역 반응을 유도하기 위한 조성물 및 방법이 본원에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 암 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포에 비해 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 종양 세포에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적인 서열로서, 종양 특이적 RNA는 종양 세포에 특이적이고, RIG-I는 종양 특이적 RNA를 많이 발현하는 종양 세포에서 선택적으로 활성화된다. 본 발명의 내인성 종양-특이적 RNA는 miRNA 또는 mRNA로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 내인성 종양-특이적 RNA는 발암성 miRNA 또는 발암성 mRNA로부터 추가로 선택될 수 있다. 발암성 miRNA 또는 mRNA는 암과 관련이 있는 것으로 여겨지는 miRNA 또는 mRNA이다.
MiRNA는 많은 암의 구성성분인 것으로 나타났으며 암 치료를 위한 새로운 방법을 제공할 수 있다. 본 발명의 방법 및 조성물의 MiRNA에는 miR-9; miR-10b; miR-17; miR-18; miR-19b; miR-21; miR-26a; miR-29a; miR-92a; miR-106b/93; miR-125b; miR-130a; miR-155; miR-181a; miR-200s; miR-210; miR-210-3p; miR-221; miR-222; miR-221/222; miR-335; miR-498; miR-504; miR-1810; miR-1908; miR-224/452; 및 miR-181/340이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 서열을 포함하는 전체 목록은 OncomirDB(Wang 외, Bioinformatics. 2014;30(15):2237-2238; mircancer.ecu.edu/browse.jsp; US20150004221A1)에서 확인할 수 있으며; 표 1 및 표 2를 참조하라).
이러한 miRNA 중 하나의 예는 miR-10b이다. miR-10b의 상향조절은 전이성 종양 세포의 이동 및 침습 뿐만 아니라 이들 세포의 생존 가능성에 원인이 되는 것으로 나타났다(Tian Y., 외, J. Biol. Chem. 2010; 285:7986-7994). 40개의 인간 식도암 샘플과 이들과 쌍을 이루는 정상 인접 조직들에서 miR-10b 수준을 분석한 결과, 샘플링된 암 조직의 95%(40개 중 38개)에서 miR-10b의 발현이 증가한 것으로 나타났다(Tian Y., 외, J. Biol.Chem.2010;285:7986-7994). 관련 표적을 나타내는 발암에 있어 소정의 역할을 하는 다른 miRNA도 많이 있으며; 이들 및 기타 miRNA는 치료 억제를 위한 잠재적인 새로운 클래스의 표적들을 나타낸다(Nguyen DD, Chang S. Int J Mol Sci. 2017;19(1):65). 예를 들어, miR-21은 교모세포종, 유방암, 대장암, 폐암, 췌장암, 피부암, 간암, 위암, 자궁경부암, 및 갑상선암에 제한되지 않는 다양한 암 세포 및 조직, 뿐만 아니라 다양한 림프암, 조혈암 및 신경모세포종에 관여하는 것으로 밝혀졌다. miR-21은 다중 발암성 신호 전달 캐스케이드를 표적으로 삼고 암 세포에서 유전자 발현 네트워크의 전체적인 조절장애를 일으키는 단일 miRNA의 대표적인 예이다(Pan, X., 외, Cancer Biol. Ther. 2010; 10:1224-1232). 증가된 miR-21 발현은 포스파타제 및 텐신 동족체(PTEN), PDCD4, RECK, TPM1과 같은 다양한 필수 종양 억제인자를 표적하여 세포 증식, 생존, 전이 및 화학내성 표현형 획득을 촉진하는 것으로 밝혀졌다(Meng, F., 외, Gastroenterology. 2007; 133:647-658; Peralta-Zaragoza O., 외, BMC Cancer. 2016; 16:215; Zhang, X., 외, BMC Cancer. 2016;16:86; Reis ST., 외, BMC Urol. 2012;12:14; Zhu S., 외, J. Biol. Chem. 2007;282:14328-14336).
MiR-155는 BRCA1에 의해 후생적으로 조절되며 유방암, 난소암, 폐암에서 과발현된다. miR-155는 B 세포 암에 대한 잠재적인 바이오마커로 조사되었다. MiR-155의 과발현은 SHIP1 및 C/EBPβ 유전자의 하향 조절을 통해 B 세포 분화를 차단하고 PI3K-Akt 및 MAPK 경로의 활성화로 인해 세포 생존이 향상된다. 신경교종과 같은 다른 암에서 miR-155의 과발현은 신경교종 조직에서 꼬리형 호메오박스 1 단백질(CDX1) 발현과의 음의 상관관계를 통해 종양 형성의 진행을 촉진한다.
MiR-210은 암 발달, 진행 및 전이의 다양한 양상들과 관련이 있다는 것이 잘 보고되어 있는 miRNA이다. 골전이성 및 비-골전이성 전립선암 조직에서 miR-210 발현의 증가가 관찰되었다. 비-골전이성 전립선암 조직에 비해 골전이성 전립선암 조직에서 발현이 증가하는 것으로 나타났으며, NF-κB 신호전달 경로를 통해 전립선암 세포 상피-중간엽 전이 및 골전이를 촉진하는 것으로 나타났다(Ren D., 외, Mol Cancer. 2017; 16: 117). miRNA-221과 같은 다른 miRNA는 유방암, 신경교종, 간세포 암종, 췌장 선암종, 흑색종, 만성 림프구성 백혈병 및 갑상선 유두암종에서 상향조절되는 것으로 밝혀졌다(Brognara E., 외, Int J Oncol. 2012 Dec;41(6):2119-27).
일부 실시형태에서, 본 발명은 암 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포에 비해 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 종양 세포에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적인 서열로서, 종양 특이적 RNA는 종양 세포에 특이적이고, RIG-I는 종양 특이적 RNA를 많이 발현하는 종양 세포에서 선택적으로 활성화된다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 발암성 miRNA이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 발암성 miRNA가 아니다.
일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-9; miR-10b; miR-17; miR-18; miR-19b; miR-21; miR-26a; miR-29a; miR-92a; miR-106b/93; miR-125b; miR-130a; miR-155; miR-181a; miR-200s; miR-210; miR-210-3p; miR-221; miR-222; miR-221/222; miR-335; miR-498; miR-504; miR-1810; miR-1908; miR-224/452; 및 miR-181/340으로 구성된 군으로부터 선택된 miRAN이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-9이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-10b이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-17이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-18이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-19b이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-21이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-26a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-29a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-92a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-106b/93이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-125b이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-130a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-155이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-181a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-200s이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-210이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-210-3p이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-221이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-222이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-221/222이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-335이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-498이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-504이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-1810이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-1908이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-224/452이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-181/340이다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 내인성 종양-특이적 RNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR10b이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR17이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR18a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR18b이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR19b이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR21이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR26a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR29a이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR92a-1이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR92a-2이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR155이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR210이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miR22이다.
일부 실시형태에서, 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA는 miR-9; miR-10b; miR-17; miR-18; miR-19b; miR-21; miR-26a; miR-29a; miR-92a; miR-106b/93; miR-125b; miR-130a; miR-155; miR-181a; miR-200s; miR-210; miR-210-3p; miR-221; miR-222; miR-221/222; miR-335; miR-498; miR-504; miR-1810; miR-1908; miR-224/452; 및 miR-181/340으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 골 및 비-골 전이성 암, 유방암, 신경교종, 간세포 암종, 췌장 선암종, 흑색종, 만성 림프구성 백혈병, 갑상선 유두암종, 교모세포종, 결장직장암, 폐암, 신장암, 췌장암, 피부암, 간암, 위암, 자궁경부암, 갑상선암, 림프암, 조혈암, 신경모세포종, 급성 골수성 백혈병, 식도암, 골육종, B세포 림프종, 림프성 백혈병, 난소암, 구강암, 방광 암, 선양 낭성 암종, 역형성 갑상선 암종, 성상세포종, 수막종, 망막모세포종과 연관된다.
일부 실시형태에서, 종양 세포는 골 전이성 암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 비-골 전이성 암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 유방암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 신경교종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 간세포 암종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 췌장 선암종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 흑색종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 만성 림프구성 백혈병과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 갑상선 유두암종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 교모세포종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 결장직장암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 폐암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 신장 암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 췌장 선암종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 피부암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 간암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 위암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 자궁경부암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 갑상선암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 림프암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 조혈암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 신경모세포종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 급성 골수성 백혈병과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 식도암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 골육종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 B 세포 림프종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 림프구성 백혈병(림프성 leukemia)과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 난소암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 구강암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 방광암과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 선양 낭성 암종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 역형성 갑상선 암종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 성상세포종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 수막종과 연관되어 있다. 일부 실시형태에서, 종양 세포는 망막모세포종과 연관되어 있다.
인간의 암에 관여하는 마이크로RNA를 식별하기 위한 많은 웹 기반 도구를 사용할 수 있다. 이에 대한 검토를 위해, Mar-Aguilar F, Rodr
Figure pct00001
guez-Padilla C, Res
Figure pct00002
ndez-P
Figure pct00003
rez D. Web-based tools for microRNAs involved in human cancer, Oncol Lett. 2016;11(6):3563-3570을 참조하라. 데이터베이스는 특정 유형의 암과 관련된 miRNA 또는 다양한 악성 종양에서의 특정 miRNA의 거동을 동시에 마이닝할 수 있으며, 특정 miRNA의 서열은 다양한 데이터베이스에서 쉽게 검색될 수 있다. 예를 들어, miRCancer(mircancer.ecu.edu)는 데이터 마이닝을 통해 수집된 miRNA 및 암 연관성에 대한 기록을 저장하는 데이터베이스이다. 규칙에 기반한 접근 방식을 고안하여 26,414개 출판물(2016년)의 제목과 초록을 분석하고 miRNA의 명칭 및 암 유형을 포함하는 전체 문장 또는 문구, 그리고 기타 표현 용어가 포함된 문구를 찾아냈다. 그런 다음 이러한 데이터 마이닝 프로세스의 결과를 직접 확인했다. miRCancer는 2,611개 출판물로부터 얻은 3,764개 이상의 miRNA-암 연관성 기록을 보유하고 있는데, 이는 176개 인간 암의 236개 miRNA 발현 프로파일에 해당한다. miRCancer는 온라인에서 무료로 접속할 수 있으며 miRNA 명칭 또는 암 유형, 또는 이들 둘의 조합으로 데이터베이스를 검색할 수 있다(Xie B, Ding Q, Han H, Wu D. miRCancer: a microRNA- cancer association database constructed by text mining on literature. Bioinformatics. 2013;29(5):638-644).
예를 들어, 데이터베이스 마이닝(2020년 12월 16일)에 따르면 miR-10b는 급성 골수성 백혈병, 방광암, 대장암, 자궁내막암, 식도암, 식도 편평 세포 암종, 위암, 위암, 교모세포종, 신경교종, 간세포암종, 폐암, 악성 흑색종, 수모세포종, 비인두암종, 비소세포폐암, 구강암, 골육종, 췌장암 및 췌관선암종 등을 비롯한 20가지 유형의 암에서 상향 조절되는 것으로 나타났다. 마찬가지로, hsa-miR-101, hsa-miR-106a, hsa-miR-106b, hsa-miR- 10b, hsa-miR-1207-5p, hsa-miR-1228, hsa-miR-1229, hsa-miR-1246, hsa-miR-125a, hsa-miR-125b, hsa-miR-1307-3p, hsa-miR-135a, hsa-miR-140, hsa-miR-141, hsa-miR-150, hsa-miR-150-5p, hsa-miR-153, hsa-miR-155, hsa-miR-17, hsa-miR-17-5p, hsa-miR- 181a, hsa-miR-181b, hsa-miR-181b-3p, hsa-miR-182, hsa-miR-182-5p, hsa-miR-183, hsa-miR-183-5p, hsa-miR-18a, hsa-miR-18b, hsa-miR-191, hsa-miR-1915-3p, hsa-miR- 196a, hsa-miR-197, hsa-miR-19a, hsa-miR-19b, hsa-miR-200a, hsa-miR-200a-3p, hsa- miR-200b, hsa-miR-200c, hsa-miR-203, hsa-miR-205, hsa-miR-205-5p, hsa-miR-206, hsa-miR-20a, hsa-miR-20b, hsa-miR-21, hsa-miR-214-3p, hsa-miR-217, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-223, hsa-miR-224, hsa-miR-224-5p, hsa-miR-23a, hsa-miR-23b, hsa-miR-24, hsa-miR-24-2-5p, hsa-miR-24-3p, hsa-miR-27a, hsa-miR-27b, hsa-miR-29a, hsa-miR-301a-3p, hsa-miR-3136-3p, hsa-miR-3188, hsa-miR-32, hsa-miR-330-3p, hsa- miR-346, hsa-miR-3646, hsa-miR-370, hsa-miR-372, hsa-miR-372-3p, hsa-miR-373, hsa-miR-374a, hsa-miR-376b, hsa-miR-378, hsa-miR-423, hsa-miR-429, hsa-miR-4469, hsa-miR-449a, hsa-miR-4513, hsa-miR-4530, hsa-miR-4732-5p, hsa-miR-494, hsa-miR- 495, hsa-miR-498, hsa-miR-5003-3p, hsa-miR-503, hsa-miR-503-3p, hsa-miR-510, hsa- miR-520c, hsa-miR-520e, hsa-miR-520g, hsa-miR-526b, hsa-miR-544a, hsa-miR-645, hsa-miR-655, hsa-miR-660-5p, hsa-miR-665, hsa-miR-675, hsa-miR-761, hsa-miR-762, hsa-miR-9, hsa-miR-92a, hsa-miR-92a-3p, hsa-miR-93, hsa-miR-93-5p, hsa-miR-937, hsa-miR-944, hsa-miR-96, 및 hsa-miR-96-5p를 비롯하여, miR-10b를 포함하는 100개 이상의 miRNA들이 유방암과 관련된 것으로 밝혀졌다.
miR-10b의 서열 또는 임의의 관심 서열은 miRbase, 마이크로RNA 데이터베이스(mirbase.org/)에서 검색할 수 있다:
>hsa-miR-10b-5p MIMAT0000254
UACCCUGUAGAACCGAAUUUGUG
>hsa-miR-10b-3p MIMAT0004556
ACAGAUUCGAUUCUAGGGGAAU.
표 1. 특정 암과 관련된 상향조절된 miRNA의 서열
표 2: miRNA에 대한 서열/역보체 서열 선택
본 발명의 방법 및 조성물은 암 발달을 촉진하는 단백질을 코딩하는 다른 RNA 표적, 예를 들어, mRNA로 확장될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 암 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포에 비해 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 종양 세포에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적인 서열로서, 종양 특이적 RNA는 종양 세포에 특이적이고, RIG-I는 종양 특이적 RNA를 많이 발현하는 종양 세포에서 선택적으로 활성화된다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 발암성 mRNA이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 발암성 mRNA이다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 mRNA가 아니다.
다수의 mRNA가 암에 관여하는 것으로 여겨진다. 폴리-A 꼬리를 포함하는 mRNA의 전체 또는 부분 안티센스 가닥은 DNA 템플릿으로부터 시험관내 전사에 의해 생성될 수 있고, 5'(p)pp로 변형될 수 있다. 5'(p)pp-항-mRNA 서열은 RNA 안정성을 증가시키는 서열 요소를 포함하도록 최적화될 수 있다. 항-mRNA는 지질과 함께 제형화되어 RNA-지질 나노입자 의약품을 얻을 수 있다. 생체 내에서 5'(p)pp-anti-mRNA 는 표적 mRNA와 혼성화하여 표적 mRNA를 침묵시켜 5'(p)pp-ds-mRNA를 형성하고, 이는 RIG-I 단백질에 결합하고 이를 활성화시켜, RIG-I 신호 전달 및 암세포 사멸을 가져온다. 예시적인 mRNA 전사체 목록은 표 3을 참조하라.
표 3. 종양 유전자 및 해당 RefSeq 등록 번호 선택
예를 들어, 잘 알려진 암 치료 표적인 서바이빈(Survivin, BIRC5라고도 함)은 이 접근법을 사용하여 표적될 수 있다. 세포주기와 아폽토시스의 다중 조절자인 서바이빈(Survivin)은 모든 인간 암에서 과발현되지만 정상 조직에서는 낮은 발현을 나타낸다. 이의 증가된 발현은 원발성 유방암의 90%에서 발견되었으며 불량한 임상 결과와 상관관계가 있다. 더욱이, 증가된 생존 수준은 음성 호르몬 수용체 상태와 유의미한 연관이 있는 것으로 나타났다. 중요한 것은, 췌장암과 같은 다른 암에서 높은 수준의 서바이빈이 검출되었으며, 여기서 서바이빈은 세포 증식 및 아폽토시스 모두와 상관관계가 있고, 이 때 이러한 항-아폽토시스 마커의 유비쿼터스 역할 가능성을 나타낸다. 화학내성을 극복하는 수단으로 서바이빈 발현을 줄이거나 제거하는 잠재적인 가치를 고려할 때, RNA 간섭(RNAi) 프로세스는 가치 있는 것으로 입증될 수 있다. 실제로, RNAi에 의한 BIRC5의 하향 조절은 시험관 내에서 급성 림프구성 백혈병, 폐 및 자궁 경부 암종 및 생체 내 유방암에 대한 가능성을 입증하였다 (Ghosh SK, Yigit MV, Uchida M, 외, Sequence-dependent combination therapy with doxorubicin and a survivin-specific small interfering RNA nanodrug demonstrates efficacy in models of adenocarcinoma. Int J Cancer. 2014;134(7):1758-1766). 독소루비신과 서바이빈 특이적 소형 간섭 RNA 나노약물을 이용한 서열 의존적 병용 요법은 선암종 모델에서 효능을 입증한다.
서바이빈을 침묵시키는 표준 siRNA 기술을 현재의 5(p)pp-항-mRNA 접근법으로 대체하면 RIG-I 신호 전달 및 세포 사멸을 유발하는 RIG-I 활성화를 촉진하여 치료 결과를 향상시킬 수 있다.
4. 올리고뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드 변형
특정 실시형태들에서, 본 발명은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 방법 및 조성물을 제공하며, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포와 비교하여 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적이다. 특정 실시형태들에서, 본 발명은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 방법 및 조성물을 제공하며, 이 때 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적인 서열을 포함한다.
5' 트리포스페이트(ppp)를 포함하는 외인성 RNA는 다양한 종양 모이어티들에서 세포 사멸의 면역원성 형태를 유도하는 것으로 나타났다(Elion, DL., et al Cancer Res. 2018 Nov 1; 78(21):6183-6195; Besch, R., et al, J Clin Investig. 2009;119:2399-411; Duewell, P., 외, Cell Death Differ. 2014;21:1825-37; Kuber, K., 외, Cancer Res. 2010;70:5293-304). 5' 바이포스페이트(5'pp) 또는 5' 트리포스페이트 변형(5'ppp)은 본 명세서에서 각각 5'pp 및 5'ppp 항-miRNA/mRNA로 지칭될 수 있다. 5'-ppp-RNA는 면역 세포에 의한 바이러스 RNA의 직접적인 감지와 결합하여 사이토카인 방출을 유도하고 종양 세포에 대해 지시된 적응 세포 면역 반응을 촉진하는 것으로 나타났다(Poeck, H., 외, Nat Med. 2008 Nov; 14(11):1256-63). 패턴 인식 수용체인 RIG-I은 언캡핑 5'ppp 또는 5'pp를 포함하는 평활 말단 dsRNA에 결합할 수 있다. 본 명세서에 개시된 바와 같이, 언캡핑은 5' →5' 트리포스페이트 링키지를 통해 mRNA의 5' 말단에 연결된 7-메틸구안신 트리포스페이트로 구성된 5' 캡 구조가 결여된 RNA를 의미한다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 종양 세포에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 제공하며, 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적인 서열을 포함한다. 본 발명은 또한 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 제공하며, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 조직에 비해 종양 조직에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적이다. 5' 트리포스페이트 구조는 아래와 같다:
바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 언캡핑 5' 트리포스페이트를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 언캡핑 5' 바이포스페이트를 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법 및 조성물의 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 miRNA에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-9; miR-10b; miR-17; miR-18; miR-19b; miR-21; miR-26a; miR-29a; miR-92a; miR-106b/93; miR-125b; miR-130a; miR-155; miR-181a; miR-200s; miR-210; miR-210-3p; miR-221; miR-222; miR-221/222; miR-335; miR-498; miR-504; miR-1810; miR-1908; miR-224/452; 및 miR-181/340으로 구성된 군으로부터 선택된 종양 miRNA에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-9에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-10b에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-17에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-18에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-19b에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-21에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-26a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-29a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-92a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-106b/93에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-125b에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-130a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-155에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-181a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-200s에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-210에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-210-3p에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-221에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-222에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-221/222에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-335에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-498에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-504에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-1810에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-1908에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-224/452에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-181/340에 상보적인 서열을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR10b에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR17에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR18a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR18b에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR19b에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR21에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR26a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR29a에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR92a-1에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR92a-2에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR155에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR210에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR22에 상보적인 서열을 포함한다.
본원에 개시된 방법 및 조성물의 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA와 이중체를 형성한다. 바람직한 실시형태에서, 이중체는 5' 평활 말단을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR-9; miR-10b; miR-17; miR-18; miR-19b; miR-21; miR-26a; miR-29a; miR-92a; miR-106b/93; miR-125b; miR-130a; miR-155; miR-181a; miR-200s; miR-210; miR-210-3p; miR-221; miR-222; miR-221/222; miR-335; miR-498; miR-504; miR-1810; miR-1908; miR-224/452; 및 miR-181/340으로 구성된 군으로부터 선택된 miRNA와 이중체를 형성한다. 바람직한 실시형태들에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택된 miRNA와 이중체를 형성한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 상기 miRNA와 이중체를 형성할 수 있으며, 여기서 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 10개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 11개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 12개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 13개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 14개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 15개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 16개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 17개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 18개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 19개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 21개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 22개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 23개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 24개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 25개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 26개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 27개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 28개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 29개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 miRNA 내의 적어도 30개의 연속 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 적어도 100% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 50% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 60% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 70% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 75% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 80% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 85% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 90% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 95% 상보적이다. 한 바람직한 실시형태들에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 상기 miRNA에 적어도 100% 상보적이다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 0 내지 5개의 불일치 염기쌍을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 5개 미만의 불일치 염기쌍을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 4개 미만의 불일치 염기쌍을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 3개 미만의 불일치 염기쌍을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 2개 미만의 불일치 염기쌍을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 1개 미만의 불일치 염기쌍을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드의 이중체 부분은 불일치 염기쌍을 포함하지 않는다.
본원에 개시된 방법 및 조성물의 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA와 이중체를 형성할 수 있고, 내인성 mRNA와 경쟁하여 상기 miRNA에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이중체는 AGO2에 의해 절단되지 않는다. 일부 실시형태에서, 이중체는 RIG-I를 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화 보다 적어도 5%, 10%,15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 또는 200% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 20% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 25% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 30% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 35% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 40% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 45% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 45% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 50% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 55% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 60% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 65% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 70% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 75% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 80% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 85% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 90% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 95% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 100% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 110% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 120% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 130% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 140% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 150% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 200% 더 크다. 바람직한 실시형태들에서, RIG-I 활성화는 종양 특이적 면역 반응을 유도한다.
본원에 제공된 방법 및 조성물의 올리고뉴클레오티드는 변형을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 바와 같이, 변형에는 핵산 포스페이트 백본, 핵산 당, 핵산 염기 및/또는 올리고뉴클레오티드의 5' 또는 3' 말단의 화학적 변형, 부가, 결실, 치환 또는 조작이 포함될 수 있다. 올리고뉴클레오티드, 특히, 치료제로 구현되는 올리고뉴클레오티드는 일반적으로 포스페이트 백본 및/또는 리보스 당에서 변형되어 뉴클레아제 저항성을 높이고 표적 RNA에 대한 친화력을 향상시킨다. 포스포로티오에이트(PS) 백본 변형은 비가교 산소 원자를 황 원자로 대체하고 혈장 내 올리고뉴클레오티드의 반감기를 수 분에서 며칠로 연장한다. 포스포디에스테르(PO) 링키지를 가진 올리고뉴클레오티드와 비교하여 PS 변형을 가진 올리고뉴클레오티드의 경우에도 단백질 결합이 강화된 것으로 보고되었다. 뉴클레아제 안정성 및 올리고뉴클레오티드의 표적 RNA에 대한 결합 친화도의 추가 개선은 2'-O-메틸, 2'-플루오로(2'-F), 2'-O-메톡시에틸(2'-MOE), 2',4'-제한된 2'-O-에틸(cEt) 및 잠금 핵산(LNA)과 같은 2' 리보스 변형에 의해 얻을 수 있다. 올리고뉴클레오티드 서열 내의 2' 변형 위치는 단백질-올리고뉴클레오티드 상호작용에 추가로 영향을 미칠 수 있다. 특정 실시형태들에서, 본 발명은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 방법 및 조성물을 제공하며, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포와 비교하여 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적이다. 특정 실시형태들에서, 본 발명은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 방법 및 조성물을 제공하며, 이 때 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA에 상보적인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 다른 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 다른 변형을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-플루오로(2'-F) 리보스 변형을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 2'-F 리보스 변형은 상응하는 염기가 시토신 또는 우라실인 경우 존재한다. 일부 실시형태에서, 상기 2'-F 리보스 변형은 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 5'-말단으로부터 10번째 또는 11번째 뉴클레오티드에 존재한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트(PS) 백본 변형을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-플루오로(2'-F) 리보스 변형 및 포스포로티오에이트(PS) 백본 변형을 추가로 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 다른 변형을 포함하지 않는다. 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 다음으로 구성된 군으로부터 선택된 다른 변형을 포함하지 않는다: 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형, N-6-메틸아데노신(m6A), 슈도우리딘(Ψ), N-1-메틸슈도우리딘(mΨ), N-1-메틸슈도우리딘(mΨ), 5-메틸 -시티딘(5mC), 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC) 또는 5-메톡시시티딘(5moC). 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-6-메틸아데노신(m6A)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-1-메틸슈도우리딘(mΨ)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메틸-시티딘(5mC)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC)을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메톡시시티딘(5moC)을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트(PS) 백본 변형, 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형, N-6-메틸아데노신(m6A), 슈도우리딘(Ψ), N-1-메틸슈도우리딘(mΨ), N-1-메틸슈도우리딘(mΨ), 5-메틸-시티딘(5mC), 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC) 또는 5-메톡시시티딘(5moC)으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-6-메틸아데노신(m6A)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 슈도우리딘(Ψ)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-1-메틸슈도우리딘(mΨ)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메틸-시티딘(5mC)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메톡시시티딘(5moC)을 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법 및 조성물의 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 10개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 15개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 16개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 17개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 18개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 19개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 20개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 21개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 22개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 23개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 24개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 25개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 26개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 27개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 28개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 29개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 30개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 50개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 50개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 30개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 29개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 28개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 27개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 26개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 25개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 50개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 30개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 29개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 28개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 27개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 26개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 25개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함한다.
5'pp 및 5'ppp 항-miRNA/mRNA는 miRNA 또는 mRNA 내의 적어도 10개(예를 들어, 적어도 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 또는 23)의 연속 뉴클레오티드에 상보적인 서열을 포함한다. 예시적인 miRNA는, 예를 들어, miR-9; miR-10b; miR-21; miR-106b/93; miR-125b; miR-130a; miR-155; miR-181a; miR-200s; miR-210-3p; miR-221/222; miR-335; miR-498; miR-504; miR-1810; miR-1908; miR-224/452; 또는 miR-181/340(예를 들어, Nguyen and Chang, Int J Mol Sci. 2017;19(1):65의 표 1 참조) 및 본원의 표 1 및 표 2에 나열된 것들을 포함한다. 예시적인 mRNA에는 본 명세서의 표 2에 나열된 것들이 포함된다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열에 적어도 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13으로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 2로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 3으로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 4로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 5로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 6으로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 7로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 8로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 9로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 10으로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 11로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 12로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 단일 가닥 5' 언캡핑 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 75% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 97% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 98% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 적어도 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열에 100% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 13으로부터 선택된 핵산 서열과 동일한 핵산 서열로 구성된다.
안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO)
안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO)는 유전자 침묵을 매개하는 세포 내부의 표적 RNA 서열에 결합하는 작은 크기의 단일 가닥 핵산이다(일반적으로 miRNA의 경우 적어도 8 또는 10nt 및 최대 약 30nt, 또는 전장 mRNA 안티센스 RNA의 경우 이보다 훨씬 길다). ASO 기반 전략은 단백질과 관련된 하류 프로세스를 표적하기 보다는 RNA 수준에서 질병 원인을 표적으로 한다. 단백질은 메신저 RNA(mRNA)에 저장된 정보를 해독하여 생성된다. 수많은 파괴적인 질병 및 장애와 관련된 비정상적인 단백질 생산은 비코딩 RNA(ncRNA)의 작용을 통해 mRNA를 표적으로 함으로써 조절될 수 있다. ncRNA 중에서 마이크로RNA(miRNA), 전달 RNA-유래 소형 RNA, 유사유전자, PIWI 상호작용 RNA, 긴 ncRNA(lncRNA) 및 원형 RNA가 유전자 발현의 조절을 통해 생물학적 기능의 조절인자로서 확인된 바 있다. 따라서 pre-mRNA, mRNA 또는 miRNA를 포함한 ncRNA를 표적으로 하는 안티센스 전략은 치료 개입을 위한 질병 유발 단백질의 생성을 변경할 수 있다.
소분자 기반 단백질 표적화와 달리, 안티센스 약물은 표적 RNA 서열과 Watson-Crick 염기 페어링 규칙에 따라 효과를 나타낸다. 이러한 Watson-Crick 분자 인식 원리는 안티센스 분야에 RNA 기반 약물 설계에 더 많은 유연성을 제공하고 개발을 가속화한다. 그러나 ASO 설계 중에, 결합 친화도를 최적화하고 뉴클레아제 내성을 개선하며 생체 내 전달을 위해 필요한 변형을 고려할 수 있다. 높은 결합 친화도, 높은 특이성 및 확장된 기능성을 갖춘 AMO를 개발하려는 시도와 함께 여러 세대의 설계가 존재하였다(Ochoa S, Milam VT. Modified Nucleic Acids: Expanding the Capabilities of Functional Oligonucleotides. Molecules. 2020;25(20):4659).
RNA 뉴클레오티드는 백본, 핵염기, 리보스 당 및 2'-리보스 치환에서 화학적으로 변형될 수 있는데, Roberts, T.C., Langer, R. & Wood, M.J.A의 문헌. Advances in oligonucleotide drug delivery. Nat Rev Drug Discov 19, 673-694 (2020)의 도 3을 참조하라.
일부 ASO(종종 1세대라고도 함)에서는 뉴클레오티드를 연결하는 포스페이트 백본이 변형된다. 포스포디에스테르 결합의 비가교 산소 원자 중 하나가 황, 메틸 또는 아민 기로 대체되어 각각 포스포로티오에이트(PS), 메틸포스포네이트 및 포스포라미데이트를 생성한다. 이러한 변형들은 동일하지 않으며 각각 고유한 특정 기능을 가지고 있다. PS 올리고뉴클레오티드는 이 1세대를 대표하며 가장 널리 사용된다. 이러한 화학적 변형은 뉴클레아제에 대한 ASO의 내성을 증가시킴으로써 안정성을 향상시키는 것이며, ASO 반감기를 연장하는 것이 지속적인 목표이다. PS 변형은 반감기를 수 분에서 수 일로 변환시킨다. 중요한 것은, 이러한 변형이 RNAse H를 활성화한다는 것이다. RNAse H는 DNA-RNA 이중체에서 RNA 가닥을 절단하는 보편적으로 발현되는 효소이다. 따라서 RNAse H는 ASO/mRNA 복합체 내의 표적 mRNA를 분해하여 인코딩된 단백질의 합성을 제한할 수 있다. 불행하게도, 생물학적으로 활성인 변형된 ASO(PS)는, 특히, 단백질에 대한 비특이적 결합으로 인해 독성이 매우 높다. 이로 인해 연구자들은 독성이 적고 보다 특이적인 차세대 ASO를 개발하게 되었다.
또 다른 클래스의 ASO(때때로 2세대 ASO라고도 함)는 리보스의 2' 위치에서의 알킬 변형이 특징이다. 산소화된 기를 도입하면 2'-O-메틸(2'-OME) 및 2'-O-메톡시에틸(2'-MOE) 뉴클레오티드를 형성하게 된다. 이러한 ASO는 PS보다 독성이 낮고 표적에 대한 친화력이 약간 더 높다. 그러나 이러한 변형은 RNAse H의 모집 및 절단과 양립할 수 없다. 이러한 유형의 ASO의 안티센스 효과는 아마도 번역의 입체적 차단 때문일 것이다. 표적 RNA가 분해되어서는 안 되는 경우 이러한 변형은 잠재적인 관심 대상이다.
다른 클래스의 ASO(때때로 3세대 ASO라고도 함)는 결합 친화도, 뉴클레아제에 대한 내성 및 약동학 프로파일을 개선하기 위한 다수의 변형을 포함하여 더욱 이질적이다. 가장 일반적인 변형에는, 리보스의 2'-산소와 4'-탄소를 연결하는 메틸렌 가교에 해당하는 잠금 핵산(LNA); 리보스가 모르폴린 모이어티로 대체되고 포스포디에스테르 결합이 포스포로디아미데이트 결합으로 대체된 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO); 및 리보스-포스페이트 백본이, 염기들이 연결된 N-(2-아미노틸) 글리신 단위들의 반복으로 구성된 폴리아미드 골격으로 대체되어 있는 펩타이드 핵산(PNA)이 포함된다(Papargyri N, Pontoppidan M, Andersen MR, Koch T, Hagedorn PH. Chemical Diversity of Locked Nucleic Acid-Modified Antisense Oligonucleotides Allows Optimization of Pharmaceutical Properties. Mol Ther Nucleic Acids. 2020;19:706-717). 이들 마지막 두 구조는 전하를 띠지 않으며 전하를 띤 ASO보다 친화력이 낮은 혈장 단백질에 결합하여 소변 내에서 이들의 분포 및 제거를 증가시킨다. 제거된 분획은 투여량의 약 10-30%에 해당하며 조직 축적에 기여하는 것으로 나타났다. 이러한 변형은 높은 안정성을 제공하지만 RNAse H 모집을 유도하지는 않는다. 이 3세대 ASO는 그 표적 mRNA와 안정적인 하이브리드를 형성하여 프로세싱 또는 번역을 방해한다.
연결 가교에 의해 가해지는 LNA 변형과 그의 메틸화 유사체(“제약된(constrained) 에틸”: cET로 알려짐)의 구조적 제약(conformational constraint)은 화학 치료법에서 새로운 기회를 창출했다. 트리시클로-DNA(tcDNA)는 결합 특성이 향상된, 이러한 구조적으로 제약된 DNA 유사체 클래스에 속한다. 이는 RNAse-H 활성을 유도하지 않지만 증가된 안정성과 향상된 세포 흡수를 보여, ASO에 비해 상당한 치료 이점을 제공한다.
이전에 강조한 바와 같이, 대부분의 2세대 및 3세대 화학적 변형을 수행하는 ASO는 RNAse H 활성을 유도하지 않는다. 그러나 ASO 말단에 있는 비-RNAse H 민감성 서열들의 쌍 사이에 비변형된 또는 PS-DNA 절단-민감성 서열을 삽입하면 RNAse H 활성이 복원될 수 있다. 생성된 구조는 “갭머”로 알려져 있다(예를 들어, Quemener, Wiley Interdiscip Rev RNA. 2020;11(5):e1594 참조).
전반적으로, 화학적 변형의 이러한 다양성은, ASO의 구조와 더불어, 선택된 표적 및 작용 메커니즘에 따라 치료 접근법의 적응에 상당한 유연성을 제공한다. 최근 여러 핵산 기반 약물에 대한 미국 식품의약국(FDA)의 승인으로 인해 안티센스 연구에 대한 관심이 더욱 촉발되었다. 현재 수많은 안티센스 약물 후보가 심혈관, 대사, 내분비, 신경, 신경근, 염증 및 감염성 질환을 치료하기 위해 임상 시험 중이다.
일부 실시형태에서, 안티센스 올리고는 해당 변형이 RIG-I 헬리케이스와의 상호작용을 방해하지 않는 한, 당업계에 공지되어 있거나 본원에 기재된 바와 같이, 염기, 2' 위치, 백본/포스페이트 또는 리보스에 하나 이상의 변형을 포함한다.
항-miRNA 올리고뉴클레오티드(AMO)
상기 언급한 바와 같이, microRNA는 유전자 발현을 엄격하게 조절하여 많은 생리학적 기능을 제어한다. 이들은 중요한 조절자이기 때문에 질병과도 연관되어 있다. 따라서 이들의 활동을 억제하는 것은 효과적인 치료 전략이 될 수 있다. AMO는 표적화된 내인성 miRNA에 상보적인 서열을 갖고 안정적이고 친화력이 높은 결합을 형성하는 ASO이다. ASO와 마찬가지로, 상기 설명한 바와 같이 다양한 화학적 특성을 가지는 것들이 합성될 수 있다. 합성으로 설계된 이들 분자는, miRNA에 대한 혼성화 뿐만 아니라 입체 차단 메커니즘을 통한 원하는 반응들에 있어서 세포의 microRNA(miRNA) 기능을 중화하는 데 사용된다. 특히, AMO가 miRNA의 5'-말단의 염기 2-8에 걸쳐 있는 miRNA '시드 영역'에 높은 친화력으로 결합하는 것이 필수적이다.
5. 치료 방법
부분적으로, 본 발명은 암 치료 방법에 관한 것으로, 이 방법은 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포에 비해 종양 세포에서 많이 발현되는 내인성 종양 특이적 RNA(tsRNA)에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 본 발명은 종양 세포에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 고려하며, 이 방법은 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA(tsRNA)에 상보적인 서열을 포함하고, 이 때 RIG-I는 종양 특이적 RNA를 많이 발현하는 종양 세포에서 선택적으로 활성화된다. 일부 실시형태에서, RNA는 mRNA이다. 일부 실시형태에서, RNA는 miRNA이다. 일부 실시형태에서, miRNA는 서열 번호 1-13으로 구성된 군으로부터 선택된다.
용어 “치료”, “치료하는”, “완화하는” 등은 일반적으로 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미하기 위해 사용되며, 또한 치료 중인 병태(예를 들어, 암)의 하나 이상의 임상적 합병증의 중증도를 개선, 경감 및/또는 감소시키는 것을 지칭하기 위해 사용될 수도 있다. 이러한 효과는 질병, 질환 또는 그 합병증의 발병이나 재발을 완전히 또는 부분적으로 지연시키는 양상에서는 예방적일 수 있으며/있거나 질병이나 병태 및/또는 해당 질병 또는 병태로 인한 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치유 양상에서는 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 “치료”는 포유동물, 특히, 인간의 질병 또는 병태의 모든 치료를 포괄한다. 본원에서 사용되는 장애 또는 병태를 “예방하는” 치료제는 통계적 샘플에서 장애 또는 병태의 발생을 비치료 대조군 샘플에 비해 치료된 샘플에서 감소시키거나 질병의 발병을 비치료 대조군 샘플에 비해 지연시키는 화합물을 의미한다.
일반적으로, 본 발명에 기재된 질환 또는 병태(예를 들어, 암)의 치료 또는 예방은 본 발명의 하나 이상의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 “유효량”으로 투여함으로써 달성된다. 제제의 유효량은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량으로 그리고 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 본 발명의 제제의 “치료 유효량”은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 인자 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 제제의 능력에 따라 달라질 수 있다. “예방적 유효량”은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 기간 동안 그리고 투여량에서 효과적인 양을 지칭한다.
특정 양상들에서, 본 발명은 질병 또는 병태(예를 들어, 암)를 치료 또는 예방하기 위한 하나 이상의 추가 활성제 또는 다른 지지 요법과 병용하여 하나 이상의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 사용을 고려한다. 본원에서 사용되는 “~와 병용하여, “~의 병용”, “~와 조합된” 또는 “공동” 투여는 추가 활성제 또는 지지 요법(예를 들어, 2차, 3차, 4차 등)이 신체에서 여전히 효과적이도록 하는 임의의 투여 형태를 의미한다(예를 들어, 여러 화합물이 일정 기간 동안 환자에게 동시에 효과적이며, 해당 화합물들의 상승작용 효과가 포함될 수 있다). 유효성은 혈액, 혈청 또는 혈장 내 측정 가능한 약물 농도와 상관관계가 없을 수 있다. 예를 들어, 다양한 치료 화합물은 동일한 제형으로 또는 별도의 제형으로, 동시에 또는 순차적으로, 그리고 다양한 일정에 따라 투여될 수 있다. 따라서, 이러한 치료를 받는 대상체는 다양한 활성제 또는 요법의 병용 효과로부터 이점을 얻을 수 있다. 본 발명의 하나 이상의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 본원에 개시된 것들과 같은 하나 이상의 다른 추가 제제 또는 지지 요법과 동시에, 그 전에, 또는 그 후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 활성제 또는 요법은 해당 특정 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 일정에 따라 투여될 것이다. 요법에 사용하기 위한 특정 조합은 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드와 추가 활성제 또는 요법의 상용성 및/또는 원하는 효과를 고려할 것이다.
본 명세서에 기재된 방법은 암 치료 방법을 포함하며 이 방법은 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 세포에 비해 종양 세포에서 많이 발현되는 miRNA 또는 mRNA에 상보적이다. 이론에 제한되지 않고, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 종양 특이적 RNA와 이중체를 형성하여, RIG-I 신호전달 경로를 통해 종양 특이적 면역 반응을 유도한다. 따라서, 선택적으로 miRNA 또는 mRNA를 억제하면서(예를 들어, 내인성 miR21에 상보적인 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 사용) 종양 세포에 대한 RIG-1 매개 면역 활성화를 결합함으로써 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시형태에서, 내인적으로 발현된 mRNA 또는 miRNA는 발암성이다. 일부 실시형태에서, 내인적으로 발현된 mRNA 또는 miRNA는 종양 특이적이다. 본원에 사용된 “종양 특이적 RNA”는 비종양 세포와 비교하여 종양 세포에서 많이 발현되는 RNA(예를 들어, miRNA 또는 mRNA)를 의미한다.
생체 내에서 miRNA는 종종 RNA-유도된 침묵 복합체(RISC) 내에서 조절 기능을 발휘한다. RISC의 핵심 소단위는 AGO2(아르고노트 단백질 계열의 구성원)에 결합된 miRNA이다. RISC 복합체 내의 miRNA는 이중 가닥 miRNA를 포함하는데, 하나의 RNA 가닥은 복합체를 표적 mRNA로 안내하는 miRNA 가이드이고, 다른 RNA 가닥은 복합체에서 제거되어 분해되는 패신저 가닥(passenger strand)이다. AGO2는 miRNA 가이드를 사용하여 상보적인 억제 표적 전사체를 식별한다.
일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA와 이중체를 형성한다. 일부 실시형태에서, 내인성 종양 특이적 RNA는 miRNA 또는 mRNA로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, miRNA 또는 mRNA는 발암성이다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA와 이중체를 형성한다. 일부 실시형태에서, 이중체는 AGO2에 의해 절단되지 않는다. 일부 실시형태에서, 이중체는 AGO2에 의해 절단된다. 일부 실시형태에서, 이중체를 0 내지 5개의 불일치 염기쌍을 포함한다.
일부 실시형태에서, 이중체는 RIG-I을 활성화한다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 5%, 10%, 15% 또는 20% 더 크다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 종양 특이적 면역 반응을 유도한다. 일부 실시형태에서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 결합하기 위해 내인성 mRNA와 경쟁한다.
본원에 개시된 방법은 비정상적인 아폽토시스 또는 분화 프로세스와 연관된 장애, 예를 들어, 세포 증식 장애 또는 세포 분화 장애, 예를 들어, 고형 종양 및 조혈암 둘 모두를 포함하는 암의 치료를 포함한다. 특정 실시형태에서, 이들 방법은 종양 특이적 면역 활성화와 miRNA 또는 mRNA 억제의 조합을 포함하는 이중 치료 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 또한 발생하는 암세포를 표적하는 면역 반응을 촉발함으로써 비정상적인 아폽토시스 또는 분화 프로세스와 연관된 장애의 발생 위험을 줄이는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 장애는 고형 종양, 예를 들어, 유방암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 간암, 폐암, 신장암, 피부암 또는 결장암이다. 일반적으로, 이들 방법은 치료가 필요하거나 이러한 치료가 필요한 것으로 결정된 대상체에게 본원에 기재된 치료제의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이들 방법은, 예를 들어, 나노입자에 연결된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본원에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드)를 포함하는 치료의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 나노입자는 자성 나노입자이다.
이러한 맥락에서 사용되는 “치료”는 비정상적인 아폽토시스 또는 분화 프로세스와 연관된 장애의 적어도 하나의 증상을 개선하는 것을 의미한다. 예를 들어, 치료로 인해 종양 크기나 성장률이 감소할 수 있다. 비정상적 아폽토시스 또는 분화 프로세스와 연관된 병태(예를 들어, 암)의 치료를 위해 본원에 기재된 화합물의 치료 유효량을 투여하면, 특히, 종양 크기 감소 또는 성장률 감소, 재발 위험 또는 빈도 감소, 재발 지연, 전이 감소, 생존율 증가 및/또는 이환율 및 사망률 감소가 이루어질 것이다.
세포 증식성 및/또는 분화성 장애의 예에는, 암, 예를 들어, 암종, 육종, 전이성 장애 또는 조혈 종양성 장애, 예를 들어, 백혈병이 포함된다. 전이성 종양은 전립선, 결장, 폐, 유방 및 간 기원을 비롯한(그러나 이에 제한되지 않음) 다양한 원발성 종양 유형에서 발생할 수 있다.
본원에 사용된 용어 “암”, “과증식성” 및 “신생물성”은 자율 성장 능력을 갖는 세포, 즉, 급속하게 증식하는 세포 성장을 특징으로 하는 비정상 상태 또는 병태를 의미한다. 과증식성 및 신생물성 질환 병태는 병리적(즉, 질환 상태를 특징짓거나 구성함)로 분류될 수 있거나, 비병리적(즉, 정상으로부터 벗어났지만 질환 상태와 연관되지 않음)으로 분류될 수 있다. 이 용어는 조직병리학적 유형 또는 침윤 단계에 관계없이 모든 유형의 암 성장 또는 발암성 과정, 전이성 조직 또는 악성으로 형질전환된 세포, 조직 또는 기관을 포함하는 것을 의미한다. “병리학적 과증식” 세포는 악성 종양 성장을 특징으로 하는 질병 상태에서 발생한다. 비병리학적 과증식 세포의 예로는 상처 복구와 관련된 세포의 증식이 포함된다.
“암” 또는 “신생물”이라는 용어에는 방광, 뼈, 폐, 신장, 유방, 갑상선, 림프계, 위장관 및 비뇨생식기에 영향을 미치는 다양한 장기 시스템의 악성 종양, 뿐만 아니라 대부분의 결장암, 신세포암종, 전립선암 및/또는 고환종양, 폐의 비소세포암종, 소장암 및 식도암과 같은 악성 종양을 포함하는 선암종이 포함된다. 다른 유형의 암에는 담도암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장암, 자궁내막암, 식도암, 위암, 교모세포종, 상피내 신생물, 백혈병, 림프종, 간암, 폐암, 흑색종, 골수종, 신경모세포종, 구강암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 피부암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 및 신장암이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 특정 실시형태에서, 암은 모세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 피부 T 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 여포성 림프종, 악성 흑색종, 편평 세포 암종, 신세포 암종, 전립선 암종, 방광세포 암종, 유방 암종, 난소 암종, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 간세포 암종, 기저종, 결장 암종, 자궁경부 이형성증, 및 카포시 육종(AIDS 관련 및 비AIDS 관련)으로부터 선택된다.
“암종”이라는 용어는 당업계에서 인정되는 것이며 호흡기계 암종, 위장계 암종, 비뇨생식기계 암종, 고환 암종, 유방암종, 전립선 암종, 내분비계 암종 및 흑색종을 포함하는 상피 또는 내분비 조직의 악성 종양을 의미한다. 일부 실시형태에서, 질환은 신장 암종 또는 흑색종이다. 예시적인 암종에는 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 두경부, 결장 및 난소 조직으로부터 형성되는 암종이 포함된다. 이 용어는 또한, 암육종을 포함하는데, 예를 들어, 이것은 암종 조직과 육종 조직으로 구성된 악성 종양을 포함한다. “선암종”은 선 조직으로부터 유래되거나 종양 세포가 인식가능한 선 구조를 형성하는 암종을 의미한다.
“육종”이라는 용어는 당업계에서 인정되며 중간엽 유래의 악성 종양을 의미한다.
증식성 장애의 추가적인 예에는 조혈 종양성 장애가 포함된다. 본원에 사용된 용어 “조혈 종양성 장애”는 조혈 기원, 예를 들어, 골수성, 림프구성 또는 적혈구 계통의 과형성/신생물 세포, 또는 이의 전구 세포에서 발생하는 질병을 포함한다. 바람직하게는, 이러한 질환은 분화가 잘 되지 않은 급성 백혈병, 예를 들어, 적혈구성 백혈병 및 급성 거핵구성 백혈병으로부터 발생한다. 또 다른 예시적인 골수성 장애에는, 급성 전골수성 백혈병(APML), 급성 골수성 백혈병(AML) 및 만성 골수성 백혈병(CML)(Vaickus, L. (1991) Crit Rev. in Oncol./Hemotol. 11:267-97에서 검토됨)이 포함되지만 이에 제한되지는 않으며; 림프구성 악성종양에는 B 계통 ALL 및 T 계통 ALL을 포함하는 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 전림프구성 백혈병(PLL), 털세포 백혈병(HLL) 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM)이 포함되지만 이에 제한되는 것은 아니다. 악성 림프종의 또 다른 형태에는 비호지킨 림프종 및 이의 변종, 말초 T 세포 림프종, 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATL), 피부 T 세포 림프종(CTCL), 거대 과립 림프구성 백혈병(LGF), 호지킨병 및 Reed-Sternberg 병이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시형태에서, 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본원에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드)는 암에 걸린 것으로(예를 들어, 원발성 암 또는 전이성 암에 걸린 것으로) 진단된 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상체는 유방암(예를 들어, 전이성 유방암)에 걸렸다. 일부 비제한적인 실시형태에서, 대상체는 남성 또는 여성, 성인, 청소년 또는 어린이이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 암 또는 전이성 암(예를 들어, 림프절의 전이성 암)의 하나 이상의 증상을 갖는다. 일부 실시형태에서, 대상체는 중증 또는 진행 단계의 암(예를 들어, 원발성 또는 전이성 암)에 걸렸다. 일부 실시형태에서, 대상체는 적어도 하나의 림프절에 전이성 종양이 존재한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 림프절제술 및/또는 유방절제술을 받았다.
RIG-I 수용체 활성화된 면역 반응
이전에 설명된 바와 같이 RIG-I는 선천성 면역계의 패턴 인식 수용체(PRR)를 감지하는 세포질 핵산이다. 이는 5' 트리포스페이트 시그니처가 있는 RNA 구조(예를 들어, 바이러스)를 인식하는 데 필수적이다. RIG-I 활성화는 암에 대한 면역 반응으로 프로그래밍될 수 있다. 중요한 것은, RIG-I을 통한 종양 세포 사멸이 면역학적 기억을 구축하는 것으로 나타났다는 것인데, 이는 신체의 면역계가 활성화되면 신체는 면역성이 되고 종양은 “이물질”로 거부됨을 의미한다.
일부 실시형태에서, 본 발명은 종양 세포에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법을 고려하며, 이 방법은 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 내인성 종양 특이적 RNA(tsRNA)에 상보적인 서열을 포함하고, 이 때 RIG-I는 종양 특이적 RNA를 많이 발현하는 종양 세포에서 선택적으로 활성화된다. 이론에 제한되지 않고, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드가 종양 특이적 RNA와 이중체를 형성하여, RIG-I 신호전달 경로를 통해 종양 특이적 면역 반응을 유도할 때 면역계는 암에서 선택적으로 활성화된다. 일부 실시형태에서, 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 투여는 항바이러스 반응, 특히, 유형 I IFN 반응을 유도한다. 일부 실시형태에서, I형 IFN 반응은 IFN-α 반응이다. 일부 실시형태에서, RIG-I 활성화는 종양 특이적 면역 반응(예를 들어, 종양 특이적 RNA를 많이 발현하는 종양 세포에 대한 반응)을 유도한다. 일부 실시형태에서, 종양 특이적 면역 반응은 I형 IFN, DAMP(위험 관련 분자 패턴) 및/또는 종양 항원의 방출을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 상기 종양 세포에 대한 면역학적 기억을 유도한다.
일부 실시형태에서, 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 투여는 종양 세포의 아폽토시스를 유도한다. 일부 실시형태에서, 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 투여는 (a) 항바이러스 반응, 특히, 유형 I IFN 반응을 유도하고, (b) 척추 동물, 특히, 포유동물에서 종양 특이적 RNA(예를 들어, miRNA21)를 하향조절한다. 본원은 척추동물, 특히, 포유동물에서 종양 세포의 아폽토시스를 유도하기 위한 약학 조성물의 제조를 위한 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 용도를 추가로 제공한다.
본원은 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 투여를 통해 종양 특이적 면역 반응을 유도함으로써 신체의 면역계를 활성화하여 원하는 치료 반응을 일으키는(예를 들어, 동물의 항종양 면역 기억을 치료 및/또는 생성하는) 방법 및/또는 조성물을 기재한다. 이론에 제한되지 않고, 도 1에 도시된 바와 같이, RIG-I 경로는 암 세포에서 특이적으로 발현되는 miRNA 또는 mRNA에 상보적인 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 도입 후 5'ppp-dsRNA의 현장 생성에 의해 암세포에서 선택적으로 활성화되며; 5'pp-ssRNA에서도 이와 동일하거나 유사한 과정이 예상된다. 결과적으로, 종양 미세환경(TME)의 항종양 면역 잠재력은 간단히 단일 가닥 RNA를 사용하여 특정 종양 억제 유전자(들)를 동시 활성화시키면서 RIG-I 신호전달 경로를 활성화시킴에 의해 밝혀질 수 있다.
6. 약학 조성물 및 투여 방식
본원에 기재된 임의의 방법에서, 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본원에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드)는 의료 전문가(예를 들어, 의사, 의사의 보조자, 간호사 또는 연구소 또는 진료소 직원), 대상체(즉, 자가 투여), 대상체의 친구 또는 가족이 투여할 수 있다. 투여는 임상 환경(예를 들어, 진료소 또는 병원), 생활 보조 시설 또는 약국에서 수행될 수 있다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시형태에서, 대상체에게 본 명세서에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본 명세서에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드) 중 적어도 하나(예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 4개)를 함유하는 조성물의 적어도 1회(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30회) 용량이 투여된다. 본 명세서에 기재된 임의의 방법에서, 적어도 하나의 자성 입자 또는 약학 조성물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 자성 입자 또는 약학 조성물 중 어느 하나)은 대상체에게 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자성 입자 또는 약학 조성물은 대상체의 림프절 내로 직접 투여(주사)된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시형태에서, 대상체에게 본 명세서에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본 명세서에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드) 중 적어도 하나(예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 4개)를 함유하는 조성물의 적어도 1회(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30회) 용량이 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.2 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.3 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.4 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.5 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.6 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.7 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.8 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 0.9 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 1 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 2 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 3 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 4 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 5 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 6 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 7 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 8 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 9 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 10 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 20 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 30 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 40 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 50 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 60 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 70 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 80 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 90 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 100 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 110 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 120 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 130 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 140 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 150 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 160 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 170 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 180 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 190 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량 범위로 투여된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.2 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.3 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.4 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.5 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.6 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.7 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.8 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 0.9 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 1 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 2 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 3 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 4 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 5 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 6 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 7 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 8 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 9 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 10 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 20 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 30 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 40 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 50 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 60 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 70 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 80 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 90 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 100 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 110 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 120 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 130 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 140 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 150 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 160 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 170 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 180 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 190 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 200 mg/kg의 투여량으로 투여된다.
특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 1일 1회 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 1일 2회 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 주 1회 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 주 2회 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 주 3회 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 2주마다 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 3주마다 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 4주마다 투여된다. 특정 실시형태들에서, 본 발명의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 매월 투여된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시형태에서, 대상체에게 본 명세서에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본 명세서에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드) 중 적어도 하나(예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 4개)를 함유하는 조성물의 적어도 1회(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30회) 용량이 투여된다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 39개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 38개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 37개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 36개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 35개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 34개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 33개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 32개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 31개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 30개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 29개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 28개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 27개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 26개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 25개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 24개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 23개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 22개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 21개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 20개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 19개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 18개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 17개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 16개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 15개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 14개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 13개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 12개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 11개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 10개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 9개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 8개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 7개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 6개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 5개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 4개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 3개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 2개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태들에서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 실시형태에서, 대상체에게 본 명세서에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본 명세서에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드) 중 적어도 하나(예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 4개)를 함유하는 조성물의 적어도 1회(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30회) 용량이 투여된다. 본 명세서에 기재된 임의의 방법에서, 적어도 하나의 자성 입자 또는 약학 조성물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 자성 입자 또는 약학 조성물 중 어느 하나)은 대상체에게 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자성 입자 또는 약학 조성물은 대상체의 림프절 내로 직접 투여(주사)된다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 1개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 2개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 3개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 4개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 5개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 6개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 7개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 8개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 9개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 10개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 11개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 12개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 13개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 14개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 15개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 16개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 17개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 18개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 19개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 20개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 21개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 22개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 23개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 24개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 25개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 26개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 27개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 28개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 29개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 30개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 31개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 32개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 33개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 34개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 35개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 36개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 37개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 38개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 39개 내지 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 39개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 38개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 37개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 36개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 35개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 34개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 33개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 32개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 31개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 30개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 29개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 28개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 27개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 26개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 25개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 24개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 23개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 22개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 21개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 20개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 19개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 18개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 17개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 16개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 15개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 14개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 13개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 12개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 11개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 10개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 9개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 8개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 7개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 6개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 5개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 4개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 4개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 3개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 적어도 2개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 상기 기재된 바와 같은 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 중 적어도 하나 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 올리고뉴클레오티드의 세포 내부로, 특히, 세포의 세포질 내부로의 전달을 촉진하는 제제를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 전달제는 본원에 기재된 제제(예를 들어, 미셀, 지질 나노입자(LNP), 구형 핵산(SNA), 세포외 소포, 합성 소포, 엑소좀, 리피도이드, 리포솜 및 리포플렉스)이다.
약학 조성물은 올리고뉴클레오티드를 안정화시키는 제제와 같은 또 다른 제제를 추가로 포함할 수 있다. 안정화제의 예에는 올리고뉴클레오티드와 복합체를 형성하여 iRNP를 형성하는 단백질, EDTA와 같은 킬레이트제, 염 및 RNase 억제제가 포함된다.
특정 실시형태에서, 약학 조성물, 특히, 본원에 기재된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 활성인 치료제(들)를 추가로 포함한다. 약학적 활성제의 예에는 면역자극제, 항바이러스제, 항생제, 항진균제, 항기생충제, 항종양제, 사이토카인, 케모카인, 성장 인자, 항혈관신생 인자, 화학요법제, 항체 및 유전자 침묵제가 포함된다. 바람직하게는, 약학적 활성제는 면역자극제, 항바이러스제 및 항종양제로 구성된 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 약학적 활성제는 동일하거나 상이한 카테고리에 속할 수 있다.
특정 실시형태에서, 약학 조성물, 특히, 본원에 기재된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학 조성물은, 항원, 항바이러스 백신, 항박테리아 백신 및/또는 항종양 백신을 추가로 포함하며, 이 때 백신은 예방적 및/또는 치료적일 수 있다.
특정 실시형태에서, 약학 조성물, 특히, 본원에 기재된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학 조성물은 레티노이드산, IFN-α 및/또는 IFN-β를 추가로 포함한다. 어떤 이론에도 제한되지 않고, 레티노이드산, IFN-α 및/또는 IFN-β는 아마도 RIG-I 발현의 상향 조절을 통해 IFN-α 생산에 대해 세포를 감작시킬 수 있다.
약학 조성물은 의도한 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 투여량을 비롯하여 그의 치료 적용에 적합한 임의의 방식으로 제형화될 수 있다. 최적의 약학 조성물은 당업계의 통상적인 지식에 따라 당업자에 의해 제형화될 수 있다.
약학 조성물은 즉시 방출, 제어 방출, 시간 지정 방출, 지속 방출, 장기 방출 또는 연속 방출용으로 제형화될 수 있다.
약학 조성물은 의도한 적용에 적합하다면, 국소, 장내 및 비경구 경로를 비롯한(그러나 이에 제한되는 것은 아님) 당업계에 공지된 임의의 경로로 투여될 수 있다. 국소 투여에는 경피 투여, 흡입 투여, 비강 투여, 질 투여, 관장 투여, 점안제 및 점이제(ear drops)가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 장내 투여에는 경구, 직장 투여 및 영양 공급관을 통한 투여가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 비경구 투여에는 정맥내, 동맥내, 근육내, 심장내, 피하, 골내, 피내, 척수강내, 복강내, 경피, 경점막 및 흡입 투여가 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 약학 조성물은 예방 및/또는 치료 목적으로 사용될 수 있다.
최적의 투여량, 빈도, 시기 및 투여 경로는 치료될 질병 또는 병태, 질병 또는 병태의 중증도, 환자의 연령, 성별 및 신체 상태, 및 이전 치료 유무와 같은 요인에 기초하여 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상체에게는 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본원에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드) 또는 약학적 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물) 및 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함한다. 적어도 하나의 추가 요법제는 화학요법제(예를 들어, 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 발루비신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포시드, 테니포시드, 타플루포시드, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 독시플루리딘, 플루오로우라실, 젬시타빈, 머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 블레오마이신, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 보르테조밉, 카르필조밉, 살리노스포라미드 A, 모든 트랜스 레티노산, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 및 비노렐빈) 및/또는 진통제(예를 들어, 아세트아미노펜, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 술린닥, 톨메틴, 셀레콕시브, 부프레노르핀, 부토르파놀, 코데인, 하이드로코돈, 하이드로모르폰, 레보르파놀, 메페리딘, 메타돈, 모르핀, 날부핀, 옥시코돈, 옥시모르폰, 펜타조신, 프로폭시펜 및 트라마돌) 일 수 있다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 면역원성 세포 사멸 유도제(ICDi)(예를 들어, 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 미톡산트론, 옥살리플라틴 및 파클리탁셀)이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 siRNA 요법이다. 일부 실시형태에서, siRNA 요법은 암과 연관된 유전자(예를 들어, PD-L1, CTLA-4, TGF-β 및/또는 VEGF)를 표적으로 한다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 표적 요법이다. 표적 요법은 개인의 유전자와 단백질에 대한 정보를 사용하여 질병을 예방, 진단 및 치료하는 의학의 한 형태인 정밀 의학이라고도 지칭되는 것의 초석이다. 이러한 치료법은 때때로 “분자 표적 약물” 또는 이와 유사한 명칭으로 명명된다. 이를 발견하는 과정을 흔히 '합리적인 약물 설계'라고 지칭한다. 이 개념은 또한 '맞춤형 의료'라고도 할 수 있다.
분자 표적 약물은 하나의 경로에서 특정 표적 분자 또는 구조적으로 관련된 표적 분자들의 세트와 상호 작용하므로; 질병 관련 프로세스와 같은 해당 경로의 종점 효과를 조절하고; 따라서 치료상의 이점을 얻는다.
분자 표적 약물은 소분자 또는 생물학적 제제, 일반적으로, 항체일 수 있다. 이는 단독으로 또는 다른 치료제 및 방법과 병용하여 사용가능하다.
이는 특정 분자 또는 관련 분자 세트를 표적으로 하고, 일반적으로 다른 분자들과의 상호 작용을 최소화하도록 설계되므로 표적 요법은 부작용이 더 적을 수 있다. 표적 항암제는 광범위하게 말하면 암의 성장, 진행, 억제 또는 제거의 결핍, 또는 확산에 관여하는 특정 분자 또는 구조적으로 관련된 분자들의 세트(총칭하여 “분자 표적”)와 상호작용함으로써 암의 성장과 확산을 차단한다. 이러한 분자 표적에는, 예를 들어, 그리고 제한없이, 신호 전달, 유전자 발현 조절, 아폽토시스 유도 또는 억제, 혈관신생 억제 또는 면역계 조절을 비롯한 하나 이상의 세포 기능에 관여하는 단백질 또는 유전자가 포함될 수 있다.
표적 요법 단일클론 항체(mAbs)와 표적 소분자는 암 치료제로 사용되고 있다. 이들은 단독 요법으로 사용되거나 다른 기존의 치료 양식과 조합하여 사용되며, 특히 치료 중인 질병이 기존 기술만을 사용한 치료에 불응성인 경우 더욱 그러하다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 분자 표적 요법이다. 일부 실시형태에서, 분자 표적 요법은 트라스투주맙, 길로트리프, 프로류킨, 알렉티닙, 캄패스, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 악시티닙, 벨리무맙, 벨리노스타트, 베바시주맙, 벨케이드, 카나키누맙, 세리티닙, 세툭시맙, 크리조티닙, 다브라페닙, 다라투무맙, 다사티닙, 데노수맙, 엘로투주맙, 에나시데닙, 에를로티닙, 게피티닙, 이브루티닙, 자이델리그, 이마티닙, 렌바티닙, 미도스타우린, 네시투무맙, 니라파립, 오비누투주맙, 오시머티닙, 파니투무맙, 레고라페닙, 리툭시맙, 룩솔리티닙, 소라페닙, 토실리주맙, 트라스투주맙으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 면역요법제이다. 본원에 사용된 용어 “면역요법”은 암세포에 대한 신체의 면역 반응을 간접적으로 또는 직접적으로 향상, 자극 또는 증가시키고/증가시키거나 다른 항암 요법의 부작용을 감소시키는 화합물, 조성물 또는 요법을 지칭한다. 따라서 면역요법은 암세포에 대한 면역계의 반응을 직접적 또는 간접적으로 자극하거나 강화하고/하거나 다른 항암제로 인해 발생했을 수 있는 부작용을 줄이는 요법이다. 면역요법은 또한 당업계에서 면역요법, 생물학적 요법, 생물학적 반응 조절제 요법 및 생물요법으로도 지칭된다. 당업계에 공지된 일반적인 면역요법의 예에는 사이토카인, 암 백신, 단일클론 항체 및 비사이토카인 보조제가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 면역요법 치료는 대상체에게 일정량의 면역 세포(T 세포, NK, 세포, 수지상 세포, B 세포...)를 투여하는 것으로 구성될 수 있다.
면역요법제는 비특이적일 수 있다, 즉, 일반적으로 면역계를 강화하여 인체가 암세포의 성장 및/또는 확산과 싸우는 데 더욱 효과적이게 되거나 또는 특이적일 수도 있다, 즉, 암세포 자체를 표적으로 할 수 있으며, 면역요법은 비특이적 면역요법제와 특이적 면역요법제를 병용할 수 있다.
비특이적 면역요법제는 면역계를 자극하거나 간접적으로 향상시키는 물질이다. 비특이성 면역요법제는 암 치료를 위한 주요 요법으로 단독으로 사용되기도 하고, 주요 요법에 추가로 사용되기도 하는데, 이 경우 비특이적 면역요법제는 다른 요법들(예를 들어 암 백신)의 효과를 강화시키는 보조제로서 사용된다. 비특이적 면역요법는 또한 후자의 맥락에서 다른 요법들의 부작용, 예를 들어, 특정 화학요법제에 의해 유발되는 골수 억제를 감소시키는 기능을 할 수 있다. 비특이적 면역요법제는 주요 면역계 세포에 작용하여 사이토카인 및 면역글로불린의 생산 증가와 같은 2차 반응을 일으킬 수 있다. 대안적으로, 제제 자체가 사이토카인을 포함할 수 있다. 비특이적 면역요법제는 일반적으로 사이토카인 또는 비사이토카인 보조제로 분류된다.
일부 실시형태에서, 면역요법제는 펨브롤리주맙(Keytruda®), 니볼루맙(Opdivo®), 아테졸리주맙(Tecentriq®), 이필리무맙(Yervoy®), 아벨루맙(Bavencio®) 및 더발루맙(Imfinzi®)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 대상체는 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-CTLA4 요법을 받았거나 받고 있다. 대안적으로, 임의의 상기 방법은 대상체에게 유효량의 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-CTLA4 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 예에서, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-CTLA4 요법은 각각 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-CTLA4 항체를 포함할 수 있다. 예시적인 항-PD-1 항체에는 펨브롤리주맙, 니볼루맙 및 AMP-224 또는 이의 항원 결합 단편이 포함된다. 예시적인 항-CTLA-4 항체에는 이필리무맙 및 트레멜리무맙, 또는 이의 항원 결합 단편이 포함된다. 예시적인 항-PD-L1 항체에는 더발루맙, 아테졸리주맙 및 아벨루맙, 또는 이의 항원 결합 단편이 포함된다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제 및 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본 명세서에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드)는 동일한 조성물(예를 들어, 동일한 약학 조성물)로 투여된다. “적어도 하나”는 동일하거나 상이한 올리고뉴클레오티드(들)의 하나 이상의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(들)가 함께 사용될 수 있음을 의미한다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제 및 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 다양한 투여 경로를 사용하여 대상체에게 투여된다(예를 들어, 경구 투여에 의해 전달되는 적어도 하나의 추가 요법제 및 정맥내 투여에 의해 전달되는 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드).
본원에 기재된 임의의 방법에서, 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물) 및 선택적으로, 적어도 하나의 추가 요법제는 적어도 주 1회(예를 들어, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회) 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 2개의 상이한 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 동일한 조성물(예를 들어, 액체 조성물)로 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 및 적어도 하나의 추가 요법제는 동일한 조성물(예를 들어, 액체 조성물)로 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 및 적어도 하나의 추가 요법제는 2개의 상이한 조성물(예를 들어, 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 함유하는 액체 조성물 및 하나 이상의 추가 요법제를 함유하는 고체 경구 조성물)로 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 알약, 정제 또는 캡슐로서 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 요법제는 서방형 경구 제형으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가 요법제는 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물)을 투여하기 전에 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가 요법제는 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 자성 입자 또는 약학 조성물)을 투여한 후에 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가 요법제 및 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물)은 대상체에서 하나 이상의 추가 요법제와 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드)의 생활성 기간이 중복되도록 대상체에게 투여된다.
일부 실시형태에서, 대상체는 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드 또는 약학 조성물)을 장기에 걸쳐(예를 들어, 적어도 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년 또는 10년에 걸쳐) 투여될 수 있다. 숙련된 의료 전문가는 진단을 위해 또는 치료의 유효성을 추적하기 위해(예를 들어, 상기 방법들 및 해당 기술분야에 공지된 방법들을 사용) 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여 치료 기간의 길이를 결정할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 숙련된 의료 전문가는 또한 대상체에게 투여되는 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(및/또는 하나 이상의 추가 요법제)의 정체 및 수(예를 들어, 증가 또는 감소)를 변경할 수 있고, 또한 치료 유효성의 평가(예를 들어, 본원에 기술되고 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용)에 기초하여 대상체에 대한 적어도 하나의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(및/또는 하나 이상의 추가 요법제)의 투여량 또는 투여 빈도를 조정(예를 들어, 증가 또는 감소)시킬 수 있다. 숙련된 의료 전문가는 치료를 중단할 시기(예를 들어, 대상체의 증상이 유의하게 감소한 시기)를 추가로 결정할 수 있다.
7. 전달
5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본원에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드)는 생체내 또는 생체외에서 당업계에서 이용가능한 다양한 공지의 적합한 방법들을 사용하여 숙주 세포 또는 대상체에 전달될 수 있다. 본 명세서에 제공된 바와 같이, 리포플렉스, 리포솜, 지질 나노입자(LNP), 구형 핵산(SNA), 나노입자, 및 당업계에 공지된 기타 방법을 포함하는 전달 시스템이 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 전달을 위해 사용될 수 있다.
5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 함유하는 다양한 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 나노입자)은 또한 생체 내에서 세포로의 전달을 위해 유기체에 투여되거나 생체 외에서 세포 또는 세포 배양물에 투여될 수 있다. 투여는 분자를 도입하여 혈액, 체액 또는 분자들과 궁극적으로 접촉시키기 위해 통상적으로 사용되는, 주사, 주입, 국소적용 및 전기천공을 비롯한 (그러나 이에 제한되지 않음) 임의의 경로들에 의해 의한다. 이러한 올리고뉴클레오티드를 투여하는 적절한 방법을 이용할 수 있으며 당업자에게 잘 알려져 있다.
올리고뉴클레오티드 전달 전략
올리고뉴클레오티드 치료제 분야는 지난 몇 년간 눈부신 발전을 이루었다. 그러나 올리고뉴클레오티드를 세포내 작용 부위로 효과적으로 전달하는 것은 여전히 중요한 문제로 남아 있다. 올리고뉴클레오티드 전달의 생물학적 기초에는 다양한 조직 장벽의 특성과 올리고뉴클레오티드의 세포 흡수 및 세포내 수송 메커니즘이 포함된다. 올리고뉴클레오티드의 전달을 향상시키기 위한 현재 접근법에는 분자 규모의 표적화된 리간드-올리고뉴클레오티드 접합체, 지질- 및 중합체-기반 나노입자, 구형 핵산(핵산으로 코팅된 무기 나노입자), 미셀, 세포외 소포, 합성 소포, 엑소좀, 리피도이드, 올리고뉴클레오티드 전달을 향상시키는 항체 접합체 및 소분자가 포함된다. 이러한 접근법의 장점과 단점은 기본 생물학과 관련하여 존재한다. 이러한 전달 방법들 중 일부는 아래에 더 자세히 설명되어 있다.
리포플렉스, 리포솜 및 지질 나노입자
지질을 이용한 제형은 핵산 전달을 향상시키는 가장 일반적인 접근법 중 하나이다. 다중음이온성 핵산 약물을 지질과 혼합하면 핵산이 더 바람직한 표면 전하를 갖고 세포내이입에 의한 흡수를 유발할 만큼 충분히 큰(~100nm 직경) 나노입자로 응축된다. 지질복합체는 다중음이온성 핵산과 양이온성 지질 사이의 직접적인 정전기적 상호작용의 결과이며, 일반적으로 상대적으로 불안정한 복합체들의 이질적인 집단이다. 리포플렉스 제제는 사용 직전에 준비해야 하며 국소 전달 용도로 성공적으로 사용되어 왔다. 대조적으로, 리포솜은 지질 이중층을 포함하며, 핵산 약물은 캡슐화된 수성 공간에 존재힌다. 리포솜은 더 복잡하며(일반적으로 양이온성 또는 융합성 지질(엔도솜 탈출을 촉진하기 위해) 및 콜레스테롤 페길화 지질로 구성됨) 리포플렉스보다 안정성이 뛰어나고 일관된 물리적 특성을 나타낸다. 예를 들어, 안정한 핵산 지질 입자라고도 알려진 일부 지질 나노입자(LNP)는 정의된 비율로 이온화 가능한 지질, 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-지질 접합체를 포함하는 리포솜이며 여러 사례에서 성공적으로 활용되었다. 획기적인 사례로는 전임상 동물 연구에서 siRNA를 사용하여 B형 간염 바이러스 및 APOB를 침묵시킨 것, 그리고 최근에는 LNP 제형으로 전달되는 siRNA인 파티시란(patisiran)이 승인된 것이다. 핵산 카고의 캡슐화는 순환계와 엔도솜에서 뉴클레아제 소화로부터 보호하는 수단을 제공한다. 추가적으로, 이온화 가능한 LNP는 또한 APOE와도 연관되어, LDLR-매개 세포내이입을 통해 간 흡수를 더욱 촉진한다. 유사하게, 리피도이드 또는 지질 유사 물질을 함유한 LNP는 설치류 및 비인간 영장류에서 강력한 siRNA-매개 침묵을 입증했다.
지질 나노입자(LNP)는 뉴클레오티드 카고의 전달을 위한 잘 알려진 수단이며, 본 명세서에 개시된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드의 전달을 위해 사용될 수 있다. LNP의 단점은 이의 전달이 주로 간 및 세망내피계로 제한된다는 것인데, 이유는 이 조직의 굴모양 모세혈관 상피가 이러한 상대적으로 큰 나노입자의 진입을 허용할 만큼 충분히 큰 공간을 제공하기 때문이다. 그러나 뇌실내 주사 후 CNS에 siRNA를 성공적으로 전달하기 위해 LNP의 국소 전달이 사용되었다. 반대로, 나노입자의 큰 크기는 본질적으로 신장 여과를 배제하고 더 높은 페이로드의 전달을 허용하므로 유리하다.
일부 실시형태에서, 본원에는 본원에 개시된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 숙주 세포 또는 대상체에게 전달하기 위한 방법이 제공되며, 이 때 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 LNP를 통해 전달된다. 일부 실시형태에서, LNP는 생분해성, 이온화가능한 지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, LNP는 3-((4,4-비스(옥틸옥시)부타노일)옥시)-2-((((3-(디에틸아미노)프로폭시)카르보닐)옥시)메틸)프로필(9Z, 12Z)-옥타데카-9,12-디에노에이트)로도 명명되는 (9Z,12Z)-3-((4,4-비스(옥틸옥시)부타노일)옥시)-2-((((3-(디에틸아미노)프로폭시)카르보닐)옥시)메틸)프로필 옥타데카-9,12-디에노에이트, 또는 또 다른 이온화 가능한 지질을 포함한다. 예를 들어, PCT/US2018/053559, WO/2017/173054, WO2015/095340, 및 WO2014/136086의 지질, 뿐만 아니라 이 문헌들에 제공된 참고문헌을 참고하라. 일부 실시형태에서, LNP 지질과 관련하여 용어 양이온성 및 이온화가능한은 상호교환 가능하며, 예를 들어, 이온화가능한 지질은 pH에 따라 양이온성이다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는 지질 나노입자에 제제화되거나 이를 통해 투여되며; 예를 들어, 그 전문이 본원에 참고문헌으로 포함되는 WO/2017/173054를 참고하라. 본원에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드들은 LNP에 의해 전달될 수 있다. 일부 예에서, 지질 성분은 생분해성, 이온화가능한 지질, 콜레스테롤, DSPC 및 PEG-DMG를 포함한다.
구형 핵산(SNA)
대체 나노입자 기반 전달 전략은 SNA 접근 방식이다. SNA 입자는 티올 링키지를 통해 표면에 조밀하게 패킹된 친수성 올리고뉴클레오티드(예를 들어, ASO, siRNA 및 면역자극 올리고뉴클레오티드)로 장식된 소수성 코어 나노입자(금, 실리카 또는 기타 다양한 물질을 포함)로 구성된다. 다른 나노입자 설계와 달리, SNA에 부착된 올리고뉴클레오티드는 코어 구조로부터 바깥쪽으로 방사된다. 노출되어 있는 동안, 올리고뉴클레오티드는 입체 장애, 높은 국소 염 농도 및 코로나 단백질과의 상호 작용을 통해 핵분해성 분해로부터 어느 정도 보호된다.
나노입자
일부 실시형태에서, 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어, WO2013/016126에 설명된 바와 같이 나노입자에 연결되거나 접합된다. 일부 실시예에서, 나노입자는 약 2 nm 내지 약 200 nm(예를 들어, 약 10 nm 내지 약 30 nm, 약 5 nm 내지 약 25 nm, 약 10 nm 내지 약 25 nm, 15nm 내지 약 25nm, 약 20nm 내지 약 25nm, 약 25nm 내지 약 50nm, 약 50nm 내지 약 200nm, 약 70nm 내지 약 200nm, 약 80nm 내지 약 200nm nm, 약 100 nm 내지 약 200 nm, 약 140 nm 내지 약 200 nm, 및 약 150 nm 내지 약 200 nm)의 직경을 가지며, 중합체 코팅을 함유한다.
일부 실시형태에서, 본원에 제공된 나노입자는 구형 또는 타원형일 수 있거나 무정형 형상을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 본원에 제공된 나노입자는 약 2 nm 내지 약 200 nm(예를 들어, 약 10 nm 내지 약 200 nm, 약 2 nm 내지 약 30 nm, 약 5 nm 내지 약 25 nm, 약 10 nm 내지 약 25 nm, 약 15 nm 내지 약 25 nm, 약 20 nm 내지 약 25 nm, 약 50 nm 내지 약 200 nm, 약 70 nm 내지 약 200 nm, 약 80 nm 내지 약 200 nm, 약 100 nm 내지 약 200 nm, 약 140 nm 내지 약 200 nm, 및 약 150 nm 내지 약 200 nm)의 (나노입자 외부 표면 상의 임의의 두 지점 사이) 직경을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 약 2 nm 내지 약 30 nm의 직경을 갖는 나노입자는 대상체의 림프절에 국재화된다. 일부 실시형태에서, 약 40 nm 내지 약 200 nm의 직경을 갖는 나노입자는 간에 국재화된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 나노입자는 자성 물질을 함유하지 않는다. 일부 실시형태에서, 나노입자는, 부분적으로, 중합체(예를 들어, 폴리(락트-코-글리콜산))를 함유하는 코어를 함유할 수 있다. 숙련된 실무자는 검(예를 들어, 아카시아, 구아), 키토산, 젤라틴, 알긴산나트륨 및 알부민을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 수의 공지된 물질이 나노입자를 제조하는 데 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 본 명세서에 기재된 나노입자를 생성하는데 사용될 수 있는 추가적인 중합체는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 나노입자를 생성하는 데 사용될 수 있는 중합체에는 셀룰로오스, 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(비닐 알코올), 폴리(아크릴산), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(메타크릴산), 폴리락타이드(PLA), 폴리글리콜라이드(PGA), 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)(PLGA), 폴리무수물, 폴리오르토에스테르, 폴리시아노아크릴레이트 및 폴리카프로락톤이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
숙련된 실무자는 나노입자의 조성에 사용되는 물질, 제조 방법, 코팅 방법 및 나노입자 크기 조절 방법이 실질적으로 다양할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 그러나 이들 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 주요 문제에는 나노입자의 생분해성, 독성 프로파일 및 약동학/약력학이 포함된다. 나노입자의 조성 및/또는 크기는 이의 생물학적 운명의 주요 결정 요인이다. 예를 들어, 더 큰 나노입자는 일반적으로 간에 흡수되어 분해되는 반면, 더 작은 나노입자(<30 nm 직경)는 일반적으로 오랜 시간 동안(때때로 인간에서 혈액 반감기가 24시간 이상) 순환하여 림프절과 과투과성 혈관구조를 가진 장기들의 간질, 예를 들어, 종양에 축적된다.
자성 나노입자
일부 실시형태에서, 나노입자는 자성일 수 있다(예를 들어, 자성 물질의 코어를 함유함). 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 염화제2철, 염화제1철, 또는 이들의 조합, 및 덱스트란 코팅을 포함한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 본 명세서에 기재된 상이한 나노입자 조성물들 중 2개 이상의 혼합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 조정 가능한 표면 작용기화를 갖는 적어도 하나의 자성 나노입자, 및 조정 가능한 자기 특성을 갖는 적어도 하나의 자성 나노입자를 함유한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 나노입자는 자성 물질(예를 들어, 치료용 자성 나노입자)의 코어를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 자성 물질 또는 입자는 자기장에 반응하는 반자성, 상자성, 초상자성 또는 강자성 물질을 함유할 수 있다. 치료용 자성 나노입자의 비제한적인 예는 마그네타이트; 페라이트(예를 들어, 망간, 코발트 및 니켈의 페라이트); Fe(II) 산화물, 및 헤마타이트 및 이들의 금속 합금의 군으로부터 선택된 금속 산화물을 함유하는 자성 물질의 코어를 함유한다. 자성 물질의 코어는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 금속염을 금속 산화물로 변환함으로써 형성될 수 있다(예를 들어, Kieslich 외, Inorg. Chem. 2011). 일부 실시형태에서, 나노입자는 시클로덱스트린 금 또는 양자점을 함유한다. 치료용 자성 나노입자를 생성하는데 사용될 수 있는 방법의 비제한적 예는 Medarova 외, Methods Mol. Biol. 555:1-13, 2009; 및 Medarova 외, Nature Protocols 1:429-431, 2006에 기재되어 있다. 추가적인 자성 재료 및 자성 재료의 제조 방법은 해당 분야에 알려져 있다. 본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시형태에서, 치료용 자성 나노입자의 위치 또는 국재화가 대상체에서 이미지화될 수 있다(예를 들어, 하나 이상의 용량의 치료용 자성 나노입자를 투여한 후 대상체에서 이미지화될 수 있다).
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 하나 이상의 아민 기로 작용기화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 작용기화는 자성 나노입자의 표면에서 일어난다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아민 기는 덱스트란 코팅에 공유적으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아민 기는 덱스트란 코팅의 하나 이상의 히드록실기를 대체한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아민 기의 수는 염화제2철, 염화제1철, 또는 이들의 조합의 농도에 기초하여 조정 가능하다. 일부 실시형태에서, 나노입자 조성물은 약 5 내지 약 1000개의 아민 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, 나노입자 조성물은 약 5 내지 25, 25 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 200 내지 250, 250 내지 300, 300 내지 350, 350 내지 400, 450 내지 500, 500 내지 550, 550 내지 600, 600 내지 650, 650 내지 700, 700 내지 750, 750 내지 800, 800 내지 850, 850 내지 900, 900 내지 950, 또는 950 내지 1000개의 아민 기를 포함한다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 자성 물질(예를 들어, 염화제2철 및/또는 염화제1철)의 코어를 함유할 수 있다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 0.60g 내지 약 0.70g의 염화제2철 및 약 0.3g 내지 약 0.5g의 염화제1철을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약 0.60g 내지 약 0.70g의 염화제2철 및 약 0.3g 내지 약 0.5g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 5 내지 150개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 0.65g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 60 내지 90개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 0.65g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 5 내지 150개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 0.65g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 1 내지 150개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 0.65g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 적어도 1 내지 10개의 아민 기, 10 내지 20개의 아민 기, 약 20 내지 30개의 아민 기, 약 30 내지 40개의 아민 기, 약 40 내지 50개 아민 기, 약 50 내지 60개 아민 기, 약 60 내지 70개 아민 기, 약 70 내지 80개 아민 기, 약 80 내지 90개 아민 기, 약 90 내지 100개 아민 기, 약 100 내지 110개 아민 기, 약 110 내지 120개 아민 기, 약 120 내지 130개 아민 기, 약 130 내지 140개 아민 기, 또는 약 140 내지 150개 아민 기로 작용기화 된다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 1g 내지 약 1.4g의 염화제2철을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약 1g 내지 약 1.4g의 염화제2철을 포함하는 자성 나노입자는 약 246 내지 500개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 1.2g의 염화제2철을 포함하는 자성 나노입자는 약 246 내지 500개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 246 내지 500개의 아민 기로 작용기화 된 자성 나노입자는 염화제2철을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 약 1.2g의 염화제2철을 포함하는 자성 나노입자는 약 200 내지 600개의 아민 기로 작용기화 된다. 일부 실시형태에서, 약 1.2g의 염화제2철을 포함하는 자성 나노입자는 적어도 약 200 내지 250개의 아민 기, 250 내지 300개의 아민 기, 약 300 내지 350개의 아민 기, 약 350 내지 400개의 아민 기, 약 400 내지 450개의 아민 기, 약 450 내지 500개의 아민 기, 약 500 내지 550개의 아민 기, 약 550 내지 600개의 아민 기, 또는 그 이상으로 작용기화 된다.
따라서, 일부 실시형태에서, 덱스트란 코팅에 접합된 아민 기의 수는 자성 나노입자를 제조하는 데 사용되는 염화제2철 및 염화제1철의 농도를 조절함으로써 미세하게 조정될 수 있다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 염화제2철, 염화제1철, 또는 이들의 조합의 농도에 기초하여 조정 가능한 자성 강도를 갖는 자성 나노입자를 포함한다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 MNP당 전체 철 중 약 0.1% 내지 약 99.9%의 제2철 이온 및 약 99.9% 내지 약 0.1%의 제1철 이온을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약 60% 내지 약 80%의 염화제2철 및 약 20% 내지 약 40%의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 80%보다 높은 염화제1철 양을 갖는 나노입자 조성물보다 더 강한 자성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 약 70%의 제2철 이온과 약 30%의 제1철 이온을 포함하는 자성 나노입자는 약 30% 이상의 제1철 이온량을 갖는 자성 나노입자보다 더 강한 자성을 갖는다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 6 내지 약 40 범위의 비선형성 지수(NLI)를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 6 내지 약 70 범위의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8.5 내지 약 14.8 범위의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8 내지 약 14 범위의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 6의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 14의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 67의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 6 내지 7, 7 내지 8, 8 내지 9, 9 내지 10, 10 내지 11, 11 내지 12, 12 내지 13, 13 내지 14, 14 내지 15, 15 내지 16, 16 내지 17, 17 내지 18, 18 내지 19, 19 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 60, 또는 60 내지 70 범위의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 약 0.54g의 염화제2철 및 약 0.2g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 8.5 내지 약 14.8 범위의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 약 0.54g의 염화제2철 및 약 0.2g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 12의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자의 자성 강도는 WO 2021/113829에 기재된 바와 같이 자성 입자 분광법에 의해 비선형성 지수(NLI)를 측정함으로써 정량화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 MNP당 전체 철 중 약 80% 내지 약 100%의 제2철 이온 및 약 20% 내지 약 0%의 제1철 이온을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약 0% 내지 약 50%의 염화제2철 및 약 100% 내지 약 50%의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 0.4g 미만의 염화제1철 함량을 갖는 자성 나노입자보다 약한 자기 특성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 약 0.54g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 0.2g 미만의 염화제1철 함량을 갖는 자성 나노입자보다 약한 자기 특성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 약 0.54g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 50 내지 약 120 범위의 NLI를 갖는다. 일부 실시형태에서, 약 0.54g의 염화제2철 및 약 0.4g의 염화제1철을 포함하는 자성 나노입자는 약 67의 NLI를 갖는다.
따라서, 일부 실시형태에서, 자성 나노입자를 제조하는데 사용되는 염화제2철 및 염화제1철의 농도를 조절함으로써 자성 나노입자의 자성(예를 들어, 자기 강도)을 미세 조정할 수 있다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8 mM 내지 약 217 mM 범위의 철 농도를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 8mM 내지 약 15mM, 약 15mM 내지 약 25mM, 약 25mM 내지 약 50mM, 50mM 내지 약 60mM, 약 60mM 내지 약 70mM, 약 70mM 내지 약 80mM, 약 80mM 내지 약 90mM, 약 90mM 내지 약 100mM, 약 100mM 내지 약 110mM, 약 110mM 내지 약 120mM, 약 120mM 내지 약 130mM, 약 130mM 내지 약 140mM, 약 140mM 내지 약 150mM, 약 150mM 내지 약 160mM, 약 160mM 내지 약 170mM, 약 170mM 내지 약 180mM, 약 180mM 내지 약 190mM, 약 190mM mM 내지 약 200mM, 약 200mM 내지 약 210mM, 및 약 210mM 내지 약 220mM 범위의 철 농도를 갖는다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 1 mg/mL 내지 약 25 mg/mL 범위의 철 농도를 갖는다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 약 1 mg/mL 내지 약 5 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 15 mg/mL, 약 15mg/mL 내지 약 20mg/mL, 또는 약 20mg/mL 내지 약 25mg/mL 범위의 철 농도를 갖는다.
일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 본 명세서에 기재된 임의의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 본 명세서에 사용된 RNA 올리고뉴클레오티드) 중 적어도 하나(예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 4개)를 함유하는 조성물을 전달하기 위해 사용된다. “적어도 하나”는 동일하거나 상이한 올리고뉴클레오티드(들)의 하나 이상의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드(들)가 함께 사용될 수 있음을 의미한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 1개의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 전달한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 2개의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 전달한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 3개의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 전달한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 4개의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 전달한다. 일부 실시형태에서, 자성 나노입자는 5개의 5'pp 또는 5'ppp ss RNA 올리고뉴클레오티드를 전달한다.
나노입자의 중합체 코팅
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 나노입자는 코어 자성 물질 위에(예를 들어, 자성 물질의 표면 위에) 중합체 코팅을 함유한다. 중합체 물질은 하나 이상의 생물학적 제제(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 핵산, 형광단 또는 표적화 펩티드 등)를 부착하거나 커플링하는 데 적합할 수 있다. 하나 이상의 생물학적 제제(예를 들어, 핵산, 형광단 또는 표적화 펩티드)는 화학적 커플링(공유 결합)에 의해 중합체 코팅에 고정될 수 있다.
일부 실시형태에서, 나노입자는 자성 물질의 코어를 물에서 상대적으로 안정한 중합체로 코팅하는 것을 포함하는 방법에 의해 형성된다. 일부 실시형태에서, 나노입자는 자성 물질을 중합체로 코팅하거나 환원성 기를 상부에 갖는 열가소성 중합체 수지에 자성 물질을 흡수시키는 것을 포함하는 방법에 의해 형성된다. 코팅은 또한 미국 특허 5,834,121, 5,395,688, 5,356,713, 5,318,797, 5,283,079, 5,232,789, 5,091,206, 4,965,007, 4,774,265, 4,770,183, 4,654,26 7, 4,554,088, 4,490,436, 4,336,173 및 4,421,660; 및 WO 10/111066(각 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함됨)에 기재된 방법을 사용하여 자성 재료에 도포될 수 있다.
산화철 나노입자의 합성 방법에는 예를 들어 물리적 방법과 화학적 방법이 포함된다. 예를 들어, 산화철은 수용액에서 Fe2+ 및 Fe3+ 염을 공침시켜 제조될 수 있다. 생성된 코어는 마그네타이트(Fe3O4), 마그헤마이트(γ-Fe2O3) 또는 이 둘의 혼합물로 구성된다. 음이온 염 함량(염화물, 질산염, 황산염 등), Fe2+ 및 Fe3+ 비율, pH 및 수용액의 이온 강도는 모두 크기를 제어하는 역할을 한다. 질소나 아르곤과 같은 불활성 가스 하의 무산소 환경에서 반응을 진행하여 합성된 나노입자의 산화를 방지하고 자성을 보호하는 것이 중요하다. 코팅 물질은 공침 과정에서 산화철 나노입자가 미세입자로 뭉치는 것을 방지하기 위해 첨가될 수 있다. 숙련된 실무자는 산화철 나노입자를 안정화하기 위해 임의의 수의 공지된 표면 코팅 물질이 사용될 수 있으며, 그 중에는 합성 및 천연 중합체, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 지방산, 폴리펩티드, 키토신 및/또는 젤라틴이 있음을 이해할 것이다.
예를 들어, 미국 특허 4,421,660은 무기 물질의 중합체 코팅 입자가, (1) 무기 고체를 산, 산과 염기의 조합, 알코올 또는 중합체 용액으로 처리하는 단계; (2) 처리된 무기 고체의 수성 분산액에 부가 중합성 단량체를 분산시키는 단계 및 (3) 생성된 분산액을 유화 중합 조건에 적용시키는 단계(컬럼 1, 21-27행)에 의해 통상적으로 제조됨을 개시한다. 또한, 미국 특허 4,421,660은 무기 나노입자를 중합체로 코팅하는 방법이 개시되어 있으며, 이 방법은 (1) 무기 고체의 개별 입자들의 수성 콜로이드 분산액에 소수성 유화 중합성 단량체를 유화시키는 단계, (2) 생성된 에멀전에 에멀전 중합 조건을 적용하여, 소수성 단량체의 수불용성 중합체 매트릭스에 분산된 무기 고체 입자의 안정한 유동성 수성 콜로이드 분산액을 형성하는 단계(컬럼 1, 42-50행)를 포함한다.
대안적으로, 크기의 시작 요건을 충족하는 중합체 코팅된 자성 물질은 시중에서 구입가능하다. 예를 들어, 시중에서 구입가능한 초소형 초상자성 산화철 나노입자로는 NC100150 주사제(Nycomed Amersham, Amersham Health), 및 페루목시톨(Ferumoxytol, AMAG Pharmaceuticals, Inc.)이 있다.
자성 물질의 코어를 코팅하는 데 사용될 수 있는 적합한 중합체에는 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드, 폴리에테르우레탄, 폴리설폰, 불소화 또는 염소화 중합체, 예를 들어, 폴리염화비닐, 폴리에틸렌, 및 폴리프로필렌, 폴리카보네이트 및 폴리에스테르가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 자성 물질의 코어를 코팅하는 데 사용될 수 있는 중합체의 추가 예에는 폴리올레핀, 예를 들어, 폴리부타디엔, 폴리디클로로부타디엔, 폴리이소프렌, 폴리클로로프렌, 폴리비닐리덴 할라이드, 폴리비닐리덴 카르보네이트 및 폴리불화 에틸렌이 포함된다. 스티렌/부타디엔, 알파-메틸 스티렌/디메틸 실록산 또는 기타 폴리실록산을 포함한 다양한 공중합체를 사용하여 자성 물질의 코어를 코팅할 수도 있다(예를 들어, 폴리디메틸 실록산, 폴리페닐메틸 실록산 및 폴리트리플루오로프로필메틸 실록산). 자성 물질의 코어를 코팅하는 데 사용할 수 있는 추가 중합체에는 폴리아크릴로니트릴 또는 아크릴로니트릴 함유 중합체, 예를 들어, 폴리 알파-아크릴로니트릴 공중합체, 알키드 또는 테르페노이드 수지 및 폴리알킬렌 폴리설포네이트가 포함된다. 일부 실시형태에서, 중합체 코팅은 덱스트란이다.
실시예
지금까지 본 발명을 일반적으로 설명하였으며, 오직 본 발명의 특정 실시형태를 설명하기 위한 목적으로만 포함되고 본 발명을 제한하고자 하는 것이 아닌 다음 실시예를 참조하면 더 쉽게 이해될 것이다.
실시예 1. RNA 올리고뉴클레오티드의 설계, 합성 및 테스트.
본 실시예에서 miRNA 억제제는 그 표적 miRNA에 완전히 상보적으로 설계되었으며, 강력한 작용제 반응을 위해 5' 말단의 바이포스페이트(pp) 트리포스페이트(ppp)에서, 그리고 전달을 위해 자성 나노입자(MN)에 접합시키기 위해 3' 말단의 티오-MC6-D에서 변형을 가진다. 5'pp 또는 5'ppp 변형은 대조 올리고의 경우 생략된다. 평활 말단 이중 가닥 구조는 5'pp 또는 5'ppp-항-miRNA-3'-티오-MC6-D를 MN에도 접합될 수 있는 상보적 miRNA와 어닐링하여 생성된다. 모든 맞춤 RNA 올리고뉴클레오티드는 알려진 방법을 사용하여 합성된다.
나노접합체의 합성 및 특성 규명
합성 절차는 간행물(Medarova Z. 외, 2016. Controlling RNA Expression in Cancer Using Iron Oxide Nanoparticles Detectable by MRI and In Vivo Optical Imaging. Methods Mol Biol. 2016;1372:163-179)로부터 채택되었으며 아래에 간략하게 요약한다. 올리고뉴클레오티드 상의 다이설파이드는 3% 트리스(2-카르복시에틸) 포스핀 하이드로클로라이드(TCEP, Thermo Scientific Co., Rockford, IL)에 의해 활성화된 후, 나노입자에 접합되기 전에 암모늄 아세테이트/에탄올 침전 처리로 정제된다. 아민화된 자성 나노입자가 합성된다. 20+ nm 크기의 나노입자는 올리고뉴클레오티드에 대한 접합에 사용된다. 자성 나노입자는 이종 이작용기성 링커 N-숙신이미딜 3-[2-피리딜디티오]-프로피오네이트(SPDP; Thermo Scientific Co., Rockford, IL)에 접합되고 올리고뉴클레오티드들을 순차적으로 활성화시킨다. 간단히 말하면, SPDP는 무수 DMSO에 용해되고 자성 나노입자와 함께 인큐베이션된다. 올리고의 3'-티오MC6은 뉴클레아제가 없는 PBS에서 3% TCEP 처리를 통해 활성화되어 티올을 방출한다. 올리고뉴클레오티드는 암모늄 아세테이트/에탄올 침전 방법을 사용하여 정제된다. TCEP 활성화 및 정제 후, 올리고뉴클레오티드를 물에 용해시키고 SPDP-변형된 자성 나노입자와 밤새 인큐베이션한다. 자성 나노입자당 올리고뉴클레오티드의 수는 전기영동 분석 방법을 사용하여 결정된다.
실시예 2. 단백질 발현 및 정제.
전장 인간 RIG-I는 대장균에서 클로닝되고 보고된 바와 같이 His-SUMO 태그가 있는 재조합 형태로 발현된다(Kwok J. 외, 2014. Expression, purification, crystallization and preliminary X-ray analysis of full-length human RIG-I. Acta Crystallogr F Struct Biol Commun. 70(Pt 2):248-251). 단백질 발현 및 정제는 아래에 요약된 바와 같이 공개된 절차로부터 조정되고 수정된다(Rawling DC. 외, 2020. Small-Molecule Antagonists of the RIG-I Innate Immune Receptor. ACS Chemical Biology.15(2):311-317.). RIG-I 발현 플라스미드는 150ng/25uL 시판 세포 스톡을 사용하여 Rosetta II(DE3) 대장균 세포(Novagen)에 형질전환되고 50mM 포타슘 포스페이트(pH 7.4) 및 1% 글리세롤이 보충된 LB 배지에서 성장된다. 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(IPTG)를 최종 농도 0.5mM까지 첨가하여 발현을 유도한다. 세포를 16°C에서 24시간 동안 성장시킨 후 원심분리로 수확하고 용해 완충액(20mM 포스페이트 pH 7.4, 500mM NaCl, 10% 글리세롤, 5mM β-메르캅토에탄올(βME))에 재현탁시켜 최종 부피가 50 ml가 되게 하고, -80°C에서 냉동시켰다. 용해를 위해 냉동 펠릿들을 실온에서 해동한 후 4L 펠릿당 추가 200ml 용해 완충액에 재현탁시킨다. 세포는 15,000psi 또는 선택한 방법에서 미세유동화기를 통과시켜 용해되고, 용해물은 100,000xg에서 30분 동안 초원심분리에 의해 정제된다. 가용성 용해물을 2.5ml Ni-NTA 비드(Qiagen)에서 인큐베이션하고 추가 40mM 이미다졸이 포함된 용해 완충액으로 세척한 다음, Ni 용출 완충액(25mM HEPES pH 8.0, 150mM NaCl, 220mM 이미다졸, 10% 글리세롤, 5mM βME)에서 용출한다. 용출된 단백질은 HiTrap 헤파린 HP 컬럼(GE Biosciences)에 결합되고, 150mM NaCl을 함유하는 완충액으로 세척되고 0.65M NaCl에서 단계적으로 용출되었다. 그런 다음 SUMO 태그를 4°C에서 2시간 동안 SUMO 프로테아제와 함께 인큐베이션하여 제거한다. 마지막으로, 겔 여과 완충액(25mM MOPS pH 7.4, 300mM NaCl, 5% 글리세롤, 5mM βME) 중의 HiPrep 16/60 Superdex 200 컬럼(GE Biosciences)을 통과시켜 단량체 단백질을 수집한다. 피크 분획들을 분자량 컷오프가 50kD인 원심 농축기(Millipore)를 사용하여 10-20μM로 농축시킨다.
실시예 3. 5'pp- 또는 5'ppp-ds- miRNA 모방체에 의한 RIG-I 활성화에 대한 시험관 내 연구.
ATPase 활성에 대한 ATP/NADH 커플링 분석은 가수분해된 ATP의 재생이 NADH의 산화와 커플링되는 반응을 기반으로 한다. ATP 가수분해의 각 주기 후, 포스포에놀피루베이트(PEP)와 피루베이트 키나제(PK)로 구성된 재생 시스템은 ADP가 다시 ATP로 전환될 때 PEP 분자 1개를 피루베이트로 전환시킨다. 이후 피루브산은 젖산탈수소효소(LDH)에 의해 젖산으로 전환되어 NADH 분자 1개가 산화된다. 본 분석은 340 nm에서 NADH 흡광도 감소 속도를 측정하며, 이는 정상 상태 ATP 가수분해 속도에 비례한다. ATP의 지속적인 재생을 통해 전체 분석 과정에서 ATP 가수분해 속도를 모니터링할 수 있다. 96웰 마이크로플레이트 형식 판독기를 사용하면 최대 96개 샘플을 동시에 분석할 수 있다. RIG-I은 ATP 의존성 RNA 헬리카제이다. 5'pp 또는 5'ppp-ds-miRNA 모방체에 의한 결합 및 활성화는 이 단백질에 ATPase 활성을 부여한다. 효소 분석은 RIG-I 수용체에 대한 작용제 또는 길항제를 테스트 및/또는 스크리닝하는 데 편리하게 사용될 수 있다.
NADH 결합 ATPase 분석의 예시 절차는 아래에 설명되어 있다(Rawling DC. 외, 2020. Small-Molecule Antagonists of the RIG-I Innate Immune Receptor. ACS Chemical Biology.15(2):311-317). NADH-결합 분석의 경우, RIG-I 단백질이 ATPase 분석 완충액(25mM MOPS pH 7.4, 150mM KCl, 2mM DTT)으로 희석되고, 초기 화합물의 경우 최종 농도가 10nM이 되고 그 다음에는 더 강력한 억제제를 시각화하기 위해 20nM이 된다. 이 경우, RIG-I는 최종 농도 250nM로 첨가되는 원하는 RNA 올리고 또는 대조군에 의해 활성화된다. 1mM NADH, 100U/ml 젖산 탈수소효소, 500U/ml 피루베이트 키나제, 2.5mM 포스포에놀 피루브산으로 구성된 커플링된 분석 혼합물을 샘플에 첨가한다. 샘플들을 RT에서 적어도 1시간 동안 인큐베이션한다. 반응들은 1:1 ATP/MgCl2 혼합물을 최종 농도 5mM까지 추가함으로써 시작된다.
RNA 작용제-유도된 RIG-I 활성화는 용이하게 이용가능한 세포주들을 기반으로 한 세포 기반 리포터 유전자 분석을 사용하여 I형 인터페론을 측정하여 평가된다. IFN 노출에 반응하는 리포터 유전자 분석을 위해 개발된 시판 세포주가 점점 더 많이 이용되고 있다. 이들 세포는 멀티웰 플레이트 분광광도계 또는 루미노미터를 사용하여 쉽게 정량화될 수 있는 가용성 유전자 생성물을 생성한다.
InvivoGen HEK-Lucia™ RIG-I 세포는 분비된 Lucia 루시퍼라제 리포터 유전자를 안정적으로 발현하는 HEK293 유래 세포인 HEK-Lucia™ Null 세포에서 생성되었다. 이 리포터 유전자는 다량체 IFN-자극 반응 요소(ISRE)에 의해 강화된 IFN-유도성 ISG54 프로모터의 제어를 받는다. HEK-Lucia™ RIG-I 세포는 높은 수준의 인간 RIG-I를 안정적으로 발현하고 3p-hpRNA 및 5'pp 또는 5'ppp-dsRNA와 같이 언캡핑 5'-트리포스페이트 말단이 있는 세포질 이중 가닥 RNA에 강력하게 반응한다. HEK-Lucia™ RIG-I 및 HEK-Lucia™ Null 세포는 IRF-유도된 Lucia 루시퍼라제 활성을 모니터링하여 RIG-I의 역할을 연구하는 데 사용될 수 있다. 세포 배양 상층액 내 IRF-유도된 Lucia의 수준은 Lucia 루시퍼라제 검출 시약(이 또한 InvivoGen 제품)인 QUANTI-Luc™을 사용하여 쉽게 모니터링할 수 있다. 세포질로 전달되어야 하는 대조군 또는 네이키드 5'pp 또는 5'ppp-dsRNA를 사용하여 RIG-I를 자극하기 위해 LyoVec™(InvivoGen)과 같은 형질감염제를 사용할 수 있다.
실시예 4. 동물 모델
실생활 이미지화 기술로 쉽게 모니터링될 수 있는 조직 특이적 종양 이식을 특징으로 하는 동소이식 모델은 임상으로 더 우수하게 전환하기 위해 질병 관련 종양 미세환경(TME)을 생성한다. 동소이식 모델은 동물 모델들의 해당 조직으로의 종양 세포주 씨딩에 관여한다. 이 전략을 통해 우리는 관련 환경에서 종양 발달을 평가하고 인간의 질병 과정을 모방하는 전임상 종양 모델의 효능을 평가할 수 있다. 동소이식 모델을 사용하면, 임상 징후, 생존 연구 설계, 생체 내 및 생체 외 기능을 모두 갖춘 이미징 플랫폼을 비롯한 다양한 방법을 통해 질병 진행을 모니터링할 수 있다. 연구 설계의 예는 아래에 설명되어 있다.
사용될 수 있는 예시적인 전이성 유방암 세포주는 MDA-MB-231-GFP, 4T1(American Type Culture Collection(ATCC), Manassas, VA, USA) 및 MDA-MB-231-luc-D3H2LN(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA)을 포함한다. 이러한 세포주는 공급업체가 권장하는 바에 따라 사용된다. 6주령 암컷 누드 마우스(nu/nu 또는 NIH III 누드)에게 인간 유방 선암종 MDA-MB-231-luc-D3H2LN 세포주(Caliper Life Sciences)를 동소 이식했다. 이 모델에서, 동소 이식된 종양들은 종양 접종 후 4주까지 국소 질환에서 림프절 전이로 진행된다. 종양 세포는 루시퍼라제를 발현하며 종양 부담의 상관 분석을 위해 비침습적 생물발광 이미지화로 검출할 수 있다. 모든 동물 실험은 연구기관 지침에 따라 수행되며 연구 동물 취급에 대한 소위원회(SRAC)의 승인을 받는다.
전이 예방: 6주령 nu/nu 마우스의 오른쪽 상단 유방 지방 패드에 2 x 106개 MDA-MB-231-luc-D3H2LN 세포(Caliper)를 주사했다. 종양 이식 후 14일차에 동물들을 실험에 사용했다.
전이의 정지: 6주령 NIH III 누드 마우스의 왼쪽 아래 유방 지방 패드에 2 x 106개의 MDA-MB-231-luc-D3H2LN 세포(Caliper)를 주사했다. 종양 이식 후 28일차에 동물들을 실험에 사용했다. MN-5'pp- 또는 MN-5'ppp-항-miR10b 및 MN-5'pp- 또는 MN-5'ppp-scr-miR을 사용한 치료는 10mg Fe/kg의 용량으로 4주에 걸쳐 주 1회 꼬리 정맥을 통한 전신 투여를 포함한다.
실시예 5. 템플릿 특이적 RIG-I 작용제, ss-pppmiRNA-21의 설계
템플릿 특이적 RIG-I 작용제인 ss-ppp-miRNA-21은 흑색종 세포에서 RIG-I을 효과적으로 작용시키고 아폽토시스를 유도한다
RIG-I 활성화를 유도하는 ss-ppp-miRNA-21의 능력을 인간 RIG-I 루시퍼라제 리포터 세포주 HEK-Lucia™ RIG-I에서 테스트했다. 시판 세포주는 높은 수준의 인간 RIG-I 및 분비된 Lucia 루시퍼라제 리포터 유전자를 안정적으로 발현한다. 이 리포터 유전자는 다량체 IFN-자극 반응 요소(ISRE)에 의해 강화된 IFN-유도성 ISG54 프로모터의 제어를 받는다. HEK-Lucia™ RIG-I 및 HEK-Lucia™ Null 대조군 세포는 IRF-유도된 Lucia 루시퍼라제 활성을 모니터링하여 RIG-I의 역할을 연구하는 데 사용될 수 있다. 웨스턴 블롯을 이용하여 세포 내 RIG-I의 높은 발현을 확인하였다(도 2A). HEK-Lucia™ RIG-I 및 HEK-Lucia™ Null 대조 세포들의 차등적인 민감도는 5' 트리포스페이트 이중 가닥 RNA 19량체(ds-ppp- RNA)로 이루어진 시판 전통 RIG-I 작용제를 이용하여 검증되었다. 널 세포와 비교하여, RIG-I 과발현 세포에서 루시퍼라제 활성의 매우 유의한 증가가 관찰되었다(도 2B).
RIG-I를 활성화하는 템플릿 특이적 RIG-I 작용제인 ss-ppp-miRNA-21의 능력을 평가했다. HEK-Lucia™ RIG-I 및 HEK-Lucia™ Null 대조 세포는 ss-ppp-miRNA-21, 뿐만 아니라 우리의 RIG-I 작용제와 동일한 단일 가닥 올리고뉴클레오티드로 처리되었으며, 예외적으로 동일한 단일 가닥 올리고뉴클레오티드는 5'-ppp를 포함하지 않는다. 테스트된 ss-ppp-miRNA-21의 세 가지 용량 수준 모두에서 유의한 RIG-I 활성화가 관찰되었다(도 2C). RIG-I 활성화에 있어서 RNA 이중체를 형성하기 위한 엄격한 요건을 고려할 때, 이러한 결과는 특히 단일 가닥 RNA 올리고뉴클레오티드의 miR-21 보체가 외부에서 공급되지 않았기 때문에 RIG-I 작용의 템플릿-지시된 메커니즘을 뒷받침한다. 흥미롭게도, 5'-ppp가 없는 경우에도 RIG-I 활성화가 적당하게 존재하였다(도 2C).
ss-ppp-miRNA-21이 HEK-루시아 리포터 세포를 과발현하는 RIG-I에서 RIG-I를 유도할 수 있음을 확인한 후, 출원인은 템플릿 특이적 RIG-I 작용제가 B16-F10 흑색종 세포주에서 아폽토시스 촉진 신호전달(pro-apoptotic signaling)의 활성화를 중개할 수 있는지 결정하기 위한 실험을 수행했다. B16-F10 흑색종 세포는 miR-21을 발현하며 세포 사멸을 종점으로 하는 내인성 RIG-I 신호 전달을 연구하는 데 사용되었다(Bek 외, 2019). 카스파제-3/7 활성화는 ss-ppp-miRNA-21 또는 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21로 처리된 B16-F10 흑색종 세포에서 측정되었다. 용량 의존적 카스파제 3/7 활성화가 5'-ppp의 존재 하에서 더욱 두드러지는 것으로 관찰되었다(도 2D). ss-ppp-miRNA-21 RIG-I 작용제를 사용할 때 종양 세포 생존력의 용량 의존적 감소도 관찰되었다(도 2E). 종양 세포 생존력의 이러한 감소는 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21을 사용하여 관찰된 것보다 유의하게 더 컸다.
ss-ppp-miRNA-21에 의한 RIG-I 작용성(RIG-I Agonism)은 템플릿 의존성을 보여준다.
ss-ppp-miRNA-21을 사용할 때 관찰된 RIG-I 활성화의 템플릿 의존성을 추가로 조사하기 위해 HEK-Lucia™ RIG-I 세포를 증가하는 농도의 합성 성숙 miRNA-21 모방체로 일시적으로 형질감염시켰다. ss-ppp-miRNA-21 작용제에 의한 RIG-I 신호전달의 매우 중요한 유도가 30 및 300 ng/ml의 합성 성숙 miRNA-21 모방체로 형질감염된 세포에서 관찰되었다(도 3A). 놀랍게도, ss-ppp-miRNA-21 작용제에 의한 RIG-I 신호전달의 유도는 불과 10,000개 세포의 배양물에서도 관찰되었다. ss-ppp-miRNA-21에 의한 활성화 수준은 시판되는 ds-ppp-RNA 양성 대조군 올리고뉴클레오티드에서 관찰된 수준과 유사했다(도 3A). 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21은 검출 가능한 RIG-I 활성화를 유발하지 못했다(도 3A). 또한, miRNA-21 모방체 농도의 함수로서 RIG-I 활성화의 용량 의존성을 분석한 결과 ss-ppp-miRNA-21을 사용할 때 miRNA-21 모방체의 EC50이 83.4ng/ml로 결정되었다. 대조적으로, 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21을 사용할 때 계산된 EC50은 357.9ng/ml였다(도 3B).
IFN-I 반응을 유도하는 템플릿-특이적 ss-ppp-miRNA-21 작용제의 능력을 B16-F10 쥐 흑색종 세포에서 평가했다. RIG-I 작용제 농도를 증가시키는 치료는 IFN-β 분비의 용량 의존적 증가를 야기했다. 성숙한 miR-21 모방체로 형질감염된 세포에서 효과가 증폭되었으며, 이는 작용제에 의한 IFN-I 자극의 템플릿-특이적 강화를 시사한다. 대조적으로, 시판 ds-ppp-RNA 작용제는 IFN-β 분비를 자극하지 못했다(도 3C).
카스파제 3/7 활성화를 miRNA-21 모방체 농도의 함수로서 측정하여 miRNA-21 모방체로 일시적으로 형질감염된 B16-F10 세포들에서 종양-세포-고유 RIG-I 신호 전달을 통한 공지의 아폽토시스 유도 메커니즘과의 일관성을 확인했다. 놀랍게도, 카스파제 3/7 활성화의 용량 의존적 증가가 관찰되었고, 그 효과는 5'-ppp-결핍 ss-miRNA-21에 비해 ss-ppp-miRNA-21로 처리된 세포에서 유의하게 높았으며 ds-ppp-RNA 양성 대조군과 비등하였다(도 3D).
RIG-I 활성화 이외에도 ss-ppp-miRNA-21로 처리된 B16-F10 세포에서 RIG-I 상향조절의 증거가 있었는지 여부를 확인하기 위해 RIG-I의 발현 수준을 평가했다. B16-F10 세포에서는 낮은 수준의 RIG-I이 검출되었다. 그러나, miR-21로 형질감염되고 ss-ppp-miRNA-21로 처리된 세포에서는, ds-ppp-RNA 양성 대조군 올리고뉴클레오티드에서 관찰된 수준을 초과하는 두드러진 RIG-I의 상향조절이 있었다(도 3E).
RIG-I 작용에 의한 면역 활성화 메커니즘 중 하나는 NF-kB 신호전달 경로의 활성화와 관련이 있다. 우리 연구에서는 NF-kB 전사활성화를 측정하기 위해 S536에서 NF-κB 소단위 p65의 인산화를 분석했다. ss-ppp-miRNA-21로 처리된 B16-F10 세포의 용해물에서 강한 포스포-P65 반응성이 관찰되었으며, 이들 세포가 miR-21 모방체로도 형질감염되었을 때 강한 반응성이 더욱 증폭되었다. 증가된 반응성은 p65의 발현 증가와 연관되지 않았으며, 이는 반응성의 증가가 표적 인산화를 특이적으로 반영한다는 것을 나타낸다(도 3F). 이 놀라운 발견은 ss-ppp-miRNA-21에 의한 효과적인 템플릿 의존성 면역 자극 메커니즘을 더욱 뒷받침한다.
본 발명의 특정한 실시형태들이 논의되었지만, 상기 설명은 예시적인 것이며 제한적이지 않다. 본 명세서 및 아래 청구범위를 검토하면 본 발명의 많은 변형이 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 전체 범위는 균등물의 전체 범위와 함께 청구항을 참조하고, 그러한 변형과 함께 명세서를 참조하여 결정되어야 한다.

Claims (134)

  1. 암 치료 방법으로서, 대상체에게 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑(uncapped) 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 이 때, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 또는 비종양 미세환경에 비해 종양 또는 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적인, 방법.
  2. 종양 또는 종양 미세환경에서 RIG-I를 선택적으로 활성화하는 방법으로서, 대상체에게 치료 유효량의 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하고, 상기 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 종양 또는 종양 미세환경에서 발현된 miRNA에 상보적인 서열을 포함하며, 이 때 RIG-I는 miRNA를 발현하는 종양 또는 종양 미세환경에서 선택적으로 활성화되는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA와 이중체를 형성하는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 발암성 miRNA인, 방법.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 종양-관련 miRNA인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 이중체는 AGO2에 의해 절단되지 않는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 이중체는 RIG-I를 활성화하는, 방법.
  9. 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 5%, 10%, 15% 또는 20% 더 큰, 방법.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, RIG-I 활성화는 종양 특이적 면역 반응을 유도하는, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 종양 특이적 면역 반응은 I형 IFN, DAMP(위험 관련 분자 패턴) 및/또는 종양 항원의 방출을 포함하는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 종양 또는 종양 미세환경에 대한 면역학적 기억을 유도하는, 방법.
  13. 청구항 1-12 중 어느 한 항에 있어서, 암은 고형 종양인, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 고형 종양은 육종, 암종 및 림프종으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  15. 청구항 1-12 중 어느 한 항에 있어서, 암은 비-고형 종양인, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 비-고형 종양은 백혈병, 골수종 및 림프종으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 방광암, 혈액암, 뼈암, 뇌암, 유방암, 결장암, 자궁경부암, 신장암, 식도암, 간암, 폐암, 갑상선암, 피부암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 직장암, 위암, 자궁암, 교모세포종 또는 두경부암으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 2개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 3개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  20. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 4개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  21. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 5개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  22. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-플루오로(2'-F) 리보스 변형을 추가로 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 2'-F 리보스 변형은 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 5'-말단으로부터 10번째 또는 11번째 뉴클레오티드에 존재하는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형을 포함하지 않는, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-6-메틸아데노신(m6A) 변형을 포함하지 않는, 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 슈도우리딘(ψ)을 포함하지 않는, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-1-메틸슈도우리딘(mψ) 변형을 포함하지 않는, 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메틸-시티딘(5mC) 변형을 포함하지 않는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC) 변형을 포함하지 않는, 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메톡시시티딘(5moC) 변형을 포함하지 않는, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 적어도 19개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함하는, 방법.
  33. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 30개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함하는, 방법.
  34. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 27개 뉴클레오티드 길이인 서열을 포함하는, 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 완전히 상보적인, 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 결합하기 위해 내인성 mRNA와 경쟁하는, 방법.
  37. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 이중체는 0 내지 5개의 불일치 염기쌍을 포함하는, 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 6의 핵산 서열을 갖는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  39. 제38항에 있어서, 서열 번호 6의 핵산은 miR-21에 상보적인, 방법.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, 암은 유방암, 난소암, 자궁경부암, 결장암, 폐암, 간암, 뇌암, 식도암, 전립선암, 췌장암 및 갑상선암으로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  41. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 1의 핵산 서열을 갖는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  42. 제41항에 있어서, 서열 번호 1의 핵산은 miR-10b에 상보적인, 방법.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서, 암은 비소세포폐암 또는 자궁경부암인, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 암은 전이성 암인, 방법.
  45. 제41항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 시토신 및 우라실은 AGO2 절단 부위에 존재하는, 방법.
  46. 제45항에 있어서, 전이성 암은 유방, 림프절, 폐, 뼈, 뇌, 간, 난소, 복막, 근육 조직, 췌장, 전립선, 식도, 결장, 직장, 위, 비인두 또는 피부에 국재화되는, 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 사용한 치료는 단일요법인, 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 정맥내 투여, 피하, 동맥내, 근육내, 복강내 또는 국소 투여에 의해 투여되는, 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 200 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  50. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  51. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 1.0 mg/kg 내지 약 10.0 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  52. 암 치료 방법으로서, 다음을 포함하는 치료 유효량의 자성 나노입자를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고:
    염화제2철, 염화제1철 또는 이들의 조합;
    덱스트란 코팅; 및
    단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드,
    이 때 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 또는 비종양 미세환경에 비해 종양 또는 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적인, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 자성 나노입자는 약 6 내지 약 40 범위의 비선형성 지수를 갖는, 방법.
  54. 제52항 또는 제53항에 있어서, 자성 나노입자는 약 8 내지 약 14 범위의 비선형성 지수를 갖는, 방법.
  55. 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 약 0.54g의 염화제2철 및 약 0.2g의 염화제1철을 포함하는, 방법.
  56. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 적어도 2개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  57. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 적어도 3개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  58. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 적어도 4개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  59. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 적어도 5개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  60. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 최대 40개의 상이한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 방법.
  61. 제52항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  62. 제52항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 발암성 miRNA인, 방법.
  63. 제52항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 종양-관련 miRNA인, 방법.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 지지 또는 보조 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  65. 제64항에 있어서, 보조 요법은 방사선 요법, 냉동 요법 및 초음파 요법을 포함하는, 방법.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서, 추가 요법제를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  67. 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 추가 요법제는 miRNA를 포함하는, 방법.
  68. 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 제67항의 miRNA는 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드에 상보적인, 방법.
  69. 제66항에 있어서, 추가 요법제는 표적 요법, 화학요법제, 면역요법제, 면역원성 세포사멸 유도제(ICDi) 및 siRNA 요법으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  70. 제69항에 있어서, 수술을 추가로 포함하는, 방법.
  71. 제69항에 있어서, 화학요법제는 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 발루비신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포시드, 테니포시드, 타플루포시드, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 독시플루리딘, 플루오로우라실, 젬시타빈, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 블레오마이신, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 올트랜스 레티노산, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 베바시주맙으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  72. 제69항에 있어서, 표적 요법은 트라스투주맙, 길로트리프, 프로류킨, 알렉티닙, 캄패스, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 악시티닙, 벨리무맙, 벨리노스타트, 베바시주맙, 벨케이드, 카나키누맙, 세리티닙, 세툭시맙, 크리조티닙, 다브라페닙, 다라투무맙, 다사티닙, 데노수맙, 엘로투주맙, 에나시데닙, 에를로티닙, 게피티닙, 이브루티닙, 자이델리그, 이마티닙, 렌바티닙, 미도스타우린, 네시투무맙, 니라파립, 오비누투주맙, 오시머티닙, 파니투무맙, 레고라페닙, 리툭시맙, 룩솔리티닙, 소라페닙, 토실리주맙, 트라스투주맙으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  73. 제69항에 있어서, 면역치료제는 면역 체크포인트 억제제인, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙(Keytruda®), 니볼루맙(Opdivo®), 아테졸리주맙(Tecentriq®), 이필리무맙(Yervoy®), 아벨루맙(Bavencio®) 및 더발루맙(Imfinzi®)으로 구성된 군으로부터 선택된, 방법.
  75. 제64항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 보조 요법은 miRNA의 발현을 유도하는, 방법.
  76. 제66항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 추가 요법제는 miRNA의 발현을 유도하는, 방법.
  77. 제73항에 있어서, ICDi는 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 미톡산트론, 옥살리플라틴 및 파클리탁셀로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  78. 제73항에 있어서, siRNA 요법은 PD-L1, CTLA-4, TGF-β 및/또는 VEGF를 표적하는, 방법.
  79. 제64항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 지지 또는 보조 요법은 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 투여 전, 투여와 동시에 또는 투여 후에 투여되는, 방법.
  80. 단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드로서, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 조직에 비해 종양 조직에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적인, RNA 올리고뉴클레오티드.
  81. 제80항에 있어서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택되는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  82. 제80항 또는 제81항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 상기 miRNA와 이중체를 형성할 수 있는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  83. 제80항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 이중체는 AGO2에 의해 절단되지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  84. 제80항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 이중체는 RIG-I을 활성화하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  85. 제84항에 있어서, RIG-I 활성화는 상응하는 비변형된 모노포스페이트 RNA 올리고뉴클레오티드에 의한 활성화보다 적어도 5%, 10%, 15% 또는 20% 더 큰, 방법.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서, RIG-I 활성화는 종양-특이적 면역 반응을 유도하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  87. 제86항에 있어서, 종양 특이적 면역 반응은 I형 IFN, DAMP(위험 관련 분자 패턴) 및/또는 종양 항원의 방출을 포함하는, 방법.
  88. 제80항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 임의의 다른 변형을 포함하지 않는, 방법.
  89. 제80항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-플루오로(2'-F) 리보스 변형을 추가로 포함하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  90. 제80항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 2'-O-메틸(2'-OMe) 리보스 변형을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  91. 제80항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-6-메틸아데노신(m6A) 변형을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  92. 제80항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 슈도우리딘(ψ)을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  93. 제80항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 N-1-메틸슈도우리딘(mψ) 변형을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  94. 제80항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메틸-시티딘(5mC) 변형을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  95. 제80항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-히드록시메틸-시티딘(5hmC) 변형을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  96. 제80항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 5-메톡시시티딘(5moC) 변형을 포함하지 않는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  97. 제80항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 완전히 상보적인, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  98. 제80항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 miRNA에 결합하기 위해 내인성 mRNA와 경쟁하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  99. 제82항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 이중체는 0 내지 5개의 불일치 염기쌍을 포함하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  100. 제80항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 1 내지 13 중 어느 하나의 핵산 서열을 포함하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  101. 제80항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 나노입자에 추가로 연결되는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  102. 제101항에 있어서, 나노입자는 자성 나노입자인, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  103. 제102항에 있어서, 자성 나노입자는 중합체 코팅으로 코팅된, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  104. 제103항에 있어서, 중합체 코팅은 덱스트란인, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  105. 제102항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 산화철; 및 하나 이상의 아민 기로 작용기화 된 덱스트란 코팅을 포함하며, 이 때 하나 이상의 아민 기의 수는 약 5 내지 약 1000인, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  106. 제102항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자의 철 함량은 약 50중량(wt)% 내지 약 100wt%의 철(III) 및 약 0wt% 내지 약 50wt%의 철(II)를 포함하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  107. 제102항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 약 5 내지 약 150개 아미노기를 포함하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  108. 제102항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 하나 이상의 이러한 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  109. 다음을 포함하는 자성 나노입자:
    염화제2철, 염화제1철 또는 이들의 조합;
    덱스트란 코팅; 및
    단일 가닥 5' 언캡핑 트리포스페이트 또는 바이포스페이트 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드로서, 상기 올리고뉴클레오티드는 비종양 또는 비종양 미세환경에 비해 종양 또는 종양 미세환경에서 많이 발현되는 miRNA에 상보적인, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드.
  110. 제109항에 있어서, 자성 나노입자는 약 6 내지 약 40 범위의 비선형성 지수를 갖는, 자성 나노입자.
  111. 제109항 또는 제110항에 있어서, 자성 나노입자는 약 8 내지 약 14 범위의 비선형성 지수를 갖는, 자성 나노입자.
  112. 제109항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 약 0.54 g의 염화제2철 및 약 0.2 g의 염화제1철을 포함하는, 자성 나노입자.
  113. 제109항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 miR10b, miR17, miR18a, miR18b, miR19b, miR21, miR26a, miR29a, miR92a-1, miR92a-2, miR155, miR210 및 miR221로 구성된 군으로부터 선택되는, 자성 나노입자.
  114. 제109항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 발암성 miRNA인, 자성 나노입자.
  115. 제109항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, miRNA는 종양-관련 miRNA인, 자성 나노입자.
  116. 제109항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 자성 나노입자는 2개 이상의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 자성 나노입자.
  117. 제116항에 있어서, 2개 이상의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 상이한 miRNA들에 상보적인, 자성 나노입자.
  118. 제116항에 있어서, 2개 이상의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 동일한 miRNA에 상보적인, 자성 나노입자.
  119. 제80항 내지 제108항 중 어느 한 항의 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드 또는 제109항 내지 제118항 중 어느 한 항의 자성 나노입자를 포함하는 약학 조성물.
  120. 제119항에 있어서, 전달제를 추가로 포함하는, 약학 조성물.
  121. 제120항에 있어서, 전달제는 미셀, 지질 나노입자(LNP), 구형 핵산(SNA), 세포외 소포, 합성 소포, 엑소좀, 리피도이드, 리포솜 및 리포플렉스로 구성된 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
  122. 제121항에 있어서, 리포솜은 지질 이중층으로부터 형성되는, 약학 조성물.
  123. 제122항에 있어서, 지질 이중층은 포스페이트 지질, 포스포글리세롤 지질, 포스포콜린 지질 및 포스포에탄올아민 지질로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 인지질을 포함하는, 약학 조성물.
  124. 제123항에 있어서, 인지질은 페길화된, 약학 조성물.
  125. 제121항에 있어서, 전달제는 리포솜 또는 지질 나노입자인, 약학 조성물.
  126. 제125항에 있어서, 리포솜 또는 지질 나노입자는 추가 요법제를 추가로 전달하는, 약학 조성물.
  127. 제126항에 있어서, 추가 요법제는 ICDi(예를 들어, 다우노루비신, 도세탁셀, 독소루비신, 미톡산트론, 옥살리플라틴 및 파클리탁셀)인, 약학 조성물.
  128. 제126항에 있어서, 추가 요법제는 siRNA(예를 들어, 암과 관련된 유전자를 표적으로 하는 siRNA)인, 약학 조성물.
  129. 제126항에 있어서, 추가 요법제는 화학요법제인, 약학 조성물.
  130. 제119항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가적인 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드를 포함하는, 약학 조성물.
  131. 제119항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 200 mg/kg의 용량으로 투여되는, 약학 조성물.
  132. 제119항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 0.2 mg/kg 내지 약 2.0 mg/kg의 용량으로 투여되는, 약학 조성물.
  133. 제119항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 약 1.0 mg/kg 내지 약 10.0 mg/kg의 용량으로 투여되는, 약학 조성물.
  134. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 RNA 올리고뉴클레오티드는 임의의 다른 변형을 포함하지 않는, 방법.
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