KR20230095983A

KR20230095983A - Gm-csf 길항제를 사용한 암의 치료

Info

Publication number: KR20230095983A
Application number: KR1020237015960A
Authority: KR
Inventors: 조 피렐로; 에벤 테사리; 루이스 카르바잘; 아날리사 드안드레아
Original assignee: 키닉사 파마슈티컬스, 리미티드
Priority date: 2020-10-26
Filing date: 2021-10-26
Publication date: 2023-06-29
Also published as: EP4232162A1; WO2022093855A1; US20220184179A1; AU2021372454A1; JP2023546657A

Abstract

본 발명은, 특히, 암의 치료 방법을 제공하며, 상기 치료 방법은 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하고, GM-CSF 길항제의 투여는 환자의 암의 하나 이상의 증상을 개선, 안정화 또는 감소시킨다. 또한, 본 개시는 특히, KRAS, NRAS, 및/또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 가진 암을 앓고 있는 환자에게서 암의 진행을 억제하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 GM-CSF 길항제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

Description

GM-CSF 길항제를 사용한 암의 치료

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2020년 10월 26일에 출원된 미국 가출원 제63/105,773호, 2020년 12월 2일에 출원된 미국 가출원 제63/120,319호, 및 2021년 9월 10일에 출원된 미국 가출원 제63/242,849호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.

서열 목록

본 명세서는 서열 목록(2021년 10월 26일에 "KPL-035BWO_ST25.txt"이라는 명칭의 .txt 파일로 전산으로 제출됨)을 참조한다. txt 파일은 2021년 10월 26일에 생성되었고 크기는 21 KB이다. 서열 목록의 전체 내용은 본원에 참고로 원용된다.

종양 세포는 숙주 T 세포 레퍼토리에 의해 잠재적으로 인식되는 고유 항원을 발현하고 종양 면역요법을 위한 강력한 표적으로서 기능한다. 그러나, 종양 세포는 숙주 면역을 회피하고 천연 항원 제시 효과기 세포 집단을 억제하는 억제 사이토카인을 발현한다. 이러한 면역억제 환경에서의 하나의 요소는 악성 종양 환자의 종양 베드, 림프절의 배액, 및 순환기에서 발견되는 조절 T 세포의 존재 증가이다. 추가 조사의 한 가지 영역은 종양 연관 무산소성을 역전시키고 악성 세포를 인식하고 제거하도록 효과기 세포를 자극하는 치료제의 개발이다.

본 발명은 특히, GM-CSF 길항제를 사용하여 암을 치료하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 다른 유전자 중에서, NRAS, KRAS, JAK2 및 PTPN11 유전자는, 이들 유전자의 신호 전달 경로에서 중요한 역할을 하며, 이러한 유전자의 돌연변이는 다양한 암과 관련이 있었다. 예를 들어, KRAS는 암에서 가장 어려운 표적 중 하나이다. 하나의 KRAS(Kirsten 랫트 육종 바이러스 종양유전자 상동체) 돌연변이는 모든 인간 종양의 최대 25%에 존재하며, 이는 가장 자주 활성화된 종양유전자 중 하나이다. 이 발견이 60년이 넘었음에도 불구하고, 연구자들은 여전히 돌연변이 형태를 억제하기 위해 고군분투하고 있다. 본 발명은 특히, GM-CSF 길항제를 사용하여 KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암을 치료하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 본 발명은, 부분적으로, GM-CSF가 면역억제 활성을 갖는 MDSC 상에서 PD-L1의 발현을 유도하고, 이러한 발현이 GM-CSF를 길항함으로써 억제될 수 있다는 놀라운 발견에 기초한다. 본 발명은 또한 본원에 추가로 기술된 바와 같은 다른 암 요법과 조합하여 GM-CSF 길항제를 사용하여 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 GM-CSF 길항제를 사용하여 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML) 및 소 골수단핵구성 백혈병(JMML)을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

일부 양태에서. 본 발명은 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는 KRAS 돌연변이를 갖는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기에서 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성의 억제를 초래한다.

일부 양태에서. 본 발명은 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기에서 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성의 억제를 초래한다.

일부 양태에서, 본 발명은, GM-CSF 길항제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암을 앓고 있는 환자에서 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

일부 양태에서, 본 발명은, GM-CSF 길항제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암을 앓고 있는 환자에서 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

일부 양태에서. 본 발명은, GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 여기에서 환자는 KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암을 앓고 있으며, 면역 반응은 대조군에 비해 증가된다.

일부 양태에서. 본 발명은, GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 여기에서 면역 반응은 대조군에 비해 증가된다.

일부 구현예에서, KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암은 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML)이다.

일부 구현예에서, KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암은 소아 골수단핵구성 백혈병(JMML)이다.

일부 구현예에서, 면역 반응은 T 세포 증식의 백분율이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD8 양성(CD8+)이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD4 양성(CD4+)이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD8 및 CD4에 대해 이중 양성(CD8+/CD4+)이다.

일부 구현예에서, 대조군은 GM-CSF 길항제의 투여 전의 환자의 면역 반응 수준을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대조군은 GM-CSF 길항제 없이 암 치료를 받는 대조군 환자에서의 기준 면역 반응 수준 또는 과거 데이터에 기초한 기준 면역 반응 수준이다.

일부 구현예에서, 암 요법은 면역요법이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 면역요법의 효능을 증가시킨다.

일 양태에서, 본 발명은 특히, 치료를 필요로 하는 환자에게 대조군 대비 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암 환자에서 PD-L1을 억제하는 방법을 제공한다.

일 양태에서, 본 발명은 특히, 치료를 필요로 하는 환자에게 대조군 대비 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 환자에서 PD-L1을 억제하는 방법을 제공한다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 암 환자의 PD-L1의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, 대조군은 GM-CSF 길항제를 투여하기 전의 환자의 PD-L1 수준을 나타낸다.

일부 구현예에서, 대조군은 GM-CSF 길항제 없이 암 치료를 받는 대조군 환자에서의 기준 PD-L1 수준 또는 과거 데이터에 기초한 기준 PD-L1 수준이다.

일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 10%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 15%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 20%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 30%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 40%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 45%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 50%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 60%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 70%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 75%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 80%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 85%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 환자의 PD-L1의 수준은 대조군에 비해 적어도 90%만큼 감소된다.

일부 구현예에서, PD-L1은 MDSC 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, PD-L1은 순환하는 MDSC 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, PD-L1은 혈장 유래 MDSC 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, PD-L1은 종양 세포 상에서 발현된다. 일부 구현예에서, PD-L1은 종양 침윤 면역 세포 상에서 발현된다.

일부 구현예에서, 환자는 순환하는 골수 유래 억제 세포(MDSC)를 갖는다.

일부 구현예에서, 환자는 낮은 수준의 침윤성 T 세포를 갖는 암을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 환자는 면역 관문 억제제(ICI) 불응성 암을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 환자는 후기 암 또는 전이성 암을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 환자는 비소세포 폐암(NSCLC), 결장직장암(CRC), 췌장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 자궁내막 암종, 선암종, 맹장 선암종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 또는 난소암으로부터 선택된 암을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 환자는 비소세포 폐암(NSCLC), 결장직장암(CRC), 또는 췌장암으로부터 선택된 암을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 환자는 유방암, 결장직장암(CRC), 전립선암, 흑색종, 방광암, 췌장암, 췌관 선암종, 간세포암, 위암, 비소세포폐암(NSCLC), 소세포폐암(SCLC), 두경부 편평 세포 암종, 비호지킨 림프종, 자궁 경부암, 위장암, 비뇨 생식기 암, 두개암, 중피종, 신장 세포 암, 부인과 암, 난소 암, 자궁내막암, 폐암, 위장암, 췌장암, 식도암, 간암, 담관세포암, 뇌암, 중피종, 악성 흑색종, 메르켈 세포 암종, 다발성 골수종, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수 형성 이상 증후군 또는 급성 림프구성 백혈병으로부터 선택된 암을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 환자는 4기 유방암, 4기 결장직장암(CRC), 전립선암, 또는 흑색종으로부터 선택된 암을 앓고 있다.

제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 적어도 하나의 다른 암 요법을 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.

일부 구현예에서, 적어도 하나의 다른 암 요법은 화학요법, MDSC-표적 요법, 면역요법, 방사선 요법 및 이들의 조합이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및 다른 암 요법은 동시에 투여된다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및 다른 암 요법은 순차적으로 투여된다.

일부 구현예에서, 환자는 GM-CSF 길항제의 투여 전에 다른 암 요법으로 치료를 받았다.

일부 구현예에서, 환자는 다른 암 요법의 투여 전에 GM-CSF 길항제로 치료를 받았다.

일부 구현예에서, 다른 암 요법은 ICI이다.

일부 구현예에서, ICI는 PD-1, CTLA-4, B7, BTLA, HVEM, TIM-3, GAL-9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, 또는 A2aR의 활성을 길항한다.

일부 구현예에서, ICI는, 항-PD-1 항체(임의로, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙), 항-PD-L1 항체(임의로, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙), 항-CTLA-4 항체(임의로, 이필리무맙), 항-PD-L2 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-BTLA 항체, 항-HVEM 항체, 항-TIM-3 항체, 항-GAL-9 항체, 항-LAG3 항체, 항-VISTA 항체, 항-KIR 항체, 항-2B4 항체, 항-CD160 항체, 항-CGEN-15049 항체, 항-CHK1 항체, 항-CHK2 항체, 항-A2aR 항체, 항-B-7 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, ICI는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-PD-L1 항체이다.

일부 구현예에서, 방법은 환자에게 화학요법제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

일부 구현예에서, MDSC-표적 요법은 항-CFS-1R 항체, 항-IL-6 항체, 올-트랜스 레티노산, 엑시티닙, 엔티노스타트, 젬시타빈, 또는 펜포르민, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 면역요법은 단클론 항체, 사이토카인, 암 백신, T 세포 결합 요법, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 단클론 항체는 항-CD3 항체, 항-CD52 항체, 항-PDl 항체, 항-PD-Ll 항체, 항-CTLA4 항체, 항-CD20 항체, 항-BCMA 항체, 이중 특이적 항체, 또는 이중 특이적 T 세포 결합자(BiTE) 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 사이토카인은 IFNa, IFNp, IFNy, IFN, IL-2, IL-7, IL-15, IL-21, IL-11, IL-12, IL-18, hGM- CSF, TNFa, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 항체 또는 이의 단편이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 가용성 GM-CSF 수용체이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편은 항-GM-CSFRα 항체 또는 이의 단편이다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRα 항체 또는 이의 단편은 인간 GM-CSFRα에 특이적인 단클론 항체이다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRα 항체는 인간 또는 인간화 IgG4 항체이다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRα 항체는 마브릴리무맙이다.

일부 구현예에서, 항-GM- CSFRα 항체 및 이의 단편은 서열번호 6에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 7에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 및 서열번호 8에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3); 및 서열번호 3에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 4에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 5에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함한다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 환자의 MDSC의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 환자의 MDSC 매개 면역억제 활성의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 환자의 말초 혈액에서 Lin-CD14+HLA-DR-M-MDSC의 백분율을 감소시킨다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 환자에게서 성숙한 MDSC 세포의 백분율을 증가시킨다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 Treg 세포, 대식세포, 및/또는 호중구의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 억제 사이토카인의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, 억제 사이토카인은 IL-10 및 TGFβ로부터 선택된다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 면역 억제 인자의 수준을 감소시킨다.

일부 구현예에서, 면역 억제 인자는 아르기나아제 1, 유도성 산화질소 합성효소(iNOS), 퍼옥시질산염, 산화질소, 반응성 산소 종, 종양 연관 대식세포, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제 및/또는 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 CD4+ T 효과기 세포의 수준을 증가시킨다.

일부 구현예에서, 대조군은 환자의 치료 전 수준 또는 백분율, 또는 이력 데이터에 기초한 기준 수준 또는 백분율이다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제 및 ICI를 포함하는, KRAS, NRAS, JAK2, 및/또는 PTPN11에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암을 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제 및 ICI를 포함하는, 암을 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 가용성 GM-CSF 수용체이다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRα 항체는 마브릴리무맙이다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRα 항체 및 이의 단편은 서열번호 6에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 7에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 및 서열번호 8에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3); 및 서열번호 3에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 4에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 5에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함한다.

일부 구현예에서, ICI는 PD-1, CTLA-4, B7, BTLA, HVEM, TIM-3, GAL-9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, 및 이들의 조합의 활성을 길항한다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제를 포함하는 약학적 조성물 및 화학요법, MDSC 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법 및 이들의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 암 요법을 포함하는 약학적 조성물을 포함하는, KRAS 돌연변이 암을 치료하기 위한 키트를 제공한다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제를 포함하는 약학적 조성물 및 화학요법, MDSC 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법 및 이들의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 암 요법을 포함하는 약학적 조성물을 포함하는, 암을 치료하기 위한 키트를 제공한다.

일부 구현예에서, 면역요법은, 항-PD-1 항체(임의로, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙), 항-PD-L1 항체(임의로, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙), 항-CTLA-4 항체(임의로, 이필리무맙), 항-PD-L2 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-BTLA 항체, 항-HVEM 항체, 항-TIM-3 항체, 항-GAL-9 항체, 항-LAG3 항체, 항-VISTA 항체, 항-KIR 항체, 항-2B4 항체, 항-CD160 항체, 항-CGEN-15049 항체, 항-CHK1 항체, 항-CHK2 항체, 항-A2aR 항체, 항-B-7 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 ICI이다.

일부 양태에서, 본 발명은 특히, 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기에서 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성의 억제를 초래한다.

일부 양태에서, 본 발명은, GM-CSF 길항제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 앓고 있는 환자에서 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

일부 양태에서. 본 발명은, GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 여기에서 환자는 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 앓고 있고, 면역 반응은 대조군에 비해 증가된다.

일 양태에서, 본 발명은 특히, 치료를 필요로 하는 환자에게 대조군 대비 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 앓는 환자에서 PD-L1을 억제하는 방법을 제공한다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제 및 ICI를 포함하는, 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제를 포함하는 약학적 조성물 및 화학요법, MDSC 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법 및 이들의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 암 요법을 포함하는 약학적 조성물을 포함하는, 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 치료하기 위한 키트를 제공한다.

일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로 활성화의 정상 수준은 건강한 비암성 환자에서의 KRAS 신호 전달 경로 활성화 수준, 또는 건강한 비암성 환자로부터 수득된 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로 활성화의 정상 수준은 비-KRAS 돌연변이 암 환자에서의 KRAS 신호 전달 경로 활성화 수준, 또는 비-KRAS 돌연변이 암 환자로부터 수득된 조직 샘플의 수준이다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로 활성화의 정상 수준은 KRAS 돌연변이 암 환자의 비암 조직에서 KRAS 신호 전달 경로 활성화 수준이다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로 활성화의 정상 수준은 비암 세포에서 KRAS 신호 전달 경로 활성화 수준이다.

일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로 상류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로 하류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 발암성 돌연변이다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 여기에서 환자는 정상에 비해 KRAS 신호전달 경로의 활성화가 증가된 암을 앓고 있고, 면역 반응은 대조군에 비해 증가된다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 여기에서 환자는 정상에 비해 JAK2 신호전달 경로가 교란된 암을 앓고 있고, 면역 반응은 대조군에 비해 증가된다.

일부 양태에서, 본 발명은 GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공하며, 여기에서 환자는 정상에 비해 PTPN11 신호전달 경로가 교란된 암을 앓고 있고, 면역 반응은 대조군에 비해 증가된다.

일부 양태에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제의 치료적 유효 투여량을 투여하는 단계를 포함하는, 환자의 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 투여는 암의 하나 이상의 증상을 대조군에 비해 개선하고, 안정화시키고, 감소시키며, 암은 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML) 또는 청소년 골수단핵구성 백혈병(JMML)이다.

일부 구현예에서, 암은 KRAS, NRAS, PTPN11, 또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는다.

일부 구현예에서, CMML은 MPN-CMML로 분류된다. 일부 구현예에서, CMML은 MDS-CMML로 분류된다.

일부 구현예에서, CMML은 CMML-0으로 분류된다. 일부 구현예에서, CMML은 CMML-1으로 분류된다. 일부 구현예에서, CMML은 CMML-2으로 분류된다.

일부 구현예에서, CMML 환자에게 GM-CSF 길항제의 투여는 AML로의 전환 시간을 단축시킨다. 일부 구현예에서, CMML 환자에게 GM-CSF 길항제의 투여는 AML로의 전환 시간을 단축시킨다.

일부 구현예에서, JMML 환자에게 GM-CSF 길항제의 투여는 AML로의 전환 시간을 단축시킨다. 일부 구현예에서, JMML 환자에게 GM-CSF 길항제의 투여는 AML로의 전환을 방지시킨다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 마브릴리무맙, 나밀루맙, 오틸리맙, 렌질루맙, 김실루맙 및 TJM2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 마브릴리무맙이다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 나밀루맙이다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 오틸리맙이다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 렌질루맙이다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 김실루맙이다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 TJM2이다.

도면은 단지 예시를 위한 것일 뿐 이에 제한되지 않는다.
도 1은 췌장암 환자의 혈액 유래의 CD14+ 세포(MDSC)를 이용한 T 세포 증식 분석을 도시하는 예시적인 막대 그래프이다. T 세포 증식은 완전한 배지에서만 배양된 T 세포와 비교했을 때, 건강한 공여자 동종 T 세포 및 췌장암 환자의 혈액으로부터 분류된 CD14+ 세포의 공동 배양 후 억제된다. T 세포 증식은 항-GM-CSFRα 항체 및 췌장암 환자의 혈액으로부터 분류된 CD14+ 세포의 배양 후 구제된다.
도 2는 암 세포 상청액으로 분비된 인간 GM-CSF의 양(n=2)으로 측정 상이한 암 세포주에서의 GM-CSF 발현 수준을 나타내는 예시적인 그래프이다. 도표는 중복으로 수행된 2개의 독립적인 ELISA 판독의 평균이며, 오차 막대는 표준 편차(+/-)를 나타낸다.
도 3은 암 세포 조건화된 배지가 단핵구를 표현형 MDSC(CD14+ 세포)로 분극화할 수 있음을 나타내는 일련의 예시적인 막대 그래프이다. 종양 조건화 배지(CM)를 생성하기 위해, 4개의 상이한 세포주를 플레이팅하고 당업계에 공지된 방법에 따라 배양하였다. 이어서, CD14+ 단핵구 세포를 CM의 존재 하에 6일 동안 배양하고 유전자 및 단백질 발현에 대해 분석하였다. 낮은 수준의 HLA-DR 바이오마커는 MDSC 표현형을 나타낸다. 정상 배양 배지(대조군)에서 성장시킨 CD+14 세포와 비교했을 때, GM-CSF-발현 암 세포의 조건화된 배지로 CD14+ 단핵구를 배양했을 때 표현형 MDSC의 증가가 관찰되었다.
도 4는 다양한 배지로 배양한 MDSC 상에서의 PD-L1 발현을 도시하는 일련의 예시적인 막대 그래프이다. 데이터는 암 세포-조건화 배지(CM) 및 재조합 GM-CSF가 보충된 CM이 MDSC 상에서 PD-L1의 발현을 유도할 수 있음을 나타낸다. 또한, 항-GM-CSFRα 항체(Ab)는 MDSC 상에서 PD-L1 발현 수준을 감소시킬 수 있다.
도 5a 및 도 5b는 다양한 배지로 배양한 MDSC 상에서의 PD-L1 발현을 도시하는 일련의 예시적인 막대 그래프이다. 데이터는 암 세포-조건화 배지(CM) 및 재조합 GM-CSF가 보충된 1일차의 CM이 정상 배양 배지(배지)에서 성장한 MDSC에 비해 MDSC 상에서 PD-L1의 발현을 유도할 수 있음을 나타낸다. 또한, 항-GM-CSFRα 항체(Ab)는 CM에서 성장한 MDSC 상에서 PD-L1 수준을 감소시킬 수 있다. 도 5a는 CM 및 항-GM-CSFRα 항체(Ab)가 동시에 첨가될 때의 PD-L1 발현을 나타낸다. PD-L1 발현은 치료 3일 후에 측정하였다. 도 5b는 항-GM-CSFRα 항체가 CM으로 배양한 후 72시간 후에 첨가될 때의 PD-L1 발현을 보여준다. PD-L1 발현은 항-GM-CSFRα 항체로 치료한지 24시간 후에 측정하였다.
도 6a는 3일 동안 암 세포 조건화 배지가 있거나 없는 건강한 대조군(n=3)으로부터 CD14+ 단핵구로 배양한 CD8+ T-세포의 증식을 보여주는 일련의 예시적인 막대 그래프이다(+/- 100 μg/mL 항-GM-CSFRα 항체). 3일차에, CD3+ T 세포를 CFSE로 표지하고, CD3/CD28/IL-2로 자극하고, 단핵구와 함께 5일 동안 공동 배양하였다. CFSE 희석을 측정하여 증식을 모니터링하고, 상응하는 세포 배양 배지에서 단핵구와 공동-배양된 증식 T 세포를 정규화하여 증식을 모니터링하였다. 도 6b는 보충의 인간 재조합 GM-CSF 및/또는 항-GM-CSFRα 항체(Ab)가 있거나 없는 상태에서 GM-CSF 발현 암 세포주로부터의 조건화된 배지로 처리된 단핵구를 사용한 T 세포 증식을 나타내는 일련의 예시적인 막대 그래프이다. GM-CSF 발현 암 세포주(CM)로부터 조건화된 배지에서 3일 동안 단핵구를 배양하였다. 0.1 μM CFSE로 표지하고 IMDM 세포 배양 배지에서 10 ng/mL의 IL-2 및 10 uL의 가용성 CD3/CD28 T 세포 활성화제(Immunocult)로 자극하여 T 세포(1x10⁵ 세포)를 제조하였다. 그런 다음, 재조합 GM-CSF(10 ng/mL) 및/또는 항-GM-CSFRα 항체(100 μg/mL)를 포함하거나 포함하지 않는 CM-처리된 단핵구와 함께 혼합 림프구 반응(MLR)에서 자극된 T 세포를 공동 배양하였다(2:1 단핵구:T 세포의 비율). 건강한 단핵구와 함께 IMDM 배양 배지에서 자극된 T 세포를 대조군으로서 사용하였다. T 세포를 5일 동안 증식시키고, CD4 및 CD8에 대해 수집하고 염색하였으며, 이는 헬퍼 T 및 세포독성 T 세포에 대한 마커이다. 세포 증식을 유세포 계측법으로 측정하고, CFSE 희석으로 평가하였다. 좌측 패널은 세포 증식 %로 T 세포 증식 분석의 결과를 나타내고, 우측 패널은 유세포 계측법에 의한 최대 %(MFI)(CD4+ 또는 CD8+ 세포에서 CFSE 희석의 신호 검출)로 결과를 나타낸다. 도 6c는 3일 동안 결장직장암 세포 조건화 배지를 사용하거나 사용하지 않은 건강한 대조군(n=3)으로부터 CD14+ 단핵구로 배양한 CD8+ T 세포의 예시적인 증식 그래프이다. 단핵구 배양 0일차에 항-GM-CSFRα 항체를 첨가하고, 3일차에 anti-PD-L1 항체를 MLR에 첨가하였다. CD3+ T 세포를 CFSE로 표지하고, CD3/CD28/IL-2로 자극하고, 단핵구와 함께 5일 동안 공동 배양하였다. CFSE 희석을 측정하여 증식을 모니터링하고, 상응하는 세포 배양 배지에서 단핵구와 공동-배양된 증식 T 세포를 정규화하여 증식을 모니터링하였다.
도 7a는 KRAS-돌연변이 암 세포 조건화 배지를 사용해 CD14+ 단핵구의 표현형 MDSC로의 분극화를 검사하기 위한 연구의 예시적인 워크플로우이다. CD14= 단핵구를 기본 배지 또는 암 세포로부터 조건화된 배지와 함께 3일 동안 배양한 다음, 유세포 계측법에 의한 표현형 분석을 수행하였다. 도 7b는 HLA=DR의 발현 저하 및 CD11b 및 PD-L1의 발현 증가를 보여주는 일련의 대표적인 히스토그램 오버레이이다. 도 7c는 암 세포 조건화 배지로 배양된 건강한 공여자 단핵구에서 HLA-DR, CD11b, 및 PD-L1의 상대적 발현을 기하 평균 형광 강도(gMFI)로 나타내는 일련의 예시적인 막대 그래프이다. P-값은 양측, 쌍 비교 스튜던트 t-테스트를 사용하여 생성하였다.
도 8a 및 도 8b는 다양한 배지로 배양한 MDSC 상에서의 PD-L1 발현을 도시하는 일련의 예시적인 그래프이다. 도 8a는 다양한 농도에서 항-GM-CSFR α 항체가 있거나 없는 결장직장암 및 췌장암 세포로부터의 조건화된 배지로 배양한 건강한 공여자 단핵구에서 기하 평균 형광 강도(gMFI)로 나타내는 PD-L1의 상대적 발현을 보여주는 대표적인 그래프이다. 도 8b는 자궁경부암 세포로부터의 조건화된 배지로 배양한 건강한 공여자 단핵구에서 기하 평균 형광 강도(gMFI)로 나타내는 PD-L1의 상대적 발현을 보여주는 대표적인 그래프이다. P-값은 Dunnett의 평균 다중 비교를 이용한 일반적인 단방향 ANOVA를 사용하여 생성하였다. (CM = 조건화 배지; n.s = 유의하지 않음)
도 9a 및 도 9b는 췌장 암종이 있는 마우스에서의 평균 종양 부피를 나타내는 일련의 예시적인 그래프이다. 도 9a는 치료 종료 후 3일차에 각 치료 그룹에 대한 마우스의 평균 종양 부피를 보여주는 대표적인 그래프이다. 도 9b는 치료 종료 후 12일차에 각 치료 그룹에 대한 마우스의 평균 종양 부피를 보여주는 대표적인 그래프이다.
도 10은 로그 순위 검정과 비교하여 2000 mm³의 종양 부피까지의 시간에 대한 예시적인 Kaplan-Meier 플롯이다. 종양 부피가 2000 mm³까지 도달하는 데 걸리는 시간은 대조군과 비교했을 때 GM-CSF 길항제 단독 또는 anti-PD-1 항체와 병용으로 치료한 마우스에서 더 길었다.

정의

본 발명이 보다 쉽게 이해되도록 하기 위해, 특정 용어가 먼저 아래에 정의된다. 다음 용어들 및 다른 용어들에 대한 추가 정의는 본 명세서 전반에 걸쳐 제시된다. 본 명세서에서 본 발명의 배경을 기술하고 그 실례에 대한 추가적인 세부 사항을 제공하기 위해 참조된 간행물 및 기타 참조 문헌은 참조로 본 명세서에 통합된다.

항체: 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린(Ig) 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 항원에 결합하는(면역반응하는) 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 지칭한다. "결합하다" 또는 "면역반응하다"는 항체가 원하는 항원 결정인자 하나 이상과 반응하는 것을 의미한다. 항체는 항체 단편을 포함한다. 항체는 또한 다클론, 단클론, 키메라 dAb(도메인 항체), 단쇄, Fab, Fab', F(ab')2 단편, scFv, 및 Fab 발현 라이브러리를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 항체는 전체 항체, 또는 면역글로불린, 또는 항체 단편일 수 있다.

아미노산: 본 명세서에서 사용되는 용어 "아미노산"은, 가장 넓은 의미로, 폴리펩티드 사슬에 연결될 수 있는 임의의 화합물 및/또는 물질을 지칭한다. 일부 구현예에서, 아미노산은 H₂N-C(H)(R)-COOH의 일반 구조를 가진다. 일부 구현예에서, 아미노산은 자연적으로 발생하는 아미노산이다. 일부 구현예에서, 아미노산은 합성 아미노산이고, 일부 구현예에서, 아미노산은 d-아미노산이고, 일부 구현예에서, 아미노산은 l-아미노산이다. "표준 아미노산"은 자연적으로 발생하는 펩티드에서 일반적으로 발견되는 20개의 표준 l-아미노산 중 어느 것을 지칭한다. "비표준 아미노산"은 합성하여 제조되거나 천연 공급원에서 얻어지는지와 관계없이, 표준 아미노산 이외의 임의의 아미노산을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 "합성 아미노산"은, 이에 한정되지 않지만, 염, (아마이드 등과 같은)아미노산 유도체 및/또는 치환체를 포함하는, 화학적으로 변형된 아미노산을 포함한다. 펩티드에 카르복실- 및/또는 아미노-말단 아미노산을 포함하는, 아미노산은 메틸화, 아마이드화, 아세틸화, 보호기, 및/또는 활성에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 펩티드의 순환 반감기를 변화시킬 수 있는 다른 화학적 그룹으로 치환에 의해 변형될 수 있다. 아미노산은 이황화 결합에 참여할 수 있다. 아미노산은 하나 이상의 화학 물질(예를 들어, 메틸기, 아세테이트기, 아세틸기, 인산기, 포르밀 모이어티, 이소프레노이드기, 황산기, 폴리에틸렌 글라이콜 모이어티, 지질 모이어티, 탄수화물 모이어티, 비오틴 모이어티 등)과의 결합과 같은 하나 이상의 번역 후 변형을 포함할 수 있다. 용어 "아미노산"은 "아미노산 잔기"와 상호교환적으로 사용되며, 유리 아미노산 및/또는 펩티드의 아미노산 잔기를 지칭할 수 있다. 용어가 유리 아미노산 또는 펩티드의 잔기 중 어느 것을 지칭하는 것으로 사용되는지는 문맥으로부터 명백할 것이다.

개선(Amelioration): 본 명세서에서 사용되는 용어 "개선"은 상태의 예방, 감소 또는 완화, 또는 대상의 상태 호전을 의미한다. 개선은 질병 상태의 완전한 회복 또는 완전한 예방을 포함하지만, 필수적인 것은 아니다. 일부 구현예에서, 개선은 관련 단백질의 수준 또는 관련 질병 조직에 결핍된 활성을 증가시키는 것을 포함한다.

대략 또는 약: 본 명세서에서 사용되는, 하나 이상의 관심 값에 적용되는 "대략" 또는 "약"이라는 용어는 언급된 기준 값과 유사한 값을 지칭한다. 어떤 구현예에서, "대략" 또는 "약"이라는 용어는, 달리 언급되지 않거나 문맥에서 명백하지 않으면, 언급된 기준 값의 어느 한 쪽으로 (높은 쪽이나 낮은 쪽으로) 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 그 이하로 포함되는 값의 범위를 지칭한다(이러한 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우를 제외함).

전달: 본 명세서에 사용된 바와 같이, "전달"은 국소 및 전신 전달을 모두 포함한다.

개선, 증가, 억제 또는 감소: 본 명세서에서 사용되는, "개선", "증가", "억제" 또는 "감소" 또는 문법적으로 동등한 용어는, 본 명세서에 기술된 치료를 시작하기 전에 동일한 개체에서의 측정, 또는 본 명세서에 기술된 치료를 하지 않은 경우, 예를 들어, 위약을 투여받은 대상체에 대조군 또는 대조군 대상체(또는 다중 대조군 대상체)에서의 측정과 같은, 기준선 측정에 대한 상대적인 값을 나타낸다. "대조군" 또는 "대조군 대상체"는 치료받는 대상체와 동일한 병태에 시달리는 대상체로서, 치료받는 대상체와 거의 동일한 연령대이다.

"억제" 또는 "억제하는": 본원에서 사용되는 "억제" 또는 "억제하는" 또는 문법적으로 동등한 용어는 생물학적 활성의 감소, 감소 또는 억제를 의미한다. 중화: 본원에서 사용되는 중화는 중화 항체가 결합하는 단백질의 생물학적 활성의 감소 또는 억제를 의미하며, 이 경우 GM-CSFRα, 예를 들어 GM-CSFRα에 대한 GM-CSF 결합의 감소 또는 억제, 또는 GM-CSFRα 매개 반응에 의해 측정된 바와 같은 GM-CSFRα에 의한 신호전달의 감소 또는 억제를 의미한다. 생물학적 활성의 감소 또는 억제는 부분적이거나 전체적일 수 있다. 항체가 GM-CSFRα를 중화시키는 정도는 이의 중화 효능으로 지칭된다.

"KRAS 돌연변이": 본원에서 사용되는 바와 같이, "KRAS 돌연변이", "KRAS 돌연변이", "K-Ras 돌연변이", "K-Ras 돌연변이", 또는 문법적 등가물은 야생형 서열과 비교하여 KRAS 유전자 또는 단백질에서 하나 이상의 돌연변이를 의미한다. 야생형 또는 정상 KRAS 유전자는 종양 성장을 억제하지만, 돌연변이 KRAS 유전자는 세포 증식을 촉진하고 종양 생성을 유발한다. "KRAS 돌연변이에 의한 암" 또는 "KRAS 돌연변이 암"은 (a) 체세포 KRAS 돌연변이를 포함하는 암 세포 또는 종양 세포, 또는 (b) 정상적인, 비암 세포에서 발견되는 수준과 비교했을 때, KRAS 암호화 DNA의 증폭 또는 KRAS 유전자의 과발현을 포함하나 이에 한정되지 않는 KRAS의 비정상적인 발현 수준을 가진 암 세포 또는 종양 세포이다. 본 명세에서 사용되는 "KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 암"은 유전자에 하나 이상의 돌연변이가 있어 KRAS 신호 전달 경로가 비정상적으로 활성화되는 암 또는 종양 세포이다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로 상류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로 하류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 발암성 돌연변이다.

환자: 본 명세서에 사용되는 용어 "환자"는 제공된 조성물이 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다(예를 들어, 실험, 진단, 예방, 미용 및 / 또는 치료 목적을 위함). 통상의 환자들은 동물을 (예를 들어, 마우스, 쥐, 토끼, 인간 이외의 영장류 및/또는 인간과 같은 포유류) 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 인간이다. 인간은 출생 전 및 출산 후 형태를 포함한다.

약학적으로 허용 가능한: 본 명세서에 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한"은, 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제나 합병증이 없이, 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 물질을 지칭한다.

실질적인 동일성:"실질적인 동일성"이라는 구문은 아미노산 또는 핵산 서열 사이의 비교를 지칭하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 2개의 서열은 상응하는 위치에 동일한 잔기를 포함하는 경우에 일반적으로 "실질적으로 동일한" 것으로 간주된다. 본 기술 분야에서 잘 알려져 있는 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 서열은, 뉴클레오티드 서열에 대한 BLAS TN 및 아미노산 서열에 대한 BLASTP, 간극 BLAST, 및 PSI-BLAST와 같은 통상의 컴퓨터 프로그램에서 이용 가능한 것들을 포함하는, 임의의 다양한 알고리즘을 사용하여 비교될 수 있다. 대표적인 이러한 프로그램은 다음에 기술되어 있다: Altschul 등, Basic local alignment search tool, J Mal. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul 등, Methods in Enzymology; Altschul 등, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis 등, Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 및 Misener 등(편), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999. 동일한 서열을 식별하는 것에 더하여, 전술한 프로그램은 일반적으로 동일성의 정도에 대한 표시를 제공한다. 일부 구현예에서, 2개의 서열은 상응하는 잔기의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상이 잔기의 관련 구간에 걸쳐 동일하다면 실질적으로 동일한 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 관련 구간은 완전한 서열이다. 일부 구현예에서, 관련 구간은 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500 또는 그 이상의 잔기이다.

대상체: 본 명세서에 사용되는 용어 "대상체"는 인간 또는 임의의 비인간 동물(예를 들어, 마우스, 쥐, 토끼, 개, 고양이, 소, 돼지, 양, 말 또는 영장류)을 지칭한다. 인간은 출생 전 및 출산 후 형태를 포함한다. 많은 구현예에서, 대상체는 인간이다. 대상체는 환자일 수 있으며, 이는 질병의 진단 또는 치료를 위해 의료 제공자에게 소개하는 인간을 지칭한다. 용어 "대상체"는 본 명세서에서 "개체" 또는 "환자"와 상호 교환 가능하게 사용된다. 대상체는 질환이나 장애로 인해 시달리거나 민감할 수 있지만 질환 또는 장애 증상을 나타내거나 나타내지 않을 수 있다.

실질적으로: 본 명세서에 사용되는 용어 "실질적으로"는 관심 있는 특성 또는 성질의 전체 또는 거의 전체 범위 또는 정도를 나타내는 질적인 조건을 지칭한다. 생물학적 기술 분야의 당업자는 설사 생물학적 및 화학적 현상이 거의 완전하지 않더라도, 완료 및/또는 완료로 진행 또는 완전한 결과를 달성하거나 막을 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, "실질적으로"라는 용어는 많은 생물학적 및 화학적 현상에 내재하는 완전성의 잠재적인 결여를 포착하기 위해 본 명세서에서 사용된다.

전신 분포 또는 전달: 본 명세서에 사용되는, "전신 분포", "전신 전달" 또는 문법적으로 동일한 용어는, 전체 신체 또는 전체 유기체에 영향을 미치는 전달 또는 분포 메커니즘 또는 접근을 지칭한다. 전형적으로, 전신 분포 또는 전달은 신체의 순환 시스템, 예를 들어 혈류를 통해 달성된다. "국소 분포 또는 전달"의 정의와 비교된다.

치료적 유효량: 본 명세서에 사용되는 용어, 치료제의 "치료적 유효량"은 질병, 장애 및/또는 병태의 증상의 발생을 치료, 진단, 예방, 및/또는 지연시키기 위해 질환, 장애, 및/또는 병태를 앓고 있거나 이에 민감한 대상에게 투여될 때, 충분한 양을 의미한다. 치료적 유효량은 통상적으로 적어도 하나의 단위 투여량을 포함하는 투여 요법을 통해 투여된다는 것은 당업자에 의해 식별될 것이다.

치료: 본 명세서에 사용되는 용어, "치료(treat, treatment)" 또는 "치료하는(treating)"은 특정 질환, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특징의 부분적 또는 완전히 경감, 개선, 완화, 억제, 예방, 발생 지연, 괴로움 감소, 및/또는 발병률을 감소시키는 데 사용되는 임의의 방법을 지칭한다. 치료는 질환과 관련된 병리 발생 위험을 감소시키기 위한 목적으로 질환의 징후를 나타내지 않고/않거나 질환의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 투여될 수 있다.

발명을 실시하기 위한 구체적인 내용

본 발명은 특히, GM-CSF 길항제를 사용하여 이를 필요로 하는 환자의 암을 치료하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, GM-CSF 길항제를 사용하여 이를 필요로 하는 환자에서 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성을 억제함으로써 암을 치료하기 위한 개선된 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 면역 관문 억제제와 조합하여 사용된다. 본 발명은 면역 관문 억제(ICI) 불응성 또는 내성 암, 또는 후기 단계 또는 전이성 암을 치료하는 데 특히 효과적인 것으로 고려된다.

본 발명의 다양한 양태는 다음의 섹션에서 자세히 기술된다. 섹션의 사용은 본 발명을 한정하려는 의미가 아니다. 각 섹션은 본 발명의 임의의 양태에 적용될 수 있다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급하지 않는 한 "및/또는"을 의미한다.

KRAS(키르스텐 랫트 육종 바이러스 종양유전자 상동체) 돌연변이

KRAS(Kirsten 랫트 육종 바이러스 종양유전자 상동체) 유전자는 RAS/MAPK 경로로 알려진 신호 전달 경로의 일부인 K-Ras라는 단백질을 만드는 데 필요한 지침을 제공한다. 단백질은 세포 외부에서 세포의 핵으로 신호를 전달한다. 이들 신호는 세포가 성장하고 분열하도록(증식하도록) 또는 성숙하여 특수한 기능을 수행(분화)하도록 지시한다. K-Ras 단백질은 GTPase이며, 이는 GTP라는 분자를 GDP라는 또 다른 분자로 전환시킨다는 것을 의미한다. 이러한 방식으로, K-Ras 단백질은 GTP 및 GDP 분자에 의해 켜지고 꺼지는 스위치처럼 작용한다. 신호를 송신하기 위해서는, GTP의 분자에 부착(결합)함으로써 신호를 켜야 한다. K-Ras 단백질은 GTP를 GDP로 전환할 때 꺼진다(비활성화된다). 단백질이 GDP에 결합될 때, 신호는 세포의 핵으로 전달되지 않는다.

KRAS유전자는 종양 유전자로 알려진 유전자의 부류에 속한다. 종양유전자는 조절된 세포 증식의 자극 과정에서 중요한 역할을 하는 정상 유전자이다. 이들 유전자에서의 돌연변이는 조절되지 않는 증식 및 암의 발생을 초래한다. RAS 유전자는 정상 세포에서 발현되고, 세포 성장 조절에 관여한다. RAS의 3가지 돌연변이가 확인되었다: H-ras, N-ras 및 K-ras. 일반적으로, 결장, 췌장 및 폐 암종은 KRAS의 돌연변이를 가지며, 방광 종양은 HRAS 돌연변이를 가지며, 조혈 신생물은 NRAS 돌연변이와 연관된다.

KRAS의 돌연변이는 폐 선암종, 점액성 선종, 췌장관 암종 및 결장직장 암종과 같은 악성 종양과 관련이 있을 수 있다. 인간 결장직장암에서, KRAS 돌연변이는 AP-1의 활성화를 통해 GST-ð의 과발현을 유도하는 것으로 보인다. 예를 들어, Miyanishi 등의 위장병학, 2001; 121 (4):865-74를 참조한다.

돌연변이 KRAS는 결장암(Burmer G C, Loreb L A, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86(7):2403-2407), 췌장암(Almogera C 등의 1988, Cell, 53(4):549-554) 및 폐암(Tam I Y 등의 2006, Clin. Cancer Res., 12(5):1647-1653 참조)에서 발견된다. KRAS는 폐 선암종에서 RAS 돌연변이의 90%를 차지한다(Forbes S 등의 Cosmic 2005. Br J Cancer, 2006; 94:318-322).

KRAS 유전자는 결장직장암에서 증폭될 수도 있다. KRAS 증폭은 KRAS 돌연변이와 상호 배타적일 수 있다. 예를 들어, Valtorta E 등의 2013, Int. J. Cancer, 133(5):1259-65를 참조한다. 야생형 KRAS의 증폭은 난소암, 위암, 자궁암 및 폐암에서도 관찰되었다. 예를 들어, Chen Y 등의 2014, PLoS ONE, 9(5):e98293을 참조한다.

인간 KRAS 유전자 서열은 GenBank 수탁 번호 NM_033360 (전사 변이체 a) (서열번호 9) 및 NM_004985.5 (전사 변이체 b) (서열번호 10)에 주어진 핵산 서열을 갖는 2개의 바람직한 전사 변이체를 갖는다. 인간 KRAS 단백질 서열은 GenBank 수탁 번호 NP_203524 (이소폼 a) (서열번호 11) 및 NP_004976.2 (이소폼 b) (서열번호 12)에 주어진 아미노산 서열을 갖는 2개의 바람직한 변이체를 갖는다.

일부 구현예에서, KRAS 돌연변이를 갖는 암은 발암성 KRAS 돌연변이를 함유하는 암 세포 또는 종양 세포이다. 암과 관련된 발암성 KRAS 돌연변이는 GG12A, G12S, G12D, G12V, G13D, G12C, Q61R, Q61L, Q61K, G12R, 및 G12C를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS의 구성적 활성화를 유도하는 G12 및/또는 G13의 발암성 치환을 포함한다. 당업자는 상기 식별된 것 이외의 KRAS 돌연변이, 및/또는 상기 KRAS 돌연변이의 조합, 및/또는 바람직하게는 KRAS의 구성적 활성화를 유도하는 다른 KRAS 돌연변이를 포함하는 KRAS 유전자가 또한 본 발명에 포함된 발암성 KRAS 돌연변이임을 이해할 것이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이를 갖는 암은 체세포 KRAS 돌연변이를 함유하는 암 세포 또는 종양 세포이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이를 갖는 암은 정상, 비암 세포에서 발견되는 수준과 비교했을 때, KRAS 암호화 DNA의 증폭, 또는 KRAS 유전자의 과발현을 포함하나 이에 한정되지 않는, KRAS 신호 전달 경로의 구성적 활성화를 갖는 암 세포 또는 종양 세포이다.

일 양태에서, 본 발명은 특히 GM-CSF 길항제로 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시켜 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세에서 사용되는 "KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 암"은 유전자에 하나 이상의 돌연변이가 있어 KRAS 신호 전달 경로가 비정상적으로 활성화되는 암 또는 종양 세포이다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로 상류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 KRAS 신호 전달 경로 하류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상과 비교하여 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 발암성 돌연변이이다.

일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 RAF 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 MAPK 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 PI3K 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 AKT 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 RAL 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 Wnt 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 수용체 티로신 키나아제 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상과 비교해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 mTOR 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 MEK 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 ERK 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 KRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 NF-kB 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다.

일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 정상, 비암 세포에서 발견되는 수준과 비교했을 때, 세포 증식을 촉진하거나, 종양 생성을 유발하거나, KRAS 암호화 DNA의 증폭, KRAS 유전자의 과발현, KRAS 단백질의 결핍, 비정상적인 과발현, 또는 KRAS 단백질의 활성화를 유도하는, KRAS 유전자 또는 KRAS 단백질의 하나 이상의 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 돌연변이는 야생형 유전자 또는 단백질과 비교하여 유전자 또는 단백질에서 하나 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 결실, 삽입, 또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 잔기 G12에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 잔기 G13에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS의 구성적 활성화를 유도하는 G12 및/또는 G13의 발암성 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 잔기 Q61에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질에서 G12D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G12V 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G13D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G12C 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질에서 Q61R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질에서 Q61L 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질에서 Q61K 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G12R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G12C 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G12A 돌연변이이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 KRAS 단백질 내 G12S 돌연변이이다.

일부 구현예에서, KRAS 돌연변이를 가진 암은 대조군과 비교했을 때 GM-CSF의 수준이 상승하였다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 GM-CSF가 환자 샘플에서 검출된다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 혈청 샘플이다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 종양 생검으로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 대조군은 암이 없는 건강한 대상체에서 GM-CSF의 수준이다. 일부 구현예에서, 대조군은 환자의 건강한 조직 샘플에서 GM-CSF의 수준이다. 일부 구현예에서, 환자는 베이스라인에서 GM-CSF의 수준에 따라 선택된다. 일부 구현예에서, 환자는 대조군 대비 GM-CSF의 수준이 상승한다.

NRAS(신경모세포종 RAS 바이러스 종양유전자 상동체) 돌연변이

NRAS 단백질은 세포에서 Ras, Raf, MAP 단백질 키나아제/세포외 신호 조절 키나아제(MEK), 세포외 신호 조절 키나아제(ERK) 경로(Ras/Raf/MEK/ERK 경로)를 활성화시킨다. 이 경로는 EGFR 수용체의 하류에 있으며, 세포 증식, 분화, 생존, 불멸화, 침윤 및 혈관신생을 포함하는 세포 맥락에 의존하는 다양한 세포 기능의 조절에 중심 역할을 한다(Peyssonnaux 및 Eychene, Biologies of the Cell, 2001, 93:3-62에서 검토됨). 실제로, Ras-의존성 Raf-MEK-MAPK 캐스케이드는 세포 표면에서 핵으로 유사분열 신호와 침습 신호를 모두 전달하여 유전자 발현 및 세포 운명의 변화를 초래하는 주요 신호 전달 경로 중 하나이다.

일부 구현예에서, NRAS 돌연변이를 갖는 암은 발암성 NRAS 돌연변이를 함유하는 암 세포 또는 종양 세포이다. 암과 관련된 발암성 NRAS 돌연변이는 GG12A, G12S, G12D, G12V, G13D, G12C, E63R, E63L, E63K, G12R, 및 G12C를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS의 구성적 활성화를 유도하는 G12 및/또는 E63의 종양원성 치환을 포함한다. 당업자는 상기 식별된 것 이외의 NRAS 돌연변이 및/또는 상기 NRAS 돌연변이의 조합, 및/또는 바람직하게는 NRAS의 구성적 활성화를 유도하는 다른 NRAS 돌연변이를 포함하는 NRAS 유전자가 또한 본 발명에 의해 포함되는 종양원성 NRAS 돌연변이라는 것을 이해할 것이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이를 갖는 암은 체세포 NRAS 돌연변이를 포함하는 암 세포 또는 종양 세포이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이를 갖는 암은, 정상, 비암 세포에서 발견되는 수준과 비교했을 때, DNA를 암호화하는 NRAS의 증폭, 또는 NRAS 유전자의 과발현을 포함하지만 이에 한정되지 않는, NRAS 신호 전달 경로의 구성적 활성화를 갖는 암 세포 또는 종양 세포이다.

일 양태에서, 본 발명은 특히, GM-CSF 길항제로 NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시켜 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 암"은 유전자에 하나 이상의 돌연변이가 있어 NRAS 신호 전달 경로가 비정상적으로 활성화되는 암 또는 종양 세포이다. 일부 구현예에서, NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 NRAS 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 NRAS 유전자에 있다. 일부 구현예에서, NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 NRAS 신호 전달 경로의 상류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 NRAS 신호 전달 경로의 하류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, 정상과 비교해 NRAS 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 발암성 돌연변이이다.

일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 정상, 비암 세포에서 발견되는 수준과 비교했을 때, 세포 증식을 촉진하거나, 종양 생성을 야기하거나, NRAS 암호화 DNA의 증폭, 또는 NRAS 유전자의 과발현, NRAS 단백질의 결핍, 비정상적인 과발현, 또는 NRAS 단백질의 활성화를 유도하는 KRAS 유전자 또는 NRAS 단백질 내의 하나 이상의 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 돌연변이는 야생형 유전자 또는 단백질과 비교하여 유전자 또는 단백질에서 하나 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 결실, 삽입, 또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 잔기 G12에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, KRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 잔기 E63에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS의 구성적 활성화를 유도하는 G12 및/또는 E63의 종양원성 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 잔기 G12에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질의 G12D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질의 G12V 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 KRAS 단백질의 G13D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 G12C 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 E63R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 E63L 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 E63K 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 G12R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질 내 G12C 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질의 G12A 돌연변이이다. 일부 구현예에서, NRAS 돌연변이는 NRAS 단백질의 G12S 돌연변이이다.

일부 구현예에서, NRAS 돌연변이를 갖는 암은 대조군과 비교했을 때 GM-CSF의 수준이 상승하였다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 GM-CSF가 환자 샘플에서 검출된다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 혈청 샘플이다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 종양 생검으로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 대조군은 암이 없는 건강한 대상체에서 GM-CSF의 수준이다. 일부 구현예에서, 대조군은 환자의 건강한 조직 샘플에서 GM-CSF의 수준이다. 일부 구현예에서, 환자는 베이스라인에서 GM-CSF의 수준에 기초하여 선택된다. 일부 구현예에서, 환자는 대조군 대비 GM-CSF의 수준이 상승한다.

JAK2(야누스 키나아제 2) 및 PTPN11 돌연변이

JAK2 유전자는 야누스 키나아제 계열의 구성원인 비수용체 티로신 키나아제 야누스 키나아제 2를 코드화하며, II형 사이토카인 수용체 계열(예: 인터페론 수용체)의 신호 전달에 관여하고, GM-CSF 수용체 계열(IL-3R, IL-5R 및 GM-CSF-R), gp130 수용체 계열(예: IL-6RR) 및 단쇄 수용체(예: Epo-R, Tpo-R, GH-R 및 PRL-R) JAK2 신호는 프로락틴 수용체의 하류에서 활성화된다. JAK2에 대한 다른 명칭은 JTK10 및 THCYT3이다. PTPN11에 의해 암호화되는 비수용체 티로신 인산분해효소인 SHP2는 또한 성장 인자, 사이토카인, 호르몬, 항원 및 세포외 기질 수용체의 하류 신호 전달 이벤트에도 참여한다. JAK2 및 SHP2는 조혈 전구 세포에서 복잡한 신호전달 네트워크를 형성한다. 교란된 JAK2 및 SHP2 신호전달은 조혈 악성 종양을 유도할 수 있다.

JAK2의 돌연변이는 골수 세포의 증식 증가 및 효과적인 성숙을 동반하는 조혈 줄기 세포의 클론성 장애인 골수 증식성 신생물(MPN)을 가진 대부분의 환자에서 확인되고, 말초 혈액 백혈구증가증 및 과도한 적혈구 또는 혈소판으로 이어져, 돌연변이에 의해 야기되는JAK2 신호전달의 구성적 활성화의 중요성을 강조하였다. MPN 환자의 50% 이상이 JAK2 V617F 돌연변이를 가지고 있다. 또한, 티로신 포스파타아제인 SHP-2를 사용해 세포질 단백질을 암호화하는 유전자인 PTPN11의 돌연변이는 JMML에서 주요 분자 이벤트이다. SHP-2는 활성화된 성장 인자 및 사이토카인 수용체의 신호를 RAS 및 다른 세포 내 신호 전달 분자로 전달하는 신호 전달자로서, MAPK 캐스케이드의 지속적인 활성화에 필요하다. 누적된 증거는 PTPN11, NRAS및 KRAS2 돌연변이가 JMML 및 기타 혈액암에서 대부분 상호 배타적임을 뒷받침한다. 반면, PTPN11 결함은 CMML 사례의 약 1.3%에서만 식별되었으며, 이는 PTPN11 병변이 CMML에서 희귀한 유전적 사건임을 나타냈다. PTPN11의 엑손 3, 엑손 8, 및 엑손 13은 돌연변이 핫스팟으로 알려져, 돌연변이된 SHP2 단백질을 초래한다. JMML 환자에서 검출된 SHP2 돌연변이는 G60R, D61Y, D61N, E69K, A72T, A72V, T73I, E76K, E76Q, E76G, E139D, 및 G506P이다.

일 양태에서, 본 발명은 특히 GM-CSF 길항제로 JAK2 신호 전달 경로의 활성화 또는 교란을 증가시켜 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "JAK2 신호 전달 경로의 활성화 또는 교란이 증가된 암"은 JAK2 신호 전달 경로의 비정상적인 활성화를 초래하거나 하류 이벤트(예를 들어, SHP2 신호전달)에서 교란을 초래하는 유전자에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암 또는 종양 세포이다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 JAK2 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 교란을 초래하는 하나 이상의 돌연변이는 JAK2 또는 SHP2 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 JAK2 유전자에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 교란을 초래하는 하나 이상의 돌연변이는 JAK2 유전자에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 교란을 초래하는 하나 이상의 돌연변이는 PTPN11 유전자에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 JAK2 신호 전달 경로의 상류 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 JAK2 신호 전달 경로의 하류의 신호 전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자 내에 있다. 일부 구현예에서, JAK2 신호전달 경로의 하류에 있는 신호전달 경로에 관여하는 단백질을 암호화하는 유전자는 PTPN11이다. 일부 구현예에서, 정상에 비해 JAK2 신호 전달 경로의 활성화를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이는 발암성 돌연변이이다.

일부 구현예에서, JAK2 돌연변이는 JAK/STAT 경로를 방해하는 JAK2 유전자 또는 JAK2 단백질의 하나 이상의 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 돌연변이는 야생형 유전자 또는 단백질과 비교하여 유전자 또는 단백질에서 하나 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 결실, 삽입, 또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, JAK2 돌연변이는 JAK22 단백질 내 잔기 V617에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, JAK2 돌연변이는 JAK2 단백질 내 V617F 돌연변이이다.

일부 구현예에서, JAK2 돌연변이를 갖는 암은 대조군과 비교해 GM-CSF의 수준이 상승한다. 일부 구현예에서, 상승된 수준의 GM-CSF가 환자 샘플에서 검출된다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 혈청 샘플이다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, 환자 샘플은 종양 생검으로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 대조군은 암이 없는 건강한 대상체에서 GM-CSF의 수준이다. 일부 구현예에서, 대조군은 환자의 건강한 조직 샘플에서 GM-CSF의 수준이다. 일부 구현예에서, 환자는 베이스라인에서의 GM-CSF의 수준에 기초하여 선택된다. 일부 구현예에서, 환자는 대조군 대비 GM-CSF의 수준이 상승한다.

일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 JAK/STAT 경로의 하류 이벤트를 방해하는 PTPN11 유전자 또는 SHP2 단백질에서의 하나 이상의 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 돌연변이는 야생형 유전자 또는 단백질과 비교하여 유전자 또는 단백질에서 하나 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산의 결실, 삽입, 또는 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 잔기 G60에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP22 단백질 내 잔기 D61에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 잔기 E69에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 잔기 A72에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 잔기 T73에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 잔기 E76에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 잔기 E139에서 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP22 단백질 내 잔기 G506에서의 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, SHP 돌연변이는 SHP2 단백질 내 G60R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP 돌연변이는 SHP2 단백질 내 G60R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 G60R 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 D61Y 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 D61N 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 E69K 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 A72T 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 A72V 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 T73I 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 E76K 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 E76Q 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 E76G 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 E139D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, SHP2 돌연변이는 SHP2 단백질 내 G506P 돌연변이이다.

골수 유래 억제 세포(MDSC)

MDSC는 골수 계통 유래 면역 세포의 이종 그룹이다. MDSC는 만성 감염증 및 암과 같은 병리학적 상황에서 강하게 확장되며, 면역자극 특성보다는 강력한 면역억제 활성을 갖는 다른 골수 세포 유형과 구별된다. CD14⁺HLA-DR^lo/neg 단핵구라고 불리는 HLA-DR 발현이 소멸했거나 없는 단핵구는 MDSC로 그룹화되며, 이는 적응 면역을 변경시키고 면역억제를 생성할 수 있다.

MDSC는 암, 감염, 만성 염증, 이식 및 자가면역의 말초 혈액, 림프 기관, 비장 및 종양 부위에 축적된다. 종양이 MDSC를 동원, 증식 및 활성화시키는 특이적 경로는 알려져 있지 않지만, 인터루킨(IL-1β), IL-6, 시클로옥시헤나아제 2(COX2)-생성 PGE₂, 고농도의 GM-CSF, M-CSF, 혈관 내피 성장 인자(VEGF), IL-10, 형질전환 성장 베타(TGFβ), 인돌레아민 2,3-디옥시헤나아제, FLT3 리간드(T), 및 줄기 세포 인자의 관여에 대한 증가의 증가하고 있다.

내성 DC 또는 MDSC를 유도하는 것으로 나타난, 종양 세포주와 면역 적격 세포의 공동 배양. 이전의 연구는 또한 종양 세포가 T 세포 기능을 억제하도록 과립구 ROS 생산을 유도하는 GM-CSF를 방출함을 시사한다. 또한, MDSC 매개 억제에서 이의 역할은 불분명하지만, 세포예정사 리간드 1(programmed death ligand 1, PD-L1)의 발현은 쥣과 종양 모델에서 MDSC의 표면 상에서 증가한다.

세포예정사 리간드 1(PD-L1)

세포예정사 리간드 1(PD-L1; CD274로도 알려짐)은 수용체 PD-1에 결합하는 면역 관문 단백질이다. PD-L1은 다양한 세포 유형, 주로 종양 세포, MDSC, 단핵구, 대식세포, 자연 살해(NK) 세포, 수지상 세포(DC), 및 활성화된 T 세포, 및 뇌, 각막, 및 망막과 같은 면역-특이 부위에서 광범위하게 발현된다. 정상적인 생리학적 조건에서, PD-1/PD-L1 신호 전달 경로의 활성화는, 과활성화를 피하고 면역 매개 조직 손상으로부터 보호하는 말초 내성의 유도 및 유지, T 세포 면역 항상성의 유지와 밀접한 관련이 있다. 질환 상태에서, PD-L1은 그의 수용체 세포예정사 1(PD-1)과 상호작용하여, 프라이밍, 성장, 증식 및 세포자멸사, 및 기능적 성숙을 포함하는 일련의 T 세포 매개 세포 면역 반응을 제어하도록 음성 신호를 송신하여 면역 탈출을 초래한다.

면역 관문 억제제(ICI)는 많은 종양의 치료 환경을 변화시켜, 일부 경우에 지속적인 반응을 유도하고, 종양 돌연변이 부하, CD8⁺ T 세포 밀도 및 PD-L1 발현은 각각 PD-1/-L1 길항제에 대한 반응의 구별되는 바이오마커로서 제안되었다. 면역 관문 차단 항체의 주요 과제 중 하나는 제한된 T 세포 반응 또는 면역학적으로 "비반응성(cold)" 종양을 갖는 악성 종양에 있다. 이러한 비반응성 종양은 침윤성 T 세포를 거의 함유하지 않으며 인식되지 않고, 면역계에 의한 강력한 반응을 유발하지 않으며, 현재의 면역요법으로 치료하기 어렵다. 본 발명자들은 놀랍게도 GM-CSF가 PD-L1을 상향조절하여 면역억제 활성에 기여한다는 것을 발견하였다. "비반응성(cold)" 종양을 "반응성(hot)" 종양으로 전환하는 것은 암 치료의 이정표 중 하나이다.

GM-CSF 길항제

GM-CSF 신호 전달

GM-CSF는 광범위한 조혈 세포 유형의 생존과 증식을 향상시키는 유형 I 전염증성 사이토카인이다. 이는 골수 세포(예를 들어, 호중구, 호염기구, 호산구, 단핵구, 및 대식세포)의 분화 및 증식의 유도자로서 처음 확인된 성장 인자이다(Wicks IP 및 Roberts AW, Nat Rev Rheumatol. 2016, 12(1):37-48). 상이한 접근법을 사용하는 연구는 GM-CSF 과발현의 경우 병리학적 변화가 거의 항상 뒤따르는 것으로 나타났다(Hamilton JA 등, Growth Factors. 2004, 22(4):225-31). GM-CSF는 혈관의 활성화된 내피를 통해 골수 세포의 수송을 향상시키고, 또한 염증 동안 혈관 내 단핵구 및 대식세포 축적에 기여할 수 있다. GM-CSF는 또한 염증이 생긴 조직에서 단핵구 및 대식세포뿐만 아니라 상주 조직 대식세포의 활성화, 분화, 생존 및 증식을 촉진한다. 이는 침윤성 단핵구가 M1 대식세포 및 단핵구 유래 수지상 세포(MoDC) 내로 분화되는 것을 촉진함으로써 염증 조직에서 항원 제시 세포의 표현형을 조절한다. 또한, 대식세포 및 MoDC에 의한 IL-23의 생산은 IL-6 및 IL-1과 같은 다른 사이토카인과 조합하여 T 세포 분화를 조절한다.

GM-CSF는 M-CSF(대식세포 콜로니 자극 인자)와 함께 대식세포의 수 및 기능을 조절한다. GM-CSF에 의해 활성화된 대식세포는 일련의 효과기 기능을 획득하며, 이들 모두는 이들을 염증성 대식세포로서 식별한다. GM-CSF-활성화 대식세포는 TNF, IL-1β, IL-6, IL-23 및 IL-12를 포함하는 전염증성 사이토카인 및 T 세포 및 다른 염증 세포를 조직 미세환경 내로 동원하는 CCL5, CCL22 및 CCL24와 같은 케모카인을 생산한다.

GM-CSF 수용체는 조혈촉진인자(haematopoietin) 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이다. 이는 알파 및 베타 서브유닛으로 구성된 이종이량체이다. 알파 서브유닛은 GM-CSF에 매우 특이적인 반면, 베타 서브유닛은 IL-3 및 IL-5를 포함하는 다른 사이토카인 수용체와 공유된다. 이는 베타 수용체 서브유닛의 더 넓은 조직 분포에 반영된다. 알파 서브유닛인 GM-CSFRa는 호중구, 대식세포, 호산구, 수지상 세포, 내피 세포 및 호흡기 상피 세포와 같은 비조혈 세포 및 골수 세포에서 주로 발현된다. 전장 GM-CSFRa는 유형 I 사이토카인 수용체 패밀리에 속하는 400개의 아미노산 유형 I 막 당단백질이며, 22개의 아미노산 신호 펩티드(위치 1 내지 22), 298개의 아미노산 세포외 도메인(위치 23 내지 320), 위치 321 내지 345의 막관통 도메인 및 짧은 55개의 아미노산 세포내 도메인으로 구성된다. 신호 펩티드는 절단되어 378개의 아미노산 단백질로서 GM-CSFRa의 성숙한 형태를 제공한다. 인간 및 쥣과 GM-CSFRa의 상보성 DNA(cDNA) 클론을 이용할 수 있고, 단백질 수준에서, 수용체 서브유닛은 36%의 동일성을 갖는다. GM-CSF는 a서브유닛 단독(Kd 1 내지 5 nM)에 상대적으로 낮은 친화도로 결합할 수 있지만 b서브유닛 단독에는 전혀 결합하지 않는다. 그러나, a 및 b 서브유닛 둘 모두의 존재는 고 친화도 리간드-수용체 복합체(Kd 대략 100 pM)를 초래한다. GM-CSF 신호 전달은 GM-CSFRa 사슬에 대한 초기 결합을 통해 발생한 후, 공통 b 사슬의 더 큰 서브유닛과의 가교 결합을 통해 높은 친화도 상호작용을 생성하며, 이는 JAK-STAT 경로를 인산화한다. 이러한 상호작용은 또한 티로신 인산화 및 MAP 키나아제 경로의 활성화를 통해 신호를 전달할 수 있다.

병리학적으로, GM-CSF는 염증, 호흡기 및 자가면역 질환을 악화시키는데 역할을 하는 것으로 나타났다. 따라서 GM-CSFRa에 대한 GM-CSF 결합의 중화는 GM-CSFR을 통해 매개되는 질환 및 병태를 치료하기 위한 치료적 접근법이다. 따라서, 본 발명은 인간 GM-CSF 또는 GM-CSFRa,에 결합하거나 GM-CSFRa에 대한 인간 GM-CSF의 결합을 억제하고/하거나, 수용체에 대한 GM-CSF 리간드의 결합으로 인한 신호 전달을 억제하는 결합 구성원에 관한 것이다. 리간드 결합 시, GM-CSFR은 JAK2/STAT5, MAPK 경로, 및 PI3K 경로를 포함하는 다수의 하류 신호 전달 경로의 자극을 유발하며, 이는 모두 골수 세포의 활성화 및 분화와 관련이 있다. 결합 구성원은 GM-CSFR을 통한 GM-CSF 신호 전달의 가역적 억제제일 수 있다.

GM-CSF 길항제

본 발명에 적합한 GM-CSF 길항제는 본원에 기술된 것을 포함하는 하나 이상의 GM-CSF 매개 신호 전달을 감소, 억제 또는 폐지할 수 있는 치료제를 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 따른 적절한 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 항체 또는 이의 단편, 가용성 GM-CSF 수용체 및 몇몇 예를 들어 GM-CSF 가용성 수용체-Fc 융합 단백질, 항-GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편과 같은 융합 단백질을 포함하는 이의 변이체를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.

일부 구현예에서, 적절한 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSFRa 항체이다. 예시적인 항-GM-CSFR 단클론 항체는, WO2007/110631로서 공개된 2007년 3월 27일에 출원된 국제 출원 PCT/GB2007/001108, 2010년 10월 10일에 출원된 EP 출원 제120770487호, 2007년 3월 27일 출원된 미국 출원 제11/692,008호, 2008년 9월 25일에 출원된 미국 출원 제12/294,616호, 2013년 7월 12일에 출원된 미국 출원 제13/941,409호, 2010년 11월 30일에 출원된 미국 출원 제14/753,792호, WO/2013/053767로서 공개된 2012년 10월 10일에 출원된 국제 출원 PCT/EP2012/070074, WO2015/177097로서 공개된 2015년 5월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/EP2015/060902, 2017년 5월 23일에 출원된 국제 출원 PCT/EP2017/062479에 기술된 것들을 포함하며, 이들 각각은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 일 구현예에서, 항-GM-CSFRa 단클론 항체는 마브릴리무맙이다. WO2007/110631은 높은 효능으로 GM-CSFRa의 생물학적 활성을 중화시키는 능력을 공유하는. 항-GM-CSFRa 항체 마브릴리무맙 및 이의 변이체의 단리 및 특성화를 보고한다. 이들 항체의 기능적 특성은, 적어도 부분적으로, 인간 GM-CSFRa의 226 내지 230 위치에서 Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln 모티프에 결합하여, GM-CSFRa와 이의 리간드 GM-CSF 사이의 연관성을 억제하는 것에 기인하는 것으로 여겨진다. 마브릴리무맙은 GM-CSFRa를 표적화함으로써 대식세포 활성화, 분화 및 생존을 조절하도록 설계된 인간 IgG4 단클론 항체이다. 이는 GM-CSFRa의 생물학적 활성의 강력한 중화제이며, RA 환자의 윤활 관절 내의 백혈구 상에서 GM-CSFRa를 결합시킴으로써 세포 생존 및 활성화를 감소시키는 치료 효과를 발휘하는 것으로 나타났다. 현재까지, 생체 내 사용을 위한 GM-CSFRa 항체 마브릴리무맙의 안전성 프로파일은 류마티스 관절염(RA)에 대한 제2상 임상시험에서 확립되었다.

특정 구현예에서, 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄로 구성된다. 중쇄 가변 도메인(VH)은 서열번호 1에서 식별된 아미노산 서열을 포함한다. 경쇄 가변 도메인(VL)은 서열번호 2에서 식별된 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 및 경쇄는 각각 상보성 결정 영역(CDR) 및 프레임워크 영역을 다음의 배열로 포함한다:

FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4.

마브릴리무맙 항체 중쇄는 다음의 CDR을 포함한다: 서열번호 3, 4 및 5의 아미노산 서열에 의해 각각 식별된 HCDR1, HCDR2, HCDR3. 경쇄는 다음의 CDR을 포함한다: 서열번호 6, 7 및 8의 아미노산 서열에 의해 각각 식별된 LCDR1, LCDR2, LCDR3.

항-GM-CSFRa 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEENEIVYAQRFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAIVGSFSPLTLGLWGQGTMVTVSS (서열번호 1)

항-GM-CSFRa 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSGSNIGAPYDVSWYQQLPGTAPKLLIYHNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCATVEAGLSGSVFGGGTKLTVL (서열번호 2)

항-GM-CSFRa 중쇄 가변 도메인 CDR 1(HCDR1) 아미노산 서열

ELSIH (서열번호 3)

항-GM-CSFRa 중쇄 가변 도메인 CDR 2(HCDR2) 아미노산 서열

GFDPEENEIVYAQRFQG (서열번호 4)

항-GM-CSFRa 중쇄 가변 도메인 CDR 3(HCDR3) 아미노산 서열

VGSFSPLTLGL (서열번호 5)

항-GM-CSFRa 경쇄 가변 도메인 CDR 1(LCDR1) 아미노산 서열

TGSGSNIGAPYDVS (서열번호 6)

항-GM-CSFRa 경쇄 가변 도메인 CDR 2(LCDR2) 아미노산 서열

HNNKRPS (서열번호 7)

항-GM-CSFRa 경쇄 가변 도메인 CDR 3(LCDR3) 아미노산 서열

ATVEAGLSGSV (서열번호 8)

일부 구현예에서, 암 치료를 위한 항-GM-CSFRa 항체는, 여기에 개시된 서열과 함께 그 전체가 참조로서 통합되는, 출원 WO2007/11063 및 WO2013053767에 개시된 GM-CSFa 결합 구성원으로부터 선택된, 마브릴리무맙의 변이체이다.

일부 구현예에서, 암 치료를 위한 항-GM-CSFRa 항체는, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 및 서열번호 8 중 하나 이상과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 갖는 CDR 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 항체는 서열번호 2와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 1과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 항체는, 서열번호 2와 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 1과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 갖는다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 항체는, 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 항체의 중쇄 불변 영역은, IgG1 항체에서 유래된 CH3 도메인에 융합된 IgG4 항체에서 유래된 CH1, 힌지 및 CH2 도메인을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 항체의 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 중쇄 불변 영역이거나 이로부터 유래된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 항체의 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파 경쇄 불변 영역이거나 이로부터 유래된다.

일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 억제제는 마브릴리무맙 항체의 단편이다. 일부 구현예에서, 억제제는 서열번호 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 CDR 서열 중 적어도 하나를 포함하는 단쇄 가변 단편(ScFv)을 포함한다. 일부 구현예에서, 억제제는 서열번호 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 CDR 서열 중 적어도 하나를 포함하는 융합 분자이다. 일부 구현예에서, 항-GM-CSFRa 억제제 서열은 서열번호 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 CDR 서열 중 적어도 하나를 포함하는 이중특이적 항체이다.

다른 구현예에서, 적절한 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 항체이다. 예시적인 항-GM-CSF 단클론 항체는, WO2006/122797로서 공개된 2006년 5월 17일에 출원된 국제 출원 PCT/EP2006/004696, WO2017/076804로서 공개된 2016년 10월 31일에 출원된 국제 출원 PCT/EP2016/076225, 및 WO/2019/070680로서 공개된 2018년 10월 2일에 출원된 국제 출원 PCT/US2018/053933에 기술된 것들을 포함하며, 여기에 개시된 서열을 포함하여 이들 각각은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 일 구현예에서, 항-GM-CSF 단클론 항체는 오틸리맙이다. 일 구현예에서, 항-GM-CSF 단클론 항체는 나밀루맙이다. 일 구현예에서, 항-GM-CSF 단클론 항체는 렌질루맙이다. 일 구현예에서, 항-GM-CSF 단클론 항체는 김실루맙이다. 일 구현예에서, 항-GM-CSF 단클론 항체는 TJM2이다.

본 개시의 항-GM-CSFRa 또는 항-GM-CSF 항체는 다중특이적, 예를 들어, 이중특이적일 수 있다. 본 개시의 항체는 포유류(예를 들어, 인간 또는 마우스), 인간화, 키메라, 재조합, 합성으로 생산되거나 자연적으로 단리될 수 있다. 본 개시의 예시적인 항체는, 제한 없이, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4), IgM, IgA (e.g., IgA1, IgA2, 및 IgAsec), IgD, IgE, Fab, Fab', Fab'2, F(ab')2, Fd, Fv, Feb, scFv, scFv-Fc, 및 SMIP 결합 잔기를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 scFv이다. scFv는, 예를 들어, scFv가 상이한 방향으로 배향되어 항원 결합을 가능하게 하는 가요성 링커를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 항체는 세포 내부의 환원 환경에서 그의 구조 및 기능을 유지하는 세포질-안정성 scFv 또는 인트라바디일 수 있다(예를 들어, Fisher 및 DeLisa, J. Mol. Biol. 385(1): 299-311, 2009; 본원에 참조로서 통합됨). 특정 구현예에서, scFv는 당업계에 공지된 방법에 따라 IgG 또는 키메라 항원 수용체로 변환된다. 구현예에서, 항체는 변성된 단백질 표적과 천연 단백질 표적 모두에 결합한다. 구현예에서, 항체는 변성된 단백질 또는 천연 단백질에 결합한다.

인간을 포함하는 대부분의 포유류에서, 전체 항체는 이황화 결합에 의해 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 갖는다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인(CH1, CH2, 및 CH3) 및 CH1과 CH2 사이의 힌지 영역으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 더 보존된 영역으로 산재되어 있는 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 아미노-말단에서 카르복시-말단까지 다음의 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다.

항체는 모든 공지된 형태의 항체 및 항체-유사 특성을 갖는 다른 단백질 스캐폴드를 포함한다. 예를 들어, 항-GM-CSFRa 항체는 단클론 항체, 다클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 이중특이적 항체, 1가 항체, 키메라 항체, 또는 섬유넥틴 또는 안키린 반복과 같은 항체 유사 특성을 갖는 단백질 스캐폴드일 수 있다. 항체는 다음의 이소형 중 어느 하나를 가질 수 있다: IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4), IgM, IgA(예를 들어, IgA1, IgA2, 및 IgAsec), IgD, 또는 IgE.

항체 단편은 항체로부터 유래된 하나 이상의 분절을 포함할 수 있다. 항체로부터 유래된 분절은 특정 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유할 수 있다. 항체 단편은, 예를 들어, Fab, Fab', Fab'2, F(ab')2, Fd, Fv, Feb, scFv, 또는 SMIP일 수 있다. 항체 단편은, 예를 들어, 디아바디, 트리아바디, 아피바디, 나노바디, 앱타머, 도메인 항체, 선형 항체, 단쇄 항체, 또는 항체 단편으로부터 형성될 수 있는 다양한 다중특이적 항체 중 어느 하나일 수 있다.

항체 단편의 예는 다음을 포함한다: (i) Fab 단편: VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편: 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) Fd 단편: VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 단편; (iv) Fv 단편: 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 단편; (v) dAb 단편: VH 및 VL 도메인을 포함하는 단편; (vi) dAb 단편: VH 도메인인 단편; (vii) dAb 단편: VL 도메인인 단편; (viii) 단리된 상보성 결정 영역(CDR); 및 (ix) 하나 이상의 합성 링커에 의해 선택적으로 연결될 수 있는 2개 이상의 단리된 CDR의 조합. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH는 별도의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 재조합 방법, 예를 들어, 이들이 단일 단백질로서 발현될 수 있게 하는 합성 링커를 사용하여 결합될 수 있으며, 이 중 VL 및 VH 영역은 쌍을 이루어 1가 결합 모이어티(단쇄 Fv(scFv)로 알려짐)를 형성한다. 항체 단편은 당업자에게 공지된 종래의 기술을 사용하여 수득될 수 있고, 일부 경우, 온전한 항체와 동일한 방식으로 사용될 수 있다. 항원 결합 단편은 재조합 DNA 기술에 의해 또는 온전한 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생산될 수 있다. 항체 단편은 개별적인 단편을 분리하는 추가의 C-말단 아미노산, N-말단 아미노산, 또는 아미노산의 첨가와 함께 전술한 임의의 항체 단편을 추가로 포함할 수 있다.

항체가 제1 종으로부터 유래된 하나 이상의 항원 결정 영역 또는 불변 영역 및 제2 종으로부터 유래된 하나 이상의 항원 결정 영역 또는 불변 영역을 포함하는 경우, 항체는 키메라로서 지칭될 수 있다. 키메라 항체는, 예를 들어, 유전자 조작에 의해 작제될 수 있다. 키메라 항체는 상이한 종(예를 들어, 마우스 및 인간 유래)에 속하는 면역글로불린 유전자 분절을 포함할 수 있다.

항체는 인간 항체일 수 있다. 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 모두가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 결합 모이어티를 지칭한다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열에서 식별되지 않은 아미노산 잔기, 예컨대 돌연변이와 같은 하나 이상의 서열 변이를 포함할 수 있다. 변형 또는 추가 아미노산은, 예를 들어, 인간 조작에 의해 도입될 수 있다. 본 개시의 인간 항체는 키메라가 아니다.

항체는 인간화될 수 있는데, 이는 비인간 면역글로불린 또는 항체로부터 실질적으로 유래된 하나 이상의 항원 결정 영역(예를 들어, 적어도 하나의 CDR)을 포함하는 항체가 인간 면역글로불린 또는 항체로부터 실질적으로 유래된 적어도 하나의 면역글로불린 도메인을 포함하도록 조작된다는 것을 의미한다. 항체는, 예를 들어, 제1 벡터에 의해 암호화된 비인간 항체로부터의 항원 인식 서열을 제2 벡터에 의해 암호화된 인간 프레임워크 내에 삽입함으로써, 본원에 기술된 변환 방법을 사용하여 인간화될 수 있다. 예를 들어, 제1 벡터는 비인간 항체(또는 이의 단편) 및 부위 특이적 재조합 모티프를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있는 반면, 제2 벡터는 인간 프레임워크를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 및 제1 벡터 상의 부위 특이적 재조합 모티프에 상보적인 부위 특이적 재조합을 포함할 수 있다. 부위 특이적 재조합 모티프는, 재조합 이벤트가 비인간 항체로부터의 하나 이상의 항원 결정 영역을 인간 프레임워크 내로 삽입함으로써 인간화 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 형성하도록 각 벡터 상에 위치할 수 있다.

특정 구현예에서, 항체는 scFv로부터 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)로 변환된다. 당업계에는 scFv 단편을 IgG로 변환하는 다양한 방법이 있다. scFv 단편을 IgG로 변환하는 이러한 방법 중 하나는 미국 특허 출원 공개 제20160362476호에 개시되어 있으며, 그 내용은 본원에 참조로서 통합된다.

병용 요법

면역 관문 억제제(ICI)

일부 구현예에서, 본 발명에 따른 암을 치료하는 방법은 GM-CSF 길항제를 ICI와 조합하여 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구현예에서, ICI는 생물학적 치료제 또는 소분자이다. 일부 구현예에서, ICI는 단클론 항체, 인간화 항체, 완전한 인간 항체, 융합 단백질 또는 이들의 조합이다.

일부 구현예에서, ICI는 CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM-3, GAL-9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, B-7 패밀리 리간드 또는 이들의 조합일 수 있는 관문 단백질을 억제한다. 일부 구현예에서, ICI는 CTLA-4, PD-L1, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM-3, GAL-9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, B-7 패밀리 리간드 또는 이들의 조합일 수 있는 관문 단백질의 리간드와 상호작용한다.

일부 구현예에서, ICI는 항-CTLA-4 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-PD-L2 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-PD-1 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-B7-H3 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-B7-H4 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-BTLA 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-HVEM 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-TIM-3 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-GAL-9 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-LAG-3 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-VISTA 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-KIR 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-2B4 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-CD160 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-CGEN-15049 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-CHK1 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-CHK2 항체이다. 일부 구현예에서, ICI는 항-A2aR 항체이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 항-B-7 항체이다.

일부 구현예에서, PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 일부 구현예에서, PD-1 항체는 니볼루맙이다. 일부 구현예에서, PD-1 항체는 세미플리맙이다. 일부 구현예에서, PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다. 일부 구현예에서, PD-L1 항체는 아벨루맙이다. 일부 구현예에서, PD-L1 항체는 두발루맙이다. 일부 구현예에서, CTLA-4 항체는 이필리무맙이다.

추가 치료제

일부 구현예에서, 본 발명에 따른 암을 치료하는 방법은 GM-CSF 길항제를 추가 치료제와 조합하여 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 추가 제제는 화학요법 및/또는 방사선 요법을 포함하는 암 요법이다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 재조합 단백질 또는 단클론 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 재조합 단백질 또는 단클론 항체는, 에타라시주맙(Abegrin), 타카투주맙 테트라크세탄, 베바시주맙(Avastin), 라베투주맙, 세툭시맙(Erbitux), 오비누투주맙(Gazyva), 트라스투주맙(Herceptin), 클리바투주맙, 트라스트주맙 엠탄신(Kadcyla), 라무시루맙, 리툭시맙(MabThera, Rituxan), 겜투주맙 오조가마이신(Mylotarg), 페르투주맙(Omnitarg), 지렌툭시맙(Rencarex), 또는 니모투주맙(Theracim, Theraloc)을 포함한다.

특정 구현예에서, GM-CSF 길항제는 전술한 관문 억제제 섹션에 기술된 바와 같은 체크포인트 억제제를 표적화하는 면역조절제를 포함한다. 특정 구현예에서, 면역조절제는 니볼루맙, 이필리무맙, 아테졸리주맙, 또는 펨브롤리주맙을 포함한다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 화학요법제이다. 특정 구현예에서, 화학요법제는, 알킬화제(예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부설판, 멜파란, 메클로레타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소우레아, 또는 테모졸로마이드), 안트라시클린(예를 들어, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 교란제(예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 탈아세틸화효소 억제제(예를 들어, 보리노스타트 또는 로미뎁신), 국소이성화효소 억제제(예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나아제 억제제(예를 들어, 보르테조밉, 엘로티닙, 게피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구체 유사체(예를 들어, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제(예를 들어, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금계 제제(예를 들어, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카보플라틴), 또는 식물 알칼로이드(예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀)이다. 일부 구현예에서, 화학요법제는 뉴클레오시드 유사체이다. 일부 구현예에서, 화학요법제는 젬시타빈이다. 특정 구현예에서, 추가 치료제는 방사선 요법이다.

암의 치료

본 발명은 다양한 암, 예를 들 면역 관문 억제(ICI) 불응성 또는 내성 암, 또는 후기 단계 또는 전이성 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 암은, 비뇨생식기암(예를 들어, 전립선암, 신세포암, 방광암), 부인과암(예를 들어, 난소암, 자궁경부암, 자궁내막암), 폐암, 위장관암(예를 들어, 비전이성 또는 전이성 대장암, 췌장암, 위암, 식도암, 간세포암, 담관세포암), 두경부암(예를 들어, 두경부 편평세포암), 악성 신경교종 및 뇌 전이를 포함하는 뇌암, 악성 중피종, 비전이성 또는 전이성 유방암(예를 들어, 호르몬 불응성 전이성 유방암), 악성 흑색종, 메르켈(Merkel) 세포 암종 또는 뼈 및 연조직 육종, 및 다발성 골수종, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병(CMML), 소아 골수성 백혈병(JMML), 골수 형성 이상 증후군 및 급성 림프모구성 백혈병과 같은 혈액 종양을 포함하는 임의의 고형 종양 또는 액상 암이다. 일부 구현예에서, 질환은 비소세포폐암(NSCLC), 유방암(예를 들어, IV기 유방암, 호르몬 불응성 전이성 유방암), 두경부암(예를 들어, 두경부 편평세포암), 전이성 대장암, 호르몬 민감성 또는 호르몬 불응성 전립선암, 결장직장암(예를 들어, IV기 결장직장암), 난소암, 간세포암, 신장세포암, 연조직 육종, 또는 소세포 폐암이다.

본원에서 사용되는 용어 "암"은 시험관 내(예를 들어, 형질전환된 세포) 또는 생체 내 과증식성 세포 성장을 특징으로 하는 광범위한 장애 부류를 지칭한다. 본 발명의 조성물 및 방법에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 병태는, 예를 들어, 양성 또는 악성 종양, 다양한 과증식증 등을 포함하는 다양한 신생물을 포함한다. 본 발명의 화합물 및 방법은 이러한 병태에 관여하는 원하지 않는 과증식성 세포 성장의 억제 및/또는 회복을 달성할 수 있다.

암의 예는, 급성 림프구성 백혈병, 성인; 급성 림프구성 백혈병, 유년기; 급성 골수성 백혈병, 성인; 부신피질암; 부신피질암, 유년기; AIDS 관련 림프종; AIDS 관련 악성종양; 항문암; 성상세포종, 유년기 소뇌; 성상세포종, 유년기 대뇌;담관암, 간외; 방광암; 방광암, 유년기; 골암, 골육종/악성 섬유성 조직구종; 뇌간 신경교종, 유년기; 뇌종양, 성인; 뇌종양, 뇌간 신경교종, 유년기; 뇌종양, 소뇌 성상세포종, 유년기; 뇌종양, 대뇌 성상세포종/악성 신경교종, 유년기; 뇌종양, 뇌실막종, 유년기; 뇌종양, 수모세포종, 유년기; 뇌종양, 천막상 원시 신경외배엽 종양, 유년기; 뇌종양, 시각경로 및 시상하부 신경교종, 유년기; 뇌종양, 유년기(기타); 유방암; 유방암 및 임신; 유방암, 유년기; 유방암, 남성; 기관지 선종/유암종, 유년기: 유암종, 유년기; 유암종 종양, 위장; 암종, 부신피질; 암종, 섬세포; 미지의 원발성 암종; 중추신경계 림프종, 원발성;소뇌 성상세포종, 유년기; 대뇌 성상세포종/악성 신경교종, 유년기; 자궁 경부암; 소아암; 만성 림프구성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병(CMML); 소아 골수성 백혈병(JMML); 만성 골수증식성 장애; 건초의 투명 세포 육종; 대장암; 결장직장암, 유년기; 피부 T 세포 림프종; 자궁내막암; 뇌실막종, 유년기; 상피암, 난소; 식도암; 식도암, 유년기; 유잉(Ewing) 종양 계열; 두개외 생식 세포 종양, 유년기; 생식선 외 생식 세포 종양; 간외 담관암; 안암, 안내 흑색종; 안암, 망막모세포종; 담낭암; 위(위장)암; 위(위장)암, 유년기; 위장 유암종 종양; 생식 세포 종양, 두개외, 유년기;생식세포 종양, 성선외; 생식 세포 종양, 난소; 임신성 융모성 종양; 신경교종. 유년기 뇌간; 신경교종. 유년기; 시각 경로 및 시상하부; 털 세포 백혈병; 두경부암; 간세포암(간암), 성인(원발성); 간세포(간)암, 유년기(원발성); 호지킨 림프종, 성인; 호지킨 림프종, 유년기; 임신 중 호지킨 림프종; 하인두암; 시상하부 및 시각 경로 신경교종, 유년기; 안구 내 흑색종; 섬 세포 암종(내분비 췌장); 카포시 육종; 신장암; 후두암; 후두암, 유년기; 백혈병, 급성 림프모구성, 성인; 백혈병, 급성 림프모구성, 유년기; 백혈병, 급성 골수성, 성인; 백혈병, 급성 골수성, 유년기 백혈병, 만성 림프구성; 백혈병, 만성 골수성; 백혈병, 모발 세포; 입술 및 구강 충치암; 간암, 성인(원발성); 간암, 유년기(원발성); 폐암, 비소세포; 폐암, 소형 세포; 림프모구성 백혈병, 성인 급성; 림프모구성 백혈병, 유년기 급성; 림프구성 백혈병, 만성; 림프종, AIDS 관련; 림프종, 중추 신경계(일차); 림프종, 피부 T 세포; 림프종, 호지킨, 성인; 림프종, 호지킨, 유년기; 림프종, 임신 중 호지킨 림프종, 비호지킨 성인; 림프종, 비호지킨, 유년기; 림프종, 임신 중 비호지킨 림프종, 일차 중추 신경계; 거대글로불린혈증, 발덴스트롬 남성 유방암; 악성 중피종, 성인; 악성 중피종, 유년기 악성 흉선종; 속질모세포종, 유년기 흑색종; 흑색종, 안구 내; 메르켈 세포 암종; 중피종, 악성; 잠재 원발성 종양을 가진 전이성 편평 경부암; 다발 내분비샘 신생물 증후군, 유년기 다발성 골수종/혈장 세포 신생물; 균상식육종 골수이형성 증후군; 골수성 백혈병, 만성; 골수성 백혈병, 아동기 급성 골수종, 다중; 골수 증식성 장애, 만성; 비강 및 부비동암; 비인두암; 비인두암, 유년기 신경아세포종; 신경섬유종; 비호지킨 림프종, 성인; 비호지킨 림프종, 유년기 임신 중 비호지킨 림프종 비소세포 폐암; 구강암, 유년기 구강 충치 및 입술암; 구인두암; 골육종/뼈의 악성 섬유성 조직구종; 난소암, 유년기; 난소 상피암; 난소 생식 세포 종양; 난소 저 악성 전위 종양; 췌장암; 췌장암, 유년기; 췌장암, 섬 세포; 부비동암 및 비강암; 부갑상선암; 음경암; 크롬친화세포종; 송과체 및 천막상 원시 신경외배엽 종양, 유년기; 뇌하수체 종양; 혈장 세포 신생물/다발성 골수종; 흉막폐 모세포종; 임신 및 유방암 임신 및 호지킨 림프종 임신 및 비호지킨 림프종 원발성 중추 신경계 림프종; 원발성 간암, 성인; 원발성 간암, 유년기 전립선암; 직장암; 신장 세포(신장)암; 신세포암, 유년기 신장 골반 및 요관, 이행 세포 암; 망막아종; 횡문근육종, 유년기; 침샘암; 침샘암, 유년기; 육종, 유잉의 종양 계열; 육종, 카포시 육종(골육종)/뼈의 악성 섬유성 조직구종; 육종, 횡문근육종, 유년기 육종, 연조직, 성인; 육종, 연조직, 유년기; 시자리 증후군; 피부암; 피부암, 유년기; 피부암(흑색종) 피부 암종, 메르켈 세포; 소세포 폐암; 소장암; 연조직 육종, 성인; 연조직 육종, 유년기 잠재 원발성 경부암, 전이성; 위암 위암, 유년기 천막상 원시 신경외배엽 종양, 유년기; T 세포 림프종, 피부, 고환암; 흉선종, 유년기 흉선종, 악성; 갑상선암; 갑상선암, 유년기; 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암; 영양막 종양, 임신 알 수 없는 주요 사이트, 암, 유년기; 비정상적인 유년기 암 요관 및 신장 골반, 이행 세포 암; 요도암; 자궁 육종 질암; 시각적 경로 및 시상하부 신경교종, 유년기; 외음부암; 발덴스트롬 거대 글로불린혈증; 및 빌름스 종양을 포함한다.

만성 골수성 백혈병(CML)은 혈액 및 골수 내 골수 세포에 영향을 미치는 반면, 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML) 및 소아 골수단핵구성 백혈병(JMML)은 감염과 싸우는 데 도움이 되는 단핵구라는 특정 골수 세포에 영향을 미친다. CMML의 경우, 진단 시 평균 연령 값은 65~75세이다. 흔한 CMML 증상은 쇠약, 피로, 설명되지 않는 멍, 및/또는 출혈, 감염 및 간 및/또는 비장 비대를 포함한다. CMML은 이형성증, 단핵구 세포의 비정상적인 생성 및 축적, 급성 백혈병으로 전환될 위험이 높은 것을 특징으로 하는 골수 신생물이다. 일부 양태에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제의 치료적 유효 투여량을 투여하는 단계를 포함하는, 환자의 CMML을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 투여는 대조군과 비교했을 때 CMML의 하나 이상의 증상을 개선, 안정화 및 감소시킨다. 2016년 세계보건기구(WHO)의 골수성 신생물 분류에서는 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML)은 골수(BM)의 이형성 특징과 함께 지속적인(3개월 이상) 말초 혈액(PB) 단핵구증가증(백혈구 수의 ≥1 Х 10⁹/L; 단핵구 ≥백혈구 계수의 10%)이 특징인 클론 조혈 줄기 세포 장애로 정의한다. 골수이형성 증후군(MDS)과 골수증식성 신생물(MPN)의 중첩된 특징 외에도, CMML을 독특한 골수 신생물로 분류하는 것은 1982년 최초의 프랑스-미국-영국(FAB) 협력 그룹의 노력으로 거슬러 올라가며 몇 가지 변화를 거쳤다. 임상적, 형태학적 및 분자적 차이를 보여주는 새로운 증거에 따라, 2016년 WHO 분류는 CMML을 "증식성"(MPN-CMML) 및 "이형성성"(MDS-CMML) 하위 유형으로 분류할 것을 다시 한 번 권장하였는데, 이는 MPN-CMML에 대해 백혈구 수 ≥ 13 Х 10⁹/L 및 MDS-CMML에 대해 백혈구 수 <13 Х 10⁹/L에 기반한다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 CMML 환자에게 투여되며, 여기서 CMML은 MPN-CMML로 분류된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 CMML 환자에게 투여되며, 여기서 CMML은 MDS-CMML로 분류된다. 또한, PB 및 BM 아세포 %에 기초하여, CMML은 3개의 카테고리로 하위 분류될 수 있다; (a) CMML-0 (프로모세포를 포함한 2%미만의 PB 아세포 및 5% 미만의 BM 아세포), (b) CMML-1 (프로모세포를 포함한 2~4%의 PB 아세포 및 5~9%의 BM 아세포), 및 (c) CMML-2 (프로모세포를 포함한 5% 초과의 PB 아세포 및 10%~19%의 BM 아세포 및/또는 임의의 Auer 막대가 존재할 때). CMML의 사망률은 궁극적으로 다음과 같은 원인에 의해 발생한다: 1) 골수 부전; 2) 돌파성 기회 감염(환자의 대다수); 3) AML로의 전환; 및/또는 4) 혈전증/혈전. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 CMML 환자에게 투여되며, 여기서 CMML은 CMML-0으로 분류된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 CMML 환자에게 투여되며, 여기서 CMML은 CMML-1로 분류된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 CMML 환자에게 투여되며, 여기서 CMML은 CMML-2로 분류된다.

CMML은 흔히 급성 골수성 백혈병(AML)으로 진행한다. 15% 내지 30%의 환자가 AML로 진행되며, 이 때, 조혈모세포 이식(HCT)을 받지 않으면 생존율이 4.7개월, 조혈모세포 이식을 받으면 14.3개월로 떨어진다. 생존에 대해 알려진 한 가지 예후 인자는 CMML 아형이다. 이형성 및 증식성 아형은 환자에게 매우 다르게 영향을 미친다: 이형성 아형을 가진 환자는 혈구수가 적고, 골수 부전과 관련된 자연 경과 및 임상 문제는 MDS 환자와 더 유사하다; 증식성 아형을 가진 환자는 혈구수가 높고, 종종 체질 증상 또는 기관비대와 관련된 증상을 갖는다. 또한, 증식성 형태의 질환을 가진 환자는 생존 기간이 더 짧으며 AML로의 전환 위험이 더 높다. 일부 구현예에서, CMML 환자에 대한 GM-CSF 길항제의 투여는 AML로의 전환까지의 시간을 감소시키거나 AML로의 전환을 방지한다.

JMML은 6세 미만의 영아 및 소아에서 가장 흔히 진단된다. 흔한 JMML 증상은 창백, 발달 지연, 식욕 감퇴, 과민성, 복부 비대, 마른 기침, 발진, 간 비대, 및/또는 비장 비대 및 림프절 비대를 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제의 치료적 유효 투여량을 투여하는 단계를 포함하는, 환자의 JMML을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 투여는 대조군과 비교했을 때 JMML의 하나 이상의 증상을 개선, 안정화시켜 감소시킨다. 일부 구현예에서, JMML 환자에게 GM-CSF 길항제의 투여는 AML로의 전환 시간을 감소시키거나 AML로의 전환을 방지한다.

약학적 조성물 및 투여

본 발명의 항체 또는 제제(본원에서 "활성 화합물"로도 지칭됨), 및 이의 유도체, 단편, 유사체 및 상동체는 투여에 적합한 약학적 조성물에 혼입될 수 있다. 이러한 조성물은 통상적으로 항체 또는 제제 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 약학적 투여와 양립 가능한 임의의 그리고 모든 용매, 분산 배지, 코팅제, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함하도록 의도된다. 적절한 담체는, 참조로서 본원에 통합되는, 본 분야의 표준 참조 텍스트인 Remington's Pharmaceutical Sciences의 가장 최신 판에 기술되어 있다. 이러한 담체 또는 희석제의 바람직한 예는 물, 식염수, 링거 용액, 덱스트로오스 용액, 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 고정유와 같은 리포좀 및 비수성 비히클이 사용될 수도 있다. 약학적 활성 물질에 대한 이러한 매체 및 제제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 종래의 매체 또는 제제가 활성 화합물과 호환되지 않는 경우를 제외하고, 조성물에서의 이의 사용이 고려된다. 보충 활성 화합물 또한 조성물에 혼입될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 의도된 투여 경로와 호환되도록 제형화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들어, 정맥내, 피내, 피하, 경구(예를 들어, 흡입), 경피(즉, 국소), 점막 통과, 및 직장 투여를 포함한다. 비경구에 사용되는 용액 또는 현탁액, 피내, 또는 피하 적용은 다음의 성분을 포함할 수 있다: 주사용수, 식염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용제와 같은 멸균 희석제; 벤질알코올, 메틸파라벤 등의 항균제; 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨과 같은 항산화제; 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)과 같은 킬레이트제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충제, 및 염화나트륨 또는 덱스트로스와 같은 장성 조절제. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨으로 조절될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 만들어진 앰플, 일회용 주사기 또는 다회 투여 바이알에 봉입될 수 있다.

주사 용도에 적합한 약학적 조성물은 멸균 수용액(가용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여의 경우, 적합한 담체는 생리식염수, 정균수, Cremophor EL™(BASF, Parsippany, N.J.) 또는 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적절한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산액 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우, 등장성 제제, 예를 들어, 설탕, 마니톨, 소르비톨, 염화나트륨과 같은 폴리알코올을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사 가능한 조성물의 장시간 흡수는, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 제제를 조성물에 포함시킴으로써 이루어질 수 있다.

멸균 주사 용액은, 필요에 따라, 위에서 열거된 성분 중 하나 또는 조합을 갖는 적절한 용매에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입한 후, 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산액 매질 및 위에 열거된 것들로부터 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은 활성 성분의 분말과 이전에 멸균 여과된 용액으로부터 임의의 원하는 추가 성분을 생성하는 진공 건조 및 동결건조이다.

경구 조성물은 대체로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 이들은 젤라틴 캡슐로 포장되거나 정제로 압축될 수 있다. 경구 치료제 투여의 목적을 위해, 활성 화합물은 부형제와 혼입될 수 있고, 정제, 트로슈 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 구강 조성물은 또한 구강청결제로서 사용하기 위한 유체 담체를 사용하여 제조될 수 있으며, 여기에서 유체 담체 내의 화합물은 경구 사용되고 헹구고 뱉어내거나 삼켜진다. 약학적으로 적합한 결합제 및/또는 보조제 물질이 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로슈 등은 다음의 성분 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다: 미정질 셀룰로오스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 유당과 같은 부형제, 알긴산, 프리모겔 또는 옥수수 전분과 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테스와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화규소와 같은 활택제; 자당 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향료와 같은 향미제.

흡입에 의한 투여의 경우, 화합물은 적절한 추진제, 예를 들어, 이산화탄소와 같은 가스, 또는 분무기를 함유하는 가압 용기 또는 디스펜서로부터의 에어로졸 분무의 형태로 전달된다.

전신 투여는 또한 점막 또는 경피 수단에 의한 것일 수 있다. 경점막 또는 경피 투여의 경우, 투과하고자 하는 장벽에 적합한 침투제가 제형에 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 경점막 투여, 세제, 담즙염, 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강 분무제 또는 좌제의 사용을 통해 달성될 수 있다. 경피 투여의 경우, 활성 화합물은 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이 연고, 고약, 겔 또는 크림으로 제형화된다.

화합물은 또한 좌제(예를 들어, 코코아 버터 및 다른 글리세리드와 같은 종래의 좌제 염기를 가짐) 또는 직장 전달을 위한 유지 관장제의 형태로 제조될 수 있다.

일 구현예에서, 활성 화합물은, 이식물 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는, 방출 제어 제형과 같은, 신체로부터 화합물을 신속하게 제거하지 않도록 보호할 담체와 함께 제조된다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체가 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 명백할 것이다. 물질은 또한 Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 리포좀 현탁액(바이러스 항원에 대한 단클론 항체를 갖는 감염된 세포에 표적화된 리포좀 포함) 또한 약학적으로 허용 가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은, 예를 들어, 미국 특허 제4,522,811호에 기술된 바와 같이, 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다.

투여 용이성 및 투여량 균일성을 위해, 경구 또는 비경구 조성물을 투여량 단위로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같은 투여량 단위 형태는 치료될 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 요구되는 약학적 담체와 연관하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 사양은 달성하고자 하는 활성 화합물의 고유한 특성 및 특정 치료 효과, 및 개체의 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 화합하는 기술에 내재된 한계에 의해 직접적으로 좌우된다.

약학적 조성물은 투여 지침과 함께 용기, 팩 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제의 치료적 유효 투여량은 약 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 125 mg, 130 mg, 135 mg, 140 mg, 145 mg, 150 mg, 155 mg, 160 mg, 165 mg, 170 mg, 175 mg, 180 mg, 185 mg, 190 mg, 195 mg, 200 mg, 205 mg, 210 mg, 215 mg, 220 mg, 225 mg, 230 mg, 235 mg, 240 mg, 245 mg, 250 mg 이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 70 mg, 275 mg, 280 mg, 285 mg, 290 mg, 295 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 375 mg, 400 mg, 425 mg, 450 mg, 475 mg, 500 mg, 550 mg, 650 mg, 625 mg, 650 mg, 675 mg, 700 mg, 725 mg, 750mg, 800 mg 이다.

일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 225 mg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 375 mg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 450 mg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 750 mg이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제의 치료적 유효 투여량은 0.1 mg/kg 내지 15 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 2 mg/kg 내지 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 3 mg/kg 내지 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 5 mg/kg 내지 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 6 mg/kg 내지 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 1 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 2 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 3 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 4 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 5 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 6 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 7 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 8 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 9 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 10 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 11 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 12 mg/kg이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효 투여량은 약 15 mg/kg이다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 특정 투여 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 투여 간격은 매주 1회이다.

일부 구현예에서, 투여 간격은 적어도 5일이다.

일부 구현예에서, 투여 간격은 2주마다 1회이다.

일부 구현예에서, 투여 간격은 3주마다 1회이다.

일부 구현예에서, 투여 간격은 4주마다 1회이다.

일부 구현예에서, 투여 간격은 5주마다 1회이다.

특정 구현예에서, GM-CSF 길항제는 정맥내 투여로 투여된다.

일부 구현예에서, GM-CSF 길항제는 초기 부하 투여량으로 투여된 후 적어도 하나의 유지 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 유지 투여량은 초기 로딩 투여량보다 낮다. 일부 구현예에서, 유지 투여량은 초기 로딩 투여량보다 높다. 일부 구현예에서, 유지 투여량은 초기 로딩 투여량보다 낮다.

실시예

본 발명은 본 명세서에 첨부된 도면으로 추가로 예시되지만, 이에 한정되지는 않는다. 본 발명의 특정 화합물, 조성물 및 방법들은 특정 구현예에 따라 특이성을 갖는 것으로 기술되었으나, 다음의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것만을 제공하며, 이를 한정하려는 것은 아니다.

실시예 1. 항-GM-CSFRα 항체는 T 세포 증식을 구제함

본 실시예의 연구는 T 세포 증식에 대한 골수 모집단의 억제 가능성이 GM-CSF 길항제에 의해 구제될 수 있음을 나타낸다.

항-GM-CSFRα 항체의 치료 유무와 상관없이 CD14+ 세포를 사용하여 T 세포 증식 분석을 수행하였다. 요약하여, 당업계에 공지된 방법에 따라 췌장암 환자로부터 수득된 혈액 샘플(PBMC)로부터 CD14+(MDSC) 세포를 단리하였다. 단리된 CD14+ 세포를 100 μg/mL의 항-GM-CSFRα 항체로 48시간 동안 치료하였다. 다음으로, 카르복시-플루오레세인 디아세테이트 숙신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지된 CD3+ T 세포를 항-GM-CSFRα 항체로 치료하거나 치료하지 않은 CD14+ 세포와 96시간 동안 공동 배양하고, CFSE 희석(분할된 세포)으로 증식을 결정하였다. 공동 배양하지 않은 T 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다.

도 1에 도시된 바와 같이, T 세포 증식은 미치료 CD14+ 세포로 배양한 후 유의하게 억제된다. 한편, 항-GM-CSFRα 항체로 치료한 CD14+ 세포는 T 세포 증식을 증가시켰으며, 이는 항-GM-CSFRα 항체의 추가는 T 세포 증식이 구제하고 MDSC의 억제 가능성을 예방함을 시사한다.

실시예 2. 암 세포 조건화된 배지는 단핵구를 표현형 MDSC로 분극화함

본 연구에서, CD+14 단핵구가 GM-CSF 발현 암 세포 유래의 조건화된 배지와 함께 배양될 때의 표현형 MDSC(HLA-DR^낮음)의 증가를 다양한 암 세포주를 사용하여 예시하였다.

GM-CSF의 발현에 대해 암 세포주를 분석하였다. 이러한 특정 연구에서, 2개의 결장직장 암종(HCT116 및 SW-480), 2개의 췌장 암종(Panc-1 및 Capan-1), 자궁경부 선암종(HeLa), 및 악성 흑색종(A375) 세포주를 GM-CSF 발현에 대해 측정하였다. 시험된 세포주 중에서, SW-480, CAPAN-1, HCT116, PANC-1은 KRAS 돌연변이를 가지고 A375는 RAF 돌연변이를 가지며, HeLa는 RAS/RAF 야생형이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 암 세포주는 GM-CSF를 상이한 수준으로 발현한다. 특히, KRAS 돌연변이 암 세포주인 SW480 및 Capan-1은 상대적으로 높은 GM-CSF의 발현을 갖는 반면, KRAS 돌연변이가 없는 HeLa 세포는 상대적으로 낮은 GM-CSF의 발현을 갖는다.

종양 조건화 배지(CM)를 생성하기 위해, 세포주를 플레이팅하고 당업계에 공지된 방법에 따라 배양하였다. 이어서, CD14+ 세포를 CM의 존재 하에 6일 동안 배양하고 유전자 및 단백질 발현에 대해 분석하였다. 낮은 수준의 HLA-DR 바이오마커는 MDSC 표현형을 나타낸다. 도 3은 정상 배양 배지에서 성장시킨 CD+14 세포와 비교하여, GM-CSF-발현 암 세포의 조건화된 배지로 CD14+ 단핵구를 배양했을 때의 표현형 MDSC의 증가를 나타낸다. 결과는 높은 GM-CSF 발현을 갖는 암 세포주로부터의 CM이 MDSC의 높은 유도를 가짐을 보여주며, 이는 GM-CSF가 단핵구의 표현형 MDSC로의 분극화에 기여함을 시사한다.

실시예 3. 항-GM-CSFRα 항체는 MDSC에서 PD-L1 상향조절을 차단함

본 실시예의 연구는 GM-CSF가 표현형 MDSC 상에서 PD-L1의 발현을 유도한다는 본 발명자에 의한 놀라운 발견을 예시한다. 특히, GM-CSF 길항제를 사용하는 치료는 GM-CSF 발현 암 세포주로부터 조건화된 배지(CM)로 치료한 단핵구 상에서 PD-L1의 발현을 억제하기에 충분하다.

면역 관문 차단 항체의 주요 과제 중 하나는 제한된 T 세포 반응 또는 면역학적으로 "비반응성(cold)" 종양을 갖는 악성 종양에 있다. 이러한 비반응성 종양은 침윤성 T 세포를 거의 함유하지 않으며 인식되지 않고, 면역계에 의한 강력한 반응을 유발하지 않으며, 현재의 면역요법으로 치료하기 어렵다. 본 발명자는 놀랍게도 GM-CSF가 면역억제 활성에 기여하는 MDSC의 표면 상의 관문 단백질인 PD-L1을 상향조절한다는 것을 발견하였다. 본 실시예의 연구는 항-GM-CSFRα 항체가 "비반응성" 종양을 "반응성" 종양으로 전환하는데 사용될 수 있으며, 이는 면역요법의 효과 및 민감도를 증가시킬 가능성이 있음을 나타낸다.

본 연구에서, CD14+ 단핵구가 GM-CSF 발현 암 세포 유래의 조건화된 배지와 함께 배양될 때의 MDSC 상의 PD-L1 발현 수준의 변화를 다양한 암 세포주를 사용하여 평가하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, GM-CSF 발현 암 세포주로부터의 조건화된 배지를 CD14+ 단핵구에 첨가하는 단계는 베이스라인(배양 배지)과 비교하여 PD-L1 발현 수준을 증가시켰다. 낮은 수준의 GM-CSF 발현을 나타낸 HeLa 세포주(도 2 참조)는 PD-L1 발현을 상향조절하지 않았다. CM과 조합된 재조합 GM-CSF(CM+GM-CSF)를 첨가하는 단계는 PD-L1의 발현을 증가시켰으며, 이는 GM-CSF가 표현형 MDSC 상의 PD-L1의 발현을 유도함을 나타낸다. PD-L1의 스파이크는 CM 단독의 낮은 기준선 PD-L1 발현을 갖는 세포주(예를 들어, Panc-1 및 HeLa 세포)에서 더 두드러졌다. 항-GM-CSFRα 항체가 PD-L1 발현에 미치는 효과 또한 조사하였다. 재조합 GM-CSF의 부재 또는 존재(각각 CM+Ab 및 CM+GM-CSF+Ab) 하에, CM에서 항-GM-CSFRα 항체로 MDSC를 치료한 결과, CM 단독 또는 CM + GM-CSF와 각각 비교하여 PD-L1 수준이 현저하게 감소하였다. 이들 데이터는 항-GM-CSFRα 항체가 GM-CSF 발현 암 세포주로부터 조건화된 배지로 치료한 CD14+ 단핵구(MDSC)에서 PD-L1 상향조절을 억제한다는 것을 나타내다.

실시예 4. 항-GM-CSFRα 항체는 MDSC에서 PD-L1 발현을 억제함

본 실시예의 연구는, GM-CSF 길항제가 MDSC 상의 PD-L1 수치가 이미 증가되었을 때 CM 치료와 동시에 또는 후에 추가되는지의 여부에 상관없이, GM-CSF 길항제가 GM-CSF 발현 암 세포주(CM)로부터의 조건화된 배지로 처리한 MDSC 상에서의 PD-L1 발현을 억제할 수 있음을 나타낸다.

도 5a에 나타낸 바와 같이, GM-CSF(10 ng/mL) 및 항-GM-CSFα 항체(100 μg/mL)가 있거나 없는 GM-CSF 암 세포주(CM)로부터의 조건화된 배지를 (표 1에 나타낸 바와 같이) CD14+ 단핵구(MDSC)에 1일차에 첨가하였다. 배양 3일 후, MDSC 세포를 PD-L1의 발현에 대해 분석하였다.

시료	내용물
A	대조군(배양 배지)
B	CM
C	CM + 항-GM-CSFRα 항체
D	CM + GM-CSF
E	CM + GM-CSF + 항-GM-CSFRα 항체

실시예 3과 일관되게, GM-CSF를 발현하는 암 세포주로부터의 조건화된 배지를 MDSC(B; CM) 또는 재조합 GM-CSF를 갖는 CM(D; CM+GM-CSF)에 첨가하는 단계는 베이스라인(A; 배양 배지)과 비교하여 PD-L1 발현 수준을 증가시켰다. 또한, 항-GM-CSFRα 항체가 도 5a의 시료 C 및 E에 도시된 바와 같이, CM 또는 CM+GM-CSF와 각각 동시에 첨가되었을 때. PD-L1의 감소가 각각 관찰되었으며, 이는 항-GM-CSFRα 항체가 MDSC 상에서 PD-L1의 상향조절을 차단함을 시사한다.

다음으로, MDSC 상에서의 PD-L1의 상승된 수준이 이미 설정되었을 때의 PD-L1 발현 수준에 대한 GM-CSF 차단의 효과를 조사하기 위해 MDSC를 조건화된 배지와 함께 배양한 후 항-GM-CSFRα 항체를 첨가하는 단계의 효과를 조사하였다. 이 특정 설정에서, MDSC를 재조합 GM-CSF가 부재하거나 존재하는 조건화된 배지에서 48시간 동안 배양하였다(도 5b의 시료 B 내지 E). 이어서, 항-GM-CSFRα 항체를 도 5b의 시료 C 및 E에 3일차(48시간 후)에 첨가하였다. 시료 A의 MDSC를 배양 배지에서 3일 동안 대조군으로서 배양하였다. MDSC의 표현형 분석을 4일차에 수행하였다. 도 5b에 나타낸 바와 같이, GM-CSF 발현 암 세포주로부터의 조건화된 배지로 MDSC를 배양한 후의 항-GM-CSFRα 항체로 MDSC를 치료한 결과(시료 C 및 E), MDSC 상에서의 PD-L1의 발현 수준이 억제되었다. 특히, 항-GM-CSFRα 항체로 단 24시간 치료 후, 시료 C 및 E에서의 PD-L1 발현은 시료 B 및 D와 비교하여 각각 감소하였다.

실시예 5. 항-GM-CSFRα 항체는 MDSC 매개 T 세포 억제를 감소시킴

본 실시예의 연구는 T 세포 증식에 대한 골수 모집단의 억제 가능성이 GM-CSF 길항제에 의해 억제될 수 있음을 추가로 나타낸다.

이러한 특정 실험에서, GM-CSF 발현 암 세포주로부터의 조건화된 배지로 치료한 단핵구를 T 세포 증식 분석에 사용하였다. 요약하여, 단핵구를 GM-CSF 발현 암 세포주(CM)로부터 조건화된 배지에서 3일 동안 배양하였다(CM-처리된 단핵구). CFSE로 표지하고 IMDM 세포 배양 배지에서 IL-2 및 가용성 CD3/CD28 T 세포 활성화제로 자극하여 CD8+T 세포(1x10⁵ 세포)를 제조하였다. 3일째에, 도 6a에 도시된 바와 같이, 자극된 T 세포는 혼합 림프구 반응(MLR)에서 항-GM-CSFRα 항체(100 μg/mL)를 포함하거나 포함하지 않는 CM-처리된 단핵구(단핵구:T 세포의 비율 2:1)와 함께 공동 배양되었다. T 세포를 5일 동안 증식시키고, 유세포 계측법에 의해 헬퍼 T 세포 및 세포독성 T 세포에 대한 마커인 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서의 CFSE 희석으로 의해 세포 증식을 평가하였다. 도 6a는 항-GM-CSFRα 항체가 CD14+ 단핵구를 기능적 MDSC로 분극화하는 GM-CSF의 능력을 방해하고, 시험관 내 증식 분석에서 MDSC 매개 T 세포 억제를 구제하였음을 보여준다. 반면, GM-CSF를 발현하지 않는 KRAS 야생형 자궁경부암 세포주(HeLa)의 조건부 배지는 기능적 MDSC를 유도하지 않는다.

혼합 림프구 반응은 전술한 바와 같이 췌장암(CAPAN-1) 조건화 배지를 사용하여 수행하였다. 도 6b는 세포 증식 %로서의 T 세포 증식 분석의 결과(좌측 패널) 및 유세포 계측법에 의한 최대 %(MFI)(CD4+ 또는 CD8+ 세포에서 CFSE 희석의 신호 검출)로서의 결과(우측 패널)를 나타낸다. 도 6b에 나타낸 바와 같이, CM으로 치료한 단핵구는 대조군과 비교했을 때 T 세포 증식을 억제하였고 재조합 GM-CSF의 첨가는 T 세포 증식을 더욱 억제하였다. 항-GM-CSFRα 항체(Ab)를 사용한 치료는 MDSC 매개 T 세포 억제를 감소시켰다.

다음으로, 결장직장암(SW-480) 조건화 배지를 사용하여 전술한 바와 같이 혼합 림프구 반응(n=2)을 수행하였다. 이 특정 실험에서, 0일차에 항-GM-CSFRα 항체를 편광 MDSC에 첨가하고, 3일차에 anti-PD-L1 항체(20 μg/mL)를 MLR에 첨가하였다. 도 6C는 시험관 내에서 생성된 기능적 MDSC에 대한 PD-L1 차단이 T 세포 증식을 억제하는 이들의 능력을 차단함을 보여준다. 특히, 항-GM-CSFRα는 적어도 항-PD-L1 항체만큼 MDSC 에서 PD-L1을 차단하고 기능성 MDSC의 억제 기능을 역전시키는 데 효과적이었다. 이러한 데이터는 또한 CD14+ 단핵구의 MDSC로의 GM-CSF-의존성 분극과 관련된 PD-L1 발현이 항종양 면역 반응을 억제하는 데 있어서 기능적으로 유의미함을 시사한다.

실시예 6. KRAS 돌연변이 암 세포 조건화된 배지는 단핵구를 표현형 MDSC로 분극화함

본 연구는 GM-CSF를 발현하는 KRAS-돌연변이 암 세포로부터 조건화된 배지로 배양된 인간 단핵구가 표현형 MDSC로 분극화된다는 것을 보여준다.

KRAS-돌연변이 종양 조건화 배지(CM)를 생성하기 위해, 세포주를 플레이팅하고 당업계에 공지된 방법에 따라 배양하였다. CD14+ 단핵구를 기본 배지 또는 KRAS-돌연변이 암 세포 조건화된 배지와 함께 3일 동안 배양한 다음, 도 7a에 도시된 바와 같이 유세포 계측법에 의해 표현형 분석(HLA-DR, CD11b, 및 PD-L1)을 수행하였다. 낮은 수준의 HLA-DR 바이오마커는 MDSC 표현형을 나타낸다. 도 7b의 대표적인 히스토그램 오버레이는 HLA-DR의 발현 감소 및 CD11b 및 PD-L1의 발현 증가를 보여준다. 유사하게, 기하 평균 형광 강도(gMFI)로서 표시된 상대 발현은, 기본 배지에서 배양된 CD+14 세포와 비교하여, CD14+ 단핵구를 KRAS-돌연변이 암 세포의 조건화된 배지로 배양했을 때, HLA-DR 발현의 감소 및 CD11b 및 PD-L1 발현의 증가를 보여준다(도 7c). 결과는, GM-CSF를 발현하는 KRAS-돌연변이 암세포의 조건화된 배지로 배양된 인간 단핵구는 도시된 바와 같이 HLA-DR의 발현이 감소하고 CD11b 및 PD-L1의 발현이 증가하여 표현형 MDSC로 분극화된다는 것을 보여준다.

실시예 7. 항-GM-CSFRα 항체는 시험관 내에서 단핵구의 분극과 관련된 PD-L1 발현을 표현형 MDSC로 억제한다.

본 실시예의 연구는 GM-CSF 길항제가 KRAS-돌연변이 암 세포주로부터 조건화된 배지(CM)로 처리된 단핵구 상에서 PD-L1의 발현을 억제하기에 충분함을 보여준다. 특히, 저용량의 GM-CSF 길항제(예: 0.1 μg/mL)로 이러한 효과를 달성하기에 충분하였다.

실시예 6에 나타낸 바와 같이, KRAS-돌연변이 암 세포주로부터 조건화된 배지를 CD14+ 단핵구에 첨가하는 단계는 베이스라인(기본 배지)과 비교하여 PD-L1 발현 수준을 증가시켰다. 본 연구에서, 다양한 농도에서 항-GM-CSFRα 항체가 PD-L1 발현에 미치는 영향을 조사하였다.

다양한 농도(0.1 μg/mL, 1.0 μg/mL, 10.0 μg/mL, 또는 100 μg/mL)의 항-GM-CSFRα 항체를 가진 CD14+ 단핵구에 GM-CSF(SW-480 및 CAPAN-1)를 포함하는 KRAS-돌연변이 암 세포주의 조건화된 배지 또는 GM-CSF(HeLa)가 없는 암 세포주의 조건화된 배지를 첨가하였다. 항-GM-CSFRα 항체가 없는 기본 배지 및 조건화된 배지를 대조군으로서 사용하였다. 배양 3일 후, MDSC 세포를 PD-L1의 발현에 대해 분석하였다.

도 8a는 항-GM-CSFRα 항체가 GM-CSF를 발현하는 결장직장(SW-480) 및 췌장(CAPAN-1) KRAS-돌연변이 암 세포로부터 조건화된 배지로 배양된 인간 단핵구 상에서 PD-L1 상향조절을 차단하고, 표현형 MDSC로의 분극을 억제하였음을 보여준다. 특히, 항-GM-CSFRα 항체는 0.1 μg/mL의 농도에서도 PD-L1 상향조절을 차단하였다. 저 GM-CSF-발현 인간 자궁경부암종 세포주(HeLa) 조건화된 배지는 PD-L1 발현을 갖는 표현형 MDSC를 유도하지 않는다 (도 8B).

실시예 8. GM-CSF 길항제는 생체 내에서 종양 성장을 억제한다

본 실시예의 연구는 GM-CSF 길항제가 종양 성장을 억제하고 생체 내에서 생존 이점을 제공할 수 있음을 보여준다.

췌장 암종의 병리학적 특징을 모방하는 췌장암의 마우스 모델을 확립하기 위해, Pan02 세포를 0일차에 암컷 C57BL/6 마우스에게 피하 이식하였다. 종양의 평균 부피가 100 mm³에 도달한 6일차에, 표 2에 나타낸 바와 같이 마우스를 6개의 상이한 치료군에 무작위로 배정하였다.

*생체 내* GM-CSF 항체의 효능에 대한 연구 설계
그룹	#마우스	치료	경로	일정	투여량
1	10	비히클 + 이소형 대조군	IP + IP	(QDx5,2off)(x2) + (Q3Dx2,3off)(x2)	0.2 mL/20 g + 10 mg/kg
2	10	비히클 + anti-mPD-1	IP + IP	(QDx5,2off)(x2) + (Q3Dx2,3off)(x2)	0.2 mL/20 g + 10 mg/kg
3	10	항-GM-CSFRα 항체 + 이소형 대조군	IP + IP	Q2Dx7 + (Q3Dx2,3오프)(x2)	20 mg/kg + 10 mg/kg
4	10	항-GM-CSFRα 항체 + 이소형 대조군	IP + IP	(QDx5,2off)(x2) + (Q3Dx2,3off)(x2)	20 mg/kg + 10 mg/kg
5	10	항-GM-CSFRα 항체 + anti-mPD-1	IP + IP	Q2Dx7 + (Q3Dx2,3오프)(x2)	20 mg/kg + 10 mg/kg
6	10	항-GM-CSFRα 항체 + anti-mPD-1	IP + IP	(QDx5,2off)(x2) + (Q3Dx2,3off)(x2)	20 mg/kg + 10 mg/kg

그룹 1의 마우스는 2일의 치료 휴일을 두고 주당 5일 동안 비히클(음성 대조군)을 매일 복강 내(IP) 주사하고, 2주 동안 이소형 대조군 항체를 매주 2회 IP 주사하고, 3일마다 3일의 치료 휴일을 두고 2주 동안 투여하였다. 그룹 2의 마우스는 2일의 치료 휴일을 두고 주당 5일 동안 비히클을 매일 IP 주사하고, 2주 동안 anti-mPD-1 항체를 매주 2회 IP 주사하고, 3일마다 3일의 치료 휴일을 두고 2주 동안 투여하였다. 그룹 3의 마우스는 항-GM-CSFRα 항체를 2주 동안 2일마다 IP 주사하고, 이소형 대조군 항체를 매주 2회 IP 주사하고, 3일마다 투여하고, 3일의 치료 휴일을 두었다. 그룹 4의 마우스는 항-GM-CSFRα 항체를 매일 5일 동안, 2일의 치료 휴일을 두고, 2주 동안, 항-GM-CSFRα 항체를 매일 IP 주사하고, 이소형 대조군 항체를 매주 2회, 3일마다, 3일의 치료 휴일를 두고, 2주 동안 IP 주사하였다. 그룹 5의 마우스는 항-GM-CSFRα 항체를 2주 동안 2일마다 IP 주사하고, 항anti-mPD-1 항체를 매주 2회 주사하고, 3일마다 투여하고, 3일의 치료 휴일을 두었다 그룹 6의 마우스는 항-GM-CSFRα 항체를 매일 5일 동안, 2일의 치료 휴일을 두고, 2주 동안, 항-GM-CSFRα 항체를 매일 IP 주사하고, 항-mPD1 항체를 매주 2회, 3일마다, 3일의 치료 휴일를 두고, 2주 동안 IP 주사하였다. 표 2에 도시된 바와 같이 항-GM-CSFRα 항체에 대해 20 mg/kg 투여량, 이소형 대조군 항체에 대해 10 mg/kg 투여량, 항-mPD-1 항체에 대해 10 mg/kg 및 비히클에 대해 0.2 mL/20g 투여량을 모든 처리군에 사용하였다.

종양 측정은 전체 연구 기간 동안 격일로 수행하였다. 연구의 일차 평가변수는 종양 성장 지연 및 전체 생존율이었다.

종양 성장 억제

항-GM-CSFRα 항체가 췌장 암종이 있는 마우스에서 종양 성장을 억제하는지 여부를 조사하기 위해, 치료 종료 후 3일 및 12일차에 각 마우스의 종양 부피를 측정하여 도 9a 및 도 9b에 나타내었다. 도 9a에 나타낸 바와 같이, 마우스에게 항-GM-CSFRα 항체 단독 또는 병용 치료를 했을 때 종양 성장 억제 방향적 개선이 있다(그룹 3, 4 및 5 대 그룹 1). 또한, 항-MPD-1 항체(그룹 6)와 항-GM-CSFRα 항체를 2주간 매일 5일간 투여하는 병용 요법은 대조군(그룹 1) 및 단일 제제(그룹 2, 3, 4)에 비해 통계적으로 유의한 종양 성장 억제를 초래한다. 도 9b는 또한 치료 종료 후 12일차에 종양 부피가 측정되었을 때와 동일한 추세를 보여준다.

생존 이점

항-GM-CSFRα 항체가 췌장 암종이 있는 마우스에게 생존 이점을 제공하는지 여부를 조사하기 위해, 도 10에 도시된 바와 같이 표시된 날짜에 각 마우스의 종양 부피를 측정하였다. 종양 부피가 2000 mm³초과하면, 마우스를 희생시켰다. 종양 부피가 2000 mm³ 이상에 도달하는데 걸리는 시간을 평가하고 도 10에 도시된 바와 같이 Kaplan-Meier 플롯으로 나타내었다. 종양 부피가 2000 mm³ 이상이 될때까지 걸리는 시간은 대조군 (그룹 1) 또는 항-mPD-1 항체만 투여한 그룹 2에 비해 항-GM-CSFRα 항체만 투여한 3그룹과 4그룹에서 더 길었다. 또한, 종양 부피가 2000 mm³ 이상이 되기까지 걸린 시간은 대조군(그룹 1) 또는 항-mPD-1 항체만 투여한 그룹 2에 비해 항-GM-CSFRα 항체를 2주간 5일간 매일 투여한 그룹 6이 더 길었다. 전반적으로, 데이터는 항-GM-CSFRα 항체를 단독으로 투여하거나 anti-PD1과 병용 투여하면 anti-PD1 항체만을 사용하는 대조군 또는 치료와 비교하여 생존 이점이 있음을 보여준다.

등가물

당업자는 본원에 기술된 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 등가물을, 일상적인 실험 이하로 이용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 상기 설명에 한정되는 것으로 의도되는 것이 아니라, 다음의 청구범위에 기재된 바와 같다.

SEQUENCE LISTING <110> Kiniksa Pharmaceuticals, Ltd. Kiniksa Pharmaceuticals Corp. <120> TREATMENT OF CANCERS WITH GM-CSF ANTAGONISTS <130> KPL-035BWO <150> 63/105,773 <151> 2020-10-26 <150> 63/120,319 <151> 2020-12-02 <150> 63/242,849 <151> 2021-09-10 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Glu Asn Glu Ile Val Tyr Ala Gln Arg Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Val Gly Ser Phe Ser Pro Leu Thr Leu Gly Leu Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 2 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ala Pro 20 25 30 Tyr Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr His Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Val Glu Ala Gly 85 90 95 Leu Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 3 Glu Leu Ser Ile His 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 4 Gly Phe Asp Pro Glu Glu Asn Glu Ile Val Tyr Ala Gln Arg Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 5 Val Gly Ser Phe Ser Pro Leu Thr Leu Gly Leu 1 5 10 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 6 Thr Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ala Pro Tyr Asp Val Ser 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 7 His Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 8 Ala Thr Val Glu Ala Gly Leu Ser Gly Ser Val 1 5 10 <210> 9 <211> 5430 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 ctaggcggcg gccgcggcgg cggaggcagc agcggcggcg gcagtggcgg cggcgaaggt 60 ggcggcggct cggccagtac tcccggcccc cgccatttcg gactgggagc gagcgcggcg 120 caggcactga aggcggcggc ggggccagag gctcagcggc tcccaggtgc gggagagagg 180 cctgctgaaa atgactgaat ataaacttgt ggtagttgga gctggtggcg taggcaagag 240 tgccttgacg atacagctaa ttcagaatca ttttgtggac gaatatgatc caacaataga 300 ggattcctac aggaagcaag tagtaattga tggagaaacc tgtctcttgg atattctcga 360 cacagcaggt caagaggagt acagtgcaat gagggaccag tacatgagga ctggggaggg 420 ctttctttgt gtatttgcca taaataatac taaatcattt gaagatattc accattatag 480 agaacaaatt aaaagagtta aggactctga agatgtacct atggtcctag taggaaataa 540 atgtgatttg ccttctagaa cagtagacac aaaacaggct caggacttag caagaagtta 600 tggaattcct tttattgaaa catcagcaaa gacaagacag agagtggagg atgcttttta 660 tacattggtg agagagatcc gacaatacag attgaaaaaa atcagcaaag aagaaaagac 720 tcctggctgt gtgaaaatta aaaaatgcat tataatgtaa tctgggtgtt gatgatgcct 780 tctatacatt agttcgagaa attcgaaaac ataaagaaaa gatgagcaaa gatggtaaaa 840 agaagaaaaa gaagtcaaag acaaagtgtg taattatgta aatacaattt gtactttttt 900 cttaaggcat actagtacaa gtggtaattt ttgtacatta cactaaatta ttagcatttg 960 ttttagcatt acctaatttt tttcctgctc catgcagact gttagctttt accttaaatg 1020 cttattttaa aatgacagtg gaagtttttt tttcctctaa gtgccagtat tcccagagtt 1080 ttggtttttg aactagcaat gcctgtgaaa aagaaactga atacctaaga tttctgtctt 1140 ggggcttttg gtgcatgcag ttgattactt cttatttttc ttaccaattg tgaatgttgg 1200 tgtgaaacaa attaatgaag cttttgaatc atccctattc tgtgttttat ctagtcacat 1260 aaatggatta attactaatt tcagttgaga ccttctaatt ggtttttact gaaacattga 1320 gggaacacaa atttatgggc ttcctgatga tgattcttct aggcatcatg tcctatagtt 1380 tgtcatccct gatgaatgta aagttacact gttcacaaag gttttgtctc ctttccactg 1440 ctattagtca tggtcactct ccccaaaata ttatattttt tctataaaaa gaaaaaaatg 1500 gaaaaaaatt acaaggcaat ggaaactatt ataaggccat ttccttttca cattagataa 1560 attactataa agactcctaa tagcttttcc tgttaaggca gacccagtat gaaatgggga 1620 ttattatagc aaccattttg gggctatatt tacatgctac taaattttta taataattga 1680 aaagatttta acaagtataa aaaattctca taggaattaa atgtagtctc cctgtgtcag 1740 actgctcttt catagtataa ctttaaatct tttcttcaac ttgagtcttt gaagatagtt 1800 ttaattctgc ttgtgacatt aaaagattat ttgggccagt tatagcttat taggtgttga 1860 agagaccaag gttgcaaggc caggccctgt gtgaaccttt gagctttcat agagagtttc 1920 acagcatgga ctgtgtcccc acggtcatcc agtgttgtca tgcattggtt agtcaaaatg 1980 gggagggact agggcagttt ggatagctca acaagataca atctcactct gtggtggtcc 2040 tgctgacaaa tcaagagcat tgcttttgtt tcttaagaaa acaaactctt ttttaaaaat 2100 tacttttaaa tattaactca aaagttgaga ttttggggtg gtggtgtgcc aagacattaa 2160 tttttttttt aaacaatgaa gtgaaaaagt tttacaatct ctaggtttgg ctagttctct 2220 taacactggt taaattaaca ttgcataaac acttttcaag tctgatccat atttaataat 2280 gctttaaaat aaaaataaaa acaatccttt tgataaattt aaaatgttac ttattttaaa 2340 ataaatgaag tgagatggca tggtgaggtg aaagtatcac tggactagga agaaggtgac 2400 ttaggttcta gataggtgtc ttttaggact ctgattttga ggacatcact tactatccat 2460 ttcttcatgt taaaagaagt catctcaaac tcttagtttt ttttttttac aactatgtaa 2520 tttatattcc atttacataa ggatacactt atttgtcaag ctcagcacaa tctgtaaatt 2580 tttaacctat gttacaccat cttcagtgcc agtcttgggc aaaattgtgc aagaggtgaa 2640 gtttatattt gaatatccat tctcgtttta ggactcttct tccatattag tgtcatcttg 2700 cctccctacc ttccacatgc cccatgactt gatgcagttt taatacttgt aattccccta 2760 accataagat ttactgctgc tgtggatatc tccatgaagt tttcccactg agtcacatca 2820 gaaatgccct acatcttatt tcctcagggc tcaagagaat ctgacagata ccataaaggg 2880 atttgaccta atcactaatt ttcaggtggt ggctgatgct ttgaacatct ctttgctgcc 2940 caatccatta gcgacagtag gatttttcaa acctggtatg aatagacaga accctatcca 3000 gtggaaggag aatttaataa 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acccagcagt taccttaaag ctgaatttat atttagtaac 4740 ttctgtgtta atactggata gcatgaattc tgcattgaga aactgaatag ctgtcataaa 4800 atgaaacttt ctttctaaag aaagatactc acatgagttc ttgaagaata gtcataacta 4860 gattaagatc tgtgttttag tttaatagtt tgaagtgcct gtttgggata atgataggta 4920 atttagatga atttagggga aaaaaaagtt atctgcagat atgttgaggg cccatctctc 4980 cccccacacc cccacagagc taactgggtt acagtgtttt atccgaaagt ttccaattcc 5040 actgtcttgt gttttcatgt tgaaaatact tttgcatttt tcctttgagt gccaatttct 5100 tactagtact atttcttaat gtaacatgtt tacctggaat gtattttaac tatttttgta 5160 tagtgtaaac tgaaacatgc acattttgta cattgtgctt tcttttgtgg gacatatgca 5220 gtgtgatcca gttgttttcc atcatttggt tgcgctgacc taggaatgtt ggtcatatca 5280 aacattaaaa atgaccactc ttttaattga aattaacttt taaatgttta taggagtatg 5340 tgctgtgaag tgatctaaaa tttgtaatat ttttgtcatg aactgtacta ctcctaatta 5400 ttgtaatgta ataaaaatag ttacagtgac 5430 <210> 10 <211> 5306 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 ctaggcggcg gccgcggcgg cggaggcagc agcggcggcg gcagtggcgg cggcgaaggt 60 ggcggcggct cggccagtac tcccggcccc cgccatttcg gactgggagc gagcgcggcg 120 caggcactga aggcggcggc ggggccagag gctcagcggc tcccaggtgc gggagagagg 180 cctgctgaaa atgactgaat ataaacttgt ggtagttgga gctggtggcg taggcaagag 240 tgccttgacg atacagctaa ttcagaatca ttttgtggac gaatatgatc caacaataga 300 ggattcctac aggaagcaag tagtaattga tggagaaacc tgtctcttgg atattctcga 360 cacagcaggt caagaggagt acagtgcaat gagggaccag tacatgagga ctggggaggg 420 ctttctttgt gtatttgcca taaataatac taaatcattt gaagatattc accattatag 480 agaacaaatt aaaagagtta aggactctga agatgtacct atggtcctag taggaaataa 540 atgtgatttg ccttctagaa cagtagacac aaaacaggct caggacttag caagaagtta 600 tggaattcct tttattgaaa catcagcaaa gacaagacag ggtgttgatg atgccttcta 660 tacattagtt cgagaaattc gaaaacataa agaaaagatg agcaaagatg gtaaaaagaa 720 gaaaaagaag tcaaagacaa agtgtgtaat tatgtaaata caatttgtac ttttttctta 780 aggcatacta gtacaagtgg taatttttgt acattacact aaattattag catttgtttt 840 agcattacct aatttttttc ctgctccatg cagactgtta gcttttacct taaatgctta 900 ttttaaaatg 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caaggccagg ccctgtgtga acctttgagc tttcatagag agtttcacag 1800 catggactgt gtccccacgg tcatccagtg ttgtcatgca ttggttagtc aaaatgggga 1860 gggactaggg cagtttggat agctcaacaa gatacaatct cactctgtgg tggtcctgct 1920 gacaaatcaa gagcattgct tttgtttctt aagaaaacaa actctttttt aaaaattact 1980 tttaaatatt aactcaaaag ttgagatttt ggggtggtgg tgtgccaaga cattaatttt 2040 ttttttaaac aatgaagtga aaaagtttta caatctctag gtttggctag ttctcttaac 2100 actggttaaa ttaacattgc ataaacactt ttcaagtctg atccatattt aataatgctt 2160 taaaataaaa ataaaaacaa tccttttgat aaatttaaaa tgttacttat tttaaaataa 2220 atgaagtgag atggcatggt gaggtgaaag tatcactgga ctaggaagaa ggtgacttag 2280 gttctagata ggtgtctttt aggactctga ttttgaggac atcacttact atccatttct 2340 tcatgttaaa agaagtcatc tcaaactctt agtttttttt ttttacaact atgtaattta 2400 tattccattt acataaggat acacttattt gtcaagctca gcacaatctg taaattttta 2460 acctatgtta caccatcttc agtgccagtc ttgggcaaaa ttgtgcaaga ggtgaagttt 2520 atatttgaat atccattctc gttttaggac tcttcttcca tattagtgtc atcttgcctc 2580 cctaccttcc acatgcccca tgacttgatg cagttttaat acttgtaatt cccctaacca 2640 taagatttac tgctgctgtg gatatctcca tgaagttttc ccactgagtc acatcagaaa 2700 tgccctacat cttatttcct cagggctcaa gagaatctga cagataccat aaagggattt 2760 gacctaatca ctaattttca ggtggtggct gatgctttga acatctcttt gctgcccaat 2820 ccattagcga cagtaggatt tttcaaacct ggtatgaata gacagaaccc tatccagtgg 2880 aaggagaatt taataaagat agtgctgaaa gaattcctta ggtaatctat aactaggact 2940 actcctggta acagtaatac attccattgt tttagtaacc agaaatcttc atgcaatgaa 3000 aaatacttta attcatgaag cttacttttt ttttttggtg tcagagtctc gctcttgtca 3060 cccaggctgg aatgcagtgg cgccatctca gctcactgca acctccatct cccaggttca 3120 agcgattctc gtgcctcggc ctcctgagta gctgggatta caggcgtgtg ccactacact 3180 caactaattt ttgtattttt aggagagacg gggtttcacc ctgttggcca ggctggtctc 3240 gaactcctga cctcaagtga ttcacccacc ttggcctcat aaacctgttt tgcagaactc 3300 atttattcag caaatattta ttgagtgcct accagatgcc agtcaccaca caaggcactg 3360 ggtatatggt atccccaaac aagagacata atcccggtcc ttaggtagtg ctagtgtggt 3420 ctgtaatatc 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ttaactgagt cacactgcat aggaatttag aacctaactt ttataggtta 4320 tcaaaactgt tgtcaccatt gcacaatttt gtcctaatat atacatagaa actttgtggg 4380 gcatgttaag ttacagtttg cacaagttca tctcatttgt attccattga tttttttttt 4440 cttctaaaca ttttttcttc aaacagtata taactttttt taggggattt ttttttagac 4500 agcaaaaact atctgaagat ttccatttgt caaaaagtaa tgatttcttg ataattgtgt 4560 agtaatgttt tttagaaccc agcagttacc ttaaagctga atttatattt agtaacttct 4620 gtgttaatac tggatagcat gaattctgca ttgagaaact gaatagctgt cataaaatga 4680 aactttcttt ctaaagaaag atactcacat gagttcttga agaatagtca taactagatt 4740 aagatctgtg ttttagttta atagtttgaa gtgcctgttt gggataatga taggtaattt 4800 agatgaattt aggggaaaaa aaagttatct gcagatatgt tgagggccca tctctccccc 4860 cacaccccca cagagctaac tgggttacag tgttttatcc gaaagtttcc aattccactg 4920 tcttgtgttt tcatgttgaa aatacttttg catttttcct ttgagtgcca atttcttact 4980 agtactattt cttaatgtaa catgtttacc tggaatgtat tttaactatt tttgtatagt 5040 gtaaactgaa acatgcacat tttgtacatt gtgctttctt ttgtgggaca tatgcagtgt 5100 gatccagttg ttttccatca tttggttgcg ctgacctagg aatgttggtc atatcaaaca 5160 ttaaaaatga ccactctttt aattgaaatt aacttttaaa tgtttatagg agtatgtgct 5220 gtgaagtgat ctaaaatttg taatattttt gtcatgaact gtactactcc taattattgt 5280 aatgtaataa aaatagttac agtgac 5306 <210> 11 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys 1 5 10 15 Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr 20 25 30 Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly 35 40 45 Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr 50 55 60 Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys 65 70 75 80 Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr 85 90 95 Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val 100 105 110 Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys 115 120 125 Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr 130 135 140 Ser Ala Lys Thr Arg Gln Arg Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val 145 150 155 160 Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Leu Lys Lys Ile Ser Lys Glu Glu Lys 165 170 175 Thr Pro Gly Cys Val Lys Ile Lys Lys Cys Ile Ile Met 180 185 <210> 12 <211> 188 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys 1 5 10 15 Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr 20 25 30 Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly 35 40 45 Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr 50 55 60 Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys 65 70 75 80 Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr 85 90 95 Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val 100 105 110 Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys 115 120 125 Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr 130 135 140 Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Asp Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val 145 150 155 160 Arg Glu Ile Arg Lys His Lys Glu Lys Met Ser Lys Asp Gly Lys Lys 165 170 175 Lys Lys Lys Lys Ser Lys Thr Lys Cys Val Ile Met 180 185

Claims

KRAS 돌연변이 암을 치료하는 방법으로서, 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성을 억제하는, 방법.
KRAS 돌연변이 암을 앓고 있는 환자에서 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 면역억제 활성을 억제하는 방법으로서, GM-CSF 길항제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
암 치료를 위한 면역 반응을 향상시키는 방법으로서, GM-CSF 길항제를 암 치료를 받는 환자에게 투여하는 단계를 포함하되, 환자는 KRAS, NRAS 또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암을 앓고 있으며, 상기 면역 반응은 대조군에 비해 증가되는, 방법.
제3항에 있어서, KRAS, NRAS, PTPN11, 또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암은 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML)인, 방법.
제3항에 있어서, KRAS, NRAS, PTPN11, 또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암은 소아 골수단핵구성 백혈병(JMML)인, 방법.
제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 반응은 T 세포 증식의 백분율인, 방법.
제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군은 GM-CSF 길항제의 투여 전에 상기 환자의 면역 반응 수준을 나타내는, 방법.
제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군은 GM-CSF 길항제 없이 암 치료를 받는 대조군 환자에서의 기준 면역 반응 수준 또는 과거 데이터에 기초한 기준 면역 반응 수준인, 방법.
제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 치료는 면역요법인, 방법.
제9항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 상기 면역요법의 효능을 증가시키는, 방법.
KRAS, NRAS, PTPN11, 및/또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암 환자에서 PD-L1을 억제하는 방법으로서, 치료를 필요로 하는 환자에게 대조군 대비 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제11항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제를 투여하는 단계는 암 환자에서 PD-L1의 수준을 감소시키는, 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 대조군은 GM-CSF 길항제의 투여 전에 상기 환자의 PD-L1 수준을 나타내는, 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 대조군은 GM-CSF 길항제 없이 암 치료를 받는 대조군 환자에서의 기준 PD-L1 수준 또는 과거 데이터에 기초한 기준 PD-L1 수준인, 방법.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자에서의 PD-L1의 수준은 상기 대조군과 비교했을 때 적어도 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PD-L1은 MDSC 상에서 발현되는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 PD-L1은 순환하는 MDSC 상에서 발현되는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 PD-L1은 혈장 유래 MDSC 상에서 발현되는, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 순환하는 골수 유래 억제 세포(MDSC)를 갖는, 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 낮은 수준의 침윤성 T 세포를 갖는 암을 앓고 있는, 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 면역 관문 억제제(ICI) 불응성 암을 앓고 있는, 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 말기 또는 전이성 암을 앓고 있는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 비소세포 폐암(NSCLC), 결장직장암(CRC), 췌장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 자궁내막 암종, 선암종, 충수 선암종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 또는 난소암으로부터 선택된 암을 앓고 있는, 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 비소세포폐암(NSCLC), 결장직장암(CRC) 또는 췌장암으로부터 선택된 암을 앓고 있는, 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 적어도 하나의 다른 암 요법을 상기 환자에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제25항에 있어서, 상기 적어도 하나의 다른 암 요법은 화학요법, MDSC-표적 요법, 면역요법, 방사선 요법 및 이들의 조합인, 방법.
제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및 상기 다른 암 요법은 동시에 투여되는, 방법.
제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및 상기 다른 암 요법은 순차적으로 투여되는, 방법.
제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 환자는 상기 GM-CSF 길항제의 투여 전에 상기 다른 암 요법으로 치료를 받은 적이 있는, 방법.
제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 환자는 상기 다른 암 요법의 투여 전에 상기 GM-CSF 길항제로 치료를 받은 적이 있는, 방법.
제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다른 암 요법은 ICI인, 방법.
제31항에 있어서, 상기 ICI는 PD-1, CTLA-4, B7, BTLA, HVEM, TIM-3, GAL-9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, 또는 A2aR의 활성을 길항하는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 ICI는, 항-PD-1 항체(임의로, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙), 항-PD-L1 항체(임의로, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙), 항-CTLA-4 항체(임의로, 이필리무맙), 항-PD-L2 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-BTLA 항체, 항-HVEM 항체, 항-TIM-3 항체, 항-GAL-9 항체, 항-LAG3 항체, 항-VISTA 항체, 항-KIR 항체, 항-2B4 항체, 항-CD160 항체, 항-CGEN-15049 항체, 항-CHK1 항체, 항-CHK2 항체, 항-A2aR 항체, 항-B-7 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택되는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 ICI는 항-PD-L1 항체인, 방법.
제26항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 환자에게 화학요법제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MDSC-표적 요법은 항-CFS-1R 항체, 항-IL-6 항체, 올-트랜스 레티노산, 엑시티닙, 엔티노스타트, 젬시타빈, 또는 펜포르민, 및 이들의 조합으로부터 선택되는, 방법.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역요법은 단클론 항체, 사이토카인, 암 백신, T 세포 결합 요법, 및 이들의 조합으로부터 선택되는, 방법.
제37항에 있어서, 상기 단클론 항체는 항-CD3 항체, 항-CD52 항체, 항-PDl 항체, 항-PD-Ll 항체, 항-CTLA4 항체, 항-CD20 항체, 항-BCMA 항체, 이중 특이적 항체, 또는 이중 특이적 T 세포 결합자(BiTE) 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택되는, 방법.
제37항에 있어서, 상기 사이토카인은 IFNa, IFNp, IFNy, IFN, IL-2, IL-7, IL-15, IL-21, IL-11, IL-12, IL-18, hGM- CSF, TNFa, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 항체 또는 이의 단편인, 방법.
제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 가용성 GM-CSF 수용체인, 방법.
제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편인, 방법.
제42항에 있어서, 상기 GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편은 항-GM-CSFRα 항체 또는 이의 단편인, 방법.
제43항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRα 항체 또는 이의 단편은 인간 GM-CSFRa에 특이적인 단클론 항체인, 방법.
제44항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRa 항체는 인간 또는 인간화 IgG4 항체인, 방법.
제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRa 항체는 마브릴리무맙인, 방법.
제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-GM- CSFRa 항체 및 이의 단편은 서열번호 6에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 7에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 및 서열번호 8에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3); 및 서열번호 3에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 4에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 5에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하는, 방법.
제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 상기 환자의 MDSC의 수준을 감소시키는, 방법.
제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 상기 환자의 MDSC 매개 면역억제 활성의 수준을 감소시키는, 방법.
제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 상기 환자의 말초 혈액에서 Lin^-CD14⁺HLA-DR^-M-MDSC의 백분율을 감소시키는 방법.
제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 상기 환자에게서 성숙한 MDSC 세포의 백분율을 증가시키는, 방법.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 Treg 세포, 대식세포 및/또는 호중구의 수준을 감소시키는, 방법.
제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 억제 사이토카인의 수준을 감소시키는, 방법.
제53항에 있어서, 상기 억제 사이토카인은 IL-10 및 TGFβ로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 면역 억제 인자의 수준을 감소시키는, 방법.
제55항에 있어서, 상기 면역 억제 인자는 아르기나아제 1, 유도성 산화질소 합성효소(iNOS), 퍼옥시질산염, 산화질소, 반응성 산소 종, 종양 연관 대식세포, 및 이들의 조합으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제 및/또는 상기 ICI의 투여는 대조군과 비교했을 때 CD4⁺ T 효과기 세포의 수준을 증가시키는, 방법.
제48항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군은 상기 환자의 치료 전 수준 또는 백분율, 또는 이력 데이터에 기초한 기준 수준 또는 백분율인, 방법.
제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 2 mg/kg 내지 10 mg/kg으로 투여되는, 방법.
제59항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 3 mg/kg으로 투여되는, 방법.
제59항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 6 mg/kg으로 투여되는, 방법.
제59항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 10 mg/kg으로 투여되는, 방법.
제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 2주마다 1회 투여되는, 방법.
제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 급성 골수성 백혈병(AML)으로의 전환까지의 시간은 감소되는, 방법.
GM-CSF 길항제 및 ICI를 포함하는, KRAS 돌연변이 암을 치료하기 위한 약학적 조성물.
제65항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 항체 또는 이의 단편인, 약학적 조성물.
제65항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 가용성 GM-CSF 수용체인, 약학적 조성물.
제65항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 항-GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편인, 약학적 조성물.
제68항에 있어서, 상기 GM-CSF 수용체 항체 또는 이의 단편은 항-GM-CSFRα 항체 또는 이의 단편인, 약학적 조성물.
제69항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRα 항체 또는 이의 단편은 인간 GM-CSFRa에 특이적인 단클론 항체인, 약학적 조성물.
제70항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRa 항체는 인간 또는 인간화 IgG4 항체인, 약학적 조성물.
제66항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRa 항체는 마브릴리무맙인, 약학적 조성물.
제66항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-GM-CSFRa 항체 및 이의 단편은 서열번호 6에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 7에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2), 및 서열번호 8에 의해 정의되는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3); 및 서열번호 3에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 4에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), 및 서열번호 5에 의해 정의되는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3)을 포함하는, 약학적 조성물.
제65항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ICI는 PD-1, CTLA-4, B7, BTLA, HVEM, TIM-3, GAL-9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, 및 이들의 조합의 활성을 길항하는, 약학적 조성물.
제65항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ICI는, 항-PD-1 항체(임의로, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙), 항-PD-L1 항체(임의로, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙), 항-CTLA-4 항체(임의로, 이필리무맙), 항-PD-L2 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-BTLA 항체, 항-HVEM 항체, 항-TIM-3 항체, 항-GAL-9 항체, 항-LAG3 항체, 항-VISTA 항체, 항-KIR 항체, 항-2B4 항체, 항-CD160 항체, 항-CGEN-15049 항체, 항-CHK1 항체, 항-CHK2 항체, 항-A2aR 항체, 항-B-7 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
KRAS, NRAS, 및/또는 JAK2에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 암을 치료하기 위한 키트로서, GM-CSF 길항제를 포함하는 약학적 조성물 및 화학요법, MDSC 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법 및 이들의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 암 요법을 포함하는 약학적 조성물을 포함하는, 키트.
제76항에 있어서, 상기 면역요법은, 항-PD-1 항체(임의로, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙), 항-PD-L1 항체(임의로, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙), 항-CTLA-4 항체(임의로, 이필리무맙), 항-PD-L2 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-BTLA 항체, 항-HVEM 항체, 항-TIM-3 항체, 항-GAL-9 항체, 항-LAG3 항체, 항-VISTA 항체, 항-KIR 항체, 항-2B4 항체, 항-CD160 항체, 항-CGEN-15049 항체, 항-CHK1 항체, 항-CHK2 항체, 항-A2aR 항체, 항-B-7 항체, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 ICI인, 키트.
환자에게서 암을 치료하는 방법으로서, 치료를 필요로 하는 환자에게 GM-CSF 길항제의 치료적 유효 투여량을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 투여하는 단계는 대조군과 비교했을 때 암의 하나 이상의 증상을 대조군에 비해 개선, 안정화, 또는 감소시키고, 상기 암은 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML) 또는 소아 골수단핵구성 백혈병(JMML)인, 방법.
제78항에 있어서, 암은 KRAS, NRAS, PTPN11, 또는 JAK2에서 하나 이상의 돌연변이를 갖는, 방법.
제78항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CMML은 MPN-CMML로서 분류되는, 방법.
제78항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CMML은 MDS-CMML로서 분류되는, 방법.
제78항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CMML은 CMML-0으로서 분류되는, 방법.
제78항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CMML은 CMML-1로서 분류되는, 방법.
제78항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CMML은 CMML-2로서 분류되는, 방법.
제78항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, CMML 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 것은 AML로 전환되는 데 걸리는 시간을 감소시키거나 AML로 전환되지 않게 하는, 방법.
제78항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, JMML 환자에게 GM-CSF 길항제를 투여하는 것은 AML로의 전환되는 데 걸리는 시간을 단축시키거나 AML로 전환되지 않게 하는, 방법.
제78항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 마브리무맙, 나밀루맙, 오틸리맙, 렌질루맙, 김실루맙 및 TJM2로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제78항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GM-CSF 길항제는 마브릴리무맙인, 방법.