KR20230092820A - Sars-cov-2에 대한 특이적 면역을 유도하기 위한 약제학적 제제 - Google Patents
Sars-cov-2에 대한 특이적 면역을 유도하기 위한 약제학적 제제 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 생명공학에 관한 것이다. 청구된 제제는 SARS-CoV-2 예방에 사용할 수 있다. 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 (26)의 게놈 형태의 제제를 포함하는 성분 (1)을 포함하고, 또한 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 (5)의 게놈 형태의 제제를 포함하는 성분 (2)을 포함하는 약제학적 제제를 생성하였다. 추가로, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 (26)의 게놈 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 (25)의 게놈 형태의 제제를 포함하는 성분 (2)을 포함하는 약제학적 제제를 생성하였다. 추가로, 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 (25)의 게놈 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 (5)의 게놈 형태의 제제를 포함하는 성분 (2)을 포함하는 약제학적 제제를 생성하였다.
Description
본 발명은 생명공학, 면역학 및 바이러스학에 관한 것이다. 청구된 제제는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스(severe acute respiratory syndrome virus) SARS-CoV-2로 인한 질병 예방에 사용할 수 있다.
2019년 말, 후베이성 (중화인민공화국)의 성도인 우한에서 병인을 알 수 없는 비정형 폐렴의 발병이 기록되었다. 연구자들이 수행한 연구에 따르면 이 발병은 코로나비리데 (Coronaviridae) 계통 B 베타코로나바이러스 (betacoronavirus) (Beta-CoV B)에 속하는 단일 가닥 RNA 바이러스에 의해 발생하였다. 2020년 2월 11일 세계보건기구 (WHO)는 새로운 바이러스 SARS-CoV-2와 이 바이러스가 유발하는 질병 COVID-19 ("코로나바이러스 질병 2019")의 공식 명칭을 지정하였다.
수개월 안에 SARS-CoV-2는 전 세계적으로 확산되어 200개 이상의 국가에서 발병하는 팬데믹이 되었다. 2020년 8월 1일까지 확진자 수는 1750만 명을 넘어섰고 사망자는 68만3000명을 넘어섰다.
코로나바이러스는 호흡기 비말, 공기 중의 먼지 입자 및 직접 접촉에 의해 사람 간 전파에 의해 확산된다. 예상 평균 잠복기는 5 내지 6일이며, 그 후 질병의 제1 증상과 징후가 나타난다. COVID-19의 일반적인 증상은 발열, 마른 기침, 숨가쁨 및 피로를 포함한다. 인후통, 관절통, 콧물, 및 두통이 또한 덜 흔한 증상으로 보고되었다.
COVID-19의 증상은 다른 많은 바이러스 감염의 징후와 유사하기 때문에 진단하기 어려울 수 있다. 진단 확인은 특수 장비, 고도로 숙련된 인력 및 고가의 시약이 필요한 실험 테스트 결과를 기반으로 한다.
COVID-19의 임상 경과는 경증에서 고도의 중증까지 다양할 수 있다. 중증 질병은 60세 이상의 사람들과 만성 병태가 있는 환자들에게 더 일반적으로 발생한다. 이 질병의 가장 심각한 합병증으로는 폐렴, 급성호흡곤란증후군, 급성호흡부전, 급성심부전, 급성신부전, 패혈성 쇼크, 심근병증 등이 포함된다. 그러나 현재 COVID-19 치료에 사용할 수 있는 에티오트로픽 (etiotropic) 약물은 이용 가능하지 않다.
SARS-CoV-2의 급속한 지리적 확산과 높은 치사율은 이 바이러스에 의해 유발되는 질병의 예방을 위한 효과적인 제제의 개발에 대한 긴급한 필요성을 야기하였다. 이 분야의 모든 연구 활동은 코로나비리데 패밀리의 다른 구성원에 의해 유발되는 질병을 예방하기 위한 산물 개발에 대한 수년간의 경험을 기반으로 한다.
코로나바이러스에 의해 유발되는 질병을 예방하기 위해 약독화 생백신을 사용할 것을 제안하는 방법 (특허 US7452542B2)이 있다. 이 백신은 바이러스가 (i) MHV-A59의 티로신6398 또는 이의 유사 위치에서 치환을 포함하는 ExoN 폴리펩타이드, 및 (ii) MHV-A59의 leu106, 또는 이의 유사한 위치에서 치환을 포함하는 Orf2a 폴리펩타이드를 인코딩하는 게놈(genome)을 포함하는 것을 특징으로 하는 약독화된 생 코로나바이러스 및 약제학적으로 허용 가능한 용매를 포함한다. 본 발명은 조류 코로나바이러스, 동물종 코로나바이러스 및 인간 코로나바이러스 OC34와 같은 다양한 코로나바이러스에 관한 것이다.
SARS-CoV에 대한 백신을 획득하기 위한 방법 (WO2006136448A2)이 있고; 이는 약독화된 SARS-CoV 바이러스를 인코딩하는 핵산에 관한 것으로, 동일한 세포 배양에서 야생형 SARS-CoV 바이러스의 최대 바이러스 역가와 비교할 때 적어도 2배 감소된 세포 배양 최대 바이러스 역가를 생성할 수 있다.
SARS-CoV로 인한 코로나바이러스 감염을 예방하기 위해 SARS-CoV 항원이 폴리-감마-글루타메이트 합성효소 (pgsBCA)로 고정된 박테리아 표면에 디스플레이되는 생박테리아 백신 사용을 제안하는 방법 (RU 2 332 457 C2B)이 있다.
백신으로 사용하기 위한 중동호흡기증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV) N 뉴클레오캡시드 단백질 및/또는 이의 면역원성 단편, 또는 MERS-CoV N 뉴클레오캡시드 단백질 및/또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 핵산 분자에 관한 방법 (WO2016116398A1)이 있다. 본 발명은 MERS-CoV에 대한 백신을 획득하기 위한 백시니아 바이러스 (vaccinia virus), 아비폭스바이러스 (avipoxvirus), 아데노바이러스 (adenovirys), 알파바이러스 (alphavirys), 랍도바이러스 (rhabdovirus) 및 헤르페스바이러스 (herpesvirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자 벡터의 용도를 추가로 개시한다.
SARS-CoV S 단백질 유전자 및 이의 항원 단편을 포함하는 폭스바이러스 및 배큘로바이러스를 포함하는 벡터 시스템을 SARS-CoV에 대한 백신으로 사용하는 것을 제안하는 방법 (WO2006071250A2)이 있다.
SARS-CoV 바이러스 S 단백질 서열을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5에 기반한 중증 급성 호흡기 증후군에 대한 백신의 사용을 제안하는 방법 (CN1276777C)이 있다.
계통발생학적 분석은 SARS-CoV-2 바이러스가 인간 집단에서 순환하는 코로나바이러스보다 박쥐에서 발견되는 코로나바이러스 (bat-SL-CoVZC45, bat-SL-CoVZXC21)와 더 밀접하게 관련되어 있음을 입증하였다. 예를 들어, SARS-CoV-2의 S 단백질은 SARS-CoV S 단백질과 75% 이상 상동성이 아닌 것으로 나타났다 (문헌[Zhou P, Yang XL, Wang XG, et al. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin. Nature. 2020;579(7798):270-273. doi:10.1038/s41586-020-2012-7]). 따라서 SARS-CoV로 인한 질병에 대한 백신 후보는 COVID-19에 효과적이지 않다.
현재까지 SARS-CoV-2 코로나바이러스에 대한 특이적 면역(specific immunity)의 유도를 위한 산물은 등록된 산물이 없다. 알려진 바와 같이 다수의 제약 회사가 백신 후보를 개발하고 있으며; 그 중 일부는 재조합 아데노바이러스 벡터를 활용하는 기술을 기반으로 한다.
제약 회사 CanSinoBIO (중국 톈진)와 베이징 생명공학 연구소 (중국 베이징)는 최적화된 SARS-CoV-2 (우한-Hu-1 단리) S 단백질 유전자 (GenBank YP_009724390)와 조직 플라스미노겐 활성제 신호 펩타이드 유전자가 포함되어 있는 COVID-19에 대한 보호를 위한 재조합 아데노바이러스 유형-5 벡터 (E1 및 E3 영역 결실) 백신 후보를 공동 개발하였다. 이 백신은 0.5 mL당 5x1010개의 개의 바이러스 입자를 포함하는 액체 제형으로 제조하였다. 이 방법은 청구된 발명의 발명자들이 프로토타입으로 선택하였다.
이 방법의 상당한 단점은 인간 아데노바이러스 유형 5에 대한 기존 면역의 존재로 인해 일부 그룹의 사람들에게 백신이 효과가 없을 수 있다는 사실과 관련이 있다.
예를 들어, 공개된 데이터에 따르면 이 백신 후보의 단일 주사는 55세 이상의 사람들에서 높은 수준의 체액 반응을 유도하기에 충분하지 않았다 (문헌[Zhu FC, Guan XH, Li YH, et al. Immunogenicity and safety of a recombinant adenovirus type-5-vectored COVID-19 vaccine in healthy adults aged 18 years or older: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 2 trial [published online ahead of print, 2020 Jul 20]. Lancet. 2020;S0140-6736(20)31605-6. doi:10.1016/S0140-6736(20)31605-6]). 그러나 COVID-19의 심각한 임상 경과에 대한 가장 높은 위험은 연금 개시 연령과 관련이 있다.
따라서, 본 발명의 배경은 광범위한 집단에서 SARS-CoV-2 코로나바이러스에 대한 면역 반응을 유도할 수 있고 안전할 약제학적 제제(pharmaceutical agent)를 개발할 긴급한 필요성을 이끌어낸다.
청구된 발명군의 기술적 목적은 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 면역 반응의 효과적인 유도를 위한 제제를 생성하는 것이다.
기술적 결과는 2개의 상이한 아데노바이러스 벡터의 사용을 통해 다양한 집단 그룹에서 SARS-Cov-2 바이러스에 대한 체액성 및 세포 매개 면역 반응의 발생을 확립하는 안전하고 효과적인 약제학적 제제의 생성이다. 또한, 기술적 결과는 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 강화된 면역 반응을 확립하는 약제학적 제제의 생성이다.
이러한 기술적 결과는 E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 배치된 발현 카세트(placed expression cassette)는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2 (변이체 1)에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제를 생성함으로써 달성된다.
추가로, E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2 (변이체 2)에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제를 생성하였다.
추가로, E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2 (변이체 3)에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제를 생성하였다.
각각의 약제학적 제제는 액체 또는 동결건조 (냉동건조) 제형으로 제공된다.
이때, 액체 제형용 약제학적 제제의 완충액(buffer solution)은, 질량% 기준으로, 다음을 포함한다:
동결건조 (냉동건조) 제형용 약제학적 제제의 완충액은, 질량% 기준으로, 다음을 포함한다:
성분 1 및 성분 2는 상이한 패키지(package)에 배치된다.
각각의 약제학적 제제는 중증 급성 호흡기 증후군 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 특이적 면역을 유도하기 위해 사용되며, 성분 1 및 성분 2는 유효량으로 1주 초과의 시간 간격으로 순차적으로 사용된다.
도 1
발현 카세트의 도식을 제시하며, 여기서:
1 - 프로모터
2 - 표적 유전자,
3 - 폴리아데닐화 신호.
도 2
실험동물 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 바이러스의 S 당단백질에 의해 재자극된 증식성 CD4+ 림프구의 백분율로 추정한, 개발된 약제학적 제제에 의한 면역화 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 생성된 동물 그룹:
1. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10. Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15. Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17. Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20. Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2);
21. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30. simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31. 인산염 완충 식염수
● - 동물별 데이터
- 각 그룹에 대해 계산된 기하 평균
도 3
마우스 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 바이러스의 S 당단백질에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 개발된 약제학적 제제에 의한 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 생성된 동물 그룹:
1. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10. Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15. Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17. Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20. Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2);
21. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30. simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31. 인산염 완충 식염수.
● - 동물별 데이터 표시
- 각 그룹에 대해 계산된 기하 평균
도 4
치사 수준의 SARS-CoV-2 바이러스 감염 모델을 사용하여 개발된 약제학적 제제 및 대조군으로 면역화된 골든 시리아 햄스터 (golden Syrian hamster)의 생존 곡선을 도시한다.
Y-축 - 동물 생존율, %
X-축 - SARS-CoV-2 바이러스에 대한 공격 후 일.
● - 개발된 약제학적 제제로 면역화된 골든 시리아 햄스터의 생존율, 생성된 그룹을 제공한다:
1) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4) Ad26- CAG -S-CoV2 성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
11) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15) Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17) Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
21) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2),
모든 그룹에서 100%에 달하였다.
◆ - 음성 대조군, 그룹:
10) Ad26-null (성분 1), Ad5-null (성분 2).
■ - 음성 대조군, 그룹:
20) Ad26-null (성분 1), simAd25-null (성분 2).
× - 음성 대조군, 그룹:
30) simAd25-null (성분 1), Ad5-null (성분 2).
▲ - 음성 대조군, 그룹:
32) - 인산염 완충 식염수.
도 5
변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제로 면역화된 영장류에서 SARS-CoV2 바이러스 항원에 대한 체액성 면역 반응의 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - SARS-CoV-2 RBD에 대한 IgG 상호 역가.
X-축 - 일.
● - 변이체 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2)에 따라 개발된 약제학적 제제에 의한 면역화.
○ - 위약.
도 6
영장류의 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 S 항원의 RBD 단편에 의해 재자극된 증식 CD4+ 림프구의 백분율로 추정되는, 개발된 약제학적 제제로 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 일.
Черным цветом обозначена группа животных, иммунизированных разработанным фармацевтическим средством по варианту 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2).
흑색은 변이체 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2)에 따라 개발된 약제학적 제제로 면역화된 동물 그룹을 나타내는데 사용된다.
대조군 (백신 접종 동물 아님)은 회색으로 표시된다.
산술 평균값은 각 데이터 그룹에 대해 점선으로 표시된다. 면역화된 동물과 대조군 (백신 접종하지 않은) 동물에 대해 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 * p<0.05 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 7
영장류의 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 S 항원의 RBD 단편에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 개발된 약제학적 제제로 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X축 - 일.
흑색은 변이체 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2)에 따라 개발된 약제학적 제제로 면역화된 동물 그룹을 나타내는데 사용된다.
대조군 (백신 접종 동물 아님)은 회색으로 표시된다.
산술 평균값은 각 데이터 그룹에 대해 점선으로 표시된다. 면역화된 동물과 대조군 (백신 접종하지 않은) 동물에 대해 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호 및 기호 * p<0.05 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 8
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제제로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 9
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD4+ 림프구의 백분율로 추정되는, 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제제로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 10
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 변이체 1에 따른 개발된 약제학적 제제의 동결건조된 (냉동 건조된) 제형으로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 11
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD4+ 림프구의 백분율에 의해 추정된, 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 동결건조된 (냉동 건조된) 제형으로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 지원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 12
면역화 전 (0일) 및 연구 14일 및 28일째에 SARS-CoV-2 S 항원에 의한 재자극 후 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제형으로 면역화된 지원자로부터의 말초 혈액 단핵 세포의 배양 배지에서 IFNγ 농도의 증가 (-배)를 도시한다.
Y-축 - IFN-감마 농도의 증가 (-배).
X-축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
▲- 28일째에 각 지원자에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호*, p<0.05; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 13
면역화 전 (0일) 및 연구 14일 및 28일째에 SARS-CoV-2 S 항원에 의한 재자극 후 변이체 1에 따른 개발된 약제학적 제제의 동결건조된 (냉동 건조된) 제형으로 면역화된 지원자로부터의 말초 혈액 단핵 세포의 세포 배양의 IFN 농도의 증가 (-배)를 도시한다.
Y-축 - IFN-감마 농도의 증가 (-배).
X-축 - 일.
●- 0일째에 각 지원자에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
점은 연구에 관련된 자원자 각각에 대한 값을 나타낸다. 평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호*, p<0.05; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 14
변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제형으로 면역화된 지원자에서 SARS-CoV2 바이러스 항원에 대한 체액성 면역 반응의 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - SARS-CoV-2 S 당단백질 RBD에 대한 IgG 역가.
X-축 - 일.
△- 자원자 각각에 대한 데이터.
도 15
는 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 동결건조 (냉동건조) 제형으로 면역화된 지원자에서 SARS-CoV2 바이러스 항원에 대한 체액성 면역 반응의 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - SARS-CoV-2 S 당단백질 RBD에 대한 IgG 역가.
X-축 - 일.
△- 자원자 각각에 대한 데이터.
발현 카세트의 도식을 제시하며, 여기서:
1 - 프로모터
2 - 표적 유전자,
3 - 폴리아데닐화 신호.
도 2
실험동물 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 바이러스의 S 당단백질에 의해 재자극된 증식성 CD4+ 림프구의 백분율로 추정한, 개발된 약제학적 제제에 의한 면역화 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 생성된 동물 그룹:
1. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10. Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15. Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17. Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20. Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2);
21. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30. simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31. 인산염 완충 식염수
● - 동물별 데이터
- 각 그룹에 대해 계산된 기하 평균
도 3
마우스 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 바이러스의 S 당단백질에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 개발된 약제학적 제제에 의한 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 생성된 동물 그룹:
1. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6. Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10. Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13. Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15. Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16. Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17. Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19. Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20. Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2);
21. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23. simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26. simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29. simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30. simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31. 인산염 완충 식염수.
● - 동물별 데이터 표시
- 각 그룹에 대해 계산된 기하 평균
도 4
치사 수준의 SARS-CoV-2 바이러스 감염 모델을 사용하여 개발된 약제학적 제제 및 대조군으로 면역화된 골든 시리아 햄스터 (golden Syrian hamster)의 생존 곡선을 도시한다.
Y-축 - 동물 생존율, %
X-축 - SARS-CoV-2 바이러스에 대한 공격 후 일.
● - 개발된 약제학적 제제로 면역화된 골든 시리아 햄스터의 생존율, 생성된 그룹을 제공한다:
1) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4) Ad26- CAG -S-CoV2 성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
11) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15) Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17) Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
21) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2),
모든 그룹에서 100%에 달하였다.
◆ - 음성 대조군, 그룹:
10) Ad26-null (성분 1), Ad5-null (성분 2).
■ - 음성 대조군, 그룹:
20) Ad26-null (성분 1), simAd25-null (성분 2).
× - 음성 대조군, 그룹:
30) simAd25-null (성분 1), Ad5-null (성분 2).
▲ - 음성 대조군, 그룹:
32) - 인산염 완충 식염수.
도 5
변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제로 면역화된 영장류에서 SARS-CoV2 바이러스 항원에 대한 체액성 면역 반응의 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - SARS-CoV-2 RBD에 대한 IgG 상호 역가.
X-축 - 일.
● - 변이체 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2)에 따라 개발된 약제학적 제제에 의한 면역화.
○ - 위약.
도 6
영장류의 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 S 항원의 RBD 단편에 의해 재자극된 증식 CD4+ 림프구의 백분율로 추정되는, 개발된 약제학적 제제로 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 일.
Черным цветом обозначена группа животных, иммунизированных разработанным фармацевтическим средством по варианту 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2).
흑색은 변이체 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2)에 따라 개발된 약제학적 제제로 면역화된 동물 그룹을 나타내는데 사용된다.
대조군 (백신 접종 동물 아님)은 회색으로 표시된다.
산술 평균값은 각 데이터 그룹에 대해 점선으로 표시된다. 면역화된 동물과 대조군 (백신 접종하지 않은) 동물에 대해 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 * p<0.05 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 7
영장류의 면역화 후 8일째에 SARS-CoV-2 S 항원의 RBD 단편에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 개발된 약제학적 제제로 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X축 - 일.
흑색은 변이체 1 (Ad26-CMV-S-SARS-CoV-2; Ad5-CMV-S-SARS-CoV-2)에 따라 개발된 약제학적 제제로 면역화된 동물 그룹을 나타내는데 사용된다.
대조군 (백신 접종 동물 아님)은 회색으로 표시된다.
산술 평균값은 각 데이터 그룹에 대해 점선으로 표시된다. 면역화된 동물과 대조군 (백신 접종하지 않은) 동물에 대해 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호 및 기호 * p<0.05 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 8
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제제로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 9
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD4+ 림프구의 백분율로 추정되는, 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제제로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 10
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD8+ 림프구의 백분율로 추정되는, 변이체 1에 따른 개발된 약제학적 제제의 동결건조된 (냉동 건조된) 제형으로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X-축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 11
SARS-CoV-2 S 항원에 의해 재자극된 증식 CD4+ 림프구의 백분율에 의해 추정된, 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 동결건조된 (냉동 건조된) 제형으로 지원자의 면역화의 효과 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - 증식 세포의 수, %
X축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 사용된 기호.
▲- 28일째에 지원자 각각에 대해 사용된 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호 *, p<0.05; **, p<0.01; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 12
면역화 전 (0일) 및 연구 14일 및 28일째에 SARS-CoV-2 S 항원에 의한 재자극 후 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제형으로 면역화된 지원자로부터의 말초 혈액 단핵 세포의 배양 배지에서 IFNγ 농도의 증가 (-배)를 도시한다.
Y-축 - IFN-감마 농도의 증가 (-배).
X-축 - 일.
●- 0일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
▲- 28일째에 각 지원자에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호*, p<0.05; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 13
면역화 전 (0일) 및 연구 14일 및 28일째에 SARS-CoV-2 S 항원에 의한 재자극 후 변이체 1에 따른 개발된 약제학적 제제의 동결건조된 (냉동 건조된) 제형으로 면역화된 지원자로부터의 말초 혈액 단핵 세포의 세포 배양의 IFN 농도의 증가 (-배)를 도시한다.
Y-축 - IFN-감마 농도의 증가 (-배).
X-축 - 일.
●- 0일째에 각 지원자에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
■- 14일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
▲- 28일째에 자원자 각각에 대해 획득된 값을 표시하는데 사용되는 기호.
점은 연구에 관련된 자원자 각각에 대한 값을 나타낸다. 평균 값은 각 데이터 그룹에 대해 흑색 선으로 표시된다. 0, 14 및 28일째에 획득된 값 사이의 통계적으로 유의한 차이는 괄호와 기호*, p<0.05; ****, p<0.001 (Mann-Whitney 테스트)로 표시된다.
도 14
변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 액체 제형으로 면역화된 지원자에서 SARS-CoV2 바이러스 항원에 대한 체액성 면역 반응의 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - SARS-CoV-2 S 당단백질 RBD에 대한 IgG 역가.
X-축 - 일.
△- 자원자 각각에 대한 데이터.
도 15
는 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 동결건조 (냉동건조) 제형으로 면역화된 지원자에서 SARS-CoV2 바이러스 항원에 대한 체액성 면역 반응의 평가 결과를 도시한다.
Y-축 - SARS-CoV-2 S 당단백질 RBD에 대한 IgG 역가.
X-축 - 일.
△- 자원자 각각에 대한 데이터.
SARS-CoV-2 바이러스에 대한 특이적 면역 반응을 유도하기 위한 안전하고 효과적인 약제학적 제제를 제조하기 위해, 아데노바이러스를 사용하는 벡터 시스템을 선택하였다. 아데노바이러스 벡터는 다음과 같은 다수의 장점을 특징으로 한다: 인간 세포에서 복제 불가능; 분열 및 비분열 인간 세포 모두에의 유입 가능성; 세포 매개 및 체액성 면역 반응 유도 가능성; 및 표적 항원의 고 수준의 발현의 확립 가능성.
동시에, 과거 병력에 아데노바이러스 감염이 있는 일부 사람들이 아데노바이러스에 대한 기존 면역 반응을 가질 수 있기 때문에 이러한 벡터의 임상 적용이 제한될 수 있다. 연구 결과에 따르면 아데노바이러스 벡터에 대한 항체 역가는 연령에 따라 증가하고 상이한 인구 세그먼트에서 다양하다. 이와 관련하여, 인간 아데노바이러스 혈청형 5에 대한 높은 혈청 유병률 수준은 미국 인구의 40 내지 45%, 사하라 사막 이남 아프리카 인구의 최대 90%에서 보고된다. (문헌[Nwanegbo E, Vardas E, Gao W, et al. Prevalence of neutralizing antibodies to adenoviral serotypes 5 and 35 in the adult populations of The Gambia, South Africa, and the United States. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2004;11(2):351-357; Dudareva M, Andrews L, Gilbert SC, et al. Prevalence of serum neutralizing antibodies against chimpanzee adenovirus 63 and human adenovirus 5 in Kenyan children, in the context of vaccine vector efficacy. Vaccine. 2009;27(27):3501-3504; Zhang S, Huang W, Zhou X, Zhao Q, Wang Q, Jia B. Seroprevalence of neutralizing antibodies to human adenoviruses type-5 and type-26 and chimpanzee adenovirus type-68 in healthy Chinese adults. J. Med. Virol. 2013;85(6):1077-1084]).
벡터에 대한 중화 항체는 전이유전자에 대한 특이적 면역 반응의 상당한 감소에 관여하고 면역화의 효과를 감소시킬 수 있다.
수행된 연구에 기반하여, 본 발명자들은 순차 면역화 동안 백신 항원에 대한 항원-특이적 면역 반응의 생성에 대한 임의의 영향을 배제할 이러한 유전적 차이를 갖는 아데노바이러스 벡터 혈청형을 확인하였다.
인간 아데노바이러스 혈청형 26, 인간 아데노바이러스 혈청형 5 및 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 3가지 바이러스를 추가 연구를 위해 선택하였다. 다음 단계에서 더 높은 성장 동역학으로 구별되는 바이러스 클론을 선택하였다. 이 클론을 유전자 조작된 재조합 아데노바이러스 벡터를 제조하는데 사용하였다.
따라서, 다수의 유형의 유전자 벡터의 이용된 조합은 일부 아데노바이러스, 특히 인간 아데노바이러스 혈청형 5에 대한 기존의 인간 면역 반응과 관련된 문제점을 극복하기 위해 약제학적 제제의 스펙트럼의 개발을 지원하였다.
이로써, 제제 제형 (인간 아데노바이러스 혈청형 26, 인간 아데노바이러스 혈청형 5, 유인원 아데노바이러스 혈청형 25)에 포함된 아데노바이러스 벡터 혈청형에 대한 환자의 면역성을 평가한 후 약제학적 제제의 변이체가 선택되는 본 발명을 사용할 수 있다.
유전 공학 기술을 이용하여, 발현 카세트를 재조합 아데노바이러스 벡터에 넣었다. 카세트에는 백신 항원 유전자 및 발현 조절 요소 (프로모터 및 폴리아데닐화 신호)가 포함되었다. 발현 카세트의 개략도는 도 1에 나와 있다.
면역 반응 유도의 효과를 최대화하기 위해, 본 발명자들은 발현 카세트의 다중 변이체를 청구하였다.
포유류 세포에서의 발현에 최적화된 SARS-CoV-2 바이러스의 스파이킹 (Spiking) (S) 단백질을 모든 카세트에서 항원으로 사용하였다. S 단백질은 코로나바이러스 구조 단백질 중 하나이다. 이는 바이러스 입자 표면에 노출되어 ACE2 (안지오텐신 (angiotensin) 전환 효소 2) 수용체와 바이러스의 결합에 관여한다. 완료된 연구 결과는 S 단백질에 대한 바이러스 중화항체의 생성을 나타내어 약제학적 제제의 개발을 위한 유망한 항원으로 평가받고 있다.
발현 카세트 서열번호 1은 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다. CMV 프로모터는 다수의 세포 유형에서 항시적 발현을 확립하는 사이토메갈로바이러스의 직전 초기 유전자의 프로모터이다. 그러나 CMV 프로모터에 의해 제어되는 표적 유전자 발현 강도는 상이한 세포 유형에 따라 다르다. 또한, CMV 프로모터 제어 하에서의 전이유전자 발현 수준은 세포 배양 기간이 증가함에 따라 감소하는 것으로 나타났다. 이는 DNA 메틸화와 관련된 유전자 발현의 억제로 인해 발생한다 (문헌[Wang W., Jia YL., Li YC., Jing CQ., Guo X., Shang XF., Zhao CP., Wang TY. Impact of different promoters, promoter mutation, and an enhancer on recombinant protein expression in CHO cells. // Scientific Reports - 2017. - Vol. 8. - P. 10416]).
발현 카세트 서열번호 2는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다. CAG 프로모터는 CMV 프로모터의 초기 인핸서, 닭 β-액틴 프로모터 및 키메라 인트론 (닭 β-액틴 및 토끼 β-글로빈)을 포함하는 합성 프로모터이다. 실험은 CAG 프로모터가 CMV 프로모터에 비해 더 높은 전사 활성을 갖는다는 것을 입증하였다 (문헌[Yang C.Q., Li X.Y., Li Q., Fu S.L., Li H., Guo Z.K., Lin J.T., Zhao S.T. Evaluation of three different promoters driving gene expression in developing chicken embryo by using in vivo electroporation. // Genet. Mol. Res. - 2014. - Vol. 13. - P. 1270-1277]).
발현 카세트 서열번호 3은 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다. EF1 프로모터는 인간 진핵생물 번역 연장 인자 1α (EF-1α)의 프로모터이다. 이 프로모터는 다양한 세포 유형에서 항시적으로 활성이다 (문헌[PMID: 28557288. The EF-1α promoter maintains high-level transgene expression from episomal vectors in transfected CHO-K1 cells]). EF-1α 유전자는 진핵 세포에서 가장 흔한 단백질 중 하나이며 거의 모든 포유류 세포 유형에서 발현을 나타내는 연장 인자 1α를 인코딩한다. EF-1α 프로모터는 바이러스 프로모터가 제어된 유전자의 발현을 촉진할 수 없는 세포와 바이러스 프로모터가 점차적으로 소멸되는 세포에서 자주 활성을 나타낸다.
발현 카세트 서열번호 4는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
따라서, 수행된 과제의 결과, 약제학적 제제의 다음 3가지 변이체가 개발되었다.
1. E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제.
2. E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제.
3. E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제.
이로써, 약제학적 제제의 성분은 상이한 패키지에 배치될 수 있다.
또한, 본 발명의 발명자들은 약제학적 제제의 액체 및 동결건조 (냉동 건조) 제형을 개발하였다.
또한, 본 발명자들은 개발된 약제학적 제제를 -18℃ 미만의 온도에서 동결 및 +2℃ 내지 +8℃의 온도 범위에서 동결건조 (냉동 건조) 둘 모두 하에 저장할 수 있게 하는 완충 용액의 이러한 변이체를 선택하였다.
또한, 성분 1 및 성분 2를 유효량으로 1주 초과의 시간 간격을 두고 순차적으로 사용하는 중증 급성 호흡기 증후군 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 특이적 면역 유도를 위한 약제학적 제제의 활용 방법이 개발되었다.
본 발명의 구현은 다음 실시예에 의해 수행된다.
실시예 1
재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈을 포함하는 발현 벡터의 생성.
제1 단계에서, 플라스미드 작제물 pAd26-Ends의 설계를 제안하였다. 이는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 상동성인 2개의 영역 (2개의 상동성 아암) 및 암피실린 내성 유전자를 보유한다. 상동성 아암 중 하나는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈의 개시 부분 (왼쪽 역 말단 반복으로부터 E1 영역)과 pIX 단백질을 포함하는 바이러스 게놈의 서열이다. 다른 상동성 아암은 게놈의 말단을 통해 ORF3 Е4 영역 뒤에 위치하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. pAd26-Ends 작제물의 합성은 모스크바 회사 "Eurogen" ZAO에서 수행하였다.
비리온으로부터 단리된 인간 아데노바이러스 혈청형 26 DNA를 pAd26-Ends와 혼합하였다. E1 영역이 결실된 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈을 보유하는 플라스미드 pAd26-dlE1을 pAd26-Ends와 바이러스 DNA 사이의 상동 재조합 과정을 통해 획득하였다.
그런 다음, 획득된 플라스미드 pAd26-dlE1에서 표준 클로닝 기술을 사용하여 오픈 리딩 프레임 6 (ORF6-Ad26)을 포함하는 서열을 인간 아데노바이러스 혈청형 26이 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈으로부터 유사한 서열로 대체하였다. 이 조작의 목적은 HEK293 세포 배양에서 효과적으로 복제할 수 있음을 확립하기 위한 것이다. 그 결과, 플라스미드 pAd26-dlE1-ORF6-Ad5를 유도하였다.
또한, 표준 유전 공학 기술을 사용하여 아데노바이러스 게놈의 E3 영역 (유전자 pVIII과 U-엑손 사이의 약 3321개 염기쌍)을 벡터의 패키징 투여량을 확장하기 위해 작제된 플라스미드 pAd26-dlE1-ORF6-Ad5로부터 결실시켰다. 결과적으로, 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 오픈 리딩 프레임 ORF6과 E1 및 E3 영역이 결실된 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 재조합 벡터 pAd26-only-null을 획득하였다. 서열 서열번호 5를 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 모 서열로 사용하였다.
또한, 본 발명자들은 발현 카세트의 다중 설계을 개발하였다:
- 발현 카세트 서열번호 1은 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
- 발현 카세트 서열번호 2는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
- 발현 카세트 서열번호 3은 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
플라스미드 작제물 pAd26-Ends에 기반하여, 유전 공학 기술을 사용하여 작제물 pArms-26-CMV-S-CoV2, pArms-26-CAG-S-CoV2, pArms-26-EF1-S-CoV2를 획득하였다. 후자의 작제물은 발현 카세트 서열번호 1, 서열번호 2, 또는 서열번호 3뿐만 아니라, 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈의 상동성 아암을 각각 포함한다.
다음으로, 작제물 pArms-26-CMV-S-CoV2, pArms-26-CAG-S-CoV2, pArms-26-EF1-S-CoV2를 상동성 아암 사이의 고유한 가수분해 부위에 의해 선형화하고; 각각의 플라스미드를 재조합 벡터 pAd26-only-null과 혼합하였다.
상동 재조합으로 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 오픈 리딩 프레임 ORF6을 갖고, E1 및 E3 영역이 결실되고, 각각 발현 카세트 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3을 갖는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈을 보유하는 플라스미드 pAd26-only-CMV-S-CoV2, pAd26-only-CAG-S-CoV2, pAd26-only-EF1-S-CoV2를 획득할 수 있었다.
제4 단계에서 플라스미드 pAd26-only-CMV-S-CoV2, pAd26-only-CAG-S-CoV2, pAd26-only-EF1-S-CoV2를 특정 제한 엔도뉴클레아제로 가수분해하여 벡터 일부를 제거하였다. 유도된 DNA 산물을 HEK293 세포 배양의 형질감염에 사용하였다.
따라서, E1 및 E3 영역이 결실되고 RF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고 혼입된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈을 포함하는 발현 벡터를 획득하였다.
실시예 2
E1 및 E3 영역은 결실되고, ORF6-Ad26 영역은 ORF6-Ad5로 대체되고 혼입된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 발현 벡터의 형태의 면역생물학제의 생성.
이 단계에서, 실시예 1에서 획득된 발현 벡터를 음이온 교환 및 배제 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 완성된 현탁액은 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 또는 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액에 아데노바이러스 입자를 포함하였다.
따라서, E1 및 E3 영역이 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체된 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반하여 하기 면역생물학제를 생성하였다:
1. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역이 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 발현 카세트는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 1 (Ad26-CMV-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
2. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, ORF6-Ad26 영역은 ORF6-Ad5로 대체되고, 발현 카세트는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 1 (Ad26-CMV-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
3. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, ORF6-Ad26 영역은 ORF6-Ad5로 대체되고, 발현 카세트는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 2 (Ad26-CAG-S-CoV2)를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
4. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, ORF6-Ad26 영역은 ORF6-Ad5로 대체되고, 발현 카세트는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 2 (Ad26-CAG-S-CoV2)를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
5. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, ORF6-Ad26 영역은 ORF6-Ad5로 대체되고 발현 카세트는 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 3 (Ad26-EF1-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
6. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, ORF6-Ad26 영역은 ORF6-Ad5로 대체되고 발현 카세트는 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 3 (Ad26-EF1-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
제공된 면역생물학제 각각은 개발된 약제학적 제제의 변이체 1 및 변이체 2의 성분 1이다.
실시예 3.
재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈을 포함하는 발현 벡터의 생성.
제1 단계에서, 플라스미드 작제물 pSim25-Ends의 설계를 제안하였다. 이는 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 상동성인 2개의 영역 (2개의 상동성 아암)을 보유한다. 상동성 아암 중 하나는 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈의 개시 부분 (왼쪽 역 말단 반복으로부터 E1 영역)과 E1-영역의 말단으로부터 pIVa2 단백질까지의 서열이다. 다른 상동성 아암은 오른쪽 역 말단 반복을 포함하는 아데노바이러스 게놈의 말단의 서열을 포함한다. pSim25-Ends 작제물의 합성은 모스크바 회사 "Eurogen" ZAO에서 수행하였다.
비리온으로부터 단리된 유인원 아데노바이러스 혈청형 25 DNA를 pSim25-Ends와 혼합하였다. E1 영역이 결실된 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈을 보유하는 플라스미드 pSim25-dlE1을 pSim25-Ends와 바이러스 DNA 사이의 상동 재조합 과정을 통해 획득하였다.
또한, 표준 유전 공학 기술을 사용하여 아데노바이러스 게놈의 E3 영역 (유전자 12.5K 내지 유전자 14.7K의 개시 부분으로부터 약 3921개 염기쌍)을 벡터의 패키징 투여량을 확장하기 위해 작제된 플라스미드 pSim25-dlE1로부터 결실시켰다. 결과적으로, 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 전장 게놈을 인코딩하고, E1 및 E3 영역이 결실된 플라스미드 작제물 pSim25-null을 획득하였다. 서열 서열번호 6을 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 모 서열로 사용하였다.
또한, 본 발명자들은 발현 카세트의 다중 설계을 개발하였다:
- 발현 카세트 서열번호 4는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
- 발현 카세트 서열번호 2는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
- 발현 카세트 서열번호 3은 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
그런 다음, 플라스미드 작제물 pSim25-Ends에 기반하여, 유전 공학 기술을 사용하여 작제물 pArms-Sim25-CMV-S-CoV2, pArms-Sim25-CAG-S-CoV2, pArms-Sim25-EF1-S-CoV2를 획득하였다. 후자의 작제물은 발현 카세트 서열번호 4, 서열번호 2, 또는 서열번호 3뿐만 아니라, 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈의 상동성 아암을 각각 포함한다. 다음으로, 작제물 pArms-Sim25-CMV-S-CoV2, pArms-Sim25-CAG-S-CoV2, pArms-Sim25-EF1-S-CoV2를 상동성 아암 사이의 고유한 가수분해 부위에 의해 선형화하고; 각각의 플라스미드를 재조합 벡터 pSim25-null과 혼합하였다. 상동 재조합으로 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 오픈 리딩 프레임 ORF6와 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 전장 게놈을 포함하고, E1 및 E3 영역이 결실되고, 각각 발현 카세트 서열번호 4, 서열번호 2 또는 서열번호 3을 갖는 플라스미드 벡터 pSim25-CMV-S-CoV2, pSim25-CAG-S-CoV2, pSim25-EF1-S-CoV2를 획득할 수 있었다.
제3 단계에서 플라스미드 pSim25-CMV-S-CoV2, pSim25-CAG-S-CoV2, pSim25-EF1-S-CoV2를 특정 제한 엔도뉴클레아제로 가수분해하여 벡터 부분을 제거하였다. 유도된 DNA 산물을 HEK293 세포 배양의 형질감염에 사용하였다. 생성된 물질을 예비량의 재조합 아데노바이러스를 생성하는데 사용하였다.
그 결과, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자: simAd25-CMV-S-CoV2 (발현 카세트 서열번호 2 포함); simAd25-EF1-S-CoV2 (발현 카세트 서열번호 3 포함)를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 25를 획득하였다.
따라서, E1 및 E3 영역은 결실되고, 혼입 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 25의 게놈을 포함하는 발현 벡터를 획득하였다.
실시예 4.
E1 및 E3 영역은 결실되고, 혼입 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터의 형태의 면역생물학제의 생성.
이 단계에서 실시예 3에서 획득된 발현 벡터를 음이온 교환 및 배제 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 완성된 현탁액은 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 또는 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액에 아데노바이러스 입자를 포함하였다.
따라서, E1 및 E3 영역이 결실된 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈을 기반로 하여 하기 면역생물학제를 제조하였다:
1. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 1 (simAd25-CMV-S-CoV2)을 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
2. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 1 (simAd25-CMV-S-CoV2)을 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
3. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 2 (simAd25-CAG-S-CoV2)를 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
4. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 2 (simAd25-CAG-S-CoV2)를 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
5. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 3 (simAd25-EF1-S-CoV2)을 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
6. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 3 (simAd25-EF1-S-CoV2)을 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
제공된 면역생물학제 각각은 개발된 약제학적 제제의 변이체 1의 성분 2 및 개발된 약제학적 제제의 변이체 3의 성분 1을 포함한다.
실시예 5.
재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈을 포함하는 발현 벡터의 생성.
제1 단계에서, 플라스미드 작제물 pAd5-Ends의 설계를 제안하였다. 이는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 상동성인 2개의 영역 (2개의 상동성 아암)을 보유한다. 상동성 아암 중 하나는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈의 개시 부분 (왼쪽 역 말단 반복으로부터 E1 영역)과 pIX 단백질을 포함하는 바이러스 게놈의 서열이다. 다른 상동성 아암은 게놈의 말단을 통해 ORF3 Е4 영역 후에 위치한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. pAd26-Ends 작제물의 합성은 모스크바 회사 "Eurogen" ZAO에서 수행하였다.
비리온으로부터 단리된 인간 아데노바이러스 혈청형 5 DNA를 pAd26-Ends와 혼합하였다. E1 영역이 결실된 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈을 보유하는 플라스미드 pAd26-dlE1을 pAd26-Ends와 바이러스 DNA 사이의 상동 재조합 과정을 통해 획득하였다.
또한, 표준 유전 공학 기술을 사용하여 아데노바이러스 게놈의 E3 영역 (유전자 12.5K의 말단으로부터 U 엑손의 서열의 개시 부분까지의 2685개 염기쌍)을 벡터의 패키징 투여량을 확장하기 위해 작제된 플라스미드 pAd5-dlE1로부터 결실시켰다. 결과적으로, 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반하고 게놈의 E1 및 E3 영역이 결실된 재조합 플라스미드 벡터 pAd5-too-null을 획득하였다. 서열 서열번호 7을 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 모 서열로 사용하였다.
또한, 본 발명자들은 발현 카세트의 다중 설계을 개발하였다:
- 발현 카세트 서열번호 1은 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
- 발현 카세트 서열번호 2는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
- 발현 카세트 서열번호 3은 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다.
그런 다음, 플라스미드 작제물 pAd5-Ends에 기반하여, 유전 공학 기술을 사용하여 pArms-Ad5-CMV-S-CoV2, pArms-Ad5-CAG-S-CoV2, pArms-Ad5-EF1-S-CoV2를 획득하였다. 후자의 작제물은 발현 카세트 서열번호 1, 서열번호 2, 또는 서열번호 3뿐만 아니라, 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈의 상동성 아암을 각각 포함한다.
다음으로, 작제물 pArms-Ad5-CMV-S-CoV2, pArms-Ad5-CAG-S-CoV2, pArms-Ad5-EF1-S-CoV2를 상동성 아암 사이의 고유한 가수분해 부위에 의해 선형화하고; 각각의 플라스미드를 재조합 벡터 pAd5-too-null과 혼합하였다. 상동 재조합으로 E1 및 E3 영역이 결실되고, 각각 발현 카세트 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3을 갖는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈을 보유하는 플라스미드 pAd5-too-CMV-S-CoV2, pAd5-too-GAC-S-CoV2, pAd5-too-EF1-S-CoV2를 획득할 수 있었다.
제4 단계에서 플라스미드 pAd5-too-CMV-S-CoV2, pAd5-too-GAC-S-CoV2, pAd5-too-EF1-S-CoV2를 특정 제한 엔도뉴클레아제로 가수분해하여 벡터 일부를 제거하였다. 유도된 DNA 산물을 HEK293 세포 배양의 형질감염에 사용하였다. 생성된 물질을 예비량의 재조합 아데노바이러스를 축적시키는데 사용하였다.
그 결과, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자: Ad5-CMV-S-CoV2 (발현 카세트 서열번호 1 포함); Ad5-CAG-S-CoV2 (발현 카세트 서열번호 2 포함); Ad5-EF1-S-CoV2 (발현 카세트 서열번호 3 포함)를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5를 획득하였다.
따라서, E1 및 E3 영역은 결실되고, 혼입 발현 카세트는는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 5의 게놈을 포함하는 발현 벡터를 획득하였다.
실시예 6.
E1 및 E3 영역은 결실되고, 혼입 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터의 형태의 면역생물학제의 생성
이 단계에서 실시예 5에서 획득된 발현 벡터를 음이온 교환 및 배제 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 완성된 현탁액은 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 또는 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 아데노바이러스 입자를 포함하였다.
따라서, E1 및 E3 영역이 결실된 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반하여 하기 면역생물학제를 제조하였다:
1. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 1 (Ad5-CMV-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
2. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 1 (Ad5-CMV-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
3. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 2 (Ad5-CAG-S-CoV2)를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
4. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 CAG 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 2 (Ad5-CAG-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
5. 약제학적 제제의 액체 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 3 (Ad5-EF1-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
6. 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형용 완충 용액 중 E1 및 E3 영역은 결실되고, 발현 카세트는 EF1 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호, 서열번호 3 (Ad5-EF1-S-CoV2)을 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
제공된 면역생물학제 각각은 개발된 약제학적 제제의 변이체 1 및 변이체 2의 성분 1을 포함한다.
제공된 면역생물학제 각각은 개발된 약제학적 제제의 변이체 1 및 변이체 3의 성분 2를 포함한다.
실시예 7.
완충액의 제조
본 발명에 따라 개발된 약제학적 제제는 상이한 바이알에 배치된 2개의 성분으로 이루어진다. 이를 통해 모든 성분은 완충 용액에 발현 카세트가 있는 재조합 아데노바이러스에 기반한 면역생물학제를 포함한다.
본 발명자들은 재조합 바이러스 입자의 안정성을 확립하는 완충액의 조성을 선택하였다. 본 방법에는 다음이 포함된다:
1. 용액 pH 값을 유지하기 위해 필요한 트리스 (히드록시메틸)아미노메탄 (트리스).
2. 필요한 이온의 힘 및 삼투압에 도달하기 위해 첨가된 염화나트륨
3. 동결 보호제로 사용되는 수크로스.
4. 2가 양이온의 공급원으로서 필요한 염화마그네슘 6수화물.
5. 자유 라디칼 산화 억제제로 사용되는 EDTA.
6. 계면활성제의 공급원으로 사용되는 폴리소르베이트-80.
7. 자유 라디칼 산화 억제제로 사용되는 에탄올 95%.
8. 용매로서 사용되는 물.
본 발명의 발명자들은 완충 용액의 두 가지 변이체를 개발하였다: 약제학적 제제의 액체 제형 및 약제학적 제제의 동결건조 (냉동 건조) 제형.
약제학적 제제의 액체 제형용 완충액의 조성에 포함된 물질의 농도를 추정하기 위하여 다수의 실험 그룹을 선택하였다 (표 1). 생성된 완충액 각각에 약제학적 제제의 성분 중 하나를 첨가하였다:
1. CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 카세트, 1*1011개의 바이러스 입자를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
2. CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 카세트, 1*1011개의 바이러스 입자를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
3. CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 카세트, 1*1011개의 바이러스 입자를 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
따라서, 약제학적 제제에 포함된 각각의 아데노바이러스 혈청형의 안정성을 확인하였다. 획득된 약제학적 제제를 -18℃ 및 -70℃에서 3개월 동안 저장한 후 해동하고; 재조합 아데노바이러스의 역가 변화를 평가하였다.
그룹 번호 | 완충 용액의 조성 | |||||||
트리스 (mg) | 염화나트륨 (mg) | 수크로스 (mg) | 염화마그네슘 6수화물 (mg) | EDTA (mg) | 폴리소르베이트-80 (mg) | 에탄올 95% (mg) | 물 | |
1 | 0.968 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
2 | 1.815 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
3 | 1.21 | 1.752 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
4 | 1.21 | 3.285 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
5 | 1.21 | 2.19 | 20 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
6 | 1.21 | 2.19 | 37,5 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
7 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.0816 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
8 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.153 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
9 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.0152 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
10 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.0285 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
11 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.2 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
12 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.375 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
13 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.002 | 내지 0.5 ml |
14 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.00375 | 내지 0.5 ml |
15 | 1.21 | 2.19 | 25 | 0.102 | 0.019 | 0.25 | 0.0025 | 내지 0.5 ml |
수행된 실험의 결과, 재조합 아데노바이러스의 역가는 -18℃ 및 -70℃의 온도에서 약제학적 제제의 액체 제형용 완충액에 3개월 동안 저장한 후에도 변하지 않는 것으로 나타났다.
따라서, 개발된 약제학적 제제 액체 제형용 완충액은, 질량% 기준으로, 하기 활성 부분 범위에서 개발된 약제학적 제제의 모든 성분의 안정성을 확립한다:
트리스: 0.1831 질량% 내지 0.3432 질량%;
염화나트륨: 0.3313 질량% 내지 0.6212 질량%;
수크로스: 3.7821 질량% 내지 7.0915 질량%;
염화마그네슘 6수화물: 0.0154 질량% 내지 0.0289 질량%;
EDTA: 0.0029 질량% 내지 0.0054 질량%;
폴리소르베이트-80: 0.0378 질량% 내지 0.0709 질량%;
에탄올 95%: 0.0004 질량% 내지 0.0007 질량%;
용매: 나머지 부분
약제학적 제제의 동결건조 (냉동건조) 제형용 완충액의 조성에 포함된 물질의 농도를 추정하기 위해 실험 그룹의 다수의 선택 사항을 제시하였다 (표 2). 생성된 완충액 각각에 약제학적 제제의 성분 중 하나를 첨가하였다:
1. CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 카세트, 1*1011개의 바이러스 입자를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 면역생물학제.
2. CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 카세트, 1*1011개의 바이러스 입자를 포함하는 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 면역생물학제.
3. CMV 프로모터, SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 유전자, 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 발현 카세트, 1*1011개의 바이러스 입자를 포함하는 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 면역생물학제.
따라서, 약제학적 제제에 포함된 각각의 아데노바이러스 혈청형의 안정성을 확인하였다. 획득된 약제를 +2℃ 및 +8℃에서 3개월 동안 저장한 다음 해동하였다. 재조합 아데노바이러스의 역가 변화를 평가하였다.
그룹 번호 | 완충 용액의 조성 | ||||||
트리스 (mg) | 염화나트륨 (mg) | 수크로스 (mg) | 염화마그네슘 6수화물 (mg) | EDTA (mg) | 폴리소르베이트-80 (mg) | 물 | |
1 | 0.1936 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
2 | 0.363 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
3 | 0.242 | 1.1224 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
4 | 0.242 | 2.1045 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
5 | 0.242 | 1.403 | 58.8 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
6 | 0.242 | 1.403 | 110.25 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
7 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.01632 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
8 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.0306 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
9 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.00304 | 0.05 | 내지 1 ml |
10 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.0057 | 0.05 | 내지 1 ml |
11 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.04 | 내지 1 ml |
12 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.075 | 내지 1 ml |
13 | 0.242 | 1.403 | 73.5 | 0.0204 | 0.0038 | 0.05 | 내지 1 ml |
수행된 실험의 결과는 +2℃ 및 +8℃의 온도에서 약제학적 제제의 동결건조 (냉동건조) 제형용 완충액에 3개월 동안 저장한 후 재조합 아데노바이러스의 역가가 변하지 않은 것으로 나타났다.
따라서, 약제의 동결건조 (냉동 건조) 제형을 위한 개발된 완충 용액은 다음 범위의 활성 부분에서 개발된 약제학적 제제의 모든 성분의 안정성을 확립한다:
트리스: 0.0180 질량% 내지 0.0338 질량%;
염화나트륨: 0.1044 질량% 내지 0.1957 질량%;
수크로스: 5.4688 질량% 내지 10.2539 질량%;
염화마그네슘 6수화물: 0.0015 질량% 내지 0.0028 질량%;
EDTA: 0.0003 질량% 내지 0.0005 질량%;
폴리소르베이트-80: 0.0037 질량% 내지 0.0070 질량%;
용매: 나머지 부분
실시예 8.
체액성 면역 반응 평가에 기반한 개발된 약제학적 제제의 면역화 효과 평가
면역화 효과의 주요 특징 중 하나는 항체 역가이다. 본 실시예는 실험 동물에 약제를 투여한 후 21일째에 SARS-CoV-2 당단백질에 대한 항체 역가의 변화와 관련된 데이터를 도출한다.
체중 18 g의 암컷인 포유류 종 - BALB/c 마우스를 실험에 사용하였다. 모든 동물을 그룹당 5마리씩 31개 그룹으로 나누었고 약제학적 제제의 성분 1을 108 바이러스 입자/100 μl의 투여량으로 근육내 주사하고 2주 후에 성분 2를 108 바이러스 입자/100 μl의 투여량으로 근육내 주사하였다. 따라서 다음과 같은 동물 그룹이 형성되었다.
1) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10) Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15) Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17) Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20) Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2);
21) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30) simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31) 인산염 완충 식염수
3주 후, 동물의 꼬리 정맥으로부터 혈액 샘플을 채취하여 혈청을 분리하였다. 효소 결합 면역흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 다음 프로토콜에 따라 항체 역가를 측정하였다:
1) 96-웰 ELISA 플레이트의 웰에 단백질 (S)을 +4℃에서 16시간 동안 흡착시켰다.
2) 그 다음, 비특이적 결합을 방지하기 위해 플레이트를 웰당 100 μl의 양으로 TPBS에 용해된 5% 우유로 "차단"하였다. 이를 1시간 동안 37℃의 진탕기에서 인큐베이션하였다.
3) 면역화된 마우스로부터의 혈청 샘플을 2배 희석 방법을 사용하여 희석하였다. 총 12개의 각 샘플 희석액을 제조하였다.
4) 희석된 혈청 샘플 각각 50 μl를 플레이트 웰에 첨가하였다.
5) 그 후, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다.
6) 인큐베이션 후 웰을 인산염 완충액으로 3회 세척하였다.
7) 또한, 양고추냉이 퍼옥시다제가 접합된 마우스 면역글로불린에 대한 2차 항체를 첨가하였다.
8) 다음으로, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션을 수행하였다.
9) 인큐베이션 후 웰을 인산염 완충액으로 3회 세척하였다.
10) 그 다음, 양고추냉이 퍼옥시다제의 기질로서 작용하고 반응에 의해 착색 화합물로 전환되는 테트라메틸벤지딘 (TMB) 용액을 첨가하였다. 황산을 첨가하여 15분 후에 반응을 정지시켰다. 다음으로, 분광 광도계를 이용하여 450 nm의 파장에서 용액의 광학 밀도 (OD)를 각 웰에서 측정하였다.
항체 역가를 용액의 광학 밀도가 음성 대조군보다 유의하게 더 높은 최종 희석액으로 결정하였다. 획득된 결과 (기하 평균)를 표 3에 나타내었다.
No. | 동물 그룹 명 | 항체 역가 |
1 | Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
2 | Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 29,407 |
3 | Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
4 | Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
5 | Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
6 | Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
7 | Ad26- EF1 -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
8 | Ad26- EF1 -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
9 | Ad26- EF1 -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
10 | Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2) | 0 |
11 | Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
12 | Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
13 | Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S -CoV2 (성분 2) | 33,779 |
14 | Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
15 | Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S -CoV2 (성분 2) | 33,779 |
16 | Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
17 | Ad26- EF1 -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
18 | Ad26- EF1 -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
19 | Ad26- EF1 -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
20 | Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2) | 0 |
21 | Ad25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
22 | simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 29,407 |
23 | simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 25,600 |
24 | simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
25 | simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 29,407 |
26 | simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 29,407 |
27 | simAd25- EF1 -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
28 | simAd25- EF1 -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2) | 38,802 |
29 | simAd25- EF1 -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2) | 33,779 |
30 | simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2) | 0 |
31 | 인산염 완충 식염수 | 0 |
제시된 데이터에 나타난 바와 같이, 약제학적 제제의 모든 변이체는 SARS-CoV-2 당단백질에 대한 체액성 면역 반응을 유도한다.
실시예 9.
재조합 아데노바이러스의 하나의 혈청형을 포함하는 대조군 산물과 비교하여 개발된 약제학적 제제로의 면역화 효과의 평가
이 실험의 목적은 재조합 아데노바이러스의 한 가지 혈청형을 포함하는 대조군 산물로 2회 면역화된 마우스의 혈청 내 SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질에 대한 항체 역가와 재조합 아데노바이러스의 2가지 상이한 혈청형을 포함하는 개발된 약제학적 제제의 상이한 변이체로 면역화시킨 후 마우스의 혈청에서 SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질에 대한 항체 역가를 비교하는 것이었다.
이 실험에서 BalB/c 마우스, 18 g, 35 pcs를 사용하였다.
동물을 2주 간격으로 면역화시켰다:
1) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2), 5*106 v.p.;
2) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2), 5*106 v.p.;
3) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2), 5*106 v.p.;
4) Ad26-CMV-S-CoV2, Ad26-CMV-S-CoV2, 5*106 v.p.;
5) Ad5-CMV-S-CoV2, Ad5-CMV-S-CoV2, 5*106 v.p.;
6) simAd25-CMV-S-CoV2, simAd25-CMV-S-CoV2, 5*106 v.p.;
7) PBS.
1개월 후, SARS-CoV-2 바이러스 S 항원에 대한 항체 역가를 효소 결합 면역흡착 분석법 (ELISA)을 사용하여 결정하였다. 실험 결과는 아래 표에 나와 있다.
그룹 명 | 항체 역가 |
Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 3,104 |
Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 2,702 |
simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2) | 3104 |
Ad26-CMV-S-CoV2, Ad26-CMV-S-CoV2 | 588 |
Ad5-CMV-S-CoV2, Ad5-CMV-S-CoV2 | 512 |
simAd25-CMV-S-CoV2, simAd25-CMV-S-CoV2 | 446 |
PBS | 0 |
제공된 데이터는 약제학적 제제를 사용한 동물의 면역화가 면역 반응에 대한 강화 효과를 갖는다는 것을 보여준다. 이 효과는 2가지 벡터 유형을 포함하는 약제학적 제제로 면역화된 동물의 혈청 내 SARS-CoV-2 바이러스 S 항원에 대한 항체 역가가 단일 벡터 유형으로 면역화된 그룹의 항체 역가의 합과 비교하여 유의하게 더 높은 것으로 입증되었다.
실시예 10.
증식 림프구 백분율 평가에 기반한 개발된 약제학적 제제로의 면역화 효과 평가
SARS-Cov2 바이러스에 대한 세포 매개 면역 수준을 코로나바이러스 S 단백질의 재조합 RBD 단편으로 세포를 두 번째 재자극한 후 시험관내 배양에서 마우스 말초혈액의 증식 CD4+ 및 CD8+ 림프구 수를 측정하여 평가하였다. 증식 CD4+ 및 CD8+ 림프구의 수를 결정하기 위해 CFSE 염료로 림프구를 염색하는 방법을 사용하였다. 이 방법은 형광성 무독성 CFSE 염료가 세포에 쉽게 혼입될 수 있는 기능을 기반으로 한다. 항원으로 세포를 자극하면 림프구가 증식하기 시작하고 모세포의 염료가 딸 세포 사이에 균일하게 분포된다. 딸 세포의 표지 농도 및 결과적으로 형광 강도는 정확히 두 배 감소한다. 따라서 감소하는 형광 강도에 의해 분열 세포를 쉽게 추적할 수 있다.
C57BL/6 마우스를 실험에 사용하였다. 모든 동물을 31개 그룹 (그룹당 3마리)으로 나누고 약제학적 제제의 성분 1을 108 바이러스 입자/100 μl의 투여량으로 근육내 주사하였다. 2주 후 성분 2를 108 바이러스 입자/100 μl의 투여량으로 주사하였다. 따라서 다음과 같은 동물 그룹이 형성되었다:
1) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10) Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15) Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
16) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17) Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20) Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2);
21) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30) simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31) 인산염 완충 식염수.
실험 8일째에 동물을 안락사시켰다. 림프구를 Ficoll-Urografin 밀도 구배 원심분리에 의해 비장으로부터 단리하였다. 그런 다음, 단리된 세포를 기술 (문헌[B.J. Quah et. al., Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, Nature Protocols, 2007, ¹ 2(9), 2049-2056])에 따라 CFSE로 염색하고, 항원 (SARS-CV-2 바이러스 S 당단백질)의 존재 하에 배양하였다.
그 후, 세포 형광분석을 사용하여 세포를 분석하였다. 그 결과를 도 1, 도 2, 도 3, 도 4에 나타내었다. 따라서, 개발된 약제학적 제제의 모든 변이체는 항원 특이적 면역 반응 (CD4+ 및 CD8+ 모두)을 유도한다고 결론지을 수 있었다.
실시예 11.
개발된 약제학적 제제의 실험 동물에서 COVID-19에 대한 보호 효능 평가
SARS-CoV-2 바이러스에 의해 유발된 치사 수준의 감염 모델을 사용하여 면역결핍증이 유도된 시리아 골든 햄스터에서 COVID-19에 대해 개발된 약제학적 제제의 보호 효능을 평가하였다.
동물을 31개 그룹 (그룹당 8마리)으로 나누고, 21일 간격으로 개발된 약제학적 제제의 성분 1 (투여량 108 바이러스 입자/동물) 및 성분 2 (투여량 108 바이러스 입자/동물)로 2회 면역화시켰다.
따라서, 하기 동물 그룹이 형성되었다:
1) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
2) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
3) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
4) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
5) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
6) Ad26- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
7) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
8) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
9) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
10) Ad26- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
11) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
12) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
13) Ad26-CMV-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
14) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
15) Ad26- CAG-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2)
16) Ad26-CAG -S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
17) Ad26-EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 2);
18) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-CAG-S-CoV2 (성분 2);
19) Ad26- EF1-S-CoV2 (성분 1), simAd25-EF1-S-CoV2 (성분 2);
20) Ad26- null (성분 1), simAd25-null (성분 2)
21) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
22) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
23) simAd25-CMV-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
24) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
25) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
26) simAd25- CAG -S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
27) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CMV-S-CoV2 (성분 2);
28) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-CAG-S-CoV2 (성분 2);
29) simAd25- EF1-S-CoV2 (성분 1), Ad5-EF1-S-CoV2 (성분 2);
30) simAd25- null (성분 1), Ad5-null (성분 2);
31) 인산염 완충 식염수.
면역억제제를 부스터 면역화 후 7일째부터 투여하고; 부스터 면역화 후 14일째에 50 μl의 양으로 동물당 106 TCID50의 투여량으로 SARS-CoV-2 바이러스로 동물의 비강내로 시험감염시켰다.
실험 과정에서, 대조군에서 백신 접종되지 않은 동물의 중량은 시험감염 후 극적으로 감소하였다 (10일째에 기준 중량의 32%의 평균 중량 감소). 동시에, 시험감염 후 첫 번째 날 동안 약제학적 제제의 모든 변이체로 면역화된 동물의 체중은 약간 감소한 후 증가하였다 (10일째에 기준 중량의 11%의 평균 중량 증가).
도 4는 시험감염 후 동물의 생존율을 도시한다. 연구 결과는 약제학적 제제의 모든 변이체를 사용한 면역화가 유도된 면역결핍 동물의 100%에 대해 SARS-CoV-2 바이러스로 인한 치사 수준의 감염에 대한 보호를 제공했음을 입증하였다. 백신을 접종하지 않은 대조군의 치사율은 100%였다.
따라서, 면역결핍이 유도된 시리아 골든 햄스터의 모델에서, 개발된 약제학적 제제로의 면역화가 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 치사 수준의 감염에 대해 동물의 100% 보호를 확립하는 보호 면역 반응을 유도함을 입증하였다.
실시예 12.
개발된 약제학적 제제의 독성 연구
성적으로 성숙한 근교계 수컷 및 암컷 마우스에서 독성을 평가하였다. 실험 연구는 약제학적 제제, 변이체 1 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2, 성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2); 약제학적 제제, 변이체 2 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2, 성분 2: simAd25-CMV-S-CoV2); 약제학적 제제, 변이체 3 (성분1: simAd25-CMV-S-CoV2, 성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2)에 의해 수행하였다. 각각의 약제학적 제제 성분을은 증량 투여량으로 근육내 및 정맥내 주사하였다: 108 v. p.; 109 v. p.; 1010 v. p.; 및 1011 v. p.
실험 동안 동물 치사나 중독 징후가 보고되지 않았다. 백신은 실험동물의 체중이나 내부 기관의 중량에 영향을 미치지 않는 것으로 밝혀졌다. 벡터 기반 백신 투여 14일 후 부검에서 확인된 바와 같이 마우스 내부 기관의 구조는 영향을 받지 않았다. 수행된 실험 연구에서 국소 자극 효과가 기록되지 않았다.
따라서, 연구 결과는 개발된 약제학적 제제의 독성이 없음을 나타낸다.
실시예 13.
영장류에서 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 면역원성 연구
이 실험 연구의 목적은 개발된 약제학적 제제로 면역화된 후 영장류의 체액성 및 T-세포 매개 면역 수준을 평가하는 것이었다.
체액성 면역 반응의 진행을 영장류의 혈액에서 SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질에 대한 항체 역가 및 바이러스 중화 항체 역가의 증가에 의해 평가하였다. 세포 매개 면역 반응의 진행을 증식 CD4+ CD8+ T 림프구의 수를 결정함으로써 평가하였다.
이 연구는 2.0 내지 2.2 kg 범위의 체중을 갖는 17마리의 붉은털 원숭이 수컷을 포함하였다. 동물을 개발된 약제학적 제제, 변이체 1 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2, 성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2)로 백신 접종하였다. 동물에 인간 치료 투여량 1011 바이러스 입자/투여량으로 성분 1을 제공하고 21일 후에 인간 치료 투여량 1011 바이러스 입자/투여량으로 성분 2를 제공하였다.
백신 접종 전 (0일) 및 백신 접종 후 7, 14 및 28일째에 모든 동물로부터 혈액 샘플을 채취하였다. SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 RBD에 대한 특이적 항체의 역가를 다음과 같이 ELISA 기술을 사용하여 개발된 약제학적 제제로 면역화시킨 후 영장류의 혈청에서 측정하였다.
- 100 ng/웰 농도의 SARS-CoV-2 바이러스 RBD 항원을 플레이트에 고정화하고;
- 영장류 혈청의 2배 희석액을 차단 완충액 (희석액 1:50 - 1:51200)에 제조하고, 고정화된 RBD-항원이 있는 플레이트 (스트립) 웰에서 인큐베이션하고;
- 세척 후, 형성된 Ag-Ab 복합체를 원숭이 항체 IgG (항-MONKEY IgG (감마 사슬) (GOAT) 항체 - 617-101-012, ROCKLAND)의 Fc-단편에 특이적인 양고추냉이 퍼옥시다제 표지 접합체로 검출하였다.
- 세척 후, 발색 기질을 형성된 복합체에 첨가한 다음, 효소 반응을 중지하기 위해 중지 시약을 사용하였다.
발색된 색 (흡수)을 두 파장: 주 필터 - 450 nm, 기준 필터 - 620 nm의 분광광도계 Multiskan FC (Thermo)를 사용하여 기록하였다.
SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질에 대한 IgG 항체 역가를 광학 밀도 값이 음성 대조군 (제제 투여 전 동일한 영장류의 혈청)의 광학 밀도 값보다 2배 더 높은 혈청 희석액으로 규정하였다. 실험 결과를 도 5에 나타내었다.
상기 발견은 개발된 약제학적 제제로 면역화된 모든 동물에서 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 항체 역가가 증가하였음을 입증한다. 이것으로, 성분 2를 주입하고 1주 후 (실험 28일째) 피크 항체 역가가 기록되었다.
붉은털 원숭이의 혈액내 바이러스 중화 항체의 수준을 한천 도포물 배지 하에서 Vero C1008 세포의 1일 단층에서 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 형성된 음성 콜로니의 억제에 기반한 중화 반응에서 결정하였다. 중화 반응을 다음과 같이 설계하였다: 일정한 양의 바이러스 - 혈청 희석액.
연구에는 백신 접종 전 (0일) 및 백신 접종 후 7, 14 및 28일째에 영장류로부터 제공된 면역 혈청이 포함되었다; 양성 대조군 샘플 (SARS-CoV-2 바이러스에 대한 특이적 항체가 존재하는 인간 회복기의 혈액 혈청 샘플); 음성 대조군 표본 (SARS-CoV-2 바이러스에 대한 특이적 항체가 부재하는 소 태아 혈청 (FCS)); 및 SARS-CoV-2 바이러스의 배양.
중화 반응에는 혈청을 1:5로 희석하여 사용하였다. SARS-CoV-2 바이러스 ("항원")에 기반한 바이러스 포함 현탁액의 작업 희석액을 2% FCS 및 항생제 (스트렙토마이신 술페이트 및 벤질페니실린 나트륨 염), 일련의 10배 단위 희석액을 각각 100 U/ml를 사용하여 행크스 용액에서 제조하였다. 제조된 희석액에서 SARS-CoV-2 바이러스의 농도는 200 PFU·ml-1에 달하였다.
실험을 수행하기 위해, 25 cm2의 작용 표면적을 갖는 플라스틱 바이알, Сellstar®를 Vero С1008 세포의 일일 단층과의 중화 반응을 위해 선택하였다. 동일한 부피의 혈청과 SARS-CoV-2 바이러스 배양액의 혼합물을 36.50℃와 37.50℃ 사이의 온도 범위에서 60분 동안 인큐베이션한 후, Vero С1008 세포의 단층에 0.5 ml의 양으로 첨가하였다 (성장 배지를 미리 제거함). 항원+항체 복합체를 36.5 내지 37.50℃에서 60분 동안 세포에 흡착시킨 후, 접종물을 따라내었다. 그런 다음 SARS-CoV-2 바이러스용으로 설계된 1차 한천 도포물을 적용하고 단층을 36.50℃ 내지 37.50℃ 사이의 온도 범위에서 2일 동안 추가로 인큐베이션하였다.
2일 후, 감염된 세포 단층을 중성 적색의 0.1% 용액으로 염색하였다. 이를 위해 2차 한천 도포물을 적용하고 36.5 내지 37.50℃에서 24시간 동안 인큐베이션을 수행하고 바이알의 음성 콜로니 수를 계수하였다. 검사된 혈청의 항체 역가를 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 형성된 음성 콜로니의 결정된 억제가 음성 대조군보다 적어도 50% 더 많은 혈청의 최고 희석으로 규정하였다.
실험 14일째에 1:5를 초과하는 바이러스 중화 항체 수준이 동물의 17.6%에 나타났으며, 실험 28일째에는 동물의 100%에 나타난 것으로 입증되었다.
따라서, 상기 발견은 개발된 약제학적 제제의 투여가 영장류에서 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 체액성 면역 반응을 유도함을 입증한다.
T-세포 매개 면역 반응을 평가하기 위해, 백신 접종 전 (0일) 및 백신 접종 후 7, 14 및 28일째에 Ficoll 용액에서 밀도 구배 원심분리에 의해 단핵 세포를 영장류의 혈액으로부터 분리하였다.
이 방법은 혈액 세포의 부동 밀도 구배를 기반으로 한다. 물에 용해된 다당류 Ficoll 용액과 함께 밀도 구배 원심분리를 사용하면 말초 혈액 세포를 분리하고 림프구, 단핵구 하위 집단, 모세포 조혈 세포 및 과립구 및 적혈구를 포함하는 분획을 포함하는 단핵 세포 분획 (MF)을 단리할 수 있다.
MF 밀도는 Ficoll보다 더 낮으므로 원심분리 후 Ficoll 시약 위에 적층된다.
과립구 및 적혈구의 밀도는 구배 밀도보다 더 높으며 구배를 통하여 시험관 바닥층으로 이동한다 (문헌[Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow //Scand.J.Clin.Lab.Investig.- 1968.-Vol.21-Suppl.97.p.1-9]). 가장 작은 세포인 혈소판은 적절한 속도로 원심분리가 수행될 때 "물/Ficoll" 단계의 경계면에 도달하지 않고 혈청에 남아 있다.
영장류의 말초혈액으로부터 단핵세포 분획을 단리한 후, 세포를 형광염료 CFSE (Invivogen, USA)로 염색하고 플레이트 웰에 넣었다.
플레이트 웰에 단핵 세포를 시딩한 후, 코로나바이러스 S 단백질의 RBD 단편을 배양 배지에 첨가함으로써 림프구를 시험관내에서 재자극하였다 (최종 단백질 농도 - 1 μg/ml). 항원이 첨가되지 않은 온전한 세포를 음성 대조군으로 사용하였다. 증식 세포의 백분율을 항원 첨가 후 72시간째에 측정하였다.
실험 결과를 도 6 및 도 7에 나타내었다.
실험 데이터는 개발된 약제학적 제제로 면역화함으로써 영장류에서 유도된 T-세포 매개 면역의 최대 수준이 증식 CD4+ T 림프구 및 CD8+ T 림프구 백분율의 산술 평균 값에 의해 평가된 바와 같이 면역화 후 28일째에 기록되었음을 나타낸다. 이 발견은 연구 21일째에 수행된 제2 (부스트) 면역화와 관련이 있다 (1.2% 대 비면역화 그룹의 0.1%). 이 경우, 증식 CD4+ 및 CD8+ T 림프구가 증식을 위해 재자극되어 백신 접종된 동물에서 이의 존재 백분율이 증가한다.
요약하면, 시험 투여량 및 면역화 요법에 사용된 개발된 약제학적 제제로 영장류의 면역화가 유의한 (비면역화 동물의 대조군에서의 값과 통계적으로 유의한 차이의) SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질에 대한 항체 역가 및 중화 항체 역가의 증가를 특징으로 하는 체액성 면역 반응을 유도한다는 결론이 내려질 수 있다. 또한 CD4+ 및 CD8+ 림프구를 모두 포함하는 T 세포 매개 면역을 유도한다.
실시예 14.
세포 매개 면역의 수준을 증식 CD4+ 및 CD8+ 림프구의 수를 결정함으로써 평가하였다.
백신 접종 후 상이한 기간에 지원자의 혈액에서 SARS-CoV-2 바이러스 항원에 대한 세포 매개 면역 반응을 평가하여 개발된 약제학적 제제의 면역원성 평가
세포 매개 면역의 수준을 변이체 1에 따라 개발된 약제학적 제제의 임상 시험에서 평가하였다.
시험은 다음으로 면역화된 40명의 지원자를 포함하였다:
1) 개발된 약제학적 제제, 변이체 1 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2, 성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2)의 액체 제형의 성분 1 및 21일 후 - 성분 2, 투여량 1x1011개의 바이러스 입자 (20명).
2) 개발된 약제학적 제제, 변이체 1 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2,성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2)의 동결건조 (냉동 건조) 제형의 성분 1 및 21일 후 - 성분 2, 투여량 1x1011개의 바이러스 입자 (20명).
0일 (백신 접종 전) 7, 14 및 28일째에 자원자로부터 혈액 샘플을 채취하고, Ficoll 용액에서 밀도 구배 원심분리에 의해 단핵 세포를 혈액으로부터 분리하였다. 그런 다음, 단리된 세포를 형광 염료 CFSE (Invivogen, USA)로 염색하고 플레이트 웰에 시딩하였다.
다음으로, 배양 배지에 코로나바이러스 S 단백질을 첨가하여 시험관내에서 림프구를 재자극하였다 (최종 단백질 농도 - 1 μg/ml). 항원이 첨가되지 않은 온전한 세포를 음성 대조군으로 사용하였다. 증식 세포의 백분율을 항원 첨가 72시간 후에 결정하였고, 감마-인터페론을 측정하기 위해 배양 배지를 샘플링하였다.
증식 세포의 %를 결정하기 위해 T 림프구 CD3, CD4, CD8 (항-CD3 Pe-Cy7 (BD Biosciences, 클론 SK7), 항-CD4 APC (BD Biosciences, 클론 SK3), 항-CD8 PerCP-Cy5.5 (BD Biosciences, 클론 SK1)의 마커 분자에 대한 항체로 이를 염색하였다. 증식 (CFSE 염료의 양이 더 적은 세포) CD4+ 및 CD8+ T 림프구를 고성능 세포형광측정기 BD FACS AriaIII (BD Biosciences, USA)를 사용하여 세포 혼합물에서 결정하였다.
코로나바이러스 S 항원에 의해 재자극된 세포의 분석에서 획득된 결과로부터 온전한 세포의 분석에서 획득된 결과를 빼서 각 표본에서 획득된 증식 세포의 백분율을 결정하였다. 획득된 결과를 도 8 및 도 9 (백신의 액체 제형) 및 도 10 및 도 11 (백신의 동결건조 제형)에 나타내었다.
제조업체의 지침에 따라, 코로나바이러스 S 단백질로 재자극 후 72시간째에 인간 혈액의 단핵 세포의 배양 배지에서 감마 인터페론 (IFNγ) 농도의 정량적 측정을 "감마-인터페론-IFA-BEST" (VECTOR-BEST, 러시아) 키트를 사용하여 수행하였다. 제공된 데이터는 도 12 (백신의 액체 제형) 및 도 13 (백신의 동결건조 제형)에 제시되어 있다.
수행된 연구의 결과는 두 가지 약제학적 제제, 변이체 1의 두 제형으로 지원자의 순차적 면역화에 의해 유도된 세포 매개 면역의 수준 (증식 CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 평균 수에 기반함)이 면역화 당일 이후로 날이 갈수록 증가하였음을 나타내었다.
두 그룹에서, 증식 CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 피크 값은 면역화 후 28일째에 기록되었다. CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 증식 값에서 통계적으로 가장 큰 차이 (p<0.001)는 연구 0일과 28일째의 값 사이에서 기록되었다.
도 12 및 도 13에 나타낸 결과에 기반하여, 약제학적 제제, 변이체 1의 두 제형으로 지원자의 순차적 면역화에 의해 유도된 세포 매개 면역의 수준 (평균 IFNγ 농도 증가에 따름)는 면역화 당일 이후 날이 지날수록 증가한다고 결론지을 수 있다.
면역화 전 (0일째) 및 백신화 후 14일째에 IFNγ 농도 증가 값의 통계적으로 유의한 차이는 p<0.001이었다. IFNγ 농도의 최대 증가는 면역화 후 28일째에 발견되었다. IFNγ 농도 증가 값의 통계적으로 가장 큰 차이 (p<0.001)는 연구 0일과 28일 사이에 기록되었다.
따라서, 이러한 발견에 기반하여, 개발된 약제학적 제제로 면역화하는 것이 면역화 전 및 후의 측정된 매개변수에서 높은 수준의 통계적 유의성으로 확인되는 강력한 항원-특이적 세포-매개 항감염 면역의 형성을 유도할 수 있다는 결론을 내릴 수 있다.
실시예 15.
백신 접종 후 상이한 기간에 지원자의 혈액 내 SARS-CoV-2 바이러스 항원에 대한 항체 역가 평가에 의한 개발된 약제학적 제제의 면역원성 평가
시험은 다음으로 면역화된 40명의 지원자를 포함하였다:
1) 개발된 약제학적 제제, 변이체 1 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2, 성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2)의 액체 제형의 성분 1, 및 21일 후 - 성분 2, 투여량 1x1011개의 바이러스 입자 (20명의 개체).
2) 개발된 약제학적 제제, 변이체 1 (성분 1: Ad26-CMV-S-CoV2, 성분 2: Ad5-CMV-S-CoV2)의 동결건조 (냉동 건조) 제형의 성분 1 및 21일 후 - 성분 2, 투여량 1x1011개의 바이러스 입자 (20명의 개체).
7일, 14일 및 28일째에 지원자로부터 혈액 샘플을 채취하고 혈청을 혈액에서 분리하였다.
SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질 RBD에 대한 항체 역가를 "SARS-CoV-2-RBD-IFA-Gamaleya" 테스트 키트에 의해 효소 결합 면역흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 측정하였다. 분석을 제조업체의 지침에 따라 수행하였다.
산물의 액체 제형이 제공된 후 지원자의 혈청에서 SARS-CoV-2 바이러스 항원에 대한 항체 역가의 결과 분석 측정을 도 14에 나타내었다.
산물의 동결건조 (냉동 건조) 제형이 제공된 후 지원자의 혈청에서 SARS-CoV-2 바이러스 항원에 대한 항체 역가의 결과 분석 측정을 도 15에 나타내었다.
발견에 의해 입증된 바와 같이, 액체 및 동결건조 (냉동 건조) 제형 둘 모두로서 개발된 약제학적 제제로의 지원자의 면역화는 강력한 (대조군, 비면역화된 지원자 그룹 값과 통계적으로 유의한 차이) SARS-CoV-2 바이러스 S 단백질에 대한 항체 역가의 증가를 특징으로 하는 체액성 면역의 획득을 지원하였다. 이와 함께 면역화 당일 이후 날이 지날수록 체액성 면역 반응의 수준이 증가하였다.
따라서, 지정된 기술적 목적, 특히 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 면역 반응의 효과적인 유도를 확립하는 제제의 개발은 제공된 실시예에 의해 입증된 바와 같이 달성된다.
제공된 모든 실시예는 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 면역 반응의 효과적인 유도를 확립하는 약제학적 제제의 효과 및 산업상 이용가능성을 확인시킨다.
SEQUENCE LISTING
<110> Federal State Budgetary Institution "National Research Center for Epidemiology and Microbiology named after the honorary academician N.F. Gamaleya" of the Ministry of Health of the Russian Federation
<120> Pharmaceutical agent and utilization method thereof for inducing specific immunity against severe acute respiratory syndrome virus SARS-CoV-2 (variants).
<160> 7
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 4711
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Developed expression cassette, containing the CMV-promoter, optimized SARS-CoV-2 S protein sequence and polyadenylation signal
<400> 1
atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata 60
acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 120
aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 180
gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 240
ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 300
atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat 360
gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag 420
tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc 480
aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga 540
ggtctatata agcagagctg gtttagtgaa ccgtcagatc cgctagagat ctggtaccgt 600
cgacgcggcc gctcgagcct aagcttggta ccatgtttgt gttccttgtg ttattgccac 660
tagtctctag tcagtgtgtg aacctgacca caagaaccca gctgcctcca gcctacacca 720
acagctttac cagaggcgtg tactaccccg acaaggtgtt cagatccagc gtgctgcact 780
ctacccagga cctgttcctg cctttcttca gcaacgtgac ctggttccac gccatccacg 840
tgtccggcac caatggcacc aagagattcg acaaccccgt gctgcccttc aacgacgggg 900
tgtactttgc cagcaccgag aagtccaaca tcatcagagg ctggatcttc ggcaccacac 960
tggacagcaa gacccagagc ctgctgatcg tgaacaacgc caccaacgtg gtcatcaaag 1020
tgtgcgagtt ccagttctgc aacgacccct tcctgggcgt ctactatcac aagaacaaca 1080
agagctggat ggaaagcgag ttccgggtgt acagcagcgc caacaactgc accttcgagt 1140
acgtgtccca gcctttcctg atggacctgg aaggcaagca gggcaacttc aagaacctgc 1200
gcgagttcgt gttcaagaac atcgacggct acttcaagat ctacagcaag cacaccccta 1260
tcaacctcgt gcgggatctg cctcagggct tctctgctct ggaacccctg gtggatctgc 1320
ccatcggcat caacatcacc cggtttcaga cactgctggc cctgcacaga agctacctga 1380
cacctggcga tagcagcagc ggatggacag ctggtgccgc cgcttactat gtgggctacc 1440
tgcagcctag aaccttcctg ctgaagtaca acgagaacgg caccatcacc gacgccgtgg 1500
attgtgctct ggatcctctg agcgagacaa agtgcaccct gaagtccttc accgtggaaa 1560
agggcatcta ccagaccagc aacttccggg tgcagcccac cgaatccatc gtgcggttcc 1620
ccaatatcac caatctgtgc cccttcggcg aggtgttcaa tgccaccaga ttcgcctctg 1680
tgtacgcctg gaaccggaag cggatcagca attgcgtggc cgactactcc gtgctgtaca 1740
actccgccag cttcagcacc ttcaagtgct acggcgtgtc ccctaccaag ctgaacgacc 1800
tgtgcttcac aaacgtgtac gccgacagct tcgtgatccg gggagatgaa gtgcggcaga 1860
ttgcccctgg acagacaggc aagatcgccg actacaacta caagctgccc gacgacttca 1920
ccggctgtgt gattgcctgg aacagcaaca acctggactc caaagtcggc ggcaactaca 1980
attacctgta ccggctgttc cggaagtcca atctgaagcc cttcgagcgg gacatctcca 2040
ccgagatcta tcaggccggc agcacccctt gtaacggcgt ggaaggcttc aactgctact 2100
tcccactgca gtcctacggc tttcagccca caaatggcgt gggctatcag ccctacagag 2160
tggtggtgct gagcttcgaa ctgctgcatg cccctgccac agtgtgcggc cctaagaaaa 2220
gcaccaatct cgtgaagaac aaatgcgtga acttcaactt caacggcctg accggcaccg 2280
gcgtgctgac agagagcaac aagaagttcc tgccattcca gcagtttggc cgggatattg 2340
ccgataccac agacgccgta cgagatcccc agacactgga aatcctggac atcacccctt 2400
gcagcttcgg cggagtgtct gtgatcaccc ctggcaccaa caccagcaat caggtggcag 2460
tgctgtacca ggacgtgaac tgtaccgaag tgcccgtggc cattcacgcc gatcagctga 2520
cacctacatg gcgggtgtac tccaccggca gcaatgtgtt tcagaccaga gccggctgtc 2580
tgatcggagc cgagcacgtg aacaatagct acgagtgcga catccccatc ggcgctggca 2640
tctgtgccag ctaccagaca cagacaaaca gccccagacg ggccagatct gtggccagcc 2700
agagcatcat tgcctacaca atgtctctgg gcgccgagaa cagcgtggcc tactccaaca 2760
actctatcgc tatccccacc aacttcacca tcagcgtgac cacagagatc ctgcctgtgt 2820
ccatgaccaa gaccagcgtg gactgcacca tgtacatctg cggcgattcc accgagtgct 2880
ccaacctgct gctgcagtac ggcagcttct gcacccagct gaatagagcc ctgacaggga 2940
tcgccgtgga acaggacaag aacacccaag aggtgttcgc ccaagtgaag cagatctaca 3000
agacccctcc tatcaaggac ttcggcggct tcaatttcag ccagattctg cccgatccta 3060
gcaagcccag caagcggagc ttcatcgagg acctgctgtt caacaaagtg acactggccg 3120
acgccggctt catcaagcag tatggcgatt gtctgggcga cattgccgcc agggatctga 3180
tttgcgccca gaagtttaac ggactgacag tgctgccacc actgctgacc gatgagatga 3240
tcgcccagta cacatctgcc ctgctggccg gcacaatcac aagcggctgg acatttggag 3300
ctggcgccgc tctgcagatc ccctttgcta tgcagatggc ctaccggttc aacggcatcg 3360
gagtgaccca gaatgtgctg tacgagaacc agaagctgat cgccaaccag ttcaacagcg 3420
ccatcggcaa gatccaggac agcctgagca gcacagcaag cgccctggga aagctgcagg 3480
acgtggtcaa ccagaatgcc caggcactga acaccctggt caagcagctg tcctccaact 3540
tcggcgccat cagctctgtg ctgaacgaca tcctgagcag actggacaag gtggaagccg 3600
aggtgcagat cgacagactg atcaccggaa ggctgcagtc cctgcagacc tacgttaccc 3660
agcagctgat cagagccgcc gagattagag cctctgccaa tctggccgcc accaagatgt 3720
ctgagtgtgt gctgggccag agcaagagag tggacttttg cggcaagggc taccacctga 3780
tgagcttccc tcagtctgcc cctcacggcg tggtgtttct gcacgtgaca tacgtgcccg 3840
ctcaagagaa gaatttcacc accgctccag ccatctgcca cgacggcaaa gcccactttc 3900
ctagagaagg cgtgttcgtg tccaacggca cccattggtt cgtgacccag cggaacttct 3960
acgagcccca gatcatcacc accgacaaca ccttcgtgtc tggcaactgc gacgtcgtga 4020
tcggcattgt gaacaatacc gtgtacgacc ctctgcagcc cgagctggac agcttcaaag 4080
aggaactgga taagtacttt aagaaccaca caagccccga cgtggacctg ggcgacatca 4140
gcggaatcaa tgccagcgtc gtgaacatcc agaaagagat cgaccggctg aacgaggtgg 4200
ccaagaatct gaacgagagc ctgatcgacc tgcaagaact ggggaagtac gagcagtaca 4260
tcaagtggcc ctggtacatc tggctgggct ttatcgccgg actgattgcc atcgtgatgg 4320
tcacaatcat gctgtgttgc atgaccagct gctgtagctg cctgaagggc tgttgtagct 4380
gtggcagctg ctgcaagttc gacgaggacg attctgagcc cgtgctcaaa ggagtcaaat 4440
tacattacac ataagatatc cgatccaccg gatctagata actgatcata atcagccata 4500
ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc acacctcccc ctgaacctga 4560
aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat tgcagcttat aatggttaca 4620
aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt tttttcactg cattctagtt 4680
gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt a 4711
<210> 2
<211> 5984
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Developed expression cassette, containing the CAG-promoter, optimized SARS-CoV-2 S protein sequence and polyadenylation signal
<400> 2
gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc 60
catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca 120
acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga 180
ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc 240
aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct 300
ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat 360
tagtcatcgc tattaccatg gtcgaggtga gccccacgtt ctgcttcact ctccccatct 420
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ggggcggggg gggggggcgc gcgccaggcg gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg 540
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ctgcgcgctg ccttcgcccc gtgccccgct ccgccgccgc ctcgcgccgc ccgccccggc 720
tctgactgac cgcgttactc ccacaggtga gcgggcggga cggcccttct cctccgggct 780
gtaattagcg cttggtttaa tgacggcttg tttcttttct gtggctgcgt gaaagccttg 840
aggggctccg ggagggccct ttgtgcgggg ggagcggctc ggggggtgcg tgcgtgtgtg 900
tgtgcgtggg gagcgccgcg tgcggctccg cgctgcccgg cggctgtgag cgctgcgggc 960
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ccccgcggtg cgggggggct gcgaggggaa caaaggctgc gtgcggggtg tgtgcgtggg 1080
gggtgagcag ggggtgtggg cgcgtcggtc gggctgcaac cccccctgca cccccctccc 1140
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ctcgccgtgc cgggcggggg gtggcggcag gtgggggtgc cgggcggggc ggggccgcct 1260
cgggccgggg agggctcggg ggaggggcgc ggcggccccc ggagcgccgg cggctgtcga 1320
ggcgcggcga gccgcagcca ttgcctttta tggtaatcgt gcgagagggc gcagggactt 1380
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gggcgcgggg cgaagcggtg cggcgccggc aggaaggaaa tgggcgggga gggccttcgt 1500
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ggctgccttc ggggggacgg ggcagggcgg ggttcggctt ctggcgtgtg accggcggct 1620
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gcagcggatg gacagctggt gccgccgctt actatgtggg ctacctgcag cctagaacct 2460
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ctctgagcga gacaaagtgc accctgaagt ccttcaccgt ggaaaagggc atctaccaga 2580
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gcaacaagaa gttcctgcca ttccagcagt ttggccggga tattgccgat accacagacg 3360
ccgtacgaga tccccagaca ctggaaatcc tggacatcac cccttgcagc ttcggcggag 3420
tgtctgtgat cacccctggc accaacacca gcaatcaggt ggcagtgctg taccaggacg 3480
tgaactgtac cgaagtgccc gtggccattc acgccgatca gctgacacct acatggcggg 3540
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acgtgaacaa tagctacgag tgcgacatcc ccatcggcgc tggcatctgt gccagctacc 3660
agacacagac aaacagcccc agacgggcca gatctgtggc cagccagagc atcattgcct 3720
acacaatgtc tctgggcgcc gagaacagcg tggcctactc caacaactct atcgctatcc 3780
ccaccaactt caccatcagc gtgaccacag agatcctgcc tgtgtccatg accaagacca 3840
gcgtggactg caccatgtac atctgcggcg attccaccga gtgctccaac ctgctgctgc 3900
agtacggcag cttctgcacc cagctgaata gagccctgac agggatcgcc gtggaacagg 3960
acaagaacac ccaagaggtg ttcgcccaag tgaagcagat ctacaagacc cctcctatca 4020
aggacttcgg cggcttcaat ttcagccaga ttctgcccga tcctagcaag cccagcaagc 4080
ggagcttcat cgaggacctg ctgttcaaca aagtgacact ggccgacgcc ggcttcatca 4140
agcagtatgg cgattgtctg ggcgacattg ccgccaggga tctgatttgc gcccagaagt 4200
ttaacggact gacagtgctg ccaccactgc tgaccgatga gatgatcgcc cagtacacat 4260
ctgccctgct ggccggcaca atcacaagcg gctggacatt tggagctggc gccgctctgc 4320
agatcccctt tgctatgcag atggcctacc ggttcaacgg catcggagtg acccagaatg 4380
tgctgtacga gaaccagaag ctgatcgcca accagttcaa cagcgccatc ggcaagatcc 4440
aggacagcct gagcagcaca gcaagcgccc tgggaaagct gcaggacgtg gtcaaccaga 4500
atgcccaggc actgaacacc ctggtcaagc agctgtcctc caacttcggc gccatcagct 4560
ctgtgctgaa cgacatcctg agcagactgg acaaggtgga agccgaggtg cagatcgaca 4620
gactgatcac cggaaggctg cagtccctgc agacctacgt tacccagcag ctgatcagag 4680
ccgccgagat tagagcctct gccaatctgg ccgccaccaa gatgtctgag tgtgtgctgg 4740
gccagagcaa gagagtggac ttttgcggca agggctacca cctgatgagc ttccctcagt 4800
ctgcccctca cggcgtggtg tttctgcacg tgacatacgt gcccgctcaa gagaagaatt 4860
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agagcctgat cgacctgcaa gaactgggga agtacgagca gtacatcaag tggccctggt 5280
acatctggct gggctttatc gccggactga ttgccatcgt gatggtcaca atcatgctgt 5340
gttgcatgac cagctgctgt agctgcctga agggctgttg tagctgtggc agctgctgca 5400
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tcactcctca ggtgcaggct gcctatcaga aggtggtggc tggtgtggcc aatgccctgg 5520
ctcacaaata ccactgagat ctttttccct ctgccaaaaa ttatggggac atcatgaagc 5580
cccttgagca tctgacttct ggctaataaa ggaaatttat tttcattgca atagtgtgtt 5640
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aaggttggct ataaagaggt catcagtata tgaaacagcc ccctgctgtc cattccttat 5820
tccatagaaa agccttgact tgaggttaga tttttttata ttttgttttg tgttattttt 5880
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<210> 3
<211> 5314
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Developed expression cassette, containing the EF1-promoter, optimized SARS-CoV-2 S protein sequence and polyadenylation signal
<400> 3
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gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt tgccgccaga acacaggtaa 240
gtgccgtgtg tggttcccgc gggcctggcc tctttacggg ttatggccct tgcgtgcctt 300
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gggccgcggg cggcgacggg gcccgtgcgt cccagcgcac atgttcggcg aggcggggcc 660
tgcgagcgcg gccaccgaga atcggacggg ggtagtctca agctggccgg cctgctctgg 720
tgcctggcct cgcgccgccg tgtatcgccc cgccctgggc ggcaaggctg gcccggtcgg 780
caccagttgc gtgagcggaa agatggccgc ttcccggccc tgctgcaggg agctcaaaat 840
ggaggacgcg gcgctcggga gagcgggcgg gtgagtcacc cacacaaagg aaaagggcct 900
ttccgtcctc agccgtcgct tcatgtgact ccacggagta ccgggcgccg tccaggcacc 960
tcgattagtt ctcgagcttt tggagtacgt cgtctttagg ttggggggag gggttttatg 1020
cgatggagtt tccccacact gagtgggtgg agactgaagt taggccagct tggcacttga 1080
tgtaattctc cttggaattt gccctttttg agtttggatc ttggttcatt ctcaagcctc 1140
agacagtggt tcaaagtttt tttcttccat ttcaggtgtc gtgaggaatt agcttggtac 1200
taatacgact cacaagcttg gtaccatgtt tgtgttcctt gtgttattgc cactagtctc 1260
tagtcagtgt gtgaacctga ccacaagaac ccagctgcct ccagcctaca ccaacagctt 1320
taccagaggc gtgtactacc ccgacaaggt gttcagatcc agcgtgctgc actctaccca 1380
ggacctgttc ctgcctttct tcagcaacgt gacctggttc cacgccatcc acgtgtccgg 1440
caccaatggc accaagagat tcgacaaccc cgtgctgccc ttcaacgacg gggtgtactt 1500
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caagacccag agcctgctga tcgtgaacaa cgccaccaac gtggtcatca aagtgtgcga 1620
gttccagttc tgcaacgacc ccttcctggg cgtctactat cacaagaaca acaagagctg 1680
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cgtgttcaag aacatcgacg gctacttcaa gatctacagc aagcacaccc ctatcaacct 1860
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catcaacatc acccggtttc agacactgct ggccctgcac agaagctacc tgacacctgg 1980
cgatagcagc agcggatgga cagctggtgc cgccgcttac tatgtgggct acctgcagcc 2040
tagaaccttc ctgctgaagt acaacgagaa cggcaccatc accgacgccg tggattgtgc 2100
tctggatcct ctgagcgaga caaagtgcac cctgaagtcc ttcaccgtgg aaaagggcat 2160
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caccaatctg tgccccttcg gcgaggtgtt caatgccacc agattcgcct ctgtgtacgc 2280
ctggaaccgg aagcggatca gcaattgcgt ggccgactac tccgtgctgt acaactccgc 2340
cagcttcagc accttcaagt gctacggcgt gtcccctacc aagctgaacg acctgtgctt 2400
cacaaacgtg tacgccgaca gcttcgtgat ccggggagat gaagtgcggc agattgcccc 2460
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tgtgattgcc tggaacagca acaacctgga ctccaaagtc ggcggcaact acaattacct 2580
gtaccggctg ttccggaagt ccaatctgaa gcccttcgag cgggacatct ccaccgagat 2640
ctatcaggcc ggcagcaccc cttgtaacgg cgtggaaggc ttcaactgct acttcccact 2700
gcagtcctac ggctttcagc ccacaaatgg cgtgggctat cagccctaca gagtggtggt 2760
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gacagagagc aacaagaagt tcctgccatt ccagcagttt ggccgggata ttgccgatac 2940
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ccaggacgtg aactgtaccg aagtgcccgt ggccattcac gccgatcagc tgacacctac 3120
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tcctatcaag gacttcggcg gcttcaattt cagccagatt ctgcccgatc ctagcaagcc 3660
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ccagaagttt aacggactga cagtgctgcc accactgctg accgatgaga tgatcgccca 3840
gtacacatct gccctgctgg ccggcacaat cacaagcggc tggacatttg gagctggcgc 3900
cgctctgcag atcccctttg ctatgcagat ggcctaccgg ttcaacggca tcggagtgac 3960
ccagaatgtg ctgtacgaga accagaagct gatcgccaac cagttcaaca gcgccatcgg 4020
caagatccag gacagcctga gcagcacagc aagcgccctg ggaaagctgc aggacgtggt 4080
caaccagaat gcccaggcac tgaacaccct ggtcaagcag ctgtcctcca acttcggcgc 4140
catcagctct gtgctgaacg acatcctgag cagactggac aaggtggaag ccgaggtgca 4200
gatcgacaga ctgatcaccg gaaggctgca gtccctgcag acctacgtta cccagcagct 4260
gatcagagcc gccgagatta gagcctctgc caatctggcc gccaccaaga tgtctgagtg 4320
tgtgctgggc cagagcaaga gagtggactt ttgcggcaag ggctaccacc tgatgagctt 4380
ccctcagtct gcccctcacg gcgtggtgtt tctgcacgtg acatacgtgc ccgctcaaga 4440
gaagaatttc accaccgctc cagccatctg ccacgacggc aaagcccact ttcctagaga 4500
aggcgtgttc gtgtccaacg gcacccattg gttcgtgacc cagcggaact tctacgagcc 4560
ccagatcatc accaccgaca acaccttcgt gtctggcaac tgcgacgtcg tgatcggcat 4620
tgtgaacaat accgtgtacg accctctgca gcccgagctg gacagcttca aagaggaact 4680
ggataagtac tttaagaacc acacaagccc cgacgtggac ctgggcgaca tcagcggaat 4740
caatgccagc gtcgtgaaca tccagaaaga gatcgaccgg ctgaacgagg tggccaagaa 4800
tctgaacgag agcctgatcg acctgcaaga actggggaag tacgagcagt acatcaagtg 4860
gccctggtac atctggctgg gctttatcgc cggactgatt gccatcgtga tggtcacaat 4920
catgctgtgt tgcatgacca gctgctgtag ctgcctgaag ggctgttgta gctgtggcag 4980
ctgctgcaag ttcgacgagg acgattctga gcccgtgctc aaaggagtca aattacatta 5040
cacataagat ctagagtcgg ggcggccggc cgctcgctga tcagcctcga ctgtgccttc 5100
tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc 5160
cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg 5220
tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa 5280
tagcaggcat gctggggatc cgagtgtcga taag 5314
<210> 4
<211> 4678
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Developed expression cassette, containing the CMV-promoter, optimized SARS-CoV-2 S protein sequence and polyadenylation signal
<400> 4
atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata 60
acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 120
aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 180
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atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat 360
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aacccagctg cctccagcct acaccaacag ctttaccaga ggcgtgtact accccgacaa 720
ggtgttcaga tccagcgtgc tgcactctac ccaggacctg ttcctgcctt tcttcagcaa 780
cgtgacctgg ttccacgcca tccacgtgtc cggcaccaat ggcaccaaga gattcgacaa 840
ccccgtgctg cccttcaacg acggggtgta ctttgccagc accgagaagt ccaacatcat 900
cagaggctgg atcttcggca ccacactgga cagcaagacc cagagcctgc tgatcgtgaa 960
caacgccacc aacgtggtca tcaaagtgtg cgagttccag ttctgcaacg accccttcct 1020
gggcgtctac tatcacaaga acaacaagag ctggatggaa agcgagttcc gggtgtacag 1080
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caagatctac agcaagcaca cccctatcaa cctcgtgcgg gatctgcctc agggcttctc 1260
tgctctggaa cccctggtgg atctgcccat cggcatcaac atcacccggt ttcagacact 1320
gctggccctg cacagaagct acctgacacc tggcgatagc agcagcggat ggacagctgg 1380
tgccgccgct tactatgtgg gctacctgca gcctagaacc ttcctgctga agtacaacga 1440
gaacggcacc atcaccgacg ccgtggattg tgctctggat cctctgagcg agacaaagtg 1500
caccctgaag tccttcaccg tggaaaaggg catctaccag accagcaact tccgggtgca 1560
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gttcaatgcc accagattcg cctctgtgta cgcctggaac cggaagcgga tcagcaattg 1680
cgtggccgac tactccgtgc tgtacaactc cgccagcttc agcaccttca agtgctacgg 1740
cgtgtcccct accaagctga acgacctgtg cttcacaaac gtgtacgccg acagcttcgt 1800
gatccgggga gatgaagtgc ggcagattgc ccctggacag acaggcaaga tcgccgacta 1860
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caacttcaac ggcctgaccg gcaccggcgt gctgacagag agcaacaaga agttcctgcc 2280
attccagcag tttggccggg atattgccga taccacagac gccgtacgag atccccagac 2340
actggaaatc ctggacatca ccccttgcag cttcggcgga gtgtctgtga tcacccctgg 2400
caccaacacc agcaatcagg tggcagtgct gtaccaggac gtgaactgta ccgaagtgcc 2460
cgtggccatt cacgccgatc agctgacacc tacatggcgg gtgtactcca ccggcagcaa 2520
tgtgtttcag accagagccg gctgtctgat cggagccgag cacgtgaaca atagctacga 2580
gtgcgacatc cccatcggcg ctggcatctg tgccagctac cagacacaga caaacagccc 2640
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cgagaacagc gtggcctact ccaacaactc tatcgctatc cccaccaact tcaccatcag 2760
cgtgaccaca gagatcctgc ctgtgtccat gaccaagacc agcgtggact gcaccatgta 2820
catctgcggc gattccaccg agtgctccaa cctgctgctg cagtacggca gcttctgcac 2880
ccagctgaat agagccctga cagggatcgc cgtggaacag gacaagaaca cccaagaggt 2940
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tttcagccag attctgcccg atcctagcaa gcccagcaag cggagcttca tcgaggacct 3060
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gggcgacatt gccgccaggg atctgatttg cgcccagaag tttaacggac tgacagtgct 3180
gccaccactg ctgaccgatg agatgatcgc ccagtacaca tctgccctgc tggccggcac 3240
aatcacaagc ggctggacat ttggagctgg cgccgctctg cagatcccct ttgctatgca 3300
gatggcctac cggttcaacg gcatcggagt gacccagaat gtgctgtacg agaaccagaa 3360
gctgatcgcc aaccagttca acagcgccat cggcaagatc caggacagcc tgagcagcac 3420
agcaagcgcc ctgggaaagc tgcaggacgt ggtcaaccag aatgcccagg cactgaacac 3480
cctggtcaag cagctgtcct ccaacttcgg cgccatcagc tctgtgctga acgacatcct 3540
gagcagactg gacaaggtgg aagccgaggt gcagatcgac agactgatca ccggaaggct 3600
gcagtccctg cagacctacg ttacccagca gctgatcaga gccgccgaga ttagagcctc 3660
tgccaatctg gccgccacca agatgtctga gtgtgtgctg ggccagagca agagagtgga 3720
cttttgcggc aagggctacc acctgatgag cttccctcag tctgcccctc acggcgtggt 3780
gtttctgcac gtgacatacg tgcccgctca agagaagaat ttcaccaccg ctccagccat 3840
ctgccacgac ggcaaagccc actttcctag agaaggcgtg ttcgtgtcca acggcaccca 3900
ttggttcgtg acccagcgga acttctacga gccccagatc atcaccaccg acaacacctt 3960
cgtgtctggc aactgcgacg tcgtgatcgg cattgtgaac aataccgtgt acgaccctct 4020
gcagcccgag ctggacagct tcaaagagga actggataag tactttaaga accacacaag 4080
ccccgacgtg gacctgggcg acatcagcgg aatcaatgcc agcgtcgtga acatccagaa 4140
agagatcgac cggctgaacg aggtggccaa gaatctgaac gagagcctga tcgacctgca 4200
agaactgggg aagtacgagc agtacatcaa gtggccctgg tacatctggc tgggctttat 4260
cgccggactg attgccatcg tgatggtcac aatcatgctg tgttgcatga ccagctgctg 4320
tagctgcctg aagggctgtt gtagctgtgg cagctgctgc aagttcgacg aggacgattc 4380
tgagcccgtg ctcaaaggag tcaaattaca ttacacataa gatatcgcgg ccgctcgagt 4440
ctagataact gatcataatc agccatacca catttgtaga ggttttactt gctttaaaaa 4500
acctcccaca cctccccctg aacctgaaac ataaaatgaa tgcaattgtt gttgttaact 4560
tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata 4620
aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatctta 4678
<210> 5
<211> 33765
<212> DNA
<213> Recombinant human adenovirus serotype 26
<220>
<223> Parental sequence of recombinant human adenovirus serotype 26, wherein the E1 and E3 regions are deleted, and ORF6-Ad26 is replaced by ORF6-Ad5
<400> 5
catcatcaat aatatacccc acaaagtaaa caaaagttaa tatgcaaatg agcttttgaa 60
ttttaacggt tttggggcgg agccaacgct gattggacga gaaacggtga tgcaaatgac 120
gtcacgacgc acggctaacg gtcgccgcgg aggcgtggcc tagcccggaa gcaagtcgcg 180
gggctgatga cgtataaaaa agcggacttt agacccggaa acggccgatt ttcccgcggc 240
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aaaactgaat gaggaagtga aaagcgaaaa ataccggtcc ctcccagggc ggaatattta 360
ccgagggccg agagactttg accgattacg tgggggtttc gattgcggtg tttttttcgc 420
gaatttccgc gtccgtgtca aagtccggtg tttatgtcac agatcagctg gtttccttta 480
agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt 540
tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt 600
aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt 660
taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt atggctgatt atgatcagtt atctagatcc 720
ggtggatcgg atatcttatg tgtaatgtaa tttgactcct ttgagcacgg gctcagaatc 780
gtcctcgtcg aacttgcagc agctgccaca gctacaacag cccttcaggc agctacagca 840
gctggtcatg caacacagca tgattgtgac catcacgatg gcaatcagtc cggcgataaa 900
gcccagccag atgtaccagg gccacttgat gtactgctcg tacttcccca gttcttgcag 960
gtcgatcagg ctctcgttca gattcttggc cacctcgttc agccggtcga tctctttctg 1020
gatgttcacg acgctggcat tgattccgct gatgtcgccc aggtccacgt cggggcttgt 1080
gtggttctta aagtacttat ccagttcctc tttgaagctg tccagctcgg gctgcagagg 1140
gtcgtacacg gtattgttca caatgccgat cacgacgtcg cagttgccag acacgaaggt 1200
gttgtcggtg gtgatgatct ggggctcgta gaagttccgc tgggtcacga accaatgggt 1260
gccgttggac acgaacacgc cttctctagg aaagtgggct ttgccgtcgt ggcagatggc 1320
tggagcggtg gtgaaattct tctcttgagc gggcacgtat gtcacgtgca gaaacaccac 1380
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tccggtgatc agtctgtcga tctgcacctc ggcttccacc ttgtccagtc tgctcaggat 1620
gtcgttcagc acagagctga tggcgccgaa gttggaggac agctgcttga ccagggtgtt 1680
cagtgcctgg gcattctggt tgaccacgtc ctgcagcttt cccagggcgc ttgctgtgct 1740
gctcaggctg tcctggatct tgccgatggc gctgttgaac tggttggcga tcagcttctg 1800
gttctcgtac agcacattct gggtcactcc gatgccgttg aaccggtagg ccatctgcat 1860
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tgtcagtccg ttaaacttct gggcgcaaat cagatccctg gcggcaatgt cgcccagaca 2040
atcgccatac tgcttgatga agccggcgtc ggccagtgtc actttgttga acagcaggtc 2100
ctcgatgaag ctccgcttgc tgggcttgct aggatcgggc agaatctggc tgaaattgaa 2160
gccgccgaag tccttgatag gaggggtctt gtagatctgc ttcacttggg cgaacacctc 2220
ttgggtgttc ttgtcctgtt ccacggcgat ccctgtcagg gctctattca gctgggtgca 2280
gaagctgccg tactgcagca gcaggttgga gcactcggtg gaatcgccgc agatgtacat 2340
ggtgcagtcc acgctggtct tggtcatgga cacaggcagg atctctgtgg tcacgctgat 2400
ggtgaagttg gtggggatag cgatagagtt gttggagtag gccacgctgt tctcggcgcc 2460
cagagacatt gtgtaggcaa tgatgctctg gctggccaca gatctggccc gtctggggct 2520
gtttgtctgt gtctggtagc tggcacagat gccagcgccg atggggatgt cgcactcgta 2580
gctattgttc acgtgctcgg ctccgatcag acagccggct ctggtctgaa acacattgct 2640
gccggtggag tacacccgcc atgtaggtgt cagctgatcg gcgtgaatgg ccacgggcac 2700
ttcggtacag ttcacgtcct ggtacagcac tgccacctga ttgctggtgt tggtgccagg 2760
ggtgatcaca gacactccgc cgaagctgca aggggtgatg tccaggattt ccagtgtctg 2820
gggatctcgt acggcgtctg tggtatcggc aatatcccgg ccaaactgct ggaatggcag 2880
gaacttcttg ttgctctctg tcagcacgcc ggtgccggtc aggccgttga agttgaagtt 2940
cacgcatttg ttcttcacga gattggtgct tttcttaggg ccgcacactg tggcaggggc 3000
atgcagcagt tcgaagctca gcaccaccac tctgtagggc tgatagccca cgccatttgt 3060
gggctgaaag ccgtaggact gcagtgggaa gtagcagttg aagccttcca cgccgttaca 3120
aggggtgctg ccggcctgat agatctcggt ggagatgtcc cgctcgaagg gcttcagatt 3180
ggacttccgg aacagccggt acaggtaatt gtagttgccg ccgactttgg agtccaggtt 3240
gttgctgttc caggcaatca cacagccggt gaagtcgtcg ggcagcttgt agttgtagtc 3300
ggcgatcttg cctgtctgtc caggggcaat ctgccgcact tcatctcccc ggatcacgaa 3360
gctgtcggcg tacacgtttg tgaagcacag gtcgttcagc ttggtagggg acacgccgta 3420
gcacttgaag gtgctgaagc tggcggagtt gtacagcacg gagtagtcgg ccacgcaatt 3480
gctgatccgc ttccggttcc aggcgtacac agaggcgaat ctggtggcat tgaacacctc 3540
gccgaagggg cacagattgg tgatattggg gaaccgcacg atggattcgg tgggctgcac 3600
ccggaagttg ctggtctggt agatgccctt ttccacggtg aaggacttca gggtgcactt 3660
tgtctcgctc agaggatcca gagcacaatc cacggcgtcg gtgatggtgc cgttctcgtt 3720
gtacttcagc aggaaggttc taggctgcag gtagcccaca tagtaagcgg cggcaccagc 3780
tgtccatccg ctgctgctat cgccaggtgt caggtagctt ctgtgcaggg ccagcagtgt 3840
ctgaaaccgg gtgatgttga tgccgatggg cagatccacc aggggttcca gagcagagaa 3900
gccctgaggc agatcccgca cgaggttgat aggggtgtgc ttgctgtaga tcttgaagta 3960
gccgtcgatg ttcttgaaca cgaactcgcg caggttcttg aagttgccct gcttgccttc 4020
caggtccatc aggaaaggct gggacacgta ctcgaaggtg cagttgttgg cgctgctgta 4080
cacccggaac tcgctttcca tccagctctt gttgttcttg tgatagtaga cgcccaggaa 4140
ggggtcgttg cagaactgga actcgcacac tttgatgacc acgttggtgg cgttgttcac 4200
gatcagcagg ctctgggtct tgctgtccag tgtggtgccg aagatccagc ctctgatgat 4260
gttggacttc tcggtgctgg caaagtacac cccgtcgttg aagggcagca cggggttgtc 4320
gaatctcttg gtgccattgg tgccggacac gtggatggcg tggaaccagg tcacgttgct 4380
gaagaaaggc aggaacaggt cctgggtaga gtgcagcacg ctggatctga acaccttgtc 4440
ggggtagtac acgcctctgg taaagctgtt ggtgtaggct ggaggcagct gggttcttgt 4500
ggtcaggttc acacactgac tagagactag tggcaataac acaaggaaca caaacatggt 4560
accaagctta ggctcgagcg gccgcgtcga cggtaccaga tctctagcgg atctgacggt 4620
tcactaaacc agctctgctt atatagacct cccaccgtac acgcctaccg cccatttgcg 4680
tcaatggggc ggagttgtta cgacattttg gaaagtcccg ttgattttgg tgccaaaaca 4740
aactcccatt gacgtcaatg gggtggagac ttggaaatcc ccgtgagtca aaccgctatc 4800
cacgcccatt gatgtactgc caaaaccgca tcaccatggt aatagcgatg actaatacgt 4860
agatgtactg ccaagtagga aagtcccata aggtcatgta ctgggcataa tgccaggcgg 4920
gccatttacc gtcattgacg tcaatagggg gcgtacttgg catatgatac acttgatgta 4980
ctgccaagtg ggcagtttac cgtaaatact ccacccattg acgtcaatgg aaagtcccta 5040
ttggcgttac tatgggaaca tacgtcatta ttgacgtcaa tgggcggggg tcgttgggcg 5100
gtcagccagg cgggccattt accgtaagtt atgtaacgcg gaactccata tatgggctat 5160
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gggtgtctta cgagggtctt tttgcttttc tgcagacatc atgaacggga ctggcggggc 5280
cttcgaaggg gggcttttta gcccttattt gacaacccgc ctgccgggat gggccggagt 5340
tcgtcagaat gtgatgggat cgacggtgga tgggcgccca gtgcttccag caaattcctc 5400
gaccatgacc tacgcgaccg tggggaactc gtcgctcgac agcaccgccg cagccgcggc 5460
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tagcccctct gtgcccagtt ccatcatcgc cgaggagaaa ctgctggccc tgctggccga 5580
gctggaagcc ctgagccgcc agctggccgc cctgacccag caggtgtccg agctccgcga 5640
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catctttatt atttattttt tcgcgcgcgg taggccctgg tccacctctc ccgatcattg 5760
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gtgttgtaga tgatccagtc atagcagggg cgctgggcgt ggtgctggat gatgtccttg 5940
aggaggagac tgatggccac ggggagcccc ttggtgtagg tgttggcaaa acggttgagc 6000
tgggagggat gcatgcgggg ggagatgatg tgcagtttgg cctggatctt gaggttggcg 6060
atgttgccac ccagatcccg ccgggggttc atgttgtgca ggaccaccag aacggtgtag 6120
cccgtgcact tggggaactt gtcatgcaac ttggaaggga atgcgtggaa gaatttggag 6180
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gtgagatcat cataagacat tttaatgaat ttggggcgga gggtgccaga ttgggggacg 6360
atggttccct cgggccccgg ggcgaagttc ccctcgcaga tctgcatctc ccaggctttc 6420
atctcggagg gggggatcat gtccacctgc ggggcgatga aaaaaacggt ttccggggcg 6480
ggggtgatga gctgcgagga gagcaggttt ctcaacagct gggacttgcc gcacccggtc 6540
gggccgtaga tgaccccgat gacgggttgc aggtggtagt tcaaggacat gcagctgccg 6600
tcgtcccgga ggaggggggc cacctcgttg agcttgtctc tgacttggag gttttcccgg 6660
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tttttcaggg gcttgagccc gtcggccatg ggcatcttgg cgagggtctg cgagaggagc 6780
tccaggcggt cccagagctc ggtgacgtgc tctacggcat ctcgatccag cagacttcct 6840
cgtttcgggg gttgggacga ctgcgactgt agggcacgag acgatgggcg tccagcgcgg 6900
ccagcgtcat gtccttccag ggtctcaggg tccgcgtgag ggtggtctcc gtcacggtga 6960
aggggtgggc cgcgggctgg gcgcttgcaa gggtgcgctt gagactcatc ctgctggtgc 7020
tgaaacgggc acggtcttcg ccctgcgcgt cggcgagata gcagttgacc atgagctcgt 7080
agttgagggc ctcggcggcg tggcccttgg cgcggagctt gcccttggaa gagcgcccgc 7140
aggcgggaca gaggagggat tgcagggcgt agagcttggg cgcgagaaag acggactcgg 7200
gggcgaaggc gtccgctccg cagtgggcgc agacggtctc gcactcgact agccaggtga 7260
gctcgggctg ctcggggtca aaaaccagtt ttcccccgtt ctttttgatg cgcttcttac 7320
ctcgcgtctc catgagtctg tgtccgcgct cggtgacaaa caggctgtct gtgtccccgt 7380
agacggactt gatgggcctg tcctgcaggg gcgtcccgcg gtcctcctcg tagagaaact 7440
cagaccactc tgagacgaag gcgcgcgtcc acgccaagac aaaggaggcc acgtgcgagg 7500
ggtagcggtc gttgtccacc agggggtcca ccttttccac ggtatgcagg cacatgtccc 7560
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ccgacggggg ggtataaaag ggggcgggtc tgtgctcgtc ctcactctct tccgcgtcgc 7680
tgtccacgag cgccagctgt tggggtaggt attccctctc aagagcgggc atgacctcgg 7740
cactcaggtt gtcagtttct agaaacgagg aggatttgat gtgggcctgc cctgccgcga 7800
tgctttttag gagactttca tccatctggt cagaaaagac tattttttta ttgtcaagct 7860
tggtggcgaa ggagccatag agggcgtttg agagaagctt ggcgatggat ctcatggtct 7920
gatttttgtc acggtcggcg cgctccttgg ccgcgatgtt gagctggaca tattcgcgcg 7980
cgacacactt ccattcgggg aagacggtgg tgcgctcgtc gggcacgatc ctgacgcgcc 8040
agccgcggtt atgcagggtg accaggtcca cgctggtggc cacctcgccg cgcaggggct 8100
cgttggtcca gcagagtctg ccgcccttgc gcgagcagaa cgggggcagc acatcaagca 8160
gatgctcgtc aggggggtcc gcatcgatgg tgaagatgcc cggacagagt tccttgtcaa 8220
aataatcgat ttttgaggat gcatcgtcca aggccatctg ccactcgcgg gcggccagcg 8280
ctcgctcgta ggggttgagg ggcggacccc aaggcatggg atgcgtgagg gcggaggcgt 8340
acatgccgca gatgtcatag acatagatgg gctccgagag gatgccgatg taggtgggat 8400
agcagcgccc cccgcggatg cttgcgcgca cgtagtcata caactcgtgc gagggggcca 8460
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tcgcctctcc tttcttctcc cacagctcgc ggttgagggc gtattcctcg tcatccttcc 8760
agtactcccg gagcgggaat cctcgatcgt ccgcacggta agagcccagc atgtagaaat 8820
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ggtacttgaa gtccgagtcg tcgcagccgc cgtgctccca gagctcgaaa tcggtgcgct 9000
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cctgggcggc gaggacgatc tcgtcaaagc cgttgatgtt gtgcccgacg atgtagagtt 9180
ccatgaatcg cgggcggcct ttgatgtgcg gcagcttttt gagctcctcg taggtgaggt 9240
cctcggggca ttgcaggccg tgctgctcga gcgcccactc ctggagatgt gggttggctt 9300
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ggaactgctg gcccacggcc atcttttctg gggtgacgca gtagaaggtg agggggtccc 9420
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tccaggtgta ggtttctaca tcgtaggtga caaagagccg ctccgtgcga ggatgagagc 9600
cgattgggaa gaactggatt tcctgccacc agttggacga gtggctgttg atgtgatgaa 9660
agtagaaatc ccgccggcga accgagcact cgtgctgatg cttgtaaaag cgtccgcagt 9720
actcgcagcg ctgcacgggc tgtacctcat ccacgagata cacagcgcgt cccttgagga 9780
ggaacttcag gagtggcggc cctggctggt ggttttcatg ttcgcctgcg tgggactcac 9840
cctggggctc ctcgaggacg gagaggctga cgagcccgcg cgggagccag gtccagatct 9900
cggcgcggcg ggggcggaga gcgaagacga gggcgcgcag ttgggagctg tccatggtgt 9960
cgcggagatc caggtccggg ggcagggttc tgaggttgac ctcgtagagg cgggtgaggg 10020
cgtgcttgag atgcagatgg tacttgattt ctacgggtga gttggtggtc gtgtccacgc 10080
attgcatgag cccgtagctg cgcggggcca cgaccgtgcc gcggtgcgct tttagaagcg 10140
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cgtgactttg aacctgaaag acagttcaac agaatcaatc tctgcgtcat tgacggcggc 10380
ctgacgcagg atctcttgca cgtcgcccga gttgtcctgg taggcgatct cggacatgaa 10440
ctgttcgatc tcctcctcct ggagatcgcc gcggcccgcg cgctccacgg tggcggcgag 10500
gtcattggag atgcgaccca tgagctgcga gaaggcgccc aggccgctct cgttccagac 10560
gcggctgtag accacgtccc cgtcggcgtc gcgcgcgcgc atgaccacct gcgcgaggtt 10620
gagctccacg tgccgcgcaa agacggcgta gttgcgcagg cgctggaaga ggtagttgag 10680
ggtggtggcg atgtgctcgg tgacgaagaa gtacatgatc cagcggcgca ggggcatctc 10740
gctgatgtcg ccgatggctt ccagcctttc catggcctcg tagaagtcca cggcgaagtt 10800
gaaaaactgg gcgttgcggg ccgagaccgt gagctcgtct tccaggagcc ggatgagttc 10860
ggcgatggtg gcgcgcacct cgcgctcgaa atccccgggg gcctcctcct cttcctcttc 10920
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acgacgacgg cgacgcaccg ggagacggtc gacgaagcgc tcgatcatct ccccgcggcg 11040
gcgacgcatg gtttcggtga cggcgcgacc ccgttcgcga ggacgcagcg tgaagacgcc 11100
gccggtcatc tcccggtaat ggggcgggtc cccattgggc agcgataggg cgctgacgat 11160
gcatcttatc aattgcggtg taggggacgt gagcgcgtcg agatcgaccg gatcggagaa 11220
tctttcgagg aaagcgtcta gccaatcgca gtcgcaaggt aagctcaaac acgtagcagc 11280
cctgcggacg ctgttagaat tgcggttgct gatgatgtaa ttgaagtagg cgtttttgag 11340
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gttgatggtg taggtgcagt tggccatgag cgaccagttg acggtctgca ggcctggctg 11700
cacgacctcg gagtacctga gccgcgagaa ggcgcgcgag tcgaagacgt agtcgttgca 11760
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gctcttcctc cgtagcctgg cggaacgcaa acgggttagg ccgcgtgtgt accccggttc 12120
gagtcccctc gaatcaggct ggagccgcga ctaacgtggt attggcactc ccgtctcgac 12180
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catccccgcg tgcagctgca gaaggacgtg cgcccggcgt acgtgcctac gcagaacctg 12660
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cgcaccctga tcgcgcgcga ggaggtggcc ctgggcctga tgcacctgtg ggacctggcg 12960
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ggtcgctggc tgctggagct gattaacatc ttgcagagca tcgtagtgca ggagcgcagc 13140
ctgagcctgg ccgagaaggt ggcggcgatc aactactcgg tgctgagcct gggcaagttt 13200
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cgcaacgacc gcatccacaa ggccgtgagc acgagccggc ggcgcgagct aagcgaccgc 13380
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gctgctgctg ctgctgatcg cgcccttcac cgacagcggc agcgtgaacc gcaactcgta 14340
cctgggccat ctgctgacgc tgtaccgcga ggccataggc caggcgcagg tggacgagca 14400
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cgactcgctg ctgcagccgc cgcgggccaa gaacgccatg gccaataacg ggatagagag 15060
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ttggtacctg tcctatacct acggggaccc cgagaagggg gtgcagtcgt ggacgctgct 16440
caccaccccg gacgttacct gcggcgcgga gcaagtctac tggtcactgc cggacctcat 16500
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cgagctcatg cccttccgcg ccaagagctt ttacaacgac ctcgccgtct actcccagct 16620
catccgcagc tacacctccc tcacccacgt cttcaaccgc ttccccgaca accagatcct 16680
ctgccgcccg cccgcgccca ccatcaccac cgtcagtgaa aacgtgcctg ctctcacaga 16740
tcacgggacg ctaccgctgc gcagcagtat ccgcggagtc cagcgagtga ccgtcactga 16800
cgcccgtcgc cgcacctgtc cctacgtcta caaggccctg ggcatagtcg cgccgcgcgt 16860
gctttccagt cgcaccttct aaaaaaatgt ctattctcat ctcgcccagc aataacaccg 16920
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accccgtccg cgtccgcggc cacttccgcg ctccctgggg cgcttacaag cgcgggcgga 17040
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cgcccgccat gcgcgccgcc cgggctctgc tgcgccgcgc cagacgcacg ggccgccggg 17280
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tatcaatgtt ggcacaacac aggcacacgt gcatacactt cctcaggatt acaagctcct 31560
cccgcgttag aaccatatcc cagggaacaa cccattcctg aatcagcgta aatcccacac 31620
tgcagggaag acctcgcacg taactcacgt tgtgcattgt caaggtgtta cattcgggca 31680
gcagcggatg atcctccagt atggtagcgc gggtttctgt ctcaaaagga ggtagacgat 31740
ccctactgta cggagtgcgc cgagacaacc gagatcgtgt tggtcgtagt gtcatgccaa 31800
atggaacgcc ggacgtagtc atatttcctg aaggagctcg actgttcctc ggtggacatt 31860
gaaatggatt ctcttgcgta ccttgtcgta cttctgccag cagaaagtgg ctcgggaaca 31920
gcagatacct ttcctcctgc tgtccttccg ctgctgacgc tcagtcatcc aactgaagta 31980
cagccattcc cgcaggttct ccagcagctc ctgtgcatct gatgaaacaa aagtcccgtc 32040
gatgcggatt ccccttaaaa catcagccag gacattgtag gccatcccaa tccagttaat 32100
gcatcctgat ctatcatgaa gaggaggtgg gggaagaact ggaagaacca tttttattcc 32160
aagcggtctc gaaggacgat aaagtgcaag tcacgcaggt gacagcgttc cccgccgctg 32220
tgctggtgga aacagacagc caggtcaaaa cccactctat tttcaaggtg ctcgactgtg 32280
gcttcgagca gtggctctac gcgtacatcc agcataagaa tcacattaaa ggctggacct 32340
ccatcgattt catcaatcat caggttacac tcattcacca tccccaggta attctcattt 32400
ttccagcctt ggattatttc tacaaattgt tggtgtaagt ccactccgca catgtggaaa 32460
agttcccaca gcgccccctc cactttcata atcaggcaga ccttcatatt agaaacagat 32520
cctgctgctc caccacctgc agcgtgttca aaacaacaag attcaatgag gttctgccct 32580
ctgccctcag ctcacgtctc agcgtcagct gcaaaaagtc actcaagtcc tcagccacta 32640
cagctgacaa ttcagagcca gggctaagcg tgggactggc aagcgtgagt gagtaccacc 32700
caaaaactgc atgctggaat aagctctctt tgtgtcaccg gtgatgcctt ccaataggtg 32760
agtgataaag cgaggtagtt tttctttaat catttgagta atagaaaagt cctctaaata 32820
agtcactagg accccaggaa ccacaatgtg gtagctgaca gcgtgtcgct caagcatggt 32880
tagtagagat gagagtctga aaaacagaaa gcatgcacta aaccagagtt gccagtctca 32940
ctgaaggaaa aatcactctc tccagcagca aagtgcccac tgggtggccc tctcggacat 33000
acaaaaatcg atccgtgtgg ttaaagagca gcacagttag ctcctgtctt ctcccagcaa 33060
agatcacatc ggactgggtt agtatgcccc tggaatggta gtcattcaag gccataaatc 33120
tgccttggta gccattagga atcagcacgc tcactctcaa gtgaaccaaa accaccccat 33180
gcggaggaat gtggaaagat tctgggcaaa aaaaggtata tctattgcta gtcccttcct 33240
ggacgggagc aatccctcca gggctatcta tgaaagcata cagagattca gccatagctc 33300
agcccgctta ccagtagaca gagagcacag cagtacaagc gccaacagca gcgactgact 33360
acccactgac ccagctccct atttaaaggc accttacact gacgtaatga ccaaaggtct 33420
aaaaaccccg ccaaaaaaac acacacgccc tgggtgtttt tcgcgaaaac acttccgcgt 33480
tctcacttcc tcgtatcgat ttcgtgactc aacttccggg ttcccacgtt acgtcacttc 33540
tgcccttaca tgtaactcag ccgtagggcg ccatcttgcc cacgtccaaa atggcttcca 33600
tgtccggcca cgcctccgcg gcgaccgtta gccgtgcgtc gtgacgtcat ttgcatcacc 33660
gtttctcgtc caatcagcgt tggctccgcc ccaaaaccgt taaaattcaa aagctcattt 33720
gcatattaac ttttgtttac tttgtggggt atattattga tgatg 33765
<210> 6
<211> 34808
<212> DNA
<213> Recombinant simian adenovirus serotype 25
<220>
<223> Parental sequence of recombinant simian adenovirus serotype 25, wherein the E1 and E3 regions are deleted
<400> 6
catcatcaat aatatacctt attttggatt gaagccaata tgataatgag ggggtggagt 60
ttgtgacgtg gcgcggggcg tgggaacggg gcgggtgacg tagtagtgtg gcggaagtgt 120
gatgttgcaa gtgtggcgga acacatgtaa gcgacggatg tggcaaaagt gacgtttttg 180
gtgtgcgccg gtgtacacag gaagtgacaa ttttcgcgcg gttttaggcg gatgttgtag 240
taaatttggg cgtaaccgag taagatttgg ccattttcgc gggaaaactg aataagagga 300
agtgaaatct gaataatttt gtgttactca tagcgcgtaa tacatggccc gaaaggagcg 360
atgtaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt 420
acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg 480
tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg 540
gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt 600
acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg 660
accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg 720
gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt 780
ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac 840
tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg 900
tgggaggtct atataagcag agctggttta gtgaaccgtc agatccgcta gagatctggt 960
accgtcgacg cggccgctcg agcctaagct tggtaccatg tttgtgttcc ttgtgttatt 1020
gccactagtc tctagtcagt gtgtgaacct gaccacaaga acccagctgc ctccagccta 1080
caccaacagc tttaccagag gcgtgtacta ccccgacaag gtgttcagat ccagcgtgct 1140
gcactctacc caggacctgt tcctgccttt cttcagcaac gtgacctggt tccacgccat 1200
ccacgtgtcc ggcaccaatg gcaccaagag attcgacaac cccgtgctgc ccttcaacga 1260
cggggtgtac tttgccagca ccgagaagtc caacatcatc agaggctgga tcttcggcac 1320
cacactggac agcaagaccc agagcctgct gatcgtgaac aacgccacca acgtggtcat 1380
caaagtgtgc gagttccagt tctgcaacga ccccttcctg ggcgtctact atcacaagaa 1440
caacaagagc tggatggaaa gcgagttccg ggtgtacagc agcgccaaca actgcacctt 1500
cgagtacgtg tcccagcctt tcctgatgga cctggaaggc aagcagggca acttcaagaa 1560
cctgcgcgag ttcgtgttca agaacatcga cggctacttc aagatctaca gcaagcacac 1620
ccctatcaac ctcgtgcggg atctgcctca gggcttctct gctctggaac ccctggtgga 1680
tctgcccatc ggcatcaaca tcacccggtt tcagacactg ctggccctgc acagaagcta 1740
cctgacacct ggcgatagca gcagcggatg gacagctggt gccgccgctt actatgtggg 1800
ctacctgcag cctagaacct tcctgctgaa gtacaacgag aacggcacca tcaccgacgc 1860
cgtggattgt gctctggatc ctctgagcga gacaaagtgc accctgaagt ccttcaccgt 1920
ggaaaagggc atctaccaga ccagcaactt ccgggtgcag cccaccgaat ccatcgtgcg 1980
gttccccaat atcaccaatc tgtgcccctt cggcgaggtg ttcaatgcca ccagattcgc 2040
ctctgtgtac gcctggaacc ggaagcggat cagcaattgc gtggccgact actccgtgct 2100
gtacaactcc gccagcttca gcaccttcaa gtgctacggc gtgtccccta ccaagctgaa 2160
cgacctgtgc ttcacaaacg tgtacgccga cagcttcgtg atccggggag atgaagtgcg 2220
gcagattgcc cctggacaga caggcaagat cgccgactac aactacaagc tgcccgacga 2280
cttcaccggc tgtgtgattg cctggaacag caacaacctg gactccaaag tcggcggcaa 2340
ctacaattac ctgtaccggc tgttccggaa gtccaatctg aagcccttcg agcgggacat 2400
ctccaccgag atctatcagg ccggcagcac cccttgtaac ggcgtggaag gcttcaactg 2460
ctacttccca ctgcagtcct acggctttca gcccacaaat ggcgtgggct atcagcccta 2520
cagagtggtg gtgctgagct tcgaactgct gcatgcccct gccacagtgt gcggccctaa 2580
gaaaagcacc aatctcgtga agaacaaatg cgtgaacttc aacttcaacg gcctgaccgg 2640
caccggcgtg ctgacagaga gcaacaagaa gttcctgcca ttccagcagt ttggccggga 2700
tattgccgat accacagacg ccgtacgaga tccccagaca ctggaaatcc tggacatcac 2760
cccttgcagc ttcggcggag tgtctgtgat cacccctggc accaacacca gcaatcaggt 2820
ggcagtgctg taccaggacg tgaactgtac cgaagtgccc gtggccattc acgccgatca 2880
gctgacacct acatggcggg tgtactccac cggcagcaat gtgtttcaga ccagagccgg 2940
ctgtctgatc ggagccgagc acgtgaacaa tagctacgag tgcgacatcc ccatcggcgc 3000
tggcatctgt gccagctacc agacacagac aaacagcccc agacgggcca gatctgtggc 3060
cagccagagc atcattgcct acacaatgtc tctgggcgcc gagaacagcg tggcctactc 3120
caacaactct atcgctatcc ccaccaactt caccatcagc gtgaccacag agatcctgcc 3180
tgtgtccatg accaagacca gcgtggactg caccatgtac atctgcggcg attccaccga 3240
gtgctccaac ctgctgctgc agtacggcag cttctgcacc cagctgaata gagccctgac 3300
agggatcgcc gtggaacagg acaagaacac ccaagaggtg ttcgcccaag tgaagcagat 3360
ctacaagacc cctcctatca aggacttcgg cggcttcaat ttcagccaga ttctgcccga 3420
tcctagcaag cccagcaagc ggagcttcat cgaggacctg ctgttcaaca aagtgacact 3480
ggccgacgcc ggcttcatca agcagtatgg cgattgtctg ggcgacattg ccgccaggga 3540
tctgatttgc gcccagaagt ttaacggact gacagtgctg ccaccactgc tgaccgatga 3600
gatgatcgcc cagtacacat ctgccctgct ggccggcaca atcacaagcg gctggacatt 3660
tggagctggc gccgctctgc agatcccctt tgctatgcag atggcctacc ggttcaacgg 3720
catcggagtg acccagaatg tgctgtacga gaaccagaag ctgatcgcca accagttcaa 3780
cagcgccatc ggcaagatcc aggacagcct gagcagcaca gcaagcgccc tgggaaagct 3840
gcaggacgtg gtcaaccaga atgcccaggc actgaacacc ctggtcaagc agctgtcctc 3900
caacttcggc gccatcagct ctgtgctgaa cgacatcctg agcagactgg acaaggtgga 3960
agccgaggtg cagatcgaca gactgatcac cggaaggctg cagtccctgc agacctacgt 4020
tacccagcag ctgatcagag ccgccgagat tagagcctct gccaatctgg ccgccaccaa 4080
gatgtctgag tgtgtgctgg gccagagcaa gagagtggac ttttgcggca agggctacca 4140
cctgatgagc ttccctcagt ctgcccctca cggcgtggtg tttctgcacg tgacatacgt 4200
gcccgctcaa gagaagaatt tcaccaccgc tccagccatc tgccacgacg gcaaagccca 4260
ctttcctaga gaaggcgtgt tcgtgtccaa cggcacccat tggttcgtga cccagcggaa 4320
cttctacgag ccccagatca tcaccaccga caacaccttc gtgtctggca actgcgacgt 4380
cgtgatcggc attgtgaaca ataccgtgta cgaccctctg cagcccgagc tggacagctt 4440
caaagaggaa ctggataagt actttaagaa ccacacaagc cccgacgtgg acctgggcga 4500
catcagcgga atcaatgcca gcgtcgtgaa catccagaaa gagatcgacc ggctgaacga 4560
ggtggccaag aatctgaacg agagcctgat cgacctgcaa gaactgggga agtacgagca 4620
gtacatcaag tggccctggt acatctggct gggctttatc gccggactga ttgccatcgt 4680
gatggtcaca atcatgctgt gttgcatgac cagctgctgt agctgcctga agggctgttg 4740
tagctgtggc agctgctgca agttcgacga ggacgattct gagcccgtgc tcaaaggagt 4800
caaattacat tacacataag atatccgatc caccggatct agataactga tcataatcag 4860
ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa 4920
cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg 4980
ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 5040
tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaacgc ggatctgggc gtggttaagg 5100
gtgggaaaga atatataagg tgggggtctt atgtagtttt gtatctgttt tgcagcagcc 5160
gccgccgcca tgagcaccaa ctcgtttgat ggaagcattg tgagctcata tttgacaacg 5220
cgcatgcccc catgggccgg ggtgcgtcag aatgtgatgg gctccagcat tgatggtcgc 5280
cccgtcctgc ccgcaaactc tactaccttg acctacgaga ccgtgtctgg aacgccgttg 5340
gagactgcag cctccgccgc cgcttcagcc gctgcagcca ccgcccgcgg gattgtgact 5400
gactttgctt tcctgagccc gcttgcaagc agtgcagctt cccgttcatc cgcccgcgat 5460
gacaagttga cggctctttt ggcacaattg gattctttga cccgggaact taatgtcgtt 5520
tctcagcagc tgttggatct gcgccagcag gtttctgccc tgaaggcttc ctcccctccc 5580
aatgcggttt aaaacataaa taaaaaacca gactctgttt ggatttggat caagcaagtg 5640
tcttgctgtc tttatttagg ggttttgcgc gcgcggtagg cccgggacca gcggtctcgg 5700
tcgttgaggg tcctgtgtat tttttccagg acgtggtaaa ggtgactctg gatgttcaga 5760
tacatgggca taagcccgtc tctggggtgg aggtagcacc actgcagagc ttcatgctgc 5820
ggggtggtgt tgtagatgat ccagtcgtag caggagcgct gggcgtggtg cctaaaaatg 5880
tctttcagta gcaagctgat tgccaggggc aggcccttgg tgtaagtgtt tacaaagcgg 5940
ttaagctggg atgggtgcat acgtggggat atgagatgca tcttggactg tatttttagg 6000
ttggctatgt tcccagccat atccctccgg ggattcatgt tgtgcagaac caccagcaca 6060
gtgtatccgg tgcacttggg aaatttgtca tgtagcttag aaggaaatgc gtggaagaac 6120
ttggagacgc ccttgtgacc tccaagattt tccatgcatt cgtccataat gatggcaatg 6180
ggcccacggg cggcggcctg ggcgaagata tttctgggat cactaacgtc atagttgtgt 6240
tccaggatga gatcgtcata ggccattttt acaaagcgcg ggcggagggt gccagactgc 6300
ggtataatgg ttccatccgg cccaggggcg tagttaccct cacagatttg catttcccac 6360
gctttgagtt cagatggggg gatcatgtct acctgcgggg cgatgaagaa aacggtttcc 6420
ggggtagggg agatcagctg ggaagaaagc aggttcctga gcagctgcga cttaccgcag 6480
ccggtgggcc cgtaaatcac acctattacc ggctgcaact ggtagttaag agagctgcag 6540
ctgccgtcat ccctgagcag gggggccact tcgttaagca tgtccctgac tcgcatgttt 6600
tccctgacca aatccgccag aaggcgctcg ccgcccagcg atagcagttc ttgcaaggaa 6660
gcaaagtttt tcaacggttt gagaccgtcc gccgtaggca tgcttttgag cgtttgacca 6720
agcagttcca ggcggtccca cagctcggtc acctgctcta cggcatctcg atccagcata 6780
tctcctcgtt tcgcgggttg gggcggcttt cgctgtacgg cagtagtcgg tgctcgtcca 6840
gacgggccag ggtcatgtct ttccacgggc gcagggtcct cgtcagcgta gtctgggtca 6900
cggtgaaggg gtgcgctccg ggctgcgcgc tggccagggt gcgcttgagg ctggtcctgc 6960
tggtgctgaa gcgctgccgg tcttcgccct gcgcgtcggc caggtagcat ttgaccatgg 7020
tgtcatagtc cagcccctcc gcggcgtggc ccttggcgcg cagcttgccc ttggaggagg 7080
cgccgcacga ggggcagtgc agacttttga gggcgtagag cttgggcgcg agaaataccg 7140
attccgggga gtaggcatcc gcgccgcagg ccccgcagac ggtctcgcat tccacgagcc 7200
aggtgagctc tggccgttcg gggtcaaaaa ccaggtttcc cccatgcttt ttgatgcgtt 7260
tcttacctct ggtttccatg agccggtgtc cacgctcggt gacgaaaagg ctgtccgtgt 7320
ccccgtatac agacttgaga ggcctgtcct cgagcggtgt tccgcggtcc tcctcgtata 7380
gaaactcgga ccactctgag acaaaggctc gcgtccaggc cagcacgaag gaggctaagt 7440
gggaggggta gcggtcgttg tccactaggg ggtccactcg ctccagggtg tgaagacaca 7500
tgtcgccctc ttcggcatca aggaaggtga ttggtttgta ggtgtaggcc acgtgaccgg 7560
gtgttcctga aggggggcta taaaaggggg tgggggcgcg ttcgtcctca ctctcttccg 7620
catcgctgtc tgcgagggcc agctgttggg gtgagtactc cctctgaaaa gcgggcatga 7680
cttctgcgct aagattgtca gtttccaaaa acgaggagga tttgatattc acctggcccg 7740
cggtgatgcc tttgagggtg gccgcatcca tctggtcaga aaagacaatc tttttgttgt 7800
caagcttggt ggcaaacgac ccgtagaggg cgttggacag caacttggcg atggagcgca 7860
gggtttggtt tttgtcgcga tcggcgcgct ccttggccgc gatgtttagc tgcacgtatt 7920
cgcgcgcaac gcaccgccat tcgggaaaga cggtggtgcg ctcgtcgggc accaggtgca 7980
cgcgccaacc gcggttgtgc agggtgacaa ggtcaacgct ggtggctacc tctccgcgta 8040
ggcgctcgtt ggtccagcag aggcggccgc ccttgcgcga gcagaatggc ggtagggggt 8100
ctagctgcgt ctcgtccggg gggtctgcgt ccacggtaaa gaccccgggc agcaggcgcg 8160
cgtcgaagta gtctatcttg catccttgca agtctagcgc ctgctgccat gcgcgggcgg 8220
caagcgcgcg ctcgtatggg ttgagtgggg gaccccatgg catggggtgg gtgagcgcgg 8280
aggcgtacat gccgcaaatg tcgtaaacgt agaggggctc tctgagtatt ccaagatatg 8340
tagggtagca tcttccaccg cggatgctgg cgcgcacgta atcgtatagt tcgtgcgagg 8400
gagcgaggag gtcgggaccg aggttgctac gggcgggctg ctctgctcgg aagactatct 8460
gcctgaagat ggcatgtgag ttggatgata tggttggacg ctggaagacg ttgaagctgg 8520
cgtctgtgag acctaccgcg tcacgcacga aggaggcgta ggagtcgcgc agcttgttga 8580
ccagctcggc ggtgacctgc acgtctaggg cgcagtagtc cagggtttcc ttgatgatgt 8640
catacttatc ctgtcccttt tttttccaca gctcgcggtt gaggacaaac tcttcgcggt 8700
ctttccagta ctcttggatc ggaaacccgt cggcctccga acggtaagag cctagcatgt 8760
agaactggtt gacggcctgg taggcgcagc atcccttttc tacgggtagc gcgtatgcct 8820
gcgcggcctt ccggagcgag gtgtgggtga gcgcaaaggt gtccctgacc atgactttga 8880
ggtactggta tttgaagtca gtgtcgtcgc atccgccctg ctcccagagc aaaaagtccg 8940
tgcgcttttt ggaacgcgga tttggcaggg cgaaggtgac atcgttgaag agtatctttc 9000
ccgcgcgagg cataaagttg cgtgtgatgc ggaagggtcc cggcacctcg gaacggttgt 9060
taattacctg ggcggcgagc acgatctcgt caaagccgtt gatgttgtgg cccacaatgt 9120
aaagttccaa gaagcgcggg atgcccttga tggaaggcaa ttttttaagt tcctcgtagg 9180
tgagctcttc aggggagctg agcccgtgct ctgaaagggc ccagtctgca agatgagggt 9240
tggaagcgac gaatgagctc cacaggtcac gggccattag catttgcagg tggtcgcgaa 9300
aggtcctaaa ctggcgacct atggccattt tttctggggt gatgcagtag aaggtaagcg 9360
ggtcttgttc ccagcggtcc catccaaggt tcgcggctag gtctcgcgcg gcagtcacta 9420
gaggctcatc tccgccgaac ttcatgacca gcatgaaggg cacgagctgc ttcccaaagg 9480
cccccatcca agtataggtc tctacatcgt aggtgacaaa gagacgctcg gtgcgaggat 9540
gcgagccgat cgggaagaac tggatctccc gccaccaatt ggaggagtgg ctattgatgt 9600
ggtgaaagta gaagtccctg cgacgggccg aacactcgtg ctggcttttg taaaaacgtg 9660
cgcagtactg gcagcggtgc acgggctgta catcctgcac gaggttgacc tgacgaccgc 9720
gcacaaggaa gcagagtggg aatttgagcc cctcgcctgg cgggtttggc tggtggtctt 9780
ctacttcggc tgcttgtcct tgaccgtctg gctgctcgag gggagttacg gtggatcgga 9840
ccaccacgcc gcgcgagccc aaagtccaga tgtccgcgcg cggcggtcgg agcttgatga 9900
caacatcgcg cagatgggag ctgtccatgg tctggagctc ccgcggcgtc aggtcaggcg 9960
ggagctcctg caggtttacc tcgcatagac gggtcagggc gcgggctaga tccaggtgat 10020
acctaatttc caggggctgg ttggtggcgg cgtcgatggc ttgcaagagg ccgcatcccc 10080
gcggcgcgac tacggtaccg cgcggcgggc ggtgggccgc gggggtgtcc ttggatgatg 10140
catctaaaag cggtgacgcg ggcgagcccc cggaggtagg gggggctccg gacccgccgg 10200
gagagggggc aggggcacgt cggcgccgcg cgcgggcagg agctggtgct gcgcgcgtag 10260
gttgctggcg aacgcgacga cgcggcggtt gatctcctga atctggcgcc tctgcgtgaa 10320
gacgacgggc ccggtgagct tgaacctgaa agagagttcg acagaatcaa tttcggtgtc 10380
gttgacggcg gcctggcgca aaatctcctg cacgtctcct gagttgtctt gataggcgat 10440
ctcggccatg aactgctcga tctcttcctc ctggagatct ccgcgtccgg ctcgctccac 10500
ggtggcggcg aggtcgttgg aaatgcgggc catgagctgc gagaaggcgt tgaggcctcc 10560
ctcgttccag acgcggctgt agaccacgcc cccttcggca tcgcgggcgc gcatgaccac 10620
ctgcgcgaga ttgagctcca cgtgccgggc gaagacggcg tagtttcgca ggcgctgaaa 10680
gaggtagttg agggtggtgg cggtgtgttc tgccacgaag aagtacataa cccagcgtcg 10740
caacgtggat tcgttgatat cccccaaggc ctcaaggcgc tccatggcct cgtagaagtc 10800
cacggcgaag ttgaaaaact gggagttgcg cgccgacacg gttaactcct cctccagaag 10860
acggatgagc tcggcgacag tgtcgcgcac ctcgcgctca aaggctacag gggcctcttc 10920
ttcttcttca atctcctctt ccataagggc ctccccttct tcttcttctg gcggcggtgg 10980
gggagggggg acacggcggc gacgacggcg caccgggagg cggtcgacaa agcgctcgat 11040
catctccccg cggcgacggc gcatggtctc ggtgacggcg cggccgttct cgcgggggcg 11100
cagttggaag acgccgcccg tcatgtcccg gttatgggtt ggcggggggc tgccatgcgg 11160
cagggatacg gcgctaacga tgcatctcaa caattgttgt gtaggtactc cgccgccgag 11220
ggacctgagc gagtccgcat cgaccggatc ggaaaacctc tcgagaaagg cgtctaacca 11280
gtcacagtcg caaggtaggc tgagcaccgt ggcgggcggc agcgggcggc ggtcggggtt 11340
gtttctggcg gaggtgctgc tgatgatgta attaaagtag gcggtcttga gacggcggat 11400
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gccccaggct tcgttttgac atcggcgcag gtctttgtag tagtcttgca tgagcctttc 11520
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gttcatcacc gtaatttcac tttccgcttc gctgggctct tcctcttcct cttgcgtccg 25140
cataccacgc gccactgggt cgtcttcatt cagccgccgc actgtgcgct tacctccttt 25200
gccatgcttg attagcaccg gtgggttgct gaaacccacc atttgtagcg ccacatcttc 25260
tctttcttcc tcgctgtcca cgattacctc tggtgatggc gggcgctcgg gcttgggaga 25320
agggcgcttc tttttcttct tgggcgcaat ggccaaatcc gccgccgagg tcgatggccg 25380
cgggctgggt gtgcgcggca ccagcgcgtc ttgtgatgag tcttcctcgt cctcggactc 25440
gatacgccgc ctcatccgct tttttggggg cgcccgggga ggcggcggcg acggggacgg 25500
ggacgacacg tcctccatgg ttgggggacg tcgcgccgca ccgcgtccgc gctcgggggt 25560
ggtttcgcgc tgctcctctt cccgactggc catttccttc tcctataggc agaaaaagat 25620
catggagtca gtcgagaaga aggacagcct aaccgccccc tctgagttcg ccaccaccgc 25680
ctccaccgat gccgccaacg cgcctaccac cttccccgtc gaggcacccc cgcttgagga 25740
ggaggaagtg attatcgagc aggacccagg ttttgtaagc gaagacgacg aggaccgctc 25800
agtaccaaca gaggataaaa agcaagacca ggacaacgca gaggcaaacg aggaacaagt 25860
cgggcggggg gacgaaaggc atggcgacta cctagatgtg ggagacgacg tgctgttgaa 25920
gcatctgcag cgccagtgcg ccattatctg cgacgcgttg caagagcgca gcgatgtgcc 25980
cctcgccata gcggatgtca gccttgccta cgaacgccac ctattctcac cgcgcgtacc 26040
ccccaaacgc caagaaaacg gcacatgcga gcccaacccg cgcctcaact tctaccccgt 26100
atttgccgtg ccagaggtgc ttgccaccta tcacatcttt ttccaaaact gcaagatacc 26160
cctatcctgc cgtgccaacc gcagccgagc ggacaagcag ctggccttgc ggcagggcgc 26220
tgtcatacct gatatcgcct cgctcaacga agtgccaaaa atctttgagg gtcttggacg 26280
cgacgagaag cgcgcggcaa acgctctgca acaggaaaac agcgaaaatg aaagtcactc 26340
tggagtgttg gtggaactcg agggtgacaa cgcgcgccta gccgtactaa aacgcagcat 26400
cgaggtcacc cactttgcct acccggcact taacctaccc cccaaggtca tgagcacagt 26460
catgagtgag ctgatcgtgc gccgtgcgca gcccctggag agggatgcaa atttgcaaga 26520
acaaacagag gagggcctac ccgcagttgg cgacgagcag ctagcgcgct ggcttcaaac 26580
gcgcgagcct gccgacttgg aggagcgacg caaactaatg atggccgcag tgctcgttac 26640
cgtggagctt gagtgcatgc agcggttctt tgctgacccg gagatgcagc gcaagctaga 26700
ggaaacattg cactacacct ttcgacaggg ctacgtacgc caggcctgca agatctccaa 26760
cgtggagctc tgcaacctgg tctcctacct tggaattttg cacgaaaacc gccttgggca 26820
aaacgtgctt cattccacgc tcaagggcga ggcgcgccgc gactacgtcc gcgactgcgt 26880
ttacttattt ctatgctaca cctggcagac ggccatgggc gtttggcagc agtgcttgga 26940
ggagtgcaac ctcaaggagc tgcagaaact gctaaagcaa aacttgaagg acctatggac 27000
ggccttcaac gagcgctccg tggccgcgca cctggcggac atcattttcc ccgaacgcct 27060
gcttaaaacc ctgcaacagg gtctgccaga cttcaccagt caaagcatgt tgcagaactt 27120
taggaacttt atcctagagc gctcaggaat cttgcccgcc acctgctgtg cacttcctag 27180
cgactttgtg cccattaagt accgcgaatg ccctccgccg ctttggggcc actgctacct 27240
tctgcagcta gccaactacc ttgcctacca ctctgacata atggaagacg tgagcggtga 27300
cggtctactg gagtgtcact gtcgctgcaa cctatgcacc ccgcaccgct ccctggtttg 27360
caattcgcag ctgcttaacg aaagtcaaat tatcggtacc tttgagctgc agggtccctc 27420
gcctgacgaa aagtccgcgg ctccggggtt gaaactcact ccggggctgt ggacgtcggc 27480
ttaccttcgc aaatttgtac ctgaggacta ccacgcccac gagattaggt tctacgaaga 27540
ccaatcccgc ccgcctaatg cggagcttac cgcctgcgtc attacccagg gccacattct 27600
tggccaattg caagccatca acaaagcccg ccaagagttt ctgctacgaa agggacgggg 27660
ggtttacttg gacccccagt ccggcgagga gctcaaccca atccccccgc cgccgcagcc 27720
ctatcagcag cagccgcggg cccttgcttc ccaggatggc acccaaaaag aagctgcagc 27780
tgccgccgcc acccacggac gaggaggaat actgggacag tcaggcagag gaggttttgg 27840
acgaggagga ggaggacatg atggaagact gggagagcct agacgaggaa gcttccgagg 27900
tcgaagaggt gtcagacgaa acaccgtcac cctcggtcgc attcccctcg ccggcgcccc 27960
agaaatcggc aaccggttcc agcatggcta caacctccgc tcctcaggcg ccgccggcac 28020
tgcccgttcg ccgacccaac cgtagatggg acaccactgg aaccagggcc ggtaagtcca 28080
agcagccgcc gccgttagcc caagagcaac aacagcgcca aggctaccgc tcatggcgcg 28140
ggcacaagaa cgccatagtt gcttgcttgc aagactgtgg gggcaacatc tccttcgccc 28200
gccgctttct tctctaccat cacggcgtgg ccttcccccg taacatcctg cattactacc 28260
gtcatctcta cagcccatac tgcaccggcg gcagcggcag caacagcagc ggccacacag 28320
aagcaaaggc gaccggatag caagactctg acaaagccca agaaatccac agcggcggca 28380
gcagcaggag gaggagcgct gcgtctggcg cccaacgaac ccgtatcgac ccgcgagctt 28440
agaaacagga tttttcccac tctgtatgct atatttcaac agagcagggg ccaagaacaa 28500
gagctgaaaa taaaaaacag gtctctgcga tccctcaccc gcagctgcct gtatcacaaa 28560
agcgaagatc agcttcggcg cacgctggaa gacgcggagg ctctcttcag taaatactgc 28620
gcgctgactc ttaaggacta gtttcgcgcc ctttctcaaa tttaagcgcg aaaactacgt 28680
catctccagc ggccacaccc ggcgccagca cctgttgtca gcgccattat gagcaaggaa 28740
attcccacgc cctacatgtg gagttaccag ccacaaatgg gacttgcggc tggagctgcc 28800
caagactact caacccgaat aaactacatg agcgcgggac cccacatgat atcccgggtc 28860
aacggaatac gcgcccaccg aaaccgaatt ctcctggaac aggcggctat taccaccaca 28920
cctcgtaata accttaatcc ccgtagttgg cccgctgccc tggtgtacca ggaaagtccc 28980
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cacctgacaa tcagagggcg aggtattcag ctcaacgacg agtcggtgag ctcctcgctt 29160
ggtctccgtc cggacgggac atttcagatc ggcggcgccg gccgctcttc attcacgcct 29220
cgtcaggcaa tcctaactct gcagacctcg tcctctgagc cgcgctctgg aggcattgga 29280
actctgcaat ttattgagga gtttgtgcca tcggtctact ttaacccctt ctcgggacct 29340
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ggctacgact gaatgttaag tggagaggca gagcaactgc gcctgaaaca cctggtccac 29460
tgtcgccgcc acaagtgctt tgcccgcgac tccggtgagt tttgctactt tgaattgccc 29520
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cgtagcctga ttcgggagtt tacccagcgc cccctgctag ttgagcggga caggggaccc 29640
tgtgttctca ctgtgatttg caactgtcct aaccctggat tacatcaaga tcttattccc 29700
tttaactaat aaaaaaaaat aataaagcat cacttactta aaatcagtta gcaaatttct 29760
gtccagttta ttcagcagca cctccttgcc ctcctcccag ctctggtatt gcagcttcct 29820
cctggctgca aactttctcc acaatctaaa tggaatgtca gtttcctcct gttcctgtcc 29880
atccgcaccc actatcttca tgttgttgca gatgaagcgc gcaagaccgt ctgaagatac 29940
cttcaacccc gtgtatccat atgacacgga aaccggtcct ccaactgtgc cttttcttac 30000
tcctcccttt gtatccccca atgggtttca agagagtccc cctggggtac tctctttgcg 30060
cctatccgaa cctctagtta cctccaatgg catgcttgcg ctcaaaatgg gcaacggcct 30120
ctctctggac gaggccggca accttacctc ccaaaatgta accactgtga gcccacctct 30180
caaaaaaacc aagtcaaaca taaacctgga aatatctgca cccctcacag ttacctcaga 30240
agccctaact gtggctgccg ccgcacctct aatggtcgcg ggcaacacac tcaccatgca 30300
atcacaggcc ccgctaaccg tgcacgactc caaacttagc attgccaccc aaggacccct 30360
cacagtgtca gaaggaaagc tagccctgca aacatcaggc cccctcacca ccaccgatag 30420
cagtaccctt actatcactg cctcaccccc tctaactact gccactggta gcttgggcat 30480
tgacttgaaa gagcccattt atacacaaaa tggaaaacta ggactaaagt acggggctcc 30540
tttgcatgta acagacgacc taaacacttt gaccgtagca actggtccag gtgtgactat 30600
taataatact tccttgcaaa ctaaagttac tggagccttg ggttttgatt cacaaggcaa 30660
tatgcaactt aatgtagcag gaggactaag gattgattct caaaacagac gccttatact 30720
tgatgttagt tatccgtttg atgctcaaaa ccaactaaat ctaagactag gacagggccc 30780
tctttttata aactcagccc acaacttgga tattaactac aacaaaggcc tttacttgtt 30840
tacagcttca aacaattcca aaaagcttga ggttaaccta agcactgcca aggggttgat 30900
gtttgacgct acagccatag ccattaatgc aggagatggg cttgaatttg gttcacctaa 30960
tgcaccaaac acaaatcccc tcaaaacaaa aattggccat ggcctagaat ttgattcaaa 31020
caaggctatg gttcctaaac taggaactgg ccttagtttt gacagcacag gtgccattac 31080
agtaggaaac aaaaataatg ataagctaac tttgtggacc acaccagctc catctcctaa 31140
ctgtagacta aatgcagaga aagatgctaa actcactttg gtcttaacaa aatgtggcag 31200
tcaaatactt gctacagttt cagttttggc tgttaaaggc agtttggctc caatatctgg 31260
aacagttcaa agtgctcatc ttattataag atttgacgaa aatggagtgc tactaaacaa 31320
ttccttcctg gacccagaat attggaactt tagaaatgga gatcttactg aaggcacagc 31380
ctatacaaac gctgttggat ttatgcctaa cctatcagct tatccaaaat ctcacggtaa 31440
aactgccaaa agtaacattg tcagtcaagt ttacttaaac ggagacaaaa ctaaacctgt 31500
aacactaacc attacactaa acggtacaca ggaaacagga gacacaactc caagtgcata 31560
ctctatgtca ttttcatggg actggtctgg ccacaactac attaatgaaa tatttgccac 31620
atcctcttac actttttcat acattgccca agaataaaga atcgtttgtg ttatgtttca 31680
acgtgtttat ttttcaattg cagaaaattt caagtcattt ttcattcagt agtatagccc 31740
caccaccaca tagcttatac agatcaccgt accttaatca aactcacaga accctagtat 31800
tcaacctgcc acctccctcc caacacacag agtacacagt cctttctccc cggctggcct 31860
taaaaagcat catatcatgg gtaacagaca tattcttagg tgttatattc cacacggttt 31920
cctgtcgagc caaacgctca tcagtgatat taataaactc cccgggcagc tcacttaagt 31980
tcatgtcgct gtccagctgc tgagccacag gctgctgtcc aacttgcggt tgcttaacgg 32040
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ggcggtggtg ctgcagcagc gcgcgaataa actgctgccg ccgccgctcc gtcctgcagg 32160
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ttgtcctccg ggcacagcag cgcaccctga tctcacttaa atcagcacag taactgcagc 32280
acagcaccac aatattgttc aaaatcccac agtgcaaggc gctgtatcca aagctcatgg 32340
cggggaccac agaacccacg tggccatcat accacaagcg caggtagatt aagtggcgac 32400
ccctcataaa cacgctggac ataaacatta cctcttttgg catgttgtaa ttcaccacct 32460
cccggtacca tataaacctc tgattaaaca tggcgccatc caccaccatc ctaaaccagc 32520
tggccaaaac ctgcccgccg gctatacact gcagggaacc gggactggaa caatgacagt 32580
ggagagccca ggactcgtaa ccatggatca tcatgctcgt catgatatca atgttggcac 32640
aacacaggca cacgtgcata cacttcctca ggattacaag ctcctcccgc gttagaacca 32700
tatcccaggg aacaacccat tcctgaatca gcgtaaatcc cacactgcag ggaagacctc 32760
gcacgtaact cacgttgtgc attgtcaaag tgttacattc gggcagcagc ggatgatcct 32820
ccagtatggt agcgcgggtt tctgtctcaa aaggaggtag acgatcccta ctgtacggag 32880
tgcgccgaga caaccgagat cgtgttggtc gtagtgtcat gccaaatgga acgccggacg 32940
tagtcatatt tcctgaagca aaaccaggtg cgggcgtgac aaacagatct gcgtctccgg 33000
tctcgccgct tagatcgctc tgtgtagtag ttgtagtata tccactctct caaagcatcc 33060
aggcgccccc tggcttcggg ttctatgtaa actccttcat gcgccgctgc cctgataaca 33120
tccaccaccg cagaataagc cacacccagc caacctacac attcgttctg cgagtcacac 33180
acgggaggag cgggaagagc tggaagaacc atgttttttt ttttattcca aaagattatc 33240
caaaacctca aaatgaagat ctattaagtg aacgcgctcc cctccggtgg cgtggtcaaa 33300
ctctacagcc aaagaacaga taatggcatt tgtaagatgt tgcacaatgg cttccaaaag 33360
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tatatctcta agcaaatccc gaatattaag tccggccatt gtaaaaatct gctccagagc 33540
gccctccacc ttcagcctca agcagcgaat catgattgca aaaattcagg ttcctcacag 33600
acctgtataa gattcaaaag cggaacatta acaaaaatac cgcgatcccg taggtccctt 33660
cgcagggcca gctgaacata atcgtgcagg tctgcacgga ccagcgcggc cacttccccg 33720
ccaggaacca tgacaaaaga acccacactg attatgacac gcatactcgg agctatgcta 33780
accagcgtag ccccgatgta agcttgttgc atgggcggcg atataaaatg caaggtgctg 33840
ctcaaaaaat caggcaaagc ctcgcgcaaa aaagaaagca catcgtagtc atgctcatgc 33900
agataaaggc aggtaagctc cggaaccacc acagaaaaag acaccatttt tctctcaaac 33960
atgtctgcgg gtttctgcat aaacacaaaa taaaataaca aaaaaacatt taaacattag 34020
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cggcgtgacc gtaaaaaaac tggtcaccgt gattaaaaag caccaccgac agctcctcgg 34140
tcatgtccgg agtcataatg taagactcgg taaacacatc aggttgattc acatcggtca 34200
gtgctaaaaa gcgaccgaaa tagcccgggg gaatacatac ccgcaggcgt agagacaaca 34260
ttacagcccc cataggaggt ataacaaaat taataggaga gaaaaacaca taaacacctg 34320
aaaaaccctc ctgcctaggc aaaatagcac cctcccgctc cagaacaaca tacagcgctt 34380
ccacagcggc agccataaca gtcagcctta ccagtaaaaa agaaaaccta ttaaaaaaac 34440
accactcgac acggcaccag ctcaatcagt cacagtgtaa aaaagggcca agtgcagagc 34500
gagtatatat aggactaaaa aatgacgtaa cggttaaagt ccacaaaaaa cacccagaaa 34560
accgcacgcg aacctacgcc cagaaacgaa agccaaaaaa cccacaactt cctcaaatcg 34620
tcacttccgt tttcccacgt tacgtcactt cccattttaa gaaaactaca attcccaaca 34680
catacaagtt actccgccct aaaacctacg tcacccgccc cgttcccacg ccccgcgcca 34740
cgtcacaaac tccaccccct cattatcata ttggcttcaa tccaaaataa ggtatattat 34800
tgatgatg 34808
<210> 7
<211> 34742
<212> DNA
<213> Recombinant human adenovirus serotype 5
<220>
<223> Parental sequence of recombinant human adenovirus serotype 5, wherein the E1 and E3 regions are deleted
<400> 7
ccatcttcaa taatatacct caaacttttt tgtgcgcgtt aatatgcaaa tgaggcgttt 60
gaatttgggg aggaagggcg gtgattggtc gagggatgag cgaccgttag gggcggggcg 120
agtgacgttt tgatgacgtg gttgcgagga ggagccagtt tgcaagttct cgtgggaaaa 180
gtgacgtcaa acgaggtgtg gtttgaacac ggaaatactc aattttcccg cgctctctga 240
caggaaatga ggtgtttctg ggcggatgca agtgaaaacg ggccattttc gcgcgaaaac 300
tgaatgagga agtgaaaatc tgagtaattt cgcgtttatg gcagggagga gtatttgccg 360
agggccgagt agactttgac cgattacgtg ggggtttcga ttaccgtgtt tttcacctaa 420
atttccgcgt acggtgtcaa agtccggtgt ttttacgtag gtgtcagctg atcgccaggg 480
tatttaaacc tgcgctctcc agtcaagagg ccactcttga gtgccagcga gaagagttgc 540
gatgcatgcg cgttgtcaaa tatgagctca caatgcttcc atcaaacgag ttggtgctca 600
tggcggcggc ggctgctgca aaacagatac aaaactacat aagaccccca ccttatatat 660
tctttcccac ccttaaccac gcccagatcc gcgttaagat acattgatga gtttggacaa 720
accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct 780
ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt 840
atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa gcaagtaaaa cctctacaaa 900
tgtggtatgg ctgattatga tcagttatct agactcgagc ggccgcgata tcttatgtgt 960
aatgtaattt gactcctttg agcacgggct cagaatcgtc ctcgtcgaac ttgcagcagc 1020
tgccacagct acaacagccc ttcaggcagc tacagcagct ggtcatgcaa cacagcatga 1080
ttgtgaccat cacgatggca atcagtccgg cgataaagcc cagccagatg taccagggcc 1140
acttgatgta ctgctcgtac ttccccagtt cttgcaggtc gatcaggctc tcgttcagat 1200
tcttggccac ctcgttcagc cggtcgatct ctttctggat gttcacgacg ctggcattga 1260
ttccgctgat gtcgcccagg tccacgtcgg ggcttgtgtg gttcttaaag tacttatcca 1320
gttcctcttt gaagctgtcc agctcgggct gcagagggtc gtacacggta ttgttcacaa 1380
tgccgatcac gacgtcgcag ttgccagaca cgaaggtgtt gtcggtggtg atgatctggg 1440
gctcgtagaa gttccgctgg gtcacgaacc aatgggtgcc gttggacacg aacacgcctt 1500
ctctaggaaa gtgggctttg ccgtcgtggc agatggctgg agcggtggtg aaattcttct 1560
cttgagcggg cacgtatgtc acgtgcagaa acaccacgcc gtgaggggca gactgaggga 1620
agctcatcag gtggtagccc ttgccgcaaa agtccactct cttgctctgg cccagcacac 1680
actcagacat cttggtggcg gccagattgg cagaggctct aatctcggcg gctctgatca 1740
gctgctgggt aacgtaggtc tgcagggact gcagccttcc ggtgatcagt ctgtcgatct 1800
gcacctcggc ttccaccttg tccagtctgc tcaggatgtc gttcagcaca gagctgatgg 1860
cgccgaagtt ggaggacagc tgcttgacca gggtgttcag tgcctgggca ttctggttga 1920
ccacgtcctg cagctttccc agggcgcttg ctgtgctgct caggctgtcc tggatcttgc 1980
cgatggcgct gttgaactgg ttggcgatca gcttctggtt ctcgtacagc acattctggg 2040
tcactccgat gccgttgaac cggtaggcca tctgcatagc aaaggggatc tgcagagcgg 2100
cgccagctcc aaatgtccag ccgcttgtga ttgtgccggc cagcagggca gatgtgtact 2160
gggcgatcat ctcatcggtc agcagtggtg gcagcactgt cagtccgtta aacttctggg 2220
cgcaaatcag atccctggcg gcaatgtcgc ccagacaatc gccatactgc ttgatgaagc 2280
cggcgtcggc cagtgtcact ttgttgaaca gcaggtcctc gatgaagctc cgcttgctgg 2340
gcttgctagg atcgggcaga atctggctga aattgaagcc gccgaagtcc ttgataggag 2400
gggtcttgta gatctgcttc acttgggcga acacctcttg ggtgttcttg tcctgttcca 2460
cggcgatccc tgtcagggct ctattcagct gggtgcagaa gctgccgtac tgcagcagca 2520
ggttggagca ctcggtggaa tcgccgcaga tgtacatggt gcagtccacg ctggtcttgg 2580
tcatggacac aggcaggatc tctgtggtca cgctgatggt gaagttggtg gggatagcga 2640
tagagttgtt ggagtaggcc acgctgttct cggcgcccag agacattgtg taggcaatga 2700
tgctctggct ggccacagat ctggcccgtc tggggctgtt tgtctgtgtc tggtagctgg 2760
cacagatgcc agcgccgatg gggatgtcgc actcgtagct attgttcacg tgctcggctc 2820
cgatcagaca gccggctctg gtctgaaaca cattgctgcc ggtggagtac acccgccatg 2880
taggtgtcag ctgatcggcg tgaatggcca cgggcacttc ggtacagttc acgtcctggt 2940
acagcactgc cacctgattg ctggtgttgg tgccaggggt gatcacagac actccgccga 3000
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tatcggcaat atcccggcca aactgctgga atggcaggaa cttcttgttg ctctctgtca 3120
gcacgccggt gccggtcagg ccgttgaagt tgaagttcac gcatttgttc ttcacgagat 3180
tggtgctttt cttagggccg cacactgtgg caggggcatg cagcagttcg aagctcagca 3240
ccaccactct gtagggctga tagcccacgc catttgtggg ctgaaagccg taggactgca 3300
gtgggaagta gcagttgaag ccttccacgc cgttacaagg ggtgctgccg gcctgataga 3360
tctcggtgga gatgtcccgc tcgaagggct tcagattgga cttccggaac agccggtaca 3420
ggtaattgta gttgccgccg actttggagt ccaggttgtt gctgttccag gcaatcacac 3480
agccggtgaa gtcgtcgggc agcttgtagt tgtagtcggc gatcttgcct gtctgtccag 3540
gggcaatctg ccgcacttca tctccccgga tcacgaagct gtcggcgtac acgtttgtga 3600
agcacaggtc gttcagcttg gtaggggaca cgccgtagca cttgaaggtg ctgaagctgg 3660
cggagttgta cagcacggag tagtcggcca cgcaattgct gatccgcttc cggttccagg 3720
cgtacacaga ggcgaatctg gtggcattga acacctcgcc gaaggggcac agattggtga 3780
tattggggaa ccgcacgatg gattcggtgg gctgcacccg gaagttgctg gtctggtaga 3840
tgcccttttc cacggtgaag gacttcaggg tgcactttgt ctcgctcaga ggatccagag 3900
cacaatccac ggcgtcggtg atggtgccgt tctcgttgta cttcagcagg aaggttctag 3960
gctgcaggta gcccacatag taagcggcgg caccagctgt ccatccgctg ctgctatcgc 4020
caggtgtcag gtagcttctg tgcagggcca gcagtgtctg aaaccgggtg atgttgatgc 4080
cgatgggcag atccaccagg ggttccagag cagagaagcc ctgaggcaga tcccgcacga 4140
ggttgatagg ggtgtgcttg ctgtagatct tgaagtagcc gtcgatgttc ttgaacacga 4200
actcgcgcag gttcttgaag ttgccctgct tgccttccag gtccatcagg aaaggctggg 4260
acacgtactc gaaggtgcag ttgttggcgc tgctgtacac ccggaactcg ctttccatcc 4320
agctcttgtt gttcttgtga tagtagacgc ccaggaaggg gtcgttgcag aactggaact 4380
cgcacacttt gatgaccacg ttggtggcgt tgttcacgat cagcaggctc tgggtcttgc 4440
tgtccagtgt ggtgccgaag atccagcctc tgatgatgtt ggacttctcg gtgctggcaa 4500
agtacacccc gtcgttgaag ggcagcacgg ggttgtcgaa tctcttggtg ccattggtgc 4560
cggacacgtg gatggcgtgg aaccaggtca cgttgctgaa gaaaggcagg aacaggtcct 4620
gggtagagtg cagcacgctg gatctgaaca ccttgtcggg gtagtacacg cctctggtaa 4680
agctgttggt gtaggctgga ggcagctggg ttcttgtggt caggttcaca cactgactag 4740
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ggttcactaa accagctctg cttatataga cctcccaccg tacacgccta ccgcccattt 4860
gcgtcaatgg ggcggagttg ttacgacatt ttggaaagtc ccgttgattt tggtgccaaa 4920
acaaactccc attgacgtca atggggtgga gacttggaaa tccccgtgag tcaaaccgct 4980
atccacgccc attgatgtac tgccaaaacc gcatcaccat ggtaatagcg atgactaata 5040
cgtagatgta ctgccaagta ggaaagtccc ataaggtcat gtactgggca taatgccagg 5100
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ctattggcgt tactatggga acatacgtca ttattgacgt caatgggcgg gggtcgttgg 5280
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tatgaactaa tgaccccgta attgattact attacagtat tacgcgctat gagtaacaca 5400
aaattattca gatttcactt cctcttattc agttttcccg cgaaaatggc caaatcttac 5460
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gagggagggg tattcagccc ttatctgacg gggcgtctcc cctcctgggc gggagtgcgt 5700
cagaatgtga tgggatccac ggtggacggc cggcccgtgc agcccgcgaa ctcttcaacc 5760
ctgacctatg caaccctgag ctcttcgtcg ttggacgcag ctgccgccgc agctgctgca 5820
tctgccgcca gcgccgtgcg cggaatggcc atgggcgccg gctactacgg cactctggtg 5880
gccaactcga gttccaccaa taatcccgcc agcctgaacg aggagaagct gttgctgctg 5940
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taaataaacg gagacggttg ttgattttaa cacagagtct gaatctttat ttgatttttc 6120
gcgcgcggta ggccctggac caccggtctc gatcattgag cacccggtgg atcttttcca 6180
ggacccggta gaggtgggct tggatgttga ggtacatggg catgagcccg tcccgggggt 6240
ggaggtagct ccattgcagg gcctcgtgct cgggggtggt gttgtaaatc acccagtcat 6300
agcaggggcg cagggcatgg tgttgcacaa tatctttgag gaggagactg atggccacgg 6360
gcagcccttt ggtgtaggtg tttacaaatc tgttgagctg ggagggatgc atgcgggggg 6420
agatgaggtg catcttggcc tggatcttga gattggcgat gttaccgccc agatcccgcc 6480
tggggttcat gttgtgcagg accaccagca cggtgtatcc ggtgcacttg gggaatttat 6540
catgcaactt ggaagggaag gcgtgaaaga atttggcgac gcctttgtgc ccgcccaggt 6600
tttccatgca ctcatccatg atgatggcga tgggcccgtg ggcggcggcc tgggcaaaga 6660
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taatgaattt ggggcggagg gtgccggact gggggacaaa ggtaccctcg atcccggggg 6780
cgtagttccc ctcacagatc tgcatctccc aggctttgag ctcggagggg gggatcatgt 6840
ccacctgcgg ggcgataaag aacacggttt ccggggcggg ggagatgagc tgggccgaaa 6900
gcaagttccg gagcagctgg gacttgccgc agccggtggg gccgtagatg accccgatga 6960
ccggctgcag gtggtagttg agggagagac agctgccgtc ctcccggagg aggggggcca 7020
cctcgttcat catctcgcgc acgtgcatgt tctcgcgcac cagttccgcc aggaggcgct 7080
ctccccccag ggataggagc tcctggagcg aggcgaagtt tttcagcggc ttgagtccgt 7140
cggccatggg cattttggag agggtttgtt gcaagagttc caggcggtcc cagagctcgg 7200
tgatgtgctc tacggcatct cgatccagca gacctcctcg tttcgcgggt tgggacggct 7260
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tcgcagcgtc cgcgtcaggg tggtctccgt cacggtgaag gggtgcgcgc cgggctgggc 7380
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ctgcgcgtcg gccaggtagc aattgaccat gagttcgtag ttgagcgcct cggccgcgtg 7500
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gtgggcgcag acggtctcgc actccacgag ccaggtgagg tcgggctggt cggggtcaaa 7680
aaccagtttc ccgccgttct ttttgatgcg tttcttacct ttggtctcca tgagctcgtg 7740
tccccgctgg gtgacaaaga ggctgtccgt gtccccgtag accgacttta tgggccggtc 7800
ctcgagcggt gtgccgcggt cctcctcgta gaggaacccc gcccactccg agacgaaagc 7860
ccgggtccag gccagcacga aggaggccac gtgggacggg tagcggtcgt tgtccaccag 7920
cgggtccacc ttttccaggg tatgcaaaca catgtccccc tcgtccacat ccaggaaggt 7980
gattggcttg taagtgtagg ccacgtgacc gggggtcccg gccggggggg tataaaaggg 8040
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gggtaggtat tccctctcga aggcgggcat gacctcggca ctcaggttgt cagtttctag 8160
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catctggtca gaaaagacga tctttttgtt gtcgagcttg gtggcgaagg agccgtagag 8280
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gacggtggtc agctcgtcgg gcacgattct gacctgccag ccccgattat gcagggtgat 8460
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atcgatggtg aagatgccgg gcaggaggtc ggggtcaaag tagctgatgg aagtggccag 8640
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cgtgccccag ggcatgggat gggtaagcgc ggaggcgtac atgccgcaga tgtcgtagac 8760
gtagaggggc tcctcgagga tgccgatgta ggtggggtag cagcgccccc cgcggatgct 8820
ggcgcgcacg tagtcataca gctcgtgcga gggggcgagg agccccgggc ccaggttggt 8880
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gatggtgggc ctttggaaga tgttgaagtg ggcgtggggc agtccgaccg agtcgcggat 9000
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agcgcagtag tcgagggtct cctggatgat gtcatacttg agctgtccct tttgtttcca 9120
cagctcgcgg ttgagaagga actcttcgcg gtccttccag tactcttcga gggggaaccc 9180
gtcctgatct gcacggtaag agcctagcat gtagaactgg ttgacggcct tgtaggcgca 9240
gcagcccttc tccacgggga gggcgtaggc ctgggcggcc ttgcgcaggg aggtgtgcgt 9300
gagggcgaaa gtgtccctga ccatgacctt gaggaactgg tgcttgaagt cgatatcgtc 9360
gcagcccccc tgctcccaga gctggaagtc cgtgcgcttc ttgtaggcgg ggttgggcaa 9420
agcgaaagta acatcgttga agaggatctt gcccgcgcgg ggcataaagt tgcgagtgat 9480
gcggaaaggt tggggcacct cggcccggtt gttgatgacc tgggcggcga gcacgatctc 9540
gtcgaagccg ttgatgttgt ggcccacgat gtagagttcc acgaatcgcg gacggccctt 9600
gacgtggggc agtttcttga gctcctcgta ggtgagctcg tcggggtcgc tgagcccgtg 9660
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ctggagggcg agatcgaggg cgagctcgac gagccggtcg tccccggaga gtttcatgac 9900
cagcatgaag gggacgagct gcttgccgaa ggaccccatc caggtgtagg tttccacatc 9960
gtaggtgagg aagagccttt cggtgcgagg atgcgagccg atggggaaga actggatctc 10020
ctgccaccaa ttggaggaat ggctgttgat gtgatggaag tagaaatgcc gacggcgcgc 10080
cgaacactcg tgcttgtgtt tatacaagcg gccacagtgc tcgcaacgct gcacgggatg 10140
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tcgtggcgcc tgcatctcgt gctgtactac gtcgtggtgg tcggcctggc cctcttctgc 10260
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gggtcggaga gcgaggacga gggcgcgcag gccggagctg tccagggtcc tgagacgctg 10380
cggagtcagg tcagtgggca gcggcggcgc gcggttgact tgcaggagtt tttccagggc 10440
gcgcgggagg tccagatggt acttgatctc caccgcgcca ttggtggcga cgtcgatggc 10500
ttgcagggtc ccgtgcccct ggggtgtgac caccgtcccc cgtttcttct tgggcggctg 10560
gggcgacggg ggcggtgcct cttccatggt tagaagcggc ggcgaggacg cgcgccgggc 10620
ggcaggggcg gctcggggcc cggaggcagg ggcggcaggg gcacgtcggc gccgcgcgcg 10680
ggtaggttct ggtactgcgc ccggagaaga ctggcgtgag cgacgacgcg acggttgacg 10740
tcctggatct gacgcctctg ggtgaaggcc acgggacccg tgagtttgaa cctgaaagag 10800
agttcgacag aatcaatctc ggtatcgttg acggcggcct gccgcaggat ctcttgcacg 10860
tcgcccgagt tgtcctggta ggcgatctcg gtcatgaact gctcgatctc ctcctcttga 10920
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accgcgtagt tgcagaggcg ctggtagagg tagttgagcg tggtggcgat gtgctcggtg 11160
acgaagaaat acatgatcca gcggcggagc ggcatctcgc tgacgtcgcc cagcgcctcc 11220
aaacgttcca tggcctcgta aaagtccacg gcgaagttga aaaactggga gttgcgcgcc 11280
gagacggtca actcctcctc cagaagacgg atgagctcgg cgatggtggc gcgcacctcg 11340
cgctcgaagg cccccgggag ttcctccact tcctcttctt cctcctccac taacatctct 11400
tctacttcct cctcaggcgg cagtggtggc gggggagggg gcctgcgtcg ccggcggcgc 11460
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tggccggggg ggtccccgtt gggcagggag agggcgctga cgatgcatct tatcaattgc 11640
cccgtaggga ctccgcgcaa ggacctgagc gtctcgagat ccacgggatc tgaaaaccgc 11700
tgaacgaagg cttcgagcca gtcgcagtcg caaggtaggc tgagcacggt ttcttctggc 11760
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gttctgagac ggcggatggt ggcgaggagc accaggtctt tgggcccggc ttgctggatg 11880
cgcagacggt cggccatgcc ccaggcgtgg tcctgacacc tggccaggtc cttgtagtag 11940
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agcccgaagc cgcgctgggg ctggacgagc gccaggtcgg cgacgacgcg ctcggcgagg 12060
atggcttgct ggatctgggt gagggtggtc tggaagtcat caaagtcgac gaagcggtgg 12120
taggctccgg tgttgatggt gtaggagcag ttggccatga cggaccagtt gacggtctgg 12180
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tagtcgttgc aggtgcgcac caggtactgg tagccgatga ggaagtgcgg cggcggctgg 12300
cggtagagcg gccatcgctc ggtggcgggg gcgccgggcg cgaggtcctc gagcatggtg 12360
cggtggtagc cgtagatgta cctggacatc caggtgatgc cggcggcggt ggtggaggcg 12420
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ggcacggtct ggcccgtgag gcgcgcgcag tcgtggatgc tctatacggg caaaaacgaa 12540
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ccgtagtctg gagaagaatc gccagggttg cgttgcggtg tgccccggtt cgaggccggc 12840
cggattccgc ggctaacgag ggcgtggctg ccccgtcgtt tccaagaccc catagccagc 12900
cgacttctcc agttacggag cgagcccctc ttttgttttg tttgtttttg ccagatgcat 12960
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ggcctgatgc acctgtggga cctgctggag gccatcgtgc agaaccccac cagcaagccg 13560
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cagagcatcg tggtgcagga gcgcgggctg ccgctgtccg agaagctggc ggccatcaac 13740
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gacgaggagg gcgagtacct ggaagactga tggcgcgacc gtatttttgc tagatgcaac 14160
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accccgaagc ctttagacag cagccccagg ccaaccggct ctcggccatc ctggaggccg 14340
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catgaccatc gacctgatga acaacgccat catcgacaat tacttggcgg tggggcggca 16620
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cattcagccg gtggagaagg atagcaagaa caggagctac aacgtactac cggacaagat 17100
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gcgctcctgg acgctgctca ccacctcgga cgtcacctgc ggcgtggagc aagtctactg 17220
gtcgctgccc gacatgatgc aagacccggt caccttccgc tccacgcgtc aagttagcaa 17280
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gcgcgtgacc gttactgacg ccagacgccg cacctgcccc tacgtctaca aggccctggg 17580
catagtcgcg ccgcgcgtcc tctcgagccg caccttctaa atgtccattc tcatctcgcc 17640
cagtaataac accggttggg gcctgcgcgc gcccagcaag atgtacggag gcgctcgcca 17700
acgctccacg caacaccccg tgcgcgtgcg cgggcacttc cgcgctccct ggggcgccct 17760
caagggccgc gtgcggtcgc gcaccaccgt cgacgacgtg atcgaccagg tggtggccga 17820
cgcgcgcaac tacacccccg ccgccgcgcc cgtctccacc gtggacgccg tcatcgacag 17880
cgtggtggcg gacgcgcgcc ggtacgcccg cgccaagagc cggcggcggc gcatcgcccg 17940
gcggcaccgg agcacccccg ccatgcgcgc ggcgcgagcc ttgctgcgca gggccaggcg 18000
cacgggacgc agggccatgc tcagggcggc cagacgcgcg gcttcaggcg ccagcgccgg 18060
caggacccgg agacgcgcgg ccacggcggc ggcagcggcc atcgccagca tgtcccgccc 18120
gcggcgaggg aacgtgtact gggtgcgcga cgccgccacc ggtgtgcgcg tgcccgtgcg 18180
cacccgcccc cctcgcactt gaagatgttc acttcgcgat gttgatgtgt cccagcggcg 18240
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gacaaaaagg aagaagaaag tgatgtggac ggattggtgg agtttgtgcg cgagttcgcc 18420
ccccggcggc gcgtgcagtg gcgcgggcgg aaggtgcaac cggtgctgag acccggcacc 18480
accgtggtct tcacgcccgg cgagcgctcc ggcaccgctt ccaagcgctc ctacgacgag 18540
gtgtacgggg atgatgatat tctggagcag gcggccgagc gcctgggcga gtttgcttac 18600
ggcaagcgca gccgttccgc accgaaggaa gaggcggtgt ccatcccgct ggaccacggc 18660
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cgccgggggt tcaagcgcga gggcgaggat ctgtacccca ccatgcagct gatggtgccc 18780
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gaggtcaagg tgcggcccat caagcaggtg gccccgggcc tgggcgtgca gaccgtggac 18900
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agcaccatgg aggtgcagac ggatccctgg atgccatcgg ctcctagtcg aagaccccgg 19020
cgcaagtacg gcgcggccag cctgctgatg cccaactacg cgctgcatcc ttccatcatc 19080
cccacgccgg gctaccgcgg cacgcgcttc taccgcggtc ataccagcag ccgccgccgc 19140
aagaccacca ctcgccgccg ccgtcgccgc accgccgctg caaccacccc tgccgccctg 19200
gtgcggagag tgtaccgccg cggccgcgca cctctgaccc tgccgcgcgc gcgctaccac 19260
ccgagcatcg ccatttaaac tttcgccagc tttgcagatc aatggccctc acatgccgcc 19320
ttcgcgttcc cattacgggc taccgaggaa gaaaaccgcg ccgtagaagg ctggcgggga 19380
acgggatgcg tcgccaccac caccggcggc ggcgcgccat cagcaagcgg ttggggggag 19440
gcttcctgcc cgcgctgatc cccatcatcg ccgcggcgat cggggcgatc cccggcattg 19500
cttccgtggc ggtgcaggcc tctcagcgcc actgagacac acttggaaac atcttgtaat 19560
aaacccatgg actctgacgc tcctggtcct gtgatgtgtt ttcgtagaca gatggaagac 19620
atcaattttt cgtccctggc tccgcgacac ggcacgcggc cgttcatggg cacctggagc 19680
gacatcggca ccagccaact gaacgggggc gccttcaatt ggagcagtct ctggagcggg 19740
cttaagaatt tcgggtccac gcttaaaacc tatggcagca aggcgtggaa cagcaccaca 19800
gggcaggcgc tgagggataa gctgaaagag cagaacttcc agcagaaggt ggtcgatggg 19860
ctcgcctcgg gcatcaacgg ggtggtggac ctggccaacc aggccgtgca gcggcagatc 19920
aacagccgcc tggacccggt gccgcccgcc ggctccgtgg agatgccgca ggtggaggag 19980
gagctgcctc ccctggacaa gcggggcgag aagcgacccc gccccgatgc ggaggagacg 20040
ctgctgacgc acacggacga gccgcccccg tacgaggagg cggtgaaact gggtctgccc 20100
accacgcggc ccatcgcgcc cctggccacc ggggtgctga aacccgaaaa gcccgcgacc 20160
ctggacttgc ctcctcccca gccttcccgc ccctctacag tggctaagcc cctgccgccg 20220
gtggccgtgg cccgcgcgcg acccgggggc accgcccgcc ctcatgcgaa ctggcagagc 20280
actctgaaca gcatcgtggg tctgggagtg cagagtgtga agcgccgccg ctgctattaa 20340
acctaccgta gcgcttaact tgcttgtctg tgtgtgtatg tattatgtcg ccgccgccgc 20400
tgtccaccag aaggaggagt gaagaggcgc gtcgccgagt tgcaagatgg ccaccccatc 20460
gatgctgccc cagtgggcgt acatgcacat cgccggacag gacgcttcgg agtacctgag 20520
tccgggtctg gtgcagtttg cccgcgccac agacacctac ttcagtctgg ggaacaagtt 20580
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gctgcgcttc gtgcccgtgg accgcgagga caacacctac tcgtacaaag tgcgctacac 20700
gctggccgtg ggcgacaacc gcgtgctgga catggccagc acctactttg acatccgcgg 20760
cgtgctggat cggggcccta gcttcaaacc ctactccggc accgcctaca acagtctggc 20820
ccccaaggga gcacccaaca cttgtcagtg gacatataaa gccgatggtg aaactgccac 20880
agaaaaaacc tatacatatg gaaatgcacc cgtgcagggc attaacatca caaaagatgg 20940
tattcaactt ggaactgaca ccgatgatca gccaatctac gcagataaaa cctatcagcc 21000
tgaacctcaa gtgggtgatg ctgaatggca tgacatcact ggtactgatg aaaagtatgg 21060
aggcagagct cttaagcctg ataccaaaat gaagccttgt tatggttctt ttgccaagcc 21120
tactaataaa gaaggaggtc aggcaaatgt gaaaacagga acaggcacta ctaaagaata 21180
tgacatagac atggctttct ttgacaacag aagtgcggct gctgctggcc tagctccaga 21240
aattgttttg tatactgaaa atgtggattt ggaaactcca gatacccata ttgtatacaa 21300
agcaggcaca gatgacagca gctcttctat taatttgggt cagcaagcca tgcccaacag 21360
acctaactac attggtttca gagacaactt tatcgggctc atgtactaca acagcactgg 21420
caatatgggg gtgctggccg gtcaggcttc tcagctgaat gctgtggttg acttgcaaga 21480
cagaaacacc gagctgtcct accagctctt gcttgactct ctgggtgaca gaacccggta 21540
tttcagtatg tggaatcagg cggtggacag ctatgatcct gatgtgcgca ttattgaaaa 21600
tcatggtgtg gaggatgaac ttcccaacta ttgtttccct ctggatgctg ttggcagaac 21660
agatacttat cagggaatta aggctaatgg aactgatcaa accacatgga ccaaagatga 21720
cagtgtcaat gatgctaatg agataggcaa gggtaatcca ttcgccatgg aaatcaacat 21780
ccaagccaac ctgtggagga acttcctcta cgccaacgtg gccctgtacc tgcccgactc 21840
ttacaagtac acgccggcca atgttaccct gcccaccaac accaacacct acgattacat 21900
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cgctcgaaca cctgctacct cttcgacccc ttcgggttct cggacgagcg cctcaagcag 23520
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gacatgtaaa ccgtgtgtgt atgttaaatg tctttaataa acagcacttt catgttacac 23940
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aaactcactt tgtggacaac acctgatcca tcaccaaact gtcaaatact cgcagaaaat 31140
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gtcttagttg taggaagtgg aaacctaaac cccattactg gcaccgtaag cagtgctcag 31260
gtgtttctac gttttgatgc aaacggtgtt cttttaacag aacattctac actaaaaaaa 31320
tactgggggt ataggcaggg agatagcata gatggcactc catataccaa tgctgtagga 31380
ttcatgccca atttaaaagc ttatccaaag tcacaaagtt ctactactaa aaataatata 31440
gtagggcaag tatacatgaa tggagatgtt tcaaaaccta tgcttctcac tataaccctc 31500
aatggtactg atgacagcaa cagtacatat tcaatgtcat tttcatacac ctggactaat 31560
ggaagctatg ttggagcaac atttggggct aactcttata ccttctcata catcgcccaa 31620
gaatgaacac tgtatcccac cctgcatgcc aacccttccc accccactct gtggaacaaa 31680
ctctgaaaca caaaataaaa taaagttcaa gtgttttatt gattcaacag ttttacagga 31740
ttcgagcagt tatttttcct ccaccctccc aggacatgga atacaccacc ctctcccccc 31800
gcacagcctt gaacatctga atgccattgg tgatggacat gcttttggtc tccacgttcc 31860
acacagtttc agagcgagcc agtctcgggt cggtcaggga gatgaaaccc tccgggcact 31920
cccgcatctg cacctcacag ctcaacagct gaggattgtc ctcggtggtc gggatcacgg 31980
ttatctggaa gaagcagaag agcggcggtg ggaatcatag tccgcgaacg ggatcggccg 32040
gtggtgtcgc atcaggcccc gcagcagtcg ctgccgccgc cgctccgtca agctgctgct 32100
cagggggtcc gggtccaggg actccctcag catgatgccc acggccctca gcatcagtcg 32160
tctggtgcgg cgggcgcagc agcgcatgcg gatctcgctc aggtcgctgc agtacgtgca 32220
acacagaacc accaggttgt tcaacagtcc atagttcaac acgctccagc cgaaactcat 32280
cgcgggaagg atgctaccca cgtggccgtc gtaccagatc ctcaggtaaa tcaagtggtg 32340
ccccctccag aacacgctgc ccacgtacat gatctccttg ggcatgtggc ggttcaccac 32400
ctcccggtac cacatcaccc tctggttgaa catgcagccc cggatgatcc tgcggaacca 32460
cagggccagc accgccccgc ccgccatgca gcgaagagac cccgggtccc ggcaatggca 32520
atggaggacc caccgctcgt acccgtggat catctgggag ctgaacaagt ctatgttggc 32580
acagcacagg catatgctca tgcatctctt cagcactctc aactcctcgg gggtcaaaac 32640
catatcccag ggcacgggga actcttgcag gacagcgaac cccgcagaac agggcaatcc 32700
tcgcacagaa cttacattgt gcatggacag ggtatcgcaa tcaggcagca ccgggtgatc 32760
ctccaccaga gaagcgcggg tctcggtctc ctcacagcgt ggtaaggggg ccggccgata 32820
cgggtgatgg cgggacgcgg ctgatcgtgt tcgcgaccgt gtcatgatgc agttgctttc 32880
ggacattttc gtacttgctg tagcagaacc tggtccgggc gctgcacacc gatcgccggc 32940
ggcggtctcg gcgcttggaa cgctcggtgt tgaaattgta aaacagccac tctctcagac 33000
cgtgcagcag atctagggcc tcaggagtga tgaagatccc atcatgcctg atggctctga 33060
tcacatcgac caccgtggaa tgggccagac ccagccagat gatgcaattt tgttgggttt 33120
cggtgacggc gggggaggga agaacaggaa gaaccatgat taacttttaa tccaaacggt 33180
ctcggagtac ttcaaaatga agatcgcgga gatggcacct ctcgcccccg ctgtgttggt 33240
ggaaaataac agccaggtca aaggtgatac ggttctcgag atgttccacg gtggcttcca 33300
gcaaagcctc cacgcgcaca tccagaaaca agacaatagc gaaagcggga gggttctcta 33360
attcctcaat catcatgtta cactcctgca ccatccccag ataattttca tttttccagc 33420
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gg 34742
1
Claims (8)
- 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스(severe acute respiratory syndrome virus) SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역(specific immunity)의 유도를 위한 약제학적 제제(pharmaceutical agent)로서, E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 배치된 발현 카세트(placed expression cassette)는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 (adenovirus) 혈청형 26의 게놈(genome)에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 약제학적 제제.
- 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제로서, E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 ORF6-Ad26 영역이 ORF6-Ad5로 대체되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 26의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 약제학적 제제.
- 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역의 유도를 위한 약제학적 제제로서, E1 및 E3 영역이 게놈으로부터 결실되고 배치된 발현 카세트는 서열번호 4, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 유인원 아데노바이러스 혈청형 25의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 1을 포함하고, 또한 E1 및 E3 영역은 게놈으로부터 결실되고, 배치된 발현 카세트는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3으로부터 선택되는, 재조합 인간 아데노바이러스 혈청형 5의 게놈에 기반한 발현 벡터 형태의 제제를 포함하는 성분 2를 포함하는 약제학적 제제.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 액체 또는 동결건조 (냉동건조) 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는, 본 명세서에 제공되는 약제학적 제제.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 성분 1 및 성분 2가 상이한 패키지(package)에 배치되는 것을 특징으로 하는, 본 명세서에 제공되는 약제학적 제제.
- 중증 급성 호흡기 증후군 바이러스 SARS-CoV-2에 대한 특이적 면역의 유도를 위한, 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따르는, 본 명세서에 제공되는 약제학적 제제의 용도로서, 성분 1 및 성분 2는 유효량으로 1주 이상의 시간 간격으로 순차적으로 사용되는 용도.
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