KR20230085579A - Novel use of compound having anti-virulence activity and anti-biofilm formation activity - Google Patents

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전혜진
유정식
나석현
윤창수
이계형
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대한민국(질병관리청 국립보건연구원장)
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Abstract

본 발명은 항병원성(anti-virulence) 활성 및 바이오필름(biofilm) 형성 억제 효과를 나타내는 화합물의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명은 세균에서 병원성을 나타내는 단백질인 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA)의 유전자 프로모터를 저해함으로써 항병원성 활성 및 바이오필름 형성 억제효과를 나타내는 화학식 I 및 II 화합물의 신규한 용도에 관한 것이다.
본 발명의 화학식 I 및 II의 화합물은 병원성 세균에 대해서 직접적인 살균효과를 나타내지 않으면서 병원성 단백질인 외막단백질 A(outer membrane protein A)의 유전자 및 단백질의 발현을 저해하므로, 항병원성 제제(anti-virulence agent)로 사용될 수 있다. 또한, OmpA의 발현과 밀접한 관련이 있는 바이오필름의 형성을 억제할 수 있어 병원성 세균의 감염에 의한 감염성 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.The present invention relates to a novel use of a compound exhibiting anti-virulence activity and biofilm formation inhibitory effect, and more particularly, the present invention relates to outer membrane protein A (outer membrane protein A), a protein exhibiting pathogenicity in bacteria. It relates to novel uses of compounds of formulas I and II that exhibit antipathogenic activity and biofilm formation inhibitory effects by inhibiting the gene promoter of membrane protein A, OmpA).
The compounds of formulas I and II of the present invention inhibit the expression of genes and proteins of outer membrane protein A, which is a pathogenic protein, without showing a direct bactericidal effect on pathogenic bacteria. agent) can be used. In addition, it can suppress the formation of a biofilm closely related to the expression of OmpA, so it can be effectively used for the prevention and treatment of infectious diseases caused by infection with pathogenic bacteria.

Description

항병원성 활성 및 바이오필름 형성 억제 효과를 나타내는 화합물의 신규한 용도{Novel use of compound having anti-virulence activity and anti-biofilm formation activity}Novel use of compound having anti-virulence activity and anti-biofilm formation activity}

본 발명은 항병원성(anti-virulence) 활성 및 바이오필름(biofilm) 형성 억제 효과를 나타내는 화합물의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명은 세균에서 병원성을 나타내는 단백질인 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA)의 유전자 프로모터(promoter)를 저해함으로써 항병원성 활성 및 바이오필름 형성 억제효과를 나타내는 화학식 I 또는 II화합물의 신규한 용도에 관한 것이다.The present invention relates to a novel use of a compound exhibiting anti-virulence activity and biofilm formation inhibitory effect, and more particularly, the present invention relates to outer membrane protein A (outer membrane protein A), a protein exhibiting pathogenicity in bacteria. It relates to a novel use of a compound of formula I or II that exhibits antipathogenic activity and biofilm formation inhibitory effect by inhibiting the gene promoter of membrane protein A (OmpA).

항생제(antibiotics)는 미생물이 생산하는 대사산물로 소량으로 다른 미생물의 발육을 억제하거나 사멸시키고 병원균에 의한 감염증을 치료하는 약물로 감염증에 뛰어난 효능을 보이기 때문에 전 세계적으로 사용되고 있다. 항생제는 곰팡이류에서 추출된 항생물질로 페니실린계, 세팔로스포린계 등의 항균성 항생제와 griseofulvin, fucidin과 같은 항진균성 항생제가 있으며, 세균류에서 추출한 항생물질로서는 macrolide, aminoglycoside, tetracycline류 및 chloramphenicol 등이 있다. 페니실린의 경우 다른 항생제에 비하여 부작용이 적으나 어떤 세균은 페니실린을 분해하는 효소를 생산하기도 하여, 인공적으로 합성한 메티실린(methicillin)이나 옥사실린(oxacillin)등이 함께 사용되고 있다.Antibiotics are metabolites produced by microorganisms, which inhibit or kill other microorganisms in small amounts and treat infections caused by pathogens. They are used worldwide because they show excellent efficacy against infections. Antibiotics are antibiotics extracted from fungi, and include antibacterial antibiotics such as penicillin and cephalosporin, and antifungal antibiotics such as griseofulvin and fucidin. Antibiotics extracted from bacteria include macrolide, aminoglycoside, tetracyclines, and chloramphenicol. Penicillin has fewer side effects than other antibiotics, but some bacteria produce an enzyme that decomposes penicillin, so artificially synthesized methicillin or oxacillin is used together.

현재까지 개발된 항생제 가운데 세계에서 가장 강력한 항생제중 하나는 반코마이신(vancomycin)으로, 페니실린의 대체약인 메티실린(methicillin)에 내성이 생긴 황색포도상구균이 퍼지자 1950년대에 개발하여 황색 포도상구균의 중증 감염증을 치료하는데 사용해 왔다.Among the antibiotics developed so far, one of the most powerful antibiotics in the world is vancomycin. have been used to treat

그러나, 항생제의 남용으로 인하여 병원균 스스로 저항할 수 있는 힘을 길러 그 내성이 점차로 강해져 어떤 항생제에도 저항할 수 있게 된 일명 슈퍼박테리아(super bacteria)가 등장함에 따라 항생제의 효과적인 사용에 문제가 발생하였다. 세균은 항생제를 극복할 수 있는 자연적인 돌연변이체가 될 수 있으며, 이 내성균들은 내성 유전자를 다른 세균들에게 전달시켜 주어 내성균의 확대는 신속하게 이루어질 수 있다. 이렇듯, 항생제 남용은 세균들의 항생제 내성을 유발하여 세균 감염에 의한 만성질환이 세계적인 이슈가 되고 있다. However, due to the abuse of antibiotics, a problem has arisen in the effective use of antibiotics as so-called super bacteria, which have developed resistance to pathogens themselves and become resistant to any antibiotics, have gradually become stronger. Bacteria can become natural mutants that can overcome antibiotics, and these resistant bacteria can pass on their resistance genes to other bacteria, so the expansion of resistant bacteria can be achieved quickly. As such, the abuse of antibiotics causes antibiotic resistance in bacteria, and chronic diseases caused by bacterial infection have become a global issue.

한편, 세균의 성장을 억제하고 죽이는데 목적인 항생제와는 달리 항병원성 물질(anti-virulence agent)은 세균의 성장에는 큰 영향을 미치지 않으면서 병원성만을 억제하므로 일반 항생제보다 세균의 항병원성 물질에 대한 저항성이 적게 유발이 된다. 항병원성 물질의 중요한 예로는 항생제 내성을 유발하는 바이오필름 형성 억제제와 또한 세포성장에는 영향을 미치지 않으면서 병원성 단백질의 생성을 억제하는 항병원성 제제가 있다. On the other hand, unlike antibiotics that aim to inhibit and kill bacterial growth, anti-virulence agents suppress only pathogenicity without significantly affecting the growth of bacteria. less induced Important examples of antipathogenic substances include biofilm formation inhibitors that induce antibiotic resistance and also antipathogenic agents that inhibit the production of pathogenic proteins without affecting cell growth.

항생제의 내성이 문제가 되고 있는 현 시점에서 감염성 세균의 성장에는 별다른 영향을 미치지 않아 항생제 내성 문제가 발생되지 않으면서, 동시에 병원성을 나타내는 바이오필름 및/또는 단백질의 생성을 억제하여 감염성 질환 등에 우수한 효과를 나타낼 수 있는 항병원성 제제에 대한 개발이 필요한 실정이다. At the present time, when resistance to antibiotics is becoming a problem, it has no significant effect on the growth of infectious bacteria, so there is no problem of antibiotic resistance, and at the same time, it suppresses the production of biofilm and / or proteins that indicate pathogenicity, so it has excellent effects on infectious diseases, etc. There is a need for development of anti-pathogenic agents capable of representing.

이에 본 발명자는 감염성 세균에서 병원성을 나타내는 단백질인 OmpA의 유전자 프로모터를 저해하는 화합물을 스크리닝 하던 중 하기 화학식 I 또는 II의 구조를 갖는 화합물이 OmpA 유전자 프로모터를 저해하여 OmpA 유전자의 발현 및 단백질의 발현을 저해하고 바이오필름의 형성을 억제하는 효과가 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, while the present inventors were screening for a compound that inhibits the gene promoter of OmpA, a protein that exhibits pathogenicity in infectious bacteria, the compound having the structure of Formula I or II below inhibits the OmpA gene promoter, thereby inhibiting the expression of OmpA gene and protein. It was found that there is an effect of inhibiting and inhibiting the formation of a biofilm, and the present invention was completed.

따라서, 본 발명의 목적은 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 대한 항병원성(anti-virulence) 조성물을 제공하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is a compound of formula I or II; Or to provide an anti-pathogenic (anti-virulence) composition for pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00001
Figure pat00001

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00002
Figure pat00002

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

본 발명의 다른 목적은 상기 항병원성 조성물을 포함하는 병원성 세균에 의한 감염성 질병의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing and treating infectious diseases caused by pathogenic bacteria comprising the anti-pathogenic composition.

본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균의 바이오필름(biofilm) 억제용 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is a compound of Formula I or II; Or to provide a composition for inhibiting biofilm of pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00003
Figure pat00003

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00004
Figure pat00004

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

상기한 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 대한 항병원성(anti-virulence) 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object of the present invention, the present invention provides a compound of formula I or II; Or it provides an anti-pathogenic (anti-virulence) composition for pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00005
Figure pat00005

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00006
Figure pat00006

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 항병원성 조성물을 포함하는 병원성 세균에 의한 감염성 질병의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating infectious diseases caused by pathogenic bacteria comprising the anti-pathogenic composition.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균의 바이오필름(biofilm) 억제용 조성물을 제공한다. In order to achieve another object of the present invention, the present invention is a compound of Formula I or II; Or it provides a composition for inhibiting biofilm of pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00007
Figure pat00007

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00008
Figure pat00008

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

이하 본 발명에 대해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 대한 항병원성(anti-virulence) 조성물을 제공한다:The present invention relates to a compound of Formula I or II; Or it provides an anti-virulence composition for pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient:

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00009
Figure pat00009

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00010
Figure pat00010

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

본 발명에서 상기 병원성 세균은 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA)를 발현하며 상기 단백질에 의해 병원성을 나타내는 세균일 수 있다. In the present invention, the pathogenic bacteria may be bacteria that express outer membrane protein A (OmpA) and show pathogenicity by the protein.

보다 구체적으로, 본 발명에서 상기 세균은 바람직하게는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 아시네토박터 칼코아세티쿠스(Acinetobacter calcoaceticus), 아시네토박터 헤모리티쿠스(Acinetobacter haemolyticus), 아시네토박터 주니(Acinetobacter junii), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 아시네토박터 리워피(Acinetobacter lwoffii), 아시네토박터 라디오레시스텐스(Acinetobacter radioresistens), 아시네토박터 우르신지(Acinetobacter ursingii), 아시네토박터 쉰들러리(Acinetobacter schindleri), 아시네토박터 파르부스(Acinetobacter parvus), 아시네토박터 베이리(Acinetobacter baylyi), 아시네토박터 보우베티(Acinetobacter bouvetii), 아시네토박터 토우너리(Acinetobacter towneri), 아시네토박터 탄도이(Acinetobacter tandoii), 아시네토박터 그리몬티(Acinetobacter grimontii), 아시네토박터 셰른버지아(Acinetobacter tjernbergiae), 및 아시네토박터 게르너리(Acinetobacter gerneri), 액티노바실러스 플레우로뉴모니아에(Actinobacillus pleuropneumoniae), 액티노바실러스 수이스(Actinobacillus suis), 어그레가티박터 액티노마이세템코니탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미디아 카비아에(Chlamydia caviae), 클라미디아 뮤리다룸(Chlamydia muridarum), 클라미도필라 뉴모니아에(Chlamydophila pneumoniae), 클라미도필라 시타키(Chlamydophila psittaci), 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii), 대장균(Escherichia coli), 플라포박테리움 사이크로필룸(Flavobacterium psychrophilum), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 해모필러스 마라수이스(Haemophilus parasuis), 히스토필러스 솜니(Histophilus somni), 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 렙토스피라 인테로간스(Leptospira interrogans), 마네미아 해몰리티카(Mannheimia haemolytica), 임균(Neisseria gonorrhoeae), 수막염균(Neisseria meningitidis), 파스튜렐라 뮬토시다(Pasteurella multocida), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 리에머렐라 안나티페스티퍼(Riemerella anatipestifer), 살모넬라(Salmonella spp) 또는 여시니아(Yersinia spp)일 수 있으며, 가장 바람직하게는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, OmpA를 발현하는 세균은 모두 이에 포함될 수 있다. More specifically, in the present invention, the bacteria are preferably Acinetobacter baumannii, Acinetobacter calcoaceticus , Acinetobacter hemolyticus, Acinetobacter haemolyticus , Acinetobacter Juni ( Acinetobacter junii ), Acinetobacter johnsonii ( Acinetobacter johnsonii ), Acinetobacter lwoffii ( Acinetobacter lwoffii ), Acinetobacter radioresistence ( Acinetobacter radioresistens ), Acinetobacter ursingi ( Acinetobacter ursingii ), Acinetobacter Schindler Lee ( Acinetobacter schindleri ), Acinetobacter parvus ( Acinetobacter parvus ), Acinetobacter baylyi ( Acinetobacter baylyi ), Acinetobacter bouvetii ( Acinetobacter bouvetii ), Acinetobacter towneri ( Acinetobacter towneri ), Acinetobacter Acinetobacter tandoii , Acinetobacter grimontii, Acinetobacter tjernbergiae , and Acinetobacter gerneri , Actinobacillus pleuropneumoniae ), Actinobacillus suis ( Actinobacillus suis ), Aggregatibacter actinomycetem comitans ( Aggregatibacter actinomycetemcomitans ), Chlamydia trachomatis ( Chlamydia trachomatis ), Chlamydia caviae ( Chlamydia caviae ), Chlamydia muridarum ( Chlamydia muridarum ), Chlamydophila pneumoniae ( Chlamydophila pneumoniae ), Chlamydophila psittaci , Cronobacter sakazakii ( Cronobacter sakazakii ), Escherichia coli ( Escherichia coli ), Flavobacterium cyclophilum ( Flavobacterium psychrophilum ) , Haemophilus influenzae ( Haemophilus influenzae ), Haemophilus marasuis ( Haemophilus parasuis ), Histophilus somni ( Histophilus somni ), Klebsiella pneumoniae ( Klebsiella pneumoniae ), Leptospira interrogans ( Leptospira interrogans ), Mannheimia haemolytica, Neisseria gonorrhoeae , Neisseria meningitidis , Pasteurella multocida , Pseudomonas aeruginosa , Liemerella anna It may be Riemerella anatipestifer , Salmonella spp or Yersinia spp , and most preferably Acinetobacter baumannii , but is not limited thereto, expressing OmpA Any bacteria that does can be included in it.

OmpA 단백질은 세균의 외막에 존재하는 단백질로 주로 그람 음성균의 세포막 표면에서 발견이 된다. 수많은 병원성 세균들에서 OmpA 단백질은 세균의 부착, 침투, 세포내 생존, 숙주 세포의 면역체계로부터의 회피, 항균성 펩타이드에 대한 저항성 또는 염증성 사이토카인의 생성과 밀접하게 연관되어 있어 병리현상에 있어서 중요한 역할을 담당하고 있다. 이러한 OmpA 단백질의 병리학적 특징들은 주로 중추신경계, 호흡기계 및 비뇨생식기계의 감염과 보다 밀접하게 관련이 되어 있다. OmpA protein is a protein present in the outer membrane of bacteria and is mainly found on the surface of the cell membrane of Gram-negative bacteria. In many pathogenic bacteria, the OmpA protein plays an important role in pathology as it is closely related to bacterial attachment, penetration, intracellular survival, evasion from the host cell's immune system, resistance to antimicrobial peptides, or production of inflammatory cytokines. is in charge of These pathological features of the OmpA protein are more closely related to infections of the central nervous system, respiratory system, and genitourinary system.

또한, OmpA 단백질은 병원성 세균의 표면에 매우 높은 빈도로, 넓은 범위에 걸쳐 발현이 되어 있기 때문에, 여러 가지 병리학적 현상에 밀접하게 관여하고 있다. 병원성 세균의 외막 표면에 발현되어 있는 OmpA는 폐렴, 뇌수막염, 치은염, 요도염, 방광염, 궤양성 전장염, 뇌염 등 수많은 감염성 질환의 병원성 단백질로 보고가 되고 있다(Veterinary Microbiology 163(2013) 207222). In addition, since the OmpA protein is expressed at a very high frequency and over a wide range on the surface of pathogenic bacteria, it is closely involved in various pathological phenomena. OmpA expressed on the outer membrane surface of pathogenic bacteria has been reported as a pathogenic protein for numerous infectious diseases such as pneumonia, meningitis, gingivitis, urethritis, cystitis, ulcerative enteritis, and encephalitis (Veterinary Microbiology 163 (2013) 207222).

본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명자들은 화학식 I 및 II의 화합물이 아시네토박터 바우마니균에서 OmpA의 유전자 프로모터를 저해하여 OmpA의 유전자 및 단백질의 발현을 억제하는 활성이 있다는 것을 확인하였다(실시예 2 내지 4). 동시에, 화학식 I 및 II의 화합물은 세균에 대하여 직접적인 증식억제효과나 살균효과를 나타내지는 않기 때문에 항병원성(anti-virulence) 제제로서 사용될 수 있음을 확인하였다. According to one embodiment of the present invention, the present inventors confirmed that the compounds of Formulas I and II inhibit the expression of OmpA genes and proteins by inhibiting the gene promoter of OmpA in Acinetobacter baumani bacteria ( Examples 2 to 4). At the same time, it was confirmed that the compounds of Formulas I and II can be used as anti-virulence agents because they do not show a direct proliferation inhibitory effect or bactericidal effect on bacteria.

따라서, 본 발명에서 화학식 I 및 II의 화합물은 병원성 물질인 OmpA 유전자 프로모터를 억제함으로써 OmpA 유전자 및 단백질의 발현을 억제하여 항병원성 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. Accordingly, the compounds of Formulas I and II in the present invention are characterized in that they suppress the expression of the OmpA gene and protein by inhibiting the OmpA gene promoter, which is a pathogenic substance, to exhibit antipathogenic activity.

본 발명에서 상기 “할로”는 할로겐 원소를 의미하며, 구체적으로는 플루오르(F), 브롬(Br), 클로라이드(Cl) 및 요오드(I)로 이루어진 군에서 선택된 임의의 1종 이상을 의미한다. In the present invention, the "halo" means a halogen element, and specifically means any one or more selected from the group consisting of fluorine (F), bromine (Br), chloride (Cl) and iodine (I).

본 발명의 바람직한 일 양태에서, 상기 화학식 I의 화합물의 R은 각각 독립적으로 브롬일 수 있고, n은 1 내지 4일 수 있다. 더 바람직하게는 상기 화학식 I의 화합물의 R은 브롬일 수 있고, n은 1일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 1의 화합물일 수 있다.In a preferred embodiment of the present invention, R of the compound of Formula I may each independently be bromine, and n may be 1 to 4. More preferably, R of the compound of Formula I may be bromine, and n may be 1. Most preferably, the compound of Formula I may be a compound of Formula 1 below.

[화학식 1][Formula 1]

Figure pat00011
Figure pat00011

본 발명의 바람직한 일 양태에서, 상기 화학식 II의 화합물의 R은 각각 독립적으로 플루오르 또는 클로라이드일 수 있고, n은 1 내지 3일 수 있다. 더 바람직하게는 상기 화학식 II의 화합물의 R은 각각 독립적으로 플루오르 또는 클로라이드일 수 있고, n은 2일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 화학식 II의 화합물은 하기 화학식 2의 화합물일 수 있다.In a preferred aspect of the present invention, R of the compound of Formula II may each independently be fluorine or chloride, and n may be 1 to 3. More preferably, R of the compound of Formula II may each independently be fluorine or chloride, and n may be 2. Most preferably, the compound of Formula II may be a compound of Formula 2 below.

[화학식 2][Formula 2]

Figure pat00012
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본 발명에서 상기 화학식 I 또는 II의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로나 생리학적으로 허용되는 다양한 유기산 또는 무기산에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 적합한 유기산으로는, 예를 들면 카르복실산, 포스폰산, 술폰산, 아세트산, 프로피온산, 옥탄산, 데칸산, 글리콜산, 락트산, 푸마르산, 숙신산, 아디프산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 글루탐산, 아스파르트산, 말레산, 벤조산, 살리실산, 프탈산, 페닐아세트산, 벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 메틸황산, 에틸황산, 도데실황산 등을 사용할 수 있고, 적합한 무기산으로는, 예를 들면 염산, 황산 또는 인산 등을 사용할 수 있다.In the present invention, the compound of Formula I or II may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt. As the salt, acid addition salts formed by various organic or inorganic acids that are pharmaceutically or physiologically acceptable are useful. Suitable organic acids are, for example, carboxylic acid, phosphonic acid, sulfonic acid, acetic acid, propionic acid, octanoic acid, decanoic acid, glycolic acid, lactic acid, fumaric acid, succinic acid, adipic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, glutamic acid, aspartic acid , maleic acid, benzoic acid, salicylic acid, phthalic acid, phenylacetic acid, benzenesulfonic acid, 2-naphthalenesulfonic acid, methyl sulfuric acid, ethyl sulfuric acid, dodecyl sulfuric acid and the like can be used, and suitable inorganic acids include, for example, hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid. can be used.

본 발명에서 상기 화학식 I 또는 II의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물, 라세미체, 또는 입체 이성질체를 모두 포함할 수 있다.In the present invention, the compound of Formula I or II may include not only pharmaceutically acceptable salts, but also all salts, hydrates and solvates, racemates, or stereoisomers that can be prepared by conventional methods. .

본 발명은 또한 화학식 I 및 II의 화합물을 유효성분으로 포함하는 항병원성 조성물을 포함하는 병원성 세균에 의한 감염성 질병의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing and treating infectious diseases caused by pathogenic bacteria, including an anti-pathogenic composition comprising the compounds of Formulas I and II as active ingredients.

본 발명에서 상기 병원성 세균은 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA)를 발현하며 상기 단백질에 의해 병원성을 나타내는 세균일 수 있다. In the present invention, the pathogenic bacteria may be bacteria that express outer membrane protein A (OmpA) and show pathogenicity by the protein.

보다 구체적으로, 본 발명에서 상기 세균은 바람직하게는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 아시네토박터 칼코아세티쿠스(Acinetobacter calcoaceticus), 아시네토박터 헤모리티쿠스(Acinetobacter haemolyticus), 아시네토박터 주니(Acinetobacter junii), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 아시네토박터 리워피(Acinetobacter lwoffii), 아시네토박터 라디오레시스텐스(Acinetobacter radioresistens), 아시네토박터 우르신지(Acinetobacter ursingii), 아시네토박터 쉰들러리(Acinetobacter schindleri), 아시네토박터 파르부스(Acinetobacter parvus), 아시네토박터 베이리(Acinetobacter baylyi), 아시네토박터 보우베티(Acinetobacter bouvetii), 아시네토박터 토우너리(Acinetobacter towneri), 아시네토박터 탄도이(Acinetobacter tandoii), 아시네토박터 그리몬티(Acinetobacter grimontii), 아시네토박터 셰른버지아(Acinetobacter tjernbergiae), 및 아시네토박터 게르너리(Acinetobacter gerneri), 액티노바실러스 플레우로뉴모니아에(Actinobacillus pleuropneumoniae), 액티노바실러스 수이스(Actinobacillus suis), 어그레가티박터 액티노마이세템코니탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미디아 카비아에(Chlamydia caviae), 클라미디아 뮤리다룸(Chlamydia muridarum), 클라미도필라 뉴모니아에(Chlamydophila pneumoniae), 클라미도필라 시타키(Chlamydophila psittaci), 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii), 대장균(Escherichia coli), 플라포박테리움 사이크로필룸(Flavobacterium psychrophilum), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 해모필러스 마라수이스(Haemophilus parasuis), 히스토필러스 솜니(Histophilus somni), 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 렙토스피라 인테로간스(Leptospira interrogans), 마네미아 해몰리티카(Mannheimia haemolytica), 임균(Neisseria gonorrhoeae), 수막염균(Neisseria meningitidis), 파스튜렐라 뮬토시다(Pasteurella multocida), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 리에머렐라 안나티페스티퍼(Riemerella anatipestifer), 살모넬라(Salmonella spp) 또는 여시니아(Yersinia spp)일 수 있으며, 가장 바람직하게는 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, OmpA를 발현하는 세균은 모두 이에 포함될 수 있다. More specifically, in the present invention, the bacteria are preferably Acinetobacter baumannii, Acinetobacter calcoaceticus , Acinetobacter hemolyticus, Acinetobacter haemolyticus , Acinetobacter Juni ( Acinetobacter junii ), Acinetobacter johnsonii ( Acinetobacter johnsonii ), Acinetobacter lwoffii ( Acinetobacter lwoffii ), Acinetobacter radioresistence ( Acinetobacter radioresistens ), Acinetobacter ursingi ( Acinetobacter ursingii ), Acinetobacter Schindler Lee ( Acinetobacter schindleri ), Acinetobacter parvus ( Acinetobacter parvus ), Acinetobacter baylyi ( Acinetobacter baylyi ), Acinetobacter bouvetii ( Acinetobacter bouvetii ), Acinetobacter towneri ( Acinetobacter towneri ), Acinetobacter Acinetobacter tandoii , Acinetobacter grimontii, Acinetobacter tjernbergiae , and Acinetobacter gerneri , Actinobacillus pleuropneumoniae ), Actinobacillus suis ( Actinobacillus suis ), Aggregatibacter actinomycetem comitans ( Aggregatibacter actinomycetemcomitans ), Chlamydia trachomatis ( Chlamydia trachomatis ), Chlamydia caviae ( Chlamydia caviae ), Chlamydia muridarum ( Chlamydia muridarum ), Chlamydophila pneumoniae ( Chlamydophila pneumoniae ), Chlamydophila psittaci , Cronobacter sakazakii ( Cronobacter sakazakii ), Escherichia coli ( Escherichia coli ), Flavobacterium cyclophilum ( Flavobacterium psychrophilum ) , Haemophilus influenzae ( Haemophilus influenzae ), Haemophilus marasuis ( Haemophilus parasuis ), Histophilus somni ( Histophilus somni ), Klebsiella pneumoniae ( Klebsiella pneumoniae ), Leptospira interrogans ( Leptospira interrogans ), Mannheimia haemolytica, Neisseria gonorrhoeae , Neisseria meningitidis , Pasteurella multocida , Pseudomonas aeruginosa , Liemerella anna It may be Riemerella anatipestifer , Salmonella spp or Yersinia spp , and most preferably Acinetobacter baumannii , but is not limited thereto, expressing OmpA Any bacteria that does can be included in it.

본 발명에서 상기 감염성 질병은 종기, 다래끼, 농가진 및 부스럼 같은 피부염, 후두염, 폐렴, 유방염, 정맥염, 방광염, 뇌막염, 장염, 요로 감염, 골수염, 각막염, 수막염, 전립선염, 심내막염, 화농성 질환, 전쟁 상부(war wound), 식중독, 폐혈증, 균혈증 또는 독성 쇼크 증후군(toxic shock syndrome)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 상기 감염성 세균에 의해서 유발될 수 있는 일체의 질병을 포함한다. In the present invention, the infectious diseases include boils, stye, impetigo and boil-like dermatitis, laryngitis, pneumonia, mastitis, phlebitis, cystitis, meningitis, enteritis, urinary tract infection, osteomyelitis, keratitis, meningitis, prostatitis, endocarditis, purulent disease, warts It may be war wound, food poisoning, sepsis, bacteremia or toxic shock syndrome, but is not limited thereto, and includes any disease that may be caused by the infectious bacteria.

본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1~90 중량부로 포함되는 것이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다.The composition of the present invention may further include pharmaceutically acceptable additives, such as starch, gelatinized starch, microcrystalline cellulose, lactose, povidone, colloidal silicon dioxide, calcium hydrogen phosphate, lactose, Mannitol, Taffy, Gum Arabic, Pregelatinized Starch, Corn Starch, Powdered Cellulose, Hydroxypropyl Cellulose, Opadry, Sodium Starch Glycolate, Carnauba Lead, Synthetic Aluminum Silicate, Stearic Acid, Magnesium Stearate, Aluminum Stearate, Calcium Stearate, White sugar, dextrose, sorbitol, and talc may be used. The pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included in an amount of 0.1 to 90 parts by weight based on the composition, but is not limited thereto.

또한, 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. In addition, the composition of the present invention can be administered in various oral and parenteral dosage forms during actual clinical administration. When formulated, diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, etc. It can be prepared using

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 MTU에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations are prepared by mixing MTU with at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose or gelatin. It can be. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate and talc may also be used. Liquid formulations for oral use include suspensions, solutions for oral use, emulsions, and syrups. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. .

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올 레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.Preparations for parenteral administration may include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents. As a base for the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogelatin, and the like may be used.

한편, 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.Meanwhile, conventional additives such as solubilizers, tonicity agents, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, and preservatives may be included in the injection.

또한, 본 발명의 치료용 조성물은 임의의 생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, l9th Edition, Alfonso, R., ed, Mack Publishing Co.(Easton, PA: 1995))를 추가로 포함할 수 있다. 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충용액, 예를 들어 인산, 시트르산 및 다른 유기산; 아스코르브산을 비롯한 항산화제; 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당 알콜, 예를 들어 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예를 들어 나트륨; 및(또는) 비이온성 계면활성제, 예를 들어 트윈, 플루로닉스 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 포함된다.In addition, the therapeutic composition of the present invention may contain any physiologically acceptable carrier, excipient or stabilizer (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Alfonso, R., ed, Mack Publishing Co. (Easton, PA). : 1995)) may additionally be included. Acceptable carriers, excipients, or stabilizers are nontoxic to recipients at the dosages and concentrations employed, and include buffers such as phosphoric acid, citric acid, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid; low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose, or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugar alcohols such as mannitol or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; and/or non-ionic surfactants such as Tween, Pluronics or polyethylene glycol (PEG).

본 발명의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 0.01 - 100 mg/kg/day이며, 바람직하게는 0.1 - 20 mg/kg/day이며, 더욱 바람직하게는 5 - 10 mg/kg/day일 수 있다. 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 간격으로 분할 투여할 수도 있다. The dosage for the human body of the present invention may vary depending on the patient's age, weight, sex, dosage form, health condition and disease degree, and is generally 0.01 - 100 mg/kg/day, preferably 0.1 - 20 mg. / kg / day, and more preferably 5 - 10 mg / kg / day. In addition, it may be administered in divided doses at regular intervals according to the judgment of a doctor or pharmacist.

본 발명의 조성물의 투여 경로는 공지된 방법, 예를 들어 정맥내, 복강내, 뇌내, 피하, 근육내, 안내, 동맥내, 뇌척수내, 또는 병변내 경로에 의한 주사 또는 주입, 또는 하기 기재된 서방성(sustained release) 시스템에 의한 주사 또는 주입이다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The route of administration of the composition of the present invention may be injection or infusion by known methods, such as intravenous, intraperitoneal, intracerebral, subcutaneous, intramuscular, intraocular, intraarterial, intracerebrospinal, or intralesional routes, or slow release as described below. It is an injection or infusion by means of a sustained release system. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers for the prevention or treatment of infectious diseases.

본 발명의 약학적 조성물은 치료 또는 예방하고자 하는 특정한 상태 또는 질환에 따라서, 상태를 치료 또는 예방하기 위해 정상적으로 투여되는 추가의 치료제도 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다. 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위해 정상적으로 투여되는 추가의 치료제는 "치료하고자 하는 질환 또는 상태에 적합한 것"으로 알려져 있다. 이러한 약제로는 제한 없이 항생제, 소염제, 기질 메탈로프로테아제 억제제, 리폭시게나제 억제제, 사이토카인 길항제, 면역 억제제, 항암제, 항바이러스제, 사이토카인, 성장 인자, 면역 조절제, 프로스타글란딘, 항-혈관 과다 증식 화합물, 또는 항생제에 대한 세균성 미생물의 감수성을 증가시키는 약제가 포함된다.Depending on the particular condition or disease to be treated or prevented, the pharmaceutical composition of the present invention may also include additional therapeutic agents normally administered to treat or prevent the condition. Additional therapeutic agents normally administered to treat or prevent a disease or condition are known as "suitable for the disease or condition being treated." These agents include, but are not limited to, antibiotics, anti-inflammatory agents, matrix metalloprotease inhibitors, lipoxygenase inhibitors, cytokine antagonists, immunosuppressive agents, anticancer agents, antiviral agents, cytokines, growth factors, immune modulators, prostaglandins, anti-angiogenic compounds. , or agents that increase the susceptibility of bacterial microorganisms to antibiotics.

본 발명의 화합물 및 이의 조성물을 투여하기에 적합한 항생제의 예로는 퀴놀론, β-락탐, 마크롤라이드, 글리코펩티드 및 리포펩티드가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.Examples of suitable antibiotics for administering the compounds of the present invention and compositions thereof include, but are not limited to, quinolones, β-lactams, macrolides, glycopeptides and lipopeptides.

본 발명에서 상기 항생제에 대한 세균의 감수성을 증가시키는 약제는, 예를 들면, 미국 특허 제5,523,288호, 미국 특허 제5,783,561호 및 미국 특허 제6,140,306호에는 그람 양성균 및 그람 음성균의 항생제 감수성을 증가시키기 위하여 살균/투과성-향상 단백질(BPI)을 사용하는 방법이 개시되어 있다. 세균의 외막의 침투성을 증가시키는 약물이 문헌[참조: Vaara, M.의 Microbiological Reviews(1992) 제395-411쪽]에 설명되어 있고, 그람 음성균의 감작화는 문헌[참조: Tsubery, H. 등의 J. Med. Chem.(2000) 제3085~3092호]에 설명되어 있으며, 이러한 약물들이 본 발명의 세균의 감수성을 증가시키는 약제에 포함될 수 있다. In the present invention, a drug that increases the sensitivity of bacteria to the antibiotic is, for example, US Patent No. 5,523,288, US Patent No. 5,783,561 and US Patent No. 6,140,306, to increase the antibiotic sensitivity of gram-positive bacteria and gram-negative bacteria. Methods of using bactericidal/permeability-enhancing proteins (BPIs) are disclosed. Drugs that increase the permeability of the outer membrane of bacteria are described in Microbiological Reviews (1992) by Vaara, M., pp. 395-411, and sensitization of Gram-negative bacteria is described in [Tsubery, H. et al. of J. Med. Chem. (2000) Nos. 3085-3092], and these drugs may be included in the agent for increasing the susceptibility of bacteria of the present invention.

본 발명은 또한 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균의 바이오필름(biofilm) 억제용 조성물을 제공한다. The present invention also relates to a compound of Formula I or II; Or it provides a composition for inhibiting biofilm of pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00013
Figure pat00013

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00014
Figure pat00014

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

본 발명에서 상기 바이오필름(biofilm)은 세균에 의해 형성된 점액질의 세균 복합체로, 고형의 생물학적 표면인 세균집락과 무생물 표면인 외막으로 구성된 복합체를 의미한다. 따라서, 본 발명에서 상기 바이오필름은 이 외막과 그 속에 들어있는 세균집락을 포함한 전체를 의미한다. 바이오필름이 형성된 세균은 항생제에 대한 저항성이 그렇지 않은 세균보다 1000배 이상 높으며, 바이오필름의 형성이 감염성 질병의 발병에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다(Rasmussen and Givskov 2006).In the present invention, the biofilm is a mucilaginous bacterial complex formed by bacteria, and refers to a complex composed of a bacterial colony, which is a solid biological surface, and an outer membrane, which is an inanimate surface. Therefore, in the present invention, the biofilm refers to the entirety including the outer membrane and the bacterial colony contained therein. Bacteria with biofilm formation are more than 1000 times more resistant to antibiotics than non-antibiotic bacteria, and it is known that biofilm formation plays an important role in the development of infectious diseases (Rasmussen and Givskov 2006).

뿐만 아니라, 상기 바이오필름은 주위에서 흔히 접할 수 있는 생체, 의학 및 산업 환경에서 흔히 발견된다. 생체에서 서식할 수 있는 병원성 미생물의 경우 숙주의 상피세포, 뼈, 치아, 및 혈관 내벽 등을 포함하는 각종 조직/기관 및 각종 인공 삽입 보형물(catheter, implant), 각종 의학기구/장비/설비 등에 바이오필름을 형성할 수 있다. 바이오필름이 형성되면 미생물은 가혹한 환경에서도 잘 견디는 것은 물론, 항생제 및 면역세포에 대하여 강한 저항력을 가지기 때문에 제거가 매우 어려우며, 만성 염증 질환의 원인이 되기도 한다. 최근 보고에 의하면, 전체 감염성 질환의 65% 정도가 바이오필름 형성이 주요인으로 알려져 있다(Ymele-Leki and Ross, 2007, Applied and Environmental Microbiology 73(6):1834-41). 따라서 본 발명의 화학식 I의 화합물에 의한 바이오필름 억제는 병원성 미생물에 의한 감염의 예방/치료에 있어 매우 중요할 수 있다.In addition, the biofilm is commonly found in bio, medical and industrial environments that can be commonly encountered around. In the case of pathogenic microorganisms that can live in a living body, various tissues/organs including host epithelial cells, bones, teeth, and inner walls of blood vessels, various artificial implants (catheters, implants), and various medical instruments/equipment/facility, etc. A film can be formed. When a biofilm is formed, it is very difficult to remove because microorganisms not only endure well in harsh environments but also have strong resistance to antibiotics and immune cells, and may cause chronic inflammatory diseases. According to a recent report, about 65% of all infectious diseases are known to be caused by biofilm formation (Ymele-Leki and Ross, 2007, Applied and Environmental Microbiology 73(6):1834-41). Therefore, inhibition of biofilm by the compound of Formula I of the present invention may be very important in the prevention/treatment of infection by pathogenic microorganisms.

본 발명의 일실시예에서는, 본 발명자는 화학식 I 및 II의 화합물이 아시네토박터 바우마니균의 바이오필름 형성을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다. In one embodiment of the present invention, the present inventors confirmed that the compounds of Formulas I and II effectively inhibit the formation of biofilm of Acinetobacter baumani.

한편, 세균에서 바이오필름이 형성되는 과정에서 OmpA가 과발현되는 것으로 알려져 있다(Proteomics 2006, 6, 42694277). 따라서 OmpA의 발현을 억제하면 바이오필름의 형성을 억제할 수 있어 병원성 감염의 예방 및 치료에 효과를 나타낼 수 있다. 상기 설명한 바와 같이, 본 발명의 화학식 I 및 II의 화합물은 OmpA 유전자 프로모터를 저해하여 OmpA 유전자 및 단백질의 발현을 저해하며 결과적으로 OmpA의 발현에 의해 유도되는 바이오필름의 형성을 억제할 수 있는 것이다. On the other hand, it is known that OmpA is overexpressed during biofilm formation in bacteria (Proteomics 2006, 6, 42694277). Therefore, suppressing the expression of OmpA can inhibit the formation of biofilms, which can be effective in preventing and treating pathogenic infections. As described above, the compounds of Formulas I and II of the present invention inhibit the expression of the OmpA gene and protein by inhibiting the promoter of the OmpA gene and consequently inhibit the formation of a biofilm induced by the expression of OmpA.

이에, 본 발명은 화학식 I 및 II의 화합물은 OmpA 유전자의 발현을 억제함으로써 바이오필름 형성을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. Accordingly, the present invention provides a composition characterized in that the compounds of Formulas I and II inhibit biofilm formation by inhibiting the expression of the OmpA gene.

본 발명은 또한 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물을 제공한다.The present invention also relates to a compound of Formula I or II; Or it provides an antiviral composition comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 I][Formula I]

Figure pat00015
Figure pat00015

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.

[화학식 II][Formula II]

Figure pat00016
Figure pat00016

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.

본 발명에서 상기 항바이러스용 조성물은 전술한 약학적 조성물을 제외한 일체의 조성물을 포함하며, 이의 비 제한적인 예시로 항바이러스용 화장료 조성물, 항바이러스용 피부 외용제 조성물, 항바이러스용 의약외품 조성물 등이 포함될 수 있다. In the present invention, the antiviral composition includes all compositions except for the above-described pharmaceutical composition, and non-limiting examples thereof include antiviral cosmetic compositions, antiviral skin external application compositions, antiviral quasi-drug compositions, and the like. can

상기 조성물이 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물인 경우, 적합한 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고 또는 스프레이의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(Foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.When the composition is a cosmetic composition or composition for external application for skin, suitable dosage forms include, for example, solutions, gels, solid or kneaded anhydrous products, emulsions obtained by dispersing an oil phase in an aqueous phase, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules, or It can be provided in the form of ionic (liposome), non-ionic vesicle dispersion, cream, toner, lotion, powder, ointment or spray. In addition, it may be prepared in the form of a foam or an aerosol composition further containing a compressed propellant.

상기 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물은 화합물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(Foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에 서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.The cosmetic composition or composition for external application for skin may include, in addition to a compound, a fatty substance, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, a fragrance, a surfactant, water, Ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering agents and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles, or commonly used in external preparations for skin It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as any other ingredients. In addition, the components may be introduced in an amount generally used in the field of skin science.

한편, 상기 조성물이 의약외품 조성물인 경우, 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 혼합되어 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.On the other hand, when the composition is a quasi-drug composition, a compound of Formula I or II; Alternatively, a pharmaceutically acceptable salt thereof may be added as it is or used together with other quasi-drugs or quasi-drug ingredients, and may be appropriately mixed and used according to a conventional method. The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use.

상기 의약외품은 그 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제, 패치, 또는 필터 충진제일 수 있다.The type of the quasi-drug is not particularly limited, but may be, for example, disinfectant cleaner, shower foam, gargreen, wet tissue, detergent soap, hand wash, humidifier filler, mask, ointment, patch, or filter filler.

본 발명이 제공하는 상기 항바이러스용 조성물은 일상생활 전반에서 바이러스 감염에 대비하기 위한 용도로 활용이 될 수 있다. The antiviral composition provided by the present invention can be utilized for use in preparation for viral infection in daily life.

본 발명의 화학식 I 및 II의 화합물은 병원성 세균에 대해서 직접적인 살균효과를 나타내지 않으면서 병원성 단백질인 외막단백질 A(outer membrane protein A)의 유전자 및 단백질의 발현을 저해하므로, 항병원성 제제(anti-virulence agent)로 사용될 수 있다. 또한, OmpA의 발현과 밀접한 관련이 있는 바이오필름의 형성을 억제할 수 있어 병원성 세균의 감염에 의한 감염성 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.The compounds of formulas I and II of the present invention inhibit the expression of genes and proteins of outer membrane protein A, which is a pathogenic protein, without showing a direct bactericidal effect on pathogenic bacteria. agent) can be used. In addition, it can suppress the formation of a biofilm closely related to the expression of OmpA, so it can be effectively used for the prevention and treatment of infectious diseases caused by infection with pathogenic bacteria.

도 1은 OmpA의 프로모터 DNA 다음에 있는 OmpA 구조단백 유전자를 제거한 후 카나마이신 항생제 내성 유전자인 nptI을 클로닝하여 제조한 reporter strain 제조 모식도를 나타낸 것이다.
도 2는 reporter strain을 이용하여 ompA 유전자의 프로모터를 저해하여 ompA 유전자의 발현을 저해하는 화합물을 스크리닝하는 모식도를 나타낸 것이다.
도 3은 선별된 2종의 화합물을 A. baumannii ATCC 17978균에 처리한 후 OmpA 단백질의 발현량 변화를 SDS-PAGE로 관찰한 결과이다.
도 4는 본 발명에서 선별된 2종의 화합물을 A. baumannii ATCC 17978균에 처리한 후 OmpA 단백질의 발현량 변화를 SDS-PAGE와 웨스턴 블롯을 통해 관찰한 결과이다.
도 5는 선별된 2종의 화합물을 A. baumannii ATCC 17978균에 처리한 후 OmpA 유전자의 발현량 변화를 real time PCR을 통해 평가한 결과이다.
도 6은 선별된 2종의 화합물 2.5 μM을 A. baumannii ATCC 17978균에 처리한 후 균막 형성 저해능을 평가한 결과(A)와 각 화합물을 농도별로 처리하여 균막 형성 저해능을 평가한 결과(B)이다.
도 7은 선별된 2종의 화합물을 A. baumannii ATCC 17978 및 reporter strain에 처리한 후 균 성장 저해 여부 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 선별된 2종의 화합물의 세포독성을 WST-1 assay를 통해 평가한 결과를 나타낸 도면이다.Figure 1 shows a schematic diagram of manufacturing a reporter strain prepared by cloning npt I, a kanamycin antibiotic resistance gene, after removing the OmpA structural protein gene next to the promoter DNA of OmpA.
Figure 2 shows a schematic diagram of screening for compounds that inhibit the expression of the ompA gene by inhibiting the promoter of the ompA gene using a reporter strain.
Figure 3 is the result of observing the change in the expression level of OmpA protein by SDS-PAGE after treating A. baumannii ATCC 17978 with the selected two compounds.
Figure 4 is the result of observing the change in the expression level of OmpA protein through SDS-PAGE and Western blot after A. baumannii ATCC 17978 was treated with the two compounds selected in the present invention.
5 shows the result of evaluating the change in the expression level of the OmpA gene through real time PCR after treating A. baumannii ATCC 17978 with the selected two compounds.
Figure 6 is a result of evaluating the biofilm formation inhibitory ability after treating A. baumannii ATCC 17978 with 2.5 μM of the two selected compounds (A) and the result of evaluating the biofilm formation inhibitory ability by treating each compound by concentration (B) am.
Figure 7 is a view showing the results of bacterial growth inhibition after treatment with A. baumannii ATCC 17978 and a reporter strain with the selected two compounds.
8 is a view showing the results of evaluating the cytotoxicity of the two selected compounds through the WST-1 assay.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are only to illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1: 시험 화합물Example 1: Test compound

본 발명자는 A. baumannii의 외막에 발현되는 구조 단백질인 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA) 유전자의 발현을 억제하는 물질을 검색하고자 한국화합물은행으로부터 7,520여종의 화합물들을 분양 받아 본 연구에 사용하였다. The present inventor received 7,520 kinds of compounds from the Korea Compound Bank to search for substances that inhibit the expression of the outer membrane protein A (OmpA) gene, a structural protein expressed in the outer membrane of A. baumannii, and used them in this study. did

실시예 2: OmpA 유전자 프로모터를 저해하는 화합물의 선별Example 2: Selection of compounds that inhibit the OmpA gene promoter

<2-1> 실험 균주<2-1> Experimental strain

실험에 사용한 A. baumannii ATCC 17978 균주는 American Type Culture Collection (ATCC)로부터 구입하였으며, 균주는 Luria-Bertani(LB)배지에 배양하였다.The A. baumannii ATCC 17978 strain used in the experiment was purchased from the American Type Culture Collection (ATCC), and the strain was cultured in Luria-Bertani (LB) medium.

<2-2> Reporter strain의 제조<2-2> Manufacture of Reporter strain

화합물 검색을 위해 OmpA의 프로모터 DNA 다음에 있는 OmpA 구조단백 유전자를 제거하고 대신 kanamycin 항생제 내성 유전자인 nptI을 클로닝하여 만든 pFL02 플라스미드를 A. baumannii ATCC 17978 균에 형질전환시켜 reporter strain인 FL01 균주를 만들었고, 이의 제조 과정을 도 1에 나타내었다. To search for the compound, the OmpA structural protein gene next to the OmpA promoter DNA was removed and the pFL02 plasmid, which was created by cloning the kanamycin antibiotic resistance gene nptI instead, was transformed into A. baumannii ATCC 17978 to create a reporter strain, FL01 strain, Its manufacturing process is shown in Figure 1.

구체적으로, ompA 유전자 발현을 저해하는 물질을 탐색할 수 있는 reporter strain FL01을 개발하기 위하여 reporter plasmid인 pFL01 플라스미드와 pFL02 플라스미드 벡터를 순차적으로 구축하였으며, pFL02 플라스미드를 A. baumannii ATCC 17978 균에 형질전환시켜 reporter strain인 FL01을 만들었다. Specifically, in order to develop reporter strain FL01 capable of searching for substances that inhibit ompA gene expression, reporter plasmid pFL01 plasmid and pFL02 plasmid vector were sequentially constructed, and pFL02 plasmid was transformed into A. baumannii ATCC 17978 strain. A reporter strain, FL01, was created.

<1> pFL01 플라스미드 벡터 개발(도 1)<1> Development of pFL01 plasmid vector (Fig. 1)

항생제 내성 유전자를 이용한 ompA 저해물질 reporter plasmid를 구축을 위해 pFL01 플라스미드 벡터를 개발하였다. Reporter plasmid 구축에 있어서 reporter gene으로 사용되는 nptI(kanamycin 내성 유전자) 이외의 항생제 마커는 반드시 필요하다. 따라서 pBR322의 tetracycline 내성 유전자 부위에 A. baumannii를 위한 특이적인 항생제 마커 erythromycin 내성 유전자(ermAM)를 삽입하여 새로운 클로닝 벡터 pFL01을 구축하였으며, 실험방법은 다음과 같다.A pFL01 plasmid vector was developed to construct an ompA inhibitor reporter plasmid using an antibiotic resistance gene. In constructing a reporter plasmid, antibiotic markers other than nptI (kanamycin resistance gene) used as a reporter gene are absolutely necessary. Therefore, a new cloning vector pFL01 was constructed by inserting the erythromycin resistance gene ( ermAM ), a specific antibiotic marker for A. baumannii , into the tetracycline resistance gene region of pBR322, and the experimental method is as follows.

① ermAM(erythromycin 내성을 야기시키는 유전자)을 증폭할 수 있는 1쌍(E03/E04)의 primer set와 ermAM 유전자를 내재하고 있는 pIL252 plasmid를 template로 하여 PCR 반응을 수행하였다. 이때 PCR 산물이 평활말단이 되게 해주는 PrimerSTAR GXL Taq DNA polymerase (다카라)를 사용하였다. ① A PCR reaction was performed using a primer set (E03/E04) capable of amplifying ermAM (a gene that causes erythromycin resistance) and the pIL252 plasmid containing the ermAM gene as a template. At this time, PrimerSTAR GXL Taq DNA polymerase (Takara), which allows the PCR product to have blunt ends, was used.

② 증폭된 ermAM(1,040 bp) DNA 절편은 gel extraction kit를 사용하여 정제하였다. ② The amplified ermAM (1,040 bp) DNA fragment was purified using a gel extraction kit.

③ Backbone plasmid인 pBR322를 제한효소 EcoRI과 SphI으로 처리한 후 DNA polymerase I (Large [Klenow] Fragment)을 이용하여 vector의 양 말단을 평활화하였다.③ Backbone plasmid pBR322 was treated with restriction enzymes Eco RI and Sph I, and both ends of the vector were blunted using DNA polymerase I (Large [Klenow] Fragment).

④ DNA의 양말단이 평활화가 된 pBR322 벡터에 PCR 반응을 통하여 증폭된 ermAM 유전자를 ligation하여 클로닝하였으며, 이렇게 만들어진 플라스미드 벡터를 pFL01이라 명명하였다.④ The ermAM gene amplified by PCR was ligated into the pBR322 vector with both ends of the DNA blunted and cloned, and the resulting plasmid vector was named pFL01.

<2> pFL02 플라스미드 벡터 개발(도 1)<2> Development of pFL02 plasmid vector (Fig. 1)

A. baumannii의 ompA promoter에 의해 항생제 내성 유전자(nptI) 발현이 조절되는 reporter plasmid 시스템을 구축하였다. 전제적인 실험개요는 3쌍(O05/O06, K03/K04, R01/R02)의 primer sets와 두 단계의 PCR 반응을 통하여 A. baumannii ompA의 promoter 부위, nptI(kanamycin 항생제 내성 유전자)의 open reading frame(ORF) 및 A. baumannii 내에서 플라스미드의 복제를 야기시키는 복제 개시점 부위를 하나의 DNA 절편으로 순차적으로 연결시키는 것이다. 순차적으로 연결된 DNA 절편은 pFL01 vector에 클로닝함으로써 ompA의 promoter에 의해 항생제 내성 유전자의 발현이 조절되는 reporter plasmid를 구축하는 것이다.A reporter plasmid system in which the expression of an antibiotic resistance gene ( nptI ) is regulated by the ompA promoter of A. baumannii was constructed. The overall experimental outline is the open reading frame of the promoter region of A. baumannii ompA and nptI (kanamycin antibiotic resistance gene) through a two-step PCR reaction with three pairs of primer sets (O05/O06, K03/K04, R01/R02). (ORF) and A. baumannii by sequentially linking the origin of replication sites that cause replication of the plasmid into one DNA segment. By cloning the sequentially linked DNA fragments into the pFL01 vector, a reporter plasmid in which the expression of the antibiotic resistance gene is controlled by the ompA promoter is constructed.

① 첫 번째 PCR 반응에서 사용되는 한 쌍의 primer set(O05/O06)은 A. baumannii의 염색체상에서 ompA 유전자의 promoter region을 증폭할 수 있는 primer이다. K03/K04 primer set은 nptI의 ORF를 증폭할 수 있는 primer이며, 남은 한 쌍의 primer set(R01/R02)는 A. baumannii 내에서 플라스미드의 복제를 야기시키는 복제 개시점 부위를 증폭할 수 있는 primer이다. ① A pair of primer sets (O05/O06) used in the first PCR reaction are primers that can amplify the promoter region of the ompA gene on the chromosome of A. baumannii . The K03/K04 primer set is a primer capable of amplifying the nptI ORF, and the remaining pair of primer sets (R01/R02) is a primer capable of amplifying the origin of replication that causes plasmid replication in A. baumannii . am.

② 사용되는 모든 primer의 Tm 값은 54oC ~ 56oC가 되도록 디자인되어 있으며, 특히 ompA의 promoter와 nptI의 ORF를 증폭할 때 사용되는 각각 reverse primer(O06, K04)의 5‘ 말단 부위에는 nptI와 복제 개시점 부위에 각각 상동성이 있는 25개의 nucleotide를 추가하여 제작하였다. 이는 overlap extension PCR을 통하여 ompA의 promoter 부위, nptI의 ORF, 플라스미드 복제 개시점 부위를 순차적으로 결합시키기 위함이다. ② The Tm value of all primers used is designed to be 54 o C ~ 56 o C. In particular, the 5' end of each reverse primer (O06, K04) used when amplifying the promoter of ompA and the ORF of nptI It was prepared by adding 25 nucleotides homologous to nptI and the replication origin site. This is to sequentially combine ompA 's promoter region, nptI 's ORF, and plasmid replication origin region through overlap extension PCR.

③ 증폭된 PCR 산물을 손쉽게 pFL01 플라스미드 벡터에 클로닝하기 위해, ompA promoter 부위를 증폭하는 데 사용되는 forward primer (O05)의 5’ 말단 부위에는 제한효소 PstI이 인지하는 염기서열 CTGCAG을 추가하였으며, 복제 개시점 부위를 증폭하는데 사용되는 reverse primer(R02)의 5‘ 말단부위에는 제한효소 AatII가 인지하는 염기서열 GACGTC을 추가하였다.③ To easily clone the amplified PCR product into the pFL01 plasmid vector, the nucleotide sequence CTGCAG recognized by the restriction enzyme Pst I was added to the 5' end of the forward primer (O05) used to amplify the ompA promoter region, and cloning The nucleotide sequence recognized by the restriction enzyme Aat II, GACGTC, was added to the 5' end of the reverse primer (R02) used to amplify the starting point.

④ 첫 번째 단계 PCR 반응에 있어서 ompA promoter 부위를 증폭하기 위해 A. baumannii의 genomic DNA가 주형으로 사용되었으며, nptI의 ORF와 복제개시점 부위를 증폭하기 위해 pUC4K와 pWH1266 플라스미드를 각각 주형 DNA로 사용하였다. PCR을 통하여 증폭된 각각의 DNA는 gel extraction kit를 사용하여 DNA를 정제하였다. 정제된 각각의 DNA를 두 번째 PCR 단계인 overlap extension PCR 반응에 있어서 주형 DNA로 사용하였다. PCR 반응에 사용된 DNA 농도는 각각 100 ng이었다. 증폭된 3개의 서로 다른 DNA 절편(ompA promoter, nptI의 ORF, 복제개시점 부위)를 하나의 평활 말단 DNA로 순차적으로 결합시키기 위해 첫 번째 PCR 반응에서 사용된 O05와 R02 primer를 이용하여 PCR 반응을 실시하였다. 두 번째 단계의 PCR 반응에서 증폭된 DNA 절편은 gel extraction kit를 사용하여 DNA를 정제하였다.④ In the first stage PCR reaction, A. baumannii genomic DNA was used as a template to amplify the ompA promoter region, and pUC4K and pWH1266 plasmids were used as template DNA to amplify the ORF of nptI and the origin of replication, respectively. . Each DNA amplified through PCR was purified using a gel extraction kit. Each purified DNA was used as template DNA in the overlap extension PCR reaction, which is the second PCR step. The DNA concentration used in the PCR reaction was 100 ng each. A PCR reaction was performed using the O05 and R02 primers used in the first PCR reaction to sequentially combine the amplified three different DNA fragments ( ompA promoter, nptI ORF, origin of replication site) into one blunt-end DNA. conducted. The DNA fragments amplified in the second stage PCR reaction were purified using a gel extraction kit.

⑤ 정제된 DNA 절편은 제한효소 PstI과 AatII를 처리한 후 동일한 제한효소로 처리된 pFL01 플라스미드에 ligation하여 클로닝하였다. 새롭게 구축된 벡터는 제한효소 처리와 DNA sequencing을 통하여 확인하였다. 구축된 벡터를 pFL02라고 명명하였다.⑤ After treating the purified DNA fragment with restriction enzymes Pst I and Aat II, it was ligated into pFL01 plasmid treated with the same restriction enzymes and cloned. The newly constructed vector was identified through restriction enzyme treatment and DNA sequencing. The constructed vector was named pFL02.

<3> Reporter strain 개발(도 2)<3> Reporter strain development (Fig. 2)

① 구축된 재조합 플라스미드 pFL02는 helper plasmid (pRK2013)를 갖고 있는 균을 이용하여 A. baumannii 세포 내로 형질전환시켰다. 형질전환된 A. baumannii ATCC 17978(pFL02 플라스미드를 갖고있는 균)은 kanamycin(50 μg/ml)과 erythromycin (30 μg/ml) 항생제가 첨가된 Luria-Bertani(LB) 고체배지에서 선별하였다.① The constructed recombinant plasmid pFL02 was transformed into A. baumannii cells using a bacterium having a helper plasmid (pRK2013). Transformed A. baumannii ATCC 17978 (a strain carrying the pFL02 plasmid) was selected on Luria-Bertani (LB) solid medium supplemented with antibiotics kanamycin (50 μg/ml) and erythromycin (30 μg/ml).

② 구축된 reporter strain이 갖고 있는 kanamycin 항생제 내성 유전자(nptI)가 ompA의 promoter에 의해 조절되는지 확인하기 위해 kanamycin (50 μg/ml)이 첨가된 LB 고체배지에서 균을 배양하였다. pFL02 plasmid를 갖고 있지 않는 A. baumannii 균과 pFL02 plasmid를 갖고 있는 A. baumannii 균을 LB broth와 erythromycin (30 μg/ml)이 첨가된 LB broth에 각각 접종하여 37oC에서 12시간 동안 진탕배양하였다. 각각 진탕배양된 균을 LB broth을 이용하여 optical density at 600 nm [OD600] 가 0.1이 되게 희석하였다. 희석된 각각의 균 (10 μl)을 kanamycin(50 μg/ml)이 첨가된 LB 고체배지에 도말하여 균의 성장을 확인하였다. ② To confirm that the kanamycin antibiotic resistance gene ( nptI ) of the constructed reporter strain is regulated by the ompA promoter, the bacteria were cultured in LB solid medium supplemented with kanamycin (50 μg/ml). A. baumannii bacteria without pFL02 plasmid and A. baumannii bacteria with pFL02 plasmid were inoculated into LB broth and LB broth supplemented with erythromycin (30 μg/ml), respectively, and cultured with shaking at 37 o C for 12 hours. . Each shaking-cultured bacteria was diluted to an optical density at 600 nm [OD 600 ] of 0.1 using LB broth. Each of the diluted bacteria (10 μl) was spread on an LB solid medium supplemented with kanamycin (50 μg/ml) to confirm the growth of the bacteria.

③ 그 결과, pFL02를 갖고 있지 않은 A. baumannii는 kanamycin(50 μg/ml)이 첨가된 배지에서 성장하지 못하였다. 그러나 pFL02를 가지고 있는 reporter strain인 FL01균은 kanamycin(50 μg/ml)이 첨가된 배지에 도말하면 균이 성장하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 사실은 pFL02 플라스미드에 존재하는 kanamycin 내성 유전자(nptI)가 A. baumannii의 ompA 유전자 발현 조절 시스템에 의하여 조절된다는 것을 의미한다. ③ As a result, A. baumannii without pFL02 did not grow in the medium containing kanamycin (50 μg/ml). However, the reporter strain FL01, which has pFL02, was confirmed to grow when spread on a medium supplemented with kanamycin (50 μg/ml). This fact means that the kanamycin resistance gene ( nptI ) present in the pFL02 plasmid is regulated by the ompA gene expression control system of A. baumannii .

위의 reporter plasmid 및 reporter strain을 만드는데 사용된 균주와 플라스미드의 특성 및 사용한 primer는 아래 표 1 및 표 2와 같다. The characteristics of the strains and plasmids used to make the above reporter plasmid and reporter strain and the primers used are shown in Tables 1 and 2 below.

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<2-3> OmpA 유전자 프로모터를 저해하는 화합물의 검색<2-3> Search for compounds that inhibit the OmpA gene promoter

항병원성 제제(anti-virulent agent)는 항생제와는 다르게 세균의 성장은 저해하지 않고, 특정 병원성인자만을 저해하는 물질이므로 야생형 균주의 성장은 저해하지 않으면서 reporter strain의 성장만을 저해하는 물질을 선별하고자 하였다. Unlike antibiotics, an anti-virulent agent is a substance that inhibits only specific pathogenic factors without inhibiting the growth of bacteria. wanted to

화합물이 reporter strain의 성장을 저해하는지는 kanamycin이 함유된 세균배양용 배지를 96-well plate의 각 well에 넣은 후 reporter strain과 검색하고자 하는 화합물을 접종하고 24시간 배양한 후 화합물을 처리하지 않은 reporter strain과 화합물을 첨가한 reporter strain의 균 성장을 ELISA reader기로 optical density를 측정하여 비교하는 방법으로 평가하였다. To check whether the compound inhibits the growth of the reporter strain, kanamycin-containing bacterial culture medium was placed in each well of a 96-well plate, then the reporter strain and the compound to be searched were inoculated and incubated for 24 hours. The bacterial growth of the strain and reporter strain added with the compound was evaluated by measuring the optical density with an ELISA reader and comparing them.

구체적으로 96-well plate의 각 well에 50 μg/ml의 kanamycin이 함유된 Mueller-Hinton broth(MHB) 100 μl를 넣고 LB broth에서 하룻밤 배양한 reporter strain FL01을 6.0 X 105되게 넣었다. 각 well에 50 μM 농도로 각각의 화합물을 첨가하여 최종 부피가 150 μl되게 한 후 37oC 배양기에서 24시간 배양하였다. 대조군으로는 하나의 plate당 3개 이상의 well에 kanamycin이 함유되어 있지 않은 Mueller-Hinton broth 100 μl와 LB broth에서 하룻밤 배양한 reporter strain FL01을 6.0 X 105되게 넣어 최종 부피가 150 μl되게 맞춘 다음 37oC 배양기에서 24시간 배양하였다. 24시간 배양된 plate를 ELISA reader기로 OD600에서 균의 성장을 측정하였다. 화합물을 첨가하지 않은 reporter strain의 균 성장과 화합물을 첨가한 reporter strain의 균 성장을 비교하였다. 1차 실험결과의 신뢰성 확보를 위해 1차 실험과 과정은 모두 동일하게 하여 반복 실험을 수행하였다. Specifically, 100 μl of Mueller-Hinton broth (MHB) containing 50 μg/ml of kanamycin was added to each well of a 96-well plate, and reporter strain FL01 cultured overnight in LB broth was added at a concentration of 6.0 X 10 5 . Each compound was added at a concentration of 50 μM to each well to make the final volume 150 μl, and then incubated for 24 hours in a 37 ° C incubator. As a control, 100 μl of Mueller-Hinton broth without kanamycin and reporter strain FL01 cultured overnight in LB broth were added to 3 or more wells per plate at a ratio of 6.0 X 10 5 to a final volume of 150 μl, and then 37 o Incubated for 24 hours in a C incubator. The plate cultured for 24 hours was measured for bacterial growth at OD600 using an ELISA reader. The bacterial growth of the reporter strain without the addition of the compound and the bacterial growth of the reporter strain with the compound were compared. In order to secure the reliability of the first test results, the first test and the procedure were all the same, and repeated tests were performed.

한국화합물은행으로부터 분양받은 7,520여종의 화합물을 대상으로 스크리닝한 결과 대조군에 비해 70% 이상 reporter strain의 성장을 저해하는 화합물을 1차적으로 선별하였다. As a result of screening 7,520 kinds of compounds distributed from the Korea Compound Bank, compounds that inhibit the growth of reporter strains by more than 70% compared to the control group were primarily selected.

스크리닝 결과 모두 15종의 화합물을 선별하였다. 이들 15종의 화합물 중 2종에 대한 reporter strain의 성장억제 효과의 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 아래의 표에서 % inhibition은 대조군(FL01 균주를 kanamycin이 함유되어 있지 않은 배지에서 성장)에 비해서 화합물을 넣은 reporter strain FL01의 균 성장 저해를 나타낸 것이다. 예를 들어, % inhibition 값이 98.45이라 하면 화합물 50 μM 농도에서 reporter strain의 균 성장이 대조군에 비해서 98.45% 저해하였다는 것을 의미한다. 또한 reporter strain의 균 성장을 50% 억제하는 화합물의 농도(50% of maximum inhibitory concentration, IC50)는 (최고로 균성장을 억제시키는 화합물 농도 - 최저로 균성장을 억제시키는 농도)/2의 공식으로 구하였다. As a result of the screening, a total of 15 compounds were selected. The results of the growth inhibitory effect of the reporter strain on two of these 15 compounds are shown in Table 3 below. In the table below, % inhibition represents the inhibition of bacterial growth of the reporter strain FL01 containing the compound compared to the control group (the FL01 strain was grown in a kanamycin-free medium). For example, if the % inhibition value is 98.45, it means that the bacterial growth of the reporter strain was inhibited by 98.45% compared to the control group at a concentration of 50 μM compound. In addition, the concentration of the compound that inhibits bacterial growth by 50% of the reporter strain (50% of maximum inhibitory concentration, IC50) is calculated by the formula (maximum inhibitory compound concentration - lowest bacterial growth concentration) / 2 did

Figure pat00019
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상기 표 3에서 볼 수 있는 바와 같이, 화합물 2종은 IC50이 2 μM 이하로 나타나 저농도에서 reporter strain의 성장을 저해하는 효과가 월등하다는 것을 알 수 있었다. 즉 3종의 화합물은 OmpA 유전자의 프로모터를 우수한 효과로 저해하기 때문에 카나마이신에 대해 내성을 나타내는 nptI이 발현되지 않아, 결과적으로 reporter strain 균주가 카나마이신이 함유된 배지에서 내성을 나타내지 못하고 성장이 억제되었다는 것을 의미한다. 또한 선행연구를 통해 A. baumannii균의 OmpA 유전자 프로모터를 억제하는 것으로 알려진 62520 화합물도 함께 스크리닝되어 본 화합물 선별 실험이 정상적으로 수행되었음을 확인하였다. As can be seen in Table 3, the IC50 of the two compounds was less than 2 μM, indicating that the effect of inhibiting the growth of the reporter strain at low concentrations was superior. That is, since the three compounds inhibited the promoter of the OmpA gene with excellent effect, nptI , which is resistant to kanamycin, was not expressed. it means. In addition, 62520 compounds known to inhibit the OmpA gene promoter of A. baumannii through previous studies were also screened together, confirming that the screening experiment for this compound was normally performed.

실시예 3: OmpA 단백질 발현 저해능Example 3: OmpA protein expression inhibition ability

OmpA 유전자는 발현된 후 세포질에서 OmpA 단백질로 합성되어 세균 외막으로 가게 된다. 따라서 스크리닝 결과 얻은 2종의 화합물이 항병원성 약물로 사용되기 위해서는 OmpA 가 병원성인자로 작용하는 외막에서의 발현이 저해되어야 하므로 상기 2종의 화합물을 A. baumannii ATCC 17978 균에 처리하여 외막 단백질만을 분리한 후 OmpA의 단백질 양의 발현 정도를 확인하였다. After the OmpA gene is expressed, it is synthesized as OmpA protein in the cytosol and goes to the bacterial outer membrane. Therefore, in order for the two compounds obtained as a result of the screening to be used as antipathogenic drugs, the expression of OmpA in the outer membrane, which acts as a pathogenic factor, must be inhibited. After that, the degree of expression of the amount of OmpA protein was confirmed.

구체적으로 wild-type A. baumannii ATCC 17978균을 10 ml의 Luria-Bertani(LB) broth에 접종하여 16시간 동안 37oC에서 150 rpm으로 진탕 배양하였다. 균 배양액을 8,000 rpm에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 제거한 다음 phosphate-buffered saline(PBS)에 재부유하여 600 nm의 흡광도에서 값이 1.0이 될 때까지 희석하여 균액을 준비하였다. 희석된 균액 20 μl와 2종의 화합물의 최종농도가 5.0 μM되게 맞춘 화합물 용액 10 μl를 Mueller-Hinton broth(MHB)에 접종하여 최종 20 ml의 균액을 만들었다. 대조군으로는 화합물의 용매로 사용된 DMSO 10 μl를 첨가하였다. 이들을 37oC에서 150 rpm으로 진탕하면서 24시간 동안 배양하였다. 균 배양액을 8,000 rpm에서 5분간 원심분리 한 후 상층액을 제거한 다음 10 mM HEPES buffer(pH 7.4)에 재부유하고, 초음파 파쇄기로 균체를 파쇄시킨 후 8000 rpm으로 5분간 원심분리하여 파쇄되지 않은 세균과 큰 덩어리는 제거하고 상층액을 얻었다. 상층액을 4oC에서 100,000 x g로 1시간 초고속원심분리하여 침사를 2% sodium lauryl sarcosinate가 들어있는 HEPES buffer에 부유시켜 실온에서 30분간 방치하여 내막단백질을 제거하고, 다시 4oC에서 1시간 동안 100,000 x g로 초고속원심분리하여 순수한 외막단백질만을 얻었다. 이렇게 얻은 외막단백질은 10% gel에서 sodium-dodecyl sulfate-gel electrophoresis(SDS-PAGE)하여 Coomasie Brilliant Blue로 염색하여 단백질 밴드를 확인하였다. Specifically, wild-type A. baumannii ATCC 17978 was inoculated into 10 ml of Luria-Bertani (LB) broth and cultured for 16 hours at 37 ° C. with shaking at 150 rpm. After centrifuging the bacterial culture at 8,000 rpm for 5 minutes, the supernatant was removed, and then re-suspended in phosphate-buffered saline (PBS) and diluted until the absorbance value at 600 nm was 1.0 to prepare a bacterial solution. 20 μl of the diluted bacterial solution and 10 μl of the compound solution adjusted to a final concentration of 5.0 μM of the two compounds were inoculated into Mueller-Hinton broth (MHB) to prepare a final 20 ml bacterial solution. As a control, 10 μl of DMSO used as a solvent for the compound was added. They were incubated for 24 hours at 37 ° C. with shaking at 150 rpm. The bacterial culture was centrifuged at 8,000 rpm for 5 minutes, the supernatant was removed, resuspended in 10 mM HEPES buffer (pH 7.4), disrupted by an ultrasonicator, and centrifuged at 8,000 rpm for 5 minutes to obtain undisrupted bacteria. and large lumps were removed to obtain the supernatant. The supernatant was ultra-high-speed centrifuged at 100,000 xg at 4 o C for 1 hour, and the sediment was suspended in HEPES buffer containing 2% sodium lauryl sarcosinate, left at room temperature for 30 minutes to remove inner membrane proteins, and then again at 4 o C for 1 hour. During ultra-high-speed centrifugation at 100,000 xg, only pure outer membrane proteins were obtained. The obtained outer membrane protein was subjected to sodium-dodecyl sulfate-gel electrophoresis (SDS-PAGE) on a 10% gel and stained with Coomasie Brilliant Blue to confirm the protein band.

이에 대한 결과를 도 3에 나타내었다. The results for this are shown in Figure 3.

도 3에 나타낸 바와 같이, 선별된 2종의 화합물(195925, 223604)은 OmpA 단백질의 발현을 미처리 대조군에 비해 확연하게 저해하는 것으로 확인되었다. As shown in FIG. 3, it was confirmed that the selected two compounds (195925 and 223604) significantly inhibited the expression of OmpA protein compared to the untreated control group.

위의 결과를 바탕으로 선별된 2종 화합물(195925, 223604)이 OmpA 단백질의 발현을 저해시키는지 확인하기 위해 A. baumannii ATCC 17978 균주에 각 화합물 2.5 μM 농도로 처리하고 24시간 배양한 후 위와 동일한 방법으로 순수 외막단백질을 얻어 10% gel에서 SDS-PAGE한 단백질은 nitrocellulose membrane으로 전기전이(electrotransfer)를 시키고, polyclonal anti-mouse OmpA 항체 및 horseradish peroxidase가 부착된 이차항체로 반응시켰다. 항체와 반응하는 단백질은 enhanced chemiluminescence system을 사용하여 발색시켰다. 대조군과 화합물을 처리한 세균에서의 OmpA 단백질의 발현차이는 densitometer를 이용하여 측정하였다. 이때 OmpA 유전자의 프로모터를 저해하는 화합물로 알려진 62520을 양성 대조군으로 사용하였다. In order to confirm whether the two compounds (195925 and 223604) selected based on the above results inhibit the expression of the OmpA protein, A. baumannii ATCC 17978 strain was treated with 2.5 μM of each compound, cultured for 24 hours, and then the same as above. Pure outer membrane protein obtained by SDS-PAGE in 10% gel was electrotransferred to nitrocellulose membrane and reacted with polyclonal anti-mouse OmpA antibody and horseradish peroxidase-attached secondary antibody. Proteins reacting with the antibody were colored using an enhanced chemiluminescence system. The difference in OmpA protein expression between the control group and the bacteria treated with the compound was measured using a densitometer. At this time, 62520, known as a compound that inhibits the promoter of the OmpA gene, was used as a positive control.

이에 대한 결과를 도 4에 나타내었다. The results for this are shown in FIG. 4 .

도 4에 나타낸 바와 같이, 223604 화합물은 20%, 195925 화합물은 26%의 OmpA 단백질의 발현을 미처리 대조군과 비교해 저해하는 것으로 확인되었다. As shown in FIG. 4, it was confirmed that compound 223604 inhibited 20% and compound 195925 inhibited 26% of OmpA protein expression compared to the untreated control group.

실시예 4: OmpA 유전자 발현 저해능(real time PCR)Example 4: OmpA gene expression inhibition (real time PCR)

223604와 195925 화합물은 세균의 외막에서 OmpA 단백질을 유의하게 저하시키는 것이 OmpA 유전자의 발현 저하에 의한 것인지를 확인하기 위하여 실시간 중합효소 연쇄반응(real time PCR)을 통해 확인하고자 하였다. The 223604 and 195925 compounds were intended to be confirmed through real time polymerase chain reaction (real time PCR) to confirm that the significant reduction of the OmpA protein in the bacterial outer membrane was due to the reduction of the expression of the OmpA gene.

구체적으로 Luria-Bertani(LB) broth에서 하룻밤 배양한 A. baumannii ATCC 17978균을 600 nm의 흡광도에서 1.0이 될 때까지 PBS에 희석하였다. 희석된 균액 10 μl와 각 화합물의 최종농도가 2.5 μM이 되게 맞춘 화합물 용액 10 μl를 980 μl의 Mueller-Hinton broth (MHB)에 접종하였다. 대조군으로는 화합물의 용매로 사용된 DMSO 10 μl를 첨가하였다. 이들을 37oC에서 150 rpm으로 진탕하면서 24시간 동안 배양하였다. 이후 Quiagen 회사의 RNeasy Mini Kit를 이용하여 세균의 전체 RNA를 추출하였다. RNA를 추출할 때, genomic DNA의 오염을 방지하기 위하여 Quiagen 회사의 DNase 처리하는 과정도 추가하였다. 전체 RNA는 Bio-Rad사의 nanodrop을 이용하여 정량한 후 1.5 μg의 RNA를 주형으로 사용하여 Thermo scientific 회사의 random hexamer primer와 M-MLV 역전사효소를 이용하여 cDNA를 만들었다. 역전사반응은 Bio-Rad사의 thermal cycler 기기를 이용하여 수행하였다. Quantitative real-time PCR 분석을 위하여 Biosystems사의 Primer Express Software (version 3.0)를 이용하여 primer를 디자인하였다. OmpA 및 16S rRNA의 PCR 수행을 위한 프라이머 서열은 다음과 같다. OmpA (sense primer: 5′- TTG CAC TTG CTA CTA TGC TTG TTG-3′, anti-sense primer: 5′-TGG CTG TCT TGG AAA GTG TAA CC-3′); 16S rRNA (sense primer: 5′-ACT CCT ACG GGA GGC AGC AGT-3′, anti-sense primer: 5′-TAT TAC CGC GGC TGC TGG C-3′). Real-time PCR은 Biosystems사의 Power SYBR Green PCR Master Mix 시약을 이용하여 StepOnePlusTM Real-time PCR Systems 기기를 이용하여 수행하였다. 증폭 특이성은 melting curve를 분석하여 측정하였다. OmpA mRNA는 16S rRNA mRNA level을 이용하여 정량화하였으며, fold change 값은 ΔΔCt 값을 이용하여 구하였다. 이때 OmpA 유전자의 프로모터를 저해하는 화합물로 알려진 62520을 양성 대조군으로 사용하였다. Specifically, A. baumannii ATCC 17978 cultured overnight in Luria-Bertani (LB) broth was diluted in PBS until the absorbance at 600 nm was 1.0. 10 μl of the diluted bacterial solution and 10 μl of the compound solution adjusted to a final concentration of 2.5 μM of each compound were inoculated into 980 μl of Mueller-Hinton broth (MHB). As a control, 10 μl of DMSO used as a solvent for the compound was added. They were incubated for 24 hours at 37 ° C. with shaking at 150 rpm. Then, total RNA of bacteria was extracted using Quiagen's RNeasy Mini Kit. When extracting RNA, DNase treatment by Quiagen was added to prevent contamination of genomic DNA. Total RNA was quantified using Bio-Rad's nanodrop, and 1.5 μg of RNA was used as a template to create cDNA using Thermo Scientific's random hexamer primer and M-MLV reverse transcriptase. Reverse transcription reaction was performed using a Bio-Rad thermal cycler device. For quantitative real-time PCR analysis, primers were designed using Biosystems' Primer Express Software (version 3.0). Primer sequences for PCR of OmpA and 16S rRNA are as follows. OmpA (sense primer: 5′- TTG CAC TTG CTA CTA TGC TTG TTG-3′, anti-sense primer: 5′-TGG CTG TCT TGG AAA GTG TAA CC-3′); 16S rRNA (sense primer: 5′-ACT CCT ACG GGA GGC AGC AGT-3′, anti-sense primer: 5′-TAT TAC CGC GGC TGC TGG C-3′). Real-time PCR was performed using a StepOnePlus TM Real-time PCR Systems instrument using Power SYBR Green PCR Master Mix reagent from Biosystems. Amplification specificity was determined by analyzing melting curves. OmpA mRNA was quantified using the 16S rRNA mRNA level, and the fold change value was obtained using the ΔΔCt value. At this time, 62520, known as a compound that inhibits the promoter of the OmpA gene, was used as a positive control.

이에 대한 결과를 도 5에 나타내었다. The results for this are shown in FIG. 5 .

도 5에 나타낸 바와 같이, 223604와 195925 화합물은 미처리 대조군과 비교해 OmpA 유전자의 발현을 2.5 μM 농도에서 각각 35%, 84%를 저해하는 것으로 나타났다. As shown in FIG. 5 , compounds 223604 and 195925 inhibited the expression of the OmpA gene by 35% and 84%, respectively, at a concentration of 2.5 μM compared to the untreated control group.

실시예 5: 균막 형성 억제능Example 5: Biofilm formation inhibitory ability

OmpA 단백질은 병원성 세균의 균막 형성, 세포부착 및 침입, 세포사 유도 등 다양한 기능을 하는 단백질이다. 따라서 OmpA 단백질이 제대로 발현되지 않는다면 이러한 병원성도 줄어들어야 항병원성 약물로 활용할 수 있다. 따라서 본 발명자들은 OmpA의 프로모터를 저해하는 본 발명의 223604와 195925 화합물이 세균의 균막 형성을 억제하는지 여부를 평가하였다.OmpA protein is a protein that performs various functions such as formation of biofilm of pathogenic bacteria, cell adhesion and invasion, and induction of cell death. Therefore, if the OmpA protein is not properly expressed, such pathogenicity must be reduced before it can be used as an anti-pathogenic drug. Therefore, the present inventors evaluated whether the 223604 and 195925 compounds of the present invention, which inhibit the OmpA promoter, inhibit bacterial biofilm formation.

구체적으로 Luria-Bertani(LB) broth에서 하룻밤 배양한 reporter strain을 파장 600 nm에서 흡광도(optical density, OD)에서 2.0이 되도록 조정한 후 LB broth에 200배 희석하였다. 희석된 균액 297 μl를 5 ml의 polystyrene tube에 넣은 후 화합물을 최종농도가 2.5 μM이 되도록 3 μl 첨가하였다. 음성 대조군으로는 화합물의 용매로 사용된 DMSO 3 μl를 첨가하였다. 균액은 30oC에서 24시간 정치배양하였다. 배양이 끝난 균액은 600 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 부유 세균의 성장을 확인한 다음, 부유세균은 제거하고 튜브를 300 μl의 PBS로 1회 세척하였다. 균막을 형성한 세균은 0.1%의 crystal violet 용액으로 실온에서 15분간 염색하고 3차 증류수를 이용하여 2회 세척한 후, 95% 에탄올로 균막형성 세균을 튜브로부터 모두 추출한 후 570 nm의 파장에서 흡광도를 측정하여 600 nm에서 측정한 흡광도로 나누어서 균막 형성능을 측정하였다. Specifically, a reporter strain cultured overnight in Luria-Bertani (LB) broth was adjusted to an optical density (OD) of 2.0 at a wavelength of 600 nm, and then diluted 200-fold in LB broth. After putting 297 μl of the diluted bacterial solution in a 5 ml polystyrene tube, 3 μl of the compound was added to a final concentration of 2.5 μM. As a negative control, 3 μl of DMSO used as a solvent for the compound was added. The bacterial solution was cultured at 30 ° C for 24 hours. The growth of airborne bacteria was confirmed by measuring the absorbance of the cultured bacterial solution at a wavelength of 600 nm, then the airborne bacteria were removed and the tube was washed once with 300 μl of PBS. Bacteria forming biofilms were stained with 0.1% crystal violet solution at room temperature for 15 minutes, washed twice with tertiary distilled water, and all bacteria forming biofilms were extracted from the tube with 95% ethanol. Absorbance at a wavelength of 570 nm. The biofilm forming ability was measured by measuring and dividing by the absorbance measured at 600 nm.

이에 대한 결과를 도 6에 나타내었다. The results for this are shown in FIG. 6 .

도 6A에 나타낸 바와 같이, 223604와 195925 화합물은 미처리 대조군과 비교해 A. baumannii ATCC 17978 균의 균막형성을 2.5 μM 농도에서 각각 66%를 저해하는 것으로 나타났다. 또한 도 6B처럼 195925 화합물은 0.63 μM 농도부터, 223604 화합물은 0.31 μM 농도부터 농도의존적으로 통계적으로 유의하게 균막형성을 저해시켰다. As shown in FIG. 6A, the 223604 and 195925 compounds inhibited the formation of A. baumannii ATCC 17978 bacteria by 66% at a concentration of 2.5 μM, respectively, compared to the untreated control group. In addition, as shown in FIG. 6B, compound 195925 inhibited biofilm formation statistically and significantly in a concentration-dependent manner from a concentration of 0.63 μM and a compound of 223604 from a concentration of 0.31 μM.

실시예 6: 선별 화합물의 야생주에서의 균성장 억제 여부Example 6: Whether selection compounds inhibit bacterial growth in wild strains

항병원성 제제(anti-virulence)는 야생형 균주의 병원성인자는 저해하지만, 균의 성장은 저해하지 않아야 하므로 선별한 2종의 화합물인 223604와 195925를 대상으로 야생형 균주에 에서의 성장억제 여부를 다음과 같은 방법에 따라 평가하였다. Anti-virulence inhibits the pathogenic factors of the wild-type strain, but should not inhibit the growth of the fungus. Therefore, the two selected compounds, 223604 and 195925, were tested for inhibition of growth in the wild-type strain as follows. It was evaluated according to the same method.

구체적으로, wild-type A. baumannii ATCC 17978균을 10 ml의 Luria-Bertani(LB) broth에 접종하여 16시간 동안 37oC에서 150 rpm으로 진탕 배양하였다. 균 배양액을 8,000 rpm에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 제거한 다음 phosphate-buffered saline(PBS)에 재부유하여 600 nm의 흡광도에서 값이 1.0이 될 때까지 희석하여 균액을 준비하였다. 96-well microplate에 well당 6.0 x 105개 세균이 들어가도록 Mueller-Hinton broth(MHB)에 희석한 균액 50 μl를 넣었다. 이 후 15종의 화합물을 최대 농도 10 μM부터 2배씩 well에 들어있는 MHB에 계단희석하여 50 μl씩 화합물을 첨가하였다. 이때 화합물이 들어있지 않은 well도 대조군으로 추가하였다. 각 well에 kanamycin이 없는 MHB 50 μl를 추가하여 well당 전체 용액이 150 μl가 되도록 하였다. 곧바로 VersaMax microplate reader기를 이용하여 흡광도 600 nm에서 0시간에 해당되는 흡광도 값을 측정하였다. 이 후 96-well plate를 37oC에서 24시간 동안 정치 배양한 후 흡광도를 측정하였다. 화합물 자체에 의한 흡광도의 영향을 제외하고자 24시간에서 0시간에 해당되는 흡광도 값을 구한 후 각 균을 약물을 처리하지 않은 그룹과 비교하여 값을 구하였다. Specifically, wild-type A. baumannii ATCC 17978 was inoculated into 10 ml of Luria-Bertani (LB) broth and cultured for 16 hours at 37 ° C. with shaking at 150 rpm. After centrifuging the bacterial culture at 8,000 rpm for 5 minutes, the supernatant was removed, and then re-suspended in phosphate-buffered saline (PBS) and diluted until the absorbance value at 600 nm was 1.0 to prepare a bacterial solution. 50 μl of the bacterial solution diluted in Mueller-Hinton broth (MHB) was added to a 96-well microplate to contain 6.0 x 10 5 bacteria per well. Thereafter, the 15 compounds were diluted stepwise in MHB contained in the well by 2 times from the maximum concentration of 10 μM, and the compound was added by 50 μl. At this time, wells containing no compound were also added as a control. 50 μl of kanamycin-free MHB was added to each well to make the total solution per well 150 μl. Immediately, the absorbance value corresponding to 0 hour was measured at 600 nm using a VersaMax microplate reader. Thereafter, the 96-well plate was incubated at 37 ° C for 24 hours, and then the absorbance was measured. In order to exclude the effect of the absorbance by the compound itself, the absorbance values corresponding to 24 hours to 0 hours were obtained, and then the values were obtained by comparing each bacteria with the group not treated with the drug.

이에 대한 결과를 도 7에 나타내었다. The results of this are shown in FIG. 7 .

도 7에 나타낸 바와 같이, 223604와 195925 화합물은 야생형 균주에 대해서는 성장을 저해하지는 않지만, reporter strain에 대해서만 성장을 억제하는 것으로 확인되어 항병원성 제제(anti-virulence)로 사용될 수 있음을 확인하였다. As shown in Figure 7, it was confirmed that the 223604 and 195925 compounds did not inhibit the growth of the wild-type strain, but inhibited the growth only of the reporter strain and could be used as anti-virulence.

실시예 7: 세포독성 평가Example 7: Cytotoxicity evaluation

상기 실시예에서 확인한 바와 같이, 본 발명의 223604와 195925 화합물은 우수한 항병원성(anti-virulence) 효과를 나타내었으나, 아무리 우수한 활성을 나타내는 화합물이더라도 세포독성이 있으면 약물로서 개발이 어렵기 때문에 본 발명자는 223604와 195925 화합물의 세포독성을 평가하였다. As confirmed in the above examples, the 223604 and 195925 compounds of the present invention showed excellent anti-virulence effects, but even if the compounds exhibit excellent activity, it is difficult to develop them as drugs if they have cytotoxicity. The cytotoxicity of compounds 223604 and 195925 was evaluated.

구체적으로, 사람 세포에서의 223604와 195925 화합물의 세포독성을 확인하기 위하여, 화합물의 최종농도가 1, 10, 100, 1000, 10000 nM 되게 사람 단핵구 세포주인 U937세포에 처리하였다. 우선 96-well plate에 well당 4.0 x 104개의 U937 세포를 넣은 후 화학식 I의 화합물을 농도별로 처리하였다. 세포배양은 37oC에서 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 이 후 WST1 용액(다카라)을 첨가하고 3시간 동안 반응시킨 후 세포 생존율을 파장 450 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 흡광도 값을 약물을 처리하지 않은 그룹과 비교하여 값을 산출하였다.Specifically, in order to confirm the cytotoxicity of the 223604 and 195925 compounds in human cells, U937 cells, a human monocyte cell line, were treated at final concentrations of 1, 10, 100, 1000, and 10000 nM. First, 4.0 x 10 4 U937 cells per well were placed in a 96-well plate, and then the compound of Formula I was treated at each concentration. Cell culture was cultured at 37 ° C for 24 hours in a CO 2 incubator. Thereafter, a WST1 solution (Takara) was added and reacted for 3 hours, and the absorbance value obtained by measuring the absorbance at a wavelength of 450 nm for cell viability was compared with the group not treated with the drug to calculate the value.

이에 대한 결과를 도 8에 나타내었다. The results for this are shown in FIG. 8 .

도 8에 나타낸 바와 같이, 10 μM에서도 아무런 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다. As shown in Figure 8, it was confirmed that no toxicity was shown even at 10 μM.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 병원성 세균에 대해서 직접적인 살균효과를 나타내지 않으면서 병원성 단백질인 외막단백질 A(outer membrane protein A)의 유전자 및 단백질의 발현을 저해하므로, 항병원성 제제(anti-virulence agent)로 사용될 수 있다. 또한, OmpA의 과발현과 밀접한 관련이 있는 바이오필름의 형성을 억제할 수 있어 병원성 세균의 감염에 의한 감염성 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있어 산업상 이용가능성이 높다. Since the compound of Formula I of the present invention inhibits the expression of the gene and protein of outer membrane protein A, which is a pathogenic protein, without showing a direct bactericidal effect on pathogenic bacteria, it is an anti-virulence agent. can be used as In addition, since it can inhibit the formation of biofilms closely related to the overexpression of OmpA, it can be effectively used for the prevention and treatment of infectious diseases caused by infection with pathogenic bacteria, and thus has high industrial applicability.

Claims (12)

하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 대한 항병원성(anti-virulence) 조성물.
[화학식 I]
Figure pat00020

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.
[화학식 II]
Figure pat00021

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.
a compound of Formula I or II; Or an anti-pathogenic (anti-virulence) composition for pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Formula I]
Figure pat00020

In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.
[Formula II]
Figure pat00021

In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.
 제1항에 있어서, 상기 세균은 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 아시네토박터 칼코아세티쿠스(Acinetobacter calcoaceticus), 아시네토박터 헤모리티쿠스(Acinetobacter haemolyticus), 아시네토박터 주니(Acinetobacter junii), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 아시네토박터 리워피(Acinetobacter lwoffii), 아시네토박터 라디오레시스텐스(Acinetobacter radioresistens), 아시네토박터 우르신지(Acinetobacter ursingii), 아시네토박터 쉰들러리(Acinetobacter schindleri), 아시네토박터 파르부스(Acinetobacter parvus), 아시네토박터 베이리(Acinetobacter baylyi), 아시네토박터 보우베티(Acinetobacter bouvetii), 아시네토박터 토우너리(Acinetobacter towneri), 아시네토박터 탄도이(Acinetobacter tandoii), 아시네토박터 그리몬티(Acinetobacter grimontii), 아시네토박터 셰른버지아(Acinetobacter tjernbergiae), 및 아시네토박터 게르너리(Acinetobacter gerneri), 액티노바실러스 플레우로뉴모니아에(Actinobacillus pleuropneumoniae), 액티노바실러스 수이스(Actinobacillus suis), 어그레가티박터 액티노마이세템코니탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미디아 카비아에(Chlamydia caviae), 클라미디아 뮤리다룸(Chlamydia muridarum), 클라미도필라 뉴모니아에(Chlamydophila pneumoniae), 클라미도필라 시타키(Chlamydophila psittaci), 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii), 대장균(Escherichia coli), 플라포박테리움 사이크로필룸(Flavobacterium psychrophilum), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 해모필러스 마라수이스(Haemophilus parasuis), 히스토필러스 솜니(Histophilus somni), 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 렙토스피라 인테로간스(Leptospira interrogans), 마네미아 해몰리티카(Mannheimia haemolytica), 네이세리아 고노호에아(Neisseria gonorrhoeae), 네이세리아 메닝기티디스(Neisseria meningitidis), 파스튜렐라 뮬토시다(Pasteurella multocida), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 리에머렐라 안나티페스티퍼(Riemerella anatipestifer), 살모넬라(Salmonella spp) 또는 여시니아(Yersinia spp)인 것을 특징으로 하는 항병원성 조성물.
The method of claim 1, wherein the bacteria are Acinetobacter baumannii , Acinetobacter calcoaceticus, Acinetobacter haemolyticus , Acinetobacter junii ), Acinetobacter johnsonii, Acinetobacter johnsonii, Acinetobacter lwoffii , Acinetobacter radioresistence , Acinetobacter ursinji ( Acinetobacter ursingii ), Acinetobacter Schindleri ( Acinetobacter schindleri ), Acinetobacter parvus, Acinetobacter parvus, Acinetobacter baylyi, Acinetobacter bouvetii , Acinetobacter bouvetii , Acinetobacter towneri, Acinetobacter tandoii ), Acinetobacter grimontii ( Acinetobacter grimontii ), Acinetobacter shernbergiae ( Acinetobacter tjernbergiae ), and Acinetobacter gerneri ( Acinetobacter gerneri ), Actinobacillus pleuropneumoniae ( Actinobacillus pleuropneumoniae ), Actino Bacillus suis ( Actinobacillus suis ), Aggregatibacter actinomycetem comitans ( Aggregatibacter actinomycetemcomitans ), Chlamydia trachomatis ( Chlamydia trachomatis ), Chlamydia caviae ( Chlamydia caviae ), Chlamydia muridarum ( Chlamydia muridarum ), Clar Midophila pneumoniae ( Chlamydophila pneumoniae ), Chlamydophila psittaci ( Chlamydophila psittaci ), Cronobacter sakazakii ( Cronobacter sakazakii ), Escherichia coli ( Escherichia coli ), Flavobacterium cyclophilum ( Flavobacterium psychrophilum ), Haemophilus Haemophilus influenzae, Haemophilus parasuis, Histophilus somni , Klebsiella pneumoniae , Leptospira interrogans , Manemia Haemolytica , Neisseria gonorrhoeae , Neisseria meningitidis, Pasteurella multocida , Pseudomonas aeruginosa , Riemerella annatipestifer ( Riemerella anatipestifer ), Salmonella ( Salmonella spp ) Or Yersinia ( Yersinia spp ) Antipathogenic composition, characterized in that.
 제1항에 있어서, 상기 화합물은 병원성(virulence) 물질인 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA) 유전자의 발현을 억제하여 항병원성 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항병원성 조성물.
The antipathogenic composition according to claim 1, wherein the compound exhibits antipathogenic activity by inhibiting the expression of outer membrane protein A (OmpA) gene, which is a virulence substance.
 제1항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 1의 화합물이고, 상기 화학식 II의 화합물은 하기 화학식 2의 화합물인 것을 특징으로 하는 항병원성 조성물:
[화학식 1]
Figure pat00022

[화학식 2]
Figure pat00023

The antipathogenic composition according to claim 1, wherein the compound of formula I is a compound of formula 1, and the compound of formula II is a compound of formula 2:
[Formula 1]
Figure pat00022

[Formula 2]
Figure pat00023

 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 의한 감염성 질병의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing and treating infectious diseases caused by pathogenic bacteria, comprising the composition according to any one of claims 1 to 4 as an active ingredient.
 제5항에 있어서, 상기 감염성 질병은 종기, 다래끼, 농가진 및 부스럼 같은 피부염, 후두염, 폐렴, 유방염, 정맥염, 방광염, 뇌막염, 장염, 요로 감염, 골수염, 각막염, 수막염, 전립선염, 심내막염, 화농성 질환, 전쟁 상부(war wound), 식중독, 폐혈증, 균혈증, 결핵 및 독성 쇼크 증후군(toxic shock syndrome)으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
The method of claim 5, wherein the infectious disease is boil, sty, impetigo and boil-like dermatitis, laryngitis, pneumonia, mastitis, phlebitis, cystitis, meningitis, enteritis, urinary tract infection, osteomyelitis, keratitis, meningitis, prostatitis, endocarditis, purulent disease , A pharmaceutical composition characterized in that it is selected from the group consisting of war wound, food poisoning, sepsis, bacteremia, tuberculosis and toxic shock syndrome.
 제5항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 항생제, 소염제, 기질 메탈로프로테아제 억제제, 리폭시게나제 억제제, 사이토카인 길항제, 면역 억제제, 항암제, 항바이러스제, 사이토카인, 성장 인자, 면역 조절제, 프로스타글란딘, 항-혈관 과다 증식 화합물 및 항생제에 대한 세균성 미생물의 감수성을 증가시키는 약제로 이루어진 군에서 선택된 치료제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
The method of claim 5, wherein the pharmaceutical composition is antibiotics, anti-inflammatory agents, matrix metalloprotease inhibitors, lipoxygenase inhibitors, cytokine antagonists, immunosuppressive agents, anticancer agents, antiviral agents, cytokines, growth factors, immune modulators, prostaglandins, anti-inflammatory agents. - A pharmaceutical composition characterized in that it further comprises a therapeutic agent selected from the group consisting of vascular hyperproliferative compounds and agents that increase the sensitivity of bacterial microorganisms to antibiotics.
 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균의 바이오필름(biofilm) 억제용 조성물.
[화학식 I]
Figure pat00024

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.
[화학식 II]
Figure pat00025

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.
a compound of Formula I or II; Or a composition for inhibiting biofilm of pathogenic bacteria comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Formula I]
Figure pat00024

In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.
[Formula II]
Figure pat00025

In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.
 제8항에 있어서, 상기 세균은 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumannii), 아시네토박터 칼코아세티쿠스(Acinetobacter calcoaceticus), 아시네토박터 헤모리티쿠스(Acinetobacter haemolyticus), 아시네토박터 주니(Acinetobacter junii), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 아시네토박터 리워피(Acinetobacter lwoffii), 아시네토박터 라디오레시스텐스(Acinetobacter radioresistens), 아시네토박터 우르신지(Acinetobacter ursingii), 아시네토박터 쉰들러리(Acinetobacter schindleri), 아시네토박터 파르부스(Acinetobacter parvus), 아시네토박터 베이리(Acinetobacter baylyi), 아시네토박터 보우베티(Acinetobacter bouvetii), 아시네토박터 토우너리(Acinetobacter towneri), 아시네토박터 탄도이(Acinetobacter tandoii), 아시네토박터 그리몬티(Acinetobacter grimontii), 아시네토박터 셰른버지아(Acinetobacter tjernbergiae), 및 아시네토박터 게르너리(Acinetobacter gerneri), 액티노바실러스 플레우로뉴모니아에(Actinobacillus pleuropneumoniae), 액티노바실러스 수이스(Actinobacillus suis), 어그레가티박터 액티노마이세템코니탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 클라미디아 카비아에(Chlamydia caviae), 클라미디아 뮤리다룸(Chlamydia muridarum), 클라미도필라 뉴모니아에(Chlamydophila pneumoniae), 클라미도필라 시타키(Chlamydophila psittaci), 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii), 대장균(Escherichia coli), 플라포박테리움 사이크로필룸(Flavobacterium psychrophilum), 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 해모필러스 마라수이스(Haemophilus parasuis), 히스토필러스 솜니(Histophilus somni), 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 렙토스피라 인테로간스(Leptospira interrogans), 마네미아 해몰리티카(Mannheimia haemolytica), 네이세리아 고노호에아(Neisseria gonorrhoeae), 네이세리아 메닝기티디스(Neisseria meningitidis), 파스튜렐라 뮬토시다(Pasteurella multocida), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 리에머렐라 안나티페스티퍼(Riemerella anatipestifer), 살모넬라(Salmonella spp) 또는 여시니아(Yersinia spp)인 것을 특징으로 하는 바이오필름 억제용 조성물.
The method of claim 8, wherein the bacteria are Acinetobacter baumannii , Acinetobacter calcoaceticus, Acinetobacter hemolyticus, Acinetobacter haemolyticus, Acinetobacter junii ), Acinetobacter johnsonii, Acinetobacter johnsonii, Acinetobacter lwoffii , Acinetobacter radioresistence , Acinetobacter ursinji ( Acinetobacter ursingii ), Acinetobacter Schindleri ( Acinetobacter schindleri ), Acinetobacter parvus, Acinetobacter parvus, Acinetobacter baylyi, Acinetobacter bouvetii , Acinetobacter bouvetii , Acinetobacter towneri, Acinetobacter tandoii ), Acinetobacter grimontii ( Acinetobacter grimontii ), Acinetobacter shernbergiae ( Acinetobacter tjernbergiae ), and Acinetobacter gerneri ( Acinetobacter gerneri ), Actinobacillus pleuropneumoniae ( Actinobacillus pleuropneumoniae ), Actino Bacillus suis ( Actinobacillus suis ), Aggregatibacter actinomycetem comitans ( Aggregatibacter actinomycetemcomitans ), Chlamydia trachomatis ( Chlamydia trachomatis ), Chlamydia caviae ( Chlamydia caviae ), Chlamydia muridarum ( Chlamydia muridarum ), Clar Midophila pneumoniae ( Chlamydophila pneumoniae ), Chlamydophila psittaci ( Chlamydophila psittaci ), Cronobacter sakazakii ( Cronobacter sakazakii ), Escherichia coli ( Escherichia coli ), Flavobacterium cyclophilum ( Flavobacterium psychrophilum ), Haemophilus Haemophilus influenzae, Haemophilus parasuis, Histophilus somni , Klebsiella pneumoniae , Leptospira interrogans , Manemia Haemolytica , Neisseria gonorrhoeae , Neisseria meningitidis, Pasteurella multocida , Pseudomonas aeruginosa , A composition for inhibiting biofilm, characterized in that it is Riemerella anatipestifer , Salmonella spp or Yersinia spp .
 제8항에 있어서, 상기 화합물은 외막단백질 A(outer membrane protein A, OmpA) 유전자의 발현을 억제함으로써 바이오필름(biofilm) 형성을 억제하는 것을 특징으로 하는 바이오필름 억제용 조성물.
[Claim 9] The composition for inhibiting biofilm according to claim 8, wherein the compound suppresses the formation of a biofilm by suppressing the expression of outer membrane protein A (OmpA) gene.
 하기 화학식 I 또는 II의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물.
[화학식 I]
Figure pat00026

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, n은 0 내지 4의 정수이다.
[화학식 II]
Figure pat00027

상기 식에서, R은 각각 독립적으로 할로이며, m은 0 내지 3의 정수이다.
a compound of Formula I or II; Or an antiviral composition comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Formula I]
Figure pat00026

In the above formula, each R is independently halo, and n is an integer from 0 to 4.
[Formula II]
Figure pat00027

In the above formula, each R is independently halo, and m is an integer from 0 to 3.
 제11항에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물, 피부 외용제 조성물 또는 의약외품 조성물인 것을 특징으로 하는 항바이러스용 조성물. The antiviral composition according to claim 11, wherein the composition is a cosmetic composition, an external composition for skin, or a quasi-drug composition.
KR1020210173891A 2021-12-07 2021-12-07 Novel use of compound having anti-virulence activity and anti-biofilm formation activity KR20230085579A (en)

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