KR20230075710A - COMPOSITION FOR TREATING CANCER HAVING mutantS ON EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR - Google Patents

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KR20230075710A
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배성진
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소재현
김선건
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부산대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 또는 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor)에 대한 약물 저항성을 갖는 암에서 우수한 암 세포 사멸 효과를 나타내는 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이에 의해 항암제 내성을 나타내는 개체를 효과적으로 치료할 수 있다. 또한, 본 발명은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 통해서 개체의 항암제에 대한 저항성 또는 이의 발현 가능성을 확인할 수 있고, 이에 PDK1 저해제를 이용해서 저항성을 극복하고 항암 효능을 향상시킬 수 있다 The present invention relates to pyruvate dehydrogenase kinase 1 (pyruvate dehydrogenase kinase), which exhibits excellent cancer cell killing effect in cancer with epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation or drug resistance to tyrosine kinase inhibitors. 1; It relates to a composition containing a PDK1) inhibitor, which can effectively treat a subject exhibiting anticancer drug resistance due to epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation. In addition, the present invention can confirm resistance to anticancer drugs or the possibility of expression thereof through epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation, and thus overcome resistance and improve anticancer efficacy using PDK1 inhibitors.

Description

상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 조성물{COMPOSITION FOR TREATING CANCER HAVING mutantS ON EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR} Composition for treating cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation {COMPOSITION FOR TREATING CANCER HAVING mutantS ON EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR}

본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 포함하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 또는 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor)에 대한 약물 저항성을 갖거나 가질 것으로 예상되는 개체의 치료용 약학적 조성물, 항암제 민감성 개선용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 통해서 개체의 항암제에 대한 저항성 또는 이의 발현 가능성을 확인하여 암 치료를 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to cancers with epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations including pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitors or drug resistance to tyrosine kinase inhibitors, or It relates to a pharmaceutical composition for treatment of a subject expected to have, and a composition for improving sensitivity to anticancer drugs. In addition, the present invention relates to a method for providing information for cancer treatment by confirming resistance to an anticancer agent or expression possibility of an individual through epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation.

상피세포성장인자수용체(Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR)의 신호 경로는 암세포의 성장에 중요한 역할을 하고 있다. 그래서 EGFR은 고형암의 치료에 있어서 분자 표적 항암제의 표적 단백질로 주목을 받고 있다(Methods Mol Biol. 2017;1652:3-35). 기존에 저분자 약물로서 1세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) 티로신 인산화효소 저해제(TKI)로 제피티닙(Gefitinib)과 엘로티닙(Erlotinib)이 개발되었고, 특히 exon 21에 858번째 류신(leucine)이 아르기닌(arginine)으로 바뀐 L858R 돌연변이 혹은 상피세포성장인자수용체(EGFR) exon 19 결실을 지닌 환자에게 뛰어난 효과가 있었다(Science, 2004, Vol 304, Issue 5676). 하지만, 제피티닙이나 엘로티닙의 치료 후 내성을 나타내는 환자 중 50% 정도가 T790M 변이를 획득하는 것이 밝혀졌다(J Thorac Oncol. 2009, Jan;4(1):1-4). 또한 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI로 T790M 변이를 표적으로 하는 오시머티닙(Osimertinib)이 개발되어 임상에 사용되고 있지만, 상피세포성장인자수용체(EGFR) exon 20에 797번째 있는 시스테인(cysteine)이 세린(serine)으로 치환된 C797S 변이가 추가로 발생하면서 오시머티닙에 대한 저항성을 보였다(JAMA Oncol, 2015;1(7):1112-1115). 따라서 폐암 등에서 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI에 대한 저항성을 가지는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이를 극복할 수 있는 효과적인 치료법을 개발이 필요하다. The epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling pathway plays an important role in the growth of cancer cells. Therefore, EGFR has attracted attention as a target protein for molecularly targeted anticancer drugs in the treatment of solid cancer (Methods Mol Biol. 2017; 1652: 3-35). Previously, as small-molecule drugs, Gefitinib and Erlotinib were developed as first-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitors (TKIs). In particular, the 858th leucine in exon 21 There was an excellent effect on patients with L858R mutation changed to arginine or epidermal growth factor receptor (EGFR) exon 19 deletion (Science, 2004, Vol 304, Issue 5676). However, it was found that about 50% of patients showing resistance after treatment with gefitinib or erlotinib acquired the T790M mutation (J Thorac Oncol. 2009, Jan;4(1):1-4). In addition, Osimertinib, which targets the T790M mutation as a third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI, has been developed and is being used clinically, but cysteine, located at position 797 in exon 20 of the epidermal growth factor receptor (EGFR), has been developed. ) showed resistance to osimertinib (JAMA Oncol, 2015; 1(7): 1112-1115) as the C797S mutation in which serine was substituted was additionally generated. Therefore, it is necessary to develop an effective treatment that can overcome epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutations with resistance to third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKIs in lung cancer.

종래에 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이에 관한 저해제 연구를 위해서는 생쥐의 pro-B 세포주인 Ba/F3 세포를 이용하여 해당 변이 상피세포성장인자수용체(EGFR) 유전자를 과발현한 다음, 저해효능을 확인하는 모델을 일반적으로 사용하였다(Target Oncol. 2018 Jun;13(3):389-398). 그러나 Ba/F3 세포주는 생쥐 기원의 혈액암 세포주로서 인간의 폐암과는 유전자 및 단백질 발현, 대사적 특성 등에서 차이가 있을 수 있다. 또한, 기존에 사용하던 폐암 세포에 변이형의 EGFR을 과발현하는 모델도(Curr Opin Oncol. 2007 Jan;19(1):55-60), 원래 발현하는 내재형 EGFR의 발현이 존재하기 때문에 EGFR의 변이에 따른 폐암 세포의 유전자 및 대사적 차이를 확인하기에는 부족한 부분이 있다. Conventionally, in order to study inhibitors related to mutations in epidermal growth factor receptor (EGFR), the mutant epidermal growth factor receptor (EGFR) gene was overexpressed using Ba/F3 cells, a pro-B cell line of mice, and then the inhibitory effect was measured. An identifying model was commonly used (Target Oncol. 2018 Jun; 13(3):389-398). However, the Ba/F3 cell line is a blood cancer cell line of mouse origin and may differ from human lung cancer in gene and protein expression and metabolic characteristics. In addition, a model that overexpresses a mutant EGFR in lung cancer cells that have been used previously (Curr Opin Oncol. 2007 Jan;19(1):55-60), since the expression of the originally expressed endogenous EGFR exists, EGFR There are insufficient parts to identify genetic and metabolic differences in lung cancer cells according to mutations.

따라서, EGFR의 변이에 따른 항암제 저항성과 유전적, 대사적 차이를 연구하기 위해서는 내재형 EGFR의 발현을 완전히 제거한 후에 변이형의 EGFR을 재발현(re-expression)시키는 모델의 구축이 필요하다. Therefore, in order to study anticancer drug resistance and genetic and metabolic differences according to EGFR mutations, it is necessary to construct a model that completely removes the expression of endogenous EGFR and then re-expresses the mutant EGFR.

선행 연구에서 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1)의 활성을 저해함으로써 다양한 암 세포주에 대하여 항암효능을 나타냄을 확인하였다(Biochem J. 1974 Sep;141(3):761-774; Bioorg Med Chem Lett. 1999 Aug 2;9(15):2223-2228; Cancers (Basel). 2019 May 23;11(5):712). 그러나 PDK1의 저해를 통하여 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이, 특히 삼중 변이에 따른 EGFR-TKI 저항성 암세포에 대한 저해 활성이 있는지는 확인된 바 없다. In previous studies, it was confirmed that anticancer effects were exhibited against various cancer cell lines by inhibiting the activity of pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) (Biochem J. 1974 Sep; 141(3):761-774; Bioorg Med Chem Lett. 1999 Aug 2;9(15):2223-2228; Cancers (Basel). 2019 May 23;11(5):712). However, it has not been confirmed whether inhibition of PDK1 has inhibitory activity against epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations, particularly EGFR-TKI-resistant cancer cells according to triple mutations.

따라서, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이, 특히 삼중 변이에 따른 저항성 암세포에 대한 효과적 치료를 위한 치료제의 개발이 필요한 실정이다. Therefore, there is a need to develop a therapeutic agent for effective treatment of epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations, particularly resistant cancer cells caused by triple mutations.

상기한 문제점을 해결하기 위한 취지에서, 본 발명의 목적은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 암 또는 티로신 인산화효소 저해제(TKI)에 대한 약물 저항성을 갖거나 가질 것으로 예상되는 개체를 치료하고, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 개체에서 항암제 민감성 개선을 위한 성분 또는 제제를 개발하는데 있다. In order to solve the above problems, an object of the present invention is to treat subjects who have or are expected to have drug resistance to epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cancer or tyrosine kinase inhibitors (TKI), and epithelial To develop a component or preparation for improving anticancer drug sensitivity in cancer subjects having cell growth factor receptor (EGFR) mutations.

또한, 본 발명의 다른 목적은 암 개체에 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1에 대한 동반진단을 위한 정보를 제공하는데 있다. Another object of the present invention is to provide information for companion diagnosis of pyruvate dehydrogenase kinase 1 to cancer subjects.

이에 본 발명의 발명자는 암 종에 따른 대사적 차이를 연구하기 위해 내재형 EGFR의 발현을 완전히 제거한 후에 변이형의 EGFR을 재발현(re-expression)시키는 모델을 구축하고, EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 갖는 암 세포주가 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI인 오시머티닙(Osimertinib)에 대한 저항성을 가지며, DCA, 렐라민, 및 후잔고시드 A와 같은 PDK1 저해제를 투여하였을 때, 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI에 대한 저항성 세포에 대한 항암활성을 나타냄을 확인하였다. 특히, PDK1 저해제가 야생형(wild-type) EGFR의 A549 세포(인간 비소세포성폐암 세포주)에 비하여 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이인 L858R/T790M/C797S 또는 19del/T790M/C797S를 가진 A549에 대하여 더 뛰어난 세포 성장 억제 효과가 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다. Accordingly, the inventors of the present invention constructed a model to re-express the mutant EGFR after completely removing the expression of endogenous EGFR in order to study metabolic differences according to cancer types, EGFR exon 19 deletion, L858R Cancer cell lines having two or more mutations selected from the group consisting of substitution, T790M substitution, and C797S substitution have resistance to osimertinib, a third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI, DCA, and relamin When PDK1 inhibitors such as , and fuzangoside A were administered, it was confirmed that they exhibit anticancer activity against cells resistant to epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI. In particular, compared to wild-type EGFR A549 cells (human non-small cell lung cancer cell line), the PDK1 inhibitor was used for epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutation L858R/T790M/C797S or A549 with 19del/T790M/C797S. It was confirmed that there is a more excellent cell growth inhibitory effect on, and the present invention was completed.

상기 목적을 달성하기 위한 수단으로서, 본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물을 제공한다. As a means for achieving the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient provides

다른 수단으로서, 본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는, 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 대한 약물 저항성 암 치료용 약학적 조성물을 제공한다. As another means, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating drug-resistant cancer against a tyrosine kinase inhibitor (TKI), comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient provides

또 다른 수단으로서, 본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 개체의 항암제 민감성 개선용 조성물을 제공한다. As another means, the present invention provides a composition for improving anticancer drug sensitivity of cancer subjects having epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations, comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient to provide.

또 다른 수단으로서, 본 발명은 암 개체로부터 얻은 시료에서 상피세포성장인자수용체(EGFR)의 유전 정보를 확인하는 단계를 포함하는 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제에 대한 동반진단(companion diagnostics)을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. As another means, the present invention provides an accompanying method for a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor comprising the step of confirming the genetic information of epidermal growth factor receptor (EGFR) in a sample obtained from a cancer subject. A method for providing information for companion diagnostics is provided.

상기 정보를 제공하는 방법은 상기 시료에서 암세포 내 발현되는 상피세포성장인자수용체가 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 경우, 상기 개체에 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제의 투여가 필요하거나; 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제와 티로신 인산화효소 저해제 (TKI)의 병용투여가 필요하다는 정보를 제공하는 단계를 더 포함할 수 있다. The method for providing the information is, when the epidermal growth factor receptor expressed in cancer cells in the sample contains two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution, the subject administration of an epipyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor is required; The method may further include providing information that a combined administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor and a tyrosine kinase inhibitor (TKI) is required.

상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 것 일 수 있다. 또한, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환을 포함하는 것 일 수 있다.The epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation may include two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution. In addition, the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation is L858R and T790M substitution; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitutions.

상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암은 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 저항성 암 일 수 있다. Cancer having the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation may be a tyrosine kinase inhibitor (TKI) resistant cancer.

상기 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)는 제피니닙(Gefitinib), 오시머티닙(Osimertinib), 엘로티닙(Erlotinib), 아파티닙(afatinib), 및 다코미티닙(dacomitinib)으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. The tyrosine kinase inhibitor (TKI) is a group consisting of Gefitinib, Osimertinib, Erlotinib, Afatinib, and dacomitinib may be selected from

상기 PDK1 저해제는 렐라민(Leelamine), 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA), 후잔고시드 A(Huzhangoside A), 오토바페놀(otobaphenol), JX06, VER-246608 및 AZD 7545으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. The PDK1 inhibitor may be selected from the group consisting of Leelamine, Dichloroacetic acid (DCA), Huzhangoside A, otobaphenol, JX06, VER-246608 and AZD 7545 there is.

본 발명에 따른 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 또는 이에 따라 티로신 인산화효소 저해제에 저항성을 갖는 암의 치료에 우수한 효과를 갖는 바, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 암을 효과적을 치료할 수 있고, 상기 암을 갖는 개체에서 항암제에 대한 저항성을 효과적으로 개선할 수 있다. 또한, 암 개체의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 확인하여 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제에 대한 동반진단을 위한 정보를 제공할 수 있어, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이의 치료에 유용하게 사용될 수 있다. The pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor according to the present invention has an excellent effect in the treatment of cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation or a cancer resistant to tyrosine kinase inhibitors accordingly, epithelial cells Growth factor receptor (EGFR) mutated cancer can be effectively treated, and resistance to anticancer drugs can be effectively improved in individuals with the cancer. In addition, it is possible to provide information for companion diagnosis of pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor by confirming epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation in cancer subjects, It can be useful for treatment.

도 1a 및 도 1b는 본 발명의 일 실시예에 따른 상피세포성장인자수용체(EGFR) 넉아웃 세포주와 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 세포주를 구축하는 과정을 나타낸 모식도이다.
도 2a 내지 도 2d는 본 발명의 일 실시예에 따른 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주의 EGFR 티로신 인산화효소 저해제(TKI)인 제피티닙(도 2a 및 2c)과 오시머티닙(도 2b 및 2d)에 대한 저항성을 확인한 결과를 보여준다:
WT 또는 EGFRWT - A549-wtEGFR 세포주; R - A549-L858R 세포주;
RM - A549-L858R/T790M 세포주; RMS - A549-L858R/T790M/C797S 세포주;
EGFR19D 또는 19D - A549-19del 세포주: EGFR19DM 또는 19DM - A549-19del/T790M 세포주;
EGFR19DMS 또는 19DMS - A549-19del/T790M/C797S 세포주.
도 3a 및 3b는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 세포주에서의 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1 발현 및 PDHA1 인산화 증가를 확인한 결과를 보여준다:
WT - A549-wtEGFR 세포주; R - A549-L858R 세포주;
RM - A549-L858R/T790M 세포주; RMS - A549-L858R/T790M/C797S 세포주;
19D - A549-19del 세포주: 19DM - A549-19del/T790M 세포주;
19DMS - A549-19del/T790M/C797S 세포주.
도 4a는 DCA의 구조를 나타낸다.
도 4b는 PDK1 저해제(DCA)의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주에 대한 세포독성을 확인한 결과를 보여준다:
WT - A549-wtEGFR 세포주;
RMS - A549-L858R/T790M/C797S 세포주; 및
19DMS - A549-19del/T790M/C797S 세포주.
도 4c는 렐라민의 구조를 나타낸다.
도 4d는 PDK1 저해제(렐라민)의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주에 대한 세포독성을 확인한 결과를 보여준다:
WT - A549-wtEGFR 세포주;
RMS - A549-L858R/T790M/C797S 세포주; 및
19DMS - A549-19del/T790M/C797S 세포주.
도 4e는 후잔고시드 A(Huzhangoside A)의 구조를 나타낸다.
도 4f는 PDK1 저해제(후잔고시드 A)의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주에 대한 세포독성을 확인한 결과를 보여준다:
WT - A549-wtEGFR 세포주;
RMS - A549-L858R/T790M/C797S 세포주; 및
19DMS - A549-19del/T790M/C797S 세포주.
도 4g는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주에서 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1의 억제에 따른 암세포의 세포사멸을 유도하는 기전을 도식화한 것이다.Figures 1a and 1b is a schematic diagram showing a process for constructing an epidermal growth factor receptor (EGFR) knockout cell line and an epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutant cell line according to an embodiment of the present invention.
2a to 2d are epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines according to an embodiment of the present invention, which are EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKIs), gefitinib (FIGS. 2a and 2c) and osimertinib (FIG. 2b). and 2d) shows the results of confirming the resistance to:
WT or EGFR WT - A549-wtEGFR cell line; R - A549-L858R cell line;
RM - A549-L858R/T790M cell line; RMS - A549-L858R/T790M/C797S cell line;
EGFR 19D or 19D - A549-19del cell line: EGFR 19DM or 19DM - A549-19del/T790M cell line;
EGFR 19DMS or 19DMS - A549-19del/T790M/C797S cell line.
Figures 3a and 3b show the results confirming the increase in pyruvate dehydrogenase kinase 1 expression and PDHA1 phosphorylation in epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutant cell lines:
WT - A549-wtEGFR cell line; R - A549-L858R cell line;
RM - A549-L858R/T790M cell line; RMS - A549-L858R/T790M/C797S cell line;
19D - A549-19del cell line: 19DM - A549-19del/T790M cell line;
19DMS - A549-19del/T790M/C797S cell line.
Figure 4a shows the structure of DCA.
Figure 4b shows the results of confirming the cytotoxicity of PDK1 inhibitor (DCA) against epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines:
WT - A549-wtEGFR cell line;
RMS - A549-L858R/T790M/C797S cell line; and
19DMS - A549-19del/T790M/C797S cell line.
Figure 4c shows the structure of Rellamine.
Figure 4d shows the results of confirming the cytotoxicity of the PDK1 inhibitor (relamin) on epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines:
WT - A549-wtEGFR cell line;
RMS - A549-L858R/T790M/C797S cell line; and
19DMS - A549-19del/T790M/C797S cell line.
Figure 4e shows the structure of Huzhangoside A (Huzhangoside A).
Figure 4f shows the results of confirming the cytotoxicity of the PDK1 inhibitor (fuzangoside A) on epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines:
WT - A549-wtEGFR cell line;
RMS - A549-L858R/T790M/C797S cell line; and
19DMS - A549-19del/T790M/C797S cell line.
Figure 4g is a schematic diagram of the mechanism of inducing apoptosis of cancer cells according to inhibition of pyruvate dehydrogenase kinase 1 in epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines.

이하에서, 본 발명을 보다 상세하기 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 형태를 가질 수 있는 바, 이하에서 기술하는 특정 실시예 및 설명은 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명을 특정한 개시 형태에 대해 한정하려는 의도가 아니다. 본 발명의 범위는 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해된다. The present invention can have various changes and can have various forms, the specific embodiments and descriptions described below are only intended to aid understanding of the present invention, and are not intended to limit the present invention to specific disclosure forms no. It is understood that the scope of the present invention includes all modifications, equivalents and substitutes included in the spirit and scope of the present invention.

본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는 상피세포성장인자수용체(Epidermal growth factor receptor; EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient.

상기 상피세포성장인자수용체(Epidermal growth factor receptor; EGFR)는 EGF 패밀리의 티로신 인산화효소 결합 리간드 수용체로 다양한 신호 전달을 활성화한다. 상피세포성장인자수용체(EGFR)의 신호 경로는 암세포의 성장에 중요한 역할을 하며, 고형암에서 치료 표적으로 주목받고 있으나, 종래 개발된 상피세포성장인자수용체 티로신 인산화효소 저해제는 상피세포성장인자수용체(EGFR)에서 변이를 유발하며, 이러한 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 포함하는 암 세포는 티로신 인산화효소 저해제 대하여 저항성이 발현되는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 여전히 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 암에 대한 치료제 개발이 필요한 실정이다. 본 발명에서 상기 EGFR의 유전 정보는 UniProt(P00533), NCBI 등의 데이터베이스의 유전자, mRNA 및 단백질 정보를 참고할 수 있다. 예를 들어, UniProt 및 Swiss-Prot에는 P00533의 참조번호로 단백질 정보를 확인할 수 있고, NCBI에서는 Gene ID 1956으로 유전자 정보를 확인할 수 있고, 핵산 서열의 정보는 NM_005228로 등록된 정보를 참고할 수 있다. The epidermal growth factor receptor (EGFR) is a tyrosine kinase-binding ligand receptor of the EGF family and activates various signal transductions. The signaling pathway of the epidermal growth factor receptor (EGFR) plays an important role in the growth of cancer cells and is attracting attention as a treatment target in solid cancers. However, previously developed epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors ), and cancer cells containing these epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations have been found to express resistance to tyrosine kinase inhibitors. Therefore, there is still a need to develop a therapeutic agent for epidermal growth factor receptor (EGFR) mutated cancer. In the present invention, genetic information of the EGFR may refer to gene, mRNA, and protein information of databases such as UniProt (P00533) and NCBI. For example, in UniProt and Swiss-Prot, protein information can be identified with reference number P00533, gene information can be identified with Gene ID 1956 in NCBI, and information registered as NM_005228 can be referred to for nucleic acid sequence information.

상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 변이를 포함할 수 있다. 일 예로, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 두 개 이상의 변이를 포함하는 다중변이 일 수 있다. 상기 다중 변이는 변이 중 하나로 EGFR T790M 변이를 포함할 수 있다. 다른 일 예로, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환 변이이거나 이를 포함할 수 있다. The epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation may include a mutation selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution. For example, the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation may be multiple mutations including two or more mutations. The multiple mutations may include the EGFR T790M mutation as one of the mutations. In another example, the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation is L858R and T790M substitution; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitution mutations, or may include them.

종래의 티로신 인산화효소 저해제인 제피티닙이나 엘로티닙은 EGFR 엑손 19 결실 또는 엑손 21에 858번째 류신(leucine)이 아르기닌(arginine)으로 바뀐 L858R 돌연변이를 가진 환자에서 효과가 뛰어난 것으로 확인되었으나, 제피티닙이나 엘로티닙의 치료 후 내성을 갖는 환자 중 50% 정도가 T790M 변이를 획득한 것이 확인 되었다. 이에 대응해서 EGFR T790M 변이를 타겟으로하는 오시머티닙(Osimertinib)이 개발되었으나, EGFR 엑손 20에 797번째 있는 시스테인(cysteine)이 세린(serine)으로 치환된 C797S 변이가 추가로 나타나면서, 종래의 티로신 인산화효소 저해제에 대한 내성이 나타나, 암의 치료에 어려움을 겪고 있다. Conventional tyrosine kinase inhibitors, gefitinib or erlotinib, have been found to be effective in patients with EGFR exon 19 deletion or L858R mutation in exon 21, in which leucine at position 858 is changed to arginine. It was confirmed that about 50% of patients with resistance after treatment with nip or erlotinib acquired the T790M mutation. In response, Osimertinib targeting the EGFR T790M mutation was developed, but as the C797S mutation in which cysteine at position 797 in EGFR exon 20 was replaced with serine was additionally found, the conventional tyrosine Resistance to kinase inhibitors has appeared, making it difficult to treat cancer.

이러한 측면에서, 본 발명의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환; 또는 L858R, T790M 및 C797S 치환의 삼중 변이 일 수 있다. In this respect, epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations of the present invention include EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitutions; or a triple mutation of L858R, T790M and C797S substitutions.

본 발명의 일 실시예에서는 EGFR 엑손 19과 T790M 및 C797S 치환을 갖는 EGFR 삼중변이 A549 암 세포주와 L858R, T790M 및 C797S 치환을 갖는 EGFR 삼중변이 세포주가 오시머티닙에 저항성을 가짐을 확인하였고, 이러한 저항성 암 세포주에 PDK1 저해제를 처리한 경우, 야생형 EGFR을 발현하는 암 세포주 대비 저항성 암 세포주에 더욱 우수한 항암 효과를 나타냄을 확인하였다. In one embodiment of the present invention, it was confirmed that the EGFR triple mutation A549 cancer cell line having EGFR exon 19, T790M and C797S substitutions and the EGFR triple mutation cell line having L858R, T790M and C797S substitutions were resistant to osimertinib, and these resistance When the cancer cell line was treated with the PDK1 inhibitor, it was confirmed that a more excellent anticancer effect was exhibited in the resistant cancer cell line compared to the cancer cell line expressing wild-type EGFR.

이러한 측면에서 본 발명의 암 치료용 약학적 조성물은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물 일 수 있다. 상기 삼중 변이는 EGFR 엑손 19과 T790M 및 C797S 치환(19del/T790M/C797S) 또는 L858R, T790M 및 C797S 치환(L858R/T790M/C797S) 일 수 있다. In this aspect, the pharmaceutical composition for treating cancer of the present invention may be a pharmaceutical composition for treating cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutation. The triple mutation may be EGFR exon 19 with T790M and C797S substitution (19del/T790M/C797S) or L858R, T790M and C797S substitution (L858R/T790M/C797S).

상기 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제는 인간 PDK1의 유전자 또는 단백질에 특이적으로 작용하여 PDK1 유전자 또는 단백질 저해제의 발현 또는 활성을 억제 또는 저해시키는 효과를 갖는 제제로서의 항 PDK1 치료제를 모두 포함하는 의미이다. 일 예로, PDK1의 발현을 억제함으로써 PDHA1의 인산화 증가를 방지하여 세포 사멸이 감소하는 현상을 막을 수 있음을 본 발명에서 새롭게 밝혔다. 구체적으로, PDK1의 발현이 증가하면 PDHA1의 인산화가 증가하여, PDH 콤플렉스의 활성이 감소하게 되고, 피루브산(pyruvate)이 아세틸-CoA(Acetyl-CoA)로 전환되지 않고 젖산(lactate)으로 발효됨으로써, 암세포에 해당촉진성(glycolytic)의 특성이 부여되며, 이로 인하여 미토콘드리아 내 전자전달계(ETC)에서 ROS의 생성이 감소하여 세포사멸이 감소하게 된다. 그러나, 본 발명에서는 EGFR 삼중변이 세포주에서 PDK1의 발현을 억제함으로써 PDHA1의 인산화 증가를 억제할 수 있음을 새롭게 밝혔고, 이러한 기작을 통해서 EGFR 변이 암 세포의 세포사멸을 효과적으로 유도할 수 있음을 확인하였다. The pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor specifically acts on the gene or protein of human PDK1 to suppress or inhibit the expression or activity of the PDK1 gene or protein inhibitor Anti-PDK1 as an agent having an effect This means that all treatments are included. For example, it was newly discovered in the present invention that suppressing the expression of PDK1 can prevent the increase in phosphorylation of PDHA1, thereby preventing the decrease in cell death. Specifically, when the expression of PDK1 increases, the phosphorylation of PDHA1 increases, the activity of the PDH complex decreases, and pyruvate is not converted to acetyl-CoA and fermented to lactate, Cancer cells are endowed with glycolytic properties, which reduces the production of ROS in the mitochondrial electron transport chain (ETC), thereby reducing apoptosis. However, in the present invention, it was newly discovered that the phosphorylation increase of PDHA1 can be inhibited by inhibiting the expression of PDK1 in EGFR triple mutant cell lines, and it was confirmed that apoptosis of EGFR mutant cancer cells can be effectively induced through this mechanism.

상기 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1)의 발현 저해제는 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오타이드, 작은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA), 짧은 헤어핀 RNA(short hairpin RNA; shRNA) 및 CRISPR/CAS9으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상 일 수 있다.The expression inhibitor of pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) is an antisense nucleotide complementary to mRNA, small interfering RNA (siRNA), short hairpin RNA (shRNA), and CRISPR/CAS9. It may be one or more selected from the group consisting of

상기 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1)의 활성 저해제는 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 천연 또는 합성화합물, 펩티드, 펩티드 미메틱스, 앱타머 및 항체로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. The activity inhibitor of pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) may be at least one selected from the group consisting of natural or synthetic compounds, peptides, peptide mimetics, aptamers, and antibodies that specifically bind to the protein.

상기 천연 또는 합성화합물은 렐라민(Leelamine), 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA), 후잔고시드 A(Huzhangoside A), 오토바페놀(otobaphenol), JX06, VER-246608 및 AZD 7545로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. 상기한 천연 또는 합성 화합물은 통상적인 유기 합성 방법으로 합성하거나 시판되는 시약을 구입하여 사용할 수 있다. The natural or synthetic compound is selected from the group consisting of Leelamine, Dichloroacetic acid (DCA), Huzhangoside A, otobaphenol, JX06, VER-246608 and AZD 7545 it could be The natural or synthetic compounds described above may be synthesized by a conventional organic synthesis method or may be used by purchasing commercially available reagents.

상기 렐라민(Leelamine)은 하기 화학식 1의 구조를 갖는 것으로, 종래에 멜라닌종의 성장을 지연시키는 것으로 밝혀졌으나, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암에서 특이적으로 우수한 암세포 사멸 활성을 가짐은 알려진 바 없다.The relamine (Leelamine) has a structure of Formula 1 below, and has been previously found to delay the growth of melanoma, but has excellent cancer cell killing activity specifically in cancers having epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations. possession is unknown.

[화학식 1][Formula 1]

Figure pat00001
Figure pat00001

상기 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA)는 아세트산의 유사체로 CHCl2COOH의 구조를 가지며, 피루브산 탈수소효소 키나아제를 저해하여 피루브산 탈수소효소의 활성을 높이는 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나 DCA가 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암에서 특이적으로 우수한 암세포 사멸 활성을 가짐은 알려진 바 없다.Dichloroacetic acid (DCA) is an analog of acetic acid, has a structure of CHCl 2 COOH, and is known to inhibit pyruvate dehydrogenase kinase to increase the activity of pyruvate dehydrogenase. However, it is not known that DCA has excellent cancer cell killing activity specifically in cancers having epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations.

상기 후잔고시드 A는 올레인산의 배당체인 트리터페노이드계 사포닌의 일종으로 호장초(Anemone rivularis Buch.-Ham. ex DC.)의 성분으로 처음 분리되었으며(Planta Med, 1984, 50:327), 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1)의 활성을 저해함으로써, MDA-MB231 유방암세포, HT29 대장암세포, Hep3B 간암세포, DLD-1 대장암세포의 성장을 억제하는 것으로 알려져 있다(Cancers, 2019, 11(5):712). 그러나 후잔고시드 A가 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암에서 특이적으로 우수한 암세포 사멸 활성을 가짐은 알려진 바 없다.The fuzangoside A is a kind of triterpenoid-based saponin, which is a glycoside of oleic acid, and was first isolated as a component of Anemone rivularis Buch.-Ham. ex DC. (Planta Med, 1984, 50:327), and pyruvic acid. It is known to inhibit the growth of MDA-MB231 breast cancer cells, HT29 colorectal cancer cells, Hep3B liver cancer cells, and DLD-1 colorectal cancer cells by inhibiting the activity of dehydrogenase kinase 1 (PDK1) (Cancers, 2019, 11(5) :712). However, it is not known that fuzangoside A has excellent cancer cell killing activity specifically in cancers having epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations.

후잔고시드 A는 다음 화학식 2의 구조식을 가질 수 있다.Fuzangoside A may have the following structural formula (2).

[화학식 2] [Formula 2]

Figure pat00002
Figure pat00002

본 발명의 일 실시예에서는 렐라민(Leelamine), 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA), 또는 후잔고시드 A(Huzhangoside A)를 각각 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 (19del/T790M/C797S 또는 L858R/T790M/C797S)를 갖는 암 세포에 처리한 경우, 야생형 EGFR을 갖는 암 세포주 대비 더욱 우수한 항암 활성을 나타냄을 실험적으로 확인하였다. In one embodiment of the present invention, each of Leelamine, dichloroacetic acid (DCA), or Huzhangoside A (EGFR) triple mutation (19del / T790M / C797S or L858R/T790M/C797S), it was experimentally confirmed that they showed superior anticancer activity compared to cancer cell lines having wild-type EGFR.

본 발명에서 암은 EGFR 관련 암질환이라면 모두 포함하는 의미이다. 일 예로 상기 암은 고형암일 수 있다. 또한, 비제한적인 예로 상기 암은 폐암, 결장암 또는 유방암일 수 있다. 상기 폐암은 비소세포성 폐암을 포함할 수 있다. In the present invention, cancer is meant to include all EGFR-related cancer diseases. For example, the cancer may be a solid cancer. In addition, as a non-limiting example, the cancer may be lung cancer, colon cancer or breast cancer. The lung cancer may include non-small cell lung cancer.

또한, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암은 변이에 의하여 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 저항성을 가질 수 있다는 점에서, 티로신 인산화효소 저해제 저항성 암 일 수 있다. In addition, cancer having the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation may be tyrosine kinase inhibitor-resistant cancer in that it may have resistance to tyrosine kinase inhibitor (TKI) by mutation.

본 발명에서 용어 "저항성"은 "내성"이라고도 하며, 특정 약제에 대하여 유의적으로 세포성 또는 생물학적 반응을 나타내지 않는 것을 의미한다. 구체적으로 약제를 이용한 치료에 대해 암세포의 사멸 속도 또는 세포 사멸이 나타나지 않거나, 감소하는 것을 의미한다. In the present invention, the term "resistance" is also referred to as "resistance", and means not showing a significant cellular or biological response to a specific drug. Specifically, it means that the death rate or cell death of cancer cells does not appear or decreases for treatment using a drug.

상기 티로신 인산화효소 저해제(TKI)는 티로신 인산화효소를 표적으로 하여 이의 발현, 활성화 등을 억제하는 기능을 나타내는 것이라면 모두 본 발명에 포함된다. 일 예로, 제피니닙(Gefitinib), 오시머티닙(Osimertinib), 엘로티닙(Erlotinib), 아파티닙(afatinib), 및 다코미티닙(dacomitinib)으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. The tyrosine kinase inhibitor (TKI) is included in the present invention as long as it exhibits a function of inhibiting the expression, activation, etc. of tyrosine kinase as a target. For example, it may be selected from the group consisting of Gefitinib, Osimertinib, Erlotinib, Afatinib, and dacomitinib, but is not limited thereto. no.

본 발명의 일 실시예에서 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 세포주는 야생형 EGFR과 달리 티로신 인산화효소(TKI)에 저항성을 나타냄을 확인하였고, 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1 저해제를 처리하여 저항성 암 세포주에 더욱 우수한 사멸 활성을 가짐을 확인하였다. In one embodiment of the present invention, it was confirmed that a cancer cell line having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation exhibits resistance to tyrosine kinase (TKI), unlike wild-type EGFR, and is treated with a pyruvate dehydrogenase kinase 1 inhibitor to achieve resistance It was confirmed to have a more excellent killing activity in cancer cell lines.

이러한 측면에서, 본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는, 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 대한 약물 저항성 암 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 상기 약물 저항성 암은 개체가 TKI 에 대한 약물 저항성을 갖거나 가질 것으로 예상되는 암을 모두 포함한다. In this respect, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating drug-resistant cancer against a tyrosine kinase inhibitor (TKI), comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient It is about. The drug-resistant cancer includes all cancers in which a subject has or is expected to have drug resistance to TKIs.

중복된 기재를 피하기 위해서, 상기한 암 치료용 약학적 조성물에 대한 부분에서 기술한 내용은 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 대한 약물 저항성 암 치료용 약학적 조성물에 대한 부분에도 그대로 준용된다. In order to avoid redundant description, the description in the section on the pharmaceutical composition for the treatment of cancer above applies mutatis mutandis to the section on the pharmaceutical composition for the treatment of drug-resistant cancer for tyrosine kinase inhibitors (TKIs) do.

본 발명은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 개체의 항암제 민감성 개선용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for improving sensitivity to anticancer agents of cancer subjects having epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations, comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient.

본 발명의 항암제 민감성 개선을 위한 조성물은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 개체에 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1을 처리하여 암 세포가 갖는 항암제에 대한 내성(또는 저항성)을 낮추고, 약제에 대한 투여 개체의 반응성을 높여 치료제의 효과를 향상시키고 예후를 좋게 하는 것을 의미한다. The composition for improving sensitivity to anticancer drugs of the present invention lowers the resistance (or resistance) of cancer cells to anticancer drugs by treating an individual having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation with pyruvate dehydrogenase kinase 1, and It means to improve the effect of the treatment by increasing the responsiveness of the administered subject and to improve the prognosis.

중복된 기재를 피하기 위해서, 상기한 암 치료용 약학적 조성물에 대한 부분에서 기술한 내용은 항암제 민감성 개선을 위한 조성물에 대한 부분에도 그대로 준용된다. In order to avoid redundant description, the description in the section on the pharmaceutical composition for treating cancer is also applied mutatis mutandis to the section on the composition for improving sensitivity to anticancer drugs.

본 발명은 암 개체로부터 얻은 시료에서 상피세포성장인자수용체(EGFR)의 유전 정보를 확인하는 단계를 포함하는 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제에 대한 동반진단(companion diagnostics)을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. The present invention is a companion diagnostics for a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor comprising the step of confirming the genetic information of epidermal growth factor receptor (EGFR) in a sample obtained from a cancer subject. Provides a way to provide information for

본 발명에서 용어 “동반진단(companion diagnostic)”이란 특정 치료 약물을 특정 환자에 적용하기 위한 가능성을 확인하기 위한 진단 테스트 중 하나를 의미하는 것으로, 본 발명에서는 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제의 적용 가능성을 확인하기 위해 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 암을 갖는 개체에서 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 동반진단 마커로서 활용할 수 있다. 따라서, 본 발명에서 동반진단은 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제 투여의 필요성 또는 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제와 티로신 인산화효소 저해제 (TKI)의 병용투여가 필요하다는 정보를 제공하기 위한 것 일 수 있다.In the present invention, the term "companion diagnostic" means one of the diagnostic tests for confirming the possibility of applying a specific therapeutic drug to a specific patient, and in the present invention, a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor In order to confirm the applicability of epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations in individuals with cancer, epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations can be utilized as a companion diagnostic marker. Therefore, the accompanying diagnosis in the present invention is to provide information on the need for administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor or the need for combined administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor and a tyrosine kinase inhibitor (TKI). may be for

본 발명에서 표현 "투여의 필요성"이란 치료제(약물)에 대한 치료효과를 얻을 수 있거나 얻을 수 있다고 예상되는 개체에 대하여 상기 치료제의 투여 여부를 결정하기 위한 것으로, 상기 결정은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이의 유/무, 수, 종류 근거해서 수행할 수 있다. In the present invention, the expression "necessity of administration" is to determine whether or not to administer the therapeutic agent to a subject that can obtain or is expected to obtain a therapeutic effect for the therapeutic agent (drug), and the determination is made by epidermal growth factor receptor ( EGFR) can be performed based on the presence/absence, number, and type of mutation.

본 발명에서 암 개체로부터 얻은 시료에서 상피세포성장인자수용체(EGFR)의 유전정보를 확인하는 것은 본 발명의 기술분야에서 단백질 또는 핵산의 유전정보를 확인하기 위한 방법을 제한 없이 이용할 수 있다. 비 제한적인 예로 차세대 시퀀싱(NGS), 항체, 프로브 등을 이용해서 특정 부위의 서열을 확인할 수 있다. In the present invention, confirming the genetic information of the epidermal growth factor receptor (EGFR) in a sample obtained from a cancer subject can be used without limitation in the method for confirming the genetic information of a protein or nucleic acid in the technical field of the present invention. As a non-limiting example, the sequence of a specific region can be identified using next-generation sequencing (NGS), antibodies, probes, and the like.

이러한 측면에서, 본 발명의 정보를 제공하는 방법은 상기 시료에서 암세포 내 발현되는 상피세포성장인자수용체가 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 경우, 상기 개체에 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제의 투여가 필요하거나; 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제와 티로신 인산화효소 저해제 (TKI)의 병용투여가 필요하다는 정보를 제공하는 단계를 더 포함할 수 있다. In this respect, the method for providing information of the present invention is an epidermal growth factor receptor expressed in cancer cells in the sample is two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution If included, administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor to the subject is required; The method may further include providing information that a combined administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor and a tyrosine kinase inhibitor (TKI) is required.

상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 것 일 수 있다. 또한, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환을 포함하는 것 일 수 있다.The epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation may include two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution. In addition, the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation is L858R and T790M substitution; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitutions.

본 발명에서 용어 "시료"는 소변, 체액(혈액, 림프액 또는 조직액 등 포함) 또는 생검 조직일 수 있고, 바람직하게는 암을 갖는 개체로부터 얻은 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 암으로 의심되거나, 판별 또는 진단받은 개체로부터 얻은 것일 수 있다.In the present invention, the term "sample" may be urine, body fluid (including blood, lymph or tissue fluid, etc.) or biopsy tissue, preferably obtained from a subject having cancer, and more preferably epidermal growth factor receptor ( EGFR) mutation may be obtained from an individual who is suspected, identified, or diagnosed with cancer.

본 발명은 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 확인하는 제제를 포함하는, PDK1 저해제에 대한 동반진단(companion diagnostics)용 키트 또는 동반진단 시스템을 제공한다.The present invention provides a kit or companion diagnostic system for companion diagnostics for a PDK1 inhibitor, including an agent for confirming epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation.

상기 동반진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 대한 설명은 본 발명의 동반진단용 키트 또는 동반진단 시스템에 준용될 수 있다.The description of the method for providing information for companion diagnosis may be applied to the companion diagnosis kit or companion diagnosis system of the present invention.

상기 키트 또는 시스템은 개체에 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제의 투여가 필요하거나; 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(PDK1) 저해제와 티로신 인산화효소 저해제 (TKI)의 병용투여가 필요하다는 정보를 제공하기 위한 것일 수 있다.The kit or system requires administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor to the subject; It may be to provide information on the need for combined administration of a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor and a tyrosine kinase inhibitor (TKI).

상기 키트는 통상적인 유전자 복제수, mRNA 발현 및 단백질 정량 분석에 기반한 진단 키트를 제한 없이 포함한다. 예를 들어, 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, 단백질 키트 또는 어레이 키트일 수 있다. RT-PCR 키트의 경우, EGFR에 대한 특이적인 프라이머 쌍 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액, 데옥시뉴클레오티드(dNTP), Taq-폴리머라아제 및 역전사 효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제, 멸균수 등을 통상적으로 키트의 구성에 포함될 수 있는 것을 포함할 수 있다. 또한, 동반진단 키트 또는 시스템을 위한 통상적인 기술이 본 발명에 적용될 수 있다.The kits include, without limitation, diagnostic kits based on conventional gene copy number, mRNA expression, and protein quantitative analysis. For example, the kit can be a RT-PCR kit, a DNA chip kit, a protein kit or an array kit. For the RT-PCR kit, in addition to a pair of primers specific for EGFR, a test tube or other suitable container, reaction buffer, deoxynucleotides (dNTPs), enzymes such as Taq-polymerase and reverse transcriptase, DNase and RNase inhibitors, sterile The number and the like may include those that may normally be included in the configuration of the kit. In addition, conventional techniques for companion diagnostic kits or systems can be applied to the present invention.

중복된 기재를 피하기 위해서, 별도의 언급이 없는 한, 암 치료용 약학적 조성물, 항암제 민감성 개선을 위한 조성물 및 동반진단(companion diagnostics)을 위한 정보를 제공하는 방법에서 기술한 본 발명 각 구성에 대한 정의 및 설명은 동반진단 키트 또는 시스템에 그대로 준용된다. In order to avoid redundant description, unless otherwise specified, for each component of the present invention described in the pharmaceutical composition for cancer treatment, the composition for improving sensitivity to anticancer drugs, and the method for providing information for companion diagnostics Definitions and explanations are applied to the companion diagnostic kit or system as it is.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples. However, the following examples are only to illustrate the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

실시예 1. 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 세포주의 구축Example 1. Construction of epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutant cell line

1-1 상피세포성장인자수용체(EGFR) 넉아웃 세포주의 구축1-1 Construction of epidermal growth factor receptor (EGFR) knockout cell line

내재형의 EGFR의 발현을 완전히 없애기 위하여, 인간의 폐암 세포주인 A549 세포(American Type Culture Collection)에서 CRISPR/Cas9 시스템을 이용하여 내재형 EGFR의 발현을 없애고, EGFR-PE가 결합한 항체(ab27764; abcam)를 사용하여 유세포 분석기(FACS; BD FACS aria III)로 EGFR의 발현이 없는 세포를 분리하여 키운 다음, 웨스턴 블롯을 이용하여 EGFR의 발현이 없는 것을 확인하여 A549-EGFR K/O 세포주를 확보하였다. In order to completely abolish the expression of endogenous EGFR, the expression of endogenous EGFR was abolished in human lung cancer cell line A549 cells (American Type Culture Collection) using the CRISPR/Cas9 system, and the EGFR-PE bound antibody (ab27764; abcam ) using a flow cytometer (FACS; BD FACS aria III) to isolate and grow cells without EGFR expression, and then confirm the absence of EGFR expression using Western blot to secure A549-EGFR K / O cell line .

1-2 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 세포주를 구축1-2 Establishment of epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutant cell line

실시예 1-1에 따라 내재형 EGFR의 발현을 없앤 A549-EGFR K/O 세포주에 레트로바이러스를 매개로 하여 야생형(wild-type) EGFR(A549-wtEGFR); L858R 변이형 EGFR(A549-L858R); L858R/T790M 변이형 EGFR(A549-L858R/T790M); L858R/T790M/C797S 변이형 EGFR(A549-L858R/T790M/C797S); 19del 변이형 EGFR(A549-19del); 19del/T790M 변이형 EGFR(A549-19del/T790M); 및 19del/T790M/C797S 변이형 EGFR의 유전자(A549-19del/T790M/C797S)를 각각 재 발현시켰다. 푸로마이신(puromycin; Sigma-Aldrich) 항생제로 선별하여, 목적하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주(A549-wtEGFR, A549-L858R, A549-L858R/T790M, A549-L858R/T790M/C797S, A549-19del, A549-19del/T790M, A549-19del/T790M/C797S)를 각각 제작하였다.wild-type EGFR (A549-wtEGFR) via a retrovirus to the A549-EGFR K/O cell line in which expression of endogenous EGFR was eliminated according to Example 1-1; L858R variant EGFR (A549-L858R); L858R/T790M variant EGFR (A549-L858R/T790M); L858R/T790M/C797S variant EGFR (A549-L858R/T790M/C797S); 19del variant EGFR (A549-19del); 19del/T790M variant EGFR (A549-19del/T790M); and 19del/T790M/C797S mutant EGFR genes (A549-19del/T790M/C797S) were respectively re-expressed. Selected with puromycin (Sigma-Aldrich) antibiotic, epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines of interest (A549-wtEGFR, A549-L858R, A549-L858R/T790M, A549-L858R/T790M/C797S, A549 -19del, A549-19del/T790M, A549-19del/T790M/C797S) respectively.

실시예 2: 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 세포주의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저해제에 대한 저항성 확인 Example 2: Confirmation of resistance to epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors of epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutant cell lines

2-1. 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주의 제피티닙에 대한 저항성 생성 확인 2-1. Confirmation of resistance to gefitinib in epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines

상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포가 1세대 EGFR 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)인 제피티닙(Gefitinib; ZD 1839, 184475-35-2; cayman chemical)에 대한 저항성을 갖는지 확인하기 위해서, 실시예 1에서 제조한 A549-wtEGFR 세포주(WT), A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)를 각각 배양한 다음 제피티닙을 농도별(1μM, 5μM, 10μM, 50μM, 100μM)로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양한 세포를 이용하여 MTT 시험법으로 세포의 생존율을 확인하였다. To determine whether epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cells have resistance to Gefitinib (ZD 1839, 184475-35-2; cayman chemical), a first-generation EGFR tyrosine kinase inhibitor (TKI) To do this, the A549-wtEGFR cell line (WT), A549-L858R cell line (R), A549-L858R/T790M cell line (RM), and A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) prepared in Example 1 were cultured, respectively. Then, gefitinib was treated at different concentrations (1 μM, 5 μM, 10 μM, 50 μM, 100 μM) and cultured for 72 hours. Cell viability was confirmed by the MTT test method using the cultured cells.

또한, 제피티닙에 의한 EGFR의 인산화 및 하위 신호전달 억제를 확인하기 위하여, A549-wtEGFR 세포주(WT), A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)를 각각 배양한 다음 제피티닙을 농도별로 6시간 동안 처리한 후, EGF를 5분 동안 처리하였다. 그 다음 세포를 파쇄하여 단백질을 추출한 후 EGFR과 그의 하위 시그널인 AKT의 인산화 정도를 웨스턴 블롯으로 확인하였다.In addition, in order to confirm the inhibition of EGFR phosphorylation and downstream signaling by gefitinib, A549-wtEGFR cell line (WT), A549-L858R cell line (R), A549-L858R/T790M cell line (RM), A549-L858R/ After culturing the T790M/C797S cell line (RMS), each concentration was treated with gefitinib for 6 hours, and then treated with EGF for 5 minutes. Then, the cells were disrupted to extract proteins, and the phosphorylation level of EGFR and its sub-signal, AKT, was confirmed by Western blotting.

그 결과, 도 2a에 나타낸 바와 같이, 10μM의 농도에서 A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)에 제피티닙에 대한 저항성이 발생한 것을 확인하였다(도 2a의 왼쪽). 또한, A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)에서는 제피티닙을 처리하더라도 인산화가 억제되지 않음을 확인하였다. 이는 A549-L858R/T790M 세포주(RM)와 A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS) 에서 제피티닙에 대한 저항성이 생성된 것을 의미한다(도 2a의 오른쪽). As a result, as shown in FIG. 2a, it was confirmed that the A549-L858R/T790M cell line (RM) and the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) developed resistance to gefitinib at a concentration of 10 μM (FIG. 2a). left of). In addition, it was confirmed that phosphorylation was not inhibited in the A549-L858R/T790M cell line (RM) and the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) even when treated with gefitinib. This means that resistance to gefitinib was generated in the A549-L858R/T790M cell line (RM) and the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) (right side of FIG. 2a).

상기와 동일한 방법으로, A549-wtEGFR 세포주(EGFRWT 또는 WT), A549-19del 세포주(EGFR19D 또는 19D), A549-19del/T790M 세포주(EGFR19DM 또는 19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS 또는 19DMS)를 각각 배양한 다음, 제피티닙을 농도별(1μM, 5μM, 10μM, 50μM, 100μM)로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양한 세포를 이용하여 MTT 시험법으로 세포의 생존율을 확인하였다.In the same manner as above, the A549-wtEGFR cell line (EGFR WT or WT), the A549-19del cell line (EGFR 19D or 19D), the A549-19del/T790M cell line (EGFR 19DM or 19DM) and the A549-19del/T790M/C797S cell line ( EGFR 19DMS or 19DMS) was cultured, respectively, and then treated with gefitinib at different concentrations (1 μM, 5 μM, 10 μM, 50 μM, 100 μM) and cultured for 72 hours. Cell viability was confirmed by the MTT test method using the cultured cells.

또한, 제피티닙에 의한 EGFR의 인산화 및 하위 신호전달 억제를 확인하기 위하여, A549-wtEGFR 세포주(EGFRWT 또는 WT), A549-19del 세포주(EGFR19D 또는 19D), A549-19del/T790M 세포주(EGFR19DM 또는 19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS 또는 19DMS)를 각각 배양한 다음 제피티닙을 농도별로 6시간을 처리한 다음 EGF를 5분 동안 처리하였다. 그 다음 세포를 파쇄하여 단백질을 추출한 후 EGFR과 그의 하위 시그널인 AKT의 인산화 정도를 웨스턴 블롯으로 확인하였다.In addition, in order to confirm the inhibition of EGFR phosphorylation and downstream signaling by gefitinib, A549-wtEGFR cell line (EGFR WT or WT), A549-19del cell line (EGFR 19D or 19D), A549-19del / T790M cell line (EGFR 19DM or 19DM) and A549-19del/T790M/C797S cell lines (EGFR 19DMS or 19DMS) were cultured, respectively, treated with gefitinib at each concentration for 6 hours, and then treated with EGF for 5 minutes. Then, the cells were disrupted to extract proteins, and the phosphorylation level of EGFR and its sub-signal, AKT, was confirmed by Western blotting.

그 결과, 도 2c에 나타낸 바와 같이, 10μM 의 농도에서 A549-19del/T790M 세포주(EGFR19DM)와 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS)에서 제피티닙에 대한 저항성이 생긴 것을 확인하였다(도 2c의 왼쪽). 또한, A549-19del/T790M 세포주(EGFR19DM)와 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS)에서는 제피티닙에 의한 인산화의 감소가 일어나지 않음을 확인하였다. 이는 세포주가 제피티닙에 대한 저항성을 가짐을 의미한다(도 2c의 오른쪽).As a result, as shown in Figure 2c, it was confirmed that the A549-19del/T790M cell line (EGFR 19DM ) and the A549-19del/T790M/C797S cell line (EGFR 19DMS ) developed resistance to gefitinib at a concentration of 10 μM ( left in Fig. 2c). In addition, it was confirmed that the decrease in phosphorylation by gefitinib did not occur in the A549-19del/T790M cell line (EGFR 19DM ) and the A549-19del/T790M/C797S cell line (EGFR 19DMS ). This means that the cell line has resistance to gefitinib (right side of FIG. 2c).

2-2. 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이 세포주의 오시머티닙에 대한 저항성 생성 확인 2-2. Confirmation of resistance to osimertinib in epidermal growth factor receptor (EGFR) mutant cell lines

EGFR 변이 세포가 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI(tyrosine kinase inhibitor)인 오시머티닙(Osimertinib; AZD 9291,1421373-65-0; cayman chemical)에 대한 저항성을 갖는지 확인하기 위해서, 실시예 1에서 제조한 A549-wtEGFR 세포주(WT), A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)를 각각 배양한 다음 제피티닙을 농도별(1μM, 5μM, 10μM, 50μM, 100μM)로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양한 세포를 이용하여 MTT 시험법으로 세포의 생존율을 확인하였다. In order to confirm whether EGFR mutant cells have resistance to third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI (tyrosine kinase inhibitor) Osimertinib (AZD 9291, 1421373-65-0; cayman chemical), Example A549-wtEGFR cell line (WT), A549-L858R cell line (R), A549-L858R/T790M cell line (RM), and A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) prepared in 1 were cultured, respectively, and then gefitinib was administered. Each concentration (1 μM, 5 μM, 10 μM, 50 μM, 100 μM) was treated and cultured for 72 hours. Cell viability was confirmed by the MTT test method using the cultured cells.

또한, 오시머티닙에 의한 EGFR의 인산화 및 하위 신호전달 억제를 확인하기 위하여, A549-wtEGFR 세포주(WT), A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)를 각각 배양한 다음 오시머티닙을 농도별(1μM, 10μM)로 6시간 동안 처리한 후, EGF를 5분 동안 처리하였다. 그 다음 세포를 파쇄하여 단백질을 추출한 후 EGFR과 그의 하위 시그널인 AKT의 인산화 정도를 웨스턴 블롯으로 확인하였다.In addition, in order to confirm the inhibition of EGFR phosphorylation and downstream signaling by osimertinib, A549-wtEGFR cell line (WT), A549-L858R cell line (R), A549-L858R/T790M cell line (RM), A549-L858R/ T790M/C797S cell lines (RMS) were cultured, respectively, and treated with osimertinib at different concentrations (1 μM, 10 μM) for 6 hours, followed by EGF treatment for 5 minutes. Then, the cells were disrupted to extract proteins, and the phosphorylation level of EGFR and its sub-signal, AKT, was confirmed by Western blotting.

그 결과, 도 2b에 나타낸 바와 같이, 5μM의 농도에서 A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)에 오시머티닙에 대한 저항성이 발생한 것을 확인하였다(도 2b의 왼쪽). 또한, A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)에서는 오시머티닙을 처리하더라도 인산화가 억제되지 않음을 확인하였다. 이는 A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)가 오시머티닙에 대한 저항성을 가짐을 의미한다(도 2b의 오른쪽). As a result, as shown in FIG. 2b, it was confirmed that resistance to osimertinib developed in the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) at a concentration of 5 μM (left side of FIG. 2b). In addition, it was confirmed that phosphorylation was not inhibited in the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) even when osimertinib was treated. This means that the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) has resistance to osimertinib (right side of FIG. 2b).

상기와 동일한 방법으로, A549-wtEGFR 세포주(EGFRWT 또는 WT), A549-19del 세포주(EGFR19D 또는 19D), A549-19del/T790M 세포주(EGFR19DM 또는 19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS 또는 19DMS)를 각각 배양한 다음, 오시머티닙을 농도별(1μM, 5μM, 10μM, 50μM, 100μM)로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양한 세포를 이용하여 MTT 시험법으로 세포의 생존율을 확인하였다.In the same manner as above, the A549-wtEGFR cell line (EGFR WT or WT), the A549-19del cell line (EGFR 19D or 19D), the A549-19del/T790M cell line (EGFR 19DM or 19DM) and the A549-19del/T790M/C797S cell line ( EGFR 19DMS or 19DMS) was cultured, respectively, and then treated with osimertinib at different concentrations (1 μM, 5 μM, 10 μM, 50 μM, 100 μM) and cultured for 72 hours. Cell viability was confirmed by the MTT test method using the cultured cells.

또한, 오시머티닙에 의한 EGFR의 인산화 및 하위 신호전달 억제를 확인하기 위하여, A549-wtEGFR 세포주(EGFRWT 또는 WT), A549-19del 세포주(EGFR19D 또는 19D), A549-19del/T790M 세포주(EGFR19DM 또는 19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS 또는 19DMS)를 각각 배양한 다음 오시머티닙을 농도별(1μM, 10μM)로 6시간을 처리한 다음 EGF를 5분 동안 처리하였다. 그 다음 세포를 파쇄하여 단백질을 추출한 후 EGFR과 그의 하위 시그널인 AKT의 인산화 정도를 웨스턴 블롯으로 확인하였다.In addition, in order to confirm the inhibition of phosphorylation and downstream signaling of EGFR by osimertinib, A549-wtEGFR cell line (EGFR WT or WT), A549-19del cell line (EGFR 19D or 19D), A549-19del / T790M cell line (EGFR 19DM or 19DM) and A549-19del/T790M/C797S cell lines (EGFR 19DMS or 19DMS) were cultured, respectively, and treated with osimertinib at different concentrations (1 μM, 10 μM) for 6 hours and then with EGF for 5 minutes. Then, the cells were disrupted to extract proteins, and the phosphorylation level of EGFR and its sub-signal, AKT, was confirmed by Western blotting.

그 결과, 도 2d에 나타낸 바와 같이, 5μM 의 농도에서 A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS)가 오시머티닙에 대한 저항성을 나타냄을 확인하였다(도 2d의 왼쪽). 또한, A549-19del/T790M/C797S 세포주(EGFR19DMS)에서는 오시머티닙에 의한 인산화의 감소가 일어나지 않음을 확인하였다. 이는 세포주가 오시머티닙에 대한 저항성을 가짐을 의미한다(도 2d의 오른쪽).As a result, as shown in FIG. 2d, it was confirmed that the A549-19del/T790M/C797S cell line (EGFR 19DMS ) showed resistance to osimertinib at a concentration of 5 μM (left side of FIG. 2d). In addition, it was confirmed that phosphorylation by osimertinib did not decrease in the A549-19del/T790M/C797S cell line (EGFR 19DMS ). This means that the cell line has resistance to osimertinib (right side of FIG. 2d).

실시예 3: 상피세포성장인자수용체(EGFR) 삼중변이 세포주에서의 PDK1 발현 및 PDHA1 인산화 증가 확인Example 3: Confirmation of PDK1 expression and PDHA1 phosphorylation increase in epidermal growth factor receptor (EGFR) triple mutant cell lines

세포주 내 발현되는EGFR의 변이에 따라서 암세포의 당대사에서 핵심 효소인 PDK1의 발현 및 PDHA1의 인산화(Cell Metab. 2006 Mar;3(3):177-185)가 변화하는지 확인하기 위하여, 실시예 1에서 구축한 A549-wtEGFR 세포주(WT), A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS), A549-19del 세포주(19D), A549-19del/T790M 세포주(19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(19DMS)를 각각 배양한 후, 웨스턴블롯(Western blot)을 통하여 각 단백질의 발현량을 확인하였다. 웨스턴블롯에 사용된 항체의 정보는 EGFR (sc-373746; Santa Cruz), p-EGFR Y1068 (ab40815; abcam), p-AKT S473 (ab81283; abcam), AKT (ab126811; abcam), Actin (sc-8432; Santa Cruz), GAPDH (sc-47724; Santa Cruz), HSP90 (sc-69703; Santa Cruz), p-PDHA1 S293 (ab92696, abcam), PDHA1 (sc-377092; Santa Cruz), PDK1 (ADI-KAP-PK112; Enzo)와 같다. Example 1 A549-wtEGFR cell line (WT), A549-L858R cell line (R), A549-L858R/T790M cell line (RM), A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS), A549-19del cell line (19D), A549 After culturing the -19del/T790M cell line (19DM) and the A549-19del/T790M/C797S cell line (19DMS), respectively, the expression level of each protein was confirmed through Western blotting. Antibody information used for Western blot includes EGFR (sc-373746; Santa Cruz), p-EGFR Y1068 (ab40815; abcam), p-AKT S473 (ab81283; abcam), AKT (ab126811; abcam), Actin (sc- 8432; Santa Cruz), GAPDH (sc-47724; Santa Cruz), HSP90 (sc-69703; Santa Cruz), p-PDHA1 S293 (ab92696, abcam), PDHA1 (sc-377092; Santa Cruz), PDK1 (ADI- KAP-PK112; same as Enzo).

그 결과, 도 3a 및 3b에 나타낸 바와 같이, A549-wtEGFR 세포주(WT)에 비하여, A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS), A549-19del 세포주(19D), A549-19del/T790M 세포주(19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(19DMS) 모두에서 PDK1의 발현과 PDHA1의 인산화 정도가 증가한 것을 확인하였다. 특히 도 3a에서 나타내듯이 A549-wtEGFR 세포주(WT) 대비 A549 A549-L858R 세포주(R), A549-L858R/T790M 세포주(RM), A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS)로 EGFR에서 변이의 수가 축적될수록 PDK1의 발현과 PDHA1의 인산화가 증가하였다. 도 3b에서도 동일하게 A549-wtEGFR 세포주(WT) 대비 A549-19del 세포주(19D), A549-19del/T790M 세포주(19DM) 및 A549-19del/T790M/C797S 세포주(19DMS)로 EGFR에서 변이의 수가 축적될수록 PDK1의 발현과 PDHA1의 인산화가 증가하는 것을 보여준다.As a result, as shown in FIGS. 3a and 3b, compared to the A549-wtEGFR cell line (WT), the A549-L858R cell line (R), the A549-L858R/T790M cell line (RM), and the A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) ), PDK1 expression and PDHA1 phosphorylation were increased in A549-19del cell line (19D), A549-19del/T790M cell line (19DM), and A549-19del/T790M/C797S cell line (19DMS). In particular, as shown in Figure 3a, the number of mutations in EGFR in A549-wtEGFR cell line (WT) compared to A549 A549-L858R cell line (R), A549-L858R/T790M cell line (RM), and A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) As it accumulated, PDK1 expression and PDHA1 phosphorylation increased. 3b, as the number of mutations in EGFR accumulates in the A549-wtEGFR cell line (WT), the A549-19del cell line (19D), the A549-19del/T790M cell line (19DM), and the A549-19del/T790M/C797S cell line (19DMS) It shows that the expression of PDK1 and the phosphorylation of PDHA1 are increased.

실시예 4: 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저항성 세포주에 대한 PDK 저해제의 사멸능 확인Example 4: Confirmation of apoptotic ability of PDK inhibitors for epidermal growth factor receptor (EGFR) resistant cell lines

4-1. DCA의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저항성 세포주에 대한 세포 독성4-1. Cytotoxicity of DCA to epidermal growth factor receptor (EGFR) resistant cell lines

PDK1 저해제로 알려진 디클로로아세트산염(Dichloroacetate; DCA; 347795, Sigma-Aldrich; 도 4a; Biochem J. 1974 Sep;141(3):761-774)의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저해제 저항성 암세포에 대한 항암 효능을 확인하기 위하여 A549-wtEGFR세포주(WT)와 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI 오시머티닙에 저항성을 보인 A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS), A549-19del/T790M/C797S 세포주(19DMS)를 각각 배양하고 DCA(Sigma-Aldrich; 347795)를 농도별(10mM, 30mM, 50mM, 150mM, 200mM, 250mM, 및 300mM)로 24시간 동안 처리한 다음, MTT 시험법을 통하여 세포의 생존율을 확인하였다. Dichloroacetate (DCA; 347795, Sigma-Aldrich; FIG. 4a; Biochem J. 1974 Sep; 141(3):761-774), known as a PDK1 inhibitor, on epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitor-resistant cancer cells To confirm anticancer efficacy, A549-wtEGFR cell line (WT) and third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) showing resistance to osimertinib, A549-19del/T790M/ Each C797S cell line (19DMS) was cultured and treated with DCA (Sigma-Aldrich; 347795) at different concentrations (10mM, 30mM, 50mM, 150mM, 200mM, 250mM, and 300mM) for 24 hours, and then the cells were subjected to the MTT assay. survival rate was confirmed.

그 결과 도 4b에 나타낸 바와 같이, DCA는 인간 폐암 세포주인 A549에 대하여 항암효능을 나타내었으며, 10 내지 150 mM 농도에서는 야생형의 EGFR을 가진 세포주(WT)보다 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI에 대한 저항성 세포주인 A549-L858R/T790M/C797S(RMS) 와 A549-19del/T790M/C797S(19DMS)에서 더 뛰어난 암세포 성장 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.As a result, as shown in Figure 4b, DCA showed anticancer activity against human lung cancer cell line A549, and at a concentration of 10 to 150 mM, it was more effective in epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI than wild-type EGFR cell line (WT). It was confirmed that A549-L858R/T790M/C797S (RMS) and A549-19del/T790M/C797S (19DMS), which are resistant to cancer cell lines, showed more excellent cancer cell growth inhibitory effects.

4-2. Leelamine의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저항성 세포주에 대한 세포 독성4-2. Cytotoxicity of leelamine to epidermal growth factor receptor (EGFR) resistant cell lines

PDK1 저해제로 알려진 렐라민(Leelamine; dehydroabietylamine; ab120923, abcam; 도 4c; Bioorg Med Chem Lett. 1999 Aug 2;9(15):2223-2228)의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저해제 저항성 암세포에 대한 항암 효능을 확인하기 위하여 A549-wtEGFR세포주(WT)와 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI 오시머티닙에 저항성을 보인 A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS), A549-19del/T790M/C797S 세포주(19DMS)를 각각 배양하고 렐라민을 농도별(0.5μM, 1μM, 5μM, 10μM, 20μM, 25μM, 및 50μM)로 24시간 동안 처리한 다음, MTT 시험법을 통하여 세포의 생존율을 확인하였다. Relamine (Leelamine; dehydroabietylamine; ab120923, abcam; FIG. 4c; Bioorg Med Chem Lett. 1999 Aug 2;9(15):2223-2228) known as a PDK1 inhibitor on epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitor-resistant cancer cells To confirm anticancer efficacy, A549-wtEGFR cell line (WT) and third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) showing resistance to osimertinib, A549-19del/T790M/ The C797S cell line (19DMS) was cultured and treated with relamin at each concentration (0.5 μM, 1 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, 25 μM, and 50 μM) for 24 hours, and then cell viability was confirmed through the MTT test method. .

그 결과 도 4d에 나타낸 바와 같이, 렐라민은 인간 폐암 세포주인 A549에 대하여 항암효능을 나타내었으며, 5 내지 29μM 농도에서는 야생형의 EGFR을 가진 세포주(WT)보다 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI에 대한 저항성 세포주인 A549-L858R/T790M/C797S(RMS) 와 A549-19del/T790M/C797S(19DMS)에서 더 뛰어난 암세포 성장 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.As a result, as shown in Figure 4d, Rellamine exhibited anticancer efficacy against human lung cancer cell line A549, and at concentrations of 5 to 29 μM, it was more effective in epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI than wild-type EGFR cell line (WT). It was confirmed that A549-L858R/T790M/C797S (RMS) and A549-19del/T790M/C797S (19DMS), which are resistant to cancer cell lines, showed more excellent cancer cell growth inhibitory effects.

4-3. 후잔고시드 A(Huzhangoside A)에 의한 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저항성 세포주에 대한 세포 독성4-3. Cytotoxicity to epidermal growth factor receptor (EGFR) resistant cell lines by huzhangoside A

PDK1 저해제인 후잔고시드 A(96315-51-4; 한국한의약진흥원 천연물물질은행 제공; 도 4e; Cancers, 2019, 11(5):712)의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 저해제 저항성 암세포에 대한 항암 효능을 확인하기 위하여, A549-wtEGFR세포주(WT)와 3세대 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI 오시머티닙에 저항성을 보인 A549-L858R/T790M/C797S 세포주(RMS), A549-19del/T790M/C797S 세포주(19DMS)를 각각 배양하고 후잔고시드를 농도별(0.1μM, 0.5μM, 1μM, 5μM, 및 10μM)로 24시간 동안 처리한 다음, MTT 시험법을 통하여 세포의 생존율을 확인하였다. PDK1 inhibitor fuzangoside A (96315-51-4; provided by the Korea Institute of Oriental Medicine Natural Products Bank; Fig. 4e; Cancers, 2019, 11(5):712) on epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitor-resistant cancer cells To confirm anticancer efficacy, A549-wtEGFR cell line (WT) and third-generation epidermal growth factor receptor (EGFR) TKI A549-L858R/T790M/C797S cell line (RMS) showing resistance to osimertinib, A549-19del/T790M / C797S cell line (19DMS) was cultured and treated with Huzangoside at each concentration (0.1 μM, 0.5 μM, 1 μM, 5 μM, and 10 μM) for 24 hours, and then the cell viability was confirmed through the MTT test method.

그 결과, 도 4f에 나타낸 바와 같이, 후잔고시드 A는 인간 폐암 세포주인 A549에 대하여 항암효능을 나타내었으며, 0.1 내지 1 μM 농도에서는 야생형의 EGFR을 가진 세포주(WT)보다 상피세포성장인자수용체(EGFR) TKI에 대한 저항성 세포주인 A549-L858R/T790M/C797S(RMS) 와 A549-19del/T790M/C797S(19DMS)에서 더 뛰어난 암세포 성장 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 4f, fuzangoside A showed anticancer activity against the human lung cancer cell line A549, and at a concentration of 0.1 to 1 μM, epidermal growth factor receptor (EGFR) was higher than that of the wild-type EGFR cell line (WT). It was confirmed that A549-L858R/T790M/C797S (RMS) and A549-19del/T790M/C797S (19DMS), which are resistant to EGFR) TKI, showed a more excellent cancer cell growth inhibitory effect.

Claims (18)

피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for treating cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient. 제1항에 있어서,
상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 것인, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 1,
The epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation is an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation comprising two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution A pharmaceutical composition for the treatment of cancer having. 제2항에 있어서,
상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환을 포함하는 것인, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 2,
The epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations are L858R and T790M substitutions; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; Or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitution containing that, epidermal growth factor receptor (EGFR) a pharmaceutical composition for the treatment of cancer having a mutation. 제1항에 있어서,
상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암은 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 저항성 암인, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 1,
Cancer having the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation is a tyrosine kinase inhibitor (tyrosine kinase inhibitor; TKI) resistant cancer, epidermal growth factor receptor (EGFR) cancer treatment having a mutation pharmaceutical composition. 제4항에 있어서,
상기 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)는 제피니닙(Gefitinib), 오시머티닙(Osimertinib), 엘로티닙(Erlotinib), 아파티닙(afatinib), 및 다코미티닙(dacomitinib)으로 이루어진 군에서 선택된 것인, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 4,
The tyrosine kinase inhibitor (TKI) is a group consisting of Gefitinib, Osimertinib, Erlotinib, Afatinib, and dacomitinib A pharmaceutical composition for the treatment of cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation selected from. 제1항에 있어서,
상기 PDK1 저해제는 렐라민(Leelamine), 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA), 후잔고시드 A(Huzhangoside A), 오토바페놀(otobaphenol), JX06, VER-246608 및 AZD 7545로 이루어진 군에서 선택된 것인, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 1,
The PDK1 inhibitor is selected from the group consisting of Leelamine, Dichloroacetic acid (DCA), Huzhangoside A, otobaphenol, JX06, VER-246608 and AZD 7545 , A pharmaceutical composition for the treatment of cancer having an epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation. 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는, 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)에 대한 약물 저항성 암 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for treating drug-resistant cancer against a tyrosine kinase inhibitor (TKI), comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient. 제7항에 있어서,
상기 암은 상피세포성장인자수용체(EGFR)에서 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 포함하는, 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 7,
The cancer is for the treatment of cancer, including two or more epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution in epidermal growth factor receptor (EGFR) pharmaceutical composition. 제8항에 있어서,
상기 암은 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환의 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 포함하는 것인, 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 8,
The cancer has L858R and T790M substitutions; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; Or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitution of the epidermal growth factor receptor (EGFR) that will contain a mutation, a pharmaceutical composition for the treatment of cancer. 제7항에 있어서,
상기 PDK1 저해제는 렐라민(Leelamine), 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA), 후잔고시드 A(Huzhangoside A), 오토바페놀(otobaphenol), JX06, VER-246608 및 AZD 7545로 이루어진 군에서 선택된 것인, 암 치료용 약학적 조성물.According to claim 7,
The PDK1 inhibitor is selected from the group consisting of Leelamine, Dichloroacetic acid (DCA), Huzhangoside A, otobaphenol, JX06, VER-246608 and AZD 7545 , A pharmaceutical composition for the treatment of cancer. 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제를 유효성분으로 포함하는, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 개체의 항암제 민감성 개선용 조성물.A composition for improving sensitivity to anticancer drugs in cancer subjects having epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations, comprising a pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor as an active ingredient. 제11항에 있어서,
상기 항암제는 티로신 인산화효소 저해제(tyrosine kinase inhibitor; TKI)인, 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이를 갖는 암 개체의 항암제 민감성 개선용 조성물.According to claim 11,
The anticancer agent is a tyrosine kinase inhibitor (TKI), an epidermal growth factor receptor (EGFR) composition for improving the sensitivity of a cancer subject having a mutation. 제11항에 있어서,
상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 것인, 항암제 민감성 개선용 조성물.According to claim 11,
Wherein the epidermal growth factor receptor (EGFR) mutation comprises two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution, anticancer drug sensitivity improvement composition. 제11항에 있어서,
상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 변이는 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환을 포함하는 것인, 항암제 민감성 개선용 조성물.According to claim 11,
The epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations are L858R and T790M substitutions; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; Or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitution that will, anti-cancer drug sensitivity improvement composition. 제11항에 있어서,
상기 PDK1 저해제는 렐라민(Leelamine), 다이클로로아세트산(Dichloroacetic acid; DCA), 후잔고시드 A(Huzhangoside A), 오토바페놀(otobaphenol), JX06, VER-246608 및 AZD 7545로 이루어진 군에서 선택된 것인, 항암제 민감성 개선을 위한 조성물.According to claim 11,
The PDK1 inhibitor is selected from the group consisting of Leelamine, Dichloroacetic acid (DCA), Huzhangoside A, otobaphenol, JX06, VER-246608 and AZD 7545 , A composition for improving sensitivity to anticancer drugs. 암 개체로부터 얻은 시료에서 상피세포성장인자수용체(EGFR)의 유전 정보를 확인하는 단계;를 포함하는 피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제에 대한 동반진단(companion diagnostics)을 위한 정보를 제공하는 방법. Confirmation of epidermal growth factor receptor (EGFR) genetic information in a sample obtained from a cancer subject; for companion diagnostics for pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitors, including How to provide information. 제16항에 있어서,
상기 시료에서 암세포 내 발현되는 상피세포성장인자수용체가 EGFR 엑손 19 결실, L858R 치환, T790M 치환, 및 C797S 치환으로 이루어진 군에서 선택된 두 개 이상의 변이를 포함하는 경우, 상기 개체가 다음 중 하나 이상의 경우에 해당할 가능성에 대한 정보를 제공하는 단계;를 더 포함하는 동반진단을 위한 정보를 제공하는 방법:
피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제의 투여가 필요함; 또는
피루브산 탈수소효소 인산화효소 1(pyruvate dehydrogenase kinase 1; PDK1) 저해제와 티로신 인산화효소 저해제 (TKI)의 병용투여가 필요함.According to claim 16,
When the epidermal growth factor receptor expressed in cancer cells in the sample contains two or more mutations selected from the group consisting of EGFR exon 19 deletion, L858R substitution, T790M substitution, and C797S substitution, the subject is one or more of the following cases A method for providing information for companion diagnosis, further comprising: providing information on a corresponding possibility;
Requires administration of pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitors; or
Concomitant administration of pyruvate dehydrogenase kinase 1 (PDK1) inhibitor and tyrosine kinase inhibitor (TKI) is required. 제17항에 있어서,
상기 변이는 L858R 및 T790M 치환; L858R, T790M 및 C797S 치환; EGFR 엑손 19 결실 및 T790M 치환; 또는 EGFR 엑손 19 결실과 T790M 및 C797S 치환을 포함하는 것인, 정보를 제공하는 방법.According to claim 17,
These mutations include the L858R and T790M substitutions; L858R, T790M and C797S substitutions; EGFR exon 19 deletion and T790M substitution; Or EGFR exon 19 deletion and T790M and C797S substitutions that will, a method for providing information.
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