KR20230063671A - A method for manufacturing a tumoroid based on a luminescent gastric cancer cell line capable of continuous cytotoxicity analysis for the evaluation of the anticancer effect of anticancer drugs - Google Patents

A method for manufacturing a tumoroid based on a luminescent gastric cancer cell line capable of continuous cytotoxicity analysis for the evaluation of the anticancer effect of anticancer drugs Download PDF

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Abstract

본 발명은 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법; 상기 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드; 상기 튜머로이드를 이용한 항암제의 세포 독성 평가 방법; 및 상기 튜머로이드를 이용한 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 이용하여 항암제의 세포 독성을 평가하는 경우, 시약으로 무독성 성분의 루시페린을 사용함으로써 1차 세포 독성 평가 이후 동일 튜머로이드에 2차 평가가 가능함에 따라 지속적인 생존력 평가가 가능하며, 장기배양이 가능한 이점을 갖는다. 또한, 본 발명의 튜머로이드는 발광 리포터가 표지된 위암 세포주를 기반으로 하고 있는바, 본 발명의 튜머로이드를 이용하는 경우 통상의 형광발광분석기를 통해 발광 강도를 측정함으로써 항암제 후보를 쉽고 빠르게 스크리닝할 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 튜머로이드를 이용한 약물 평가법은 기존 생체 내 (in vivo) 동물 실험 보다 시간과 비용이 절약되며, 생체 내 (in vivo) 동물 실험 시 필연적으로 직면하는 동물 생명 윤리 문제점을 회피할 수 있다.The present invention provides a method for preparing a tumouroid based on a luminescent gastric cancer cell line; Tumeroids based on the luminescent gastric cancer cell line prepared by the above method; a method for evaluating the cytotoxicity of an anticancer agent using the tumeroid; and a screening method for a substance for treating or improving cancer using the tumeroid. In the case of evaluating the cytotoxicity of an anticancer drug using the luminescent gastric cancer cell line-based tumeroid prepared by the method of the present invention, luciferin, a non-toxic component, is used as a reagent, allowing secondary evaluation on the same tumeric after the first cytotoxicity evaluation. According to this method, continuous viability evaluation is possible and long-term culture is possible. In addition, since the tumouroid of the present invention is based on a gastric cancer cell line labeled with a luminescent reporter, when using the tumouroid of the present invention, an anticancer drug candidate can be screened easily and quickly by measuring the luminescence intensity through a conventional fluorescence spectrometer. there is. In addition, the drug evaluation method using the tumeroid of the present invention saves time and money compared to existing in vivo animal experiments, and avoids animal bioethics problems inevitably encountered during in vivo animal experiments. can

Description

항암제의 항암효과 평가를 위한 지속적 세포독성 분석이 가능한 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법{A method for manufacturing a tumoroid based on a luminescent gastric cancer cell line capable of continuous cytotoxicity analysis for the evaluation of the anticancer effect of anticancer drugs}A method for manufacturing a tumoroid based on a luminescent gastric cancer cell line capable of continuous cytotoxicity analysis for the evaluation of the anticancer effect of anticancer drugs anticancer drugs}

본 발명은 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법; 상기 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드; 상기 튜머로이드를 이용한 항암제의 세포 독성 평가 방법; 및 상기 튜머로이드를 이용한 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다.The present invention provides a method for preparing a tumouroid based on a luminescent gastric cancer cell line; Tumeroids based on the luminescent gastric cancer cell line prepared by the above method; a method for evaluating the cytotoxicity of an anticancer agent using the tumeroid; and a screening method for a substance for treating or improving cancer using the tumeroid.

2차원 (Two dimensional, 2D) 세포 배양은 1900년대 초반부터 연구에서 필수적인 방법으로 알려졌다. 그러나 시험관 내 (in vitro) 세포 배양과 같은 기존의 세포 실험은 인간의 생체 내에서 세포가 3D로 자라나는 것에 비해, 시험관 내 (in vitro) 테스트에서는 웰 (well)이나 디쉬 (dish)의 표면에 부착하여 자라난다. 2D 배양 모델에서 세포는 평편한 단층으로 배양되기 때문에 각각의 세포에 배지의 같은 양이 균등하게 닿게 된다. 이로 인해 각각의 세포는 균등한 성장과 증식으로 이어진다. 반면에 실제 생체 내 환경은 균등성장이 어렵다. 즉, 2D 세포 배양법은 실제 인체 환경과 차이가 존재할 수밖에 없으며, 이로 인한 여러 한계점이 존재한다. Two dimensional (2D) cell culture has been known as an essential method in research since the early 1900s. However, conventional cell experiments such as in vitro cell culture show that cells grow in 3D in a human body, whereas in vitro tests attach to the surface of a well or dish. it grows In the 2D culture model, cells are cultured as a flat monolayer, so that the same amount of medium reaches each cell evenly. This leads to equal growth and proliferation of each cell. On the other hand, it is difficult to achieve uniform growth in the actual in vivo environment. That is, the 2D cell culture method inevitably differs from the actual human body environment, and there are several limitations due to this.

위와 같은 문제점을 극복하기 위해서 3차원 (Three dimensional, 3D) 세포 배양법이 고안되었다. 최근 연구에 따르면, 세포 수 모니터링, 자극에 대한 반응, 약물 대사 등의 연구에서 3D 세포 배양법이 기존 2D 세포 배양법보다 개선된 방법임이 증명되었다. 3D 세포배양은 암 연구, 줄기세포 연구 등 다양한 응용 분야에 적용될 수 있기에 주목을 받고 있다.In order to overcome the above problems, a three-dimensional (3D) cell culture method was devised. According to recent studies, it has been proven that 3D cell culture is an improved method over conventional 2D cell culture in studies of cell number monitoring, response to stimulation, drug metabolism, and the like. 3D cell culture is attracting attention because it can be applied to various applications such as cancer research and stem cell research.

암 연구에 3D 세포배양법을 구현하는 여러 가지 방법이 있는데 그중 가장 주목받고 있는 방법은 암세포로부터 튜머로이드 (Tumoroid)를 제작하는 방법이다. 튜머로이드란 환자로부터 채취한 암세포를 삼차원 배양법으로 생성한 암세포 집합체를 의미하며, 또한, 이차원적으로 자라는 암세포주를 키워 삼차원적 구조를 이루게 한 것은 공처럼 생겼다 하여 스페로이드 (spheroid)라고도 부른다.There are several methods for implementing 3D cell culture in cancer research, but the method that is attracting the most attention is the method of producing tumoroids from cancer cells. A tumoroid refers to a cancer cell aggregate generated by a three-dimensional culture method of cancer cells collected from a patient. In addition, a cancer cell line that grows two-dimensionally to form a three-dimensional structure is called a spheroid because it looks like a ball.

튜머로이드를 이용한 시험관 내 (in vitro) 테스트는 다음과 같은 장점이 있다. 첫째, 3D 세포배양법은 시험관 내 (in vitro) 실험임에도 생체 내 실험 모델 (in vivo model)과 유사하게 3차원적 약물의 항암효과 평가가 가능하다는 이점이 있다. 일반적인 단층 (monolayer)의 세포 생존력 분석법 (cell viability assay)과 달리 다층 (multilayer)인 튜머로이드 생존력 분석법에서 나타나는 장점이다. 둘째, 튜머로이드 기술을 이용 시 항암제의 독성평가 생체 내 (in vivo) 실험 진행 시 실험동물 사용으로 필연적으로 직면하는 동물 윤리 문제를 회피할 수 있다. 동물 윤리에 대한 사람들의 관심이 점차 많아짐에 따라 동물실험의 절차도 점차 까다로워지고 있다. 실제 유럽에서는 2013년부터 화장품 동물실험이 금지되었으며 호주, 뉴질랜드, 인도, 이스라엘에서도 최근 유사한 금지령을 제정하였다. 또한 우리나라도 2016년 화장품법 개정으로 화장품 원료에 대한 동물실험을 금지하고 있다. 따라서 나노입자를 이용한 새로운 항암제형 연구에서도 전세계의 트렌드에 맞게 제형화된 항암제의 독성평가를 위한 가이드 라인을 제시할 필요성이 요구된다. 셋째, 인간 암세포로 제작한 튜머로이드는 동물실험이 인체에 미치는 영향을 반영하지 못해 발생하는 부작용을 회피하는 대안이 될 수 있다. 과거 탈리도마이드 부작용 사례에서 알 수 있듯이 동물실험에서는 무해한 약물이 인체에서는 심각한 부작용을 일으킬 여지가 존재한다. 사람과 동물의 유전적 차이로 인해 약물이 주입되었을 때 작용기전의 차이가 발생할 수 있으며 이로 인한 부작용 발생 가능성이 존재한다. 인간의 세포주를 사용하여 튜머로이드를 제작하여 약효평가를 한다면, 사람과 동물의 작용기전이 차이로 인한 부작용을 막을 수 있다. In vitro tests using tumeric have the following advantages. First, the 3D cell culture method has the advantage of being able to evaluate the anticancer effect of drugs in three dimensions similar to an in vivo model even though it is an in vitro experiment. Unlike the general monolayer cell viability assay, this is an advantage of the multilayer tumeric viability assay. Second, it is possible to avoid animal ethics problems that are inevitably faced with the use of laboratory animals during in vivo experiments for toxicity evaluation of anticancer drugs when using the tumeroid technology. As people's interest in animal ethics increases, the procedures for animal testing are becoming more and more complicated. In fact, in Europe, cosmetic animal testing has been banned since 2013, and similar bans have recently been enacted in Australia, New Zealand, India, and Israel. In addition, with the revision of the Cosmetics Act in 2016, animal testing on cosmetic ingredients is prohibited in Korea. Therefore, in research on new anticancer formulations using nanoparticles, there is a need to present guidelines for toxicity evaluation of anticancer drugs formulated according to global trends. Third, tumeroids made from human cancer cells can be an alternative to avoid side effects caused by failing to reflect the effects of animal experiments on the human body. As can be seen from the past side effects of thalidomide, there is room for a drug that is harmless in animal experiments to cause serious side effects in the human body. Due to the genetic difference between humans and animals, a difference in the mechanism of action may occur when the drug is injected, and there is a possibility of side effects due to this. If a human cell line is used to produce a tumeroid and the drug efficacy is evaluated, side effects caused by the difference in the mechanism of action between humans and animals can be prevented.

한편, 세포 독성 (Cytotoxicity) 은 시험관 내 (in vitro) 연구에서 생물학적 평가를 위한 중요한 지표 중 하나이다. 세포 독성 및 세포 생존력 분석은 여러 가지 세포 기능을 토대로 하며, 광범위한 세포 독성 분석이 현재 독성학 (Toxicology) 및 약리학 (Pharmacology) 분야에서 사용된다.Meanwhile, cytotoxicity is one of the important indicators for biological evaluation in in vitro studies. Cytotoxicity and cell viability assays are based on several cell functions, and a wide range of cytotoxicity assays are currently used in the fields of Toxicology and Pharmacology.

세포 생존력 평가법에 사용되는 대표적인 방법으로는 MTT assay, Trypan Blue Exclusion Test, Clonogenic Survival assay 등이 있다. 그러나 기존의 세포 독성 평가 방법은 분석에 사용하는 시약(DMSO, 트리판 블루, 글루타르알데히드) 자체의 세포 독성으로 인해 한번 세포 생존력 분석에 사용된 세포를 재평가할 수 없는 문제점이 있다.Representative methods used for cell viability evaluation include MTT assay, Trypan Blue Exclusion Test, and Clonogenic Survival assay. However, the conventional cytotoxicity evaluation method has a problem in that the cells used for the cell viability assay cannot be re-evaluated due to the cytotoxicity of the reagents used in the assay (DMSO, trypan blue, glutaraldehyde) themselves.

이러한 배경 하에, 본 발명자는 발광 위암 세포주 (AGS-Luc2)를 기반으로 하여 튜머로이드를 제조하였으며, 그 결과 상기 튜모로이드를 이용하여 항암제의 항암효과 평가를 위한 지속적 세포독성 분석이 가능하며, 또한, 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정함으로써 쉽고 빠르게 항암제 후보를 스크리닝할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Under this background, the present inventors prepared a tumouroid based on a luminescent gastric cancer cell line (AGS-Luc2), and as a result, continuous cytotoxicity analysis for evaluating the anticancer effect of an anticancer agent is possible using the tumouroid, and also, The present invention was completed by confirming that anticancer drug candidates can be screened easily and quickly by measuring the emission intensity using a fluorescence emission spectrometer.

한국등록특허 제10-2275677호Korean Patent Registration No. 10-2275677

따라서 본 발명의 목적은 항암제의 항암효과 평가를 위한 지속적 세포독성 분석이 가능한 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a method for preparing a luminescent gastric cancer cell line-based tumeric capable of continuous cytotoxicity analysis for evaluating the anticancer effect of an anticancer agent.

본 발명의 다른 목적은 상기 방법으로 제조된 항암제의 항암효과 평가를 위한 지속적 세포독성 분석이 가능한 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a tumoroid based on a luminescent gastric cancer cell line capable of continuous cytotoxicity analysis for evaluating the anticancer effect of an anticancer agent prepared by the above method.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 이용하여 항암제의 세포 독성을 평가하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for evaluating the cytotoxicity of an anticancer agent using the luminescent gastric cancer cell line-based tumeroid.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 이용하여 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for screening a substance for treatment or improvement of cancer using the luminescent gastric cancer cell line-based tumeroid.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서,In order to achieve the object of the present invention as described above,

본 발명은 a) 세포 배양 플레이트의 온도가 37℃가 되도록 세팅하는 단계; b) 세팅된 상기 플레이트의 각 웰 (well)에 마트리젤 (matrigel)을 분주하는 단계; c) 분주된 상기 마트리젤 내부에 발광 위암 세포를 침투시키는 단계; 및 d) 소태아혈청 및 페니실린을 첨가한 RPMI 1640 배지를 플레이트의 각 웰 (well)에 주입한 후 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법을 제공한다.The present invention comprises the steps of a) setting the temperature of the cell culture plate to be 37 ° C; b) dispensing matrigel into each well of the set plate; c) infiltrating luminescent gastric cancer cells into the dispensed Matrigel; and d) injecting RPMI 1640 medium supplemented with fetal bovine serum and penicillin into each well of the plate and then culturing the cells.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 세포 배양 플레이트는 ULA 플레이트 (Ultra low attachment plate)일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cell culture plate may be an ultra low attachment plate (ULA plate).

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 발광 위암 세포는 AGS-Luc2 세포일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the luminescent gastric cancer cells may be AGS-Luc2 cells.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 d) 단계의 배양은 2 ~ 3주 동안 이루어질 수 있다.In one embodiment of the present invention, the culture in step d) may be performed for 2 to 3 weeks.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 d) 단계 후 e) 2 ~ 3일 주기로 배지를 교체하면서 발광 위암 세포가 구형의 스페로이드 (spheroid) 구조를 형성하는지 확인하는 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, after step d), the method may further include e) checking whether the luminescent gastric cancer cells form a spheroidal spheroid structure while replacing the medium every 2 to 3 days.

또한, 본 발명은 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 제공한다.In addition, the present invention provides a luminescent gastric cancer cell line-based tumoroid prepared by the method.

또한, 본 발명은 ⅰ) 상기 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제를 처리하는 단계; ⅱ) 항암제가 처리된 튜머로이드에 루시페린을 포함하는 용액을 처리하여 반응시키는 단계; 및 ⅲ) 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정하는 단계를 포함하는, 항암제의 세포 독성 평가 방법을 제공한다.In addition, the present invention comprises the steps of i) treating the tumoroid based on the luminescent gastric cancer cell line with an anticancer agent; ii) treating and reacting a solution containing luciferin with the anticancer agent-treated tumeroid; and iii) measuring the luminescence intensity using a fluorescence spectrometer.

또한, 본 발명은 상기 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리하는 단계; 항암제 후보 물질이 처리된 튜머로이드에 루시페린을 포함하는 용액을 처리하여 반응시키는 단계; 및 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정하는 단계를 포함하는, 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.In addition, the present invention comprises the steps of processing an anticancer drug candidate to the tumoroid based on the luminescent gastric cancer cell line; reacting a solution containing luciferin to the tumoroid treated with an anticancer drug candidate; And it provides a screening method for a substance for treating or improving cancer, comprising measuring the emission intensity using a fluorescence emission analyzer.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리시 무처리군 대비 발광 강도가 감소하는 경우 암 치료 또는 개선용 물질로 판단할 수 있다.In one embodiment of the present invention, when the tumouroid is treated with an anticancer drug candidate material, when the luminescence intensity decreases compared to the non-treated group, it can be determined as a substance for cancer treatment or improvement.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리시 무처리군 대비 발광 강도가 증대되거나 변화가 없는 경우 암 치료 또는 개선용 물질이 아닌 것으로 판단할 수 있다.In one embodiment of the present invention, when the tumouroid is treated with an anticancer drug candidate material, it can be determined that it is not a substance for cancer treatment or improvement if the emission intensity is increased or there is no change compared to the untreated group.

본 발명의 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 이용하여 항암제의 세포 독성을 평가하는 경우, 시약으로 무독성 성분의 루시페린을 사용함으로써 1차 세포 독성 평가 이후 동일 튜머로이드에 2차 평가가 가능함에 따라 지속적인 생존력 평가가 가능하며, 장기배양이 가능한 이점을 갖는다.In the case of evaluating the cytotoxicity of an anticancer drug using the luminescent gastric cancer cell line-based tumeroid prepared by the method of the present invention, luciferin, a non-toxic component, is used as a reagent, allowing secondary evaluation on the same tumeric after the first cytotoxicity evaluation. According to this method, continuous viability evaluation is possible and long-term culture is possible.

또한, 본 발명의 튜머로이드는 발광 리포터가 표지된 위암 세포주를 기반으로 하고 있는바, 본 발명의 튜머로이드를 이용하는 경우 통상의 형광발광분석기를 통해 발광 강도를 측정하여 수치로 정량화가 가능하기에 항암제 후보를 쉽고 빠르게 스크리닝할 수 있다.In addition, since the tumouroid of the present invention is based on a gastric cancer cell line labeled with a luminescent reporter, in the case of using the tumouroid of the present invention, the luminescence intensity can be measured by a conventional fluorescence spectrometer and quantified numerically, so it can be used as an anticancer agent. Candidates can be screened easily and quickly.

뿐만 아니라, 본 발명의 튜머로이드를 이용한 약물 평가법은 기존 생체 내 (in vivo) 동물 실험 보다 시간과 비용이 절약되며, 생체 내 (in vivo) 동물 실험 시 필연적으로 직면하는 동물 생명 윤리 문제점을 회피할 수 있다.In addition, the drug evaluation method using the tumeroid of the present invention saves time and money compared to existing in vivo animal experiments, and avoids animal bioethics problems inevitably encountered during in vivo animal experiments. can

도 1은 본 발명의 발광 위암 세포주(AGS-Luc2 cell) 기반의 튜머로이드의 제조 과정을 나타내는 모식도이다.
도 2는 시간 경과에 따른 본 발명의 발광 위암 세포주(AGS-Luc2 cell) 기반의 튜머로이드의 성장 과정을 보여주는 사진이다.
도 3은 본 발명의 튜머로이드를 이용하여 지속적 세포독성 분석을 확인하기 위한 항암제의 1차, 2차 투여 및 튜머로이드 샘플의 발광 강도 측정 과정을 시계열적으로 보여주는 모식도이다.
도 4 (a)는 대표적인 항암제 중 하나인 도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자를 본 발명의 발광 위암 세포주(AGS-Luc2 cell) 기반의 튜머로이드에 투여한 이후 72 시간 뒤 IVIS로 촬영한 사진이며, (b)는 발광 강도를 측정하여 수치화한 그래프이다(DEX/AL: 도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자).1 is a schematic diagram showing a manufacturing process of a tumouroid based on the luminescent gastric cancer cell line (AGS-Luc2 cell) of the present invention.
2 is a photograph showing the growth process of a luminescent gastric cancer cell line (AGS-Luc2 cell)-based tumoroid of the present invention over time.
3 is a schematic diagram showing the first and second administration of an anticancer agent and the measurement of the luminescence intensity of a tumeric sample time-sequentially to confirm the continuous cytotoxicity assay using the tumeric of the present invention.
Figure 4 (a) is a photograph taken by IVIS 72 hours after administration of albumin nanoparticles encapsulated with one of the representative anticancer agents, docetaxel, to a luminescent gastric cancer cell line (AGS-Luc2 cell)-based tumoroid of the present invention, ( b) is a graph digitized by measuring the luminescence intensity (DEX/AL: albumin nanoparticles encapsulated with docetaxel).

본 발명은 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법으로서, 상기 방법은 a) 세포 배양 플레이트의 온도가 37℃가 되도록 세팅하는 단계; b) 세팅된 상기 플레이트의 각 웰 (well)에 마트리젤 (matrigel)을 분주하는 단계; c) 분주된 상기 마트리젤 내부에 발광 위암 세포를 침투시키는 단계; 및 d) 소태아혈청 및 페니실린을 첨가한 RPMI 1640 배지를 플레이트의 각 웰 (well)에 주입한 후 세포를 배양하는 단계를 포함할 수 있다.The present invention provides a method for preparing a tumouroid based on a luminescent gastric cancer cell line, the method comprising the steps of a) setting the temperature of a cell culture plate to 37°C; b) dispensing matrigel into each well of the set plate; c) infiltrating luminescent gastric cancer cells into the dispensed Matrigel; and d) injecting RPMI 1640 medium supplemented with fetal bovine serum and penicillin into each well of the plate and then culturing the cells.

본 발명의 a) 단계는 세포 배양 플레이트를 셋팅하는 단계로서, 자세하게는 세포 배양 플레이트를 CO2 인큐베이터에 하루 (24 시간) 동안 보관하여 플레이트의 온도가 37℃가 되도록 세팅 단계이다.Step a) of the present invention is a step of setting the cell culture plate, and in detail, the cell culture plate is stored in a CO 2 incubator for one day (24 hours) to set the temperature of the plate to 37°C.

상기 a) 단계에서 세포 배양 플레이트는 세포가 플레이트 바닥에 붙지 않는 플레이트로서, ULA 멀티플 웰 플레이트 (Ultra low attachment multiple well plate)일 수 있다.In the step a), the cell culture plate is a plate to which cells do not adhere to the bottom of the plate, and may be a ULA multiple well plate (Ultra low attachment multiple well plate).

본 발명의 b) 단계는 세포 배양 플레이트의 각 웰 (well)에 마트리젤 (matrigel)을 분주하는 단계로서, 자세하게는 상기 a) 단계를 통해 37℃ 온도로 세팅된 세포 배양 플레이트의 각 웰 (well)에 마트리젤 (matrigel)을 돔(dome)형태로 분주하는 단계이다.Step b) of the present invention is a step of dispensing matrigel into each well of a cell culture plate, and in detail, each well of a cell culture plate set at a temperature of 37 ° C through step a) ) is a step of dispensing matrigel in a dome shape.

본 발명의 c) 단계는 마트리젤 내부에 발광 위암 세포를 침투시키는 단계로서, 자세하게는 상기 b) 단계를 통해 돔(dome)형태로 분주된 마트리젤 내부에 발광 위암 세포주인 AGS-Luc2 세포를 피펫을 이용하여 마트리젤 내부로 주입하는(침투시키는) 단계이다.Step c) of the present invention is a step of infiltrating luminescent gastric cancer cells into Matrigel, and in detail, AGS-Luc2 cells, a luminescent gastric cancer cell line, are injected into Matrigel dispensed in a dome shape through step b) with a pipette. This is the step of injecting (permeating) into the Matrigel using

본 발명의 d) 단계는 배양 배지를 플레이트의 각 웰 (well)에 주입한 후 세포를 배양하는 단계로서, 자세하게는 소태아혈청 및 페니실린을 첨가한 RPMI 1640 배지를 플레이트의 각 웰 (well)에 주입한 후 세포를 2 ~ 3주 동안 배양하는 단계이다.Step d) of the present invention is a step of culturing cells after injecting the culture medium into each well of the plate, in detail, RPMI 1640 medium supplemented with fetal bovine serum and penicillin is poured into each well of the plate This step is to culture the cells for 2 to 3 weeks after injection.

본 발명의 튜머로이드 제조 방법은 상기 d) 단계 이후 추가적으로 e) 2 ~ 3일 주기로 배지를 교체하면서 발광 위암 세포가 구형의 스페로이드 (spheroid) 구조를 형성하는지 확인하는 단계를 더 포함할 수 있다.The method for preparing a tumouroid of the present invention may further include, after step d), e) checking whether the luminescent gastric cancer cells form a spheroidal spheroid structure while replacing the medium every 2 to 3 days.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 제공한다.In addition, the present invention provides a luminescent gastric cancer cell line-based tumeric prepared by the above method.

또한, 본 발명은 ⅰ) 상기 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제를 처리하는 단계; ⅱ) 항암제가 처리된 튜머로이드에 루시페린을 포함하는 용액을 처리하여 반응시키는 단계; 및 ⅲ) 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정하는 단계를 포함하는, 항암제의 세포 독성 평가 방법을 제공한다.In addition, the present invention comprises the steps of i) treating the tumoroid based on the luminescent gastric cancer cell line with an anticancer agent; ii) treating and reacting a solution containing luciferin with the anticancer agent-treated tumouroid; and iii) measuring the luminescence intensity using a fluorescence spectrometer.

본 발명의 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드를 이용하여 항암제의 세포 독성을 평가하는 경우, 시약으로 무독성 성분의 루시페린을 사용함으로써 1차 세포 독성 평가 이후 동일 튜머로이드에 2차 평가가 가능함에 따라 지속적인 생존력 평가가 가능하며, 장기배양이 가능한 이점을 갖는다.In the case of evaluating the cytotoxicity of an anticancer agent using the luminescent gastric cancer cell line-based tumeric of the present invention, luciferin, a non-toxic component, is used as a reagent, so that after the 1st cytotoxicity evaluation, the same tumeric can undergo a 2nd evaluation, resulting in continuous viability. Evaluation is possible, and it has the advantage of being able to be cultured for a long time.

또한, 본 발명은 상기 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리하는 단계; 항암제 후보 물질이 처리된 튜머로이드에 루시페린을 포함하는 용액을 처리하여 반응시키는 단계; 및 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정하는 단계를 포함하는, 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.In addition, the present invention comprises the steps of processing an anticancer drug candidate to the tumoroid based on the luminescent gastric cancer cell line; reacting a solution containing luciferin to the tumoroid treated with an anticancer drug candidate; And it provides a screening method for a substance for treating or improving cancer, comprising measuring the emission intensity using a fluorescence emission analyzer.

본 발명의 튜머로이드는 발광 리포터가 표지된 위암 세포주를 기반으로 하고 있는바, 본 발명의 튜머로이드를 이용하는 경우 통상의 형광발광분석기를 통해 발광 강도를 측정함으로써 항암제 후보를 쉽고 빠르게 스크리닝할 수 있다.Since the tumouroid of the present invention is based on a gastric cancer cell line labeled with a luminescent reporter, when using the tumouroid of the present invention, an anticancer drug candidate can be screened easily and quickly by measuring luminescence intensity using a conventional fluorescence spectrometer.

본 발명의 일구체예에서, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리시 무처리군 대비 발광 강도가 감소하는 경우 암 치료 또는 개선용 물질로 판단할 수 있으며, 무처리군 대비 발광 강도가 증대되거나 변화가 없는 경우 암 치료 또는 개선용 물질이 아닌 것으로 판단할 수 있다.In one embodiment of the present invention, when an anticancer drug candidate material is treated with a luminescent gastric cancer cell line-based tumoroid, when the luminescence intensity decreases compared to the untreated group, it can be determined as a substance for cancer treatment or improvement, and the luminescence intensity compared to the untreated group If it increases or does not change, it can be determined that it is not a substance for cancer treatment or improvement.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are intended to explain the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

<실시예><Example>

재료 준비material preparation

위선암 세포주인 AGS-luc2(CRL-1739-LUC2™) 세포는 American Type Culture Collection(ATCC; Manassas, VA, USA)에서 구입하였으며, 마트리젤(Matrigel)은 Corning (NY, USA) 에서 구입하였고, ULA 24 웰 플레이트 (Ultra low attachment 24 well plate)는 Corning (NY, USA)에서 구입하였으며, Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI 1640) 은 Corning (NY, USA)에서 구입하였고, FBS (Fetal Bovine Serum)및 페니실린 (Penicillin Streptomycin Solution)은 Corning (NY, USA)에서 구입하였으며, D-루시페린 칼륨염 (D-Luciferin potassium salt)는 GoldBio (MO, USA) 에서 구입하였으며, 96 웰 블랙 플레이트 (96 well black plate)는 Corning (NY, USA)에서 구입하였으며, 도세탁셀 (Docetaxel) 및 소혈청알부민은 LC Laboratories Co., Ltd. (Woburn, MA, USA)에서 구입하였다.Gastric adenocarcinoma cell line AGS-luc2 (CRL-1739-LUC2™) cells were purchased from the American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, USA), Matrigel was purchased from Corning (NY, USA), and ULA Ultra low attachment 24 well plate was purchased from Corning (NY, USA), Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI 1640) was purchased from Corning (NY, USA), FBS (Fetal Bovine Serum) and penicillin (Penicillin Streptomycin Solution) was purchased from Corning (NY, USA), D-Luciferin potassium salt was purchased from GoldBio (MO, USA), and a 96 well black plate was purchased from GoldBio (MO, USA). Corning (NY, USA), Docetaxel and bovine serum albumin were purchased from LC Laboratories Co., Ltd. (Woburn, MA, USA).

<실시예 1><Example 1>

발광 위암 세포주(AGS-Luc2 cell)를 이용한 튜머로이드 제조Tumeroid production using luminescent gastric cancer cell line (AGS-Luc2 cell)

ULA 24 웰 플레이트 (Ultra low attachment 24 well plate)를 CO2 인큐베이터에 하루 (24 시간) 동안 보관하여 ULA 플레이트의 온도가 37℃가 되도록 세팅하였다. 이후, 37℃의 ULA 플레이트에 세포외 기질 역할인 마트리젤을 돔(dome)형태로 15 μL 분주한 다음, AGS_Luc2 세포 3 μL (4.8×104 cell)을 10 μL 피펫을 이용하여 마트리젤에 침투시켰다. 이후, 1 % 페니실린(100 μg/mL) 5 mL 및 10 %(v/v) 소태아혈청(FBS) 50 mL 이 보충된 RPMI 1640 배지를 각 웰 당 2 mL 씩 (2 mL/well) 넣어 준 다음 인큐베이터에서 배양하였다. 2 ~ 3일에 한번 씩 배지를 갈아주며 꾸준히 확인하며 (2~3주) AGS-Luc2 세포가 구형의 스페로이드 (spheroid) 구조를 형성하는지 확인하였다. 본 발명의 튜머로이드 제조 과정은 도 1에서 자세히 나타내었다.The ULA 24 well plate (Ultra low attachment 24 well plate) was stored in a CO 2 incubator for one day (24 hours), and the temperature of the ULA plate was set to 37°C. Thereafter, 15 μL of Matrigel, which serves as an extracellular matrix, is dispensed in a dome shape on a ULA plate at 37 ° C. Then, 3 μL of AGS_Luc2 cells (4.8×10 4 cell) is infiltrated into Matrigel using a 10 μL pipette. made it Then, 2 mL of RPMI 1640 medium supplemented with 5 mL of 1% penicillin (100 μg/mL) and 50 mL of 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS) was added to each well (2 mL/well). Cultured in the following incubator. It was confirmed that the AGS-Luc2 cells formed a spherical spheroid structure by constantly changing the medium every 2 to 3 days (2 to 3 weeks). The manufacturing process of the tumeric of the present invention is shown in detail in FIG. 1 .

그 결과 도 2에서 나타낸 바와 같이, 시간 경과에 따라 본 발명의 AGS-Luc2 세포를 이용한 튜머로이드가 구형의 구조를 형성해가는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 2, it was confirmed that the tumeric using the AGS-Luc2 cells of the present invention formed a spherical structure over time.

<실시예 2><Example 2>

도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자 제조Preparation of albumin nanoparticles encapsulated with docetaxel

도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자는 직접 제조하여 사용하였다. 자세하게는, 알부민 나노입자를 제조하기 위해 13.32 mg의 도세탁셀을 4 mL의 에탄올에 용해시켰다. 소혈청알부민(BSA)을 정제수에 넣기 전에 0.1 N NaOH와 pH 미터기(Mettler Toledo Cor., USA)를 사용하여 정제수의 pH가 10이 되게 조정하였다. 그 후 에탄올에 녹인 용액을 5 mL 주사기에 넣고 초당 1방울의 속도로 적가하였다. 그 후, 상온에서 교반기 위에서 5~15 분간 교반한 다음, 8 % 글루타르알데하이드 용액(glutaraldehyde solution)을 30 μL를 가하여 24 시간 동안 교반시켰다. 이후 용액을 10,000 rpm, 20℃에서 10 분 동안 원심분리하고, 원심분리된 용액 중 상층액만 수득하였다. 이 과정을 세 번 반복하였다. 그런 다음 동결 건조기에 24 시간 동안 넣어 용액에 존재하는 에탄올과 정제수를 제거하여 박막을 형성하였다. 상기 막에 1 mL의 정제수를 첨가하고 초음파 분해(sonification)하여 탁도 있는 액체를 최종적으로 제조하였다.Albumin nanoparticles encapsulated with docetaxel were directly prepared and used. Specifically, 13.32 mg of docetaxel was dissolved in 4 mL of ethanol to prepare albumin nanoparticles. Before adding bovine serum albumin (BSA) to the purified water, the pH of the purified water was adjusted to 10 using 0.1 N NaOH and a pH meter (Mettler Toledo Cor., USA). Thereafter, the solution dissolved in ethanol was put into a 5 mL syringe and added dropwise at a rate of 1 drop per second. Then, after stirring at room temperature on a stirrer for 5 to 15 minutes, 30 μL of 8% glutaraldehyde solution was added thereto and stirred for 24 hours. Then, the solution was centrifuged at 10,000 rpm and 20° C. for 10 minutes, and only the supernatant was obtained from the centrifuged solution. This process was repeated three times. Then, it was placed in a freeze dryer for 24 hours to form a thin film by removing ethanol and purified water present in the solution. 1 mL of purified water was added to the membrane and sonification was performed to finally prepare a liquid having turbidity.

<실험예 1><Experimental Example 1>

본 발명의 튜머로이드를 이용한 항암제 약물 처리에 따른 세포독성 평가Evaluation of cytotoxicity according to anticancer drug treatment using the tumouroid of the present invention

[약물 처리 이전 - 1차 튜머로이드 샘플 발광 촬영][Before drug treatment - 1st tumeric sample luminescence photography]

먼저, <실시예 1>을 통해 제조된 본 발명의 튜머로이드에 약물을 처리하기에 앞서 In-vivo Optical Imager (VISQUE InVivo Smart-LF, Republic of Korea)기기로 튜머로이드 샘플의 발광 강도를 측정하기 위해서 RPMI 1640 배지 1 mL에 D-루시페린 칼륨염 (D-Luciferin potassium salt) 150 μg을 혼합하여 루시페린 용액 (Luciferin solution)을 제조하였다. 제조된 루시페린 용액을 IVIS(In Vivo Imaging System) 발광 이미지 측정을 위해 96 웰 블랙 플레이트 (96 well black plate)에 넣어주고(100 μL/ well) 튜머로이드 샘플을 각 웰에 옮겨주었다. 이후 IVIS 기기의 필터를 Luminescene, exposure time를 30초로 맞춰주고 샘플을 촬영하였다. First, before treating the tumeric of the present invention prepared in <Example 1> with a drug, measuring the luminescence intensity of the tumeric sample with an In-vivo Optical Imager (VISQUE InVivo Smart-LF, Republic of Korea) To this end, a Luciferin solution was prepared by mixing 150 μg of D-Luciferin potassium salt with 1 mL of RPMI 1640 medium. The prepared luciferin solution was put into a 96 well black plate (100 μL/well) for IVIS (In Vivo Imaging System) luminescence image measurement, and a tumeric sample was transferred to each well. Afterwards, the filter of the IVIS device was adjusted to Luminescene and the exposure time was set to 30 seconds, and the sample was photographed.

[1차 약물 처리][Primary drug treatment]

상기 1차 튜머로이드 샘플 발광 촬영 후 본 발명의 튜머로이드를 RPMI 1640이 채워진 24 웰 플레이트 (Ultra low attachment 24 well plate) (2 mL/ well)에 다시 옮긴 이후 상기 <실시예 2>를 통해 제조된 도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자를 300 nM 농도로 20 μL을 넣어준 다음 72 시간 동안 처리하였다. 한편, 대조군의 경우 도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자 대신 RPMI1640 배지 (20 μL)를 처리하였다.After taking the luminescence of the first tumeric sample, the tumeric of the present invention was transferred to an ultra low attachment 24 well plate (2 mL/well) filled with RPMI 1640, and then prepared in <Example 2> 20 μL of docetaxel-encapsulated albumin nanoparticles at a concentration of 300 nM was then treated for 72 hours. Meanwhile, in the case of the control group, RPMI1640 medium (20 μL) was used instead of docetaxel-encapsulated albumin nanoparticles.

[1차 약물 처리 이후 2차 튜머로이드 샘플 발광 촬영][Second tumeric sample luminescence photography after first drug treatment]

상기 1차 약물 처리 후 72시간이 경과한 시점에 24 웰에 보관되고 있던 샘플들을 다시 96 웰 블랙 플레이트 (96 well black plate)에 옮겨준 다음 루시페린 용액, IVIS 기기 설정을 약물 treat 이전 촬영과 같은 방식으로 설정하여 약물 효능평가를 위한 발광 광도를 측정하였다. At 72 hours after the first drug treatment, the samples stored in 24 wells were transferred to a 96 well black plate again, and the luciferin solution and IVIS device settings were set in the same way as before drug treatment. was set to measure the luminous intensity for drug efficacy evaluation.

[휴지기][rest period]

1차 약물 처리가 끝난 튜머로이드는 RPMI 1640 배지를 각 웰 당 2mL 넣어 준 24 웰 플레이트 (Ultra low attachment 24 well plate)로 옮겨준 다음 CO2 인큐베이터에서 4일 (96 시간) 동안 휴지기를 두어 보관하였다.Tumeroids after the first drug treatment were transferred to a 24-well plate (Ultra low attachment 24-well plate) containing 2 mL of RPMI 1640 medium per well, and stored in a CO 2 incubator for 4 days (96 hours) after resting. .

[2차 약물 처리][Secondary drug treatment]

약물의 2차 항암효능 평가를 위하여 휴지기를 거친 튜머로이드에 상기 <실시예 2>를 통해 제조된 도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자를 300 nM 농도로 20 μL을 넣은 뒤 72 시간 동안 처리하였다.In order to evaluate the secondary anticancer efficacy of the drug, 20 μL of docetaxel-encapsulated albumin nanoparticles prepared in <Example 2> were added to the tumouroid at a concentration of 300 nM and treated for 72 hours.

[3차 튜머로이드 샘플 발광 촬영] 1차 평가와 동일한 조건에서 발광 강도를 측정하였다. [Third tumeric sample luminescence photographing] The luminescence intensity was measured under the same conditions as in the first evaluation.

그 결과 도 4에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 AGS-Luc2 세포를 이용한 튜머로이드에 도세탁셀이 봉입된 알부민 나노입자 (항암제형)를 1차 처리한 경우, 항암제형을 처리하기 이전과 비교 시 암세포의 형성을 억제하였음을 확인하였다. 또한 휴지기를 두고 항암제형을 2차 처리한 결과 항암제형을 처리하기 이전 및 1차 항암제형 처리 시보다 암세포의 형성을 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해, 본 발명의 튜머로이드를 이용하는 경우 항암제의 항암효과 평가를 위한 지속적 세포독성 분석이 가능함을 확인하였으며, 튜머로이드의 발광 강도를 측정하여 그 값을 수치화함으로써 항암제 효능의 정량 분석이 가능함을 확인할 수 있었다. 따라서 이러한 기술이 새로운 항암제 신약개발 후보군을 탐색하는 데 도움이 될 것으로 판단된다. As a result, as shown in FIG. 4, when the albumin nanoparticles (anti-cancer formulation) encapsulated with docetaxel in the tumoroid using the AGS-Luc2 cells of the present invention are first treated, the number of cancer cells compared to before treatment with the anti-cancer formulation It was confirmed that the formation was inhibited. In addition, as a result of the secondary treatment of the anticancer formulation with a resting period, it was confirmed that the formation of cancer cells was suppressed more than before treatment with the anticancer formulation and during the first treatment with the anticancer formulation. Through this, it was confirmed that continuous cytotoxicity analysis for evaluating the anticancer effect of an anticancer drug is possible when using the tumeroid of the present invention, and it is confirmed that the quantitative analysis of the efficacy of an anticancer drug is possible by measuring the luminescence intensity of the tumeroid and quantifying the value. could Therefore, it is judged that this technology will be helpful in exploring new anticancer drug candidate groups.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, the present invention has been looked at with respect to its preferred embodiments. Those skilled in the art to which the present invention pertains will be able to understand that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered from an illustrative rather than a limiting point of view. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the equivalent scope will be construed as being included in the present invention.

Claims (10)

a) 세포 배양 플레이트의 온도가 37℃가 되도록 세팅하는 단계;
b) 세팅된 상기 플레이트의 각 웰 (well)에 마트리젤 (matrigel)을 분주하는 단계;
c) 분주된 상기 마트리젤 내부에 발광 위암 세포를 침투시키는 단계; 및
d) 소태아혈청 및 페니실린을 첨가한 RPMI 1640 배지를 플레이트의 각 웰 (well)에 주입한 후 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법.a) setting the temperature of the cell culture plate to be 37°C;
b) dispensing matrigel into each well of the set plate;
c) infiltrating luminescent gastric cancer cells into the dispensed Matrigel; and
d) A method for producing a luminescent gastric cancer cell line-based tumouroid, comprising injecting RPMI 1640 medium supplemented with fetal bovine serum and penicillin into each well of a plate and then culturing the cells. 제1항에 있어서,
상기 세포 배양 플레이트는 ULA 플레이트 (Ultra low attachment plate)인 것을 특징으로 하는, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법.According to claim 1,
Characterized in that the cell culture plate is an ultra low attachment plate (ULA plate), a method for producing a luminescent gastric cancer cell line-based tumeric. 제1항에 있어서,
상기 발광 위암 세포는 AGS-Luc2 세포인 것을 특징으로 하는, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법.According to claim 1,
Wherein the luminescent gastric cancer cells are AGS-Luc2 cells. 제1항에 있어서,
상기 d) 단계의 배양은 2 ~ 3주 동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법.According to claim 1,
The method for producing a luminescent gastric cancer cell line-based tumeric, characterized in that the culture in step d) is cultured for 2 to 3 weeks. 제1항에 있어서,
상기 d) 단계 후 e) 2 ~ 3일 주기로 배지를 교체하면서 발광 위암 세포가 구형의 스페로이드 (spheroid) 구조를 형성하는지 확인하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드 제조 방법.According to claim 1,
After step d), e) replacing the medium every 2 to 3 days to check whether the luminescent gastric cancer cells form a spheroidal spheroid structure. manufacturing method. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드.A luminescent gastric cancer cell line-based tumoroid prepared by the method of any one of claims 1 to 5. ⅰ) 제6항의 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제를 처리하는 단계;
ⅱ) 항암제가 처리된 튜머로이드에 루시페린을 포함하는 용액을 처리하여 반응시키는 단계; 및
ⅲ) 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정하는 단계를 포함하는, 항암제의 세포 독성 평가 방법.i) treating the tumoroid based on the luminescent gastric cancer cell line of claim 6 with an anticancer agent;
ii) treating and reacting a solution containing luciferin with the anticancer agent-treated tumeroid; and
iii) a method for evaluating cytotoxicity of an anticancer agent, comprising the step of measuring luminescence intensity using a fluorescence spectrometer. 제6항의 발광 위암 세포주 기반의 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리하는 단계; 항암제 후보 물질이 처리된 튜머로이드에 루시페린을 포함하는 용액을 처리하여 반응시키는 단계; 및 형광발광분석기를 이용하여 발광 강도를 측정하는 단계를 포함하는, 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법.Treating the tumoroid based on the luminescent gastric cancer cell line of claim 6 with an anticancer drug candidate; reacting a solution containing luciferin to the tumoroid treated with an anticancer drug candidate; And a screening method for a substance for treatment or improvement of cancer comprising measuring the intensity of emission using a fluorescence spectrometer. 제8항에 있어서,
상기 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리시 무처리군 대비 발광 강도가 감소하는 경우 암 치료 또는 개선용 물질로 판단하는 것을 특징으로 하는, 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법.According to claim 8,
A method for screening a substance for treating or ameliorating cancer, characterized in that when the tumoroid is treated with a candidate anticancer drug, when the luminescence intensity decreases compared to the untreated group, it is judged as a substance for cancer treatment or improvement. 제8항에 있어서,
상기 튜머로이드에 항암제 후보 물질을 처리시 무처리군 대비 발광 강도가 증대되거나 변화가 없는 경우 암 치료 또는 개선용 물질이 아닌 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는, 암의 치료 또는 개선용 물질의 스크리닝 방법.According to claim 8,
A method for screening a substance for treating or ameliorating cancer, characterized in that when the tumoroid is treated with an anticancer drug candidate substance, it is determined that it is not a substance for cancer treatment or improvement if the emission intensity is increased or there is no change compared to the untreated group.
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