KR20230059075A - 퀴니자린(quinizarin)을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 퀴니자린(quinizarin)을 포함하는 제 2형 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로서, 퀴니자린 (quinizarin)이 인슐린 저항성을 감소시키고, 포도당 흡수 (glucose uptake)를 촉진시켜 제 2형 당뇨병에 대하여 항당뇨 효능이 있으며, 식물 유래 천연물질로써 기존 합성물질 치료제의 부작용을 완화시킬 수 있다는 장점이 있다.

Description

퀴니자린(quinizarin)을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물 {Pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes comprising quinizarin}

본 발명은 퀴니자린(quinizarin)을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 더 상세하게는 포도당 흡수를 증가시키고, 인슐린 저항성을 감소시키는 퀴니자린의 항당뇨 활성에 의해 당뇨병 예방 또는 치료 효과가 나타나는 약학적 조성물에 관한 것이다.

당뇨병은 혈액 내 함유되어 있는 포도당 농도가 높아서 소변으로 포도당이 나오는 대사질환이다. 현재 전세계적으로 비만인구 증가와 함께 당뇨병으로 사망하는 환자의 수가 점차 늘어가고 있는 추세이다. 대한당뇨병학회의 조사결과에 따르면 2018년 기준 당뇨병 유별률은 13.8%로, 추계 인구를 적용할 경우 494만명에 이르며, 이중 당뇨병 인지율은 65%, 치료율은 60%에 불가한 것으로 나타났다. 우리나라에서의 당뇨병 환자의 약 56%가 경구혈당강화제 단독투여하는 방식으로, 10.5%가 인슐린 및 경구혈당강하제를 병합투여하는 방식으로 치료하고 있으며, 치료를 받지 않는 환자가 39.5%에 이르는 것으로 나타났다.

당뇨병은 그 자체로서도 위험하지만 상승된 혈당 수치의 결과로 합병증이 유발될 가능성이 높다. 장기간에 걸친 높은 수준의 혈당에 의해 혈관이 좁아지며, 좁아진 혈관은 혈류를 감소시켜 혈압이 상승한다. 대표적인 합병증으로는 죽상경화증, 당뇨성 간손상, 신부전 등이 있으며 이외에도 당뇨병은 시력이나, 신경에도 영향을 미칠 수 있다.

당뇨병은 자가면역질환, 바이러스 감염 등에 의해 인슐린이 생성되는 췌장의 랑게르한스섬의 베타 세포가 파괴되어 인슐린 결핍에 의해 혈당이 높아져 생기는 제1형 당뇨병, 인슐린의 분비는 충분하지만 인슐린 감수성이 부족하여 혈당이 높아지는 제2형 당뇨병 및 당뇨병 증상이 없다가 임신 20주 이후에 임산부에게서 발병하는 임신성 당뇨병으로 구분된다. 이 중 제2형 당뇨병은 식습관, 적은 운동량 또는/및 과다한 스트레스 등에 의해 비만, 고혈압을 비롯한 다른 질병과 함께 발병하며 일반적으로 성인에서 많이 발병한다. 또한, 제2형 당뇨병은 우리나라에서 발병하는 당뇨병의 대부분을 차지하고, 체중에 따라 비만형과 비비만형으로 나뉘며, 인슐린 치료법을 요하지 않는다.

당뇨병 치료제로는 크게 인슐린, 경구용 혈당강하제, 주사용 혈당강하제로 구분된다. 인슐린은 세부적으로 초속효성, 속효성, 중시간형, 혼합형 등으로 구분된다. 경구용 혈당강하제로는 메트포르민, 알파-글루코시다제 억제제 (아카보즈, 보글리보스), DPP4억제제 (예컨대, 시타글립틴, 빌다 글립틴) 등이 있으며, 주사용 혈당강하제로는 GLP-1 효능제 (예컨대, 엑세나타이드, 리라글루티드) 등이 있다. 인슐린은 제1형 및 제2형 당뇨병 환자에서 인슐린 요법이 요구되는 경우에 사용되고, 경구용 및 주사용 혈당 강하제의 경우 식이 및 운동요법을 통해 혈당 조절이 충분히 되지 않는 제2형 당뇨병 환자에서 혈당을 감소시키기 위해 사용되고 있다. 다만, 기존 치료제들은 상기 효과에도 불구하고 심각한 부작용과 같은 안정성이 지속적으로 문제되고 있다. 예컨대, 비만, 저혈당, 다뇨, 메스꺼움, 구토, 복통, 빈맥, 저혈압 간 기능 장애, 위장 장애, 백혈구 수치 감소, 빈혈, 젖산산증, 신기능 장애, 인슐린 감소, 탈수 등의 부작용들이 알려져 있다. 따라서, 최근에는 기존 당뇨병 치료제들이 가지는 부작용을 대체할 목적으로 부작용이 거의 없는 식물 유래 천연물질들의 치료효과에 대한 관심이 높아지고 있다.

이에, 본 발명은 기존의 합성 약물 및 약리조성물이 가지는 다양한 부작용을 완화시킬 수 있는 당뇨병 예방 또는 치료제를 개발하기 위해 예의노력한 결과, 식물성 천연 안트라퀴논의 하나인 퀴니자린이 인슐린 저항성을 감소시키고, 포도당 흡수를 촉진시키며, 포도당 운반체 세포막 단백질인 GLUT-4의 발현을 촉진시킨다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 퀴니자린을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 건강기능성 식품 및 당뇨병 예방 또는 치료를 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 퀴니자린 (quinizarin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 1 ~ 150μM의 농도로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 다음과 같은 특징들로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

(ⅰ) 세포의 성장 비억제;

(ⅱ) 세포 내 포도당 흡수율 증가; 및

(ⅲ) 세포의 인슐린 저항성 감소.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 AKT 및/또는 GLUT4 단백질 발현을 50% ~ 200%로 증가시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 IRS-1 단백질 발현을 10% ~ 50%로 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명은 또한, 퀴니자린을 유효성분으로 포함하는, 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 건강기능성 식품은 퀴니자린 (quinizarin)을 1 ~ 150μM의 농도로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 건강기능성 식품은 다음과 같은 특징들로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

(ⅰ) 세포의 성장 비억제;

(ⅱ) 세포 내 포도당 흡수율 증가; 및

(ⅲ) 세포의 인슐린 저항성 감소.

본 발명은 또한, 다음 단계를 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료를 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

(ⅰ) 환자로부터 분리된 샘플로부터 인슐린 저항성을 측정하는 단계;

(ⅱ) 상기 저항성을 정상 대조군의 인슐린 저항성과 비교하는 단계; 및

(ⅲ) 상기 환자의 인슐린에 대한 저항성이 정상 대조군의 인슐린에 대한 저항성과 비교하여 증가되어 있는 경우, 제1항 내지 제6항의 어느 한 항의 조성물 투여가 적합한 환자로 평가하는 단계.

본 발명에 있어서, 상기 환자는 공복혈당이 140 mg/dL 이상이거나 식후 2시간 이후 혈당이 200 mg/dL 이상으로 증가된 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 인슐린 저항성이 유도된 근육세포의 인슐린저항성을 완화시키고, 세포내 포도당 흡수를 증가시켜 항당뇨 활성을 나타내므로 당뇨병 예방 또는 치료 효과가 있다. 또한, 본 발명은 천연물질인 퀴니자린(Quinizarin)을 유효성분으로 포함하여 기존의 합성 약물 및 약리조성물이 유발하는 부작용들을 개선시킬 수 있다.

도 1은 퀴니자린의 분화되지 않은 근육세포 내 생존력 측정 결과이다.
도 2는 퀴니자린의 분화된 근육세포 내 생존력 측정 결과이다.
도 3은 퀴니자린 처리 후 분화된 근육세포에서의 포도당 흡수량 변화에 관한 것이다.
도 4는 퀴니자린 처리 후 인슐린 저항성이 유도된 분화된 근육세포에서의 포도당 흡수량 변화에 관한 것이다.
도 5는 인슐린 저항성이 유도된 분화된 근육세포에서의 GLUT-4 mRNA의 발현량 측정 결과이다.
도 6은 인슐린 저항성이 유도된 분화된 근육세포에서의 AKT 단백질 발현량 측정 결과이다.
도 7은 인슐린 저항성이 유도된 분화된 근육세포에서의 IRS-1 mRNA의 발현량 측정 결과이다.

이하, 발명을 상세히 설명한다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

당뇨병 치료제 연구에서 일반적으로 인슐린 신호전달 경로 (insulin signaling pathway)의 마커들을 확인한다. 인슐린은 췌장의 랑게르한스섬 (islet of Langerhans)의 베타세포 (β-cell)에서 생성 및 분비되어 간과 근육세포와 같은 표적세포에 작용하여 혈액의 포도당을 흡수하고, 저장하여 인체의 혈당수치를 조절하는 중요한 호르몬이다. 인슐린이 분비되면 표적세포의 세포막 표면에 존재하는 인슐린 수용체 (insulin receptor)에 인슐린이 결합한 후 docking protein인 인슐린수용체기질 IRS-1 (IRS-1, insulin receptor substrate-1)의 인산화를 증가시키고, 인산화된 IRS-1는 PI3K (IP-3 kinase)를 인산화 시키며, 이는 AKT 단백질의 인산화를 유도한다. 인산화된 AKT는 세포내의 GLUT4 (GLUT4, glucose transporter 4)를 세포막으로 이동시켜 혈액 내의 포도당을 세포내로 흡수하여 혈당 농도를 낮춘다.

제2형 당뇨병에서의 주된 증상의 원인의 하나인 인슐린 저항성 (insulin resistance)은 생리적농도에서 인슐린 감수성 (insulin sensitivity)이 정상보다 저하된 대사상태 (metabolic state)로 정리된다. 즉, 인슐린 저항성 당뇨병이라고 불리는 제2형 당뇨병에서 췌장의 베타세포에서의 인슐린 생성 및 분비능이 보상적으로 증가(hyperinsulinemia)되어 있는 상태에서는 정상혈당을 유지하지만 인슐린의 분비 농도가 인슐린 저항성을 극복할 수 없어 혈당이 높은 상태가 된다. 인슐린 저항성이 발병되는 대표적인 원인으로는 조직에서의 유리지방산의 이용 증가로 간의 Diacylglycerol이 증가하고 이로 인하여 간과 근육조직에서의 PKCs (Phosphoenolpyruvate carboxykinase)와 JNK (c-Jun-N-terminal kinase), IKK-β (IKB kinase-β) 등을 활성화시키고, 활성화된 serine/threonine kinase에 의해 IRS1/2의 serine phosphorylation이 증가하고 tyrosine phosphorylation은 감소하게 되며, 그 결과 PI3K와 AKT의 활성을 감소시켜 GLUT4의 포도당 흡수가 감소하게 되어 간에서의 HGO (HGO, hepatic glucose output)이 억제되지 않아 인슐린 저항성이 발생하게 된다(대한내과학회지: 제77권 제2호, 2009).

이에, 본 발명에서는 퀴니자린 (quinizarin)이 1) 인슐린 저항성 (Insulin-resistance)이 유도된 분화된 근육세포에서 인슐린 저항성관련 마커인 IRS-1의 mRNA의 발현량을 감소시키는 기작으로 인슐린 저항성을 감소시키고, 2) 분화된 근육세포에서의 포도당 흡수 (Glucose uptake)를 촉진시키며, 3) 포도당 흡수 (Glucose uptake)를 촉진시키는 포도당 운반체 세포막 단백질인 GLUT-4의 발현을 증가시키고, 4) GLUT-4 단백질의 활성 및 세포막으로의 이동을 유도하는 단백질인 AKT의 인산화를 증가시켜 포도당 흡수율을 향상시킨다는 점을 확인함으로써 항당뇨 효능이 우수함을 입증하였다.

따라서, 본 발명은 일관점에서 퀴니자린(quinizarin) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 퀴니자린 (quinizarin)은 안트라퀴논 (anthraquinon)기본 골격에 1, 4번 탄소에 각각 OH그룹을 가진 구조로 되어 있고, [화학식 1]로 표시된다.

[화학식 1]

본 발명은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 함체와 함께 제제화 될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 퀴니자린 (quinizarin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 1 ~ 150 μM, 바람직하게는 5 ~ 100 μM, 더 바람직하게는 10 ~ 50μM 농도로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 다음과 같은 특징들로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

(ⅰ) 세포의 성장 비억제;

(ⅱ) 세포 내 포도당 흡수율 증가; 및

(ⅲ) 세포의 인슐린 저항성 감소.

본 발명에 있어서, 퀴니자린을 포함한 약학적 조성물을 근육세포에 투여하는 경우 근육세포의 성장을 0 ~ 11.5%로 감소시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 퀴니자린을 포함한 약학적 조성물은 근육세포의 세포 내 포도당 흡수율을 50 ~ 170%로, 바람직하게는 100 ~ 158%로 증가시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 AKT 및/또는 GLUT4 단백질 발현을 50% ~ 200%로 증가시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 IRS-1 단백질 발현을 10% ~ 50%로 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명은 다른 관점에서 퀴니자린을 유효성분으로 포함하는, 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능성 식품에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 건강기능성 식품은 퀴니자린 (quinizarin)을 1 ~ 150 μM, 바람직하게는 5 ~ 100 μM, 더 바람직하게는 10 ~ 50μM 농도로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 건강기능성 식품은 다음과 같은 특징들로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

(ⅰ) 세포의 성장 비억제;

(ⅱ) 세포 내 포도당 흡수율 증가; 및

(ⅲ) 세포의 인슐린 저항성 감소.

본 발명은 또다른 관점에서 다음 단계를 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료를 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.

(ⅰ) 환자로부터 분리된 샘플로부터 인슐린 저항성을 측정하는 단계;

(ⅱ) 상기 저항성을 정상 대조군의 인슐린 저항성과 비교하는 단계; 및

(ⅲ) 상기 환자의 인슐린에 대한 저항성이 정상 대조군의 인슐린에 대한 저항성과 비교하여 증가되어 있는 경우, 제1항 내지 제6항의 어느 한 항의 조성물 투여가 적합한 환자로 평가하는 단계.

본 발명에 있어서, 상기 환자는 공복혈당이 정상 대조군인 110 mg/dL 이하인데 비해 공복혈당이 140 mg/dL 이상이거나, 식후 2시간 이후 혈당이 정상인 140 mg/dL 이하인데 비해 식후 2시간 이후 혈당이 200 mg/dL 이상으로 증가된 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에서 용어 “예방”은 질병을 축소시키는 방지(averting), 지연(delaying), 방해(impeding) 또는 저해(hindering)와 관련된 것이다.

본 발명에서 용어 “치료”는 질병의 증상을 개선, 치유 또는 감소 또는 질병의 진행을 감소 또는 정지시키기 위해 질병에 걸린 피험자를 돌보는 것과 관련된 것이다.

본 발명에서, 용어 “약학적 조성물(pharmaceutical composition)”은 본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 희석제 또는 담체와 같은 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 혼합물을 의미한다. 약학적 조성물은 치료 용도를 위한 조성물뿐만 아니라 화장품 조성물을 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 그 필요에 따라 대상체에게 투여하는 방법이 제공되어 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 조성물은 인간에게 투여할 수 있다.

본 발명에서, 약학적 조성물의 설명은 원칙적으로 인간에게 투여하기 위한 약학적 조성물에 관한 것이지만, 통상의 기술자는 이러한 조성물이 일반적으로 모든 종류의 동물에게 투여하기 적합함을 이해하게 될 것이다. 다양한 동물에게 투여하기 위한 약학적 조성물의 변형을 잘 이해하고, 숙련된 수의학 약리학자는 필요하다면 단순히 통상적인 실험으로 이러한 변형을 설계 및/또는 수행할 수 있다.

본 발명에서, 약학적 조성물은 약리학 분야에 알려져 있거나 이후 내용에서 전개되는 임의의 방법에 의해 제조될 수도 있다. 일반적으로, 이러한 정제용 방법은 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 연관시키는 단계를 포함하고, 이어서 필요하거나 원하는 경우 생성물을 원하는 단일- 또는 다중-용량 단위로 성형 및/또는 포장하는 단계를 포함한다.

본 발명에서, 약학적 조성물은 단일 단위 용량 및/또는 복수의 단일 단위 용량으로서 제조, 포장, 및/또는 포장하지 않은 채로 판매될 수도 있다. 본원에서 사용하는 바와 같이, "단위 용량"은 사전 설정된 양의 활성 성분을 포함하는 약학적 조성물의 개별적인 양이다. 활성 성분의 양은 대상체에게 투여되는 활성 성분의 투여량 및/또는 그러한 투여량의 편리한 분획 예컨대 투여량의 1/2 또는 1/3과 일반적으로 동일하다.

본 발명에서, 약학적 조성물 내 활성 성분, 제약상 허용되는 부형제, 및/또는 임의의 추가 성분의 상대량은 치료 대상체의 동일성, 크기, 및/또는 장애에 따라 그리고 조성물이 투여되는 경로에 따라 변할 것이다. 예로서, 조성물은 0.1％ 내지 100％ (w/w) 활성 성분을 포함할 수도 있다.

본 발명에서, 제약상 허용되는 부형제는 특정한 투여 형태 목적에 적합한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 희석제, 또는 다른 액체 비히클, 분산액 또는 현탁 보조제, 표면 활성제, 등장화제, 증점제 또는 유화제, 보존제, 고체 결합제, 윤활제 등을 포함한다. 레밍턴(Remington)의 문헌[The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, (Lippincott, Williams ＆ Wilkins, Baltimore, MD, 2006]은 약학적 조성물 조제에 사용된 다양한 부형제 및 이의 제조를 위한 공지된 기술을 개시한다. 임의의 통상적인 담체 배지가 예컨대 임의의 원하지 않는 생물학적 효과를 제공하거나 다르게는 약학적 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용함으로써 물질 또는 그 유도체와 공존할 수 없는 것을 제외하고, 그 용도는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려한다. 제약상 허용되는 부형제는 적어도 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％ 순수하다.

상기 부형제는 인간 및 수의학적 용도에서 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국식품의 약품국에 의해 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 제약 등급이다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전(EP)의 표준을 충족한다.

일부 실시예에서, 부형제는 인간 및 수의학적 용도에서 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국식품의 약품국에 의해 승인되어 있다. 일부 실시예에서, 부형제는 제약 등급이다. 일부 실시예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전(EP)의 표준을 충족한다.

약학적 조성물의 제조에 사용된 제약상 허용되는 부형제는 불활성 희석제, 분산제 및/또는 과립화제, 표면 활성제 및/또는 유화제, 붕해제, 결합제, 보존제, 완충제, 윤활제, 및/또는 오일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

이러한 부형제는 임의로 본 발명의 제제에 포함될 수도 있다. 부형제 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스, 착색제, 코팅제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제는 조제사의 판단에 따라 조성물에 존재할 수 있다.

예시적인 희석제는 탄산칼슘, 탄산나트륨, 인산칼슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 칼슘 히드로겐 포스페이트, 인산나트륨 락토스, 수크로스, 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 염화나트륨, 건조 전분, 옥수수 전분, 분말형 당, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 과립화제 및/또는 분산제는 감자 전분, 옥수수 전분, 타피오카 전분, 소듐 스타치 글리콜레이트, 점토, 알긴산, 구아 검, 시트러스 펄프, 한천, 벤토나이트, 셀룰로스 및 목재 생성물, 천연 스폰지, 양이온-교환 수지, 탄산칼슘, 규산염, 탄산나트륨, 가교-결합형 폴리(비닐-피롤리돈) (크로스포비돈), 소듐 카르복시메틸전분 (소듐 스타치 글리콜레이트), 카르복시메틸 셀룰로스, 가교-결합형 소듐 카르복시메틸 셀룰로스 (크로스카르멜로스), 메틸셀룰로스, 예비젤라틴화 전분 (전분 1500), 미세결정질 전분, 수불용성 전분, 칼슘 카르복시메틸 셀룰로스, 규산알루미늄마그네슘 (비검), 소듐 라우릴 술페이트, 4급 암모늄 화합물, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 표면 활성제 및/또는 유화제는 천연 유화제 (예를 들어 아카시아, 한천, 알긴산, 알긴산나트륨, 트라가칸트, 촌드럭스(chondrux), 콜레스테롤, 크산탄, 펙틴, 젤라틴, 난황, 카세인, 양모 지방, 콜레스테롤, 왁스, 및 레시틴), 콜로이드성 점토 (예를 들어 벤토나이트 [규산알루미늄] 및 비검 [규산알루미늄마그네슘]), 장쇄 아미노산 유도체, 고분자량 알콜 (예를 들어 스테아릴 알콜, 세틸 알콜, 올레일 알콜, 트리아세틴 모노스테아레이트, 에틸렌 글리콜 디스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리비닐 알콜), 카르보머 (예를 들어 카르복시 폴리메틸렌, 폴리아크릴산, 아크릴산 중합체, 및 카르복시비닐 중합체), 카라기난, 셀룰로스 유도체 (예를 들어 카르복시메틸셀룰로스 소듐, 분말화 셀룰로스, 히드록시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스), 소르비탄 지방산 에스테르 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 [트윈 20], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 [트윈 60], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트 [트윈 80], 소르비탄 모노팔미테이트 [스팬 40], 소르비탄 모노스테아레이트 [스팬 60], 소르비탄 트리스테아레이트 [스팬 65], 글리세릴 모노올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트 [스팬80]), 폴리옥시에틸렌 에스테르 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트 [미르즈 45], 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일, 폴리에톡실화 피마자 오일, 폴리옥시메틸렌 스테아레이트, 및 솔루톨), 수크로스 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르 (예를 들어 크레모포르), 폴리옥시에틸렌 에테르, (예를 들어 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르 [브리즈 30]), 폴리(비닐-피롤리돈), 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 올레산나트륨, 칼륨 올레에이트, 에틸 올레에이트, 올레산, 에틸 라우레이, 소듐 라우릴 술페이트, 플루로닉 F 68, 폴록사머 188, 세트리모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드, 벤즈알코늄클로라이드, 도큐세이트 소듐, 및/또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 결합제는 전분 (예를 들어 옥수수 전분 및 전분 페이스트); 젤라틴; 당 (예를 들어 수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 덱스트린, 당밀, 락토스, 락티톨, 만니톨); 천연 및 합성 검 (예를 들어 아카시아, 알긴산나트륨, 아이리쉬 모스의 추출물, 판워 검, 섀티 검, 이사폴 후스크스의 점액, 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 폴리(비닐-피롤리돈), 규산알루미늄마그네슘 (비검), 및 라치 아라보갈락탄); 알기네이트; 폴리에틸렌 옥시드; 폴리에틸렌 글리콜; 무기 칼슘 염; 규산; 폴리메타크릴레이트; 왁스; 물; 알콜; 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 보존제는 항산화제, 킬레이트화제, 항미생물 보존제, 항진균 보존제, 알콜 보존제, 산성 보존제, 및 다른 보존제를 포함할 수도 있다. 예시적인 항산화제는 알파 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 모노티오글리세롤, 메타중아황산칼륨, 프로피온산, 프로필 갈레이트, 아스코르브산나트륨, 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 및 아황산나트륨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 킬레이트화제는 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 시트르산 1수화물, 이나트륨 에데테이트, 이칼륨 에데테이트, 에데트산, 푸마르산, 말산, 인산, 소듐 에데테이트, 타르타르산, 및 트리소듐 에데테이트를 포함한다. 예시적인 항미생물 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 벤질 알콜, 브로노폴, 세트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드, 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로크실레놀, 크레졸, 에틸 알콜, 글리세린, 헥세티딘, 이미드우레아, 페놀, 페녹시에탄올, 페닐에틸 알콜, 페닐질산수은 (phenylmercuric nitrate), 프로필렌 글리콜, 및 티메로살을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 항진균 보존제는 부틸 파라벤, 메틸 파라벤, 에틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤조산, 히드록시벤조산, 칼륨 벤조에이트, 소르브산칼륨, 벤조산나트륨, 프로피온산나트륨, 및 소르브산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 알콜 보존제는 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 페놀, 페놀계 화합물, 비스페놀, 클로로부탄올, 히드록시벤조에이트, 및 페닐에틸 알콜을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 산성 보존제는 비타민 A, 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로틴, 시트르산, 아세트산, 데히드로아세트산, 아스코르브산, 소르브산, 및 피트산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 보존제는 토코페롤, 토코페롤 아세테이트, 데테록시메 메실레이트, 세트리미드, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔드 (BHT), 에틸렌디아민, 소듐 라우릴 술페이트 (SLS), 소듐 라우릴 에테르 술페이트 (SLES), 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 칼륨 술파이트, 메타중아황산칼륨, 글리단트 플러스, 페노닙, 메틸파라벤, 저몰 115, 게르마벤 II, 네올론, 카톤, 및 에욱실을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시예에서, 보존제는 항-산화제이다. 다른 실시예에서, 보존제는 킬레이트화제이다.

예시적인 완충제는 시트레이트 완충 용액, 아세테이트 완충 용액, 포스페이트 완충제 용액, 염화암모늄, 탄산칼슘, 염화칼슘, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루비오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, D-글루콘산, 글리세로인산칼슘, 락트산칼슘, 프로판산, 칼슘 레불리네이트, 펜탄산, 이염기성 인산칼슘, 인산, 삼염기성 인산칼슘, 수산화칼슘 포스페이트, 아세트산칼륨, 염화칼륨, 글루콘산칼륨, 칼륨 혼합물, 이염기성 인산칼륨, 일염기성 인산칼륨, 인산칼륨 혼합물, 아세트산나트륨, 중탄산나트륨, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 락트산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 일염기성 인산나트륨, 인산나트륨 혼합물, 트로메타민, 수산화마그네슘, 수산화알루미늄, 알긴산, 피로겐-자유수, 등장성 염수, 링거(Ringer's) 용액, 에틸 알콜, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 윤활제는 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 스테아르산, 실리카, 활석, 맥아, 글리세릴 베하네이트, 수소화 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 류신, 마그네슘 라우릴 술페이트, 소듐 라우릴 술페이트, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

예시적인 오일은 아몬드, 살구 커넬, 아보카도, 바바수야자, 베르가모트, 흑색 커런트 종자, 보리지, 케이드, 카모마일, 카놀라, 카라웨이, 카르나우바, 카스토르, 시나몬, 코코아 버터, 코코넛, 대구 간, 커피, 옥수수, 목화 종자, 에뮤, 유칼립투스, 달맞이꽃, 생선, 아마 씨, 게라니올, 호박, 포도 종자, 개암, 히솝, 이소프로필 미리스테이트, 호호바, 쿠쿠이 넛, 라반딘, 라벤더, 레몬, 리트세아 쿠베바, 마카데미아 넛, 아욱, 망고 종자, 메도우폼 종자, 밍크, 넛멕, 올리브, 오렌지색의 오렌지색 라피, 팜, 팜핵, 복숭아 커넬, 땅콩, 양귀비 종자, 호박 종자, 평지씨, 쌀겨, 로즈마리, 홍화, 샌달우드, 사스쿠아나, 세이보리, 산자나무, 참깨, 시어 버터, 실리콘, 대두, 해바라기, 티트리, 엉겅퀴, 쓰바키, 베티버, 호두, 및 밀 배아 오일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 오일은 부틸 스테아레이트, 카프릴산 트리글리세리드, 카프르산 트리글리세리드, 시클로메티콘, 디에틸 세바케이트, 디메티콘 360, 이소프로필 미리스테이트, 미네랄 오일, 옥틸도데칸올, 올레일 알콜, 실리콘 오일, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

경구 및 비경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 활성 성분 외에, 액체 투여 형태는 본 기술분야에 공동으로 사용된 불활성 희석제 예컨대, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 싹, 올리브, 아주까리, 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸르푸릴 알콜, 소르비탄의 폴리에틸렌 글리콜 및 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 포함할 수도 있다. 불활성 희석제 외에, 경구 조성물은 아주반트 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 및 퍼퓸제를 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 특정 실시예에서, 본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 가용화제 예컨대 크레모포르, 알콜, 오일, 변성 오일, 글리콜, 폴리소르베이트, 시클로덱스트린, 중합체, 및 이들의 조합과 혼합된다.

주사가능한 제제, 예를 들어, 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액은 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 공지된 기술 분야에 따라 조제될 수도 있다. 멸균 주사가능한 제제는 비독성 비경구 허용되는 희석제 또는 용매, 예를 들어, 1,3-부탄디올 내 용액에서의 멸균 주사가능한 용액, 현탁액 또는 에멀젼일 수도 있다. 허용되는 비히클 및 용매 중에서 채택될 수도 있는 것은 물, 링거(Ringer's) 용액, U.S.P. 및 등장성 염화나트륨용액이다. 또한, 멸균, 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 채택되고 있다. 이를 위하여 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함하는 임의의 무자극 고정 오일이 채택될 수 있다. 또한, 지방산 예컨대 올레산이 주사제의 제조에 사용되고 있다.

주사가능한 제제는 예를 들어 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 전에 멸균수 또는 다른 멸균 주사가능한 배지에 용해 또는 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태인 멸균제를 포함시킴으로써 멸균될 수 있다.

약물의 효과를 연장하기 위하여, 흔히 피하 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 느리게 하는 것이 바람직하다. 이는 낮은 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액을 사용함으로써 이루어진다. 그러면 약물의 흡수율은 결국 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있는 용해율에 좌우된다. 대안으로, 비경구 투여 약물의 지연된 흡수는 오일 비히클에서 약물을 용해 또는 현탁화함으로써 이루어진다.

본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 국소 및/또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제 및/또는 패치를 포함할 수도 있다. 일반적으로, 활성 성분은 멸균 장애하에서 제약상 허용되는 담체 및/또는 임의의 필요한 보존제 및/또는 요구될 수도 있는 완충제와 혼합되어 있다. 추가로, 본 발명은 흔히 활성 성분의 몸체로의 제어된 전달을 제공하는 추가 장점을 갖는 경피 패치의 사용을 고려한다. 이러한 투여 형태는 예를 들어 활성 성분을 적당한 배지에 융해 및/또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 대안으로 또는 추가로, 비율 제어 막을 제공하고/거나 활성 성분을 중합체 매트릭스 및/또는 겔에 분산시킴으로써 비율이 제어될 수도 있다.

국소 투여를 위한 제제는 액체 및/또는 세미 액체 제제 예컨대 도찰제, 로션, 수중유 및/또는 유중수 에멀젼 예컨대 크림, 연고/또는 페이스트, 및/또는 용액 및/또는 현탁액을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 활성 성분의 농축이 용매 내 활성 성분의 용해도 한계만큼 높을 수도 있지만, 국소-투여가능한 제제는 예를 들어 약 1％ 내지 약 10％ (w/w) 활성 성분을 포함할 수도 있다. 국소 투여를 위한 제제는 본원에서 기술한 하나 이상의 추가 성분을 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 전형적으로 쉬운 투여 및 균일한 투여를 위하여 투여 단위 형태로 제조된다. 그러나 본 발명의 조성물의 total 일일 용법은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 담당의에 의해 결정될 것임을 이해하게 될 것이다. 임의의 특정 대상체에 대한 특정한 치료 유효 용량 수준은 질환, 장애, 또는 치료 중인 장애 및 장애의 심각도를 포함하는 다양한 인자; 채택된 특정 활성 성분의 활성; 채택된 특정 조성물; 대상체의 나이, 체중, 전반적인 건강, 성별 및 다이어트; 채택된 특정 활성 성분의 투여 시간, 투여 경로, 및 배설율; 치료 기간; 채택된 특정 활성 성분과 조합하거나 동시에 사용한 약물; 및 의료 분야에 잘 알려진 인자 등에 좌우될 것이다.

본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 임의의 경로로 투여될 수도 있다. 일부 실시예에서, 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 수질내, 척수강내, 피하, 뇌실내, 경피, 피내, 직장, 질내, 복강내, 국소(분말, 연고, 크림, 및/또는 액적에 의함), 점막, 코, 입, 경장, 설하; 기관내 점적주입, 기관지 점적주입, 및/또는 흡입; 및/또는 경구 스프레이, 비강 스프레이, 및/또는 에어로졸을 포함하는 다양한 경로에 의해 투여된다. 구체적으로 고려되는 경로는 침투성 정맥내 주사, 혈액 및/또는 림프 공급을 통한 국부 투여, 및/또는 환부 부위에 대한 직접 투여이다. 일반적으로 투여의 가장 적합한 경로는 작용제의 특성(예를 들어, 위장관의 환경에서의 안정성), 및 대상체의 장애(예를 들어 대상체가 경구 투여를 참을 수 있는지 여부)를 포함하는 다양한 인자에 좌우될 것이다. 현재 경구 및/또는 비강 스프레이 및/또는 에어로졸 경로가 치료제를 폐 및/또는 호흡기계에 직접 전달하기 위하여 가장 공통으로 이용되고 있다. 그러나 본 발명은 약물 전달 분야에서의 진전을 고려하는 임의의 적절한 경로에 의한 본 발명에 따른 약학적 조성물의 전달을 포함한다.

특정 실시예에서, 본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매일 대상체 체중의 약 0.001 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 25 mg/kg을 하루에 1회 이상 전달하기 충분한 투여량 수준으로 투여하여 원하는 치료 효과를 얻을 수도 있다. 목적 투여량은 하루에 세 번, 하루에 두 번, 하루마다, 이틀마다, 삼일마다, 매주마다, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 전달될 수도 있다. 특정 실시양태에서, 목적 투여량은 다중 투여(예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 회 이상의 투여)를 통해 전달될 수도 있다.

본 발명에서, 용량 범위는 성인에게 제공된 약학적 조성물의 투여에 대한 가이던스를 제공함을 이해하게 될 것이다. 예를 들어 어린이 또는 청소년에게 투여되는 양은 전문의 또는 본 기술분야의 숙련자에 의해 결정될 수 있고, 성인에게 투여되는 것보다 적거나 동일할 수 있다. 유효량을 달성하는 데 요구되는 본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 정확한 양은 예를 들어 대상체의 종, 나이, 및 전반적인 장애, 부작용 또는 장애의 심각도, 특성 화합물의 동일성, 투여 방식 등에 따라 대상체마다 다를 것이다.

본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 조합 요법으로 사용될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 조합 요법에 사용되기 위한 치료의 특정한 조합(치료제 또는 절차)은 달성될 목적 치료 효과 및 목적 치료제 및/또는 절차의 적합성을 고려할 것이다.

본 발명에서, 약학적 조성물은 단독으로 또는 하나 이상의 치료 활성제와 조합하여 투여될 수 있다. "조합"의 경우, 다음 전달 방법이 본 발명의 범위에 속하긴 하지만, 작용제가 꼭 동일한 시간에 투여되어야 하고/하거나 같이 전달되기 위해 제형화되어야 한다는 것을 시사하도록 의도되진 않는다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적 치료제 또는 의료 절차와 동시에, 그보다 먼저, 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각 작용제는 그 작용제에 대해 정해진 투여량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다. 추가로, 본 발명은 신체 내에서 그의 생체이용률을 개선시키고, 그의 대사를 감소 및/또는 수정하고, 그의 분비를 억제하고, 및/또는 그의 분포를 수정할 수 있는 작용제와 조합하여 본 발명의 약학적 조성물을 전달하는 것을 아우른다. 이 조합에서 사용되는 본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 치료 활성제는 단일 조성물로 같이 투여되거나 상이한 조성물로 별도로 투여될 수 있다는 것이 더 이해될 것이다.

조합 요법에 사용되는 특정한 조합은 달성될 목적 치료 효과 및/또는 치료 활성제의 적합성을 고려할 것이다. 사용되는 조합은 동일한 장애에 대해 목적 효과를 달성할 수 있고(예를 들어, 본 발명에 따른 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 동일한 장애를 치료하는 데 사용되는 또 다른 치료 활성제와 병용하여 투여될 수 있다), 및/또는 이것들은 상이한 효과를 달성할 수 있다(예를 들어, 임의의 부작용 제어)는 것이 이해될 것이다.

본 발명에서, "치료 활성제"는 장애를 치료, 예방, 지연, 환원 또는 개선시키기 위한 의약으로서 사용되는 임의의 물질을 가리키고, 예방적 및 치유적 치료를 포함하는, 치료에 사용되는 물질을 가리킨다.

일부 실시예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 하나 이상의 증상 또는 암 특징을 치료, 경감, 개선, 완화시키고, 그 개시를 지연시키고, 그 진행을 억제시키고, 그 중증도를 감소시키고, 및/또는 그 발생률을 감소시키는 데 유용한 임의의 치료 활성제 또는 절차 (예를 들어, 수술, 방사선 요법)와 조합하여 투여될 수 있다.

본 발명에서 용어 “약학적으로 허용가능한 염”이란, 모(parent) 화합물의 바람직한 약리(pharmacological) 활성을 갖는, 화합물의 염을 가리키며, 비록 “약학적으로”라고 기재하고는 있으나, 식품에 사용가능한 염 또한 포함한다. 이들은 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 가리키며, 상기 염으로는 당업계에 널리 알려진 염들을 사용하면 되며, 특별히 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

본 발명의 상기 퀴니자린 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 신경내분비종양 예방 또는 치료용 조성물은 이를 유효성분으로 포함하는 어떠한 제형으로도 적용가능하며, 경구용 또는 비경구용 제형으로 제조할 수 있다. 본 발명의 약학적 제형은 구강(oral), 직장(rectal), 비강(nasal), 국소(topical; 볼 및 혀 밑을 포함), 피하, 질(vaginal) 또는 비경구(parenteral; 근육내, 피하 및 정맥내를 포함) 투여에 적당한 것 또는 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.

본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 경구 투여용 제형으로는, 예를 들어 정제, 트로키제, 로렌지, 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제로 제제화할 수 있다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제, 스테아르산 마스네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유를 포함할 수 있으며, 캡슐제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 비경구 투여용 제형으로는, 피하주사, 정맥주사 또는 근육내 주사등의 주사용 형태, 좌제 주입방식 또는 호흡기를 통하여 흡입이 가능하도록 하는 에어로졸제 등 스프레이용으로 제제화할 수 있다. 주사용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 좌제로 주입하기 위해서는, 코코아버터 또는 다른 글리세라이드 등 통상의 좌약 베이스를 포함하는 좌약 또는 관장제와 같은 직장투여용 조성물로 제제화할 수 있다. 에어로졸제 등의 스프레이용으로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않은 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명한 것이다.

[실시예]

퀴니자린(quinizarin)의 분화되지 않은 근육세포생존율 측정

C2C12 (Mouse myoblast cell line) 근육세포에 대한 퀴니자린 (Quinizarin)의 세포 생존률을 측정하기 위해 CCK 어세이 (CCK-8 kit)를 실시하였다. 근육세포로 분화시키지 않은 C2C12세포를 96-웰 플레이트 (96-well plate)에 0.5×10⁴cells/well로 분주하여 24시간 동안 5 % CO₂, 37℃ 인큐베이터 (incubator)에서 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)에 10% FBS (Welgene, USA), 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin)을 첨가한 배지에서 배양하였다. 배양 후 배양액을 제거하고 DMEM HG medium과 퀴니자린 (Quinizarin)을 농도별로 (0 μM, 1 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, 50 μM)을 처리한 후 24시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 이후 CCK시약을 10 μL/well로 넣어준 후 인큐베이터에서 30분 동안 배양한 후 ELISA reader로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다(도 1).

그 결과, 퀴니자린을 0 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, 50 μM 의 농도로 처리하였을 때, 세포 생존력에는 변화가 없는 것으로 확인되어 50 μM 농도까지는 세포 독성은 없는 것으로 나타났다(도 1).

퀴니자린(quinizarin)의 분화된 근육세포생존율 측정

C2C12 (mouse myoblast cell line) 근육세포에 대한 퀴니자린 (quinizarin)의 세포 생존률을 측정하기 위해 CCK 어세이 (CCK-8 kit)를 실시하였다. 분화 유도후의 세포생존률 확인은 앞선 분화 유도 전의 경우와 마찬가지로 C2C12 근육세포를 96-웰 플레이트 (96-well plate)에 0.5×10⁴cells/well로 분주하여 24시간 동안 5 % CO₂, 37℃인큐베이터(incubator)에서 배양하였다. 이 후 배양액을 제거하고 배지를 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin), 2% Horse serum (Gibco, USA) 이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)으로 바꾸어 7일 동안 분화 유도하였다. 그 후에 DMEM HG medium과 퀴니자린 (quinizarin)을 농도별로 (0 μM, 1 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, 50 μM)을 처리한 후 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 다음 CCK시약을 10 μL/well로 넣어준 후 인큐베이터에서 30분 동안 배양한 후 ELISA reader로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다(도 2).

그 결과, 퀴니자린을 0 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, 50 μM의 농도로 처리하였을 때, 세포 생존력에는 변화가 없는 것으로 확인되어 50 μM 농도까지는 세포 독성은 없는 것으로 나타났다(도 2).

퀴니자린(quinizarin)이 분화된 근육세포에서 포도당 흡수(glucose uptake)에 미치는 영향 분석

분화된 C2C12 (Mouse myoblast cell line) 근육세포에 대한 퀴니자린 (quinizarin)의 포도당 흡수 효과를 조사하기 위해 C2C12 근육세포를 96-웰 블랙 플레이트 (96-well black plate)에 0.5 × 10⁴ cells/well 밀도로 분주하고 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin), 2% Horse serum (Gibco, USA) 이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)으로 매일 배지를 교체하면서 7일 동안 근육세포를 분화시킨 후 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose (DMEM LG medium; Welgene, USA) 배지로 교체하여 16시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 배양액을 제거한 뒤 DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, 1X)로 2번 워싱한 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Glucose Free (DMEM GF medium; Welgene, USA)에 퀴니자린을 0 μM, 20 μM, 30 μM, 또는 40 μM의 농도로 3시간 30분 처리하였다. Quercetin-3-O-xyloside 처리 이후 insulin (Sigma aldrich, USA)을 1 μM 농도로 30분 처리하였다. 2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deoxyglucose (2-NBDG: Invitrogen, USA)을 50 μM 농도로 2시간 처리하였다. 인산완충식염수로 세척한 후 형광분광광도계(기기 제조사)로 485 nm (exitation), 535 nm (emission) 에서 세포 내 2-NBDG 함량을 측정하였다(도 3).

그 결과, 퀴니자린 (quinizarin)을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM 의 농도로 처리한 후 인슐린단독 처리군과 인슐린-퀴니자린 병합 처리군을 비교했을 때, 인슐린 및 퀴니자린을 병합 처리하였을 때 근육세포의 포도당 흡수량 수준이 농도 의존적으로 증가함을 확인할 수 있다(도 3). 이는 퀴니자린이 근육세포에서 포도당 흡수를 촉진시킨다는 것을 나타낸다.

퀴니자린(quinizarin)의 인슐린 저항성이 유도된 분화된 근육세포에서 포도당 흡수에 미치는 영향 분석

인슐린 저항성이 유도된 분화된 C2C12 (mouse myoblast cell line) 근육세포에 대한 퀴니자린(quinizarin)의 포도당 흡수 효과를 조사하기 위해 C2C12 근육세포를 96-웰 블랙 플레이트 (96-well black plate)에 0.5 × 10⁴ cells/well 밀도로 분주하고 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin), 2% Horse serum (Gibco, USA) 이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)으로 매일 배지를 교체하면서 7일 동안 근육세포를 분화시킨 후 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose (DMEM LG medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지로 교체하여 16시간 동안 인큐베이터에서 배양하여 인슐린 저항성을 유도하였다. 배양액을 제거한 뒤 DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, 1X)로 2번 워싱한 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Glucose Free (DMEM GF medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지에 퀴니자린을 0 μM, 20 μM, 30 μM, 또는 40 μM의 농도로 3시간 30분 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 이후 insulin (Sigma aldrich, USA)을 1 μM 농도로 30분 처리하였다. 2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deoxyglucose (2-NBDG: Invitrogen, USA) 을 50 μM 농도로 2시간 처리하였다. 다음 인산완충식염수로 세척한 후 형광분광광도계(기기 제조사)로 485 nm (exitation), 535 nm (emission)에서 세포 내 2-NBDG 함량을 측정하였다(도 4).

그 결과, 퀴니자린 (quinizarin)을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM의 농도로 처리한 후 Pa+In 처리군과 퀴니자린 처리군을 비교했을 때, 퀴니자린을 처리한 근육세포의 포도당 흡수량 수준이 농도 의존적으로 증가함을 확인할 수 있다(도 4). 이는 퀴니자린이 인슐린 저항성이 유도된 근육세포에서 포도당 흡수를 촉진 시킨다는 것을 나타낸다.

퀴니자린(quinizarin) 처리 후 인슐린 저항성이 유도된 근육세포에서의 GLUT4 mRNA 발현 수준 분석

퀴니자린 (quinizarin)의 항당뇨 관련 기전을 조사하기 위해 인슐린 저항성이 유도된 분화된 C2C12 근육세포에 대해 GLUT-4 (glucose transporter type 4)의 mRNA 발현량을 RT-PCR (Reverse transcriptase polymerase chain reaction)방법으로 조사하였다.

구체적으로, C2C12 근육세포를 6-웰 플레이트 (6-well plate)에 1 × 10 cells/well의 농도로 시딩 (seeding)하고 24시간 후 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin), 2% Horse serum (Gibco, USA) 이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)으로 배지를 갈아서 7일 동안 근육세포를 분화시켰다. 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose (DMEM LG medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지로 교체하여 16시간 동안 인큐베이터에서 배양하여 인슐린 저항성을 유도하였다. 배양액을 제거한 뒤 DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, 1X)로 2번 워싱한 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Glucose Free (DMEM GF medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지에 퀴니자린을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM의 농도로 3시간 30분 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 이후 insulin (Sigma aldrich, USA)을 1 μM 농도로 2시간 30분 처리한 후 1X DPBS로 3번 워싱 한다음 RNA 추출키트 (Total RNA extraction kit, Intron)를 이용하여 RNA를 얻었다. 추출한 RNA는 정량한 후 cDNA합성 키트 (Applied biosystems)를 이용하여 cDNA를 합성하였고, 합성된 cDNA에 GLUT4 primer (F-CAG CTC TCA GGC ATC AAT; R-TCT ACT AAG AGC ACC GAG, Cosmogenetech, Seoul, Korea)를 이용하여 RT-PCR를 수행한 후 2% agarose gel로 전기영동을 진행하여 mRNA발현량을 조사하였다(도 5).

그 결과, 퀴니자린 (quinizarin)을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM 의 농도로 처리한 후 Pa+In 처리군과 퀴니자린 처리군을 비교했을 때, 퀴니자린을 처리한 근육세포의 GLUT4 mRNA 발현 레벨수준이 농도 의존적으로 증가함을 확인할 수 있다(도 5). 이는 퀴니자린이 인슐린 저항성이 유도된 근육세포에서 포도당 흡수가 증가되는 기작으로 GLUT4의 mRNA발현량을 증가시킴으로서 항당뇨 효능이 있다는 것을 나타낸다.

퀴니자린(quinizarin) 처리 후 인슐린 저항성이 유도된 분화된 근육세포에서의 AKT 단백질 발현 수준 분석

퀴니자린(quinizarin)의 항당뇨 관련 기전을 조사하기 위해 인슐린 저항성이 유도된 분화된 C2C12 근육세포에 대해 AKT 단백질의 단백질 발현 감소 또는 증가를 웨스턴 블렛 (western blot)방법으로 조사하였다. 구체적으로, C2C12 근육세포를 6-웰 플레이트 (6-well plate)에 1 × 10 cells/well의 농도로 시딩 (seeding)하고 24시간 후 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin), 2% Horse serum (Gibco, USA) 이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)으로 배지를 갈아서 7일 동안 근육세포를 분화시켰다. 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose (DMEM LG medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지로 교체하여 16시간 동안 인큐베이터에서 배양하여 인슐린 저항성을 유도하였다. 배양액을 제거한 뒤 DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, 1X)로 2번 워싱한 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Glucose Free (DMEM GF medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지에 퀴니자린을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM 의 농도로 3시간 30분 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 이후 insulin (Sigma aldrich, USA)을 1 μM 농도로 2시간 30분 처리한 후 1X DPBS로 3번 워싱 한다음 각 웰에 60 μL의 용해 버퍼 (lysis buffer)를 첨가 후, 스크래퍼로 세포를 긁어모은 후 30분 동안 얼음 상에서 반응시키고, 12,000 rpm에서 10분 동안 원심분리 하여 단백질을 수득하였다. 이후 수득한 단백질을 브래드포드 분석법 (Bradford 분석법)을 이용하여 단백질을 정량 후 샘플 버퍼(sample buffer)를 넣고 95℃에서 5분 동안 변성시킨 뒤에 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 겔을 이용하여 전기영동 하였다. 전기영동 후 폴리 비닐 다이플루오라이드 막 (poly-vinyl difluoride membrane)에 옮긴 후, 1차 항-phospho AKT, 항-total AKT (CST, USA)항체를 (1:1000, v/v)를 5% 탈지분유 (skim milk)에 희석하여 폴리 비닐 다이플루오라이드 막에 넣고 4℃에서 24시간 반응시켰다. 이후 TBST (Tris-Buffered Saline와 Tween 20의 혼합액, 0.1% Tween 20)로 10분마다 3번 세척하고 HRP (horeseradish peroxidase)-conjugated 2차 항체를 5% 탈지분유에 (1:2000 v/v)으로 희석하여 5 μL 첨가한 후 25 ℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 위와 같은 방법으로 TBST를 이용하여 3차례 세척한 후 ECL (enchanced chemiluminescence) 기질 용액을 막아 1분 동안 반응시킨 후에 X-ray 필름에 현상하였다. 얻어진 결과를 이미지 J 프로그램을 이용하여 수치화하였고, [도 6]에 나타냈다.

그 결과, 퀴니자린 (quinizarin)을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM 의 농도로 처리한 후 Pa+In 처리군과 퀴니자린 처리군을 비교했을 때, 퀴니자린을 처리한 근육세포의 인산화된 AKT 발현 레벨수준이 농도 의존적으로 증가함을 확인할 수 있다(도 6). 이는 퀴니자린이 인슐린 저항성이 유도된 근육세포에서 AKT 단백질 인산화를 증가되는 기작에 의해 GLUT4 단백질 활성 및 세포표면으로의 이동을 유도하여 혈당을 낮추는 항당뇨 효능이 있다는 것을 나타낸다.

퀴니자린 (quinizarin) 처리 후 인슐린 저항성이 유도된 근육세포에서의 IRS-1 mRNA 발현 수준 분석

퀴니자린 (quinizarin)의 항당뇨 관련 기전을 조사하기 위해 인슐린 저항성이 유도된 분화된 C2C12 근육세포에 대해 IRS-1 (insulin receptor substrate 1)의 mRNA 발현량을 RT-PCR (Reverse transcriptase polymerase chain reaction)방법으로 조사하였다.

구체적으로, C2C12 근육세포를 6-웰 플레이트 (6-well plate)에 1 × 10 cells/well의 농도로 시딩 (seeding)하고 24시간 후 1% 페니실린 스트렙토마이신 (penicillin streptomysin), 2% Horse serum (Gibco, USA) 이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle's Medium High glucose (DMEM HG medium; Hyclone, USA)으로 배지를 갈아서 7일 동안 근육세포를 분화시켰다. 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose (DMEM LG medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지로 교체하여 16시간 동안 인큐베이터에서 배양하여 인슐린 저항성을 유도하였다. 배양액을 제거한 뒤 DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, 1X)로 2번 워싱한 다음 Dulbecco's Modified Eagle's Medium Glucose Free (DMEM GF medium; Welgene, USA)에 0.5 mM Palmitic acid와 1% BSA가 포함된 배지에 퀴니자린을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM 의 농도로 3시간 30분 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 이후 insulin (Sigma aldrich, USA)을 1 μM 농도로 2시간 30분 처리한 후 1X DPBS로 3번 워싱 한다음 RNA 추출키트 (Total RNA extraction kit, Intron)를 이용하여 RNA를 얻었다. 추출한 RNA는 정량한 후 cDNA합성 키트 (Applied biosystems)를 이용하여 cDNA를 합성하였고, 합성된 cDNA에 IRS-1 primer (F-AAT AGC CGT GGT GAT TAC AT, R-CAG AAG CAG AAG CAG AGG,Cosmogenetech, Seoul, Korea)를 이용하여 RT-PCR를 수행한 후 2% agarose gel로 전기영동을 진행하여 mRNA발현량을 조사하였다(도 7).

그 결과, 퀴니자린 (quinizarin)을 10 μM, 20 μM, 또는 50 μM 의 농도로 처리한 후 Pa+In 처리군과 퀴니자린 처리군을 비교했을 때, 퀴니자린을 50 μM 처리한 근육세포의 IRS-1 mRNA 발현 레벨수준이 인슐린 저항성을 유도하지 않은 N (normal)군과 거의 비슷한 농도로 감소함을 확인할 수 있다(도 7). 이는 퀴니자린이 인슐린 저항성이 유도된 근육세포에서 IRS-1의 mRNA농도를 감소시킴으로서 인슐린 저항성을 감소시키는 항당뇨 효능이 있다는 것을 나타낸다.

Claims (13)

1. 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 퀴니자린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 1 ~ 150μM의 농도로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 다음과 같은 특징들로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물:
   (ⅰ) 세포의 성장 비억제;
   (ⅱ) 세포 내 포도당 흡수율 증가; 및
   (ⅲ) 세포의 인슐린 저항성 감소.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 AKT 및/또는 GLUT4 단백질 발현을 50% ~ 200%로 증가시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 IRS-1 단백질 발현을 10% ~ 50%로 감소시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
7. 퀴니자린을 유효성분으로 포함하는, 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능성 식품.
   
8. 제7항에 있어서,
   상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 하는, 건강기능성 식품.
   
9. 제7항에 있어서,
   상기 건강기능성 식품은 퀴니자린을 1 ~ 150μM의 농도로 포함하는 것을 특징으로 하는, 건강기능성 식품.
   
10. 제7항에 있어서,
    상기 건강기능성 식품은 다음과 같은 특징들로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 건강기능성 식품:
    (ⅰ) 세포의 성장 비억제;
    (ⅱ) 세포 내 포도당 흡수율 증가; 및
    (ⅲ) 세포의 인슐린 저항성 감소.
    
11. 다음 단계를 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료를 위한 정보를 제공하는 방법:
    (ⅰ) 환자로부터 분리된 샘플로부터 인슐린 저항성을 측정하는 단계;
    (ⅱ) 상기 저항성을 정상 대조군의 인슐린 저항성과 비교하는 단계; 및
    (ⅲ) 상기 환자의 인슐린에 대한 저항성이 정상 대조군의 인슐린에 대한 저항성과 비교하여 증가되어 있는 경우, 제1항 내지 제6항의 어느 한 항의 조성물 투여가 적합한 환자로 평가하는 단계.
    
12. 제11항에 있어서,
    상기 환자는 공복혈당이 140 mg/dL 이상이거나 식후 2시간 이후 혈당이 200 mg/dL 이상으로 증가된 것을 특징으로 하는, 방법.
    
13. 제11항에 있어서,
    상기 당뇨병은 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 하는, 방법.

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