KR20230057391A - 프럭타나제를 포함하는 구강 관리 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 프럭타나제를 포함하는 구강관리 조성물, 의약으로서의 상기 조성물의 용도, 경구 질환의 치료에서의 상기 조성물의 용도, 상기 조성물을 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법, 생물막을 상기 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 생물막의 제거 방법, 상기 조성물을 포함하는 부품의 키트, 및 프럭타나제에 관한 것이다.

Description

프럭타나제를 포함하는 구강 관리 조성물

서열목록에 대한 참조

본 출원은 컴퓨터로 판독 가능한 형태의 서열 목록을 포함한다. 컴퓨터로 판독 가능한 형태가 본 명세서에 참조로 포함된다.

기술분야

본 발명은 프럭타나제(fructanase)를 포함하는 구강관리 조성물, 의약으로서의 상기 조성물의 용도, 경구 질환의 치료에서의 상기 조성물의 용도, 상기 조성물을 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법, 물체를 상기 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는 생물막의 제거 방법, 상기 조성물을 포함하는 부품의 키트, 및 프럭타나제에 관한 것이다.

생물막(biofilm)은 구강 표면을 포함하는 다수의 상이한 환경의 고체 표면 상에서 발견되는 박테리아의 군집이다. 구강 생물막 또는 치태는 구강 건강 문제, 예컨대, 구취, 탈회, 치아 우식증, 충치, 잠재적 치아 상실 및 치주질환(치은염 및 치주염)과 연관된 다수의 박테리아를 포함한다.

구강 생물막의 형성은 각각 유도기, 성장기 및 정상 상태로서 알려진 3단계에서 일어난다. 유도기에서, 타액으로부터의 당단백질은 구강 표면, 예컨대, 치아에 결합하고, 박테리아에 대한 부착 부위로서 작용하는 피막으로 지칭되는 구조를 생성한다. 성장기에서, 공동 응집(co-aggregation)이 일어나며, 즉, 2차 박테리아 이주종(colonizer)이 1차 박테리아 이주종에 부착되어, 생물막의 밀도를 증가시키고, 생물막을 성장 및 성숙시킨다. 정상 상태에서, 생물막 성장은 지연되고, 종국적으로 중단된다. 이런 단계-기반 형성 주기는 생물막이 여러 개의 연속층에 존재하게 하여, 생물막의 물리적 마모를 더 어렵게 한다.

생물막 내에서, 존재하는 박테리아 세포는 주로 물, 단백질, 세포외다당류, 지질다당류, 지질, 계면활성제 및 세포외 DNA로 이루어진 세포외 중합체 기질에서 분포되며, 세포외다당류는 생물막의 건조 중량의 주요 부분을 차지한다(H. C. Flemming, and J. Wingender (2010), Nat. Rev. Microbiol. 8, 623-633). 세포외다당류는 (1-3)-α-D-글루칸, (1-4)-α-D-글루칸, (1-6)-α-D-글루칸 및 (2-6)-β-D-프럭탄을 포함하는, 주로 글루코스 및 프럭토스 동종중합체이다. 이들 다당류는 섭취된 수크로스로부터 스트렙토코커스 종(Streptococcus spp.), 락토바실러스 종(Lactobacillus spp.) 및 악티노마이세스 종(Actinomyces spp.)과 같은 구강 박테리아에 의해 분비된 글루코실트랜스퍼라제 및 프럭토실트랜스퍼라제에 의해 합성된다. 뮤탄스(Mutans) 및 덱스트란은 치태 형성에서 특히 중요한 글루칸이다. 뮤탄스는 이들의 측쇄에서 (1-3)-α 결합 및 (1-6)-α-글리코사이드 결합으로 연결된 글루코스 분자로 구성된 주요 사슬을 갖는 고도로 분지된 구조를 갖는다. 덱스트란은 또한 (1-3)-α-결합으로부터 시작하는 이들의 골격 및 측쇄에서 수많은 연속 (1-6)-α-결합을 포함하는 글루코스의 고분자량 중합체이다(M. Pleszczynska et al. (2016), Biotechnol. Appl. Biochem. 64(3), 337-346). 프럭탄은 주로 선형 다당류이고, 주로 β-(2,6)-연결 프럭토실 잔기 및 일부 β-(2,1)-연결된 분지로 이루어진다.

항균제에 대한 증가된 내성뿐만 아니라 생물막의 기계적 특성 때문에, 다수의 현재의 구강관리 제품은 생물막 형성을 처리하고 연관된 구강 건강 문제를 완화시키는 것에 있어서는 다소 비효율적이다. 생물막 제거에 대한 주요 초점은 기계적 마모에 있었다. 그러나, 이 접근은 생물막의 다층 특성으로 인해 곤란하며, 예를 들어, 칫솔질에 의한 생물막의 기계적 제거가 생물막이 부착 및 확장되는 구강의 면적을 넓게 및 깊게 만들고, 그에 따라 이를 감소시키기보다는 문제의 심각도를 잠재적으로 증가시킨다는 사실에 의해 추가로 손상된다.

구강 질환에서 생물막의 중요한 역할을 고려해서, 구강 생물막을 효과적으로 표적화할 수 있는 구강관리 조성물에 대한 당업계의 요구가 있다. WO 1997/38669(Novozymes)는 뮤타나제 및 덱스트라나제를 포함하는 구강관리 조성물을 기재하고, WO 1998/57653(Novozymes)은 덱스트라나제 및 풀룰라나제를 포함하는 구강관리 조성물을 제공하며, WO 2000/17331은 파에니바실루스(Paenibacillus) 프럭타나제를 포함하는 구강관리 조성물을 개시하고, WO 2020/099490(Novozymes)은 뮤타나제 및 DNase를 포함하는 구강관리 조성물을 기재한다. 그러나, 구강 생물막을 더 효과적으로 분해할 수 있는 추가적인 그리고 개선된 구강관리 조성물에 대한 요구가 여전히 있다.

본 발명은 구강 생물막의 방지 및 제거에 유용한 프럭타나제를 포함하는 구강관리 조성물을 제공한다.

제1 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드(clade)에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반(levan)-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는다.

제2 양상에서, 본 발명은 의약(medicament)으로서 사용하기 위한 제1 양상에 따른 조성물에 관한 것이다.

제3 양상에서, 본 발명은 구강 질환의 치료에서 사용하기 위한 제1 양상에 따른 조성물에 관한 것이다.

제4 양상에서, 본 발명은 인간 또는 동물 대상체의 치료 또는 예방적 치료를 위한 제1 양상에 따른 조성물의 용도에 관한 것이다.

제5 양상에서, 본 발명은 인간 또는 동물 대상체의 치료 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 인간 또는 동물 대상체에게 제1 양상에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

제6 양상에서, 본 발명은 구강 생물막의 제거 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 구강 생물막을 제1 양상에 따른 구강 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.

제7 양상에서, 본 발명은

a) 제1 양상에 따른 구강 조성물; 및

b) 사용을 위한 지침

을 포함하는 부품의 키트에 관한 것이다.

제8 양상에서, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 및 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드와 적어도 60%의 서열 동일성을 갖는 프럭타나제에 관한 것이되; 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며, 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고; 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는다.

정의

클레이드: 용어 "클레이드"는 공통선조로 거슬러 올라간 상동성 특성에 기반하여 함께 클러스터링된 폴리펩티드의 그룹을 의미한다. 폴리펩티드 클레이드는 계통수로서 시각화될 수 있고, 클레이드는 공통선조 및 모든 이의 직계 비속으로 이루어진 폴리펩티드의 그룹이다. 계통수의 클레이드(서브클레이드) 내의 그룹을 형성하는 폴리펩티드는 또한 공통 특성을 공유할 수 있고, 클레이드 내의 다른 폴리펩티드보다 더 밀접하게 관련된다.

의치: 용어 "의치"는 의치뿐만 아니라 치아 교정기, 얼라이너(aligner), 유지장치 등을 아우르는 것을 의미한다.

DNase: 용어 "DNase"는 DNA 골격에서 포스포디에스테르 결합의 가수분해 절단을 촉매하고, 그에 따라 DNA를 분해시키는 DNase(데옥시리보뉴클레아제) 활성을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 엑소-데옥시리보뉴클레아제는 DNA 골격 말단에서 잔기를 절단하거나 쪼개고, 엔도-데옥시리보뉴클레아제는 DNA 골격 내에서 쪼개거나 또는 절단한다. DNase는 이중 가닥 DNA만을 절단할 수 있거나, 이중 가닥 및 단일 가닥 DNA를 절단할 수 있다. 용어 "DNases" 및 표현 "DNase 활성을 갖는 폴리펩티드"는 본 출원 전체적으로 상호 호환적으로 사용된다. 본 발명의 목적을 위해, DNase 활성은 WO 2020/099491의 분석 I 또는 분석 II(아래의 실시예에서 재현함)에 기재되는 절차에 따라 결정될 수 있다.

단편: 용어 "단편"은 성숙 폴리펩티드 또는 도메인의 아미노 및/또는 카복실 말단으로부터 하나 이상의 아미노산이 부재하는 폴리펩티드를 의미하며, 단편은 프럭타나제 활성을 갖는다.

프럭타나제: 용어 "프럭타나제"는 프럭탄에서 글리코사이드 결합의 가수분해 절단을 촉매하고, 따라서 프럭탄을 분해시키는 프럭타나제 활성을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 용어 "프럭타나제" 및 표현 "프럭타나제 활성을 갖는 폴리펩티드"는 본 출원 전체적으로 상호 호환적으로 사용된다.

프럭탄은 특정 부류의 그람-양성 및 그람-음성 박테리아, 예를 들어, 바실러스(Bacillus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 슈도모나스(Pseudomonas), 에르위니아(Erwinia) 및 악티노마이세스(Actinomyces)에서뿐만 아니라 일부 진균, 예를 들어, 아스페르길루스(Aspergillus) 및 페니실룸(Penicillium)에서 발견되는 프럭토스 분자의 중합체이다. 박테리아에 의해 생성된 프럭탄 분자는 주로 β-(2,6)-연결 프럭토실 잔기 및 일부 β-(2,1)-연결된 분지로 이루어진다. 일부 프럭탄은 레반으로 불리며, 100,000개 초과의 프럭토실 단위의 중합도(DP)에 도달할 수 있다. (Vijn and Smeekens, Plant Physiology 1999, Vol. 120: 351-359; Van den Ende, J Exp Bot. 2018, Vol. 69 (18): 4227-4231). 프럭탄의 다른 주요 유형인 이눌린은 주로 β-(2,1)-연결 프럭토실 잔기 및 일부 β-(2,6)-연결 분지를 포함한다. 따라서, 프럭타나제는 프럭탄, 레반 및/또는 이눌린을 분해하는 폴리펩티드이고, 용어 "프럭타나제 활성"은 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및/또는 이눌린-분해 활성을 포함한다. 또한, 다수의 프럭타나제는 또한 글루코스와 프럭토스를 함유하는 이당류인 수크로스를 분해한다. 따라서, 다수의 프럭타나제는 또한 수크로스-분해 활성을 갖는다. 본 발명의 목적을 위해, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성(즉, 효소 활성)은 아래의 실시예 4에 기재되는 방법에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는다.

바람직한 실시형태에서, 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는다.

본 발명의 프럭타나제는 프럭토스-함유 다당류를 가수분해하는 효소를 함유하는 글리코실 가수분해효소 32(GH32) 패밀리에 속한다. GH32 패밀리는 이눌리나제(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제(EC 3.2.1.64), 레바나제(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제(EC 3.2.1.153) 및 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제(EC 3.2.1.154)를 포함한다. 이들 효소 활성은 프럭토스-함유 다당류 프럭탄, 레반 및 이눌린의 분해를 제공한다.

따라서, 바람직한 실시형태에서, 프럭타나제는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153) 및 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하되, 프럭타나제는 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 다당류를 분해한다.

프럭타나제는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성을 가질 수 있다. 엔도-작용 활성은 다당류 기질의 글리코사이드 결합의 무작위 절단을 나타내는 반면, 엑소-작용 활성은 프럭타나제가 다당류 기질의 비환원 및/또는 환원 말단에서 작용한다는 것을 나타낸다.

뮤타나제: 용어 "뮤타나제"는 뮤탄에서 -1,3-글리코사이드 결합의 가수분해 절단을 촉매하여, 뮤탄을 분해시키는 뮤타나제 활성을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 용어 "뮤타나제" 및 표현 "뮤타나제 활성을 갖는 폴리펩티드"는 본 출원 전체적으로 상호 호환적으로 사용된다. 본 발명의 목적을 위해, 뮤타나제 활성은 WO 2017/083228에 또는 문헌[A. Wiater et al., Mycological Research, vol. 105, pp. 1357-1363, 2001]에 기재되어 있는 절차에 따라 결정될 수 있다.

모체 또는 모 프럭타나제: 용어 "모체" 또는 "모 프럭타나제"는 본 발명의 효소 변이체가 생산되도록 변경이 일어난 프럭타나제를 의미한다. 모체는 천연 유래(야생형) 폴리펩티드이거나, 이의 변이체 또는 단편일 수 있다.

서열 동일성: 두 아미노산 서열 간 또는 두 뉴클레오티드 서열 간 관련성이 파라미터 "서열 동일성"에 의해 설명된다.

본 발명의 목적을 위해, 2개의 아미노산 서열들 사이의 서열 동일성은 EMBOSS 패키지의 Needle 프로그램(EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), 바람직하게는 버전 5.0.0 또는 이후의 버전에서 실행된 바와 같은 Needleman-Wunsch 알고리즘(문헌[Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453])을 사용하여 결정된다. 사용되는 파라미터는 갭 개방 페널티 10, 갭 연장 페널티 0.5, 및 EBLOSUM62(BLOSUM62의 EMBOSS 버전) 치환 매트릭스이다. "가장 긴 동일성"(-nobrief 옵션을 사용해서 수득됨)으로 표지된 니들 프로그램의 결과물이 동일성 백분율로 사용되며, 다음과 같이 계산된다:

(동일 잔기×100)/(정렬 길이 - 정렬 중 갭의 총 수)

본 발명의 목적을 위해, 2개의 데옥시리보뉴클레오티드 서열 사이의 서열 동일성은 EMBOSS 패키지의 Needle 프로그램(EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, 상기 참조), 바람직하게는 버전 5.0.0 또는 이후의 버전에서 실행된 바와 같은 Needleman-Wunsch 알고리즘(Needleman and Wunsch, 1970, 상기 참조)을 사용하여 결정된다. 사용된 매개변수들은 갭 개방 패널티 10, 갭 확장 패널티 0.5, 그리고 EDNAFULL(NCBI NUC4.4의 EMBOSS 버전) 치환 매트릭스이다. "가장 긴 동일성"(-nobrief 옵션을 사용해서 수득됨)으로 표지된 Needle의 결과물이 동일성 백분율로 사용되며, 다음과 같이 계산된다:

(동일 데옥시리보뉴클레오티드×100)/(정렬 길이 - 정렬 중 갭의 총 수)

변이체: 용어 "변이체"는 모 프럭타나제와 비교할 때 하나 이상의 위치에서 변경, 즉, 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 프럭타나제를 의미한다. 치환이란, 어느 위치를 차지하는 아미노산의 상이한 아미노산으로의 치환을 의미하고; 결실이란, 어느 위치를 차지하는 아미노산의 제거를 의미하며; 삽입이란, 어느 위치를 차지하는 아미노산에 인접하여 바로 다음에의 아미노산 첨가를 의미한다.

모티프 명명법

본 발명의 목적을 위해, 명명법 [G/N] 또는 [GN]은 이 위치에서 아미노산이 글리신(Gly, G) 또는 아스파라긴(Asn, N)일 수 있다는 것을 의미한다. 마찬가지로, 명명법[T/D/S] 또는 [TDS]는 이 위치에서 아미노산이 본 명세서에 기재된 바와 같은 다른 조합물의 경우 트레오닌(Thr, T), 아스파르트산(Asp, D) 또는 세린(Ser, S) 등일 수 있다는 것을 의미한다. 추가로 달리 제한되지 않는 한, 아미노산 X는 임의의 자연적 아미노산일 수 있는 것으로 정의된다.

도 1은 나노DSF(nanoDSF) 기기를 이용하여 생성된 열 안정성 데이터의 예를 나타낸다. 패널 A는 온도의 함수로서 서열번호 2에 대해 3회 얻은 데이터(350 ㎚ 대 330 ㎚에서의 형광 방출의 비)의 예이다. 패널 B은 패널 A에서의 원자료의 일계 도함수를 나타낸다. 일계 도함수 플롯에서 피크 최대값은 Tm으로 지칭되는 열 언폴딩 전이(thermal unfolding transition)의 중점(mid-point)에 대응한다. 본 예에서, Tm은 66.1℃에 대응하고, 3가지의 복제물 내에서 고도로 재현 가능하다.

서열 개요

서열번호 1은 페니실룸 오크로클로론(Penicillium ochrochloron)으로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 2는 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis)로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 3은 바실러스 리체니포르미스 S16으로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 4는 아트로박터 종(Arthrobacter sp.) Leaf337으로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 5는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 6은 플라보박테리움 반파쿠엔스(Flavobacterium banpakuense)로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 7은 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger)로부터 단리된 프럭타나제이다.

서열번호 8은 서열번호 2 내지 6의 발현 동안 사용된 분비 신호이다.

서열번호 9는 서열번호 2 내지 6의 발현 동안 사용된 His-태그이다.

서열번호 10은 바실러스 시비(Bacillus cibi)로부터 단리된 DNase이다.

서열번호 11은 트리코데르마 하르지아눔(Trichoderma harzianum)으로부터 단리된 뮤타나제이다.

서열번호 12는 모티프 WMND이다.

서열번호 13은 프라이머이다.

서열번호 14는 프라이머이다.

서열번호 15는 프라이머이다.

서열번호 16은 프라이머이다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 구강관리 적용에 특히 적합한 프럭타나제를 포함하는 구강관리 조성물에 관한 것이다. 이들 프럭타나제는 모두 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며, 서열 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함한다. 이들 프럭타나제는 프럭토스-함유 다당류 및 이당류 프럭탄, 레반, 이눌린 및 수크로스를 분해할 수 있고, 이들은 구강 생물막의 방지 및 제거에서 고도로 활성이다. 이들 프럭타나제가 특히 프럭탄, 레반 및 이눌린을 분해시키는 능력은 구강 생물막의 방지 및 제거에 대해 양호한 효과를 제공하는 것으로 추측된다. 또한, 이들 프럭타나제는 광범위한 구강관리 성분과 공동제형화될 때 고도로 안정적이어서, 이들을 구강관리 제형에서 사용하기에 매우 적합하게 한다.

따라서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는다.

프럭타나제

본 발명과 관련하여, 적합한 프럭타나제는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 WMND 모티프를 포함하는 글리코실 가수분해효소 32(GH32) 패밀리의 프럭타나제이다. 이러한 프럭타나제는 일반적으로 미생물 기원, 바람직하게는 박테리아 또는 진균 기원이다.

실시형태에서, 프럭타나제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

a) 서열번호 1과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

b) 서열번호 2와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

c) 서열번호 3과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

d) 서열번호 4와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖고, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

e) 서열번호 5와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖고, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

f) 서열번호 6과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

g) 서열번호 7과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;

및

h) (a), (b), (c), (d), (e), (f) 또는 (g)의 폴리펩티드의 단편으로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 상기 단편.

일 실시형태에서, 프럭타나제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

a) 서열번호 1을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

b) 서열번호 2를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

c) 서열번호 3을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

d) 서열번호 4를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

e) 서열번호 5를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

f) 서열번호 6을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드; 및

g) 서열번호 7을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드.

프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 프럭타나제는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 바람직하게는 엑소-작용 활성을 가질 수 있다. 바람직하게는, 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성 및 레반-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성 및 이눌린-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성을 갖는다.

프럭타나제는 동등한 또는 개선된 효소 활성, 특히, 및 독립적으로, 동등한 또는 개선된 프럭탄-분해 활성, 동등한 또는 개선된 레반-분해 활성, 동등한 또는 개선된 이눌린-분해 활성 및 동등한 또는 개선된 수크로스-분해 활성을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 2가지의 효소 활성은 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하지 않고, WMND 클레이드에 속하고, 서열 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제와 비교할 때 동등하거나 또는 개선된다.

바람직하게는, 프럭타나제는 독립적으로 i) 동등한 또는 개선된 프럭탄-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 프럭탄-분해 활성, ii) 동등한 또는 개선된 레반-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 레반-분해 활성, iii) 동등한 또는 개선된 이눌린-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 이눌린-분해 활성, 및 iv) iii) 동등한 또는 개선된 수크로스-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의 수크로스-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 독립적으로 i) 동등한 또는 개선된 프럭탄-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 프럭탄-분해 활성, ii) 동등한 또는 개선된 레반-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 레반-분해 활성, 및 iii) 동등한 또는 개선된 이눌린-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 이눌린-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 독립적으로 i) 동등한 또는 개선된 프럭탄-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 프럭탄-분해 활성, 및 ii) 동등한 또는 개선된 레반-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 레반-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 독립적으로 i) 동등한 또는 개선된 프럭탄-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 프럭탄-분해 활성, 및 ii) 동등한 또는 개선된 이눌린-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의 이눌린-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 독립적으로 i) 동등한 또는 개선된 레반-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의, 레반-분해 활성, 및 ii) 동등한 또는 개선된 이눌린-분해 활성, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상의 이눌린-분해 활성을 갖는다.

바람직하게는, 프럭타나제는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153) 및 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함한다. 이들 효소 활성은 모두 프럭토스-함유 다당류 프럭탄, 레반 및 이눌린의 분해를 의미한다. 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153) 및 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성은 독립적으로, 동등하거나, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상 개선될 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 2가지의 효소 활성은 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하지 않고, WMND 클레이드에 속하고, 서열 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제와 비교할 때 동등하거나 또는 개선된다.

프럭타나제는 구강관리에 적합한 제형 및/또는 형식, 특히 치약, 마우스워시, 로젠지, 민트, 검, 캔디 등과 같은 제형 또는 형식에서 상당히 안정적이다. 고안정성, 예를 들어, 동등한 또는 개선된 안정성은 동등한 또는 개선된 물리적 및/또는 화학적 안정성일 수 있다. 동등한 또는 개선된 화학적 안정성, 즉, 다른 제제(예를 들어, 다른 효소, 활성 성분, 부형제 또는 용매)의 존재 하에 동등한 또는 개선된 안정성은 프럭타나제와 다른 제제가 공동제형화 및/또는 공동투여될 때, 바람직하게는 공동제형화 시 일어날 수 있다.

본 발명과 관련하여, 용어 "동등한 화학적 안정성"은 특정 구강관리 성분 또는 구성성분의 존재 하에 (또는 다르게 표현하면, 이와 함께 공동제형화되는) 프럭타나제의 화학적 안정성이 동일한 프럭타나제 단독(즉, 상기 구강관리 성분의 부재 하에서) 화학적 안정성의 +/- 5% 이내라는 것을 의미한다.

본 발명과 관련하여, 용어 "개선된 화학적 안정성"은 특정 구강관리 성분 또는 구성성분의 존재 하에 (또는 다르게 표현하면, 이와 함께 공동제형화되는) 프럭타나제의 화학적 안정성이 동일한 프럭타나제 단독(즉, 상기 구강관리 성분의 부재 하에서) 화학적 안정성의 5% 초과, 예를 들어, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 심지어 그보다 더 개선된다는 것을 의미한다.

본 발명의 목적을 위해, 화학적 안정성은 특정 구강관리 성분의 존재 하에 열 언폴딩 전이 중점(Tm)에 의해 정해지는 열적 안정성으로서 아래의 실시예 3에 따라 결정될 수 있다.

일 실시형태에서, 프럭타나제는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 프럭타나제는 벤조에이트(예를 들어, 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산나트륨, 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(예를 들어, 플루오린화나트륨), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 벤조에이트, 예를 들어, 벤조산나트륨을 포함하고, 프럭타나제는 벤조에이트, 예를 들어, 벤조산나트륨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 0.01 내지 5% 벤조에이트, 더 바람직하게는 0.05 내지 2.5% 벤조에이트, 훨씬 더 바람직하게는 0.1 내지 1% 벤조에이트, 가장 바람직하게는 0.1 내지 0.5% 벤조에이트의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 100 mM 벤조에이트, 더 바람직하게는 5 내지 50 mM 벤조에이트, 가장 바람직하게는 10 내지 35 mM 벤조에이트의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 아르기닌을 포함하고, 프럭타나제는 아르기닌의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 500 mM 아르기닌, 더 바람직하게는 25 내지 250 mM 아르기닌, 훨씬 더 바람직하게는 25 내지 100 mM 아르기닌, 가장 바람직하게는 30 내지 90 mM 아르기닌의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 EDTA를 포함하고, 프럭타나제는 EDTA의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 0.1 내지 10 mM EDTA, 더 바람직하게는 0.5 내지 5 mM EDTA, 가장 바람직하게는 1 mM EDTA의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 에탄올을 포함하고, 프럭타나제는 에탄올의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 0.1 내지 20% 에탄올, 더 바람직하게는 1 내지 10% 에탄올, 훨씬 더 바람직하게는 2.5 내지 7.5% 에탄올, 가장 바람직하게는 5% 에탄올의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 100000 mM 에탄올, 더 바람직하게는 100 내지 10000 mM 에탄올, 가장 바람직하게는 1000 mM 에탄올의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 글리세롤을 포함하고, 프럭타나제는 글리세롤의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 50% 글리세롤, 더 바람직하게는 5 내지 40% 글리세롤, 가장 바람직하게는 10 내지 30% 글리세롤의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 100 내지 10000 mM 글리세롤, 더 바람직하게는 500 내지 5000 mM 글리세롤, 훨씬 더 바람직하게는 750 내지 4000 mM 글리세롤, 가장 바람직하게는 1000 내지 3250 mM 글리세롤의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 인산염, 예를 들어, 인산나트륨 또는 인산칼륨을 포함하고, 프럭타나제는 인산염, 예를 들어, 인산나트륨 또는 인산칼륨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 50 mM 인산염, 더 바람직하게는 2.5 내지 25 mM 인산염, 훨씬 더 바람직하게는 5 내지 10 mM 인산염의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 소르비톨을 포함하고, 프럭타나제는 소르비톨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 0.1 내지 70% 소르비톨, 더 바람직하게는 1 내지 60% 소르비톨, 훨씬 더 바람직하게는 5 내지 50% 소르비톨, 가장 바람직하게는 10 내지 40% 소르비톨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 100 내지 10000 mM 소르비톨, 더 바람직하게는 250 내지 5000 mM 소르비톨, 훨씬 더 바람직하게는 500 내지 2500 mM 소르비톨, 가장 바람직하게는 550 내지 2200 mM 소르비톨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 소르베이트, 예를 들어, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨 또는 소르브산칼슘을 포함하고, 프럭타나제는 소르베이트, 예를 들어, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨 또는 소르브산칼슘의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 0.01 내지 5% 소르베이트, 더 바람직하게는 0.05 내지 2.5% 소르베이트, 훨씬 더 바람직하게는 0.1 내지 1% 소르베이트, 가장 바람직하게는 0.1 내지 0.5% 소르베이트의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 100 mM 소르베이트, 더 바람직하게는 5 내지 75 mM 소르베이트, 훨씬 더 바람직하게는 7.5 내지 50 mM 소르베이트, 가장 바람직하게는 10 내지 35 mM 소르베이트의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 플루오린화물, 예를 들어, 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석을 포함하고, 프럭타나제는 플루오린화물, 예를 들어, 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 5000 ppm 플루오린화물, 더 바람직하게는 500 내지 2500 ppm 플루오린화물, 가장 바람직하게는 1,000 내지 1500 ppm 플루오린화물의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 100 mM 플루오린화물, 더 바람직하게는 5 내지 75 mM 플루오린화물, 훨씬 더 바람직하게는 10 내지 50 mM 플루오린화물, 가장 바람직하게는 20 내지 40 mM 플루오린화물의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 과산화물, 예를 들어, 과산화수소를 포함하고, 프럭타나제는 과산화물, 예를 들어, 과산화수소의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 1000 mM 과산화물, 더 바람직하게는 50 내지 750 mM 과산화물, 가장 바람직하게는 100 내지 500 mM 과산화물의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 만니톨을 포함하고, 프럭타나제는 만니톨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 바람직하게는, 프럭타나제는 1 내지 1000 mM 만니톨, 더 바람직하게는 150 내지 750 mM 만니톨, 가장 바람직하게는 250 내지 550 mM 만니톨의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다.

프럭타나제는 구강 생물막을 방지하고/하거나 제거한다. 실시형태에서, 프럭타나제는 생물막 방지에 대해 동등하거나, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상 개선된 효과를 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 프럭타나제는 GH32 도메인, GH32C 도메인를 포함하지 않고, WMND 클레이드에 속하고, 서열 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제와 비교할 때 생물막 방지에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다. 실시형태에서, 프럭타나제는 생물막 제거에 대해 동등하거나, 예를 들어, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 140%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% 이상 개선된 효과를 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 프럭타나제는 GH32 도메인, GH32C 도메인를 포함하지 않고, WMND 클레이드에 속하고, 서열 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제와 비교할 때 생물막 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 1과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 페니실룸으로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 페니실룸 오크로클로론으로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 1 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 1과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 2와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 리체니포르미스로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 2 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 2와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 3과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 리체니포르미스, 바람직하게는 바실러스 리체니포르미스 S16으로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 3 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 3과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 4와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 아트로박터로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 아트로박터 종 Leaf337로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 4 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 4와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 5와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 서브틸리스로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 5 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 5와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 6과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 플라보박테리움(Flavobacterium)으로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 플라보박테리움 반파쿠엔스로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 6 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 6과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 서열번호 7과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드를 포함하되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 아스페르길루스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 아스페르길루스 니거로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 7 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 7과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 및 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 프럭타나제에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고; 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 프럭타나제에 관한 것이다:

a) 서열번호 1을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

b) 서열번호 2를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

c) 서열번호 3을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

d) 서열번호 4를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

e) 서열번호 5를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;

f) 서열번호 6을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드; 및

g) 서열번호 7을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 1과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 페니실룸으로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 페니실룸 오크로클로론으로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 1 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 1과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 2와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 리체니포르미스로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 2 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 2와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 3과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 리체니포르미스, 바람직하게는 바실러스 리체니포르미스 S16으로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 3 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 3과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 4와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 아트로박터로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 아트로박터 종 Leaf337로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 4 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 4와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 5와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 서브틸리스로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 5 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 5와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 6과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 플라보박테리움으로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 플라보박테리움 반파쿠엔스로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 6 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 6과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 서열번호 7과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 단리된 또는 정제된 폴리펩티드에 관한 것이되, 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 아스페르길루스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 아스페르길루스 니거로부터 얻을 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭타나제 활성을 갖는 서열번호 7 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 서열번호 7과 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 엔도-작용 활성 및/또는 엑소-작용 활성, 가장 바람직하게는 엑소-작용 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩티드는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153), 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 포함하고, 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 다당류를 분해한다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 폴리펩티드는 생물막 방지 및/또는 제거에 대해 동등한 또는 개선된 효과를 갖는다.

구강관리에서 유리한 효과를 갖는 다른 효소

본 발명의 구강관리 조성물은 또한 구강관리에 대해 유리한 효과를 갖는 1가지 이상의 추가적인 효소(들)를 포함할 수 있다.

따라서, 일 양상에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하고, 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 적어도 1종의 구강관리 성분; 및 (c) 적어도 1종의 다른 효소를 포함하되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는 적어도 1종의 다른 효소는 DNase, 디스퍼신(dispersin), 프로테아제, 리파제, 탄수화물 가수분해효소, 덱스트라나제, 뮤타나제, 산화환원효소, 락카제, 페록시다제, 옥시다제 및 라이소자임으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일반적으로, 선택된 효소(들)의 특성들은 선택된 구강관리 조성물의 특성과 양립될 수 있어야 하고(즉, 최적 pH, 기타 다른 효소 성분 및 비 효소 성분과의 혼화성 등), 이 효소(들)는 유효량으로 존재하여야 한다.

본 발명의 조성물에서 사용하기에 적합한 DNase, 디스퍼신, 프로테아제, 리파제, 탄수화물 가수분해효소, 덱스트라나제, 뮤타나제, 산화환원효소, 락카제, 페록시다제, 옥시다제 및 라이소자임의 예는 아래에 기재되는 것뿐만 아니라 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있는 당업계에서 이용 가능한 다른 것을 포함한다.

DNase

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) DNase; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

용어 "DNase"는 DNA 골격에서 포스포디에스테르 결합의 가수분해 절단을 촉매하고, 그에 따라 DNA를 분해시키는 DNase(데옥시리보뉴클레아제) 활성을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 엑소데옥시리보뉴클레아제는 DNA 골격 말단에서 잔기를 절단하거나 쪼개고, 엔도-데옥시리보뉴클레아제는 DNA 골격 내에서 쪼개거나 또는 절단한다. DNase는 이중 가닥 DNA만을 절단할 수 있거나, 이중 가닥 및 단일 가닥 DNA를 절단할 수 있다.

바람직하게는 DNase는 임의의 효소 부류 E.C.3.1, 바람직하게는 E.C.3.1.21, 예를 들어, E.C.3.1.21.X(X = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9임), 또는, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레아제 I, 데옥시리보뉴클레아제 IV, I형 부위-특이적 데옥시리보뉴클레아제, II형 부위-특이적 데옥시리보뉴클레아제, III형 부위-특이적 데옥시리보뉴클레아제, CC-선호 엔도-데옥시리보뉴클레아제, 데옥시리보뉴클레아제 V, T(4) 데옥시리보뉴클레아제 II, T(4) 데옥시리보뉴클레아제 IV 또는 E.C. 3.1.22.Y(여기서, Y = 1, 2, 4 또는 5임), 예를 들어, 데옥시리보뉴클레아제 II, 아스페르길루스 데옥시리보뉴클레아제 K(1), 크로스오버 정션(Crossover junction) 엔도-데옥시리보뉴클레아제, 데옥시리보뉴클레아제 X로부터 선택된다.

바람직하게는, DNase 활성을 갖는 폴리펩티드는 미생물로부터 얻으며, DNase는 미생물 효소이다. DNase는 바람직하게는 진균 또는 박테리아 기원이다.

DNase는 바실러스, 예를 들어, 바실러스 리체니포르미스, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 종-62451, 바실러스 호리코시(Bacillus horikoshii), 바실러스 종-16840, 바실러스 종-62668, 바실러스 종-13395, 바실러스 호르넥키애(Bacillus horneckiae), 바실러스 종-11238, 바실러스 시비, 바실러스 이드리엔시스(Bacillus idriensis), 바실러스 종-62520, 바실러스 종-16840, 바실러스 종-62668, 바실러스 알기콜라(Bacillus algicola), 바실러스 비에트나멘시스(Bacillus vietnamensis), 바실러스 화진포엔시스(Bacillus hwajinpoensis), 바실러스 인디쿠스(Bacillus indicus), 바실러스 마리스플라비(Bacillus marisflavi), 바실러스 루시페렌시스(Bacillus luciferensis) 및 바실러스 종 SA2-6으로부터 얻을 수 있다.

DNase는 다음 중 임의의 것으로부터 얻을 수 있다: 파이레노카에톱시스 종(Pyrenochaetopsis sp.), 비브리세아 플라보비렌스(Vibrissea flavovirens), 세토스파에리아 로스트라트(Setosphaeria rostrate), 엔도프라그미엘라 발디나(Endophragmiella valdina), 코리네스포라 카시콜라(Corynespora cassiicola), 파라포마 종(Paraphoma sp.) XZ1965, 모닐리니아 프럭티콜라(Monilinia fructicola), 쿠르불라리아 루나타(Curvularia lunata), 페니실룸 레티쿨리스포룸(Penicillium quercetorum), 페니실룸 쿠에르세토룸(Penicillium quercetorum), 세토파에오스파에리아 종(Setophaeosphaeria sp.), 알테나리아(Alternaria), 알테나리아 종(Alternaria sp.) XZ2545, 트리코더마 레세이(Trichoderma reesei), 카에토미움 써모필룸(Chaetomium thermophilum), 시탈리디움 서모필룸(Scytalidium thermophilum), 메타포코니아 수칼라스포리아(Metapochonia suchlasporia), 달디니아 피사(Daldinia fissa), 아크레모니움 종(Acremonium sp.) XZ2007, 아크레모니움 종 XZ2414, 아크레모니움 디크로모스포룸(Acremonium dichromosporum), 사로클라디움 종(Sarocladium sp.) XZ2014, 메타리지움 종(Metarhizium sp.) HNA15-2, 이사리아 테누이페스(Isaria tenuipes) 시탈리디움 시르시나툼(Scytalidium circinatum), 메타리지움 레피디오타에(Metarhizium lepidiotae), 써모비스포라 비스포라(Thermobispora bispora), 스포로르미아 피메타리아(Sporormia fimetaria), 피크니디오포라 cf. 디스페라(Pycnidiophora cf. dispera), 환경 샘플 D, 환경 샘플 O, 클라비시피타세아(Clavicipitaceae) sp-70249, 웨스터디켈라 종(Westerdykella sp.) AS85-2, 후미콜로프시스 세팔로스포리오이데스(Humicolopsis cephalosporioides), 네오사르토리아 마사(Neosartorya massa), 로우소엘라 인터메디아(Roussoella intermedia), 플레오스포라레스(Pleosporales), 파에오스파에리아(Phaeosphaeria) 또는 디디모스파에리아 푸틸리스(Didymosphaeria futilis).

특히 바람직한 실시형태에서, DNase는 구강관리 제형, 예를 들어, 치약, 마우스워시, 민트, 로젠지, 검 등에서 그리고/또는 구강관리 구성성분, 예를 들어, 도데실황산나트륨(SDS) 또는 플루오린화물 공급원, 예컨대, 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석의 존재 하에 개선된 안정성을 나타낸다. 개선된 안정성을 갖는 이러한 DNase의 예는 WO 2020/099491에 개시되어 있다.

일 실시형태에서, DNase는 바실러스로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 바실러스 시비로부터 얻을 수 있으며, 서열번호 10과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖고, DNase 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, DNase는 서열번호 10에 나타낸 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, DNase는 서열번호 10을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다.

디스퍼신

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 디스퍼신; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

디스퍼신은 헥소사미니다제 활성, 바람직하게는 폴리-N-아세틸글루코사민(PNAG) 분해 활성을 갖는 폴리펩티드이다. 일례는 글리코사이드 가수분해효소 20 패밀리에 속하는 베타-N-아세틸글루코사미니다제인 디스퍼신 B(DspB)이다. 디스퍼신은 치주 병원균 아그레가티박터 악티노마이세템코미탄스(Aggregatibacter actinomycetemcomitans), 그람 음성 구강세균에 의해 생성된다. 디스퍼신 B는 생물막에서 발견된 아세틸글루코사민 중합체의 베타-1,6-글리코사이드 결합을 특이적으로 가수분해하는 베타-헥소사미니다제이다. 적합한 디스퍼신 B 및 이의 변이체는 WO 2014/061117 및 WO 2017/186936에 기재되어 있다.

다른 적합한 디스퍼신은 디스퍼신 2 및 이의 변이체(WO 2017/186936), 디스퍼신 5 및 이의 변이체, 및 디스퍼신 8 및 이의 변이체를 포함한다.

실시형태에서, 본 발명의 조성물은 디스퍼신 B, 디스퍼신 2, 디스퍼신 5 및 디스퍼신 8로부터 선택된 디스퍼신을 포함한다.

실시형태에서, 본 발명의 조성물은 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드 또는 글리코사이드 가수분해효소 패밀리 20에 속하는 촉매 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다(GH20, www.cazy.org).

프로테아제

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 프로테아제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

구강관리 내에서, 프로테아제는, 치아 표면 상에 흡착되고 구강 생물막에 대한 부착 지점으로서 작용하는 피막을 형성하는 타액 단백질을 파괴한다. 프로테아제는 또한 박테리아 세포벽 및 막의 구조적 구성성분의 부품을 형성하는 단백질을 분해할 수 있다.

본 발명의 구성성분에 적합한 프로테아제는 생화학분자생물학회 국제학술대회(International Union of Biochemistry and Molecular Biology: IUBMB))의 권고(1992)에 따른 효소 분류 번호(E.C.) 3.4하에 분류되는 효소이다. 예에는 효소 분류(E.C.) 번호 하에 분류된 것으로부터 선택되는 프로테아제를 포함한다:

3.4.11.5(프롤릴 아미노펩티다제), 3.4.11.9(X-pro 아미노펩티다제), 3.4.11.10(박테리아 류실 아미노펩티다제), 3.4.11.12(호열성 아미노펩티다제), 3.4.11.15(리실 아미노펩티다제), 3.4.11.17(트립토판일 아미노펩티다제), 3.4.11.18(메티오닐 아미노펩티다제)을 포함하는, 3.4.11(즉, 소위 아미노펩티다제);

3.4.21.1(키모트립신), 3.4.21.4(트립신), 3.4.21.25(쿠쿠미신), 3.4.21.32(브라키우린), 3.4.21.48(세레비신) 및 3.4.21.62(서브틸리신)을 포함하는 3.4.21(즉, 소위 세린 엔도펩티다제);

3.4.22.2(파파인), 3.4.22.3(피카인), 3.4.22.6(키모파파인), 3.4.22.7(아스클레파인), 3.4.22.14(악티니다인), 3.4.22.30(카리카인) 및 3.4.22.31(아나나인)을 포함하는, 3.4.22(즉, 소위 시스테인 엔도펩티다제);

3.4.23.1(펩신 A), 3.4.23.18(아스페르길로펩신 I), 3.4.23.20(페니실로펩신) 및 3.4.23.25(사카로펩신)를 포함하는 3.4.23(즉, 소위 아스파르트산 엔도펩티다제); 및

3.4.24.28(바실로라이신)을 포함하는 3.4.24(즉, 소위 메탈로엔도펩티다제).

관련 서브틸리신의 예는 서브틸리신 BPN', 서브틸리신 아밀로사카리티쿠스, 서브틸리신 168, 서브틸리신 메센테리코펩티다제, 서브틸리신 칼스버그, 서브틸리신 DY, 서브틸리신 309, 서브틸리신 147, 테르미타제, 아콰라이신, 바실러스 PB92 프로테아제, 프로테이나제 K, 프로테아제 TVV7 및 프로테아제 TW3을 포함한다.

이러한 용이하게 이용 가능한 상업적 프로테아제의 구체적인 예는 상표명 Esperase™, Alcalase™, Neutrase™, Dyrazym™, Savinase™, Pyrase™, Pancreatic 트립신 NOVO™(PTN), Bio-FeedC Pro™, Clear-Lens Pro™, Maxtase™, Maxacal™, Maxapem™, Opticlean™ 및 Purafect™ 하에 판매되는 것을 포함한다.

본 발명의 조성물에 포함되는 프로테아제는 또한 위에 언급된 프로테아제의 변이체를 포함한다. 이러한 프로테아제 변이체의 예는 EP 130 756; EP 214 435; WO 87/04461; WO 87/05050; EP 251 446; EP 260 105; 문헌[Thomas et al., (1985), Nature 318, pp. 375-376; Thomas et al., (1987), J. Mol. Biol. 193, pp. 803-81; Russel et al., (1987), Nature 328, p. 496-500]; WO 88/08028; WO 88/08033; WO 89/06279; WO 91/00345; EP 525 610); 및 WO 94/02618에 개시되어 있다.

프로테아제의 활성은 문헌["Methods of Enzymatic Analysis", third edition, vol. 5, 1984, Verlag Chemie, Weinheim]에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다.

리파제

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 리파제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

구강관리 내에서, 리파제는 박테리아 세포벽 및 막의 구조적 구성성분의 부분을 형성하는 지질을 분해함으로써 구강 박테리아를 표적화한다.

본 발명의 구성성분에 적합한 리파제는 생화학분자생물학회 국제학술대회(International Union of Biochemistry and Molecular Biology: IUBMB))의 권고(1992)에 따른 효소 분류 번호(E.C.) 3.1.1(카복실산 에스터 하이드롤라제)하에 분류되는 효소를 포함한다. 예는 효소 분류(E.C.) 번호 3.1.1.3(트리아실글리세롤 리파제) 및 3.1.1.4(포스포리파제 A2) 하에 분류되는 것으로부터 선택된 리파제를 포함한다.

적합한 리파제의 예는 다음의 미생물로부터 유래된 리파제를 포함한다: 휴미콜라(Humicola), 예를 들어, 휴미콜라 브레비스포라(H. brevispora), 휴미콜라 라누기노사(H. lanuginosa), 휴미콜라 브레비스 변종 서모이데아(H. brevis var. thermoidea) 및 휴미콜라 인솔렌스(H. insolens)(US 4,810,414); 슈도모나스, 예를 들어, 슈도모나스 프라기(Ps. fragi), 슈도모나스 스투트제리(Ps. stutzeri), 슈도모나스 세파시아(Ps. cepacia) 및 슈도모나스 플루오레센스(Ps. fluorescens)(WO 89/04361) 또는 슈도모나스 플란타리(Ps. plantarii) 또는 슈도모나스 글라디올리(Ps. gladioli)(미국 특허 제4,950,417호) 또는 슈도모나스 알칼리게네스(Ps. alcaligenes) 및 슈도모나스 슈도알칼리게네스(Ps. pseudoalcaligenes)(EP 218 272) 또는 슈도모나스 멘도시나(Ps. mendocina)(WO 88/09367; US 5,389,536); 후사리움(Fusarium), 예를 들어, 후사리움 옥시스포럼(F. oxysporum)(EP 130,064) 또는 후사리움 솔라니 피시(F. solani pisi)(WO 90/09446); 무코르(Mucor)(리조무코르(Rhizomucor)로도 불림), 예를 들어, 무코르 미에헤이(M. miehei)(EP 238 023); 크로모박테리움(Chromobacterium)(특히 크로모박테리움 비스코섬(C. viscosum)); 아스페르길루스(특히 아스페르길루스 니거); 칸디다(Candida), 예를 들어, 칸디다 실린드라세아(C. cylindracea)(칸디다 루고사(C. rugosa)로도 알려짐) 또는 칸디다 안타르티카(C. Antarctica)(WO 88/02775) 또는 칸디다 안타르티카 리파제 A 또는 B(WO 94/01541 및 WO 89/02916); 게오트리쿰(Geotricum), 예를 들어, 게오트리쿰 칸디둠(G. candidum)(Schimada et al., (1989), J. Biochem., 106, 383-388); 페니실룸, 예를 들어, 페니실룸 카멤베르티(P. camembertii)(Yamaguchi et al., (1991), Gene 103, 61-67); 리조푸스(Rhizopus), 예를 들어, 리조푸스 델레마(R. delemar)(Hass et al., (1991), Gene 109, 107-113) 또는 리조푸스 니베우스(R. niveus)(Kugimiya et al., (1992) Biosci. Biotech. Biochem. 56, 716-719) 또는 리조푸스 오리자에(R. oryzae); 바실러스, 예를 들어, 바실러스 서브틸리스(B. subtilis)(Dartois et al., (1993) Biochemica et Biophysica Acta 1131, 253-260) 또는 바실러스 스테아로서모필루스(B. stearothermophilus)(JP 64/7744992) 또는 바실러스 푸밀러스(B. pumilus)(WO 91/16422).

용이하게 입수 가능한 상업적 리파제의 구체적인 예는 상표명 Lipolase™, Lipolase C Ultra™, Lipozyme™, Palatase™, Novozym 435™ 및 Lecitase™(Novozymes) 하에서 판매되는 것을 포함한다.

다른 리파제의 예는 Lumafast™, Genencor Int. Inc.로부터의 슈도모나스 멘도시안(Ps. mendocian) 리파제; Lipomax™, Gist Brocades/Genencor Int. Inc.로부터의 슈도모나스 슈도알칼리게네스 리파제; Unilever로부터의 후사리움 솔라니(Fusarium solani) 리파제(큐티나제); Solvay Enzymes으로부터의 바실러스 종 리파제이다. 다른 리파제는 다른 회사로부터 입수 가능하다.

또한 리파제 변이체가 본 발명에 적합한 리파제로서 상정된다는 것이 이해되어야 한다. 이러한 예는, 예를 들어, WO 93/01285 및 WO 95/2261에 기재되어 있다.

리파제의 활성은 문헌["Methods of Enzymatic Analysis", Third Edition, 1984, Verlag Chemie, Weinhein, vol. 4]에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다.

탄수화물 가수분해효소

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 탄수화물 가수분해효소; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는 탄수화물 가수분해효소는 알파-아밀라제이다.

탄수화물 가수분해효소는 특히 5 및 6원 고리 구조의 탄수화물 쇄(예를 들어, 전분)를 분해시킬 수 있는 모든 효소(즉, 생화학분자생물학회 국제학술대회(IUBMB)의 권고(1992)에 따른 효소 분류 번호(E.C.) 3.2하에 분류되는 효소(글리코시다제))로서 정의될 수 있다. 이러한 탄수화물 구조는 구강 생물막의 중요한 구조적 구성성분이다.

예에는 효소 분류(E.C.) 번호 하에 분류된 것으로부터 선택되는 탄수화물 가수분해효소를 포함한다:

알파-아밀라제(3.2.1.1) 베타-아밀라제(3.2.1.2), 글루칸 1,4-알파-글루코시다제(3.2.1.3), 셀룰라제(3.2.1.4), 엔도-1,3(4)-베타-글루카나제(3.2.1.6), 엔도-1,4-베타-자일라나제(3.2.1.8), 덱스트라나제(3.2.1.11), 키티나제(3.2.1.14), 폴리갈락투로나제(3.2.1.15), 베타-글루코시다제(3.2.1.21), 알파-갈락토시다제(3.2.1.22), 베타-갈락토시다제(3.2.1.23), 아밀로-1,6-글루코시다제(3.2.1.33), 자일란 1,4-베타-자일로시다제(3.2.1.37), 글루칸 엔도-1,3-베타-D-글루코시다제(3.2.1.39), 알파-덱스트린 엔도-1,6-글루코시다제(3.2.1.41), 수크로스 알파-글루코시다제(3.2.1.48), 글루칸 엔도-1,3-알파-글루코시다제(3.2.1.59), 글루칸 1,4-베타-글루코시다제(3.2.1.74), 글루칸 엔도-1,6-베타-글루코시다제(3.2.1.75), 아라비난 엔도-1,5-알파-아라비노시다제(3.2.1.99), 락타제(3.2.1.108), 키토나나제(3.2.1.132) 및 자일로스 아이소머라제(5.3.1.5).

관련 탄수화물 가수분해효소의 예는 트리코데르마 하르지아눔으로부터 유래된 알파-1,3-글루카나제; 파에실로마이세스(Paecilomyces) 균주로부터 유래된 알파-1,6-글루카나제; 바실러스 서브틸리스로부터 유래된 베타-글루카나제; 휴미콜라 인솔렌스(Humicola insolens)로부터 유래된 베타-글루카나제; 아스페르길루스 니거로부터 유래된 베타-글루카나제; 트리코더마(Trichoderma) 균주로부터 유래된 베타-글루카나제; 오에르스코비아 잔티네오리티카(Oerskovia xanthineolytica) 균주로부터 유래된 베타-글루카나제; 아스페르길루스 니거로부터 유래된 엑소-1,4-알파-D-글루코시다제(글루코아밀라제); 바실러스 서브틸리스로부터 유래된 알파-아밀라제; 바실러스 아밀로리쿠에파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)로부터 유래된 알파-아밀라제; 바실러스 스테아로서모필루스로부터 유래된 알파-아밀라제; 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae)로부터 유래된 알파-아밀라제; 비병원성 미생물로부터 유래된 알파-아밀라제; 아스페르길루스 니거로부터 유래된 알파-갈락토시다제; 휴미콜라 인솔렌스로부터 유래된 펜토사나제, 자일라나제, 셀로비아제, 셀룰라제 및 헤미-셀룰라제; 트리코더마 레세이로부터 유래된 셀룰라제; 비병원성 곰팡이로부터 유래된 셀룰라제; 아스페르길루스 니거로부터 유래된 펙티나제, 셀룰라제, 아라비나제 및 헤미-셀룰로스; 페니실룸 리라시눔으로부터 유래된 덱스트라나제; 비병원성 곰팡이로부터 유래된 엔도-글루카나제; 바실러스 아시도풀리티쿠스(Bacillus acidopullyticus)로부터 유래된 풀룰라나제; 클루이베로마이세스 프라길리스(Kluyveromyces fragilis)로부터 유래된 베타-갈락토시다제; 트리코더마 레세이로부터 유래된 자일라나제를 포함한다.

본 발명의 실시형태에서, 전분-변형 효소는 CGTase(E.C. 2.4.1.19) 또는 트랜스글루코시다제(2.4.1.18)이다.

전분-변형 효소가 CGTase일 때, 바실러스 오토리티쿠스(Bacillus autolyticus) 균주, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 균주, 바실러스 서쿨란스(Bacillus circulans) 균주, 바실러스 서쿨란스 변종 알칼로필루스(Bacillus circulans var. alkalophilus) 균주, 바실러스 코아굴란스(Bacillus coagulans) 균주, 바실러스 피르무스(Bacillus firmus) 균주, 바실러스 할로필루스(Bacillus halophilus) 균주, 바실러스 마세란스(Bacillus macerans)의 균주, 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium) 균주, 바실러스 오벤시스(Bacillus ohbensis) 균주, 바실러스 스테아로서모필루스 균주, 바실러스 서브틸리스 균주, 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae) 균주, 서모아나에로박터 종(Thermoanaerobacter sp.) 균주, 서모아나에로박터 에탄올리쿠스(Thermoanaerobacter ethanolicus) 균주, 서모아나에로박터 핀니(Thermoanaerobacter finnii) 균주, 클로스트리듐 서모아밀로리티쿰(Clostridium thermosaccharolyticum) 균주, 클로스트리듐 서모사카로리티쿰(Clostridium thermosaccharolyticum) 균주 또는 서모아에로박테리움 서모설푸리게네스(Thermoanaerobacterium thermosulfurigenes) 균주로부터 유래될 수 있다.

전분-변형 효소가 트랜스글루코시다제일 때, 아스페르길루스 니거로부터 유래될 수 있다.

본 발명의 다른 실시형태에서, 구강관리 조성물은 전분-가수분해 효소를 포함한다. 이는 전형적으로 알파-아밀라제, 예컨대, 박테리아 알파-아밀라제, 예컨대, BAN™ 또는 Maltogenase™, 또는 바실러스 서브틸리스로부터 유래된 알파-아밀라제; 바실러스 아밀로리쿠에파시엔스로부터 유래된 알파-아밀라제; 바실러스 스테아로서모필루스로부터 유래된 알파-아밀라제; 아스페르길루스 오리자에로부터 유래된 알파-아밀라제; 또는 비병원성 미생물로부터 유래된 알파-아밀라제일 것이다.

알파-아밀라제는 또한 진균 알파-아밀라제, 예컨대, Fungamyl™일 수 있다.

본 발명의 다른 실시형태에서 전분-가수분해 효소는 탈분지화 효소, 특히 풀룰라나제(E. C 3.2.1.41), 예컨대, Promozyme™일 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 구강관리 조성물은 상기 정의한 바와 같은 적어도 1종의 전분-변형 효소, 특히 CGTase, 및 뮤타나제 및/또는 덱스트라나제를 포함한다.

다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 구강관리 조성물은 위에서 정의한 바와 같은 적어도 1종의 전분-가수분해 효소, 특히 박테리아 알파-아밀라제, 및 뮤타나제 및/또는 덱스트라나제를 포함한다.

뮤타나제는 트리코더마 종 균주, 특히 트리코더마 하르지아눔(T. harzianum), 특히 트리코더마 하르지아눔 CBS 243.71로부터 유래될 수 있다.

덱스트라나제는 파에실로마이세스 종(Paecilomyces sp.) 균주, 특히 파에실로마이세스 리라시누스(Paecilomyces lilacinus)로부터 유래될 수 있다.

덱스트라나제

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 덱스트라나제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

덱스트라나제는 구강 생물막의 중요한 구조적 구성성분인 탄수화물 분자를 분해한다.

덱스트라나제는 덱스트란에서 알파-1,6-글리코사이드 결합을 분해하는 알파-1,6-글루카나제(1,6-알파-D-글루칸-6-글루카노가수분해효소로도 알려짐)이다. 여러 미생물, 그 중에서도 페니실룸, 파에실로마이세스, 아스페르길루스, 후사리움, 스피카리아(Spicaria), 베르티실리움(Verticillium), 헬민토스포리움(Helminthosporium) 및 카에토미움(Chaetomium) 속의 진균; 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 스트렙토코커스, 셀비브리오(Cellvibrio), 사이토파가(Cytophaga), 브레비박테리움(Brevibacterium), 슈도모나스, 코리네박테리움(Corynebacterium), 아르트로박터(Arthrobacter) 및 플라보박테리움의 박테리아 속 및 리포마이세스 스타르케이(Lipomyces starkeyi)와 같은 효모는 덱스트라나제를 생성할 수 있다.

상업적으로 입수 가능한 제품은 페니실룸 리라시움(Penicillium lilacium) 균주의 발효에 의해 생성된 Novozymes로부터의 Dextranase™ 50 ℓ를 포함한다. 덱스트라나제 50 ℓ는 미가공 설탕즙 또는 시럽에서 덱스트란을 분해하기 위해 제당 산업에서 사용된다.

뮤타나제

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 뮤타나제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

뮤타나제는 구강 생물막의 중요한 구조적 구성성분인 탄수화물 분자를 분해한다.

뮤타나제는 뮤탄에서 -1,3-글리코사이드 결합을 분해하는 -1,3-글루카나제(-1,3-글루카노가수분해효소로도 알려짐)이다. 뮤타나제는 트리코더마(Hasegawa et al., (1969), Journal of Biological Chemistry 244, p. 5460-5470; Guggenheim and Haller, (1972), Journal of Dental Research 51, p. 394-402) 및 스트렙토마이세스(Streptomyces)(Takehara et al., (1981), Journal of Bacteriology 145, p. 729-735), 클라도스포륨 레시나에(Cladosporium resinae)(Hare et al. (1978), Carbohydrate Research 66, p. 245-264), 슈도모나스 종(미국 특허 제4,438,093호), 플라보박테리움 종(JP 77038113), 바실러스 서쿨란스(JP 63301788) 및 아스페르길루스 종 균주로부터 유래되었다. 트리코데르마 하르지아눔으로부터의 뮤타나제 유전자는 클로닝 및 서열분석되었다(일본 특허 제4-58889/A호).

본 발명의 구강관리 조성물에서 사용하기에 적합한 뮤타나제는 트리코더마를 포함하는 군으로부터의, 특히 트리코데르마 하르지아눔 균주, 예컨대, 트리코데르마 하르지아눔 CBS 243.71(본 명세서에서 서열번호 11로서 개시된 성숙 폴리펩티드), 또는 페니실룸, 특히 페니실룸 푸니쿨로섬 균주, 예컨대, 페니실룸 푸니쿨로섬 NRRL 1768, 또는 페니실룸 리라시눔 균주, 예컨대, 페니실룸 리라시눔 NRRL 896, 또는 페니실룸 퍼퓨로제넘(Penicillium purpurogenum) 균주, 예컨대, 페니실룸 퍼퓨로제넘 CBS 238.95 균주 또는 슈도모나스 속 균주, 또는 플라보박테리움 종 균주 또는 바실러스 서쿨란스 균주 또는 아스페르길루스 종 균주 또는 스트렙토마이세스 종 균주로부터의 사상성 균주로부터 생성될 수 있다.

뮤타나제는 또한 페니실룸 퍼퓨로제넘으로부터 유래될 수 있다.

미국 특허 제4,353,981호(Guggenheim 등)은 치태의 제거를 위한 트리코데르마 하르지아눔 CBS 243.71 뮤타나제(본 명세서에서 서열번호 11로서 개시된 성숙 폴리펩티드), 페니실룸 푸니쿨로섬 NRRL 1768 뮤타나제 및 페니실룸 리라시눔 NRRL 896 뮤타나제의 용도를 개시한다.

일 실시형태에서, 뮤타나제는 트리코더마로부터 얻을 수 있고, 예를 들어, 트리코데르마 하르지아눔으로부터 얻을 수 있고, 서열번호 11과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖고, 뮤타나제 활성을 갖는다. 바람직한 실시형태에서, 뮤타나제는 서열번호 11에 나타낸 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개만큼 상이하다. 바람직한 실시형태에서, 뮤타나제는 서열번호 11을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 또는 이루어진다.

산화환원효소

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 산화환원효소; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는 산화환원효소는 락카제 또는 관련 효소, 옥시다제 또는 페록시다제이다.

산화환원효소는 산화환원을 촉매하는 효소이고, 이들은 치아를 표백하는 것이 발견되었다. 이들은 생화학분자생물학회 국제학술대회(IUBMB)의 권고(1992)에 따른 효소 분류 번호(E.C.) 1(산화환원효소) 하에 분류된다.

본 발명에 따르면, 3가지 유형의 산화환원효소가 특히 상정된다: 1) 분자 산소(O₂) 상에서 작용하고 과산화물(예를 들어, H₂O₂)에 대한 임의의 요구 없이 물(H₂O)을 수득하는 락카제, 또는 타이로시나제와 같은 관련 효소; 2) 분자 산소(O₂) 상에서 작용하고 과산화물(H₂O₂)을 수득하는 옥시다제; 및 3) 과산화물(예를 들어, H₂O₂) 상에서 작용하고 물(H₂O)을 수득하는 페록시다제.

바람직한 산화환원효소는 임의의 부수적 활성이 없는 미생물 기원, 특히 재조합 및/또는 실질적으로 정제된 효소이다. 미생물 효소는 본 발명과 관련하여 박테리아, 사상성 진균 또는 효모로부터 유래된 효소를 의미한다.

수용자로서 산소(O₂) 상에서 작용하는 효소의 경우에, 상기 산소는 공기에 의해 공급된 분자 산소일 수 있다.

3가지 유형의 효소의 조합물을 포함하는 효소 시스템은 또한 본 발명의 조성물에 적합한 것으로 상정된다. 효소 시스템은, 예를 들어, 락카제 또는 관련 효소 및 옥시다제; 락카제 또는 관련 효소 및 페록시다제; 락카제 또는 관련 효소 및 옥시다제 및 페록시다제; 또는 옥시다제 및 페록시다제로 이루어질 수 있다.

락카제 및 관련 효소

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 락카제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

락카제 및 관련 효소의 그룹 내에서 적합한 효소의 예는 휘발성 황 화합물(volatile sulphur compound: VSC)을 산화시킬 수 있는 것이고, 당해 질소 화합물은 모노-및 디페놀산 옥시다제, 예컨대, 카테콜 옥시다제(1.10.3.1), 락카제(E.C. 1.10.3.2), 타이로시나제(E.C. 1.14.18.1) 및 빌리루빈 옥시다제(E.C. 1.3.3.5)이다.

락카제는 o-디페놀뿐만 아니라 p-디페놀을 산화시켜 이들의 대응하는 퀴논을 형성한다. 타이로시나제 및 카테콜 옥시다제는 o-디페놀에서 모노페놀의 하이드록실화 및 o-퀴논에서 o-디페놀의 산화를 촉매한다.

락카제는 보통 적합한 공여자, 바람직하게는 클로로겐산과 함께 적용된다.

본 발명의 조성물에 적합한 락카제는 폴리포루스 종 균주(Polyporus sp.), 특히 폴리포루스 핀시투스 균주(트라메테스 빌로사(Trametes villosa)로도 불림) 또는 폴리포러스 베르시콜로르(Polyporus versicolor), 또는 마이셀리오프토라 종(Myceliophthora sp.) 균주, 예를 들어, 마이셀리오프토라 서모필라(M. thermophila) 또는 리족토니아 종(Rhizoctonia sp.)의 균주, 특히 리족토니아 프라티콜라(Rhizoctonia praticola) 또는 리족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani) 균주, 또는 스키탈리디움 종(Scytalidium sp.) 균주, 특히 스키탈리디움 서모필룸(S. thermophilium), 또는 피리쿨라리아 종(Pyricularia sp.) 균주, 특히 피리쿨라리아 오리자에(Pyricularia oryzae), 또는 코프리누스 종(Coprinus sp.) 균주, 예컨대, 코프리누스 시네레우스(C. cinereus)로부터 유래될 수 있다. 락카제는 또한 진균, 예컨대, 콜리비아(Collybia), 포르네스(Fornes), 렌티누스(Lentinus), 플레우로투스(Pleurotus), 아스페르길루스, 뉴로스포라(Neurospora), 포도스포라(Podospora), 플레비아(Phlebia), 예를 들어, 플레비아 라디아타(P. radiata)(WO 92/01046), 코리오루스 종(Coriolus sp.), 예를 들어, 코리오루스 히르시투스(C. hirsitus)(JP 2-238885) 및 보트리티스(Botrytis)로부터 유래될 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시형태에서, 락카제는 WO 1995/33836에 기재되어 있는 마이셀리오프토라 종 균주, 특히, 마이셀리오프토라 서모필라(Myceliophthora thermophila) 락카제로부터 유래된다.

빌리루빈 옥시다제는 마이로테시움 종(Myrothecium sp.) 균주, 예컨대, 마이로테시움 베루카리아(M. verrucaria) 균주로부터 유래될 수 있다.

페록시다제

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 페록시다제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

페록시다제는 목적하는 결과, 즉, 악취의 제거 또는 적어도 감소를 얻기 위해 H₂O₂ 또는 옥시다제 중 하나와 조합하여 사용되어야 한다.

적합한 페록시다제는 수용자로서 과산화물에 대해 작용하는 효소의 그룹, 예를 들어, E.C. 1.11.1, 특히 페록시다제(E.C. 1.11.1.7) 내에서 발견될 수 있다.

수용자로서 과산화물 상에서 작용하는 적합한 효소의 구체적인 예는 진균종 코프리누스의 균주, 특히 코프리누스 시네레우스 또는 코프리누스 마크로리주스(Coprinus macrorhizus) 균주로부터 유래되거나, 또는 바실러스 박테리아 속의 균주, 특히 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus) 균주로부터 유래된 페록시다제를 포함한다.

할로페록시다제는 또한 본 발명에 따라 적합하다. 할로페록시다제는 대응하는 하이포할로스산(hypohalous acid)의 존재 하에 할로겐화물, 즉, 염화물, 브롬화물 및 요오드화물을 산화시킬 수 있는 효소 부류를 형성한다. 적합한 할로페록시다제는 쿠르불라리아 종(Curvularia sp.), 특히 쿠르부라리아 베루쿨로사(C. verruculosa)로부터 유래될 수 있다.

옥시다제

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 옥시다제; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

과산화물(H₂O₂)을 수득하는 옥시다제는 악취를 제거하거나 또는 적어도 감소시킬 수 있도록 페록시다제와 조합하여 사용되어야 한다. 적합한 옥시다제는 글루코스 옥시다제(E.C. 1.1.3.4), 헥소스 옥시다제(E.C. 1.1.3.5), L-아미노산 옥시다제(E.C. 1.4.3.2), 자일리톨 옥시다제, 갈락토스 옥시다제(E.C. 1.1.3.9), 피라노스 옥시다제(E.C. 1.1.3.10), 알코올 옥시다제(E.C. 1.1.3.13)를 포함한다.

L-아미노산 옥시다제가 사용된다면, 트리코더마 종, 예컨대, 트리코데르마 하르지아눔, 예컨대, WO 1994/25574에 기재되어 있는 L-아미노산 옥시다제, 또는 트리코더마 비리데(Trichoderma viride)로부터 유래될 수 있다.

적합한 글루코스 옥시다제는 아스페르길루스 종, 예컨대, 아스페르길루스 니거 균주로부터, 또는 클라도스포리움 종(Cladosporium sp.) 균주, 특히 클라도스포리움 옥시스포룸(Cladosporium oxysporum)으로부터 유래될 수 있다.

홍조류 콘드러스 크리스푸스(Chondrus crispus)로부터의 헥소스 옥시다제(통상적으로 아이리쉬 모스(Irish moss)로 알려짐)(Sullivan and lkawa, (1973), Biochim. Biophys. Acta 309, p. 11-22; lkawa, (1982), Meth. in Enzymol. 89, Carbohydrate Metabolism Part D, 145-149)는 광범위한 탄수화물, 예컨대, D-글루코스, D-갈락토스, 말토스, 셀로비오스, 락토스, D-글루코스 6-포스페이트, D-만노스, 2-데옥시-D-글루코스, 2-데옥시-D-갈락토스, D-푸카제, D-글루쿠론산 및 D-자일로스를 산화시킨다.

홍조류 아이리도피쿠스 플라시둠(Iridophycus flaccidum)은 여러 상이한 단당류 및 이당류를 산화시키는 용이하게 추출 가능한 헥소스 옥시다제를 생성한다(Bean and Hassid, (1956), J. Biol. Chem 218, p. 425; Rand et al. (1972), J. Food Science 37, p. 698-710).

효소의 다른 적합한 기는 산소의 존재 하에 자일리톨, D-소르비톨, D-갈락티톨, D-만니톨 및 D-아라비니톨을 산화시키는 자일리톨 옥시다제(JP 80892242에 개시되어 있음)이다. 자일리톨 옥시다제는 스트렙토마이세스 종 균주(예를 들어, 스트렙토마이세스 IKD472, FERM P-14339)로부터 얻을 수 있다. 상기 효소는 7.5의 최적 pH를 갖고, pH 5.5 내지 10.5 및 최대 65℃의 온도에서 안정적이다.

라이소자임

일 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; (b) 라이소자임; 및 (c) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

본 발명의 조성물에 적합한 라이소자임은 EC 3.2.1.17 하에 분류되는 것을 포함한다. 라이소자임은 또한 뮤라미다제로도 알려져 있고, 다수의 유기체, 예컨대, 바이러스, 식물, 곤충, 조류, 파충류 및 포유류에서 자연적으로 생긴다. 포유류에서, 라이소자임은 비강 분비액, 타액, 눈물, 장 내용물, 소변 및 유즙으로부터 단리되었다. 효소는 N-아세틸뮤라민산의 탄소수 1과 N-아세틸-D-글루코사민의 탄소수 4 사이의 글리코사이드 결합을 절단한다. 생체내에서, 이들 두 탄수화물은 중합되어 다수 미생물의 세포벽 다당류를 형성한다. 이것이 박테리아 펩타이도글리칸을 분해하는 능력으로 인해, 라이소자임은 항균제로서 작용한다.

라이소자임은 5가지 상이한 글리코사이드 가수분해효소(GH) 패밀리(CAZy, www.cazy.org): 달걀 흰자 라이소자임(GH22), 거위알 흰자 라이소자임(GH23), 박테리오파지 T4 라이소자임(GH24), 스핑고모나스(Sphingomonas) 편모 단백질(GH73) 및 칼라롭시스(Chalaropsis) 라이소자임(GH25)으로 분류되었다. 패밀리 GH23 및 GH24의 라이소자임은 주로 박테리오파지로부터 알려졌으며 최근에 이르러서야 진균에서 확인되었다. 라이소자임 패밀리 GH25는 다른 라이소자임 패밀리와 구조적으로 관련되지 않은 것으로 확인되었다. 달걀 흰자로부터 추출된 라이소자임은 상업적 시장에서 이용 가능한 주요 제품이다.

본 발명의 조성물에 대해, 바람직한 라이소자임은 GH22 라이소자임, GH23 라이소자임, GH24 라이소자임, GH73 라이소자임 및 GH25 라이소자임으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 라이소자임은 GH25 라이소자임이다. GH25 라이소자임의 예는, 예를 들어, WO 2013/076253, WO 2005/080559, PCT/CN2017/117753 및 PCT/CN2017/117765에서 찾을 수 있다.

구강관리 성분 및 형식

본 발명의 구강관리 조성물은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

구강관리 성분은 구강관리 조성물의 유형뿐만 아니라 구강관리 조성물의 목적하는 특징 및/또는 활성에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "성분" 및 "구성성분"은 구강관리 조성물에 관해 상호 호환적으로 사용된다.

본 발명의 구강관리 조성물은 구강 내부의 생물막, 예를 들어, 치아 상에, 구강의 연조직 상에 그리고 구강에 존재하는 의치 상에 존재하는 생물막을 제거하도록 설계된 내부 구강관리 조성물, 예컨대, 치약, 덴탈 크림, 마우스워시, 마우스 린스, 로젠지, 파스틸, 츄잉검, 과자류(confectionary), 사탕 등일 수 있다.

본 발명의 구강관리 조성물은 또한 세정을 위해 구강으로부터 제거된 의치로부터 생물막을 제거하도록 설계된 외부 구강관리 조성물, 예컨대, 의치 클리닝액, 의치 클리닝정, 의치 클리닝 분말 등일 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 구강관리 조성물은 내부 구강관리 조성물이고, 적어도 1종의 구강관리 구성성분은 연마제, 습윤제, 용매, 증점제, 결합제, 완충제, 발포제, 거품 조절제, 감미제, 연화제, 가소제, 향미제, 착색제, 치료제, 항균제, 치석 조절제, 플루오린화물 공급원, 보존제, 세정제, 계면활성제, 착색제, 완충제, 연화제, 가소제, 미백제, 표백제, 검-베이스 성분 및 증량제로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 명세서에 언급된 구강관리 성분은 기능성에 따라 공통 헤더(general header)에 의해 범주화되고, 이는 당업자에 의해 인식될 바와 같이 성분이 추가적인 기능성을 포함할 수 있기 때문에, 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

치약, 덴탈 크림, 마우스워시 및 마우스 린스

치약, 덴탈 크림, 마우스워시 및 마우스 린스 형태의 본 발명의 내부 구강관리 조성물은 다음의 범주로부터 선택되는 성분 및/또는 물질을 포함할 수 있다:

치약

치약 및 덴탈 크림/겔은 전형적으로 연마제, 용매, 습윤제, 세정제/계면활성제, 증점제 및 결합제, 완충제, 향미제, 감미제, 플루오린화물 공급원, 치료제, 효소, 착색제 및 보존제를 포함한다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는 치약 또는 덴탈 크림 형태의 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖되, 적어도 1종의 구강관리 성분은 다음의 성분으로부터 선택된다:

본 발명의 구강관리 조성물은 (최종 치약 조성물의 중량%로) 다음의 성분을 포함하는 치약일 수 있다:

연마제: 10 내지 70%

습윤제: 0 내지 80%

증점제: 0.1 내지 20%

결합제: 0.01 내지 10%

감미제: 0.1 내지 5%

발포제: 0 내지 15%

프럭타나제: 0.01 내지 10%

구강에 작용(들)을 갖는 다른 효소(들): 0.01 내지 20%

마우스워시

플라크 제거액을 포함하는 본 발명의 마우스워시 및 마우스 린스는 전형적으로 프럭타나제, 담체 액체, 세정제/계면활성제, 완충제, 향미제, 습윤제, 감미제, 치료제, 플루오린화물 공급원, 착색제, 보존제 및 효소를 포함한다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는 마우스워시 또는 마우스 린스 형태의 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖되, 적어도 1종의 구강관리 성분은 다음의 성분으로부터 선택된다:

본 발명의 구강관리 조성물은 (최종 마우스워시 조성물의 중량%로) 다음의 성분을 포함하는 마우스워시일 수 있다:

물: 0 내지 70%

에탄올: 0 내지 20%

습윤제: 0 내지 20%

계면활성제: 0 내지 2%

프럭타나제: 0.01 내지 10%

구강에 작용(들)을 갖는 효소(들): 0.01 내지 20%

기타 성분: 0 내지 2%(예를 들어, 향미제, 감미제, 플루오린화물 공급원).

마우스워시 조성물은 pH 범위 6 내지 7.5에서 적절한 완충제, 예를 들어, 시트르산나트륨 또는 인산염으로 완충될 수 있다.

치약, 덴탈 크림, 마우스워시 및 마우스 린스에 적합한 관련 구강관리 구성성분은 아래에 추가로 상세하게 설명된다. 당업자는 구강관리 조성물 유형뿐만 아니라 구체적 구강관리 조성물의 목적하는 특징 및/또는 활성에 따라 구강관리 성분을 변화시킬 수 있다. 구강관리 조성물은 반드시 언급한 성분 모두를 포함하는 것은 아닐 수도 있다.

연마제

연마 광택 물질이 본 발명의 구강관리 조성물에 혼입될 수 있다. 본 발명에 따르면, 상기 연마 광택 물질은 알루미나 및 이의 수화물, 예컨대, 알파 알루미나 삼수화물, 삼규산마그네슘, 탄산마그네슘, 카올린, 알루미노규산염, 예컨대, 하소된 규산알루미늄 및 규산알루미늄, 탄산칼슘, 규산지르코늄, 벤토나이트, 이산화규소, 중탄산나트륨, 및 또한 분말 플라스틱, 예컨대, 염화폴리비닐, 폴리아마이드, 폴리메틸 메타크릴레이트, 폴리스티렌, 페놀-포름알데하이드 수지, 멜라민-포름알데하이드 수지, 우레아-포름알데하이드 수지, 에폭시 수지, 분말 폴리에틸렌, 실리카 제로젤, 하이드로겔 및 에어로겔 등을 포함한다.

또한 피로인산칼슘, 수용성 알칼리 메타인산염, 폴리-메타인산염, 인산이칼슘 및/또는 이의 이수화물, 오쏘인산이칼슘, 인산삼칼슘, 미립자 수산화인회석 등이 연마제로서 적합하다. 또한 이들 물질의 혼합물을 사용할 수 있다.

치아 법랑질 또는 상아질을 과도하게 마모시키지 않고 금속 이온 및 플루오린화물과 같은 다른 가능한 성분과 양호한 양립성을 갖는 뛰어난 치아 세정 및 광택 성능의 독특한 이점으로 인해 다양한 유형의 실리카 치아 연마재가 바람직하다.

구강관리 조성물에 따라서, 연마 제품은 0 내지 70 중량%, 바람직하게는 1 중량% 내지 70 중량%로 존재할 수 있다.

치약의 경우, 연마 물질 함량은 전형적으로 최종 치약 제품의 10 중량% 내지 70 중량%의 범위에 있다.

습윤제

습윤제는, 예를 들어, 치약으로부터의 물의 손실을 방지하기 위해 그리고 공기에 노출 시 치약의 경화를 피하기 위해 사용된다. 일부 습윤제는 또한 치약 및 마우스워시 조성물에 바람직한 단맛의 향미를 제공한다. 본 발명에 따른 구강관리 조성물에서 사용하기 위한 적합한 습윤제는 다음의 화합물 및 이들의 혼합물을 포함한다: 글리세롤, 폴리올, 소르비톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 폴리옥시에틸렌, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 1,3-프로판디올, 1,4-부탄디올, 수소화된 부분적으로 가수분해된 다당류 등, 코코넛 지방산, N-메틸-타우린의 아마이드 및 Pluronic®.

습윤제는 일반적으로 0 중량% 내지 80 중량%, 바람직하게는 5 내지 70 중량%로 존재한다.

증점제/결합제

적합한 증점제 및/또는 결합제는 실리카, 전분, 트래거캔스검, 잔탄검, 카라야검, 카라기난(아이리쉬 모스의 추출물), 아라비아 고무, 알기네이트, 펙틴, 셀룰로스 유도체, 예컨대, 하이드록시에틸 셀룰로스, 카복시메틸 셀룰로스나트륨, 하이드록시프로필 셀룰로스 및 하이드록시에틸 프로필 셀룰로스, 폴리아크릴산 및 이의 염, 폴리비닐피롤리돈 및 카복시비닐 중합체뿐만 아니라 무기 증점제, 예컨대, 비정질 실리카 화합물을 포함한다. 이들 제제는 본 발명의 구강관리 조성물을 안정화시킨다.

증점제는 치약, 덴탈 크림 및 겔에서뿐만 아니라 마우스워시에서 0.1 내지 20 중량%의 양으로, 그리고 결합제는 최종 생성물의 0.01 내지 10 중량%의 정도로 존재할 수 있다.

발포제 및 거품 조절제

발포제 비누로서, 음이온성, 양이온성, 비이온성, 양쪽성 및/또는 양쪽이온성 계면활성제가 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 이들은 최종 생성물의 0 중량% 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 13 중량%, 더 바람직하게는 0.25 중량% 내지 10 중량%의 수준으로 존재할 수 있다. 계면활성제는 이들이 구강관리 조성물에 포함되는 효소 및 다른 성분에 대해 비활성화 효과를 발휘하지 않는 정도로만 적합하다. 유용한 표면 활성제는 음이온성, 비이온성 및 양성 화합물을 포함하며, 음이온성 화합물이 바람직하다.

적합한 계면활성제의 예는 보다 고차의 알킬설페이트의 염, 예컨대, 라우릴황산나트륨 또는 알킬기에 8 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 다른 적합한 알킬설페이트; 라우릴설포아세트산나트륨, 보다 고차 지방산의 설폰화된 모노글리세라이드의 염, 예컨대, 소듐 코코넛 모노글리세라이드 설포네이트 또는 10 내지 18개의 탄소 원자의 지방산의 다른 적합한 설폰화된 모노글리세라이드; 보다 고차 지방산의 아마이드, 예를 들어, 12 내지 16개의 탄소 원자 산과 보다 저급의 지방족 아미노산, 예컨대, 소듐-N-메틸-N-팔미토일 타우라이드, 소듐 N-라우로일-, N-미리스토일- 및 N-팔미토일 사르코시네이트의 염; 이러한 지방산의 에스테르와 동위원소 산과의 또는 글리세롤모노설페이트와의 염; 예컨대, 수소화된 코코넛 오일 지방산의 모노설페이트된 모노글리세라이드의 나트륨염; 올레핀 설포네이트, 예를 들어, 알켄 설포네이트 또는 알켄 설포네이트 또는 분자의 탄소 쇄에 12 내지 16개의 탄소 원자를 갖는 이들의 혼합물의 염; 및 보다 고차 지방산의 비누, 예컨대, 12 내지 18개의 탄소 원자, 예를 들어, 코코넛 지방산의 비누를 포함한다.

염의 양이온은 나트륨, 칼륨 또는 모노-, 디 또는 트리에탄올 아민일 수 있다. 비이온성 계면활성제는 수크로스/지방산 에스테르, 말토스/지방산 에스테르, 말티톨/지방산 에스테르, 말토트리이톨/지방산 에스테르, 말토테트리톨/지방산 에스테르, 말토펜타이톨/지방산 에스테르, 말토헥사이톨/지방산 에스테르, 마호헵타이톨/지방산 에스테르, 소르비탄/지방산 에스테르, 락토스/지방산 에스테르, 락티노스/지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌/지방산 에스테르, 지방산 알칸올아마이드, 폴리옥시에틸렌 소르비탄/지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌/수소화된 피마자유 및 폴리글리세린/지방산 에스테르를 포함한다.

라우릴황산나트륨, 도데실벤젠설폰산나트륨 및 라우릴사르코신산나트륨이 가장 바람직하다.

바람직한 거품 조절제는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

발포제 및 거품 조절제는 0 중량% 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 10 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

감미제

적합한 감미제는 사카린 및 이의 수용성 염, 덱스트로스, 수크로스, 락토스, 말토스, 레불로스, 아스파르탐, 사이클라메이트염, D-트립토판, 디하이드로클라콘, 아세설팜, 스테비오사이드, 레바우디오사이드, 글리시리진, 펠라르틴, 타우마틴, p-메톡시신남산 알데하이드, 수소화된 전분 가수분해물, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨, 만니톨 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

감미제는 0.001 중량% 내지 60 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 50 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

향미제

향미제는 보통 소량으로, 예컨대, 0.01 중량% 내지 약 5 중량%, 특히 0.1 중량% 내지 5 중량%로 존재한다. 본 발명에서 사용될 수 있는 향미제는 윈터그린 오일, 페퍼민트 오일, 스피어민트 오일, 클로브 버드 오일, 멘톨, 아네톨, 메틸 살리실레이트, 유칼립톨, 카시아, 1-멘틸 아세테이트, 세이지, 유제놀, 파슬리 오일, 옥사논, 알파-이리손, 마조람, 레몬, 오렌지, 크랜베리, 프로페닐 구아에톨, 신나몬, 바닐린, 에틸 바닐린, 헬리오트로핀, 4-시스-헵텐알, 디아세틸, 메틸파라-tert-부틸 페닐 아세테이트, 카르본(carvone), 시네올, 멘톤, 신남산 알데하이드, 리모넨, 오시멘, n-데실 알코올, 시트로넬롤, 알파-테르피네올, 메틸 아세테이트, 시트로넬릴 아세테이트, 메틸 유제놀, 리나룰, 티몰, 로즈마리 오일, 피멘토 오일, 규조토 오일, 유칼립투스 오일 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

냉각수는 또한 향미 시스템의 부분일 수 있거나, 또는 조성물에 별도로 첨가될 수 있다. 본 조성물에서 바람직한 냉각수는 파라멘탄 카복시아마이드 제제, 예컨대, N-에틸-p-멘탄-3-카복스아마이드(상업적으로 'WS-3"로서 알려져 있음), 멘톨, 3-1-멘톡시프로판-1,2-디올("TK-10"), 멘톤 글리세롤 아세탈("MGA"), 멘틸 락테이트 및 이들의 혼합물이다.

미백제/표백제

미백제/표백제는 H₂O₂를 포함하고, 최종 조성물의 중량을 기준으로 계산하여 5% 미만, 바람직하게는 0.05 내지 4%의 양으로 첨가될 수 있다.

본 발명에 의해 포함될 수 있는 다른 표백제는 페록시디포스페이트, 우레아, 과산화물, 금속 과산화물, 예컨대, 칼슘 과산화물, 나트륨 과산화물, 스트론튬 과산화물, 마그네슘 과산화물, 차아염소산염, 예컨대, 차아염소산나트륨, 및 과붕산염, 과규산염, 과인산염 및 과탄산염, 예컨대, 과붕산나트륨, 과규산칼륨 및 과탄산나트륨을 포함한다. 과산화물 화합물은 트리페닐메탄 염료, 킬레이트제 또는 항산화제, 예컨대, 부틸화된 하이드록시 아니솔(BHA) 또는 부틸화된 하이드록시 톨루엔(BHT)의 첨가에 의해 안정화될 수 있다.

용매

용매는 보통 조성물이, 예를 들어, 치약, 덴탈 크림 또는 겔인 경우에 조성물에 유동가능한 형태를 제공하거나 또는, 예를 들어, 마우스워시 또는 마우스 린스의 경우에 조성물의 다른 성분을 용해시키기에 충분한 양으로 본 발명의 조성물에 첨가된다.

적합한 용매는 0.1% 내지 70%의 양으로 존재할 수 있는 물, 에탄올 및 물/에탄올 혼합물을 포함한다.

항균제

본 발명은 또한 수용성 항균제, 예컨대, 클로르헥시딘, 트리클로산, 디글루코네이트, 헥세티딘, 알렉시딘, 4차 암모늄 항균 화합물을 포함하고, 특정 금속 이온의 수용성 공급원, 예컨대, 아연, 구리, 은 및 제일주석(예를 들어, 염화아연, 염화구리 및 염화제일주석, 및 질산은)이 또한 포함될 수 있다.

거의 가용성이지 않은 아연염, 예컨대, 시트르산아연, 아연 C14-알킬 말레에이트, 아연 벤조에이트, 아연 카프로에이트, 아연 카보네이트는 또한 타액 중 이들 아연염의 느린 용해로 인해 아연 이온의 항균 유효성을 연장시키기 위해 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다.

항균제는 0 중량% 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 40 중량%, 가장 바람직하게는 0.1 중량% 내지 30 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

치석-조절제

본 발명의 조성물은 임의의 피로인산염, 예컨대, 피로인산이나트륨, 피로인산이칼륨, 피로인산사칼륨, 피로인산사나트륨 및 이들의 혼합물을 포함하는 무기 인 치석-조절제와 같은 치석-조절제를 포함할 수 있다.

치석-조절제로서 작용할 수 있는 유기 인 화합물은 폴리인산염, 예컨대, 디소듐 에탄-1-하이드록시-1,1-디포스포네이트(EHDP), 메탄디포스폰산 및 2-포스포노부탄-1 2,4-트리카복실산을 포함한다.

치석-조절제는 0 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

보존제

적합한 보존제는 벤조산나트륨, 소르브산칼륨, p-하이드록시벤조에이트 에스테르, 메틸 파라벤, 에틸 파라벤, 프로필 파라벤, 시트르산, 시트르산칼슘 및 이들의 혼합물을 포함한다.

보존제는 0 중량% 내지 40 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 30 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

플루오린화물 공급원

본 발명의 조성물은 또한 플루오린화물 공급원으로서 사용될 수 있는 성분을 포함할 수 있다. 바람직한 가용성 플루오린화물 공급원은 플루오린화나트륨, 플루오린화칼륨, 플루오린화 제일주석, 플루오린화인듐, 일불소인산나트륨, 헥사플루오로규산나트륨, 플루오린화아연, 플루오린화리튬, 플루오린화알루미늄, 산성 플루오린화인산염, 중플루오린화암모늄, 사플루오린화티타늄 및 플루오린화아민을 포함한다.

플루오린화나트륨 및 일불소인산나트륨이 특히 바람직하다.

플루오린화물 공급원은 0 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 15 중량%, 가장 바람직하게는 0.1 중량% 내지 10 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 적어도 1종의 구강관리 성분은 플루오린화물 공급원이고; 바람직하게는 플루오린화물 공급원은 플루오린화나트륨, 플루오린화칼슘, 플루오린화 제일주석 또는 일불소인산나트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

착색제

본 발명의 구강관리 조성물에 적합한 착색제 또는 색소는 비독성, 수용성 무기 색소, 예컨대, 이산화티타늄 및 크로뮴옥사이드 그린, 울트라마린 블루 및 핑크 및 산화제이철뿐만 아니라 알루미나 상의 FD&C 염료의 칼슘 또는 알루미늄 염을 확장시킴으로써 제조된 수불용성 염료 레이크, 예컨대, FD&C Green No.1 레이크, FD&C Blue No.2 레이크, FD&C Red No. 30 레이크, FD&C Yellow No. 16 레이크 및 FD&C Yellow No. 10을 포함한다.

바람직한 불투명화제는 이산화티타늄이다.

착색제는 0 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 15 중량%, 가장 바람직하게는 0.1 중량% 내지 10 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

완충제

본 발명의 구강관리 조성물은 또한 완충제, 즉, pH-조절제, 예컨대, 알칼리 금속 수산화물, 탄산염, 세스퀴탄산염, 붕산염, 규산염, 인산염, 이미다졸 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

구체적인 완충제는 모노인산나트륨, 트리인산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 알칼리금속 탄산염, 탄산나트륨, 이미다졸, 피로인산염, 시트르산나트륨, 염산, 수산화나트륨, 트리에탄올아민, 트리에틸아민, 락트산, 말산, 퓨마르산, 타르타르산, 인산 및 이들의 혼합물을 포함한다.

완충제는 0 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 5 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

츄잉검

본 발명에 따른 구강 조성물이 츄잉검일 때, 이는 임의의 알려진 유형의 츄잉검, 예컨대, 선택적으로 코팅된 츄잉검 조각뿐만 아니라 의도된 용도에 대응하여 임의의 목적하는 형상을 구비한 스틱 또는 츄잉검일 수 있다. 츄잉검 제제는 풍선껌 품질을 포함하는 임의의 품질을 가질 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는 츄잉검 형태의 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖되, 적어도 1종의 구강관리 성분은 탄성중합체, 연화제, 가소제, 유화제, 왁스, 착색제, 감미제, 향미제, 증량제 및 증점제로부터 선택된다.

검 베이스 성분

츄잉검은 전통적으로 향미제, 감미제 및 착색제를 함유하는 수용성 또는 베이스 부분 및 수용성 부분으로 이루어진 것으로 간주된다. 검의 검 베이스 부분은 최종 제품에 씹는 특징을 부여하는 씹는 물질이다. 이는 향미제 및 감미제의 방출 프로파일을 정하며, 검 제품에서 유의미한 역할을 한다. 향미제, 감미제 및 착색제는 츄잉검의 감각 매력의 측면을 제공하는 것으로 여겨질 수 있다. 본 발명에 따른 츄잉검 제제에서 사용되는 츄잉검 베이스로서 제한은 존재하지 않는다. 예를 들어, Dansk Tyggegummi Fabrik A/S, L.A. Dreyfus 또는 Cafasa Gum SIA로부터 입수 가능한 통상적인 츄잉검 베이스가 보통 적합하지만, 특별히 제조된 제형이 또한 사용될 수 있다. 제형은 츄잉검의 목적하는 유형 또는 구조의 목적하는 유형에 따른다. 검 베이스에 적합한 원재료는 문헌[U.S. Chewing Gum Base Regulations - Code of Federal Regulations, Title 21, Section 172,615]에 따라 그리고 다른 국립 및 국제 목록(또는 포지티브 리스트)에 따른 물질을 포함하고, 탄성중합체, 수지, 왁스, 폴리비닐 아세테이트, 오일, 지방, 유화제, 충전제 및 항산화제를 포함한다.

검 베이스는 보통 최종 생성물의 15 내지 90 중량%, 바람직하게는 30 내지 40 중량%, 더 바람직하게는 5 내지 25 중량%를 포함한다.

탄성중합체는 베이스에 씹힘, 탄력성 또는 반동을 제공하고, 최종 츄잉검에서 기포 및 향 방출을 제어한다. 이들은 당업계에 공지된 임의의 수용성 중합체일 수 있다. 이들은 천연과 합성 둘 다의 스티렌 부타디엔 공중합체(SBR) 및 비-SBR 유형을 포함한다. 천연 탄성중합체의 예는 고무, 예컨대, 고무 라텍스(천연 고무) 및 구아율, 및 검, 예컨대, 치클, 젤루통(jelutong), 발라타, 구타페르카, 레치 카프시(lechi capsi), 소르바, 크라운 검, 니스페로, 로시디냐, 페릴로, 니거 구타, 투누, 구타 카이(gutta kay), 펜다레, 레체 드 바카(leche de vaca), 치키불, 크라운 검 등 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 합성 탄성중합체의 예는 폴리이소부틸렌, 이소부틸렌-이소프렌 공중합체(부틸고무), 폴리에틸렌, 폴리부타디엔, 스티렌부타디엔 공중합체, 폴리이소프렌 등 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

검 베이스 조성물에서 사용되는 탄성중합체(고무)의 양은 사용되는 검 베이스의 유형(접착성, 또는 통상적, 풍선껌 또는 표준) 목적하는 검 베이스 조성물의 점조도, 및 최종 츄잉검 제품을 제조하기 위해 조성물에서 사용되는 다른 성분과 같은 다양한 인자에 따라서 크게 다를 것이다. 일반적으로, 탄성중합체는 검 베이스 조성물의 총량을 기준으로 약 15 중량% 내지 약 60 중량%, 바람직하게는 약 25 중량% 내지 약 30 중량%의 양으로 검 베이스 조성물 중에 존재한다.

탄성중합체 용매는 탄성중합체 구성성분을 연화 또는 가소화하는 것을 돕는다. 이렇게 함으로써 이들을 씹는 것에 부피감(bulkiness)을 제공한다.

탄성중합체 용매는 천연 로진 에스테르 및, 예를 들어, 테르펜의 합성 유도체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 사용하기에 적합한 탄성중합체 용매의 예는 톨유 로진 에스테르; 부분적으로 수소화된 목재 및 검 로진; 목재 및 검 로진의 글리세롤 에스테르, 부분적으로 수소화된 목재/검 로진, 부분적으로 이량체화된 목재 및 검 로진, 중합체화된 목재 및 검 로진, 및 톨유 로진; 목재 로진의 탈취 글리세롤 에스테르; 목재 및 검 로진의 펜타에리트리톨 에스테르; 부분적으로 수소화된 목재 및 검 로진; 부분적으로 수소화된 목재 로진의 메틸 에스테르; 로진 및 개질된 로진의 메틸, 글리세롤 및 펜타에리트리톨 에스테르, 예컨대, 수소화된, 이량체화 및 중합된 로진; 테르펜 수지, 예컨대, 알파-피넨 또는 베타-피넨, 테르펜 탄화수소 수지의 중합체; 폴리테르펜; 등 및 이들의 혼합물을 포함한다. 탄성중합체 용매는 검 베이스 조성물의 약 2 중량% 내지 약 40 중량%, 바람직하게는 약 7 중량% 내지 약 15 중량%의 양으로 검 베이스 조성물 중에 사용될 수 있다.

폴리비닐 아세테이트는 검 베이스에 신축성 또는 탄성을 제공한다. 이들은 또한 씹는 부피감, 연성 및 기포, 친수성 특징 및 향미 방출에 영향을 미친다.

검 베이스 조성물 중에 존재하는 상이한 분자량 폴리비닐 아세테이트의 양은 목적하는 씹는 특성, 예컨대, 온전함, 연성, 씹는 부피감, 필름-형성 특징, 친수성 특징 및 향미 방출을 갖는 완성된 츄잉검을 제공하는 데 효과적이어야 한다. 검 베이스 조성물에서 사용되는 폴리비닐 아세테이트의 총량은 보통 총 검 베이스 조성물을 기준으로 약 45 중량% 내지 약 92 중량%이다. 비닐 중합체는 약 2000 Da 최대 약 95,000 Da 범위의 분자량을 가질 수 있다.

전형적으로, 저 분자량 폴리비닐 아세테이트는 중량 평균 분자량이 약 2,000 Da 내지 약 14,000 Da이다. 중간 분자량 폴리비닐 아세테이트는 전형적으로 중량 평균 분자량이 약 15,000 Da 내지 55,000 Da이다. 고 분자량 폴리비닐 아세테이트는 전형적으로 중량 평균 분자량이 55,000 Da 내지 약 95,000 Da이지만, 500,000 Da만큼 높은 범위일 수 있다.

왁스, 지방 및 오일은 탄성중합체 혼합물을 가소화하고, 검 베이스의 탄성을 개선시킨다. 왁스는 부드러운 또는 단단한 씹기를 제공하고, 향미 방출에 영향을 미치고, 검 베이스에 부피감 및 부드러움을 제공할 수 있다. 지방 및 오일은 부드러운 씹기를 제공한다. 지방, 오일 및 왁스는 개개로 또는 조합하여 사용될 수 있거나, 검 베이스는 무왁스 검 베이스일 수 있다.

왁스는 사용되는 경우, 광물, 동물 식물성 또는 합성 기원일 수 있다. 광물 왁스의 비제한적 예는 석유 왁스, 예컨대, 파라핀 및 미정질 왁스를 포함하고, 동물 왁스는 밀랍을 포함하고, 식물성 왁스는 카나우바, 칸델릴라, 쌀겨, 에스파르토, 아마 및 사탕수수를 포함하고, 합성 왁스는 피셔-트롭시(Fischer-Tropsch) 합성에 의해 생성된 것 및 이들의 혼합물을 포함한다.

검 조성물에서 사용 가능한 적합한 오일 및 지방은 수소화된 또는 부분적으로 수소화된 식물성 또는 동물성 지방, 예컨대, 면실유, 대두유, 코코넛유, 팜핵유, 우지, 수소화된 탤로, 라드, 코코아 버터, 라놀린 등; 지방산, 예컨대, 팔미트산, 올레산, 스테아르산, 리놀렌산, 라우르산, 미리스트산, 카프론산, 카프릴산, 데칸산 또는 에스테르 및 스테아르산나트륨 및 스테아르산칼륨과 같은 염을 포함한다. 이들 성분은 사용될 때 일반적으로 최대 약 7 중량%의 검 조성물, 바람직하게는 최대 약 3.5 중량%의 검 조성물의 양으로 존재한다.

수소화된 식물성 오일이 연화제로서 바람직하며, 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있는 대두유 및 면실유를 포함한다. 이들 연화제는 양호한 질감 및 부드러운 씹는 특징을 갖는 검 베이스 조성물을 제공한다. 이들 연화제는 일반적으로 검 베이스 조성물의 약 5 중량% 내지 약 14 중량%의 양으로 사용된다.

유화제는 검 베이스 조성물의 비혼화성 구성성분을 단일 안정적인 시스템에 분산시키는 데 도움을 준다. 이들은 친수성 특징을 검 베이스에 제공하고, 수지 및 폴리비닐 아세테이트를 가소화하는 데 도움을 준다. 이들은 또한 베이스의 연성 및 베이스의 기포 특징에 영향을 미친다. 전형적인 유화제는 아세틸화된 모노글리세라이드, 글리세릴 모노스테아레이트, 레시틴, 지방산 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 레시틴, 트리아세틴, 글리세릴 트리아세테이트 등 및 이들의 혼합물을 포함한다.

바람직한 유화제는 글리세릴 모노스테아레이트 및 아세틸화된 모노글리세라이드이다. 이들은 가소제로서 작용한다. 유화제는 검 베이스 조성물의 약 2 중량% 내지 약 15 중량%, 바람직하게는 검 베이스 조성물의 약 7 중량% 내지 약 11 중량%의 양으로 사용될 수 있다.

지방, 오일, 왁스, 유화제 및 특정 당 증량제는 종종 함께 그룹화되고, 연화제로 지칭된다. 이들 성분의 저분자량 때문에, 연화제는 검 베이스의 기본 구조를 침투하여 이를 가소성 및 덜 점성으로 만들 수 있다. 위의 유용한 가소제 및 연화제는 라놀린, 팔미트산, 올레산, 스테아르산, 스테아르산나트륨, 스테아르산칼륨, 글리세릴 트리아세테이트, 글리세릴 레시틴, 글리세릴 모노스테아레이트, 프로필렌 글리콜 노나스테아레이트, 아세틸화된 모노글리세라이드, 글리세린, 완전 불포화된 식물성 오일, 예컨대, 비수소화된 면실유, 수소화된 식물성 오일, 석유 왁스, 소르비탄 모노스테아레이트, 탤로 등, 및 이들의 혼합물을 포함하고, 또한 높은 프럭토스 옥수수 시럽, 옥수수 시럽, 소르비톨 용액, 수소화된 전분 가수분해물 등, 및 이들의 혼합물을 포함한다.

존재하는 연화제의 양은 목적하는 씹는 부피감 및 연성을 갖는 완성된 츄잉검을 제공하기 위한 유효량이어야 한다. 연화제로서 사용될 때, 이들 물질은 일반적으로 검 베이스 조성물에서 최대 약 25 중량%의 양으로, 바람직하게는 검 베이스 조성물의 약 1 중량% 내지 약 17 중량%의 양으로 사용된다.

검 베이스는 추가로 계면활성제를 함유할 수 있다. 적합한 계면활성제의 예는 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올리에이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노라우레이트, 폴리에틸렌(4) 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌, (4) 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 트리스테아레이트, 폴리옥시에틸렌(5) 소르비탄 모노올리에이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 트리올리에이트, 소르비탄 모노라우레이트 등을 포함한다. 존재하는 계면활성제의 양은 목적하는 연성을 갖는 완성된 츄잉검을 제공하는 데 효과적이어야 한다. 전형적으로, 계면활성제는 검 베이스의 총 중량의 총 중량을 기준으로 약 0.5 중량% 내지 약 3.0 중량%의 양으로 베이스에서 사용된다.

본 발명의 검 베이스 조성물은 또한 때때로 증량제로 지칭되는 충전제의 유효량을 포함할 수 있다. 이들 물질은 단단함 및 벌크를 더하고, 츄잉검의 질감 및 향미 방출에 영향을 미친다. 유용한 충전제는 유기 및 무기 화합물(광물 보조제), 예컨대, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 석회석 분말, 규산마그네슘, 인산칼슘, 셀룰로스 중합체, 점토, 알루미나, 수산화알루미늄, 규산알루미늄, 탤크, 인산삼칼슘, 인산이칼슘 등 및 이들의 혼합물을 포함한다. 이들 충전제 또는 보조제는 검 베이스 조성물에서 다양한 양으로 사용될 수 있다. 존재하는 충전제의 양은 목적하는 향미 방출 및 온전함을 갖는 완성된 츄잉검을 제공하는 데 유효하여야 한다. 전형적으로, 충전제는 검 베이스 조성물의 약 1 중량% 내지 약 40 중량%, 바람직하게는 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 양으로 검 베이스 조성물 중에 사용된다.

검 베이스는 또한 개선된 안정성을 제공하고, 임의의 오일 맛을 줄이고, 더 긴 보관수명을 제공하기 위해 항산화제를 포함할 수 있다. 항산화제의 전형적인 비제한적 예는 부틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 부틸화된 하이드록시 아니솔(BHA), 프로필 갈레이트이다. 이들의 혼합물이 또한 사용될 수 있다.

기타 검 성분

츄잉검 조성물 중 남아있는 성분은 통상적이며, 보통 최종 생성물의 10 내지 85 중량%를 포함한다.

이들의 예는 츄잉검에 대해 통상적으로 사용되는 유형 및 양의 감미제, 연화제, 착색제, 증량제, 증점제 및 향미제이다.

적합한 향미제는 천연향 및 인공향과 같은 당업자에게 알려진 향을 갖는다. 이들 향은 합성 향미 오일 및 향미 방향족 및/또는 오일, 올레오레진 및 식물, 잎, 꽃, 열매 등으로부터 유래된 추출물, 및 이들의 조합물로부터 선택될 수 있다. 비제한적인 대표적 향미 오일은 스피어민트 오일, 계피 오일, 윈터그린 오일(메틸 살리실레이트), 페퍼민트 오일, 클로브 오일, 베이유, 아니스유, 유칼립투스 오일, 타임 오일, 상엽유, 육두구 오일, 올스파이스, 세이지 오일, 메이스, 쓴편도 오일 및 카시아 오일을 포함한다. 다른 유용한 향미는 인공, 천연 및 합성 열매향, 예컨대, 바닐라, 및 레몬, 오렌지, 라임, 자몽을 포함하는 시트러스 오일 및 사과, 배, 복숭아, 포도, 딸기, 라즈베리, 체리, 자두, 파인애플, 살구 등을 포함하는 열매 에센스이다. 이들 향미제는 액체 또는 고체 형태로 사용될 수 있고, 개개로 또는 혼합하여 사용될 수 있다. 보통 사용되는 향미는 개개로 사용되든 혼합하여 사용되든, 민트, 예컨대, 페퍼민트, 멘톨, 인공 바닐라, 계피 유도체, 및 다양한 열매향을 포함한다.

다른 유용한 향미제는 알데하이드를 포함하고, 에스테르, 예컨대, 신남일 아세테이트, 신남알데하이드, 시트레이트 디에틸아세탈, 디하이드로카빌 아세테이트, 유게놀 포르메이트, p-메틸 아니솔 등이 사용될 수 있다. 일반적으로, 임의의 향미 또는 식품 첨가제가 사용될 수 있다.

알데하이드 향미의 추가적인 예는 아세트알데하이드(사과), 벤즈알데하이드(체리, 아몬드), 아니스 알데하이드(감초, 아니스), 신남산 알데하이드(신나몬), 시트랄, 즉, 알파-시트랄(레몬, 라임), 네랄, 즉, 베타-시트랄(레몬, 라임), 데칸알(오렌지, 레몬), 에틸 바닐린(바닐라, 크림), 헬리오트로프, 즉, 피페로날(바닐라, 크림), 바닐린(바닐라, 크림), 알파-아밀 신남알데하이드(강한 과일향), 부티르알데하이드(버터, 치즈), 발레르알데하이드(버터, 치즈), 시트로넬랄(다수 유형), 데칸알(감귤류), 알데하이드 C-8(감귤류), 알데하이드 C-9(감귤류), 알데하이드 C-12 (감귤류), 2-에틸 부티르알데하이드(장과류), 헥센알, 즉, 트랜스-2-헥센알(장과류), 톨릴 알데하이드(체리, 아몬드), 베라트랄데하이드(바닐라), 2,6-디메틸-5-헵텐알, 즉, 멜론알(멜론), 2,6-디메틸옥탄알(풋과일), 및 2-도데센알(시트러스, 만다린), 체리, 포도, 딸기 쇼트케이크, 이들의 혼합물 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 명세서에서 사용되는 향미제의 양은 보통은 최종 츄잉검 조성물의 유형, 개개 향, 사용되는 검 및 목적하는 향의 강도와 같은 인자에 따른 선호도의 문제이다. 따라서, 향미제의 양은 최종 생성물에서 목적하는 결과를 얻기 위해 달라질 수 있으며, 이러한 변형은 과도한 실험에 대한 요구 없이 당업자의 능력 이내이다. 검 조성물에서, 향미제는 일반적으로는 츄잉검 조성물의 약 0.02 중량% 내지 약 5 중량%의 양으로 존재한다.

츄잉검 조성물은 일반적으로 증량제를 포함한다. 이러한 증량제(카더(carder), 익스텐더(extender))는 수용성일 수 있고, 단당류, 이당류, 다당류, 당 알코올 및 이들의 혼합물; 소르비톨, 자일리톨, 말티톨, 만니톨, 이소말트(Suddeutsche Zucker에 의해 상표명 Palatinit™ 하에 제작된 알파-D-글루코피라노실-1,6-만니톨과 알파-D-글루코피라노실-1,6-소르비톨의 라세미 혼합물), 글리세롤, 아스파르탐, Lycasin® 글리세롤, 갈락티톨 아세설팜 K, 사카린 및 이의 염, 시클라메이트 및 이의 염, 네오헤스페리딘 디하이드로칼콘, 글리실리진산 및 이의 염, 타우만틴 및 수크랄로스뿐만 아니라 이들의 혼합물 또는 다른 적합한 감미제, 말토덱스트린과 이들의 혼합물; 수소화된 전분 가수분해물; 수소화된 헥소스; 수소화된 이당류; 광물, 예컨대, 탄산칼슘, 탤크, 이산화티타늄, 인산이칼슘, 셀룰로스 등 및 이들의 혼합물로 이루어지지만, 이들로 제한되지 않는 군으로부터 선택되는 증량제를 포함한다. 증량제는 츄잉검 조성물의 최대 약 60 중량%의 양으로, 바람직하게는 약 25 중량% 내지 약 60 중량%의 양으로 사용될 수 있다.

츄잉검 조성물은 또한 고강도 감미제(감미료)를 포함할 수 있다. 고강도 감미제는 수크로스보다 실질적으로 더 큰 강도의 단맛을 갖는다. 적합한 강도 감미료의 예는 하기를 포함한다:

a) 수용성 천연 유래 강도 감미료, 예컨대, 디하이드로칼콘, 모넬린, 스테비오사이드, 글리시리진, 디하이드로플라벤올 및 L-아미노디카복실산 아미노알칸온산 에스테르 아마이드, 예컨대, 미국 특허 제4,619,834호에 개시된 것, 및 이들의 혼합물;

b) 가용성 사카린 염, 예컨대, 나트륨 또는 칼슘 사카린 염, 시클라메이트 염, 3,4-디하이드로-6-메틸-1,2,3-옥사티아진-4-온-2,2-디옥사이드의 나트륨, 암모늄 또는 칼슘염, 3,4-디하이드로-6-메틸-1,2,3-옥사티아진-4-온-2,2-디옥사이드의 칼륨염(아세설팜-K), 사카린의 유리 산 형태 등 및 이들의 혼합물을 포함하는, 수용성 인공 감미료;

c) L-아스파르트산 유래 감미료, 예컨대, 1-아스파르틸-L-페닐알라닌 메틸 에스테르(아스파르탐) 및 미국 특허 제3,492,131호에 기재된 물질, L-알파-아스파르틸-N-(2,2,4,4-테트라메틸-3-티에탄일)-D-알라닌아마이드 수화물(알리테임(Alitame)), L-아스파르틸-L-페닐글리세린 및 L-아스파르틸-L-2,5-디하이드로페닐-글리신의 메틸 에스테르, L-아스파르틸-2.5-디하이드로-L-페닐알라닌, L-아스파르틸-L-(1-사이클로헥센)-알라닌 등 및 이들의 혼합물을 포함하는 디펩티드 기반 감미료;

d) 천연 유래 수용성 감미료로부터 유래된 수용성 강도 감미료, 예컨대, 보통의 당(수크로스)의 염소화된 유도체, 예를 들어, 클로로데옥시당 유도체, 예컨대, 예를 들어, Sucralose® 제품 표기 하에 알려진 클로로데옥시수크로스 또는 클로로데옥시갈락토수크로스의 유도체; 클로로데옥시수크로스 및 클로로데옥시갈락토수크로스 유도체의 예는 1-클로로-1'-데옥시수크로스; 4-클로로-4-데옥시-알파-D-갈락토피라노실-알파-D-프럭토프라노사이드, 또는 4- 클로로-4-데옥시갈락토수크로스; 4-클로로-4-데옥시-알파-D-갈락토피라노실-1-클로로-l데옥시- 베타-D-프럭토-프라노사이드, 또는 4,1'-디클로로-4,1'-디데옥시갈락토수크로스; 1',6'-디클로로-1',6'-디데옥시수크로스; 4-클로로-4-데옥시-알파-D-갈락토피라노실-1,6-디클로로-1,6-디데옥시-베타-D-프럭토프라노사이드, 또는 4,1',6'-트리클로로-4,1',6'-트리데옥시갈락토수크로스; 4,6-디클로로-4,6-디데옥시-알파-D-갈락토피라노실-6-클로로-6-데옥시-베타-D-프럭토프라노사이드, 또는 4,6,6'-트리클로로-4,6,6'-트리데옥시갈락토수크로스; 6,1',6'-트리클로로-6,1',6'-트리데옥시수크로스; 4,6-디클로로-4,6-디데옥시-알파-D-갈락토피라노실-1,6-디클로로-1,6-디데옥시-베타-D-프럭토프라노사이드 또는 4,6,1',6'-테트라클로로-4,6,1',6'-테트라데옥시갈락토-수크로스; 및 4,6,1',6'-테트라데옥시-수크로스, 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음;

e) 단백질 기반 강도 감미료, 예컨대, 타우마오코커스 다니클리(Thaumaoccous daniclii)(타우마틴 I 및 II). 츄잉검 조성물 중에 사용되는 감미료의 양은 특정 츄잉검에 대해 선택되는 감미료에 따라 다를 것이다. 따라서, 임의의 주어진 감미료에 대해, 목적하는 단맛 수준을 제공하기 위해 충분량의 감미료가 사용된다. 위에 기재된 당류 감미료 및 당 알코올은 보통 츄잉검 조성물의 총 중량을 기준으로 보통 약 1 중량% 내지 약 70 중량%의 양으로, 바람직하게는 약 40 중량% 내지 약 50 중량%의 양으로 사용된다. 위에 기재한 강한 감미료는 보통 츄잉검 조성물의 총 중량을 기준으로 최대 약 1 중량%, 바람직하게는 약 0.05 중량% 내지 약 0.4 중량%의 양으로 사용된다.

본 발명에서 유용한 착색제는 목적하는 색을 생성하는 데 효과적인 양으로 사용된다. 이들 착색제는 검 조성물의 최대 약 6 중량%의 양으로 혼입될 수 있는 색소를 포함한다. 바람직한 색소인 이산화티타늄은 검 조성물의 최대 약 2 중량%, 바람직하게는 약 1 중량% 미만의 양으로 혼입될 수 있다. 착색제는 또한 식품, 약물 및 화장품 적용분야에 적합한 천연 식품 색 및 염료를 포함할 수 있다. 이들 착색제는 F.D.& C. 염료 및 레이크로서 알려져 있다. 앞서 언급한 용도를 위한 허용 가능한 물질은 바람직하게는 수용성이다. 예시적인 비제한적 예는 5,5-인디고틴디설폰산의 이나트륨염인 F.D.& C. Blue No.2로서 알려진 인디고이드 염료(indigoid dye)를 포함한다. 유사하게, F.D.& C. Green No.1로 알려진 염료는 트리페닐메탄 염료를 포함하고, 4-[4-(N-에틸-N-p-설포늄벤질아미노)디페닐메틸렌]-[1-(N-에틸-N-p-설포늄벤질)-델타-2,5-사이클로-헥사디엔이민]의 일나트륨염이다.

증점제의 예는 메틸 셀룰로스, 알기네이트, 카라기난, 잔탄검, 젤라틴, 캐러브, 트래거캔스 및 로커스트콩, 유화제, 예컨대, 레시틴 및 글리세릴 모노스테아레이트, 산미료, 예컨대, 말산, 아디프산, 시트르산, 타르타르산, 퓨마르산 및 이들의 혼합물을 포함한다.

검 베이스에서 사용하는 데 적합한 것으로 상기 논의한 가소제, 연화제, 유화제, 왁스 및 항산화제는 또한 츄잉검 조성물에서 사용될 수 있다.

활성 검 성분

츄잉검 형태의 본 발명의 구강관리 조성물은 또한 다양한 활성 성분, 예컨대, 항균제, Zn 염, 플루오린화물 및 우레아를 함유할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 구강 조성물은 원한다면, 임의의 다른 활성 성분, 예컨대, 충지방지제, 치석방지제, 플라크방지제, 치주질환방지제, 항진균제, 흡연방지제, 감기방지제, 치은염에 대한 제제 등을 포함한다.

조성물에서 사용되는 항균제는 임의의 다양한 양이온성 항균제, 예컨대, 4차 암모늄 화합물(예를 들어, 염화세틸피리디늄) 및 치환된 구아니딘, 예컨대, 클로르헥시딘 및 대응하는 화합물 알렉시딘일 수 있다. 양이온성 항균제의 혼합물이 또한 본 발명에서 사용될 수 있다.

항균성 4차 암모늄 화합물은 4차 질소 상의 치환체 중 중 하나 또는 둘이 일부 8 내지 20개, 전형적으로 10 내지 18개의 탄소 원자의 탄소 쇄 길이(전형적으로 알킬기)를 갖지만, 남아있는 치환체(전형적으로 알킬 또는 벤질기)는 더 낮은 수의 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 7개의 탄소 원자, 전형적으로 메틸 또는 에틸기를 갖는 것을 포함한다. 도데실 트리메틸 암모늄 브로마이드, 테트라데실 피리디늄 클로라이드, 테트라데실 에틸 피리디늄 클로라이드, 도데실 디메틸(2-페녹시에틸) 암모늄 브로마이드, 벤질 디메틸스테아릴 암모늄 클로라이드, 세틸 피리디늄 클로라이드, 4차화된 5-아미노-1,3-비스 2-에틸-헥실)-5-메틸 헥사 하이드로피리미딘 및 벤즈에토늄 클로라이드는 전형적인 4차 암모늄 항박테리아제의 예시이다. 다른 화합물은 본 명세서에 참조에 의해 원용된 Bailey 등의 1980년 6월 3일자의 미국 특허 제4,206,215호에 개시되어 있는 바와 같은 비스[4-(R-아미노)-1-피리디늄]알칸이다. 피리디늄 화합물은 바람직한 4차 암모늄 화합물이다.

양이온성 항균제는 일반적으로 본 조성물에서 약 0.02% 내지 약 1%, 바람직하게는 약 0.3% 내지 약 0.7% 가장 바람직하게는 약 0.3% 내지 약 0.5%의 수준으로 사용된다.

용이하게 가용성인 아연염으로서, 원칙적으로는 임의의 생리적으로 허용 가능한, 용이하게 가용성인 무기산 또는 유기산의 아연염을 사용할 수 있으며, 상기 염은 아연 이온을 방출할 수 있고, 식품, 화장품 또는 약제 제품에서와 같은 의도된 용도로 승인 중이다. 비제한적 예는, 예를 들어, 시트르산아연, 황산아연, 락트산아연, 염화아연, 아세트산아연뿐만 아니라 이들의 혼합물이다. 이들 염 중에서 아세트산아연이 바람직하다.

사용되는 아연염은, 적합한 기간 내에 목표로 하는 목적을 위해 효율적인 아연 이온 양의 방출이 구강에서 보장되도록 용이하게 가용성이어야 한다.

유리하게는, 아연염은 0.001 내지 1.25 중량%의 양으로 구강 조성물에 존재한다. 사용되는 양은 투여 형태 및 의도된 용도에 따르며, 의도된 용도에 효율적인 아연 이온의 양이 방출되도록 맞추어진다.

맛-차폐(taste-masking) 염이 사용되기 때문에, 염화나트륨, 염화암모늄 및 생리적으로 허용 가능한 알칼리 금속, 알칼리토금속 및/또는 탄산암모늄 중에서 적어도 1종의 염이 선택된다.

알칼리금속은 특히 나트륨 또는 칼륨인 반면, 알칼리토금속은 유리하게는 칼슘 또는 마그네슘이다. 특히 바람직한 맛-차폐 염은 탄산나트륨, 탄산칼륨 및 탄산마그네슘, 염화나트륨, 염화암모늄뿐만 아니라 이들의 혼합물이다.

맛-차폐 염은 유리하게는 0.05 내지 6.25 중량%, 더 바람직하게는 0.25 내지 3.50 중량%, 예컨대, 0.50 내지 2.50 중량%의 양으로 구강 조성물 중에 사용된다.

아연의 맛을 가리기 위한 맛-차폐 염의 사용량은 각 경우에 당업자에 의해 결정될 수 있고, 당해 특정 아연 염 및 선택되는 투여 형태에 따른다.

우레아는 섭식 또는 음용에 후속적으로 치태에서 생성되는 산을 중화시키기 위해 항우식성 제품으로서 사용된다. 우레아 이외에도, 조성물은 또한 구강 내에서 우세한 조건 하에서 우레아를 방출할 수 있는 약리학적으로 허용 가능한 물질을 함유할 수 있다. 이의 예는 하기와 같다: 우레아와 무기 화합물, 예컨대, 황산마그네슘, 인산칼슘, 염화나트륨 등 사이의 염 및 첨가 화합물.

본 발명에 따른 조성물의 우레아 함량은 0.05 중량% 내지 80 중량%, 바람직하게는 0.2 중량% 내지 25 중량%으로 다르다.

츄잉검 조성물은 표준 기법 및 당업자에게 알려진 기기를 이용하여 제조될 수 있다. 본 발명에 따라 유용한 장치는 혼합 및 비팅(beating) 장치도 포함한다.

로젠지 및 파스틸

로젠지는 구강 또는 인두에서 빨아먹거나 보유하고 있도록 의도되는 가향된 의약 투약 형태이다. 이들은 비타민, 항생제, 방부제, 국소 마취제, 항히스타민, 충혈제거제, 코르티코스테로이드, 수렴제, 진통제, 방향제, 완화제 또는 이들 성분의 조합물을 함유할 수 있다. 로젠지는 다양한 형상을 취할 수 있고, 가장 통상적인 것은 편평한 형태, 원형, 팔각형 및 양면이 볼록한 형태이다. 바실리로 불리는 다른 유형은 짧은 막대형 또는 원통형이다. 파스틸로 불리는 연질의 다양한 로젠지는 젤라틴 또는 글리세로젤라틴 베이스 또는 아카시아, 수크로스 및 물 베이스의 의약으로 이루어진다(H. A. Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Volume 1 (1980), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.).

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는 로젠지 또는 파스틸 형태의 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖고; 적어도 1종의 구강관리 성분은 윤활제, 증량제, 감미제 및 향미제로부터 선택된다.

윤활제

압축된 로젠지의 제조에서 윤활제의 용도는 이것이 형성된 다이로부터의 로젠지의 방출을 용이하게 하는 것이다. 본 발명에서 사용되는 윤활제는 하전되지 않고 양이온성 항균제를 방해(예를 들어, 복잡하게 함)하지 않는 고체 물질이다. 물질은 바람직하게는 수불용성이어야 한다. 이들 요구사항을 충족시키는 적합한 물질의 한 가지 유형은 비독성 탄화수소 지방 또는 유도체이다. 예는 수소화된 탤로 및 수소화된 식물성 오일을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜은 이들이 고체 물질이라면(일반적으로 4000 Da 내지 6000 Da 범위의 분자량을 갖는 것을 의미함) 윤활제로서 사용될 수 있다. 이들 물질은 또한 아래에 언급된 바와 같은 충전제로서 사용될 수 있다.

윤활제의 혼합물이 또한 본 발명에서 사용될 수 있다. 윤활제는 약 0.1% 내지 약 4.0% 바람직하게는 약 0.5% 내지 약 2%의 수준으로 사용된다.

로젠지 비히클

용어 "로젠지 비히클"은 본 명세서에서 활성 성분, 이러한 프럭타나제(들), 다른 효소 및 치료제뿐만 아니라 윤활제를 운반하는 물질(들)을 지칭하기 위해 사용된다. 이들 물질은 증량제 또는 충전제로도 알려져 있다. 비히클은 비우식성이기 때문에, 비히클은 수크로스 및 유사한 물질이 없어야 한다.

허용 가능한 충전제 물질은 만니톨, 소르비톨, 자일리톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 비우식성 덱스트란을 포함한다. 충전제는 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다.

만니톨은 천연 유래 당 알코올이고, 미세한 분말로서 이용 가능하다. 이는 수크로스의 약 50%만의 단맛을 갖는다. 그러나, 용액의 만니톨의 네거티브한 열은 로젠지가 용해됨에 따라 입 안에서 쾌적하고, 시원한 감각을 부여하는 것을 가능하게 한다.

소르비톨은 만니톨의 화학적 이성질체이고, 유사한 정도의 단맛을 갖는다. 네거티브한 이 용액의 열은, 또한 입 안에서 쾌적하고, 시원한 감각을 제공한다. 소르비톨은 자유 유동 과립으로서 또는 결정질 분말로서 이용 가능하다. 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 또한 본 조성물에서 사용될 수 있다. 이들 물질은 일반식이 HOCH₂ (CH₂OCH₂)_nCH₂OH인 에틸렌 옥사이드의 중합체이다. PEG의 단독 사용은 선호되지는 않지만, 다른 충전제와 조합한 이들의 사용은 허용 가능하다. 가장 바람직한 것으로 밝혀진 분자량은 4000 Da 내지 6000 Da이다.

충전제는 본 발명에서 일반적으로는 약 85% 내지 약 99.8%, 바람직하게는 약 90% 내지 약 98%, 가장 바람직하게는 약 94% 내지 약 97%의 수준으로 사용된다.

기타 로젠지 구성성분

허용 가능한 로젠지는 위에 약술한 바와 같이 활성 성분, 윤활제 및 충전제 물질만을 이용하여 제작될 수 있다. 그러나, 심미적 관점으로부터 더 허용 가능한 로젠지를 제조하기 위해, 적합한 희석제 상에 흡착되는 물질, 예컨대, 분무 건조 또는 캡슐화된 향미제 또는 액체 향미제가 일반적으로 포함된다. 분무 건조 또는 캡슐화된 향미제가 바람직하다. 적합한 향미제에는 페퍼민트 오일, 윈터그린 오일, 사사프라스 오일, 스피어민트 오일 및 클로브 오일을 포함한다. 감미제는 또한 본 조성물에서의 용도에 허용 가능하다. 적합한 제제는 아스파르탐, 아세설팜, 사카린, 덱스트로스 및 레불로스를 포함한다. 감미제 및 향미제는 일반적으로 본 발명의 조성물에서 약 0.1 % 내지 약 2%, 바람직하게는 약 0.25% 내지 약 1.5%의 수준으로 사용된다.

또한 추가적으로 항우식 유효성을 제공하기 위해 약 0.0025 중량% 내지 약 5.0 중량%, 바람직하게는 약 0.005 중량% 내지 약 2.0 중량%의 플루오린화물 농도를 제공하기에 충분한 양으로 본 로젠지에 존재하는 수용성 플루오린화물 화합물의 고체 형태를 갖는 것이 허용 가능하다. 바람직한 플루오린화물은 플루오린화나트륨, 플루오린화 제일주석, 플루오린화인듐 및 일불소인산나트륨이다. 로젠지는 또한 다양한 활성 성분, 예컨대, 항균제, Zn 염, 플루오린화물 및 우레아(상기 참조)를 함유할 수 있다.

과자류 및 사탕

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는 과자류 또는 사탕 형태의 구강관리 조성물에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖고; 적어도 1종의 구강관리 성분은 착색제, 감미제, 향미제 및 오일 조절제로부터 선택된다.

사탕 제형의 제조는 역사적으로 잘 알려져 있으며, 수 년 동안 거의 변하지 않았다. 과자류 항목은 "딱딱한" 과자류 또는 "부드러운" 과자류로서 분류되어왔다. 본 발명의 휘발성 오일-조절제는 조절제를 통상적인 딱딱한 과자류 및 부드러운 과자류에 혼합함으로써 혼입될 수 있다.

딱딱한 과자류는 통상적인 수단에 의해 가공되고 제형화될 수 있다. 일반적으로, 딱딱한 과자류는 비정질 또는 유리질 조건에서 유지되는 당과 다른 탄수화물 증량제의 혼합물로 구성된 베이스를 갖는다. 이 형태는 일반적으로 약 0.5% 내지 약 1.5%의 수분을 갖는 당의 고체 시럽으로 간주된다. 이러한 물질은 일반적으로는 최종 조성물의 최대 약 92 중량% 옥수수 시럽, 최대 약 55 중량% 당 및 약 0.1 중량% 내지 약 5 중량% 물을 함유한다. 시럽 구성성분은 일반적으로는 프럭토스가 많은 옥수수 시럽으로 제조되지만, 다른 물질을 포함할 수 있다. 추가 성분, 예컨대, 향미제, 감미료, 산미료, 착색제 등이 또한 첨가될 수 있다.

이러한 과자류는 통상적인 방법, 예컨대, 연소 쿠커(fire cooker), 진공 쿠커 및 고속 대기 쿠커(atmospheric cooker)로도 지칭되는 표면 긁기 쿠커(scraped-surface cooker)를 수반하는 것에 의해 일상적으로 제조될 수 있다.

연소 쿠커는 사탕 베이스를 제조하는 전통적인 방법을 수반한다. 이 방법에서, 목적하는 양의 탄수화물 증량제는 증량제가 용해될 때까지 주전자에서 제제를 가열함으로써 수 중에 용해된다. 이어서, 추가적인 증량제가 첨가될 수 있고, 145 내지 156℃의 최종 온도가 달성될 때까지 조리가 계속된다. 이어서, 배치(batch)는 냉각되고, 향미제, 착색제 등과 같은 첨가제를 혼입하기 위해 플라스틱 같은 덩어리로서 작업된다.

고속 대기 쿠커는 박동-교환기(beat-exchanger) 표면을 이용하며, 이는 열 교환 표면 상에서 사탕의 필름을 펼치는 것을 수반하고, 사탕은 몇 분 내에 165 내지 170℃까지 가열된다. 이어서, 사탕은 100 내지 120℃까지 냉각되고, 향미제, 착색제 등과 같은 첨가제의 혼입을 가능하게 하는 플라스틱같은 덩어리로서 작업된다.

진공 쿠커에서, 탄수화물 증량제는 125 내지 132℃까지 비등되고, 진공이 적용되며, 추가 가열 없이 추가적인 물이 비등된다. 조리가 완료되면, 덩어리는 반고체이고, 플라스틱 같은 점조도를 갖는다. 이 시점에서, 향미제, 착색제 및 기타 첨가제는 일상적인 기계적 혼합 작업에 의해 덩어리로 혼합된다.

딱딱한 과자류의 통상적인 제조 동안 향미제, 착색제 및 기타 첨가제를 균일하게 혼합하는 데 필요한 최적의 혼합은 물질의 균일한 분포를 얻는 데 필요한 시간에 의해 결정된다. 정상적으로는, 4 내지 10분의 혼합 시간이 허용 가능한 것으로 발견되었다.

일단 사탕 덩어리가 적절하게 유연해지면, 작업 가능한 부분으로 절단될 수 있거나, 목적하는 형상으로 형성될 수 있다. 목적하는 최종 생성물의 형상 및 크기에 따라서 다양한 형상화 기법이 이용될 수 있다. 딱딱한 과자류의 조성물 및 제조의 일반적인 논의는 문헌[H. A. Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Volume 1 (1980), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y]에서 찾을 수 있다.

본 발명에 따라 유용한 장치는 과자류 제조 기술에 잘 알려진 조리 및 혼합 장치를 포함하고, 구체적인 장치의 선정은 당업자에게 분명할 것이다. 대조적으로, 압축 정제 과자류는 특정 물질을 함유하고, 압력 하에서 구조로 형성된다.

이들 과자류는 일반적으로는 조성물의 최대 약 95 중량%의 양의 당, 및 전형적인 정제 부형제, 예컨대, 결합제 및 윤활제뿐만 아니라 향미제, 착색제 등을 함유한다. 단단한 과자류와 유사하게, 부드러운 과자류가 본 발명에서 이용될 수 있다. 누가와 같은 부드러운 과자류의 제조는 통상적인 방법, 예컨대, 두 주요 구성성분의 조합물, 즉, (1) 고비등 시럽, 예컨대, 옥수수 시럽, 수소화된 전분 가수분해물 등, 및 (2) 일반적으로 난백 알부민, 젤라틴, 식물성 단백질, 예컨대, 대두 유래 화합물, 무설탕 유즙 유래 화합물, 예컨대, 유즙 단백질 및 이들의 혼합물로부터 제조된 상대적으로 가벼운 질감의 프라페(frappe)를 수반한다. 프라페는 일반적으로 상대적으로 가벼우며, 예를 들어, 약 0.5 내지 약 0.7 그램/cc의 밀도 범위일 수 있다.

과자류의 향미 구성성분은 연관된 쓴맛 또는 다른 불쾌한 뒷맛을 갖는 향미제이다. 이들 향미제 구성성분은 천연 및 합성 향미제 액체, 예컨대, 휘발성 오일, 합성 향미제 오일, 향미 방향족 및 오일, 액체, 올레오레진 또는 식물, 잎, 꽃, 열매, 줄기로부터 유래된 추출물 및 이들의 조합물로부터 선택될 수 있다. 휘발성 오일의 비제한적인 대표적 예는 스피어민트 오일, 계피 오일, 윈터그린 오일(메틸 살리실레이트), 페퍼민트 오일, 멘톨, 클로브 오일, 베이유, 아니스유, 유칼립투스 오일, 타임 오일, 상엽유, 육두구 오일, 올스파이스 오일, 세이지 오일, 메이스 추출물, 쓴편도 오일 및 카시아 오일을 포함한다. 또한, 과자류는 또한 각각으로 또는 혼합된, 바닐라와 같은 열매 향미제, 및 레몬, 오렌지, 포도, 라임 및 자몽을 포함하는 시트러스 오일 및 사과, 배, 복숭아, 포도, 딸기, 라즈베리, 체리, 자두, 파인애플, 살구 등을 포함하는 열매 에센스를 포함하는 인공, 천연 및 합성 열매 향미제를 함유할 수 있다.

다른 유용한 향미제는 알데하이드 및 에스테르, 예컨대, 벤즈알데하이드(체리, 아몬드), 시트랄, 즉, 알파-시트랄(레몬, 라임), 네랄, 즉, 베타-시트랄(레몬, 라임), 데칸알(오렌지, 레몬), 알데하이드 C-8(감귤류), 알데하이드 C-9(감귤류), 알데하이드 C-12(감귤류), 톨릴 알데하이드(체리, 아몬드), 2,6-디메틸-옥탄알(풋과일), 및 2-도데센알(감귤류, 만다린), 이들의 혼합물 등을 포함한다.

감미료가 이용되는 예에서, 본 발명은 천연과 인공 감미료 둘 다를 포함하는 당업계에 잘 공지된 해당 감미료의 포함을 상정한다. 감미료는 다음의 비제한적 목록으로부터 선택될 수 있다: 당, 예컨대, 수크로스, 글루코스(옥수수 시럽), 덱스트로스, 전화당, 프럭토스 및 이들의 혼합물, 사카린 및 이의 다양한 염, 예컨대, 나트륨 또는 칼슘 염; 사이클람산 및 이의 다양한 염, 예컨대, 나트륨염; 디펩티드 감미료, 예컨대, 아스파르탐, 디하이드라칼콘 화합물, 글리시리진; 스테비아 레바우디아나(Stevia Rebaudiana)(스테비오사이드); 수크로스의 클로로-유도체; 디하이드로플라빈올; 하이드록시과이어콜 에스테르; L-아미노 디카복실산 겜-디아민; L-아미노디카복실산 아미노알켄산 에스테르 아마이드; 및 당 알코올, 예컨대, 소르비톨, 소르비톨 시럽, 만니톨, 자일리톨 등. 또한 합성 감미제 3,6-디하이드로-6-메틸-1,2,3-옥사티아진-4-온-2,2-디옥사이드, 특히 이의 칼륨(아세설팜-K), 나트륨 및 칼슘염이 상정된다.

과자류는 또한 착색제를 포함할 수 있다. 착색제는 식품, 약물 및 화장품 적용분야에 적합하고, FD&C 염료 등으로서 알려진 임의의 수많은 염료로부터 선택될 수 있다. 앞서 언급한 사용 범위에 허용 가능한 물질은 바람직하게는 수용성이다. 예시적인 예는 5,5'-인디고틴디설폰산의 이나트륨염인 FD&C Blue No. 2로 알려진 인디고이드 염료를 포함한다. 유사하게, FD&C Green No. 1로 알려진 염료는 트리페닐메탄 염료를 포함하고, 4-[4-N-에틸-p-설포벤질아미노)디페닐메틸안]-[1-(N-에틸-N-p-설포늄벤질)-2-5-사이클로헥사디엔이민]의 일나트륨염이다. 모든 FD&C 및 D&C 염료 및 이들의 대응하는 화학적 구조의 전체 설명은 문헌[Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, in Volume 5]에서 찾을 수 있다.

과자류는 또한 휘발성 오일-조절제, 예컨대, 캡시쿰 올레오레진을 포함할 수 있다. 오일-조절제는 구강에서 별도의 성분으로서 검출되지 않지만, 휘발성 오일의 감각 인식을 변형시키는 능력을 갖는 양으로 존재한다.

오일-조절제는 과자류의 약 1 내지 약 150 ppm의 양으로 존재한다. 캡시쿰은 캡시쿰 미니뭄(Capsicum minimum), 캡시쿰 프루테센(Capsicum frutescens), 캡시쿰 안눔(Capsicum annuum) 및 유사한 변종으로부터 입수 가능하다. 상업적으로, 캡시쿰의 열매는 칠리 또는 후추로 지칭된다. 이들 열매는 이들의 자극성(bite), 매움 및 특이한 냄새의 지나친 효력에 대해 알려져 있다.

과자류 압축 정제 제형에 대해, 이들은 정제 과립화 베이스 및 다양한 첨가제, 예컨대, 감미료 및 향미제를 함유할 것이다. 사용되는 정제 과립화 베이스는 사용되는 베이스의 유형, 목적하는 마손도 및 최종 제품을 제조하기 위해 사용되는 기타 구성성분에 따라 다를 것이다. 이들 과자류는 일반적으로 조성물의 최대 95 중량%의 양으로 당을 함유한다.

과자류 압축 정제는 추가로 정제 부형제, 예컨대, 결합제 또는 윤활제뿐만 아니라 향미제, 착색제 및 휘발성 오일 및 휘발성 오일-조절제를 포함할 수 있다.

이들 과자류에 대해 실시할 수 있는 변형은 광범위하고, 특히 추가적인 조성물 충전제, 향미제의 용도, 착색제의 용도 등에 있어서 당업자의 능력 이내이다.

외부 구강관리 조성물

외부 구강관리 제형, 즉, 의치 클리닝액, 의치 클리닝정, 의치 클리닝 분말 등은 다음의 범주로부터 선택된 성분 및/또는 물질을 포함할 수 있다:

바람직한 실시형태에서, 적어도 하나의 구강관리 성분은 담체 액체, 살균제 및 표백제, 청정제, 세정제 및 계면활성제, 발포제, 보존제, 및 향미제로 이루어진 군으로부터 선택된다.

기타 구강관리 조성물

본 발명의 경구 조성물은 또한 치아 클리닝에 적합한 필라멘트, 예를 들어, 치실로서 유용한 필라멘트에 포함될 수 있다. 바람직하게는, 구강관리 조성물은 필라멘트의 외부에 코팅된다. 따라서, 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물을 포함하는 필라멘트에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖고; 필라멘트는 치아 세정에 적합하다.

본 발명의 구강관리 조성물은 또한 동물 간식에 포함될 수 있고, 이에 의해 동물의 구강 건강상태를 개선시키는 데 사용될 수 있다. 따라서, 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 동물 간식 형태의 본 발명의 구강관리 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 동물 간식은 반려동물 간식이다. 가장 바람직하게는, 동물 치료는 개 간식이다.

구강 조성물은 동물 간식의 외면 상에 코팅되거나, 다른 간식 성분과 혼합되거나, 간식의 내부 구획에 포함될 수 있다. 바람직하게는, 구강관리 조성물은 간식의 내부 구획에 포함된다.

적합한 유형의 동물 간식뿐만 아니라 이러한 간식의 제조 방법은 당업자에게 잘 공지되어 있고, 예를 들어, EP 0 258 037 A2, US 4,892,748 B2, 및 US 8,496,985 B2에 기재되어 있다.

대안의 양상에서, 본 발명은 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물을 포함하는 동물 간식에 관한 것이되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

바람직하게는, 동물 간식은 반려동물 간식이다. 가장 바람직하게는, 동물 치료는 개 간식이다.

구강 조성물은 동물 간식의 외면 상에 코팅되거나, 다른 간식 성분과 혼합되거나, 간식의 내부 구획에 포함될 수 있다. 바람직하게는, 구강관리 조성물은 간식의 내부 구획에 포함된다.

구강 질환의 치료

본 발명의 구강관리 조성물은 경구 질환의 치료에서 사용하기에 적합하되, 생물막의 제거가 요망된다. 본 발명의 조성물은 치주 질환 및 치아 우식증을 치료하는 데 특히 적합하다.

치주질환으로도 알려진 치주병은 박테리아 감염 및 그에 따른 시험 시의 생물막 구성 및 치아를 둘러싸는 조직에 의해 야기되는 일련의 염증성 병태이다. 치주병은 중증도의 측면에서 다음의 범주로 나눌 수 있다: 치은염(플라크-유도 치은염을 포함), 만성 치주염, 공격적 치주염, 전신 질환의 징후로서의 치주염, 괴사 궤양 치은염/치주염, 치주조직의 농양 및 치주-근관 복합 병소. 치주병은 추가로 영향받은 영역의 정도에 따라 국소화 또는 일반화된 것으로 고려될 수 있다.

충치 또는 구멍으로도 알려진 치아우식증은 유기산, 예컨대, 락트산에 의해 야기되고, 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 및 일부 락토바실러스(Lactobacillus) 종을 포함하는 구강 내에 존재하는 특정 생물막-형성 박테리아에 의해 방출된다. 치아우식증은 치아 주변 조직의 염증, 치아소실 및 감염 또는 농양 형성과 같은 추가적인 합병증과 연관될 수 있다. 치아우식증은 위치, 병인론, 진행률, 및 예를 들어, G.V. Black 분류(분류 I, II, III, IV, V 및 VI)에 따른, 영향받은 경조직에 의해 분류될 수 있다.

일 양상에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한,

(a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및

(b) 적어도 1종의 구강관리 성분

을 포함하는 구강관리 조성물에 관한 것이되;

프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 구강 질환의 치료에서 사용하기 위한,

(a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및

(b) 적어도 1종의 구강관리 성분

을 포함하는 구강관리 조성물에 관한 것이되,

프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명은 치주병 및/또는 치아 우식증의 치료에서 사용하기 위한,

(a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및

(b) 적어도 1종의 구강관리 성분

을 포함하는 구강관리 조성물에 관한 것이되,

프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 인간 또는 동물 대상체의 치료 또는 예방적 치료를 위한,

(a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및

(b) 적어도 1종의 구강관리 성분

을 포함하는 구강관리 조성물의 용도에 관한 것이되,

프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 인간 또는 동물 대상체의 치료 방법에 관한 것이고, 상기 방법은

(a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및

(b) 적어도 1종의 구강관리 성분

을 포함하는 구강관리 조성물을 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,

프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 바람직하게는, 구강관리 조성물은 상기 대상체의 구강에 투여된다.

일 양상에서, 본 발명은 경구 생물막을 제거하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 생물막을 (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제; 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하는, 구강관리 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하되; 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 구강관리 조성물은 외부 구강관리 조성물이고, 생물막은 대상체 상에 위치되고; 바람직하게는 대상체는 의치이다. 일 실시형태에서, 대상체는 구강 내부 또는 외부에 위치된다.

실시예

분석

DNase 활성 분석 1

DNase 활성은 공급업자로부터의 매뉴얼에 따라 준비한 Methyl Green(BD, 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크 소재)을 이용하는 DNase 시험 한천 상에서 결정하였다. 간략히 말해서, 21 g의 한천을 500 ㎖ 물에 용해시키고, 이어서, 15분 동안 121℃에서 오토클레이빙하였다. 오토클레이빙한 한천을 수욕에서 48℃까지 온도를 조절하고, 20 ㎖의 한천을 페트리접시에 붓고 밤새 실온에서 인큐베이션에 의해 고형화시켰다. 고형화된 한천 플레이트 상에서, 5 ㎕의 효소 용액을 첨가하고, 점무늬 효소 용액 주변의 무색 구역으로서 DNase 활성을 관찰한다.

DNase 활성 분석 2

공급업자의 매뉴얼에 따라 DNaseAlert 키트(11-02-01-04, IDT Integrated DNA Technologies)를 이용함으로써 DNase 활성을 결정하였다. 간략히 말해서, 95 ㎕ DNase 샘플을 마이크로타이터 플레이트에서 5 ㎕ 기질과 혼합하고, BMG Labtech(536 ㎚ 여기, 556 ㎚ 방출)로부터의 Clariostar 마이크로타이터 판독기를 이용하여 형광을 즉시 측정하였다.

실시예 1: 프럭타나제의 클로닝 및 발현

서열번호 2 내지 6

서열번호 2 및 서열번호 6을 암호화하는 DNA를 각각 바실러스 리체니포르미스 및 플라보박테리움 반파쿠엔스 균주로부터 단리시켰고, 미국에서 수집하였다(표 1 참조). 균주로부터의 염색체 DNA에 차세대 서열분석 기술을 이용하여 전체 게놈 서열분석을 실시하였다. CAZy 데이터베이스에 정해진 바와 같이 글리코실 가수분해효소 도메인을 함유한 단백질 서열에 대해 게놈 서열을 분석하였다(www.cazy.org, Lombard V, et al. 2014, Nucleic Acids Res 42:D490-D495). 글리코사이드 가수분해효소 패밀리 GH32 도메인을 함유하는 서열(GH32, CAZy 데이터베이스, www.cazy.org, Lombard V, et al. 2014, Nucleic Acids Res 42:D490-D495)을 게놈에서 확인하였다.

바실러스 리체니포르미스, 아트로박터 종 Leaf337 및 바실러스 서브틸리스의 균주로부터 각각 유래된 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 5를 암호화하는 DNA를 공공 데이터베이스에서 확인하였다(표 1 참조).

서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5 및 서열번호 6을 암호화하는 DNA는 Twist Bioscience로부터의 합성 유전자로서 주문하였다. BsaI 및 T4 DNA 리가제 효소를 이용하여 표준 Golden Gate 클로닝 방법에 의해 WO 2012/025577에 기재된 바실러스 발현 벡터에 합성 DNA 단편을 지향적으로 조립하였다. 간략히 말해서, 유전자의 성숙 펩티드를 암호화하는 DNA를 바실러스 클라우시(Bacillus clausii) 분비 신호(BcSP; 다음의 아미노산 서열을 가짐: MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA(서열번호 8)에 대해 틀 내에 클로닝시켰다. BcSP는 유전자에서 천연 분비 신호를 대체하였다. BcSP 서열 하류에서, 친화도 태그 서열을 도입하여 정제 과정을 용이하게 하였다(His-태그; 다음의 아미노산 서열을 가짐: HHHHHHPR, 서열번호 9). 따라서 발현된 유전자는 BcSP 서열, 이어서 His-태그 서열, 이어서 성숙 프럭타나제 서열을 포함하였다.

최종 발현 플라스미드를 바실러스 서브틸리스 발현 숙주에 형질전환시켰다. 형질전환 시 바실러스 서브틸리스 숙주 세포 게놈에 상동성 재조합에 의해 유전자를 통합하였다. 삼중 프로모터 시스템의 제어 하에서 유전자 작제물을 발현시켰다(WO 1999/43835에 기재한 바와 같음). 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제를 암호화하는 유전자를 마커로서 사용하였다(문헌[Diderichsen et al., 1993, Plasmid 30: 312-315]에 기재한 바와 같음). ㎖당 6 마이크로그램의 클로람페니콜을 보충한 LB 배지 한천 상에서 형질전환체를 선택하였다. 발현 작제물을 함유하는 하나의 재조합 바실러스 서브틸리스 클론을 선택하고, 각각 100 ㎖ 효모 추출물-기반 배지를 함유하는 500 ㎖의 배플 삼각 플라스크에서 회전 진탕 테이블 상에서 배양시켰다. 30℃ 내지 37℃에서 3 내지 5일의 배양 후에, 효소 함유 상청액을 원심분리에 의해 채취하고, 5 ㎖ HisTrap Excel 칼럼(GE Healthcare Life Sciences) 상에서 금속 이온으로서 Ni²⁺를 이용하여 고정 금속 크로마토그래피(IMAC)에 의한 His-태그 정제에 의해 효소를 정제하였다. 정제는 pH 7에서 발생하였고, 결합된 단백질을 이미다졸로 용리시켰다. 정제된 효소의 순도를 SDS-PAGE에 의해 확인하였고, 50 mM HEPES, 100 mM NaCl, pH 7.0에서 완충제 교환 후에 280 ㎚에서의 흡광도에 의해 효소 농도를 결정하였다.

서열번호 1 및 서열번호 7

서열번호 1의 클로닝 및 발현을 서열 특이적 프라이머 서열번호 13 및 서열번호 14를 이용하여 WO 2018/113745의 실시예 14에 기재한 바와 같이 행하였고, 페니실룸 오크로클로론(P. ochrochloron)으로부터의 gDNA를 이용하는 PCR 증폭을 WO 2018/113745의 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조하였다.

균주 ColS1300 및 niiA/niiD 좌위에서 통합을 위해 3개의 중복 단편을 갖는 US 2019/0225988에 기재된 전략을 이용하여 서열번호 7의 클로닝 및 발현을 행하였다. 서열번호 7을 암호화하는 유전자에 대응하는 중간 단편을 프라이머 서열번호 15 및 서열번호 16을 이용하여 WO 2018/113745의 실시예 2에 기재한 바와 같이 제조한 아스페르길루스 니거 gDNA로부터 PCR-증폭시켰다.

정제

발효 브로스로부터의 서열번호 1 내지 7의 회수를 위해 소수성 상호작용 크로마토그래피 정제를 사용하였고: 황산암모늄을 1.8 M의 최종 농도까지 첨가하고, 샘플을 0.2 μM 막을 통한 최종 여과 단계 전에 30분 동안 교반하였다. 샘플을

Explorer 상의 5 ㎖ HiTrap™ 페닐(HS) 칼럼에 적용하였다. 로딩 전에, 50 mM HEPES + 1.8 M AMS pH 7을 이용하여 5개의 칼럼 용적(CV)에서 칼럼을 평형 상태로 만들었다. 비결합 물질을 제거하기 위해, 샘플 적용 후에 칼럼을 50 mM HEPES + 1.8 M AMS pH 7의 5 CV로 세척하였다. 표적 단백질을 50 mM HEPES + 20% 에탄올 pH 7를 이용하여 칼럼으로부터 10 ㎖ 루프로 용리시켰다. 루프로부터, 샘플을 대략 50 ㎖ 탈염 칼럼(HiPrep™ 26/10 탈염) 상에 장입하고, 이를 샘플 적용 전에 50 mM HEPES + 100 mM NaCl pH 7.0의 3 CV로 평형 상태로 만들었다. 표적 단백질을 루프로부터 50 mM HEPES + 100 mM NaCl pH 7.0이 있는 탈염 칼럼으로 옮겼다. 표적 단백질을 피크 분획화에 기반하여 용리시켜 하나의 관에 샘플을 얻었다. 유속은 10 ㎖/분이었다. A280 분석에 의해 농도 추정치를 얻었고, SDS-PAGE 분석에 의해 샘플 순도를 얻었다.

실시예 2: 계통수 및 클레이드의 작제 　

GH32 계통수

GH32 도메인을 함유하는 본 발명의 폴리펩티드 서열의 계통수를 CAZY에 규정된 바와 같이 작제하였다(Lombard, Henrissat et al, 2014. The carbohydrate-active enzymes database (CAZy) in 2013. Nucleic Acids Res. 42, http://www.cazy.org/). 적어도 1종의 GH32 도메인을 함유하는 성숙 폴리펩티드 서열의 다중 정렬로부터 계통수를 작제하였다. MUSCLE 알고리즘 버전 3.8.31을 이용하여 서열을 정렬하고(Edgar, 2004. Nucleic Acids Research 32(5): 1792-1797), FastTree 버전 2.1.8(Price et al., 2010, PloS one 5(3))을 이용하여 계통수를 작제하고, iTOL을 이용하여 시각화하였다(Letunic & Bork, 2007. Bioinformatics 23(1): 127-128).

GH32 도메인을 함유하는 폴리펩티드의 서브세트는 또한 Pfam 도메인 ID PF08244에 의해 정의된 바와 같은 글리코실 가수분해효소 패밀리 32 C 말단의 도메인을 함유한다(The Pfam protein families database: towards a more sustainable future: R.D. Finn, P. Coggill, R.Y. Eberhardt, S.R. Eddy, J. Mistry, A.L. Mitchell, S.C. Potter, M. Punta, M. Qureshi, A. Sangrador-Vegas, G.A. Salazar, J. Tate, A. Bateman, Nucleic Acids Research (2016) Database Issue 44:D279-D285). 본 발명의 모든 폴리펩티드는 GH32 도메인뿐만 아니라 글리코실 가수분해효소 패밀리 32 C 말단 도메인을 함유한다. 글리코실 가수분해효소 패밀리 32 C 말단\ 도메인은 GH32C 도메인으로 칭할 것이다. 예로서, 바실러스 리체니포르미스로부터의 서열번호 2에서, GH32C 도메인은 328 내지 483번 위치에 위치된다.

WMND 클레이드의 생성

위에 기재한 바와 같이 생성된 계통수를 이용하여, GH32 도메인 및 GH32C 도메인을 함유하는 폴리펩티드를 별도의 폴리펩티드 서열 클레이드로 분리시킬 수 있다. 이들 클러스터는 하나 이상의 짧은 서열 모티프뿐만 아니라 GH32 및 GH32C 도메인을 함유하는 것으로 정의된다.

GH32 도메인뿐만 아니라 GH32C 도메인을 함유하는 것에 추가로, 프럭타나제는 WMND 클레이드에 속한다. WMND 클레이드의 프럭타나제는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 함유하고, 바실러스 리체니포르미스 프럭타나제(서열번호 2)의 22 내지 25번 위치에서 아미노산 WMND(Trp-Met-Asn-Asp)에 대응하는 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함한다. 25번 위치에서 아스파르테이트는 활성 부위의 부분이다(W. Lammens et al. (2009), Journal of Experimental Botany, 60(3), 727-740).

서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 및 서열번호 7 모두는 WMD 클레이드에 속하고, GH32 도메인, GH32C 도메인 및 모티프 WMND를 포함한다(아래의 표 2를 참조한다).

실시예 3: 구강관리 구성성분의 존재 하의 열 안정성

열 안정성 측정을 위한 구강관리 제형의 제조

프럭타나제의 열 언폴딩 전이 중점(Tm)을 구강관리 제품 제형 및 선택한 구강관리 상업적 제품에서 통상적으로 사용되는 농도 범위 내에서 구강관리 조성물의 널리 사용되는 구성성분의 존재 하에 측정하였다. 열 안정성을 평가하기 위해 Tm 파라미터를 사용하였는데, 이것이 폴딩 및 언폴딩된 단백질 분자의 동일한 집단이 있는 온도이기 때문이다. Tm은 열 안정성을 평가할 때 사용하기 위한 널리 허용되는 파라미터이다.

다양한 공급업자로부터 고도로 순수한 생명공학 등급의 시약을 얻었고, MilliQ 워터를 이용하여 저장 용액을 새로 제조하였다. Tm 측정에서 사용한 이들 제형 화학물질 및 이들의 저장액뿐만 아니라 최종 농도를 표 3에 열거한다.

프럭타나제의 정제된 제제를 개개 구강관리 구성성분, 시트르산염 인산염 완충제(McIlvaine 완충제) 및 MilliQ 워터로 이루어진 모델 구강관리 제형에서 추가 10배 희석 전에 2 ㎎/㎖의 저장액 농도로 희석시켰고, 이는 0.2 ㎎/㎖의 최종 단백질 농도에 대응한다. 70 ㎕의 최종 용적을 갖고 열 안정성 측정을 위해 사용한 384 웰 소 용적 딥 웰 플레이트(Greiner Bio-One International, 항목 번호 784201)에서 모든 희석물을 제조하였다.

pH 5.0 및 pH 6.0에서 McIlvaine 완충제를 이용하여 구강의 생리적 pH 범위에 가깝게 각 프럭타나제의 Tm 측정을 수행하였다. 51.50 ㎖ 0.2 M Na₂HPO₄와 48.50 ㎖ 0.1 M 시트르산을 혼합함으로써 100 ㎖의 McIIvaine 완충제 pH 5.0을 제조하였고, 63.15 ㎖ 0.2 M Na₂HPO₄ 및 36.85 ㎖ 0.1 M 시트르산을 혼합함으로써 pH 6.0 McIIvaine 완충제를 제조하였다.

열 안정성 측정

모세관 기반 나노 시차 주사 형광 기기(나노DSF); Prometheus NT.Plex(NanoTemper Technologies GmbH, 독일 뮌헨 소재)를 이용하여 열 안정성 측정을 수행하였다. NanoTemper Technologies로부터의 표준 나노DSF 등급 모세관 칩을 사용하였다(Cat#: PR-AC002).

모세관 작용에 의해 프럭타나제 샘플을 모세관에 장입하였다(각 샘플을 3회). 충분한 신호를 보장하기 위해 기기 상에서 LED 출력을 변경함으로써 330 및 350 ㎚에서의 방출 강도를 최적화하였다. 330 및 350 ㎚에서의 형광 신호를 온도의 함수로서 지속적으로 모니터링하였다(열 언폴딩을 위해 사용한 가열 속도는 20℃에서 95℃까지 분당 3.3℃였다). 제조업자에 의해 제공된 PR.StabilityAnalysis 1.1.0.11077 소프트웨어를 이용하여 데이터를 분석하였다. 분석은 모델 독립적이고, Tm으로 정의되는 대략의 열 언폴딩 전이 중점에 대응하는 일계 도함수의 피크 최대값을 단순히 취한다(도 1 참조).

열 안정성 데이터의 재현 가능성

도 1은 나노DSF 기기를 이용하여 생성된 열 안정성 데이터의 예를 나타낸다. 패널 A는 온도의 함수로서 서열번호 2에 대해 3회 얻은 데이터(350 ㎚ 대 330 ㎚에서의 형광 방출의 비)의 예이다. 패널 B은 패널 A에서의 원자료의 일계 도함수를 나타낸다. 일계 도함수 플롯에서 피크 최대값은 Tm으로 지칭되는 열 언폴딩 전이의 중점에 대응한다. 본 예에서, Tm은 pH 5.0에서 66.1℃에 대응하고, 3가지의 복제물 내에서 고도로 재현 가능하다.

도 1에 나타낸 데이터는 나노DSF를 이용하여 널리 사용되는 구강관리 구성성분의 존재 하에 프럭타나제에 대해 생성된 데이터 유형의 예이다. 모든 경우에, 데이터는 일계 도함수에서 분명한 언폴딩 전이 및 분명하게 나타나는 피크를 나타냈고, 이는 고도로 재현 가능하였다.

결과

표 4는 pH 5.0에서의 3회 측정으로부터 유래된 프럭타나제의 평균 Tm 값을 나타낸다. pH 6.0에서 수행한 유사한 측정 결과를 표 5에 나타낸다.

표 4 및 표 5에 나타낸 데이터로부터, 프럭타나제가 이러한 플루오린화나트륨, 아르기닌 및 과산화수소를 포함하는 구강관리에서 사용되는 다수의 제형 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 열 안정성을 갖는다는 것은 분명하다. 이와 관련하여, 용어 "동등한 화학적 안정성"은 구강관리 구성성분과 함께 공동제형화된 프럭타나제의 Tm 값이 동일한 프럭타나제 단독(즉, 대조군)의 Tm 값의 +/- 5% 이내라는 것을 의미하고, 용어 "개선된 화학적 안정성"은 구강관리 구성성분과 함께 공동제형화된 프럭타나제의 Tm 값이 동일한 프럭타나제 단독(즉, 대조군)의 Tm 값에 비해서 5% 초과, 예를 들어, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 또는 심지어 그보다 더 증가된다는 것을 의미한다.

과산화수소에 의해 부여되는 유해한 화학 반응에도 불구하고, 표 4 및 표 5는 프럭타나제가 높은 과산화수소 농도와 낮은 과산화수소 농도 둘 다에서 양호한 열 안정성을 나타낸다는 것을 보여준다.

더 나아가, 모든 평가한 제형 성분은 개별적으로 대조군에 비해 시험한 pH 범위에 걸쳐 열 안정성에 대해 유해한 효과를 갖지 않는다는 것이 분명하다(표 4 및 표 5).

종합하면, 본 실시예에서 제시된 데이터는 이들 프럭타나제가 널리 사용되는 구강관리 구성성분의 존재 하에 높은 열 안정성을 갖고, 이들을 통상적인 구강관리 제형과 양립 가능하게 만든다는 것을 분명하게 나타낸다.

실시예 4: 프럭타나제 활성 분석

분석 설명

프럭타나제를 4가지 상이한 기질과 함께 인큐베이션시켰다:

1) 수크로스(1% w/v - CHE02134, 500 ㎎을 50 ㎖ MilliQ 워터에 첨가함)

2) 프럭탄(Megazyme K-FRUCHK, 3 ㎎을 300 ㎕의 최종 용적으로 25 mM Universal 완충제, pH 6(아세트산, MES, HEPES 및 글리신)에 용해시킴)

3) 이눌린(치커리 뿌리로부터 유래; Megazyme P-INUL로부터의 DP2-60, 0.1% w/v, 10 ㎎을 10 ㎖ MilliQ 워터에 첨가함)

4) 레반(Megazyme P-레반, 3 ㎎을 300 ㎕의 최종 용적으로 25 mM Universal 완충제, pH 6(아세트산, MES, HEPES 및 글리신)에 용해시킴)

각각의 샘플을 25 mM Universal 완충제 pH 6(아세트산, MES, HEPES 및 글리신)에 10×로 희석시켰다. 샘플을 50 ppm(0.05 ㎎/㎖)의 최종 농도로 첨가하였다. 프럭타나제 및 각각의 기질을 함유하는 샘플을 37℃에서 60분 동안 1400 rpm에서 인큐베이션시키고, 효소 첨가가 없는 샘플을 기질 대조군으로서 사용하였다.

인큐베이션 후에, 샘플을 실온에서 5분 동안 16100 x G에서 교반하였다. 상청액을 다음과 같이 1) 액체 크로마토그래피 및 2) 환원당에 의해 분석하였다:

1) 다음의 구배를 이용하여 PD10 칼럼(ThermoFisher Scientific)으로 Dionex IC300 시스템 상에서 액체 크로마토그래피를 수행하였다:

프럭토스 및 글루코스(Sigma)를 표준 참조로서 사용하였다.　 면적으로서 분당 나노 쿨롬(nC*분)으로 액체 크로마토그래피에 의해 프럭토스 방출을 측정하였다. 본 명세서에서, 면적은 프럭토스 방출에 비례한다.

1) 환원당 분석을 위해, 50 g의 타르타르산 칼륨 나트륨(K-Na-타르트레이트, Merck 8087) 및 20 g의 NaOH(Merck 1.06498)를 1 L의 물에 칭량함으로써 작업 완충제를 제조하였다.

PAHBAH 시약으로도 불리는 환원제로서, 225 ㎎ PAHBAH를 15 ㎖의 완충제에 칭량함으로써 PAHBAH 용액(4-하이드록시벤조산 하이드라자이드, Sigma H-9882)를 제조하였다.

75 ㎕의 각 샘플 상청액을 PCR 플레이트에 옮기고 150 ㎕ PAHBAH 시약을 첨가함으로써 비색 반응을 생성하였다. PCR 기계에서 95℃에서 10분 동안 인큐베이션시킨 후에, 150 ㎕의 각 샘플을 마이크로타이터 플레이트에 옮기고 405 ㎚에서의 흡광도(A405)를 판독하였다.

결과

두 상이한 분석, 즉, 액체 크로마토그래피 및 비색 환원 말단은 평가한 프럭타나제가 고수준의 활성을 갖는 프럭탄을 가수분해할 수 있다는 것을 나타냈다. 이들 프럭타나제는 프럭탄, 레반 및 이눌린 중 적어도 둘을 포함하여 시험한 4가지의 기질 중 적어도 둘을 분해할 수 있다. 프럭타나제는 모노당류 프럭토스를 생성할 수 있는데, 이는 엑소-작용 메커니즘을 나타낸다.

실시예 5: 단일- 및 다수 종 생물막 방지 분석

프럭타나제의 서브세트를 구강 생물막 형성을 방지하는 능력에 대해 추가로 평가하였다. 96-웰 마이크로타이터 플레이트에서 성장시킨 3가지 상이한 생물막에 대해 생물막 형성에 대한 방지 효과를 평가하였다. 두 생물막은 각각 스트렙토코커스 뮤탄스 UA159 및 스트렙토코커스 다우네이(Streptococcus downei) DSM5635의 단일종 생물막이었고, 하나는 3가지 치아 병원균 스트렙토코커스 뮤탄스 UA159, 악티노마이세스 나이슬런디(Actinomyces naeslundii) ATCC 12104 및 스트렙토코커스 오랄리스(Streptococcus oralis) ATCC 35037로 이루어진 혼합종 생물막이었다(H. Koo et al., Journal of Bacteriology 2010; K. B. Ahn et al., PLoS ONE, 2018; H. M. Nassar and R. L. Gregory, Journal of Oral Microbiology, 2017).

96-웰 마이크로타이터 플레이트(Nunclon Delta surface, ThermoScientific #167008)을 75 ㎕의 트립티카제 소이 브로스(Tripticase Soy Broth: TSB) + 스트렙토코커스 뮤탄스 UA159, 스트렙토코커스 다우네이 DSM5635 중 하나, 또는 스트렙토코커스 뮤탄스 UA159, 악티노마이세스 나이슬런디 ATCC 12104, 및 스트렙토코커스 오랄리스 ATCC 35037의 혼합물의 1x 107 CFU/㎖ 박테리아 접종물을 함유하는 1% 수크로스로 채웠다. 프럭타나제 처리 샘플에 대해, 완충제(50 mM HEPES, 100 mM NaCl, pH 7) 중 25 ㎕의 효소 용액을 첨가하여 80 ppm의 최종 농도를 수득하였다. 대조군 처리 샘플에 대해, 효소 용액을 완충제(50 mM HEPES, 100 mM NaCl, pH 7)로 대체하였다.

플레이트를 혐기성 조건 하에 ThermoFisher Scientific Rectangular AnaeroBox™ 용기(2.5 ℓ, #AN0025A)에서 진탕시키지 않고 21시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 효소 및 대조군 샘플을 8회 반복하여 평가하였다.

인큐베이션 후에, 100 ㎕ 0.9% NaCl로 2회 부드럽게 세척함으로써 플랑크톤 박테리아를 제거하고, 생물막을 15분 동안 실온에서 0.95% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하였다. 플레이트를 100 ㎕ 0.9% NaCl로 2회 린스하고, 부착된 염료를 수 중 96% 에탄올 및 0.1% 아세트산 용액으로 용해시켰다. 흡광도를 마이크로플레이트 판독기 SpectraMax M3, Molecular Devices로 600 ㎚에서 측정하였다.

데이터 가공을 위해, 효소 또는 완충제 처리 후 남아있는 생물막 정도에 비례하도록 흡광도를 취하였다. 결과를 생물막 방지의 백분율로서 표현하고, 다음과 같이 계산하였다:

100-((A600 ㎚ 효소 처리 샘플)/(A600 ㎚ 완충제 대조군 처리 샘플)×100),

여기서, A600 ㎚는 효소 또는 완충제 처리 샘플의 600 ㎚에서 측정한 8개의 흡광도의 평균을 지칭한다. 결과를 아래의 표 6 내지 표 8에 열거한다:

위의 표 6 내지 8에서 알 수 있는 바와 같이, 서열번호 1 및 서열번호 2의 프럭타나제는 알려진 치아 병원균에 의해 형성된 단일종 생물막(각각 스트렙토코커스 뮤탄스 및 스트렙토코커스 다우네이)뿐만 아니라 다수 종 생물막(스트렙토코커스 뮤탄스, 스트렙토코커스 오랄리스 및 악티노마이세스 나이슬런디)의 형성에 대한 방지 효과를 갖는다.

실시예 6: 인간 타액 생물막 방지 분석

프럭타나제를 인간 타액으로부터 생물막을 방지하는 능력에 대해 평가하였다. WO 2020/099490에 기재된 방법에 따라 약간 변형하여 생물막 방지 분석을 수행하였다. 간략히 말해서, McIIvaine 완충제, pH6(12.63 ㎖ 0.2 M Na₂HPO₄ + 7.37 ㎖ 0.1 M 시트르산을 혼합함으로써 제조) 중 40 ppm의 효소 용액을 제조함으로써 프럭타나제 처리 샘플을 제조하고, 대조군 처리 샘플은 McIIvaine 완충제, pH6으로 이루어졌다. 효소 및 대조군 샘플을 8회 반복하여 평가하였다.

데이터 가공을 위해, 효소 또는 완충제 처리 후 남아있는 생물막 정도에 비례하도록 흡광도를 취하였다. 생물막 방지 백분율을 다음과 같이 계산하였다:

100-((A600 ㎚ 효소 처리 샘플)/(A600 ㎚ 완충제 대조군 처리 샘플)×100),

여기서, A600 ㎚는 효소 또는 완충제 처리 샘플의 SpectraMax M3, Molecular Devices를 이용하여 600 ㎚에서 수행한 8개의 흡광도 측정의 평균을 지칭한다. 결과를 아래의 표 9에 열거한다:

표 9로부터 알 수 있는 바와 같이, 프럭타나제는 인간 타액으로부터의 생물막 성장을 방지할 수 있다.

실시예 7: 인간 타액 생물막 제거 분석

서열번호 2의 프럭타나제를 인간 타액으로부터의 생물막 성장을 제거하는 능력에 대해 평가하였다. WO 2020/099490에 기재된 방법에 따라 약간 변형하여 생물막 제거 분석을 수행하였다. 간략히 말해서, 50 mM HEPES, 100 mM NaCl, pH7 중 20 ppm의 효소 용액을 제조함으로써 프럭타나제 처리 샘플을 제조하고, 대조군 처리 샘플은 50mM HEPES, 100 mM, NaCl pH7로 이루어진다. 효소 및 대조군 샘플을 4회 반복하여 평가하였다.

데이터 가공을 위해, 효소 또는 완충제 처리 후 남아있는 생물막 정도에 비례하도록 흡광도를 취하였다. 생물막 제거 백분율을 다음과 같이 계산하였다:

100-((A600 ㎚ 효소 처리 샘플)/(A600 ㎚ 완충제 대조군 처리 샘플)×100),

여기서, A600 ㎚는 SpectraMax M3, Molecular Devices를 이용하여 효소 또는 완충제 처리 샘플의 600 ㎚에서 측정한 4개의 흡광도의 평균을 지칭한다. 결과를 아래의 표 10에 열거한다:

표 10에서 알 수 있는 바와 같이, 프럭타나제(서열번호 2로 예시)는 인간 타액으로부터 성장된 생물막을 제거할 수 있다.

본 명세서에 개시되는 특정 양상은 본 발명의 몇몇 양상의 예시로서 의도되므로, 본 명세서에 기재되고 청구되는 본 발명은 이들 양상에 의해 범위가 제한되지 않는다. 어떠한 동등한 양상도 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 실제로, 본 명세서에 나타내고 기재되는 것들에 부가하여 본 발명의 다양한 변형이 상기 기재로부터 당업자에게 명확해질 것이다. 이러한 변형도 첨부되는 청구범위의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다. 상충되는 경우, 정의를 포함하는 본 개시가 우선시된다.

SEQUENCE LISTING <110> Novozymes A/S <120> ORAL CARE COMPOSITION COMPRISING A FRUCTANASE <130> 15232-WO-PCT <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1411 <212> PRT <213> Penicillium ochrochloron <400> 1 Gln Thr Tyr Asp Glu Leu Tyr Arg Pro Gln Tyr His Phe Thr Pro Pro 1 5 10 15 Val Asn Trp Met Asn Asp Pro Asn Gly Leu Leu Tyr His Asn Gly Leu 20 25 30 Tyr His Leu Tyr Tyr Gln Tyr Asn Pro Gly Gly Asn Thr Trp Gly Ala 35 40 45 Met Ser Trp Gly His Ala Thr Ser Thr Asp Leu Thr His Trp Asn His 50 55 60 Gln Pro Ile Ala Leu Leu Ala Arg Gly Tyr Pro Gly Asp Ile Thr Glu 65 70 75 80 Met Phe Phe Ser Gly Ser Ala Val Ala Asp Thr Gln Asn Thr Ser Gly 85 90 95 Phe Gly Thr Ser Gly Lys Val Pro Phe Val Ala Met Tyr Thr Ser Tyr 100 105 110 Tyr Pro Ala Ser Gln Asn Leu Pro Ser Gly Lys Leu Val Asn Gly Gly 115 120 125 Gln Gln Ala Gln Ser Ile Ala Tyr Ser Leu Asp Glu Gly Met Thr Trp 130 135 140 Thr Thr Tyr Asp Ala Ala Asn Pro Val Ile Leu Asn Pro Pro Thr Pro 145 150 155 160 Tyr Thr Asp Gln Trp Arg Asp Phe Arg Asp Pro Phe Leu Phe Trp His 165 170 175 Glu Ala Ser Gln Lys Trp Ile Ser Val Val Ser Leu Ala Gln Leu His 180 185 190 Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ser Pro Asn Leu Lys Asp Trp Thr Tyr Ser 195 200 205 Ser Glu Phe Gly Pro Trp Asn Ala Val Gly Gly Val Trp Glu Cys Pro 210 215 220 Ser Leu Phe Pro Leu Ala Val Asp Gly Asp Asp Ala Asn Thr Lys Trp 225 230 235 240 Ile Met Gln Ile Gly Leu Asn Pro Gly Gly Pro Pro Gly Val Thr Gly 245 250 255 Ser Gly Thr Gln Tyr Ile Val Gly Thr Phe Asp Gly Thr Lys Phe Val 260 265 270 Ala Asp Pro Asn Ser Pro Leu Ser Ala His Thr Ser Thr Ser Thr Thr 275 280 285 Thr Ser Ala Ser Val Thr Thr Ser Ala Ser Ile Thr Thr Ser Ala Ser 290 295 300 Ile Thr Pro Thr Thr Thr Lys Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Gly 305 310 315 320 Asp Ile Ile Phe Gln Asp Phe Glu Gly Ala Gly Asp Phe Ala Ser Arg 325 330 335 Gly Trp Val Ala Thr Gly Gly Leu Leu Gly Ala Ala Pro Ala Lys Gly 340 345 350 Thr Leu Ala Gly Gln Gln Thr Val Thr Gly Tyr Ala Gly Ser Gln Leu 355 360 365 Val Asn Thr Phe Leu Ser Gly Asp Ser Thr Thr Gly Thr Leu Thr Ser 370 375 380 Pro Ala Phe Thr Ile Ser Leu Pro Tyr Val Asn Phe Leu Ile Gly Gly 385 390 395 400 Gly Asn Ala Pro Gly Thr Glu Cys Ile Asn Leu Lys Val Gln Gly Gln 405 410 415 Ala Val Arg Thr Ala Thr Gly Ala Asn Val Glu Gln Leu Ala Pro Thr 420 425 430 Thr Trp Asn Val Thr Asp Leu Met Gly Gln Thr Ala Val Leu Glu Ile 435 440 445 Val Asp Gln Gln Thr Gly Gly Trp Gly His Ile Leu Ile Asp Gln Ile 450 455 460 Thr Phe Thr Ser Ser Thr Ser Thr Asn Asn Leu His Lys Arg Ser Val 465 470 475 480 Ser Ser Val Thr Trp Asp Phe Asn Gly Thr Ser Thr Phe Ala Asp Tyr 485 490 495 Gly Trp Thr Pro Ser Gly Asp Phe Val Gly Lys Gly Pro Ala Gln Gly 500 505 510 Thr Leu Ala Gly Gln Gln Val Val Thr Gly Asn Met Gly Asn Phe Val 515 520 525 Asn Thr Phe Leu Ser Gly Asp Gly Thr Thr Gly Thr Leu Thr Ser Pro 530 535 540 Ala Phe Thr Ile Thr Gln Lys Lys Ile Asn Phe Leu Ile Gly Gly Gly 545 550 555 560 Asn Ser Pro Gly Met Glu Cys Ile Asn Leu Lys Ile Gln Gly Gln Val 565 570 575 Val Arg Thr Ala Thr Gly Ala Asn Ala Glu 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Pro Ser Thr Tyr Phe 785 790 795 800 Ala Pro Leu Ala Pro Ser Gly Asp Gly Arg Val Thr Met Arg Ile Leu 805 810 815 Leu Asp Arg Ser Ser Val Glu Val Phe Gly Gly Gln Gly Glu Val Thr 820 825 830 Ile Ser Ala Gln Ile Phe Pro Gln Asp Asn Gly Val Asp Val Arg Leu 835 840 845 Phe Ser Arg Gly Gly Ser Thr Asn Ala Ile Thr Ile Asp Ala Ile Val 850 855 860 Leu Asp Ser Val Tyr Asp Ser Ser Thr Pro Ser Ala Ser Leu Ser Thr 865 870 875 880 Ser Ser Thr Ser Ile Gly Thr Val Thr Thr Thr Phe Ser Asn Thr Val 885 890 895 Thr Thr Ser Val Gly Asn Thr Leu Thr Thr Ser Thr Arg Thr Val Thr 900 905 910 Ser Ala Ser Pro Thr Ser Thr Ala Pro Tyr Asp Phe Arg Pro Val Phe 915 920 925 His Phe Val Pro Glu Glu Asn Trp Met Asn Glu Pro Asn Gly Leu Ile 930 935 940 Lys Ile Asp Ser Thr Trp His Leu Phe Phe Gln His Asn Pro Thr Gly 945 950 955 960 Asn Phe Trp Gly Asn Leu Ser Trp Gly His Ala Thr Ser Ile Asp Leu 965 970 975 Val Ser Trp Asp Tyr Lys Pro Val Ala Ile Ser Ser Ala Asp Gly Ile 980 985 990 Gln Ala Phe Thr Gly Thr Ser Tyr Phe Asp Ala 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Gly Glu Thr Thr 465 470 475 480 Leu Thr Ala Gln Ile Phe Pro Ser Asn Asp Ala Val His Ala Arg Leu 485 490 495 Val Ser Thr Gly Gly Ala Thr Glu Asp Val Arg Val Asp Val His Asn 500 505 510 Ile Thr Ser Thr Trp Asn 515 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Signal peptide <400> 8 Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile 1 5 10 15 Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala 20 25 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> His-tag <400> 9 His His His His His His Pro Arg 1 5 <210> 10 <211> 182 <212> PRT <213> Bacillus cibi <400> 10 Thr Pro Pro Gly Thr Pro Ser Lys Ser Ala Ala Gln Ser Gln Leu Asn 1 5 10 15 Ala Leu Thr Val Lys Thr Glu Gly Ser Met Ser Gly Tyr Ser Arg Asp 20 25 30 Leu Phe Pro His Trp Ile Ser Gln Gly Ser Gly Cys Asp Thr Arg Gln 35 40 45 Val Val Leu Lys Arg Asp Ala Asp Ser Tyr Ser Gly Asn Cys Pro Val 50 55 60 Thr Ser Gly Ser Trp Tyr Ser Tyr Tyr Asp Gly Val Thr Phe Thr Asn 65 70 75 80 Pro Ser Asp Leu Asp Ile Asp His Ile Val Pro Leu Ala Glu Ala Trp 85 90 95 Arg Ser Gly Ala Ser Ser Trp Thr Thr Ser Lys Arg Gln Asp Phe Ala 100 105 110 Asn Asp Leu Ser Gly Pro Gln Leu Ile Ala Val Ser Ala Ser Thr Asn 115 120 125 Arg Ser Lys Gly Asp Gln Asp Pro Ser Thr Trp Gln Pro Pro Arg Ser 130 135 140 Gly Ala Ala Cys Gly Tyr Ser Lys Trp Trp Ile Ser Thr Lys Tyr Lys 145 150 155 160 Trp Gly Leu Ser Leu Gln Ser Ser Glu Lys Thr Ala Leu Gln Gly Met 165 170 175 Leu Asn Ser Cys Ser Tyr 180 <210> 11 <211> 610 <212> PRT <213> Trichoderma harzianum <400> 11 Ala Pro Ala Asn Val Ala Ile Arg Ser Leu Glu Glu Arg Ala Ser Ser 1 5 10 15 Ala Asp Arg Leu Val Phe Cys His Phe Met Ile Gly Ile Val Gly Asp 20 25 30 Arg Gly Ser Ser Ala Asp Tyr Asp Asp Asp Met Gln Arg Ala Lys Ala 35 40 45 Ala Gly Ile Asp Ala Phe Ala Leu Asn Ile Gly Val Asp Gly Tyr Thr 50 55 60 Asp Gln Gln Leu Gly Tyr Ala Tyr Asp Ser Ala Asp Arg Asn Gly Met 65 70 75 80 Lys Val Phe Ile Ser Phe Asp Phe Asn Trp Trp Ser Pro Gly Asn Ala 85 90 95 Val Gly Val Gly Gln Lys Ile Ala Gln Tyr Ala Ser Arg Pro Ala Gln 100 105 110 Leu Tyr Val Asp Asn Arg Pro Phe Ala Ser Ser Phe Ala Gly Asp Gly 115 120 125 Leu Asp Val Asn Ala Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ser Asn Val Tyr Phe 130 135 140 Val Pro Asn Phe His Pro Gly Gln Ser Ser Pro Ser Asn Ile Asp Gly 145 150 155 160 Ala Leu Asn Trp Met Ala Trp Asp Asn Asp Gly Asn Asn Lys Ala Pro 165 170 175 Lys Pro Gly Gln Thr Val Thr Val Ala Asp Gly Asp Asn Ala Tyr Lys 180 185 190 Asn Trp Leu Gly Gly Lys Pro Tyr Leu Ala Pro Val Ser Pro Trp Phe 195 200 205 Phe Thr His Phe Gly Pro Glu Val Ser Tyr Ser Lys Asn Trp Val Phe 210 215 220 Pro Gly Gly Pro Leu Ile Tyr Asn Arg Trp Gln Gln Val Leu Gln Gln 225 230 235 240 Gly Phe Pro Met Val Glu Ile Val Thr Trp Asn Asp Tyr Gly Glu Ser 245 250 255 His Tyr Val Gly Pro Leu Lys Ser Lys His Phe Asp Asp Gly Asn Ser 260 265 270 Lys Trp Val Asn Asp Met Pro His Asp Gly Phe Leu Asp Leu Ser Lys 275 280 285 Pro Phe Ile Ala Ala Tyr Lys Asn Arg Asp Thr Asp Ile Ser Lys Tyr 290 295 300 Val Gln Asn Glu Gln Leu Val Tyr Trp Tyr Arg Arg Asn Leu Lys Ala 305 310 315 320 Leu Asp Cys Asp Ala Thr Asp Thr Thr Ser Asn Arg Pro Ala Asn Asn 325 330 335 Gly Ser Gly Asn Tyr Phe Met Gly Arg Pro Asp Gly Trp Gln Thr Met 340 345 350 Asp Asp Thr Val Tyr Val Ala Ala Leu Leu Lys Thr Ala Gly Ser Val 355 360 365 Thr Val Thr Ser Gly Gly Thr Thr Gln Thr Phe Gln Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Ala Asn Leu Phe Gln Ile Pro Ala Ser Ile Gly Gln Gln Lys Phe Ala 385 390 395 400 Leu Thr Arg Asn Gly Gln Thr Val Phe Ser Gly Thr Ser Leu Met Asp 405 410 415 Ile Thr Asn Val Cys Ser Cys Gly Ile Tyr Asn Phe Asn Pro Tyr Val 420 425 430 Gly Thr Ile Pro Ala Gly Phe Asp Asp Pro Leu Gln Ala Asp Gly Leu 435 440 445 Phe Ser Leu Thr Ile Gly Leu His Val Thr Thr Cys Gln Ala Lys Pro 450 455 460 Ser Leu Gly Thr Asn Pro Pro Val Thr Ser Gly Pro Val Ser Ser Leu 465 470 475 480 Pro Ala Ser Ser Thr Thr Arg Ala Ser Ser Pro Pro Val Ser Ser Thr 485 490 495 Arg Val Ser Ser Pro Pro Val Ser Ser Pro Pro Val Ser Arg Thr Ser 500 505 510 Ser Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ser Ser Thr Pro Pro Ser Gly Gln Val 515 520 525 Cys Val Ala Gly Thr Val Ala Asp Gly Glu Ser Gly Asn Tyr Ile Gly 530 535 540 Leu Cys Gln Phe Ser Cys Asn Tyr Gly Tyr Cys Pro Pro Gly Pro Cys 545 550 555 560 Lys Cys Thr Ala Phe Gly Ala Pro Ile Ser Pro Pro Ala Ser Asn Gly 565 570 575 Arg Asn Gly Cys Pro Leu Pro Gly Glu Gly Asp Gly Tyr Leu Gly Leu 580 585 590 Cys Ser Phe Ser Cys Asn His Asn Tyr Cys Pro Pro Thr Ala Cys Gln 595 600 605 Tyr Cys 610 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif <400> 12 Trp Met Asn Asp 1 <210> 13 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 13 acacaactgg ggatccacca tggcttctcg gcttgtgaca g 41 <210> 14 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 14 agatctcgag aagcttatca gagcaaaatc gaccgcacg 39 <210> 15 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 15 caactggggg cagtgagagc gatatggctc gtcttttgaa ggccg 45 <210> 16 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 16 ctaccgccag cagtgtctgc gatttaattc cacgtcgaag taatattgtg aacatcaac 59

Claims (16)

1. 구강관리 조성물로서, (a) GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하는 프럭타나제(fructanase); 및 (b) 적어도 1종의 구강관리 성분을 포함하되; 상기 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반(levan)-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3 또는 4가지의 효소 활성을 갖는, 구강관리 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 프럭타나제는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성 및 이눌린-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 효소 활성을 갖는, 구강관리 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 프럭타나제는 이눌리나제 활성(EC 3.2.1.7), 2,6-β-프럭탄 6-레반바이오하이드롤라제 활성(EC 3.2.1.64), 레바나제 활성(EC 3.2.1.65), 프럭탄 β-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.80), 프럭탄 β-(2,1)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.153) 및 프럭탄 β-(2,6)-프럭토시다제 활성(EC 3.2.1.154)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 적어도 3가지, 적어도 4가지, 적어도 5가지 또는 6가지의 효소 활성을 갖되, 상기 프럭타나제는 프럭탄, 레반 및 이눌린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지, 예를 들어, 3가지의 다당류를 분해하는, 구강관리 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프럭타나제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 구강관리 조성물:
   a) 서열번호 1과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   b) 서열번호 2와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   c) 서열번호 3과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   d) 서열번호 4와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖고, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   e) 서열번호 5와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖고, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   f) 서열번호 6과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   g) 서열번호 7과 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하며, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 폴리펩티드;
   및
   h) (a), (b), (c), (d), (e), (f) 또는 (g)의 폴리펩티드의 단편으로서, GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고, 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 단편.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프럭타나제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 구강관리 조성물:
   a) 서열번호 1을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;
   b) 서열번호 2를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;
   c) 서열번호 3을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;
   d) 서열번호 4를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;
   e) 서열번호 5를 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드;
   f) 서열번호 6을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드; 및
   g) 서열번호 7을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 폴리펩티드.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프럭타나제는 벤조에이트(바람직하게는 벤조산나트륨), 아르기닌, EDTA, 에탄올, 글리세롤, 인산염(바람직하게는 인산나트륨 또는 인산칼륨), 소르비톨, 소르브산칼륨, 플루오린화물(바람직하게는 플루오린화나트륨, 일불소인산나트륨, 플루오린화칼슘 또는 플루오린화 제일주석), 과산화수소 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 구강관리 성분의 존재 하에 동등한 또는 개선된 화학적 안정성을 갖는, 구강관리 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 다른 효소를 더 포함하고; 바람직하게는 상기 적어도 1종의 다른 효소는 DNase 디스퍼신, 프로테아제, 리파제, 탄수화물 가수분해효소, 덱스트라나제, 뮤타나제, 산화환원효소, 락카제, 페록시다제, 옥시다제 및 라이소자임으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 가장 바람직하게는 상기 적어도 1종의 다른 효소는 DNase 또는 뮤타나제인, 구강관리 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 내부 구강관리 조성물의 형태; 바람직하게는 치약, 덴탈 크림, 마우스워시, 마우스 린스, 로젠지, 파스틸, 츄잉검, 과자류(confectionary) 또는 사탕 형태인, 구강관리 조성물.
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 외부 구강관리 조성물의 형태; 바람직하게는 의치 클리닝액, 의치 클리닝정 또는 의치 클리닝 분말의 형태인, 구강관리 조성물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 의약(medicament)으로서 사용하기 위한, 구강관리 조성물.
11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 구강 질환의 치료에서 사용하기 위한; 바람직하게는 치주병 및/또는 치아 우식증의 치료에서 사용하기 위한, 구강관리 조성물.
12. 인간 또는 동물 대상체의 치료 또는 예방적 치료를 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 구강관리 조성물의 용도.
13. 인간 또는 동물 대상체의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 구강관리 조성물을 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고; 바람직하게는 상기 구강관리 조성물은 상기 대상체의 구강에 투여되는, 방법.
14. 구강 생물막의 제거 방법으로서, 상기 구강 생물막을 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 구강관리 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
15. 키트 부품으로서,
    a) 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 구강관리 조성물; 및
    b) 사용을 위한 지침
    을 포함하는, 키트 부품.
16. 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 및 서열번호 7로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드와 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 프럭타나제로서, 상기 폴리펩티드는 GH32 도메인, GH32C 도메인을 포함하고 WMND 클레이드에 속하며 모티프 WMND(서열번호 12)를 포함하고; 상기 폴리펩티드는 프럭탄-분해 활성, 레반-분해 활성, 이눌린-분해 활성 및 수크로스-분해 활성으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2가지의 효소 활성을 갖는, 프럭타나제.

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