KR20230051262A - autophagy activator - Google Patents

Abstract

토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제. 상기 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.An autophagy activator comprising tocopherol phosphate or a salt thereof as an active ingredient. A composition for activating autophagy, comprising the autophagy activator and a pharmaceutically acceptable carrier.

Description

오토파지 활성화제autophagy activator

본 발명은, 오토파지 활성화제 및 오토파지 활성화용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an autophagy activator and a composition for activating autophagy.

본원은, 2020년 9월 17일에 일본에 출원된 일본 특허 출원 제2020-156458호에 기초하여 우선권을 주장하고, 그 내용을 여기에 원용한다.This application claims priority based on Japanese Patent Application No. 2020-156458 for which it applied to Japan on September 17, 2020, and uses the content here.

오토파지(autophagy)는, 기아, 성장 인자 결핍 및 병원체 감염 등의 세포 외 혹은 세포 내의 스트레스 및 시그널에 응답하여, 노후화 혹은 손상된 세포 내 물질 및 오르가넬라를 분해함으로써, 에너지의 재생산 및 손상 물질의 제거를 하는 메커니즘이며, 정상적인 세포의 항상성 유지에 중요하다. 과거의 연구로부터, 노화가 진행될수록 세포 내의 오토파지 활성이 급격하게 감소된다고 보고되어 있다(비특허문헌 1). 또한, 오토파지를 억제한 경우, 세포 내에 노후 미토콘드리아나 잘못 접혀 겹쳐진 단백질 등이 과잉으로 축적되어, 세포 내의 산화 스트레스가 증가함으로써 세포사가 유도되고, 결과로서 세포가 노화하게 된다.Autophagy, in response to extracellular or intracellular stresses and signals such as starvation, growth factor deficiency, and pathogen infection, regenerates energy and removes damaged substances by decomposing aged or damaged intracellular materials and organella. It is an important mechanism for maintaining normal cellular homeostasis. From past studies, it has been reported that autophagy activity in cells rapidly decreases as aging progresses (Non-Patent Document 1). In addition, when autophagy is inhibited, old mitochondria, misfolded and overlapping proteins, etc. are excessively accumulated in cells, and oxidative stress in cells increases, leading to cell death, resulting in cell aging.

따라서, 세포 내의 노화된 물질 및 오르가넬라를 분해하고, 그 분해산물을 리사이클하는 오토파지를 활성화함으로써, 세포 내의 불필요한 물질을 신속하게 제거함으로써 세포의 항상성을 높일 수 있다.Therefore, cell homeostasis can be improved by rapidly removing unnecessary substances in cells by activating autophagy that decomposes aged substances and organella in cells and recycles the degradation products.

한편, 노화가 오토파지에 미치는 영향으로서, 인간의 뇌에서는 가령(加齡)과 함께 ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자의 발현량이 저하되는 것이 알려져 있다. 또한, 알츠하이머병 등의 신경 변성 질환에서는, 오토파지의 활성 저하가 확인된다고 되어 있다. 그 때문에, 오토파지의 활성화는 알츠하이머병을 비롯하여, 헌팅톤병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환의 치료 및 예방에 기여하는 것이 알려져 있다(비특허문헌 2, 3). 특히 알츠하이머병에서는 오토파지의 기능이 저해되어 있기 때문에, 아밀로이드 β라고 불리는 응집 단백질이 생체 내에 축적되고, 이것이 발증에 관계되어 있다고 되어 있다(비특허문헌 4). 또한, 뇌의 흑질 및 담창구에 있어서의 철의 침착과 대뇌의 위축을 수반하는 신경 변성 질환인 SENDA병(SENDA: static encephalopathy of childhood with neurodegeneration in adulthood), 소화관에 위중한 염증 혹은 궤양을 야기하는 염증성 장질환인 크론병, 및 암에 대해서도, 오토파지 관련 유전자나 선택적 오토파지에 관여하는 유전자의 변이가 영향을 미친다고 되어 있다(비특허문헌 6).On the other hand, as an effect of aging on autophagy, it is known that the expression levels of the ATG5 gene, the ATG7 gene, and the Beclin 1 gene decrease with age in the human brain. In addition, it is said that in neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, the activity of autophagy is reduced. Therefore, it is known that the activation of autophagy contributes to the treatment and prevention of neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease and Parkinson's disease (Non-Patent Documents 2 and 3). Particularly in Alzheimer's disease, since the function of autophagy is inhibited, an aggregation protein called amyloid β accumulates in the living body, and it is said that this is related to the onset (Non-Patent Document 4). In addition, SENDA disease (SENDA: static encephalopathy of childhood with neurodegeneration in adulthood), a neurodegenerative disease accompanied by iron deposition in the substantia nigra and globus pallidum and atrophy of the cerebrum, inflammatory bowel disease that causes serious inflammation or ulcers in the digestive tract It is said that mutations in autophagy-related genes or genes involved in selective autophagy also have an effect on diseases such as Crohn's disease and cancer (Non-Patent Document 6).

오토파지의 과정은 효모 및 포유류의 양쪽에서 연구되고 있으며, 최대로 36의 단백질이 이용되고 있다. 그 중에서도 오토파고솜의 형성으로부터 그 내용물의 분화까지는, 오토파지 관련 유전자(ATG)에 코딩되는 Atg 단백질에 의해 제어되고 있으며, Atg12-ATG5 결합계, LC3-포스파티딜에탄올아민(PE) 결합계를 포함하는 6개의 그룹으로 분류할 수 있고, 각각이 각 과정에서 단계적으로 작용하고 있다.The process of autophagy has been studied in both yeast and mammals, and a maximum of 36 proteins are used. Among them, from the formation of the autophagosome to the differentiation of its contents, it is controlled by the Atg protein encoded in the autophagy-related gene (ATG), including the Atg12-ATG5 linkage system and the LC3-phosphatidylethanolamine (PE) linkage system. It can be classified into six groups, each of which acts in stages in each process.

한편, 오토파지는 정상 상태에서는 낮은 레벨로 억제되어 있지만, 기아 등 스트레스 하에서는 활성화된다. mTOR(mammalian target of rapamycin)은 효모부터 포유류에 걸친 오토파지의 주요한 억제 인자로서 작용하고 있지만, 기아 조건 하에서는 mTOR가 불활성화되어 오토파지가 유도되는 것이 알려져 있다(비특허문헌 5).On the other hand, autophagy is suppressed to a low level under normal conditions, but is activated under stress such as starvation. mTOR (mammalian target of rapamycin) acts as a major suppressor of autophagy from yeast to mammals, but it is known that mTOR is inactivated and autophagy is induced under starvation conditions (Non-Patent Document 5).

오토파지 활성화제로서는, 오토파지의 활성 상태의 마커인 LC3 관련의 인자를 증가시켜 오토파지를 활성화하는 화합물, 그리고 오토파지 플럭스(오토파고솜의 리소좀에의 융합을 포함함)를 촉진시키는 화합물이 보고되어 있다(특허문헌 1 내지 4).Examples of autophagy activators include compounds that activate autophagy by increasing LC3-related factors, which are markers of autophagy activity, and compounds that promote autophagy flux (including fusion of autophagosomes to lysosomes). It has been reported (Patent Documents 1 to 4).

국제 공개 제2018/173653호International Publication No. 2018/173653 일본 특허 공개 제2018-80204호 공보Japanese Unexamined Patent Publication No. 2018-80204 일본 특허 공표 제2018-510902호 공보Japanese Patent Publication No. 2018-510902 일본 특허 공표 제2019-529514호 공보Japanese Patent Publication No. 2019-529514

Yogendra S. Rajawat et al., Aging: Central role for autophagy and the lysosomal degradative system. Ageing Research Reviews 8(2009) 199-213. Yogendra S. Rajawat et al., Aging: Central role for autophagy and the lysosomal degradative system. Aging Research Reviews 8 (2009) 199-213. Aaron Barnett et al., Autophagy in Aging and Alzheimer's Disease: Pathologic or Protective?. J Alzheimers Dis. 2011;25(3):385-394. Aaron Barnett et al., Autophagy in Aging and Alzheimer's Disease: Pathologic or Protective?. J Alzheimers Dis. 2011;25(3):385-394. Marta M. Lipinski et al., Genome-wide analysis reveals mechanisms modulating autophagy in normal brain aging and in Alzheimer's disease. Proc Natl Acad Sci USA. 2010, 107, 14164-14169. Marta M. Lipinski et al., Genome-wide analysis reveals mechanisms modulating autophagy in normal brain aging and in Alzheimer's disease. Proc Natl Acad Sci USA. 2010, 107, 14164-14169. Xiangqing Li et al., Cubeben induces autophagy via PI3K-AKT- mTOR pathway to protect primary neurons against amyloid beta in Alzheimer's disease. Cytotechnology(2019) 71:679-686.Xiangqing Li et al., Cubeben induces autophagy via the PI3K-AKT-mTOR pathway to protect primary neurons against amyloid beta in Alzheimer's disease. Cytotechnology (2019) 71:679-686. 이노마타 등, 「오토파지와 노화의 관련성」, 기후켄 치과학회 잡지, 2018년, 제45권, 제1호, 1-7 Inomata et al., "Relationship between autophagy and aging", Journal of the Gifuken Dental Society, 2018, Vol. 45, No. 1, 1-7 카게야마 등, 「오토파지와 질환」, 영역 융합 리뷰, 2014년, 3, e006Kageyama et al., "Autophagy and Disease", Domain Convergence Review, 2014, 3, e006

상기한 바와 같이 알츠하이머병 등의 각종 질환에 있어서 오토파지 기능이 저하되는 것이 알려져 있고, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는 약제가 요구되고 있다. 그러나, 종래 알려져 있는 약제에서는, 그 효과는 아직 불충분하다고 할 수 있다.As described above, it is known that the autophagy function is reduced in various diseases such as Alzheimer's disease, and there is a demand for a drug capable of effectively activating autophagy. However, in conventionally known drugs, the effect can be said to be still insufficient.

그래서, 본 발명은, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는 오토파지 활성화제, 및 상기 오토파지 활성화제를 함유하는 오토파지 활성화용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, an object of the present invention is to provide an autophagy activator capable of effectively activating autophagy, and a composition for activating autophagy containing the autophagy activator.

본 발명은, 이하의 양태를 포함한다.The present invention includes the following aspects.

[1] 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제.[1] An autophagy activator containing tocopherol phosphate or a salt thereof as an active ingredient.

[2] 상기 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염이, α-토코페롤인산에스테르 및 γ-토코페롤인산에스테르로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염인, [1]에 기재된 오토파지 활성화제.[2] The autophagy activator according to [1], wherein the tocopherol phosphate ester or salt thereof is at least one tocopherol phosphate ester selected from the group consisting of α-tocopherol phosphate ester and γ-tocopherol phosphate ester or salt thereof.

[3] 상기 토코페롤인산에스테르의 염을 유효 성분으로서 함유하고, 상기 토코페롤인산에스테르의 염이 토코페롤인산에스테르의 나트륨염인, [1] 또는 [2]에 기재된 오토파지 활성화제.[3] The autophagy activator according to [1] or [2], which contains a tocopherol phosphate salt as an active ingredient, and wherein the tocopherol phosphate salt is a sodium salt of tocopherol phosphate ester.

[4] LC3 유전자의 발현을 촉진시키는, [1] 내지 [3] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제.[4] The autophagy activator according to any one of [1] to [3], which promotes expression of the LC3 gene.

[5] ATG5 유전자의 발현을 촉진시키는, [1] 내지 [4] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제.[5] The autophagy activator according to any one of [1] to [4], which promotes expression of the ATG5 gene.

[6] ATG7 유전자의 발현을 촉진시키는, [1] 내지 [5] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제.[6] The autophagy activator according to any one of [1] to [5], which promotes the expression of the ATG7 gene.

[7] Beclin 1 유전자의 발현을 촉진시키는, [1] 내지 [6] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제.[7] The autophagy activator according to any one of [1] to [6], which promotes expression of the Beclin 1 gene.

[8] mTOR 유전자의 발현을 억제하는, [1] 내지 [7] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제.[8] The autophagy activator according to any one of [1] to [7], which inhibits mTOR gene expression.

[9] 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 사용하는, [1] 내지 [8] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제.[9] The autophagy activator according to any one of [1] to [8], which is used for preventing or treating Alzheimer's disease.

[10] [1] 내지 [9] 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.[10] A composition for activating autophagy, comprising the autophagy activator according to any one of [1] to [9] and a pharmaceutically acceptable carrier.

[11] 상기 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 합계 함유량이, 오토파지 활성화용 조성물의 전량에 대하여 0.01 내지 10질량％인, [10]에 기재된 오토파지 활성화용 조성물.[11] The composition for activating autophagy according to [10], wherein the total content of the tocopherol phosphate ester or salt thereof is 0.01 to 10% by mass relative to the total amount of the composition for activating autophagy.

본 발명에 의해, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는 오토파지 활성화제, 및 상기 오토파지 활성화제를 함유하는 오토파지 활성화용 조성물이 제공된다.According to the present invention, an autophagy activator capable of effectively activating autophagy and a composition for activating autophagy containing the autophagy activator are provided.

(오토파지 활성화제)(autophagy activator)

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제를 제공한다.In one embodiment, the present invention provides an autophagy activator containing tocopherol phosphate or a salt thereof as an active ingredient.

여기서 「오토파지(autophagy)」란, 노후되거나 또는 손상된 세포 내 물질 및 오르가넬라를 분해함으로써, 에너지의 재생산 및 손상 물질의 제거를 하는 메커니즘이다.Here, "autophagy" is a mechanism that reproduces energy and removes damaged substances by decomposing aged or damaged intracellular substances and organella.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 오토파지 마커인 LC3 유전자, 그리고 오토파고솜에 포함되는 ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자의 발현을 촉진시켜, 오토파지를 활성화시킬 수 있다. 또한, 오토파지의 억제 인자로서 작용하는 mTOR 유전자의 발현을 억제함으로써, 오토파지를 활성화시킬 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can activate autophagy by promoting the expression of the LC3 gene, which is an autophagy marker, and the ATG5 gene, ATG7 gene, and Beclin 1 gene contained in autophagosomes. In addition, autophagy can be activated by suppressing the expression of the mTOR gene, which acts as an autophagy inhibitor.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 유효 성분으로서 포함하는 것이면 특별히 한정되지 않는다. 본 실시 형태의 오토파지 활성화제에 사용되는 토코페롤인산에스테르로서는, 하기 일반식 (1)로 표시되는 화합물을 들 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment is not particularly limited as long as it contains tocopherol phosphate or a salt thereof as an active ingredient. Examples of the tocopherol phosphate ester used in the autophagy activator of the present embodiment include compounds represented by the following general formula (1).

[식 중, R¹, R² 및 R³은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 메틸기를 나타낸다.][Wherein, R ¹ , R ² and R ³ independently represent a hydrogen atom or a methyl group.]

토코페롤인산에스테르에는, 상기 일반식 (1) 중의 R¹, R², R³에 의해, α-토코페롤인산에스테르(R¹, R², R³=CH₃), β-토코페롤인산에스테르(R¹, R³=CH₃, R²=H), γ-토코페롤인산에스테르(R¹, R²=CH₃, R³=H), δ-토코페롤인산에스테르(R¹=CH₃, R², R³=H), ζ₂-토코페롤인산에스테르(R², R³=CH₃, R¹=H), η-토코페롤인산에스테르(R²=CH₃, R¹, R³=H) 등이 존재한다.In the tocopherol phosphate ester, α-tocopherol phosphate ester (R ¹ , R ² , R ³ =CH ₃ ), β-tocopherol phosphate ester (R 1 ) by R ¹ , R ² , R ³ in the general formula (1 ⁾ , R ³ =CH ₃ , R ² =H), γ-tocopherol phosphate (R ¹ , R ² =CH ₃ , R ³ =H), δ-tocopherol phosphate (R ¹ =CH ₃ , R ² , R ³ =H), ζ ₂ -tocopherol phosphate ester (R ² , R ³ =CH ₃ , R ¹ =H), η-tocopherol phosphate ester (R ² =CH ₃ , R ¹ , R ³ =H), etc. do.

토코페롤인산에스테르는 특별히 한정되지 않고, 이들 토코페롤인산에스테르 중 어느 것이어도 된다. 이들 중에서도, α-토코페롤인산에스테르 및 γ-토코페롤인산에스테르가 바람직하고, α-토코페롤인산에스테르가 보다 바람직하다.The tocopherol phosphate ester is not particularly limited, and any of these tocopherol phosphate esters may be used. Among these, α-tocopherol phosphate ester and γ-tocopherol phosphate ester are preferred, and α-tocopherol phosphate ester is more preferred.

상기 일반식 (1)로 표시되는 화합물은, 크로만환의 2위에 비대칭 탄소 원자를 갖기 때문에, d체 및 l체의 입체 이성체, 그리고 dl체가 존재한다. 토코페롤인산에스테르는 이들 입체 이성체 중 어느 것이어도 되지만, dl체가 바람직하다.Since the compound represented by the general formula (1) has an asymmetric carbon atom at the 2nd position of the chroman ring, stereoisomers of the d- and l-isomers, and the dl-form exist. Although any of these stereoisomers may be sufficient as tocopherol phosphate ester, the dl form is preferable.

상기한 것 중에서도, 토코페롤인산에스테르로서는, dl-α-토코페롤인산에스테르 및 dl-γ-토코페롤인산에스테르가 바람직하고, dl-α-토코페롤인산에스테르가 보다 바람직하다.Among the above, as tocopherol phosphate ester, dl-α-tocopherol phosphate ester and dl-γ-tocopherol phosphate ester are preferred, and dl-α-tocopherol phosphate ester is more preferred.

토코페롤인산에스테르의 염은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 무기 염기와의 염, 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.The salt of tocopherol phosphate ester is not particularly limited, and examples thereof include salts with inorganic bases and salts with organic bases.

무기 염기와의 염으로서는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토류 금속염; 알루미늄염; 암모늄염; 아연염 등을 들 수 있다.As a salt with an inorganic base, For example, alkali metal salts, such as a sodium salt and a potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salts and magnesium salts; aluminum salt; ammonium salt; Zinc salt etc. are mentioned.

유기 염기와의 염으로서는, 예를 들어 알킬암모늄염, 염기성 아미노산과의 염 등을 들 수 있다.As a salt with an organic base, the salt with an alkyl ammonium salt and a basic amino acid etc. are mentioned, for example.

상기한 것 중에서도, 토코페롤인산에스테르의 염으로서는, 알칼리 금속염이 바람직하고, 나트륨염이 보다 바람직하다. 토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염, 특히 나트륨염은 물에 대한 용해성이 높고, 또한 성상이 분말이 되기 때문에 취급이 용이해진다는 이점을 갖고 있다.Among the above, as a salt of a tocopherol phosphate ester, an alkali metal salt is preferable and a sodium salt is more preferable. Alkali metal salts of tocopherol phosphate esters, especially sodium salts, have high solubility in water and have the advantage of being easy to handle because they are powdery.

토코페롤인산에스테르의 바람직한 형태로서는, 상기 일반식 (1)로 표시되는 화합물의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), α-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), γ-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), dl-α-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), dl-γ-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염) 등을 들 수 있다.Preferred forms of tocopherol phosphate esters include alkali metal salts (eg sodium salts) of the compound represented by the general formula (1), alkali metal salts (eg sodium salts) of α-tocopherol phosphate esters, alkalis of γ-tocopherol phosphate esters metal salts (eg sodium salt), alkali metal salts of dl-α-tocopherol phosphate ester (eg sodium salt), alkali metal salts of dl-γ-tocopherol phosphate ester (eg sodium salt), and the like.

토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염 중에서, α-토코페롤인산에스테르의 나트륨염 및 γ-토코페롤인산에스테르의 나트륨염이 바람직하고, α-토코페롤인산에스테르의 나트륨염이 보다 바람직하다.Among the alkali metal salts of tocopherol phosphate esters, the sodium salt of α-tocopherol phosphate and the sodium salt of γ-tocopherol phosphate are preferred, and the sodium salt of α-tocopherol phosphate ester is more preferred.

dl-α-토코페롤인산에스테르의 나트륨염은 TPNa(등록 상표)(표시 명칭: 토코페릴인산 Na)의 제품명으로 쇼와 덴코에서 시판되고 있다. 상기 TPNa는 토코페롤인산에스테르의 바람직한 예로서 예시된다.The sodium salt of dl-?-tocopheryl phosphate ester is commercially available from Showa Denko under the product name of TPNa (registered trademark) (trade name: Na tocopheryl phosphate). The above TPNa is exemplified as a preferred example of tocopherol phosphate ester.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 토코페롤인산에스테르 및 그의 염에서 선택되는 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 토코페롤인산에스테르의 염을 포함하는 것이 바람직하고, 토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염)을 단독으로 사용하는 것이 보다 바람직하다.As the autophagy activator of the present embodiment, one type selected from tocopherol phosphate esters and salts thereof may be used alone, or two or more types may be used in combination. The autophagy activator of the present embodiment preferably contains a salt of tocopherol phosphate ester, and more preferably uses an alkali metal salt (eg, sodium salt) of tocopherol phosphate ester alone.

토코페롤인산에스테르 또는 그의 염은 공지된 제조 방법에 의해 제조할 수 있다. 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염은, 예를 들어 일본 특허 공개 소59-44375호 공보, 국제 공개 공보 제97/14705호 등에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.Tocopherol phosphoric acid esters or salts thereof can be produced by known production methods. Tocopherol phosphate ester or its salt can be manufactured by the method described in Unexamined-Japanese-Patent No. 59-44375, international publication 97/14705, etc., for example.

예를 들어, 용매 중에 용해된 토코페롤에 옥시염화인 등의 인산화제를 작용시켜, 반응 종료 후에 적절히 정제함으로써 토코페롤인산에스테르를 얻을 수 있다. 또한, 얻어진 토코페롤인산에스테르를, 산화마그네슘 등의 금속 산화물, 수산화나트륨 등의 금속 수산화물, 또는 수산화암모늄이나 수산화알킬암모늄 등으로 중화함으로써, 토코페롤인산에스테르의 염을 얻을 수 있다. 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 제조 방법은 상기 방법에 한정되지 않는다.For example, tocopherol phosphoric acid esters can be obtained by allowing a phosphorylating agent such as phosphorus oxychloride to act on tocopherol dissolved in a solvent and purifying appropriately after completion of the reaction. A salt of tocopherol phosphate ester can also be obtained by neutralizing the obtained tocopherol phosphate ester with a metal oxide such as magnesium oxide, a metal hydroxide such as sodium hydroxide, or ammonium hydroxide or alkylammonium hydroxide. The manufacturing method of tocopherol phosphate ester or its salt is not limited to the said method.

이하, 토코페롤인산에스테르 및 그의 염을 통합하여 「토코페롤인산에스테르 등」이라고 기재하는 경우가 있다.Hereinafter, tocopherol phosphate esters and salts thereof may be collectively described as "tocopherol phosphate esters, etc.".

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환의 치료의 목적으로, 그 자체를 환자에 투여하여 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 오토파지를 활성화할 목적으로, 의약품이나 화장품에 배합하여 사용할 수도 있다. 또한, 후술하는 오토파지 활성화용 조성물에 배합하여 사용해도 된다.The autophagy activator of the present embodiment can be used by administering itself to a patient for the purpose of treating neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, and Parkinson's disease. In addition, the autophagy activator of the present embodiment may be used in combination with pharmaceuticals or cosmetics for the purpose of activating autophagy. In addition, it may be used in combination with a composition for activating autophagy described later.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, LC3 유전자의 발현을 촉진시킴으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can effectively activate autophagy by promoting expression of the LC3 gene.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 ATG5 유전자의 발현을 촉진시킴으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can effectively activate autophagy by promoting the expression of the ATG5 gene.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 ATG7 유전자의 발현을 촉진시킴으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can effectively activate autophagy by promoting the expression of the ATG7 gene.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 Beclin 1 유전자의 발현을 촉진시킴으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can effectively activate autophagy by promoting the expression of the Beclin 1 gene.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 mTOR 유전자의 발현을 억제함으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can effectively activate autophagy by suppressing mTOR gene expression.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있으므로, 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.Since the autophagy activator of the present embodiment can effectively activate autophagy, it can be used for preventing or treating Alzheimer's disease.

아밀로이드 β는, 신경 세포에 있어서의 오토파지의 저하를 야기하는 것이 알려져 있다. 또한, 아밀로이드 β는, 오토파지의 저하와 그것에 의한 신경 세포의 아포토시스라고 불리는 세포사를 유인하는 것이 알려져 있다.It is known that amyloid β causes a decrease in autophagy in nerve cells. In addition, it is known that amyloid β induces a decrease in autophagy and thereby cell death called apoptosis of nerve cells.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can promote LC3 gene expression in the presence of amyloid β.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 ATG5 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can promote ATG5 gene expression in the presence of amyloid β.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 ATG7 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can promote ATG7 gene expression in the presence of amyloid β.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can inhibit apoptosis in the presence of amyloid β.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 유전자의 발현을 촉진시킬 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제할 수 있다.The autophagy activator of the present embodiment can promote expression of at least one gene selected from the group consisting of the LC3 gene, the ATG5 gene, and the ATG7 gene in the presence of amyloid β, particularly in nerve cells. In addition, the autophagy activator of the present embodiment can suppress apoptosis in the presence of amyloid β, particularly in nerve cells.

아밀로이드 β 존재 하에서 LC3 유전자 발현을 촉진시킨다는 것은, 아밀로이드 β 존재 하에서, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제를 투여함으로써, 상기 오토파지 활성화제를 투여하지 않았을 경우와 비교하여, LC3 유전자의 발현량이 상승하는 것을 의미한다. ATG5 유전자 및 ATG7 유전자에 대해서도 마찬가지이다.The promotion of LC3 gene expression in the presence of amyloid β means that by administering the autophagy activator of the present embodiment in the presence of amyloid β, the expression level of the LC3 gene is increased compared to the case where the autophagy activator is not administered. means that The same applies to the ATG5 gene and the ATG7 gene.

아밀로이드 β 존재 하에서 아포토시스를 억제한다는 것은, 아밀로이드 β 존재 하에서, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제를 투여함으로써, 상기 오토파지 활성화제를 투여하지 않았을 경우와 비교하여, 아포토시스가 억제되는 것을 의미한다.Suppression of apoptosis in the presence of amyloid β means that apoptosis is suppressed by administering the autophagy activator of the present embodiment in the presence of amyloid β, compared to the case where the autophagy activator is not administered.

LC3(microtubule associated protein 1 light chain 3 alpha: NCBI Gene ID: 84557)은, 오토파지의 시그널 전달 상류에서 포스파티딜에탄올아민을 부가받아, 오토파고솜막에 유인되는 LC3-II로 변환되어, 오토파고솜막에 결합한다. LC3은 오토파고솜의 마커로서 사용된다. 인간 LC3 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_032514.4 및 NM_181509.3 등을 들 수 있다.LC3 (microtubule associated protein 1 light chain 3 alpha: NCBI Gene ID: 84557) is converted to LC3-II, which is attracted to the autophagosome membrane by adding phosphatidylethanolamine upstream of the autophagy signal transduction, to the autophagosome membrane. combine LC3 is used as a marker for autophagosomes. Examples of the nucleotide sequence of the human LC3 gene include NM_032514.4 and NM_181509.3 registered in the NCBI Reference Sequence database.

ATG5(autophagy related 5: NCBI Gene ID: 9474)는 ATG12와 결합하고, 유비퀴틴과 같은 공액계에서 E1과 같은 활성화 효소로서 기능한다. 인간 ATG5 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_001286106.1, NM_001286107.1, NM_001286108.1, NM_001286111.1 및 NM_004849.4 등을 들 수 있다.ATG5 (autophagy related 5: NCBI Gene ID: 9474) binds to ATG12 and functions as an activating enzyme like E1 in a conjugation system such as ubiquitin. Examples of the nucleotide sequence of the human ATG5 gene include NM_001286106.1, NM_001286107.1, NM_001286108.1, NM_001286111.1 and NM_004849.4 registered in the NCBI Reference Sequence database.

ATG7(autophagy related 7: NCBI Gene ID: 10533)은 ATP 의존적으로 LC3 및 ATG12를 활성화하는 E1 유사 활성화 효소로서 기능한다. 인간 ATG7 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_001136031.3, NM_001144912.2, NM_001349232.2, NM_001349233.2, NM_001349234.2 등을 들 수 있다.ATG7 (autophagy related 7: NCBI Gene ID: 10533) functions as an E1-like activating enzyme that activates LC3 and ATG12 in an ATP-dependent manner. Examples of the nucleotide sequence of the human ATG7 gene include NM_001136031.3, NM_001144912.2, NM_001349232.2, NM_001349233.2, and NM_001349234.2 registered in the NCBI Reference Sequence database.

Beclin 1(NCBI Gene ID: 8678)은 ATG14L, Vps34mp150과 함께 크레스(cres) III PI3K 복합체를 형성하고, 오토파고솜 형성의 정의 제어 인자로서 기능한다. 인간 Beclin 1 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_001313998.2, NM_001313999.1, NM_001314000.1 및 NM_003766.4 등을 들 수 있다.Beclin 1 (NCBI Gene ID: 8678) forms a cres III PI3K complex with ATG14L and Vps34mp150 and functions as a defining control factor for autophagosome formation. Examples of the nucleotide sequence of the human Beclin 1 gene include NM_001313998.2, NM_001313999.1, NM_001314000.1 and NM_003766.4 registered in the NCBI Reference Sequence database.

mTOR(mechanistic target of rapamycin kinase: NCBI Gene ID: 2475)은 포스파티딜이노시톨 키나아제 관련 키나아제의 1종이며, DNA 손상 및 영양 결핍 등의 스트레스에 대한 세포 응답을 매개한다. mTOR는 오토파지의 억제 인자로서 기능한다. 인간 mTOR 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_004958.4 등을 들 수 있다.mTOR (mechanistic target of rapamycin kinase: NCBI Gene ID: 2475) is a type of phosphatidylinositol kinase-related kinase and mediates cellular responses to stresses such as DNA damage and nutrient deficiency. mTOR functions as an inhibitor of autophagy. Examples of the nucleotide sequence of the human mTOR gene include NM_004958.4 registered in the NCBI Reference Sequence database.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환의 발증 리스크가 높은 환자에 투여하여, 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환을 예방하기 위해 사용해도 된다. 또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환을 발증한 환자에 투여하여, 신경 변성 질환의 진행이나 악화를 억제하기 위해 사용해도 된다.The autophagy activator of the present embodiment is administered to patients with a high risk of developing neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease and Parkinson's disease, to prevent neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease and Parkinson's disease. You can use it. In addition, the autophagy activator of the present embodiment may be administered to a patient who has developed a neurodegenerative disease such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, or Parkinson's disease, and may be used to suppress the progression or aggravation of the neurodegenerative disease.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는, 후술하는 오토파지 활성화용 조성물과 마찬가지의 방법으로 환자에 투여할 수 있고, 경구적으로 투여해도 되고, 비경구적으로 투여해도 되고, 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 피부 내, 피하, 복강 내 등에 투여해도 되고, 좌제로서 직장 내 투여해도 되고, 피부 외용제로서 피부에 투여해도 된다.The autophagy activator of the present embodiment can be administered to a patient by the same method as the composition for activating autophagy described later, and may be administered orally or parenterally, intravenously, intraarterially, or intramuscularly. It may be administered internally, intradermally, subcutaneously, intraperitoneally, etc., intrarectally as a suppository, or administered to the skin as an external preparation for the skin.

(오토파지 활성화용 조성물)(Composition for activating autophagy)

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 상술한 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a composition for activating autophagy containing the aforementioned autophagy activator and a pharmaceutically acceptable carrier.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은 통상의 방법(예를 들어, 일본 약전 기재된 방법)에 따라서, 상술한 오토파지 활성화제, 약학적으로 허용되는 담체, 및 경우에 따라서 다른 성분을 혼합하여 제제화함으로써 제조할 수 있다.The composition for activating autophagy of the present embodiment is formulated according to a conventional method (eg, the method described in the Japanese Pharmacopoeia) by mixing the above-described autophagy activator, a pharmaceutically acceptable carrier, and other components as needed. can be manufactured by

본 명세서에 있어서 「약학적으로 허용되는 담체」란, 유효 성분의 생리 활성을 저해하지 않고, 또한 그 투여 대상에 대하여 실질적인 독성을 나타내지 않는 담체를 의미한다. 또한, 「실질적인 독성을 나타내지 않는」이란, 그 성분이 통상 사용되는 투여량에 있어서, 투여 대상에 대하여 독성을 나타내지 않는 것을 의미한다. 약학적으로 허용되는 담체로서는, 특별히 제한되지 않고, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 유화제, 안정제, 희석제, 주사제용 용제, 유성 기제, 보습제, 감촉 향상제, 계면 활성제, 고분자, 증점·겔화제, 용제, 분사제, 산화 방지제, 환원제, 산화제, 킬레이트제, 산, 알칼리, 분체, 무기염, 물, 금속 함유 화합물, 불포화 단량체, 다가 알코올, 고분자 첨가제, 보조제, 습윤제, 증점제, 점착 부여 물질, 유성 원료, 액상 매트릭스, 지용성 물질, 고분자 카르복실산염 등을 들 수 있다.In the present specification, "pharmaceutically acceptable carrier" means a carrier that does not inhibit the physiological activity of the active ingredient and does not exhibit substantial toxicity to the subject of administration. In addition, "no substantial toxicity" means that the component does not exhibit toxicity to the subject of administration at a dose normally used. Examples of pharmaceutically acceptable carriers include, but are not particularly limited to, excipients, binders, disintegrants, lubricants, emulsifiers, stabilizers, diluents, solvents for injections, oily bases, moisturizers, texture improvers, surfactants, polymers, thickeners and gelling agents. , solvents, propellants, antioxidants, reducing agents, oxidizing agents, chelating agents, acids, alkalis, powders, inorganic salts, water, metal-containing compounds, unsaturated monomers, polyhydric alcohols, polymer additives, auxiliary agents, wetting agents, thickeners, tackifiers, Oil-based raw materials, liquid matrices, fat-soluble substances, polymer carboxylates, and the like are exemplified.

이들 성분의 구체예로서는, 예를 들어 국제 공개 공보 제2016/076310호에 기재된 것 등을 들 수 있다. 또한, 고분자·증점·겔화제의 구체예로서는, 메타크로일옥시에틸포스포릴콜린, 메타크릴산부틸 또는 이들의 중합체 등을 들 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.As a specific example of these components, the thing of international publication 2016/076310, etc. are mentioned, for example. Moreover, as a specific example of a polymer/thickener/gelling agent, methacryloxyethyl phosphorylcholine, butyl methacrylate, or these polymers etc. are mentioned. A pharmaceutically acceptable carrier may be used individually by 1 type, or may use 2 or more types together.

또한, 기타 성분으로서는, 특별히 제한되지 않고, 방부제, 항균제, 자외선 흡수제, 미백제, 소염제, 항염증제, 육모용 약제, 혈행 촉진제, 자극제, 호르몬류, 주름 방지제, 항노화제, 당김제, 냉감제, 온감제, 창상 치유 촉진제, 자극 완화제, 진통제, 세포 부활제, 식물·동물·미생물 엑기스, 종자유, 진양제, 각질 박리·용해제, 땀 억제제, 청량제, 수렴제, 효소, 핵산, 향료, 색소, 착색제, 염료, 안료, 소염 진통제, 항진균제, 항히스타민제, 최면 진정제, 정신 안정제, 항고혈압제, 강압 이뇨제, 항생 물질, 마취제, 항균성 물질, 항간질제, 관 혈관 확장제, 생약, 가려움 방지제, 각질 연화 박리제, 자외선 차단제, 방부 살균제, 항산화 물질, pH 조정제, 첨가제, 금속 비누 등을 들 수 있다. 이들 성분의 구체예로서는, 예를 들어 국제 공개 공보 제2016/076310호에 기재된 것 등을 들 수 있다. 또한, 식물·동물·미생물 엑기스의 구체예로서는, 서양개보리뺑이(Lapsana communis) 꽃/잎/줄기, 차잎 등을 들 수 있다. 종자유의 구체예로서는, 모링가 종자유를 들 수 있다. 향료의 구체예로서는, 페릴알데히드를 들 수 있다. 다른 성분은 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.In addition, other components are not particularly limited, and preservatives, antibacterial agents, ultraviolet absorbers, whitening agents, anti-inflammatory agents, anti-inflammatory agents, hair growth agents, blood circulation promoters, stimulants, hormones, anti-wrinkle agents, anti-aging agents, tightening agents, cooling agents, and warming agents. Wound healing accelerator, irritation reliever, analgesic, cell activator, plant/animal/microorganism extract, seed oil, antiseptic, keratin exfoliation/dissolving agent, antiperspirant, cooling agent, astringent, enzyme, nucleic acid, fragrance, pigment, colorant, dye , pigment, anti-inflammatory drug, antifungal drug, antihistamine, hypnotic sedative, mental stabilizer, antihypertensive, antihypertensive, antihypertensive, antibiotic, anesthetic, antibacterial, antiepileptic, tubular vasodilator, herbal medicine, anti-itch, keratin softening exfoliant, sunscreen, antiseptic bactericides, antioxidants, pH adjusters, additives, metal soaps, and the like. As a specific example of these components, the thing of international publication 2016/076310, etc. are mentioned, for example. Further, specific examples of plant/animal/microorganism extracts include Lapsana communis flowers/leaves/stems, tea leaves, and the like. As a specific example of seed oil, moringa seed oil is mentioned. As a specific example of the perfume, perylaldehyde is exemplified. Other components may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은 상기 오토파지 활성화제를 치료적 유효량 함유할 수 있다. 「치료적 유효량」이란, 환자의 질환 치료 또는 예방하는 데 유효한 약제의 양을 의미한다. 치료적 유효량은, 투여 대상의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중 등에 따라 변동될 수 있다.The composition for activating autophagy of the present embodiment may contain a therapeutically effective amount of the autophagy activator. A "therapeutically effective amount" means an amount of a drug effective for treating or preventing a patient's disease. A therapeutically effective amount may vary depending on the disease state, age, sex, and weight of the subject to be administered.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은, 토코페롤인산에스테르 등이, 오토파지를 활성화할 수 있는 양일 수 있다. 또한, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은, 토코페롤인산에스테르 등이, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 유전자의 발현을 촉진할 수 있는 양일 수 있다. 혹은, 토코페롤인산에스테르 등이, 오토파지 억제 인자인 mTOR 유전자의 발현을 억제할 수 있는 양일 수 있다. 또한, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은, 토코페롤인산에스테르 등이, 아밀로이드 β의 존재 하에서 아포토시스를 억제할 수 있는 양일 수 있다. 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서의 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 합계 함유량이, 오토파지 활성화용 조성물의 전량에 대하여 예를 들어 0.01 내지 10질량％여도 되고, 예를 들어 0.1 내지 10질량％여도 되고, 예를 들어 0.1 내지 5질량％여도 되고, 예를 들어 0.1 내지 3질량％여도 되고, 예를 들어 0.1 내지 2질량％여도 되고, 예를 들어 0.3 내지 2질량％여도 되고, 예를 들어 0.6 내지 1.5질량％여도 된다.In the composition for activating autophagy of the present embodiment, the therapeutically effective amount of the autophagy activator may be an amount capable of activating autophagy, such as tocopherol phosphate. In addition, the therapeutically effective amount of the autophagy activator is an amount capable of promoting the expression of at least one gene selected from the group consisting of tocopherol phosphate ester, LC3 gene, ATG5 gene, ATG7 gene, and Beclin 1 gene. can Alternatively, tocopherol phosphate or the like may be in an amount capable of suppressing the expression of the mTOR gene, which is an autophagy inhibitory factor. In addition, the therapeutically effective amount of the autophagy activator may be an amount capable of inhibiting apoptosis in the presence of amyloid β, such as tocopherol phosphate. The therapeutically effective amount of the autophagy activator in the composition for activating autophagy of the present embodiment is, for example, 0.01 to 10% by mass, based on the total amount of the total amount of tocopherol phosphate or salt thereof. may be, for example, 0.1 to 10 mass%, for example 0.1 to 5 mass%, for example 0.1 to 3 mass%, for example 0.1 to 2 mass%, for example 0.3-2 mass % may be sufficient, and 0.6-1.5 mass % may be sufficient, for example.

상기 토코페롤인산에스테르 등의 오토파지 활성화용 조성물 중의 함유량은, 1종의 토코페롤인산에스테르 등을 단독으로 사용하는 경우에는 그 화합물의 함유량을 의미하고, 토코페롤인산에스테르 등을 2종 이상 조합하여 사용하는 경우에는, 이들 화합물의 합계의 함유량을 의미한다.The content in the composition for activating autophagy, such as the tocopherol phosphate ester, refers to the content of the compound when one type of tocopherol phosphate ester or the like is used alone, and when two or more tocopherol phosphate esters are used in combination. E means the total content of these compounds.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은 의약 조성물이어도 되고, 화장료여도 된다.The composition for activating autophagy of the present embodiment may be a pharmaceutical composition or a cosmetic.

(의약 조성물)(Pharmaceutical composition)

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 상술한 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 의약 조성물을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a pharmaceutical composition for activating autophagy, containing the above-described autophagy activator and a pharmaceutically acceptable carrier.

본 실시 형태의 의약 조성물에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체로서는, 특별히 제한되지 않고, 상기에 열거된 것 외에도 의약품에 일반적으로 사용되는 담체를 사용할 수 있다. 예를 들어, 일본 약전, 일본 약전외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 2013(야쿠지 닛포사, 2013년), 의약품 첨가물 사전 2016(일본 의약품 첨가제 협회편, 야쿠지 닛포사, 2016년), Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th edition(Pharmaceutical Press, 2012년) 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.In the pharmaceutical composition of the present embodiment, the pharmaceutically acceptable carrier is not particularly limited, and carriers generally used for pharmaceuticals other than those listed above can be used. For example, Japanese Pharmacopoeia, Japanese Non-Pharmacopeia Drug Specifications, Pharmaceutical Excipients Specifications 2013 (Yakuji Nippo Co., Ltd., 2013), Pharmaceutical Excipients Dictionary 2016 (Japanese Pharmaceutical Excipients Association Edition, Yakuji Nippos Co., 2016), Handbook of Pharmaceutical Common raw materials described in Excipients, 7th edition (Pharmaceutical Press, 2012) can be used. A pharmaceutically acceptable carrier may be used individually by 1 type, or may use 2 or more types together.

본 실시 형태의 의약 조성물은 상기 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체에 더하여, 다른 성분을 함유하고 있어도 된다. 다른 성분으로서는, 특별히 제한되지 않고, 일반적인 의약품 첨가물을 사용할 수 있다. 또한, 기타 성분으로서, 상술한 오토파지 활성화제 이외의 활성 성분을 사용할 수도 있다. 다른 성분으로서의 의약품 첨가물 및 활성 성분으로서는, 상기에 열거된 것 외에도, 예를 들어 일본 약전, 일본 약전외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 2013(야쿠지 닛포사, 2013년), 의약품 첨가물 사전 2016(일본 의약품 첨가제 협회편, 야쿠지 닛포사, 2016년), Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th edition(Pharmaceutical Press, 2012년) 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다. 다른 성분은 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.In addition to the autophagy activator and pharmaceutically acceptable carrier, the pharmaceutical composition of the present embodiment may contain other components. As the other component, it is not particularly limited, and general pharmaceutical additives can be used. In addition, as other components, active ingredients other than the aforementioned autophagy activator may be used. As pharmaceutical additives and active ingredients as other ingredients, in addition to those listed above, for example, Japanese Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia Non-Pharmacopeia Drug Standards, Pharmaceutical Additives Standards 2013 (Yakuji Nippo Co., Ltd., 2013), Pharmaceutical Additives Dictionary 2016 (Japanese Pharmaceuticals) Excipient Association Edition, Yakuji Nippos, 2016), Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th edition (Pharmaceutical Press, 2012), etc. can use general raw materials described. Other components may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.

본 실시 형태의 의약 조성물의 제형으로서는, 특별히 제한되지 않고, 의약품 제제로서 일반적으로 사용되는 제형으로 할 수 있다. 예를 들어, 정제, 피복 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 액제, 현탁제, 유제 등의 경구적으로 투여하는 제형; 및 주사제, 좌제, 피부 외용제 등의 비경구적으로 투여하는 제형 등을 들 수 있다. 이들 제형의 의약 조성물은 통상적인 방법(예를 들어, 일본 약전 기재된 방법)에 따라서 제제화할 수 있다.The dosage form of the pharmaceutical composition of the present embodiment is not particularly limited, and a dosage form generally used as a pharmaceutical preparation can be used. For example, orally administered dosage forms such as tablets, coated tablets, pills, powders, granules, capsules, solutions, suspensions, and emulsions; and parenterally administered formulations such as injections, suppositories, and skin external preparations. Pharmaceutical compositions of these dosage forms can be formulated according to a conventional method (for example, the method described in the Japanese Pharmacopoeia).

본 실시 형태의 의약 조성물의 투여 방법은 특별히 제한되지 않고, 의약품의 투여 방법으로서 일반적으로 사용되는 방법으로 투여할 수 있다. 예를 들어, 정제, 피복 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 액제, 현탁제, 유제 등으로서 경구 투여해도 되고, 주사제, 수액 제제 등으로서 단독으로, 또는 포도당액, 링거액 등의 일반적인 수액과 혼합하여, 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 피부 내, 피하, 복강 내 등에 투여해도 되고, 좌제로서 직장 내 투여해도 되고, 피부 외용제로서 피부에 투여해도 된다.The administration method of the pharmaceutical composition of the present embodiment is not particularly limited, and can be administered by a method generally used as a pharmaceutical administration method. For example, it may be administered orally as tablets, coated tablets, pills, powders, granules, capsules, solutions, suspensions, emulsions, etc., alone as injections, infusion preparations, etc., or in combination with general infusions such as glucose solution and Ringer's solution. It may be mixed and administered intravenously, intraarterially, intramuscularly, intradermally, subcutaneously, intraperitoneally, etc., intrarectally as a suppository, or administered to the skin as an external skin preparation.

본 실시 형태의 의약 조성물의 투여량은 치료적 유효량으로 할 수 있다. 치료적 유효량은, 환자의 증상, 체중, 연령 및 성별 등, 그리고 의약 조성물의 제형 및 투여 방법 등에 따라 적절히 결정하면 된다. 예를 들어, 본 실시 형태의 의약 조성물의 투여량은, 경구 투여의 경우에는, 토코페롤인산에스테르 등으로서 투여 단위 형태당 0.01 내지 500mg, 주사제의 경우에는, 토코페롤인산에스테르 등으로서 투여 단위 형태당 0.02 내지 250mg, 좌제의 경우에는, 토코페롤인산에스테르 등으로서 투여 단위 형태당 0.01 내지 500mg 등을 예시할 수 있다. 또한, 피부 외용제의 경우에는, 예를 들어 토코페롤인산에스테르 등으로서 투여 단위 형태당 0.15 내지 500mg을 예시할 수 있고, 예를 들어 0.15 내지 300mg이어도 되고, 예를 들어 0.15 내지 200mg이어도 되고, 예를 들어 0.2 내지 100mg이어도 된다.The dose of the pharmaceutical composition of the present embodiment can be a therapeutically effective amount. A therapeutically effective amount may be appropriately determined depending on the patient's symptoms, body weight, age, sex, etc., and the formulation and administration method of the pharmaceutical composition. For example, the dosage of the pharmaceutical composition of the present embodiment is 0.01 to 500 mg per dosage unit form as tocopherol phosphate ester or the like in the case of oral administration, and 0.02 to 500 mg per dosage unit form as tocopherol phosphate ester or the like in the case of injection. 250 mg, in the case of a suppository, 0.01 to 500 mg per dosage unit form as tocopherol phosphate or the like can be exemplified. In addition, in the case of skin external preparations, for example, 0.15 to 500 mg per dosage unit form as tocopherol phosphate ester etc. 0.2 to 100 mg may be sufficient.

본 실시 형태의 의약 조성물의 투여 간격은, 환자의 증상, 체중, 연령 및 성별 등, 그리고 의약 조성물의 제형 및 투여 방법 등에 따라 적절히 결정하면 된다. 예를 들어, 1일 1회 또는 2 내지 3회 정도 등으로 할 수 있다.The administration interval of the pharmaceutical composition of the present embodiment may be appropriately determined depending on the patient's symptoms, body weight, age, sex, etc., and the dosage form and administration method of the pharmaceutical composition. For example, it can be set to once a day or about 2 to 3 times.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 오토파지 활성의 저하에 기인하는 질환의 치료 또는 예방을 위해 사용할 수 있다. 그러한 질환으로서는, 예를 들어 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환; 크론병 등의 염증성 장질환; 및 암 등을 들 수 있다.The pharmaceutical composition of the present embodiment can be used for the treatment or prevention of diseases caused by a decrease in autophagy activity. Examples of such diseases include neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, and SENDA disease; inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease; and cancer.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 예를 들어 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환; 크론병 등의 염증성 장질환; 또는 암의 환자에 투여하여, 신경 변성 질환, 염증성 장질환, 또는 암의 진행을 억제하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환; 크론병 등의 염증성 장질환; 또는 암의 환자에 투여하여, 신경 변성 질환, 염증성 장질환, 또는 암을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은 아밀로이드 β에 기인하는 질환을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은 LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자, 또는 Beclin 1 유전자의 발현량 저하에 기인하는 질환을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은 mTOR의 발현량 상승에 기인하는 질환을 치료하기 위해 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition of this embodiment, for example, neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, SENDA disease; inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease; Alternatively, it can be administered to cancer patients to inhibit progression of neurodegenerative diseases, inflammatory bowel diseases, or cancers. Moreover, the pharmaceutical composition of this embodiment is neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, and SENDA disease; inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease; Or it can be administered to a cancer patient and used to treat neurodegenerative disease, inflammatory bowel disease, or cancer. In addition, the pharmaceutical composition of the present embodiment can be used to treat a disease caused by amyloid β. In addition, the pharmaceutical composition of the present embodiment can be used to treat a disease caused by a decrease in the expression level of the LC3 gene, the ATG5 gene, the ATG7 gene, or the Beclin 1 gene. In addition, the pharmaceutical composition of the present embodiment can be used to treat a disease caused by an increase in mTOR expression level.

본 실시 형태의 의약 조성물은 상기한 것 중에서도, 특히 알츠하이머병을 치료하기 위해 적합하게 사용할 수 있다.Among the above, the pharmaceutical composition of the present embodiment can be particularly suitably used for treating Alzheimer's disease.

본 실시 형태의 의약 조성물은 알츠하이머병을 비롯하여, 헌팅톤병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환의 발증 리스크가 높은 환자에 투여하여, 신경 변성 질환을 예방하기 위해 사용할 수도 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 크론병 등의 염증성 장질환의 발증 리스크가 높은 환자에 투여하여, 염증성 장질환을 예방하기 위해 사용할 수도 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 암의 발증 리스크가 높은 환자에 투여하여, 암을 예방하기 위해 사용할 수도 있다.The pharmaceutical composition of the present embodiment can be administered to patients with a high risk of onset of neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, and SENDA disease, and can also be used to prevent neurodegenerative diseases. In addition, the pharmaceutical composition of the present embodiment can be administered to a patient with a high risk of developing inflammatory bowel disease such as Crohn's disease, and can also be used to prevent inflammatory bowel disease. In addition, the pharmaceutical composition of the present embodiment can be administered to a patient with a high risk of developing cancer and used to prevent cancer.

(화장료)(cosmetics)

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 상술한 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화를 위한 화장료를 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a cosmetic for activating autophagy, containing the above-described autophagy activator and a pharmaceutically acceptable carrier.

본 실시 형태의 화장료에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체로서는, 특별히 제한되지 않고, 상기에 열거된 것 외에도 화장료에 일반적으로 사용되는 담체를 사용할 수 있다. 예를 들어, 화장품 원료 기준 제2판 주해(일본 공정서 협회편, 야쿠지 닛포사, 1984년), 화장품 원료 기준외 성분 규격(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 기준외 성분 규격 추보(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 종별 허가 기준(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 사전(닛코 케미컬즈사, 1991년), International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook 2002 Ninth Edition Vol.1 내지 4, by CTFA 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.In the cosmetic composition of the present embodiment, the pharmaceutically acceptable carrier is not particularly limited, and carriers commonly used in cosmetics other than those listed above can be used. For example, Commentary on the 2nd Edition of Standards for Cosmetics Ingredients (Japan Compendium Association, Yakuji Nippo, 1984), Standards for Ingredients Outside of Standards for Cosmetics (Ministry of Health and Welfare Pharmaceutical Affairs Bureau, Yakuji Nippo, 1993), Cosmetics Supplemental specification of ingredient standards other than raw material standards (Ministry of Health and Welfare Pharmaceutical Affairs Bureau review division, Yakuji Nippo, 1993), cosmetics category approval criteria (Ministry of Health, Welfare and Pharmaceutical Affairs Bureau review division, Yakuji Nippo, 1993), cosmetics raw material dictionary (Nikko Chemicals, Inc., 1991), International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook 2002 Ninth Edition Vol.1 to 4, by CTFA, etc., can be used. A pharmaceutically acceptable carrier may be used individually by 1 type, or may use 2 or more types together.

본 실시 형태의 화장료는 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체에 더하여, 다른 성분을 함유하고 있어도 된다. 다른 성분으로서는, 특별히 제한되지 않고, 일반적인 화장품 첨가물을 사용할 수 있다. 또한, 기타 성분으로서, 상술한 오토파지 활성화제 이외의 활성 성분을 사용할 수도 있다. 다른 성분으로서의 화장품 첨가물 및 활성 성분으로서는, 상기에 열거된 것 외에도, 예를 들어 화장품 원료 기준 제2판 주해(일본 공정서 협회편, 야쿠지 닛포사, 1984년), 화장품 원료 기준외 성분 규격(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 기준외 성분 규격 추보(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 종별 허가 기준(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 사전(닛코 케미컬즈사, 1991년), International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook 2002 Ninth Edition Vol.1 내지 4, by CTFA 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다. 다른 성분은 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.In addition to the autophagy activator and the pharmaceutically acceptable carrier, the cosmetic of the present embodiment may contain other components. As the other component, it is not particularly limited, and general cosmetic additives can be used. In addition, as other components, active ingredients other than the aforementioned autophagy activator may be used. As cosmetic additives and active ingredients as other ingredients, in addition to those listed above, for example, Cosmetic Ingredient Standards 2nd Edition Commentary (Japanese Compendium Association edition, Yakuji Nippo Co., Ltd., 1984), Cosmetic Ingredient Standards Non-Standard Ingredients Standard ( Ministry of Health and Welfare Pharmaceutical Affairs Bureau Examination Division Supervision, Yakuji Nippo Co., Ltd., 1993), Cosmetic Ingredient Standard Ingredient Standard Supervision (Ministry of Health and Welfare Pharmaceutical Affairs Bureau Examination Division Supervision, Yakuji Nippo Corporation, 1993), Cosmetic Type Approval Standards (Ministry of Health and Welfare Pharmaceutical Affairs Bureau Examination Division Supervision, Ya Kuji Nippo Co., Ltd., 1993), Cosmetic Ingredient Dictionary (Nikko Chemicals Co., Ltd., 1991), International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook 2002 Ninth Edition Vol. 1 to 4, by CTFA, etc. can be used. Other components may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.

본 실시 형태의 화장료 형태로서는, 특별히 제한되지 않고, 화장료로서 일반적으로 사용되는 형태로 할 수 있다. 예를 들어, 샴푸, 린스, 이발제 등의 모발용 화장료; 세안료, 클렌징제, 화장수, 유액, 로션, 크림, 젤, 썬 스크린제, 팩, 마스크, 미용액 등의 기초 화장료; 파운데이션류, 화장 기초, 립스틱류, 립글로스, 볼터치류 등의 메이크업 화장료; 보디 세정료, 보디 파우더, 방취 화장료 등의 보디 화장료 등을 들 수 있다. 이들 화장료는 통상적인 방법을 따라서 제조할 수 있다.The cosmetic form of the present embodiment is not particularly limited, and can be a form generally used as a cosmetic. For example, cosmetics for hair, such as a shampoo, conditioner, and a hair conditioner; basic cosmetics such as face wash, cleansing agent, lotion, lotion, lotion, cream, gel, sunscreen agent, pack, mask, beauty essence; makeup cosmetics such as foundations, makeup foundations, lipsticks, lip glosses, and cheek touches; and body cosmetics such as body washing, body powder, and deodorizing cosmetics. These cosmetics can be prepared according to conventional methods.

또한, 본 실시 형태의 화장료의 제형으로서는, 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형, W/O/W형, O/W/O형 등의 유화형, 유화 고분자형, 유성, 고형, 액상, 연상(練狀), 스틱상, 휘발성 기름형, 분상, 젤리상, 젤상, 페이스트상, 크림상, 시트상, 필름상, 미스트상, 스프레이형, 에어로졸상, 다층상, 기포상, 플레이크상 등을 들 수 있다.In addition, the dosage form of the cosmetic of the present embodiment is not particularly limited, and examples thereof include oil-in-water (O/W) type, water-in-oil (W/O) type, W/O/W type, and O/W/O type. Emulsion type, emulsified polymer type, oil, solid, liquid, smoke, stick, volatile oil, powder, jelly, gel, paste, cream, sheet, film, mist, etc. Spray form, aerosol form, multilayer form, bubble form, flake form, etc. are mentioned.

본 실시 형태의 화장료의 사용량은 특별히 제한되지 않지만, 오토파지를 활성화하는 데 유효한 양으로 할 수 있이다. 예를 들어, 본 실시 형태의 화장료의 사용량은, 토코페롤인산에스테르 등의 양으로서 1회의 사용당 0.15 내지 500mg을 예시할 수 있고, 예를 들어 0.15 내지 300mg이어도 되고, 예를 들어 0.15 내지 200mg이어도 되고, 예를 들어 0.2 내지 100mg이어도 된다.The amount of cosmetic used in the present embodiment is not particularly limited, but can be an amount effective for activating autophagy. For example, the amount of cosmetics used in the present embodiment can be 0.15 to 500 mg per use as an amount of tocopherol phosphate or the like, for example, 0.15 to 300 mg may be sufficient, for example, 0.15 to 200 mg may be sufficient. , for example, 0.2 to 100 mg may be sufficient.

본 실시 형태의 화장료의 사용 간격은 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어 1일 1회 또는 2 내지 3회 정도 등으로 할 수 있다.The usage interval of the cosmetic composition of the present embodiment is not particularly limited, but may be, for example, once a day or about 2 to 3 times a day.

본 실시 형태의 화장료는 오토파지 활성의 저하에 기인하는 증상을 완화하기 위해 사용할 수 있다. 혹은, 오토파지 활성의 저하에 기인하는 증상의 발증을 예방하기 위해서, 이들 발증 리스크가 높은 피험자에 의해 일상적인 스킨케어나 메이크업에 사용되어도 된다.The cosmetic composition of the present embodiment can be used to alleviate symptoms caused by a decrease in autophagy activity. Alternatively, in order to prevent the onset of symptoms caused by a decrease in autophagy activity, it may be used for daily skin care or makeup by subjects at high risk of developing these symptoms.

[기타 실시 형태][Other embodiments]

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, 오토파지를 활성화하는 방법을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a method for activating autophagy, including a step of administering tocopherol phosphate or a salt thereof to a target.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자, 또는 Beclin 1 유전자의 발현을 촉진시키는 방법을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a method for promoting the expression of LC3 gene, ATG5 gene, ATG7 gene, or Beclin 1 gene, including the step of administering tocopherol phosphate or a salt thereof to a target.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, mTOR 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a method for inhibiting mTOR gene expression, comprising administering tocopherol phosphate or a salt thereof to a target.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제하는 방법을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a method for inhibiting apoptosis in the presence of amyloid β, including a step of administering tocopherol phosphate or a salt thereof to a subject.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 오토파지를 활성화하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides tocopherol phosphate esters or salts thereof for activating autophagy.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자, 또는 Beclin 1 유전자의 발현을 촉진시키기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides a tocopherol phosphate ester or a salt thereof for promoting expression of the LC3 gene, the ATG5 gene, the ATG7 gene, or the Beclin 1 gene.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, mTOR 유전자의 발현을 억제하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides tocopherol phosphate esters or salts thereof for suppressing mTOR gene expression.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides tocopherol phosphate esters or salts thereof for inhibiting apoptosis in the presence of amyloid β.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, SENDA병, 크론병 또는 암을 예방 또는 치료하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides tocopherol phosphate esters or salts thereof for preventing or treating Alzheimer's disease, Huntington's disease, Parkinson's disease, SENDA disease, Crohn's disease or cancer.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 오토파지 활성화제를 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate or a salt thereof for preparing an autophagy activator.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자, 또는 Beclin 1 유전자 발현의 촉진제를 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate esters or salts thereof to prepare an stimulator of expression of the LC3 gene, the ATG5 gene, the ATG7 gene, or the Beclin 1 gene.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, mTOR 유전자 발현의 억제제를 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate or a salt thereof to prepare an inhibitor of mTOR gene expression.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자 발현의 촉진제를 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate esters or salts thereof to prepare an agent for stimulating the expression of the LC3 gene, the ATG5 gene, or the ATG7 gene in the presence of amyloid β.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스 억제제를 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides use of tocopherol phosphate or a salt thereof for preparing an apoptosis inhibitor in the presence of amyloid β.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 오토파지 활성화용 조성물을 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate or a salt thereof to prepare a composition for activating autophagy.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자, 또는 Beclin 1 유전자 발현의 촉진용 조성물을 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate or a salt thereof to prepare a composition for promoting expression of the LC3 gene, the ATG5 gene, the ATG7 gene, or the Beclin 1 gene.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, mTOR 유전자 발현의 억제용 조성물을 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate or a salt thereof to prepare a composition for inhibiting mTOR gene expression.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자 발현의 촉진용 조성물을 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate esters or salts thereof to prepare a composition for promoting the expression of LC3 gene, ATG5 gene, or ATG7 gene in the presence of amyloid β.

일 실시 형태에 있어서 본 발명은, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스 억제용 조성물을 제조하기 위한, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 사용을 제공한다.In one embodiment, the present invention provides the use of tocopherol phosphate or a salt thereof for preparing a composition for inhibiting apoptosis in the presence of amyloid β.

실시예Example

이하, 실시예에 기초하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples, but the present invention is not limited to these examples.

[토코페롤류][Tocopherols]

이하의 실시예 및 처방예에서는, 하기 토코페롤인산에스테르의 나트륨염을 사용하였다.In the following examples and formulation examples, the sodium salt of the following tocopherol phosphate ester was used.

α-TPNa: dl-α-토코페릴인산나트륨(표시 명칭: 토코페릴인산 Na, 제품명; TPNa(등록 상표), 쇼와 텐코사제)α-TPNa: dl-α-tocopheryl phosphate sodium (labeled name: tocopheryl phosphate Na, product name; TPNa (registered trademark), manufactured by Showa Tenko Co., Ltd.)

γ-TPNa: dl-γ-토코페릴인산나트륨(쇼와 텐코사제)γ-TPNa: sodium dl-γ-tocopheryl phosphate (manufactured by Showa Tenko Co., Ltd.)

α-TPNa 용액: α-TPNa를 0.05％(V/V) 에탄올 수용액에 용해시켰다.α-TPNa solution: α-TPNa was dissolved in 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution.

γ-TPNa 용액: γ-TPNa를 0.05％(V/V) 에탄올 수용액에 용해시켰다.γ-TPNa solution: γ-TPNa was dissolved in 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution.

이하의 비교예에서는, 하기 토코페롤류를 사용하였다.In the following comparative examples, the following tocopherols were used.

아세트산토코페롤: 에자이 가부시키가이샤제Tocopherol acetate: manufactured by Eisai Co., Ltd.

α-토코페롤: Sigma-Aldrich사제α-Tocopherol: manufactured by Sigma-Aldrich

γ-토코페롤: Sigma-Aldrich사제γ-tocopherol: manufactured by Sigma-Aldrich

아세트산토코페롤 용액: 아세트산토코페롤을 0.05％(V/V) 에탄올 수용액에 용해시켰다.Tocopherol acetate solution: Tocopherol acetate was dissolved in a 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution.

α-토코페롤 용액: α-토코페롤을 0.05％(V/V) 에탄올 수용액에 용해시켰다.[alpha]-tocopherol solution: [alpha]-tocopherol was dissolved in 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution.

γ-토코페롤 용액: γ-토코페롤을 0.05％(V/V) 에탄올 수용액에 용해시켰다.[gamma]-tocopherol solution: [gamma]-tocopherol was dissolved in 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution.

<인간 노화 섬유 아세포에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자, Beclin 1 유전자의 발현 촉진 효과의 평가><Evaluation of the effect of promoting expression of LC3 gene, ATG5 gene, ATG7 gene, and Beclin 1 gene in human senescent fibroblast cells>

인위적으로 노화를 유발한 세포를 제작하기 위해서, 섬유 아세포를 사용하여 시험을 행하였다. 노화 섬유 아세포는 이하의 수순에 의해 제작하였다.In order to prepare artificially senescent cells, tests were conducted using fibroblasts. Senescent fibroblasts were prepared by the following procedure.

(노화 섬유 아세포의 제작)(Fabrication of senescent fibroblasts)

10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서, 인간 정상 섬유 아세포(NB1RGB; RIKEN BRC 셀 뱅크)를 콘플루언트가 될 때까지 배양하였다. 그 후, 250μM 과산화수소수로 2시간 처리하고, 새로운 10％ 소 태아 혈청을 첨가한 D-MEM 배지에서 24시간 배양하였다. 이 과산화수소수에 의한 처리와 세포 배양의 조작을 3회 반복하여, 얻어진 섬유 아세포를 노화 섬유 아세포로 하였다.Normal human fibroblasts (NB1RGB; RIKEN BRC cell bank) were cultured until confluent in D-MEM medium (Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (MP Biomedicals). Thereafter, they were treated with 250 μM hydrogen peroxide for 2 hours and cultured for 24 hours in D-MEM medium supplemented with fresh 10% fetal bovine serum. Treatment with hydrogen peroxide and cell culture were repeated three times, and the obtained fibroblasts were used as senescent fibroblasts.

(유전자의 발현 촉진 효과의 평가)(Evaluation of gene expression promoting effect)

제작한 노화 섬유 아세포를 10000개/cm²의 파종 밀도로 준비하고, 10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하였다. 이어서, 실시예 1에서는, α-TPNa의 최종 농도가 1μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 2에서는, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 3에서는, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 2에서는, 아세트산토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, 아세트산토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 3에서는, α-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 4에서는, γ-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다.The prepared senescent fibroblasts were prepared at a seeding density of 10000 cells/cm ² , and cultured for 24 hours in D-MEM medium (manufactured by Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (manufactured by MP Biomedicals). Subsequently, in Example 1, the α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 1 μM. In Example 2, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 10 µM. In Example 3, a γ-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of γ-TPNa was 10 µM. In Comparative Example 2, a tocopherol acetate solution was added to the medium so that the final concentration of tocopherol acetate was 10 µM. In Comparative Example 3, an α-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of α-tocopherol was 10 µM. In Comparative Example 4, a γ-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of γ-tocopherol was 10 µM.

또한, 비교예 1에서는, 배지에 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만을 첨가하였다.In Comparative Example 1, only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added to the medium.

이어서, 각각의 배지를 24시간, 37℃, 5％ CO₂ 하에서 배양하였다.Then, each medium was incubated for 24 hours at 37° C. under 5% CO ₂ .

참고예 1로서, 상기 인간 정상 섬유 아세포를 10000개/cm²의 파종 밀도로 준비하고, 10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하고, 해당 배지에 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만을 첨가하였다. 이어서, 24시간, 37℃, 5％ CO₂ 하에서 배양하였다.As Reference Example 1, the normal human fibroblasts were prepared at a seeding density of 10000 cells/cm ² and cultured for 24 hours in D-MEM medium (manufactured by Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (manufactured by MP Biomedicals). And, only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added to the medium. Then, culture was performed for 24 hours at 37°C and 5% CO ₂ .

그 후, Nucleospin(등록 상표) RNA 키트(다카라 바이오사제)를 사용하여, 각 예의 노화 섬유 아세포 또는 인간 정상 섬유 아세포로부터 RNA를 추출하고, 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성하였다. 이어서, 이 cDNA를 템플릿에 정량 리얼타임 PCR로 LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자에 특이적인 프라이머(다카라 바이오사제)를 각각 사용하여, 각 유전자의 발현량을 정량하였다.Thereafter, RNA was extracted from the senescent fibroblasts or human normal fibroblasts of each case using Nucleospin (registered trademark) RNA kit (manufactured by Takara Bio), and cDNA was synthesized from the obtained RNA. Subsequently, the expression level of each gene was quantified using primers specific to the LC3 gene, ATG5 gene, ATG7 gene, and Beclin 1 gene (manufactured by Takara Bio) by quantitative real-time PCR using this cDNA as a template.

내부 표준 유전자로서 화합물 첨가에 의해 발현에 변동이 보이지 않는 하우스키핑 유전자의 GAPDH(프라이머; 다카라 바이오사제)의 발현량을 정량하고, 그 값에 따라 각 유전자의 발현량을 표준화하였다. 상기 각 예에 있어서의 유전자 발현량에 대해서, 비교예 1에 있어서의 각 유전자의 발현량을 각각 1.00으로 했을 때의, 상대 유전자 발현량을 구하였다. 그 결과를 표 1에 나타냈다.As an internal standard gene, the expression level of GAPDH (primer; manufactured by Takara Bio), a housekeeping gene whose expression was not changed by addition of the compound, was quantified, and the expression level of each gene was standardized according to the value. Regarding the gene expression level in each of the above examples, the relative gene expression level when the expression level of each gene in Comparative Example 1 was set to 1.00, respectively, was determined. The results are shown in Table 1.

표 1에 나타내는 바와 같이, 참고예 1 및 비교예 1에 있어서, 각각 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만 첨가하여 배양한 인간 정상 섬유 아세포 및 노화 섬유 아세포에서는, 비교예 1의 노화 섬유 아세포의 경우가, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자의 발현량은 저하되었거나, 또는 거의 변함없었다.As shown in Table 1, in Reference Example 1 and Comparative Example 1, normal human fibroblasts and senescent fibroblasts cultured by adding only a 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution, respectively, have a higher In some cases, the expression levels of the LC3 gene, the ATG5 gene, the ATG7 gene, and the Beclin 1 gene were reduced or almost unchanged.

또한, 실시예 1 및 2의 α-TPNa를 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포, 그리고 실시예 3의 γ-TPNa를 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, 비교예 1에 비해, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자의 발현 촉진 효과가 확인되었다. 또한 종래 이용되고 있던 비교예 2의 아세트산토코페롤을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에 비해서도 높은 발현 촉진 효과가 확인되었다.In addition, senescent fibroblasts cultured with the addition of α-TPNa in Examples 1 and 2, and senescent fibroblasts cultured with the addition of γ-TPNa in Example 3, compared to Comparative Example 1, LC3 gene, ATG5 gene, The effect of promoting the expression of ATG7 gene and Beclin 1 gene was confirmed. In addition, a higher expression promoting effect was confirmed compared to senescent fibroblasts cultured with the addition of tocopherol acetate of Comparative Example 2, which was conventionally used.

참고예 1의 인간 정상 섬유 아세포에 비해, 비교예 1의 노화 섬유 아세포에서는 LC3 유전자의 발현 저하가 보였지만, 실시예 1 내지 3의 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포는, 참고예 1의 정상 섬유 아세포보다도 LC3 유전자의 발현량이 증가하였으며, LC3 유전자의 우수한 발현 촉진 효과가 확인되었다. 한편, 비교예 2 내지 3의 아세트산토코페롤 또는 α-토코페롤을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, LC3 유전자의 발현 촉진 효과는 보이지 않고, 비교예 4의 γ-토코페롤을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는 LC3 유전자의 발현 촉진 효과가 약간이었다.Compared to the normal human fibroblasts of Reference Example 1, the senescent fibroblasts of Comparative Example 1 showed a decrease in the expression of the LC3 gene, but the senescent fibroblasts cultured with the addition of the tocopherol phosphate salt of Examples 1 to 3 were similar to those of Reference Example 1. The expression level of LC3 gene increased more than that of normal fibroblasts, and the excellent expression promotion effect of LC3 gene was confirmed. On the other hand, in the senescent fibroblasts cultured with the addition of tocopherol acetate or α-tocopherol of Comparative Examples 2 and 3, the effect of promoting the expression of the LC3 gene was not observed, whereas in the senescent fibroblast cells cultured with the addition of γ-tocopherol of Comparative Example 4, The effect of promoting the expression of the LC3 gene was slight.

또한, 참고예 1의 인간 정상 섬유 아세포에 비해, 비교예 1의 노화 섬유 아세포에서는 ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량은 저하되었지만, 실시예 1 내지 3의 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, 비교예 1의 노화 섬유 아세포보다도 ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현이 촉진되었다. 또한, 실시예 1 내지 3의 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, Beclin 1 유전자의 발현 촉진 효과도 확인되었다.In addition, compared to the normal human fibroblasts of Reference Example 1, in the senescent fibroblasts of Comparative Example 1, the expression levels of ATG5 and ATG7 genes were reduced, but senescent fibers cultured with the addition of the tocopherol phosphate salts of Examples 1 to 3 In the blast cells, the expression of the ATG5 gene and the ATG7 gene was promoted more than in the senescent fibroblast cells of Comparative Example 1. In addition, in senescent fibroblasts cultured with the addition of the tocopherol phosphate salts of Examples 1 to 3, the effect of promoting the expression of the Beclin 1 gene was also confirmed.

즉, 실시예 1 내지 3의 오토파지 활성화제인 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, LC3 유전자, ATG5 유전자, ATG7 유전자 및 Beclin 1 유전자의 발현 촉진 효과가 확인되었다.That is, in senescent fibroblasts cultured with the addition of tocopherol phosphate, an autophagy activator of Examples 1 to 3, the effect of promoting the expression of LC3 gene, ATG5 gene, ATG7 gene, and Beclin 1 gene was confirmed.

<인간 노화 섬유 아세포에 있어서의 mTOR 유전자의 발현 억제 효과의 평가><Evaluation of mTOR gene expression inhibitory effect in human senescent fibroblasts>

상기에서 제작한 노화 섬유 아세포를 10000개/cm²의 파종 밀도로 준비하고, 10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하였다. 이어서, 실시예 4에서는, α-TPNa의 최종 농도가 1μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 5에서는, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 6에서는, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 6에서는, 아세트산토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, 아세트산토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 7에서는, α-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 8에서는, γ-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다.The senescent fibroblasts prepared above were prepared at a seeding density of 10000 cells/cm ² and cultured for 24 hours in D-MEM medium (manufactured by Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (manufactured by MP Biomedicals). Subsequently, in Example 4, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 1 μM. In Example 5, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 10 μM. In Example 6, a γ-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of γ-TPNa was 10 µM. In Comparative Example 6, a tocopherol acetate solution was added to the medium so that the final concentration of tocopherol acetate was 10 µM. In Comparative Example 7, an α-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of α-tocopherol was 10 µM. In Comparative Example 8, a γ-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of γ-tocopherol was 10 µM.

또한, 비교예 5에서는, 배지에 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만을 첨가하였다.In Comparative Example 5, only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added to the medium.

이어서, 각각의 배지를 24시간, 37℃, 5％ CO₂ 하에서 배양하였다.Then, each medium was incubated for 24 hours at 37° C. under 5% CO ₂ .

참고예 2로서, 상기 인간 정상 섬유 아세포를 10000개/cm²의 파종 밀도로 준비하고, 10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하고, 해당 배지에 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만을 첨가하였다. 이어서, 24시간, 37℃, 5％ CO₂ 하에서 배양하였다.As Reference Example 2, the normal human fibroblasts were prepared at a seeding density of 10000 cells/cm ² and cultured for 24 hours in D-MEM medium (manufactured by Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (manufactured by MP Biomedicals). And, only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added to the medium. Then, culture was performed for 24 hours at 37°C and 5% CO ₂ .

그 후, Nucleospin(등록 상표) RNA 키트(다카라 바이오사제)를 사용하여, 각 예의 노화 섬유 아세포 또는 인간 정상 섬유 아세포로부터 RNA를 추출하고, 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성하였다. 이어서, 이 cDNA를 템플릿에 정량 리얼타임 PCR로 mTOR 유전자에 특이적인 프라이머(다카라 바이오사제)를 사용하여, mTOR 유전자의 발현량을 정량하였다.Thereafter, RNA was extracted from the senescent fibroblasts or human normal fibroblasts of each case using Nucleospin (registered trademark) RNA kit (manufactured by Takara Bio), and cDNA was synthesized from the obtained RNA. Subsequently, the expression level of the mTOR gene was quantified using this cDNA as a template by quantitative real-time PCR using primers specific to the mTOR gene (manufactured by Takara Bio).

내부 표준 유전자로서 화합물 첨가에 의해 발현에 변동이 보이지 않는 하우스키핑 유전자의 GAPDH(프라이머; 다카라 바이오사제)의 발현량을 정량하고, 그 값에 따라 각 유전자의 발현량을 표준화하였다. 상기 각 예에 있어서의 유전자 발현량에 대해서, 비교예 5에 있어서의 mTOR 유전자의 발현량을 1.00으로 했을 때의, 상대 유전자 발현량을 구하였다. 그 결과를 표 2에 나타냈다.As an internal standard gene, the expression level of GAPDH (primer; manufactured by Takara Bio), a housekeeping gene whose expression was not changed by addition of the compound, was quantified, and the expression level of each gene was standardized according to the value. Regarding the gene expression level in each of the above examples, the relative gene expression level when the mTOR gene expression level in Comparative Example 5 was set to 1.00 was determined. The results are shown in Table 2.

표 2에 나타내는 바와 같이, 참고예 2 및 비교예 5에 있어서, 각각 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만 첨가하여 배양한 인간 정상 섬유 아세포 및 노화 섬유 아세포에서는, 참고예 2의 인간 정상 섬유 아세포에 비해, 비교예 5의 노화 섬유 아세포에서는 mTOR 유전자의 발현 항진이 보였다. 실시예 4 및 5의 α-TPNa를 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포, 그리고 실시예 6의 γ-TPNa를 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, 참고예 2의 정상 섬유 아세포보다도, mTOR 유전자의 발현이 저하되어 있으며, mTOR 유전자의 발현 억제 효과가 확인되었다.As shown in Table 2, in Reference Example 2 and Comparative Example 5, human normal fibroblasts and senescent fibroblasts cultured by adding only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution, respectively, were human normal fibroblasts of Reference Example 2. In comparison, the senescent fibroblasts of Comparative Example 5 showed increased mTOR gene expression. In the senescent fibroblasts cultured with the addition of α-TPNa of Examples 4 and 5 and the senescent fibroblasts cultured with the addition of γ-TPNa in Example 6, expression of the mTOR gene was higher than in the normal fibroblasts of Reference Example 2. decreased, and the effect of suppressing the expression of the mTOR gene was confirmed.

한편, 비교예 6의 아세트산토코페롤을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포, 비교예 7의 α-토코페롤을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포 및 비교예 8의 γ-토코페롤을 첨가하여 배양한 노화 섬유 아세포에서는, 모두 mTOR 유전자의 발현량은 비교예 5와 동등 이상이며, mTOR 유전자의 발현 억제 효과는 확인되지 않았다.On the other hand, in senescent fibroblasts cultured with the addition of tocopherol acetate of Comparative Example 6, senescent fibroblasts cultured with the addition of α-tocopherol of Comparative Example 7, and senescent fibroblasts cultured with the addition of γ-tocopherol of Comparative Example 8, In all cases, the expression level of the mTOR gene was equal to or higher than that of Comparative Example 5, and the effect of suppressing the expression of the mTOR gene was not confirmed.

<인간 신경 아세포종에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 촉진 효과의 평가><Evaluation of the effect of promoting expression of LC3 gene, ATG5 gene and ATG7 gene in human neuroblastoma>

인간 신경 아세포종(SH-SY5Y; ATCC로부터 입수)에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량을 이하의 시험 방법으로 측정하고, 토코페롤인산에스테르염에 의한 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 촉진 효과를 평가하였다.The expression levels of the LC3 gene, ATG5 gene, and ATG7 gene in human neuroblastoma (SH-SY5Y; obtained from ATCC) were measured by the following test method, and the LC3 gene, ATG5 gene, and ATG7 gene by tocopherol phosphate ester salt were determined. The expression promoting effect was evaluated.

이하의 실시예 및 비교예에서는, 신경 세포에 있어서의 오토파지의 저하를 야기하는 것이 알려져 있는 아밀로이드 β를 각 배지에 첨가하여 시험을 행하였다.In the following Examples and Comparative Examples, tests were conducted by adding amyloid β, which is known to cause a decrease in autophagy in nerve cells, to each medium.

SH-SY5Y 세포를 10000개/cm²의 파종 밀도로 준비하고, 10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM/Ham's F-12 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하였다. 이어서, 실시예 7에서는, α-TPNa의 최종 농도가 1μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 8에서는, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 9에서는, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다.SH-SY5Y cells were prepared at a seeding density of 10000 cells/cm ² and cultured for 24 hours in D-MEM/Ham's F-12 medium (manufactured by Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (manufactured by MP Biomedicals). . Subsequently, in Example 7, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 1 μM. In Example 8, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 10 µM. In Example 9, the γ-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of γ-TPNa was 10 μM.

비교예 10에서는, 아세트산토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, 아세트산토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 11에서는, α-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 12에서는, γ-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다.In Comparative Example 10, a tocopherol acetate solution was added to the medium so that the final concentration of tocopherol acetate was 10 µM. In Comparative Example 11, an α-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of α-tocopherol was 10 µM. In Comparative Example 12, a γ-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of γ-tocopherol was 10 µM.

또한, 비교예 9에서는, 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만을 배지에 첨가하였다.In Comparative Example 9, only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added to the medium.

이어서, 아밀로이드 β(Sigma-Aldrich사제)를 0.01％(V/V) DMSO 수용액에 녹인 아밀로이드 β 용액을 조제하고, 각 배지에 있어서의 아밀로이드 β의 최종 농도가 20μM이 되도록, 해당 아밀로이드 β 용액을 각 배지에 첨가하였다.Next, an amyloid β solution was prepared by dissolving amyloid β (manufactured by Sigma-Aldrich) in 0.01% (V/V) DMSO aqueous solution, and the amyloid β solution was dissolved in each medium so that the final concentration of amyloid β in each medium was 20 µM. was added to the medium.

또한, 참고예 3에서는 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만 첨가하고, 아밀로이드 β 용액은 첨가하지 않았다.In Reference Example 3, only a 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added, and no amyloid β solution was added.

이어서, 각각의 배지를 48시간, 37℃, 5％ CO₂ 하에서 배양하였다.Then, each medium was incubated for 48 hours at 37° C. under 5% CO ₂ .

그 후, Nucleospin(등록 상표) RNA 키트(다카라 바이오사제)를 사용하여, 각 예의 SH-SY5Y 세포로부터 RNA를 추출하고, 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성하였다. 이어서, 이 cDNA를 템플릿에 정량 리얼타임 PCR로 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자에 특이적인 프라이머(다카라 바이오사제)를 각각 사용하여, 각 유전자의 발현량을 정량하였다.Thereafter, RNA was extracted from SH-SY5Y cells of each case using Nucleospin (registered trademark) RNA kit (manufactured by Takara Bio), and cDNA was synthesized from the obtained RNA. Subsequently, the expression level of each gene was quantified using primers specific to the LC3 gene, ATG5 gene, and ATG7 gene (manufactured by Takara Bio) by quantitative real-time PCR using this cDNA as a template, respectively.

내부 표준 유전자로서 화합물 첨가에 의해 발현에 변동이 보이지 않는 하우스키핑 유전자의 GAPDH(프라이머; 다카라 바이오사제)의 발현량을 정량하고, 그 값에 따라 각 유전자의 발현량을 표준화하였다. 상기 각 예에 있어서의 유전자 발현량에 대해서, 참고예 3에 있어서의 각 유전자의 발현량을 각각 1.00으로 했을 때의, 상대 유전자 발현량을 구하였다. 그 결과를 표 3에 나타냈다.As an internal standard gene, the expression level of GAPDH (primer; manufactured by Takara Bio), a housekeeping gene whose expression was not changed by addition of the compound, was quantified, and the expression level of each gene was standardized according to the value. Regarding the gene expression level in each of the above examples, the relative gene expression level when the expression level of each gene in Reference Example 3 was set to 1.00, respectively, was determined. The results are shown in Table 3.

표 3에 나타내는 바와 같이, 참고예 3 및 비교예 9에 있어서, 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만 첨가하고 아밀로이드 β를 첨가하지 않은 참고예 3의 SH-SY5Y 세포에 비해, 추가로 아밀로이드 β를 첨가하여 배양한 비교예 9의 SH-SY5Y 세포에서는, LC3 유전자의 발현 저하가 보였다. 실시예 7 내지 9의 오토파지 활성화제인 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 9의 SH-SY5Y 세포보다도 LC3 유전자의 발현량이 높고, 토코페롤인산에스테르염에 의한 LC3 유전자의 발현 촉진 효과가 확인되었다. 한편, 비교예 10 내지 12의 아세트산토코페롤, α-토코페롤 또는 γ-토코페롤을 첨가하여 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 9에 비해, LC3 유전자 발현의 현저한 증가는 확인되지 않았다.As shown in Table 3, in Reference Example 3 and Comparative Example 9, compared to the SH-SY5Y cells of Reference Example 3 in which only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added and no amyloid β was added, amyloid β was further increased. In the SH-SY5Y cells of Comparative Example 9 cultured with the addition of , a decrease in the expression of the LC3 gene was observed. In SH-SY5Y cells cultured with the addition of tocopherol phosphate, an autophagy activator of Examples 7 to 9, the expression level of the LC3 gene was higher than that of the SH-SY5Y cells of Comparative Example 9. Expression promoting effect was confirmed. On the other hand, in SH-SY5Y cells cultured with the addition of tocopherol acetate, α-tocopherol or γ-tocopherol of Comparative Examples 10 to 12, compared to Comparative Example 9, a significant increase in LC3 gene expression was not confirmed.

또한, 아밀로이드 β를 첨가하지 않은 참고예 3의 SH-SY5Y 세포에 비해, 추가로 아밀로이드 β를 첨가하여 배양한 비교예 9의 SH-SY5Y 세포에서는, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 저하가 보였다. 실시예 7 내지 9의 오토파지 활성화제인 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 9의 SH-SY5Y 세포보다도 ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 모두 증가하였으며, 토코페롤인산에스테르염의 ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 촉진 효과가 확인되었다. 한편, 비교예 10 내지 12의 아세트산토코페롤, α-토코페롤 또는 γ-토코페롤을 첨가하여 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 9에 비해, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 현저한 증가는 확인되지 않았다.In addition, compared to the SH-SY5Y cells of Reference Example 3 to which amyloid β was not added, the expression of the ATG5 gene and the ATG7 gene was decreased in the SH-SY5Y cells of Comparative Example 9 cultured with further addition of amyloid β. In SH-SY5Y cells cultured with the addition of tocopherol phosphate, an autophagy activator of Examples 7 to 9, the expression levels of both the ATG5 gene and the ATG7 gene were increased compared to the SH-SY5Y cells of Comparative Example 9. The effect of promoting the expression of the ATG5 gene and the ATG7 gene was confirmed. On the other hand, in SH-SY5Y cells cultured with the addition of tocopherol acetate, α-tocopherol or γ-tocopherol of Comparative Examples 10 to 12, compared to Comparative Example 9, the expression levels of the ATG5 gene and the ATG7 gene were not significantly increased.

<인간 신경 아세포종에 있어서의 아밀로이드 β에 기인하는 아포토시스의 억제 작용의 평가><Evaluation of inhibitory effect on apoptosis due to amyloid β in human neuroblastoma>

토코페롤인산에스테르염 존재 하에서의 인간 신경 아세포종(SH-SY5Y; ATCC로부터 입수)에 있어서의 아포토시스 세포의 비율을, 하기 시험 방법으로 측정하고, 토코페롤인산에스테르염에 의한 아포토시스의 억제 작용을 평가하였다.The ratio of apoptotic cells in human neuroblastoma (SH-SY5Y; obtained from ATCC) in the presence of tocopherol phosphate ester salt was measured by the following test method, and the apoptosis inhibitory effect of tocopherol phosphate ester salt was evaluated.

이하의 실시예 및 비교예에서는, 오토파지의 저하와 그것에 의한 신경 세포의 아포토시스라고 불리는 세포사를 유인하는 것으로 알려져 있는 아밀로이드 β를 각 배지에 첨가하여 시험을 행하였다.In the following Examples and Comparative Examples, tests were conducted by adding amyloid β, which is known to induce a decrease in autophagy and thereby induce cell death called apoptosis of nerve cells, to each medium.

SH-SY5Y 세포를 50000개/cm²의 파종 밀도로 준비하고, 10％ 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM/Ham's F-12 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하였다. 이어서, 실시예 10에서는, α-TPNa의 최종 농도가 1μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 11에서는, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다. 실시예 12에서는, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-TPNa 용액을 배지에 첨가하였다.SH-SY5Y cells were prepared at a seeding density of 50000/cm ² and cultured for 24 hours in D-MEM/Ham's F-12 medium (Sigma-Aldrich) supplemented with 10% fetal bovine serum (MP Biomedicals). . Subsequently, in Example 10, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 1 μM. In Example 11, an α-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of α-TPNa was 10 µM. In Example 12, a γ-TPNa solution was added to the medium so that the final concentration of γ-TPNa was 10 µM.

비교예 14에서는, 아세트산토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, 아세트산토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 15에서는, α-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, α-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다. 비교예 16에서는, γ-토코페롤의 최종 농도가 10μM이 되도록, γ-토코페롤 용액을 배지에 첨가하였다.In Comparative Example 14, a tocopherol acetate solution was added to the medium so that the final concentration of tocopherol acetate was 10 µM. In Comparative Example 15, an α-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of α-tocopherol was 10 µM. In Comparative Example 16, a γ-tocopherol solution was added to the medium so that the final concentration of γ-tocopherol was 10 µM.

또한, 비교예 13에서는, 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만을 배지에 첨가하였다.In Comparative Example 13, only 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added to the medium.

이어서, 아밀로이드 β(Sigma-Aldrich사제)를 0.01％(V/V) DMSO 수용액에 녹인 아밀로이드 β 용액을 조제하고, 각 배지에 있어서의 아밀로이드 β의 최종 농도가 30μM이 되도록, 해당 아밀로이드 β 용액을 각 배지에 첨가하였다.Next, an amyloid β solution was prepared by dissolving amyloid β (manufactured by Sigma-Aldrich) in a 0.01% (V/V) DMSO aqueous solution, and the amyloid β solution was dissolved in each medium so that the final concentration of amyloid β in each medium was 30 µM. was added to the medium.

또한, 참고예 4에서는 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만 첨가하고, 아밀로이드 β 용액은 첨가하지 않았다.In Reference Example 4, only a 0.05% (V/V) ethanol aqueous solution was added, and no amyloid β solution was added.

이어서, 각각의 배지를 48시간, 37℃, 5％ CO₂ 하에서 배양하였다.Then, each medium was incubated for 48 hours at 37° C. under 5% CO ₂ .

그 후, 배지를 제거한 각 SH-SY5Y 세포에 10μM Hoechst33342(Sigma-Aldrich사제) 수용액을 첨가하여 실온(25℃)에서 10분간 정치하였다. 용액을 제거 후, 각 SH-SY5Y 세포를 인산 완충액(PBS, 와코 쥰야쿠사제)으로 세정하고, 형광 현미경 하에서 크로마틴 응집에 의한 아포토시스와 같은 강한 Hoechst 형광이 보이는 세포수(Hoechst(+) 세포)를 계측하였다. 독립 시행의 4 실험으로, 각 시야 5000 세포 이상을 계측하고, 해당 4 실험에 있어서의 Hoechst(+) 세포의 비율의 평균값을, 아포토시스를 일으키고 있는 세포의 비율로 하였다. 각 예에 대해서, 참고예 4에 있어서의 아포토시스 세포의 비율을 1.00으로 했을 때의 상대값을 산출하고, 그 결과를 표 4에 나타냈다.Thereafter, an aqueous solution of 10 μM Hoechst33342 (manufactured by Sigma-Aldrich) was added to each SH-SY5Y cell from which the medium was removed, and the cells were allowed to stand at room temperature (25° C.) for 10 minutes. After removing the solution, each SH-SY5Y cell was washed with phosphate buffer (PBS, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the number of cells showing strong Hoechst fluorescence such as apoptosis due to chromatin aggregation under a fluorescence microscope (Hoechst (+) cells) was measured. In 4 independent experiments, 5000 or more cells in each visual field were counted, and the average value of the percentages of Hoechst (+) cells in the 4 experiments was taken as the percentage of cells undergoing apoptosis. For each case, the relative value when the ratio of apoptotic cells in Reference Example 4 was set to 1.00 was calculated, and the results are shown in Table 4.

표 4에 나타내는 바와 같이, 참고예 4 및 비교예 13에 있어서, 0.05％(V/V) 에탄올 수용액만 첨가하고 아밀로이드 β를 첨가하지 않은 참고예 4의 SH-SY5Y 세포에 비해, 추가로 아밀로이드 β를 첨가하여 배양한 비교예 13의 SH-SY5Y 세포에서는, 아포토시스 세포의 비율이 증가하는 것이 확인되었다.As shown in Table 4, in Reference Example 4 and Comparative Example 13, compared to the SH-SY5Y cells of Reference Example 4 in which only 0.05% (V/V) aqueous ethanol solution was added and no amyloid β was added, further amyloid β In the SH-SY5Y cells of Comparative Example 13 cultured with the addition of, it was confirmed that the proportion of apoptotic cells increased.

비교예 14 내지 16의 아세트산토코페롤, α-토코페롤 또는 γ-토코페롤을 첨가하여 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 13의 SH-SY5Y 세포에 비해, 아포토시스 세포의 비율의 저하는 확인되지 않았다.In SH-SY5Y cells cultured with the addition of tocopherol acetate, α-tocopherol or γ-tocopherol of Comparative Examples 14 to 16, compared to the SH-SY5Y cells of Comparative Example 13, a decrease in the proportion of apoptotic cells was not observed.

한편, 실시예 10 내지 12의 오토파지 활성화제인 토코페롤인산에스테르염을 첨가하여 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 13의 SH-SY5Y 세포에 비해 아포토시스 세포의 비율이 저하되는 것이 확인되었다.On the other hand, in SH-SY5Y cells cultured with the addition of tocopherol phosphate, an autophagy activator of Examples 10 to 12, it was confirmed that the ratio of apoptotic cells was lowered compared to SH-SY5Y cells of Comparative Example 13.

[처방예][Prescription example]

오토파지 활성화용 조성물로서, 외용제의 처방예 1 및 2를 표 5에 나타냈다.As compositions for activating autophagy, Formulation Examples 1 and 2 for external use are shown in Table 5.

이상, 본 발명의 바람직한 실시예를 설명했지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되지 않는다. 본 발명의 취지를 일탈하지 않는 범위에서, 구성의 부가, 생략, 치환 및 기타 변경이 가능하다. 본 발명은 전술한 설명에 의해 한정되지 않고, 첨부한 클레임 범위에 의해서만 한정된다.In the above, preferred embodiments of the present invention have been described, but the present invention is not limited to these embodiments. Addition, omission, substitution, and other changes to the configuration are possible without departing from the spirit of the present invention. The present invention is not limited by the foregoing description, but only by the scope of the appended claims.

본 발명에 의해, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는 오토파지 활성화제, 및 상기 오토파지 활성화제를 함유하는 오토파지 활성화용 조성물이 제공된다.According to the present invention, an autophagy activator capable of effectively activating autophagy and a composition for activating autophagy containing the autophagy activator are provided.

Claims (11)

토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제.An autophagy activator comprising tocopherol phosphate or a salt thereof as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염이, α-토코페롤인산에스테르 및 γ-토코페롤인산에스테르로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염인, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to claim 1, wherein the tocopherol phosphate ester or salt thereof is at least one tocopherol phosphate ester selected from the group consisting of α-tocopherol phosphate ester and γ-tocopherol phosphate ester or salt thereof. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 토코페롤인산에스테르의 염을 유효 성분으로서 함유하고, 상기 토코페롤인산에스테르의 염이 토코페롤인산에스테르의 나트륨염인, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to claim 1 or 2, which contains a salt of tocopherol phosphate as an active ingredient, and the salt of tocopherol phosphate is a sodium salt of tocopherol phosphate ester. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, LC3 유전자의 발현을 촉진시키는, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to any one of claims 1 to 3, which promotes expression of the LC3 gene. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, ATG5 유전자의 발현을 촉진시키는, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to any one of claims 1 to 4, which promotes expression of the ATG5 gene. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, ATG7 유전자의 발현을 촉진시키는, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to any one of claims 1 to 5, which promotes expression of the ATG7 gene. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, Beclin 1 유전자의 발현을 촉진시키는, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to any one of claims 1 to 6, which promotes expression of the Beclin 1 gene. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, mTOR 유전자의 발현을 억제하는, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to any one of claims 1 to 7, which inhibits expression of the mTOR gene. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 사용하는, 오토파지 활성화제.The autophagy activator according to any one of claims 1 to 8, which is used for preventing or treating Alzheimer's disease. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.A composition for activating autophagy, comprising the autophagy activator according to any one of claims 1 to 9 and a pharmaceutically acceptable carrier. 제10항에 있어서, 상기 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염의 합계 함유량이, 오토파지 활성화용 조성물의 전량에 대하여 0.01 내지 10질량％인, 오토파지 활성화용 조성물.The composition for activating autophagy according to claim 10, wherein the total content of the tocopherol phosphate ester or salt thereof is 0.01 to 10% by mass based on the total amount of the composition for activating autophagy.