KR20230041255A

KR20230041255A - 눈개승마 추출물을 유효성분으로 포함하는 건선 개선용 조성물

Info

Publication number: KR20230041255A
Application number: KR1020210124647A
Authority: KR
Inventors: 김진철; 함정엽; 김태정; 박영태; 홍성철; 반츠라크치; 주하늘; 김영석; 유형석
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2021-09-17
Filing date: 2021-09-17
Publication date: 2023-03-24

Abstract

본 발명은 눈개승마 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 건선을 예방, 경감 또는 치료하는데 사용하기 위한 조성물을 제공한다.

Description

눈개승마 추출물을 유효성분으로 포함하는 건선 개선용 조성물 {Composition for improving psoriasis symptom comprising extract of Aruncus dioicus var. kamtschaticus}

본 명세서는 눈개승마 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 자가면역피부질환, 특히 건선의 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

건선(Psoriasis)은 은백색의 인설을 동반한 구진을 나타내는 흔한 자가면역 피부 질환으로 분포나 정도가 개인에 따라 전신성 박탈, 홍반, 소양감, 건조감 및 작열감 등 아주 다양한 증상을 나타낸다. 전세계적으로 발생하나 인종 및 종족간 발생 빈도에 현저한 차이를 보이며 임상 경과는 다양할 수 있지만 일반적으로 호전과 악화를 반복하면서 지속되는 형태를 보인다. 건선의 발병 기전은 아직 완전히 규명되지 않았지만 염증세포의 침윤, 면역 활성화 분자 증가, Th1 및 Th17 반응, 염증 관련 사이토카인의 비정상적인 변화 등 염증이 중요한 역할을 한다는 연구결과가 보고되고 있다.

건선은 만성 재발성 질환이기에, 우수한 효과를 보이면서도 부작용이 적은 치료법을 적용하여야만 한다. 알려진 치료법으로는 국소 치료, 전신 치료, 광선 치료 및 생물학적 제제를 이용한 치료로 요약되며 경증인 경우 국소 치료를 시행하는게 일반적이며, 그 정도가 심할 경우 자외선 요법을 병행하거나 전신 치료를 시행하는 것이 원칙이다.

하지만 건선에 대한 치료에 사용되는 알려진 천연물 기능성 제제는 많지 않은 실정이다.

한국공개특허 10-2000-0064607 호 한국공개특허 10-2018-0134856 호 한국공개특허 10-2018-0053292 호

상기와 같은 문제를 해결하기 위하여, 본 발명자들은 천연물에서 건선 예방 및 치료용 조성물을 검색하던 중, 눈개승마 추출물 또는 이의 분획물을 투여하는 경우 수분량의 증가 및 수분 손실량의 감소와 피부 형태학적 변화와 염증 발현의 억제를 통해 건선의 천연물을 이용한 광선 치료를 통한 완화 수단의 가능성을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

이에 본 발명은 눈개승마 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 약학 조성물, 상기 약학 조성물을 포함하는 키트, 및 상기 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 자가면역질환, 특히 건선의 개선 또는 치료방법을 제공하고자 한다.

본 발명의 목적은 이상에서 언급한 목적으로 제한되지 않는다. 본 발명의 목적은 이하의 설명으로 보다 분명해 질 것이며, 특허청구범위에 기재된 수단 및 그 조합으로 실현될 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기의 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면은 눈개승마 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 눈개승마는 Aruncus dioicus var. kamtschaticus 이며, 상기 눈개승마 추출물은 물, C₁-C₆의 알코올, 또는 C₁-C₆의 알코올 수용액의 추출물인, 자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 C₁-C₆ 알코올 수용액의 농도는 10% 내지 98% (v/v)인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 눈개승마 추출물은 눈개승마의 지상부 또는 지하부의 추출물이며, 상기 눈개승마 추출물은 에탄올 추출물인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 눈개승마 분획물은 눈개승마 추출물의 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물 분획물인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 자가면역피부질환은 건선인, 조성물을 제공한다.

일 구현예에서, 상기 조성물은 건선에 의한 피부 수분 손실량의 감소, 피부 수분량의 증가, 건선에 의한 피부 두께의 변화량 감소 또는 건선에 의한 피부 발적부위의 감소를 통해 건선을 예방, 개선 또는 치료하는 것인, 조성물을 제공한다.

일 구현예에서, 상기 조성물은 IL-1β, IL_23p19, TNF-α, CCL20, CXCL8, S100A7, S100A8, S100A9 중에서 선택된 어느 하나 이상의 염증성 사이토카인의 감소를 통해 건선을 예방, 개선 또는 치료하는 것인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 건강기능식품인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 기능성 화장료 조성물인, 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 건선의 예방, 경감 또는 치료하는 데 사용될 수 있다. 즉, 상기 조성물은 건선에 의한 피부의 수분 손실량의 감소 및 수분량의 증가, 피부 두께의 변화와 염증반응을 유의하게 억제할 수 있다.

본 발명의 효과는 이상에서 언급한 효과로 한정되지 않는다. 본 발명의 효과는 이하의 설명에서 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 할 것이다.

도 1은 동물 모델의 개략적인 실험계획이다.
도 2은 본원발명 실시예 2-2에서 4개 군의 개략도이다.
도 3은 본원발명 실시예 2-2에서 동물 실험 모델에서 건선 유발 모델의 7일간의 변화사진이다.
도 4 및 5는 본원발명 실시예 2-3의 결과이다.
도 6은 본원발명 실시예 2-4의 결과이다.
도 7은 본원발명 실시예 2-5의 결과이다.
도 8은 본원발명 실시예 2-6의 결과이다.
도 9는 본원발명 실시예 3-3의 결과이다.

달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 성분, 반응 조건, 성분의 함량을 표현하는 모든 숫자, 값 및/또는 표현은, 이러한 숫자들이 본질적으로 다른 것들 중에서 이러한 값을 얻는 데 발생하는 측정의 다양한 불확실성이 반영된 근사치들이므로, 모든 경우 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 기재에서 수치범위가 개시되는 경우, 이러한 범위는 연속적이며, 달리 지적되지 않는 한 이러한 범 위의 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지의 모든 값을 포함한다. 더 나아가, 이러한 범위가 정수를 지칭하는 경우, 달리 지적되지 않는 한 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지를 포함하는 모든 정수가 포함된다.

본 명세서에 있어서, 범위가 변수에 대해 기재되는 경우, 상기 변수는 상기 범위의 기재된 종료점들을 포함하는 기재된 범위 내의 모든 값들을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, "5 내지 10"의 범위는 5, 6, 7, 8, 9, 및 10의 값들뿐만 아니라 6 내지 10, 7 내지 10, 6 내지 9, 7 내지 9 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 5.5, 6.5, 7.5, 5.5 내지 8.5 및 6.5 내지 9 등과 같은 기재된 범위의 범주에 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다. 또한 예를 들면, "10% 내지 30%"의 범위는 10%, 11%, 12%, 13% 등의 값들과 30%까지를 포함하는 모든 정수들뿐만 아니라 10% 내지 15%, 12% 내지 18%, 20% 내지 30% 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 10.5%, 15.5%, 25.5% 등과 같이 기재된 범위의 범주 내의 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다.

이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명에서 사용된 용어 "눈개승마"란, 고산지역에서 자라는 다년생 초본으로, 낙엽이 많고 반그늘 혹은 음지에서 자생한다. 식물의 크기는 30 ~ 100 cm이고, 잎은 길이가 3 ~ 10 cm, 폭은 1 ~ 6 cm로 광택이 나는 긴 잎자루를 가지고 있다. 2~3회 정도 깃털과 같은 모양으로 갈라지는 깃꼴겹잎으로, 끝이 뾰족하고 가장자리에 파고드는 모양의 톱니가 있다. 꽃은 흰색으로, 길이는 10 ~ 30 cm 이며 부채꽃 모양으로 펼쳐지고 아래에서부터 피어서 위로 올라간다. 열매는 7~8월에 익고 갈색으로 타원형이며, 길이가 약 0.3 cm 가량인데, 익을 때는 광채가 있다. 이중 본 발명에서 사용된 눈개승마의 경우, 어린잎을 이용하였다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 눈개승마는 Aruncus dioicus var. kamtschaticus 일 수 있다.

눈개승마 추출물은 천연, 잡종, 변종 식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들어 뿌리, 줄기, 잎, 꽃, 열매의 몸통, 열매의 껍질뿐만 아니라 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하며 줄기 뿌리에서 추출할 수 있다. 본 발명의 눈개승마 추출물은 추출용매로 추출한 용매 추출물, 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획한 분획물 또는 상기 분획물에 크로마토그래피를 통하여 수득한 정제물일 수 있다. 상기 추출용매는 천연물 추출에 사용될 수 있는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 이들의 혼합물, 예를 들면 물 또는 에탄올일 수 있다. 본 발명의 눈개승마 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있다. 보다 구체적으로는, 상기 눈개승마 추출물의 제조는 불순물을 제거한 눈개승마 줄기뿌리의 건조물을 분쇄한 분쇄물에 추출용매를 가하고 추출하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 용매를 이용한 추출법은 냉침추출법, 온침추출법, 가용화 추출법, 환류추출법 또는 초음파 분쇄 추출법일 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.

또한, 상기 추출물의 분획물의 제조는 상기 추출법으로 제조한 추출물에 분획용매를 가한 후에 분획용매의 극성에 따라 분획물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 분획물을 수득하는 방법은 층분리에 의한 분리법 또는 분획법으로 수행할 수 있다. 보다 구체적으로 상기 추출물에 분획용매를 가한 후에, 예를 들어 에틸아세테이트 및 물의 분획 용매를 상기 기재와 동일한 순서로 가한 후에 층분리된 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 층분리에 의한 분획법은 상기 용매의 비극성의 정도에 따라 그 순차적으로 추출물에 가하고, 각 적용시마다 층분리에 의해 얻어지는 분획물을 수득하는 방법일 수 있고, 일 예로 에탄올 수용액 추출물에 에틸아세테이트를 첨가하여 층분리가 된 에틸아세테이트층을 분획하여 얻은 에틸아세테이트 분획물; 상기 에틸아세테이트 분획물을 분리하고 남은 층인 물 분획물 순서로 수득하는 방법일 수 있다. 상기 분획물의 정제를 위한 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography, TLC) 또는 고성능 액체 크로마토그래피 (high performance liquid chromatography, HPLC) 등의 다양한 크로마토그래피를 이용하여 수행할 수 있다.

상기 탄소수 1 내지 6의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 펜탄올, 또는 헥산올일 수 있따. 또한, 탄소수 1 내지 6의 알코올 수용액은 농도가 5 내지 99%일 수 있다. 바림직한 구현예에 있어서 추출용매는 에탄올일 수 있다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 자가면역피부질환은 건선, 루프스, 아토피 피부염인, 자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

"건선(Psoriasis)"은 전신성 박탈, 홍반, 소양감, 건조감, 작열감 등의 증상을 나타낸다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 건선에 의한 피부 수분 손실량의 감소, 피부 수분량의 증가, 건선에 의한 피부 두께의 변화량 감소 또는 건선에 의한 피부 발적부위의 감소를 통해 건선을 개선 또는 치료하는 것인, 자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 조성물은 IL-1β, IL_23p19, TNF-α, CCL20, CXCL8, S100A7, S100A8, S100A9 중에서 선택된 어느 하나 이상의 염증성 사이토카인의 감소를 통해 건선을 예방, 개선 또는 치료하는 것인, 조성물을 제공한다.

일구현예에서, 본 발명의 상기 약학 조성물은 피부의 수분량을 증가시키거나 귀와 피부 상피의 두께 변화와 염증 발현을 억제시키는 것일 수 있다. 상기 피부의 형태 변화는 염증반응으로 인해 정상 대조군에 비해 귀와 피부의 표면의 두께가 두꺼워지고 염증 반응에 따른 염증 세포와 T cell 수의 증가로 인한 염증 발현을 나타내는데 본 발명의 조성물은 이를 억제 및 개선시키는 것일 수 있다. 본 발명의 일구현예에서 눈개승마 추출물 또는 이의 분획물을 처리 하여, 실험 종료 후 분획물 처리군에서 건선 유발군과 비교하여 손상 부위가 줄어듦과 동시에 유의적으로 피부의 수분량의 증가와 수분손실량이 감소함을 확인하였다. 또한 단백질과 RNA 수준에서 염증 발현이 감소함을 확인하였다.

본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 히드록시메틸셀룰로오스, 미결정셀룰로스, 규소화미결정셀룰로오스, 포비돈, 크로스포비돈, 크로스카멜로오스나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 노이시린, 콜로이드실리콘디옥사이드, 유당, 탈크, 스테아르산마그네슘, 콜로이드 스테아릴마그네슘, 및 광물유 등으로부터 선택된 1종 이상이 포함될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 처리량은 사용목적, 질환의 중증도, 연령, 체중, 건강 성별, 약물에 대한 민감도 처리시간 경로 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소들을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 상기 조성물은 눈개승마 추출물 또는 그의 분획물을 단일 유효성분으로서 포함하는 것일 수 있다. 즉, 눈개승마 추출물 또는 그의 분획물 외의 다른 단일 유효성분을 포함하지 않는 것일 수 있다. 일구현에서 상기 약학 조성물을 건선을 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 처리하는 단계를 포함하는 개체에서 건선을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 개체는 포유동물일 수 있다. 상기 포유동물을 사람, 개, 고양이, 소, 염소, 또는 돼지일 수 있다. 또한, 사람 또는 인간을 제외한 동물일 수 있으며, 사람 또는 인간을 제외한 포유 동물일 수 있다. 상기 처리는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 처리될 수 있다. 예를 들어 피부 도포, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피 패치, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 등의 경로를 통해 처리될 수 있고, 구체적으로 피부 도포의 경로 등을 통해 목적하는 바에 따라 처리될 수 있다. 바람직하게는 피부 도포의 경로를 통해 처리될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 나이, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 약학 조성물은 1일 0.001 mg/kg 내지 1 mg/kg으로, 바람직하게는 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg으로 투여될 수 있다. 투여는 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 수회, 바람직하기로는 1회 내지는 6회 분할 투여할 수 있다.

본 발명의 다른 측면은 본 발명의 일 측면 중 어느 하나에 따른 약학 조성물을 포함하는 키트(Kit)를 제공한다.

본 발명의 또 하나의 다른 측면은, 자가면역피부질환을 가지는 대상의 자가면역피부질환을 개선 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 본 발명의 일 측면 중 어느 하나에 따른 약학 조성물을 피부 도포의 경로로 투여하는 단계; 를 포함하는, 자가면역피부질환을 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 또 하나의 다른 측면에 있어서, 상기 대상은 인간을 제외한 동물인, 자가면역피부질환을 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 또 하나의 다른 측면에 있어서, 상기 자가면역피부질환은 건선인, 자가면역피부질환을 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 건강식품 조성물은 눈개승마 추출물 또는 이로부터 분획한 용매분획물을 포함하는 것으로, 그 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 선식, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 그 밖에도 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 활성성분으로서 눈개승마 추출물 또는 이로부터 분획한 용매분획물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 함량은 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 건강식품의 전체 중량대비 0.001 내지 70 중량% 범위로 포함될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없다면 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 예를 들면, 건강음료로 제조하는 경우는 상기 활성성분 이외에도 음료 제조 시에 통상적으로 사용되는 첨가제로서 천연 탄수화물 또는 향미제 등을 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예를 들어, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예를 들어, 말토스, 슈크로스 등) 및 폴리사카라이드(예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등)와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 포함될 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 건강식품의 전체 중량대비 1 내지 20 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량% 범위로 함유될 수 있다. 상기 향미제는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)가 포함될 수 있다. 그 밖에도 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 풍미제(합성 또는 천연 풍미제), 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제의 함량에 특별한 제한을 두고 있지는 않지만, 건강식품의 전체 중량대비 0.1 내지 20 중량%의 범위로 포함될 수 있다.

본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 기능성 화장료 조성물인, 조성물을 제공한다. 본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 및 외용제 중 어느 하나의 형태로 제형화된 조성물을 제공한다. 본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 본 명세서의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시에 불과하며, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 눈개승마 추출물 및 분획물 제조

본 실시예에서 사용된 눈개승마(Aruncus dioicus var. kamtschaticus)는 대한민국 강원도 홍천군에 위치한 산약초이야기에서 구매하였다.

1-1. 에탄올 추출물의 제조

눈개승마의 어린 잎 0.6 kg을 에탄올 1.6 L에 담구어 48 시간 실온에서 정치하는 것을 3회 반복하였다. 용액을 거름종이로 여과하여 얻어진 여과액(filtrate)을 감압 증류하여 추출물 30 g을 얻었다.

눈개승마의 어린 잎 2.89 kg을 에탄올 8 L에 담구어 sonication 30분 진행하여 72 시간 실온에서 정치하는 것을 3회 반복하였다. 용액을 거름종이로 여과하여 얻어진 여과액(filtrate)을 감압 증류하여 추출물 30 g을 얻었다.

1-2. 분획물의 제조

(1) 에틸아세테이트 층 분획물

1절에서 얻은 조추출물 중 30 g을 물 200 mL에 녹이고 이를 에틸아세테이트 200 mL와 혼합한 후 24 시간 실온에서 정치한 후 에틸아세테이트 층을 분리하였다. 이 과정을 3회 수행하여 얻어진 에틸아세테이트 층을 감압 농축하여 에틸아세테이트 분획물을 얻었다.

(2) 부탄올 층 분획물

상기 분획물층에서 얻어진 물 층과 부탄올 200 mL을 혼합한 후 24 시간 실온에서 정치한 후 부탄올층을 분리하였다. 이 과정을 3회 수행하여 얻어진 부탄올 층을 감압 및 농축하여 부탄올 분획물을 얻었다.

(3) 물 층 분획물

상기 분획물층에서 얻어진 물 층을 감압 및 농축하여 물 분획물을 얻었다.

실시예 2: 실험동물을 이용한 효능 평가

2-1. 건선 동물 모델 제작

6 주령 수컷 Balb/c 마우스(강원생명과학, 한국)를 구입하고, 일주일 순화 후, 5% 이미퀴모드(동아ST,한국)를 사용하여 건선 유발을 진행하였다. 도 1은 동물 모델의 대략적인 실험계획이다. 실험군당 5마리씩 총 25 마리의 동물 모델을 이용하여 항건선 효능을 탐색하였다.

2-2. 동물 실험 디자인

이미퀴모드로 인해 유발된 건선에 대한 눈개승마 추출물의 효과를 확인하기 위하여, 상기 1절의 실험동물을 이용하였다. 무작위로 배정된 군당 5 마리의 개체를 각 5개의 실험군 별로 다음과 같이 구성하였다:

아무 처리를 하지 않은 정상 대조군 (Non-treatment control, NTC),

1절의 방법으로 이미퀴모드로 인한 건선을 유발시킨 질환군 (IMQ),

건선유도 후 맹리 피부에 Dexamethasone을 바른 군(Positive control, DEX), 실시예 1의 눈개승마 추출물을 100 mg/kg 바른 군 (실험군, K23 100mg/kg)

및

실시예 1의 눈개승마 추출물을 200 mg/kg 바른 군 (실험군, K23 200mg/kg)

총 5개 군으로 구성하였다.

실험 방법은, IMQ Cream으로 건선을 유도한 후, 매일 실험군 및 DEX군에는 도 2에 표현된 양만큼 매일 발라 주는 형태로 실험을 진행하였다. 도 3은 동물 실험모델에서 건선 유발 모델 대비 상기 처리군의 7일 동안 사진이다.

2-3. 조직염색을 통한 등의 상피 두께 및 염증 개선효과 검증

일주일동안 처리 후, 동물로부터 등 피부조직을 적출한 후, 파라핀 블록을 제작하였다. 파라핀 블록을 5 μm로 절삭하여 슬라이드 샘플을 제작한 후, H&E staining을 통하여 피부조직의 두께 변화를 측정하였다.

실험 결과는 도 4 및 도 5와 같았다.

그 결과, 건선을 유도한 IMQ군에서는 두께가 증가한 반면, IMQ군 대비 상피층의 두께가 감소하는 경향은 DEX군과 눈개승마 추출물 처리군에서 두께가 감소하는 것으로 나타났다.

2-4. 면역형광법을 통한 등의 상피 조직 손상 개선효과 검증

일주일동안 처리 후, 동물로부터 등 피부조직을 적출한 후, 파라핀 블록을 제작하였다. 파라핀 블록을 5 μm로 절삭하여 슬라이드 샘플을 제작한 후, immunofluorescence을 통하여 건선으로 인한, 상피 조직 손상에 대한 바이오마커의 변화를 측정하였다.

실험 결과는 도 6과 같았다.

그 결과, 무처리군 대비 건선을 유도한 IMQ군에서는 filaggrin, loricrin, 및 keratin 1 발현량이 감소하고 keratin 14 의 발현량이 증가한 반면, DEX군과 마찬가지로 눈개승마 추출물 처리군에서 filaggrin, loricrin, 및 keratin 1 발현량이 증가하며 및 keratin 14 의 발현량이 감소한 것으로 나타났다.

2-5. 동물실험을 통한 RNA 수준에서의 염증 개선 효과

적출한 조직 200 mg 정량한 후, 완충액(100 mM Tri-HCl, 250 mM sucrose pH 7.4)을 400 μL 첨가하여 균질화하였다. 균질화 후, 새로운 튜브에 넣고 10,000 xg에 10분 동안 원심분리하였다. 상층과 하층의 debris를 제외한 중간층을 분리하여 샘플로 사용하였다.

준비된 샘플에서 CXCL1, CXCL2, IL-1β, S100A8, S100A9 함량을 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)법으로 측정하였다. 발생정도는 ELISA reader로 450 nm에서 흡광도를 측정한 후, 표준곡선을 이용하여 사이토카인 농도를 정량화 하였다.

실험 결과는 도 7과 같았다.

2-5. 동물실험을 통한 RNA 수준에서의 염증 개선 효과

적출한 조직 200 mg 정량한 후, 완충액 (Easy Blue Tissue Lysis Buffer)을 700 μL 첨가하여균질화하였다. 균질화 후, 새로운 튜브에 넣고 400 μL chloroform 추가로 넣어서 vortex- 했다. 10,000 xg에 10분 동안 원심분리한 다음에 상층을 세로운 튜브에 욺기고 300 μL 70% 에틸에타트을 넣었다. 상온에서 10 분 둔 다음에 10,000 xg에 2분 동안 원심분리기 둘리고 상층을 버렸다. 밑에 남은 pellet-을 70% 에타놀로 2 번 washing 하였다. 튜브를 말리고 50 μL 증류소에 pellet-을 녹여서 RNA 총량을 측정하고 cDNA 합성을 진행하고 샘플로 사용하였다.

준비된 샘플에서 CXCL1, CXCL2, IL-1β, S100A8, S100A9 qRT-PCR 법으로 측정하였다. Ct 값을 갖고 사이토카인 증가룰을 정량화 하였다.

실험 결과는 도 7과 같았다.

2-6. Western blot 분석

피부조직을 lysis buffer (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, 50 mM NaF, 10 mM Na₄P₂O₇, 1% IGEPAL, 2mM Na₃VO₄, 0.25% protease inhibitor cocktail, and 1% phosphatase inhibitor cocktail)로 용해시킨 후 단백질 정량을 시행하였다. 10-25 μg의 단백질을 11% SDS-PAGE에서 전기영동한 뒤, nitrocellulose membrane에 2시간동안 전이시켰다. Membrane은 1시간동안 blocking 한 후, cFOS, IRF9, IRF1, P-IRF3, IRF3, P-p65, p65, P-ERK, ERK에 대한 항체로 검출하였다.

실험 결과는 도 8과 같았다.

실시예 3. 세포 실험을 통한 단백질 수준에서의 건선 개선 효과 확인

3-1. 세포 및 세포 배양

실험에 사용된 세포는 HaCaT으로 한국세포은행에서 제공받았다. 세포배양은 Dulbecco's modified Eagle Medium (DMEM)에 10% (V/V) fetal Bovine serum (FBS)와 1% penicillin-streptomycin solution을 첨가한 후 37^oC, 5% CO₂의 배양기에서 배양하였고, 2~3일 간격으로 계대배양하여 유지하였다.

3-2. 추출물 시료의 처리

세포를 5x10⁵ cells/well의 밀도로 6 well plate에 분주하여 안정화시킨 후 각 well에 추출물을 무혈청 배양액에 녹여 처리하여, 24시간 배양시킨 후 배지를 제거하고 세포를 살짝 덮을 정도로 PBS를 첨가한 후, IL-17a/TNF-α 첨가하였다.

3-3. 세포 RNA 수준에서의 염증 마커, IL-1β, CCL20, CXCL8의 생산 개선 효과.

HaCaT 세포에 추출물과 IL-17a/TNF-α 처리 후 24 시간 배양한 총 RNA-를 분리하고 qRT-PCR 기계를 이용하여 IL-1β, CCL20, CXCL8, 의 농도를 측정하였다.

실험 결과는 도 9와 같았다.

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아니며, 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 환제의 제조

실시예 1을 30 중량%, 옥수수전분 30 중량%, 글리세린 20 중량% 및 솔비톨 분말 20 중량%를 혼합하고, 제환기를 사용하여 환을 제조하였다. 내용물의 최종 중량은 3.5g 이었다.

[제형예 2] 정제의 제조

실시예 1의 추출물 30 중량%, 유당 20.5 중량%, 덱스트린 20 중량%, 말티톨 분말 20 중량% 및 자일리톨 분말 7 중량%를 혼합하고, 유동층 건조기를 이용하여 과립화한 다음, 슈거 에스테르(sugar ester) 2.5 중량%를 첨가하여 타정기로 타정하였다. 내용물의 최종 중량은 2g이었다.

[제형예 3] 과립제의 제조

실시예 1의 추출물 30 중량%, 자일리톨 5 중량% 및 이소말트 65 중량%를 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후에 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 2g이었다.

[제형예 4] 주사제의 제조

하기 표 1에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.

배합 성분	함량
실시예 1	10-50mg
주사용 멸균 증류수	적량
pH 조절제	적량

[제형예 5] 건강식품

하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강식품을 제조하였다.

배합 성분	함량
실시예 1	20mg
비타민 A 아세테이트	70μg
비타민 E	1.0mg
비타민 B1	0.13mg
비타민 B2	0.15mg
비타민 B6	0.5mg
비타민 B12	0.2μg
비타민 C	10mg
비오틴	10μg
니코틴산아미드	1.7mg
엽산	50μg
판토텐산 칼슘	0.5mg
황산 제1철	1.75mg
산화아연	0.82mg
탄산마그네슘	25.3mg
제1인산칼륨	15mg
제2인산칼슘	55mg
구연산칼륨	90mg
탄산칼슘	100mg
염화마그네슘	24.8mg

[제형예 5] 건강음료

하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강음료을 제조하였다.

배합 성분	함량
실시예 1	1000mg
구연산	1000mg
올리고당	100g
타우린	1g
정제수	잔량

이상, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징으로 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

눈개승마 추출물, 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는,
자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 눈개승마는 Aruncus dioicus var. kamtschaticus 이며,
상기 눈개승마 추출물은 물, C₁-C₆의 알코올, 또는 C₁-C₆의 알코올 수용액의 추출물인, 자가면역피부질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물.
제 2항에 있어서,
상기 C₁-C₆ 알코올 수용액의 농도는 10% 내지 98% (v/v)인, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 눈개승마 추출물은 눈개승마의 지상부 또는 지하부의 추출물이며,
상기 눈개승마 추출물은 에탄올 추출물인, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 눈개승마 분획물은 눈개승마 추출물의 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물 분획물인, 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 자가면역피부질환은 건선인, 조성물.
제 6항에 있어서,
상기 조성물은 건선에 의한 피부 수분 손실량의 감소, 피부 수분량의 증가, 건선에 의한 피부 두께의 변화량 감소 또는 건선에 의한 피부 발적부위의 감소를 통해 건선을 예방, 개선 또는 치료하는 것인, 조성물.
제 7항에 있어서,
상기 조성물은 IL-1β, IL_23p19, TNF-α, CCL20, CXCL8, S100A7, S100A8, S100A9 중에서 선택된 어느 하나 이상의 염증성 사이토카인의 감소를 통해 건선을 예방, 개선 또는 치료하는 것인, 조성물.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 건강기능식품인, 조성물.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 기능성 화장료 조성물인, 조성물.