KR20230037069A - 환자-특이적 면역요법을 위해 세포의 제조를 조정하기 위한 시스템 및 방법 - Google Patents

환자-특이적 면역요법을 위해 세포의 제조를 조정하기 위한 시스템 및 방법 Download PDF

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KR20230037069A
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patient
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therapy
acceptance
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앤 브룩스
스티브 맥라이즈
크리스틴 랜지
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이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크.
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    • C12N2506/30—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from cancer cells, e.g. reversion of tumour cells

Abstract

환자에 대한 확장된 세포 치료제의 제조를 조정하기 위한 방법은 환자에 대한 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청을 수신하는 단계; 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자 또는 세포 주문 식별자를 생성하는 단계; 및 환자로부터 수득된 고형 종양의 적어도 일부로부터 세포 치료제를 확장하는 프로세스를 개시하는 단계를 포함한다. 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 확장 프로세스에서 1차 시점에 이은 2차 시점에서 특정 허용 기준을 충족하지 않는다면, 세포 확장 기술을 사용한 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 2차 시점의 허용 매개변수에 기초하여 1차 시점부터 가능할지 여부가 결정된다. 이러한 확장 재수행이 가능하면 확장된 세포 치료제를 사용하는 환자 치료 이벤트가 재일정관리된다.

Description

환자 특이적 면역요법을 위한 세포 제조를 조정하기 위한 시스템 및 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 4월 22일에 출원된 미국 가출원 번호 제63/013,942호, 2021년 3월 2일에 출원된 미국 가출원 번호 제63/155,711호, 및 2021년 3월 11일에 출원된 미국 가출원 번호 제63/159,806호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각은 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
종양 침윤 림프구(TIL)의 입양 전달을 사용한 벌크한 난치성 암의 치료는 예후가 좋지 않은 환자에 대한 요법으로서 강력한 접근법이다. Gattinoni, et al., Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 383-393. 다수의 TIL은 성공적인 면역요법에 요구되며, 왕성하고 신뢰성 있는 프로세스는 상업화에 필요하다. 이는 세포 확장에 의한 기술적, 물류적, 및 규제적 쟁점 때문에 달성하는 데 도전이었다. IL-2-기반의 TIL 확장에 이어서 "급속 확장 프로세스"(REP)는 그의 속도 및 효율성 때문에 TIL 확장을 위한 바람직한 방법이 되었다. Dudley, et al., Science 2002, 298, 850-54; Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-57; Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-39; Riddell, et al., Science 1992, 257, 238-41; Dudley, et al., J. Immunother. 2003, 26, 332-42. REP는 14일의 기간에 걸쳐 TIL의 1,000배 확장을 초래할 수 있지만, 이는 종종 공급자(feeder) 세포로서 다수의 공여자로부터의 방사선조사된 동종이형 말초 혈액 단핵 세포(PBMC, 단핵 세포(MNC)로도 공지됨)의 큰 과량(예를 들어, 200배), 뿐만 아니라 항-CD3 항체(OKT3) 및 고 용량의 IL-2를 요구한다. Dudley, et al., J. Immunother. 2003, 26, 332-42. REP 절차를 겪은 TIL은 흑색종을 갖는 환자에서 숙주 면역억제 후에 성공적인 입양 세포 요법을 생성했다.
도 1은 동종이형 TIL을 제조하기 위한 다양한 단계를 포함하는 TIL을 사용한 입양 세포 요법을 사용하여 환자를 치료하는 다양한 단계를 개략적으로 도시한다.
도 2a는 TIL 제조를 위한 GEN 3 프로세스에 대한 타임라인을 보여준다.
도 2b는 2A 프로세스와 TIL 제조를 위한 GEN 3 프로세스의 실시양태 사이의 비교를 보여준다.
도 2c는 GEN 3의 실시양태, GEN 3.1 프로세스의 실시양태, 및 TIL 제조를 위한 GEN 3.1 프로세스의 대안적인 실시양태 사이의 비교를 보여준다.
도 3a는 환자에 대한 TIL의 제조를 조정하기 위한 시스템의 블록도를 보여준다.
도 3b는 일부 실시양태에 따른 플랫폼 내의 표준에 더하여 상업적으로 이용 가능한 소프트웨어 플랫폼에 대해 적절하게 변형되거나 구축된 시스템(300)의 구성요소에 대한 객체 스키마를 예시한다.
도 3c 내지 도 3e는 일부 실시양태에 따른 제조 시설에서 제조 프로세스를 통한 생물학적 물질에 대한 추적을 개략적으로 예시한다.
도 3f는 제조 프로세스의 일부 실시양태(예를 들어, GEN 3 프로세스)에 따른, 제조 프로세스를 통한 고형암의 수득부터 환자에 주입까지 세포 치료제의 여정을 통해 COC 및 COI를 유지하는 프로세스를 개략적으로 예시한다.
도 3g는 일부 실시양태에 따른 세포 치료제의 표지에 대한 대표적인 이미지이다.
도 3h는 일부 실시양태에 따른 세포 치료제의 제조 프로세스 동안 생성된 다양한 유형의 표지를 보여주는 표이다.
도 3i 및 3j는 일부 실시양태에 따른 최종 생성물에 대한 표지의 대표적인 이미지이다.
도 3k-3p는 일부 실시양태에 따른 종양 조달 양식의 대표적인 스크린샷 이미지이다.
도 4a 및 4b는 TIL 제조 프로세스의 성공에 기초한 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 결정하기 위한 흐름도를 보여준다.
도 4c는 TIL 제조 프로세스의 성공에 기초한 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 결정하기 위한 대안적인 실시양태의 흐름도를 보여준다.
도 5는 TIL 제조를 위한 22일 프로세스인 프로세스 2A의 실시양태의 다이어그램을 보여준다.
도 6은 TIL 제조를 위한 1C 프로세스와 2A 프로세스의 실시양태 사이의 비교를 보여준다.
도 7은 1C 프로세스 타임라인을 보여준다.
도 8은 2A 프로세스의 실시양태에 대한 상세한 개략도를 보여준다.
도 9는 단계 A 내지 F의 개요를 제공하는 예시적인 프로세스 2A 차트를 보여준다.
도 10은 프로세스 1C 및 프로세스 2A의 예시적인 실시양태로부터 단계 A 내지 F의 비교 표를 보여준다.
도 11은 프로세스 1C의 실시양태와 프로세스 2A의 실시양태의 상세한 비교를 보여준다.
서열 목록의 간단한 설명
서열번호 1은 무로모납(muromonab) 중쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호 2는 무로모납 경쇄의 아미노산 서열이다.
서열번호 3은 재조합 인간 IL-2 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호 4는 알데스류킨(aldesleukin)의 아미노산 서열이다.
서열번호 5는 IL-2 형태이다.
서열번호 6은 넴발류킨 알파(nemvaleukin alfa)의 아미노산 서열이다.
서열번호 7은 IL-2 형태이다.
서열번호 8은 뮤신 도메인 폴리펩티드이다.
서열번호 9는 재조합 인간 IL-4 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호 10은 재조합 인간 IL-7 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호 11은 재조합 인간 IL-15 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호 12는 재조합 인간 IL-21 단백질의 아미노산 서열이다.
서열번호 13은 IL-2 서열이다.
서열번호 14는 IL-2 뮤테인 서열이다.
서열번호 15는 IL-2 뮤테인 서열이다.
서열번호 16은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR1_IL-2이다.
서열번호 17은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR2이다.
서열번호 18은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR3이다.
서열번호 19는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR1_IL-2 kabat이다.
서열번호 20은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR2 kabat이다.
서열번호 21은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR3 kabat이다.
서열번호 22는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR1_IL-2 clothia이다.
서열번호 23은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR2 clothia이다.
서열번호 24는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR3 clothia이다.
서열번호 25는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR1_IL-2 IMGT이다.
서열번호 26은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR2 IMGT이다.
서열번호 27은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 HCDR3 IMGT이다.
서열번호 28은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 VH 사슬이다.
서열번호 29는 IgG.IL2R67A.H1의 중쇄이다.
서열번호 30은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 LCDR1 kabat이다.
서열번호 31은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 LCDR2 kabat이다.
서열번호 32는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 LCDR3 kabat이다.
서열번호 33은 IgG.IL2R67A.H1을 위한 LCDR1 chothia이다.
서열번호 34는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 LCDR2 chothia이다.
서열번호 35는 IgG.IL2R67A.H1을 위한 LCDR3 chothia이다.
서열번호 36은 VL 사슬이다.
서열번호 37은 경쇄이다.
서열번호 38은 경쇄이다.
서열번호 39는 경쇄이다.
서열번호 40은 인간 4-1BB의 아미노산 서열이다.
서열번호 41은 뮤린 4-1BB의 아미노산 서열이다.
서열번호 42는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(utomilumab)(PF-05082566)의 중쇄이다.
서열번호 43은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 경쇄이다.
서열번호 44는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 45는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 46은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 47은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 48은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 49는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 50은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 51은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 유토밀루맙(PF-05082566)의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 52는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(urelumab)(BMS-663513)의 중쇄이다.
서열번호 53은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 경쇄이다.
서열번호 54는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 55는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 56은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 57은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 58은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 59는 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 60은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 61은 4-1BB 작동제 모노클로날 항체 우렐루맙(BMS-663513)의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 62는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 Fc 도메인이다.
서열번호 63은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 64는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 65는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 66은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 67은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 68은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 69는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 70은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 71은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 72는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 73은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 Fc 도메인이다.
서열번호 74는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 75는 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 76은 TNFRSF 작동제 융합 단백질의 링커이다.
서열번호 77은 4-1BB 리간드(4-1BBL) 아미노산 서열이다.
서열번호 78은 4-1BBL 폴리펩티드의 가용성 부분이다.
서열번호 79는 4-1BB 작동제 항체 4B4-1-1 버전 1의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 80은 4-1BB 작동제 항체 4B4-1-1 버전 1의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 81은 4-1BB 작동제 항체 4B4-1-1 버전 2의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 82는 4-1BB 작동제 항체 4B4-1-1 버전 2의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 83은 4-1BB 작동제 항체 H39E3-2에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 84는 4-1BB 작동제 항체 H39E3-2에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 85는 인간 OX40의 아미노산 서열이다.
서열번호 86은 뮤린 OX40의 아미노산 서열이다.
서열번호 87은 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(tavolixizumab)(MEDI-0562)의 중쇄이다.
서열번호 88은 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 경쇄이다.
서열번호 89는 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 90은 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 91은 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 92는 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 93은 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 94는 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 95는 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 96은 OX40 작동제 모노클로날 항체 타볼릭시주맙(MEDI-0562)의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 97은 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 중쇄이다.
서열번호 98은 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 경쇄이다.
서열번호 99는 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 100은 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 101은 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 102는 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 103은 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 104는 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 105는 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 106은 OX40 작동제 모노클로날 항체 11D4의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 107은 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 중쇄이다.
서열번호 108은 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 경쇄이다.
서열번호 109는 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 110은 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 111은 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 112는 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 113은 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 114는 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 115는 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 116은 OX40 작동제 모노클로날 항체 18D8의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 117은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 118은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 119는 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 120은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 121은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 122는 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 123은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 124는 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu119-122의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 125는 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 126은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 127은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 중쇄 CDR1이다.
서열번호 128은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 중쇄 CDR2이다.
서열번호 129는 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 중쇄 CDR3이다.
서열번호 130은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 경쇄 CDR1이다.
서열번호 131은 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 경쇄 CDR2이다.
서열번호 132는 OX40 작동제 모노클로날 항체 Hu106-222의 경쇄 CDR3이다.
서열번호 133은 OX40 리간드(OX40L) 아미노산 서열이다.
서열번호 134는 OX40L 폴리펩티드의 가용성 부분이다.
서열번호 135는 OX40L 폴리펩티드의 대안적인 가용성 부분이다.
서열번호 136은 OX40 작동제 모노클로날 항체 008의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 137은 OX40 작동제 모노클로날 항체 008의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 138은 OX40 작동제 모노클로날 항체 011에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 139는 OX40 작동제 모노클로날 항체 011에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 140은 OX40 작동제 모노클로날 항체 021의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 141은 OX40 작동제 모노클로날 항체 021에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 142는 OX40 작동제 모노클로날 항체 023에 대한 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 143은 OX40 작동제 모노클로날 항체 023에 대한 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 144는 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 145는 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 146은 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 147은 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 148은 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 149는 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 150은 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 151은 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 152는 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 153은 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 154는 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 155는 인간화 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 156은 OX40 작동제 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역(VH)이다.
서열번호 157은 OX40 작동제 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역(VL)이다.
서열번호 158은 PD-1 저해제 니볼루맙(nivolumab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 159는 PD-1 저해제 니볼루맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 160은 PD-1 저해제 니볼루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 161은 PD-1 저해제 니볼루맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 162는 PD-1 저해제 니볼루맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 163은 PD-1 저해제 니볼루맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 164는 PD-1 저해제 니볼루맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 165는 PD-1 저해제 니볼루맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 166은 PD-1 저해제 니볼루맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 167은 PD-1 저해제 니볼루맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 168은 PD-1 저해제 펨브롤리주맙(pembrolizumab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 169는 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 170은 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 171은 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 172는 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 173은 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 174는 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 175는 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 176은 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 177은 PD-1 저해제 펨브롤리주맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 178은 PD-L1 저해제 더발루맙(durvalumab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 179는 PD-L1 저해제 더발루맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 180은 PD-L1 저해제 더발루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 181은 PD-L1 저해제 더발루맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 182는 PD-L1 저해제 더발루맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 183은 PD-L1 저해제 더발루맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 184는 PD-L1 저해제 더발루맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 185는 PD-L1 저해제 더발루맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 186은 PD-L1 저해제 더발루맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 187은 PD-L1 저해제 더발루맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 188은 PD-L1 저해제 아벨루맙(avelumab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 189는 PD-L1 저해제 아벨루맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 190은 PD-L1 저해제 아벨루맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 191은 PD-L1 저해제 아벨루맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 192는 PD-L1 저해제 아벨루맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 193은 PD-L1 저해제 아벨루맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 194는 PD-L1 저해제 아벨루맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 195는 PD-L1 저해제 아벨루맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 196은 PD-L1 저해제 아벨루맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 197은 PD-L1 저해제 아벨루맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 198은 PD-L1 저해제 아테졸리주맙(atezolizumab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 199는 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 200은 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 201은 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 202는 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 203은 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 204는 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 205는 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 206은 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 207은 PD-L1 저해제 아테졸리주맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 208은 CTLA-4 저해제 이필리무맙(ipilimumab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 209는 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 210은 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 211은 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 212는 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 213은 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 214는 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 215는 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 216은 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 217은 CTLA-4 저해제 이필리무맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 218은 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 219는 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 220은 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 221은 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 222는 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 223은 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 224는 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 225는 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 226은 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 227은 CTLA-4 저해제 트레멜리무맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 228은 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙(zalifrelimab)의 중쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 229는 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 경쇄 아미노산 서열이다.
서열번호 230은 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열이다.
서열번호 231은 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열이다.
서열번호 232는 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 중쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 233은 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 중쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 234는 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 중쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
서열번호 235는 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 경쇄 CDR1 아미노산 서열이다.
서열번호 236은 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 경쇄 CDR2 아미노산 서열이다.
서열번호 237은 CTLA-4 저해제 잘리프렐리맙의 경쇄 CDR3 아미노산 서열이다.
I. 도입
급속 확장 프로토콜(REP)에 의해 생체외에서 배양된 TIL을 활용한 입양 세포 요법은 흑색종을 갖는 환자에서 숙주 면역억제 후 성공적인 입양 세포 요법을 생성하였다. 예를 들어, 일부 경우에는 종양 특이적 T 림프구의 입양 전이 전의 림프구제거술은 조절 T 세포와 면역계의 경쟁 요소("시토카인 싱크")를 제거하여 치료 효능을 향상시키는 데 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 일부 경우에, ACT의 효능은 ACT를 투여받는 환자를 TIL 주입 전, 예를 들어 TIL 주입 28일 내지 25일 전에 비-골수절제성 화학요법으로 사전 치료함으로써 ACT의 효능을 증가시킬 수 있다. 또한, TIL 주입 후 IL-2 치료 요법이 치료의 성공 기회를 개선시킬 수 있다는 것도 발견되었다. 이러한 주입전 치료 및 주입후 치료의 타이밍 및 기간은 전체 치료요법의 궁극적인 효능을 결정한다.
따라서, 다양한 치료 요법의 일정관리는 최종 생성물에 대한 허용 매개변수에 그 자체가 의존적인 TIL 제조 프로세스의 타이밍 및 기간에 따라 달라진다. 현재의 주입 허용 매개변수는 TIL의 조성(예를 들어, CD28, CD8 또는 CD4 양성)의 판독 및 확장된 TIL 생성물(본원에서 REP 생성물이라고도 함)의 배수 확장 및 생존력에 의존적이다. REP 생성물의 배수 확장 및 생존력은 결국 확장 프로세스 동안 측정된 다양한 매개변수에 따라 달라진다. 주입용으로 허용되는 REP 생성물의 산출량 및 타이밍에 있어서의 이러한 변동은 종양을 제조 시설로 운송하는 물류, REP 생성물의 이동 및 TIL 제조 프로세스 동안 다양한 환자 치료 이벤트의 일정관리에 문제를 제기한다.
더욱이, TIL 제조 프로세스의 여러 단계 동안의 세포 생존력 및 세포 카운트(count)와 같은 다양한 매개변수는 TIL 제조 프로세스의 마지막에서 허용가능한 생존력, 수치 배수 및 최종 세포 카운트가 수득되도록 후속 단계의 지속시간을 결정한다.
또한, TIL 제조 프로세스 전반을 포함하여 환자로부터 제거된 시점부터 환자에게 주입되는 시점까지 생물학적 물질의 추적을 유지하여, 제조 지연, 물질의 오표지화 및 환자의 오인을 피함으로써, 환자의 안전을 개선하는 것이 중요하다.
본 개시내용은 제조 프로세스의 여러 단계 동안 다양한 측정된 매개변수에 기초하여 다양한 환자 치료 이벤트를 동적으로 일정관리함으로써 환자 및 다양한 환자 치료 이벤트에 대한 확장 세포 치료제(cell therapy product)의 제조 프로세스를 조정하기 위한 체계(framework)를 제공한다.
예를 들어, 한 실시양태에서, 환자에 대한 확장된 T-세포의 제조를 조정하기 위한 방법은 컴퓨팅에 의해 환자에 대한 T-세포를 확장하기 위한 세포 주문 요청을 수신하는 단계; 컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자 또는 세포 주문 식별자를 생성하는 단계; 및 T-세포를 확장하기 위한 프로세스를 개시하는 단계를 포함할 수 있다. T-세포를 확장하는 프로세스는 임상 시설에서 환자에 대해 절차를 수행하여 환자로부터 T-세포를 수득하고, 수득한 T-세포를 제조 시설로 이동하는 것을 포함할 수 있다. 제조 시설에서 수득한 T 세포를 수용한 후, 환자 치료 이벤트를 컴퓨팅 장치에 의해 동적으로 일정관리한다. 동적 일정관리는 후속적으로 수득되는 확장 T-세포의 허용 매개변수에 따라 달라진다. 세포 확장 기술을 사용하여, 수득한 T-세포 중 적어도 일부로부터 T-세포의 확장이 개시되고 확장 T-세포의 허용 매개변수가 결정된다.
다른 실시양태에서, 환자에 대한 확장된 세포 치료제의 제조를 조정하기 위한 방법은 컴퓨팅 장치에 의해 환자에 대한 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청을 수신하는 단계; 컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자를 생성하는 단계; 및 세포 치료제를 확장하기 위한 프로세스를 개시하는 단계를 포함할 수 있다. 세포 치료제를 확장하는 프로세스는 임상 시설에서 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위해 환자에 대해 절차를 수행하는 단계 및 수득한 고형 종양을 제조 시설로 이동하는 단계를 포함할 수 있다. 제조 시설에서 고형 종양을 수용한 후 환자 치료 이벤트는 컴퓨팅 장치에 의해 동적으로 일정관리된다. 동적 일정관리는 후속적으로 수득되는 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수에 따라 달라진다. 세포 확장 기술을 사용하여 수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장은 개시되고 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수는 1차 시점 및 1차 시점에 이은 2차 시점에 결정된다. 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 1차 시점 및 2차 시점에서 특정 허용 기준을 충족하는지 여부가 결정된다. 1차 시점의 허용 매개변수가 허용 기준을 충족한다면, 세포 치료제의 확장은 2차 시점까지 계속된다. 확장 세포 치료제의 허용 매개변수가 2차 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는 경우에는 2차 시점의 허용 매개변수에 기초하여 1차 시점으로부터 세포 확장 기술을 사용하여 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 가능한지 여부를 결정한다. 확장의 재수행이 가능한 것으로 결정되면, 세포 치료제의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장이 1차 시점에서의 세포 확장 기술을 사용하여 2차 시점에서 수득된다. 1차 시점으로부터 세포 치료제의 확장을 재수행한 후 세포 치료제의 확장에 대한 완료 시점이 추정된다. 환자 치료 이벤트는 세포 치료제의 확장 완료 추정 시간 및 환자에게 확장된 세포 치료제의 주입 전 또는 후에 환자 치료 이벤트의 타이밍에 기초하여 일정을 재일정관리한다. 세포 치료제의 후속 확장은 1차 시점부터 완료한다.
본 개시내용은 생물학적 물질이 환자로부터 추출된 시간부터 환자에게 다시 주입되는 시간까지 생물학적 물질을 정확하게 추적하기 위한 방법 및 시스템을 추가로 제공한다. 특히, 본원에 개시된 방법 및 시스템은 생물학적 물질에 대한 신원 연속성(chain of identity) 및 관리 연속성(chain of custody)의 유지를 용이하게 한다.
예를 들어, 한 실시양태에서, 환자의 생물학적 물질을 추적하는 방법은 환자에 대한 생물학적 물질의 제조에 대한 세포 주문 요청을 수신하는 것을 포함할 수 있다. 세포 주문 요청을 수신하면, 컴퓨팅 장치는 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자를 생성한다. 환자-특이적 식별자는 환자 식별자, 세포 요청 주문 식별자, 주문 코드 및 세포 주문 로트 번호 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 그런 다음, 환자의 생물학적 물질은 이 생물학적 물질이 환자로부터 추출되는 임상 시설로부터 제조 시설로 생물학적 물질을 운송하는 동안, 제조 프로세스 중 제조 시설에서, 그리고 제조 시설로부터 제조된 생물학적 물질을 제조된 생물학적 물질이 있는 임상 시설로부터, 그리고 다시 제조된 생물학적 물질이 환자-특이적 식별자를 사용하여 환자 내로 주입되는 임상 시설로 다시 운송되는 동안 추적된다. 추적은 컴퓨팅 장치에 의해, 운송 및 제조 프로세스로부터 각 단계에서 추적 이벤트를 기록하는 것을 포함할 수 있다. 추적 이벤트의 기록은 환자의 생물학적 물질의 관리 연속성을 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급된 모든 특허 및 간행물은 그 전체가 참고로 포함된다.
"생체내"라는 용어는 대상체의 신체에서 일어나는 이벤트를 지칭한다.
"시험관내"라는 용어는 대상체의 신체 외부에서 발생하는 이벤트를 지칭한다. 시험관내 검정은 살아 있거나 죽은 세포가 사용되는 세포 기반 검정을 포함하며, 온전한 세포가 이용되지 않는 무세포 검정을 포괄할 수도 있다.
용어 "생체외"는 대상체의 신체에서 제거된 세포, 조직 및/또는 기관에 대한 절차를 처리하거나 수행하는 것을 수반하는 이벤트를 지칭한다. 적절하게, 세포, 조직 및/또는 기관은 수술 또는 치료 방법으로 대상체의 신체로 복귀될 수 있다.
"급속 확장"이라는 용어는 항원 특이적 TIL의 수가 1주의 기간 동안 적어도 약 3배(또는 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 또는 9배), 보다 바람직하게는 1주의 기간에 걸쳐 적어도 약 10배(또는 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 또는 90배), 또는 가장 바람직하게는 1주의 기간에 걸쳐 적어도 약 100배 증가하는 것을 의미한다. 다수의 급속 확장 프로토콜은 하기에 개요된다.
본원에서 "종양 침윤 림프구" 또는 "TIL"이란 대상체의 혈류를 떠났고, 종양 내로 이동된 백혈구로서 원래 얻어진 세포의 집단을 의미한다. TIL은 CD8+ 세포독성 T 세포 (림프구), Th1 및 Th17 CD4+ T 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포 및 M1 대식세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. TIL은 1차 및 2차 TIL 둘 다를 포함한다. "1차 TIL"은 본원에 개요된 바와 같이 환자 조직 샘플로부터 수득된 것들 (때때로 "신선하게 수득된" 또는 "신선하게 단리된" 것으로 지칭됨)이고, "2차 TIL"은 벌크한 TIL 및 확장된 TIL ("REP TIL" 또는 "사후-REP TIL")을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 본원에서 논의된 바와 같이 확장되거나 증식된 임의의 TIL 세포 집단이다. TIL 세포 집단은 유전적으로 변형된 TIL을 포함할 수 있다.
본원에서 "세포의 집단"(TIL을 포함함)이란 공통적인 특성을 공유하는 다수의 세포를 의미한다. 일반적으로, 집단은 일반적으로 수에 있어서 1 × 106 내지 1 × 1010개의 범위이며, 상이한 TIL 집단은 상이한 수를 포함한다. 예를 들어, IL-2의 존재 하에서의 1차 TIL의 초기 성장은 대략 1 × 108개의 세포의 벌크한 TIL의 집단을 발생시킨다. REP 확장은 일반적으로 주입을 위한 1.5 × 109 내지 1.5 × 1010개의 세포의 집단을 제공하기 위해 수행된다. 일부 실시양태에서, REP 확장은 2.3 × 1010 - 13.7 × 1010개의 집단을 제공하기 위해 수행된다.
본원에서 "냉동보존된 TIL"이란 1차, 벌크한, 또는 확장된(REP TIL) 중 어느 하나인 TIL이 약 -150℃ 내지 -60℃의 범위에서 처리되고, 저장되는 것을 의미한다. 냉동보존을 위한 일반적 방법은 또한 실시양태를 비롯한 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 명확성을 위해, "냉동보존된 TIL"은 1차 TIL의 공급원으로서 사용될 수 있는 동결된 조직 샘플과는 구별된다.
본원에서 "해동된 냉동보존된 TIL"이란 이전에 냉동보존된 후, 세포 배양 온도 또는 TIL이 환자에게 투여될 수 있는 온도를 포함하나 이에 제한되지는 않는 실온 이상으로 복귀되도록 처리된 TIL의 집단을 의미한다.
TIL은 일반적으로 세포 표면 마커를 사용하여 생화학적으로, 또는 종양을 침윤시키고 치료를 실행하는 그들의 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다. TIL은 일반적으로 하기 바이오마커 중 1종 이상을 발현함으로써 범주화될 수 있다: CD4, CD8, TCR αβ, CD27, CD28, CD56, CCR7, CD45Ra, CD95, PD-1, 및 CD25. 추가적으로 및 대안적으로, TIL은 환자 내로의 재도입 시 고형 종양을 침윤시키는 그들의 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다.
용어 "냉동보존 배지들" 또는 "냉동보존 배지"는 세포의 냉동보존에 사용될 수 있는 임의의 배지를 지칭한다. 이러한 배지는 7% 내지 10% DMSO를 포함하는 배지를 포함할 수 있다. 예시적인 배지로는 크리오스토르(CryoStor) CS10, 하이퍼써마솔(Hyperthermasol), 뿐만 아니라 이들의 조합을 포함한다. 용어 "CS10"은 스템셀 테크놀로지즈(Stemcell Technologies)로부터 또는 바이오라이프 솔루션즈 (Biolife Solutions)로부터 수득되는 냉동보존 배지를 지칭한다. CS10 배지는 상표명 "CryoStor® CS10"에 의해 지칭될 수 있다. CS10 배지는 DMSO를 포함하는 혈청-무함유, 동물 성분-무함유 배지이다.
용어 "중심 기억 T 세포"는 인간에서 CD45R0+이고, CCR7 (CCR7hi) 및 CD62L (CD62hi)을 구성적으로 발현하는 T 세포의 하위세트를 지칭한다. 중심 기억 T 세포의 표면 표현형은 또한 TCR, CD3, CD127(IL-7R), 및 IL-15R을 포함한다. 중심 기억 T 세포에 대한 전사 인자는 BCL-6, BCL-6B, MBD2, 및 BMI1을 포함한다. 중심 기억 T 세포는 TCR 촉발 후에 이펙터 분자로서 주로 IL-2 및 CD40L을 분비한다. 중심 기억 T 세포는 혈액에서 CD4 구획에 우세하며, 인간에서 림프절 및 편도에 비례적으로 풍부하다.
용어 "이펙터 기억 T 세포"는 중심 기억 T 세포와 같이, CD45R0+이지만, CCR7의 구성적 발현을 소실하였고(CCR7lo), CD62L 발현에 대해 이질성이거나 낮은(CD62Llo) 인간 또는 포유동물 T 세포의 하위세트를 지칭한다. 중심 기억 T 세포의 표면 표현형은 또한 TCR, CD3, CD127(IL-7R), 및 IL-15R을 포함한다. 중심 기억 T 세포에 대한 전사 인자는 BLIMP1을 포함한다. 이펙터 기억 T 세포는 항원 자극 후, 인터페론-γ, IL-4, 및 IL-5를 비롯한 높은 수준의 염증성 시토카인을 급속하게 분비한다. 이펙터 기억 T 세포는 혈액에서 CD8 구획에 우세하며, 인간에서 폐, 간, 및 장에 비례적으로 풍부하다. CD8+ 이펙터 기억 T 세포는 다량의 퍼포린을 운반한다.
용어 "닫힌 계"는 환경 외부에 대해 닫힌 계를 지칭한다. 세포 배양 방법에 적절한 임의의 닫힌 계는 본 발명의 방법에 이용될 수 있다. 닫힌 계로는 예를 들어, 닫힌 G-용기를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 종양 분절이 닫힌 계에 첨가되면, 계는 TIL이 환자에게 투여되도록 준비될 때까지 외부 환경에 대해 열리지 않는다.
종양을 파괴하는 프로세스를 기술하기 위해 본원에 사용된 바와 같은 용어 "단편화", "단편", 및 "단편화된"은 기계적 단편화 방법, 예컨대 종양 조직을 으깨기, 슬라이스하기, 나누기, 및 세절하기, 뿐만 아니라 종양 조직의 물리적 구조를 파괴하는 임의의 다른 방법을 포함한다.
용어 "세침 흡인물" 또는 FNA는 샘플을 채취하되, 종양을 제거하거나 절제하지 않은 종양 샘플링을 포함하는 샘플링 또는 진단 절차에 사용될 수 있는 일종의 생검 절차를 지칭한다. 세침 흡인에서, 중공 바늘, 예를 들어 25-18 게이지가 종양 내로 또는 종양 및 유체를 함유하는 영역 내로 삽입되고 본원에 기재된 바와 같이 추가 분석 또는 확장을 위해 세포(조직 포함)가 수득된다. FNA를 사용하면 조직 세포의 조직학적 구조를 보존함이 없이 세포가 제거된다. FNA는 TIL을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 세침 흡인 생검은 초음파 유도 세침 흡인 생검 바늘을 사용하여 수행된다. FNA 바늘은 Becton Dickinson, Covidien 등으로부터 시판된다.
용어 "코어 생검" 또는 "코어 바늘 생검"은 샘플이 채취되지만 종양이 제거되거나 절제되지 않은 종양 샘플링을 비롯한 샘플링 또는 진단 절차에 채용될 수 있는 일종의 생검 절차를 지칭한다. 코어 생검에서, 중공 바늘, 예를 들어 16-11 게이지가 종양 내로 또는 종양 및 유체를 함유하는 영역으로 삽입되고, 본원에 기재된 바와 같이 추가 분석 또는 확장을 위해 세포(조직 포함)가 수득된다. 코어 생검을 사용 시, FNA에 비해 더 큰 바늘 크기를 감안하면 조직 세포의 조직학적 구조가 일부 보존되면서 세포가 제거될 수 있다. 코어 생검 바늘은 일반적으로 종양의 조직학적 구조의 적어도 일부를 보존할 수 있는 게이지 크기이다. 코어 생검은 TIL을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 코어 바늘 생검은 Bard Medical, Becton Dickinson 등으로부터 상업적으로 이용가능한 생검 기구, 진공 보조 코어-바늘 생검 기구, 정위 유도 코어-바늘 생검 기구, 초음파 유도 코어-바늘 생검 기구, MRI-유도 코어-바늘 생검 기구를 사용하여 수행된다.
용어 "말초 혈액 단핵 세포" 및 "PBMC"는 림프구(T 세포, B 세포, NK 세포) 및 단핵구를 비롯한 둥근 핵을 갖는 말초 혈액 세포를 지칭한다. 항원 제시 세포(PBMC는 일종의 항원 제시 세포임)로서 사용되는 경우, 말초 혈액 단핵 세포는 방사선조사된 동종이형 말초 혈액 단핵 세포이다.
용어 "말초 혈액 림프구" 및 "PBL"은 말초 혈액에서 확장된 T 세포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PBL은 공여체로부터의 전체 혈액 또는 성분채집술 생성물로부터 분리된다. 일부 실시양태에서, PBL은 공여체로부터의 전체 혈액 또는 성분채집술 생성물로부터 T 세포 표현형의 양성 또는 음성 선택, 예컨대, CD3+ CD45+의 T 세포 표현형에 의해 분리된다.
용어 "항-CD3 항체"는 성숙한 T 세포의 T 세포 항원 수용체에서의 CD3 수용체에 대해 지정된 인간, 인간화, 키메라 또는 뮤린 항체를 비롯한 항체 또는 그의 변이체, 예를 들어, 모노클로날 항체를 지칭한다. 항-CD3 항체는 무로모납으로도 공지된 OKT-3을 포함한다. 항-CD3 항체는 또한 T3 및 CD3ε으로도 알려진 UHCT1 클론을 포함한다. 다른 항-CD3 항체로는 예를 들어, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 및 비실리주맙을 포함한다.
용어 "OKT-3"(본원에서 "OKT3"으로도 지칭됨)은 성숙한 T 세포의 T 세포 항원 수용체에서의 CD3 수용체에 대해 지정된 인간, 인간화, 키메라, 또는 뮤린 항체를 비롯한 모노클로날 항체 또는 그의 바이오시밀러 또는 변이체를 지칭하며, 시판되는 형태, 예컨대 OKT-3 (30 ng/mL, MACS GMP CD3 순수, 밀테니 바이오테크, 인크. (Miltenyi Biotech, Inc.), 미국 캘리포니아주 샌 디에고) 및 무로모납 또는 그의 변이체, 보존적 아미노산 치환, 글리코형, 또는 바이오시밀러를 포함한다. 무로모납의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 표 1 (서열번호 1 및 서열번호 2)에 주어진다. OKT-3을 생산할 수 있는 하이브리도마는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection)에 기탁되어 있으며, ATCC 수탁 번호 CRL 8001이 할당되어 있다. OKT-3을 생산할 수 있는 하이브리도마는 또한 유러피안 콜렉션 오브 오텐티케이티드 셀 컬쳐즈 (European Collection of Authenticated Cell Cultures) (ECACC)에 기탁되어 있으며, 카탈로그 번호 86022706으로 할당되어 있다.
<표 1>
무로모납의 아미노산 서열.
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용어 "IL-2" (본원에서 "IL2"로도 지칭됨)는 인터루킨-2로 공지된 T 세포 성장 인자를 지칭하며, 인간 및 포유동물 형태, 그의 보존적 아미노산 치환, 글리코형, 바이오시밀러, 및 변이체를 비롯한 IL-2의 모든 형태를 포함한다. IL-2는 예를 들어, 문헌 [Nelson, J. Immunol. 2004, 172, 3983-88] 및 [Malek, Annu. Rev. Immunol. 2008, 26, 453-79]에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-2의 아미노산 서열은 표 2 (서열번호 3)에 주어진다. 예를 들어, 용어 IL-2는 IL-2의 인간, 재조합 형태, 예컨대 알데스루킨(프로루킨(PROLEUKIN), 단일 사용 바이알 당 2200만 IU로 다중 공급자로부터 시판됨), 뿐만 아니라 미국 뉴햄프셔주 포츠마우스에 소재하는 셀제닉스, 인크.(CellGenix, Inc.) (셀그로 지엠피 (CELLGRO GMP)) 또는 미국 뉴저지주 이스트 브룬스위크에 소재하는 프로스펙-타니 테크노진 리미티드 (ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.) (카탈로그 번호 CYT-209-b)에 의해 상업적으로 공급되는 재조합 IL-2의 형태 및 다른 판매자로부터의 다른 상업적 등가물을 포괄한다. 알데스루킨 (데스-알라닐-1, 세린-125 인간 IL-2)은 대략 15 kDa의 분자량을 갖는 IL-2의 비글리코실화된 인간 재조합 형태이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 알데스루킨의 아미노산 서열은 표 2(서열번호 4)에 주어진다. 용어 IL-2는 또한 미국 캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코에 소재하는 넥타 테라퓨틱스(Nektar Therapeutics)로부터 이용가능하거나, 또는 각 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 국제특허출원 공개 제WO 2018/132496 A1호의 실시양태 19에 기재된 방법 또는 미국 특허 출원 공개 제US 2019/0275133 A1호의 실시양태 1에 기재된 방법과 같은 본 기술분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있는 페길화된 IL2 프로드러그 벰페그알데스류킨(NKTR-214, 평균 6개의 리신 잔기가 [(2,7-비스{[메틸폴리(옥시에틸렌)]카바모일}-9H-플루오렌-9-일)메톡시]카보닐)에 의해 치환된 N6인 서열번호 4에서와 같은 페길화된 인간 재조합 IL-2)을 비롯한 본원에 기재된 바와 같은 IL-2의 페길화된 형태를 포괄한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 벰페그알데스류킨(NKTR-214) 및 다른 페길화된 IL-2 분자는 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0328791 A1호 및 국제 특허 출원 공개 제WO 2012/065086 A1호에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 접합된 IL-2의 대안적 형태는 미국 특허 제4,766,106호, 제5,206,344호, 제5,089,261호 및 제4,902,502호에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2의 제형은 미국 특허 제6,706,289호에 기재되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 Synthorx, Inc.로부터 이용가능한 THOR-707이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 THOR-707 및 또 다른 대안적 형태의 IL-2의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 제US 2020/0181220 A1호 및 제US 2020/0330601 A1호에 기술되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드; 및 K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 위치에서 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드에 결합하는 접합 모이어티를 포함하는 인터루킨 2(IL-2) 접합체이며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열번호 5에 상응하는 것이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 위치는 T37, R38, T41, F42, F44, Y45, E61, E62, E68, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 위치는 T37, T41, F42, F44, Y45, P65, V69, L72, 및 Y107로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 위치는 R38 및 K64로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 위치는 E61, E62, 및 E68로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 위치는 E62에 있다. 일부 실시양태에서, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 잔기는 리신, 시스테인, 또는 히스티딘으로 추가로 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 잔기는 시스테인으로 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 잔기는 리신으로 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, K35, T37, R38, T41, F42, K43, F44, Y45, E61, E62, E68, K64, P65, V69, L72 및 Y107로부터 선택되는 아미노산 잔기는 비천연 아미노산으로 추가로 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 비천연 아미노산은 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK), N6-프로파길에톡시-L-리신(PraK), BCN-L-리신, 노르보르넨 리신, TCO-리신, 메틸테트라진 리신, 알릴옥시카르보닐리신, 2-아미노-8-옥소노난산, 2-아미노-8-옥소옥탄산, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-아지도메틸-L-페닐알라닌(pAMF), p-요오도-L-페닐알라닌, m-아세틸페닐알라닌, 2-아미노-8-옥소노난산, p-프로파길옥시페닐알라닌, p-프로파길-페닐알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, L-도파, 불소화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, O-알릴티로신, O-메틸-L-티로신, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 포스포노티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcp-세린, L-포스포세린, 포스포노세린, L-3-(2-나프틸)알라닌, 2-아미노-3-((2-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)셀라닐)프로판산, 2-아미노-3-(페닐셀라닐)프로판산, 또는 셀레노시스테인을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-2 접합체는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2 수용체 α(IL-2Rα) 서브유닛에 대해 감소된 친화도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 감소된 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 IL-2Rα에 대한 결합 친화도의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 감소이다. 일부 실시양태에서, 감소된 친화도는 야생형 IL-2 폴리펩티드에 비해 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 30배, 50배, 100배, 200배, 300배, 500배, 1000배 또는 그 이상이다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 IL-2Rα와 IL-2의 결합을 손상시키거나 차단한다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가 접합 모이어티는 수용성 중합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체 각각은 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜)(PPG), 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리(옥시에틸화 폴리올), 폴리(올레핀 알코올), 폴리(비닐피롤리돈), 폴리(하이드록시알킬메타크릴아미드), 폴리(하이드록시알킬메타크릴레이트), 폴리(사카라이드), 폴리(α-하이드록시산), 폴리(비닐 알코올), 폴리포스파젠, 폴리옥사졸린(POZ), 폴리(N-아크릴로일모르폴린), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체 각각은 독립적으로 PEG를 포함한다. 일부 실시양태에서, PEG는 선형 PEG 또는 분지형 PEG이다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체 각각은 독립적으로 다당류를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다당류는 덱스트란, 폴리시알산(PSA), 히알루론산(HA), 아밀로스, 헤파린, 헤파란 설페이트(HS), 덱스트린, 또는 하이드록시에틸-전분(HES)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체 각각은 독립적으로 글리칸을 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체 각각은 독립적으로 폴리아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가 접합 모이어티는 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 단백질은 독립적으로 알부민, 트랜스페린 또는 트랜스티레틴을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 단백질은 독립적으로 Fc 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각각의 단백질은 독립적으로 IgG의 Fc 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가 접합 모이어티는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드 각각은 독립적으로 XTEN 펩티드, 글리신-풍부 호모아미노산 중합체(HAP), PAS 폴리펩티드, 엘라스틴-유사 폴리펩티드(ELP), CTP 펩티드, 또는 젤라틴-유사 단백질(GLK) 중합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드는 글루타밀화에 의해 변형된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드에 직접 결합된다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 링커를 통해 단리 및 정제된 IL-2 폴리펩티드에 간접적으로 결합된다. 일부 실시양태에서, 링커는 동종이작용기성 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 동종이작용기성 링커는 로망(Lomant) 시약 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트) DSP, 3'3'-디티오비스(설포숙신이미딜 프로프리오네이트)(DTSSP), 디숙신이미딜 수베레이트(DSS), 비스(설포숙신이미딜)수베레이트(BS), 디숙신이미딜 타르트레이트(DST), 디설포숙신이미딜타르트레이트(설포 DST), 에틸렌글리코비스(숙신이미딜숙시네이트)(EGS), 디숙신이미딜글루타레이트(DSG), N,N'-디숙신이미딜카보네이트(DSC), 디메틸 아디피미데이트(DMA), 디메틸 피멜리미데이트(DMP), 디메틸 수베리미데이트(DMS), 디메틸-3,3'-디티오비스프로피온이미데이트(DTBP), 1,4-디-(3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미도)부탄(DPDPB), 비스말레이미도헥산(BMH), 아릴 할라이드 함유 화합물(DFDNB), 예를 들어 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠 또는 1,3-디플루오로-4,6-디니트로벤젠, 4,4'-디플루오로-3,3'-디니트로페닐술폰(DFDNPS), 비스-[β-(4-아지도살리실아미도)에틸]디설파이드(BASED), 포름알데히드, 글루타르알데히드, 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르, 아디프산 디히드라지드, 카르보히드라지드, o-톨루이딘, 3,3'-디메틸벤지딘, 벤지딘, α,α'-p-디아미노디페닐, 디요오도-p-자일렌 설폰산, N,N'-에틸렌-비스(요오도아세트아미드), 또는 N,N'-헥사메틸렌-비스(요오도아세트아미드)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 이종이작용기성 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이종이작용기성 링커는 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(sPDP), 장쇄 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(LC-sPDP), 수용성-장쇄 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(설포-LC-sPDP), 숙신이미딜옥시카르보닐-α-메틸-α-(2-피리딜디티오)톨루엔(sMPT), 설포숙신이미딜-6-[α-메틸-α-(2)-피리딜디티오)톨루아미도]헥사노에이트(설포-LC-sMPT), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트(sMCC), 설포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트(설포-sMCC), m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르(MBs), m-말레이미도벤조일-N-히드록시설포숙신이미드 에스테르(설포-MBs), N-숙신이미딜(4-요오도악테일)아미노벤조에이트(sIAB), 설포숙신이미딜(4-요오도악테일)아미노벤조에이트(설포-sIAB), 숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(sMPB), 설포숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(설포-sMPB), N-(γ-말레이미도부티릴옥시)숙신이미드 에스테르(GMB), N-(γ-말레이미도부티릴옥시)설포숙신이미드 에스테르(설포-GMB), 숙신이미딜 6-((요오도아세틸)아미노)헥사노에이트(sIAX), 숙신이미딜 6-[6-(((요오도아세틸)아미노)헥사노일)아미노]헥사노에이트(slAXX), 숙신이미딜 4-((((요오도아세틸)아미노)메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(sIAC), 숙신이미딜 6-(((((4-요오도아세틸)아미노)메틸)시클로헥산-1-카르보닐)아미노) 헥사노에이트(sIACX), p-니트로페닐 요오도아세테이트(NPIA), 카르보닐 반응성 및 설프히드릴 반응성 가교제, 예를 들어 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 히드라지드(MPBH), 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실-히드라지드-8(M2C2H), 3-(2-피리딜디티오)프로피오닐 히드라지드(PDPH), N-히드록시숙신이미딜-4-아지도살리실산(NHs-AsA), N-히드록시설포숙신이미딜-4-아지도살리실산(설포-NHs-AsA), 설포숙신이미딜-(4-아지도살리실아미도)헥사노에이트(설포-NHs-LC-AsA), 설포숙신이미딜-2-(p-아지도살리실아미도)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAsD), N-히드록시숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(HsAB), N-히드록시설포숙신이미딜-4-아지도벤조에이트(설포-HsAB), N-숙신이미딜-6-(4'-아지도-2'-니트로페닐아미노)헥사노에이트(sANPAH), 설포숙신이미딜-6-(4'-아지도-2'-니트로페닐아미노)헥사노에이트(설포-sANPAH), N-5-아지도-2-니트로벤조일옥시숙신이미드(ANB-NOs), 설포숙신이미딜-2-(m-아지도)-o-니트로벤즈아미도)-에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAND), N-숙신이미딜-4(4-아지도페닐)1,3'-디티오프로피오네이트(sADP), N-설포숙신이미딜(4-아지도페닐)-1,3'-디티오프로피오네이트(설포-sADP), 설포숙신이미딜 4-(ρ-아지도페닐)부티레이트(설포-sAPB), 설포숙신이미딜 2-(7-아지도-4-메틸쿠마린-3-아세트아미드)에틸-1,3'-디티오프로피오네이트(sAED), 설포숙신이미딜 7-아지도-4-메틸쿠메인-3-아세테이트(설포-sAMCA), p-니트로페닐 디아조피루베이트(pNPDP), p-니트로페닐-2-디아조-3,3,3-트리플루오로프로피오네이트(PNP-DTP), 1-(ρ-아지도살리실아미도)-4-(요오도아세트아미도)부탄(AsIB), N-[4-(ρ-아지도살리실아미도)부틸]-3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미드(APDP), 벤조페논-4-요오도아세트아미드, p-아지도벤조일 히드라지드(ABH), 4-(ρ-아지도살리실아미도)부틸아민(AsBA), 또는 p-아지도페닐 글리옥살(APG)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 절단가능한 링커를 포함하고, 선택적으로 디펩티드 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 디펩티드 링커는 Val-Cit, Phe-Lys, Val-Ala 또는 Val-Lys을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 절단 불가능한 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 선택적으로 말레이미도카프로일(mc), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트(sMCC), 또는 설포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트(설포-sMCC)를 포함하는, 말레이미드 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 스페이서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 p-아미노벤질 알코올(PAB), p-아미노벤지옥시카르보닐(PABC), 이의 유도체 또는 유사체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합 모이어티는 IL-2 접합체의 혈청 반감기를 연장할 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가 접합 모이어티는 IL-2 접합체의 혈청 반감기를 연장할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 본원에 기재된 임의의 IL-2 형태의 단편이다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 미국 특허 출원 공개 제US 2020/0181220 A1호 및 미국 특허 출원 공개 제US 2020/0330601 A1호에 개시된 바와 같이 페길화된다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이고, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호 5에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호 5 내의 아미노산 위치와 관련하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72의 아미노산을 치환한다. 일부 실시양태에서, IL-2 폴리펩티드는 서열번호 5에 비해 하나의 잔기의 N-말단 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 IL-2R 알파 사슬 체결이 결여되어 있지만, 중간 친화도 IL-2R 베타-감마 신호전달 복합체에 대한 정상적인 결합을 유지한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호 5 내의 아미노산 위치와 관련하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72의 아미노산을 치환한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호 5에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호 5 내의 아미노산 위치와 관련하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72의 아미노산을 치환한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 접합 모이어티에 공유적으로 부착된 N6-아지도에톡시-L-리신(AzK)을 포함하는 IL-2 폴리펩티드를 포함하는 IL-2 접합체이며, 여기서 IL-2 폴리펩티드는 서열번호 5에 대해 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; AzK는 서열번호 5 내의 아미노산 위치와 관련하여 위치 K35, F42, F44, K43, E62, P65, R38, T41, E68, Y45, V69, 또는 L72의 아미노산을 치환한다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 알케르메스, 인크.(Alkermes, Inc.)로부터 이용가능한 ALKS-4230(서열번호 6)으로도 공지된 넴발류킨 알파(nemvaleukin alfa)이다. 넴발류킨 알파는 또한 펩티딜 링커(60GG61)를 통해 인간 인터루킨 2 단편(62-132)에 융합되고, 펩티딜 링커(133GSGGGS138)를 통해 인간 인터루킨 2 수용체 α-사슬 단편(139-303)에 융합되고, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생산되고, 글리코실화된 인간 인터루킨 2 단편(1-59) 변이체(Cys125>Ser51); G2 펩티드 링커(60-61)를 통해 인간 인터루킨 2(IL-2)(4-74)-펩티드(62-132) 및 GSG3S 펩티드 링커(133-138)를 통해 인간 인터루킨 2 수용체 α-사슬(IL2R 서브유닛 알파, IL2Rα, IL2RA)(1-165)-펩티드(139-303)에 융합되고, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생산되고, 글리코형 알파인 인간 인터루킨 2(IL-2)(75-133)-펩티드 [Cys125(51)>Ser]-돌연변이체(1-59)로도 알려져 있다. 넴발류킨 알파의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시되어 있다. 일부 실시양태에서, 넴발류킨 알파는 하기 해독후 변형, 즉 위치 31-116, 141-285, 184-242, 269-301, 166-197 또는 166-199, 168-199 또는 168-197(서열번호 6의 넘버링 사용)에서 이황화 가교, 및 서열번호 6의 넘버링을 사용 시, 위치 N187, N206, T212에 글리코실화 부위를 나타낸다. 넴발류킨 알파의 제조 및 특성, 뿐만 아니라 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2의 추가적인 대안적 형태는 미국 특허 출원 공개 제US 2021/0038684 A1호 및 미국 특허 제10,183,979호에 기재되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호 6에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 단백질이다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호 6에 제공된 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호 7의 아미노산 24-452, 또는 그의 변이체, 단편 또는 유도체를 포함하는 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 서열번호 7의 아미노산 24-452, 또는 그의 변이체, 단편, 또는 유도체에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 다른 IL-2 형태는 미국 특허 제10,183,979호에 기술되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 선택적으로, 일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 뮤신 도메인 폴리펩티드 링커에 의해 제2 융합 파트너에 연결된 제1 융합 파트너를 포함하는 융합 단백질이고, 여기서 제1 융합 파트너는 IL-1Rα 또는 IL-1Rα에 대해 적어도 98%의 아미노산 서열 동일성을 갖고 IL-Rα의 수용체 길항제 활성을 갖는 단백질이고, 여기서 제2 융합 파트너는 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 뮤신 도메인 폴리펩티드 링커는 서열번호 8 또는 서열번호 8에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 융합 단백질의 반감기는 뮤신 도메인 폴리펩티드 링커의 부재 하에 제2 융합 파트너에 대한 제1 융합 파트너의 융합체와 비교하여 개선된다.
<표 2>
인터루킨의 아미노산 서열.
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 본 발명에 사용하기에 적합한 IL-2 형태는 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 접목된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하는 항체 시토카인 접목된 단백질을 포함하며, 여기서 항체 시토카인 접목된 단백질은 조절 T 세포보다 T 이펙터 세포를 우선적으로 확장시킨다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 접목된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이고, 항체 시토카인 접목된 단백질은 조절 T 세포보다 T 이펙터 세포를 우선적으로 확장시킨다. 한 실시양태에서, IL-2 요법은 미국 특허 출원 공개 제US 2020/0270334 A1호에 기재된 항체의 투여를 포함하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 접목된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이고, 항체 시토카인 접목된 단백질은 조절 T 세포보다 T 이펙터 세포를 우선적으로 확장시키고, 여기서 항체는 서열번호 39를 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호 38을 포함하는 IgG 클래스 중쇄; 서열번호 37을 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호 29를 포함하는 IgG 클래스 중쇄; 서열번호 39를 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호 29를 포함하는 IgG 클래스 중쇄; 및 서열번호 37을 포함하는 IgG 클래스 경쇄 및 서열번호 38을 포함하는 IgG 클래스 중쇄로 이루어지는 군으로부터 선택되는 IgG 클래스 중쇄 및 IgG 클래스 경쇄를 추가로 포함한다.
실시양태에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VH의 HCDR1 내로 접목되고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 한 실시양태에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VH의 HCDR2 내로 접목되고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 한 실시양태에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VH의 HCDR3 내로 접목되고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 실시양태에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VL의 LCDR1 내로 접목되고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 실시양태에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VL의 LCDR2 내로 접목되고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다. 실시양태에서, IL-2 분자 또는 이의 단편은 VL의 LCDR3 내로 접목되고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이다.
IL-2 분자의 삽입은 CDR의 N-말단 영역 또는 그 근처, CDR의 중간 영역 또는 CDR의 C-말단 영역 또는 그 근처일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 CDR 내로 혼입된 IL-2 분자를 포함하고, 여기서 IL2 서열은 CDR 서열을 프레임이동시키지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 CDR 내로 혼입된 IL-2 분자를 포함하며, 여기서 IL-2 서열은 CDR 서열의 전부 또는 일부를 교체한다. IL-2 분자에 의한 교체는 CDR의 N-말단 영역, CDR의 중간 영역 또는 CDR의 C-말단 영역 또는 그 근처일 수 있다. IL-2 분자에 의한 교체는 CDR 서열의 1개 또는 2개 아미노산 만큼 적거나 전체 CDR 서열일 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-2 분자는 펩티드 링커 없이 CDR에 직접 접목되고, CDR 서열과 IL-2 서열 사이에 추가 아미노산이 없다. 일부 실시양태에서, IL-2 분자는 CDR 서열과 IL-2 서열 사이에 하나 이상의 추가 아미노산이 있는 펩티드 링커를 사용하여 CDR에 간접적으로 접목된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-2 분자는 IL-2 뮤테인이다. 일부 경우에, IL-2 뮤테인은 R67A 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-2 뮤테인은 서열번호 14 또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-2 뮤테인은 미국 특허 출원 공개 제US 2020/0270334 A1호의 표 1에 있는 아미노산 서열을 포함하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 16, 서열번호 19, 서열번호 22 및 서열번호 25로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR1을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 7, 서열번호 10, 서열번호 13 및 서열번호 16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR1을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 17, 서열번호 20, 서열번호 23, 및 서열번호 26으로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR2로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR1을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 18, 서열번호 21, 서열번호 24, 및 서열번호 27로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR3을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 미국 특허 출원 공개 제2020/0270334 A1호의 IgG.IL2F71A.H1 또는 IgG.IL2R67A.H1, 또는 그의 변이체, 유도체 또는 단편, 또는 그의 보존적 아미노산 치환, 또는 그에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 단백질을 포함한다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 시토카인 접목된 단백질의 항체 성분은 팔리비주맙의 면역글로불린 서열, 프레임워크 서열, 또는 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 시토카인 접목된 단백질은 야생형 IL-2 분자, 예컨대 비제한적으로 알데스류킨 또는 비교가능한 분자보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 시토카인 접목된 단백질은 표 3에 제시된 서열을 갖는다.
<표 3>
예시적인 팔리비주맙 항체-IL-2 접목된 단백질의 서열.
Figure pct00003
Figure pct00004
용어 "IL-4"(본원에서 "IL4"로도 지칭됨)는 Th2 T 세포에 의해, 그리고 호산구, 호염기구, 및 비만 세포에 의해 생산되는 인터루킨 4로 공지된 시토카인을 지칭한다. IL-4는 나이브 헬퍼 T 세포(Th0 세포)의 Th2 T 세포로의 분화를 조절한다. Steinke and Borish, Respir. Res. 2001, 2, 66-70. IL-4에 의한 활성화 시, Th2 T 세포는 양성 피드백 루프에서 추가 IL-4를 후속적으로 생산한다. IL-4는 또한 B 세포 증식 및 클래스 II MHC 발현을 자극하며, B 세포로부터 IgE 및 IgG1 발현으로의 클래스 스위칭을 유도한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4는 미국 뉴저지주 이스트 브룬스위크에 소재하는 프로스펙-타니 테크노진 리미티드 (카탈로그 번호 CYT-211) 및 미국 매사추세츠주 월텀에 소재하는 써모피셔 사이언티픽, 인크. (ThermoFisher Scientific, Inc.) (인간 IL-15 재조합 단백질, 카탈로그 번호 지브코 (Gibco) CTP0043)를 비롯한 다수의 공급자로부터 시판된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4의 아미노산 서열은 표 2(서열번호 9)에 주어진다.
용어 "IL-4" (본원에서 "IL4"로도 지칭됨)는 Th2 T 세포에 의해, 그리고 호산구, 호염기구, 및 비만 세포에 의해 생산되는 인터루킨 4로 공지된 시토카인을 지칭한다. IL-4는 나이브 헬퍼 T 세포 (Th0 세포)의 Th2 T 세포로의 분화를 조절한다. Steinke and Borish, Respir. Res. 2001, 2, 66-70. IL-4에 의한 활성화 시, Th2 T 세포는 양성 피드백 루프에서 추가 IL-4를 후속적으로 생산한다. IL-4는 또한 B 세포 증식 및 클래스 II MHC 발현을 자극하며, B 세포로부터 IgE 및 IgG1 발현으로의 클래스 스위칭을 유도한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4는 미국 뉴저지주 이스트 브룬스위크에 소재하는 프로스펙-타니 테크노진 리미티드 (카탈로그 번호 CYT-211) 및 미국 매사추세츠주 월텀에 소재하는 써모피셔 사이언티픽, 인크. (ThermoFisher Scientific, Inc.) (인간 IL-15 재조합 단백질, 카탈로그 번호 지브코 (Gibco) CTP0043)를 비롯한 다수의 공급자로부터 시판된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-4의 아미노산 서열은 표 2(서열번호 5)에 주어진다.
용어 "IL-7"(본원에서 "IL7"로도 지칭됨)은 기질 및 상피 세포로부터, 뿐만 아니라 수지상 세포로부터 수득될 수 있는 인터루킨 7로 공지된 글리코실화된 조직-유래된 시토카인을 지칭한다. Fry and Mackall, Blood 2002, 99, 3892-904. IL-7은 T 세포의 발달을 자극할 수 있다. IL-7은 IL-7 수용체 알파 및 공통 감마 쇄 수용체로 이루어진 이종이량체인 IL-7 수용체에 결합하며, 이는 흉선 내에서의 T 세포 발달 및 말초부 내에서의 생존에 중요한 일련의 신호이다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-7은 미국 뉴저지주 이스트 브룬스위크에 소재하는 프로스펙-타니 테크노진 리미티드 (카탈로그 번호 CYT-254) 및 미국 매사추세츠주 월텀에 소재하는 써모피셔 사이언티픽, 인크.(인간 IL-15 재조합 단백질, 카탈로그 번호 지브코 PHC0071)를 비롯한 다수의 공급자로부터 시판된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-7의 아미노산 서열은 표 2(서열번호 6)에 주어진다.
용어 "IL-15" (본원에서 "IL15"로도 지칭됨)은 인터루킨-15로 공지된 T 세포 성장 인자를 지칭하며, 인간 및 포유동물 형태, 그의 보존적 아미노산 치환, 글리코형, 바이오시밀러, 및 변이체를 비롯한 IL-2의 모든 형태를 포함한다. IL-15는 예를 들어, 문헌 [Fehniger and Caligiuri, Blood 2001, 97, 14-32]에 기재되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. IL-15는 IL-2와 β 및 γ 신호전달 수용체 서브유닛을 공유한다. 재조합 인간 IL-15는 12.8 kDa의 분자 질량을 갖는 114개의 아미노산(및 N-말단 메티오닌)을 함유하는 단일, 비-글리코실화된 폴리펩티드 쇄이다. 재조합 인간 IL-15는 미국 뉴저지주 이스트 브룬스위크에 소재하는 프로스펙-타니 테크노진 리미티드(카탈로그 번호 CYT-230-b) 및 미국 매사추세츠주 월텀에 소재하는 써모피셔 사이언티픽, 인크.(인간 IL-15 재조합 단백질, 카탈로그 번호 34-8159-82)를 비롯한 다수의 공급자로부터 시판된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-15의 아미노산 서열은 표 2(서열번호 7)에 주어진다.
용어 "IL-21"(본원에서 "IL21"로도 지칭됨)은 인터루킨-21로 공지된 다면발현성 시토카인 단백질을 지칭하며, 인간 및 포유동물 형태, 그의 보존적 아미노산 치환, 글리코형, 바이오시밀러, 및 변이체를 비롯한 IL-21의 모든 형태를 포함한다. IL-21은 예를 들어, 문헌[Spolski and Leonard, Nat. Rev. Drug. Disc. 2014, 13, 379-95]에 기재되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. IL-21은 자연 살해 T 세포 및 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 의해 주로 생산된다. 재조합 인간 IL-21은 15.4 kDa의 분자 질량을 갖는 132개의 아미노산을 함유하는 단일, 비-글리코실화된 폴리펩티드 쇄이다. 재조합 인간 IL-21은 미국 뉴저지주 이스트 브룬스위크에 소재하는 프로스펙-타니 테크노진 리미티드(카탈로그 번호 CYT-408-b) 및 미국 매사추세츠주 월텀에 소재하는 써모피셔 사이언티픽, 인크. (인간 IL-21 재조합 단백질, 카탈로그 번호 14-8219-80)를 비롯한 다수의 공급자로부터 시판된다. 본 발명에 사용하기에 적합한 재조합 인간 IL-21의 아미노산 서열은 표 2 (서열번호 8)에 주어진다.
"항-종양 유효량", "종양-저해 유효량", 또는 "치료량"이 표시되는 경우, 투여되는 본 발명의 조성물의 정확한 양은 환자 (대상체)의 연령, 중량, 종양 크기, 감염 또는 전이의 정도, 및 상태에 있어서의 개별적 차이를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로 본원에 기재된 종양 침윤 림프구(예를 들어, 2차 TIL 또는 유전적으로 변형된 세포독성 림프구)를 포함하는 제약 조성물은 104 내지 1011개의 세포/kg 체중(예를 들어, 105 내지 106, 105 내지 1010, 105 내지 1011, 106 내지 1010, 106 내지 1011,107 내지 1011, 107 내지 1010, 108 내지 1011, 108 내지 1010, 109 내지 1011, 또는 109 내지 1010개의 세포/kg 체중)의 투여량으로 투여될 수 있으며, 그들 범위 내의 모든 정수 값을 포함하는 것으로 언급될 수 있다. 종양 침윤 림프구(일부의 경우, 유전적으로 변형된 세포독성 림프구를 포함함) 조성물은 또한 이들 투여량으로 다수회 투여될 수 있다. 종양 침윤 림프구 (일부의 경우, 유전적으로 변형된 세포독성 림프구를 포함함)는 면역요법에서 통상적으로 공지된 주입 기법을 사용함으로써 투여될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319: 1676, 1988] 참조). 특정 환자에 대한 최적 투여량 및 치료 처방은 환자를 질환의 징후에 대해 모니터링하고, 그에 따라 치료를 조정함으로써 의학의 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
용어 "혈액학적 악성종양", "혈액학 악성종양" 또는 상관성이 있는 의미의 용어는 혈액, 골수, 림프절, 및 림프계의 조직을 포함하나 이에 제한되지는 않는 조혈 및 림프 조직의 포유동물 암 및 종양을 지칭한다. 혈액학적 악성종양은 또한 "액체 종양"으로 지칭된다. 혈액학적 악성종양으로는 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 림프종(CLL), 소 림프구성 림프종(SLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 단핵구성 백혈병(AMoL), 호지킨 림프종, 및 비-호지킨 림프종을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 용어 "B 세포 혈액학적 악성종양"은 B 세포에 영향을 미치는 혈액학적 악성종양을 지칭한다.
용어 "고형 종양"은 통상적으로 낭종 또는 액상 영역을 함유하지 않는 조직의 비정상적 덩어리를 지칭한다. 고형 종양은 양성 또는 악성일 수 있다. 용어 "고형 종양 암"은 악성, 신생물성, 또는 암성 고형 종양을 지칭한다. 고형 종양 암으로는 육종, 암종, 및 림프종, 예컨대, 폐, 유방, 전립선, 결장, 직장, 및 방광의 암을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 고형 종양의 조직 구조는 실질(암 세포) 및 암 세포가 분산되고, 지지 미세환경을 제공할 수 있는 지지 기질 세포를 포함하는 상호의존적 조직 구획을 포함한다.
용어 "액체 종양"은 자연에서 유체인 세포의 비정상적 덩어리를 지칭한다. 액체 종양 암으로는 백혈병, 골수종, 및 림프종, 뿐만 아니라 다른 혈액학적 악성종양을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 액체 종양으로부터 수득되는 TIL은 또한 본원에서 골수 침윤 림프구(MIL)로 지칭될 수 있다. 말초 혈액에서 순환하는 액체 종양을 비롯한 액체 종양으로부터 수득되는 TIL은 또한 본원에서 PBL로도 지칭될 수 있다. 용어 MIL, TIL, 및 PBL은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 세포가 유래되는 조직 유형에 기초하는 것만이 상이하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "미세환경"은 전체로서의 고형 또는 혈액학적 종양 미세환경 또는 미세환경 내의 세포의 개별적 하위세트를 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 종양 미세환경은 문헌[Swartz, et al., Cancer Res., 2012, 72, 2473]에 기재된 바와 같이, "신생물성 변형을 촉진시키고, 종양 성장 및 침습을 지지하고, 숙주 면역으로부터 종양을 보호하고, 치료 내성을 조성하고, 우세한 전이가 번성하는 니치(niche)를 제공하는 세포, 가용성 인자, 신호전달 분자, 세포외 매트릭스, 및 기계적 신호"의 복합 혼합물을 지칭한다. 종양은 T 세포에 의해 인식되어야 하는 항원을 발현하지만, 면역계에 의한 종양 청소는 미세환경에 의한 면역 억제 때문에 드물다.
본원에 사용된 용어 "동적으로 일정관리" 또는 "동적 일정관리"는 하나 이상의 후속 이벤트의 성과 또는 결과에 기초하여 일어나는 이벤트에 대해 유연성 있는 일정을 생성하는 것을 지칭할 수 있다. 환자 치료 이벤트와 같이 이벤트에 대한 일정관리 날짜는 일정관리 날짜를 일정관리한 후, 이벤트 전에 수행되는 하나 이상의 제조 단계의 성과 또는 결과에 기초하여 동적으로 변경될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 환자가 본 발명에 따른 TIL의 주입 전에 비-골수절제 화학요법으로 사전-치료되는, TIL의 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자가 본 발명에 따른 TIL의 주입 전에 비-골수절제 화학요법으로 사전-치료되는 TIL의 집단이 제공될 수 있다. 한 실시양태에서, 비-골수절제 화학요법은 2일 동안(TIL 주입 전 제27일 및 제26일) 시클로포스파미드 60 mg/kg/일 및 5일 동안 (TIL 주입 전 제27일 내지 제23일) 플루다라빈 25 mg/m2/일이다. 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 비-골수절제 화학요법 및 TIL 주입(제0일에) 후에, 환자는 생리학적 허용시까지 8시간마다 720,000 IU/kg으로 정맥내로 IL-2의 정맥내 주입을 받는다.
실험적 발견은 종양-특이적 T 림프구의 입양 전달 전의 림프구제거가 조절성 T 세포를 제거하고, 면역계의 요소 ("시토카인 싱크")를 경쟁시킴으로써 치료 효능을 향상시키는 데 있어서 핵심적 역할을 함을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 일부 실시양태는 본 발명의 rTIL의 도입 전에 환자에 대한 림프구제거 단계(때때로 "면역억제 컨디셔닝"으로도 지칭됨)를 활용한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "공동-투여", "공동-투여하는", "와 조합으로 투여되는", "와 조합으로 투여하는", "동시", 및 "공동"은 활성 제약 성분 및/또는 그들의 대사물 둘 모두가 동시에 대상체에 존재하도록, 2종 이상의 활성 제약 성분 (본 발명의 바람직한 실시양태에서, 예를 들어, 복수의 TIL과 조합으로 적어도 1종의 칼륨 채널 작동제)의 투여를 포괄한다. 공동-투여는 별개의 조성물에서의 동시 투여, 별개의 조성물에서의 상이한 시간에서의 투여, 또는 2종 이상의 활성 제약 성분이 존재하는 조성물에서의 투여를 포함한다. 별개의 조성물에서의 동시 투여 및 작용제 둘 모두가 존재하는 조성물에서의 투여가 바람직하다.
용어 "유효량" 또는 "치료적 유효 투여량"은 질환 치료를 포함하나 이에 제한되지는 않는 의도된 적용을 실행하는 데 충분한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 화합물의 조합의 양을 지칭한다. 치료적 유효 투여량은 의도된 적용(시험관내 또는 생체내), 또는 치료되는 대상체 및 질환 상태(예를 들어, 대상체의 체중, 연령 및 성별), 질환 상태의 중증도, 또는 투여의 방식에 따라 다양할 수 있다. 상기 용어는 또한 표적 세포에서의 특정 반응(예를 들어, 혈소판 부착 및/또는 세포 이동의 감소)을 유도할 용량에도 적용된다. 구체적인 용량은 선택된 특정 화합물, 이어지는 투여 요법, 화합물이 다른 화합물과 조합으로 투여되는지 여부, 투여의 시기, 그것이 투여되는 조직, 및 화합물이 운반되는 물리적 전달 시스템에 따라 다양할 것이다.
용어 "치료", "치료하는", "치료하다" 등은 바람직한 약리학적 및/또는 생리적 효과를 수득하는 것을 지칭한다. 효과는 질환 또는 그의 증상을 완전하게 또는 부분적으로 예방하는 관점에서 예방적일 수 있고/거나, 질환 및/또는 질환에 기인하는 유해 효과에 대한 부분적 또는 완전한 치유의 관점에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "치료"는 포유동물에서, 특히 인간에서 질환의 임의의 치료를 커버하며, (a) 질환에 걸릴 성향이 있을 수 있지만, 그 질환을 갖는 것으로 아직 진단되지 않은 대상체에서 질환이 발생하는 것을 방지하는 것; (b) 질환을 저해하는 것, 즉, 그의 발달 또는 진행을 저지하는 것; 및 (c) 질환을 완화시키는 것, 즉, 질환의 퇴행을 유발하고/거나, 1종 이상의 질환 증상을 완화시키는 것을 포함한다. "치료"는 또한 심지어 질환 또는 상태의 부재 하에서도, 약리학적 효과를 제공하기 위한 작동제의 전달을 포괄하는 것을 의미한다. 예를 들어, "치료"는 백신의 경우와 같이, 질환 상태의 부재 하에 면역 반응을 유발하거나, 면역성을 부여할 수 있는 조성물의 전달을 포괄한다.
핵산 또는 단백질의 부분에 관하여 사용되는 경우 용어 "이종"은 핵산 또는 단백질이 자연에서 서로에 대해 동일한 관계에서 발견되지 않는 2개 이상의 하위서열을 포함하는 것을 나타낸다. 예를 들어, 핵산은 전형적으로 재조합적으로 생성되어 새로운 기능적 핵산을 제조하기 위해 배열된 비관련된 유전자로부터의 2개 이상의 서열, 예를 들어, 하나의 공급원으로부터의 프로모터 및 또 다른 공급원으로부터의 암호 영역, 또는 여러 공급원으로부터의 암호 영역을 갖는다. 유사하게, 이종 단백질은 자연에서 서로에 대해 동일한 관계에서 발견되지 않는 2개 이상의 하위서열을 포함하는 단백질(예를 들어, 융합 단백질)을 나타낸다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드의 맥락에서 용어 "서열 동일성", "퍼센트 동일성", 및 "서열 퍼센트 동일성" (또는 그의 동의어, 예를 들어, "99% 동일한")이란 용어는 임의의 보존적 아미노산 치환을 서열 동일성의 일부로서 고려함이 없이, 최대 상응성으로 비교되고 정렬된 경우(필요에 따라, 갭을 도입함), 동일한 것이거나 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 퍼센트 동일성은 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리듬을 사용하여 또는 육안 검사에 의해 측정될 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 정렬을 수득하기 위해 사용될 수 있는 다양한 알고리듬 및 소프트웨어는 본 기술분야에 공지되어 있다. 퍼센트 서열 동일성을 결정하는 데 적합한 프로그램으로는 예를 들어 미국 정부의 국립 생명공학 정보 센터 (National Center for Biotechnology Information) BLAST 웹 사이트로부터 이용가능한 BLAST 프로그램의 조를 들 수 있다. 2개의 서열 사이의 비교는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리듬 중 어느 하나를 사용하여 수행될 수 있다. BLASTN은 핵산 서열을 비교하는 데 사용되는 반면, BLASTP는 아미노산 서열을 비교하는 데 사용된다. ALIGN, ALIGN-2(제넨테크 (Genentech), 미국 캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코) 또는 DNASTAR로부터 이용가능한 멕얼라인(MegAlign)은 서열을 정렬하는 데 사용될 수 있는 추가의 공개적으로 이용가능한 소프트웨어 프로그램이다. 본 기술분야의 통상의 기술자는 특정 정렬 소프트웨어에 의해 최대 정렬을 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 정렬 소프트웨어의 디폴트 매개변수가 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "변이체"는 참조 항체, 단백질 또는 융합 단백질의 아미노산 서열 내의 또는 그에 인접한 특정 위치에 1개 이상의 치환, 결실 및/또는 부가에 의해 참조 단백질, 항체 또는 융합 단백질의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하는 단백질, 항체 또는 융합 단백질을 포괄하나, 이에 제한되지는 않는다. 변이체는 참조 항체의 아미노산 서열에 비해 그의 아미노산 서열에 1개 이상의 보존적 치환을 포함할 수 있다. 보존적 치환은, 예를 들어, 유사하게 하전되거나 비하전된 아미노산의 치환을 수반할 수 있다. 변이체는 참조 항체, 단백질 또는 융합 단백질의 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한다. 용어 변이체는 또한 페길화된 항체 또는 단백질을 포함한다.
본원에서 "종양 침윤 림프구" 또는 "TIL"이란 대상체의 혈류를 떠났고, 종양 내로 이동한 백혈구로서 원래 수득된 세포의 집단을 의미한다. TIL은 CD8+ 세포독성 T 세포(림프구), Th1 및 Th17 CD4+ T 세포, 자연 살해 세포, 수지상 세포 및 M1 대식세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. TIL은 1차 및 2차 TIL 둘 다를 포함한다. "1차 TIL"은 본원에 개요된 바와 같이 환자 조직 샘플로부터 수득된(때때로 "신선하게 수득된" 또는 "신선하게 단리된"으로 지칭됨) 것이고, "2차 TIL"은 본원에서 논의된 바와 같은 벌크한 TIL 및 확장된 TIL("REP TIL") 뿐만 아니라 "재REP TIL"을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 본원에서 논의된 바와 같이 확장되거나 증식된 임의의 TIL 세포 집단이다. 재REP TIL은 예를 들어 2차 확장 TIL 또는 제2 추가의 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, 재REP TIL로 지칭되는 TIL을 비롯한, 도 2a 및/또는 도 9의 단계 D에 기재된 것)을 포함할 수 있다.
TIL은 일반적으로 세포 표면 마커를 사용하여 생화학적으로, 또는 종양을 침윤시키고, 치료를 실행하는 그들의 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다. TIL은 일반적으로 하기 바이오마커 중 1종 이상을 발현함으로써 범주화될 수 있다: CD4, CD8, TCR αβ, CD27, CD28, CD56, CCR7, CD45Ra, CD95, PD-1, 및 CD25. 추가적으로, 및 대안적으로, TIL은 환자 내로 재도입 시 고형 종양을 침윤시키는 그들의 능력에 의해 기능적으로 정의될 수 있다. TIL은 효력에 의해 추가로 특징규명될 수 있다 - 예를 들어, TIL은 예를 들어, 인터페론 (IFN) 방출이 약 50 pg/mL 초과, 약 100 pg/mL 초과, 약 150 pg/mL 초과, 또는 약 200 pg/mL 초과인 경우 강력한 것으로 간주될 수 있다. TIL은 예를 들어, 인터페론(IFNγ) 방출이 약 50 pg/mL 초과, 약 100 pg/mL 초과, 약 150 pg/mL 초과, 또는 약 200 pg/mL 초과, 약 300 pg/mL 초과, 약 400 pg/mL 초과, 약 500 pg/mL 초과, 약 600 pg/mL 초과, 약 700 pg/mL 초과, 약 800 pg/mL 초과, 약 900 pg/mL 초과, 약 1000 pg/mL 초과인 경우, 강력한 것으로 간주될 수 있다.
용어 "제약학적으로 허용되는 담체" 또는 "제약학적으로 허용되는 부형제"는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성제 및 흡수 지연제, 및 불활성 성분을 포함하는 것으로 의도된다. 활성 제약 성분을 위한 이러한 제약학적으로 허용되는 담체 또는 제약학적으로 허용되는 부형제의 사용은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 제약학적으로 허용되는 담체 또는 제약학적으로 허용되는 부형제가 활성 제약 성분과 비혼화성인 한을 제외하고는, 본 발명의 치료 조성물에서의 그의 사용은 고려된다. 추가의 활성 제약 성분, 예컨대 다른 약물은 또한 기재된 조성물 및 방법 내로 혼입될 수 있다.
용어 "약" 및 "대략"은 값의 통계적으로 유의미한 범위 내를 의미한다. 이러한 범위는 주어진 값 또는 범위의 크기 자릿수 내, 바람직하게는 50% 내, 보다 바람직하게는 20% 내, 보다 바람직하게는 여전히 10% 내, 보다 더 바람직하게는 5% 내일 수 있다. 용어 "약" 또는 "대략"에 의해 포괄되는 허용가능한 변이는 연구 하의 특정 계에 의존하며, 본 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 이해될 수 있다. 더욱이, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "약" 및 "대략"은 치수, 크기, 제형, 매개변수, 형상 및 다른 양 및 특징이 정확하지 않고, 정확할 필요가 없지만, 바람직한 경우, 내성, 이행 인자, 라운딩 오프, 측정 오차 등, 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 인자를 반영하는 대략적일 수 있고, 및/또는 더 크거나 더 작을 수 있음을 의미한다. 일반적으로, 치수, 크기, 제형, 매개변수, 형상 또는 다른 양 또는 특징은 명백하게 이렇게 언급되든지 그렇지 않은 "약" 또는 "대략"이다. 매우 상이한 크기, 형상 및 치수의 실시양태는 기재된 배열을 채용할 수 있음이 주목된다.
원래 및 보정된 형태로 첨부된 청구범위에 사용되는 경우 전이적 용어 "포함하는", "로 본질적으로 이루어진" 및 "로 이루어진"은 존재하는 경우, 비인용된 추가의 청구항 요소 또는 단계가 청구항(들)의 범위로부터 배제되는 것에 관하여 청구항 범위를 한정한다. 용어 "포함하는"은 포함적 또는 개방-말단인 것으로 의도되며, 임의의 추가의, 비인용된 요소, 방법, 단계 또는 물질을 배제하지 않는다. 용어 "로 이루어진"은 청구항에 명시된 것들 외의 임의의 요소, 단계 또는 물질, 및 후자의 예에서 명시된 물질(들)과 연관된 통상적인 불순물을 배제한다. 용어 "로 본질적으로 이루어진"은 청구항의 범위를 명시된 요소, 단계 또는 물질(들) 및 청구된 발명의 기본적이고 신규한 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들로 제한한다. 본 발명을 구현하는 본원에 기재된 모든 조성물, 방법, 및 키트는 대안적인 실시양태에서 전이적 용어 "포함하는", "로 본질적으로 이루어진", 및 "로 이루어진" 중 임의의 것에 의해 보다 구체적으로 정의될 수 있다.
II. TIL 제조 프로세스(GEN3 프로세스의 실시양태)
임의의 특정 이론에 제한되지 않고, 본 발명의 방법에 기재된 바와 같이 T-세포의 활성화를 프라이밍하는 프라이밍 1차 확장에 이어 T-세포의 활성화를 부스팅하는 급속 2차 확장은 "더 젊은" 표현형을 보유하는 확장된 T-세포의 제조를 허용하고, 이와 같이 본 발명의 확장된 T-세포는 다른 방법에 의해 확장된 T-세포보다 암세포에 대해 더 큰 세포독성을 나타낼 것으로 예상된다고 여겨진다. 특히, 본 발명의 방법에 의해 교시된 바와 같이, 항-CD3 항체(예를 들어, OKT-3), IL-2 및 선택적으로 항원 제시 세포(APC)에 대한 노출에 의해 프라이밍되고, 그 다음 추가 항-CD-3 항체(예를 들어, OKT-3), IL-2 및 APC에 대한 후속 노출에 의해 부스팅되는 T-세포의 활성화는 배양물에서 T 세포의 성숙을 제한하거나 피하여, 덜 성숙한 표현형을 갖는 T 세포 집단을 산출하고, 여기서 T 세포는 배양물에서 확장에 의해 덜 고갈되고 암 세포에 대해 더 큰 세포독성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 급속 2차 확장 단계는 (a) 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서 소규모 배양으로 T-세포를 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 2차 확장을 수행하는 단계, 그 다음 (b) 소규모 배양물의 T-세포를 제1 용기보다 큰 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기로의 이동을 수행하고, 소규모 배양물의 T 세포를 제2 용기에서 더 큰 규모의 배양물로 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양하는 단계에 의해, 배양물의 스케일링업(scaling up)을 달성하는 복수의 단계로 분할된다. 일부 실시양태에서, 급속 확장 단계는 (a) 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서 제1 소규모 배양으로 T-세포를 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 2차 확장을 수행하는 단계, 및 그 다음 (b) 제1 소규모 배양물로부터의 T-세포를 제1 용기와 크기가 동일한 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기 내로 및 용기 중으로 이동을 수행하고 배분하는 단계로서, 이때 각 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 이동된 제1 소규모 배양물로부터의 T 세포의 일부는 제2 소규모 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양되는 것인 단계에 의해 배양물의 스케일링 아웃(scaling out)을 달성하도록 복수의 단계로 분할된다. 일부 실시양태에서, 급속 확장 단계는 (a) 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서 소규모 배양으로 T-세포를 약 3 내지 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 2차 확장을 수행하는 단계, 및 그 다음 (b) 소규모 배양으로부터의 T-세포를 제1 용기보다 크기가 큰 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 내로 및 용기 중으로 이동을 수행하고 배분하는 단계로서, 이때 각 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 이동된 소규모 배양물로부터의 T 세포의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 4 내지 7일의 기간 동안 배양되는 것인 단계에 의해 배양물의 스케일링 아웃 및 스케일링업을 달성하도록 복수의 단계로 분할된다. 일부 실시양태에서, 급속 확장 단계는 (a) 제1 용기, 예를 들어, G-REX 100MCS 용기에서 소규모 배양물로 T-세포를 약 4일의 기간 동안 배양함으로써 급속 2차 확장을 수행하는 단계, 및 그 다음 (b) 소규모 배양물로부터의 T-세포를 제1 용기보다 크기가 큰 2, 3, 또는 4개의 제2 용기, 예를 들어, G-REX 500MCS 용기 내로 및 용기 중으로 이동을 수행하고 배분하는 단계로서, 이때 각 제2 용기에서 이러한 제2 용기로 이동된 소규모 배양물로부터의 T 세포의 일부는 더 큰 규모의 배양물에서 약 5일의 기간 동안 배양되는 것인 단계에 의해 배양물의 스케일링 아웃 및 스케일링업을 달성하도록 복수의 단계로 분할된다.
이들 특징의 일부를 함유하는 프로세스 3(본원에서 GEN3으로도 지칭됨)으로 공지된 예시적인 TIL 프로세스는 도 2a 및 2c 및/또는 도 9에 도시되며, 프로세스 2A를 능가하는 본 개시내용의 이 실시양태의 일부 이점은 도 2b에 기재된다. 프로세스 3의 2가지 실시양태는 도 2c에 도시하였다. 프로세스 2A 또는 Gen 2는 또한 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 제2018/.0280436호에 기재되어 있다. 프로세스 3 또는 Gen 3은 전체가 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 제PCT/US2019/059718호 뿐만 아니라, 본 출원에 제공된 바와 같은 도면, 및 도 5, 6, 8, 9, 10, 및 11에도 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 급속 2차 확장은 프라이밍 1차 확장에 의해 수행된 T 세포의 활성화가 감소하거나, 약화되거나, 퇴화하거나 또는 감퇴하기 시작한 후에 수행된다.
일부 실시양태에서, 급속 2차 확장은 프라이밍 1차 확장에 의해 수행되는 T 세포의 활성화가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39,40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100%만큼, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100%만큼 감소된 후에 수행된다.
일부 실시양태에서, 급속 2차 확장은 프라이밍 1차 확장에 의해 수행된 T-세포의 활성화가 1% 내지 100%, 또는 약 1% 내지 100% 범위의 백분율만큼 감소한 후에 수행된다.
일부 실시양태에서, 급속 2차 확장은 프라이밍 1차 확장에 의해 수행된 T-세포의 활성화가 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90%, 또는 90% 내지 100% 범위 또는 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90%, 또는 90% 내지 100% 범위의 백분율만큼 감소한 후에 수행된다.
일부 실시양태에서, 급속 2차 확장은 프라이밍 1차 확장에 의해 수행된 T-세포의 활성화가 적어도 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 만큼 감소한 후에 수행된다.
일부 실시양태에서, 급속 2차 확장은 프라이밍 1차 확장에 의해 수행된 T-세포의 활성화가 최대 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 만큼 감소한 후에 수행된다.
일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장에 의해 수행되는 T-세포 활성화의 감소는 항원에 의한 자극에 반응하여 T-세포에 의해 방출되는 인터페론 감마의 양의 감소에 의해 결정된다. 인터페론 감마의 초기 또는 대조군 수준과 비교하여 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 및/또는 75%의 T-세포에 의해 방출된 인터페론 감마 양의 감소는 T-세포 활성화의 감소를 나타낸다. T-세포에 의해 방출된 인터페론 감마 양의 200 pg/mL 미만, 250 pg/mL 미만, 300 pg/mL 미만, 350 pg/mL 미만, 400 pg/mL 미만, 450 pg/mL 미만, 500 pg/mL 미만, 550 pg/mL 미만, 600 pg/mL 미만, 650 pg/mL 미만, 700 pg/mL 미만, 750 pg/mL 미만, 800 pg/mL 미만, 850 pg/mL 미만, 900 pg/mL 미만, 950 pg/mL 미만 또는 1000 pg/mL 미만으로의 감소는 T-세포 활성화의 감소를 나타낸다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 최대, 또는 약 7일 또는 약 8일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 최대, 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일 또는 8일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 또는 8일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 급속 2차 확장은 최대, 또는 약 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 급속 2차 확장은 최대, 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 급속 2차 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 1일 내지 7일, 또는 약 1일 내지 약 7일의 기간 동안 수행되고 T-세포의 급속 2차 확장은 1일 내지 11일 또는 약 1일 내지 약 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T 세포의 프라이밍 1차 확장은 최대 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일 또는 8일의 기간 동안 수행되고, T-세포의 급속 2차 확장은 최대, 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일 또는 11일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 1일 또는 약 1일 내지 8일 또는 약 8일의 기간 동안 수행되고 T-세포의 급속 2차 확장은 1일 또는 약 1일내지 9일 또는 약 9일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 8일의 기간 동안 수행되고 T-세포의 급속 2차 확장은 9일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T 세포의 프라이밍 1차 확장은 1일 또는 약 1일 내지 7일 또는 약 7일의 기간 동안 수행되고 T 세포의 급속 2차 확장은 1일 또는 약 1일 내지 9일 또는 약 9일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포의 프라이밍 1차 확장은 7일의 기간 동안 수행되고 T-세포의 급속 2차 확장은 9일의 기간 동안 수행된다.
일부 실시양태에서, T-세포는 종양 침윤 림프구(TIL)이다.
일부 실시양태에서, T-세포는 골수 침윤 림프구(MIL)이다.
일부 실시양태에서, T-세포는 말초 혈액 림프구(PBL)이다.
일부 실시양태에서, T-세포는 암을 앓고 있는 공여자로부터 수득된다.
일부 실시양태에서, T-세포는 암을 앓고 있는 환자로부터 절제된 종양으로부터 수득된 TIL이다.
일부 실시양태에서, T-세포는 혈액 악성종양을 앓고 있는 환자의 골수로부터 수득된 MIL이다.
일부 실시양태에서, T-세포는 공여자로부터의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 수득된 PBL이다. 일부 실시양태에서, 공여자는 암을 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 결장직장암, 자궁경부암, 비소세포폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 공여자는 종양을 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 종양은 액체 종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 공여자는 혈액 악성종양을 앓고 있다.
본 개시내용의 특정 측면에서, 면역 이펙터 세포, 예를 들어, T-세포는 FICOLL 분리와 같은 본 기술분야의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다. 하나의 바람직한 측면에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 성분채집에 의해 수득된다. 성분채집 생성물은 전형적으로 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 포함한 림프구를 함유한다. 한 측면에서, 성분채집에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하고, 선택적으로 세포를 후속 처리 단계에 적절한 완충액 또는 배지에 배치하기 위해 세척될 수 있다. 한 실시양태에서, 세포는 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척된다. 대안적인 실시양태에서, 세척 용액에는 칼슘이 결여되고 마그네슘이 결여될 수 있거나, 또는 모두는 아니지만 많은 2가 양이온이 결여될 수 있다. 한 측면에서, T-세포는 적혈구를 용해하고 단핵구를 제거함으로써, 예를 들어 PERCOLL 구배를 통한 원심분리 또는 역류 원심분리성 세정에 의해 말초 혈액 림프구로부터 단리된다.
일부 실시양태에서, T-세포는 전체 혈액 또는 공여자의 림프구에 대해 농축된 성분채집 생성물로부터 분리된 PBL이다. 일부 실시양태에서, 공여자는 암을 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 난소암, 자궁내막암, 갑상선암, 결장직장암, 자궁경부암, 비소세포폐암종(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비소세포 폐암종(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인간 유두종 바이러스에 의해 유발된 암, 두경부암(두경부 편평 세포 암종(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장암 및 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 공여자는 종양을 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 종양은 액체 종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 공여자는 혈액 악성종양을 앓고 있다. 일부 실시양태에서, PBL은 양성 또는 음성 선택 방법을 사용하여, 즉 T-세포 표현형에 대한 마커(들), 예를 들어 CD3+ CD45+를 사용하여 PBL을 제거하거나, 또는 비-T 세포 표현형 세포를 제거하고 PBL을 잔류시킴으로써 림프구가 농축된 성분채집 생성물 또는 전체 혈액으로부터 단리된다. 다른 실시양태에서, PBL은 구배 원심분리에 의해 단리된다. 공여자 조직으로부터 PBL의 분리 시, PBL의 프라이밍 1차 확장은 본원에 기재된 임의의 방법의 프라이밍 1차 확장에 따라 프라이밍 1차 확장 배양물에 단리된 PBL의 적합한 수(일부 실시양태에서, 대략 1x107 PBL)를 파종함으로써 개시될 수 있다.
본원에서 논의되고 일반적으로 개략된 바와 같이, TIL은 환자 샘플에서 취해지며, 본원에 기재된 TIL 확장 프로세스를 사용하여 환자에게 이식하기 전에 TIL의 수를 확장하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, TIL은 선택적으로 하기에 논의되는 바와 같이 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 확장 전 또는 후에 냉동보존될 수 있다. 일단 해동되면 환자에게 주입하기 전에 대사를 증가시키기 위해 재자극될 수도 있다.
일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(본원에서 사전-급속 확장(Pre-REP)으로 지칭되는 프로세스, 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 B로서 도시된 프로세스 포함)은 1 내지 8일로 단축되고 급속 2차 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(Rapid Expansion Protocol: REP)이라고 하는 프로세스, 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 D로서 도시된 프로세스 포함)은 이하에 뿐만 아니라 실시양태 및 도면에서 자세히 논의되는 바와 같이 1일 내지 9일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(본원에서 사전-급속 확장(Pre-REP)으로 지칭되는 프로세스, 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 B로서 도시된 프로세스 포함)은 1 내지 8일로 단축되고 급속 2차 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)이라고 하는 프로세스 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 D로 도시된 프로세스 포함)은 이하 뿐만 아니라 실시양태 및 도면에서 자세히 논의되는 바와 같이 1 내지 8일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(본원에서 사전-급속 확장(Pre-REP)으로 지칭되는 프로세스, 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 B로서 도시된 프로세스 포함)은 1 내지 7일로 단축되고 급속 2차 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)이라고 하는 프로세스 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 D로 도시된 프로세스 포함)은 이하 뿐만 아니라 실시양태 및 도면에서 자세히 논의되는 바와 같이 1 내지 9일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(본원에서 사전-급속 확장(Pre-REP)으로 지칭되는 프로세스, 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 B로서 도시된 프로세스 포함)은 1 내지 7일로 단축되고 급속 2차 확장(본원에서 급속 확장 프로토콜(REP)이라고 하는 프로세스 뿐만 아니라 도 2a에서 단계 D로 도시된 프로세스 포함)은 이하 뿐만 아니라 실시양태 및 도면에서 자세히 논의되는 바와 같이 1 내지 10일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 8일로 단축되고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 7 내지 9일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 8일이고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 8 내지 9일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 7일로 단축되고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 7 내지 8일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 8일로 단축되고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 8일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 8일이고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 9일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 8일이고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 10일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 7일이고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 7일 내지 10일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 7일이고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 8일 내지 10일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 7일이고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 9일 내지 10일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B로서 기재된 확장)은 7일로 단축되고 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 7일 내지 9일이다. 일부 실시양태에서, 프라이밍 1차 확장 및 급속 2차 확장(예를 들어, 도 2a에서 단계 B 및 단계 D로서 기재된 확장)은 이하에서 및 실시양태 및 도면에서 자세히 논의되는 바와 같이 14-16일이다. 특히, 본 발명의 특정 실시양태는 IL-2의 존재 하에 OKT-3과 같은 항-CD3 항체에 대한 노출, 또는 적어도 IL-2 및 항-CD3 항체, 예를 들어, OKT-3의 존재 하에 항원에 대한 노출에 의해 TIL이 활성화되는 프라이밍 1차 확장 단계를 포함하는 것으로 간주된다. 특정 실시양태에서, 전술한 바와 같은 프라이밍 1차 확장 단계에서 활성화되는 TIL은 TIL의 1차 집단, 즉 1차 세포 집단이다.
일부 실시양태에서, TIL은 1차 확장 이후 및 2차 확장 전에 저장되지 않고, TIL은 2차 확장으로 바로 진행된다(예를 들어, 일부 실시양태에서, 도 2a에 도시된 바와 같이 단계 B에서 단계 D로의 이행 동안에 저장소가 없다). 일부 실시양태에서, 이행은 본원에 기재된 바와 같이 닫힌 계에서 발생한다. 일부 실시양태에서, TIL의 2차 집단인 1차 확장으로부터의 TIL은 이행 기간 없이 2차 확장으로 바로 진행된다.
일부 실시양태에서, 1차 확장, 예를 들어 도 2a에 따른 단계 B는 닫힌 계 생물반응기에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계는 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장 동안 사용된다. 일부 실시양태에서, 단일 생물반응기가 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용된 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
본원에서 지칭된 "단계" 표시 A, B, C 등은 도 2a의 비제한적인 예 및 본원에 기재된 특정 비제한적인 실시양태를 참조한 것이다. 이하 및 도 2a에서 단계의 순서화는 예시적이며, 추가 단계, 단계의 반복 및/또는 단계의 생략뿐만 아니라 단계의 임의의 조합 또는 순서는 본 출원 및 본원에 개시된 방법에 의해 고려된다.
A. 세포 생존력 분석
세포 생존력 검정은 본 기술분야에 공지된 표준 검정을 사용하여 프라이밍 1차 확장(때로는 초기 벌크 확장이라고도 함) 후에 수행될 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 방법은 프라이밍 1차 확장 후에 세포 생존력 검정을 수행하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 생존력 검정은 2차 확장 후(예를 들어, REP 후), 뿐만 아니라 최종 수확 후에 수행될 수 있다. 예를 들어, 트리판 블루 배제 검정은 사세포를 선택적으로 표지하고 생존력 평가를 허용하는 벌크 TIL의 샘플에 대해 수행될 수 있다. 생존력 테스트에 사용하기 위한 기타 검정은 Alamar blue 검정; 및 MTT 검정을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
1. 세포 카운트, 생존력, 유세포 분석
일부 실시양태에서, 세포 카운트 및/또는 생존력이 측정된다. 비제한적으로, CD3, CD4, CD8 및 CD56과 같은 마커, 뿐만 아니라 본원에 개시되거나 기재된 임의의 다른 마커의 발현은 FACSCanto™ 유세포분석기(BD Biosciences)를 사용하여, BD Bio-sciences(BD Biosciences, 캘리포니아주 산호세)로부터 시판되는 것에 제한되지 않는 항체를 이용한 유세포분석에 의해 측정될 수 있다. 세포는 일회용 c-칩 혈구계산기(VWR, 일리노이주 바타비아)를 사용하여 수동으로 계수할 수 있고, 생존력은 트립판 블루 염색을 포함하나, 이에 제한되지 않는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 평가할 수 있다. 세포 생존력은 또한 전체가 본원에 참조로 포함되는 USSN 제15/863,634호에 기초하여 검정될 수 있다. 세포 생존력은 또한 모든 목적에 있어서 전체가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 공개 제2018/0280436호 또는 국제 특허 공개 제WO/2018/081473호에 기초하여 검정될 수도 있다.
일부 경우에, 벌크 TIL 집단은 이하에서 논의되는 프로토콜을 사용하여, 즉시 냉동보존될 수 있다. 대안적으로, 벌크 TIL 집단은 REP를 거친 다음, 이하에서 논의되는 바와 같이 냉동보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우, 대량 또는 REP TIL 집단은 적절한 치료를 위해 유전적 변형으로 처리될 수 있다.
III. TIL 제조 프로세스(프로세스 2A의 실시양태)
이러한 특징 중 일부를 함유하는 프로세스 2A로 알려진 예시적인 TIL 프로세스는 도 5에 도시되며, 프로세스 1C에 비해 본 발명의 이 실시양태의 차이점 및 이점 중 일부는 도 6 뿐만 아니라 도 11에 기술된다. 프로세스 1C는 비교를 위해 도 6, 7 및 10에 도시된다. 프로세스 2A의 실시양태는 도 6 뿐만 아니라 도 5, 9, 10 및 11에 도시된다. 도 10 및 11은 예시적인 1C 프로세스와 비교하여 예시적인 2A 프로세스를 추가로 제공한다.
본원에 논의된 바와 같이, 본 발명은 환자에게 이식하기 전에 대사 활성 및 그에 따른 상대적 건강을 증가시키기 위한 냉동보존된 TIL의 재자극에 관한 단계, 및 상기 대사 건강을 테스트하는 방법을 포함할 수 있다. 본원에 일반적으로 개략된 바와 같이, TIL은 일반적으로 환자 샘플로부터 채취되고 환자에게 이식하기 전에 그 수를 확장하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, TIL은 선택적으로 이하에 논의된 바와 같이 유전적으로 조작될 수 있다.
일부 실시양태에서, TIL은 냉동보존될 수 있다. 일단 해동되면 환자에게 주입하기 전에 대사를 증가시키기 위해 재자극될 수도 있다.
일부 실시양태에서, 하기 뿐만 아니라 실시양태 및 도면에서 상세하게 논의되는 바와 같이, 1차 확장(사전REP로 지칭되는 프로세스 및 도 9에서 단계 A로서 보여준 프로세스 포함)은 3일 내지 14일로 단축되고, 2차 확장(REP로 지칭되는 프로세스 뿐만 아니라 도 9에서 단계 B로서 보여준 프로세스 포함)은 7일 내지 14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 실시양태에서 논의되고 도 5, 6, 8, 9, 10, 및 11에서 보여주는 바와 같이, 1차 확장(예를 들어, 도 9에서 단계 B로서 기재된 확장)은 11일로 단축되고 2차 확장(예를 들어, 도 9에서 단계 D에 기재된 바와 같은 확장)은 11일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 하기에 그리고 실시양태 및 도면에서 상세하게 논의되는 바와 같이, 1차 확장 및 2차 확장의 조합(예를 들어, 도 9에서 단계 B 및 단계 D로서 기재된 확장)은 22일로 단축된다.
하기 "단계" 표시 A, B, C 등은 도 9를 참조로 하고 본원에 기재된 특정 실시양태를 참조로 한다. 하기 및 도 9에서 단계의 순서화는 예시적이며 단계의 임의의 조합 또는 순서, 뿐만 아니라 추가 단계, 단계의 반복 및/또는 단계의 생략은 본 출원 및 본원에 개시된 방법에 의해 고려된다.
A. 단계 A: 환자 종양 샘플 수득하기
일반적으로, TIL은 환자 종양 샘플로부터 처음 수득된 다음, 본원에 기재된 추가 조작을 위해 더 큰 집단으로 확장되고, 선택적으로 냉동보존되고, 본원에 개략된 바와 같이 재자극되고, 선택적으로 TIL 건강의 지표로서 표현형 및 대사 매개변수에 대해 평가된다.
환자 종양 샘플은 일반적으로 외과적 절제술, 바늘 생검, 코어 생검, 소규모 생검, 또는 종양과 TIL 세포의 혼합물을 함유하는 샘플을 수득하기 위한 기타 수단을 통해 본 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수득할 수 있다. 일부 실시양태에서, 다중병변 샘플링이 사용된다. 일부 실시양태에서, 외과적 절제술, 바늘 생검, 코어 생검, 소규모 생검, 또는 종양 및 TIL 세포의 혼합물을 함유하는 샘플을 수득하기 위한 기타 수단은 다중 병변 샘플링(즉, 환자의 하나 이상의 종양 부위 및/또는 위치, 뿐만 아니라 동일 위치에 있거나 근접한 위치에 있는 하나 이상의 종양으로부터 샘플을 수득함)을 포함한다. 일반적으로, 종양 샘플은 원발성 종양, 침습성 종양 또는 전이성 종양을 비롯한 임의의 고형 종양으로부터 유래될 수 있다. 종양 샘플은 또한 혈액 악성종양으로부터 수득된 종양과 같은 액체 종양일 수 있다. 고형 종양은 폐 조직일 수 있다. 일부 실시양태에서, 유용한 TIL은 비소세포 폐 암종(NSCLC)으로부터 수득된다.
일단 수득되면, 종양 샘플은 일반적으로 예적 박리를 사용하여 1 내지 약 8 mm3의 작은 조각으로 단편화되며, 약 2 내지 3 mm3이 특히 유용하다. 일부 실시양태에서, TIL은 이들 단편으로부터 효소적 종양 분해물을 사용하여 배양된다. 이러한 종양 분해물은 효소 배지(예를 들어, Roswell Park Memorial Institute(RPMI) 1640 완충액, 2mM 글루타메이트, 10 mcg/mL 겐타마이신, 30 단위/mL의 DNase 및 1.0 mg/mL의 콜라게나제)에서 인큐베이션한 다음, 기계적 해리(예를 들어, 조직 해리기를 사용함)에 의해 생성될 수 있다. 종양 분해물은 종양을 효소 배지에 넣고 대략 1분 동안 종양을 기계적으로 해리시킨 다음, 5% CO2에서 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 작은 종양 조직만이 존재할 때까지 전술한 조건 하에 기계적 해리 및 인큐베이션의 주기를 반복하여 생성할 수 있다. 이 과정의 마지막에, 세포 현탁액이 많은 수의 적혈구 또는 사세포를 함유한다면, 이들 세포를 제거하기 위해 FICOLL 분지형 친수성 다당류를 사용한 밀도 구배 분리를 수행할 수 있다. 본 기술분야에 공지된 대안적 방법, 예컨대, 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2012/0244133 A1호에 기재된 것이 사용될 수 있다. 전술한 임의의 방법은 TIL을 확장하는 방법 또는 암을 치료하는 방법에 대해 본원에 기재된 임의의 실시양태에 사용될 수 있다.
종양 해리 효소 혼합물은 하나 이상의 해리(분해) 효소, 예컨대, 비제한적으로, 콜라게나제(콜라게나제의 임의의 블렌드 또는 유형 포함), Accutase™, Accumax™, 히알루로니다제, 중성 프로테아제(디스파제), 키모트립신, 키모파파인, 트립신, 카제이나제, 엘라스타제, 파파인, 프로테아제 유형 XIV(프로나제), 데옥시리보뉴클레아제 I(DNase), 트립신 저해제, 임의의 기타 해리 또는 단백분해 효소, 및 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 해리 효소는 동결건조된 효소로부터 재구성된다. 일부 실시양태에서, 동결건조된 효소는 HBSS와 같은 멸균 완충액의 양으로 재구성된다.
일부 경우에, 콜라게나제(예컨대, 동물성 유리 1형 콜라게나제)는 10 mL의 멸균 HBSS 또는 다른 완충액에서 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 2892 PZ U/바이알의 농도일 수 있다. 일부 실시양태에서, 콜라게나제는 5 mL 내지 15 mL 완충액에서 재구성된다. 일부 실시양태에서, 재구성 후 콜라게나제 스톡은 약 100 PZ U/mL 내지 약 400 PZ U/mL, 예를 들어, 약 100 PZ U/mL 내지 약 400 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL 내지 약 350 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL- 약 300 PZ U/mL, 약 150 PZ U/mL-약 400 PZ U/mL, 약 100 PZ U/mL, 약 150 PZ U/mL, 약 200 PZ U/mL, 약 210 PZ U/mL, 약 220 PZ U/mL, 약 230 PZ U/mL, 약 240 PZ U/mL, 약 250 PZ U/mL, 약 260 PZ U/mL, 약 270 PZ U /mL, 약 280 PZ U/mL, 약 289.2 PZ U/mL, 약 300 PZ U/mL, 약 350 PZ U/mL, 또는 약 400 PZ U/mL의 범위이다.
일부 실시양태에서, 중성 프로테아제는 1 mL의 멸균 HBSS 또는 다른 완충액에서 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 175 DMC U/바이알의 농도일 수 있다. 일부 실시양태에서, 재구성 후 중성 프로테아제 스톡은 약 100 DMC/mL 내지 약 400 DMC/mL, 예를 들어, 약 100 DMC/mL 내지 약 400 DMC/mL, 약 100 DMC/mL 내지 약 350 DMC/mL 범위, 약 100 DMC/mL 내지 약 300 DMC/mL, 약 150 DMC/mL 내지 약 400 DMC/mL, 약 100 DMC/mL, 약 110 DMC/mL, 약 120 DMC/mL, 약 130 DMC/mL, 약 140 DMC/mL, 약 150 DMC/mL, 약 160 DMC/mL, 약 170 DMC/mL, 약 175 DMC/mL, 약 180 DMC/mL, 약 190 DMC/mL, 약 200 DMC/mL, 약 250 DMC/mL, 약 300 DMC/mL, 약 350 DMC/mL, 또는 약 400 DMC/mL 범위이다.
일부 실시양태에서, DNAse I은 1mL의 멸균 HBSS 또는 다른 완충액에서 재구성된다. 동결건조된 스톡 효소는 4 KU/바이알의 농도였다. 일부 실시양태에서, 재구성 후 DNase I 스톡은 약 1 KU/mL 내지 10 KU/mL 범위, 예를 들어, 약 1 KU/mL, 약 2 KU/mL, 약 3 KU/mL, 약 4 KU/mL, 5 KU/mL, 약 6 KU/mL, 약 7 KU/mL, 약 8 KU/mL, 약 9 KU/mL, 또는 약 10 KU/mL이다.
일부 실시양태에서, 효소 스톡은 변동적이며 농도가 결정되어야 할 필요가 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 동결건조된 스톡의 농도는 검증될 수 있다. 일부 실시양태에서, 분해물 칵테일에 첨가된 효소의 최종 양은 결정된 스톡 농도에 기초하여 조정된다.
일부 실시양태에서, 효소 혼합물은 약 10.2 ul의 중성 프로테아제(0.36 DMC U/mL), 21.3 μL의 콜라게나제(1.2PZ/mL) 및 250 ul의 DNAse I(200 U/mL)을 멸균 HBSS 약 4.7 mL에 포함한다.
앞서 나타낸 바와 같이, 일부 실시양태에서, TIL은 고형 종양으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 고형 종양은 단편화되지 않는다. 일부 실시양태에서, 고형 종양은 단편화되지 않고 전체 종양으로서 효소 분해로 처리된다. 일부 실시양태에서, 종양은 콜라게나제, DNase 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 분해된다. 일부 실시양태에서, 종양은 콜라게나제, DNase 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 1-2시간 동안 분해된다. 일부 실시양태에서, 종양은 콜라게나제, DNase 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 37℃, 5% CO2에서 1-2시간 동안 분해된다. 일부 실시양태에서, 종양은 콜라게나제, DNase 및 히알루로니다제를 포함하는 효소 혼합물에서 회전하면서 37℃, 5% CO2에서 1-2시간 동안 분해된다. 일부 실시양태에서, 종양은 일정한 회전으로 밤새 분해된다. 일부 실시양태에서, 종양은 일정한 회전으로 37℃, 5% CO2에서 밤새 분해된다. 일부 실시양태에서, 전체 종양은 효소와 조합되어 종양 분해 반응 혼합물을 형성한다.
일부 실시양태에서, 종양은 멸균 완충액에서 동결건조된 효소에 의해 재구성된다. 일부 실시양태에서, 완충제는 멸균 HBSS이다.
일부 실시양태에서, 효소 혼합물은 콜라게나제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 콜라게나제는 콜라게나제 IV이다. 일부 실시양태에서, 콜라게나제에 대한 작업 스톡은 100 mg/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 실시양태에서, 효소 혼합물은 DNAse를 포함한다. 일부 실시양태에서, DNAse에 대한 작업 스톡은 10,000 IU/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 실시양태에서, 효소 혼합물은 히알루로니다제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 히알루로니다제에 대한 작업 스톡은 10 mg/mL 10X 작업 스톡이다.
일부 실시양태에서, 효소 혼합물은 10 mg/mL 콜라게나제, 1000 IU/mL DNAse, 및 1 mg/mL 히알루로니다제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 효소 혼합물은 10 mg/mL 콜라게나제, 500 IU/mL DNAse, 및 1 mg/mL 히알루로니다제를 포함한다.
일반적으로, 수확된 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "신선하게 수확된" 세포 집단이라고 한다.
일부 실시양태에서, 단편화는 예를 들어 절개 및 분해를 비롯한 물리적 단편화를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단편화는 물리적 단편화이다. 일부 실시양태에서, 단편화는 절개이다. 일부 실시양태에서, 단편화는 분해에 의한 것이다. 일부 실시양태에서, TIL은 효소적 종양 분해물 및 환자로부터 수득된 종양 단편으로부터 처음 배양될 수 있다. 한 실시양태에서, TIL은 효소적 종양 분해물 및 환자로부터 수득된 종양 단편으로부터 처음 배양될 수 있다.
종양이 고형 종양인 일부 실시양태에서, 종양은 종양 샘플을 예를 들어 단계 A(도 1에 제공된 바와 같음)에서와 같이 수득한 후 물리적 단편화를 겪는다. 일부 실시양태에서, 단편화는 냉동보존 전에 발생한다. 일부 실시양태에서, 단편화는 냉동보존 후에 발생한다. 일부 실시양태에서, 단편화는 종양을 수득한 후 및 임의의 냉동보존의 부재 하에 발생한다. 일부 실시양태에서, 종양은 단편화되고 10, 20, 30, 40개 이상의 단편 또는 조각이 1차 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 실시양태에서, 종양은 단편화되고 30 또는 40개의 단편 또는 조각이 1차 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 실시양태에서, 종양은 단편화되고 40개의 단편 또는 조각이 1차 확장을 위해 각 용기에 배치된다. 일부 실시양태에서, 다중 단편은 약 4개 내지 약 50개의 단편을 포함하고, 여기서 각 단편은 약 27 mm3의 부피를 갖는다. 일부 실시양태에서, 다중 단편은 약 1300 mm3 내지 약 1500 mm3의 총 부피를 갖는 약 30 내지 약 60개의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중 단편은 약 1350 mm3의 총 부피를 갖는 약 50개의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중 단편은 약 1g 내지 약 1.5g의 총 질량을 갖는 약 50개의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중 단편은 약 4개의 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, TIL은 종양 단편으로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 예리한 절개에 의해 수득된다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 10 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 8 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 1 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 2 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 3 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 4 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 5 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 6 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 7 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 8 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 9 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 10 mm3이다. 일부 실시양태에서, 종양은 1-4 mm × 1-4 mm × 1-4 mm이다. 일부 실시양태에서, 종양은 1mm × 1mm × 1mm이다. 일부 실시양태에서, 종양은 2mm × 2mm × 2mm이다. 일부 실시양태에서, 종양은 3mm × 3mm × 3mm이다. 일부 실시양태에서, 종양은 4 mm × 4 mm × 4 mm이다.
일부 실시양태에서, 종양은 각 조각 상의 출혈성, 괴사성, 및/또는 지방 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다. 일부 실시양태에서, 종양은 각 조각 상의 출혈성 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다. 일부 실시양태에서, 종양은 각 조각 상의 괴사 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다. 일부 실시양태에서, 종양은 각 조각 상의 지방 조직의 양을 최소화하기 위해 절제된다.
일부 실시양태에서, 종양 단편화는 종양 내부 구조를 유지하기 위해 수행된다. 일부 실시양태에서, 종양 단편화는 메스로 톱질 동작을 수행하지 않고 수행된다. 일부 실시양태에서, TIL은 종양 분해물로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 종양 분해물은 효소 배지, 예를 들어, 비제한적으로 RPMI 1640, 2mM GlutaMAX, 10 mg/mL 겐타마이신, 30 U/mL DNase 및 1.0 mg/mL 콜라게나제와 같은 효소 배지에서 인큐베이션한 후, 기계적 해리(GentleMACS, Miltenyi Biotec, 캘리포니아주 어번)에 의해 생성되었다. 종양을 효소 배지에 넣은 후, 종양은 약 1분 동안 기계적으로 해리될 수 있다. 그런 다음 용액은 37℃, 5% CO2에서 30분 동안 인큐베이션될 수 있고, 그 다음 약 1분 동안 다시 기계적으로 파괴될 수 있다. 5% CO2, 37℃에서 30분 동안 다시 인큐베이션된 후, 종양은 대략 1분 동안 3번째로 기계적으로 파괴될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조직의 큰 조각이 존재한다면, 3번째 기계적 파괴 후, 1회 또는 2회의 추가 기계적 해리가 5% CO2, 37℃에서 30분의 추가 인큐베이션 과 함께 또는 없이 샘플에 적용되었다. 일부 실시양태에서, 세포 현탁액이 다수의 적혈구 또는 사세포를 함유하는 경우 최종 인큐베이션 종료 시, 이들 세포를 제거하기 위해 Ficoll을 사용한 밀도 구배 분리가 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 1차 확장 단계 이전에 수확된 세포 현탁액은 "1차 세포 집단" 또는 "신선하게 수확된" 세포 집단이라고 한다.
일부 실시양태에서, 세포는 샘플 수확 후 선택적으로 동결될 수 있고, 도 9에 예시될 뿐만 아니라 하기에 추가로 상세하게 기재된 단계 B에 기재된 확장으로 진입하기 전에 동결 저장될 수 있다.
1. 흉막 삼출 T 세포 및 TIL
일부 실시양태에서, 샘플은 흉막액 샘플이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 프로세스에 따른 확장을 위한 T-세포 TIL의 공급원은 흉막액 샘플이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 흉막 삼출 유래 샘플이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따른 확장을 위한 T-세포 또는 TIL의 공급원은 흉막 삼출 유래 샘플이다. 예를 들어, 모든 목적에 대해 전체가 참고로 본원에 포함되는 미국 특허 공개 제US 2014/0295426호에 기재된 방법을 참조한다.
일부 실시양태에서, TIL이 의심되고/되거나 TIL을 함유하는 임의의 흉막액 또는 흉막 삼출이 사용될 수 있다. 이러한 샘플은 NSCLC 또는 SCLC와 같은 원발성 또는 전이성 폐암에서 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 샘플은 다른 기관, 예를 들어, 유방, 난소, 결장 또는 전립선에서 기원하는 2차 전이성 암 세포일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용하기 위한 샘플은 흉막 삼출물이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용하기 위한 샘플은 흉막 누출액이다. 다른 생물학적 샘플은, 예를 들어, 복부의 복수액 또는 췌장 낭종액을 비롯하여, TIL을 함유하는 다른 장액을 포함할 수 있다. 복수액 및 흉막액은 매우 유사한 화학계를 수반한다; 복부 및 폐는 모두 악성 종양에서와 동일한 물체로 흉막강 및 복부강에 중피 계열 및 유체 형태를 가지며, 일부 실시양태에서 이러한 유체는 TIL을 함유한다. 본 개시내용이 흉막액을 예시하는 일부 실시양태에서, TIL을 함유하는 복수액 또는 다른 낭종액을 사용하여 유사한 결과를 갖는 동일한 방법이 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 흉막액은 환자로부터 제거된 그대로 처리되지 않은 형태이다. 일부 실시양태에서, 처리되지 않은 흉막액은 접촉 단계 전에 EDTA 또는 헤파린 튜브와 같은 표준 혈액 수집 튜브에 배치된다. 일부 실시양태에서, 처리되지 않은 흉막액은 접촉 단계 전에 표준 CellSave® 튜브(Veridex)에 배치된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 생존 가능한 TIL의 수의 감소를 피하기 위해 환자로부터 수집 직후 CellSave 튜브에 배치된다. 생존 가능한 TIL의 수는 4℃에서도 처리되지 않은 흉막액에 남아 있다면 24시간 이내에 상당한 정도로 감소할 수 있다. 일부 실시양태에서, 샘플은 환자로부터 제거된 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간 또는 최대 24시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 4℃에서 환자로부터 제거된 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간 또는 최대 24시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다.
일부 실시양태에서, 선택된 대상체의 흉막액 샘플은 희석될 수 있다. 한 실시양태에서, 희석은 1:10 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 실시양태에서, 희석은 1:9 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 실시양태에서, 희석은 1:8 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 실시양태에서, 희석은 1:5 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 실시양태에서, 희석은 1:2 흉막액 대 희석제이다. 또 다른 실시양태에서, 희석은 1:1 흉막액 대 희석제이다. 일부 실시양태에서, 희석제는 식염수, 인산염 완충 식염수, 또 다른 완충액 또는 생리학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 환자로부터 수집 및 4℃에서도 미처리 흉막액에 남아 있다면 24-48시간 내에 상당한 정도로 발생할 수 있는 생존 TIL의 감소를 피하기 위한 희석 직후에 CellSave 튜브에 배치된다. 일부 실시양태에서, 흉막액 샘플은 환자로부터 제거하고 희석한 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 24시간, 36시간, 최대 48시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다. 일부 실시양태에서, 흉막액 샘플은 환자로부터 제거하고 4℃에서 희석한 후 1시간, 5시간, 10시간, 15시간, 24시간, 36시간, 최대 48시간 이내에 적절한 수집 튜브에 배치된다.
또 다른 실시양태에서, 흉막액 샘플은 추가 처리 단계 이전에 통상적인 수단에 의해 농축된다. 일부 실시양태에서, 흉막액의 이러한 전처리는 방법을 수행하는 실험실로의 운송 또는 추후 분석(예를 들어, 수집 후 24-48시간 이후)을 위해 흉막액을 냉동보존해야 하는 상황에서 바람직하다. 일부 실시양태에서, 흉막액 샘플은 대상체로부터 회수한 후 흉막액 샘플을 원심분리하고 완충액에 원심분리물 또는 펠릿을 재현탁함으로써 제조된다. 일부 실시양태에서, 흉막액 샘플은 수송 또는 차후 분석 및/또는 처리를 위해 냉동보존되기 전에 다중 원심분리 및 재현탁으로 처리된다.
일부 실시양태에서, 흉막액 샘플은 추가 처리 단계 전에 여과 방법을 사용하여 농축된다. 일부 실시양태에서, 접촉 단계에 사용된 흉막액 샘플은 막을 통한 흉막액의 통과를 허용하지만 종양 세포는 보유하는 공지되고 본질적으로 균일한 기공 크기를 함유하는 필터를 통해 유체를 여과함으로써 제조된다. 일부 실시양태에서, 멤브레인 내의 기공의 직경은 적어도 4 μM일 수 있다. 다른 실시양태에서, 기공 직경은 5 μM 이상일 수 있고, 다른 실시양태에서는 6, 7, 8, 9, 또는 10 μM 중 어느 하나일 수 있다. 여과 후, 막에 의해 보유된 TIL을 포함하는 세포는 적절한 생리학적으로 허용되는 완충액 내로 멤브레인으로부터 헹구워질 수 있다. 이러한 방식으로 농축된 TIL을 포함한 세포는 그 다음 방법의 접촉 단계에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 흉막액 샘플(예를 들어, 미처리 흉막액 포함), 희석된 흉막액, 또는 재현탁된 세포 펠릿은 샘플에 존재하는 비핵화된 적혈구를 차등적으로 용해시키는 용해 시약과 접촉된다. 일부 실시양태에서, 이 단계는 흉막액이 상당한 수의 RBC를 함유하는 상황에서 추가 처리 단계 전에 수행된다. 적합한 용해 시약은 단일 용해 시약 또는 용해 시약과 퀀치(quench) 시약, 또는 용해제, 퀀치 시약 및 고정 시약을 포함한다. 적합한 용해 시스템은 상업적으로 판매되며 BD Pharm Lyse™ 시스템(Becton Dickenson)을 포함한다. 다른 용해 시스템으로는 Versalyse™ 시스템, FACSlyse™ 시스템(Becton Dickenson), Immunoprep™ 시스템 또는 Erythrolyse II 시스템(Beckman Coulter, Inc.) 또는 염화암모늄 시스템을 포함한다. 일부 실시양태에서, 용해 시약은 적혈구의 효율적인 용해, 및 흉막액에 TIL의 보존 및 TIL의 표현형 특성인 주요 요건에 따라 달라질 수 있다. 용해를 위해 단일 시약을 사용하는 것 외에도, 본원에 기술된 방법에 유용한 용해 시스템은 제2 시약, 예를 들어 방법의 나머지 단계 동안 용해 시약의 효과를 퀀치시키거나 지연시키는 것, 예를 들어, Stabilyse™ 시약(Beckman Coulter, Inc.)을 포함할 수 있다. 용해 시약의 선택 또는 방법의 바람직한 실시양태에 따라 통상적인 고정 시약을 사용할 수도 있다.
일부 실시양태에서, 상기 본원에 기재된 바와 같이, 미처리된, 희석된, 또는 다중 원심분리되거나 처리된 흉막액 샘플은 본원에 제공된 바와 같이 추가 처리 및/또는 확장되기 전에 약 -140℃의 온도에서 냉동보존된다.
B. 단계 B: 1차 확장
1. 젊은 TIL
일부 실시양태에서, 본 방법은 대상체/환자에게 투여시 복제 주기를 증가시킬 수 있고, 이와 같이 나이든 TIL(즉, 대상체/환자에게 투여하기 전에 더 많은 복제 라운드를 추가로 겪은 TIL)보다 부가적인 치료 이점을 제공할 수 있는, 젊은 TIL을 수득하는 것을 제공한다. 젊은 TIL의 특징은 문헌, 예를 들어, Donia, et al., Scandinavian Journal of Immunology, 75:157-167 (2012); Dudley et al., Clin Cancer Res, 16:6122-6131 (2010); Huang et al., J Immunother, 28(3):258-267(2005); Besser et al., Clin Cancer Res, 19(17):OF1-OF9(2013); Besser et al., J Immunother 32:415-423 (2009); Robbins, et al., J Immunol 2004; 173:7125-7130; Shen et al., J Immunother, 30:123-129(2007); Zhou, et al., J Immunother, 28:53-62 (2005); 및 Tran, et al., J Immunother, 31:742-751 (2008)에 기재되어 있으며, 이들 모두는 각각의 전체가 본원에 참조로 포함된다.
T 림프구 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한되지만, 많은 수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생성된다. 이러한 유전자 분절: V(가변), D(다양성), J(연결) 및 C(불변)는 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법에 의해 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본 방법에 의해 수득된 TIL은 새로 수확된 TIL 및/또는 예를 들어 도 9에 구현된 방법 이외의 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 이외의 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본 방법에 의해 수득된 TIL은 새로 수확된 TIL 및/또는 도 10에 예시된 바와 같이 프로세스 1C로 지칭되는 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 1차 확장에서 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 실시양태에서, 다양성은 면역글로불린에 있고 면역글로불린 중쇄에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 면역글로불린에 있고 면역글로불린 경쇄에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 T-세포 수용체에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 알파, 베타, 감마 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다.
도 9의 단계 A에 기재된 바와 같이, 종양 단편의 절개 또는 분해 후, 결과적으로 생성된 세포는 종양 및 기타 세포에 비해 TIL의 성장을 유리하게 하는 조건 하에 IL-2를 함유하는 혈청에서 배양된다. 일부 실시양태에서, 종양 분해물은 2mL 웰에서 6000 IU/mL의 IL-2와 함께 불활성화된 인간 AB 혈청을 포함하는 배지에서 인큐베이션된다. 이 1차 세포 집단은 일정 기간, 일반적으로, 3일 내지 14일 동안 배양되어 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 × 108 벌크 TIL 세포를 초래한다. 일부 실시양태에서, 이 1차 세포 집단은 7일 내지 14일의 기간 동안 배양되어 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 × 108 벌크 TIL 세포를 초래한다. 일부 실시양태에서, 이 1차 세포 집단은 10일 내지 14일의 기간 동안 배양되어, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 × 108 벌크 TIL 세포를 초래한다. 일부 실시양태에서, 이 1차 세포 집단은 약 11일의 기간 동안 배양되어, 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 × 108 벌크 TIL 세포를 초래한다.
바람직한 실시양태에서, TIL의 확장은 이하 및 본원에 기재된 바와 같은 초기 벌크 TIL 확장 단계(예를 들어, 사전-REP로 지칭되는 프로세스를 포함할 수 있는 도 9의 단계 B에 기재된 단계), 그 다음 단계 D 이하에 그리고 본원에 기재된 바와 같은 2차 확장(급속 확장 프로토콜(REP) 단계로 지칭된 프로세스를 포함하는 단계 D), 그 다음 선택적 냉동보존, 그 다음 이하에 그리고 본원에 기재된 바와 같은 2차 단계 D(재자극 REP 단계로 지칭되는 프로세스를 포함함)를 사용하여 수행될 수 있다. 이 프로세스에서 수득된 TIL은 본원에 기재된 바와 같은 표현형 특성 및 대사 매개변수에 대해 선택적으로 특성화될 수 있다.
TIL 배양물이 24-웰 플레이트에서, 예를 들어, Costar 24-웰 세포 배양 클러스터, 평평한 바닥(Corning In-corporated, Corning, NY)을 사용하여 개시되는 실시양태에서, 각 웰에 IL-2(6000 IU/mL; Chiron Corp., Emeryville, CA)와 함께 2mL의 완전 배지(CM) 중 1 × 106 종양 분해 세포 또는 하나의 종양 단편이 접종될 수 있다. 일부 실시양태에서, 종양 단편은 약 1 mm3 내지 10 mm3이다.
일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 배양 배지의 약어인 "CM"으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 단계 B에 대한 CM은 10% 인간 AB 혈청, 25mM HEPES 및 10 mg/mL 겐타마이신이 보충된 GlutaMAX를 포함하는 RPMI 1640으로 이루어진다. 배양이 40mL 용량 및 10 cm2 기체 투과성 실리콘 바닥(예를 들어, G-Rex10; Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton, MN)을 가진 기체 투과성 플라스크에서 개시되는 실시양태(도 1)에서, 각 플라스크에는 IL-2가 포함된 CM 10-40mL 중 10-40 × 106 생존성 종양 분해 세포 또는 5-30개의 종양 단편을 부하했다. G-Rex10 및 24웰 플레이트 모두 5% CO2에서 37℃의 가습 인큐베이터에서 인큐베이션되었고, 배양 개시 5일 후, 배지의 절반을 제거하고 새로운 CM 및 IL-2로 교체하고, 5일 후, 배지의 절반을 2-3일마다 교환했다.
종양 단편의 제조 후, 결과적으로 생성된 세포(즉, 단편)는 종양 및 기타 세포에 비해 TIL의 성장에 유리한 조건 하에 IL-2를 함유하는 혈청에서 배양된다. 일부 실시양태에서, 종양 분해물은 2 mL 웰에서 6000 IU/mL의 IL-2와 함께 불활성화된 인간 AB 혈청(또는 일부 경우에, 본원에 개략된 바와 같이, aAPC 세포 집단의 존재 하에)을 포함하는 배지에서 인큐베이션된다. 이 1차 세포 집단은 일정 기간, 일반적으로 10일 내지 14일 동안 배양되어 벌크 TIL 집단, 일반적으로 약 1 × 108 벌크 TIL 세포를 초래한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 동안의 성장 배지는 IL-2 또는 그의 변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL은 재조합 인간 IL-2(rhIL-2)이다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 20-30 × 106 IU/mg의 비활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 20 × 106 IU/mg의 비활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 25 × 106 IU/mg의 비활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 1 mg 바이알에 대해 30 × 106 IU/mg의 비활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 4-8 × 106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 5-7 × 106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 6 × 106 IU/mg의 IL-2의 최종 농도를 갖는다. 일부 실시양태에서, IL-2 스톡 용액은 실시양태 4에 기재된 바와 같이 제조된다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 10,000 IU/mL의 IL-2, 약 9,000 IU/mL의 IL-2, 약 8,000 IU/mL의 IL-2, 약 7,000 IU/mL의 IL-2, 약 6000 IU/mL의 IL-2 또는 약 5,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 9,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 5,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 8,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 7,000 IU/mL의 IL-2 내지 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 6,000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-2를 추가로 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 1000 IU/mL, 약 1500 IU/mL, 약 2000 IU/mL, 약 2500 IU/mL, 약 3000 IU/mL, 약 3500 IU/mL, 약 4000 IU/mL, 약 4500 IU/mL, 약 5000 IU/mL, 약 5500 IU/mL, 약 6000 IU/mL, 약 6500 IU/mL, 약 7000 IU/mL, 약 7500 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 1000 내지 2000 IU/mL, 2000 내지 3000 IU/mL, 3000 내지 4000 IU/mL, 4000 내지 5000 IU/mL, 5000 내지 6000 IU/mL, 6000 내지 7000 IU/mL, 7000 내지 8000 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다.
일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15, 약 400 IU/mL의 IL-15, 약 300 IU/mL의 IL-15, 약 200 IU/mL의 IL-15, 약 180 IU/mL의 IL-15, 약 160 IU/mL의 IL-15, 약 140 IU/mL의 IL-15, 약 120 IU/mL의 IL-15 또는 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 400 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 300 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 200 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-15를 추가로 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다.
일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21, 약 15 IU/mL의 IL-21, 약 12 IU/mL의 IL-21, 약 10 IU/mL의 IL-21, 약 5 IU/mL의 IL-21, 약 4 IU/mL의 IL-21, 약 3 IU/mL의 IL-21, 약 2 IU/mL의 IL-21, 약 1 IU/mL의 IL- 21, 또는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 15 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 12 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 10 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 5 IU/mL의 IL-21 내지 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 약 2 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-21을 추가로 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다.
한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 30 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1 ng/mL, 약 2.5 ng/mL, 약 5 ng/mL, 약 7.5 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 15 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 25 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 35 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 약 200 ng/mL, 약 500 ng/mL, 및 약 1 μg/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 0.1 ng/mL 내지 1 ng/mL, 1 ng/mL 내지 5 ng/mL, 5 ng/mL 내지 10 ng/mL, 10 ng/mL 내지 20 ng/mL, 20 ng/mL 내지 30 ng/mL, 30 ng/mL 내지 40 ng/mL, 40 ng/mL 내지 50 ng/mL, 50 ng/mL 내지 100 ng/mL의 OKT-3 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 OKT-3 항체를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, OKT-3 항체는 무로모납이다.
일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 세포 배양 배지에 하나 이상의 TNFRSF 작동제를 포함한다. 일부 실시양태에서, TNFRSF 작동제는 4-1BB 작동제를 포함한다. 일부 실시양태에서, TNFRSF 작동제는 4-1BB 작동제이고, 4-1BB 작동제는 우레루맙, 우토밀루맙, EU-101, 융합 단백질, 및 이의 단편, 유도체, 변이체, 바이오시밀러 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, TNFRSF 작동제는 0.1 μg/mL 내지 100 μg/mL의 세포 배양 배지 중 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다. 일부 실시양태에서, TNFRSF 작동제는 20 μg/mL 내지 40μg/mL의 세포 배양 배지 중 농도를 달성하기에 충분한 농도로 첨가된다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 TNFRSF 작동제 이외에, 세포 배양 배지는 약 3000 IU/mL의 초기 농도의 IL-2 및 약 30 ng/mL의 초기 농도의 OKT-3 항체를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 TNFRSF 작동제는 4-1BB 작동제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 일부 실시양태에서, 1차 확장 배양 배지는 배양 배지의 약어인 "CM"으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, CM1(배양 배지 1)로 지칭된다. 일부 실시양태에서, CM은 10% 인간 AB 혈청, 25mM HEPES 및 10 mg/mL 겐타마이신이 보충된 GlutaMAX를 포함하는 RPMI 1640으로 이루어진다. 배양이 40mL 용량 및 10 cm2 기체 투과성 실리콘 바닥(예를 들어, G-Rex10; Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton, MN)을 가진 기체 투과성 플라스크에서 개시되는 실시양태(도 1)에서, 각 플라스크에는 IL-2가 포함된 CM 10-40mL 중의 10-40 × 106 생존성 종양 분해 세포 또는 5-30개의 종양 단편을 부하했다. G-Rex10 및 24웰 플레이트 모두 5% CO2에서 37℃의 가습 인큐베이터에서 인큐베이션되었고, 배양 개시 5일 후, 배지의 절반을 제거하고 새로운 CM 및 IL-2로 교체하고, 5일 후, 배지의 절반을 2-3일마다 교환했다. 일부 실시양태에서, CM은 실시양태에 기재된 CM1이며, 실시양태 5를 참조한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장은 초기 세포 배양 배지 또는 제1 세포 배양 배지에서 발생한다. 일부 실시양태에서, 초기 세포 배양 배지 또는 제1 세포 배양 배지는 IL-2를 포함한다.
일부 실시양태에서, 1차 확장(예를 들어, 도 9의 단계 B에 기재된 것과 같은 프로세스를 포함하며, 이는 때로 사전-REP로 지칭되는 프로세스를 포함할 수 있음) 프로세스는 실시양태 및 도면에 논의된 바와 같이 3-14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 1차 확장(예를 들어, 도 9의 단계 B에 기재된 것과 같은 프로세스를 포함하며, 이는 때로 사전-REP로 지칭되는 프로세스를 포함할 수 있음)은 예를 들어, 도 9의 단계 B에 기재된 바와 같은 확장을 포함할 뿐만 아니라, 도 5, 6, 8, 9, 10, 및 11에 도시된 바와 같이 7일 내지 14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 단계 B의 1차 확장은 도 5, 6, 8, 9, 10 및 11에 도시된 바와 같이 10일-14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 1차 확장은 도 9의 단계 B에 기재된 바와 같은 확장을 포함할 뿐만 아니라 도 5, 6, 8, 9, 10 및 11에 도시된 바와 같이 11일로 단축된다.
일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 1일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 2일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 3일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 4일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 5일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 6일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 7일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 8일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 9일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 10일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 11일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 12일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 13일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 1일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 2일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 3일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 4일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 5일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 6일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 7일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 8일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 9일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 10일 내지 11일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 11일 동안 진행될 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-2, IL-7, IL-15 및/또는 IL-21의 조합은 1차 확장 동안 조합으로 사용된다. 일부 실시양태에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 뿐만 아니라 이들의 임의의 조합은 예를 들어 본원에 기재된 것뿐만 아니라 도 9에 따른 단계 B 프로세스 동안을 포함하는 1차 확장 동안 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합은 1차 확장 동안 조합으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21 뿐만 아니라 이들의 임의의 조합은 도 9에 따른 단계 B 프로세스 동안 및 본원에 기재된 바와 같이 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 1차 확장(예를 들어, 사전-REP로 지칭되는 프로세스; 예를 들어, 도 9에 따른 단계 B를 포함함) 프로세스는 도면에서 논의되는 바와 같이 3일 내지 14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 단계 B의 1차 확장은 도 5, 6, 8, 9, 10 및 11에 도시된 바와 같이 7일 내지 14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 단계 B의 1차 확장은 도 5, 6, 8, 9, 10 및 11에 도시된 바와 같이 10일 내지 14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 1차 확장은 도 5, 6, 8, 9, 10 및 11에 도시된 바와 같이 11일로 단축된다.
일부 실시양태에서, 1차 확장, 예를 들어 도 9에 따른 단계 B는 닫힌 계 생물반응기에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계는 본원에 기재된 바와 같은 TIL 확장을 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 단일 생물반응기가 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용된 단일 생물반응기는, 예를 들어, G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
1. 시토카인 및 기타 첨가제
본원에 기재된 확장 방법은 일반적으로 본 기술분야에 공지된 바와 같은 시토카인, 특히 IL-2을 고용량으로 갖는 배양 배지를 사용한다.
대안적으로, 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제US 2017/0107490 A1호에 기재된 것으로서, IL-2, IL-15 및 IL-21의 2 이상의 조합과 같이, TIL의 급속 확장 및 또는 2차 확장을 위해 시토카인의 조합을 사용하는 것이 부가적으로 가능하다. 따라서, 가능한 조합으로는 IL-2 및 IL-15, IL-2 및 IL-21, IL-15 및 IL-21 및 IL-2, 또는 IL-15 및 IL-21을 포함하며, 후자가 많은 실시양태에서 특별히 사용되고 있다. 시토카인의 조합의 사용은 림프구, 특히 본원에 기재된 바와 같은 T-세포의 발생에 특히 유리하다.
한 실시양태에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 배양 배지에 OKT-3 항체 또는 무로모납의 첨가를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 배양 배지에 4-1BB 작동제의 첨가를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 단계 B는 또한 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 배양 배지에 OX-40 작동제의 첨가를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 티아졸리딘디온 화합물과 같은 증식제-활성화 수용체(PPAR)-감마 작동제를 포함하는 퍼옥시솜 증식제-활성화 수용체 감마 공동활성화제 I-알파 작동제와 같은 첨가제는 개시내용이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제US 2019/0307796 A1호에 기재된 바와 같이, 단계 B 동안 배양 배지에 사용될 수 있다.
C. 단계 C: 1차 확장에서 2차 확장으로의 이행
일부 경우에, 예를 들어 도 9에 나타낸 바와 같은 단계 B로부터 수득한 TIL 집단을 포함하는 1차 확장으로부터 수득된 벌크 TIL 집단은 이하 본원에서 논의된 프로토콜을 사용하여 즉시 냉동보존될 수 있다. 대안적으로, 2차 TIL 집단으로 지칭되는 1차 확장으로부터 수득된 TIL 집단은 2차 확장(때로 REP로 지칭되는 확장을 포함할 수 있음)으로 처리될 수 있고, 그 다음 이하에 논의되는 바와 같이 냉동보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우, 1차 TIL 집단(때로 벌크 TIL 집단으로 지칭됨) 또는 2차 TIL 집단(일부 실시양태에서 REP TIL 집단으로 지칭되는 집단을 포함할 수 있음)은 확장 전 또는 1차 확장 후 및 2차 확장 전에 적절한 처리를 위해 유전자 변형을 거칠 수 있다.
일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터(예를 들어, 도 9에 나타낸 바와 같은 단계 B로부터) 수득된 TIL은 선택을 위한 표현형별화될 때까지 저장된다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터(예를 들어, 도 9에 나타낸 바와 같은 단계 B로부터) 수득된 TIL은 저장되지 않고 2차 확장으로 직접 진행된다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 수득된 TIL은 1차 확장 후 및 2차 확장 전에 냉동보존되지 않는다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 약 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 약 3일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 약 4일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 약 4일 내지 10일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 약 7일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 약 14일에 발생한다.
일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 1일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 TIL 확장은 2일 내지 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 3일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 4일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 5일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 6일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 7일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 8일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 9일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 10일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 11일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 12일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 13일 내지 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 후 14일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 1일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 2일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 3일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 4일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 5일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 6일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 7일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 8일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 9일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 10일 내지 11일에 발생한다. 일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행은 단편화가 발생한 때로부터 11일에 발생한다.
일부 실시양태에서, TIL은 1차 확장 후 및 2차 확장 전에 저장되지 않고, TIL은 2차 확장으로 직접 진행된다(예를 들어, 일부 실시양태에서, 도 9에 도시된 바와 같이 단계 B로부터 단계 D로의 이행 동안 저장되지 않는다). 일부 실시양태에서, 이행은 본원에 기재된 바와 같이 닫힌 계에서 발생한다. 일부 실시양태에서, TIL의 2차 집단인 1차 확장으로부터의 TIL은 이행 기간 없이 2차 확장으로 직접 진행된다.
일부 실시양태에서, 1차 확장으로부터 2차 확장으로의 이행, 예를 들어 도 9에 따른 단계 C는 닫힌 계 생물반응기에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 닫힌 계가 사용된다. 일부 실시양태에서, 단일 생물반응기가 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용된 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
D. 단계 D: 2차 확장
일부 실시양태에서, TIL 세포 집단은 수확 및 초기 벌크 프로세싱 후, 예를 들어, 단계 A 및 단계 B 후 및 도 9에 나타낸 바와 같이 단계 C로 지칭된 이행 후, 수가 확장된다. 이 추가 확장은 본원에서 2차 확장이라 지칭되며, 이는 급속 확장 프로세스(REP; 뿐만 아니라 도 9의 단계 D에 나타낸 바와 같은 프로세스)라고 본 기술분야에서 일반적으로 지칭되는 확장 프로세스를 포함할 수 있다. 2차 확장은 일반적으로 기체 투과성 용기에 공급자 세포, 시토카인 공급원, 및 항-CD3 항체를 비롯한 다수의 성분을 포함하는 배양 배지를 사용하여 달성된다.
일부 실시양태에서, TIL의 2차 확장 또는 2차 TIL 확장(이는 때로 REP로 지칭되는 확장 및 도 9의 단계 D에 나타낸 바와 같은 프로세스를 포함할 수 있음)은 본 기술분야의 기술자에게 공지된 임의의 TIL 플라스크 또는 용기를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 7일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 8일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 9일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 10일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 11일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 12일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 13일 내지 약 14일 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 TIL 확장은 약 14일 동안 진행될 수 있다.
한 실시양태에서, 2차 확장은 본 개시내용의 방법을 사용하여 기체 투과성 용기에서 수행될 수 있다(예를 들어, REP로 지칭되는 확장 및 도 9의 단계 D에 나타낸 바와 같은 프로세스 포함). 예를 들어, TIL은 인터루킨-2(IL-2) 또는 인터루킨-15(IL-15)의 존재 하에 비특이적 T 세포 수용체 자극을 사용하여 급속 확장될 수 있다. 비특이적 T 세포 수용체 자극은, 예를 들어, 항-CD3 항체, 예컨대, 약 30 ng/ml의 OKT3, 마우스 모노클로날 항-CD3 항체(Ortho-McNeil, 뉴저지주 래리턴 또는 Miltenyi Biotech, 미국 오번에서 상업적으로 이용가능함) 또는 UHCT-1(BioLegend로부터 상업적으로 이용가능함, 미국 캘리포니아주 샌디에고)을 포함할 수 있다. TIL은 벡터로부터 선택적으로 발현될 수 있는 암의 항원성 부분, 예컨대 에피토프(들)를 포함하는 하나 이상의 항원을 2차 확장 동안 포함함으로써 시험관내에서 TIL의 추가 자극을 유도하기 위해 확장될 수 있으며, 그 예로는 선택적으로 T 세포 성장 인자, 예컨대, 300 IU/mL IL-2 또는 IL-15의 존재 하에, 인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2) 결합 펩티드, 예를 들어, 0.3 μM MART-1:26-35(27L) 또는 gpl 00:209-217(210M)이 있다. 다른 적합한 항원으로는, 예를 들어, NY-ESO-1, TRP-1, TRP-2, 티로시나제 암 항원, MAGE-A3, SSX-2, 및 VEGFR2, 또는 이의 항원성 부분을 포함할 수 있다. TIL은 또한 HLA-A2-발현 항원-제시 세포 상에 펄싱된 암의 동일한 항원(들)에 의한 재자극을 통해 급속 확장될 수도 있다. 대안적으로, TIL은, 예를 들어, 방사선조사된 자가 림프구 또는 방사선조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 IL-2에 의해 추가로 재자극될 수 있다. 일부 실시양태에서, 재자극은 2차 확장의 일부로 발생한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 방사선조사된 자가 림프구의 존재 하에 또는 방사선조사된 HLA-A2+ 동종이계 림프구 및 IL-2에 의해 발생한다.
한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-2를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 3000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 1000 IU/mL, 약 1500 IU/mL, 약 2000 IU/mL, 약 2500 IU/mL, 약 3000 IU/mL, 약 3500 IU/mL, 약 4000 IU/mL, 약 4500 IU/mL, 약 5000 IU/mL, 약 5500 IU/mL, 약 6000 IU/mL, 약 6500 IU/mL, 약 7000 IU/mL, 약 7500 IU/mL, 또는 약 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 1000 내지 2000 IU/mL, 2000 내지 3000 IU/mL, 3000 내지 4000 IU/mL, 4000 내지 5000 IU/mL, 5000 내지 6000 IU/mL, 6000 내지 7000 IU/mL, 7000 내지 8000 IU/mL, 또는 8000 IU/mL의 IL-2를 포함한다.
한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 OKT3 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 30 ng/mL의 OKT3 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 0.1 ng/mL, 약 0.5 ng/mL, 약 1 ng/mL, 약 2.5 ng/mL, 약 5 ng/mL, 약 7.5 ng/mL, 약 10 ng/mL, 약 15 ng/mL, 약 20 ng/mL, 약 25 ng/mL, 약 30 ng/mL, 약 35 ng/mL, 약 40 ng/mL, 약 50 ng/mL, 약 60 ng/mL, 약 70 ng/mL, 약 80 ng/mL, 약 90 ng/mL, 약 100 ng/mL, 약 200 ng/mL, 약 500 ng/mL, 및 약 1 μg/mL의 OKT3 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 0.1 ng/mL 내지 1 ng/mL, 1 ng/mL 내지 5 ng/mL, 5 ng/mL 내지 10 ng/mL, 10 ng/mL 내지 20 ng/mL, 20 ng/mL 내지 30 ng/mL, 30 ng/mL 내지 40 ng/mL, 40 ng/mL 내지 50 ng/mL, 50 ng/mL 내지 100 ng/mL의 OKT3 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21의 조합이 2차 확장 동안 조합으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, IL-2, IL-7, IL-15, 및/또는 IL-21 뿐만 아니라 이들의 임의의 조합은, 예를 들어, 본원에 기재된 것뿐만 아니라 도 9에 따른 단계 D 프로세스 동안을 포함하는 2차 확장 동안 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21의 조합은 2차 확장 동안 조합으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, IL-2, IL-15, 및 IL-21 뿐만 아니라 이들의 임의의 조합은 도 9에 따르고, 본원에 기재된 바와 같은 단계 D 프로세스 동안 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 2차 확장은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 공급자 세포를 포함하는 보충된 세포 배양 배지에서 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 보충된 세포 배양 배지에서 발생한다. 일부 실시양태에서, 보충된 세포 배양 배지는 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 공급자 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 세포 배양 배지는 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC; 항원 제시 공급자 세포라고도 지칭됨)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 공급자 세포(즉, 항원 제시 세포)를 포함하는 세포 배양 배지에서 발생한다.
일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15, 약 400 IU/mL의 IL-15, 약 300 IU/mL의 IL-15, 약 200 IU/mL의 IL-15, 약 180 IU/mL의 IL-15, 약 160 IU/mL의 IL-15, 약 140 IU/mL의 IL-15, 약 120 IU/mL의 IL-15, 또는 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 500 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 400 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 300 IU/mL의 IL-15 내지 약 100 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 200 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-15를 추가로 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 180 IU/mL의 IL-15를 포함한다.
일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21, 약 15 IU/mL의 IL-21, 약 12 IU/mL의 IL-21, 약 10 IU/mL의 IL-21, 약 5 IU/mL의 IL-21, 약 4 IU/mL의 IL-21, 약 3 IU/mL의 IL-21, 약 2 IU/mL의 IL-21, 약 1 IU/mL의 IL -21, 또는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 20 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 15 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 12 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 10 IU/mL의 IL-21 내지 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 5 IU/mL의 IL-21 내지 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지는 약 2 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 0.5 IU/mL의 IL-21을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 IL-21을 추가로 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포 배양 배지는 약 1 IU/mL의 IL-21을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원 제시 공급자 세포(APC)는 PBMC이다. 한 실시양태에서, 급속 확장 및/또는 2차 확장에서 TIL 대 PBMC 및/또는 항원 제시 세포의 비는 약 1 대 25, 약 1 대 50, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 약 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 한 실시양태에서, 급속 확장 및/또는 2차 확장에서 TIL 대 PBMC의 비는 1 대 50 내지 1 대 300 사이이다. 한 실시양태에서, 급속 확장 및/또는 2차 확장에서 TIL 대 PBMC의 비는 1 대 100 내지 1 대 200 사이이다.
한 실시양태에서, REP 및/또는 2차 확장은 150 ml 배지에 벌크 TIL이 100배 또는 200배 과량의 비활성화된 공급자 세포, 30 mg/mL OKT3 항-CD3 항체 및 3000 IU/mL IL-2와 혼합되어 있는 플라스크에서 수행된다. 세포가 대안적 성장 챔버로 이동될 때까지 배지 교체(새로운 배지로의 호흡(respiration)을 통해 일반적으로 2/3 배지 교체)가 수행된다. 대안적인 성장 챔버로는 G-REX 플라스크 및 이하에 더욱 충분하게 논의되는 기체 투과성 용기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 2차 확장(REP 프로세스로 지칭되는 프로세스를 포함할 수 있음)은 실시양태 및 도면에서 논의되는 바와 같이 7-14일로 단축된다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 11일로 단축된다.
한 실시양태에서, REP 및/또는 2차 확장은 T-175 플라스크 및 이전에 기재된 바와 같은 기체 투과성 백(Tran, et al., J. Immunother. 2008, 31, 742-51; Dudley, et al., J. Immunother. 2003, 26, 332-42) 또는 기체 투과성 배양기(G-Rex 플라스크)를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 확장(급속 확장으로 지칭되는 확장 포함)은 T-175 플라스크에서 수행되고, 150 mL의 배지에 현탁된 약 1 × 106 TIL이 각 T-175 플라스크에 첨가될 수 있다. TIL은 3000 IU/mL의 IL-2 및 30 ng/ml의 항-CD3이 보충된 CM과 AIM-V 배지의 1:1 혼합물에서 배양될 수 있다. T-175 플라스크는 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션될 수 있다. 배지의 절반은 5일째 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 50/50 배지를 사용하여 교환될 수 있다. 일부 실시양태에서, 7일째 2개의 T-175 플라스크로부터의 세포는 3 L 백에서 조합될 수 있고, 5% 인간 AB 혈청 및 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 300 mL의 AIM V를 300 ml의 TIL 현탁액에 첨가했다. 각 백의 세포 수는 매일 또는 2일마다 계수했고, 새로운 배지를 추가하여 세포 카운트를 0.5와 2.0 × 106 세포/mL 사이로 유지했다.
한 실시양태에서, 2차 확장(REP로 지칭되는 확장, 뿐만 아니라 도 9의 단계 D에서 지칭되는 확장을 포함할 수 있음)은 100cm 기체 투과성 실리콘 바닥을 갖는 500mL 용량의 기체 투과성 플라스크(G-Rex 100, 미국 미네소타주 뉴 브라이튼 소재 Wilson Wolf Manufacturing Corporation에서 상업적으로 이용가능함)에서 수행될 수 있고, 5×106 또는 10×106 TIL은 5% 인간 AB 혈청, 3000 IU/mL의 IL-2 및 30 ng/ml의 항-CD3(OKT3)이 보충된 50/50 배지 400 mL에서 PBMC와 함께 배양될 수 있다. G-Rex 100 플라스크는 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션될 수 있다. 5일째에, 상청액 250mL를 제거하고 원심분리기 병에 넣고 1500rpm(491×g)에서 10분 동안 원심분리할 수 있다. TIL 펠릿은 5% 인간 AB 혈청, 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 새로운 배지 150mL 에 의해 재현탁될 수 있고 원래 G-Rex 100 플라스크에 다시 첨가될 수 있다. TIL이 G-Rex 100 플라스크에서 연속적으로 확장되면 7일째에 각 G-Rex 100 중의 TIL은 각 플라스크에 존재하는 배지 300mL에 현탁될 수 있고, 세포 현탁액은 3개의 100mL 분취량으로 분할하여 3개의 G-Rex 100 플라스크에 파종하는 데 사용될 수 있다. 그런 다음, 5% 인간 AB 혈청 및 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 AIM-V 150mL를 각 플라스크에 첨가할 수 있다. G-Rex 100 플라스크는 5% CO2 중 37℃에서 인큐베이션될 수 있고, 4일 후에 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 AIM-V 150mL가 각 G-REX 100 플라스크에 첨가될 수 있다. 세포는 배양 14일째에 수확할 수 있다.
한 실시양태에서, 2차 확장(REP로 지칭되는 확장 포함)은 벌크 TIL이 150 ml 배지에서 100배 또는 200배 과량의 비활성화된 공급자 세포, 30 mg/mL OKT3 항-CD3 항체 및 3000 IU/mL IL-2와 혼합되어 있는 플라스크에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 배지 교체는 세포가 대안적인 성장 챔버로 전달될 때까지 수행한다. 일부 실시양태에서, 배지의 2/3은 신선한 배지를 이용한 호흡에 의해 교체된다. 일부 실시양태에서, 대안적인 성장 챔버는 G-REX 플라스크 및 이하에 더욱 충분하게 논의되는 바와 같은 기체 투과성 용기를 포함한다.
한 실시양태에서, 2차 확장(REP로 지칭되는 확장 포함)이 수행되고, 우수한 종양 반응성에 대해 TIL이 선택되는 단계를 추가로 포함한다. 본 기술분야에 공지된 임의의 선택 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2016/0010058 A1호에 기재된 방법이 우수한 종양 반응성에 대한 TIL의 선택에 사용될 수 있다.
선택적으로, 세포 생존력 검정은 본 기술분야에 공지된 표준 검정을 사용하여 2차 확장(REP 확장으로 지칭되는 확장 포함) 후에 수행될 수 있다. 예를 들어, 트리판 블루 배제 검정은 사세포를 선택적으로 표지하고 생존력 평가를 허용하는 벌크 TIL의 샘플에서 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL 샘플은 Cellometer K2 자동 세포 계수기(Nexcelom Bioscience, 매사츄세츠주 로렌스)를 사용하여 계수되고 생존력이 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생존력은 예를 들어 실시양태 15에 기재된 Cellometer K2 Image Cytometer Automatic Cell Counter 프로토콜에 따라 결정된다.
일부 실시양태에서, TIL의 2차 확장(REP로 지칭되는 확장 포함)은 T-175 플라스크 및 이전에 기재된 바와 같은(Tran KQ, Zhou J, Durflinger KH, et al., 2008, J Immunother., 31:742-751 및 Dudley ME, Wunderlich JR, Shelton TE, et al. 2003, J Immunother., 26:332-342) 기체 투과성 백, 또는 기체 투과성 G-Rex 플라스크를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 플라스크를 사용하여 수행된다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 기체 투과성 G-Rex 플라스크를 사용하여 수행된다. 일부 실시양태에서, 2차 확장은 T-175 플라스크에서 수행되고, 약 1×106 TIL이 약 150 mL의 배지에 현탁되고 이것이 각 T-175 플라스크에 첨가된다. TIL은 방사선조사된(50 Gy) 동종이계 PBMC와 함께 1 대 100의 비로 "공급자" 세포로서 배양되고, 세포는 3000 IU/mL의 IL-2 및 30 ng/mL의 항-CD3이 보충된 CM 및 AIM-V 배지의 1:1 혼합물(50/50 배지)에서 배양되었다. T-175 플라스크는 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션된다. 일부 실시양태에서, 배지의 절반은 5일째에 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 50/50 배지를 사용하여 교환한다. 일부 실시양태에서, 7일째에, 2개의 T-175 플라스크로부터의 세포를 3L 백에서 조합하고 5% 인간 AB 혈청 및 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 AIM-V 300 mL를 TIL 현탁액 300mL에 첨가한다. 각 백에 있는 세포의 수는 매일 또는 2일마다 계수할 수 있고 세포 카운트를 약 0.5와 약 2.0×106 세포/mL 사이로 유지하기 위해 신선한 배지를 첨가할 수 있다.
일부 실시양태에서, 2차 확장(REP로 지칭되는 확장 포함)은 100cm2 기체 투과성 실리콘 바닥을 갖는 500 mL 용량의 플라스크(G-Rex 100, Wilson Wolf)(도 1)에서 수행되고, 약 5x106 또는 10x106 TIL이 3000 IU/mL의 IL-2 및 30 ng/mL의 항-CD3이 보충된 50/50 배지 400 mL에서 방사선조사된 동종이계 PBMC와 함께 1 대 100의 비로 배양된다. G-Rex 100 플라스크는 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션된다. 일부 실시양태에서, 5일째에 상청액의 250mL를 제거하여 원심분리기 병에 넣고 10분 동안 1500rpm(491g)에서 원심분리한다. 그런 다음, TIL 펠릿은 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 신선한 50/50 배지 150 mL로 재현탁하여 원래의 G-Rex 100 플라스크에 다시 첨가될 수 있다. TIL이 G-Rex 100 플라스크에서 연속적으로 확장되는 실시양태에서, 7일째에 각 G-Rex 100의 TIL은 각 플라스크에 존재하는 300mL 배지에 현탁되고 세포 현탁액은 3개의 100mL 분취량으로 나누어, 3개의 G-Rex 100 플라스크에 파종하는데 사용한다. 그런 다음 5% 인간 AB 혈청 및 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 AIM-V 150mL를 각 플라스크에 첨가한다. G-Rex 100 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고 4일 후 3000 IU/mL의 IL-2가 포함된 AIM-V 150mL를 각 G-Rex 100 플라스크에 첨가한다. 세포는 배양 14일째에 수확한다.
T 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한적이지만 많은 수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생산된다. 이러한 유전자 분절, 즉 V(가변), D(다양성), J(연결) 및 C(불변)는 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법에 의해 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 2차 확장에서 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 실시양태에서, 다양성은 면역글로불린에 있고 면역글로불린 중쇄에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 면역글로불린에 있고 면역글로불린 경쇄에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 T-세포 수용체에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 알파, 베타, 감마 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 알파, 베타, 감마 및 델타 수용체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 T-세포 수용체 중 하나에 있다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다.
일부 실시양태에서, 2차 확장 배양 배지(예를 들어, 때로 CM2 또는 2차 세포 배양 배지로 지칭됨)는 IL-2, OKT-3 및 이하에 더욱 상세히 논의되는 항원 제시 공급자 세포(APC)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 2차 확장, 예를 들어, 도 9에 따른 단계 D는 닫힌 계 생물반응기에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계는 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 단일 생물반응기가 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용된 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
1. 공급자 세포 및 항원 제시 세포
한 실시양태에서, 본원에 기재된 2차 확장 절차(예를 들어, 도 9의 단계 D에 기재된 것, 뿐만 아니라 REP로 지칭되는 것과 같은 확장을 포함함)는 REP TIL 확장 및/또는 2차 확장 동안 과량의 공급자 세포를 필요로 한다. 많은 실시양태에서, 공급자 세포는 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전체 혈액 단위로부터 수득되는 말초 혈핵 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 방사선조사 또는 열처리를 통해 비활성화되고, 실시양태, 특히 방사선조사 동종이계 PBMC의 복제 불능을 평가하기 위한 예시적인 프로토콜을 제공하는 실시양태 14에 기재된 바와 같은 REP 절차에 사용된다.
일부 실시양태에서, PBMC는 14일째에 생존 세포의 총 수가 REP 0일째 및/또는 2차 확장 0일째(즉, 2차 확장의 시작일)에 배양물에 투입된 초기 생존 세포 수보다 적은 경우, 복제 불능으로 간주되고 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용이 허용된다. 예를 들어, 실시양태 14를 참조한다.
일부 실시양태에서, PBMC는 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생존 세포의 총 수가 7일 및 14일째에, REP 0일째 및/또는 2차 확장 0일째(즉, 2차 확장의 시작일)에 배양물에 투입된 초기 생존 세포의 수로부터 증가되지 않았다면, 복제 불능으로 간주되며 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용이 허용된다. 일부 실시양태에서, PBMC는 30 ng/ml OKT3 항체 및 3000 IU/ml IL-2의 존재 하에 배양된다. 예를 들어, 실시양태 13을 참조한다.
일부 실시양태에서, PBMC는 OKT3 및 IL-2의 존재 하에 배양된 생세포의 총 수가 7일 및 14일째에, REP 0일째 및/또는 2차 확장 0일째(즉, 2차 확장의 시작일)에 배양물에 투입된 초기 생존 세포의 수로부터 증가되지 않았다면, 복제 불능으로 간주되며 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용이 허용된다. 일부 실시양태에서, PBMC는 5-60 ng/ml OKT3 항체 및 1000-6000 IU/ml IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 실시양태에서, PBMC는 10-50 ng/ml OKT3 항체 및 2000-5000 IU/ml IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 실시양태에서, PBMC는 20-40 ng/ml OKT3 항체 및 2000-4000 IU/ml IL-2의 존재 하에 배양된다. 일부 실시양태에서, PBMC는 25-35 ng/ml OKT3 항체 및 2500-3500 IU/ml IL-2의 존재 하에 배양된다.
일부 실시양태에서, 항원 제시 공급자 세포는 PBMC이다. 일부 실시양태에서, 항원-제시 공급자 세포는 인공 항원-제시 공급자 세포이다. 한 실시양태에서, 2차 확장에서 TIL 대 항원 제시 공급자 세포의 비는 약 1 대 25, 약 1 대 50, 약 1 대 100, 약 1 대 125, 약 1 대 150, 약 1 대 175, 1 대 200, 약 1 대 225, 약 1 대 250, 약 1 대 275, 약 1 대 300, 약 1 대 325, 약 1 대 350, 약 1 대 375, 약 1 대 400, 또는 약 1 대 500이다. 한 실시양태에서, 2차 확장에서 TIL 대 항원-제시 공급자 세포의 비는 1 대 50 내지 1 대 300 사이이다. 한 실시양태에서, 2차 확장에서 TIL 대 항원-제시 공급자 세포의 비는 1 대 100 내지 1 대 200이다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 2차 확장 절차는 약 2.5×109 공급자 세포 대 약 100×106 TIL의 비를 필요로 한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 2차 확장 절차는 약 2.5×109 공급자 세포 대 약 50×106 TIL의 비를 필요로 한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 2차 확장 절차는 약 2.5×109 공급자 세포 대 약 25×106 TIL을 필요로 한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 2차 확장 절차는 2차 확장 동안 과량의 공급자 세포를 필요로 한다. 많은 실시양태에서, 공급자 세포는 건강한 혈액 공여자로부터의 표준 전체 혈액 단위로부터 수득되는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. PBMC는 Ficoll-Paque 구배 분리와 같은 표준 방법을 사용하여 수득된다. 한 실시양태에서, PBMC 대신에 인공 항원 제시(aAPC) 세포가 사용된다.
일반적으로, 동종이계 PBMC는 방사선조사 또는 열처리를 통해 비활성화되고, 도 5, 6, 8, 9, 10 및 11에 기재된 예시적인 절차를 비롯한 본원에 기재된 TIL 확장 절차에 사용된다.
한 실시양태에서, 인공 항원 제시 세포는 PBMC의 대체물로서, 또는 PBMC와 조합으로 2차 확장에 사용된다.
2. 시토카인
본원에 기재된 확장 방법은 일반적으로 본 기술분야에 공지된 바와 같은 시토카인, 특히 IL-2의 고용량을 갖는 배양 배지를 사용한다.
대안적으로, TILS의 급속 확장 및/또는 2차 확장을 위해 시토카인의 조합을 사용하는 것이 추가로 가능하며, 일반적으로 전체가 분명하게 본원에 참조로 포함되는 국제 공개 제WO 2015/189356호 및 WO 국제 공개 제WO 2015/189357호에 개략되어 있는 것으로서 IL-2, IL-15 및 IL-21 중 2종 이상의 조합이 있다. 따라서, 가능한 조합으로는 IL-2와 IL-15, IL-2와 IL-21, IL-15와 IL-21 및 IL-2, IL-15와 IL-21을 포함하며, 후자는 많은 실시양태에서 특히 유용하다. 시토카인 조합의 사용은 림프구의 발생, 특히 본원에 기재된 바와 같은 T-세포의 발생에 특히 유리하다.
3. 항-CD3 항체
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 확장 방법에 사용되는 배양 배지(REP로 지칭되는 것을 포함함, 예를 들어 도 9 참조)는 또한 항-CD3 항체를 포함한다. IL-2와 조합된 항-CD3 항체는 TIL 집단에서 T 세포 활성화 및 세포 분열을 유도한다. 이 효과는 전체 길이의 항체, 뿐만 아니라 Fab 및 F(ab')2 단편에서도 관찰될 수 있으며, 전자가 일반적으로 바람직하다; 예를 들어, 전체가 본원에 참조로 포함되는 Tsoukas et al., J. Immunol. 1985, 135, 1719를 참조한다.
본 기술분야의 기술자에 의해 인식되는 바와 같이, 본 발명에 사용될 수 있는 적합한 항-인간 CD3 항체는 다수가 있으며, 그 예로는 뮤린, 인간, 영장류, 래트, 및 개과의 항체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 다양한 포유류로부터의 항-인간 CD3 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함한다. 특정 실시양태에서, OKT3 항-CD3 항체가 사용된다(뉴저지주 래리턴 소재의 오르토-맥닐(Ortho-McNeil) 또는 캘리포니아주 오번 소재의 밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotech)으로부터 상업적으로 이용가능함).
E. 단계 E: TIL 수확
2차 확장 단계 후, 세포가 수확될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은, 예를 들어, 도 9에 제공된 바와 같이 1회, 2회, 3회, 4회 또는 그 이상의 확장 단계 후에 수확된다. 일부 실시양태에서, TIL은 예를 들어 도 9에 제공된 바와 같이 2회의 확장 단계 후에 수확된다.
TIL은, 예를 들어, 원심분리를 포함하는 임의의 적절한 멸균 방식으로 수확될 수 있다. TIL 수확 방법은 본 기술분야에 잘 알려져 있으며 이러한 공지된 임의의 방법이 본 프로세스에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 자동화 시스템을 사용하여 수확된다.
세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 예를 들어 Fresenius Kabi, Tomtec Life Science, Perkin Elmer 및 Inotech Biosystems International, Inc.를 비롯한 다양한 공급원으로부터 상업적으로 이용가능하다. 임의의 세포 기반 수확기가 본 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 멤브레인 기반 세포 수확기이다. 일부 실시양태에서, 세포 수확은 LOVO 시스템(Fresenius Kabi에 의해 제조됨)과 같은 세포 처리 시스템을 통해 이루어진다. "LOVO 세포 처리 시스템"이라는 용어는 또한 멸균 및/또는 닫힌 계 환경에서 스피닝 멤브레인 또는 스피닝 필터와 같은 멤브레인 또는 필터를 통해 세포를 포함하는 용액을 펌핑하여, 펠릿화 없이 상청액 또는 세포 배양 배지를 제거하기 위한 연속 유동 및 세포 처리를 허용할 수 있는, 임의의 공급업체에서 제조한 임의의 기기 또는 장치를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 세포 수확기 및/또는 세포 처리 시스템은 밀폐된 멸균 시스템에서 세포 분리, 세척, 유체 교환, 농축 및/또는 기타 세포 처리 단계를 수행할 수 있다.
일부 실시양태에서, 수확, 예를 들어 도 9에 따른 단계 E는 닫힌 계 생물반응기로부터 수행된다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계는 본원에 기재된 바와 같이 TIL 확장을 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 단일 생물반응기가 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용된 단일 생물반응기는 예를 들어 G-REX-10 또는 G-REX-100이다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계 생물반응기는 단일 생물반응기이다.
F. 단계 F: 최종 제형/주입 백으로의 전달
도 9에 예시적인 순서로 제공되고 앞에서 그리고 본원에 상세히 개략된 바와 같은 단계 A 내지 E가 완료된 후, 세포는 환자에 대한 투여에 사용하기 위한 용기로 전달된다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 확장 방법을 사용하여 치료적으로 충분한 수의 TIL이 수득되면, 이들은 환자에게 투여하는 데 사용하기 위한 용기로 전달된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 APC를 사용하여 확장된 TIL은 제약 조성물로서 환자에게 투여된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 멸균 완충액 중 TIL의 현탁액이다. 본 개시내용의 PBMC를 사용하여 확장된 TIL은 본 기술분야에 공지된 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, T-세포는 단일 동맥내 또는 정맥내 주입으로서 투여되며, 이는 바람직하게는 대략 30 내지 60분 동안 지속된다. 다른 적절한 투여 경로로는 복강내, 척추강내 및 림프내를 포함한다.
1. 제약 조성물, 투여량 및 투여 요법
한 실시양태에서, 본 개시내용의 방법을 사용하여 확장된 TIL은 제약 조성물로서 환자에게 투여된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 멸균 완충제 중 TIL의 현탁액이다. 본 개시내용의 PBMC를 사용하여 확장된 TIL은 본 기술분야에 공지된 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, T-세포는 바람직하게는 대략 30 내지 60분 동안 지속되는 단일 동맥내 또는 정맥내 주입으로서 투여된다. 다른 적절한 투여 경로로는 복강내, 척추강내 및 림프내 투여를 포함한다.
임의의 적합한 용량의 TIL이 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 특히 암이 흑색종인 경우, 약 2.3×1010 내지 약 13.7×1010 TIL이 투여되고, 평균 약 7.8×1010 TIL이 투여된다. 한 실시양태에서, 약 1.2×1010 내지 약 4.3×1010의 TIL이 투여된다. 일부 실시양태에서, 약 3×1010 내지 약 12×1010 TIL이 투여된다. 일부 실시양태에서, 약 4×1010 내지 약 10×1010 TIL이 투여된다. 일부 실시양태에서, 약 5×1010 내지 약 8×1010 TIL이 투여된다. 일부 실시양태에서, 약 6×1010 내지 약 8×1010 TIL이 투여된다. 일부 실시양태에서, 약 7×1010 내지 약 8×1010 TIL이 투여된다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 2.3×1010 내지 약 13.7×1010이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 7.8×1010 TIL이며, 특히 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 1.2×1010 내지 약 4.3×1010 TIL이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 3×1010 내지 약 12×1010 TIL이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 4×1010 내지 약 10×1010 TIL이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 5×1010 내지 약 8×1010 TIL이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 6×1010 내지 약 8×1010 TIL이다. 일부 실시양태에서, 치료 유효 투여량은 약 7×1010 내지 약 8×1010 TIL이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 수는 약 1×106, 2×106, 3×106, 4×106, 5×106, 6x106, 7x106, 8×106, 9×106, 1×107, 2×107, 3×107, 4×107, 5×107, 6×107, 7×107, 8×107, 9×107, 1×108, 2×108, 3×108, 4×108, 5×108, 6×108, 7×108, 8×108, 9×108, 1×109, 2×109, 3×109, 4×109, 5×109, 6×109, 7×109, 8×109, 9×109, 1×1010, 2×1010, 3×1010, 4×1010, 5×1010, 6×1010, 7×1010, 8×1010, 9×1010, 1×1011, 2×1011, 3×1011, 4×1011, 5×1011, 6×1011, 7×1011, 8×1011, 9×1011, 1×1012, 2×1012, 3×1012, 4×1012, 5×1012, 6×1012, 7×1012, 8×1012, 9×1012, 1×1013, 2×1013, 3×1013, 4×1013, 5×1013, 6×1013, 7×1013, 8×1013, 및 9×1013이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 수는 1×106 내지 5×106, 5×106 내지 1×107, 1×107 내지 5×107, 5×107 내지 1×108, 1×108 내지 5×108, 5×108 내지 1×109, 1×109 내지 5×109, 5×109 내지 1×1010, 1×1010 내지 5×1010, 5×1010 내지 1×1011, 5×1011 내지 1×1012, 1×1012 내지 5×1012, 및 5×1012 내지 1×1013이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 농도는, 예를 들어, 제약 조성물의 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02% 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v 또는 v/v 미만이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 농도는 제약 조성물의 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19.75%, 19.50%, 19.25% 19%, 18.75%, 18.50%, 18.25% 18%, 17.75%, 17.50%, 17.25% 17%, 16.75%, 16.50%, 16.25%, 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25%, 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11.75%, 11.50%, 11.25% 11%, 10.75%, 10.50%, 10.25% 10%, 9.75%, 9.50%, 9.25% 9%, 8.75%, 8.50%, 8.25% 8%, 7.75%, 7.50%, 7.25% 7%, 6.75%, 6.50%, 6.25%, 6%, 5.75%, 5.50%, 5.25% 5%, 4.75%, 4.50%, 4.25%, 4%, 3.75%, 3.50%, 3.25%, 3%, 2.75%, 2.50%, 2.25%, 2%, 1.75%, 1.50%, 125%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v, 또는 v/v 초과이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 농도는 제약 조성물의 약 0.0001% 내지 약 50%, 약 0.001% 내지 약 40%, 약 0.01% 내지 약 30%, 0.02% 내지 약 29%, 약 0.03% 내지 약 28%, 약 0.04% 내지 약 27%, 약 0.05% 내지 약 26%, 약 0.06% 내지 약 25%, 약 0.07% 내지 약 24%, 약 0.08% 내지 약 23%, 약 0.09% 내지 약 22%, 약 0.1% 내지 약 21%, 약 0.2% 내지 약 20%, 약 0.3% 내지 약 19%, 약 0.4% 내지 약 18%, 약 0.5% 내지 약 17%, 약 0.6% 내지 약 16%, 약 0.7% 내지 약 15%, 약 0.8% 내지 약 14%, 약 0.9% 내지 약 12% 또는 약 1% 내지 약 10% w/w, w/v 또는 v/v 범위이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 농도는 제약 조성물의 약 0.001% 내지 약 10%, 약 0.01% 내지 약 5%, 약 0.02% 내지 약 4.5%, 0.03% 내지 약 4%, 약 0.04% 내지 약 3.5%, 약 0.05% 내지 약 3%, 약 0.06% 내지 약 2.5%, 약 0.07% 내지 약 2%, 약 0.08% 내지 약 1.5%, 약 0.09% 내지 약 1%, 약 0.1% 내지 약 0.9% w/w, w/v 또는 v/v 범위이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 양은 10g, 9.5g, 9.0g, 8.5g, 8.0g, 7.5g, 7.0g, 6.5g, 6.0g, 5.5g, 5.0g, 4.5g, 4.0g, 3.5g, 3.0g, 2.5g, 2.0g, 1.5g, 1.0g, 0.95g, 0.9g, 0.85g, 0.8g, 0.75g, 0.7g, 0.65g, 0.6g, 0.55g, 0.5g, 0.45g, 0.4g, 0.35g, 0.3g, 0.25g, 0.2g, 0.15g, 0.1g, 0.09g, 0.08g, 0.07g, 0.06g, 0.05g, 0.04g, 0.03g, 0.02g, 0.01g, 0.009g, 0.008g, 0.007g, 0.006g, 0.005g, 0.004g, 0.003g, 0.002g, 0.001g, 0.0009g, 0.0008g, 0.0007g, 0.0006g, 0.0005g, 0.0004g, 0.0003g, 0.0002g, 또는 0.0001g 이하이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL의 양은 0.0001g, 0.0002g, 0.0003g, 0.0004g, 0.0005g, 0.0006g, 0.0007g, 0.0008g, 0.0009g, 0.001g, 0.0015g, 0.002g, 0.0025g, 0.003g, 0.0035g, 0.004g, 0.0045g, 0.005g, 0.0055g, 0.006g, 0.0065g, 0.007g, 0.0075g, 0.008g, 0.0085g, 0.009g, 0.0095g, 0.01g, 0.015g, 0.02g, 0.025g, 0.03g, 0.035g, 0.04g, 0.045g, 0.05g, 0.055g, 0.06g, 0.065g, 0.07g, 0.075g, 0.08g, 0.085g, 0.09g, 0.095g, 0.1g, 0.15g, 0.2g, 0.25g, 0.3g, 0.35g, 0.4g, 0.45g, 0.5g, 0.55g, 0.6g, 0.65g, 0.7g, 0.75g, 0 0.8g, 0.85g, 0.9g, 0.95g, 1g, 1.5g, 2g, 2.5, 3g, 3.5, 4g, 4.5g, 5g, 5.5g, 6g, 6.5g, 7g, 7.5 g, 8g, 8.5g, 9g, 9.5g, 또는 10g 초과이다.
본 발명의 제약 조성물에 제공된 TIL은 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 정확한 투여량은 투여 경로, 화합물이 투여되는 형태, 치료할 대상체의 성별 및 연령, 치료할 대상체의 체중, 및 주치의의 선호도 및 경험에 따라 달라질 것이다. 적절한 경우 임상적으로 확립된 TIL 투여량이 사용될 수도 있다. TIL의 투여량과 같이, 본원의 방법을 사용하여 투여되는 제약 조성물의 양은 치료 받는 인간 또는 포유류, 장애 또는 상태의 중증도, 투여 속도, 활성 제약 성분의 배치 및 처방 의사의 재량에 따라 달라질 것이다.
일부 실시양태에서, TIL은 단일 용량으로 투여될 수 있다. 이러한 투여는 주사, 예를 들어, 정맥내 주사에 의한 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 다중 용량으로 투여될 수 있다. 투여는 1년에 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 또는 6회 초과일 수 있다. 투여는 월 1회, 2주에 1회, 주 1회, 또는 격일에 1회일 수 있다. TIL의 투여는 필요한 한 오랫 동안 계속될 수 있다.
일부 실시양태에서, TIL의 유효 투여량은 약 1×106, 2×106, 3×106, 4×106, 5×106, 6x106, 7×106, 8×106, 9×106, 1×107, 2×107, 3×107, 4×107, 5×107, 6×107, 7×107, 8×107, 9×107, 1×108, 2×108, 3×108, 4×108, 5×108, 6×108, 7×108, 8×108, 9×108, 1×109, 2×109, 3×109, 4×109, 5×109, 6×109, 7×109, 8×109, 9×109, 1×1010, 2×1010, 3×1010, 4×1010, 5×1010, 6×1010, 7×1010, 8×1010, 9×1010, 1×1011, 2×1011, 3×1011, 4×1011, 5×1011, 6×1011, 7×1011, 8×1011, 9×1011, 1×1012, 2×1012, 3×1012, 4×1012, 5×1012, 6×1012, 7×1012, 8×1012, 9×1012, 1×1013, 2×1013, 3×1013, 4×1013, 5×1013, 6×1013, 7×1013, 8×1013, 및 9×1013이다. 일부 실시양태에서, TIL의 유효 투여량은 1×106 내지 5×106, 5×106 내지 1×107, 1×107 내지 5×107, 5×107 내지 1×108, 1×108 내지 5×108, 5×108 내지 1×109, 1×109 내지 5×109, 5×109 내지 1×1010, 1×1010 내지 5×1010, 5×1010 내지 1×1011, 5×1011 내지 1×1012, 1×1012 내지 5×1012, 및 5×1012 내지 1×1013 범위이다.
일부 실시양태에서, TIL의 유효 투여량은 약 0.01 mg/kg 내지 약 4.3 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 3.6 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 3.2 mg/kg, 약 0.35 mg/kg 내지 약 2.85 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 2.85 mg/kg, 약 0.3 mg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.45 mg/kg 내지 약 1.7 mg/kg, 약 0.15 mg/kg 내지 약 1.3 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 1.15 mg/kg, 약 0.45 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.55 mg/kg 내지 약 0.85 mg/kg, 약 0.65 mg/kg 내지 약 0.8 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 내지 약 0.75 mg/kg, 약 0.7 mg/kg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.85 mg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 1.85 mg/kg, 약 1.15 mg/kg 내지 약 1.7 mg/kg, 약 1.3 mg/kg 내지 약 1.6 mg/kg, 약 1.35 mg/kg 내지 약 1.5 mg/kg, 약 2.15 mg/kg 내지 약 3.6 mg/kg, 약 2.3 mg/kg 내지 약 3.4 mg/kg, 약 2.4 mg/kg 내지 약 3.3 mg/kg, 약 2.6 mg/kg 내지 약 3.15 mg/kg, 약 2.7 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 2.8 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 또는 약 2.85 mg/kg 내지 약 2.95 mg/kg의 범위이다.
일부 실시양태에서, TIL의 유효 투여량은 약 1 mg 내지 약 500 mg, 약 10 mg 내지 약 300 mg, 약 20 mg 내지 약 250 mg, 약 25 mg 내지 약 200 mg, 1 mg 내지 약 50 mg, 약 5 mg 내지 약 45 mg, 약 10 mg 내지 약 40 mg, 약 15 mg 내지 약 35 mg, 약 20 mg 내지 약 30 mg, 약 23 mg 내지 약 28 mg, 약 50 mg 내지 약 150 mg, 약 60 mg 내지 약 140 mg, 약 70 mg 내지 약 130 mg, 약 80 mg 내지 약 120 mg, 약 90 mg 내지 약 110 mg, 또는 약 95 mg 내지 약 105 mg, 약 98 mg 내지 약 102 mg, 약 150 mg 내지 약 250 mg, 약 160 mg 내지 약 240 mg, 약 170 mg 내지 약 230 mg, 약 180 mg 내지 약 220 mg, 약 190 mg 내지 약 210 mg, 약 195 mg 내지 약 205 mg, 또는 약 198 내지 약 207 mg 범위이다.
TIL의 유효량은 유사한 유용성이 있는 작동제의 허용되는 임의의 투여 방식에 의해, 예컨대, 비내 및 피하 경로, 동맥내 주사에 의해, 정맥내, 복강내, 비경구, 근육내, 피하, 국소, 이식 또는 흡입에 의해 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다.
G. 선택적인 세포 생존력 분석
선택적으로, 세포 생존력 검정은 본 기술분야에 알려진 표준 검정을 사용하여 단계 B의 1차 확장 후에 수행될 수 있다. 예를 들어, 트리판 블루 배제 검정은 사세포를 선택적으로 라벨링하고 생존력 평가를 허용하는, 벌크 TIL의 샘플에 수행될 수 있다. 생존력 테스트에 사용하기 위한 기타 검정으로는 Alamar 블루 검정; 및 MTT 검정을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
1. 세포 카운트, 생존력, 유세포 분석
일부 실시양태에서, 세포 수 및/또는 생존력이 측정된다. 본원에 개시되거나 기재된 임의의 다른 것뿐만 아니라 CD3, CD4, CD8 및 CD56과 같지만, 이에 제한되지 않는 마커의 발현은 항체, 예를 들어, BD Bio-sciences(BD Biosciences, 캘리포니아주 산요세)에서 상업적으로 이용가능한 것이지만, 이에 제한되지 않는 항체를 가지고 FACSCantoTM 유세포 분석기(BD Biosciences)를 사용하여 유세포분석에 의해 측정할 수 있다. 세포는 일회용 c-칩 혈구계산기(VWR, 일리노이주 바타비아)를 사용하여 수동으로 계수할 수 있고, 생존력은 트립판 블루 염색을 포함하나 이에 제한되지 않는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 평가할 수 있다.
일부 경우에, 벌크 TIL 집단은 이하에 논의되는 프로토콜을 사용하여 즉시 냉동보존될 수 있다. 대안적으로, 벌크 TIL 집단은 REP를 거친 다음, 이하에 논의되는 바와 같이 냉동보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 경우, 벌크 또는 REP TIL 집단은 적절한 치료를 위해 유전자 변형으로 처리될 수 있다.
2. 세포 배양
한 실시양태에서, TIL을 확장하는 방법은 약 5,000mL 내지 약 25,000mL의 세포 배지, 약 5,000mL 내지 약 10,000mL의 세포 배지, 또는 약 5,800mL 내지 약 8,700mL의 세포 배지를 사용하는 것을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, TIL의 수를 확장하는 것은 1종 이하의 세포 배양 배지를 사용한다. 임의의 적합한 세포 배양 배지, 예를 들어 AIM-V 세포 배지(L-글루타민, 50μM 스트렙토마이신 설페이트, 및 10μM 겐타마이신 설페이트) 세포 배양 배지(Invitrogen, 캘리포니아주 칼스배드)가 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명의 방법은 TIL의 수를 확장하기 위해 필요한 배지의 양 및 배지 유형의 수를 유리하게 감소시킨다. 한 실시양태에서, TIL의 수를 확장하는 것은 3일 또는 4일마다 보다 덜 빈번하게 신선한 세포 배양 배지를 세포에 첨가하는 것(세포에게 영양공급하기로도 지칭됨)을 포함할 수 있다. 기체 투과성 용기에서 세포 수를 확장하는 것은 세포를 확장하는 데 필요한 영양공급 빈도를 줄임으로써 세포 수를 확장하는 데 필요한 절차를 간소화한다.
한 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 기체 투과성 용기 내의 세포 배지는 여과되지 않는다. 여과되지 않은 세포 배지의 사용은 세포 수를 확장하는 데 필요한 절차를 간소화할 수 있다. 한 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 기체 투과성 용기의 세포 배지에는 베타-머캅토에탄올(BME)이 결여된다.
한 실시양태에서, 방법의 지속기간은 포유류로부터 종양 조직 샘플을 수득하는 단계; 세포 배지를 담고 있는 제1 기체 투과성 용기에서 종양 조직 샘플을 배양하는 단계; 종양 조직 샘플로부터 TIL을 수득하는 단계; 약 14 내지 약 42일, 예를 들어, 약 28일의 지속기간 동안 aAPC를 사용하여 세포 배지가 담긴 제2 기체 투과성 용기에서 TIL의 수를 확장하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, TIL은 기체 투과성 용기에서 확장된다. 기체 투과성 용기는 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2005/0106717 A1호에 기재된 것을 포함하는 본 기술분야에 공지된 방법, 조성물 및 장치를 사용하여 PBMC를 통해 TIL을 확장하는 데 사용되었다. 한 실시양태에서, TIL은 기체 투과성 백에서 확장된다. 한 실시양태에서, TIL은 Xuri Cell Expansion System W25(GE Healthcare)와 같은 기체 투과성 백에서 TIL을 확장하는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 한 실시양태에서, TIL은 Xuri Cell Expansion System W5(GE Healthcare)로도 알려진 WAVE Bioreactor System과 같은 기체 투과성 백에서 TIL을 확장시키는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 한 실시양태에서, 세포 확장 시스템은 약 100 mL, 약 200 mL, 약 300 mL, 약 400 mL, 약 500 mL, 약 600 mL, 약 700 mL, 약 800 mL, 약 900 mL, 약 1L, 약 2L, 약 3L, 약 4L, 약 5L, 약 6L, 약 7L, 약 8L, 약 9L, 및 약 10L로 이루어진 군으로부터 선택되는 부피를 갖는 기체 투과성 세포 백을 포함한다. 한 실시양태에서, TIL은 G-Rex 플라스크(Wilson Wolf Manufacturing으로부터 상업적으로 이용가능함)에서 확장될 수 있다. 이러한 실시양태는 세포 집단이 약 5x105 세포/cm2로부터 10x106과 30x106 세포/cm2 사이로 확장되도록 한다. 한 실시양태에서, 이러한 확장은 세포에 신선한 세포 배양 배지를 첨가(세포에 영양공급하기라고도 지칭됨)함이 없이 수행된다. 한 실시양태에서, 이것에는 배지가 G-Rex 플라스크에서 약 10cm 높이로 남아 있는 한, 영양공급이 없다. 한 실시양태에서, 이것에는 영양공급이 없지만, 하나 이상의 시토카인의 첨가를 포함한다. 한 실시양태에서, 시토카인은 배지와 시토카인을 혼합할 필요가 전혀 없이 볼루스(bolus)로서 첨가될 수 있다. 이러한 용기, 장치 및 방법은 본 기술분야에 공지되어 있고 TIL을 확장하는 데 사용되었으며, 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0377739A1호, 국제 공개 제WO 2014/210036 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US2013/0115617 A1호, 국제 공개 제WO 2013/188427 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US2011/0136228 A1호, 미국 특허 제US 8,809,050 B2호, 국제 공개 제WO 2011/072088 A2호, 미국 특허 출원 공개 제US 2016/0208216 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2012/0244133 A1호, 국제 공개 제WO 2012/129201 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2013/0102075 A1호, 미국 특허 제US 8,956,860 B2호, 국제 공개 제WO 2013/173835 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2015/0175966 A1호에 기재된 것을 포함하며, 그 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 프로세스는 또한 Jin et al., J. Immunotherapy, 2012, 35:283-292. Optional Genetic Engineering of TILs에도 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, TIL은 고친화성 T-세포 수용체(TCR), 예를 들어, MAGE-1, HER2 또는 NY-ESO-1와 같은 종양 연관 항원에 표적화된 TCR, 또는 종양 연관 세포 표면 분자(예를 들어, 메조텔린) 또는 계통 제한 세포 표면 분자(예를 들어, CD19)에 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 부가적인 작용기를 포함하도록 선택적으로 유전자 조작된다.
H. TIL의 선택적 냉동보존
상기에 논의되고 도 9에 제공된 단계 A 내지 E에 예시된 바와 같이, 냉동보존은 TIL 확장 프로세스 전반에 걸쳐 수많은 시점에서 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 2차 확장(예를 들어, 도 9의 단계 D에 따라 제공된 바와 같음) 후, TIL의 확장된 집단은 냉동보존될 수 있다. 냉동보존은 일반적으로 TIL 집단을 동결 용액, 예를 들어, 85% 보체 불활성화된 AB 혈청 및 15% 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 넣어 달성할 수 있다. 용액 중의 세포를 극저온 바이알에 넣고, -80℃에서 24시간 동안 저장하며, 선택적으로 냉동보존을 위해 기체 질소 냉동고로 전달된다. Sadeghi et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986 참조. 일부 실시양태에서, TIL은 5% DMSO에서 냉동보존된다. 일부 실시양태에서, TIL은 세포 배양 배지 + 5% DMSO에서 냉동보존된다. 일부 실시양태에서, TIL은 실시양태 8 및 9에 제공된 방법에 따라 냉동보존된다.
적절한 경우, 세포를 냉동고에서 꺼내고 용액의 약 4/5가 해동될 때까지 37℃ 수조에서 해동한다. 세포는 완전 배지에서 일반적으로 재현탁되고 선택적으로 1회 이상 세척된다. 일부 실시양태에서, 해동된 TIL은 본 기술분야에 공지된 바와 같이 계수되고 생존력에 대해 평가될 수 있다.
I. 확장된 TIL의 표현형 특성
일부 실시양태에서, TIL은 본원 및 실시양태에 기재된 것을 비롯한 확장 후 수많은 표현형 마커의 발현에 대해 분석된다. 한 실시양태에서, 하나 이상의 표현형 마커의 발현이 조사된다. 일부 실시양태에서, TIL의 표현형 특성은 단계 B에서 1차 확장 후에 분석된다. 일부 실시양태에서, TIL의 표현형 특성은 단계 C에서 이행 동안 분석된다. 일부 실시양태에서, TIL의 표현형 특성은 단계 C에 따른 이행 동안 및 냉동보존 후 분석된다. 일부 실시양태에서, TIL의 표현형 특성은 단계 D에 따른 2차 확장 후에 분석된다. 일부 실시양태에서, TIL의 표현형 특성은 단계 D에 따른 2회 이상의 확장 후에 분석된다. 일부 실시양태에서, 마커는 TCRab(즉, TCRα/β), CD57, CD28, CD4, CD27, CD56, CD8a, CD45RA, CD8a, CCR7, CD4, CD3, CD38 및 HLA-DR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 마커는 TCRab(즉, TCRα/β), CD57, CD28, CD4, CD27, CD56, 및 CD8a로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 마커는 CD45RA, CD8a, CCR7, CD4, CD3, CD38, 및 HLA-DR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 마커의 발현이 조사된다. 일부 실시양태에서, 각 군으로부터의 하나 이상의 마커로부터의 발현이 조사된다. 일부 실시양태에서, HLA-DR, CD38 및 CD69 발현 중 하나 이상이 해동된 TIL과 비교하여 신선한 TIL에서 유지된다(즉, 통계적으로 유의미한 차이를 나타내지 않음). 일부 실시양태에서, TIL의 활성화 상태는 해동된 TIL에서 유지된다.
한 실시양태에서, 하나 이상의 조절 마커의 발현이 측정된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD137, CD8a, Lag3, CD4, CD3, PD-1, TIM-3, CD69, CD8a, TIGIT, CD4, CD3, KLRG1, 및 CD154로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD137, CD8a, Lag3, CD4, CD3, PD-1, 및 TIM-3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD69, CD8a, TIGIT, CD4, CD3, KLRG1, 및 CD154로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 분자 발현은 신선한 TIL과 비교하여 해동된 TIL에서 저하된다. 일부 실시양태에서, 조절 분자 LAG-3 및 TIM-3의 발현은 신선한 TIL과 비교하여 해동된 TIL에서 저하된다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8, NK, TCRαβ 발현에는 유의미한 차이가 없다. 일부 실시양태에서, 해동된 TIL과 비교하여 신선한 TIL에서 CD4, CD8, NK, TCRαβ 발현 및/또는 기억 마커에는 유의미한 차이가 없다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 도 9에 예시된 바와 같이, 본원에 제공된 방법에 의해 생성된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에서 구현된 방법 외의 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL 간에는 CD4, CD8, NK, TCRαβ 발현의 유의미한 차이가 없다.
일부 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 수확된 TIL 집단, 및/또는 치료 TIL 집단에 대한 선택은, 전술한 것을 포함하는 또는 예를 들어, 도 9에 제공된 바와 같은 임의의 단계 동안 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ에 기초한 TIL의 1차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 TIL의 2차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 TIL의 3차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 수확된 TIL 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 TIL의 치료 집단의 선택은 수행되지 않는다.
한 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 또는 수확된 TIL 집단에 대한 선택은 하기를 포함하는 종양 침윤성 림프구(TIL)를 TIL의 치료 집단으로 확장시키는 방법 중 임의의 단계 (a) 내지 (f) 동안 수행되지 않는다:
(a) 환자로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득하는 단계;
(b) 종양 단편을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (b)로부터 단계 (c)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(d) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 2차 집단에 비해 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포의 증가된 하위집단을 포함하는 TIL의 치료 집단이며, TIL의 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (c)로부터 단계 (d)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(e) 단계 (d)로부터 수득한 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 단계 (d)로부터 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계; 및
(f) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)로부터 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계.
한 실시양태에서, CD4, CD8, 및/또는 NK, TCRαβ 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 또는 수확된 TIL 집단의 선택은 하기를 포함하는 확장된 종양 침윤성 림프구(TIL)를 투여하는 것을 포함하는 암이 있는 대상체를 치료하는 방법의 임의의 단계 (a) 내지 (h) 동안 수행되지 않는다:
(a) 환자로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득하는 단계;
(b) 종양 단편을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (b)로부터 단계 (c)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(d) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 2차 집단에 비해 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포의 증가된 하위집단을 포함하는 TIL의 치료 집단이며, TIL의 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (c)로부터 단계 (d)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(e) 단계 (d)로부터 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 단계 (d)로부터 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계; 및
(f) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)로부터 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(g) 선택적으로, 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존 프로세스를 사용하여 냉동보존하는 단계; 및
(h) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료 유효 투여량을 환자에게 투여하는 단계.
일부 실시양태에서, 기억 마커는 CCR7 및 CD62L로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 해동된 TIL과 비교하여 신선한 TIL의 생존력은 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%이다. 일부 실시양태에서, 신선한 및 해동된 TIL 둘 모두의 생존력은 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과이다. 일부 실시양태에서, 신선한 및 해동된 생성물 모두의 생존력은 80% 초과, 81% 초과, 82% 초과, 83% 초과, 84% 초과, 85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 또는 90% 초과이다. 일부 실시양태에서, 신선한 및 해동된 생성물 모두의 생존력은 86% 초과이다.
한 실시양태에서, 재자극된 TIL은 또한 시토카인 방출 검정을 사용하여 시토카인 방출에 대해 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 OKT3에 의한 자극 또는 자가 종양 분해물과의 공동 배양에 대한 응답으로 인터페론-7(IFN-7) 분비에 대해 평가될 수 있다. 예를 들어, OKT3 자극을 사용하는 실시양태에서, TIL은 광범위하게 세척되고, 인산염 완충 식염수에 희석된 0.1 또는 1.0 μg/mL의 OKT3으로 예비코팅된 96웰 평평한 바닥 플레이트에서 0.2mL CM 중 1×105 세포로 이반복 웰을 준비했다. 밤새 인큐베이션 후, 상청액을 수확하고 상청액 중 IFN-7을 ELISA(Pierce/Endogen, 매사츄세츠주 워번)에 의해 측정한다. 공동 배양 검정을 위해 1×105 TIL 세포를 자가 종양 세포와 함께(1:1 비율) 96웰 플레이트에 넣는다. 24시간 인큐베이션 후, 상청액을 수확하고 IFN-7 방출을, 예를 들어 ELISA에 의해 정량할 수 있다.
세포 표면 바이오마커의 유세포 분석: TIL 샘플은 세포 표면 마커의 유세포 분석을 위해 분취했고, 예를 들어, 실시양태 7, 8 및 9를 참조한다.
일부 실시양태에서, TIL은 다양한 조절 마커에 대해 평가되고 있다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 TCRα/β, CD56, CD27, CD28, CD57, CD45RA, CD45RO, CD25, CD127, CD95, IL-2R-, CCR7, CD62L, KLRG1, 및 CD122로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 TCRα/β이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD56이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD27이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD28이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD57이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD45RA이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD45RO이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD25이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD127이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD95이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 IL-2R-이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CCR7이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD62L이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 KLRG1이다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD122이다.
한 실시양태에서, 확장된 TIL은 본원 및 실시양태에 기재된 것을 비롯한 수많은 표현형 마커의 발현에 대해 분석된다. 실시양태에서, 하나 이상의 표현형 마커의 발현이 조사된다. 일부 실시양태에서, 마커는 TCRab(즉, TCRα/β), CD57, CD28, CD4, CD27, CD56, CD8a, CD45RA, CD8a, CCR7, CD4, CD3, CD38, 및 HLA-DR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 마커는 TCRab(즉, TCRα/β), CD57, CD28, CD4, CD27, CD56, 및 CD8a로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 마커는 CD45RA, CD8a, CCR7, CD4, CD3, CD38, 및 HLA-DR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 마커의 발현이 조사된다. 일부 실시양태에서, 각 군으로부터의 하나 이상의 마커로부터의 발현이 조사된다. 일부 실시양태에서, HLA-DR, CD38 및 CD69 발현 중 하나 이상은 해동된 TIL과 비교하여 신선한 TIL에서 유지된다(즉, 통계적으로 유의미한 차이를 나타내지 않음). 일부 실시양태에서, TIL의 활성화 상태는 해동된 TIL에서 유지된다.
한 실시양태에서, 하나 이상의 조절 마커의 발현이 측정된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD137, CD8a, Lag3, CD4, CD3, PD1, TIM-3, CD69, CD8a, TIGIT, CD4, CD3, KLRG1, 및 CD154로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD137, CD8a, Lag3, CD4, CD3, PD1, 및 TIM-3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 마커는 CD69, CD8a, TIGIT, CD4, CD3, KLRG1, 및 CD154로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 조절 분자 발현은 신선한 TIL과 비교하여 해동된 TIL에서 저하된다. 일부 실시양태에서, 조절 분자 LAG-3 및 TIM-3의 발현은 신선한 TIL과 비교하여 해동된 TIL에서 저하된다. 일부 실시양태에서, CD4, CD8, NK, TCRαβ 발현에는 유의미한 차이가 없다. 일부 실시양태에서, 해동된 TIL과 비교하여 신선한 TIL에서 CD4, CD8, NK, TCRαβ 발현 및/또는 기억 마커에는 유의미한 차이가 없다.
일부 실시양태에서, 기억 마커는 CCR7 및 CD62L로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 해동된 TIL과 비교하여 새로운 TIL의 생존력은 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%이다. 일부 실시양태에서, 신선한 및 해동된 TIL 둘 모두의 생존력은 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과이다. 일부 실시양태에서, 신선한 및 해동된 생성물 모두의 생존력은 80% 초과, 81% 초과, 82% 초과, 83% 초과, 84% 초과, 85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 또는 90% 초과이다. 일부 실시양태에서, 신선한 및 해동된 생성물 모두의 생존력은 86% 초과이다.
한 실시양태에서, 재자극된 TIL은 또한 시토카인 방출 검정을 사용하여 시토카인 방출에 대해 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 OKT3에 의한 자극 또는 자가 종양 분해물과의 공동배양에 대한 응답으로 인터페론-7(IFN-7) 분비에 대해 평가될 수 있다. 예를 들어, OKT3 자극을 사용하는 실시양태에서, TIL은 광범위하게 세척되고, 인산염 완충 식염수에 희석된 0.1 또는 1.0 μg/mL의 OKT3로 예비코팅된 96웰 평평한 바닥 플레이트에서 0.2mL CM 중 1×105 세포로 이반복 웰을 준비한다. 밤새 인큐베이션한 후, 상청액을 수확하고 상청액 중 IFN-7을 ELISA(Pierce/Endogen, Woburn, MA)에 의해 측정한다. 공동배양 검정을 위해 1×105 TIL 세포를 자가 종양 세포와 함께 96웰 플레이트에 넣는다(1:1 비율). 24시간 인큐베이션한 후 상청액을 수확하고 IFN-7 방출을, 예를 들어 ELISA에 의해 정량할 수 있다.
일부 실시양태에서, 3000 pg/106 TIL 내지 300000 pg/106 TIL 초과 또는 그 이상의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 3000 pg/106 TIL 초과, 5000 pg/106 TIL 초과, 7000 pg/106 TIL 초과, 9000 pg/106 TIL 초과, 11000 pg/106 TIL 초과, 13000 pg/106 TIL 초과, 15000 pg/106 TIL 초과, 17000 pg/106 TIL 초과, 19000 pg/106 TIL 초과, 20000 pg/106 TIL 초과, 40000 pg/106 TIL 초과, 60000 pg/106 TIL 초과, 80000 pg/106 TIL 초과, 100000 pg/106 TIL 초과, 120000 pg/106 TIL 초과, 140000 pg/106 TIL 초과, 160000 pg/106 TIL 초과, 180000 pg/106 TIL 초과, 200000 pg/106 TIL 초과, 220000 pg/106 TIL 초과, 240000 pg/106 TIL 초과, 260000 pg/106 TIL 초과, 280000 pg/106 TIL 초과, 300000 pg/106 TIL 초과 또는 그 이상의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 3000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 5000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및 /또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 7000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 9000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 11000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 13000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 15000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 17000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 19000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 20000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 40000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 60000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 80000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 100000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 120000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 140000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 160000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 180000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 200000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 220000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 240000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 260000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 280000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 300000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 3000 pg/106 TIL 초과 내지 300000 pg/106 TIL 또는 그 이상의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 3000 pg/106 TIL 초과, 5000 pg/106 TIL 초과, 7000 pg/106 TIL 초과, 9000 pg/106 TIL 초과, 11000 pg/106 TIL 초과, 13000 pg/106 TIL 초과, 15000 pg/106 TIL 초과, 17000 pg/106 TIL 초과, 19000 pg/106 TIL 초과, 20000 pg/106 TIL 초과, 40000 pg/106 TIL 초과, 60000 pg/106 TIL 초과, 80000 pg/106 TIL 초과, 100000 pg/106 TIL 초과, 120000 pg/106 TIL 초과, 140000 pg/106 TIL 초과, 160000 pg/106 TIL 초과, 180000 pg/106 TIL 초과, 200000 pg/106 TIL 초과, 220000 pg/106 TIL 초과, 240000 pg/106 TIL 초과, 260000 pg/106 TIL 초과, 280000 pg/106 TIL 초과, 300000 pg/106 TIL 초과 또는 그 이상의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 3000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 5000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 7000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 9000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 11000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 13000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 15000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 17000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 19000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 20000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 40000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 60000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 80000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 100000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 120000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 140000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 160000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 180000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 200000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 220000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 240000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 260000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 280000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 300000 pg/106 TIL 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, 1000 pg/ml 초과 내지 300000 pg/ml 또는 그 이상의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 1000 pg/ml 초과, 2000 pg/ml 초과, 3000 pg/ml 초과, 4000 pg/ml 초과, 5000 pg/ml 초과, 6000 pg/ml 초과, 7000 pg/ml 초과, 8000 pg/ml 초과, 9000 pg/ml 초과, 10000 pg/ml 초과, 20000 pg/ml 초과, 30000 pg/ml 초과, 40000 pg/ml 초과, 50000 pg/ml 초과, 60000 pg/ml 초과, 70000 pg/ml 초과, 80000 pg/ml 초과, 90000 pg/ml 초과, 100000 pg/ml 초과 또는 그 이상의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 1000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 2000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 3000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 4000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 5000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 6000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 7000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 8000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 9000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 10000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 20000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 30000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 40000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 50000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 60000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 70000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 80000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 90000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 100000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 120000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 140000 pg/ml 초과의 Granzyme B를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 160000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 180000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 200000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 220000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 240000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 260000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 280000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 300000 pg/ml 초과의 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 포함하는 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 확장 방법은 TIL의 비-확장된 집단에 비해, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9에 제공된 바와 같은 TIL을 포함하는 시험관내에서 증가된 Granzyme B 분비를 나타내는 TIL의 확장된 집단을 생산한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장된 집단에 비해 적어도 1배 내지 50배 또는 그 이상 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해, 적어도 1배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 30배, 적어도 40배, 적어도 50배 또는 그 이상 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 1배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 2배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 3배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 4배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 5배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 6배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 7배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 8배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 9배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 10배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 20배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 30배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 40배 증가된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 TIL의 확장된 집단의 Granzyme B 분비는 TIL의 비-확장 집단에 비해 적어도 50배 증가된다.
일부 실시양태에서, 표현형 특징은 냉동보존 후에 조사된다.
J. 확장된 TIL의 대사 건강
재자극된 TIL은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 해동 후 TIL에 비해, 기초 해당과정의 유의미한 향상을 특징으로 한다. 한 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 수확된 TIL 집단, 및/또는 치료적 TIL 집단의 선택은, 상기 논의된 것 또는 예를 들어 도 9에 제공된 바와 같은 것을 포함하는 임의의 단계 동안 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 2차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 3차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 수확된 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 치료적 집단의 선택은 수행되지 않는다.
실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 또는 수확된 TIL 집단의 선택은 하기를 포함하는 종양 침윤 림프구(TIL)를 TIL의 치료적 집단으로 확장시키는 방법 중 임의의 단계 (a) 내지 (f) 동안 수행되지 않는다:
(a) 환자로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득하는 단계;
(b) 종양 단편을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (b)로부터 단계 (c)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(d) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 2차 집단에 비해 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포의 증가된 하위집단을 포함하는 TIL의 치료 집단이며, 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (c)로부터 단계 (d)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(e) 단계 (d)로부터 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 단계 (d)로부터 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계; 및
(f) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)로부터 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계.
한 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 또는 수확된 TIL 집단의 선택은 하기를 포함하는 확장된 종양 침윤성 림프구(TIL)를 투여하는 것을 포함하는 암이 있는 대상체를 치료하는 방법의 임의의 단계 (a) 내지 (h) 동안 수행되지 않는다:
(a) 환자로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 대상체로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득하는 단계;
(b) 종양 단편을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3-14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (b)로부터 단계 (c)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(d) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7-14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 2차 집단에 비해 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포의 증가된 하위집단을 포함하는 TIL의 치료 집단이며, TIL의 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (c)로부터 단계 (d)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(e) 단계 (d)로부터 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 단계 (d)로부터 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계; 및
(f) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)로부터 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 발생하는 것인 단계;
(g) 선택적으로, 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존 프로세스를 사용하여 냉동보존하는 단계; 및
(h) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료 유효 투여량을 환자에게 투여하는 단계.
본원에 기재된 방법에 의해 제조된 TIL은, 예를 들어, 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법 이외의 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 이외의 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 기초 해당과정의 상당한 향상을 특징으로 한다. 한 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 수확된 TIL 집단, 및/또는 치료적 TIL 집단의 선택은 상기 논의된 것 또는 예를 들어 도 9에 제공된 바와 같은 것을 포함하는 임의의 단계 동안 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 2차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 3차 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 수확된 TIL 집단의 선택은 수행되지 않는다. 일부 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 치료적 집단의 선택은 수행되지 않는다. 한 실시양태에서, CD8 발현에 기초한 TIL의 1차 집단, TIL의 2차 집단, TIL의 3차 집단, 또는 수확된 TIL 집단의 선택은 단계 (a) 내지 (h) 중 임의의 단계 동안 수행되지 않는다.
예비 호흡 용량(SRC) 및 해당과정 비축량은 본 개시내용의 여러 방법에 의해 확장된 TIL에 대해 평가될 수 있다. Seahorse XF Cell Mito Stress 테스트는 미토콘드리아의 전자 전달 사슬의 성분을 표적으로 하는 호흡 조절제를 사용하여 세포의 산소 소비율(OCR)을 직접 측정함으로써 미토콘드리아 기능을 측정한다. 테스트 화합물(이하에 기재되는, 올리고마이신, FCCP 및 로테논과 안티마이신 A의 혼합물)은 각각 ATP 생산, 최대 호흡 및 비-미토콘드리아 호흡을 측정하기 위해 연속적으로 주입된다. 그런 다음 이러한 매개변수와 기초 호흡을 사용하여 양성자 누출 및 예비 호흡 용량을 계산한다. 각 변조제(modulator)는 전자 전달 사슬의 특정 성분을 표적으로 한다. 올리고마이신은 ATP 합성효소(복합체 V)를 저해하고 올리고마이신 주사 후 OCR의 감소는 세포 ATP 생산과 연관된 미토콘드리아 호흡과 상관성이 있다. 카르보닐 시안화물-4(트리플루오로메톡시) 페닐히드라존(FCCP)은 양성자 구배를 붕괴시키고 미토콘드리아 막 전위를 붕괴시키는 연합해제 작용제(uncoupling agent)이다. 결과적으로 전자 전달 사슬을 통한 전자 흐름은 저해되지 않고 산소는 복합체 IV에 의해 최대로 소모된다. FCCP 자극 OCR은 최대 호흡과 기초 호흡 간의 차이로 정의되는 예비 호흡 용량을 계산하는 데 사용될 수 있다. 예비 호흡 용량(SRC)은 증가된 에너지 요구에 응답하는 세포의 능력에 대한 척도이다. 3차 주사는 복합체 I 저해제인 로테논과 복합체 III 저해제인 안티마이신 A의 혼합물이다. 이 조합은 미토콘드리아 호흡을 차단하고 미토콘드리아 외부의 프로세스에 의해 구동되는 비미토콘드리아 호흡의 계산을 가능하게 한다. 일부 실시양태에서, 비교는 예를 들어 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법 이외의 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법 이외의 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 대한 것이다.
일부 실시양태에서, 대사 검정은 기초 호흡이다. 일반적으로, 2차 확장 TIL은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%인 기초 호흡률을 갖는다. 일부 실시양태에서, 기초 호흡률은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 50% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 기초 호흡률은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 60% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 기초 호흡률은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 70% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 기초 호흡률은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 80% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 기초 호흡률은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 90% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 기초 호흡률은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 95% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, reREP TIL이라고도 지칭되는 TIL을 포함하는, 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률과 통계적으로 유의미하게 다르지 않은 기초 호흡률을 갖는다. 일부 실시양태에서, 비교는, 예를 들어, 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 대한 것이다.
일부 실시양태에서, 대사 검정은 예비 호흡 용량이다. 일반적으로, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, reREP TIL이라고도 지칭되는 TIL을 포함하는, 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%인 예비 호흡 용량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL의 기초 호흡률의 약 50% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 50% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 60% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 70% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 80% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 90% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 예비 호흡 용량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 95% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL이라고도 지칭되는 TIL을 포함하는, 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률과 통계적으로 유의미하게 다르지 않은 예비 호흡 용량을 갖는다.
일반적으로, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL이라고도 지칭되는 TIL을 포함하는, 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 방법외에 다른 방법을 포함하는, 본원에 제공된 방법외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%인 예비 호흡 용량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 측정된 대사 검정은 해당과정 비축량이다. 일부 실시양태에서, 대사 검정은 예비 호흡 용량이다. 세포(호흡) 대사를 측정하기 위해, 세포를 미토콘드리아 호흡 및 해당과정의 저해제로 처리하여 다음 척도로 이루어지는 TIL에 대한 대사 프로필을 결정했다: 기준선 산화적 인산화(OCR에 의해 측정됨), 예비 호흡 용량, 기준선 해당과정 활성(ECAR에 의해 측정됨), 및 해당과정 비축량. 대사 프로필은 미토콘드리아 ATP 생산 차단 시 해당 과정을 수행하는 세포의 능력을 결정할 수 있도록 하는 Seahorse Combination Mitochondrial/Glycolysis Stress Test Assay(Agilent®에서 상업적으로 이용가능한 키트 포함)를 사용하여 수행했다. 일부 실시양태에서, 세포에게 글루코스를 결핍시키고, 이어서 글루코스를 주사하고, 이어서 스트레스제를 주사한다. 일부 실시양태에서, 스트레스제는 올리고마이신, FCCP, 로테논, 안티마이신 A 및/또는 2-데옥시글루코스(2-DG), 뿐만 아니라 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 올리고마이신은 10 mM로 첨가된다. 일부 실시양태에서, FCCP는 10 mM로 첨가된다. 일부 실시양태에서, 로테논은 2.5 mM로 첨가된다. 일부 실시양태에서, 안티마이신 A는 2.5 mM로 첨가된다. 일부 실시양태에서, 2-데옥시글루코스(2-DG)는 500mM로 첨가된다. 일부 실시양태에서, 해당과정 능력, 해당과정 비축량, 및/또는 비-해당과정 산성화가 측정된다. 일반적으로, TIL은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%인 해당과정 비축량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 50% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 60% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 70% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 80% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 90% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 95% 내지 약 99%이다.
일부 실시양태에서, 대사 검정은 기초 해당과정이다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 또는 적어도 10배의 기초 해당과정의 증가를 갖는다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 약 2배 내지 약 10배의 기초 해당과정의 증가를 갖는다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 약 2배 내지 약 8배의 기초 해당과정의 증가를 갖는다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 약 3배 내지 약 7배의 기초 해당과정의 증가를 갖는다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 약 2배 내지 약 4배의 기초 해당과정의 증가를 갖는다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 약 2배 내지 약 3배의 기초 해당과정의 증가를 갖는다.
일반적으로, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예컨대, 예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%인 해당과정 비축량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL의 기초 호흡률의 약 50% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 60% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 70% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 80% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어, 도 9에 구현된 것 외에 다른 방법을 포함하는 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL의 기초 호흡률의 약 90% 내지 약 99%이다. 일부 실시양태에서, 해당과정 비축량은 신선하게 수확된 TIL의 기초 호흡률의 약 95% 내지 약 99%이다.
Granzyme B 생산: Granzyme B는 TIL이 표적 세포를 사멸시키는 능력의 또 다른 척도이다. CD3, CD28 및 CD137/4-1BB에 대한 항체를 사용하여 전술한 바와 같이 재자극된 배지 상층액도 Human Granzyme B DuoSet ELISA Kit(R & D Systems, Minneapolis, MN)를 제조업자의 지시에 따라 사용하여 Granzyme B의 수준에 대해 평가했다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 2차 추가 확장 TIL(예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 증가된 그랜자임 B 생산을 갖는다. 일부 실시양태에서, 2차 확장 TIL 또는 제2 추가 확장 TIL(예를 들어, reREP TIL로 지칭되는 TIL을 포함하는 도 9의 단계 D에 기재된 것)은 증가된 세포독성 활성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 텔로미어 길이는 세포 생존력 및/또는 세포 기능의 척도로 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 텔로미어는 놀랍게도, 예를 들어, 도 9에서 구현된 방법 이외의 방법을 포함하여 본원에 제공된 방법 외에 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 본 발명에 의해 생성된 TIL에서 동일한 길이이다. 텔로미어 길이 측정: 게놈 DNA 및 세포학적 제제에서 텔로미어의 길이를 측정하기 위해 다양한 방법이 사용되었다. 텔로미어 제한 단편(telomere restriction fragment: TRF) 분석은 텔로미어 길이를 측정하는 황금 표준이다(de Lange et al., 1990). 그러나, TRF의 주요 한계는 다량의 DNA(1.5^g)가 필요하다는 것이다. 텔로미어 길이 측정을 위해 널리 사용되는 2가지 기술, 즉 형광 동일계내 혼성화(FISH; Agilent Technologies, 캘리포니아주 산타클라라) 및 정량적 PCR은 본 발명에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 도 9에 제공된 바와 같이, 단계 A의 초기 수확 TIL과 예를 들어 단계 D로부터의 확장된 TIL 사이에 텔로미어 길이에는 변화가 없다.
일부 실시양태에서, TIL은 그랜자임 B, 퍼포린 및 그래뉼리신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 마커를 발현한다. 일부 실시양태에서, TIL은 그랜자임 B를 발현한다. 일부 실시양태에서, TIL은 퍼포린을 발현한다. 일부 실시양태에서, TIL은 그래뉼리신을 발현한다.
실시양태에서, 재자극된 TIL은 또한 시토카인 방출 검정을 사용하여 시토카인 방출에 대해 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 인터페론-γ(IFN-γ) 분비에 대해 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 ELISA 검정에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는, 예를 들어, 도 2(특히, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9)에 제공된 바와 같은 단계 D 이후, 급속 2차 확장 단계 후에 ELISA 검정에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, TIL 건강은 IFN-감마(IFN-γ) 분비에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 활성 TIL을 나타낸다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 생산에 대한 효능 검정이 사용된다. IFN-γ 생산은 세포독성 가능성의 또 다른 척도이다. IFN-γ 생산은 CD3, CD28 및 CD137/4-1BB에 대한 항체로 자극된 TIL 배지에서 시토카인 IFN-γ의 수준을 결정함으로서 측정될 수 있다. 이들 자극된 TIL로부터 배지 내의 IFN-γ 수준은 IFN-γ 방출을 측정함으로써 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 도 2(특히, 예를 들어, 도 2a)에 제공된 바와 같은 2A 프로세스의, 예를 들어, 단계 D와 비교했을 때, 도 2(특히, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 TIL)에 제공된 바와 같은 Gen 3 프로세스의 예를 들어 단계 D에서 IFN-γ 생산의 증가는 단계 D TIL의 세포독성 잠재력의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 이상 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 1배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 2배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 3배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 4배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 5배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 Quantikine ELISA 키트를 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 생체외 TIL에서 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 예를 들어 도 2b 방법을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 생성된 TIL을 비롯한 생체외 TIL에서 측정된다.
일부 실시양태에서, IFN-γ를 적어도 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 이상 분비할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9를 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ를 적어도 1배 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ를 적어도 2배 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ를 적어도 3배 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ를 적어도 4배 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ를 적어도 5배 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, 적어도 100 pg/ml 내지 약 1000 pg/mL 또는 그 이상의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은 예를 들어 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TIL은 적어도 200 pg/ml, 적어도 250 pg/ml, 적어도 300 pg/ml, 적어도 350 pg/ml, 적어도 400 pg/ml, 적어도 450 pg/ml, 적어도 500 pg/ml, 적어도 550 pg/ml, 적어도 600 pg/ml, 적어도 650 pg/ml, 적어도 700 pg/ml, 적어도 750 pg/ml, 적어도 800 pg/ml, 적어도 850 pg/ml, 적어도 900 pg/ml, 적어도 950 pg /ml, 또는 적어도 1000 pg/mL 이상의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 200 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 200 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 300 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 400 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 500 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 600 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 700 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 800 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 900 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 1000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 2000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 3000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 4000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 5000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 6000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 7000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 8000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 9000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 10,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 15,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 20,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 25,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 30,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 35,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 40,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 45,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 50,000 pg/ml의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, 적어도 100 pg/ml/5e5 세포 내지 약 1000 pg/ml/5e5 세포 이상의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 200 pg/ml/5e5 세포, 적어도 250 pg/ml/5e5 세포, 적어도 300 pg/ml/5e5 세포, 적어도 350 pg/ml/5e5 세포, 적어도 400 pg/ml/5e5 세포, 적어도 450 pg/ml/5e5 세포, 적어도 500 pg/ml/5e5 세포, 적어도 550 pg/ml/5e5 세포, 적어도 600 pg/ml/5e5 세포, 적어도 650 pg/ml/5e5 세포, 적어도 700 pg/ml/5e5 세포, 적어도 750 pg/ml/5e5 세포, 적어도 800 pg/ml/5e5 세포, 적어도 850 pg/ml/5e5 세포, 적어도 900 pg/ml/5e5 세포, 적어도 950 pg/ml/5e5 세포, 적어도 1000 pg/ml/5e5 세포 또는 그 이상의 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 200 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 200 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 300 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 400 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 500 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 600 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 700 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 800 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 900 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 1000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 2000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 3000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 4000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 5000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 6000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 7000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 8000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 9000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 10,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 15,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 20,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 25,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 30,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 35,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 40,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 45,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, 적어도 50,000 pg/ml/5e5 세포 IFN-γ 분비를 할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, IFN-γ 분비에 비해 TNF-α(즉, TNF-알파)를 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 또는 5배 이상 낮은 수준으로 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비에 비해 TNF-α를 적어도 1배 낮은 수준으로 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비에 비해 TNF-α를 적어도 2배 낮은 수준으로 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비에 비해 TNF-α를 적어도 3배 낮은 수준으로 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비에 비해 TNF-α를 적어도 4배 낮은 수준으로 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비에 비해 TNF-α를 적어도 5배 낮은 수준으로 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, TNF-α(즉, TNF-알파)를 적어도 200 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 500 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 1000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 2000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 3000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 4000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 5000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 6000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 7000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 8000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다. 일부 실시양태에서, TNF-α를 적어도 9000 pg/ml/5e5 세포 내지 약 10,000 pg/ml/5e5 세포 이상 분비할 수 있는 TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL이다.
일부 실시양태에서, IFN-γ 및 그랜자임 B 수준은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL의 표현형 특징을 결정하기 위해 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 및 TNF-α 수준은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL의 표현형 특징을 결정하기 위해 측정된다. 일부 실시양태에서, 그랜자임 B 및 TNF-α 수준은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL의 표현형 특징을 결정하기 위해 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ, 그랜자임 B 및 TNF-α 수준은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 2b 및/또는 도 2c 및/또는 도 9 방법을 비롯한 본 발명의 확장 방법에 의해 생성된 TIL의 표현형 특징을 결정하기 위해 측정된다.
일부 실시양태에서, 표적 세포를 용해하는 TIL의 세포독성 잠재력은 생물발광 세포주, P815(클론 G6)와 TIL의 공동배양 검정을 사용하여, 고도로 민감한 용량 의존적 방식으로 TIL 세포독성을 측정하는 TIL 검정을 위한 생물발광 재지향성 용해 검정(효력 검정)에 따라 평가했다.
일부 실시양태에서, 본 방법은 전술한 방법을 사용하여 TIL 생존력을 평가하는 검정을 제공한다. 일부 실시양태에서, TIL은 예를 들어 도 9에 제공된 것을 비롯하여, 앞서 논의된 바와 같이 확장된다. 일부 실시양태에서, TIL은 생존력에 대해 평가하기 전에 냉동보존된다. 일부 실시양태에서, 생존력 평가는 1차 확장, 2차 확장 및 추가 2차 확장을 수행하기 전에 TIL을 해동하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 세포 증식, 세포 독성, 세포 사망, 및/또는 TIL 집단의 생존력과 관련된 기타 항목을 평가하기 위한 검정으로서 제공한다. 생존력은 상기 기술된 임의의 TIL 대사 검정, 뿐만 아니라 본 기술분야에 공지된 세포 생존력을 평가하기 위한 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 세포 증식, 세포 독성, 세포 사멸, 및/또는 도 9에 예시된 것을 비롯한 본원에 기재된 방법을 사용하여 확장된 TIL의 생존력과 관련된 기타 항목을 평가하기 위한 검정을 제공한다.
본 발명은 또한 TIL 생존력을 결정하기 위한 검정 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, TIL은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어 도 9에서 구현된 방법 이외에 다른 방법을 비롯하여 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 동일한 생존력을 갖는다. 일부 실시양태에서, TIL은 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어 도 9에서 구현된 방법 이외에 다른 방법을 비롯하여 본원에 제공된 것과 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교하여 증가된 생존력을 갖는다. 본 개시내용은 다음을 포함하는 종양 침윤 림프구(TIL)를 더 큰 TIL 집단으로 확장함으로써 TIL을 생존력에 대해 검정하기 위한 방법을 제공한다:
(i) 이전에 확장된 TIL의 1차 집단을 수득하는 단계;
(ii) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계; 및
(iii) 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)로 2차 TIL 집단의 세포 배양 배지를 보충함으로써 2차 확장을 수행하여, 3차 TIL 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 3차 TIL 집단은 2차 TIL 집단보다 수가 적어도 100배 더 많고, 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 적어도 14일 동안 수행되며, 3차 TIL 집단은 2차 TIL 집단에 비해 증가된 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포의 하위집단을 포함하며, 3차 집단이 생존력에 대해 추가로 검정되는 것인 단계.
일부 실시양태에서, 방법은 하기를 추가로 포함한다:
(iv) 추가 IL-2, 추가 OKT-3, 및 추가 APC로 3차 TIL 집단의 세포 배양 배지를 보충함으로써 추가 2차 확장을 수행하는 단계로서, 여기서 추가 2차 확장은 단계 (iii)에서 수득된 것보다 큰 TIL 집단을 수득하기 위해 적어도 14일 동안 수행되고, 큰 TIL 집단은 3차 TIL 집단에 비해 증가된 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포의 하위집단을 포함하며, 3차 집단은 생존력에 대해 추가로 검정되는 것인 단계.
일부 실시양태에서, 단계 (i) 전에, 세포는 냉동보존된다.
일부 실시양태에서, 세포는 단계 (i)을 수행하기 전에 해동된다.
일부 실시양태에서, 단계 (iv)는 분석에 충분한 TIL을 수득하기 위해 1회 내지 4회 반복된다.
일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (iii) 또는 (iv)는 약 40일 내지 약 50일의 기간 내에 수행된다.
일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (iii) 또는 (iv)는 약 42일 내지 약 48일의 기간 내에 수행된다.
일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (iii) 또는 (iv)는 약 42일 내지 약 45일의 기간 내에 수행된다.
일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (iii) 또는 (iv)는 약 44일 이내에 수행된다.
일부 실시양태에서, 단계 (iii) 또는 (iv)의 세포는 신선하게 수확된 세포와 유사한 수준으로 CD4, CD8, 및 TCRαβ를 발현한다.
일부 실시양태에서, 항원 제시 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다.
일부 실시양태에서, PBMC는 단계 (iii)에서 9일 내지 17일 중 임의의 날에 세포 배양물에 첨가된다.
일부 실시양태에서, 단계 (iv)에서 더 큰 TIL 집단 중 이펙터 T 세포 및/또는 중심 기억 T 세포는 3차 세포 집단 중 이펙터 T-세포, 및/또는 중심 기억 T-세포에 비해, CD27의 발현, CD28의 발현, 더 긴 텔로미어, 증가된 CD57 발현, 및 저하된 CD56 발현으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 특징을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포는 증가된 CD57 발현 및 저하된 CD56 발현을 나타낸다.
일부 실시양태에서, APC는 인공 APC(aAPC)이다.
일부 실시양태에서, 방법은 고친화도 T 세포 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 이용하여 1차 TIL 집단을 형질도입하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 형질도입하는 단계는 단계 (i) 전에 발생한다.
일부 실시양태에서, 방법은 T 세포 신호전달 분자의 적어도 하나의 엔도도메인(endodomain)과 융합된 단일쇄 가변 단편 항체를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 이용하여 1차 TIL 집단을 형질도입하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 형질도입하는 단계는 단계 (i) 전에 발생한다.
일부 실시양태에서, TIL은 생존력에 대해 검정된다.
일부 실시양태에서, TIL은 냉동보존 후 생존력에 대해 검정된다.
일부 실시양태에서, TIL은 냉동보존 후 및 단계 (iv) 후에 생존력에 대해 검정된다.
T 림프구 및 B 림프구의 다양한 항원 수용체는 제한되지만 다수의 유전자 분절의 체세포 재조합에 의해 생성된다. 이러한 유전자 분절인, V(가변), D(다양성), J(연결), 및 C(불변)는 면역글로불린 및 T-세포 수용체(TCR)의 결합 특이성 및 하류 적용을 결정한다. 본 발명은 T-세포 레퍼토리 다양성(때로는 폴리클로날성이라고도 지칭됨)을 나타내고 증가시키는 TIL을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, T-세포 레퍼토리 다양성의 증가는 신선하게 수확된 TIL 및/또는 예를 들어 도 9에 구현된 방법 이외의 방법을 포함하는 본원에 제공된 방법 이외의 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL과 비교한 것이다. 일부 실시양태에서, 본 방법에 의해 수득된 TIL은 T-세포 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 1차 확장에서 수득된 TIL은 T-세포 레퍼토리 다양성의 증가를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 다양성의 증가는 면역글로불린 다양성 및/또는 T-세포 수용체 다양성의 증가이다. 일부 실시양태에서, 다양성은 면역글로불린 내에 있고, 면역글로불린 중쇄 내에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 면역글로불린 내에 있고, 면역글로불린 경쇄 내에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 T-세포 수용체 내에 있다. 일부 실시양태에서, 다양성은 알파, 베타, 감마, 및 델타 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 T-세포 수용체 중 하나 내에 있다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 알파 및/또는 베타의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 알파의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, T-세포 수용체(TCR) 베타의 발현이 증가한다. 일부 실시양태에서, TCRab(즉, TCRα/β)의 발현이 증가한다.
본 개시내용에 따르면, 생존력 및/또는 대상체에 대한 투여에 추가 사용을 위해 TIL을 검정하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 종양 침윤 림프구(TIL)를 검정하는 방법은 다음을 포함한다:
(i) 1차 TIL 집단을 수득하는 단계;
(ii) 2차 TIL 집단을 생성하기 위해 IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 1차 TIL 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하는 단계; 및
(iii) 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)로 2차 TIL 집단의 세포 배양 배지를 보충함으로써 2차 확장을 수행하여, 3차 TIL 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 3차 TIL 집단은 2차 TIL 집단보다 수가 적어도 50배 더 큰 것인 단계;
(iv) 3차 TIL 집단을 수확하고, 세척하고, 및 냉동보존하는 단계;
(v) 냉동보존된 TIL을 극저온 온도에 저장하는 단계;
(vi) 3차 TIL 집단을 해동하여 해동된 3차 TIL 집단을 제공하는 단계; 및
(vii) 추가 IL-2, OKT-3, 및 APC로 3차 집단의 세포 배양 배지를 보충함으로써 해동된 3차 TIL 집단의 일부의 추가 2차 확장을 적어도 3일의 추가 확장 기간(때로 reREP 기간이라고도 지칭됨) 동안 수행하는 단계로서, 여기서 3차 확장은 4차 TIL 집단을 수득하기 위해 수행되고, 4차 TIL 집단 중 TIL의 수는 3차 TIL 집단의 TIL 수와 비교되어 비율을 수득하는 것인 단계;
(viii) 단계 (vii)의 비율에 기초하여, 해동된 TIL 집단이 환자에게 투여하기에 적합한 것인지를 결정하는 단계;
(ix) 4차 TIL 집단 중 TIL 수 대 3차 TIL 집단 중 TIL 수의 비율이 단계 (viii)에서 5:1 초과인 것으로 결정되면, 환자에게 해동된 3차 TIL 집단의 치료적 유효 투여량을 투여하는 단계.
일부 실시양태에서, 추가 확장 기간(때로, reREP 기간이라고 지칭됨)은 4차 TIL 집단 중 TIL의 수 대 3차 TIL 집단 중 TIL의 수의 비율이 50:1 초과일 때까지 수행된다.
일부 실시양태에서, 치료적 유효 투여량에 충분한 TIL의 수는 약 2.3×1010 내지 약 13.7×1010이다.
일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (vii)은 약 40일 내지 약 50일의 기간 내에 수행된다. 일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (vii)은 약 42일 내지 약 48일의 기간 이내에 수행된다. 일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (vii)은 약 42일 내지 약 45일의 기간 이내에 수행된다. 일부 실시양태에서, 단계 (i) 내지 (vii)은 약 44일 이내에 수행된다.
일부 실시양태에서, 단계 (iii) 또는 (vii)의 세포는 CD4, CD8, 및 TCRαβ를 신선하게 수확된 세포와 유사한 수준으로 발현한다. 일부 실시양태에서, 세포는 TIL이다.
일부 실시양태에서, 항원 제시 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)이다. 일부 실시양태에서, PBMC는 단계 (iii)에서 9일 내지 17일 중 임의의 날에 세포 배양물에 첨가된다.
일부 실시양태에서, 단계 (iii) 또는 (vii)의 더 큰 TIL 집단 중 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T 세포는 3차 세포 집단의 이펙터 T-세포, 및/또는 중심 기억 T-세포에 비해 CD27의 발현, CD28의 발현, 더 긴 텔로미어, 증가된 CD57 발현, 및 저하된 CD56 발현으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 특징을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 이펙터 T-세포 및/또는 중심 기억 T-세포는 증가된 CD57 발현 및 저하된 CD56 발현을 나타낸다.
일부 실시양태에서, APC는 인공 APC(aAPC)이다.
일부 실시양태에서, 고친화도 T 세포 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 이용하여 TIL의 1차 집단을 형질도입시키는 단계.
일부 실시양태에서, 형질도입시키는 단계는 단계 (i) 전에 발생한다.
일부 실시양태에서, T 세포 신호전달 분자의 적어도 하나의 엔도도메인과 융합된 단일쇄 가변 단편 항체를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 이용하여 TIL의 1차 집단을 형질도입시키는 단계.
일부 실시양태에서, 형질도입시키는 단계는 단계 (i) 전에 발생한다.
일부 실시양태에서, TIL은 단계 (vii) 후에 생존력에 대해 검정된다.
본 개시내용은 또한 TIL을 검정하는 추가 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은
(i) 냉동보존된 TIL의 1차 집단의 일부를 수득하는 단계;
(ii) 냉동보존된 TIL의 1차 집단의 일부를 해동시키는 단계;
(iii) TIL의 1차 집단의 일부를 적어도 3일의 추가 확장 기간(때로는 reREP라고도 지칭됨) 동안 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)를 포함하는 세포 배양 배지에서 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, TIL의 1차 집단의 일부를 TIL의 2차 집단과 비교하여 TIL 수의 비를 수득하고, TIL의 2차 집단 중 TIL의 수 대 TIL의 1차 집단의 일부 중의 TIL의 수의 비는 5:1 초과인 것인 단계;
(iv) 단계 (iii)에서의 비에 기초하여, TIL의 1차 집단이 환자에 대한 치료적 투여에 사용하기에 적합한지 여부를 결정하는 단계;
(v) TIL의 2차 집단에 있는 TIL의 수 대 TIL의 1차 집단에 있는 TIL의 수의 비가 단계 (iv)에서 5:1 초과인 것으로 결정되는 경우, TIL의 1차 집단이 치료적 투여에 사용하기에 적합한 것으로 결정하는 단계
를 포함하는, TIL을 검정하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, TIL의 2차 집단에 있는 TIL의 수 대 TIL의 1차 집단의 일부에 있는 TIL의 수의 비는 50:1 초과이다.
일부 실시양태에서, 방법은 본원에서 제공된 실시양태 중 임의의 것에 기재된 바와 같은 방법에 따라 단계 (i)로부터의 냉동보존된 TIL의 전체 1차 집단의 확장을 수행하는 것을 더 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 단계 (i)로부터의 냉동보존된 TIL의 전체 1차 집단을 환자에게 투여하는 것을 더 포함한다.
K. TIL 제조를 위한 닫힌 계
본 발명은 TIL 배양 프로세스 동안 닫힌 계의 사용을 제공한다. 이러한 닫힌 계는 미생물 오염을 방지하고/거나 감소시키는 것을 허용하고, 보다 적은 플라스크의 사용을 허용하고, 비용 감소를 허용한다. 일부 실시양태에서, 닫힌 계는 2개의 용기를 사용한다.
이러한 닫힌 계는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, http://www.fda.gov/cber/guidelines.htm 및 https://www.fda.gov/BiololgicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Blood/ucm076779.htm.에서 발견될 수 있다.
FDA 웹사이트 상에 제공된 바와 같이, 멸균 방법을 갖는 닫힌 계는 공지되어 있으며, 널리 기재되어 있다. 상기 언급되고 하기 적절한 부분에서 제공된 바와 같이, https://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Blood/ucm076779.htm을 참조한다.
도입
멸균 연결 장치(STCD)는 호환성 배관의 2개의 조각 사이에 멸균 용접을 생성한다. 이 절차는 다양한 용기 및 튜브 직경의 멸균 연결을 허용한다. 이 지침은 이들 장치의 사용을 위한 권고된 관례 및 절차를 기재한다. 이 지침은 멸균 연결 장치의 제조자가 시장화에 대한 승인 또는 허가를 얻기 위해 FDA에 제출해야 하는 데이터 또는 정보를 다루지 않는다. 또한, 표지화에서 인가되지 않은 목적을 위한 승인되거나 허가된 멸균 연결 장치의 사용은 장치가 연방 식품, 약물 및 화장품 법률 (Federal Food, Drug and Cosmetic Act) 하에 불순하고 부정표시된 것으로 간주되는 것을 야기할 수 있음을 주목하는 것이 중요하다.
1. FDA 권고사항
통상적으로 FDA-허가된 STCD를 사용할 것을 제안하는 혈액 생성물의 제조자는 각각의 혈액 생성물에 대해 표준 작업 절차 (SOP) 매뉴얼에 이러한 사용에 관한 정보를 포함시켜야 한다. 이들 항목은 기록 저장, 생성물 추적, 튜브 용접 품질 관리, 소프트웨어 및 일회용품의 로트 수 (첨가되는 요소의 공급원(들)을 포함함)를 포함해야 한다. 품질 관리 절차는 각각의 용접의 통합성의 시험을 포함해야 한다.
2. STCD의 적용
사용자는 장치의 사용이 새로운 생성물을 생성하거나, 안전성 및 효능이 입증되지 않은 규제된 생성물의 형태를 상당히 변형시킬 수 있음을 알아야 한다. 그들 "새로운 생성물"을 위해, 인가, 신청서, 또는 신청 보완서에 대한 대상은 SOP의 제출 외에도 FDA에 제출되어야 한다. 일반적으로, 세포 성분을 포함하는 풀링 또는 혼합은 면허 신청서 또는 신청 보완서의 제출 및 승인을 요구하는 생성물의 변화를 나타낸다. 이러한 신청서 및 신청 보완서는 "새로운 생성물"이 안전하고, 제안된 데이팅 기간 전반에 걸쳐 그의 의도된 사용에 유효함을 입증하는 제조 절차의 데이터 및 설명을 함유해야 한다.
하기 코멘트는 FDA 허가된 또는 승인된 STCD의 보다 통상적인 사용에 대한 지침으로서 제공된다:
L. 새로운 또는 보다 작은 바늘을 혈액 수집 세트에 첨가하기
절차 (전혈 수집, 혈소판성분채집술 또는 공급원 혈장 수집)의 개시 전에 STCD를 사용하여 바늘을 첨가하는 것은 기능적으로 닫힌 계를 여는 것으로 간주되지 않는다. 바늘이 절차 동안 첨가되는 경우, 단지 액체-충전된 배관을 용접하기 위해 승인된 STCD가 사용되어야 한다. 용접 통합성의 시험이 만족스러운 경우, STCD의 사용은 기능적으로 닫힌 계를 여는 것으로 간주되지 않는다.
열린 계에서 제조된 혈소판, 성분채집술은 24시간 구형으로 표지되어야 하고, 기능적으로 닫힌 계에서 제조된 혈소판, 성분채집술 생성물은 5일 구형으로 표지되어야 한다 (문헌 [Revised Guideline for Collection of Platelets, Pheresis, October 7, 1988] 참조).
첨가된 배관 및 바늘의 공급원 및 명세는 혈액 센터의 SOP 및 기록에서 다루여져야 한다. STCD를 사용하여 바늘을 첨가하는 것은 인가된 기관이 사전승인을 필요로 하는 제조의 주요한 변화를 나타내지 않는다.
M. STCD를 사용하여 성분을 제조하기
STCD가 추가의 성분 제조 백을 부착시키는 데 사용되는 경우, 이동 팩의 공급원 및 혈액 단위 수 및 ABO/Rh의 적절한 입증을 확인하는 기록은 적절하게 유지되어야 한다. 모든 혈액 및 혈액 성분은 적절하게 표지되어야 한다 (21 CFR 606.121).
예:
Figure pct00005
신선한 동결된 혈장으로부터의 냉동침전된 AHF의 제조를 위해 제4 백을 전혈 수집 삼중-팩에 첨가함.
Figure pct00006
추가의 용액의 적혈구 단위에의 연결.
Figure pct00007
성분 제조에 사용하기 위해 FDA 인가된 인-라인 필터의 첨가.
Figure pct00008
제3 저장 용기의 혈소판성분채집술 하니스(harness)에의 첨가.
Figure pct00009
상기 언급된 사용을 위해, 절차는 개발되어야 하고, 기록은 유지되어야 하지만, 면허권자는 절차를 시작하기 위해 FDA 승인을 가질 필요는 없다.
1. 혈액 생성물을 풀링하기 위해 STCD를 사용하기
전혈 수집으로부터 제조된 혈소판을 풀링하기 위한 STCD의 적절한 사용은 통상적으로 사용되는 스파이크 및 포트 엔트리부터 잠재적 오염을 제거할 수 있다. 수혈 직전에 수행된 풀링은 이러한 적절한 사용의 예이다. 풀링된 혈소판은 풀링 후 4시간 이하에 투여되어야 한다 (21 CFR 606.122(l)(2) 참조).
그러나, 풀링 및 후속의 저장은 무작위 공여자 단위의 투여에 비해 위험을 증가시킬 수 있으며; 한 오염된 단위가 다른 것으로 풀링되고, 투여 전에 저장되는 경우, 투여되는 총 박테리아 접종물은 추가의 부피에서의 복제의 결과로서 증가될 수 있다. 따라서, 4시간 초과 동안 혈소판을 풀링하고 저장하기 위한 STCD의 제안된 사용은 이러한 풀링이 증가된 위험과 연관되는지 여부를 만족스럽게 다루는 데이터에 의해 지지되어야 한다.
이러한 혈소판 풀링은 새로운 생성물의 제조를 구성한다.
혈소판을 포함하는 풀링 또는 혼합은 저장 기간이 4시간을 초과하는 경우 면허 신청서 또는 신청 보완서의 제출 및 승인을 요구하는 새로운 생성물의 제조로 간주된다.
2. 소아과 사용 및 분할된 단위를 위한 분취물을 제조하기 위해 STCD를 사용하기
STCD를 사용하여 제조된 전혈, 적혈구, 및 신선한 동결된 혈장에 대한 소아과 단위 및 분할된 단위는 하기 조건이 충족되는 경우 생물제제 면허 신청 (BLA) 보완서가 요구되는 새로운 생성물로서 간주되지 않을 것이다:
제조자는 사용되는 각각의 항응고제에 대한 승인을 비롯한, 원래 (즉, 비분할된) 생성물에 대한 승인된 생물제제 면허 또는 면허 보완서를 가져야 한다.
표지는 분배 전에 검토 및 승인을 위해 제출되어야 한다. 표기법은 FDA 형식 2567, 표지 및 회람의 송달 (Transmittal of Labels and Circulars)의 코멘트 섹션 하에 이루어져야 한다.
제조되는 성분의 저장을 위해 승인된 최종 생성물 용기가 사용되어야 한다.
인가 하에 제조된 혈소판은 적어도 5.5 × (10)10개의 혈소판을 함유해야 한다 (21 CFR 640.24 (c)). 인가 하에 제조된 혈소판, 성분채집술은 적어도 3.0 × (10)11개의 혈소판을 함유해야 한다 (문헌 [Revised Guideline for the Collection of Platelets, Pheresis, October 7, 1988] 참조).
전혈 수집으로부터 및 혈장으로부터 분할된 생성물을 제조하기 위한 STCD의 사용에 관해 따라야 할 절차 및 자동화 혈액성분채집술 절차에 의해 제조된 혈소판은 하기의 설명을 포함해야 한다:
Figure pct00010
성분채집술 하니스 또는 수집 용기가 어떻게 FDA-허가된 STCD로 변형될 것인지;
Figure pct00011
분할된 혈장 또는 전혈 생성물의 최소 부피;
Figure pct00012
분할된 혈소판채집술 생성물의 부피 및 혈소판 농도;
Figure pct00013
생성물의 저장 시간. 생성물은 승인된 용기에 있어야 하고, 이러한 용기의 표지 상의 저장 시간과 일치해야 한다;
Figure pct00014
혈액 센터의 기록에서 분할된 생성물을 표지하고 추적하는 데 사용되는 방법(들).
주: 분취물을 표지하는 절차는 절차에서 명백하게 언급되어야 하고, 기록 저장은 필요할 경우 모든 성분의 추적 및 회수를 허용하기에 적당해야 한다.
3. 자동화 혈장성분채집술 절차 동안 추가의 염수 또는 항응고제 라인을 연결하기 위해 STCD를 사용하기
절차는 개발되어야 하고, 기록은 사용을 위한 기기 제조자의 지시와 일관되게 유지되어야 하지만, 면허권자는 절차를 시작하기 위해 FDA 승인을 가질 필요는 없다.
4. 프로세싱 용액을 부착하기 위해 STCD를 사용하기
프로세싱 용액을 갖는 용기를 세척되거나 동결된 적혈구 생성물에 부착하기 위해 STCD를 사용하는 경우, 생성된 생성물에 대한 데이팅 기간은, 데이터가 보다 긴 데이팅 기간을 지지하는 CBER에 대한 면허 신청서 또는 신청 보완서의 형태로 제공되지 않는다면, 24시간이다 (21 CFR 610.53(c)). 면제 또는 변형은 디렉터, CBER로부터의 글에서 승인되어야 한다 (21 CFR 610.53(d)).
5. FDA-허가된 백혈구 감소 필터를 첨가하기 위해 STCD를 사용하기
일부 백혈구-감소 필터는 전혈 수집 시스템에 완전하게 부착되지 않는다. 사전-저장 여과를 위한 STCD의 사용을 위한 절차는 사용을 위한 필터 제조자의 지시와 일치해야 한다.
허여 전의 백혈구 감소는 주요한 제조 변화를 구성한다. 따라서, STCD를 사용하여 제조된 새로운 백혈구-감소된 생성물을 위해, 제조자는 생물제제 면허 신청서 (21 CFR 601.2) 또는 사전 승인 신청 보완서를 FDA에 제출해야 한다 (21 CFR 601.12).
시험을 위해 혈액 생성물 용기로부터 샘플을 제거하기 위해 STCD를 사용하기 (예를 들어, 교차 매칭을 위한 혈소판 또는 혈소판, 성분채집술의 용기로부터 혈소판의 샘플을 얻기 위해 STCD를 사용하기).
샘플 철회 후의 생성물의 부피 및/또는 세포 카운트가 원래 표지 상에 또는 정보의 회람에 언급된 것과 상이한 경우, 생성물 상의 표지는 새로운 부피 및/또는 세포 카운트를 반영하도록 변형되어야 한다. 예를 들어, 혈소판의 단위의 혈소판 카운트를 5.5 × (10)10개 미만의 혈소판까지 감소시키는 샘플은 제거되지 않을 수 있다 (21 CFR 640.24 (c)).
6. FDA 지침으로부터의 추가의 정보
FDA 지침은 STCD의 사용을 다루는 FDA에의 신청서 및 신청 보완서의 제출을 위한 명세에 관한 일반적 지침 뿐만 아니라 구체적 정보 및 예를 제시한다. STCD의 적절한 사용에 관하여 추가의 질문이 발생하는 경우, 혈액 연구 및 검토 관청, 생물제제 평가 및 연구 센터 (Office of Blood Research and Review, Center for Biologics Evaluation and Research)로 관심이 향해져야 한다.
일부 실시양태에서, 닫힌 계는 종양 단편이 얻어지는 때로부터 TIL이 환자에의 투여 또는 냉동보존을 위해 준비될 때까지 1개의 용기를 사용한다. 일부 실시양태에서, 2개의 용기가 사용되는 경우, 제1 용기는 닫힌 G-용기이고, TIL의 집단은 원심분리되고, 제1 닫힌 G-용기를 열지 않고 주입 백으로 전달된다. 일부 실시양태에서, 2개의 용기가 사용되는 경우, 주입 백은 하이포써모솔-함유 주입 백이다. 닫힌 계 또는 닫힌 TIL 세포 배양 시스템은 일단 종양 샘플 및/또는 종양 단편이 첨가된 것에 특징이 있고, 시스템을 외부로부터 긴밀하게 밀봉하여 박테리아, 진균, 및/또는 임의의 다른 미생물 오염의 침입이 없는 닫힌 환경을 형성한다.
일부 실시양태에서, 미생물 오염의 감소는 약 5% 내지 약 100%이다. 일부 실시양태에서, 미생물 오염의 감소는 약 5% 내지 약 95%이다. 일부 실시양태에서, 미생물 오염의 감소는 약 5% 내지 약 90%이다. 일부 실시양태에서, 미생물 오염의 감소는 약 10% 내지 약 90%이다. 일부 실시양태에서, 미생물 오염의 감소는 약 15% 내지 약 85%이다. 일부 실시양태에서, 미생물 오염의 감소는 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.
닫힌 계는 미생물 오염의 부재 하에서 및/또는 그의 유의한 감소와 함께 TIL 성장을 허용한다.
더욱이, TIL 세포 배양 환경의 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압은 각각 세포가 배양됨에 따라 다양하다. 결과적으로, 세포 배양에 적절한 배지는 순환되더라도, 닫힌 환경은 여전히 TIL 증식을 위한 최적 환경으로서 일정하게 유지될 필요가 있다. 이 목적으로, 닫힌 환경의 배양 액체 내의 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압의 물리적 인자는 센서에 의해 모니터링되는 것이 바람직하며, 그의 신호는 배양 환경의 유입구에 설치되는 기체 교환기를 제어하는 데 사용되고, 닫힌 환경의 기체 분압은 세포 배양 환경을 최적화하도록 배양 액체의 변화에 따라 실시간으로 조정되는 것이 바람직하다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 유입구에서 닫힌 환경으로 닫힌 환경의 pH, 이산화탄소 분압 및 산소 분압을 측정하는 모니터링 장치를 구비한 기체 교환기를 혼입시키고, 모니터링 장치로부터의 신호에 기초하여 기체 농도를 자동적으로 조정함으로써 세포 배양 환경을 최적화하는 닫힌 세포 배양 시스템을 제공한다.
일부 실시양태에서, 닫힌 환경 내의 압력은 연속적으로 또는 간헐적으로 제어된다. 즉, 닫힌 환경에서의 압력은 예를 들어 압력 유지 장치에 의해 다양화될 수 있으며, 따라서, 공간이 양의 압력 상태에서 TIL의 성장에 적합함을 보장하거나, 음의 압력 상태에서의 유체의 삼출을 촉진시키고, 따라서, 세포 증식을 촉진시킨다. 더욱이, 음의 압력을 간헐적으로 인가함으로써, 닫힌 환경에서의 순환 액체를 닫힌 환경의 부피의 일시적 수축에 의해 균일하게 및 효율적으로 대체하는 것이 가능하다.
일부 실시양태에서, TIL의 증식을 위한 최적 배양 성분은 치환되거나 첨가될 수 있으며, IL-2 및/또는 OKT3, 뿐만 아니라 조합과 같은 인자를 포함하여 첨가될 수 있다.
N. 세포 배양
한 실시양태에서, 상기 논의된 뿐만 아니라 도 9에 예시된 것들을 비롯한 TIL을 확장시키는 방법은 약 5,000 mL 내지 약 25,000 mL의 세포 배지, 약 5,000 mL 내지 약 10,000 mL의 세포 배지, 또는 약 5,800 mL 내지 약 8,700 mL의 세포 배지를 사용하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 배지는 예를 들어 실시양태 21에 기재된 바와 같이 혈청 무함유 배지이다. 일부 실시양태에서, 1차 확장에서의 배지는 혈청 무함유이다. 일부 실시양태에서, 2차 확장에서의 배지는 혈청 무함유이다. 일부 실시양태에서, 1차 확장 및 2차 확장에서의 배지는 둘 다 혈청 무함유이다. 한 실시양태에서, TIL의 수를 확장시키는 것은 하나 초과의 유형의 세포 배양 배지를 사용한다. 임의의 적합한 세포 배양 배지, 예를 들어, AIM-V 세포 배지 (L-글루타민, 50 μM 스트렙토마이신 술페이트, 및 10 μM 겐타미신 술페이트) 세포 배양 배지 (Invitrogen, 캘리포니아주 칼스배드)가 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명 방법은 유리하게는 TIL의 수를 확장시키는 데 요구되는 배지의 양 및 배지의 유형의 수를 감소시킨다. 한 실시양태에서, TIL의 수를 확장시키는 것은 세포를 3일 또는 4일 이하마다보다 덜 빈번하게 세포를 공급하는 것을 포함할 수 있다. 기체 투과성 용기에서 세포의 수를 확장시키는 것은 세포를 확장시키는 데 필요한 공급 빈도를 감소시킴으로써 세포의 수를 확장시키는 데 필요한 절차를 간소화한다.
한 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 기체 투과성 용기에서의 세포 배지는 비여과된다. 비여과된 세포 배지의 사용은 세포의 수를 확장시키는 데 필요한 절차를 간소화할 수 있다. 한 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 기체 투과성 용기에서의 세포 배지는 베타-머캅토에탄올 (BME)이 결여된다.
한 실시양태에서, 포유동물로부터 종양 조직 샘플을 수득하고; 종양 조직 샘플을 그 안에 세포 배지를 함유하는 제1 기체 투과성 용기에서 배양하고; 종양 조직 샘플로부터 TIL을 수득하고; TIL의 수를 세포 배지를 함유하는 제2 기체 투과성 용기에서 약 7일 내지 14일, 예를 들어, 약 11일의 지속기간 동안 확장시키는 것을 포함하는 방법의 지속기간. 일부 실시양태에서, 사전-REP는 약 7일 내지 14일, 예를 들어, 약 11일이다. 일부 실시양태에서, REP는 약 7일 내지 14일, 예를 들어, 약 11일이다.
한 실시양태에서, TIL은 기체-투과성 용기에서 확장된다. 기체-투과성 용기는 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2005/0106717 A1호에 기재된 것들을 비롯한, 관련 기술분야에 공지된 방법, 조성물, 및 장치를 사용하여 PBMC를 사용하여 TIL을 확장시키는 데 사용되었다. 한 실시양태에서, TIL은 기체-투과성 백에서 확장된다. 한 실시양태에서, TIL은 기체 투과성 백, 예컨대 주리 세포 확장 시스템 W25 (지이 헬스케어)에서 TIL을 확장시키는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 한 실시양태에서, TIL은 기체 투과성 백, 예컨대 주리 세포 확장 시스템 W5 (지이 헬스케어)로도 공지된 웨이브 생물반응기 시스템에서 TIL을 확장시키는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 한 실시양태에서, 세포 확장 시스템은 약 100 mL, 약 200 mL, 약 300 mL, 약 400 mL, 약 500 mL, 약 600 mL, 약 700 mL, 약 800 mL, 약 900 mL, 약 1 L, 약 2 L, 약 3 L, 약 4 L, 약 5 L, 약 6 L, 약 7 L, 약 8 L, 약 9 L, 및 약 10 L로 이루어진 군으로부터 선택되는 부피를 갖는 기체 투과성 세포 백을 포함한다.
한 실시양태에서, TIL은 G-Rex 플라스크 (윌슨 울프 매뉴팩처링으로부터 시판됨)에서 확장될 수 있다. 이러한 실시양태는 세포 집단이 약 5×105개의 세포/cm2 내지 10×106 내지 30×106개의 세포/cm2로 확장되는 것을 허용한다. 한 실시양태에서, 이것에는 영양공급이 없다. 한 실시양태에서, 이것에는 배지가 G-Rex 플라스크에 약 10 cm의 높이로 있는 한 영양공급이 없다. 한 실시양태에서, 이것에는 영양공급이 없지만, 1종 이상의 시토카인의 첨가가 있다. 한 실시양태에서, 시토카인은 시토카인을 배지와 혼합할 임의의 필요 없이 볼루스로서 첨가될 수 있다. 이러한 용기, 장치, 및 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, TIL을 확장시키는 데 사용되었고, 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0377739A1호, 국제 공개 제WO 2014/210036 A1호, 미국 특허 출원 공개 제us 2013/0115617 A1호, 국제 공개 제WO 2013/188427 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2011/0136228 A1호, 미국 특허 제US 8,809,050 B2호, 국제 공개 제WO 2011/072088 A2호, 미국 특허 출원 공개 제US 2016/0208216 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2012/0244133 A1호, 국제 공개 제WO 2012/129201 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2013/0102075 A1호, 미국 특허 제US 8,956,860 B2호, 국제 공개 제WO 2013/173835 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2015/0175966 A1호에 기재된 것들을 포함하며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 프로세스는 또한 문헌 [Jin et al., J. Immunotherapy, 2012, 35:283-292]에 기재되어 있다.
O. TIL의 선택적 유전적 조작
일부 실시양태에서, TIL은 고-친화도 T 세포 수용체 (TCR), 예를 들어, 종양-연관된 항원, 예컨대 MAGE-1, HER2, 또는 NY-ESO-1, 또는 종양-연관된 세포 표면 분자 (예를 들어, 메소텔린) 또는 계통-제한된 세포 표면 분자 (예를 들어, CD19)에 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)에서 표적화된 TCR을 포함하나 이에 제한되지는 않는 추가의 기능성을 포함하도록 선택적으로 유전자 조작된다.
P. TIL의 선택적 냉동보존
벌크한 TIL 집단 또는 TIL의 확장된 집단 중 어느 하나는 선택적으로 냉동보존될 수 있다. 일부 실시양태에서, 냉동보존은 치료 TIL 집단에 대해 일어난다. 일부 실시양태에서, 냉동보존은 2차 확장 후에 수확된 TIL에 대해 일어난다. 일부 실시양태에서, 냉동보존은 도 9의 예시적인 단계 F에서의 TIL에 대해 일어난다. 일부 실시양태에서, TIL은 주입 백에서 냉동보존된다. 일부 실시양태에서, TIL은 주입 백에서의 정치 전에 냉동보존된다. 일부 실시양태에서, TIL은 냉동보존되고, 주입 백에 정치되지 않는다. 일부 실시양태에서, 냉동보존은 냉동보존 배지를 사용하여 수행된다. 일부 실시양태에서, 냉동보존 배지는 디메틸술폭시드 (DMSO)를 함유한다. 이는 일반적으로 TIL 집단을 동결 용액, 예를 들어 85% 보체 불활성화된 AB 혈청 및 15% 디메틸 술폭시드 (DMSO) 내로 놓음으로써 달성된다. 용액 중의 세포를 냉동 바이알 내로 정치하고, 냉동보존을 위한 기체성 질소 동결기로의 선택적 전달과 함께, -80 ℃에서 24시간 동안 저장한다. 문헌 [Sadeghi, et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986]을 참조한다.
적절할 경우, 세포를 동결기로부터 제거하고, 용액의 대략 4/5가 해동될 때까지 37 ℃ 수조에서 해동시킨다. 세포를 일반적으로 완전 배지에 재현탁시키고, 선택적으로 1회 이상 세척한다. 일부 실시양태에서, 해동된 TIL을 카운팅하고, 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 생존력에 대해 평가할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, TIL의 집단은 CS10 냉동보존 배지 (크리오스토르 10, 바이오라이프 솔루션즈)를 사용하여 냉동보존된다. 바람직한 실시양태에서, TIL의 집단은 디메틸술폭시드 (DMSO)를 함유하는 냉동보존 배지를 사용하여 냉동보존된다. 바람직한 실시양태에서, TIL의 집단은 1:1 (부피:부피) 비의 CS10 및 세포 배양 배지를 사용하여 냉동보존된다. 바람직한 실시양태에서, TIL의 집단은 약 1:1 (부피:부피) 비의 CS10 및 추가의 IL-2를 더 포함하는 세포 배양 배지를 사용하여 냉동보존된다.
단계 A 내지 E에서 상기 논의된 바와 같이, 냉동보존은 TIL 확장 프로세스 전반에 걸쳐 다수의 시점에서 일어날 수 있다. 일부 실시양태에서, 단계 B에 따른 1차 확장 후의 벌크한 TIL 집단 또는 단계 D에 따른 1회 이상의 2차 확장 후의 TIL의 확장된 집단은 냉동보존될 수 있다. 냉동보존은 일반적으로 TIL 집단을 동결 용액, 예를 들어, 85% 보체 불활성화된 AB 혈청 및 15% 디메틸 술폭시드 (DMSO) 내로 정치함으로써 달성될 수 있다. 용액 중의 세포를 냉동 바이알 내로 정치하고, 냉동보존을 위한 기체성 질소 동결기로의 선택적 전달과 함께, -80 ℃에서 24시간 동안 저장한다. 문헌 [Sadeghi, et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986]을 참조한다.
적절할 경우, 세포를 동결기로부터 제거하고, 용액의 대략 4/5가 해동될 때까지 37 ℃ 수조에서 해동시킨다. 세포를 일반적으로 완전 배지에 재현탁시키고, 임의로 1회 이상 세척한다. 일부 실시양태에서, 해동된 TIL을 카운팅하고, 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 생존력에 대해 평가할 수 있다.
일부의 경우, 단계 B TIL 집단은 하기 논의된 프로토콜을 사용하여 즉시 냉동보존될 수 있다. 대안적으로, 벌크한 TIL 집단은 단계 C 및 단계 D로 처리된 후, 단계 D 후에 냉동보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 것인 경우, 단계 B 또는 단계 D TIL 집단은 적합한 처리를 위해 유전적 변형으로 처리될 수 있다.
Q. 선택적 세포 생존력 분석
선택적으로, 세포 생존력 검정은 1차 확장 (때때로 초기 벌크한 확장으로 지칭됨) 후에 관련 기술분야에 공지된 표준 검정을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 죽은 세포를 선택적으로 표지하고, 생존력 평가를 허용하는 트리판 블루 배제 검정은 벌크한 TIL의 샘플에 대해 수행될 수 있다. 생존력을 시험하는 데 사용하기 위한 다른 검정으로는 알라마 블루 검정; 및 MTT 검정을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
1. 세포 카운트, 생존력, 유동 세포측정법
일부 실시양태에서, 세포 카운트 및/또는 생존력이 측정된다. 마커, 예컨대 CD3, CD4, CD8, 및 CD56, 뿐만 아니라 본원에 개시되거나 기재된 임의의 다른 것들 (그러나, 이에 제한되지는 않음)의 발현은 항체를 사용한 유동 세포측정법, 예를 들어 비디 바이오-사이언시즈 (비디 바이오사이언시즈, 미국 캘리포니아주 산 호세)로부터 시판되는 것들 (그러나 이에 제한되지는 않음)에 의해 FACSCanto™ 유동 세포측정기 (비디 바이오사이언시즈)를 사용하여 측정될 수 있다. 세포는 일회용 c-칩 혈구계 (VWR, 미국 일리노이주 바타비아)를 사용하여 수동으로 카운팅될 수 있으며, 생존력은 트리판 블루 염색을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
일부의 경우, 벌크한 TIL 집단은 하기 논의된 프로토콜을 사용하여 즉시 냉동보존될 수 있다. 대안적으로, 벌크한 TIL 집단은 REP로 처리된 후, 하기 논의된 바와 같이 냉동보존될 수 있다. 유사하게, 유전적으로 변형된 TIL이 요법에 사용될 것인 경우, 벌크한 또는 REP TIL 집단은 적합한 처리를 위해 유전적 변형으로 처리될 수 있다.
2. 세포 배양
한 실시양태에서, TIL을 확장시키는 방법은 약 5,000 mL 내지 약 25,000 mL의 세포 배지, 약 5,000 mL 내지 약 10,000 mL의 세포 배지, 또는 약 5,800 mL 내지 약 8,700 mL의 세포 배지를 사용하는 것을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, TIL의 수를 확장시키는 것은 1가지 이하의 유형의 세포 배양 배지를 사용한다. 임의의 적합한 세포 배양 배지, 예를 들어, AIM-V 세포 배지 (L-글루타민, 50 μM 스트렙토마이신 술페이트, 및 10 μM 겐타미신 술페이트) 세포 배양 배지 (Invitrogen, 캘리포니아주 칼스배드)가 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 본 발명 방법은 유리하게는 TIL의 수를 확장시키는 데 요구되는 배지의 양 및 배지의 유형의 수를 감소시킨다. 한 실시양태에서, TIL의 수를 확장시키는 것은 3일 또는 4일마다보다 덜 빈번하게 세포에 영양공급하는 것을 포함할 수 있다. 기체 투과성 용기에서 세포의 수를 확장시키는 것은 세포를 확장시키는 데 필요한 영양공급 빈도를 감소시킴으로써 세포의 수를 확장시키는 데 필요한 절차를 간소화한다.
한 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 기체 투과성 용기에서의 세포 배지는 비여과된다. 비여과된 세포 배지의 사용은 세포의 수를 확장시키는 데 필요한 절차를 간소화할 수 있다. 한 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 기체 투과성 용기에서의 세포 배지에는 베타-머캅토에탄올 (BME)이 결여된다.
한 실시양태에서, 방법의 지속기간은 포유동물로부터 종양 조직 샘플을 수득하고; 종양 조직 샘플을 그 안에 세포 배지를 함유하는 제1 기체 투과성 용기에서 배양하고; 종양 조직 샘플로부터 TIL을 수득하고; TIL의 수를 약 14일 내지 약 42일, 예를 들어, 약 28일의 지속기간 동안 aAPC를 사용하여 그 안에 세포 배지를 함유하는 제2 기체 투과성 용기에서 확장시키는 것을 포함한다.
한 실시양태에서, TIL은 기체-투과성 용기에서 확장된다. 기체-투과성 용기는 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2005/0106717 A1호에 기재된 것들을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 방법, 조성물, 및 장치를 사용하여 PBMC를 사용하여 TIL을 확장시키는 데 사용되었다. 한 실시양태에서, TIL은 기체-투과성 백에서 확장된다. 한 실시양태에서, TIL은 기체 투과성 백, 예컨대 주리 세포 확장 시스템 W25 (지이 헬스케어)에서 TIL을 확장시키는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 한 실시양태에서, TIL은 기체 투과성 백, 예컨대 주리 세포 확장 시스템 W5 (지이 헬스케어)로도 공지된 웨이브 생물반응기 시스템에서 TIL을 확장시키는 세포 확장 시스템을 사용하여 확장된다. 한 실시양태에서, 세포 확장 시스템은 약 100 mL, 약 200 mL, 약 300 mL, 약 400 mL, 약 500 mL, 약 600 mL, 약 700 mL, 약 800 mL, 약 900 mL, 약 1 L, 약 2 L, 약 3 L, 약 4 L, 약 5 L, 약 6 L, 약 7 L, 약 8 L, 약 9 L, 및 약 10 L로 이루어진 군으로부터 선택되는 부피를 갖는 기체 투과성 세포 백을 포함한다.
한 실시양태에서, TIL은 G-Rex 플라스크 (윌슨 울프 매뉴팩처링으로부터 시판됨)에서 확장될 수 있다. 이러한 실시양태는 세포 집단이 약 5×105개의 세포/cm2 에서부터 10×106 내지 30×106개의 세포/cm2 사이까지 확장되는 것을 허용한다. 한 실시양태에서, 이것에는 영양공급이 없다. 한 실시양태에서, 이것에는 배지가 G-Rex 플라스크에 약 10 cm의 높이로 있는 한 영양공급이 없다. 한 실시양태에서, 이것에는 영양공급이 없지만, 1종 이상의 시토카인의 첨가를 갖는다. 한 실시양태에서, 시토카인은 시토카인을 배지와 혼합할 임의의 필요 없이 볼루스로서 첨가될 수 있다. 이러한 용기, 장치, 및 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, TIL을 확장시키는 데 사용되었고, 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0377739A1호, 국제 공개 제WO 2014/210036 A1호, 미국 특허 출원 공개 제us 2013/0115617 A1호, 국제 공개 제WO 2013/188427 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2011/0136228 A1호, 미국 특허 제US 8,809,050 B2호, 국제 공개 제WO 2011/072088 A2호, 미국 특허 출원 공개 제US 2016/0208216 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2012/0244133 A1호, 국제 공개 제WO 2012/129201 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2013/0102075 A1호, 미국 특허 제US 8,956,860 B2호, 국제 공개 제WO 2013/173835 A1호, 미국 특허 출원 공개 제US 2015/0175966 A1호에 기재된 것들을 포함하며, 이들의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 이러한 프로세스는 또한 문헌 [Jin et al., J. Immunotherapy, 2012, 35:283-292]에 기재되어 있다. TIL의 선택적 유전자 조작
일부 실시양태에서, TIL은 고-친화도 T 세포 수용체 (TCR), 예를 들어, 종양-연관된 항원, 예컨대 MAGE-1, HER2, 또는 NY-ESO-1, 또는 종양-연관된 세포 표면 분자 (예를 들어, 메소텔린) 또는 계통-제한된 세포 표면 분자 (예를 들어, CD19)에 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)에서 표적화된 TCR을 포함하나 이에 제한되지는 않는 추가의 기능성을 포함하도록 선택적으로 유전자 조작된다.
IV. 환자를 치료하는 방법
치료 방법은 초기 TIL 수집 및 TIL의 배양과 함께 시작한다. 이러한 방법은 둘 다 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Jin et al., J. Immunotherapy, 2012, 35(3):283-292]에 의해 관련 기술분야에 기재되어 있다. 치료 방법의 실시양태는 실시양태를 비롯한 하기 섹션 전반에 걸쳐 기재된다.
예를 들어 상기 단계 A 내지 F에 기재된 바와 같은 또는 상기 단계 A 내지 F에 따른(또한, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 도시된 바와 같은) 것을 비롯한 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 확장된 TIL은 암을 갖는 환자의 치료에서 특정 용도를 발견한다 (예를 들어, 문헌 [Goff, et al., J. Clinical Oncology, 2016, 34(20):2389-239], 뿐만 아니라 보충적 내용에 기재된 바와 같음; 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 일부 실시양태에서, TIL을 이전에 기재된 바와 같이 전이성 흑색종의 절제된 침착물로부터 성장시켰다 (문헌 [Dudley, et al., J Immunother., 2003, 26:332-342] 참조; 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 신선한 종양을 멸균 조건 하에서 절개할 수 있다. 대표적 샘플을 형식적 병원체 분석을 위해 수집할 수 있다. 2 mm3 내지 3 mm3의 단일 단편이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자 당 5, 10, 15, 20, 25 또는 30개의 샘플이 수득된다. 일부 실시양태에서, 환자 당 20, 25, 또는 30개의 샘플이 수득된다. 일부 실시양태에서, 환자 당 20, 22, 24, 26, 또는 28개의 샘플이 수득된다. 일부 실시양태에서, 환자 당 24개의 샘플이 수득된다. 샘플을 24-웰 플레이트의 개별적 웰에 정치하고, 고-용량 IL-2 (6,000 IU/mL)를 갖는 성장 배지에서 유지하고, 종양의 파괴 및/또는 TIL의 증식에 대해 모니터링할 수 있다. 프로세싱 후에 잔류하는 생존 세포를 갖는 임의의 종양을 단일 세포 현탁액 내로 효소적으로 소화시키고, 본원에 기재된 바와 같이 냉동보존할 수 있다.
일부 실시양태에서, 성공적으로 성장된 TIL을 표현형 분석 (CD3, CD4, CD8, 및 CD56)을 위해 샘플링하고, 이용가능한 경우 자가 종양에 대해 시험할 수 있다. TIL은 밤샘 공동배양이 인터페론-감마 (IFN-γ) 수준 > 200 pg/mL 및 2배 배경을 생성한 경우 반응성인 것으로 간주될 수 있다. (Goff, et al., J Immunother., 2010, 33:840-847; 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 일부 실시양태에서, 자가 반응성 또는 충분한 성장 패턴의 증거를 갖는 배양물을 때때로 급속 확장 (REP)으로 지칭되는 2차 확장을 비롯한 2차 확장 (예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9의 단계 D에 따라 제공된 바와 같은 2차 확장)을 위해 선택할 수 있다. 일부 실시양태에서, 높은 자가 반응성 (예를 들어, 2차 확장 동안 높은 증식)을 갖는 확장된 TIL은 추가의 2차 확장을 위해 선택된다. 일부 실시양태에서, 높은 자가 반응성 (예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9의 단계 D에서 제공된 바와 같은 2차 확장 동안 높은 증식)을 갖는 TIL은 도 2a 및/또는 도 9의 단계 D에 따른 추가의 2차 확장을 위해 선택된다.
일부 실시양태에서, 환자는 ACT (입양 세포 전달)로 직접적으로 이동되지 않으며, 예를 들어, 일부 실시양태에서, 수확 및/또는 1차 확장 후, 세포는 즉시 활용되지 않는다. 이러한 실시양태에서, TIL은 냉동보존되고, 환자에의 투여 전 2일에 해동될 수 있다. 이러한 실시양태에서, TIL은 냉동보존되고, 환자에의 투여 전 1일에 해동될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 냉동보존되고, 환자에의 투여 직전에 해동될 수 있다.
주입 백 TIL의 냉동보존된 샘플의 세포 표현형은 유동 세포측정법 (예를 들어, 플로조 (FlowJo))에 의해 표면 마커 CD3, CD4, CD8, CCR7, 및 CD45RA (비디 바이오사이언시즈)에 대해, 뿐만 아니라 본원에 기재된 방법 중 임의의 것에 의해 분석될 수 있다. 혈청 시토카인은 표준 효소-결합 면역흡착 검정 기법을 사용하여 측정할 수 있다. 혈청 IFN-γ의 상승은 > 100 pg/mL 및 혈청 IFN-γ의 기준선 수준보다 적어도 4배 또는 적어도 3배 또는 적어도 2배 또는 적어도 1배 더 큰 것으로서 정의될 수 있다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >1000 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >200 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >250 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >300 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >350 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >400 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >450 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >500 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >550 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >600 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >650 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >700 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >750 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >800 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >850 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >900 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >950 pg/mL로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 혈청 IFN-γ의 상승은 >1000 pg/mL로서 정의된다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 방법, 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 예시된 것들에 의해 제조된 TIL은 TIL의 임상적 효능의 놀라운 개선을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 방법, 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 예시된 것들에 의해 제조된 TIL은 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 예시된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에 기재된 것들 외의 방법에 의해 제조된 TIL에 비해 증가된 임상적 효능을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 것들 외의 방법은 프로세스 1C 및/또는 1세대 (Gen 1)로 지칭되는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 증가된 효능은 DCR, ORR, 및/또는 다른 임상적 반응에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 방법, 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 예시된 것들에 의해 제조된 TIL은 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 예시된 것들 외의 방법, 예를 들어 Gen 1 프로세스를 비롯한 본원에 기재된 것들 외의 방법에 의해 제조된 TIL에 비해 유사한 반응까지의 시간 및 안전성 프로필을 나타낸다.
일부 실시양태에서, IFN-감마 (IFN-γ)는 치료 효능 및/또는 증가된 임상적 효능의 지표이다. 일부 실시양태에서, TIL로 치료되는 대상체의 혈액 중의 IFN-γ는 활성 TIL의 지표이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 생산에 대한 효력 검정이 채용된다. IFN-γ 생산은 세포독성 잠재성의 또 다른 척도이다. IFN-γ 생산은 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 기재된 바와 같은 것들을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료되는 대상체의 생체외 혈액, 혈청, 또는 TIL에서 시토카인 IFN-γ의 수준을 결정함으로써 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, IFN-γ의 증가는 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료되는 환자에서 치료 효능의 지표이다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 1배, 2배, 3배, 4배, 또는 5배 이상 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 1배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 2배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 3배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 4배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ 분비는 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 5배 증가된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 콴티킨 ELISA 키트를 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 기재된 바와 같은 것들을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료되는 대상체의 생체외 TIL에서 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 기재된 바와 같은 것들을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료되는 대상체의 혈액에서 측정된다. 일부 실시양태에서, IFN-γ는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 기재된 바와 같은 것들을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL로 치료되는 대상체의 TIL 혈청에서 측정된다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 기재된 바와 같은 것들을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL은 도 2a 및/또는 도 9에 예시되지 않은 것들을 비롯한 다른 방법, 예컨대 예를 들어, 프로세스 1C 방법으로 지칭되는 방법에 의해 제조된 TIL에 비해 증가된 폴리클로날성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 유의하게 개선된 폴리클로날성 및/또는 증가된 폴리클로날성은 치료 효능 및/또는 증가된 임상적 효능의 지표이다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 T-세포 레퍼토리 다양성을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성의 증가는 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL의 투여에 관한 치료 효능의 지표일 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해 1배, 2배, 10배, 100배, 500배, 또는 1000배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 1배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 2배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 10배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 100배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 500배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 비치료된 환자에 비해 및/또는 예를 들어 도 2a 및/또는 도 9에 구현된 것들 외의 방법을 비롯한 본원에서 제공된 것들과는 다른 방법을 사용하여 제조된 TIL로 치료되는 환자에 비해 1000배 증가된다.
효능의 척도는 관련 기술분야에 공지된 뿐만 아니라 본원에 기재된 바와 같이, 질환 제어율 (DCR) 뿐만 아니라 전체 반응률 (ORR)을 포함할 수 있다.
A. 암을 치료하는 방법
본원에 기재된 조성물 및 방법은 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 이들은 성인 환자 또는 소아 환자에서 암과 같은 과다증식성 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 것이다. 이들은 또한 본원에 및 하기 단락에 기재된 바와 같은 다른 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 과다증식성 장애는 암이다. 일부 실시양태에서, 과다증식성 장애는 고형 종양 암이다. 일부 실시양태에서, 고형 종양 암은 항문암, 방광암, 유방암(삼중-음성 유방암 포함), 골암, 인유두종 바이러스(HPV)에 의해 유발된 암, 중추신경계 관련 암(뇌실막종, 수모세포종, 신경모세포종, 송과체종 및 원시신경외배엽종양 포함), 자궁경부암(편평세포 자궁경부암, 선편평 자궁경부암, 자궁경부 선암 포함), 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 식도위 접합부암, 위암, 위장관암, 위장관 기질 종양, 교모세포종, 신경교종, 두경부암(두경부 편평세포암(HNSCC), 하인두암, 후두암, 비인두암, 구인두암 및 인두암 포함), 신장암, 간암, 폐암종(비소세포폐암종(NSCLC) 및 소세포폐암 포함), 흑색종(포도막 흑색종, 맥락막 흑색종, 모양체 흑색종 또는 홍채 흑색종 포함), 중피종(악성 흉막 중피종 포함), 난소암, 췌장암(췌관 선암종 포함), 음경암, 직장암, 신장암, 신세포암종, 육종 (유잉 육종, 골육종, 횡문근육종 및 기타 뼈 및 연조직 육종 포함), 갑상선암(갑상선 역형성암 포함), 자궁암 및 질암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 과증식성 장애는 혈액 악성종양이다. 일부 실시양태에서, 혈액 악성종양은 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 여포 림프종, 외투 세포 림프종 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 혈액 악성종양이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 혈액 악성종양이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 MIL 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 혈액 악성종양이다.
한 실시양태에서, 암은 화학요법, 방사선 요법, 또는 면역요법을 비롯한 적어도 하나의 이전 요법을 사용한 치료에 대해 재발하거나 난치성인 고형 종양 암 및 혈액학적 악성종양을 포함하는 전술한 암 중 하나이다. 한 실시양태에서, 암은 화학요법, 방사선 요법, 및/또는 면역요법을 포함하는 적어도 2개의 이전 요법을 사용한 치료에 대해 재발하거나 난치성인 전술한 암 중 하나이다. 한 실시양태에서, 암은 화학요법, 방사선 요법, 및/또는 면역요법을 포함하는 적어도 3개의 이전 요법에 의한 치료에 대해 재발하거나 난치성인 전술한 암 중 하나이다.
일부 실시양태에서, 암은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 암이다. 따라서, MSI-H 및 dMMR 암 및 테스트는 문헌[Kawakami, et al., Curr. Treat. Options Oncol. 2015, 16, 30]에 기술되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL 또는 PBL을 사용하여 암에 걸린 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 인간이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암에 걸린 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 비인간이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 반려 동물이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 CCR을 발현하도록 변형된 TIL, MIL, 또는 PBL을 사용하여 암에 걸린 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 영장류, 말, 개 또는 고양이과 동물이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 BRAF 저해제 및/또는 MEK 저해제를 사용한 치료에 난치성이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 베무라페닙, 다브라페닙, 엔코라페닙, 소라페닙, 및 이의 제약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 BRAF 저해제를 사용한 치료에 난치성이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, 셀루메티닙, 피마세르티닙, 레파메티닙, 및 이의 제약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 MEK 저해제를 사용한 치료에 난치성이다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 베무라페닙, 다브라페닙, 엔코라페닙, 소라페닙, 및 이의 제약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 BRAF 저해제, 및 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, 셀루메티닙, 피마세르티닙, 레파메티닙, 및 이의 제약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 MEK 저해제를 사용한 치료에 난치성이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암이 있는 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 암은 소아암이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암이 포도막 흑색종인 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 포도막 흑색종은 맥락막 흑색종, 모양체 흑색종 또는 홍채 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 소아암은 신경모세포종이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 소아암이 육종인 암 환자를 치료하는 방법을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 육종은 골육종이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 육종은 연조직 육종이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 연조직 육종은 횡문근육종, 유잉 육종, 또는 원시 신경외배엽 종양(PNET)이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 소아암은 중추신경계(CNS) 연관 암이다. 일부 실시양태에서, 소아암은 화학요법에 의한 치료에 대해 난치성이다. 일부 실시양태에서, 소아암은 방사선 요법에 의한 치료에 대해 난치성이다. 일부 실시양태에서, 소아암은 디누툭시맙을 사용한 치료에 대해 난치성이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 CNS 연관 암은 수모세포종, 송과체종, 신경교종, 뇌실막종 또는 교모세포종이다.
본원에 기재된 조성물 및 방법은 암을 치료하기 위한 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 암은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를 사용한 이전 치료에 대해 난치성이거나 내성이다. 일부 실시양태에서, 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대한 1차 난치성 환자이다. 일부 실시양태에서, 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대한 이전의 반응을 나타내지 않는다. 일부 실시양태에서, 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대한 이전의 반응을 나타내고, 이어서 환자의 암 진행을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암은 적어도 하나의 화학요법제와 조합된 항-CTLA-4 항체 및/또는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체에 대해 난치성이다. 일부 실시양태에서, 이전의 화학요법제는 카르보플라틴, 파클리탁셀, 페메트렉시드 및/또는 시스플라틴이다. 일부 이전의 실시양태에서, 화학요법제(들)는 백금 이중 화학요법제이다. 일부 실시양태에서, 백금 이중 요법은 시스플라틴 및 카르보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제1 화학요법제 및 비노렐빈, 젬시타빈 및 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 nab-파클리탁셀)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제2 화학요법제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 백금 이중 화학요법제는 페메트렉세드와 조합된다.
일부 실시양태에서, NSCLC는 PD-L1 음성이고/이거나 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 종양 비율 점수(TPS)가 1% 미만인 PD-L1을 발현하는 암 환자로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, NSCLC는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 및 백금 이중 요법을 포함하는 조합 요법에 대해 난치성이며, 여기서 백금 이중 요법은 다음을 포함한다:
i) 시스플라틴 및 카르보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제1 화학요법제,
ii) 및 비노렐빈, 젬시타빈 및 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 nab-파클리탁셀 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제2 화학요법제.
일부 실시양태에서, NSCLC는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체, 페메트렉세드, 및 백금 이중 요법을 포함하는 조합 요법에 난치성이며, 여기서 백금 이중 요법은 다음을 포함한다:
i) 시스플라틴 및 카르보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제1 화학요법제,
ii) 및 비노렐빈, 젬시타빈 및 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀 또는 nab-파클리탁셀 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제2 화학요법제.
일부 실시양태에서, NSCLC는 항-PD-1 항체에 의해 치료되었다. 일부 실시양태에서, NSCLC는 항-PD-L1 항체에 의해 치료되었다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없다. 일부 실시양태에서, NSCLC는 항-PD-1 항체에 의해 치료되지 않았다. 일부 실시양태에서, NSCLC는 항-PD-L1 항체에 의해 치료되지 않았다. 일부 실시양태에서, NSCLC는 화학요법제에 의해 이전에 치료된 적이 있다. 일부 실시양태에서, NSCLC는 화학요법제에 의해 이전에 치료되었지만, 더 이상 화학요법제에 의해 치료되지 않는다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 항-PD-1/PD-L1 경험이 없다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 PD-L1의 낮은 발현을 갖는다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없는 NSCLC를 갖고 있거나, 화학요법 치료 후지만 항-PD-1/PD-L1 경험이 없다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없거나 또는 화학요법 치료 후지만 항-PD-1/PD-L1 경험이 없으며 PD-L1의 낮은 발현을 갖는다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 기준선에서 벌크한 질환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 기준선에서 벌크한 질환을 갖고 PD-L1의 낮은 발현을 갖는다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 PD-L1의 검출가능한 발현이 없다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없거나 화학요법 치료 후지만 항-PD-1/PD-L1 경험이 없고 PD-L1의 검출가능한 발현이 없다. 일부 실시양태에서, 환자는 기준선에서 벌크한 질환을 갖고 PD-L1의 검출가능한 발현이 없다. 일부 실시양태에서, NSCLC 환자는 치료 경험이 없는 NSCLC 또는 화학요법 이후(예를 들어, 화학요법제 이후)지만 PD-L1의 낮은 발현을 갖고/있거나 기준선에서 벌크한 질환을 갖는 항-PD-1/PD-L1 경험이 없다. 일부 실시양태에서, 최대 종양 직경이 횡단면 또는 관상면에서 측정 시 7 cm 초과인 경우에는 벌크한 질환을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 벌크한 질환은 단축 직경이 20 mm 이상인 종창 림프절이 있을 때를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 NSCLC에 대한 표준 의료 치료법을 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-L1 발현은 종양 비율 점수에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 난치성 NSCLC 종양이 있는 대상체는 1% 미만의 종양 비율 점수(TPS)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 난치성 NSCLC 종양을 갖는 대상체는 ≥ 1% TPS를 갖는다. 일부 실시양태에서, 난치성 NSCLC를 갖는 대상체는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체로 이전에 치료되었고 종양 비율 점수는 상기 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체 치료 이전에 결정되었다. 일부 실시양태에서, 난치성 NSCLC를 갖는 대상체는 항-PD-L1 항체로 이전에 치료되었고 종양 비율 점수는 상기 항-PD-L1 항체 치료 이전에 결정되었다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 도 1에 기재된 것을 비롯한 본 발명의 방법에 의해 제조된 TIL은, 예를 들어, 프로세스 1C 방법이라고 지칭되는 방법과 같은 도 1에 예시되지 않은 방법을 비롯한 다른 방법에 의해 생성된 TIL에 비해, 증가된 폴리클로날성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 유의미하게 개선된 폴리클로날성 및/또는 증가된 폴리클로날성은 암 치료에 대한 치료 효능 및/또는 증가된 임상 효능을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 T-세포 레퍼토리 다양성을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성의 증가는 본 발명의 방법에 의해 생성된 TIL의 투여에 관한 치료 효능을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은, 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 비해, 1배, 2배, 10배, 100배, 500배, 또는 1000배 증가된다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 미치료된 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법 외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 의해 치료된 환자에 비해 1배 증가한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 미치료된 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법 외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 의해 치료된 환자에 비해 2배 증가한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 미치료된 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법 외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 의해 치료된 환자에 비해 10배 증가한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 미치료된 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법 외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 의해 치료된 환자에 비해 100배 증가한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 미치료된 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 의해 치료된 환자에 비해 500배 증가한다. 일부 실시양태에서, 폴리클로날성은 미치료된 환자 및/또는 예를 들어, 도 1에 구현된 방법 외에 다른 방법을 비롯한 본원에 제공된 방법외의 방법을 사용하여 제조된 TIL에 의해 치료된 환자에 비해 1000배 증가한다.
일부 실시양태에서, PD-L1 발현은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 테스트 방법을 사용하여 종양 비율 점수에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, NSCLC 종양을 갖는 대상체 또는 환자는 < 1% 종양 비율 점수(TPS)를 갖는다. 일부 실시양태에서, NSCLC 종양은 ≥ 1% TPS를 갖는다. 일부 실시양태에서, NSCLC를 갖는 대상체 또는 환자는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체로 이전에 치료되었고 종양 비율 점수는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체 치료 이전에 결정되었다. 일부 실시양태에서, NSCLC를 갖는 대상체 또는 환자는 항-PD-L1 항체로 이전에 치료되었고 종양 비율 점수는 항-PD-L1 항체 치료 이전에 결정되었다. 일부 실시양태에서, 난치성 또는 내성 NSCLC 종양이 있는 대상체 또는 환자는 1% 미만의 종양 비율 점수(TPS)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 난치성 또는 내성 NSCLC 종양을 갖는 대상체 또는 환자는 ≥1% TPS를 갖는다. 일부 실시양태에서, 난치성 또는 내성 NSCLC를 갖는 대상체 또는 환자는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체로 이전에 치료되었고 종양 비율 점수는 항-PD-1 및 /또는 항-PD-L1 항체 치료 이전에 결정되었다. 일부 실시양태에서, 난치성 또는 내성 NSCLC를 갖는 대상체 또는 환자는 항-PD-L1 항체로 이전에 치료되었고 종양 비율 점수는 항-PD-L1 항체 치료 이전에 결정되었다.
일부 실시양태에서, NSCLC는 1% 미만(TPS <1%)인 종양 비율 점수(TPS), 또는 PD-L1 단백질에 대해 임의의 강도로 염색하는 부분 또는 완전한 멤브레인 염색을 보여주는, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법 이전에 취한 환자로부터의 생존 종양 세포의 백분율을 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 <50%, <45%, <40%, <35%, <30%, <25%, <20%, <15%, <10%, <9%, <8%, <7%, <6%, <5%, <4%, <3%, <2%, <1%, <0.9%, <0.8%, <0.7%, <0.6%, <0.5%, <0.4%, <0.3%, <0.2%, <0.1%, <0.09%, <0.08%, <0.07%, <0.06%, <0.05%, <0.04%, <0.03%, <0.02% 및 <0.01%으로 이루어진 군으로부터 선택되는 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 약 50%, 약 45%, 약 40%, 약 35%, 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1%, 약 0.9%, 약 0.8%, 약 0.7%, 약 0.6%, 약 0.5%, 약 0.4%, 약 0.3%, 약 0.2%, 약 0.1%, 약 0.09%, 약 0.08%, 약 0.07%, 약 0.06%, 약 0.05%, 약 0.04%, 약 0.03%, 약 0.02%, 및 약 0.01%로 이루어진 군으로부터 선택된 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 1%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.9%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.8%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.7%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.6%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.5%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.4%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.3%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.2%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. 한 실시양태에서, NSCLC는 0% 내지 0.1%의 TPS를 나타내는 NSCLC이다. TPS는 문헌[Hirsch, et al. J. Thorac. Oncol. 2017, 12, 208-222]에 기재된 것 또는 펨브롤리주맙 또는 기타 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법으로 치료하기 전에 TPS를 결정하는 데 사용된 것과 같은, 관련 기술에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 미국 식품의약국(FDA)에서 승인한 TPS 측정 방법도 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, PD-L1은 엑소좀 PD-L1이다. 일부 실시양태에서, PD-L1은 순환성 종양 세포에서 발견된다.
일부 실시양태에서, 부분 멤브레인 염색은 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99%, 또는 그 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 완전한 멤브레인 염색은 대략 100% 멤브레인 염색을 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-L1에 대한 테스트는 환자 혈청에서 PD-L1의 수준을 측정하는 것을 수반할 수 있다. 이들 실시양태에서, 환자 혈청에서 PD-L1의 측정은 종양 이질성의 불확실성 및 연속 생검의 환자 불편함을 제거한다.
일부 실시양태에서, 기준선 또는 표준 수준과 비교하여 상승된 가용성 PD-L1은 NSCLC에서 악화된 예후와 상관관계가 있다. 예를 들어, Okuma, et al., Clinical Lung Cancer, 2018, 19, 410-417; Vecchiarelli, et al., Oncotarget, 2018, 9, 17554-17563을 참조한다. 일부 실시양태에서, PD-L1은 엑소좀 PD-L1이다. 일부 실시양태에서, PD-L1은 순환성 종양 세포 상에서 발현된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL)의 집단을 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여함으로써 비-소세포성 폐암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 대상체 또는 환자는 다음 중 적어도 하나를 가지며:
<1%인 PD-L1의 소정의 종양 비율 점수(TPS),
1%-49%의 PD-L1의 TPS 점수, 또는
하나 이상의 드라이버 돌연변이의 소정의 부재,
여기서, 드라이버 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손 20 돌연변이, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 방법은:
(a) 대상체로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 대상체 또는 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(b) TIL의 1차 집단을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(c) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 1차 확장은 약 3 내지 14일 동안 수행되어 TIL의 2차 집단을 수득하며, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (b)에서 단계 (c)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(d) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 약 7일 내지 14일 동안 수행되어 TIL의 3차 집단을 수득하고, TIL의 3차 집단은 TIL의 치료 집단이고, 2차 팽창은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (c)에서 단계 (d)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(e) 단계 (d)에서 수득한 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 단계 (d)에서 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계; 및
(f) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(g) 냉동보존 프로세스를 사용하여 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존하는 단계; 및
(h) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료 유효 투여량을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 종양 침윤성 림프구(TIL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비-소세포성 폐암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은:
(a) PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 환자의 종양을 테스트하는 단계,
(b) 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 부재에 대해 환자를 테스트하는 단계로서, 여기서 드라이버 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손 20 돌연변이, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 단계,
(c) 환자가 약 1% 내지 약 49%의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지를 결정하고, 환자가 또한 드라이버 돌연변이를 갖지 않는지를 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 대상체 또는 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 1차 집단을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(f) IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하여 TIL의 2차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 여기서 1차 확장은 약 3-14일 동안 수행되어 TIL의 2차 집단을 수득하고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (e) 내지 단계 (f)는 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(g) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충하여 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 약 7-14일 동안 수행되어 TIL의 3차 집단을 수득하고, TIL의 3차 집단은 TIL의 치료 집단이며, 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (f)에서 단계 (g)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득된 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 여기서 단계 (d)로부터 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계; 및
(i) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 여기서 단계 (e)로부터 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(j) 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존 프로세스를 사용하여 냉동보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료 유효 투여량을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 종양 침윤 림프구(TIL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비-소세포성 폐암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은:
(a) 환자의 종양을 PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 부재에 대해 테스트하는 단계로서, 여기서 드라이버 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손 20 돌연변이, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이, 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 단계,
(c) 환자가 약 1% 미만의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지를 결정하고, 환자가 또한 드라이버 돌연변이를 갖지 않는지를 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 대상체 또는 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 1차 집단을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(f) TIL의 2차 집단을 생성하기 위해 IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3일 내지 14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (e) 내지 단계 (f)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(g) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7일 내지 14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 치료 집단이고, 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (f)에서 단계 (g)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득한 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 단계 (d)에서 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나며; 및
(i) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(j) 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존 프로세스를 사용하여 냉동보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료적 유효 투여량을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 종양 침윤성 림프구(TIL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비-소세포성 폐암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은:
(a) 환자의 종양을 PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 부재에 대해 테스트하는 단계로서, 여기서 드라이버 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, 또는 RET 융합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 단계,
(c) 환자가 약 1% 내지 약 49%의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지를 결정하고, 환자가 또한 드라이버 돌연변이를 갖지 않는지를 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 대상체 또는 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 1차 집단을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(f) TIL의 2차 집단을 생성하기 위해 IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3일 내지 14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (e) 내지 단계 (f)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(g) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7일 내지 14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 치료 집단이고, 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (f)에서 단계 (g)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득한 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계; 및
(i) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(j) 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존 프로세스를 사용하여 냉동보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료적 유효 투여량을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 종양 침윤성 림프구(TIL)의 집단을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 비-소세포성 폐암종(NSCLC)을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은:
(a) 환자의 종양을 PD-L1 발현 및 PD-L1의 종양 비율 점수(TPS)에 대해 테스트하는 단계,
(b) 환자를 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 부재에 대해 테스트하는 단계로서, 여기서 드라이버 돌연변이는 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, KRAS 돌연변이, BRAF 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1 돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, 또는 RET 융합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 단계,
(c) 환자가 약 1% 미만의 PD-L1에 대한 TPS 점수를 갖는지를 결정하고, 환자가 또한 드라이버 돌연변이를 갖지 않는지를 결정하는 단계,
(d) 대상체로부터 수득한 종양 샘플을 다중 종양 단편으로 처리함으로써 대상체 또는 환자로부터 절제된 종양으로부터 TIL의 1차 집단을 수득 및/또는 수용하는 단계;
(e) TIL의 1차 집단을 닫힌 계에 첨가하는 단계;
(f) TIL의 2차 집단을 생성하기 위해 IL-2를 포함하는 세포 배양 배지에서 TIL의 1차 집단을 배양함으로써 1차 확장을 수행하는 단계로서, 여기서 1차 확장은 제1 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 1차 확장은 TIL의 2차 집단을 수득하기 위해 약 3일 내지 14일 동안 수행되고, TIL의 2차 집단은 TIL의 1차 집단보다 수가 적어도 50배 더 많고, 단계 (e) 내지 단계 (f)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(g) TIL의 2차 집단의 세포 배양 배지를 추가 IL-2, OKT-3, 및 항원 제시 세포(APC)와 함께 보충함으로써 2차 확장을 수행하여 TIL의 3차 집단을 생성하는 단계로서, 여기서 2차 확장은 TIL의 3차 집단을 수득하기 위해 약 7일 내지 14일 동안 수행되고, TIL의 3차 집단은 TIL의 치료 집단이고, 2차 확장은 제2 기체 투과성 표면적을 제공하는 밀폐 용기에서 수행되고, 단계 (f)에서 단계 (g)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(h) 단계 (d)에서 수득한 TIL의 치료 집단을 수확하는 단계로서, 여기서 단계 (d)에서 단계 (e)로의 이행은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계; 및
(i) 단계 (e)로부터 수확된 TIL 집단을 주입 백으로 전달하는 단계로서, 단계 (e)에서 (f)로의 전달은 계를 개방함이 없이 일어나는 것인 단계;
(j) 단계 (f)로부터 수확된 TIL 집단을 포함하는 주입 백을 냉동보존 프로세스를 사용하여 냉동보존하는 단계; 및
(k) 단계 (g)의 주입 백으로부터 TIL의 3차 집단의 치료적 유효 투여량을 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 치료적 TIL 집단의 치료 유효 투여량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 치료적 유효 투여량의 TIL 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 및 TIL 조성물의 치료적 유효 투여량을 각각 투여하기 전에, 비-골수절제 림프구제거 요법이 대상체에게 투여되도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 비-골수절제 림프구제거 요법이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드의 투여, 이어서 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈의 투여 단계를 포함하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 TIL 세포를 대상체에게 투여한 다음 날에 시작하여 고-용량의 IL-2 요법으로 대상체를 치료하는 단계를 추가로 포함하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 고-용량 IL-2 요법이 관용까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥내 주입으로 투여되는 600,000 또는 720,000 IU/kg을 포함하도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 고형 종양이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비-소세포 폐암종(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인유두종 바이러스에 의한 암, 두경부암(두경부 편평세포암(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장 암 또는 신세포 암종이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종, HNSCC, 자궁경부암, NSCLC, 교모세포종(GBM 포함) 및 위장관암이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 HNSCC이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 자궁경부암이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 NSCLC이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 교모세포종(GBM 포함)이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 위장관암이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 과돌연변이된 암이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 소아 과돌연변이된 암이도록 변형된 본원에 기재된 암이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효 투여량의 치료적 TIL 집단을 투여하는 것을 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 치료적 TIL 집단을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효 투여량의 TIL 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 본원에 기재된 TIL 조성물의 치료적 유효 투여량을 대상체에게 투여하기 전에, 비-골수절제 림프구제거 요법이 대상체에게 투여되도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 본원에 기재된 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 비-골수절제 림프구제거 요법이 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량의 시클로포스파미드 투여 및 이어서 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량의 플루다라빈 투여 단계를 포함하도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 환자에게 TIL 세포의 투여 다음 날부터 시작하여 고-용량 IL-2 처방으로 환자를 치료하는 단계를 추가로 포함하도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 고-용량 IL-2 요법이 관용까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥내 주입으로 투여되는 600,000 또는 720,000 IU/kg을 포함하도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 고형 종양이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종, 난소암, 자궁경부암, 비-소세포 폐암(NSCLC), 폐암, 방광암, 유방암, 인유두종 바이러스에 의한 암, 두경부암(두경부 편평세포암(HNSCC) 포함), 교모세포종(GBM 포함), 위장관암, 신장 암 또는 신세포 암종이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종, HNSCC, 자궁경부암, NSCLC, 교모세포종(GBM 포함) 및 위장관암이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 흑색종이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 HNSCC이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 자궁경부암이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 NSCLC이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 교모세포종이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 위장관암이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 과돌연변이된 암이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암이 소아 과돌연변이된 암이도록 변형된 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 TIL 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효 투여량의 치료적 TIL 집단을 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암을 치료하는 방법에 사용되는 본원에 기재된 치료적 TIL 집단의 용도를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효 투여량의 TIL 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암을 치료하는 방법에 사용되는 임의의 이전 단락에 기재된 TIL 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 환자에게 비-골수절제 림프구제거 요법을 투여한 후, 이전 단락 중 어느 하나에 기재된 치료적 TIL 집단의 치료적 유효 투여량 또는 본원에 기재된 TIL 조성물의 치료적 유효 투여량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 환자의 암을 치료하는 방법에 사용되는 본원에 기재된 치료적 TIL 집단 또는 본원에 기재된 TIL 조성물의 용도를 제공한다.
1. 드라이버 돌연변이에 기초하여 암을 치료하는 방법
본원에 사용된 "드라이버 돌연변이" 및/또는 "실행가능한 돌연변이" 및/또는 "발암성 드라이버 돌연변이"라는 문구는 전형적으로 발암성 드라이버(즉, 암 드라이버 또는 암 유도인자)로 간주되는 돌연변이를 지칭한다. 이러한 돌연변이 중 하나 이상의 존재는 전통적으로 표적화된 요법의 표적으로 활용되었다. 종종, 드라이버 돌연변이는 예를 들어 티로신 키나제 저해제(TKI)를 포함하는 표적화된 치료 모이어티를 사용한 치료에 대해 조사 및/또는 분석된다. 이러한 드라이버 돌연변이는 일부 실시양태에서 1차 요법적 치료에 대한 반응에 영향을 주거나 영향을 미칠 수 있다. 본원에 기재된 TIL 요법 방법 및 조성물은 이러한 드라이버 돌연변이가 환자 또는 대상체에 존재하는지 여부에 관계없이 치료에 효과적이다. 이러한 드라이버 돌연변이는 전체 엑솜 시퀀싱 또는 특정 드라이버 돌연변이의 검출을 표적으로 하는 방법을 포함하는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 테스트 및 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 존재 또는 부재를 나타내는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 존재를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암은 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 부재를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암은 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 부재 또는 존재에 대해 분석되었다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 드라이버 돌연변이가 존재하지 않는다. 일부 실시양태에서, 암 치료는 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 존재 또는 부재와 무관하다. 일부 실시양태에서, 암은 EGFR 돌연변이, EGFR 삽입, EGFR 엑손20, KRAS 돌연변이, BRAF-돌연변이, BRAF V600E 돌연변이, BRAF V600K 돌연변이, BRAF V600 돌연변이, ALK 돌연변이, c-ROS 돌연변이(ROS1-돌연변이), ROS1 융합, RET 돌연변이, RET 융합, ERBB2 돌연변이, ERBB2 증폭, BRCA 돌연변이, MAP2K1 돌연변이, PIK3CA, CDKN2A, PTEN 돌연변이, UMD 돌연변이, NRAS 돌연변이, KRAS 돌연변이, NF1 돌연변이, MET 돌연변이, MET 스플라이스 및/또는 변경된 MET 신호전달, TP53 돌연변이, CREBBP 돌연변이, KMT2C 돌연변이, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 돌연변이, ATM 돌연변이, SETD2 돌연변이, FLT3 돌연변이, PTPN11 돌연변이, FGFR1 돌연변이, EP300 돌연변이, MYC 돌연변이, EZH2 돌연변이, JAK2 돌연변이, FBXW7 돌연변이, CCND3 돌연변이 및 GNA11 돌연변이로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 드라이버 돌연변이를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암은 1% 미만의 PD-L1 TPS를 나타내고 하나 이상의 드라이버 돌연변이의 소정의 부재를 갖는다.
일부 실시양태에서, 암은 EGFR 저해제, BRAF 저해제, ALK 저해제, c-Ros 저해제, RET 저해제, ERBB2 저해제, BRCA 저해제, MAP2K1 저해제, PIK3CA 저해제, CDKN2A 저해제, PTEN 저해제, UMD 저해제, NRAS 저해제, KRAS 저해제, NF1 저해제, MET 저해제 TP53 저해제, CREBBP 저해제, KMT2C 저해제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 저해제, ATM 저해제, SETD2 저해제, FLT3 저해제, PTPN11 저해제, FGFR1 저해제, EP300 저해제, MYC 저해제, EZH2 저해제, JAK2 저해제, FBXW7 저해제, CCND3 저해제, 및 GNA11 저해제에 의한 치료를 표시하지 않는 암이다.
일부 실시양태에서, 암은 1% 미만의 PD-L1 TPS를 나타내고 EGFR 저해제, BRAF 저해제, ALK 저해제, c-Ros 저해제, RET 저해제, ERBB2 저해제, BRCA 저해제, MAP2K1 저해제, PIK3CA 저해제, CDKN2A 저해제, PTEN 저해제, UMD 저해제, NRAS 저해제, KRAS 저해제, NF1 저해제, MET 저해제 TP53 저해제, CREBBP 저해제, KMT2C 저해제, KMT2D 돌연변이, ARID1A 돌연변이, RB1 저해제, ATM 저해제, SETD2 저해제, FLT3 저해제, PTPN11 저해제, FGFR1 저해제, EP300 저해제, MYC 저해제, EZH2 저해제, JAK2 저해제, FBXW7 저해제, CCND3 저해제 및 GNA11 저해제에 의한 치료를 표시하지 않는다.
일부 실시양태에서, 암은 NSCLC이고, EGFR 돌연변이는 NSCLC로부터 소세포 폐암(SCLC)으로 종양 형질전환을 초래한다.
일부 실시양태에서, 암(또는 그의 생검)은 고-종양 돌연변이 부담(고-TMB; > 10 mut/kb) 및/또는 높은 미세부수체 불안정성(MSI-높음)을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암(또는 그의 생검)은 고-종양 돌연변이 부담(고-TMB; > 10 mut/kb)을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 암(또는 그의 생검)은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-높음)을 나타낸다. 종양 돌연변이 부담을 평가하기 위한 방법 및 시스템은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법 및 시스템의 예시적인 개시내용은 미국 특허 제9,792,403호, 미국 특허 출원 공개 제US 2018/0363066 A1호, 국제 특허 출원 공개 제WO 2013/070634 A1호 및 제WO 2018/106884 A1호, 및 문헌[Metzker, Nature Biotechnol. Rev. 2010, 11, 31-46]에서 찾아볼 수 있고, 각각은 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, EGFR 돌연변이는 예를 들어 T790M, Ex19Del, L858R, Exon 20 삽입, delE709-T710insD, I744_K745insKIPVAI, K745_E746insTPVAIK, E709X, E709K, E709A, Exon 18 결실, G719X, G719A, G719S, L861Q, S768I, L747P, A763_764insFQEA, D770_N771insNPG, A763_764insFQEA, P772_H773insDNP exon 20 삽입, H773_V774insNPH exon 20 삽입, S768I, D770_N771insSVD, V769_D770InsASV, p.K745_E746insIPVAIK, p.K745_E746insTPVAIK, p.I744_K745insKIPVAI, D770_N771insNPG, P772_H773insPNP, A763_Y764insFQEA, 및/또는 EGFR 키나제 도메인 중복(EGFR-KDD)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, EGFR 돌연변이는 T790M, Ex19Del, L858R, Exon 20 삽입, delE709-T710insD, I744_K745insKIPVAI, K745_E746insTPVAIK, E709X, E709K, E709A, Exon 18 결실, G719X, G719A, G719S, L861Q, S768I, L747P, A763_764insFQEA, D770_N771insNPG, A763_764insFQEA, P772_H773insDNP exon 20 삽입, H773_V774insNPH exon 20 삽입, S768I, D770_N771insSVD, V769_D770InsASV, p.K745_E746insIPVAIK, p.K745_E746insTPVAIK, p.I744_K745insKIPVAI, D770_N771insNPG, P772_H773insPNP, A763_Y764insFQEA, 및/또는 EGFR 키나제 도메인 중복(EGFR-KDD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, EGFR 돌연변이는 L858R/T790M, Ex19Del/T790M, G719X/L861Q, G719X/S768I(또는 S768I/G719X), S768I/L858R, L858R/E709A, 및/또는 E746_T751delinsA+T790M을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 이중 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, EGFR 돌연변이는 L858R/T790M, Ex19Del/T790M, G719X/L861Q, G719X/S768I(또는 S768I/G719X), S768I/L858R, L858R/E709A, 및 E746_T751delinsA+T790M으로 이루어진 군으로부터 선택되는 이중 돌연변이이다. EGFR 돌연변이에 관한 추가 특성 및 방법은 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO 2010/020618 A1호에 제공되어 있다.
일부 실시양태에서, ALK 돌연변이는 EML4-ALK 변이체 1(AB274722.1; BAF73611.1), EML4-ALK 변이체 2(AB275889.1; BAF73612.1), EML4-ALK 변이체 3a(AB374361.1; BAG55003.1), EML4-ALK 변이체 3b(AB374362.1; BAG55004.1), EML4-ALK 변이체 4(AB374363.1; BAG75147.1), EML4-ALK 변이체 5a(AB374364.1; BAG75148.1), EML4-ALK 변이체 5b(AB374365.1; BAG75149.1), EML4-ALK 변이체 6(AB462411.1; BAH57335.1), EML4-ALK 변이체 7(AB462412.1; BAH57336.1), KIF5B-ALK(AB462413.1; BAH57337.1), NPM-ALK, TPM3-ALK, TFGXL-ALK, TEGL-ALK, TFGS-ALK, A11C-ALK, CLTC-ALK, MSN-ALK, TPM4-ALK, MYH9-ALK, RANBP2-ALK, AL017-ALK 및 CARS-ALK(예를 들어, Pulford et al., (2004) J. Cell. Physiol. 199:330-358 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 숙련된 기술자는 ALK 키나제 변이체가 ALK 키나제와 이의 융합 파트너 사이의 특정 융합 이벤트에 따라 발생할 수 있음을 이해할 것이다(예를 들어, EML4는 예를 들어, 개시내용이 본원에 참고로 포함되는 Horn and Pao, J. Clin. Oncol. 2009, 27, 4247-4253에 기재된 바와 같이, 적어도 엑손 2, 6a, 6b, 13, 14 및/또는 15을 융합할 수 있음).
ALK 돌연변이의 추가 예는 미국 특허 제9,018,230호 및 제9,458,508호에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 ROS1 돌연변이는 ROS1 융합체이며, 여기서 ROS1 단백질의 키나제 도메인(또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드)을 포함하는 ROS1 폴리펩티드의 일부는 다른 폴리펩티드(또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드)의 전부 또는 일부에 융합되고, 이 제2 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드의 이름이 융합체에서 명명된다. 일부 실시양태에서, ROS1 돌연변이는 바람직하게는 SLC34A2-ROS1(ROS1 엑손 32 및 34에 융합된 SLC34A2 엑손 13del2046 및 4), CD74-ROS1(ROS1 엑손 32 및 34에 융합된 CD74 엑손 6), EZR-ROS1(ROS1 엑손 34에 융합된 EZR 엑손 10), TPM3-ROS1(ROS1 엑손 35에 융합된 TPM3 엑손 8), LRIG3-ROS1(ROS1 엑손 35에 융합된 LRIG3 엑손 16), SDC4-ROS1(ROS1 엑손 32에 융합된 SDC4 엑손 2 및 4 및 ROS1 엑손 34에 융합된 SDC4 엑손 4), FIG-ROS1로도 알려진 GOPC-ROS1(ROS1 엑손 35에 융합된 GOPC 엑손 8 및 ROS1 엑손 36에 융합된 GOPC 엑손 4), 및 ROS1G2032R로도 알려진 G2032R로 이루어진 군으로부터 선택되는 ROS1-융합 단백질을 나타내는, ROS1-융합 단백질(예를 들어, IHC에 의해), 및/또는 ROS-융합 유전자(예를 들어, FISH에 의해), 및/또는 ROS1 mRNA(예를 들어, qRT-PCR에 의해)로서 결정된다.
ROS1 돌연변이 및 ROS 융합체의 추가 개시내용은 미국 특허 출원 공개 제US 2010/0221737 A1호, 제US 2015/0056193 A1호, 및 제US 2010/0143918 A1호, 및 국제 특허 출원 공개 제WO2010/093928 A1호에 제공되어 있고, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, RET 돌연변이는 RET 융합체 또는 점 돌연변이이다.
일부 실시양태에서, RET 점 돌연변이는 H6650, K666E, K666M, S686N, G691S, R694Q, M700L, V706M, V706A, E713K, G736R, G748C, A750P, S765P, P766S, E768Q, E768D, L769L, R770Q, D771N, N777S, V7781, Q781R, L790F, Y791F, Y791N, V804L, V804M, V804E, E805K, E806C, Y806E, Y806F, Y806S, Y806G, Y806C, E818K, S819I, G823E, Y826M, R833C, P841L, P841P, E843D, R844W, R844Q, R844L, M848T, 1852M A866W, R873W, A876V, L881V, A883F, A883S, A883T, E884K, R886W, S891A, R8970, D898V, E901K, 5904F, S904C2, K907E, K907M, R908K, G911D, R912P, R912Q M918T, M918V, M918L6, A919V, E921K, S922P, S922Y, T930M, F961L, R972G, R982C, M1009V, D1017N, V10416, 및 M1064T를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, RET 융합체는 BCR, BCR, CLIP 1, KIFSB, CCDC6, PTClex9, NCOA4, TRIM33, ERC1, FGFRIOP, MBD1, RAB61P2, PRKARIA, TRIM24, KTN1, GOLGA5, HOOK3, KIAA1468, TRIM27, AKAP13, FKBP15, SPECCIL, TBL1XR1, CEP55, CUX1, ACBD5, MYH13, PIBF1, KIAA1217, 및 MPRIP로 이루어진 군으로부터 선택되는 융합 파트너와 RET 사이의 융합체이다.
RET 돌연변이의 추가 개시내용은 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제10035789호에 제공되어 있다.
일부 실시양태에서, BRAF 돌연변이는 BRAF V600E/K 돌연변이이다. 다른 실시양태에서, BRAF 돌연변이는 비-V600E/K 돌연변이이다.
일부 실시양태에서, 비-V600E/K BRAF 돌연변이는 키나제-활성화 돌연변이, 키나제-손상 돌연변이, 또는 키나제-미지 돌연변이, 및 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 키나제-활성화 돌연변이는 R4621, 1463S, G464E, G464R, G464V, G466A, G469A, N58is, E586K, F595L, L597Q, L597R, L5975, L597V, A598V, T599E, V600R, K601E, 5602D, A728V 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 키나제-손상된 돌연변이는 G466E, G466R, G466V, Y472C, K483M, D594A, D594E, D594G, D594H, D594N, D594V, G596R, T599A, 5602A, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 키나제-미지 돌연변이는 T4401, 5467L, G469E, G469R, G4695, G469V, L584F, L588F, V600 K6OldelinsE, 56051, Q609Q, E611Q, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 비-V600E/K BRAF 돌연변이는 D594, G469, K601E, L597, T599 중복, L485W, F247L, G466V, BRAF 융합, BRAF-AGAP3 재배열, BRAF 엑손 15 슬라이스 변이체, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, Met 돌연변이는 c-Met 단백질의 적어도 하나의 생체활성의 증가, 개선된 것과 같은 티로신 키나제 활성, 수용체 상동체 이량체화 리간드 결합 대형, 바디 및 이종이량체의 향상 등을 유발하는 점 돌연변이, 결실 돌연변이, 삽입 돌연변이, 역위, 비정상적 스플라이싱, 미스센스 돌연변이, 또는 유전자 확대를 포함한다. Met 돌연변이는 c-Met 유전자의 임의의 부분에 위치할 수 있다. 한 실시양태에서, 돌연변이는 c-MET 유전자에 의해 암호화된 c-Met 단백질의 키나제 도메인에 있다. 일부 실시양태에서, c-Met 돌연변이는 N375, V13, V923, R175, V136, L229, S323, R988, S1058/T1010 및 E168에서의 점 돌연변이이다.
일부 실시양태에서, ERBB2 돌연변이는 ERBB2의 아미노산 서열에서의 점 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, ERBB2의 점 돌연변이는 아미노산 치환을 야기하거나, mRNA 스플라이싱을 야기하는 것, 또는 상류 영역에서의 점 돌연변이이다. 여기서, 돌연변이는 Q568E, P601R, I628M, P885S, R143Q, R434Q, 및 E874K로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환을 야기하는 뉴클레오티드 돌연변이를 포함한다.
일부 실시양태에서, ERBB2 돌연변이는 ERBB2 증폭이다. 일부 실시양태에서, ERBB2 증폭은 V659E, G309A, G309E, S310F, D769H, D769Y, V777L, P780ins, P780-Y781insGSP, V842I, R896C, K753E, 및 L755S로 이루어진 군으로부터 선택되는 점 돌연변이를 포함하고, 폴리머라제 연쇄 반응 또는 개시내용이 본원에 참고로 포함되는 Bose, et al., Cancer Discov. 2013, 3(2), 224-237; 및 Zuo, et al. Clin Cancer Res. 2016, 22(19), 4859-4869에 기재된 것과 같은 관련 기술분야에 공지된 기타 시퀀싱 기술에 의해 검출될 수 있다.
일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 BRCA1 및/또는 BRCA2, 바람직하게는 BRCA1호에서의 돌연변이, 및/또는 단백질 생성물이 다음을 포함하는 DNA 손상 부위에서 BRCA1 및/또는 BRCA2와 연합하는 하나 이상의 다른 유전자에서의 돌연변이이다: ATM, ATR, Chk2, H2AX, 53BP1, NFBD1, Mre11, Rad50, Nibrin, BRCA1-연관 RING 도메인(BARD1), Abraxas 및 MSH2. 이들 유전자 중 하나 이상에서의 돌연변이는 BRCA1 및/또는 BRCA2에서의 돌연변이를 모방하는 유전자 발현 패턴을 초래할 수 있다.
특정 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 비-동의어 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 넌센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 스플라이싱 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 돌연변이 mRNA 및 궁극적으로 돌연변이 단백질로서 발현된다. 일부 실시양태에서, BRCA1/2 단백질은 기능적이다. 다른 실시양태에서, BRCA1/2 단백질은 감소된 활성을 갖는다. 다른 실시양태에서, BRCA1/2 단백질은 비-기능적이다.
치환과 관련하여 본원에 사용된 것으로서, 돌연변이에 관한 "=" 기호는 일반적으로 동의어 치환, 침묵 코돈 및/또는 침묵 치환을 지칭한다. 특히, 동의어 치환(침묵 치환 또는 침묵 코돈이라고도 함)은 생성된 아미노산 서열이 변형되지 않은, 단백질을 암호화하는 유전자의 엑손에서 한 뉴클레오티드 염기의 다른 염기로의 치환을 지칭한다. 이는 유전자 코드가 "축퇴성", 즉 일부 아미노산이 하나보다 많은 3염기 쌍 코돈에 의해 암호화되는 사실 때문이다. 주어진 아미노산에 대한 일부 코돈은 동일한 아미노산을 암호화하는 다른 코돈과 단 하나의 염기쌍만 다르기 때문에, 야생형 염기를 대안예 중 하나로 대체하는 점 돌연변이는 동일한 아미노산을 유전자의 해독 동안 연장하는 폴리펩티드 쇄 내로 혼입시킬 것이다. 일부 실시양태에서, 비암호화 DNA에 영향을 미치는 동의어 치환 및 돌연변이는 종종 침묵 돌연변이로 간주되며; 그러나, 항상 돌연변이가 침묵형이고 어떠한 영향도 없는 것은 아니다. 예를 들어, 동의어 돌연변이는 전사, 스플라이싱, mRNA 수송 및 해독에 영향을 미칠 수 있으며, 이들 중 어느 것이든 결과적으로 초래되는 표현형을 변경할 수 있어 동의어 돌연변이를 비-침묵형으로 만든다. 희귀 코돈에 대한 tRNA의 기질 특이성은 해독 타이밍 및 결과적으로 단백질의 동시해독 폴딩에 영향을 미칠 수 있다. 이것은 많은 종에서 관찰된 코돈 용법 편향에서 분명해진다. 비동의어 치환/돌연변이는 보존적(유사한 물리화학적 특성을 가진 아미노산으로의 변화), 반보존적(예를 들어, 음전하를 띤 아미노산에서 양전하를 띤 아미노산으로), 또는 방사형(매우 다른 아미노산)으로 임의로 분류될 수 있는 아미노산의 변화를 초래한다. 일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 하기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 BRCA1 돌연변이이다: P871L, K1183R, D693N, S1634G, E1038G, S1040N, S694=(=: 침묵 코돈), M1673I, Q356R, S1436=. L771=, K654Sfs*47, S198N, R496H, R841W, R1347G, H619N, S1533I, L30=. A622V, Y655Vfs*18, R496C, E597K, R1443*, E23Vfs*17, L30F, E111Gfs*3, K339Rfs*2, L512F, D693N, P871S, S1140G, Q1240*, P1770S, R7=, L52F, T176M, A224S, L347=, S561F, E597*, K820E, K893Rfs*107, E962K, M1014I, R1028H, E1258D, E1346K, R1347T, L1439F, H1472R, Q1488*, S1572C, E1602K, R1610C, L1621=, Q1625*, Q1625=, D1754N, R1772Q, R1856*, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, BRCA 돌연변이는 V2466A, N289H, N991D, S455=(=: 침묵 코돈), N372H, H743=, V1269=, S2414=, V2171=, L1521=, T3033Nfs*11, K1132=, T3033Lfs*29, R2842C, N1784Tfs*7, K3326*, K3326*, D1420Y, I605Yfs*9, I3412V, A2951T, T3085Nfs*26, R2645Nfs*3, S1013*, T1915M, F3090=, V3244I, A1393V, R2034C, L1356=, E2981Rfs*37, N1784Kfs*3, K3416Nfs*11, K1691Nfs*15, S1982Rfs*22, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 BRCA2 돌연변이이다.
일부 실시양태에서, NRAS 돌연변이는 E63K, Q61R, Q61K, G12D, G13D, Q61R, Q61L, Q61K, G12S, G12C, G13R, Q61H, G12V, G12A, Q61L, G13V, Q61H, Q61H, G12R, G13C, Q61P, G13S, G12D, G13A, G13D, A18T, Q61X, G60E, G12S, Q61=(=: 침묵 코돈), Q61E, Q61R, A146T, A59T, A59D, Q61=, R68T, A146T, G12A, E62Q, G75=, A91V, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
E132K일부 실시양태에서, PIK3CA 돌연변이는 치환 돌연변이, 결실 돌연변이 및 삽입 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 PIK3CA의 나선 도메인 및 이의 키나제에서 일어난다. 다른 실시양태에서, PIK3CA의 P85BD 도메인에서. 일부 실시양태에서, PIK3CA 돌연변이는 엑손 1, 2, 4, 5, 7, 9, 13, 18, 및 20에 있다. 일부 실시양태에서, PIK3CA 돌연변이는 엑손 9 및 20에 있다. 또 다른 실시양태에서, PIK3CA 돌연변이는 위에 나열된 임의의 돌연변이의 조합이다. 이들 엑손의 임의의 조합은 선택적으로 다른 엑손의 테스트와 함께 테스트될 수 있다. 돌연변이 테스트는 전체 암호 서열을 따라 수행될 수 있거나, 또는 돌연변이가 클러스터링하는 것으로 발견된 영역에 집중될 수 있다. 돌연변이의 특정 핫스팟은 PIK3CA 암호 서열의 뉴클레오티드 위치 1624, 1633, 1636 및 3140에서 일어난다.
일부 실시양태에서, PIK3CA 돌연변이의 크기는 1 내지 3개의 뉴클레오티드 범위로 작다. 일부 실시양태에서, PIK3CA 돌연변이는 G1624A, G1633A, C1636A, A3140G, G113A, T1258C, G3129T, C3139T, E542K, E545K, Q546R, H1047L, H1047R 및G2702T를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, MAP2K1 돌연변이는 체세포 MAP2K1 돌연변이, 선택적으로 MEK1 수준을 상향조절하는 MAP2K1 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, MAP2K1 돌연변이는 HRAS, KRAS, NRAS, ARAF, BRAF, RAF1, MAP2K2, MAPK1, MAPK3, MAP3K3을 포함하는 RAS/MAPK 경로와 연관된 하나 이상의 유전자의 돌연변이이다. 특정 실시양태에서, MAP2K1 돌연변이는 RASA, PTEN, ENG, ACVRL1, SMAD4, GDF2 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자에 있다.
일부 실시양태에서, MAP2K1 돌연변이는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: P124S, Q56P, K57N, E203K, G237*, P124L, G128D, D67N, K57E, E102_I103del, C121S, K57T, K57N, Q56P, P124L, K57N, G128V, Q58_E62del, F53L, I126=, I103_K104del, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, KRAS 돌연변이는 비동의어 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, KRAS 돌연변이는 넌센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, KRAS 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, KRAS 돌연변이는 스플라이싱 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, KRAS 돌연변이는 돌연변이 mRNA 및 궁극적으로 돌연변이 단백질로서 발현된다. 일부 실시양태에서, 돌연변이된 KRAS 단백질은 기능적이다. 다른 실시양태에서, 돌연변이된 KRAS 단백질은 감소된 활성을 갖는다. 다른 실시양태에서, 돌연변이된 KRAS 단백질은 비-기능적이다.
일부 실시양태에서, KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G13D, G12C, G12A, G12S, G12R, G13C, Q61H, A146T, Q61R, Q61H, Q61L, G13S, A146V, Q61K, G13R, G12F, K117N, G13A, G13V, A59T, V14I, K117N, Q22K, Q61P, A146P, G13D, L19F, L19F, Q61K, G12V, G60=, G12=, G13=, A18D, T58I, Q61E, E63K, G12L, G13V, A59G, G60D, G10R, G10dup, D57N, A59E, V14G, D33E, G12I, G13dup, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않고, 여기서 =는 침묵 암호를 나타낸다.
일부 실시양태에서, NF1 돌연변이는 치환 돌연변이, 결실 돌연변이, 미스센스 돌연변이, 비정상적인 스플라이싱 돌연변이, 및 삽입 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, NF1 돌연변이는 기능 상실(LOF) 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, NF1 돌연변이는 R1947X(C5839T), R304X, 엑손 37 돌연변이, 엑손 4b 돌연변이, 엑손 7 돌연변이, 엑손 10b 돌연변이, 및 엑손 10c 돌연변이(예를 들어, 1570G→T, E524X)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, CDKN2A 돌연변이는 R24P, D108G, D108N, D108Y, G125R, P114L, R80*, R58*, H83Y, W110*, P114L, E88*, W110*, E120*, D108Y, D84Y, D84N, E69*, P81L, Q50*, L78Hfs*41, D108N, S12*, P48L, E61*, Y44*, E88K, R80*, D84G, L16Pfs*9, Y129*, D108H,A148T, A36G, A102V, W15*, H83R, A57V, E33*, D74Y, A76V, E153K, D74N, H83D, V82M, R58*, Y129*, E119*, Y44*, D74A, T18_A19dup, Y44Lfs*76, L32_L37del, V28_E33del, D14_L16del, A68T, 또는 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, PTEN 돌연변이는 비-동의어 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, PTEN 돌연변이는 넌센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, PTEN 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, PTEN 돌연변이는 스플라이싱 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이된 PTEN은 mRNA 및 궁극적으로 단백질로서 발현된다. 일부 실시양태에서, 돌연변이된 PTEN 단백질은 기능적이다. 다른 실시양태에서, 돌연변이된 PTEN 단백질은 감소된 활성을 갖는다. 다른 실시양태에서, 돌연변이된 PTEN 단백질은 비-기능적이다. 일부 실시양태에서, PTEN 돌연변이는 R130Q, R130G, T319*, R233*, R130*, K267Rfs*9, N323Mfs*21, N323Kfs*2, R173C, R173H, R335*, Q171*, Q245*, E7*, D268Gfs*30, R130Q, Q214*, R130L, C136R, Q298*, Q17*, H93R, P248Tfs*5, I33del, R233*, E299*, G132D, Y68H, T319Kfs*24, N329Kfs*14, V166Sfs*14, V290*, T319Nfs*6, R142W, P38S, A126T, H61R, F278L, S229*, R130P, G129R, R130Qfs*4, P246L, R130*, G165R, C136Y, R173C, I101T, Y155C, D92E, K164Rfs*3, N184Efs*6, G129E,R130G, G36R, F341V, H123Y, C124S, M35VG127E, G165E 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, TP53 돌연변이는 R175H, G245S, R248Q, R248W, R249S, R273C, R273H, R282W, C135Y, C141Y, P151S, V157F, R158L, Y163C, V173L, V173M, C176F, H179R, H179Y, H179Q, Y205C, Y220C, Y234C, M237I, C238Y, S241F, G245D, G245C, R248L, R249M, V272M, R273L, P278L, R280T, E285K, E286K, R158H, C176Y, I195T, G214R, G245V, G266R, G266E, P278S, R280K, 또는 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 추가 실시양태에서, TP53 돌연변이는 G245S; R249S; R273C; R273H; C141Y, V157F, R158L, Y163C, V173L, V173M, Y205C, Y220C, G245C, R249M, V272M, R273L, 및 E286K로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, TP53 돌연변이는 상기 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다.
일부 실시양태에서, CREBBP 돌연변이는 R1446C, R1446H, S1680del, I1084Sfs*15, P1948L, I1084Nfs*3, ?R386*, S893L, R1341*, P1423Lfs*36, P1488L, Y1503H, R1664C, A1824T, R1173*, R1360*, Y1450C, H2228D, S71L, P928=, D1435N, W1502C, Y1503D, R483*, R601Q, S945L, R1103*, R1288W, R1392*, C1408Y, D1435G, R1446L, H1485Y, Q1491K, Q96*, L361M, L524Wfs*6, Q540*, Q1073*, A1100V, R1169C, C1237Y, R1347W, G1411E, W1472C, I1483F, P1488T, R1498*, Y1503F, Q1856*, R1985C, R2104C, S2328L, V2349=, S2377L, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, KMT2C 돌연변이는 D348N, P350=, R380L, C391*, P309S, C988F, Y987H, S990G, K2797Rfs*26, V346=, R894Q, R284Q, S806=, R1690=, P986=, A1685S, G315S, Q755*, R909K, T316S, S772L, G838S, L291F, P335=, C988F, Q2680=, E765G, K339N, Y816*, R526P, N729D, G845E, I817Nfs*11, G892R, C1103*, S3660L, F4496Lfs*21, G315C, R886C, D348N, S793=, V919L, R2481S, R2884*, R4549C, M305Dfs*28, T316S, P377=, I455M, T820I, S965=, S730Y, P860S, Q873Hfs*40, R904*, R2610Q, R4478*, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, KMT2D 돌연변이는 L1419P, E640D, E541D, E455D, T2131P, K1420R. P2354Lfs*30, G2493=, Q3612=, I942=, T1195Hfs*17, P4170=, P1194H, G1235Vfs*95, P4563=, P647Hfs*283, L449_P457del, P3557=, Q3603=, R1702*, P648Tfs*2, R5501*, R4198*, R4484*, R83Q, R1903*, R2685*, R4282*, L5326=, R5432W, R2734*, Q2800*, R2830*, Q3745dup, S4010P, R4904*, G5182Afs*61, R5214H, R1615*, Q2380*, R2687*, R2771*, V3089Wfs*30, Q3799Gfs*212, R4536*, R5030C, R5048C, R5432Q, A221Lfs*40, A476T, A2119Lfs*25,P2557L, R2801*, Q3913*, R4420W, G4641=, R5097*, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, ARID1A 돌연변이는, 예를 들어, 대상체가 C884*(*: 넌센스 돌연변이), E966K, Q1411*, F1720fs(fs: 프레임시프트), G1847fs, C1874fs, D1957E, Q1430, R1721fs, G1255E, G284fs, R1722*, M274fs, G1847fs, P559fs, R1276*, Q2176fs, H203fs, A591fs, Q1322*, S2264*, Q586*, Q548fs, 및 N756fs로 이루어진 군으로부터 선택되는 ARID1A의 돌연변이를 갖는 것을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, RB1 돌연변이는 R320X, R467X, R579X, R455X, R358X, R251X, R787X, R552X, R255X, R556X, Y790X, Q575X, E323X, R661W, R579*, R455*, R556*. R787*, R661W, R445*, R467*, Q217*, Q471*, W195*, Q395*, I680T, E137*, R255*, Q344*, Q62*, E440K, A488V, P777Lfs*33, E322K, R656W, G617Rfs*36, C221*, E440*,Q93*, Q504*, E125*, S834*, E323*, Q685*, S829*, W516*, G435*, Q257*, E79*, S567L, V654M, V654Sfs*14,G100Efs*11, K715*, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, ATM 돌연변이는 ATM 유전자 서열에 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 돌연변이이다: 10744A>G;10744A>G; 11482G>A; IVS3-558A>T; 146C>G; 381delA; IVS8-3delGT; 1028delAAAA; 1120C>T; 1930ins16; IVS16+2T>C; 2572T>C; IVS21+1G>A; 3085delA; 3381delTGAC; 3602delTT; 4052delT; 4396C>T; 5188C>T; 5290delC; 5546delT; 5791G>CCT; 6047A>G; IVS44-1G>T; 6672delGC/6677delTACG; 6736dell 1/6749del7; 7159insAGCC; 7671delGTTT; 7705del14; 7865C>T; 7979delTGT; 8177C>T; 8545C>T; 8565T>A; IVS64+1G>T; 및 9010del28.
본 발명의 일부 실시양태에서, SETD2 돌연변이는 NCBI 수탁 번호 NM_014159의 mRNA 서열의 전사 개시 코돈 위치가 1로 설정될 때 SETD2 단백질을 암호화하는 유전자 서열의 변경이다. 일부 실시양태에서, 7558번째 G(구아닌)은 T(티민)으로 치환, 4774번째 C(사이토신)은 T로 치환, 1210번째 A(아데닌)은 T로 치환, 4883번째 T는 G로 치환, 5290번째 C는 T로 치환, 7072번째 C는 T로 대체, 4144번째 G는 T로 대체, 1297번째 C는 T로 대체, 755번째 T는 G로 대체, 7261번째 T는 G로 치환, 6700번은 T로 대체, 2536번째 C는 T로 치환, 7438번째 C가 T 치환으로 대체되거나, 3866번째 위치에 A가 삽입되고, 6712번째 위치에 T가 삽입되고, 7572번째 위치에 T가 삽입되고, 913번째 A가 결실되고, 5619번째 C가 결실되고, 염기 4603-4604가 결실되고, 1번째 염기가 결실되고, 1936번째 C가 결실되고, 3094-3118번째 염기가 결실되고, 5289번째 위치에 A가 삽입되고, 6323-6333 염기가 결실된다.
일부 실시양태에서, FLT3 돌연변이는 하기를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다: (Q569_E648)ins, D835X, (Q569_E648)delins, (D835_I836), D835Y, D835V, D835Y, D835H, T227M, I836del, N676K, D835E, Y597_E598insDYVDFREY, D835E, D835del, F594_D600dup, A680V, D839G, D96=, D835H, V491L, D835E, Q989*, D835V, L561=, I836del, P986Afs*27, D7G, D324N, S451F, D835N, L576P, Y597_E598insDVDFREY, V491L, N841T, D324N, Y572C, R595_L601dup, K663R, N676K, F691L, D835A, I836H, N841K, S993L, L832F, I836M, A66V, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, PTPN11 돌연변이는 하기를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다: c E76K, A72V, A72T, D61Y, D61V, G60V, E69K, E76G, G507V, S506L, G507A, T73I, E76A, E76Q, S506P, D61N, F71L, E76V, F71L, A72D, V432M, T472M, P495L, N58Y, F285S, S506A, S189A, A465T, R502W, G507R, T511K, D61H, D61G, G507E, G60R, G60A, Q514L, E139D, Y197*, N308D, Q514H, Q514H, N58S, E123D, L206=, A465G, P495S, G507R, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, FGFR1 돌연변이는 하기를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다: N577K, K687E, N577K, D166del, T371M, R476W, T350=, E498K, N577D, D683G, R87C, A154D, N303=, A374V, D550=, S633=, V695L, G728=, R765W, P803S, W19C, P56=, R113C, V149I, S158L, D166dupR220C, N224Kfs*8, D249N, R281W, R281Q, A299S, S424L, S461F, S467F, R506Q, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, EP300 돌연변이는 하기를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다: D1399N, Y1414C, M1470Cfs*26, Y1111*, H2324Pfs*55, R1627W, N2209_Q2213delinsK, Q2268del, L415P, M1470Nfs*3, E1514K, C1201Y, P1452L, S952*, C1164Y, D1399Y, S507G, Q824*, D1507N, H2324Tfs*29, P925T, P1440L, W1466C, P1502L, A1629V, R1645*, N1700Tfs*9, P1869L, Q65*, A171V, R202*, R580Q, A627V, Q1082*, N1236Kfs*2, N1286S, R1312*, R1356*, C1385F, H1451L, R1462*, Y1467N, Y1467H, R1478H, R1627Q, R86*, R370H, R397*, R754C, P842S, I997V, E1014*, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, MYC 돌연변이는 E61T, E68I, R74Q, R75N, W135E, W136E, V394D, L420P, W96E, V325D, L351P, N-말단에서 결실된 41개의 아미노산을 갖는 MYC 단백질(dN2MYC), N26S, S161L, P74L, V7M, F153S, E54D, P246, L164V, P74S, A59V, T73I, P72T,T73A, H374R, P17S, T73N, S264N, P72S, Q52del, S21T, P74A, S107N, P75S, S77P, P261S, P74Q, S190R, A59T, F153C, P75H, T73I, S77F, N11S, S21N, P78L, P72L, N9K, S190N, S267F, T73P, P78S, G105D, S187C, L71M, Q10H, L191x, Q50x, L191F, R25K, F130L, Y27S, D195N, D2G, V20A, V6G, V20I, D2H, P75A, G152D, P74T, C40Y, E8K, Q48x, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, EZH2 돌연변이는 변경된 히스톤 메틸화 패턴과 연관이 있다. 일부 실시양태에서, EZH2 돌연변이는 아미노산 Y641(Y646과 동등함, 촉매적 도메인)의 F, N, H, S 또는 C로의 변환으로 이어져, H3K27의 과트리메틸화를 초래하고 림프종발병을 유도한다. 일부 실시양태에서, EZH2 돌연변이는 EZH2 SET-도메인 돌연변이, EZH2의 과발현, 다른 PRC2 서브유닛의 과발현, 히스톤 아세틸 트랜스퍼라제(HAT)의 기능 상실 돌연변이, 및 MLL2의 기능 상실을 포함한다. EZH2 Y646 돌연변이에 대해 이형접합성인 세포는 EZH2 단백질에 대해 동형접합성 야생형(WT)인 세포 또는 Y646 돌연변이에 대해 동형접합성인 세포에 비해 H3K27의 과트리메틸화를 초래한다.
일부 실시양태에서, EZH2 돌연변이는 Y646F, Y646N, D185H, Y646F, Y646S, Y646H, R690H, Y646X, E745K, Y646C, V626M, V679M, R690H, R684H, A682G, E249K, G159R, R288Q, N322S, A692V, R690C, D730* (삽입 프레임시프트), S695L, R684C, M667T, R288*, S644*, D192N, K550T,Q653E, D664G, R347Q,Y646C,G660R, R213C, A255T, S538L, N693K, I55M, R561H, A692V, K515R,Y733*, R63*, Q570*, Q328*, R25Q, T467P A656V, T573I, C571Y, E725K, R16W, P577L, F145S, V680M, G686D, G135R, K634E, S652F, R298C, G648E, R566H, L149R, R502Q, Y731D, R313W, N675K, S652C, T374Hfs*3, N152Ifs*15, E401Kfs*22, K406Mfs*17, E246*, S624C, I146T, V626M, L674S, H694R, A581S, 및 이의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, JAK2 돌연변이는 JAK2 유전자의 돌연변이이며, 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: G1920T 돌연변이와 조합된 T1923C 돌연변이, G1920T/C1922T 돌연변이, 또는 G1920A 돌연변이. 일부 실시양태에서, JAK2 돌연변이는 하기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 치환을 포함하는 돌연변이 JAK2 단백질이다: V617F, V617I, R683G, N542_E543del, E543_D544del, R683S, R683X, F537_K539delinsL(프레임내 결실), K539L, N1108S, R1113H, R1063H, R487C, I540Mfs*3 (결실-프레임시프트), R867Q, K539L, G571S, R1113C, R938Q, R228Q, L830*, E1080*, K539L, C618R, R564Q, D1036H, L1088S, H538Nfs*4, D873N, V392M, I682F, L393V, M535I, C618R, T875N, L611V, D319N, L611S, G921S, H538Y, S1035L, 및 이의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, FBXW7 돌연변이는 W244* (*: 종결 코돈), R222*, R278*, E192A, S282*, E113D, R465H/C, 726+1 G>A 스플라이스, R505C, R479Q, R465C, R367*, R499Vfs*25 (fs*: 프레임시프트), R658*, D600Y, D520N, D520Y, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 점 돌연변이이다. 추가 실시양태에서, FBXW7 돌연변이는 R479Q 및 S582L, R465H 및 S582L, D520N, D520Y 및 R14Q, 및 R367* 및 S582L을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 이중 또는 삼중 돌연변이이다.
일부 실시양태에서, CCND3 돌연변이는 S259A, R271Pfs*53 (삽입-유발 프레임시프트), E51*, Q260*, P199S, T283A, T283P, V287D, D286_T288del, R271Gfs*33, Q276*, R241Q, D238G, R33P, I290K, I290T, I290R, P267fs, P284S, P284L, P100S, E253D, S262I, R14W, R114L, D238N, A266E, R167W, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, GNA11 돌연변이는 Q209L, R183C, T257=, R183C, G208Afs*16, Q209H, R183C, Q209P, Q209R, Q209H, ?T96=, R210W, R256Q, T334=, G48D, S53G, Q209P, R213Q, 및 이의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, GNA11 돌연변이는 엑손 4에 2개의 돌연변이, 예를 들어, V182에 돌연변이 및 T175에 돌연변이, 또는 엑손 5에 1개 이상의 돌연변이를 갖는다.
2. PD-1 및 PD-L1 저해제와의 조합
일부 실시양태에서, 암 환자에게 제공되는 TIL 요법은 TIL 단독의 치료 집단을 사용한 치료를 포함할 수 있거나 TIL 및 하나 이상의 PD-1 및/또는 PD-L1 저해제를 포함하는 조합 치료를 포함할 수 있다.
계획된 사멸 1(PD-1)은 T 세포, B 세포, 자연 살해(NK) T 세포, 활성화된 단핵구 및 수지상 세포에 의해 발현되는 288개 아미노산의 막관통 면역관문 수용체 단백질이다. CD279로도 알려진 PD-1은 CD28 패밀리에 속하며, 인간의 경우 염색체 2의 Pdcd1 유전자에 의해 암호화된다. PD-1은 하나의 면역글로불린(Ig) 수퍼패밀리 도메인, 막관통 영역, 및 면역 수용체 티로신 기반 저해 모티프(ITIM) 및 면역 수용체 티로신 기반 스위치 모티프(ITSM)를 함유하는 세포내 도메인으로 이루어진다. PD-1 및 이의 리간드(PD-L1 및 PD-L2)는 문헌[Keir, et al., Annu. Rev. Immmunol. 2008, 26, 677-704]에 기재된 바와 같이 면역 관용에 주요 역할을 하는 것으로 알려져 있다. PD-1은 T 세포 면역 반응을 부정적으로 조절하는 저해 신호를 제공한다. PD-L1(B7-H1 또는 CD274로도 알려짐) 및 PD-L2(B7-DC 또는 CD273으로도 알려짐)는 PD-1을 발현하는 활성화된 T 세포가 만날 수 있는 종양 세포 및 기질 세포에서 발현되어, T 세포의 면역 억제를 야기한다. PD-L1은 인간 염색체 9 상의 Cd274 유전자에 의해 암호화된 290개 아미노산의 막관통 단백질이다. PD-1 저해제, PD-L1 저해제, 및/또는 PD-L2 저해제를 사용하여 PD-1과 이의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 사이의 상호작용을 차단하면, 문헌[Topalian, et al., N. Eng. J. Med. 2012, 366, 2443-54]에 기재된 것과 같은 최근 임상 연구에서 입증되었듯이 면역 내성을 극복할 수 있다. PD-L1은 많은 종양 세포주에서 발현되는 반면, PD-L2는 대부분 수지상 세포 및 몇몇 종양 계열에서 발현된다. T 세포(활성화 후 PD-1을 유도적으로 발현함) 외에도, PD-1은 또한 B 세포, 자연 살해 세포, 대식세포, 활성화된 단핵구, 및 수지상 세포에서도 발현된다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 관련 기술분야에 공지된 임의의 PD-1 저해제 또는 PD-1 차단제일 수 있다. 특히, 이는 다음 단락에서 더 자세히 설명된 PD-1 저해제 또는 차단제 중 하나이다. 용어 "저해제", "길항제" 및 "차단제"는 PD-1 저해제와 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 의심의 여지를 피하기 위해, 항체인 PD-1 저해제에 대한 본원의 언급은 화합물 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 접합체 또는 바이오시밀러를 지칭할 수 있다. 의심의 여지를 피하기 위해, PD-1 저해제에 대한 본원의 언급은 또한 소분자 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염, 에스테르, 용매화물, 수화물, 공결정 또는 전구약물을 지칭할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, PD-1 저해제는 항체(즉, 항-PD-1 항체), 이의 단편, 예를 들어, Fab 단편, 또는 이의 단일쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 폴리클로날 항체이다. 바람직한 실시양태에서, PD-1 저해제는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 PD-1과의 결합에 대해 경쟁하고/하거나 PD-1 상의 에피토프에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체는 PD-1과의 결합에 대해 경쟁하고/하거나, PD-1 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 약 100pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 90pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 80pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 70pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 60pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 50pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 40pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 30pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 20pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 약 10pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하고, 또는 약 1pM 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합하는 것이다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 약 7.5 × 105 l/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 7.5 × 105 l/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 8 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합, 약 8.5 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 9 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 9.5 × 105 l/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 1 × 106 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-1에 결합하는 것이다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 약 2 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.1 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.2 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.3 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.4 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.5 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.6 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.7 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.8 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.9 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 또는 약 3 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하는 것이다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 10 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 9 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 8 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 7 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 6 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 5 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 4 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 3 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 2 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하고, 또는 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 약 1 nM 이하의 IC50으로 차단하거나 저해하는 것이다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙(nivolumab)(Bristol-Myers Squibb Co.로부터 OPDIVO로서 시판됨), 또는 이의 바이오시밀러, 항원-결합 단편, 접합체 또는 변이체이다. 니볼루맙은 PD-1 수용체를 차단하는 완전 인간 IgG4 항체이다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 면역글로불린 G4 카파, 항-(인간 CD274) 항체이다. 니볼루맙은 CAS(Chemical Abstracts Service) 등록 번호 946414-94-4로 할당되어 있으며, 5C4, BMS-936558, MDX-1106 및 ONO-4538로도 알려져 있다. 니볼루맙의 제조 및 특성은 미국 특허 제8,008,449호 및 국제 특허 공개 제WO 2006/121168호에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 다양한 형태의 암에서 니볼루맙의 임상적 안전성 및 효능은 Wang, et al., Cancer Immunol. Res. 2014, 2, 846-56; Page, et al., Ann. Rev. Med., 2014, 65, 185-202; 및 Weber, et al., J. Clin. Oncology, 2013, 31, 4311-4318에 기재되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 니볼루맙의 아미노산 서열은 표 18에 제시되어 있다. 니볼루맙은 22-96, 140-196, 254-314, 360-418, 22"-96", 140"-196", 254"-314", 및 360"-418"에 중쇄내 이황화 결합; 23'-88', 134'-194', 23"'-88"', 및 134"'-194"'에 경쇄내 이황화 결합; 127-214', 127"-214"'에 중쇄-경쇄간 이황화 결합, 219-219" 및 222-222"에 중쇄-중쇄간 이황화 결합; 및 290, 290"에 N-글리코실화 부위(H CH2 84.4)를 갖는다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 서열번호 158에 의해 제공된 중쇄 및 서열번호 159에 의해 제공된 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 158 및 서열번호 159에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 이의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 158 및 서열번호 159에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 158 및 서열번호 159에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 158 및 서열번호 159에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 158 및 서열번호 159에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 463 및 서열번호 159에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 160에 제시된 서열을 포함하고, PD-1 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 161에 제시된 서열, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 160 및 서열번호 161에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 160 및 서열번호 161에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 160 및 서열번호 161에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 160 및 서열번호 161에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 160 및 서열번호 161에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 162, 서열번호 163, 및 서열번호 164에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 및 각각 서열번호 165, 서열번호 166, 및 서열번호 167에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 PD-1 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 항-PD-1 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 생성물의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 생성물과 비교하여 하나 이상의 해독후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체를 포함하며, 여기서, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 생성물은 니볼루맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-PD-1 항체이고, 여기서 항-PD-1 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 생성물의 제형과 상이한 제형으로 제공되고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 생성물은 니볼루맙이다. 항-PD-1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합의 EMA와 같은 의약품 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 생성물에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 니볼루맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되며, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 니볼루맙이다.
<표 18> 니볼루맙과 관련된 PD-1 저해제에 대한 아미노산 서열
Figure pct00015
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 니볼루맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여되고 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여되고 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여되고 약 1 mg/kg으로, 그 다음 이필리무맙 3 mg/kg이 4회 용량 동안 3주마다 동일한 날에 투여되고, 그 다음 2주마다 240 mg 또는 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전)에 1, 2, 3, 4, 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 6주마다 약 1 mg/kg의 이필리무맙과 함께 2주마다 약 3 mg/kg으로 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 6주마다 1 mg/kg의 이필리무맙 및 2주기의 백금-이중 화학요법과 함께 3주마다 약 360 mg으로 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 2주마다 약 240 mg 또는 4주마다 480 mg으로 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 및 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 2주마다 약 240 mg으로 소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 6주마다 1 mg/kg의 이필리무맙과 함께 3주마다 약 360 mg으로 악성 흉막 중피종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 약 3 mg/kg으로, 그 다음, 이필리무맙이 약 1 mg/kg으로 4회 용량에 대해 3주마다 같은 날에 투여되고, 그 다음 2주마다 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 약 3 mg/kg으로, 그 다음 이필리무맙이 1 mg/kg으로 4회 용량에 대해 3주마다 동일한 날에 투여되고, 그 다음 2주마다 240 mg, 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 고전적 호지킨 림프종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 고전적 호지킨 림프종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 고전적 호지킨 림프종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 국소 진행성 또는 전이성 요로상피암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 국소 진행성 또는 전이성 요로상피암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 성인 및 소아 환자에서 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 ≥40 kg의 성인 및 소아 환자에서 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 ≥40 kg의 성인 및 소아 환자에서 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 40 kg 미만의 소아 환자에서 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 2주마다 약 3 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 ≥40kg의 성인 및 소아 환자에서 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 약 3 mg/kg에 이어, 이필리무맙 1 mg/kg이 3주마다 4회 용량 동안 동일한 날에 투여된 다음, 2주마다 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 ≥40kg의 성인 및 소아 환자에서 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 약 3 mg/kg에 이어, 이필리무맙 1 mg/kg이 3주마다 4회 용량 동안 동일한 날에 투여된 다음, 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 약 1 mg/kg에 이어, 이필리무맙 3 mg/kg이 3주마다 4회 용량 동안 동일한 날에 투여된 다음, 2주마다 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 약 1 mg/kg에 이어, 이필리무맙 3 mg/kg이 3주마다 4회 용량 동안 동일한 날에 투여된 다음, 4주마다 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 니볼루맙은 식도 편평 세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 식도 편평 세포 암종을 치료하기 위해 2주마다 약 240 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 식도 편평 세포 암종을 치료하기 위해 4주마다 약 480 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 니볼루맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙(미국 뉴저지주 케닐워스 소재의 Merck & Co., Inc.로부터 KEYTRUDA로서 시판됨), 또는 그의 항원-결합 단편, 접합체 또는 변이체를 포함한다. 펨브롤리주맙은 CAS 등록 번호 1374853-91-4로 지정되었으며, 람브롤리주맙, MK-3475 및 SCH-900475로도 알려져 있다. 펨브롤리주맙은 면역글로불린 G4, 항-(인간 단백질 PDCD1(프로그래밍된 세포 사멸 1))(인간-생쥐(Mus musculus) 모노클로날 중쇄), 인간-생쥐 모노클로날 경쇄를 갖는 이황화물, 이량체 구조를 갖는다. 펨브롤리주맙의 구조는 또한 면역글로불린 G4, 항(인간 프로그램된 세포 사멸 1); 인간화 마우스 모노클로날 κ 경쇄 이량체(226-226":229-229")-비스이황화물을 갖는 인간화 마우스 모노클로날 [228-L-프롤린(H10-S>P)]γ4 중쇄(134-218')-이황화물로도 기재될 수 있다. 펨브롤리주맙의 특성, 용도 및 제조는 국제 특허 공개 제WO 2008/156712 A1호, 미국 특허 제8,354,509 및 미국 특허 출원 공개 제US 2010/0266617 A1호, 제US 2013/0108651 A1호, 및 제US 2013/0109843 A2호에 기재되어 있으며, 각각의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 다양한 형태의 암에서 펨브롤리주맙의 임상적 안전성 및 효능은 문헌[Fuerst, Oncology Times, 2014, 36, 35-36; Robert, et al., Lancet, 2014, 384, 1109-17; 및 Thomas, et al., Exp. Opin. Biol. Ther., 2014, 14, 1061-1064]에 기재되어 있다. 펨브롤리주맙의 아미노산 서열은 표 19에 제시되어 있다. 펨브롤리주맙은 하기 이황화 가교: 22-96, 22"-96", 23'-92', 23"'-92"', 134-218', 134"-218"', 138'-198', 138"'-198"', 147-203, 147"-203", 226-226", 229-229", 261-321, 261"-321", 367-425, 및 367"-425", 및 하기 글리코실화 부위(N): Asn-297 및 Asn-297"를 포함한다. 펨브롤리주맙은 Fc 영역에 안정화 S228P 돌연변이가 있는 IgG4/카파 아이소타입이고; IgG4 힌지 영역에 이 돌연변이의 삽입은 IgG4 항체에서 전형적으로 관찰되는 절반 분자의 형성을 방지한다. 펨브롤리주맙은 각 중쇄의 Fc 도메인 내 Asn297에서 이질성으로 글리코실화되어 온전한 항체에 대해 대략 149 kDa의 분자량을 산출한다. 펨브롤리주맙의 주요 글리코형은 푸코실화된 아갈락토 바이안테너리 글리칸 형태(G0F)이다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 서열번호 168에 의해 제공된 중쇄 및 서열번호 169에 의해 제공된 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 168 및 서열번호 169에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이의 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 168 및 서열번호 169에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 168 및 서열번호 169에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 168 및 서열번호 169에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 168 및 서열번호 169에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 168 및 서열번호 169에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 170에 제시된 서열을 포함하고, PD-1 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 171에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 170 및 서열번호 171에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 170 및 서열번호 171에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 170 및 서열번호 171에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 170 및 서열번호 171에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 170 및 서열번호 171에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 각각 서열번호 172, 서열번호 173, 및 서열번호 174에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이들의 보존적 아미노산 치환, 및 각각 서열번호 175, 서열번호 176, 및 서열번호 177에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이들의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 PD-1 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 항-PD-1 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 해독후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체를 포함하며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-PD-1 항체이고, 여기서 항-PD-1 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다. 항-PD-1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 펨브롤리주맙이다.
<표 19> 펨브롤리주맙과 관련된 PD-1 저해제에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00016
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 펨브롤리주맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 펨브롤리주맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg /kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 여기서 펨브롤리주맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 니볼루맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, PD-1 저해제는 펨브롤리주맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 여기서 펨브롤리주맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 흑색종을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 흑색종을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 NSCLC를 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 NSCLC를 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 NSCLC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 소세포 폐암(SCLC)을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 SCLC를 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 SCLC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 두경부 편평 세포암(HNSCC)을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 HNSCC를 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 HNSCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 고전적 호지킨 림프종(cHL) 또는 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 고전적 호지킨 림프종(cHL) 또는 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL)을 치료하기 위해 성인에 대해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 고전적 호지킨 림프종(cHL) 또는 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL)을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 요로상피암종을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 요로상피암종을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 3주마다 약 200 mg으로 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 MSI-H 또는 dMMR 암을 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 MSI-H 또는 dMMR 암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍 결장직장암(dMMR CRC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 MSI-H 또는 dMMR CRC를 치료하기 위해 6주마다 약 400mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 위암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 위암을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 식도암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 식도암을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 자궁경부암을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 자궁경부암을 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 간세포 암종(HCC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 HCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 메르켈 세포 암종(MCC)을 치료하기 위해 성인의 경우 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 MCC를 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 MCC를 치료하기 위해 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 신세포 암종(RCC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 RCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로, 매일 2회 경구의 악시티닙 5mg과 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 자궁내막 암종을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 MSI-H 또는 dMMR이 아닌 종양의 경우 매일 1회 경구로 렌바티닙 20 mg과 함께 6주마다 약 400 mg으로 자궁내막 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 높은 종양 돌연변이 부담(TMB-H) 암을 치료하기 위해 성인의 경우 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 TMB-H 암을 치료하기 위해 성인의 경우 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 TMB-H 암을 치료하기 위해 소아의 경우 3주마다 약 2 mg/kg(최대 200 mg)으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 피부 편평 세포 암종(cSCC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 cSCC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 삼중 음성 유방암(TNBC)을 치료하기 위해 3주마다 약 200 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 TNBC를 치료하기 위해 6주마다 약 400 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 환자 또는 대상체가 성인인 경우, 즉, 성인 적응증의 치료인 경우, 6주마다 400 mg의 추가 투여 요법이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2, 3, 4 또는 5일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙 투여는 IL-2 투여 후 1, 2 또는 3일 후에 시작된다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펨브롤리주맙은 또한 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 또는 3주 전에 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 시판되는 항-PD-1 모노클로날 항체, 예를 들어 항-m-PD-1 클론 J43(Cat # BE0033-2) 및 RMP1-14(Cat # BE0146) (Bio X Cell, Inc., 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논)이다. 다수의 시판되는 항-PD-1 항체가 관련 기술의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 미국 특허 제8,354,509호 또는 미국 특허 출원 공개 제2010/0266617 A1호, 제2013/0108651 A1호, 제2013/0109843 A2호에 개시된 항체이며, 이들의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 미국 특허 제8,287,856호, 제8,580,247호, 및 제8,168,757호 및 미국 특허 출원 공개 제2009/0028857 A1호, 제2010/0285013 A1호 제2013/0022600 A1호 및 제2011/0008369 A1호에 기재된 항-PD-1 항체이며, 이들의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 또 다른 실시양태에서, PD-1 저해제는 미국 특허 제8,735,553 B1호에 개시된 항-PD-1 항체이며, 그의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 CT-011로도 공지된 피딜리주맙이며, 이는 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,686,119호에 기재되어 있다.
한 실시양태에서, PD-1 저해제는 소분자 또는 펩티드, 또는 펩티드 유도체, 예컨대, 미국 특허 제8,907,053호; 제9,096,642호; 및 제9,044,442호 및 미국 특허 출원 공개 제US 2015/0087581호에 기재된 것; 미국 특허 출원 공개 제2015/0073024호에 기재된 것과 같은 1,2,4-옥사디아졸 화합물 및 유도체; 미국 특허 출원 공개 제2015/0073042호에 기재된 것과 같은 환형 펩티드모방 화합물 및 유도체; 미국 특허 출원 공개 제US2015/0125491호에 기재된 것과 같은 환형 화합물 및 유도체; 국제 특허 출원 공개 제WO 2015/033301호에 기재된 것과 같은 1,3,4-옥사디아졸 및 1,3,4-티아디아졸 화합물 및 유도체; 국제 특허 출원 공개 제WO 2015/036927호 및 제WO 2015/04490호에 기재된 것과 같은 펩티드 기반 화합물 및 유도체, 또는 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0294898호에 기재된 것과 같은 거대환형 펩티드 기반 화합물 및 유도체일 수 있으며; 이들 각각의 개시내용은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다. 한 실시양태에서, PD-1 저해제는 리제네론, 인크.(Regeneron, Inc.)로부터 시판되는 세미플리맙이다.
한 실시양태에서, PD-L1 또는 PD-L2 저해제는 관련 기술에 공지된 임의의 PD-L1 또는 PD-L2 저해제, 길항제 또는 차단제일 수 있다. 특히, 이는 이하 단락에서 더 자세히 설명되는 PD-L1 또는 PD-L2 저해제, 길항제 또는 차단제 중 하나이다. 용어 "저해제", "길항제" 및 "차단제"는 PD-L1 및 PD-L2 저해제와 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 의심의 여지를 피하기 위해, 항체인 PD-L1 또는 PD-L2 저해제에 대한 본원의 언급은 화합물 또는 그의 항원 결합 단편, 변이체, 접합체 또는 바이오시밀러를 지칭할 수 있다. 의심의 여지를 피하기 위해, PD-L1 또는 PD-L2 저해제에 대한 본원의 언급은 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염, 에스테르, 용매화물, 수화물, 공결정 또는 전구약물을 지칭할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물, 프로세스 및 방법은 PD-L1 또는 PD-L2 저해제를 포함한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 또는 PD-L2 저해제는 소분자이다. 바람직한 실시양태에서, PD-L1 또는 PD-L2 저해제는 항체(즉, 항-PD-1 항체), 그의 단편, 예컨대, Fab 단편, 또는 그의 단일쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 또는 PD-L2 저해제는 폴리클로날 항체이다. 바람직한 실시양태에서, PD-L1 또는 PD-L2 저해제는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 또는 PD-L2 저해제는 PD-L1 또는 PD-L2와의 결합에 대해 경쟁하고/거나 PD-L1 또는 PD-L2 상의 에피토프에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체는 PD-L1 또는 PD-L2와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나 PD-L1 또는 PD-L2 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 PD-L1 저해제는 화합물이 PD-L2 수용체를 비롯한 다른 수용체에 결합하거나 상호작용하는 것보다 실질적으로 더 낮은 농도에서 PD-L1에 결합하거나 상호작용한다는 점에서 PD-L1에 대해 선택적이다. 특정 실시양태에서, 화합물은 PD-L2 수용체에 대한 것보다 적어도 약 2배 더 높은 농도, 약 3배 더 높은 농도, 약 5배 더 높은 농도, 약 10배 더 높은 농도, 약 20배 더 높은 농도, 약 30배 더 높은 농도, 약 50배 더 높은 농도, 약 100배 더 높은 농도, 약 200배 더 높은 농도, 약 300배 더 높은 농도, 또는 약 500배 더 높은 농도인 결합 상수로 PD-L1 수용체에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 PD-L2 저해제는 화합물이 PD-L1 수용체를 비롯한 다른 수용체에 결합하거나 상호작용하는 것보다 실질적으로 더 낮은 농도에서 PD-L2에 결합하거나 이와 상호작용한다는 점에서, PD-L2에 대해 선택적이다. 특정 실시양태에서, 화합물은 PD-L1 수용체에 대한 것보다 적어도 약 2배 더 높은 농도, 약 3배 더 높은 농도, 약 5배 더 높은 농도, 약 10배 더 높은 농도, 약 20배 더 높은 농도, 약 30배 더 높은 농도, 약 50배 더 높은 농도, 약 100배 더 높은 농도, 약 200배 더 높은 농도, 약 300배 더 높은 농도, 또는 약 500배 더 높은 농도인 결합 상수로 PD-L2 수용체에 결합한다.
어떠한 이론에도 구속됨이 없이, 종양 세포는 PD-L1을 발현하고 T 세포는 PD-1을 발현하는 것으로 여겨진다. 그러나, 종양 세포에 의한 PD-L1 발현은 PD-1 또는 PD-L1 저해제 또는 차단제의 효능에 필요하지 않다. 한 실시양태에서, 종양 세포는 PD-L1을 발현한다. 또 다른 실시양태에서, 종양 세포는 PD-L1을 발현하지 않는다. 일부 실시양태에서, 방법은 TIL과 조합으로, 본원에 기재된 것과 같은 PD-1 및 PD-L1 항체의 조합을 포함할 수 있다. PD-1 및 PD-L1 항체 및 TIL의 조합 투여는 동시 또는 순차적일 수 있다.
일부 실시양태에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 저해제는 약 100 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 90pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 80pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 70pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 60 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 50 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2 결합하고, 약 40pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 또는 약 30 pM 이하의 KD로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하는 것이다.
일부 실시양태에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 저해제는 약 7.5 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 8 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 8.5 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 9 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 약 9.5 × 105 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하고, 또는 약 1 × 106 1/M·s 이상의 kassoc으로 인간 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하는 것이다.
일부 실시양태에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 저해제는 약 2 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-L1 또는 PD-L2에 결합하고, 약 2.1 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.2 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.3 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.4 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.5 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.6 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-1에 결합하고, 약 2.7 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-L1 또는 PD-L2에 결합하고, 또는 약 3 × 10-5 1/s 이하의 kdissoc으로 인간 PD-L1 또는 PD-L2에 결합한다.
일부 실시양태에서, PD-L1 및/또는 PD-L2 저해제는 약 10 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 9 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 8 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 7 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 6 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 5 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 4 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 3 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 약 2 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하거나 저해하고; 또는 약 1 nM 이하의 IC50으로 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2의 결합을 차단하는 것이다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 MEDI4736(아스트라제네카 피엘씨.(AstraZeneca plc.)의 자회사인, 매릴랜드주 게이터스버그에 소재하는 메드임뮨, 엘엘씨(Medimmune, LLC)로부터 시판됨)으로도 공지된 더발루맙, 또는 그의 항원 결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 미국 특허 제8,779,108호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0034559호에 개시된 항체이며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 더발루맙의 임상 효능은 Page, et al., Ann. Rev. Med., 2014, 65, 185-202; Brahmer, et al., J. Clin. Oncol. 2014, 32, 5s(보충, 초록 8021); 및 McDermott, et al., Cancer Treatment Rev., 2014, 40, 1056-64에 기재되어 있다. 더발루맙의 제조 및 특성은 미국 특허 제8,779,108호에 기재되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 더발루맙의 아미노산 서열은 표 20에 제시되어 있다. 더발루맙 모노클로날 항체는 22-96, 22"-96", 23'-89', 23"'-89"', 135'-195', 135"'-195"', 148-204, 148"-204", 215'-224, 215"'-224", 230-230", 233-233", 265-325, 265"-325", 371-429, 및 371"-429'에 이황화 결합; 및 Asn-301 및 Asn-301"에 N-글리코실화 부위를 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 서열번호 178에 의해 제공된 중쇄 및 서열번호 179에 의해 제공된 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 178 및 서열번호 179에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이의 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 178 및 서열번호 179에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 178 및 서열번호 179에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 178 및 서열번호 179에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 178 및 서열번호 179에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 178 및 서열번호 179에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 더발루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 180에 제시된 서열을 포함하고, PD-L1 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 181에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 180 및 서열번호 181에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 180 및 서열번호 181에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 180 및 서열번호 181에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 180 및 서열번호 181에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 180 및 서열번호 181에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 182, 서열번호 183, 및 서열번호 184에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환, 및 각각 서열번호 185, 서열번호 186, 및 서열번호 187에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 이의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 PD-L1 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 더발루맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 항-PD-L1 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열에 대해 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 해독 후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 포함하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 더발루맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독 후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-PD-L1 항체이고, 여기서 항-PD-L1 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 더발루맙이다. 항-PD-L1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 더발루맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 더발루맙이다.
<표 20> 더발루맙과 관련된 PD-L1 저해제에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00017
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 MSB0010718C(Merck KGaA/EMD 세로노로부터 시판됨)로도 공지된 아벨루맙, 또는 그의 항원 결합 단편, 접합체 또는 변이체이다. 아벨루맙의 제조 및 특성은 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0341917 A1호에 기재되어 있으며, 그 개시 내용은 본원에 참고로 구체적으로 포함된다. 아벨루맙의 아미노산 서열은 표 21에 제시되어 있다. 아벨루맙은 22-96, 147-203, 264-324, 370-428, 22"-96", 147"-203", 264"-324" 및 370"-428"에 중쇄내 이황화 결합(C23-C104); 22'-90', 138'-197', 22"'-90"' 및 138"'-197"'에 경쇄내 이황화 결합(C23-C104); 223-215' 및 223"-215"'에 중쇄-경쇄내 이황화 결합(h 5-CL 126); 229-229" 및 232-232"에 중쇄-중쇄내 이황화 결합(h 11, h 14); 300, 300"에 N-글리코실화 부위(H CH2 N84.4); 푸코실화 복합체 바이안테너리 CHO형 글리칸; 및 450 및 450'에 H CHS K2 C-말단 리신 클리핑을 갖는다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 서열번호 188로 제공되는 중쇄 및 서열번호 189로 제공되는 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 188 및 서열번호 189에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이의 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 188 및 서열번호 189에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 188 및 서열번호 189에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 188 및 서열번호 189에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 188 및 서열번호 189에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 188 및 서열번호 189에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 아벨루맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 190에 제시된 서열을 포함하고, PD-L1 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 191에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 190 및 서열번호 191에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 190 및 서열번호 191에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 190 및 서열번호 191에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 190 및 서열번호 191에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 190 및 서열번호 191에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 192, 서열번호 193 및 서열번호 194에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 그의 보존적 아미노산 치환, 및 각각 서열번호 195, 서열번호 196, 및 서열번호 197에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 PD-L1 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 아벨루맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 항-PD-L1 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열과 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품과 비교하여 하나 이상의 해독 후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 포함하며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아벨루맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-PD-L1 항체이고, 여기서 항-PD-L1 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아벨루맙이다. 항-PD-L1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아벨루맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제제는 아벨루맙이다.
<표 21> 아벨루맙과 관련된 PD-L1 저해제에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00018
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 MPDL3280A 또는 RG7446(스위스 바젤 소재의 로쉐 홀딩 아게(Roche Holding AG)의 자회사인 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.)로부터 TECENTRIQ로서 시판됨)으로도 공지된 아테졸리주맙, 또는 그의 항원 결합 단편, 접합체 또는 변이체이다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 미국 특허 제8,217,149호에 개시된 항체이며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 구체적으로 포함된다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 미국 특허 출원 공개 제2010/0203056 A1호, 제2013/0045200 A1호, 제2013/0045201 A1호, 제2013/0045202 A1호, 또는 제2014/0065135 A1호에 개시된 항체이며, 그의 개시내용은 본원에 참고로 구체적으로 포함된다. 아테졸리주맙의 제조 및 특성은 미국 특허 제8,217,149호에 기재되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 아테졸리주맙의 아미노산 서열은 표 22에 제시되어 있다. 아테졸리주맙은 22-96, 145-201, 262-322, 368-426, 22"-96", 145"-201", 262"-322" 및 368"-426"에 중쇄내 이황화 결합(C23-C104); 23'-88', 134'-194', 23"'-88"' 및 134"'-194"'에 경쇄내 이황화 결합(C23-C104); 221-214' 및 221"-214"'에 중쇄-경쇄내 이황화 결합(h 5-CL 126); 227-227" 및 230-230"에 중쇄-중쇄내 이황화 결합(h 11, h 14); 및 298 및 298'에 N-글리코실화 부위(H CH2 N84.4>A)를 갖는다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 서열번호 198에 의해 제공된 중쇄 및 서열번호 199에 의해 제공된 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 198 및 서열번호 199에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 그의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 198 및 서열번호 199에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 198 및 서열번호 199에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 198 및 서열번호 199에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 198 및 서열번호 199에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 198 및 서열번호 199에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 아테졸리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 200에 제시된 서열을 포함하고, PD-L1 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 201에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 200 및 서열번호 201에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 200 및 서열번호 201에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 200 및 서열번호 201에 제시된 서열과 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 200 및 서열번호 201에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 200 및 서열번호 201에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 각각 서열번호 202, 서열번호 203, 및 서열번호 204에 제시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 그의 보존적 아미노산 치환, 및 각각 서열번호 205, 서열번호 206, 및 서열번호 207에 제시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 PD-L1 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다.
한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 항-PD-L1 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열과 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품와 비교하여 하나 이상의 해독 후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-L1 항체를 포함하며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-PD-L1 항체이고, 여기서 항-PD-L1 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다. 항-PD-L1 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 아테졸리주맙이다.
<표 22> 아테졸리주맙과 관련된 PD-L1 저해제에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00019
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0341917 A1호에 기재된 항체를 포함하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1에 대한 결합에 대해 이들 항체 중 임의의 항체와 경쟁하는 항체가 또한 포함된다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-935559로도 공지된 MDX-1105이며, 이는 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제US 7,943,743호에 개시되어 있다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제US 7,943,743호에 개시된 항-PD-L1 항체로부터 선택된다.
한 실시양태에서, PD-L1 저해제는 시판되는 모노클로날 항체, 예컨대, INVIVOMAB 항-m-PD-L1 클론 10F.9G2(카탈로그 # BE0101, 미국 뉴햄스셔주 웨스트 레바논에 소재하는 바이오 엑스 셀, 인크.(Bio X Cell, Inc.))이다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(MIH1)와 같은 시판되는 모노클로날 항체이다. 다수의 시판되는 항-PD-L1 항체는 관련 기술의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
한 실시양태에서, PD-L2 저해제는 시판되는 모노클로날 항체, 예컨대 BIOLEGEND 24F.10C12 마우스 IgG2a, κ 아이소타입(카탈로그 # 329602 캘리포니아주 샌디에고 소재의 바이오레전드, 인크.(Biolegend, Inc.)), SIGMA 항-PD -L2 항체(카탈로그 # SAB3500395, 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리치 컴패니.(Sigma-Aldrich Co.)), 또는 관련 기술의 통상의 기술자에게 공지된 다른 시판되는 항-PD-L2 항체이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 TIL 요법을 투여하는 단계를 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하고, 추가로 PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제 중 하나를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 포함하는 키트를 포함한다.
3. CTLA-4 저해제와의 조합
일부 실시양태에서, 암 환자에게 제공되는 TIL 요법은 TIL의 치료 집단을 단독으로 사용한 치료를 포함할 수 있거나 TIL 및 하나 이상의 CTLA-4 저해제를 포함하는 조합 치료를 포함할 수 있다.
세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA-4)는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 구성원이며 헬퍼 T 세포의 표면에서 발현된다. CTLA-4는 CD28 의존성 T 세포 활성화의 음성 조절인자이며 적응 면역 반응의 관문(checkpoint) 역할을 한다. T 세포 공동-자극 단백질 CD28과 유사하게, CTLA-4 결합 항원은 세포 상에 CD80 및 CD86을 제시한다. CTLA-4는 T 세포에 억제인자 신호를 전달하는 반면, CD28은 자극 신호를 전달한다. 인간 CTLA-4에 대한 인간 항체는 바이러스 및 박테리아 감염의 치료 또는 예방 및 암 치료와 같은 많은 질병 상태에서 면역자극 조절제로 기술되어 있다(WO 01/14424 및 WO 00/37504). 이필리무맙(MDX-010) 및 트레멜리무맙(CP-675,206)을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 유형의 고형 종양 치료를 위한 임상 시험에서 다수의 완전 인간 항-인간 CTLA-4 모노클로날 항체(mAb)가 연구되었다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 관련 기술에 공지된 임의의 CTLA-4 저해제 또는 CTLA-4 차단제일 수 있다. 특히, 다음 단락에서 더 자세히 설명되는 CTLA-4 저해제 또는 차단제 중 하나이다. 용어 "저해제", "길항제" 및 "차단제"는 CTLA-4 저해제와 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 의심의 여지를 피하기 위해, 항체인 CTLA-4 저해제에 대한 본원의 언급은 화합물 또는 그의 항원 결합 단편, 변이체, 접합체 또는 바이오시밀러를 지칭할 수 있다. 의심의 여지를 피하기 위해, CTLA-4 저해제에 대한 본원의 언급은 또한 소분자 화합물 또는 그의 제약학적으로 허용되는 염, 에스테르, 용매화물, 수화물, 공결정 또는 전구약물을 지칭할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 CTLA-4 저해제로는 항-CTLA-4 항체, 인간 항-CTLA-4 항체, 마우스 항-CTLA-4 항체, 포유동물 항-CTLA-4 항체, 인간화 항CTLA-4 항체, 모노클로날 항-CTLA-4 항체, 폴리클로날 항-CTLA-4 항체, 키메라 항-CTLA-4 항체, MDX-010(이필리무맙), 트레멜리무맙, 항-CD28 항체, 항-CTLA-4 애드넥틴, 항-CTLA-4 도메인 항체, 단일쇄 항-CTLA-4 단편, 중쇄 항-CTLA-4 단편, 경쇄 항-CTLA-4 단편, 공동-자극 경로에 작동작용하는 CTLA-4의 저해제, PCT 공개 제WO 2001/014424호에 개시된 항체, PCT 공개 제WO 2004/035607호에 개시된 항체, 미국 공개 제2005/0201994호에 개시된 항체, 및 특허허여된 유럽 특허 제EP 1212422 B1호에 개시된 항체를 비제한적으로 포함하며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 추가 CTLA-4 항체는 미국 특허 제5,811,097호, 제5,855,887호, 제6,051,227호 및 제6,984,720호; PCT 공개 제WO 01/14424호 및 제WO 00/37504호; 및 미국 공개 제2002/0039581호 및 제2002/086014호에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다른 항-CTLA-4 항체는, 예를 들어, WO 98/42752; 미국 특허 제6,682,736호 및 제6,207,156호; Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071(1998); Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145): 초록 제2505호(2004)(항체 CP-675206); Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998), 및 미국 특허 제5,977,318호, 제6,682,736호, 제7,109,003호 및 제7,132,281호에 개시된 것을 포함하며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
추가적인 CTLA-4 저해제로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다: CD28 항원이 그의 동족 리간드에 결합하는 능력을 방해할 수 있고, CTLA-4가 그의 동족 리간드에 결합하는 능력을 저해할 수 있고, 공동-자극 경로를 통해 T 세포 반응을 증강시킬 수 있고, CD28 및/또는 CTLA-4에 결합하는 B7의 능력을 방해할 수 있고, 공동-자극 경로를 활성화하기 위한 B7의 능력을 방해할 수 있고, CD28 및/또는 CTLA-4에 결합하는 CD80의 능력을 방해할 수 있고, 공동-자극 경로를 활성화하는 CD80의 능력을 방해할 수 있고, CD28 및/또는 CTLA-4에 결합하는 CD86의 능력을 방해할 수 있고, 공동-자극 경로를 활성화하는 CD86의 능력을 방해할 수 있고, 그리고 일반적으로 활성화되는 것으로부터 공동-자극 경로를 방해할 수 있는 임의의 저해제. 이것은 다른 CTLA-4 저해제 중에서도, 공동-자극 경로의 다른 구성원 중에서 CD28, CD80, CD86, CTLA-4의 소분자 저해제; 공동-자극 경로의 다른 구성원 중에서 CD28, CD80, CD86, CTLA-4에 대한 항체; 공동-자극 경로의 다른 구성원 중에서 CD28, CD80, CD86, CTLA-4에 대한 안티센스 분자; 공동-자극 경로의 다른 구성원 중에서 CD28, CD80, CD86, CTLA-4에 대해 지향된 애드넥틴, 공동-자극 경로의 다른 구성원 중에서 CD28, CD80, CD86, CTLA-4의 RNAi 저해제(단일 및 이중 가닥 모두)를 반드시 포함한다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 약 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 10-12 M 이하, 예를 들어, 10-13 M과 10-16 M 사이, 또는 종점으로서 전술한 값 중 임의의 2개의 값을 갖는 임의의 범위 이내의 Kd로 CTLA-4에 결합한다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 이필리무맙의 Kd보다 10배 이하의 Kd로 CTLA-4에 결합한다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 이필리무맙의 Kd와 같거나 그 미만(예를 들어, 최대 10배 이하, 또는 최대 100배 이하)인 Kd로 CTLA-4에 결합한다. 일부 실시양태에서, CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 CTLA-4 저해제에 의한 저해에 대한 IC50 값은 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 각각 CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 이필리무맙-매개의 저해에 대한 IC50보다 10배 이하로 더 크다. 일부 실시양태에서, CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 CTLA-4 저해제에 의한 저해에 대한 IC50 값은 동일한 검정을 사용하여 비교할 때, 각각 CD80 또는 CD86에 대한 CTLA-4 결합의 이필리무맙-매개의 저해와 대략 같거나 그 미만(예를 들어, 최대 10배 더 낮은, 또는 최대 100배 더 낮은)이다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 적절한 대조군에 비해 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%, 예를 들어 50% 내지 75%, 75% 내지 90%, 또는 90% 내지 100%로 CTLA-4의 발현을 저해 및/또는 생물학적 활성을 저하시키기에 충분한 양으로 사용된다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 경로 저해제는 적절한 대조군에 비해 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%, 예를 들어 적절한 대조군에 비해 50% 내지 75%, 75% 내지 90%, 또는 90% 내지 100% 사이로 CD80, CD86, 또는 이 둘 모두에 대한 CTLA-4의 결합을 감소시킴으로써 CTLA-4의 생물학적 활성을 저하시키기에 충분한 양으로 사용된다. 관심 작용제의 효과를 평가하거나 정량하는 정황에서 적절한 대조군은 전형적으로 관심 작용제, 예를 들어 CTLA-4 경로 저해제에 노출되었거나 처리된 적이 없는(또는 무시할 수 있는 양에 노출 또는 처리된 적이 있는) 비슷한 생물학적 계(예를 들어, 세포 또는 대상체)이다. 일부 실시양태에서 생물학적 계는 자체가 대조군으로서 역할을 할 수 있다(예를 들어, 생물학적 계는 작용제에 대한 노출 또는 처리 전에 평가될 수 있고, 노출 또는 처리가 시작되거나 종료된 후의 상태와 비교될 수 있다. 일부 실시양태에서, 전통적인 대조군이 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb Co.로부터 Yervoy로서 시판됨), 또는 그의 바이오시밀러, 항원-결합 단편, 접합체, 또는 변이체이다. 관련 기술에 공지된 바와 같이, 이필리무맙은 항-CTLA-4 항체, 기능적 인간 레퍼토리를 생성하기 위해 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 인간 유전자를 갖는 트랜스제닉 마우스로부터 유래된 완전한 인간 IgG 1κ 항체를 지칭한다. 이필리무맙은 또한 그의 CAS 등록 번호 477202-00-9로 지칭될 수 있고, PCT 공개 제WO 01/14424호에 의해 언급될 수 있으며, 이는 그 전체가 모든 목적에 대해 본원에 참고로 포함된다. 항체 10DI로 개시되어 있다. 구체적으로, 이필리무맙은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역(서열번호 211을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 210을 포함하는 중쇄 가변 영역을 가짐)을 함유한다. 이필리무맙의 제약학적 조성물은 이필리무맙 및 하나 이상의 희석제, 비히클 또는 부형제를 함유하는 모든 제약학적으로 허용되는 조성물을 포함한다. 이필리무맙을 함유하는 제약학적 조성물의 예는 국제 특허 출원 공개 제WO 2007/67959호에 기재되어 있다. 이필리무맙은 정맥내(IV) 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 서열번호 208로 제공되는 중쇄 및 서열번호 209로 제공되는 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 208 및 서열번호 209에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 이의 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 208 및 서열번호 209에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 208 및 서열번호 209에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 208 및 서열번호 209에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 208 및 서열번호 209에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 208 및 서열번호 209에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 210에 제시된 서열을 포함하고, CTLA-4 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 211에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 210 및 서열번호 211에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 210 및 서열번호 211에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 210 및 서열번호 211에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 210 및 서열번호 211에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 210 및 서열번호 211에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 212, 서열번호 213, 및 서열번호 214에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호 215, 서열번호 216, 및 서열번호 217에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 CTLA-4 상의 동일한 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/거나 결합한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 CTLA-4 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열과 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품와 비교하여 하나 이상의 해독 후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-CTLA-4 항체를 포함하며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 이필리무맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 이필리무맙의 아미노산 서열은 표 23에 제시된다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 또는 승인을 위해 제출된 항-CTLA-4 항체이며, 여기서 항-CTLA-4 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 이필리무맙이다. 항-CTLA-4 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 이필리무맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 이필리무맙이다.
<표 23> 이필리무맙에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00020
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 이필리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 이필리무맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 또는 6주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 최대 4회 용량 동안 3주마다 약 mg/kg으로 절제불가능 또는 전이성 흑색종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 흑색종의 보조 치료를 위해 4회 용량 동안 3주마다 약 10 mg/kg으로, 이어서 최대 3년 동안 12주마다 10 mg/kg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 진행성 신세포 암종을 치료하기 위해 동일한 날에 니볼루맙 3 mg/kg 직후에 약 1 mg/kg으로 4회 용량 동안 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 조합의 4회 용량을 완료한 후, 니볼루맙은 진행성 신세포 암종 및/또는 신세포 암종에 대한 표준 투여 요법에 따라 단일 작용제로서 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암을 치료하기 위해, 동일한 날에 30분에 걸친 니볼루맙 3 mg/kg 정맥내 투여 직후에 30분에 걸쳐 정맥내로 약 1 mg/kg으로 4회 용량 동안 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 조합의 4회 용량을 완료한 후, 니볼루맙은 높은 미세부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결핍(dMMR) 전이성 결장직장암에 대한 표준 투여 요법에 따라 권장된 대로 단일 작용제로서 투여한다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 간세포 암종을 치료하기 위해 동일한 날에 30분에 걸친 니볼루맙 1 mg/kg 정맥내 투여 직후에 30분에 걸쳐 정맥내로 약 3 mg/kg으로 4회 용량 동안 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 조합의 4회 용량을 완료한 후, 간세포 암종에 대한 표준 투여 요법에 따라 니볼루맙을 단일 작용제로서 투여한다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 6주마다 약 1 mg/kg씩, 2주마다 3 mg/kg의 니볼루맙과 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 전이성 비-소세포 폐암을 치료하기 위해 6주마다 약 1 mg/kg씩, 3주마다 니볼루맙 360 mg 및 2 주기의 백금-이중 화학요법과 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, 이필리무맙은 악성 흉막 중피종을 치료하기 위해 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙은 악성 흉막 중피종을 치료하기 위해 6주마다 약 1 mg/kg씩, 3주 마다 니볼루맙 360 mg과 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 3, 4 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 이필리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2, 또는 3주 전에 시작된다.
트레멜리무맙(CP-675,206으로도 알려짐)은 완전한 인간 IgG2 모노클로날 항체이고 CAS 번호 745013-59-6을 갖는다. 트레멜리무맙은 미국 특허 제6,682,736호(본원에 참고로 포함됨)에 항체 11.2.1로서 개시되어 있다. 트레멜리무맙의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 각각 서열번호 218 및 219에 제시되어 있다. 트레멜리무맙은 흑색종 및 유방암을 포함한 다양한 종양의 치료를 위한 임상 시험에서 조사되었고; 여기서 트레멜리무맙은 0.01 및 15 mg/kg의 용량 범위에서 4주 또는 12주마다 단일 용량 또는 다중 용량으로 정맥내 투여되었다. 본 발명에 의해 제공된 요법에서, 트레멜리무맙은 국소적으로, 특히 피내 또는 피하로 투여된다. 피내 또는 피하 투여되는 트레멜리무맙의 유효량은 전형적으로 1인당 5 - 200 mg/용량 범위이다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙의 유효량은 용량당 1인당 10 내지 150 mg/용량 범위이다. 일부 특정 실시양태에서, 트레멜리무맙의 유효량은 1인당 약 10, 25, 37.5, 40, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 또는 200 mg/용량이다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 서열번호 218에 의해 제공된 중쇄 및 서열번호 219에 의해 제공된 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 218 및 서열번호 219에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 그의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 218 및 서열번호 219에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 218 및 서열번호 219에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 218 및 서열번호 219에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 218 및 서열번호 219에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 218 및 서열번호 219에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 220에 제시된 서열을 포함하고, CTLA-4 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 221에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 220 및 서열번호 221에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 220 및 서열번호 221에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 220 및 서열번호 221에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 220 및 서열번호 221에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 220 및 서열번호 221에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 222, 서열번호 223, 및 서열번호 224에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호 225, 서열번호 226, 및 서열번호 227에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 CTLA-4 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/거나 결합한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 항-CTLA-4 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열과 적어도 97% 서열 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품와 비교하여 하나 이상의 해독 후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-CTLA-4 항체를 포함하며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 트레멜리무맙의 아미노산 서열은 표 24에 제시되어 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-CTLA-4 항체이며, 여기서 항-CTLA-4 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되고, 여기서, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다. 항-CTLA-4 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 트레멜리무맙이다.
<표 24> 트레멜리무맙에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00021
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙 투여는 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4, 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 약 200 mg, 약 220 mg, 약 240 mg, 약 260 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 320 mg, 약 340 mg, 약 360 mg, 약 380 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 440 mg, 약 460 mg, 약 480 mg, 또는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙 투여는 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4, 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2 또는 3주 전에 시작된다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 트레멜리무맙 또는 그의 바이오시밀러이고, 트레멜리무맙은 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다 또는 6주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙 투여는 절제전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전에) 1, 2, 3, 4, 또는 5주 전에 시작된다. 일부 실시양태에서, 트레멜리무맙 투여는 절제 전(즉, 대상체 또는 환자로부터 종양 샘플을 수득하기 전) 1, 2 또는 3주 전에 시작된다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 아제너스(Agenus)의 잘리프렐리맙(zalifrelimab), 또는 그의 바이오시밀러, 항원 결합 단편, 접합체 또는 변이체이다. 잘리프렐리맙은 완전한 인간 모노클로날 항체이다. 잘리프렐리맙은 화학 초록 서비스(CAS) 등록 번호 2148321-69-9로 지정되었으며 AGEN1884로도 알려져 있다. 잘리프렐리맙의 제조 및 특성은 미국 특허 제10,144,779호 및 미국 특허 출원 공개 제US2020/0024350 A1호에 기재되어 있으며, 그 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 서열번호 228로 제공되는 중쇄 및 서열번호 229로 제공되는 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 228 및 서열번호 229에 제시된 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄, 또는 그의 항원 결합 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), 변이체 또는 접합체를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 228 및 서열번호 229에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 228 및 서열번호 229에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 228 및 서열번호 229에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 228 및 서열번호 229에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 228 및 서열번호 229에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 잘리프렐리맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역(VR)을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제 중쇄 가변 영역(VH)은 서열번호 230에 제시된 서열을 포함하고, CTLA-4 저해제 경쇄 가변 영역(VL)은 서열번호 231에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 230 및 서열번호 231에 제시된 서열과 각각 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 230 및 서열번호 231에 제시된 서열과 각각 적어도 98% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 230 및 서열번호 231에 제시된 서열과 각각 적어도 97% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 230 및 서열번호 231에 제시된 서열과 각각 적어도 96% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 230 및 서열번호 231에 제시된 서열과 각각 적어도 95% 동일한 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 각각 서열번호 231, 서열번호 233, 및 서열번호 234에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 각각 서열번호 235, 서열번호 236, 및 서열번호 237에 제시된 서열, 또는 그의 보존적 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 전술한 항체 중 임의의 항체와 동일한 CTLA-4 상의 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/거나 결합한다.
한 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 잘리프렐리맙과 관련하여 약물 규제 당국에 의해 승인된 CTLA-4 바이오시밀러 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 바이오시밀러는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 아미노산 서열과 적어도 97% 동일성, 예를 들어, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품와 비교하여 하나 이상의 해독 후 변형을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항-CTLA-4 항체를 포함하며, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 해독후 변형은 글리코실화, 산화, 탈아미드화 및 절두 중 하나 이상으로부터 선택된다. 잘리프릴리맙의 아미노산 서열은 표 25에 제시되어 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 승인되거나 승인을 위해 제출된 항-CTLA-4 항체이며, 여기서 항-CTLA-4 항체는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품의 제형과 상이한 제형으로 제공되고, 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다. 항-CTLA-4 항체는 미국 FDA 및/또는 유럽 연합의 EMA와 같은 약물 규제 당국의 승인을 받을 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다. 일부 실시양태에서, 바이오시밀러는 하나 이상의 부형제를 추가로 포함하는 조성물로서 제공되고, 여기서 하나 이상의 부형제는 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품에 포함된 부형제와 동일하거나 상이하고, 여기서 기준 의약품 또는 기준 생물학적 제품은 잘리프렐리맙이다.
<표 25> 잘리프렐리맙에 대한 아미노산 서열.
Figure pct00022
추가 항-CTLA-4 항체의 예는 AGEN1181, BMS-986218, BCD-145, ONC-392, CS1002, REGN4659, 및 ADG116을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들은 관련 기술의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체는 하기 특허 공보 중 임의의 공보에 개시된 항-CTLA-4 항체이다: US 2019/0048096 A1; US 2020/0223907; US 2019/0201334; US 2019/0201334; US 2005/0201994; EP 1212422 B1; WO 2018/204760; WO 2018/204760; WO 2001/014424; WO 2004/035607; WO 2003/086459; WO 2012/120125; WO 2000/037504; WO 2009/100140; WO 2006/09649; WO2005092380; WO 2007/123737; WO 2006/029219; WO 2010/0979597; WO 2006/12168; 및 WO1997020574, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다. 추가 CTLA-4 항체는 미국 특허 제5,811,097호, 제5,855,887호, 제6,051,227호 및 제6,984,720호; PCT 공개 제WO 01/14424호 및 제WO 00/37504호; 및 미국 공개 제2002/0039581호 및 제2002/086014호; 및/또는 미국 특허 제5,977,318호, 제6,682,736호, 제7,109,003호 및 제7,132,281호에 기재되어 있으며, 이들 각각은 참고로 본원에 포함된다. 일부 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체는, 예를 들어, 하기에 개시된 것이다: WO 98/42752; 미국 특허 제6,682,736호 및 제6,207,156호; Hurwitz, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95, 10067-10071(1998); Camacho, et al., J. Clin. Oncol., 2004, 22, 145(Abstract No. 2505(2004)(항체 CP-675206); 또는 Mokyr, et al., Cancer Res., 1998, 58, 5301-5304(1998), 각각이 본원에 참고로 포함됨.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 WO 1996/040915(본원에 참고로 포함됨)에 개시된 CTLA-4 리간드이다.
일부 실시양태에서, CTLA-4 저해제는 CTLA-4 발현의 핵산 저해제이다. 예를 들어, 항-CTLA-4 RNAi 분자는 PCT 공개 제WO 1999/032619호 및 제WO 2001/029058호; 미국 공개 제2003/0051263호, 제2003/0055020호, 제2003/0056235호, 제2004/265839호, 제2005/0100913호, 제2006/0024798호, 제2008/0050342호, 제2008/0081373호, 제2008/0248576호, 및 제2008/055443호; 및/또는 미국 특허 제6,506,559호, 제7,282,564호, 제7,538,095호, 및 제7,560,438호(본원에 참고로 포함됨)에 기재된 분자의 형태를 취할 수 있다. 일부 경우에, 항-CTLA-4 RNAi 분자는 유럽 특허 제EP 1309726호(본원에 참고로 포함됨)에 기재된 이중 가닥 RNAi 분자의 형태를 취한다. 일부 경우에, 항-CTLA-4 RNAi 분자는 미국 특허 제7,056,704호 및 제7,078,196호(본원에 참고로 포함됨)에 기재된 이중 가닥 RNAi 분자의 형태를 취한다. 일부 실시양태에 있어서, CTLA-4 저해제는 국제 특허 출원 공개 제WO 2004/081021호(본원에 참고로 포함됨)에 기재된 압타머이다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CTLA-4 RNAi 분자는 미국 특허 제5,898,031호, 제6,107,094호, 제7,432,249호, 및 제7,432,250호, 및 유럽 출원 제EP 0928290호(본원에 참고로 포함됨)에 기재된 RNA 분자이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 TIL 요법을 투여하는 단계를 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하고, 추가로 CTLA-4 저해제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) CTLA-4 저해제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) CTLA-4 저해제를 포함하는 키트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 TIL 요법을 투여하는 단계를 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하고, 추가로 CTLA-4 저해제 및 PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 저해제, 및 (iii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 저해제, 및 (iii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 포함하는 키트를 포함한다.
4. 환자의 림프구제거 사전컨디셔닝
한 실시양태에서, 본 발명은 TIL의 집단으로 암을 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 환자는 본 개시내용에 따른 TIL의 주입 전에 비-골수절제 화학요법으로 사전처리된다. 한 실시양태에서, 본 발명은 비-골수절제 화학요법으로 사전처리된 환자에서 암 치료에 사용하기 위한 TIL 집단을 포함한다. 한 실시양태에서, TIL 집단은 주입에 의한 투여를 위한 것이다. 한 실시양태에서, 비-골수절제 화학요법은 2일 동안(TIL 주입 27일 및 26일전) 시클로포스파미드 60 mg/kg/일 및 5일 동안(TIL 주입 27일 내지 23일전) 플루다라빈 25 mg/m2/일이다. 한 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 비-골수절제 화학요법 및 TIL 주입(0일째) 후, 환자는 생리학적 관용까지 8시간마다 720,000 IU/kg씩 정맥내로 IL-2(알데스류킨, PROLEUKIN으로 시판됨)의 정맥내 주입을 수용한다. 특정 실시양태에서, TIL 집단은 IL-2와 조합으로 암을 치료하는데 사용하기 위한 것이고, 여기서 IL-2는 TIL 집단 후에 투여된다.
실험 결과는 종양 특이적 T 림프구의 입양 전달 이전에 림프구제거가 면역계의 조절 T 세포와 경쟁 요소('시토카인 싱크')를 제거함으로써 치료 효능을 향상시키는 데 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 일부 실시양태는 본 발명의 TIL의 도입 전에 환자에 대해 림프구제거 단계(때로는 "면역억제성 컨디셔닝"으로도 지칭됨)를 활용한다.
일반적으로, 림프구제거는 플루다라빈 또는 시클로포스파미드(활성 형태는 마포스파미드로 지칭됨) 및 이들의 조합의 투여를 사용하여 달성된다. 이러한 방법은 Gassner, et al., Cancer Immunol. Immunother. 2011, 60, 75-85, Muranski, et al., Nat. Clin. Pract. Oncol., 2006, 3, 668-681, Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-5239, 및 Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-2357에 기재되어 있으며, 이들 모두는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 플루다라빈은 0.5 μg/mL 내지 10 μg/mL 플루다라빈의 농도로 투여된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈은 1 μg/mL 플루다라빈의 농도로 투여된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈 치료는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 이상 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈은 10 mg/kg/일, 15 mg/kg/일, 20 mg/kg/일, 25 mg/kg/일, 30 mg/kg/일, 35 mg/kg/일, 40 mg/kg/일 또는 45 mg/kg/일의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈 치료는 2-7일 동안 35 mg/kg/일로 투여된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈 치료는 4-5일 동안 35 mg/kg/일로 투여된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈 치료는 4-5일 동안 25 mg/kg/일로 투여된다.
일부 실시양태에서, 시클로포스파미드의 활성 형태인 마포스파미드는 시클로포스파미드의 투여에 의해 0.5 μg/mL 내지 10 μg/mL의 농도로 수득된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드의 활성 형태인 마포스파미드는 시클로포스파미드의 투여에 의해 1 μg/mL의 농도로 수득된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드 치료는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 이상 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드는 100 mg/m2/일, 150 mg/m2/일, 175 mg/m2/일, 200 mg/m2/일, 225 mg/m2/일, 250 mg/m2/일, 275 mg/m2/일 또는 300 mg/m2/일의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드는 정맥내로(즉, i.v.) 투여된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드 치료는 2-7일 동안 35 mg/kg/일씩 투여된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드 치료는 4-5일 동안 250 mg/m2/일 i.v.로 투여된다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드 치료는 4일 동안 250 mg/m2/일 i.v.로 투여된다.
일부 실시양태에서, 림프구제거는 플루다라빈 및 시클로포스파미드를 환자에게 함께 투여함으로써 수행된다. 일부 실시양태에서, 플루다라빈은 25 mg/m2/일 i.v. 투여되고, 시클로포스파미드는 250 mg/m2/일 i.v.로 4일 이상 투여된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여한 후 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하여 수행된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 시클로포스파미드 및 플루다라빈은 둘 다 처음 2일 동안 투여되고, 여기서 림프구제거는 총 5일 후에 수행된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 약 50 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하여 수행되며, 여기서 시클로포스파미드 및 플루다라빈은 처음 2일차에 둘 모두가 투여되고, 여기서 림프구제거는 총 5일 후에 수행된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 약 50 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 20 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 시클로포스파미드 및 플루다라빈은 처음 2일차에 둘 모두가 투여되고, 여기서 림프구제거는 총 5일 후에 수행된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 약 40 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 20 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 시클로포스파미드 및 플루다라빈은 처음 2일차에 둘 모두가 투여되고, 여기서 림프구제거는 총 5일 후에 수행된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 약 40 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여하고 5일 동안 약 15 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행되며, 여기서 시클로포스파미드 및 플루다라빈은 처음 2일차에 둘 모두가 투여되고, 여기서 림프구제거는 총 5일 후에 수행된다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드 및 25 mg/m2/일 용량으로 플루다라빈을 투여한 후, 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여함으로써 수행된다.
한 실시양태에서, 시클로포스파미드는 메스나(mesna)와 함께 투여된다. 한 실시양태에서, 메스나는 15 mg/kg으로 투여된다. 메스나가 주입되는 실시양태에서, 그리고 연속 주입되는 경우, 메스나는 각 시클로포스파미드 용량과 동시에 시작하여 24시간에 걸쳐, 대략 2시간 동안 시클로포스파미드와 함께 주입될 수 있으며(-5일 및/또는 -4일차에), 그 다음 나머지 22일 동안에는 3 mg/kg/시간의 속도로 주입될 수 있다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 환자에게 TIL의 3차 집단을 투여한 다음 날부터 시작하여 IL-2 요법으로 환자를 치료하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 림프구제거는 환자에게 TIL의 3차 집단의 투여와 동일한 날에 시작하는 IL-2 요법으로 환자를 치료하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 림프구제거는 5일의 사전컨디셔닝 치료를 포함한다. 일부 실시양태에서, 일수는 -5일 내지 -1일, 또는 0일 내지 4일로 표시된다. 일부 실시양태에서, 요법은 -5일 및 -4일(즉, 0일 및 1일)에 시클로포스파미드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 요법은 -5일 및 -4일(즉, 0일 및 1일)에 정맥내 시클로포스파미드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 요법은 -5일 및 -4일(즉, 0일 및 1일)에 60 mg/kg의 정맥내 시클로포스파미드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 시클로포스파미드는 메스나와 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 요법은 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 요법은 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 요법은 25 mg/m2 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 요법은 -5 및 -1일(즉, 0 내지 4일)에 25 mg/m2 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 요법은 -5 및 -1일(즉, 0 내지 4일)에 25 mg/m2 정맥내 플루다라빈을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 2일 동안 60 mg/m2/일 용량의 시클로포스파미드 및 25 mg/m2/일 용량의 플루다라빈을 투여한 후, 5일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 2일 동안 60 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드 및 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여한 후, 3일 동안 25 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 26에 따라 투여된다.
<표 26> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00023
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 27에 따라 투여된다.
<표 27> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00024
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 28에 따라 투여된다.
<표 28> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00025
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 29에 따라 투여된다.
<표 29> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00026
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 30에 따라 투여된다.
<표 30> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00027
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 31에 따라 투여된다.
<표 31> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00028
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 32에 따라 투여된다.
<표 32> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00029
일부 실시양태에서, 비-골수절제 림프구제거 요법은 표 33에 따라 투여된다.
<표 33> 예시적인 림프구제거 및 치료 요법.
Figure pct00030
일부 실시양태에서, 상기 골수절제 림프구제거 요법의 실시양태와 함께 사용된 TIL 주입은 본원에 기재된 바와 같은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 본원에 기재된 임의의 TIL 조성물일 수 있고, 또한 본원에 기재된 바와 같은 IL-2 요법의 추가 및 공동요법(예컨대, PD-1 및 PD-L1 저해제)의 투여 뿐만 아니라, TIL 주입 대신에 MIL 및 PBL의 주입을 포함할 수도 있다.
5. IL-2 요법
한 실시양태에서, IL-2 요법은 고용량 IL-2 요법을 포함하며, 여기서 고용량 IL-2 요법은 알데스류킨, 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체를 포함하고, TIL 치료적 집단의 치료적 유효 일부를 투여한 다음 날부터 시작하여 정맥내로 투여되며, 여기서 알데스류킨 또는 바이오시밀러 또는 변이체는 0.037 mg/kg 또는 0.044 mg/kg IU/kg(환자 체질량)의 용량으로 관용까지 8시간마다 15분 볼루스 정맥내 주입을 사용하여 최대 14회 용량 동안 투여된다. 9일의 휴식 후에 이 일정은 추가 14 용량에 대해, 총 최대 28회 용량 동안 반복될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-2는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6회 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-2는 최대 6회 용량의 최대 투여량으로 투여된다.
한 실시양태에서, IL-2 요법은 점감식 IL-2 요법을 포함한다. 점감식 IL-2 요법은 O'Day, et al., J. Clin. Oncol. 1999, 17, 2752-61 및 Eton, et al., Cancer 2000, 88, 1703-9에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다. 한 실시양태에서, 점감식 IL-2 요법은 18 × 106 IU/m2 알데스류킨 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체를 6시간에 걸쳐 정맥내 투여한 후, 12시간에 걸쳐 18 × 106 IU/m2를 정맥내 투여한 다음, 18 × 106 IU/m2를 24시간에 걸쳐 정맥내로 투여한 다음, 4.5 × 106 IU/m2를 72시간 동안 정맥내로 투여하는 것을 포함한다. 이 치료 주기는 28일마다 최대 4주기 동안 반복될 수 있다. 한 실시양태에서, 점감식 IL-2 요법은 1일차에 18,000,000 IU/m2, 2일차에 9,000,000 IU/m2, 및 3일 및 4일차에 4,500,000 IU/m2를 포함한다.
한 실시양태에서, IL-2 요법은 저용량 IL-2 요법을 포함한다. 관련 기술에 공지된 임의의 저용량 IL-2 요법, 예컨대, 개시내용이 본원에 참고로 포함되는 Dominguez-Villar and Hafler, Nat. Immunology 2000, 19, 665-673; Hartemann, et al., Lancet Diabetes Endocrinol. 2013, 1, 295-305; 및 Rosenzwaig, et al., Ann. Rheum. Dis. 2019, 78, 209-217에 기재된 저용량 IL-2 요법이 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 저용량 IL-2 요법은 5일 동안 연속 주입으로 투여되는 24시간당 18 × 106 IU/m2의 알데스류킨 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체, 그 다음, IL-2 요법 없이 2-6일, 그 다음, 선택적으로 24시간당 18 × 106 IU/m2의 연속 주입으로서 정맥내 알데스류킨 또는 이의 바이오시밀러 또는 변이체의 추가 5일, 선택적으로, 그 다음 IL-2 요법 없이 3주를 포함하며, 그 후 추가 주기가 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, IL-2 요법은 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 페길화된 IL-2의 투여를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 요법은 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 벰페갈데스류킨, 또는 그의 단편, 변이체 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
한 실시양태에서, IL-2 요법은 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 THOR-707, 또는 그의 단편, 변이체 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
한 실시양태에서, IL-2 요법은 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 넴발류킨 알파, 또는 그의 단편, 변이체 또는 바이오시밀러의 투여를 포함한다.
한 실시양태에서, IL-2 요법은 항체 백본 상에 접목된 IL-2 단편의 투여를 포함한다. 한 실시양태에서, IL-2 요법은 IL-2 저친화성 수용체에 결합하는 항체-시토카인 접목된 단백질의 투여를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 접목된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 항체 시토카인 접목된 단백질은 조절 T 세포보다 T 이펙터 세포를 우선적으로 확장시킨다. 한 실시양태에서, 항체 시토카인 접목된 단백질은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 및 VH 또는 VL의 CDR에 접목된 IL-2 분자 또는 이의 단편을 포함하고, 여기서 IL-2 분자는 뮤테인이고, 항체 시토카인 접목된 단백질은 조절 T 세포보다 T 이펙터 세포를 우선적으로 확장시킨다. 한 실시양태에서, IL-2 요법은 0.10 mg/일 내지 50 mg/일의 용량으로 1, 2, 4, 6, 7, 14 또는 21일마다 서열번호 29 및 서열번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 서열번호 37 및 서열번호 39로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄, 또는 이의 단편, 변이체 또는 바이오시밀러를 포함하는 항체의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 시토카인 접목된 단백질은 비제한적으로, 알데스류킨(Proleukin®) 또는 비슷한 분자와 같은 야생형 IL-2 분자보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 전술한 골수절제성 림프구제거 요법의 실시양태와 함께 사용되는 TIL 주입은 본원에 기재된 임의의 TIL 조성물일 수 있고, 또한 IL-2 요법의 첨가 및 본원에 기재된 공동 요법(예컨대, PD-1 및 PD-L1 저해제)의 투여 뿐만 아니라, TIL 주입 대신에 MIL 및 PBL의 주입을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 TIL 요법을 투여하는 단계를 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하고, 추가로 IL-2 요법을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) IL-2 요법을 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물 및 (ii) IL-2 요법을 포함하는 키트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 TIL 요법을 투여하는 단계를 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하고, 추가로 IL-2 요법 및 PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 요법, 및 (iii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 요법, 및 (iii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 포함하는 키트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 암 환자를 치료하는 방법으로서, TIL 요법을 투여하는 단계로서, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하는 것인 단계, 및 추가로 CTLA-4 저해제 및 IL-2 요법을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 저해제, 및 (iii) IL-2 요법을 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) CTLA-4 저해제, 및 (iii) IL-2 요법을 포함하는 키트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 TIL 요법을 투여하는 단계를 포함하는 암 환자를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서 TIL 요법은 CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물을 포함하고, 추가로 IL-2 요법, CTLA-4 저해제 및 PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 요법, (iii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제, 및 (iv) CTLA-4 저해제를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 (i) CCR을 발현하도록 유전적으로 변형된 TIL 생성물, (ii) IL-2 요법, (iii) PD-1 저해제 또는 PD-L1 저해제, 및 (iv) CTLA-4 저해제를 포함하는 키트를 포함한다.
B. 입양 세포 전달
입양 세포 전달(ACT)은 효과적인 형태의 면역요법이며, 항종양 활성을 갖는 면역 세포를 암 환자에게 전달하는 것을 수반한다. ACT는 시험관내에서 항종양 활성이 있는 림프구의 식별, 이러한 세포를 많은 수로 시험관내 확장, 및 이를 암-보유 숙주 내로 주입하는 것을 수반하는 치료 접근 방식이다. 입양 전달에 사용되는 림프구는 절제된 종양의 기질에서 유래될 수 있다(종양 침윤 림프구 또는 TIL). ACT를 위한 TIL은 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은, 예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 기재된 바와 같은 방법에 따라 제조된다. 이들은 또한 항종양 T-세포 수용체(TCR) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 유전적으로 조작된 경우, 혈액으로부터 유래되거나 혈액 유래인 것일 수 있고, 혼합 림프구 종양 세포 배양(MLTC)에 의해 농축되거나, 자가 항원 제시 세포 및 종양 유래 펩티드를 사용하여 클로닝될 수 있다. 림프구가 주입될 암 보유 숙주로부터 기원하는 ACT는 자가 ACT라고 한다. 미국 공개 제2011/0052530호는 주로 전이성 흑색종을 앓고 있는 환자의 치료를 위해 암 퇴행을 촉진하도록 입양 세포 요법을 수행하는 방법에 관한 것이며, 그 전체가 이들 방법에 대해 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, TIL은 본원에 기재된 바와 같이 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL은 단일 용량으로 투여될 수 있다. 이러한 투여는 주사, 예를 들어 정맥내 주사에 의한 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, TIL 및/또는 세포독성 림프구는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 투여는 1년에 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 또는 6회 초과일 수 있다. 투여는 한 달에 한 번, 2주에 한 번, 1주일에 한 번, 또는 이틀에 한 번일 수 있다. TIL 및/또는 세포독성 림프구의 투여는 필요한 만큼 계속할 수 있다.
V. 세포 확장 생성물의 제조 및 환자 치료 이벤트의 공조
본원에서 논의된 바와 같이, 환자로부터 종양 절제에서부터 TIL 제조 완료 시까지의 타이밍은, 예를 들어, 환자로부터 수득할 수 있는 종양의 크기, 다양한 제조 단계의 종료 시의 세포 카운트, 다양한 제조 단계가 수행되는 일수 등을 비롯한 여러 요인에 따라 달라진다. 결과적으로, 다양한 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 데에는 특정한 양의 유연성이 필요하다. 일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트는 림프구제거를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트는 TIL 주입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트는 백혈구 성분채집 절차를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트는 IL-2 요법의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트는 종양 절제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트는 시술 후 치료를 위한 입원 환자 체류를 포함한다.
본 개시내용의 한 측면은 본원에 개시된 방법을 구현하기 위한 시스템을 제공한다. 시스템은 환자 포털, 제조 포털, 임상의 포털 및 물류 포털을 포함할 수 있다. 환자 포털을 통해 환자 또는 환자와 연관된 사람(예를 들어, 간병인, 보호자 또는 법적 권한을 위임받은 대리인)(본원에서는 편의상 "환자"로 통칭)이 환자 치료 이벤트의 일정에 관한 정보에 액세스할 수 있다. 환자 포털은 이 정보에 액세스하기 위해 환자에게 인증 정보를 제공하도록 요구할 수 있다. 환자 포털은 또한 환자가 예를 들어 주소 또는 기타 개인 정보와 같은 환자와 관련된 정보를 편집할 수 있도록 한다.
병원측 인터페이스라고도 하는 임상의 포털은 클리닉(즉, 클리닉 직원)이 환자, 제조 프로세스, 제조 시설, 물류 제공자에 관한 정보 뿐만 아니라 클리닉에서 수행되거나 수행될 다양한 환자 치료 이벤트와 관련된 정보에 액세스 및/또는 편집할 수 있게 한다.
제조 포털은 병원측 인터페이스 및 물류 포털/물류 인터페이스와 통신하여 제조 프로세스 및/또는 제조 슬롯의 가용성에 관한 정보를 결정하고 전달한다. 제조 포털은 또한 본원에 개시된 다양한 제조 단계에서 업데이트된 품질 정보를 포함하는 제조 라벨의 생성을 가능하게 한다.
본원에서 물류 인터페이스라고도 하는 물류 포털은 제조 포털 및 클리닉과 제조 설비 사이에 재료(즉, 고형 종양, 또는 제조된 세포 치료제)의 운송 일정에 관한 병원측 인터페이스 교환 정보, 예를 들어, 제조 일정, 제조 슬롯의 가용성 및 재료의 적당한 운송을 용이하게 하는 환자 치료 이벤트의 일정과 통신한다.
본원에 개시된 다양한 방법을 구현하기 위한 시스템은 독점 컴퓨터 프로그램을 구현하거나, 또는 예를 들어 Vineti, Salesforce.com, Salesforce Health Cloud, IQVIA, TracSel 및 SAP에 의해 제공되는 것과 같은 시판되는 소프트웨어 플랫폼을 적절히 변형시킴으로써 컴퓨팅 시스템에서 구현될 수 있다.
시스템을 적절하게 구현하고 본원에 개시된 하나 이상의 방법을 수행하기 위한 시판되는 소프트웨어 플랫폼의 변형은 플랫폼으로 하여금 원래 설계되지 않은 프로세스를 수행하도록 할 수 있다. 다시 말해서, 일부 실시양태에서 변형은 플랫폼에 의해 제공된 다양한 도구의 비통상적인 사용에 기초할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 다양한 방법을 구현하기 위한 시스템은 물류 작업의 자동화를 가능하게 하는 ERP(Enterprise Resource Planning) 시스템 및 제조 작업의 자동화를 가능하게 하는 MES(Manufacturing Execution System)를 통합하는 프레임워크 프로그램과 같은 소프트웨어 플랫폼을 포함할 수 있다. 이러한 프레임워크 프로그램의 예는 미국 특허 제7,343,605호에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
예를 들어, MES 애플리케이션과 나란히, 기업 제어 레벨(전사적 자원 관리 레벨) 및 자동화 레벨(제어 레벨)의 애플리케이션도 프레임워크 프로그램을 통해 통합될 수도 있고, 워크스테이션(예를 들어, 임상 시설, 제조 시설 또는 택배 시설)을 통해 모니터 또는 관리될 수 있다. 따라서, 프레임워크 프로그램은 환자 등록, 종양 조달, 제조 시설로 종양 운송, 치료적 또는 확장된 세포 치료제의 제조, 임상 시설로 치료적 세포 치료제의 운송, 환자에 요법의 투여, 및 후속적인 환자 치료 이벤트를 비롯한 전체 환자 치료 프로세스를 위한 통합 플랫폼을 형성할 수 있다. 기업 제어 레벨, MES 레벨 및 자동화 레벨에서의 상이한 애플리케이션은 어댑터 및/또는 래퍼(wrapper)의 도움으로 간단하고 비용 효율적으로 프레임워크 프로그램에 의해 통합될 수 있다. 따라서, 프레임워크 프로그램은 미들웨어 플랫폼 및 제조 애플리케이션 통합 도구로 간주되어야 한다. 최종 사용자(예를 들어, 사례 관리자)는 워크스테이션을 통해 모니터링할 애플리케이션의 각 상태를 볼 수 있으며 애플리케이션의 데이터 및 방법에 액세스할 수도 있다. 또한, 최종 사용자는 이 액세스를 통해 애플리케이션을 서로 연결할 수 있다.
따라서, 프레임워크 프로그램은 먼저 서로 다른 기업 레벨에서의 애플리케이션의 수직 통합을 달성하는 것을 가능하게 하고, 두 번째로 프레임워크 프로그램은 MES 레벨에서 애플리케이션의 수평 통합을 가능하게 한다.
예를 들어, 플랫폼에 정보를 저장할 수 있는 소프트웨어 기반 사례 객체는 저장되는 정보 유형의 전체 정의이다. 예를 들어, 기성 플랫폼의 소프트웨어 기반 사례 객체를 사용하면 고객 문의에 대한 정보를 저장할 수 있다. 이러한 객체의 경우에는 해당 데이터 유형의 특정 경우에 대한 정보를 저장하는 다수의 기록이 있을 수 있다. 따라서, 개인의 훈련 문의에 대한 정보를 저장하는 사례 기록 및 다른 개인의 구성 문제에 대한 정보를 저장하는 또 다른 사례 기록이 있다. 이들 객체는 예를 들어 환자, 그 환자에 대한 환자 치료 이벤트 및 해당 일정에 관한 정보를 저장하도록 맞춤화될 수 있다.
유사하게, 기성 플랫폼 내에서 제공되는 알림 및 경고와 같은 자동화된 작용 및 비즈니스 논리 작용과 같은 워크플로 규칙은, 예를 들어, 제조 프로세스의 변화 및 그에 따른 제조 일정의 변화, 제조 슬롯의 가용성 및 QA 테스트 결과에 기초한 환자 치료 이벤트의 일정에 있어서의 변화를 촉발하도록 수정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 본원에 전체가 참고로 포함되는 미국 특허 제10,747,209호 및 미국 특허 제7,799,273호에 기재된 것과 같은 제조 프로세스 동안 가능한 실패 지점을 결정하기 위한 품질 보증 기능을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 본원에 전체가 참고로 포함되는 미국 특허 제8,491,839호에 기재된 것과 같은 환자로부터 수득된 고형 종양(또는 이의 단편)으로부터 최종 세포 치료제를 제조하는 프로세스 동안 생성된 전자 배취 기록의 무결성을 유지하도록 구성된 데이터 시스템을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 T-세포의 치료 집단과 같은 확장된 세포 치료제를 생산하는 세포 제조 프로세스에 사용하기 위해 조정된 애플리케이션 소프트웨어를 포함한다. 애플리케이션 소프트웨어는 기체 투과성 장치와 같은 세포 제조를 위한 닫힌 계에 포함된 복수의 장치를 제어하도록 구성된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 본원에 개시된 애플리케이션 소프트웨어 및 세포 제조 방법을 통합하여 복수의 최종 사용자에 의해 사용되어 시스템으로부터 수집된 데이터가 분석되고 품질 보증 프로토콜 및 검증 프로토콜이 달성되는지를 결정하는 데 사용되는 포괄적인 검증 및 품질 보증 프로토콜을 제공한다.
일부 실시양태에서, 시스템은 애플리케이션 소프트웨어를 다수의 생성물 라인 및/또는 다수의 세포 제조 시설에 적용하여, 다수의 세포 제조 라인 및 다수의 생성물 라인이 동일한 시스템을 사용하여 모니터링 및 제어된다.
일부 실시양태에서, 시스템은 본원에 기재된 방법을 세포 제조 프로세스의 세포 배양 시스템의 배취 최적화로 구현함으로써, 세포 배양 시스템에 의해 수집된 데이터가 초과 시간 연속적으로 추적되고 데이터가 세포 배양 시스템을 분석하는 데 사용된다. 또한, 상기 데이터는 통합되어 세포 제조 프로세스의 품질 관리 프로세스를 전체적으로 분석하는 데 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 최종 세포 치료제를 제조하는 프로세스의 다양한 단계를 수행하기 위한 워크 스테이션의 설계를 가능하게 한다. 워크 스테이션은 수행 중인 프로세스의 무결성을 보장하고 가능한 경우 교정 조치를 가능하게 하기 위해 이전 단계와 연관된 데이터의 검증을 가능하게 하도록 구성될 수 있다. 그러한 워크 스테이션 설계의 예는 미국 특허 제8,041,444호에 제공되며, 이 특허 전체가 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 다양한 제조업체에서 이용 가능한 제조 일정에 대한 액세스를 제공함으로써 병원 시설에서 수득한 고형 종양으로부터 세포 치료제를 제조할 수 있는 다양한 제조업체와 병원 시설 간의 공조를 가능하게 한다. 이러한 공조를 가능하게 하는 시스템의 예는 미국 특허 제8,069,071호에 제공되어 있으며, 이 특허 전체가 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 세포 치료제의 제조 및 수송에 관한 정보에 세포 치료제의 제조와 연관된 다양한 실체가 실시간 액세스(적절한 허가 포함)할 수 있는 클라우드 기반의 아키텍처를 기반으로 한다. 그러한 클라우드 기반 아키텍처의 예는 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제9,965,562호에 제공되어 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 환자로부터 종양을 수득하고, 수득된 종양으로부터 세포 치료제를 제조하고, 종양 및 세포 치료제를 수송하는 것과 연관된 직원이 본원에 전체가 참고로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2004/0243260호에 기재된 바와 같이 프로세스 제어 및 승인을 위한 전자 서명을 사용하여 자신을 식별하고 인증할 수 있게 한다.
일부 실시양태에서, 시스템은 고객 관계 관리(CRM) 서브시스템을 추가로 포함하거나 그 안에 통합시킬 수 있다. CRM 서브시스템은, 예를 들어, 의사, 병원 사이트, 간호사, 청구인, 비즈니스 연락처 등과 같은 다양한 당사자에 관한 정보를 보관할 수 있다. 정보는 CRM 서브시스템에 의해 유지되어 하나의 단일화된 퍼널(funnel)에서 당사자의 단일 보기(single view)를 유지할 수 있어, 시스템 내에서 개인 정보 보호를 준수하는 방식으로 잠재 고객 및 당사자에 대한 플랫폼 기반의 단일 퍼널 보기를 공유할 수 있다. 당사자 간의 관계와 관련된 정보는 개인 식별 정보를 제거하여 부분적으로 또는 완전히 익명으로, 분산된 다중 마스터, 다중 슬레이브 또는 피어-피어 상황에서 하나 이상의 분산된 슬레이브 또는 피어 CRM 시스템에 공유될 수 있다. 이러한 CRM 서브시스템의 한 예는 미국 특허 출원 공개 제2014/0244351호, 미국 특허 제US 8,489,451호 및 미국 특허 제US 9,342,292호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 시스템은 실시간 의료 이벤트 및/또는 제조 이벤트에 의해 촉발되는 메시지를 수용, 처리 및 라우팅하기 위한 중앙 이벤트 처리 서브시스템을 포함하는 네트워크를 제공하도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 중앙 이벤트 처리 시스템은 의료 이벤트와 연관된 환자 정보를 식별하고 환자 정보를 건강 계획, 클리닉 위치, TIL 제조 시설 및/또는 물류 제공자 중 하나 이상과 일치시킬 수 있다. 의료 및/또는 제조 이벤트를 이해 당사자와 일치시키면 중앙 이벤트 처리 서브시스템은 촉발하는 이벤트의 짧은 기간 내에(즉, 거의 실시간으로) 의료 및/또는 제조 이벤트에 관한 정보의 적어도 일부를 하나 이상의 이해 당사자에게 전달할 수 있다. 예를 들어, 각각의 이해 당사자와 연관된 규칙에 기초하여 중앙 이벤트 처리 시스템은 정보를 전달하고/하거나 이해 당사자가 의료 이벤트를 자각하도록 이해 당사자에게 경고 또는 통지를 발행할 수 있다. 이러한 중앙 이벤트 처리 서브시스템의 예는 미국 특허 출원 공개 제2014/0372147호 및 미국 특허 제US 10,242,060호에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 시스템은 환자 치료 이벤트, 예를 들어, 종양 절제, 림프구감소증, 백혈구 성분채집술, TIL의 주입, 및/또는 IL-2 요법, 또는 본원에 개시된 다른 환자 치료 이벤트를 포함하는 암 치료 요법에 대한 워크플로를 선택하도록 조작가능하다. 워크플로의 선택 시, 시스템은 환자를 대신하여 세포 주입 요법에 해당하는 구매 주문을 생성할 수 있으며, 여기서 세포 주입 요법에 해당하는 주문은 해당 세포 주문 요청 및 암 치료에 해당하는 특정 치료 요법에 대한 요청 중 적어도 하나를 포함한다. 이러한 워크플로 선택 서브시스템의 예는 미국 특허 출원 공개 제US 2014/0088985호에 개시되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
일부 실시양태에서, 시스템은 환자 또는 환자 대리인과 문자 또는 음성 통신 이전에 원격 액세스 장치의 인증을 포함하는 서비스 요청의 인증을 포함할 수 있는 전화 서브시스템을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인증은 원격 액세스 장치를 자동으로 인증하거나 환자(또는 대리인)에게 질문함으로써 달성될 수 있다. 이러한 전화 서브시스템 및 인증 방법의 예는 미국 특허 출원 공개 제US 2019/0026747호에 개시되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
A. 세포 확장 생성물의 제조를 공조하기 위한 시스템
본 개시내용의 실시양태는, 예를 들어, 환자에 대한 T-세포 또는 TIL과 같은 세포 치료제의 제조를 공조하고, 제조 프로세스의 다양한 단계 뿐만 아니라 제조 프로세스의 다양한 단계의 진행 및 성공에 기반한 다양한 환자 치료 이벤트를 동적으로 일정관리하기 위한 방법 및 시스템을 포함한다.
본원에 기재된 방법 및 시스템은 면역 요법 절차 동안 환자 특이적 생물학적 샘플에 대한 지속적이고 자동적인 관리 연속성 및 신원 연속성을 제공하는 기존 시스템에 비해 특정한 기술적 이점을 제공하도록 추가로 조작가능하여, 환자, 의사, 제조업체 및 기타 의료 관계자와 같은 이해 당사자가 면역 요법 절차의 현재 단계 및 절차 중 환자의 생물학적 샘플 상태를 신속하게 이해하고 추적하는 데 사용할 수 있는 전산화된 정보 포털를 생성한다. 관리 연속성 및 신원 연속성을 유지하는 능력의 부족은 생명을 위협하는 병을 앓고 있는 환자의 경우, 측정할 수 없을 정도로 심각할 수 있는 제조 프로세스 동안의 지연을 초래한다.
본 개시내용의 실시양태는 제조 프로세스(QA, 제조, 출하 테스트 및 운송을 위한 마무리 포함) 동안 생물학적 물질의 관리 연속성, 및 최종 제품 전달 프로세스(주입 장소로의 운송 및 전달 포함) 동안 생물학적 물질의 관리 연속성의 유지를 가능하게 한다. 본 개시내용의 실시양태는 추가로 관리 연속성을 특정 환자와 지속적이고 일정하게 연관시킬 수 있게 함으로써 제조의 모든 단계 동안 환자와 생물학적 물질 간의 완전한 신원 연속성을 보장한다.
COC 및 COI의 유지는 환자로부터 수송, 제조 프로세스, 수송 및 환자에게 환송까지 생물학적 물질의 전체 여정 동안의 각 이벤트를 세포 주문 식별자 및 환자-특이적 식별자(환자에게 고유함)와 연관짓고, 전체 여정 동안의 각 이벤트를 추적함으로써 수행된다.
또한, 본원에 기재된 방법 및 시스템은 환자로부터 생체 조직의 수득을 제조 프로세스와 통합하고 동기화할 뿐만 아니라 생체 조직을 수득하는 것에서부터 세포 치료제의 투여 및 COC 및 COI를 위한 후속 처리 이벤트에 이르기까지의 각 단계를 검사하는 기능을 제공하도록 조작가능하다.
본원에 기재된 방법 및 시스템은 환자로부터 생체 조직 수득, 선택된 제조 시설로의 생체 조직 전달, 선택된 제조 시설에서의 세포 치료제 제조, 및 제조 시설로부터 환자 치료를 위한 클리닉까지 세포 치료제의 전달에 대한 물류를 공조하도록 추가로 조작가능하다.
도 3a는 본 개시내용의 실시양태에 따른 환자에 대한 세포 치료제의 제조를 공조하기 위한 시스템에 대한 블록도를 도시한다. 일부 실시양태에서, 도 3a의 구성요소들에 의해 수행되는 기능은 단일 구성요소로 통합될 수 있다. 또한, 일부 실시양태에서, 도 3a에서 하나 이상의 구성요소에 의해 수행되는 기능은 또한 도 3a의 다른 구성요소에 의해 수행될 수 있다.
도 3a를 참조하면, 시스템(300)은 병원측 인터페이스(110), 이벤트 스케줄러(120), 물류 인터페이스(본원에서 택배 포털이라고도 지칭됨)(130) 및/또는 제조 포털(140)을 포함할 수 있다. 병원측 인터페이스(110), 이벤트 스케줄러(120), 물류 인터페이스(130) 및 제조 포털(140)은 각각, 예를 들어 LAN, WAN(예를 들어, 인터넷) 및/또는 셀룰러 네트워크와 같은 통신 네트워크를 사용하여 다른 3가지와 통신한다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110), 이벤트 스케줄러(120), 물류 인터페이스(130), 제조 포털(140), 및 해당 모듈(예를 들어, 도 3에 도시됨)은 시판되는 소프트웨어 플랫폼, 예를 들어 Vineti, Salesforce.com, Salesforce Health Cloud, IQVIA, TracSel 및 SAP에 의해 제공되는 것에 따라 적절하게 수정 또는 구축된다.
병원측 인터페이스(110)는 예를 들어 본원에 개시된 바와 같은 암에 대한 요법을 제공하는 것과 같이 환자 치료를 위한 투여를 담당하는 병원 또는 기타 시설과 연관되거나 상호작용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 환자로부터 고형 종양을 수득하고 고형 종양 또는 이의 단편으로부터 세포 치료제를 수득하기 위한 절차를 수행하는 임상 시설과 연계된다. 일부 실시양태에서, 임상 시설은 오로지 고형 종양을 수득하는 기능만 하고, 반면 고형 종양 또는 이의 단편으로부터 세포 치료제를 수득하는 프로세스는 제조 시설에서 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 제조 시설로부터 수득된 확장된 세포 치료제의 주입을 수행하고 환자에게 후속 치유 및/또는 임의의 사전 또는 후속 치료를 제공하는 병원과 연계된다. 병원 또는 클리닉의 임상의 또는 직원은 병원측 인터페이스(110)를 통해 시스템(300)과 상호작용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 예를 들어 데스크탑 컴퓨터, 클라우드 서버, 랩탑 컴퓨터, 모바일 장치, 또는 프로세서에서 실행되고 메모리와 상호작용하는 하드웨어 및 소프트웨어 모듈을 포함하는 임의의 다른 컴퓨팅 장치와 같은 하나 이상의 컴퓨팅 장치를 포함한다. 병원측 인터페이스(110)는 유선 또는 무선 연결을 통해 병원 또는 임상 시설에서 조작되거나 이와 연관된 컴퓨팅 장치에 연결될 수 있다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 환자로부터 추출한 시점부터 환자에게 주입하는 시점까지 생물학적 물질(예를 들어, 환자로부터의 종양, 환자로부터 수득된 T-세포, T-세포 확장 프로세스의 다양한 단계에서 확장된 T-세포 등)을 추적하도록 구성된 추적 모듈(112)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 환자가 TIL 주입 치료에 등록된 경우, 환자에 대한 확장된 세포 치료제의 제조를 위한 세포 주문 요청이 생성되고 세포 주문 요청과 연관된 세포 주문 식별자가 발생된다. 일부 실시양태에서, 구매 주문은 세포 주문 요청에 따라 발생되고 병원 시설로부터 시스템에 업로드된다. 일부 실시양태에서, 시스템은 구매 주문을 생성 및/또는 업로드하기 위한 인터페이스를 포함할 수 있다.
또한, 환자에게 고유한 환자-특이적 식별자가 발생되고 세포 주문 식별자와 연관된다. 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는, 예를 들어, 순차적인 접미사가 있는 환자 ID #를 포함할 수 있으며, 여기서 접미사는 환자마다 순서대로 첨가된 단일 문자이다 (A-Z). 환자-특이적 식별자는 시스템에서 고유한 것이다. 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는 특정 페르소나(본 문서의 다른 곳에서 자세히 설명됨)에게만 보일 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는 제조된 생물학적 물질 뿐만 아니라 환자 생물학적 물질의 여정을 통해 인쇄된 모든 라벨에 인쇄된다. 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는 모든 시스템 사용자에게만 판독된다. 다시 말해서, 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는 일단 생성되면 편집될 수 없다.
일부 실시양태에서, 세포 주문 식별자는, 예를 들어, 고유 환자 식별자, 세포 주문 식별자, 주문 코드, 세포 주문 로트 번호, 다양한 시점에서 하나 이상의 허용 매개변수 값, 허용 기준이 다양한 시점에서 충족되는지 여부를 나타내는 하나 이상의 지표, 또는 이들의 조합과 같은 정보를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포 주문 식별자 및 환자-특이적 식별자는 환자와 연관된 임의의 생물학적 물질(예를 들어, 환자로부터 추출된 고형 종양, 이의 단편, 이로부터 추출된 세포 치료제, 또는 세포 치료제의 확장으로부터 수득되는 확장된 세포 치료제)이 관리를 변경하거나 처리를 겪는 각 지점에서 스캔된다. 스캔된 각각은 환자로부터의 추출 시간부터 환자로의 주입 시간까지의 전체 프로세스 동안 추적 모듈(112)에 의해 기록되고 검증될 수 있다. 전체 프로세스 동안 각 단계에서 환자-특이적 식별자의 검증은 생성물의 신원 연속성(COI)을 보장하는 반면, 전체 프로세스 동안 각 단계에서 세포 주문 식별자의 검증은 생성물에 대한 관리 연속성(COC)을 보장한다. COI 및 COC의 유지에 관한 세부 사항은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 스캔된 정보는 병원 시설에 의해 생성된 구매 주문으로 검증된다. 예를 들어, 운송이 제조 시설에 수용되면, 운송 용기의 라벨을 스캔할 수 있고 라벨의 정보는 구매 주문서에 의해 검증되어 정확성을 보장할 수 있다. 일부 실시양태에서, 검증 결과는 시스템 내에 기록된다.
추적 모듈(112)은 도 3a에 도시되고 본원에서 병원측 인터페이스(110)의 일부인 것으로 설명되지만, 추적 모듈(112)은 일부 실시양태에서 프로세서 및 메모리를 갖는 독립형 컴퓨팅 장치로서 구현될 수 있다. 유사하게, 추적 모듈(112)은 또한 일부 실시양태에서 독립형 소프트웨어 모듈(예를 들어, 클라우드 서버에 저장됨)로서 구현될 수 있다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 환자 액세스 모듈(116)을 통해 환자에게 제한된 액세스를 제공하여 환자가 치료 절차 및 해당 일정에 관한 정보를 수득할 수 있도록 한다. 환자 액세스 모듈(116)은 또한 환자가 예를 들어 개인 식별 정보, 보험 정보, 및 임상의를 위한 자신의 건강 상태와 관련된 정보와 같은 자신에 관한 정보를 제공할 수 있게 할 수 있다.
병원측 인터페이스(110)는 임상 시설의 직원이 소정의 프로토콜에 따라 환자로부터 고형 종양을 수득하고 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위한 절차와 관련된 정보를 입력할 수 있도록 조작가능한 조달 모듈(114)을 추가로 포함할 수 있다. 고형 종양을 수득하기 위한 절차와 관련된 정보는, 일부 실시양태에서, 사후 검사가 규제 요건의 준수를 보장할 수 있도록 저장될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조달 모듈(114)은 추가로 임상 시설의 직원이 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위해 사용된 프로세스 및 고형 종양에 대하여 제조 시설로 정보를 제공할 수 있게 할 수 있다. 임상 시설이 또한 고형 종양으로부터 세포 치료제를 수득하도록 조작가능한 실시양태에서, 조달 모듈(114)은 임상 시설의 직원이, 예를 들어, 세포 치료제를 수득하기 위해 사용한 프로세스 또는 절차, 및 수득된 세포 치료제에 대해 수행된 품질 관리 검정 결과와 같은 수득된 세포 치료제에 대한 정보를 제조 시설로 제공할 수 있게 할 수 있다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 제조 공조 모듈(118)을 추가로 포함할 수 있다. 제조 공조 모듈(118)은 임상 시설의 사용자가, 예를 들어, 제조 슬롯의 가용성 및 하나 이상의 제조 시설 각각에서 이용가능한 기능과 같은 하나 이상의 제조 시설에 관한 정보를 수득할 수 있도록 조작가능하다. 제조 공조 모듈(118)은 추가로 임상 시설의 사용자가 선택된 제조 시설에서 제조 슬롯의 예약을 공조하고 환자로부터 수득된 고형 종양, 이의 단편 또는 세포 치료제의 수송을 준비하도록 물류 인터페이스(130)를 통해 물류 제공자와 공조할 수 있게 한다. 제조 공조 모듈(118)은 추가로 임상 시설의 사용자가 제조 포털(140)을 통해 제조 프로세스 및/또는 제조 프로세스 동안 수행된 품질 관리 검정에 관한 정보를 수득할 수 있게 한다.
이벤트 스케줄러(120)는 임상 시설 및 제조 시설에서 수행되는 다양한 활동의 일정관리를 공조하도록 조작가능하다. 추가적으로 또는 대안적으로, 이벤트 스케줄러(120)는 임상 시설과 제조 시설, 세포치료제 제조 시설, 예를 들어 세포치료제 확장이 일어나는 시설 간의 세포 치료제의 수송을 용이하게 하기 위해 물류 제공자에게 다양한 활동의 일정관리에 관한 정보를 제공할 수 있다. 이하에서 더 자세히 설명하는 바와 같이, 세포 치료제의 제조 동안 일어나는 다양한 이벤트를 기반으로 이벤트 스케줄러는 다른 이벤트(들)가 발생해야 하는 시기를 동적으로 일정관리하도록 구성된다.
일부 실시양태에서, 이벤트 스케줄러(120)는, 예를 들어, 데스크탑 컴퓨터, 서버, 랩탑 컴퓨터, 모바일 장치, 또는 프로세서에서 실행되고 메모리와 상호작용하는 하드웨어 및 소프트웨어 모듈을 포함하는 임의의 다른 컴퓨팅 장치와 같은 컴퓨팅 장치(122)를 포함한다. 하드웨어 및/또는 소프트웨어 모듈은 허용 결정 모듈(123) 및 일정관리 모듈(125)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 컴퓨팅 장치(122)는 병원 인터페이스(110), 제조 포털(140) 및 물류 인터페이스(130)를 통해 액세스 가능한 클라우드 서버일 수 있다. 이벤트 스케줄러(120)는 유선 또는 무선 접속을 통해 제조 시설 및/또는 병원 시설에서 작동되거나 이와 연관된 컴퓨팅 장치에 접속될 수 있다.
허용 결정 모듈(123)은 이벤트 스케쥴러(120)의 일부인 것으로서 도 3a에 도시되어 있지만, 허용 결정 모듈(123)은 또한 제조 포털(140)의 일부로서 구현될 수도 있다는 것이 이해될 것이다. 대안적으로, 허용 결정 모듈(123)은 또한 예를 들어 클라우드 서버에서 호스팅되는 독립형 소프트웨어 모듈로서 구현될 수 있다.
물류 인터페이스 또는 택배 포털(130)은 예를 들어 택배 서비스 또는 패키지 취급 서비스와 같은 물류 제공자와 연계되거나 상호작용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 물류 인터페이스(130)는 예를 들어 데스크탑 컴퓨터, 클라우드 서버, 랩탑 컴퓨터, 모바일 장치, 또는 프로세서에서 실행되고 메모리와 상호작용하는 하드웨어 및 소프트웨어 모듈을 포함하는 임의의 다른 컴퓨팅 장치와 같은 하나 이상의 컴퓨팅 장치를 포함한다. 물류 인터페이스(130)는 인터넷과 같은 네트워크를 통해 유선 또는 무선 접속을 통해, 물류 제공자에서 조작되거나 물류 제공자와 연계된 컴퓨팅 장치에 접속될 수 있다.
제조 포털(140)은 확장된 세포 치료제를 제조하는 제조 시설과 연계될 수 있다. 제조 포털(140)은 제조 시설의 직원이, 예를 들어, 신원 연속성 및 관리 연속성의 유지, 제조 동안 수행된 품질 관리 검정에 관한 정보 기록, 다양한 프로세스 사이의 이행 기록, 및 확장 프로세스 동안 세포 치료제의 용기에 라벨 제공을 포함하는 확장된 세포 생성물의 제조 동안의 다양한 프로세스를 제어 및 기록할 수 있도록 조작가능하다.
일부 실시양태에서, 제조 포털(140)은 예를 들어 데스크탑 컴퓨터, 클라우드 서버, 랩탑 컴퓨터, 모바일 장치, 또는 프로세서에서 실행되고 매모리와 상호작용하는 하드웨어 및 소프트웨어 모듈을 포함하는 임의의 다른 컴퓨팅 장치와 같은 하나 이상의 컴퓨팅 장치를 포함한다. 제조 포털(140)은 유선 또는 무선 접속을 통해 제조 시설에서 조작되거나 그와 연관된 컴퓨팅 장치에 접속될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제조 포털(140)은 라벨링 모듈(142) 및 COC/COI 모듈(144)을 포함한다. 라벨링 모듈(142)은 제조 시설의 직원이 확장된 세포 치료제의 제조 프로세스(본원에서 확장 프로세스라고도 함) 동안 세포 치료제를 운반하는 용기에 대한 라벨을 생성할 수 있도록 조작가능하다. 라벨은, 예를 들어, 환자-특이적 식별자, 용기를 취급하고/하거나 확장 프로세스의 현재 및/또는 이전 단계를 수행하는 직원에 관한 식별자, 이전 단계에서 수행된 품질 관리 검정의 결과, 라벨 생성 이유에 관한 이유 코드, 환자-특이적 식별자로 세포 치료제를 식별하는 바코드 또는 2D 코드(예를 들어, QR 코드), 및 기타 적절한 정보와 같은 정보를 포함할 수 있다.
COC/COI 모듈(144)은 제조 시설과 연관된 사용자가 확장 프로세스 동안 관리의 검사 연속성을 유지할 수 있도록 조작가능하다. COC/COI 모듈(144)은 제조 시설과 연관된 사용자가, 확장되는 세포 치료제와 연관된 환자의 신원의 검사 연속성을 유지할 수 있도록 추가로 조작가능하다.
도 3b는 표준 플랫폼 내의 표준에 추가하여 시판되는 소프트웨어 플랫폼을 기반으로 적절하게 변형되거나 구축된 시스템(300)의 구성요소에 대한 객체 스키마를 예시한다. 예를 들어, 시판되는 소프트웨어 플랫폼은 환자 액세스(예를 들어, 환자 식별자, 환자 연락처 정보, 환자 인증 정보 등 포함), 치료 계획(예를 들어, 환자 치료 이벤트의 초기 일정 포함), 임상의 액세스(예를 들어, 임상의 식별자 및 임상의 인증 정보), 및 제조 액세스(예를 들어, 제조 시설의 연락처 정보)에 해당하는 빌트인 객체를 가질 수 있다.
한편, 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위한 절차와 연관된 종양 조달 양식, 확장된 세포 치료제를 제조하는 데 사용되는 프로세스에 관한 정보 및 수득한 고형 종양이 처리되는 방식에 관한 정보를 포함하는 제조 주문서, 하나 이상의 제조 시설에서의 제조 일정, 전체 프로세스의 검사를 가능하게 하는 라벨 검사 흔적과 같은 객체는 시스템(300)과 연관된 특정 기능을 제공하기 위해 빌트인 객체와 인터페이스하도록 맞춤 제작될 수 있다.
맞춤 제작 객체 및 빌트인 객체는 환자로부터 고형 종양을 수득하는 것부터 확장된 세포 치료제를 환자에게 주입하는 것까지 모든 이벤트를 통해 COC 및 COI를 유지 및 검사할 수 있기 위해 서로 상호작용하도록 시스템(300)에 구성된다. 빌트인 객체와 함께 맞춤 제작 객체는 제조 프로세스 진행 방식에 기초하여 환자 치료 이벤트 및 연관 물류의 일정을 잡는다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 로트 기록 및 라벨 검사 흔적과 같은 맞춤 제작 객체가 시스템(300)에 제공될 수 있다. 이들 맞춤 제작 객체는 맞춤 제작 워크플로 자동화 및 맞춤 제작 사용자 프로필에 추가하여, 원래 시판되는 소프트웨어 플랫폼에서 구상될 수 없었던, 예를 들어 COC/COI의 유지, 검사 기능, 제조 실행을 기반으로 한 환자 치료 이벤트의 동적 일정관리, 제조 실행을 기반으로 한 라벨 생성 및/또는 제조 실행 및 조달 사이의 상호작용과 같은 기능을 갖는 시판되는 소프트웨어 플랫폼을 제공한다. 종양 조달 절차, COC 및 COI의 유지, 및 제조 프로세스 동안 라벨의 생성에 대한 맞춤 제작 객체 및 빌트인 객체 사이의 상호작용에 대한 추가 세부사항은 본원의 다른 곳에서 제공된다.
B. COC 및 COI 유지를 위한 맞춤 제작 객체와 빌트인 객체 간의 상호작용
도 3c 내지 도 3e는 본 개시내용의 일부 실시양태에 따른 제조 시설에서의 제조 프로세스를 통한 생물학적 물질에 대한 추적을 개략적으로 예시한다. 일부 실시양태에서, 초기에 임상 시설의 환자로부터 수득한 종양 샘플이 제조 시설로 전달될 때, 운송 라벨이 스캔되고, 스캔으로부터 수득된 정보가 시스템의 해당 컴퓨터 기반 객체와 연계된다. 정보는 세포 주문 식별자, 환자-특이적 식별자, 종양 절제 시기, 종양 절제에 사용된 프로세스, 절제 후 종양을 저장하는 데 사용된 프로세스, 및 종양으로부터 세포 치료제를 확장하는데 사용될 예상 프로세스를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 스캔을 통해 수득한 환자 관련 정보가 제조 시설에서 별도로 수신된 세포 주문 요청(예를 들어, 제조 포털(140)을 통해)에 의해 검증되면, 제조 시설에서 수용된 대로 시스템에 종양이 표시되고, 관리 연속성이 제조 시설로 전달된다. 제조 프로세스를 통한 관리 연속성 및 신원 연속성이 유지되는 방식에 대한 세부 사항은 본원의 다른 곳에서 설명된다.
종양은 그 다음 품질 점검을 위해 이동한다. 품질 점검 동안, 스캔에서 수신된 종양 관련 정보는 종양 샘플이 필수 품질 기준을 충족하는지 확인하기 위해 추가로 검증된다. 이 프로세스에서 검증된 정보는, 예를 들어, 종양 절제에 사용되는 프로세스 및 절제 후 종양을 저장하고 운송하는 데 사용되는 프로세스에 관한 정보를 포함한다. 종양 절제에 사용된 프로세스에 관한 정보는, 예를 들어, 본원의 다른 곳에서 더 자세히 설명되는 종양 조달 양식에서 처리된 다양한 분야를 포함할 수 있다. 종양이 품질 기준을 충족하는 것으로 간주되면, 해당 라벨이 스캔되고 해당 객체가 업데이트된다. 객체에 포함된 업데이트된 정보는, 예를 들어, 병원 시설 및 물류 제공자(본원서는 택배 시설이라고도 함)를 비롯한 시스템 전체를 통해 액세스할 수 있다. 일부 실시양태에서, 병원 시설 및 택배 시설과 연관된 다양한 프로세스는 업데이트된 객체에 기초하여 업데이트된다.
종양은 그 다음 제조로 이동된다. 그 다음, 적절한 종양 샘플이 이동되고 있는지 그리고 적절한 제조 프로세스에 의해 제조가 처리되는지를 검증하기 위해 0일차 배취 기록 라벨이 스캔된다. 종양은 그 다음 적절한 플라스크(환자의 종양이 처리되는 확장 프로세스를 위한 배지 및 시약 포함)로 이동하고, 플라스크의 라벨이 스캔된다. 해당 객체는 적절한 타임스탬프가 있는 스캔에서 수득되는 정보를 사용하여 업데이트된다.
0일차 플라스크는 그 다음 인큐베이터실로 수동으로 이동되고, 이로부터 제조실로 이동된다. 제조실에서 플라스크 라벨은 다시 스캔되고 그 안에 함유된 정보가 기록된다. 플라스크 라벨의 정보는 적절한 제조 프로세스가 후속되도록 하는 데에도 사용된다.
특정 제조 프로세스에 기초하여 1차 필수 시간(예를 들어, 도 3c에 도시된 11일)이 후속된 후에, 플라스크에 파종한다. 파종 프로세스 동안 플라스크는 제조실에서 꺼내야 할 필요가 있을 수 있다. 이러한 경우 플라스크 라벨을 스캔하고 플라스크가 제조실을 떠나기 전후에 배취 기록을 업데이트한다. 스캔 전후의 정보는 추가 프로세스가 수행되기 전에 일치시킨다.
파종 프로세스 후, 플라스크는 제조실로 재도입된다. 플라스크 라벨은 파종 프로세스 후 제조실로 재도입되기 전후에 스캔되며 배취 기록이 업데이트된다. 스캔 전후의 정보를 일치시켜 올바른 플라스크가 사용되고 있고 적절한 후속 프로세스가 세포 치료제의 추가 처리에 사용되는지 검증한다.
2차 필수 시간 후(예를 들어, 도 3c에 도시된 16일차에), 파종된 플라스크로부터의 세포는 복수의 백(예를 들어, 도 3c에 도시된 5개의 백)으로 분할된다. 각 백(bag)의 라벨은 제조실로 재도입되기 전후에 스캔되고 배취 기록에 해당하는 객체가 적절하게 업데이트된다. 스캔 전후의 정보는 플라스크의 세포가 세포 주문 요청에 따라 분할되고 적절한 제조 프로세스를 사용하여 백이 추가 처리되는지 검증하는 데 사용된다.
일부 실시양태에서, 품질 검정은 제조 프로세스가 세포 주문 요청에 따라 그리고 소정의 일정에 따라 진행되고 있는지 보장하기 위해 1차 및 2차 필수 시간에 수행된다. 이러한 실시양태에서, 품질 관리 검정의 결과는 또한 스캔된 정보에 포함될 수 있다. 해당 스캔에서 이러한 정보를 수득한 즉시, 해당 시점에서 수득한 세포 치료제의 품질이 특정 품질 기준을 충족하지 않는 것으로 결정되면, 그에 따라 배취 기록 및 해당 객체를 업데이트한다. 필요한 경우, 제조 프로세스의 일정도 업데이트한다. 일부 실시양태에서, 업데이트된 일정은 병원 시설 및 택배사에 의해 수행될 해당 프로세스에 대한 일정이 적절하게 업데이트되도록 병원 시설 및 택배사에 전달될 수 있다. 제조 일정이 업데이트되는 시기와 방식에 대한 세부 사항은 본원의 다른 곳에 설명되어 있다.
그 다음, 제조 프로세스는 복수의 백에서 소정의 종점까지 지속된다(예정대로, 또는 적절하게 수정된 일정 및/또는 중간 단계로). 일부 실시양태에서, 복수의 백 중 하나로부터의 세포는 최종 확장된 세포 치료제에 대한 품질 검정을 수행하는 데 사용된다. 그 다음, 품질 검정에서 선택된 백 및 최종 제품으로 출하될 세포를 함유한 백에 라벨을 붙이며, 이 라벨은 배취 기록 및 해당 객체를 업데이트하기 위해 스캔된다.
최종 제품으로 출하될 백은 그 다음 카세트에 투입되고 병원 시설로의 수송을 위해 동결된다. 카세트의 라벨이 스캔되고 배취 기록이 해당 객체와 함께 업데이트된다. 그 다음 품질 관리 검정을 수행하기 위해 사용할 백의 라벨을 스캔하고 배취 기록 및 해당 객체를 업데이트하고, 백을 품질 관리 스테이션으로 이동시킨다. 품질 관리 검정 결과를 수득한 즉시, 결과를 스캔하고 배취 기록 및 해당 객체를 업데이트한다.
일부 실시양태에서, 최종 제품으로 출하될 백은 백에 들어 있는 제품이 품질 검정 결과가 아직 나오지 않았기 때문에 환자에 대한 요법에 사용하도록 아직 승인되지 않았다는 경고와 함께 택배사(및 궁극적으로 병원 시설)로 출하될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 품질 검정 결과가 수득되면 해당 객체가 실시간으로 업데이트되어 최종 세포 치료제를 환자에게 전달하는 시간을 단축시킬 수 있다.
최종 세포 치료제가 환자에 대한 치료 용도로 승인되었음을 품질 검정 결과가 나타내면 카세트를 스캔하고 배취 기록 및 해당 객체를 업데이트한다. 그 다음, 카세트는 수송을 위해 준비 처리되고 물류 제공자(즉, 택배사)에게 인계되고 스캔되어 관리 연속성이 택배사로 전달되었음을 나타낸다.
그 다음, 택배사는 최종 세포 치료제를 병원 시설로 수송하고, 여기서 라벨은 다시 스캔되어 관리 연속성이 병원 시설로 전달되었음을 나타낸다. 최종 세포 치료제가 병원 시설로 배송되었음을 제조 시설과 택배사가 고지하기 위해 배취 기록 및 해당 객체가 업데이트된다.
C. 제조 프로세스 동안 세포 치료제 라벨링 및 관리 연속성 및 신원 연속성의 유지
도 3f는 제조 프로세스(예를 들어, GEN 2 프로세스 또는 GEN 3 프로세스)의 일부 실시양태에 따라, 고형 종양의 수득에서부터 제조 프로세스를 거쳐 환자에 주입에 이르기까지 세포 치료제의 여정을 통해 COC 및 COI를 유지하는 프로세스를 개략적으로 예시한다. 일부 실시양태에서, 초기에 병원측 인터페이스(110)는 병원측 인터페이스(110)와 연결된 병원의 직원(예를 들어, 등록 간호사)으로부터 환자에 대한 정보를 수신한다. 환자에 대한 정보는 건강 보험, 개인 식별 정보, 건강 관련 정보, 환자 등록 정보(예를 들어, 동의서) 또는 환자를 식별하고 돌보는 데 도움이 될 수 있는 환자와 관련된 임의의 기타 정보를 포함할 수 있다.
병원의 직원, 예를 들어, 임상의가, 예를 들어 TIL 주입 요법에 대한 후보가 될 환자를 결정한 후, 환자는 병원측 인터페이스(110)에 연결된 컴퓨터를 통해 TIL 주입 요법을 진행하는 동의를 제공할 수 있다.
병원의 직원은 그 다음 이벤트 스케줄러(120)를 통해 환자에 대한 TIL 주입 요법을 주문할 수 있다. 병원의 청구 부서 직원은 물류 인터페이스(130)를 통해 환자에 대한 TIL 주입 요법에 대한 구매 주문을 할 수 있다. TIL 주입 요법 주문 및 구매 주문은 병원 측 인터페이스(110)로 전송될 수 있다. 병원 측 인터페이스(110)는 환자 등록뿐만 아니라 주문 및 구매 주문 수신을 확인하고, 동의가 완료된 후 세포 스케줄러(120)에게 세포 주문 요청을 발행할 수 있다. 유사하게, 병원측 인터페이스는 다양한 환자 치료 이벤트가 예정되었음을 통지하기 위해 보험 제공자와 통신할 수 있고, 또한 지불을 처리하기 위해 보험 제공자에게 환자 치료 이벤트의 일정을 제공할 수 있다.
환자-특이적 식별자는 그 다음 세포 주문 요청과 연계될 수 있고 모든 처리 및/또는 운송 단계에서 환자와 연관된 생물학적 물질에 부착되어, 본원에 더욱 상세히 설명되는 바와 같이 생물학적 물질의 중단 없는 관리 연속성 및 신원 연속성 추적을 가능하게 할 수 있다. 환자-특이적 식별자는 또한 전체 치료 요법을 통해 환자의 추적을 유지하도록 여러 환자 치료 프로세스를 투여하는 데 사용되는 치료 장비 뿐만 아니라 환자와 연계될 수 있다.
또한, 환자-특이적 식별자는 다양한 환자 치료 이벤트에 따른 지불 처리를 가능하게 하기 위해 병원측 인터페이스(110)를 통해 보험 제공자에게 전달될 수 있다. 환자-특이적 식별자는 추가로 택배 포털(130)을 통해 택배사로 전달되어 택배사가 수송되는 생물학적 물질과 연관된 환자의 신원을 검증할 수 있도록 할 수 있다.
본원에 개시된 다양한 실시양태에서, 제조 이벤트 및/또는 환자 치료 이벤트(변경 여부에 상관없이)의 일정에 관한 일정관리 모듈(125)과 병원측 인터페이스(110), 제조 포털(140) 또는 물류 인터페이스(130) 간의 임의의 통신에는 처리 및 예정되는 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자가 동반된다. 환자-특이적 식별자를 포함하는 이러한 통신은 병원측 인터페이스(110), 제조 포털(140) 및 물류 인터페이스(130)가 생물학적 물질을 정확하게 처리, 추적 및 식별할 수 있게 하여 생물학적 물질 또는 환자의 오인을 방지하고 환자의 안전을 향상시킨다.
추가로, 본원에 상세히 설명된 바와 같이, 환자-특이적 식별자는 확장 프로세스를 통해 COC/COI의 유지를 가능하게 하고 규제 요건을 준수하기 위해 사후 검사할 수 있도록 하기 위해 확장 프로세스 동안 사용된 용기에 라벨을 생성하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는 신원 연속성/관리 연속성을 추적할 뿐만 아니라 이벤트 이력을 추적하는 데에도 사용되도록 구성된 세포 주문 식별자에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자 외에도 세포 주문 식별자는 처리 단계를 겪고 있는 환자의 생물학적 물질에 각각 해당하는 여러 지표 또는 필드(field)를 포함할 수 있다. 도 3g는 일부 실시양태에 따른 세포 치료제에 대한 라벨의 대표적인 이미지이다. 일부 실시양태에서, 라벨은 세포 주문 식별자(350), 2D 코드(예를 들어, QR 코드)(362), 사유 필드(370) 및 제품 필드(380)를 포함한다. 세포 주문 식별자(350)는, 예를 들어, 환자 이름(354), 환자-특이적 식별자(352), 환자의 생년월일(예를 들어, 추가 검증용)(356), 병원-연관 환자 식별자(358) 및 제조 로트 번호(360)와 같은 다양한 필드를 포함할 수 있다.
따라서, 라벨은 COI/COC의 유지를 가능하게 하고, 또한 임상 치료 센터에서 종양 절제 물질의 추적, 제조 시설로 종양 물질의 운송, 모든 프로세스 중 및 완제품 샘플의 테스트를 포함하는 제조, 임상 치료 센터로 의약품의 운송, 및 의약품 주입을 가능하게 한다.
일부 실시양태에서, 도 3h에 예시된 것과 같이, 제조 프로세스를 통해 고형 종양을 수득하는 것에서부터 환자로의 주입에 이르기까지 세포 치료제의 여정 동안 여러 시점에서 여러 라벨이 생성될 수 있다. 여러 시점에서 생성된 라벨은 도 3g에 예시된 라벨에 포함된 추가 정보 또는 다른 정보를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 세포 확장 프로세스 동안 생성된, 예를 들어 세포 확장 프로세스 동안 사용된 용기에 부착된 라벨은 다양한 시점에 해당하는 필드 및 각각의 시점에서 이루어진, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부에 대한 결정 결과를 포함할 수 있다.
따라서, 프로세스의 임의의 단계에서 라벨은 환자에 대한 정보를 제공하여(환자-특이적 식별자를 통해) 신원 연속성 및 관리 연속성을 유지할 수 있게 한다. 라벨은 또한 연관된 생물학적 물질이 겪은 다양한 처리 단계에 대한 정보를 제공하여, 예를 들어 검사 목적을 위해, 이벤트 이력뿐만 아니라 관리 연속성에 대한 기록을 제공할 수 있다.
따라서, 시스템(300)은 세포 치료제 제조 프로세스 및 공급망 전반에 걸쳐 COI 및 COC를 유지하도록 구성될 수 있다. 또한, 시스템(300)은 21 CFR Part 11, HIPAA(건강보험이동성과 결과보고책무활동) 및 GDPR(일반 데이터 보호 규정) 규정을 충족하고 데이터가 안전하게 보호되도록 하는 보호 장치를 포함하도록 구성될 수 있다.
민감한 데이터에 대한 액세스를 제한 및 통제하기 위해, 시스템(300)은 일부 실시양태에서 사용자 기반 역할 및 액세스를 구현한다. 일부 실시양태에서, 타임 스탬프는 생성 시점에 라벨에 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 추적 모듈을 통해 추적되는 세포 주문 식별자는, 예를 들어, 다양한 운송/수송 이벤트, 다양한 제조 프로세스 이벤트, 및/또는 치료 요법의 다양한 단계와 연관된 지표 또는 필드를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 지표 또는 필드는 라벨에 인쇄되지 않을 수 있지만, 요법의 진행을 추적할 뿐만 아니라 환자와 관련된 생물학적 물질을 추적하기 위한 추적 모듈에 의해 생성되거나 첨부될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 특정 단계의 완료 시간을 나타내는 타임스탬프는 주어진 지표 또는 필드가 변경되거나 업데이트되는 모든 단계에서 세포 주문 식별자와 연관되거나 첨부될 수 있다. 이러한 업데이트된 세포 주문 식별자에 포함된 정보는 또한 본원의 다른 곳에서 상세히 논의되는 바와 같이 환자 치료 이벤트를 동적으로 재일정관리하기 위해 사용될 수 있음을 이해할 것이다.
1. 제조 프로세스 동안 세포 치료제의 라벨링
다시 도 3f를 살펴보면, 일부 실시양태에서, 세포 주문 식별자는 판독가능한 라벨에 인쇄되고 바코드 또는 QR 코드(또는 2D 코드)와 연관되어, 종양 절제에서부터 자가 의약품의 주입에 이르기까지 식별의 적절한 검증을 허용한다. 라벨은 생물학적 물질 및 치료 요법과 연관된 객체에 부착될 수 있다. 예를 들어, 환자-특이적 식별자를 포함하는 라벨은 병원 또는 임상 시설에서 TIL 제조 시설로 절제된 종양을 운반하는 용기, TIL 제조 장비 및 다양한 제조 단계 동안의 용기, 확장된 TIL을 병원 또는 임상 시설로 다시 운송하기 위한 운송 용기, 다양한 치료 이벤트와 연관된 장비, 또는 이의 임의의 조합에 부착될 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 환자는 병원측 인터페이스(110)의 환자 액세스 모듈(116)을 통해 시스템에 입력될 수 있고 등록된다. 추적가능한 환자 정보의 시스템 내 등록 및 포착 시, 환자-특이적 식별자(COI 번호)가 시스템에 의해 환자에게 할당될 수 있다. 환자-특이적 식별자의 할당은 절제 날짜 및 제조 슬롯을 예정할 수 있게 한다.
시스템 내 제조 슬롯의 예정은 제조 사이트에서 세포 주문의 생성 및 로트 번호 할당을 촉발한다.
종양 절제 전에, 임상 시설은 시스템에 액세스하고, 정확한 환자 식별을 확인하고, 종양 병 라벨 및 종양 운송업체 라벨을 생성할 수 있다. 라벨은 세포 주문 식별자 외에 환자-특이적 식별자를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자는 세포 주문 식별자 내의 필드일 수 있다.
종양 절제 후 추적 모듈(112)에서 관리 연속성이 개시된다. 라벨이 붙은 종양 병은 그런 다음 운송업체에게 배치되고 제조 사이트로 수송하기 위해 택배사에 인도될 수 있다. 택배사가 운송업체 라벨의 세포 주문 번호가 시스템(300)에 통합되어 있는 운송업체 시스템의 운송 주문서 상의 세포 주문 번호와 일치하는지 검증함으로써 관리 연속성이 계속되어 치료 센터와 제조 사이트 간에 종양의 실시간 추적을 제공한다.
제조 사이트로 종양의 배송 시, 시스템 내에는 배송 증거가 생성될 수 있다. 종양의 수용 시, 제조 직원은 COC/COI 모듈(144)을 통해 제조 모듈(140)에서 시스템 내로 제조 로트 번호를 입력한다. 환자 기록(제조 공조 모듈(118)을 통해 이용가능하게 됨)이 올라오면, 제조 로트 번호와 환자-특이적 식별자가 연관이 있는지를 검증하기 위해 종양 병의 라벨이 시스템 내로 스캔된다. 검증 시, COC는 제조 사이트로 이동한다.
제조 시설의 직원이 시스템에 들어갈 수 있으며, 여기서 라벨링 모듈(142)은 세포 주문 요청서를 함유한 재공품(work in process: WIP) 라벨의 생성을 가능하게 한다. 사후 기록의 검사를 용이하게 하기 위해 WIP 라벨을 배취 기록 및 세포 성장 플라스크에 부착할 수 있다. 도 3g는 한 실시양태에 따른 WIP 라벨의 대표 이미지이다. 도 3h는 한 실시양태에 따른 라벨의 여러 WIP 유형 및 각 유형의 라벨에 포함된 정보를 보여준다.
제조 직원은 제조 프로세스 동안 주요 이행 지점에서 라벨을 스캔하여 세포 성장 플라스크의 세포 주문 식별자 번호가 배취 기록과 일치하는지 검증할 수 있어, COI가 제조 프로세스 전반에 걸쳐 유지되도록 보장한다.
추가로, 각 품질 관리(QC) 샘플은 생성된 결과가 해당 배취 기록에 연결되도록 보장하기 위해 COI 번호가 있는 자체 라벨을 가질 것이다. 제조 프로세스가 완료되면 라벨링 모듈(142)은 최종 제품 라벨을 생성할 수 있다. 도 3i 및 3j는 최종 제품 라벨의 예이다.
도 3i-3j에서 관찰되듯이, 이러한 최종 제품 라벨은 이름(354), 생년월일(DOB)(356) 및 환자-특이적 식별자(352)를 포함한 고유한 환자 식별 정보를 함유한다. 최종 제품 라벨은 최종 제품에 부착되고, 배취 기록 및 라벨은 모두 스캔되어 제조 시설 내에서 COI 및 완전한 관리 연속성을 보장한다.
최종 제품은 일치하는 환자-특이적 식별자를 포함하는 동일한 세포 주문 식별자와 함께 운송업체에 배치되고, 주입을 위한 치료 센터로 전달하기 위해 택배사로 검증 및 전송된다. 그런 다음, 택배사는 운송 용기 상의 세포 주문 식별자 및 환자-특이적 식별자가 물류 인터페이스(130)를 통해 수신된 택배사 시스템의 세포 주문 및 환자 정보와 일치하는지 검증하여 제조 사이트와 치료 센터 간에 각 의약품 로트의 거의 실시간 추적을 제공한다. 이때, COC는 제조 사이트에서 택배사로 전달된다.
택배사는 최종 제품을 환자에게 주입하기 위한 치료 센터로 배송한다. 택배사는 물류 인터페이스(130)를 통해 배송 증명(POD)을 개시할 수 있고 COC는 택배사에서 치료 센터로 전달된다. COI는 치료 센터에서 환자에게 제품을 주입하는 것으로 종료된다.
본원에서 논의되는 바와 같이, 각 처리 단계 후에 병원측 인터페이스(110), 이벤트 스케줄러(120), 제조 포털(140) 및 물류 인터페이스(130) 사이에서 환자-특이적 식별자를 통신하면, 모든 연루된 당사자(예를 들어, 임상 시설, 제조 시설 및 물류 제공자)가 생물학적 물질의 식별 연속성 뿐만 아니라 관리 연속성의 기록을 수신하고 생물학적 물질이 겪은 다양한 프로세스 단계의 기록도 수신하도록 보장한다.
따라서, 라벨을 통해 고형 종양에 제공된 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 요청은 운송 추적을 가능하게 하여 환자 안전 및 규제 준수(예를 들어, FDA 검사)에 필요한 관리 연속성 및 식별 연속성을 유지할 수 있게 한다.
2. 제조 프로세스에 대한 변경 사례에서 라벨 조정
제조 시설에 고형 종양이 수용된 즉시, 세포 주문 요청에 따라 세포 치료제의 제조가 개시된다. 예를 들어, 고형 종양의 적어도 일부는 세포 확장 기술을 사용하여 세포 치료제를 제조하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제조 시설과 연관된 컴퓨터 서브시스템, 예를 들어, 라벨링 모듈(142)은 세포 확장에 사용되는 고형 종양의 일부와 연관되는 제2 라벨이 인쇄되게 할 수 있다. 제2 라벨은 환자-특이적 식별자 및 세포 요청 식별자를 포함할 수 있다. 제2 라벨은 추가로 관리 연속성 및 식별 연속성을 유지하기 위해 세포 치료제의 추적을 가능하게 할 수 있다.
후속적으로, 세포 치료제의 제조 동안 다양한 시점에서 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 결정된다. 그 다음, 허용 결정 모듈(123)에서 허용 매개변수가 비교되어 특정 시점에서 결정된 허용 매개변수가 해당 시점에서의 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정한다. 허용 매개변수는 본원에 개시된 임의의 적절한 방법 또는 프로세스에 의해 결정될 수 있다. 또한, 허용 기준은 본원에 개시된 임의의 허용 기준일 수 있다.
일부 실시양태에서, 허용 매개변수의 결정 결과 및 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부는 본원의 다른 곳에 개시된 바와 같은 세포 주문 식별자에 첨부될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제3 라벨은 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지(또는 충족하지 않는지)의 결정 결과에 기초하여 생성될 수 있다.
예를 들어, 2차 시점의 허용 매개변수가 2차 시점의 허용 기준을 충족하지 않는 경우, 제조 프로세스 동안 사용된 용기에는 2차 시점의 허용 매개변수가 2차 시점의 허용 기준을 충족하지 않는다는 정보 및 2차 시점의 허용 기준이 충족되지 않는 이유를 전달하는 "사유 코드"를 포함하는 제3 라벨이 생성된다.
추가로, 2차 시점에서 수득된 세포 치료제가 2차 시점에서 허용 기준을 충족하는 세포 치료제를 적절하게 수득하기 위해 2차 시점 이전의 1차 시점부터 재처리될 수 있는 것으로 결정된다면, 제3 라벨은, 예를 들어, 본원의 다른 곳에 개시되는 신규 또는 업데이트된 세포 주문 식별자와 같은 정보를 포함할 수 있다. 그러한 경우에, 제3 라벨은 2차 시점의 허용 기준의 이유 및 1차 시점으로부터 세포 치료제를 재처리하는 것이 적절한 이유에 관한 정보를 전달하기 위해 "사유 코드"를 추가로 포함할 수 있다.
다음으로, 하나 이상의 시점에서 허용 기준이 충족되는지 여부에 기초하여, 허용 결정 모듈(123)에서 결정된 바와 같이, 세포 치료제의 제조를 위한 제조 일정은 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같은 업데이트된 제조 일정을 생성하도록 적절하게 수정된다. 또한, 제조 시설에서 제조 슬롯의 가용성은 세포 치료제의 현재 제조 일정에 변경 사항이 있다면, 이를 반영하도록 적절하게 수정된다. 그 제조 시설에서 제조 슬롯의 변경되거나 업데이트된 가용성은 그 다음 컴퓨팅 장치에 통신될 수 있다. 또한, 환자 치료 이벤트의 예비 일정은 또한 업데이트된 제조 일정에 기초하여 수정될 수 있고, 환자 치료 이벤트의 업데이트된 일정은 컴퓨팅 장치에 통신될 수 있다.
세포 치료제의 제조는 그 다음 업데이트된 제조 일정에 따라 완료된다.
일부 실시양태에서, 허용 매개변수가 결정되는 복수의 시점 각각에 해당하는 제조 라벨이 생성된다. 각 시점의 제조 라벨은 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 업데이트된 정보를 포함할 수 있다. 업데이트된 정보는 해당 시점의 허용 매개변수 및/또는 허용 매개변수가 그 시점의 허용 기준을 충족하는지 여부를 포함할 수 있다.
또한, 일부 실시양태에서, 제조 프로세스를 제어하는 컨트롤러는 업데이트된 제조 라벨을 판독하고 후속 처리 단계를 결정하도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 2차 시점에서 QA 테스트 후 업데이트된 제조 라벨이 세포 치료제가 특정 허용 기준을 충족하지 않지만 세포 치료제가 1차 시점부터 재처리될 수 있다고 표시하는 경우, 컨트롤러는 제조 프로세스에 적절한 변경을 야기할 수 있다. 또한, 업데이트된 라벨의 정보를 기반으로 제조 일정, 제조 슬롯 가용성 및 환자 치료 이벤트 일정에 대한 적절한 변경도 이루어진다. 관련 기술의 기술자는 업데이트된 제조 라벨이 제조된 세포 치료제의 품질에 관한 정보 및 식별 연속성과 관리 연속성을 용이하게 하는 사유 코드 외에도, 세포 주문 식별자 및 환자-특이적 식별자를 포함할 수 있음을 이해할 것이다.
관련 기술의 기술자는 업데이트된 제조 라벨을 판독하여 수득되는 바와 같이, 제조 일정, 제조 슬롯의 가용성 및 환자 치료 이벤트 일정에 대한 변경에 관한 정보가 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스에 통신될 수 있어, 해당 컴퓨팅 장치가 해당 실체와 연관된 각 일정에 해당하는 변경을 수행할 수 있게 한다.
D. 환자 치료 이벤트와 함께 세포 치료제 제조의 공조
도 4a 및 4b는 본 개시내용의 실시양태에 따라 환자에 대한 TIL의 제조를 공조하기 위한 방법에 대한 흐름도를 보여준다. 일부 실시양태에서, 도 4a 및 도 4b에 예시된 방법은 전체적으로 도 3a에 도시된 시스템에서 구현되는 반면, 일부 실시양태에서, 도 4a 및 4b에 예시된 방법은 도 3a에 도시된 시스템 일부에 의해 구현된다. 일부 실시양태에서, 이벤트 스케줄러(120)는, 예를 들어, S305에서 병원측 인터페이스(110)로부터 환자에 대한 세포 치료제, 예를 들어, T-세포 확장을 위한 세포 주문 요청, 및 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자를 수신한다.
일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자 또는 대안적으로 세포 주문 식별자는 추적 모듈(112)보다는, 예를 들어, S310에서 이벤트 스케줄러(120)에 의해 생성된다.
세포 주문 요청은, 예를 들어, 환자 식별 정보, 다양한 환자 치료 이벤트에 대한 목표 날짜, 및/또는 최종 확장된 TIL 제조 제품에 대한 목표 매개변수와 같은 정보를 포함할 수 있다. 세포 주문 요청이 수신되면, 이벤트 스케줄러(120)는 환자-특이적 식별자에 해당하는 세포 주문 요청이 수신되었음을 나타내는 확인을 병원 측 인터페이스(110)에 전송할 수 있다. 환자-특이적 식별자가 이벤트 스케줄러(120)에 의해 생성되는 실시양태에서, 이벤트 스케줄러(120)는 환자에 대한 세포 주문 요청이 수신되었음을 나타내는 확인을 전송할 수 있고, 환자-특이적 식별자 또는 세포 주문 식별자를 병원측 인터페이스(110)에 제공할 수 있다. 또한, 이벤트 스케줄러(120)는 수신된 세포 주문 요청에 기초하여 환자 치료 이벤트의 목표 일정을 전송할 수 있다.
또한, 이벤트 스케줄러(120)는, 예를 들어, S315에서, 환자-특이적 식별자를 포함하는 개시 요청서를 병원측 인터페이스(110), 예를 들어, 임상 시설로 전송하여, 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위한 절차를 환자에 대해 수행하고 수득한 고형 종양을 제조 시설로 전달하기 위해 택배사 픽업 시간을 예약할 수 있다. 본원에서 논의되는 바와 같이, 절차는 환자로부터 종양의 일부를 추출하기 위한 종양 생검을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 이벤트 스케줄러(120)는 병원측 인터페이스(110)를 사용하여 직원으로부터 절차 날짜를 수신할 수 있다. 이에 응답하여, 이벤트 스케줄러(120)는 직원에게 공급 물품(예를 들어, 종양 절제 키트, 종양 운송 용기 또는 냉동 운송 용기)을 필요에 따라 주문하도록 촉구할 수 있고, 이를 환자-특이적 식별자와 연관지을 수 있다.
고형 종양을 수득하기 위한 절차가 수행되고, 고형 종양이, 예를 들어, S320에서 운송된 후, 그리고 일단 수득된 고형 종양이 제조 시설에서 수용되면, 일정관리 모듈(125)은, 예를 들어, S325에서, 다양한 환자 치료 이벤트뿐만 아니라 다양한 제조 이벤트를 동적으로 일정을 잡고, 각 이벤트를 환자-특이적 식별자와 연관짓는다. 일부 실시양태에서, 일정관리 모듈(125)은 수득한 고형 종양을 수용하기 전에, 예를 들어, 환자로부터 고형 종양을 수득하는 절차의 일정관리에 대한 정보를 병원측 인터페이스(110)로부터 수용한 즉시, 제조 이벤트 및 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 결정하고, 각 이벤트를 환자-특이적 식별자와 연관짓는다.
다양한 제조 이벤트에 대한 일정은 환자-특이적 식별자와 연관되며 다양한 제조 단계(예를 들어, 도 2a, 2b 또는 2c 및/또는 도 9에 도시된 단계 A-F)가 수행되는 해당 목표 날짜, 뿐만 아니라 TIL 제조 프로세스의 완료에 대한 해당 목표 날짜를 포함할 수 있다. 본원에서 논의된 바와 같이, 다양한 제조 단계의 목표 날짜는 수용한 종양의 크기, 주어진 단계를 개시하기 전의 세포 카운트, 주어진 단계의 종료 시 수치적 배수, 주어진 단계 동안 특정 수치적 배수를 달성하는데 필요한 일수, 및/또는 기타 요인과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다.
다양한 환자 치료 이벤트에 대한 일정은, 예를 들어, 목표 TIL 주입 날짜, 림프구제거 날짜, 입원 환자 입원 기간, IL-2 주입 요법에 대한 일정, 및/또는 기타 유사한 치료 관련 날짜를 포함할 수 있다. 본원에서 논의된 바와 같이, 환자 치료 이벤트에 대한 일정은 제조 이벤트에 대한 일정, 특히 TIL 제조 완료 날짜에 따라 달라진다. 다양한 환자 치료 이벤트에 대한 일정은 일부 실시양태에서 환자-특이적 식별자와 함께 병원측 인터페이스(110)로 전송될 수 있다.
일정관리 모듈(125)은 상이한 제조 단계의 진행 및 성공에 기초하여 환자 치료 이벤트에 대한 일정 뿐만 아니라 제조 이벤트에 대한 일정을 동적으로 변경하도록 구성된다. 예를 들어, 다른 단계에서 확장 세포 치료제와 연관된 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부에 따라, 후속 제조 단계가 개시되는 날짜가 변경될 필요가 있고, 이에 따라 목표 완료 날짜가 변경되고, 결과적으로, 환자 치료 이벤트의 날짜가, 예를 들어, 도 4b 또는 4c에 도시된 방법을 사용하여 변경될 필요가 있다.
허용 결정 모듈(123)은 확장 세포 치료제와 연관된 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정한다. 허용 매개변수로는 세포 카운트, 세포 생존율, 무균성, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, CD5 카운트, 인터페론 γ(INF-γ) 생산, 내독소 검정 결과, 그람 염색 검정 결과 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 허용 매개변수의 일부 또는 전부는 허용 매개변수가 측정되는 단계에 따라 허용 기준을 충족해야 할 수도 있다. 예를 들어, 1차 프라이밍 확장(1차 시점이라고도 지칭됨)의 종료 시, 예를 들어, 확장 개시로부터 11일차에, 허용 기준은 세포 카운트가 적어도 5 × 106 생존 세포이어야 하는 것일 수 있다. 다른 단계에서의 허용 기준은 또한 확장을 수행하는 데 사용되는 프로세스(예를 들어, Gen 2, Gen 3, Gen 3.1 등)에 따라 달라진다.
따라서, 허용 결정 모듈(123)은 허용 매개변수가 확장을 수행하기 위해 사용되는 프로세스에 따라 확장의 개시 이후에 하나보다 많은 상이한 시점에서 특정 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정할 수 있다. 다시 말해서, 허용 결정 모듈(123)은 다음 조치 과정을 결정하기 위해 각각 상이한 특정 시점에서 QA 테스트라고도 본원에서 지칭되는 품질 테스트를 수행하고, 일정관리 모듈(125)은 허용 결정 모듈(123)로부터 수득되는 QA 테스트의 결과에 기초하여 후속되는 제조 단계 및 환자 치료 이벤트를 동적으로 일정관리한다.
Gen 2, Gen 2 유사 및 Gen 3 프로세스에 대한 최종 제품을 테스트하기 위한 허용 매개변수 및 허용 기준의 한 예가 표 B에 제공된다.
표 B:
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도 4b를 참조하면, 한 실시양태에서, 세포 치료제의 확장 개시 후, 허용 결정 모듈(123)은, 예를 들어, S402에서, 1차 시점에서 확장된 세포 치료제가 1차 시점과 연관된 QA 테스트(예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 도시된 단계 B 이후)를 통과하는지 여부를 결정한다. 세포가 1차 시점, 예를 들어, S404에서 QA 테스트를 통과하지 못하는 것으로 결정 시, 허용 결정 모듈(123)은 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못한 것인지 여부를 결정한다. 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 예를 들어, S422에서, 사례를 잠재적 종결에 대해 재검토한다.
다른 한편, 세포가 오염 이외의 이유, 예를 들어, 낮은 세포 카운트 또는 낮은 생존율로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 일정관리 모듈(125)은 세포가 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라 진행 중인 단계를 일정 시간 동안 연장할 수 있고, 예를 들어, S408에서, 최종 수확물로부터의 결과를 재검토할 수 있다. 일부 실시양태에서, 모든 후속 제조 단계 및 환자 치료 이벤트는 일정 시간 동안 진행 중인 단계를 연장한 결과로서 다시 일정관리될 수 있다.
대안적으로, 일정관리 모듈(125)은 제조 프로세스 완료의 잠재적인 지연을 설명하거나, 제조 완료와 세포 치료제 주입 사이의 시간 지연을 허용하기 위해 제조된 세포 치료제의 잠재적인 극저온 동결을 설명할 수 있도록 환자 치료 이벤트만 다시 일정을 잡을 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 치료제는 환자의 T-세포를 포함한다는 것이 이해될 것이다. 일부 실시양태에서, 세포 치료제는 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함한다. 따라서, 본원에서의 논의는 간단함을 위해 세포 치료제를 T-세포 또는 TIL로서 상호교환적으로 지칭할 수 있다.
예를 들어, 일부 경우에, 세포 치료제는 1차 시점에 QA 테스트를 통과하지 못함에도 불구하고 최종 QA 테스트를 통과할 수 있다. 이러한 경우, 제조 이벤트 및 환자 치료 이벤트에 대한 이상적인 일정에서 벗어나, 불필요한 환자 치료를 피하기 위해 최종 QA 테스트가 수행될 때까지 림프구제거를 지연하는 것이 현명할 수 있다. 따라서, 세포가 1차 시점에서 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라, S418에서 환자 치료 이벤트의 일정이 환자 치료 이벤트에 대한 이상적인 일정에서 벗어날 필요가 있는지 여부가 결정된다. 환자 치료 이벤트의 일정이 이상적인 일정에서 벗어날 필요가 있다고 결정되면, 일정관리 모듈(125)은, 예를 들어 S420에서, 림프구제거 뿐만 아니라 후속적인 환자 치료 이벤트를 다시 일정관리(즉, 지연)할 수 있고, 추가로 선택적으로 제조 프로세스의 완료 후 극저온 동결 단계를 일정관리할 수 있다.
S402를 다시 참조하면, 세포가 1차 시점에 QA 테스트를 통과한다면, 제조 프로세스 또는 환자 치료 이벤트의 일정에 대한 변경이 필요하지 않을 수 있다. 허용 결정 모듈(123)은 그 다음, 예를 들어 S406에서, 2차 시점에서 확장된 T-세포가 2차 시점(예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 도시된 단계 C 또는 단계 D 이후)과 연관된 QA 테스트를 통과하는지 여부를 결정한다.
세포가 2차 시점에 QA 테스트를 통과하지 못한다면, 허용 결정 모듈(123)은, 예를 들어, S404에서, 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했는지 여부를 결정한다. 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 사례를, 예를 들어, S422에서, 잠재적 종료에 대해 재검토한다.
다른 한편, 세포가 오염 이외의 이유, 예를 들어, 낮은 세포 카운트 또는 낮은 생존율로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 일정관리 모듈(125)은 세포가 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라 진행 중인 단계를 일정 시간 동안 연장할 수 있고, 예를 들어, S408에서, 최종 수확물의 결과를 재검토할 수 있다. 일부 실시양태에서, 모든 후속 제조 단계 및 환자 치료 이벤트는 일정 시간 동안 진행 중인 단계를 연장한 결과로서 일정을 다시 잡을 수 있다.
대안적으로, 일정관리 모듈(125)은 제조 프로세스 완료의 잠재적인 지연을 설명하거나, 제조 완료와 TIL 주입 사이의 시간 지연을 허용하는 제조된 TIL의 잠재적인 극저온 동결을 설명하기 위해 환자 치료 이벤트만 다시 일정을 잡을 수 있다.
예를 들어, 일부 경우에, 세포는 2차 시점에 QA 테스트를 통과하지 못함에도 불구하고 최종 QA 테스트를 통과할 수 있다. 이러한 경우, 환자 치료 이벤트의 이상적인 사전결정된 일정(본원에서 골든 경로로서 지칭되기도 함)에서 벗어나, 불필요한 환자 치료를 피하기 위해 최종 QA 테스트가 수행될 때까지 림프구제거를 지연시키는 것이 현명할 수 있다. 따라서, 세포가 2차 시점에서 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라, 일정관리 모듈(125)은 예를 들어, S420에서, 림프구제거 뿐만 아니라 후속적인 환자 치료 이벤트를 다시 일정관리(즉, 지연)할 수 있고, 추가로 선택적으로 제조 프로세스의 완료 후 극저온 동결 단계를 일정관리할 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포가 1차 또는 2차 시점에서 QA 테스트에 실패한 경우, 환자-특이적 식별자는 세포가 각각의 시점에서 QA 테스트에 실패했다는 것을 식별하도록 업데이트될 수 있고, 병원측 인터페이스(110) 및 물류 인터페이스(130)는 환자(환자-특이적 식별자와 연관된)에 대한 환자 치료 이벤트가 취소되거나 지연되어야 할 가능성이 있음을 통지받는다. 환자 치료 이벤트가 예정된 일정(예를 들어, 골든 경로 일정)에서 벗어났고 환자 치료 이벤트가 다시 일정을 잡아야 하는 경우, 병원측 인터페이스(110) 및 물류 인터페이스(130)는 환자-특이적 식별자에 해당하는 일정이 업데이트되었음을 통지하며, 업데이트된 일정은 병원측 인터페이스(110) 및 물류 인터페이스(130)에 전한다.
이러한 통지를 통해 임상 시설 또는 병원은 환자 치료 이벤트에 대한 다양한 일정을 적절하게 조정할 수 있을 뿐만 아니라 적절한 직원의 가용성 및 각각의 환자 치료 이벤트에 필요한 시설 및 장비의 가용성에 관한 필요한 물류 배치를 할 수 있다. 통지는 추가로 병원 또는 임상 시설이 환자 치료 이벤트 일정의 변경을 환자에게 알리는 것을 용이하게 할 수 있다. 대안적으로, 이벤트 스케줄러(120) 및/또는 병원측 인터페이스(110)는 환자와 직접 통신하여 환자 치료 이벤트의 일정 변경을 환자에게 통지할 수 있고, 변경된 일정에 따라 환자 치료 이벤트를 배치하기 위해 환자가 병원 또는 임상 시설과 공조할 수 있게 한다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 지불 처리를 위한 적절한 조치가 취해질 수 있도록 업데이트된 일정을 보험 제공자에게 추가로 전할 수 있다.
유사하게, 통지는 물류 제공자(들)가 생물학적 물질을 취급하기에 적절한 직원의 가용성 및 적절한 운송 상자의 배치와 같이, 생물학적 물질의 운송 일정을 재조정하기 위해 필요한 배치를 할 수 있게 한다.
S406을 다시 참조하면, 세포가 2차 시점에서 QA 테스트를 통과한다면, 일정관리 모듈(125)은 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 유지할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 일정관리 모듈(125)은, 예를 들어, S410에서, 제조 프로세스가 아직 지연될 수 있거나, 또는 원하는 최종 제품을 산출할 수 없다는 낮지만 0이 아닌 확률이 있다는 통고와 함께 예정된 일정에 기초하여 림프구제거 치료가 환자에게 투여될 수 있음을 병원측 인터페이스(110)에 전할 수 있다. 이러한 통신은 도 4b에서 "위험한 상태의 림프구제거"로 지정된다. 이러한 상황에서 제조 프로세스 또는 환자 치료 이벤트의 일정은 변경되지 않는다.
그 다음, 허용 결정 모듈(123)은, 예를 들어, S412에서, 3차 시점에서 확장된 T-세포가 3차 시점(예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 도시된 단계 D 또는 단계 E 이후에)과 연관된 QA 테스트를 통과하는지 여부를 결정한다.
세포가 3차 시점에 대한 QA 테스트를 통과하면, 확장된 세포는 목표 TIL 주입 날짜에 제품을 출하할 준비가 된 것으로 간주한다. 이러한 경우에 일정관리 모듈(125)은, 예를 들어, S424에서 환자 치료 이벤트가 목표 일정으로 지속되어야 함을 병원측 인터페이스(110)에 통지한다. 즉, 일정은 변경되지 않는다.
한편, 세포가 3차 시점에 QA 테스트를 통과하지 못한다면, 세포가 3차 시점에 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라 확장된 세포가 주입을 위해 제공될 수 있는지 또는 치료가 종료될 수 있는지를 결정하기 위해 제품 영향 평가가, 예를 들어 S414에서, 수행된다(예를 들어, 치료를 투여하는 의사 또는 최고 의료 책임자에 의해). 제품 영향 평가 시, 예를 들어, S416에서, 사용가능한 제품으로 치료를 계속하는 것과 연관된 특정 위험이 있을 수 있다는 경고와 함께 치료를 진행할 수 있다고 결정되면, 확장된 세포는, 예를 들어, S424에서, 환자 치료 이벤트의 일정에 어떠한 변경 없이 출하가 승인된다.
도 4c를 참조하면, 한 실시양태에서, 세포 치료제의 확장이 개시된 후, 허용 결정 모듈(123)은, 예를 들어, S402에서, 1차 시점에 확장된 세포 치료제가 1차 시점(예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 제시된 단계 B 이후)과 연관된 QA 테스트를 통과하는지 여부를 결정한다. S404와 같은 1차 시점에서 세포가 QA 테스트를 통과하지 못하는 것으로 결정되면, 허용 결정 모듈(123)은 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했는지 여부를 결정한다. 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 사례를, 예를 들어, S422에서 잠재적 종료에 대해 재검토한다.
다른 한편, 세포가 오염 이외의 이유, 예를 들어, 낮은 세포 카운트 또는 낮은 생존율로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 일정관리 모듈(125)은 세포가 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라 진행 중인 단계를 일정 시간 동안 연장할 수 있고, 예를 들어, S408에서, 최종 수확물의 결과를 재검토할 수 있다. 일부 실시양태에서, 모든 후속 제조 단계 및 환자 치료 이벤트는 일정 시간 동안 진행 중인 단계를 연장한 결과로서 일정을 다시 잡을 수 있다.
S402를 다시 참조하면, 세포가 1차 시점에서 QA 테스트를 통과한다면, 제조 프로세스 또는 환자 치료 이벤트의 일정에 변경이 이루어지지 않는다. 허용 결정 모듈(123)은 그 다음, 예를 들어 S406에서, 2차 시점에서 확장된 T-세포가 2차 시점(예를 들어, 도 2a 및/또는 도 9에 도시된 단계 C 또는 단계 D 이후)과 연관된 QA 테스트를 통과하는지 여부를 결정한다.
세포가 2차 시점에서 QA 테스트를 통과하지 못한다면, 허용 결정 모듈(123)은, 예를 들어, S404'에서 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했는지 여부를 결정한다. 세포가 오염으로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 사례는, 예를 들어, S422에서 잠재적 종료에 대해 재검토된다.
다른 한편, 세포가 오염 이외의 이유, 예를 들어, 낮은 세포 카운트 또는 낮은 생존율로 인해 QA 테스트를 통과하지 못했다면, 허용 결정 모듈(123)은, 예를 들어, S458에서, 2차 시점에 수득된 세포 치료제가 1차 시점부터 세포 제조 프로세스를 다시 수행할 수 있는 충분한 품질을 가지고 있어 2차 시점에서의 허용 기준을 충족하는 허용 매개변수를 가진 2차 시점의 세포 치료제를 초래하는지 여부를 결정한다. 이러한 결정은 2차 시점에 수득한 세포 치료제의 허용 매개변수를 기반으로 할 수 있다. 예로써, 2차 시점의 허용 매개변수가 총 생존 세포 카운트를 제외한 2차 시점의 모든 허용 기준을 충족한다면, 필요한 생존 세포 카운트를 수득하기 위해 1차 시점과 2차 시점 사이에 세포 제조 프로세스를 다시 수행하는 것이 실행 가능할 수 있다.
1차 시점부터 세포 제조 프로세스를 다시 수행하는 것이 실행 가능하지 않은 것으로 결정되면, 사례를, 예를 들어, S422에서 잠재적 종료에 대해 재검토한다.
한편, 1차 시점과 2차 시점 사이에 세포 제조 프로세스의 재수행이 실행 가능한 것으로 결정되면, 일정관리 모듈(125)은, 예를 들어, S460에서, 1차 시점과 2차 시점 사이에서 프로세스를 재수행한 후 세포 제조 프로세스의 완료 시간을 추정한다. 1차 시점과 2차 시점 사이에 세포 제조 프로세스를 재수행하는 데 필요한 시간은 2차 시점에서 수득한 세포 치료제의 허용 매개변수에 기초하여 추정할 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 세포 치료제를 제조하기 위해 1차 시점부터 프로세스를 재수행하는 것을 포함하는 세포 확장 과정을 완료하는 데 필요한 시간은 2차 시점에서 수득한 세포 치료제의 허용 매개변수에 따라 달라질 수 있다.
그 다음, 일정관리 모듈(125)은 2차 시점에서 수득한 세포 치료제의 허용 매개변수에 기초하여 1차 시점부터 세포 제조 프로세스를 재수행한 결과로서 모든 후속 제조 단계 및 환자 치료 이벤트의 일정을 다시 잡을 수 있다. 예를 들어, 일정관리 모듈(125)은 제조 프로세스의 완료 지연을 설명하거나, 제조 완료와 TIL 주입 사이의 시간 지연을 허용하기 위해 제조된 TIL의 잠재적인 극저온 동결을 설명하기 위해 환자 치료 이벤트의 일정을 다시 잡을 수 있다.
한편, 2차 시점에서 수득한 세포 치료제의 허용 매개변수가 모든 허용 기준을 충족하는 경우, 세포 제조 프로세스는 원래 예정대로 계속될 수 있다.
관련 기술의 기술자는 이러한 재수행이 실행 가능한 것으로 결정되면 1차 시점부터 세포 제조 프로세스를 재수행한 후에도 반복된 2차 시점(본원에서 대안적인 2차 시점이라고도 함)에서 수득된 세포 치료제의 허용 매개변수가 결정된다는 것을 이해할 것이다. 그런 다음, 반복된 2차 시점(세포 제조 프로세스의 원래 2차 시점과 다를 수 있음)에서 허용 매개변수가 2차 시점 이후에 세포 제조 프로세스를 계속하기 전에 2차 시점에 대한 허용 기준을 충족하는지 여부를 다시 결정한다.
계속된 프로세스는 그 다음 일부 실시양태에서 도 4b에 도시된 것과 동일한 경로 "B"를 따른다. 예를 들어, 일부 경우에, 세포는 2차 시점에서 QA 테스트를 통과하지 못했음에도 불구하고 최종 QA 테스트를 통과할 수 있다. 이러한 경우에는 환자 치료 이벤트의 이상적인 사전결정된 일정(본원에서 황금 경로라고도 함)에서 벗어나, 불필요한 환자 치료를 피하기 위해 최종 QA 테스트가 수행될 때까지 림프구제거를 지연시키는 것이 현명할 수 있다. 따라서, 세포가 2차 시점에서 QA 테스트를 통과하지 못한 이유에 따라, 일정관리 모듈(125)은, 예를 들어, S420에서 림프구제거 및 후속 환자 치료 이벤트의 일정을 다시 잡고(즉, 지연시킴), 추가로 제조 프로세스의 완료 후 극저온 동결 단계의 추가 일정을 잡을 수 있다.
관련 기술의 기술자는 세포 제조 프로세스가 허용 매개변수를 결정하기 위한 여러 시점을 갖는 경우, 그리고 이러한 허용 매개변수가 해당 시점의 허용 기준을 충족하는지 여부에 따라, 직전 시점부터 세포 제조 프로세스의 단계를 재수행하는 것이 실행 가능할 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, "1차 시점" 및 "2차 시점"이라는 용어는 허용 매개변수가 결정되는 수치적으로 1차 및 수치적으로 2차 시점을 반드시 설명하는 것은 아니다. 대신, "1차 시점"은 후속 시점의 허용 매개변수가 그 시점의 허용 기준을 충족하지 않는다면, 세포 제조 프로세스의 단계를 재수행하는 것이 실행 가능할 수 있는 세포 제조 프로세스의 시점을 지칭한다. 예를 들어, 1C-프로세스(도 6 참조)에서, 1차 및 2차 시점은 각각 27일 및 30일, 각각 30일 및 36일, 또는 각각 36일 및 43일일 수 있다. 유사하게, 2A-프로세스(도 6 참조)에서, 1차 및 2차 시점은 각각 11일 및 16일, 또는 각각 16일 및 22일일 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포가 1차 또는 2차 시점에서 QA 테스트에 실패한 경우, 세포가 각각의 시점에서 QA 테스트에 실패했다는 것을 식별하도록 환자-특이적 식별자는 업데이트될 수 있고, 병원측 인터페이스(110) 및 물류 인터페이스(130)는 환자(환자-특이적 식별자와 연관된)에 대한 환자 치료 이벤트가 취소되거나 지연되어야 할 가능성이 있다는 통지를 받는다.
1차 시점에서 세포 제조 프로세스의 재수행이 실행 가능한 경우, 세포 치료제의 제조 일정은 이상적인 일정에서 벗어날 수 있기 때문에, 환자 치료 이벤트의 일정도 사전 결정된 일정(예를 들어, 황금 경로 일정)에서 벗어난다. 이에 따라, 일정관리 모듈은 환자 치료 이벤트의 일정을 다시 잡고, 병원측 인터페이스(110) 및 물류 인터페이스(130)는 환자-특이적 식별자에 해당하는 일정이 업데이트되어 있다는 통지를 받는다. 업데이트된 일정은 병원측 인터페이스(110) 및 물류 인터페이스(130)에 전한다.
본원에서 논의된 바와 같이, 일정 변경에 대한 이러한 통지는 임상 시설 또는 병원이 환자 치료 이벤트에 대한 다양한 일정을 적절하게 조정할 수 있게 한다. 또한, 적절한 인력의 가용성 및 각각의 환자 치료 이벤트에 필요한 시설 및 장비의 가용성과 관련하여 필요한 물류 배치가 이루어질 수 있다. 통지는 병원 또는 임상 시설이 환자 치료 이벤트 일정의 변경을 환자에게 알리는 것을 더욱 용이하게 할 수 있다. 대안적으로, 이벤트 스케줄러(120) 및/또는 병원측 인터페이스(110)는 환자와 직접 통신하여 환자 치료 이벤트의 일정 변경을 환자에게 통지할 수 있고 변경된 일정에 따라 환자 치료 이벤트를 배치하기 위해 환자가 병원 또는 임상 시설과 공조할 수 있게 할 수 있다.
일부 실시양태에서, 병원측 인터페이스(110)는 지불 처리를 위한 적절한 조치가 취해질 수 있도록 업데이트된 일정을 보험 제공자에게 추가로 전할 수 있다.
유사하게, 통지는 물류 제공자(들)가, 예를 들어, 적절한 운송 상자의 배치 및 생물학적 물질을 취급할 적절한 인력의 가용성과 같은 생물학적 물질의 운송 일정을 다시 잡기 위해 필요한 배치를 할 수 있게 한다.
일부 실시양태에서, 치료가 종료되지 않는 한, 일정관리 모듈(125)은 물류 인터페이스(130)와 통신하여 다양한 시점에서의 QA 테스트의 결과에 기초하여 결정된 완료 날짜에 기초하여 픽업 주문을 제공한다. 그 다음, 물류 인터페이스(130)는 확장된 TIL을 적시에 수집하고 후속 환자 치료(예를 들어, 주입)를 위해 병원 또는 임상 시설로 운송하기에 적절한 배치를 하도록 물류 제공자(도시되지 않음)와 통신한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 물류 제공자는 예정된 환자 치료 이벤트가 있기 몇 일 전에 생물학적 샘플을 취급하기 위한 특수 용기를 병원이나 임상 시설로 운송해야 할 수도 있다.
유사하게, 확장된 세포가 QA 테스트를 통과한 것으로 결정되면, 일정관리 모듈(125)은 예정된 완료 날짜 및 환자 치료 이벤트의 일정(즉, 업데이트된 일정)을 병원측 인터페이스(110)에 전한다. 한편, 치료가 종료되어야 하는 것으로 결정되면, 일정관리 모듈(125)은 치료가 종료되어야 함을 병원측 인터페이스(110)와 통신한다.
일부 실시양태에서, 환자 치료 이벤트를 재일정관리할 때, 환자 치료 이벤트에 대한 업데이트된 일정은 연관된 환자-특이적 식별자와 함께 병원측 인터페이스(110)로 전송된다.
일부 실시양태에서, 세포 주문 식별자와 환자-특이적 식별자 간의 연관성은 1차 시점부터 세포 제조 프로세스의 단계를 재수행하는 것이 실행 가능한 것으로 결정된다면 업데이트될 수 있다. 예를 들어, 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실행 가능하다고 결정되면, 세포 주문 식별자는 환자-특이적 식별자와 분리된다. 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자가 생성될 수 있고 환자-특이적 식별자는 새로운 세포 주문 식별자와 연관된다. 새로운 세포 주문 식별자는 일부 실시양태에서 2차 시점에 결정된 허용 매개변수에 기초하여 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 주문 식별자는 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 결정되는 각 시점에 해당하는 필드를 포함할 수 있다. 또한, 일부 실시양태에서, 세포 주문 식별자는 또한, 예를 들어, 어떤 허용 매개변수가 허용 기준 및 허용 매개변수의 값을 충족하는지를 포함하여, 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부에 대한 결정의 결과를 포함할 수도 있다.
일부 실시양태에서, 환자-특이적 식별자, 새로운 세포 주문 식별자 및 세포 치료제의 확장 완료 추정 시간은 병원측 인터페이스가 세포 치료제를 추적하고 세포 치료제를 환자와 연관지을 수 있도록 병원측 인터페이스로 전송된다.
세포 주문 식별자에 포함된 다양한 필드는 일정관리 모듈(125)로 하여금 다양한 시점에서 생성된 업데이트된 또는 새로운 세포 주문 식별자에 기초하여 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트 뿐만 아니라 환자 치료 이벤트에 대한 새로운 일정을 결정할 수 있게 할 수 있다. 그런 다음 새로운 일정은 연관된 환자-특이적 식별자와 함께 물류 인터페이스로 전송된다. 환자-특이적 식별자 및 업데이트된 또는 새로운 세포 주문 식별자는 또한 일부 실시양태에서 새로운 일정과 함께 물류 인터페이스로 전송되어 세포 치료제에 대한 관리 연속성 및 신원 연속성을 유지할 수 있도록 한다.
일부 실시양태에서, 예를 들어, 2차 시점에서의 허용 매개변수가 허용 기준에 대한 특정 임계값을 충족하지 않기 때문에 세포 제조 프로세스의 단계를 재수행하는 것이 실행 가능하지 않은 것으로 결정되면, 2차 시점 이후의 환자 치료는 취소될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 환자 치료의 취소는 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스에 전한다. 일부 실시양태에서, 세포 제조 프로세스의 단계를 재수행하는 것이 실행 가능하지 않다고 결정되면 확장된 세포 치료제는 파괴될 수 있다. 예를 들어, 세포 제조 프로세스의 단계가 재수행될 수 없다면 생존가능한 확장 세포 치료제를 수득하는 것이 불가능할 수 있는 경우, 세포 치료제의 주입도 불가능해진다. 따라서, 2차 시점 이후에 환자 치료 이벤트를 계속하는 것이 환자에게 해로울 수 있다(예를 들어, 건강 결과 측면에서 또는 재정적 결과 측면에서 또는 둘 다). 또한, 2차 시점에 확장된 세포 치료제가 더이상 사용될 수 없는 것으로 2차 시점에 결정된 허용 매개변수에 기초하여 결정되면(예를 들어, 2차 시점의 세포 치료제가 오염되거나 다른 특정 허용 기준을 충족하지 않는다면), 세포 치료제는 파괴될 수 있다. 이러한 경우, 세포 주문 식별자는 환자-특이적 식별자와 분리된다.
E. 제조 시설 간의 제조 슬롯의 조정
본 개시내용의 추가 측면에서, 환자에 대한 세포 치료제를 제조하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자에 대한 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청을 수신하는 것을 포함한다. 세포 주문 요청은 임상 시설과 연관된 컴퓨팅 장치에서 수신될 수 있다. 세포 주문 요청은 예를 들어 병원측 인터페이스(110)를 통해 수신될 수 있다. 일부 실시양태에서, 컴퓨팅 장치는 세포 주문 요청을 수신할 때 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 식별자를 생성하고, 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 식별자를 세포 주문 요청과 연관지을 수 있다.
세포 주문 요청 외에도, 컴퓨팅 장치는 세포 치료제를 제조하기 위한 복수의 제조 시설에서 제조 슬롯을 수신할 수 있다. 예를 들어, 컴퓨팅 장치는 복수의 제조 시설과, 예를 들어, 인터넷을 통해 연결된 컴퓨터 서브시스템에 통신적으로 연결될 수 있어, 컴퓨팅 장치에 의한 질의에 대한 응답으로 컴퓨팅 장치는 제조 슬롯에 관한 정보를 수신할 수 있다. 각 제조 시설의 제조 슬롯은 해당 제조 시설에서의 장비 및 직원의 가용성을 표시하여, 제조 시설이 세포 주문 요청에 따라 세포 치료제를 제조할 수 있도록 할 수 있다.
컴퓨팅 장치는 세포 치료제로 환자를 치료하기 위한 환자 치료 이벤트의 예비 일정을 추가로 수신할 수 있다. 예비 일정은 세포 치료제가 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같은 제조 프로세스 동안 각 제조 단계에서 QA 기준을 충족한다는 가정하에 세포 치료제를 제조하는 이상적인 일정에 기초하여 결정될 수 있다.
세포 주문 요청, 제조 슬롯 및 환자 치료 이벤트의 예비 일정을 수신하면, 컴퓨팅 장치는 일정관리 사용자 인터페이스에서 환자 치료 이벤트의 예비 일정에 기초하여 세포 치료제를 제조하기 위한 복수의 가용성 제조 슬롯을 결정하고 디스플레이할 수 있다. 가용성 제조 슬롯은, 예를 들어, 임상 시설의 위치, 각 제조 시설의 위치, 각 제조 시설과 임상 시설 간에 세포 치료제를 운송하기 위한 물류 제공자의 가용성, 환자 치료 이벤트와 연관된 필요한 치료 절차를 수행하기 위한 임상 시설에서의 임상 직원의 가용성, 및 각 위치에서 세포 치료제의 도착 및/또는 사용 시기에 영향을 미칠 수 있는 임의의 기타 요인과 같은 요인에 기초하여 결정된다.
가용성 제조 슬롯 중 하나는 그 다음 컴퓨팅 장치의 운영자에 의해 또는 컴퓨팅 장치에 의해 자동적으로 선택된다. 가용성 제조 슬롯이 선택되면, 고형 종양은 적절한 절차를 수행하여, 예를 들어 의료 시설에서 환자로부터 수득될 수 있다. 절차는 예비 일정에 따라, 그리고 각 제조 시설에 대한 고형 종양의 운송 시기 및 물류 제공자의 가용성을 고려하여 가용성 제조 슬롯에 기초하여 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 컴퓨팅 장치는 고형 종양과 연관될 1차 운송업체 라벨(예를 들어, 도 3h의 1열 참조)의 인쇄를 개시할 수 있다. 1차 운송업체 라벨은 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 식별자를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1차 라벨은 임상 시설, 선택된 제조 시설 및 물류 제공자와 관련된 정보를 추가로 포함할 수 있다. 추가적으로, 1차 제품 라벨(예를 들어, 도 3h의 2열 참조)과 연관된다. 1차 제품 라벨의 예는 도 3g에 예시되어 있다.
그런 다음, 고형 종양은 이용 가능한 제조 슬롯에 따라 선택된 제조 시설로 전달된다. 관련 기술의 기술자는 고형 종양이 살아있는 세포를 포함하기 때문에 선택된 제조 시설에 고형 종양이 도착하는 시간이 제조 단계가 허용 시간대에 개시될 수 있도록 제조 슬롯의 가용성과 신중하게 공조되어야 한다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 임상 시설로부터 선택된 제조 슬롯으로 고형 종양의 전달은 물류 제공자의 가용성, 뿐만 아니라 이러한 전달에 영향을 미칠 수 있는 기타 요인에 기초하여 신중하게 공조되어야 한다. 예를 들어, 일부 경우에 예상될 수 있는 날씨 관련 지연 또는 교통 지연이 있을 수 있어, 전달 일정은 이에 따라 조정될 수 있다. 다른 경우에는 전달 지연이 예측될 수 없을 수 있다. 그러나, 이러한 경우에도 임상 시설로부터 선택된 제조 시설로의 고형 종양의 전달은 다른 적절한 방식으로 공조될 수 있다.
F. 종양 조달 프로토콜
도 3a를 다시 참조하면, 시스템(300)의 병원측 인터페이스는 임상 시설의 직원이 소정의 프로토콜에 따라 환자로부터 고형 종양을 수득하고 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위한 절차와 관련된 정보를 입력할 수 있게 하는 종양 조달 모듈(114)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조달 모듈(114)은 환자로부터 고형 종양(또는 이의 단편)을 수득하고 이를 제조 시설로 수송하기 위해 준비하는 프로세스 동안 적절한 절차를 따르도록 보장하기 위해 임상 시설의 직원에 의해 사용되는 종양 조달 양식을 포함한다. 도 3k-3p는 본 개시내용의 일부 실시양태에 따른 종양 조달 양식의 대표적인 스크린샷이다. 종양 조달 양식은 일부 실시양태에서 환자로부터 종양을 수득하기 위한 기술자가 수행하는 절차와 관련된 정보를 입력할 것를 요구할 수 있다. 입력된 정보는 필요한 경우 사후 검사를 위해 배취 기록을 업데이트하는데 사용될 수 있다.
더욱이, 배취 기록에 포함된 정보는 시스템 전체에서 액세스 가능하기 때문에(적절한 허가 하에), 종양을 수득하기 위해 따르는 프로세스와 관련된 정보는 제조 시설의 직원도 이용 가능하다. 일부 실시양태에서, 제조 시설의 직원은 제조 시설에서 수용한 생물학적 물질이 추가 처리에 적합한 것임을 보장하기 위한 품질 관리 조치로서 종양을 수득하기 위한 프로세스와 관련된 정보에 액세스할 수 있다.
일부 실시양태에서, 종양 조달 양식은 프로세스의 후속 단계로 기술자가 진행할 수 있기 전에 특정 기준이 충족될 것을 요구하는 스마트 양식 특징을 포함한다. 예를 들어, 기술자는 프로세스 동안 사용되는 세포 배양 배지와 관련된 정보, 예컨대 만료 날짜를 입력해야 할 필요가 있을 수 있고, 만료 날짜가 현재 날짜보다 이전이라면, 종양 조달 모듈(114)은 기술자에게 경고할 수 있다. 또한, 종양 조달 모듈(114)은 기술자가 프로세스와 관련된 임의의 추가 정보를 입력하는 것을 허용하지 않아 기술자가 프로세스를 중단하도록 할 수 있다.
유사하게, 종양 조달 양식은 후속 단계 또는 절차와 관련된 정보의 입력을 가능하게 하기 전에 기술자가 특정 단계 또는 절차를 수행하도록 요구할 수 있다. 따라서, 조달 모듈(114)은 기술자가 특정 단계를 누락하거나 건너뛰지 않고 특정 프로토콜을 따를 것을 요구한다.
일부 실시양태에서, 조달 모듈(114)은 수득된 종양을 제조 시설로의 수송을 위해 택배사에 출하할 수 있기 전에 종양 조달 양식이 검증되는 것을 요구할 수 있다. 검증 요구 사항은 종양을 수득할 때 적절한 프로토콜과 절차를 따르도록 보장하기 위한 안전 장치 역할을 한다. 일부 실시양태에서, 조달 모듈(114)은 종양 조달 양식을 검증하는 사람이 종양 조달 양식에 정보를 입력하는 사람과 동일하지 않을 것을 요구할 수 있다. 이러한 검증 요구 사항은 또한 적절한 규제 요구 사항을 준수하도록 보장한다.
G. 환자 지원 서비스
본 개시내용의 실시양태는 여행, 건강 관리, 건강 보험, 상환, 및 기타 치료 관련 서비스를 지원하기 위해 환자 또는 환자의 대리인(본원에서 총칭하여 환자라고 함)과 인터페이스하는 환자 지원 서비스를 가능하게 하기 위해 추가로 조작가능하다. 환자 지원 서비스는 일부 실시양태에서 제조 프로세스 및 COC/COI 프로세스에 액세스(적절한 허가 하에)할 수 있는 페르소나 및 통신 인터페이스와 인터페이스할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 페르소나라는 용어는 사용자 유형을 지칭한다. 주어진 페르소나는 시스템 및 시스템 내 정보에 대해 특정 수준의 액세스 권한을 부여받고 특정 기능에 액세스할 수 있다. 시스템 내의 페르소나는 커뮤니티 페르소나, 조직 조달 페르소나, 제조업체 페르소나, 환자 지원 페르소나, 환자 페르소나 및 의료 시스템 사용자 페르소나를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
커뮤니티 페르소나는 환자에게 치료 절차를 제공하는 센터의 직원이 액세스할 수 있는 커뮤니티 사용자에 관한 것이다. 커뮤니티 페르소나의 사용자는 예를 들어 세포 요법 공조자, 골수 이식 간호사, 병원 청구 부서 등을 포함할 수 있다. 커뮤니티 페르소나의 사용자와 연관된 기능에는 새 환자 등록, 환자 등록 데이터 업데이트, 환자에 대한 TIL 주문 요청 생성 및 제출, 절제 날짜 예약 또는 변경, 골든 경로 날짜 보기, 최종 제품 배송 날짜 보기, 병원 구매 주문 업로드, 환자 동의서 업로드, 환자 지원 옵션에 환자 등록, 간병인 기록 보기 및 업데이트, 승인을 위한 종양 조달 양식 작성 및 제출, 종양 조달 양식 승인, 종양 조달 양식 인쇄, 종양 조달 양식 업로드, 및 배지 병 및 종양 운송업체 라벨 인쇄를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
제조업체 페르소나와 연관된 사용자는 종양 수용 직원, 품질 관리 직원, 제조 프로세스 직원 및 최종 제품 포장 직원을 포함한다. 제조업체 페르소나와 연관된 기능으로는 로트 번호 입력, 사용가능하고 예약된 제조 슬롯 보기, 진행 중인, 최종 제품 및 운송 라벨의 인쇄 및 스캐닝을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
종양 조달 페르소나와 연관된 사용자는 예를 들어 외과의사 및 골수 이식 간호사를 포함한다. 종양 조달 페르소나와 연관된 기능으로는, 종양 조달 양식 작성, 승인을 위한 종양 조달 양식 제출, 종양 조달 양식 승인, 종양 조달 양식 인쇄 및 종양 조달 양식 업로드를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다.
환자 지원 페르소나의 사용자는 환자 지원 요원, 환자 상담원, 병원 청구서, 병원 보험 관리자 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 환자 지원 페르소나와 연관된 기능으로는, 환자 보조 서비스 사례 보기, 이 사례에 파일 업로드, 사례에 주석 달기, 사례 관리자에게 사례 전달하기 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
시스템의 일부 실시양태에서, 특정 유형의 정보는 특정 페르소나에 액세스 가능하다. 일부 실시양태에서, 정보는 다른 유형의 기능을 수행할 때가 아니라 특정 유형의 기능을 수행할 때만 특정 페르소나의 사용자에게 액세스가능할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서 COC/COI 및 제조 프로세스 정보는 환자 지원 페르소나를 통해 병원 청구서 및/또는 병원 보험 관리자에게 액세스 가능하지만, 환자 상담원에게는 보이지 않을 수 있다. 일부 실시양태에서, 제조 및 COC/COI 정보는 예를 들어 환자 치료 이벤트 일정관리하기, 일정관리 프로세스를 통해 환자 보조하기 및/또는 환자 치료 이벤트를 위한 수송을 통해 환자 보조하기의 기능을 수행하는 환자 지원 직원에게 보일 수는 있으나, 편집은 불가능할 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 환자의 종양으로부터 수득된 세포 집단을 세포 치료제로 확장함으로써 세포 치료제를 제조하는 방법은 다음을 포함할 수 있다:
환자에 대한 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청에 기초하여 제조 시설에서 환자로부터 세포 집단을 수용하는 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자를 생성하는 단계;
세포 치료제를 제조하기 위해 다음을 포함하는 프로세스를 개시하는 단계:
제조 시설에서 세포 집단을 수용한 후, 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 일정관리하기,
세포 확장 기술을 사용하여 세포 집단의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을 개시하고, 1차 시점 및 1차 시점에 이은 2차 시점에서 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하기,
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 해당 시점과 연관된 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기,
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 1차 시점에서 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 2차 시점까지 세포 확장 기술을 사용하여 수득한 세포 치료제 중 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을 계속하기, 및
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 2차 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로:
세포 확장 기술을 사용하여 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 2차 시점에서의 허용 매개변수에 기초하여 1차 시점부터 실현가능한지 여부를 결정하기,
재수행이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로, 세포 확장 기술을 사용하여 2차 시점에서 수득한 세포 치료제의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을, 세포 치료제를 수득하기 위한 1차 시점부터 재수행하기,
컴퓨팅 장치에 의해, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제 확장을 재수행한 후 세포 치료제 확장의 완료 시간을 추정하기, 및
컴퓨팅 장치에 의해, 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 1차 시점부터 세포 치료제의 후속 확장을 완료하기,
여기서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 세포 치료제의 확장 완료의 추정된 시간 및 확장된 세포 치료제를 환자에 주입하기 이전 또는 이후에 환자 치료 이벤트의 타이밍에 기초하여 수행됨, 및
환자 지원 서비스, 예를 들어 여행, 건강 관리, 건강 보험, 상환 및 기타 치료 관련 서비스에 대한 지원을 제공하기.
VI. 추가 고려 사항
상기에 제시된 실시예는 관련 기술의 기술자에게 본 발명의 조성물, 시스템 및 방법의 실시양태를 만들고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 하기 위해 제공되며, 발명자들이 자신의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하려고 의도된 것이 아니다. 관련 기술의 기술자에게 자명한 본 발명을 수행하기 위한 전술한 방식의 수정은 다음 청구범위의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 명세서에 언급된 모든 특허 및 간행물은 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련자의 기술 수준을 나타낸다.
모든 표제 및 섹션 지정은 명확성과 참조 목적으로만 사용되며 어떤 식으로든 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 예를 들어, 관련 기술의 기술자는 본원에 기술된 본 발명의 사상 및 범주에 따라 적절한 경우, 상이한 표제 및 섹션의 다양한 측면을 조합한 유용성을 인식할 것이다.
본원에 인용된 모든 참고 문헌은 각각의 개별 간행물 또는 특허 또는 특허 출원이 모든 목적 면에서 그 전체가 참고로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그들 전체가 본원에 참고로 포함된다.
관련 기술의 기술자에게 자명한 바와 같이, 본 출원의 많은 수정 및 변형이 그 사상 및 범주에서 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 본원에 설명된 특정 실시양태 및 실시예는 단지 예로서 제공되며, 그 적용은 청구범위가 부여된 균등물의 전체 범위와 함께 첨부된 청구범위의 표현 방식에 의해서만 제한되어야 한다.
본 개시내용의 측면들의 다양한 예들은 편의를 위해 번호가 매겨진 조항(1, 2, 3 등)로서 기술된다. 이는 예로서 제공된 것이지, 대상 기술을 제한하지 않는다. 도면 및 참조 번호의 식별은 단지 예로서 이하에 제공되며, 조항은 이러한 식별에 의해 제한되지 않는다.
조항 1. 환자 유래의 종양에서 수득한 세포 집단을 세포 치료제로 확장시켜 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
환자에 대한 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청에 기초하여 제조 시설에서 환자 유래 세포 집단을 수용하는 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자를 생성하는 단계;
세포 치료제를 제조하기 위해 하기를 포함하는 프로세스를 개시하는 단계:
제조 시설에서 세포 집단을 수용한 후, 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 일정관리하기,
세포 확장 기술을 사용하여 세포 집단의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을 개시하고, 1차 시점 및 1차 시점에 이은 2차 시점에서 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하기,
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 해당 시점과 연관된 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기,
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 1차 시점에서 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 2차 시점까지 세포 확장 기술을 사용하여 수득한 세포 치료제 중 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을 계속하기, 및
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 2차 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로:
세포 확장 기술을 사용하여 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 2차 시점에서의 허용 매개변수에 기초하여 1차 시점부터 실현가능한지 여부를 결정하기,
재수행이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로, 세포 확장 기술을 사용하여 2차 시점에서 수득한 세포 치료제의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을, 세포 치료제를 수득하기 위한 1차 시점부터 재수행하기,
컴퓨팅 장치에 의해, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제 확장을 재수행한 후 세포 치료제 확장의 완료 시간을 추정하기, 및
컴퓨팅 장치에 의해, 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 1차 시점부터 세포 치료제의 후속 확장을 완료하기,
여기서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 세포 치료제의 확장 완료의 추정된 시간 및 확장된 세포 치료제를 환자에게 주입하기 이전 또는 이후에 환자 치료 이벤트의 타이밍에 기초하여 수행되는 것인 단계를 포함하는, 방법.
조항 2. 조항 1에 있어서, 세포 치료제가 T-세포를 포함하는 방법.
조항 3. 조항 1에 있어서, 세포 치료제가 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함하는 방법.
조항 4. 조항 1에 있어서, 환자 치료 이벤트가 입원 환자 입원 기간, 절제 날짜, 림프구제거 날짜, 환자에게 세포 치료제를 주입하기 위한 주입 날짜 및 IL-2 치료 날짜 중 하나 이상을 포함하는 방법.
조항 5. 조항 1에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기는 수득한 세포 치료제의 확장을 개시한 후 복수의 시점에서 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 것을 포함하고, 복수의 시점은 1차 시점 및 2차 시점을 포함하는 것인, 방법.
조항 6. 조항 5에 있어서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 임의의 복수의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 것을 포함하는 방법.
조항 7. 조항 5에 있어서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 오염 때문에 임의의 복수의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 환자 치료 이벤트를 종료하는 것을 포함하는 방법.
조항 8. 조항 5에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 오염으로 인해 임의의 복수의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 후속되는 세포 치료제의 확장을 종료하는 것인 방법.
조항 9. 조항 8에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하기가 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과, 및 그람 염색 검정 결과의 결정 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
조항 10. 조항 9에 있어서, 세포 확장 기술은 급속 확장 단계를 포함하고,추가로 하기를 포함하는 방법:
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 급속 확장 단계 이전에 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기; 및
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 확장된 세포 치료제의 제조 완료 이전 날짜로 림프구제거 날짜를 예정하고, 확장된 세포 치료제의 제조를 완료한 다음 날짜로 주입 날짜를 예정하며, 주입 날짜 이후에 IL-2 치료 날짜를 예정하기.
조항 11. 조항 1에 있어서, 세포 확장 기술은 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
조항 12. 조항 1에 있어서, 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행한 후 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 것이 2차 시점의 허용 매개변수 및 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는데 사용된 세포 집단과 연관된 허용 매개변수 중 하나 또는 둘 모두에 기초하여 1차 시점부터 확장 프로세스를 완료하는데 필요한 시간을 결정하는 것을 포함하는, 방법.
조항 13. 조항 1에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 방법이 세포 주문 요청을 수신한 즉시, 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 식별자 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 확인을, 환자와 연관된 세포 주문 요청이 수신된 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 포함하는, 방법.
조항 14. 조항 13에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 세포 확장 기술 및 세포 주문 요청이 수신된 시기에 따라 세포 치료제의 확장 동안 허용 기준을 충족하는지를 결정하기 위해, 1차 및 2차 시점을 포함하는 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 15. 조항 13에 있어서, 환자 치료 이벤트를 재일정관리할 때, 환자-특이적 식별자와 연관된 환자 치료 이벤트에 대해 업데이트된 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 16. 조항 15에 있어서,
완료 시간에 기초하여 환자-특이적 식별자와 관련된 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 것; 및
완료 시간에 기초하여 환자-특이적 식별자와 연관된 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 것
을 추가로 포함하는 방법.
조항 17. 조항 16에 있어서, 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로:
컴퓨팅 장치에 의해, 환자-특이적 식별자로부터 세포 주문 식별자를 분리하고,
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자를 생성하고 새로운 세포 주문 식별자를 환자-특이적 식별자와 연관짓는 것
을 추가로 포함하는 방법.
조항 18. 조항 17에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 방법이 새로운 세포 주문 식별자 및 세포 치료제의 확장 완료의 추정 시간을 포함하는 환자-특이적 식별자를 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 19. 조항 17에 있어서,
컴퓨팅 장치에 의해, 환자 치료 이벤트의 재일정관리에 기초하여 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트에 대한 새로운 일정을 생성하고,
운송 및 물류 이벤트의 재일정관리에 기초하여, 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자와 연관된 운송 및 물류 이벤트의 새로운 일정을 물류 인터페이스로 전송하는 것
을 추가로 포함하는 방법.
조항 20. 조항 17에 있어서,
컴퓨팅 장치에 의해, 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부의 결정이 이루어진 각 시점에서 환자-특이적 식별자와 연관짓는 것을 포함하고, 새로운 세포 주문 식별자는 각각의 개별 시점에 해당하는 필드 및 결정 결과를 포함하는 것인 방법.
조항 21. 조항 20에 있어서, 일정관리가:
컴퓨팅 장치에 의해, 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자에 기초하여 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 것을 포함하는 방법.
조항 22. 조항 21에 있어서, 재수행이 불가능하다는 결정에 대한 응답으로, 컴퓨팅 장치에 의해, 2차 시점 이후에 예정된 환자 치료 이벤트를 취소하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 23. 조항 22에 있어서, 환자 치료 이벤트의 취소를 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 24. 조항 23에 있어서, 재수행이 실현가능하지 않다는 결정에 대한 응답으로, 확장 세포 치료제를 파괴하고 환자-특이적 식별자를 세포 주문 식별자로부터 분리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 25. 재일정관리된 환자 치료 이벤트에 따라 조항 1의 방법에 의해 수득된 확장 세포 치료제로 환자를 치료하는 방법.
조항 26. 환자에 대한 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
컴퓨팅 장치에 의해, 환자에 대한 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청, 세포 치료제를 제조하기 위한 복수의 제조 시설에서의 제조 슬롯을 수신하는 단계로서, 여기서 각각의 제조 시설에 대한 제조 슬롯은 각각의 제조 시설, 및 세포 치료제로 환자를 치료하기 위한 환자 치료 이벤트의 예비 일정과 연관된 제조업체 컴퓨터 서브시스템으로부터의 컴퓨팅 장치에서 수신되는 것인 단계;
환자 치료 이벤트의 예비 일정에 기초하여 세포 치료제를 제조하기 위한 복수의 이용가능한 제조 슬롯을 컴퓨팅 장치에 의해 일정관리 사용자 인터페이스에서 결정하고 디스플레이하는 단계;
이용가능한 제조 슬롯 중 하나를 선택한 후, 의료 시설에서 환자 치료 이벤트의 예비 일정 및 이용가능한 제조 슬롯에 따라 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위해 환자에 대해 절차를 수행하는 단계;
수득한 고형 종양을 이용가능한 제조 슬롯에 따라 이용가능한 제조 슬롯에 해당하는 제조 시설로 전달하는 단계;
수득한 고형 종양을 제조 시설에서 수용한 즉시, 수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 제조를 세포 확장 기술을 사용하여 개시하는 단계;
세포 치료제의 제조 동안, 1차 시점 및 1차 시점에 이은 2차 시점에서 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수 및 허용 매개변수가 해당하는 시점과 연관된 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계로서, 허용 매개변수는 해당하는 시점과 연관된 검정의 결과에 기초하여 결정되는 것인 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 치료제의 제조를 위한 제조 일정, 제조 시설에 해당하는 제조 슬롯, 및 1차 시점 및 2차 시점 중 하나 또는 둘 모두에서의 허용 기준이 충족되는지 여부에 기초한 환자 치료 이벤트의 예비일정을 수정하는 단계; 및
1차 및 2차 시점 둘 모두에서의 허용 기준이 충족된다면, 수정된 제조 일정에 따라 세포 치료제의 제조를 완료하는 단계를 포함하는 방법.
조항 27. 조항 26에 있어서, 제조된 세포 치료제를 의료 시설로 이송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 28. 조항 26에 있어서, 세포 주문 요청을 수신하는 즉시, 컴퓨팅 장치에 의해, 환자 및 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자를 생성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 29. 조항 28에 있어서, 컴퓨팅 장치에 의해, 수득한 고형 종양에 대한 용기의 운송 라벨을 자동적으로 생성하는 단계를 추가로 포함하고, 운송 라벨은 환자-특이적 식별자, 세포 주문 요청, 제조 슬롯 및 사용가능한 제조 슬롯에 해당하는 제조 시설을 포함하는 것인 방법.
조항 30. 조항 29에 있어서, 컴퓨팅 장치에 의해, 수득한 고형 종양에 대한 용기의 제조 라벨을 자동적으로 생성하는 단계를 추가로 포함하고, 제조 라벨은 제조 라벨이 생성될 때 세포 치료제를 제조하는 데 사용되는 제조 프로세스에 해당하는 시점, 용기-식별 바코드, 환자-특이적 식별자, 그 시점에 완료된 제조 단계, 완료된 프로세스와 연관된 허용 매개변수, 및 그 시점에서 수행되는 제조 프로세스를 포함하는 것인, 방법.
조항 31. 조항 26에 있어서, 세포 치료제가 T-세포를 포함하는 방법.
조항 32. 조항 26에 있어서, 세포 치료제가 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함하는 방법.
조항 33. 조항 26에 있어서, 환자 치료 이벤트가 입원환자 입원 기간, 절제 날짜, 림프구제거 날짜, 환자에게 세포 치료제를 주입하기 위한 주입 날짜 및 IL-2 치료 날짜 중 하나 이상을 포함하는 방법.
조항 34. 조항 26에 있어서, 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 것이 수용된 세포 치료제의 확장 개시 후 복수의 시점에서 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 것을 포함하고, 복수의 시점은 1차 및 2차 시점을 포함하는 것인 방법.
조항 35. 조항 34에 있어서, 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트의 재일정관리하고 세포 치료제의 후속 확장을 완료하는 것을 추가로 포함하고, 여기서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 것을 포함하는, 방법.
조항 36. 조항 34에 있어서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리가 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 오염 때문에 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 환자 치료 이벤트를 종료하는 것을 포함하는 방법.
조항 37. 조항 34에 있어서, 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 오염으로 인해 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 세포 치료제의 후속 확장을 종료하는 것인 방법.
조항 38. 조항 37에 있어서, 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 것이 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과, 및 그람 염색 검정의 결과 중 하나 이상의 결정을 포함하는 것인 방법.
조항 39. 조항 38에 있어서, 세포 확장 기술이 급속 확장 단계를 포함하고,방법은 하기를 추가로 포함하는 것인 방법:
제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 급속 확장 단계 이전에 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계; 및
제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 세포 치료제의 제조 완료 이전 날짜에 림프구제거 날짜를 예정하고, 세포 치료제의 제조 완료 이후의 날짜에 주입 날짜를 예정하며, 및 주입 날짜 이후에 IL-2 치료 날짜를 예정하는 단계.
조항 40. 조항 26에 있어서, 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
조항 41. 조항 26에 있어서, 컴퓨팅 장치에 의해 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것에 이어서, 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 것이 2차 시점의 허용 매개변수 및 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는데 사용된 세포 집단과 연관된 허용 매개변수 중 하나 또는 둘 모두에 기초하여 1차 시점부터 확장 프로세스를 완료하는데 필요한 시간을 결정하는 것을 포함하는 방법.
조항 42. 조항 29에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 방법은 세포 주문 요청을 수신한 즉시, 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 식별자 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 확인을, 환자와 연관된 세포 주문 요청이 수신된 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
조항 43. 조항 42에 있어서, 세포 확장 기술 및 세포 주문 요청이 수신된 시기에 따라, 제조된 세포 치료제의 허용 매개변수가 세포 치료제의 확장 동안의 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기 위해, 1차 시점 및 2차 시점을 포함한 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 44. 조항 43에 있어서, 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 즉시, 환자-특이적 식별자와 연관된 환자 치료 이벤트에 대해 업데이트된 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 45. 조항 44에 있어서,
완료 시간에 기초하여 환자-특이적 식별자와 연관된 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및
완료 시간에 기초하여 환자-특이적 식별자와 연관된 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
조항 46. 조항 45에 있어서, 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로:
컴퓨팅 장치에 의해, 환자-특이적 식별자로부터 세포 주문 식별자를 분리시키는 단계, 및
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자를 생성하고 새로운 세포 주문 식별자를 환자-특이적 식별자와 연관짓는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
조항 47. 조항 46에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 방법은 새로운 세포 주문 식별자 및 세포 치료제의 확장 완료 추정 시간을 포함하는 환자-특이적 식별자를 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 48. 조항 47에 있어서,
컴퓨팅 장치에 의해, 환자 치료 이벤트의 재일정관리에 기초하여 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트에 대한 새로운 일정을 생성하는 단계, 및
새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자와 연관된 운송 및 물류 이벤트의 새로운 일정을 운송 및 물류 이벤트의 재일정관리에 기초하여 물류 인터페이스로 전송하는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
조항 49. 조항 48에 있어서,
컴퓨팅 장치에 의해, 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부의 결정이 이루어지는 각 시점에서 환자-특이적 식별자와 연관짓는 단계를 추가로 포함하고, 새로운 세포 주문 식별자는 각각의 개별 시점에 해당하는 필드 및 결정 결과를 포함하는 것인 방법.
조항 50. 조항 49에 있어서, 일정관리는:
컴퓨팅 장치에 의해, 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자에 기초하여 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 것을 포함하는 것인 방법.
조항 51. 조항 50에 있어서, 재수행이 불가능하다는 결정에 대한 응답으로, 컴퓨팅 장치에 의해, 2차 시점 이후에 일정관리된 환자 치료 이벤트를 취소하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 52. 조항 51에 있어서, 환자 치료 이벤트의 취소를 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 53. 조항 52에 있어서, 재수행이 실현가능하지 않다는 결정에 대한 응답으로, 확장된 세포 치료제를 파괴하고 세포 주문 식별자로부터 환자-특이적 식별자를 분리시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 54. 재일정관리된 환자 치료 이벤트에 따라 조항 26의 방법에 의해 수득된 제조된 세포 치료제로 환자를 치료하는 방법.
조항 55. 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
제조 시설에서 환자로부터 수득한 고형 종양을 수용하는 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 확장 기술을 사용하여 수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 세포 치료제를 제조하기 위한 프로세스에서 사용되는 제조 용기에 대한 제조 라벨을 생성하는 단계로서, 제조 라벨은 환자, 제조 프로세스 및 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 정보를 포함하는 것인 단계;
세포 치료제를 제조하는 프로세스를 개시하는 단계로서,
의료 시설에서 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위해 환자에 대해 절차를 수행하는 단계,
수득된 고형 종양을 제조 시설로 전달하는 단계,
제조 시설에서 수득한 고형 종양을 수용한 후, 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 동적으로 일정관리하는 단계로서, 동적 일정관리는 후속적으로 수득되는 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수에 의존적인 것인 단계,
수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 세포 치료제의 확장을 세포 확장 기술을 사용하여 개시하고 확장 세포 치료제의 허용 매개변수를 복수의 시점에서 결정하는 단계,
제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 복수의 시점에서 결정하기 위해 품질 관리 검정을 수행하는 단계;
컴퓨팅 장치에서, 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 수신하는 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 각각의 복수의 시점에 해당하는 업데이트된 제조 라벨을 생성하는 단계로서, 업데이트된 제조 라벨은 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 업데이트된 정보를 포함하고, 업데이트된 정보는 해당하는 시점에서의 허용 매개변수를 포함하는 것인 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 복수의 시점 각각에서의 업데이트된 제조 라벨을 판독하는 단계; 및
복수의 시점 각각에서 업데이트된 제조 라벨로부터 판독된 정보에 기초하여 세포 치료제의 확장을 완료하는 단계를 포함하는 방법.
조항 56. 조항 55에 있어서, 만일 하기와 같은 경우라면, 컴퓨팅 장치에 의해 경고 신호를 제공하는 단계를 추가로 포함하는 방법:
후속 제조 단계에 대한 업데이트된 제조 라벨의 환자 관련 정보가 직전 제조 단계의 제조 라벨에 있는 환자 관련 정보와 일치하지 않거나, 또는
제조 프로세스의 주어진 시점에 대해 업데이트된 제조 라벨의 허용 매개변수가 제조 프로세스의 해당 시점에 대한 허용 기준을 충족하지 않는 경우,
여기서 허용 매개변수는 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과 및 그람 염색 검정 결과 중 하나 이상을 포함함.
조항 57. 조항 55에 있어서, 환자에 관한 정보가 환자-특이적 식별자 및 환자에 대한 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청과 연관된 세포 주문 식별자를 포함하는 방법.
조항 58. 조항 55에 있어서, 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
조항 59. 조항 55에 있어서, 제조 라벨이 환자, 제조 프로세스 및 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 정보를 암호화하는 바코드를 포함하는 방법.
조항 60. 조항 56에 있어서, 사용되는 세포 확장 기술 및 제조 시설에서 세포 주문 요청이 수신되는 시기에 따라, 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 제조 프로세스 동안 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기 위해, 1차 시점 및 1차 시점에 이은 2차 시점을 포함하는 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 61. 조항 60에 있어서, 물류 인터페이스와 통합하는 단계, 택배사 상태 정보를 포함하는 택배사 컴퓨팅 서브시스템을 통해 택배사 상태 정보를 수신하는 단계, 및 택배사 상태 정보를 수신하는 것에 대한 응답으로, 결정된 제조 일정에 기초하여 제조된 세포 치료제를 운송하기 위한 운송 일정을 결정하는 단계, 및 제조된 세포 치료제를 함유하는 운송 용기에 대한 운송 라벨을 생성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 62. 조항 60에 있어서, 결정된 운송 일정에 기초하여 물류 시설에 운송 요청을 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 63. 조항 60에 있어서, 최종 품질 관리 검정을 수행하기 전에 제조된 세포 치료제를 함유하는 운송 용기에 대한 운송 라벨을 생성하는 단계를 추가로 포함하며, 운송 라벨은 최종 품질 관리 검정 결과가 해당 허용 매개변수가 해당 허용 기준을 충족함을 나타내지 않는 한, 제조된 세포 치료제는 출하 불가능함을 나타내는 것인 방법.
조항 64. 조항 56에 있어서,
제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족한다고 결정되는 즉시, 세포 치료제 제조의 완료 날짜를 결정하는 단계;
컴퓨팅 장치에 의해, 완료 날짜에 기초하여 환자를 치료하기 위한 세포 치료제의 사용에 해당하는 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 생성하는 단계;
완료 날짜에 기초하여 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및
환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
조항 65. 조항 55에 있어서, 세포 치료제가 T-세포를 포함하는 방법.
조항 66. 조항 55에 있어서, 세포 치료제가 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함하는 방법.
조항 67. 조항 55에 있어서, 환자 치료 이벤트가 입원환자 입원 기간, 절제 날짜, 림프구제거 날짜, 환자에게 세포 치료제를 주입하기 위한 주입 날짜 및 IL-2 치료 날짜 중 하나 이상을 포함하는 방법.
조항 68. 조항 56에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계가 수득된 세포 치료제의 확장 개시 후 복수의 시점에서 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 것을 포함하고, 복수의 시점은 1차 및 2차 시점을 포함하는 것인 방법
조항 69. 조항 68에 있어서, 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 세포 치료제의 후속 확장을 완료하는 단계를 추가로 포함하고, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 것을 포함하는 방법.
조항 70. 조항 68에 있어서, 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 오염으로 인해 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 환자 치료 이벤트를 종료하는 것을 포함하는 방법.
조항 71. 조항 68에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 오염으로 인해 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 세포 치료제의 후속 확장을 종료하는 것인 방법.
조항 72. 조항 71에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 것이 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과, 및 그람 염색 검정 결과의 결정 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
조항 73. 조항 72에 있어서, 세포 확장 기술이 급속 확장 단계를 포함하고,방법이 하기를 추가로 포함하는 것인 방법:
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 급속 확장 단계 이전에 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계; 및
확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 림프구제거 날짜를 세포 치료제의 제조 완료 이전 날짜로 예정하고, 주입 날짜를 세포 치료제의 제조 완료 이후의 날짜로 예정하고, IL-2 치료 날짜를 주입 날짜 이후로 예정하는 단계.
조항 74. 조항 55에 있어서, 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
조항 75. 조항 55에 있어서, 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행한 후 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계가 2차 시점에서의 허용 매개변수 및 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는데 사용된 세포 집단과 연관된 허용 매개변수 중 하나 또는 둘 모두에 기초하여 1차 시점부터 확장 프로세스를 완료하는데 필요한 시간을 결정하는 것을 포함하는 방법.
조항 76. 조항 57에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 방법은 세포 주문 요청을 수신한 즉시, 환자-특이적 식별자 및 세포 주문 식별자 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 확인을 그 환자와 연관된 세포 주문 요청이 수신된 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 77. 조항 76에 있어서, 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 세포 확장 기술 및 세포 주문 요청이 수신된 시기에 따라, 세포 치료제의 확장 동안 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기 위해 1차 및 2차 시점을 포함하는 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 78. 조항 76에 있어서, 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 즉시, 환자-특이적 식별자와 연관된 환자 치료 이벤트에 대한 업데이트된 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 79. 조항 78에 있어서, 완료 시간에 기초하여 환자-특이적 식별자와 연관된 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및 완료 시간에 기초하여 환자-특이적 식별자와 연관된 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 80. 조항 79에 있어서, 1차 시점부터 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로:
컴퓨팅 장치에 의해, 환자-특이적 식별자로부터 세포 주문 식별자를 분리시키는 단계, 및
컴퓨팅 장치에 의해, 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자를 생성하고 새로운 세포 주문 식별자를 환자-특이적 식별자와 연관짓는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
조항 81. 조항 80에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 방법이 새로운 세포 주문 식별자 및 세포 치료제의 확장 완료의 추정 시간을 포함하는 환자-특이적 식별자를 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 82. 조항 80에 있어서,
컴퓨팅 장치에 의해, 환자 치료 이벤트의 재일정관리에 기초하여 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트에 대한 새로운 일정을 생성하는 단계, 및
새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자와 연관된 운송 및 물류 이벤트의 새로운 일정을 운송 및 물류 이벤트의 재일정관리에 기초하여 물류 인터페이스로 전송하는 단계
를 추가로 포함하는 방법.
조항 83. 조항 80에 있어서,
컴퓨팅 장치에 의해, 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부의 결정이 이루어진 각 시점에서 환자-특이적 식별자와 연관짓는 단계를 추가로 포함하고, 새로운 세포 주문 식별자가 각각의 개별 시점에 해당하는 필드 및 결정 결과를 포함하는 방법.
조항 84. 조항 83에 있어서, 일정관리가:
컴퓨팅 장치에 의해, 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자에 기초하여 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 것을 포함하는 방법.
조항 85. 조항 84에 있어서, 재수행이 불가능하다는 결정에 대한 응답으로, 컴퓨팅 장치에 의해, 2차 시점 이후에 일정관리된 환자 치료 이벤트를 취소하는 것을 추가로 포함하는 방법.
조항 86. 조항 85에 있어서, 환자 치료 이벤트의 취소를 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 87. 조항 86에 있어서, 재수행이 실현가능하지 않다는 결정에 대한 응답으로, 확장된 세포 치료제를 파괴하고 환자-특이적 식별자를 세포 주문 식별자로부터 분리시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
조항 88. 재일정관리된 환자 치료 이벤트에 따라 조항 55의 방법에 의해 수득된 확장 세포 치료제로 환자를 치료하는 방법.

Claims (89)

  1. 환자의 종양으로부터 수득한 세포 집단을 세포 치료제(cell therapy product)로 확장하여 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
    컴퓨팅 장치에 의해, 환자에 대한 세포 집단을 확장하기 위한 세포 주문 요청을 수신하는 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자를 포함하는 세포 주문 식별자를 생성하는 단계;
    상기 세포 치료제를 제조하기 위한 프로세스를 개시하는 단계로서, 상기 프로세스가 하기를 포함하는 단계:
    제조 시설에서 상기 세포 집단을 수용한 후, 상기 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 동적으로 일정관리하는 단계로서, 상기 동적 일정관리는 후속적으로 수득된 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수에 의존적인 것인 단계,
    세포 확장 기술을 사용하여 상기 수득한 세포 집단의 적어도 일부로부터 상기 세포 치료제의 확장을 개시하고 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 단계,
    상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계,
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 세포 치료제의 초기 확장을 완료하는 단계, 및
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 상기 컴퓨팅 장치에 의해 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 상기 세포 치료제의 후속 확장을 완료하는 단계로서,
    여기서 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 상기 환자에 대한 상기 확장된 세포 치료제의 주입 및 상기 환자에 대한 상기 확장된 세포 치료제의 주입 이전 또는 이후의 환자 치료 이벤트 사이에 임상적으로 결정된 시간 갭에 기초하여 수행되는 것인 단계;
    를 포함하는 방법.
  2. 환자의 종양으로부터 수득한 세포 집단을 세포 치료제로 확장시킴으로써 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
    상기 환자에 대한 상기 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청에 기초하여 제조 시설에서 상기 환자로부터 세포 집단을 수용하는 단계;
    컴퓨팅 장치에 의해, 상기 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자를 포함하는 세포 주문 식별자를 생성하는 단계;
    상기 세포 치료제를 제조하기 위한 하기를 포함하는 프로세스를 개시하는 단계:
    상기 제조 시설에서 상기 세포 집단을 수용한 후, 상기 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 단계,
    세포 확장 기술을 사용하여 상기 세포 집단의 적어도 일부로부터 상기세포 치료제의 확장을 개시하고, 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 1차 시점 및 상기 1차 시점에 이은 2차 시점에서 결정하는 단계,
    상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 해당 시점과 연관된 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계,
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 1차 시점에서 상기 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 상기 세포 확장 기술을 사용하여 상기 수득한 세포 치료제 중 적어도 일부로부터의 상기 세포 치료제의 확장을 상기 2차 시점까지 계속하는 단계, 및
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 2차 시점의 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로:
    상기 세포 확장 기술을 사용하여 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 상기 2차 시점에서의 상기 허용 매개변수에 기초하여 상기 1차 시점부터 실현가능한 것인지 여부를 결정하는 단계,
    상기 재수행이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로, 상기 세포 치료제를 수득하기 위해 상기 1차 시점부터 상기 세포 확장 기술을 사용하여 상기 2차 시점에서 수득한 상기 세포 치료제의 적어도 일부로부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는 단계,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행한 후 상기 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계, 및
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 상기 1차 시점부터 세포 치료제의 후속 확장을 완료하는 단계로서,
    여기서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 상기 세포 치료제의 확장 완료의 추정 시간 및 상기 환자에 대한 상기 확장된 세포 치료제의 주입 이전 또는 이후에 환자 치료 이벤트의 타이밍에 기초하여 수행되는 것인, 단계;
    를 포함하는 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 세포 치료제가 T-세포를 포함하는 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 세포 치료제가 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함하는 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트가 입원환자 입원 기간, 절제 날짜, 림프구제거 날짜, 상기 환자에게 상기 세포 치료제를 주입하기 위한 주입 날짜 및 IL-2 치료 날짜 중 하나 이상을 포함하는 방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계가
    상기 수득된 세포 치료제의 확장 개시 후 복수의 시점에서 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수를 결정하는 것을 포함하고, 상기 복수의 시점은 상기 1차 및 상기 2차 시점을 포함하는 것인, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 것을 포함하는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 오염으로 인해 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 상기 환자 치료 이벤트를 종료하는 것을 포함하는 방법.
  9. 제6항에 있어서, 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 오염으로 인해 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 상기 세포 치료제의 후속 확장을 종료하는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 단계가 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과, 및 그람 염색 검정 결과의 결정 중 하나 이상을 포함하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 급속 확장 단계를 포함하고,
    상기 방법이
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 급속 확장 단계 이전에 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계; 및
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 상기 확장된 세포 치료제의 제조 완료 이전 날짜로 림프구제거 날짜를 일정관리하고, 상기 확장된 세포 치료제의 제조 완료 이후의 날짜로 주입 날짜를 일정관리하고, 및 상기 주입 날짜 이후로 IL-2 치료 날짜를 일정관리하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  12. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 상기 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  13. 제2항에 있어서, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행한 후 상기 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계가 상기 2차 시점의 허용 매개변수 및 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는데 사용된 세포 집단과 연관된 허용 매개변수 중 하나 또는 둘 모두에 기초하여 상기 1차 시점부터 상기 확장 프로세스를 완료하는데 필요한 시간을 결정하는 것을 포함하는, 방법.
  14. 제1항 또는 제2항에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 상기 세포 주문 요청의 수신 시, 상기 환자-특이적 식별자 및 상기 세포 주문 식별자 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 확인을, 상기 환자와 연관된 상기 세포 주문 요청이 수신된 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 세포 확장 기술에 따른 상기 세포 치료제의 확장 동안 및 상기 세포 주문 요청이 수신될 때 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하는지를 결정하기 위해, 1차 및 2차 시점을 포함하는 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  16. 제14항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리 시, 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 상기 환자 치료 이벤트에 대한 업데이트된 일정을 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 완료 시간에 기초하여 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및
    상기 완료 시간에 기초하여 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 상기 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로:
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자-특이적 식별자로부터 상기 세포 주문 식별자를 분리시키는 단계,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자를 생성하고 상기 새로운 세포 주문 식별자를 상기 환자-특이적 식별자와 연관시키는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, 세포 치료제를 확장시키기 위한 상기 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 상기 방법이 상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 환자-특이적 식별자 및 상기 세포 치료제의 확장 완료의 추정 시간을 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  20. 제18항에 있어서,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리에 기초하여 상기 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트에 대한 새로운 일정을 생성하는 단계, 및
    상기 운송 및 물류 이벤트의 재일정관리에 기초하여, 상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 운송 및 물류 이벤트의 새로운 일정을 물류 인터페이스로 전송하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  21. 제18항에 있어서,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부의 결정이 이루어지는 각 시점의 상기 환자-특이적 식별자와 각각의 개별 시점에 해당하는 필드 및 상기 결정 결과를 포함하는 새로운 세포 주문 식별자와 연관짓는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 일정관리가:
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자에 기초하여 상기 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 것을 포함하는 방법.
  23. 제21항에 있어서, 상기 재수행이 불가능하다는 결정에 대한 응답으로, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 2차 시점 이후에 일정관리된 상기 환자 치료 이벤트를 취소하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 취소를 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 재수행이 실현가능하지 않다는 결정에 대한 응답으로, 상기 확장된 세포 치료제를 파괴하고, 상기 환자-특이적 식별자를 상기 세포 주문 식별자로부터 분리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  26. 재일정관리된 환자 치료 이벤트에 따라 제1항의 방법에 의해 수득된 확장 세포 치료제로 환자를 치료하는 방법.
  27. 환자에 대한 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
    컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자에 대한 상기 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청, 상기 세포 치료제를 제조하기 위한 복수의 제조 시설에서 제조 슬롯을 수신하는 단계로서, 각각의 제조 시설에 대한 상기 제조 슬롯은 각각의 제조 시설과 연계된 제조업체 컴퓨터 서브시스템, 및 상기 세포 치료제로 상기 환자를 치료하기 위한 환자 치료 이벤트의 예비 일정으로부터 상기 컴퓨팅 장치에서 수신되는 것인 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에 의해 상기 환자 치료 이벤트의 예비 일정에 기초하여 상기 세포 치료제를 제조하기 위한 복수의 이용가능한 제조 슬롯을 결정하고 일정관리 사용자 인터페이스에 디스플레이하는 단계;
    상기 이용가능한 제조 슬롯 중 하나를 선택한 후, 의료 시설에서 상기 환자 치료 이벤트의 예비 일정 및 상기 이용가능한 제조 슬롯에 따라 상기 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위해 상기 환자에 대해 절차를 수행하는 단계;
    상기 수득한 고형 종양을 상기 이용가능한 제조 슬롯에 따라 상기 이용가능한 제조 슬롯에 해당하는 제조 시설로 전달하는 단계;
    상기 수득한 고형 종양을 상기 제조 시설에서 수용 시, 상기 수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 세포 확장 기술을 사용하여 상기 세포 치료제의 제조를 개시하는 단계;
    상기 세포 치료제의 제조 동안, 1차 시점 및 상기 1차 시점에 이은 2차 시점에서 상기 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수 및 상기 허용 매개변수가 해당 시점과 연관된 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계로서, 상기 허용 매개변수는 해당하는 시점과 연관된 검정의 결과에 기초하여 결정되는 것인 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 세포 치료제의 제조를 위한 제조 일정, 상기 제조 시설에 해당하는 제조 슬롯, 및 상기 1차 시점 및 2차 시점 중 하나 또는 둘 모두에서의 상기 허용 기준이 충족되는지 여부에 기초하여 환자 치료 이벤트의 예비일정을 변경하는 단계; 및
    상기 1차 및 2차 시점 둘 모두에서의 상기 허용 기준이 충족된다면, 상기 변경된 제조 일정에 따라 상기 세포 치료제의 제조를 완료하는 단계
    를 포함하는 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 제조된 세포 치료제를 상기 의료 시설로 전달하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  29. 제27항에 있어서, 상기 세포 주문 요청의 수신 시, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자 및 상기 세포 주문 요청과 연관된 환자-특이적 식별자를 생성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 수득한 고형 종양을 위한 용기에 대한 운송 라벨을 자동적으로 생성하는 단계를 추가로 포함하고, 상기 운송 라벨은 상기 환자-특이적 식별자, 상기 세포 주문 요청, 상기 제조 슬롯 및 상기 이용가능한 제조 슬롯에 해당하는 상기 제조 시설을 포함하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 수득한 고형 종양을 위한 용기에 대한 제조 라벨을 자동적으로 생성하는 단계를 추가로 포함하고, 상기 제조 라벨은 상기 제조 라벨이 생성될 때 상기 세포 치료제를 제조하는 데 사용되는 제조 프로세스에 해당하는 시점, 용기-식별 바코드, 상기 환자-특이적 식별자, 상기 시점에 완료된 제조 단계, 상기 완료된 프로세스와 연관된 허용 매개변수, 및 상기 시점에서 수행되는 제조 프로세스를 포함하는 방법.
  32. 제27항에 있어서, 상기 세포 치료제가 T-세포를 포함하는 방법.
  33. 제27항에 있어서, 상기 세포 치료제가 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함하는 방법.
  34. 제27항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트가 입원환자 입원 기간, 절제 날짜, 림프구제거 날짜, 상기 환자에게 상기 세포 치료제를 주입하기 위한 주입 날짜 및 IL-2 치료 날짜 중 하나 이상을 포함하는 방법.
  35. 제27항에 있어서, 상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계가 상기 수용된 세포 치료제의 확장 개시 후 복수의 시점에서 상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수를 결정하는 것을 포함하고, 상기 복수의 시점은 상기 1차 및 상기 2차 시점을 포함하는 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 컴퓨팅 장치에 의해 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 세포 치료제의 후속 확장을 완료하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 상기 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서의 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 것을 포함하는 것인, 방법.
  37. 제35항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리는 상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 오염으로 인해 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 상기 환자 치료 이벤트를 종료하는 것을 포함하는 방법.
  38. 제35항에 있어서, 상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 오염으로 인해 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 상기 세포 치료제의 후속 확장을 종료하는 방법.
  39. 제38항에 있어서, 상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수를 결정하는 단계가 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과, 및 그람 염색 검정의 결과 중 하나 이상을 포함하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 급속 확장 단계를 포함하고,
    상기 방법이:
    상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 급속 확장 단계 이전에 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계; 및
    상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 상기 세포 치료제의 제조 완료 이전 날짜에 림프구제거 날짜를 일정관리하고, 상기 세포 치료제의 제조 완료 이후의 날짜에 주입 날짜를 일정관리하며, 및 상기 주입 날짜 이후에 IL-2 치료 날짜를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  41. 제27항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 상기 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  42. 제27항에 있어서, 상기 컴퓨팅 장치에 의해 상기 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것에 이어서, 상기 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계가 상기 2차 시점의 상기 허용 매개변수 및 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는데 사용된 세포 집단과 연관된 상기 허용 매개변수 중 하나 또는 둘 모두에 기초하여 상기 1차 시점으로부터 상기 확장 프로세스를 완료하는데 필요한 시간을 결정하는 것을 포함하는 방법.
  43. 제27항에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 상기 방법이 상기 세포 주문 요청 수신 시, 상기 환자-특이적 식별자 및 상기 세포 주문 식별자 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 확인을, 상기 환자와 연관된 상기 세포 주문 요청이 수신된 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 세포 확장 기술에 따른 세포 치료제의 확장 동안 및 상기 세포 주문 요청이 수신될 때 상기 제조된 세포 치료제의 허용 매개변수가 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기 위해, 상기 1차 및 2차 시점을 포함한 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리 시, 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 상기 환자 치료 이벤트에 대해 업데이트된 일정을 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  46. 제45항에 있어서,
    완료 시간에 기초하여 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및
    상기 완료 시간에 기초하여 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 상기 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로:
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자-특이적 식별자로부터 상기 세포 주문 식별자를 분리시키는 단계, 및
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자를 생성하고 상기 새로운 세포 주문 식별자를 상기 환자-특이적 식별자와 연관짓는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  48. 제47항에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 상기 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 상기 방법이 상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자 및 상기 세포 치료제의 추정된 확장 완료 시간을 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  49. 제48항에 있어서,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리에 기초하여 상기 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트에 대한 새로운 일정을 생성하는 단계, 및
    상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 운송 및 물류 이벤트의 새로운 일정을 운송 및 물류 이벤트의 재일정관리에 기초하여 물류 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  50. 제49항에 있어서,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하는지 여부에 대한 결정이 이루어지는 각 시점에서 상기 환자-특이적 식별자와, 각각의 개별 시점에 해당하는 필드 및 결정 결과를 포함하는 상기 새로운 세포 주문 식별자를 연관짓는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  51. 제50항에 있어서, 상기 일정관리는:
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자에 기초하여 상기 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 것을 포함하는 방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 재수행이 불가능하다는 결정에 대한 응답으로, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 2차 시점 이후에 일정관리된 상기 환자 치료 이벤트를 취소하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  53. 제52항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 취소를 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 재수행이 실현가능하지 않다는 결정에 대한 응답으로, 상기 확장된 세포 치료제를 파괴하고 상기 세포 주문 식별자로부터 상기 환자-특이적 식별자를 분리시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  55. 재일정관리된 환자 치료 이벤트에 따라 제27항의 방법에 의해 수득되는 제조된 세포 치료제로 환자를 치료하는 방법.
  56. 세포 치료제를 제조하는 방법으로서,
    제조 시설에서 환자로부터 수득한 고형 종양을 수용하는 단계;
    컴퓨팅 장치에 의해, 세포 확장 기술을 사용하여 상기 수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 상기 세포 치료제를 제조하기 위한 프로세스에서 사용되는 제조 용기에 대한 제조 라벨을 생성하는 단계로서, 상기 제조 라벨은 상기 환자, 상기 제조 프로세스 및 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 정보를 포함하는 것인 단계;
    상기 세포 치료제를 제조하는 프로세스를 개시하는 단계로서, 상기 프로세스가
    의료 시설에서 상기 환자로부터 고형 종양을 수득하기 위해 상기 환자에 대해 절차를 수행하는 단계,
    상기 수득된 고형 종양을 제조 시설로 전달하는 단계,
    상기 제조 시설에서 상기 수득한 고형 종양을 수용한 후, 상기 컴퓨팅 장치에 의해 환자 치료 이벤트를 동적으로 일정관리하는 단계로서, 상기 동적 일정관리는 후속적으로 수득한 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수에 의존적인 것인 단계,
    상기 수득한 고형 종양의 적어도 일부로부터 상기 세포 치료제의 확장을 세포 확장 기술을 사용하여 개시하고 상기 확장 세포 치료제의 허용 매개변수를 복수의 시점에서 결정하는 단계를 포함하는 것인 단계;
    상기 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 복수의 시점에서 결정하기 위해 품질 관리 검정을 수행하는 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에서, 상기 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 수용하는 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 각각의 복수의 시점에 해당하는 업데이트된 제조 라벨을 생성하는 단계로서, 상기 업데이트된 제조 라벨은 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 업데이트된 정보를 포함하고, 상기 업데이트된 정보는 해당 시점에서의 상기 허용 매개변수를 포함하는 것인 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 복수의 시점 각각에서의 상기 업데이트된 제조 라벨을 판독하는 단계; 및
    상기 복수의 시점 각각에서 상기 업데이트된 제조 라벨로부터 판독된 정보에 기초하여 상기 세포 치료제의 확장을 완료하는 단계를 포함하는 방법.
  57. 제56항에 있어서,
    후속 제조 단계에 대한 상기 업데이트된 제조 라벨에서의 환자 관련 정보가 직전 제조 단계의 제조 라벨에서의 상기 환자 관련 정보와 일치하지 않거나, 또는
    상기 제조 프로세스의 주어진 시점에 대해 업데이트된 제조 라벨에서의 허용 매개변수가 상기 제조 프로세스의 해당 시점에 대한 허용 기준을 충족하지 않는 경우라면,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 경고 신호를 제공하는 단계를 추가로 포함하되,
    여기서 상기 허용 매개변수는 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과 및 그람 염색 검정 결과 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  58. 제56항에 있어서, 상기 환자에 관한 정보가 환자-특이적 식별자 및 상기 환자에 대한 상기 세포 치료제를 제조하기 위한 세포 주문 요청과 연관된 세포 주문 식별자를 포함하는 방법.
  59. 제56항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 상기 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  60. 제56항에 있어서, 상기 제조 라벨이 상기 환자, 상기 제조 프로세스 및 제조된 세포 치료제의 품질과 연관된 정보를 암호화하는 바코드를 포함하는 방법.
  61. 제57항에 있어서, 사용되는 상기 세포 확장 기술 및 상기 제조 시설에서 세포 주문 요청이 수신되는 시기에 따라, 상기 제조된 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 상기 제조 프로세스 동안 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기 위해, 1차 시점 및 상기 1차 시점에 이은 2차 시점을 포함하는 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  62. 제61항에 있어서, 물류 인터페이스와 통합하는 단계, 택배사 상태 정보가 포함되는 택배사 컴퓨팅 서브시스템을 통해 택배사 상태 정보를 수신하는 단계, 및 상기 택배사 상태 정보를 수신하는 것에 대한 응답으로, 상기 결정된 제조 일정에 기초하여 상기 제조된 세포 치료제를 운송하기 위한 운송 일정을 결정하는 단계, 및 상기 제조된 세포 치료제를 함유하는 운송 용기에 대한 운송 라벨을 생성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  63. 제61항에 있어서, 상기 결정된 운송 일정에 기초하여 물류 시설로 운송 요청을 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  64. 제61항에 있어서, 최종 품질 관리 검정을 수행하기 전에 상기 제조된 세포 치료제를 함유하는 운송 용기에 대한 운송 라벨을 생성하는 단계를 추가로 포함하며, 상기 운송 라벨은 상기 최종 품질 관리 검정 결과가 해당하는 허용 매개변수가 해당 허용 기준을 충족함을 나타내지 않는 한, 상기 제조된 세포 치료제는 출하 불가능함을 나타내는 방법.
  65. 제57항에 있어서,
    상기 제조된 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족한다는 결정 시, 상기 세포 치료제 제조의 완료 날짜를 결정하는 단계;
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 완료 날짜에 기초하여 환자를 치료하기 위한 세포 치료제의 사용에 해당하는 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 생성하는 단계;
    상기 완료 날짜에 기초하여 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및
    상기 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  66. 제57항에 있어서, 상기 세포 치료제가 T-세포를 포함하는 방법.
  67. 제57항에 있어서, 상기 세포 치료제가 종양 침윤 림프구(TIL)를 포함하는 방법.
  68. 제57항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트가 입원환자 입원 기간, 절제 날짜, 림프구제거 날짜, 상기 환자에게 상기 세포 치료제를 주입하기 위한 주입 날짜 및 IL-2 치료 날짜 중 하나 이상을 포함하는 방법.
  69. 제57항에 있어서, 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계가 상기 수득된 세포 치료제의 확장 개시 후 복수의 시점에서 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 것을 포함하며, 상기 복수의 시점은 상기 1차 및 상기 2차 시점을 포함하는 것인 방법.
  70. 제69항에 있어서, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하고 세포 치료제의 후속 확장을 완료하는 단계를 추가로 포함하되, 상기 환자 치료 이벤트의 상기 재일정관리는 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 상기 환자 치료 이벤트를 재일정관리하는 것을 포함하는 방법.
  71. 제69항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 상기 재일정관리는 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 오염으로 인해 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로 상기 환자 치료 이벤트를 종료하는 단계를 포함하는 방법.
  72. 제69항에 있어서, 상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 오염으로 인해 상기 복수의 시점 중 임의의 시점에서 상기 허용 기준을 충족하지 않는다는 결정에 대한 응답으로, 세포 치료제의 상기 후속 확장을 종료하는 것인 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수를 결정하는 단계가 생존율, 무균성, 세포 카운트, 마이코플라스마 카운트, CD3 카운트, 내독소 검정 결과, 및 그람 염색 검정 결과 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  74. 제73항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 급속 확장 단계를 포함하고,
    상기 방법이:
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 급속 확장 단계 이전에 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하는 단계; 및
    상기 확장 세포 치료제에 대한 상기 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족한다는 결정에 대한 응답으로, 림프구제거 날짜를 상기 세포 치료제의 제조 완료 이전 날짜로 일정관리하고, 주입 날짜를 상기 세포 치료제의 제조 완료 이후의 날짜로 일정관리하고, 상기 주입 날짜 이후로 IL-2 치료 날짜를 일정관리하는 단계
    를 추가로 포함하는 것인 방법.
  75. 제56항에 있어서, 상기 세포 확장 기술이 단일 밀폐 용기 생물반응기에서 상기 세포 치료제를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  76. 제56항에 있어서, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행한 후 상기 세포 치료제의 확장 완료 시간을 추정하는 단계가 상기 2차 시점에서의 상기 허용 매개변수 및 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는데 사용된 세포 집단과 연관된 상기 허용 매개변수 중 하나 또는 둘 모두에 기초하여 상기 1차 시점부터 확장 프로세스를 완료하는데 필요한 시간을 결정하는 것을 포함하는 방법.
  77. 제58항에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 상기 방법이 상기 세포 주문 요청의 수신 시, 상기 환자-특이적 식별자 및 상기 세포 주문 식별자 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 확인을 상기 환자와 연관된 상기 세포 주문 요청이 수신된 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  78. 제77항에 있어서, 상기 세포 확장 기술에 따른 상기 세포 치료제의 확장 동안 및 상기 세포 주문 요청이 수신될 때 상기 확장 세포 치료제에 대한 허용 매개변수가 상기 허용 기준을 충족하는지 여부를 결정하기 위해, 상기 1차 및 2차 시점을 포함하는 복수의 시점에 해당하는 날짜 세트를 일정관리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  79. 제78항에 있어서, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리 시, 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 상기 환자 치료 이벤트에 대한 업데이트된 일정을 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  80. 제79항에 있어서,
    상기 완료 시간에 기초하여 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 픽업 주문을 물류 인터페이스로 전송하는 단계; 및
    상기 완료 시간에 기초하여 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 상기 환자 치료 이벤트에 대한 일정을 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  81. 제80항에 있어서, 상기 1차 시점부터 상기 세포 치료제의 확장을 재수행하는 것이 실현가능하다는 결정에 대한 응답으로:
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자-특이적 식별자로부터 상기 세포 주문 식별자를 분리시키는 단계, 및
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 세포 주문 요청과 연관된 새로운 세포 주문 식별자를 생성하고 상기 새로운 세포 주문 식별자를 상기 환자-특이적 식별자와 연관짓는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  82. 제81항에 있어서, 세포 치료제를 확장하기 위한 상기 세포 주문 요청이 병원측 인터페이스로부터 수신되고, 상기 방법이 상기 새로운 세포 주문 식별자 및 상기 세포 치료제의 확장 완료의 추정 시간을 포함하는 상기 환자-특이적 식별자를 상기 병원측 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  83. 제82항에 있어서,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 환자 치료 이벤트의 재일정관리에 기초하여 상기 환자 치료 이벤트와 연관된 운송 및 물류 이벤트에 대한 새로운 일정을 생성하는 단계, 및
    상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자와 연관된 운송 및 물류 이벤트의 새로운 일정을 상기 운송 및 물류 이벤트의 재일정관리에 기초하여 물류 인터페이스로 전송하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  84. 제81항에 있어서,
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 허용 매개변수가 특정 허용 기준을 충족하는지 여부의 결정이 이루어지는 각 시점에서 상기 환자-특이적 식별자와 각각의 개별 시점에 해당하는 필드 및 상기 결정 결과를 포함하는 상기 새로운 세포 주문 식별자를 연관짓는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 일정관리가:
    상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 새로운 세포 주문 식별자를 포함하는 상기 환자-특이적 식별자에 기초하여 상기 환자 치료 이벤트를 일정관리하는 단계를 포함하는 방법.
  86. 제85항에 있어서, 상기 재수행이 불가능하다는 결정에 대한 응답으로, 상기 컴퓨팅 장치에 의해, 상기 2차 시점 이후에 일정관리된 상기 환자 치료 이벤트를 취소하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  87. 제86항에 있어서, 환자 치료 이벤트의 취소를 병원측 인터페이스 및 물류 인터페이스로 전송하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  88. 제87항에 있어서, 상기 재수행이 실현가능하지 않다는 결정에 대한 응답으로, 상기 확장된 세포 치료제를 파괴하고 상기 환자-특이적 식별자를 상기 세포 주문 식별자로부터 분리시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  89. 재일정관리된 환자 치료 이벤트에 따라 제56항의 방법에 의해 수득된 확장 세포 치료제로 환자를 치료하는 방법.
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