KR20220125330A - 지속 면역요법 - Google Patents

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KR20220125330A
KR20220125330A KR1020227027452A KR20227027452A KR20220125330A KR 20220125330 A KR20220125330 A KR 20220125330A KR 1020227027452 A KR1020227027452 A KR 1020227027452A KR 20227027452 A KR20227027452 A KR 20227027452A KR 20220125330 A KR20220125330 A KR 20220125330A
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cancer
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cell population
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에릭 스티븐 부라크
줄리 메트칼프
나탈리 그린슈타인
메이두오 후
존 피츠모리스 밸리언트
소날 파텔
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퓨전 파마슈티칼즈 인크.
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Abstract

종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 표적을 결합할 수 있는 방사면역접합체를 투여하는 것을 포함하는, CD8+ T 세포 침윤의 종양 내로의 유도를 필요로 하는 환자에서 CD8+ T 세포 침윤을 종양 내로 유도하는 방법. 일부 실시양태에서, 종양 내로 침윤되는 CD8+ T 세포 집단은 환자에서 지속되고 따라서 전이가 형성되지 못하도록 하고/거나 재발 가능성을 감소시키는 작용을 할 수 있다.

Description

지속 면역요법
관련 출원
본 출원은 2020년 1월 10일에 출원된 미국 가특원출원 62/959,879, 및 2020년 6월 10일에 출원된 미국 가특원출원 63/037,520을 우선권 주장하며, 이들 가특허출원 각각의 전체 내용은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유하고 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2021년 1월 4일에 생성된 상기 ASCII 카피는 FPI_009_Sequence_Listing_ST25.txt로 명명되며 크기는 480바이트이다.
수많은 치료제가 암 치료에 대해 평가되어 왔다. 그러나, 많은 치료제가 단독요법으로 사용될 때 제한된 치료 효능을 입증하거나 치료에 적합하지 않은 최대 허용 용량을 표시한다. 기존의 치료 실패는 세포독성 치료제가 모든 생존 종양 세포를 사멸시킬 수 없기 때문에 또는, 수동 또는 표적 면역치료제의 경우에, 충분한 수의 세포독성 T 세포를 유도하고 동원하지 못하기 때문에, 치료 후에도 지속되는 암성 세포를 포함한다. 게다가, 암세포는 전이되어 속발성 종양을 형성하고/거나 이전에 환자 종양 부피의 개선 및 심지어 명백한 완전한 종양 퇴행을 발생시킨 항암제 치료의 치료 효과에 저항할 수 있도록 하는 유전적 재배열을 겪을 수 있다.
따라서, 완전한 및/또는 지속적인 항암 치료 효과를 달성하기 위해 단독으로 또는 다른 항암 치료제와 조합하여 사용될 수 있는 지속 형태의 항암 요법을 제공하는 치료제 및 치료 방법에 대한 필요성이 있다. 또한 현재의 면역요법 양식에 내성이 있는 소위 차가운 종양(cold tumor)에 효과적인 치료법에 대한 극도의 필요성이 있다.
현재 개시된 방법은 면역요법에 대해 전형적으로 고도로 반응하지 않는 종양 (예컨대 차가운 종양)에서도, CD8+ T 세포 집단의 종양의 코어 내로의 침윤을 유도하기 위해 사용될 수 있다. 현재 개시된 방법에 따르면, 이를 필요로 하는 환자는 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 표적에 결합할 수 있는 방사면역접합체를 투여받는다. 일부 실시양태에서, 종양 내로 침윤되는 CD8+ T 세포 집단은 환자에서 지속되고 따라서 전이가 형성되는 것을 예방하고/하거나 재발 가능성을 감소시키는 작용을 할 수 있다.
한 측면에서, CD8+ T 세포 침윤의 종양 내로의 유도를 필요로 하는 대상체에게 하기 구조식을 포함하는 방사면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 CD8+ T 세포 침윤을 종양 내로 유도하는 방법이며,
여기서, 상기 방사면역접합체의 상기 투여는 CD8+ T 세포 집단의 종양의 코어 내로의 침윤을 발생시키고; 여기서 상기 CD8+ T 세포 집단은 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 제2 종양-연관 항원에 특이적인 T-세포 수용체 (TCR)를 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고; 여기서 CD8+ T 세포는 제2 종양-연관 항원을 발현하는 세포를 우선적으로 사멸시킬 수 있는 것인 방법이 제공된다:
A-L-B
화학식 I-a
여기서,
A는 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이며, 여기서 금속 착물은 악티늄-225 (225Ac) 또는 그의 자손체를 포함하고,
L은 링커이고,
B는 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 제1 종양-연관 항원에 결합할 수 있는 표적화 모이어티이며;
단, A-L-이 하기에 나타낸 바와 같은 화합물 1의 금속 착물인 경우, B는 AVE1642가 아니다
Figure pct00001
.
일부 실시양태에서, CD8+ T 세포 집단은 참조 수준보다 더 큰 수준, 예를 들어, 참조 수준보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 또는 적어도 5배 더 큰 수준에서 종양의 코어에서 검출가능하다.
일부 실시양태에서, CD8+ T 세포 집단은 종양의 코어에서 세포 (예를 들어, 생존 세포)의 적어도 5%, 적어도 7.5%, 적어도 10%, 적어도 12.5%, 또는 적어도 15%를 나타낸다.
일부 실시양태에서, CD8+ T 세포는 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 또는 적어도 70%를 나타낸다.
일부 실시양태에서, CD8+ T 세포는 투여 단계로부터 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 적어도 30일, 적어도 35일, 또는 적어도 40일 후에 대상체에서 검출가능하다.
일부 실시양태에서, 제1 종양-연관 항원은 제2 종양-연관 항원과 상이하다. 일부 실시양태에서, 제2 종양-연관 항원은 신생항원이다.
일부 실시양태에서, 종양은 원발성 종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 속발성 종양이다.
일부 실시양태에서, 종양은 고도로 면역원성이 아니다. 예를 들어, 종양은 중간 정도로 면역원성이거나 면역학적으로 차가울 수 있다.
일부 실시양태에서, 종양은 투여 시점에 부피가 적어도 100 mm3, 적어도 150 mm3, 또는 적어도 또는 약 175 mm3이다.
일부 실시양태에서, 종양은 고형 종양이다.
예를 들어, 고형 종양은 육종, 예를 들어, 혈관육종 또는 혈관내피종, 성상세포종, 연골육종, 유잉 육종(Ewing's sarcoma), 섬유육종, 신경교종, 평활근육종, 지방육종, 악성 섬유종 조직구종 (MFH), 중간엽 또는 혼합 중배엽 종양, 중피 육종 또는 중피종, 점액육종, 골육종, 횡문근육종, 및 활막 육종으로 이루어진 군으로부터 선택된 육종일 수 있다. 일부 실시양태에서, 육종은 골육종이다.
예를 들어, 고형 종양은 암종, 예를 들어, 선양 낭포, 부신피질 암종, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 담낭 암종, 위암, 두경부암, 폐암 (예를 들어, 소세포 폐암 또는 비-소세포 폐암, 또는 폐의 선암종), 신경모세포종, 신경내분비암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 고환암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암종일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암종은 방광암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 췌장암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 두경부암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 간암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 뇌암이다. 일부 실시양태에서, 암종은 신경모세포종이다. 일부 실시양태에서, 암종은 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 종양은 액체 종양이다.
일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양의 코어에서 세포 증식의 억제를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양의 진행의 둔화 또는 억제를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양의 퇴행을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양의 완전한 퇴행을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양 세포의 전이를 예방하거나 억제한다.
일부 실시양태에서, A-L-은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 금속 착물이다:
Figure pct00002
Figure pct00003
.
일부 실시양태에서, L은 화학식 I-b 내에 나타낸 바와 같은 구조식 -L1-(L2)n-을 갖는다:
A-L1-(L2)n-B
화학식 I-b
여기서,
A는 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이며, 여기서 금속 착물은 악티늄-225 (225Ac) 또는 그의 자손체를 포함하고;
B는 표적화 모이어티이고;
L1은 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 1-5이고;
각각의 L2는, 독립적으로, 하기 구조식을 갖고:
(-X1-L3-Z1-)
화학식 III
여기서,
X1은 C=O(NR1), C=S(NR1), OC=O(NR1), NR1C=O(O), NR1C=O(NR1), -CH2PhC=O(NR1), -CH2Ph(NH)C=S(NR1), O, 또는 NR1이고; 각각의 R1은 독립적으로 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고, 여기서 C1-C6 알킬은 옥소 (=O), 헤테로아릴, 또는 그의 조합에 의해 치환될 수 있고;
L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고;
Z1은 CH2, C=O, C=S, OC=O, NR1C=O, 또는 NR1이고, 여기서 R1은 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 피롤리딘-2,5-디온이다.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 하기 구조식을 포함한다:
Figure pct00004
여기서, B는 표적화 모이어티이다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 적어도 100 kDa, 적어도 125 kDa, 또는 적어도 150 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 소분자이다.
일부 실시양태에서, 제1 종양-연관 항원은 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체 (IGF-1R), 종양 상피 마커-1 (TEM-1), 및 섬유모세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 인간이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암의 치료 또는 예방을 필요로 한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암에 걸린 것으로 진단된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 난치성 암의 치료를 필요로 한다.
일부 실시양태에서, 투여 단계는 방사면역접합체의 전신 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 전신 투여는 비경구 투여, 예를 들어 정맥내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여, 피하 투여, 또는 피내 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 전신 투여는 장 투여, 예를 들어, 경-위장 투여 또는 경구 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 투여 단계는 방사면역접합체의 국소 투여를 포함한다. 예를 들어, 국소 투여는 종양주위 주사 및/또는 종양내 주사를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 투여 단계는 생체외에서 방사면역접합체를 상기 대상체의 체액과 접촉시키는 것을 포함하고, 여기서 상기 체액은 적어도 하나의 암세포를 함유한다.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 다른 세포독성제와 조합하여 투여되지 않는다.
일부 실시양태에서, 방법은 방사면역접합체를 투여하는 단계 후에 대상체에게 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 예를 들어, 추가의 치료제는 비-세포독성제일 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, 방사면역접합체는 더 낮은 유효 용량으로 투여되고/거나 추가의 치료제는 더 낮은 유효 용량으로 투여된다.
정의
본원에 사용된 바와 같이, 작용제를 대상체에게 "투여하는 것"은 상기 대상체의 세포를 작용제와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제를 "투여하는 것"은 상기 대상체의 세포를 생체내에서 작용제와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 작용제를 투여하는 것, 예를 들어 방사면역접합체를 투여하는 것은 세포 (예를 들어, 암세포)를 함유하는 환자의 체액을 생체외에서 작용제와 접촉시키는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "항체"는 아미노산 서열이 지정된 항원, 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 및 그의 단편을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 본 발명에 따른 항체는 임의의 유형 (예를 들어, IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM) 또는 아형 (예를 들어, IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)일 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 항체의 특징적인 서열 또는 부분이 항체의 하나 이상의 영역 (예를 들어, 가변 영역, 초가변 영역, 불변 영역, 중쇄, 경쇄, 및 그의 조합)에서 발견되는 아미노산을 포함할 수 있음을 인식할 것이다. 게다가, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 항체의 특징적인 서열 또는 부분이 하나 이상의 폴리펩티드 쇄를 포함할 수 있고, 동일한 폴리펩티드 쇄 또는 상이한 폴리펩티드 쇄에서 발견되는 서열 요소를 포함할 수 있음을 인식할 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, "항원-결합 단편"은 모 항체의 결합 특성의 특이성을 유지하는 항체의 일부를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의, 용어 "결합" 또는 "에 결합하는"은, 표적 항원과 또는 표적 항원에 대한 적어도 일시적인 상호작용 또는 회합을 의미한다. 예를 들어, "결합" 또는 "에 결합하는"은 방사면역접합체 또는 CD8+ T 세포가 종양-연관 항원을 발현하는 암세포와 일시적으로 또는 지속적으로 접촉하는 과정을 지칭할 수 있다. 본원에 기재된 일부 실시양태에서, 방사면역접합체의 표적화 모이어티는 종양-연관 항원에 결합할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 결합하는 것은 종양-연관 항원과 방사면역접합체의 표적화 모이어티 간의 상호작용을 통해 발생한다. 본원에 기재된 일부 실시양태에서, CD8+ T 세포 집단의 세포는 종양-연관 항원에 결합할 수 있다. 예를 들어, 결합하는 것은 CD8+ T 세포가 TCR, CD8, 및 MHC-결합 항원 간의 상호작용을 통해 항원 제시 세포와 지속적으로 접촉하는 과정을 포함한다.
용어 "이관능성 킬레이트" 또는 "이관능성 접합체"는 상호교환적으로 사용되며, 본원에 사용된 바와 같이, 킬레이트화 기 또는 그의 금속 착물, 링커 및 표적화 모이어티 (예컨대 종양 특이적 항원 또는 종양 연관 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편)를 함유하는 방사면역접합체 화합물을 지칭한다.
용어 "암"은 악성 신생물 세포의 증식에 의해 야기되는 임의의 질환, 예컨대 종양, 신생물, 암종, 육종, 백혈병, 및 림프종을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CD8+ T 세포 집단"은 세포 표면 당단백질 CD8 (분화 클러스터 8)을 발현하는 하나 이상의 T 세포의 군을 지칭한다. CD8은 T 세포 수용체 (TCR)에 대한 공동-수용체로 작용하고 주요 조직적합성 복합체에 결합하는 막관통 당단백질이다. CD8은 부분적으로 암세포와 연관된 특이적 항원을 인식함으로써 암세포 파괴를 매개하는 세포독성 T 세포의 표면 상에서 발현된다.
"면역 체크포인트 억제제" (약어 "ICI")로도 공지된 용어 "체크포인트 억제제"는 면역 체크포인트 단백질의 작용을 차단하는, 예를 들어, 이러한 면역 체크포인트 단백질이 그의 파트너 단백질에 결합하는 것을 차단하는 작용제를 지칭한다. 일부 암세포는 면역 체크포인트 단백질을 발현하는 것으로 공지되어 있어, T 세포가 이러한 암세포를 파괴 표적으로 인식하지 못한다. 일반적으로, 체크포인트 억제제는 T 세포 상의 특이적 면역 체크포인트 단백질과 표적 세포 간의 상호작용을 차단함으로써 T 세포에 의한 암세포의 파괴를 촉진하며, 여기서 이러한 상호작용은 그렇지 않으면 T 세포에 의한 표적 세포 파괴를 억제하는 신호로 작용할 것이다. 체크포인트 억제제는 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 차단하거나 CTLA-4와 B7-1/B7-2의 상호작용을 차단하는 작용제를 포함한다. 특이적 체크포인트 억제제의 비제한적 예는 하기 항체-기반 약물을 포함한다: 이필리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 및 세미플리맙.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "킬레이트"는 2개 이상의 지점에서 중심 금속 또는 방사성금속 원자에 결합될 수 있는 유기 화합물 또는 그의 일부를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "접합체"는 킬레이트화 기 또는 그의 금속 착물, 링커 기를 함유하고, 임의로 표적화 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편)를 함유하는 분자를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "화합물"은 도시된 구조의 모든 입체이성질체, 기하 이성질체, 및 호변이성질체를 포함하는 것을 의미한다. 본원에 기재된 화합물은 비대칭 (예를 들어, 하나 이상의 입체중심을 가짐)일 수 있다. 모든 입체이성질체, 예컨대 거울상이성질체 및 부분입체이성질체는 달리 표시되지 않는 한 의도된다. 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 함유하는 본 개시내용의 화합물은 광학 활성 또는 라세미 형태로 단리될 수 있다. 광학 활성 출발 물질로부터 광학 활성 형태를 어떻게 제조하는 지에 대한 방법은, 관련 기술분야에, 예컨대 라세미 혼합물의 분해 또는 입체선택적 합성에 의해 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "차가운" 또는 "면역학적으로 차가운"은 종양 또는 암과 관련하여 사용될 때, 체크포인트 억제제에 반응하지 않는 종양을 지칭한다 (적어도 체크포인트 억제제 이외의 치료제의 부재 하에.) 전형적으로, 면역학적으로 차가운 종양은, 치료제의 부재 하에, 종양 T 세포 침윤의 결핍 또는 부족을 특징으로 한다. 면역학적으로 차가운 종양의 예는, 제한 없이, T 세포 침윤의 결핍을 특징으로 하는 교모세포종, 난소암, 전립선암, 췌장암, 및 유방암 종양을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "코어"는 종양과 관련하여 사용될 때 종양의 변연 경계(margin boundary) ("엣지(edge)" 또는 "보더(border)"로도 공지됨)로부터 적어도 약 250 μm인 종양 내의 영역을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 요법 또는 치료제와 관련하여 사용될 때 어구 "와 조합하여"는 대상체가 2종 이상의 치료제 또는 양식에 동시에 노출되는 상황을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 서로 "조합하여" 투여되는 요법 또는 치료제는 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 서로 "조합하여" 투여되는 요법 또는 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 서로 "조합하여" 투여되는 요법 또는 치료제는 중복 투여 요법으로 투여된다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "세포독성"은 작용제 또는 요법과 관련하여 사용될 때, 예를 들어, 암세포가 분열 및 성장하는 것을 직접적으로 정지시킴으로써 직접적인 세포 사멸을 야기하는 작용제 또는 요법을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "세포독성"제 및 요법은, 예를 들어, 세포를 면역계에 의한 사멸에 더 취약하게 함으로써 (예를 들어, 면역 체크포인트 억제로 발생함) 또는 DNA 손상 복구를 억제함으로써, 세포 사멸에 대한 유일한 기여가 간접적인 그러한 작용제 및 요법을 지칭하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "대상체에서 검출가능한"은 실체가 대상체에서 조직 또는 그의 샘플 (예를 들어, 종양 샘플, 혈액 샘플 등)에서 검출가능함을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "하락하다," "하락된," "증가하다," "증가된," "감소," "감소된," 및 기타 상대적인 용어 예컨대 "더 큰," "더 높은," "더 적은" 및 "더 낮은" (예를 들어, 치료 결과 또는 효과와 관련하여)은 본원에 기재된 바와 같이 참조 수준에 대한 의미를 갖는다.
본원에 사용된 바와 같이, "검출제"는 항원을 함유하는 세포를 위치시킴으로써 질환을 진단하는 데 유용한 분자 또는 원자를 지칭한다. 검출제로 폴리펩티드를 표지하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 검출제의 예는 방사성동위원소 및 방사성핵종, 염료 (예컨대 비오틴-스트렙타비딘 복합체), 조영제, 발광제 (예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트 또는 FITC, 로다민, 란타나이드 인광체, 시아닌, 및 IR 염료), 및 자성체, 예컨대 가돌리늄 킬레이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "DNA 손상 및 복구 억제제" (DDRi)는 내인성 또는 외인성 염색체 손상에 의해 야기된 세포 DNA 손상의 복구를 방지하고, 정상적으로 발생하는 DNA 복구 메커니즘 및 세포 생존의 유지에 필요한 연관 과정의 억제를 통해 작용하는 작용제를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 작용제 (예를 들어, 방사면역접합체)와 관련하여 사용될 때 용어 "유효량"은 임상 결과와 같은 유익하거나 원하는 결과에 영향을 미치기에 충분한 양이다. "유효량"은 적용되는 상황에 따라 다르다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역접합체"는 표적화 모이어티, 예컨대 항체 (또는 그의 항원-결합 단편), 나노바디, 아피바디, 또는 피브로넥틴 III형 도메인의 공통 서열을 포함하는 접합체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 면역접합체는 표적화 모이어티당 평균 적어도 0.10개의 접합체 (예를 들어, 표적화 모이어티당 평균 적어도 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 4, 5, 또는 8개의 접합체)를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "면역원성"은 종양과 관련하여 사용될 때 생체내 적응 면역 반응을 도출하는 종양의 능력을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "고도로 면역원성" 종양은 면역 체크포인트 억제에 고도로 반응하는, 예를 들어, 면역 체크포인트 억제제로 치료될 때 종양 퇴행을 나타내는 종양을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이 "중간 정도로 면역원성" 종양은 면역 체크포인트 억제에 중간 정도로 반응하는 종양을 지칭하며, 예를 들어, 예를 들어, 기껏해야 지연된 종양 진행을 나타내나 면역 체크포인트 억제에 반응하여 퇴행은 나타내지 않는다.
본원에 사용된 용어 "침윤"은 세포, 예를 들어, 면역 세포와 관련하여 사용될 때 대상체의 한 조직 (예를 들어, 혈액 또는 비장)에서 대상체의 또 다른 조직 (예를 들어, 종양)으로의 이러한 세포의 이동을 지칭한다. 따라서, 어구 "종양 침윤" 또는 "종양으로의 침윤"은 또 다른 위치로부터 종양으로 세포의 이동을 지칭하고, 어구 "종양 코어 침윤" 또는 "종양의 코어 내로의 침윤"은 종양의 코어 내로의 세포의 이동을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "더 낮은 유효 용량"은 작용제 (예를 들어, 치료제)와 함께 용어로 사용될 때 작용제가 참조 실험에서 단독 요법으로 사용되거나 다른 치료 지침에 의해 치료적으로 효과적인 것으로 이전에 결정된 것보다 더 낮은 용량으로 치료 프로토콜에서 치료적으로 효과적인 작용제의 투여량을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 어구 "변연 영역"은 종양과 관련하여 사용될 때 종양의 변연 경계의 양쪽으로부터 약 250 μm 이내인 영역을 지칭한다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 "변연 영역"은 종양 내의 250 μm 너비 영역과 종양 외부의 250 μm 너비 영역을 둘 다 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "신생항원"은 면역계에 의해 이전에 인식되지 않은 새롭게 형성된 항원을 의미한다. 신생항원은 예를 들어 변경된 종양 또는 단백질로부터 (예를 들어, 돌연변이로 인해 발생), 바이러스 단백질로부터 등 다수의 방식으로 발생할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약 조성물"은 제약상 허용되는 부형제와 함께 제제화된 본원에 기재된 화합물을 함유하는 조성물을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 포유동물의 질환 치료를 위한 치료 요법의 일부로서 정부 규제 기관의 승인 하에 제조 또는 판매된다. 제약 조성물은, 예를 들어, 단위 투여 형태로 경구 투여용 (예를 들어, 정제, 캡슐, 캐플릿, 겔캡, 또는 시럽); 국소 투여용 (예를 들어, 크림, 젤, 로션, 또는 연고로서); 정맥내 투여용 (예를 들어, 미립자 색전이 없고 정맥내 사용에 적합한 용매 시스템 중의 멸균 용액으로서); 또는 본원에 기재된 임의의 다른 제제로 제제화될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "제약상 허용되는 부형제"는 본원에 기재된 화합물 이외의 임의의 성분 (예를 들어, 활성 화합물을 현탁시키거나 용해할 수 있는 비히클)을 지칭하며, 환자에서 비독성 및 비염증 특성을 갖는다. 부형제는 예를 들어: 접착방지제, 항산화제, 결합제, 코팅제, 압축 보조제, 붕해제, 염료 (색소), 연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 향료, 방향제, 활택제 (유동 증강제), 윤활제, 방부제, 인쇄 잉크, 방사선보호제, 흡착제, 현탁제 또는 분산제, 감미제, 또는 수화수를 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는 아스코르브산, 히스티딘, 포스페이트 완충제, 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘 (2염기성), 스테아르산칼슘, 크로스카르멜로스, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸 셀룰로스, 젤라틴, 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸파라벤, 미세결정질 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 전호화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 쉘락, 이산화규소, 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 시트르산나트륨, 소듐 스타치 글리콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 스테아르산, 수크로스, 활석, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 크실리톨을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약상 허용되는 염"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 또는 알레르기 반응 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 본원에 기재된 화합물의 그러한 염을 나타낸다. 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 제약상 허용되는 염은 문헌 [Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977] 및 [Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl and C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008]에 기재되어 있다. 염은 본원에 기재된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 계내 제조되거나 유리 염기 기를 적합한 유기 산과 반응시킴으로써 별도로 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 제조될 수 있도록 이온화가능한 기를 가질 수 있다. 이들 염은 무기 또는 유기 산을 포함하는 산 부가 염일 수 있거나, 염은, 본 발명의 화합물의 산성 형태의 경우에, 무기 또는 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 빈번히, 화합물은 제약상 허용되는 산 또는 염기의 부가 생성물로서 제조된 제약상 허용되는 염으로서 제조되거나 사용된다. 적합한 제약상 허용되는 산 및 염기는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예컨대 산 부가 염을 형성하기 위한 염산, 황산, 브로민화수소산, 아세트산, 락트산, 시트르산, 또는 타르타르산, 및 염시성 산을 형성하기 위한 수산화칼륨, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 카페인, 다양한 아민이다. 적합한 염의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 확립되어 있다.
대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 및 마그네슘, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 아민 양이온 (암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 및 에틸아민을 포함하나 이에 제한되지는 않음)을 포함한다.
용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 상호교환적으로 사용되며, 본원에 사용된 바와 같이, 펩티드 결합에 의해 서로 부착된 적어도 2개의 아미노산의 스트링을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 적어도 3-5개의 아미노산을 포함할 수 있고, 이들 각각은 적어도 1개의 펩티드 결합을 통해 다른 것에 부착된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 폴리펩티드가 하나 이상의 "비-천연" 아미노산 또는 그럼에도 불구하고 폴리펩티드 쇄로 통합될 수 있는 다른 실체를 포함할 수 있음을 인식할 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 글리코실화될 수 있고, 예를 들어 폴리펩티드는 하나 이상의 공유 연결된 당 모이어티를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단일 "폴리펩티드" (예를 들어, 항체 폴리펩티드)는 2개 이상의 개별 폴리펩티드 쇄를 포함할 수 있으며, 이는 일부 경우에, 예를 들어 1개 이상의 이황화물 결합 또는 다른 수단에 의해 서로 연결될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "우선적 사멸" 또는 "우선적으로 사멸시킨다"는 실체 (예를 들어, CD8+ T 세포 또는 작용제)가 또 다른 유형보다 더 큰 수준에서 한 유형의 세포를 사멸시키는 능력, 예를 들어 정상 세포보다 종양 세포를 사멸시키고/거나 항원을 발현하지 않는 세포보다 항원을 발현하는 세포를 사멸시키는 능력을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 실체는 한 유형의 세포를 또 다른 유형보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 또는 적어도 10배 더 큰 수준으로 우선적으로 사멸시킨다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "CD8 + T 세포 집단의 생성"은 CD8을 발현하고 V(D)J 재조합 및 TCR DNA의 유전자 재배열을 거쳐 특이적 항원, 예를 들어 세포 표면 항원, 예를 들어 종양-연관 항원을 인식하는 TCR을 생성하는 세포독성 T 세포를 생성 및 선택하는 과정을 지칭한다. CD8+ T 세포 집단의 생성은 또한 CD8+ T 세포 집단의 세포 증식 단계를 포함할 수 있다.
CD8+ T 세포 집단의 생성은 CD8+ T 세포 집단의 활성화가 뒤따를 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "CD8+ T 세포 집단의 활성화"는 CD8 T 세포 집단의 세포가 활성화되어 종양-연관 항원에 결합하고 암세포를 파괴하는 과정을 지칭한다. CD8+ T 세포 활성화는 항원 제시 세포, 예를 들어 성숙 수지상 세포와의 상호작용을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은, 예를 들어, 방사면역접합체를 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 투여하는 것은 CD8+ T 세포 집단의 활성화를 발생시킨다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "방사성접합체"는 방사성동위원소 또는 방사성핵종, 예컨대 본원에 기재된 방사성동위원소 또는 방사성핵종 중 임의의 것을 포함하는 임의의 접합체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "방사면역접합체"는 방사성동위원소 또는 방사성핵종, 예컨대 본원에 기재된 방사성동위원소 또는 방사성핵종 중 임의의 것을 포함하는 임의의 면역접합체를 지칭한다.
용어 "방사면역요법" 또는 "방사성접합체 면역요법"은 상호교환적으로 사용된다. 본원에 사용된 바와 같이, 이들 용어는 치료 효과를 생성하기 위해 방사면역접합체를 사용하는 방법을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 방사면역요법은 이를 필요로 하는 대상체에게 방사면역접합체의 투여를 포함할 수 있고, 여기서 방사면역접합체의 투여는 대상체에서 치료 효과를 생성한다. 일부 실시양태에서, 방사면역요법은 세포를 포함하는 환자의 체액 또는 세포에 방사면역접합체의 투여를 포함할 수 있으며, 여기서 방사면역접합체의 투여는 세포를 사멸시킨다. 여기서 방사면역요법은 세포의 선택적 사멸을 포함하고, 일부 실시양태에서 세포는 암에 걸린 대상체의 암세포이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "방사성핵종"은 방사성 붕괴를 겪을 수 있는 원자 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 18F, 35S, 47Sc, 55Co, 60Cu, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 75Br, 76Br , 77Br , 89Zr, 86Y, 87Y, 90Y, 97Ru,99Tc, 99mTc 105Rh, 109Pd, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 149Pm, 149Tb, 153Sm,166Ho, 177Lu,186Re, 188Re,198Au, 199Au, 203Pb, 211At, 212Pb , 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, 229Th, 66Ga, 67Ga, 68Ga, 82Rb, 117mSn, 201Tl)를 지칭한다. 용어 방사능 핵종, 방사성동위원소, 또는 방사능 동위원소는 또한 방사성핵종을 기재하는데 사용될 수 있다. 방사성핵종은 상기에 기재한 바와 같이 검출제로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방사성핵종은 알파-방출 방사성핵종이다.
본원에 사용된 바와 같이, "참조 수준"은 적절한 참조 조건 하에 관찰되는 수준을 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 참조 수준은 실험 동물 모델 또는 임상 시험에서 대조군과 함께 상기 방법의 사용에 의해 결정된 수준이다. 일부 실시양태에서, 참조 수준은 치료 전 또는 치료 시작시 동일한 대상체에서의 수준이다. 일부 실시양태에서, 참조 수준은 상기 치료 방법에 의해 치료되지 않는 집단의 평균 수준이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "난치성 암"은 현재 사용되는 항암제 또는 현재 항암 요법에 의한 치료에 반응하지 않거나 반응하지 않을 수 있는 암의 형태를 지칭한다. 용어 "난치성 암"은 치료 시작시 치료에 내성이 있는 암뿐만 아니라 초기에 항암제 치료에 대한 반응성을 나타내고 나중에 치료에 반응하지 않게 되는 암을 포함한다. 예를 들어, 난치성 암은 암세포가 치료에 반응하여 증식을 정지하는 데 실패하거나 초기에 치료에 반응하여 증식을 정지하나 항암제를 사용한 추가 치료에도 불구하고 증식을 다시 시작하는 암의 형태를 포함할 수 있다. 높은 재발 빈도를 가진 명백한 퇴행도 난치성으로 간주될 수 있다. 난치성 암은 1차, 2차, 또는 심지어 3차 현재 치료법을 사용하는 특이적 항암 치료에 반응하지 않을 수 있다. 난치성 암을 앓고 있는 환자는 본원에서 "난치성 암 환자"로 지칭될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "에 특이적인"은 항원에 대해 특이적인 T-세포 수용체 (TCR)의 맥락에서 사용될 때, 펩티드가 항원-제시 세포에 의해 표시될 때, 예를 들어, 펩티드가 주요 조직적합성 복합체 (MHC)/β-2 마이크로글로불린 (β2M) 복합체에 의해 표시될 때 TCR이 항원으로부터 프로세스된 펩티드를 인식하는 능력을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 및 "환자"는 인간 또는 비인간 동물 (예를 들어, 포유동물)을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용될 수 있다. 본원에 기재된 일부 실시양태에서, 환자는 난치성 암의 치료를 필요로 한다. 이러한 환자는 또한 "난치성 암 환자"로 지칭될 수 있다.
"실질적인 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"이란 2개의 서열이 최적으로 정렬될 때 참조 서열 내의 상응하는 위치에서 동일한, 아미노산 잔기의 특정된 백분율을 각각 갖거나, 참조 서열과 동일한 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 폴리펩티드 서열을 의미한다. 예를 들어, 참조 서열과 "실질적으로 동일한" 아미노산 서열은 참조 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는다. 폴리펩티드의 경우, 비교 서열의 길이는 일반적으로 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 50, 75, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 또는 350개의 인접 아미노산 (예를 들어, 전장 서열)일 것이다. 서열 동일성은 디폴트 설정에서 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 지네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group)의 서열 분석 소프트웨어 패키지(Sequence Analysis Software Package), 위스콘신 대학교 생명공학 센터(University of Wisconsin Biotechnology Center), 위스콘신주 53705, 매디슨, 1710 유니버서티 애비뉴). 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결실, 및 기타 변형에 상동성 정도를 할당함으로써 유사한 서열을 매칭할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "표적화 모이어티"는 주어진 표적에 결합하는 임의의 분자 또는 분자의 임의의 부분을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 소분자, 단백질 또는 폴리펩티드 예컨대 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 나노바디, 어피바디, 또는 피브로넥틴 III형 도메인의 공통 서열이다.
본원에 사용된 바와 같이, 그리고 관련 기술분야에서 널리 이해되는 바와 같이, 병태 (예를 들어, 본원에 기재된 병태, 예컨대 암)를 "치료하기 위해" 또는 상기 병태의 "치료"는 유익하거나 원하는 결과, 예컨대 임상 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 유익하거나 원하는 결과는 하나 이상의 증상 또는 병태의 완화 또는 개선; 질환, 장애 또는 병태의 정도 감소; 질환, 장애 또는 병태의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태; 질환, 장애 또는 병태의 확산 예방; 질환, 장애 또는 병태의 진행을 지연시키거나 둔화시키는 것; 질환, 장애 또는 병태의 개선 또는 완화; 및 관해 (부분적이든 전체적이든) (검출가능하든 검출가능하지 않든)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 질환, 장애 또는 병태를 "완화하는 것"은 질환, 장애 또는 병태의 정도 및/또는 바람직하지 않은 임상 징후가 치료 부재 하에 정도 또는 시간 경과와 비교하여, 더 감소되고/거나 진행의 시간 경과가 둔화되고 길어지는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "종양-연관 항원" 또는 "종양 연관 항원"은 정상 세포보다 유의하게 더 많은 양으로 종양 세포 상에 존재하는 항원을 의미한다.
종양:
본원에 사용된 바와 같이, "원발성 종양"은 원발성 기원 부위에서의 원래 종양 성장을 지칭하며 전이의 생성물이 아니다.
본원에 사용된 바와 같이, "속발성 종양"은 종종 전이 과정을 통해 원발성 기원 부위에서 속발성 해부학적 부위로 퍼진 종양 성장을 포함한다. 실험 동물 모델의 맥락에서, "속발성 종양"은 또한 종양 재-시험감염 실험에서 형성되는 종양을 지칭할 수 있으며, 여기서 동물은 이전에 받은 것과 동일한 유형의 암세포로 다시 시험감염된다.
"고형 종양"은 비정상적인 조직 덩어리를 포함하는 암, 예를 들어 육종, 암종, 및 림프종을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "액체 종양"은 체액에 존재하는 암, 예를 들어 림프종 및 백혈병이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "종양-특이적 항원" 또는 "종양 특이적 항원"은 종양 세포에만 내인적으로 존재하는 항원을 지칭한다.
도 1a는 실시예 2에 기재되고 중간 정도로 면역원성 동계 마우스 모델, CT-26 마우스 결장암 모델을 사용하여 수행된 실험을 예시한다.
도 1b는 100 nCi 또는 200 nCi에서 비히클, TAB-199 (인간 모노클로날 IGF-1R 항체), 또는 [225Ac]-FPI-1792 ('TAT')로 처리된 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다. [225Ac]-FPI-1792는 패스트-클리어(Fast-Clear)™ 링커를 통해 DOTA 킬레이트화 모이어티에 접합된 TAB-199를 포함하는 방사면역접합체이며, 여기서 225Ac는 DOTA 모이어티에 복합체화된다.
도 1c는 실시예 2에 기재된 실험에서 사용된 마우스로부터의 대표적인 Ki67-염색된 CT-26 종양 조직을 나타내는 일련의 패널이다. Ki67은 세포 증식의 마커이다. 비히클 대조군 (D7-대조군-비처리) 또는 200 nCi의 [225Ac]-FPI-1792 (D7-200 nCi Ac-TAB-199)의 투여 후 7일차에 절개된 종양으로부터 조직 절편을 수득하였다. 상단 패널, 2X 배율. 하단 패널, 20X 배율.
도 1d는 실시예 2에 기재된 실험에서 사용된 마우스로부터의 대표적인 CD8-염색된 CT-26 종양 조직을 나타내는 일련의 패널이다. CD8은 T 세포의 마커이다. 비히클 대조군 (D7-대조군-비처리) 또는 200 nCi의 [225Ac]-FPI-1792 (D7-200 nCi Ac-TAB-199)의 투여 후 7일차에 절개된 종양으로부터 조직 절편을 수득하였다. 상단 패널, 2X 배율. 하단 패널, 20X 배율.
도 1e는 실시예 2에 기재된 실험에서 사용된 마우스로부터의 대표적인 그랜자임 B-염색된 CT-26 종양 조직을 나타내는 일련의 패널이다. 그랜자임 B는 자연 살해 세포 및 세포독성 T 세포의 과립에서 발견되는 세린 프로테아제이다. 비히클 대조군 (D7-대조군-비처리) 또는 200 nCi의 [225Ac]-FPI-1792 (D7-200 nCi Ac-TAB-199)의 투여 후 7일차에 절개된 종양으로부터 조직 절편을 수득하였다. 상단 패널, 2X 배율. 하단 패널, 20X 배율.
도 2a는 실시예 3에 기재되고 중간 정도로 면역원성 동계 마우스 모델, CT-26 마우스 결장암 모델을 사용하여 수행된 실험을 예시한다.
도 2b는 실시예 3에 기재된 실험에 대한 투여 일정을 나타낸다. 도 3b 상단의 숫자는 일수를 나타낸다.
도 2c는 비히클, TAB-199 (인간 모노클로날 IGF-1R 항체); 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 ('TAT'); 200 nCi [225Ac]-FPI-1792와 PD-1 항체의 조합; 200 nCi [225Ac]-FPI-1792와 CTLA-4 항체의 조합; 및 200 nCi [225Ac]-FPI-1792, PD-1 항체, 및 CTLA-4 항체로 처리된 마우스에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다. (실시예 3 참조).
도 2d는 실시예 3에 기재된 실험에서 사용된 마우스로부터의 대표적인 Ki67-염색된 CT-26 종양 조직을 나타내는 일련의 패널이다. 비히클 대조군, TAB-199, [225Ac]-FPI-1792, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1의 투여 후 12일차에 절개된 종양으로부터 조직 절편을 수득하였다.
도 2e는 실시예 3에 기재된 실험에서 사용된 마우스로부터의 대표적인 CD8-염색된 CT-26 종양 조직을 나타내는 일련의 패널이다. 비히클 대조군, TAB-199, [225Ac]-FPI-1792, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1의 투여 후 12일차에 절개된 종양으로부터 조직 절편을 수득하였다.
도 2f는 실시예 3에 기재된 실험에서 사용된 마우스로부터의 대표적인 그랜자임 B-염색된 CT-26 종양 조직을 나타내는 일련의 패널이다. 비히클 대조군, TAB-199, [225Ac]-FPI-1792, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1의 투여 후 12일차에 절개된 종양으로부터 조직 절편을 수득하였다.
도 2g는 실시예 3에 기재된 실험으로부터의 종양 조직에서 Ki67-양성 세포의 정량화를 도시하는 그래프이다. 총 세포 핵 및 Ki67-양성 세포의 카운트는 비히클 대조군, TAB-199, [225Ac]-FPI-1792, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1의 투여 후 12일차에 절개된 종양으로부터 수득된 조직 절편 상의 종양 코어로부터 5개의 상이한 영역 상에서 수행하였다. p-값: * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001.
도 2h는 실시예 3에 기재된 실험으로부터의 종양 조직에서 CD8-양성 세포의 정량화를 도시하는 그래프이다. 총 세포 핵 및 CD8-양성 세포의 카운트는 비히클 대조군, TAB-199, [225Ac]-FPI-1792, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1의 투여 후 12일차에 절개된 종양으로부터 수득된 조직 절편 상의 종양 코어로부터 5개의 상이한 영역 상에서 수행하였다. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001.
도 2i는 실시예 3에 기재된 실험으로부터의 종양 조직에서 그랜자임 B-양성 세포의 정량화를 도시하는 그래프이다. 총 세포 핵 및 그랜자임 B-양성 세포의 카운트는 비히클 대조군, TAB-199, [225Ac]-FPI-1792, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1의 투여 후 12일차에 절개된 종양으로부터 수득된 조직 절편 상의 종양 코어로부터 5개의 상이한 영역 상에서 수행하였다. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001.
도 3a는 실시예 4에 기재되고 중간 정도로 면역원성 동계 마우스 모델, CT-26 마우스 결장암 모델을 사용하여 수행된 종양 재-시험감염 실험을 예시한다.
도 3b는 실시예 4에 기재된 바와 같이, 비처리 (대조군 종양) 마우스에서 또는 실험의 시작에서 200 nCi의 방사면역접합체를 원래 투여받은 마우스에서 2회차 CT-26 동종이식 종양 세포 이식 후 11일차에 이식된 CT-26 동종이식 종양 조직 (속발성 종양)의 CD8 면역염색을 나타내는 일련의 패널이다.
도 3c는 비히클, [225Ac]-FPI-1792 ('TAT'), [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1, [225Ac]-FPI-1792 + CTLA4, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1 + 항-CTLA4로 처리된 마우스에 대한 속발성 종양 성장 곡선을 나타낸다. 종양 부피는 종양 재-시험감염 후 일수에 대해 플롯팅된다. 실험은 실시예 4에 기재되어 있다.
도 4a는 중간 정도로 면역원성 동계 마우스 모델, CT-26 마우스 결장암 모델을 사용하여 마우스에 대해 수행된 종양 재-시험감염 실험을 예시한다. 실시예 5는 도시된 재-시험감염 실험을 거친 마우스의 T-세포 분석을 기재한다.
도 4b는 실시예 5에 기재된 바와 같이, 비처리, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1로 처리된, 마우스로부터의 비장 및 종양에서 CD8+ T 세포의 빈도를 도시한다.
도 4c는 실시예 5에 기재된 실험에서 사용된 사량체 분석을 도시하는 개략도이다. 사량체 분석은 MHC 클래스 I 분자 및 항원의 펩티드 서열이 공지된 경우 항원-특이적 CD8+ T 세포의 열거를 허용한다. 이 분석에서 사용된 펩티드 항원은 CT-26 (종양이 생성된 동계 마우스 모델에서 사용된 결장암 세포주)로부터의 면역우성 CD8+ T 세포 에피토프인 AH1 (SPSYVYHGF (서열식별번호: 1))이었다.
도 4d는 실시예 5에 기재된 바와 같이, 비처리되거나, [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD-1, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4, 또는 [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA-4 + 항-PD-1로 처리된 마우스로부터의 비장 및 종양에서 (CT-26) 항원-특이적 CD8+ T 세포의 빈도 (모든 CD8+ T 세포의 백분율로서)를 도시한다. CT26 펩티드 (AH1)에 특이적인 CD8+ T 세포의 빈도를 사량체 분석을 사용하여 결정하였다. (도 4c 참조.)
도 5a는 실시예 6에 기재되고 면역원성적으로 차가운 동계 마우스 모델, 4T1 삼중 음성 유방암 모델을 사용하여 수행된 실험의 예시이다.
도 5b는 실시예 6에 기재된 바와 같이, 비히클, CTLA-4 항체, [225Ac]-FPI-1792 ('TAT'), 또는 CTLA-4 항체와 [225Ac]-FPI-1792 둘 다의 조합으로 처리된 마우스에 대한 4T1 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 5c는 실시예 6에 기재된 바와 같이, 비히클, RMP1-14 (PD-1 항체), [225Ac]-FPI-1792 ('TAT'), 또는 RMP1-14와 [225Ac]-FPI-1792 둘 다의 조합으로 처리된 마우스에 대한 4T1 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도면은 반드시 축척에 맞춰 그려져야 하는 것은 아니며, 도면의 물체도 서로에 대해 반드시 축척에 맞춰 그려져야 하는 것은 아니라는 것을 이해하여야 한다. 도면은 본원에 개시된 장치, 시스템, 및 방법의 다양한 실시양태에 대한 명확성과 이해를 제공하도록 의도된 도시이다. 가능하면 어디에나, 도면 전체에 걸쳐 동일한 참조 번호를 사용하여 동일하거나 유사한 부품을 언급할 것이다. 게다가, 도면은 어떤 식으로든 본 교시내용의 범위를 제한하도록 의도되지 않음을 이해하여야 한다.
본원에는 CD8+ T 세포 침윤의 종양 내로 (예를 들어, 종양의 코어 내로)의 유도를 필요로 하는 환자에서 CD8+ T 세포 침윤을 종양 내로 (예를 들어, 종양의 코어 내로) 유도하는 방법이 기재되어 있다. 개시된 방법은 환자에게 본원에 추가로 기재된 바와 같은 구조를 갖는 방사면역접합체, 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
방사면역접합체
본 개시내용에 따라 사용되는 방사면역접합체는 일반적으로 화학식 I-a의 구조를 포함한다:
A-L-B
화학식 I-a
여기서,
A는 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이며, 여기서 금속 착물은 악티늄-225 (225Ac) 또는 그의 자손체를 포함하고,
L은 링커이고,
B는 제1 종양-연관 항원에 결합할 수 있는 표적화 모이어티이며; 단, A-L-이 하기에 나타낸 바와 같은 화합물 1의 금속 착물인 경우, B는 AVE1642가 아니다.
Figure pct00005
일부 실시양태에서, A-L-은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 금속 착물이다:
Figure pct00006
Figure pct00007
.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 화학식 II로 나타낸 구조를 갖거나 포함한다:
Figure pct00008
여기서, B는 표적화 모이어티이고 225Ac는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA) 모이어티에 복합체화된다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티에 대한 킬레이트화 모이어티의 평균 비 또는 중앙값 비는 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 2 이하, 또는 약 1이다. 일부 방사면역접합체에서, 표적화 모이어티에 대한 킬레이트화 모이어티의 평균 비 또는 중앙값 비는 약 1이다.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체가 포유동물에게 투여된 후, 장관 경로, 신장 경로, 또는 둘 다에 의해 배출되는 방사선의 비율 (투여되는 방사선의 총량 중)은 참조 방사면역접합체를 투여받은 필적할 만한 포유동물에 의해 배출된 방사선의 비율보다 더 크다. "참조 면역접합체"란 적어도 (1) 상이한 링커를 갖는 것; (2) 상이한 크기의 표적화 모이어티를 갖는 것 및/또는 (3) 표적화 모이어티가 결핍된 것에 의해 본원에 기재된 방사면역접합체와 상이한 공지된 방사면역접합체를 의미한다. 일부 실시양태에서, 참조 방사면역접합체는 [90Y]-이브리투모맙 티욱세탄 (제발린(Zevalin) (90Y)) 및 [111In]-이브리투모맙 티욱세탄 (제발린 (In-111))으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 주어진 경로 또는 경로 세트)에 의해 배출된 방사선의 비율은 참조 방사면역접합체를 투여받은 필적할 만한 포유동물에 의해 동일한 경로(들)에 의해 배출된 방사선의 비율보다 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 더 크다. 일부 실시양태에서, 배출된 방사선의 비율은 참조 방사면역접합체를 투여받은 필적할 만한 포유동물에 의해 배출된 방사선의 비율보다 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 2.5배, 적어도 3배, 적어도 3.5 fold, 적어도 4배, 적어도 4.5배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 또는 적어도 10배 더 크다. 배출 정도는 관련 기술분야에 공지된 방법, 예를 들어 소변 및/또는 대변에서의 방사능 측정 및/또는 일정 기간에 걸친 전신 방사능 측정에 의해 측정될 수 있다. 또한, 예를 들어 국제 특허 공개 WO 2018/024869를 참조한다.
일부 실시양태에서, 배출 정도는 투여 후 적어도 또는 약 12시간, 투여 후 적어도 또는 약 24시간, 투여 후 적어도 또는 약 2일, 투여 후 적어도 또는 약 3일, 투여 후 적어도 또는 약 4일, 투여 후 적어도 또는 약 5일, 투여 후 적어도 또는 약 6일, 또는 투여 후 적어도 또는 약 7일의 기간에서 측정된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 방사면역접합체가 마우스에 투여되는 경우, (a) 투여된 총 방사선의 15% 미만이 투여 후 1일까지 배출되고, (b) 총 방사선의 적어도 15% 투여된 것은 투여 후 7일까지 배출된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 방사면역접합체가 마우스에 투여되는 경우, 투여된 총 방사선의 10% 미만이 투여 후 2일까지 신장 경로에 의해 배출된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 방사면역접합체가 마우스에 투여되는 경우, (a) 투여된 총 방사선의 15% 미만이 투여 후 1일까지 배출되고; (b) 투여된 총 방사선의 10% 미만이 투여 후 2일까지 신장 경로를 통해 배출되고; (c) 투여된 총 방사선의 적어도 15%가 투여 후 7일까지 배출된다.
표적화 모이어티가 소분자이고/거나 50 kDa 미만의 분자량을 갖는 일부 실시양태에서, 방사면역접합체가 마우스에 투여되는 경우, (a) 투여된 총 방사선의 15% 미만이 투여 후 1일까지 배출되고, (b) 투여된 총 방사선의 적어도 15%가 투여 후 7일까지 배출된다.
표적화 모이어티가 소분자이고/거나 50 kDa 미만의 분자량을 갖는 일부 실시양태에서, 방사면역접합체가 마우스에 투여되는 경우, (a) 투여된 총 방사선의 15% 미만이 투여 후 1일까지 배출되고; (b) 투여된 총 방사선의 10% 미만이 투여 후 2일까지 신장 경로를 통해 배출되고; (b) 투여된 총 방사선의 적어도 15%가 투여 후 7일까지 배출된다.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체가 포유동물에게 투여된 후, 방사면역접합체는 참조 접합체 (예를 들어, 참조 면역접합체, 예컨대 참조 방사면역접합체)와 비교하여 하락된 오프-타겟 결합 효과 (예를 들어, 독성)를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 이러한 하락된 오프-타겟 결합 효과는 또한 본원에 기재된 바와 같이 더 큰 배출 속도를 나타내는 방사면역접합체의 특색이다.
킬레이트화 모이어티
적합한 킬레이트화 모이어티의 예는, DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DOTMA (1R,4R,7R,10R)-α,α',α",α'"-테트라메틸-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산, DOTAM (1,4,7,10-테트라키스(카르바모일메틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), DOTPA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라프로피온산), DO3AM-아세트산 (2-(4,7,10-트리스(2-아미노-2-옥소에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1-일)아세트산), DOTA-GA 무수물 (2,2',2"-(10-(2,6-디옥소테트라히드로-2H-피란-3-일)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산, DOTP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라(메틸렌 포스폰산)), DOTMP (1,4,6,10-테트라아자시클로데칸-1,4,7,10-테트라메틸렌 포스폰산, DOTA-4AMP (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라키스(아세트아미도-메틸렌포스폰산), CB-TE2A (1,4,8,11-테트라아자비시클로[6.6.2]헥사데칸-4,11-디아세트산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산), NOTP (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리(메틸렌 포스폰산), TETPA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라프로피온산), TETA (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸-1,4,8,11-테트라 아세트산), HEHA (1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산), PEPA (1,4,7,10,13-펜타아자시클로펜타데칸-N,N',N",N"',N""-펜타아세트산), H4옥타파 (N,N'-비스(6-카르복시-2-피리딜메틸)-에틸렌디아민-N,N'-디아세트산), H2데드파 (1,2-[[6-(카르복시)-피리딘-2-일]-메틸아미노]에탄), H6포스파 (N,N'-(메틸렌포스포네이트)-N,N'-[6-(메톡시카르보닐)피리딘-2-일]-메틸-1,2-디아미노에탄), TTHA (트리에틸렌테트라민-N,N,N',N",N"',N"'-헥사아세트산), DO2P (테트라아자시클로도데칸 디메탄포스폰산), HP-DO3A (히드록시프로필테트라아자시클로도데칸트리아세트산), EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산), 데페록사민, DTPA (디에틸렌트리아민펜타아세트산), DTPA-BMA (디에틸렌트리아민펜타아세트산-비스메틸아미드), HOPO (옥타덴테이트 히드록시피리디논), 또는 포르피린을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
링커
일부 실시양태에서, 링커는 A 및 B가 없는 화학식 I-b의 일부로서, 화학식 I-b의 구조 내에 나타낸 바와 같다:
A-L1-(L2)n-B
화학식 I-b
(A 및 B는 화학식 I-a에서 정의된 바와 같다).
따라서, 일부 실시양태에서, 링커는 -L1-(L2)n-이고, 여기서:
L1은 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 1-5이고;
각각의 L2는, 독립적으로, 하기 구조식을 갖고:
(-X1-L3-Z1-)
화학식 III
여기서, X1은 C=O(NR1), C=S(NR1), OC=O(NR1), NR1C=O(O), NR1C=O(NR1), -CH2PhC=O(NR1), -CH2Ph(NH)C=S(NR1), O, 또는 NR1이고; 각각의 R1은 독립적으로 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고, 여기서 C1-C6 알킬은 옥소 (=O), 헤테로아릴, 또는 그의 조합에 의해 치환될 수 있고;
L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬 (예를 들어, C5-C20 폴리에틸렌 글리콜)이고;
Z1은 CH2, C=O, C=S, OC=O, NR1C=O, 또는 NR1이고, 여기서 R1은 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 피롤리딘-2,5-디온이다.
일부 실시양태에서, L1은 치환된 C1-C6 알킬 또는 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고, 치환기는 헤테로아릴 기 (예를 들어, 6원 질소-함유 헤테로아릴)를 포함한다.
일부 실시양태에서, L3은 치환된 C1-C50 알킬또는 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고, 치환기는 헤테로아릴 기 (예를 들어, 6원 질소-함유 헤테로아릴)를 포함한다.
일부 실시양태에서, A는 하나 이상의 헤테로아릴 기 (예를 들어, 6원 질소-함유 헤테로아릴)를 포함하는 마크로시클릭 킬레이트화 모이어티이다.
가교-결합 기
일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 표적화 모이어티 대신에 또는 이에 더하여 가교-결합 기를 포함한다 (예를 들어, 화학식 I의 B는 가교-결합 기를 포함한다).
가교-결합 기는 공유 결합에 의해 2개 이상의 분자를 연결할 수 있는 반응성 기이다. 가교-결합 기를 사용하여 링커 및 킬레이트화 모이어티를 치료제 또는 표적화 모이어티에 부착할 수 있다. 가교-결합 기를 또한 사용하여 링커 및 킬레이트화 모이어티를 생체내 표적에 부착할 수 있다. 일부 실시양태에서, 가교-결합 기는 아미노-반응성, 메티오닌 반응성 또는 티올-반응성 가교-결합 기, 또는 소르타제-매개 커플링이다. 일부 실시양태에서, 아미노-반응성 또는 티올-반응성 가교-결합 기는 활성화된 에스테르, 예컨대 히드록시숙신이미드 에스테르, 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 에스테르, 4-니트로페놀 에스테르 또는 이미데이트, 무수물, 티올, 이황화물, 말레이미드, 아지드, 알킨, 변형 알킨, 변형 알켄, 할로겐, 술포네이트, 할로아세틸, 아민, 히드라지드, 디아지린, 포스핀, 테트라진, 이소티오시아네이트, 또는 옥사지리딘을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소르타제 인식 서열은 말단 글리신-글리신-글리신 (GGG) 및/또는 LPTXG 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 가교-결합 기의 사용이 본원에 개시된 특이적 구축물에 제한되지 않고, 오히려 다른 공지된 가교-결합 기를 포함할 수 있음을 이해할 것이다.
표적화 모이어티
표적화 모이어티는 주어진 표적, 예를 들어, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원에 결합할 수 있는 임의의 분자 또는 분자의 임의의 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 표적 내의 에피토프에 결합할 수 있다. 종양을 갖는 환자에게 방사면역접합체를 투여하는 것을 포함하는 방법의 맥락에서, 표적은 예를 들어, 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 항원 (예를 들어, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 항원 (예를 들어, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원)에 결합할 수 있다. 적합한 종양-연관 항원의 예는 IGF-1R, 종양 내피 마커-1 (TEM-1, 엔도시알린으로도 공지된), 및 FGFR3을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 종양-연관 항원이 IGF-1R인 실시양태에서, 표적화 모이어티는 AVE1642 (인간화 모노클로날 IGF-1R 항체 (사노피(Sanofi)®-아벤티스(Aventis)/이뮤노겐))가 아니다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 적어도 50 kDa, 적어도 75 kDa, 적어도 100 kDa, 적어도 125 kDa, 적어도 150 kDa, 적어도 175 kDa, 적어도 200 kDa, 적어도 225 kDa, 적어도 250 kDa, 적어도 275 kDa, 또는 적어도 300 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 적어도 100 kDa, 적어도 125 kDa, 또는 적어도 150 kDa의 분자량을 갖는다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 소분자를 포함한다. 예를 들어, 표적 리간드 (예를 들어, 고친화도 표적 리간드)인 소분자, 또는 그의 유도체는 표적화 모이어티로서 사용될 수 있다. 적합한 소분자의 예는 제한 없이, PSMA-617 (전립선-특이적 막 항원 리간드) 및 3BP-227 (뉴로텐신 수용체 유형 1 길항제)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 모이어티는 표적화 및 치료적 모이어티 둘 다이며, 즉, 모이어티는 주어진 표적에 결합할 수 있고 또한 치료적 이점을 부여한다.
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 단백질 또는 폴리펩티드 (예를 들어, 변형된 폴리펩티드)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 아비머, 나노바디, 어피바디, 및 피브로넥틴 유형 III 도메인 (예를 들어, 센티린 또는 애드넥틴), 또는 전술한 것 중 임의의 것을 포함하는 분자로부터의 공통 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
항체
일부 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 항체는 전형적으로 이황화물 결합에 의해 함께 연결된 2개의 동일한 경쇄 폴리펩티드 및 2개의 동일한 중쇄 폴리펩티드를 포함한다. 각각의 쇄의 아미노 말단에 위치한 첫 번째 도메인은 아미노산 서열이 다양하여, 각각의 개별 항체의 항체-결합 특이성을 제공한다. 이들은 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) 영역으로 공지되어 있다. 각각 쇄의 다른 도메인은 아미노산 서열이 상대적으로 변하지 않으며 불변 중쇄 (CH) 및 불변 경쇄 (CL) 영역으로 공지되어 있다. 경쇄는 전형적으로 하나의 가변 영역 (VL) 및 하나의 불변 영역 (CL)을 포함한다. IgG 중쇄는 가변 영역 (VH), 제1 불변 영역 (CH1), 힌지 영역, 제2 불변 영역 (CH2), 및 제3 불변 영역 (CH3)을 포함한다. IgE 및 IgM 항체에서, 중쇄는 추가 불변 영역 (CH4)을 포함한다.
본 개시내용과 함께 사용하기에 적합한 항체는, 예를 들어, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중-특이적 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타류 항체, 키메라 항체, 단일쇄 Fv (scFv), 이황화물-연결된 Fv (sdFv), 및 항-이디오타입 (항-Id) 항체, 및 상기 중 임의의 것의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간화된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 키메라이다. 항체는 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 항체의 "항원 결합 단편"은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 용어 "항원 결합 단편"에 포함되는 결합 단편의 예는 Fab 단편, F(ab')2 단편, Fd 단편, Fv 단편, scFv 단편, dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), 및 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, "항원 결합 단편"은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 이들 항체 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득될 수 있고, 단편은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝될 수 있다.
본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은 항체 합성에 대해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 생성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)]; [Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50]; WO 92/22324; WO 98/46645 참조). 키메라 항체는 예를 들어 문헌 [Morrison, 1985, Science 229:1202]에 기재된 방법을 사용하여 생성할 수 있고, 인간화 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 6,180,370에 기재된 방법에 의해 생성할 수 있다.
본원에 기재된 추가 항체는 예를 들어 문헌 [Segal et al., J. Immunol. Methods 248:1-6 (2001)]; 및 [Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같은, 이중특이적 항체, 및 다가 항체, 또는 본원에 기재된 분자 중 임의의 것이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 아미노산 서열 변이체; 예를 들어, 의도된 표적에 결합하는 능력을 유지하는 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 아미노산 서열 변이체는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 최종 구성에 도달할 수 있되, 최종 구축물이 원하는 특성, 예를 들어 항원 결합을 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 억제 항체 ("길항 항체"라고도 함) 또는 그의 항원-결합 단편이고, 예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 표적의 하나 이상의 기능을 적어도 부분적으로 억제한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1 nM 내지 10 nM (종점 포함) 또는 0.1 nM 내지 1 nM (종점 포함)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
일부 실시양태에서, Kd는 관심 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 그의 항원의 Fab 버전으로 수행된 방사성-표지된 항원 결합 검정 (방사성면역검정, RIA)에 의해 측정된다.
일부 실시양태에 따르면, Kd는 고정된 항원을 사용한 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 표적 (예를 들어, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원)의 에피토프에 대항하여 지시된 인간 모노클로날 항체이다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 천연 및/또는 합성 기원의 임의의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 예를 들어, 포유동물 기원의 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 불변 도메인은, 존재하는 경우, 인간 불변 도메인이다. 일부 실시양태에서, 가변 도메인은 포유동물 가변 도메인, 예를 들어, 인간화 또는 인간 가변 도메인이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 사용되는 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 재조합 뮤린 항체, 키메라, 인간화 또는 완전한 인간 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 약물 표적화 및 영상화 적용을 위한 다른 모이어티에 추가로 커플링된다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 진단 목적을 위해, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 표지되고, 즉 표지 기에 커플링된다. 적합한 표지의 비제한적 예는 방사능 표지, 형광 표지, 적합한 염료 기, 효소 표지, 발색체, 화학발광 기, 비오티닐 기, 2차 리포터에 의해 인식되는 미리 결정된 폴리펩티드 에피토프 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 표지가 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 공유 결합된다.
그러한 표지된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 ("항체 접합체"로도 지칭됨)은 특히 면역조직화학 검정에서 또는 생체내 분자 영상화에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 치료 목적을 위해, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 이펙터 기, 특히 치료 이펙터 기, 예를 들어 세포독성제 또는 방사능 기 작용제와 추가로 접합된다.
폴리펩티드
폴리펩티드는 예를 들어 다양한 혈액학적 작용제 (예를 들어, 에리트로포이에틴, 혈액-응고 인자 등을 포함), 인터페론, 콜로니 자극 인자, 항체, 효소, 및 호르몬 중 임의의 것을 포함한다. 특정한 폴리펩티드의 정체는 본 개시내용을 제한하려는 것이 아니며, 관심 임의의 폴리펩티드는 본 방법에서 폴리펩티드일 수 있다.
본원에 기재된 폴리펩티드는 관심 표적 (예를 들어, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원)에 결합할 수 있는 표적-결합 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 막관통 폴리펩티드 (예를 들어, 수용체) 또는 리간드 (예를 들어, 성장 인자)에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 합성 폴리펩티드, 예를 들어 천연 발생 폴리펩티드 (예를 들어, 소마토스타틴)의 유사체이다.
적합한 폴리펩티드의 비제한적 예는 시클릭 옥타펩티드 예컨대 옥트레오테이트 및 옥트레오티드를 포함한다. 예를 들어, 옥트레오테이트 및 옥트레오티드는 DOTA 이중관능성 킬레이터에 접합되어 각각 DOTA-TATE 및 DOTA-TOC를 형성할 수 있으며, 이들은 높은-SSTR2 발현 암에 종종 사용된다.
변형된 폴리펩티드
본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용하기에 적합한 폴리펩티드는 변형된 아미노산 서열을 가질 수 있다. 변형된 폴리펩티드는 상응하는 참조 폴리펩티드와 실질적으로 동일할 수 있다 (예를 들어, 변형된 폴리펩티드의 아미노산 서열은 참조 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 가질 수 있다). 특정 실시양태에서, 변형은 원하는 생물학적 활성을 유의하게 파괴하지 않는다. 변형은 원래의 폴리펩티드의 생물학적 활성을 감소시킬 수 있거나 (예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 25%, 35%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 또는 95%까지), 효과가 없을 수 있거나, 증가시킬 수 있다 (예를 들어, 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 100%, 200%, 500%, 또는 1000%까지). 변형된 폴리펩티드는 폴리펩티드의 특성, 예컨대 생체내 안정성, 생체이용률, 독성, 면역학적 활성, 면역학적 동일성, 및 접합 특성을 갖거나 최적화할 수 있다.
변형은 번역 후 처리와 같은 자연적 과정, 또는 관련 기술분야에 공지된 화학적 변형 기술에 의한 변형을 포함한다. 변형은 폴리펩티드 골격, 아미노산 측쇄 및 아미노 말단 또는 카르복시-말단을 포함한 폴리펩티드의 어느 곳에서나 일어날 수 있다. 동일한 유형의 변형은 주어진 폴리펩티드의 여러 부위에서 동일하거나 다양한 정도로 존재할 수 있으며, 폴리펩티드는 하나 초과의 유형의 변형을 함유할 수 있다. 폴리펩티드는 유비퀴틴화의 결과로 분지될 수 있으며, 분지 유무에 관계없이 시클릭일 수 있다. 시클릭, 분지형 및 분지형 시클릭 폴리펩티드는 번역 후 자연적 과정으로부터 발생되거나 합성으로 제조될 수 있다. 다른 변형은 PEG화, 아세틸화, 아실화, 아세토미도메틸 (Acm) 기 추가, ADP-리보실화, 알킬화, 아미드화, 비오틴화, 카르바모일화, 카르복시에틸화, 에스테르화, 플라빈에 대한 공유 부착, 헴 모이어티에 대한 공유 부착, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 부착, 약물의 공유 부착, 마커 (예를 들어, 형광 또는 방사능)의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스파티딜이노시톨의 공유 부착, 가교-결합, 고리화, 이황화물 결합 형성, 탈메틸화, 공유 가교결합의 형성, 시스틴의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포르밀화, 감마-카르복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 히드록실화, 아이오딘화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 단백질분해 처리, 인산화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황산화, 단백질에 아미노산의 전이-RNA 매개 첨가 예컨대 아르기닐화 및 유비퀴틴화를 포함한다.
변형된 폴리펩티드는 또한 폴리펩티드 서열에 보존적 또는 비보존적 (예를 들어, D-아미노산, 데스아미노산)의 아미노산 삽입, 결실, 또는 치환을 포함할 수 있다 (예를 들어, 이러한 변화가 폴리펩티드의 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는 경우). 특히, 본원에서 폴리펩티드의 아미노 또는 카르복시-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 부가하면, 예를 들어 이황화물 결합에 의해 이러한 폴리펩티드의 접합이 촉진될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 아미노-말단에 단일 시스테인 잔기 또는 카르복시-말단에 단일 시스테인 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다. 아미노산 치환은 보존적 (즉, 잔기가 동일한 일반 유형 또는 기의 또 다른 것에 의해 대체됨) 또는 비보존적 (즉, 잔기가 또 다른 유형의 아미노산에 의해로 대체됨)일 수 있다. 게다가, 자연 발생 아미노산은 비-자연 발생 아미노산으로 치환될 수 있다 (즉, 비-자연 발생 보존적 아미노산 치환 또는 비-자연 발생 비-보존적 아미노산 치환).
합성으로 제조된 폴리펩티드는 DNA에 의해 자연적으로 코딩되지 않은 아미노산 (예를 들어, 비-자연 발생 또는 비천연 아미노산)의 치환을 포함할 수 있다. 비-자연 발생 아미노산의 예는 D-아미노산, N-보호된 아미노산, 시스테인의 황 원자에 부착된 아세틸아미노메틸 기를 갖는 아미노산, PEG화된 아미노산, 화학식 NH2(CH2)nCOOH (여기서 n은 2-6임)의 오메가 아미노산, 중성 비극성 아미노산, 예컨대 사르코신, t-부틸 알라닌, t-부틸 글리신, N-메틸 이소류신, 및 노르류신을 포함한다. 페닐글리신은 Trp, Tyr 또는 Phe를 대체할 수 있으며; 시트룰린과 메티오닌 술폭시드는 중성 비극성, 시스테인산은 산성이고, 오르니틴은 염기성이다. 프롤린은 히드록시프롤린으로 대체될 수 있으며 특성을 부여하는 형태를 유지할 수 있다.
유사체는 치환 돌연변이유발에 의해 생성될 수 있고 원래의 폴리펩티드의 생물학적 활성을 유지할 수 있다. "보존적 치환"으로 확인된 치환의 예는 표 1에 나타냈다. 이러한 치환이 원하지 않는 변화를 발생시키는 경우, 표 1에서 "예시적 치환"으로 명명되거나, 아미노산 부류와 관련하여 본원에 추가로 기재된 바와 같은 다른 유형의 치환을 도입하고 생성물을 스크리닝한다.
<표 1>
아미노산 치환
Figure pct00009
기능 또는 면역학적 동일성의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어 시트 또는 나선 입체형태와 같은 치환 영역에서 폴리펩티드 백본의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 및/또는 (c) 측쇄의 벌크에 미치는 그의 영향이 상당히 상이한 치환을 선택함으로써 완수된다.
제약 조성물
일부 실시양태에서, 방법은 본원에 기재된 바와 같은 방사면역접합체의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 이러한 제약 조성물은 다양한 약물 전달 시스템에서 사용하기 위해 제제화될 수 있다. 1종 이상의 생리학적으로 허용되는 부형제 또는 담체는 또한 적절한 제제화를 위해 제약 조성물에 포함될 수 있다. 본 개시내용에서 함께 사용하기에 적합한 제제의 비제한적 예는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed., 1985]에 기재된 것들을 포함한다. 약물 전달 방법에 대한 간략한 검토는, 예를 들어, 문헌 [Langer (Science 249:1527-1533, 1990)]을 참조한다.
제약 조성물은 본원에 논의된 다양한 투여 경로 중 임의의 것을 위해 제제화될 수 있고 (예를 들어, 본원의 "투여 및 투여량" 하위섹션 참조), 데포 주사 또는 침식성 임플란트 또는 구성요소와 같은 수단에 의한 지속 방출 투여가 고려된다. 따라서, 본 개시내용은 특히 허용되는 담체, 바람직하게는 수성 담체, 예를 들어, 물, 완충수, 염수, 또는 PBS에 용해되거나 현탁된 본원에 개시된 작용제 (예를 들어, 방사면역접합체)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 pH 조정제 및 완충제, 등장성 조절제, 습윤제, 또는 세제와 같은 생리학적 조건에 근접하도록 제약상 허용되는 보조 물질을 함유한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 경구 전달을 위해 제제화되고 임의로 정제 또는 캡슐과 같은 단위 투여 형태의 제제화를 위한 결합제 또는 충전제와 같은 불활성 성분을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 국소 투여용으로 제제화되고 임의로 크림, 연고, 겔, 페이스트, 또는 점안제의 제제화를 위한 용매 또는 유화제와 같은 불활성 성분을 함유할 수 있다.
일부 실시양태에서, 제공된 제약 조성물은 통상적인 멸균 기술에 의해 멸균되고, 예를 들어 멸균 여과될 수 있다. 생성된 수용액은 그대로 사용하기 위해 포장되거나, 동결건조될 수 있다. 동결건조 제제는 예를 들어 투여 전에 멸균 수성 담체와 조합될 수 있다. 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 보다 바람직하게는 5 내지 9 또는 6 내지 8, 가장 바람직하게는 6 내지 7, 예컨대 6 내지 6.5일 것이다. 생성된 고체 형태의 조성물은, 예를 들어, 정제 또는 캡슐의 밀봉된 패키지와 같이 각각이 고정된 양의 상기-언급된 작용제 또는 작용제들을 함유하는 다중 단일 용량 단위로 포장될 수 있다. 고체 형태의 제약 조성물은 또한 국소 적용 가능한 크림 또는 연고용으로 설계된 짜낼 수 있는 튜브와 같이 유연한 수량을 위한 용기에 포장될 수 있다.
기능적 효과
많은 실시양태에서, 제공된 방법에 따라 방사면역접합체를 투여하는 것은 림프구 집단의 종양 내로 (예를 들어, 종양의 코어 내로) 침윤을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 림프구 집단은 T 세포 (예를 들어, CD8+ T 세포)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 림프구 집단은 세포독성 림프구, 예를 들어 활성화된 CD8+ T 세포 및/또는 자연 살해 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 림프구 집단은 세포독성 및/또는 활성화된 림프구의 하나 이상의 마커 (세포 표면 마커 및/또는 세포내 마커)에 대해 양성인 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 림프구 집단은 CD3, CD8, CD16, CD25, CD27, CD44, CD45, CD46, CD53, CD56, CD57, CD69, CD137, 그랜자임 B, 또는 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 마커에 대해 양성인 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 림프구 집단은 종양-연관 항원에 특이적인 (예를 들어, 인식하는) T 세포 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하는 CD8+ T 세포 집단을 포함한다. 일부 실시양태에서, 종양-연관 항원은 방사면역접합체 내의 표적화 모이어티가 결합할 수 있는 종양-연관 항원과 상이하다. 일부 실시양태에서, CD8+ T 세포는 신생항원인 종양-연관 항원에 특이적인 T 세포 수용체를 발현한다.
일부 실시양태에서, 림프구 집단은 종양-연관 항원을 발현하는 세포를 우선적으로 사멸시킬 수 있는 세포 (예를 들어, CD8+ T 세포)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 림프구 집단 (예를 들어, CD8+ T 세포 집단)은 참조 수준보다 더 큰, 예를 들어, 참조 수준보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 또는 적어도 5배 더 큰 수준으로 종양 (예를 들어, 종양의 영역 예컨대 종양의 코어)에서 검출가능하다.
일부 실시양태에서, 림프구 집단 (예를 들어, CD8+ T 세포 집단)은 종양 내 세포 또는 종양의 영역 (예를 들어, 종양의 코어)의 적어도 5%, 적어도 7.5%, 적어도 10%, 적어도 12.5%, 또는 적어도 15%를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 종양-연관 항원에 특이적인 (예를 들어, 인식하는) T 세포 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포는 종양 또는 종양의 영역 (예를 들어, 종양의 코어)에 침윤된 CD8+ T 세포 집단의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 또는 적어도 70%를 나타낸다.
일부 실시양태에서, CD8+ 세포 (예를 들어, 종양-연관 항원에 특이적인 T 세포 수용체를 발현하는 CD8+ 세포)는 투여 단계로부터 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 적어도 30일, 적어도 35일, 또는 적어도 40일 대상체에서 검출가능하다 (예를 들어, 대상체의 조직 또는 그의 샘플에서 검출가능함).
특정 실시양태에서, 제공된 방법에 따라 방사면역접합체를 투여하는 것은 종양, 예를 들어 종양의 코어에서 세포 증식의 억제를 발생시킨다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 투여된 대상체로부터의 종양 조직에서의 세포 증식은 참조 수준에 비해 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 12.5배, 적어도 15배, 적어도 17.5배, 또는 적어도 20배 더 낮다. 세포 증식은 세포내 또는 세포 상의 마커 (예를 들어, Ki67)의 평가를 포함하여 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법 중 임의의 것을 사용하여 평가할 수 있다.
종양에서 특정한 마커 (예를 들어, CD8 T 세포의 마커, 세포 증식의 마커, 아폽토시스의 마커 등)에 대해 양성인 세포의 수 및/또는 비율은 다양한 공지된 방법 중 임의의 것을 사용하여 평가될 수 있다. 예를 들어, 일부 방법에서 단면의 마커에 대해 양성으로 염색된 세포의 수는 종양의 단면 내의 영역에서 모든 세포 핵 (예를 들어, 생존 세포의 마커에 대해 양성으로 염색된 핵)의 백분율로서 계산된다. 특정 실시양태에서, 카운팅은 단면 내의 몇몇 영역 (예를 들어, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개 영역)에서 수행되고, 백분율은 다양한 영역으로부터의 카운트의 평균으로서 계산된다.
일부 실시양태에서, 종양 내의 저산소 영역 (예를 들어, 종양의 중심에서 전형적으로 발견되는 영역)은 세포 계수를 수행할 때 제외된다. 이들 저산소 영역은 치료제의 부재 하에 괴사하는 경향이 있다. 예를 들어, 종양을 가진 대상체에게 투여된 작용제의 결과로 발생하는 종양 세포 사멸 (예를 들어, 아폽토시스 및/또는 괴사에 의함)을 평가할 때, 이러한 저산소 영역 이외의 영역을 선택하여 세포 계수를 수행할 수 있다.
일부 방법에서, 세포는 관심 조직으로부터 단일 세포 현탁액을 수득하거나 제조하고, 하나 이상의 마커에 대해 세포를 염색하고, 유세포 분석법과 같은 것을 사용하는 것과 같이, 염색된 세포에 대해 세포 분류 또는 정량화 기술을 수행함으로써 정량화된다.
특정 실시양태에서, 제공된 방법에 따라 방사면역접합체를 투여하는 것은 종양의 진행의 둔화 또는 억제를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양의 퇴행을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 투여 단계는 종양의 완전한 퇴행을 발생시킨다.
특정 실시양태에서, 제공된 방법에 따라 방사면역접합체를 투여하는 것은 종양 세포의 전이 억제를 발생시킨다. 이러한 억제는 예를 들어 전이 수의 감소, 전이의 공격성 감소, 및/또는 전이 발달의 지연을 포함할 수 있다.
종양
치료를 필요로 하는 환자는 하나 이상의 종양을 가질 수 있다. 하나 이상의 종양은 원발성 종양, 속발성 종양, 또는 원발성 종양과 속발성 종양 둘 다를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 종양은 고도의 면역원성이 아니며, 예를 들어 종양은 중간 정도로 면역원성이거나 면역학적으로 차갑다. 일부 실시양태에서, 종양은 체크포인트 억제제 요법에 대해 반응하지 않거나 부분적으로만 반응한다. 일부 실시양태에서, 종양 (치료의 부재 하에)은 예를 들어 총 생존 세포 또는 세포 핵의 10% 미만, 7.5% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 또는 0.5% 미만의 수준에서 림프구 (예를 들어, T 세포, 예컨대 CD8+ T 세포)의 침윤이 없거나 낮은 것을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 종양은 방사면역접합체 투여 시점에 부피가 적어도 50 mm3, 적어도 75 mm3, 적어도 100 mm3, 적어도 적어도 125 mm3, 적어도 150 mm3, 적어도 175 mm3, 또는 적어도 200 mm3이다.
일부 실시양태에서, 암은 고형 종양, 예를 들어 암종, 육종, 흑색종 또는 림프종이다.
일부 실시양태에서, 고형 종양은 암종, 예를 들어 선암종, 편평 세포 암종, 또는 선편평 암종이다. 암종의 비제한적 예는 선양 낭포, 부신피질 암종, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 담낭 암종, 위암, 두경부암, 폐암 (예를 들어, 소세포 폐암 또는 비-소세포 폐암, 또는 폐의 선암종), 신경모세포종, 신경내분비암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 고환암을 포함한다.
일부 실시양태에서, 고형 종양은 육종이다. 육종의 비제한적 예는 혈관육종 또는 혈관내피종, 성상세포종, 연골육종, 유잉 육종, 섬유육종, 신경교종, 평활근육종, 지방육종, 악성 섬유종 조직구종 (MFH), 중간엽 또는 혼합 중배엽 종양, 중피 육종 또는 중피종, 점액육종, 골육종, 횡문근육종, 및 활막 육종을 포함한다.
일부 실시양태에서, 종양은 신경모세포종이다.
일부 실시양태에서, 종양은 뇌종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 신경교종이다.
일부 실시양태에서, 종양은 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 종양은 비고형 종양, 예를 들어 액체 종양 또는 혈액학적 종양이다. 일부 실시양태에서, 종양은 골수종, 예를 들어 다발성 골수종이다. 일부 실시양태에서, 종양은 백혈병, 예를 들어 급성 골수성 백혈병이다.
일부 실시양태에서, 종양은 혼합 유형 종양, 예를 들어 혼합 중배엽 종양, 암육종, 또는 기형암종이다.
대상체
일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 인간이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 암이 있거나 암이 발병할 위험이 있다. 예를 들어, 대상체는 암 진단으로 진단되었을 수 있다. 예를 들어, 암은 원발성 암 또는 속발성 (예를 들어, 전이성) 암일 수 있다. 대상체는 임의의 암 병기, 예를 들어 림프절 침범이 있거나 없이 그리고 전이가 있거나 없는 병기 I기, II기, III기 또는 IV기를 가질 수 있다. 제공된 방사면역접합체 및 조성물은 암의 추가 성장을 예방하거나 감소시킬 수 있고/있거나 그렇지 않으면 암을 개선할 수 있다 (예를 들어, 전이를 예방하거나 감소시킬 수 있다). 일부 실시양태에서, 대상체는 암에 걸리지 않았지만, 예를 들어 하나 이상의 위험 인자 예컨대 환경 노출, 하나 이상의 유전적 돌연변이 또는 변이체의 존재, 가족력 등의 존재로 인해, 암이 발병할 위험이 있는 것으로 결정되었다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암으로 진단되지 않았다.
일부 실시양태에서, 대상체는 난치성 암의 치료를 필요로 한다.
투여 및 투여량
본원에 기재된 방사면역접합체 및 그의 제약 조성물은 전신 및 국소 투여 경로를 포함한 임의의 다양한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
전신 투여 경로는 비경구 경로 및 장 경로를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방사면역접합체 또는 그의 제약 조성물은 비경구 경로, 예를 들어 정맥내, 동맥내, 복강내, 피하 또는 피내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 방사면역접합체 또는 그의 제약 조성물은 정맥내 투여된다. 일부 실시양태에서, 방사면역접합체 또는 그의 제약 조성물은 장 투여 경로, 예를 들어, 경-위장을 통해, 또는 경구로 투여된다.
국소 투여 경로는 종양주위 주사 및 종양내 주사를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
제약 조성물은 방사선 치료 계획, 진단, 및/또는 치료적 치료를 위해 투여될 수 있다. 방사선 치료 계획 또는 진단 목적을 위해 투여되는 경우, 방사면역접합체는 진단 유효량 및/또는 치료 유효량을 결정하기에 유효한 양으로 대상체에게 투여될 수 있다. 치료적 적용에서, 제약 조성물은 장애 및 그의 합병증의 증상을 치유하거나 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 양으로 이미 병태 (예를 들어, 암)를 앓고 있는 대상체 (예를 들어, 인간)에게 투여될 수 있다. 이러한 목적을 완수하기에 적절한 양은 질환 또는 의학적 상태와 연관된 적어도 하나의 증상을 실질적으로 개선하기에 충분한 화합물의 양인 "치료 유효량"으로 정의된다. 예를 들어, 암의 치료에서, 질환 또는 병태의 임의의 증상을 하락, 예방, 지연, 억제 또는 정지시키는 작용제 또는 화합물은 치료적으로 효과적일 것이다. 치료 유효량의 작용제 또는 화합물은 질환 또는 병태를 치료하는 데 필요하지 않지만, 예를 들어 질환 또는 병태의 발병이 지연, 방해, 또는 예방되거나, 질환 또는 병태 증상이 개선되거나 질환 또는 병태의 조건이 변경되도록 질환 또는 병태에 대한 치료를 제공할 수 있다. 예를 들어, 질환 또는 병태가 덜 심각해지고/거나 개체의 회복이 가속화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 방사선 치료 계획에 효과적인 양의 방사면역접합체 또는 조성물의 제1 용량을 투여받은 다음에, 치료 유효량의 방사면역접합체 또는 조성물의 제2 용량 또는 용량 세트를 투여받는다.
유효량은 질환 또는 병태의 중증도 및 대상체의 다른 특성 (예를 들어, 체중)에 따라 달라질 수 있다. 대상체 (예를 들어, 인간과 같은 포유동물)를 위한 개시된 방사면역접합체 및 조성물의 치료 유효량은 개체의 차이 (예를 들어, 연령, 체중, 및 대상체의 병태의 차이)를 고려하여 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 암세포를 표적화하는 증진된 능력을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 개시된 방사면역접합체의 유효량은 비접합 및/또는 비-방사선표지된 표적화 모이어티의 치료 효과에 대한 등가 용량보다 더 낮다 (예를 들어, 약 90%, 75%, 50%, 40%, 30%, 20%, 15%, 12%, 10%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1%)
유효량을 포함하는 본원의 제약 조성물의 단일 또는 다중 투여는 치료 의사에 의해 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다. 투여량 및 투여 일정은 대상체의 질환 또는 병태의 중증도에 기초하여 결정 및 조정될 수 있으며, 이는 임상의 또는 본원에 기재된 것들에 따라 통상적으로 실시되는 방법에 따라 치료 과정 전반에 걸쳐 모니터링될 수 있다.
치료 요법
특정 실시양태에서, 방사면역접합체는 치료 요법의 일부로서 투여되는 유일한 세포독성제이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 (동시에, 순차적으로, 또는 중복 투여 영역에서) 또 다른 세포독성제와 조합하여 투여되지 않는다. 따라서, 이들 실시양태에서, 방사면역접합체를 포함하는 치료 요법의 과정 동안 대상체가 노출되는 유일한 세포독성제는 방사면역접합체 그 자체이다.
일부 실시양태에서, 방사면역접합체는 또 다른 작용제, 예를 들어 치료제와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 비-세포독성제, 예를 들어 DNA 손상 및 복구 억제제 (DDRi), 체크포인트 억제제, 또는 그의 임의의 조합이다.
체크포인트 억제제
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 방사면역접합체와 조합하여 투여된다. 일반적으로, 적합한 체크포인트 억제제는 면역 억제 체크포인트 단백질을 억제한다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 세포독성 T-림프구-연관 항원 4 (CTLA-4), 프로그래밍된 사멸 1 (PD-1), 프로그래밍된 사멸 리간드-1 (PD-L1), LAG-3, T 세포 면역글로불린 뮤신 3 (TIM-3), 및 킬러 면역글로불린-유사 수용체 (KIR)로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질을 억제한다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 CTLA-4, PD-1, 또는 PD-L1에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 PD-1과 PD-L1 간의 상호작용을 방해 (예를 들어, 결합을 방해)한다.
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 소분자이다.
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 예를 들어 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 인간 또는 인간화 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 마우스 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 CTLA-4 항체이다. CTLA-4 항체의 비제한적 예는 BMS-986218, BMS-986249, 이필리무맙, 트레멜리무맙 (이전에는 티실리무맙, CP-675,206), MK-1308, 및 REGN-4659를 포함한다. CTLA-4 항체의 추가 예는 마우스 모노클로날 항체인 4F10-11이다.
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 PD-1 항체이다. PD-1 항체의 비제한적 예는 캄렐리주맙, 세미플루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 신틸리맙, 티슬렐리주맙 및 토리팔리맙을 포함한다. PD-1 항체의 추가 예는 마우스 모노클로날 항체인 RMP1-14이다.
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 PD-L1 항체이다. PD-L1 항체의 비제한적 예는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 및 더발루맙이 포함된다.
일부 실시양태에서, 하나 초과의 체크포인트 억제제의 조합이 사용된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, CTLA-4 억제제 및 PD-1 또는 PD-L1 억제제 둘 모두가 사용된다.
추가 설명 없이, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 설명에 기초하여, 본 개시내용을 최대한 활용할 수 있다고 여겨진다. 따라서 하기 구체적 예는 단지 예시적인 것으로 해석되어야 하며 어떠한 방식으로든 개시내용의 나머지 부분을 제한하는 것이 아니다.
실시예
실시예 1. [ 225 Ac]-FPI-1792, IGF-1R-표적화 방사면역접합체의 합성
TAB-199 (크리에이티브 바이오랩스(Creative Biolabs)로부터 상업적으로 입수가능한, 서브나노몰 친화도를 가진 뮤린 IGF-1R을 또한 인식하는 인간 모노클로날 IGF-1R 항체)를 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA) 킬레이트화 모이어티 및 패스트클리어™ 링커 (퓨전 파마슈티컬즈(Fusion Pharmaceuticals))를 포함하는 이관능성 킬레이트인 FPI-1397 (퓨전 파마슈티컬즈)에 접합시켰다. FPI-1397의 구조는 하기에 나타냈다:
Figure pct00010
생성된 접합체를 정제하고, 재제제화하고, [225Ac]로 방사성표지하였다. [225Ac]-FPI-1792로 명명된 최종 접합체는 하기 구조식을 포함하며, 여기서 TAB-199가 항체로서 우측에 있다. [225Ac]는 DOTA 모이어티에 복합체화된다.
Figure pct00011
실시예 2. 중간 정도로 면역원성 결장암 세포주에서 [ 225 Ac]-FPI-1792의 투여 후 CD8+ T 세포에 의한 코어 종양 침윤
[225Ac]-FPI-1792는 패스트-클리어™ 링커를 통해 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA) 킬레이트화 모이어티에 접합된 TAB-199를 포함하는 방사면역접합체이며, 여기서 225Ac는 DOTA 모이어티에 복합체화된다.
종양 세포 증식 및 종양 성장에 대한 [225Ac]-FPI-1792 투여 효과를 결장암의 CT-26 마우스 모델인 중간 정도로 면역원성 동계 마우스 모델에서 평가하였다. CT-26 세포는 뮤린 IGF-1R을 발현하고 항-CTLA-4 항체에 민감하나 항-PD-1 항체에는 부분적으로만 민감하다.
도 1a는 이들 실험의 개략도를 도시한다. CT-26 세포를 면역 적격 마우스에 이식하였다. 이식된 CT-26 세포를 4일 동안 또는 이들이 대략 100-150 mm3 부피의 종양을 생성할 때까지 계내에서 증식하도록 하였다. 이어서 동물에게 비히클 (대조군), TAB-199 (네이키드 항체), 또는 [225Ac]-FPI-1792 (100 nCi 또는 200 nCi)를 투여하였다.
처리 개시 후에 CT-26 종양 부피를 모니터링하였다. 비히클 대조군 또는 네이키드 항체가 투여된 동물에서 CT-26 종양의 상대 종양 부피는 투여 후 0일 내지 20일에 증가하였다 (도 1b). 100 nCi의 TAT의 투여는 비히클 대조군 또는 네이키드 항체의 투여와 비교하여 7일 내지 20일에 종양 성장의 상대적으로 더 낮은 증가 및 작은 상대적 종양 크기를 발생시켰다 (도 1b). 100 nCi의 [225Ac]-FPI-1792의 투여는 투여 후 18일차 또는 약 18일차에 상대 종양 부피의 안정기를 발생시켰다 (도 1b). 200 nCi의 [225Ac]-FPI-1792의 투여는 비히클 대조군, 네이키드 항체, 또는 100 nCi [225Ac]-FPI-1792의 투여와 비교하여 7일 내지 20일에 더 작은 상대적 종양 크기를 발생시켰다 (도 1b). 게다가, 200 nCi [225Ac]-FPI-1792의 투여는 기준선과 비교하여 종양 부피의 상대적 하락을 발생시켰다 (도 1b). 구체적으로, 투여 후 대략 9일 후, 200 nCi에서 TAT로 처리된 동물의 CT-26 종양은 치료 시작시 CT-26 종양의 크기에 비해 크기가 하락하기 시작하였다. 200 nCi에서 TAT로 처리된 동물에서 CT-26 종양 부피의 하락은 투여 후 약 25일까지 계속되는 것으로 보였고, 그 후 종양 부피는 비교적 변하지 않고 유지되었다 (도 1b).
CT-26 종양을 투여 후 7일차에 동물로부터 수확하여 종양 세포 증식 및 면역조직화학에 의한 종양 코어 내로의 CD8+ T 세포의 침윤을 평가하였다. 간략하게, 포르말린-고정 파라핀-포매 (FFPE) 조직은 면역조직화학을 위해 다음과 같이 준비하였다: 종양을 절제하고, 포름알데히드에 고정시키고, 파라핀을 포매하고, 절편화하였다.
단면에서, 종양 코어로부터의 영역 (변연 경계로부터 > 250 μM) 및 저산소/괴사 영역으로부터 떨어진 영역을 평가하였다.
세포 증식 마커 Ki67에 대한 면역염색에 의해 종양 세포 증식을 평가하였다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792가 투여된 CT-26-주사된 동물로부터 종양 조직의 Ki67 염색은 비히클이 투여된 CT-26-주사된 동물로부터의 종양 조직과 비교하여 더 낮은 수준의 Ki67 염색을 나타냈고 (도 1c), 이는 [225Ac]-FPI-1792의 투여는 종양 세포 증식을 감소시켰음을 시사한다.
CT-26 종양 코어 내로의 CD8+ T 세포의 침윤을 CD8에 대한 면역염색에 의해 평가하였다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792가 투여된 CT-26-주사된 동물로부터의 종양 조직의 CD8 염색은 비히클이 투여된 CT-26-주사된 동물로부터의 종양 조직과 비교하여 상대적으로 더 높은 수준의 CD8 염색을 나타냈다 (도 1d). CT-26 종양에서 세포독성 T 세포와 자연 살해 세포의 기능을 세포 독성 T 세포 및 자연 살해 세포에서 발현되는 세린 프로테아제인 그랜자임 B에 대한 면역염색에 의해 평가하였다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 처리된 CT-26 주사된 동물의 종양 조직의 그랜자임 B 염색은 비히클이 투여된 CT-26 주사된 동물의 종양 조직과 비교하여 상대적으로 더 높은 수준의 그랜자임 B 염색을 나타냈다 (도 1e). 이들 결과는 활성화된 CD8+ T 세포 및/또는 자연 살해 세포를 포함한, CD8+ T 세포의 상당한 종양 코어 침윤을 시사한다.
이들 결과는 IGF-1R을 인식할 수 있는 알파-방출 방사면역접합체인 [225Ac]-FPI-1792를 투여하는 것은 비히클 대조군을 투여할 때 수득한 수준에 비해 CD8+ T 세포 및 기타 그랜자임 B-발현 면역 세포의 현저하게 증가된 수준으로 종양 코어 내로의 침윤을 발생시켰음을 입증한다. [225Ac]-FPI-1792의 투여는 또한 IGF-1R-발현 종양 세포의 종양 세포 증식을 하락시키고, 상대적 종양 성장을 하락시켰고 (비히클 대조군 또는 저온 항체의 투여와 비교하여), 전체 종양 성장을 역전시켰다.
실시예 3. 중간 정도로 면역원성 결장암 세포주에서 [ 225 Ac]-FPI-1792 투여 후 코어 종양에서 CD8+ T 세포의 정량화
세포 증식 및 CD8+ T 세포 종양 코어 침윤을 추가로 평가하기 위해, CT-26 종양 접종 및 5개 처리군 중 하나에 따른 치료 (하기에 나타냄)는 CT-26 종양이 실시예 2에서보다 후기 단계로 발달하도록 허용한 것을 제외하고는, 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행하였다. 처리 개시 전에 종양을 대략 6일 동안 또는 종양이 대략 175 mm3가 될 때까지) 발달되도록 하였다.
· 비히클
· TAB-199 (저온 항체)
· 200 nCi [225Ac]-FPI-1792
· 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1
· 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA4
· 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1 + 항-CTLA4
도 2a는 이들 실험의 개략도를 도시한다. 도 2b는 다양한 치료제 (투여되는 경우)에 대한 투여 일정 (일 단위)을 예시한다. 조합 처리군에서, 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 먼저 투여하고 그 다음날부터 추가의 치료제를 투여하였다.
도 2c에 도시된 바와 같이 (상대 종양 부피를 도시함), 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군 (200 nCi [225Ac]-FPI-1792가 공동-치료제 없이 투여된 군 포함)은 비히클 및 저온 항체군의 종양 성장과 비교하여 유의하게 감소된 종양 성장을 나타냈다.
처리 개시 후 12일차에 면역조직화학적 분석을 위해 종양을 수집하고, 실시예 2에 기재된 바와 같이 FFPE 조직을 제조하였다. 종양 절편을 세포 증식 (Ki67), T-세포 (CD8), 및 세포독성 T 세포 또는 자연 살해 세포 (그랜자임 B)의 다양한 마커에 대해 염색하였다. 종양 코어로부터의 대표적인 비영역 괴사 영역(예를 들어, 변연 경계로부터 > 250 um)은 도 2d, 2e, 및 2f에 나타냈다.
도 2d는 Ki67로 염색된 절편으로부터의 대표적인 결과를 나타낸다. 비히클 및 저온 항체 대조군과 비교하여 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군으로부터의 절편에서 현저히 감소된 Ki67 (그리고 따라서 감소된 세포 증식)이 관찰되었다.
도 2e는 CD8로 염색된 절편으로부터의 대표적인 결과를 나타낸다. 비히클 및 저온 항체 대조군과 비교하여 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군으로부터의 절편에서 현저히 증가된 CD8 염색이 관찰되었다. 도 2f는 그랜자임 B로 염색된 절편으로부터의 대표적인 결과를 나타낸다. 비히클 및 저온 항체 대조군과 비교하여 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군으로부터의 절편에서 현저하게 증가된 그랜자임 B 염색이 관찰되었다. 이들 결과는 활성화된 CD8+ T 세포 및/또는 자연 살해 세포를 포함한, CD8+ T 세포의 상당한 종양 코어 침윤을 시사한다.
면역조직화학 결과를 정량화하기 위해, Ki67-, CD8-, 및 그랜자임 B-양성 세포인 세포의 수를 5개의 개별 영역으로부터 카운트하고 각각의 처리군에 대해 평균을 냈다. 양성 세포의 백분율은 모든 생존 세포 핵의 백분율로서 계산하였다.
도 2g는 % Ki67-양성 세포를 결정하기 위한 정량 결과를 도시한다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군은 비히클 및 TAB-199 (저온 항체) 대조군과 비교하여 Ki67 염색이 유의하게 하락함 (그리고 따라서 세포 증식 하락함)을 나타냈다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 처리군 간에는 어떤 유의한 차이도 검출되지 않았다.
도 2h는 % CD8-양성 세포를 결정하기 위한 정량 결과를 도시한다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군은 비히클 및 TAB-199 (저온 항체) 대조군과 비교하여 CD8+ 세포의 백분율이 유의하게 증가된 것으로 나타났다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 처리군 간에는 어떤 유의한 차이도 검출되지 않았다.
도 2i는 % 그랜자임 B-양성 세포를 결정하기 위한 정량 결과를 도시한다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 모든 처리군은 비히클 및 TAB-199 (저온 항체) 대조군과 비교하여 그랜자임 B+ 세포의 백분율이 유의하게 증가된 것으로 나타났다. 200 nCi [225Ac]-FPI-1792를 포함한 처리군 간에는 어떤 유의한 차이도 검출되지 않았다.
이들 결과는 실시예 2에 기재된 실험에 대한 투여 시간에 비해 나중 시점 (및 종양이 더 큰 경우)에 [225Ac]-FPI-1792를 투여하는 것이 또한 CD8+ T 세포 및 기타 그랜자임 B-발현 면역 세포의 종양 코어 내로 침윤, 종양 세포 증식 하락, 상대적 종양 성장 하락 (비히클 대조군 또는 저온 항체 투여와 비교하여), 및 전체 종양 성장 역전을 발생시켰음을 입증한다.
게다가, 세포 정량 분석은 침윤 (종양의 코어에서 CD8+ 및 그랜자임 B+ 염색의 존재에 의해 평가됨) 및 세포 증식의 차이가 대조군 (비히클 및 저온 항체)과 처리군 ([225Ac]-FPI-1792 단독 또는 하나 이상의 체크포인트 억제제와 조합하여) 처리 후 12일차에 통계학적으로 유의함을 나타냈다. 게다가, 평가된 시점에서, [225Ac]-FPI-1792를 단독 사용한 어떤 처리도 필적할 만한 CD8+ T 세포 침윤 및 세포 증식 결과를 산출하지 않았으며 이는 하나 이상의 체크포인트 억제제와 조합하여 [225Ac]-FPI-1792를 사용한 처리에서와 같았다.
실시예 4. 결장직장암 세포 모델에서 종양 재-시험감염 실험에서 입증된 바와 같은 [ 225 Ac]-FPI-1792 투여의 지속 효과
CT-26 결장암 세포를 접종하고, [225Ac]-FPI-1792로 처리한 마우스의 속발성 종양 코어에서 종양 성장 및 CD8+ T 세포의 존재를 평가함으로써 종양-침윤 림프구의 지속성을 평가하고, 그 후 동일한 종양 세포주 (CT-26)로 재-시험감염시켰다.
도 3a는 이 재-시험감염 실험에 대한 개략도를 설명한다.
CT-26 종양 접종 및 [225Ac]-FPI-1792를 사용한 처리를 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행하였다. 추가의 마우스 군을 1) [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1; 2) [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA4; 또는 3)) [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1 + 항-CTLA4로 처리하였다. 치료 투여 30일 후, 동물에게 CT-26 세포를 반대측 측면 상에 동종이식 이식하도록 재-시험감염시켰다. 재-시험감염 후 처리가 제공되지 않았다. 비처리 마우스를 대조군으로 사용하였다.
재-시험감염 11일 후, 속발성 종양으로부터 조직을 수득하였다. FFPE 조직을 실시예 2에 기재된 바와 같이 제조하였다. 종양 코어로부터의 영역을 CD8 항체와의 반응성에 대해 평가하였다. 대조군과 비교하여, 원래 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 단독으로 처리된 동물로부터의 속발성 종양 조직에서 더 높은 빈도의 CD8+ T 세포가 검출되었고, 후속적으로 CT-26 세포로 재-시험감염시켰다 (도 3b). 이들 결과는 [225Ac]-FPI-1792의 단일 투여가 속발성 종양의 코어에 침윤할 수 있는 CD8+ T 세포 집단을 유도함을 시사한다. 게다가, 이 CD8+ T 세포 집단은 대조군과 비교하여 더 높은 수준으로 지속된다.
재-시험감염 후 종양 성장을 모든 처리군 및 대조군에서 평가하였다. 도 3c에 나타낸 바와 같이, 모든 처리군은 대조군과 비교하여 현저히 감소된 종양 성장을 나타냈다. 다양한 처리군 ( [225Ac]-FPI-1792 단독 또는 하나 이상의 체크포인트 억제제와 조합하여 처리)의 15마리 동물 중 13마리는 속발성 종양의 어떤 성장도 나타내지 않았다.
이들 결과는 [225Ac]-FPI-1792 단독, 또는 체크포인트 억제제와 조합하여 단일 투여에 의해 매개되는 "백신 효과"를 입증한다. 따라서, [225Ac]-FPI-1792 단독 투여는 지속되고 궁극적으로 속발성 종양의 코어로 침윤하는 CD8+ T 세포를 통해 지속되고 유익한 효과를 부여한다.
이들 결과는 [225Ac]-FPI-1792를 사용한 치료가 종양 재발 또는 속발성 전이의 개선 또는 예방을 촉진할 수 있음을 시사한다.
실시예 5. 비장에서 종양으로의 종양 항원-특이적 CD8+ T 세포의 [ 225 Ac]-FPI-1792 -매개 동원
비장으로부터 속발성 종양으로의 T-세포 동원은 실시예 4에 기재된 실험에서 CT-26 종양 재-시험감염이 제시된 마우스에서 평가되었다.
실시예 4에서 언급된 바와 같이, 종양 재-시험감염 후 마우스에 어떤 처리도 제공하지 않았다. 재-시험감염 후 14일차에, 속발성 종양 및 비장이 하기 처리군의 마우스로부터 단리되었다:
· 비처리 (비히클)
· [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1
· [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA4
· [225Ac]-FPI-1792 + 항-PD1 + 항-CTLA4
조직을 콜라게나제 및 DNase로 분해하여 단일 세포 현탁액을 형성하였다. CD45+ 조혈 세포를 자기(magnetic) 선택에 의해 단일 세포 현탁액으로부터 정제한 다음에, 세포를 염색하고 CD8의 발현에 대해 분석하였다.
도 4b는 분석된 처리군에 걸쳐 비장 (좌측 패널) 및 종양 (우측 패널) 세포에서 T 세포 빈도(CD45+ 정제된 세포에서 CD8 발현에 의해 평가되 바와 같음)를 나타낸다. 비히클 대조군으로부터의 상응하는 샘플과 비교하여, [225Ac]FPI-1792 조합 요법 처리군에서의 비장 샘플은 감소된 수준의 CD8+ T 세포를 나타냈으며, 한편 [225Ac]-FPI-1792 조합 요법 처리군의 종양 샘플은 증가된 수준의 CD8+ T 세포를 나타냈다. 이들 결과는 재-시험감염 후 CD8+ T 세포가 속발성 종양으로 광범위하게 동원되었음을 나타낸다.
종양 세포에 특이적인 CD8+ T 세포의 비율을 평가하기 위해, CT26으로부터의 면역우세 CD8+ T 세포 에피토프인 AH1 (SPSYVYHGF (서열식별번호: 1))을 사용하여 MHC I 사량체-기반 분석을 수행하였다. 도 4c는 이 사량체 기술을 나타내는 개략도이다. 사량체 시약은 4개의 동일한 비오틴화된 MHC 클래스 I/β2M 단위로부터 어셈블리되며, AH1 펩티드 항원이 로드되고 형광 표지된 스트렙타비딘과 함께 유지되어 유세포 분석을 통해 항원-특이적 T 세포를 검출하도록 하였다. 따라서, 사량체-양성 T 세포는 CT26 에피토프에 특이적인 T-세포 수용체를 발현하는 T 세포이다.
도 4d는 분석된 처리군에 걸친 비장 (좌측 패널) 및 종양 (우측 패널) 세포로부터의 사량체 분석 결과를 제공한다. 사량체 세포의 수준은 CD8+ T 세포의 백분율로서 표시된다. 비장에서, CT26 에피토프-특이적 T 세포의 증가된 수준이 비처리 대조군 (2-3%)과 비교하여 처리된 마우스 (대략 11-17%)에서 검출되었다. 종양에서, 비처리 대조군 (1-2%)과 비교하여 처리된 마우스의 종양에서 매우 높은 빈도의 CT26 에피토프-특이적 T 세포가 검출되었다 (대략 30-70%).
이들 결과는 속발성 종양에서 종양-특이적 CD8+ T 세포의 광범위한 축적을 나타낸다. 게다가, 이들 결과는 [225Ac]-FPI-1792의 투여가 종양 세포에 의해 발현되는 종양-연관 항원에 특이적인 T-세포 수용체를 가진 CD8+ T 세포의 생성 및 침윤을 야기한다는 것을 나타낸다.
실시예 6. 면역학적으로 차가운 전이성 유방암 세포주에서 종양 억제
[225Ac]-FPI-1792를 동계 4T1 삼중-음성 유방암 모델을 사용하여 면역학적으로 차가운 종양에서 평가하였다. 4T1 세포는 뮤린 IGF-1R을 발현하고 빠른 진행으로 종양을 발달시킨다. 4T1 세포는 고도로 전이성이고, 면역원성이 거의 없으며, 체크포인트 억제에 내성이 있다 (예를 들어, PD1 또는 CTLA4 차단으로).
도 5a는 이들 실험의 개략도를 도시한다. 4T1 세포를 Balb/c 면역 적격 마우스에 이식하였다. 이식된 4T1 세포를 4일 동안 또는 이들이 대략 50 mm3 부피의 종양을 생성할 때까지 계내에서 증식하도록 하였다. 이어서 동물에게 비히클 (대조군), 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 단독, 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 + 5 mg/kg 4F10-11 (항-CTLA4), 또는 200 nCi [225Ac]-FPI-1792 + 5 mg/kg RMP1-14 (항-PD1)를 투여하였다. 처리 개시 후에 4T1 종양 부피를 평가하였다. 도 5b 및 5c는 항-CTLA4와의 그의 조합 (도 5b) 또는 항-PD1과의 그의 조합 (도 5c)과 비교하여 200 nCi [225Ac]-FPI-1792에 대한 상대 종양 부피를 나타낸다. 항-CTLA4 처리 단독으로는 종양 성장에 대해 관찰가능한 효과가 없었지만, [225Ac]-FPI-1792 + 항-CTLA4 처리군에서 유의한 종양 억제가 관찰되었다 (도 5b).
이들 결과는 [225Ac]-FPI-1792가 면역학적으로 차가운 종양을 면역 체크포인트 억제에 민감하게 만들 수 있음을 시사한다.
실시예 7. 방사면역접합체 투여의 효능 및 안전성을 평가하기 위한 임상 I상 시험
인간 환자에게 투여하기 위한 방사면역접합체의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해 임상 I상 시험을 수행하였다. [225Ac]-FPI-1434는 패스트클리어™ 링커를 통해 DOTA 모이어티에 연결된 IGF-1R (AVE1642)에 결합하는 인간화 모노클로날 항체를 포함하는 방사면역접합체이며; 따라서 [225Ac]-FPI-1434는 링커 및 킬레이트화 모이어티에서 [225Ac]-FPI-1792와 유사하나 사용된 IGF-1R 항체와 상이하다.
[111In]-FPI-1547은 [225Ac]-FPI-1434와 동일한 링커 및 항체를 포함하는 [225Ac]-FPI-1434의 인듐-111 유사체이다. [111In]-FPI-1547은 [225Ac]-FPI-1434로 치료하기 전에 IGF-1R 발현 표적의 환자 선택 및 정량화에 사용된다.
185 MBq의 [111In]-FPI-1547을 환자에게 정맥내 투여한 후, 흡수된 방사선량을 추정하였다. 환자의 연속적인 전방/후방 섬광조영술 영상을 6-8일에 걸쳐 수득하였다. 카운트 데이터를 전신 스캔으로부터 추출하였으며 CT-기반 부피를 사용하여 MIRD 스키마에 따라 정상 장기 및 조직에 대한 방사선 흡수선량을 추정하였다. 이어서 각각의 환자에 대한 [225Ac]-FPI-1434의 계획된 치료 투여에 대한 방사선량 추정치를 OLINDA/EXM 소프트웨어 (버전 2.0)를 사용하여 수행하였으며 신장 (18 Gy), 간 (31 Gy) 및 폐 (16.5 Gy)에 대한 프로토콜-특정된 방사선량 한도 내에 있음을 확인하였다. [225Ac]-FPI-1434의 계획된 치료 투여는 최대 허용 용량까지 10, 20, 40, 80 및 120 kBq/kg 체중의 5개 초기 코호트의 변형된 3+3 용량 증량 설계를 따랐다.
8명의 환자에게 각각 185 MBq의 [111In]-FPI-1547을 투여하고 후속 선량측정 평가를 겪도록 하였다. 8명의 환자 모두가 종양 결합활성을 나타냈고 모두가 선량측정을 기준으로 하여 최대 120 kBq/kg을 받을 자격이 있었다. 하기 장기에 대해 투여된 활성 단위당 추정 평균 방사선량 (±SD)은 다음과 같았다: 신장, 966±179 mGy-Eq/MBq; 간, 803±260 mGy-Eq/MBq; 및 폐, 672±185 mGy-Eq/MBq. 모든 환자의 평균 전신 방사선량 (±SD)은 146±19 mGy-Eq/MBq (범위 117-170 mGy-Eq/MBq)였다. 7명의 환자 (88%)가 0.80 내지 2.3 MBq [225Ac]-FPI-1434 범위의 1회 치료 투여를 받았다. [225Ac]-FPI-1434는 일반적으로 예상치 못한 임상적으로 유의한 유해 사례가 보고되지 않고 내약성이 양호하였다.
이들 결과는 인간 환자에 대한 환자-특이적 용량의 악티늄-225 방사면역접합체의 투여가 또한 내약성이 용이하며 예상치 못한 임상적으로 유의한 유해 사례를 발생시키지 않았음을 입증한다. 게다가, 인듐-111 방사면역접합체의 투여는 인간 환자에게 내약성이 양호하며 환자의 몸 전체 및 신장, 간 및 폐와 같은 중대 장기에서 허용되는 수준의 방사선을 발생시켰다.
따라서, 인듐-111 및 악티늄-225 방사면역접합체 둘 다는 예상치 못한 임상적으로 유의한 유해 사례의 발생 없이 환자에게 안전하게 투여되었다. 이들 결과는 인듐-111 방사면역접합체 투여가 환자에 대한 잠재적 위험을 추정하고 악티늄-225 방사면역접합체 투여에 대한 환자-특이적 치료 계획을 생성하는 데 성공적으로 사용되었음을 추가로 입증한다.
등가물/기타 실시양태
관련 기술분야의 통상의 기술자는 단지 일상적인 실험을 사용하여 본원에 기재된 구체적 실시양태와 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 포함되도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Fusion Pharmaceuticals Inc. Burak, Eric Steven <120> SUSTAINED IMMUNOTHERAPY <130> FPI-009 <150> 62/959879 <151> 2020-01-10 <150> 63/037520 <151> 2020-06-10 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AH1 peptide antigen <400> 1 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gly Phe 1 5

Claims (93)

  1. CD8+ T 세포 침윤의 종양 내로의 유도를 필요로 하는 대상체에게 하기 구조식을 포함하는 방사면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 CD8+ T 세포 침윤을 종양 내로 유도하는 방법이며,
    여기서, 상기 방사면역접합체의 상기 투여는 CD8+ T 세포 집단의 종양의 코어 내로의 침윤을 발생시키고;
    여기서 상기 CD8+ T 세포 집단은 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 제2 종양-연관 항원에 특이적인 T-세포 수용체 (TCR)를 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고;
    여기서 CD8+ T 세포는 제2 종양-연관 항원을 발현하는 세포를 우선적으로 사멸시킬 수 있는 것인 방법:
    A-L-B
    화학식 I-a
    여기서,
    A는 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이며, 여기서 금속 착물은 악티늄-225 (225Ac) 또는 그의 자손체를 포함하고,
    L은 링커이고,
    B는 종양 내의 적어도 일부 세포에 의해 발현되는 제1 종양-연관 항원에 결합할 수 있는 표적화 모이어티이며;
    단, A-L-이 하기에 나타낸 바와 같은 화합물 1의 금속 착물인 경우, B는 AVE1642가 아니다
    Figure pct00012
    .
  2. 제1항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 참조 수준보다 더 큰 수준에서 종양의 코어에서 검출가능한 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 참조 수준보다 적어도 2배 더 큰 수준에서 검출가능한 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 참조 수준보다 적어도 3배 더 큰 수준에서 검출가능한 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 참조 수준보다 적어도 4배 더 큰 수준에서 검출가능한 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 참조 수준보다 적어도 5배 더 큰 수준에서 검출가능한 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 종양의 코어에서 세포의 적어도 5%를 나타내는 것인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 종양의 코어에서 세포의 적어도 7.5%를 나타내는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 종양의 코어에서 세포의 적어도 10%를 나타내는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 종양의 코어에서 세포의 적어도 12.5%를 나타내는 것인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포 집단이 종양의 코어에서 세포의 적어도 15%를 나타내는 것인 방법.
  12. 제1항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 15%를 나타내는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 20%를 나타내는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 25%를 나타내는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 30%를 나타내는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 35%를 나타내는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 40%를 나타내는 것인 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 45%를 나타내는 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 50%를 나타내는 것인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 55%를 나타내는 것인 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 60%를 나타내는 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 65%를 나타내는 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 상기 CD8+ T 세포 집단의 적어도 70%를 나타내는 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 투여 단계로부터 적어도 10일 후에 대상체에서 검출가능한 것인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 투여 단계로부터 적어도 15일 후에 대상체에서 검출가능한 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 투여 단계로부터 적어도 20일 후에 대상체에서 검출가능한 것인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 투여 단계로부터 적어도 25일 후에 대상체에서 검출가능한 것인 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 투여 단계로부터 적어도 30일 후에 대상체에서 검출가능한 것인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포가 투여 단계로부터 적어도 40일 후에 대상체에서 검출가능한 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 종양-연관 항원이 제2 종양-연관 항원과 상이한 것인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 제2 종양-연관 항원이 신생항원인 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 원발성 종양인 방법.
  33. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 속발성 종양인 방법.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 고도로 면역원성이 아닌 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, 종양이 면역학적으로 차가운 것인 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 투여 시점에 부피가 적어도 100 mm3인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 종양이 투여 시점에 부피가 적어도 150 mm3인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 종양이 투여 시점에 부피가 적어도 또는 약 175 mm3인 방법.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 고형 종양인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 고형 종양이 육종인 방법.
  41. 제40항에 있어서, 육종이 혈관육종 또는 혈관내피종, 성상세포종, 연골육종, 유잉 육종, 섬유육종, 신경교종, 평활근육종, 지방육종, 악성 섬유종 조직구종 (MFH), 중간엽 또는 혼합 중배엽 종양, 중피 육종 또는 중피종, 점액육종, 골육종, 횡문근육종, 및 활막 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  42. 제41항에 있어서, 육종이 골육종인 방법.
  43. 제39항에 있어서, 고형 종양이 암종인 방법.
  44. 제43항에 있어서, 암종이 선양 낭포 암종, 부신피질 암종, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 담낭암, 위암, 두경부암, 폐암 (예를 들어, 소세포 폐암 또는 비-소세포 폐암, 또는 폐의 선암종), 신경모세포종, 신경내분비암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신장암, 고환암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 암종이 방광암인 방법.
  46. 제44항에 있어서, 암종이 췌장암인 방법.
  47. 제44항에 있어서, 암종이 유방암인 방법.
  48. 제44항에 있어서, 암종이 두경부암인 방법.
  49. 제44항에 있어서, 암종이 간암인 방법.
  50. 제44항에 있어서, 암종이 폐암인 방법.
  51. 제44항에 있어서, 암종이 뇌암인 방법.
  52. 제44항에 있어서, 암종이 신경모세포종인 방법.
  53. 제44항에 있어서, 암종이 흑색종인 방법.
  54. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 액체 종양인 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여 단계가 종양의 코어에서 세포 증식의 억제를 발생시키는 것인 방법.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여 단계가 종양의 진행의 둔화 또는 억제를 발생시키는 것인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 투여 단계가 종양의 퇴행을 발생시키는 것인 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 투여 단계가 종양의 완전한 퇴행을 발생시키는 것인 방법.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여 단계가 종양 세포의 전이를 예방하거나 억제하는 것인 방법.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, A-L-이 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물의 금속 착물인 방법:
    Figure pct00013

    Figure pct00014
    .
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, L이 화학식 I-b 내에 나타낸 바와 같은 구조식 -L1-(L2)n-을 갖는 것인 방법:
    A-L1-(L2)n-B
    화학식 I-b
    여기서,
    A는 킬레이트화 모이어티의 금속 착물이며, 여기서 금속 착물은 악티늄-225 (225Ac) 또는 그의 자손체를 포함하고;
    B는 표적화 모이어티이고;
    L1은 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    n은 1-5이고;
    각각의 L2는, 독립적으로, 하기 구조식을 갖고:
    (-X1-L3-Z1-)
    화학식 III
    여기서,
    X1은 C=O(NR1), C=S(NR1), OC=O(NR1), NR1C=O(O), NR1C=O(NR1), -CH2PhC=O(NR1), -CH2Ph(NH)C=S(NR1), O, 또는 NR1이고; 각각의 R1은 독립적으로 H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고, 여기서 C1-C6 알킬은 옥소 (=O), 헤테로아릴, 또는 그의 조합에 의해 치환될 수 있고;
    L3은 임의로 치환된 C1-C50 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C50 헤테로알킬이고;
    Z1은 CH2, C=O, C=S, OC=O, NR1C=O, 또는 NR1이고, 여기서 R1은 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 피롤리딘-2,5-디온이다.
  62. 제61항에 있어서, 방사면역접합체가 하기 구조식을 포함하는 것인 방법:
    Figure pct00015

    여기서, B는 표적화 모이어티이다.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 폴리펩티드를 포함하는 것인 방법.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 것인 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 적어도 100 kDa의 분자량을 갖는 것인 방법.
  66. 제65항에 있어서, 표적화 모이어티가 적어도 125 kDa의 분자량을 갖는 것인 방법.
  67. 제66항에 있어서, 표적화 모이어티가 적어도 150 kDa의 분자량을 갖는 것인 방법.
  68. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 소분자인 방법.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 종양-연관 항원이 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체 (IGF-1R), 종양 상피 마커-1 (TEM-1), 및 섬유모세포 성장 인자 수용체 3 (FGFR3)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 포유동물인 방법.
  71. 제70항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 것인 방법.
  73. 제72항에 있어서, 대상체가 암에 걸린 것으로 진단되는 것인 방법.
  74. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 난치성 암의 치료를 필요로 하는 것인 방법.
  75. 제1항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단계가 방사면역접합체의 전신 투여를 포함하는 것인 방법.
  76. 제75항에 있어서, 전신 투여가 비경구 투여를 포함하는 것인 방법.
  77. 제76항에 있어서, 비경구 투여가 정맥내 투여를 포함하는 것인 방법.
  78. 제76항에 있어서, 비경구 투여가 동맥내 투여를 포함하는 것인 방법.
  79. 제76항에 있어서, 비경구 투여가 복강내 투여를 포함하는 것인 방법.
  80. 제76항에 있어서, 비경구 투여가 피하 투여를 포함하는 것인 방법.
  81. 제76항에 있어서, 비경구 투여가 피내 투여를 포함하는 것인 방법.
  82. 제75항에 있어서, 전신 투여가 장 투여를 포함하는 것인 방법.
  83. 제82항에 있어서, 장 투여가 경-위장 투여를 포함하는 것인 방법.
  84. 제82항에 있어서, 장 투여가 경구 투여를 포함하는 것인 방법.
  85. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단계가 방사면역접합체의 국소 투여를 포함하는 것인 방법.
  86. 제85항에 있어서, 국소 투여가 종양주위 주사를 포함하는 것인 방법.
  87. 제85항에 있어서, 국소 투여가 종양내 주사를 포함하는 것인 방법.
  88. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 단계가 생체외에서 방사면역접합체를 상기 대상체의 체액과 접촉시키는 것을 포함하고, 여기서 상기 체액이 적어도 하나의 암세포를 함유하는 것인 방법.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 방사면역접합체가 또 다른 세포독성제와 조합하여 투여되지 않는 것인 방법.
  90. 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 방사면역접합체를 투여하는 단계 후에 대상체에게 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  91. 제90항에 있어서, 추가의 치료제가 비-세포독성제인 방법.
  92. 제90항 또는 제91항에 있어서, 방사면역접합체가 더 낮은 유효 용량으로 투여되는 것인 방법.
  93. 제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제가 더 낮은 유효 용량으로 투여되는 것인 방법.
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