KR20220123105A

KR20220123105A - 항-갈렉틴-9 항체 및 그것의 용도

Info

Publication number: KR20220123105A
Application number: KR1020227026683A
Authority: KR
Inventors: 두코스 저메인 마르갈; 레이첼 파체리; 니콜라 아르투로 알도 벨트라미넬리; 프란시스코 아드리안; 리앙 슈바이처; 뮤리엘 데이비드; 윤-유에 루
Original assignee: 하이파이바이오 (에이치케이) 리미티드
Priority date: 2020-01-07
Filing date: 2021-01-06
Publication date: 2022-09-05
Also published as: CA3163988A1; EP4087873A1; JP2023510429A; IL294466A; AU2021205143A1; MX2022008421A; BR112022013494A2; CN115210261A; WO2021139682A1; US20230054718A1

Abstract

본 발명은 Gal9에 대한 인간화된 단클론성 항체, 및 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트의 길항물질과의 병용 요법을 포함하여, 암을 치료하기 위한 항체의 사용 방법을 제공한다.

Description

항-갈렉틴-9 항체 및 그것의 용도

관련 출원에 대한 언급

본 출원은 2020년 1월 7일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 62/957,910에 대한 우선권을 주장하며, 모든 서열 및 도면을 포함한 그것의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.

갈렉틴-9 (또는 Gal9)는 인간에서 10개를 포함하여, 척추동물에서 적어도 15개의 구성원을 가진 단백질의 갈렉틴 (또는 유형-S 렉틴) 패밀리의 구성원이다. 갈렉틴-9는 리더 펩타이드가 없는 가용성 34-39 kDa 단백질이지만, 그럼에도 불구하고 비고전적 메커니즘을 통해 분비된다. 그것은 우선적으로 당단백질 및 당지질의 베타-갈락토시드 잔기와 상호작용한다. 인간에서, 갈렉틴-9는 3가지 아이소폼, 길거나, 중간이거나 짧은 형태로 존재한다.

갈렉틴-9는 HAVCR2 (TIM-3)에 대해 가장 연구가 많이 이루어진 리간드 중 하나로, 다양한 혈액암, 예컨대, CLL, MDS, 호지킨 및 비-호지킨 림프종, AML, 뿐만 아니라 폐암, 유방암, 및 간세포 암종과 같은 고형 종양 상에서 발현된다.

HAVCR2/ 갈렉틴-9 상호작용은 종양 미세환경 및 만성 감염에서 T 세포 팽창 및 이펙터 기능을 약화시키는 것으로 발견되었다. 더욱이, 갈렉틴-9는 종양 세포 형질전환, 세포 주기 조절, 혈관신생, 및 세포 부착에 의해 종양형성에 기여하였다.

갈렉틴-9는 또한 조절 T 림프구 (또는 Treg)에 의해 직접적으로 발현되며, 그것의 발현은 Treg 활성화 중에 증가된다. 한편, 갈렉틴-9는 이펙터 T 림프구 (예컨대 CD8⁺ CTL)에 의해 매우 약하게 발현되며, 이 발현은 이펙터 T 림프구 활성화 중에 소멸된다. 항-Gal9 항체에 의한 갈렉틴-9의 억제는 Treg의 억제자 활성을 억제하는 것으로 나타났다.

Wu 등 (Immunity 41(2):270-282, 2014)은 Gal-9가 면역 반응을 조절하는 데 중요하다고 보고하였다. Gal-9는 유도된 조절 T 세포 (iTreg)에 의해 고도로 발현되며 iTreg 세포의 생성 및 기능에 중요하지만, 자연적인 조절 T (nTreg) 세포에 대해서는 그렇지 않다. iTreg 세포에서의 Gal-9 발현은 전사 인자 Smd3에 의해 구동되어 피드 포워드 루프(feed-forward loop)를 형성하여서, Foxp3 발현을 한층 더 촉진하였다. Gal-9는 수용체인 CD44에 직접 결합하여 형질전환 성장 인자-β(TGF-β) 수용체 I (TGF-βRI)과 복합체를 형성함으로써 iTreg 세포 안정성 및 기능을 증가시켰고, Smd3을 활성화하였다. Gal-9 신호전달은 추가로 Foxp3 유전자좌의 CNS1 영역을 통해 우세하게 작용함으로써 iTreg 세포를 조절하는 것으로 나타났다. 외인성 Gal-9는 Treg 세포에 대한 이펙터 분자인 것 외에도, iTreg 세포 분화 및 유지를 강화하기 위하여 TGF-β와 상조적으로 작용한다.

다양한 유형의 T 림프구는 정상적으로, 예를 들어 "이펙터" 세포 또는 이펙터 T 림프구로 발달하고, 그것은 숙주 유기체를 방어하기 위한 특수 면역 기능을 수행할 것이다. 그러므로 CD4⁺ T 림프구 또는 보조 T 림프구는 체액성 기능 (특이적 항체의 생성)에서 특히 B 림프구 및 그들의 세포독성 활성에서 CD8⁺ T 림프구를 보조하는 주요 사이토카인을 분비한다.

CD4⁺ T 림프구의 또 다른 집단은 자연적인 T 림프구, 또는 "조절 T 림프구 (Treg)"로 이루어진다. 그것은 CD25 분자를 구성적으로 과다발현하고 (따라서 "CD4⁺CD25⁺"로 불림) Foxp3 전사 인자를 구성적으로 과다발현한다. 이 작은 백분율의 CD4⁺CD25⁺ T 림프구는 TCR에 의해 다양한 자가 항원을 인식할 면역 반응의 실행자(actor)를 부정적으로 조절하는 특이성을 가진다. 조절자 T 림프구는 또한 특히 유기체를 자가면역 질병의 출현에 대해 보호하기 위한 면역 체계의 생리하게서 중요한 역할을 수행한다. 달리 말하면, Treg는 CD25, CTLA-4 및 GITR을 구성하는 발현, 및 전사 인자 Foxp3의 특이적 발현을 특징으로 하는 자연적인 조절 T 림프구 (또는 "nTreg")의 하위 집단이다.

Treg는 이펙터 T 림프구에 대해 면역억제 활성을 나타낸다. 그러한 활성은, 일단 종양과 같은 병리적 상황에서 활성화되면, 종양 성장을 촉진한다. 그러므로, Treg의 억제자 활성은 이펙터 T 림프구의 기능을 억제함으로써 항-종양 면역 반응을 감소시키는 활성으로서 이해될 수 있다.

갈렉틴-9는 주로 상이한 면역 수용체와의 상호작용으로부터 초래되는 종양 면역억제와 관련된다. 예를 들어, Gal9는 Gal9 차단시 감소된 Th1 세포자멸사, Gal9 녹아웃 마우스의 CIA (콜라겐-유도 관절염)에 대한 증가된 민감성, Gal9 투여시 연장된 그라프팅 생존율 및 AID 억제에 의해 증명되는 바, Th1 반응을 억제하고 말초 내성을 유도한다. Gal9는 또한 말초 NK 세포 기능을 조절하여 모체-태아 내성을 촉진하고, MDSC의 팽창을 촉진하며, TGF-β와 상승하여 Treg 확장을 촉진한다.

Circulating 수준 of Gal9의 순환하는 수준은 건강한 대조군과 비교하여 특정 암 환자에서 상당히 더 높다.

본원에 기술된 발명은 갈렉틴-9에 대해 지시된 인간화된 항체 및 조절 T 림프구 (Treg)의 억제제 활성과 관련된 질환의 치를 위한 그것의 용도에 관한 것이다.

구체적으로, 본원에 기술된 발명은 TME (종양 미세환경)에 면역억제를 방출하여, 암 환자에서 항종양 활성 및 임상적 반응을 유도하는 항-Gal9 중화 항체를 제공한다. 발명의 항-Gal9 중화 항체는 US 2017-0283499 A1 (2015SIS 6월 5일에 출원, 본원에 참조로 포함됨)에서 개시된 2개의 항-Gal9 중화 항체 (각각 Ab1 및 Ab2)를 토대로 한 유도체 항체로, 두 중화 항체는 모두 재조합 인간 Gal9에 nM 이하의 EC₅₀ 값으로 결합하며, CD4⁺ T 세포의 인간 Gal9 유도 세포자멸사 또는 건강한 기증자의 말초 혈액으로부터의 Treg의 팽창을 차단한다. 그러나, 이들 두 항체는 Ab2가 재조합 인간 Gal9와 2개의 면역 수용체 (R1 및 R2)와의 상호작용을 차단하지만, Ab1은 그렇지 않다는 점에서 상이하다.

본원에 기술된 발명은 Ab1 및 Ab2를 토대로 한 다중 인간화된 단클론성 항체를 제공한다. 이들 인간화된 단클론성 항체는 재조합 인간 및/또는 쥐과 Gal9에 결합하고, Gal9 유도 Th1 세포자멸사를 차단하며, Gal9 유도 Treg 팽창을 차단한다. 보다 중요하게, 발명의 인간화된 단클론성 항체는 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트를 표적화하는 항체와 상승적으로 작용함으로써, 면역 요법에서 만나게 되는 저항 (예컨대, PD-1 및 PD-L1 길항물질을 사용하는 비효율성의 저항) 을 극복하는 치료적 장점을 제공한다.

발명의 항체는 AML 및 DLBCL과 같은 혈액암뿐만 아니라, 유방암, 두경부암, 폐암, 흑색종 (포도막 흑색종 포함), 결장암, 직장 암종, 난소암, 간암, 및 전립선암과 같은 고형 암을 치료하는 데에 광범위하게 사용된다.

그러므로 발명의 한 측면은 분리된 단클론성 항체, 또는 그것의 항원 결합 단편을 제공하며, 상기 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 갈렉틴-9에 특이적이고, 상기 단클론성 항체는: (1a) SEQ ID NO: 2의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 4의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 6의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (1b) SEQ ID NO: 10의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 12의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 14의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (2a) SEQ ID NO: 18의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 20의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 22의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (2b) SEQ ID NO: 26의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 28의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 30의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (3a) SEQ ID NO: 34의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 36의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 38의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (3b) SEQ ID NO: 42의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 44의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 46의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (4a) SEQ ID NO: 50의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 52의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 54의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (4b) SEQ ID NO: 58의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 60의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 62의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (5a) SEQ ID NO: 66의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 68의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 70의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (5b) SEQ ID NO: 74의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 76의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 78의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (6a) SEQ ID NO: 82의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 84의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 86의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (6b) SEQ ID NO: 90의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 92의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 94의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (7a) SEQ ID NO: 98의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 100의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 102의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (7b) SEQ ID NO: 106의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 108의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 110의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는 (8a) SEQ ID NO: 114의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 116의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 118의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및, (8b) SEQ ID NO: 122의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 124의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 128의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함한다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편에서: (1c) (1a) 및 (1b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 5의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 1의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (2c) (2a) 및 (2b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 17의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (3c) (3a) 및 (3b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 37의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 33의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (4c) (4a) 및 (4b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 53의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 49의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (5c) (5a) 및 (5b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 69의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 65의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (6c) (6a) 및 (6b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 85의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 81의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (7c) (7a) 및 (7b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 101의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 97의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는 (8c) (8a) 및 (8b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 117의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 113의 HFR1 서열을 추가로 포함한다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편에서: (1A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 8이고/이거나; (1B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 16이거나, 또는, (2A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 24이고/이거나; (2B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 32이거나, 또는, (3A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 40이고/이거나; (3B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 48이거나, 또는, (4A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 56이고/이거나; (4B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 64이거나, 또는, (5A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 72이고/이거나; (5B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 80이거나, 또는, (6A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 88이고/이거나; (6B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 96이거나, 또는, (7A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 104이고/이거나; (7B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 112이거나, 또는 (8A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 120이고/이거나; (8B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 128이다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 인간화된 항체이며, (1) SEQ ID NO: 8의 HCVR 서열 및 SEQ ID NO: 16의 LCVR 서열; 또는, (2) SEQ ID NO: 72의 HCVR 서열 및 SEQ ID NO: 80의 LCVR 서열을 포함한다.

특정 구체예에서, 그것의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 사슬 Fv 또는 scFv, 이황화 결합된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디(intrabody), IgG△CH2, 미니바디(minibody), F(ab')3, 테트라바디(tetrabody), 트라이아바디(triabody), 디아바디(diabody), 단일 도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc이다.

일부 구체예에서, 발명의 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 면역 이펙터 기능을 없애는 조작된 Fc 영역을 가진다. 예를 들어, 본 발명의 항체의 조작된 Fc 영역은 "LALA" 이중 돌연변이 (Leu235Ala와 함께 Leu234Ala)를 가질 수 있고 그로써 감소된 이펙터 기능을 가질 수 있다. 그러한 항체는 IgG1 상에 LALA 이중 돌연변이를 갖기 위해 G1AA의 표시를 가질 수 있다.

Fcγ 수용체 (FcγR) 및 보체 단백질 C1q에 결합하는 것을 부분적으로 또는 완전히 피할 수 있고, 그로써 면역 이펙터 기능이 없어진 다른 재조합 인간 IgG 항체 (hIgG)가 기술분야에 알려져 있고, FcγR 활성화 및 Fc 매개 독성을 감소시키기 위해 다양한 치료적 적용을 위해 사용된다. 특정한 그러한 Fc-조작된 항체/단편은 부분적으로 이 목표를 달성하는 한편, 다른 것들은 FcγR 활성화 및 Fc 매개 독성을 완전히 없앤다. 특정 구체예에서, 발명의 항체/단편은 hIgG1-P329G LALA 또는 hIgG4-P329G SPLE (IgG4의 인간 IgG4 S228P/L235E 변이체) 돌연변이를 포함하여 FcγR 및 C1q 상호작용이 완전히 폐지되고, 영향을 받지 않는 FcRn 상호작용 및 Fc 안정성을 가지는 조작된 hIgG Fc 도메인을 가진다. P329G Fc 돌연변이는 FcγR과의 프롤린 샌드위치 모티프(proline sandwich motif)의 형성을 방해한다. 이 모티프가 모든 IgG Fc/FcγR 복합체의 계면에 존재하기 때문에, 그것의 방해는 이펙터 침묵 IgG 분자를 생성하기 위해 모든 인간 및 대부분의 다른 포유류 IgG 하위부류에 적용될 수 있다. 그러므로 특정 구체예에서, 본 발명의 항체/단편은 그러한 이펙터 침묵 Fc 돌연변이를 가진 임의의 하나의 IgG 하위부류를 가진다.

특정 구체예에서, 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 마우스 Gal9와 교차 반응한다.

특정 구체예에서, 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 약 0.1-0.2 nM의 EC50으로 인간 Gal9에 결합하고/하거나, 약 0.5-1.0 nM의 EC50으로 마우스 Gal9에 결합한다.

특정 구체예에서, 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 약 25 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 5 nM, 2 nM, 또는 1 nM 미만의 Kd로 인간 Gal9에 결합한다.

특정 구체예에서, 발명의 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 항체의 개발 가능성을 개선하기 위해 설계된 그것의 아미노산 서열의 하나 이상의 점 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 하나 이상의 점 돌연변이는 항체를 숙주 세포에서 그것의 발현 중에, 제조 중에 그것의 정제를, 및/또는 제제화 과정 중에, 및/또는 대상 환자에게의 투여 중에 더 안정적으로 만든다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 점 돌연변이는 항체를 제조 및/또는 제제과 과정 중에 응집될 가능성을 더 적게 만든다.

특정 구체예에서, 발명은 그것의 서열 (예컨대, 그것의 CDR 중 하나 이상)에서 하나 이상의 아미노산을 대체함으로써 개발 가능성 문제가 최소화되거나 또는 감소된, 예컨대 소수성이 제거되거나 감소된 및/또는 전하가 최적화된 치료 항체를 제공한다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 Gal9에 결합하여 Gal9가 Gal9 수용체 (예컨대, TIM3 또는 CD44)에 결합하는 것을 억제한다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 T 세포 (예컨대 CD4+ T 세포)의 Gal-9 유도 Th1 세포자멸사를 중화한다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 Gal9 유도 Treg 팽창을 억제한다.

특정 구체예에서, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 이종이식 종양을 가진 마우스에서 면역 체크포인트의 길항물질과 함께 상승적으로 생체내에서 종양 성장을 억제하고/하거나 생존을 연장시킨다.

특정 구체예에서, 면역 체크포인트의 길항물질은 PD-1 또는 PD-L1에 특이적인 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이다.

발명의 또 다른 측면은 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 발명의 PD-1 또는 PD-L1, 및 면역 체크포인트의 길항물질을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

특정 구체예에서, 면역 체크포인트는 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트이다.

특정 구체예에서, 면역 체크포인트의 길항물질은 유효량에 특이적인 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이다.

특정 구체예에서, 항체는 항-PD-1 항체, 예컨대 세미플리맙(cemiplimab), 니볼루맙(nivolumab), 또는 펨브롤리주맙(pembrolizumab)이다.

특정 구체예에서, 항체는 항-PD-L1 항체, 예컨대 아벨루맙(avelumab), 두르발루맙(durvalumab), 아테졸리주맙(atezolizumab), KN035, 또는 CK-301이다.

특정 구체예에서, 면역 체크포인트의 길항물질은 PD-1/PD-L1의 (비-항체) 펩타이드 억제제, 예컨대 AUNP12; PD-L1의 소분자 억제제, 예컨대 CA-170, 또는 BMS-986189와 같은 거대고리형 펩타이드이다.

특정 구체예에서, 암은 혈액암 (예컨대 AML 및 DLBCL), 또는 고형 종양 (예컨대 유방암, 두경부암, 폐암, 흑색종 (포도막 흑색종 포함), 결장암, 직장 암종, 난소암, 간암, 및 전립선암)이다.

특정 구체예에서, 방법은 환자에게 화학요법제, 항-혈관신생제, 성장 억제제, 면역항암제(immune-oncology agent), 및/또는 항-신생물 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

발명의 또 다른 측면은 발명의 중쇄 또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그것의 항원 결합 부분을 제공한다.

특정 구체예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다.

발명의 또 다른 측면은 발명의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 제공한다.

특정 구체예에서, 벡터는 발현 벡터 (예컨대, 포유류 발현 벡터, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터, 또는 박테리아 발현 벡터)이다.

발명의 또 다른 측면은 암으로 진단받았거나 암이 발병할 위험이 있거나 또는 암이 재발한 환자에서 이펙터 T 세포 증식을 촉진, 강화, 복원 또는 구제하고/하거나, 이펙터 T 세포 활성을 증강시키는 방법, 또는 암을 가진 환자를 확인 및 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 환자로부터의 샘플에서 건강하거나 대조군 개체에서의 갈렉틴-9의 참조 수준보다 높은 갈렉틴-9의 수준을 환자가 가진 것으로 확인되었을 때 환자에게 유효량의 발명의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함한다.

특정 구체예에서, 방법은 샘플 중의 갈렉틴-9의 수준을 참조 수준에 비교함으로써 환자가 참조 수준보다 높은 샘플 중의 갈렉틴-9의 수준을 가진 것으로 확인하는 단계를 추가로 포함한다.

특정 구체예에서, 방법은 환자에게 면역 체크포인트의 길항물질을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

특정 구체예에서, 항체는 항-PD-1 항체, 예컨대 세미플리맙, 니볼루맙, 또는 펨브롤리주맙이다.

특정 구체예에서, 항체는 항-PD-L1 항체, 예컨대 아벨루맙, 두르발루맙, 아테졸리주맙, KN035, 또는 CK-301이다.

특정 구체예에서, 환자는 FAB M0, M1, M4 또는 M5 AML 환자이거나, 환자는 FAB M2 또는 M3 AML 환자가 아니다.

특정 구체예에서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플이다.

발명의 또 다른 측면은 AML로 진단받았거나, AML이 발병할 위험이 있거나 또는 AML이 재발한 환자에서 이펙터 T 세포 증식을 구제 또는 촉진하고/하거나 이펙터 T 세포 활성을 증강시키는 방법, 또는 AML을 가진 환자를 확인 및 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 환자로부터의 골수(BM) 유래 단핵 세포(MNC) 샘플에서 건강하거나 대조군 개체에서의 BM 유래 MNC 또는 CD34⁺ 세포의 참조 수준보다 통계적으로 상당히 높거나 낮은 갈렉틴-9-암호화 mRNA의 수준을 환자가 가진 것으로 확인되었을 때, 환자에게 유효량의 발명의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함한다.

특정 구체예에서, 환자로부터의 BM 유래 MNC 샘플에서 갈렉틴-9-암호화 mRNA의 수준은 환자가 FAB M0, M1, M2, M4, 또는 M5 AML 환자일 때 참조 수준보다 상당히 더 높다.

특정 구체예에서, BM 유래 MNC 샘플에서 갈렉틴-9-암호화 mRNA의 수준은 환자가 FAB M3 AML 환자일 때 참조 수준보다 상당히 더 낮다.

발명의 또 다른 측면은 암의 치료에 사용하기 위한, 갈렉틴-9에 대해 지시되거나 그것에 특이적인 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 이펙터 T 세포 증식을 구제하고/하거나, 이펙터 T 세포 활성을 증강시킨다.

특정 구체예에서, 이펙터 T 세포는 Th1 세포이다.

발명의 또 다른 측면은 발명의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 이펙터 T 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 이펙터 T 세포 증식을 구제 또는 촉진하고/하거나, 이펙터 T 세포 활성을 증강시키는 방법을 제공한다.

특정 구체예에서, 이펙터 T 세포는 Th1 세포이다.

발명의 또 다른 측면은 항종양 (항암) 활성을 초래하는 면역 메모리를 유도하거나 촉진하기 위한 방법 및 관련된 조성물을 제공한다. 특정 구체예에서, 방법은 대상체에게 조성물 (예컨대 발명의 항체를 포함하는 제약학적 조성물)을, 대상체에서 종양 또는 암 개시, 진행 또는 재발을 효과적으로 감소시키거나 억제하는 면역 메모리를 유도, 자극 또는 촉진하는 데 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다.

본원에 기술된 발명의 임의의 한 구체예는, 실시예 또는 청구범위에만 기술된 것을 포함하여, 분명하게 부인하거나 그렇지 않으면 부적절하지 않는 한 발명의 임의의 하나 이상의 추가의 구체예와 조합될 수 있음이 이해되어야 한다.

도 1은 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 서열 정렬을 도시한다.
도 2는 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 서열 정렬을 도시한다.
도 3은 재조합 인간 Gal-9를 향한 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 결합 친화도 (nM의 EC₅₀으로서 측정됨)를 도시한다. 상이한 항원에 대한 아이소타입 매칭된 항체가 음성 대조군으로서 사용된다. 한 가지 경우에, 원래의 인간-마우스 키메라 항체가 또한 비교를 위해 포함된다.
도 4는 재조합 마우스 Gal-9를 향한 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 결합 친화도 (nM의 EC₅₀으로서 측정됨)를 도시한다. 상이한 항원에 대한 아이소타입 매칭된 항체가 음성 대조군으로서 사용된다. 한 가지 경우에, 원래의 인간-마우스 키메라 항체가 또한 비교를 위해 포함된다.
도 5는 발명의 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체가 TIM3 및 CDC44에 대한 결합을 차단할 수 있음을 보여준다.
도 6은 발명의 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 Gal-9 유도 Th1 세포 세포자멸사를 중화시키는 능력을 도시한다.
도 7은 발명의 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 Gal-9 유도 Treg 팽창을 중화시키는 능력을 도시한다.
도 8은 항-PD1 항체와 함께 사용될 때 발명의 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 장기간 생존을 촉진시키는 능력을 도시한다. 데이터는 항-PD1 항체와의 병용 요법이 종양 부피 증가의 억제에 의해 측정되는 바 상당히 더 나은/상승적 치료 효능을 유도한 것을 입증한다.
도 9는 항-PD1 항체와 함께 사용될 때 발명의 다양한 항-인간 갈렉틴-9 인간화된 항체의 장기간 생존을 촉진시키는 능력을 도시한다. 데이터는 항-PD1 항체와의 병용 요법이 시간 경과에 따른 생존에 의해 측정되는 바 상당히 더 나은/상승적 치료 효능을 유도한 것을 입증한다.
도 10은 AML 환자 및 건강한 개체로부터의 혈청 또는 혈장에서 갈렉틴-9의 수준을 도시한다. 데이터는 화학요법 치료 후 완전한 차도시 진단시 또는 재발/난치성 (R/R) 단계의 AML 환자로부터의 혈장의 갈렉틴-9 수준이 건강한 환자 및 AML 환자로부터의 혈장에서보다 상당히 더 높았음을 입증한다.
도 11은 프랑스-미국-영국 (FAB) 분류에 따라 계층화된 AML 환자의 혈장 또는 혈청 내 갈렉틴-9의 수준을 도시한다. 데이터는 진단시 FAB M2 또는 FAB M3 AML 환자의 혈장 내 갈렉틴-9 단백질 수준이 FAB M0, M1, M4 또는 M5 AML 환자로부터의 혈장에서 관찰된 것보다 상당히 더 낮았음을 보여준다. 진단시 FAB M3 AML 환자의 혈장 내 갈렉틴-9 단백질 수준은 정상적인, 생리적 범위 내에 있었다.
도 12는 프랑스-미국-영국 (FAB) 분류에 따라 계층화된 AML 환자로부터의, 또는 건강한 개체로부터의 골수(BM) 유래 단핵 세포(MNC)에서의 갈렉틴-9-암호화 mRNA (LGALS9)의 수준을 도시한다. 데이터는 진단시 AML 환자로부터의 BM 유래 MNC 중의 갈렉틴-9-암호화 mRNA 수준이 건강한 개체로부터의 BM 유래 MNC 또는 CD34⁺ 세포에서 관찰된 것보다 더 높았음을 입증한다. 진단시 FAB M3 AML 환자로부터의 BM 유래 MNC 중의 갈렉틴-9-암호화 mRNA 수준은 FAB M0, M1, M4 또는 M5 AML 환자로부터의 BM 유래 MNC 또는 건강한 개체로부터의 BM 유래 MNC 또는 CD34⁺ 세포에서 관찰된 것보다 상당히 더 낮았다.
도 13은 단일 요법으로서 발명의 항체의 항-종양 활성을 도시한다. 이 실험은 발명의 항-Gal9 단클론성 항체가 이종이식 마우스 모델에서 생체내 종양 성장을 억제하는데 효과적인 것을 입증한다. 특히, 약 50만개의 암세포가 실험용 마우스에 접종되었고 종양 덩어리는 미리 결정된 크기까지 성장하도록 허용되었다. 그런 다음 마우스는 무작위로 나누어지고 두 가지 항체 중 하나로 복강내로(i.p.) 주입되었다: (1) 10 mg/kg 용량의 IgG 아이소타입 대조표준, (2) 10 mg/kg 용량의 항-Gal9 항체 HFB9-2. 다양한 그룹에 대한 항체의 제1 용량은 1일 째에 투여되었고, 후속 용량은 임의의 그룹에 대해 항-HFB9-2 항체 및 대조군 항체로 총 8회 용량에 대해 3일마다 투여되었다. 데이터는 평균 ± s.e.m. (n = 그룹당 10마리 마우스)으로서 표시된다. 본 발명의 항-Gal9 항체는 생체내에서 종양 성장에 대해 억제 효과를 나타냈음이 분명하다.
도 14는 생존의 관점에서 단일요법으로서의 발명의 항체의 항-종양 활성을 추가로 도시한다: 대조군 그룹의 모든 마우스는 사망하였고, HFB9-2 치료 그룹의 마우스의 40% (10마리 중 4마리)가 6주가 끝났을 때 종양 없이 생존하였다.
도 15는 발명의 항체의 항-종양 활성의 면역 메모리를 도시한다. 제1 종양 접종/도전 후에, 나이브 동물은 4마리 동물 중 2마리에서 31일 내에 3000mm³의 인도적 종점의 종양 부피에 도달하는 종양이 발생하였다. 발명의 항체인 에 의해 이전에 치료되고 치유된, 완전한 종양 퇴행을 가진 4마리 동물은 제1 종양 도전 후 63일에 접종된 제2 Wehi-164 종양 도전을 완전히 거부하였다. 이들 데이터는 HFB9-2 치료에 의해 유도된 장기간 면역 메모리를 시사한다.

1. 개요

비록 면역 체크포인트를 표적화하는 단클론성 항체가 광범위한 종양 유형에서 임상적인 성공을 입증하였지만, 지속적인 반응은 치료에 대한 일차 또는 이차 내성으로 인해 환자의 일부에서만 관찰된다.

본 출원인은 갈렉틴 9 (Gal-9)가 종양을 현재의 면역요법에 대해 내성이 되게 만드는 종양 미세환경에 존재하는 핵심 인자라 여긴다. 다른 증거들 중에서, 높은 Gal-9 발현이 AML 및 ALL과 같은 혈액암 및 다중 고형 종양을 포함하여, 상이한 유형의 암에서 보고되었다.

본원에 기술된 발명은 적어도 하위세트의 암 환자에서 내성을 극복하고 임상 반응을 개선하는, Gal-9를 표적화하는 항체를 제공한다. 발명의 단클론성 항체는 나노몰 미만의 친화도로 인간 Gal-9에 특이적으로 결합하며, 인간 종양 세포에 의해 생성된 재조합 Gal-9 및 Gal-9를 인식하고, 마우스 및 원숭이 Gal-9 오르소로그(ortholog)와 교차 반응한다. 그것은 또한 Gal-9와 그것의 수용체인 TIM3 및 CD44와의 상호작용을 용량 의존성 방식으로 차단한다. 이들 두 수용체는 이펙터 및 조절 T 세포에서 Gal-9 면역억제 신호를 매개하는 것으로 기술되어 있다. 건강한 기증자로부터의 인간 PBMC의 발명의 항체로의 처리는 Gal-9 유도 Th1 세포 세포자멸사를 방지하고 조절 T 세포의 팽창을 억제한다.

발명의 항체의 특정한 인간화된 버전은 안정성 및 약동학 (PK) 프로파일의 관점에서 추가의 유리한 특징을 나타내며, 그로써 치료 항체로서 추가의 개발에 특별히 적합하다. 구체적으로, 그러한 인간화된 항체는 적어도 14일 동안 40℃에서뿐만 아니라, 낮은 pH에서 여러 시간 동안, 그리고 여러 번의 동결-해동 사이클 후에 안정성을 보였다. 한편, 인간화된 항체에 대해 C57BL/6 마우스에 10 mg/kg의 단일 용량의 투여 후에 높은 혈장 노출이 관찰되었다.

본 발명의 항체는 많은 암, 예컨대 AML을 치료하기 위해 사용될 수 있다. Gal-9는 AML에서, 백혈병 줄기 세포에 대한 자가 재생 인자, 및 항암 면역의 억제자로서의 이중 역할을 하는 것으로 보고되었다. 그러므로, 본 발명의 Gal-9 중화 항체를 사용함으로써 Gal-9 기능을 길항하는 것은 AML을 치료하기 위한 매력적인 치료 접근법을 나타낸다.

종합적으로, 본원에 제공된 데이터는 발명의 항체로의 Gal-9의 중화가 현재의 면역요법의 효능을 제한하는 것으로 알려져 있는 핵신 면역억제 메커니즘을 차단한다.

발명의 상세한 측면은 아래의 다양한 섹션에서 추가로 그리고 별도로 기술된다. 그러나, 실시예 또는 도면에만 기술된 구체예, 및 아래의 한 섹션 하에서만 기술된 구체예를 포함하여, 발명의 임의의 한 구체예는 발명의 임의의 다른 구체예(들)와 조합될 수 있는 것이 이해되어야 한다.

2. 정의

용어 "항체"는 가장 넓은 의미로, 한정하는 것은 아니지만 단클론성 항체, 다클론성 항체, 및 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체)를 포함하여, 다양한 항체를 포함한다. 용어 "항체"는 또한 중쇄의 상보성 결정 영역 (CDR) 1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 분자를 광범위하게 나타내며, 분자는 항원에 결합할 수 있다. 용어 "항체"는 또한, 한정하는 것은 아니지만, 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 및 마우스, 인간, 시노몰구스 원숭이, 등과 같은 다양한 종의 항체를 포함한다.

그러나, 더 좁은 의미로, "항체"는 본 발명의 키메라 단클론성 항체, 인간화된 단클론성 항체, 및 인간 단클론성 항체, 특히 인간화된 단클론성 항체를 포함하여 다양한 단클론성 항체를 나타낸다.

일부 구체예에서, 항체는 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 중쇄 가변 영역 및 적어도 일부의 중쇄 불변 영역을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 (CH), 및 경쇄 가변 영역 및 적어도 일부의 경쇄 불변 영역을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하고, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 및 적어도 일부의 중쇄 불변 영역을 포함하며, 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 및 적어도 일부의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

본원에서 사용되는 바, 단일 사슬 Fv (scFv), 또는 예를 들어 6개의 모든 CDR (3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR)을 포함하는 단일 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 임의의 다른 항체는 중쇄 및 경쇄를 가지는 것으로 여겨진다. 일부 그러한 구체예에서, 중쇄는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항체의 영역이고 경쇄는 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 항체의 영역이다.

본원에서 사용되는 용어 "중쇄 가변 영역 (HCVR)"은 최소한, 중쇄 CDR1 (CDR-H1), 프레임워크 2 (HFR2), CDR2 (CDR-H2), FR3 (HFR3), 및 CDR3 (CDR-H3)을 포함하는 영역을 나타낸다. 일부 구체예에서, 중쇄 가변 영역은 또한 CDR-H1에 대해 N-말단인 적어도 일부 (예컨대, 전체)의 FR1 (HFR1), 및/또는 CDR-H3에 대해 N-말단인 적어도 일부 (예컨대, 전체)의 FR4 (HFR4)를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "중쇄 불변 영역"은 적어도 3개의 중쇄 불변 단일 도메인, CH1, CH2, 및 CH3을 포함하는 영역을 나타낸다. 비제한적인 예시의 중쇄 불변 영역으로는 γ, δ 및 α를 들 수 있다. 비제한적인 예시의 중쇄 불변 영역으로 또한 ε 및 μ를 들 수 있다. 각각의 중쇄 불변 영역은 항체 아이소타입에 상응한다. 예를 들어, γ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgG 항체이고, δ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgD 항체이며, α 불변 영역을 포함하는 항체는 IgA 항체이고, ε 불변 영역을 포함하는 항체는 IgE 항체이며, μ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgM 항체이다. 특정 아이소타입은 추가로 하위부류로 세분화될 수 있다. 예를 들어, IgG 항체는, 한정하는 것은 아니지만, IgG1 (γ1 불변 영역을 포함함), IgG2 (γ2 불변 영역을 포함함), IgG3 (γ3 불변 영역을 포함함), 및 IgG4 (γ4 불변 영역을 포함함) 항체를 포함하고; IgA 항체는, 한정하는 것은 아니지만, IgA1 (α1 불변 영역을 포함함) 및 IgA2 (α2 불변 영역을 포함함) 항체를 포함하며; 및 IgM 항체는, 한정하는 것은 아니지만, IgM1 (μ1 불변 영역을 포함함) 및 IgM2 (μ2 불변 영역을 포함함)를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "중쇄"는 리더 서열이 있거나 없이, 적어도 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 나타낸다. 일부 구체예에서, 중쇄는 적어도 일부의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "전장 중쇄"는 리더 서열이 있거나 없이, C-말단 리신이 있거나 없이, 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "경쇄 가변 영역 (LCVR)"은 경쇄 CDR1 (CDR-L1), 프레임워크 (FR) 2 (LFR2), CDR2 (CDR-L2), FR3 (LFR3), 및 CDR3 (CDR-L3)을 포함하는 영역을 나타낸다. 일부 구체예에서, 경쇄 가변 영역은 또한 적어도 일부 (예컨대, 전체)의 FR1 (LFR1) 및/또는 적어도 일부 (예컨대, 전체)의 FR4 (LFR4)를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "경쇄 불변 영역"은 경쇄 불변 도메인, C_L.을 포함하는 영역을 나타낸다. 비제한적인 예시의 경쇄 불변 영역으로 λ 및 κ를 들 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "경쇄"는 리더 서열이 있거나 없이, 적어도 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 나타낸다. 일부 구체예에서, 경쇄는 적어도 일부의 경쇄 불변 영역을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "전장 경쇄"는 리더 서열이 있거나 없이, 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 나타낸다,

용어 (항체의) "항체 단편" 또는 "항원 결합 부분"으로는, 한정하는 것은 아니지만, 항원에 결합할 수 있는 단편, 예컨대 Fv, 단일 사슬 Fv (scFv), Fab, Fab', 및 (Fab')₂를 들 수 있다. 특정 구체예에서, 항체 단편으로는 Fab, Fab', F(ab')₂, F_d, 단일 사슬 Fv 또는 scFv, 이황화 결합된 F_v, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgG△CH₂, 미니바디, F(ab')₃, 테트라바디, 트라이아바디, 디아바디, 단일 도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb₂, (scFv)₂, 또는 scFv-FcF를 들 수 있다.

용어 "Fab"는 대략 50,000 달톤의 분자량을 가진 항체 단편을 나타내며, 항원에 대한 결합의 활성을 가진다. 그것은 중쇄의 n-말단 측의 대략 절반 및 이황화 가교에 의해 연결된 경쇄 전체를 포함한다. Fab는 특히 면역글로불린의 프로테아제인 파파인에 의한 처리에 의해 얻어질 수 있다.

용어 "F(ab')₂"는 대략 100,000 달톤의 단편 및 항원에 대한 결합 활성을 나타낸다. 이 단편은 힌지 영역에서 이황화 가교를 통해 연결된 2개의 Fab 단편보다 약간 더 크다. 이들 단편은 면역글로불린을 프로테아제인 펩신으로 처리함으로써 얻어진다.

단일 Fv 사슬 "scFv"는 VL 및 VH 단일 도메인을 암호화하는 유전자 및 이들 단일 도메인에 결합하도록 의도된 펩타이드를 암호화하는 서열을 사용하여 합성된 VH: VL 폴리펩타이드에 상응한다. 발명에 따르는 scFv는 예를 들어 유전자 재조합 기법을 사용하여 적절한 입체형태로 유지되는 CDR을 포함한다.

"scFv"의 다이머는 펩타이드 결합에 의해 함께 연결된 2개의 scFv 분자에 상응한다. 이 Fv 사슬은 종종 펩타이드를 코딩하는 링커 서열에 의해 연결된 VH 및 VL을 코딩하는 유전자를 포함하는 융합 유전자의 발현의 결과이다. 인간 scFv 단편은, 바람직하게는 유전자 재조합 기법을 사용하여 적절한 입체형태로 유지되는 CDR 영역을 포함할 수 있다.

"dsFv" 단편은 이황화 가교에 의해 안정화된 VH-VL 헤테로다이머이다; 그것은 이가일 수 있다 (dsFV₂). 이가 Sc(Fv)₂ 또는 다가 항체의 단편은 자발적으로 일가 scFv의 결합에 의해 형성되거나 펩타이드 결합 서열에 의해 scFv 단편을 연결함으로써 생성될 수 있다.

Fc 단편은 항체의 생물학적 특성, 특히 면역 이펙터에 의해 인식될 또는 보체를 활성화하는 그것의 능력을 지지한다. 그것은 힌지 영역을 지나 중쇄의 불변 단편으로 이루어진다.

용어 "디아바디"는 2개의 항원 고정 부위를 갖는 작은 항체 단편을 의미한다. 이들 단편은, 동일한 VH-VL 폴리펩타이드 사슬 내에서, 가변 경쇄 도메인 VL에 연결된 가변 중쇄 도메인 VH를 포함한다. 동일한 사슬의 2개의 단일 도메인의 매칭을 허용하기에는 너무 짧은 결합 서열을 사용하면, 또 다른 사슬의 2개의 상보하는 단일 도메인과의 매칭이 반드시 발생하고 그에 따라 2개의 항원 고정 부위가 생성된다.

참조 항체로서 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 항체 경합 검정에 의해 측정될 수 있다. 그것은 경합 검정에서 참조 항체의 그것의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 나타내거나, 역으로, 참조 항체는 경합 검정에서 항체의 그것의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단한다. 용어 "경합"은 동일한 에피토프에 대해 경합하는 항체의 맥락에서 사용될 때, 항체 간 경합이 테스트되는 항체가 참조 항체의 공통 항원에 대한 특이적 결합을 방지 또는 억제하는 검정에 의해 측정되는 것을 의미한다.

수많은 유형의 경합 결합 검정, 예를 들어: 고상 직접 또는 간접 방사성 면역검정 (RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경합 검정 (예컨대, Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253 참고); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예컨대, Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619 참고); 고상 직접 표지화 검정; 고상 직접 표지화된 샌드위치 검정 (예컨대, Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press 참고); I¹²⁵ 표지를 사용하는 고상 직접 표지 RIA (예컨대, Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15 참고); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예컨대, Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552 참고); 및 직접 표지화된 RIA (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol.)가 사용될 수 있다.

전형적으로, 그러한 검정은 고체 표면 또는, 미표지 테스트 항원 결합 단백질 및 표지화된 참조 항체 중 어느 것을 포함하는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 포함한다. 경합 억제는 테스트 항체의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 측정함으로써 측정된다. 경합 검정에 의해 확인된 항체 (경합하는 항체)로는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및 입체 장애가 일어나도록 참조 항체에 의해 결합된 에티포프에 충분히 가까운 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 들 수 있다. 일부 구체예에서, 경합하는 항체가 과잉으로 존재할 때, 그것은 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75%만큼 억제할 것이다. 일부 경우에, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 97% 또는 그 이상만큼 억제된다.

용어 "항원"은 선택적 결합제에 의해 결합될 수 있고, 추가적으로 그 항원에 결합할 수 있는 항체를 생성하기 위해 포유류에서 사용될 수 있는 분자 또는 분자 부분, 예컨대 항체 또는 그것의 면역학적으로 기능적인 단편을 나타낸다. 항원은 항체와 상호작용할 수 있는 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.

용어 "에피토프"는 선택적 결합제에 의해 결합되는 항원 분자의 부분, 예컨대 항체 또는 그것의 단편이다. 용어는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 결정기를 포함한다. 에피토프는 연속적이거나 비연속적일 수 있다 (예컨대, 폴리펩타이드에서, 폴리펩타이드 서열에서 서로에 대해 연속적이지 않지만 분자의 맥락 내에 있는 아미노산 잔기는 항원 결합 단백질에 의해 결합됨). 일부 구체예에서, 에피토프는 그것이 항체를 생성하기 위해 사용된 에피토프와 유사한 3차원 구조를 포함한다는 점에서 모방적일 수 있지만, 항체를 생성하기 위해 사용된 그 에피토프에서 발견되는 아미노산 잔기를 전혀 포함하지 않거나 일부만 포함한다. 에피토프 결정기는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐 기와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹을 포함할 수 있고, 특정 3차원 구조적 특징, 및/또는 특정 전하 특징을 가질 수 있다.

일부 구체예에서, "에피토프"는 그것을 측정하기 위해 사용된 방법에 의해 정의된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 만약 수소-중수소 교환 (HDX)에 의해 측정되는 바, 항체가 참조 항체와 동일한 영역의 항원에 결합한다면, 항체는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.

예를 들어, 모(parent) 항체 HFB9-1 및 HFB9-2의 에피토프 서열은 US 2017-0283499 A1 (본원에 참조로 포함됨)에서 SEQ ID NO: 9로서 개시된다. 이 서열은 P4 펩타이드에 상응하며 결합 펩타이드의 단부 및 갈렉틴-9의 C-말단 부분의 시작 부분을 포함한다. 그것은 갈렉틴-9의 3개의 아이소폼(isoform)에 존재한다 (예컨대, S 아이소폼의 아미노산 166 내지 178, M 아이소폼의 아미노산 178 내지 190, L 아이소폼의 아미노산 210 내지 222). 발명의 인간화된 항체는 갈렉틴-9의 적어도 하나의, 바람직하게는 모든 아이소폼에 결합할 수 있다.

특정 구체예에서, X-선 결정학에 의해 측정되는 바, 항체는 만약 그것이 항원의 동일한 영역에 결합한다면 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 것이다.

본원에서 사용되는 "키메라 항체"는 제1 종 (예컨대 마우스, 래트, 시노몰구스 원숭이, 등)으로부터의 적어도 하나의 가변 영역 및 제2 종 (예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이, 닭, 등)으로부터의 적어도 하나의 불변 영역을 포함하는 항체를 나타낸다. 일부 구체예에서, 키메라 항체는 적어도 하나의 마우스 가변 영역 및 적어도 하나의 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 키메라 항체의 모든 가변 영역은 제1 종으로부터 유래하고 키메라 항체의 모든 불변 영역은 제2 종으로부터 유래된다.

본원에서 사용되는 "인간화된 항체"는 비-인간 가변 영역 (예컨대 마우스, 래트, 시노몰구스 원숭이, 닭, 등)의 프레임워크 영역의 적어도 하나의 아미노산이 인간 가변 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체되어 있는 항체를 나타낸다. 일부 구체예에서, 인간화된 항체는 적어도 하나의 인간 불변 영역 또는 그것의 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 인간화된 항체 단편은 Fab, scFv, (Fab')₂, 등이다.

본원에서 사용되는 용어 "CDR-그라프팅된 항체"는 제1 (비-인간) 종의 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)이 제2 (인간) 종의 프레임워크 영역 (FR) 위로 그라프팅되어 있는 인간화된 항체를 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간에서 생성된 항체, 인간 면역글로불린 유전자를 포함하는 비-인간 동물, 예컨대 Xeno마우스^®에서 생성된 항체, 및 시험관내 방법, 예컨대 항체 레퍼토리가 인간 면역글로불린 서열을 토대로 하는 것인 파지 디스플레이를 사용하여 선택된 항체를 나타낸다.

"숙주 세포"는 벡터 또는 분리된 폴리뉴클레오타이드의 수령체일 수 있거나 또는 수령체인 세포를 나타낸다. 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 예시의 진핵 세포로는 포유류 세포, 예컨대 영장류 또는 비-영장류 동물 세포; 진균 세포, 예컨대 효모; 식물 세포; 및 곤충 세포를 들 수 있다. 비제한적인 예시의 포유류 세포로는, 한정하는 것은 아니지만, NSO 세포, PER.C6^® 세포 (Cru세포), 및 293 및 CHO 세포, 및 그것들의 유도체, 예컨대 각각 293-6E 및 DG44 세포를 들 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "분리된"은 자연계에서 전형적으로 함께 발견되는 구성요소의 적어도 일부로부터 분리된 또는 그것과 전형적으로 함께 생성되는 구성요소의 적어도 일부로부터 분리된 분자를 나타낸다. 예를 들어, 폴리펩타이드는 그것이 생성된 세포의 구성요소의 적어도 일부로부터 분리될 때 "분리된"으로서 언급된다. 폴리펩타이드가 발현 후에 세포에 의해 분비되는 경우, 그것을 생성한 세포로부터 폴리펩타이드를 함유한 상층액을 물리적으로 분리하는 것은 폴리펩타이드를 "분리하는 것"으로 여겨진다. 유사하게, 폴리뉴클레오타이드는 그것이 전형적으로 자연계에서 발견되거나, 그것이 생성된 세포의 구성요소의 적어도 일부로부터 분리된 더 큰 폴리뉴클레오타이드 (예컨대, 예를 들어, DNA 폴리뉴클레오타이드의 경우에 게놈 DNA 또는 미토콘드리아 DNA)의 일부가 아닌 경우 "분리된"으로서 언급된다. 그러므로, 숙주 세포 내부에서 벡터에 함유된 DNA 폴리뉴클레오타이드는 그 폴리뉴클레오타이드가 자연계에서 그 벡터에서 발견되는 것이 아닌 한 "분리된"으로서 언급될 수 있다.

용어 "대상체" 및 "환자"는 인간과 같은 포유류를 나타내기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 일부 구체예에서, 한정하는 것은 아니지만, 설치류, 유인원, 고양이과, 개과, 말, 소과, 돼지, 양, 염소, 포유류 실험실 동물, 포유류 농장 동물, 포유류 스포츠 동물, 및 포유류 애완동물을 포함하여, 다른 비-인간 포유류를 치료하는 방법이 또한 제공된다. 일부 경우에, "대상체" 또는 "환자"는 질환 또는 장애에 대한 치료를 필요로 하는 (인간) 대상체 또는 환자를 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "샘플" 또는 "환자 샘플"은 예를 들어 물리적, 생화학적, 화학적 및/또는 물리생리적 특징을 토대로 특성화되고/되거나 확인될 세포 및/또는 다른 분자 실체를 함유하는 관심 있는 대상체로부터 얻어진 또는 유래된 물질을 나타낸다. "질환 샘플" 및 그것의 변이라는 구절은 특성화될 세포 및/또는 분자 실체를 함유할 것으로 예상될 수 있는 또는 함유하는 것으로 알려진 관심 있는 대상체로부터 얻어진 임의의 샘플을 나타낸다.

"조직 또는 세포 샘플"은 대상체 또는 환자의 조직으로부터 얻어진 유사한 세포의 집합을 의미한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은 신선한, 동결된 및/또는 보존된 장기 또는 조직 샘플 또는 생검 또는 흡인물로부터의 고체 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 구성요소; 가래, 뇌척수액, 양수, 복막액, 또는 간질액과 같은 체액; 대상체의 임신 또는 발달의 임의의 시기로부터의 세포일 수 있다. 조직 샘플은 또한 일차 또는 배양된 세포 또는 세포주일 수 있다. 선택적으로, 조직 또는 세포 샘플은 질환 조직/장기로부터 얻어진다. 조직 샘플은 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소, 항생물질, 등과 같이 자연계에서 조직과 자연적으로는 혼합되지 않는 화합물을 함유할 수 있다.

본원에서 사용되는 바, "참조 샘플", "참조 세포", 또는 "참조 조직"은 그것에 대해 확인하기 위해 발명의 방법 또는 조성물이 사용되는 질환 또는 상태에 영향을 받지 않는 것으로 알려져 있거나, 여겨지는 공급원으로부터 얻어진 샘플, 세포 또는 조직을 나타낸다. 한 구체예에서, 참조 샘플, 참조 세포 또는 참조 조직은 질환 또는 상태가 발명의 조성물 또는 방법을 사용하여 확인되는 대상과 동일한 대상체 또는 환자의 신체의 건강한 부분으로부터 얻어진다. 한 구체예에서, 참조 샘플, 참조 세포 또는 참조 조직은 질환 또는 상태가 발명의 조성물 또는 방법을 사용하여 확인되는 대상이 아닌 대상체 또는 환자인 적어도 한 개체의 신체의 건강한 부분으로부터 얻어진다. 일부 구체예에서, 참조 샘플, 참조 세포 또는 참조 조직은 질환 또는 상태가 발달하기 전에 또는 질환 또는 상태의 초기 단계에서 환자로부터 이전에 얻어졌다.

"장애" 또는 "질환"은 발명의 하나 이상의 Gal-9 길항물질로의 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 상태이다. 이것으로는 포유류가 문제의 장애를 일으키기 쉬운 그런 병리적 상태를 포함하여 만성 및 급성 장애 또는 질환을 들 수 있다. 본원에서 치료될 장애의 비제한적인 예로는 암을 들 수 있다.

"조절 T 림프구의 억제자 활성과 관련된 질병"은 조절 T 림프구의 억제자 활성이, 특히 질병의 발달 또는 지속을 촉진함으로써 역할을 하는 임의의 질병 (자가면역은 아님)을 의미한다. 특히, 조절 T 림프구의 억제자 활성은 종양의 발달을 촉진하는 것이 입증되어 있다. 그러므로 본 발명은 보다 구체적으로 T 림프구의 억제자 활성이 역할을 하는 암을 목표로 한다.

용어 "암"은 본원에서 이상적으로 높은 수준의 증식 및 성장을 나타내는 세포의 그룹을 나타내기 위해 사용된다. 암은 양성 (또한 양성 종양으로도 언급됨), 전-악성, 또는 악성일 수 있다. 암 세포는 고체 암 세포 (즉, 고형 종양을 형성함) 또는 백혈병 암 세포일 수 있다. 용어 "암 성장"은 본원에서 상응하는 크기 또는 암의 정도의 증가를 유도하는 암을 포함하는 세포 또는 세포들에 의한 증식 또는 성장을 나타내기 위해 사용된다.

암의 예로는 한정하는 것은 아니지만, 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 들 수 있다. 그러한 암의 보다 구체적인 비제한적인 예로는 편평세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연조직 육종, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평 암종, 복막암, 간세포 암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간암종, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장암, 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관 암종, 담낭 암종, 위암, 흑색종, 및 다양한 유형의 두경부암을 들 수 있다.

급성 골수성 백혈병 (AML)의 프랑스-미국-영국 (FAB) 분류는 AML을 질환의 상이한 단계로 분류한다. FAB 하위유형은 표 1에 제시된다.

FAB 분류

FAB 하위유형	설명
M0	미분화된 급성 골수모세포성 백혈병
M1	최소 성숙이 있는 급성 골수모세포성 백혈병
M2	성숙이 있는 급성 골수모세포성 백혈병
M3	급성 전골수구성 백혈병 (APL)
M4	급성 골수단세포 백혈병
M5	급성 단세포성 백혈병
M6	급성 적혈구모세포성 백혈병
M7	급성 거핵모세포성 백혈병

특정 구체예에서, 본원에서 사용되는 암은 혈액암 (예컨대 AML 및 DLBCL), 또는 고형 종양 (예컨대 유방암, 두경부암, 폐암, 흑색종 (포도막 흑색종 포함), 결장암, 직장 암종, 난소암, 간암, 및 전립선암)이다.

"화학요법제"는 암의 치료에 유용할 수 있는 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 티오테파 및 CYTOXAN^® 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제; 부술판, 임프로술판 및 피포술판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포라미드, 트라이에틸렌티오포스포라미드 및 트라이메틸롤로멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄토테신 (합성 유사체 토포테칸을 포함함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그것의 아도젤레센, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 염산염, 멜팔란, 노벰비신, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생물질, 예컨대 엔다이인 항생물질 (예컨대, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마몰 및 칼리케아미신 오메갈 (예컨대, Agnew, Chem lntl. Ed. Engl , 33: 183-186 (1994) 참고); 디네미신 A를 포함한 디네미신; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네로카르지노스타틴 발색단 및 관련된 발색단백질 엔다이인 항생물질 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, ADRIAMYCIN^® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 큐엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사산물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라신 (5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트라이메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 다이데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-아드레날, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 다이아지퀴온; 엘포미틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미토크산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소크산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK^® 다당류 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지큐온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예컨대 TAXOL^® 파클리탁셀 (Bristol- Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE^® 크레모포르 유리, 파클리탁셀의 알부민 조작된 나노입자 제형 (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), 및 TAXOTEREe^® 독세탁셀 (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로란부실; GEMZAR^® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토크산트론; 빈크리스틴; NAVELBINE^® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (Camptosar, CPT-11) (5-FU 및 류코보린으로의 이리노테칸의 치료 요법 포함); 토포아이소머라제 억제제 RFS 2000; 다이플루오로메틸로니틴 (DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 카페시타빈; 콤브레타스타틴; 류코보린 (LV); 옥살리플라틴 치료 요법 (FOLFOX)을 포함한 옥살리플라틴; PKC-알파, Raf, H-Ras, EGFR의 억제제 (예컨대, 에를로티닙(erlotinib) (TAECEVA^®)) 및 세포 증식을 감소시키는 VEGF-A 및 상기 열거된 것들 중 임의의 것의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 들 수 있다.

추가의 비제한적인 예시의 화학요법제로는 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM)와 같은 암에 대한 호르몬 작용을 조절 또는 억제하는 작용을 하는 항-호르몬제, 이를테면, 예를 들어, 타목시펜 (NOLVADEX^® 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시 타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 FARESTON^® 토레미펜; 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는, 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE^® 메게스트롤 아세테이트, AROMASIN^® 엑스메스탄, 포르메스타니, 파드로졸, RIVISOR^® 보로졸, FEMARA^® 테르로졸, 및 ARIMIDEX^® 아나스트로졸; 및 항-안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 바이칼루타미드, 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-다이옥솔란 뉴클레오사이드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상적인 세포 증식에 연루된 신호전달 경로의 유전자의 발현을 억제하는 것들, 예컨대, 예를 들어, PKC-알파, Ralf 및 H-Ras; 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제 (예컨대, ANGIOZYME^® 리보자임) 및 HER2 발현 억제제; 백신, 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어, ALLOVECTIN^® 백신, LEUVECTIN^® 백신, 및 VAXID^® 백신; PROLEUKIN^® rIL-2; LURTOTECAN^® 토포이소머라제 1 억제제; ABARELIX^® rmRH; 및 상기 열거된 것들 중 임의의 것의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 들 수 있다.

"항-혈관신생제" 또는 "혈관신생 억제제"는 혈관신생, 혈관형성, 또는 바람직하지 못한 혈관 투과성을 직접적으로 또는 간접적으로 억제하는 작은 분자량 물질, 폴리뉴클레오타이드 (예컨대, 억제 RNA (RNAi 또는 siRNA) 포함), 폴리펩타이드, 분리된 단백질, 재조합 단백질, 항체, 또는 콘쥬게이트 또는 그것들의 융합 단백질을 나타낸다. 항-혈관신생제는 혈관신생 인자 또는 그것의 수용체에 결합하고 그것의 혈관신생 활성을 타단하는 그런 작용제를 포함하는 것이 이해되어야 한다. 예를 들어, 항-혈관신생제는 혈관신생제에 대한 항체 또는 다른 길항물질, 예컨대, VEGF-A에 대한 항체 (예컨대, 베바시주맙(bevacizumab) (AVASTIN^®)) 또는 VEGF-A 수용체 (예컨대, KDR 수용체 또는 Flt-1 수용체)에 대한 항체, 항-PDGFR 억제제, 예컨대 GLEEVEC^® (이마티닙(Imatinib) 메실레이트), VEGF 수용체 신호전달을 차단하는 소분자 (예컨대, PTK787/ZK2284, SU6668, SUTENTt^®/SUl 1248 (수니티닙(sunitinib) 말레이트), AMG706, 또는 예컨대 국제 특허 출원 WO 2004/113304에 기재된 것들이다). 항-혈관신생제는 또한 천연 혈관신생 억제제, 예컨대, 안지오스타틴, 엔도스타틴, 등을 포함한다. 예컨대, Klagsbrun and D'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179 (예컨대, 악성 흑생종에서 항-혈관신생 요법을 열거하는 표 3; Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12): 1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556 (예컨대, 항-혈관신생 인자를 열거하는 표 2); 및, Sato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206 (예컨대, 임상 시험에서 사용된 항-혈관신생제를 열거하는 표 1) 참고.

본원에서 사용되는 바, "성장 억제제"는 시험관내에서나 생체내에서 세포 (예컨대 VEGF를 발현하는 세포)의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 나타낸다. 그러므로, 성장 억제제는 S 단계(phase)에서 세포 (예컨대 VEGF를 발현하는 세포)의 백분율을 상당히 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 세포 주기 진행을 (S 단계 이외의 곳에서) 차단하는 작용제, 예컨대 G1 정지 및 M 단계 정지를 유도하는 작용제를 들 수 있다. 고전적인 M 단계 차단제로는 빈카(vinca) (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산, 및 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드, 및 블레오마이신과 같은 토포이소머라제 II 억제제를 들 수 있다. G1을 정지시키는 작용제, 예를 들어, 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로르에타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 및 아라-C와 같은 DNA 알킬화제가 또한 S 단계 정지로 넘어간다. 추가 정보는 Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), e.g., p. 13에서 찾아볼 수 있다. 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 다 주목 나무로부터 유래되는 항암 약물이다. 유럽 주목으로부터 유래된 도세탁셀 (TAXOTERE^®, Rhone-Poulenc Rorer)은 파클리탁셀 (TAXOL^®, Bristol-Myers Squibb)의 반합성 유사체이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은 튜불린 다이머로부터 미세소관의 조립을 촉진하고 탈중합을 방지함으로써 미세소관을 안정화시켜서 세포에서 유사분열의 억제를 초래한다.

용어 "항-신생물 조성물"은 적어도 하나의 활성 치료제를 포함하는, 암 치료에 유용한 조성물을 나타낸다. 치료제의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 예컨대, 화학요법제, 성장 억제제, 세포독성제, 방사선 요법에 사용된 작용제, 항-혈관신생제, 암 면역치료제 (또한 면역 항암제(immuno-oncology agent)로도 언급됨), 세포자멸사 작용제, 항-튜불린 작용제, 및 암을 치료하기 위한 다른 작용제, 예컨대 항-HER-2 항체, 항-CD20 항체, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 길항물질 (예컨대, 티로신 키나제 억제제), HER1/EGFR 억제제 (예컨대, 에를로티닙 (TARCEVAR®), 혈소판 유래 성장 인자 억제제 (예컨대, GLEEVEC® (이마티닙 메실레이트)), COX-2 억제제 (예컨대, 세레콕시브(celecoxib)), 인터페론, CTLA4 억제제 (예컨대, 항-CTLA 항체 이필리무맙(ipilimumab) (YERVOY®)), PD-1 억제제 (예컨대, 항-PD1 항체, BMS-936558), PDL1 억제제 (예컨대, 항-PDL1 항체, MPDL3280A), PDL2 억제제 (예컨대, 항-PDL2 항체), VISTA 억제제 (예컨대, 항-VISTA 항체), 사이토카인, 다음의 표적 ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA, PD-1, PDL1, PDL2, CTLA4, VISTA, 또는 VEGF 수용체(들) 중 하나 이상에 결합하는 길항물질 (예컨대, 중화 항체), TRAIL/ Apo2, 및 다른 생리활성 및 유기 화학물질 작용제, 등을 들 수 있다. 그것들의 조합 또한 발명에 포함된다.

"치료"는, 예를 들어, 목적이 표적으로 한 병리적 상태 또는 장애를 둔화 (경감)시키는 것뿐만 아니라, 예를 들어, 목적이 상태 또는 장애의 재발을 억제하는 것인 치료적 치료를 나타낸다. "치료"는 인간을 포함하여 포유류에서 질환 (본원에서 또한 "장애" 또는 "상태"로도 언급됨)에 대한 치료제의 임의의 투여 또는 적용을 포함하며, 질환 또는 질환의 진행의 억제, 질환 또는 그것의 진행의 억제 또는 둔화, 그것의 발달의 정지, 질환의 부분적인 또는 전체적인 완화, 질환의 하나 이상의 증상의 부분적인 또는 전체적인 완화, 또는 손실된, 잃어버린, 또는 결핍된 기능의 복원 또는 수복; 또는 비효율적인 과정의 자극을 포함한다. 용어 "치료"는 또한 임의의 표현형 특징의 중증도의 감소 및/또는 그 특징의 발생률, 정도, 또는 가능성의 감소를 포함한다. 치료를 필요로 하는 개체는 이미 장애가 있는 개체뿐만 아니라 장애가 재발할 위험이 있는 개체 또는 장애의 재발이 예방되거나 둔화되어야 할 개체를 포함한다.

용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하기에 효과적인 약물의 양을 나타낸다. 일부 구체예에서, 유효량은 원하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 나타낸다. 발명의 Gal9 길항물질의 치료적 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 길항물질이 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 능력에 따라 달라질 수 있다. 치료적 유효량은 Gal9 길항물질의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료적으로 유익한 효과보다 더 큰 양을 포함한다.

"예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 나타낸다. 전형적으로, 반드시는 아니지만, 대상체에서 예방적 용량이 질환 전에 또는 질환의 초기 단계에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.

"제약학적으로 허용되는 담체"는 무독성 고체, 반고체, 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질, 제제화 보조제, 또는 대상체에게 투여하기 위해 함께 "제약학적 조성물"을 포함하는 치료제와 함께 사용하기 위한 기술분야에 관행적인 담체를 나타낸다. 제약학적으로 허용되는 담체는 사용되는 투여량 및 농도에서 수령체에게 무독성이며 제제의 다른 구성요소와 양립할 수 있다. 제약학적으로 허용되는 담체는 사용된 제제에 적절하다. 예를 들어, 만약 치료제가 경구로 투여되어야 하는 것이라면, 담체는 젤 캡슐일 수 있다. 만약 치료제가 피하로 투여되어야 하는 것이라면, 담체는 이상적으로는 피부에 자극적이지 않으며 주입 부위 반응을 유발하지 않는다.

"제조 물품"은 적어도 하나의 시약, 예컨대, 질환 또는 장애의 치료를 위한 의약품, 또는 본원에서 기술된 바이오마커를 특이적으로 검출하기 위한 프로브를 포함하는 임의의 제조품 (예컨대, 포장 또는 용기) 또는 키트이다. 일부 구체예에서, 제조품 또는 키트는 본원에 기술된 방법을 수행하기 위한 단위로서 홍보되거나, 분배되거나, 또는 판매된다.

3. 암 치료 방법

본원에 기술된 발명은 인간 및 다른 비-인간 포유류를 치료하는 방법에 사용하기 위한 Gal9 길항물질 (예컨대 항-Gal9 항체)을 제공한다.

병리학적 상황에서, Treg는 부적절한 면역 억제, 예를 들어, 종양 성장을 촉진할 수 있을 면역 억제를 유발할 수 있다. Treg는 특히 이펙터 T 림프구의 활성을 부적절하게 억제함으로써 수많은 암 유형의 발달을 촉진함으로써, 항-종양 면역 반응을 감소시키는 것과 관련이 있다.

활성화 중에, 갈렉틴-9는 Treg에 의해 직접 발현되는 한편, 이펙터 T 림프구에 의해서는 매우 약하게만 발현되거나, 전혀 발현되지 않는다. 그러므로, 예를 들어, Gal-9 특이적 항체를 사용하여 갈렉틴-9를 표적화하는 것은 이펙터 T 림프구의 고갈을 유발할 위험 없이 조절 T 림프구의 억제자 활성을 특이적으로 억제할 수 있다. 갈렉틴-9에 대해 지시되고, 조절 T 림프구의 억제자 활성을 억제하는, 발명에 따르는 항체는 그러므로 조절 T 림프구의 억제자 활성과 관련된 질환 또는 상태의 치료, 특히 암의 치료에 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 Gal9 길항물질을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다.

일부 구체예에서, 암을 치료하는 방법이 제공되며, 방법은 암을 가진 대상체에게 Gal9 길항물질을 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 암을 치료하기 위한 Gal9 길항물질의 용도가 제공된다.

발명의 방법/용도에 의해 치료될 수 있는 암으로는 조절 T 림프구가 그것의 억제자 활성을 발휘하는 암, 예컨대 상대적으로 다량의 조절 T 림프구가 종양 조직에 또는 순환계에 존재하는 그런 암을 들 수 있다. 조절 T 림프구의 팽창 (Treg의 빈도에 의해 측정될 수 있음)은 일반적으로 Treg 활성화의 증가와 상관이 있다. 조절 T 림프구의 빈도는 기술분야에 알려져 있는 임의의 방법에 의해, 예를 들어 종양내 림프구 또는 순환하는 림프구의 유동 세포분석 (facs) 분석에 의해, 또는 종양 조직의 면역조직학적 염색에 의해 평가될 수 있다.

암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하여, Gal9 길항물질로 치료될 수 있는 비제한적인 예시의 암이 본원에 제공된다. 그러한 암의 보다 구체적인 비제한적인 예로는 흑색종, 자궁경부암, 편평세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연조직 육종, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평 암종, 복막암, 간세포 암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 난소암, 간암, 방광암, 간암종, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장암, 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관 암종, 담낭 암종, 위암, 흑색종, 및 다양한 유형의 두경부암을 들 수 있다.

특정 구체예에서, 발명의 방법/용도는 고수준의 조절 T 림프구가 알려져 있는, 및/또는 암/종양이 분명하게 불량한 예후와 관련되어 있는 암, 이를테면: 만성 골수성 백혈병 (CML), 결장암, 흑색종, 자궁의 암, 유방암, 췌장암, 위암, 난소암, 중추신경계의 일차 림프종, 다발성 골수종, 전립선암, 호지킨 림프종, 또는 간세포 암종을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

특정 구체예에서, 발명의 방법/용도는 면역 억제자 역할을 충족하는 갈렉틴-9를 운반하는 다량의 엑소좀을 생산하는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 그러한 암의 비제한적인 예로는: 바이러스 유도 암, 예를 들어 EBV (엡스타인-바 바이러스)와 관련된 비인두 암종 또는 HCV (C형 간염 바이러스) 또는 HBV (B형 간염 바이러스)와 관련된 간세포 암종 (CHC)을 들 수 있다.

일부 구체예에서, 암은 혈액암 (예컨대 AML 및 DLBCL), 또는 고형 종양 (예컨대 유방암, 두경부암, 폐암, 흑색종 (포도막 흑색종 포함), 결장암, 직장 암종, 난소암, 간암, 및 전립선암)이다.

특정 구체예에서, 발명의 방법/용도는 C형 간염으로부터 유발되는 섬유증의 재발을 치료하기 위해 사용될 수 있는데, 조절 T 림프구의 빈도를 증가시키는 것이 그러한 섬유증의 재발을 예측하는 인자인 것으로 또한 입증되었기 때문이다.

일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 항-Gal9 항체, 또는 간단하게 "Gal9 항체"이다.

일부 구체예에서, 암을 치료하기 위한 Gal9 길항물질은 비-항체 단백질, 예컨대 Gal9와 그것의 리간드 사이의 상호작용을 억제하며, 선택적으로 추가로 융합 파트너를 포함하고 융합 분자 형태의 Gal9 단백질의 가용성 버전 또는 그것의 일부분 (예컨대, ECD)일 수 있다. 다양한 예시의 Gal9 길항물질이 이어지는 섹션에서 보다 상세하게 기술된다.

일부 구체예에서, 발명의 Gal9 길항물질은 단독으로, 또는 대안으로 질환 또는 적응증을 치료할 수 있는 것으로 알려져 있는 임의의 다른 적합한 화합물과 함께 사용될 수 있다.

그러므로 발명의 특정 구체예에 따르면, 갈렉틴-9에 대해 지시되고 이전에 정의된 것과 같이 조절 T 림프구의 억제자 활성을 억제하는 항체는 조절 T 림프구의 억제자 활성과 관련된 질환을 치료하기 위한 제2 치료제, 예를 들어 항암제와 함께 사용된다.

즉, 용도가 암의 치료인 경우, 항체는 예를 들어 수술, 방사선요법, 화학요법 또는 그것들의 조합과 같은 암에 대한 알려져 있는 치료법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체는 종양 항원, 특히 EBV 항원에 대한 이펙터 림프구의 1회 이상의 주입으로 이루어진 입양 면역요법과 함께 사용될 수 있다. 일부 측면에 따르면, 암 치료를 위해 발명에 따라 갈렉틴-9에 대해 지시된 항체와 함께 사용된 다른 항암제는 항-혈관신생제를 포함한다. 특정 측면에 따르면, 항체는 사이토카인, 예를 들어 항-종양 면역 반응을 자극하는 사이토카인과 공동 투여될 수 있다.

그러한 병용 요법에서, 발명의 항체는 제2 치료제 전에, 후에, 또는 동시에 사용될 수 있다. 병용 요법과 관련하여 하기의 추가 섹션을 참고한다.

4. 투여 경로 및 담체

다양한 구체예에서, Gal9 길항물질 (예컨대, Gal9 Ab)은 피하로 또는 정맥내로 투여될 수 있다. 간단하게, "Gal9 길항물질"은 여기서, 좁은 의미로, 발명의 Gal1 항체, 예컨대 발명의 인간화된 Gal9 항체를 나타낸다.

일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 한정하는 것은 아니지만, 경구, 동맥내, 비경구, 비강내, 근육내, 심장내, 기관내, 볼, 직장, 복강내, 흡입에 의한, 피부내, 국소적, 경피, 및 척수강내 경로, 또는 다른 경로, 예컨대, 이식에 의한 경로를 포함하여, 다양한 경로에 의해 생체내에서 투여될 수 있다.

일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 항-Gal9 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이고, 정맥내로 (i.v.) 또는 피하로 (s.c.) 투여된다.

본 조성물은, 한정하는 것은 아니지만, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌제, 관장제, 주사제, 흡입제, 및 에어로졸을 포함하여 고체, 반고체, 액체, 또는 가스 형태의 조제물로 제제화될 수 있다.

다양한 구체예에서, Gal9 길항물질을 포함하는 조성물은 광범위한 제약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제로 제공된다 (예컨대, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams 및 Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000) 참고). 비히클, 보조제, 및 희석제를 포함하여 다양한 제약학적으로 허용되는 담체가 이용 가능하다. 더욱이, 다양한 제약학적으로 허용되는 보조 물질, 예컨대 pH 조정제 및 완충제, 긴장성 조정제, 안정화제, 습윤제 등이 또한 이용 가능하다. 비제한적인 예시의 담체로는 식염수, 완충 식염수, 덱스트로스, 물, 글리세롤, 에탄올, 및 그것들의 조합을 들 수 있다.

다양한 구체예에서, Gal9 길항물질을 포함하는 조성물은, 그것을 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 또는 다른 오일, 합성 지방족 산 글리세라이드, 고급 지방족 산의 에스테르, 또는 프로필렌 글리콜에 용해, 현탁, 또는 유화시킴으로써; 그리고 필요하다면 가용화제, 등장성 작용제, 현탁제, 유화제, 안정화제 및 보존제와 같은 종래의 첨가제와 함께, 피하 투여를 포함하여 주사용으로 제제화될 수 있다.

다양한 구체예에서, 조성물은, 예를 들어, 다이클로로다이플루오로메탄, 프로판, 질소, 등과 같은 가압된 허용 가능한 추진제를 사용하여 흡입용으로 제제화될 수 있다.

조성물은 또한, 다양한 구체예에서, 예컨대 생분해성 또는 비-생분해성 중합체와 함께 사방형 마이크로캡슐로 제제화될 수 있다. 비제한적인 예시의 생분해성 제제로는 폴리락트산-글리콜산 (PLGA) 중합체를 들 수 있다. 비제한적인 예시의 비-생분해성 제제로는 폴리글리세린 지방산 에스테르를 들 수 있다. 그러한 제제를 제조하는 특정 방법은 예를 들어 EP 1125584 A1에서 기술된다.

하나 이상의 용기를 포함하며, 각각의 용기가 하나 이상의 용량의 Gal9 길항물질을 함유한 제약학적 투여 팩이 또한 제공된다. 일부 구체예에서, 단위 투여량이 제공되며, 단위 투여량은 하나 이상의 추가 작용제와 함께 또는 없이 Gal9 길항물질을 포함하는 조성물의 미리 결정된 양을 함유한다. 일부 구체예에서, 그러한 단위 투여량은 일회용의 주사용 사전 충전 주사기로 공급된다. 다양한 구체예에서, 단위 투여량에 함유된 조성물은 식염수, 수크로스, 등; 완충제, 예컨대 인산염, 등을 포함할 수 있고/있거나; 안정적이고 효과적인 pH 범위 내에서 제제화될 수 있다. 대안으로, 일부 구체예에서, 조성물은 적절한 액체, 예를 들어, 멸균수의 첨가시 재구성될 수 있는 동결건조된 분말로서 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 한정하는 것은 아니지만, 수크로스 및 아르기닌을 포함하여, 단백질 응집을 억제하는 하나 이상의 물질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 발명의 조성물은 헤파린 및/또는 프로테오글리칸을 포함한다.

제약학적 조성물은 특정 적응증의 치료 또는 예방을 위해 효과적인 양으로 투여된다. 치료적 유효량은 전형적으로 치료되는 대상체의 체중, 그 또는 그녀의 신체적 또는 건강 상태, 치료되는 상태의 확장성, 또는 치료되는 대상체의 연령에 좌우된다.

일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 50 μg/kg 체중 내지 약 50 mg/kg 체중의 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 100 μg/kg 체중 내지 약 50 mg/kg 체중의 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 100 μg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중의 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 0.5 mg/kg 체중 내지 약 20 mg/kg 체중의 범위의 양으로 투여될 수 있다.

일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 10 mg 내지 약 1,000 mg의 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 20 mg 내지 약 500 mg의 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 20 mg 내지 약 300 mg의 범위의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 용량당 약 20 mg 내지 약 200 mg의 범위의 양으로 투여될 수 있다.

Gal9 길항물질은 대상체에게 필요한 만큼 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 유효 용량의 Gal9 길항물질은 대상체에게 1회 이상 투여된다. 다양한 구체예에서, 유효 용량의 Gal9 길항물질은 대상체에게 월 1회, 월 1회 미만으로, 예컨대, 2개월마다, 3개월마다, 또는 6개월마다 투여된다. 다른 구체예에서, 유효 용량의 Gal9 길항물질은 월 1회 이상, 예컨대, 예를 들면, 2주마다, 매주, 주 2회, 주 3회, 매일, 또는 1일에 여러 번 투여된다. 유효 용량의 Gal9 길항물질은 대상체에게 적어도 한 번 투여된다. 일부 구체예에서, 유효 용량의 Gal9 길항물질은 적어도 1개월, 적어도 6개월, 또는 적어도 1년의 기간 동안을 포함하여, 여러 번 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 상태의 하나 이상의 증상을 완화시키기 위하여 필요한 만큼 대상체에게 투여된다.

5. 병용 요법

발명의 Gal9 길항물질은, 임의의 항체 및 그것의 기능성 단편을 포함하여, 다른 생물학적으로 활성인 물질 또는 질환의 치료를 위한 다른 치료 과정과 함께 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, Gal9 길항물질은 단독으로 또는 다른 치료 방식과 함께 투여될 수 있다. 그것은 다른 치료 방식, 예컨대 방사선 요법 전에, 실질적으로 동시에, 또는 후에 제공될 수 있다.

암의 치료를 위해, Gal9 길항물질은 하나 이상의 항암제, 예컨대 the 면역 체크포인트 억제제, 화학요법제, 성장 억제제, 항-혈관신생제 또는 항-신생물 조성물과 함께 투여될 수 있다.

특정 구체예에서, Gal9 길항물질은 Gal9에 특이적으로 결합하며 ("Gal9 결합 길항물질"), 예컨대, Gal9 길항물질 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 면역 체크포인트 억제제 (예컨대, PD-1 또는 PD-L1 경로의 억제제)와 같은 제2 길항물질과 함께, 면역체계의 자극이 유익할 질환, 예컨대 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체에게 투여된다. 2개의 길항물질은, 예컨대 Gal9 길항물질과 면역항암제와의 조합에 대해 아래에서 기술되는 것과 같이, 동시에 또는 연속적으로 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가 치료제, 예컨대, 체크포인트 조절제가 암 또는 감염성 질환을 치료하기 위하여 Gal9 결합 길항물질로의 치료에 첨가될 수 있다.

특정 구체예에서, Gal9 길항물질은 또 다른 치료와 함께, 동시에, 또는 연속적으로 대상체, 예컨대, 암을 가진 대상체에 투여된다. 예를 들어, Gal9 길항물질은 방사선요법, 수술, 또는 화학요법, 예컨대, 표적화된 화학요법 또는 면역요법 중 하나 이상과 함께 투여될 수 있다.

면역요법, 예컨대, 암 면역요법은 암 백신 및 면역항암제를 포함한다. Gal9 길항물질은, 예컨대, Gal9에 결합하는 단백질, 항체, 항체 단편 또는 소분자일 수 있다. Gal9 길항물질은 Gal9에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편일 수 있다.

특정 구체예에서, 암을 가진 대상체의 치료 방법은 암을 가진 대상체에게 Gal9 길항물질, 예컨대, Gal9 항체, 및 하나 이상의 면역 항암제, 예컨대 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 단계를 포함한다.

면역요법, 예컨대, 면역항암제를 사용하는 요법은 대상체에서 면역 반응을 증강, 자극, 및/또는 상향조절하기에 효과적이다. 한 측면으로, Gal9 길항물질과 면역항암제 (예컨대 PD-1 억제제)의 투여는 암 치료에, 예컨대 종양 성장의 억제에 시너지 효과를 가진다.

한 측면으로, Gal9 길항물질은 면역항암제의 투여 전에 순차적으로 투여된다. 한 측면으로, Gal9 길항물질은 면역항암제 (예컨대 PD-1 억제제)와 동시에 투여된다. 또 한 측면으로, Gal9 길항물질은 면역항암제 (예컨대 PD-1 억제제)의 투여 후에 순차적으로 투여된다. 2가지 작용제의 투여는 예컨대, 30분, 60분, 90분, 120분, 3시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 3일, 5일, 7일, 또는 1주 이상 떨어진 시간에 시작하거나, 또는 제2 작용제의 투여는 제1 작용제가 투여된 후, 예컨대, 30분, 60분, 90분, 120분, 3시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 3일, 5일, 7일, 또는 1주 이상 후에 시작할 수 있다.

특정 측면으로, Gal9 길항물질 및 면역항암제 (예컨대, PD-1 억제제)는 동시에 투여되며, 예컨대, 30분 또는 60분의 기간 동안 환자에게 동시에 투입된다. Gal9 길항물질은 면역항암제 (예컨대 PD-1 억제제)와 공동 제제화될 수 있다.

면역 항암제로는, 예를 들어, 소분자 약물, 항체 또는 그것의 단편, 또는 다른 생물학적 분자 또는 소분자를 들 수 있다. 생물학적 면역 항암제의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 항체, 항체 단편, 백신 및 사이토카인을 들 수 있다. 한 측면으로, 항체는 단클론성 항체이다. 특정 측면으로, 단클론성 항체는 인간화된 또는 인간 항체이다.

한 측면으로, 면역항암제는 (i) 자극 (공동 자극을 포함함) 분자 (예컨대, 수용체 또는 리간드)의 작용물질 또는 (ii) 면역 세포, 예컨대, T 세포 상의 억제 (공동 억제를 포함함) 분자 (예컨대, 수용체 또는 리간드)의 길항물질이며, 둘 다 항원 특이적 T 세포 반응의 증폭을 초래한다. 특정 측면으로, 면역항암제는 (i) 자극 (공동 자극을 포함함) 분자 (예컨대, 수용체 또는 리간드)의 작용물질 또는 (ii) 선천성 면역에 관여하는 세포, 예컨대, NK 세포 상의 억제 (공동 억제를 포함함) 분자 (예컨대, 수용체 또는 리간드)의 길항물질이며, 면역항암제는 선천성 면역을 증강시킨다. 그러한 면역 항암제는 종종 면역 체크포인트 조절제, 예컨대, 면역 체크포인트 억제제 또는 면역 체크포인트 자극제로서 언급된다.

특정 구체예에서, 면역항암제는 막 결합 리간드의 B7 패밀리의 구성원인 B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5, 및 B7-H6, 또는 B7 패밀리 구성원에 특이적으로 결합하는 공동 자극 또는 공동 억제 수용체를 표적으로 하는 (또는 특이적으로 결합하는) 작용제일 수 있다. 면역항암제는 막 결합 리간드의 TNF 패밀리의 구성원 또는 그것에 특이적으로 결합하는 공동 자극 또는 공동 억제 수용체, 예컨대 TNF 수용체 패밀리 구성원을 표적으로 하는 작용제일 수 있다. 면역항암제에 의해 표적화될 수 있는 예시의 TNF 및 TNFR 패밀리 구성원으로 CD40 및 CD40L, OX-40, OX-40L, GITR, GITRL, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fnl4, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTfiR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, 림프독소 α/TNPβ, TNFR2, TNFa, LTfiR, 림프독소 a1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY 및 NGFR을 들 수 있다. 암을 치료하기 위해 Gal9 길항물질 작용제와 함께 사용될 수 있는 면역항암제는 작용제, 예컨대, B7 패밀리 구성원, B7 수용체 패밀리 구성원, TNF 패밀리 구성원 또는 TNFR 패밀리 구성원을 표적화하는 항체, 예컨대 위에서 기술된 것들을 들 수 있다.

한 측면으로, Gal9 길항물질은 (i) CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM3, CEACAM-1, BTLA, CD69, 갈렉틴-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, B7-H3, B7-H4, 2B4, CD48, GARP, PDIH, LAIRl, TIM-1, TIM-4, 및 PSGL-1과 같은 T 세포 활성화를 억제하는 단백질의 길항물질 (예컨대, 면역 체크포인트 억제제) 및 (ii) B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, CD40L, DR3 및 CD28H와 같은 T 세포 활성화를 자극하는 단백질의 작용물질 중 하나 이상과 함께 투여된다.

한 측면으로, 면역항암제는 T 세포 활성화를 억제하는 사이토카인 (예컨대, IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, 및 다른 면역억제 사이토카인)을 억제하는 작용제 (즉 사이토카인의 길항물질)이거나 또는 T 세포 활성화를 자극하고, 면역 반응을 자극하는 사이토카인, 예컨대 IL-2, IL- 7, IL-12, IL-15, IL-21 및 IFNα의 작용물질 (예컨대, 사이토카인 자체)이다.

면역 체계를 자극하기 위해, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위해 Gal9 길항물질과 조합될 수 있는 다른 작용제로는, NK 세포 상의 억제 수용체의 길항물질 또는 NK 세포 상의 활성화 수용체의 작용물질을 들 수 있다. 예를 들어, 항-Gal9 길항물질은 KIR의 길항물질과 조합될 수 있다.

병용 요법을 위한 또 다른 작용제로는 대식세포 또는 단핵세포를 억제하거나 고갈시키는 작용제, 이를테면 한정하는 것은 아니지만 RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, W013/87699, W013/119716, WO13/132044) 또는 FPA008 (WO11/140249; W013169264; WO14/036357)을 포함하여 CSF-IR 길항 항체와 같은 CSF-IR 길항물질을 들 수 있다.

면역 항암제는 또한 TGF-β 신호전달을 억제하는 작용제를 포함한다.

Gal9 길항물질과 조합될 수 있는 추가 작용제로는 종양 항원 제공을 향상시키는 작용제, 예컨대, 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비 세포 백신, CpG 올리고뉴클레오타이드, 및 이미퀴모드(imiquimod), 또는 종양 세포의 면역원성을 증강시키는 치료제 (예컨대, 안트라사이클린)를 들 수 있다.

Gal9 길항물질과 조합될 수 있는 또 다른 치료제로는 Treg 세포를 고갈 또는 차단하는 치료제, 예컨대 CD25와 특이적으로 결합하는 작용제를 들 수 있다.

Gal9 길항물질과 조합될 수 있는 또 다른 치료법은 인돌아민 다이옥시게나제 (IDO), 다이옥시게나제, 아르기나제, 또는 산화질소 합성효소와 같은 대사 효소를 억제하는 치료법이다.

사용될 수 있는 작용제의 또 다른 부류로는 아데노신의 형성을 억제하거나 아데노신 A2A 수용체를 억제하는 작용제를 들 수 있다.

암을 치료하기 위해 Gal9 길항물질과 조합될 수 있는 다른 치료법은 T 세포 무기력 또는 탈진을 반전/방지하는 치료법 및 종양 부위에서 선천성 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발시키는 치료법을 포함한다.

Gal9 길항물질은 하나 이상의 면역항암제 (예컨대 면역 체크포인트 억제제)와 조합될 수 있고, 예컨대, 면역 경로의 다중 요소를 표적으로 하는 조합 접근법, 예컨대, 다음 중 하나 이상과 조합될 수 있다: 종양 항원 제공을 향상시키는 치료법 (예컨대, 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비 세포 백신, CpG 올리고뉴클레오타이드, 이미퀴모드); 예컨대, CTLA-4 및/또는 PD1/PD-L1/PD-L2 경로를 억제함으로써 및/또는 Treg 또는 다른 면역 억제 세포를 고갈 또는 차단함으로써 음성 면역 조절을 억제하는 치료법; 예컨대, CD-137, OX-40 및/또는 GITR 경로를 자극하고/하거나 T 세포 이펙터 기능을 자극하는 작용물질로 양성 면역 조절을 자극하는 치료법; 항-종양 T 세포의 빈도를 전신적으로 증가시키는 치료법; Treg, 예컨대 종양의 Treg를, CD25의 길항물질 (예컨대, 다클리주맙(daclizumab))을 사용하거나 또는 생체외 항-CD25 비드 고갈에 의해 Treg를 고갈시키거나 억제하는 치료법; 종양에서 억제 골수 세포의 기능에 영향을 주는 치료법; 종양 세포의 면역원성을 증강시키는 치료법 (예컨대, 안트라사이클린); 유전자 변형된 세포, 예컨대 키메라 항원 수용체에 의해 변형된 세포를 포함하여, 입양 T 세포 또는 NK 세포 전달 (CAR-T 치료법); 인돌아민 다이옥시게나제 (IDO), 다이옥시게나제, 아르기나제 또는 산화질소 합성효소와 같은 대사 효소를 억제하는 치료법; T 세포 무기력 또는 탈진을 반전/방지하는 치료법; 종양 부위에서 선천성 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발시키는 치료법; 면역 자극 사이토카인의 투여 또는 면역 억제 사이토카인의 차단.

예를 들어, Gal9 길항물질은 양성 공동자극 수용체를 결찰시키는 하나 이상의 작용물질 작용제; 억제 수용체를 통해 신호전달을 약화시키는 하나 이상의 길항물질 (차단제), 예컨대 종양 미세환경 내 뚜렷한 면역 억제 경로를 극복하는 길항물질 (예컨대, PD-L1/PD-1/PD-L2 상호작용 차단); 항-종양 면역 세포, 예컨대 T 세포의 빈도를 전신적으로 증가시키거나, Treg를 고갈 또는 억제하는 (예컨대, CD25를 억제함으로써) 하나 이상의 작용제; IDO와 같은 대사 효소를 억제하는 하나 이상의 작용제; T 세포 무기력 또는 탈진을 반전/방지하는 하나 이상의 작용제; 및 종양 부위에서 선천성 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발시키는 하나 이상의 작용제와 함께 사용될 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 CTLA-4 길항물질, 예컨대 길항적 CTLA-4 항체이다. 적합한 CTLA-4 항체로는, 예를 들어, YERVOY (이필리무맙) 또는 트레멜리무맙(tremelimumab)을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 PD-1 길항물질, 예컨대 길항적 PD-1 항체이다. 적합한 PD-1 항체로는, 예를 들어, OPDIVO (니볼루맙), KEYTRUDA (펨브롤리주맙), 또는 MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493)을 들 수 있다. 면역항암제는 또한 피딜리주맙(pidilizumab) (CT-011)을 포함할 수 있다. PD-1 수용체를 표적화하는 또 다른 접근법은 AMP-224로 불리는, IgG1의 Fc 부분에 융합된 PD-L2 (B7-DC)의 세포외 도메인으로 구성된 재조합 단백질이다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 PD-L1 길항물질, 예컨대 길항적 PD-L1 항체이다. 적합한 PD-L1 항체로는, 예를 들어, MPDL3280A (RG7446; WO2010/077634), 두르발루맙 (MEDI4736), BMS-936559 (WO2007/005874), MSB0010718C (WO2013/79174) 또는 rHigM12B7을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 LAG-3 길항물질, 예컨대 길항적 LAG-3 항체이다. 적합한 LAG3 항체로는, 예를 들어, BMS-986016 (WO1O/19570, WO 14/08218), 또는 IMP-731 또는 IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273)을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 CD137 (4-1BB) 작용물질, 예컨대 작용성 CD137 항체이다. 적합한 CD137 항체로는, 예를 들어, 우렐루맙(urelumab) 또는 PF- 05082566 (W012/32433)을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 GITR 작용물질, 예컨대 작용성 GITR 항체이다. 적합한 GITR 항체로는, 예를 들어, TRX-518 (WO06/105021, WO09/009116), MK-4166 (WO11/028683) 또는 WO2015/031667에서 개시된 GITR 항체를 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 OX40 작용물질, 예컨대 작용성 OX40 항체이다. 적합한 OX40 항체로는, 예를 들어, MEDI-6383, MEDI-6469 또는 MOXR0916 (RG7888; WO06/029879)을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 CD40 작용물질, 예컨대 작용성 CD40 항체이다. 특정 구체예에서, 면역항암제는 CD40 길항물질, 예컨대 길항적 CD40 항체이다. 적합한 CD40 항체로는, 예를 들어, 루카투무맙(lucatumumab) (HCD122), 다세투주맙(dacetuzumab) (SGN-40), CP-870,893 또는 Chi Lob 7/4를 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 CD27 작용물질, 예컨대 작용성 CD27 항체이다. 적합한 CD27 항체로는, 예를 들어, 바를리루맙(varlilumab) (CDX-1127)을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 MGA271 (B7H3에 대한) (WO11/109400)이다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 KIR 길항물질, 예컨대 리릴루맙(lirilumab)이다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 IDO 길항물질이다. 적합한 IDO 길항물질로는, 예를 들어, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), 인독시모드(indoximod), NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237) 또는 F001287을 들 수 있다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 Toll-유사수용체 작용물질, 예컨대, TLR2/4 작용물질 (예컨대, 바실러스 칼메트-게랑균(Calmette-Guerin)); TLR7 작용물질 (예컨대, 힐튼놀(Hiltonol) 또는 이미퀴모드); TLR7/8 작용물질 (예컨대, 레지퀴모드(Resiquimod)); 또는 TLR9 작용물질 (예컨대, CpG7909)이다.

한 구체예에서, 면역 체계의 자극으로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 예컨대, 암 또는 감염성 질환을 가진 대상체는 Gal9 길항물질 및 면역항암제의 대상체에의 투여에 의해 치료되며, 여기서 면역항암제는 TGF-β 억제제, 예컨대, GC1008, LY2157299, TEW7197 또는 IMC-TR1이다.

6. 예시의 Gal9 길항물질

일부 구체예에서, Gal9 길항물질은 Gal9 항체이다. 일부 구체예에서, 암 치료용 Gal9 길항물질은 비-항체 단백질, 예컨대 Gal9와 그것의 리간드 사이의 상호작용을 억제하며, 선택적으로 추가로 융합 파트너를 포함하고 융합 분자 형태의 Gal9 단백질의 가용성 Gal9 또는 그것의 일부분 (예컨대, ECD)일 수 있다. 길항물질은, 다른 구체예에서, 또한 소분자 또는 작은 펩타이드일 수 있다.

Gal9 항체

일부 구체예에서, Gal9와 그것의 리간드의 결합을 차단하는 항체가 제공된다. 일부 구체예에서, Gal9 매개 신호전달을 억제하는 항체가 제공된다. 일부 그러한 구체예에서, 항체는 Gal9 항체이다. 일부 구체예에서, Gal9 항체는 Gal9의 그것의 리간드에의 결합을 억제한다. 일부 구체예에서, Gal9 항체는 Gal9 매개 신호전달을 억제한다.

일부 구체예에서, 발명의 Gal9 항체는 Gal9, 예컨대 인간 Gal9의 경우 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤0.001 nM (예컨대 10^-8 M 미만, 예컨대 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예컨대, 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리 상수 (K_d)를 가진다. 특정 구체예에서, Gal9 항체는 Gal9, 예컨대 인간 Gal9의 경우 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤0.001 nM (예컨대 10^-8 M 미만, 예컨대 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예컨대, 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리 상수 (K_d)를 가진다.

일부 구체예에서, 본우너에 제공된 임의의 특징을 갖는 Gal9 항체는 Gal9의 신호전달의 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 90% 또는 100%를 억제한다.

일부 구체예에서, 항체는 다중 종으로부터의 Gal9에 결합한다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항체는 인간 Gal9에 결합하고, 또한 마우스, 래트, 개, 기니피그, 및 시노몰구스 원숭이로부터 선택된 적어도 하나의 비-인간 포유류로부터의 Gal9에 결합한다.

일부 구체예에서, 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 구체예에서, 이중특이적 항체가 제공된다. 비제한적인 예시의 이중특이적 항체로는 제1 항원에 결합하는 중쇄/경쇄 조합을 포함하는 제1 팔(arm) 및 제2 항원에 결합하는 중쇄/경쇄 조합을 포함하는 제2 팔을 포함하는 항체를 들 수 있다. 추가의 비제한적인 예시의 다중특이적 항체는 이중 가변 도메인 항체이다. 일부 구체예에서, 이중특이적 항체는 Gal9의 결합을 억제하는 제1 팔 및 예컨대, CD3에 결합함으로써 T 세포를 자극하는 제2 팔을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 팔은 Gal9에 결합한다.

특정 구체예에서, 인간화된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 포함하여, 발명의 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은, 항체의 개발 가능성을 개선하도록 설계된 아미노산 서열의 하나 이상의 점 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, Raybould 등 (Five computational developability guidelines for therapeutic antibody profiling, PNAS　116(10): 4025-4030, 2019)은 가변 도메인 서열의 다운로드 가능한 상동성 모델을 구축하고, 그것을 5가지의 개발 가능성 지침에 대해 테스트하며, 잠재적인 서열 가변성(liabilities) 및 표준 형태를 보고하는 컴퓨터 도구인 치료 항체 프로파일러 (TAP)를 기술하였다. 저자들은 추가로 TAP를 opig.stats.ox.ac.uk/webapps/sabdab-sabpred/TAP.php에서 무료로 제공한다.

치료 mAb 개발에 대해서는, 항원에 대한 원하는 친화도를 달성하는 것 외에도 많은 장벽이 있다. 이것들로는 고유한 면역원성, 화학적 및 입체형태적 불안정성, 자가 회합, 높은 점도, 다중특이성, 및 빈약한 발현을 들 수 있다. 예를 들어, 고수준의 소수성은, 특히 고도로 가변적인 상보성 결정 영역 (CDR)에서 응집, 점도, 및 다중특이성에 반복적으로 연루되었다. 중쇄 및 경쇄 가변 단일 도메인의 순전하(net charge)의 비대칭 또한 고농도에서의 자가 회합 및 점도와 상관이 있다. CDR의 양전하 및 음전하의 패치는 높은 제거율 및 빈약한 발현 수준과 관련이 있다. 생성물 이질성 (예컨대, 산화, 이성질체화, 또는 글리코실화를 통한)은 종종 번역후 또는 번역과 동시의 변형이 일어나기 쉬운 특정 서열 모티프로부터 유발된다. 컴퓨터 도구는 서열 가변성의 확인을 용이하게 하기 위해 이용 가능하다. Warszawski 등 (Optimizing antibody affinity and stability by the automated design of the variable light-heavy chain interfaces. PLoS Comput Biol 15(8): e1007207. https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1007207)은 또한 가변 경쇄-중쇄 계면의 자동 설계에 의해 항체 친화도 및 안정성을 최적화하는 방법을 기술하였다. 후호 항체의 잠재적 개발 가능성 문제를 확인하기 위해 추가의 방법이 이용 가능하고, 본 발명의 바람직한 구체예에서 하나 이상의 돌연변이가 발명의 최적화된 치료 항체로 이어지도록 그러한 문제를 해결하기 위해 종래 방법을 통해 후보 항체에 도입될 수 있다.

경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC) 가변 영역, CDR 영역, 및 프레임워크 영역 (FR)을 포함하여, 특정한 대표적인 항체의 서열이 하기에서 열겨된다.

HFB9-1hz1-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 2)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 4)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 6)

HCVR:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTMT

ADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 8)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 10)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 12)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 14)

LCVR:

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 16)

모든 항체 중쇄 서열의 경우, 프레임워크 영역 서열 HFR1 - HFR4는 VH-CDR 서열에 의해 규정된다. 예를 들어, HFR1은 VH-CDR1에 대해 N-말단인 HCVR의 서열이다. HFR2는 VH-CDR1과 VH-CDR2 사이에 있는 HCVR의 서열이다. HFR3은 VH-CDR2와 VH-CDR3 사이에 있는 HCVR의 서열이다. HFR4는 HCVR의 가장 C-말단의 서열이다.

마찬가지로, 모든 항체 경쇄 서열의 경우, 프레임워크 영역 서열 LFR1 - LFR4는 VL-CDR 서열에 의해 규정된다. 예를 들어, LFR1은 VL-CDR1에 대해 N-말단인 LCVR의 서열이다. LFR2는 VL-CDR1과 VL-CDR2 사이에 있는 LCVR의 서열이다. LFR3은 VL-CDR2와 VL-CDR3 사이에 있는 LCVR의 서열이다. LFR4는 LCVR의 가장 C-말단의 서열이다.

HFB9-1hz1-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 1, 3, 5, 및 7이다. HFB9-1hz1-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 9, 11, 13, 및 15이다.

HFB9-1hz2-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 18)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 20)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 22)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTIT

ADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCTRHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 24)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 26)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 28)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 30)

DIVMTQSPDSLAVSLGEratINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 32)

HFB9-1hz2-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 17, 19, 21, 및 23이다. HFB9-1hz2-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 25, 27, 29, 및 31이다.

HFB9-1hz3-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 34)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 36)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 38)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTIT

ADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 40)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 42)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 44)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 46)

DIVMTQSPDSLAVSLGEratINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 48)

HFB9-1hz3-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 33, 35, 37, 및 39이다. HFB9-1hz3-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 41, 43, 45, 및 47이다.

HFB9-1hz4-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 50)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 52)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 54)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTIT

ADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 56)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 58)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 60)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 62)

DIVMTQSPDSLAVSLGEERATINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSG

SGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 64)

HFB9-1hz4-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 49, 51, 53, 및 55이다. HFB9-1hz4-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 57, 59, 61, 및 63이다.

HFB9-2hz11-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTEYTIH (SEQ ID NO: 66)

VH-CDR2: WFYPGSGSTEYAQKFQG (SEQ ID NO: 68)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 70)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSGSTEYAQKFQGRVTMT

ADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCERHGGYDGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 72)

VL-CDR1: KSSQSLLYSNNQKNYLA (SEQ ID NO: 74)

VL-CDR2: WASTRGS (SEQ ID NO: 76)

VL-CDR3: QQYYSYPFT (SEQ ID NO: 78)

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRGSGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 80)

HFB9-2hz11-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 65, 67, 69, 및 71이다. HFB9-2hz11-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 73, 75, 77, 및 79이다.

HFB9-2hz12-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTEYTIH (SEQ ID NO: 82)

VH-CDR2: WFYPGSGSAEYAQKFQG (SEQ ID NO: 84)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 86)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTEYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSGSAEYAQKFQGRVTIT

ADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCERHGGYDGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 88)

VL-CDR1: KSSQSLLYSNNQKNYLA (SEQ ID NO: 90)

VL-CDR2: WASTRGS (SEQ ID NO: 92)

VL-CDR3: QQYYSYPFT (SEQ ID NO: 94)

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRGSGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 96)

HFB9-2hz12-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 81, 83, 85, 및 87이다. HFB9-2hz12-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 89, 91, 93, 및 95이다.

HFB9-2hz13-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTEYTIH (SEQ ID NO: 98)

VH-CDR2: WFYPGSGSTEYAQKFQG (SEQ ID NO: 100)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 102)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSGSTEYAQKFQGRVTMT

ADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCERHGGYDGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 104)

VL-CDR1: KSSQSLLYSNNQKNYLA (SEQ ID NO: 106)

VL-CDR2: WASTRGS (SEQ ID NO: 108)

VL-CDR3: QQYYSYPFT (SEQ ID NO: 110)

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRGSGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 112)

HFB9-2hz13-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 EQ ID NO: 97, 99, 101, 및 103이다. HFB9-2hz13-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 105, 107, 109, 및 111이다.

HFB9-2hz14-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTEYTIH (SEQ ID NO: 114)

VH-CDR2: WFYPGSGSTEYSPSFQG (SEQ ID NO: 116)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 118)

EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYTFTEYTIHWVRQMPGKGLEWMGWFYPGSGSTEYSPSFQGQVTIS

ADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCERHGGYDGFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 120)

VL-CDR1: KSSQSLLYSNNQKNYLA (SEQ ID NO: 122)

VL-CDR2: WASTRGS (SEQ ID NO: 124)

VL-CDR3: QQYYSYPFT (SEQ ID NO: 126)

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRGSGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 128)

HFB9-2hz14-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 113, 115, 117, 및 119이다. HFB9-2hz14-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 121, 123, 125, 및 127이다.

7. 인간화된 항체

일부 구체예에서, Gal9 항체는 인간화된 항체이다. 인간화된 항체는 인간화된 항체가 항체 치료제에 대한 면역 반응, 및 치료제의 감소된 유효성을 초래할 수 있는 비-인간 항체에 대한 인간 면역 반응 (예컨대 인간 항-마우스 항체 (HAMA) 반응)을 감소 또는 제거하기 때문에 치료 분자로서 유용하다.

항체는 임의의 표준 방법에 의해 인간화될 수 있다. 비제한적인 예시의 인간화 방법으로는, 예컨대, 미국 특허 제 5,530,101호; 5,585,089호; 5,693,761호; 5,693,762호; 6,180,370호; Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al, Nature 332: 323-27 (1988); Verhoeyen et al, Science 239: 1534-36 (1988); 및 미국 공개 공보 US 2009/0136500에서 기술된 것들을 들 수 있다. 인용된 문헌은 모두 참조로 포함된다.

인간화된 항체는 비-인간 가변 영역의 프레임워크 영역의 적어도 하나의 아미노산이 인간 프레임워크 영역의 상응하는 위치로부터의 아미노산으로 대체되어 있는 항체이다. 일부 구체예에서, 비-인간 가변 영역의 프레임워크 영역의 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 15, 또는 적어도 20개의 아미노산이 하나 이상의 인간 프레임워크 영역의 하나 이상의 상응하는 위치로부터의 아미노산으로 대체된다.

일부 구체예에서, 치환에 사용된 상응하는 인간 아미노산의 일부는 상이한 인간 면역글로불린 유전자의 프레임워크 영역으로부터 유래한다. 즉, 일부 그러한 구체예에서, 하나 이상의 비-인간 아미노산은 제1 인간 항체의 인간 프레임워크 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체되거나 제1 인간 면역글로불린 유전자에 의해 암호화될 수 있거나, 하나 이상의 비-인간 아미노산은 제2 인간 항체의 인간 프레임워크 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체되거나 제2 인간 면역글로불린 유전자에 의해 암호화될 수 있거나, 하나 이상의 비-인간 아미노산은 제3 인간 항체의 인간 프레임워크 영역으로부터의 상응하는 아미노산으로 대체되거나 제3 인간 면역글로불린 유전자에 의해 암호화될 수 있거나, 등이다. 추가로, 일부 구체예에서 단일 프레임워크 영역, 예를 들어, FR2에서 치환에 사용되는 상응하는 인간 아미노산의 전부는 동일한 인간 프레임워크로부터 유래할 필요는 없다. 그러나, 일부 구체예에서, 치환에 사용되는 상응하는 인간 아미노산의 전부는 동일한 인간 항체로부터 유래되거나 동일한 인간 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된다.

일부 구체예에서, 항체는 하나 이상의 전체 프레임워크 영역을 상응하는 인간 프레임워크 영역으로 대체함으로써 인간화된다. 일부 구체예에서, 인간 프레임워크 영역은 대체되는 비-인간 프레임워크 영역에 대해 최고 수준의 상동성을 가지는 것이 선택된다. 일부 구체예에서, 그러한 인간화된 항체는 CDR-그라프팅된 항체이다.

일부 구체예에서, CDR-그라프팅에 이어서, 하나 이상의 프레임워크 아미노산이 마우스 프레임워크 영역의 상응하는 아미노산으로 다시 변경된다. 그러한 "역돌연변이"는, 일부 구체예에서, 하나 이상의 CDR의 구조에 기여하는 것으로 나타나고/거나 항원 접촉에 관여하는 것일 수 있고/있거나 항체의 전체적인 구조적 무결성에 관여하는 것으로 나타나는 하나 이상의 마우스 프레임워크 아미노산을 유지하기 위해 만들어진다. 일부 구체예에서, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 하나, 또는 0개의 역돌연변이가 CDR 그라프팅 후 항체의 프레임워크 영역에서 만들어진다.

일부 구체예에서, 인간화된 항체는 또한 인간 중쇄 불변 영역 및/또는 인간 경쇄 불변 영역을 포함한다.

8. 인간 항체

일부 구체예에서, Gal9 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 임의의 적합한 방법에 의해 만들어질 수 있다. 비제한적인 예시의 방법으로는 인간 면역글로불린 유전자좌를 포함하는 형질도입 마우스에서 인간 항체를 제조하는 것을 들 수 잇다. 예컨대, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et al, Nature 362: 255-8 (1993); onberg et al, Nature 368: 856-9 (1994); 및 미국 특허 제 5,545,807호; 6,713,610호; 6,673,986호; 6,162,963호; 5,545,807호; 6,300,129호; 6,255,458호; 5,877,397호; 5,874,299호; 및 5,545,806호 참고.

비제한적인 예시의 방법으로 또한 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 인간 항체를 제조하는 것을 들 수 있다. 예컨대, Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227: 381-8 (1992); Marks et al, J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991); 및 PCT 공개 공보 WO 99/10494 참고.

인간 항체 불변 영역

일부 구체예에서, 본원에서 기술된 인간화된, 키메라, 또는 인간 항체는 하나 이상의 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 인간 중쇄 불변 영역은 IgA, IgG, 및 IgD로부터 선택된 아이소타입의 것이다. 일부 구체예에서, 인간 경쇄 불변 영역은 Κ 및 λ로부터 선택된 아이소타입의 것이다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 인간 IgG 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 Fc 융합 파트너는, 예를 들어, IgG1 불변 영역에 C237S 돌연변이를 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 인간 IgG2 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 그러한 구체예에서, IgG2 불변 영역은 미국 특허 제 6,900,292호에서 기술된 것과 같이 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 그러한 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 인간 IgG4 불변 영역에 S241P 돌연변이를 포함한다. 예컨대, Angal et al. Mol. Immunol. 30(1):105-108 (1993) 참고. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 인간 IgG4 불변 영역 및 인간 κ 경쇄를 포함한다.

중쇄 불변 영역의 선택은 항체가 생체내에서 이펙터 기능을 가질 것인지의 여부를 결정할 수 있다. 그러한 이펙터 기능은, 일부 구체예에서, 항체 의존성 세포 매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 포함하며, 항체가 결합되는 세포의 사멸을 초래할 수 있다. 전형적으로, 인간 IgG1 또는 IgG3 중쇄를 포함하는 항체는 이펙터 기능을 가진다.

일부 구체예에서, 이펙터 기능은 바람직하지 않다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 이펙터 기능은 염증 상태 및/또는 자가면역 장애의 치료에서는 바람직하지 않을 수 있다. 일부 그러한 구체예에서, 인간 IgG4 또는 IgG2 중쇄 불변 영역은 선택되거나 조작된다. 일부 구체예에서, IgG4 불변 영역은 S241P 돌연변이를 포함한다.

본원에 기술된 어떠한 항체든지 임의의 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 그러한 방법은, 한정하는 것은 아니지만, 친화성 매트릭스 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피의 사용을 포함한다. 적합한 친화성 리간드로는 항체가 결합하는 항원 및/또는 에피토프, 및 항체 불변 영역에 결합하는 리간드를 들 수 있다. 예를 들어, 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G, 또는 항체 친화성 칼럼이 불변 영역에 결합하고 항체를 정제하기 위해 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC), 예를 들어, 부틸 또는 페닐 칼럼이 또한 일부 폴리펩타이드를 정제하기 위해 사용된다. 폴리펩타이드를 정제하는 많은 방법이 기술분야에 알려져 있다.

대안으로, 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체는 세포-유리 시스템에서 생성된다. 비제한적인 예시의 세포-유리 시스템은, 예컨대, Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al, Biotechnol. Adv. 21 : 695-713 (2003)에서 기술되어 있다.

9. Gal9 길항물질을 암호화하는 핵산 분자

발명은 또한 본원에 기술된 항체, 예컨대 Gal9 항체의 하나 이상의 사슬을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 분자를 제공한다. 일부 구체예에서, 핵산 분자는 본원에 기술된 항체의 종쇄 또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 핵산 분자는 본원에 기술된 항체의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포두 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 핵산 분자는 중쇄를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드를 포함하고 제2 핵산 분자는 경쇄를 암호화하는 제2 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.

일부 그러한 구체예에서, 중쇄 및 경쇄는 하나의 핵산 분자로부터, 또는 2개의 별도의 핵산 분자로부터, 2개의 별도의 폴리펩타이드로서 발현된다. 일부 구체예에서, 예컨대 항체가 scFv인 경우, 단일한 폴리뉴클레오타이드는 함께 연결되어 있는 중쇄 및 경쇄를 모두 포함하는 단일 폴리펩타이드를 암호화한다.

일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체의 중쇄 또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 번역될 때 중쇄 또는 경쇄의 N-말단에 위치한 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드를 포함한다. 위에서 논의된 것과 같이, 리더 서열은 천연 중쇄 또는 경쇄 리더 서열이거나, 또 다른 이종성 리더 서열일 수 있다.

핵산 분자는 기술분야에서 관례적인 재조합 DNA 기법을 사용하여 구성될 수 있다. 일부 구체예에서, 핵산 분자는 선택된 숙주 세포, 예컨대 포유류 세포에서의 발현에 적합한 발현 벡터이다.

10. 벡터

본원에 기술된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 제공된다. 그러한 벡터로는, 한정하는 것은 아니지만, DNA 벡터, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 등을 들 수 있다. 일부 구체예에서, 벡터는 중쇄를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오타이드 서열 및 경쇄를 암호화하는 제2 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 중쇄 및 경쇄는 2개의 별도의 폴리펩타이드로서 벡터로부터 발현된다. 일부 구체예에서, 중쇄 및 경쇄는, 예컨대, 예를 들어, 항체가 scFv일 때 단일한 폴리펩타이드의 일부로서 발현된다.

일부 구체예에서, 제1 벡터는 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하고 제2 벡터는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 벡터 및 제2 벡터는 숙주 세포에 유사한 양 (예컨대 유사한 몰량 또는 유사한 질량)으로 형질주입된다. 일부 구체예에서, 5:1 내지 1:5 사이의 몰- 또는 질량비의 제1 벡터 및 제2 벡터가 숙주 세포에 형질주입된다. 일부 구체예에서, 중쇄를 암호화하는 벡터 및 경쇄를 암호화하는 벡터에 대해 1:1 내지 1:5의 질량비가 사용된다. 일부 구체예에서, 중쇄를 암호화하는 벡터 및 경쇄를 암호화하는 벡터에 대해 1:2의 질량비가 사용된다.

일부 구체예에서, 벡터는 CHO 또는 CHO 유래 세포에서, 또는 NSO 세포에서 폴리펩타이드의 발현에 최적화되는 것이 선택된다. 예시의 그러한 벡터는, 예컨대, Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)에서 기술된다. 일부 구체예에서, 벡터는 인간을 포함한 동물에서 Gal9 길항물질의 생체내 발현을 위해 선택된다. 일부 그러한 구체예에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 발현은 조직 특이적 방식으로 기능하는 프로모터 또는 프로모터들의 제어 하에 있다. 예를 들어, 간 특이적 프로모터는, 예컨대, PCT 공개 공보 WO2006/076288에서 기술된다.

11. 숙주 세포

다양한 구체예에서, 본원에 기술된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 원핵 세포, 예컨대 박테리아 세포에서; 또는 진핵 세포, 예컨대 진균 세포 (예컨대 효모), 식물 세포, 곤충 세포, 및 포유류 세포에서 발현될 수 있다. 그러한 발현은, 예를 들어, 기술분야에 알려져 있는 과정에 따라 수행될 수 있다. 폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용될 수 있는 예시의 진핵 세포로는, 한정하는 것은 아니지만, COS 세포, 이를테면 COS 7 세포; 293 세포, 이를테면 293-6E 세포; CHO 세포, 이를테면 CHO-S 및 DG44 세포; PER.C6® 세포 (Crucell); 및 NSO 세포를 들 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 효모에서 발현될 수 있다. 예컨대, 미국 공개 번호 US 2006/0270045 A1 참고. 일부 구체예에서, 특정 진핵 세포는 그것이 Gal9 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 대해 원하는 번역후 변형을 만드는 능력을 토대로 선택된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, CHO 세포는 293 세포에서 생성된 동일한 폴리펩타이드보다 더 높은 수준의 시알릴화를 가지는 폴리펩타이드를 생성한다.

하나 이상의 핵산의 원하는 숙주 세포로의 도입은, 한정하는 것은 아니지만, 칼슘 포스페이트 형질주입, DEAE-덱스트란 매개 형질주입, 양이온 지질 매개 형질주입, 전기천공, 형질도입, 감염, 등을 포함하여 임의의 방법에 의해 이루어질 수 있다. 비제한적인 예시의 방법은, 예컨대, Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)에서 기술된다. 핵산은 임의의 적합한 방법에 따라 원하는 숙주 세포에 일시적으로 또는 안정적으로 형질주입될 수 있다.

일부 구체예에서, 하나 이상의 폴리펩타이드가 임의의 적합한 방법에 따라 폴리펩타이드를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자로 조작되거나 형질주입된 동물에서 생체내에서 생성될 수 있다.

실시예

실시예 1 인간화된 항-Gal-9 항체는 인간 및 마우스 갈렉틴-9에 대한 높은 결합 친화도를 가진다

이 실시예는 발명의 다양한 항-인간 Gal-9 인간화된 항체가 인간 및 마우스 Gal-9 둘 다에 대해 높은 결합 친화도를 가지는 것을 입증한다.

항체 결합 친화도를 ForteBio (Creative Biolabs)사로부터 상업적으로 이용 가능한 Octet 시스템을 사용하여 측정하였다. Creative Biolabs 설명에 따르면, Octet 플랫폼은 96- 또는 384-웰 마이크로플레이트에서의 생체분자 상호작용의 평가를 지지하는 기기, 바이오센서, 시약 및 검정 키트를 포함한 전체 세트의 시스템을 이용하는 생물츨 간섭계 (BLI) 기술을 토대로 한다. Octet 시스템은 미세유체의 필요성을 피하기 위해 침지- 및-판독 검정 방식을 사용하며, 동역학뿐만 아니라 친화성의 실시간, 표지 유리 분석을 가능하게 한다. 항체 상호작용을 조사하기 위해 사용될 수 있는 3가지의 바이오센서 기반 검정 방향이 있다: 탠덤 차단, 사전혼합 차단 및 고전적 샌드위치. Biacore와 비교하면, Octet의 침지- 및 판독 검정은 더 긴 분석물 결합 단계를 허용하고 분석물의 리간드 코팅 센서에의 재결합을 선호한다. 한편, 더 빠른 결합 시간으로 더 적은 샘플을 소비하게 되어, 실험자들의 귀중한 단백질을 절약한다.

또한 Creative Biolabs 설명에 따르면, BLI 기술의 원리는 2개의 표면 - 고정된 단백질 층 및 내부 참조 층으로부터 반사된 백색광의 광학 간섭 패턴을 토대로 한다. 바이오센서 상단 표면 상에 고정된 리간드와 용액 중의 분석물 사이의 결합으로 바이오센서 상단에서 광학적 두께가 증가되며, 그것은 나노미터로 측정된 간섭 패턴의 이동을 초래한다. 파장 이동 (△λ)은 생물학적 층의 광학 두께의 변화의 직접적인 척도이다. 이 이동이 일정 기간 동안 측정되고, 그것의 크기를 시간의 함수로서 도표화할 때, 고전적 결합/해리 곡선이 얻어진다. 이런 상호작용을 실시간으로 측정하여, 결합 특이성, 결합 속도 및 해리 속도, 및 농도를 뛰어난 정밀도 및 정확성으로 모니터링하는 능력을 제공한다.

이 시스템을 사용하여, 재조합 인간 및 마우스 Gal-9를 향한 항체 친화성을 발명의 선택된 인간화된 항체에 대해 측정하고, 그 결과를 아래의 표에 요약한다. 데이터는 테스트된 인간화된 항체가 인간 및 마우스 Gal-9 단백질/항원 둘 다에 대해 중간 내지 낮은 nM 범위의 높은 친화도를 가진 것을 보여준다.

* hGal9M - 인간 갈렉틴 9; mGal9M - 마우스 갈렉틴 9.

발명의 선택된 인간화된 항체에 대한 서열 정렬을 표준 서열 정렬 소프트웨어를 사용하여 수행하였고, 그 결과를 도 1 및 2에 도시한다. 구체적으로, 도 1에서, 4개의 인간화된 항체의 V_H 및 V_L 영역을 정렬하여 인간-마우스 키메라 항체 HFB9-1의 원래의 V_H 및 V_L 영역에 각각 비교하여 아미노산 잔기의 변화를 보였다. 인간화는 대부분 중쇄 및 경쇄 가변 영역 (HCVR 및 LCVR)의 프레임워크 영역의 아미노산 서열을 변화시켰다. 그러나, 광범위한 변화가 또한 중쇄 CDR2 서열 내에서 관찰되었다 (도 1 참고).

유사하게, 도 2에서, 6개의 인간화된 항체의 V_H 및 V_L 영역을 정렬하여 인간-마우스 키메라 항체 HFB9-2의 원래의 V_H 및 V_L 영역에 각각 비교하여 아미노산 잔기의 변화를 보였다. 인간화는 대부분 중쇄 및 경쇄 가변 영역 (HCVR 및 LCVR)의 프레임워크 영역의 아미노산 서열을 변화시켰다. 그러나, 광범위한 변화가 또한 중쇄 CDR2 서열 내에서 관찰되었고, 하나의 인간화된 항체에 대해 중쇄 CDR1 서열 내의 한 잔기에서 관찰되었다 (도 2 참고).

실시예 2 항-Gal9 항체는 Gal9에 대해 나노몰 (nM) 미만의 친화도를 나타낸다

이 실험은 발명의 인간화된 항체가 재조합 인간 Gal9에 대해 매우 높은 (나노몰 미만의) 친화도를 나타내며, 원숭이 Gal9뿐만 아니라 재조합 마우스 Gal9과 교차 반응하는 것(데이터 미제시)을 입증한다. 각각의 테스트된 인간화된 항체에 대한 EC50 값을 증가하는 농도의 각 항체에 대해 측정하였고, 그 결과를 재조합 인간 Gal9에 대한 결합의 경우 도 3에서, 그리고 재조합 마우스 Gal9에 대한 결합의 경우 도 4에서 표로 제시하였다.

1hz4 항체 외에, HFB9-1의 3개의 인간화된 변이체는 모두 인간 및 마우스 Gal-9 둘 다에 대해 nM 미만의 수준의 친화도를 나타낸 것이 분명하다 (도 3 및 4 참고). 한편, 6개의 인간화된 HFB9-2 항체 중 5개 (2hz12 제외)가 인간 Gal9에 대해 nM 미만 수준의 친화도를 나타냈을뿐만 아니라, 5개 중 4개 (2h14 제외)는 마우스 Gal9에 대해 nM 미만 수준의 친화도를 유지하였다.

원숭이 오르소로그 Gal9에 대한 강력한 교차 반응성이 또한 관찰되었다 (데이터 미제시).

경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC) 가변 영역, CDR 영역, 및 프레임워크 영역 (FR)을 포함하여, 이들 대표적인 항체의 서열을 아래에 열거한다.

HFB9-1hz1-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 2)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 4)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 6)

HCVR:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTMT

ADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 8)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 10)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 12)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 14)

LCVR:

DIVMTQSPDSLAVSLGEratINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 16)

HFB9-1hz2-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 18)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 20)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 22)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTIT

ADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCTRHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 24)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 26)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 28)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 30)

DIVMTQSPDSLAVSLGEratINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 32)

HFB9-1hz3-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 34)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 36)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 38)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTIT

ADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 40)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 42)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 44)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 46)

DIVMTQSPDSLAVSLGEratINCKSSQSLFYSTNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGS

GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYYFPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 48)

HFB9-1hz4-hG1AA

VH-CDR1: GYTFTDYTIH (SEQ ID NO: 50)

VH-CDR2: WFYPGSHSIKYAQKFQGR (SEQ ID NO: 52)

VH-CDR3: HGGYDGFDY (SEQ ID NO: 54)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTDYTIHWVRQAPGQGLEWMGWFYPGSHSIKYAQKFQGRVTIT

ADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARHGGYDGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 56)

VL-CDR1: KSSQSLFYSTNQKNYLA (SEQ ID NO: 58)

VL-CDR2: WASTRES (SEQ ID NO: 60)

VL-CDR3: QQYYYFPYT (SEQ ID NO: 62)

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HFB9-2hz11-hG1AA

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HFB9-2hz12-hG1AA

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HFB9-2hz13-hG1AA

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HFB9-2hz13-hG1AA의 HFR1-HFR4 서열은 SEQ ID NO: 97, 99, 101, 및 103이다. HFB9-2hz13-hG1AA의 LFR1-LFR4 서열은 SEQ ID NO: 105, 107, 109, 및 111이다.

HFB9-2hz14-hG1AA

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실시예 3 Binding by 항-Gal9 항체에 의한 결합은 수용체 TIM3 및 CD44에 대한 Gal9 결합을 차단한다

이 실험은 발명의 항-Gal9 항체가 Gal-9의 그것의 수용체 TIM3 및 CD44에 대한 결합을 차단함으로써, Gal-9로부터의 하류 신호전달을 길항하는 것을 입증한다.

도 5의 데이터는 발명의 인간화된 항체가 TIM3 및 CD44 수용체에 대한 Gal9 결합을 용량 의존적 방식으로 차단한 것을 분명하게 보여주었다.

실시예 4 항-Gal9 항체는 Gal9 유도 Th1 세포자멸사를 중화한다

Yang 등 (Inflammation 40(3):1062-1071, 2017)은 상승된 갈렉틴-9가 Th1 이펙터 기능을 억제하고 골관절염에서 활성화된 CD4⁺ T 세포의 세포자멸사를 유도하는 것을 보고하였다. 이 실험은 발명의 항-Gal9 항체가 Gal9 유도 Th1 세포자멸사를 중화하는 것을 입증한다.

구체적으로, 인간 PBMC를 건강한 기증자로부터 분리하고, 증가하는 농도의 발명의 항체와 함께 항체의 부재 하에 T 세포세포자멸사를 유도하는 양의 Gal9의 존재 하에 인큐베이션하였다. 세포자멸성 CD4+ T 세포의 백분율을 항체 농도 범위에 대해 측정하여 항체에 대한 EC50 값을 측정하였다. 그 결과를 도 6에 요약하였다. 데이터는 건강한 기증자로부터의 인간 PBMC를 발명의 항체로 처리한 것이 Gal-9 유도 Th1 세포 세포자멸사를 용량 의존적 방식으로 방지하였음을 분명하게 보여주었다.

실시예 5 항-Gal9 항체는 Gal9 유도 Treg 발현을 억제한다

위에서 논의된 것과 같이, 갈렉틴-9는 Treg에 의해 직접적으로 발현되며, 그 활성화는 Gal9의 증가된 발현과 관련이 있다. 이 실험은 발명의 항-Gal9 항체에 의한 갈렉틴-9의 억제가 Treg 팽창을 억제하는 것을 입증한다.

구체적으로, 인간 PBMC를 건강한 기증자로부터 분리하고, 증가하는 농도의 발명의 항체와 함께 항체의 부재 하에 Treg 팽창을 자극하는 양의 Gal9의 존재 하에 인큐베이션하였다. 모든 생존 가능한 세포 중에서 Foxp3⁺ Ki67^높은 T 세포의 백분율을 항체 농도 범위에 대해 측정하여 항체에 대한 EC50 값을 측정하였다. 그 결과를 도 7에 요약하였다. 데이터는 Foxp3 및 Ki67 마커 발현을 토대로 더 높은 항체 농도가 더 낮은 백분율의 팽창된 Treg와 관련되었다는 점에서, 건강한 기증자로부터의 인간 PBMC를 발명의 항체로 처리한 것이 Gal-9 유도 Treg 팽창을 용량 의존적 방식으로 억제하였음을 분명하게 보여주었다.

실시예 6 항-Gal9 항체 및 항-PD-1 항체로의 조합 치료는 생체내에서 종양 성장의 억제 및 생존율 연장에서 시너지 효과를 나타냈다

이 실험은 발명의 항-Gal9 단클론성 항체 및 항-PD-1 항체가 이종이식 마우스 모델에서 생체내에서 종양 성장을 억제하는데 시너지 효과를 가지는 것을 입증한다.

특히, 약 50만개의 암 세포를 실험 마우스에 접종하고 종양 덩어리가 미리 결정된 크기까지 성장하도록 하였다. 그런 다음 마우스를 무작위로 그룹화하여 다음의 4개의 항체 또는 항체 조합 중 하나로 복강내로 (i.p.) 주사하였다: (1) 10 mg/kg 용량의 IgG 아이소타입 대조군, (2) 10 mg/kg 용량의 항-Gal9 항체 HFB9-2 (클론 RMP1-14), (3) 10 mg/kg 용량의 항-mPD-1 항체, 또는 (4) 10 mg/kg 용량의 항-mPD-1 항체와 10 mg/kg 용량의 항-HFB9-2 항체의 조합.

다양한 그룹에 대해 제1 용량의 항체를 제1 일에 투여하고, 후속 용량을 항-mPD-1 항체를 포함한 임의의 그룹에 대해 총 4회 용량 동안 3일마다 투여하였고, 항-HFB9-2 항체 및 대조군 항체를 포함한 임의의 그룹에 대해 총 7회 용량 동안 3일마다 투여하였다. 데이터를 평균 ± s.e.m.으로서 표시한다 (n = 그룹당 8마리 마우스) (도 8).

본 발명의 항-Gal9 항체 및 항-mPD-1 항체는, 조합 치료가 7주의 연구 기간 중에 500 mm³ 이하로 종양 성장을 본질적으로 완전하게 억제한 점에서 생체내에서 종양 성장을 억제하는데 시너지 효과를 나타냈음이 분명하다. 한편, 대조군 그룹 및 항-HFB9-2 그룹에서 종양 성장은 이 수준을 빠르면 2주에 초과하였고, 항-mPD-1 그룹은 이 수준을 빠르면 4주에 초과하였다.

나아가, 생존율의 관점에서 (도 9), 대조군 그룹의 모든 마우스는 3주가 거의 끝나갈 때 모두 사망하였고, 항-HFB9-2 항체 그룹의 마우스는 모두 5주가 거의 끝나갈 때 모두 사망하였으며, 항-mPD-1 그룹의 마우스의 단지 25% (8마리 중 2마리)가 7주가 끝났을 때 종양 없이 생존하였다. 그러나, 동시에, 조합 치료 그룹은 75% 생존율을 보였고, 8마리 중 5마리가 종양이 없었으며, 한 마리는 약 100 mm³ 종양을 가졌다.

이런 놀라운 발견은 Gal-9 기능과 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트를 동시에 억제하는 것이 상승적으로 생체내에서의 종양 성장을 억제하고 생존을 연장시킬 수 있음을 강력하게 시사한다.

실시예 7 항-Gal9 항체는 안정적이다

본 발명의 인간화된 항-Gal9 항체가 보관시 안정적이고, 따라서 치료제로서 추가의 개발에 적합한 것을 확인하기 위하여, 다양한 개발 가능성 검정을 선택된 인간화된 항체에 대해 실행하였다.

제1 실험으로, 1-2.75 mg/mL의 본 발명의 인간화된 항체, HFB9-1hz1-hG1AA, HFB9-1hz2-hG1AA, HFB9-1hz3-hG1AA, HFB9-2hz11-hG1AA, 및 HFB9-2hz13-hG1AA를 25 또는 40℃에서 PBS (pH 7.4)에 보관하고, 다양한 항체의 안정성을 0, 3, 7, 및 14일에 측정하였다. 결과 (제시되지 않음)는 테스트된 모든 항체가 테스트 조건에서 안정적이었음을 입증하였다.

제2 실험으로, 동일한 항체를 낮은 pH 조건 (1100 mM AcH, pH 3.5, 25℃) 하에서, 0, 3, 및 6시간 동안 안정성에 대해 테스트하였다. 그 결과 (제시되지 않음)는 테스트된 모든 항체가 테스트 조건에서 안정적이었음을 다시 입증하였다.

제3 실험으로, 동일한 항체에 대해 1, 2, 또는 3회의 동결-해동 주기를 수행하였다. 그 결과 (제시되지 않음)는 테스트된 모든 항체가 테스트 조건에서 안정적이었음을 다시 입증하였다.

실시예 8 AML 환자로부터의 혈장 및 혈청 중의 갈렉틴-9 수준

환자 혈장 및 혈청 중의 Gal-9의 수준을 측정하기 위하여, AML 환자로부터의 말초혈 샘플을 구스타프 루시 연구소 (Gustave Roussy Institute (Villejuif, FRANCE))의 임상 혈액학부로부터 기관 검토 위원회에서 승인한 프로토콜을 따라 얻었다. 헬싱키 선언에 따라 모든 환자로부터 사전 서면 동의서를 얻었다. 환자를 프랑스-미국-영국 (FAB) 분류 기준에 따라 계층화하였다. AML 환자로부터 말초혈 유래 혈장 또는 혈청을 표준 과정을 따라 준비하였다. 건강한 기증자의 경우, 혈장 또는 혈청 샘플을 상업적 공급원으로부터 얻었다.

혈장 또는 혈청 중의 갈렉틴-9 단백질 수준을 R&D SYSTEMS®로부터의 "Quantikine® ELISA 인간 갈렉틴-9"를 사용하여 ELISA에 의해 평가하였고, 통계적 분석 (쌍을 이루지 않은 양측 t-검정)을 윈도우 소프트웨어에 대해 PRISM® 5를 사용하여 수행하였다.

도 10에서 도시된 것과 같이, 진단시 또는 질환의 재발/난치 단계 (R/R)에서 AML 환자의 혈장의 갈렉틴-9 단백질 수준은 건강한 개체로부터의 혈장에서 관찰된 것보다 상당히 더 높았다. 화학요법 후 완전한 차도 시에 AML 환자의 혈장의 갈렉틴-9 단백질 수준은 정상적인 생리적 범위에 가까웠다.

도 11에서 도시된 것과 같이, 진단시 FAB M2 또는 FAB M3 AML 환자의 혈장 중의 갈렉틴-9 단백질 수준은 FAB M0, M1, M4 또는 M5 AML 환자로부터의 혈장에서 관착된 것보다 상당히 더 낮았다. 진단시 FAB M3 AML 환자의 혈장 중의 갈렉틴-9 단백질 수준은 정상적인 생리적 범위 내에 있었다.

추가적으로, LGALS9 mRNA 발현 수준을 AML 환자 및 건강한 개체에서 재조사하였다. LGALS9 mRNA 발현 수준을 Tyner 등에 의해 기탁된 공개적으로 이용 가능한 "AML_Ohsu_Nature 2018" 데이터세트로부터 추출하였다 (연구의 완전한 설명을 위해 PMID 30333627 참고). 데이터를 도 12에서 표준화된 log2 RPKM으로서 표시한다. 점선은 각각 건강한 개체 또는 AML 환자로부터의 BM 유래 MNC의 LGALS9 수준의 중앙값을 나타낸다.

도 12에서 도시된 것과 같이, 진단시 (고려된 모든 FAB) AML 환자로부터의 BM 유래 MNC의 갈렉틴-9-암호화 mRNA 수준은 건강한 개체로부터의 BM 유래 MNC 또는 CD34+ 세포에서 관찰된 것보다 더 높았다. 추가적으로, 진단시 FAB M3 AML 환자로부터의 BM 유래 MNC 중의 갈렉틴-9-암호화 mRNA 수준은 FAB M0, M1, M4 또는 M5 AML 환자로부터의 BM 유래 MNC에서 또는 건강한 개체로부터의 BM 유래 MNC 또는 CD34⁺ 세포로부터 관찰된 것보다 상당히 더 낮았다.

SEQUENCE LISTING <110> HIFIBIO (HK) LIMITED <120> ANTI-GALECTIN-9 ANTIBODY AND USES THEREOF <130> CIE210001PCT <160> 128 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR1 <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 <400> 2 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Ile His 1 5 10 <210> 3 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR2 <400> 3 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 4 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 <400> 4 Trp Phe Tyr Pro Gly Ser His Ser Ile Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly Arg <210> 5 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR3 <400> 5 Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg 20 25 30 <210> 6 <211> 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Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Glu Arg His Gly Gly Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 105 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR1 <400> 105 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 20 <210> 106 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 <400> 106 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 107 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR2 <400> 107 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 108 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 <400> 108 Trp Ala Ser Thr Arg Gly Ser 1 5 <210> 109 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR3 <400> 109 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 110 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 <400> 110 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 111 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR4 <400> 111 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 112 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCVR <400> 112 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 113 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR1 <400> 113 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser 20 25 <210> 114 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 <400> 114 Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Thr Ile His 1 5 10 <210> 115 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR2 <400> 115 Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 116 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 <400> 116 Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 117 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR3 <400> 117 Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Glu Arg 20 25 30 <210> 118 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR3 <400> 118 His Gly Gly Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr 1 5 <210> 119 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HFR4 <400> 119 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 120 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCVR <400> 120 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Glu Arg His Gly Gly Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 121 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR1 <400> 121 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 20 <210> 122 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 <400> 122 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 123 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR2 <400> 123 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 <400> 124 Trp Ala Ser Thr Arg Gly Ser 1 5 <210> 125 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR3 <400> 125 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 126 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 <400> 126 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 127 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LFR4 <400> 127 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 128 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCVR <400> 128 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys

Claims

분리된 단클론성 항체, 또는 그것의 항원 결합 단편으로서, 상기 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 갈렉틴-9에 대해 특이적임며, 싱기 단클론성 항체는:
(1a) SEQ ID NO: 2의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 4의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 6의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(1b) SEQ ID NO: 10의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 12의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 14의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(2a) SEQ ID NO: 18의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 20의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 22의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(2b) SEQ ID NO: 26의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 28의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 30의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(3a) SEQ ID NO: 34의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 36의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 38의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(3b) SEQ ID NO: 42의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 44의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 46의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(4a) SEQ ID NO: 50의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 52의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 54의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(4b) SEQ ID NO: 58의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 60의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 62의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(5a) SEQ ID NO: 66의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 68의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 70의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(5b) SEQ ID NO: 74의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 76의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 78의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(6a) SEQ ID NO: 82의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 84의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 86의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(6b) SEQ ID NO: 90의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 92의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 94의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(7a) SEQ ID NO: 98의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 100의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 102의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(7b) SEQ ID NO: 106의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 108의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 110의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR); 또는
(8a) SEQ ID NO: 114의 HCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 116의 HCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 118의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (HCVR); 및,
(8b) SEQ ID NO: 122의 LCVR CDR1 서열, SEQ ID NO: 124의 LCVR CDR2 서열, 및 SEQ ID NO: 128의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (LCVR)
을 포함하는, 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서,
(1c) (1a) 및 (1b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 5의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 1의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(2c) (2a) 및 (2b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 17의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(3c) (3a) 및 (3b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 37의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 33의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(4c) (4a) 및 (4b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 53의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 49의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(5c) (5a) 및 (5b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 69의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 65의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(6c) (6a) 및 (6b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 85의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 81의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(7c) (7a) 및 (7b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 101의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 97의 HFR1 서열을 추가로 포함하거나; 또는
(8c) (8a) 및 (8b)의 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 117의 HFR3 서열을 추가로 포함하고, 선택적으로 SEQ ID NO: 113의 HFR1 서열을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 또는 제2항에 있어서,
(1A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 8이고/이거나;
(1B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 16이거나, 또는,
(2A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 24이고/이거나;
(2B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 32이거나, 또는,
(3A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 40이고/이거나;
(3B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 48이거나, 또는,
(4A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 56이고/이거나;
(4B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 64이거나, 또는,
(5A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 72이고/이거나;
(5B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 80이거나, 또는,
(6A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 88이고/이거나;
(6B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 96이거나, 또는,
(7A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 104이고/이거나;
(7B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 112이거나, 또는,
(8A) HCVR 서열은 SEQ ID NO: 120이고/이거나;
(8B) LCVR 서열은 SEQ ID NO: 128인 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화된 항체이고,
(1) SEQ ID NO: 8의 HCVR 서열 및 SEQ ID NO: 16의 LCVR 서열; 또는,
(2) SEQ ID NO: 72의 HCVR 서열 및 SEQ ID NO: 80의 LCVR 서열
을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 그것의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')₂, F_d, 단일 사슬 Fv 또는 scFv, 이황화 결합된 F_v, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgG△CH₂, 미니바디, F(ab')₃, 테트라바디, 트라이아바디, 디아바디, 단일 도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb₂, (scFv)₂, 또는 scFv-Fc인 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 마우스 Gal9와 교차 반응하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 약 0.1-0.2 nM의 EC50으로 인간 Gal9에 결합하고/하거나, 약 0.5-1.0 nM의 EC50으로 마우스 Gal9에 결합하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 약 25 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 5 nM, 2 nM, 또는 1 nM 미만의 K_d로 인간 Gal9에 결합하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, Gal9에 결합하여 Gal9가 Gal9 수용체 (예컨대, TIM3 또는 CD44)에 결합하는 것을 억제하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 (예컨대 CD4⁺ T 세포)의 Gal-9 유도 Th1 세포자멸사를 중화하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Gal9 유도 Treg 팽창을 억제하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 체크포인트의 길항물질과 함께 상승적으로 생체내에서 종양 성장을 억제하고/하거나 이종이식 종양을 가진 마우스에서의 생존을 연장시키는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 체크포인트의 길항물질은 PD-1 또는 PD-L1에 대해 특이적인 항체 또는 그것의 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편.
필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 환자에게 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편, 및 면역 체크포인트의 길항물질을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제14항에 있어서, 면역 체크포인트는 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트이고, 선택적으로 면역 체크포인트의 길항물질은 PD-1 또는 PD-L1에 대해 특이적인 항체 또는 그것의 항원 결합 단편; PD-1/PD-L1의 펩타이드 억제제; PD-L1의 소분자 억제제; 거대고리형 펩타이드; 또는 그것들의 임의의 조합인 것을 특징으로 하는 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서, 암은 혈액암 (예컨대 AML 및 DLBCL), 또는 고형 종양 (예컨대 유방암, 두경부암, 폐암, 흑색종 (포도막 흑색종 포함), 결장암, 직장 암종, 난소암, 간암, 및 전립선암)인 것을 특징으로 하는 방법.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 화학요법제, 항-혈관신생제, 성장 억제제, 면역항암제, 및/또는 항-신생물 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 중쇄 또는 경쇄 또는 그것의 항원 결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드.
제18항에 있어서, 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오타이드.
제18항 또는 제19항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터로서, 예컨대 발현 벡터 (예컨대, 포유류 발현 벡터, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터, 또는 박테리아 발현 벡터)인 것인 벡터.
암으로 진단받았거나, 암이 발병할 위험이 있거나 또는 암이 재발한 환자에서 이펙터 T 세포 증식을 구제 또는 촉진하고/하거나 이펙터 T 세포 활성을 증강시키는 방법, 또는 암을 가진 환자를 확인 및 치료하는 방법으로서, 방법은 환자로부터의 샘플에서 건강하거나 대조군 개체에서의 갈렉틴-9의 참조 수준보다 높은 갈렉틴-9의 수준을 환자가 가진 것으로 확인되었을 때, 환자에게 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제21항에 있어서, 샘플 중의 갈렉틴-9의 수준을 참조 수준에 비교함으로써 환자가 참조 수준보다 높은 샘플 중의 갈렉틴-9의 수준을 가진 것으로 확인하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 또는 제22항에 있어서, 환자에게 면역 체크포인트의 길항물질을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 선택적으로 면역 체크포인트는 PD-1/PD-L1 면역 체크포인트인 것을 특징으로 하는 방법.
제23항에 있어서, 면역 체크포인트의 길항물질은 PD-1 또는 PD-L1에 특이적인 항체 또는 그것의 항원 결합 단편; PD-1/PD-L1의 (비-항체) 펩타이드 억제제; PD-L1의 소분자 억제제; 거대고리형 펩타이드; 또는 그것들의 임의의 조합인 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 혈액암 (예컨대 AML 및 DLBCL), 또는 고형 종양 (예컨대 유방암, 두경부암, 폐암, 흑색종 (포도막 흑색종 포함), 결장암, 직장 암종, 난소암, 간암, 및 전립선암)인 것을 특징으로 하는 방법.
제25항에 있어서, 환자는 FAB M0, M1, M4 또는 M5 AML 환자이거나, 또는 환자는 FAB M2 또는 M3 AML 환자가 아닌 것을 특징으로 하는 방법.
제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플인 것을 특징으로 하는 방법.
AML로 진단받았거나, AML이 발병할 위험이 있거나 또는 AML이 재발한 환자에서 이펙터 T 세포 증식을 구제 또는 촉진하고/하거나 이펙터 T 세포 활성을 증강시키는 방법, 또는 AML을 가진 환자를 확인 및 치료하는 방법으로서, 방법은 환자로부터의 골수(BM) 유래 단핵 세포(MNC) 샘플에서 건강하거나 대조군 개체에서의 BM 유래 MNC 또는 CD34⁺ 세포의 참조 수준보다 통계적으로 상당히 높거나 낮은 갈렉틴-9-암호화 mRNA의 수준을 환자가 가진 것으로 확인되었을 때, 환자에게 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제28항에 있어서, (1) 환자로부터의 BM 유래 MNC 샘플 중의 갈렉틴-9-암호화 mRNA의 수준은 환자가 FAB M0, M1, M2, M4, 또는 M5 AML 환자일 때 참조 수준보다 상당히 더 높거나, 또는 (2) 환자로부터의 BM 유래 MNC 샘플 중의 갈렉틴-9-암호화 mRNA의 수준은 환자가 FAB M3 AML 환자일 때 참조 수준보다 상당히 더 낮은 것을 특징으로 하는 방법.
암의 치료에 사용하기 위한, 갈렉틴-9에 대해 지시되거나 그것에 특이적인 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 이펙터 T 세포 증식을 구제하고/하거나, 이펙터 T 세포 활성을 증강시키며, 선택적으로 이펙터 T 세포는 Th1 세포인, 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분.
이펙터 T 세포 증식을 구제 또는 촉진하고/하거나, 이펙터 T 세포 활성을 증강시키는 방법으로서, 상기 이펙터 세포를 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 이펙터 T 세포와 접촉시키는 단계를 포함하고, 선택적으로 이펙터 T 세포는 Th1 세포인, 방법.
대상체에서 면역 메모리를 유도 또는 촉진하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하며, 면역 메모리는 대상체에서 종양 진행 또는 재발, 또는 암세포 증식을 억제하거나 감소시키는데 효과적인, 방법.