KR20220113414A - 항-pd-l1 항체 제제 - Google Patents

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KR20220113414A
KR20220113414A KR1020227021568A KR20227021568A KR20220113414A KR 20220113414 A KR20220113414 A KR 20220113414A KR 1020227021568 A KR1020227021568 A KR 1020227021568A KR 20227021568 A KR20227021568 A KR 20227021568A KR 20220113414 A KR20220113414 A KR 20220113414A
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아다 후이
주디스 주-시모니
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본원 발명은 항-PD-L1 항체를 포함하는 액상 제약학적 제제, 예컨대 피하 투여를 위한 액상 제약학적 제제를 제공한다. 본원 발명은 또한, 이런 제제를 만들기 위한 방법 및 이런 제제를 이용하는 방법을 제공한다.

Description

항-PD-L1 항체 제제
관련된 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2019년 12월 9일 자 제출된 미국 가출원 번호 62/945,730에 우선권을 주장하고, 이것의 내용은 본원에서 온전히 참조로서 편입된다.
ASCII 텍스트 파일 형태에서 서열 목록의 제출
ASCII 텍스트 파일 형태로 제출된 다음의 내용물은 본원에서 온전히 참조로서 편입된다: 서열 목록 (파일 명칭: 146392049940SEQLIST.TXT, 기록된 일자: 2020년 11월 22일, 크기: 9 KB)의 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF).
기술 분야
본원 발명은 항-PD-L1 항체를 포함하는 액상 제약학적 제제, 예컨대 피하 투여를 위한 액상 제약학적 제제를 제공한다. 본원 발명은 또한, 이런 제제를 만들기 위한 방법 및 이런 제제를 이용하는 방법을 제공한다.
발명의 배경
지난 수년 동안 항체의 제약학적 이용이 증가하였다. 많은 경우에 이런 항체는 정맥내 (IV) 루트를 통해 주사되거나 또는 주입된다. 유감스럽게도, 정맥내 루트를 통해 투여될 수 있는 항체의 양은 항체의 물리화학적 특성에 의해, 특히 적합한 액체 제제에서 이의 용해도와 안정성에 의해, 그리고 주입액의 용적에 의해 제한된다. 대안적 투여 경로는 피하 또는 근육내 주사이다. 이들 주사 경로는 주사되는 최종 용액에서 높은 단백질 농도를 필요로 한다 (Shire, S.J., Shahrokh, Z. et al, "Challenges in the development of high protein concentration formulations", J. Pharm. Sci. 2004; 93(6): 1390-1402; Roskos, L.K., Davis C.G. et al, "The clinical pharmacology of therapeutic antibodies", Drug Development Research 2004; 61(3): 108-120). 용적을 증가시키고, 그것에 의하여 치료 용량을 증가시키기 위해, 항체 제제가 주사될 수 있는 사이질 공간을 증가시키기 위한 글리코사미노글리카나아제 효소(들)를 이용하는 것이 제안되었다 (WO2006/091871).
피하 주사를 위한 치료적으로 활성 항체의 고도로 농축된, 안정된 제약학적 제제를 제공하는 것이 요구된다. 피하 주사의 이점은 이를 통해 개업의가 환자를 상당히 짧게 간섭하면서 이것을 수행할 수 있다는 점이다. 게다가 환자가 혼자 힘으로 피하 주사를 수행하도록 훈련될 수 있다. 통상적으로 피하 루트를 통한 주사는 대략 2 ml로 제한된다. 복수 용량을 필요로 하는 환자의 경우에, 여러 단위 용량 제제가 신체 표면의 복수 부위에 주사될 수 있다. 피하 투여에 적합한 고도로 농축된, 안정된 제약학적 항-PD-L1 항체 제제는 현재 시장에서 가용하지 않다. 이런 이유로, 피하 주사를 위한 치료적으로 활성 항체의 이런 고도로 농축된, 안정된 제약학적 제제를 제공하는 것이 요구된다. 비경구 약물의 하피 내로의 주사는 일반적으로, 피하 (SC) 조직에서 수력학적 전도도에 대한 이러한 점탄성 저항 및 주사 시에 발생되는 배압 (Aukland K. and Reed R., "Interstitial-Lymphatic Mechanisms in the control of Extracellular Fluid Volume", Physiology Reviews", 1993; 73: 1-78)뿐만 아니라 통증의 지각으로 인해 2 ml 이하의 용적으로 한정된다.
높은 농도 단백질 제제의 제조는 매우 어렵고, 그리고 각 단백질이 상이한 응집 거동을 갖기 때문에, 각 제제를 이용된 특정 단백질에 적응시키는 것이 요구된다. 응집체는 적어도 일부 사례에서 치료 단백질의 면역원성을 야기하는 것으로 의심된다. 단백질 또는 항체 응집체에 대한 면역원성 반응은 치료 단백질 또는 항체를 무효하게 만들 수 있는 중화 항체를 야기할 수 있다. 피하 주사와 관련하여 단백질 응집체의 면역원성이 가장 문제가 되는 것으로 보이는데, 여기서 반복 투여는 면역 반응의 위험을 증가시킨다.
PD-L1은 많은 암에서 과다발현되고 불량한 예후와 종종 연관된다 (Okazaki T et al., Intern. Iramim. 2007 19(7):813) (Thompson RH et al., Cancer Res 2006, 66(7):3381). 흥미롭게도, 대다수의 종양 침윤 T 림프구는 정상적인 조직에서 T 림프구 및 말초혈 T 림프구와는 대조적으로, PD-1을 두드러지게 발현하는데, 이것은 종양-반응성 T 세포 상에서 PD-1의 상향조절이 손상된 항종양 면역 반응에 기여할 수 있다는 것을 암시한다 (Blood 2009 114(8): 1537). 이것은 PD-1 발현 T 세포와 상호작용하여 T 세포 활성화의 약화 및 면역 감시의 회피를 야기하는 PD-L1 발현 종양 세포에 의해 매개된 PD-L1 신호전달의 활용에 기인할 수 있다 (Sharpe et al., Nat Rev 2002) (Keir ME et al., 2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677). 이런 이유로, PD-L1/PD-1 상호작용의 저해는 종양의 CD8+ T 세포-매개된 사멸을 증강할 수 있다.
PD-1 및 PD-1과의 상호작용을 통해 신호하는 다른 분자, 예컨대 예정된 사멸 리간드 1 (PD-L1) 및 예정된 사멸 리간드 2 (PD-L2)의 치료적 표적화는 많은 관심을 받고 있는 분야이다. PD-L1 신호전달의 저해는 암 및 급성과 만성 (예를 들면, 지속) 감염 둘 모두를 비롯한 감염의 치료를 위해 T 세포 면역성을 증강하기 위한 수단으로서 제안되었다. 정맥내 주입에 이용될 수 있는 항-PD-L1 항체의 제제는 설명되었다 (참조: US 2016/0319022). 하지만, 피하 주사에 적합한 항-PD-L1 항체에 대한 최적 제제는 아직 개발되지 않았기 때문에, 유의미한 충족되지 않는 의료 요구가 존재한다.
특허 출원, 특허 공보, 그리고 UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호를 비롯한, 본원에서 인용된 모든 참고문헌은 마치 각 개별 참고문헌이 참조로서 편입되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 표시되는 것처럼 전체적으로 본원에서 참조로서 편입된다.
요약
한 양상에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도에서 단일클론 항-PD-L1 항체, 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 200 mM 내지 약 280 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.04% (w/v) 내지 약 0.08% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트, 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도에서 메티오닌, 그리고 약 5.6 내지 약 6.0의 pH를 포함하고, 여기서 상기 단일클론 항체는 다음을 포함한다:
(a) 경쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1;
(2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2;
(3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
(b) 중쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1;
(2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2;
(3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역. 일부 구체예에서, 제제 내에 단일클론 항체는 약 120 g/L 내지 약 130 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 단일클론 항체는 약 125 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 히스티딘 아세트산염은 약 17 mM 내지 약 22 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 히스티딘 아세트산염은 약 20 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 수크로오스는 약 220 mM 내지 약 260 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 수크로오스는 약 240 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, pH는 약 5.8이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20이다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 약 0.05% (w/v) 내지 약 0.07% (w/v)의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 약 0.06% (w/v)의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 메티오닌은 약 10 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제는 히알루론산분해효소를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소는 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)이다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소는 약 2000 U/ml의 농도로 존재한다.
한 양상에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도에서 단일클론 항-PD-L1 항체, 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 200 mM 내지 약 280 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.03% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트, 그리고 약 5.3 내지 약 5.7의 pH를 포함하고, 여기서 상기 단일클론 항체는 다음을 포함한다:
(a) 경쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1;
(2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2;
(3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
(b) 중쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1;
(2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2;
(3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역. 일부 구체예에서, 제제 내에 단일클론 항체는 약 120 g/L 내지 약 130 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 단일클론 항체는 약 125 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 히스티딘 아세트산염은 약 17 mM 내지 약 22 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 히스티딘 아세트산염은 약 20 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 수크로오스는 약 220 mM 내지 약 260 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 수크로오스는 약 240 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, pH는 약 5.5이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20이다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 약 0.02% (w/v)의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되기에 앞서 히알루론산분해효소와 혼합된다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소는 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)이다. 일부 구체예에서, 혼합물에서 히알루론산분해효소 농도는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml이다. 일부 구체예에서, 혼합물에서 히알루론산분해효소 농도는 약 2000 U/ml이다.
전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 선행 동결 건조가 진행되지 않는다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 인간화 항체이다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 전장 항체이다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 IgG1 항체이다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 단일클론 항체는 유리 바이알 또는 금속 합금 용기에서 보관된다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 금속 합금은 316L 스테인리스강 또는 하스텔로이이다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제는 2-8℃에서 적어도 6 개월 동안 안정된다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제는 2-8℃에서 적어도 12 개월 동안 안정된다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제는 2-8℃에서 적어도 24 개월 동안 안정된다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 보관 후 생물학적 활성의 적어도 약 80%를 유지한다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 생물학적 활성은 PD-L1에 대한 항체 결합에 의해 계측된다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 전술된 양상 또는 본원에서 설명된 임의의 구체예 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
전술된 임의의 양상 또는 구체예의 액상 제약학적 제제를 담는 용기를 포함하는 제조 물품 역시 본원에서 제공된다. 일부 구체예에서, 용기는 유리 바이알 또는 금속 합금 용기이다. 일부 구체예에서, 금속 합금은 316L 스테인리스강 또는 하스텔로이이다.
전술된 임의의 양상 또는 구체예의 액상 제약학적 제제를 담는 용기를 포함하는 키트 역시 본원에서 제공된다.
전술된 임의의 양상 또는 구체예의 액상 제약학적 제제의 효과량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법 역시 본원에서 제공되는데, 여기서 질환 또는 장애는 감염, 암 및 염증성 질환으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 질환 또는 장애는 암이다. 일부 구체예에서, 암은 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 요로상피세포 암종 및 유방암으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이다. 일부 구체예에서, 개체는 인간이다.
본원에서 설명된 다양한 구체예의 특성 중에서 한 가지, 일부 또는 전부가 조합되어 본원 발명의 다른 구체예를 형성할 수 있는 것으로 이해된다. 본원 발명의 이런 저런 양상은 당업자에게 명백해질 것이다. 본원 발명의 이런 저런 구체예는 다음의 상세한 설명에 의해 더욱 설명된다.
도면의 간단한 설명
특허 또는 출원 파일은 유색으로 작성된 적어도 하나의 도면을 내포한다. 유색 도면(들)을 갖는 본 특허 또는 특허 출원 공보의 사본은 요구 및 수수료의 납부 시에 사무국에 의해 제공될 것이다.
도 1a-1c는 복수의 동결/해동 주기 후 다양한 원료의약품 (DS) 제제의 고분자량 종류 (HMWS) (도 1a), 이온 교환 크로마토그래피 (IEC) 주된 피크 백분율 (도 1b), 그리고 비환원 모세관 전기이동-SDS (NR CE-SDS) 프리 피크 합계 (도 1c)의 수준을 보여준다.
도 2a-2c는 25 ℃에서 1 개월까지 후 다양한 DS 제제의 산 종류 (도 2a), 염기 종류 (도 2b) 및 HMWS (도 2c)의 수준을 보여준다.
도 3a-3b는 25 ℃에서 3 개월까지 후 의약품 (DP) 제제의 HMWS (도 3a) 및 SEC 주된 피크 백분율 (도 3b)의 수준을 보여준다.
도 4a-4b는 25 ℃에서 3 개월까지 후 DP 제제에서 산 종류 (도 4a) 및 염기 종류 (도 4b)의 수준을 보여준다.
도 5a-5b는 25 ℃에서 3 개월까지 후 DP 제제에서 프리 피크 (도 5a) 및 NR CE-SDS 주된 피크 (도 5b)의 백분율을 보여준다.
도 6a-6c는 40 ℃에서 1 개월까지 후 DP 제제에서 HMWS (도 6a), SEC 주된 피크 백분율 (도 6b), 그리고 프리 피크의 NR CE-SDS 합계 (도 6c)의 수준을 보여준다.
도 7a-7c는 40 ℃에서 1 개월까지 후 DP 제제에서 산 종류 (도 7a), 염기 종류 (도 7b), 그리고 IEC 주된 피크의 백분율 (도 7c)의 수준을 보여준다.
도 8a-8b는 다양한 DP 제제에서 3 개월까지 동안 40 ℃ (도 8a)에서 및 25 ℃ (도 8b)에서 폴리소르베이트 20의 안정성을 보여준다.
도 9a-9b는 25 ℃에서 3 개월까지 동안 다양한 DP 제제를 이용한 rHuPH20 활성 검정을 보여준다.
도 10a-10b는 24 시간 동안 교반되는 동안, 상이한 농도의 폴리소르베이트를 포함하는 제제에서 rHuPH20 활성을 보여준다. 더 높은 농도의 폴리소르베이트는 실온에서 교반하에, rHuPH20 활성을 더 높은 수준에서 유지하였다.
도 11은 5℃ 및 25℃ 사이의 온도에서 다양한 DP 제제의 점도를 보여준다.
상세한 설명
I. 정의
본원 발명을 상세하게 설명하기 전, 본원 발명은 특정 조성물 또는 생물학적 시스템에 한정되지 않으며, 이들은 당연히, 달라질 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본원에서 이용된 용어는 단지 특정한 구체예를 설명하기 위한 것이고, 그리고 한정하는 것으로 의도되지 않는 것으로 이해된다. 본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 이용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥에서 별도로 명시되지 않으면, 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "분자"에 대한 언급은 2개 또는 그 이상의 이런 분자의 조합 등을 임의적으로 포함한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "약"은 당업자에게 쉽게 공지된 개별 값에 대한 통상의 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 값 또는 파라미터에서 "약"에 대한 언급은 상기 값 또는 파라미터 그 자체에 관계하는 구체예를 포함한다 (및 설명한다).
본원에서 설명된 발명의 양상과 구체예는 "포함하는", "구성되는" 및 "본질적으로 구성되는" 양상과 구체예를 포함하는 것으로 이해된다.
용어 "제약학적 제제"는 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 허용하는 그런 형태이고, 그리고 이러한 제제가 투여될 개체에게 받아들이기 어려울 정도로 독성인 추가 성분을 내포하지 않는 제조물을 지칭한다. 이런 제제는 무균이다. "제약학적으로 허용되는" 부형제 (운반제, 첨가제)는 이용되는 활성 성분의 유효 용량을 제공하기 위해 대상 포유동물에게 합리적으로 투여될 수 있는 것들이다.
"무균" 제제는 무균이거나 또는 모든 살아있는 미생물 및 이들의 포자가 없거나 또는 본질적으로 없다.
"동결된" 제제는 0℃ 미만의 온도에서 제제이다. 일반적으로, 동결된 제제는 동결 건조되지 않고 선행 또는 후속 동결 건조도 진행되지 않는다. 일정한 구체예에서, 동결된 제제는 보관을 위한 동결된 원료의약품 (스테인리스강 탱크에서) 또는 동결된 의약품 (최종 바이알 형상에서)을 포함한다.
"안정된" 제제는 그 안에 단백질이 보관 시에 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 일부 구체예에서, 제제는 보관 시에 물리적 및 화학적 안정성뿐만 아니라 생물학적 활성을 본질적으로 유지한다. 보관 기간은 일반적으로, 제제의 의도된 보관 수명에 근거하여 선택된다. 단백질 안정성을 계측하기 위한 다양한 분석 기법이 당해 분야에서 가용하고, 그리고 예를 들면, Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) 및 Jones, A. Adv. Drug Deliver}' Rev. 10: 29-90 (1993)에서 검토된다. 안정성은 선택된 기간 동안 선택된 온도에서 계측될 수 있다. 안정성은 응집체 형성의 평가 (예를 들면, 크기 배제 크로마토그래피를 이용하여, 혼탁도를 계측함으로써 및/또는 시각적 검사에 의해); 양이온 교환 크로마토그래피, 영상화 모세관 등전위 초점 (icIEF) 또는 모세관 구역 전기이동을 이용하여 전하 이질성을 사정함으로써; 아미노 말단 또는 카르복시 말단 서열 분석; 질량 분광계 분석; 환원된 항체 및 무손상 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩티드 지도 (예를 들면, 트립신 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능을 평가하는 것 등을 비롯한, 다양한 상이한 방식으로 정성적으로 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정은 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상을 수반할 수 있다: 응집, 탈아미드화 (예를 들면, Asn 탈아미드화), 산화 (예를 들면, Met 산화), 이성화 (예를 들면, Asp 이성화), 클리핑/가수분해/단편화 (예를 들면, 힌지 영역 단편화), 숙신이미드 형성, 손상된 시스테인(들), N 말단 연장, C 말단 처리, 글리코실화 차이, 기타 등등.
단백질은 만약 컬러 및/또는 선명도의 시각 검사 시에, 또는 UV 광 산란에 의해 또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 계측될 때 응집, 침전 및/또는 변성의 징후를 거의 또는 전혀 보여주지 않으면, 제약학적 제제에서 "물리적 안정성을 유지한다."
단백질은 만약 소정의 시점에서 화학적 안정성이 상기 단백질이 아래에 규정된 바와 같이 생물학적 활성을 여전히 유지하는 것으로 고려되는 정도이면, 제약학적 제제에서 "화학적 안정성을 유지한다." 화학적 안정성은 단백질의 화학적으로 변경된 형태를 검출하고 정량함으로써 사정될 수 있다. 화학적 변경은 예를 들면, 크기 배제 크로마토그래피, SDS-PAGE 및/또는 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화/비행 시간 질량 분광분석법 (MALDI TOF MS)을 이용하여 평가될 수 있는 크기 변형 (예를 들면, 클리핑)을 수반할 수 있다. 화학적 변경의 다른 유형은 예를 들면, 이온 교환 크로마토그래피 또는 icIEF에 의해 평가될 수 있는 전하 변경 (예를 들면, 탈아미드화의 결과로서 발생)을 포함한다.
항체는 만약 소정의 시점에서 항체의 생물학적 활성이 검정 (예를 들면, 항원 결합 검정)에서 결정될 때, 제약학적 제제가 제조된 시점에 나타내진 생물학적 활성의 적어도 약 60% (검정의 오차 내에)이면, 제약학적 제제에서 "생물학적 활성을 유지한다." 항체에 대한 다른 "생물학적 활성" 검정은 하기에 상술된다.
본원에서 이용된 바와 같이, 단일클론 항체의 "생물학적 활성"은 항원에 결합하고, 그리고 시험관내에서 또는 생체내에서 계측될 수 있는 계측 가능한 생물학적 반응을 야기하는 항체의 능력을 포함한다.
본원에서 "탈아미드화된" 단일클론 항체는 이의 하나 또는 그 이상의 아스파라긴 잔기가 예를 들면, 아스파르트산 또는 이소아스파르트산으로 유도체화된 것이다.
본원에서 "산화된" 단일클론 항체는 이의 하나 또는 그 이상의 트립토판 잔기 및/또는 하나 또는 그 이상의 메티오닌이 산화된 것이다.
본원에서 "당화된" 단일클론 항체는 이의 하나 또는 그 이상의 리신 잔기가 당화된 것이다.
"탈아미드화에 감수성"인 항체는 탈아미드화되기 쉬운 것으로 밝혀진 하나 또는 그 이상의 잔기를 포함하는 것이다.
"산화에 감수성"인 항체는 산화되기 쉬운 것으로 밝혀진 하나 또는 그 이상의 잔기를 포함하는 것이다.
"응집에 감수성"인 항체는 특히, 동결 및/또는 교반 시에 다른 항체 분자(들)와 함께 응집하는 것으로 밝혀진 것이다.
"단편화에 감수성"인 항체는 예를 들면, 이의 힌지 영역에서 2개 또는 그 이상의 단편으로 개열되는 것으로 밝혀진 것이다.
"탈아미드화, 산화, 응집, 또는 단편화를 감소시키는"은 상이한 제제에서 조제된 단일클론 항체에 비하여 탈아미드화, 산화, 응집, 또는 단편화를 예방하거나 또는 이의 양을 감소시키는 것으로 의도된다.
조제되는 항체는 본질적으로 순수하고, 바람직하게는 본질적으로 균질할 수 있다 (예를 들면, 오염 단백질 등이 없다). "본질적으로 순수한" 항체는 조성물 내에 단백질의 총 중량에 근거하여, 중량으로 적어도 약 90%, 바람직하게는 중량으로 적어도 약 95%의 항체를 포함하는 조성물을 의미하고, "본질적으로 균질한" 항체는 조성물 내에 단백질의 총 중량에 근거하여, 중량으로 적어도 약 99%의 항체를 포함하는 조성물을 의미한다.
"등장성"은 관심되는 제제가 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는 것으로 의미된다. 등장성 제제는 일반적으로, 약 250 내지 350 mOsm의 삼투압을 갖는다. 등장성은 예를 들면, 증기압 또는 결빙 유형 삼투압계를 이용하여 계측될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, "완충액"은 이의 산-염기 접합체 성분의 작용에 의해 pH에서 변화에 저항하는 완충된 용액을 지칭한다. 일부 구체예에서, 본원 발명의 완충액은 약 4.5 내지 약 7.0, 바람직하게는 약 5.6 내지 약 7.0, 예를 들면 5.6 내지 6.9, 5.7 내지 6.8, 5.8 내지 6.7, 5.9 내지 6.6, 5.9 내지 6.5, 6.0, 6.0 내지 6.4, 또는 6.1 내지 6.3의 범위에서 pH를 갖는다. 한 구체예에서 완충액은 pH 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0을 갖는다. 예를 들면, 인산나트륨은 이러한 범위에서 pH를 제어할 완충액의 실례이다.
본원에서 이용된 바와 같이, "계면활성제"는 표면 활성제, 예컨대 비이온성 계면활성제를 지칭한다. 본원에서 계면활성제의 실례는 폴리소르베이트 (예를 들면, 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80); 폴록사머 (예를 들면, 폴록사머 188); 트리톤; 황산도데실나트륨 (SDS); 라우릴황산나트륨; 나트륨 옥틸 글리코시드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-술포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코크아미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 이소스테아르아미도프로필-베타인 (예를 들면, 라우로아미도프로필); 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 이소스테아르아미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일- 또는 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트; 및 MONAQUATTM 계열 (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.); 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 그리고 에틸렌 및 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들면, 플루로닉, PF68 등); 기타 등등을 포함한다. 한 구체예에서, 본원에서 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다.
약리학적 의미에서, 본원 발명의 맥락에서, 항체의 "치료 효과량"은 항체 치료가 효과적인 장애의 예방 또는 치료에 효과적인 양을 지칭한다. "장애"는 항체를 이용한 치료로부터 유익성을 얻을 임의의 상태이다. 이것은 포유동물을 문제되는 장애에 취약하게 만드는 병리학적 상태를 포함하는 만성과 급성 장애 또는 질환을 포함한다.
"보존제"는 예를 들면, 그 안에 세균 작용을 본질적으로 감소시키고, 따라서 복수 이용 제제의 생산을 용이하게 하는, 제제 내에 임의적으로 포함될 수 있는 화합물이다. 잠재적 보존제의 실례는 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄, 헥사메토늄 염화물, 벤잘코늄 염화물 (알킬벤질디메틸암모늄 염화물의 혼합물, 여기서 알킬 기는 긴 사슬 화합물이다) 및 벤제토늄 염화물을 포함한다. 다른 유형의 보존제는 방향족 알코올, 예컨대 페놀, 부틸 및 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올, 그리고 m-크레졸을 포함한다. 한 구체예에서, 본원에서 보존제는 벤질 알코올이다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "치료"는 임상 병리학의 코스 동안 치료되는 개체 또는 세포의 자연적인 코스를 변경하도록 설계된 임상적 개입을 지칭한다. 바람직한 치료 효과는 질환 진행의 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 그리고 관해 또는 향상된 예후를 포함한다. 예를 들면, 만약 암성 세포의 증식을 감소시키고 (또는 이들 세포를 파괴하고), 질환으로부터 발생하는 증상을 감소시키고, 질환을 겪는 개체의 삶의 질을 증가시키고, 질환을 치료하는 데 필요한 다른 약제의 용량을 감소시키고, 질환의 진행을 지연시키고 및/또는 개체의 생존을 연장하는 것을 포함하지만 이들에 한정되지 않는, 암과 연관된 한 가지 또는 그 이상의 증상이 경감되거나 또는 제거되면, 개체는 성공적으로 "치료"된다.
본원에서 이용된 바와 같이, "질환의 진행을 지연시키는" 것은 상기 질환 (예컨대 암)의 발달을 미루고, 방해하고, 늦추고, 지연시키고, 안정시키고 및/또는 연기시키는 것을 의미한다. 이러한 지연은 질환의 이력 및/또는 치료되는 개체에 따라 시간 길이가 변할 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 유의미한 지연은 개체에서 질환이 발달하지 않는다는 점에서, 실제로 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들면, 후기 단계 암, 예컨대 전이의 발달이 지연될 수 있다.
"효과량"은 특정 장애의 계측 가능한 향상 또는 예방을 달성하는 데 필요한 적어도 최소량이다. 본원에서 효과량은 인자, 예컨대 환자의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 그리고 개체에서 원하는 반응을 이끌어 내는 항체의 능력에 따라서 변할 수 있다. 효과량은 또한, 치료의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 우위에 있는 것이다. 예방적 용도의 경우에, 유익한 또는 원하는 결과는 위험을 제거하거나 또는 감소시키고, 심각도를 줄이고, 또는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동 증상, 이의 합병증 및 상기 질환의 발달 동안 나타나는 중간 병리학적 표현형을 비롯하여 상기 질환의 개시를 지연시키는 것과 같은 결과를 포함한다. 치료적 용도의 경우에, 유익한 또는 원하는 결과는 질환으로부터 발생하는 한 가지 또는 그 이상의 증상을 감소시키고, 질환으로 고통받는 개체의 삶의 질을 증가시키고, 질환을 치료하는 데 필요한 다른 약제의 용량을 감소시키고, 예컨대 표적화를 통해 다른 약제의 효과를 증강하고, 질환의 진행을 지연시키고 및/또는 생존을 연장하는 것과 같은 임상적 결과를 포함한다. 암 또는 종양의 경우에, 약물의 효과량은 암 세포의 숫자를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키고; 주변 장기 내로 암 세포 침윤을 저해하고 (다시 말하면, 얼마간 늦추거나 또는 바람직하게는 중단시키고); 종양 전이를 저해하고 (다시 말하면, 얼마간 늦추고 바람직하게는 중단시키고); 종양 성장을 얼마간 저해하고; 및/또는 장애와 연관된 증상 중에서 한 가지 또는 그 이상을 얼마간 완화하는 데 효과를 가질 수 있다. 효과량은 1회 또는 그 이상의 투여에서 투여될 수 있다. 본원 발명을 위해, 약물, 화합물 또는 제약학적 조성물의 효과량은 예방적 또는 치료적 처치를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하는 데 충분한 양이다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 제약학적 조성물의 효과량은 다른 약물, 화합물 또는 제약학적 조성물과 함께 달성되거나 또는 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "효과량"은 한 가지 또는 그 이상의 치료적 작용제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있고, 그리고 단일 작용제는 한 가지 또는 그 이상의 다른 작용제와 함께, 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 또는 달성되면, 효과량으로 제공된 것으로 고려될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, "함께"는 다른 치료 양상에 더하여 한 가지 치료 양상의 투여를 지칭한다. 따라서, "함께"는 개체에게 다른 치료 양상의 투여 이전, 동안 또는 이후, 한 가지 치료 양상의 투여를 지칭한다.
"장애"는 포유동물을 문제되는 장애에 취약하게 만드는 병리학적 상태를 비롯한 만성과 급성 장애 또는 질환을 포함하지만 이들에 한정되지 않는, 치료로부터 유익성을 얻을 임의의 상태이다.
용어 "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"는 어느 정도의 비정상 세포 증식과 연관되는 장애를 지칭한다. 한 구체예에서, 세포 증식성 장애는 암이다. 한 구체예에서, 세포 증식성 장애는 종양이다.
본원에서 이용된 바와 같이, "종양"은 악성 또는 양성인지에 상관없이 모든 신생물 세포 성장과 증식, 그리고 모든 전암성과 암성 세포와 조직을 지칭하고, 용어 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에서 상호간에 배타적으로 지칭되지 않는다.
용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로, 조절되지 않은 세포 성장에 의해 특징되는, 포유동물에서 생리학적 상태를 지칭하거나 또는 설명한다. 암의 실례는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 그리고 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 이런 암의 더 특정한 실례는 편평상피 세포 암 (예를 들면 상피 편평상피 세포 암), 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평상피 암종을 비롯한 폐암, 복막의 암, 간세포암, 위장관암 및 위장관 버팀질 암을 비롯한 위암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로의 암, 간암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 표재 확산 흑색종, 악성 흑색점 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 소결절성 흑색종, 다발성 골수종 및 B-세포 림프종 (낮은 등급/여포성 비호지킨 림프종 (NHL); 소형 림프성 (SL) NHL; 중간 등급/여포성 NHL; 중간 등급 미만성 NHL: 높은 등급 면역모세포 NHL; 높은 등급 림프모구성 NHL; 높은 등급 소형 비균열 세포 NHL; 거대 질환 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 포함); 만성 림프성 백혈병 (CLL); 급성 림프모구성 백혈병 (ALL); 모양 세포성 백혈병; 만성 골수모구성 백혈병; 그리고 이식후 림프구증식성 질환 (PTLD)뿐만 아니라 모반증과 연관된 비정상적인 혈관 증식, 부종 (예컨대 뇌 종양과 연관된 것), 메이그 증후군, 뇌암뿐만 아니라 두경부암, 그리고 연관된 전이를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 일정한 구체예에서, 본원 발명의 항체에 의한 치료에 순응하는 암은 유방암, 결장직장암, 직장암, 비소세포 폐암, 교모세포종, 비호지킨 림프종 (NHL), 신장 세포 암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 카르시노이드 암종, 두경부암, 난소암, 중피종, 그리고 다발성 골수종을 포함한다. 일부 구체예에서, 암은 소세포 폐암, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 유방 암종, 위암, 결장직장암 (CRC), 그리고 간세포 암종에서 선택된다. 일부 구체예에서, 암은 비소세포 폐암, 결장직장암, 교모세포종 및 유방 암종뿐만 아니라 이들 암의 전이성 형태에서 선택된다.
"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 실례는 알킬화제 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (CYTOXAN®); 알킬 술폰산염 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민을 비롯한 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토제닌 (특히 불라탁신 및 불라타시논); 델타-9-테트라히드로칸나비놀 (드로나비놀, MARINOL®); 베타-라파촌; 라파콜; 콜키시네스; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (HYCAMTIN®), CPT-11 (이리노테칸, CAMPTOSAR® 포함), 아세틸캄포테신, 스코폴렉틴 및 9-아미노캄포테신); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘루테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 산화물 염산염, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소요소 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제 예컨대 에네다인 항생제 (예를 들면, 칼리키아마이신, 특히 칼리키아마이신 감마1I 및 칼리키아마이신 오메가Il (참조: 예를 들면, Nicolaou et al., Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); CDP323, 경구 알파-4 인테그린 저해제; 디네미신 A를 비롯한 디네미신; 에스페라마이신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색단백질 에네다인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (ADRIAMYCIN®, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포솜 주사 (DOXIL®), 리포솜 독소루비신 TLC D-99 (MYOCET®), 페길화된 리포솜 독소루비신 (CAELYX®) 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 푸로마이신, 켈라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 튜베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 대사길항물질 예컨대 메토트렉사트, 젬시타빈 (GEMZAR®), 테가푸르 (UFTORAL®), 카페시타빈 (XELODA®), 에포틸론 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 콤브레타스타틴; 엽산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉사트, 프테로프테린, 트리메트렉사트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피온산염, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤; 항아드레날제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물 예컨대 프로릴산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에니루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트렉사트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티니움 아세트산염; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 질산염; 히드록시요소; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 다당류 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2'-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀 (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제제 (ABRAXANETM) 및 도세탁셀 (TAXOTERE®, Rhome-Poulene Rorer, Antony, France); 클로람부실; 6-티오구아닌; 메르캅토푸린; 메토트렉사트; 백금 작용제 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 (예를 들면, ELOXATIN®) 및 카르보플라틴; 빈블라스틴 (VELBAN®), 빈크리스틴 (ONCOVIN®), 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®) 및 비노렐빈 (NAVELBINE®)을 비롯한, 튜불린 중합화가 미소관을 형성하는 것을 예방하는 빈카; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 류코보린; 노반트론; 에다트렉사트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 국소이성화효소 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 벡사로텐 (TARGRETIN®)을 비롯한, 레티노이드 예컨대 레티노산; 비스포스포네이트 예컨대 클로드로네이트 (예를 들면, BONEFOS® 또는 OSTAC®), 에티드로네이트 (DIDROCAL®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (ZOMETA®), 알렌드로네이트 (FOSAMAX®), 파미드로네이트 (AREDIA®), 틸루드로네이트 (SKELID®), 또는 리세드로네이트 (ACTONEL®); 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 일탈적 세포 증식에 연루된 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 저해하는 것들, 예컨대 예를 들면, PKC-알파, Raf, H-Ras 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R) (예를 들면, 에를로티닙 (TarcevaTM)); 및 세포 증식을 감소시키는 VEGF-A; 백신 예컨대 THERATOPE® 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN® 백신 및 VAXID® 백신; 국소이성화효소 1 저해제 (예를 들면, LURTOTECAN®); rmRH (예를 들면, ABARELIX®); BAY439006 (소라페닙; Bayer); SU-11248 (수니티닙, SUTENT®, Pfizer); 페리포신, COX-2 저해제 (예를 들면 셀레콕시브 또는 에토리콕시브), 프로테오솜 저해제 (예를 들면 PS341); 보르테조밉 (VELCADE®); CCI-779; 티피파르닙 (R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 저해제 예컨대 오블리메르센 나트륨 (GENASENSE®); 픽산트론; EGFR 저해제; 티로신 키나아제 저해제; 세린-트레오닌 키나아제 저해제 예컨대 라파마이신 (시롤리무스, RAPAMUNE®); 파르네실전달효소 저해제 예컨대 로나파르닙 (SCH 6636, SARASARTM); 그리고 상기 중 어느 것의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2가지 또는 그 이상의 병용 예컨대 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어인 CHOP; 및 5-FU 및 류코보린과 병용된 옥살리플라틴 (ELOXATINTM)을 이용한 치료 섭생에 대한 약어인 FOLFOX, 그리고 상기 중 어느 것의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2가지 또는 그 이상의 병용을 포함한다.
본원에서 규정된 바와 같이, 화학요법제는 암의 성장을 증진할 수 있는 호르몬의 효과를 조절하거나, 감소시키거나, 차단하거나 또는 저해하는 행동을 하는 "항호르몬 작용제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다. 이들은 예를 들면, 타목시펜 (NOLVADEX® 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리녹시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 FARESTON.cndot.토레미펜을 비롯한, 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절인자 (SERMs); 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 아로마타아제 효소를 저해하는 아로마타아제 저해제, 예컨대 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE® 메게스트롤 아세트산염, AROMASIN® 엑세메스테인, 포르메스타니, 파드로졸, RIVISOR® 보로졸, FEMARA® 레트로졸 및 ARIMIDEX® 아나스트로졸; 및 항안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤라이드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 일탈적 세포 증식에 연루된 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 저해하는 것들, 예컨대 예를 들면, PKC-알파, Raf 및 H-Ras; 리보자임 예컨대 VEGF 발현 저해제 (예를 들면, ANGIOZYME® 리보자임) 및 HER2 발현 저해제; 백신 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN® 백신 및 VAXID® 백신; PROLEUKIN® rIL-2; LURTOTECAN® 국소이성화효소 1 저해제; ABARELIX® rmRH; 비노렐빈 및 에스페라마이신 (U.S. 특허 번호 4,675,187 참조), 그리고 상기 중 어느 것의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2가지 또는 그 이상의 병용을 포함하지만 이들에 한정되지 않는, 호르몬 그 자체일 수 있다.
본원에서 이용될 때, "성장 저해제"는 시험관내 또는 생체내 중 어느 한 가지에서 세포의 성장을 저해하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 한 구체예에서, 성장 저해제는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 예방하거나 또는 감소시키는 성장 저해 항체이다. 다른 구체예에서, 성장 저해제는 S 기에서 세포의 백분율을 유의미하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 저해제의 실례는 세포 주기 진행을 차단하는 작용제 (S 기 이외의 위치에서), 예컨대 G1 정지 및 M-기 정지를 유도하는 작용제를 포함한다. 고전적인 M-기 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산, 그리고 국소이성화효소 II 저해제 예컨대 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 작용제, 예를 들면, DNA 알킬화제 예컨대 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로르에타민, 시스플라틴, 메토트렉사트, 5-플루오로우라실 및 ara-C는 또한 S-기 정지로 월경한다. 추가 정보는 Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995)에 의한 "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs"라는 제목으로 Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, 특히 p. 13에서 발견될 수 있다. 탁산 (파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 모두 주목 나무로부터 유래된 항암 약물이다. 유럽 주목으로부터 유래된 도세탁셀 (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer)은 파클리탁셀의 반합성 유사체 (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb)이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은 튜불린 이합체로부터 미소관의 조립을 증진하고, 그리고 해중합화를 예방함으로써 미소관을 안정시키는데, 이것은 세포에서 유사분열의 저해를 야기한다.
"방사선요법"은 정상적으로 기능하는 능력을 제한할 만큼 충분한 손상을 세포에 유도하거나 또는 세포를 완전히 파괴하기 위한 지향된 감마선 또는 베타선의 이용인 것으로 의미된다. 치료의 선량 및 지속 기간을 결정하기 위한 많은 방식이 당해 분야에서 알려져 있는 것으로 인지될 것이다. 전형적인 치료는 1회 투여 및 하루에 10 내지 200 단위 (Grays)의 전형적인 선량 범위로서 제공된다.
치료의 목적으로 "피험자" 또는 "개체"는 인간, 사육 및 경작용 동물, 그리고 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물을 비롯한, 포유동물로서 분류된 임의의 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소 등을 지칭한다. 일부 구체예에서, 포유동물은 인간이다.
용어 "항체"는 본원에서 가장 넓은 의미에서 이용되고, 그리고 단일클론 항체 (전장 단일클론 항체 포함), 다중클론 항체, 다중특이적 항체 (예를 들면, 이중특이적 항체), 그리고 항체 단편 (이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내기만 하면)을 특정적으로 커버한다.
"단리된" 항체는 자연 환경의 성분으로부터 확인되고, 분리되고 및/또는 회수된 것이다. 자연 환경의 오염체 성분은 상기 항체에 대한 연구적, 진단적 또는 치료적 이용을 간섭하는 물질이고, 그리고 효소, 호르몬, 그리고 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 (1) 예를 들면, 로리법에 의해 결정될 때 항체의 중량으로 95%보다 크게, 그리고 일부 구체예에서, 중량으로 99%보다 크게; (2) 예를 들면, 스피닝 컵 서열분석기의 이용에 의해 N 말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 획득하는 데 충분한 정도까지, 또는 (3) 예를 들면, 쿠마시 블루 또는 은 염색을 이용하여 환원 또는 비환원 조건하에 SDS-PAGE에 의해 균질성까지 정제된다. 단리된 항체는 재조합 세포 내에서 원지에서 항체를 포함하는데, 그 이유는 항체의 자연 환경의 적어도 한 가지 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 하지만, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
"선천적 항체"는 통상적으로, 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성되는 약 150,000 달톤의 이종사합체성 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되고, 반면 이황화 연쇄의 숫자는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄 사이에서 서로 다르다. 각 중쇄와 경쇄는 또한, 규칙적으로 이격된 사슬내 이황화 다리를 갖는다. 각 중쇄는 한쪽 단부에서 가변 도메인 (VH), 그 이후에 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 한쪽 단부에서 가변 도메인 (VL) 및 다른 단부에서 불변 도메인을 갖는다; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 첫 번째 불변 도메인과 함께 정렬되고, 그리고 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 함께 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이에 인터페이스를 형성하는 것으로 생각된다.
용어 "불변 도메인"은 항원 결합 부위를 내포하는 면역글로불린의 다른 부분인 가변 도메인에 비하여 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인 (집합적으로, CH) 및 경쇄의 CHL (또는 CL) 도메인을 내포한다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로, 항체의 최대 가변 부분이고 항원 결합 부위를 내포한다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 일정한 부분이 항체 사이에서 서열에서 광범위하게 상이하고, 그리고 특정 항원에 대한 각 특정 항체의 결합과 특이성에 이용된다는 사실을 지칭한다. 하지만, 가변성은 항체의 가변 도메인의 전역에서 균등하게 분포되지 않는다. 이것은 경쇄와 중쇄 가변 도메인 둘 모두에서 초가변 영역 (HVR)으로 불리는 3개의 분절에서 농축된다. 가변 도메인의 더 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 선천적 중쇄와 경쇄의 가변 도메인은 각각, 3개의 HVR에 의해 연결된, 베타-시트 입체형상을 주로 채택하는 4개의 FR 영역을 포함하고, 이들은 루프 연결을 형성하고, 그리고 일부 경우에, 베타-시트 구조의 일부를 형성한다. 각 사슬에서 HVR은 FR 영역에 의해 매우 근접하여 묶여지고, 그리고 다른 사슬로부터 HVR과 함께, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)을 참조한다). 불변 도메인은 항체를 항원에 결합시키는 데 직접적으로 관련되지 않지만, 다양한 작동체 기능, 예컨대 항체 의존성 세포 독성에서 항체의 참여를 나타낸다.
임의의 포유류 종으로부터 항체 (면역글로불린)의 "경쇄"는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 근거하여, 카파("κ")와 람다("λ")로 불리는 2가지 명확하게 상이한 유형 중에서 한 가지에 배정될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 IgG "아이소타입" 또는 "하위부류"는 그들의 불변 영역의 화학적 및 항원성 특징에 의해 규정되는 면역글로불린의 임의의 하위부류인 것으로 의미된다.
중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 항체 (면역글로불린)는 상이한 부류에 배정될 수 있다. 면역글로불린의 5가지 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있고, 그리고 이들 중에서 몇몇은 하위부류 (아이소타입), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 더욱 세분될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각, α, γ, ε, γ 및 μ로 불린다. 면역글로불린의 상이한 부류의 이들 아단위 구조 및 3차원 입체형상은 널리 알려져 있고, 그리고 예를 들면, Abbas et al. Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders, Co., 2000)에서 전반적으로 설명된다. 항체는 항체 및 하나 또는 그 이상의 다른 단백질 또는 펩티드의 공유 또는 비공유 연관에 의해 형성되는, 더 큰 융합 분자의 부분일 수 있다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체 및 "전체 항체"는 아래에 규정된 바와 같은 항체 단편이 아닌, 실제적으로 무손상 형태에서 항체를 지칭하기 위해 본원에서 교체가능하게 이용된다. 이들 용어는 특히, Fc 영역을 내포하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본원에서 목적을 위해 "나신 항체"는 세포독성 모이어티 또는 방사성 표지에 접합되지 않는 항체이다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 부분을 포함한다, 바람직하게는 이의 항원 결합 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에서 설명된 항체 단편은 항원 결합 단편이다. 항체 단편의 실례는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단일 사슬 항체 분자; 그리고 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편을 생산하고, 이들은 각각 단일 항원 결합 부위를 갖고, 그리고 쉽게 결정화하는 능력을 반영하는 명칭인 잔여 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 F(ab')2 단편을 산출하는데, 이것은 2개의 항원 결합 부위를 갖고 항원을 여전히 교차연결할 수 있다.
"Fv"는 완전 항원 결합 부위를 내포하는 최소 항체 단편이다. 한 구체예에서, 2-사슬 Fv 종류는 단단한, 비공유 연관에서 하나의 중쇄와 하나의 경쇄 가변 도메인의 이합체로 구성된다. 단일 사슬 Fv (scFv) 종류에서, 하나의 중쇄와 하나의 경쇄 가변 도메인은 이러한 경쇄와 중쇄가 2-사슬 Fv 종류에서와 유사한 "이합체성" 구조로 연관할 수 있도록 유연한 펩티드 링커에 의해 공유 연결될 수 있다. 이러한 입체형상에서 각 가변 도메인의 3개의 HVR은 상호작용하여 VH-VL 이합체의 표면상에서 항원 결합 부위를 규정한다. 집합적으로, 6개 HVR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 하지만, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 단지 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)도 비록 전체 결합 부위보다 친화성이 낮긴 하지만, 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 중쇄와 경쇄 가변 도메인을 내포하고, 그리고 또한, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 첫 번째 불변 도메인 (CH1)을 내포한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터 하나 또는 그 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 소수 잔기의 부가에 의해 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 본원에서, 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 자유 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 Fab' 단편의 쌍으로서 최초 생산되었는데, 이들은 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는다. 항체 단편의 다른 화학적 연계 역시 알려져 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH와 VL 도메인을 포함하는데, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에서 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더욱 포함하는데, 이것은 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 한다. scFv에 관한 검토를 위해, 예를 들면, Pluckth
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n, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315를 참조한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 지칭하는데, 이들 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬 (VH-VL) 내에서 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 너무 짧아 동일한 사슬 상에서 두 도메인 사이에 대합을 허용하지 않는 링커를 이용함으로써, 이들 도메인은 다른 사슬의 상보성 도메인과 대합을 이루고 2개의 항원 결합 부위를 창출하도록 강제된다. 디아바디는 이가 또는 이중특이적일 수 있다. 디아바디는 예를 들면, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 그리고 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)에서 더 충분히 설명된다. 트리아바디 및 테트라바디 역시 Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)에서 설명된다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실제적으로 균질한 항체의 모집단으로부터 획득된 항체를 지칭한다, 예를 들면, 상기 모집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 돌연변이, 예를 들면, 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단일클론"은 구별된 항체의 혼합물이 아니라는, 항체의 특징을 표시한다. 일정한 구체예에서, 이런 단일클론 항체는 전형적으로, 표적에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 포함하는데, 여기서 표적-결합 폴리펩티드 서열은 복수의 폴리펩티드 서열로부터 단일 표적 결합 폴리펩티드 서열의 선택을 포함하는 과정에 의해 획득되었다. 예를 들면, 선택 과정은 복수의 클론, 예컨대 하이브리도마 클론, 파지 클론, 또는 재조합 DNA 클론의 풀로부터 고유한 클론의 선별일 수 있다. 선택된 표적 결합 서열은 예를 들면, 표적에 대한 친화성을 향상시키고, 표적 결합 서열을 인간화하고, 세포 배양 동안 이의 생산을 향상시키고, 생체내에서 이의 면역원을 감소시키고, 다중특이적 항체를 창출하고, 기타 등등을 위해 더욱 변경될 수 있고, 그리고 변경된 표적 결합 서열을 포함하는 항체 역시 본원 발명의 단일클론 항체인 것으로 이해되어야 한다. 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 지향된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다중클론 항체 제조물과 대조적으로, 단일클론 항체 제조물의 각 단일클론 항체는 항원 상에서 단일 결정인자에 대해 지향된다. 단일클론 항체 제조물은 그들의 특이성에 더하여, 전형적으로 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는다는 점에서 유리하다.
수식어 "단일클론"은 항체의 실제적으로 균질한 모집단으로부터 획득되는 것으로서 항체의 특징을 표시하고, 그리고 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않는다. 예를 들면, 본원 발명에 따라서 이용되는 단일클론 항체는 예를 들면, 하이브리도마 방법 (예를 들면, Kohler and Milstein, Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), 재조합 DNA 방법 (예를 들면, U.S. 특허 번호 4,816,567을 참조한다), 파지 전시 기술 (예를 들면, Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)를 참조한다), 그리고 인간 면역글로불린 서열을 인코딩하는 인간 면역글로불린 좌위 또는 유전자 중에서 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하기 위한 기술 (예를 들면, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); U.S. 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016; Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 그리고 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)를 참조한다)를 비롯한 다양한 기술에 의해 만들어질 수 있다.
본원에서 단일클론 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 또는 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 또는 이들 서열에 상동하고, 반면 사슬(들)의 나머지 부분이 다른 종으로부터 유래되거나 또는 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 또는 이들 서열에 상동한 "키메라" 항체뿐만 아니라 원하는 생물학적 활성을 나타내기만 하면, 이런 항체의 단편을 특정적으로 포함한다 (예를 들면, U.S. 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)를 참조한다). 키메라 항체는 PRIMATTZFD® 항체를 포함하는데, 여기서 상기 항체의 항원 결합 영역은 예를 들면, 마카크 원숭이를 관심되는 항원으로 면역화함으로써 생산된 항체로부터 유래된다.
비인간 (예를 들면, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 내포하는 키메라 항체이다. 한 구체예에서, 인간화 항체는 수용자의 HVR로부터 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및/또는 수용력을 갖는, 비인간 종 (공여자 항체), 예컨대 생쥐, 쥐, 토끼 또는 비인간 영장류의 HVR로부터 잔기에 의해 대체되는 인간 면역글로불린 (수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 FR 잔기가 상응하는 비인간 잔기에 의해 대체된다. 게다가, 인간화 항체는 수용자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 더욱 정밀화하기 위해 만들어질 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실제적으로 모두 포함할 것인데, 여기서 초가변 루프의 전부 또는 실제적으로 전부가 비인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 그리고 FR의 전부 또는 실제적으로 전부가 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 임의적으로 또한, 전형적으로 인간 면역글로불린의 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가 상세를 위해, 예를 들면, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)을 참조한다. 또한, 예를 들면 Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); 그리고 U.S. 특허 번호 6,982,321 및 7,087,409를 참조한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 소유하고 및/또는 본원에서 개시된 바와 같은 인간 항체를 만들기 위한 임의의 기술을 이용하여 만들어진 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 특정적으로 배제한다. 인간 항체는 파지 전시 라이브러리를 비롯한, 당해 분야에서 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). 인간 단일클론 항체의 제조를 위해 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)에서 설명된 방법이 또한 가용하다. 또한, van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)를 참조한다. 인간 항체는 항원 공격에 대한 응답으로 이런 항체를 생산하도록 변형되지만, 내인성 좌위에 장애가 있는 유전자도입 동물, 예컨대 면역화된 제노마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다 (예를 들면, XENOMOUSETM 기술에 관하여 U.S. 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584를 참조한다). 또한, 인간 B-세포 하이브리도마 기법을 통해 산출된 인간 항체에 관하여, 예를 들면, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)를 참조한다.
"종-의존성 항체"는 이것이 두 번째 포유류 종으로부터 유래된 항원의 동족체에 대해 갖는 것보다, 첫 번째 포유류 종으로부터 항원에 대해 더 강한 결합 친화성을 갖는 것이다. 통상적으로, 종-의존성 항체는 인간 항원에 "특이적으로 결합하지만" (예를 들면, 약 1x10-7 M 이내, 약 1x10-8 M 이내, 또는 약 1x10-9 M 이내의 결합 친화성 (Kd) 값을 갖지만), 두 번째 비인간 포유류 종으로부터 유래된 항원의 동족체에 대해, 인간 항원에 대한 이의 결합 친화성보다 적어도 약 50배, 또는 적어도 약 500배, 또는 적어도 약 1000배 약한 결합 친화성을 갖는다. 종-의존성 항체는 앞서 규정된 바와 같은 다양한 유형의 항체 중 어느 것일 수 있고, 그리고 인간화 또는 인간 항체일 수 있다.
본원에서 이용될 때, 용어 "초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"는 서열에서 초가변성이고 및/또는 구조적으로 규정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH에서 3개 (H1, H2, H3), 그리고 VL에서 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 선천적 항체에서, H3 및 L3은 6개 HVR 중에서 최대 다양성을 나타내고, 그리고 H3은 특히, 항체에 뛰어난 특이성을 부여하는 데 고유한 역할을 수행하는 것으로 생각된다. 참조: 예를 들면, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003). 실제로, 중쇄 단독으로 구성되는 자연 발생 낙타과 항체는 경쇄의 부재에서도 기능적이고 안정적이다. 예를 들면, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)을 참조한다.
다수의 HVR 묘사가 본원에서 이용되고 포괄된다. Kabat 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열 가변성에 근거되고, 그리고 가장 흔히 이용되는 것이다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia는 그 대신에, 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR은 Kabat HVR 및 Chothia 구조적 루프 사이에 타협을 나타내고, 그리고 Oxford Molecular의 AbM 항체 모형화 소프트웨어에 의해 이용된다. "접촉" HVR은 가용한 복합 결정 구조의 분석에 근거된다. 이들 HVR 각각으로부터 잔기는 아래에서 제시된다.
루프 Kabat AbM Chothia 접촉
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat 넘버링)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia 넘버링)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
HVR은 아래와 같은 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3), 그리고 VH에서 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102 (H3). 가변 도메인 잔기는 이들 정의 각각에 대해 Kabat et al., 위와 같음에 따라 넘버링된다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 규정된 바와 같은 HVR 잔기 이외에 가변 도메인 잔기이다.
용어 "Kabat의 경우에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링" 또는 "Kabat의 경우에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", 그리고 이들의 변이는 Kabat et al., 위와 같음에서 항체의 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 이용되는 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 이용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축, 또는 이것 내로 삽입에 상응하는 더 적은 또는 추가 아미노산을 내포할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입물 (Kabat에 따라 잔기 52a), 그리고 중쇄 FR 잔기 82 뒤에 삽입된 잔기 (예를 들면, Kabat에 따라 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 넘버링은 항체의 서열 및 "표준" Kabat 넘버링된 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해 소정의 항체에 대해 결정될 수 있다.
가변 도메인 내에 잔기 (대략, 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113)를 지칭할 때, Kabat 넘버링 시스템이 일반적으로 이용된다 (예를 들면, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 색인"은 일반적으로, 면역글로불린 중쇄 불변 영역에서 잔기를 지칭할 때 이용된다 (예를 들면, Kabat et al., 위와 같음에서 보고된 EU 색인). "Kabat의 경우에서와 같은 EU 색인"은 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다.
표현 "선형 항체"는 Zapata et al. (1995 Protein Eng, 8(10):1057-1062)에서 설명된 항체를 지칭한다. 간단히 말하면, 이들 항체는 한 쌍의 탠덤 Fd 분절 (VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는데, 이들은 상보성 경쇄 폴리펩티드와 함께, 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적이다"는 계측 가능하고 재현 가능한 상호작용, 예컨대 표적 및 항체 사이의 결합을 지칭하는데, 이것은 생물학적 분자를 비롯한 분자의 이질성 모집단의 존재에서 표적의 존재를 결정한다. 예를 들면, 표적 (이것은 에피토프일 수 있다)에 특이적으로 결합하는 항체는 이것이 다른 표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화성으로, 결합능으로, 더 쉽게 및/또는 더 큰 지속 기간에서 이러한 표적에 결합하는 항체이다. 한 구체예에서, 관련 없는 표적에 항체의 결합의 정도는 예를 들면, 방사면역검정 (RIA)에 의해 계측될 때 표적에 대한 상기 항체의 결합의 약 10%보다 적다 일정한 구체예에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, 또는 ≤ 0.1 nM의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 일정한 구체예에서, 항체는 상이한 종으로부터 단백질 사이에서 보존되는 단백질 상에 에피토프에 특이적으로 결합한다. 다른 구체예에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있지만, 이를 필요로 하지는 않는다.
II. 항체 제제 및 제조물
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 바와 같은 항-PD-L1 항체를 포함하는 액상 제약학적 제제, 예컨대 피하 투여를 위한 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공된다. 일부 구체예에서, 제제는 항-PD-L1 항체 (예를 들면, 단일클론 항체), 수크로오스, 완충액 및 계면활성제를 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 5.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구체예에서, 제제는 메티오닌을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에서 설명된 제제 내에 항-PD-L1 항체는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 완충액은 히스티딘 (예를 들면, 히스티딘 아세트산염)이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 완충액은 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 약 200 mM 내지 약 280 mM이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 계면활성제는 폴리소르베이트 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 폴리소르베이트는 약 0.005% (w/v) 내지 약 0.08% (w/v)의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제는 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도에서 메티오닌을 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 약 5.0 내지 약 6.3의 pH를 갖는다. 일부 구체예에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도에서 본원에서 설명된 바와 같은 항-PD-L1 항체, 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 200 mM 내지 약 280 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.04% (w/v) 내지 약 0.08% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트, 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도에서 메티오닌, 그리고 약 5.6 내지 약 6.0의 pH를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 히알루론산분해효소 (예를 들면, 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPh20))를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도에서 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPh20)를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
일부 구체예에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도에서 본원에서 설명된 바와 같은 항-PD-L1 항체, 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 200 mM 내지 약 280 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.03% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트, 그리고 약 5.3 내지 약 5.7의 pH를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 -20℃에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 2 년, 적어도 3 년, 또는 적어도 4 년 동안 안정된다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 2-8℃에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 2 년, 또는 적어도 3 년 동안 안정된다. 일부 구체예에서, 보관 후, 항체는 보관 전, 다시 말하면, 제약학적 제제가 제조된 시점에 나타내진 생물학적 활성 (예를 들면, 표적에 결합, 또는 치료 효능)의 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%를 유지한다.
일정한 구체예에서, 제제는 약 40℃에서 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 28일, 또는 그 이상 동안 안정된다. 일정한 구체예에서, 제제는 약 40℃에서 안정된다 for 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 그 이상 주. 일정한 구체예에서, 제제는 약 25℃에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월, 또는 그 이상 동안 안정된다. 일정한 구체예에서, 제제는 약 5℃에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월, 또는 그 이상 동안 안정된다. 일정한 구체예에서, 제제는 약 -20℃에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48개월, 또는 그 이상 동안 안정된다. 일정한 구체예에서, 제제는 5℃ 또는 -20℃에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48개월, 또는 그 이상 동안 안정된다. 게다가, 일부 구체예에서 제제는 제제의 동결 (예를 들면, -20℃, -40℃ 또는 -70℃로) 및 해동 이후에, 예를 들면 1, 2, 3, 4 또는 5회 주기의 동결과 해동 이후에 안정된다.
A. 항-PD-L1 항체
일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 항-PD-L1 항체이다. PDL1, B7-H1, B7-4, CD274 및 B7-H로서 또한 알려져 있는 PD-L1 (예정된 세포 사멸 1 리간드 1)은 막경유 단백질이고, 그리고 이의 PD-1과의 상호작용은 T-세포 활성화 및 사이토킨 생산을 저해한다. 일부 구체예에서, 본원에서 설명된 항-PD-L1 항체는 인간 PD-L1에 결합한다. 본원에서 설명된 제제를 이용하여 조제될 수 있는 항-PDL1 항체의 실례는 본원에서 참조로서 편입되는 PCT 특허 출원 WO 2010/077634 A1, US 8,217,149 및 US 2016/0319022에서 설명된다.
일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 PD-L1 및 PD-1 사이의 및/또는 PD-L1 및 B7-1 사이의 결합을 저해할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv 및 (Fab')2 단편으로 구성된 군에서 선택되는 항체 단편이다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 전장 항체이다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 인간 항체이다.
WO 2010/077634 A1, US 8,217,149 및 US 2016/0319022에서 설명된 항-PD-L1 항체는 본원에서 설명된 제제에서 조제될 수 있다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 제제 내에 항-PD-L1 항체는 다음을 포함한다:
(a) 경쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1;
(2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2;
(3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
(b) 중쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1;
(2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2;
(3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역.
또 다른 구체예에서, 본원에서 설명된 제제 내에 항-PD-L1 항체는 중쇄와 경쇄 서열을 포함하고, 여기서:
(a) 중쇄 가변 영역 서열은 중쇄 가변 영역 서열: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (서열 번호: 8)에 적어도 85% 서열 동일성을 갖거나, 또는
(b) 경쇄 가변 영역 서열은 경쇄 가변 영역 서열: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK (서열 번호: 7)에 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다.
일부 구체예에서, 제제 내에 상기 단일클론 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 상기 단일클론 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역, 그리고 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 추가의 특정한 양상에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 더욱 포함한다. 다른 추가의 양상에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3 및 IgG4로 구성된 군에서 선택된다. 다른 추가의 특정한 양상에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 다른 추가의 양상에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B 및 IgG3으로 구성된 군에서 선택된다. 다른 추가의 양상에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 다른 추가의 특정한 양상에서, 항체는 감소되거나 또는 최소 작동체 기능을 갖는다. 다른 추가의 특정한 양상에서, 최소 작동체 기능은 "작동체-없는 Fc 돌연변이" 또는 비글리코실화로부터 발생한다. 또 다른 추가의 구체예에서, 작동체-없는 Fc 돌연변이는 불변 영역에서 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
또 다른 구체예에서, 본원에서 설명된 제제 내에 항-PD-L1 항체는 중쇄와 경쇄 서열을 포함하고, 여기서:
(a) 중쇄 서열은 하기 중쇄 서열에 적어도 85% 서열 동일성을 갖고: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:10), 또는
(b) 경쇄 서열은 하기 경쇄 서열에 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:9).
일부 구체예에서, 중쇄와 경쇄 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체가 제공되고, 여기서 경쇄 서열은 서열 번호: 9의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 구체예에서, 중쇄와 경쇄 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체가 제공되고, 여기서 중쇄 서열은 서열 번호: 10의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 구체예에서, 중쇄와 경쇄 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체가 제공되고, 여기서 경쇄 서열은 서열 번호: 9의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖고, 그리고 중쇄 서열은 서열 번호: 10의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다.
일부 구체예에서, 중쇄와 경쇄를 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체가 제공되고, 여기서 경쇄는 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하고 중쇄는 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 제제 내에 항-PD-L1 항체는 다음을 포함한다:
(a) 경쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1;
(2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2;
(3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
(b) 중쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1;
(2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2;
(3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 상기 단일클론 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역, 그리고 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역에 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 제제 내에 항-PD-L1 항체는 다음을 포함한다:
(a) 경쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1;
(2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2;
(3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
(b) 중쇄 가변 영역으로서:
(1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1;
(2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2;
(3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 중쇄와 경쇄 서열을 포함하고, 여기서 경쇄 서열은 서열 번호: 9의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 구체예에서, 중쇄와 경쇄 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체가 제공되고, 여기서 중쇄 서열은 서열 번호: 10의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 구체예에서, 중쇄와 경쇄 서열을 포함하는 단리된 항-PD-L1 항체가 제공되고, 여기서 경쇄 서열은 서열 번호: 9의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖고, 그리고 중쇄 서열은 서열 번호: 10의 아미노산 서열에 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다.
일부 구체예에서, 단리된 항-PD-L1 항체는 산화된 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 산화된 단일클론 항체는 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 산화된 단일클론 항체는 W33, W50 또는 W101 중에서 하나 또는 그 이상이 산화되는, 서열 번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 산화된 단일클론 항체는 M253 및 M429 중에서 하나 또는 그 이상이 산화되는, 서열 번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 산화된 단일클론 항체는 보관 전, 다시 말하면, 제약학적 제제가 제조된 시점에 나타내진 생물학적 활성 (예를 들면, 표적에 결합, 또는 치료 효능)의 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%를 유지한다.
일부 구체예에서, 단리된 항-PD-L1 항체는 당화된 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 당화된 단일클론 항체는 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 당화된 단일클론 항체는 하나 또는 그 이상의 리신이 당화되는, 서열 번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 당화된 단일클론 항체는 K65가 당화되는, 서열 번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 구체예에서, 단리된 항-PD-L1 항체는 비글리코실화된다.
일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙 (TECENTRIQ®)이다.
본원에서 임의의 구체예에서, 단리된 항-PDL1 항체는 인간 PD-L1, 예를 들면, UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호 Q9NZQ7.1에서 도시된 바와 같은 인간 PD-L1, 또는 이의 변이체에 결합할 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본원에서 설명된 임의의 항체를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 구체예에서, 핵산은 임의의 전술된 항-PD-L1 항체를 인코딩하는 핵산의 발현에 적합한 벡터를 더욱 포함한다. 다른 추가의 특정한 양상에서, 벡터는 핵산의 발현에 적합한 숙주 세포 내에 있다. 다른 추가의 특정한 양상에서, 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포이다. 다른 추가의 특정한 양상에서, 진핵 세포는 포유류 세포, 예컨대 중국 햄스터 난소 (CHO)이다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 당해 분야에서 공지된 방법을 이용하여, 예를 들면, 발현에 적합한 형태에서 임의의 전술된 항-PD-L1 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 핵산을 내포하는 숙주 세포를 이런 항체 또는 단편을 생산하는 데 적합한 조건하에 배양하고, 그리고 상기 항체 또는 단편을 회수하는 단계를 포함하는 과정에 의해 만들어질 수 있다.
B. 항체 제조
일반적으로, 연구, 검사 및 임상에서 이용을 위한 항체를 제조하기 위한 다양한 방법론은 당해 분야에서 충분히 확립된다. 제제 내에 항체는 항체를 산출하기 위한 당해 분야에서 가용한 기술을 이용하여 제조되는데, 이들의 예시적인 방법은 WO 2010/077634 A1, US 8,217,149 및 US 2016/0319022에서 설명된다.
C. 생물학적으로 활성 항체
전술된 바와 같이 생산된 항체는 치료적 관점으로부터 유익한 특성을 갖는 항체를 선택하거나 또는 항체의 생물학적 활성을 유지하는 제제와 조건을 선택하기 위한 한 가지 또는 그 이상의 "생물학적 활성" 검정이 진행될 수 있다. 항체는 자신이 조성된 항원에 결합하는 능력에 대해 검사될 수 있다. 예를 들면, 항-PD-L1 항체의 경우에, 상기 항체의 항원 결합 성질은 PD-L1에 결합하는 능력을 검출하는 검정에서 평가될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체의 결합은 예를 들면, 포화 결합; ELISA; 및/또는 경쟁 검정 (예를 들면, RIA의)에 의해 결정될 수 있다. 또한, 항체는 예를 들면, 치료제로서 이의 유용성을 평가하기 위해, 다른 생물학적 활성 검정이 진행될 수도 있다. 이런 검정은 당해 분야에서 공지되고, 그리고 상기 항체에 대한 표적 항원 및 의도된 용도에 의존한다. 예를 들면, 항체에 의한 PD-L1 차단의 생물학적 효과가 CD8+T 세포, 림프성 맥락수막염 바이러스 (LCMV) 생쥐 모형 및/또는 예를 들면 US 특허 8,217,149에서 설명된 바와 같은 동계 종양 모형에서 사정될 수 있다.
관심되는 항원 상에서 특정 에피토프에 결합하는 항체 (예를 들면, PD-L1에 대한 실례의 항-PDL1 항체의 결합을 차단하는 것들)를 선별검사하기 위해, 일과적인 교차 차단 검정, 예컨대 Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)에서 설명된 것이 수행될 수 있다. 대안으로, 항체가 관심되는 에피토프에 결합하는지를 결정하기 위해, 예를 들면, Champe et al., J. Biol. Chem. 270:1388-1394 (1995)에서 설명된 바와 같은 에피토프 지도화가 수행될 수 있다.
D. 제제의 제조
관심되는 항체의 제조 후 (예를 들면, 본원에서 개시된 바와 같이 조제될 수 있는 항체를 생산하기 위한 기술은 아래에서 상술될 것이고 당해 분야에서 공지된다), 이것을 포함하는 제약학적 제제가 제조된다. 일정한 구체예에서, 조제되는 항체는 사전 동결 건조가 실행되지 않았고, 그리고 본원에서 관심되는 제제는 수성 제제이다. 일정한 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다. 일정한 구체예에서, 항체는 전장 항체이다. 한 구체예에서, 제제에서 항체는 항체 단편, 예컨대 F(ab')2이고, 이러한 사례에서 전장 항체에 대해 발생할 수 없는 문제 (예컨대, Fab에 대한 상기 항체의 클리핑)가 다뤄질 필요가 있을 수 있다. 제제 내에 존재하는 항체의 치료 효과량은 예를 들면, 투여의 원하는 용량 용적 및 양식(들)을 고려함으로써 결정된다. 약 100 g/L 내지 약 150 g/L, 또는 약 110 g/L 내지 약 140 g/L, 또는 약 120 g/L 내지 약 130 g/L은 본원에서 설명된 제제 내에 바와 같은 항체의 예시적인 농도이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 110 g/L 내지 약 140 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 120 g/L 내지 약 130 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 100 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 105 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 110 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 115 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 120 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 125 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 130 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 135 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 140 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 145 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 약 150 g/L의 농도로 존재한다. 100 g/L 내지 150 g/L, 또는 110 g/L 내지 140 g/L, 또는 120 g/L 내지 130 g/L은 본원에서 설명된 제제 내에 바와 같은 항체의 예시적인 농도이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 100 g/L 내지 150 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 110 g/L 내지 140 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 120 g/L 내지 130 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 100 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 105 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 110 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 115 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 120 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 125 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 130 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 135 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 140 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 145 g/L의 농도로 존재한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 150 g/L의 농도로 존재한다.
상기 항체를 pH-완충된 용액에 포함하는 액상 제약학적 제제가 제조된다. 본원 발명의 완충액은 약 5.0 내지 약 6.5의 범위에서 pH를 갖는다. 일정한 구체예에서 pH는 약 5.3 내지 약 6.0의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.6 내지 약 6.0의 범위 안에 있거나, 약 5.7 내지 약 5.9의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.3 내지 약 5.7의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.4 내지 약 5.6의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.5 내지 약 5.8의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.0 내지 약 6.0의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.1 내지 약 5.8의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.2 내지 약 5.8의 범위 안에 있거나, pH는 약 5.3 내지 약 5.8의 범위 안에 있거나, 또는 pH는 약 5.4 내지 약 5.8의 범위 안에 있다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.2 또는 약 5.2의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.3 또는 약 5.3의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.4 또는 약 5.4의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.5 또는 약 5.5의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.6 또는 약 5.6의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.7 또는 약 5.7의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.8 또는 약 5.8의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 5.9 또는 약 5.9의 pH를 갖는다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 제제는 6.0 또는 약 6.0의 pH를 갖는다. pH를 이러한 범위 내에서 제어할 완충액의 실례는 히스티딘 (예컨대 L-히스티딘) 또는 아세트산나트륨을 포함한다. 일정한 구체예에서, 완충액은 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염 또는 아세트산나트륨을 내포한다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 완충액은 약 15 mM 내지 약 25 mM, 약 16 mM 내지 약 25 mM, 약 17 mM 내지 약 25 mM, 약 18 mM 내지 약 25 mM, 약 19 mM 내지 약 25 mM, 약 20 mM 내지 약 25 mM, 약 21 mM 내지 약 25 mM, 약 22 mM 내지 약 25 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 또는 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염 또는 아세트산나트륨을 내포한다. 일정한 구체예에서, 완충액은 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염을 내포한다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 완충액은 약 15 mM 내지 약 25 mM, 약 16 mM 내지 약 25 mM, 약 17 mM 내지 약 25 mM, 약 18 mM 내지 약 25 mM, 약 19 mM 내지 약 25 mM, 약 20 mM 내지 약 25 mM, 약 21 mM 내지 약 25 mM, 약 22 mM 내지 약 25 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 또는 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염을 내포한다. 본원 발명의 일정한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염을 내포한다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.0에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.1에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.2에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.3에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.4에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.5에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.6에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.7에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.8에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 5.9에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 6.0에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 6.1에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 6.2에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 6.3에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 6.4에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 약 20 mM의 양, pH 6.5에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.0에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.1에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.2에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.3에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.4에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.5에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.6에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.7에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.8에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 5.9에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 6.0에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 6.1에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 6.2에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 6.3에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 6.4에서 히스티딘 아세트산염이다. 한 구체예에서, 완충액은 20 mM의 양, pH 6.5에서 히스티딘 아세트산염이다.
제제는 약 200 mM 내지 약 280 mM의 양에서 수크로오스를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 약 210 mM 내지 약 280 mM, 약 220 mM 내지 약 280 mM, 약 230 mM 내지 약 280 mM, 약 240 mM 내지 약 280 mM, 약 200 mM 내지 약 270 mM, 약 200 mM 내지 약 260 mM, 약 200 mM 내지 약 240 mM, 약 210 mM 내지 약 270 mM, 약 220 mM 내지 약 260 mM, 약 230 mM 내지 약 250 mM, 또는 약 235 mM 내지 약 245 mM이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 약 200 mM, 약 210 mM, 약 220 mM, 약 230 mM, 약 235 mM, 약 240 mM, 약 245 mM, 약 250 mM, 약 260 mM, 약 270 mM, 또는 약 280 mM이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 약 240 mM이다. 제제는 200 mM 내지 280 mM의 양에서 수크로오스를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 210 mM 내지 280 mM, 220 mM 내지 280 mM, 230 mM 내지 280 mM, 240 mM 내지 280 mM, 200 mM 내지 270 mM, 200 mM 내지 260 mM, 200 mM 내지 240 mM, 210 mM 내지 270 mM, 220 mM 내지 260 mM, 230 mM 내지 250 mM, 또는 235 mM 내지 245 mM이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 200 mM, 210 mM, 220 mM, 230 mM, 약 235 mM, 240 mM, 245 mM, 250 mM, 260 mM, 270 mM, 또는 280 mM이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 수크로오스는 240 mM이다.
일부 구체예에서, 계면활성제가 항체 제제에 첨가된다. 예시적인 계면활성제는 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 (예를 들면, 폴리소르베이트 20, 80 등) 또는 폴록사머 (예를 들면, 폴록사머 188 등)를 포함한다. 첨가되는 계면활성제의 양은 이것이 조제된 항체의 응집을 감소시키고 및/또는 제제에서 미립자의 형성을 최소화하고 및/또는 흡착을 감소시키도록 하는 정도이다. 예를 들면, 계면활성제는 약 0.005% (w/v) 내지 약 0.08% (w/v)의 양으로 제제 내에 존재할 수 있다. 일부 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 약 0.005% 내지 약 0.07%, 약 0.005% 내지 약 0.065%, 약 0.005% 내지 약 0.06%, 약 0.01% 내지 약 0.08%, 약 0.015% 내지 약 0.08%, 약 0.02% 내지 약 0.08%, 약 0.01% 내지 약 0.03%, 약 0.01% 내지 약 0.025%, 약 0.01% 내지 약 0.02%, 약 0.015% 내지 약 0.03%, 약 0.02% 내지 약 0.03%, 약 0.015% 내지 약 0.025%, 약 0.02% 내지 약 0.04%, 약 0.05% 내지 약 0.08%, 약 0.055% 내지 약 0.08%, 약 0.06% 내지 약 0.08%, 약 0.05% 내지 약 0.07%, 약 0.05% 내지 약 0.065%, 약 0.055% 내지 약 0.065%, 약 0.06% 내지 약 0.07%, 약 0.06% 내지 약 0.065%, 약 0.055% 내지 약 0.06%, 또는 약 0.055% 내지 약 0.07%이다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 약 0.02% (w/v)이다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 약 0.06% (w/v)이다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.02% (w/v)이다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.06% (w/v)이다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.01% 또는 약 0.01%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.015% 또는 약 0.015%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.02% 또는 약 0.02%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.025% 또는 약 0.025%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.03% 또는 약 0.03%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.05% 또는 약 0.05%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.055% 또는 약 0.055%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.06% 또는 약 0.06%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.065% 또는 약 0.065%의 양으로 제제 내에 존재한다. 일정한 구체예에서, 계면활성제 (예를 들면, 폴리소르베이트 20)는 0.07% 또는 약 0.07%의 양으로 제제 내에 존재한다.
일부 구체예에서, 메티오닌이 항체 제제에 첨가된다. 일부 구체예에서, 제제 내에 메티오닌은 약 1 mM 내지 약 20 mM, 약 5 mM 내지 약 15 mM, 약 6 mM 내지 약 14 mM, 약 7 mM 내지 약 13 mM, 약 8 mM 내지 약 12 mM, 약 9 mM 내지 약 11 mM, 약 8 mM 내지 약 13 mM, 약 8 mM 내지 약 11 mM, 약 8 mM 내지 약 10 mM, 약 9 mM 내지 약 13 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM, 또는 약 9 mM 내지 약 10 mM이다. 일정한 구체예에서, 제제 내에 메티오닌은 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM 또는 약 15 mM이다. 특정한 구체예에서, 제제 내에 메티오닌은 약 10 mM이다. 일부 구체예에서, 제제 내에 메티오닌은 1 mM 내지 20 mM, 5 mM 내지 15 mM, 6 mM 내지 14 mM, 7 mM 내지 13 mM, 8 mM 내지 12 mM, 9 mM 내지 11 mM, 8 mM 내지 13 mM, 8 mM 내지 11 mM, 8 mM 내지 10 mM, 9 mM 내지 13 mM, 9 mM 내지 12 mM, 또는 9 mM 내지 10 mM이다. 일정한 구체예에서, 제제 내에 메티오닌은 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM 또는 15 mM이다. 특정한 구체예에서, 제제 내에 메티오닌은 10 mM이다.
일정한 구체예에서, 히알루로난-분해 효소 (또는 히알루론산분해효소) 또는 히알루로난 합성 저해제가 본원에서 설명된 항체 제제에 첨가되거나, 투여에 앞서 본원에서 설명된 항체 제제와 혼합되거나, 또는 본원에서 설명된 항체 제제와 병용투여된다. 히알루로난 (히알루론산; HA)은 포유동물에서 결합 조직, 피부, 연골 및 윤활액 내에 두드러지게 존재하는 글리코사미노글리칸이다. 결합 조직에서, 히알루로난과 연관된 수화수가 조직 사이에 수화된 기질을 발생시킨다. HA는 많은 세포의 세포외 기질, 특히 연한 결합 조직에서 발견된다. 히알루론산분해효소는 히알루로난을 분해하는 효소이다.
글리코사미노글리칸 (GAG)은 세포외 기질 (ECM)의 복합적인 선형 다당류이다. GAG는 N-치환된 헥소사민 및 우론산 (히알루로난 (HA), 콘드로이틴 황산염 (CS), 콘드로이틴 (C), 데르마탄 황산염 (DS), 헤파란 황산염 (HS) 및 헤파린 (H)의 경우에), 또는 갈락토오스 (케라탄 황산염 (KS)의 경우에)의 반복되는 이당류 구조에 의해 특징화된다. HA를 제외하고, 이들 모두 코어 단백질에 공유 결합된 상태로 존재한다. 코어 단백질을 갖는 GAG는 구조적으로 프로테오글리칸 (PG)으로서 지칭된다.
HA는 많은 세포의 세포외 기질에서 특히 연한 결합 조직에서 발견된다. HA는 예컨대 물 및 혈장 단백질 항상성에서 다양한 생리학적 기능이 배정되었다 (Laurent T.C. et al, FASEB J., 1992; 6: 2397-2404). HA 생산은 증식 세포에서 증가하고 유사분열에서 일정한 역할을 수행할 수 있다. 이것은 또한, 이동 및 세포 이주에 연루되었다. HA는 세포 조절, 발달 및 분화에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 보인다 (Laurent et al, 위와 같음). HA는 임상 의학에서 폭넓게 이용되었다. 이의 조직 보호 및 유변 물성은 안과 수술 (예를 들면 백내장 수술 동안 각막 내피를 보호하기 위해)에서 유용한 것으로 증명되었다. 히알루로난 단백질 상호작용은 또한, 세포외 기질 또는 "기저 물질"의 구조에 관련된다.
히알루론산분해효소는 동물 왕국 전역에서 발견되는, 일군의 일반적으로 중성 또는 산 활성 효소이다. 히알루론산분해효소는 기질 특이성 및 작용 기전에 대하여 서로 다르다 (WO 2004/078140). 히알루론산분해효소의 3가지 일반적인 부류가 있다:
1. 사당류와 육당류를 주요 최종 산물로서 갖는 엔도-베타-N-아세틸헥소스아미니다아제인 포유류-유형 히알루론산분해효소, (EC 3.2.1.35). 이들은 가수분해 활성 및 글리코시드전달효소 활성 둘 모두를 갖고, 그리고 히알루로난 및 콘드로이틴 황산염 (CS), 일반적으로 C4-S 및 C6-S를 분해할 수 있다.
2. 세균 히알루론산분해효소 (EC 4.2.99.1)는 히알루로난 및 다양한 정도로, CS와 DS를 분해한다. 이들은 일차적으로 이당류 최종 산물을 산출하는 베타 제거 반응에 의해 작동하는 엔도-베타-N-아세틸헥소스아미니다아제이다.
3. 거머리, 다른 기생충 및 갑각류로부터 히알루론산분해효소 (EC 3.2.1.36)는 베타 1-3 연쇄의 가수분해를 통해 사당류와 육당류 최종 산물을 산출하는 엔도-베타-글루쿠론산분해효소이다.
포유류 히알루론산분해효소는 2가지 군으로 더욱 분할될 수 있다: 중성 활성 효소 및 산 활성 효소. 인간 유전체에는 6개의 히알루론산분해효소-유사 유전자, HYAL1, HYAL2, HYAL3, HYAL4, HYALP1 및 PH20/SPAM1이 있다. HYALP1은 위유전자이고, 그리고 HYAL3은 임의의 공지된 기질을 향한 효소 활성을 소유하는 것으로 밝혀지지 않았다. HYAL4는 콘드로이티나아제이고 히알루로난을 향해 활성을 거의 나타내지 않는다. HYAL1은 원형적 산 활성 효소이고, 그리고 PH20은 원형적 중성 활성 효소이다. 산 활성 히알루론산분해효소, 예컨대 HYAL1 및 HYAL2는 일반적으로 중성 pH (다시 말하면 pH 7)에서 촉매 활성을 결여한다. 예를 들면, HYALl은 pH 4.5 초과에서 시험관내에서 촉매 활성을 거의 나타내지 않는다 (Frost I.G. and Stern, R., "A microtiter-based assay for hyaluronidase activity not requiring specialized reagents", Anal. Biochemistry, 1997; 251:263- 269). HYAL2는 시험관내에서 매우 낮은 고유 활성도를 갖는 산 활성 효소이다.
히알루론산분해효소-유사 효소는 일반적으로 글리코실포스파티딜 이노시톨 앵커를 통해 원형질막에 잠금되는 것들 예컨대 인간 HYAL2 및 인간 PH20 (Danilkovitch-Miagkova et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U SA, 2003; 100(8):4580- 4585; Phelps et al, Science 1988; 240(4860): 1780-1782), 그리고 일반적으로 가용성인 것들 예컨대 인간 HYAL1 (Frost, I.G. et al, "Purification, cloning, and expression of human plasma hyaluronidase", Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997; 236(1): 10-15)에 의해 또한 특징화될 수 있다. 하지만, 종간의 변동이 있다: 예를 들면 소 PH20은 원형질막에 매우 느슨하게 부착되고 포스포 리파아제 민감성 앵커를 통해 고정되지 않는다 (Lalancette et al, Biol Reprod., 2001; 65(2):628- 36). 소 히알루론산분해효소의 이러한 고유한 특질은 임상적 이용을 위한 추출물로서, 가용성 소 고환 히알루론산분해효소의 이용을 가능하게 하였다 (Wydase™, Hyalase™). 다른 PH20 종류는 일반적으로, 세정제 또는 리파아제의 이용이 없으면 가용성이 아닌 지질 고정된 효소이다. 예를 들면, 인간 PH20은 GPI 앵커를 통해 원형질막에 고정된다. 지질 앵커를 폴리펩티드 내로 도입하지 않을 인간 PH20 DNA 작제물을 만들려는 시도는 촉매적으로 비활성 효소, 또는 불용성 효소 중 어느 한 가지를 야기하였다 (Arming et al, Eur. J. Biochem., 1997; 1; 247(3):810-4). 자연 발생 마카크 정자 히알루론산분해효소는 가용성 형태 및 막 결합된 형태 둘 모두에서 발견된다. 64 kDa 막 결합된 형태는 pH 7.0에서 효소 활성을 소유하는 반면, 54 kDa 형태는 pH 4.0에서만 활성이다 (Cherr et al, Dev. Biol, 1996;10; 175(1): 142-53). 따라서, PH20의 가용성 형태는 종종, 중성 조건하에 효소 활성을 결여한다.
WO2006/091871 및 US 특허 번호 7,767,429에서 교시에 따라서, 소량의 가용성 히알루론산분해효소 당단백질 (sHASEGP)이 하피 내로 치료 약물의 투여를 용이하게 하기 위해 제제 내로 도입될 수 있다. 세포외 공간에서 HA를 신속하게 해중합함으로써, sHASEGP는 사이질의 점도를 감소시키고, 그것에 의하여 수력학적 전도도를 증가시키고, 그리고 더 큰 용적이 SC 조직 내로 안전하고 편안하게 투여될 수 있도록 한다. 감소된 사이질 점도를 통해 sHASEGP에 의해 유도된 증가된 수력학적 전도도는 더 큰 분산을 가능하게 하고, SC 투여된 치료 약물의 전신 생체이용률을 잠재적으로 증가시킨다.
하피에 주사될 때, sHASEGP에 의한 HA의 해중합화는 SC 조직에서 주사 부위에 국지화된다. 실험 증거는 sHASEGP가 CD-I 생쥐에서 단일 정맥내 투약 이후에 혈액에서 검출 가능한 전신 흡수 없이, 생쥐에서 13 내지 20 분의 반감기로 사이질 공간에서 국지적으로 비활성화된다는 것을 증명한다. 혈관 구획 내에서 sHASEGP는 0.5 mg/kg까지의 용량에서, 생쥐 및 시노몰구스 원숭이 각각에서 2.3 및 5 분의 반감기를 보여준다. SC 조직에서 HA 기질의 끊임없는 합성과 조합된, sHASEGP의 신속한 제거는 투여후 24 내지 48 시간 이내에 효과가 완전히 반전될 수 있는 다른 공동주사된 분자에 대한 일시적인 국부 활성 투과 증강을 야기한다 (Bywaters G.L., et al, "Reconstitution of the dermal barrier to dye spread after Hyaluronidase injection", Br. Med. J., 1951; 2 (4741): 1178- 1183).
국부 유체 분산에 대한 효과에 더하여, sHASEGP는 또한 흡수 강화제로서 작용한다. 16 킬로달톤 (kDa) 이상인 거대분자는 확산을 통한 모세관을 통한 흡수로부터 거의 배제되고 주로 배수 림프절을 통해 흡수된다. 피하 투여된 거대분자 예컨대 예를 들면 치료 항체 (대략 150 kDa의 분자량)는 이런 이유로, 혈관 구획 내로 후속 흡수를 위해 배수 림프관에 도달하기 전 사이질 기질을 횡단해야 한다. 국부 분산을 증가시킴으로써, sHASEGP는 많은 거대분자의 흡수의 속도 (Ka)를 증가시킨다. 이것은 sHASEGP의 부재에서 SC 투여에 비하여 증가된 피크 혈중 농도 (Cmax) 및 잠재적으로 증가된 생체이용률을 야기한다 (Bookbinder L.H., et al, "A recombinant human enzyme for enhanced interstitial transport of therapeutics", J. Control. Release 2006; 114: 230- 241).
동물 기원의 히알루론산분해효소 산물은 일차적으로, 피하 주입 (큰 용적에서 유체의 SC 주사/주입)을 위한 다른 병용투여된 약물의 분산과 흡수를 증가시키기 위해 60년 이상 동안 임상적으로 이용되었다 (Frost G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4: 427-440). 히알루론산분해효소의 작용 기전에 관한 상세는 하기 간행물에서 상세하게 설명되었다: Duran-Reynolds F., "A spreading factor in certain snake venoms and its relation to their mode of action", CR Soc Biol Paris, 1938; 69-81; Chain E., "A mucolytic enzyme in testes extracts", Nature 1939; 977-978; Weissmann B., "The transglycosylative action of testicular hyaluronidase", J. Biol. Chem., 1955; 216: 783-94; Tammi, R., Saamanen, A.M., Maibach, H.I., Tamrni M., "Degradation of newly synthesized high molecular mass hyaluronan in the epidermal and dermal compartments of human skin in organ culture", J. Invest. Dermatol. 1991; 97: 126-130; Laurent, U.B.G., Dahl, L.B., Reed, R.K., "Catabolism of hyaluronan in rabbit skin takes place locally, in lymph nodes and liver", Exp. Physiol. 1991; 76: 695-703; Laurent, T.C. and Fraser, J.R.E., "Degradation of Bioactive Substances: Physiology and Pathophysiology", Henriksen, J.H. (Ed) CRC Press, Boca Raton, FL; 1991. pp. 249-265; Harris, E.N., et al, "Endocytic function, glycosaminoglycan specificity, and antibody sensitivity of the recombinant human 190-kDa hyaluronan receptor for endocytosis (HARE)", J. Biol. Chem. 2004; 279:36201-36209; Frost, G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4: 427-440. EU 국가에서 허가된 히알루론산분해효소 산물은 Hylase® "Dessau" 및 Hyalase®를 포함한다. US에서 승인된 동물 기원의 히알루론산분해효소 산물은 Vitrase™, Hydase™ 및 Amphadase™을 포함한다.
히알루론산분해효소 산물의 안전성과 효능은 폭넓게 확립되었다. 확인된 가장 유의미한 안전성 위험은 과민성 및/또는 알레르기항원성인데, 이것은 동물-유래된 제조물의 순도의 결여에 관련된 것으로 생각된다 (Frost, G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4: 427-440). 유의할 점은 UK, 독일 및 US 사이에 동물-유래된 히알루론산분해효소의 허가된 용량에 대하여 차이가 있다는 것이다. UK에서, 피하 또는 근육내 주사에 대한 어쥬번트로서 상용의 용량은 주사에 직접적으로 첨가되는 1500 단위이다. US에서, 이러한 목적에 이용되는 상용의 용량은 150 단위이다. 피하 주입에서, 히알루론산분해효소는 상대적으로 큰 용적의 유체의 피하 투여를 보조하는 데 이용된다. UK에서, 1500 단위의 히알루론산분해효소는 일반적으로, 피하 이용을 위한 각각 500 내지 1000 ml의 유체가 제공된다. US에서는, 피하 주입 용액의 각 리터에 대해 150 단위가 적절한 것으로 고려된다. 독일에서는, 이러한 목적으로 150 내지 300 단위가 적절한 것으로 고려된다. UK에서는, 국부 마취제의 확산이 1500 단위의 첨가에 의해 가속화된다. 독일 및 US에서는, 이러한 목적으로 150 단위가 적절한 것으로 고려된다. 용량 차이 (UK에서 용량이 US에서보다 10배 높다)에도 불구하고, US 및 UK 각각에서 시판되는 동물-유래된 히알루론산분해효소 산물의 안정성 프로필에서 명확한 차이가 보고되지 않았다. 2005년 12월 2일 자에, Halozyme Therapeutics Inc.는 재조합 인간 히알루론산분해효소, rHuPH20의 주사가능 제제 (HYLENEX™)에 대해 FDA로부터 허가를 받았다. FDA는 하기 징후의 SC 투여용으로 150 단위의 용량에서 HYLENEX™를 허가하였다:
- 다른 주사된 약물의 흡수와 분산을 증가시키기 위한 어쥬번트로서
- 피하 주입을 위해
- 방사선비투과성 작용제의 재흡수를 향상시키기 위한 SC 요로조영술에서 보조약으로서.
규제 검토의 일부로서, rHuPH20은 다른 주사된 약물의 분산과 흡수를 증강하는, 이전에 허가된 동물-유래된 히알루론산분해효소 제조물과 동일한 특성을 소유하지만, 향상된 안전성 프로필을 갖는 것으로 확립되었다. 특히, 동물-유래된 히알루론산분해효소와 비교하여 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)의 이용은 동물 병원체에 의한 오염 및 전염 가능한 해면상 뇌병증의 잠재적인 위험을 최소화한다.
가용성 히알루론산분해효소 당단백질 (sHASEGP), 이들을 제조하기 위한 제법 및 제약학적 조성물에서 이들의 이용은 WO 2004/078140에서 설명되었다. 아래에 더욱 개설된 바와 같은 상술된 실험 작업은 청구된 제제가 놀랍게도, 우호적인 보관 안정성을 갖고, 그리고 보건 당국에 의한 허가를 위한 모든 요건을 충족한다는 것을 보여주었다.
본원 발명에 따른 제제에서 히알루론산분해효소는 예를 들면 활성 물질 (이것은 침투 증강제로서 작용한다)의 흡수를 증가시킴으로써, 항-PD-L1 항체의 전신 순환으로의 전달을 증강하는 것으로 생각된다. 히알루론산분해효소는 또한, SC 사이질 조직의 세포외 성분인 히알루로난의 가역적 가수분해에 의한 피하 적용 루트를 통해, 치료적 항-PD-L1 항체의 전신 순환 내로의 전달을 증가시키는 것으로 생각된다. 하피에서 히알루로난의 가수분해는 SC 조직의 사이질 공간에서 통로를 일시적으로 개방하고, 그것에 의하여 치료적 항-PD-L1 항체의 전신 순환 내로의 전달을 향상시킨다. 이에 더하여, 상기 투여는 인간에서 감소된 통증 및 SC 조직의 더 적은 용적-파생된 팽화를 보여주다.
히알루론산분해효소는 국지적으로 투여될 때, 전체 효과를 국지적으로 갖는다. 다시 말하면, 히알루론산분해효소는 비활성화되고, 수 분 내에 국지적으로 물질대사되며, 전신 또는 장기간 효과를 갖는 것으로 언급되지 않았다. 혈류에 들어갈 때, 수 분 내에 히알루론산분해효소의 신속한 비활성화는 상이한 히알루론산분해효소 산물 사이에서 비슷한 생체분포 연구를 수행하는 능력을 현실적으로 불가능하게 만든다. 이러한 특성은 또한, 히알루론산분해효소 산물이 원위 부위에서는 작용할 수 없기 때문에, 임의의 잠재적인 전신 안전성 우려를 최소화한다. 본원 발명에 따른 모든 히알루론산분해효소의 통합 특질은 화학 구조, 종 공급원, 조직 공급원, 또는 동일한 종과 조직으로부터 공급된 의약품의 배치에서 차이와 상관없이, 히알루로난을 해중합하는 능력이다. 이들은 상이한 구조를 가짐에도 불구하고 그들의 활성이 동일 (효능 제외)하다는 사실에서, 특이하다. 본원 발명의 제제에 따른 히알루론산분해효소는 본원에서 설명된 안정된 제약학적 제제에서 항-PD-L1 항체의 분자 완전성에 대한 부정적인 효과를 갖지 않는 것으로 특징화된다. 게다가, 히알루론산분해효소는 항-PD-L1 항체의 전신 순환으로의 전달만을 단순히 변경하며, 전신적으로 흡수된 항-PD-L1 항체의 치료 효과를 제공하거나 또는 이들 효과에 기여할 수 있는 어떤 특성도 소유하지 않는다. 히알루론산분해효소는 전신적으로 생체이용가능하지 않고, 그리고 본원 발명에 따른 안정된 제약학적 제제의 권고된 보관 조건에서 항-PD-L1 항체의 분자 완전성에 부정적으로 영향을 주지 않는다. 이것은 이런 이유로, 본원 발명에 따른 항-PD-L1 항체 제제에서 부형제로서 고려된다. 이것이 어떤 치료 효과도 발휘하지 않기 때문에, 이것은 치료적으로 활성 항-PD-L1 항체와는 별개로 제약학적 형태의 한 가지 요소를 나타낸다. 본원 발명에 따른 다수의 적합한 히알루론산분해효소는 선행 기술로부터 알려져 있다. 일부 구체예에서, 효소는 인간 히알루론산분해효소, 예컨대 rHuPH20으로서 알려져 있는 효소이다. rHuPH20은 N-아세틸 글루코사민의 Ci 위치 및 글루쿠론산의 C4 위치 사이의 β-1,4 연쇄의 가수분해에 의해 히알루로난을 해중합하는 중성 및 산 활성 β-1,4 글리코실 가수분해효소의 패밀리의 구성원이다. 히알루로난은 결합 조직, 예컨대 피하 사이질 조직 및 일정한 특수한 조직, 예컨대 탯줄 및 유리체액의 세포내 기저 물질에서 발견되는 다당류이다. 히알루로난의 가수분해는 사이질 조직의 점도를 일시적으로 감소시키고 주사된 유체 또는 국지화된 여출물 또는 삼출물의 분산을 증진하여, 이들의 흡수를 용이하게 한다. 히알루론산분해효소의 효과는 국지적이고 가역적이며, 조직 히알루로난의 완전한 재구성이 24 내지 48 시간 내에 발생한다 (Frost, G.I., "Recombinant human hyaluronidase (rHuPH20): an enabling platform for subcutaneous drug and fluid administration", Expert Opinion on Drug Delivery, 2007; 4:427-440). 히알루로난의 가수분해를 통한 결합 조직의 투과성에서 증가는 병용투여된 분자의 분산과 흡수를 증가시키는 능력에 대한 히알루론산분해효소의 효능과 상관한다.
인간 유전체는 여러 히알루론산분해효소 유전자를 내포한다. 단지 PH20 유전자 산물만 생리학적 세포외 조건하에 효과적인 히알루론산분해효소 활성을 소유하고 확산 작용제로서 작용하며, 반면 산 활성 히알루론산분해효소는 이러한 특성을 갖지 않는다. rHuPH20은 치료적 용도에 현재 이용 가능한 처음이자 유일한 재조합 인간 히알루론산분해효소이다. 인간 유전체는 여러 히알루론산분해효소 유전자를 내포한다; 단지 PH20 유전자 산물만 생리학적 세포외 조건하에 효과적인 히알루론산분해효소 활성을 소유하고 확산 작용제로서 작용한다. 자연 발생 인간 PH20 단백질은 카르복시 말단 아미노산에 부착된 지질 앵커를 갖는데, 상기 카르복시 말단 아미노산은 이것을 원형질막에 고정한다. Halozyme에 의해 개발된 rHuPH20 효소는 지질 부착에 대한 책임이 있는, 카르복시 말단에서 이런 아미노산을 결여하는 절두된 결실 변이체이다. 이것은 소 고환 제조물에서 발견되는 단백질과 유사한 가용성, 중성 pH-활성 효소를 유발한다. rHuPH20 단백질은 분비의 과정 동안 N 말단으로부터 제거되는 35개의 아미노산 신호 펩티드로 합성된다. 성숙 rHuPH20 단백질은 일부 소 히알루론산분해효소 제조물에서 발견되는 것과 이종상동성인 진짜 N 말단 아미노산 서열을 내포한다.
동물 유래된 PH20 및 재조합 인간 rHuPH20을 비롯한, PH20 히알루론산분해효소는 N-아세틸 글루코사민의 C1 위치 및 글루쿠론산의 C4 위치 사이의 β-1,4 연쇄의 가수분해에 의해 히알루로난을 해중합한다. 사당류는 가장 작은 소화 산물이다 (Weissmann, B., "The transglycosylative action of testicular hyaluronidase", J. Biol. Chem., 1955; 216: 783-94). 이러한 N-아세틸 글루코사민/글루쿠론산 구조는 재조합 생물학적 산물의 N-연결된 글리칸에서는 발견되지 않고, 그리고 이런 이유로, rHuPH20은 자신이 조제되는 항체의 글리코실화에 영향을 주지 않을 것이다. rHuPH20 효소는 그 자체로, 단일클론 항체에서 발견되는 것과 유사한 코어 구조를 갖는, 분자당 6개의 N-연결된 글리칸을 소유한다. 예상한 바와 같이, 이들 N-연결된 구조는 시간의 추이에서 변하지 않는데, 이것은 이들 N-연결된 글리칸 구조에 대한 rHuPH20의 효소 활성의 결여를 확증한다. rHuPH20의 짧은 반감기 및 히알루로난의 일정한 합성은 조직에 대한 상기 효소의 짧은 국부 작용을 야기한다.
본원 발명에 따른 피하 제제에서 부형제인 히알루론산분해효소는 재조합 DNA 기술을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이러한 방식으로, 동일한 단백질 (동일한 아미노산 서열)이 항상 획득되고, 그리고 조직으로부터 추출 동안 공동정제된 오염 단백질에 의해 유발되는 알레르기 반응이 회피되도록 담보된다. 일부 구체예에서, 본원 발명에 따른 제제에서 이용되는 히알루론산분해효소는 인간 효소, 예컨대 rHuPH20이다. rHuPH20 (HYLENEX™)의 아미노산 서열은 널리 알려져 있고 CAS 등록 번호 757971-58-7 하에 가용하다. 근사 분자량은 61 kDa이다 (US 특허 번호 7,767,429를 또한 참조한다).
복수의 구조적 및 기능적 비교가 자연적으로 공급된 포유류 히알루론산분해효소, 그리고 인간 및 다른 포유동물로부터 획득된 PH-20 cDNA 클론 사이에서 수행되었다. PH-20 유전자가 재조합 산물 rHuPH20에 대해 이용되는 유전자이다; 하지만 재조합 의약품은 PH-20 유전자에 의해 인코딩된 완전 단백질의 447개 아미노산 절두된 이형이다. 아미노산 서열에 대하여 구조 유사성은 어떤 비교에서도 60%를 좀처럼 초과하지 않는다. 기능적 비교는 rHuPH20의 활성이 이전에 허가된 히알루론산분해효소 산물의 것과 매우 유사하다는 것을 보여준다. 이러한 정보는 히알루론산분해효소의 공급원과 상관없이, 히알루론산분해효소의 단위의 임상적 안전성과 효능이 동등하다는 과거 50 년 동안의 임상 소견과 일치한다. 본원 발명에 따른 항-PD-L1 항체 SC 제제에서 rHuPH20의 이용은 더 높은 용적의 의약품의 투여를 가능하게 하고, 그리고 피하 투여된 항-PD-L1 항체, 예컨대 아테졸리주맙의 전신 순환 내로의 흡수를 잠재적으로 증강한다.
소량의 가용성 히알루론산분해효소 당단백질 (sHASEGP)을 이용함으로써 치료 단백질과 항체의 피하 주사를 용이하게 하는 것이 제안되었다; WO2006/091871을 참조한다. 이런 가용성 히알루론산분해효소 당단백질의 첨가 (병용 제제로서 또는 병용투여에 의해)는 치료 약물의 하피 내로의 투여를 용이하게 하는 것으로 밝혀졌다. 세포외 공간에서 히알루로난 HA를 신속하게 해중합함으로써, sHASEGP는 사이질의 점도를 감소시키고, 그것에 의하여 수력학적 전도도를 증가시키고 더 큰 용적이 피하 조직 내로 안전하고 편안하게 투여될 수 있도록 한다. 감소된 사이질 점도를 통해 sHASEGP에 의해 유도된 증가된 수력학적 전도도는 더 큰 분산을 가능하게 하고, SC 투여된 치료 약물의 전신 생체이용률을 잠재적으로 증가시킨다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 제제는 예컨대 약 1000 U/ml 내지 약 5000 U/ml의 양으로, 적어도 하나의 히알루론산분해효소 (예를 들면 rHuPH20)의 효과량을 포함한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1000 U/ml 내지 약 4000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1000 U/ml 내지 약 2000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 2000 U/ml 내지 약 4000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 2000 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1500 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1500 U/ml 내지 약 2500 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1500 U/ml 내지 약 2000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 2000 U/ml 내지 약 2500 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1750 U/ml 내지 약 2250 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1900 U/ml 내지 약 2100 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 1950 U/ml 내지 약 2050 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 약 2000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1000 U/ml 내지 4000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1000 U/ml 내지 3000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1000 U/ml 내지 2000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 2000 U/ml 내지 4000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 2000 U/ml 내지 3000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1500 U/ml 내지 3000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1500 U/ml 내지 2500 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1500 U/ml 내지 2000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 2000 U/ml 내지 2500 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1750 U/ml 내지 2250 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1900 U/ml 내지 2100 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 1950 U/ml 내지 약 2050 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 히알루론산분해효소 (예를 들면, rHuPH20)는 2000 U/ml의 농도로 제제 내에 존재한다.
히알루론산분해효소를 포함하는 본원 발명의 액상 제약학적 제제는 피하 주사에 특히 적합하다. 항-PD-L1 항체 및 히알루론산분해효소를 포함하는 이런 제제가 하나의 단일 병용 제제의 형태에서 또는 대안으로 피하 주사 직전에 혼합될 수 있는 2개의 별개의 제제의 형태에서 투여용으로 제공될 수 있다는 것은 당업자에 의해 명백히 이해된다. 대안으로 항-PD-L1 항체 및 히알루론산분해효소는 신체의 상이한 부위에서, 예컨대 서로 바로 인접한 부위에서 별개의 주사로서 투여될 수 있다. 본원 발명에 따른 제제 내에 존재하는 치료제를 연속 주사로서, 예를 들면 먼저 히알루론산분해효소를 주사하고, 그 이후에 항-PD-L1 항체 제제를 주사하는 것도 가능하다. 이들 주사는 또한, 역전된 순서로, 다시 말하면 항-PD-L1 항체 제제를 먼저 주사하고, 그 이후에 히알루론산분해효소를 주사함으로써 수행될 수 있다. 항-PD-L1 항체 및 히알루론산분해효소가 별개의 주사로서 투여되는 경우에, 이들 단백질 중에서 한 가지 또는 둘 모두, 히알루론산분해효소를 제외하고 첨부된 청구항에서 특정된 바와 같은 농도에서 완충제, 안정제(들) 및 비이온성 계면활성제와 함께 제공되어야 한다. 이후, 히알루론산분해효소가 예를 들면 약 6.5의 pH에서 L-히스티딘 /HCl 완충액, 100 내지 150 mM NaCl 및 0.01 내지 0.1 % (w/v) 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80에 담겨 제공될 수 있다. 한 구체예에서 항-PD-L1 항체는 본원에서 특정된 바와 같은 농도에서 완충제, 안정제(들) 및 비이온성 계면활성제와 함께 제공된다.
상기에서 언급된 바와 같이 히알루론산분해효소는 항-PD-L1 항체 제제에서 추가 부형제인 것으로 고려될 수 있다. 히알루론산분해효소는 항-PD-L1 항체 제제를 제조하는 시점에서 항-PD-L1 항체 제제에 첨가될 수 있거나 또는 주사 직전에 첨가될 수 있다. 대안으로 히알루론산분해효소는 별개의 주사로서 제공될 수 있다. 후자 경우에 히알루론산분해효소는 피하 주사가 발생하기 전 적합한 희석제로 재구성되어야 하는 동결 건조된 형태에서 별개의 바이알에 담겨 제공될 수 있거나, 또는 제조업체에 의해 액체 제제로서 제공될 수 있다. 항-PD-L1 항체 제제 및 히알루론산분해효소는 별개의 실체로서 입수될 수 있거나, 또는 피하 투여를 위한 양쪽 주사 성분 및 적합한 사용설명서를 포함하는 키트로서 또한 제공될 수 있다. 이들 제제 중에서 하나 또는 둘 모두의 재구성 및/또는 투여를 위한 적합한 사용설명서 또한 제공될 수 있다.
이런 이유로 본원 발명은 또한, 피하 투여를 위한 양쪽 주사 성분 및 적합한 사용설명서를 포함하는 키트의 형태에서, 제약학적으로 활성 항-PD-L1 항체 또는 이런 항체의 혼합물 및 적절한 양의 적어도 하나의 히알루론산분해효소의 고도로 농축된, 안정된 제약학적 제제로 구성되는 제약학적 조성물을 제공한다.
본원 발명의 추가 양상은 본원 발명에 따른 액상 제약학적 제제를 포함하는 주사 장치에 관계한다. 이런 제제는 제약학적으로 활성 항-PD-L1 항체 또는 이런 항체 분자의 혼합물 및 본원에서 개설된 바와 같은 적합한 부형제로 구성될 수 있고, 그리고 병용 제제로서 또는 병용투여를 위한 별개의 제제로서 히알루론산분해효소를 추가적으로 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도에서 본원에서 설명된 단일클론 항-PD-L1 항체, 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 200 mM 내지 약 280 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.04% (w/v) 내지 약 0.08% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트, 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도에서 메티오닌, 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도에서 히알루론산분해효소, 약 5.6 내지 약 6.0의 pH를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
일부 구체예에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 125 g/L의 농도에서 본원에서 설명된 단일클론 항-PD-L1 항체, 약 20 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 240 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.06% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트 20, 약 10 mM의 농도에서 메티오닌, 약 2000의 농도에서 rHuPH20, 그리고 약 5.8의 pH를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
일부 구체예에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 100 g/L 내지 약 150 g/L의 농도에서 본원에서 설명된 단일클론 항-PD-L1 항체, 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 200 mM 내지 약 280 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.03% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트, 그리고 약 5.3 내지 약 5.7의 pH를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되기에 앞서 히알루론산분해효소와 혼합된다. 일부 구체예에서, 혼합물에서 히알루론산분해효소 농도는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml이다. 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
일부 구체예에서, 액상 제약학적 제제가 본원에서 제공되고, 상기 제제는 약 125 g/L의 농도에서 본원에서 설명된 단일클론 항-PD-L1 항체, 약 20 mM의 농도에서 히스티딘 아세트산염, 약 240 mM의 농도에서 수크로오스, 약 0.02% (w/v)의 농도에서 폴리소르베이트 20, 그리고 약 5.5의 pH를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되기에 앞서 rHuPH20와 혼합된다. 일부 구체예에서, 혼합물에서 rHuPH20 농도는 약 2000 U/이다. 일부 구체예에서, 제제는 무균이다. 일부 구체예에서, 제제는 개체에게 투여되는 데 적합하다. 일부 구체예에서, 제제는 피하 투여를 위한 것이다.
한 구체예에서, 제제는 상기의 작용제 (예를 들면, 항체, 완충액, 수크로오스 및/또는 계면활성제)를 내포하고, 그리고 한 가지 또는 그 이상의 보존제, 예컨대 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, 클로로부탄올 및 벤제토늄 Cl가 본질적으로 없다. 다른 구체예에서, 보존제가 제제 내에 포함될 수 있는데, 특히 상기 제제가 다중용량 제제인 경우에 그러하다. 보존제의 농도는 약 0.1% 내지 약 2%, 예컨대 약 0.5% 내지 약 1% 범위 안에 있을 수 있다. 제제의 원하는 특징에 부정적으로 영향을 주지 않는다면, 한 가지 또는 그 이상의 다른 제약학적으로 허용되는 운반체, 부형제 또는 안정제, 예컨대 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에서 설명된 것들이 제제 내에 포함될 수 있다. 허용되는 운반체, 부형제 또는 안정제는 이용된 용량과 농도에서 수용자에게 비독성이고, 그리고 추가 완충제; 조용매; 아스코르빈산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 킬레이트화제 예컨대 EDTA; 금속 착물 (예를 들면 Zn-단백질 복합체); 생물분해성 중합체 예컨대 폴리에스테르; 및/또는 염-형성 반대이온을 포함한다.
본원에서 예시적인 제약학적으로 허용되는 운반체는 틈새 약물 분산 작용제, 예컨대 가용성 중성 활성 히알루론산분해효소 당단백질 (sHASEGP), 예를 들면, 인간 가용성 PH20 히알루론산분해효소 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 더욱 포함한다. rHuPH20을 포함하는 일정한 예시적인 sHASEGP 및 이용 방법은 US 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에서 설명된다. 한 양상에서, sHASEGP는 한 가지 또는 그 이상의 추가 글리코사미노글리카나아제, 예컨대 콘드로이티나아제와 병용된다.
본원에서 제제는 또한, 치료되는 특정 징후에 대해 필요에 따라 한 가지 이상의 단백질, 예컨대 다른 단백질에 부정적으로 영향을 주지 않는 상보성 활성을 갖는 것들을 내포할 수 있다. 예를 들면, 항체가 항-PD-L1인 경우에, 이것은 다른 작용제 (예를 들면, 화학요법제 및 항신생물제)와 병용될 수 있다.
일부 구체예에서, 제제 내에 항체의 물리적 안정성, 화학적 안정성, 또는 생물학적 활성이 평가되거나 또는 계측된다. 당해 분야에서 공지되고 본원의 실시예에서 설명된 임의의 방법이 제제 내에 항체의 안정성과 생물학적 활성을 평가하는 데 이용될 수 있다. 예를 들면, 제제 내에 항체의 안정성은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC 또는 SE-HPLC), 영상화 모세관 등전위 초점 (ICIEF), 펩티드 매핑, 작은-용적 광 차폐 (HIAC) 검정, 그리고 모세관 전기이동 (CE) 기술 예컨대 CE-황산도데실나트륨 (CE-SDS) 및 CE-글리칸 분석에 의해 계측될 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 -20℃에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 14 개월, 적어도 약 16 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 20 개월, 적어도 약 21 개월, 적어도 약 22 개월, 적어도 약 23 개월, 적어도 약 24 개월, 적어도 약 3 년, 또는 적어도 약 4 년 동안 안정된다. 일부 구체예에서, 제제 내에 항체는 2℃ 내지 8℃ (예를 들면, 5℃)에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 14 개월, 적어도 약 16 개월, 적어도 약 18 개월, 적어도 약 20 개월, 적어도 약 21 개월, 적어도 약 22 개월, 적어도 약 23 개월, 또는 적어도 약 24 개월 동안 안정된다. 일부 구체예에서, 항체 (다시 말하면, 항체 단량체)의 안정성은 보관 후 제제에서 크기 배제 크로마토그래피에 의해 계측된다. 일부 구체예에서, 항체 (다시 말하면, 항체 단량체)의 안정성은 보관 후 제제에서 영상화 모세관 등전위 초점에 의해 계측된다. 일부 구체예에서, 전체 단백질 (예를 들면, 항체 및 응집체 포함)과 비교하여 제제 내에 항체 단량체의 퍼센트는 -20℃에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 또는 적어도 약 24 개월 동안 보관 후 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94% 또는 약 95%보다 크다. 일부 구체예에서, 전체 단백질 (예를 들면, 항체 및 응집체 포함)과 비교하여 제제 내에 항체 단량체의 퍼센트는 2℃ 내지 8℃ (예를 들면, 5℃)에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 또는 적어도 약 24 개월 동안 보관 후 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94% 또는 약 95%보다 크다. 일부 구체예에서, 전체 단백질 (예를 들면, 항체 및 응집체 포함)과 비교하여 제제 내에 항체 단량체의 퍼센트는 실온 (예를 들면, 약 15℃ 내지 25℃)에서 적어도 약 2 시간, 적어도 약 4 시간, 적어도 약 6 시간, 적어도 약 8 시간, 적어도 약 10 시간, 적어도 약 12 시간, 적어도 약 14 시간, 적어도 약 16 시간, 적어도 약 18 시간, 적어도 약 20 시간, 또는 적어도 약 24 시간 동안 교반 후 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94% 또는 약 95%보다 크다. 일부 구체예에서, 제제 내에 총 응집체 (예를 들면, 고분자량 종류 및 저분자량 종류)의 퍼센트는 -20℃에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 또는 적어도 약 24 개월 동안 보관 후 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%보다 적다. 일부 구체예에서, 제제 내에 총 응집체 (예를 들면, 고분자량 종류 및 저분자량 종류)의 퍼센트는 2℃ 내지 8℃ (예를 들면, 5℃)에서 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 18 개월, 또는 적어도 약 24 개월 동안 보관 후 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%보다 적다. 일부 구체예에서, 제제 내에 총 응집체 (예를 들면, 고분자량 종류 및 저분자량 종류)의 퍼센트는 실온 (예를 들면, 약 15℃ 내지 25℃)에서 적어도 약 2 시간, 적어도 약 4 시간, 적어도 약 6 시간, 적어도 약 8 시간, 적어도 약 10 시간, 적어도 약 12 시간, 적어도 약 14 시간, 적어도 약 16 시간, 적어도 약 18 시간, 적어도 약 20 시간, 또는 적어도 약 24 시간 동안 교반 후 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%보다 적다. 본원에서 임의의 구체예에서, 안정된 제제는 유리 바이알, 금속 합금 용기, 또는 정맥내 (IV) 백에서 보관될 수 있다. 일부 구체예에서, 금속 합금은 316L 스테인리스강 또는 하스텔로이이다.
생체내 투여에 이용되는 제제는 무균이어야 한다. 이것은 제제의 제조에 앞서 또는 제조 이후에, 무균 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
III. 항체 제제의 치료 및 투여의 방법
제제는 공지된 방법, 예컨대 정맥내 투여 (예를 들면, 일시 주사로서 또는 일정한 기간에 걸쳐 연속 주입에 의해), 근육내, 복막내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내, 척수강내, 경구, 국소, 또는 흡입 루트와 일관하게, 항체를 이용한 치료가 필요한 포유동물, 예컨대 인간에게 투여된다. 한 구체예에서, 제제는 정맥내 투여에 의해 포유동물에게 투여된다. 이런 목적을 위해, 제제는 예를 들면 주입기를 이용하여 또는 IV 라인을 통해 주사될 수 있다. 한 구체예에서, 제제는 피하 투여에 의해 포유동물에게 투여된다.
항체의 적합한 용량 ("치료 효과량")은 예를 들면 치료되는 질환, 질환의 중증도와 경과, 항체가 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 항체에 대한 반응, 이용된 항체의 유형, 그리고 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체는 적절하게는 한꺼번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 투여되고, 그리고 진단으로부터 계속하여 임의의 시점에서 환자에게 투여될 수 있다. 항체는 유일 치료제로서, 또는 문제되는 질환을 치료하는 데 유용한 다른 약물 또는 요법과 함께 투여될 수 있다.
일반적인 명제로서, 인간에게 투여되는 항체의 치료 효과량은 1회 또는 그 이상의 투여에 의하는지에 상관없이 약 0.01 내지 약 50 mg/kg의 환자 체중의 범위 안에 있을 것이다. 일부 구체예에서, 이용되는 항체는 예를 들면, 하루에 약 0.01 내지 약 45 mg/kg, 약 0.01 내지 약 40 mg/kg, 약 0.01 내지 약 35 mg/kg, 약 0.01 내지 약 30 mg/kg, 약 0.01 내지 약 25 mg/kg, 약 0.01 내지 약 20 mg/kg, 약 0.01 내지 약 15 mg/kg, 약 0.01 내지 약 10 mg/kg, 약 0.01 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 0.01 내지 약 1 mg/kg으로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체는 15 mg/kg으로 투여된다. 하지만, 다른 투약 섭생이 유용할 수도 있다. 한 구체예에서, 본원에서 설명된 항-PD-L1 항체는 21-일 주기의 1일 자에 약 100 mg, 약 200 mg, 약 300 mg, 약 400 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 700 mg, 약 800 mg, 약 900 mg, 약 1000 mg, 약 1100 mg, 약 1200 mg, 약 1300 mg 또는 약 1400 mg의 용량으로 인간에게 투여된다. 용량은 단회 용량으로서, 또는 복수 용량 (예를 들면, 2 또는 3회 용량), 예컨대 주입으로서 투여될 수 있다. 병용 치료에서 투여되는 항체의 용량은 단일 치료와 비교하여 감소될 수 있다. 이러한 요법의 진행은 전통적인 기술에 의해 쉽게 모니터링된다.
본원에서 설명된 항-PD-L1 항체를 내포하는 제제는 다양한 시험관내와 생체내 진단과 치료 적용에서 이용될 수 있다. 예를 들면, 항체를 내포하는 제제는 질환 또는 장애 (예를 들면, PD-1 및 PD-L1 상호작용에 의해 매개된 질환 또는 장애)를 치료하기 위해 개체 또는 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 질환 또는 장애는 암이다. 일부 구체예에서, 암은 국소 진행성 또는 전이성이다. 일부 구체예에서, 암은 고형 종양, 혈액암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 위암, 신경교종, 두부암, 백혈병, 간암, 폐암 (예를 들면, 비소세포 폐암), 림프종, 골수종, 경부암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 신장암, 타액선암, 위암, 흉선 상피암, 갑상선암, 그리고 두경부의 편평상피 세포 암종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 암은 비소세포 폐암이다. 일부 구체예에서, 암은 소세포 폐암이다. 일부 구체예에서, 암은 요로상피세포 암종이다. 일부 구체예에서, 암은 유방암이다. 일부 구체예에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이다. 일부 구체예에서, 치료되는 개체 또는 대상체는 PD-L1 양성 암 세포 (예를 들면, IHC에 의해 검출됨)를 앓는다.
일부 구체예에서, 질환 또는 장애는 감염이다. 일부 구체예에서, 감염은 지속 감염이다. 일부 구체예에서, 감염은 바이러스 감염, 세균 감염, 진균 감염, 기생충 감염, 또는 원충 감염이다. 일부 구체예에서, 바이러스 감염은 시토메갈로바이러스 엡스타인 바르 바이러스, B형 간염, C형 간염 바이러스, 헤르페스 바이러스, 홍역 바이러스, 인플루엔자, 인간 면역결핍 바이러스, 인간 T 림프영양성 바이러스, 림프성 맥락수막염 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스 및/또는 리노바이러스로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 세균 감염은 헬리코박터 (Helicobacter) 종, 미코박테리움 (Mycobacterium) 종, 포르피로모나스 (Porphyromonas) 종, 클라미디아 (Chlamydia) 종, 살모넬라 (Salmonella) 종, 리스테리아 (Listeria) 종, 스트렙토코쿠스 (Streptococcus) 종, 헤모필루스 (Haemophilus) 종, 나이세리아 (Neisseria) 종, 클렙시엘라 (Klebsiella) 종, 보렐리아 (Borrelia) 종, 박테로이데스 (Bacterioides) 종, 그리고 트레포네마 (Treponema) 종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 원충 감염은 리슈만편모충 (Leishmania) 종, 열대열원충 (Plasmodium falciparum), 주혈흡충 (Schistosoma) 종, 톡소플라스마 (Toxoplasma) 종, 파동편모충 (Trypanosoma) 종, 그리고 태니아 (Taenia) 종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 진균 감염은 분아균증, 콕시디오이데스 진균증, 히스토플라스마증, 칸디다증, 효모균증, 아스페르길루스증, 모균증 및 폐포자충증으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, 질환 또는 장애는 염증성 질환이다. 일부 구체예에서, 염증성 질환은 급성 파종성 뇌척수염, 애디슨병, 알츠하이머병, 강직성 척추염, 항인지질 항체 증후군, 죽상경화증, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 관절염, 베흐체트병, 베르게르병, 수포성 유천포창, 소아 지방변증, 샤가스병, 담관염, 크론병, 피부근염, 제1형 당뇨병, 사구체신염, 굿파스처 증후군, 이식편 대 숙주 질환, 그레이브스병, 길랭 바레 증후군, 하시모토병, 두드러기, 과다 IgE 증후군, 특발성 혈소판감소성 자반병, 홍반성 루푸스, 루푸스 신장염, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 장기 이식 거부, 파킨슨병, 천포창, 악성 빈혈, 다발근육염, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 레이노 증후군, 류마티스성 관절염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 측두 동맥염, 갑상선염, 궤양성 대장염, 포도막염, 혈관염, 그리고 베게너 육아종증으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, 항체를 내포하는 제제는 질환 또는 장애를 치료하기 위해 다른 치료제와 함께 개체 또는 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 암을 치료하기 위해, 본원에서 설명된 항-PD-L1 항체 제제는 다른 항암 치료 (예를 들면, 화학요법 또는 상이한 항체 치료)와 함께 투여될 수 있다.
IV. 제조 물품 또는 키트
본원 발명의 다른 구체예에서, 본원 발명의 액상 제약학적 제제를 담는 용기를 포함하고, 그리고 사용설명서를 임의적으로 제공하는 제조 물품 또는 키트가 제공된다. 적합한 용기는 예를 들면, 병, 바이알, 백 및 주사기를 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리, 플라스틱 (예컨대, 폴리염화비닐 또는 폴리올레핀), 또는 금속 합금 (예컨대, 스테인리스강 또는 하스텔로이)으로부터 형성될 수 있다. 예시적인 용기는 300 cc 금속 합금 용기 (예를 들면, -20 ℃에서 보관하기 위한)이다. 다른 예시적인 용기는 10-50 cc 유리 바이알 (예를 들면, 2-8℃에서 보관하기 위한)일 수 있다. 예를 들면, 용기는 10 cc, 15 cc, 20 cc, 또는 50 cc 유리 바이알일 수 있다. 용기는 제제를 유지하고, 그리고 용기 상에 또는 이와 결부된 라벨은 이용 방향을 지시할 수 있다. 제조 물품은 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 주사기, 그리고 사용설명서를 포함하는 포장 삽입물을 비롯하여, 상업적 관점 및 이용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 더욱 포함할 수도 있다. 일부 구체예에서, 제조 물품은 다른 작용제 (예를 들면, 화학요법제 및 항신생물제) 중에서 한 가지 또는 그 이상을 더욱 포함한다. 한 가지 또는 그 이상의 작용제에 대한 적합한 용기는 예를 들면, 병, 바이알, 백 및 주사기를 포함한다.
본 명세서는 당업자가 본원 발명을 실시할 수 있게 하는 데 충분한 것으로 고려된다. 본 명세서에서 도시되고 설명된 것들 이외에, 본원 발명의 다양한 변형이 상기 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백할 것이고, 그리고 첨부된 청구항의 범위 안에 들어간다. 본원에서 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 본원에서 온전히 참조로서 편입된다.
본원 발명은 하기 실시예를 참조하면 더 완전하게 이해될 것이다. 하지만, 이들은 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본원에서 설명된 실시예와 구체예는 단지 예시적인 목적을 위한 것이고, 그리고 이에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 제시되고 본원의 기술적 사상과 이해범위 및 첨부된 청구항의 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다.
실시예
실시예 1: 원료의약품 (DS) 제제 안정성
DS 연구를 위해, 제제가 스테인리스강 미니-캔 내로 충전되고, 그리고 아테졸리주맙 동결된 보관을 평가하고 안정성을 가속화하는 데 적합한 보관 조건에서 배치되었다. 연구를 위한 DS를 조제하기 위해, 아테졸리주맙의 한외여과 정용여과 풀이 적합한 완충계 (예를 들면 히스티딘 아세트산염, 히스티딘 염산염, 아르기닌을 동반한 히스티딘 아세트산염)로 완충액 교환되었고, 그리고 이후, DS를 조제하기 위해 폴리소르베이트 20 및 메티오닌이 한외여과 정용여과 재료에 첨가되었다.
복수의 동결 해동 주기 후 DS 안정성
도 1a-1c는 복수의 동결/해동 주기 후 다양한 DS 제제의 고분자량 종류 (HMWS) (도 1a), 이온 교환 크로마토그래피 (IEC) 주된 피크 백분율 (도 1b), 그리고 비환원 모세관 전기이동-SDS (NR CE-SDS) 프리 피크 합계 (도 1c)의 수준을 보여준다. 모든 제제는 150 mg/ml 또는 125 mg/ml의 아테졸리주맙 (도면에서 150 mg 또는 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 (HA) 또는 히스티딘 염산염 (HCl), 10 mM 메티오닌, 그리고 0.06% (w/v) 폴리소르베이트 20을 포함하였다. 별도로 명시되지 않으면, 모든 제제는 pH 5.5이었다. 낮은 수크로오스 농도 (예를 들면 100 mM)를 내포하는 제제는 높은 단백질 농도에서 복수의 동결 해동 주기 내내 안정성을 유지하는 데 불충분하였다. 이들 실험의 결과로서, 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염을 포함하는 제제에 대해 240 mM의 수크로오스 농도가 5회 동결/해동 (F/T) 주기를 뒷받침하도록 선택되었다.
25 ℃에서 DS 안정성
도 2a-2c는 25 ℃에서 1 개월까지 후 다양한 DS 제제의 산 종류 (도 2a), 염기 종류 (도 2b) 및 HMWS (도 2c)의 수준을 보여준다. 모든 제제는 125 mg/ml의 아테졸리주맙 (도면에서 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 (HA) 또는 히스티딘 염산염 (HCl), 10 mM 메티오닌, 그리고 0.06% (w/v) 폴리소르베이트 20을 포함하였다. IEC는 pH 5.5 제제에서 더 낮은 백분율의 산성체 및 더 높은 백분율의 염기성체를 보여주었다.
실시예 2: 의약품 (DP) 제제 안정성
DP 안정성 연구를 위해, 제제가 유리 바이알 내로 충전되고, 그리고 상이한 완충계와 부형제에서 아테졸리주맙의 안정성을 평가하는 데 적합한 보관 조건에서 배치되었다. 조제하기 위해, 아테졸리주맙의 한외여과 정용여과 풀이 적합한 완충계 (예를 들면 히스티딘 아세트산염, 히스티딘 염산염, 아르기닌을 동반한 히스티딘 아세트산염)로 완충액 교환되었고, 그리고 이후, DS를 조제하기 위해 폴리소르베이트 20, 메티오닌 및 재조합 인간 히알루론산분해효소가 한외여과 정용여과 재료에 첨가되었다.
25 ℃에서 DP 안정성
도 3a-3b는 25 ℃에서 3 개월까지 후 DP 제제의 HMWS (도 3a) 및 SEC 주된 피크 백분율 (도 3b)의 수준을 보여준다. 모든 제제는 125 mg/ml 아테졸리주맙 (도면에서 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. pH 5.8에서 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제는 다른 2개의 제제와 비교하여 더 높은 SEC 주된 피크 백분율을 가졌다 (도 3b). pH 5.5에서 히스티딘 염산염을 포함하는 제제는 다른 2개의 제제와 비교하여 더 높은 백분율의 HMWS를 가졌다 (도 3a). 전반적으로, 히스티딘 아세트산염 제제는 히스티딘 염산염 제제와 비교할 때 SEC에 의한 약간 더 느린 분해를 보여주었다.
도 4a-4b는 25 ℃에서 3 개월까지 후 DP 제제에서 산 종류 (도 4a) 및 염기 종류 (도 4b)의 수준을 보여준다. 모든 제제는 125 mg/ml 아테졸리주맙 (도면에서 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. 전반적으로, 3개의 모든 제제 사이에 IEC 주된 피크 분해 속도는 유사하였다. 하지만, 산 종류 및 염기 종류의 형성이 이들 3개의 제제 사이에서 상이하였다. pH 5.8에서 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제는 다른 2개의 제제와 비교하여 더 낮은 백분율의 염기 종류를 가졌다 (도 4b). 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제는 히스티딘 염산염을 포함하는 제제와 비교하여 더 높은 백분율의 산 종류를 가졌다 (도 4a).
도 5a-5b는 25 ℃에서 3 개월까지 후 DP 제제에서 프리 피크 (도 5a) 및 NR CE-SDS 주된 피크 (도 5b)의 백분율을 보여준다. 모든 제제는 125 mg/ml 아테졸리주맙 (도면에서 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다.
40 ℃에서 DP 안정성
도 6a-6c는 40 ℃에서 1 개월까지 후 DP 제제에서 HMWS (도 6a), SEC 주된 피크 백분율 (도 6b), 그리고 프리 피크의 NR CE-SDS 합계 (도 6c)의 수준을 보여준다. 모든 제제는 150 mg/ml 또는 125 mg/ml의 아테졸리주맙 (도면에서 150 mg 또는 125 mg으로서 표시됨), 200-240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. 125 mg/ml 아테졸리주맙 및 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제는 다른 제제보다 더 적은 HMWS (도 6a), 더 높은 주된 피크 백분율 (도 6b), 그리고 NR-CE SDS 프리 피크의 더 낮은 합계 (도 6c)를 가졌다. 단백질 농도가 증가함에 따라서, HMWS 또한 증가하였다. pH의 관점으로부터, 더 높은 pH (예를 들면 5.8)는 HMWS 형성과 단편화를 감소시켰다. 아르기닌의 첨가 또한 HMWS에서 증가에 기여하였다. 비록 아르기닌이 용해도를 증가시킬 수 있긴 하지만, 이것은 아테졸리주맙의 물리적 안정성 (예를 들면 HMWS의 증가)을 유지하는 데 실패하였다.
도 7a-7c는 40 ℃에서 1 개월까지 후 DP 제제에서 산 종류 (도 7a), 염기 종류 (도 7b), 그리고 IEC 주된 피크의 백분율 (도 7c)의 수준을 보여준다. 모든 제제는 150 mg/ml 또는 125 mg/ml의 아테졸리주맙 (도면에서 150 mg 또는 125 mg으로서 표시됨), 200-240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. 히스티딘 아세트산염 완충액을 포함하는 제제는 히스티딘 염산염 완충액 또는 히스티딘 아세트산염 + 아르기닌 완충액을 포함하는 제제와 비교하여 더 높은 수준의 산 종류를 가졌다 (도 7a). pH 5.8에서 125 mg/ml 아테졸리주맙 및 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제는 다른 제제와 비교하여 더 낮은 수준의 염기 종류를 가졌다 (도 7b).
제시된 산물 안정성 결과에 근거하여, pH 5.8에서 125 mg/mL 아테졸리주맙 및 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제가 아테졸리주맙에 대한 제제로 선택되었다.
실시예 3: 폴리소르베이트 20 안정성
도 8a-8b는 다양한 DP 제제에서 3 개월까지 동안 40 ℃ (도 8a)에서 및 25 ℃ (도 8b)에서 폴리소르베이트 20의 안정성을 보여준다. 모든 제제는 125 mg/ml 아테졸리주맙 (도면에서 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. 폴리소르베이트 20은 40℃ 및 25℃ 둘 모두에서 3 개월 후, 다른 2개의 제제와 비교하여 히스티딘 아세트산염 및 pH 5.8을 포함하는 제제에서 더 적은 분해를 보여주었다.
전술된 25℃ 실험으로부터 데이터가 25 ℃에서 6 개월 후 손실된 폴리소르베이트 20의 이론적 양을 계산하는 데 이용되었다. 아래의 표에서 알 수 있는 바와 같이, 폴리소르베이트 20은 다른 2개의 제제와 비교하여 히스티딘 아세트산염 및 pH 5.8을 포함하는 제제에서 6 개월 후 더 적은 분해를 보여줄 것으로 예측된다.
Figure pct00002
아테졸리주맙의 산물 안정성에 더하여, 히스티딘 아세트산염 및 pH 5.8을 포함하는 제제는 폴리소르베이트 20 안정성을 가장 효과적으로 유지하였다.
실시예 4: rHuPH20 활성
도 9a-9b는 25 ℃에서 3 개월까지 동안 다양한 DP 제제를 이용한 rHuPH20 활성 검정을 보여준다. 모든 제제는 150 mg/ml 또는 125 mg/ml의 아테졸리주맙 (도면에서 150 mg 또는 125 mg으로서 표시됨), 20 mM 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. pH 5.8에서 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제는 pH 5.5에서 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제보다 높은 수준에서 rHuPH20 활성을 유지하였다. pH를 증가시키는 것 또한 25C에서 rHuPH20 안정성을 증가시켰다. 비록 히스티딘 염산염을 포함하는 제제가 다른 제제와 비교할 때, 가속화된 조건에서 rHuPH20의 더 나은 안정성 (도 9b)을 제공하긴 하지만, 히스티딘 염산염은 아테졸리주맙에 충분히 적합하지 않았다. 비록 히스티딘 아세트산염을 포함하는 제제의 경우에 가속화된 조건에서 rHuPH20 활성에서 약간 감소가 관찰되긴 하지만, 이것은 5℃ 보관에서는 관찰되지 않았다. 결과적으로, 히스티딘 아세트산염 및 pH 5.8을 포함하는 제제가 아테졸리주맙에 대해 선택되었다.
도 10a-10b는 24 시간 동안 교반되는 동안, 상이한 농도의 폴리소르베이트를 포함하는 제제에서 rHuPH20 활성을 보여준다. 더 높은 농도의 폴리소르베이트는 실온에서 교반하에, rHuPH20 활성을 더 높은 수준에서 유지하였다. 교반에 대항하여 rHuPH20 손실을 예방하기 위해, 최소한 0.03% (w/v) 폴리소르베이트 20이 필요하다. 폴리소르베이트 20 방출 기준 및 보관 수명에 걸쳐 가능한 폴리소르베이트 분해를 고려하여, 0.06% (w/v)의 폴리소르베이트 20 수준이 제제에 대해 선택되었다.
실시예 5: 의약품 (DP) 제제 점도
도 11은 5℃ 및 25℃ 사이의 온도에서 다양한 DP 제제의 점도를 보여준다. 모든 제제는 127-128 mg/ml 아테졸리주맙, 20 mM 히스티딘 아세트산염 또는 히스티딘 염산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 그리고 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하였다. 히스티딘 염산염을 포함하는 제제는 평가된 모든 온도에서 가장 높은 점도를 가졌다.
이들 실시예에서 설명된 제제 선별검사에 근거하여, pH 5.8에서 125 mg/ml 아테졸리주맙, 20 mM 히스티딘 아세트산염, 240 mM 수크로오스, 10 mM 메티오닌, 0.06% 폴리소르베이트 20, 2000 U/ml 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)를 포함하는 DP 제제가 피하 투여를 위한 아테졸리주맙 제제에 대해 선택되었다.
SEQUENCE LISTING <110> Genentech, Inc. <120> ANTI-PD-L1 ANTIBODY FORMULATIONS <130> 14639-20499.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/945,730 <151> 2019-12-09 <160> 10 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His 1 5 10 <210> 5 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 8 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 10 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445

Claims (55)

  1. 액상 제약학적 제제이며,
    약 100 g/L 내지 약 150 g/L 농도의 단일클론 항-PD-L1 항체,
    약 15 mM 내지 약 25 mM 농도의 히스티딘 아세트산염,
    약 200 mM 내지 약 280 mM 농도의 수크로오스,
    약 0.04% (w/v) 내지 약 0.08% (w/v) 농도의 폴리소르베이트,
    약 5 mM 내지 약 15 mM 농도의 메티오닌, 및
    약 5.6 내지 약 6.0의 pH
    를 포함하고,
    상기 단일클론 항체는
    (a) (1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1,
    (2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2,
    (3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및
    (b) (1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1,
    (2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2,
    (3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3
    을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 액상 제약학적 제제.
  2. 청구항 제1항에 있어서, 제제 중 단일클론 항체는 약 120 g/L 내지 약 130 g/L의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  3. 청구항 제1항에 있어서, 제제 중 단일클론 항체는 약 125 g/L의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  4. 청구항 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘 아세트산염은 약 17 mM 내지 약 22 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  5. 청구항 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘 아세트산염은 약 20 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  6. 청구항 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로오스는 약 220 mM 내지 약 260 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  7. 청구항 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로오스는 약 240 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  8. 청구항 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, pH는 약 5.8인 액상 제약학적 제제.
  9. 청구항 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제제 중 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20인 액상 제약학적 제제.
  10. 청구항 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리소르베이트는 약 0.05% (w/v) 내지 약 0.07% (w/v)의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  11. 청구항 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리소르베이트는 약 0.06% (w/v)의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  12. 청구항 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 메티오닌은 약 10 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  13. 청구항 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    히알루론산분해효소
    를 더욱 포함하는 액상 제약학적 제제.
  14. 청구항 제13항에 있어서, 히알루론산분해효소는 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)인 액상 제약학적 제제.
  15. 청구항 제13항 또는 제14항에 있어서, 히알루론산분해효소는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  16. 청구항 제13항 또는 제14항에 있어서, 히알루론산분해효소는 약 2000 U/ml의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  17. 액상 제약학적 제제이며,
    약 100 g/L 내지 약 150 g/L 농도의 단일클론 항-PD-L1 항체,
    약 15 mM 내지 약 25 mM 농도의 히스티딘 아세트산염,
    약 200 mM 내지 약 280 mM 농도의 수크로오스,
    약 0.01% (w/v) 내지 약 0.03% (w/v) 농도의 폴리소르베이트, 및
    약 5.3 내지 약 5.7의 pH
    를 포함하고,
    상기 단일클론 항체는
    (a) (1) 아미노산 서열 RASQDVSTAVA (서열 번호: 1)를 포함하는 HVR-L1,
    (2) 아미노산 서열 SASFLYS (서열 번호: 2)를 포함하는 HVR-L2,
    (3) 아미노산 서열 QQYLYHPAT (서열 번호: 3)를 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및
    (b) (1) 아미노산 서열 GFTFSDSWIH (서열 번호: 4)를 포함하는 HVR-H1,
    (2) 아미노산 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 번호: 5)를 포함하는 HVR-H2,
    (3) 아미노산 서열 WPGGFDY (서열 번호: 6)를 포함하는 HVR-H3
    을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 액상 제약학적 제제.
  18. 청구항 제17항에 있어서, 제제 중 단일클론 항체는 약 120 g/L 내지 약 130 g/L의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  19. 청구항 제17항에 있어서, 제제 중 단일클론 항체는 약 125 g/L의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  20. 청구항 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘 아세트산염은 약 17 mM 내지 약 22 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  21. 청구항 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘 아세트산염은 약 20 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  22. 청구항 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로오스는 약 220 mM 내지 약 260 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  23. 청구항 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로오스는 약 240 mM의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  24. 청구항 제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, pH는 약 5.5인 액상 제약학적 제제.
  25. 청구항 제17항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 제제 중 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20인 액상 제약학적 제제.
  26. 청구항 제17항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리소르베이트는 약 0.02% (w/v)의 농도로 존재하는 것인 액상 제약학적 제제.
  27. 청구항 제17항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에게 투여되기에 앞서 히알루론산분해효소와 혼합되는 액상 제약학적 제제.
  28. 청구항 제27항에 있어서, 히알루론산분해효소는 재조합 인간 히알루론산분해효소 (rHuPH20)인 액상 제약학적 제제.
  29. 청구항 제27항 또는 제28항에 있어서, 혼합물 중 히알루론산분해효소 농도는 약 1000 U/ml 내지 약 3000 U/ml인 액상 제약학적 제제.
  30. 청구항 제27항 또는 제28항에 있어서, 혼합물 중 히알루론산분해효소 농도는 약 2000 U/ml인 액상 제약학적 제제.
  31. 청구항 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체는 선행 동결 건조가 진행되지 않는 것인 액상 제약학적 제제.
  32. 청구항 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체는 인간화 항체인 액상 제약학적 제제.
  33. 청구항 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체는
    서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및
    서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 액상 제약학적 제제.
  34. 청구항 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체는 전장 항체인 액상 제약학적 제제.
  35. 청구항 제34항에 있어서, 단일클론 항체는 IgG1 항체인 액상 제약학적 제제.
  36. 청구항 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체는
    서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
    서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
    를 포함하는 것인 액상 제약학적 제제.
  37. 청구항 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체는 유리 바이알 또는 금속 합금 용기에서 보관되는 것인 액상 제약학적 제제.
  38. 청구항 제37항에 있어서, 금속 합금은 316L 스테인리스강 또는 하스텔로이인 액상 제약학적 제제.
  39. 청구항 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 2-8℃에서 적어도 6 개월 동안 안정적인 것인 액상 제약학적 제제.
  40. 청구항 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 2-8℃에서 적어도 12 개월 동안 안정적인 것인 액상 제약학적 제제.
  41. 청구항 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 2-8℃에서 적어도 24 개월 동안 안정적인 것인 액상 제약학적 제제.
  42. 청구항 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 제제 중 항체는 보관 후 그의 생물학적 활성의 적어도 약 80%를 유지하는 것인 액상 제약학적 제제.
  43. 청구항 제42항에 있어서, 생물학적 활성은 PD-L1에 대한 항체 결합에 의해 계측되는 것인 액상 제약학적 제제.
  44. 청구항 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 무균(sterile)인 액상 제약학적 제제.
  45. 청구항 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 개체로의 투여에 적합한 액상 제약학적 제제.
  46. 청구항 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 피하 투여를 위한 액상 제약학적 제제.
  47. 청구항 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항의 액상 제약학적 제제를 담는 용기
    를 포함하는 제조 물품.
  48. 청구항 제47항에 있어서, 용기는 유리 바이알 또는 금속 합금 용기인 제조 물품.
  49. 청구항 제48항에 있어서, 금속 합금은 316L 스테인리스강 또는 하스텔로이인 제조 물품.
  50. 청구항 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항의 액상 제약학적 제제를 담는 용기
    를 포함하는 키트.
  51. 개체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법이며,
    청구항 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항의 액상 제약학적 제제의 효과량을 개체에게 투여하는 단계
    를 포함하고,
    상기 질환 또는 장애는 감염, 암 및 염증성 질환으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
  52. 청구항 제51항에 있어서, 질환 또는 장애는 암인 방법.
  53. 청구항 제52항에 있어서, 암은 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 요로상피세포 암종 및 유방암으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
  54. 청구항 제53항에 있어서, 유방암은 삼중 음성 유방암인 방법.
  55. 청구항 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 개체는 인간인 방법.
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