KR20220097312A - Composition for enhancing cancer treatment effect containing nintedanib and use thereof - Google Patents

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장미희
고가연
육채민
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한국과학기술연구원
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Abstract

The present invention relates to a pharmaceutical composition for enhancing a therapeutic effect of cancer containing nintedanib as an active ingredient and uses thereof. The composition of the present invention kills cancer fibroblast, inhibits proliferation of cancer fibroblast, and inhibits the expression level of growth factors and the like, so that it is possible to reduce anticancer drug resistance by inhibiting the composition of a tumor microenvironment. Therefore, it is possible to enhance a cancer treatment effect by using the composition.

Description

닌테다닙을 포함하는 암 치료 효과 증진용 조성물 및 이의 용도 {Composition for enhancing cancer treatment effect containing nintedanib and use thereof}Composition for enhancing cancer treatment effect containing nintedanib and use thereof

본 발명은 닌테다닙(Nintedanib)을 유효성분으로 포함하는 암의 치료 효과 증진용 약학 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of cancer comprising nintedanib as an active ingredient and a use thereof.

대한민국 통계청의 분석에 따르면 암은 대한민국의 제 1의 사망원인으로 남성이 31.7%, 여성이 22.5%를 차지하며 전체 인구의 31.7%가 암으로 사망한다. 암을 치료하기 위한 방법으로는 수술을 통한 치료, 방사선 치료 그리고 항암제 투여를 통한 치료 등이 있으나 이러한 치료방법들은 부작용이 수반되거나, 암의 진행 정도에 따라 시술이 제한적으로 적용된다. 특히, 대부분의 항암제는 분열이 왕성한 세포의 세포주기를 멈추게 하고 사멸케 하는 메커니즘으로 작동하기 때문에 세포 이외에도 정상적으로 분열하는 세포를 공격해서 탈모, 식욕부진 그리고 백혈구 감소로 인한 면역력 저하 등의 부작용을 동반한다. 이로 인해 거듭된 연구결과 양적인 측면에서는 그 종류가 늘었지만, 질적인 측면에서는 큰 변화가 없었다.According to the analysis of the National Statistical Office of the Republic of Korea, cancer is the number one cause of death in Korea, accounting for 31.7% of men and 22.5% of women, and 31.7% of the total population die from cancer. Methods for treating cancer include treatment through surgery, radiation treatment, and treatment with anticancer drugs, but these treatment methods are accompanied by side effects or are limited in treatment depending on the degree of cancer progression. In particular, since most anticancer drugs work as a mechanism to stop and kill the cell cycle of actively dividing cells, they attack normally dividing cells in addition to cells, causing side effects such as hair loss, loss of appetite, and decreased immunity due to decreased white blood cell count. . As a result of repeated research, the number of types increased in terms of quantity, but there was no significant change in terms of quality.

항암화학요법을 이용한 암치료에 있어서 장애가 되는 요소 중의 하나는 항암제 내성이다. 암환자에 대한 항암화학요법이 성공하기 위해서는 정상조직이 살아남을 수 있는 혈중농도에서 환자는 부작용을 감수할 수 있어야 하고 암세포는 사멸해야 한다. 그러나 항암제를 지속적으로 투여하는 경우 항암제에 대한 약제 내성은 암세포를 죽일 수 있는 혈중농도에 도달할 수 있는 양의 항암제를 투여했음에도 불구하고 암세포가 죽지 않는 경우가 발생하는데, 이를 항암제 내성이라고 한다.One of the obstacles in cancer treatment using chemotherapy is anticancer drug resistance. In order for chemotherapy to be successful for cancer patients, the patient must be able to tolerate side effects at a blood concentration at which normal tissues can survive, and cancer cells must die. However, when anticancer drugs are continuously administered, drug resistance to anticancer drugs occurs when cancer cells do not die despite administration of an amount of anticancer drug that can reach a blood concentration that can kill cancer cells, which is called anticancer drug resistance.

항암제 내성은 환자에 따라 다를 수 있으며, 심지어 같은 조직으로부터 유래된 종양들 사이의 유전적 차이 등을 포함한 다양한 인자들에 의해 유발될 수도 있다. 항암제 내성 기전은 일반적으로 세포외적 내성과 세포 내적 내성으로 크게 분류될 수 있는데, 세포외적 내성은 환자에 따라 특이적으로 심한 부작용을 나타내 충분한 농도의 항암제를 투여하지 못한 경우나 경구용 항암제를 투여했을 때처럼 장내 흡수가 비정상적으로 저하된 경우에 환자의 암세포가 in vitro에서 암세포를 죽일 수 있는 농도에 노출되지 못 했기 때문에 항암제에 대해 내성을 보일 수 있다. 혹은 충분한 혈중농도에는 도달했으나 암조직으로의 혈류분포가 좋지 않거나 생리학적으로 혈관과 암조직 사이에 장벽(blood-tissue barrier)이 있음으로 해서 약물이 조직내로 침투가 되지 못 하는 부위(pharmacologic sanctuary)에 암세포가 존재하는 경우와 같이, 궁극적으로 암세포가 충분한 농도의 항암제에 노출되지 못 할 때에도 항암제 내성이 나타난다.　 이에 반해 세포 내적 내성은 암세포가 충분한 농도의 항암제에 노출되었는데도 불구하고, 약제의 흡수를 저하시키거나 방출을 촉진시켜 궁극적으로 약제 전달기전이 변화한 경우와, 약제의 활성을 저하시키거나 불활성화를 증진시키는 약제 대사과정의 변이가 유발된 경우, 약제 표적의 증감 또는 돌연변이로 인한 표적의 변이, 그리고 손상된 표적의 복구기전이 활성화되어 고농도의 항암제가 존재함에도 불구하고 암세포들이 죽지 않는 현상을 의미한다.Anticancer drug resistance may vary from patient to patient, and may even be induced by various factors, including genetic differences between tumors derived from the same tissue. In general, anticancer drug resistance mechanisms can be broadly classified into extracellular resistance and intracellular resistance. In cases where intestinal absorption is abnormally reduced, as is the case, the patient's cancer cells may show resistance to anticancer drugs because they have not been exposed to a concentration that can kill cancer cells in vitro. Or, a site where the drug cannot penetrate into the tissue (pharmacologic sanctuary) because sufficient blood concentration has been reached but the blood flow to the cancer tissue is poor or there is a physiological barrier between the blood vessel and the cancer tissue (pharmacologic sanctuary). As in the case where cancer cells exist in cancer cells, ultimately, resistance to anticancer drugs appears even when cancer cells are not exposed to a sufficient concentration of anticancer drugs. On the other hand, intracellular resistance is a case in which the drug delivery mechanism is ultimately changed by reducing drug absorption or promoting release even when cancer cells are exposed to a sufficient concentration of an anticancer agent, and when the drug activity is reduced or inactivated. When a mutation in the metabolic process of a drug that promotes is induced, the target mutation due to increase or decrease or mutation of the drug target, and the recovery mechanism of the damaged target are activated, so that cancer cells do not die despite the presence of a high concentration of anticancer agent.

한편, 암세포의 증식과 침습, 혈관 전이 후 암세포의 정착 등에 영향을 미친다고 알려진 암 섬유아세포는 극히 최근에 등장한 개념으로서 연구의 초창기에 있고 그 잠재적 가치에 비해 아직까지는 경쟁이 치열하지 않은 실정이다.On the other hand, cancer fibroblasts, which are known to affect the proliferation and invasion of cancer cells, and the colonization of cancer cells after vascular metastasis, are a very recent concept and are in the early stages of research, and competition is not yet fierce compared to their potential value.

현재 항암 치료의 가장 큰 문제점이 항암제 내성 및 새로운 항암치료 표적의 부족이라는 점을 고려할 때, 이러한 문제를 해결하기 위해 암 섬유아세포의 성장 등을 효과적으로 억제할 수 있는 치료제의 개발이 필요하다.Considering that the biggest problem of current anticancer treatment is anticancer drug resistance and lack of new anticancer treatment targets, it is necessary to develop a therapeutic agent that can effectively inhibit the growth of cancer fibroblasts, etc. to solve these problems.

일 양상은 닌테다닙(Nintedanib) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암의 치료 효과 증진용 약학 조성물을 제공한다.One aspect provides a pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of cancer comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

다른 양상은 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.Another aspect provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and an anticancer agent as an active ingredient.

또 다른 양상은 상기 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.Another aspect provides a method of treating cancer, comprising administering to an individual a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancer.

또 다른 양상은 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 면역세포치료제의 치료 효과 증진용 약학 조성물을 제공한다.Another aspect provides a pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of an immune cell therapy, comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

일 양상은 닌테다닙(Nintedanib) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암의 치료 효과 증진용 약학 조성물을 제공하는 것이다. One aspect is to provide a pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of cancer comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 명세서에서의 용어, "닌테다닙(Nintedanib)"은 특발성 폐 섬유증(idiopathic pulmonary fibrosis) 및 일부 유형의 비소세포성 폐암 치료제로 알려져 있는 것으로서, 상품명 오페브(Ofev) 및 바르가테프(Vargatef)로 판매되고 있으며, 하기 화학식 1의 구조식을 가지고 있다.As used herein, the term "Nintedanib" is a known therapeutic agent for idiopathic pulmonary fibrosis and some types of non-small cell lung cancer, under the trade names Ofev and Vargatef. It is sold, and has the structural formula of the following Chemical Formula 1.

[화학식 1][Formula 1]

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본 명세서에서의 용어 "암"은 신체 조직의 자율적인 과잉 성장에 의해 비정상적으로 자라난 종양, 또는 종양을 형성하는 병을 의미한다. 상기 암은 고형암일 수 있으며, 구체적으로 흑색종, 편평세포암종, 유방암, 두경부암, 갑상선암, 연부조직육종, 골육종, 고환암, 전립선암, 난소암, 방광암, 피부암, 뇌암, 혈관육종, 비만세포종, 백혈병, 림프종, 간암, 폐암, 췌장암, 위암, 신장암, 대장암, 조혈 종양, 신경 모세포종, 표피암종 및 이의 전이암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있으며, 보다 구체적으로 췌장임일 수 있다.As used herein, the term “cancer” refers to a tumor that has grown abnormally due to the autonomous overgrowth of body tissues, or a disease that forms a tumor. The cancer may be a solid cancer, specifically melanoma, squamous cell carcinoma, breast cancer, head and neck cancer, thyroid cancer, soft tissue sarcoma, osteosarcoma, testicular cancer, prostate cancer, ovarian cancer, bladder cancer, skin cancer, brain cancer, angiosarcoma, mastocytoma, It may be at least one selected from the group consisting of leukemia, lymphoma, liver cancer, lung cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, kidney cancer, colorectal cancer, hematopoietic tumor, neuroblastoma, epidermal carcinoma, and metastatic cancer thereof, and more specifically, it may be pancreas.

본 명세서에서의 용어 “약학적으로 허용가능한 염"은, 양이온과 음이온이 정전기적 인력에 의해 결합하고 있는 물질인 염 중에서도 약제학적으로 사용될 수 있는 형태의 염을 의미하는데, 통상적으로 금속염, 유기 염기와의 염, 무기산과의 염, 유기산과의 염, 염기성 또는 산성 아미노산과의 염 등이 될 수 있다. 예를 들어, 금속염으로는 알칼리 금속염(나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염(칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등), 알루미늄염 등이 될 수 있고; 유기 염기와의 염으로는 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 2,6-루티딘, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N,N-디벤질에틸렌디아민 등과의 염이 될 수 있으며; 무기산과의 염으로는 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과의 염이 될 수 있고; 유기산과의 염으로는 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등과의 염이 될 수 있으며; 염기성 아미노산과의 염으로는 아르기닌, 라이신, 오르니틴 등과의 염이 될 수 있고; 산성 아미노산과의 염으로는 아스파르트산, 글루탐산 등과의 염이 될 수 있다. 특히 바람직한 염으로는, 화합물이 그 내에 산성관능기를 가지는 경우, 알칼리 금속염 (예컨대, 나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염 (예컨대, 칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등) 등과 같은 무기염, 및 암모늄염과 같은 유기 염이 있으며, 화합물이 그 내에 염기성 관능기를 가지는 경우, 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과 같은 무기산과의 염, 아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산 등과 같은 유기산과의 염이 있다.As used herein, the term “pharmaceutically acceptable salt” refers to a salt in a form that can be used pharmaceutically among salts that are substances in which a cation and an anion are combined by electrostatic attraction, typically a metal salt, an organic base. It can be a salt with, a salt with an inorganic acid, a salt with an organic acid, a salt with a basic or acidic amino acid, etc. For example, as a metal salt, an alkali metal salt (sodium salt, potassium salt, etc.), an alkaline earth metal salt (calcium salts, magnesium salts, barium salts, etc.), aluminum salts, etc. Salts with organic bases include triethylamine, pyridine, picoline, 2,6-lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine , cyclohexylamine, dicyclohexylamine, N,N-dibenzylethylenediamine, etc. Salts with inorganic acids may be salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, etc.; Salts with organic acids include formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, phthalic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, etc.; salts of arginine, lysine, ornithine, etc.; salts with acidic amino acids may be salts with aspartic acid, glutamic acid, etc. As particularly preferred salts, the compound contains an acidic functional group therein When having, there are inorganic salts such as alkali metal salts (eg, sodium salt, potassium salt, etc.), alkaline earth metal salt (eg calcium salt, magnesium salt, barium salt, etc.) and the like, and organic salts such as ammonium salt, wherein the compound is contained therein. In the case of having a basic functional group, salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, etc., organic acids such as acetic acid, phthalic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, etc. There is a salt of

본 명세서에서의 용어, "암 치료 효과 증진"또는 "항암 효과 증진”은 암세포의 항암제에 대한 내성을 감소시키거나, 또는 항암제에 대한 감수성/민감성 증가시켜 항암제의 암 치료 효과를 개선 및/또는 향상시키는 것을 의미한다. As used herein, the term "enhancement of cancer treatment effect" or "enhancement of anticancer effect" refers to reducing the resistance of cancer cells to an anticancer agent, or increasing sensitivity/sensitivity to an anticancer agent to improve and/or improve the cancer treatment effect of an anticancer agent means to do

상기 조성물은 항암 치료 보조제일 수 있다. 본 명세서에 있어서, "보조제(adjuvant)"란 주 약물, 즉, 항암제의 약효를 보조하여 치료 효과를 개선 및/또는 향상시키거나, 주 약물의 유해한 작용을 막거나 완화하는 목적으로 사용되는 보조 약물을 의미한다.The composition may be an adjuvant for anticancer treatment. As used herein, the term "adjuvant" refers to a main drug, that is, an adjuvant drug used for the purpose of improving and/or enhancing the therapeutic effect by assisting the drug efficacy of the anticancer agent, or preventing or alleviating the harmful action of the main drug. means

상기 조성물은 종양 미세환경(Tumor microenvironment)의 형성 또는 활성을 저해하는 것일 수 있다.The composition may inhibit the formation or activity of a tumor microenvironment.

본 명세서에서의 용어 "종양 미세환경(Tumor microenvironment)"또는 "암 미세환경"은 암 세포 주변의 다른 세포들과 세포외 기질(extracellular matrix), 성장호르몬, 신호전달 물질 등의 복잡하고 다양한 요소로 구성된 총체를 의미하는 것으로서, 섬유아세포(fibroblast), 대식세포(macrophage), 림프구(lymphocyte), 내피 세포(endothelial cell), 혈관주위세포(pericyte), 평활근(smooth muscle), 말초 신경(peripheral nerve) 등 10가지가 넘는 세포와 1000 종이 넘는, 아직도 제대로 규명되지 않은 다양한 세포외 기질로 구성되며, 개개 암세포의 특성에 따라 이 세포들과 세포외 기질의 조합이 상이하며 매우 복잡하고 다양하게 구성된다. 1889년 영국의 의사 Dr. Stephen Paget이 'seed and soil' 이론을 제시하며 암세포라는 seed가 성장하는 데에는 종양 미세환경이 soil으로서 중요한 역할을 한다고 발표하여 종양 미세환경이 암의 발생 및 진행에 필수적인 역할을 한다고 제시한 바 있다. 최근 암세포 자체를 공격하는 기존의 항암 치료법만으로는 암의 진행과 전이를 막을 수 없다는 한계를 극복하기 위한 방법으로서 종양 미세환경을 타겟으로 하는 새로운 치료법에 관심이 쏠리고 있는 추세이다.As used herein, the term "tumor microenvironment" or "cancer microenvironment" refers to other cells around cancer cells and complex and various elements such as extracellular matrix, growth hormone, and signaling substances. As it means the total body composed of, fibroblast, macrophage, lymphocyte, endothelial cell, pericyte, smooth muscle (smooth muscle), peripheral nerve (peripheral nerve) It consists of more than 10 types of cells and more than 1000 types of extracellular matrix that has not yet been properly identified. In 1889, the British physician Dr. Stephen Paget presented the 'seed and soil' theory and announced that the tumor microenvironment plays an important role as soil for the growth of seeds called cancer cells, suggesting that the tumor microenvironment plays an essential role in the development and progression of cancer. Recently, attention is focused on new therapies targeting the tumor microenvironment as a method to overcome the limitation that existing anticancer therapies that attack cancer cells themselves cannot prevent cancer progression and metastasis.

상기 조성물은 암 섬유아세포(Cancer associated fibroblasts, CAF)의 활성을 억제할 수 있으며, 구체적으로 상기 암 섬유아세포의 사멸을 유도하거나 증식을 억제하는 것일 수 있다.The composition may inhibit the activity of cancer fibroblasts (Cancer associated fibroblasts, CAF), specifically, may induce apoptosis or inhibit proliferation of the cancer fibroblasts.

본 명세서에서의 용어 "암 섬유아세포(Cancer associated fibroblasts, CAF)"또는 "암 연관 섬유아세포"는 암 세포 주변의 섬유아세포로서 정상 조직의 일반적인 섬유아세포와 형태 및 기능면에서 상이한 특성을 지니고 있으며,"tumor-associated fibroblast", "carcinogenic-associated fibroblast" 또는 "activated fibroblast"로도 불린다. 상기 암 섬유아세포 및 이로부터 발현/분비되는 각종 성장인자, 사이토카인 등은 암세포의 증식을 촉진하고, 다른 염증세포들을 암세포 주변으로 불러들여 암의 침습 및 정착을 촉진하며, 기존의 항암치료의 효과를 크게 떨어뜨리고, 암세포에 대한 인체의 면역반응을 무력화시킨다. 따라서, 상기 암 섬유아세포를 억제하면 암의 증식, 악성 종양의 진행과 전이를 차단하는 데 큰 도움이 될 수 있으며, 기존 항암제의 효과를 향상시킬 수 있고, 인체면역반응을 정상화시킬 수 있다. As used herein, the term "Cancer associated fibroblasts (CAF)" or "Cancer associated fibroblasts" refers to fibroblasts surrounding cancer cells and has characteristics different from those of normal fibroblasts in normal tissues in terms of shape and function, Also called "tumor-associated fibroblast", "carcinogenic-associated fibroblast" or "activated fibroblast". The cancer fibroblasts and various growth factors and cytokines expressed/secreted therefrom promote the proliferation of cancer cells, bring other inflammatory cells to the vicinity of the cancer cells to promote the invasion and settlement of cancer, and the effect of existing anticancer treatment It greatly reduces the immune system and neutralizes the body's immune response to cancer cells. Therefore, inhibition of the cancer fibroblasts can be of great help in blocking cancer proliferation, progression and metastasis of malignant tumors, can improve the effects of existing anticancer drugs, and normalize the immune response of the body.

또한, 상기 암 섬유아세포는 콜라겐(collagen), 라미닌(laminin), 피브로넥틴(fibronectin), 테나신-C(Tenascin-C) 등의 다양한 세포외 기질(extracellular matrix)을 합성하여 암세포 주변을 채우는 등 종양 미세환경을 구성하는 데에 가장 중요한 세포로 알려져 있다.In addition, the cancer fibroblasts synthesize various extracellular matrices such as collagen, laminin, fibronectin, and Tenasin-C to fill the periphery of cancer cells. It is known as the most important cell in composing the microenvironment.

상기 조성물에 의해 활성이 억제되는 암 섬유아세포는 PDGFR (Platelet-derived growth factor receptor) 또는 FGFR (Fibroblast growth factor receptor)를 발현하는 암 섬유아세포일 수 있으며, 구체적으로 상기 PDGFR 또는 FGFR의 발현 수준이 높은 암 섬유아세포일 수 있다. 또한, 상기 PDGFR는 PDGFR-β일 수 있으며, 상기 FGFR은 FGFR1일 수 있다.Cancer fibroblasts whose activity is inhibited by the composition may be cancer fibroblasts expressing platelet-derived growth factor receptor (PDGFR) or fibroblast growth factor receptor (FGFR), specifically, a high expression level of PDGFR or FGFR. and cancer fibroblasts. In addition, the PDGFR may be PDGFR-β, and the FGFR may be FGFR1.

상기 조성물은 암섬유아세포의 사이토카인, 성장 인자 및/또는 이들의 수용체의 활성을 억제할 수 있으며, 구체적으로 이들의 발현 수준 및/또는 분비를 억제하는 것일 수 있다. 또한, 상기 사이토카인, 성장 인자 및 이들의 수용체는 암세포 증식을 촉진하거나 암 미세환경을 조성하는 데에 영향을 미치는 것일 수 있다.The composition may inhibit the activity of cytokines, growth factors and/or their receptors in cancer fibroblasts, and specifically inhibit their expression level and/or secretion. In addition, the cytokines, growth factors, and their receptors may have an effect on promoting cancer cell proliferation or creating a cancer microenvironment.

상기 사이토카인 또는 성장 인자는 M-CSF(Macrophage colony-stimulating factor), NT-3(Neurotrophin-3), NT-4, TGF-α (Transforming growth factor-α), TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, VEGF(Vascular endothelial growth factor), VEGF3, VEGF-D, PDGF-AA (Platelet-derived growth factor-AA), PDGF-AB, PDGF-BB, PLGF(Placental growth factor) 및 SCF(Stem cell factor)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있다.The cytokine or growth factor is M-CSF (Macrophage colony-stimulating factor), NT-3 (Neurotrophin-3), NT-4, TGF-α (Transforming growth factor-α), TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, VEGF (Vascular endothelial growth factor), VEGF3, VEGF-D, PDGF-AA (Platelet-derived growth factor-AA), PDGF-AB, PDGF-BB, PLGF (Placental growth factor) and SCF (Stem cell) factor) may be one or more selected from the group consisting of.

상기 수용체는 PDGFR-β(Platelet-derived growth factor receptor-β), FGFR (Fibroblast growth factor receptor), M-CSFR(Macrophage colony-stimulating factor receptor) 및 VEGFR2(Vascular endothelial growth factor receptor 2)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있으며, 구체적으로 PDGFR-β 및/또는 FGFR일 수 있다.The receptor is PDGFR-β (Platelet-derived growth factor receptor-β), FGFR (Fibroblast growth factor receptor), M-CSFR (Macrophage colony-stimulating factor receptor) and VEGFR2 (Vascular endothelial growth factor receptor 2) from the group consisting of It may be one or more selected, specifically PDGFR-β and/or FGFR.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 PDGFRβ/pPDGFRβ 및/또는 FGFR1/p FGFR1의 발현 수준을 효과적으로 억제할 수 있을을 확인하였는 바, 상기 조성물은 PDGFRβ 또는 FGFR1을 표적으로 하는 것임을 알 수 있다.According to one embodiment, it was confirmed that the composition can effectively inhibit the expression level of PDGFRβ/pPDGFRβ and/or FGFR1/p FGFR1, and it can be seen that the composition targets PDGFRβ or FGFR1.

본 발명의 암의 치료 효과 증진용 약학 조성물은 종양 미세환경을 조성하는 데에 중요한 역할을 하는 암 섬유아세포을 사멸, 증식을 억제하거나, 또는 암 섬유아세포에서 발현되거나 분비되는 사이토카인, 성장 인자 및 이들의 수용체의 발현 수준 및/또는 분비 수준을 감소시킬 수 있다. 따라서, 상기 조성물을 이용하면 종양 미세환경 형성을 억제할 수 있는 바, 종양 미세환경에 의해 유발되는 항암제 내성 등을 감소시킴으로서 암 치료 효과를 개선하거나 증진시킬 수 있다. 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미할 수 있다. 여기서 "약학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.The pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of cancer of the present invention kills cancer fibroblasts, which play an important role in creating a tumor microenvironment, inhibits proliferation, or cytokines, growth factors, and these may reduce the expression level and/or secretion level of the receptor. Therefore, by using the composition, it is possible to suppress the formation of the tumor microenvironment, and by reducing the anticancer drug resistance caused by the tumor microenvironment, it is possible to improve or enhance the cancer treatment effect. The pharmaceutical composition may include a pharmaceutically acceptable carrier. The "pharmaceutically acceptable carrier" may refer to a carrier or diluent that does not inhibit the biological activity and properties of the injected compound without irritating the organism. Here, "pharmaceutically acceptable" means that it does not inhibit the activity of an active ingredient and does not have toxicity beyond what the application (prescription) target can adapt.

상기 조성물은 항암제/암 치료제의 효율 또는 활성 증진용 조성물일 수 있으며, 구체적으로 상기 항암제 또는 암 치료제는 면역항암제 또는 화학항암제일 수 있으며, 보다 구체적으로 자연살해세포(NK 세포) 치료제 또는 CAR-NK 세포치료제일 수 있다.The composition may be a composition for enhancing the efficiency or activity of an anticancer agent/cancer agent, and specifically, the anticancer agent or cancer agent may be an immunotherapy or chemotherapy, and more specifically, a natural killer cell (NK cell) therapeutic agent or CAR-NK It may be a cell therapy product.

상기 조성물은 NK 세포 또는 CAR-NK 세포의 활성을 향상시키는 것일 수 있으며, 구체적으로 암세포 및/또는 암섬유아세포의 존재 하에서 NK 세포 또는 CAR-NK 세포의 활성을 향상시키는 것일 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. The composition may improve the activity of NK cells or CAR-NK cells, and specifically, may improve the activity of NK cells or CAR-NK cells in the presence of cancer cells and/or cancer fibroblasts. The type of carrier that can be used in the present invention may be any carrier that is commonly used in the art and is pharmaceutically acceptable. Non-limiting examples of the carrier include saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, and the like. These may be used alone or in mixture of two or more. The pharmaceutical composition may be prepared as an oral dosage form or a parenteral dosage form according to the route of administration by a conventional method known in the art, including a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredient.

상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제제화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물을 제제화할 경우, 일반적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 또는 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 추가하여 조제될 수 있다.The pharmaceutical composition may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, or sterile injection solutions according to conventional methods, respectively. When formulating the pharmaceutical composition, it may be prepared by adding a diluent or excipient such as a generally used filler, extender, binder, wetting agent, disintegrant, or surfactant.

상기 약학 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.When the pharmaceutical composition is prepared as an oral dosage form, a powder, granule, tablet, pill, dragee, capsule, liquid, gel, syrup, suspension, wafer, etc. formulation according to a method known in the art together with a suitable carrier. can be manufactured with Examples of suitable pharmaceutically acceptable carriers include sugars such as lactose, glucose, sucrose, dextrose, sorbitol, mannitol, and xylitol, starches such as corn starch, potato starch, wheat starch, cellulose, methylcellulose, ethylcellulose, Cellulose such as sodium carboxymethylcellulose and hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, magnesium stearate, mineral oil, malt, gelatin, talc, polyol, vegetable and oil. In the case of formulation activity, if necessary, the formulation may include a diluent and/or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, and a surfactant.

상기 약학 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.When the pharmaceutical composition is prepared for parenteral use, it may be formulated in the form of injections, transdermal administrations, nasal inhalants and suppositories together with suitable carriers according to methods known in the art. In the case of formulation for injection, suitable carriers include sterile water, ethanol, polyols such as glycerol or propylene glycol, or mixtures thereof, preferably Ringer's solution, PBS (phosphate buffered saline) containing triethanolamine, or sterilization for injection. Water, an isotonic solution such as 5% dextrose, etc. may be used. When formulated for transdermal administration, it may be formulated in the form of an ointment, a cream, a lotion, a gel, an external solution, a pasta agent, a liniment agent, an air roll, and the like. In the case of nasal inhalants, it can be formulated in the form of an aerosol spray using a suitable propellant such as dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide, and the like. witepsol), tween 61, polyethylene glycols, cacao fat, laurin fat, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene stearate, sorbitan fatty acid esters, etc. may be used.

상기 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 상기 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 약학 조성물은 단독으로 투여하거나 공지된 암 질환에 대한 치료 효과를 나타내는 것으로 알려진 성분과 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.The pharmaceutical composition may be administered in a pharmaceutically effective amount, and the term "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat or prevent a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment or prevention, , the effective dose level depends on the severity of the disease, the activity of the drug, the patient's age, weight, health, sex, the patient's sensitivity to the drug, the time of administration of the composition of the present invention used, the route of administration and the rate of excretion, the duration of treatment, and the present It can be determined according to factors including drugs used in combination with or concurrently with the composition of the invention and other factors well known in the medical field. The pharmaceutical composition may be administered alone or in combination with a component known to exhibit a therapeutic effect on a known cancer disease. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with a minimum amount without side effects.

상기 약학 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 성인 1인당 약 0.1ng 내지 약 1,000 mg/kg, 바람직하게는 1 ng 내지 약 100 mg/kg로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량 또는 투여횟수는 어떠한 면으로든 본원의 범위를 한정하는 것은 아니다.The dosage of the pharmaceutical composition can be determined by those skilled in the art in consideration of the purpose of use, the degree of addiction of the disease, the age, weight, sex, history, or the type of material used as an active ingredient, etc. of the patient. For example, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in an amount of about 0.1 ng to about 1,000 mg/kg, preferably 1 ng to about 100 mg/kg per adult, and the administration frequency of the composition of the present invention is particularly limited thereto. Although not limited, it may be administered once a day or administered several times in divided doses. The dosage or frequency of administration is not intended to limit the scope of the present application in any way.

다른 양상은 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다. 상기 "닌테다닙", "암", 및 "약학 조성물"에 대한 설명은 전술한 바와 같다.Another aspect is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and an anticancer agent as an active ingredient. The descriptions of “nintedanib”, “cancer”, and “pharmaceutical composition” are the same as described above.

본 명세서에서의 용어 "치료"는, 본 발명의 조성물의 투여에 의해 암 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "treatment" refers to any action that improves or beneficially changes the symptoms of a cancer disease by administration of the composition of the present invention.

본 명세서에서의 용어 "예방"은, 본 발명의 조성물의 투여에 의해 암 질환 또는 질환의 발병 가능성이 억제되거나 지연되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term “prevention” refers to any action in which the possibility of developing a cancer disease or disease is suppressed or delayed by administration of the composition of the present invention.

상기 항암제는 면역항암제 또는 화학항암제일 수 있다. 구체적으로 화학항암제는 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 페메트렉시드 (Pemetrexed), 시스플라틴 (Cisplatin), 젬시타빈 (Gemcitabine), 카보플라틴 (Carboplatin), 플루오로우라실 (5-FU), 사이클로포스파마이드 (Cyclophosphamide), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 빈크리스틴 (Vincristine), 에토포사이드 (Etoposide), 독소루비신 (Doxorubicin), 타목시펜(tamoxifen), 토레미펜(Toremifene), 풀베스트란트(Fulvestrant), 디인돌리메탄(Diindolylmethane), 엑스메스탄 (Exemestane), 랄록시펜(Raloxifene), 아로마타제 억제제(aromatase inhibitor), 안트라사이클린(Anthracycline), 탁산(Taxan), 이리노테칸(Irinotecan), 에리불린(Eribulin), 도세탁셀(Docetaxel), 및 아브락산(Abraxane) 등일 수 있다.The anti-cancer agent may be an immuno-oncology agent or a chemical anti-cancer agent. Specifically, chemotherapy drugs include oxaliplatin, pemetrexed, cisplatin, gemcitabine, carboplatin, fluorouracil (5-FU), and cyclophosphamide. ), paclitaxel, vincristine, etoposide, doxorubicin, tamoxifen, toremifene, fulvestrant, diindolylmethane, diindolylmethane Exemestane, Raloxifene, aromatase inhibitor, Anthracycline, Taxan, Irinotecan, Eribulin, Docetaxel, and Abraxane (Abraxane) and the like.

상기 면역항암제는 암 세포 자체를 공격하는 기존 항암제와는 달리 우리 몸의 면역 체계를 자극해면역 세포가 암세포를 공격하도록 유도하는 암 치료제로 면역관문억제제, 면역세포치료제, 및 항암면역치료 백신 등이 있다. 상기 면역관문억제제는 암세포를 공격하는 T세포 의 활동을 무력화시키는 면역관문 단백질 (PD1, PDL1, CTLA4, Tim3, LAG3 등)에 특이적으로 결합하는 항체를 사용하여 면역관문 단백질의 활성을 차단해 T세포 가 제대로 기능하도록 하도록 하는 것으로서, 구체적으로 이필리무맙(Ipilimumab), 펨브롤리주맙 (Pembrolizumab), 니볼루맙 (Nivolumab), 아테졸리주맙 (Atezolizumab), 아벨루맙 (Avelumab), 더발루맙(Durmalumab), 및 세미플리맙(Cemiplimab) 등일 수 있다.The immunotherapy is a cancer treatment that stimulates the immune system of the body to induce immune cells to attack cancer cells, unlike existing anticancer drugs that attack cancer cells themselves. have. The immune checkpoint inhibitor uses an antibody that specifically binds to immune checkpoint proteins (PD1, PDL1, CTLA4, Tim3, LAG3, etc.) that neutralize the activity of T cells that attack cancer cells and blocks the activity of the immune checkpoint protein To allow cells to function properly, specifically Ipilimumab, Pembrolizumab, Nivolumab, Atezolizumab, Avelumab, Durmalumab , and semiplimab (Cemiplimab), and the like.

상기 면역세포치료제는 인체의 면역세포인 수지상세포(dendritic cell), 자연살해세포(natural killer cell), T세포 등을 이용해 체내 면역반응을 활성화시켜 암세포를 보다 효과적으로 공격할 수 있도록 하는 치료제를 의미하며, 구체적으로 키메릭 항원 수용체(Chimeric antigen receptor, CAR) T-세포치료제, CAR-NK 세포 치료제가 있으며, 면역세포의 CAR에 T/NK 세포를 활성화 시키는 보조인자를 부착해 암세포를 공격하는 효과를 높일 수도 있다.The immune cell therapy means a therapeutic agent that activates the immune response in the body using dendritic cells, natural killer cells, T cells, etc. , specifically, there are chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy and CAR-NK cell therapy. may be raised

상기 항암 면역치료 백신은 면역 기능을 향상시킬 수 있는 단백질 펩타이드 분자를 암환자에게 투여하여 면역체계를 활성화시킴으로써 체내 면역기능을 증진하고 암세포가 공격되도록 하는 면역치료법을 의미한다.The anti-cancer immunotherapy vaccine refers to an immunotherapy method in which a protein peptide molecule capable of improving immune function is administered to a cancer patient to activate the immune system, thereby enhancing the immune function in the body and allowing cancer cells to be attacked.

상기 조성물에 포함되는 항암제는 면역세포치료제일 수 있다. 상기 면역세포치료제는 야생형의 면역세포 그 자체 또는 유전적으로 조작된 면역세포일 수 있고, 상기 면역세포들은 대상 개체의 자가, 동종 또는 이종에서 유래된 것일 수 있다. 상기 면역세포치료제는 수지상세포(dendritic cell), 자연살해세포(natural killer cell), T 세포(T cell), 종양 침윤 T 세포(tumor-infiltrating lymphocyte, TIL), T 세포 수용체 발현 T 세포 (TCR-modified T cell, TCR-T), 키메릭 항원 수용체 발현 T 세포 (CAR-modified T cell, CAR-T), 림포카인 활성 세포(lymphokine-activated killer, LAK), 및 키메릭 항원 수용체 발현 NK 세포 (CAR-modified NK cell, CAR-NK)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있으며, 구체적으로 NK 세포 또는 CAR-NK 세포일 수 있다.The anticancer agent included in the composition may be an immune cell therapy agent. The immune cell therapy agent may be a wild-type immune cell itself or a genetically engineered immune cell, and the immune cells may be autologous, allogeneic, or xenogeneic. The immune cell therapy is dendritic cells, natural killer cells, T cells (T cells), tumor-infiltrating lymphocytes (TIL), T cell receptor-expressing T cells (TCR- modified T cells (TCR-T), chimeric antigen receptor expressing T cells (CAR-modified T cells, CAR-T), lymphokine-activated killer (LAK), and chimeric antigen receptor expressing NK cells (CAR-modified NK cell, CAR-NK) may be one or more selected from the group consisting of, specifically, may be NK cells or CAR-NK cells.

본 명세서에서 용어, "자연살해세포(Natural killer cell)"는, 선천면역을 담당하는 중요한 림프구 세포로서, 전체 림프구 세포 중 5-10%를 차지하며 T 세포와 달리 간이나 골수에서 성숙한다. 자연살해세포는 다양한 선천면역 수용체를 세포 표면에 발현하여 정상세포와 비정상 세포를 구별할 수 있는 것으로 알려져 있으며 바이러스 감염세포나 종양 세포 등 표적세포를 인지하면 즉각적으로 공격하여 제거할 수 있는 것으로 알려져 있다. 비정상세포를 인지한 자연살해세포는 퍼포린을 분비하여 표적 세포의 세포막에 구멍을 내고, 그랜자임을 세포막 내에 분비하여 세포질을 해체함으로써 세포사멸(Apoptosis) 일으키거나, 세포 내부에 물과 염분을 주입해서 세포 괴사(Necrosis)를 일으킨다. 또한 간접적인 방법으로서, 사이토카인을 분비하여 세포독성 T 세포, B 세포를 활성화시킬 수 있다. 이러한 자연살해세포에 매개되는 면역 작용 효과는 자연살해세포의 수와 높은 활성도가 모두 매우 중요한 척도가 되는 것으로 알려져 있다As used herein, the term "Natural killer cell (Natural killer cell)" is an important lymphocyte cell responsible for innate immunity, accounts for 5-10% of all lymphocytes, and matures in the liver or bone marrow, unlike T cells. Natural killer cells are known to be able to differentiate between normal and abnormal cells by expressing various innate immune receptors on the cell surface. . Natural killer cells recognizing abnormal cells secrete perforin to puncture the cell membrane of the target cell, secrete granzyme into the cell membrane to dismantle the cytoplasm to cause apoptosis, or inject water and salt into the cell This causes cell necrosis. In addition, as an indirect method, cytokines can be secreted to activate cytotoxic T cells and B cells. It is known that both the number and high activity of natural killer cells are very important measures for the immune effect mediated by these natural killer cells.

상기 조성물에 있어서, 상기 닌테다닙은 NK 세포 또는 CAR-NK 세포의 활성을 향상시키는 것일 수 있으며, 구체적으로 암세포 살상 효능 활성을 활성화시키는 것일 수 있다. 예를 들어 NK 세포 활성 마커인 NKp46, NKp30, CD69, NKp44, NKG2C 및 DNAM-1으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 활성 또는 발현 수준을 향상시키는 것일 수 있다.In the composition, the nintedanib may enhance the activity of NK cells or CAR-NK cells, and specifically, may activate the cancer-killing activity. For example, it may be to improve the activity or expression level of one or more selected from the group consisting of NK cell activity markers NKp46, NKp30, CD69, NKp44, NKG2C and DNAM-1.

또한, 상기 조성물에 있어서, 상기 닌테다닙은 선택적으로 NK 세포 또는 CAR-NK 세포의 활성을 향상시키는 것일 수 있으며, 구체적으로 암세포 및/또는 암섬유아세포의 존재 하에서(공배양시) NK 세포 또는 CAR-NK 세포의 활성을 향상시키고, 암세포 및/또는 암섬유아세포이 존재하지 않는 경우에는 NK 세포 또는 CAR-NK의 활성에 영향을 미치지 않는 것일 수 있다.In addition, in the composition, the nintedanib may selectively enhance the activity of NK cells or CAR-NK cells, specifically NK cells or CAR in the presence of cancer cells and/or cancer fibroblasts (in co-culture). -Enhance the activity of NK cells, and when cancer cells and/or cancer fibroblasts do not exist, it may not affect the activity of NK cells or CAR-NK.

상기 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제는 병용 투여되는 것일 수 있으며, 구체적으로 상기 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제는 하나의 제형으로 동시에 투여되거나, 또는 별개의 제형으로 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것일 수 있다.The nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the anticancer agent may be administered in combination, and specifically, the nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the anticancer agent are administered simultaneously in one formulation, or separately The dosage form may be administered simultaneously or sequentially.

또 다른 양상은 상기 암 치료 또는 예방용 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 또는 예방 방법을 제공하는 것이다. 상기 "암", 및 "약학 조성물"에 대한 설명은 전술한 바와 같다.Another aspect is to provide a method for treating or preventing cancer comprising administering the pharmaceutical composition for treating or preventing cancer to an individual. The description of "cancer" and "pharmaceutical composition" is the same as described above.

본 명세서에서 사용되는 용어 "개체"는 암 질환이 발병되거나 발병할 위험이 있는 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물, 조류, 파충류, 양식어류 등을 제한 없이 포함할 수 있으며, 상기 개체는 인간을 제외하는 것일 수 있다.As used herein, the term "subject" may include, without limitation, mammals, birds, reptiles, farmed fish, etc., including mice, livestock, and humans, which are at risk of developing or developing a cancer disease, and the subject is It may exclude humans.

상기 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 이때, 조성물은 액제, 산제, 에어로졸, 주사제, 수액제(링겔), 캡슐제, 환제, 정제, 좌제 또는 패치의 형태로 제형화되어 투여할 수 있다. 상기 암 예방 또는 치료용 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition may be administered singly or multiple times in a pharmaceutically effective amount. In this case, the composition may be formulated and administered in the form of a solution, powder, aerosol, injection, infusion (ringel), capsule, pill, tablet, suppository or patch. The administration route of the pharmaceutical composition for preventing or treating cancer may be administered through any general route as long as it can reach the target tissue.

상기 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피패치투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 등의 경로를 통해 투여 될 수 있다. 다만, 경구 투여 시에는 제형화되지 않은 형태로도 투여할 수 있고, 위산에 의하여 상기 약학 조성물의 유효성분이 변성 또는 분해될 수 있기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화된 형태 또는 경구용 패치형태로 구강내에 투여할 수도 있다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition is not particularly limited thereto, but according to the purpose, intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, transdermal patch administration, oral administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, rectal administration, etc. It can be administered via route. However, when administered orally, it may be administered in an unformulated form, and since the active ingredient of the pharmaceutical composition may be denatured or degraded by gastric acid, the oral composition may be coated with the active agent or formulated to be protected from degradation in the stomach. It can also be administered orally in the form of a powdered form or an oral patch. In addition, the composition may be administered by any device capable of transporting the active substance to a target cell.

또 다른 양상은 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 면역세포치료제의 치료 효과 증진용 약학 조성물을 제공하는 것이다. 상기 "닌테다닙", 및 "약학 조성물"에 대한 설명은 전술한 바와 같다.Another aspect is to provide a pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of an immune cell therapy agent, comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. The description of "nintedanib" and "pharmaceutical composition" is the same as described above.

상기 면역세포치료제는 야생형의 면역세포 그 자체 또는 유전적으로 조작된 면역세포일 수 있고, 상기 면역세포들은 대상 개체의 자가, 동종 또는 이종에서 유래된 것일 수 있다. 구체적으로, 수지상세포(dendritic cell), 자연살해세포(natural killer cell), T 세포(T cell), 종양 침윤 T 세포(tumor-infiltrating lymphocyte, TIL), T 세포 수용체 발현 T 세포 (TCR-modified T cell, TCR-T), 키메릭 항원 수용체 발현 T 세포 (CAR-modified T cell, CAR-T), 림포카인 활성 세포(lymphokine-activated killer, LAK), 및 키메릭 항원 수용체 발현 NK 세포 (CAR-modified NK cell, CAR-NK)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있다.The immune cell therapy agent may be a wild-type immune cell itself or a genetically engineered immune cell, and the immune cells may be autologous, allogeneic, or xenogeneic. Specifically, dendritic cells, natural killer cells, T cells (T cells), tumor-infiltrating lymphocytes (TIL), T cell receptor expressing T cells (TCR-modified T cells) cell, TCR-T), chimeric antigen receptor expressing T cell (CAR-modified T cell, CAR-T), lymphokine-activated killer (LAK), and chimeric antigen receptor expressing NK cell (CAR) -modified NK cell, CAR-NK) may be one or more selected from the group consisting of.

상기 조성물은 표적 부위(조직, 병변 등)에 대한 면역세포치료제의 침윤(infiltration)을 향상시킴으로서 면역세포치료제의 치료 효과를 증진시키는 것일 수 있다.The composition may enhance the therapeutic effect of the immune cell therapy agent by improving the infiltration of the immune cell therapy agent into the target site (tissue, lesion, etc.).

상기 조성물은 암 또는 섬유아세포 관련 질환에 대한 치료 효과를 증진시키는 것일 수 있다. 상기 섬유아세포 관련 질환은 섬유아세포의 비이상적인 증식, 변이 등에 의해 발병하는 질환을 의미하는 것으로서, 구체적으로 폐 섬유화증(Pulmonary Fibrosis), 특발성 폐 섬유화증(Idiopathic Pulmonary Fibrosis), 방사선 조사에 의한 폐 손상(Radiation-induced lung injury) 또는 폐 섬유화, 폐부종, 낭포성 섬유증(Cystic Fibrosis), 간 섬유화, 심내막 심근섬유증(Endomyocardial Fibrosis), 심근경색(Myocardial Infarction), 심방 섬유화(Artrial Fibrosis), 신경교 반흔(Glial scar), 신장 섬유증(Renal Fibrosis), 골수 섬유증(Myelofibrosis), 관절 섬유증(Arthrofibrosis), 지방 섬유증, 피부 섬유증, 신경 섬유증 및 근 섬유증으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있다.The composition may enhance the therapeutic effect on cancer or fibroblast-related diseases. The fibroblast-related disease refers to a disease caused by abnormal proliferation and mutation of fibroblasts, and specifically, lung fibrosis (Pulmonary Fibrosis), idiopathic pulmonary fibrosis (Idiopathic Pulmonary Fibrosis), lung damage caused by radiation (Radiation-induced lung injury) or lung fibrosis, pulmonary edema, cystic fibrosis, liver fibrosis, endomyocardial fibrosis, myocardial infarction, atrial fibrosis, glial scar ( Glial scar), renal fibrosis (Renal Fibrosis), myelofibrosis (Myelofibrosis), joint fibrosis (Arthrofibrosis), fatty fibrosis, skin fibrosis, may be at least one selected from the group consisting of nerve fibrosis and myofibrosis.

본 발명의 조성물은 암 섬유아세포의 사멸, 증식 억제, 및 성장 인자 등의 발현 수준을 억제함으로서, 종양 미세환경 조성을 억제하여 항암제 내성 등을 감소시킬 수 있는 바, 상기 조성물을 이용하여 암 치료 효과를 증진시킬 수 있다.The composition of the present invention can reduce the anticancer drug resistance by suppressing the tumor microenvironment composition by suppressing the apoptosis, proliferation inhibition, and expression levels of growth factors, etc. of cancer fibroblasts, and the cancer treatment effect using the composition can be promoted

도 1은 닌테다닙의 농도별 처리에 따른 췌장암 유래 암섬유아세포(A)와 췌장암 세포주(B)의 생존율을 나타낸 도면이다.
도 2의 A는 췌장암 유래 암섬유아세포의 PDGFR 발현 수준을 나타낸 도면이고, B 및 C는 닌테다닙의 농도별 처리에 따른 췌장암 유래 암섬유아세포에서의 PDGFR, VEGFR2 및 FGFR1 발현 수준변화를 나타낸 도면이다.
도 3은 닌테다닙의 처리 유무에 따른 췌장암 유래 암섬유아세포 배양액의 Secretome 분석 결과를 나타낸 도면이다.
도 4의 A는 각각 GFP 또는 RFP를 발현하는 췌장암 세포주 capan2 및 췌장암 유래 암섬유아세포를 나타낸 도면이고, B는 상기 세포들을 이용한 3D 스페로이드 공배양 시스템을 나타낸 도면이다.
도 5는 3D 스페로이드 공배양 시스템을 이용하여 자연살해세포 및 닌테다닙 처리에 따른 암세포 사멸 효과를 형광현미경으로 관찰한 도면이다.
도 6은 3D 스페로이드 공배양 시스템을 이용하여 자연살해세포 및 닌테다닙 처리에 따른 암세포 사멸 효과를 형광 강도로 그래프화하여 나타낸 도면이다.
도 7은 3D 스페로이드 공배양 시스템을 이용하여 자연살해세포 및 닌텐다닙의 병용 투여에 따른 암세포 사멸 효과를 나타낸 도면이다.
도 8의 A는 NK 세포에 닌텐다닙 처리시의 NK 세포 활성 마커의 발현 수준을 비교한 도면이고, B는 암세포/암섬유아세포의 존재하에 NK 세포에 닌텐다닙 처리시의 NK 세포 활성 마커의 발현 수준을 비교한 도면이다.
도 9의 A는 본 발명에서 제작한 CAR-NK 세포의 모식도를 나타낸 도면이고, B는 CAR-NK세포에서의 CAR 발현 수준을 확인한 도면이고, C는 CAR-NK세포의 암항원 과발현 암세포에 대한 암 살상능을 확인한 도면이고, D는 3D 스페로이드 공배양 시스템을 이용하여 CAR-NK 세포의 암세포 사멸 효과를 확인한 도면이다.
도 10의 A는 in vivo 실험 진행 모식도를 나타낸 도면이고, B 및 C는 CAR-NK세포와 닌텐다닙의 병용 투여에 따른 암 세포 사멸 효과를 동물 실험을 통해 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 11은 닌테다닙 및 자연살해세포 치료제를 이용한 항암 과정을 대략적으로 나타낸 도면이다.1 is a diagram showing the survival rate of pancreatic cancer-derived cancer fibroblasts (A) and pancreatic cancer cell lines (B) according to the treatment by concentration of nintedanib.
FIG. 2A is a diagram showing the PDGFR expression level of pancreatic cancer-derived cancer fibroblasts, B and C are diagrams showing changes in PDGFR, VEGFR2 and FGFR1 expression levels in pancreatic cancer-derived cancer fibroblasts according to treatment by concentration of nintedanib .
Figure 3 is a diagram showing the secretome analysis results of the pancreatic cancer-derived cancer fibroblast culture medium according to the presence or absence of treatment with nintedanib.
4A is a diagram illustrating the pancreatic cancer cell line capan2 and pancreatic cancer-derived cancer fibroblasts expressing GFP or RFP, respectively, and B is a diagram illustrating a 3D spheroid co-culture system using the cells.
5 is a view of observing the cancer cell killing effect of natural killer cells and nintedanib treatment with a fluorescence microscope using a 3D spheroid co-culture system.
6 is a graph showing the cancer cell killing effect of natural killer cells and nintedanib treatment with fluorescence intensity using a 3D spheroid co-culture system.
7 is a diagram showing the cancer cell killing effect according to the combined administration of natural killer cells and nintendanib using a 3D spheroid co-culture system.
FIG. 8A is a diagram comparing the expression level of NK cell activity markers upon treatment with nintendanib in NK cells, and B is a diagram illustrating the expression of NK cell activity markers upon treatment with nintendanib on NK cells in the presence of cancer cells/cancer fibroblasts. It is a diagram comparing the levels.
9A is a diagram showing a schematic diagram of the CAR-NK cells prepared in the present invention, B is a diagram confirming the CAR expression level in CAR-NK cells, and C is a diagram showing the CAR-NK cell overexpressing cancer antigen. It is a view confirming the cancer killing ability, D is a view confirming the cancer cell killing effect of CAR-NK cells using a 3D spheroid co-culture system.
10A is a diagram showing a schematic diagram of the in vivo experiment, B and C are diagrams showing the results of confirming the cancer cell killing effect of CAR-NK cells and nintendanib co-administration through animal experiments.
11 is a diagram schematically showing the anticancer process using nintedanib and natural killer cell therapeutics.

이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, it will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예 1: 닌테다닙의 암섬유아세포 성장 억제 효과 확인Example 1: Confirmation of cancer fibroblast growth inhibitory effect of nintedanib

닌테다닙(Nintedanib)가 암섬유아세포(cancer associated fibroblast, CAF)의 성장을 억제할 수 있는 지 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.To determine whether nintedanib can inhibit the growth of cancer associated fibroblasts (CAF), the following experiment was performed.

먼저, 췌장암 환자 유래 섬유아세포주 4가지를 1X104/웰의 농도로 96웰 플레이트에 하룻동안 배양하고, 닌테다닙 0.1, 1 또는 10uM의 농도로 처리하고, 72시간 뒤 EZ-Cytox (Dozen Bio) 시약을 사용하여, 생존한 세포의 비율을 멀티플레이트 리더기로 495nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과, 닌테다닙의 농도가 증가할수록 섬유아세포의 세포 생존률이 감소하며, 10uM 농도에서는 세포 생존률이 약 50%로 감소되는 것을 확인하였다(도 1A).First, 4 types of pancreatic cancer patient-derived fibroblast lines were cultured in a 96-well plate at a concentration of 1X10 4 /well for one day, treated with nintedanib at a concentration of 0.1, 1 or 10uM, and 72 hours later, EZ-Cytox (Dozen Bio) Using the reagent, the percentage of viable cells was measured for absorbance at 495 nm with a multi-plate reader. As a result, as the concentration of nintedanib increased, the cell viability of fibroblasts decreased, and it was confirmed that the cell viability was reduced to about 50% at a concentration of 10 uM (FIG. 1A).

다음으로, 췌장암 세포주인 capan2 및 miapaca2를 상기와 동일한 방법으로 배양한 후, 닌테다닙 0.1, 1 또는 10uM의 농도로 처리하여 생존한 세포의 비율을 측정하였다. 그 결과, 췌장암 세포주는 닌테다닙을 처리하여도 세포 생존율이 크게 감소하지 않은 것을 확인하였다(도 1B).Next, the pancreatic cancer cell lines, capan2 and miapaca2, were cultured in the same manner as above, and then treated with a concentration of 0.1, 1, or 10 uM of nintedanib to measure the percentage of surviving cells. As a result, it was confirmed that the cell viability of the pancreatic cancer cell line was not significantly reduced even when nintedanib was treated ( FIG. 1B ).

상기 결과를 토대로, 닌테다닙은 췌장암 세포를 억제하지 않으나, 췌장암 유래의 섬유아세포의 성장을 억제하는 것을 알 수 있다.Based on the above results, it can be seen that nintedanib does not inhibit pancreatic cancer cells, but inhibits the growth of pancreatic cancer-derived fibroblasts.

실시예 2: 닌테다닙 처리에 따른 암섬유아세포 마커 발현 수준 확인Example 2: Confirmation of expression level of cancer fibroblast markers according to treatment with nintedanib

닌테다닙 처리에 의해 암섬유아세포 마커의 발현 수준을 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to confirm the expression level of cancer fibroblast markers by treatment with nintedanib, the following experiment was performed.

먼저, 췌장암 환자 유래 섬유아세포에서 섬유아세포 과발현 단백질 마커인 a-SMA, FAP, p-PDGFRb, PDGFRb의 발현을 웨스턴블랏팅(Western blotting) 실험으로 분석하였다. 구체적으로, 췌장암 환자 유래 섬유아세포에 프로테아제 억제제(Thermo Scientific)가 포함된 세포 용해 완충액을 첨가하여 용해시킨 후. 샘플링하여 웨스턴 블랏팅을 위한 샘플을 제작하였다. 상기 샘플을 SDS-PAGE에 전기영동하고 이를 니트로셀룰로스 막에 이동시킨 후, 탈지분유를 이용하여 블락킹하였다. 다음으로, 상기 막을 a-SMA, FAP, p-PDGFRb, 또는 PDGFRb에 대한 1차 항체와 4℃에서 하룻동안 인큐베이션시키고 워싱한 후, 상기 1차 항체에 결합할 수 있는 horseradish 퍼옥시다제-결합 2차 항체로 실온에서 2 시간 동안 인큐베이션시켰다. 이 후 웨스턴 ECL 기질 (Thermo scientific)을 사용하여 화학 발광에 의해 가시화되었고, 상기 수득한 발광 이미지를 Chemidoc(biorad)으로 분석하였다. 그 결과, 췌장암 환자 유래 섬유아세포에서는 닌테다닙의 표적 단백질로 알려진 PDGFR의 발현 수준이 우수한 것을 확인하였다(도 2A).First, the expression of a-SMA, FAP, p-PDGFRb, and PDGFRb, which are fibroblast overexpression protein markers, in fibroblasts derived from pancreatic cancer patients was analyzed by Western blotting. Specifically, after lysis by adding a cell lysis buffer containing a protease inhibitor (Thermo Scientific) to fibroblasts derived from a pancreatic cancer patient. Samples were prepared for western blotting by sampling. The sample was electrophoresed on SDS-PAGE, transferred to a nitrocellulose membrane, and blocked using powdered skim milk. Next, the membrane is incubated with a primary antibody against a-SMA, FAP, p-PDGFRb, or PDGFRb at 4° C. for one day and washed, followed by horseradish peroxidase-binding 2 capable of binding to the primary antibody. The primary antibody was incubated for 2 h at room temperature. Then, it was visualized by chemiluminescence using a Western ECL substrate (Thermo scientific), and the obtained luminescence image was analyzed by Chemidoc (biorad). As a result, it was confirmed that the expression level of PDGFR, known as the target protein of nintedanib, was excellent in fibroblasts derived from pancreatic cancer patients ( FIG. 2A ).

다음으로, 닌테다닙 처리에 따른 췌장암 환자 유래 섬유아세포의 PDGFR 발현 수준을 확인하기 위해, 닌테다닙을 1, 3, 또는 5 uM 농도로 처리한 후 상기의 웨스턴 블랏팅 방법을 통해 PDGFRβ 및 인산화된 PDGFRβ(pPDGFRβ)의 발현 수준을 확인하였다. 그 결과, 닌테다닙 처리 농도가 증가함에 따라 PDGFRβ 및 pPDGFRβ의 발현 수준이 감소하는 것일 확인하였는 바(도 2B), 상기 결과를 토대로 닌테다닙이 췌장암 환자 유래 섬유아세포에서 PDGFRβ 및 pPDGFRβ의 발현 수준을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있다.Next, in order to determine the PDGFR expression level of fibroblasts derived from pancreatic cancer patients following nintedanib treatment, nintedanib was treated with 1, 3, or 5 uM concentration and then PDGFRβ and phosphorylated PDGFRβ through the Western blotting method described above. The expression level of (pPDGFRβ) was confirmed. As a result, it was confirmed that the expression levels of PDGFRβ and pPDGFRβ decreased as the nintedanib treatment concentration increased ( FIG. 2B ). Based on the above results, nintedanib effectively reduced the expression levels of PDGFRβ and pPDGFRβ in fibroblasts derived from pancreatic cancer patients. It can be seen that it can be suppressed.

다음으로, 닌테다닙 처리에 따른 췌장암 환자 유래 섬유아세포의 PDGFR, VEGFR/pVEGFR 및 FGFR1/pFGFR1의 발현 수준을 확인하기 위해, 닌테다닙을 1, 3, 5 또는 10 uM 농도로 처리한 후 상기의 웨스턴 블랏팅 방법을 통해 PDGFRβ/pPDGFRβ, VEGFR/pVEGFR 및 FGFR1/pFGFR1의 발현 수준을 확인하였다. 그 결과, 닌테다닙 처리 농도가 증가함에 따라 PDGFRβ/pPDGFRβ 및 FGFR1/pFGFR1의 발현 수준이 감소하는 것일 확인하였다(도 2C). 따라서, 상기 결과를 토대로 닌테다닙이 췌장암 환자 유래 섬유아세포에서 PDGFRβ/pPDGFRβ 및 FGFR1/pFGFR1를 표적으로 하여 발현 수준을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있다.Next, in order to determine the expression levels of PDGFR, VEGFR/pVEGFR and FGFR1/pFGFR1 in pancreatic cancer patient-derived fibroblasts according to nintedanib treatment, nintedanib was treated with 1, 3, 5 or 10 uM concentration and then the western Expression levels of PDGFRβ/pPDGFRβ, VEGFR/pVEGFR and FGFR1/pFGFR1 were confirmed by blotting. As a result, it was confirmed that the expression levels of PDGFRβ/pPDGFRβ and FGFR1/pFGFR1 decreased as the concentration of nintedanib treatment increased ( FIG. 2C ). Therefore, based on the above results, it can be seen that nintedanib can effectively suppress the expression level by targeting PDGFRβ/pPDGFRβ and FGFR1/pFGFR1 in fibroblasts derived from pancreatic cancer patients.

실시예 3: 닌테다닙 처리에 따른 암섬유아세포 분비 성장인자 및 사이토카인의 발현수준 변화 확인Example 3: Confirmation of changes in the expression level of growth factors and cytokines secreted by cancer fibroblasts according to treatment with nintedanib

닌테다닙 처리에 의해 암섬유아세포의 세포 내 분비되는 성장인자 및 사이토카인의 발현 수준을 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to confirm the expression levels of growth factors and cytokines secreted into the cells of cancer fibroblasts by treatment with nintedanib, the following experiment was performed.

구체적으로, 췌장암 유래 암섬유아세포의 닌테다닙 처리 유무에 따른 secretome 분석을 수행하기 위해, 환자유래 섬유아세포주를 1X106/플레이트의 농도로 60mm 세포배양 플레이트에 시딩하고 하룻동안 배양한 뒤, 다음날 3ug/ml 닌테다닙을 처리한 혈장제외 배지로 교체하고 72시간 뒤 세포상층액을 수거하였다. 다음으로 성장인자분석 멤브레인에 성장인자 발현정도를 비교할 수 있도록 항체 혼합액을 4℃에서 밤새 붙인 뒤 미리 수거해둔 세포상층액을 2ml 반응시키고, 다음날 검출용액을 사용하여 화학 발광에 의해 가시화 시킨 뒤, 상기 수득한 발광 이미지를 luminograph ii (Atto)로 분석하였다.Specifically, in order to perform secretome analysis of pancreatic cancer-derived cancer fibroblasts with or without nintedanib treatment, a patient-derived fibroblast cell line was seeded on a 60 mm cell culture plate at a concentration of 1X10 6 /plate and cultured for one day, followed by 3ug the next day. /ml Cell supernatant was collected 72 hours after replacing the plasma-free medium treated with nintedanib. Next, after attaching the antibody mixture to the growth factor analysis membrane overnight at 4°C to compare the expression level of the growth factor, 2 ml of the previously collected cell supernatant was reacted, and the next day, using the detection solution, visualized by chemiluminescence, The obtained luminescence image was analyzed by luminograph ii (Atto).

그 결과, 닌테다닙 처리 시 다양한 사이토카인 및 성장인자의 발현 수준이 억제되는 것을 확인하였으며, 구체적으로 M-CSF, M-CSFR, NT-3, NT-4, TGF-α, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, VEGF, VEGFR2, VEGF3, VEGF-D, PDGFR-β, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PLGF, SCF 및 IL-6의 발현 수준이 감소된 것을 확인하였다(도 3).As a result, it was confirmed that the expression levels of various cytokines and growth factors were suppressed during treatment with nintedanib, specifically M-CSF, M-CSFR, NT-3, NT-4, TGF-α, TGF-β1, TGF It was confirmed that the expression levels of -β2, TGF-β3, VEGF, VEGFR2, VEGF3, VEGF-D, PDGFR-β, PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PLGF, SCF and IL-6 were reduced ( 3).

상기 결과를 토대로, 닌테다닙 처리에 의해 췌장암 유래 암섬유아세포에서 암세포 성장에 필요한 성장인자 및 사이토카인의 발현 수준이 현저히 감소하는 것을 알 수 있다.Based on the above results, it can be seen that the expression levels of growth factors and cytokines required for cancer cell growth in pancreatic cancer-derived cancer fibroblasts are significantly reduced by treatment with nintedanib.

실시예 4: 암미세환경 조성을 위한 3D 스페로이드 공배양 시스템 구축 Example 4: 3D spheroid co-culture system construction for dark microenvironment composition

닌테다닙 처리가 암 미세환경에 미치는 효능을 효과적으로 확인하기 위해, 하기와 같은 방법으로 3D 스페로이드 공배양 시스템을 구축하였다.In order to effectively confirm the efficacy of nintedanib treatment on the cancer microenvironment, a 3D spheroid co-culture system was constructed as follows.

구체적으로, 췌장암 세포주인 capan2과 췌장암 환자 유래 섬유아세포주(CAF)를 각각 GFP 및 RFP를 발현하도록 형질변환시키기 위해, 먼저 GFP 또는 RFP 발현을 유도할 수 있는 바이러스를 HEK293T 세포에 처리하고, 48시간 뒤 바이러스가 포함된 배양액을 수득하고, 이를 1200rpm, 3분간 원심분리 하였다. 상기 원심분리된 상등액을 0.45μm 필터에 통과시키고, 이것을 8μg/ml의 폴리브렌(santa cruz, sc-134220)을 첨가하여, 6X106/웰 농도의 capan2 및 CAF에 각각 처리하여 48시간 배양하였다. 이 후 capan2 및 CAF의 형질변환된 세포의 비율을 각각 GFP와 RFP 발현으로 형광표지세포분류기 (fluorescence activated cell sorter: FACS) 분석을 통해 분석하였다. 그 결과 capan2은 GFP를 발현하고 CAF는 RFP를 발현하도록 형질전환된 것을 확인하였다(도 4A).Specifically, in order to transform the pancreatic cancer cell line capan2 and the pancreatic cancer patient-derived fibroblast cell line (CAF) to express GFP and RFP, respectively, first, the HEK293T cells were treated with a virus capable of inducing GFP or RFP expression, and then for 48 hours. After obtaining a culture solution containing the virus, it was centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes. The centrifuged supernatant was passed through a 0.45 μm filter, and 8 μg/ml of polybrene (santa cruz, sc-134220) was added thereto, treated with capan2 and CAF at a concentration of 6X10 6 /well, respectively, and cultured for 48 hours. Thereafter, the ratio of capan2 and CAF-transfected cells was analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis for GFP and RFP expression, respectively. As a result, it was confirmed that capan2 was transformed to express GFP and CAF to express RFP (FIG. 4A).

다음으로, 상기에서 제조한 GFP를 발현하도록 형질전환된 capan2와 RFP를 발현하도록 형질전환된 CAF를 각 5X103/웰의 농도로 1:1 비율로 섞은 뒤 라운드바닥 플레이트에 넣고 1200rpm, 3분간 원심분리하여 세포를 모아주었다. 3일간 배양하여 공배양이 이루어져 3D 모델이 만들어지면, Hochest으로 37℃ 에서 20분간 염색한 NK92 세포주를 5X103/웰의 농도로 넣어준 뒤 NK92에 의한 암세포 사멸 효과를 실시간세포관찰현미경(lionheart/biotech)을 이용하여 확인할 수 있다(도 4B).Next, capan2 transformed to express GFP and CAF transformed to express RFP prepared above were mixed at a concentration of 5X10 3 /well in a 1:1 ratio, put in a round bottom plate, and centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes. Separated and collected cells. When the 3D model was made by culturing for 3 days, the NK92 cell line stained with Hochest at 37°C for 20 minutes was added at a concentration of 5X10 3 /well, and then the cancer cell killing effect by NK92 was observed under a real-time cell observation microscope (lionheart/ biotech) can be used (FIG. 4B).

실시예 5: 닌테다닙 및 자연살해세포 병용 투여에 따른 항암 효과 확인Example 5: Confirmation of anticancer effect according to combination administration of nintedanib and natural killer cells

닌테다닙 및 자연살해세포 병용 투여에 따른 항암 효과를 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to confirm the anticancer effect of the combined administration of nintedanib and natural killer cells, the following experiment was performed.

구체적으로, 상기 실시예 4에서 제작한 3D 스페로이드 공배양 시스템을 이용하여, GFP를 발현하도록 형질전환된 capan2와 RFP를 발현하도록 형질전환된 CAF의 공배양이 이루어져 3D 모델이 만들어지면, 상기 공배양에 Hochest으로 염색된 자연살해세포주인 NK92 5X103/웰 단독, 닌테다닙 2uM 단독 또는 NK92과 닌테다닙 2uM을 병용처리하고, 48시간~72시간 뒤 자연살해세포에 의한 암세포 사멸 효과를 실시간세포관찰현미경 (lionheart/biotech)을 이용하여 확인하였다. 또한, 실시간세포관찰현미경의 소프트웨어를 이용하여 mock, NK92, Nintedanib, NK92+nintendanib 처리군에서의의 GFP 발현 강도의 합계(sum of GFP intensity)값을 표준화(normalize)하여 암세포 사멸 효과를 분석하였고, 그래프화 하였다. Specifically, using the 3D spheroid co-culture system prepared in Example 4, co-culture of capan2 transformed to express GFP and CAF transformed to express RFP is made to form a 3D model, In culture, NK92 5X10 3 /well, a natural killer cell line stained with Hochest, alone, nintedanib 2uM alone, or NK92 and nintedanib 2uM were treated in combination, and the effect of natural killer cells killing cancer cells was observed in real time after 48 to 72 hours. It was confirmed using a microscope (lionheart/biotech). In addition, the cancer cell killing effect was analyzed by normalizing the sum of GFP intensity values in mock, NK92, Nintedanib, and NK92+nintendanib-treated groups using the software of a real-time cell observation microscope. got angry

그 결과, 자연살해세포 또는 닌테다닙을 단독으로 투여한 경우보다 자연살해세포와 닌테다닙을 병용투여한 경우 암세포 사멸 효과가 현저히 우수한 것을 확인하였다(도 5 및 도 6).As a result, it was confirmed that the cancer cell killing effect was significantly better when the natural killer cells and nintedanib were co-administered than when the natural killer cells or nintedanib were administered alone ( FIGS. 5 and 6 ).

다음으로, GFP를 발현하도록 형질전환한 췌장암세포주인 capan2와 RFP를 발현하도록 형질전환한 환자유래 섬유아세포주를 각각 5X103/well 농도로 1:1 비율로 섞은 뒤, 라운드바닥 플레이트에 넣고 1200rpm, 3분간 원심분리하여 세포를 모아주었다. 3일간 배양한 뒤 공배양이 이루어져 3D 모델(암 스페로이드)이 만들어지면, 2uM 농도의 닌테다닙 단독 또는 Hochest로 37℃ 에서 20분간 염색한 NK92 세포주 2X104/well와 2uM 농도의 닌테다닙을 넣어준 뒤, 72시간동안 NK92에 의한 암세포 사멸 효과를 실시간세포관찰현미경 (lionheart/biotech)을 이용하여 확인하였다.Next, the pancreatic cancer cell line transformed to express GFP, capan2, and the patient-derived fibroblast cell line transformed to express RFP, respectively, were mixed at a concentration of 5X10 3 /well at a 1:1 ratio, put on a round bottom plate, and 1200rpm, Cells were collected by centrifugation for 3 minutes. After culturing for 3 days, co-culture is performed and a 3D model (cancer spheroid) is made, nintedanib alone at a concentration of 2uM or NK92 cell line 2X10 4 /well stained with Hochest for 20 minutes at 37°C and nintedanib at a concentration of 2uM are added. After giving, the cancer cell killing effect by NK92 for 72 hours was confirmed using a real-time cell observation microscope (lionheart/biotech).

그 결과, 닌테다닙 단독을 처리하는 경우보다 닌텐다닙과 NK92의 조합을 처리한 경우 현저히 우수한 암세포 사멸효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다 (도 7A).As a result, it was confirmed that treatment with the combination of nintedanib and NK92 can exhibit a significantly superior cancer cell killing effect than when treated with nintedanib alone (FIG. 7A).

다음으로, 췌장암 세포주인 capan2와 환자유래 섬유아세포주를 각각 5X104/well 농도로 1:1 비율로 섞은 뒤 라운드바닥 플레이트에 넣고 1200rpm, 3분간 원심분리하여 세포를 모아주었다. 하루간 배양하여 공배양이 이루어져 3D 모델(암 스페로이드)이 만들어지면 3uM 농도의 닌텐다닙 단독 또는 인간 1차 NK세포 2X105/well와 3uM 농도의 닌테다닙을 넣어준 뒤 24시간 뒤 NK92에 의한 암세포 사멸 효과를 7aad염색을 통해 형광표지세포분류기 (fluorescence activated cell sorter: FACS) 분석을 통해 분석하였다. 그 결과, 닌테다닙 단독을 처리하는 경우보다 닌텐다닙과 NK 세포의 조합을 처리한 경우 현저히 우수한 암세포 사멸효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다 (도 7B). 상기 결과를 종합해보면, 닌테다닙이 NK 세포의 암세포 사멸 효능을 향상시키게 할 수 있음을 알 수 있다.Next, the pancreatic cancer cell line capan2 and the patient-derived fibroblast cell line were each mixed at a concentration of 5X10 4 /well in a 1:1 ratio, placed in a round bottom plate, and centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes to collect cells. When a 3D model (cancer spheroid) is made by culturing for one day, nintendanib alone at a concentration of 3uM or human primary NK cells 2X10 5 /well and nintedanib at a concentration of 3uM were added, and 24 hours later, NK92 The cancer cell killing effect was analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis through 7aad staining. As a result, it was confirmed that treatment with the combination of nintedanib and NK cells can exhibit a significantly superior cancer cell killing effect than when treated with nintedanib alone ( FIG. 7B ). Taken together, it can be seen that nintedanib can enhance the cancer cell killing efficacy of NK cells.

실시예 6: 닌테다닙 처리에 따른 자연살해세포 활성 확인Example 6: Confirmation of natural killer cell activity according to treatment with nintedanib

닌테다닙 처리에 의해 자연살해세포의 활성을 조절할 수 있는 지 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to confirm whether the activity of natural killer cells can be regulated by nintedanib treatment, the following experiment was performed.

먼저, NK 세포주 2X105/well에 3uM 농도의 닌테다닙을 넣어준 뒤, 48시간 후 NK 세포 활성 마커의 발현 수준을 형광표지세포분류기 (fluorescence activated cell sorter: FACS) 분석을 통해 분석하였다.First, nintedanib at a concentration of 3uM was added to NK cell line 2X10 5 /well, and the expression level of NK cell activation markers after 48 hours was analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis.

그 결과, NK 세포 활성 마커의 발현 수준은 닌테다닙 처리에 따라 증가/감소하지 않고 변동이 없는 것을 확인하였다(도 8A).As a result, it was confirmed that the expression level of the NK cell activity marker did not increase / decrease according to the treatment with nintedanib and did not change ( FIG. 8A ).

다음으로, 췌장암 세포주인 capan2와 환자유래 섬유아세포주를 각각 5X104/well 농도로 1:1 비율로 섞은 뒤 라운드바닥 플레이트에 넣고 1200rpm, 3분간 원심분리하여 세포를 모아주었다. 하루간 배양하여 공배양이 이루어져 3D 모델(암 스페로이드)이 만들어지면, 1X105/well 또는 4X105/well와 3uM 농도의 Nintedanib 넣어준 뒤, 48시간 배양 후 NK세포 활성 마커의 발현 수준을 형광표지세포분류기 (fluorescence activated cell sorter: FACS) 분석을 통해 분석하였다.Next, the pancreatic cancer cell line capan2 and the patient-derived fibroblast cell line were each mixed at a concentration of 5X10 4 /well in a 1:1 ratio, placed in a round bottom plate, and centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes to collect cells. When a 3D model (cancer spheroid) is made by culturing for one day, Nintedanib at a concentration of 1X10 5 /well or 4X10 5 /well and 3uM is added, and the expression level of the NK cell activity marker is fluoresced after 48 hours of incubation. It was analyzed by a fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis.

그 결과, 닌테다닙 처리에 의해 NK 세포 활성 마커의 발현 수준을 증가하는 것을 확인하였다 (도 8B).As a result, it was confirmed that the expression level of NK cell activity markers increased by treatment with nintedanib ( FIG. 8B ).

상기 결과를 종합해보면, 닌테다닙의 NK 세포 활성 증진 효과는 암세포/암섬유아세포의 존재 하에서 나타날 수 있으며, 이는 닌테다닙 처리시 암섬유아세포에서 분비되는 사이토카인의 양이 감소됨으로서 발생하는 것임을 알 수 있다.Summarizing the above results, it can be seen that the NK cell activity enhancing effect of nintedanib can be seen in the presence of cancer cells/cancer fibroblasts, which is caused by a decrease in the amount of cytokines secreted from cancer fibroblasts during treatment with nintedanib. have.

실시예 7: 췌장암 표적 CAR-NK 및 닌테다닙 병용 투여에 따른 항암 효과 확인Example 7: Confirmation of anticancer effect according to combined administration of pancreatic cancer target CAR-NK and nintedanib

7.1: 췌장암 표적 CAR-NK 제작7.1: Production of CAR-NK targeting pancreatic cancer

췌장암 표적 효율이 증가된 CAR-NK 세포를 제작하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to construct CAR-NK cells with increased pancreatic cancer targeting efficiency, the following experiment was performed.

구체적으로, 인간 1차 NK 세포의 췌장암 표적성을 높이기 위한 CAR(chimeric antigen receptor) 유전자를 렌티바이러스를 이용하여 삽입한 MSLN 암항원 표적 CAR-NK를 제작하였다 (도 9A). 상기 CAR-NK 세포의 배양 72시간 후 CAR 발현정도를 형광표지세포분류기 (fluorescence activated cell sorter: FACS) 분석을 통해 분석하였다. 그 결과, CAR가 효과적으로 발현되고 있음을 확인하였다 (도 9B)Specifically, CAR-NK, an MSLN cancer antigen-targeting cancer antigen target, was prepared by using a lentivirus to insert a CAR (chimeric antigen receptor) gene for enhancing the pancreatic cancer targeting of human primary NK cells ( FIG. 9A ). After 72 hours of culturing the CAR-NK cells, the CAR expression level was analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis. As a result, it was confirmed that CAR was effectively expressed (FIG. 9B)

다음으로, 상기에서 제작한 CAR-NK 세포의 암세포 살상 효능을 확인하기 위해, 암항원을 과발현시킨 암세포와 암항원이 발현되지 않는 암세포를 각각 5X105/well씩 라운드 플레이트에 넣고, 상기에서 제작한 암항원 표적 CAR-NK를 2.5X105/well을 넣고 배양하였다. 24시간 뒤 annexinV/pi염색을 통해 암항원 특이적 세포사멸 효과를 형광표지세포분류기 (fluorescence activated cell sorter: FACS) 분석을 통해 분석하였다. 그 결과, 암항원이 과발현된 암세포에 대한 암세포 살상 효능이 현저히 향상된 것을 확인하였다 (도 9C).Next, in order to confirm the cancer cell killing efficacy of the CAR-NK cells prepared above, the cancer cells overexpressing the cancer antigen and the cancer cells not expressing the cancer antigen were placed in a round plate at a rate of 5X10 5 /well, respectively, and prepared above. The cancer antigen target CAR-NK was incubated with 2.5X10 5 /well. After 24 hours, the cancer antigen-specific apoptosis effect was analyzed by annexinV/pi staining by fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis. As a result, it was confirmed that the cancer cell killing efficacy against cancer antigen-overexpressed cancer cells was significantly improved (FIG. 9C).

다음으로, 췌장암 세포주인 capan2와 환자유래 섬유아세포주를 각각 5X104/well 농도로 1:1 비율로 섞은 뒤 라운드바닥 플레이트에 넣고 1200rpm, 3분간 원심분리하여 세포를 모아주었다. 하루간 배양하여 공배양이 이루어져 3D 모델(암 스페로이드)이 만들어지면, NK 세포 또는 상기 CAR-NK 세포 5X104/well 또는 2X105/well를 넣어준 뒤, 72시간동안 암세포 사멸 효과를 실시간세포관찰현미경 (lionheart/biotech)을 이용하여 확인하였다. 그 결과, 상기에서 제작한 CAR-NK 세포의 암세포 살상 효능이 일반 NK 세포에 비해 현저히 향상되었음을 확인하였다(도 9D).Next, the pancreatic cancer cell line capan2 and the patient-derived fibroblast cell line were each mixed at a concentration of 5X10 4 /well in a 1:1 ratio, placed in a round bottom plate, and centrifuged at 1200 rpm for 3 minutes to collect cells. After co-culture for one day and a 3D model (cancer spheroid) is made, NK cells or the CAR-NK cells 5X10 4 /well or 2X10 5 /well are added, and the cancer cell killing effect is observed for 72 hours in real time. It was confirmed using an observation microscope (lionheart/biotech). As a result, it was confirmed that the cancer cell killing efficacy of the CAR-NK cells prepared above was significantly improved compared to normal NK cells (FIG. 9D).

상기 결과를 토대로, 췌장암 표적 효율이 증가된 CAR-NK세포 효과적으로 제작되었음을 알 수 있다.Based on the above results, it can be seen that CAR-NK cells with increased pancreatic cancer targeting efficiency were effectively produced.

7.2: CAR-NK 및 닌테다닙 병용 투여에 따른 항암 효과 평가7.2: Evaluation of the anticancer effect of CAR-NK and nintedanib co-administration

상기에서 제작한 CAR-NK와 닌테다닙의 병용 투여에 따른 암 세포 사멸 효과를 동물 수준에서 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to confirm the cancer cell killing effect of the combined administration of CAR-NK and nintedanib prepared above at the animal level, the following experiment was performed.

구체적으로, 6주령 NSG 수컷 마우스에 luciferase-Canpan2 (cancer cell, 2x106 cell/mouse) 단독 또는 luciferase-Canpan2 및 CAF 혼합 세포 (각각, 1x 106 cell/mouse) 각각을 s.c로 주입하여 이종이식(xenograft) 마우스를 제작하였다. 이후 2주 뒤에 닌테다닙 (2mg/kg) 단독 또는 NK/CAR-NK (5X106 cell, i.v. injection) 세포와 닌테다닙의 조합을 처리하였다 (도 10A). 상기 마우스는 닌테다닙 및/또는 NK/CAR-NK 처리 전(D18) 및 처리 후(D38) 현미경으로 관찰하여 암세포의 크기를 확인하였으며, 현미경 관찰 후 상기 암세포를 적출하여 크기를 비교하였다.Specifically, luciferase-Canpan2 (cancer cell, 2x10 6 cell/mouse) alone or luciferase-Canpan2 and CAF mixed cells (each, 1x 10 6 cell/mouse) were respectively injected into 6-week-old NSG male mice by sc to xenograft ( xenograft) mice were prepared. After 2 weeks, nintedanib (2mg/kg) alone or NK/CAR-NK (5X10 6 cell, iv injection) cells and a combination of nintedanib were treated ( FIG. 10A ). The mice were observed under a microscope before (D18) and after (D38) treatment with nintedanib and/or NK/CAR-NK to confirm the size of the cancer cells, and after microscopic observation, the cancer cells were excised and the size was compared.

상기 실험 결과, 닌텐다닙, NK92 또는 CAR-NK 세포를 단독으로 처리한 경우 보다, 닌텐다닙과 CAR-NK 세포를 병용투여한 경우 암의 크기가 현저히 감소되는 것을 확인하였다 (도 10B 및 C).As a result of the above experiment, it was confirmed that the size of the cancer was significantly reduced when nintendanib and CAR-NK cells were co-administered, rather than when nintendanib, NK92 or CAR-NK cells were treated alone ( FIGS. 10B and C).

상기 결과를 종합해보면, 닌테다닙의 NK 세포 활성 증진 효과는 CAR-NK 세포에 대해서도 적용될 수 있으며, 세포 수준뿐만 아니라 생체 수준에서도 효과적으로 암을 억제할 수 있음을 알 수 있다.Summarizing the above results, it can be seen that the NK cell activity enhancing effect of nintedanib can be applied to CAR-NK cells, and can effectively inhibit cancer not only at the cellular level but also at the in vivo level.

상기 실시예의 실험결과들을 종합해보면, 폐암 치료제로 알려진 닌테다닙은 췌장암 세포에 직접적으로 항암효과를 유도할 수는 없으나, 암미세환경을 조성하는 암섬유아세포의 성장을 억제할 수 있으며, 암미세환경 조절과 관련된 사이토카인 등의 분비를 억제할 수 있음을 확인하였다. 따라서, 닌테다닙은 암미세환경의 조성을 억제하는 효과가 있음으로, 기존의 항암제와 병용투여한다면, 보다 효과적으로 암을 치료할 수 있음을 알 수 있다 (도 11).Combining the experimental results of the above Examples, nintedanib, known as a lung cancer treatment agent, cannot directly induce an anticancer effect on pancreatic cancer cells, but can inhibit the growth of cancer fibroblasts that form a cancer microenvironment, and can inhibit the cancer microenvironment. It was confirmed that the secretion of cytokines related to regulation can be inhibited. Therefore, it can be seen that nintedanib has an effect of inhibiting the composition of the cancer microenvironment, and thus, when administered in combination with an existing anticancer agent, it can be seen that cancer can be treated more effectively ( FIG. 11 ).

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.The above description of the present invention is for illustration, and those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not restrictive.

Claims (15)

닌테다닙(Nintedanib) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암의 치료 효과 증진용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of cancer comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 고형암인 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the cancer is a solid cancer. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 흑색종, 편평세포암종, 유방암, 두경부암, 갑상선암, 연부조직육종, 골육종, 고환암, 전립선암, 난소암, 방광암, 피부암, 뇌암, 혈관육종, 비만세포종, 백혈병, 림프종, 간암, 폐암, 췌장암, 위암, 신장암, 대장암, 조혈 종양, 신경 모세포종, 표피암종 및 이의 전이암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인 약학 조성물.The method according to claim 1, wherein the cancer is melanoma, squamous cell carcinoma, breast cancer, head and neck cancer, thyroid cancer, soft tissue sarcoma, osteosarcoma, testicular cancer, prostate cancer, ovarian cancer, bladder cancer, skin cancer, brain cancer, angiosarcoma, mastocytoma, leukemia, Lymphoma, liver cancer, lung cancer, pancreatic cancer, stomach cancer, kidney cancer, colorectal cancer, hematopoietic tumor, neuroblastoma, epidermal carcinoma, and a pharmaceutical composition that is at least one selected from the group consisting of metastases thereof. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 암 섬유아세포(Cancer associated fibroblasts, CAF)의 사멸을 유도하거나 증식을 억제하는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the composition induces apoptosis or inhibits proliferation of cancer fibroblasts (CAF). 청구항 1에 있어서, 상기 암 섬유아세포는 PDGFR (Platelet-derived growth factor receptor) 또는 FGFR (Fibroblast growth factor receptor)을 발현하는 것인, 약학 조성물.The method according to claim 1, wherein the cancer fibroblasts to express the PDGFR (Platelet-derived growth factor receptor) or FGFR (Fibroblast growth factor receptor), the pharmaceutical composition. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 암 섬유아세포의 사이토카인, 성장 인자 또는 이들의 수용체의 발현 수준을 억제하는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the composition inhibits the expression level of cytokines, growth factors or their receptors in cancer fibroblasts. 청구항 6에 있어서, 상기 사이토카인, 성장 인자 또는 이들의 수용체는 M-CSF(Macrophage colony-stimulating factor), M-CSFR(Macrophage colony-stimulating factor receptor), FGFR (Fibroblast growth factor receptor), NT-3(Neurotrophin-3), NT-4, TGF-α (Transforming growth factor-α), TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, VEGF(Vascular endothelial growth factor), VEGFR2(Vascular endothelial growth factor receptor 2), VEGF3, VEGF-D, PDGFR-β(Platelet-derived growth factor receptor-β), PDGF-AA (Platelet-derived growth factor-AA), PDGF-AB, PDGF-BB, PLGF(Placental growth factor), SCF(Stem cell factor), IL-6 및 IL-8으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것인 약학 조성물.The method according to claim 6, wherein the cytokine, growth factor or their receptor is M-CSF (Macrophage colony-stimulating factor), M-CSFR (Macrophage colony-stimulating factor receptor), FGFR (Fibroblast growth factor receptor), NT-3 (Neurotrophin-3), NT-4, TGF-α (Transforming growth factor-α), TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, VEGF (Vascular endothelial growth factor), VEGFR2 (Vascular endothelial growth factor receptor 2) , VEGF3, VEGF-D, PDGFR-β (Platelet-derived growth factor receptor-β), PDGF-AA (Platelet-derived growth factor-AA), PDGF-AB, PDGF-BB, PLGF (Placental growth factor), SCF (Stem cell factor), a pharmaceutical composition that is at least one selected from the group consisting of IL-6 and IL-8. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 종양 미세환경(Tumor microenvironment)을 저해하는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the composition inhibits the tumor microenvironment. 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancer comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and an anticancer agent as an active ingredient. 청구항 9에 있어서, 상기 항암제는 면역세포 치료제인 것인 약학 조성물. The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the anticancer agent is an immune cell therapeutic agent. 청구항 10에 있어서, 상기 면역세포치료제는 수지상세포(dendritic cell), 자연살해세포(natural killer cell), T 세포(T cell), 종양 침윤 T 세포(tumor-infiltrating lymphocyte, TIL), T 세포 수용체 발현 T 세포 (TCR-modified T cell, TCR-T), 키메릭 항원 수용체 발현 T 세포 (CAR-modified T cell, CAR-T), 림포카인 활성 세포(lymphokine-activated killer, LAK), 및 키메릭 항원 수용체 발현 NK 세포 (CAR-modified NK cell, CAR-NK)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것인 약학 조성물.The method according to claim 10, wherein the immune cell therapy agent dendritic cells (dendritic cells), natural killer cells (natural killer cells), T cells (T cells), tumor-infiltrating lymphocytes (TIL), T cell receptor expression T cells (TCR-modified T cells, TCR-T), chimeric antigen receptor expressing T cells (CAR-modified T cells, CAR-T), lymphokine-activated killer (LAK), and chimeric Antigen receptor-expressing NK cells (CAR-modified NK cell, CAR-NK) is at least one pharmaceutical composition selected from the group consisting of. 청구항 9에 있어서, 상기 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제는 병용 투여되는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the anticancer agent are administered in combination. 청구항 9에 있어서, 상기 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 항암제는 하나의 제형으로 동시에 투여되거나, 또는 별개의 제형으로 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the anticancer agent are administered simultaneously in one formulation, or are administered simultaneously or sequentially in separate formulations. 닌테다닙 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 면역세포치료제의 치료 효과 증진용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for enhancing the therapeutic effect of an immune cell therapy, comprising nintedanib or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 청구항 14에 있어서, 상기 조성물은 암 또는 섬유아세포 관련 질환에 대한 치료 효과를 증진시키는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 14, wherein the composition enhances the therapeutic effect on cancer or fibroblast-related diseases.
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