KR20220084817A - Anti-obese composition comprising water extract of Gymnaster koraiensis - Google Patents

Abstract

본 발명은 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물에 관한 것이다. 상기 물 추출물은 비만 동물모델에서 체중을 감소시키며, 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키고, 혈중 인슐린 및 렉틴을 감소시키며, 아디포넥틴을 증가시키고, 지방조직에서 비만관련 유전자의 발현을 억제하는 효과가 우수하다. 따라서, 상기 추출물을 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 건강기능식품 또는 치료제로 유용하게 사용할 수 있다.The present invention relates to an anti-obesity composition comprising a honey ant odor water extract as an active ingredient. The water extract has excellent effects in reducing body weight in obese animal models, reducing triglycerides and cholesterol, reducing blood insulin and lectin, increasing adiponectin, and inhibiting the expression of obesity-related genes in adipose tissue. Therefore, the extract can be usefully used as a health functional food or therapeutic agent capable of preventing, improving or treating obesity.

Description

벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물{Anti-obese composition comprising water extract of Gymnaster koraiensis}Anti-obese composition comprising water extract of Gymnaster koraiensis as an active ingredient

본 발명은 벌개미취 물 추출물을 포함하는 항비만용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to an anti-obesity composition comprising a honey ant odor water extract.

일반적으로 비만이란, 지방 조직이 과잉으로 몸에 축적된 상태를 말하며 건강 진단 등에서 이용되는 BMI(Body Mass Index(체격 지수), 체중(kg)을 신장(m)의 제곱으로 나눈 것)에서 BMI가 22가 되는 체중을 표준 체중이라고 하고, 그것보다 1할 이상 많은 체중을 과체중, 2할 이상 많은 체중을 비만이라고 한다. 최근, 식생활의 구미화, 교통 기관의 발달에 의한 운동 부족 등을 이유로 비만이나 그 예비군이 증가하고 있다. 특히, 비만은 고혈압증, 당뇨병, 지방간, 동맥 경화증, 뇌경색, 고지혈증, 말초혈관 장해, 허혈성심질환의 발증과의 관련성이 높고, 이들 질환의 발증의 예방과 치료 측면에서도 비만의 예방 또는 해소가 매우 중요하다.In general, obesity refers to a condition in which adipose tissue is accumulated in the body excessively. A weight at 22 is called a standard weight, a weight more than 10% more than that is called overweight, and a weight more than 20% more than that is called obesity. In recent years, obesity and its reserve group are increasing due to the lack of exercise due to the deterioration of diet and the development of transportation systems. In particular, obesity is highly related to the onset of hypertension, diabetes, fatty liver, arteriosclerosis, cerebral infarction, hyperlipidemia, peripheral vascular disorder, and ischemic heart disease, and prevention or resolution of obesity is very important in terms of prevention and treatment of these diseases. .

비만을 예방 또는 해소하기 위해서는, 식사 요법이나 운동 요법 등의 생활 습관의 개선이 바람직하나 용이하게 행할 수 있는 것은 아니다. 또한, 비만에 대한 치료로서는 지질 흡수 저해제, 소화 흡수 저해제 등의 약물요법도 있지만 그 사용은 중증의 비만증에 한정된다.In order to prevent or eliminate obesity, improvement of lifestyles such as diet and exercise therapy is desirable, but not easily performed. In addition, as treatment for obesity, there are drug therapies such as lipid absorption inhibitors and digestive absorption inhibitors, but their use is limited to severe obesity.

비만을 치료하기 위한 약제로는 시상하부를 자극하여 식욕을 억제시키는 식욕억제제로 시부트라민(sibutramine), 펜터마인(phentermine), 다이에틸프로피온(diethyl-propion), 펜디메트라진(phendimetrazine), 벤즈페타민(benzphetamine), 메타페타민(methamphetamine) 등이 알려져 있으며, 췌장의 지방소화효소에 대한 저해제를 이용하여 섭취된 지방의 흡수를 억제시키는 오르리스타트(orlistat) 등도 알려져 있고, 알파-글루코시다제 저해제로 당뇨병에 사용하는 아카보스(acarbose) 등도 알려져 있다.Drugs for the treatment of obesity include sibutramine, phentermine, diethyl-propion, phendimetrazine, benzphetamine, which are appetite suppressants that suppress appetite by stimulating the hypothalamus. (benzphetamine), metaphetamine (methamphetamine), etc. are known, and orlistat (orlistat), which inhibits absorption of ingested fat by using an inhibitor of pancreatic lipodigestive enzyme, is also known, and is an alpha-glucosidase inhibitor. Acarbose, which is used for diabetes, is also known.

이 중, 다채로운 작용을 가지면서도 장기간 복용시에도 부작용 등의 우려가 적은 천연물 유래 성분을 이용한 다양한 물건이 다이어트 식품 등으로서 비만의 예방이나 해소를 위해 판매되고 있고 동시에 새로운 항비만 활성을 갖는 물질의 탐색이 행하여지고 있다. 그러나, 비만은 현재까지 완치가 어려우며 불면증, 신경 불안, 두통, 혈압 상승, 위장 장애, 과민증, 담즙 분비 장애, 지용성 비타민 흡수 억제 등의 심각한 부작용이 동반되는 것으로 알려져 있다.Among these, various products using natural ingredients derived from ingredients that have a variety of actions and are less likely to cause side effects even when taken for a long period of time are being sold as diet food, etc. this is being done However, obesity is difficult to cure until now, and it is known that serious side effects such as insomnia, nervous anxiety, headache, increase in blood pressure, gastrointestinal disorder, hypersensitivity, bile secretion disorder, and inhibition of absorption of fat-soluble vitamins are accompanied.

한편, 벌개미취(Gymnaster koraiensis)는 우리나라의 특산 다년초로서 속명으로 고려쑥부쟁이라고 불리며 국화과에 속한다. 햇볕이 잘 들고 습기가 충분한 곳에서 자라며, 특히 제주도 경기도 이남에서 재배된다. 높이는 50 ~ 60cm이며, 너비는 1.5 ~ 3cm이다. 잎은 끝이 뾰족하고 길이가 12 ~ 19cm가 되며, 너비 1.5 ~3cm로 밑 부분이 점차 좁아지며 딱딱하고 양면에 털이 거의 없으며 가장자리에 잔톱니가 있다. 여러해살이식물로 꽃은 10월에 피고 지름 4 ~ 5cm로 연한 자주색이며 가지 끝과 원줄기 끝에 달리고 총포는 반구형이며 길이는 약 13mm, 지름은 약 8mm이다. 포편은 4줄로 배열되고 외편은 길이는 4 ~ 5mm, 너비는 약 1.5mm로 긴 타원형이며, 가장자리에 털이 있다.On the other hand, Gymnaster koraiensis ( Gymnaster koraiensis ) is a special perennial plant in Korea. It grows in sunny and moist places, especially in Jeju-do and south of Gyeonggi-do. The height is 50 to 60 cm, and the width is 1.5 to 3 cm. Leaves are sharp at the tip, 12 to 19cm long, 1.5 to 3cm wide, with a gradually narrower bottom, hard, with few hairs on both sides, and fine sawtooths on the edges. It is a perennial plant with flowers blooming in October, 4-5cm in diameter, light purple, hanging on the tip of branches and main stem, and the involucre is hemispherical, about 13mm long and about 8mm in diameter. The bracts are arranged in 4 rows, and the outer part is 4 to 5mm long and about 1.5mm wide, and has a long oval shape, with hairs on the edge.

이러한 벌개미취 단독 추출물의 항비만 효과에 대한 연구는 보고된 바 없으므로, 본 연구자들은 벌개미취 추출물이 지방세포 분화 억제, 콜레스테롤 저하 효과 및 지방 세포 분화 또는 축적에 결정적 역할을 하는 단백질 발현 억제 효과와 지방 분해 및 지방 생성을 감소시키는 역할을 하는 단백질 발현 활성 효과가 우수하다는 점을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. Since no studies on the anti-obesity effect of this extract alone have been reported, the present researchers found that the extract of honey ants extract has the effect of inhibiting adipocyte differentiation, cholesterol lowering effect, and protein expression inhibitory effect, which plays a decisive role in adipocyte differentiation or accumulation, and lipolysis and lipolysis. The present invention was completed by confirming that the effect of protein expression activity, which plays a role in reducing adipogenesis, was excellent.

본 발명의 목적은 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for anti-obesity comprising a honey ant odor water extract as an active ingredient.

또한 본 발명의 목적은, 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다. It is also an object of the present invention to provide a health functional food composition for anti-obesity comprising a beehive odor water extract as an active ingredient.

또한 본 발명의 목적은, 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. It is also an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of obesity-related metabolic diseases, comprising an extract of honey ant odor water as an active ingredient.

또한 본 발명의 목적은, 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a health functional food composition for the prevention or improvement of obesity-related metabolic diseases, comprising an extract of honey ant odor water as an active ingredient.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약학적 조성물을 제공한다. In order to solve the above problems, the present invention provides a pharmaceutical composition for anti-obesity comprising an extract of beehive odor water as an active ingredient.

또한 본 발명은, 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 건강기능식품 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a health functional food composition for anti-obesity comprising the water extract of honey ant odor as an active ingredient.

또한 본 발명은, 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity-related metabolic diseases, comprising an extract of beehive odor water as an active ingredient.

또한 본 발명은, 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving obesity-related metabolic diseases, comprising an extract of honey ant odor water as an active ingredient.

본 발명의 벌개미취 물 추출물은 비만 동물모델에서 체중을 감소시키며, 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키고, 혈중 인슐린 및 렉틴을 감소시키며, 아디포넥틴을 증가시키고, 지방조직에서 비만관련 유전자의 발현을 억제하는 효과가 우수하다. 따라서, 상기 추출물을 비만을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 건강기능식품 또는 치료제로 유용하게 사용할 수 있다.The water extract of honey ants of the present invention has the effect of reducing body weight, reducing triglycerides and cholesterol, reducing blood insulin and lectin, increasing adiponectin, and inhibiting the expression of obesity-related genes in adipose tissue in an obese animal model. great. Therefore, the extract can be usefully used as a health functional food or therapeutic agent capable of preventing, improving or treating obesity.

도 1은 벌개미취 열수 추출물의 제조공정 및 이의 유효성분을 분리하는 과정을 나타낸 도이다.
도 2는 벌개미취 열수 추출물(A)와 벌개미취 70% 에탄올 추출물(B)의 세포독성 실험 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 벌개미취 열수 추출물(A)와 벌개미취 70% 에탄올 추출물(B)의 지방분화 억제 활성을 나타낸 도이다.
도 4는 벌개미취 열수 추출물(A)와 벌개미취 70% 에탄올 추출물(B)의 콜레스테롤 저하 활성을 나타낸 도이다.
도 5는 벌개미취 열수 추출물의 중성 지방 합성 저하 활성을 나타낸 도이다.
도 6은 벌개미취 열수 추출물의 지방 관련 단백질 발현 억제 또는 증가 활성을 확인한 도이다.
도 7은 실험설계도를 나타낸 도이다.
도 8은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 체중감소효과를 확인한 도이다..
도 9는 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 간조직의 무게를 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 10은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 간조직의 무게를 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 11은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 지방조직의 무게를 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 12는 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 혈당을 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 13은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 간 내 지방을 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 14는 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 AST, ALT를 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 15는 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 혈중 인슐린 및 렙틴의 감소효과 및 아디포넥틴의 증가효과를 확인한 도이다.
도 16은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 지방조직 및 간조직 내 지방축적을 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 17은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 비만관련 유전자의 발현을 감소시키는 효과를 확인한 도이다.
도 18은 비만동물 모델에서 벌개미취 열수 추출물의 비만관련 단백질의 발현을 감소시키는 효과를 확인한 도이다.1 is a view showing the manufacturing process of the hot water extract of honey ant odor and the process of separating its active ingredient.
Figure 2 is a diagram showing the cytotoxicity test results of the hot water extract (A) and 70% ethanol extract (B) of honey ants.
Figure 3 is a diagram showing the fat differentiation inhibitory activity of the hot water extract (A) and the 70% ethanol extract (B) of honey ants.
4 is a diagram showing the cholesterol-lowering activity of the hot water extract (A) and the 70% ethanol extract (B).
5 is a diagram showing the neutral fat synthesis lowering activity of the hot water extract of honeysuckle lichen.
Figure 6 is a diagram confirming the activity of inhibiting or increasing the expression of fat-related proteins of the hot water extract of honeysuckle lichen.
7 is a diagram showing an experimental design diagram.
Figure 8 is a diagram confirming the weight reduction effect of the hot water extract of honey ants in an obese animal model.
9 is a view confirming the effect of reducing the weight of the liver tissue of the hot water extract of honey ants in an obese animal model.
10 is a view confirming the effect of reducing the weight of the liver tissue of the hot water extract of honeysuckle in an obese animal model.
11 is a view confirming the effect of reducing the weight of adipose tissue of the hot water extract of honeysuckle in an obese animal model.
12 is a view confirming the effect of reducing the blood sugar of the hot water extract of honey ants in an obese animal model.
13 is a view confirming the effect of reducing the fat in the liver of the hot water extract of honeysuckle in an obese animal model.
14 is a diagram confirming the effect of reducing the AST and ALT of the hot water extract of honeysuckle in an obese animal model.
15 is a diagram confirming the effect of reducing insulin and leptin and increasing adiponectin in the blood of the hot water extract of honeysuckle in an obese animal model.
Figure 16 is a diagram confirming the effect of reducing the fat accumulation in adipose tissue and liver tissue of the hot water extract of honeysuckle chrysanthemum in an obese animal model.
17 is a view confirming the effect of reducing the expression of obesity-related genes of the hot water extract of honey ants in an obese animal model.
18 is a view confirming the effect of reducing the expression of obesity-related proteins of the hot water extract of honeysuckle in an obese animal model.

본 발명은 벌개미취 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for anti-obesity comprising a honey ant odor water extract as an active ingredient.

본 발명의 벌개미취 물 추출물은 지방분화를 억제하고 콜레스테롤 저하 효과를 가지며, 벌개미취 열수 추출물은 지방 관련 단백질인 AKT, C/EBPα, PPARγ, PLIN1, FABP4, ACC1, FAS 단백질의 발현을 억제한다. 또한 AMPK, pAMPK 단백질 발현이 증가되는 효과를 갖일 수 있다.The water extract of honey ant chrysanthemum of the present invention inhibits fat differentiation and has cholesterol lowering effects, and the hot water extract of honey ant worm inhibits the expression of fat-related proteins AKT, C/EBPa, PPARγ, PLIN1, FABP4, ACC1, and FAS proteins. In addition, it may have the effect of increasing the expression of AMPK and pAMPK proteins.

또한, 본 발명의 벌개미취 물 추출물은 비만 동물 모델에서 체중, 체중증가량 및 식이효율을 감소시킬 수 있고, 혈청 중 중성지방과 콜레스테롤을 감소시키는 효과가 있고, 지방 조직과 간 조직에서 중성지방 함량을 감소시키며, 인슐린과 렙틴 농도를 감소시키며, 아디포넥틴의 농도를 증가시키는 효과가 있다. 또한, 비만 관련 유전자의 발현을 감소시키는 효과가 있다.In addition, the water extract of beehive ants of the present invention can reduce body weight, weight gain and dietary efficiency in an obese animal model, has an effect of reducing triglycerides and cholesterol in serum, and reduces triglyceride content in adipose tissue and liver tissue It has the effect of decreasing the concentration of insulin and leptin, and increasing the concentration of adiponectin. In addition, there is an effect of reducing the expression of obesity-related genes.

상기 벌개미취 추출물은 물, 알코올, 유기용매 및 이들의 혼합물로 구성되는 군에서 선택되는 용매로 추출될 수 있으나, 물 추출물이 바람직하다.The honey ant odor extract may be extracted with a solvent selected from the group consisting of water, alcohol, organic solvents, and mixtures thereof, but a water extract is preferable.

본 발명의 물 추출물 내에는 하기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물을 포함할 수 있다.The water extract of the present invention may include compounds represented by the following Chemical Formulas 1 to 4.

[화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 3][Formula 3]

[화학식 4][Formula 4]

상기 벌개미취 추출물은 지방분화를 억제하고 콜레스테롤 저하 효과를 가지며, 벌개미취 열수 추출물은 지방 관련 단백질인 AKT, C/EBPα, PPARγ, PLIN1, FABP4, ACC1, FAS 단백질의 발현을 억제한다. 또한 AMPK, pAMPK 단백질 발현이 증가되는 효과를 가질 수 있다. The honey ant lichen extract inhibits fat differentiation and has a cholesterol lowering effect, and the hot water extract of honey ant lichen inhibits the expression of fat-related proteins AKT, C/EBPa, PPARγ, PLIN1, FABP4, ACC1, and FAS proteins. In addition, it may have the effect of increasing the expression of AMPK and pAMPK proteins.

상기 항비만은 비만 증상을 개선하는 것으로, 상기 비만은 대사 장애로 인하여 체내에 지방세포가 증식 분화하고 이로 인하여 체지방이 과잉으로 축적된 상태를 의미한다. 비만인 경우 체지방이 체중의 25% 이상이며, 신체 비만지수(체질량지수, Body mass index: 체중(kg)을 신장(m)의 제곱으로 나눈 값)가 25 이상이면 비만으로 진단한다.The anti-obesity refers to alleviating the symptoms of obesity, and the obesity refers to a state in which fat cells proliferate and differentiate in the body due to metabolic disorders, and thereby excessive accumulation of body fat. Obesity is diagnosed when body fat is 25% or more of body weight and body mass index (body mass index: weight (kg) divided by height (m) squared) is 25 or more.

상기 체지방은 신체를 구성하는 지방조직을 의미하며 피하조직, 유선, 및 신장주위 등에 널리 분포하고, 저장지방으로 에너지에 이용되는 것 이외에 내장 보호와 체온 조절기능을 한다. 저장지방이 과잉으로 축적된 상태를 비만이라고 하며 비만에서는 합병증 예방 관점에서 체중보다 체지방의 양이 중요시 된다.The body fat refers to adipose tissue constituting the body and is widely distributed in the subcutaneous tissue, mammary gland, and around the kidneys, and is used for energy as storage fat, and functions to protect internal organs and regulate body temperature. A state in which excess fat is stored is called obesity, and in obesity, the amount of body fat is more important than body weight from the viewpoint of preventing complications.

본 발명에서 비만이란 고지방 식이로 인한 비만일 수 있다.In the present invention, obesity may be obesity due to a high-fat diet.

본 발명의 용어 "개선"은 상기 조성물을 이용하여 비만의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미하며, 상기 항비만 조성물은 간 및 혈장의 트리글리세롤 및 콜레스테롤 수준의 개선 효과가 우수하다.The term "improvement" of the present invention refers to any action that improves or benefits the symptoms of individuals suspected of and onset of obesity using the composition, and the anti-obesity composition has an effect of improving triglycerol and cholesterol levels in the liver and plasma great.

상기 비만 상태에 이르면 비만 관련 대사성 질환이 동반되는데, 상기 비만 관련 대사성 질환은 뇌졸중, 고지혈증, 동맥경화, 심혈관 질환, 인슐린 항상성 또는 비알콜성 지방간을 포함할 수 있다. 따라서 간 및 혈장의 트리글리세롤 및 콜레스테롤의 수준이 개선되면 상기 대사성 질환의 개선 효과가 우수할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.When the obesity state is accompanied by obesity-related metabolic diseases, the obesity-related metabolic diseases may include stroke, hyperlipidemia, arteriosclerosis, cardiovascular disease, insulin homeostasis, or nonalcoholic fatty liver. Therefore, when the levels of triglycerol and cholesterol in the liver and plasma are improved, the improvement effect of the metabolic disease may be excellent, but the present invention is not limited thereto.

상기 "유효성분으로 포함하는"은 항비만 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 비만을 유발하는 중성지방의 합성을 저해하는 것으로, 혈중 지질 농도 개선, 체중 증량 억제 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.The "comprising as an active ingredient" contains an effective amount capable of exhibiting an anti-obesity effect, for example, inhibiting the synthesis of triglycerides causing obesity, improving blood lipid concentration, inhibiting weight gain, etc. can mean doing

상기 벌개미취는 높이는 50 ~ 60cm이며, 너비는 1.5 ~ 3cm이다. 잎은 끝이 뾰족하고 길이가 12 ~ 19cm가 되며, 너비 1.5 ~3cm로 밑 부분이 점차 좁아지며 딱딱하고 양면에 털이 거의 없으며 가장자리에 잔톱니가 있다. 여러해살이식물로 꽃은 10월에 피고 지름 4 ~ 5cm로 연한 자주색이며 가지 끝과 원줄기 끝에 달리고 총포는 반구형이며 길이는 약 13mm, 지름은 약 8mm이다. 포편은 4줄로 배열되고 외편은 길이는 4 ~ 5mm, 너비는 약 1.5mm로 긴 타원형이며, 가장자리에 털이 있다. 본 발명의 벌개미취는 바람직하게는, 벌개미취의 잎일 수 있다.The height of the honey ant lice is 50 to 60 cm, and the width is 1.5 to 3 cm. Leaves are sharp at the tip, 12 to 19cm long, 1.5 to 3cm wide, with a gradually narrower bottom, hard, with few hairs on both sides, and fine sawtooths on the edges. It is a perennial plant with flowers blooming in October, 4-5cm in diameter, light purple, hanging on the tip of branches and main stem, and the involucre is hemispherical, about 13mm long and about 8mm in diameter. The bracts are arranged in 4 rows, and the outer part is 4 to 5mm long and about 1.5mm wide, and has a long oval shape, with hairs on the edge. Preferably, the honey ant odor of the present invention may be a leaf of the honey ant odor.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 벌개미취 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물이 제공 된다.According to another aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of obesity-related metabolic diseases comprising the extract as an active ingredient.

상기 대사성 질환은 비만, 제2형 당뇨, 이상지질혈증, 인슐린저항성, 간지방증(hepatic steatosis) 및 비알콜성 지방간(fatty liver)으로 구성된 군에서 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The metabolic disease may be one or more from the group consisting of obesity, type 2 diabetes, dyslipidemia, insulin resistance, hepatic steatosis and non-alcoholic fatty liver, but is not limited thereto.

상기 "예방"은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 비만 증상이 상기 조성물을 사용 하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.The "prevention" means any action that reduces the frequency or degree of occurrence of a pathological phenomenon. Prevention may be complete or partial. In this case, it may mean a phenomenon in which the symptoms of obesity in the individual are reduced compared to the case where the composition is not used.

상기 "치료"는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.The "treatment" refers to any action that clinically intervenes to alter the natural process of a subject or cell to be treated, and may be performed while a clinical pathology is in progress or to prevent it. The desired therapeutic effect is to prevent the occurrence or recurrence of a disease, alleviate symptoms, reduce all direct or indirect pathological consequences of the disease, prevent metastasis, reduce the rate of disease progression, or reduce the disease progression rate. alleviating or temporarily ameliorating the condition, or improving the prognosis.

상기 조성물은 경구적 전달, 비경구적 전달의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 전신 또는 국소 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 적절한 투여 형태를 제공하도록 적합한 양의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체와 함께 제형화될 수 있다.The composition may be administered in the form of oral delivery or parenteral delivery. The composition may be administered systemically or locally, and the administration may include oral administration and parenteral administration. The compositions may be formulated with a suitable amount of a pharmaceutically acceptable vehicle or carrier to provide an appropriate dosage form.

상기 조성물은 약학 조성물의 제조에 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The composition may further include a carrier, excipient and diluent used in the preparation of the pharmaceutical composition. The carrier, excipient and diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil.

또한, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화 하여 사용할 수 있다.In addition, the composition can be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups and aerosols, external preparations, suppositories, and sterile injection solutions.

경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있고, 상기 고형제제는 상기 화합물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 혼합하여 조제할 수 있다. 또한, 상기 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제가 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있고, 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 외에 여러 가지 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 사용될 수 있다. 상기 비수성용제, 현탁제는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르가 사용될 수 있다. 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴이 사용될 수 있다. 상기 조성물은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 약학적으로 유효한 양이 투여될 수 있으며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 상기 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 상이해질 수 있으며, 적합한 총 1 일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다. A solid preparation for oral administration may include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and the solid preparation includes at least one excipient to the compound and its fractions, for example, starch, calcium carbonate, sucrose, lactose. , or it can be prepared by mixing gelatin and the like. In addition to the above excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may be used. Liquid formulations for oral administration may include suspensions, solutions, emulsions, syrups, etc., and various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives, etc. may be used in addition to simple diluents such as water and liquid paraffin. Formulations for parenteral administration may be used as sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized formulations, and suppositories. The non-aqueous solvent and suspension agent may be propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, or injectable ester such as ethyl oleate. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin oil, and glycerogelatin may be used. The composition may be administered in a pharmaceutically effective amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level may vary depending on the individual type and severity, age, sex, type of disease, and drug. Activity, sensitivity to drug, administration time, administration route and excretion rate, duration of treatment, factors including concurrent drugs, and other factors well known in the medical field may be determined according to factors. The composition may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. and may be administered single or multiple. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art. The preferred dosage of the composition may vary depending on the condition and weight of the patient, the degree of disease, the drug form, the route and period of administration, and a suitable total daily amount may be determined by the treating physician within the scope of sound medical judgment. .

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 벌개미취 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 관련 대사성 질환 예방 또는 건강기능식품이 제공된다.According to another aspect of the present invention, there is provided an obesity-related metabolic disease prevention or health functional food comprising the extract of honey ant lichen as an active ingredient.

상기 건강기능식품은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, 상기 기능성은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미할 수 있다.The health functional food means a food manufactured and processed using raw materials or ingredients useful for the human body in accordance with the Health Functional Food Act, and the functionality is to control nutrients or physiologically affect the structure and function of the human body. It may refer to ingestion for the purpose of obtaining useful effects for health purposes, such as action.

상기 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 식품 첨가물은 다른 규정이 없는 한 식품의 약품 안정처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 적합성 여부를 판단할 수 있다.The health functional food may include normal food additives, and unless otherwise specified, the standards and standards for the relevant item according to the general rules and general test methods of the Food Additives Code approved by the Ministry of Food and Drug Safety. conformity can be judged by

상기 식품 첨가물 공전에 기재된 품목은 예컨대 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류를 들 수 있다.Items described in the Food Additives Codex include, for example, chemical compounds such as ketones, glycine, potassium citrate, nicotinic acid, and cinnamic acid; Mixtures, such as an added alkali agent, a preservative agent, and a tar dye agent, are mentioned.

상기 건강기능식품은 대사성 질환의 예방 또는 개선을 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있으며, 예컨대, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 보조 식품, 식품 첨가제 등에 사용될 수 있다.The health functional food can be used in various ways, such as foods and beverages for the prevention or improvement of metabolic diseases, for example, various foods, beverages, gum, tea, vitamin complexes, health functional supplements, food additives, and the like.

상기 건강기능식품은 대사성 질환의 예방 또는 개선을 목적으로 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조 및 가공될 수 있다.The health functional food may be manufactured and processed into any one formulation selected from the group consisting of tablets, granules, powders, capsules, liquid solutions and pills for the purpose of preventing or improving metabolic diseases.

구체적으로 상기 정제 형태의 건강기능식품은 상기 화합물, 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와의 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축 성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수 있으며, 필요에 따라 적당한 제피제로 제피할 수도 있다.Specifically, the health functional food in the form of tablets is granulated with a mixture of the compound, excipient, binder, disintegrant, and other additives in a conventional manner, and then a lubricant is added thereto and compression-molded, or the mixture is directly compression-molded. can be manufactured. In addition, the health functional food in the form of tablets may contain a mating agent, etc., if necessary, and may be coated with a suitable skinning agent if necessary.

상기 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질캅셀제는 통상의 경질캅셀에 상기 화합물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물 또는 그의 입상물 또는 제피한 입상물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질캅셀제는 상기 화합물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물을 젤라틴 등 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 솔비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.Among the health functional foods in the form of capsules, hard capsules can be prepared by filling conventional hard capsules with a mixture of the compound and additives such as excipients, or their granules or coated granules, and soft capsules include the compound and excipients It can be prepared by filling a mixture with additives, such as gelatin, in a capsule base. The soft capsules may contain a plasticizer such as glycerin or sorbitol, a colorant, a preservative, and the like, if necessary.

상기 환 형태의 건강기능식품은 상기 화합물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 적당한 제피제로 제피를, 또는 전분, 탈크 또는 적당한 물질로 환의를 입힐 수도 있다.The health functional food in the form of a ring can be prepared by molding a mixture of the compound, excipient, binder, disintegrant, etc. in an appropriate way, and if necessary, the skin is coated with sucrose or other suitable skinning agent, or starch, talc, or a suitable substance. It can also be dressed up as

상기 과립형태의 건강기능식품은 상기 화합물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.The health functional food in the form of granules may be prepared in a granular form by an appropriate method of a mixture of the compound, excipients, binders, disintegrants, etc., and may contain flavoring agents, flavoring agents, etc. as necessary.

또한, 상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함할 수 있다.In addition, the definitions of terms for the excipients, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agents, and the like are described in documents known in the art and may include those having the same or similar functions.

본 발명이 속하는 기술분야의 당업자라면 본 발명의 기재내용에 기초하여 각 구성의 종류, 도입 비율 등을 변화시켜 적용할 수 있을 것이며, 상기 변형에도 불구하고 동등한 기술적 효과가 구현되는 경우라면, 본 발명의 기술적 사상에 포괄된다고 할 것이다.Those skilled in the art to which the present invention pertains will be able to apply by changing the type, introduction ratio, etc. of each configuration based on the description of the present invention, and if equivalent technical effects are realized despite the above modifications, the present invention It will be said that it is encompassed by the technical thought of

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.Through the following examples, the present invention will be described in more detail, but it is obvious that the present invention is not limited by the following examples.

[실시예 1]벌개미취 물 추출물 제조 및 유효성분 분석[Example 1] Preparation of beehive odor water extract and analysis of active ingredients

1. 벌개미취 물 추출물 및 이의 분획물 제조1. Preparation of honey ant odor water extract and its fractions

2018년 농촌진흥청 국립원예특작과학원 인삼특작부 시험포장에서 재배된 벌개미취 잎을 수확 후 동결건조하였다. 상기 벌개미취 시료에 약 10배의 증류수를 가하여 상온 24시간 3회 추출 후 여과하였다. 여과된 추출물을 동결건조하여 벌개미취 물 추출물을 얻었다. 벌개미취 추출물은 20배의 증류수에 녹인 후 분획여두(분획 깔대기)에 넣은 다음 동량의 핵산을 넣어 잘 혼합시키고 물층 과 핵산층으로 분리, 상기 과정을 3회 반복하였다. 물 층에 다시 클로로포름을 넣어 물층과 클로로포름층으로 분리하였으며 이를 3회 반복하였다. 이 후, 에틸아세테이트, 부탄올 층도 위와 같은 방법으로 각각의 분획물을 얻었고, 이로부터 유효성분들을 확보하였다. 특히, 화학식 4의 물질은 신규물질로서, 이 후, 실험결과 항비만효과가 우수함을 확인하였고, 하기에서 분리된 화학식 1 내지 4의 물질들은 모두 항비만 효과가 존재함을 확인하였다(화학식 1의 화합물: Gymnasterkoreayne A(클로로포름 분획물에서 분리); 화학식 2의 화합물: 1β,6α,9β-trihydroxytrans-eudesm-3-ene-1,6-di-O-β-D-glucopyranoside(부탄올 분획물 중 2번째 소분획에서 분리); 화학식 3의 화합물: Gymnasterkoreaside B(부탄올 분획물 중 2번째 소분획물에서 분리); 화학식 4의 화합물: 본 발명의 신규화합물; 부탄올 분획물 중 3번째 소분획물에서 분리).In 2018, the leaves grown in the test field of the Ginseng Special Crop Department of the National Academy of Horticultural and Herbal Science, Rural Development Administration, were harvested and then freeze-dried. About 10 times of distilled water was added to the honey ant odor sample, extracted three times for 24 hours at room temperature, and then filtered. The filtered extract was freeze-dried to obtain a water extract of honey ant odor. After dissolving the honey ant odor extract in 20 times distilled water, it was put into a fractionation funnel (separation funnel), the same amount of nucleic acid was added, mixed well, and separated into a water layer and a nucleic acid layer, and the above process was repeated 3 times. Chloroform was added to the water layer again to separate the water layer and the chloroform layer, and this was repeated 3 times. After that, the ethyl acetate and butanol layers were also obtained from each fraction in the same manner as above, and active ingredients were obtained therefrom. In particular, the material of Chemical Formula 4 is a novel material, and after that, it was confirmed that the anti-obesity effect was excellent as a result of the experiment, and it was confirmed that all of the substances of Chemical Formula 1 to 4 isolated below had an anti-obesity effect (of the formula 1) Compound: Gymnasterkoreayne A (isolated from the chloroform fraction); isolated from the fraction), the compound of formula 3: Gymnasterkoreaside B (isolated from the second subfraction of the butanol fraction); the compound of the formula 4: a novel compound of the present invention; isolated from the third subfraction of the butanol fraction).

[화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 3][Formula 3]

[화학식 4][Formula 4]

[실시예 2]in vitro에서 벌개미취 물 추출물(열수 추출물)의 항비만효과 확인[Example 2] Confirmation of anti-obesity effect of honey ant odor water extract (hot water extract) in vitro

1. 전지방세포주 배양 1. Cultivation of whole adipocytes

전지방세포(3T3-L1)는 American Type Culture Collection (CL-173, ATCC, VA, USA)에서 구입하였다. 3T3-L1 세포의 생육배지로 1X penicilin/streptomycin/glutamine (P/S/G, Gibco, Canada)과 10% bovine calf serum (BCS, Gibco, Canada)가 포함된 Dulbecco's modified Eagles medium (DMEM, Gibco, Canada)을 사용하였고 37℃, 5% CO₂조건하에 배양하였다. Preadipocytes (3T3-L1) were purchased from the American Type Culture Collection (CL-173, ATCC, VA, USA). 3T3-L1 cell growth medium, Dulbecco's modified Eagles medium (DMEM, Gibco, Canada) was used and cultured at 37°C and 5% CO2 conditions.

2. 벌개미취 물추출물의 세포 독성 측정2. Measurement of cytotoxicity of honey ant odor water extract

벌개미취 추출물의 세포 독성 측정을 위하여 실시예 1.1과 같이 배양된 세포를 이용하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. 세포독성은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2- (4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS, Promega, WI, USA) assay를 사용하여 측정하였다. 3T3-L1 세포를 96 well plate에 1×10⁵ cell/mL로 분주하여 24시간 배양한 후 벌개미취 추출물을 25, 50, 100, 200, 300 및 400 μg/mL 농도로 처리하였다. 24시간 후 multi plate reader (Synergy H1, Biotek, VT, USA)를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.In order to measure the cytotoxicity of the honey ants extract, the experiment was carried out as follows using the cells cultured as in Example 1.1. Cytotoxicity was measured using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS, Promega, WI, USA) assay. did 3T3-L1 cells were aliquoted in a 96 well plate at 1×10 ⁵ cell/mL and cultured for 24 hours. After 24 hours, absorbance was measured at 490 nm using a multi-plate reader (Synergy H1, Biotek, VT, USA).

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 벌개미취 열수 추출물(AKW)은 400 μg/mL 의 농도까지 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였으며, 벌개미취 70% 에탄올 추출물(AKE) 또한 100 μg/mL 의 농도까지 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다. As a result, as shown in FIG. 2, it was confirmed that the hot water extract (AKW) did not show cytotoxicity up to a concentration of 400 μg/mL, and the 70% ethanol extract (AKE) of honey anthospice was also cytotoxic up to a concentration of 100 μg/mL. It was confirmed that this did not appear.

3. 벌개미취 물 추출물의 지방세포 분화 및 분화 억제능 측정3. Measurement of Adipocyte Differentiation and Differentiation Inhibitory Activity of H.

벌개미취 물 추출물의 지방세포 분화 및 분화 억제능 측정을 위하여 1.1과 같이 배양된 세포를 이용하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. 1×10⁵ cells/mL을 12 well-plate에 세포 밀도가 100%가 될 때까지 37℃, 5% CO₂의 환경에서 배양하였다. 지방세포로 분화를 유도하기 위한 분화유도배지는 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 1 μM dexamethasone (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 10 μg/mL insulin (Gibco, Canada), 1X P/S/G, 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco, Canada)이 포함된 DMEM배지를 사용하였다. 지방세포로 분화를 유도하기 위해 분화유도배지에서 48시간 배양한 후 인슐린(10 μg/ml)이 포함된 분화유지배지로 교체하였다. 이 후, 48시간 간격으로 배지를 교체한 후 분화유도 상태를 확인 하였다. In order to measure the adipocyte differentiation and differentiation inhibitory ability of the water extract of honey ants, the experiment was carried out as follows using the cells cultured as in 1.1. 1×10 ⁵ cells/mL were cultured in a 12 well-plate at 37° C. and 5% CO ₂ environment until the cell density reached 100%. Differentiation induction medium for inducing differentiation into adipocytes is 0.5 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 1 μM dexamethasone (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) , USA), 10 μg/mL insulin (Gibco, Canada), 1X P/S/G, and DMEM medium containing 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco, Canada) were used. In order to induce differentiation into adipocytes, they were cultured for 48 hours in a differentiation induction medium and then replaced with a differentiation medium containing insulin (10 μg/ml). Thereafter, the differentiation induction state was checked after replacing the medium every 48 hours.

분화유도과정 중에 벌개미취 추출물의 분화 억제 효능을 확인하기 위해 분화유도배지 및 분화유지배지에 추출물 0, 6.25, 12.5, 25, 50 및 100 μg/mL을 함께 처리하였다. 추출물을 처리하지 않고 분화 유도한 것을 대조군으로 하였으며, 비교를 위해 지방분화를 억제하는 conjugated linoleic acid (CLA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 처리하고 분화 유도 한 것을 양성대조군으로 하였다.During the differentiation induction process, 0, 6.25, 12.5, 25, 50 and 100 μg/mL of the extracts were treated together in the differentiation induction medium and the differentiation maintenance medium to confirm the differentiation inhibitory effect of the extracts. A control group that was differentiated without treatment with the extract was treated with conjugated linoleic acid (CLA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) to inhibit fat differentiation, and a positive control group was used to induce differentiation. .

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 벌개미취 열수 추출물(AKW)은 6.25 μg/mL ~ 100 μg/mL 의 모든 처리농도에서 유의적은 효과를 보여 낮은 농도에서도 우수한 지방분화 억제 활성을 나타냄을 확인하였다. 에탄올 추출물과 비교하여, 열수 추출물에서 지방분화 억제 활성이 우수함을 확인하였다. As a result, as shown in FIG. 3, it was confirmed that the hot water extract (AKW) from honey ant odorifera showed a significant effect at all treatment concentrations of 6.25 μg/mL to 100 μg/mL, thereby exhibiting excellent lipodifferentiation inhibitory activity even at low concentrations. Compared with the ethanol extract, it was confirmed that the hot-water extract had excellent fat differentiation inhibitory activity.

4. 벌개미취 추출물의 콜레스테롤 저하 효과 4. Cholesterol lowering effect of honey ant odor extract

벌개미취 추출물의 콜레스테롤 저하 효과 측정을 위하여, 1.1과 같이 배양된 세포를 이용하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. In order to measure the cholesterol-lowering effect of the honey ant odor extract, the experiment was carried out as follows using the cells cultured as in 1.1.

콜레스테롤 저하 실험은 Cholesterol/ Cholesteryl Ester Assay Kit (Abcam, Cambridge, UK)를 사용하여 제품의 프로토콜에 따라 측정하였다. 분화 시킨 세포에 Chloroform: Isopropanol: NP-40 (7:11:0.1)을 넣어 지질을 추출하고, 원심분리기를 이용하여 상등액을 수집하였다. 상기 상등액을 50℃로 Air dry를 하고, 제품의 용매를 넣어서 37℃에서 60분 반응 시킨 후 흡광도 OD570 nm에서 측정하였다. Cholesterol lowering test was measured using the Cholesterol/Cholesteryl Ester Assay Kit (Abcam, Cambridge, UK) according to the product protocol. Chloroform: Isopropanol: NP-40 (7:11:0.1) was added to the differentiated cells to extract lipids, and the supernatant was collected using a centrifuge. The supernatant was air-dried at 50°C, and the product solvent was added and reacted at 37°C for 60 minutes, and then absorbance was measured at OD570 nm.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 벌개미취 열수 추출물(AKW)의 경우, 6.25 ~ 100 μg/mL에서 우수한 콜레스테롤 저하 효과를 나타냈으며 특히 낮은 농도인 6.25 μg/mL에서도 총 콜레스테롤 함량이 약 40 mg/dL로 벌개미취를 처리 하지 않은 대조군 대비 약 50% 억제율로 우수한 콜레스테롤 저하 효과를 가지는 것으로 나타남을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 4, in the case of the hot water extract (AKW) from honey ant odor, it showed an excellent cholesterol-lowering effect at 6.25 ~ 100 μg/mL, and the total cholesterol content was about 40 mg/mL even at a particularly low concentration of 6.25 μg/mL. It was confirmed that it had an excellent cholesterol-lowering effect with an inhibitory rate of about 50% compared to the control group not treated with dL.

5. 벌개미취 추출물의 중성지방 합성 저해 효과 5. Inhibitory effect on triglyceride synthesis of honey ant odor extract

벌개미취 물 추출물의 중성지방 합성 저해 효과 측정을 위하여 1.1과 같이 배양된 세포를 이용하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. In order to measure the inhibitory effect on the synthesis of triglycerides of the water extract of honey bee lice, the experiment was carried out as follows using the cells cultured as in 1.1.

중성지방 저하 실험은 WAKO Lab Triglyceride kit (Wako Pure Chemical, Osaka, Japan)를 이용하여 제품의 프로토콜에 따라 측정하였다. 지방 분화된 세포에 extraction solvent [Hexane / isopropanol (2 : 1)]을 실온에서 30분 처리 후 상등액을 이용하여 제품의 시약을 첨가 뒤 흡광도 OD 530-550 nm에서 측정하였다. Triglyceride reduction experiment was measured according to the product protocol using the WAKO Lab Triglyceride kit (Wako Pure Chemical, Osaka, Japan). After the extraction solvent [Hexane / isopropanol (2: 1)] was treated at room temperature for 30 minutes, the product reagent was added to the supernatant, and the absorbance was measured at OD 530-550 nm.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 벌개미취 열수 추출물(AKW)의 경우 12.5 ~ 100 μg/mL에서 우수한 중성지방 합성 저해 효과를 나타냈으며 특히 25 μg/mL에서 총 중성지방 함량이 약 0.4 nmol로 나타나 벌개미취 추출물 처리를 하지 않은 대조군 대비 약 40%의 억제율을 보여 우수한 중성지방 합성 저하 효과를 가지는 것으로 나타났다. As a result, as shown in FIG. 5 , in the case of the hot water extract (AKW) of honey ants, it exhibited an excellent neutral fat synthesis inhibitory effect at 12.5 to 100 μg/mL, and in particular, at 25 μg/mL, the total triglyceride content was about 0.4 nmol. Compared to the control group that was not treated with the extract, the inhibition rate was about 40%, indicating that it had an excellent triglyceride synthesis lowering effect.

6. 벌개미취 추출물의 지방 관련 단백질 발현 정도 확인6. Confirmation of expression level of fat-related protein in honey ant odor extract

벌개미취 추출물의 지방 관련 단백질 발현 정도 확인을 위하여, 1.1과 같이 배양된 세포를 이용하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. 지방세포(3T3-L1 cell)에 벌개미취 열수 추출물(AKW)을 6.25, 12.5, 25, 50, 100 μg/mL 의 농도로 처리 후 지방분화를 유도하였다. 지방분화가 된 세포에 RIPA buffer (Cell signaling, USA)로 용해한 후 얼음에서 30분간 반응시켰다. 세포 용해액을 4℃, 13,000rpm에서 20분간 원심분리하고, 상층액을 Bradford 시약(Biorad, USA)을 이용하여 단백질 정량을 하였다. 세포 용해액은 5X Lamilae buffer (iNtRON, Korea)와 혼합하여 95℃에서 5분간 가열 후 각 20μg 단백질량에 해당하는 시료를 10% SDS-PAGE에서 전기영동 하여 분리하였다. 전기영동 된 단백질은 polyvinylidene difluoride membrane (PVDF; Millipore, Germany) 막에 옮겨 상온에서 30분 동안 blocking (5% skim milk in TBST) 하였다. 항체처리 후 enhanced chemiluminescence (ECL) western blotting detection kit (Biorad, USA)로 반응하였다. 단백질 발현은 Davinci-K chemilumination (Korea)로 확인하였다.In order to confirm the expression level of the fat-related protein in the honey ant lichen extract, the experiment was carried out as follows using the cells cultured as in 1.1. Adipocytes (3T3-L1 cells) were treated with hot water extract (AKW) from honey ants at concentrations of 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 μg/mL to induce adipogenesis. After dissolving the adipocyte-differentiated cells with RIPA buffer (Cell signaling, USA), they were reacted on ice for 30 minutes. The cell lysate was centrifuged at 4° C. and 13,000 rpm for 20 minutes, and the supernatant was quantified for protein using Bradford reagent (Biorad, USA). The cell lysate was mixed with 5X Lamilae buffer (iNtRON, Korea), heated at 95°C for 5 minutes, and then separated by electrophoresis of a sample corresponding to each 20 μg protein in 10% SDS-PAGE. The electrophoresed protein was transferred to a polyvinylidene difluoride membrane (PVDF; Millipore, Germany) membrane and blocked (5% skim milk in TBST) at room temperature for 30 minutes. After antibody treatment, the reaction was performed with enhanced chemiluminescence (ECL) western blotting detection kit (Biorad, USA). Protein expression was confirmed by Davinci-K chemilumination (Korea).

그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이 벌개미취 열수 추출물 처리를 통해 농도 의존적으로 지방 세포 분화 또는 축적에 결정적 역할을 하는 AKT, C/EBPα, PPARγ, PLIN1, FABP4, ACC1, FAS 단백질 발현 억제와 지방 조직에서 지방분해 및 지방생성을 감소하는 역할을 하는 AMPK, AMPK의 활성화 형태인 pAMPK 단백질 발현이 증가함을 확인하였다. As a result, as shown in FIG. 6, AKT, C/EBPa, PPARγ, PLIN1, FABP4, ACC1, FAS protein expression, which plays a decisive role in adipocyte differentiation or accumulation in a concentration-dependent manner, was suppressed and It was confirmed that AMPK, which plays a role in reducing lipolysis and adipogenesis, and pAMPK protein, an activated form of AMPK, increased.

[실시예 3]비만 동물모델에서 벌개미취 물 추출물의 비만 예방 또는 치료효과 확인[Example 3] Confirmation of obesity prevention or treatment effect of honey ant odor water extract in obese animal model

1. 비만 동물 제조 및 실험설계1. Obese animal manufacturing and experimental design

실험동물은 생후 7주령의 특정병원균이 부재된 C57BL/6 수컷 마우스 40마리를 ㈜ 라온 바이오 (경기도, 용인)에서 구입하였다. 실험기간 동안 SPF (specified pathogen free) 환경인 동물 사육실의 온도는 23±2°C, 상대습도 55±5%로 일정하게 유지하고 명암주기는 12시간 간격으로 자동조절 하였다. 사육기간 동안 식이와 음용수는 자유섭취 방법으로 급식하였다. 실험동물은 충북대학교 실험동물센터에서 수행하였으며 실험동물 관리 및 이용에 관한 지침에 따라 관리하였다.For the experimental animals, 40 male C57BL/6 mice without specific pathogens at 7 weeks of age were purchased from Raon Bio (Gyeonggi-do, Yongin). During the experiment, the temperature of the animal breeding room, which is a specified pathogen free (SPF) environment, was kept constant at 23±2°C and relative humidity of 55±5%, and the light-dark cycle was automatically adjusted at intervals of 12 hours. During the breeding period, food and drinking water were fed in a free way. Experimental animals were performed at the Laboratory Animal Center of Chungbuk National University and were managed according to the guidelines for the management and use of laboratory animals.

상기 7주령 수컷 마우스 40마리를 1주일간 일반식을 먹이며 실험실 환경에 적응시킨 후 난괴법 (randomized complete block design)으로 각 실험군당 8마리씩 정상 식이군 (normal chow: normal), 고지방식이군 (high fat diet : HFD), 25 mg/kg, 50 mg/kg 벌개미취 물 추출물(열수 추출물)을 경구 투여 첨가군(AKO)의 4그룹으로 나누어 12주간 SPF 동물실에 사육하며 실험하였다. After adapting to the laboratory environment by feeding the 40 7-week-old male mice on a regular diet for 1 week, 8 mice in each experimental group by the randomized complete block design were given a normal diet group (normal chow: normal) and a high-fat diet group (high). fat diet: HFD), 25 mg/kg, 50 mg/kg honey ant odor water extract (hot water extract) were divided into 4 groups of oral administration addition group (AKO) and breeding in SPF animal room for 12 weeks was tested.

도 7에 실험설계도와 같이 12주 동안 정상 식이군을 제외하고 나머지 실험군들은 비만 유도를 위하여 총 칼로리의 60%가 지방인 고지방식을 제공하였으며, 5주부터는 농도별로 벌개미취 물 추출물은 0.5% CMC (carboxyl methyl cellulose)에 녹여, 쥐들에게 투약하였으며, 이 때 벌개미취 물 추출물의 투약은 oral gavage를 이용하여 경구 투여하였다. 경구 투여의 대조군으로 벌개미취 추출물이 없는 0.5% CMC (vehicle)을 사용하였다. 12주간의 실험기간 동안 고형 사료와 물 섭취량은 2일 간격으로 오전 10시경에, 체중은 1주일 간격으로 일정한 시간에 측정하여 기록하였다. As shown in the experimental design in Figure 7, except for the normal diet group for 12 weeks, the remaining experimental groups were provided with a high-fat diet in which 60% of total calories were fat to induce obesity, and from 5 weeks onwards, the water extract from beehive ants by concentration was 0.5% CMC ( It was dissolved in carboxyl methyl cellulose) and administered to rats. As a control for oral administration, 0.5% CMC (vehicle) without extract of honey ant odor was used. During the 12-week experiment period, solid feed and water intakes were measured and recorded at 10:00 am every 2 days, and body weight was measured and recorded at regular intervals of 1 week.

2, 체중 및 식이 효율 측정2, weight and dietary efficiency measurement

실험기간 동안 실험동물의 상태 관찰을 위하여 주 1회 전자저울로 체중을 측정하였다. 식이는 2일마다 오전 10시경에 제공되고, 이때 공급한 사료의 양과 남은 사료의 양을 측정하여 그 차이로 식이 섭취량을 계산하였다. 식이 효율 (FER : The feed efficiency ratio)은 실험 기간에 증가한 체중 증가량을 동일한 기간 동안의 식이섭취량으로 나누어 산출하였다. 이의 결과를 도 8 및 표 1에 나타내었다.During the experiment period, the body weight was measured with an electronic scale once a week to observe the condition of the experimental animals. Food was provided every 2 days around 10 am, and the amount of feed supplied and the amount of remaining feed were measured at this time, and the food intake was calculated with the difference. The feed efficiency ratio (FER) was calculated by dividing the weight gain during the experiment by the food intake during the same period. The results are shown in FIG. 8 and Table 1.

FER = {(body weight change (g/day)/ food intake (g/day)} × 100FER = {(body weight change (g/day)/ food intake (g/day)} × 100

도 8 및 표 1에 나타난 바와 같이, 12주간의 실험 수행 후 실험동물들의 외관상 몸무게의 변화를 보이며, 실질적인 체중의 측정결과도 비만대조군에 비교하여 벌개미취 물 추출물을(AKO)을 경구 투여한 실험군(AKO 25mg/kg, AKO 50mg/kg)에서 유효성 있게 감소됨을 확인하였다. 또한, 비만대조군의 식이효율이 7.24%이었으나, 벌개미취 물 추출물 (AKO 25, AKO 50)을 포함한 실험군에서는 비만대조군(HFD)에 비하여 통계학적으로 유의성 있게 (p<0.001) 식이효율이 감소하는 추이를 보임을 확인하였다.As shown in Figure 8 and Table 1, after 12 weeks of the experiment, the experimental animals showed a change in their apparent body weight, and the actual weight measurement results were also compared to the obese control group in the experimental group (AKO) administered orally. AKO 25mg/kg, AKO 50mg/kg) was confirmed to be effectively reduced. In addition, although the diet efficiency of the obese control group was 7.24%, the experimental group including the honey ant odor water extract (AKO 25, AKO 50) showed a statistically significant (p<0.001) decrease in dietary efficiency compared to the obesity control group (HFD). visible was confirmed.

[표 1][Table 1]

3. 간 조직 및 지방 조직의 무게 확인3. Check the weight of liver tissue and adipose tissue

실험동물은 식이 실험 종료 후 (12주 후) 12시간 절식 시킨 뒤 에테르로 마취하여 마우스를 개복하였다. 혈액지표분석을 위해 복부를 개복한 후 멸균된 주사기를 사용하여 하대정맥에서 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 얼음에 정치시킨 후 3000 rpm (4°C) 에서 10 내지 15분간 원심 분리하여 상층액 (혈청) 을 실험에 사용하였다. 채혈 후 즉시 간과 지방조직 (부고환지방, 복막하지방, 피하지방) 들을 적출하였다. 조직들은 PBS를 이용해 세척하고 여과지로 수분을 제거 한 후, 무게를 측정하였다. 간조직 결과를 도 9 및 도 10에 지방조직 결과를 표 2와 도 11에 나타내었다.The experimental animals were fasted for 12 hours after the end of the feeding experiment (12 weeks), and then anesthetized with ether, and the mice were laparotized. Blood was collected from the inferior vena cava using a sterile syringe after laparotomy of the abdomen for blood indicator analysis. After standing on ice, the collected blood was centrifuged at 3000 rpm (4°C) for 10 to 15 minutes, and the supernatant (serum) was used for the experiment. Immediately after blood collection, liver and adipose tissue (epidermis fat, peritoneal fat, subcutaneous fat) were extracted. Tissues were washed with PBS, dried with filter paper, and then weighed. The liver tissue results are shown in FIGS. 9 and 10, and the adipose tissue results are shown in Table 2 and FIG. 11 .

도 9 및 도 10에 나타난 바와 같이, 간조직 무게 차이는 벌개미취 물 추출물 (AKO25. AKO50) 실험군 모두 비만대조군(HFD)와 비교하여 유의성 있게 감소됨을 확인하였다.As shown in FIGS. 9 and 10 , it was confirmed that the difference in liver tissue weight was significantly reduced in both the honey ant odor water extract (AKO25. AKO50) experimental groups compared to the obesity control group (HFD).

표 2와 도 11에 나타난 바와 같이, 실험군들의 지방조직들(부고환지방, 복막하지방, 피하지방)의 무게를 측정하고 외관성 조직을 관찰한 결과 비만대조군(HFD)에 비하여 벌개미취 물 추출물의 실험군(AKO 25, AKO 50)에서 유의성 있게 감소함을 확인하였다.As shown in Table 2 and Fig. 11, the weight of the adipose tissue (epithelial fat, peritoneal fat, subcutaneous fat) of the experimental groups was measured and the apparent tissues were observed. As a result, compared to the obesity control group (HFD), the experimental group of the water extract of honey ants. (AKO 25, AKO 50) was confirmed to be significantly reduced.

[표 2][Table 2]

4. 혈당에 대한 효과 확인4. Check the effect on blood sugar

공복 혈당 수치를 글로코스 농도는 자동생화학분석기 (Hitachi 7080; Hitachi Science System Ltd.)를 사용하여 측정하였다. 이의 결과를 도 12에 나타내었다.The fasting blood glucose level and the glucose concentration were measured using an automatic biochemical analyzer (Hitachi 7080; Hitachi Science System Ltd.). The results are shown in FIG. 12 .

이의 결과, 비만대조군(HFD)에 비하여 벌개미취 물 추출물(AKO)의 실험군에서 유의성 있게 감소됨을 확인하였다. 상기 벌개미취 물 추출물(AKO)에 의해 비만이 완화되고, 높아진 혈당이 감소되었음을 알 수 있었다. 그러므로 벌개미취 추출물이 비만 및 당뇨병등의 대사 질환 치료에 영향을 줄 수 있을 것로 판단될 수 있다.As a result, it was confirmed that the experimental group of the honey ant odor water extract (AKO) was significantly reduced compared to the obesity control group (HFD). It was found that obesity was alleviated and elevated blood sugar was reduced by the honey ant odor water extract (AKO). Therefore, it can be determined that the honey ant odor extract can affect the treatment of metabolic diseases such as obesity and diabetes.

5. 혈액 내 지방 함량 분석5. Analysis of Fat Content in Blood

혈액의 지질 분석 (triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, free fatty acid)을 수행하였다. 이의 결과를 표 3에 나타내었다.Blood lipid analysis (triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, free fatty acid) was performed. The results are shown in Table 3.

고지방식으로 비만을 유도한 비만대조군(HFD)에서도 혈중지질의 농도 이상이 나타났다. 그러나 벌개미취 물 추출물 (AKO)의 실험군 (AKO 25 mg/kg, AKO 50 mg/kg)에서는 비만대조군에 비하여 유의성 있게 혈중지질의 농도 감소가 나타남을 확인하였다. 이는 벌개미취 추출물(AKO)이 고지방식에 의해 유도된 비만에서 일어나는 지질 축적을 효과적으로 억제함으로써 혈중 콜레스테롤과 중성지질의 농도를 감소시켜 고지혈증과 심혈관계통 질환을 예방 및 개선하는 효과가 있을 수 있음을 나타낸다.In the obesity control group (HFD), which was induced by a high-fat diet, abnormalities in blood lipid concentrations were observed. However, it was confirmed that the experimental group (AKO 25 mg/kg, AKO 50 mg/kg) of the honey ant odor water extract (AKO) showed a significant decrease in blood lipid concentration compared to the obese control group. This indicates that AKO extract can be effective in preventing and improving hyperlipidemia and cardiovascular diseases by effectively inhibiting lipid accumulation occurring in obesity induced by a high-fat diet, thereby reducing the concentration of blood cholesterol and triglycerides.

[표 3][Table 3]

6. 간의 지방(triglyceride) 함량 측정 6. Determination of liver triglyceride content

간에서 지방을 측정하였다. 보다 구체적으로, 간의 트라이글리세라이드(triglyceride) 함량은 Folch 방법을 변형하여 분석하였다. 간 조직 중 가장 큰 엽을 선택하여 분리하고 그 무게의 10배에 해당하는 chloroform:methanol mixture (2:1) 를 처리하여 homogenizer (polytron PT-MR 3100) 로 균질화 후, 상온에서 20분 동안 shaking한 다음 9% sodium chloride로 세척하였다. 균질화 시킨 시료들을 7,000 rpm에서 15분간 원심분리 하여 상층액을 시료로 triglyceride determination kit (Sigma, USA)를 사용하여 triglyceride 함량을 분석하였다. 이의 결과를 도 13에 나타내었다.Fat was measured in the liver. More specifically, the triglyceride content of the liver was analyzed by modifying the Folch method. The largest lobe of liver tissue was selected and separated, treated with a chloroform:methanol mixture (2:1) equivalent to 10 times its weight, homogenized with a homogenizer (polytron PT-MR 3100), and then shaken at room temperature for 20 minutes. Then it was washed with 9% sodium chloride. The homogenized samples were centrifuged at 7,000 rpm for 15 minutes, and the triglyceride content was analyzed using a triglyceride determination kit (Sigma, USA) using the supernatant as a sample. The results are shown in FIG. 13 .

도 13에 나타난 바와 같이, 비만대조군(HFD)에서는 간의 중성지방 함량이 높게 나왔으나 벌개미취 물 추출물 (AKO)의 실험군의 경우 유의성 있게 간에서 지방축척이 감소되어 지질의 농도가 낮게 나타남을 확인하였따. 이는 벌개미취 추출물 (AKO)이 고지방식에 의해 유도된 비만에서 간의 지질 축적을 효과적으로 억제함으로써 지방간을 예방 및 개선하는 것으로 판단될 수 있다.As shown in FIG. 13, in the obesity control group (HFD), the liver triglyceride content was high, but in the case of the experimental group of the honey ant odor water extract (AKO), the fat accumulation in the liver was significantly reduced, and it was confirmed that the lipid concentration was low. . It can be judged that beehive extract (AKO) prevents and improves fatty liver by effectively inhibiting lipid accumulation in the liver in obesity induced by a high-fat diet.

7.간기능 검사(AST, ALT)7. Liver function test (AST, ALT)

간기능 검사를 위하여, AST 및 ALT 검사를 수행하였다. 이의 결과를 도 14에 나타내었다.For liver function tests, AST and ALT tests were performed. The results are shown in FIG. 14 .

도 14에 나타난 바와 같이, 비만대조군(HFD)의 경우 혈청 AST, ALT 활성 값이 정상식이와 비교해 수치가 높은데 반해 벌개미취 물 추출물 (AKO 50mg/kg)의 실험군에서는 높아진 AST, ALT 수치가 유의성 있게 감소함을 확인하였다.As shown in FIG. 14 , in the case of the obesity control group (HFD), the serum AST and ALT activity values were higher than those of the normal diet, whereas the elevated AST and ALT levels were significantly decreased in the experimental group of the honey ant odor water extract (AKO 50 mg/kg). was confirmed.

8. 혈액 내 인슐린 및 렙틴 아디포넥틴의 농도 확인8. Check the concentration of insulin and leptin adiponectin in the blood

혈액 내 인슐린 (insulin), 렙틴 (leptin), 아디포넥틴 (adiponectin) 농도는 각각 mouse insulin ELISA kit, mouse leptin ELISA kit, mouse adiponectin ELISA kit (CrystalChem, Inc., USA)를 구입하여 ELISA reader로 측정하였다. 이의 결과를 도 15에 나타내었다.The blood insulin (insulin), leptin (leptin), and adiponectin concentrations were measured with an ELISA reader by purchasing a mouse insulin ELISA kit, a mouse leptin ELISA kit, and a mouse adiponectin ELISA kit (CrystalChem, Inc., USA), respectively. The results are shown in FIG. 15 .

도 15에 나타난 바와 같이, 비만대조군(HFD)의 경우 정상식이(ND)에 비해 높은 혈액 내 인슐린 농도를 갖는 반면, 벌개미취 물 추출물의 실험군(AKO25, AKO50)에서는 인슐린의 농도가 비만대조군에 비해 현저히 감소함을 확인하였다. As shown in FIG. 15 , the obesity control group (HFD) had a higher blood insulin concentration than that of the normal diet (ND), whereas in the experimental group (AKO25, AKO50) of the honey ant odor water extract, the insulin concentration was significantly higher than that of the obesity control group. was confirmed to decrease.

또한, 비만을 유도한 비만대조군(HFD)의 경우 정상식이에 비해 높은 렉틴의 농도와 낮은 아디포넥틴의 농도를 나타냈다. 그러나 이러한 결과가 벌개미취 추출물 실험군(AKO25, AKO50)에서는 비만대조군에 비해 렉틴의 농도는 낮아지고 아디포넥틴의 농도는 높게 나타남을 확인하여, 비만을 예방 또는 개선하는 것을 확인하였다.In addition, the obesity-induced obesity control group (HFD) showed higher lectin concentrations and lower adiponectin concentrations compared to the normal diet. However, these results confirmed that the concentration of lectin was lower and the concentration of adiponectin was higher in the experimental group (AKO25, AKO50) than the obesity control group, thereby preventing or improving obesity.

9. 간 조직과 지방 조직 염색 관찰 (H & E 염색)9. Observation of liver tissue and adipose tissue staining (H&E staining)

벌개미취 추출물이 조직의 모양 및 기능에 주는 효과를 확인하기 위하여, 조직 염색을 하여 관찰하였다. 보다 구체적으로, 간 조직과 지방 조직의 일부를 적출하여 10% neutral buffered formalin 용액에 24 내지 48시간 고정한 후 증류수로 수세한 후, 파라핀 (paraffin) 과정을 거쳐 포매하였다. 이렇게 만들어진 파라핀 블록은 4 내지 5 μM의 두께로 박절하여 절편 슬라이드를 제작하였다. 그리고 제작된 절편 슬라이드는 xylene으로 파라핀을 제거시키고, 100%, 95%, 90%, 80%, 70% 에탄올로 친수화 시킨 후 hematoxylin (핵)과 eosin (세포질)으로 염색하였다. 이 후 농도별로 에탄올을 처리하여 탈수 시키고(70%, 80%, 90% 및 100%), xylene을 이용해 알코올을 제거한 후 mounting 용액으로 봉입하였다. 염색된 슬라이드는 광학현미경 (Olympus, Japan)과 현미경에 장착된 디지털 카메라를 이용하여 관찰 및 촬영하였다. 이의 결과를 도 16에 나타내었다.In order to confirm the effect of the honey ant odor extract on the shape and function of the tissue, tissue staining was performed and observed. More specifically, a portion of liver tissue and adipose tissue was extracted, fixed in 10% neutral buffered formalin solution for 24 to 48 hours, washed with distilled water, and then embedded through a paraffin process. The prepared paraffin block was sliced to a thickness of 4 to 5 μM to prepare a sectioning slide. The prepared section slides were deparaffinized with xylene, hydrophilized with 100%, 95%, 90%, 80%, and 70% ethanol, and then stained with hematoxylin (nucleus) and eosin (cytoplasm). After that, it was dehydrated by treatment with ethanol for each concentration (70%, 80%, 90%, and 100%), and alcohol was removed using xylene and then sealed with a mounting solution. The stained slides were observed and photographed using an optical microscope (Olympus, Japan) and a digital camera mounted on the microscope. The results are shown in FIG. 16 .

도 16에 나타난 바와 같이, 고지방식으로 비만을 유도한 비만대조군(HFD)의 경우 정상식이에 비하여, 지방조직에서 지방의 크기가 커졌으며, 간 조직에서는 지방축척이 높게 나타남을 확인하였다. As shown in FIG. 16 , in the case of an obesity control group (HFD) induced to be obese with a high-fat diet, compared to the normal diet, it was confirmed that the size of fat in the adipose tissue was increased and the fat accumulation was high in the liver tissue.

그러나, 벌개미 물 추출물의 실험군(AKO25, AKO 50) 에서는 비만대조군에 비하여, 지방 조직의 지방의 크기가 작아졌으며, 간 조직에서는 지방의 함량이 감소됨을 확인하였다. 따라서, 벌개미취 추출물이 비만에 따른 지방의 축척을 지방 조직과 간 조직 모두에서 감소시킴으로써 비만을 개선하는 것으로 판단될 수 있다.However, it was confirmed that in the experimental group (AKO25, AKO50) of the honey ant water extract, the size of fat in adipose tissue was smaller than in the obese control group, and the content of fat in liver tissue was reduced. Therefore, it can be determined that the honey ant chaff extract improves obesity by reducing the accumulation of fat in both adipose tissue and liver tissue according to obesity.

10. 지방 조직과 간 조직에서 비만 관련 유전자의 발현 양상 비교10. Comparison of expression patterns of obesity-related genes in adipose tissue and liver tissue

벌개미취 물 추출물이 비만 관련 유전자의 발현을 감소시키는지 확인하기 위하여, FAS (fatty acid synthase), SCD-1 (stearoyl CoA desaturase-1), SREBP-1C(sterol regulatory element binding protein-1c) 유전자의 발현양상을 지방 조직과 간 조직에서 확인하였다. 상기 유전자의 발현량을 qRT-PCR을 수행하였고, 표 4에 이용한 프라이머서열을 나타내었다. 먼저, 적출한 지방 조직과 간 조직은 각각 RNeasy Lipid Tissue Mini kit 와 RNeasy Mini kit (Qiagen, USA)의 제조사 protocol에 따라 total RNA를 추출하였다.Expression of FAS (fatty acid synthase), SCD-1 (stearoyl CoA desaturase-1), SREBP-1C (sterol regulatory element binding protein-1c) genes The pattern was confirmed in adipose tissue and liver tissue. qRT-PCR was performed on the expression level of the gene, and the primer sequences used are shown in Table 4. First, total RNA was extracted from the extracted adipose tissue and liver tissue according to the manufacturer's protocol of the RNeasy Lipid Tissue Mini kit and the RNeasy Mini kit (Qiagen, USA), respectively.

추출한 RNA를 SuperScript® IV First-Strand Synthesis System (Invitrogen, USA)를 이용하여 reverse transcription에 의해 cDNA로 합성하였다. 비만관련 유전자들의 발현을 측정하기 위해 Fast SYBR® Green Master Mix (Applied Biosystems, USA)을 이용한 real-time PCR를 실시하였고, 기계는 real-time PCR (Applied Biosystems, USA)을 사용하였다. 각각의 유전자에 대한 PCR primer의 염기서열은 표 4에 제시하였다. Real-time PCR 반응은 총 25 μL 내에 cDNA 2 μL와 2X SYBR mix 12.5 μL, forward와 reverse primer는 각각 100 pmol/μL를 1 μL씩 첨가하였고, 나머지는 H₂O로 채워주었다. PCR 증폭 단계는 다음과 같고 증폭 cycle은 40 cycle을 실시하였다. Hot start를 위해 95°C에서 15분, 증폭 단계의 denaturation을 95°C에서 15초, annealing을 55°C에서 30초, extension을 72°C에서 30초간 반복하며, 각 cycle의 extension 후에 값이 기록되었다. 각 유전자의 상대적 정량을 위해 18s ribosomal RNA (18s rRNA: internal control)의 발현 정도를 이용하여 보정하였다. 모든 cycle이 완료된 후 primer의 특이성을 확인하기 위해 melting curve 분석을 실시하였다. 결과의 분석은 Applied Biosystems에서 제공하는 One step system software v2.1로 분석하였다. 이의 결과를 도 17에 나타내었다. The extracted RNA was synthesized into cDNA by reverse transcription using SuperScript® IV First-Strand Synthesis System (Invitrogen, USA). To measure the expression of obesity-related genes, real-time PCR using Fast SYBR® Green Master Mix (Applied Biosystems, USA) was performed, and the machine used real-time PCR (Applied Biosystems, USA). The nucleotide sequences of PCR primers for each gene are shown in Table 4. For the real-time PCR reaction, 2 µL of cDNA and 12.5 µL of 2X SYBR mix were added in a total of 25 µL, and 100 pmol/µL of each of the forward and reverse primers were added in 1 µL each, and the rest was filled with H ₂ O. The PCR amplification step was as follows, and the amplification cycle was 40 cycles. Repeat at 95 °C for 15 min for hot start, denaturation of the amplification step at 95 °C for 15 s, annealing at 55 °C for 30 s, and extension at 72 °C for 30 s. It was recorded. For the relative quantification of each gene, it was corrected using the expression level of 18s ribosomal RNA (18s rRNA: internal control). After all cycles were completed, melting curve analysis was performed to confirm the specificity of the primer. The results were analyzed with One step system software v2.1 provided by Applied Biosystems. The results are shown in FIG. 17 .

그림 17에 나타난 바와 같이, 두 조직 모두에서 비만대조군(HFD)은 정상식이군과 비교하여, FAS, SCD-1, SREBP-1C의 발현이 현저히 증가하였다.As shown in Figure 17, in both tissues, the expression of FAS, SCD-1, and SREBP-1C was significantly increased in the obesity control group (HFD) compared to the normal diet group.

그러나, 벌개미취 물 추출물 실험군(AKO 25, AKO 50)에서는 비만대조군에 비해 지방 형성 유전자들의 발현이 유의성 있게 감소한 것을 확인하였다. 따라서, 벌개미취 물 추출물이 지방 조직과 간 조직에서의 지질형성을 억제함으로써 비만을 개선하는 것으로 판단된다.However, it was confirmed that the expression of adipogenic genes was significantly reduced in the test group (AKO 25, AKO 50) of the honey ant odor water extract compared to the obesity control group. Therefore, it is judged that the water extract of honey ant chrysanthemum improves obesity by inhibiting lipid formation in adipose tissue and liver tissue.

[표 4][Table 4]

11. 지방 조직에서 비만 관련 단백질의 발현 양상 비교11. Comparison of expression patterns of obesity-related proteins in adipose tissue

상기 실시예 3. 10에 확인한 유전자 발현의 변화가 단백질의 발현 변화에도 영향을 미치는지 확인하기 위하여, 웨스턴 블롯팅을 통하여, 단백질 발현양을 확인하였다. In order to confirm whether the change in gene expression confirmed in Example 3. 10 also affects the change in protein expression, the amount of protein expression was confirmed through western blotting.

보다 구체적으로, 지방 및 간 조직을 lysis buffer (250mM Sucrose, 10mM HEPES, 0.2mM potassium EDTA, ddH2O, protease inhibitors)에 (5:1 내지 10:1 vol to tissue weight) 비율로 넣어 균질화시켜 원심분리 후 상층액을 수집하였다. 단백질 정량은 BioRad assay reagent (Bio-Rad, USA)를 이용하여 측정하였다. 정량한 단백질 50μg 단백질을 10% SDS-PAGE로 분리한 후 gel 을 PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane (Milipore, USA)에 transfer하고 5% skim milk in Tris bufferd saline/tween-20 (TBST; 140 mM sodium chloride, 3.0 mM potassium chloride, 25 mM Tris and 0.05% tween-20)로 상온에서 1시간 blocking 하였다. 그 후 TBST 용액으로 membrane를 여러 번 세척한 후, 지질 관련 단백질 (SCD-1, FAS, SREBP-1C) 및 AMPK signal 일차항체를 이용하여 4℃에서 밤새 membrane과 반응시켰다. 다음 날 membrane을 여러 차례 세척한 후, 일차항체에 특이적인 이차항체 (goat anti-rabbit lgG-HRP 또는 anti-mouse lgG-HRP, Santa Cruz, USA)를 실온에서 1시간 동안 membrane과 반응시켰다. Membrane을 씻어준 다음 ECL reagent (GE Healthcare, USA)와 반응시켜 X-ray 필름에 감광시키고 현상하여 밴드를 확인하였다. 이의 결과를 도 18에 나타내었다.More specifically, after centrifugation by putting fat and liver tissue in a lysis buffer (250mM Sucrose, 10mM HEPES, 0.2mM potassium EDTA, ddHO, protease inhibitors) in a ratio (5:1 to 10:1 vol to tissue weight) to homogenize. The supernatant was collected. Protein quantification was measured using BioRad assay reagent (Bio-Rad, USA). After separating the quantified protein 50μg protein by 10% SDS-PAGE, the gel was transferred to a PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane (Milipore, USA) and 5% skim milk in Tris bufferd saline/tween-20 (TBST; 140 mM sodium chloride) , 3.0 mM potassium chloride, 25 mM Tris and 0.05% tween-20) were blocked at room temperature for 1 hour. After washing the membrane several times with TBST solution, it was reacted with the membrane overnight at 4°C using lipid-related proteins (SCD-1, FAS, SREBP-1C) and AMPK signal primary antibody. The next day, after washing the membrane several times, a secondary antibody specific to the primary antibody (goat anti-rabbit lgG-HRP or anti-mouse lgG-HRP, Santa Cruz, USA) was reacted with the membrane for 1 hour at room temperature. After washing the membrane, it was reacted with an ECL reagent (GE Healthcare, USA), exposed to an X-ray film, and developed to confirm a band. The results are shown in FIG. 18 .

이의 결과, 비만대조군(HFD)에서는 상기 단백질들의 발현이 증가된 반면, 벌개미취 물 추출물 실험군(AKO 25, AKO 50) 에서 이의 발현이 감소되어지는 것을 확인하였다. 따라서, 벌개미취 물 추출물 (AKO)이 실질적인 비만 관련 단백질의 발현을 감소시킴으로써 비만의 예방 및 개선 효과가 있을 것으로 판단된다.As a result, it was confirmed that the expression of the proteins was increased in the obesity control group (HFD), while the expression was decreased in the beehive odor water extract experimental group (AKO 25, AKO 50). Therefore, it is judged that the honey ant odor water extract (AKO) has the effect of preventing and improving obesity by substantially reducing the expression of obesity-related proteins.

Claims (16)

벌개미취(Gymnaster koraiensis)물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 및 개선용 식품 조성물. A food composition for the prevention and improvement of obesity comprising a water extract or a fraction thereof as an active ingredient. 제 1항에 있어서, 상기 물 추출물은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는, 조성물.
[화학식 1]

The composition of claim 1, wherein the water extract comprises a compound represented by the following formula (1).
[Formula 1]

제 1항에 있어서, 상기 물 추출물은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 포함하는, 조성물.
[화학식 2]

The composition of claim 1, wherein the water extract comprises a compound represented by the following formula (2).
[Formula 2]

제 1항에 있어서, 상기 물 추출물은 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물을 포함하는, 조성물.
[화학식 3]

The composition of claim 1, wherein the water extract comprises a compound represented by the following formula (3).
[Formula 3]

제 1항에 있어서, 상기 물 추출물은 하기 화학식 4로 표시되는 화합물을 포함하는, 조성물.
[화학식 4]

The composition of claim 1, wherein the water extract comprises a compound represented by the following formula (4).
[Formula 4]

제 1항에 있어서, 상기 물 추출물은
1)지방세포분화 억제;
2)콜레스테롤 저하;
3)중성지방 합성 저해;
4)지방세포 분화 단백질 발현 억제;
5)체중 감소;
6)혈중 인슐린 및 렙틴 농도를 감소;
7)혈중 아디포넥틴 농도 증가; 및
8)비만 관련 유전자 발현 감소;의 효과를 갖는 것인, 조성물.The method of claim 1, wherein the water extract is
1) inhibition of adipocyte differentiation;
2) lowering cholesterol;
3) inhibition of triglyceride synthesis;
4) suppression of adipocyte differentiation protein expression;
5) weight loss;
6) reduce blood insulin and leptin concentrations;
7) increase the concentration of adiponectin in the blood; and
8) Obesity-related gene expression reduction; will have the effect of, the composition. 제 1항에 있어서, 상기 물 추출물은 하기 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물을 포함하는 것인, 조성물.
[화학식 1]

[화학식 2]

[화학식 3]

[화학식 4]

The composition of claim 1, wherein the water extract comprises a compound represented by the following Chemical Formulas 1 to 4.
[Formula 1]

[Formula 2]

[Formula 3]

[Formula 4]

벌개미취(Gymnaster koraiensis)물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for anti- obesity comprising a water extract or a fraction thereof as an active ingredient. 제 8항에 있어서, 상기 물 추출물은 하기 화학식 1 내지 4의 화합물 중 어느하나 이상을 포함한 것인, 조성물.
[화학식 1]

[화학식 2]

[화학식 3]

[화학식 4]

The composition of claim 8, wherein the water extract comprises any one or more of the following compounds of Formulas 1 to 4.
[Formula 1]

[Formula 2]

[Formula 3]

[Formula 4]

제 8항에 있어서, 상기 물 추출물은 AKT(Protein kinase B), C/EBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins α), PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor γ), PLIN1(Perilipin 1), FABP4(Fatty Acid-Binding Protein 4), ACC1(Acetyl-CoA carboxylase 1) 및 FAS 단백질 발현을 억제하여 지방 분화를 억제하는 것인, 조성물. The method of claim 8, wherein the water extract is AKT (Protein kinase B), C/EBPa (CCAAT-enhancer-binding proteins α), PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor γ), PLIN1 (Perilipin 1), FABP4 (Fatty Acid) -Binding Protein 4), ACC1 (Acetyl-CoA carboxylase 1) and inhibiting the expression of FAS protein to inhibit adipogenesis, the composition. 제 8항에 있어서,
상기 물 추출물은 AMPK(AMP-activated protein kinase)의 활성화 형태인 pAMPK 단백질 발현이 증가시켜 지방 분해 및 지방 생성을 감소시키는 것인, 조성물. 9. The method of claim 8,
The water extract increases the expression of pAMPK protein, which is an activated form of AMPK (AMP-activated protein kinase), thereby reducing lipolysis and lipogenesis, the composition. 제 8항에 있어서, 상기 물 추출물은 지방조직에서 FAS(fatty acid synthase), SCD-1(stearoyl CoA desaturase-1) 및 SREBP-1c(sterol regulatory element binding protein-1c) 유전자의 발현을 감소시키는 것인, 조성물.The method of claim 8, wherein the water extract reduces the expression of fatty acid synthase (FAS), stearoyl CoA desaturase-1 (SCD-1) and sterol regulatory element binding protein-1c (SREBP-1c) genes in adipose tissue. Phosphorus, composition. 벌개미취(Gymnaster koraiensis)물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 비만치료에 있어서, 지방조직에서 FAS(fatty acid synthase), SCD-1(stearoyl CoA desaturase-1) 및 SREBP-1c(sterol regulatory element binding protein-1c) 유전자의 발현을 감소시키기 위한 조성물.In the treatment of obesity comprising a water extract or a fraction thereof as an active ingredient, FAS (fatty acid synthase), SCD-1 ( stearoyl CoA desaturase-1) and SREBP-1c (sterol regulatory element binding) in adipose tissue protein-1c) a composition for reducing gene expression. 벌개미취 물 추출물을 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물. A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of obesity-related metabolic diseases, comprising a honey ant odor water extract. 제 14 항에 있어서,
상기 비만 관련 대사성 질환은 뇌졸중, 고지혈증, 동맥경화, 심혈관 질환 및 비알코올성 지방간으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.15. The method of claim 14,
The obesity-related metabolic disease is one or more selected from the group consisting of stroke, hyperlipidemia, arteriosclerosis, cardiovascular disease and non-alcoholic fatty liver, a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity-related metabolic disease. 벌개미취 물 추출물을 포함하는 비만 관련 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.

A health functional food composition for the prevention or improvement of obesity-related metabolic diseases, comprising a honey ant odor water extract.

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