KR20220064983A - Nkg2d 융합 단백질 및 이의 용도 - Google Patents

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KR20220064983A
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힐마르 에베르스바흐
필립 에거
에밀리에 라몬도우
라이언 설리반
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노파르티스 아게
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Abstract

다양한 질환의 치료를 위한 NKG2D 융합 단백질 및 이들의 용도가 제공된다.

Description

NKG2D 융합 단백질 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 특허법(35 U.S.C. §119(e)) 하에서 다음의 미국 가출원 특허: (1) 2019년 9월 18일자로 출원된 US 62/902,071 및 (2) 2019년 9월 18일자로 출원된 US 62/902,080의 유익을 주장한다. 이들 가출원의 개시내용은 이들의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
광범위한 암 유형을 예방 및 치료하기 위한 신규하고 효과적인 치료제에 대한 필요가 있다. 당업계의 이들 및 다른 문제에 대한 해결책이 본 명세서에 제공된다.
2개의 단량체를 포함하는 이량체 단백질이 본 명세서에 제공되며, 각 단량체는 (1) 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체; (2) 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체; (3) 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 연결하는 제1 펩타이드 링커; 및 (4) 면역글로불린(Ig)의 단편 결정화 가능 영역(Fc 영역)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 상이한 아미노산 서열을 가진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 글리신-세린 펩타이드 링커이다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 식 (GGGS)n(서열번호 9)으로 나타내며, n은 1, 2, 3, 4 또는 5이다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 GGGSGGGS(서열번호 10)이다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgG1의 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 5, 6, 63, 64, 65 또는 68에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 5, 6, 63, 64, 65 또는 68의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 N-말단에서 C-말단까지, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 제1 펩타이드 링커, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체 및 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 펩타이드 링커 없이 Fc 영역에 직접 융합된다. 일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 제2 펩타이드 링커를 통해 Fc 영역과 연결된다.
일부 실시형태에서, 단량체는, N-말단에서 C-말단까지, Fc 영역, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 제1 펩타이드 링커 및 제2 NKG2D 펩타이드 또는 변이체 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 펩타이드 링커 없이 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 직접 융합된다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 제2 펩타이드 링커를 통해 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 연결된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 추가적인 1 또는 2개의 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 및 69 중 어느 하나에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 및 69 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 및 70 중 어느 하나에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 및 70 중 어느 하나를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 2개의 단량체는 공유적으로 연결된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 Cys-Cys 브리지를 통해 연결된다.
일부 실시형태에서, 이량체 단백질은 약물 모이어티를 추가로 포함한다.
또한 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 및 70 중 어느 하나를 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 제공된다.
또한 본 명세서에 기재된 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 본 명세서에 추가로 제공된다.
본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 단리된 폴리뉴클레오타이드 또는 본 명세서에 기재된 벡터를 포함하는 조성물이 본 명세서에 추가로 제공된다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함한다.
또한 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 단리된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터 또는 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하는 세포가 본 명세서에 제공된다.
일부 실시형태에서, 세포는 중국 햄스터 난소(Chinese hamster ovary: CHO) 세포이다.
일부 실시형태에서, 세포는 변형된 CHO 세포이다.
일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포는 비활성화된 매트립타제(matriptase) 유전자 또는 매트립타제 유전자의 넉아웃(knock-out)(결실)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질이 본 명세서에 제공된다.
질환의 치료를 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 질환 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 질환은 NKG2D 리간드 발현 질환이다.
일부 실시형태에서, 질환은 암, 자가면역질환, 간 질환, 신경 손상, 유전성 운동 및 감각 신경병증, 노화 또는 바이러스 감염이다.
일부 실시형태에서, 질환은 암 또는 자가면역질환이다.
일부 실시형태에서, 암은 NKG2D 리간드 발현 암이다.
일부 실시형태에서, 대상체는 NKG2D 리간드 발현 암을 갖는다.
일부 실시형태에서, 리간드 발현 암은 폐암, 난소암, 결장암, 췌장암, 방광암, 유방암, 간세포암종(HCC), 신세포암, 비인두암(NPC), 전립선암, 흑색종, 형질세포암, 백혈병, 림프종, 신경교종 또는 신경아세포종이다.
일부 실시형태에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)이다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가적인 항암 요법 또는 항암제를 이용하여 대상체를 치료하는 단계를 더 포함한다.
일부 실시형태에서, 추가적인 항암 요법은 수술, 방사선 요법, 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 아쥬반트 요법 또는 면역요법이다.
일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 DNA를 손상시키는 화학요법이다.
일부 실시형태에서, NKG2D 리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 또는 ULBP6이다.
일부 실시형태에서, 자가면역질환은 류마티스 관절염, 결장염, 셀리악병, 다발성 경화증, 원형 탈모증, 1형 당뇨병, 만성 폐쇄성 폐질환, 죽상동맥경화증 또는 2형 당뇨병과 관련된 대사 증후군이다.
일부 실시형태에서, 간 질환은 간 섬유증, 문맥 고혈압, 비알코올성 지방간염(NASH), 지방간 질환 및 간경변이다.
일부 실시형태에서, 신경 손상은 말초 또는 뇌신경, 척수에 대한 또는 뇌, 뇌신경에 대한 외상성 또는 독성 손상, 외상성 뇌 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 척수 손상, 또는 기저 유전 질환과 관련된 손상이다.
일부 실시형태에서, 유전성 운동 및 감각 신경병증은 샤르코-마리-투스병(예를 들어, 피라미드 특징을 갖는 1A형, 2형, 3형 또는 6형) 또는 레프숨병이다.
일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 간염, 엡스타인-바르 또는 거대세포바이러스이다.
또한 NKG2D 리간드 발현 질환을 진단하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (1) NKG2D 리간드 발현 질환을 갖는 대상체로부터 생물학적 샘플을 얻는 단계; (2) 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하는 결합 시약과 접촉시키는 단계; 및 (3) 결합 시약에 대한 NKG2D 리간드의 결합을 검출하는 단계로서, 결합 시약에 대한 NKG2D 리간드의 결합은 대상체에서의 NKG2D 리간드 발현 질환의 진단을 나타내는, 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, NKG2D 리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 또는 ULBP6이다.
의약으로서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공된다.
질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공된다.
질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터, 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공되되, 상기 질환은 NKG2D 리간드 발현 질환이다.
질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터, 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공되되, 상기 질환은 암 또는 자가면역질환이다.
도 1a 내지 도 1b는 NKG2D-Fc 구조의 개략도를 제공한다. 도 1a는 NKG2D(녹색) -Fc(청색)의 다이어그램을 제공한다. 도 1b는 PDB 1HYR에 기반한 NKG2D-Fc와 MICA(오렌지색)의 상호작용 모델을 제공한다.
도 2a 내지 도 2b는 리포터 유전자 분석에 기반하여 NKG2D-L 표적 세포에 대한 ADCC 신호전달을 유발함에 있어서 N' NKG2D(즉, NKG2D 펩타이드(들)는 Fc 단편의 N 말단에 위치됨) 및 2개의 NKG2D 동형이량체의 우수성을 입증한다. 도 2a에서, JNL 리포터 유전자 형광은 NKG2D-Fc 작제물에 의해 유발되었고, 이는 NKG2D-L+ 표적 세포와의 공동 배양물에서 JNL 세포에 대한 Fc 수용체의 가교를 나타낸다. 도 2b는 N' NKG2D(H1/H2) 또는 C' NKG2D(H3/H4)(즉, NKG2D 펩타이드(들)는 Fc 단편의 C 말단에 위치됨) 중 하나 및 1개의 NKG2D 동형이량체(H1/H3), 또는 2개의 NKG2D 동형이량체(H2/H4)를 이용하는 본 실험에서 사용되는 NKG2D-Fc 변이체의 다이어그램을 제공한다.
도 3a 내지 도 3b는 마우스 NKG2D-Fc 대리(surrogate) 작제물이 0개의 아미노산의 최적 링커 길이를 갖는 마우스 NKG2D 리간드를 발현시키는 세포에 결합한다는 것을 입증한다. Y 축은 평균 R-PE 형광이다. 도 3a는 마우스 RAE-1알파를 과발현시키는 세포에 대한 작제물의 결합을 도시한다. 도 3b는 마우스 RAE-1엡실론을 발현시키는 세포에 대한 작제물의 결합을 도시한다.
도 4a 내지 도 4d는 2개의 NKG2D 동형이량체가 최적의 결합가이며, 2개의 동형이량체 이상의 추가적인 결합가는 NKG2D 결합가 및 배향 최적화에 기반한 사멸 활성에 유의미한 이점을 제공하지 않는다는 것을 입증한다. 도 4a는 도 4b에서 사용되는 작제물의 다이어그램을 도시한다. 도 4b는 인간 MICA*008-발현 표적 세포에 대한 ADCC 리포터 유전자 분석의 결과를 도시한다. 도 4c는 도 4d에서 사용되는 작제물의 다이어그램을 도시한다. 도 4d는 인간 MICA*008-발현 표적 세포에 대한 ADCC 리포터 유전자 분석의 결과를 도시한다.
도 5a 내지 도 5d는 예시적인 NKG2D-Fc 변이체에 대한 정보를 제공한다. 도 5a는 NKG2D-Fc의 두 변이체인 HH8 및 HH2의 다이어그램을 제공한다. HH8은 2개의 FLNSLF 서열의 결실에 의해 HH2와 상이하다. 도 5b는 NKG2D-Fc 구조의 다이어그램을 제공한다. 도 5c는 HH2/HH8의 전체 서열을 제공한다. 적색의 서열은 HH8로부터 결실된다. 도 5d는 HH2, HH7 및 HH8 결합의 Biacore 센소그램(우측 그래프) 및 정량화 요약(좌측 표)을 도시하는 HH2, HH7 및 HH8의 생성 특징을 제공한다.
도 6은 HH8의 서열을 제공한다. NKG2D는 검정, 힌지 영역은 녹색, CH2는 청색, CH3은 보라색, N-글리코실화 부위는 적색, 아이소머화 부위는 오렌지색, 링커 서열은 밝은 녹색으로 나타낸다(서열번호 29).
도 7은 HH10의 서열을 제공한다. NKG2D는 검정, 힌지 영역은 녹색, CH2는 청색, CH3은 보라색, N-글리코실화 부위는 적색, 아이소머화 부위는 오렌지색, 링커 서열은 밝은 녹색으로 나타낸다(서열번호 31).
도 8은 HH8-afuco의 서열을 제공한다. NKG2D는 검정, 힌지 영역은 녹색, CH2는 청색, CH3은 보라색, N-글리코실화 부위는 적색, 아이소머화 부위는 오렌지색, 링커 서열은 밝은 녹색으로 나타낸다(서열번호 29).
도 9a 내지 도 9e는 CHO 생성이 NKG2D-Fc ADCC 활성을 개선시킨다는 것을 입증한다. NKG2D-Fc ADCC 활성은 CT26.WT-huMICA*008(도 9a), CT26.WT-huMICA*001(도 9b), CT26.WT-huMICB*001(도 9c) 및 CT26.WT-cyMICB*05(도 9d)와의 공동 배양물에서 리포터유전자 활성에 의해 측정되었다. 도 9e는 HEK-유래 NKG2D-Fc와 비교할 때 CHO-유래 NKG2D-Fc의 EC50 개선의 요약을 도시한다.
도 10은 CHO MaKO 세포주에서 생성된 HH2 단백질의 제2 NKG2D 단편에서의 클리핑(clipping) 부위의 LC-MS에 의한 식별을 도시한다.
도 11a 내지 도 11b는 NKG2D-Fc가 한 자릿수 nM EC50으로 모두 8개의 NKG2D-L에 특이적으로 결합한다는 것을 입증한다. 도 11a는 실험 다이어그램을 제공한다. 도 11b는 인간 NKG2D-L을 과발현시키는 세포에 대한 HH8의 결합을 도시한다.
도 12a 내지 도 12b는 HH8이 모든 시험한 cyno NKG2D-L에 결합한다는 것을 입증한다. 도 12a는 실험 다이어그램을 제공한다. 도 12b는 cyno NKG2D-L을 과발현시키는 세포에 대한 HH8의 결합을 도시한다.
도 13a 내지 도 13b는 NKG2D-Fc가 다수의 상이한 적응증으로부터의 암 세포주에 결합하지만, 정상 huPBMC에는 결합하지 않는다는 것을 입증한다. 도 13a는 인간 종양 세포주에 대한 NKG2D-Fc의 결합을 도시한다. 도 13b는 정상 인간 PBMC에 대한 NKG2D-Fc의 결합을 도시한다.
도 14a 내지 도 14b는 NKG2D-Fc가 시험관내 NKG2D 발현을 보존한다는 것을 입증한다. 도 14a는 실험 다이어그램을 제공한다. 도 14b는 NKG2D-L+ 표적 세포와 공동 배양된 NK 세포 상의 NKG2D 발현이 NKG2D-Fc의 첨가에 의해 회복된다는 것을 입증한다.
도 15는 향상된 ADCC 변이체가 시험관내 기능을 개선시켰다는 것을 입증하며, 리포터 유전자 분석에서 ADCC 활성에 대한 다양한 아미노산 변이체의 효과를 도시한다.
도 16a 내지 도 16d는 HH8, HH10 및 HH8-AFUCO가 NKG2D-L+ 표적 세포주에 대해 ADCC를 촉진시킨다는 것을 입증한다. HH10 및 HH8-AFUCO는 NK3.3 사멸 분석에서 개선된 활성을 갖는다. 도 16a 내지 도 16d는 NKG2D-L+ 표적 세포주의 특이적 사멸을 도시한다.
도 17a 내지 도 17e는 NKG2D-Fc가 종양 세포에 직접 결합하고, ADCC/ADCP를 통해 종양을 사멸시키도록 면역 세포를 보충하여, 암 면역 주기를 개시한다는 것을 입증한다. 도 17a는 NKG2D-Fc, HH8이 1차 인간 NK 세포에 의해 HCT-116 세포의 사멸을 촉진시킨다는 것을 입증한다. 도 17b 내지 도 17c는 NKG2D-Fc가 1차 인간 NK 세포에 의한 OVCAR-3 세포의 사멸을 촉진시킨다는 것을 입증한다. 도 17d 내지 도 17e는 NKG2D-Fc, HH8이 CD69 발현, NKG2D 발현, 크기 및 입상도에 의해 측정된 바와 같이 HCT-116 세포와의 96시간 공동 배양물에서 1차 인간 NK 세포의 연장된 활성화를 촉진시킨다는 것을 입증한다.
도 18은 NKG2D-Fc, HH8이 1차 마우스 대식세포 및 NKG2D-L 발현 마우스 종양 세포와의 공동 배양물에서 서브-nM EC50으로 ADCP를 통한 NKG2D-L+ 종양의 사멸을 촉진시킨다는 것을 입증한다.
도 19a 내지 도 19f는 HH8 및 HH10이 huMICA*008(도 19a), huMICB*001(도 19b), huULBP1(도 19c), huULBP2(도 19d), cyMICA*08(도 19e) 및 (도 19f) cyMICB*05(도 19f)를 포함하는, 모든 시험 NKG2D-L에 대해 시험관내 ADCC를 촉진시킨다는 것을 입증한다.
도 20a 내지 도 20b는 생체내 프로파일에 대한 생성 세포주 및 Fc 형식의 영향을 입증하는 마우스에서 NKG2D-Fc의 약물동태학을 도시한다. 도 20a는 HEK 또는 CHO에서 생성되거나, 또는 Fc 변이를 갖는 NKG2D-Fc 변이체의 생체내 약물동태학을 도시한다. 도 20b는 CHO에서 생성된 NKG2D-Fc 변이체의 생체내 약물동태학을 도시한다.
도 21a 내지 도 21b는 항체-유사 PK 프로파일 및 생체내 순환 후 표적에 결합하는 능력의 보유를 입증하는, 사이노몰거스 원숭이에서의 HH8의 약물동태학을 도시한다. 도 21a는 생체외 MICA(표적)에 결합할 수 있는 총량 또는 양으로서 정량화된, 투약 후 시간의 표시된 수에서의 HH8 농도를 도시한다. 도 21b는 전형적인 IgG 시뮬레이션에 따른 투약 후 시간의 표시된 수에서의 HH8 혈청 농도를 도시한다.
도 22a 내지 도 22b는 마우스 종양 과발현 NKG2D-L이 불량한 CD8/NK 침윤, 표현형모사(phenocopying) 인간 NKG2D-L+ 종양을 갖는다는 것을 입증한다. NKG2D-Fc는 마우스 CD8+ 및 NK 세포 종양 존재를 회복시킨다. 도 22a는 연구 설계의 다이어그램을 제공한다. 도 22b는 종양 내로 침윤하는 NK 세포 및 CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다.
도 23a 내지 도 23b는 NKG2D-L+ 종양으로부터의 종양-침윤성 마우스 CD8+ 및 NK 세포가 탈감작된다는 것을 입증한다. NKG2D-Fc는 종양-침윤성 NK 및 CD8+ T 세포의 활성화를 회복한다. 도 23a는 종양 이식 후 2일에 20 ㎎/㎏으로 아이소타입 또는 NKG2D-Fc에 의한 마우스의 처리를 나타내는 마우스 연구의 다이어그램을 제공한다. 도 23b는 CD69에 의해 측정된 바와 같은 NKG2D 발현 및 활성화의 회복을 입증하는, 투약 후 5일에 NKG2D-Fc의 약력학적 효과를 도시한다.
도 24a 내지 도 24b는 HH8 및 HH10이 마우스 모델에서 효능있다는 것을 입증한다. 도 24a는 제2일 및 제9일에 5 ㎎/㎏으로 인간 IgG1 아이소타입인 HH8 또는 HH10 중 하나로 처리한 C57Bl/6 마우스에서의 EL4-huMICA*001 종양 성장을 도시한다. 도 24b는 a에서 마우스의 카플란-마이어 곡선을 도시한다.
정의
본 발명의 다양한 실시형태 및 양상을 본 명세서에 나타내고 기재하지만, 이러한 실시형태 및 양상은 단지 예로서 제공된다는 것은 당업자에게 분명할 것이다. 수많은 변형, 변경 및 대체가 이제 본 발명을 벗어나지 않으면서 당업자에게 발생할 것이다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 실시형태에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는데 이용될 수 있다는 것이 이해되어야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속한 기술 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다. 다음의 참고문헌은 본 발명에서 사용되는 용어 중 다수의 일반적 정의를 당업자에게 제공한다: 문헌[Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994)]; 문헌[The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988)]; 문헌[The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991)]; 및 문헌[Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)]. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 다음의 용어는 달리 표시되지 않는 한, 이들에 주어지는 의미를 갖는다.
본 개시내용 및 다음의 청구범위에서 단수 용어의 사용은, 특정 예에서 해당 용어가 구체적으로 하나 및 단지 하나를 의미하는 특정 예로 의도된다는 것이 문맥으로부터 분명하지 않다면, "적어도 하나"를 의미하는 특허의 전통적인 접근에 따른다. 마찬가지로, 용어 "포함하는"은 개방적이며, 추가적인 항목, 특징, 성분 등을 제외하지 않는다. 본 명세서에서 확인되는 참고문헌은 달리 표시되지 않는 한 이들의 전문이 본 명세서에 분명하게 참조에 의해 원용된다.
용어 "포함하다(comprise)", "포함하다(include)" 및 "갖다(have)" 및 이들의 파생어는 종합적인, 개방적 용어로서 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 예를 들어, "포함하는(comprising)", "포함하는(including)" 또는 "갖는(having)"의 사용은 구성요소가 포함하거나, 갖거나, 포함하는 것이 동사를 포함하는 절의 대상에 의해 포함되는 유일한 구성요소가 아니라는 것을 의미한다.
용어 "아미노산"은 천연 유래 및 합성 아미노산뿐만 아니라 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 천연 유래 아미노산은 유전자 암호에 의해 암호화되는 것뿐만 아니라 추후에 변형된 아미노산, 예를 들어 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉 수소, 카복실기, 아미노기 및 R 기에 결합된 α 탄소가 있는 화합물, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭시드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만 천연 유래 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 화학적 화합물을 지칭한다. 용어 "비천연 유래 아미노산" 및 "비천연 아미노산"은 천연에서 발견되지 않는 아미노산 유사체, 합성 아미노산 및 아미노산 모방체를 지칭한다.
아미노산은 이들의 통상적으로 알려진 3글자 기호로 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회(Biochemical Nomenclature Commission)에 의해 권장되는 1글자 기호로 본 명세서에 언급될 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오타이드는 이들의 통상적으로 허용되는 1글자 암호로 언급될 수 있다.
"폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"이라는 용어는 본 명세서에서 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용되되, 중합체는 실시형태에서 아미노산으로 이루어지지 않는 모이어티에 접합될 수 있다. 이 용어는 천연 유래 아미노산 중합체 및 자연 비발생 아미노산 중합체뿐만 아니라 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 유래 아미노산의 인공적인 화학적 모방체인 아미노산 중합체에도 적용된다. "융합 단백질"은 단일 모이어티로서 재조합적으로 발현된 둘 이상의 별개의 단백질 서열을 암호화하는 키메라 단백질을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "핵산", "핵산 분자", "핵산 올리고머", "올리고뉴클레오타이드", "핵산 서열," "핵산 단편" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 상호 호환적으로 사용되며, 다양한 길이를 가질 수 있는 함께 공유적으로 연결되는 뉴클레오타이드의 중합체 형태, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 변형을 포함하는 것으로 의도되지만, 이들로 제한되지 않는다. 상이한 폴리뉴클레오타이드는 상이한 3차원 구조를 가질 수 있고, 알려진 또는 알려지지 않은 다양한 기능을 수행할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드의 비제한적 예는 유전자, 유전자 단편, 엑손, 인트론, 유전자 사이 DNA(이질염색성 DNA를 포함하지만, 이것으로 제한되지 않음), 전령 RNA(mRNA), 전달 RNA, 리보솜 RNA, 리보자임, cDNA, 재조합 폴리뉴클레오타이드, 분지형 폴리뉴클레오타이드, 플라스미드, 벡터, 서열의 단리된 DNA, 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브 및 프라이머를 포함한다. 본 발명의 방법에서 유용한 폴리뉴클레오타이드는 천연 핵산 서열 및 이의 변이체, 인공 핵산 서열, 또는 이러한 서열의 조합을 포함할 수 있다.
폴리뉴클레오타이드는 전형적으로 4개의 뉴클레오타이드 염기의 특정 서열로 구성된다: 아데닌(A); 사이토신(C); 구아닌(G); 및 티민(T)(폴리뉴클레오타이드가 RNA일 때 티민(T)에 대신 우라실(U)). 따라서, 용어 "폴리뉴클레오타이드 서열"은 폴리뉴클레오타이드 분자의 알파벳의 표현이며; 대안적으로, 상기 용어는 폴리뉴클레오타이드 분자 그 자체에 적용될 수 있다. 이 알파벳 표현은 중앙 처리 장치를 갖는 컴퓨터에서 데이터베이스에 입력되고, 생물정보학 적용분야, 예컨대, 기능성유전체학 및 상동성 검색에 대해 사용된다. 폴리뉴클레오타이드는 선택적으로 하나 이상의 비-가닥 뉴클레오타이드(들), 뉴클레오타이드 유사체(들) 및/또는 변형된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
"보존적으로 변형된 변이체"는 아미노산 및 핵산 서열 모두에 적용된다. 특정 핵산 서열에 대해, "보존적으로 변형된 변이체"는 동일 또는 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 해당 핵산을 지칭한다. 유전자 암호의 축퇴로 인해, 다수의 핵산 서열은 임의의 주어진 단백질을 암호화할 것이다. 예를 들어, GCA, GCC, GCG 및 GCU 코돈은 모두 알라닌 아미노산을 암호화한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 특정되는 모든 위치에서, 이 코돈은 암호화되는 폴리펩타이드를 바꾸지 않으면서 기술된 상응하는 코돈 중 임의의 것으로 변경될 수 있다. 이러한 핵산 변이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류인 "침묵 변이"이다. 폴리펩타이드를 암호화하는 본 명세서에서의 모든 핵산 서열은 또한 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 설명한다. 당업자는 핵산 내의 각각의 코돈(통상적으로 메티오닌에 대한 유일한 코돈인 AUG, 그리고 통상적으로 트립토판에 대한 유일한 코돈인 TGG를 제외)이 기능적으로 동일한 분자를 생성하도록 변형될 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 기술된 각각의 서열에 내포된다.
아미노산 서열에 관해, 당업자는 암호화된 서열에서 단일 아미노산 또는 아미노산의 적은 백분율을 변경, 첨가 또는 결실하는 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질 서열에 대한 개개 치환, 결실 또는 첨가가, 변경이 화학적으로 유사한 아미노산으로의 아미노산 치환을 초래하는 "보존적으로 변형된 변이체"라는 것을 인식할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 잘 공지되어 있다. 상기 보존적으로 변형된 변이체는 본 발명의 다형성 변이체, 종간 동족체 및 대립유전자에 추가되고, 이를 배제하지 않는다.
다음의 8개 그룹은 각각, 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다:
1) 알라닌(A), 글리신(G);
2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R), 라이신(K);
5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V);
6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W);
7) 세린(S), 트레오닌(T); 및
8) 시스테인(C), 메티오닌(M)
(예를 들어, 문헌[Creighton, Proteins (1984)] 참조).
"서열 동일성 백분율"은 비교 창에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교하여 결정되며, 비교 창에서 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 일부는 2개 서열의 최적 정렬을 위해, 참조 서열(첨가 또는 결실을 포함하지 않음)에 비해 첨가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 상기 백분율은 둘 다의 서열에서 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 나타나는 위치의 수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 수를 비교창에서 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱해서 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 계산된다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열과 관련하여 용어 "동일한" 또는 백분율 "동일성"은 이하에 기재하는 디폴트 파라미터를 이용하는 BLAST 또는 BLAST 2.0 서열 비교 알고리즘을 이용하여 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정할 때 동일하거나 또는 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드의 구체화된 백분율(즉, 비교 창 또는 표시된 영역에 대한 최대 대응도를 위해 비교되고 정렬될 때, 구체화된 영역에 대해 약 60%의 동일성, 바람직하게는 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 더 높은 동일성)을 갖는 둘 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다(예를 들어, NCBI 웹 사이트 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/ 등 참조). 이어서, 이러한 서열은 "실질적으로 동일한" 것으로 언급된다. 본 정의는 또한 시험 서열의 보완을 지칭하거나, 이에 적용될 수 있다. 상기 정의는 또한 결실 및/또는 첨가를 갖는 서열뿐만 아니라 치환을 갖는 것을 포함한다. 이하에 기재하는 바와 같이, 선호되는 알고리즘은 갭 등을 설명할 수 있다. 바람직하게는, 동일성은 적어도 약 25개의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 길이인 영역에 걸쳐, 또는 더 바람직하게는 50 내지 100개의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 길이인 영역에 걸쳐 존재한다.
아미노산 또는 뉴클레오타이드 염기 "위치"는 N-말단(또는 5'-단부)에 대해 이의 위치에 기반하여 참조 서열에서 각각의 아미노산(또는 뉴클레오타이드 염기)을 순차적으로 확인하는 숫자로 표시된다. 최적의 정렬을 결정할 때 고려되어야 하는 결실, 삽입, 절단, 융합 등으로 인해, 일반적으로 단순히 N-말단으로부터 계수함으로써 결정된 시험 서열의 아미노산 잔기 수는 참조 서열에서 이의 대응하는 위치의 수와 반드시 동일하지는 않을 것이다. 예를 들어, 정렬된 참조 서열에 대해 변이체가 결실을 갖는 경우에, 결실 부위에서 참조 서열 내 위치에 대응하는 변이체에 아미노산이 없을 것이다. 정렬된 참조 서열에 삽입이 있는 경우에, 삽입은 참조 서열에서 넘버링된 아미노산 위치에 대응하지 않을 것이다. 절단 또는 융합의 경우에, 대응하는 서열에서 임의의 아미노산에 대응하지 않는 참조 또는 정렬 서열 중 하나에 아미노산의 신장이 있을 수 있다.
주어진 아미노산 또는 폴리뉴클레오타이드 서열의 넘버링과 관련하여 사용될 때 "~에 관해 넘버링된" 또는 "~에 대응하는"이라는 용어는 주어진 아미노산 또는 폴리뉴클레오타이드 서열이 참조 서열과 비교될 때 구체화된 참조 서열의 잔기의 넘버링을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "프로브" 또는 "프라이머"는 샘플에 대한 특정 혼성화가 검출될 수 있는 하나 이상의 핵산 단편인 것으로 정의된다. 프로브 또는 프라이머는 사용될 특정 기법에 따라 임의의 길이를 가질 수 있다. 예를 들어, PCR 프라이머는 일반적으로 10 내지 40개의 뉴클레오타이드 길이인 반면, 예를 들어, 서던 블롯에 대한 핵산 프로브는 100개 초과의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. 프로브는 비표지되거나 이하에 기재하는 바와 같이 표지될 수 있고, 따라서 표적 또는 샘플에 대한 이의 결합이 검출될 수 있다. 프로브는 염색체의 하나 이상의 특정(사전 선택된) 부분으로부터의 핵산의 공급원, 예를 들어, 하나 이상의 클론, 단리된 전체 염색체 또는 염색체 단편, 또는 중합효소 연쇄 반응(PCR) 증폭 산물의 수집물로부터 생성될 수 있다. 표적 구성요소 상에 고정된 핵산의 길이 및 복잡성은 본 발명에 중요하지 않다. 당업자는 주어진 혼성화 절차를 위한 최적의 혼성화 및 신호 생성을 제공하기 위해, 그리고 상이한 유전자 또는 게놈 위치 중에서 필요한 분해능을 제공하기 위해 이들 인자를 조절할 수 있다.
프로브는 또한 어레이 내와 같은 고체 표면(예를 들어, 나이트로셀룰로스, 유리, 석영, 용융 실리카 슬라이드) 상에 고정된 단리된 핵산일 수 있다. 일부 실시형태에서, 프로브는, 예를 들어, WO 96/17958에 기재된 바와 같은 핵산 어레이의 구성원일 수 있다. 고밀도 어레이를 생성할 수 있는 기법이 또한 본 목적을 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Fodor (1991) Science 767-773]; 문헌[Johnston (1998) Curr. Biol. 8: R171-R174]; 문헌[Schummer (1997) Biotechniques 23: 1087-1092]; 문헌[Kern (1997) Biotechniques 23: 120-124]; 미국 특허 제5,143,854호 참조).
어구 "~에 선택적으로(또는 특이적으로) 혼성화하는"은, 예를 들어, 보다 엄격한 조건 하에, 다른 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 총 세포 또는 라이브러리 DNA 또는 RNA)보다 고친화도로 특정 뉴클레오타이드 서열에만 분자를 결합, 이중화 또는 혼성화하는 것을 지칭한다.
어구 "엄격한 혼성화 조건"은 핵산이 전형적으로 핵산의 복합체 혼합물에서 이의 표적 서열에 혼성화하지만 다른 서열에는 혼성화하지 않는 조건을 지칭한다. 엄격한 조건은 서열-의존적이고, 상이한 상황에서는 상이할 것이다. 보다 긴 서열은 보다 고온에서 특이적으로 혼성화한다. 핵산의 혼성화에 대한 광범위한 가이드는 문헌[Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)]에서 발견된다. 일반적으로, 엄격한 혼성화 조건은 정해진 이온 강도 pH에서 특정 서열에 대한 열적 융점(Tm)보다 약 5 내지 10℃ 더 낮게 선택된다. Tm은 (정해진 이온 강도, pH 및 핵산 농도 하에) 표적에 상보성인 프로브의 50%가 평형상태에서 표적 서열에 혼성화하는 온도이다(표적 서열이 과량으로 존재하기 때문에, Tm에서 프로브의 50%는 평형상태에서 점유됨). 엄격한 혼성화 조건은 또한 탈안정화제, 예컨대, 포름아마이드의 첨가에 의해 달성될 수 있다. 선택적 또는 특이적 혼성화에 대해, 양의 신호는 배경의 적어도 2배이고, 바람직하게는 배경 혼성화의 10배이다. 예시적인 엄격한 혼성화 조건은 다음과 같을 수 있다 50% 포름아마이드, 5×SSC 및 1% SDS를 42℃에서 인큐베이션, 또는 5×SSC, 1% SDS를 65℃에서 인큐베이션, 65℃에서 0.2×SSC 및 0.1% SDS에서 세척. 예시적인 "보통으로 엄격한 혼성화 조건"은 37℃에서 40% 포름아마이드, 1 M NaCl, 1% SDS의 완충제 중 혼성화, 및 45℃에서 1×SSC에서 세척을 포함한다. 양성 혼성화는 배경의 적어도 2배이다. 당업자는 대안의 혼성화 및 세척 조건이 유사한 엄격도 조건을 제공하는 데 이용될 수 있다는 것을 용이하게 인식할 것이다. 혼성화 파라미터를 결정하기 위한 추가적인 가이드라인은 수많은 참고문헌, 예를 들어, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, ed. Ausubel, et al., John Wiley & Sons]에 제공된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "접합체"는 원자 또는 분자 사이의 회합을 지칭한다. 회합은 직접적 또는 간접적일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 제공된 제1 모이어티(예를 들어, 핵산 모이어티)와 제2 모이어티(펩타이드 모이어티) 사이의 접합체는, 예를 들어, 공유 결합에 의해 직접적일 수 있거나, 또는 예를 들어, 비공유 결합(예를 들어, 정전기적 상호작용(예를 들어, 이온 결합, 수소 결합, 할로겐 결합), 반데르 발스 상호작용(예를 들어, 쌍극자-쌍극자, 쌍극자-유발 쌍극자, 런던 분산력), 고리 적층(파이 효과), 소수성 상호작용 등)에 의해 간접적일 수 있다. 일부 실시형태에서, 접합체는 친핵성 치환(예를 들어, 아민 및 알코올과 아실 할로겐화물, 활성 에스테르의 반응), 친전자성 치환(예를 들어, 엔아민 반응) 및 탄소-탄소 및 탄소-헤테로원자 다중 결합에 대한 첨가(예를 들어, 마이클 반응, 디일스-알더 반응)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 접합 화학을 이용하여 형성된다. 이들 및 기타 유용한 반응은, 예를 들어, 문헌[March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1985]; 문헌[Hermanson, BIOCONJUGATE TECHNIQUES, Academic Press, San Diego, 1996]; 및 문헌[Feeney et al., MODIFICATION OF PROTEINS; Advances in Chemistry Series, Vol. 198, American Chemical Society, Washington, D.C., 1982]에서 논의된다.
본 명세서에 기재된 특정 단백질(예를 들어, NKG2D, MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5, ULBP6)에 대해, 명명된 단백질은 (예를 들어, 천연 단백질에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내의) 단백질의 예상된 활성을 유지하는 임의의 단백질의 천연 유래 형태 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 변이체는 천연 유래 형태와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, 단백질은 이의 NCBI 서열 참조에 의해 확인되는 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, 단백질은 이의 NCBI 서열 참조에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편이다.
따라서, NKG2D는 KLRKl; 살해 세포 렉틴-유사 수용체 서브패밀리 K, 구성원 1; CD314; KLR; NKG2-D; FLJ17759; C-형 렉틴-유사 수용체의 CD94/NKG2 패밀리에 속하는 막관통 단백질인 FLJ75772 또는 D12S2489E로도 지칭된다. 인간에서, 이는 NK 세포, γδ T 세포 및 CD8+ αβT 세포에 의해 발현된다. NKG2D는 스트레스, 악성 형질전환 및 감염된 세포 표면 상에 나타나는 MIC 및 RAET1/ULBP 패밀리로부터 스스로 생긴 단백질을 인식한다. 본 명세서에 기재된 NKG2D는 임의의 NKG2D의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 NKG2D에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, NKG2D 변이체 또는 상동체는 천연 유래 NKG2D와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, NKG2D는 이의 NCBI 서열 참조 NP_031386에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, NKG2D는 이의 NCBI 서열 참조(NP_031386)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%). 본 명세서에 기재된 이량체 단백질에서 사용될 수 있는 상이한 유형의 NKG2D 변이체의 더 상세한 설명은 이하에 제공한다.
MHC 클래스 I 폴리펩타이드-관련 서열 A, MIC-A, PERB11.1로도 지칭되는 "MICA"라는 용어는 임의의 MICA의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 MICA에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, MICA 변이체 또는 상동체는 천연 유래 MICA와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, MICA는 이의 NCBI 서열 참조 NP_000238, NP_001170990, NP_001276081, NP_001276082 또는 NP_001276083에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, MICA는 이의 NCBI 서열 참조(NP_000238, NP_001170990, NP_001276081, NP_001276082 또는 NP_001276083)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
MHC 클래스 I 폴리펩타이드-관련 서열 B, MIC-B, PERB11.2로도 지칭되는 "MICB"라는 용어는 임의의 MICB의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 MICB에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, MICB 변이체 또는 상동체는 천연 유래 MICB와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, MICB는 이의 NCBI 서열 참조 NP_001276089, NP_001276090 또는 NP_005922에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, MICB는 이의 NCBI 서열 참조(NP_001276089, NP_001276090 또는 NP_005922)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
UL16 결합 단백질 1, RAET1I, N2DL-1, NKG2DL1로도 지칭되는 "ULBP1"이라는 용어는 임의의 ULBP1의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 ULBP1에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, ULBP1 변이체 또는 상동체는 천연 유래 ULBP1과 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, ULBP1은 이의 NCBI 서열 참조 NP_001304018 또는 NP_079494에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, ULBP1은 이의 NCBI 서열 참조(NP_001304018 또는 NP_079494)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
UL16 결합 단백질 2, N2DL2, RAET1H, ALCAN-알파, NKG2DL2, RAET1L로도 지칭되는 "ULBP2"라는 용어는 임의의 ULBP2의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 ULBP2에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, ULBP2 변이체 또는 상동체는 천연 유래 ULBP2와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, ULBP2는 이의 NCBI 서열 참조 NP_079493에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, ULBP2는 이의 NCBI 서열 참조(NP_079493)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
UL16 결합 단백질 3, RAET1N, N2DL-3, NKG2DL3로도 지칭되는 "ULBP3"이라는 용어는 임의의 ULBP3의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 ULBP3에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, ULBP3 변이체 또는 상동체는 천연 유래 ULBP3과 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, ULBP3은 이의 NCBI 서열 참조 NP_078794에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, ULBP3은 이의 NCBI 서열 참조(NP_078794)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
UL16 결합 단백질 4, RAET1E, LETAL, N2DL-4, NKG2DL4, RAET1E2, RL-4, bA350J20.7, 레티노산 초기 전사체 1E로도 지칭되는 "ULBP4"이라는 용어는 임의의 ULBP4의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 ULBP4에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, ULBP4 변이체 또는 상동체는 천연 유래 ULBP4와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, ULBP4는 이의 NCBI 서열 참조 NP_001230254, NP_001230256, NP_001230257 또는 NP_631904에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, ULBP4는 이의 NCBI 서열 참조(NP_001230254, NP_001230256, NP_001230257 또는 NP_631904)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
UL16 결합 단백질 5 또는 레티노산 초기 전사체 1G(RAET1G)로도 지칭되는 "ULBP5"이라는 용어는 임의의 ULBP5의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 ULBP5에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, ULBP5 변이체 또는 상동체는 천연 유래 ULBP5와 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, ULBP5는 이의 NCBI 서열 참조 NP_001001788.2에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, ULBP5는 이의 NCBI 서열 참조(NP_001001788.2)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
UL16 결합 단백질 6 또는 레티노산 초기 전사체 1L(RAET1L)로도 지칭되는 "ULBP6"이라는 용어는 임의의 ULBP6의 천연 유래 형태, 또는 (예를 들어, 천연 ULBP6에 비해 적어도 50%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 활성 이내로) 이의 단백질 활성을 유지하는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, ULBP6 변이체 또는 상동체는 천연 유래 ULBP6과 비교할 때 서열 또는 서열의 일부(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속적 아미노산 부분)에 걸쳐 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 다른 실시형태에서, ULBP6은 이의 NCBI 서열 참조 NP_570970.2에 의해 확인된 바와 같은 단백질이다. 다른 실시형태에서, ULBP6은 이의 NCBI 서열 참조(NP_570970.2)에 의해 확인되는 바와 같은 단백질 또는 이의 기능성 단편에 대해 실질적으로 동일하다(예를 들어, 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%).
본 명세서에서 사용되는 용어 "링커" 또는 "생체접합 링커"는 생체접합 반응기의 원자 또는 분자 사이의 회합을 초래하는 분자를 지칭한다. 회합은 직접적 또는 간접적일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 제공된 제1 생체접합 반응기(예를 들어, -NH2, -COOH, -N-하이드록시석신이미드 또는 -말레이미드)와 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 설프하이드릴, 황-함유 아미노산, 아민, 아민 측쇄 함유 아미노산 또는 카복실레이트) 사이의 접합체는, 예를 들어, 공유결합에 의해 직접적이거나, 예를 들어, 비공유 결합(예를 들어, 정전기적 상호작용(예를 들어, 이온 결합, 수소 결합, 할로겐 결합), 반데르 발스 상호작용(예를 들어, 쌍극자-쌍극자, 쌍극자-유발 쌍극자, 런던 분산력), 고리 적층(파이 효과), 소수성 상호작용 등)에 의해 간접적일 수 있다. 일부 실시형태에서, 생체접합 링커는 친핵성 치환(예를 들어, 아민 및 알코올과 아실 할로겐화물, 활성 에스테르의 반응), 친전자성 치환(예를 들어, 엔아민 반응) 및 탄소-탄소 및 탄소-헤테로원자 다중 결합에 대한 첨가(예를 들어, 마이클 반응, 디일스-알더 반응)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 생체접합 화학(즉, 2개의 생체접합 반응기의 회합)을 이용하여 형성된다. 이들 및 기타 유용한 반응은, 예를 들어, 문헌[March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1985]; 문헌[Hermanson, BIOCONJUGATE TECHNIQUES, Academic Press, San Diego, 1996]; 및 문헌[Feeney et al., MODIFICATION OF PROTEINS; Advances in Chemistry Series, Vol. 198, American Chemical Society, Washington, D.C., 1982]에서 논의된다. 일부 실시형태에서, 제1 생체접합 반응기(예를 들어, 말레이미드 모이어티)는 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 설프하이드릴)에 공유적으로 부착된다. 일부 실시형태에서, 제1 생체접합 반응기(예를 들어, 할로아세틸 모이어티)는 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 설프하이드릴)에 공유적으로 부착된다. 일부 실시형태에서, 제1 생체접합 반응기(예를 들어, 피리딜 모이어티)는 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 설프하이드릴)에 공유적으로 부착된다. 일부 실시형태에서, 제1 생체접합 반응기(예를 들어, -N-하이드록시석신이미드 모이어티)는 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 아민)에 공유적으로 부착된다. 일부 실시형태에서, 제1 생체접합 반응기(예를 들어, 말레이미드 모이어티)는 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 설프하이드릴)에 공유적으로 부착된다. 일부 실시형태에서, 제1 생체접합 반응기(예를 들어, -설포-N-하이드록시석신이미드 모이어티)는 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 아민)에 공유적으로 부착된다.
일부 실시형태에서, 링커는 펩타이드 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 가요성 펩타이드 링커이다. 일부 실시형태에서, 가요성 펩타이드 링커는 약 20개 이하의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 약 12개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12개를 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 약 4 내지 약 16개의 아미노산 길이의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 약 2 내지 약 25개의 아미노산 길이의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 25개 초과의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 다음의 아미노산 중 둘 이상을 포함한다: 글리신, 세린, 알라닌 및 프롤린. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 글리신-세린 링커이다. 일부 실시형태에서, 글리신-세린 링커는 식 (GS)n으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12(서열번호 7)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGGS)n의 식으로 나타내는 G4S 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 8)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGGA)n의 식으로 나타내는 G4A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 12)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGGP)n의 식으로 나타내는 G4P 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 13)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGA)n의 식으로 나타내는 G3A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 14)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGS)n의 식으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 9)이다. 일부 실시형태에서, 글리신-세린 링커는 식 GGGSGGGS(서열번호 10)로 나타낸다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 프로테아제-의존적 절단 가능 부위를 포함한다. 프로테아제-절단 가능 펩타이드 링커의 예는 MMP 민감성 링커 GGPLGL W AGG(서열번호 15) 및 인자 Xa-민감성 링커 IEGR(서열번호 16)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 당업자는 다양한 절단 가능 서열이 본 명세서에 제공된 링커에 대해 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
일부 실시형태에서, 연결 분자 또는 링커는 비-펩타이드 링커일 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 비-펩타이드 링커는 서로 연결된 둘 이상의 반복 단위를 포함하는 생체 적합 중합체이다. 비-펩타이드 중합체의 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜(PPG), 코-폴리(에틸렌/프로필렌) 글리콜, 폴리옥시에틸렌(POE), 폴리우레탄, 폴리포스파젠, 다당류, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리아크릴 아마이드, 폴리아크릴레이트, 폴리사이아노아크릴레이트, 지질 중합체, 키틴, 하이알루론산 및 헤파린을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. Fc 융합 분자에 유용한 비-펩타이드 링커의 더 상세한 설명에 대해, 예를 들어, 본 명세서에 참조에 의해 원용된 WO/2006/107124를 참조한다. 일부 실시형태에서, 이러한 링커는 특정 링커에 따라서 약 1 kDa 내지 50 kDa의 분자량 범위를 가질 것이다. 일부 실시형태에서, 전형적인 PEG는 약 1 내지 5 kDa의 분자량을 갖고, 폴리에틸렌 글리콜은 약 5 kDa 내지 50 kDa의 분자량, 더 바람직하게는 약 10 kDa 내지 40 kDa을 갖는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "벡터"는 핵산이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 일부 실시형태에서, "벡터"는 숙주 세포에서 발현될 수 있는 관심 대상의 핵산, 예를 들어, 보다 큰 핵산 서열 내의 관심 대상의 핵산, 또는 세포, 조직 및/또는 유기체에 대한 전달에 적합한 구조를 포함하는 임의의 유전자 구성요소(예를 들어, DNA, RNA, 또는 이들의 혼합물), 예컨대, 플라스미드, 파지, 트랜스포존, 코스미드, 염색체, 바이러스, 비리온 등이다. 예를 들어, 벡터는 삽입물(예를 들어, 발현될 유전자를 암호화하는 이종성 핵산 또는 해당 유전자의 오픈 리딩 프레임) 및 하나 이상의 추가적인 구성요소, 예를 들어, 삽입물의 발현을 전달 또는 제어하는 데 적합한 구성요소를 포함할 수 있다. 벡터 중 한 가지 유형은 "플라스미드"이며, 이는 추가의 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 선형 또는 원형의 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가의 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 소정의 벡터는 이들 벡터(예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)가 도입된 숙주 세포 내에서 자율 복제할 수 있다. 다른 벡터(예를 들어, 비에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내에 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합되어, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 소정의 벡터는 이들 벡터가 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "발현 벡터"로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드 형태로 존재한다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는, 플라스미드가 가장 보편적으로 사용되는 형태의 벡터이므로, 상호 호환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능의 역할을 하는 이러한 다른 형태의 발현 벡터, 예컨대 바이러스 벡터(예컨대 복제 결함성 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스)를 포함하는 것으로 의도된다. 추가적으로, 일부 바이러스 벡터는 특이적으로 또는 비특이적으로 특정 세포 유형을 표적화할 수 있다. 복제-부적격 바이러스 벡터 또는 복제-결함 바이러스 벡터는 이들의 표적 세포를 감염시키고, 이들의 바이러스 페이로드를 전달할 수 있지만, 이어서, 세포 용해 및 사멸을 야기하는 전형적인 용해 경로를 계속하지 못하는 바이러스 벡터를 지칭한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 "벡터"는 특히 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드 단편을 운반할 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 벡터는 분자 운반체처럼 작용하여, 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포에 전달한다. 발현 벡터는 이에 혼입된 폴리뉴클레오타이드를 적절하게 발현시키기 위해 조절 서열을 포함하는 적어도 하나의 발현 카세트를 포함할 수 있다. 세포에 혼입될 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 관심 대상의 폴리펩타이드 또는 선택 가능한 마커를 암호화)는 이로부터 발현되기 위해 벡터의 발현 카세트(들)에 삽입될 수 있다. 숙주 세포에 도입될 때, 발현 카세트는 특히 관심 대상의 폴리펩타이드를 암호화하는 혼입된 폴리뉴클레오타이드를 RNA로 전사시키도록 세포의 기작을 지시할 수 있고, 이어서, 보통 추가로 가공되고, 최종적으로 관심 대상의 폴리펩타이드로 번역된다. 벡터는 원형 또는 선형(화된) 형태로 존재할 수 있다. 용어 "벡터"는 또한 외래 핵산 단편의 전달을 가능하게 하는 인공 염색체, 바이러스 벡터 또는 유사한 각각의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
본 명세서에 기재된 조성물은 정제될 수 있다. 정제된 조성물은 적어도 약 60중량%(건조 중량)의 관심 대상의 화합물이다. 바람직하게는, 제제는 적어도 약 75중량%, 더 바람직하게는 적어도 약 90중량%, 및 가장 바람직하게는 적어도 약 99중량% 이상의 관심 대상의 화합물이다. 순도는 임의의 적절한 표준 방법에 의해, 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피, 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동에 의해 측정된다.
용어 "단리된"은 핵산 또는 단백질에 적용되는 경우 핵산 또는 단백질이 천연 상태에서 회합된 다른 세포 성분이 본질적으로 없다는 것을 의미한다. 이는, 예를 들어, 균질한 상태일 수 있고, 건조 또는 수용액일 수 있다. 순도 및 균질성은 전형적으로 분석 화학 기법, 예컨대, 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 결정된다. 제제에 존재하는 우세한 종인 단백질은 실질적으로 정제된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "세포"는 대사 또는 이의 게놈 DNA를 보존 또는 복제하는 데 충분한 다른 기능을 수행하는 세포를 지칭한다. 세포는, 예를 들어, 무손상 막의 존재, 특정 염료에 의한 염색, 자손을 생산하는 능력 또는 생식세포의 경우에, 생존 가능한 자손을 생산하기 위해 제2 생식세포와 조합되는 능력을 포함하는, 당업계의 잘 공지된 방법에 의해 확인될 수 있다. 세포는 원핵 세포 및 진핵 세포를 포함할 수 있다. 원핵 세포는 박테리아를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 진핵 세포는 효모 세포, 및 식물 및 동물, 예를 들어, 포유류, 곤충(예를 들어, 스포돕테라(spodoptera)) 및 인간 세포로부터 유래된 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "저해제", "리프레서" 또는 "길항제" 또는 "하향조절자"는 대조군에 비해 검출 가능하게 더 낮은 발현 또는 활성 수준을 초래하는 물질을 상호 호환적으로 지칭한다. 저해된 발현 또는 활성은 대조군에서보다 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이하일 수 있다. 특정 예에서, 저해는 대조군에 비해 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 이상이다. "저해제"는, 예를 들어, 결합, 자극을 부분적 또는 전체적으로 차단, 활성화를 감소, 방해 또는 지연시키거나, 또는 단백질 활성에 필요한 신호 전달, 유전자 발현 또는 효소 활성을 비활성화, 탈감작 또는 하향조절함으로써, 세포 기능(예를 들어, 복제)을 저해하는 펩타이드, siRNA, (예를 들어, shRNA, miRNA, snoRNA), 화합물 또는 소분자이다.
"약제학적 조성물"은 대상체에 대한 투여에 적합한 형태로 본 명세서에 기재된 조성물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질)을 함유하는 제형이다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 벌크 또는 단위 투약 형태이다. 단위 투약 형태는, 예를 들어, 동결건조 제형, 캡슐, IV 백, 정제, 에어로졸 흡입기 상의 단일 펌프 또는 바이알을 포함하는 임의의 다양한 형태이다. 조성물의 단위 용량에서 활성 성분(예를 들어, 개시된 핵산의 제형)의 양은 유효한 양이며, 수반되는 특정 치료에 따라 달라진다. 당업자는 때때로 환자의 연령 및 병태에 따라 투약량에 대한 일상적인 변화를 만드는 것이 필요하다는 것을 인식할 것이다. 투약량은 또한 투여 경로에 따라 다를 것이다. 경구, 폐, 직장, 비경구, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 흡입, 협측, 설하, 흉강내, 척추강내, 비강내 등을 포함하는 다양한 경로가 상정된다. 본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여를 위한 투약 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "약제학적으로 허용 가능한"이라는 어구는 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 유해/유익비에 상응하며, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 음이온, 양이온, 물질, 조성물, 담체 및/또는 투약 형태를 지칭한다.
"약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비독성이며, 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 약제학적 조성물을 제조하는 데 유용한 부형제를 의미하고, 수의학적 용도뿐만 아니라 인간 약제학적 용도에 허용 가능한 부형제를 포함한다. 본 명세서 및 청구범위에서 사용되는 바와 같은 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 1종 이상의 이러한 부형제를 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제의 철저한 논의는 문헌[REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Pub. Co., N.J. 1991)]에서 이용 가능하다. 치료적 조성물에서 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 액체, 예컨대, 물, 식염수, 글리세롤 및 에탄올을 함유할 수 있다. 추가적으로, 이러한 비히클에 습윤제 또는 유화제, pH 완충 물질 등과 같은 보조 물질이 존재할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 이의 의도된 투여 경로에 적합하게 되도록 제형화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들어, 정맥내, 진피내, 피하, 경구(예를 들어, 흡입), 경피(국소) 및 경점막 투여를 포함한다.
경구 투여에 적합한 제형은 (a) 액체 용액, 예컨대, 희석제, 예컨대, 물, 식염수 또는 PEG 400 중에서 현탁된 유효량의 패키징된 핵산; (b) 액체, 고체, 과립 또는 젤라틴으로서, 각각 사전 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 캡슐, 사쉐 또는 정제; (c) 적절한 액체 중의 현탁액; 및 (d) 적합한 에멀션으로 이루어질 수 있다. 정제 형태는 락토스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 인산칼슘, 옥수수 전분, 감자 전분, 미정질셀룰로스, 젤라틴, 콜로이드 이산화규소, 활석, 스테아르산마그네슘, 스테아르산 및 기타 부형제, 착색제, 충전제, 결합제, 희석제, 완충제, 습윤제, 보존제, 향미제, 염료, 붕해제 및 약제학적으로 적합한 담체 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 로젠지 형태는 향미제, 예를 들어, 수크로스에 활성 성분을 포함할 수 있고, 파스틸은 활성 성분에 추가로 당업계에 공지된 담체를 함유하는 비활성 베이스, 예컨대, 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로스 및 아카시아 에멀션, 겔 등 중에 활성 성분을 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 또한 거대한, 느리게 대사되는 거대분자, 예컨대, 단백질, 다당류, 예컨대, 키토산, 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 공중합체(예컨대, 라텍스 작용기화된 세파로스(TM), 아가로스, 셀룰로스 등), 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체 및 지질 응집물(예컨대, 오일 점적 또는 리포솜)을 포함할 수 있다. 추가적으로, 이들 담체는 면역자극제(즉, 아쥬반트)로서 작용할 수 있다.
직장 투여에 적합한 제형은, 예를 들어, 좌약 베이스와 함께 패키징된 핵산으로 이루어진 좌약을 포함한다. 적합한 좌약 베이스는 천연 또는 합성 트리글리세라이드 또는 파라핀 탄화수소를 포함한다. 또한, 예를 들어, 액체 트리글리세라이드, 폴리에틸렌 글리콜 및 파라핀 탄화수소를 포함하는 베이스와 선택한 화합물의 조합물로 이루어진 젤라틴 직장 캡슐을 사용할 수 있다.
예를 들어, 관절내(관절에서), 정맥내, 근육내, 종양내, 진피내, 복강내 및 피하 경로에 의한 것과 같은 비경구 투여에 적합한 제형은 항산화제, 완충제, 정균제, 및 의도된 수용자의 혈액과 등장성인 제형을 제공하는 용질, 및 현탁제, 가용화제, 증점제, 안정제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 함유할 수 있는, 수성 및 비수성 등장 멸균 주사 용액을 포함한다. 본 발명의 실행에서, 조성물은, 예를 들어, 정맥내 주입에 의해, 경구, 국소, 복강내, 방광내 또는 척추강내로 투여될 수 있다. 비경구 투여, 경구 투여 및 정맥내 투여는 바람직한 투여 방법이다. 조성물의 제형은 단일 용량 또는 다회 용량 밀봉 용기, 예컨대, 앰플 및 바이알에 제공될 수 있다.
비경구, 피내, 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음의 성분을 포함될 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대, 주사용수, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 긴장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 주사기 또는 다회 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 화학치료를 위해 현재 사용되는 다수의 잘 공지된 방법으로 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 암 치료를 위해, 본 발명의 조성물은 종양에 직접 주사되거나, 혈류 또는 체강에 주사되거나, 또는 경구로 취해지거나 또는 패치를 이용하여 피부를 통해 적용될 수 있다. 선택된 용량은 유효한 치료를 구성하기에 충분해야 하지만, 허용 가능하지 않은 부작용을 야기할 만큼 높지 않아야 한다. 환자의 질환 병태의 상태(예를 들어, 암, 전암 등) 및 건강 상태는 바람직하게는 치료 도중 및 이후의 합리적인 기간 동안에 면밀하게 모니터링되어야 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "단일요법"은 이를 필요로 하는 대상체에게 단일 활성 또는 치료 화합물의 투여를 지칭한다. 바람직하게는, 단일요법은 치료적 유효량의 활성 조성물(예를 들어, TWIST 펩타이드, 전달 비히클에 결합된 TWIST 펩타이드, TWIST 펩타이드를 포함하는 융합 단백질, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 조성물)의 투여를 수반할 것이다. 예를 들어, 암 치료를 위해 본 명세서에 기재된 조성물 중 하나가 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 암 단일요법이 본 명세서에 기재될 수 있다. 단일요법은, 바람직하게는 조합물의 각 성분이 치료적 유효량으로 존재하는, 다중 활성 조성물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 다중 조성물)의 조합물이 투여되는 병용 요법과 대조될 수 있다. 본 명세서에 기재된 조성물을 이용하는 단일요법은 목적하는 생물학적 효과를 유발함에 있어서 병용 요법보다 더 효과적일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "병용 요법" 또는 "공동 요법" 또는 "공동 투여"는 본 명세서에 기재된 조성물과, 이들 치료제의 공동 작용으로부터 유리한 효과를 제공하도록 의도되는 특정 치료 요법의 부분으로서 적어도 제2 제제의 투여를 포함한다. 조합물의 유리한 효과는 치료제의 조합물로부터 초래되는 약물동태학적 또는 약력학적 공동 작용을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 조합물 중의 이들 치료제의 투여는 전형적으로 정해진 시간(보통 선택된 조합물에 따라 분, 시간, 일 또는 주)에 걸쳐 수행된다. "병용 요법"은 별개의 단일요법의 부분으로서의 이들 치료제 중 둘 이상의 투여가, 우연히 또는 임의로 본 명세서에 기재된 조합물을 초래하는 것을 포함하는 것으로 의도될 수 있지만, 일반적으로는 그러한 것은 아니다.
일부 실시형태에서, 공동 투여는 제2 활성제의 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 또는 24시간 이내에 1종의 활성제를 투여하는 것을 포함한다. 공동 투여는 2종의 활성제를 동시에, 거의 동시에(예를 들어, 서로 약 1, 5, 10, 15, 20 또는 30분 이내에), 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 공동 투여는 공동 제형화, 즉, 활성제를 둘 다 포함하는 단일 약제학적 조성물의 제조에 의해 달성될 수 있다. 다른 실시형태에서, 활성제는 별개로 제형화될 수 있다. 다른 실시형태에서, 활성 및/또는 보조제는 서로 연결 또는 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 암(예를 들어, 전립선암, 거세-저항성 전립선암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 교모세포종, 난소암, 폐암, 편평세포 암종(예를 들어, 두부, 경부 또는 식도), 결장직장암, 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 림프종, B 세포 림프종, 또는 다발성 골수종)에 대한 치료, 예컨대 수술 또는 바이러스 질환(예를 들어, 헤르페스바이러스 감염 연관 질환 또는 간염 바이러스 감염 연관 질환 또는 HIV 감염 연관 질환)을 치료하는 데 유용한 것으로 알려진 다른 치료와 조합될 수 있다.
"병용 요법"은 각 치료제가 다른 시간에 투여되는 순차적 방식으로 이들 치료제를 투여하는 것뿐만 아니라, 실질적으로 동시 방식으로 이들 치료제들, 또는 이들 치료제들 중 적어도 둘을 실질적으로 동시 방식으로 투여하는 것 또한 포괄하는 것으로 의도된다. 실질적으로 동시 투여는, 예를 들어, 대상체에게 고정된 비의 각 치료제를 갖는 단일 캡슐을, 또는 치료제 각각에 대한 단일 캡슐을 다수 투여함으로써 달성될 수 있다. 각 치료제의 순차적 또는 실질적으로 동시 투여는 경구 경로, 정맥내 경로, 근육내 경로 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 적절한 경로에 의해 달성될 수 있다. 치료제는 동일한 경로에 의해 또는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 선택되는 조합물의 제1 치료제는 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있지만, 조합물의 다른 치료제는 경구로 투여될 수 있다. 대안적으로, 예를 들어, 모든 치료제는 경구로 투여될 수 있거나, 모든 치료제는 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다. 치료제가 투여되는 순서는 그다지 중요하지 않다.
"병용 요법"은 또한 다른 생물학적 활성 성분 및 비-약물 요법(예를 들어, 수술 또는 방사선 치료)과 추가로 병용하여 상기 기재한 바와 같은 치료제를 투여하는 것을 포괄한다. 병용 요법이 비약물 치료를 추가로 포함하는 경우, 치료제와 비-약물 치료의 공동 작용으로부터의 유리한 효과가 달성되는 한, 비-약물 치료는 임의의 적합한 시간에 수행될 수 있다. 예를 들어, 적절한 경우에, 비-약물 치료가 치료제의 투여로부터 일시적으로 제거될 때, 아마도 며칠 또는 심지어 몇 주까지 유리한 효과가 여전히 달성된다.
본 명세서에 기재된 조성물은 제2 화학치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 제2 화학치료제(또한 항신생물제 또는 항증식제로도 지칭됨)는 www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0.asp에 열거된 알킬화제; 항생제; 항-대사물질; 해독제; 인터페론; 다클론성 또는 단클론성 항체; EGFR 저해제; HER2 저해제; 히스톤 데아세틸라제 저해제; 호르몬; 유사분열 저해제; MTOR 저해제; 멀티-키나제 저해제; 세린/트레오닌 키나제 저해제; 타이로신 키나제 저해제; VEGF/VEGFR 저해제; 탁산 또는 탁산 유도체, 아로마타제 저해제, 안트라사이클린, 미세소관 표적화 약물, 국소이성질화효소 독성 약물, 분자 표적 또는 효소(예를 들어, 키나제 또는 단백질 메틸트랜스퍼라제)의 저해제, 사이티딘 유사체 약물 또는 임의의 화학치료제, 항-신생물제 또는 항증식제일 수 있다.
"항암 요법"은 이의 보통의 의미에 따라 사용되며, 항신생물 특성 또는 세포의 성장 또는 증식을 저해하는 능력을 갖는 요법을 선택적으로 따르는 요법을 지칭한다.
"항암제"는 보통의 의미에 따라 사용되며, 항신생물 특성 또는 세포의 성장 또는 증식을 저해하는 능력을 갖는 조성물(예를 들어, 화합물, 약물, 길항제, 저해제, 조절제)을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 항암제는 화학치료제이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 암 치료 방법에서 효용을 갖는 본 명세서에서 확인되는 제제이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 암 치료를 위해 FDA 또는 미국 이외의 국가의 유사한 규제 기관에 의해 승인된 제제이다.
이하에 제시되는 항암제는 예시적인 목적을 위한 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 일부 실시형태에서, 적어도 1종의 항암제는 이하의 목록으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 1종 초과의 항암제, 예를 들어, 2, 3, 4 또는 5종의 항암제는 이의 의도된 기능을 수행하기 위해 선택된다. 일부 실시형태에서, 항암제는 IL-15(예를 들어, GenBank AAX37025)/IL-15Ra(예를 들어, GenBank AAP69528.1) 이형복합체(예를 들어, WO2007/001677 및 WO20007/084342에 개시되고/되거나 서열번호 67에 의해 암호화된 IL-15/IL-Ra 이형복합체)이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 항-PD-1 항체 또는 기타 PD-1 저해제이다. PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 항체, 항체 단편 및 다른 억제제는 당해 분야에서 이용 가능하며, 본 명세서에 기재된 본 발명의 CAR과 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어 니볼루맙(BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭됨; 브리스톨-마이어스 스큅)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전 인간 IgG4 단클론성 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 인간 단클론성 항체는 미국 특허 제8,008,449호 및 국제 공개 제2006/121168호에 개시되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; 큐어 테크)은 PD-1에 결합하는 인간화 IgG1k 단클론성 항체이다. 피딜리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 단클론성 항체는 국제 공개 제2009/101611호에 개시되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙(lambrolizumab)으로도 알려져 있으며, MK03475로도 지칭됨; Merck)은 PD-1에 결합하는 인간화 IgG4 단클론성 항체이다. 펨브롤리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 항체는 미국 특허 제8,354,509호 및 국제 공개 제2009/114335호에 개시되어 있다. MEDI4736(Medimmune)은 PDL1에 결합하며, 리간드와 PD1의 상호작용을 저해하는 인간 단클론성 항체이다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론성 항체이다. MDPL3280A 및 PD-L1에 대한 다른 인간 단클론성 항체는 미국 특허 제7,943,743호 및 미국 특허 출원 공개 제20120039906에 개시되어 있다. 다른 항-PD-L1 결합 작용제는 YW243.55.S70(중쇄 및 경쇄 가변 영역은 국제 공개 제2010/077634호에서 서열번호 20 및 21로 예시됨) 및 MDX-1 105(BMS-936559로도 지칭됨, 예를 들어 국제 공개 제2007/005874호에 개시된 항-PD-L1 결합제)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어 국제 공개 제2010/027827호 및 국제 공개 제2011/066342호에 개시됨)는 PD-1과 B7-H1 간의 상호작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다. 다른 항-PD-1 항체는 AMP 514(Amplimmune), 다른 것들 중 특히, 예를 들어 미국 특허 제8,609,089호, 미국 특허 공개 제2010028330호 및/또는 미국 특허 공개 제20120114649호에 개시된 항-PD-1 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항암제는 177Lu-PSMA-617(루테튬(117Lu) 옥소도트레오타이드)와 같은, 그러나 이로 제한되는 것은 아닌 방사성 리간드이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 암 백신이다.
일부 실시형태에서, 항암제는 HDAC 저해제와 같은, 히스톤 변형에 영향을 미치는 화합물이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 화학치료제(예컨대, 2CdA, 5-FU, 6-머캅토퓨린, 6-TG, Abraxane™, Accutane®, 악티노마이신-D, Adriamycin®, Alimta®, 올 트랜스 레티노산, 아메토프테린, Ara-C, 아자시타딘, BCNU, Blenoxane®, Camptosar®, CeeNU®, 클로파라빈, Clolar™, Cytoxan®, 다우노루비신 하이드로클로라이드, DaunoXome®, Dacogen®, DIC, Doxil®, Ellence®, Eloxatin®, Emcyt®, 에토포사이드 포스페이트, Fludara®, FUDR®, Gemzar®, Gleevec®, 헥사메틸멜아민, Hycamtin®, Hydrea®, Idamycin®, Ifex®, 익사베필론, Ixempra®, L-아스파라기나제, Leukeran®, 리포솜 Ara-C, L-PAM, 리소드렌, Matulane®, 미트라신, 미토마이신-C, Myleran®, Navelbine®, Neutrexin®, 닐로티닙, Nipent®, 질소 머스터드, Novantrone®, Oncaspar®, Panretin®, Paraplatin®, Platinol®, 카무스틴 이식물이 있는 prolifeprospan 20, Sandostatin®, Targretin®, Tasigna®, Taxotere®, Temodar®, TESPA, Trisenox®, Valstar®, Velban®, Vidaza™, 빈크리스틴 설페이트, VM 26, Xeloda® 및 Zanosar®); 생물제제(예컨대, 알파 인터페론, 바실러스 칼메트-게랑, Bexxar®, Campath®, Ergamisol®, 엘로티닙, Herceptin®, 인터류킨-2, Iressa®, 레날리도마이드, Mylotarg®, Ontak®, Pegasys®, Revlimid®, Rituxan®, Tarceva™, Thalomid®, Tykerb®, Velcade® 및 Zevalin™); 코르티코스테로이드(예컨대, 나트륨 인산 덱사메타손, DeltaSone® 및 Delta-Cortef®); 호르몬 요법(예컨대, Arimidex®, Aromasin®, Casodex®, Cytadren®, Eligard®, Eulexin®, Evista®, Faslodex®, Femara®, Halotestin®, Megace®, Nilandron®, Nolvadex®, Plenaxis™ 및 Zoladex®); 및 방사성의약품(예컨대, Iodotope®, Metastron®, Phosphocol® 및 사마륨 SM-153)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 항암제는 www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0.asp에 열거된 알킬화제; 항생제; 항-대사물질; 해독제; 인터페론; 다클론성 또는 단클론성 항체; EGFR 저해제; HER2 저해제; 히스톤 데아세틸라제 저해제; 호르몬; 유사분열 저해제; MTOR 저해제; 멀티-키나제 저해제; 세린/트레오닌 키나제 저해제; 타이로신 키나제 저해제; VEGF/VEGFR 저해제; 탁산 또는 탁산 유도체, 아로마타제 저해제, 안트라사이클린, 미세소관 표적화 약물, 국소이성질화효소 독성 약물, 분자 표적 또는 효소(예를 들어, 키나제 또는 단백질 메틸트랜스퍼라제)의 저해제, 사이티딘 유사체 약물 또는 임의의 화학치료제, 항-신생물제 또는 항증식제를 포함하는 군으로부터 선택된 화학치료제(항신생물제 또는 항증식제로도 지칭됨)이다.
예시적인 알킬화제는 사이클로포스파마이드(사이톡산(Cytoxan); Neosar); 클로람부실(Leukeran); 멜팔란(Alkeran); 카무스틴(BiCNU); 부설판(Busulfex); 로무스틴(CeeNU); 다카바진(DTIC-Dome); 옥살리플라틴(Eloxatin); 카무스틴(Gliadel); 이포스파마이드(Ifex); 메클로르에타민(Mustargen); 부설판(Myleran); 카보플라틴(Paraplatin); 시스플라틴(CDDP; Platinol); 테모졸로마이드(Temodar); 티오테파 (Thioplex); 벤다무스틴(Treanda); 또는 스트렙토조신(Zanosar)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 항생제는 독소루비신(Adriamycin); 독소루비신 리포솜(Doxil); 미톡산트론(Novantrone); 블레오마이신(Blenoxane); 다우노루비신(Cerubidine); 다우노루비신 리포솜(DaunoXome); 닥티노마이신(Cosmegen); 에피루비신(Ellence); 이다루비신(Idamycin); 플리카마이신(Mithracin); 미토마이신(Mutamycin); 펜토스타틴(Nipent); 또는 발루비신(Valstar)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 항-대사물질은 플루오로우라실(Adrucil); 카페시타빈(Xeloda); 하이드록시우레아(Hydrea); 머캅토퓨린(Purinethol); 페메트렉세드(Alimta); 플루다라빈(Fludara); 넬라라빈(Arranon); 클라드리빈(Cladribine Novaplus); 클로파라빈(클로라(Clolar)); 사이타라빈(Cytosar-U); 데시타빈(Dacogen); 사이타라빈 리포솜(DepoCyt); 하이드록시우레아(Droxia); 프랄라트렉세이트(Folotyn); 플록수리딘(FUDR); 겜시타빈(Gemzar); 클라드리빈(Leustatin); 플루다라빈(Oforta); 메토트렉세이트(MTX; Rheumatrex); 메토트렉세이트(Trexall); 티오구아닌(Tabloid); TS-1 또는 사이타라빈(Tarabine PFS)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 해독제는 아미포스틴(Ethyol) 또는 메스나(Mesnex)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 인터페론은 인터페론 알파-2b(Intron A) 또는 인터페론 알파-2a(Roferon-A)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 다클론성 또는 단클론성 항체는 트라스투주맙(Herceptin); 오파투무맙(Arzerra); 베바시주맙(Avastin); 리툭시맙(Rituxan); 세툭시맙(Erbitux); 파니투무맙(Vectibix); 토시투모맙/요오드131 토시투모맙(Bexxar); 알렘투주맙(Campath); 이브리투모마브(Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); 겜투주맙(Mylotarg); 에쿨리주맙(Soliris) 또는 데노수맙을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 EGFR 저해제는 게피티닙(Iressa); 라파티닙(Tykerb); 세툭시맙(Erbitux); 에를로티닙(Tarceva); 파니티무맙(Vectibix); PKI-166; 카너티닙(CI-1033); 마투주맙(Emd7200) 또는 EKB-569를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 HER2 저해제는 트라스투주맙(Herceptin); 라파티닙(Tykerb) 또는 AC-480을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 히스톤 데아세틸라제 저해제는 보리노스탓(Zolinza)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 호르몬은 타목시펜(Soltamox; Nolvadex); 랄록시펜(Evista); 메게스트롤(Megace); 류프로라이드(Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); 풀베스트란트(Faslodex); 레트로졸(Femara); 트립토렐린(Trelstar LA; Trelstar Depot); 엑세메스탄(Aromasin); 고세렐린(Zoladex); 비칼루타마이드(Casodex); 아나스트로졸(Arimidex); 플루옥시메스테론(Androxy; Halotestin); 메드록시프로게스테론(Provera; Depo-Provera); 에스트라무스틴(Emcyt); 플루타마이드(Eulexin); 토레미펜(Fareston); 데가렐릭스(Firmagon); 닐루타마이드(Nilandron); 아바렐릭스(Plenaxis); 또는 테스토락톤(Teslac)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 유사분열 저해제는 파클리탁셀(Taxol; Onxol; Abraxane); 도세탁셀(Taxotere); 빈크리스틴(Oncovin; Vincasar PFS); 빈블라스틴(Velban); 에토포사이드(Toposar; Etopophos; VePesid); 테니포사이드(Vumon); 익사베필론(Ixempra); 노코다졸; 에포틸론; 비노렐빈(Navelbine); 캄토테신(CPT); 이리노테칸(Camptosar); 토포테칸(Hycamtin); 암사크린 또는 라멜라린 D(LAM-D)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 MTOR 저해제는 에베롤림무스(Afinitor) 또는 템시롤리무스(Torisel); 라파뮨, 리다포롤리무스; 또는 AP23573을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 다중-키나제 저해제는 소라페닙(Nexavar); 수니티닙(Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; 모테사닙; 또는 AP24534를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 세린/트레오닌 키나제 저해제는 루복시스타우린; 에릴/에아수딜 하이드로클로라이드; 플라보피리돌; Pkc412; 브리오스타틴 KAI-9803; SF1126; 또는 PD 332991을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 타이로신 키나제 저해제는 에를로티닙(Tarceva); 게피티닙(Iressa); 이마티닙(Gleevec); 소라페닙(Nexavar); 수니티닙(Sutent); 트라스투주맙(Herceptin); 베바시주맙(Avastin); 리툭시맙(Rituxan); 라파티닙(Tykerb); 세툭시맙(Erbitux); 파니투무맙(Vectibix); 에베롤림무스(Afinitor); 알렘투주맙(Campath); 겜투주맙(Mylotarg); 템시롤리무스(Torisel); 파조파닙(Votrient); 다사티닙(Sprycel); 닐로티닙(Tasigna); 바탈라닙(Ptk787; ZK222584); WHI-P154; WHI-P131; AC-220; 또는 AMG888을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 VEGF/VEGFR 저해제는 베바시주맙(Avastin); 소라페닙(Nexavar); 수니티닙(Sutent); 라니비주맙; 페갑타닙; 또는 반데티닙을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 미세소관 표적화 약물은 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 노코다졸, 에포틸론 및 나벨빈을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 국소이성질화효소 독성 약물은 테니포사이드, 에토포사이드, 아드리아마이신, 캄토테신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 미톡산트론, 암사크린, 에피루비신 및 이다루비신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 탁산 또는 탁산 유도체는 파클리탁셀 및 도세탁셀을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 일반적 화학치료제, 항신생물제, 항증식제는 알트레타민(Hexalen); 아이소트레티노인(Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); 트레티노인(Vesanoid); 아자시티딘(Vidaza); 보르테조밉(Velcade) 아스파라기나제(Elspar); 레바미솔(Ergamisol); 미토탄(Lysodren); 프로카바진(Matulane); 페그아스파라기나제(Oncaspar); 데닐류킨 디피톡스(Ontak); 포피머(Photofrin); 알데스류킨(Proleukin); 레날리도마이드(Revlimid); 벡사로텐(Targretin); 탈리도마이드(Thalomid); 템시롤리무스(Torisel); 삼산화비소(Trisenox); 베르테포르핀(Visudyne); 미모신(Leucenol); (1M 테가푸르 - 0.4 M 5-클로로-2,4-디하이드록시피리미딘 - 1 M 칼륨 옥소네이트), 또는 로바스타틴을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 항암제는 화학치료제 또는 사이토카인, 예컨대, G-CSF(과립구 집락 자극 인자)이다.
일부 실시형태에서, 항암제는 표준 화학요법 조합물, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, CMF(사이클로포스파마이드, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실), CAF(사이클로포스파마이드, 아드리아마이신 및 5-플루오로우라실), AC(아드리아마이신 및 사이클로포스파마이드), FEC(5-플루오로우라실, 에피루비신 및 사이클로포스파마이드), ACT 또는 ATC(아드리아마이신, 사이클로포스파마이드 및 파클리탁셀), 리툭시맙, 젤로다(카페시타빈), 시스플라틴(CDDP), 카보플라틴, TS-1(1:0.4:1 몰비의 테가푸르, 기메스탓 및 오타스탓 칼륨), 캄토테신-11(CPT-11, 이리노테칸 또는 Camptosar™), CHOP(사이클로포스파마이드, 하이드록시다우노루비신, 온코빈 및 프레드니손 또는 프레드니솔론), R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파마이드, 하이드록시다우노루비신, 온코빈, 프레드니손 또는 프레드니솔론) 또는 CMFP(사이클로포스파마이드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 프레드니손)일 수 있다.
일부 실시형태에서, 항암제는 효소, 예컨대, 수용체 또는 비수용체 키나제의 저해제일 수 있다. 수용체 및 비수용체 키나제는, 예를 들어, 타이로신 키나제 또는 세린/트레오닌 키나제이다. 본 명세서에 기재된 키나제 저해제는 소분자, 폴리핵산, 폴리펩타이드 또는 항체이다. 예시적인 키나제 저해제는 베바시주맙(표적 VEGF), BIBW 2992(표적 EGFR 및 Erb2), 세툭시맙/얼비툭스(표적 Erb1), 이마티닙/글리빅(Gleevic)(표적 Bcr-Abl), 트라스투주맙(표적 Erb2), 게피티닙/이레사(표적 EGFR), 라니비주맙(표적 VEGF), 페갑타닙(표적 VEGF), 에를로티닙/타세바(표적 Erb1), 닐로티닙(표적 Bcr-Abl), 라파티닙(표적 Erb1 및 Erb2/Her2), GW-572016/라파티닙 디토실레이트(표적 HER2/Erb2), 파니투무맙/벡티빅스(표적 EGFR), 반데티닙(표적 RET/VEGFR), E7080(RET 및 VEGFR을 포함하는 다중 표적), 허셉틴(표적 HER2/Erb2), PKI-166(표적 EGFR), 카네르티닙/CI-1033(표적 EGFR), 수니티닙/SU-11464/수텐트(표적 EGFR 및 FLT3), 마투주맙/Emd7200(표적 EGFR), EKB-569(표적 EGFR), Zd6474(표적 EGFR 및 VEGFR), PKC-412(표적 VEGR 및 FLT3), 바탈라니브/Ptk787/ZK222584(표적 VEGR), CEP-701(표적 FLT3), SU5614(표적 FLT3), MLN518(표적 FLT3), XL999(표적 FLT3), VX-322(표적 FLT3), Azd0530(표적 SRC), BMS-354825(표적 SRC), SKI-606(표적 SRC), CP-690(표적 JAK), AG-490(표적 JAK), WHI-P154(표적 JAK), WHI-P131(표적 JAK), 소라페닙/넥사바르(표적 RAF 키나제, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-β, KIT, FLT-3 및 RET), 다사티닙/스프라이셀(BCR/ABL 및 Src), AC-220(표적 Flt3), AC-480(표적 모두 HER 단백질, "panHER"), 모테사닙 디포스페이트(표적 VEGF1-3, PDGFR 및 c-kit), 데노수맙(표적 RANKL, SRC를 저해), AMG888(표적 HER3) 및 AP24534(Flt3을 포함하는 다중 표적)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 세린/트레오닌 키나제 저해제는 라파뮨(표적 mTOR/FRAP1), 데포롤리무스(표적 mTOR), 서티칸/에베롤리무스(표적 mTOR/FRAP1), AP23573(표적 mTOR/FRAP1), 에릴/파수딜 하이드로클로라이드(표적 RHO), 플라보피리돌(표적 CDK), 셀리시클립/CYC202/로스코비트린(표적 CDK), SNS-032/BMS-387032(표적 CDK), 루복시스타우린(표적 PKC), Pkc412(표적 PKC), 브리오스타틴(표적 PKC), KAI-9803(표적 PKC), SF1126(표적 PI3K), VX-680(표적 Aurora 키나제), Azd1152(표적 Aurora 키나제), Arry-142886/AZD-6244(표적 MAP/MEK), SCIO-469(표적 MAP/MEK), GW681323(표적 MAP/MEK), CC-401(표적 JNK), CEP-1347(표적 JNK) 및 PD 332991(표적 CDK)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
추가적으로, 본 명세서에 기재된 펩타이드 조성물은 면역자극제(예를 들어, 바실루스 칼메트-게랭(BCG), 레바미솔, 인터류킨-2, 알파-인터페론 등), 단클론성 항체(예를 들어, 항-CD20, 항-HER2, 항CD52, 항-HLA-DR 및 항VEGF 단클론성 항체), 면역독소(예를 들어, 항-CD33 단클론성 항체-칼리케아마이신 접합체, 항-CD22 단클론성 항체-슈도모나스 외독소 접합체 등), 및 방사면역요법(예를 들어, 111In, 90Y 또는 131I 등에 접합된 항-CD20 단클론성 항체)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 통상적인 면역치료제와 공동투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 펩타이드 조성물은 종양 항원으로 향하는 항체에 선택적으로 접합되는 방사성 핵종, 예컨대, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 89Sr, 86Y, 87Y, 90Y, 105Rh, 111Ag, 111In, 117mSn, 149Pm, 153Sm, 166Ho, 177Lu, 186Re, 188Re, 211At 및 212Bi를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 통상적인 방사선치료제와 공동투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 사용되는 항암제는 독소루비신, 시스플라틴, 카보플라틴, 탁산, 캄토테신 또는 이들의 임의의 조합물을 지칭한다.
"대상체" 또는 "환자"는 포유류를 포함한다. 포유류는, 예를 들어, 인간 또는 적절한 비인간 포유류, 예컨대, 영장류, 마우스, 랫트, 개, 고양이, 소, 말, 염소, 낙타, 양 또는 돼지일 수 있다. 대상체는 또한 조류 또는 가금류일 수 있다. 일부 실시형태에서, 포유류는 인간이다. 따라서, 상기 방법은 인간 요법과 수의학적 적용분야 둘 다에 적용 가능하다. 일부 실시형태에서, 대상체 또는 이를 필요로 하는 대상체는 NKG2D 리간드 발현 질환을 갖는 대상체이다. "NKG2D 리간드 발현 질환"은 KG2D 리간드(예를 들어, MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 및/또는 ULBP6) 발현이 이러한 질환 또는 병태가 없는 대상체와 비교할 때 비정상(예를 들어, 보다 높거나 또는 보다 낮음)인 질환 또는 병태이다. 예시적인 NKG2D 리간드 발현 질환은 암, 자가면역질환을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 대상체 또는 이를 필요로 하는 대상체는 암을 갖는 대상체 또는 전암성 병태를 갖는 대상체이다. 일부 실시형태에서, 이를 필요로 하는 대상체는 암을 갖는다. 일부 실시형태에서, 대상체 또는 이를 필요로 하는 대상체는 자가면역질환을 갖는 대상체이다.
용어 "자가면역질환"은 포유류의 면역계가 포유류 자신의 조직에 대한 또는 포유류에게 본질적으로 해롭지 않은 항원에 대한 체액성 또는 세포성 면역 반응을 가중시켜, 이러한 포유류에서의 조직 손상을 생성하는 장애를 지칭한다. 증상 및 중증도의 정도는 환자에 따라 다르다. 또한, 환자에서 질환의 임상 특징은 시간에 따라 극적으로 다르다.
자가면역장애의 예는 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염 및 I형 당뇨병을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 자가면역질환은 또한 급성 사구체신염, 애디슨병, 성인 발병 특발성 부갑상선 기능저하증(AOIH), 전두탈모증, 근위축성 축삭경화증, 강직성 척추염, 자가면역 재생불량빈혈, 자가면역 용혈빈혈, 베체트병, 셀리악병, 만성 활동 간염, CREST 증후군, 크론병, 피부근염, 확장성 심근병증, 호산구 증가증-근육통 증후군, 단순 수포성 표피박리증(EBA), 거대 세포성 동맥염, 굿파스쳐 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 혈색소증, 헤노호-쉰라인 자반증, 특발성 IgA 신증, 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM), 청소년 류마티스 관절염, 람베르트-이튼 증후군, 선상 IgA 피부증, 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증근무력증, 심근염, 기면증, 괴사혈관염, 신생아 루푸스 증후군(NLE), 신증 증후군, 유사천포창, 천포창, 다발근염, 원발 경화성 담관염, 건선, 급속 진행성 신염(RPGN), 라이터 증후군, 류마티스 관절염, 피부경화증, 쇼그렌 증후군, 강직인간 증후군, 갑상선염 및 궤양성 결장염을 포함한다. 이는 완전한 목록인 것으로 의도되지 않으며, 오히려, 자가면역은 광범위한 임상 현상이라는 것을 입증하는 것으로 의도된다. 이들 쇠약성 및 잠재적으로 치명적인 장애의 임상적 진단 및 치료에 관련된 문제의 일부 이해를 제공하기 위해, 본 분야의 예시적인 질환, 예컨대, 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 혼합 결합 조직병 및 APLS는 본 명세서에서 이하에 추가로 논의한다.
일부 실시형태에서, 자가면역질환은 류마티스 관절염, 결장염, 셀리악병, 다발성 경화증, 원형 탈모증, 1형 당뇨병, 만성 폐쇄성 폐질환, 죽상동맥경화증 또는 2형 당뇨병과 관련된 대사 증후군이다.
명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "암"은 백혈병, 림프종, 흑색종, 신경내분비 종양, 암종 및 육종을 포함하는, 포유류에서 발견되는 모든 유형의 암, 신생물 또는 악성 종양을 지칭한다. 본 명세서에 제공된 조성물, 약제학적 조성물 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적인 암은 림프종, 육종, 방광암, 골암, 뇌 종양, 자궁경부암, 결장암, 식도 암, 위암, 두경부 암, 신장암, 골수종, 갑상선암, 백혈병, 전립선암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성, ER 양성, ER 음성, 화학요법 저항성, 허셉틴 저항성, HER2 양성, 독소루비신 저항성, 타목시펜 저항성, 유관 암종, 소엽암, 원발성, 전이성), 난소암, 췌장암, 간암(예를 들어, 간세포 암종), 폐암(예를 들어, 비소세포 폐 암종, 편평세포 폐 암종, 선암종, 거대 세포 폐 암종, 소세포 폐 암종, 카시노이드, 육종), 다형성 교모세포종, 신경교종, 흑색종, 전립선암, 거세-저항성 전립선암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 교모세포종, 난소암, 폐암, 편평세포 암종 (예를 들어, 두부, 경부 또는 식도), 직장결장암, 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 림프종, B 세포 림프종, 또는 다발성 골수종을 포함한다. 추가적인 예는 갑상선암, 내분비계암, 뇌암, 유방암, 자궁경관암, 결장암, 두경부암, 식도암, 간암, 신장암, 폐암, 비소세포폐암, 흑색종, 중피종, 난소암, 육종, 위암, 자궁암 또는 수모세포종, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경아세포종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 난소암, 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 마크로글로불린혈증, 원발성 뇌 종양, 암, 악성 췌장 인슐린종, 악성 카시노이드, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선 암, 신경아세포종, 식도 암, 비뇨기관암, 악성고칼슘혈증, 자궁내막암, 부신피질암, 내분비 또는 외분비 췌장의 신생물, 갑상선 수질암, 갑상선 수질 암종, 흑색종, 결장직장암, 유두갑상선암, 간세포 암종, 유두의 파제트병, 엽상종양, 소엽암, 유관 암종, 췌장 성상 세포의 암, 간성상세포의 암 또는 전립선암을 포함한다. 일부 실시형태에서, NKG2D 리간드 발현 암은 폐암, 난소암, 결장암, 췌장암, 방광암, 유방암, 간세포암종(HCC), 신세포암, 비인두암(NPC), 전립선암, 흑색종, 형질세포암, 백혈병, 림프종, 신경교종 또는 신경아세포종이다.
용어 "백혈병"은 광범위하게 혈액-형성 기관의 진행성, 악성 질환을 지칭하며, 일반적으로 기형적 증식 및 백혈병 및 혈액 및 골수 중의 이들의 전구체의 발생을 특징으로 한다. 백혈병은 일반적으로 (1) 질환-급성 또는 만성의 지속기간 및 특징; (2) 관련된 세포 유형; 골수(골수성), 림프구(림프성) 또는 단핵구; 및 (3) 혈액-백혈병 또는 비백혈병성(아백혈성)에서 비정상 세포 수의 증가 또는 비증가에 기반하여 임상적으로 분류된다. 본 명세서에 제공된 조성물, 약제학적 조성물 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적인 백혈병은, 예를 들어, 급성 비림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 급성 과립구 백혈병, 만성 과립구 백혈병, 급성 전골수구성백혈병, 성인 T-세포 백혈병, 비백혈병성 백혈병, 백혈구병성 백혈병, 호염기성 백혈병, 아세포 백혈병, 소 백혈병, 만성 골수구성 백혈병, 피부백혈병, 배아 백혈병, 호산구 백혈병, 그로스 백혈병, 털세포 백혈병, 조혈세포 백혈병, 원시혈구 백혈병, 조직구 백혈병, 줄기 세포 백혈병, 급성 단핵구 백혈병, 백혈구 감소증 백혈병, 림프관 백혈병, 림프아구 백혈병, 림프구성 백혈병, 림프성 백혈병, 림프구 백혈병, 림프육종 세포 백혈병, 비만 세포 백혈병, 거대핵세포 백혈병, 소골수아구성 백혈병, 단핵구 백혈병, 골수아구성 백혈병, 골수구성 백혈병, 골수 과립구 백혈병, 골수단핵구 백혈병, 네겔리 백혈병, 혈장 세포 백혈병, 다발성 골수종, 형질세포 백혈병, 전골수구성백혈병, 리더 세포 백혈병, 실링 백혈병, 줄기 세포 백혈병, 아백혈성 백혈병 또는 미분화 세포 백혈병을 포함한다.
용어 "육종"은 일반적으로 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성되고 일반적으로 미소섬유 또는 균질한 물질에 함입된 빽빽하게 패킹된 세포로 구성된 종양을 지칭한다. 본 명세서에 제공된 조성물, 약제학적 조성물 또는 방법으로 치료될 수 있는 육종은 연골육종, 섬유육종, 림프육종, 흑색육종, 점액육종, 골육종, 아베메티(Abemethy) 육종, 지방 육종, 지방육종, 포상 연부 육종, 법랑아육종 육종, 포도상 육종, 녹색종 육종, 융모막 암종, 배아 육종, 윌름 종양 육종, 자궁내막 육종, 기질 육종, 유잉 육종, 근막 육종, 섬유아세포 육종, 거대세포 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다색소 출혈 육종, B 세포의 면역아세포 육종, 림프종, T-세포의 면역아세포 육종, 젠슨 육종, 카포시 육종, 쿠퍼 세포 육종, 혈관육종, 백혈육종, 악성 간엽세포종 육종, 골막주위 육종, 망상구육종, 라우스 육종, 장액낭종 육종, 활액 육종 또는 모세혈관확장 육종을 포함한다.
용어 "흑색종"은 피부 및 기타 기관의 멜라닌 생성세포계로부터 생기는 종양을 의미하는 것이다. 본 명세서에 제공된 조성물, 약제학적 조성물 또는 방법으로 치료될 수 있는 흑색종은, 예를 들어, 선단-흑자성 흑색종, 무멜라닌 흑색종, 양성 청소년 흑색종, 클라우드맨 흑색종, S91 흑색종, 하딩-파세이 흑색종, 청소년 흑색종, 악성 흑색점 흑색종, 악성 흑색종, 결절성 흑색종, 조갑 흑색종, 또는 표재 확장성 흑색종을 포함한다.
"유방암"은 모든 형태의 유방암을 포함한다. 유방암은 원발성 상피 유방암을 포함할 수 있다. 유방암은 유방이 다른 종양, 예컨대, 림프종, 육종 또는 흑색종에 의해 수반되는 암을 포함할 수 있다. 유방암은 유방의 암종, 유방의 유관 암종, 유방의 소엽암, 유방의 미분화 암종, 유방의 엽상낭육종, 유방의 혈관육종 및 유방의 원발성 림프종을 포함할 수 있다. 유방암은 I, II, IIIA, IIIB, IIIC 및 IV기 유방암을 포함할 수 있다. 유방의 유관 암종은 면포, 점액소(콜로이드), 수질, 림프구성 침윤물을 수반한 수질, 유두, 경성암 및 관형으로 이루어진 군으로부터 선택된 조직학적 유형을 갖는 침습 암종, 관내상피암 성분 우선암종, 염증성 유방암, 및 유관 암종을 포함할 수 있다. 유방의 소엽암은 제자리 성분이 우세한 침습성 소엽암, 침습성 소엽암, 및 침윤성 소엽암을 포함할 수 있다. 유방암은 파제트병, 유관내 암종을 수반한 파제트병 및 침습성 유관 암종을 수반한 파제트병을 포함할 수 있다. 유방암은 조직학적 및 초미세구조 비균질성(예를 들어, 혼합 세포 유형)을 갖는 유방 신생물을 포함할 수 있다.
치료될 유방암은 가족성 유방암을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 산발성 유방암을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 남성 대상체에서 생길 수 있다. 치료될 유방암은 여성 대상체에서 생길 수 있다. 치료될 유방암은 폐경전 여성 대상체 또는 폐경후 여성 대상체에서 생길 수 있다. 치료될 유방암은 30세 이상의 대상체, 또는 30세 미만의 대상체에서 생길 수 있다. 치료될 유방암은 50세 이상의 대상체, 또는 50세 미만의 대상체에서 생겼다. 치료될 유방암은 70세 이상의 대상체 또는 70세 미만의 대상체에서 생길 수 있다.
치료될 유방암은 BRCA1, BRCA2 또는 p53에서 가족성 또는 자발적 돌연변이를 확인하도록 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 HER2/neu 유전자 증폭을 갖거나, HER2/neu를 과발현시키거나, 또는 저수준, 중간 수준 또는 고수준의 HER2/neu 발현을 갖는 것으로 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 에스트로겐 수용체(ER), 프로게스테론 수용체(PR), 인간 표피성장인자 수용체-2, Ki-67, CA15-3, CA 27-29 및 c-Met로 이루어진 군으로부터 선택된 마커에 대해 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 ER-미지, ER-풍부 또는 ER-부족으로서 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 ER-음성 또는 ER-양성으로서 유형화될 수 있다. 유방암의 ER-유형화는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 수행될 수 있다. 유방암의 ER-유형화는 문헌[Onkologie 27: 175-179(2004)]에 제시된 바와 같이 수행될 수 있다. 치료될 유방암은 PR-미지, PR-풍부 또는 PR-불량으로서 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 PR-음성 또는 PR-양성으로서 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 수용체 양성 또는 수용체 음성으로서 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 CA 15-3 또는 CA 27-29, 또는 둘 다의 상승된 혈액 수준과 관련되는 것으로 유형화될 수 있다. 치료될 유방암은 "삼중-음성 유방암" (TNBC) (에스트로겐 수용체 [ER]-음성, 프로게스테론 수용체[PR]-음성, 및 인간 표피성장인자 수용체 2 [HER2]-음성)일 수 있다.
치료될 유방암은 유방의 국소화된 종양을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 음성 감시 림프절(SLN) 생검과 관련된 유방의 종양을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 양성 감시 림프절(SLN) 생검과 관련된 유방의 종양을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 하나 이상의 양성 보조 림프절과 관련된 유방의 종양을 포함할 수 있으며, 보조 림프절은 임의의 적용 가능한 방법에 의해 병기화되었다. 치료될 유방암은 결절 음성 상태(예를 들어, 결절-음성) 또는 결절 양성 상태(예를 들어, 결절-양성)를 갖는 것으로 유형화된 유방의 종양을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 신체 내 다른 위치로 전이된 유방의 종양을 포함할 수 있다. 치료될 유방암은 뼈, 폐, 간 또는 뇌로 이루어진 군으로부터 선택된 위치로 전이된 것으로 분류될 수 있다. 치료될 유방암은 전이성, 국소화, 국부, 국소-국부, 국소 진행, 원거리, 다심성, 양쪽성, 동측성, 대측성, 신규 진단, 재발 및 수술 불가능으로 이루어진 군으로부터 선택된 특징에 따라 분류될 수 있다.
용어 "암종"은 주변 조직을 침윤하고 전이를 일으키는 경향이 있는 상피세포로 구성되는 악성 신규 성장을 지칭한다. 본 명세서에 제공된 조성물, 약제학적 조성물 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적인 암종은, 예를 들어, 갑상선 수질 암종, 가족성 갑상선 수질 암종, 샘꽈리 암종, 선방 암종, 선낭성 암종, 선낭암종, 선암종, 부신피질암종, 폐포 암종, 폐포 세포 암종, 기저 세포 암종, 바닥세포암종, 바닥세포모양 암종, 기저편평세포 암종, 기관지폐포 암종, 세기관지 암종, 기관지유래 암종, 대뇌모양 암종, 담관세포 암종, 융모막 암종, 콜로이드 암종, 면포 암종, 코퍼스 암종, 소공질 암종, 흉부갑옷암종, 피부 암종, 원통형 암종, 원주 세포 암종, 관암종, 유관 암종, 듀럼 암종, 배아 암종, 뇌질모양 암종, 표피모양 암종, 상피 아데노이드 암종, 외성장 암종, 궤양 암종, 섬유성 암종, 젤라틴성 암종, 젤상 암종, 거대세포 암종, 거대세포 암종, 선상 암종, 과립막 세포 암종, 모모 세포암종, 헤마토이드 암종, 간세포 암종, 허슬 세포 암종, 유리질 암종, 유부신종 암종, 영아 배아 암종, 제자리 암종, 표피내 암종, 상피내 암종, 크롬페처 암종, 쿨키츠키(Kulchitzky)-세포 암종, 거대 세포 암종, 수정체 암종, 렌티큘러 암종, 지방종성 암종, 소엽암, 림프 상피 암종, 속질 암종, 수질 암종, 멜라닌 암종, 무른 암종, 점액소 암종, 점액분비 암종, 점액성 암종, 점막표피양 암종, 추벽 암종, 점액질 암종, 점액종성 암종, 비인두암, 연맥 세포 암종, 화골성 암종, 유골 암종, 유두 암종, 문맥주위 암종, 침습전 암종, 가시세포 암종, 수질모양 암종, 신장 신세포 암종, 예비 세포 암종, 육종성 암종, 슈나이더 암종, 경성 암종, 음낭암종, 인환세포 암종, 단일 암종, 소세포 암종, 솔레노이드 암종, 회전 타원체 세포 암종, 방추상 세포 암종, 해면체 암종, 편평 암종, 편평세포 암종, 선상 암종, 모세혈관확장성암종, 모세혈관확장상 암종, 이행상피암종, 결절황색종, 관형 암종, 결절상 암종, 사마귀모양 암종 또는 융모암종을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "전이", "전이성" 및 "전이암"은 상호 호환적으로 사용될 수 있으며, 하나의 기관 또는 다른 비인접 기관 또는 신체 부분으로부터의 증식성 질환 또는 장애, 예를 들어, 암의 확산을 지칭한다. 암은 본래의 부위, 예를 들어, 유방에서 발생하며, 이 부위가 원발성 종양, 예를 들어, 원발성 유방암으로 지칭된다. 원발성 종양 또는 본래의 부위에서 일부 암 세포는 국소 영역에서 주변의 정상 조직을 침투 및 침윤하는 능력 및/또는 시스템을 통해 신체 내 다른 부위 및 조직까지 순환하는 림프계 또는 혈관계의 벽을 침투하는 능력을 획득한다. 원발성 종양의 암 세포로부터 형성된 제2의 임상적으로 검출 가능한 종양은 전이성 또는 2차 종양으로서 지칭된다. 암 세포가 전이될 때, 전이성 종양 및 이의 세포는 본래의 종양과 비슷한 것으로 추정된다. 따라서, 폐암이 유방으로 전이된다면, 유방 부위에서의 2차 종양은 비정상 폐 세포로 이루어지며, 비정상 유방 세포는 아니다. 유방에서 2차 종양은 전이성 폐암으로 지칭된다. 따라서, 전이성 암이라는 어구는 대상체가 원발성 종양을 갖고 있거나 가졌고, 하나 이상의 2차 종양을 갖는 질환을 지칭한다. 비전이성 암 또는 전이성이 아닌 암을 갖는 대상체라는 어구는 대상체가 원발성 종양을 갖지만 하나 이상의 2차 종양은 갖지 않는 질환을 지칭한다. 예를 들어, 전이성 폐암은 원발성 폐 종양 또는 이의 병력을 갖고, 제2 위치 또는 다수의 위치, 예를 들어, 유방에서 하나 이상의 2차 종양을 갖는 대상체에서의 질환을 지칭한다.
치료될 암은 미국암연합회(AJCC) TNM 분류 시스템에 따라 병기화될 수 있으며, 종양(T)은 TX, T1, T1mic, T1a, T1b, T1c, T2, T3, T4, T4a, T4b, T4c 또는 T4d의 병기가 부여되고; 국소 림프절(N)은 NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b 또는 N3c의 병기가 부여되고; 원거리 전이(M)는 MX, M0 또는 M1의 병기가 부여될 수 있다. 치료될 암은 미국암연합회(AJCC) 분류에 따라 I기, IIA기, IIB기, IIIA기, IIIB기, IIIC기 또는 IV기로서 병기화될 수 있다. 치료될 암은 등급 GX(예를 들어, 등급은 평가될 수 없음), 등급 1, 등급 2, 등급 3 또는 등급 4로서 AJCC 분류에 따른 등급이 부여될 수 있다. 치료될 암은 pNX, pN0, PN0 (I-), PN0 (I+), PN0 (mol-), PN0 (mol+), PN1, PN1(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b 또는 pN3c의 AJCC 병리학 분류(pN)에 따라 병기화될 수 있다.
치료될 암은 직경이 약 2센티미터 이하인 것으로 결정된 종양을 포함할 수 있다. 치료될 암은 직경이 약 2 내지 약 5 센티미터인 것으로 결정된 종양을 포함할 수 있다. 치료될 암은 직경이 약 3센티미터 이상인 것으로 결정된 종양을 포함할 수 있다. 치료될 암은 직경이 약 5센티미터 초과인 것으로 결정된 종양을 포함할 수 있다. 치료될 암은 현미경 검사에 의해 양호하게 분화, 보통으로 분화, 불량하게 분화 또는 미분화로 분류될 수 있다. 치료될 암은 현미경 검사에 의해 유사분열수(예를 들어, 세포분열의 양) 또는 핵 분화도(예를 들어, 세포 변화)에 대해 분류될 수 있다. 치료될 암은 현미경 검사에 의해 괴사 면적(예를 들어, 사멸 또는 악화 세포의 면적)과 관련되는 것으로 분류될 수 있다. 치료될 암은 비정상 핵형을 갖거나, 비정상적인 염색체 수를 갖거나, 외관이 비정상적인 하나 이상의 염색체를 갖는 것으로 분류될 수 있다. 치료될 암은 홀배수체, 삼배체, 사배체인 것으로, 또는 변경된 배수성을 갖는 것으로 분류될 수 있다. 치료될 암은 전체 염색체의 염색체 전좌, 또는 결실 또는 중복, 또는 염색체 일부의 결실, 중복 또는 증폭 영역을 갖는 것으로 분류될 수 있다.
치료될 암은 DNA 혈구계산, 유세포분석, 또는 영상 혈구 계산에 의해 평가될 수 있다. 치료될 암은 세포 분열의 합성 단계에서(예를 들어, 세포 분열의 S기에서) 세포의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%를 갖는 것으로 유형화될 수 있다. 치료될 암은 낮은 S기 분획 또는 높은 S기 분획을 갖는 것으로 유형화될 수 있다.
본 명세서에 제공되는 바와 같은 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 언급된 목적을 달성하는 데(예를 들어, 이것이 투여되는 효과를 달성하고, 질환을 치료하고, 효소 활성을 감소시키고, 효소 활성을 증가시키고, 전사 활성을 감소시키고, 전사 활성을 증가시키고, 질환 또는 병태의 하나 이상의 증상을 감소시키는 데) 충분한 양이다. "유효량"의 예는 "치료적 유효량"으로도 지칭될 수 있는, 질환의 증상 또는 증상들의 치료, 예방 또는 감소에 기여하는 데 충분한 양이다. 증상 또는 증상들의 "감소"(및 이 어구의 문법적 동의어)는 증상(들)의 중증도 또는 빈도의 감소, 또는 증상(들)의 제거를 의미한다. 약물의 "예방적 유효량"은, 대상체에게 투여될 때, 의도된 예방적 효과, 예를 들어, 손상, 질환, 병리 또는 병태의 발병(또는 재발)의 예방 또는 지연, 또는 손상, 질환, 병리 또는 병태 또는 이들의 증상의 발병(또는 재발) 가능성의 감소를 가질 약물의 양이다. 완전한 예방적 효과는 1회 용량의 투여에 의해 일어나는 것은 아니며, 일련의 용량의 투여 후에만 일어날 수 있다. 따라서, 예방적 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "활성 감소량"은 길항제의 부재에 비하여, 효소 또는 단백질(예를 들어, 전사 인자)의 활성을 감소시키는 데 필요한 길항제(저해제)의 양을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 "활성 증가량"은 작용제의 부재에 비하여, 효소 또는 단백질(예를 들어, 전사 인자)의 활성을 증가시키는 데 필요한 작용제(활성제)의 양을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "기능 붕괴성 양"은 길항제의 부재에 비하여, 효소 또는 단백질(예를 들어, 전사 인자)의 기능을 붕괴시키는 데 필요한 길항제(저해제)의 양을 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 "기능 증가량"은 작용제의 부재에 비하여, 효소 또는 단백질(예를 들어, 전사 인자)의 기능을 증가시키는 데 필요한 작용제(활성제)의 양을 지칭한다. 정확한 양은 치료 목적에 의존할 것이며, 공지된 기법을 이용하여 당업자에 의해 확인될 것이다(예를 들어, 문헌[Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992)]; 문헌[Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999)]; 문헌[Pickar, Dosage Calculations (1999)]; 및 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins] 참조). 일부 실시형태에서, 치료될 질환 또는 병태는 암이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료하는" 또는 "치료하다"는 질환, 병태 또는 장애와 싸울 목적을 위한 환자의 관리 및 돌봄을 나타내며, 질환, 병태 또는 장애의 증상 또는 합병증을 완화하기 위한, 또는 질환, 병태 또는 장애를 제거하기 위한 본 명세서에 기재된 조성물의 투여를 포함한다. 용어 "치료하다"는 또한 시험관내 또는 동물 모델에서의 세포의 치료를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "완화하다"는 장애의 징후 또는 증상의 중증도가 감소되는 과정을 나타내는 것으로 의도된다. 중요하게는, 징후 또는 증상은 제거되지 않고는 완화될 수 있다. 본 발명의 조성물 또는 약제학적 조성물의 투여는 징후 또는 증상의 제거를 야기할 수도 있거나 야기할 수 있지만, 제거가 필요하지는 않다. 유효 투약량은 징후 또는 증상의 중증도를 감소시키는 것으로 예상되어야 한다. 예를 들어, 다수 위치에서 생길 수 있는 암과 같은 장애의 징후 또는 증상은, 암의 중증도가 다수 위치의 적어도 하나 내에서 감소되는 경우에 완화된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "중증도"는 전암성, 또는 양성 상태로부터 악성 상태로 전환하는 암의 가능성을 기재하는 것을 의미한다. 대안적으로 또는 추가로, 중증도는, 예를 들어, TNM 시스템(국제암연합(UICC) 및 미국암연합회(AJCC)에 의해 허용됨)에 따라 또는 다른 당업계에 인식된 방법에 의한 암 병기를 기재하는 것을 의미한다. 암 병기는 원발성 종양의 위치, 종양 크기, 종양의 수 및 연관된 림프절(림프절 내로의 암 확산)과 같은 인자에 기반한 암의 정도 또는 중증도를 지칭한다. 대안적으로 또는 추가로, 중증도는 당업계에 인식된 방법에 의한 종양 등급을 나타내는 것으로 의도된다(국립 암 연구소, www.cancer.gov 참조). 종양 등급은 현미경 하에 얼마나 비정상적으로 보이는지와 종양이 얼마나 빨리 성장하고 확산될 가능성이 있는지에 관해 암 세포를 분류하는 데 사용되는 시스템이다. 종양 등급을 결정할 때 세포의 구조 및 성장 패턴을 포함하는 다수의 인자가 고려된다. 종양 등급을 결정하기 위해 사용되는 특정 인자는 각각의 암 유형에 따라 다르다. 중증도는 또한 종양 세포가 동일한 조직 유형의 정상 세포와 얼마나 비슷한지에 관한 것인, 분화로도 불리는 조직학적 등급을 나타낸다(국립 암 연구소, www.cancer.gov 참조). 더 나아가, 중증도는 종양 세포 내 핵의 크기 및 형상 및 분열되는 종양 세포의 백분율을 지칭하는 핵 등급을 나타낸다(국립 암 연구소, www.cancer.gov 참조).
중증도는 또한 종양이 성장 인자를 분비하고, 세포외 기질을 분해하거나, 혈관을 형성하거나, 병치된 조직에 대한 접착력을 상실하거나, 전이된 정도를 나타낼 수 있다. 또한, 중증도는 원발성 종양이 전이된 위치 수를 나타낼 수 있다. 최종적으로, 중증도는 다양한 유형 및 위치의 종양을 치료함에 있어서의 어려움을 포함할 수 있다. 예를 들어, 수술 불가능한 종양, 다수의 신체계에 대해 더 큰 접근을 갖는 해당 암(혈액학적 및 면역학적 종양) 및 전통적인 치료에 대해 가장 큰 저항성이 있는 종양이 가장 중증으로 간주된다. 이들 상황에서, 대상체의 기대 수명 연장 및/또는 통증 감소, 암 세포 비율의 감소 또는 세포를 하나의 계통으로 제한하는 것 및 암 병기/종양 등급/조직학적 등급/핵 등급의 개선이 암의 징후 또는 증상을 완화시키는 것으로 간주된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "증상"은 질환, 질병, 손상 또는 신체에 이상이 있는 것의 지표로서 정의된다. 증상은 증상을 경험하는 개체에 의해 느껴지거나 인식되지만, 다른 사람에 의해서는 용이하게 인식되지 않을 수도 있다. 다른 사람들은 비의료 전문가로서 정의된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "징후"는 또한 신체에 이상이 있다는 지표로서 정의된다. 그러나 징후는 의사, 간호사 또는 다른 의료 전문가가 알 수 있는 것으로서 정의된다.
암은 거의 모든 징후 또는 증상을 야기할 수 있는 질환의 그룹이다. 징후 및 증상은 암이 있는 장소, 암의 크기, 및 이것이 근처의 기관 또는 구조에 얼마나 영향을 미치는지에 따라 다를 것이다. 암이 확산되면(전이되면), 신체의 다른 부분에서 증상이 나타날 수 있다. 예를 들어, 암은 또한 발열, 피로 또는 체중감소와 같은 증상을 야기할 수 있다. 통증은 일부 암, 예컨대, 뼈암 또는 고환암에 의한 조기 증상일 수 있다. 그러나 대체로 통증은 진행된 질환의 증상이다. 피부암과 마찬가지로, 일부 내부 암은 보일 수 있는 피부 징후를 야기할 수 있다. 이들 변화는 보다 어둡게(과색소침착), 황색(황달), 또는 적색(홍반)으로 보이는 피부; 가려움; 또는 다모증을 포함한다.
대안적으로 또는 추가로, 암 하위유형에는 특정 징후 또는 증상이 존재한다. 배변 습관 또는 방광 기능의 변화는 암을 나타낼 수 있다. 장기간 변비, 설사 또는 대변 크기의 변화는 결장암의 징후일 수 있다. 배뇨작용에 따른 통증, 혈뇨 또는 방광 기능의 변화(예컨대, 더 빈번한 또는 덜 빈번한 배뇨작용)는 방광 또는 전립선 암과 관련될 수 있었다.
피부 병태의 변화 또는 새로운 피부 병태의 출현은 암을 나타낼 수 있다. 피부암은 출혈이 있을 수 있고, 치유되지 않는 상처처럼 보일 수 있다. 구강 내 장기 지속되는 상처는, 특히 흡연을 하거나, 담배를 씹거나, 또는 빈번하게 술을 마시는 환자에서 구강암일 수 있다. 음경 또는 질 상의 상처는 감염 또는 조기 암의 징후일 수 있다.
이례적인 출혈 또는 분비물은 암을 나타낼 수 있다. 이례적인 출혈은 조기 또는 진행된 암에서 발생될 수 있다. 가래(담) 내의 혈액은 폐암의 징후일 수 있다. 대변 내의 혈액(또는 어두운 색 또는 검정 대변)은 결장 또는 직장암의 징후일 수 있었다. 자궁경관 또는 자궁내막(자궁의 내벽)의 암은 질 출혈을 야기할 수 있다. 소변 중의 혈액은 방광 또는 신장암의 징후일 수 있다. 유두로부터의 혈성분비물은 유방암의 징후일 수 있다.
유방에서 또는 신체의 다른 부분에서의 붓기 또는 덩어리는 암의 존재를 나타낼 수 있다. 다수의 암은 피부를 통해, 주로 유방, 고환, 림프절(샘) 및 신체의 연조직에서 느껴질 수 있다. 덩어리 또는 붓기는 암의 초기 또는 말기 징후일 수 있다. 임의의 덩어리 또는 붓기는, 특히 새로 생겼거나 또는 크기가 커진 경우에 암을 나타낼 수 있다.
소화불량 또는 연하의 어려움은 암을 나타낼 수 있다. 이들 증상은 통상적으로 다른 원인을 갖지만, 소화불량 또는 연하 문제는 식도, 위 또는 인두(목구멍)의 암 징후일 수 있다.
사마귀 또는 점의 최근의 변화는 암을 나타낼 수 있다. 색, 크기 또는 형상이 변하거나, 또는 뚜렷한 경계가 상실된 임의의 사마귀, 점 또는 주근깨는 잠재적인 암 발생을 나타낸다. 예를 들어, 피부 병변은 흑색종일 수 있다.
지속적 기침 또는 목쉰소리는 암을 나타낼 수 있다. 없어지지 않는 기침은 폐암의 징후일 수 있다. 목쉰소리는 후두(소리 상자) 또는 갑상선 암의 징후일 수 있다.
상기 열거된 징후 및 증상은 암에서 보다 빈번히 보이는 것들이지만, 덜 흔하며 본 명세서에 열거되지 않은 다수의 다른 것들이 있다.
암 치료는 종양 크기의 감소를 초래할 수 있다. 종양 크기의 감소는 "종양 퇴행"으로도 지칭된다. 바람직하게는, 치료 후에, 종양 크기는 치료 전 크기에 비해 약 5% 이상만큼 감소될 것이고; 더 바람직하게는, 종양 크기는 약 10% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 20% 이상만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 약 30% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 40% 이상만큼 감소되고; 더욱 더 바람직하게는, 약 50% 이상만큼 감소되며; 가장 바람직하게는, 약 75% 이상만큼 감소된다. 종양의 크기는 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 크기는 종양 직경으로서 측정될 수 있다.
암 치료는 종양 용적의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후에, 종양 용적은 치료 전 크기에 비해 약 5% 이상만큼 감소될 것이고; 더 바람직하게는, 종양 용적은 약 10% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 20% 이상만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 약 30% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 40% 이상만큼 감소되고; 더욱 더 바람직하게는, 약 50% 이상만큼 감소되며; 가장 바람직하게는, 약 75% 이상만큼 감소된다. 종양 용적은 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다.
암 치료는 종양 수의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후에, 종양 수는 치료 전 수에 비해 약 5% 이상만큼 감소될 것이고; 더 바람직하게는, 종양 수는 약 10% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 20% 이상만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 약 30% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 40% 이상만큼 감소되고; 더욱 더 바람직하게는, 약 50% 이상만큼 감소되며; 가장 바람직하게는, 약 75% 이상만큼 감소된다. 종양 수는 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 수는 맨눈으로 또는 특정 배율에서 보이는 종양을 계수함으로써 측정될 수 있다. 바람직하게는, 특정 배율은 2×, 3×, 4×, 5×, 10× 또는 50×이다.
암 치료는 원발성 종양 부위로부터 떨어진 다른 조직 또는 기관에서의 전이성 병변 수 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후에, 전이성 병변의 수는 치료 전 수에 비해 약 5% 이상만큼 감소될 것이고; 더 바람직하게는, 전이성 병변의 수는 약 10% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 20% 이상만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 약 30% 이상만큼 감소되며; 더 바람직하게는, 약 40% 이상만큼 감소되고; 더욱 더 바람직하게는, 약 50% 이상만큼 감소되며; 가장 바람직하게는, 약 75% 이상만큼 감소된다. 전이성 병변의 수는 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 전이성 병변의 수는 맨눈으로 또는 특정 배율에서 보이는 전이성 병변의 수를 계수함으로써 측정될 수 있다. 바람직하게는, 특정 배율은 2×, 3×, 4×, 5×, 10× 또는 50×이다.
암 치료는 운반체를 단독으로 받는 집단과 비교할 때 치료되는 대상체 집단의 평균 생존 시간 증가를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 더 바람직하게는, 60일 초과; 더 바람직하게는, 90일 초과; 및 가장 바람직하게는, 120일 초과만큼 증가될 것이다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는, 예를 들어, 활성 조성물을 이용하는 치료의 개시 후 집단에 대한 평균 생존 길이를 계산함으로써 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간 증가는 또한, 예를 들어, 활성 조성물에 의한 치료의 제1 라운드의 완료 후 집단에 대한 평균 생존 길이를 계산함으로써 측정될 수 있다.
암 치료는 비치료 대상체 집단과 비교할 때 치료되는 대상체 집단의 평균 생존 시간 증가를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 더 바람직하게는, 60일 초과; 더 바람직하게는, 90일 초과; 및 가장 바람직하게는, 120일 초과만큼 증가될 것이다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는, 예를 들어, 활성 조성물을 이용하는 치료의 개시 후 집단에 대한 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간 증가는 또한, 예를 들어, 활성 조성물에 의한 치료의 제1 라운드의 완료 후 집단에 대한 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다.
암 치료는 본 명세서에 기재된 조성물이 아닌 약물을 이용하는 단일요법을 받는 집단과 비교할 때 치료되는 대상체 집단의 평균 생존 시간 증가를 초래할 수도 있거나 초래할 수 있다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 더 바람직하게는, 60일 초과; 더 바람직하게는, 90일 초과; 및 가장 바람직하게는, 120일 초과만큼 증가될 것이다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는, 예를 들어, 활성 조성물을 이용하는 치료의 개시 후 집단에 대한 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간 증가는 또한, 예를 들어, 활성 조성물에 의한 치료의 제1 라운드의 완료 후 집단에 대한 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다.
암 치료는 운반체를 단독으로 받는 집단과 비교할 때 치료되는 대상체 집단의 사망률 감소를 초래할 수 있다. 암 치료는 비치료 집단과 비교할 때 치료되는 대상체 집단의 사망률 감소를 초래할 수 있다. 암 치료는 본 명세서에 기재된 조성물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 프로드러그, 대사물질, 유사체 또는 유도체가 아닌 약물을 이용하는 단일요법을 받는 집단과 비교할 때 치료되는 대상체 집단의 사망률의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 사망률은 2% 초과; 더 바람직하게는, 5% 초과; 더 바람직하게는, 10% 초과; 및 가장 바람직하게는, 25% 초과만큼 감소될 것이다. 치료되는 대상체 집단의 사망률 감소는 임의의 재현 가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 집단의 사망률 감소는, 예를 들어, 활성 조성물에 의한 치료의 개시 후 집단에 대해 단위 시간당 질환-관련 사망의 평균 수를 계산함으로써 측정될 수 있다. 집단의 사망률 감소는 또한, 예를 들어, 활성 조성물에 의한 치료의 제1 라운드의 완료 후 집단에 대해 단위 시간당 질환-관련 사망의 평균 수를 계산함으로써 측정될 수 있다.
암 치료는 종양 성장률의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후에, 종양 성장률은 치료 전 수에 대해 적어도 5%만큼 감소될 것이고; 더 바람직하게는, 종양 성장률은 적어도 10%만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 적어도 20%만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 적어도 30%만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 적어도 40%만큼 감소되고; 더 바람직하게는, 적어도 50%만큼 감소되고; 훨씬 더 바람직하게는, 적어도 50%만큼 감소되고; 가장 바람직하게는, 적어도 75%만큼 감소된다. 종양 성장률은 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 성장률은 단위 시간당 종양 직경의 변화에 따라 측정될 수 있다.
암 치료는 종양 재성장의 감소를 초래할 수 있다. 바람직하게는, 치료 후에, 종양 재성장은 5% 미만일 것이고; 더 바람직하게는, 종양 재성장은 10% 미만일 것이고; 더 바람직하게는, 20% 미만일 것이고; 더 바람직하게는, 30% 미만일 것이고; 더 바람직하게는, 40% 미만일 것이고; 더 바람직하게는, 50% 미만일 것이고; 훨씬 더 바람직하게는, 50% 미만일 것이고; 가장 바람직하게는, 75% 미만일 것이다. 종양 재성장은 임의의 재현 가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 종양 재성장은, 예를 들어, 치료 후 이전 종양 수축 후의 종양 직경 증가를 측정함으로써 측정된다. 종양 재성장의 감소는 치료가 중단된 후 다시 일어나는 종양의 부전에 의해 나타난다.
"접촉하는"은 이의 보통의 의미에 따라 사용되고, 적어도 2개의 별개의 종(예를 들어, 생체분자 또는 세포를 포함하는 화학적 화합물)이 반응하거나, 상호 작용하거나 또는 물리적으로 접촉되기에 충분히 근접하게 되는 과정을 지칭한다. 그러나, 얻어진 반응 생성물이 첨가된 시약 간의 반응으로부터 직접적으로 또는 반응 혼합물에서 생성될 수 있는 첨가된 시약 중 하나 이상으로부터의 중간체로부터 생성될 수 있다는 것이 인식되어야 한다. 일부 실시형태에서, 접촉은, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 리보핵산을 엔도뉴클레아제 및 인핸서 요소와 상호작용시키는 것을 포함한다.
"대조군" 샘플 또는 값은 시험 샘플에 대한 비교를 위해 기준으로서, 보통 알려진 기준의 역할을 하는 샘플을 지칭한다. 예를 들어, 시험 샘플은 시험 조건으로부터, 예를 들어, 시험 화합물의 존재 하에 취해질 수 있고, 예를 들어, 시험 화합물의 부재 하에(음성 대조군) 또는 알려진 화합물의 존재 하에(양성 대조군), 알려진 조건으로부터의 샘플과 비교될 수 있다. 대조군은 또한 다수의 시험 또는 결과로부터 모은 평균값을 나타낼 수 있다. 당업자는 대조군이 임의의 수의 파라미터의 평가를 위해 설계될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 대조군은 약학적 데이터(예를 들어, 반감기) 또는 치료적 측정(예를 들어, 부작용의 비교)에 기반하여 치료적 이점을 비교하기 위해 고안될 수 있다. 당업자는 표준 대조군이 주어진 상황에서 가장 적절하고 표준 대조군 값에 대한 비교에 기반하여 데이터를 분석할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 표준 대조군은 또한 데이터의 유의도(예를 들어, 통계학적 유의도)를 결정하는 데 가치가 있을 수 있다. 예를 들어, 주어진 파라미터에 대한 값이 표준 대조군에서 크게 변한다면, 시험 샘플 중의 변화는 유의한 것으로 간주되지 않을 것이다.
본 명세서에 정의되는 바와 같은 용어 "저해", "저해하다", "저해하는" 등은 저해제가 존재하지 않을 때의 활성 또는 기능에 비해 생체분자 또는 생물학적 시스템의 활성 또는 기능에 부정적으로 영향을 미치는 것(예를 들어, 감소시키는 것)을 의미한다. 일부 실시형태에서, 저해는 질환 또는 질환의 증상 감소를 지칭한다.
활성체(예를 들어, 작용제) 상호작용에 대해 본 명세서에 정의되는 바와 같은 용어 "활성화", "활성화하다", "활성화하는" 등은 활성체가 존재하지 않을 때 활성 또는 기능에 비해 생체분자 또는 생물학적 시스템의 활성 또는 기능에 긍정적으로 영향을 미치는(예를 들어, 증가시키는) 것을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 용어 "투여하는"은 대상체에 대한 경구 투여, 좌약 투여, 국소 접촉, 정맥내, 비경구, 복강내, 근육내, 병변내, 척추강내, 두개내, 비강내 또는 피하 투여, 또는 서방출 장치, 예를 들어, 미니-삼투압 펌프의 이식을 의미한다. 투여는 비경구 및 경점막(예를 들어, 협측, 설하, 구개, 잇몸, 비강, 질, 직장 또는 경피)를 포함하는 임의의 경로에 의한다. 일부 실시형태에서, 투여는 종양에 대한 직접 투여를 포함한다. 비경구 투여는, 예를 들어, 정맥내, 근육내, 세동맥내, 진피내, 피하, 복강내, 심실내 및 두개내를 포함한다. 다른 전달 방식은 리포좀 제형의 사용, 정맥내 주입, 경피 패치 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. "공동 투여하다"는 본 명세서에 기재된 조성물이 1종 이상의 추가적인 요법(예를 들어, 항암제 또는 화학치료)의 투여와 동시에, 투여 직전에 또는 투여 직후에 투여된다는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물은 단독으로 투여될 수 있거나 또는 환자에게 공동 투여될 수 있다. 공동 투여는 개개로 또는 병용으로의(1종 초과의 화합물 또는 제제) 화합물의 동시 또는 순차적 투여를 의미한다. 따라서, 제제는 또한 원한다면 다른 활성 물질과(예를 들어, 대사 분해를 감소시키기 위해) 조합될 수 있다. 본 명세서에 기재된 조성물은 경피로, 국소 경로로 전달될 수 있고, 어플리케이터 스틱, 용액, 현탁액, 에멀션, 겔, 크림, 연고, 페이스트, 젤리, 도료, 분말 및 에어로졸로서 제형화될 수 있다. 경구 제제는 환자에 의한 섭취에 적합한 정제, 알약, 분말, 드라제, 캡슐, 액체, 로젠지, 카셰, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등을 포함한다. 고체 형태 제제는 분말, 정제, 알약, 캡슐, 카셰, 좌약 및 분산 가능한 과립을 포함한다. 액체 형태 제제는 용액, 현탁액 및 에멀션, 예를 들어, 물 또는 물/프로필렌 글리콜 용액을 포함한다. 본 명세서에 기재된 조성물은 지속 방출 및/또는 편안함을 제공하기 위해 성분을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 성분은 고분자량, 음이온성 점액모방(mucomimetic) 중합체, 겔화 다당류 및 미세하게 분열된 약물 담체 기질을 포함한다. 이들 성분은 미국 특허 제4,911,920호; 제5,403,841호; 제5,212,162호; 및 제4,861,760호에서 더욱 상세하게 논의된다. 이들 특허의 전체 내용은 모든 목적을 위해 본 명세서에 이들의 전문이 참조에 의해 원용된다. 본 명세서에 기재된 조성물은 또한 신체에서 서방출을 위한 미소구체로서 전달될 수 있다. 예를 들어, 미소구체는 피하로 느리게 방출되는 약물-함유 미소구체의 진피내 주사를 통해(문헌[Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7:623-645, 1995]; 생분해성 및 주사 가능한 겔 제형으로서(예를 들어, 문헌[Gao Pharm. Res. 12:857-863, 1995] 참조); 또는 경구 투여용 미소구체로서(예를 들어, 문헌[Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 49:669-674, 1997] 참조) 투여될 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물의 제형은 세포막과 융합되거나 흡수되는 리포솜의 사용에 의해, 즉, 세포의 표면 막 단백질 수용체에 결합하여 내포작용을 초래하는 리포솜에 부착되는 수용체 리간드를 사용함으로써, 전달될 수 있다. 리포솜을 이용함으로써, 특히, 리포솜 표면이 표적 세포에 특이적인 수용체 리간드를 운반하는 경우에, 또는 다르게는 특정 기관에 우선적으로 보내지는 경우에, 생체내 표적 세포 내로 본 명세서에 기재된 조성물의 전달에 집중할 수 있을 것이다. (예를 들어, 문헌[Al-Muhammed, J. Microencapsul. 13:293-306, 1996]; 문헌[Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6:698-708, 1995]; 문헌[Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46:1576-1587, 1989] 참조). 본 명세서에 기재된 조성물은 또한 나노입자로서 전달될 수 있다.
포유류에게 투여되는 투약량 및 빈도(단일 또는 다회 용량)는 다양한 인자, 예를 들어, 포유류가 다른 질환을 앓고 있는지의 여부, 및 이의 투여 경로; 수용자의 크기, 연령, 성별, 건강상태, 체중, 체질량지수 및 식이요법; 치료 중인 질환의 특성 및 증상 정도(예를 들어, 암(예를 들어, 전립선암, 거세-저항성 전립선암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 교모세포종, 난소암, 폐암, 편평세포 암종(예를 들어, 두부, 경부 또는 식도), 결장직장 암, 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 림프종, B 세포 림프종 또는 다발성 골수종)의 증상), 동시 치료의 종류, 치료 중인 질환으로부터의 합병증 또는 다른 건강-관련 문제에 따라 다를 수 있다. 다른 치료 요법 또는 제제는 본 출원인의 발명의 방법 및 화합물과 함께 사용될 수 있다. 확립된 투약량의 조절 및 조작(예를 들어, 빈도 및 지속기간)은 당업자의 능력 내에서 용이하다.
본 명세서에 기재된 화합물 또는 조성물에 대해, 치료적 유효량은 세포 배양 분석으로부터 초기에 결정될 수 있다. 표적 농도는 본 명세서에 기재되거나 당업계에 공지된 방법을 이용하여 측정한 바와 같은 본 발명에 기재된 방법을 달성할 수 있는 활성 화합물(들)의 농도일 것이다.
당업계에 잘 공지된 바와 같이, 인간 용도를 위한 치료적 유효량은 또한 동물 모델로부터 결정될 수 있다. 예를 들어, 인간에 대한 용량은 동물에서 효과적인 것으로 발견된 농도를 달성하도록 제형화될 수 있다. 인간에서 투약량은 상기 기재한 바와 같이 화합물 유효성을 모니터링하고, 투약량을 상향 또는 하향 조절함으로써 조절될 수 있다. 상기 기재한 방법 및 기타 방법에 기반하여 인간에서 최대 효능을 달성하는 용량을 조절하는 것은 당업자의 능력 내에서 용이하다.
투약량은 환자의 필요요건 및 사용 중인 화합물에 따라 다를 수 있다. 환자에 투여되는 용량은 시간에 걸쳐 환자에서 유리한 치료 반응을 달성하는 데 충분하여야 한다. 용량의 크기는 또한 임의의 유해한 부작용의 존재, 특성 및 정도에 의해 결정될 것이다. 특정 상황을 위한 적절한 투약량의 결정은 실행자의 기술 이내이다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적의 용량 미만인 보다 적은 투약량으로 개시된다. 이후에, 투약량은 상황 하에서 최적의 효과에 도달될 때까지 적은 증분으로 증가된다.
투약량 및 간격은 치료 중인 특정 임상 적응증에 효과적인 투여되는 화합물 수준을 제공하기 위해 개개로 조절될 수 있다. 이는 개체의 질환 상태의 중증도에 비례한 치료 요법을 제공할 것이다.
본 명세서에 제공된 교시를 이용하여, 실질적인 독성을 야기하지 않고, 또한 특정 환자에 의해 입증되는 임상 증상을 치료하는 데 유효한, 효과적인 예방적 또는 치료적 치료 요법이 계획될 수 있다. 이 계획은 화합물 효능, 상대적 생체 이용 가능성, 환자 체중, 유해한 부작용의 존재 및 중증도, 바람직한 투여 방식 및 선택된 제제의 독성 프로파일과 같은 인자를 고려함에 의한 활성 화합물의 주의깊은 선택을 수반하여야 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "약"은 특정 값을 포함하는 값의 범위를 의미하며, 이는 당업자가 특정 값과 합리적으로 유사하다고 간주할 것이다. 일부 실시형태에서, 용어 "약"은 당업계에서 일반적으로 허용되는 측정을 이용하여 표준 편차 이내를 의미한다. 일부 실시형태에서, 약은 특정 값의 +/- 10%로 연장되는 범위를 의미한다. 일부 실시형태에서, 약은 특정 값을 의미한다.
본 명세서에 기재되는 바와 같은, 선행 기술에 비추어 해결될 객관적 기술 문제는 NKG2D 리간드-발현(NKG2D-L+) 질환 및 병태를 예방 및 치료하기 위한 개선된 조성물 및 방법을 제공하는 것이다. 일부 실시형태에서, 이러한 NKG2D 리간드-발현 질환 및 병태는 암 및 자가면역질환을 포함한다. 본 명세서에서 이 문제에 대한 해결책이 처음으로 제공된다. 재조합 단백질의 클리핑은 세포 배양물에서의 주된 문제이다. 재조합 DNA 기술에 의해 박테리아 및 포유류에서 생성된 단백질은 종종 배양물에서 완전히 또는 부분적으로 분해된다. 이는 저비용에서 종종 효율 및 고생산성이 요구되는 생명공학 산업에 대한 주요한 과제를 제시한다. 따라서, 클리핑 위험의 경감 또는 클리핑 수준의 최소화는 재조합 단백질-기반 치료에 중요하다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 선행기술 작제물(들)에 비해 세포 내에서 예상치 못한, 우수하고 보다 높은 안정성(예를 들어, 보다 낮은 클리핑)을 입증하였다(예를 들어, 도 5a 내지 도 5c 참조). 일부 실시형태에서, 명세서에 기재된 조성물의 조합물 및 변형된 CHO 세포주(예를 들어, 비활성화 또는 넉아웃 매트립타제 유전자(CHO-Mako)를 포함하는 CHO 세포)의 사용은 클리핑 위험을 최소 수준으로 완화시킨다. 또한, 본 명세서에 기재된 조성물은 우수한 시험관내 및 생체내 치료 효과를 나타내었다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 ADCC 활성을 개선시키는 데 우수한 효과를 입증하였다(예를 들어, 도 9a 내지 도 9e 참조). 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 한 자리 수 nM EC50으로 모든 NKG2D 리간드에 대한 우수한 결합 특이성을 나타내었다(예를 들어, 도 11a 내지 도 11b, 도 12a 내지 도 12b 참조). 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 NKG2D-L+ 종양 사멸에서 우수한 생체내 효능을 입증하였다(예를 들어, 도 18, 도 24a 내지 도 24b 참조). 동등하게 중요하게, 본 명세서에 기재된 조성물은 이들의 개발 능력 평가에 기반하여 저위험 및 중간의 기술적 노력에 의한 우수한 개발능력을 입증하였다.
조성물
따라서, 2개의 단량체를 포함하는 이량체 단백질이 본 명세서에 제공되되, 각각의 단량체는 (1) 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체; (2) 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체; (3) 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 연결하는 제1 펩타이드 링커; 및 (4) 면역글로불린(Ig)의 단편 결정화 가능 영역(Fc 영역)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 2개의 단량체는 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 2개의 단량체는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 상이한 아미노산 서열을 가진다.
일부 실시형태에서, 이량체 단백질의 각각의 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 NKG2D 서열의 세포외 부분, 예를 들어, 인간 NKG2D의 아미노산 잔기 78 내지 216; 뮤린 NKG2D의 78 내지 232, 94 내지 232 또는 92 내지 232를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질은 NKG2D의 세포외 도메인의 일부를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질의 NKG2D의 세포외 도메인은 N-말단에서, C-말단에서, 또는 둘 다에서 단축될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질을 생성하는 데 사용되는 세포외 도메인의 N-말단은 폴리펩타이드의 전체 세포외 부분에 대해 하나 이상의 아미노산 잔기에 의해, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60 등만큼 단축될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질을 생성하는 데 사용되는 세포외 도메인의 C-말단은 폴리펩타이드의 전체 세포외 부분에 대해 하나 이상의 아미노산 잔기에 의해, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60 등만큼 단축될 수 있다. 예로서 인간 NKG2D를 이용하여, 이량체 단백질은 인간 NKG2D의 세포외 도메인의 단편을 포함할 수 있으며, 여기서, 도메인의 N-말단은 아미노산 잔기 79, 80, 81, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 약 110, 약 120, 약 130, 약 140 또는 약 150에서 시작된다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질은 NKG2D의 세포외 도메인의 단편을 포함할 수 있으며, 여기서, 도메인의 C-말단은 아미노산 잔기 231, 230, 229, 228, 227, 226, 225, 224, 223, 222, 221, 220, 219, 218, 217, 216, 215, 214, 213, 212, 211, 210, 209, 208, 207, 206, 205 등에서 종결된다. NKG2D 서열의 세포외 도메인의 각 말단에서 이러한 결실이 조합될 수 있다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어지거나, 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어지거나, 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 2에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어지거나, 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 3에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어지거나, 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 4에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 2에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 3에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 4에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 면역글로불린 G (IgG)의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgG1의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgG2의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgG3의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgG4의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 마우스 IgG2a의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgM의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgA1의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgA2의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgD의 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 인간 IgE의 Fc 영역을 포함한다.
면역글로불린의 Fc 영역은 면역 방어를 매개함에 있어서 중요한 역할을 한다. FcyR은 대식세포, NK 세포, 수지상 세포, B 세포, 호중구 및 비만 세포를 포함하는 다수의 세포 유형에 대한 막관통 당단백질로서 대부분 발현된다. Fc-매개 활성은 Fc-FcyR 상호작용을 통한 효과기 세포의 보충(recruitment)을 포함한다. 기능적으로 구별될 수 있는 2가지 부류의 Fc 수용체가 있다: 활성화 Fc 수용체 부류 및 저해 Fc 수용체 부류. 활성화 Fc 수용체는 인간 FcyRIA, FcyRIIA 및 FcyRIIIA뿐만 아니라 이들의 뮤린 오솔로그, 즉, FcyRI, FcyRIII FcyRIV를 포함한다. 활성화 FcyR은 ADCC 및 ADCP를 매개하고, 면역 복합체의 내포작용을 유발하여 항원 제시를 야기하고, 사이토카인 및 전염증 인자의 생성 및 방출에 기여한다. IgG 구조 및 작용 메커니즘의 일반적 검토를 위해, 문헌[Liu et al. (2008; Immunological Reviews, 222: 9-27)]을 참조한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 Fc 부분은 활성화 Fc 수용체, 및 일부 실시형태에서, 활성화 Fc Ig 도메인에 결합하고, 이량체화를 가능하게 하는 힌지 영역을 포함하는 도메인이다.
본 개시내용에 유용한 이량체 단백질의 Fc 부분은 이를 종-특이적으로 만드는 데 용이하게 적합할 수 있다. 뮤린 시스템, 예를 들어, 마우스로부터 유래된 세포에서 사용하기 위한 일부 실시형태에서, 이량체 단백질을 생성하는 데 사용되는 Fc 단편은 뮤린 유래의 단편이다. 일부 실시형태에서, 뮤린 IgG2a의 Fc 단편이 사용된다. 인간 대상체에서 사용하기 위한 일부 실시형태에서, 이량체 단백질을 생성하는 데 사용되는 Fc 단편은 인간 유래의 단편이다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질의 각 단량체는 활성화 Fc Ig 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc는 인간 면역글로불린(IgG)의 단편 결정화 가능 영역(Fc)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 면역글로불린은 IgGl이다.
일부 실시형태에서, Fc 단편의 돌연변이체 또는 알로타입은 본 명세서에 기재된 이량체 단백질에서 사용된다. Fc와 이의 수용체의 상호 작용, Fc의 효과기 기능뿐만 아니라 Fc-함유 분자의 반감기에 영향을 미칠 수 있는, Fc 도메인 내의 다수의 유용한 돌연변이가 기재되었다. 이들은 Fc에서 탄수화물 모이어티에 대한 특정 아미노산 치환 및/또는 변형을 포함한다. 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Liu et al., 2008, Immunological Reviews, 222:9-27]; 문헌[Nimmerjahn & Ravetch, 2007, Curr. Opin. Immunol., 19(2): 239-45]을 참조한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 Fc는 FcyRIIIA에 대해 보다 높은 친화도를 나타내지만, FcyRIIB에 대해서는 그렇지 않고, 이에 의해 ADCC를 촉진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 Fc는 FcyRIIIA에 대해 보다 높은 친화도 및 FcyRIIB에 대한 감소된 결합을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 Fc는 돌연변이 Ser298Ala/Glu333Ala/Lys334Ala를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 Fc는 개선된 ADCC를 발휘하도록 예상되는 돌연변이 Ser239Asp/Ile332Glu를 포함한다. ADCC를 향상시키기 위한 다른 돌연변이는 Ser239Asp/Ala330Leu/Ile332Glu, Ser239Asp/Ser298Ala/Ile332Ala 및 Phe243Leu/Arg292Pro/Tyr300Leu/Val305Ile/Pro396Leu을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 Fc는 "Fc 침묵"이며, 즉, 효과기 세포와의 최소 상호 작용을 갖는다. 침묵화된 효과기 기능은 항체의 Fc 영역의 돌연변이에 의해 얻을 수 있고, 당업계에 기재되어 있다: LALA 및 N297A(문헌[Strohl, W., 2009, Curr. Opin. Biotechnol. vol. 20(6):685-691]); 및 D265A(문헌[Baudino et al., 2008, J. Immunol. 181: 6664-69]) 또한 Heusser 등의 WO2012065950를 참조한다. Fc 침묵 돌연변이의 예는 IgG1 Fc 아미노산 서열에서 L234A 및 L235A 돌연변이, DAPA(D265A, P329A)(예를 들어, 미국 특허 제6,737,056호), N297A, DANAPA(D265A, N297A 및 P329A) 및/또는 LALADANAPS(L234A, L235A, D265A, N297A 및 P331S)를 포함하는 LALA 돌연변이체를 포함한다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 5, 6, 63, 64, 65 또는 68에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 5에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 6에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 63에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 64에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 65에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 68에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 5, 6, 63, 64, 65 또는 68의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 두 단량체 중 하나 또는 둘 다는 N-말단에서 C-말단까지, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 제1 펩타이드 링커, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체 및 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 펩타이드 링커 없이 Fc 영역에 직접 융합된다. 일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 제2 펩타이드 링커를 통해 Fc 영역과 연결된다.
일부 실시형태에서, 이량체는 2개의 동일한 단량체를 포함하며, 여기서, 각 단량체는 N-말단에서 C-말단까지, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 제1 펩타이드 링커, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체 및 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 펩타이드 링커 없이 Fc 영역에 직접 융합된다. 일부 실시형태에서, 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 제2 펩타이드 링커를 통해 Fc 영역과 연결된다.
일부 실시형태에서, 두 단량체 중 하나 또는 둘 다는 N-말단에서 C-말단까지, Fc 영역, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 제1 펩타이드 링커 및 제2 NKG2D 펩타이드 또는 변이체 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 펩타이드 링커 없이 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 직접 융합된다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 제2 펩타이드 링커를 통해 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 연결된다.
일부 실시형태에서, 이량체는 2개의 동일한 단량체를 포함하며, 여기서, 각 단량체는 N-말단에서 C-말단까지, Fc 영역, 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 제1 펩타이드 링커, 및 제2 NKG2D 펩타이드 또는 변이체 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 펩타이드 링커 없이 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 직접 융합된다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 제2 펩타이드 링커를 통해 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 연결된다.
일부 실시형태에서, 두 단량체 중 하나 또는 둘 다는 1 또는 2개의 추가적인 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 추가적인 1 또는 2개의 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체 각각은 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 추가적인 1 또는 2개의 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체 각각은 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 링커는 펩타이드 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 가요성 펩타이드 링커이다. 일부 실시형태에서, 가요성 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 또는 제2 펩타이드 링커)는 약 20개 이하(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개)의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 약 12개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12개를 포함한다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 또는 제2 펩타이드 링커)는 약 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 또는 제2 펩타이드 링커)는 약 4 내지 약 16개(예를 들어, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16개)의 아미노산 길이의 범위이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 또는 제2 펩타이드 링커)는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 또는 제2 펩타이드 링커)는 25개 초과의 아미노산 길이이다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 또는 제2 펩타이드 링커)는 다음의 아미노산 중 둘 이상을 포함한다: 글리신, 세린, 알라닌 및 프롤린. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 글리신-세린 링커이다. 일부 실시형태에서, 글리신-세린 링커는 식 (GS)n으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12(서열번호 7)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGGS)n의 식으로 나타내는 G4S 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 8)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGGA)n의 식으로 나타내는 G4A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 12)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGGP)n의 식으로 나타내는 G4P 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 13)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGA)n의 식으로 나타내는 G3A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 14)이다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 링커는 (GGGS)n의 식으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 9)이다. 일부 실시형태에서, 글리신-세린 링커는 GGGSGGGS(서열번호 10)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 글리신-세린 링커는 GGGGS(서열번호 11)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 글리신-세린 링커는 GGGS(서열번호 66)의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 약 20개 이하의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 약 12개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12개를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 약 4 내지 약 16개의 아미노산 길이의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 약 2 내지 약 25개의 아미노산 길이의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 25개 초과의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 다음의 아미노산 중 둘 이상을 포함한다: 글리신, 세린, 알라닌 및 프롤린. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 글리신-세린 링커이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 식 (GS)n으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12(서열번호 7)이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 (GGGGS)n의 식으로 나타내는 G4S 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 8)이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 (GGGGA)n의 식으로 나타내는 G4A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 12)이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 (GGGGP)n의 식으로 나타내는 G4P 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 13)이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 (GGGA)n의 식으로 나타내는 G3A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 14)이다. 일부 실시형태에서, 제1 펩타이드 링커는 (GGGS)n의 식으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 9)이다. 일부 실시형태에서, 제1 링커는 GGGSGGGS(서열번호 10)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 링커는 GGGGS(서열번호 11)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 링커는 GGGS(서열번호 66)의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 약 20개 이하의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 약 12개 이하의 아미노산 잔기, 예를 들어, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12개를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 약 4 내지 약 16개의 아미노산 길이의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 약 2 내지 약 25개의 아미노산 길이의 범위에 있다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 25개 초과의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 다음의 아미노산 중 둘 이상을 포함한다: 글리신, 세린, 알라닌 및 프롤린. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 글리신-세린 링커이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 식 (GS)n으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12(서열번호 7)이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 (GGGGS)n의 식으로 나타내는 G4S 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 8)이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 (GGGGA)n의 식으로 나타내는 G4A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 12)이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 (GGGGP)n의 식으로 나타내는 G4P 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 13)이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 (GGGA)n의 식으로 나타내는 G3A 링커이되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 14)이다. 일부 실시형태에서, 제2 펩타이드 링커는 (GGGS)n의 식으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5(서열번호 9)이다. 일부 실시형태에서, 제2 링커는 GGGSGGGS(서열번호 10)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 링커는 GGGGS(서열번호 11)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 제2 링커는 GGGS(서열번호 66)의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 펩타이드 링커(예를 들어, 제1 펩타이드 링커 및/또는 제2 펩타이드 링커)는 프로테아제-의존적 절단 가능 부위를 포함한다. 프로테아제-절단 가능 펩타이드 링커의 예는 MMP 민감성 링커 GGPLGL W AGG(서열번호 15) 및 인자 Xa-민감성 링커 IEGR(서열번호 16)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 당업자는 다양한 절단 가능 서열이 본 명세서에 제공된 링커에 대해 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
일부 실시형태에서, 연결 분자 또는 링커는 비-펩타이드 링커일 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 비-펩타이드 링커는 서로 연결된 둘 이상의 반복 단위를 포함하는 생체 적합 중합체이다. 비-펩타이드 중합체의 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜(PPG), 코-폴리(에틸렌/프로필렌) 글리콜, 폴리옥시에틸렌(POE), 폴리우레탄, 폴리포스파젠, 다당류, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리아크릴 아마이드, 폴리아크릴레이트, 폴리사이아노아크릴레이트, 지질 중합체, 키틴, 하이알루론산 및 헤파린을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. Fc 융합 분자에 유용한 비-펩타이드 링커의 더 상세한 설명에 대해, 예를 들어, 본 명세서에 참조에 의해 원용된 WO/2006/107124를 참조한다. 일부 실시형태에서, 이러한 링커는 특정 링커에 따라서 약 1 kDa 내지 50 kDa의 분자량 범위를 가질 것이다. 일부 실시형태에서, 전형적인 PEG는 약 1 내지 5 kDa의 분자량을 갖고, 폴리에틸렌 글리콜은 약 5 kDa 내지 50 kDa의 분자량, 더 바람직하게는 약 10 kDa 내지 40 kDa을 갖는다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 또는 69에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 17에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 19에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 21에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 23에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 25에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 27에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 29에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 31에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 33에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 35에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 37에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 39에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 41에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 43에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 45에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 47에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 49에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 51에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 53에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 55에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 57에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 59에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 61에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 69에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 이량체는 2개의 단량체를 포함하며, 여기서, 각 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 또는 69에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 또는 69의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 이량체는 2개의 단량체를 포함하며, 여기서 각 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 또는 69의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 대안적으로, 이들로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 또는 70에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 18에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 20에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 22에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 24에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 26에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 28에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 30에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 32에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 34에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 36에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 38에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 40에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 42에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 44에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 46에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 48에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 50에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 52에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 54에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 56에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 58에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 60에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 62에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 70에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 이량체는 2개의 단량체를 포함하며, 여기서, 각 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 또는 70에 대해 적어도 85%(예를 들어, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%)의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 또는 70을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 18을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 20을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 22를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 24를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 26을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 28을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 30을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 32를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 34를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 36을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 38을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 40을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 42를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 44를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 46을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 48을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 50을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 52를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 54를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 56을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 58을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 60을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 62를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 단량체는 서열번호 70을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 이량체는 2개의 단량체를 포함하며, 여기서 각 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 또는 70을 포함하거나 또는 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된다.
일부 실시형태에서, 2개의 단량체는 공유적으로 연결된다. 예를 들어, 단량체의 제1 생체접합 반응기(예를 들어, -NH2, -COOH, -N-하이드록시석신이미드 또는 -말레이미드)와 본 명세서에 제공된 다른 단량체의 제2 생체접합 반응기(예를 들어, 설프하이드릴, 황-함유 아미노산, 아민, 아민 측쇄 함유 아미노산, 또는 카복실레이트) 사이의 접합은, 예를 들어, 공유 결합 또는 링커에 의한 직접 접합일 수 있다. 일부 실시형태에서, 단량체는 Cys-Cys 브리지를 통해 연결된다.
일부 실시형태에서, 이량체 단백질은 약물 모이어티를 추가로 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, "약물 모이어티"는 표적화된 세포(예를 들어, 암 세포)에 대한 전달용으로 의도되는 치료제를 지칭한다. 일반적으로, 약물 모이어티는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 단량체의 카복시 말단에 접합된다(예를 들어, 직접 또는 간접적으로 공유 결합된다). 그러나, 당업자는 일부 실시형태에서, 약물 모이어티가 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 단량체의 아미노 말단에 접합된다는 것을 인식한다. "약물 모이어티"의 예는 약물(예를 들어, 소분자), 독소(예를 들어, 림프독소 패밀리의 분자), 방사성 핵종, 효소, 사이토카인, 케모카인, 화합물 활성화 또는 혈관신생 차단으로 향하는 항체 단일쇄 가변 단편, 또는 본질적으로 임의의 항종양 화합물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 단량체의 아미노 말단 및/또는 카복시 말단에 직접 융합된다.
일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 사이토카인 또는 이의 기능성 부분을 포함한다. 사이토카인은 면역 세포 기능을 조절할 수 있는 단백질 및 펩타이드이다. 사이토카인의 "기능성 부분"은 면역 세포 기능을 조절하는(예를 들어, 하나 이상의 사이토카인 수용체에 결합하는) 능력을 보유하는 사이토카인 단편이다. 사이토카인의 예는 형질전환 성장인자 베타(TGFβ), 인터페론- 알파(IFN-a), 인터페론-베타(IFN-β), 및 인터페론-감마(IFN-γ), 인터류킨(예를 들어, IL-1 내지 IL-36, 특히, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15 및 IL-18), 종양 괴사 인자(예를 들어, TNF-알파 및 TNF-베타), 적혈구 생성소(EPO), MIP3a, 단핵구 화학주성 단백질(MCP)-l, 세포내 접착 분자(ICAM), 대식세포 집락 자극 인자(M-CSF), 과립구 집락 자극 인자(G-CSF) 및 과립구-대식세포 집락 자극인자(GM-CSF)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 TGFβ, IL-2, IL-4, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21 및 IFN-a로 이루어진 군으로부터 선택된 사이토카인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 사이토카인/사이토카인 수용체 이형복합체를 포함한다. 사이토카인/사이토카인 수용체 이형복합체는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Rowley et al., Eur J Immunol. 2009 Feb; 39(2): 491-506]에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 IL-15(예를 들어, GenBank AAX37025)/IL-15Ra(예를 들어, GenBank AAP69528.1) 이형복합체를 포함하는 약물 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 IL-15(GenBank AAX37025)의 아미노산 22 내지 135에 융합된 인간 IL-15 수용체 알파(hIL15Ra, GenBank AAP69528.1)의 아미노산 31 내지 107을 포함한다. 일부 실시형태에서, IL-15 및 IL-15Ra는 링커, 예를 들어, 20-아미노산(G4S)4(서열번호 3) 링커에 의해 분리된다. IL-15/IL-15Ra 이형복합체를 포함하는 이량체 NKG2D-Fc 키메라는 실시예 부문에 추가로 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 이량체 NKG2D-Fc 키메라는 IL-12p35 및 IL-12p40의 이형복합체를 포함하는 약물 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, IL-12p35 및 IL-12p40은 본 명세서에 기재된 펩타이드 링커에 의해 분리된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 IL-23pl9 및 IL-23p40의 이형복합체를 포함하는 약물 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, IL-23pl9 및 IL-23p40은 본 명세서에 기재된 펩타이드 링커에 의해 분리된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 IL-27p28 및 EB 1의 이형복합체를 포함하는 약물 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, IL-27p28 및 EB 1은 본 명세서에 기재된 펩타이드 링커에 의해 분리된다. 일부 실시형태에서, 사이토카인/사이토카인 수용체 이형복합체의 각 서브유닛은 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 상이한 단량체에 상에 있다.
일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 항체 단일쇄 가변 단편(ScFv)이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, "항체 단일쇄 가변 단편"은 짧은 링커 펩타이드와 연결된 면역글로불린의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질을 지칭한다. ScFv 단백질은 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고 본래의 면역글로불린의 특이성을 보유한다. 일부 실시형태에서, ScFv는 면역 관문 단백질(예를 들어, PD1 또는 CTLA4)에 결합한다. 일부 실시형태에서, ScFv는 혈관신생을 차단한다(예를 들어, 혈관신생의 조절자, 예컨대, VEGF에 결합한다).
일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 케모카인이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, "케모카인"은 백혈구의 보충을 자극하는 저분자량 단백질을 지칭한다. 일반적으로, 케모카인은 1차 전염증 매개체, 예컨대, 인터류킨-1(IL-1) 또는 종양 괴사 인자(TNF)에 의해 유도되는 2차 전염증 매개체이다. 케모카인은 4가지 패밀리로 분류될 수 있다: CC 케모카인(예를 들어, CCLl 내지 CCL-28), CXC(예를 들어, CXCL1 내지 CXCL17), C(예를 들어, XCL1, XCL2), 및 CX3C(CX3CL1).
일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 소분자이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, "소분자"는 연구실에서 합성되거나 자연에서 발견되는 비-펩타이드, 비올리고머 유기 화합물을 지칭한다. 소분자 약물의 비제한적 예는 소분자 키나제 저해제(예를 들어, 에베롤림무스, 게피티닙, 이마티닙 등), 브로모도메인 저해제(예를 들어, JQ1, 1-BET 151, RVX-208 등), 항생제(예를 들어, 카나마이신, 네오마이신, 시프로플록사신 등) 및 항바이러스제(예를 들어, 리바비린, 리만타딘, 지도부딘 등)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 소분자는 항종양 화합물이다. 항-종양 화합물은 본 개시내용의 다른 곳에서 더욱 상세하게 논의된다.
일부 실시형태에서, 약물 모이어티는 방사성핵종이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, "방사성핵종"은 의학적으로 유용한 방사성 핵종을 의미한다. 방사성 핵종의 예는 99mTc, 188Re, 186Re, 153Sm, 166Ho, 90Y, 89Sr, 67Ga, 68Ga, mIn, 183Gd, 59Fe, 225Ac, 212Bi, 211At, 45Ti, 60Cu, 61Cu 및 67Cu를 포함한다.
또한 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 또는 70을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 제공된다.
본 명세서에 기재된 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 본 명세서에 추가로 제공된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 예시적인 벡터는 유럽 특허 제3027646 B1호 또는 WO2009/080720에 개시된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 이들 각각의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 단리된 폴리뉴클레오타이드 또는 본 명세서에 기재된 벡터를 포함하는 조성물이 본 명세서에 추가로 제공된다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함한다. "약제학적으로 허용 가능한 부형제" 및 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 대상체에 대한 활성제의 투여 및 대상체에 의한 흡수를 돕고, 환자에 대한 유의미한 유해 독성 효과를 야기하는 일 없이 본 개시내용의 조성물에 포함될 수 있는 물질을 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제의 비제한적 예는 물, NaCl, 생리 식염수 용액, 락트산 링거액, 정상 수크로스, 정상 글루코스, 결합제, 충전제, 붕해제, 윤활제, 코팅제, 감미제, 향미제, 염 용액(예컨대, 링거 용액), 알코올, 오일, 젤라틴, 탄수화물, 예컨대, 락토스, 아밀로스 또는 전분, 지방산 에스테르, 하이드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리딘 및 착색제 등을 포함한다. 이러한 제제는 멸균될 수 있고, 원한다면, 본 개시내용의 화합물과 유해하게 반응하지 않는 보조제, 예컨대, 윤활제, 보존제, 안정제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치기 위한 염, 완충제, 착색제, 및/또는 방향 물질 등과 혼합된다. 당업자는 다른 약제학적 부형제가 본 개시내용에서 유용하다는 것을 인식할 것이다.
또한 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 단리된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터 또는 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하는 세포가 본 명세서에 제공된다.
일부 실시형태에서, 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다.
일부 실시형태에서, 세포는 변형된 CHO 세포이다.
일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포는 비활성화된 매트립타제 유전자 또는 매트립타제 유전자의 넉아웃(결실)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포는 WO2015166427에 기재되어 있는 세포를 포함하며, 이의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 생성 세포주에 대한 적합한 선택 공정은 WO2010/022961 및 WO2015/015419에 개시되어 있으며, 이들 각각의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포에 의해 생성되는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 다른 유형의 세포주(예를 들어, HEK 세포)에 의해 생성되는 것보다 더 강력하다(예를 들어, 도 9 참조). 일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포에 의해 생성된 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 다른 유형의 세포주에 의해 생성된 이량체 단백질보다 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 이상 강력하다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 효력은 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 이의 ADCC 활성을 통해 측정될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포에 의해 생성된 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 다른 유형의 세포주에 의해 생성된 이량체 단백질의 ADCC 활성보다 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 또는 더 높은 ADCC 활성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질의 효력은 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 동력학 결합 친화도 상수(KD)를 통해 측정될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포에 의해 생성된 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 다른 유형의 세포주에 의해 생성된 이량체 단백질의 KD보다 적어도 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10배 더 낮은(즉, 더 강한) NKG2D 리간드에 대한 KD를 갖는다.
일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포에 의해 생성된 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 다른 유형의 세포주(예를 들어, HEK 세포)에 의해 생성된 것보다 더 양호한 생체내 약물동태학(PK) 특성을 갖는다(예를 들어, 도 20 참조). 일부 실시형태에서, PK 특성은 분포 용적(VD), 투여 후 약물의 최대 혈장 농도(Cmax), Cmax에 도달하는 시간(tmax), 단위 시간당 약물이 제거되는 혈장의 용적(CL), 농도-시간 곡선의 적분(단일 용량 후 또는 정상 상태에서)(곡선하 면적, AUC), 약물 농도가 본래 값의 절반에 도달하는 데 필요한 시간(t1/2)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 변형된 CHO 세포에 의해 생성된 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 생체내 PK 값은 다른 유형의 세포주에 의해 생성된 이량체 단백질의 PK 값보다 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 더 양호하다. 일부 실시형태에서, PK 값은 당업계에 공지된 방법에 따라 계산된 VD, t1/2 및/또는 AUC에 기반하여 결정될 수 있다.
본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질은 글리코실화된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질의 Fc 영역은 글리코실화된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질은 비푸코실화(afucosylate)된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질의 Fc 영역은 비푸코실화된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60개의 글리코실화 부위를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60개의 푸코실화 부위를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질의 각 단량체의 글리코실화 수준은 적어도 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질의 각 단량체의 비푸코실화 수준은 적어도 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질의 각 Fc 영역의 글리코실화 수준은 적어도 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 세포에 의해 생성된 이량체 단백질의 각 Fc 영역의 비푸코실화 수준은 적어도 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이다.
실시형태에서, 본 명세서에 기재된 글리코실화된 이량체 단백질은 본 명세서에 기재된 더 적게 글리코실화되거나 또는 글리코실화되지 않은 이량체 단백질에 비해 NKG2D 리간드에 대해 보다 높은(예를 들어, 적어도 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10배 더 큰) 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 글리코실화된 이량체 단백질은 본 명세서에 기재된 더 적게 글리코실화되거나 또는 글리코실화되지 않은 이량체 단백질에 비해 보다 높은(예를 들어, 적어도 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10배 또는 더 큰) ADCC 활성을 갖는다.
일부 실시형태에서, 보다 높은 비푸코실화 수준을 갖는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 보다 낮은 비푸코실화 수준을 갖는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질에 비해 Fc 수용체(예를 들어, CD16)에 대해 보다 높은(예를 들어, 적어도 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10, 20, 30, 40, 50 , 60, 70, 80, 90, 100배 또는 더 큰) 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시형태에서, 보다 높은 비푸코실화 수준을 갖는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 보다 낮은 비푸코실화 수준을 갖는 본 명세서에 기재된 이량체 단백질에 비해 보다 높은(예를 들어, 적어도 약 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10배 또는 더 큰) ADCC 활성을 갖는다.
글리코실화 수준 또는 비푸코실화 수준은, 예를 들어, LC-MS 또는 2AB-HILIC(2-아미노벤즈아마이드(2-AB)-표지된 N-글리칸)에 의해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 또한, 상이한 비푸코실화 수준을 갖는 단백질을 생성하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 단백질은 비푸코실화 효소를 결여하는 세포에서, 또는 푸코실화를 방해하는 RMD의 포함에 의해 생성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 약 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%보다 더 낮은 수준인 클리핑 수준을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 약 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%보다 더 낮은 클리핑 수준을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 선행기술 이량체 작제물의 클리핑 수준보다 적어도 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 더 낮은 클리핑 수준을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 변형된 CHO 세포에서 생성된 이량체 단백질은 상이한 세포 유형에서 생성된 이량체 단백질의 클리핑 수준보다 적어도 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 더 낮은 클리핑 수준을 갖는다.
클리핑 수준은 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 실시예 4에 기재된 방법에 따라 결정될 수 있다.
본 개시내용에 기재된 임의의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 NKG2D 수용체의 내인성 리간드에 결합할 수 있다. 인간에서 공지된 NKG2D-리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 및 ULBP6을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 NKG2D 수용체 리간드의 한 가지 초과의(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8) 유형에 결합할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 한 자릿수 nM EC50로 모두 8개의 리간드에 결합한다(예를 들어, 도 11 참조). 일부 실시형태에서, 리간드에 대한 이량체 분자의 결합 친화도(KD)는 약 10E-06 M 내지 10E-12 M이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 분자의 KD는 약 0.01 nM 내지 50 nM - 예를 들어, 약 0.06 내지 12.97 nM(예를 들어, 약 0.06 nM, 0.07 nM, 0.08 nM, 0.09 nM, 0.1 nM, 0.11 nM, 0.12 nM, 0.13 nM, 0.14 nM, 0.15 nM, 0.16 nM, 0.17 nM, 0.18 nM, 0.19 nM, 0.2 nM, 0.21 nM, 0.22 nM, 0.23 nM, 0.24 nM, 0.25 nM, 0.26 nM, 0.27 nM, 0.28 nM, 0.29 nM, 0.3 nM, 0.31 nM, 0.32 nM, 0.33 nM, 0.34 nM, 0.35 nM, 0.36 nM, 0.37 nM, 0.38 nM, 0.39 nM, 0.4 nM, 0.41 nM, 0.42 nM, 0.43 nM, 0.44 nM, 0.45 nM, 0.46 nM, 0.47 nM, 0.48 nM, 0.49 nM, 0.5 nM, 0.51 nM, 0.52 nM, 0.53 nM, 0.54 nM, 0.55 nM, 0.56 nM, 0.57 nM, 0.58 nM, 0.59 nM, 0.6 nM, 0.61 nM, 0.62 nM, 0.63 nM, 0.64 nM, 0.65 nM, 0.66 nM, 0.67 nM, 0.68 nM, 0.69 nM, 0.7 nM, 0.71 nM, 0.72 nM, 0.73 nM, 0.74 nM, 0.75 nM, 0.76 nM, 0.77 nM, 0.78 nM, 0.79 nM, 0.8 nM, 0.81 nM, 0.82 nM, 0.83 nM, 0.84 nM, 0.85 nM, 0.86 nM, 0.87 nM, 0.88 nM, 0.89 nM, 0.9 nM, 0.91 nM, 0.92 nM, 0.93 nM, 0.94 nM, 0.95 nM, 0.96 nM, 0.97 nM, 0.98 nM, 0.99 nM, 1 nM, 1.01 nM, 1.02 nM, 1.03 nM, 1.04 nM, 1.05 nM, 1.06 nM, 1.07 nM, 1.08 nM, 1.09 nM, 1.1 nM, 1.11 nM, 1.12 nM, 1.13 nM, 1.14 nM, 1.15 nM, 1.16 nM, 1.17 nM, 1.18 nM, 1.19 nM, 1.2 nM, 1.21 nM, 1.22 nM, 1.23 nM, 1.24 nM, 1.25 nM, 1.26 nM, 1.27 nM, 1.28 nM, 1.29 nM, 1.3 nM, 1.31 nM, 1.32 nM, 1.33 nM, 1.34 nM, 1.35 nM, 1.36 nM, 1.37 nM, 1.38 nM, 1.39 nM, 1.4 nM, 1.41 nM, 1.42 nM, 1.43 nM, 1.44 nM, 1.45 nM, 1.46 nM, 1.47 nM, 1.48 nM, 1.49 nM, 1.5 nM, 1.51 nM, 1.52 nM, 1.53 nM, 1.54 nM, 1.55 nM, 1.56 nM, 1.57 nM, 1.58 nM, 1.59 nM, 1.6 nM, 1.61 nM, 1.62 nM, 1.63 nM, 1.64 nM, 1.65 nM, 1.66 nM, 1.67 nM, 1.68 nM, 1.69 nM, 1.7 nM, 1.71 nM, 1.72 nM, 1.73 nM, 1.74 nM, 1.75 nM, 1.76 nM, 1.77 nM, 1.78 nM, 1.79 nM, 1.8 nM, 1.81 nM, 1.82 nM, 1.83 nM, 1.84 nM, 1.85 nM, 1.86 nM, 1.87 nM, 1.88 nM, 1.89 nM, 1.9 nM, 1.91 nM, 1.92 nM, 1.93 nM, 1.94 nM, 1.95 nM, 1.96 nM, 1.97 nM, 1.98 nM, 1.99 nM, 2 nM, 2.01 nM, 2.02 nM, 2.03 nM, 2.04 nM, 2.05 nM, 2.06 nM, 2.07 nM, 2.08 nM, 2.09 nM, 2.1 nM, 2.11 nM, 2.12 nM, 2.13 nM, 2.14 nM, 2.15 nM, 2.16 nM, 2.17 nM, 2.18 nM, 2.19 nM, 2.2 nM, 2.21 nM, 2.22 nM, 2.23 nM, 2.24 nM, 2.25 nM, 2.26 nM, 2.27 nM, 2.28 nM, 2.29 nM, 2.3 nM, 2.31 nM, 2.32 nM, 2.33 nM, 2.34 nM, 2.35 nM, 2.36 nM, 2.37 nM, 2.38 nM, 2.39 nM, 2.4 nM, 2.41 nM, 2.42 nM, 2.43 nM, 2.44 nM, 2.45 nM, 2.46 nM, 2.47 nM, 2.48 nM, 2.49 nM, 2.5 nM, 2.51 nM, 2.52 nM, 2.53 nM, 2.54 nM, 2.55 nM, 2.56 nM, 2.57 nM, 2.58 nM, 2.59 nM, 2.6 nM, 2.61 nM, 2.62 nM, 2.63 nM, 2.64 nM, 2.65 nM, 2.66 nM, 2.67 nM, 2.68 nM, 2.69 nM, 2.7 nM, 2.71 nM, 2.72 nM, 2.73 nM, 2.74 nM, 2.75 nM, 2.76 nM, 2.77 nM, 2.78 nM, 2.79 nM, 2.8 nM, 2.81 nM, 2.82 nM, 2.83 nM, 2.84 nM, 2.85 nM, 2.86 nM, 2.87 nM, 2.88 nM, 2.89 nM, 2.9 nM, 2.91 nM, 2.92 nM, 2.93 nM, 2.94 nM, 2.95 nM, 2.96 nM, 2.97 nM, 2.98 nM, 2.99 nM, 3 nM, 3.01 nM, 3.02 nM, 3.03 nM, 3.04 nM, 3.05 nM, 3.06 nM, 3.07 nM, 3.08 nM, 3.09 nM, 3.1 nM, 3.11 nM, 3.12 nM, 3.13 nM, 3.14 nM, 3.15 nM, 3.16 nM, 3.17 nM, 3.18 nM, 3.19 nM, 3.2 nM, 3.21 nM, 3.22 nM, 3.23 nM, 3.24 nM, 3.25 nM, 3.26 nM, 3.27 nM, 3.28 nM, 3.29 nM, 3.3 nM, 3.31 nM, 3.32 nM, 3.33 nM, 3.34 nM, 3.35 nM, 3.36 nM, 3.37 nM, 3.38 nM, 3.39 nM, 3.4 nM, 3.41 nM, 3.42 nM, 3.43 nM, 3.44 nM, 3.45 nM, 3.46 nM, 3.47 nM, 3.48 nM, 3.49 nM, 3.5 nM, 3.51 nM, 3.52 nM, 3.53 nM, 3.54 nM, 3.55 nM, 3.56 nM, 3.57 nM, 3.58 nM, 3.59 nM, 3.6 nM, 3.61 nM, 3.62 nM, 3.63 nM, 3.64 nM, 3.65 nM, 3.66 nM, 3.67 nM, 3.68 nM, 3.69 nM, 3.7 nM, 3.71 nM, 3.72 nM, 3.73 nM, 3.74 nM, 3.75 nM, 3.76 nM, 3.77 nM, 3.78 nM, 3.79 nM, 3.8 nM, 3.81 nM, 3.82 nM, 3.83 nM, 3.84 nM, 3.85 nM, 3.86 nM, 3.87 nM, 3.88 nM, 3.89 nM, 3.9 nM, 3.91 nM, 3.92 nM, 3.93 nM, 3.94 nM, 3.95 nM, 3.96 nM, 3.97 nM, 3.98 nM, 3.99 nM, 4 nM, 4.01 nM, 4.02 nM, 4.03 nM, 4.04 nM, 4.05 nM, 4.06 nM, 4.07 nM, 4.08 nM, 4.09 nM, 4.1 nM, 4.11 nM, 4.12 nM, 4.13 nM, 4.14 nM, 4.15 nM, 4.16 nM, 4.17 nM, 4.18 nM, 4.19 nM, 4.2 nM, 4.21 nM, 4.22 nM, 4.23 nM, 4.24 nM, 4.25 nM, 4.26 nM, 4.27 nM, 4.28 nM, 4.29 nM, 4.3 nM, 4.31 nM, 4.32 nM, 4.33 nM, 4.34 nM, 4.35 nM, 4.36 nM, 4.37 nM, 4.38 nM, 4.39 nM, 4.4 nM, 4.41 nM, 4.42 nM, 4.43 nM, 4.44 nM, 4.45 nM, 4.46 nM, 4.47 nM, 4.48 nM, 4.49 nM, 4.5 nM, 4.51 nM, 4.52 nM, 4.53 nM, 4.54 nM, 4.55 nM, 4.56 nM, 4.57 nM, 4.58 nM, 4.59 nM, 4.6 nM, 4.61 nM, 4.62 nM, 4.63 nM, 4.64 nM, 4.65 nM, 4.66 nM, 4.67 nM, 4.68 nM, 4.69 nM, 4.7 nM, 4.71 nM, 4.72 nM, 4.73 nM, 4.74 nM, 4.75 nM, 4.76 nM, 4.77 nM, 4.78 nM, 4.79 nM, 4.8 nM, 4.81 nM, 4.82 nM, 4.83 nM, 4.84 nM, 4.85 nM, 4.86 nM, 4.87 nM, 4.88 nM, 4.89 nM, 4.9 nM, 4.91 nM, 4.92 nM, 4.93 nM, 4.94 nM, 4.95 nM, 4.96 nM, 4.97 nM, 4.98 nM, 4.99 nM, 5 nM, 5.01 nM, 5.02 nM, 5.03 nM, 5.04 nM, 5.05 nM, 5.06 nM, 5.07 nM, 5.08 nM, 5.09 nM, 5.1 nM, 5.11 nM, 5.12 nM, 5.13 nM, 5.14 nM, 5.15 nM, 5.16 nM, 5.17 nM, 5.18 nM, 5.19 nM, 5.2 nM, 5.21 nM, 5.22 nM, 5.23 nM, 5.24 nM, 5.25 nM, 5.26 nM, 5.27 nM, 5.28 nM, 5.29 nM, 5.3 nM, 5.31 nM, 5.32 nM, 5.33 nM, 5.34 nM, 5.35 nM, 5.36 nM, 5.37 nM, 5.38 nM, 5.39 nM, 5.4 nM, 5.41 nM, 5.42 nM, 5.43 nM, 5.44 nM, 5.45 nM, 5.46 nM, 5.47 nM, 5.48 nM, 5.49 nM, 5.5 nM, 5.51 nM, 5.52 nM, 5.53 nM, 5.54 nM, 5.55 nM, 5.56 nM, 5.57 nM, 5.58 nM, 5.59 nM, 5.6 nM, 5.61 nM, 5.62 nM, 5.63 nM, 5.64 nM, 5.65 nM, 5.66 nM, 5.67 nM, 5.68 nM, 5.69 nM, 5.7 nM, 5.71 nM, 5.72 nM, 5.73 nM, 5.74 nM, 5.75 nM, 5.76 nM, 5.77 nM, 5.78 nM, 5.79 nM, 5.8 nM, 5.81 nM, 5.82 nM, 5.83 nM, 5.84 nM, 5.85 nM, 5.86 nM, 5.87 nM, 5.88 nM, 5.89 nM, 5.9 nM, 5.91 nM, 5.92 nM, 5.93 nM, 5.94 nM, 5.95 nM, 5.96 nM, 5.97 nM, 5.98 nM, 5.99 nM, 6 nM, 6.01 nM, 6.02 nM, 6.03 nM, 6.04 nM, 6.05 nM, 6.06 nM, 6.07 nM, 6.08 nM, 6.09 nM, 6.1 nM, 6.11 nM, 6.12 nM, 6.13 nM, 6.14 nM, 6.15 nM, 6.16 nM, 6.17 nM, 6.18 nM, 6.19 nM, 6.2 nM, 6.21 nM, 6.22 nM, 6.23 nM, 6.24 nM, 6.25 nM, 6.26 nM, 6.27 nM, 6.28 nM, 6.29 nM, 6.3 nM, 6.31 nM, 6.32 nM, 6.33 nM, 6.34 nM, 6.35 nM, 6.36 nM, 6.37 nM, 6.38 nM, 6.39 nM, 6.4 nM, 6.41 nM, 6.42 nM, 6.43 nM, 6.44 nM, 6.45 nM, 6.46 nM, 6.47 nM, 6.48 nM, 6.49 nM, 6.5 nM, 6.51 nM, 6.52 nM, 6.53 nM, 6.54 nM, 6.55 nM, 6.56 nM, 6.57 nM, 6.58 nM, 6.59 nM, 6.6 nM, 6.61 nM, 6.62 nM, 6.63 nM, 6.64 nM, 6.65 nM, 6.66 nM, 6.67 nM, 6.68 nM, 6.69 nM, 6.7 nM, 6.71 nM, 6.72 nM, 6.73 nM, 6.74 nM, 6.75 nM, 6.76 nM, 6.77 nM, 6.78 nM, 6.79 nM, 6.8 nM, 6.81 nM, 6.82 nM, 6.83 nM, 6.84 nM, 6.85 nM, 6.86 nM, 6.87 nM, 6.88 nM, 6.89 nM, 6.9 nM, 6.91 nM, 6.92 nM, 6.93 nM, 6.94 nM, 6.95 nM, 6.96 nM, 6.97 nM, 6.98 nM, 6.99 nM, 7 nM, 7.01 nM, 7.02 nM, 7.03 nM, 7.04 nM, 7.05 nM, 7.06 nM, 7.07 nM, 7.08 nM, 7.09 nM, 7.1 nM, 7.11 nM, 7.12 nM, 7.13 nM, 7.14 nM, 7.15 nM, 7.16 nM, 7.17 nM, 7.18 nM, 7.19 nM, 7.2 nM, 7.21 nM, 7.22 nM, 7.23 nM, 7.24 nM, 7.25 nM, 7.26 nM, 7.27 nM, 7.28 nM, 7.29 nM, 7.3 nM, 7.31 nM, 7.32 nM, 7.33 nM, 7.34 nM, 7.35 nM, 7.36 nM, 7.37 nM, 7.38 nM, 7.39 nM, 7.4 nM, 7.41 nM, 7.42 nM, 7.43 nM, 7.44 nM, 7.45 nM, 7.46 nM, 7.47 nM, 7.48 nM, 7.49 nM, 7.5 nM, 7.51 nM, 7.52 nM, 7.53 nM, 7.54 nM, 7.55 nM, 7.56 nM, 7.57 nM, 7.58 nM, 7.59 nM, 7.6 nM, 7.61 nM, 7.62 nM, 7.63 nM, 7.64 nM, 7.65 nM, 7.66 nM, 7.67 nM, 7.68 nM, 7.69 nM, 7.7 nM, 7.71 nM, 7.72 nM, 7.73 nM, 7.74 nM, 7.75 nM, 7.76 nM, 7.77 nM, 7.78 nM, 7.79 nM, 7.8 nM, 7.81 nM, 7.82 nM, 7.83 nM, 7.84 nM, 7.85 nM, 7.86 nM, 7.87 nM, 7.88 nM, 7.89 nM, 7.9 nM, 7.91 nM, 7.92 nM, 7.93 nM, 7.94 nM, 7.95 nM, 7.96 nM, 7.97 nM, 7.98 nM, 7.99 nM, 8 nM, 8.01 nM, 8.02 nM, 8.03 nM, 8.04 nM, 8.05 nM, 8.06 nM, 8.07 nM, 8.08 nM, 8.09 nM, 8.1 nM, 8.11 nM, 8.12 nM, 8.13 nM, 8.14 nM, 8.15 nM, 8.16 nM, 8.17 nM, 8.18 nM, 8.19 nM, 8.2 nM, 8.21 nM, 8.22 nM, 8.23 nM, 8.24 nM, 8.25 nM, 8.26 nM, 8.27 nM, 8.28 nM, 8.29 nM, 8.3 nM, 8.31 nM, 8.32 nM, 8.33 nM, 8.34 nM, 8.35 nM, 8.36 nM, 8.37 nM, 8.38 nM, 8.39 nM, 8.4 nM, 8.41 nM, 8.42 nM, 8.43 nM, 8.44 nM, 8.45 nM, 8.46 nM, 8.47 nM, 8.48 nM, 8.49 nM, 8.5 nM, 8.51 nM, 8.52 nM, 8.53 nM, 8.54 nM, 8.55 nM, 8.56 nM, 8.57 nM, 8.58 nM, 8.59 nM, 8.6 nM, 8.61 nM, 8.62 nM, 8.63 nM, 8.64 nM, 8.65 nM, 8.66 nM, 8.67 nM, 8.68 nM, 8.69 nM, 8.7 nM, 8.71 nM, 8.72 nM, 8.73 nM, 8.74 nM, 8.75 nM, 8.76 nM, 8.77 nM, 8.78 nM, 8.79 nM, 8.8 nM, 8.81 nM, 8.82 nM, 8.83 nM, 8.84 nM, 8.85 nM, 8.86 nM, 8.87 nM, 8.88 nM, 8.89 nM, 8.9 nM, 8.91 nM, 8.92 nM, 8.93 nM, 8.94 nM, 8.95 nM, 8.96 nM, 8.97 nM, 8.98 nM, 8.99 nM, 9 nM, 9.01 nM, 9.02 nM, 9.03 nM, 9.04 nM, 9.05 nM, 9.06 nM, 9.07 nM, 9.08 nM, 9.09 nM, 9.1 nM, 9.11 nM, 9.12 nM, 9.13 nM, 9.14 nM, 9.15 nM, 9.16 nM, 9.17 nM, 9.18 nM, 9.19 nM, 9.2 nM, 9.21 nM, 9.22 nM, 9.23 nM, 9.24 nM, 9.25 nM, 9.26 nM, 9.27 nM, 9.28 nM, 9.29 nM, 9.3 nM, 9.31 nM, 9.32 nM, 9.33 nM, 9.34 nM, 9.35 nM, 9.36 nM, 9.37 nM, 9.38 nM, 9.39 nM, 9.4 nM, 9.41 nM, 9.42 nM, 9.43 nM, 9.44 nM, 9.45 nM, 9.46 nM, 9.47 nM, 9.48 nM, 9.49 nM, 9.5 nM, 9.51 nM, 9.52 nM, 9.53 nM, 9.54 nM, 9.55 nM, 9.56 nM, 9.57 nM, 9.58 nM, 9.59 nM, 9.6 nM, 9.61 nM, 9.62 nM, 9.63 nM, 9.64 nM, 9.65 nM, 9.66 nM, 9.67 nM, 9.68 nM, 9.69 nM, 9.7 nM, 9.71 nM, 9.72 nM, 9.73 nM, 9.74 nM, 9.75 nM, 9.76 nM, 9.77 nM, 9.78 nM, 9.79 nM, 9.8 nM, 9.81 nM, 9.82 nM, 9.83 nM, 9.84 nM, 9.85 nM, 9.86 nM, 9.87 nM, 9.88 nM, 9.89 nM, 9.9 nM, 9.91 nM, 9.92 nM, 9.93 nM, 9.94 nM, 9.95 nM, 9.96 nM, 9.97 nM, 9.98 nM, 9.99 nM, 10 nM, 10.01 nM, 10.02 nM, 10.03 nM, 10.04 nM, 10.05 nM, 10.06 nM, 10.07 nM, 10.08 nM, 10.09 nM, 10.1 nM, 10.11 nM, 10.12 nM, 10.13 nM, 10.14 nM, 10.15 nM, 10.16 nM, 10.17 nM, 10.18 nM, 10.19 nM, 10.2 nM, 10.21 nM, 10.22 nM, 10.23 nM, 10.24 nM, 10.25 nM, 10.26 nM, 10.27 nM, 10.28 nM, 10.29 nM, 10.3 nM, 10.31 nM, 10.32 nM, 10.33 nM, 10.34 nM, 10.35 nM, 10.36 nM, 10.37 nM, 10.38 nM, 10.39 nM, 10.4 nM, 10.41 nM, 10.42 nM, 10.43 nM, 10.44 nM, 10.45 nM, 10.46 nM, 10.47 nM, 10.48 nM, 10.49 nM, 10.5 nM, 10.51 nM, 10.52 nM, 10.53 nM, 10.54 nM, 10.55 nM, 10.56 nM, 10.57 nM, 10.58 nM, 10.59 nM, 10.6 nM, 10.61 nM, 10.62 nM, 10.63 nM, 10.64 nM, 10.65 nM, 10.66 nM, 10.67 nM, 10.68 nM, 10.69 nM, 10.7 nM, 10.71 nM, 10.72 nM, 10.73 nM, 10.74 nM, 10.75 nM, 10.76 nM, 10.77 nM, 10.78 nM, 10.79 nM, 10.8 nM, 10.81 nM, 10.82 nM, 10.83 nM, 10.84 nM, 10.85 nM, 10.86 nM, 10.87 nM, 10.88 nM, 10.89 nM, 10.9 nM, 10.91 nM, 10.92 nM, 10.93 nM, 10.94 nM, 10.95 nM, 10.96 nM, 10.97 nM, 10.98 nM, 10.99 nM, 11 nM, 11.01 nM, 11.02 nM, 11.03 nM, 11.04 nM, 11.05 nM, 11.06 nM, 11.07 nM, 11.08 nM, 11.09 nM, 11.1 nM, 11.11 nM, 11.12 nM, 11.13 nM, 11.14 nM, 11.15 nM, 11.16 nM, 11.17 nM, 11.18 nM, 11.19 nM, 11.2 nM, 11.21 nM, 11.22 nM, 11.23 nM, 11.24 nM, 11.25 nM, 11.26 nM, 11.27 nM, 11.28 nM, 11.29 nM, 11.3 nM, 11.31 nM, 11.32 nM, 11.33 nM, 11.34 nM, 11.35 nM, 11.36 nM, 11.37 nM, 11.38 nM, 11.39 nM, 11.4 nM, 11.41 nM, 11.42 nM, 11.43 nM, 11.44 nM, 11.45 nM, 11.46 nM, 11.47 nM, 11.48 nM, 11.49 nM, 11.5 nM, 11.51 nM, 11.52 nM, 11.53 nM, 11.54 nM, 11.55 nM, 11.56 nM, 11.57 nM, 11.58 nM, 11.59 nM, 11.6 nM, 11.61 nM, 11.62 nM, 11.63 nM, 11.64 nM, 11.65 nM, 11.66 nM, 11.67 nM, 11.68 nM, 11.69 nM, 11.7 nM, 11.71 nM, 11.72 nM, 11.73 nM, 11.74 nM, 11.75 nM, 11.76 nM, 11.77 nM, 11.78 nM, 11.79 nM, 11.8 nM, 11.81 nM, 11.82 nM, 11.83 nM, 11.84 nM, 11.85 nM, 11.86 nM, 11.87 nM, 11.88 nM, 11.89 nM, 11.9 nM, 11.91 nM, 11.92 nM, 11.93 nM, 11.94 nM, 11.95 nM, 11.96 nM, 11.97 nM, 11.98 nM, 11.99 nM, 12 nM, 12.01 nM, 12.02 nM, 12.03 nM, 12.04 nM, 12.05 nM, 12.06 nM, 12.07 nM, 12.08 nM, 12.09 nM, 12.1 nM, 12.11 nM, 12.12 nM, 12.13 nM, 12.14 nM, 12.15 nM, 12.16 nM, 12.17 nM, 12.18 nM, 12.19 nM, 12.2 nM, 12.21 nM, 12.22 nM, 12.23 nM, 12.24 nM, 12.25 nM, 12.26 nM, 12.27 nM, 12.28 nM, 12.29 nM, 12.3 nM, 12.31 nM, 12.32 nM, 12.33 nM, 12.34 nM, 12.35 nM, 12.36 nM, 12.37 nM, 12.38 nM, 12.39 nM, 12.4 nM, 12.41 nM, 12.42 nM, 12.43 nM, 12.44 nM, 12.45 nM, 12.46 nM, 12.47 nM, 12.48 nM, 12.49 nM, 12.5 nM, 12.51 nM, 12.52 nM, 12.53 nM, 12.54 nM, 12.55 nM, 12.56 nM, 12.57 nM, 12.58 nM, 12.59 nM, 12.6 nM, 12.61 nM, 12.62 nM, 12.63 nM, 12.64 nM, 12.65 nM, 12.66 nM, 12.67 nM, 12.68 nM, 12.69 nM, 12.7 nM, 12.71 nM, 12.72 nM, 12.73 nM, 12.74 nM, 12.75 nM, 12.76 nM, 12.77 nM, 12.78 nM, 12.79 nM, 12.8 nM, 12.81 nM, 12.82 nM, 12.83 nM, 12.84 nM, 12.85 nM, 12.86 nM, 12.87 nM, 12.88 nM, 12.89 nM, 12.9 nM, 12.91 nM, 12.92 nM, 12.93 nM, 12.94 nM, 12.95 nM, 12.96 nM 또는 12.97 nM)이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 NKG2D 수용체 리간드의 서브세트에 (예를 들어, 이에 대해 보다 높은 친화도로) 결합한다. 돌연변이유발 분석과 조합한 3D 구조 데이터는 NKG2D가 이의 내인성 리간드의 다양한 어레이의 인식 및 결합에 허용적이라는 것을 나타내었다. NKG2D에 대한 리간드는 세포 표면 상에서 발현될 수 있다. 일부 실시형태에서, NKG2D에 대한 리간드는 세포 표면으로부터 "분리"될 수 있고, 가용성 리간드로서 존재한다. 특정 암에서, NKG2D 리간드, 예컨대, MICA는 과발현되고, 일부 경우에, 예를 들어, 혈청 중에서, 혈류 또는 주변 조직에 가용성 형태로 방출된다(예를 들어, 분리된다)는 것이 알려져 있다. 이는, 적어도 부분적으로, 암의 발병 및/또는 진행에 기여하는 것으로 여겨진다. 따라서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 중화제로서 기능함으로써 비정상적으로 상승된 수준으로 존재하는 리간드의 발현에 균형을 잡는 데 있어서, 세포 표면 상에 존재하거나 또는 방출된 형태로서, 이러한 리간드의 결합에 유용하다. NKG2D 리간드가 대상체의 암 세포 표면 상에서 발현되는 경우, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 대상체에게 투여될 때 세포 표면 리간드에 결합한다. 리간드에 대한 본 명세서에 기재된 이량체 단백질의 결합은 NK 세포 상에 존재하는 내인성 NKG2D 수용체의 활성화를 방지할 수 있다. NKG2D 리간드가 암 세포로부터 "분리"되는 경우, 예를 들어, 대상체의 혈류로 방출되는 경우, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 가용성 리간드에 결합하여 이를 추가 작용으로부터 봉쇄시킨다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질은 야생형 NKG2D 수용체 또는 당업계에 공지된 다른 키메라 단백질에 비해 향상된 ADCC 능력을 갖는다.
약제학적 조성물
또한 본 명세서에 개시된 이량체 단백질(예를 들어, 변형된 CHO 세포에서 생성된 이량체 단백질)을 적어도 1종의 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체와 조합하여 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다.
"약제학적 조성물"은 대상체에게 투여하기에 적합한 형태로 본 명세서에 개시된 이량체 단백질을 함유하는 제형이다. 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 벌크 또는 단위 투약 형태이다. 단위 투약 형태는, 예를 들어, 동결건조 제형, 캡슐, IV 백, 정제, 에어로졸 흡입기 상의 단일 펌프 또는 바이알을 포함하는 임의의 다양한 형태이다. 조성물의 단위 용량에서 활성 성분(예를 들어, 개시된 이량체 단백질의 제형)의 양은 유효한 양이며, 수반되는 특정 치료에 따라 달라진다. 당업자는 때때로 환자의 연령 및 병태에 따라 투약량에 대한 일상적인 변화를 만드는 것이 필요하다는 것을 인식할 것이다. 투약량은 또한 투여 경로에 따라 다를 것이다. 경구, 폐, 직장, 비경구, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 흡입, 협측, 설하, 흉강내, 척추강내, 비강내 등을 포함하는 다양한 경로가 상정된다. 본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여를 위한 투약 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 일 실시형태에서, 활성 화합물은 멸균 조건 하에 약제학적으로 허용 가능한 담체, 및 필요한 임의의 보존제, 완충제, 또는 분사제와 혼합된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "약제학적으로 허용 가능한"이라는 어구는 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 유해/유익비에 상응하며, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 음이온, 양이온, 물질, 조성물, 담체 및/또는 투약 형태를 지칭한다.
"약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비독성이며, 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 약제학적 조성물을 제조하는 데 유용한 부형제를 의미하고, 수의학적 용도뿐만 아니라 인간 약제학적 용도에 허용 가능한 부형제를 포함한다. 본 명세서 및 청구범위에서 사용되는 바와 같은 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 1종 이상의 이러한 부형제를 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 이의 의도된 투여 경로에 적합하게 되도록 제형화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들어, 정맥내, 진피내, 피하, 경구(예를 들어, 흡입), 경피(국소) 및 경점막 투여를 포함한다. 비경구, 피내, 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음의 성분을 포함될 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 긴장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 주사기 또는 다회 용량 바이알에 봉입될 수 있다. 일부 실시형태에서, 비경구, 진피내, 또는 피하 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액의 pH는 약 6 내지 약 8(예를 들어, 약 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8)이다.
방법 및 용도
질환의 치료를 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 질환 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 조성물 또는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 질환은 NKG2D 리간드 발현 질환이다. 일부 실시형태에서, 질환은 암, 자가면역질환, 간 질환, 신경 손상, 유전성 운동 및 감각 신경병증, 노화 또는 바이러스 감염이다. 일부 실시형태에서, 질환은 암 또는 자가면역질환이다. 일부 실시형태에서, 암은 NKG2D 리간드 발현 암이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 NKG2D 리간드 발현 암을 갖는다.
일부 실시형태에서, 리간드 발현 암은 폐암, 난소암, 결장암, 췌장암, 방광암, 유방암, 간세포암종(HCC), 신세포암, 비인두암(NPC), 전립선암, 흑색종, 형질세포암, 백혈병, 림프종, 신경교종 또는 신경아세포종이다.
일부 실시형태에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)이다.
일부 실시형태에서, NKG2D 리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 또는 ULBP6이다.
일부 실시형태에서, 자가면역질환은 류마티스 관절염, 결장염, 셀리악병, 다발성 경화증, 원형 탈모증, 1형 당뇨병, 만성 폐쇄성 폐질환, 죽상동맥경화증 또는 2형 당뇨병과 관련된 대사 증후군이다.
일부 실시형태에서, 간 질환은 간 섬유증, 문맥 고혈압, 비알코올성 지방간염(NASH), 지방간 질환 및 간경변이다.
일부 실시형태에서, 신경 손상은 말초 또는 뇌신경, 척수에 대한 또는 뇌, 뇌신경에 대한 외상성 또는 독성 손상, 외상성 뇌 손상, 뇌졸중, 뇌동맥류, 척수 손상, 또는 기저 유전 질환과 관련된 손상이다.
일부 실시형태에서, 유전성 운동 및 감각 신경병증은 샤르코-마리-투스병(예를 들어, 피라미드 특징을 갖는 1A형, 2형, 3형 또는 6형) 또는 레프숨병이다.
일부 실시형태에서, 바이러스 감염은 간염, 엡스타인-바르 또는 거대세포바이러스이다.
특정 대상체(예를 들어, 환자)가 본 명세서에 기재된 이량체 단백질을 포함하는 암 요법을 받아야하는지의 여부는 대상체에서 하나 이상의 NKG2D 리간드의 비정상적 발현에 대해 시험함으로써 결정될 수 있다. 대상체에서 "하나 이상의 NKG2D 리간드의 비정상적 발현"은 대조군 수준(예를 들어, 건강한 대상체로부터의 발현 수준)과 비교할 때 대상체에서 얻은 생물학적 샘플 중의 리간드(들)의 과발현을 의미한다. 일부 실시형태에서, 생물학적 샘플은 암성인 것으로 의심되는 대상체의 조직으로부터 취한 생검 샘플을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 생물학적 샘플은 악성종양에 대한 시험을 위해 고형 종양으로부터 수집된다. 일부 실시형태에서, 생물학적 샘플은 혈액 샘플, 예를 들어, 혈청, 대변 샘플, 소변 샘플 등을 구성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 생물학적 샘플은 암 또는 자가면역질환과 같은 질환의 진단 또는 진행에 대한 시험 목적을 위해 대상체로부터 수집한 임의의 세포 또는 조직 샘플일 수 있다.
당업자는 생물학적 샘플에 존재하는 하나 이상의 마커의 존재 및 수준에 대한 분석을 위해 사용되는 다양한 실험실 기법 및 프로토콜에 익숙하다. 대상체가 NKG2D 리간드(들)의 과발현과 관련된 암을 갖는지의 여부를 결정하기 위해, 전형적으로 면역친화도 분석이 수행된다. 특정 상황에서, 이용 가능한 생물학적 샘플의 유형에 따라서, 면역조직학적 또는 면역세포화학적 분석이 수행될 수 있다. 이들 분석을 수행하기 위한 다수의 항체는 상업적으로 입수 가능하다. 이들 목적을 위해 통상적으로 사용되는 방법은 ELISA, 면역블롯 및 면역조직화학을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에 기재된 조성물은 대상체에게 직접 투여될 수 있다. 용어 "투여" 및 "투여하다"는 생체내, 즉, 대상체의 신체에서 약제학적 제제가 이의 표적 세포, 예를 들어, 질환 세포에 접촉하도록, 대상체에게 약제를 제공하는 수단을 지칭한다. 일부 실시형태에서, NKG2D-Fc를 포함하는 조성물은 대상체에게 전신으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 전신 투여는 정맥내 주사를 통해 전달된다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질을 포함하는 조성물은 국소로 투여된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 고형 종양에 직접 또는 고형 종양의 근위에 전달될 수 있다.
본 명세서에 기재된 임의의 조성물은 다양한 투여 경로를 통해 대상체 신체의 임의의 부분에 투여될 수 있다. 조성물은 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 근육내, 직장내, 질내, 척추강내, 기관내, 진피내, 또는 경피 주사에 의해, 경구 또는 비강 투여에 의해, 흡입에 의해, 또는 시간 경과에 따른 점진적 관류에 의해 투여될 수 있다. 조성물은 특정 조직에 전달될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 포유류의 관절, 비강 점막, 혈액, 폐, 장, 근조직, 피부 또는 복막강에 전달될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가 예에서, 조성물의 에어로졸 제제는 흡입에 의해 대상체에게 제공될 수 있다.
필요한 투약량은 투여 경로, 제형의 특성, 환자 질병의 특성, 대상체의 크기, 체중, 표면적, 연령 및 성별, 투여 중인 다른 약물, 및 담당하는 의사의 판단에 따라 다르다. 적합한 투약량은 전형적으로 약 0.01 g 내지 약 5 g의 범위(예를 들어, 약 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9 또는 5 g)이다. 일부 실시형태에서, 적합한 투약량은 약 250 ㎎ 내지 약 1400 ㎎의 범위(예를 들어, 약 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1010, 1020, 1030, 1040, 1050, 1060, 1070, 1080, 1090, 1100, 1110, 1120, 1130, 1140, 1150, 1160, 1170, 1180, 1190, 1200, 1210, 1220, 1230, 1240, 1250, 1260, 1270, 1280, 1290, 1300, 1310, 1320, 1330, 1340, 1350, 1360, 1370, 1380, 1390 또는 1400)이다. 필요한 투약량의 광범위한 변형은 이용 가능한 다양한 이량체 조성물 및 다양한 투여 경로의 상이한 효율을 고려하여 예상될 것이다. 이들 투약량 수준의 변형은 당업계에서 잘 이해되는 바와 같은 최적화를 위한 표준 경험 루틴을 이용하여 조절될 수 있다. 투여는 일회 또는 다회(예를 들어, 2- 또는 3-, 4-, 6-, 8-, 10-, 20-, 50-, 100, 150- 이상의 배수)일 수 있다. 적합한 전달 비히클(예를 들어, 중합체 마이크로입자 또는 이식 가능한 장치)에서의 조성물의 캡슐화는 전달 효율을 증가시킬 수 있다.
본 명세서에 제공된 임의의 조성물에 의한 치료의 지속기간은 1일만큼 짧은 것부터 숙주의 수명만큼 긴 것(예를 들어, 수년)까지의 임의의 길이일 수 있다. 예를 들어, 이량체 조성물은 3개월 동안 1개월에 1회, 또는 10년의 기간 동안 1년에 1회로 투여될 수 있다. 또한 치료 빈도는 가변적일 수 있다는 것을 주목한다. 일부 실시형태에서, 이량체 조성물은 1일에, 1주에, 또는 1년에 1회(또는 2회, 3회 등) 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이량체 조성물은 2주마다 1회 투여될 수 있다. 이량체 조성물은 함께, 예를 들어, 하나 이상의 다른 암 요법과 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
유효량의 본 명세서에 기재된 임의의 조성물이 대상체에 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "유효한"은 목적하는 치료 효과, 예컨대, 면역 반응을 유발하지만, 대상체에서 유의미한 독성을 유발하지 않는 임의의 양을 지칭한다. 이러한 양은 알려진 양의 특정 조성물의 투여 후에 대상체의 생물학적 반응, 예를 들어, 면역 반응 및 증상의 개선을 평가함으로써 결정될 수 있다. 또한, 독성 수준은, 만약에 있다면, 알려진 양의 특정 조성물을 투여하기 전 및 후에 대상체의 임상 증상을 평가함으로써 결정될 수 있다. 대상체에게 투여되는 특정 조성물의 유효량은 목적하는 결과뿐만 아니라 숙주의 반응 및 독성 수준에 따라 조절될 수 있다는 것을 주목한다. 유의미한 독성은 각각의 특정 숙주에 대해 다를 수 있으며, 대상체의 질환 상태, 연령 및 통증에 대한 내성을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다수의 인자에 따라 다르다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가적인 항암 요법 또는 항암제를 이용하여 대상체를 치료하는 단계를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 추가적인 항암 요법은 수술, 방사선 요법, 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 아쥬반트 요법 또는 면역요법이다. 일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 DNA를 손상시키는 화학요법이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 IL-15(예를 들어, GenBank AAX37025)/IL-15Ra(예를 들어, GenBank AAP69528.1) 이형복합체(예를 들어, WO2007/001677 및 WO20007/084342에 개시되고/되거나 서열번호 67에 의해 암호화된 IL-15/IL-Ra 이형복합체)이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 항-PD-1 항체 또는 기타 PD-1 저해제이다. PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 항체, 항체 단편 및 다른 저해제는 당해 분야에서 이용 가능하며, 본 명세서에 기재된 본 발명의 CAR과 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어 니볼루맙(BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭됨; 브리스톨-마이어스 스큅)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전 인간 IgG4 단클론성 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 인간 단클론성 항체는 미국 특허 제8,008,449호 및 국제 공개 제2006/121168호에 개시되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; 큐어 테크)은 PD-1에 결합하는 인간화 IgG1k 단클론성 항체이다. 피딜리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 단클론성 항체는 국제 공개 제2009/101611호에 개시되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙(lambrolizumab)으로도 알려져 있으며, MK03475로도 지칭됨; Merck)은 PD-1에 결합하는 인간화 IgG4 단클론성 항체이다. 펨브롤리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 항체는 미국 특허 제8,354,509호 및 국제 공개 제2009/114335호에 개시되어 있다. MEDI4736(Medimmune)은 PDL1에 결합하며, 리간드와 PD1의 상호작용을 저해하는 인간 단클론성 항체이다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론성 항체이다. MDPL3280A 및 PD-L1에 대한 다른 인간 단클론성 항체는 미국 특허 제7,943,743호 및 미국 특허 출원 공개 20120039906에 개시되어 있다. 다른 항-PD-L1 결합 작용제는 YW243.55.S70(중쇄 및 경쇄 가변 영역은 국제 공개 제2010/077634호에서 서열번호 20 및 21로 예시됨) 및 MDX-1 105(BMS-936559로도 지칭됨, 예를 들어 국제 공개 제2007/005874호에 개시된 항-PD-L1 결합제)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어 국제 공개 제2010/027827호 및 국제 공개 제2011/066342호에 개시됨)는 PD-1과 B7-H1 간의 상호작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다. 다른 항-PD-1 항체는 AMP 514(Amplimmune), 다른 것들 중 특히, 예를 들어 미국 특허 제8,609,089호, 미국 특허 공개 제2010028330호 및/또는 미국 특허 공개 제20120114649호에 개시된 항-PD-1 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항암제는 방사성 리간드, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 177Lu-PSMA-617(루테튬(117Lu) 옥소도트레오타이드)이다. 일부 실시형태에서, 항암제는 암 백신이다.
일부 실시형태에서, 추가적인 암 요법은 세포독성제 및/또는 비-세포독성제를 포함한다. "세포독성제"는 세포의 기능을 저해하거나 막고/막거나 세포의 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소(예를 들어, 131I, 125I, 90Y 및 186Re), 화학치료제, 및 독소, 예컨대, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 유래의 효소적으로 활성인 독소 또는 합성 독소, 또는 이의 단편을 포함하는 것으로 의도된다. 비-세포독성제는 세포 기능을 저해하거나 또는 막지 않고/않거나 세포 파괴를 야기하지 않는 물질을 지칭한다. "비-세포독성제"는 세포독성으로 활성화될 수 있는 제제를 포함할 수 있다. 비-세포독성제는 비드, 리포솜, 기질 또는 입자를 포함할 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 미국 특허 공개 제2003/0028071호 및 제2003/0032995호 참조). 이러한 제제는 본 명세서에 기재된 이량체 조성물과 접합, 결합, 연결 또는 회합될 수 있다.
일부 실시형태에서, 통상적인 암 의약은 본 명세서에 기재된 조성물과 함께 투여된다. 일부 실시형태에서, 암 치료를 필요로 하는 대상체는 표적 암 세포와 관련된 하나 이상의 추가적인 제제와 함께 본 명세서에 기재된 이량체 조성물로 치료된다. 고도로 적합한 제제는 암 세포에서 DNA-손상, 예를 들어, 세포 DNA에서 이중 가닥 파손을 촉진시키는 해당 제제를 포함한다. 당업자에게 공지된 DNA-손상제의 임의의 형태가 사용될 수 있다. DNA 손상은 전형적으로 방사선 요법 및/또는 화학요법에 의해 생성될 수 있다. DNA-손상제는 또한 유전자독성제로도 지칭된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "~와 함께"는 이량체 조성물이 한 가지 이상의 추가적인 요법의 투여 전에, 또는 후에 한 가지 이상의 추가적인 요법과 병행하여(동시, 또는 별개이지만 근접하여) 대상체에게 투여된다는 것을 의미한다.
방사선 요법의 예는 외부 방사선 요법 및 내부 방사선 요법(근접치료로도 불림)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 외부 방사선 요법에 대한 에너지원은 x-선, 감마선 및 입자빔을 포함하고, 내부 방사선에 사용되는 에너지원은 방사성 요오드(요오드 또는 요오드), 스트론튬, 또는 인, 팔라듐, 세슘, 인듐, 포스페이트 또는 코발트의 방사성동위원소를 포함한다. 방사선 요법을 투여하는 방법은 당업자에게 잘 공지되어 있다.
특히 유용한 DNA-손상 화학치료제의 예는 하기를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 부설판(Myleran), 카보플라틴(Paraplatin), 카무스틴(BCNU), 클로람부실(Leukeran), 시스플라틴(Platmol), 사이클로포스파마이드(Cytoxan, Neosar), 다카바진(DTIC-Dome), 이포스파마이드(Ifex), 로무스틴(CCNU), 메클로르에타민 (질소 머스타드, Mustargen), 멜팔란(Alkeran) 및 프로카바진(Matulane).
다수의 다른 화학치료제는 또한 단독으로 또는 병용하여 본 명세서에 기재된 방법에 대해 사용될 수 있다. 이들은 메토트렉세이트, 빈크리스틴, 아드리아마이신, 시스플라틴, 비-당 함유 클로로에틸니트로소유레아, 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 블레오마이신, 독소루비신, 다카바진, 탁솔, 프라질린, 메글라민 GLA, 발루비신, 카무스타인 및 폴리페르포산, MMI270, BAY 12-9566, RAS 파네실 트랜스퍼라제 저해제, 파네실 트랜스퍼라제 저해제, MMP, MTA/LY231514, LY264618/로메텍솔(Lometexol), 글라모렉(Glamolec), CI-994, TNP-470, 하이캄틴(Hycamtin)/토포테칸, PKC412, 발스포다르/PSC833, 노반트론/미토산트론, 메타레트(Metaret)/수라민, 바티마스타트(Batimastat), E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, Incel/VX-710, VX-853, ZD0101, ISI641, ODN 698, TA 2516/마리마스타트, BB2516/마리마스타트, CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f, 레모날(Lemonal) DP 2202, FK 317, 피시바닐/OK-432, AD 32/발루비신, 메타스트론/스트론튬 유도체, 테모달/테모졸마이드, 에바세트/리포솜 독소루비신, 유탁산(Yewtaxan)/파클리탁셀, 탁솔/파클리탁셀, 젤로드(Xeload)/카페시타빈, 후트론(Furtulon)/독시플루리딘, 사이클로팍스(Cyclopax)/경구 파클리탁셀, 경구 탁소이드, SPU-077/시스플라틴, HMR 1275/플라보피리돌, CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/RAS 종양유전자 저해제, BMS-182751/경구용 백금, UFT(테가푸르/우라실), 에르가미솔/레바미솔, 에닐우라실/776C85/5FU 증강제, 캄토/레바미솔, 캠토사/이리노테칸, 투모덱스/랄리트렉세드, 류스타틴/클라드리빈, 파섹스(Paxex)/파클리탁셀, 독실/리포솜 독소루비신, 케릭스(Caelyx)/리포솜 독소루비신, 플루다라(Fludara)/플루다라빈, 파르마루비신/에피루비신, DepoCyt, ZD 1839, LU 79553/비스-나프탈리미드, LU 103793/돌라스타인, 케릭스/리포솜 독소루비신, 겜자르/겜시타빈, ZD 0473/아노르메드(Anormed), YM 116, 요오드 씨드(Iodine seed), CDK4 및 CDK2 저해제, PARP 저해제, D4809/덱시포사마이드, Ifes/메스넥스(Mesnex)/이포스아마이드, 부몬/테니포사이드, 파라플라틴/카보플라틴, 플란틴올/시스플라틴, 베페사이드/에토포사이드, ZD 9331, 탁소텔/도세탁셀, 구아닌 아라비노사이드의 프로드러그, 탁산 유사체, 니트로소우레아, 알킬화제, 예컨대, 멜펠란 및 사이클로포스파마이드, 아미노글루테티마이드, 아스파라기나제, 부설판, 카보플라틴, 클로람부실, 시스플라틴, 사이타라빈 HCl, 닥티노마이신, 다우노루비신 HCl, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에토포사이드(VP16-213), 플록수리딘, 플루오로우라실(5-FU), 플루타마이드, 하이드록시우레아(하이드록시카브아마이드), 이포스파마이드, 인터페론 알파-2a, 알파-2b, 류프롤라이드 아세테이트(LHRH-방출 인자 유사체), 로무스틴(CCNU), 메클로르에타민 HCl(질소 머스타드), 머캅토퓨린, 메스나, 미토탄(o.p'-DDD), 미톡산트론 HCl, 옥트레오타이드, 플리카마이신, 프로카바진 HCl, 스트렙토조신, 타목시펜 시트레이트, 티오구아닌, 티오테파, 빈블라스틴 설페이트, 암사크린(m-AMSA), 아자시티딘, 적혈구생성소, 헥사메틸멜라민(HMM), 인터류킨 2, 미토구아존(메틸-GAG; 메틸 글리옥살 비스-구아닐하이드라존; MGBG), 펜토스타틴(2'데옥시코포르마이신), 세무스틴(메틸-CCNU), 테니포사이드(VM-26) 및 빈데신 설페이트를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
또한, 다음의 제제는 또한 본 발명에 유용할 수 있다: 알킬화제, 예컨대, 카보플라틴 및 시스플라틴, 질소 머스타드 알킬화제, 니트로소우레아 알킬화제, 예컨대, 카무스틴(BCNU), 항대사물질, 예컨대, 메토트렉세이트, 폴리닌산, 퓨린 유사체 항대사물질, 머캅토퓨린, 피리미딘 유사체 항대사물질, 예컨대, 플루오로우라실(5-FU) 및 겜시타빈(Gemzar®), 호르몬 항신생물제, 예컨대, 고세렐린, 류프롤라이드 및 타목시펜, 천연 항신생물제, 예컨대, 알데스류킨, 인터류킨-2, 도세탁셀, 에토포사이드(VP-16), 인터페론 알파, 파클리탁셀(Taxol®), 및 트레티노인(ATRA), 항생제 천연 항신생물제, 예컨대, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 다우노마이신 및 미토마이신 C를 포함하는 미토마이신, 및 빈카 알칼로이드 천연 신생물제, 예컨대, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 하이드록시우레아, 아세톤, 아드리아마이신, 이포스파마이드, 에노시타빈, 에피티오스탄올, 아클라루비신, 안시타빈, 니무스틴, 프로카바진 하이드로클로라이드, 카보쿠온, 카보플라틴, 카르모푸르, 크로모마이신 A3, 항종양 다당류, 항종양 혈소판 인자, 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 시조필란, 사이타라빈(사이토신 아라비노사이드), 다카바진, 티오모신, 티오테파, 테가푸르, 돌라스타틴, 돌라스타틴 유사체, 예컨대, 아우리스타틴, CPT-11(이리노테칸), 미토잔트론, 비노렐빈, 테니포사이드, 아미노프테린, 카보마이신, 에스페라마이신(예를 들어, 본 명세서에 참조에 의해 원용된 미국 특허 제4,675,187호 참조), 네오카지노스타틴, OK 432, 블레오마이신, 후트론, 브록순딘, 부설판, 혼반, 페플로마이신, 베스타틴(Ubenimex®), 인터페론-β, 메피티오스탄, 미토브롬톨, 멜팔란, 라미닌 펩타이드, 렌티난, 운지버섯 추출물, 테가푸르/우라실, 에스트라무스틴(에스트로겐/메클로르에타민), 탈리도마이드 및 레날리도마이드(Revlmid®).
다른 적합한 화학 치료제는 프로테아좀 저해제를 포함한다. 프로테아좀 저해제는 단백질, 특히, 세포 유지, 성장, 분열 및 세포사에 관련된 단명하는 단백질을 분해시키는 세포 복합체인 프로테아좀의 작용을 차단시킨다. 프로테아좀 저해제의 예는 보르테조밉(Velcade®), 락타시스틴(AG Scientific, Inc, 캘리포니아주 샌디에이고에 소재), MG1 32(Biomol International, 펜실베니아주 플리머스 미팅에 소재) PS-519, 에포네마이신, 에폭소마이신, 아클라시노마이신 A, 디펩타이드 벤즈아마이드, CVT-63417 및 비닐 설폰 트리펩타이드 프로테아좀 저해제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법은 암 면역요법을 포함하는 하나 이상의 다른 암 치료와 함께 사용된다. 암 면역요법은 암을 거부하기 위한 면역계의 사용이다. 주요 전제는 질환을 초래하는 종양 세포를 공격하는 대상체의 면역계를 자극하는 것이다. 이는 대상체 자신의 면역계가 파괴될 표적으로서 종양 세포를 인식하도록 제공되는 경우 대상체의 면역화를 통하거나, 또는 대상체 면역계가 치료제에 의해 종양 세포를 파괴하도록 보충되는 경우 약물로서 항체와 같은 치료제의 투여를 통할 수 있다. 암 면역요법은 항체-기반 요법 및 사이토카인-기반 요법을 포함한다.
다수의 치료적 단클론성 항체는 FDA에 의해 인간용으로 승인되었고, 더욱 진행 중에 있다. 암 면역요법을 위한 FDA-승인 단클론성 항체는 CD52, CD33, CD20, ErbB2, 혈관내피성장인자 및 표피성장인자 수용체에 대한 항체를 포함한다. 따라서, 하나 이상의 암-관련 항원을 표적화하는 이들 및 다른 항체는 본 명세서에 기재된 이량체 조성물과 함께 투여될 병용 요법에서 사용하기에 적합하다. 암 요법에 대해 FDA에 의해 승인된 단클론성 항체의 예는 하기를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 리툭시맙(Rituxan™으로서 입수 가능), 트라스투주맙(Herceptin™으로서 입수 가능), 알렘투주맙(Campath-IH™으로서 입수 가능), 세툭시맙(Erbitux™으로서 입수 가능), 베바시주맙(Avastin™으로서 입수 가능), 파니투무맙(Vectibix™으로서 입수 가능), 겜투주맙 오조가미신(Mylotarg™으로서 입수 가능), 이브리투모맙 튜세탄(Zevalin™으로서 입수 가능) 및 토시투모맙(Bexxar™으로서 입수 가능). 미국에서 암 요법에 대해 현재 인간 임상 시험이 진행중인 단클론성 항체의 예는 이하를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: WX-G250(Rencarex™으로서 입수 가능), 이필리무맙(MDX-010으로서 입수 가능), 자노리무맙(HuMax-CD4로서 입수 가능), 오파투누맙(HuMax-CD20으로서 입수 가능), chl4.18, 잘루투무맙(HuMax-EGFr로서 입수 가능), 오레고보맙(B43.13, OvalRex™으로서 입수 가능), 에드레콜로맙(IGN-101, Panorex™으로서 입수 가능), 131I-chTNT-I/B(Cotara™으로서 입수 가능), 펨투모맙(R-1549, Theragyn™으로서 입수 가능), 린투주맙(SGN-33으로서 입수 가능), 라베투주맙(hMN14, CEAcide™으로서 입수 가능), 카투막소맙(Removab™으로서 입수 가능), CNTO 328(cCLB8로서 입수 가능), 3F8, 177Lu-J591, 니모투주맙, SGN-30, 티실리무맙(CP-675206로서 입수 가능), 다클리주맙(Zenapax™으로서 입수 가능), 에프라투주맙(hLL2, LymphoCide™으로서 입수 가능), 90Y-에프라투주맙, 갈릭시맙(IDEC-114로서 입수 가능), MDX-060, CT-011, CS-1008, SGN-40, 마파투무맙(TRM-I로서 입수 가능), 아폴리주맙(HuIDlO, Remitogen™으로서 입수 가능) 및 볼로시씨맙(M200으로서 입수 가능).
암 면역요법은 또한 사이토카인-기반 요법을 포함한다. 사이토카인-기반 암 요법은 대상체의 면역 반응을 조절하는 하나 이상의 사이토카인을 이용한다. 암 치료에서 유용한 사이토카인의 비제한적 예는 인터페론-a(IFN-a), 인터류킨-2(IL-2), 과립구-대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF) 및 인터류킨-12(IL-12)를 포함한다.
본 출원 전체적으로 인용되는 모든 참고문헌의 전체 내용(참고문헌, 발행된 특허, 공개된 특허 출원, 및 공동 계류 중인 특허 출원)은 본 명세서에 분명하게 참조에 의해 원용된다.
또한 NKG2D 리간드 발현 질환을 진단하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (1) NKG2D 리간드 발현 질환을 갖는 대상체로부터 생물학적 샘플을 얻는 단계; (2) 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 이량체 단백질 또는 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하는 결합 시약과 접촉시키는 단계; 및 (3) 결합 시약에 대한 NKG2D 리간드의 결합을 검출하는 단계로서, 결합 시약에 대한 NKG2D 리간드의 결합은 대상체에서의 NKG2D 리간드 발현 질환의 진단을 나타내는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, NKG2D 리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 또는 ULBP6이다.
의약으로서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터, 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공된다.
질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터, 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공된다.
질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터, 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공되되, 상기 질환은 NKG2D 리간드 발현 질환이다.
질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 이량체 단백질, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드, 본 명세서에 기재된 벡터, 또는 본 명세서에 기재된 조성물이 본 명세서에 제공되되, 상기 질환은 암 또는 자가면역질환이다.
이량체 NKG2D-Fc 단백질의 제조
일부 실시형태에서, 이량체 NKG2D-Fc 키메라 작제물은 통상적인 재조합 DNA 방법에 의해 생성된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이량체 NKG2D 단백질은 단일(예를 들어, 인접한) 재조합 폴리펩타이드로서 생성된다. 다른 실시형태에서, 이량체 NKG2D 단백질의 둘 이상의 부분은 별개의 단편으로서 생성되고, 후속적으로 함께 연결되어 이량체 NKG2D-Fc 분자를 수득한다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질의 각 NKG2D 부분 및 이량체 단백질의 Fc 부분은 각각 별개의 재조합 폴리펩타이드로서 생성되고, 이어서, 화학적 연결 수단에 의해 함께 융합되어 융합된 NKG2D-Fc를 수득한다. 이 생성 방법은 비-펩타이드 연결 분자가 사용되는 상황에서 특히 바람직할 수 있다. 유사하게, 이 생성 방법은 또한 단일의 인접한 폴리펩타이드로서 생성될 때 이량체 NKG2D-Fc 단백질이 정확하게 폴딩되지 않는 경우에(예를 들어, 리간드에 적절하게 결합하지 않는 경우에) 바람직할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이량체 단백질(예를 들어, NKG2D 부분 및 Fc 부분)의 각 단량체는 단일 인접 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 단일 재조합 폴리펩타이드로서 세포에서 생성된다. 일부 실시형태에서, 이량체 NKG2D 분자는 단백질-단백질 상호작용에 의해, 예를 들어, Fc-단편에 의해 생성된다.
재조합 폴리펩타이드의 생성을 위해, 다양한 숙주 유기체가 사용될 수 있다. 적합한 숙주는 박테리아, 예컨대, 이콜라이(E. coli), 효모 세포, 곤충 세포, 식물 세포 및 포유류 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 적합한 숙주 유기체의 선택은 이량체 NKG2D-Fc 단백질의 특정 적용에 따라 다를 것이다. 당업자는 재조합 폴리펩타이드를 생성하기 위한 적합한 숙주를 선택함에 있어서 특정 기준을 고려하는 방법을 이해할 것이다. 적합한 숙주의 선택에 영향을 미치는 인자는, 예를 들어, 번역 후 변형, 예컨대, 인산화 및 글리코실화 패턴뿐만 아니라 기술적 인자, 예컨대, 일반적인 예상 수율 및 정제의 용이함을 포함한다. 생체내에서 사용될 이량체 NKG2D-Fc의 숙주 특이적 번역 후 변형은 특정 특이적 변형 후 고도로 면역원성(항원성)인 것으로 알려져 있기 때문에 주의깊게 고려되어야 한다.
일단 생성되면, 이량체 NKG2D-Fc는 임의의 적합한 수단, 예컨대, 당업자에게 공지된 크로마토그래피 방법에 의해 정제될 수 있다. 크로마토그래피 방법의 예는 겔 여과 크로마토그래피를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Caine et al., Protein Expr. Purif., 1996, 8: 159-66] 참조. 일부 실시형태에서, 이량체 NKG2D-Fc는 단백질 A 면역친화도 크로마토그래피에 의해 정제된다.
당업자에 의해 인식될 바와 같이, 이량체 NKG2D 키메라 부분은 또한 별개로 제조 및 단리되고, 화학적 합성에 의해 결합될 수 있다.
실시예
실시예 1. 작제물 설계
MOE(Chemical Computing Group ULA)를 이용하여, 전장 인간 IgG1 항체(PDB 1HZH) 및 복합체 NKG2D/MICA(PDB IHYR)의 구조적 분석에 기반하여, NKG2D-Fc 변이체의 모델을 구성하였다. 도 1a는 NKG2D-Fc 변이체의 개략적 표현을 나타낸다. 모델을 PyMol Molecular Graphics System(Schroedinger LLC)에서 시각화하였다. 모델에서, 청색 영역은 NKG2D-Fc 변이체의 Fc 부분을 나타내고, 녹색 영역은 NKG2D-Fc 변이체의 NKG2D 부분을 나타내며, 오렌지색 영역은 결합된 MICA 단백질을 나타낸다(도 1b).
실시예 2. 조작 및 서열
실시예 2.1(도 2a 내지 도 2b)
NKG2D는 이량체로서 이의 리간드에 결합한다. NKG2D가 Fc 부분에 융합될 때, NKG2D 이량체는 Fc 단편의 이량체화에 의해 형성될 수 있거나, 또는 2개의 NKG2D 단편은 펩타이드 링커에 의해 연결되고, Fc 단편에 융합되어, 2개의 NKG2D 이량체를 갖는 2가 동형-이량체 단백질을 초래한다.
앞서 기재한 변이체뿐만 아니라 N-말단 및 C-말단의 Fc 융합 둘 다의 ADCC 신호전달을 유발하는 능력을 리포터 유전자 분석(RGA)에서 시험하였다.
4개의 인간 이량체 NKG2D-Fc 변이체를 먼저 HEK293T 세포에 일시적으로 발현시키고, 단백질 A 면역친화도 크로마토그래피에 의해 정제한다. 재조합 인간 MICA*008을 과발현시키는 1.5e4 조작된 안정한 CT26.WT 세포(표적 세포)를 10% FBS(분석 배지)로 보충한 RPMI-글루타맥스 배지(Gibco)에서 재현탁시키고, 백색 96-웰 플레이트의 웰에 플레이팅하였다. 세포를 분석 배지에서 희석시킨 상이한 몰 농도의 이량체 NKG2D-Fc 변이체와 함께 인큐베이션시켰다. 1시간의 인큐베이션 후에, 9e4 FcγRIIIa V158 NFAT 루시퍼라제 Jurkat(JNL) 세포(효과기 세포)를 실험 웰에 첨가하여 1:6의 표적:효과기 세포비를 초래한다. 분석 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰당 60 ㎕의 Bright-Glo™(Promega)의 첨가 및 빛으로부터 보호된 실온에서의 3분 동안의 인큐베이션에 의해 FcγRIIIa 수용체의 농도-의존적 활성화가 나타났다. Synergy HT 플레이트 판독기(Biotek)를 이용하여 얻어진 생물발광을 측정하였다. 배경 차감 형광 신호를 이용하여 절반의 최대 유효 농도(EC50)(ng/㎖)를 결정하였다(예를 들어, 도 2a 내지 도 2b 참조).
실시예 2.2(도 3a 내지 도 3b)
펩타이드 링커가 없는 또는 상이한 펩타이드 링커 길이(10, 20 또는 30개의 아미노산)를 갖는 Fc 영역의 N-말단에 또는 C-말단에 융합된 이량체 마우스 NKG2D-Fc 변이체의 결합을 특성규명하기 위해 세포 표면에서 발현된 마우스 NKG2D-리간드에 대한 유동-활성화 세포 분류(FACS) 기반 결합 분석을 수행하였다.
두 상이한 조작된 안정한 CT26.WT 세포주에 대해 절반 최대 유효 농도(EC50)(nM)를 결정하고, 이들의 표면에서 재조합 리간드 마우스 Rae-1α 및 마우스 Rae-1ε을 과발현시킨다. 세포를 5% FCS 및 0.04% NaN3(FACS 완충제)로 보충한 DPBS에서 상이한 농도의 단백질과 함께 인큐베이션시켰다. R-피코에리트린(R-PE)(Jackson ImmunoResearch, 참고 115-115-164)으로 표지된 항-마우스 Fc 항체로 결합된 단백질을 검출하였다. 각 샘플에 대해, Cell Quest Pro 소프트웨어(BD Biosciences)를 이용하여 살아있는 게이팅 세포의 얻어진 형광의 평균을 차감하였다.
모든 변이체는 링커 길이 및 배향과 독립적으로, Rae-1e와 유사하게 결합한다. 대조적으로, 20 또는 30aa의 링커 길이를 갖는 C-말단의 변이체는 Rae-1a에 대해 훨씬 감소된 결합을 나타낸다. 모든 다른 변이체는 이 리간드에 대해 비슷한 결합을 나타낸다.
실시예 2.3 (도 4a 내지 도 4d)
상이한 구조 및 NKG2D 결합가를 갖는 이량체 NKG2D-Fc 변이체의 ADCC 신호전달을 유발하는 능력을 리포터 유전자 분석에서 시험하였다.
변이체를 먼저 HEK293T 세포에 일시적으로 발현시키고, 단백질 A 면역친화도 크로마토그래피에 의해 정제한다.
재조합 인간 MICA*008을 과발현시키는 1.5e4 조작된 안정한 CT26.WT 세포(표적 세포)를 10% FBS(분석 배지)로 보충한 RPMI-글루타맥스 배지(Gibco)에서 재현탁시키고, 백색 96-웰 플레이트의 웰에 플레이팅하였다. 세포를 분석 배지에서 희석시킨 상이한 몰 농도의 이량체 NKG2D-Fc 변이체와 함께 인큐베이션시켰다. 1시간의 인큐베이션 후에, 항-ULBP2, ULBP5, ULBP6 염소 항체(Thermo Scientific, 참고 PA5-47118)를 이용하여 1 내지 2시간 동안 미리 차단시킨 9e4 FcγRIIIa V158 NFAT 루시퍼라제 Jurkat(JNL) 세포(효과기 세포)를 실험 웰에 첨가하여 1:6의 표적:효과기 세포비를 초래하였다. 대조군으로서, 표적 세포의 부재 하에(C+E 웰) NKG2D-Fc 단백질을 효과기 세포와 함께 인큐베이션시킴으로써 NKG2D-Fc 변이체와 효과기 세포의 반응성을 평가하였다. 분석 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰당 60 ㎕의 One-Glo™(Promega)의 첨가 및 빛으로부터 보호된 실온에서의 3분 동안의 인큐베이션에 의해 FcγRIIIa 수용체의 농도-의존적 활성화가 나타났다. Synergy HT 플레이트 판독기(Biotek)를 이용하여 얻어진 생물발광을 측정하였다. 배경 차감 형광 신호를 이용하여 절반의 최대 유효 농도(EC50)(ng/㎖)를 결정하였다(예를 들어, 도 4a 내지 도 4d 참조).
결합가 및 구조는 세포를 표적화하고 세포 사멸을 유발하는 능력에서 어떤 역할을 한다. 도 4b는 1가(HH17)에서 2가(HH16)까지의 결합의 적어도 1 log의 EC50 증가를 나타낸다. 놀랍게도, 분자의 구조, 본 명세서의 HH16 대 HH8은 세포 사멸(EC50)에서 적어도 1 log 차이를 갖는다. 2 내지 4의 결합가의 추가적인 증가 또는 다른 구조(도 4c 내지 도 4d)는 세포 사멸을 개선시키지 않는다.
실시예 2.4(도 5a 내지 도 5d)
적절한 발현 숙주에서 프로테아제 절단 및 분해의 분석은 본 발현 숙주에서의 추가적인 개발에 중요한 파라미터이다.
변이체를 유동 전기천공법(Maxcyte®)에 의해 CHO MaKO 세포에 일시적으로 발현시키고, 단백질 A 면역친화도 크로마토그래피에 의해 정제한다.
단백질의 전장 변성 감소 및 탈글리코실화 후 LC-MS에 의해 각 변이체에 대한 클리핑된 단백질 수준을 평가하였다.
재조합 인간 NKG2D 리간드에 대한 직접 결합 분석을 수행하여 5개의 아미노산 결실이 리간드에 대한 이량체 NKG2D-Fc의 결합에 영향을 미치는지를 결정하였다.
분석물로서 재조합 인간 MICA*001 리간드를 이용하여 단백질-A 포획 NKG2D-Fc 변이체 상에서 동력학 결합 친화도 상수(KD)를 측정하였다. 실온에서 BIAcore® T200(GE Healthcare, 스위스 글라트부르크에 소재) 상에서 측정을 수행하였다. 단백질 A 연구 등급 센서 칩(GE Healthcare, 참조 29127555)의 유세포 상에서 NKG2D-Fc 변이체를 포획하였다. 모든 단백질을 0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 계면활성제 P20에서 희석시켰다. 참조로서 사용하기 위해, 임의의 포획 단백질 없이 하나의 유세포를 블랭크로 남겨두었다. 참조에 대한 분석물 희석 시리즈의 후속적 주입 및 유세포 측정에 의해 결합 데이터를 획득하였다. 데이터 평가 동안 이중 참조를 허용하기 위해 농도 0 샘플(실행 완충제 단독)을 포함시켰다. 데이터 평가를 위해, 이중 참조 센소그램을 사용하였고, 해리상수(KD)를 분석하였다.
특정 프로테아제 절단 부위를 제2 NKG2D 도메인에서 LC-MS에 의해 확인할 수 있다(도 5a 내지 도 5c). 이 부위의 결실에 의해, 분해 산물의 유의미한 감소를 달성할 수 있었다(도 5d). 예상한 바와 같이, 149번 위치 aa에서의 클리핑은 결합 친화도가 시험 샘플과 비슷한, 단량체 분획의 6% 감소에만 기여한다(도 5d).
실시예 3. 작제물 형식
결합 및 세포 사멸 활성을 확인하기 위해 개발 중의 생성에 가까운 세포주로부터의 물질을 시험하였다.
재조합 인간 MICA*008, 인간 MICA*001, 인간 MICB*001 또는 사이노몰거스 MICB05 리간드 및 부적절한 표적인 GUS를 과발현시키는 1.5e4 조작된 안정한 CT26.WT 세포(표적 세포)를 10% FBS(분석 배지)로 보충한 RPMI-글루타맥스 배지(Gibco)에서 재현탁시키고, 백색 96-웰 플레이트의 웰에 플레이팅하였다. 세포를 분석 배지에서 희석시킨 상이한 몰 농도의 이량체 NKG2D-Fc 변이체와 함께 인큐베이션시켰다. 1시간의 인큐베이션 후에, 항-ULBP2, ULBP5, ULBP6 염소 항체(Thermo Scientific, 참고 PA5-47118)를 이용하여 1 내지 2시간 동안 미리 차단시킨 9e4 FcγRIIIa V158 NFAT 루시퍼라제 Jurkat(JNL) 세포(효과기 세포)를 실험 웰에 첨가하여 1:6의 표적:효과기 세포비를 초래하였다. 분석 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰당 60 ㎕의 One-Glo™(Promega)의 첨가 및 빛으로부터 보호된 실온에서의 3분 동안의 인큐베이션에 의해 FcγRIIIa 수용체의 농도-의존적 활성화가 나타났다. Synergy HT 플레이트 판독기(Biotek)를 이용하여 얻어진 생물발광을 측정하였다. 배경 차감 형광 신호를 이용하여 절반의 최대 유효 농도(EC50)(ng/㎖)를 결정하였다.
결과는, 놀랍게도, 유전적으로 동일한 작제물로부터의 HEK 유래 물질에 비하여, 적어도 10배만큼의 CHO 유래 물질의 활성 증가를 입증한다. 발견점은 적어도 2개의 적절한 인간 표적에 대해 유사하였다(도 9e).
실시예 4. 생성 및 클리핑
상이한 발현 숙주로부터 유래되었지만, 유전적으로 동일한 물질에 대해 특히 149/150번 위치에 대한 프로테아제 절단 수준을 분석하였다.
각 단백질 배치(batch)를 8 M 우레아, 0.4M NH4CO3, 0.17M DTT에 25 마이크로그램을 용해시키고, 30분 동안 50℃에서 가열하고, 이어서, 40 마이크로리터의 milliQ 워터의 첨가 후에 1 마이크로그램의 PNGase F와 함께 37℃에서 1시간의 인큐베이션에 의해 변성환원 및 탈글리코실화시켰다. 환원 변성된 탈글리코실화 단백질을 액체-크로마토그래피-질량분광학(LC-MS)에 주사하였다(214 ㎚에서 UV를 이용하여 BEH C4 1 ㎜ * 150 ㎜, Waters QTOF premier)(예를 들어, 도 10 참조).
2 ㎎의 HH2 참조 샘플(HEK-6E에서 생성)을 2E5 세포/㎖의 CHO-C8TD, CHO-MaKo 및 CHO-HPT3로 접종한 50 ㎖ DM133 세포 배양물 배지(Irvine Scientific)에 혼합하였다. Beckman Coulter Vicell을 이용하여 세포 밀도 및 생존 능력의 모니터링 하에 150 rpm 및 10% CO2에서 오비탈 진탕기(Infors HT)에서 8일 동안 36.5℃에서 진탕 플라스크(Corning)를 배양시켰다. 모든 상청액을 채취하고, 정제까지 -60℃ 미만에서 냉동시켰다. 수욕 내 30℃에서 해동시킨 후에, 1 ㎖ MabSelect SuRe 칼럼(GE Healthcare) 상에서 정제 전에 상청액을 멸균 여과시키고, 50 mM 아세트산, pH 3.0을 이용하여 단계 용리시켰다. 모든 용출액을 1 M Tris를 이용하여 pH 5.0으로 직접 적정하였다. 분석물에 대한 분취액을 취하고, 질량분석법에 의한 분석까지 -60℃ 미만에서 즉시 냉동시켰다. 각 샘플의 25 ㎍ 단백질을 우레아로 변성시키고, DTT로 환원시키고, PNGaseF로 탈글리코실화시켰다. 후속적으로 모든 단백질을 물/아세토니트릴 구배를 이용하는 BEH C4 RP 칼럼(Waters) 상에서 LC-MS QTOF 프리미어 시스템(Waters)에 의해 분석하였다. 결과를 이하의 표 1에 요약한다.
Figure pct00001
안정한 CHO-MaKO 세포에서 HH2, HH8, HH8-afuco 및 HH10의 추가적인 생성은 공동 배양 분석의 초기 결과를 확인하였다. 모든 제출 샘플에 대한 RP-MS 분석에 의해 소량의 클리핑 생성물(1% 이하의 낮은 수준)을 검출하였다.
방법 1(환원 및 알킬화된 RP-MS): 400 ㎍의 단백질을 Milli-Q 워터를 이용하여 356 ㎕의 총 용적으로 희석시키고, 20 ㎕의 1M Tris, pH 8.0을 첨가하여 pH를 조절하였다. 24 ㎕의 PNGaseF(GNF, 1㎎/㎖)를 첨가하여 탈글리코실화를 수행하고, 밤새 37℃에서 인큐베이션시켰다. 44 ㎕의 탈글리코실화된 샘플을 50 ㎕의 8M 구아니딘-HCl, 5 ㎕의 1M Tris pH 8.0, 1 ㎕ 1M DTT와 혼합하였다. 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션시킨 후에, 즉시 2 ㎕의 1M IAM을 첨가하고, 암실 내에서 다시 1시간 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 1 ㎕의 1M DTT를 최종적으로 샘플에 첨가하여, 알킬화를 퀀칭시키고, 후속적으로 3 ㎍의 단백질을 물/이소프로판올 및 아세토니트릴 구배를 이용하여 60℃에서 PLRP-S 칼럼(Agilent) 상의 LC-MS QTOF 시스템(Waters)으로 분석하였다.
방법 2(환원 RP-MS): 100 ㎍의 단백질을 Milli-Q 워터를 이용하여 9 ㎕의 총 용적으로 1:18로 희석시키고, 1.7 ㎕의 0.5M Tris, pH 7.5를 첨가하여 pH를 조절하였다. 6 ㎕의 PNGaseF(GNF, 1㎎/㎖) 및 1 ㎕의 EndoH(NEB, 125,000 U/㎖)를 첨가하여 탈글리코실화를 수행하였다. 샘플을 밤새 37℃에서 인큐베이션시켰다. 7.3 ㎕의 탈글리코실화된 샘플을 50 ㎕의 8 M 구아니딘-HCl, 5 ㎕의 1 M Tris pH 8.0, 1 ㎕의 1M DTT와 혼합하고, 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 즉시 1 ㎕의 10% TFA를 샘플에 첨가하였다. 후속적으로 3 ㎍의 단백질을 물/이소프로판올 및 아세토니트릴 구배를 이용하여 80℃에서 Acquity CSH C18(Waters) 상의 LC-MS QTOF 시스템(Waters)으로 분석하였다.
실시예 5. 시험관내 결합
향상된 ADCC의 결합 및 재조합 인간 MICA*001 및 MICB*001 리간드에 대한 야생형 NKG2D-Fc 변이체를 특성규명하기 위해 직접 결합 분석을 수행하였다. MICA 및 MICB에 대한 NKG2D 이량체 각각의 결합(1가 결합 셋업)을 특성규명하기 위해 NKG2D-Fc 변이체를 먼저 리간드로서 사용고, 두 번째로 2개의 동형이량체를 가질 때의 결합(2가 결합 셋업)에 대한 효과를 결정하기 위해 분석물로서 사용하였다.
1가 결합 셋업을 위해, 분석물로서 재조합 인간 NKG2D 리간드를 이용하여 단백질-A 포획 NKG2D-Fc 변이체 상에서 동력학 결합 친화도 상수(KD)를 측정하였다. 실온에서 BIAcore® T200(GE Healthcare, 스위스 글라트부르크에 소재) 상에서 측정을 수행하였다. 단백질 A 연구 등급 센서 칩(GE Healthcare, 참조 29127555)의 유세포 상에서 NKG2D-Fc 변이체를 포획하였다. 모든 단백질을 0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 계면활성제 P20에서 희석시켰다. 참조로서 사용하기 위해, 임의의 포획 단백질 없이 하나의 유세포를 블랭크로 남겨두었다. 참조에 대한 분석물 희석 시리즈의 후속적 주입 및 유세포 측정에 의해 결합 데이터를 획득하였다. 데이터 평가 동안 이중 참조를 허용하기 위해 농도 0 샘플(실행 완충제 단독)을 포함시켰다. 데이터 평가를 위해, 이중 참조 센소그램을 사용하였고, 해리상수(KD)를 분석하였다.
2가 결합 셋업을 위해, 분석물로서 NKG2D-Fc 변이체를 이용하여 스트렙타비딘 포획 재조합 인간 NKG2D 리간드 상에서 동력학 결합 친화도 상수(KD)를 측정하였다. 실온에서 BIAcore® T200(GE Healthcare, 스위스 글라트부르크) 상에서 측정을 수행하였다. 모든 단백질을 0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 계면활성제 P20에서 희석시켰다. 바이오틴일화된 NKG2D 리간드를 제조업자의 권장(GE Healthcare)에 따라 표준 절차를 이용하여 SA 연구 등급 센서 칩(GE Healthcare, 참조 29104992)의 유세포 상에서 공유적으로 포획하였다. 참조로서 사용하기 위해, 하나의 유세포를 블랭크 고정시켰다. 참조에 대한 분석물 희석 시리즈의 후속적 주입 및 유세포 측정에 의해 결합 데이터를 획득하였다. 데이터 평가 동안 이중 참조를 허용하기 위해 농도 0 샘플(실행 완충제 단독)을 포함시켰다. 데이터 평가를 위해, 이중 참조 센소그램을 사용하였고, 해리상수(KD)를 분석하였다.
2가 결합 셋업에서, 모두 3개의 분석 샘플(IgG1-Fc wt와 함께 HH8, IgG1-Fc_SDIE와 함께 HH10, 및 낮은 푸코스 함량을 갖는 IgG1-Fc wt과 함께 HH8_afuc)은 리간드 둘 다, 즉, MICA*001 및 MICB*001에 대해 서브나노몰 범위에서 비슷한 결합을 나타낸다. 예상한 바와 같이, 측정된 친화도는 결합활성 효과로 인해 1가 결합 셋업에서 더 낮다. 본 명세서에서, MICB*001에 대한 결합이 2배만큼 감소되기 때문에, MICA*001에 대한 모든 샘플의 결합은 두 자리 수 nM 범위에 있다.
Figure pct00002
6e6 293FT 세포(Invitrogen)를 10 ㎖ cD10을 갖는 10 ㎝ 접시에 플레이팅하고, 이어서, 3시간 후에 배지를 5 ㎖의 사전 가온시킨 Opti-MEM1로 바꾸었다. 표시된 리간드에 대해 암호화하는 DNA 플라스미드로 제조업자의 지침에 따라 리포펙타민-2000을 이용하여 OptiMem-1 첨가 후 4시간에 세포를 형질감염시켰다. 밤새 인큐베이션시킨 후에, 5 ㎖ PBS + 2 mM EDTA의 2회의 순차적 세척에 의해 세포를 채취하였다. 세포를 Nexcelom 세포 계수기 상에서 계수하고, 10 ㎍/㎖ HH8 또는 10 ㎍/㎖ 인간 IgG1 아이소타입과 함께 PBS + 2 mM EDTA + 2% 소태아 혈청(FACS 완충제)에서 100e3개의 세포를 재현탁시켰다. 세포를 15분 동안 4℃에서 염색시키고, 이어서, 200 ㎕ FACS 완충제에서 1회 세척하고, 15분 동안 4℃에서 2차 항체, Alexa488-표지된 염소 항-huIgG(A11013, Thermo Fisher)로 염색하였다. 이어서, 세포를 200 ㎕ FACS 완충제에서 1회 세척하고, 100 ㎕ FACS 완충제 중에서 재현탁시키고, 추가 100 ㎕의 IC 고정 완충제(eBioscience)로 고정시킨 후에 BD Fortessa 상에서 실행하고 Flowjo에서 분석하였다(예를 들어, 도 11a 내지 도 11b 참조).
6e6 293FT 세포(Invitrogen)를 10 ㎖ cD10을 갖는 10 ㎝ 접시에 플레이팅하고, 이어서, 3시간 후에 배지를 5 ㎖의 사전 가온시킨 Opti-MEM1로 바꾸었다. 표시된 리간드에 대해 암호화하는 DNA 플라스미드로 제조업자의 지침에 따라 리포펙타민-2000을 이용하여 OptiMem-1 첨가 후 4시간에 세포를 형질감염시켰다. 밤새 인큐베이션시킨 후에, 5 ㎖ PBS + 2 mM EDTA의 2회의 순차적 세척에 의해 세포를 채취하였다. 세포를 Nexcelom 세포 계수기 상에서 계수하고, 10 ㎍/㎖ HH8 또는 10 ㎍/㎖ 인간 IgG1 아이소타입과 함께 PBS + 2 mM EDTA + 2% 소태아 혈청(FACS 완충제)에서 100e3개의 세포를 재현탁시켰다. 세포를 15분 동안 4℃에서 염색시키고, 이어서, 200 ㎕ FACS 완충제에서 1회 세척하고, 15분 동안 4℃에서 2차 항체, Alexa488-표지된 염소 항-huIgG(A11013, Thermo Fisher)로 염색하였다. 이어서, 세포를 200 ㎕ FACS 완충제에서 1회 세척하고, 100 ㎕ FACS 완충제 중에서 재현탁시키고, 추가 100 ㎕의 IC 고정 완충제(eBioscience)로 고정시킨 후에 BD Fortessa 상에서 실행하고 Flowjo에서 분석하였다(예를 들어, 도 12a 내지 도 12b 참조).
1e6-5e6 종양 세포를 T-75 플라스크에서 25 ㎖ DMEM + 10% FBS 중에 직접 파종하고, 이어서, 5% CO2 중 37℃에서 배양시켰다. 72시간 후에, PBS + 2 mM EDTA에서 피펫팅함으로써 세포를 채취하였다. 정상 공여자 PBMC를 Leukopaks(HemaCare)로부터 채취하고, Ficoll로 정제하였다. 세포를 Nexcelom 세포 계수기 상에서 계수하고, 15분 동안 4℃에서 5 ㎕ TruStain FcX(eBioscience)와 함께 PBS + 2 mM EDTA + 2% 소태아 혈청(FACS 완충제)에서 100e3개의 세포를 재현탁시켰다. 이어서, 세포를 원심분리시키고, FACS 완충제 + 10 ㎍/㎖ HH8 또는 10 ㎍/㎖ 인간 IgG1 아이소타입에서 재현탁시켰다. 세포를 15분 동안 4℃에서 염색시키고, 이어서, 200 ㎕ FACS 완충제에서 1회 세척하고, 15분 동안 4℃에서 2차 항체, Alexa488-표지된 염소 항-huIgG(A11013, Thermo Fisher)로 염색하였다. 이어서, 세포를 200 ㎕ FACS 완충제에서 1회 세척하고, 100 ㎕ FACS 완충제 중에서 재현탁시키고, 추가 100 ㎕의 IC 고정 완충제(eBioscience)로 고정시킨 후에 BD Fortessa 상에서 실행하고 Flowjo에서 분석하였다(예를 들어, 도 13a 내지 도 13b 참조).
실시예 6. 시험관내 작용
1차 인간 NK 세포를 Leukopaks로부터 정제하고, 90% 소태아 혈청 + 10% DMSO에서 냉동시켰다. NK 세포를 분석일에 페놀 레드가 없는 RPMI + 10% 열-비활성화된 FBS + 50 μM 베타-머캅토에탄올 + 50 IU/㎖ 인간 IL-2(Corning)(분석 배지)에 해동시켰다. 표시된 NKG2D-L을 과발현시키도록 조작한 CT26.WT 세포를 분석 배지에서 배양시키고, 이어서, PBS + 2 mM EDTA로 채취하였다. 50,000개의 NK 세포 및 25,000개의 CT26.WT 세포를 각 웰에 첨가하고, NKG2D-Fc 항체의 희석물을 표시한 바와 같이 첨가하였다. 이어서, 분석을 37℃ + 5% CO2에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 비접착 세포를 채취하고, 항-CD45 APC-Cy7(eBioscience HI-30) 및 항-NKG2D APC(eBioscience 1D11)로 15분 동안 염색하고, 이어서, 세척 및 고정시키고, 이어서, BD Fortessa 및 Flowjo 상에서 분석하였다. CD45+의 NKG2D 중위 형광 강도를 아이소타입(100%) 또는 비드-기반 하향조절(0%)에 정규화시켰다(예를 들어, 도 14a 내지 도 14b 참조).
실시예 7. 생체내 기능- ADCC
향상된 Fc 감마 수용체 결합은 또한 효과기 세포 상에서 수용체의 더 강한 활성화로 인해 증가된 ADCC 활성을 초래하였고, 이를 세포의 RGA에서 표적 세포주로서 인간 MICA*008을 과발현시키는 세포주를 이용하는 셋업에서 시험하였다(도 15).
재조합 인간 MICA*008 리간드를 과발현시키는 1.5e4 조작된 안정한 CT26.WT 세포(표적 세포)를 10% FBS(분석 배지)로 보충한 RPMI-글루타맥스 배지(Gibco)에서 재현탁시키고, 백색 96-웰 플레이트의 웰에 플레이팅하였다. 세포를 분석 배지에서 희석시킨 상이한 몰 농도의 이량체 NKG2D-Fc 변이체와 함께 인큐베이션시켰다. 1시간의 인큐베이션 후에, 9e4 FcγRIIIa V158 NFAT 루시퍼라제 Jurkat(JNL) 세포(효과기 세포)를 실험 웰에 첨가하여 1:6의 표적:효과기 세포비를 초래한다. 분석 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰당 60 ㎕의 One-Glo™(Promega)의 첨가 및 빛으로부터 보호된 실온에서의 3분 동안의 인큐베이션에 의해 FcγRIIIa 수용체의 농도-의존적 활성화가 나타났다. Synergy HT 플레이트 판독기(Biotek)를 이용하여 얻어진 생물발광을 측정하였다. 배경 차감 형광 신호를 이용하여 절반의 최대 유효 농도(EC50)(ng/㎖)를 결정하였다.
Fc_감마 수용체 결합을 향상시키기 위한 돌연변이를 갖는 NKG2D-Fc 버전(HH10)은 야생형 IgG1-Fc(HH8)를 갖는 NKG2D-Fc 버전에 비하여 10배 더 강한 세포 사멸 활성을 나타내었다. Fc_감마 수용체 결합을 없앤 돌연변이를 갖는 NKG2D-Fc의 버전은 세포 사멸 활성을 나타내지 않는다(도 15). HEK 발현으로부터 유래된 IgG1wt를 갖는 NKG2D-Fc의 샘플은 도 9에서 이미 나타낸 바와 같이 적어도 10배 더 낮은 세포 사멸 활성을 나타내었다.
Figure pct00003
ADCC 향상(HH10 및 HH8-AFUCO) 및 야생형(HH8) NKG2D-Fc 변이체의 ADCC 활성을 시험관내 ADCC 분석(도 16a 내지 도 16d), 예컨대, 인간 CD16 발현 효과기 세포주를 이용하는 미국 특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재한 것에 의해 결정하였다. NKG2D-Fc 변이체의 생물학적 ADCC 활성을 NKG2D 리간드-발현 표적 및 NK 효과기 세포의 존재 하에 ADCC를 촉발시키는 이들의 능력에 기반하여 측정하였다. 인간 MICA*008, MICB*001, ULBP1 또는 ULBP2로 안정하게 형질감염시킨 칼세인 표지된 CT26.WT 세포를 상이한 농도의 NKG2D-Fc 변이체, 및 과량의 자연 살해 세포, 즉, 본 명세서에서 NK3.3 세포주(Saint Louis University, 참조 SLU-1011)와 함께 인큐베이션시켰다. 세포를 세척하고, RPMI 페놀이 없는 배지에서 재현탁시켜 1:20 표적 대 효과기 세포비에 도달되었다. 분석 배지를 표적 세포의 칼세인의 자발적 방출을 감소시키기 위해 1.5 mM의 프로베네시드(Invitrogen, 참조 P36400)로 보충하였다. 각 웰에서 사멸 세포로부터의 칼세인 방출을 측정함으로써 37℃/5% CO2에서 1시간 반의 인큐베이션 후에 CT26.WT 표적 세포의 농도-의존적 사멸을 분석하였다. 각 분석 플레이트는 실험군 웰과 대조군 웰의 조합을 포함한다. (i) 표적 세포로부터의 자발적 칼세인 방출(표적 자발성) 및 (ii) 표적 세포로부터의 최대 칼세인 방출(표적 최대값)을 설명하기 위해 몇 가지 상이한 유형의 대조군 웰을 사용하였다. 구체적 사멸의 백분율을 다음의 (실험 - 표적 자발성)/(표적 최대값 - 표적 자발성)로서 계산하였다. 절반의 최대 유효 농도(EC50)(ng/㎖)를 각 표적 세포주에 대해 결정하였다.
10,000개의 HCT-116 또는 OVCAR-3 세포를 50 ㎕의 낮은 IgG cR10 + 50 μM 2-ME + 100 IU/㎖ 인간 IL-2 중 96-웰 플레이트에 플레이팅하고, ACEA xCelligence 상의 37℃에서 51시간 동안 인큐베이션시켰다. 종양 플레이팅 후 51시간에, 100e3개의 NK 세포 및 표시된 농도에서의 NKG2D-Fc를 100 ㎕ 분석 배지 최종 용적에 대해 50 ㎕로 첨가하였다. 종양 플레이팅 후 72시간 또는 NK 세포 첨가 후 21시간에 사멸을 판독하고, NK 세포 첨가 전의 임피던스를 100% 생존으로 그리고 종양 세포 첨가 전의 임피던스를 0% 생존으로 설정함으로써 정규화하였다. NK 세포 첨가 후 96시간에, 유세포분석을 위해 웰의 비-접착 분획을 단리시키고, 항-CD56(eBioscience CMSSB PE-Cy7), 항-CD69(eBioscience H1.2F3 FITC), 항-CD45(eBioscience HI30 APC-Cy7), 항-NKG2D(Thermo Fisher 1D11 BV421), 및 Live/Dead Blue(Thermo Fisher L34962)로 염색하고, Becton Dickinson Fortessa 및 Flowjo(TreeStar) 상에서 분석하였다(예를 들어, 도 17a 내지 도 17e 참조).
1차 마우스 대식세포를 4e6/10 ㎖ cR10 + 50 ng/㎖ M-CSF(Peprotech)/10 ㎝ 접시에서 배양시킨 붉은 마우스 대퇴골 골수로부터 생성하였다. 2주의 총 배양까지 격일로 배지를 새롭게 하였다. 배양의 첫 번째 주 후에, 추가적인 M-CSF를 첨가하지 않았다. 셀 스크레이퍼(cell scraper)를 이용하여 2주 후에 대식세포를 채취하고, RPMI 1640 + 10% FBS 중 10 μM에서 CellTrace Violet(Life Technologies)로 표지하였다. 인간 ULBP2를 과발현시키도록 형질도입된 CT26.WT 세포를 RPMI 1640 + 10% FBS 중 1 μM에서 CFSE로 표지하였다. 50,000개의 CT26.WT 세포를 96-웰 v-바닥 플레이트에 플레이팅하고, 마우스 대식세포를 2:1의 효과기:표적으로 첨가하였다. 이어서, NKG2D-Fc를 표시된 농도로 첨가하였다. 세포를 2.5시간 동안 37℃에서 인큐베이션시키고, 이어서, 스핀다운시키고, 유동 직전에 100 ㎕ PBS + 2% FBS + 2 mM EDTA 중 1 ㎍/㎖ 7-AAD로 염색하였다. 식균 세포(CFSE+CellTraceViolet+)를 BD Fortessa 상에서 유세포분석에 의해 정량화하고, Flowjo에서 분석하였다(예를 들어, 도 18 참조).
재조합 인간 및 사이노몰거스 NKG2D 리간드를 과발현시키는 1.5e4 조작된 안정한 CT26.WT 세포(표적 세포)를 10% FBS(분석 배지)로 보충한 RPMI-글루타맥스 배지(Gibco)에서 재현탁시키고, 백색 96-웰 플레이트의 웰에 플레이팅하였다. 세포를 분석 배지에서 희석시킨 상이한 몰 농도의 이량체 NKG2D-Fc 변이체와 함께 인큐베이션시켰다. 1시간의 인큐베이션 후에, 9e4개의 FcγRIIIa V158 NFAT 루시퍼라제 Jurkat(JNL) 세포(효과기 세포)를 실험 웰에 첨가하여 1:6의 표적:효과기 세포비를 초래한다. 분석 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰당 60 ㎕의 One-Glo™(Promega)의 첨가 및 빛으로부터 보호된 실온에서의 3분 동안의 인큐베이션에 의해 FcγRIIIa 수용체의 농도-의존적 활성화가 나타났다. Synergy HT 플레이트 판독기(Biotek)를 이용하여 얻어진 생물발광을 측정하였다. 배경 차감 형광 신호를 이용하여 절반의 최대 유효 농도(EC50)(ng/㎖)를 결정하였다(예를 들어, 도 19a 내지 도 19f 참조).
Figure pct00004
실시예 8. 생체내 PK
8 내지 10주령의 암컷 C57Bl/6 마우스를 5 ㎎/㎏의 표시된 단백질로 주사하였다. 표시된 시점에, 20 내지 25 ㎕의 혈청을 생성하는 데 충분한 혈액 용적을 꼬리 정맥으로부터 회수하고, 원심분리시켜 혈청을 단리시켰다. 이어서, 혈청을 냉동시키고, 그 다음에, 후속적으로 해동시켰다. 비오틴 항-인간(Southern Biotech 2049-08)으로 코팅된 MSD 스트렙타비딘 플레이트를 이용하여 인간 IgG1을 정량화하고, 마우스 혈청을 첨가하고, 항-인간 설포태그(Southern Biotech 2049-01)로 검출하고, 제조업자 지침에 따라 신호를 검출하였다. 이어서, 샘플을 판독하고, MSD 기기 상에서 정량화하였다. HEK 세포로부터 유래된 물질을 이용하여 5 ㎎/㎏ 용량에 의한 HH8 및 SQX244 상의 초기 마우스 PK는 NKG2D-Fc의 빠른 제거 및 짧은 혈청 반감기를 나타내었다. HEK에 비해, CHO 세포 유래 물질은 마우스 및 NHP에서 PK를 유의미하게 개선시켰다. CHO로부터의 HH8 및 SQX244는 약간 더 빠른 분포상을 갖는 IgG 아이소타입에 대해 유사한 PK를 가졌다. 시험 용량에서 막 표적-매개 약물 분포(TMDD)로 인한 빠른 제거는 관찰되지 않았고, NHP에서 항-약물 항체(ADA)는 검출되지 않았다. CHO-HySi로부터의 과시알릴화(Hyper sialylation)는 PK에 대해 추가적인 효과가 없었고, 따라서 주요 발생기에서 추가 특성규명을 위해 CHO-HySi를 선택해제하였다(예를 들어, 도 20a 내지 도 20b 참조).
Figure pct00005
52 내지 77월령의 암컷 사이노몰거스 원숭이를 1 내지 100 ㎎/㎏의 HH8로 주사하였다. 표시된 시점에, 200 내지 250 ㎕의 혈청을 생성하는 데 충분한 혈액 용적을 대퇴부 정맥으로부터 회수하고, 원심분리시켜 혈청을 단리시켰다. 이어서, 혈청을 냉동시키고, 그 다음에, 후속적으로 해동시켰다. Fc 포획 또는 표적 포획을 이용하여 인간 IgG1을 정량화하였다. Fc 포획을 위해, 스트렙타비딘 코팅 플레이트를 비오틴 항-인간(Southern Biotech 2049-08)으로 코팅하고, 표적 기반 포획을 위해, 마이크로타이터 플레이트를 MICA로 직접 코팅하였다. 이어서, 사이노몰거스 원숭이 혈청을 첨가하고, HRP 접합 항-인간(Southern Biotech 2049-05)으로 검출하였다. 비색 판독을 이용하여 신호를 측정하였다. Fc 포획 기반 PK 분석으로부터의 개개 Cyno PK 데이터를 Cynos에서의 전형적인 IgG PK 예측에 따라 플롯팅하였다. cynos에서의 전형적인 IgG PK 예측은 2개의 구획 PK 모델에 기반하며, 3 ㎏ 원숭이에 대해 V1 = 41 ㎖/㎏, V2 = 44 ㎖/㎏, CL = 6 ㎖/일/㎏ 및 Q = 17 ㎖/일/㎏이다(Dostalek M et al., mAbs, 2017). 약간 더 빠른 분포 및 제거기를 제외하고, HH8 PK는 전형적인 IgG 항체 PK와 일반적으로 비슷하였다(예를 들어, 도 21a 내지 도 21b 참조).
실시예 9. 생체내 PD
인간 ULBP2를 과발현시키기 위해 CT26.WT 세포(ATCC)를 조작하고, RPMI-1640 + 10% 열-비활성화 FBS에서 확장시켰다. 1e6개의 세포를 6 내지 8주령의 Balb/c 마우스(Jackson)의 상부 좌측 옆구리에 피하로 이식하였다. 제0일에 시작해서, 마우스에 5 ㎎/㎏의 인간 IgG1 아이소타입 또는 HEK HH8을 복강내로 주사하였다. 이 주사를 6회의 총 용량에 대해 격일로 반복하였다. 6번째 용량 후 2일에, 종양을 채취하고, 단세포 현탁액에 분해시키고, 항-CD45, 항-NKp46 및 항-CD8로 염색하고 나서, BD Fortessa 및 Flowjo 상에서 분석하였다. NK 세포를 NKp46+CD45+ 세포로서 확인하였다. CD8+ T 세포를 CD8+CD45+ 세포로서 확인하고, 종양 내로의 침투율을 정량화한다(예를 들어, 도 22a 내지 도 22b 참조).
인간 MICA*001을 과발현시키기 위해 EL4 세포를 조작하였다. 이들 세포를 DMEM + 10% 열-비활성화된 FBS에서 확장시킨 후에 6 내지 8주령의 C57Bl/6 마우스(Jackson)의 상부 우측 옆구리에 피하로 500e3개의 세포를 이식하였다. 이어서, 마우스에 종양 이식 후 제2일에 20 ㎎/㎏ HH8 또는 인간 IgG1 아이소타입을 투약하고, 5일 후 효소 분해에 의해 종양을 채취하고, 항-CD69, 항-NKG2D, 항-CD45, 항-NKp46으로 염색하고, BD Fortessa 및 Flowjo 상에서 분석하였다. NK 세포를 NKp46+CD45+ 세포로서 확인하였다. CD69 및 NKG2D 중위 형광 강도를 계산하고, 본 명세서에 제시한다(예를 들어, 도 23a 내지 도 23b 참조).
실시예 10. 생체내 효능
인간 MICA*001을 과발현시키기 위해 EL4 세포를 조작하였다. 이들 세포를 DMEM + 10% 열-비활성화된 FBS에서 확장시킨 후에 6 내지 8주령의 C57Bl/6 마우스(Jackson)의 상부 우측 옆구리에 피하로 500e3개의 세포를 이식하였다. 이어서, 종양 이식 후 제2일, 제9일 및 제16일에 마우스에 5 ㎎/㎏ HH8, HH10 또는 인간 IgG1 아이소타입을 투약하였다. 종양을 캘리퍼에 의해 측정하고, 생존을 1,000 ㎣에 도달하는 시간으로서 계산하였다(예를 들어, 도 24a 내지 도 24b 참조).
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균등론
본 명세서에 인용된 각각의 및 모든 특허, 특허 출원 및 간행물의 개시 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 본 발명은 특정한 양상과 관련하여 개시되었지만, 다른 당업자가 본 발명의 진정한 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 본 발명의 다른 양태 및 변형을 고안할 수 있을 것임이 분명하다. 첨부된 청구범위는 모든 이러한 양상 및 균등물의 변형을 포함하는 것으로 해석되도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG <120> NKG2D FUSION PROTEINS AND USES THEREOF <130> PAT058633-WO-PCT <140> <141> <150> 62/902,080 <151> 2019-09-18 <150> 62/902,071 <151> 2019-09-18 <160> 76 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 141 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu 1 5 10 15 Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn 20 25 30 Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala 35 40 45 Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu 50 55 60 Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu 65 70 75 80 Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile 85 90 95 Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys 100 105 110 Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr 115 120 125 Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln 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gaggatggaa gctctctcag ctacaaccag 1080 cttaccctgg tggaaattcc caaaggaagc tgcgcagtgt atggttcaag tttcaaagcc 1140 tacacagaag attgcgctaa cctgaataca tacatttgca tgaaaagggc tgtcagaagt 1200 ggaggcgggt ctggaggcgg gtctttccaa cctgtcctgt gcaacaaaga agtgcccgtc 1260 agttccagag agggctactg tgggccatgt cccaataatt ggatttgcca cagaaacaac 1320 tgctaccagt tctttaatga ggagaaaact tggaaccagt cacaagcctc ttgtctgtca 1380 caaaacagca gcttgctgaa aatctacagc aaggaggagc aggactttct gaagctggtc 1440 aaatcttatc actggatggg tctggtgcag atccccgcca atggatcttg gcaatgggag 1500 gacggctctt ctctctccta taatcagctg acactggtag aaatccccaa agggagctgt 1560 gcagtgtacg ggagcagttt taaggcctat accgaggatt gcgcaaattt gaacacttac 1620 atctgcatga agagggccgt c 1641 <210> 61 <211> 557 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 61 Ile Ser Ala Met Val Arg Ser Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys 1 5 10 15 Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 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tcgttagcgc cctgccgatc 300 cagcaccagg actggatgtc aggtaaagaa tttaagtgca aggtgaataa taaggatctg 360 cccgctccta ttgagagaac gattagcaag cccaagggct ccgtgcgcgc accccaagtc 420 tacgttcttc ctcccccaga agaggagatg accaaaaagc aggtcaccct gacgtgtatg 480 gtgactgatt ttatgcccga agatatttac gtggaatgga caaacaacgg taaaacagag 540 ctgaactaca agaatactga gcccgtgctg gactccgacg gctcttactt tatgtatagc 600 aagctgagag ttgagaagaa aaattgggta gagagaaatt cttactcatg ttctgttgta 660 catgaaggac tgcacaatca tcacaccaca aagagtttca gtagaactcc aggtaaaggt 720 ggagggggct ccggaggtgg gggcagcggg ggaggtgggt ccggtggggg aggctctggc 780 ggaggtgggt ctggaggcgg tgggagcttt caacctgtcc tgtgtaacaa agaggttcca 840 gtgagttcaa gagagggata ctgcgggcca tgtccgaata actggatctg ccacaggaac 900 aactgctatc agtttttcaa cgaagaaaag acatggaacc agagtcaggc ttcctgtttg 960 tctcagaact ccagtctgct gaagatttac tcaaaggagg aacaggactt cctcaaactg 1020 gtaaagagct atcattggat gggactggtt cagatcccag ccaatggctc ttggcagtgg 1080 gaggatggaa gctctctcag ctacaaccag cttaccctgg tggaaattcc caaaggaagc 1140 tgcgcagtgt atggttcaag tttcaaagcc tacacagaag attgcgctaa cctgaataca 1200 tacatttgca tgaaaagggc tgtcagaagt ggaggcgggt ctggaggcgg gtctttccaa 1260 cctgtcctgt gcaacaaaga agtgcccgtc agttccagag agggctactg tgggccatgt 1320 cccaataatt ggatttgcca cagaaacaac tgctaccagt tctttaatga ggagaaaact 1380 tggaaccagt cacaagcctc ttgtctgtca caaaacagca gcttgctgaa aatctacagc 1440 aaggaggagc aggactttct gaagctggtc aaatcttatc actggatggg tctggtgcag 1500 atccccgcca atggatcttg gcaatgggag gacggctctt ctctctccta taatcagctg 1560 acactggtag aaatccccaa agggagctgt gcagtgtacg ggagcagttt taaggcctat 1620 accgaggatt gcgcaaattt gaacacttac atctgcatga agagggccgt c 1671 <210> 63 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 63 Ile Ser Ala Met Val Arg Ser Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys 1 5 10 15 Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 20 25 30 Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser 35 40 45 Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp 50 55 60 Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln 65 70 75 80 Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser 85 90 95 Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys 100 105 110 Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile 115 120 125 Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro 130 135 140 Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met 145 150 155 160 Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn 165 170 175 Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser 180 185 190 Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn 195 200 205 Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu 210 215 220 His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 225 230 235 <210> 64 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Arg Thr Val Ala 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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 66 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 66 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 67 <211> 284 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 67 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 20 25 30 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 35 40 45 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 50 55 60 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 65 70 75 80 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 85 90 95 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 100 105 110 Thr Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile 115 120 125 Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn 130 135 140 Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val 145 150 155 160 Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys 165 170 175 Cys Ile Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser 180 185 190 Thr Val Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro 195 200 205 Ser Gly Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala 210 215 220 Ala Thr Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys 225 230 235 240 Ser Pro Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His 245 250 255 Gly Thr Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser 260 265 270 Ala Ser His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly 275 280 <210> 68 <211> 227 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic 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His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Lys 225 <210> 69 <211> 503 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 69 Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys 1 5 10 15 Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp 20 25 30 Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn 35 40 45 Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys 50 55 60 Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile Pro Thr Asn 65 70 75 80 Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu 85 90 95 Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser 100 105 110 Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys 115 120 125 Met Gln Arg Thr Val Arg Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Asn 130 135 140 Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro 145 150 155 160 Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu 165 170 175 Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala 180 185 190 Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu 195 200 205 Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly 210 215 220 Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr 225 230 235 240 Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe 245 250 255 Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met 260 265 270 Gln Arg Thr Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 275 280 285 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 290 295 300 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 305 310 315 320 Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 325 330 335 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 340 345 350 Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 355 360 365 Trp Leu 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agaggaccag 180 gatctgctga agctcgtgaa gtcctaccac tggatgggcc tggtgcacat ccccaccaat 240 ggcagctggc agtgggagga cggcagcatc ctgagcccca acctgctgac catcatcgag 300 atgcagaagg gcgactgcgc cctgtacgcc agcagcttca agggctacat cgagaactgt 360 agcaccccca acacctacat ctgtatgcag cggaccgtca gaagtggagg cgggtctgga 420 ggcggatcca accaggaagt gcagatcccc ctgaccgaga gctactgcgg cccctgcccc 480 aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 540 tacgagagcc aggccagctg catgagccag aacgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 600 gaggaccagg atctgctgaa gctcgtgaag tcctaccact ggatgggcct ggtgcacatc 660 cccaccaatg gcagctggca gtgggaggac ggcagcatcc tgagccccaa cctgctgacc 720 atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagcttcaa gggctacatc 780 gagaactgca gcacccccaa cacctacatt tgcatgcagc gtacggttga caagacccac 840 acctgccctc cctgtccagc ccctgaactg ctgggaggcc ctagcgtgtt cctgttcccc 900 ccaaagccca aggacaccct gatgatcagc cggacccccg aagtgacctg tgtggtggtg 960 gccgtgtctc acgaggaccc tgaagtgaag tttaattggt acgtggacgg cgtggaagtg 1020 cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa cagtacgcca gcacctaccg ggtggtgtcc 1080 gtgctgacag tgctgcacca ggactggctg aacggcaaag agtacaagtg caaggtgtcc 1140 aacaaggccc tggccgctcc catcgagaaa accatcagca aggccaaggg ccagccccgc 1200 gaaccccagg tgtacacact gccccctagc agggacgagc tgaccaagaa ccaggtgtcc 1260 ctgacctgcc tcgtgaaggg cttctacccc tccgatatcg ccgtggaatg ggagagcaac 1320 ggccagcccg agaacaacta caagaccacc ccccctgtgc tggactccga cggctcattc 1380 ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag tcccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc 1440 tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac cactacaccc agaagtccct gagcctgagc 1500 cccggcaaa 1509 <210> 71 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 71 Phe Leu Asn Ser Leu Phe 1 5 <210> 72 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 72 Gly Gly Gly Gly Ala 1 5 <210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> 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Claims (59)

  1. 2개의 단량체를 포함하는 이량체 단백질로서, 각 단량체는:
    (1) 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체;
    (2) 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체;
    (3) 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 연결하는 제1 펩타이드 링커; 및
    (4) 면역글로불린(Ig)의 단편 결정화 가능 영역(Fc 영역)
    을 포함하는, 이량체 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 동일한 아미노산 서열을 갖는, 이량체 단백질.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 상이한 아미노산 서열을 갖는, 이량체 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 펩타이드 링커는 글리신-세린 펩타이드 링커인, 이량체 단백질.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 링커는 식 (GGGS)n(서열번호 9)으로 나타내되, n은 1, 2, 3, 4 또는 5인, 이량체 단백질.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 링커는 (GGGS)2(서열번호 10)인, 이량체 단백질.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 영역을 포함하는, 이량체 단백질.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1의 Fc 영역을 포함하는, 이량체 단백질.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열번호 5, 6, 63, 64, 65 또는 68에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열번호 5, 6, 63, 64, 65 또는 68의 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 N-말단에서 C-말단까지, 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 상기 제1 펩타이드 링커, 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체 및 상기 Fc 영역을 포함하는, 이량체 단백질.
  16. 제15항에 있어서, 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 펩타이드 링커 없이 상기 Fc 영역과 직접 융합되는, 이량체 단백질.
  17. 제15항에 있어서, 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체는 제2 펩타이드 링커를 통해 상기 Fc 영역과 연결되는, 이량체 단백질.
  18. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 N-말단에서 C-말단까지, 상기 Fc 영역, 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체, 상기 제1 펩타이드 링커 및 상기 제2 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 포함하는, 이량체 단백질.
  19. 제18항에 있어서, 상기 Fc 영역은 펩타이드 링커 없이 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 직접 융합되는, 이량체 단백질.
  20. 제19항에 있어서, 상기 Fc 영역은 제2 펩타이드 링커를 통해 상기 제1 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체와 연결되는, 이량체 단백질.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 1 또는 2개의 추가적인 NKG2D 펩타이드 또는 이의 변이체를 더 포함하는, 이량체 단백질.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 및 69 중 어느 하나에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 서열번호 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61 및 69 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 이량체 단백질.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 및 70 중 어느 하나에 대해 적어도 85%의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된, 이량체 단백질.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단량체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 및 70 중 어느 하나를 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열에 의해 암호화된, 이량체 단백질.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2개의 단량체는 공유적으로 연결되는, 이량체 단백질.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2개의 단량체는 Cys-Cys 브리지를 통해 연결되는, 이량체 단백질.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 약물 모이어티를 더 포함하는, 이량체 단백질.
  29. 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62 및 70 중 어느 하나를 포함하거나 이들로 이루어진 핵산 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드.
  30. 제29항의 상기 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 벡터.
  31. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드 또는 제30항의 벡터를 포함하는, 조성물.
  32. 제31항에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함하는, 조성물.
  33. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드, 제30항의 벡터 또는 제31항 또는 제32항의 조성물을 포함하는, 세포.
  34. 제33항에 있어서, 상기 세포는 중국 햄스터 난소(Chinese hamster ovary: CHO) 세포인, 세포.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 세포는 변형된 CHO 세포인, 세포.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 CHO 세포는 비활성화된 매트립타제(matriptase) 유전자 또는 매트립타제 유전자의 넉아웃(knock-out)을 포함하는, 세포.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항의 세포에 의해 생성된 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 이량체 단백질.
  38. CHO 세포에 의해 생성된 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 이량체 단백질.
  39. 제38항에 있어서, 상기 CHO 세포는 변형된 CHO 세포인, 이량체 단백질.
  40. 제39항에 있어서, 상기 변형된 CHO 세포는 비활성화된 매트립타제 유전자 또는 매트립타제 유전자의 넉아웃을 포함하는, 이량체 단백질.
  41. 질환의 치료 방법으로서, 질환 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제28항 및 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항의 이량체 단백질 또는 제31항 또는 제32항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 질환은 NKG2D 리간드 발현 질환인, 방법.
  43. 제41항에 있어서, 상기 질환은 암 또는 자가면역질환인, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 암은 NKG2D 리간드 발현 암인, 방법.
  45. 제41항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 NKG2D 리간드 발현 암을 갖는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 상기 리간드 발현 암은 폐암, 난소암, 결장암, 췌장암, 방광암, 유방암, 간세포암종(HCC), 신세포암, 비인두암(NPC), 전립선암, 흑색종, 형질세포암, 백혈병, 림프종, 신경교종 또는 신경아세포종인, 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)인, 방법.
  48. 제41항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 항암 요법 또는 항암제를 이용하여 상기 대상체를 치료하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 추가적인 항암 요법은 수술, 방사선 요법, 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 아쥬반트 요법 또는 면역요법인, 방법.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 상기 추가적인 암 요법은 DNA를 손상시키는 화학요법인, 방법.
  51. 제41항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NKG2D 리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 또는 ULBP6인, 방법.
  52. 제41항에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스 관절염, 결장염, 셀리악병, 다발성 경화증, 원형 탈모증, 1형 당뇨병, 만성 폐쇄성 폐질환, 죽상동맥경화증 또는 2형 당뇨병과 관련된 대사 증후군인, 방법.
  53. NKG2D 리간드 발현 질환의 진단 방법으로서,
    (1) NKG2D 리간드 발현 질환을 갖는 대상체로부터 생물학적 샘플을 얻는 단계;
    (2) 상기 생물학적 샘플을 제1항 내지 제28항 및 제37항 중 어느 한 항의 이량체 단백질 또는 제31항 또는 제32항의 조성물을 포함하는 결합 시약과 접촉시키는 단계; 및
    (3) 상기 결합 시약에 대한 상기 NKG2D 리간드의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합 시약에 대한 상기 NKG2D 리간드의 결합은 상기 대상체에서의 상기 NKG2D 리간드 발현 질환의 진단을 나타내는, 단계
    를 포함하는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 NKG2D 리간드는 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5 또는 ULBP6인, 방법.
  55. 의약으로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제28항 및 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드, 제30항의 벡터, 또는 제31항 또는 제32항의 조성물.
  56. 의약의 제조에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제28항 및 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드, 제30항의 벡터, 또는 제31항 또는 제32항의 조성물.
  57. 질환의 치료에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제28항 및 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드, 제30항의 벡터, 또는 제31항 또는 제32항의 조성물.
  58. 질환의 치료에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제28항 및 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드, 제30항의 벡터, 또는 제31항 또는 제32항의 조성물로서, 상기 질환은 NKG2D 리간드 발현 질환인, 이량체 단백질, 폴리뉴클레오타이드, 벡터 또는 조성물.
  59. 질환의 치료에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제28항 및 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항의 이량체 단백질, 제29항의 폴리뉴클레오타이드, 제30항의 벡터, 또는 제31항 또는 제32항의 조성물로서, 상기 질환은 암 또는 자가면역질환인, 이량체 단백질, 폴리뉴클레오타이드, 벡터 또는 조성물.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023215882A1 (en) * 2022-05-05 2023-11-09 Northwestern University Methods of treating immunotherapy-associated adverse effects

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4675187A (en) 1983-05-16 1987-06-23 Bristol-Myers Company BBM-1675, a new antibiotic complex
US4911920A (en) 1986-07-30 1990-03-27 Alcon Laboratories, Inc. Sustained release, comfort formulation for glaucoma therapy
FR2588189B1 (fr) 1985-10-03 1988-12-02 Merck Sharp & Dohme Composition pharmaceutique de type a transition de phase liquide-gel
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
DE69212850T2 (de) 1991-01-15 1997-03-06 Alcon Lab Inc Verwendung von Karrageenan in topischen ophthalmologischen Zusammensetzungen
US5212162A (en) 1991-03-27 1993-05-18 Alcon Laboratories, Inc. Use of combinations gelling polysaccharides and finely divided drug carrier substrates in topical ophthalmic compositions
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
US5830645A (en) 1994-12-09 1998-11-03 The Regents Of The University Of California Comparative fluorescence hybridization to nucleic acid arrays
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6997863B2 (en) 2001-07-25 2006-02-14 Triton Biosystems, Inc. Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles
US7074175B2 (en) 2001-07-25 2006-07-11 Erik Schroeder Handy Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
PT1899364T (pt) 2005-05-17 2020-05-20 Univ Connecticut Composições e métodos para imunomodulação num organismo
JP5252635B2 (ja) 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
CA2636111C (en) 2006-01-13 2018-04-03 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Codon optimized il-15 and il-15r-alpha genes for expression in mammalian cells
CN104945508B (zh) 2007-06-18 2019-02-22 默沙东有限责任公司 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体
PT3075858T (pt) 2007-12-21 2020-04-30 Novartis Ag Vetor de expressão de mamífero
CN104548091A (zh) 2008-02-11 2015-04-29 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
BRPI0917891A2 (pt) 2008-08-25 2015-11-24 Amplimmune Inc antagonistas de pd-1 e métodos de utilização dos mesmos
EP2350129B1 (en) 2008-08-25 2015-06-10 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
CA2734340C (en) 2008-08-28 2019-03-05 Novartis Ag Cell surface display of polypeptide isoforms by stop codon readthrough
LT4209510T (lt) 2008-12-09 2024-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui
EP2393835B1 (en) 2009-02-09 2017-04-05 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
AR083847A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Novartis Ag Variantes de fc (fragmento constante) silenciosas de los anticuerpos anti-cd40
RU2716977C2 (ru) 2013-07-31 2020-03-17 Новартис Аг Новые селективные векторы и способы селекции эукариотических клеток-хозяев
PL3536776T3 (pl) 2014-04-29 2024-03-25 Novartis Ag Nowe komórki kręgowców i sposoby ekspresji rekombinowanej polipeptydu będącego przedmiotem zainteresowania
CN108367071B (zh) * 2015-11-13 2022-05-13 达纳-法伯癌症研究所有限公司 用于癌症免疫疗法的nkg2d-ig融合蛋白

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