KR20220050166A

KR20220050166A - Igm 글리코변이체

Info

Publication number: KR20220050166A
Application number: KR1020227008888A
Authority: KR
Inventors: 브루스 키트; 딘 응; 라메쉬 발리가
Original assignee: 아이쥐엠 바이오사이언스 인코포레이티드
Priority date: 2019-08-23
Filing date: 2020-08-21
Publication date: 2022-04-22
Also published as: MX2022002239A; EP4017533A1; AU2020337333A1; CA3149350A1; US20220306760A1; JP2022545682A; WO2021041250A1; BR112022003282A2; IL290253A; CN114269380A; EP4017533A4

Abstract

본 개시내용은 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자를 제공하되, 상기 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄는 표적에 특이적으로 결합하는 결합 도메인과 회합되는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역의 적어도 하나의 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하도록 돌연변이되고/되거나 적어도 하나의 N-연결된 글리코실화 모티프가 상기 변이체 IgM 중쇄에 도입된다.

Description

IGM 글리코변이체

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 미국 가출원 제62/891,263호(출원일: 2019년 8월 23일)의 이익을 주장하며, 이것은 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되고, 전문이 참조에 의해 포함된 서열 목록을 포함한다. ASCII 사본은 2020년 8월 21일에 작성되었고, 파일명은 026WO1-Sequence-Listing이며, 크기는 166,573바이트이다.

다량체화될 수 있는 항체 및 항체-유사 분자, 예컨대, IgA 및 IgM 항체는 예를 들어, 개선된 특이성, 개선된 결합활성(avidity) 및 다중 결합 표적에 대한 결합 능력을 허용하는 면역-종양학 및 감염 질환 분야에서 유망한 약물 후보물질로 출현하였다. 예를 들어, 미국 특허 제9,951,134호 및 제9,938,347호 및 PCT 특허 공개 제WO 2016/141303호, 제WO 2016/154593호, 제WO 2016/168758호, 제WO 2017/059387호, 제WO 2017 059380호, 제WO 2018/017888호, 제WO 2018/017763호, 제WO 2018/017889호 및 제WO 2018/017761호(이들의 내용은 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함됨) 참고.

다가 항체의 약동학(PK) 및 약력학(PD)은 복잡하고, 번역 시에 그리고 번역 후에 단클론성 항체의 구조뿐만 아니라 그것이 표적으로 하는 생리학적 시스템에 좌우된다. 더욱이, 상이한 항체 부류는 전형적으로 상이한 세포 시스템 및 생리 시스템을 통해서 대상체에서 처리된다. 예를 들어, IgG 항체 부류는 20일의 혈청 반감기를 갖는 반면, IgM 및 IgA 항체에 대한 반감기는 단지 약 5 내지 8일이다(문헌[Brekke, OH., and I. Sandlie, Nature Reviews Drug Discovery 2: 52-62 (2003)]).

항체 또는 다른 생물치료제의 PK의 주요 결정인자 중 하나는 이의 수준 및 글리코실화의 유형이다(문헌[Higel, F. et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 139:123-131 (2019)]). 항체 상의 특정 잔기에 공유 연결된 당 모이어티 및 이의 유도체는 그것이 수용체, 예컨대, 아시알로-당단백질(asialo-glycoprotein: ASGP) 수용체에 의해서 어떻게 인식되는 지를 결정할 수 있고, 그 다음 이것이 시스템 순환으로부터 얼마나 빨리 제거되는지를 결정한다. 각각의 IgM 중쇄 불변 영역은 아스파라긴-(N-)연결된 글리코실화의 5개의 부위를 갖고, J-쇄는 하나의 N-연결된 글리코실화 부위를 갖는다. 따라서, IgM을 함유하는 오량체 J-쇄는 최대 51개의 글리칸 모이어티를 함유하며, 이것은 복잡한 글리코실화 프로파일을 초래한다(문헌[Hennicke, J., et al., Anal. Biochem. 539:162-166 (2017)]). 글리칸의 복잡성은 균질하게 글리코실화된 물질의 제조를 어렵게 만들 수 있다.

다량체 항체의 설계에서 이루어진 발전에도 불구하고, 이들 분자의 물성, 약동학 특성 및 약력학 특성을 조작할 수 있는 것이 필요하다.

본 개시내용은 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자를 제공하되, 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄는 표적에 특이적으로 결합하는 결합 도메인과 회합되는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 포함하고, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역의 적어도 하나의 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하도록 돌연변이되고, N-연결된 글리코실화 모티프는 아미노산 서열 N-X₁-S/T를 포함하되, N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이며, S/T는 세린 또는 트레오닌이다. 특정 실시형태에서, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 서열번호 1(대립유전자 IGHM*03) 또는 서열번호 2(대립유전자 IGHM*04)의 아미노산 46(모티프 N1), 아미노산 209(모티프 N2), 아미노산 272(모티프 N3), 아미노산 279(모티프 N4), 및 아미노산 440(모티프 N5)에 상응하는 아미노산 위치에서 시작하는 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프 N- X₁-S/T를 포함하는 인간 IgM 중쇄 불변 영역으로부터 유래된다. 특정 실시형태에서, N-X₁-S/T 모티프 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하는 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 실시형태에서, IgM-유래 결합 분자는 모티프 N1, 모티프 N2, 모티프 N3, 모티프 N5, 또는 모티프 N1, N2, N3 또는 N5 중 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 모두의 임의의 조합에 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함하되, 아미노산 삽입, 결실 또는 치환은 해당 모티프에서 글리코실화를 방지한다.

특정 실시형태에서, IgM-유래 결합 분자는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 N46, N209, N272 또는 N440에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함하되, 치환된 아미노산은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 S48, S211, S274 또는 S442에 상응하는 아미노산 위치의 임의의 아미노산인 아미노산 치환이고, 치환된 아미노산은 트레오닌을 제외한 임의의 아미노산 또는 아미노산 치환 중 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 임의의 조합이다. 특정 실시형태에서, 아미노산 치환은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 N46X₂, N46A, N46D, N46Q, N46K, S48X₃, S48A, N229X₂, N229A, N229D, N229Q, N229K, S231X₃, S231A, N272X₂, N272A, N272D, N272Q, N272K, S274X₃, S274A, N440X₂, N440A, N440D, N449Q, N449K, S242X₃ 또는 S424A 또는 아미노산 치환 중 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 임의의 조합에 상응할 수 있되, X₂는 임의의 아미노산이고, X₃은 트레오닌을 제외한 임의의 아미노산이다.

특정 실시형태에서, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 아미노산 서열 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 또는 서열번호 18을 포함하는 변이체 인간 IgM 불변 영역이다.

특정 실시형태에서, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 변이체 IgM 중쇄 불변 영역에 적어도 하나의 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프를 도입하도록 돌연변이되되, 적어도 하나의 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 IgM 항체에서 자연적으로 글리코실화되지 않은 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 내의 부위에 도입된다. 특정 실시형태에서, 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 상이한 면역글로불린 아이소타입, 예를 들어, 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4, 인간 IgA1, 인간 IgA2, 인간 IgD 및 인간 IgE로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 면역글로불린 아이소타입에 존재하는 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프의 위치에 상응하는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 내의 위치에 존재한다.

특정 실시형태에서, 표적은 표적 에피토프, 표적 항원, 표적 세포, 표적 기관 또는 표적 바이러스이다.

특정 실시형태에서, IgM-유래 결합 분자는 각각 5개 또는 6개의 2가 IgM 결합 단위를 포함하는 오량체 또는 육량체 IgM 항체이되, 각각의 결합 단위는, 각각 변이체 IgM 불변 영역에 대해 아미노 말단에 위치된 VH를 포함하는 2개의 IgM 중쇄 및 각각 면역글로불린 경쇄 불변 영역에 대해 아미노 말단에 위치된 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 2개의 면역글로불린 경쇄를 포함하고, VH와 VL은 조합하여 표적에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 형성한다. 특정 실시형태에서, 5개 또는 6개 IgM 결합 단위는 동일하다.

특정 실시형태에서 IgM-유래 결합 분자는 오량체이고, J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체를 더 포함한다. 특정 실시형태에서, J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 20을 포함하는 성숙 인간 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체이다. 특정 실시형태에서, J-쇄는 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 변이체 J-쇄와 동일한 참조 J-쇄에 비해서 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함하는 기능성 변이체 J-쇄이고, 변이체 J-쇄를 포함하는 IgM-유래 결합 분자는 변이체 J-쇄 내의 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 동일하고, 동일한 동물 종에게 동일한 방식으로 투여되는 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 대상체 동물에게 투여될 때 증가된 혈청 반감기를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 참조 J-쇄에 비해서 1개, 2개, 3개 또는 4개의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함한다. 특정 실시형태에서, 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 야생형 성숙 인간 J-쇄(서열번호 20)의 아미노산 Y102에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함하며, 예를 들어, 서열번호 20의 Y102에 상응하는 아미노산은 알라닌(A)으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서 J-쇄는 변이체 인간 J-쇄 J*이고, 이것은 아미노산 서열 서열번호 21을 포함한다.

특정 실시형태에서, 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 성숙 인간 J-쇄(서열번호 20)의 아미노산 49(모티프 N6)에 상응하는 아미노산 위치에서 시작하는 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프 N-X₁-S/T 내에 돌연변이를 포함하되, N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이며, S/T는 세린 또는 트레오닌이고, 돌연변이는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지한다. 예를 들어, 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 서열번호 20의 아미노산 N49 또는 아미노산 S51에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함할 수 있되, S51에 상응하는 아미노산은 트레오닌(T)으로 치환되지 않거나 또는 변이체 J-쇄는 서열번호 20의 아미노산 N49 및 S51 둘 다에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 알라닌(A), 글리신(G), 트레오닌(T), 세린(S) 또는 아스파트산(D)으로 치환된다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 알라닌(A)으로 치환된다. J-쇄가 변이체 인간 J-쇄인 경우, J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 22를 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 아스파트산(D)으로 치환된다. J-쇄가 변이체 인간 J-쇄인 경우, J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 23을 포함한다.

특정 실시형태에서, J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체는 변형된 J-쇄는 이종 모이어티를 더 포함하는 변형된 J-쇄이되, 이종 모이어티는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 융합되거나 접합된다. 특정 실시형태에서 이종 모이어티는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 융합된 폴리펩타이드이다. 예를 들어, 이종 폴리펩타이드는 예를 들어, 적어도 5개의 아미노산 내지 25개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드 링커를 통해서 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 융합될 수 있고, 예를 들어, 펩타이드 링커는 GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 29)로 이루어질 수 있다. 특정 실시형태에서, 이종 폴리펩타이드는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 N-말단, J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 C-말단, 또는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 N-말단 및 C-말단 둘 다에 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서 이종 폴리펩타이드는 결합 도메인, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항원 결합 단편은 scFv 단편이다. 특정 실시형태에서, 이종 scFv 단편은 CD3ε에 특이적으로 결합한다. 특정 실시형태에서, 변형된 J-쇄는 각각 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 및 서열번호 54; 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 62, 서열번호 65, 서열번호 67, 및 서열번호 69; 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 62, 서열번호 65, 서열번호 67, 및 서열번호 70; 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 63, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 71; 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 72; 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 73을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 항-CD3ε scFv에 펩타이드 링커를 통해 접합된 아미노산 서열 서열번호 24(V15J), 서열번호 25(V15J*), 서열번호 26(V15J N49D), 또는 서열번호 55(SJ*) 또는 서열번호 20, 21, 22 또는 23을 포함한다.

본 개시내용은 본 명세서에 제공된 바와 같은 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 이러한 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다. 특정 실시형태에서 조성물은 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열 및 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열은 별개의 벡터에 존재한다. 특정 실시형태에서 이들은 단일 벡터 상에 존재한다. 특정 실시형태에서, 제공된 조성물은 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체를 암호화하는 핵산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열, 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열 및 J-쇄를 암호화하는 핵산 서열은 단일 벡터에 존재하거나 2개 이상의 별개의 벡터에 존재할 수 있다. 이러한 벡터는 본 개시내용에 제공되어 있다. 본 개시내용은 또한 제공된 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터 중 임의의 하나 이상을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 개시내용은 또한 제공된 IgM-유래 결합 분자의 생산 방법을 제공하며, 이 방법은 제공된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 불변 영역 또는 항체를 회수하는 단계를 포함한다.

도 1a 및 도 1b는 다양한 인간 면역글로불린 아이소타입 및 하위유형인 인간 IgG1(IGHG1, 진뱅크 AIC63046.1의 서열번호 34, 아미노산 141 내지 470), 인간 IgG2(IGHG2, 서열번호 35, 진뱅크 AXN93662.2의 아미노산 1 내지 326), 인간 IgG3(IGHG3, 서열번호 36, 진뱅크 AXN93659.2의 아미노산 1 내지 377), 인간 IgG4(IGHG4, 서열번호 37, 진뱅크 sp|P01861.1의 아미노산 1 내지 327), 인간 IgA1(IGHA1, 서열번호 38, 진뱅크 AIC59035.1의 아미노산 144 내지 496), 인간 IgA2(IGHA2, 서열번호 39, 진뱅크 P01877.4의 아미노산 1 내지 340), 인간 IgD(IGHD, 서열번호 40, 진뱅크 P01880.3의 아미노산 1 내지 384), 인간 IgE(IGHE, 서열번호 41, 진뱅크 P01854.1의 아미노산 1 내지 428) 및 인간 IgM(IGHM, 대립유전자 IGHM*04, 서열번호 2)의 중쇄 불변 영역의 정렬을 도시한 도면. 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 두번 밑줄쳐져 있고, 아스파라긴 잔기는 볼드체로 제시되어 있다. 쇄내 이황화 결합에 참여한 시스테인(C) 아미노산 잔기는 화살표로 표시되고, 쇄간 이황화 결합에 참여한 시스테인 잔기는 바벨 형상으로 표시된다. 도 1a는 CH1 도메인, 힌지 영역 또는 등가의 도메인 및 CH2/CH3 도메인을 나타낸다. 도 1b는 CH3/CH4 도메인 및 테일-피스 도메인을 나타낸다.
도 2a 및 도 2b는 인간 IgM 중쇄 불변 영역 아미노산 서열(대립유전자 IGHM*04, 서열번호 2)과 마우스(진뱅크: CAC20701.1, 서열번호 42), 시노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey)(진뱅크의 아미노산 14 내지 487: EHH62210.1, 서열번호 43), 레서스 원숭이(rhesus monkey)(진뱅크의 아미노산 147 내지 600: EHH28233.1, 서열번호 45), 침팬지(진뱅크: PNI88330.1, 서열번호 44) 및 수마트란 오랑우탄(Sumatran orangutan)(진뱅크: PNJ04968.1, 서열번호 46)의 IgM 중쇄 불변 영역 아미노산 서열의 정렬을 도시한 도면. 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프에 상응하는 아미노산이 상자로 표시된다.
도 3은 5개의 N-연결된 글리코실화 부위의 위치를 나타낸, 인간 IgM 중쇄의 공간-채움 모델을 도시한 도면.
도 4는 N1, N2, N3, N4, N5 및 N6에서 단일 알라닌 돌연변이를 갖는 IgM + VJH 변형된 J-쇄 글리코변이체의 발현 및 조립을 나타낸 염색된 비환원 폴리아크릴아마이드 겔을 도시한 도면.
도 5는 N1, N2, N3, N4, N5 및 N6에 단일 아스파트산 돌연변이를 갖는 IgM + VJH 변형된 J-쇄 글리코변이체의 발현 및 조립을 나타낸 염색된 비환원 폴리아크릴아마이드 겔 및 웨스턴 블롯(항-J-쇄 항체와 반응)을 도시한 도면.
도 6은 N1과 N2, N2와 N3, N1과 N3, N1 및 N5 및 N6에 이중 아스파트산 돌연변이를 갖는 IgM + VJH 변형된 J-쇄 글리코변이체의 발현 및 조립을 나타낸, 항-J-쇄 항체와 반응된 비-환원 폴리아크릴아미드 겔의 웨스턴 블롯을 도시한 도면.
도 7은 표적 항원에 대한 글리코돌연변이체의 ELISA 결합을 도시한 도면.

정의

본 명세서에 사용된 바와 같이, 단수 실체는 하나 이상의 실체를 지칭하고; 예를 들어, "결합 분자"는 하나 이상의 결합 분자를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, "단수 표현", "하나 이상" 및 "적어도 하나의"는 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다.

추가로, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "및/또는"은 2개의 명시된 특징 또는 성분을 각각 그 나머지 하나와 함께 또는 그것 없이 구체적으로 개시하는 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 본 명세서에서 예컨대, "A 및/또는 B"와 같은 구에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 유사하게, "A, B 및/또는 C"와 같은 구에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"은 하기 실시형태 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련된 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]이 당업자에게 본 개시내용에서 사용되는 다수 용어에 관한 일반 사전을 제공한다.

단위, 접두사, 및 기호는 국제 단위계(Systeme International de Unites: SI) 허용 형태로 표시된다. 수치 범위는 범위를 한정하는 수치를 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 방향으로 좌측에서 우측으로 기재된다. 본 명세서에서 제공되는 표제는 본 개시내용의 다양한 실시형태 또는 실시형태들을 제한하지 않으며, 이는 전체적으로 본 명세서에 대한 참고일 수 있다. 따라서, 바로 아래에 정의되는 용어는 전문이 본 명세서에 대한 참고로 보다 완전히 정의된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리펩타이드"는 단수의 "폴리펩타이드" 뿐만 아니라, 복수의 "폴리펩타이드들"을 포함하는 것으로 의도되고, (펩타이드 결합으로도 공지된) 아마이드 결합에 의해 선형으로 연결된 단량체(아미노산)로 구성된 분자를 지칭한다. 용어 "폴리펩타이드"는 2개 이상의 아미노산의 임의의 쇄 또는 쇄들을 지칭하며, 명시된 길이의 산물을 지칭하는 것은 아니다. 따라서, 펩타이드, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질", "아미노산 쇄", 또는 2개 이상의 아미노산의 쇄 또는 쇄들을 지칭하는 데 사용되는 임의의 다른 용어가 "폴리펩타이드"의 정의 내에 포함되고, 용어 "폴리펩타이드"는 이러한 용어 중 임의의 것 대신에, 또는 그와 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 용어 "폴리펩타이드"는 또한 제한 없이, 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아마이드화, 및 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 또는 비자연 발생 아미노산에 의한 변형을 비롯한, 폴리펩타이드의 발현 후 변형의 산물을 지칭하는 것으로 의도된다. 폴리펩타이드는 생물학적 공급원으로부터 유래되거나, 또는 재조합 기술에 의해 제조될 수 있지만, 반드시 설계된 핵산 서열로부터 번역되어야 하는 것은 아니다. 이는 화학적 합성을 비롯한, 임의의 방식으로 생성될 수 있다.

본 명세서에 개시된 폴리펩타이드는 약 3개 이상, 5개 이상, 10개 이상, 20개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 75개 이상, 100개 이상, 200개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상, 또는 2,000개 이상의 아미노산의 크기일 수 있다. 폴리펩타이드는 정의된 3차원 구조를 가질 수 있지만, 이것은 반드시 그러한 구조를 갖는 것은 아니다. 정의된 3차원 구조를 갖는 폴리펩타이드는 폴딩된 것으로 지칭되며, 정의된 3차원 구조를 갖지 않고, 오히려 다수의 상이한 입체형태를 취할 수 있는 폴리펩타이드는 폴딩되지 않은 것으로 지칭된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 당단백질은 아미노산, 예를 들어, 세린 또는 아스파라긴의 산소 함유 또는 질소 함유 측쇄를 통해서 단백질에 부착된 적어도 하나의 탄수화물 모이어티에 커플링된 단백질을 지칭한다.

"단리된" 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 이의 자연 환경에 존재하지 않는 폴리펩타이드인 것으로 의도된다. 특정 수준의 정제가 요구되는 것은 아니다. 예를 들어, 단리된 폴리펩타이드는 이의 천연 또는 자연 환경으로부터 제거될 수 있다. 임의의 적합한 기술에 의해서 분리되거나, 분별되거나 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 천연 또는 재조합 폴리펩타이드에서와 같이, 숙주 세포에서 발현된 재조합 방식으로 생산된 폴리펩타이드 및 단백질은 본 명세서에 개시된 바와 같이 단리된 것으로 간주된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비자연 발생 폴리펩타이드" 또는 이의 임의의 문법적 변형은 심사원 또는 관리 기관 또는 사법 기관에 의해 "자연 발생"인 것으로 결정 또는 해석되거나 또는 결정 또는 해석될 수 있는 폴리펩타이드의 형태를 명백하게 배제하지만, 이것만을 배제하는 것인 조건부 정의이다.

본 명세서에 개시된 다른 폴리펩타이드는 상기 폴리펩타이드의 단편, 유도체, 유사체, 또는 변이체, 및 이의 임의의 조합물이다. 본 명세서에 개시된 바와 같이 용어 "단편", "변이체", "유도체" 및 "유사체"는 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 상응하는 천연 항체 또는 폴리펩타이드의 특성 중 적어도 일부를 보유하는 임의의 폴리펩타이드를 포함한다. 폴리펩타이드의 단편은 본 명세서 다른 곳에서 논의된 특이적 항체 단편에 더하여, 예를 들어, 단백질분해 단편뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드의 변이체는 상기에 기술된 바와 같은 단편, 및 또한 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입으로 인한 변경된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 변이체는 비-자연 발생적일 수 있다. 비-자연 발생 변이체는 당업계에 공지된 돌연변이유발 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 변이체 폴리펩타이드는 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 포함할 수 있다. 유도체는 본래 폴리펩타이드 상에서 발견되지 않는 추가의 특징을 나타내도록 변경된 폴리펩타이드이다. 예는 융합 단백질을 포함한다. 변이체 폴리펩타이드는 본 명세서에서 "폴리펩타이드 유사체"로서 지칭될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 폴리펩타이드의 "유도체"는 또한 하나 이상의 아미노산이 작용성 측쇄 기의 반응에 의해 화학적으로 유도체화된 대상 폴리펩타이드를 지칭할 수 있다. 또한 20종의 표준 아미노산의 하나 이상의 유도체를 함유하는 펩타이드가 "유도체"로서 포함된다. 예를 들어, 4-하이드록시프롤린이 프롤린 대신 치환될 수 있고; 5-하이드록시라이신이 라이신 대신 치환될 수 있고; 3-메틸히스티딘이 히스티딘 대신 치환될 수 있고; 호모세린이 세린 대신 치환될 수 있고; 오르니틴이 라이신 대신 치환될 수 있다.

"보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 또 다른 아미노산으로 대체된 것이다. 염기성 측쇄(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예컨대, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예컨대, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타 분지형 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 비롯한, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 패밀리가 당업계에 정의되어 있다. 예를 들어, 타이로신을 대신한 페닐알라닌의 치환은 보존적 치환이다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드, 결합 분자 및 항체의 서열에서의 보존적 치환은 항체가 결합하는 항원에 대한, 아미노산 서열을 함유하는 폴리펩타이드, 결합 분자 또는 항체의 결합을 폐기하지 않는다. 항원 결합을 제거하지 않는 뉴클레오타이드 및 아미노산 보존적 치환을 식별하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1 187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); 및 Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:.412-417 (1997)] 참고).

용어 "폴리뉴클레오타이드"는 단수의 핵산뿐만 아니라 복수의 핵산들을 포함하도록 의도되고, 단리된 핵산 분자 또는 작제물, 예컨대, 메신저 RNA(mRNA), cDNA, 또는 플라스미드 DNA(pDNA: 플라스미드 DNA)를 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 종래의 포스포다이에스터 결합 또는 비종래의 결합(예를 들어, 펩타이드 핵산(peptide nucleic acid: PNA)에서 발견되는 것과 같은 아마이드 결합)을 포함할 수 있다. 용어 "핵산" 또는 "핵산 서열"은 폴리뉴클레오타이드에 존재하는 임의의 하나 이상의 핵산 분절, 예컨대, DNA 또는 RNA 단편을 지칭한다.

"단리된" 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드는 이의 천연 환경으로부터 분리된 임의의 형태의 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드인 것으로 의도된다. 예를 들어, 젤-정제된 폴리뉴클레오타이드, 또는 벡터 내에 함유된 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드는 "단리된" 것으로 간주될 것이다. 또한, 클로닝을 위한 제한 부위를 갖도록 조작된 폴리뉴클레오타이드 분절, 예를 들어, PCR 산물은 "단리된" 것으로 간주된다. 단리된 폴리뉴클레오타이드의 추가 예는 이종 숙주 세포에서 유지되는 재조합 폴리뉴클레오타이드 또는 비-천연 용액, 예컨대, 완충제 또는 염수 중의 (부분적으로 또는 실질적으로) 정제된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 단리된 RNA 분자는 전사체가 자연에서는 발견되는 것이 아닌, 폴리뉴클레오타이드의 생체내 또는 시험관내 RNA 전사체를 포함한다. 단리된 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 합성 방식으로 생산된 이러한 분자를 추가로 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 조절 요소, 예컨대, 프로모터, 리보솜 결합 부위, 또는 전사 종결인자일 수 있거나, 또는 이들을 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비자연 발생 폴리뉴클레오타이드" 또는 이의 임의의 문법적 변형은 심사원 또는 관리 기관 또는 사법 기관에 의해 "자연 발생"인 것으로 결정 또는 해석되거나 또는 결정 또는 해석될 수 있는 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드의 형태를 명백하게 배제하지만, 이것만을 배제하는 것인 조건부 정의이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "암호 영역"은 아미노산으로 번역되는 코돈으로 이루어진 핵산의 일부이다. "정지 코돈"(TAG, TGA 또는 TAA)은 아미노산으로 번역되지 않지만, 그것은 암호 영역의 부분인 것으로 간주될 수 있으나, 임의의 측접한 서열, 예를 들어, 프로모터, 리보솜 결합 부위, 전사 종결인자, 인트론 등은 암호 영역의 부분이 아니다. 2개 이상의 암호 영역이 단일 폴리뉴클레오타이드 작제물에, 예를 들어, 단일 벡터 상에, 또는 별개의 폴리뉴클레오타이드 작제물에, 예를 들어, 별개의(상이한) 벡터 상에 존재할 수 있다. 추가로, 임의의 벡터는 단일 암호 영역을 함유할 수 있거나, 또는 2개 이상의 암호 영역을 포함할 수 있고, 예를 들어, 단일 벡터는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 별개로 암호화할 수 있다. 또한, 벡터, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 또 다른 암호 영역에 융합되거나 또는 융합되지 않은 이종 암호 영역을 포함할 수 있다. 이종 암호 영역은 제한 없이, 특화된 요소 또는 모티프를 암호화하는 것, 예컨대, 분비 신호 펩타이드 또는 이종 기능성 도메인을 포함한다.

특정 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은 DNA이다. DNA의 경우, 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 일반적으로 하나 이상의 암호 영역과 작동 가능하게 회합된 프로모터 및/또는 다른 전사 또는 번역 제어 요소를 포함할 수 있다. 작동 가능한 회합은 유전자 산물, 예를 들어, 폴리펩타이드에 대한 암호 영역이, 유전자 산물의 발현이 조절 서열(들)의 영향 또는 제어 하에 배치되도록 하는 방식으로 하나 이상의 조절 서열과 회합되어 있는 경우이다. 프로모터 기능의 유도가 목적하는 유전자 산물을 암호화하는 mRNA의 전사를 초래하면, 그리고 두 DNA 단편 사이의 연결부의 본성이 유전자 산물의 발현을 지시하는 발현 조절 서열의 능력을 방해하지 않거나, 또는 DNA 주형이 전사될 능력을 방해하지 않는다면, 2개의 DNA 단편(예컨대, 폴리펩타이드 암호 영역 및 이와 회합된 프로모터)은 "작동 가능하게 회합"된 것이다. 따라서, 프로모터가 핵산을 전사의 전사를 달성할 수 있었으면, 프로모터 영역은 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산과 작동 가능하게 회합될 것이다. 프로모터는 미리 결정된 세포에서 DNA의 실질적인 전사를 지시하는 세포-특이적 프로모터일 수 있다. 프로모터뿐만 아니라, 다른 전사 제어 요소, 예를 들어, 인핸서, 오퍼레이터, 리프레서, 및 전사 종결 신호가 세포-특이적 전사를 지시하기 위해 폴리뉴클레오타이드와 작동 가능하게 회합될 수 있다.

다양한 전사 제어 영역이 당업자에게 공지되어 있다. 이것은 제한 없이, 척추동물 세포에서 기능하는 전사 제어 영역, 예컨대, 비제한적으로, 사이토메갈로바이러스(인트론 A와 함께 극 초기 프로모터), 시미안 바이러스 40(초기 프로모터) 및 레트로바이러스(예컨대, 라우스 육종 바이러스)로부터의 프로모터 및 인핸서 분절을 포함한다. 다른 전사 제어 영역은 척추동물 유전자로부터 유래된 것, 예컨대, 액틴, 열 충격 단백질, 소 성장 호르몬 및 토끼 β글로빈뿐만 아니라, 진핵 세포에서 유전자 발현을 제어할 수 있는 기타 서열을 포함한다. 추가의 적합한 전사 제어 영역은 조직-특이적 프로모터 및 인핸서뿐만 아니라, 림포카인-유도성 프로모터(예컨대, 인터페론 또는 인터류킨에 의해 유도 가능한 프로모터)를 포함한다.

유사하게, 다양한 번역 제어 요소가 당업자에게 공지되어 있다. 이것은 리보솜 결합 부위, 번역 개시 및 종결 코돈, 및 피코나바이러스로부터 유래된 요소(특히 CITE 서열로도 지칭되는, 내부 리보솜 유입 부위, 또는 IRES(internal ribosome entry site))를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.

다른 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 RNA, 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA), 전달 RNA 또는 리보솜 RNA의 형태일 수 있다.

폴리뉴클레오타이드 및 핵산 암호 영역은 본 명세서에 개시된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 폴리펩타이드의 분비를 지시하는, 분비 또는 신호 펩타이드를 암호화하는 추가 암호 영역과 회합될 수 있다. 신호 가설에 따르면, 포유동물 세포에 의해서 분비된 단백질은 일단 성장하는 단백질 쇄의 조면 소포체를 통한 외수송이 개시되면, 성숙한 단백질로부터 절단되는 신호 펩타이드 또는 분비 리더 서열을 갖는다. 당업자는 척추동물 세포에 의해서 분비되는 폴리펩타이드가 폴리펩타이드의 N-말단에 융합된 신호 펩타이드를 가질 수 있고, 이는 완전한 또는 "전장" 폴리펩타이드로부터 절단되어 폴리펩타이드의 분비된 또는 "성숙한" 형태가 제조된다는 것을 인지한다. 특정 실시형태에서, 천연 신호 펩타이드, 예를 들어, 면역글로불린 중쇄 또는 경쇄 신호 펩타이드, 또는 이와 작동 가능하게 회합되는 폴리펩타이드의 분비를 지시하는 능력을 보유하는 서열의 기능성 유도체가 사용된다. 대안적으로, 이종 포유동물 신호 펩타이드 또는 이의 기능성 유도체가 사용될 수 있다. 예를 들어, 야생형 리더 서열은 인간 조직 플라스미노겐 활성화제(tissue plasminogen activator: TPA) 또는 마우스 β-글루쿠로니다제의 리더서열로 치환될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합 분자"는 가장 광범위한 의미에서 수용체, 예를 들어, 에피토프 또는 항원 결정기에 특이적으로 결합하는 분자를 지칭한다. 본 명세서에서 추가로 기술되는 바와 같이, 결합 분자는 본 명세서에 기술된 하나 이상의 "결합 도메인", 예를 들어, "항원 결합 도메인"을 포함할 수 있다. 결합 분자의 비제한적인 예는 항원-특이적 결합을 보유하는 항체 또는 본 명세서에 상세하게 기술된 바와 같은 항체-유사 분자이다. 특정 실시형태에서 "결합 분자"는 본 명세서에 상세하게 기재된 바와 같은 항체 또는 항체-유사 분자 또는 항체-유래 분자를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합 도메인" 또는 "항원 결합 도메인"은 표적, 예를 들어, 에피토프, 폴리펩타이드, 세포 또는 기관에 특이적으로 결합하는 데 필요하고 충분한 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 항체-유사 또는 항체-유래 분자의 영역을 지칭한다(상호 교환 가능하게 사용될 수 있다). 예를 들어, "Fv", 예를 들어, 2개의 별개의 폴리펩타이드 소단위로서, 또는 단일 쇄로서의 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 "결합 도메인"으로 간주된다. 다른 항원 결합 도메인은 비제한적으로 카멜리드 종으로부터 유래되는 항체의 단일 도메인 중쇄 가변 영역(VHH) 또는 피브로넥틴 스캐폴드에서 발현되는 6개의 면역글로불린 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)을 포함한다. 본 명세서에 기술된 바와 같은 "결합 분자" 또는 "항체"는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개 또는 그 초과의 "항원 결합 도메인"을 포함할 수 있다.

용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 항체(또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 이의 단편, 변이체 또는 유도체, 예를 들어, 예를 들어, IgM-유사 항체)는 적어도 (예를 들어, 카멜리드 종으로부터의) 중쇄의 가변 도메인 또는 적어도 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 포함한다. 척추동물계에서의 기본 면역글로불린 구조는 비교적 양호하게 이해되어 있다. (예를 들어, 문헌[Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988] 참고). 달리 언급되지 않는 한, 용어 "항체"는 항체의 작은 항원 결합 단편부터 전체 크기의 항체, 예컨대, 2개의 완전한 중쇄 및 2개의 완전한 경쇄를 포함하는 IgG 항체, 4개의 완전한 중쇄 및 4개의 완전한 경쇄를 포함하고, J-쇄 및/또는 분비 성분을 포함하는 IgA 항체, 또는 10개 또는 12개의 완전한 중쇄 및 10개 또는 12개의 완전한 경쇄를 포함하고, J 쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 선택적으로 포함하는 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체 또는 IgM-유사 항체의 범위인 것을 포함한다.

용어 "면역글로불린"은 생화학적으로 구별될 수 있는 다양한 광범위한 부류의 폴리펩타이드를 포함한다. 당업자는 중쇄가 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론(γ, μ, α, δ, ε)으로 분류되고, 이들 중에서 일부 하위부류(예를 들어, γ1-γ4 또는 α1-α2))가 존재한다는 것을 인지할 것이다. 항체의 "아이소타입"을 각각 IgG, IgM, IgA IgD 또는 IgE로 결정하는 것은 이러한 쇄의 본성이다. 면역글로불린 하위부류(하위유형), 예를 들어, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁, IgA₂등은 양호하게 특징규명되어 있고, 기능적 분화를 부여하는 것으로 공지되어 있다. 각각의 이러한 면역글로불린의 변형된 버전은 본 개시내용을 고려하여 당업자에게 쉽게 식별 가능하고, 따라서 본 개시내용의 범주 내에 포함된다.

경쇄는 카파 또는 람다(κ, λ)로 분류된다. 각각의 중쇄 부류는 카파 또는 람다 경쇄와 결합될 수 있다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄는 서로 공유 결합되며, 2개 중쇄의 "테일" 부분은 공유 이황화 결합부, 또는 면역글로불린이 하이브리도마, B 세포 또는 유전적으로 조작된 숙주 세포에 의해 발현되는 경우, 비공유 결합부에 의해서 서로 결합된다. 중쇄에서, 아미노산 서열은 Y 구성의 포크형 단부의 N 말단에서부터 각각 쇄의 하부에서 C 말단으로 이어진다. 특정 항체, 예컨대, IgG 항체의 기본 구조는 이황화 결합을 통해서 공유적으로 연결되어 본 명세서에서 "H2L2" 구조, 또는 "결합 단위"라고도 지칭되는 "Y" 구조를 형성하는 2개의 중쇄 소단위 및 2개의 경쇄 소단위를 포함한다.

용어 "결합 단위"는 표준 "H2L2" 면역글로불린 구조, 즉, 2개의 중쇄 또는 이의 단편 및 2개의 경쇄 또는 이의 단편에 상응하는 결합 분자의 부분, 예를 들어, 항체, 항체-유사 분자 또는 항체-유래 분자, 이의 항원 결합 단편 또는 이의 다량체화 단편을 지칭하도록 본 명세서에서 사용된다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 결합 분자가 2가 IgG 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 경우, 용어 "결합 분자" 및 "결합 단위"는 동의어이다. 다른 실시형태에서, 예를 들어, 결합 분자가 다량체, 예를 들어, 이량체 IgA 항체 또는 IgA-유사 항체, 오량체 IgM 항체 또는 IgM-유사 항체, 또는 육량체 IgM 항체 또는 IgM-유사 항체 또는 이의 임의의 유도체인 경우, 결합 분자는 2개 이상의 "결합 단위"를 포함한다. IgA 이량체의 경우에는 2개, 또는 IgM 오량체 또는 육량체의 경우에는 각각 5개 또는 6개이다. 결합 단위가 전장의 항체 중쇄 및 경쇄를 포함할 필요는 없지만, 상기에 정의되는 바와 같이, 이것은 전형적으로는 2가일 것이며, 즉, 2개의 "항원 결합 도메인"을 포함할 것이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 본 개시내용에 제공된 특정 결합 분자는 "이량체"이고, IgA 불변 영역 또는 이의 다량체화 단편을 포함하는 2개의 2가 결합 단위를 포함한다. 본 개시내용에 제공되는 특정 결합 분자는 "오량체" 또는 "육량체"이고, IgM 불변 영역 또는 이의 다량체화 단편 또는 변이체를 포함하는 5 또는 6개의 2가 결합 단위를 포함한다. 2개 이상 예를 들어, 2개, 5개 또는 6개의 결합 단위를 포함하는 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 항체-유사 분자 또는 항체-유래 결합 분자를 본 명세서에서 "다량체"라고 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "J-쇄"는 임의의 동물 종의 천연 서열 IgM 또는 IgA 항체의 J-쇄, 이의 임의의 기능성 단편, 이의 유도체 및/또는 이의 변이체, 예컨대, 아미노산 서열이 서열번호 20으로 제시되는 성숙 인간 J-쇄를 지칭한다. 다양한 J-쇄 변이체 및 변형된 J-쇄 유도체가 본 명세서에 개시된다. 당업자는 "기능성 단편" 또는 "기능성 변이체"가 IgM 중쇄 불변 영역과 회합하여 오량체 IgM 항체를 형성할 수 있는(또는 대안적으로 IgA 중쇄 불변 영역과 회합하여 이량체 IgA 항체를 형성할 수 있는) 이러한 단편 또는 변이체를 포함한다는 것을 인식할 것이다.

용어 "변형된 J-쇄"는 천연 J-쇄 서열에 도입되거나 이에 부착된 이종 모이어티, 예를 들어, 이종 폴리펩타이드, 예를 들어, 외래 결합 도메인 또는 기능성 도메인을 포함하는 천연 서열 J-쇄 폴리펩타이드의 유도체를 지칭하도록 본 명세서에서 사용된다. 도입은 이종 폴리펩타이드 또는 다른 모이어티의 직접 또는 간접 융합 또는 펩타이드를 비롯한 임의의 수단에 의해서 또는 화학적 링커를 통한 부착에 의해서, 달성될 수 있다. 용어 "변형된 인간 J-쇄"는 제한 없이, 이종 모이어티, 예를 들어, 이종 폴리펩타이드, 예를 들어, 외래 결합 도메인의 도입에 의해 변형된 서열번호 20의 아미노산 서열 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체의 천연 서열 인간 J-쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 이종 모이어티는 IgM의 오량체로의 효율적인 중합 또는 IgA의 이량체로의 효율적인 중합 및 이러한 중합체의 표적에 대한 결합을 방해하지 않는다. 예시적인 변형된 J-쇄는 예를 들어, 미국 특허 제9,951,134호 및 제10,618,978호 및 미국 특허 출원 공개 제2019-0185570호에서 발견될 수 있으며, 이들 각각은 전문은 본 명세서에 참조에 의해 포함된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "IgM-유래 결합 분자"는 총괄적으로 천연 IgM 항체, IgM-유사 항체뿐만 아니라 항체 항원 결합 도메인 또는 이의 소단위 대신에 비-항체 결합 및/또는 기능성 도메인을 포함하는 다른 IgM-유래 결합 분자 및 이의 임의의 단편, 예를 들어, 이의 다량체화 단편, 변이체 또는 유도체를 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "IgM-유사 항체"는 일반적으로 육량체를 형성하는 능력 또는 J-쇄와 회합하여 오량체를 형성하는 능력을 여전히 보유하는 변이체 항체 또는 항체-유래 결합 분자를 지칭한다. IgM-유사 항체 또는 IgM-유래 결합 분자는 전형적으로 적어도 IgM 불변 영역의 Cμ4-tp 도메인을 포함하지만, 다른 항체 아이소타입, 예를 들어, 동일한 종 또는 상이한 종으로부터의 IgG로부터의 중쇄 불변 영역 도메인을 포함할 수 있다. IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 마찬가지로 IgM-유사 항체가 육량체 및/또는 오량체를 형성할 수 있는 한, 하나 이상의 불변 영역이 결실된 항체 단편일 수 있다. 따라서, IgM-유사 항체 또는 IgM-유래 결합 분자는 예를 들어, 혼성 IgM/IgG 항체일 수 있거나 또는 IgM 항체의 "다량체화 단편"일 수 있다.

용어 "결합가", "2가", "다가" 및 문법적 등가물은 주어진 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 항체-유사 분자, 또는 주어진 결합 단위에서 결합 도메인, 예를 들어, 항원 결합 도메인의 수를 지칭한다. 따라서, 주어진 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체, 다른 IgM-유래 결합 분자 또는 이의 다량체화 단편과 관련하여 용어 "2가", "4가", 및 "6가"는 각각 2개의 항원 결합 도메인, 4개의 항원 결합 도메인, 및 6개의 항원 결합 도메인의 존재를 나타낸다. 각각의 결합 단위가 2가인 전형적인 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 10 또는 12가를 가질 수 있다. 2가 또는 다가 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 항체-유래 분자는 단일특이적일 수 있고, 즉, 항원 결합 도메인 모두는 동일하거나, 또는 이중특이적 또는 다중특이적일 수 있고, 예를 들어, 2개 이상의 항원 결합 도메인이 상이하고, 예를 들어, 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 결합하거나, 또는 완전히 다른 항원에 결합한다.

용어 "에피토프"는 항체, 항체-유사 분자 또는 항체-유래 분자의 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 분자 결정기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 분자, 예컨대, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 설포닐기의 화학적 활성 표면 그룹핑을 포함할 수 있고, 특정 실시형태에서, 이것은 3차원 구조 특징 및/또는 특이적 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 항체의 항원 결합 도메인에 의해서 결합되는 표적의 영역이다.

용어 "표적"은 가장 광범위한 의미에서, 결합 분자, 예를 들어, 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자에 의해 결합될 수 있는 물질을 포함하도록 사용된다. 표적은 예를 들어, 폴리펩타이드, 핵산, 탄수화물, 지질 또는 기타 분자 또는 이러한 분자 상의 최소 에피토프일 수 있다. 더욱이, "표적"은 예를 들어, 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자에 의해 결합될 수 있는 에피토프를 포함하는 세포, 기관 또는 유기체, 예를 들어, 동물, 식물, 미생물 또는 바이러스일 수 있다.

항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자의 경쇄 및 중쇄 둘 다는 구조적 및 기능적 상동성의 영역으로 나뉜다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이와 관련하여, 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH) 부분 둘 다의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 것이 인식될 것이다. 이에 반해서, 경쇄의 불변 영역 도메인(CL) 및 중쇄의 불변 영역 도메인(예를 들어, CH1, CH2, CH3, 또는 CH4)은 생물학적 특성, 예컨대, 분비, 경태반 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등을 부여한다. 통상적으로, 불변 영역 도메인의 넘버링은 이들이 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노 말단으로부터 멀어질수록 더 증가한다. N-말단 부분은 가변 영역이며, C-말단 부분은 불변 영역이고; CH3(또는 예를 들어, IgM의 경우 CH4) 및 CL 도메인은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카복시-말단을 포함한다.

"전장 IgM 항체 중쇄"는 N-말단에서 C-말단 방향으로, 항체 중쇄 가변 도메인(VH), 항체 중쇄 불변 도메인 1(CM1 또는 Cμ1), 항체 중쇄 불변 도메인 2(CM2 또는 Cμ2), 항체 중쇄 불변 도메인 3(CM3 또는 Cμ3), 및 테일피스를 포함할 수 있는 항체 중쇄 불변 도메인 4(CM4 또는 Cμ4)를 포함하는 폴리펩타이드이다.

상기에 언급된 바와 같이, 가변 영역(들)은 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자가 항원 상의 에피토프를 선택적으로 인식하고, 이에 특이적으로 결합하는 것을 가능하게 한다. 즉, 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자의 VL 도메인 VH 도메인, 또는 상보성 결정 영역(CDR)의 하위세트가 조합되어 항원 결합 도메인을 형성한다. 보다 구체적으로, 항원 결합 도메인은 VH 및 VL 쇄 각각 상의 3개의 CDR에 의해 정의될 수 있다. 특정 항체는 더 큰 구조를 형성한다. 예를 들어, IgA는 분비 성분과 추가로 회합될 수 있는 이황화 결합을 통해서 공유 연결된 2개의 H2L2 결합 단위 및 J-쇄를 포함하는 분자를 형성할 수 있고, IgM은 이황화 결합을 통해서 공유 연결된, 5 또는 6개의 H2L2 결합 단위, 및 선택적으로 J 쇄를 포함하는 오량체 또는 육량체 분자를 형성할 수 있다.

항체 항원 결합 도메인에 존재하는 6개의 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항체가 수성 환경에서 이의 3차원 구조를 취함에 따라 특이적으로 위치되어 항원 결합 도메인을 형성하는 짧은, 비-인접 아미노산 서열이다. "프레임워크" 영역이라고 지칭되는, 항원 결합 도메인 내의 아미노산 중 나머지는 더 적은 분자간 가변성을 나타낸다. 골격 영역은 대개 β-시트 입체형태를 취하고, CDR은 β-시트 구조를 연결하고, 일부 경우에서는 이의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 따라서, 프레임워크 영역은 쇄간, 비공유 상호작용에 의해서 올바른 배향으로 CDR을 위치시키는 스캐폴드를 형성하는 작용을 한다. 배치된 CDR에 의해 형성된 항원 결합 도메인은 면역반응성 항원 상에서 에피토프에 상보적인 표면을 정의한다. 이러한 상보적인 표면은 항체의 이의 동족 에피토프에 대한 비공유 결합을 촉진시킨다. 각각 CDR 및 프레임워크 영역을 구성하는 아미노산은, 당업자에 의해서 임의의 주어진 중쇄 또는 경쇄 가변 영역에 대해 쉽게 식별될 수 있는데, 그 이유는 이것이 다양한 상이한 방식으로 정의되어 있기 때문이다(전문이 본 명세서에 참고로 포함된, 문헌["Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat, E., et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983); 및 Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901-917 (1987)] 참고).

관련 기술 분야에서 이용되고/되거나, 허용되는 용어의 2개 이상의 정의가 존재하는 경우, 본 명세서에서 사용되는 용어의 정의는 달리 명확하게 그 반대로 언급되지 않는 한, 이러한 모든 의미를 포함하는 것으로 의도된다. 구체적인 예는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견되는 비인접 항원 조합 부위를 설명하기 위한 용어 "상보성 결정 영역"("CDR")의 사용이다. 이러한 특정 영역은 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) 및 Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 기술되어 있다. 카밧(Kabat) 및 코티아(Chothia) 정의는 서로 비교되는 경우, 아미노산의 중첩 또는 하위세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 지칭하기 위해서 어느 한 정의(또는 당업자에게 공지된 다른 정의)를 적용하는 것은 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 정의되고, 사용되는 용어의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다. 상기에 인용된 문헌 각각에 의해서 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 적절한 아미노산은 비교로서 하기 표 1에 기재되어 있다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 아미노산 번호는 CDR의 서열 및 크기에 따라 달라질 것이다. 당업자는 항체의 가변 영역 아미노산 서열을 고려하여 어느 아미노산이 특정 CDR을 포함하는지를 통상적으로 결정할 수 있다.

항체 가변 도메인은 또한 예를 들어, CDR을 비롯한 가변 영역 분절을 식별하기 위해서 IMGT 정보 시스템을 사용하여 분석될 수 있다(imgt_dot_cines_dot_fr/) (IMGT®/V-Quest)(예를 들어, 문헌[Brochet, X. et al., Nucl. Acids Res. 36:W503-508 (2008)] 참고).

카밧 등은 또한 임의의 항체에 적용 가능한 가변 도메인 서열에 대한 넘버링 체계를 정의하였다. 당업자는 서열 그 자체를 초과하는 임의의 실험 데이터에 의존하지 않고, 명확하게 "카밧 넘버링"의 이러한 체계를 임의의 가변 도메인 서열에 지정할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "카밧 넘버링"은 문헌[Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983)]에 의해서 언급된 넘버링 체계를 지칭한다. 그러나, 카밧 넘버링 체계의 사용이 명확하게 언급되지 않은 경우, 본 개시내용에서 모든 아미노산 서열에 대해서는 연속 넘버링이 사용된다.

인간 IgM 불변 도메인에 대한 카밧 넘버링 시스템은 문헌[Kabat, et. al. "Tabulation and Analysis of Amino acid and nucleic acid Sequences of Precursors, V-Regions, C-Regions, J-Chain, T-Cell Receptors for Antigen, T-Cell Surface Antigens, β-2 Microglobulins, Major Histocompatibility Antigens, Thy-1, Complement, C-Reactive Protein, Thymopoietin, Integrins, Post-gamma Globulin, α-2 Macroglobulins, and Other Related Proteins," U.S. Dept. of Health and Human Services (1991)]에서 찾아볼 수 있다. IgM 불변 영역은 순차적으로(불변 영역의 제1 아미노산에서 시작하여 아미노산 #1) 또는 카밧 넘버링 규칙을 사용함으로써 넘버링될 수 있다. 순차적으로(본 명세서에서 서열번호 1(대립유전자 IGHM*03) 및 서열번호 2(대립유전자 IGHM*04)로 제시됨) 또는 카밧 시스템에 의한 인간 IgM 불변 영역의 2개의 대립유전자의 넘버링의 비교를 하기에 제시한다. 밑줄친 아미노산 잔기는 카밧 시스템에서 설명되지 않는다: (하기에 두번 밑줄친 "X"는 세린(S)(서열번호 1) 또는 글리신(G)(서열번호 2)일 수 있다):

IgM 중쇄에 대한 순차적인(서열번호 1 또는 서열번호 2)/카밧 넘버링 키

결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자, 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체 및/또는 이의 다량체화 단편은 다클론성, 단클론성, 인간, 인간화된 또는 키메라 항체, 단일 쇄 항체, 에피토프-결합 단편, 예를 들어, Fab, Fab' 및 F(ab')₂, Fd, Fvs, 단일-쇄 Fvs (scFv), 단일-쇄 항체, 이황화-연결된 Fv(sdFv), VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해서 제조된 단편을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. ScFv 분자는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 제5,892,019호에 기술되어 있다.

"특이적으로 결합하는"이란, 일반적으로 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 이의 항원 결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하고, 결합은 항원 결합 도메인과 에피토프 사이의 일부 상보성을 수반한다는 것을 의미한다. 이러한 정의에 따라서, 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 항체-유사 또는 항체-유래 분자는 그가 무작위의 비관련 에피토프에 결합할 때보다 보다 쉽게 이의 항원 결합 도메인을 통해서 에피토프에 결합할 때, 에피토프에 "특이적으로 결합한다"라고 말할 수 있다. 용어 "특이성"은 본 명세서에서 특정 결합 분자가 특정 에피토프에 결합하는 상대적인 친화도를 한정하는 데 사용된다. 예를 들어, 결합 분자 "A"는 결합 분자 "B"보다 주어진 에피토프에 대해서 더 높은 특이성을 갖는 것으로 간주될 수 있거나, 또는 결합 분자 "A"는 이것이 관련된 에피토프 "D"에 대해서 갖는 것보다 더 높은 특이성으로 에피토프 "C"에 결합한다고 지칭될 수 있다.

본 명세서에 개시된 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 5×10^-2초^-1, 10^-2초^-1, 5×10^-3초^-1, 10^-3초^-1, 5×10^-4초^-1, 10^-4초^-1, 5×10^-5초^-1, 또는 10^-5초^-1 5×10^-6초^-1, 10^-6초^-1, 5×10^-7초^-1 또는 10^-7초^-1 이하의 오프 레이트(k(off))로 표적 항원에 결합한다고 지칭될 수 있다.

본 명세서에 개시된 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 10³M^-1초^-1, 5×10³M^-1초^-1, 10⁴M^-1초^-1, 5×10⁴M^-1초^-1, 10⁵M^-1초^-1, 5×10⁵M^-1초^-1, 10⁶M^-1초^-1, 또는 5×10⁶M^-1초^-1 또는 10⁷M^-1초^-1 이상의 온 레이트(k(on))로 표적 항원에 결합한다고 지칭될 수 있다.

결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체는, 이것이 참조 항체 또는 항원 결합 단편의 에피토프에 대한 결합을 어느 정도 차단시키는 정도까지 에피토프에 우선적으로 결합하는 경우, 에피토프에 대한 참조 항체 또는 항원 결합 단편의 결합을 경쟁적으로 저해한다고 지칭된다. 경쟁적 저해는 관련 기술 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 경쟁적 ELISA 검정에 의해서 결정될 수 있다. 결합 분자는 주어진 에피토프에 대한 참조 항체 또는 항원 결합 단편의 결합을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50%만큼 경쟁적으로 저해시킨다고 지칭될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "친화도"는 예를 들어, 면역글로불린 분자의 하나 이상의 항원 결합 도메인과 개별 에피토프의 결합 강도에 관한 척도를 지칭한다. (문헌[Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988) at pages 27-28] 참고). 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "결합활성"은 항원 결합 도메인 집단과 항원 사이의 복합체의 전체 안정성을 지칭한다(예를 들어, 상기 Harlow의 문헌의 페이지 29 내지 34] 참고). 결합활성은 집단 중의 개별 항원 결합 도메인과 특이적 에피토프의 친화도, 및 또한 면역글로불린 및 항원의 원자가 둘 다와 관련된다. 예를 들어, 2가 단클론성 항체 및 고도로 반복되는 에피토프 구조, 예를 들어, 중합체를 갖는 항원 간의 상호작용이 높은 결합활성 중 하나일 것이다. 2가 단클론성 항체와, 세포 표면 상의 높은 밀도의 수용체 간의 상호작용 또한 높은 결합활성 중 하나일 것이다.

본 명세서에 개시된 바와 같은 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는 또한 이의 교차 반응성과 관련하여 기술되거나, 명시될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "교차 반응성"은 한 항원에 대해서 특이적인, 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체가 제2 항원과 반응하는 능력; 2개의 상이한 항원성 물질 간의 관련성에 관한 척도를 지칭한다. 따라서, 결합 분자가 이의 형성을 유도한 것과 다른 에피토프에 결합하는 경우, 이것은 교차 반응성이다. 교차 반응성 에피토프는 일반적으로 유도 에피토프와 동일한 상보적인 구조적 특징부 다수를 함유하며, 일부 경우에, 실제로 본래의 것보다 더욱 잘 정합할 수 있다.

결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체는 또한 항원에 대한 결합 친화도와 관련하여 기술되거나, 명시될 수 있다. 예를 들어, 결합 분자는 5×10^-2M, 10^-2M, 5×10^-3M, 10^-3M, 5×10^-4M, 10^-4M, 5×10^-5M, 10^-5M, 5×10^-6M, 10^-6M, 5×10^-7M, 10^-7M, 5×10^-8M, 10^-8M, 5×10^-9M, 10^-9M, 5×10^-10M, 10^-10M, 5×10^-11M, 10^-11M, 5×10^-12M, 10^-12M, 5×10^-13M, 10^-13M, 5×10^-14M, 10^-14M, 5×10^-15M, 또는 10^-15M 이하의 해리 상수 또는 K_D로 항원에 결합할 수 있다.

단일 쇄 항체 또는 다른 항원 결합 도메인을 포함하는 "항원-결합 항체 단편"은 단독으로 존재할 수 있거나, 또는 힌지 영역, CH1, CH2, CH3, 또는 CH4 도메인, J-쇄, 또는 분비 성분 중 하나 이상의 것과 함께 조합하여 존재할 수 있다. 가변 영역(들)과, 힌지 영역, CH1, CH2, CH3, 또는 CH4 도메인, J-쇄, 또는 분비 성분 중 하나 이상의 임의의 조합물을 포함할 수 있는 항원 결합 단편이 또한 포함된다. 결합 분자, 예를 들어, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 조류 및 포유동물을 비롯한, 임의의 동물 기원으로부터 유래될 수 있다. 항체는 예를 들어, 인간, 뮤린, 당나귀, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 라마, 말 또는 닭 항체일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 가변 영역은 기원이 (예를 들어, 상어로부터의) 콘드릭토이드(condricthoid)일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터, 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대하여 트랜스제닉인 동물로부터 단리된 항체를 포함하고, 일부 예에서는 하기, 및 예를 들어, 미국 특허 제5,939,598(Kucherlapati 등)에 기술된 바와 같이, 내인성 면역글로불린을 발현할 수 있고, 일부 경우에서는 그렇지 않을 수 있다. 본 개시내용의 실시형태에 따르면, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자가 다량체, 예를 들어, 육량체 또는 오량체를 형성할 수 있는 한 항체의 항원-결합 단편, 예를 들어, scFv 단편을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 이러한 단편은 "다량체화 단편"을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "중쇄 소단위"는 면역글로불린 중쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함하고, 결합 분자, 예를 들어, 중쇄 소단위를 포함하는 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자는 VH 도메인, CH1 도메인, 힌지(예를 들어, 상부, 중간 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, CH4 도메인, 또는 이의 변이체 또는 단편 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 예를 들어, 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자 또는 이의 단편, 예를 들어, 다량체화 단편, 변이체, 또는 유도체는 제한 없이, VH 도메인에 더하여, CH1 도메인; CH1 도메인, 힌지, 및 CH2 도메인; CH1 도메인 및 CH3 도메인; CH1 도메인, 힌지, 및 CH3 도메인; 또는 CH1 도메인, 힌지 도메인, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자 또는 이의 단편, 예를 들어, 다량체화 단편, 변이체 또는 유도체는 VH 도메인에 더하여, CH3 도메인 및 CH4 도메인; 또는 CH3 도메인, CH4 도메인, 및 J-쇄를 포함할 수 있다. 추가로, 본 개시내용에서 사용하기 위한 결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자에는 특정 불변 영역 부분, 예를 들어, CH2 도메인 모두 또는 일부가 없을 수 있다. 당업자는, 이러한 도메인(예를 들어, 중쇄 소단위)은 그것이 본래 면역글로불린 분자와 아미노산 서열이 달라지게 하도록 변형될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 본 개시내용의 실시형태에 따르면, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자가 다량체, 예를 들어, 육량체 또는 오량체를 형성하기에 충분한 부분의 IgM 중쇄 불변 영역을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 이러한 단편은 "다량체화 단편"을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "경쇄 소단위"는 면역글로불린 경쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 경쇄 소단위는 적어도 VL을 포함하고, CL(예를 들어, Cκ 또는 Cλ) 도메인을 추가로 포함할 수 있다.

결합 분자, 예를 들어, 항체, 항체-유사 분자, 항체-유래 분자 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체, 또는 이의 다량체화 단편은 그것이 인식하거나, 또는 특이적으로 결합하는 표적, 예를 들어, 표적 항원의 에피토프(들) 또는 부분(들)에 의해 기술되거나 명시될 수 있다. 항체의 항원 결합 도메인과 특이적으로 상호작용하는 표적 항원의 부분은 "에피토프", 또는 "항원 결정기"이다. 표적 항원은 단일 에피토프 또는 적어도 2개의 에피토프를 포함할 수 있고, 항원의 크기, 입체형태 및 유형에 따라 임의의 수의 에피토프를 포함할 수 있다.

상기에 제시된 바와 같이, 다양한 면역글로불린 부류의 불변 영역의 소단위 구조 및 3차원 구성은 널리 공지되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "VH 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 아미노 말단 가변 도메인을 포함하고, 용어 "CH1 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 제1(가장 아미노 말단) 불변 영역 도메인을 포함한다. CH1 도메인은 VH 도메인에 인접하고, 전형적인 IgG 중쇄 분자의 힌지 영역에 대해서 아미노 말단이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "이황화 결합"은 2개의 황 원자 사이에, 예를 들어, 폴리펩타이드의 시스테인 잔기 내에 형성된 공유 경합을 포함한다. 아미노산 시스테인은 제2 티올기와 이황화 결합 또는 브리지를 형성할 수 있는 티올기를 포함한다. 이황화 결합은 "쇄내", 즉, 단일 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 소단위 내의 시스테인 잔기에 대한 연결일 수 있거나, 또는 "쇄간", 즉, 2개의 별개의 폴리펩타이드 소단위, 예를 들어, 항체 중쇄 및 항체 경쇄, 항체 중쇄 또는 IgM 또는 IgA 항체 중쇄 불변 영역 및 J-쇄에 대한 연결일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 면역반응성 영역 또는 부위가 제1 종으로부터 수득 또는 유래되고, (무손상, 부분 또는 변형된 것일 수 있는) 불변 영역은 제2 종으로부터 수득된 것인 항체를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 표적 결합 영역 또는 부위는 비인간 공급원(예를 들어, 마우스 또는 영장류)로부터의 것일 것이고, 불변 영역은 인간이다.

용어 "다중특이적 항체" 또는 "이중특이적 항체"는 단일 항체 분자 내에 2개 이상의 상이한 에피토프에 대한 항원 결합 도메인을 갖는 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자를 지칭한다. 정규 항체 구조에 더하여 2개의 결합 특이성을 갖는 다른 결합 분자가 작제될 수 있다. 이중특이적 또는 다중특이적 항체에 의한 에피토프 결합은 동시에 또는 순차적일 수 있다. 트리오마 및 하이브리드 하이브리도마는 이중특이적 항체를 분비할 수 있는 세포주의 두 예이다. 이중특이적 항체는 또한 재조합 수단에 의해 구성될 수 있다(

Future Oncol. 6:1387-94 (2010); Mabry and Snavely, IDrugs. 13:543-9 (2010)). 이중특이적 항체는 또한 다이아바디일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조작된 항체"는 가변 도메인, 불변 영역 및/또는 J-쇄가 하나 이상의 아미노산의 적어도 부분적인 대체에 의해서 변형된 항체를 지칭한다. 특정 실시형태에서 공지된 특이성의 항체로부터의 전체 CDR은 이종 항체의 프레임영역 영역 내로 그래프팅될 수 있다. 대안적인 CDR이 프레임워크 영역이 유래된 항체와 동일한 부류 또는 심지어는 하위부류의 항체로부터 유래될 수 있지만, CDR은 또한 상이한 부류의 항체로부터, 예를 들어, 다른 종으로부터의 항체로부터 유래될 수 있다. 공지된 특이성의 비인간 인간 항체로부터의 하나 이상의 "공여자" CDR이 인간 중쇄 또는 경쇄 프레임워크 영역 내로 그래프팅된 조작된 항체는 본 명세서에서 "인간화 항체"라고 지칭된다. 특정 실시형태에서, CDR 모두가 공여자 가변 영역으로부터의 완전한 CDR로 치환되는 것은 아니지만, 공여자의 항원 결합 능력은 여전히 수여자 가변 도메인으로 전달될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,585,089호, 제5,693,761호, 제5,693,762호 및 제6,180,370호에 기재된 설명을 고려할 때, 일상적인 실험을 수행함으로써 또는 시행착오 시험에 의해서 기능성의 조작된 또는 인간화 항체를 수득하는 것은 당업자의 권한 내에 양호하게 포함될 것이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "조작된"은 합성 수단에 의한(예를 들어, 재조합 기술에 의한, 시험관내 펩타이드 합성에 의한, 펩타이드의 효소적 또는 화학적 커플링에 의한 또는 상기 기술의 일부 조합에 의한) 핵산 또는 폴리펩타이드 분자의 조작을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "연결된", "융합된" 또는 "융합" 또는 다른 문법적 등가물이 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 이러한 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단을 비롯한 어느 수단에 의해서 2개 초과의 요소 또는 성분을 함께 연결시키는 것을 지칭한다. "프레임내 융합"은 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 오픈 리딩 프레임(open reading frame: ORF)을 본래 ORF의 번역 리딩 프레임을 유지시키는 방식으로 연결시켜 연속적인 더 긴 ORF를 형성하는 것을 지칭한다. 따라서, 재조합 융합 단백질은 (분절이 일반적으로 자연에서 상기와 같이 연결되지 않은)본래 ORF에 의해서 암호화된 폴리펩타이드에 상응하는 2개 이상의 분절을 함유하는 단일 단백질이다. 따라서, 리딩 프레임은 융합된 분절 전체에 걸쳐 연속적으로 제조되지만, 분절은 예를 들어, 프레임내 링커 서열에 의해 물리적으로 또는 공간적으로 이격될 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린 가변 영역의 CDR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 프레임내 융합될 수 있지만, "융합된" CDR이 연속적인 폴리펩타이드의 일부로서 공동 번역되는 한, 적어도 하나의 면역글로불린 골격 영역 또는 추가의 CDR 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 이격될 수 있다.

폴리펩타이드와 관련하여, "선형 서열" 또는 "서열"은 서열에서 서로 이웃하는 아미노산이 폴리펩타이드의 1차 구조에서 인접하는, 아미노 말단에서 카복실 말단 방향으로의 폴리펩타이드에서의 아미노산의 순서이다. 폴리펩타이드의 또 다른 부분에 대해서 "아미노-말단" 또는 "N-말단"인 폴리펩타이드의 부분은 순차적 폴리펩타이드 쇄에서 더 앞에 오는 부분이다. 유사하게, 폴리펩타이드의 또 다른 부분에 대해서 "카복시-말단" 또는 "C-말단"인 폴리펩타이드의 부분은 순차적 폴리펩타이드 쇄에서 더 뒤에 오는 부분이다. 예를 들어, 전형적인 항체에서, 가변 도메인은 불변 영역에 대해서 "N 말단"이고, 불변 영역은 가변 도메인에 대하여 "C 말단"이다.

용어 "발현"은 본 명세서에서 사용된 바와 같이 유전자가 생화학물질, 예를 들어, 폴리펩타이드를 생산하는 과정을 지칭한다. 이러한 과정은 제한 없이, 유전자 넉다운뿐만 아니라 일시적 발현 및 안정적인 발현 둘 다를 비롯한, 세포 내에서의 유전자의 기능적 존재의 임의의 출현을 포함한다. 이것은 제한 없이, 유전자의 RNA, 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA)로의 전사, 및 이러한 mRNA의 폴리펩타이드(들)로의 번역을 포함한다. 목적하는 최종 생성물이 생화학물질인 경우, 발현은 이러한 생화학물질 및 임의의 전구체 생성을 포함한다. 유전자의 발현은 "유전자 산물"을 생산한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 유전자 산물은 핵산, 예를 들어, 유전자의 전사에 의해 제조된 메신저 RNA 또는 전사체로부터 번역된 폴리펩타이드일 수 있다. 본 명세서에 기술된 유전자 산물은 전사후 변형, 예를 들어, 폴리아데닐화를 갖는 핵산, 또는 번역후 변형, 예를 들어, 메틸화, 글리코실화, 지질의 첨가, 다른 단백질 소단위와의 회합, 단백질분해 절단 등을 갖는 폴리펩타이드를 추가로 포함한다.

"치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위해" 또는 "완화시키는" 또는 "완화시키기 위해"와 같은 용어는 진단된 기존의 병적 병태 또는 장애의 증상을 치유하고/하거나, 둔화시키고/시키거나, 감소시키고/시키거나, 이의 진행을 정지 또는 둔화시키는 치료적 조치를 지칭한다. "예방하다", "예방", "회피하다", "제지" 등과 같은 용어는 진단되지 않은 표적 병적 병태 또는 장애의 발생을 예방하는 예방 또는 예방적 조치를 지칭한다. 따라서, "치료를 필요로 하는 대상체"는 이미 장애를 갖는 대상체; 이러한 장애에 쉽게 걸리는 대상체; 및 장애가 예방되고자 하는 대상체를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "혈청 반감기" 또는 "혈장 반감기"는 투여 후에 약물, 예를 들어, 결합 분자, 예컨대, 본 명세서에 기술된 바와 같은 항체, 항체-유사 또는 항체-유래 분자 또는 이의 단편, 예를 들어, 다량체화 단편의 혈청 또는 혈장 농도가 50% 감소되는데 걸리는 시간(예를 들어, 분, 시간 또는 일 단위)을 지칭한다. 두 반감기는, 중심 구획, 예를 들어, 정맥내 전달의 경우 혈액으로부터, 말초 구획(예를 들어, 조직 또는 기관)으로의 약물 재분포 과정으로 인한 혈장 농도에서의 감소율인 알파 반감기, α 반감기 또는 t_1/2α, 및 배설 또는 대사 과정으로 인한 감소율인 베타 반감기, β 반감기 또는 t_1/2β로서 기술될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "혈장 약물 농도-시간 곡선 하 면적" 또는 "AUC"는 약물의 용량의 투여 후 약물에 대한 실제 신체 노출을 반영하며, ㎎*h/ℓ 단위로 표현된다. 이러한 곡선 하 면적은 0시간(t₀)에서부터 무한대(∞)까지 측정되며, 신체로부터의 약물의 제거 속도 및 투여되는 양에 좌우된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "평균 체류 시간" 또는 "MRT"는 약물이 신체에 남아있는 평균 시간 길이를 지칭한다.

"대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유동물"은 진단, 예후 또는 요법이 바람직한 임의의 대상체, 특히, 포유동물 대상체를 의미한다. 포유동물 대상체는 인간, 가축, 농장 동물 및 동물원 동물, 스포츠용 동물 또는 애완 동물, 예를 들어, 개, 고양이, 기니피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 돼지, 소, 곰 등을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 예를 들어, "요법이 유용할 대상체" 및 "치료를 필요로 하는 동물"은 하나 이상의 항원 결합 도메인을 포함하는 주어진 치료제, 예를 들어, 결합 분자, 예컨대, 항체의 투여가 유용할 모든 유망한 대상체로부터의 대상체의 하위세트를 지칭한다. 이러한 결합 분자, 예를 들어, 항체는 예를 들어, 진단 절차를 위해 그리고/또는 질환의 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있다.

IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자

IgM은 항원에 의한 자극에 대한 반응으로 B 세포에 의해 생산되는 제1 면역글로불린이고, 혈청 중에 대략 1.5 ㎎/㎖로 자연적으로 존재하고, 반감기는 약 5일이다. IgM은 오량체 또는 육량체 분자이고, 따라서 5개 또는 6개의 결합 단위를 포함한다. IgM 결합 단위는 전형적으로 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함한다. IgG 중쇄 불변 영역은 3개의 중쇄 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)을 함유하는 반면, IgM의 중쇄(μ) 불변 영역은 제4 불변 도메인(CH4)을 추가로 함유하고, C 말단 "테일피스"를 포함한다. 인간 IgM 불변 영역은 전형적으로 아미노산 서열 서열번호 1(예를 들어, 진뱅크 수탁 번호 pir||S37768, CAA47708.1, 및 CAA47714.1, 대립유전자 IGHM*03와 동일한) 또는 서열번호 2(예를 들어, 진뱅크 수탁번호 sp|P01871.4, 대립유전자 IGHM*04와 동일함)을 포함한다. 인간 Cμ1 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 약 아미노산 5에서부터 대략 아미노산 102까지의 범위이고; 인간 Cμ2 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 약 아미노산 114에서부터 약 아미노산 205까지의 범위이고, 인간 Cμ3 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 약 아미노산 224에서부터 약 아미노산 319까지의 범위이고, Cμ4 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 약 아미노산 329에서부터 약 아미노산 430까지의 범위이고, 테일피스는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 약 아미노산 431에서부터 약 아미노산 453까지의 범위이다.

진뱅크 수탁 번호 CAB37838.1 및 pir||MHHU를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 소수의 서열 변화를 갖는 인간 IgM 불변 영역의 다른 형태 또는 대립유전자가 존재한다. 본 개시내용에 기재되고 다른 곳에 청구된 서열번호 1 또는 2에 상응하는 위치에서 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실이 마찬가지로 대안적인 인간 IgM 서열, 뿐만 아니라 다른 종의 IgM 불변 영역 아미노산 서열에 혼입될 수 있다.

본 명세서에 제공된 바와 같은 인간 IgM 불변 영역 및 또한 특정 비-인간 영장류 IgM 불변 영역은 전형적으로 5개의 자연 발생 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프 또는 부위를 포함한다. 도 1 참고. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "N-연결된 글리코실화 모티프"는 아미노산 서열 N-X₁-S/T를 포함하거나 이것으로 이루어지며, 식 중, N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린(P)을 제외한 임의의 아미노산이고, S/T는 세린(S) 또는 트레오닌(T)이다. 글리칸이 아스파라긴 잔기의 질소 원자에 부착된다. 예를 들어, 문헌[Drickamer K, Taylor ME (2006), Introduction to Glycobiology (2nd ed.). Oxford University Press, USA] 참고. N-연결된 글리코실화 모티프는 46("N1"), 209("N2"), 272("N3"), 279("N4") 및 440("N5")번 위치에서 시작하는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 인간 IgM 중쇄 불변 영역에서 발생한다. 이들 5개의 모티프는 비-인간 영장류 IgM 중쇄 불변 영역에서 보존되고, 5개 중 4개는 마우스 IgM 중쇄 불변 영역에서 보존된다. 도 2 참고. 본 명세서 다른 곳에 제공된 바와 같이, N4를 제외하고, 인간 IgM 중쇄 불변 영역 내의 이들 부위 각각은 IgM 발현을 허용하고, 육량체 또는 오량체로의 조립을 허용하면서, 이 부위에서 글리코실화를 방지하도록 돌연변이될 수 있다.

각각의 IgM 중쇄 불변 영역은 결합 도메인, 예를 들어, 항원 결합 도메인, 예를 들어, scFv 또는 VHH, 또는 항원 결합 도메인의 소단위, 예를 들어, VH 영역과 회합된다. 특정 실시형태에서 결합 도메인은 비-항체 결합 도메인, 예를 들어, 수용체 엑토도메인, 이의 리간드 또는 수용체-결합 단편, 사이토카인 또는 이의 수용체-결합 단편, 성장 인자 또는 이의 수용체 결합 단편, 신경전달물질 또는 이의 수용체 결합 단편, 펩타이드 호르몬 또는 이의 수용체 결합 단편, 면역 관문 조절인자 리간드 또는 이의 수용체-결합 단편 또는 세포외 기질 단백질의 수용체-결합 단편일 수 있다. 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 PCT 공개 제WO 202000867호 참고.

5개의 IgM 결합 단위는 추가적인 작은 폴리펩타이드 쇄(J-쇄) 또는 이의 기능성 단편, 변이체 또는 유도체와 복합체를 형성하여 오량체 IgM 항체 또는 IgM-유사 항체를 형성할 수 있다. 인간 J-쇄의 전구체 형태는 서열번호 19로 제시된다. 신호 펩타이드는 서열번호 19의 아미노산 1에서부터 약 아미노산 22까지 연장되고, 성숙 인간 J-쇄는 서열번호 19의 약 아미노산 23에서부터 아미노산 159까지 연장된다. 성숙 인간 J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 20을 포함한다.

예시적인 변이체 및 변형된 J-쇄가 본 명세서 다른 곳에 제공된다. J-쇄가 없으면, IgM 항체 또는 IgM-유사 항체는 전형적으로 최대 12개의 항원 결합 도메인을 포함하는, 육량체로 조립된다. J-쇄가 있으면, J-쇄가 추가의 항원 결합 도메인(들)을 포함하는 하나 이상의 이종 폴리펩타이드를 포함하는 변형된 J-쇄인 경우 IgM 항체 또는 IgM-유사 항체는 전형적으로 최대 10개 이상의 항원 결합 도메인을 포함하는 오량체로 조립된다. 5개 또는 6개의 IgM 결합 단위의 오량체 또는 육량체 IgM 항체 또는 IgM-유사 항체로의 어셈블리는 Cμ4 및 테일피스 도메인을 포함하는 것으로 생각된다. 예를 들어, 문헌[Braathen, R., et al., J. Biol. Chem. 277:42755-42762 (2002)] 참고. 따라서, 본 개시내용에 제공된 오량체 또는 육량체 IgM 항체는 전형적으로 적어도 Cμ4 및/또는 테일피스 도메인(본 명세서에서 총괄하여 Cμ4-tp로 지칭됨)을 포함한다. 따라서 IgM 중쇄 불변 영역의 "다량체화 단편"은 적어도 Cμ4-tp 도메인을 포함한다. IgM 중쇄 불변 영역은 Cμ3 도메인 또는 이의 단편, Cμ2 도메인 또는 이의 단편, Cμ1 도메인 또는 이의 단편 및/또는 다른 IgM 중쇄 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 본 명세서에 제공된 바와 같은 완전한 IgM 중(μ)쇄 불변 도메인, 예를 들어, 서열번호 1 또는 서열번호 2 또는 이의 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함할 수 있다.

특정 실시형태에서, 본 개시내용은 5개의 2가 결합 단위를 포함하는 오량체 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자를 제공하며, 여기서 각각의 결합 단위는 2개의 IgM 중쇄 불변 영역 또는 이의 다량체화 단편 또는 변이체를 포함하며, 각각은 항원 결합 도메인 또는 이의 소단위와 회합된다. 특정 실시형태에서, 2개의 IgM 중쇄 불변 영역은 인간 중쇄 불변 영역이다.

일부 실시형태에서, 다량체 결합 분자는 육량체이고, 6개의 2가 결합 단위 또는 이의 변이체 또는 단편이다. 일부 실시형태에서, 다량체 결합 분자는 육량체이고, 6개의 2가 결합 단위 또는 이의 변이체 또는 단편을 포함하고, 여기서 각각의 결합 단위는 2개의 IgM 중쇄 불변 영역 또는 이의 다량체화 단편 또는 변이체를 포함한다.

IgM 중쇄 불변 영역은 Cμ1 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ2 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ3 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ4 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체 및/또는 테일 피스(tp) 또는 이의 단편 또는 변이체 중 하나 이상을 포함할 수 있되, 단, 불변 영역은 IgM 또는 IgM-유사 항체에서 목적하는 기능을 제공할 수 있어야 하고, 예를 들어, 제2 IgM 불변 영역과 회합하여 1개, 2개 또는 그 초과의 항원-결합 도메인(들)을 갖는 결합 단위를 형성하고/하거나 다른 결합 단위(및 오량체의 경우, J-쇄)와 회합하여 육량체 또는 오량체를 형성할 수 있어야 한다. 특정 실시형태에서 개별 결합 단위 내의 2개의 IgM 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편 또는 변이체 각각은 Cμ4 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, 테일피스(tp) 또는 이의 단편 또는 변이체 또는 Cμ4 도메인과 tp 또는 이의 단편 또는 변이체의 조합물을 포함한다. 특정 실시형태에서 개별 결합 단위 내의 2개의 IgM 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편 또는 변이체 각각은 Cμ3 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ2 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ1 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, 또는 이들의 임의의 조합물을 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, IgM 또는 IgM-유사 항체의 결합 단위는 2개의 경쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, IgM 또는 IgM-유사 항체의 결합 단위는 경쇄의 2개의 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄는 카파 경쇄이다. 일부 실시형태에서, 경쇄는 람다 경쇄이다. 일부 실시형태에서, 각각의 결합 단위는 각각 면역글로불린 경쇄 불변 영역에 대한 아미노산 말단에 위치된 VL을 포함하는 2개의 면역글로불린 경쇄를 포함한다.

본 명세서에 제공된 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자가 오량체인 경우, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 전형적으로 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서 J-쇄는 본 명세서 다른 곳에 기술된 바와 같이 부착된 하나 이상의 이종 모이어티를 추가로 포함하는 변형된 J-쇄 또는 이의 변이체이다. 특정 실시형태에서 J-쇄는 본 명세서 다른 곳에 논의된 바와 같이, 본 명세서에 제공된 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 혈청 반감기에 영향을 미치도록, 예를 들어, 향상시키도록 돌연변이될 수 있다. 특정 실시형태에서 J-쇄는 본 명세서 다른 곳에 논의된 바와 같이 글리코실화에 영향을 미치도록 돌연변이될 수 있다.

IgM 중쇄 불변 영역은 Cμ1 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ2 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ3 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체 및/또는 Cμ4 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체 중 하나 이상을 포함할 수 있되, 단, 불변 영역은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자에서 목적하는 기능을 제공할 수 있어야 하고, 예를 들어, 제2 IgM 불변 영역과 회합하여 1개, 2개 또는 그 초과의 항원-결합 도메인(들)을 갖는 결합 단위를 형성하고/하거나 다른 결합 단위(및 오량체의 경우, J-쇄)와 회합하여 육량체 또는 오량체를 형성할 수 있어야 한다. 특정 실시형태에서 개별 결합 단위 내의 2개의 IgM 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편 또는 변이체 각각은 Cμ4 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, 테일피스(tp) 또는 이의 단편 또는 변이체 또는 Cμ4 도메인과 TP 또는 이의 단편 또는 변이체의 조합물을 포함한다. 특정 실시형태에서 개별 결합 단위 내의 2개의 IgM 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편 또는 변이체 각각은 Cμ3 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ2 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, Cμ1 도메인 또는 이의 단편 또는 변이체, 또는 이들의 임의의 조합물을 추가로 포함한다.

변형된 J-쇄

특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체 또는 IgM-유사 항체의 J-쇄는 조립되고, 결합 표적(들)에 결합하는 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 능력을 방해하지 않으면서, 예를 들어, 이종 모이어티 또는 2개 이상의 이종 모이어티, 예를 들어, 폴리펩타이드를 도입함으로써 변형될 수 있다. 각각의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제9,951,134호 및 제10,618,978호 및 미국 특허 출원 공개 제2019-0185570호 참고. 따라서, 본 명세서 다른 곳에 기재된 바와 같은 다중특이적 IgM 또는 IgM-유사 항체를 비롯한 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 또는 IgM-유사 항체는 이종 모이어티, 예를 들어, J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체 내에 도입된, 예를 들어, 융합되거나 화학적으로 접합된 이종 폴리펩타이드를 포함하는 변형된 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 이종 모이어티는 J-쇄에 프레임 내에서 융합되거나 J-쇄에 화학적으로 접합된 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열 또는 이의 단편 또는 변이체일 수 있다. 특정 실시형태에서 이종 폴리펩타이드는 펩타이드 링커, 예를 들어, 적어도 5개의 아미노산 내지 25개 이하의 아미노산으로 전형적으로 이루어진 펩타이드 링커를 통해서 J-쇄 또는 이의 기능성 단편에 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 펩타이드 링커는 GGGGS(서열번호 27), GGGGSGGGGS(서열번호 28), GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 29), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 30) 또는 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 31)로 이루어진다. 특정 실시형태에서 이종 모이어티는 J-쇄에 접합된 화학 모이어티일 수 있다. J-쇄에 접합될 이종 모이어티는 비제한적으로 결합 모이어티, 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 이의 단편, 예를 들어, 단일 쇄 Fv(scFv) 분자, 사이토카인, 예를 들어, IL-2 또는 IL-15(예를 들어, 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된 PCT 출원 제PCT/US2020/046379호), IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 반감기를 증가시킬 수 있는 안정화 펩타이드 또는 화학 모이어티, 예컨대, 중합체 또는 사이토톡신을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이종 모이어티는 결합 분자, 예를 들어, 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 HSA 결합 분자의 반감기를 증가시킬 수 있는 안정화 펩타이드를 포함한다.

일부 실시형태에서, 변형된 J-쇄는 비제한적으로 표적 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 폴리펩타이드(작은 펩타이드 포함)를 포함할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 변형된 J-쇄와 회합된 항원 결합 도메인은 본 명세서 다른 곳에 기재된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 이의 단편일 수 있다. 특정 실시형태에서 항원 결합 도메인은 예를 들어, 카멜리드 또는 콘드릭토이드 항체로부터 유래된 scFv 항원 결합 도메인 또는 단일-쇄 항원 결합 도메인일 수 있다. 항원 결합 도메인은 J-쇄 기능 또는 회합된 IgM 또는 IgA 항체의 기능을 방해하지 않으면서 결합 표적에 대한 항원-결합 도메인의 결합을 허용하는 임의의 위치에서 J-쇄 내에 도입될 수 있다. 삽입 위치는 C-말단 또는 그 근처, N-말단 또는 그 근처 또는 J-쇄의 3차원 구조를 기준으로 접근 가능한 내부 위치를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 항원 결합 도메인은 서열번호 20의 시스테인 잔기 92와 101 사이에 서열번호 20의 성숙 인간 J-쇄 내에 도입될 수 있다. 추가 실시형태에서, 항원 결합 도메인은 글리코실화 부위에 또는 그 근처에서 서열번호 20의 인간 J-쇄 내에 도입될 수 있다. 추가 실시형태에서, 항원 결합 도메인은 C-말단으로부터의 약 10개 아미노산 잔기 내에 또는 N-말단으로부터의 약 10개 아미노산 내에, 서열번호 20의 인간 J-쇄 내에 도입될 수 있다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 J-쇄는 예를 들어, 본 명세서에 제공된 IgM 항체, IgM-유사 항체, IgA 항체, IgA-유사 항체 또는 IgM- 또는 IgA-유래 결합 분자의 혈청 반감기를 변경할 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 J-쇄이다. 예를 들어 특정 아미노산 치환, 결실 또는 삽입은 대상체 동물에게 투여될 때 변이체 J-쇄 내의 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 동일하고, 동일한 동물 종에게 동일한 방법을 사용하여 투여되는 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 증가된 혈청 반감기를 나타내는 IgM-유래 결합 분자를 생성할 수 있다. 특정 실시형태에서 변이체 J-쇄는 참조 J-쇄에 비해서 1개, 2개, 3개 또는 4개의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 다량체 결합 분자는 하나 이상의 중합체 Ig 수용체(예를 들어, pIgR, Fc 알파-뮤 수용체(FcαμR) 또는 Fc 뮤 수용체(FcμR))에 대한 감소된 결합 또는 감소된 글리코실화를 갖는 변이체 J-쇄 서열, 예컨대, 본 명세서에 제공된 변이체 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 PCT 공개 제WO 2019/169314호 참고. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 J-쇄는 성숙 야생형 인간 J-쇄(서열번호 20)의 아미노산 Y102에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함한다. "성숙 야생형 인간 J-쇄의 아미노산 Y102에 상응하는 아미노산"은 인간 J-쇄 내의 Y102에 상동성인 임의의 종의 J-쇄의 서열 내의 아미노산을 의미한다. 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 PCT 공개 제WO 2019/169314호 참고. 서열번호 20에서의 Y102에 상응하는 위치는 적어도 43개의 다른 종의 J-쇄 아미노산 서열에서 보존된다. 본 명세서에 참조에 의해서 포함된 미국 특허 제9,951,134호의 도 4 참고. 서열번호 20의 Y102에 상응하는 위치의 특정 돌연변이는 돌연변이체 J-쇄를 포함하는 IgM 오량체에 대한 특정 면역글로불린 수용체, 예를 들어, 인간 또는 뮤린 Fcαμ 수용체, 뮤린 Fcμ 수용체 및/또는 인간 또는 뮤린 중합체 Ig 수용체(pIg 수용체)의 결합을 저해할 수 있다. 서열번호 20의 Y102에 상응하는 아미노산에 돌연변이를 포함하는 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 동물에게 투여되는 경우 치환을 제외하고는 동일하고 동일한 방식으로 동일한 종에게 투여되는 상응하는 항체, 항체-유사 분자 또는 결합 분자보다 개선된 혈청 반감기를 갖는다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 Y102에 상응하는 아미노산은 임의의 아미노산으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 Y102에 상응하는 아미노산은 알라닌(A), 세린(S) 또는 아르기닌(R)으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 Y102에 상응하는 아미노산은 알라닌으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체는 본 명세서에서 "J*" 라고 지칭되는 변이체 인간 J-쇄이고, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함한다.

글리코변이체 IgM-유래 결합 분자

본 개시내용은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개 또는 12개의 변이체 IgM-유래 중쇄(들)를 포함하는 단리된 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자를 제공한다. 본 개시내용에 제공된 바와 같이, 변이체 IgM-유래 중쇄(들)는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 이것은 전장 IgM 중쇄 불변 영역의 변이체, IgM 중쇄 불변 영역의 다량체화 단편 또는 다량체화에 필요한 IgM 중쇄 불변 영역의 적어도 최소 부분을 포함하는 혼성 불변 영역일 수 있고, 관심 표적에 특이적으로 결합하는 결합 도메인, 예를 들어, 항체 항원-결합 도메인과 회합될 수 있다. 표적에 결합하는 결합 도메인은 예를 들어, 항원-결합 도메인 항원-결합 도메인의 소단위, 예를 들어, 항체의 중쇄 가변 영역(VH)일 수 있다. 본 개시내용은 임의의 관심 표적에 결합하는 결합 분자에 관한 것이다.

본 명세서에 제공된 바와 같은 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 또는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 결합 분자의 글리코실화, 예를 들어, 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화에 영향을 미치는 변경을 포함한다. 예를 들어, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역(들)은 5개의 자연-발생 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프(인간 IgM 중쇄 불변 영역의 경우) 중 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상 또는 4개에서 글리코실화를 방해하는, 예를 들어, 방지하는 예를 들어, 1개 이상의 단일 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있고, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 그 모티프에서 글리코실화를 방지하도록 돌연변이되며, N-연결된 글리코실화 모티프는 아미노산 서열 N-X₁-S/T를 포함하되, N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이고, S/T는 세린 또는 트레오닌이다. 인간 및 비-인간 영장류 IgM 중쇄 불변 영역은 전형적으로 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프를 갖고, 마우스 IgM 중쇄 불변 영역은 전형적으로 4개의 N-연결된 글리코실화 모티프를 갖는다. 도 2 참고.

결합 분자의 글리코실화에 영향을 미치는 IgM-유래 결합 분자는 결합 분자의 특정 생리학적, 약동학적 또는 약력학적 특성을 변경, 예를 들어, 개선시킬 수 있다. 예를 들어, 이러한 결합 분자는 개선된 혈청 반감기를 나타낼 수 있고/있거나 발현 및 제조 동안 보다 균질한 항체 제제를 허용한다. 따라서, 이러한 결합 분자는 생물의약을 제조를 보다 안전하고, 보다 효과적이고, 보다 용이하게 할 수 있다.

본 명세서에 제공된 바와 같이, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 서열번호 1(대립유전자 IGHM*03) 또는 서열번호 2(대립유전자 IGHM*04)의 아미노산 46(모티프 N1), 아미노산 209(모티프 N2), 아미노산 272(모티프 N3), 아미노산 279(모티프 N4) 및 아미노산 440(모티프 N5)에 상응하는 아미노산 위치에서 시작하는 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프 N-X₁-S/T를 포함하는 인간 IgM 중쇄 불변 영역(예를 들어, 서열번호 1 또는 서열번호 2)으로부터 유래될 수 있다. 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 마찬가지로 예를 들어, 다른 인간 IgM 대립유전자로부터, 비-인간 영장류 IgM 중쇄 불변 영역으로부터 또는 다른 종, 예를 들어, 설치류 IgM 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 마우스 IgM 중쇄 불변 영역의 IgM 중쇄 불변 영역으로부터 유래될 수 있다. 인간 IgM 중쇄 불변 영역에서 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프인 N1 내지 N5는 다른 영장류 종에서는 보존되지만, 마우스 IgM 중쇄 불변 영역에서, 위치 N3에서의 N-연결된 글리코실화 모티프는 보존되지 않는다. 도 2 참고.

특정 실시형태에서, 모티프 N1, 모티프 N2, 모티프 N3 및/또는 모티프 N5에 상응하는 N-X₁-S/T 모티프 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개는 그 모티프에서 글리코실화를 방지하는 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함한다. 글리코실화의 방지는 아스파라긴 잔기를 제거함으로써 또는 그것을 비-아스파라긴 잔기로 치환시킴으로써 또는 그 모티프 내의 제3 위치에서 세린 또는 트레오닌 잔기를 제거함으로써 또는 세린 또는 트레오닌 잔기를 비-세린 또는 트레오닌 잔기로 치환시킴으로써 달성될 수 있다. 이 모티프에서의 글리코실화의 방지는 또한 모티프의 위치 X₁에 프롤린 잔기를 삽입함으로써 달성될 수 있다.

따라서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 모티프 N1, 모티프 N2, 모티프 N3, 모티프 N5 또는 모티프 N1, N2, N3 또는 N5의 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 모두의 임의의 조합의 N, X₁, 또는 S/T 위치 중 어느 하나에 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있고, 아미노산 삽입, 결실 또는 치환은 그 모티프에서 글리코실화를 방지한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 N46, N209, N272 또는 N440에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환 또는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 N46, N209, N272, 또는 N440에 아미노산 치환을 포함할 수 있고, 치환된 아미노산은 임의의 아미노산이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "서열 내의 특정 아미노산에 상응하는 아미노산 위치"는 상동성 서열 내의 아미노산, 예를 들어, 비-인간 영장류 중쇄 불변 영역 또는 인간 IgM 불변 영역의 또 다른 대립유전자에서 보존된 모티프일 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 S48, S211, S274 또는 S442에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환 또는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 S48, S211, S274 또는 S442에 아미노산 치환을 포함할 수 있고, 치환된 아미노산은 트레오닌을 제외한 임의의 아미노산 또는 아미노산 치환의 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 임의의 조합이다.

예를 들어, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 N46X₂, N46A, N46D, N46Q, N46K, S48X₃, S48A, N229X₂, N229A, N229D, N229Q, N229K, S231X₃, S231A, N272X₂, N272A, N272D, N272Q, N272K, S274X₃, S274A, N440X₂, N440A, N440D, N449Q, N449K, S242X₃ 또는 S424A에 상응하는 아미노산 치환 또는 아미노산 치환의 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 임의의 조합을 포함할 수 있고, X₂는 임의의 아미노산이고, X₃은 트레오닌을 제외한 임의의 아미노산이다. 당업자는 추가 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입이 마찬가지로 주어진 모티프에서 N-연결된 글리코실화를 방지할 수 있다는 것을 쉽게 이해할 것이다.

특정 실시형태에서, IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 아미노산 서열 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 또는 서열번호 18을 포함하는 변이체 인간 IgM 불변 영역이다. 이들 서열 각각에서, X191은 G 또는 S일 수 있다.

본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 변이체 IgM 중쇄 불변 영역에 적어도 하나의 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프를 도입하도록 추가로 돌연변이될 수 있고, 여기서 적어도 하나의 새로운 N-연결된 글리코실화 모티프는 IgM 항체에서 자연적으로 글리코실화되지 않은 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 내의 부위에 도입된다. 이러한 새로운 N-연결된 글리코실화 모티프는 예를 들어, 혈청 반감기를 개선시킴으로써, 제조 수율을 개선시킴으로써 또는 결합 분자에 의해서 보유된 글리칸에 더 큰 컨시스턴시를 제공함으로써, IgM-유래 결합 분자의 물리적, 약력학적 또는 약동학적 특성을 개선시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 새로운 N-연결된 글리코실화 모티프는 상이한 면역글로불린 아이소타입에 존재하는 N-연결된 글리코실화 모티프의 위치에 상응하는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 내의 위치에 도입될 수 있다. 예를 들어, 도 1의 정렬 참고. 특정 실시형태에서 상이한 면역글로불린 아이소타입은 인간 IgG1(예를 들어, 서열번호 34), 인간 IgG2(예를 들어, 서열번호 35), 인간 IgG3(예를 들어, 서열번호 36), 인간 IgG4(예를 들어, 서열번호 37), 인간 IgA1(예를 들어, 서열번호 38), 인간 IgA2(예를 들어, 서열번호 39), 인간 IgD(예를 들어, 서열번호 40) 및 인간 IgE(예를 들어, 서열번호 41)로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 면역글로불린 아이소타입이다. 이들 서열은 하기에 제시되어 있다. 당업자는 이들 서열의 대립유전자 변이체가 존재하고, 본 개시내용에 포함된다는 것을 쉽게 이해할 것이다.

본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자는 결합 도메인 또는 이의 소단위, 예를 들어, 항체 항원-결합 도메인, 예를 들어, 관심 표적에 특이적으로 결합하는 항체 항원-결합 도메인의 scFv, VHH 또는 VH 소단위와 회합된 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개 또는 12개의 글리코변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 표적은 표적 에피토프, 표적 항원, 표적 세포, 표적 기관 또는 표적 바이러스이다. 표적은 비제한적으로, 종양 항원, 다른 종양학 표적, 면역 종양학 표적, 예컨대, 면역 관문 저해제, 감염 질환 표적, 예컨대, 감염된 세포의 표면 상에서 발현되는 바이러스 항원, 혈액 뇌 장벽 수송에 관여된 표적 항원, 신경퇴행성 질환 및 신경염증성 질환에 관여된 표적 항원 및 이들의 임의의 조합물을 포함할 수 있다. 예시적인 표적 및 이러한 표적에 결합하는 결합 도메인은 본 명세서 다른 곳에 제공되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2019-0100597호, PCT 공개 제WO2017/059387호(및 관련 미국 공개 제2019-0185570호), 제WO/2017/196867호, 제WO2018/017888호, 제WO2018/017889호, 제WO2018/017761호, WO2018/017763호, 제WO2018/187702호, 제WO2019165340호, 제WO2019/169314호 또는 제WO2020086745, PCT 출원 제PCT/US2020/046379호, 제PCT/US2020/046335호 또는 미국 특허 제9,951,134호, 제9,938,347호, 제8,377,435호, 제9,458,241호, 제9,409,976호, 제10,351,631호, 제10,570,191호, 제10,604,559호 또는 제10,618,978호에서 찾아볼 수 있다. 이들 출원 및/또는 특허 각각은 이들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.

특정 실시형태에서, 표적은 종양 또는 암 세포에서만 다량으로 발현되고, 성인의 정상적인 건강한 세포에서 검출 가능하지 않은 수준으로만 발현될 수 있는 종양-특이적 항원, 즉, 표적 항원이다. 특정 실시형태에서 표적은 종양-연관 항원, 즉, 건강한 세포 및 암성 세포 둘 다에서 발현되지만 정상의 건강한 세포에서보다 암성 세포에서 훨씬 더 높은 밀도로 발현되는 표적 항원이다. 예시적인 종양-특이적 및 종양-연관 항원은 비제한적으로 B-세포 성숙화 항원(BCMA), CD19, CD20, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2, ErbB2라고도 부름), HER3(ErbB3), 수용체 티로신-단백질 키나제 ErbB4, 세포독성 T-림프구 항원 4(CTLA4), 세포 예정사 단백질 1(PD-1), 예정사-리간드 1(PD-L1), 혈관 내피 성장 인자(VEGF), VEGF 수용체-1(VEGFR1), VEGFR2, CD52, CD30, 전립선-특이적 막 항원(PSMA), CD38, 강글리오사이드 GD2, 신호전달 림프구성 활성화 분자 패밀리 구성원 7의 자가-리간드 수용체(self-ligand receptor of the signaling lymphocytic activation molecule family member 7: SLAMF7), 혈소판-유래 성장 인자 수용체 A(PDGFRA), CD22, FLT3(CD135), CD123, MUC-16, 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 1(CEACAM-1), 메소텔린, 종양-연관 칼슘 신호 트랜스듀서 2(Trop-2), 글리피칸-3(GPC-3), 인간 혈액 그룹 H 타입 1 삼당류(Globo-H), 시알릴 Tn 항원(STn 항원) 또는 CD33을 포함한다. 당업자는 표적 항원이 다수의 상이한 명칭으로 문헌에 나타나지만, 이러한 널리 공지된 치료 표적은 온라인, 예를 들어, EXPASY.org에서 입수 가능한 데이터베이스를 사용하여 쉽게 식별될 수 있다.

다른 종양 연관 및/또는 종양-특이적 항원은 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: DLL4, 노치(Notch)1, 노치2, 노치3, 노치4, JAG1, JAG2, c-Met, IGF-1R, 패치트(Patched), 헤지호그 패밀리 폴리펩타이드, WNT 패밀리 폴리펩타이드, FZD1, FZD2, FZD3, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, FZD9, FZD10, LRP5, LRP6, IL-6, TNF알파, IL-23, IL-17, CD80, CD86, CD3, CEA, Muc16, PSCA, CD44, c-Kit, DDR1, DDR2, RSPO1, RSPO2, RSPO3, RSPO4, BMP 패밀리 폴리펩타이드, BMPR1a, BMPR1b 또는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 단백질, 예컨대, TNFR1(DR1), TNFR2, TNFR1/2, CD40(p50), Fas(CD95, Apo1, DR2), CD30, 4-1BB(CD137, ILA), TRAILR1(DR4, Apo2), DR5(TRAILR2), TRAILR3(DcR1), TRAILR4(DcR2), OPG(OCIF), TWEAKR(FN14), LIGHTR(HVEM), DcR3, DR3, EDAR 또는 XEDAR.

특정 실시형태에서, IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 각각 5개 또는 6개의 2가 IgM 결합 단위를 포함하는 오량체 또는 육량체 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자이다. 특정 실시형태에 따르면, 각각의 결합 단위는 각각 변이체 IgM 불변 영역에 대해 아미노산 말단에 위치된 VH를 갖는 본 명세서에 기재된 바와 같은 2개의 글리코변이체 IgM 중쇄 및 각각 면역글로불린 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 카파 또는 람다 불변 영역에 대해 아미노 말단에 위치된 경쇄 가변 도메인(VL)을 갖는 2개의 면역글로불린 경쇄를 포함한다. 제공된 VH와 VL은 조합되어 관심 표적에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 형성한다. 특정 실시형태에서, 5개 또는 6개 IgM 결합 단위는 동일하다.

IgM-유래 결합 분자가 오량체인 이들 실시형태에서, 그것은 본 명세서 다른 곳에 기재된 바와 같은 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 20을 포함하는 성숙 인간 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체일 수 있다. 당업자는 이러한 문맥에서 "기능성 단편" 또는 "기능성 변이체"가 IgM 결합 단위, 예를 들어, IgM 중쇄 불변 영역과 회합되어 오량체 IgM 항체를 형성할 수 있는 단편 및 변이체를 포함한다는 것은 인식할 것이다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 J-쇄는 하나 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 변이체 J-쇄와 동일한 참조 J-쇄에 비해서 하나 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함하는 기능성 변이체 J-쇄이다. 예를 들어 특정 아미노산 치환, 결실 또는 삽입은 대상체 동물에게 투여될 때 변이체 J-쇄 내의 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 동일하고, 동일한 동물 종에게 동일한 방식으로 투여되는 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 증가된 혈청 반감기를 나타내는 IgM-유래 결합 분자를 생성할 수 있다. 특정 실시형태에서 변이체 J-쇄는 참조 J-쇄에 비해서 1개, 2개, 3개 또는 4개의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다.

본 명세서 다른 곳에 상세하게 기재된 바와 같이, 특정 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자의 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 야생형 성숙 인간 J-쇄(서열번호 20)의 아미노산 Y102에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함한다. Y102는 임의의 아미노산, 예를 들어 알라닌을 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서 변이체 인간 J-쇄는 본 명세서에서 "J*"라고 지칭되는 아미노산 서열 서열번호 21을 포함할 수 있다.

변이체 또는 야생형 아미노산 서열을 갖는, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 J-쇄 또는 단편은 이종 모이어티를 추가로 포함하는 "변형된 J-쇄"일 수 있고, 이종 모이어티는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 융합되거나 접합된다. 예시적인, 그러나 비제한적인 이종 모이어티가 예를 들어, 본 명세서에 참조에 의해 포함된 미국 특허 제9,951,134호 및 제10,618,978호 및 미국 특허 출원 공개 제2019/0185570호에 제공된다. 특정 실시형태에서, 이종 모이어티는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 또는 그 내에 융합된 폴리펩타이드이다. 이종 폴리펩타이드는 일부 예에서 펩타이드 링커를 통해서 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 또는 그 내에 융합될 수 있다. 임의의 적합한 링커가 사용될 수 있고, 예를 들어, 펩타이드 링커는 적어도 5개의 아미노산, 적어도 10개의 아미노산 및 적어도 20개의 아미노산, 적어도 30개의 아미노산 또는 그 초과의 아미노산 등을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 펩타이드 링커는 25개 이하의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서 펩타이드 링커는 5개의 아미노산, 10개의 아미노산, 15개의 아미노산, 20개의 아미노산 또는 25개의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 특정 실시형태에서 펩타이드 링커는 글리신 및 세린, 예를 들어, (GGGGS)n을 포함하고, 여기서 N은 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 초과(서열번호 84)일 수 있다. 특정 실시형태에서, 펩타이드 링커는 GGGGS(서열번호 27), GGGGSGGGGS(서열번호 28), GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 29), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 30) 또는 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 31)로 이루어진다. 특정 실시형태에서, 이종 폴리펩타이드는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 N-말단, J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 C-말단, 또는 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 N-말단 및 C-말단 둘 다에 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서 이종 폴리펩타이드는 J-쇄 내부에 내부적으로 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 이종 폴리펩타이드는 결합 도메인, 예를 들어, 항원 결합 도메인일 수 있다. 예를 들어, 이종 폴리펩타이드는 항체, 항체의 소단위 또는 항체의 항원-결합 단편, 예를 들어, scFv 단편일 수 있다. 특정 실시형태에서, 결합 도메인, 예를 들어, scFv 단편은 효과기 세포, 예를 들어, T 세포 또는 NK 세포에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서 결합 도메인, 예를 들어, scFv 단편은 세포독성 T 세포, 예를 들어, CD3ε 상의 CD3에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자의 변형된 J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 24(V15J), 서열번호 25(V15J*), 서열번호 26(V15J N49D) 또는 각각 뮤린 항체 SP34의 6개의 상보성 결정 영역, VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VLCDR1, VLCDR2 및 VLCDR3 아미노산 서열 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 및 서열번호 54를 포함하는 항-CD3ε scFv 항원-결합 도메인을 포함하는 J-쇄, 예를 들어, 아미노산 서열 서열번호 55 또는 각각 VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VLCDR1, VLCDR2 및 VLCDR3 아미노산 서열 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 62, 서열번호 65, 서열번호 67, 및 서열번호 69; 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 62, 서열번호 65, 서열번호 67, 및 서열번호 70; 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 63, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 71; 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 72; 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 73을 포함하는 항-CD3ε scFv 항원-결합 도메인, 예를 들어, 각각 서열번호 74 및 서열번호 75, 서열번호 76 및 서열번호 77, 서열번호 78 및 서열번호 79, 서열번호 80 및 서열번호 81 또는 서열번호 82 및 서열번호 83의 VH 및 VL을 포함하는 변형된 J-쇄 SJ*를 포함한다.

향상된 혈청 반감기를 갖는 IgM-유래 결합 분자

본 명세서에 기재된 글리코실화 돌연변이에 더하여, 본 명세서에 제공된 바와 같은 특정 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 향상된 혈청 반감기를 갖도록 추가로 조작될 수 있다. IgM-유래 결합 분자의 혈청 반감기를 향상시킬 수 있는 예시적인 IgM 중쇄 불변 영역 돌연변이는 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 국제 공개 제WO 2019/169314호에 개시되어 있다. 예를 들어, 본 명세서 다른 곳에 기재된 글리코실화 돌연변이 중 하나 이상에 더하여, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자의 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 야생형 인간 IgM 불변 영역(예를 들어, 서열번호 1 또는 서열번호 2)의 아미노산 S401, E402, E403, R344 및/또는 E345에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함할 수 있다. "야생형 인간 IgM 불변 영역의 아미노산 S401, E402, E403, R344, 및/또는 E345에 상응하는 아미노산"은 인간 IgM 불변 영역 내의 S401, E402, E403, R344 및/또는 E345에 상동성인 임의의 종의 IgM 불변 영역의 서열 내의 아미노산을 의미한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 1 또는 서열번호 2의 S401, E402, E403, R344 및/또는 E345에 상응하는 아미노산은 임의의 아미노산, 예를 들어, 알라닌으로 치환될 수 있다.

야생형 J-쇄는 전형적으로 하나의 N-연결된 글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자의 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 예를 들어, 성숙 인간 J-쇄(서열번호 20) 또는 J*(서열번호 21)의 아미노산 49(모티프 N6)에 상응하는 아미노산 위치에서 시작하는, 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프 N-X₁-S/T 내에 돌연변이를 포함하고, 여기서 N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이고, S/T는 세린 또는 트레오닌이고, 여기서 돌연변이는 그 모티프에서 글리코실화를 방지한다. PCT 공개 제WO 2019/169314호에 입증된 바와 같이, 이 부위에서 글리코실화를 방지하는 돌연변이는 대상체 동물에게 투여될 때 변이체 J-쇄에 글리코실화를 방지하는 돌연변이 또는 돌연변이들을 제외하고는 동일하고, 동일한 동물 종에 동일한 방식으로 투여되는 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 증가된 혈청 반감기를 나타내는, IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 항체 분자를 생성할 수 있다.

예를 들어, 특정 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자의 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 서열번호 20의 아미노산 N49 또는 아미노산 S51에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함할 수 있되, 단 S51에 상응하는 아미노산은 트레오닌(T)으로 치환되지 않거나, 변이체 J-쇄는 서열번호 20의 아미노산 N49 및 S51 둘 다에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 임의의 아미노산, 예를 들어, 알라닌(A), 글리신(G), 트레오닌(T), 세린(S) 또는 아스파트산(D)으로 치환된다. 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 알라닌(A)으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자의 J-쇄는 변이체 인간 J-쇄이고, 아미노산 서열 서열번호 22를 갖는다. 또 다른 특정 실시형태에서, 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 아스파트산(D)으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 오량체 IgM-유래 결합 분자의 J-쇄는 변이체 인간 J-쇄이고, 아미노산 서열 서열번호 23를 갖는다.

감소된 CDC 활성도를 갖는 변이체 인간 IgM 불변 영역

본 명세서에 기재된 글리코실화 돌연변이에 더하여, 특정 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자는 감소된 CDC 활성도를 부여하는 돌연변이를 제외하고는 동일한 상응하는 참조 인간 IgM 불변 영역을 갖는 참조 IgM 항체 또는 IgM-유사 항체에 비해서, 보체의 존재 하에서 세포에 감소된 보체-의존적 세포독성(complement-dependent cytotoxicity: CDC) 활성도를 추가로 나타낼 수 있다. 이들 CDC 돌연변이는 돌연변이 중 어느 하나와 조합되어 N-연결된 글리코실화를 차단할 수 있고/있거나 본 명세서에 제공된 바와 같은 증가된 혈청 반감기를 부여할 수 있다. "상응하는 참조 인간 IgM 불변 영역"은, CDC 활성도에 영향을 미치는 불변 영역에서의 변형 또는 변형들을 제외하고는 변이체 IgM 불변 영역과 동일한 인간 IgM 불변 영역 또는 이의 부분, 예를 들어, Cμ3 도메인을 의미한다. 특정 실시형태에서, 변이체 인간 IgM 불변 영역은 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된 PCT 공개 제WO/2018/187702호에 기재된 바와 같은 야생형 인간 IgM 불변 영역에 비해서, 예를 들어, Cμ3 도메인에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. CDC를 측정하기 위한 검정은 당업자에게 널리 공지되어 있고, 예시적인 검정은 예를 들어, PCT 공개 제WO/2018/187702호에 기술되어 있다.

특정 실시형태에서, 감소된 CDC 활성도를 부여하는 변이체 인간 IgM 불변 영역은 서열번호 1(인간 IgM 불변 영역 대립유전자 IGHM*03) 또는 서열번호 2(인간 IgM 불변 영역 대립유전자 IGHM*04)의 위치 L310, P311, P313 및/또는 K315에 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시형태에서, 감소된 CDC 활성도를 부여하는 변이체 인간 IgM 불변 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 P311번 위치에서 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 포함한다. 다른 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 변이체 IgM 불변 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 P313번 위치에서 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 함유한다. 다른 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 변이체 IgM 불변 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 P311 및/또는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 P313번 위치에 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 치환의 조합을 함유한다. 이들 프롤린 잔기는 임의의 아미노산, 예를 들어, 알라닌, 세린 또는 글리신으로 독립적으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 감소된 CDC 활성도를 부여하는 변이체 인간 IgM 불변 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 K315번 위치에서 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 포함한다. 라이신 잔기는 임의의 아미노산, 예를 들어, 알라닌, 세린, 글리신 또는 아스파트산으로 독립적으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 감소된 CDC 활성도를 부여하는 변이체 인간 IgM 불변 영역은 아스파트산으로의 서열번호 1 또는 서열번호 2의 K315번 위치에서 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시형태에서, 감소된 CDC 활성도를 부여하는 변이체 인간 IgM 불변 영역은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 L310번 위치에서 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 포함한다.라이신 잔기는 임의의 아미노산, 예를 들어, 알라닌, 세린, 글리신 또는 아스파트산으로 독립적으로 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 감소된 CDC 활성도를 부여하는 변이체 인간 IgM 불변 영역은 아스파트산으로의 서열번호 1 또는 서열번호 2의 L310번 위치에서 야생형 인간 IgM 불변 영역에 상응하는 아미노산 치환을 포함한다.

폴리뉴클레오타이드, 벡터 및 숙주 세포

본 개시내용은 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자의 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 단리된, 재조합 및/또는 비-자연-발생 폴리뉴클레오타이드를 추가로 제공한다. "폴리펩타이드 소단위"는 독립적으로 번역될 수 있는 결합 분자, 결합 단위, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 항원 결합 도메인의 일부분을 의미한다. 예는 비제한적으로 항체 가변 도메인, 예를 들어, VH 또는 VL, J 쇄, 분비 성분, 단일 쇄 Fv, 항체 중쇄, 항체 경쇄, 항체 중쇄 불변 영역, 항체 경쇄 불변 영역 및/또는 이의 임의의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함한다.

특정 실시형태에서, 폴리펩타이드 소단위는 변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 포함하는 본 명세서에 제공된 바와 같은 변이체 IgM-유래 중쇄를 포함할 수 있고, 변이체 IgM 중쇄 불변 영역의 적어도 하나의 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 그 모티프에서 글리코실화를 방지하도록 돌연변이된다. 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 모두 본 명세서에 제공된 바와 같은 결합 도메인, 예를 들어, 항원-결합 도메인 또는 이의 소단위, 예를 들어, 항원-결합 도메인의 VH 부분에 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서 폴리뉴클레오타이드는 변이체 인간 IgM-유래 중쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드 소단위를 암호화할 수 있다. 예를 들어, IgM-유래 중쇄 폴리펩타이드 소단위는 서열번호 3 내지 18 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

특정 실시형태에서, 폴리펩타이드 소단위는 본 명세서 다른 곳에 기재된 바와 같은 항원 결합 도메인의 항체 VL 부분을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 폴리펩타이드 소단위는 항체 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 항체 경쇄 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함할 수 있는데, 이것은 VL의 C-말단 단부에 융합될 수 있다.

특정 실시형태에서 폴리펩타이드 소단위는 본 명세서에 제공된 바와 같은 J-쇄, 변형된 J-쇄 또는 이의 임의의 기능성 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 폴리펩타이드 소단위는 인간 J-쇄 또는 변형된 J-쇄를 비롯한 이의 기능성 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 J-쇄 폴리펩타이드 소단위는 서열번호 19 내지 26 또는 55 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

특정 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 발현 벡터, 예컨대, 플라스미드는 하나의 폴리펩타이드 소단위, 예를 들어, 변이체 IgM-유래 중쇄, 경쇄 또는 J-쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함할 수 있거나 또는 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자의 2개 이상 또는 3개 모두의 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 2개 이상 핵산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 3개 이상의 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열은 별개의 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 별개의 발현 벡터 상에 존재할 수 있다. 본 개시내용은 이러한 단일 또는 다수의 발현 벡터를 제공한다. 본 개시내용은 또한 제공된 폴리뉴클레오타이드(들) 또는 발현 벡터(들)를 암호화하는 하나 이상의 숙주 세포를 제공한다.

따라서, 특정 실시형태에서, 항원-결합 도메인을 형성하기 위해서, 항체의 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이 IgM-유래 구조에 대한 발현 벡터 주형, 특히 본 명세서에 제공된 바와 같은 변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 암호화하는 것, 예를 들어, 서열번호 3 내지 18 중 어느 하나에 삽입될 수 있고, 본 명세서에 제공된 바와 같은 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 암호화하는, 예를 들어, 서열번호 19 내지 26 또는 55 중 어느 하나를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 경쇄와 추가로 조합되어, 글리코실화가 본 명세서 다른 곳에 기재된 바와 같이 하나 이상의 N-연결된 글리코실화 모티프에서 손상된 5개 또는 6개 결합 단위를 갖는 IgM-유래 결합 분자를 생성할 수 있다. 간략하면, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 암호화하는 핵산 서열을 기존의 분자로부터 합성 또는 증폭시키고, 적절한 배향으로 그리고 발현 시에 벡터가 목적하는 전장 중쇄 또는 경쇄를 산출하도록 하는 프레임으로 하나 이상의 벡터 내에 삽입할 수 있다. 이러한 목적에 유용한 벡터는 당업계에 공지되어 있다. 이러한 벡터는 또한 인핸서 및 목적하는 쇄의 발현을 달성하는데 필요한 다른 서열을 포함할 수 있다. 다수의 벡터 또는 단일 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 벡터 또는 이들 벡터들은 숙주 세포에 형질주입될 수 있고, 그 다음 변이체 IgM-유래 중쇄 및/또는 경쇄 및/또는 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체가 발현되고, IgM-유래 결합 분자가 조립되고, 그 다음 단리 및/또는 정제될 수 있다. 발현 시 쇄는 향상된 혈청 반감기를 보유하는 완전 기능성 다량체 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자를 형성한다. 발현 및 정제 공정을 필요한 경우 상업적인 스케일로 수행할 수 있다.

본 개시내용은 2개 이상 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 조성물을 추가로 제공하며, 여기서 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드는 총괄적으로 상기에 기재된 바와 같은 변경된 글리코실화를 갖는 IgM-유래 결합 분자를 암호화할 수 있다. 특정 실시형태에서 조성물은 본 명세서 다른 곳에 제공된 바와 같은 변이체 IgM-유래 중쇄 또는 이의 다량체화 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호 3 내지 18 중 어느 하나를 포함할 수 있고, IgM-유사 중쇄는 결합 도메인, 예를 들어, 이의 항원-결합 도메인 또는 소단위, 예를 들어, VH 도메인을 추가로 포함한다. 조성물은 항원 결합 도메인의 VL을 적어도 포함하는 경쇄 또는 이의 단편, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 추가로 포함할 수 있다. 제공된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 조성물은 본 명세서에 제공된 바와 같은 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호 19 내지 26 또는 55 중 어느 하나를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 조성물을 구성하는 폴리뉴클레오타이드는 2개, 3개 또는 그 초과의 개별 벡터, 예를 들어, 발현 벡터 상에 위치될 수 있다. 이러한 벡터는 본 개시내용에 제공되어 있다. 특정 실시형태에서 본 명세서에 제공된 바와 같은 조성물을 구성하는 폴리뉴클레오타이드 중 2개 이상은 단일 벡터, 예를 들어, 발현 벡터 상에 위치될 수 있다. 이러한 벡터는 본 개시내용에 제공되어 있다.

본 개시내용은 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 임의의 소단위, 본 명세서에 제공된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 조성물, 또는 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 또는 이의 임의의 소단위를 총괄하여 암호화하는 벡터 또는 2종, 3종 또는 그 초과의 벡터를 포함하는 숙주 세포, 예를 들어, 원핵 또는 진핵 숙주 세포를 추가로 제공한다.

관련된 실시형태에서, 본 개시내용은 본 개시내용에 제공된 바와 같이 감소된 글리코실화를 갖는 IgM-유래 결합 분자를 생성시키는 방법을 제공하며, 여기서 이 방법은 본 명세서에 제공된 바와 같은 숙주 세포를 배양하고, IgM-유래 결합 분자를 회수하는 단계를 포함한다.

사용 방법

본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 이 방법은 대상체에게 치료적 유효량의 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 다른 IgM-유래 결합 분자를 투여하는 단계를 포함한다. 본 개시내용에 의해서 제공된 바와 같은 감소된 글리코실화를 갖는 IgM-유래 결합 분자는 결합 분자 상의 글리코폼의 수를 단순화하고, 결합 분자에 부착된 당의 특징을 보다 일정하게 함으로써, 예를 들어, 글리칸에 대한 시알산기의 보다 완전한 첨가에 의해서 보다 균질한 치료 조성물을 생성할 수 있다. 균질성에 대한 이러한 개선은 글리코실화에서의 감소를 제외하고는 동일한 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 제조에서 더 큰 용이성을 부여할 수 있고, 또한 결합 분자에 대해서 더 큰 안전성을 부여할 수 있다. 또한, 감소된 글리코실화를 갖는 IgM-유래 결합 분자는 글리코실화의 감소를 제외하고는 동일한 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 증가된 혈청 반감기를 나타낼 수 있다. "치료적 유효 용량 또는 유효량" 또는 "유효량"은 투여될 때 대상체의 치료에 대해서 긍정적인 치료 반응을 제공하는 IgM-유래 결합 분자의 양을 의도한다.

예를 들어, 암의 치료를 위한 조성물의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태, 대상체가 인간인지 동물인지의 여부, 투여되는 다른 의약 및 치료가 예방적인지 치료적인지의 여부를 비롯한 다수의 상이한 인자에 따라 달라진다. 보통, 대상체는 인간이지만, 트랜스제닉 포유동물을 비롯한 비-인간 포유동물이 또한 치료될 수 있다. 치료 투여량은 안정성 및 효능을 최적화하기 위해서 당업자에게 공지된 일상적인 방법을 사용하여 역가될 수 있다.

치료될 대상체는 치료를 필요로 하는 임의의 동물, 예를 들어, 포유동물일 수 있고, 특정 실시형태에서, 대상체는 인간 대상체이다.

이의 가장 간단한 형태에서, 대상체에게 투여될 제제는 본 명세서 다른 곳에 기재된 바와 같은 약제학적 부형제, 담체 또는 희석제와 조합될 수 있는, 종래의 투여 형태로 투여되는 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자 또는 이의 다량체 항원 결합 단편이다.

본 개시내용의 조성물은 임의의 적합한 방법에 의해서, 예를 들어, 비경구로, 심실내로(intraventricularly), 경구로, 흡입 스프레이에 의해서, 국소로, 직장으로, 비내로, 협측으로, 질내로 또는 이식 저장소를 통해서 투여될 수 있다. 용어 "비경구"는 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활막내(intra-synovial), 흉골내(intrasternal), 척추강내(intrathecal), 간내(intrahepatic), 병변내(intralesional) 및 두개내(intracranial) 주사 또는 주입 기술을 포함한다.

약제학적 조성물 및 투여 방법

본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자, 예를 들어, IgM 항체, IgM-유사 항체 또는 IgM-유래 결합 분자를 제조하는 방법 및 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 방법은 본 개시내용에 비추어 당업자에 의해서 쉽게 결정되거나 널리 공지되어 있다. 특정 실시형태에서, 투여 형태는 특히 종양내, 정맥내 또는 동맥내 주사 또는 드립(drip)을 위한 주사용 용액일 것이다. 적합한 약제학적 조성물은 완충제(예를 들어, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 계면활성제(예를 들어, 폴리솔베이트), 선택적으로 안정화제(예를 들어, 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다.

개시된 IgM-유래 결합 분자는 활성제의 투여를 용이하게 하도록 그리고 활성제의 안정성을 촉진시키도록 제형화될 수 있다. 따라서 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한, 비독성, 멸균 담체, 예컨대, 생리 식염수, 비독성 완충제, 보존제 등을 포함할 수 있다. 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자의 약제학적 유효량은 표적에 대한 효과적인 결합을 달성하고, 치료 이익을 달성하기에 충분한 양을 의미한다. 적합한 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 예를 들어, 21^st Edition (Lippincott Williams & Wilkins) (2005)]에 기재되어 있다.

본 명세서에 제공된 특정 약제학적 조성물은 예를 들어, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액을 비롯한 허용 가능한 투여 형태로 경구로 투여될 수 있다. 특정 약제학적 조성물은 또한 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해서 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 생체이용률을 향상시키기 위해서 염수 중의 용액으로서 벤질 알코올 또는 다른 적합한 보존제, 흡수 프로모터를 사용하여 그리고/또는 다른 종래의 가용화제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다.

단일 투여 형태를 제조하기 위해서 담체 물질과 함께 조합될 수 있는 IgM-유래 결합 분자의 양은 예를 들어, 치료될 대상체 또는 특정 투여 모드에 따라서 달라질 것이다. 조성물은 단일 용량으로서, 다회 용량으로서 또는 주입으로 확립된 시간 기간에 걸쳐서 투여될 수 있다. 투여 요법은 또한 최적의 목적하는 반응(예를 들어, 치료 또는 예방 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다.

본 개시내용은 또한 질환, 예를 들어, 암의 치료, 예방 또는 관리를 위한 의약의 제조에서의 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자의 용도를 제공한다. 본 개시내용은 또한 질환, 예를 들어, 암을 치료, 예방 또는 관리하는 데 사용하기 위한 본 명세서에 제공된 바와 같은 IgM-유래 결합 분자를 제공한다.

달리 제시하지 않는 한, 본 개시내용은 관련 기술 분야의 기술 범위에 포함되는, 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 트랜스제닉 생물학, 미생물학, 재조합 DNA, 및 면역학의 종래의 기술을 사용한다. 이러한 기술은 문헌에 상세하게 설명되어 있다(예를 들어, 문헌[Green and Sambrook, ed. (2012) Molecular Cloning A Laboratory Manual (4th ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press); Sambrook et al., ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY); D. N. Glover and B.D. Hames, eds., (1995) DNA Cloning 2d Edition (IRL Press), Volumes 1-4; Gait, ed. (1990) Oligonucleotide Synthesis (IRL Press)]; Mullis 등의 미국 특허 제4,683,195호; 문헌[Hames and Higgins, eds. (1985) Nucleic Acid Hybridization (IRL Press); Hames and Higgins, eds. (1984) Transcription And Translation (IRL Press); Freshney (2016) Culture Of Animal Cells, 7th Edition (Wiley-Blackwell); Woodward, J., Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1985); Perbal (1988) A Practical Guide To Molecular Cloning; 2d Edition (Wiley-Interscience); Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory); S.C. Makrides (2003) Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells (Elsevier Science); Methods in Enzymology, Vols. 151-155 (Academic Press, Inc., N.Y.); Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London); Weir and Blackwell, eds.; 및 Ausubel et al. (1995) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons)] 참고).

항체 조작의 일반적인 원리는 예를 들어, 문헌[Strohl, W.R., and L.M. Strohl (2012), Therapeutic Antibody Engineering (Woodhead Publishing)]에 제시되어 있다. 단백질 조작의 일반적인 원리는 예를 들어, 문헌[Park and Cochran, eds. (2009), Protein Engineering and Design (CDC Press)]에 제시되어 있다. 면역학의 일반적인 원리는 문헌[Abbas and Lichtman (2017) Cellular and Molecular Immunology 9th Edition (Elsevier)]에 제시되어 있다. 추가로, 당업계에 공지된 면역학의 표준 방법은 예를 들어, 문헌[Current Protocols in Immunology (Wiley Online Library); Wild, D. (2013), The Immunoassay Handbook 4th Edition (Elsevier Science); Greenfield, ed. (2013), Antibodies, a Laboratory Manual, 2d Edition (Cold Spring Harbor Press); 및 Ossipow and Fischer, eds., (2014), Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Humana Press)]에 따를 수 있다.

상기에 인용된 모든 문헌뿐만 아니라 본 명세서에 인용된 모든 문헌은 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다.

하기 실시예는 설명의 방식으로 제공되며, 제한의 방식이 아니다.

실시예

실시예 1: IgM 글리코변이체의 작제 및 특징규명

모든 인간 면역글로불린의 N-연결된 글리코실화 부위를 도 1a 및 도 1b에서 비교한다. 다양한 상이한 종의 IgM 항체의 N-연결된 글리코실화 부위를 도 2a 및 도 2b에 도시한다. 인간 IgM 중쇄의 공간-채움 모델을 도 3에 도시한다. 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프는 Cμ1 도메인에서 N1(서열번호 1 또는 서열번호 2의 N46), Cμ2 도메인에서 N2(서열번호 1 또는 서열번호 2의 N209), Cμ3 도메인에서 N3(서열번호 1 또는 서열번호 2의 N272), Cμ3 도메인의 N4(서열번호 1 또는 서열번호 2의 N279) 및 테일 피스 도메인에서 N5(서열번호 1 또는 서열번호 2의 N440)로서 도시된다.

서열번호 2의 인간 IgM 불변 영역에 존재하는 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프에 아스파라긴(N) 잔기의 단일 알라닌 또는 아스파트산 돌연변이를 갖는 변형된 인간 IgM 불변 영역을 암호화하는 DNA 변이체를 설계하였고, 합성을 위해 상업적 공급원에 제출하였다. 야생형 또는 변형된 IgM 불변 영역을 포함하는 야생형 또는 변형된 인간 오량체 또는 육량체 IgM 항체를 발현할 수 있고, CD20에 특이적으로 결합할 수 있는 예시적인 플라스미드 작제물을 하기 방법에 의해서 생산하였다.

표준 분자 생물학 기술에 의해서 중쇄 및 경쇄 발현 벡터에 서브클로닝하기 위해서 1.5.3의 VH 및 VL 영역(각각 서열번호 32 및 33, 미국 공개 제2019-0100597호 참고) 및 N1 내지 N5에 다양한 단일 아스파라긴 대 알라닌 돌연변이 또는 아스파라긴 대 아스파트산 돌연변이를 암호화하는 DNA 단편을 상업적 공급원에 의해서 합성하였다.

IgM 중쇄, 경쇄 및 변형된 J-쇄(V15J, 서열번호 24)를 암호화하는 플라스미드 작제물을 CHO 세포에 공동형질주입시키고, 글리코변이체 항-CD20 IgM 항체를 발현하는 세포를 선택하였으며, 모두 표준 방법에 따랐다. 6개의 단일 알라닌 돌연변이를 N49(N6)에서 V15J J-쇄 내의 그 다음-연결된 글리코실화 모티프에 만들고, 야생형 IgM과 커플링시켰다.

세포 상청액 중에 존재하는 항체를 제조사의 프로토콜에 따라서 Capture Select IgM(카탈로그 2890.05, BAC, 써모 피셔사(Thermo Fisher))을 사용하여 회수하였다. 예를 들어, PCT 특허 공개 제WO 2016/141303호에 이미 기재된 바와 같이, 항체를 비-환원 조건 하에서 SDS PAGE로 평가하여 조립을 확인하였다. 알라닌 돌연변이체를 도 4에 제시하고, 아스파트산 돌연변이체를 항-J-쇄 항체와 반응된 웨스턴 블롯과 함께, 도 5에 도시한다. 도 4에 나타난 바와 같이, N1, N2 및 N3에서 단일 알라닌 돌연변이를 갖는 변이체 IgM뿐만 아니라 상응하는 야생형 IgM(1.5.3IgM V15J)이 발현되었고, N4에 단일 알라닌 돌연변이를 갖는 변이체 IgM은 감소된 발현을 나타내었고, N5에 단일 알라닌 돌연변이를 갖는 변이체 IgM은 육량체로서 조립되었다. N6에 단일 알라닌 돌연변이를 갖는 IgM이 또한 적절하게 발현되고, 조립되었다. 도 5에 나타난 바와 같이, N1, N2, N3, N5 및 N6에 단일 아스파트산 돌연변이를 갖는 변이체 IgM은 오량체로서 적절하게 발현 및 조립되었고, N4에서의 돌연변이는 발현되거나 조립되지 않았다.

다음으로, 선택된 이중 아스파트산 돌연변이체를 상기에 기재된 바와 같이 작제하였고, 예를 들어, PCT 특허 공개 제WO 2016/141303호에 이미 기재된 바와 같이, 항체를 비-환원 조건 하에서 SDS PAGE로 평가하여 조립을 확인하였다. IgM 결합 단위와 J-쇄의 적절한 조립을 보여주기 위해서, 이들 돌연변이체를 항-J-쇄 항체를 사용한 웨스턴 블롯에 의해서 평가하였다. 결과를 도 6에 나타낸다. N1D와 N2D, N2D와 N3D, 및 N1D와 N3D에서의 이중 돌연변이체 모두는 오량체로서 적절하게 발현되고, 조립되었지만, N1D와 N5D에서의 이중 돌연변이체는 J-쇄 없이 육량체로서 발현되거나 조립되지 않았는데, 그 이유는 이 작제물이 항-J-쇄 항체와 반응하지 않았기 때문이다.

실시예 2: 보체 의존적 세포독성

실시예 1에서 생성된 1.5.3IgM V15J, 1.5.3IgM V15J N1A, 1.5.3IgM V15J N2A 및 1.5.3IgM V15J N3A 항체를 보체 의존적 세포독성(CDC) 검정을 사용하여 비교하였다.

CD20을 발현하는 Raji 세포주(ATCC 카탈로그 번호 CCL-86)를 사용하여 항체 각각의 CDC 효능을 결정하였다. 50,000개 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하였다. 세포를 연속 희석된 항체로 처리하였다. 인간 혈청 보체(퀴델사 카탈로그 번호 A113)를 각각의 웰에 10%의 최종 농도로 첨가하였다. 반응 혼합물을 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. Cell Titer Glo 시약(프로메가사 카탈로그 번호 G7572)을 각각의 웰에 존재하는 배양 배지의 부피와 동일한 부피로 첨가하였다. 플레이트를 2분 동안 진탕하고, 10분 동안 실온에서 인큐베이션시키고, 발광을 광도계(luminometer) 상에서 측정하였다. 시험된 항체 간에는 CDC 활성도에서 유의한 차이가 존재하지 않았다(데이터 나타내지 않음).

실시예 3: T-세포 활성화 검정

실시예 1에서 생성된 1.5.3IgM V15J, 1.5.3IgM V15J N1A, 1.5.3IgM V15J N2A 및 1.5.3IgM V15J N3A 항체를 T-세포 활성화 검정을 사용하여 비교하였다.

조작된 주카트 T-세포(프로메가사 CS176403) 및 RPMI8226 세포(ATCC CCL-155)를 10% 소태아 혈청(인비트로젠사)이 보충된 RPMI(인비트로젠사) 중에서 배양하였다. 항체의 연속 희석물을 백색 384웰 검정 플레이트에서 20㎕의 7500 RPMI8226 세포와 함께 2시간 동안 37℃에서 5% CO₂ 하에서 인큐베이션시켰다. 조작된 주카트 세포(25000)를 혼합물에 40㎕의 최종 부피로 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 37℃에서 5% CO₂ 하에서 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포 혼합물을 루시페린(프로메가사, Cell Titer Glo)을 함유하는 20㎕ 용해 완충제와 혼합하여 루시페라제 리포터 활성도를 측정하였다. 광 출력을 EnVision 플레이트 리더에 의해서 측정하였다. EC₅₀을 프리즘 소프트웨어를 사용하여 4 파리미터 곡선 핏에 의해서 결정하였다. 시험된 항체 간에는 T-세포 활성화에서 유의한 차이가 존재하지 않았다(데이터 나타내지 않음).

실시예 4: ELISA 결합

예시적인 결합 도메인에 융합되고, 항-CD3J*를 포함하는 WT 인간 IgM 불변 영역(서열번호 1), N3D IgM 불변 영역(서열번호 8) 또는 N3K IgM 불변 영역(서열번호 56)을 사용하여 항체를 생성시켰다. 예시적인 결합 도메인의 표적에 결합하는 항체의 능력을 실시예 1에서 생성된 1.5.3 WT IgM VJ*와 비교하였다.

96웰 백색 폴리스타이렌 ELISA 플레이트(피어스사 15042)를 웰당 100㎕로 10㎍/㎖ 또는 0.3㎍/㎖의 표적 단백질로 밤새 4℃에서 코팅하였다. 이어서, 플레이트를 0.05% PBS-Tween으로 세척하고, 2% BSA-PBS로 차단시켰다. 차단 후, 항체의 100㎕의 연속 희석물을 웰에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 다음 플레이트를 세척하고, HRP 접합된 마우스 항-인간 카파(서던 바이오테크사(Southern Biotech), 9230-05. 2% BSA-PBS에 1:6000 희석됨)와 함께 30분 동안 인큐베이션시켰다. 0.05% PBS-Tween을 사용한 10회의 마지막 세척 후, 플레이트를 SuperSignal 화학발광 기질(써모피셔사(ThermoFisher), 37070)을 사용하여 판독하였다. 발광 데이터를 EnVision 플레이트 판독기(퍼킨 엘머사(Perkin-Elmer))에서 수집하고, 4-파리미터 로직 모델을 사용하여 GraphPad Prism으로 분석하였다.

결과를 도 7에 나타낸다. 결합은 예시적인 항체들 사이에서 대등하였다. 항-CD20 IgM 항체는 표적에 결합하지 않았다.

본 개시내용의 범위 및 범주는 상기에 기술된 예시적인 실시형태 중 임의의 것에 의해서 제한되지 않아야 하지만, 하기 청구범위 및 이의 등가물에 따라서만 한정되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> IGM BIOSCIENCES, INC. <120> IGM GLYCOVARIANTS <130> 004-026WO1 <140> <141> <150> 62/891,263 <151> 2019-08-23 <160> 84 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 453 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 2 <211> 453 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 3 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 3 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Ala Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 4 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 4 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 5 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 5 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Ala Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 6 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 6 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asp Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 7 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 7 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Ala 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 8 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 8 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asp 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 9 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 9 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Ala Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 10 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 10 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asp Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 11 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 11 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Ala Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 12 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 12 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asp Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 13 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 13 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asp Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 14 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 14 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asp Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asp 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 15 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 15 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asp 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 16 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 16 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asp Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 17 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 17 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asp Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asp 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 18 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 18 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asp Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asp Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asp 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asp Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 19 <211> 159 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Lys Asn His Leu Leu Phe Trp Gly Val Leu Ala Val Phe Ile Lys 1 5 10 15 Ala Val His Val Lys Ala Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp 20 25 30 Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser 35 40 45 Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val 50 55 60 Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg 65 70 75 80 Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro 85 90 95 Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn 100 105 110 Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg 115 120 125 Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr 130 135 140 Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 145 150 155 <210> 20 <211> 137 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 1 5 10 15 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 20 25 30 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 35 40 45 Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 50 55 60 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 65 70 75 80 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 85 90 95 Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 100 105 110 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 115 120 125 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 130 135 <210> 21 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 1 5 10 15 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 20 25 30 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 35 40 45 Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 50 55 60 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 65 70 75 80 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 85 90 95 Ala Thr Glu Thr Cys Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 100 105 110 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 115 120 125 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 130 135 <210> 22 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 22 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 1 5 10 15 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 20 25 30 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 35 40 45 Ala Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 50 55 60 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 65 70 75 80 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 85 90 95 Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 100 105 110 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 115 120 125 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 130 135 <210> 23 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 1 5 10 15 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 20 25 30 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 35 40 45 Asp Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 50 55 60 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 65 70 75 80 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 85 90 95 Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 100 105 110 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 115 120 125 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 130 135 <210> 24 <211> 393 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 130 135 140 Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 225 230 235 240 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 245 250 255 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 260 265 270 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 275 280 285 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 290 295 300 Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 305 310 315 320 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 325 330 335 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 340 345 350 Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 355 360 365 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 370 375 380 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 385 390 <210> 25 <211> 393 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 130 135 140 Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 225 230 235 240 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 245 250 255 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 260 265 270 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 275 280 285 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 290 295 300 Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 305 310 315 320 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 325 330 335 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 340 345 350 Ala Thr Glu Thr Cys Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 355 360 365 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 370 375 380 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 385 390 <210> 26 <211> 393 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 130 135 140 Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala 145 150 155 160 Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 165 170 175 Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val 180 185 190 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 210 215 220 Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 225 230 235 240 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 245 250 255 Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala 260 265 270 Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp 275 280 285 Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu 290 295 300 Asp Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His 305 310 315 320 Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp 325 330 335 Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser 340 345 350 Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala 355 360 365 Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala 370 375 380 Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp 385 390 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 30 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 31 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 32 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 32 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ser Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Asn Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 33 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Ala 85 90 95 Thr Gln Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 34 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 35 <211> 326 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 36 <211> 377 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 100 105 110 Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 115 120 125 Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 130 135 140 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 195 200 205 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 260 265 270 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 275 280 285 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 290 295 300 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 305 310 315 320 Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 325 330 335 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 340 345 350 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 355 360 365 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 375 <210> 37 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 38 <211> 353 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr 1 5 10 15 Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe 20 25 30 Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val 35 40 45 Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr 50 55 60 Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly 65 70 75 80 Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp 85 90 95 Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro 100 105 110 Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser 115 120 125 Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn 130 135 140 Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe 145 150 155 160 Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu 165 170 175 Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys 180 185 190 Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr 195 200 205 Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn 210 215 220 Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu 225 230 235 240 Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser 245 250 255 Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro 260 265 270 Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly 275 280 285 Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp 290 295 300 Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu 305 310 315 320 Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro 325 330 335 Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys 340 345 350 Tyr <210> 39 <211> 340 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr 1 5 10 15 Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe 20 25 30 Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val 35 40 45 Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr 50 55 60 Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly 65 70 75 80 Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Ser Ser Gln Asp 85 90 95 Val Thr Val Pro Cys Arg Val Pro Pro Pro Pro Pro Cys Cys His Pro 100 105 110 Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser 115 120 125 Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly 130 135 140 Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly 145 150 155 160 Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu 165 170 175 Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr Phe Thr Cys Thr 180 185 190 Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala Asn Ile Thr Lys 195 200 205 Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser 210 215 220 Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg 225 230 235 240 Gly Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln 245 250 255 Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro 260 265 270 Ser Gln Gly Thr Thr Thr Tyr Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala 275 280 285 Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Glu Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His 290 295 300 Glu Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Met Ala 305 310 315 320 Gly Lys Pro Thr His Ile Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Ala Asp 325 330 335 Gly Thr Cys Tyr 340 <210> 40 <211> 384 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg 1 5 10 15 His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly 20 25 30 Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser 35 40 45 Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr 50 55 60 Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly 65 70 75 80 Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu 85 90 95 Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro 100 105 110 Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala 115 120 125 Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys 130 135 140 Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu 145 150 155 160 Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala 165 170 175 Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val 180 185 190 Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly 195 200 205 Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser 210 215 220 Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu 225 230 235 240 Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu 245 250 255 Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro 260 265 270 Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala 275 280 285 Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile 290 295 300 Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe 305 310 315 320 Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Arg Ser Thr Thr Phe Trp Ala 325 330 335 Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr 340 345 350 Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala 355 360 365 Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys 370 375 380 <210> 41 <211> 428 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Ala Ser Thr Gln Ser Pro Ser Val Phe Pro Leu Thr Arg Cys Cys Lys 1 5 10 15 Asn Ile Pro Ser Asn Ala Thr Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Ala Thr 20 25 30 Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Met Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu 35 40 45 Asn Gly Thr Thr Met Thr Leu Pro Ala Thr Thr Leu Thr Leu Ser Gly 50 55 60 His Tyr Ala Thr Ile Ser Leu Leu Thr Val Ser Gly Ala Trp Ala Lys 65 70 75 80 Gln Met Phe Thr Cys Arg Val Ala His Thr Pro Ser Ser Thr Asp Trp 85 90 95 Val Asp Asn Lys Thr Phe Ser Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro 100 105 110 Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro 115 120 125 Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr 130 135 140 Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu 145 150 155 160 Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser 165 170 175 Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr 180 185 190 Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys 195 200 205 Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro 210 215 220 Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu 225 230 235 240 Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser 245 250 255 Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys 260 265 270 Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr 275 280 285 Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro 290 295 300 His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro 305 310 315 320 Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly 325 330 335 Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro 340 345 350 Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp 355 360 365 Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe 370 375 380 Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys 385 390 395 400 Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln 405 410 415 Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys 420 425 <210> 42 <211> 455 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 42 Ala Ser Gln Ser Phe Pro Asn Val Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Ser 1 5 10 15 Pro Leu Ser Asp Lys Asn Leu Val Ala Met Gly Cys Leu Ala Arg Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Ser Thr Ile Ser Phe Thr Trp Asn Tyr Gln Asn Asn Thr 35 40 45 Glu Val Ile Gln Gly Ile Arg Thr Phe Pro Thr Leu Arg Thr Gly Gly 50 55 60 Lys Tyr Leu Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Ser Pro Lys Ser Ile Leu 65 70 75 80 Glu Gly Ser Asp Glu Tyr Leu Val Cys Lys Ile His Tyr Gly Gly Lys 85 90 95 Asn Arg Asp Leu His Val Pro Ile Pro Ala Val Ala Glu Met Asn Pro 100 105 110 Asn Val Asn Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Ser Gly Pro Ala 115 120 125 Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Glu Ala Thr Asn Phe Thr Pro Lys 130 135 140 Pro Ile Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp Gly Lys Leu Val Glu Ser Gly 145 150 155 160 Phe Thr Thr Asp Pro Val Thr Ile Glu Asn Lys Gly Ser Thr Pro Gln 165 170 175 Thr Tyr Lys Val Ile Ser Thr Leu Thr Ile Ser Glu Ile Asp Trp Leu 180 185 190 Asn Leu Asn Val Tyr Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe 195 200 205 Leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Cys Ala Ala Ser Pro Ser Thr Asp Ile 210 215 220 Leu Asn Phe Thr Ile Pro Pro Ser Phe Ala Asp Ile Phe Leu Ser Lys 225 230 235 240 Ser Ala Asn Leu Thr Cys Leu Val Ser Asn Leu Ala Thr Tyr Glu Thr 245 250 255 Leu Ser Ile Ser Trp Ala Ser Gln Ser Gly Glu Pro Leu Glu Thr Lys 260 265 270 Ile Lys Ile Met Glu Ser His Pro Asn Gly Thr Phe Ser Ala Lys Gly 275 280 285 Val Ala Ser Val Cys Val Glu Asp Trp Asn Asn Arg Lys Glu Phe Val 290 295 300 Cys Thr Val Thr His Arg Asp Leu Pro Ser Pro Gln Lys Lys Phe Ile 305 310 315 320 Ser Lys Pro Asn Glu Val His Lys His Pro Pro Ala Val Tyr Leu Leu 325 330 335 Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Val Thr 340 345 350 Cys Leu Val Lys Gly Phe Ser Pro Ala Asp Ile Ser Val Gln Trp Lys 355 360 365 Gln Arg Gly Gln Leu Leu Pro Gln Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro 370 375 380 Met Pro Glu Pro Gly Ala Pro Gly Phe Tyr Phe Thr His Ser Ile Leu 385 390 395 400 Thr Val Thr Glu Glu Glu Trp Asn Ser Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val 405 410 415 Val Gly His Glu Ala Leu Pro His Leu Val Thr Glu Arg Thr Val Asp 420 425 430 Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Ile Met Ser 435 440 445 Asp Thr Gly Gly Thr Cys Tyr 450 455 <210> 43 <211> 487 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 43 Phe Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Glu Ser Ala 1 5 10 15 Gly Pro Phe Lys Trp Glu Pro Ser Val Ser Ser Pro Asn Ala Pro Leu 20 25 30 Asp Thr Asn Glu Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro 35 40 45 Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Phe Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser 50 55 60 Lys Gly Val Trp Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala 65 70 75 80 Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Ala Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr 85 90 95 Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu 100 105 110 Gln Asn Val Pro Leu Pro Val Val Ala Glu Arg Pro Pro Asn Val Ser 115 120 125 Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Val Gly Asn Pro Arg Glu Ser 130 135 140 Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Glu Val 145 150 155 160 Ser Trp Leu Arg Asp Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Ile Thr Thr Asp 165 170 175 Arg Val Glu Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Phe Lys Val 180 185 190 Thr Ser Thr Leu Thr Val Ser Glu Arg Asp Trp Leu Ser Gln Ser Val 195 200 205 Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Lys Asn Val 210 215 220 Ser Ser Val Cys Gly Pro Asn Pro Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala 225 230 235 240 Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu 245 250 255 Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Ala Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Thr 260 265 270 Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Leu Lys Thr His Thr Asn Ile Ser 275 280 285 Glu Ser His Pro Asn Gly Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile 290 295 300 Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Arg Cys Thr Val Thr 305 310 315 320 His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys 325 330 335 Gly Val Ala Met His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg 340 345 350 Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr 355 360 365 Gly Phe Ser Pro Ala Asp Ile Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln 370 375 380 Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro 385 390 395 400 Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu 405 410 415 Glu Asp Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu 420 425 430 Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly 435 440 445 Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Ile Leu Trp Thr Thr Leu 450 455 460 Ser Thr Phe Val Ala Leu Phe Val Leu Thr Leu Leu Tyr Ser Gly Ile 465 470 475 480 Val Thr Phe Ile Lys Val Arg 485 <210> 44 <211> 452 <212> PRT <213> Pan troglodytes <400> 44 Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser 1 5 10 15 Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe 20 25 30 Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp 35 40 45 Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr 50 55 60 Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Glu Val Met Gln Gly 65 70 75 80 Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys 85 90 95 Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Thr Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val 100 105 110 Ser Ile Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Ser 115 120 125 Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln 130 135 140 Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr 145 150 155 160 Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Gln Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys 165 170 175 Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser 180 185 190 Val Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn 195 200 205 Ala Ser Ser Met Cys Ser Pro Gly Pro Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe 210 215 220 Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys 225 230 235 240 Leu Ala Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Leu Thr Ile 245 250 255 Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile 260 265 270 Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser 275 280 285 Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val 290 295 300 Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro 305 310 315 320 Lys Glu Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala 325 330 335 Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Leu Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val 340 345 350 Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly 355 360 365 Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu 370 375 380 Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser 385 390 395 400 Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His 405 410 415 Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr 420 425 430 Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala 435 440 445 Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 45 <211> 454 <212> PRT <213> Macaca mulatta <400> 45 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ala Pro Leu Asp Thr Asn Glu Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Phe Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Lys Gly Val Trp Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Ala Ser Lys Asp Val Met 65 70 75 80 Gln Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly 85 90 95 Asn Lys Glu Gln Asn Val Pro Leu Pro Val Leu Ala Glu Arg Pro Pro 100 105 110 Asn Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Val Gly Asn Pro 115 120 125 Arg Glu Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln 130 135 140 Ile Glu Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Ile 145 150 155 160 Thr Thr Asp Arg Val Glu Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr 165 170 175 Phe Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Val Ser Glu Arg Asp Trp Leu Ser 180 185 190 Gln Ser Val Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln 195 200 205 Lys Asn Val Ser Ser Val Cys Gly Pro Asn Pro Asp Thr Ala Ile Arg 210 215 220 Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser 225 230 235 240 Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Ala Thr Tyr Asp Ser Val 245 250 255 Thr Ile Thr Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Leu Lys Thr His Thr 260 265 270 Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Gly Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu 275 280 285 Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Arg Cys 290 295 300 Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser 305 310 315 320 Arg Pro Lys Gly Val Ala Met His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro 325 330 335 Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys 340 345 350 Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Ile Phe Val Gln Trp Met Gln 355 360 365 Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met 370 375 380 Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr 385 390 395 400 Val Ser Glu Glu Asp Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val 405 410 415 Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys 420 425 430 Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp 435 440 445 Thr Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 46 <211> 453 <212> PRT <213> Pongo abelii <400> 46 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Leu Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Thr Gly Ser Lys 50 55 60 Tyr Val Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Ile Phe Ile Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Ser Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Ala Ser Gly Ile Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Asn Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Lys 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Ser Pro Asn Pro Asn Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Ala Ser Tyr Asp Ser Met Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Ala Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Asp Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 47 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 47 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn 1 5 10 <210> 49 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 49 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Lys Asp 20 <210> 50 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 50 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 15 <210> 51 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 51 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 52 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro 1 5 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu 1 5 <210> 55 <211> 420 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 55 Met Gly Trp Ser Tyr Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr 65 70 75 80 Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95 Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val 115 120 125 Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln 145 150 155 160 Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu Thr 165 170 175 Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn 180 185 190 Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly Leu 195 200 205 Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 210 215 220 Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln 225 230 235 240 Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu 245 250 255 Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly 260 265 270 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Glu Asp Glu Arg 275 280 285 Ile Val Leu Val Asp Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg 290 295 300 Ile Ile Arg Ser Ser Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn 305 310 315 320 Ile Arg Ile Ile Val Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro 325 330 335 Thr Ser Pro Leu Arg Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys 340 345 350 Lys Lys Cys Asp Pro Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr 355 360 365 Ala Thr Gln Ser Asn Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys 370 375 380 Ala Thr Tyr Asp Arg Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val 385 390 395 400 Tyr Gly Gly Glu Thr Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala 405 410 415 Cys Tyr Pro Asp 420 <210> 56 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (191)..(191) <223> Gly or Ser <400> 56 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Xaa Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Lys 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala 405 410 415 His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr 435 440 445 Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 57 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 57 Thr Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Asp Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 59 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 59 Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Asp <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 61 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 61 Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 62 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 His Ala Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Val Ser Trp Phe Ala His 1 5 10 <210> 63 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 63 Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val 1 5 10 <210> 64 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 64 Asp Ala Tyr Gly Gln Tyr Phe Tyr Asp Val 1 5 10 <210> 65 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 65 Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 66 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 66 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 67 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 67 Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro 1 5 <210> 68 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 68 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 69 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Ala Leu Trp Tyr Ser Asp Leu Trp Val 1 5 <210> 71 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Lys Gln Ser Tyr Ser Arg Arg Thr 1 5 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Lys Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr 1 5 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Thr Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr 1 5 <210> 74 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 74 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Glu Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 75 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 75 Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 76 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 76 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Glu Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 77 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 77 Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asp Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asp 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 78 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 78 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 79 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 79 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala 20 25 30 Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 80 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 80 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 81 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 81 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala 20 25 30 Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 82 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 82 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Gln Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 83 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala 20 25 30 Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln 85 90 95 Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 84 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(25) <223> This sequence may encompass 1-5 "Gly Gly Gly Gly Ser" repeating units <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 84 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25

Claims

단리된 IgM-유래 결합 분자로서, 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 포함하되, 상기 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄는 표적에 특이적으로 결합하는 결합 도메인과 회합된 변이체 IgM 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역의 적어도 하나의 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하도록 돌연변이되며, N-연결된 글리코실화 모티프는 아미노산 서열 N-X₁-S/T를 포함하되, N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이며, S/T는 세린 또는 트레오닌인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제1항에 있어서, 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 서열번호 1(대립유전자 IGHM*03) 또는 서열번호 2(대립유전자 IGHM*04)의 아미노산 46(모티프 N1), 아미노산 209(모티프 N2), 아미노산 272(모티프 N3), 아미노산 279(모티프 N4), 및 아미노산 440(모티프 N5)에 상응하는 아미노산 위치에서 시작하는 5개의 N-연결된 글리코실화 모티프 N-X₁-S/T를 포함하는 인간 IgM 중쇄 불변 영역으로부터 유래되는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제2항에 있어서, N-X₁-S/T 모티프 중 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 적어도 4개는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하는 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제3항에 있어서, 모티프 N1, 모티프 N2, 모티프 N3, 모티프 N5, 또는 모티프 N1, N2, N3 또는 N5 중 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 모두의 임의의 조합에 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함하되, 상기 아미노산 삽입, 결실 또는 치환은 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제4항에 있어서, 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 N46, N209, N272 또는 N440에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함하되, 상기 치환된 아미노산은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 S48, S211, S274 또는 S442에 상응하는 아미노산 위치의 임의의 아미노산인 아미노산 치환이고, 상기 치환된 아미노산은 트레오닌을 제외한 임의의 아미노산 또는 상기 아미노산 치환 중 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 임의의 조합인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제5항에 있어서, 서열번호 1 또는 서열번호 2의 N46X₂, N46A, N46D, N46Q, N46K, S48X₃, S48A, N229X₂, N229A, N229D, N229Q, N229K, S231X₃, S231A, N272X₂, N272A, N272D, N272Q, N272K, S274X₃, S274A, N440X₂, N440A, N440D, N449Q, N449K, S242X₃ 또는 S424A에 상응하는 아미노산 치환 또는 상기 아미노산 치환 중 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 임의의 조합을 포함하되, X₂는 임의의 아미노산이고, X₃은 트레오닌을 제외한 임의의 아미노산인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 아미노산 서열 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 또는 서열번호 18을 포함하는 변이체 인간 IgM 불변 영역인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역은 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역에 적어도 하나의 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프를 도입하도록 돌연변이되되, 상기 적어도 하나의 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 IgM 항체에서 자연적으로 글리코실화되지 않은 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 내의 부위에 도입되는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제8항에 있어서, 상기 새로운 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프는 상이한 면역글로불린 아이소타입에 존재하는 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프의 위치에 상응하는 상기 변이체 IgM 중쇄 불변 영역 내의 위치에 존재하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제9항에 있어서, 상기 상이한 면역글로불린 아이소타입은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3, 인간 IgG4, 인간 IgA1, 인간 IgA2, 인간 IgD 및 인간 IgE로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 면역글로불린 아이소타입인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적은 표적 에피토프, 표적 항원, 표적 세포, 표적 기관 또는 표적 바이러스인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 각각 5개 또는 6개의 2가 IgM 결합 단위를 포함하는 오량체 또는 육량체 IgM 항체이되, 각각의 결합 단위는, 각각 상기 변이체 IgM 불변 영역에 대해 아미노 말단에 위치된 VH를 포함하는 2개의 IgM 중쇄 및 각각 면역글로불린 경쇄 불변 영역에 대해 아미노 말단에 위치된 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 2개의 면역글로불린 경쇄를 포함하고, 상기 VH와 VL은 조합하여 상기 표적에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 형성하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제12항에 있어서, 상기 5개 또는 6개의 IgM 결합 단위는 동일한, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제12항 또는 제13항에 있어서, 오량체이고, J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체를 더 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제14항에 있어서, 상기 J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 20을 포함하는 성숙 인간 J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 J-쇄는 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 상기 변이체 J-쇄와 동일한 참조 J-쇄에 비해서 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함하는 기능성 변이체 J-쇄이고, 상기 IgM-유래 결합 분자는 상기 변이체 J-쇄 내의 상기 1개 이상의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 제외하고는 동일하고, 동일한 동물 종에게 동일한 방식으로 투여되는 참조 IgM-유래 결합 분자에 비해서 대상체 동물에게 투여될 때 증가된 혈청 반감기를 나타내는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제16항에 있어서, 상기 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 상기 참조 J-쇄에 비해서 1개, 2개, 3개 또는 4개의 단일 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 상기 야생형 성숙 인간 J-쇄(서열번호 20)의 아미노산 Y102에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제18항에 있어서, 상기 서열번호 20의 Y102에 상응하는 아미노산은 알라닌(A)으로 치환된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제19항에 있어서, 상기 J-쇄는 아미노산 서열 서열번호 21을 포함하는 변이체 인간 J-쇄 J*인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 상기 성숙 인간 J-쇄(서열번호 20)의 아미노산 49(모티프 N6)에 상응하는 아미노산 위치에서 시작하는 아스파라긴(N)-연결된 글리코실화 모티프 N-X₁-S/T 내에 돌연변이를 포함하되, N은 아스파라긴이고, X₁은 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이며, S/T는 세린 또는 트레오닌이고, 상기 돌연변이는 해당 모티프에서 글리코실화를 방지하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제21항에 있어서, 상기 변이체 J-쇄 또는 이의 기능성 단편은 서열번호 20의 아미노산 N49 또는 아미노산 S51에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함하되, S51에 상응하는 상기 아미노산은 트레오닌(T)으로 치환되지 않거나 또는 상기 변이체 J-쇄는 서열번호 20의 아미노산 N49 및 S51 둘 다에 상응하는 아미노산 위치에 아미노산 치환을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제22항에 있어서, 상기 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 알라닌(A), 글리신(G), 트레오닌(T), 세린(S) 또는 아스파트산(D)으로 치환된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제23항에 있어서, 상기 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 알라닌(A)으로 치환된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제24항에 있어서, 상기 J-쇄는 변이체 인간 J-쇄이고, 아미노산 서열 서열번호 22를 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제23항에 있어서, 상기 서열번호 20의 N49에 상응하는 위치는 아스파트산(D)으로 치환된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제26항에 있어서, 상기 J-쇄는 변이체 인간 J-쇄이고, 아미노산 서열 서열번호 23을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제14항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체는 이종 모이어티를 더 포함하는 변형된 J-쇄이되, 상기 이종 모이어티는 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 융합되거나 접합된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제28항에 있어서, 상기 이종 모이어티는 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 접합된 폴리펩타이드인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제29항에 있어서, 상기 이종 폴리펩타이드는 펩타이드 링커를 통해서 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체에 접합된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제30항에 있어서, 상기 펩타이드 링커는 적어도 5개 아미노산 내지 25개 이하의 아미노산을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 펩타이드 링커는 GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 29)로 이루어진, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종 폴리펩타이드는 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 N-말단, 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 C-말단, 또는 상기 J-쇄 또는 이의 단편 또는 변이체의 상기 N-말단 및 상기 C-말단 둘 다에 융합된, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종 폴리펩타이드는 결합 도메인을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제34항에 있어서, 상기 이종 폴리펩타이드의 상기 결합 도메인은 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제35항에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 scFv 단편인, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제36항에 있어서, 상기 이종 scFv 단편은 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
제37항에 있어서, 상기 변형된 J-쇄는 각각 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 53, 및 서열번호 54; 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 62, 서열번호 65, 서열번호 67, 및 서열번호 69; 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 62, 서열번호 65, 서열번호 67, 및 서열번호 70; 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 63, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 71; 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 72; 서열번호 58, 서열번호 61, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 및 서열번호 73을 포함하는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 항-CD3ε scFv에 펩타이드 링커를 통해 접합된 아미노산 서열 서열번호 24(V15J), 서열번호 25(V15J*), 서열번호 26(V15J N49D), 또는 서열번호 55(SJ*) 또는 서열번호 20, 21, 22 또는 23을 포함하는, 단리된 IgM-유래 결합 분자.
폴리뉴클레오타이드로서, 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오타이드.
제39항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 조성물.
제40항에 있어서, 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, 조성물.
제41항에 있어서, 상기 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열 및 상기 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열은 별개의 벡터에 존재하는, 조성물.
제41항에 있어서, 상기 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열 및 상기 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열은 단일 벡터에 존재하는, 조성물.
제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, J-쇄 또는 이의 기능성 단편 또는 이의 기능성 변이체를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, 조성물.
제44항에 있어서, 상기 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열, 상기 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열 및 상기 J-쇄를 암호화하는 핵산 서열은 단일 벡터에 존재하는, 조성물.
제44항에 있어서, 상기 적어도 하나의 변이체 IgM-유래 중쇄를 암호화하는 핵산 서열, 상기 경쇄 폴리펩타이드 소단위를 암호화하는 핵산 서열 및 상기 J-쇄를 암호화하는 핵산 서열은 각각 별개의 벡터에 존재하는, 조성물.
제42항, 제43항, 제45항 및 제46항 중 어느 한 항의 벡터 또는 벡터들.
숙주 세포로서, 제39항의 폴리뉴클레오타이드, 제40항 내지 제46항 중 어느 한 항의 조성물 또는 제47항의 벡터 또는 벡터들을 포함하되, 상기 숙주 세포는 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 IgM-유래 결합 분자를 발현할 수 있는, 숙주 세포.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 IgM-유래 결합 분자의 생산 방법으로서, 제48항의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 불변 영역 또는 항체를 회수하는 단계를 포함하는, IgM-유래 결합 분자의 생산 방법.