KR20220029710A - 슈도모나스 pcrv를 특이적으로 인식하는 항체 및 이의 용도 - Google Patents

슈도모나스 pcrv를 특이적으로 인식하는 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20220029710A
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종 리
차오 왕
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스테이드슨 (베이징) 바이오팔마슈티칼스 캄퍼니 리미티드
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Abstract

본 출원은 슈도모나스 PcrV를 특이적으로 인식하는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 이들 항체의 제조 및 사용 방법이 제공된다.

Description

슈도모나스 PCRV를 특이적으로 인식하는 항체 및 이의 용도
본 출원은 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)으로부터의 PcrV를 특이적으로 인식하는 항체, 및 슈도모나스 감염의 치료 및 예방 방법을 포함하는 이의 제조방법 및 용도에 관한 것이다.
ASCII 텍스트 파일에 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일에 대한 다음 제출 내용은 그 전체가 참조에 의해 여기에 포함된다: 서열목록의 컴퓨터 판독 가능 형식(CRF)(파일명: 710262000340SEQLIST.TXT, 기록일자:2019년, 3월 31일 크기: 47 KB).
녹농균(Pseudomonas aeruginosa)은 자연계에 널리 존재하는 절대 호기성 그람 음성 바실러스이다. 일반적으로 병원성은 낮지만, 기회감염을 일으키는 병원체로 암, 당뇨병, 면역결핍증 등 다양한 기존 질환을 앓고 있는 환자와 면역억제 작용을 나타내는 약제를 투여받는 환자에서 흔히 발생한다. 피부 점막이 파열된 환자는 녹농균 감염에 취약한 반면 만성 구조적 폐 질환(예: COPD 또는 낭포성 섬유증)이 있는 환자에게는 상당한 위험이 있다. 녹농균은 종종 폐렴, 요로 감염, 패혈증 등을 종종 유발하고 종종 심각한 결과를 초래할 수 있다. 병원 내 감염의 최대 10%는 녹농균에 기인하며 사망률은 녹농균 균혈증 환자에서 40%에 가깝다.
임상 현장에서, 녹농균(P. aeruginosa) 감염은 기존 항생제에 대한 감수성이 낮을 뿐만 아니라, 다양한 항생제에 내성을 획득하는 경향이 높기 때문에 가장 치료하기 어려운 감염 중 하나로 여겨진다. 따라서 항생제 무기고를 개발하는 전략은 녹농균 감염을 퇴치하는데 장점이 제한적이다. 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)은 특히 인공 호흡을 하는 환자에서, 병원 획득 감염의 주요 원인이며, 낭포성 섬유증 환자의 주요 사망 원인이다.
질병 중증도와 관련된 주요 독성 인자는 박테리아 독소를 숙주 세포의 세포질에 직접 주입하는 녹농균 III형 분비 시스템(T3SS)이다. 녹농균의 높은 세포독성은 III형 외독소 분비 시스템(T3SS)을 통해 진핵 세포에 독소를 주입함으로써 나타난다. PcrV는 III형 외독소 분비계를 구성하는 294 잔기의 단백질(NCBI Accession No. AAC45935, SEQ NO: 71)이며, 이를 암호화하는 오페론 서열이 공개되어 있다(US 6,551,795, Yahr, TL et al., J. Bacteriol., 1997, vol.179, p.7165).
T3SS 인젝티솜 복합체의 끝에 위치한 PcrV 단백질은 T3SS 기능에 필요하며, 녹농균을 표적으로 하는 면역예방 전략의 동물 모델에서 잘 검증된 표적이다.
P. aeruginosa T3SS는 이 기회감염성 병원체에 의해 유발된 감염에서의 개입에 대해 잘 검증된 표적이다. T3SS 성분 단백질을 사용한 능동의 백신 접종과 PcrV를 표적으로 하는 수동 면역 요법 모두 동물 모델에서 녹농균 질병을 강력하게 약화시킨다.
PcrV에 대한 제어는 녹농균 감염 조절에서 치료수단으로 이어질 수 있기 때문에, (T. Sawa 외., Nature Medicine, 1999, vol. 5, p. 392) 중화 활성을 갖는 PcrV에 대한 다클론 항체(Shime N 외., J. Immunol.2001, vol.167, p.5880, Imamura Y 외., Eur. Respir. J., 2007, Vol.29, p.965) 및 단일클론 항체(WO2002064161A2, Karine Faure 외., J. Immune Therapies and Vaccines, 2003, Vol. 1, Dara W. Frank 외., J. Infect. Disease, 2002, Vol. 186, p.64)가 보고되어 있다. 그러나 다클론항체는 항원성을 개선하기 어렵기 때문에 인간화 및 약학 조성물로 사용하기 어렵다. V2L2로 명명된, PcrV에 대한 항체는 Warrener 외., 2014, Antimicrob . Agents Chemother., 58, 4384-4391에 기재되어 있다. PcrV-특이적 마우스 단일클론 항체 MAb166을 기반으로 하는 항-PcrV Mab의 페길화된 Fab 단편은 인공 호흡을 하는 환자에서 녹농균 호흡기 감염을 예방하기 위해 비활성이다. 시험관 내 P. aeruginosa T3SS를 차단하는 데 효과적이지만, MAb166은 동물 모델에서 보호를 위해 상대적으로 높은 항체 용량을 필요로 한다. 본 출원은 시험관내 및 생체내에서 PcrV의 강력한 억제를 나타낸 신규한 항-PcrV mAb를 제공한다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및 공개 특허 출원의 개시 내용은 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
본 출원은 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체, 및 슈도모나스 감염을 치료하기 위한 그의 사용 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 출원은 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체를 제공하며, 여기서 에피토프는 Pseudomonas PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175 및 Ser202로 구성되는 군으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 약 0.1 pM 내지 약 1 nM의 Kd로 슈도모나스 PcrV에 결합한다.
한 측면에서, 본 출원은 단리된 항-PcrV 항체를 제공하며, 여기서 상기 항- PcrV 항체는 하기를 포함하는 헤비체인 가변 영역(VH):
X1X2X3MS (서열번호 39)를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역(HC-CDR) 1 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 D 또는 S, X2 는 Y 또는 N 그리고 X3 는 P, H, Y 또는 S; X1ISESGGSTX2X3ADSVKG (서열번호 40)를 포함하는 HC-CDR2 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 G 또는 V; X2 는 N 또는 Y; 그리고 X3 는 D 또는 Y; 및 GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV (서열번호 41)를 포함하는 HC-CDR3 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S 또는 C, X2 는 T, G, D, Y, Q 또는 A, X3 는 S, D, N, E, L, A, 또는 Y, X4 는 S, T, Y, 또는 A, X5 는 S, H, Q, A, R, K,G, E, Y 또는 D, X6 는 H 또는 C, 및 X7 는 F 또는 Y; 및
하기를 포함하는 라이트체인 가변 영역(VL): RASQGIX1SYLA (서열번호 42)를 포함하는 라이트 체인 상보성 결정 영역(LC-CDR) 1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S 또는 R; AASTLQS (서열번호 34)를 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 QQLX1SYPLX2 (서열번호 43)를 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S, N 또는 K, 그리고 X2 는 S 또는 T임; 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 단리된 항-PcrV 항체가 제공되며, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 헤비체인 가변 영역(VH):
DX1X2MS (서열번호 44)를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역(HC-CDR) 1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 N 또는 Y 그리고 X2 는 P, H, 또는 Y; X1ISESGGSTNYADSVKG (서열번호 45)를 포함하는 HC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 G 또는 V; 및 GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV (서열번호 46)를 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 N, S, D, 또는 L, X2 는 S 또는 A, 그리고 X3 는 F 또는 Y; 및
하기를 포함하는 라이트체인 가변 영역(VL): RASQGISSYLA (서열번호 32)를 포함하는 라이트체인 상보성 결정 영역(LC-CDR) 1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; AASTLQS (서열번호 34)를 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및 QQLSSYPLX1 (서열번호 47)를 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S 또는 T. 일부 실시양태에서, 단리된 항-PcrV 항체가 제공되며, 여기서 상기 항- PcrV 항체는 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3를 포함하는 VH, 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL을 포함한다.
위에서 설명된 단리된 항-PcrV 항체 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 서열번호 9-14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32-33 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체.
위에서 설명된 단리된 항-PcrV 항체 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다: (i) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (ii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (iii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (iv) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (v) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (vi) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (vii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (viii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (ix) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (x) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xi) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xiii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xiv) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xv) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xvi) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (xvii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 또는 (xviii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
위에서 설명된 단리된 항-PcrV 항체 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다: (i) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (ii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; (iii) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 또는 (iv) 다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
0013
위에서 설명된 단리된 항-PcrV 항체 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다: 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH ; 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL.
일부 실시양태에서, 상기 단리된 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다: 서열번호 51-52 및 61-62 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 51-52 및 61-62 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH ; 및 서열번호 65 또는 67의 아미노산 서열, 또는 서열번호 서열번호 65 또는 67의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL.
일부 실시양태에서, 상기 단리된 항- PcrV 항체는 다음을 포함한다: (i) 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (ii) 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (iii) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (iv) 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (v) 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (vi) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (vii) 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (viii) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (ix) 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (x) 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xi) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xii) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xiii) 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xiv) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xv) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xvi) 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xvii) 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 (xviii) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
일부 실시양태에서, 상기 기재된 단리된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나의 단리된 항-PcrV 항체와 경쟁적으로 PcrV에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같은 단리된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체가 제공된다.
상기 기재된 단리된 항-PcrV 항체 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 Fc 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 전장 IgG 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 전장 IgG1 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 키메라, 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 싱글 체인 Fv(scFv), Fv 단편, dAb, Fd 또는 디아바디(diabody)로 구성되는 군으로부터 선택되는 항원 결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 상기 기재된 항-PcrV 항체 중 어느 하나를 코딩하는 단리된 핵산 분자(들)가 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 핵산 분자 중 어느 하나에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터가 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 항-PcrV 항체 중 어느 하나, 상기 기재된 핵산 분자 중 어느 하나, 또는 상기 기재된 벡터 중 어느 하나를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, a) 항-PcrV 항체를 발현하기에 효과적인 조건 하에 상기 기재된 숙주 세포 중 어느 하나를 배양하는 단계; 및 b) 상기 숙주 세포로부터 발현된 항-PcrV 항체를 얻는 단계를 포함하는 항-PcrV 항체를 생산하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 상기 기재된 항-PcrV 항체 중 어느 하나에 따른 항-PcrV 항체의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 개체의 질병 또는 병태를 예방 또는 치료하는 방법 또는 상기 기재된 약학 조성물 중 어느 하나에 따른 항-PcrV 항체를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 항-PcrV 항체 중 어느 하나에 따른 항-PcrV 항체, 또는 질병이나 상태를 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서의 상기 기재된 약학 조성물 중 어느 하나에 따른 항-PcrV 항체를 포함하는 약학 조성물의 용도이다. 일부 실시양태에서, 질병 또는 상태는 병원성 감염이다. 일부 실시양태에서, 감염은 그람-음성 박테리아 감염이다. 일부 실시양태에서, 박테리아는 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)이다. 일부 실시양태에서, 질병 또는 상태는 녹농균 감염에 의해 유발된 하나 이상의 증상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 증상은 열, 오한, 피로, 근육 및 관절 통증, 관절 종창, 두통, 설사, 피부 발진, 상처의 고름, 균혈증, 급성 폐렴, 또는 복강내 감염 중 하나 이상을 포함한다.
상기 기재된 치료 방법 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제 중 적어도 하나는 항생제이다. 일부 실시양태에서, 상기 항생제는 이미페넴, 토브라마이신, 시프로플록사신, 메로페넴 또는 아즈트레오남 중 하나 이상이다.
또한, 상기 기재된 항-PcrV 항체, 핵산, 벡터, 단리된 숙주 세포 중 어느 하나를 포함하는 약학 조성물, 키트 및 제조 물품이 제공된다.
도 1A 및 1B는 부모 13-42 mAb 및 기준 항체 V2L2-MD와 비교하여 RBC 용해를 억제하는 데 있어서 납 최적화된 항체를 유도하는 능력을 보여준다.
도 2A 및 2B는 부모 13-42 mAb와 비교하여 A549 세포 용해를 억제하는데 있어서 최적화된 항체를 유도하는 능력을 보여준다.
도 3은 ELISA에 의해 측정된 기준 항체 Mab166 및 V2L2-MD와 비교하여 BV 입자에 대한 최적화된 항체 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10을 유도하는 교차 반응성을 나타낸다.
도 4A 내지 4E는 FACS에 의해 측정된 PcrV-음성 A549 세포에 대한 13-42 mAb 및 최적화된 항체 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10의 교차 반응성을 나타낸다.
도 5A, 5B 및 5C는 부모 13-42 mAb 및 V2L2-MD 기준 항체와 비교하여 각각 O1-52/66, O16-177/81 및 O6-57/66 균주에 의해 유발된 RBC 용해를 억제하는 최적화된 항체 7B1, 7C1 및 8C1의 능력을 보여준다.
도 6A 내지 6D는 부모 13-42 mAb 과 비교하여 각각 O1-52/66, O6-57/66, O16-177/81 및 O11-PA103 균주에 의해 유발된 A549 세포 용해를 억제하는 최적화된 항체 7B1, 7C1 및 8C1의 능력을 보여준다.
도 7A 및 7B는 부모 13-42 mAb와 비교하여 마우스 급성 폐렴 모델에서 예방적으로 생존을 개선하는 최적화된 항체 7B1, 7C1 및 3G3의 유도 능력을 보여준다.
도 8A 및 8B는 마우스 급성 폐렴 모델에서 녹농균의 장기 부담을 예방적으로 감소시키는 부모 13-42mAb, 기준 항체 V2L2-MD 및 납 최적화된 항체 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10의 유도 능력을 보여준다.
도 9는 부모 13-42 mAb와 비교하여 마우스 복강내 감염 모델에서 예방적으로 생존을 개선하는 최적화된 항체 7B1, 7C1 및 8C1의 유도 능력을 보여준다.
도 10은 부모 13-42 mAb와 비교하여 면역결핍 마우스 급성 폐렴 모델에서 예방적으로 생존을 개선하는 최적화된 항체 7B1, 7C1 및 8C1의 유도 능력을 보여준다.
도 11A 및 11B는 기준 항체 V2L2-MD와 비교하여 마우스 급성 폐렴 모델에서 치료학적으로 생존을 개선하는 최적화된 항체 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10의 유도 능력을 보여준다.
도 12A 및 12B는 단독으로 또는 항생제 메로페넴(MEM), 토브라마이신(TOB) 또는 시프로플록사신(CIP)과 조합된 경우 마우스 복강내 감염 모델에서 예방적으로 생존을 개선하는 최적화된 항체 7B1 및 8C1의 유도능력을 보여준다.
도 13A 및 13B는 각각 3 mg/kg 및 30 mg/kg 용량으로 정맥내 투여될 때 최적화된 항체 7B1, 7C1, 8C1, 6D10 및 기준 항체 V2L2-MD에 대한 래트의 약동학적 프로파일을 나타낸다.
도 14A 내지 14D는 ELISA에 의해 측정된 예시적인 아미노산 잔기에서 돌연변이가 있는 야생형 PcrV 및 PcrV에 대한 최적화된 항체 7B1의 결합 친화도를 나타낸다.
한 측면에서 본 출원은 항-PcrV 항체를 제공한다. scFv 파지 라이브러리에 대한 선택, 친화성 성숙 및 적절하게 설계된 생화학적 및 생물학적 분석법의 조합을 사용하여, 우리는 적혈구 및 A549 세포 용해의 작용을 억제하고, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)에 대한 치료적 및 예방적 생체내 보호 모두를 제공하는 PcrV에 결합하는 매우 강력한 항체 분자를 확인하였다. 여기에 제시된 결과는 우리의 항체들이 공지된 항-PcrV 항체 Mab166 또는 V2L2-MD와 비교할 때 PcrV의 다른 영역 또는 에피토프에 결합하고, 다양한 생물학적 분석에서 증명된 바와 같이 놀랍게도 공지된 항-PcrV 항체보다 훨씬 더 강력하다는 것을 나타낸다.
본 출원에 의해 제공되는 항-PcrV 항체는, 예를 들어 전장 항-PcrV 항체, 항-PcrV scFv, 항-PcrV Fc 융합 단백질, 다중-특이성(예를 들어, 이중특이성) 항-PcrV 항체, 항-PcrV 면역접합체 등을 포함한다.
한 측면에서, 본 출원은 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체를 제공하며, 여기서 상기 에피토프는 Pseudomonas PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175 및 Ser202로 구성되는 군으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 잔기를 포함한다.
또한, 특이적 서열을 갖는 항-PcrV 항체 및 이러한 항체와 동일한 에피토프와 경쟁하거나 이에 결합하는 항체가 제공된다. 또한, 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물, 및 항-PcrV 항체의 제조 및 사용 방법이 제공된다.
정의
여기에서 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는" 은 임상 결과를 포함하여 유익하거나 원하는 결과를 얻기 위한 접근법이다. 이 응용 프로그램의 목적을 위해, 유익하거나 원하는 임상 결과에는 다음 중 하나 이상이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다: 질병으로 인한 하나 이상의 증상 완화, 질병의 정도 감소, 질병 안정화(예: 질병의 악화 예방 또는 지연), 질병의 확산(예: 병원체의 전신 확산) 예방 또는 지연, 질병의 재발 방지 또는 지연, 질병의 진행 지연 또는 더딤, 질병 상태 개선, 질병의 완화(부분적 또는 전체적) 제공, 질병 치료에 필요한 하나 이상의 다른 의약의 용량 감소,질병의 진행 지연, 삶의 질 증가 또는 개선, 체중 증가 증가, 및/또는 생존 연장. 또한 "치료"에는 감염(예를 들어, 숙주 세포 용해 또는 괴사)의 병리학적 결과의 감소가 포함된다. 적용 방법은 이러한 치료 측면 중 임의의 하나 이상을 고려한다.
"방지하다"라는 용어 및 "예방된", "예방하는", "예방" 등과 같은 유사한 단어는 질병 또는 상태, 예를 들어 병원성 감염의 발생 또는 재발 가능성을 방지, 억제, 또는 감소시키는 것을 의미한다. 또한 질병 또는 상태의 발생 또는 재발을 지연시키거나, 질병 또는 상태의 증상의 발생 또는 재발을 지연시키는 것을 의미한다. 본원에 사용된 "예방" 및 유사한 단어는 또한 질병 또는 상태의 발생 또는 재발 이전에 질병 또는 상태의 강도, 효과, 증상 및/또는 부담을 감소시키는 것을 포함한다. 본원에 사용된 "예방" 및 유사한 단어는 또한 질병 또는 상태, 예를 들어 병원성 감염의 발생 또는 재발에 대한 위험 및 감수성을 감소시키는 것을 포함한다.
용어 "항체"는 전장 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 전장 항체는 2개의 헤비체인과 2개의 라이트체인을 포함한다. 라이트체인 및 헤비체인의 가변 영역은 항원 결합을 담당한다. 두 체인의 가변 영역은 일반적으로 상보성 결정 영역(CDR)(LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는 라이트체인(LC) CDR, HC- CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3를 포함하는 헤비체인(HC) CDRs)으로 불리는 3개의 매우 가변적인 루프를 함유한다. 본원에 개시된 항체들 및 항원-결합 단편들에 대한 CDR 경계는 Kabat, Chothia 또는 Al-Lazikani(Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991)의 규칙에 의해 정의되거나 확인될 수 있다. 헤비체인 또는 라이트체인의 3개의 CDRs은 프레임워크 영역(FRs)으로 알려진 측면 스트레치들 사이에 삽입되며, 이는 CDRs 보다 고도로 보존되고 초가변 루프를 지지하는 스캐폴드를 형성한다. 헤비 및 라이트체인의 불변 영역은 항원 결합에 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 항체들은 그들의 헤비체인의 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로 클래스에 할당된다. 항체들의 5가지 주요 클래스 또는 이소타입은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ 헤비체인의 존재를 특징으로 하는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 이다. 주요 항체 클래스 중 일부는 IgG1(γ1 헤비체인), IgG2(γ2 헤비체인), IgG3(γ3 헤비체인), IgG4(γ4 헤비체인), IgA1(α1 헤비체인) 또는 IgA2(α2 헤비체인)와 같은 서브클래스들로 나뉜다.
여기서 사용된 용어 "항원-결합 단편"은 예를들어, 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디설파이드 안정화된 Fv 단편 (dsFv), (dsFv)2, 이중특이성 dsFv (dsFv-dsFv'), 디설파이드 안정화된 디아바디 (ds 디아바디), 단일체인 Fv (scFv), scFv 이량체 (2가 디아바디), 하나 이상의 CDRs를 포함하는 항체의 일부로부터 형성된 다중특이성 항체, 카멜라이즈드(camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 이가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 포함하는 항체 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 부모 항체 또는 부모 항체 단편(예를 들어, 부모 scFv)이 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 단편은 하나 이상의 상이한 인간 항체로부터 프레임워크 영역에 이식된 특별한 인간 항체로부터의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "에피토프"는 항체 또는 항체 모이어티가 결합하는 항원 상의 원자 또는 아미노산의 특정 그룹을 지칭한다. 2개의 항체 또는 항체 모이어티는 항원에 대해 경쟁적 결합을 나타내는 경우 항원 내에서 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 1차 항체가 2차 항체의 표적 PcrV 결합을 1차 항체의 등몰 농도의 존재 하에, 또는 그 반대로, 약 50% 이상(예: 약 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 이상) 억제하는 경우에, 1차 항체는 표적 PcrV에 결합을 위하여 2차 항체와 "경쟁한다". 그들의 교차 경쟁을 기반으로 하는 항체를 "비닝(binning)"하기 위한 높은 처리량 프로세스는 PCT 공개 번호 WO 03/48731에 설명되어 있다.
본원에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식하는" 또는 " ~ 에 특이적이다"는 표적과 항체 사이의 결합과 같은 측정 가능하고 재생 가능한 상호작용을 지칭하며, 이는 생물학적 분자를 포함한 이질적인 분자 집단의 존재 하에서 표적의 존재를 결정짓는다. 예를 들어, 표적(에피토프일 수 있음)을 특이적으로 인식하는 항체는 다른 표적에 대한 결합보다 더 큰 친화성, 결합력(avidity), 더 쉽게 및/또는 더 긴 지속 시간으로 이 표적에 결합하는 항체이다. 일부 실시양태에서, 항원을 특이적으로 인식하는 항체는 다른 표적들에 대한 그의 결합 친화도의 적어도 약 10배인 결합 친화도로 항원의 하나 이상의 항원 결정기와 반응한다.
본원에 사용된 "단리된" 항-PcrV 항체는 (1) 자연에서 발견되는 단백질과 회합되지 않고, (2) 동일한 공급원으로부터의 다른 단백질이 없고, (3) 다른 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나 (4) 자연에서 발생하지 않는, 항-PcrV 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "단리된 핵산"은 게놈, cDNA 또는 합성 기원의 핵산 또는 이들의 일부 조합을 의미하는 것으로 의도되며, 그 기원으로 인해 "단리된 핵산"(1)은 "단리된 핵산"이 자연에서 발견되는 폴리뉴클레오타이드의 전부 또는 일부와 관련되지 않거나, (2) 자연에서 연결되지 않은 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결되거나, 또는 (3) 다음과 같이 자연에서 발생하지 않는 폴리뉴클레오타이드 더 큰 서열의 일부로서 자연에서 발생하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 헤비 및 라이트체인 폴리펩타이드 모두의 가변 영역 내에서 발견되는 비-인접 항원 결합 부위를 의미하는 것으로 의도된다. 이러한 특별한 영역들은 하기에서 설명되어 있으며, Kabat 외., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat 외., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991); Chothia 외., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Al-Lazikani B. 외., J. Mol. Biol., 273: 927-948 (1997); MacCallum 외., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996); Abhinandan 및 Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008); Lefranc M.P. 외., Dev. Comp. Immunol ., 27: 55-77 (2003); and Honegger 및 Pluckthun, J. Mol . Biol., 309:657-670 (2001), 여기서 상기 정의는 서로 비교할 때 아미노산 잔기의 중복 또는 하위 집합을 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 이식된 항체의 CDR 또는 이의 변이체를 지칭하기 위한 정의의 적용은 본원에서 정의되고 사용되는 용어의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 상기 인용된 문헌 각각에 의해 정의된 CDRs을 포함하는 아미노산 잔기들은 비교로서 하기 표 1에 제시된다. CDR 예측 알고리즘 및 인터페이스는 다음을 포함하는 당업계에 공지되어 있다: 예를들어, Abhinandan 및 Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008); Ehrenmann F. 외., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307 (2010); 및 Adolf-Bryfogle J. 외., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438 (2015). 이 단락에 인용된 참고 문헌의 내용은 본 출원에서 사용하고 본 명세서의 하나 이상의 청구범위에 포함될 수 있도록 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
[표 1] CDR 정의
Figure pct00001
1잔기 넘버링은 Kabat 외., supra 의 명명법을 따른다.
2잔기 넘버링은 Chothia 외., supra의 명명법을 따른다.
3잔기 넘버링은 MacCallum 외., supra의 명명법을 따른다.
4잔기 넘버링은 Lefranc 외., supra의 명명법을 따른다.
5잔기 넘버링은 Honegger 및 Pl
Figure pct00002
ckthun, supra의 명명법을 따른다.
용어 "키메라 항체"는 헤비 및/또는 라이트체인의 일부가 특정 종으로부터 유도되거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 반면, 나머지 체인(들)은 그들이 본 출원의 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종에서 유도되거나 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체, 뿐만 아니라 그러한 항체의 단편의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이다 (미국 특허 번호 4,816,567 및 Morrison 외., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984) 참조).
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 단단한 비공유 결합에서 하나의 헤비체인 및 하나의 라이트체인 가변 영역 도메인의 이량체로 구성된다. 이들 2개 도메인의 접힘으로부터 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(각각 헤비체인 및 라이트체인으로부터 3개의 루프)가 나온다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화도이지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일-체인 Fv"는 단일 폴리펩타이드 체인에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv에 대한 리뷰를 위하여 다음을 참조한다; Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994).
용어 "디아바디"는 인터-체인과 같은 일반적으로 VH 및 VL 도메인 사이에 짧은 링커(예: 약 5 내지 약 10개 잔기)가 있는 scFv 단편(이전 단락 참조)을 구성함으로써 제조된 소형 항체 단편을 지칭하지만, 이는 V 도메인의 인트라-체인 페어링이 달성되어 2가 단편, 즉 2개의 항원 결합 부위를 갖는 단편이 생성된다. 이중특이성 디아바디는 2개의 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩타이드 사슬에 존재하는 2개의 "교차" scFv 단편의 이종이량체이다. 디아바디는 예를들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 Hollinger 외.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)에서 더욱 충분히 설명되었다.
비-인간(예를들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 인간 면역글로불린(수용자 항체)으로, 수용자의 초가변 영역(HVR)으로부터의 잔기가 원하는 항체 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 쥐, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종의 초가변 영역(공여자 항체)으로부터의 잔기로 대체된다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형들은 항체 성능을 더욱 개선하기 위해 수행된다. 일반적으로, 인간화 항체는 1개 이상, 및 전형적으로 2개의, 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 루프에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FRs은 인간 면역글로불린 서열의 것들과 같다. 인간화 항체는 또한 임의로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역을 포함할 것이다. 자세한 내용은 Jones 외., Nature 321:522-525(1986); Riechmann 외., Nature 332:323-329(1988); 및 Presta, Curr . Op. Struct . Biol . 2:593-596 (1992)를 참조한다.
본원에서 확인된 폴리펩티드 및 항체 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 백분율(%)" 또는 "상동성"은 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하여 서열을 정렬한 후 비교되는 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성의 백분율을 결정하기 위한 정렬은, 예를들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR), 또는 MUSCLE 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 그러나 여기의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 MUSCLE(Edgar, RC, Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797, 2004; Edgar, RC, BMC Bioinformatics 5(1) :113, 2004)을 사용하여, 생성된다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 출원의 FcR은 IgG 항체(γ 수용체)에 결합하는 것이고, 이러한 수용체의 대립형질 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함하는, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 서브클래스의 수용체를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함하며, 이들은 주로 그의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM)를 포함한다(M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234(1997) 리뷰 참조). 이 용어는 FcγRIIIA 알로타입과 같은 알로타입:FcγRIIIA-Phe158, FcγRIIIA-Val158, FcγRIIA-R131 및/또는 FcγRIIA-H131 을 포함한다. FcRs은 Ravetch 및 Kinet, Annu, Immunol 9:457-92(1991); Capel 외., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas 외., J. Lab. 클린. 메드. 126:330-41(1995)에서 리뷰되었다. 미래에 확인될 것을 포함하는 다른 FcRs은 본 명세서에서 용어 "FcR"에 포함된다. 상기 용어는 또한 모체 IgGs를 태아로 전달하는 역할을 하는 신생아 수용체인 FcRn을 포함한다(Guyer 외., J. Immunol. 117:587(1976) 및 Kim 외., J. Immunol. 24: 249(1994)).
용어 "FcRn"은 신생아 Fc 수용체(FcRn)를 지칭한다. FcRn은 주요 조직적합성 복합체(MHC)와 구조적으로 유사하며 β2-마이크로글로불린에 비공유적으로 결합된 α-사슬로 구성된다. 신생아 Fc 수용체 FcRn의 다중 기능은 Ghetie 및 Ward (2000) Annu . Annu . Rev. Immunol . 18, 739-766에서 검토된다. FcRn은 면역글로불린 IgGs를 산모에서 새끼로 수동적으로 전달하고 혈청 IgG 수준을 조절하는 역할을 한다. FcRn은 세포 내 및 세포를 가로질러 온전한 형태로 음세포화된(pinocytosed) IgG에 결합 및 수송하고, 기본 분해 경로로부터 이들을 구출하는 구제(salvage) 수용체로 작용할 수 있다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH1 도메인"은 일반적으로 약 아미노산 118에서 약 아미노산 215까지 확장된다(EU 넘버링 시스템).
"힌지 영역"은 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216에서 Pro230으로 늘어나는 것으로 정의된다(Burton, Molec. Immunol. 22:161-206(1985)). 다른 IgG 이소타입의 힌지 영역은 헤비체인 간의 S-S 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 동일한 위치에 배치함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH2 도메인"은 일반적으로 약 아미노산 231에서 약 아미노산 340까지 확장된다. CH2 도메인은 다른 도메인과 밀접하게 페어링을 이루지 않는다는 점에서 독특하다. 오히려, 2개의 N-연결된 분지형 탄수화물 체인이 온전한 천연 IgG 분자의 2개의 CH2 도메인 사이에 삽입된다. 탄수화물이 도메인-도메인 페어링에 대한 대체물을 제공하고 CH2 도메인을 안정화하는 데 도움이 될 수 있다고 추측되었다. Burton, Molec Immunol. 22:161-206(1985).
"CH3 도메인"은 Fc 영역(즉, 대략 아미노산 잔기 341에서 항체 서열의 C-말단 말단까지, 전형적으로 아미노산 잔기 446 또는 IgG의 447)에서 CH2 도메인에 대한 C-말단 잔기의 스트레치를 포함한다.
"기능적 Fc 단편"은 천연 서열 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 갖는다. 예시적인 "효과기 기능"은 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식균 작용; 세포 표면 수용체(예: B 세포 수용체, BCR)의 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 효과기 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 도메인)과 조합될 것을 요구하고 당업계에 공지된 다양한 검정을 사용하여 평가될 수 있다.
"변경된" FcR 결합 친화도 또는 ADCC 활성을 갖는 변이체 IgG Fc를 갖는 항체는 부모 폴리펩티드 또는 천연 서열 Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드과 비교하여, 향상된 또는 감소된 FcR 결합 활성(예를 들어, FcγR 또는 FcRn) 및/또는 ADCC 활성을 가지는 것이다. FcR에 대한 "증가된 결합을 나타내는" 변이체 Fc는 부모 폴리펩티드 또는 천연 서열 IgG Fc보다 더 높은 친화도로(예를 들어, 더 낮은 겉보기 Kd 또는 IC50 값) 적어도 하나의 FcR에 결합한다. 일부 실시양태에 따르면, 부모 폴리펩티드와 비교하여 결합의 개선은 약 3배, 예를 들어, 약 5, 10, 25, 50, 60, 100, 150, 200 또는 최대 500배, 또는 결합에 있어서 약 25% 내지 1000% 개선이다. FcR에 대한 "감소된 결합을 나타내는" 폴리펩타이드 변이체는 부모 폴리펩티드보다 더 낮은 친화도(예를 들어, 더 높은 겉보기 Kd 또는 더 높은 IC50 값)로 하나 이상의 FcR에 결합한다. 부모 폴리펩티드와 비교하여 결합의 감소는 결합의 약 40% 이상 감소일 수 있다.
"항체 의존성 세포 매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 세포독성의 한 형태를 의미하며, 특정 세포독성 세포(예: 자연살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)에 존재하는 Fc 수용체(FcRs)에 결합된 분비된 Ig가 이들 세포독성 이펙터 세포가 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합하도록 하고 후속적으로 세포독소로 표적 세포를 죽일 수 있다. 항체는 세포독성 세포를 "팔"로 만들고 이러한 사멸에 필요하다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포에 대한 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)의 464페이지 표3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337에 기술된 것과 같은 시험관내 ADCC 분석을 수행할 수 있다. 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포는 말초혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들어 Clynes 등.PNAS (USA) 95:652-656 (1998)에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.
"증가된 ADCC를 나타내거나" 인간 이펙터 세포의 존재 하에 야생형 IgG Fc를 갖는 폴리펩티드 또는 부모 폴리펩티드보다 더 효과적으로 ADCC를 매개하는 변이체 Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드는, 검정에서 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드 및 야생형 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드(또는 부모 폴리펩티드)의 양이 본질적으로 동일한 경우, 시험관내 또는 생체내에서 실질적으로 ADCC 매개에 더욱 효과적인 것이다. 일반적으로, 이러한 변이체는 예를 들어 동물 모델 등에서 ADCC 활성을 결정하기 위한 검정 또는 방법과 같은 당업계에 공지된 임의의 시험관내 ADCC 검정을 사용하여 확인될 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 변이체는 약 5배 내지 약 100배이, 예를 들어 약 25 내지 약 50배, 야생형 Fc(또는 부모 폴리펩티드)보다 ADCC 매개에 더 효과적이다.
"보체 의존적 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적 보체 경로의 활성화는 보체 시스템의 첫 번째 구성요소(C1q)가 그들의 동족 항원에 결합된 항체(적절한 서브클래스의)에 결합에 의해 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석을, 예를들어 Gazzano-Santoro 외.,J. Immunol. Methods 202:163 (1996)에 기재된 바와 같이, 수행할 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열 및 증가 또는 감소된 C1q 결합 능력을 갖는 폴리펩티드 변이체는 미국 특허 번호 6,194,551B1 및 WO99/51642에 기재되어 있다. 이러한 특허 공보의 내용은 참고로 여기에 구체적으로 포함된다. 역시 Idusogie 외. J. Immunol. 164: 4178-4184(2000) 참조.
달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열"은 서로의 변성된 버전이고 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열이라는 어구는 또한 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 일부 버전에서 인트론(들)을 포함할 수 있는 정도로 인트론을 포함할 수 있다.
"작동가능하게 연결된"이라는 용어는 조절 서열과 이종 핵산 서열 사이의 기능적 연결을 지칭하여 후자의 발현을 초래한다. 예를 들어, 제1 핵산 서열은 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계에 위치할 때 제2 핵산 서열과 작동가능하게 연결된다. 예를 들어, 프로모터는 상기 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, 작동가능하게 연결된 DNA 서열은 연속적이며, 필요한 경우 동일한 리딩 프레임에서 2개의 단백질 코딩 영역을 연결한다.
"상동성"은 2개의 폴리펩티드 사이 또는 2개의 핵산 분자 사이의 서열 유사성 또는 서열 동일성을 지칭한다. 2개의 비교된 서열 모두의 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 서브유닛에 의해 점유될 때, 예를들어, 2개의 DNA 분자 각각의 위치가 아데닌에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 상동성이다. 두 서열 사이의 상동성 백분율은 두 서열이 공유하는 일치하거나 상동인 위치의 수를 비교된 위치의 수로 나눈 값에 100을 곱한 함수이다. 예를들어, 두 서열의 위치 중 10개 중 6개가 일치하거나 상동이면 두 서열은 60% 상동이다. 예를들어, DNA 서열 ATTGCC 및 TATGGC는 50% 상동성을 공유한다. 일반적으로 두 개의 서열이 최대 상동성을 제공하도록 정렬될 때 비교가 이루어진다.
본원에 개시된 바와 같은 항-PcrV 항체 또는 조성물의 "유효량"은, 구체적으로 언급된 목적을 수행하기에 충분한 양이다. "유효량"은 경험적으로 그리고 명시된 목적과 관련된 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
용어 "치료적으로 유효량"은 개체의 질병 또는 장애를 "치료"하는데 효과적인, 본원에 개시된 바와 같은 항-PcrV 항체 또는 조성물의 양을 지칭한다. 녹농균 감염의 경우, 본원에 개시된 바와 같은 항-PcrV 항체 또는 조성물의 치료적으로 유효량은 감염된 세포의 수를 감소시킬 수 있고; 감염의 확산을 억제(즉, 어느 정도 늦추고 바람직하게는 중지); 및/또는 감염과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화할 수 있다. 본원에 개시된 바와 같은 항-PcrV 항체 또는 조성물이 녹농균의 성장을 예방하고/하거나 감염에서 녹농균을 죽일 수 있는 정도까지, 항-PcrV는 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료적으로 유효량은 환자의 감염을 억제하는 양이다. 일부 실시양태에서, 치료적으로 유효량은 환자의 감염을 완전히 근절시키는 양이다.
본원에 사용된 "약학적으로 허용가능한" 또는 "약리학적으로 적합한"은 생물학적으로 또는 달리 바람직하지않은 물질이 아닌 물질을 의미하며, 예를들어 상기 물질은 임의의 현저한 바람직하지 않은 생물학적 영향을 유발하거나 그것이 포함된 조성물의 다른 성분들과 해로운 방식으로 상호작용하는 것이 없이, 환자에게 투여되는 약학 조성물에 혼입될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제는 바람직하게는 독성 및 제조 테스트의 필수 표준을 충족하고/하거나 미국 식품의약국(U.S. Food and Drug Administration)이 준비한 Inactive Ingredient Guide에 포함되어 있다.
여기에 기술된 출원의 실시양태는 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는" 실시예를 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 값 또는 매개변수 "약"에 대한 언급은 그 값 또는 매개변수 그 자체에 대한 변경을 포함(및 설명)한다. 예를들어, "약 X"를 언급하는 설명에는 "X"에 대한 설명이 포함된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 값 또는 매개변수 "아닌"에 대한 언급은 일반적으로 값 또는 매개변수 "외에"를 의미하고 설명한다. 예를들어, 상기 방법이 X 유형 감염을 치료하는 데 사용되지 않는다는 것은 상기 방법이 X 이외의 유형의 감염을 치료하는 데 사용됨을 의미한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "하나", "또는" 및 "상기"는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시 대상을 포함한다.
항-PcrV 항체
한 측면에서, 본 출원은 PcrV에 특이적으로 결합하는 항-PcrV 항체를 제공한다. 항-PcrV 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 마우스 항체, 인간 항체, 및 본원에서 논의된 헤비 체인 및/또는 라이트 체인 CDRs을 포함하는 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 한 측면에서, 본 출원은 PcrV에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 고려되는 항-PcrV 항체는, 예를들어, 전장 항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 IgG1, IgG2 또는 IgG4), 항-PcrV scFv, 다중-특이성(예를 들어, 이중특이성) 항-PcrV 항체, 항-PcrV 면역접합체 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일체인Fv (scFv), Fv 단편, dAb, Fd, 또는 디아바디이다. 일부 실시양태에서, PcrV에 특이적으로 결합하는 항체에 대한 언급은 항체가 비표적에 대한 그의 결합 친화도의 약 10배 이상(예를 들어 약 10, 102, 103, 104, 105, 106, 또는 107 배 중 어느 하나 이상 포함)인 친화도로 PcrV에 결합함을 의미한다. 일부 실시양태에서, 상기 비표적은 PcrV가 아닌 항원이다. 결합 친화도는 ELISA, 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석, 또는 방사성면역침전 분석(RIA)과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다. Kd는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석 또는 생물층 간섭계(BLI)와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
특정 측면에서, 슈도모나스 PcrV에 특이적으로 결합하는 항-PcrV 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (a) 녹농균의 옵소닌식세포 사멸(OPK)을 촉진, 매개 또는 강화, 및/또는 (b) III형 독소 분비 시스템의 활동을 방해한다.
인간 서열을 함유하는 항-PcrV 항체(예를 들어, 인간 CDR 서열을 포함하는 인간 헤비체인 및 라이트체인 가변 도메인 서열)가 본원에서 광범위하게 논의되지만, 비-인간 항-PcrV 항체도 고려된다. 일부 실시양태에서, 비-인간 항-PcrV 항체는 본원에 기재된 바와 같은 항-PcrV 항체로부터의 인간 CDR 서열 및 비-인간 프레임워크 서열을 포함한다. 비-인간 프레임워크 서열은, 일부 실시양태에서, 예를 들어 포유동물, 예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 돼지, 소(예: 소, 황소, 버팔로), 사슴, 양, 염소, 닭, 고양이, 개, 패럿, 영장류(예: 마모셋, 붉은털 원숭이) 등을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 인간 CDR 서열을 사용하여 합성 헤비체인 및/또는 라이트체인 가변 도메인을 생성하기 위해 사용될 수 있는 임의의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 비-인간 항-PcrV 항체는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 인간 CDR 서열을 비-인간 프레임워크 서열 (예를들어, 마우스 또는 닭 프레임워크 서열) 상에 이식함으로써 생성된 항-PcrV 항체를 포함한다.
예시적인 PcrV 단백질의 완전한 아미노산 서열은 서열번호: 71의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 내의 에피토프를 특이적으로 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV에 특이적이며 종 교차-반응성 또는 다른 유형의 비-슈도모나스 단백질 교차-반응성을 나타내지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 내의 선형 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 내의 비선형 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하며, 여기서 상기 에피토프는 서열번호 71에 따른, 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175 및 Ser202 의 군으로부터 선택된 하나 이상의 임의의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 아미노산 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 여기서 에피토프는 서열번호 71에 따른 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202 의 군으로부터 선택된 2개 이상의 아미노산 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 여기서 에피토프는 서열번호 71에 따른 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202의 군으로부터 선택된 적어도 3개의 아미노산 잔기들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 여기서 에피토프는 서열번호 71에 따른 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202의 군으로부터 선택된 적어도 4개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 여기서 에피토프는 서열번호 71에 따른 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202의 군으로부터 선택된 적어도 5개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 여기서 에피토프는 서열 번호 71에 따른 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175 및 Ser202를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 항체 헤비체인 불변 영역 및 항체 라이트체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG1 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG2 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG3 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG4 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG는 인간 IgG이다. 일부 실시양태에서, 헤비체인 불변 영역은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 헤비체인 불변 영역은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV는 람다 라이트체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 카파 라이트체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 라이트체인 불변 영역은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 항체 헤비체인 가변 도메인 및 항체 라이트체인 가변 도메인을 포함한다.
한 측면에서, 본 출원은 단리된 항-PcrV 항체를 제공하며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 헤비체인 가변 도메인(VH): X1X2X3MS (서열번호 39)을 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역(HC-CDR) 1, 또는 최대 약 3개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 D 또는 S, X2 는 Y 또는 N 그리고 X3 는 P, H, Y 또는 S; X1ISESGGSTX2X3ADSVKG (서열번호 40)을 포함하는 HC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 G 또는 V; X2 는 N 또는 Y; 그리고 X3 는 D 또는 Y; 및 GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV (서열번호 41)을 포함하는 HC-CDR3또는 최대 3개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체. 여기서 X1 는 S 또는 C, X2 는 T, G, D, Y, Q 또는 A, X3 는 S, D, N, E, L, A, 또는 Y, X4 는 S, T, Y, 또는 A, X5 는 S, H, Q, A, R, K, G, E, Y 또는 D, X6 는 H 또는 C, 그리고 X7 는 F 또는 Y 및 다음을 포함하는 라이트체인 가변 도메인(VL): RASQGIX1SYLA (서열번호 42)를 포함하는 라이트체인 상보성 결정 영역(LC-CDR) 1 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 S 또는 R; AASTLQS (서열번호 34)를 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및 QQLX1SYPLX2 (서열번호 43)를 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 S, N 또는 K, 그리고 X2 는 S 또는 T, 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR 1, 또는 최대 약 3개(예, 약 1, 2, 또는 3) 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 서열번호 9-14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR 2, 또는 최대 약 3개(예, 약 1, 2, 또는 3) 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 그리고 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR 3, 또는 최대 약 3개(예, 약 1, 2, 또는 3) 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32 또는 33 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1 또는 약 3개(예, 약 1, 2, 또는 3) 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 약 3개(예, 약 1, 2, 또는 3) 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 그리고 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 약 3개(예, 약 1, 2, 또는 3) 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH:서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9-14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32 또는 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 그리고 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하는 VH 및, 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 전장 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 IgG1 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기IgG1는 인간 IgG1 이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 IgG4 불변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IgG4 는 인간 IgG4 이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 헤비체인 불변 영역은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 헤비체인 불변 영역은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 라이트체인 불변 영역은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 단리된 항-PcrV 항체가 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 헤비체인 가변 도메인(VH):DX1X2MS (서열번호 44)를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역 (HC-CDR) 1, 또는 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 N 또는 Y 그리고 X2 는 P, H, 또는 Y; X1ISESGGSTNYADSVKG (서열번호 45)를 포함하는 HC-CDR2, 또는 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 G 또는 V; 및 GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV (서열번호 46)를 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 N, S, D, 또는 L, X2 는 S 또는 A, 그리고 X3 는 F 또는 Y; 및 다음을 포함하는 라이트체인 가변 도메인(VL):RASQGISSYLA (서열번호 32)를 포함하는 라이트체인 상보성 결정 영역 (LC-CDR) 1, 또는 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; AASTLQS (서열번호 34)를 포함하는 LC-CDR2, 또는 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; QQLSSYPLX1 (서열번호 47)를 포함하는 LC-CDR3, 또는 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S 또는 T, 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 51의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3를 포함하는 VH, 및 서열번호 67의 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2 and LC-CDR3를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 52의 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하는 VH, 그리고 서열번호 65의 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 61의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3를 포함하는 VH, 및 서열번호 65의 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3를 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 62의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3를 포함하는 VH, 및 서열번호 67의 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3를 포함하는 VL 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 48의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다 :다음을 포함하는 VH:서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들; 및 다음을 포함하는 VL ;서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH :서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3;그리고 다음을 포함하는 VL : 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체로서 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3;그리고 다음을 포함하는 VL : 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 49의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 5개의 아미놘 치환을 포함하는 그의 변이체 ; 그리고 다음을 포함하는 VL ;서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 5개의 아미놘 치환을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 적어도 약 90%(예를들어 적어도 약 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 의 어느 하나) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체, 그리고 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 50의 아미노산을 포함하는 VH 그리고 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 을 포함하는 VH 그리고 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함하는 VL 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다;다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 51의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 67의 아미노산 서 열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다;다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 52의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다;다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 53의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다;다음을 포함하는 VH :서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 적어도 약 90%(예를들어 적어도 약 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 의 어느 하나) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체, 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 54의 아미노산을 포함하는 VH 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 을 포함하는 VH 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함하는 VL 를 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다 :다음을 포함하는 VH:서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들; 및 다음을 포함하는 VL ;서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다;다음을 포함하는 VH :서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 55의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다:다음을 포함하는 VH: 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들; 및 다음을 포함하는 VL ;서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH :서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3;그리고 다음을 포함하는 VL : 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체로서 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3;그리고 다음을 포함하는 VL : 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 56의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH :서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3;그리고 다음을 포함하는 VL : 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체로서 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3;그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 57의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다;다음을 포함하는 VH :서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다; 다음을 포함하는 VH :서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 58의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 하기를 포함한다:다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들; 및 다음을 포함하는 VL ;서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 59의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 60의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 61의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 63의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 64의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH : 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체들, 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 VH: 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 그리고 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 특이적으로 경쟁하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항-PcrV 항체가 제공된다: 다음을 포함하는 VH; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL: 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열 또는 적어도 약 90% (예를들어 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의) 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VH 및 서열번호 70의 아미노산 서열 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함하는 VL 을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3 그리고 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 를 포함하는 VL 을 포함한다.
일부 실시양태에서, 경쟁 분석을 사용하여 PcrV에 대한 결합에 대해 본원에 기재된 항-PcrV 항체와 경쟁하는 단일클론 항체를 확인할 수 있다. 경쟁 분석은 동일하거나 입체적으로 중첩되는 에피토프를 인식함으로써 2개의 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지 또는 하나의 항체가 상기 항원에 대한 다른 항체의 결합을 경쟁적으로 억제하는지 여부를 결정하는 데 사용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 본원에 기재된 항체에 의해 결합되는 동일한 에피토프에 결합한다. 예시적인 경쟁 분석은 Harlow and Lane(1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.)에 제공된 것과 같은 일상적인 분석을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 항체가 결합하는 에피토프를 매핑하는 상세한 예시적인 방법은 Morris(1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 각각이 다른 에피토프의 결합을 50% 이상 차단하는 경우 2개의 항체가 동일한 에피토프에 결합한다고 한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체와 경쟁하는 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체이다.
예시적인 항-PcrV 항체 서열이 표 2 및 3에 제시되어 있다. 당업자는 CDR 위치의 예측 및 항체 헤비체인 및 라이트체인 가변 영역의 한정에 대해 많은 알고리즘이 공지되어 있음을 인식할 것이다. 본원에 기술된 항체들로부터의 CDRs, VH 및/또는 VL 서열을 포함하지만 하기 표에 예시된 것과 다른 예측 알고리즘에 기초한 항-PcrV 항체는 본 발명의 범위 내에 있다.
[표 2] 예시적인 항- PcrV 항체 CDR 서열
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
[표 3] 예시적인 V H 및 V L 서열.
Figure pct00006
Figure pct00007
[표 4]
Figure pct00008
결합 친화도
결합 친화도는 Kd, Koff, Kon, 또는 Ka 표시할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "Koff"는 동역학 선택 설정으로부터 결정된 바와 같이, 항체/항원 복합체로부터 항체의 해리에 대한 오프-레이트 상수를 지칭하도록 의도된다. 본원에 사용된 용어 "Kon"는 항체/항원 복합체를 형성하기 위한 항원에 대한 항체의 회합에 대한 온-레이트 상수를 지칭하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 평형 해리 상수 "Kd"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 상수를 지칭하고, 평형 상태의 항체 분자 용액에 존재하는 모든 항체-결합 도메인의 절반을 차지하는데 필요한 항원의 농도를 기술하고, Koff/Kon 과 동일하다. Kd의 측정은 모든 결합제가 용액에 있다는 것을 전제로 한다. 항체가 세포벽에 묶인 경우(예: 효모 발현 시스템), 상응하는 평형 속도 상수는 EC50으로 표시되며, 이는 Kd 의 양호한 근사치를 제공한다. 친화도 상수 Ka 는 해리 상수, Kd의 역수이다.
해리 상수(Kd)는 항원에 대한 항체 부분의 친화도를 나타내는 지표로 사용된다. 예를들어, 다양한 마커 시약(marker agent)으로 표시된 항체를 이용하여 Scatchard 법에 의해, 뿐만 아니라 Biacore(Amersham Biosciences 제조)를 사용하여, 표면 플라즈몬 공명에 의한 생체분자 상호작용 분석, 사용자 매뉴얼 및 첨부된 키트에 따라 쉽게 분석이 가능하다. 이러한 방법들을 사용하여 도출할 수 있는 Kd 값은 M(몰) 단위로 표시된다. 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 예를 들어, ≤ 10-7 M, ≤ 10-7 M, ≤ 10-9 M, ≤ 10-10 M, ≤ 10-11 M, ≤ 10-12 M 또는 ≤ 10-13 M 의 Kd를 가질 수 있다.
항체의 결합 특이성은 당업계에 공지된 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 이러한 방법에는 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIAcore-테스트 및 펩티드 스캔이 포함되지만, 이에 국한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 표적 PcrV와 약 10-7 M 내지 약 10-13 M (예; 약 10-7 M 내지 약 10-13 M, 약 10-8 M 내지 약 10-13 M, 약 10-9 M 내지 약 10-13 M, 또는 약 10-10 M 내지 약 10-12 M)의 Kd 로 특이적으로 결합한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체 및 PcrV 사이의 결합의 Kd 는 약 10-7　M 내지 약 10-13　M, 약 1Х10-7　M 내지 약 5Х10-13　M, 약 10-7　M 내지 약 10-12　M, 약 10-7　M 내지 약 10-11　M, 약 10-7　M 내지 약 10-10　M, 약 10-7　M 내지 약 10-9　M, 약 10-8　M 내지 약 10-13　M, 약 1Х10-8　M 내지 약 5Х10-13　M, 약 10-8　M 내지 약 10-12　M, 약 10-8　M 내지 약 10-11　M, 약 10-8　M 내지 약 10-10　M, 약 10-8　M 내지 약 10-9　M, 약 5Х10-9　M 내지 약 1Х10-13　M, 약 5Х10-9　M 내지 약 1Х10-12　M, 약 5Х10-9　M 내지 약 1Х10-11　M, 약 5Х10-9　M 내지 약 1Х10-10　M, 약 10-9　M 내지 약 10-13　M, 약 10-9　M 내지 약 10-12　M, 약 10-9　M 내지 약 10-11　M, 약 10-9　M ㅍ 약 10-10　M, 약 5Х10-10　M 내지 약 1Х10-13　M, 약 5Х10-10　M 내지 약 1Х10-12　M, 약 5Х10-10　M 내지 약 1Х10-11　M, 약 10-10　M 내지 약10-13　M, 약 1Х10-10　M 내지 약 5Х10-13　M, 약 1Х10-10　M 내지 약 1Х10-12　M, 약 1Х10-10　M 내지 약 5Х10-12　M, 약 1Х10-10　M 내지 약 1Х10-11　M, 약 10-11　M 내지 약 10-13　M, 약 1Х10-11　M 내지 약 5Х10-13　M, 약 10-11　M 내지 약 10-12　M, 또는 약 10-12　M 내지 약 10-13　M 이다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체 및 및 PcrV 사이의 결합의 Kd 는 약 10-7 M 내지 약 10-13 M 이다.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체와 비-표적 간의 결합의 Kd 는 항-PcrV 항체와 표적 간의 결합의 Kd 보다 더 높고, 본원에서 일부 실시양태에서 다음과 같이 표적(예를 들어, PcrV)에 대한 항-PcrV 항체의 결합 친화도는 비-표적에 대한 것보다 더 높은 것으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 비표적은 PcrV가 아닌 항원이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체(PcrV에 대한)와 비-PcrV 표적 사이의 결합의 Kd 는 항-PcrV 항체와 표적 PcrV 사이의 결합의 Kd의 약 10배 이상일 수 있고, 예를 들어, 약 10-100배, 약 100-1000배, 약 103-104 배, 약 104-105 배, 약 105-106 배, 약 106-107 배, 약 107-108 배, 약 108-109배, 약 1010-1011 배, 또는 약 1011-1012 배일 수 있다.
핵산
항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산 분자가 또한 고려된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 전장 항-PcrV 항체를 포함한 전장 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산 (또는 핵산 세트)이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산 (또는 핵산 세트)은 펩티드 태그 (예를 들어, 단백질 정제 태그, 예를들어, His-태그, HA 태그)를 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함할 수 있다.
또한 여기에서 고려된 것은 항-PcrV 항체, 항-PcrV 항체의 폴리펩티드 성분들을 코딩하는 단리된 핵산, 또는 본원에서 기재된 항-PcrV 항체의 폴리펩티드 성분들을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포이다.
본 출원은 또한 이들 핵산 서열에 대한 변이체를 포함한다. 예를들어, 변이체는 적어도 적당히 엄격한 혼성화 조건 하에 본 출원의 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산 서열에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 출원은 또한 본 출원의 핵산이 삽입된 벡터를 제공한다.
간략히 요약하면, 항-PcrV 항체를 코딩하는 천연 또는 합성 핵산에 의한 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)의 발현은 상기 핵산을 적절한 발현 벡터 내로 삽입함으로써 달성될 수 있고, 상기 핵산은 예를 들어 프로모터(예: 림프구 특이적 프로모터) 및 3' 비번역 영역(UTR)을 포함하는 5' 및 3' 조절 요소들에 작동 가능하게 연결된다.
상기 벡터는 진핵 숙주 세포에서 복제 및 통합에 적합할 수 있다. 전형적인 클로닝 및 발현 벡터는 원하는 핵산 서열의 발현 조절에 유용한 전사 및 번역 종결자, 개시 서열, 및 프로모터를 함유한다.
본 출원의 핵산은 또한 표준 유전자 전달 프로토콜을 사용하여 핵산 면역화 및 유전자 치료에 사용될 수 있다. 유전자 전달 방법은 당업계에 공지되어 있고,예를 들어, U.S. Pat. 제5,399,346호; 5,580,859; 5,589,466, 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, 본 출원은 유전자 요법 벡터를 제공한다.
상기 핵산은 여러 유형의 벡터로 클로닝될 수 있다. 예를들어, 상기 핵산은 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하나 이에 제한되지 않는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 특히 관심 있는 벡터에는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터 및 시퀀싱 벡터가 포함된다.
추가로, 발현 벡터는 바이러스 벡터의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, Green and Sambrook(2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York), 및 기타 바이러스학 및 분자 생물학 매뉴얼에 설명되어 있다. 벡터로서 유용한 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스 바이러스, 및 렌티바이러스를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체에서 기능적인 복제 기점, 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위, 및 하나 이상의 선택가능한 마커를 함유한다(예를들어 WO 01/96584; WO 01/29058; 및 U.S. 특허. 제. 6,326,193 참조)
많은 바이러스 기반 시스템이 포유류 세포 내로의 유전자 전달을 위해 개발되었 다. 예를 들어, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템을 위한 편리한 플랫폼을 제공한다. 선택된 유전자는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 벡터에 삽입되고 레트로바이러스 입자에 패키징될 수 있다. 그 다음, 재조합 바이러스는 단리되어 생체내 또는 생체외에서 대상체의 세포에 전달될 수 있다. 다수의 레트로바이러스 시스템이 당업계에 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 아데노바이러스 벡터가 사용된다. 다수의 아데노바이러스 벡터가 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 렌티바이러스 벡터가 사용된다. 렌티바이러스와 같은 레트로바이러스에서 파생된 벡터는 딸 세포에서 이식유전자의 장기적이고 안정적인 통합 및 전파를 허용하기 때문에 장기 유전자 전달을 달성하는 데 적합한 도구이다. 렌티바이러스 벡터는 간세포와 같은 비증식성 세포를 형질도입할 수 있다는 점에서 쥐 백혈병 바이러스와 같은 종양-레트로바이러스에서 유래된 벡터에 비해 추가적인 이점이 있다. 그들은 또한 낮은 면역원성의 추가 이점을 가지고 있다.
추가 프로모터 요소, 예를들어 인핸서는 전사 개시의 빈도를 조절한다. 일반적으로, 이들은 시작 부위의 업스트림 30-110 bp 영역에 위치하지만, 최근에 많은 프로모터가 시작 부위의 다운스트림에도 기능적 요소를 포함하는 것으로 나타났다. 프로모터 요소 사이의 간격은 종종 유연하므로, 요소들이 서로에 대해 반전되거나 이동할 때 프로모터 기능이 보존된다. 티미딘 키나제(tk) 프로모터에서, 프로모터 요소들 사이의 간격은 활성이 감소하기 시작하기 전에 50bp로 증가할 수 있다.
적합한 프로모터의 한 예는 즉시 초기 거대세포바이러스(CMV) 프로모터 서열이다. 이 프로모터 서열은 이에 작동적으로 연결된 임의의 폴리뉴클레오티드 서열의 높은 수준의 발현을 유도할 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 적합한 프로모터의 또 다른 예는 신장 성장 인자-1α(EF-1α)이다. 그러나 유인원 바이러스 40(SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 장 말단 반복(LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스 즉시 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스 프로모터, 뿐만 아니라 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 헤모글로빈 프로모터, 및 크레아틴 키나제 촉진제와 같은 인간 유전자 프로모터를 포함하나 이에 제한되지 않는 다른 구성적 프로모터 서열도 사용될 수 있다. 또한, 상기 적용은 구성적 프로모터의 사용으로 제한되어서는 안된다. 유도성 프로모터도 적용의 일부로 고려된다. 유도성 프로모터의 사용은 그러한 발현이 바람직할 때 작동적으로 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 켜거나, 발현이 바람직하지 않을 때 발현을 끌 수 있는 분자 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터의 예는 메탈로티오닌 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린 프로모터를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체의 발현은 유도성이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산 서열은 본원에 기재된 임의의 유도성 프로모터를 비롯한 유도성 프로모터에 작동가능하게 연결된다.
유도성 프로모터
유도성 프로모터의 사용은 그러한 발현이 바람직할 때 작동적으로 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 켜거나, 발현이 바람직하지 않을 때 발현을 끌 수 있는 분자 스위치를 제공한다. 진핵 세포에 사용하기 위한 예시적인 유도성 프로모터 시스템은 호르몬-조절 요소를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다(예: Mader, S. and White, JH (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5603-5607 참조), 합성 리간드 조절 요소(예: Spencer, DM 외. 1993) Science 262: 1019-1024 참조) 및 이온화 방사선-조절 요소(예: Manome, Y. 외.(1993) Biochemistry 32: 10607 -10613Datta, R. 외. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 1014- 10153 참조). 시험관내 또는 생체내 포유동물 시스템에서 사용하기 위한 추가의 예시적인 유도성 프로모터 시스템은 Gingrich 외. (1998) Annual Rev. Neurosci 21:377-405에서 검토된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 발현하는 데 사용하기 위한 유도성 프로모터 시스템은 Tet 시스템이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 발현하는 데 사용하기 위한 유도성 프로모터 시스템은 E. coli로부터의 lac 억제자 시스템이다.
본 출원에서 사용하기 위한 예시적인 유도성 프로모터 시스템은 Tet 시스템이다. 이러한 시스템은 Gossen 외(1993).에 의해 설명된 Tet 시스템을 기반으로 한다. 예시적인 실시양태에서, 관심 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 Tet 작동자(TetO) 부위를 포함하는 프로모터의 제어 하에 있다. 비활성 상태에서, Tet 억제자(TetR)는 TetO 부위에 결합하여 프로모터의 전사를 억제한다. 활성 상태에서, 예를 들어 테트라사이클린(Tc), 안하이드로테트라사이클린, 독시사이클린(Dox) 또는 이들의 활성 아날로그와 같은 유도제의 존재 하에, 상기 유도제는 TetO로부터 TetR의 방출을 유발하여 전사가 일어나도록 한다. 독시사이클린은 1-디메틸아미노-2,4a,5,7,12-펜타하이드록시-11-메틸-4,6-디옥소-1,4a,11,11a,12,12a-헥사히드로테트라센-3-카르복사미드의 화학명을 갖는 항생제의 테트라사이클린 계열의 구성원이다.
한 실시양태에서, TetR 은 포유동물 세포, 예를 들어, 뮤린 또는 인간 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 대부분의 아미노산은 유전 코드의 축퇴성으로 인해 하나 이상의 코돈에 의해 인코딩되어, 핵산에 의해 코딩되는 아미노산 서열의 변경 없이 주어진 핵산의 뉴클레오티드 서열에 실질적인 변이를 허용한다. 그러나, 많은 유기체는 "코돈 편향"(즉, 주어진 아미노산에 대한 특정 코돈(들)의 사용에 대한 편향)으로도 알려진 코돈 사용의 차이를 나타낸다. 코돈 편향은 종종 특정 코돈에 대한 우세한 종의 tRNA의 존재와 상관관계가 있으며, 이는 차례로 mRNA 번역의 효율성을 증가시킨다. 따라서, 특정 유기체(예를 들어, 원핵생물)로부터 유래된 코딩 서열은 코돈 최적화를 통해 상이한 유기체(예를 들어, 진핵생물)에서의 개선된 발현을 위해 맞춤화될 수 있다.
Tet 시스템의 다른 특정 변형에는 다음과 같은 "Tet-Off" 및 "Tet-On" 시스템이 포함된다. Tet-Off 시스템에서 전사는 Tc 또는 Dox 존재하에서 비활성이다. 그 시스템에서, 헤르페스 심플렉스 바이러스로부터의 VP16의 강한 전사활성화 도메인에 융합된 TetR로 구성된 테트라사이클린-조절된 트랜스활성화제 단백질(tTA)은 테트라사이클린-반응성 프로모터 요소(TRE)의 전사 조절하에 있는 표적 핵산의 발현을 조절한다. TRE는 프로모터(일반적으로 인간 사이토메갈로바이러스(hCMV) 즉시-초기 프로모터에서 유래한 최소 프로모터 서열)에 융합된 TetO 서열 연쇄체(concatamers)로 구성된다. Tc 또는 Dox가 없는 경우, tTA는 TRE에 결합하여 표적 유전자의 전사를 활성화한다. Tc 또는 Dox가 있는 경우, tTA는 TRE에 결합할 수 없으며, 표적 유전자로부터의 발현은 비활성 상태로 유지된다.
반대로, Tet-On 시스템에서, 전사는 Tc 또는 Dox의 존재하에 활성화된다. Tet-On 시스템은 역 테트라사이클린-조절된 트랜스활성화제인 rtTA를 기반으로 한다. tTA와 마찬가지로, rtTA는 TetR 억제자와 VP16 트랜스활성 도메인으로 구성된 융합 단백질이다. 그러나 TetR DNA 결합 부분의 4개 아미노산 변화는 rtTA의 결합 특성을 변경하여 Dox의 존재 하에 표적 이식유전자의 TRE에 있는 tetO 서열만 인식할 수 있도록 한다. 따라서 Tet-On 시스템에서, TRE-조절된 표적 유전자의 전사는 Dox의 존재하에서만 rtTA에 의해 자극된다.
다른 유도성 프로모터 시스템은 E. coli의 lac 억제인자 시스템이다(Brown 외., Cell 49:603-612(1987) 참조). lac 억제자 시스템은 lac 작동자(lacO)를 포함하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된 관심 폴리뉴클레오티드의 전사를 조절함으로써 기능한다. lac 억제자(lacR)는 LacO에 결합하여, 관심 있는 폴리뉴클레오티드의 전사를 방지한다. 관심 폴리뉴클레오티드의 발현은 적절한 유도제, 예를 들어 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(IPTG)에 의해 유도된다.
폴리펩타이드 또는 이의 일부의 발현을 평가하기 위해, 세포 내로 도입될 발현 벡터는 또한 바이러스 벡터를 통해 형질감염 또는 감염시키려는 세포 집단으로부터발현 세포의 식별 및 선택을 용이하게 하기 위해 선별가능한 마커 유전자 또는 리포터 유전자 또는 둘 모두를 함유할 수 있다. 다른 측면에서, 상기 선택 가능한 마커는 DNA의 별도 조각에 운반될 수 있고 공동-형질감염 절차에 사용될 수 있다. 선택가능한 마커 및 리포터 유전자 모두는 숙주 세포에서 발현을 가능하게 하는 적절한 조절 서열과 플랭크될 수 있다. 유용한 선택가능한 마커는, 예를 들어 neo 등과 같은 항생제-내성 유전자를 포함한다.
리포터 유전자는 잠재적으로 형질감염된 세포를 식별하고 조절 서열의 기능을 평가하는 데 사용된다. 일반적으로, 리포터 유전자는 수용 유기체 또는 조직에 존재하지 않거나 이에 의해 발현되지 않고 그의 발현이 예를들어 효소 활성과 같은 일부 쉽게 검출 가능한 특성에 의해 나타나는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자이다. 리포터 유전자의 발현은 DNA가 수용 세포 내에 도입된 후 적절한 시간에 분석된다. 적합한 리포터 유전자는 루시페라제, β-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 분비된 알칼리성 포스파타제, 또는 녹색 형광 단백질 유전자를 코딩하는 유전자를 포함할 수 있다(예를 들어, Ui-Tel 외., 2000 FEBS Letters 479: 79-82). 적합한 발현 시스템은 잘 알려져 있으며 공지된 기술을 사용하여 제조하거나 상업적으로 얻을 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자의 발현 수준이 가장 높은 최소 5' 플랭킹 영역을 갖는 구조물이 프로모터로 확인된다. 이러한 프로모터 영역은 리포터 유전자에 연결될 수 있고 프로모터-구동 전사를 조절하는 능력에 대한 제제를 평가하는 데 사용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 전장 항-PcrV 항체에 따른 전장 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 핵산은 전장 항-PcrV 항체의 헤비 및 라이트체인을 코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 핵산 서열 각각은 별개의 벡터에 함유된다. 일부 실시양태에서, 핵산 서열의 적어도 일부는 동일한 벡터에 함유된다. 일부 실시양태에서, 모든 핵산 서열은 동일한 벡터에 함유된다. 벡터는 예를 들어 포유동물 발현 벡터 및 바이러스 벡터(예를 들어, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 헤르페스 바이러스 및 렌티바이러스로부터 유래된 것)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
유전자를 세포 내로 도입하고 발현시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 발현 벡터의 맥락에서, 상기 벡터는 당업계의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들어 포유동물, 박테리아, 효모 또는 곤충 세포 내로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포로 전달될 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전, 리포펙션, 입자 충격, 미세주입, 전기천공 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 생산하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Green and Sambrook(2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York) 참조. 일부 실시양태에서, 숙주 세포로의 폴리뉴클레오타이드의 도입은 인산칼슘 형질감염에 의해 수행된다.
관심 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 생물학적 방법에는 DNA 및 RNA 벡터의 사용이 포함된다. 바이러스 벡터, 특히 레트로바이러스 벡터는 포유동물, 예를 들어 인간 세포에 유전자를 삽입하는 가장 널리 사용되는 방법이 되었다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스, 헤르페스 심플렉스바이러스 1, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, U.S.특허. 제5,350,674호 및 제5,585,362호 참조.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 화학적 수단은 거대분자 복합체, 나노캡슐, 미소구체, 비드, 및 수중유 에멀젼, 미셀, 혼합 미셀 및 리포솜을 포함하는 지질 기반 시스템과 같은 콜로이드 분산 시스템을 포함한다. 시험관내 및 생체내 전달 비히클로서 사용하기 위한 예시적인 콜로이드성 시스템은 리포솜(예를 들어, 인공 막 소포)이다.
비-바이러스 전달 시스템이 사용되는 경우, 예시적인 전달 비히클은 리포솜이다. 지질 제형의 사용은 핵산을 숙주 세포로 도입하기 위해 고려된다(시험관내, 생체외 또는 생체내). 다른 측면에서, 상기 핵산은 지질과 연관될 수 있다. 지질과 관련된 핵산은 리포솜의 수성 내부에 캡슐화될 수 있고, 리포솜의 지질 이중층 내에 산재되어 있고, 리포솜 및 올리고뉴클레오티드 둘 모두와 관련된 연결 분자를 통해 리포솜에 부착되고, 리포솜에 포획되고, 리포솜과 복합되고, 지질을 함유한 용액에 분산되고, 지질과 혼합되고, 지질과 결합되고, 지질에서 현탁액으로 함유되고, 미셀과 함유되거나 복합되고, 또는 지질과 관련될 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 관련 조성물은 용액 내 임의의 특정 구조로 제한되지 않는다. 예를 들어, 이중층 구조, 미셀 또는 "붕괴된" 구조로 존재할 수 있다. 또한 용액에 단순히 산재되어, 크기나 모양이 균일하지 않은 응집체를 형성할 수도 있 다. 지질은 자연적으로 발생할 수 있는 지방 물질이거나 합성 지질일 수 있다. 예를 들어, 지질에는 세포질에서 자연적으로 발생하는 지방 방울 뿐만 아니라 지방산, 알코올, 아민, 아미노 알코올 및 알데히드와 같은 장쇄 지방족 탄화수소 및 그 유도체를 포함하는 화합물 클래스가 포함된다.
외인성 핵산을 숙주 세포에 도입하거나 달리 세포를 본 출원의 억제자에 노출시키는 데 사용된 방법에 관계없이, 숙주 세포에서 재조합 DNA 서열의 존재를 확인하기 위해 다양한 분석이 수행될 수 있다. 이러한 분석은, 예를 들어, 서던 및 노던 블롯팅, RT-PCR 및 PCR과 같은 당업자에게 잘 알려진 "분자 생물학적" 분석; 예를들어, 면역학적 수단(ELISA 및 웨스턴 블롯)에 의해 또는 출원의 범위 내에 속하는 제제를 확인하기 위해 본원에 기재된 검정에 의한 특정 펩티드의 존재 또는 부재 검출과 같은 "생화학적" 검정을 포함한다.
항-PcrV 항체의 제조
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 모노클로날 항체이거나 모노클로날 항체로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 단일클론 항체로부터의 VH 및 VL 도메인, 또는 그의 변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 모노클로날 항체로부터의 CH1 및 CL 도메인, 또는 그의 변이체를 추가로 포함한다. 모노클로날 항체는, 예를 들어 하이브리도마 방법, 효모 디스플레이, 파지 디스플레이 방법을 비롯한 당업계에 공지된 방법을 사용하거나, 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 추가로, 예시적인 효모 디스플레이 및 파지 디스플레이 방법이 본원 및 하기 실시예에 기재되어 있다.
하이브리도마 방법에서, 햄스터, 마우스 또는 기타 적절한 숙주 동물은 일반적으로 면역화제로 면역화되어 상기 면역화제에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 상기 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 상기 면역화제는 관심 단백질의 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 필요한 경우, 말초 혈액 림프구("PBL")가 사용되거나, 인간이 아닌 포유동물 공급원이 필요한 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 그리고나서 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 불멸화된 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다. 불멸화된 세포주는 일반적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 일반적으로, 쥐 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 하이브리도마 세포는 바람직하게는 융합되지 않은 불멸화된 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 부모 세포에 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 없는 경우, 하이브리도마용 배양 배지는 일반적으로 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘("HAT 배지")을 포함하며, 이는 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지한다.
일부 실시양태에서, 불멸화 세포주는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 항체의 안정적인 고수준 발현을 지원하고, HAT 배지와 같은 배지에 민감하다. 일부 실시양태에서, 불멸화 세포주는 뮤린 골수종 세포주이며, 이는 예를 들어 캘리포니아주 샌디에이고에 있는 Salk Institute 세포 분포 센터 및 버지니아주 마나사스에 있는 American Type Culture Collection에서 얻을 수 있다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주 또한 인간 단일클론 항체의 생산에 대해 기술된 바 있다.
하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 그 다음 폴리펩티드에 대해 지시된 모노클로날 항체의 존재에 대해 분석될 수 있다. 하이브리도마 세포에 의해 생성된 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전법에 의해 또는 방사성 면역분석법(RIA) 또는 효소-결합 면역흡수성 분석법(ELISA)과 같은 시험관내 결합 분석법에 의해 결정될 수 있다. 이러한 기술 및 분석은 당업계에 공지되어 있다. 모노클로날 항체의 결합 친화도는 예를 들어, Scatchard analysis of Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220(1980)에 의해 결정될 수 있다.
원하는 하이브리도마 세포가 확인된 후, 클론은 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다. Goding, supra. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어 둘베코 변형된 이글 배지 및 RPMI-1640 배지를 포함한다. 대안적으로, 하이브리도마 세포는 포유동물에서 복수로서 생체내에서 성장할 수 있다.
서브 클론에 의해 분비되는 단일클론 항체는 예를 들어 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지 또는 복수 액으로부터 단리 또는 정제될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 항-PcrV 항체에 따르면, 항-PcrV 항체는 항체 라이브러리(예를 들어 scFv 또는 Fab 단편을 제시하는 파지 라이브러리)로부터 선택된 클론으로부터의 서열을 포함한다. 상기 클론은 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체 단편에 대한 조합 라이브러리를 스크리닝하여 식별할 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 원하는 결합 특성을 갖는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 상기 방법들은 예를들면, Hoogenboom 외., Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien 외, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001) 에서 리뷰되고 예를들면 다음에서 추가로 설명된다; McCafferty 외., Nature 348:552-554; Clackson 외., Nature 352: 624-628 (1991); Marks 외., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003); Sidhu 외., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee 외., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee 외., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004).
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 개별적으로 클로닝되고 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합되며, 그런 다음 이는 Winter 외., Ann. Immunol., 12: 433-455(1994)에 기재된 대로 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 scFv 단편들 또는 Fab 단편들로서 항체 단편들을 표시한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구성할 필요 없이 면역원에 대한 고친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 순수한 레퍼토리는 Griffiths 외., EMBO J, 12:725-734 (1993). 에 의해 기술된 바와 같이 어떠한 면역화 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자가-항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공하기 위해 (예를 들어, 인간으로부터) 클로닝될 수 있다. 마지막으로, 순수한 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 세그먼트를 클로닝함으로써 합성적으로 만들어질 수 있고, Hoogenboom 및 Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)에 의해 기술된 바와 같이, 매우 가변적인 CDR3 영역을 인코딩하고 시험관 내에서 재배열을 달성하기 위해 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 사용한다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기술하는 특허 공보는 예를 들어: U.S. 특허. 제 5,750,373, 및 US 특허 공보 제 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360를 포함한다.
항-PcrV 항체는 표적 PcrV에 특이적인 항-PcrV 항체 부분에 대한 라이브러리를 스크리닝하기 위해 파지 디스플레이를 사용하여 제조될 수 있다. 상기 라이브러리는 적어도 1 x 109개(예로서 적어도 약 1 Х 109, 2.5 Х 109, 5 Х 109, 7.5 Х 109, 1 Х 1010, 2.5 Х 1010, 5 Х 1010, 7.5 Х 1010, 또는 1 Х 1011 중 임의의) 의 독특한 인간 항체 단편들의 다양성을 갖는 인간 scFv 파지 디스플레이 라이브러리일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 라이브러리는 모든 인간 헤비체인 및 라이트체인 서브패밀리를 포함하는 건강한 공여자로부터의 인간 PMBCs 및 비장으로부터 추출된 DNA로부터 구축된 순수한 인간 라이브러리이다. 일부 실시양태에서, 상기 라이브러리는 자가면역 질환 환자, 암 환자 및 감염 질환 환자와 같은 다양한 질환을 갖는 환자로부터 단리된 PBMCs로부터 추출된 DNA로부터 구축된 순수한 인간 라이브러리이다. 일부 실시양태에서, 상기 라이브러리는 반-합성 인간 라이브러리이고, 여기서 헤비체인 CDR3은 임의의 주어진 위치에 동등하게 존재할 가능성이 있는 모든 아미노산(시스테인 제외)으로 완전히 무작위화된다(예로서, Hoet, R.M. 외., Nat. Biotechnol. 23(3):344-348, 2005 참조). 일부 실시양태에서, 상기 반-합성 인간 라이브러리의 헤비체인 CDR3 는 약 5 내지 약 24 (예로서 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 중 임의의) 길이의 아미노산을 가진다. 일부 실시양태에서, 상기 라이브러리는 완전-합성 파지 디스플레이 라이브러리이다. 일부 실시양태에서, 상기 라이브러리는 qll-이니간 파지 디스플레이 라이브러리이다.
높은 친화도로 표적 PcrV에 결합하는 파지 클론은 고체 지지체(예를 들어, 용액 패닝을 위한 비드 또는 세포 패닝을 위한 포유동물 세포와 같은)에 결합된 표적 PcrV에 대한 파지의 반복적 결합에 의해 선택될 수 있고, 결합되지 않은 파지가 제거되고 특이적으로 결합된 파지가 용출된다. 상기 결합된 파지 클론들은 그리고나서 용출되어 발현 및 정제를 위해 E. coli XL1-Blue와 같은, 적절한 숙주 세포를 감염시키는 데 사용된다. 패닝은 표적 PcrV에 특이적으로 결합하는 파지 클론들을 풍부하게 하기 위해, 용액 패닝, 세포 패닝, 또는 이 둘의 조합으로 복수의(예: 약 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상) 라운드 동안 수행될 수 있다. 풍부해진 파지 클론들은 예를 들어 ELISA 및 FACS 를 포함하는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 표적 PcrV에 대한 특이적 결합에 대해 테스트될 수 있다.
단일클론 항체는 또한 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 것과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 출원의 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 쉽게 단리되고 서열결정될 수 있다. 상기 기술된 바와 같은 하이브리도마 세포 또는 상기 출원의 PcrV-특이적 파지 클론은 이러한 DNA의 공급원으로 작용할 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터 내로 배치될 수 있으며, 이는 그리고나서 유인원 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 형질감염되며, 재조합 숙주 세포에서 단일클론 항체의 합성을 얻는다. DNA는 또한 예를 들어, 상동성 비-인간 서열 대신에 인간 헤비체인 및 라이트체인 불변 도메인 및/또는 프레임워크 영역에 대한 코딩 서열을 치환함으로써 (미국 특허 제4,816,567호; Morrison 외. supra) 또는 면역글로불린 코딩 서열에 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유 결합함으로써 변형될 수 있다. 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 본 출원의 항체의 불변 도메인에 대해 치환될 수 있거나, 또는 키메라 2가 항체를 생성하기 위해 출원의 항체의 하나의 항원-결합 부위의 가변 도메인에 대해 치환될 수 있다.
상기 항체들은 1가 항체일 수 있다. 1가 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 한 방법은 면역글로불린 라이트체인 및 변형된 헤비체인의 재조합 발현을 포함한다. 헤비체인 가교를 방지하기 위해 일반적으로 Fc 영역의 임의의 지점에서 헤비체인이 절단된다. 대안적으로, 관련 시스테인 잔기들은 다른 아미노산 잔기로 치환되거나 가교를 방지하기 위해 결실된다.
시험관내 방법은 또한 1가 항체를 제조하는 데 적합하다. 그의 단편, 특히 Fab 단편들을 생성하기 위한 항체의 절단(digestion)은, 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다.
원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 결합 부위)은 면역글로불린 불변-도메인 서열에 융합될 수 있다. 상기 융합은 바람직하게는 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 헤비체인 불변 도메인과의 융합이다. 일부 실시양태에서, 라이트체인 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 헤비체인 불변 영역(CH1)은 상기 융합체 중 적어도 하나에 존재한다. 면역글로불린 헤비체인 융합체 및, 원하는 경우, 면역글로불린 라이트체인을 코딩하는 DNAs는 별도의 발현 벡터들에 삽입되고, 적합한 숙주 유기체 내에 동시-형질감염된다(co-transfected).
인간 및 인간화 항체들
항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체)는 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 비인간(예: 뮤린) 항체 일부분의 인간화 형태는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 체인, 또는 일반적으로 비인간 면역글로불린에서 유래한 최소 서열을 포함하는 이의 단편(예: Fv, Fab, Fab', F(ab')2, scFv 또는 항체의 기타 항원-결합 하위서열)이다. 인간화 항체 부분에는 인간 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(수혜자 항체)이 포함되며, 여기서 수용자의 CDR로부터의 잔기들은 원하는 특이성, 친화도 및 능력(capacity)을 갖는 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비-인간 종(공여자 항체)의 CDR로부터의 잔기들로 대체된다. 일부 실시양태에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기들은 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 인간화 항체 일부분은 또한 수용자 항체나 수입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 일반적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 수 있고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 영역에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 공통 서열의 영역이다.
일반적으로, 인간화 항체는 비-인간인 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이러한 비인간 아미노산 잔기들은 종종 "수입(import)" 잔기라고 하며, 이는 일반적으로 "수입" 가변 도메인으로부터 가져온다. 일부 실시양태에 따르면, 인간화는 Winter 및 동료들의 방법((Jones 외., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann 외., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen 외., Science, 239: 1534-1536 (1988)))에 따라 인간 항체의 상응하는 서열에 대해 설치류 CDRs 또는 CDR 서열을 치환함으로써 본질적으로 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체 일부분은 항체 일부분이며(미국 특허 제816,567)이며, 여기서 온전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 적은 양이 비인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환되었다. 실제로, 인간화 항체 일부분은 일반적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사한 부위로부터의 잔기로 치환된, 인간 항체 일부분이다.
인간화에 대한 대안으로 인간 항체 모이어티가 생성될 수 있다. 예를 들어, 면역화 시, 내인성 면역글로불린 생산 없이 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 형질전환 동물(예: 마우스)을 생산하는 것이 이제 가능하다. 예를들어, 키메라 및 생식계열 돌연변이 마우스에서 항체 헤비체인 연결 영역(JH) 유전자의 동형접합 결실이 내인성 항체 생산의 완전한 억제를 초래하는 것으로 설명되어 왔다. 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 어레이를 그러한 생식계열 돌연변이 마우스로로 옮기면 항원 공격 시 인간 항체가 생성될 것이다. 예를들어, Jakobovits 외., PNAS USA, 90:2551 (1993); Jakobovits 외., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann 외., Year in Immunol., 7:33 (1993); U.S. Patent Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669; 5,545,807; 및 WO 97/17852 참조. 대안적으로, 인간 항체는 인간 면역글로불린 유전자좌를 트랜스제닉 동물, 예를 들어, 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 마우스에 도입함으로써 제조될 수 있다. 챌린지 시, 유전자 재배열, 조립 및 항체 레퍼토리를 비롯한 모든 면에서 인간에서 볼 수 있는 것과 매우 유사한 인간 항체 생산이 관찰된다. 이러한 접근은 예를들면, U.S. Patent Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016, 및 Marks 외., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992); Lonberg 외., Nature, 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994); Fishwild 외., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996); Lonberg 및 Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995)에서 설명된다.
인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포(미국 특허 5,567,610 및 5,229,275 참조)에 의해 또는 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. Hoogenboom 및 Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Cole 외. 및 Boerner 외.의 기술을 인간 단일클론 항체의 제조에 또한 사용할 수 있다. Cole 외., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) and Boerner 외., J. Immunol., 147(1): 86-95 (1991).
항-PcrV 항체 변이체
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체)의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구성체(construct)가 원하는 특성, 예를 들어 항원 결합을 보유한다면, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 최종 구성체에 도달하도록 만들어질 수 있다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항-PcrV 항체 변이체가 제공된다. 치환적 돌연변이 유발에 대한 관심 부위는 HVRs 및 FRs 을 포함한다. 아미노산 치환들은 관심 항체 내에 도입될 수 있고 원하는 활성, 예를 들어 개선된 생물활성, 유지/향상된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 녹농균(P. aeruginosa)과 같은 병원체의 개선된 옵소닌 식세포 사멸(OPK)에 대해 생성물들을 스크리닝할 수 있다.
보존적 치환들을 하기 표 4 에 나타내었다
[표 4] 보존적 치환들
Figure pct00009
아미노산은 일반적인 측쇄 특성에 따라 상이한 클래스로 분류될 수 있다.
a. 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
b. 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
c. 산성: Asp, Glu;
d. 염기성: His, Lys, Arg;
e. 체인 배향에 영향을 미치는 잔기들: Gly, Pro;
f. 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환들은 이러한 클래스 중 하나의 구성원을 다른 클래스로 교환하는 것을 수반할 수 있다.
예시적인 치환적 변이체는, 예를 들어 파지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하여 편리하게 생성될 수 있는, 친화도 성숙 항체이다. 간략하게, 하나 이상의 CDR 잔기가 돌연변이되고 변이체 항체 모이어티가 파지 상에 표시되고 특정 생물학적 활성(예를들어, RBC 용해 억제 분석 또는 결합 친화도에 기초한 생물활성)에 대해 스크리닝된다. 변경(예:치환)은 예를들어 RBC 용해 억제 분석 또는 항체 친화도에 기초한로 생물활성을 개선하기 위해 HVRs 에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경들은 HVR "핫스팟", 즉, 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 인코딩된 잔기들예를 들어, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008) 참조), 및/또는 특이성 결정 잔기(SDRs)에서 만들어질 수 있고, 생성된 변이체 VH 또는 VL 은 결합 친화도에 대해 테스트된다. 2차 라이브러리로부터 구성하고 재선택에 의한 친화도 성숙이, 예를들어, Molecular Biology 178:1-37(O'Brien 외., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))에서의 방법에서 Hoogenboom 외.에서 설명되었다.
친화도 성숙의 일부 실시양태에서, 다양성은 임의의 다양한 방법(예를들어, 오류가 발생하기 쉬운 PCR, 체인 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지정 돌연변이유발)에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자 내로 도입된다. 그리고나서 2차 라이브러리가 생성된다. 상기 라이브러리는 그런 다음 원하는 친화도를 가지는 임의의 항체 변이체를 식별하기 위하여 스크리닝된다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 HVR 잔기들(예: 한 번에 4-6개 잔기)를 무작위화하는, HVR-지향 접근 방식을 포함한다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는, 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히 CDR-H3 및 CDR-L3이 자주 표적이 된다.
일부 실시양태에서, 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입 또는 결실은 하나 이상의 HVR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예를 들어, 본원에 제공된 보존적 치환)이 HVRs 에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 일부 실시양태에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 확인하기 위한 유용한 방법은 Cunningham 및 Wells (1989) Science, 244:1081-1085에 기술된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 지칭된다. 이 방법에서, 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정하기 위하여 표적 잔기들의 잔기 또는 그룹(예: arg, asp, his, lys 및 glu와 같은 하전된 잔기)이 확인되고 중성의 또는 음으로 하전된 아미노산(예;알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체된다. 추가 치환이 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 항원-항체 복합체의 결정 구조는 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해 결정될 수 있다. 이러한 접촉 잔기들 및 인접 잔기들은 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 이들이 원하는 특성들이 포함하는지 확인하기 위해 변이체들은 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개 잔기에서 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기들의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소(예: ADEPT의 경우) 또는 폴리펩티드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
Fc 영역 변이체들
일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체 또는 항-PcrV Fc 융합 단백질)의 Fc 영역 내로 도입될 수 있고, 따라서 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 영역 변이체는 종종 Fc 수용체(FcRs)에 대한 결합과 관련된 향상된 ADCC 이펙터(effector) 기능을 갖는다. 일부 실시양태에서, Fc 영역 변이체는 감소된 ADCC 효과기 기능을 갖는다. 이펙터 기능을 변경할 수 있는 Fc 서열들에 대한 변경 또는 돌연변이의 많은 예가 있다. 예를 들어, WO 00/42072 및 Shields 외. J Biol. Chem 9(2): 6591-6604(2001)는 FcRs 에 대한 결합이 개선되거나 감소된 항체 변이체를 기술한다. 이들 간행물의 내용은 참고로 여기에 구체적으로 포함된다.
항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)은 종양 세포에 대한 치료 항체의 작용 메커니즘이다. ADCC는 면역계의 이펙터 세포가 표적 세포(예: 감염된 세포)를 적극적으로 용해시키는 세포 매개 면역 방어이며, 그의 막-표면 항원이 특이적 항체(예: 항-PcrV 항체)에 의해 결합되었다. 전형적인 ADCC는 항체들에 의한 NK 세포의 활성화를 포함한다. NK 세포는 Fc 수용체인 CD16을 발현한다. 이 수용체는 표적 세포의 표면에 결합된 항체의 Fc 부분을 인식하고 결합한다. NK 세포 표면의 가장 흔한 Fc 수용체는 CD16 또는 FcγRIII라고 지칭한다. 항체의 Fc 영역에 대한 Fc 수용체의 결합은 NK 세포 활성화, 세포용해 과립의 방출 및 결과적인 표적 세포 사멸을 초래한다.
일부 실시양태에서, 본 출원은 모든 이펙터 기능은 아니지만 일부를 보유하는 Fc 영역을 포함하는 항-PcrV 항체 변이체(예: 전장 항-PcrV 항체 변이체)를 고려하며, 이는 생체내 항-PcrV 항체의 반감기가 중요하지만 특정 이펙터 기능(예: CDC 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 애플리케이션들에 대해 바람직한 후보가 되게 한다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 상기 항체가 FcγR 결합이 결여되어 있지만(따라서 ADCC 활성이 결여될 가능성이 있음) FcRn 결합 능력은 유지하는지 확인하기 위해 수행될 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는, FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포에 대한 FcR 발현은 Ravetch 및 Kinet, Rev. Immunol. 9:457-492 (1991) 464 페이지 표3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 비제한적 예가 하기에 설명되어 있다; U.S. 특허 제 5,500,362 (예로서. Hellstrom, I. 외. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 참조) 및 Hellstrom, I 외., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); U.S. 특허.제5,821,337(Bruggemann, M. 외., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참조). 대안적으로, 비-방사성 분석 방법을 사용할 수 있다.(예를들어 하기 참조, 유세포 분석을 위한 ACTITM 비-방사성 세포독성 분석(CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.; 및 CytoTox 96TM 비-방사성 세포독성 분석(Promega, Madison, Wis.). 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포들은 말초혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들어 Clynes 외. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다. 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인하기 위해 C1q 결합 분석을 또한 수행할 수 있다. 예를들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 분석을 수행할 수 있다.(예를들어, 하기 참조 Gazzano-Santoro 외., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M. S. 외., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M. S. 및 M. J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). FcRn 결합 및 생체내 청소율(clearance)/반감기 결정은 또한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다.(예를들어, Petkova, S. B. 외., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체에는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상이 치환된 항체가 포함된다(미국 특허 제6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체에는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 가지는 Fc 돌연변이체가 포함되며, 여기에는 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체가 포함된다(미국 특허 제7,332,581).
FcRs 에 대한 개선되거나 감소된 결합을 가지는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다.(예를 들어, 미국 특허 제 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields 외., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) 참조).
일부 실시양태에서, 예를들어 Moore 외., MAbs. 2(2): 181-189(2010)에서 기술된 바와 같은, 변경된(즉, 개선되거나 감소된) 옵소닌화를 초래하는 변경이 Fc 영역에서 이루어진다.
일부 실시양태에서, 반감기를 증가 및/또는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합을 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 Fc 영역을 포함하는 항-PcrV 항체(예로서, 전장 항-PcrV 항체) 변이체가 제공된다. 증가된 반감기와 FcRn에 대한 개선된 결합을 갖는 항체는 US2005/0014934A1(Hinton 외.)에 기재되어 있다. 이러한 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 하기의 Fc 영역 잔기들 중 하나 이상에서 치환된 변이체를 포함한다: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 3786, 362, 3876 380, 382, 413, 424 또는 434, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환(미국 특허 제7,371,826).
또한 Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988); 미국 특허 제5,648,260; 미국 특허 제5,624,821; 및 Fc 영역 변이체의 다른 실시예에 관한 WO 94/29351.
본원에 기재된 임의의 Fc 변이체 또는 이들의 조합을 포함하는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)가 고려된다.
글리코실화 변이체
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)는 항-PcrV 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 항-PcrV 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 항-PcrV 항체 또는 그의 폴리펩티드 부분의 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항-PcrV 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-연결에 의해 부착되는 분지형, 바이안테나리(biantennary) 올리고당을 포함한다. 예를 들어, Wright 외., TIBTECH 15:26-32(1997) 참조. 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를들어, 만노오스, N-아세틸 글루코사민(GlcNAc), 갈락토오스 및 시알산, 뿐만 아니라 바이안테너리 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 특정 개선된 특성을 갖는 항-PcrV 항체 변이체를 생성하기 위해 본 출원의 항-PcrV 항체에서 올리고당의 변형이 이루어질 수 있다.
Fc의 CH2 도메인에 부착된 N-글리칸은 이종(heterogeneous)이다. CHO 세포에서 생성된 항체 또는 Fc 융합 단백질은 푸코실트랜스퍼라제 활성에 의해 푸코실화된다. Shoji-Hosaka 외., J. Biochem. 2006, 140:777-83 참조. 일반적으로, 자연적으로 발생하는 푸코실화된 IgG의 적은 백분율이 인간 혈청에서 검출될 수 있다. Fc의 N-글리코실화는 FcγR 에 대한 결합에 중요하며; N-글리칸의 푸코실화는 FcγRIIIa 에 대한 Fc의 결합 능력을 증가시킨다. 증가된 FcγRIIIa 결합은 ADCC를 향상시킬 수 있으며, 이는 세포독성이 바람직한 특정 항체 치료 적용들에서 유리할 수 있다.
일부 실시양태에서, Fc-매개 세포독성이 바람직하지 않은 경우, 증진된 이펙터 기능이 해로울 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 단편 또는 CH2 도메인은 글리코실화되지 않는다. 일부 실시양태에서, CH2 도메인의 N-글리코실화 부위는 글리코실화를 방지하기 위해 돌연변이 된다.
일부 실시양태에서, Fc 영역에 부착된 탄수화물 구조가 감소된 푸코스를 갖거나 푸코스가 결여되어 ADCC 기능을 개선할 수 있는 Fc 영역을 포함하는 항-PcrV 항체(예컨대 전장 항-PcrV 항체) 변이체가 제공된다. 구체적으로, 야생형 CHO 세포에서 생산된 동일한 항-PcrV 항체 상의 푸코스 양에 비해 감소된 푸코스를 갖는 항-PcrV 항체가 본원에서 고려된다. 즉, 이들은 천연 CHO 세포(예를 들어, 천연 FUT8 유전자를 함유하는 CHO 세포와 같은, 천연 글리코실화 패턴을 생성하는 CHO 세포)에 의해 생성되는 경우보다 더 적은 양의 푸코스를 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 그 상의 N-연결된 글리칸의 약 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 또는 5% 미만이 푸코스를 포함하는 항체이다. 예를들어, 이러한 항-PcrV 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 그 위의 N-연결된 글리칸 중 어느 것도 푸코스를 포함하지 않는 것, 즉 항-PcrV 항체는 푸코스가 완전히 없거나, 또는 푸코스가 없거나 푸코실화되어 있는 항체이다. 푸코스의 양은 예를 들어, WO 2008/077546에 기술된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분석기에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 당구조(예: 복합, 하이브리드 및 고 만노스 구조)의 합과 비교하여 Asn297에서 당 사슬 내의 푸코스의 평균 양을 계산하여 결정된다. Asn297은 Fc 영역(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링)에서 약 297번 위치에 위치한 아스파라긴 잔기를 의미하고; 그러나, Asn297은 항체의 사소한 서열 변이들로 인해, 위치 297의 약 ±3개 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294와 300 사이에 위치할 수도 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108(Presta, L.); US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) 참조. "탈푸코실화(defucosylated)" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체에 관련된 공보의 예는 하기를 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki 외. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki 외. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). 탈푸코실화된 항체를 생성할 수 있는 세포주의 예에는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US P특허 출원 제 US 2003/0157108 A1, Presta, L ;및 WO 2004/056312 A1, Adams 외., 특히 실시예 11에서), 및 α-1,6-푸코실트랜스퍼라아제 유전자, FUT8, 넉아웃 CHO 세포들과 같은 넉아웃 세포주들(예로서., Yamane-Ohnuki 외. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. 외., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107)을 포함한다.
항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체) 변이체는 이등분된 올리고당, 예를 들어 항-PcrV 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테나리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된 올리고당과 함께 추가로 제공된다. 이러한 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체) 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는, 예를들어 WO 2003/011878(Jean-Mairet 외.); 미국 특허 제6,602,684호(Umana 외.); US 2005/0123546(Umana 외.), 및 Ferrara 외., Biotechnology 및 Bioengineering, 93(5): 851-861(2006)에 기술된다. Fc 영역에 부착된 올리고당에 적어도 하나의 갈락토오스 잔기를 가진 항-PcrV 항체(전장 항-PcrV 항체와 같은) 변이체도 또한 제공된다. 이러한 항-PcrV 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는 다음과 같이 설명된다. 예를들어, WO 1997/30087 (Patel 외.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.).
일부 실시양태에서, Fc 영역을 포함하는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체) 변이체는 FcγRIII에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 영역을 포함하는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체) 변이체는 인간 이펙터 세포(예: T 세포)의 존재 하에 ADCC 활성을 갖거나 인간 야생형 Fc 영역을 포함하는 다른 동일한 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)와 비교한 인간 이펙터 세포의 존재 하에 증가된 ADCC 활성을 갖는다.
시스테인 조작된 변이체
일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작된 항-PcrV 항체(예컨대 전장 항-PcrV 항체)를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 치환된 잔기는 항-PcrV 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기는 항-PcrV 항체의 접근가능한 부위에 위치되고 항-PcrV 항체를 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 항-PcrV 면역접합체를 생성하기 위해, 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티와 같은다른 모이어티에 접합하는데 사용될 수 있다. 시스테인 조작된 항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체)는 예를 들어 U.S. 특허. 제7,521,541호에 기술된 바와 같이 생성될 수 있다.
유도체들
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)는 당업계에 공지되어 있고 용이하게 입수가능한 추가의 비-단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항-PcrV 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/무수 말레산 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예: 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에서 그의 안정성으로 인해 제조상 이점이 있을 수 있다. 상기 중합체는 임의의 분자량일 수 있으며, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항-PcrV 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 하나 이상의 중합체가 부착된 경우, 그들은 동일하거나 다른 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 항-PcrV 항체 유도체가 개선될 것인지 여부에 따라 개선될 항-PcrV 항체의 특정 특성 또는 기능, 정의된 조건 등 하에서, 치료에 사용되어질 항-PcrV 항체 유도체인지 여부 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는 고려 사항을 기반으로 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체) 및 비단백질성 부분의 접합체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다(Kam 외., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 상기 방사선은 임의의 파장일 수 있고, 일반 세포에 해를 끼치지 않지만, 항-PcrV 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포가 사멸되는 온도까지 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
약학 조성물
항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체), 상기 항체를 인코딩하는 핵산, 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 핵산 또는 본원에 기재된 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 조성물(예: 또한 여기서 조성물로 지칭되는 약학 조성물)이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
항-PcrV 항체의 적합한 제형은 원하는 정도의 순도를 갖는 항-PcrV 항체를 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 수득된다(Remington's Pharmaceutical Sciences 16판, Osol, A. Ed. (1980)), 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산과 메티오닌을 포함한 항산화제;방부제(예: 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸);저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린과 같은 단백질; 올리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신과같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 포도당, 만노오스 또는 덱스트린을 포함한 기타 탄수화물; EDTA 와 같은 킬레이트제; 슈크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온; 금속 착물(예: Zn-단백질 착물); 및/또는 TWEENTM, PLURONICSTM, 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다. 예시적인 제형은 WO98/56418에 기재되어 있으며, 이는 본 명세서에 참고로 명시적으로 포함된다. 피하투여에 적합한 동결건조 제형은 WO97/04801에 기재되어 있다. 이러한 동결건조된 제형은 고단백질 농도로 적합한 희석제로 재구성될 수 있고 재구성된 제형은 본원에서 치료될 개체에게 피하 투여될 수 있다. 리포펙틴 또는 리포솜을 사용하여 본 출원의 항-PcrV 항체를 세포에 전달할 수 있다.
본원의 제형은 또한 치료되는 특정 적응증에 필요한 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체) 이외에 하나 이상의 활성 화합물을 함유할 수 있으며, 바람직하게는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 보완적인 활동이 있는 것이다. 예를 들어, 항-PcrV 항체 외에 항종양제, 성장억제제, 세포독성제, 또는 화학요법제를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
이러한 다른 제제의 유효량은 상기 제형에 존재하는 항-PcrV 항체의 양, 질병 또는 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 기타 인자에 따라 달라진다. 이들은 일반적으로 본 명세서에 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 또는 지금까지 사용된 투여량의 약 1 내지 99%로 사용된다.
항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체)는 또한 콜로이드성 약물 전달 시스템(예: 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼에서 예를들어, 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해, 예를 들어 히드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐에 의해 제조된 마이크로캡슐 내에 각각 갇힐 수 있다. 서방성 제제를 조제할 수 있다.
항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체)의 서방성 제제가 제조될 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항체(또는 이의 단편)를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락타이드(미국 특허 제 3,773,919), L-글루탐산과 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, LUPRON DEPOTTM(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사 가능한 미소구체)와 같은 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 및 폴리-D(-)-3-하이드록시부티르산과 같다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 젖산-글리콜산과 같은 중합체는 100일 이상 동안 분자를 방출할 수 있지만, 특정 하이드로겔은 더 짧은 기간 동안 단백질을 방출한다. 캡슐화된 항체가 체내에 장기간 남아 있으면 37℃에서 습기에 노출되어 변성되거나 응집되어 생물학적 활성이 손실되고 면역원성의 변화가 발생할 수 있다. 관련된 메커니즘에 따른 항-PcrV 항체의 안정화를 위한 합리적인 전략이 고안될 수 있다. 예를 들어, 응집 메커니즘이 티오-디설파이드 교환을 통한 분자간 S-S 결합 형성인 경우, 설프히드릴 잔기를 변형하고, 산성 용액으로부터 동결건조하고, 수분 함량을 조절하고, 적절한 첨가제를 사용하고, 특정 폴리머 매트릭스 조성을 개발함으로써 안정화가 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)는 시트레이트, NaCl, 아세테이트, 숙시네이트, 글리신, 폴리소르베이트 80(Tween 80), 또는 전술한 것의 임의의 조합을 포함하는 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 약 100mM 내지 약 150mM 글리신을 포함하는 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 약 50mM 내지 약 100mM NaCl을 포함하는 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 약 10mM 내지 약 50mM 아세테이트를 포함하는 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 약 10mM 내지 약 50mM 숙시네이트를 포함하는 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 약 0.005% 내지 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하는 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 pH가 약 5.1 내지 5.6인 버퍼에서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 10mM 시트레이트, 100mM NaCl, 100mM 글리신, 및 0.01% 폴리소르베이트 80을 포함하는 버퍼에서 제제화되며, 여기서 제제는 pH 5.5이다.
생체 내 투여에 사용되는 제제는 멸균되어야 한다. 이것은 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
항PcrV 항체를 이용한 치료 또는 예방 방법
특정 측면에서, 본원에 기재된 임의의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 슈도모나스 감염을 치료하는 방법은 슈도모나스 감염과 관련된 질병 및/또는 상태에 대한 치료 또는 예방 효과를 추가로 제공한다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 항-PcrV 항체 중 임의의 것을 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 예방하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 항-PcrV 항체 중 어느 하나에 따른 항-PcrV 항체의 용도, 또는 질병 또는 상태를 치료하기 위한 의약의 제조에서 상기 기재된 약학 조성물 중 어느 하나에 따른 항-PcrV 항체를 포함하는 약학 조성물.
슈도모나스 감염과 관련된 질병 및/또는 상태에는 열, 오한, 피로, 근육 및 관절 통증, 관절 부기, 두통, 설사, 피부 발진, 상처의 고름, 균혈증, 급성 폐렴, 복강내 감염이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 추가의 예시적인 질병에는 다음이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다: 호흡기 감염, 균혈증, 패혈성 쇼크, 화농성 관절염, 장염, 피부 및 연조직 감염(화상 감염 등), 요로 감염, 장 감염, 궤양성 각막염, 만성 화농성 중이염, 유양돌기염, 부비동염, 및 심내막염. 일부 실시양태에서, 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법은 슈도모나스 감염으로 인한 사망률을 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 내의 선형 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PcrV는 슈도모나스 PcrV 내의 비선형 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열 번호: 71에 따른 슈도모나스 PCrV 의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202의 군으로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 잔기 중 하나 이상을 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함한다; 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9-14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32-33 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9-14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32-33 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9-14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32-33 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호: 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호: 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 다음을 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH , 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다: 다음을 포함하는 VH , 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 를 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 48의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며 상기 항체는 하기를 포함한다:다음을 포함하는 VH: 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 49의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가지는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가지는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다:서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL . 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL .
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 50의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 66의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 51의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 67의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 개체에서 슈도모나스 감염을 예방한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 52의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 53의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 다음을 포함하는 항체와 경쟁한다; 다음을 포함하는 VH, 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 54의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 55의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 67의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 55의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 67의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 57의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 68의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 58의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 69의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 59의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 60의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 61의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 62의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 67의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 63의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항-PcrV 항체는, 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 64의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 67의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁한다: 다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 항 PcrV 항체는 하기를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다:다음을 포함하는 VH, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 다음을 포함하는 VL, 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3.
일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PcrV 항체는, 여기서 상기 항-PcrV 항체는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL 을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다: 다음을 포함하는 VH: 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 5개 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 다음을 포함하는 VL :서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 5개의 아미노산 치환들을 포함하는 그의 변이체. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 62의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 그의 변이체; 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 70의 아미노산 서열과 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 본원에 기재된 항-PcrV 항체는 슈도모나스 PcrV 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 여기서 상기 에피토프는 서열번호 71에 따른, 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202 군으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 잔기 중 어느 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 항-PcrV 항체는 서열번호 71에 따른, 슈도모나스 PcrV의 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202 군으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 잔기 중 어느 하나에 결합하는 항체와 경쟁한다.
본원에 기재된 임의의 치료 또는 예방 방법에 따른 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 항체 헤비체인 불변 영역 및 항체 라이트체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항-PcrV 항체는 IgG1 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG2 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG3 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 IgG4 헤비체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG는 인간 IgG이다. 일부 실시양태에서, 헤비체인 불변 영역은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 헤비체인 불변 영역은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV는 람다 라이트체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 카파 라이트체인 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 라이트체인 불변 영역은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체는 항체 헤비체인 가변 도메인 및 항체 라이트체인 가변 도메인을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 치료 또는 예방 방법에 따른 일부 실시양태에서, 상기 방법은 슈도모나스 감염과 관련된 질환 및/또는 상태에 대한 치료 또는 예방 효과를 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체에서 슈도모나스 감염을 예방한다.
일부 실시양태에서, 상기 개체는 포유동물(예를 들어, 인간, 인간이 아닌 영장류, 래트, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 등)이다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 개체는 임상 환자, 임상 시험 지원자, 실험 동물 등이다. 일부 실시양태에서, 개체는 약 60세 미만(예를 들어, 약 50, 40, 30, 25, 20, 15, 또는 10세 중 임의의 것 미만 포함)이다. 일부 실시양태에서, 개체는 약 60세 초과(예를 들어, 약 70, 80, 90, 또는 100세 중 임의의 것 초과 포함)이다.
일부 실시양태에서, 개체는 녹농균 감염과 관련된 하나 이상의 위험 인자를 갖는다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 개체는 피부 점액층을 노출시키거나 파열시켰다. 일부 실시양태에서, 개체는 하나 이상의 화상 상처를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 하나 이상의 수술 상처를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 피부 질환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개인은 기계적 인공호흡기 또는 카테터와 같으나 이에 제한되지 않는 이물질과 함께 삽입된다. 일부 실시양태에서, 개체는 HIV 감염, AIDS 및/또는 호중구 결핍을 포함하나 이에 제한되지 않는, 면역결핍 질환으로 진단되거나 유전적으로 경향이 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 하나 이상의 형태의 화학요법을 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 하나 이상의 형태의 글루코코르티코이드 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 하나 이상의 형태의 화학요법을 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 암, 당뇨병 및/또는 만성 구조적 폐 질환(예: 낭포성 섬유증 또는 COPD)으로 진단되거나 유전적으로 경향이 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 소화 시스템 및/또는 다른 기관에서 식물상 불균형으로 진단되거나 유전적으로 경향이 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 본원에 기재된 하나 이상의 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 위험 인자를 갖는다.
일부 실시양태에서 본 출원은 항-PcrV 항체(예를 들어, 본원에 기재된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나, 예를들어, 단리된 항-PcrV 항체)를 개체의 병원체에 의해 감염된 세포에 투여하고, 상기 방법은 개체에게 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본원에 기재된 방법 중 어느 하나에 따른 일부 실시양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제 중 적어도 하나는 항생제이다. 일부 실시양태에서, 항생제는 페니실린, 세팔로스포린, 카르바페넴, 플루오로퀴놀론, 아미노글리코시드, 모노박탐, 폴리믹신, β-락타마제 억제제를 함유하는 항생제 조합, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 항생제는 세페핌, 세프타지딤, 세피롬, 이미페넴, 메로페넴, 티카르실린, 피페라실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 아즈트레오남, 토브라마이신, 겐타마이신, 아미카신, 시프로플록사신, 레보플록사존, 세포페라존-설박탐, 피페라실린-타조박탐, 포스포마이신 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 항생제는 이미페넴, 토브라마이신, 시프로플록사신, 메로페넴 또는 아즈트레오남 중 하나 이상이다. 일부 실시양태에서, 항생제는 젠타마이신, 암피실린 또는 카나마이신 중 하나 이상이다.
PcrV 발현 및 이들 질환의 임상적 묘사를 나타내는 감염원(infectious agents)에 대한 많은 진단 방법이 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법에는 예를 들어 면역조직화학, PCR 및 형광 인 시투 하이브리다이제이션(FISH)가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 상기 출원의 항-PcrV 항체(예를 들어, 전장 항-PcrV 항체) 및/또는 조성물은 PcrV-발현 병원체와 관련된 질병 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위해 제2, 제3 또는 제4 제제(예를 들어, 항생제 포함)와 조합하여 투여된다.
항-PCRV 항체의 투여량 및 투여 방법
개인(예: 인간)에게 투여되는 항-PCRV 항체(예: 단리된 항-PCRV 항체) 조성물의 용량은 특정 조성물, 투여 방식 및 치료되는 질병의 유형에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물(예: 단리된 항-PCRV 항체를 포함하는 조성물)의 양은 슈도모나스 감염의 치료 또는 예방에서 객관적 반응(예: 부분 반응 또는 완전 반응)을 초래하는데 효과적이다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체 조성물의 양은 개체에서 완전한 반응을 일으키기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 항-PcrV 항체 조성물의 양은 개체에서 부분 반응을 일으키기에 충분하다.
일부 실시양태에서, 투여되는 항-PcrV 항체 조성물의 양(예를 들어, 단독으로 투여되는 경우)은 항-PCRV 항체 조성물로 치료된 개체 집단 중 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 5%, 50%, 55%, 60%, 64%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 중 어느 이상의 항-PCRV 항체 조성물로 치료된 개체 집단 중 전체 반응률을 생성하기에 충분하다. 본원에 기재된 방법에 의한 치료 또는 예방에 대한 개인의 반응은 예를 들어 그람 염색 또는 기타 표현형 시험과 같은 방법에 의한 슈도모나스의 검출에 기초하여 결정될 수 있다. 본원에 기재된 방법들에 의한 치료 또는 예방에 대한 개인의 반응은 예를 들어 그람 염색 또는 기타 표현형 시험과 같은 방법에 의한 슈도모나스의 검출에 기초하여 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물(예: 단리된 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물)의 양은 개체의 무진행 생존을 연장하기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양은 개체의 전체 생존을 연장하기에 충분하다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양(예를 들어 함께 투여되는 경우)은 항-PCrV 항체 조성물로 치료된 개체의 집단 중에서 약 50%, 60%, 70%, 또는 77% 초과의 임상적 이익을 생성하기에 충분하다.
일부 실시양태에서, 조성물(예: 단리된 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물)의 양은 단독으로 또는 제2, 제3 및/또는 제4 작용제와 조합하여, 치료 전 동일한 피험자의 해당 장기 부담과 비교하거나 치료를 받지 않은 다른 피험자의 해당 활동과 비교하여 슈도모나스 장기 부담의 수를 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 중 어느것으로 감소시키기에 충분한 양이다. 정제된 효소를 사용한 시험관 내 분석, 세포 기반 분석, 동물 모델 또는 인간 테스트와 같은 표준 방법을 사용하여 이러한 효과의 크기를 측정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)의 양은 독성 효과를 유도하는 수준 미만(즉, 임상적으로 허용가능한 독성 수준 이상의 효과)이거나 또는 조성물이 개체에게 투여될 때 잠재적인 부작용이 조절되거나 용인될 수 있는 수준이다.
일부 실시양태에서, 조성물의 양은 동일한 투여 요법 후 조성물의 최대 허용 용량(MTD)에 가깝다. 일부 실시양태에서, 조성물의 양은 MTD의 약 80%, 90%, 95%, 또는 98% 초과이다.
일부 실시양태에서, 조성물 중 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)의 양은 약 0.001㎍ 내지 약 1000㎍ 범위에 포함된다.
일부 실시양태에서, 조성물 또는 방법은 하나 이상의 항생제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중 항생제(이미페넴, 토브라마이신, 시프로플록사신, 메로페넴, 아즈트레오남, 티카르실린, 피페라실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 젠타마이신 또는 아미카신)의 양은 약 0.001 ㎍ 내지 약 1000 ㎍의 범위에 포함된다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 조성물 중 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)의 유효량은 총 체중의 약 0.1㎍/kg 내지 약 100mg/kg의 범위에 있다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 조성물 중 항생제(예: 이미페넴, 토브라마이신, 시프로플록사신, 메로페넴, 아즈트레오남, 티카르실린, 피페라실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 젠타마이신 또는 아미카신)의 유효량은 총 체중의 약 0.1㎍/kg 내지 약 100mg/kg의 범위에 있다.
항-PcrV 항체 조성물은 다양한 경로를 통해 개체(예: 인간)에게 투여될 수 있으며, 예를 들어, 정맥내, 동맥내, 복강내, 폐내, 경구, 흡입, 방광내, 근육내, 기관내, 피하, 안내, 척추강내, 경점막 및 경피를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물의 지속적 연속 방출 제제가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 정맥내 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 문맥내 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 동맥내 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 복강내 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 간내 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 간 동맥 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 투여는 제1 질환 부위에서 원위(distal)의 주사 부위에 대한 것이다.
제조품 및 키트
본 출원의 일부 실시양태에서, 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하거나 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)를 PcrV를 발현하는 병원체에 의해 부착된 세포에 전달하는데 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기에는 예를 들어 병, 바이알, 주사기 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일반적으로, 용기는 본원에 기재된 질병 또는 장애를 치료하는 데 효과적인 조성물을 보유하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 본 출원의 항-PcrV 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 상기 조성물이 특정 상태를 치료하는 데 사용됨을 나타낸다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 환자에게 항-PcrV 항체 조성물을 투여하기 위한 지침을 추가로 포함할 것이다. 본원에 기재된 조합 요법을 포함하는 제조 물품 및 키트가 또한 고려된다.
패키지 삽입물은 그러한 치료 제품의 사용에 관한 적응증(indications), 사용법, 투여량, 투여, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 포함하는 치료 제품의 상업적 패키지에 관례적으로 포함된 설명서를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 패키지 삽입물은 조성물이 박테리아 감염을 치료하기 위해 사용됨을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 패키지 삽입물은 조성물이 슈도모나스 감염을 치료하기 위해 사용된다는 것을 나타낸다.
추가로, 제조 물품은 주사용 정균수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액과 같은 약학적으로 허용가능한 버퍼를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이것은 다른 버퍼, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하여 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 재료를 추가로 포함할 수 있다.
다양한 목적, 예를들어 개체의 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하거나, 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)를 PcrV를 발현하는 병원체에 의해 부착된 세포에 전달하는 데 유용한 키트가 또한 임의로 제조 물품과 조합하여 제공된다. 본 출원의 키트는 항-PcrV 항체 조성물(또는 단위 투여 형태 및/또는 제조 물품)을 포함하는 하나 이상의 용기를 포함하고, 일부 실시양태에서, 추가로 다른 제제(예: 본원에 기재된 제제) 및/또는 여기에 설명된 방법 중 하나에 따라 사용을 위한 지침을 포함한다. 키트는 치료에 적합한 개체의 선택에 대한 설명을 추가로 포함할 수 있다. 출원의 키트에 제공된 지침은 일반적으로 라벨 또는 패키지 삽입물(예: 키트에 포함된 종이 시트)상에 작성된 지침이나, 기계 판독 가능 지침(예: 자기 또는 광 저장 디스크에 포함된 지침)도 허용된다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 키트는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 a) 본원에 기재된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나를 포함하는 조성물, 및 b) 유효량의 하나 이상의 다른 제제, 여기서 다른 제제는 항-PcrV 항체의 효과(예를 들어, 치료 효과, 검출 효과)를 향상시킨다. 일부 실시양태에서, 키트는 a) 본원에 기재된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나를 포함하는 조성물, 및 b) 개체에서 슈도모나스 감염을 치료하기 위해 개체에게 항-PcrV 항체 조성물을 투여하기 위한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 a) 본원에 기재된 항-PcrV 항체 중 임의의 하나를 포함하는 조성물, b) 유효량의 적어도 하나의 다른 제제를 포함하며, 여기서 다른 제제는 항-PcrV 항체의 효과(예를 들어, 치료 효과, 검출 효과 )를 향상시키고 c) 개체의 슈도모나스 감염을 치료하는 데 유용한 항-PcrV 항체 조성물 및 기타 제제(들)를 개체에게 투여하기 위한 지침을 포함한다. 항-PcrV 항체 및 기타 제제(들)는 별도의 용기 또는 단일 용기에 존재할 수 있다. 예를 들어, 키트는 하나의 별개의 조성물 또는 둘 이상의 조성물을 포함할 수 있으며, 여기서 하나의 조성물은 항-PcrV 항체를 포함하고 다른 조성물은 또 다른 제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 키트는 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)를 코딩하는 핵산(또는 핵산 세트)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 a) 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산(또는 핵산 세트), 및 b) 핵산(또는 핵산 세트)을 발현하기 위한 숙주 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 a) 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산 (또는 핵산 세트), 및 b) i) 숙주 세포에서 항-PcrV 항체를 발현시키는 것, ii) 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물의 제조, 및 iii) 개체의 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하기 위해 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하기 위한 지침을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 a) 항-PcrV 항체를 코딩하는 핵산(또는 핵산 세트), b) 핵산(또는 핵산 세트)을 발현하기 위한 숙주 세포, 및 c) i) 항-PcrV 항체를 발현시키는 것, ii) 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 제조하는 것, 및 iii) 개체에서 슈도모나스 감염을 치료 또는 예방하기 위해 항-PcrV 항체를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 것을 위한 지침을 포함한다.
상기 출원의 키트는 적절한 포장에 있다. 적합한 포장은 바이알, 병(bottles), 병(jars), 유연성 포장(예: 밀봉된 마일러(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 키트는 버퍼 및 해석상의 정보와 같은 추가 구성 요소들을 선택적으로 제공할 수 있다. 따라서, 본 출원은 또한 바이알(예를 들어, 밀봉된 바이알), 병(bottles), 병(jars), 유연성 포장 등을 포함하는 제조 물품을 제공한다.
항-PcrV 항체 조성물의 사용과 관련된 지침은 일반적으로 의도된 치료를 위한 투여량, 투여 일정 및 투여 경로에 대한 정보를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지(예: 다중 용량 패키지) 또는 하위 단위 용량일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 항-PcrV 항체(예: 전장 항-PcrV 항체)의 충분한 용량을 함유하여 연장된 기간, 예를 들어 1주일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3개월, 4개월, 5개월, 7개월, 8개월, 9개월, 또는 그 이상 동안 개체의 효과적인 치료를 제공하는 키트가 제공될 수 있다. 키트는 또한 항-PcrV 항체 및 약학 조성물의 다중 단위 용량 및 약국, 예를 들어 병원 약국 및 조제 약국에서 보관 및 사용하기에 충분한 양으로 포장된 사용을 위한 지침들을 포함할 수 있다.
당업자는 본 출원의 범위 및 사상 내에서 여러 실시예가 가능함을 인식할 것이다. 본 출원은 이제 다음의 비제한적 실시예를 참조하여 더욱 상세하게 설명될 것이다. 다음 실시예는 출원을 추가로 설명하지만, 물론 그 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예들
실시예 1: 재조합 슈도모나스 PcrV의 생성 및 항-PcrV scFv 항체의 선택
재조합 슈도모나스 PcrV의 생성
PcrV(PAO1)의 전장 서열을 합성하고(Generay, Shanghai) 제한 효소 인식 부위 NdeI 및 BamHI를 사용하여 발현 벡터 pET에 서브클로닝하였다. His-tag 또는 기타 일반적으로 사용되는 태그들이 PcrV를 태그하기 위하여 사용되었다. 발현 벡터 pET-6his-PcrV, pET-6his-Avi-PcrV를 생성하였다. 이 구조체에서 "his"는 His-태그를 나타내고 "Avi"는 Avidin 태그를 나타낸다. pET-6his-PcrV, pET-6His-Avi-PcrV를 포함하는 재조합 PcrV의 발현 및 정제는 제조사의 프로토콜에 따라 수행하였다. 요약하면, E. Coli 세포를 발현 벡터로 형질전환시키고, 상기 세포를 IPTG로 유도하고 25℃, 220rpm에서 밤새 배양하였다. 이어서, E. Coli 세포를 초음파처리하고, 세포 파편을 펠렛화하여 제거하고, 단백질을 원심분리에 의해 분리하였다. 이어서, his-태그를 발현하는 단백질을 제조사의 프로토콜에 따라 Ni 세파로스 정제를 사용하여 정제하였다. 특히, Qiagen Ni-NTA 슈퍼플로우 카트리지는 고정 금속 친화성 크로마토그래피(IMAC) 분석에 사용되었다. 카트리지는 먼저 150cm/h의 유속으로 버퍼 A1(50mM Na3PO4, 0.15M NaCl, pH 7.2)으로 평형을 이루었다. 배양 배지의 상층액의 pH를 7.2로 조정하고 150cm/h의 실온에서 카트리지를 통해 흘렸다. 다음으로 버퍼 A1(카트리지 부피의 6배)을 사용하여 150cm/h에서 카트리지를 평형화하였다. 카트리지 부피의 10배인 50mM PB 용액(0.15M NaCl 및 0.2M 이미다졸, pH 7.2)을 사용하여 카트리지를 세척하고 용출액을 수집했습하였다.
비오틴화된 PCrV 항원의 생성
비오틴 리가제 B0101A(GENECOPOEIATM)를 사용한 6His-Avi-PcrV의 비오틴화를 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다. 간단히 말해서, 버퍼 A\B 및 비오틴 리가제를 6His-Avi-PcrV에 첨가한 후 30℃에서 1시간 동안 인큐베이션했하였다. 비오틴화된 PcrV는 이후에 Bhavi-PcrV로 지칭된다. 비오틴화 효율은 ELISA를 사용하여 측정하였다. 간단히 말해서, Bhavi-PcrV는 마그네틱 비드(Dynabeads™ MyOne™ Streptavidin T1)와 함께 인큐베이션하여 제거되었고, 상청액 중 6His-Avi-PcrV의 농도는 알려진 농도의 6His-Avi-PcrV를 표준 물질로 사용하여 ELISA에 의해 정량화되었다. 비오틴화 효율은 90%로 결정되었다.
항-PcrV scFv 항체의 선택
효모 scFv 항체 디스플레이 라이브러리의 생성: 2000개의 인간 혈액 샘플로부터 수집된 RNA를 cDNA로 역전사하고, VH 및 VK 특이적 프라이머를 사용하여 VH 및 VK 단편을 증폭시켰다. 겔 추출 및 정제 시 링커를 통해 VH와 VK를 연결하여 scFv를 생성했하였다. scFv를 효모 디스플레이 플라스미드 PYD1에 클로닝한 다음, 효모에 전기천공하여 효모 scFv 항체 디스플레이 라이브러리를 생성하였다.
PcrV 결합에 의해 결정된 항-PcrV scFv 항체의 선택:
PcrV를 인식하는 scFv를 효모 디스플레이 라이브러리로부터 분리하였다. 간단히 말해서, 자기-활성화 세포 분류(MACS)를 사용하여 항-PcrV scFv 항체를 발현하는 세포를 강화하였다. 제조업체의 프로토콜에 따라 Bhavi-PcrV를 자기 비드(Dynabeads™ MyOne™ 스트렙타비딘 T1)와 밤새 혼합하여 바이오틴화된 PcrV를 자기 비드에 코팅하였다. 그런 다음 scFv 항체 효모 라이브러리를 PcrV-인식 항체를 나타내는 효모를 강화하기 위해 PcrV 코팅된 비드와 혼합하고, 반면, 비-결합제는 세척 단계에서 세척된다. 이어서, 수집된 효모 세포를 PcrV 단백질로 표지하고 FACS로 분류하여 PcrV에 대한 높은 친화도를 갖는 항체를 나타내는 효모를 선택하였다. FACS 매개 선택은 2-3 주기로 반복되었다. 상기 선택된 효모 라이브러리 세포를 한천에 플레이팅하고 단일 콜로니를 선택하고 추가 FAC 분석에 의해 분석하였다. PcrV에 양성 결합을 나타내는 효모 클론으로부터, 각 scFV 유전자를 원핵생물 발현 벡터에 서브클로닝하고 6-his 태그와 융합시켰다. 그런 다음 His-표지된 scFv를 위에서 설명한대로, Ni 세파로오스 정제를 사용하여 정제하였다. 선별 과정의 마지막에 양성 scFv 항체 패널을 얻었고, 녹농균에 의해 유발된 RBC 용해를 억제하는 능력에 대한 기능적 테스트를 거쳤다.
RBC 용해 억제에 의해 결정된 항-PcrV scFv 후보의 분석
단일클론 scFv 항체를 선택하고 RBC 용해 분석에 의해 생물학적 활성에 대해 평가하였다. 간단히 말해서, 적혈구(RBC)는 원심분리에 의해 신선한 전 인간 또는 토끼 혈액으로부터 제조되었고, EDTA로 보충되었으며 다중 인산염-완충 식염수(PBS) 세척으로 세척되었다. 둘베코의 변형 이글 배지(DMEM)와 10% 소 태아 혈청(FBS)(Gibco)에서 세척된 RBC(최종 2.5%[vol/vol]) 및 PBS에 희석된 정제된 항-PcrV 항체를 둥근 바닥의 웰플레이트에 결합하였다. 균주 57/66(O6) 녹농균을 2x YT 배지(Oxford)에서 중간 로그 단계로 성장시키고, 원심분리에 의해 수확하고, 600 nm(OD600)에서 0.15의 광학 밀도로 DMEM-소 태아 혈청(FBS)에 재현탁하였다. 10 마이크로리터의 박테리아 현탁액을 RBC-항체 혼합물에 첨가하고, 교반에 의해 혼합하고, 37℃ 및 5% CO2에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 간단히 원심분리하여(1000rpm, 1분) 손상되지 않은 RBC를 펠렛화하고, 상청액을 평평한 바닥 96웰 플레이트로 옮기고, OD405를 측정하여 임의의 용해를 검출했으며, 이로부터 용해 억제의 상대적인 양은 다음과 같이 계산되고 그려진다. 항체에 대한 IC50 값도 결정되었다.
실시예 2: 전장 인간 항-PcrV 항체의 생성 및 특성화
전장 항-PcrV 항체의 생성
가장 강력한 scFv 항체는 인간 IgG1 헤비체인 불변 도메인 및 인간 카파 라이트체인 불변 도메인을 갖는 인간 IgG1 항체 분자로서 재포맷되었다. VL 및 VH는 원핵생물 발현 벡터로부터 증폭되었고 진핵생물 발현 벡터 pTT5-L(카파 불변 도메인 함유) 및 pTT5-H1(IgG1 헤비체인 불변 도메인 함유)에 도입되었다. 헤비체인 및 라이트체인을 발현하는 플라스미드를 추출하고 293F 세포를 형질감염시키는 데 사용하였다. 세포를 37℃, 8% CO2 및 120rpm에서 5일 동안 배양한 후, 배양 배지 내의 항체를 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
간단히 말해서, 단백질 A 컬럼은 먼저 50mM PBS 및 0.15M NaCl(pH7.2)을 함유하는 PBS 버퍼로 150cm/h의 유속 및 컬럼 부피의 6배인 부피로 평형화되었다. 배양 배지의 상등액(pH는 7.2로 조정됨)을 150cm/h의 속도로 컬럼에 통과시켰다. 추가 평형에서, 상기 컬럼을 50mM 시트르산나트륨(pH3.5)을 사용하여 세척하고 항-PcrV 항체를 함유하는 용리액을 수집하였다. 전장 항체는 실시예 1의 방법 및 하기 기재된 방법에 따라 RBC 용해(실시예 1 참조), A549/U937 세포 용해, 뿐만 아니라 급성 폐렴 마우스 모델에서 생존 개선을 억제하는 능력에 대해 기능적으로 특성화되었다.
A549 또는 U937 용해 억제에 의해 결정된 항-PcrV 후보 분석
녹농균에 의해 유발된 세포독성 및 세포 용해를 억제하는 능력을 분석하기 위해, 후보 항-PcrV 항체를 DMEM 플러스 10% 소 태아 혈청의 흰색 96웰 플레이트(Nunc Nunclon Delta)에 접종한 인간 기관지 상피 세포주 A549 또는 인간 조직구 림프종 세포주 U937에 첨가하였다. 로그 단계 균주 PA103(O11) 녹농균을 감염 다중도(MOI) 10으로 추가하고 37℃ 및 5% CO2에서 2시간 동안 배양한 다음 실온에서 20분 평형화하였다. 용해된 세포에서 방출된 젖산 탈수소효소(LDH)를 CytoTox-ONE 키트(Promega)를 사용하여 정량화하여, 막 무결성을 분석하였다. 이에 따라 용해 억제의 상대적인 양을 플롯팅하였다. 항체에 대한 IC50 값이 또한 결정되었다.
마우스 급성 폐렴 모델에서 결정된 항-PcrV 후보 분석
후보 항-PcrV 항체를 마우스 급성 폐렴 모델에서 생존을 개선하는 능력에 대해 분석하였다. 예방 모델에서 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 감염 24시간 전에 후보 항체 또는 PBS를 복강 내(ip) 1, 5, 10 또는 25 mg/kg 마우스 체중의 용량으로 투여하였다. 이전에 설명한 대로(DiGiandomenico 외., 2007, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104:4624-4629) 수행된 급성 폐렴 모델을 생성하기 위해, BALB/c 마우스는 치사량 또는 치사량의 두 배(8×105 -1.6×106 CFU; 1*또는 2* LD90)에서 40μl 접종물에 현탁된 녹농균(PA103 균주)로 접종되었다. 마우스 생존은 감염 후 최대 7일 동안 기록되었다.
추가 최적화를 위한 리드 항체로서 13-42 mAb
생성된 전장 항체 중에서, RBC 용해, A549 또는 U937 세포 용해를 억제하는 능력, 뿐만 아니라 급성 폐렴 마우스 모델에서 생존을 개선하는 능력에 의해 결정된 바와 같이, 13-42 단일클론 항체가 주요 리드 항체로서 선택되었다.
실시예 3: 최적화된 전장 항-PcrV 항체의 생성 및 특성화
생성된 전장 항체 중에서 13-42가 추가 최적화를 위해 리드 부모 항체로 선택되었다. 특히, 13-42는 헤비체인(HC-CDR3)의 CDR3 영역에서 유리 시스테인 잔기 및 글리코실화 부위를 제거하고, 뿐만 아니라 HC-CDR1, HC-CDR2 및 LC-CDR3 의 11개 아미노산 잔기를 선택적으로 조작하여 인간 생식계열에 대한 상동성을 개선하도록 최적화되었. 13-42 유래된 항체를 최적화하기 위해 두 가지 방법론이 사용되었다.
첫 번째 방법에서 HC-CDR3의 두 시스테인을 인코딩하는 유전자 좌는 먼저 정지 코돈을 인코딩하여 최적화 템플릿을 생성하도록 돌연변이 되었다. 후속적으로, 종결 코돈을 인코딩하는 돌연변이된 유전자 좌(이전에 2개의 시스테인을 인코딩함)를 20개의 아미노산 중 임의의 것으로 무작위로 돌연변이시켰다.
동시에, HC-CDR3의 글리코실화 부위(즉, NSS)는 HC-CDR3의 임의의 NXS 서열에서 Asn(N) 또는 Ser(S)을 돌연변이시켜 제거되었고: CDR-H3의 나머지 아미노산 각각의 유전자좌는 무작위로 한 번에 하나씩 돌연변이되었다. 마지막으로, CDR-L3, CDR-H1 및 CDR-H2의 비인간 아미노산 서열을 돌연변이시켜 인간 서열에 대한 상동성을 개선하였다.
대안적인 계획에서, HC-CDR3에서 2개의 시스테인을 인코딩하는 유전자좌는 먼저 정지 코돈을 인코딩하도록 돌연변이되어 최적화 템플릿을 생성하였다. 후속적으로, 종결 코돈을 인코딩하는 돌연변이된 유전자좌(이전에 2개의 시스테인을 인코딩함)를 20개의 아미노산 중 임의의 것으로 무작위로 돌연변이시켰다. 동시에, CDR-H3의 시스테인에 의해 이전에 플랭킹된 모든 아미노산의 유전자좌는 동시에 무작위로 돌연변이되었다. 마지막으로, CDR-L3, CDR-H1 및 CDR-H2의 비인간 아미노산 서열을 돌연변이시켜 인간 서열에 대한 상동성을 개선하였다.
13-42의 scFv로 시작하여, CDR 영역에 돌연변이를 함유하는 파지 scFv 디스플레이 라이브러리를 상기 기재된 바와 같이 생성하였다. 높은 친화도와 낮은 해리율로 PcrV에 결합할 수 있는 변이체를 ELISA 또는 BLI를 사용하여 확인하고, RBC 용해 및 A549 세포 용해에 대한 억제에 대한 그들의 기능을 테스트하였다. 부모 13-42 scFv와 비교하여 필적하거나 개선된 생물학적 활성을 나타내는 13-42로부터 최적화된 scFv 항체를 사용하여 전장 항체를 생성하였다. 선별이 끝날 때 최적화된 전장 항체 패널을 얻었다.
최적화된 항체를 ELISA에 의해 분석된 바와 같이 PCrV 결합에 대해 테스트하였다. ELISA 실험을 위해, 합성 PcrV를 사용하여 96웰 플레이트의 웰을 코팅하였다. 다음 날 PBST로 세척하고, 200μL PBS-milk로 1시간 동안 차단하고, PBST로 다시 세척한 후, 상기 항체를 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였고, 플레이트를 0.1% TBST로 6회 세척한 후 100μL의 염소-항-인간 Fc 항체-AP(PBS 중 1:3000)를 각 웰에 첨가하고 1시간 동안 인큐베이션하였다. 0.1% TBST로 6회 세척한 후, 각 웰에 pNPP 50μL를 첨가하고 37℃에서 10-20분간 발색하였다. 신호는 410nm에서 마이크로플레이트 판독기로 판독되었다. ELISA 결과(OD410)를 분석하고 EC50 값을 표 5와 같이 계산하였다.
[표 5]
Figure pct00010
최적화된 항-PcrV mAb 클론 7B1, 7C1, 8C1, 6A10, 5B3, 3B12, 4A10, 2B1, 7B2, 3H10, 3G3, 3A11 및 3A9의 PcrV에 대한 결합 동역학 및 친화도가 또한 BLIV에 의해 테스트되었으며 또한 표 6에 나타냈다.
[표 6]
Figure pct00011
최적화된 전장 항체는 그리고나서 실시예 1 및 2에 기재된 방법에 따라 RBC 용해 및 A549 세포 용해를 억제하는 능력에 대해 기능적으로 특성화되었다.
최적화된 항-PcrV 항체는 녹농균으로 인한 RBC 및 A549 세포 용해를 억제함
최적화된 항-PcrV 항체에 의한 RBC 용해 억제
최적화된 항-PcrV mAb 클론 7B1, 7C1, 8C1, 6D10, 6A10, 5B3, 3B12, 4A10, 2B1, 7B2, 3H10, 3G3, 9B12, 3A9, 2D3, F57의 적혈구 용해를 억제하는 능력은 부모 13-42 mAb 및 참조 항체 V2L2-MD와 비교되었다. RBC 용해 억제 분석을 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다.
도 1A 및 1B 및 표 7에 나타낸 바와 같이, 13-42로부터 최적화된 모든 항체는 부모 13-42 mAb 및 V2L2-MD로서 RBC 용해를 억제하는데 있어서 더 우수하거나 필적하는 효능을 나타내었다.
[표 7]
Figure pct00012
최적화된 항-PcrV 항체에 의한 A549 세포 용해 억제
A549 세포 용해를 억제하는 최적화된 항-PcrV 7B1, 7C1, 8C1, 6D10, 6A10, 5B3, 3B12, 4A10, 2B1, 7B2, 3H10, 3G3, 3A11, 3A9의 능력은 또한 부모 13-42 mAb와 비교하여 평가되었다. A549 세포 용해 억제 분석을 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행하였다.
도 2A 및 2B 및 표 8에서 나타낸 바와 같이, 13-42로부터 최적화된 모든 항체는 부모 13-42 mAb로서 A549 용해를 억제하는데 더 우수하거나 필적하는 효능을 나타내었다.
[표 8]
Figure pct00013
실시예 4: 최적화된 항-PcrV 항체의 특이성 및 친화도 특성화
최적화된 항체 중에서, 7C1, 7B1, 8C1 및 6D10 항체는 PcrV 결합에서의 그들의 친화도 및 특이성에 대해 추가로 특성화되었다.
PCrV에 대한 최적화된 항체의 결합 친화도
최적화된 항-PcrV mAb 클론 7B1, 7C1, 8C1, 6D10 와 참조 항체 V2L2-MD 의 PcrV에 대한 결합에 대한 결합 상수(ka), 해리 상수(kd) 및 평형 해리 상수(kD)는 BIACORE(GE company)에서 테스트되었다. 최적화된 클론 7B1, 7C1, 8C1, 6D10(각각 8.47E-11M, 4.57E-11M, 3.16E-11M, 5.20E-11 M)에 대한 kD 값은 V2L2-MD 항체에 대한 kD 값과 유사한 것으로 결정되었다(4E-11 M). 또한 최적화된 항체 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10은 필적하는 ka 및 kd 값으로 나타낸 바와 같이, PcrV 결합에서 필적하는 연관 및 해리 동역학을 나타내었다(데이터는 나타내지 않음).
항-PcrV 항체의 특이성
최적화된 항-PcrV 항체의 특이성은 BV 입자 및 PcrV-음성 A549 세포에 대한 교차-반응성을 측정함으로써 특성화되었다.
BV 입자에 대한 교차 반응성: ELISA를 사용하여, 최적화된 항체 7C1, 7B1, 8C1, 6D10 및 참조 항체 V2L2-MD 및 Mab166을 이전에 설명된 방법에 따라 BV 입자에 대한 교차 반응성에 대해 테스트하였다(Hotzel I, 외 참조 , 2012, mAbs 4:6, 753-760). 도 3에 나타난 바와 같이, Mab166은 BV 입자에 대해 높은 수준의 비특이적 결합을 나타내었다. 대조적으로, 항체 7C1, 7B1, 8C1, 6D10은 V2L2-MD와 유사하고 Mab166보다 훨씬 낮은, 낮은 수준의 비특이적 결합을 나타냈다.
A549 세포에 대한 교차 반응성: FACS를 사용하여 부모 항체 13-42, 최적화된 항체 7C1, 7B1, 8C1, 6D10 및 V2L2-MD를 PcrV-음성 A549 세포에 대한 교차 반응성에 대해 테스트하였다. 도 4A-4E, 13-42 mAb 에 나타낸 바와 같이, 뿐만 아니라 최적화된 항체 7C1, 7B1, 8C1, 6D10은 모두 음성 대조군(항체 없음) 및 V2L2-MD와 유사하게 낮은 수준의 A549 결합을 나타내었고, 반면 A549 세포에 대한 GM-CSFR에 특이적인 양성 대조군 항체는 A549 세포에 대한 더 높은 수준의 결합을 나타냈다.
종합하면, 이들 결과는 최적화된 항체 7C1, 7B1, 8C1 및 6D10이 부모 항체 13-42 mAb 및 참조 항체 V2L2-MD와 유사하게 낮은 비특이적 결합을 나타내었음을 나타내었고, 다른 참조 항-PcrV 항체인, Mab166보다 훨씬 낮은 비특이적 결합을 나타내었다.
실시예 5: 최적화된 전장 항-PcrV 항체는 녹농균 균주를 광범위하게 중화시킨다.
최적화된 항-PcrV 항체가 광범위한 녹농균 균주를 중화할 수 있는지 여부를 조사하기 위해, 여러가지 임상적으로 관련된 녹농균 균주(O6, O11, O1, O16)에 의해 유발되는 RBC 및 A549 세포 용해를 억제하는 최적화된 항-PcrV 항체의 능력, 이들이 녹농균 감염의 임상 사례의 70% 를 나타내는 능력, 이 조사되었다.
최적화된 항-PcrV 항체에 의한 RBC 용해 억제
최적화된 항-PcrV mAb 클론 7C1, 8C1 및 7B1은 녹농균의 다양한 균주, 즉 균주 O1-52/66, O16-177/81, 및 O6-57/66에 의한 적혈구 용해를 억제하는 그들의 능력에 대하여 부모 13-42 mAb 및 참조 항체 V2L2-MD와 비교하여 추가로 분석되었다. RBC 용해 억제 분석을 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다.
도 5A-5C 및 표 9에서 나타낸 바와 같이, 최적화된 mAb 클론 7C1, 8C1 및 7B1은 참조 항체 V2L2-MD 또는 부모 13-42 mAb 보다 균주 O1-52/66, O16-177/81 및 O6-57/66에 의한 RBC 용해 억제에 있어서 더 나은 효능을 나타내었다.
[표 9]
Figure pct00014
최적화된 항-PcrV 항체에 의한 A549 세포 용해 억제
최적화된 항-PcrV mAb 클론 7C1, 8C1, 및 7B1은 부모 13-42 mAb와 비교하여 녹농균의 다양한 균주, 즉 균주 O6-57/66, O11-PA103, O1-52/66 및 O16-177/81 에 의한 A549 세포 용해를 억제하는 능력에 대해 분석되었습니다. A549 세포 용해 억제 분석을 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행하였다.
도 6A-6D 및 표 10에서, 최적화된 mAb 클론 7C1, 8C1 및 7B1은 부모 13-42 mAb와 비교하여 균주 O6-57/66, O11-PA103, O1-52/66 및 O16-177/81에 의한 A549 용해를 억제하는데 필적할만한 효능을 나타내었다.
[표 10]
Figure pct00015
최적화된 항체가 녹농균 균주를 광범위하게 중화할 수 있음을 추가로 설명하기 위해 다양한 형태의 PcrV 돌연변이체에 결합하는 이들 항체의 능력을 테스트하였다. 간단히 말해서, 유전자은행 데이터베이스에서 100개의 PcrV 서열을 무작위로 선택했하였다. 서열번호 71에 나타낸 야생형 서열과 대조적으로, 선택된 서열의 13%는 위치 225에서 R, G, 또는 K를 함유하였고(야생형 서열 서열번호 71의 S와 비교하여), 이것은 7B1의 에피토프 주변의 주요 돌연변이였다.
최적화된 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10 항체는 이러한 PcrV 돌연변이체(위치 225에 돌연변이 있음)에 결합하는데 있어 친화도 및 특이성을 특징으로 하며, 이러한 돌연변이체에도 강력하게 결합하는 것으로 밝혀졌다(데이터는 표시되지 않음). 이러한 발견은 최적화된 항-PcrV 항체가 다양한 형태의 PcrV 돌연변이를 발현할 수 있는, 광범위한 스펙트럼의 녹농균 균주를 중화할 수 있음을 추가로 설명한다.
실시예 6: 녹농균 감염에 대한 예방적 치료로서 최적화된 항-PcrV 항체
녹농균 감염에 대한 예방에 있어서 최적화된 항-PcrV 항체의 능력은 마우스 폐렴 모델, 복강내 감염 모델 및 면역저하된 마우스 폐렴 모델에서 생존 개선으로 입증되었다.
항- PcrV 항체에 의한 마우스 폐렴 모델의 생존 개선
마우스 폐렴 모델에서 생존을 개선하는 최적화된 항-PcrV 항체 7C1, 7B1 및 3G3의 능력은 이전에 기술된 HIV에 대한 광범위 중화 항체인 부모 13-42 mAb 및 HIV-10E8과 비교하여 평가되었으며(Huang J, 외, 2012, Nature 491:406), 음성 대조군으로 사용하였다. 예방 모델에서, 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 감염 24시간 전에, 1 또는 10mg/kg 마우스 체중의 투여량으로 항체를 복강내(i.p.) 투여하였다. 급성 폐렴을 유도하기 위해, BALB/c 마우스에 치사량(1*LD90) 또는 치사량의 두배(2*LD90)(8×105 ~ 1.6Х106 CFU)로 40μl 접종물에 부유한 녹농균(PA103 균주)를 비강내 접종하였다. 마우스 생존은 감염 후 최대 7일 동안 기록되었다. 결과는 Kaplan-Meier 생존 곡선으로 표시되었다.
도 7A 및 7B 에서 카플란-마이어 생존 곡선에 의해 도시된 바와 같이, P. aeruginosa 접종에서 1배 및 2배의 치사량(1*LD90 또는 2* LD90; 8Х105~ 1.6Х106 CFU)의 모든 항-PcrV 항체는 음성 대조군과 비교하여 유의한 생존 개선을 나타내었다(P<0.001). 또한, 최적화된 항체 7C1, 7B1은 부모 13-42 mAb보다 필적하거나 더 나은 생존 개선을 나타내었다(P<0.05). 생존의 차이는 로그 순위 테스트에 의해 계산되었다.
항- PcrV 항체를 투여한 마우스 폐렴 모델의 장기 부담
급성 폐렴 모델에 대한 장기 부담을 줄이는 데 있어 부모 항-PcrV 항체 13-42 mAb의 능력을 평가하고 참조 항체 V2L2-MD의 능력과 비교하였다. 급성 폐렴 모델에 대한 장기 부담을 줄이는 데 있어서 최적화된 항-PcrV 항체 클론 7B1, 7C1, 8C1 및 6D10의 능력을 추가로 평가하였다. HIV-10E8 은 음성 대조군으로 사용되었다.
예방 모델에서, 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 항체 또는 PBS를 감염 24시간 전에, 10 mg/kg 마우스 체중으로 복강내(i.p.) 투여하였다.급성 폐렴을 유도하기 위해, BALB/c 마우스에 치사량의 절반(0.5*LD90, 3x105 CFU)으로 40μl 접종물에 현탁된 녹농균(PA103 균주)을 비강내 접종하였다. 감염 24시간 후, 마우스를 안락사시키고 폐, 비장 및 신장을 적출하고, 균질화하고 희석한 후 한천에 플레이팅하여 각 장기 샘플에서 녹농균 부담을 나타내는 생존 가능한 박테리아 단위(CFU)를 측정하였다.
도 8A에 도시된 바와 같이, 13-42 mAb는 V2L2-MD와 비교하여, 마우스 폐렴 모델에서 폐에서 장기 부담을 줄이는 데 더 나은 효능을 보였고, 비장 및 신장에서 장기 부담을 줄이는 데 유사한 효능을 보였다.
도 8B에 도시된 바와 같이, 최적화된 항-PcrV 항체 클론 7B1, 7C1, 8C1, 및 6D10은 V2L2-MD와 비교하여 폐, 비장 및 신장의 장기 부담을 줄이는 데 필적할만한 효능을 보였고, 및 HIV-10E8과 비교하여 마우스 폐렴 모델에서 폐, 신장, 비장의 장기 부담을 줄이는 데 더 높은 효능을 나타내었다.
항- PcrV 항체를 이용한 마우스 복강내 감염 모델에서 생존 개선
마우스 복강내 감염 모델에서 생존을 개선하는 최적화된 항-PcrV 항체 7C1, 7B1 및 8C1의 능력을 부모 13-42 mAb와 비교하여 평가하였다. HIV-10E8은 음성 대조군으로 사용되었다. 마우스 복강내 감염 모델은 이전에 설명된 대로 생성되었 다(Warrener 외., 2014, Antimicrob. Agents Chemother., 58, 4384-4391 참조).
예방 모델에서, 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 감염 24시간 전에 5 또는 25mg/kg 마우스 체중의 복강내(i.p.) 주사로 항체를 투여하였다. 복강내 감염을 유도하기 위해, BALB/c 마우스에 3배 치사량(3*LD90 = 7×105 CFU)으로 300μl 접종물에 부유한 녹농균(P. aeruginosa)(O6-57/66 균주)을 복강내 접종하였다. 마우스 생존은 감염 후 최대 5일 동안 기록되었다.
도 9에 도시된 바와 같이, 녹농균 접종의 3배 치사량(3* LD90)에서, 모든 항-PcrV 항체는 25mg/kg 항체 용량(P<0.0001)에서 음성 대조군과 비교하여 유의한 생존 개선을 나타내었다. 또한, 최적화된 항체 7C1, 7B1은 5 mg/kg 항체 용량(P<0.05)에서 부모 13-42 mAb와 필적하거나 더 나은 생존 개선을 나타내었다. 생존의 차이는 로그 순위 테스트에 의해 계산되었다.
항- PcrV 항체에 의한 면역저하 마우스 폐렴 모델에서 생존 개선
면역결핍 마우스에서 급성 폐렴 모델에 대한 생존을 개선하는 최적화된 항-PcrV 항체 7C1, 7B1 및 8C1의 능력을 부모 13-42와 비교하여 평가하였다. HIV-10E8은 음성 대조군으로 사용되었다. 면역결핍 마우스 모델에서 급성 폐렴 모델은 이전에 설명한 대로 생성되었다(DiGiandomenico 외., 2014, Sci . Transl . Med ., 6: 262ra155).
예방 모델에서, 면역 억제를 달성하기 위해, 녹농균 감염 4일 및 1일 전에 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 150mg/kg의 사이클로포스파미드를 2회 투여하여 백혈구 수를 억제하였다. 그런 다음 항체를 감염 24시간 전에 3.2 내지 5mg/kg 마우스 체중의 용량으로 복강내(i.p.)로 투여하였다. 급성 폐렴을 유도하기 위해, BALB/c 마우스에 치사량(1*LD90 = 10 PFU)의 40μl 접종물에 현탁된 녹농균(P. aeruginosa)(O6-57/66 균주)을 비강내 접종하였다. 마우스 생존은 감염 후 최대 10일 동안 기록되었다.
도 10에 도시된 바와 같이, 녹농균 접종의 치사량(1*LD90)에서 모든 항-PcrV 항체는 음성 대조군과 비교하여 유의한 생존 개선을 나타내었다(P<0.05). 또한, 최적화된 항체 7C1은 부모 13-42 항체보다 더 나은 생존 개선을 나타내었고(P<0.05), 최적화된 항체 7B1, 8C1은 부모 13-42 항체보다 유사하거나 더 나은 보호를 나타내었다(P<0.05). 생존의 차이는 로그 순위 테스트에 의해 계산되었다.
종합하면, 이들 결과는 본원에 개시된 항-PcrV 항체가 면역결핍 마우스 급성 폐렴 모델에서 녹농균 감염을 예방적으로 중화시키기 위해 사용될 수 있음을 보여준다.
실시예 7: 녹농균 감염에 대한 치료제로 최적화된 항- PcrV 항체
녹농균 감염을 치료적으로 중화시키는 최적화된 항-PcrV 항체의 능력은 마우스 폐렴 모델에서 생존 개선으로 입증되었다.
최적화된 항- PcrV 항체에 의한 마우스 폐렴 모델에서 생존 개선
마우스 급성 폐렴 모델에 대한 생존을 개선하는 최적화된 항-PcrV 항체 7C1, 7B1, 8C1 및 6D10의 능력을 양성 대조군 V2L2-MD와 비교하여 평가하였다. HIV-10E8은 음성 대조군으로 사용되었다.
치료 모델에서, 급성 폐렴을 유도하기 위해, 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 치사량(1*LD90 = 8x105 CFU)의 40μl 접종물에 현탁된 녹농균(PA103 균주)을 비강내 접종하였다. 항체 또는 PBS는 감염 후 1시간에 1mg/kg 또는 10mg/kg 마우스 체중의 용량으로 정맥내(i.v.) 투여되었다. 마우스 생존은 감염 후 최대 6일 동안 기록되었다.
도 11A-11B에 도시된 바와 같이, 녹농균 접종의 치사량(1*LD90)에서, 모든 항-PcrV 항체는 음성 대조군과 비교하여 유의한 생존 개선을 나타내었다(p<0.05). 또한, 최적화된 항체 7C1, 7B1, 8C1 및 6D10은 V2L2-MD에 필적하는 생존 개선을 나타내었다. 생존의 차이는 로그 순위 테스트에 의해 계산되었다. 결과는 본원에 개시된 항-PcrV 항체가 녹농균 감염을 치료적으로 중화시키기 위해 사용될 수 있음을 보여준다.
실시예 8: 최적화된 항-PcrV 항체와 항생제를 이용한 녹농균 감염의 병용 치료
항- PcrV 항체와 항생제를 병용한 마우스 복강내 감염 모델에서 생존 개선
최적화된 항-PcrV 항체 7B1 또는 8C1이 마우스 복강내 감염 모델에서 생존을 개선하는 능력을 항생제 메로페넴, 토브라마이신, 시프로플록사신과 비교하여 평가하였고; 그리고 또한 7B1 또는 8C1과 항생제 중 하나의 조합 치료와 비교하여 평가하였다. HIV-10E8은 음성 대조군으로 사용되었다.
항-PcrV 테스트를 위한 예방 모델에서, 7-8주령 BALB/c 마우스(Vital River Laboratory)에 감염 24시간 전에 항체를 복강내 주사하거나 감염 1시간 후에 항생제를 주사하였다. 구체적으로, 상기 마우스에 최적화된 항-PcrV 항체 클론 7B1 또는 8C1(5mg/kg), 메로페넴(3mg/kg), 토브라마이신(10mg/kg), 시프로플록사신(30mg/kg), 또는 7B1 또는 8C1과 항생제들 중 하나의 조합을 투여하였다. 복강내 감염을 유도하기 위해, BALB/c 마우스에 치사량의 3배(3*LD90=7x105 CFU)로 300μl 접종물에 현탁된 녹농균(PA103 균주)을 복강내 접종하였다. 마우스 생존은 감염 후 최대 5일 동안 기록되었다.
도 12A에 도시된 바와 같이, 녹농균(PA103 염색) 접종물의 3* LD90의 치사량에서, 최적화된 항체 7B1(5mg/kg에서)은 항생제 메로페넴(3mg/kg에서)보다 더 좋거나 필적하는 생존 개선을 나타냈다. 7B1(5mg/kg)과 항생제 메로페넴(3mg/kg), 토브라마이신(10mg/kg) 또는 시프로플록사신(30mg/kg)의 조합은 항체 단독 치료 또는 각각의 항생제 단독 치료와 비교하여 향상된 생존 개선을 나타냈다.(p < 0.05). 도 1에 도시된 바와 같이. 도 12B에서, 8C1(5mg/kg)과 항생제 토브라마이신(10mg/kg) 또는 시프로플록사신(30mg/kg)의 조합도 항체 단독 치료 또는 각각의 항생제 치료에 비해 향상된 생존 개선을 나타냈다(p < 0.05). 이러한 결과는 녹농균을 중화하는데 항생제와 조합된 본원에 개시된 항-PcrV 항체를 사용하는 임상 가능성을 입증한다.
실시예 9: 최적화된 항- PcrV 항체의 약동학적 프로파일
부모 13-42 항-PcrV 항체 및 최적화된 클론의 생체내 약동학을 조사하기 위해, 래트에서 7C1, 7B1, 8C1 및 6D10 항체의 혈장 수준을 시간 경과에 따라 측정하였다.
래트의 약동학 프로필: 40마리의 건강한 성인 래트(약 0.2kg 무게)를 두 그룹으로 동등하게 나누었으며, 각 그룹은 비슷한 평균 무게를 기록하였다. 한 그룹에는 30mg/kg의 V2L2-MD, 7C1, 7B1, 8C1 또는 6D10을 정맥 주사하고 다른 그룹에는 3mg/kg의 V2L2-MD, 7C1, 7B1, 8C1 또는 6D10을 정맥 주사하였다. 주사 후 1시간에 채혈한 후, 주입 후 0시간, 0.5시간, 2시간, 8시간, 1일, 3일, 7일, 11일, 17일, 23일, 31일, 41일 및 52일에 채혈하였다. 원심분리 후, ELISA를 이용하여 항체 농도를 분석하기 위해 혈장을 사용하였다. ELISA 실험을 위해, 합성 PcrV를 사용하여 96웰 플레이트의 웰을 코팅하였다. 다음 날, PBST로 세척한 후, 200μL PBS-밀크로 1시간 동안 차단하고, PBST로 다시 세척한 후, 혈장을 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 0.1% TBST로 6회 세척한 후 100μL의 염소-항-인간 Fc 항체-AP(PBS 중 1:3000)를 각 웰에 첨가하고 1시간 동안 인큐베이션하였다. 0.1% TBST로 6회 세척한 후, 각 웰에 pNPP 50μL를 첨가하고 37℃에서 10~20분간 발색하였다. 신호는 410nm에서 마이크로플레이트 판독기로 판독되었다.
도 13A 및 13B에서 나타낸 바와 같이, 고 및 저 i.v. 투여량(3 mg/kg 또는 30 mg/kg)에서 7C1, 7B1, 8C1 또는 6D10의 반감기는, 참조 항체 V2L2-MD의 투여량과 비슷하거나 더 길었으며, 이는 상기 최적화된 항체가 참조 항체 V2L2-MD와 비교하여 다양한 투여량에서 더욱 안정적인 약동학적 프로파일을 표시함을 나타낸다.
실시예 10: 최적화된 항체에 의해 인식되는 에피토프
항-PcrV 항체에 의해 결합된 에피토프를 특성화하기 위해, 돌연변이를 PcrV 단백질에 도입하고, 최적화된 항체 7B1 mAb가 이러한 PcrV 돌연변이에 결합하는 능력을 ELISA에 의해 측정하였다.
항- PcrV 항체의 에피토프 매핑
디스커버리 스튜디오 소프트웨어를 사용하여, 7B1에 대한 PcrV의 예측된 결합 부위와 최적화된 항체를 확인하고, 결합 부위 내 및 결합 부위에 근접한 아미노산 잔기를 선택하고 알라닌 스캐닝을 실시하였다. 이어서, 이들 선택된 돌연변이를 보유하는 PcrV 단백질을 발현시켰다. 각각의 돌연변이된 PcrV 단백질에 대한 7B1-IgG1의 결합 친화도를 ELISA를 사용하여 분석하였다. 도 14A 내지 도 14D는 돌연변이된 PcrV에 대한 항체의 ELISA 결합 곡선을 나타낸 것으로, 돌연변이 위치는 서열번호 71에 따른 것이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, PcrV는 His-태그된 야생형 녹농균 PcrV(PcrV-6His)를 나타낸다. 야생형 PcrV의 아미노산 서열의 다양한 위치에서의 돌연변이는 상기 기재된 바와 같이 알라닌 스캐닝을 사용하여 생성되었다. 도 14A-14D에 도시된 바와 같이, 위치 Q160에서의 돌연변이는 7B1-IgG1에 의한 결합에 유의하게 영향을 미쳤다(도 14C). 대조적으로, PcrV에서 Q160의 돌연변이는 참조 항체 V2L2-MD 에 의한 결합에 영향을 미치지 않는다(데이터는 표시되지 않음). 위치 D165에서의 돌연변이도 7B1-IgG1에 의한 결합에 영향을 미쳤다(도 14C). 또한, D170, D173, T175 및 S202 위치 각각에서의 돌연변이는 7B1-IgG1에 의한 결합에 영향을 미쳤다(도 14D). 이러한 결과에 기초하여, 7B1-IgG1 항체의 예시적인 에피토프는 서열번호 71에 따라 아미노산 잔기 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175 및 Ser202를 포함하는 것으로 확인되었다.
SEQUENCE LISTING <110> STAIDSON (BEIJING) BIOPHARMACEUTICALS CO.,LTD. <120> ANTIBODIES SPECIFICALLY RECOGNIZING PSEUDOMONAS PCRV AND USES THEREOF <130> 71026-20003.40 <140> Not Yet Assigned <141> COncurrently Herewtih <160> 74 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Asp Tyr Pro Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Ser Tyr Pro Met Ser 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Asp Asn His Met Ser 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Asp Tyr Ser Met Ser 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Ser Tyr His Met Ser 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Ser Asn His Met Ser 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> 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105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 54 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 54 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Asp Ser Thr Lys His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 55 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 55 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Gln Ser Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 56 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 56 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Asp Glu Tyr Gly His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 57 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 57 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Asp Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Ala Ser Ala Gly His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 58 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 58 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Asp Ala Ser Glu His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 59 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 59 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Gln Asp Ser Tyr His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 60 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 60 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 61 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 61 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Asp Ser Ser His Phe Tyr Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 62 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 62 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Leu Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 63 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 63 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Asp Ser Ser His Phe Phe Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 64 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 64 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn 20 25 30 Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Glu Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Phe Ser Thr Asn Ser Asp His Phe Tyr Arg Ala Val 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 65 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 65 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 66 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 66 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 67 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 67 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 68 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 68 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 69 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 69 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 70 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 70 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Lys Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 71 <211> 294 <212> PRT <213> Pseudomonas aeruginosa <400> 71 Met Glu Val Arg Asn Leu Asn Ala Ala Arg Glu Leu Phe Leu Asp Glu 1 5 10 15 Leu Leu Ala Ala Ser Ala Ala Pro Ala Ser Ala Glu Gln Glu Glu Leu 20 25 30 Leu Ala Leu Leu Arg Ser Glu Arg Ile Val Leu Ala His Ala Gly Gln 35 40 45 Pro Leu Ser Glu Ala Gln Val Leu Lys Ala Leu Ala Trp Leu Leu Ala 50 55 60 Ala Asn Pro Ser Ala Pro Pro Gly Gln Gly Leu Glu Val Leu Arg Glu 65 70 75 80 Val Leu Gln Ala Arg Arg Gln Pro Gly Ala Gln Trp Asp Leu Arg Glu 85 90 95 Phe Leu Val Ser Ala Tyr Phe Ser Leu His Gly Arg Leu Asp Glu Asp 100 105 110 Val Ile Gly Val Tyr Lys Asp Val Leu Gln Thr Gln Asp Gly Lys Arg 115 120 125 Lys Ala Leu Leu Asp Glu Leu Lys Ala Leu Thr Ala Glu Leu Lys Val 130 135 140 Tyr Ser Val Ile Gln Ser Gln Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ala Lys Gln 145 150 155 160 Gly Ile Arg Ile Asp Ala Gly Gly Ile Asp Leu Val Asp Pro Thr Leu 165 170 175 Tyr Gly Tyr Ala Val Gly Asp Pro Arg Trp Lys Asp Ser Pro Glu Tyr 180 185 190 Ala Leu Leu Ser Asn Leu Asp Thr Phe Ser Gly Lys Leu Ser Ile Lys 195 200 205 Asp Phe Leu Ser Gly Ser Pro Lys Gln Ser Gly Glu Leu Lys Gly Leu 210 215 220 Ser Asp Glu Tyr Pro Phe Glu Lys Asp Asn Asn Pro Val Gly Asn Phe 225 230 235 240 Ala Thr Thr Val Ser Asp Arg Ser Arg Pro Leu Asn Asp Lys Val Asn 245 250 255 Glu Lys Thr Thr Leu Leu Asn Asp Thr Ser Ser Arg Tyr Asn Ser Ala 260 265 270 Val Glu Ala Leu Asn Arg Phe Ile Gln Lys Tyr Asp Ser Val Leu Arg 275 280 285 Asp Ile Leu Ser Ala Ile 290 <210> 72 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 73 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 74 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325

Claims (31)

  1. 슈도모나스 PcrV의 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체로서, 상기 에피토프는 슈도모나스 PcrV의 아미노산 잔기 Gln160, Asp165, Asp170, Asp173, Thr175, 및 Ser202 를 포함하는 단리된 항-PcrV 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항-PcrV 항체는 약 0.1 pM 내지 약 1 nM의 Kd 로 슈도모나스 PcrV에 결합하는 단리된 항-PcrV 항체.
  3. 하기를 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    다음을 포함하는 헤비체인 가변 도메인(VH),
    X1X2X3MS (서열번호 39)를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역(HC-CDR) 1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 D 또는 S, X2 는 Y 또는 N 그리고 X3 는 P, H, Y 또는 S; X1ISESGGSTX2X3ADSVKG (서열번호 40)를 포함하는 HC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 G 또는 V; X2 는 N 또는 Y; 그리고 X3 는 D 또는 Y; 및GRFX1X2X3X4X5X6FX7RAVYGMDV (서열번호 41)를 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S 또는 C, X2 는 T, G, D, Y, Q 또는 A, X3 는 S, D, N, E, L, A, 또는 Y, X4 는 S, T, Y, 또는 A, X5 는 S, H, Q, A, R, K,G, E, Y 또는 D, X6 는 H 또는 C, 그리고 X7 는 F 또는 Y;
    및 다음을 포함하는 라이트체인 가변 도메인(VL),
    RASQGIX1SYLA (서열번호 42)를 포함하는 라이트체인 상보성 결정 영역 (LC-CDR) 1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 is는 S 또는 R; AASTLQS (서열번호 34)를 포함하는 라이트체인 상보성 결정 영역 (LC-CDR) 2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;및 QQLX1SYPLX2 (서열번호 43)를 포함하는 라이트체인 상보성 결정 영역 (LC-CDR) 3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S, N 또는 K, 그리고 X2 는 S 또는 T.
  4. 제3항에 있어서, 하기를 포함하는 단리된 항-PcrV 항체;
    다음을 포함하는 VH,
    DX1X2MS (서열번호 44) 를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역 HC-CDR 1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 N 또는 Y,그리고 X2는 P, H, 또는 Y; X1ISESGGSTNYADSVKG (서열번호 45)를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역 HC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 G 또는 V; 그리고 GRFSTX1SX2HFX3RAVYGMDV (서열번호 46)를 포함하는 헤비체인 상보성 결정 영역 HC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 은 N, S, D, 또는 L, X2 은 S 또는 A, 그리고 X3 은 F 또는 Y;
    및 다음을 포함하는 VL,
    RASQGISSYLA (서열번호 32)를 포함하는 LC-CDR1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; AASTLQS (서열번호 34)를 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 QQLSSYPLX1 (서열번호 47)를 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체, 여기서 X1 는 S 또는 T.
  5. 하기를 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    다음을 포함하는 VH,
    서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 서열번호 9-14, 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 15-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 및
    다음을 포함하는 VL,
    서열번호 32-33 의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 35-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 최대 약 3개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체.
  6. 다음을 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 를 포함하는 VH, 및 서열번호 65-70 중 어느 한 항의 아미노산 서열을 포함하는 VL 의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 을 포함하는 VL.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 항-PcrV 항체:
    (i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (iii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (v) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (vi) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (vii) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (viii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (ix) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (x) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xi) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xiii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xiv) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xvi) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (xvii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 또는
    (xviii) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체.
  8. 제7항에 있어서, 다음을 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    (i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (ii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;
    (iii) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체;또는
    (iv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 VH, 또는 상기 HC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체; 그리고 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 VL, 또는 상기 LC-CDRs 내에 최대 약 5개의 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 다음을 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 48-64 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체, 및 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65-70 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체.
  10. 제9항에 있어서, 다음을 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    서열번호 51-52 및 61-62 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 또는 서열번호 51-52 및 61-62 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체, 및 서열번호 65 또는 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 또는 서열번호 65 또는 67의 아미노산 서열과 적어도 약 90% 서열 동일성을 가지는 그의 변이체.
  11. 제9항에 있어서, 다음을 포함하는 단리된 항-PcrV 항체:
    (i) 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (iii) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (iv) 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (v) 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (vi) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (vii) 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (viii) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ix) 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (x) 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xi) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xii) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xiii) 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xiv) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xv) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xvi) 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (xvii) 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 VL;또는
    (xviii) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 단리된 항-PcrV 항체와 경쟁적으로 PcrV에 특이적으로 결합하거나, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 단리된 항-PcrV 항체와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-PcrV 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PcrV 항체는 Fc 단편을 포함하는 것인 단리된 항-PcrV 항체.
  14. 제13항에 있어서, 상기 항-PcrV 항체는 전장 IgG 항체인 단리된 항-PcrV 항체.
  15. 제14항에 있어서, 상기 항-PcrV 항체는 전장 IgG1 또는 IgG4 항체인 단리된 항-PcrV 항체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PcrV 항체는 키메라, 인간 또는 인간화된 것인 단리된 항-PcrV 항체.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PcrV 항체는 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일사슬 Fv(scFv), Fv 단편, dAb, Fd 또는 디아바디로 이루어진 군으로부터 선택되는 항원 결합 단편인 단리된 항-PcrV 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 단리된 항-PcrV 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  19. 제18항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  20. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 단리된 항-PcrV 항체, 제18항의 단리된 핵산, 또는 제19항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  21. 다음을 포함하는 항-PcrV 항체를 생산하는 방법:
    a) 항-PcrV 항체를 발현하기에 효과적인 조건 하에 제20항의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    b) 숙주 세포로부터 발현된 항-PcrV 항체를 수득하는 단계.
  22. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항-PcrV 항체, 제18항의 핵산, 제19항의 벡터, 또는 제20항의 단리된 숙주 세포, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  23. 유효량의 제22항의 약학 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 개체에서 질병 또는 상태를 치료하는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 질병 또는 상태는 병원성 감염인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 감염은 그람-음성 박테리아 감염인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 박테리아는 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)인 것인 방법.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질병 또는 상태는 녹농균 감염에 의해 유발된 하나 이상의 증상을 포함하는 것인 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 증상은 열, 오한, 피로, 근육 및 관절 통증, 관절의 부종, 두통, 설사, 피부 발진, 상처의 고름, 균혈증, 급성 폐렴, 복강내 감염, 호흡기 감염, 패혈성 쇼크, 화농성 관절염, 장염, 피부 및 연조직 감염, 요로 감염, 장 감염, 궤양성 각막염, 만성 화농성 중이염, 유양돌기염, 부비동염 또는 심내막염 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  29. 제23항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 하나 이상의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 치료제 중 하나 이상이 항생제인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 항생제는 이미페넴, 토브라마이신, 시프로플록사신, 메로페넴 또는 아즈트레오남 중 하나 이상인 방법.
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