KR20220019903A - 귀리 추출물 또는 아베난쓰라마이드를 포함하는 피부 상태 또는 혈관 협착 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 귀리 추출물 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide)를 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 등에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 피부 미백, 피부 재생, 피부 탄력 증진 및 피부 주름 개선과 같은 피부 상태 개선을 위한 기능성 화장품 소재로 사용될 수 있으며, 혈관 협착 개선 및 색소침착 질환의 치료제로서도 활용될 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 귀리 추출물 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide)를 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 등에 관한 것이다.
피부 노화가 일어나면, 피부 탄력이 감소하고 피부 주름이 증가하게 되는데, 피부 탄력 감소 및 피부 주름의 형성은 콜라겐의 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 MMP(Matrix metalloproteinase)의 발현이 촉진되어 나타나는 것으로 알려져 있다.
또한, 노화의 진행이나 자외선 등에 의해 피부 세포에서는 염증 유발인자들의 생성이 증가하며, 염증 반응으로 인하여 MMP의 생합성이 증가하여 콜라겐 분해가 일어나고, 피부 탄력의 감소와 피부 주름의 형성이 나타나게 된다. 따라서, 피부 주름 감소 및 탄력 유지를 위해서는 염증 반응 억제와 상처로부터 피부 재생을 촉진시켜 피부를 보호하는 것이 필요하다.
한편, 사람의 피부색은 피부 내 멜라닌(Melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(Tyrosine)에 티로시나아제(Tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(Dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다.
일반적으로 알려진 미백 성분으로는, 코직산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나아제 효소 활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 있다. 이들은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증의 개선에도 이용 가능하다. 그러나, 피부 적용 시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적인 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.
따라서, 생체에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 피부 재생, 주름, 피부 탄력 및 미백에 우수한 효과를 나타내는 성분의 개발이 요구되고 있다.
한편, 귀리는 수용성 식이섬유와 단백질, 그리고 비타민과 미네랄이 풍부하다고 알려져 있다. 아베난쓰라마이드(Avenanthramide), 페놀산(Phenolic acid) 및 플라보노이드(Flavonoid)는 귀리 성분의 가장 중요한 페놀 화합물로 알려져 있으며, 페놀 화합물의 경우 항산화, 항염, 항알러지 및 항발암성의 생물학적 활성이 보고되었다. 귀리 및 이의 지표성분인 아베난쓰라마이드 A, B 및 C의 항산화 및 항염증 활성에 대하여 이전에 보고된바 있으나, 미백, 색소침착 억제 및 기미색소 생성 억제 등 티로시나아제 억제를 통한 피부 보호제로서의 역할은 알려지지 않았다.
본 발명자들은 귀리 추출물 및 이의 지표성분인 아베난쓰라마이드가 피부 탄력, 피부 재생 및 피부 노화와 관련된 인자인 MMP-9의 발현과 효소 활성을 저해하고, 피부 미백과 관련된 인자인 티로시나아제의 활성과 멜라닌 생성을 억제함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다. 또한, 본 발명자들은 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드가 혈관 협착을 개선시킬 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 혈관 협착의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 혈관 협착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 상기 조성물을 이용하여 개체의 피부 상태를 개선하는 미용방법을 제공한다.
뿐만 아니라, 본 발명은 상기 조성물의 피부 상태 개선 용도를 제공한다.
나아가, 본 발명은 피부 상태 개선용 제제의 제조를 위한 상기 조성물의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
뿐만 아니라, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 피부 색소침착 질환의 예방, 개선 또는 치료 용도를 제공한다.
나아가, 본 발명은 피부 색소침착 질환의 예방, 개선 또는 치료용 제제의 제조를 위한 상기 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 혈관 협착의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 혈관 협착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
더욱이, 본 발명은 상기 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 혈관 협착의 예방, 개선 또는 치료방법을 제공한다.
뿐만 아니라, 본 발명은 상기 조성물의 혈관 협착의 예방, 개선 또는 치료 용도를 제공한다.
나아가, 본 발명은 혈관 협착의 예방, 개선 또는 치료용 제제의 제조를 위한 상기 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선은 피부 미백, 피부 재생, 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 피부 미백은 기미, 주근깨, 흑자, 검버섯, 점, 밀크커피 반점, 오타모반, 청색모반, 과다 색소침착 반점, 약물 사용 후의 과다 색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 완화하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 아베난쓰라마이드는 아베난쓰라마이드 A, 아베난쓰라마이드 B 또는 아베난쓰라마이드 C일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 귀리 추출물은 탄소수 1 내지 6의 알코올, 물, 아세톤, 에테르(ether), 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 아임계 유체, 초임계 유체 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 티로시나아제의 활성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 멜라닌 생성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 유효성분은 MMP-9(Matrix metallopeptidase 9)의 발현 또는 이의 효소 활성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어서, 상기 피부 색소침착 질환은 기미, 주근깨, 흑자, 검버섯, 점, 밀크커피 반점, 오타모반, 청색모반, 과다 색소침착 반점, 약물 사용 후의 과다 색소침착, 임신성 갈색반, 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따르면, 귀리 추출물 및 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드는 MMP-9의 발현과 효소 활성을 저해하고, 티로시나아제의 활성과 멜라닌 생성을 억제한다. 따라서, 본 발명의 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드를 포함하는 조성물은 피부 미백, 피부 재생, 피부 탄력 증진 및 피부 주름 개선과 같은 피부 상태 개선을 위한 기능성 화장품 소재로 사용될 수 있으며, 혈관 협착 개선 및 색소침착 질환의 치료제로서도 활용될 것으로 기대된다.
도 1a는 아베난쓰라마이드 A, B 및 C의 화학 구조를 보여준다.
도 1b는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMT 실험 결과를 보여준다.
도 2는 TNF-α로 활성화 시킨 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 세포 이동(migration) 및 상처 치유(wound healing)에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 3a는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMP-9 단백질 발현에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 3b는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMP-9 mRNA 발현에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 3c는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMP-9 효소 활성에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 4는 피부 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMT 실험 결과를 보여준다.
도 5a는 시험관 내(in vitro)에서 실시한 아베난쓰라마이드의 티로시나아제 활성 억제를 평가한 결과를 보여준다.
도 5b는 α-MSH 처리한 피부 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 티로시나아제 활성 억제를 평가한 결과를 보여준다.
도 6은 α-MSH 처리한 피부 세포에서 아베난쓰라마이드의 멜라닌 생성 억제 활성을 평가한 결과를 보여준다.
도 7은 분자 도킹 시뮬레이션 분석을 통한 아베난쓰라마이드와 티로시나아제의 결합 부위 예측 결과를 보여준다.
도 8은 귀리 추출물 및 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드의 MAPKs 신호전달경로를 통해 MMP-9의 활성 및 생성을 조절하고, 멜라닌 생성을 억제하는 메커니즘을 개략적으로 보여준다.
도 1b는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMT 실험 결과를 보여준다.
도 2는 TNF-α로 활성화 시킨 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 세포 이동(migration) 및 상처 치유(wound healing)에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 3a는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMP-9 단백질 발현에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 3b는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMP-9 mRNA 발현에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 3c는 사람 평활근 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMP-9 효소 활성에 미치는 영향을 평가한 결과를 보여준다.
도 4는 피부 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 MMT 실험 결과를 보여준다.
도 5a는 시험관 내(in vitro)에서 실시한 아베난쓰라마이드의 티로시나아제 활성 억제를 평가한 결과를 보여준다.
도 5b는 α-MSH 처리한 피부 세포를 이용하여 실시한 아베난쓰라마이드의 티로시나아제 활성 억제를 평가한 결과를 보여준다.
도 6은 α-MSH 처리한 피부 세포에서 아베난쓰라마이드의 멜라닌 생성 억제 활성을 평가한 결과를 보여준다.
도 7은 분자 도킹 시뮬레이션 분석을 통한 아베난쓰라마이드와 티로시나아제의 결합 부위 예측 결과를 보여준다.
도 8은 귀리 추출물 및 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드의 MAPKs 신호전달경로를 통해 MMP-9의 활성 및 생성을 조절하고, 멜라닌 생성을 억제하는 메커니즘을 개략적으로 보여준다.
본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 귀리는 그 원형을 훼손하지 않고 그대로 사용하거나, 당업자가 의도하는 공정 속도 및 공정(제조) 효율을 고려하여 전처리 과정을 수행한 후 사용할 수 있으며, 상기 전처리 과정으로는, 예를 들어 통상적인 선별, 수세, 절단, 분말화, 건조 등의 단계를 거칠 수 있다.
본 발명에 있어서, 귀리 추출물은 귀리 전체 또는 그 일부로부터 수득될 수 있으며, 예를 들어 줄기, 뿌리, 잎, 열매 및 꽃으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 부위로부터 수득될 수 있다.
상기 귀리 추출물은 공지의 천연물 추출방법에 의하여 추출될 수 있다. 예를 들어, 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 본 발명의 귀리 추출물은 에탄올로 추출될 수 있다. 추출방법은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 통상의 추출방법이 사용 가능하다. 상기 에탄올은 농도가 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 50%, 10 내지 40%, 10 내지 30%, 10 내지 25%, 10 내지 20%, 15 내지 50%, 15 내지 40%, 15 내지 30%, 15 내지 25% 또는 15 내지 20%의 에탄올 추출물일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 아베난쓰라마이드는 아베난쓰라마이드 A, 아베난쓰라마이드 B 또는 아베난쓰라마이드 C일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 아베난쓰라마이드는 귀리의 지표성분으로 알려져 있으며, 아베난쓰라마이드 A, B 및 C의 화학 구조는 도 1a에 나타내었다.
본 발명의 화장료 조성물은 아베난쓰라마이드의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어, "화장품학적으로 허용 가능한 염"이란 화장품학적으로 허용되는 무기산, 유기산 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다. 또한, 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"이란 약학적으로 허용되는 무기산, 유기산 또는 염기로부터 유도된 염을 포함하며, 용어 “식품학적으로 허용 가능한 염”이란 식품학적으로 허용되는 유기산, 무기산 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.
적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.
적합한 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, “개선"이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 피부 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 상태 개선은 피부 미백, 피부 재생, 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 미백은, 예를 들어 기미, 주근깨, 흑자, 검버섯, 점, 밀크커피 반점, 오타모반, 청색모반, 과다 색소침착 반점, 약물 사용 후의 과다 색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 또는 상처(또는 피부염)로 인한 염증 후 과다 색소침착을 완화(개선)하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 유효성분은 티로시나아제의 활성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다(실시예 6 참조).
또한, 상기 유효성분은 멜라닌 생성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다(실시예 7 참조).
또한, 상기 유효성분은 MMP-9의 발현 또는 이의 효소 활성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다(실시예 4 참조).
본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 미스트, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 핸드로션, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 클렌징오일, 클렌징밤, 바디로션 또는 바디클렌저의 형태일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 더 포함할 수 있다.
수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.
유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.
고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.
고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.
스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.
이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.
에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.
탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.
실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.
불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.
동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.
보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.
수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.
지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.
수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.
지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.
에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.
계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.
비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌) 솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP(폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.
음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.
양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.
양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.
유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체 등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.
유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.
자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.
살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.
산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.
pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.
알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 0.01-5% 중량 백분율 또는 0.01-3% 중량 백분율로 배합될 수 있다.
본 발명의 제형이 로션, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 혈관 협착의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품 조성물 일 수 있다. 상기 건강기능식품은 이너 뷰티(inner beauty) 푸드 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가질 수 있다. 상기 이너 뷰티(inner beauty)는 '먹는 화장품 또는 뷰티 푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸 속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너 뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 예를 들면, 화장품과 이너 뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품 또는 약제만 사용하는 것에 비해 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 피부 상태 개선 효과를 볼 수 있는 장점을 가질 수 있다.
상기 유효성분을 식품 첨가물로 사용할 경우, 유효성분을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01-0.20 g 또는 약 0.04-0.10 g이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 색소침착 질환 또는 혈관 협착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 색소침착 질환 또는 혈관 협착의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 용어, "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 쥐(rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어, “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어, "예방"이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어, "피부 색소침착 질환"은 피부의 변색 또는 비정상적으로 착색된 세포의 증식이 이루어지는 피부의 모든 질환 또는 질병을 의미하며, 피부 색소침착은 과다하거나 원치 않는 색소 침착을 포함할 수 있다. 노화, 환경 스트레스 및 UV 노출과 같은 요인은 피부 색소침착의 잠재적인 원인이 될 수 있다. 본 발명의 피부 색소침착은 환자의 기본적인 색소 침착에 비해 피부 및/또는 모낭에서 생합성되고 모발 또는 피부에 침착된 하나 이상의 다양한 종류의 멜라닌의 증가에 기인할 수 있으며, 예컨대 기미, 주근깨, 흑자, 검버섯, 점, 밀크커피 반점, 오타모반, 청색모반, 과다 색소침착 반점, 약물 사용 후의 과다 색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물 내의 유효성분의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는 에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 1928, 2208, 2906, 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜 4000,6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 1828, 2906, 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9% 염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO3) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na2S2O3), 아황산나트륨(Na2SO3), 질소가스(N2), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16(Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈(Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입(AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈(N, Es), 웨코비(W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제(TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 실험방법
실험재료
20% 주정 귀리 추출물 준비는 500 gram의 귀리를 최종 농도가 20%(g/vol)되도록 첨가하여 파쇄, 혼합 및 추출을 통해 상청액을 원심분리로 모은 뒤, 동결건조하여 제조하였다. 아베난쓰라마이드(Avenanthramide A, B, C)는 20% 주정 귀리 추출물에서 HPLC를 통해 분리하였다. 구체적으로, 20% 주정 귀리 추출물을 역상 고속 크로마토그라피(reverse phase HPLC; RPHPLC) 컬럼(CAPCELL-PAK C18, 4.6 mm Х 250 mm, Shiseido Co., Japan)에 로딩하여 농도 균배 그래디언트(5-65% acetonitrile/0.1% TFA) 용매로 60분 동안 유속 1 ml/min으로 실시하였다. 시료추출 건조물(100 μg)을 5 μl의 dimethylsulfoxide(DMSO)에 녹여 2 μl씩 주입하였다. 아베난쓰라마이드(Avenanthramide A, B, C)는 경우에 따라 Sigma-Aldrich(Saint-Louis, Mo, USA)에서 구매하였다. Corning trans-well Wright-Giemsa 염색 용액(stain solution), DAPI(6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride)는 Sigma-Aldrich(Saint-Louis, Mo, USA)에서 구매하였다. 사이토카인 분비 확인용 ELISA assay 키트는 Affymetrix eBioscience(USA)에서 구매하였다. 인간 재조합 TNF-α 단백질은 PeproTech(Rocky Hill, NJ, USA)에서 구매하였고, 항체 NFkB는 Abcam(Cambridge, MA, USA)에서, p-IkB, IkB는 Santa Cruz Biotechnology(Paso Robles, CA, USA)에서 구매하였다. 또 다른 항체 pERK, ERK, pp38, pJNK, JNK는 Cell signaling technology(Danvers, MA, USA)에서 구매하였으며, MMP-9, MMP-2, p38, β-actin은 Santa Cruz Biotechnology(Paso Robles, CA, USA)에서 구매하였다.
세포 배양
사람 피부암 세포(SK-MEL-2)와 사람 평활근 세포(HASMC)는 American Type Culture Collection(ATCC; Rockville, MD, USA)에서 구매하였다. 세포를 DMEM(WelGENE Co., Daegu, Korea)에서 배양하였으며, 각각의 배지에 10% FBS(Fetal bovine serum), 100 U/ml 페니실린, 100 mg/ml 스트렙토마이신(P/S)을 처리한 후 37℃및 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다.
역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)
트렌스펙션 된 HASMC 세포의 총 RNA를 TRIzol 시약(Invitrogen, USA)을 이용하여 추출한 후 cDNA를 oligo dT primer using RT-PreMIX 키트(Takara Shuzo, Japan)를 이용하여 합성하였다. cDNA는 하기의 프라이머를 이용하여 PCR 장치로 증폭하였다.
MMP-9: forward 5'-TCCCTGGAGACCTGAGAACC-3' (서열번호 1), reverse 5'-CGGCAAGTCTTCCGAGTAGTT-3' (서열번호 2)
MMP-2: forward 5'-TGAAGGTCGGTGTGAACGGA-3' (서열번호 3) reverse 5'-CATGTAGCCATGAGGTCCACCAC-3' (서열번호 4)
β-actin: forward 5'-TCCTTCTGCATCCTGTCGGC-3' (서열번호 5), reverse 5'-CAAGAGATGGCCACGGCTGC-3' (서열번호 6)
웨스턴 블랏
100 mM Na-orthovanadate, 100 mM NaF 및 100 mM Na-pyrophosphate 포함된 1% NP40 단백질 용해 버퍼를 이용하여 트렌스펙션 된 HASMC 세포로부터 단백질을 추출한 후, 추출물을 4℃, 13000 rpm에서 원심분리 하였다. 추출된 단백질을 Bio-Rad protein assay(Bio-Rad Laboratories Hercules, CA, USA)로 정량한 후, 동일한 양의 단백질을 SDS-PAGE(SDS-polyacrylamide)를 통해 크기 별로 분리시켰다. 이후 PVDF(Polyvinylidene difluoride) 막에 옮기고, 막을 1차 항체와 2차 항체와 반응시킨 후 ECL(Enhanced chemiluminescence)을 통해 결과를 확인하였다.
Trans-well 세포 이동 분석
HASMC 세포를 trans-well 상단에 첨가하고, 하단에는 TNF-α를 처리한 배지를 첨가한 후 24시간 동안 배양하였다. 8 mm 공극 크기의 막(pore size membrane)을 통해 이동된 세포들을 메탄올을 통해 고정하고, Giemsa로 염색한 뒤 광학현미경을 통해 염색된 세포를 확인하였다.
상처 치유(Wound healing) 분석
HASMC 세포를 6웰 배양판에서 배양하였다. 상처는 인위적으로 노란색 피펫 팁(200 μl)으로 긁힌 뒤 중간 정도로 세 번 씻었다. 아베난쓰라마이드 또는 아베난쓰라마이드 + TNF-α를 24시간 동안 처리한 후 각각의 웰을 현미경으로 관찰하였다.
젤라틴 자이모그래피(Zymography) 분석
준비된 아베난쓰라마이드 샘플을 5% 트리-글리신 SDS 샘플 버퍼와 혼합하여 1 mg/ml 젤라틴이 함유된 10% 폴리아크릴라미드 젤에 로딩하였다. 젤은 110 V에서 80분간 작동한 후 2.5% 트리톤 X-100으로 20분간 세척 후 10 mM 트리스 베이스, 40 mM 트리스로 인큐베이션 하였다. 그 후, 상온에서 12시간 동안 HCl, 200 mM NaCl, 10 mM CaCl2 배양 버퍼로 다시 인큐베이션 하였다. 이후 젤을 50% 메탄올에 0.5% 코마시 블루 염색약에 10%의 아세트산으로 2시간 동안 염색하였다. 염색을 제외하고 투명한 띠로 나타난 MMP-9 활성부위를 파란 바탕에서 검출하였다.
사이토카인 분비 측정 분석
배양 배지에서 TNF-α, IL-6 및 IL-1β와 같은 염증성 사이토카인의 수준은 프로토콜에 따라 각 사이토카인별 항체와 함께 ELISA 키트(Affymetrix, eBioscience)를 사용하여 측정하였다. 96웰 플레이트에 포획 항체를 5시간 이상 부착시켜 인큐베이션 하였다. 워싱액으로 3번에서 5번 워싱을 해주었다. 블로킹 액을 사용하여 30분 동안 인큐베이션을 진행하였다. 똑같이 워싱액으로 3번에서 5번 워싱을 하였다. 준비된 배지(약물 24시간 처리 후 추출한 배지)를 첨가해주고, 2시간 동안 인큐베이션 하였다. 그리고 검출 항체를 1시간 동안 추가로 붙여주었다. 워싱 후 형광 태그가 부착된 기질을 15분간 넣어준 후 정지 솔루션을 추가하였다. 이후 마이크로 리더기에서 450 nm 흡광도에서 측정하였다.
면역 형광법
HASMC에 TNF-α를 처리하고 24시간 후에 4% PFA(paraformaldehyde)를 이용하여 고정시킨 후 0.2 % Triton-100로 투과성을 높여주고, 1차 항체, 2차 항체, DAPI를 순차적으로 염색시킨 후 형광현미경을 통해 확인하였다.
티로시나아제(Tyrosinase) 억제 활성 측정
티로시나아제 활성은 분광광도계를 이용하여 측정하였다. 반응튜브에 0.1 ml 용량으로 110 U/ml 활성을 갖는 버섯(mushroom) 티로시나아제(EC 1.14.18.1)를 0.1 ml의 10 mM L-DOPA와 함께 넣어주었다. 그 반응튜브에 0.05 ml의 측정용 시료와 0.25 ml의 175 mM sodium phosphate 버퍼(pH 6.8)에 녹아 있는 측정용 시료 0.05 ml를 혼합하였다. 이 튜브를 37℃에서 2분간 보온 반응하였다. 반응 생성물인 도파크롬(DOPAchrome)을 파장 475 nm에서 측정하였다. 티로시나아제 활성 억제율을 시료 용액의 흡광도 감소율로서 표현하였다. SK-MEL-2 사람 흑색종(melanoma) 세포를 24웰 플레이트에 웰 당 2 X 105 세포수로 분주하고, 아베난쓰라마이드를 각각의 농도로 첨가한 후 24 시간 동안 보온하였다. 24시간 후 각각의 웰들을 10 mM PBS로 세척하고, 100 μl의 10 mM PBS(1% Triton X-100)를 첨가하여 부유시켰다. 용액을 볼텍스(vortex)로 균질 부유시킨 뒤 원심분리 하여 상청액을 측정용 효소용액으로 간주하고 얻었다. 이렇게 얻은 40 μl의 용액을 96웰 마이크로플레이트(BD Falcon, Bedford, MA, USA)에 옮기고, 여기에 효소 기질인 100 μl L-dopa(2 mg/ml)를 추가로 첨가하였다. 1시간 동안 37℃에서 보온반응 하여 흡광도를 405 nm에서 마이크로플레이트 리더기를 사용하여 측정하였다.
효소 억제 활성은 다음의 공식으로 결정하였다.
억제도(%) = [(A - B) - (C - D)]/(A - B) X 100
(A는 대조군의 반응 후 흡광도, B는 대조군의 반응 전 흡광도, C는 시료 용액의 반응 후 흡광도, D는 시료 용액의 반응 전 흡광도).
티로시나아제의 키네틱(kinetic) 활성기전을 알아보기 위하여, 여러 농도의 L-DOPA(0.625에서 5 mM 범위), 버섯 티로시나아제 용액(1000 U/ml) 및 50 mM 인산칼륨 버퍼(pH 6.5)를 96웰 플레이트에 주입하고, 아베난쓰라마이드(Ave A, B, C) 용액을 첨가하여 총 용액을 200 μl로 조정하였다. 티로시나아제의 미하엘리스(Michaelis) 상수(Km)를 라인위버-버크 방정식(Lineweaver-Burk plot)을 사용하여 다양한 L-DOPA 농도에 따라 효소 활성을 측정한 뒤 결정하였다.
멜라닌 생성량 측정
SK-MEL-2 세포를 24웰 플레이트에 웰 당 2 X 105 세포수를 접종하고, 각 농도로 아베난쓰라마이드(A, B, C)를 준비하여 전처리 하였다. 1시간 뒤 α-MSH(100 nM)를 처리하여 48시간 동안 보온하였다. 이후 각 웰을 PBS로 세정하고, 400 μl의 0.2 N NaOH를 첨가하여 세포를 분산시켜 60℃에서 1시간 보온한 뒤 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.
티로시나아제 효소와 화합물의 도킹 컴퓨터 시뮬레이션
화합물의 타겟 단백질인 티로시나아제를 tyrosinase related protein 1(PDB ID: 5M8S)에 의해 SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/)을 통하여 생성하였다. 아베난쓰라마이드 A(Avn A), B(Avn B) 및 C(Avn C)의 도킹 시뮬레이션을 만들기 위하여, 화합물의 2D 구조를 생성하여 3D 구조로 전환시켰다. 에너지 최소화 과정을 ChemOffice 프로그램(http://www.cambridgesoft.com)으로 생성시켰다. Avn A, Avn B 및 Avn C와 티로시나아제와의 도킹 시뮬레이션을 Autodock Vina를 사용하여 실시하였다(O. Trott, A.J. Olson, AutoDock Vina: improving the speed and accuracy of docking with a new scoring function, efficient optimization, and multithreading, J. Comput. Chem. 31 (2010) 455-461). 티로시나아제의 결합 포켓은 티로시나아제-코직산(tyrosinase-kojic acid; PDB ID: 5M8M) 복합체로부터 얻은 예측된 활성 부위를 사용하여 예측하였다. 도킹 시뮬레이션 결과를 Chimera로 나타내고(J.E. Mills, P.M. Dean, Three-dimensional hydrogen-bond geometry and probability information from a crystal survey, J. Comput. Aided Mol. Des. 10 (1996) 607-622), 얻어진 도킹 시뮬레이션 결과에 근거하여 Chimera에서의 default 수치로 0.4 angstrom과 20.0 degree의 bonding relaxation 상수를 사용하여 가능한 수소결합을 분석하였다(E.F. Pettersen, T.D. Goddard, C.C. Huang, G.S. Couch, D.M. Greenblatt, E.C.Meng, T.E. Ferrin, UCSF Chimera-a visualization system for exploratory research and analysis, J. Comput. Chem. 25 (2004) 1605-1612). Avn A, B, C의 피부 자극성은 QSAR(quantitative structure-activity relationship) 분석을 통하여 예측하였다.
실시예 2. 귀리 추출물 및 지표성분 아베난쓰라마이드의 세포독성 평가
귀리의 주요 성분인 아베난쓰라마이드의 분자량은 315.28 g/mol이며, 화학 구조는 도 1a에 나타내었다. 20% 주정 귀리 추출물 및 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드의 세포독성을 확인하기 위하여, MTT assay 실험을 진행하였다. 대표적으로 사람 평활근 세포(HASMC)를 모델 세포로서 사용하였다. TNF-α만 처리한 none 군(TNF-α only group)은 대조군의 세포 생존율과 비교하여 유의성을 보이지 않았다. 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드를 0, 50 및 100 μM로 처리했을 때 none 군과 비교하여 세포 생존율에 있어 유의성을 보이지 않았으며, 이를 통하여 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드에 세포독성이 없음을 확인하였다(도 1b, 표 1)
실시예 3. 귀리 추출물 및 지표성분 아베난쓰라마이드의 혈관 협착 개선 효과
TNF-α는 혈관 협착, 전이 등에 관여한다고 보고되어 왔다(Morisaki N, Xu QP, Koshikawa T, Saito Y, Yoshida S, Ueda S. Tumour necrosis factor-alpha can modulate the phenotype of aortic smooth muscle cells. Scand J Clin Lab Invest. 1993 Jul;53(4):347-52). TNF-α로 활성화시킨 HASMC에서 20% 주정 귀리 추출물 및 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드가 상처 치유(wound healing) 및 세포 이동(migration)에 있어서 어떤 효과를 나타내는지 확인하기 위하여 실험을 진행하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 사람 평활근 세포에 TNF-α를 처리하였을 때 상처 치유(wound healing) 및 세포 이동이 증가되었으나, 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드를 같이 처리하였을 때는 상처 치유 및 세포 이동이 억제되었다(표 2).
실시예 4. 귀리 추출물 및 지표성분 아베난쓰라마이드의 MMP-9 발현 및 활성 억제 효과
20% 주정 귀리 추출물 및 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드의 피부 보호, 피부 재생 활성화 및 피부 탄력성 효과를 평가하기 위하여, TNF-α에 의해 자극된 MMP-9과 MMP-2의 발현 수준을 RT-PCR과 웨스턴 블랏으로, 효소 활성을 젤라틴 자이모그래피 분석으로 평가하였다. 100 ng/ml TNF-α와 0-100 μM 20% 주정 귀리 추출물 또는 아베난쓰라마이드를 사람 동맥 평활근 세포에 처리하고, 24시간 배양한 후 단백질과 mRNA 수준을 측정하였다.
그 결과, 도 3a에 나타난 바와 같이, 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드로 처리된 HASMC에서 MMP-2의 변화는 거의 없었으나, MMP-9의 단백질 수준은 감소하였다(표 3).
또한, 도 3b에 나타난 바와 같이, 0-100 μM 범위에서 고농도로 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드를 처리한 세포에서 MMP-9 mRNA 수준이 감소하였다(표 4).
또한, 도 3c에 나타난 바와 같이, 사람 평활근 세포에서 TNF-α 유도된 MMP-9에 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드를 처리하였을 때 대조군 세포(TNF-α로만 유도된 MMP-9)에서보다 상당히 낮아 물질 처리에 의하여 MMP-9 효소 활성이 억제되었다(표 5).
위와 같은 결과는 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드가 MMP-9의 mRNA와 단백질 수준을 감소시키고, 효소 활성을 억제시킬 수 있음을 보여준다.
실시예 5. 피부 세포에서 귀리 추출물 및 지표성분 아베난쓰라마이드의 세포독성 평가
20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드(Avn A, Avn B 및 Avn C)의 안전성 확보를 위한 세포독성 검정을 MTT 검정법으로 실시하였다. 그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 대조군으로 무처리군과 α-MSH 처리군은 세포독성을 나타내지 않았다. 또한, Avn A, Avn B, Avn C 및 귀리 추출물 처리를 0, 50 및 100 μM 농도와 50 μM과 100 μM으로 처리한 결과, 세포에 대한 독성을 보이지 않았다(표 6). 구체적으로, 20% 주정 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드를 100 μM까지 처리한 결과, SK-MEL-2 세포의 증식에 독성을 나타내지 않았다. 따라서, 이후의 실험에서는 이 농도로 처리하였다.
실시예 6. 귀리 추출물 및 지표성분 아베난쓰라마이드의 티로시나아제 저해 활성
도 5a에 나타난 바와 같이, 시험관 내 20% 주정 귀리 추출물 및 Avn A, Avn B, Avn C는 0, 10, 25, 50 및 100 μM 농도에서 농도 의존적으로 티로시나아제의 활성을 억제하였다(표 7). Avn C의 억제 활성이 가장 우수하였으며, 그 다음으로 Avn A, Avn B 순서였다.
또한, 도 5b에 나타난 바와 같이, α-MSH 유발 SK-MEL-2 세포에서의 티로시나아제 활성도 농도 의존적으로(0, 50, 100 μM) 저해하였다(표 8). SK-MEL-2 세포에서도 Avn C가 효소 활성을 가장 강하게 저해하였으며, Avn A나 Avn B 보다 효과가 우수하였다.
이상의 결과들은 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드가 피부 세포에서 α-MSH 유발 티로시나아제의 활성을 저해함을 보여준다.
실시예 7. 귀리 추출물 및 지표성분 아베난쓰라마이드의 피부 세포에서의 멜라닌 생성 억제 효과
멜라닌 합성에 티로시나아제가 관여하며, 티로시나아제는 L-티로신을 3,4-dihydroxyphenylalanine(L-DOPA)로 전환시키고, L-DOPA는 다시 도파퀴논(DOPAquinone)을 거쳐 멜라닌으로 합성된다(Masaru Murakami 1, Fumihide Matsuzaki, Masayuki Funaba. Regulation of Melanin Synthesis by the TGF-beta Family in B16 Melanoma Cells. Mol Biol Rep. 2009 Jul;36(6):1247-50).
도 6에 나타난 바와 같이, 멜라닌 생합성은 0, 50 및 100 μM 농도의 20% 주정 귀리 추출물 및 Avn A, Avn B, Avn C 처리에 의하여 저해되었다(표 9). Avn C의 효과가 가장 우수하였으며, 그 다음으로 Avn A, Avn B의 순서로 효과가 우수하였다. 이러한 결과는 귀리 추출물 및 아베난쓰라마이드가 피부 세포에서 멜라닌 생합성을 효과적으로 억제함을 보여준다.
실시예 8. 분자 도킹 시뮬레이션 분석을 통한 아베난쓰라마이드와 티로시나아제의 결합 부위 예측
도킹 시뮬레이션 결과, Avn A, Avn B 및 Avn C가 효과적으로 티로시나아제-코직산 복합체 형성시의 결합 부위들에 존재함을 확인하였다(도 7). 이들 화합물들의 3가지 페닐프로파노이드(phenylpropanoid)들이 모두 포켓 안의 위치에 존재함을 확인하였다. 티로시나아제에 대한 Avn C의 결합 친화도는 -4.0 kcal/mol로 계산되었으며, AutoDock Vina 분석법을 통하여 Avn A(-3.7 kcal/mol) 및 Avn B(-2.9 kcal/mol)의 결합 친화도 수치보다 높음을 확인하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
<110> Research & Business Foundation SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY
<120> Composition for improving skin condition or angiostenosis
comprising oat extract or avenanthramide
<130> MP20-059
<160> 6
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Forward primer for MMP-9
<400> 1
tccctggaga cctgagaacc 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Reverse primer for MMP-9
<400> 2
cggcaagtct tccgagtagt t 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Forward primer for MMP-2
<400> 3
tgaaggtcgg tgtgaacgga 20
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Reverse primer for MMP-2
<400> 4
catgtagcca tgaggtccac cac 23
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Forward primer for beta-actin
<400> 5
tccttctgca tcctgtcggc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Reverse primer for beta-actin
<400> 6
caagagatgg ccacggctgc 20
Claims (13)
- 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide) 또는 이의 화장품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 피부 상태 개선은 피부 미백, 피부 재생, 피부 탄력 증진 또는 피부 주름 개선인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 피부 미백은 기미, 주근깨, 흑자, 검버섯, 점, 밀크커피 반점, 오타모반, 청색모반, 과다 색소침착 반점, 약물 사용 후의 과다 색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 완화하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 아베난쓰라마이드는 아베난쓰라마이드 A, 아베난쓰라마이드 B 또는 아베난쓰라마이드 C인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 귀리 추출물은 탄소수 1 내지 6의 알코올, 물, 아세톤, 에테르(ether), 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 아임계 유체, 초임계 유체 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 유효성분은 티로시나아제의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 유효성분은 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 유효성분은 MMP-9(Matrix metallopeptidase 9)의 발현 또는 이의 효소 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피부 상태 개선용 식품 조성물.
- 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제10항에 있어서,
상기 피부 색소침착 질환은 기미, 주근깨, 흑자, 검버섯, 점, 밀크커피 반점, 오타모반, 청색모반, 과다 색소침착 반점, 약물 사용 후의 과다 색소침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물. - 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 혈관 협착의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 귀리 추출물, 또는 귀리의 지표성분인 아베난쓰라마이드(Avenanthramide) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 혈관 협착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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KR1020200100136A KR20220019903A (ko) | 2020-08-10 | 2020-08-10 | 귀리 추출물 또는 아베난쓰라마이드를 포함하는 피부 상태 또는 혈관 협착 개선용 조성물 |
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KR1020220179211A KR20230005075A (ko) | 2020-08-10 | 2022-12-20 | 귀리 추출물 또는 아베난쓰라마이드를 포함하는 피부 상태 또는 혈관 협착 개선용 조성물 |
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KR101761080B1 (ko) | 2008-11-14 | 2017-07-24 | 삐에르화브르데르모-코스메띠끄 | 이삭 피기 전 수확된 귀리 지상 부위들 추출물 |
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