KR20220012913A - 융합 복소환 유도체 - Google Patents

Abstract

본 출원에는 융합 복소환 유도체 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 이들 화합물을 제조하기 위한 화학적 방법 및 HBV 감염과 관련된 질환의 치료에서의 이들의 용도가 개시되어 있다.

Description

융합 복소환 유도체

본 출원은 융합 복소환 유도체 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 이들 화합물을 제조하기 위한 화학적 방법 및 HBV 감염과 관련된 질환의 치료에서의 이들의 용도에 관한 것이다.

관련 출원

본 출원은 2019년 5월 28일자로 출원된 유럽 특허 출원 제19176933.0호, 2020년 4월 20일자로 출원된 PCT/CN2020/085720 및 2019년 5월 28일자로 출원된 미국 가출원 제62/853,533호에 대한 우선권을 주장하며, 이들의 내용은 그 전체가 본원에 포함된다.

만성 B형 간염 바이러스(HBV) 감염은 전 세계 인구의 5%를 넘는 인구(전 세계적으로 3억 5천만명이 넘는 사람, 및 미국에서 125만명이 넘는 개인)에서 발생하는 중대한 세계적 건강 문제이다.

예방용 HBV 백신의 이용가능성에도 불구하고, 만성 HBV 감염의 부담은 개발 도상국의 대부분의 지역에서 최적이 아닌 치료 옵션과 지속적인 신규 감염률로 인해 계속해서 중대한, 해결되지 않은 전 세계적 의료 문제가 되고 있다. 현행 치료법은 치유를 제공하지 않으며 단지 두 부류의 작용제(인터페론 알파 및 뉴클레오시드 유사체/바이러스 폴리머라아제의 억제제)에 한정되고; 약물 내성, 낮은 효능, 및 내용성 문제가 이들의 효과를 제한한다. 낮은 HBV 치유율은 적어도 부분적으로는, 바이러스 생성을 완전히 억제하는 것이 단일 항바이러스제에 의해서는 달성하기 어렵다는 사실에 기인한다. 그러나, HBV DNA의 지속적 억제는 간질환의 진행을 늦추고 간세포 암종의 예방을 돕는다. HBV-감염 환자에 대한 현행 치료법의 목표는 혈청중 HBV DNA를 낮은 수준 또는 검출불가능한 수준까지 감소시키고 궁극적으로는 간경변 및 간세포 암종의 발생을 감소시키거나 예방하는 것이다.

HBV 캡시드 단백질은 바이러스 생명 주기 동안 필수적인 기능을 한다. HBV 캡시드/코어 단백질은 세포간 통과 동안 바이러스 게놈을 보호하는 준안정성 바이러스 입자 또는 단백질 쉘을 형성하고, 또한 게놈 캡시드화, 게놈 복제, 및 비리온의 형태 형성 및 탈출을 포함하는 바이러스 복제 과정에서 중추적인 역할을 한다. 캡시드 구조는 또한 바이러스 침입 후 탈코팅을 허용하도록 환경 신호(environmental cue)에 반응한다. 이와 일관되게, 캡시드 조립 및 분해의 적절한 타이밍, 적절한 캡시드 안정성 및 코어 단백질 기능은 바이러스 감염성에 결정적인 것으로 밝혀졌다.

HBV 캡시드 단백질의 중요한 기능은 바이러스 캡시드 단백질 서열에 엄격한 진화적 제약을 부과하여, 낮은 서열 가변성 및 높은 보존성이 관찰되게 한다. 이와 일관되게, 조립을 방해하는 HBV 캡시드의 돌연변이는 치명적이며, 캡시드 안정성을 교란시키는 돌연변이는 바이러스 복제를 심각하게 약화시킨다. 많은 돌연변이가 기능에 해롭다는 점에서 다기능성 HBV 코어/캡시드 단백질에 대한 높은 기능적 제약은 높은 서열 보존성과 일치한다. 실제로, 코어/캡시드 단백질 서열은 HBV 유전자형들 전체에 걸쳐 >90% 동일하고 단지 소수의 다형성 잔기를 나타낸다. 따라서 HBV 코어/캡시드 단백질 결합 화합물에 대한 저항성 선택은 바이러스 복제 적합성에 큰 영향을 미치지 않고서 선택하는 것이 어려울 수 있다.

바이러스 캡시드에 결합하고 HIV, 리노바이러스 및 HBV의 복제를 억제하는 화합물을 설명하는 보고서는 항바이러스 약물 표적으로서의 바이러스 캡시드 단백질에 대한 개념의 강력한 약리학적 증거를 제공한다.

바이러스 생성의 억제를 증가시킬 수 있고 HBV 감염을 치료, 개선 및/또는 예방할 수 있는 치료제가 당업계에 필요하다. 이러한 치료제를 단독요법으로 또는 다른 HBV 치료 또는 보조 치료와 병용하여 HBV 감염 환자에게 투여하면, 바이러스 부담이 현저히 감소하고, 예후가 개선되고, 질환의 진행이 감소하고, 혈청전환율이 향상될 것이다.

HBV의 임상적 중요성의 관점에서, 바이러스 생성의 억제를 증가시킬 수 있고 HBV 감염을 치료, 개선 및/또는 예방할 수 있는 화합물의 확인은 새로운 치료제의 개발에 대한 매력적인 방안을 나타낸다. 이러한 화합물이 본원에 제공된다.

본 발명은 본원에 참고로 포함된, 본원에 첨부된 독립항 및 종속항에 의해 각각 정의되는 일반적인 실시 형태 및 바람직한 실시 형태에 관한 것이다. 본 발명은 캡시드 조립 조절이 가능한 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 선행 기술 화합물에 대하여 특성들의 유리한 균형을 제공할 수 있으며, 예를 들어, 본 화합물은 상이한 프로파일을 나타낼 수 있고, 개선된 용해도를 나타낼 수 있는 등이다. 따라서, 특히, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것이다:

[화학식 I]

여기서,

R¹은 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리로서, 상기 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리는

- N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고/하거나;

- 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 6}알킬, OC_{1- 6}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며 ;

더 구체적으로 R¹은 Cl, F, CN, CH₃, CF₃, 및 CF₂H로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;

R³은 H, F, OH, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, CONHC_{1 - 4}알킬, CONHC_3-6시클로알킬, NHSO₂C_{1 - 4}알킬 및 NHSO₂C_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

H,

C_{1- 4}알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, CH₂CF₃, C_{1- 4}알킬, OH, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, SO₂N(CH₃)₂ 및 C_3-4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 실시 형태는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 화학식 I의 화합물의 제약적 활성 대사산물, 및 화학식 I의 화합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체와, 이들의 제약상 허용가능한 염을 포함한다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기술되거나 예시된 화학종으로부터 선택되는 화합물이다.

본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I의 화합물, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 I의 제약적 활성 대사산물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제 또는 하나 이상의 다른 약제 또는 치료제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 사용 방법 또는 용도에 관한 것이다. 실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 치료 또는 개선하고, HBV 생성의 억제를 증가시키고, HBV 캡시드 조립 또는 다른 HBV 바이러스 복제 단계 또는 이의 생성물을 방해하는 데 사용된다. 본 방법은 이러한 방법을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 하나 이상의 화학식 I의 화합물, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 I의 화합물의 제약적 활성 대사산물을 투여하는 단계를 포함한다. 치료 방법의 추가 실시 형태가 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기재되어 있다.

또한 본 발명은 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 입체이성질체, 동위원소 변이체, N-옥시드, 또는 용매화물에 관한 것이다:

[화학식 Ia]

여기서,

R^1a는 C_{6- 10}아릴 또는 5 또는 6원 헤테로아릴로서, R^1a는 메틸 또는 플루오로로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환되며;

R^2a는 수소 및 C_1-6알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;

R^3a는 Cl, CN, 및 C_1-4할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R^4a는 수소, 히드록시, 플루오로, 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X^a는 CF 또는 N이다.

추가 실시 형태는 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 화학식 Ia의 화합물의 제약적 활성 대사산물, 및 화학식 Ia의 화합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체와, 이들의 제약상 허용가능한 염을 포함한다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기술되거나 예시된 화학종으로부터 선택되는 화합물이다.

본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 Ia의 제약적 활성 대사산물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제 또는 하나 이상의 다른 약제 또는 치료제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 화학식 Ia의 화합물의 사용 방법 또는 용도에 관한 것이다. 실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 치료 또는 개선하고, HBV 생성의 억제를 증가시키고, HBV 캡시드 조립 또는 다른 HBV 바이러스 복제 단계 또는 이의 생성물을 방해하는 데 사용된다. 본 방법은 이러한 방법을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 Ia의 화합물의 제약적 활성 대사산물을 투여하는 단계를 포함한다. 치료 방법의 추가 실시 형태가 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기재되어 있다.

본 발명의 목적은 종래의 방법론 및/또는 선행 기술의 단점 중 적어도 하나를 극복 또는 개선하거나, 또는 이에 대한 유용한 대안을 제공하는 것이다. 본 발명의 추가의 실시 형태, 특징 및 장점은 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용] 및 개시된 주제의 실시를 통하여 명백해질 것이다.

본 발명의 주제의 추가의 실시 형태, 특징 및 장점은 이러한 개시의 다음의 상세한 설명 및 그 실시를 통하여 명백해질 것이다. 간결함을 위해, 본 명세서에 인용된 특허를 포함한 간행물은 본원에 참고로 포함된다.

화학식 I의 화합물, 및 이의 제약상 허용가능한 염, 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 개시된 화합물의 제약적 활성 대사산물이 본원에 제공된다.

일 실시 형태에서, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다:

[화학식 I]

여기서,

R¹은 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 6}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 치환된 페닐; 또는 1 또는 2개의 N 원자를 함유하고, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 6}알킬, OC_{1- 6}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 9원 이환식 고리이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;

R³은 H, F, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, CONHC_{1 - 4}알킬, CONHC_{3 - 6}시클로알킬, NHSO₂C_{1 - 4}알킬 및 NHSO₂C_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

H,

C_{1- 4}알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, CH₂CF₃, C_{1- 4}알킬, OH, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, SO₂N(CH₃)₂ 및 C_3-4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 실시 형태에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 및 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하며, 여기서,

R¹은 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리로서, 상기 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리는

- N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고/하거나;

- 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 6}알킬, OC_{1- 6}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;

더 구체적으로 R¹은 Cl, F, CN, CH₃, CF₃, 및 CF₂H로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;

R³은 H, F, OH, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, CONHC_{1 - 4}알킬, CONHC_3-6시클로알킬, NHSO₂C_{1 - 4}알킬 및 NHSO₂C_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

H,

C_{1- 4}알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하며,

여기서,

R¹은 Cl, F, CN, CH₃, CF₃, 및 CF₂H로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;

R³은 H, F, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, CONHC_{1 - 4}알킬, 및 CONHC_3-6시클로알킬, NHSO₂C_{1 - 4}알킬, NHSO₂C_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

H,

C_{1- 4}알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하며,

여기서,

R¹은 할로, 구체적으로 Cl 또는 F, CN, C_{1- 6}알킬, 구체적으로 CH₃, CH₂F, CHF₂, 및 CF₃H로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0이며;

W는 CHR³이며;

R³은 H, F, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, 및 NHSO₂C_{1 - 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_1-2알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사디아졸릴, 인돌릴, 이미다조[1,2-a]피리디닐, 및 퀴놀리닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

추가 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하며,

여기서,

R¹은 할로, 구체적으로 Cl 또는 F, CN, C_{1- 6}알킬, 구체적으로 CH₃, CH₂F, CHF₂, CF₃ 및 CF₂CH₃으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0이며;

W는 CHR³이며;

R³은 H, F, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, 및 NHSO₂C_{1 - 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_1-2알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사디아졸릴, 인돌릴, 이미다조[1,2-a]피리디닐, 및 퀴놀리닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 추가 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하며,

여기서,

R¹은 할로, 구체적으로 Cl 또는 F, CN, C_{1- 6}알킬, 구체적으로 CH₃, CH₂F, CHF₂, CF₃ 및 CF₂CH₃으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H 또는 메틸, 구체적으로 메틸이며;

n은 0이며;

W는 CHR³이며;

R³은 H이며;

X는 CH₂이며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 6원 단환식 방향족 고리(N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 및 옥사디아졸릴로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_{1- 2}알킬

(여기서, 상기 5 내지 6원 단환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O)이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R¹이 플루오로, 염소 및 시아노 치환체로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 치환된 페닐이고, 더 구체적으로 R¹이 디클로로페닐, 3-시아노-4-클로로페닐; 또는 3-시아노-4-플루오로페닐인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R¹이 하나 이상의 염소 치환체로 치환된 페닐인, 더 구체적으로 R¹이 디클로로페닐인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R²가 H 또는 메틸인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 Z가 C=O인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 X가 CH₂인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 W가 CH₂ 또는 CHF인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R⁵가 C_{1- 4}알킬, 및 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이며, 여기서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고, 헤테로원자는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되며, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R⁵가 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬인 화합물이며, 여기서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고, 헤테로원자는 N이며, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R⁵가 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬인 화합물이며, 여기서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 페닐, 피리딜, 피라졸릴 또는 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R⁵가 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬인 화합물이며, 여기서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 페닐, 피리딜, 피라졸릴 또는 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃ 및 OCF₂H로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 본원에 기술된 화합물이며, 여기서, Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_1-2알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사디아졸릴, 테트라졸릴, 인돌릴, 이미다조[1,2-a]피리디닐, 퀴놀리닐 및 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리미디닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 본원에 기술된 화합물이며, 여기서, Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 6원 단환식 방향고리(N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사디아졸릴, 및 테트라졸릴로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_{1- 2}알킬

(여기서, 상기 5 내지 6원 단환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 본원에 기술된 화합물이며, 여기서, Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 6원 단환식 방향고리(N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 및 옥사디아졸릴로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_{1- 2}알킬

(여기서, 상기 5 내지 6원 단환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 본원에 기술된 화합물이며, 여기서, Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 6원 단환식 방향고리(1, 2 또는 3개의 N 원자를 선택적으로 함유함)로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_{1- 2}알킬

(여기서, 상기 5 내지 6원 단환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 본원에 기술된 화합물이며, 여기서, Y는 NR⁵이며;

R⁵는

5 내지 6원 단환식 방향족 고리(1, 2, 또는 3개의 N 원자를 선택적으로 함유하며, 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 및 트리아졸릴로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 치환된 C_{1- 4}알킬, 구체적으로 C_{1- 2}알킬

(여기서, 상기 5 내지 6원 단환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 구체적으로 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 hepG2.117 세포주에서 HBV DNA의 억제에 대하여 0.10 μM 미만의 EC₅₀을 나타내는 화합물이다.

본 발명의 추가 실시 형태는 하기 기술된 화합물(표 1 참조), 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이다.

[표 1]

일 양태에서, 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 이의 제약상 허용가능한 염, 입체이성질체, 동위원소 변이체, N-옥시드, 또는 용매화물이 본원에 제공된다:

[화학식 Ia]

여기서,

R^1a는 C_{6- 10}아릴 또는 5 또는 6원 헤테로아릴로서, R^1a는 메틸 또는 플루오로로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환되며;

R^2a는 수소 및 C_{1- 6}알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;

R^3a는 Cl, CN, 및 C_{1- 4}할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R^4a는 수소, 히드록시, 플루오로, 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X^a는 CF 또는 N이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^1a가 다음으로부터 독립적으로 선택되는 화합물이다: 1H-1,2,4-트리아졸-3-일, 1,2,4-옥사디아졸-5-일, 1H-테트라졸-5-일, 1H-피라졸-3-일, 1-메틸-1H-피라졸-3-일, 1-메틸-1H-피라졸-5-일, 이속사졸-3-일, 이속사졸-5-일, 또는 페닐.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^2a가 수소 또는 메틸로부터 선택되는 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^3a가 Cl, CN, 또는 C_{1- 4}할로알킬인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 X^a가 CF인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 X^a가 N인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은

가 3-시아노-4-플루오로페닐, 3-클로로-4-플루오로페닐, 또는 4-플루오로-3-트리플루오로메틸페닐인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^4a가 수소, 히드록시, 또는 플루오로인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^4a가 수소인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^4a가 히드록시인 화합물이다.

실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R^4a가 플루오로인 화합물이다.

화학식 Ia의 화합물의 추가 실시 형태는 아래에 나타낸 바와 같은 화합물이다:

[표 2]

및 이들의 제약상 허용가능한 염, N-옥시드, 또는 용매화물.

제약 조성물

다음을 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 개시된다:

(A) 적어도 하나의 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:

[화학식 I]

(여기서,

R¹은 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리로서, 상기 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리는

- N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고/하거나;

- 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 6}알킬, OC_{1- 6}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며 ;

더 구체적으로 R¹은 Cl, F, CN, CH₃, CF₃, 및 CF₂H로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;

R³은 H, F, OH, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, CONHC_{1 - 4}알킬, CONHC_3-6시클로알킬, NHSO₂C_{1 - 4}알킬 및 NHSO₂C_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

H,

C_{1- 4}알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, CH₂CF₃, C_{1- 4}알킬, OH, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, SO₂N(CH₃)₂ 및 C_3-4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택됨),

및

(B) 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제.

다음을 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 개시된다:

(A) 적어도 하나의 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:

[화학식 I]

(여기서,

R¹은 Cl, F, CN, CH₃, CF₃, 및 CF₂H로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;

R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;

R³은 H, F, CONHC_{1 - 4}알킬, 및 CONHC_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Y는 NR⁵이며;

R⁵는

H,

C_{1- 4}알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택됨),

및

(B) 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제.

본 발명의 일 실시 형태는 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제 및 본원에 기술된 바와 같은, 예를 들어 하기 기술된 화합물(표 3 참조), 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 포함하는 제약 조성물이다.

[표 3]

다음을 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 개시된다:

(A) 적어도 하나의 하기 화학식 Ia의 화합물:

[화학식 Ia]

(여기서,

R^1a는 C_{6- 10}아릴 또는 5 또는 6원 헤테로아릴로서, R^1a는 메틸 또는 플루오로로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환되며;

R^2a는 수소 및 C_{1- 6}알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;

R^3a는 Cl, CN, 및 C_{1- 4}할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R^4a는 수소, 히드록시, 플루오로, 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택되며;

X^a는 CF 또는 N임);

및 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 입체이성질체, 동위원소 변이체, N-옥시드 또는 용매화물; 및

(B) 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제.

본 발명의 일 실시 형태는 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제 및 표 4에 열거된 적어도 하나의 화합물과, 이러한 화합물의 임의의 제약상 허용가능한 염, N-옥시드 또는 용매화물, 또는 이러한 화합물의 임의의 제약상 허용가능한 프로드러그, 또는 이러한 화합물의 임의의 제약적 활성 대사산물을 포함하는 제약 조성물이다.

[표 4]

실시 형태들에서, 제약 조성물은 적어도 하나의 추가의 활성제 또는 치료제를 포함한다. 추가의 활성 치료제는 예를 들어 항-HBV제, 예컨대 HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 캡시드 조립 조절제, 역전사효소 억제제, 면역조절제, 예컨대 TLR-작용제, 또는 HBV 생명 주기 및/또는 HBV 감염의 결과에 영향을 미치는 임의의 기타 약제를 포함할 수 있다. 본 발명의 활성제를 단독으로, 또는 하나 이상의 추가 활성제와 조합하여 사용하여 본 발명의 제약 조성물을 제형화한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물" 또는 "제약 조성물"은 본 발명 내에서 유용한 하나 이상의 화합물과 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물은 환자 또는 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 용이하게 한다. 화합물을 투여하는 다수의 기술(정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안구, 폐, 및 국소 투여를 포함하지만, 이에 한정되지 않음)이 당업계에 존재한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 환자 내로 또는 환자에게 운반하거나 수송하여 상기 화합물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있게 하는 데 관여하는, 제약상 허용가능한 물질, 조성물 또는 담체, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 안정제, 분산제, 현탁제, 희석제, 부형제, 증점제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로, 이러한 구성체는 신체의 하나의 기관 또는 일부로부터 신체의 또 다른 기관 또는 일부로 운반되거나 수송된다. 각각의 담체는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 비롯한 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용가능한 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: 당류, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말형 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 표면 활성제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장 식염수; 링거액(Ringer's solution); 에틸 알코올; 인산염 완충액; 및 제약 제형에 사용되는 다른 비독성 상용성 물질.

본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 또한 본 발명 내에서 유용한 화합물의 활성과 양립가능하고 환자에게 생리학적으로 허용가능한 모든 코팅, 항균 및 항진균제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 보충적 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 실시에 사용되는 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 추가 성분은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)]에 기술되어 있다.

"제약상 허용가능한 부형제"는 비독성이고, 생물학적으로 내용성이며, 그렇지 않으면 대상체에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 물질, 예컨대 불활성 물질을 지칭하는 것으로서, 이는 약리학적 조성물에 첨가되거나, 또는 달리 비히클, 담체, 또는 희석제로서 사용되어 약제의 투여를 용이하게 하고, 이와 양립가능하다. 부형제의 예는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당 및 전분 유형, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물유 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

활성제의 하나 이상의 투여 단위를 함유하는 제약 조성물의 전달 형태는 당업자에게 공지되거나 당업자가 이용가능하게 되는 적합한 제약 부형제 및 배합 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 조성물은 적합한 전달 경로, 예를 들어 경구, 비경구, 직장, 국소 또는 안구 경로에 의해, 또는 흡입에 의해 본 발명의 방법으로 투여될 수 있다.

제제는 정제, 캡슐, 사셰(sachet), 당의정, 산제, 과립, 로젠지, 재구성용 산제, 액체 제제 또는 좌제의 형태일 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 정맥내 주입, 국소 투여 또는 경구 투여용으로 제형화된다.

경구 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 용액, 에멀젼 또는 현탁액으로 제공될 수 있다. 경구 조성물을 제조하기 위하여, 화합물은 예를 들어, 일일 약 0.05 내지 약 100 mg/kg, 또는 일일 약 0.05 내지 약 35 mg/kg, 또는 일일 약 0.1 내지 약 10 mg/kg의 투여량을 생성하도록 제형화될 수 있다. 예를 들어, 일일 약 5 mg 내지 5 g의 총 일일 투여량은 일일 1회, 2회, 3회 또는 4회 투약함으로써 달성될 수 있다.

경구 정제는 불활성 희석제, 붕해제, 결합제, 활택제, 감미제, 착향제, 착색제 및 보존제와 같은 제약상 허용가능한 부형제와 혼합된 본 발명에 따른 화합물을 포함할 수 있다. 적합한 불활성 충전제는 탄산나트륨 및 탄산칼슘, 인산나트륨 및 인산칼슘, 락토스, 전분, 당, 글루코스, 메틸 셀룰로오스, 스테아르산마그네슘, 만니톨, 소르비톨 등을 포함한다. 예시적인 액체 경구 부형제는 에탄올, 글리세롤, 물 등을 포함한다. 전분, 폴리비닐-피롤리돈(PVP), 나트륨 전분 글리콜레이트, 미정질 셀룰로오스 및 알긴산이 적합한 붕해제이다. 결합제는 전분 및 젤라틴을 포함할 수 있다. 활택제는 존재하는 경우 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 원하는 경우, 정제는 위장관에서의 흡수를 지연시키기 위해 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 코팅될 수 있거나 장용 코팅으로 코팅될 수 있다.

경구 투여용 캡슐은 경질 및 연질 젤라틴 캡슐을 포함한다. 경질 젤라틴 캡슐을 제조하기 위하여, 본 발명의 화합물은 고체, 반고체 또는 액체 희석제와 혼합될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐은 본 발명의 화합물을 물, 오일, 예컨대 땅콩유 또는 올리브유, 액체 파라핀, 단쇄 지방산의 모노 및 디-글리세리드의 혼합물, 폴리에틸렌 글리콜 400, 또는 프로필렌 글리콜과 혼합함으로써 제조될 수 있다.

경구 투여용 리퀴드는 현탁액, 용액, 에멀젼 또는 시럽의 형태일 수 있거나, 또는 사용 전에 물 또는 기타 적합한 비히클을 이용하여 재구성하기 위한 건조 생성물로서 제공되거나 동결건조될 수 있다. 이러한 액체 조성물은 제약상 허용가능한 부형제, 예컨대 현탁제(예를 들어, 소르비톨, 메틸 셀룰로오스, 알긴산나트륨, 젤라틴, 히드록시에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 알루미늄 스테아레이트 겔 등); 비수성 비히클, 예를 들어 오일(예를 들어, 아몬드유 또는 분획화된 코코넛유), 프로필렌 글리콜, 에틸 알코올 또는 물; 보존제(예를 들어, 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산); 습윤제, 예컨대 레시틴; 및 원하는 경우 착향제 또는 착색제를 선택적으로 함유할 수 있다.

본 발명의 활성제는 또한 비경구 경로에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 좌제로서 직장 투여하기 위한 것으로 제형화될 수 있다. 정맥내, 근육내, 복강내 또는 피하 경로를 포함하는 비경구 사용을 위하여, 본 발명의 화합물은 적절한 pH 및 등장성으로 완충된 살균 수성 용액 또는 현탁액으로 또는 비경구적으로 허용가능한 오일로 제공될 수 있다. 적합한 수성 비히클은 링거액 및 등장성 염화나트륨을 포함한다. 이러한 형태는 앰플 또는 일회용 주사 장치와 같은 단위 용량 형태, 적절한 용량이 인출될 수 있는 바이알과 같은 다중 용량 형태, 또는 주사가능 제형을 제조하는 데 사용될 수 있는 고체 형태 또는 예비농축물로 제공된다. 예시적인 주입 용량은 수 분 내지 수 일의 범위의 기간에 걸쳐 제약적 담체와 혼합된 화합물 약 1 내지 1000 μg/kg/분의 범위일 수 있다.

국소 투여를 위하여, 화합물은 약 0.1% 내지 약 10%의 약물 대 비히클의 농도로 제약적 담체와 혼합될 수 있다. 본 발명의 화합물을 투여하는 또 다른 방식은 경피 전달에 영향을 미치기 위하여 패치 제형을 이용할 수 있다.

본 발명의 화합물은 대안적으로 본 발명의 방법에서 흡입에 의해, 비강 또는 경구 경로를 통하여, 예를 들어 적합한 담체를 또한 함유하는 스프레이 제형으로 투여될 수 있다.

사용 방법

본 개시 화합물은 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물, 더 구체적으로 이를 필요로 하는 인간에서 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 유용하다.

비제한적인 양태에서, 이들 화합물은 (i) HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 조립 및 기타 HBV 코어 단백질 기능을 조절 또는 파괴하거나, (ii) 감염성 바이러스 입자의 생성 또는 감염을 억제하거나, (iii) 캡시드 조립 조절제로서 작용하는 감소된 감염성 또는 복제 능력을 갖는 결함 바이러스 입자에 영향을 미치도록 HBV 캡시드와 상호작용할 수 있다. 특히, 그리고 임의의 특정 작용 기작에 얽매이지 않고, 본 개시 화합물은 정상적인 바이러스 캡시드 조립 및/또는 미성숙 또는 성숙 입자의 분해의 방해, 가속화, 감소, 지연 및/또는 억제에 의해 비리온 조립 및/또는 분해, 비리온 성숙, 바이러스 유출 및/또는 표적 세포 감염의 방해와 같은 항바이러스 효과를 초래하는 비정상적인 캡시드 형태를 유도함으로써 HBV를 치료하는 데 유용한 것으로 여겨진다. 본 개시 화합물은 캡시드의 안정성을 교란시키도록 성숙 또는 미성숙 바이러스 캡시드와 상호작용하는 캡시드 조립의 파괴자로서 작용하여 그의 조립 및/또는 분해에 영향을 미칠 수 있다. 본 개시 화합물은 바이러스 캡시드의 안정성, 기능 및/또는 정상적인 형태에 필요한 단백질 폴딩 및/또는 염 가교를 교란시켜 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있다. 본 개시 화합물은 캡시드에 결합하고 세포 폴리단백질 및 전구체의 대사를 변경하여 단백질 단량체 및/또는 올리고머 및/또는 비정상적인 입자의 비정상적인 축적을 초래할 수 있는데, 이는 세포 독성 및 감염된 세포의 사멸을 야기한다. 본 개시 화합물은 최적 안정성의 캡시드의 형성 실패를 야기할 수 있으며, 이는 (예를 들어, 감염성 동안) 바이러스의 효율적인 코팅해제 및/또는 분해에 영향을 준다. 본 개시 화합물은 캡시드 단백질이 미성숙형인 경우 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있다. 본 개시 화합물은 캡시드 단백질이 성숙형인 경우 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있다. 본 개시 화합물은 바이러스 감염성 동안 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있으며, 이는 추가로 HBV 바이러스 감염성을 약화시키고/시키거나 바이러스 로드를 감소시킬 수 있다. 본 개시 화합물에 의한 캡시드 조립 및/또는 분해의 방해, 가속화, 억제, 지연 및/또는 감소는 바이러스를 숙주 유기체로부터 근절할 수 있다. 본 개시 화합물에 의한 대상체로부터의 HBV의 근절은 유리하게는 만성 장기 요법의 필요성을 제거하고/하거나 장기 요법의 지속 기간을 감소시킨다.

본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 I의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

부가적으로, HBV는 델타 간염 바이러스(hepatitis delta virus; HDV)에 대하여 헬퍼(helper) 바이러스로서 작용하며, 전 세계적으로 1500만명 초과의 사람이 HBV/HDV 동시감염되어 있을 수 있다고 추정되고, 이때 HBV만을 앓고 있는 환자에 비해 간경변으로의 빠른 진행의 위험이 증가하고 비대상성 간경변(hepatic decompensation)이 증가한다(문헌[Hughes, S.A. et al. Lancet 2011, 378, 73-85]). 따라서 HDV는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 감염시킨다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 HBV/HDV 동시감염, 또는 HBV/HDV 동시감염과 관련된 질환의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다. 따라서, 특정 실시 형태에서, HBV 감염은 구체적으로 HBV/HDV 동시감염이고, 포유동물, 구체적으로 인간은 HBV/HDV 동시감염될 수 있거나 HBV/HDV 동시감염의 위험이 있다.

또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 단독요법에 적합하다. 실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 자연 또는 천연 HBV 주에 대하여 효과적이다. 실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 현재 공지된 약물에 대하여 저항성인 HBV 주에 대하여 효과적이다.

또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 화합물은 HBV cccDNA의 활성, 안정성, 기능 및 바이러스 복제 특성을 조절(예를 들어, 억제 또는 방해)하는 방법에 사용될 수 있다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 HBV cccDNA의 형성을 감소시키거나 예방하는 방법에 사용될 수 있다.

또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 화합물은 HBV cccDNA의 활성을 조절(예를 들어, 억제 또는 방해)하는 방법에 사용될 수 있다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 HBV cccDNA의 형성을 감소시키는 방법에 사용될 수 있다.

또 다른 실시 형태에서, 본 개시 화합물은 감염된 세포 내로부터의 HBV RNA 입자의 방출 또는 생성을 조절, 억제 또는 방해하는 방법에 사용될 수 있다.

추가 실시 형태에서, HBV RNA 입자의 총 부하(또는 농도)가 조절된다. 바람직한 실시 형태에서, HBV RNA의 총 부하가 감소된다.

또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유의 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여와 비교하여 개체에서 바이러스 로드를 더 큰 정도로 또는 더 빠른 속도로 감소시킨다.

일 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유의 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여보다 더 낮은 발생률의 바이러스 돌연변이 및/또는 바이러스 저항성을 야기한다.

또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은 개체에게 하나 이상의 HBV 백신, 뉴클레오시드 HBV 억제제, 인터페론 또는 이들의 임의의 조합물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

일 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 단독의 또는 역전사효소 억제제와 조합된 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 치료적 유효량을 개체에게 투여함으로써 HBV 바이러스 로드를 감소시키는 단계; 및 추가로 HBV 백신의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 I의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 단독의 또는 역전사효소 억제제와 조합된 화학식 Ia의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 치료적 유효량을 개체에게 투여함으로써 HBV 바이러스 로드를 감소시키는 단계; 및 추가로 HBV 백신의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체의 HBV 바이러스 로드를 모니터링하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서, 본 방법은 HBV 바이러스가 검출불가능하게 되는 기간 동안 실시된다.

조합물

하나 이상의 본 개시 화합물과 하나 이상의 추가 치료제의 조합물이 본원에 제공된다. 실시 형태들에서, 본원에 제공된 방법은 개체에게 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 병용 요법에 사용하기에 적합하다. 본 발명의 화합물은 HBV 감염을 치료하는 데 유용한 하나 이상의 추가 화합물과 조합되어 유용할 수 있다. 이들 추가 화합물은 HBV 감염의 증상 또는 영향을 치료, 예방 또는 감소시키는 것으로 공지된 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함할 수 있다.

예시적인 실시 형태에서, 추가 활성 성분은 HBV 감염과 관련된 병태 또는 장애의 치료에 효과적인 것으로 공지되거나 발견된 것들, 예컨대 또 다른 HBV 캡시드 조립 조절제 또는 HBV 감염과 관련된 특정 병태 또는 장애, 또는 HBV 감염 그 자체와 관련된 또 다른 표적에 대하여 활성인 화합물이다. 조합물은 (예를 들어, 조합물에 본 발명에 따른 활성제의 효력 또는 효과를 강화하는 화합물을 포함시킴으로써) 효능을 증가시키거나, 하나 이상의 부작용을 감소시키거나, 또는 본 발명에 따른 활성제의 필요한 용량을 감소시키는 역할을 할 수 있다. 추가 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 데 있어서 유사한 결과를 달성하는 데 필요한 단독의 상기 하나 이상의 추가 치료제의 투여와 비교하여 더 낮은 용량 또는 빈도로 상기 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 것을 허용한다.

이러한 화합물은 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는다: HBV 병용 약물, HBV 백신, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HBsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로필린 억제제, HBV 바이러스 침입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파르네소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민-2, 3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제, 및 HBV 생명 주기에 영향을 주고/주거나 HBV 감염의 결과에 영향을 주는 임의의 기타 약제 또는 이들의 조합.

실시 형태들에서, 본 발명의 화합물은 HBV 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, 인터페론, 예컨대 페길화된 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 캡시드 조립 조절제, 역전사효소 억제제, 시클로필린/TNF 억제제, TLR-작용제와 같은 면역조절제, HBV 백신, 및 HBV 생명 주기에 영향을 주고/주거나 HBV 감염의 결과에 영향을 주는 임의의 기타 약제 또는 이들의 조합과 병용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 약제(또는 이의 염)와 병용될 수 있다:

라미부딘(lamivudine)(3TC, 제픽스(Zeffix), 헵토비르(Heptovir), 에피비르(Epivir), 및 에피비르-HBV), 엔테카비르(바라클루드(Baraclude), 엔타비르(Entavir)), 아데포비르 디피복실(헵사라(Hepsara), 프레베온(Preveon), 비스-POM PMEA), 테노포비르 디소프록실 푸마레이트(비리어드(Viread), TDF 또는 PMPA)를 포함하지만 이에 한정되지 않는, HBV 역전사효소 억제제, 및 DNA 및 RNA 폴리머라아제 억제제;

인터페론 알파(IFN-α), 인터페론 베타(IFN-β), 인터페론 람다(IFN-λ), 및 인터페론 감마(IFN-γ)를 포함하지만 이에 한정되지 않는 인터페론;

바이러스 침입 억제제;

바이러스 성숙 억제제;

BAY 41-4109과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 문헌에 기술된 캡시드 조립 조절제;

역전사효소 억제제;

TLR-작용제와 같은 면역조절제; 및

AT-61((E)-N-(1-클로로-3-옥소-1-페닐-3-(피페리딘-1-일)프로프-1-엔-2-일)벤즈아미드), AT-130((E)-N-(1-브로모-1-(2-메톡시페닐)-3-옥소-3-(피페리딘-1-일)프로프-1-엔-2-일)-4-니트로벤즈아미드), 및 유사한 유사체와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 확실하거나 비공지된 기작의 약제.

실시 형태들에서, 추가 치료제는 인터페론이다. 용어 "인터페론" 또는 "IFN"은 바이러스 복제 및 세포 증식을 억제하고 면역 반응을 조절하는 고도로 상동성인 종-특이적 단백질의 패밀리의 임의의 구성원을 지칭한다. 인간 인터페론은 다음의 3가지 부류로 분류된다: 인터페론-알파(IFN-α), 인터페론-베타(IFN-β), 및 인터페론-오메가(IFN-ω)를 포함하는 I형, 인터페론-감마(IFN-γ)를 포함하는 II형, 및 인터페론-람다(IFN-λ)를 포함하는 III형. 개발되어 구매가능한 재조합 형태의 인터페론은 본원에서 사용되는 용어 "인터페론"에 포함된다. 화학적으로 변형되거나 돌연변이된 인터페론과 같은 인터페론의 아형도 본원에서 사용되는 용어 "인터페론"에 포함된다. 화학적으로 변형된 인터페론은 페길화 인터페론 및 글리코실화 인터페론을 포함한다. 인터페론의 예는 또한, 인터페론-알파-2a, 인터페론-알파-2b, 인터페론-알파-n1, 인터페론-베타-1a, 인터페론-베타-1b, 인터페론-람다-1, 인터페론-람다-2, 및 인터페론-람다-3을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 페길화 인터페론의 예는 페길화 인터페론-알파-2a 및 페길화 인터페론 알파-2b를 포함한다.

따라서, 일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 인터페론 알파(IFN-α), 인터페론 베타(IFN-β), 인터페론 람다(IFN-λ), 및 인터페론 감마(IFN-γ)로 이루어진 군으로부터 선택되는 인터페론과 조합되어 투여될 수 있다. 특정한 일 실시 형태에서, 인터페론은 인터페론-알파-2a, 인터페론-알파-2b, 또는 인터페론-알파-n1이다. 또 다른 특정한 실시 형태에서, 인터페론-알파-2a 또는 인터페론-알파-2b는 페길화된다. 바람직한 실시 형태에서, 인터페론-알파-2a는 페길화 인터페론-알파-2a(PEGASYS)이다.

또 다른 실시 형태에서, 추가 치료제는 인터페론 부류에 속하는 생물학적 약제를 포함하는 면역 조절제 또는 면역 자극제의 요법제로부터 선택된다.

또한, 추가 치료제는 HBV 복제 또는 지속성에 필요한 다른 필수 바이러스 단백질(들) 또는 숙주 단백질의 기능을 방해하는 약제일 수 있다.

다른 실시 형태에서, 추가 치료제는 바이러스의 침입 또는 성숙을 차단하거나 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 또는 비-뉴클레오시드(뉴클레오티드) 폴리머라아제 억제제와 같이 HBV 폴리머라아제를 표적으로 하는 항바이러스제이다. 병용 요법의 추가 실시 형태에서, 역전사효소 억제제 및/또는 DNA 및/또는 RNA 폴리머라아제 억제제는 지도부딘(Zidovudine), 디다노신(Didanosine), 잘시타빈(Zalcitabine), ddA, 스타부딘(Stavudine), 라미부딘, 아바카비르(Abacavir), 엠트리시타빈(Emtricitabine), 엔테카비르(Entecavir), 아프리시타빈(Apricitabine), 아테비라핀(Atevirapine), 리바비린, 아시클로비르, 팜시클로비르, 발라시클로비르, 간시클로비르, 발간시클로비르, 테노포비르(Tenofovir), 아데포비르(Adefovir), PMPA, 시도포비르, 에파비렌츠(Efavirenz), 네비라핀(Nevirapine), 델라비르딘(Delavirdine) 또는 에트라비린(Etravirine)이다.

일 실시 형태에서, 추가 치료제는 자연적인 제한된 면역 반응을 유도하여 관련없는 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 면역조절제이다. 즉, 면역조절제는 항원 제시 세포의 성숙, T-세포의 증식, 및 사이토카인 방출에 영향을 미칠 수 있다(예를 들어, 특히 IL-12, IL-18, IFN-알파, -베타, 및 -감마 및 TNF-알파).

추가 실시 형태에서, 추가 치료제는 TLR 조절제 또는 TLR 작용제, 예컨대 TLR-7 작용제 또는 TLR-9 작용제이다. 병용 요법의 추가 실시 형태에서, TLR-7 작용제는 SM360320(9-벤질-8-히드록시-2-(2-메톡시-에톡시)아데닌) 및 AZD 8848(메틸 [3-({[3-(6-아미노-2-부톡시-8-옥소-7,8-디히드로-9H-퓨린-9-일)프로필][3-(4-모르폴리닐)프로필]아미노}메틸)페닐]아세테이트)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

병용 요법의 추가 실시 형태에서, TLR-7 작용제는 SM360320(9-벤질-8-히드록시-2-(2-메톡시-에톡시)아데닌) 및 AZD 8848(메틸 [3-({[3-(6-아미노-2-부톡시-8-옥소-7,8-디히드로-9H-퓨린-9-일)프로필][3-(4-모르폴리닐)프로필]아미노}메틸)페닐]아세테이트)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, HBV 백신은 RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GENEVAC-B, 또는 SHANVAC B 중 적어도 하나이다.

또 다른 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 단독의 또는 역전사효소 억제제와 조합된 본 발명의 화합물의 치료적 유효량을 개체에게 투여함으로써 HBV 바이러스 로드를 감소시키는 단계; 및 추가로 HBV 백신의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 역전사효소 억제제는 지도부딘, 디다노신, 잘시타빈, ddA, 스타부딘, 라미부딘, 아바카비르, 엠트리시타빈, 엔테카비르, 아프리시타빈, 아테비라핀, 리바비린, 아시클로비르, 팜시클로비르, 발라시클로비르, 간시클로비르, 발간시클로비르, 테노포비르, 아데포비르, PMPA, 시도포비르, 에파비렌츠, 네비라핀, 델라비르딘 또는 에트라비린 중 하나일 수 있다.

본원에 기술된 임의의 병용 요법에 있어서, 상승 효과는 예를 들어 Sigmoid-E_max 방정식(문헌[Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453]), 뢰베(Loewe) 가법성의 방정식(문헌[Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326]) 및 중간값-효과 방정식(문헌[Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55)]과 같은 적합한 방법을 사용하여 계산될 수 있다. 상기 언급된 각각의 방정식을 실험 데이터에 적용하여 상응하는 그래프를 생성하여 약물 조합의 효과의 평가에 도움을 줄 수 있다. 상기 언급된 방정식과 관련된 상응하는 그래프는 각각 농도-효과 곡선, 이소볼로그램 곡선 및 조합 지수 곡선이다.

방법

본 출원은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

본 방법은 다음의 단계 a), b), c), d), e) 및 f) 중에서 적어도 하나의 단계를 포함한다:

a) NaBH₃CN의 존재 하에 하기 화학식 II:

[화학식 II]

의 화합물을 하기 화학식 III:

[화학식 III]

의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 형성하는 단계:

[화학식 IV]

(여기서, n은 0 또는 1의 정수이며;

G¹은 디클로로페닐이며;

G²는 수소 또는 C_1-4알킬이며;

G³은 수소 또는 C_1-4알킬이며;

G⁴는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨);

b) 요오드화칼륨(KI)의 존재 하에 하기 화학식 V:

[화학식 V]

의 화합물을 하기 화학식 VI:

[화학식 VI]

의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 VII의 화합물을 형성하는 단계:

[화학식 VII]

(여기서, n은 0이며,

G¹은 디클로로페닐이며;

G²는 수소 또는 C_{1- 4}알킬이며;

G⁵는 수소 또는 C_1-4알킬이며;

G⁶은 C_{2- 5}알키닐,

N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리(상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, C_{3- 4}시클로알킬 및 SO₂N(CH₃)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)임);

c) 하기 화학식 VIII:

[화학식 VIII]

의 화합물을, 선택적으로 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데스-7-엔(DBU)의 존재 하에, 1,5,7-트리아자바이시클로[4.4.0]데스-5-엔(TBD) 또는 트리메틸알루미늄(Al(CH₃)₃)과 반응시켜 하기 화학식 IX:

[화학식 IX]

의 화합물을 형성하는 단계

(여기서,

R은 수소 또는

이며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

G¹은 디클로로페닐 또는 tert-부톡시드이며;

G²는 수소 또는 C_{1- 4}알킬이며;

G⁷은 C_1-4알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,

N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리(상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, C_{3- 4}시클로알킬 및 SO₂N(CH₃)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨),

C_2-5알키닐이며;

G⁸은 수소 또는 C_1-4알킬임);

d) 비-친핵성 염기, 더 구체적으로 탄산세슘(Cs₂CO₃) 또는 수소화나트륨(NaH)의 존재 하에 하기 화학식 X:

[화학식 X]

의 화합물을 하기 화학식 XI:

[화학식 XI]

의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 XII의 화합물을 형성하는 단계:

[화학식 XII]

(여기서, n은 0 또는 1의 정수이며;

G¹은 디클로로페닐이며;

G²는 수소 또는 C_1-4알킬이며;

G⁹는 수소 또는 C_1-4알킬이며;

G¹⁰은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리(상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_1-4알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, C_{3- 4}시클로알킬, C(=O)Ot-Bu 및 SO₂N(CH₃)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)이며;

L은 브로마이드, 클로라이드 또는 요오다이드임);

e) 하기 화학식 XIII:

[화학식 XIII]

의 화합물을 강산, 더 구체적으로 염산(HCl) 또는 트리플루오로아세트산(TFA)과 반응시켜 하기 화학식 XIV의 화합물을 형성하는 단계:

[화학식 XIV]

(여기서,

n은 0 또는 1의 정수이며;

G²는 수소 또는 메틸이며;

G¹¹은 H,

C_1-4알킬,

하나 이상의 F로 치환된 C_1-4알킬,

5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,

상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)이며;

Q는 CH₂, CHF, CH(CH₂OH), CH(CH₂F), C=CH₂, 또는 CHNHSO₂CH₃이며;

R은 CH₂ 또는 O이며;

T는 C=O 또는 C=S임);

f) 비-친핵성 염기, 더 구체적으로 탄산나트륨(Na₂CO₃), 트리에틸아민(Et₃N) 또는 디이소프로필에틸아민(DIPEA)의 존재 하에, 하기 화학식 XIV:

[화학식 XIV]

의 화합물을 하기 화학식 XV:

[화학식 XV]

의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 XVI의 화합물을 형성하는 단계:

[화학식 XVI]

(여기서, R₁은 디클로로페닐이며, G², n, Q, R, T 및 G¹¹은 단계 e)에서 정의됨)

(단,

방법이 단계 a를 포함하는 경우, 방법은 단계 c를 추가로 포함하고,

방법이 단계 b를 포함하는 경우, 방법은 단계 c를 추가로 포함하고,

방법이 단계 e를 포함하는 경우, 방법은 단계 f를 추가로 포함함).

정의

본 발명을 설명하기 위해 사용된 다양한 용어의 정의가 아래에 열거되어 있다. 이들 정의는 특정한 경우에 달리 제한되지 않는 한, 개별적으로 또는 더 큰 그룹의 일부로서 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 용어에 적용된다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 일반적으로, 적용가능 분야의 숙련자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 사용된 명명법 및 세포 배양, 분자 유전학, 유기 화학, 및 펩티드 화학에서의 실험실 절차는 당업계에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것들이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 단수형 용어("a" 및 "an")는 하나 이상의(즉, 적어도 하나의) 이의 문법적 대상을 지칭한다. 예를 들어, "요소"는 하나 이상의 요소를 의미한다. 더욱이, "포함하는"이라는 용어와, 다른 형태, 예컨대 "포함하고 있다", "포함하다", 및 "포함된"의 사용은 한정적인 것이 아니다.

명세서 및 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하는"은 "~으로 이루어진" 및 "~으로 본질적으로 이루어진" 실시 형태를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다", "포함하고 있다", "갖는", "갖다", "할 수 있다", "함유하다", 및 이들의 변이형은 지명된 성분들/단계들의 존재를 필요로 하고 다른 성분들/단계들의 존재를 허용하는 개방형 연결 문구(open-ended transitional phrase), 용어 또는 단어인 것으로 의도된다. 그러나, 이러한 설명은 조성물 또는 공정을 열거된 화합물로 "이루어진" 및 "본질적으로 이루어진" 것으로 설명하는 것으로도 해석되어야 하며, 이는 지명된 화합물만이 임의의 제약상 허용가능한 담체와 함께 존재하는 것을 허용하고, 다른 화합물은 배제한다. 본원에 개시된 모든 범위는 인용된 종점을 포함하고 독립적으로 조합가능하다(예를 들어, "50 mg 내지 300 mg"의 범위는 종점인 50 mg 및 300 mg과, 모든 중간 값을 포함한다). 범위의 종점 및 본원에 개시된 임의의 값은 정확한 범위 또는 값으로 한정되지 않으며; 이러한 범위 및/또는 값의 근사치를 포함하기에 충분히 부정확하다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 근사치에 대한 표현은 관련된 기본 기능을 변화시키지 않으면서 달라질 수 있는 임의의 정량적 표현을 수식하도록 적용될 수 있다. 따라서, "실질적으로"와 같은 용어(들)로 수식된 값은 경우에 따라서는 특정된 정확한 값으로 한정되지 않을 수 있다. 적어도 일부의 경우, 근사치에 대한 표현은 값을 측정하기 위한 기기의 정밀도에 해당할 수 있다.

용어 "알킬"은 사슬에 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기의 예는 메틸(Me, 이는 또한 기호 "/"로 구조적으로 도시될 수 있음), 에틸(Et), n-프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸(tBu), 펜틸, 이소펜틸, tert-펜틸, 헥실, 이소헥실, 및 당업계의 통상적인 기술 및 본원에 제공된 교시에 비추어 볼 때 전술한 예 중 어느 하나와 등가인 것으로 간주될 기를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 C₁-₄알킬은 사슬에 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 C₁-₆알킬은 사슬에 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다.

용어 "시클로알킬"은 탄소환당 3 내지 12개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 부분 포화, 단환식, 융합 다환식, 또는 스피로 다환식 탄소환을 지칭한다. 시클로알킬 기의 예시적인 예는 적절하게 결합된 모이어티들의 형태의 하기 엔티티를 포함한다:

.

단환식, 이환식 또는 삼환식 방향족 탄소환은 1, 2 또는 3개의 고리로 이루어진 방향족 고리 시스템을 나타내고, 상기 고리 시스템은 탄소 원자만으로 구성되며; 방향족이라는 용어는 당업자에게 잘 알려져 있으며 4n + 2개의 전자, 즉 6, 10, 14개 등의 π-전자를 갖는 환형 공액(cyclically conjugated) 시스템을 나타낸다(

의 법칙).

단환식, 이환식 또는 삼환식 방향족 탄소환의 특정 예로는 페닐, 나프탈레닐, 안트라세닐이 있다.

용어 "페닐"은 하기 모이어티를 나타낸다:

.

용어 "헤테로아릴"은 N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자 및 탄소 원자를 함유하는 5 내지 10개의 고리 구성원을 갖는 방향족 단환식 또는 이환식 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 용어 헤테로아릴에는, 고리가 탄소 원자로 이루어지고 적어도 하나의 헤테로원자 구성원을 갖는, 5 또는 6원의 방향족 고리가 포함된다. 적합한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황을 포함한다. 5원 고리의 경우, 헤테로아릴 고리는 질소, 산소, 또는 황 중 하나의 구성원 및 추가로 최대 3개의 추가 질소를 함유하는 것이 바람직하다. 6원 고리의 경우, 헤테로아릴 고리는 바람직하게는 1 내지 4개의 질소 원자, 예를 들어 테트라졸릴(예를 들어,

), 더 구체적으로 1 내지 3개의 질소 원자를 함유한다. 6원 고리가 3개의 질소를 갖는 경우, 최대 2개의 질소 원자가 인접한다. 헤테로아릴 기의 예는 푸릴, 티에닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사디아졸릴, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 벤조푸릴, 벤조티에닐, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조트리아졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 및 퀴나졸리닐을 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 헤테로아릴은 안정한 구조를 발생시키는 임의의 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 펜던트 기에 부착된다.

당업자는 상기 열거되거나 예시된 헤테로아릴 기의 화학종이 총망라된 것이 아니며, 이러한 정의된 용어의 범주 내의 추가의 화학종이 또한 선택될 수 있음을 인식할 것이다.

용어 "시아노"는 기 -CN을 지칭한다.

용어 "할로" 또는 "할로겐"은 클로로, 플루오로, 브로모 또는 요오도를 나타낸다.

용어 "치환된"은 명시된 기 또는 모이어티가 하나 이상의 치환체를 가짐을 의미한다. 용어 "비치환된"은 명시된 기가 치환체를 갖지 않음을 의미한다. 용어 "선택적으로 치환된"은 명시된 기가 비치환되거나 하나 이상의 치환체로 치환됨을 의미한다. "치환된"이라는 용어가 구조 시스템을 설명하는 데 사용되는 경우, 치환은 상기 시스템의 임의의 원자가-허용 위치에서 일어남을 의미한다. 특정 모이어티 또는 기가 임의의 특정 치환체로 치환되거나 선택적으로 치환된 것으로 명시적으로 언급되지 않은 경우, 이러한 모이어티 또는 기는 비치환된 것으로 의도됨이 이해된다.

용어 "파라", "메타", 및 "오르토"는 당업계에서 이해되는 바와 같은 의미를 갖는다. 따라서, 예를 들어, 완전히 치환된 페닐 기는 페닐 고리의 부착점에 인접한 "오르토"(o) 위치 둘 모두, "메타"(m) 위치 둘 모두, 및 상기 부착점의 맞은편의 하나의 "파라"(p) 위치에 치환체를 갖는다. 페닐 고리 상의 치환체의 위치를 더 명확히 하기 위하여, 아래에 예시된 바와 같이 상기 2개의 다른 오르토 위치를 오르토 및 오르토'로 표기하고 상기 2개의 다른 메타 위치를 메타 및 메타'로 표기한다.

피리딜 기 상의 치환체를 언급할 때, 용어 "파라", "메타" 및 "오르토"는 피리딜 고리의 부착점에 대한 치환체의 배치를 지칭한다. 예를 들어, 아래의 구조는 오르토 위치에 X¹ 치환체, 메타 위치에 X² 치환체, 파라 위치에 X³ 치환체가 있는 3-피리딜로 설명된다:

.

더욱 간결한 설명을 제공하기 위하여, 본원에 제공된 양적 표현의 일부는 "약"이라는 용어로 한정되지 않는다. 용어 "약"이 명시적으로 사용되는지 여부에 관계없이, 본원에 제공된 모든 양은 실제 주어진 값을 나타내려는 것이고, 또한 이러한 주어진 값에 대한 실험 및/또는 측정 조건으로 인한 근사치 및 등가물을 포함하여 당업계의 통상적인 기술에 기초하여 합리적으로 추론될 수 있는 이러한 주어진 값에 대한 근사치를 나타내려는 것으로 이해된다. 수율이 백분율로 주어질 때마다, 그러한 수율은, 특정한 화학량론적 조건 하에서 얻어질 수 있는 엔티티의 최대 양에 대한 수율이 주어지는 엔티티의 질량을 나타낸다. 백분율로 주어진 농도는 다르게 표시되지 않는 한 질량비를 지칭한다.

용어 "완충" 용액 또는 "완충제" 용액은 본원에서 이들의 표준 의미에 따라 상호교환가능하게 사용된다. 완충 용액은 배지의 pH를 조절하는 데 사용되며, 이의 선택, 용도 및 기능은 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[G.D. Considine, ed., Van Nostrand's Encyclopedia of Chemistry, p. 261, 5^th ed. (2005)]을 참조한다(이는 특히 완충제 용액과, 완충제 성분의 농도가 완충제의 pH와 어떻게 관련되는지를 설명함). 예를 들어, 완충 용액은 용액의 pH를 약 7.5에서 유지하도록 용액에 MgSO₄ 및 NaHCO₃을 10:1(w/w)의 비로 첨가하여 얻는다.

본원에 제공된 임의의 화학식은 구조식에 의해 도시된 구조 및 특정 변형 또는 형태를 갖는 화합물을 나타내고자 한다. 특히, 본원에 제공된 임의의 화학식의 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있으므로 상이한 거울상이성질체 형태로 존재할 수 있다. 상기 일반 화학식의 화합물의 모든 광학 이성질체 및 이의 혼합물은 상기 화학식의 범주 내에 있는 것으로 간주된다. 따라서, 본원에 제공된 임의의 화학식은 라세미체, 하나 이상의 거울상이성질체 형태, 하나 이상의 부분입체이성질체 형태, 하나 이상의 회전장애이성질체 형태, 및 이들의 혼합물을 나타내고자 한다. 또한, 특정 구조는 기하 이성질체(즉, 시스 및 트랜스 이성질체), 호변이성질체 또는 회전장애이성질체로 존재할 수 있다.

동일한 분자식을 갖지만 원자 결합의 성질 또는 시퀀스 또는 공간에서의 원자 배열이 상이한 화합물을 "이성질체"로 칭함이 또한 이해되어야 한다.

서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 "부분입체이성질체"라고 하고, 거울상들이 서로 겹쳐지지 않는 것을 "거울상이성질체"라고 한다. 예를 들어, 화합물이 비대칭 중심을 갖는 경우, 이것은 4개의 다른 기에 결합되고, 한 쌍의 거울상이성질체가 가능하다. 거울상이성질체는 비대칭 중심의 절대 배열에 의해 특성화될 수 있으며 Cahn 및 Prelog의 R- 및 S-시퀀싱 규칙에 의해 설명되거나 분자가 편광면을 회전시키고 우선성 또는 좌선성으로(즉, 각각 (+)- 또는 (-)-이성질체로서) 지정되는 방식에 의해 설명된다. 키랄 화합물은 개별 거울상이성질체 또는 이들의 혼합물로 존재할 수 있다. 동일한 비율의 거울상이성질체들을 포함하는 혼합물은 "라세미 혼합물"로 칭해진다.

"호변이성질체"는 특정 화합물 구조의 상호교환가능한 형태이고 수소 원자 및 전자의 변위가 다양한 화합물을 지칭한다. 따라서 두 구조는 π 전자 및 원자(보통 H)의 이동을 통하여 평형 상태에 있을 수 있다. 예를 들어, 엔올과 케톤은 산 또는 염기 처리에 의해 빠르게 상호전환되기 때문에 호변이성질체이다. 호변이성질체의 또 다른 예로는 페닐 니트로메탄의 산- 및 니트로-형태가 있으며, 이들도 마찬가지로 산 또는 염기 처리에 의해 형성된다.

호변이성질체 형태는 관심 화합물의 최적의 화학 반응성 및 생물학적 활성의 달성과 관련될 수 있다.

본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있고; 따라서 이러한 화합물은 개별 (R)- 또는 (S)-입체이성질체로서 또는 이들의 혼합물로서 생성될 수 있다.

달리 지시되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에서의 특정 화합물의 설명 또는 명명은 개별 거울상이성질체 및 이들의 혼합물(라세미 혼합물 또는 기타) 둘 다를 포함하고자 한다. 입체화학의 결정 방법 및 입체이성질체의 분리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.

특정 예는 절대 거울상이성질체로 표시되지만 배열이 알려지지 않은 거울상순수 물질을 나타내고자 하는 화학 구조를 포함한다. 이러한 경우 (R*) 또는 (S*) 또는 (*R) 또는 (*S)를 명칭에 사용하여 상응하는 입체중심의 절대 입체화학이 알려져 있지 않음을 나타낸다. 따라서 (R*) 또는 (*R)로 지정된 화합물은 (R) 또는 (S)의 절대 배열을 갖는 거울상순수 화합물을 지칭한다. 절대 입체화학이 확인된 경우, 구조는 (R) 및 (S)를 사용하여 명명된다.

기호

및

는 본원에 예시된 화학 구조에서 동일한 공간 배치를 의미하는 것으로 사용된다. 이와 유사하게, 기호

및

는 본원에 예시된 화학 구조에서 동일한 공간 배치를 의미하는 것으로 사용된다.

추가로, 본원에 제공된 임의의 화학식은 이러한 형태가 명시적으로 열거되지 않은 경우에도 이러한 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체, 및 이들의 혼합물을 또한 지칭하고자 한다. 특정한 화학식 I의 화합물, 또는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 용매화물로서 수득될 수 있다. 용매화물은 용액 상태의 또는 고체 또는 결정질 형태로서의, 본 발명의 화합물과 하나 이상의 용매와의 상호작용 또는 착물화로부터 형성된 것을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 용매는 물이고 용매화물은 수화물이다. 또한, 화학식 I의 화합물의 특정 결정질 형태, 또는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 공결정으로서 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 결정질 형태로 수득되었다. 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물의 결정질 형태는 사실상 입방체였다. 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 결정질 형태로 수득되었다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 여러 다형 형태 중 하나로, 결정질 형태들의 혼합물로서, 다형 형태로서, 또는 비정질 형태로서 수득되었다. 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물들은 용액 중에서 하나 이상의 결정질 형태들 및/또는 다형 형태들 사이에서 전환된다.

추가로, 본원에 제공된 임의의 화학식은 이러한 형태가 명시적으로 열거되지 않은 경우에도 이러한 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체, 및 이들의 혼합물을 또한 지칭하고자 한다. 특정한 화학식 Ia의 화합물, 또는 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 용매화물로서 수득될 수 있다. 용매화물은 용액 상태의 또는 고체 또는 결정질 형태로서의, 본 발명의 화합물과 하나 이상의 용매와의 상호작용 또는 착물화로부터 형성된 것을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 용매는 물이고 용매화물은 수화물이다. 또한, 화학식 Ia의 화합물의 특정 결정질 형태, 또는 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 공결정으로서 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, 화학식 Ia의 화합물은 결정질 형태로 수득되었다. 다른 실시 형태에서, 화학식 Ia의 화합물의 결정질 형태는 사실상 입방체였다. 다른 실시 형태에서, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 결정질 형태로 수득되었다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 Ia의 화합물은 여러 다형 형태 중 하나로, 결정질 형태들의 혼합물로서, 다형 형태로서, 또는 비정질 형태로서 수득되었다. 다른 실시 형태에서, 화학식 Ia의 화합물들은 용액 중에서 하나 이상의 결정질 형태들 및/또는 다형 형태들 사이에서 전환된다.

본원에서 화합물에 대한 언급은 다음 중 어느 하나에 대한 언급을 의미한다: (a) 이러한 화합물의 실제로 인용된 형태, 및 (b) 명명될 때 이러한 화합물이 고려되는 매질에서의 그 화합물의 형태들 중 임의의 것. 예를 들어, R-COOH와 같은 화합물에 대한 본원에서의 언급은 예를 들어, R-COOH_(s), R-COOH_(sol), 및 R-COO^- _(sol) 중 어느 하나에 대한 언급을 포함한다. 이 예에서, R-COOH_(s)는 예를 들어 정제 또는 일부 다른 고체 제약 조성물 또는 제제에 있을 수 있는 고체 화합물을 지칭하고; R-COOH_(sol)는 용매 중 화합물의 비해리된 형태를 지칭하고; R-COO^- _(sol)는 용매 중 화합물의 해리된 형태, 예컨대 수성 환경에서의 화합물의 해리된 형태를 지칭한다(이러한 해리된 형태가 R-COOH로부터 유도되든지, 이의 염으로부터 유도되든지, 또는 고려 중인 매질에서 해리 시 R-COO^-를 생성하는 임의의 다른 엔티티로부터 유도되든지 간에). 또 다른 예에서, "화학식 R-COOH의 화합물에 엔티티를 노출시키는 것"과 같은 표현은 그러한 노출이 일어나는 매질에 존재하는 화합물 R-COOH의 형태(들)에 대한 그러한 엔티티의 노출을 지칭한다. 또 다른 예에서, "엔티티를 화학식 R-COOH의 화합물과 반응시키는 것"과 같은 표현은 (a) 이러한 반응이 일어나는 매질에 존재하는 이러한 엔티티의 화학적 관련 형태(들)의 이러한 엔티티를, (b) 이러한 반응이 일어나는 매질에 존재하는 화합물 R-COOH의 화학적 관련 형태(들)과 반응시키는 것을 지칭한다. 이와 관련하여, 이러한 엔티티가 예를 들어 수성 환경에 있는 경우, 화합물 R-COOH가 이러한 상기 매질에 있으므로 엔티티가 R-COOH_(aq) 및/또는R-COO^- _(aq)와 같은 화학종에 노출되고 있는 중임이 이해되며, 여기서, 하첨자 "(aq)"는 화학 및 생화학에서의 통상적인 의미에 따라 "수성"을 나타낸다. 이러한 명명 예에서 카르복실산 작용기가 선택되었지만; 이 선택은 제한으로 의도되는 것이 아니라 단지 예시일 뿐이다. 유사한 예가 당해 화합물을 함유하는 매질에서 공지된 방식에 따라 상호작용하거나 변환되는 임의의 다른 기, 및 아민에 있는 것과 같은 염기성 질소 구성원, 히드록실을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다른 작용기에 관하여 제공될 수 있음이 이해된다. 이러한 상호작용 및 변환은 해리, 회합, 호변이성, 가수분해를 포함하는 가용매분해, 수화를 포함하는 용매화, 양성자화 및 탈양성자화를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이와 관련하여 추가의 예는, 주어진 매질에서의 이러한 상호작용 및 변형이 당업자에게 공지되어 있기 때문에 본원에 제공되지 않는다.

또 다른 예에서, 쯔비터이온성 화합물은 쯔비터이온 형태로 명시적으로 명명되지 않더라도 쯔비터이온을 형성하는 것으로 알려진 화합물을 언급함으로써 본원에 포함된다. 쯔비터이온, 쯔비터이온들, 및 이들의 동의어인 쯔비터이온성 화합물(들)과 같은 용어는 잘 알려져 있고 정의된 과학적 명칭의 표준 세트의 일부인 표준 IUPAC-승인 명칭이다. 이와 관련하여 쯔비터이온이라는 명칭은 ChEBI(Chemical Entities of Biological Interest) 분자 엔티티 사전에 의해 명칭 식별 CHEBI:27369로 지정된다. 일반적으로 잘 알려진 바와 같이, 쯔비터이온 또는 쯔비터이온성 화합물은 부호가 반대인 형식 단위 전하를 갖는 중성 화합물이다. 때때로 이러한 화합물은 "내부 염"이라는 용어로 지칭된다. 다른 출처에서는 이러한 화합물이 "쌍극성 이온"으로 지칭되지만, 다른 출처에서는 후자의 용어가 잘못된 명칭으로 간주된다. 구체적인 예로서, 아미노에탄산(아미노산 글리신)은 화학식 H₂NCH₂COOH를 가지며, 이것은 일부 매질에서(이 경우 중성 매질에서) 쯔비터이온 양쪽성 이온 ⁺H₃NCH₂COO^-의 형태로 존재한다. 이들 용어의 공지되고 잘 확립된 의미에서의 쯔비터이온, 쯔비터이온성 화합물, 내부 염 및 쌍극성 이온은 본 발명의 범주 내에 있으며, 이는 어떠한 경우에도 당업자에 의해 그렇게 인식되는 바와 같다. 당업자에 의해 인식될 각각의 모든 실시 형태를 명명할 필요는 없기 때문에, 본 발명의 화합물과 관련된 쯔비터이온성 화합물의 구조는 본원에 명시적으로 제공되지 않는다. 그러나 이들은 본 발명의 실시 형태들의 일부이다. 이와 관련하여 추가의 예는, 주어진 화합물의 다양한 형태를 초래하는 주어진 매질에서의 상호작용 및 변형이 당업자에게 공지되어 있기 때문에 본원에 제공되지 않는다.

본원에 제공된 임의의 화학식은 또한 비표지 형태 및 동위원소 표지 형태의 화합물을 나타내고자 한다. 동위원소 표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는 본원에 제공된 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물 내에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소 및 요오드의 동위원소, 예컨대 각각 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²⁵I를 포함한다. 이러한 동위원소 표지 화합물은 대사 연구(바람직하게는 ¹⁴C 사용), 반응 역학 연구(예를 들어 중수소(즉, D 또는 ²H) 또는 삼중수소(즉, T 또는 ³H) 사용), 검출 또는 영상 기술, 예컨대 양전자 방출 단층 촬영(PET) 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영(SPECT)(약물 또는 기질 조직 분포 분석을 포함함), 또는 환자의 방사선 치료에 유용하다. 구체적으로, ¹⁸F 또는 ¹¹C 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 추가로, 중수소(즉, ²H)와 같은 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 기인하는 특정한 치료적 장점(예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지 화합물 및 이의 프로드러그는 일반적으로 동위원소 비표지 시약을 용이하게 입수가능한 동위원소 표지 시약으로 치환하여 하기 기술된 반응식 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행함으로써 제조될 수 있다.

본원에 제공된 임의의 화학식을 언급할 때, 특정 변수에 대한 가능한 화학종의 목록으로부터 특정 모이어티를 선택하는 것은 다른 곳에 나타나는 변수에 대한 화학종의 상기 선택을 정의하고자 하는 것이 아니다. 환언하면, 변수가 두 번 이상 나타나는 경우, 달리 기재되지 않는 한, 특정된 목록으로부터의 화학종의 선택은 화학식의 다른 곳에서의 상기 변수에 대한 화학종의 선택과 무관하다.

지정 및 명명법에 대한 전술한 해석적 고려 사항에 따르면, 본원에서 세트에 대한 명시적 언급은 화학적으로 유의미한 경우 그리고 달리 지시되지 않는 한, 그러한 세트의 실시 형태에 대한 독립적인 언급, 및 명시적으로 언급된 세트의 하위세트의 가능한 실시 형태의 각각의 모든 것에 대한 언급을 의미함이 이해된다.

치환체 용어에 대한 첫 번째 예로서, 치환체 S¹ _예가 S₁ 및 S₂ 중 하나이고 치환체 S² _예가 S₃ 및 S₄ 중 하나인 경우, 이러한 지정은 다음의 선택에 따라 주어진 본 발명의 실시 형태를 지칭한다: S¹ _예가 S₁이고 S² _예가 S₃임; S¹ _예가 S₁이고 S² _예가 S₄임; S¹ _예가 S₂이고 S² _예가 S₃임; S¹ _예가 S₂이고 S² _예가 S₄임; 및 등가의 개개의 이러한 선택. "S¹ _예는 S₁ 및 S₂ 중 하나이고, S² _예는 S₃ 및 S₄ 중 하나임"이라는 더 짧은 용어는 이에 따라 간결함을 위해 본원에서 사용되지만, 제한을 위한 것은 아니다. 일반적인 용어로 기재된 치환체 용어에 대한 전술한 첫 번째 예는 본원에 기술된 다양한 치환체 지정을 예시하기 위한 것이다. 치환체에 대해 본원에 제공된 전술한 규칙은 적용가능한 경우 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, G¹, G², G³, G⁴, G⁵, G⁶, G⁷, G⁸, G⁹, G¹⁰, G¹¹, n, L, R, T, Q, W, X, Y, 및 Z 및 본원에 사용된 임의의 다른 일반 치환체 기호와 같은 구성원까지 확대된다.

또한, 임의의 구성원 또는 치환체에 대해 둘 이상의 지정이 주어지는 경우, 본 발명의 실시 형태는 독립적으로 취해지는 열거된 지정, 및 이의 등가물로부터 만들어질 수 있는 다양한 그룹을 포함한다. 치환체 용어에 대한 두 번째 예로서, 치환체 S_예가 S₁, S₂, 및 S₃ 중 하나임이 본원에 기술된다면, 이 목록은 다음의 것인 본 발명의 실시 형태를 지칭한다: S_예가 S₁임; S_예가 S₂임; S_예가 S₃임; S_예가 S₁ 및 S₂ 중 하나임; S_예가 S₁ 및 S₃ 중 하나임; S_예가 S₂ 및 S₃ 중 하나임; S_예가 S₁, S₂ 및 S₃ 중 하나임; 및 S_예가 임의의 등가의 개개의 이러한 선택임. "S_예가 S₁, S₂, 및 S₃ 중 하나임"이라는 더 짧은 용어는 이에 따라 간결함을 위해 본원에서 사용되지만, 제한을 위한 것은 아니다. 일반적인 용어로 기재된 치환체 용어에 대한 전술한 두 번째 예는 본원에 기술된 다양한 치환체 지정을 예시하기 위한 것이다. 치환체에 대해 본원에 제공된 전술한 규칙은 적용가능한 경우 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, G¹, G², G³, G⁴, G⁵, G⁶, G⁷, G⁸, G⁹, G¹⁰, G¹¹, n, L, R, T, Q, W, X, Y, 및 Z 및 본원에 사용된 임의의 다른 일반 치환체 기호와 같은 구성원까지 확대된다.

j > i인 명명법 "C_{i -j}"는, 본원에서 치환체의 부류에 적용되는 경우, i 및 j를 포함하는 i개에서 j개까지의 탄소 구성원의 모든 개개의 수가 독립적으로 실현되는 본 발명의 실시 형태를 지칭하는 것을 의미한다. 예로서, 용어 C_1-4는 독립적으로 1개의 탄소 구성원(C₁)을 갖는 실시 형태, 2개의 탄소 구성원(C₂)을 갖는 실시 형태, 3개의 탄소 구성원(C₃)을 갖는 실시 형태, 및 4개의 탄소 구성원(C₄)을 갖는 실시 형태를 지칭한다.

용어 C_{n -m}은 n ≤ N ≤ m을 충족하고 이때 m > n인 사슬의 탄소 구성원의 총 수 N을 갖는, 직쇄 또는 분지형 지방족 사슬을 지칭한다. 본원에 언급된 임의의 이중치환체는 다양한 부착 가능성 중 하나 초과가 허용되는 경우 그러한 가능성을 포함함을 의미한다. 예를 들어, A ≠ B인 경우, 이중치환체 -A-B-에 대한 언급은 본원에서 A가 제1 치환 구성원에 부착되고 B가 제2 치환 구성원에 부착된 그러한 이중치환체를 지칭하며, 이것은 또한 A가 제2 치환 구성원에 부착되고 B가 제1 치환 구성원에 부착된 그러한 이중치환체를 지칭한다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물, 바람직하게는 상기 기술된 것들 및 본원에 예시된 특정 화합물의 제약상 허용가능한 염, 및 이러한 염을 사용한 치료 방법을 포함한다.

용어 "제약상 허용가능한"은 미국 연방 또는 주 정부의 규제 기관 또는 미국 이외 국가의 해당 기관에서 승인되거나 승인받을 수 있다는 것, 또는 동물, 보다 구체적으로는 인간에 사용하기 위해 미국 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 등재되어 있다는 것을 의미한다.

"제약상 허용가능한 염"은 비독성이거나, 생물학적으로 내약성이거나, 그렇지 않으면 대상체에 투여하기에 생물학적으로 적합한 화학식 I로 표시되는 화합물의 유리 산 또는 염기의 염을 의미하고자 한다. 이것은 모 화합물의 원하는 약리 활성을 가져야 한다. 일반적으로, 문헌[G.S. Paulekuhn, et al., "Trends in Active Pharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange Book Database", J. Med . Chem., 2007, 50:6665-72], 문헌[S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", J Pharm Sci., 1977, 66:1-19], 및 문헌[Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use, Stahl and Wermuth, Eds., Wiley-VCH and VHCA, Zurich, 2002]을 참조한다. 제약상 허용가능한 염의 예로는 약리학적으로 유효하고 과도한 독성, 자극 또는 알러지 반응 없이 환자의 조직과 접촉하기에 적합한 것이 있다. 화학식 I의 화합물은 충분히 산성인 기, 충분히 염기성인 기, 또는 이들 둘 다인 유형의 작용기를 가질 수 있고, 이에 따라 다수의 무기 또는 유기 염기, 및 무기 및 유기 산과 반응하여 제약상 허용가능한 염을 형성할 수 있다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 이러한 제약상 허용가능한 프로드러그를 사용한 치료 방법에 관한 것이다. 용어 "프로드러그"는 표기된 화합물의 전구체를 의미하며, 상기 전구체는 대상체에게 투여한 후 가용매분해 또는 효소적 절단과 같은 화학적 또는 생리학적 과정을 통해 또는 생리학적 조건 하에 생체 내에서 그 화합물을 생성한다(예를 들어, 프로드러그는 생리학적 pH가 되면 화학식 I의 화합물 또는 화학식 Ia의 화합물로 전환된다). "제약상 허용가능한 프로드러그"는 비독성이고, 생물학적 내약성이고, 그렇지 않으면 대상체에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 프로드러그이다. 적합한 프로드러그 유도체의 선택 및 제조를 위한 예시적인 절차는 예를 들어 문헌["Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985]에 기술되어 있다.

또한 본 발명은 본 발명의 방법에 또한 사용될 수 있는 화학식 I의 화합물 및 화학식 Ia의 화합물의 제약적 활성 대사산물에 관한 것이다. "제약적 활성 대사산물"은 화학식 I의 화합물 또는 이의 염 또는 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 염의 체내에서의 대사의 약리학적 활성 생성물을 의미한다. 화합물의 프로드러그 및 활성 대사산물은 당업계에 공지되어 있거나 이용가능한 통상적인 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Bertolini, et al., J Med Chem. 1997, 40, 2011-2016]; 문헌[Shan, et al., J Pharm Sci. 1997, 86 (7), 765-767]; 문헌[Bagshawe, Drug Dev Res. 1995, 34, 220-230]; 문헌[Bodor, Adv Drug Res. 1984, 13, 224-331]; 문헌[Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985)]; 및 문헌[Larsen, Design and Application of Prodrugs , Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen, et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)]을 참조한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물" 또는 "제약 조성물"은 본원에 제공된 하나 이상의 화합물과 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물은 환자 또는 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 용이하게 한다. 화합물을 투여하는 다수의 기술(정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안구, 폐, 및 국소 투여를 포함하지만, 이에 한정되지 않음)이 당업계에 존재한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 본원에 제공된 화합물을 환자 내로 또는 환자에게 운반하거나 수송하여 상기 화합물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있게 하는 데 관여하는, 제약상 허용가능한 물질, 조성물 또는 담체, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 안정제, 분산제, 현탁제, 희석제, 부형제, 증점제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로, 이러한 구성체는 신체의 하나의 기관 또는 일부로부터 신체의 또 다른 기관 또는 일부로 운반되거나 수송된다. 각각의 담체는 본원에 제공된 화합물을 비롯한 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용가능한 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: 당류, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말형 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 표면 활성제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장 식염수; 링거액(Ringer's solution); 에틸 알코올; 인산염 완충액; 및 제약 제형에 사용되는 다른 비독성 상용성 물질. 본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 또한, 본원에 제공된 화합물의 활성과 양립가능하고 환자에게 생리학적으로 허용가능한 모든 코팅, 항균 및 항진균제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 보충적 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. "제약상 허용가능한 담체"는 본원에 제공된 화합물의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 제공된 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 추가 성분은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)]에 기술되어 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "안정화제"는 본원에 개시된 화합물의 분해를 화학적으로 억제하거나 방지할 수 있는 중합체를 지칭한다. 안정화제는 당해 화합물의 화학적 및 물리적 안정성을 향상시키기 위해 화합물의 제형에 첨가된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "정제"는 통상적인 타정 공정에 의해 원료의약품 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 적합한 부형제(예를 들어, 충전제, 붕해제, 활택제, 글리단트, 및/또는 계면활성제)와 함께 압축함으로써 생성될 수 있는 경구 투여성, 단회 용량, 고체 투여 형태를 나타낸다. 정제는 통상적인 과립화 방법, 예를 들어 습식 또는 건식 과립화를 사용하여 후속 압축 및 선택적 코팅과 함께 과립을 선택적으로 분쇄하여 제조할 수 있다. 정제는 또한 스프레이-건조에 의해 제조될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "캡슐"은 약물이 경질 또는 연질 가용성 용기 또는 "쉘" 내에 봉입된 고체 투여 형태를 지칭한다. 용기 또는 쉘은 젤라틴, 전분 및/또는 기타 적합한 물질로 형성될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량", "제약적 유효량" 및 "치료적 유효량"은 원하는 생물학적 결과를 제공하기에 충분하면서도 비독성인 에이전트의 양을 지칭한다. 그 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인의 감소 또는 경감, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 임의의 개별적인 경우에 적절한 치료량은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조합물", "치료적 조합물", "제약 조합물" 또는 "조합 생성물"은 2가지 이상의 치료제가 독립적으로, 동시에, 또는 시간 간격을 두고(특히, 이들 시간 간격이 조합 파트너가 협력 효과, 예를 들어 상승 효과를 나타내는 것을 허용하는 경우) 개별적으로 투여될 수 있는 병용 투여를 위한 비-고정 조합물 또는 부분들의 키트를 지칭한다.

용어 "조절제"는 억제제 및 활성화제 둘 다를 포함하며, 여기서, "억제제"는 HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 조립 및 기타 HBV 코어 단백질 기능을 감소시키거나, 방지하거나, 불활성화하거나, 둔감화하거나 하향 조절하는 화합물을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "캡시드 조립 조절제"는 정상적인 캡시드 조립(예를 들어, 성숙 동안) 또는 정상적인 캡시드 분해(예를 들어, 감염 동안)를 방해하거나 가속화하거나 억제하거나 저해하거나 지연시키거나 감소시키거나 변경시키거나, 또는 캡시드 안정성을 교란하고 이에 의해 비정상적인 캡시드의 형태 및 기능을 유도하는 화합물을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 캡시드 조립 또는 분해를 가속화함으로써 비정상적인 캡시드 형태를 유도한다. 또 다른 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 주요 캡시드 조립 단백질(CA)과 상호작용(예를 들어, 활성 부위에서의 결합, 알로스테릭 부위에서의 결합, 폴딩의 변경 및/또는 저해 등)을 함으로써 캡시드의 조립 또는 분해를 방해한다. 또 다른 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 CA의 구조 또는 기능(예를 들어, CA의 조립 능력, 분해 능력, 기질에의 결합 능력, 적합한 형태로의 폴딩 등)의 교란을 야기하며, 이는 바이러스 감염성을 약화시키고/시키거나 바이러스에 치명적이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성을 치유하거나, 고치거나, 경감시키거나, 완화하거나, 변경하거나, 해결하거나, 개선시키거나, 호전시키거나 영향을 줄 목적으로, 치료제, 즉 본 발명의 화합물(단독으로 또는 또 다른 약제와 조합하여)을, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성이 있는 환자에게 적용하거나 투여하는 것으로 정의되거나, 환자로부터의 단리된 조직 또는 세포주에 (예를 들어, 진단 또는 생체 외 적용을 위하여) 치료제를 적용하거나 투여하는 것으로 정의된다. 이러한 치료는 약물유전체학 분야에서 얻은 지식에 기초하여 구체적으로 조정되거나 변형될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방하다" 또는 "예방"은 아무것도 발생하지 않은 경우 장애 또는 질환 발생이 없음, 또는 이미 장애 또는 질환의 발생이 있었던 경우 추가의 장애 또는 질환 발생이 없음을 의미한다. 또한 장애 또는 질환과 관련된 증상의 일부 또는 전부를 예방하는 능력이 고려된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자", "개체" 또는 "대상체"는 인간 또는 비-인간 포유동물을 지칭한다. 비-인간 포유동물은 예를 들어 가축 및 애완 동물, 예컨대 양, 소, 돼지, 개, 고양이 및 쥣과 포유동물을 포함한다. 바람직하게는, 환자, 대상체 또는 개체는 인간이다.

본 발명에 따른 치료 방법에서, 유효량의 본 발명에 따른 의약제가 이러한 질환, 장애 또는 병태를 앓고 있거나 갖는 것으로 진단된 대상체에게 투여된다. "유효량"은 지정된 질환, 장애 또는 병태에 대해 이러한 치료를 필요로 하는 환자에서 일반적으로 원하는 치료적 또는 예방적 이점을 가져오기에 충분한 양 또는 용량을 의미한다. 본 발명의 화합물의 유효량 또는 유효 용량은 모델링, 용량 증량 연구 또는 임상 시험과 같은 일상적인 방법에 의해, 그리고 일상적인 요인, 예를 들어 투여 또는 약물 전달의 양식 또는 경로, 화합물의 약동학적 특성, 질환, 장애 또는 병태의 중증도 및 경과, 대상체의 이전의 요법 또는 진행 중인 요법, 대상체의 건강 상태 및 약물에 대한 반응, 및 치료 의사의 판단을 고려하여 확인될 수 있다. 용량의 예는 단일 또는 분할 투여 단위(예를 들어, BID, TID, QID)로, 대상체 체중 1 kg당 일일 약 0.001 내지 약 200 mg의 화합물, 바람직하게는 약 0.05 내지 100 mg/kg/일, 또는 약 1 내지 35 mg/kg/일의 범위 내에 있다. 70 kg 인간의 경우, 적합한 투여량에 대한 예시적인 범위는 약 0.05 내지 약 7 g/일, 또는 약 0.2 내지 약 2.5 g/일이다.

화합물의 용량의 예로는 약 1 mg 내지 약 2,500 mg이 있다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 조성물에서 사용되는 본 발명의 화합물의 용량은 약 10,000 mg 미만, 또는 약 8,000　mg 미만, 또는 약 6,000 mg 미만, 또는 약 5,000 mg 미만, 또는 약 3,000 mg 미만, 또는 약 2,000 mg 미만, 또는 약 1,000 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만이다. 이와 유사하게, 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 바와 같은 제2 화합물(즉, HBV 치료를 위한 또 다른 약물)의 용량은 약 1,000 mg 미만, 또는 약 800 mg 미만, 또는 약 600 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 400 mg 미만, 또는 약 300 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 100 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만, 또는 약 40 mg 미만, 또는 약 30 mg 미만, 또는 약 25 mg 미만, 또는 약 20 mg 미만, 또는 약 15 mg 미만, 또는 약 10 mg 미만, 또는 약 5 mg 미만, 또는 약 2 mg 미만, 또는 약 1 mg 미만, 또는 약 0.5 mg 미만, 및 이의 모든 전체적이거나 부분적인 증분이다.

환자의 질환, 장애 또는 병태가 개선되었으면 예방 또는 유지 치료를 위해 용량을 조정할 수 있다. 예를 들어, 투여량 또는 투여 빈도, 또는 이들 둘 다는 원하는 치료 또는 예방 효과가 유지되는 수준까지 증상의 함수로서 감소될 수 있다. 물론 증상이 적절한 수준까지 완화되었으면 치료를 중단할 수 있다. 그러나, 환자는 증상의 임의의 재발시에 간헐적 치료를 장기적으로 필요로 할 수 있다.

개시된 방법에 따라 치료될 수 있는 HBV 감염은 HBV 유전자형 A, B, C, 및/또는 D 감염을 포함한다. 그러나, 일 실시 형태에서, 개시된 방법은 임의의 HBV 유전자형을 치료할 수 있다("범-유전자형 치료"). HBV 유전자형 결정은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, INNO-LIPA® HBV Genotyping(Innogenetics N.V., 벨기에 겐트 소재)을 사용하여 수행될 수 있다.

본 출원의 독자를 돕기 위해 설명은 다양한 단락 또는 섹션으로 분리되었다. 이러한 분리는 소정의 단락 또는 섹션의 요지를 또 다른 단락 또는 섹션의 요지에서 분리하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 반대로, 본 발명의 설명은 고려될 수 있는 다양한 섹션, 단락 및 문장의 모든 조합을 포함한다.

본원에 인용된 모든 참고 문헌의 각각의 관련 개시 내용이 구체적으로 참고로 포함된다. 하기 실시예는 예시로 제공되는 것으로서, 제한으로 제공되는 것이 아니다.

실시예

이제 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 화합물을 아래의 그의 일반적인 제조를 위한 예시적인 합성 반응식 및 하기의 구체적인 실시예를 참조하여 설명할 것이다. 당업자는 본원의 다양한 화합물을 얻기 위해, 원하는 생성물을 생성하기 위하여 적절한 경우 보호를 이용하거나 이용하지 않고서 궁극적으로 원하는 치환체가 반응 반응식을 통하여 운반되도록 출발 물질을 적합하게 선택할 수 있음을 인식할 것이다. 대안적으로, 궁극적으로 원하는 치환체 대신에 반응 반응식을 통해 운반될 수 있고 적절한 경우 원하는 치환체로 대체될 수 있는 적합한 기를 사용하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 변수는 화학식 I 및 화학식 Ia를 참조하여 상기 정의된 바와 같다. 반응은 용매의 융점과 환류 온도 사이, 바람직하게는 0℃와 용매의 환류 온도 사이에서 수행될 수 있다. 반응물을 통상적인 가열 또는 마이크로웨이브 가열을 사용하여 가열할 수 있다. 반응은 또한 용매의 정상 환류 온도보다 높은 온도에서 밀봉 가압 용기에서 수행될 수 있다.

화학식 I 및 화학식 Ia의 화합물은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 그의 상응하는 염으로 전환될 수 있다. 예를 들어, 화학식 I의 아민을 용매, 예컨대 Et₂O, CH₂Cl₂, THF, MeOH, 클로로포름, 또는 이소프로판올에서 트리플루오로아세트산, HCl, 또는 시트르산으로 처리하여 상응하는 염 형태를 제공한다. 대안적으로, 역상 HPLC 정제 조건의 결과로 트리플루오로아세트산 또는 포름산 염이 수득된다. 화학식 I 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염의 결정질 형태는 극성 용매(극성 용매들의 혼합물 및 극성 용매들의 수성 혼합물을 포함함) 또는 비극성 용매(비극성 용매들의 혼합물)로부터의 재결정화에 의해 결정질 형태로 수득될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물이 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 이들은 이에 따라 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 이들은 추가적으로 부분입체이성질체로서 존재할 수 있다. 이러한 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.

"입체이성질체 혼합물"(둘 이상의 입체이성질체의 혼합물을 의미하고 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 이들의 조합을 포함함)로 표시된 화합물을 SFC 분해에 의해 분리한다.

화합물은 형태-특이적 합성에 의해 또는 분해에 의해 단일 거울상이성질체와 같은 단일 형태로서 수득될 수 있다. 화합물은 대안적으로 라세미(1:1) 또는 비-라세미(1:1이 아님) 혼합물과 같은 다양한 형태의 혼합물로서 수득될 수 있다. 거울상 이성질체의 라세미 및 비-라세미 혼합물이 수득되는 경우, 단일 거울상이성질체는 당업자에게 공지된 통상적인 분리 방법, 예컨대 키랄 크로마토그래피, 재결정화, 부분입체이성질체 염 형성, 부분입체이성질체 부가물로의 유도체화, 생체내변환 또는 효소적 변환을 이용하여 단리될 수 있다. 위치이성질체 또는 부분입체이성질체 혼합물이 수득되는 경우, 적용가능한 경우 단일 이성질체는 크로마토그래피 또는 결정화와 같은 통상적인 방법을 이용하여 분리될 수 있다.

1. 일반적 정보

화학명

화학명은 화학 소프트웨어인 ACD/ChemSketch를 사용하여 생성하였으며, 바람직하게는 IUPAC 규칙을 따를 수 있다.

LCMS 방법에 대한 일반 절차

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정은 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기 및 컬럼(각각의 방법에 명시된 바와 같음)을 사용하여 수행하였다. 필요한 경우, 추가의 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).

컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원과 함께 구성된 질량 분광계(MS)로 가져왔다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어로 데이터를 획득하였다.

화합물들은 그들의 실험적 체류 시간(Rt) 및 이온에 의해 기술되어 있다. 데이터의 표에 상이하게 명시되어 있지 않다면, 보고된 분자 이온은 [M+H]⁺(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]^- (탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접적으로 이온화가능한 것이 아닌 경우, 부가 생성물의 유형이 명시된다(즉, [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- 등). 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어졌다.

이하에서, "SQD"는 단일 사중극자 검출기를, "MSD"는 질량 선택적 검출기를, "RT"는 실온을, "BEH"는 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드를, "DAD"는 다이오드 어레이 검출기를, "HSS"는 고강도 실리카를, "Q-Tof"는 사중극자 비행시간 질량 분광계를, "CLND"는 화학발광 질소 검출기를, "ELSD"는 증발 광 스캐닝 검출기를 의미한다.

LCMS 방법

[표 5]

(유량은 mL/분으로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분으로 표현됨).

SFCMS 방법에 대한 일반 절차

이산화탄소(CO2) 전달용의 이원 펌프 및 모디파이어(modifier), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐, 400 bar까지 견디는 고압 유동 셀을 갖춘 다이오드 어레이 검출기로 구성된 분석용 초임계 유체 크로마토그래피(Supercritical fluid chromatography; SFC)를 사용하여 SFC 측정을 수행하였다. 질량 분광계(MS)와 함께 구성되는 경우, 컬럼으로부터의 유동물을 (MS)로 보냈다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 획득하였다.

분석적 SFC/MS 방법(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현되며; 배압(backpressure; BPR)은 bar 단위로 표현됨).

SFC 방법

[표 6]

(유량은 mL/분으로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분으로 표현됨).

NMR 분석

¹H NMR 스펙트럼은 1) Bruker DPX 400 MHz 분광계 또는 2) Bruker Avance 400 MHz 분광계 또는 c) Bruker Avance III 400 MHz 분광계 또는 d) Bruker Avance 600 MHz 분광계 또는 e) Bruker Avance NEO 400 MHz 분광계 또는 f) Bruker 모델 AVIII 400 분광계, g) ZKNJ BIXI-1 300 MHz, Bruker Avance III 400 MHz 또는 h) Bruker AVANCE Neo 400 MHz에서 기록되었다.

달리 기재되지 않는 한, 주위 온도에서의 NMR 스펙트럼을 기록하였다. 데이터를 다음과 같이 보고한다: 눈금의 TMS(δ = 0 ppm)에 대한 백만분율(ppm) 단위의 화학적 이동, 적분, 다중성 (s = 단일 피크, d = 이중 피크, t = 삼중 피크, q = 사중 피크, quin = 오중 피크, sext = 육중 피크, sept = 칠중 피크, m = 다중 피크, b = 브로드, 또는 이들의 조합), 헤르츠(Hz) 단위의 커플링 상수(들) J.

MS 분석

질량 스펙트럼은 달리 지시되지 않는 한 포지티브 모드에서 전자분무 이온화(ESI)를 사용하여 Shimadzu LCMS-2020 MSD 또는 Agilent 1200/G6110A MSD에서 얻었다.

2. 약어

[표 7]

3. 절차 및 화합물 분석

3.1. 6원 고리의 합성

3.1.1. 중간체의 합성

3.1.1.1. 중간체 I3 의 합성

중간체 I1

벤질 [(1S)-1-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)에틸]카르바메이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

벤질 [(2S)-1-아미노-1-술파닐리덴프로판-2-일]카르바메이트 (3.36 g, 12.1 mmol, 86%의 순도)를 EtOH (135 mL)에 용해시켰다. 포름산 히드라진 (4.36 g, 72.7 mmol) 및 HgCl₂ (4.28 g, 15.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (200 mL)에 희석시키고, NaHCO₃ (포화, 수성), 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 합한 수성 층을 EtOAc (5 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 분획을 이전에 수득된 잔사와 합하였다. 잔사를 EtOH (135 mL)에 용해시키고, 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하여 중간체 I1 (1.82 g, 58%)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 I2

벤질 {(1S)-1-[1-(디메틸술파모일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]에틸}카르바메이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I1 (2.10 g, 8.08 mmol, 95%의 순도)을 DMF (53 mL)에 용해시켰다. K₂CO₃ (3.35 g, 24.3 mmol) 및 디메틸술파모일 클로라이드 (1.04 mL, 9.70 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시키고, H₂O (50 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하여 중간체 I2 (1.42 g, 47%, 94%의 순도)를 제공하였다.

중간체 I3

3-[(1S)-1-아미노에틸]-N,N-디메틸-1H-1,2,4-트리아졸-1-술폰아미드

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I2 (1.42 g, 3.76 mmol, 94%의 순도)를 MeOH (40 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 아르곤 하에 퍼지하고, Pd/C (10%의 순도, 142 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂ (3회)로 퍼지하고, 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 Celite®에서 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 중간체 I3 (830 mg)을 제공하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

3.1.1.2. 중간체 I5 의 합성

중간체 I4

에틸 5-(3,4-디클로로벤조일)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

DCM (500 mL) 중 5-tert-부틸-3-에틸 6,7-디히드로-2H-피라졸로[3,4-c]피리딘-3,5(4H) 디카르복실레이트 (17.8 g, 60.4 mmol) 및 TFA (46.2 mL, 604 mmol)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 DCM에 용해시켰다. 상기 용액을 0℃까지 냉각시켰다. Et₃N (33.6 mL, 242 mmol), 이어서 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (13.3 g, 63.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물 (300 mL)로 켄칭하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 90:10으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I4 (16.2 g, 73%)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 I5

에틸 2-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]에틸}-5-(3,4-디클로로벤조일)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

MeCN (150 mL) 중 중간체 I4 (4.00 g, 10.9 mmol), Cs₂CO₃ (5.31 g, 16.3 mmol), 및 3-(boc-아미노)프로필 브로마이드 (2.56 g, 11.4 mmol)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 90:10으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I5 (3.0 g, 54%)를 투명 오일로서 수득하였다.

3.1.1.3. 중간체 I6 의 합성

5-tert-부틸 3-에틸 2-(2-브로모에틸)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트

MeCN (125 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (1.25 g, 4.23 mmol), 1,2-디브로모에탄 (4.02 g, 21.2 mmol) 및 K₂CO₃ (1.76 g, 12.7 mmol)의 혼합물을 환류 하에 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 여전히 고온인 상태에서 데칼라이트에서 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 95:5로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I6 (1.7 g, 60%)을 투명 오일로서 수득하였다.

3.1.1.4. 중간체 I8 의 합성

중간체 I7

에틸 (6R)-5-(3,4-디클로로벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

DCM (20 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 (6R)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (4.52 g, 14.6 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 36.5 mL, 146 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 DCM (150 mL)에 희석시키고, Et₃N (9.16 mL, 65.7 mmol)을 첨가하였다. 상기 용액을 0℃까지 냉각시키고, DCM (30 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (3.21 g, 15.3 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 2시간 동안 교반시키고, DCM (750 mL)으로 희석시켰다. 유기 상을 물 (2 x 500 mL), NaHCO₃ (포화, 수성, 500 mL) 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 중간체 I7 (4.63 g, 83%)을 수득하였다.

중간체 I8

에틸 (6R)-2-{2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]에틸}-5-(3,4-디클로로벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

MeCN (180 mL) 및 DMF (5 mL) 중 중간체 I7 (4.85 g, 12.1 mmol)의 용액에 Cs₂CO₃ (5.92 g, 18.2 mmol), 및 MeCN (20 mL) 중 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)에틸 메탄술포네이트 (3.48 g, 14.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반시키고, EtOAc (100 mL) 및 H₂O (100 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 시클로헥산/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 95:5로부터 50:50까지)로 정제하여 중간체 I8 (3.30 g, 52%)을 수득하였다.

3.1.1.5. 중간체 I9 의 합성

에틸 (6R)-2-(2-브로모에틸)-5-(3,4-디클로로벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

DMF (60 mL) 중 중간체 I7 (4.00 g, 10.5 mmol)의 용액에 Cs₂CO₃ (6.82　g, 20.9 mmol) 및 1,2-디브로모에탄 (4.51 mL, 52.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시키고, H₂O (50 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 EtOAc (3 x 70　mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (3 x 60 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 시클로헥산/EtOAc, 구배: 9:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I9 (2.90 g, 55%)를 백색 폼으로서 수득하였다.

3.1.1.6. 중간체 I60 의 합성

질소 분위기 하에 -78℃에서 테트라히드로푸란 (40 mL) 중 4-브로모-3-클로로벤조산 (3.00 g, 12.7 mmol)의 용액에 염화리튬 (1.62 g, 38.2 mmol) 및 테트라히드로푸란 중 2 M 이소프로필마그네슘 클로라이드 (20 mL, 40 mmol)를 첨가하였다. -78℃에서 10분 동안 교반시킨 후, 상기 혼합물을 0℃까지 가온하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 N,N-디메틸포름아미드 (4.69 g, 64.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl (10 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 수성 층을 1 N 히드로클로라이드 수성 용액으로 pH = 3으로 산성화하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I57 (1.9 g, 73%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.68 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 8.04 - 7.96 (m, 3H).

N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 중간체 I57 (1.00 g, 4.88 mmol, 90%의 순도)의 용액에 광유 중 60 중량% 수소화나트륨 (215 mg, 5.38 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후 요오도메탄 (760 mg, 5.35 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 1 N 염산 수성 용액 (5 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 수성 중탄산나트륨 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I58 (880 mg, 82%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.37 (s, 1H), 8.06 - 7.98 (m, 3H), 3.91 (s, 3H).

디클로로메탄 (10 mL) 중 중간체 I58 (250 mg, 1.13 mmol, 90%의 순도)의 용액에 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드 (920 mg, 5.71 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 중간체 I59 (170 mg, 61%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ 8.10 - 8.09 (m, 1H), 8.04 - 8.02 (m, 1H), 7.76 - 7.74 (m, 1H), 6.97 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H).

메탄올 (3 mL) 및 테트라히드로푸란 (3 mL) 중 중간체 I59 (170 mg, 0.694 mmol, 90%의 순도)의 용액에 물 (1.5 mL) 중 수산화리튬 수화물 (45 mg, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 물 (10 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 1 N 히드로클로라이드 수성 용액으로 pH = 3으로 산성화하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 중간체 I60 (150 mg, 94%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, 1H), 8.04 - 8.02 (m, 2H), 7.85 - 7.83 (m, 1H), 7.28 (t, J = 53.6 Hz, 1H).

3.1.1.7. 중간체 I64 의 합성

사염화탄소 (90 mL) 중 메틸 4-클로로-3-메틸벤조에이트 (2.00 g, 10.8 mmol) 및 N-브로모숙신이미드 (5.78 g, 32.5 mmol)의 용액에 2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴) (450 mg, 2.74 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 80℃에서 하룻밤 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 물 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 n-헥산 (10 mL)로 미분화하여 중간체 I61 (3.12 g, 80%의 수율, ¹H NMR로부터 95%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.49 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 11.2, 2.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 3.93 (s, 3H).

아세톤 (100 mL) 및 물 (20 mL) 중 중간체 I61 (3.12 g, 8.66 mmol, 95%의 순도)의 용액에 질산은(I) (2.94 g, 17.3 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 질소 분위기 하에 1.5시간 동안 환류시켰다. 그 후 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 여과액을 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 수성 상을 디클로로메탄 (10 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I62 (1.7 g, 94%의 수율, ¹HNMR로부터 95%의 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.49 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.19 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H).

디클로로메탄 (5 mL) 중 중간체 I62 (300 mg, 1.44 mmol, 95%의 순도)의 용액에 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드 (1.157 g, 7.175 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 중간체 II63 (270 mg, 81%의 수율, ¹H NMR로부터 95%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.39 (s, 1H), 8.13 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 72.8 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H).

메탄올 (3 mL) 및 테트라히드로푸란 (3 mL) 중 중간체 I63 (270 mg, 1.16 mmol, 95%의 순도)의 용액에 물 (1.5 mL) 중 수산화리튬 수화물 (75 mg, 1.8 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 물 (10 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 1 N 히드로클로라이드 수성 용액으로 pH = 3으로 산성화하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 중간체 I64 (220 mg, 87%의 수율, ¹H NMR로부터 95%의 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.40 (s, 1H), 8.18 - 8.17 (m, 1H), 8.10 - 8.08 (m, 1H), 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 54.0 Hz, 1H).

3.1.1.8. 중간체 I69 의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 메틸 3-브로모-4-메틸벤조에이트 (2.00 g, 8.70 mmol), 시안화아연 (1.64 g, 14.0 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (1.0 g, 0.87 mmol)의 혼합물을 질소 하에 100℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 그 후 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 5: 1)로 정제하여 중간체 I65 (1.4 g, 92%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.27 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.41(d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.61 (s, 3H).

퍼클로로메탄 (8 mL) 중 중간체 I65 (500 mg, 2.86 mmol)의 용액에 N-브로모숙신이미드 (1.27 g, 7.14 mmol) 및 벤조일 퍼옥시드 (75%, 28 mg, 0.086 mmol)를 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 85℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, 디클로로메탄 (20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 수성 중탄산나트륨 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켜 조 중간체 I66 (900 mg, 95%의 수율, ¹H NMR로부터 80%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.32 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 3.98 (s, 3H).

아세토니트릴 (6 mL) 중 중간체 I66 (500 mg, 1.50 mmol)의 용액에 물 (3 mL) 중 질산은 (765 mg, 4.50 mmol)의 용액을 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 80℃에서 6시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 물 (10 mL)로 희석시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 100:1~5:1)로 정제하여 중간체 I67 (130 mg, 46%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.42 (s, 1H), 8.48 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.40 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H).

디클로로메탄 (4 mL) 중 중간체 I67 (130 mg, 0.69 mmol)의 용액에 (디에틸아미노)설퍼 트리플루오라이드 (222 mg, 1.38 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 중탄산나트륨 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켜 중간체 I68 (140 mg, 97%의 수율, ¹HNMR로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.42 (s, 1H), 8.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 (t, J = 54.0 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H).

테트라히드로푸란/물 (2 : 1, 3 mL) 중 중간체 I68 (140 mg, 0.66 mmol)의 용액에 수산화리튬 수화물 (34 mg, 0.80 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 물 (5 mL)로 희석시키고, 1 N 염산으로 pH = 2로 산성화하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켜 중간체 I69 (100 mg, 76.6%의 수율, ¹H NMR로부터 95%의 순도)를 담황색 고체로서 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.87 (brs, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 54.0 Hz, 1H).

3.1.1.9. 중간체 I71 의 합성

(디에틸아미노)설퍼 트리플루오라이드 (532 mg, 3.30 mmol)를 디클로로메탄 (7 mL) 중 메틸 3-플루오로-4-포르밀벤조에이트 (300 mg, 1.65 mmol)의 빙냉 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 (7 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켜 중간체 I70 (300 mg, 89%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (t, J = 54.4 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H).

테트라히드로푸란/물 (2 : 1, 3 mL) 중 중간체 I70 (100 mg, 0.49 mmol)의 용액에 수산화리튬 수화물 (23 mg, 0.54 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 물 (5 mL)로 희석시키고, 0.5 N 염산으로 pH = 4로 산성화하였다. 그 후 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켜 중간체 I71 (84 mg, 90%의 수율, ¹H NMR로부터 95%의 순도)을 담황색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.47 (brs, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.82 - 7.76 (m, 2H), 7.29 (t, J = 54.0 Hz, 1H).

3.1.1.10. 중간체 I76 의 합성

아세트산 (19 mL) 중 3,6-디클로로피콜린산 (9.5 g, 49.5 mmol)의 용액에 아세트산 (19 mL) 중 33% 브롬화수소를 첨가하였다. 상기 혼합물을 110℃까지 가열하고, 110℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 추가의, 아세트산 (10 mL) 중 33% 브롬화수소를 첨가한 후, 혼합물을 110℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 추가의, 아세트산 (10 mL) 중 33% 브롬화수소를 첨가하고, 그 후 혼합물을 110℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 얼음물 (100 mL)에 부었다. 백색 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (10 mL)로 2회 세척하고, 감압 하에 건조시켜 중간체 I72 (6.46 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 50%의 수율)를 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.15 (br s, 1H), 8.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H).

테트라히드로푸란 (40 mL) 중 중간체 I72 (2 g, 90%의 순도, 7.61 mmol)의 용액에 톨루엔 (13 mL, 19.5 mmol) 중 1.5 M 디이소부틸알루미늄 히드라이드를 질소 분위기 하에 -60℃에서 서서히 첨가하였다. -60℃에서 3시간 동안 교반시킨 후, 반응물을 포화 염화암모늄 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 물 (40 mL) 및 에틸 아세테이트 (40 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (40 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (40 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1)로 정제하여 중간체 I73 (1.52 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 82%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.16 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H).

디클로로메탄 (40 mL) 중 중간체 I73 (1.52 g, 90%의 순도, 6.21 mmol)의 용액에 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드 (5.6 g, 34.7 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 차가운 포화 중탄산나트륨 수용액 (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 20 : 1)로 정제하여 중간체 I74 (1.45 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 87%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.81 (t, J = 53.6 Hz, 1H).

메탄올 (6 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (6 mL) 중 중간체 I74 (1.5 g, 90%의 순도, 5.57 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (546 mg, 0.746 mmol) 및 트리에틸아민 (1.26 g, 12.5 mmol)의 용액을 일산화탄소 분위기 (0.5 Mpa) 하에 90℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1)로 정제하여 중간체 I75 (1.1 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 80%의 수율)를 연한 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 53.6 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H).

메탄올 (2 mL) 중 중간체 I75 (200 mg, 0.85 mmol)의 용액에 5 M 수산화리튬 수용액 (0.5 mL, 2.5 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 30℃에서 하룻밤 교반시킨 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, 1 M 히드로클로라이드 수성 용액으로 pH를 대략 3으로 산성화하고, 그 후 에틸 아세테이트 (5 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I76 (180 mg, ¹H NMR로부터 95%의 순도, 96%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.96 (t, J = 53.6 Hz, 1H).

3.1.1.11. 중간체 I79 의 합성

-10℃의 메탄올 (17 mL) 중 소듐 메톡시드 (메탄올 중 25%) (20 mL, 87.5 mmol)의 용액에 메탄올 (4.2 mL) 중 3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤즈알데히드 (4.20 g, 21.9 mmol) 및 메틸 2-아지도아세테이트 (8.5 mL, 87.5 mmol)의 용액을, 시린지 드라이버를 이용하여 1시간 동안 (0.3 mL/분) 첨가하였다. 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 반응 혼합물을 5시간 동안 교반시켰다. 얼음물을 반응 혼합물에 첨가하고, 반응물이 실온까지 되도록 10분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과시키고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 메틸 (Z)-2-아지도-3-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)아크릴레이트 I77 (1.90 g, 수율: 30%)을 백색 고체로서 수득하였다.

반응은 각각에 대해 다음 절차에 따라 9개의 배치로 수행하였다: m-자일렌 (6 mL) 중 메틸 (Z)-2-아지도-3-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)아크릴레이트 I77 (210 mg, 0.726 mmol)의 용액을 160℃ 예열 핫 플레이트에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 9개의 반응 혼합물을 합하고, 물 (3x300 mL)과 함께 동시증발시켰다. 잔사를 컬럼 (90/10으로부터 50/50까지의 시클로헥산/EtOAc)으로 정제하였다. 수득된 것을 EtOAc와 시클로헥산의 혼합물에 미분화하였다. 침전물을 여과시켜 메틸 5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-2-카르복실레이트 I78 (1.20 g, 수율: 70%)을 백색 고체로서 수득하였다.

THF (10 mL) 중 메틸 5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-2-카르복실레이트 I78 (1.20 g, 4.60 mmol)의 용액에 물 (5 mL) 중 NaOH (551 mg, 13.8 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 46시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL) 및 물 (50 mL)로 희석시키고, 층들을 분리하였다. 수성 층을 HCl (1 N) 수성 용액으로 산성화하고, 그 후 DCM (3x100 mL) 및 MeOH (몇 드롭)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 건조상태까지 농축시켜 5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-2-카르복실산 I79 (1.05 g, 수율: 92%)를 백색 분말로서 수득하였다.

3.1.1.12. 중간체 I85 의 합성

DCM (32 mL) 및 아세토니트릴 (18 mL) 중 메틸 4-브로모-5-플루오로-1H-인돌-2-카르복실레이트 (2.27 g, 8.34 mmol)의 용액에 DMAP (1.33 g, 10.9 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (2.58 g, 11.8 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 DCM (120 mL) 및 H₂O (50 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 유기 층을 H₂O (50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (100/0으로부터 90/10까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 1-(tert-부틸) 2-메틸 4-브로모-5-플루오로-1H-인돌-1,2-디카르복실레이트 I80 (2.66 g, 수율: 86%)을 무색 오일로서 수득하였다.

I80 (2.66 g, 7.15 mmol)를 1,4-디옥산 (53 mL)과 물 (10 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 상기 혼합물을 격렬한 교반 하에 20분 동안 아르곤으로 탈기시키고, 그 후 S-Phos 리간드 (293 mg, 0.715 mmol), 탄산칼륨 (2.96 g, 21.4 mmol) 및 포타슘 비닐트리플루오로보레이트 (1.92 g, 14.3 mmol). 플라스크를 진공/아르곤으로 3회 퍼지하고, 그 후 아세트산팔라듐 (0.080 g, 0.357 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 다시 진공/아르곤으로 3회 퍼지하고, 그 후 75℃에서 1시간 동안 교반되도록 두었다. 상기 혼합물을 EtOAc (350 mL)로 희석시키고, 그 후 H2O (2 x 70 mL), 염수 (2 x 70 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 그 후 진공에서 농축시켜 1-(tert-부틸) 2-메틸 5-플루오로-4-비닐-1H-인돌-1,2-디카르복실레이트 I81을 수득하였다 (2.55 g의 조 물질, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다).

아세톤 (50 mL) 및 물 (10 mL) 중 I81 (1.00 g, 3.13 mmol)의 용액에 사산화오스뮴 (0.313 g, 0.094 mmol) 및 과요오드산나트륨 (3.35 g, 15.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 7시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 및 아세톤으로 희석시키고, 현탁액을 소결 유리 필터로 여과시키고, 잔사를 아세톤으로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시켜 대부분의 아세톤을 제거하였다. 생성된 용액을 EtOAc (200 mL)로 희석시키고, 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (100/0으로부터 95/5까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 1-(tert-부틸) 2-메틸 5-플루오로-4-포르밀-1H-인돌-1,2-디카르복실레이트 I82 (623 mg, 수율: 62%)를 백색 분말로서 수득하였다.

마이크로웨이브 반응 바이알에서, I82 (0.414 g, 1.29 mmol)를 DCM (5.8 mL)에 용해시켰다. 상기 용액을 0℃까지 냉각시키고, 그 후 DAST (0.51 mL, 3.87 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 15분에 걸쳐 실온까지 도달하도록 하고, 바이알을 밀봉하고, 그 후 50℃에서 2.5시간 동안 및 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 그 후 포화 NaHCO₃ 수용액 (5 mL)을 서서히 첨가하여 켄칭하였으며, 격렬한 버블링이 나타났다. 수성 층을 DCM (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 95/5까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 1-(tert-부틸) 2-메틸 4-(디플루오로메틸)-5-플루오로-1H-인돌-1,2-디카르복실레이트 I83 (394 mg, 84%)을 황색 오일로서 수득하였다.

DCM (15 mL) 중 I83 (597 mg, 1.74 mmol)의 용액에 HCl (6.52 mL, 디옥산 중 1 M, 26.1 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 20시간 동안 교반시켰다. LCMS: 불완전 전환. 상기 용액을 6시간 동안 40℃까지 가열하였다. LCMS는 여전히 불완전한 전환을 나타냈다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 그 후 DCM (7 mL)에 희석시키고, B (3.00 mL, 12 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반되도록 두었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 그 후 잔사를 DCM (2 x 20 mL)과 함께 동시증발시켜 베이지색 분말로서의 메틸 4-(디플루오로메틸)-5-플루오로-1H-인돌-2-카르복실레이트 I84 (425 mg, 수율: 99%)를 수득하였다.

THF (4 mL) 중 I84 (425 mg, 1.75 mmol)의 용액에 물 (2 mL) 중 NaOH (210 mg, 5.24 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 H₂O (60 mL)로 희석시키고, 그 후 DCM (2 x 30 mL) 및 EtOAc (30 mL)로 세척하였다. 수성 층을 1 M HCl 수용액으로 pH가 대략 1이 될 때까지 산성화하고, 그 후 DCM (2 x 100 mL), 몇 드롭의 MeOH를 포함하는 DCM (50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 DCM:MeOH 및 산성수에 용해시켰으며; 수성 층은 교반 후 분홍색으로 변하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 물 (3 x 20 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 제1 분획을 수득하였다.

수성 층을 DCM/MeOH (9:1, 3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 제2 분획을 수득하였다. 두 분획을 합하고, 역상 플래시 크로마토그래피 (C18_IR_50_F0025, 98/2로부터 0/100까지의 물/ACN, 50분)로 정제하여 4-(디플루오로메틸)-5-플루오로-1H-인돌-2-카르복실산 I85 (239 mg, 수율: 58%)를 베이지색 분말로서 수득하였다.

3.1.1.12. 중간체 I90 의 합성

테트라히드로푸란 (500 mL) 중 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (50 g, 98%의 순도, 246 mmol)의 용액에 테트라히드로푸란 중 1.0 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (250 mL, 250 mmol)을 -78℃에서 적가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반시킨 후, 테트라히드로푸란 (200 mL) 중 디에틸 옥살레이트 (39.5 g, 270 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 물 (200 mL)로 켄칭하고, 1 M 히드로클로라이드 수성 용액으로 중화시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 3-(2-에톡시-2-옥소아세틸)-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (78.4 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 96%의 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) 15.35 (br s, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.41 (t, J = 6.8 Hz, 3H).

아세트산 (100 mL) 중 tert-부틸 3-(2-에톡시-2-옥소아세틸)-4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (78.4 g, 90%의 순도, 236 mmol)의 용액에 물 중 85% 히드라진 수화물 (34 g, 577 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반시킨 후, 혼합물을 빙냉 포화 중탄산나트륨 수용액 (500 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (1500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 5-(tert-부틸) 3-에틸 1,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (74.9 g, ¹HNMR로부터 90%의 순도, 97%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 13.68 (br s, 0.3H), 13.29 (br s, 0.7H), 4.50 (s, 2H), 4.34 - 4.19 (m, 2H), 3.61 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.68 (s, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.31 (t, J = 6.4 Hz, 3H).

아세토니트릴 (10 mL) 중 중간체 5-(tert-부틸) 3-에틸 1,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (500 mg, 1.524 mmol, 90%의 순도)의 용액에 벤질 (2-브로모에틸)카르바메이트 (415 mg, 1.61 mmol) 및 탄산세슘 (745 mg, 2.29 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 3 : 1)로 정제하여 중간체 I86 (320 mg, 42%의 수율, ¹H NMR로부터 95%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.39 - 7.30 (m, 5H), 5.28 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.67 - 4.64 (m, 2H), 4.53 (s, 2H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.75 - 3.56 (m, 4H), 2.73 - 2.71 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

에탄올 (5 mL) 중 중간체 I86 (320 mg, 95%의 순도, 0.643 mmol)의 용액에 10 중량%의 목탄상 팔라듐 (40 mg)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃까지 가열하고, 하룻밤 교반시켰다 (수소 벌룬 하에). 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I87 (200 mg, 83%의 수율, LCMS로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.52분, 질량: C₁₆H₂₆N₄O₄에 대한 이론치: 338.2, m/z 실측치: 339.1 [M+H]⁺.

1,4-디옥산 (3 mL) 중 중간체 I87 (150 mg, 0.399 mmol, 90%의 순도)의 용액에 2,3,4,6,7,8-헥사히드로-1H-피리미도[1,2-a]피리미딘 (20 mg, 0.144 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 분취용 TLC (디클로로메탄: 메탄올 = 10: 1)로 정제하여 중간체 I88 (100 mg, 81%의 수율, LCMS로부터 95%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.39분, 질량: C₁₄H₂₀N₄O₃에 대한 이론치: 292.2, m/z 실측치: 237.1 [M+H-56]⁺.

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 중간체 I88 (100 mg, 0.325 mmol, 95%의 순도)의 용액에 수소화나트륨 (광유 중 60%, 20 mg, 0.50 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시켰다. 그 후 4-메톡시벤질클로라이드 (55 mg, 0.35 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I89 (145 mg, 97%의 수율, LCMS로부터 90%의 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.62분, 질량: C₂₂H₂₈N₄O₄에 대한 이론치: 412.2, m/z 실측치: 357.1 [M+H-56]⁺.

에틸 아세테이트 (2 mL) 중 중간체 I89 (145 mg, 0.316 mmol, 90%의 순도)의 용액에 4 M HCl/EtOAc (3 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 중간체 I90 히드로클로라이드 염 (100 mg, 86%의 수율, LCMS로부터 95%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.29분, 질량: C₁₇H₂₀N₄O₂에 대한 이론치: 312.2, m/z 실측치: 313.1 [M+H]⁺.

3.1.1.13. 중간체 I92*R 및 I92*S 의 합성

THF (50 mL) 중 tert-부틸 4-옥소-2-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (4.50 g, 16.84 mmol)의 용액에 LiHMDS (1 M, 20 mL)를 -70℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 -70℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 그 후 디에틸 옥살레이트 (3.20 g, 21.89 mmol)를 -70℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반시켰다. LCMS는 원하는 생성물이 주로 형성되었음을 보여주었다. 상기 혼합물을 1 N HCl (500 mL)로 켄칭하고, EtOAc (5x300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 화합물 I91 (5.50 g, 조 물질)을 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다. MS (ESI): 질량: C₁₅H₂₀F₃NO₆에 대한 이론치: 367.1; m/z 실측치: 368.1 [M+H]⁺.

EtOH (30 mL) 중 tert-부틸 5-(2-에톡시-2-옥소아세틸)-4-옥소-2-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 I91 (5.50 g, 14.97 mmol)의 용액에 NH₂NH₂·H₂O (882 mg, 14.97 mmol, 85%의 순도)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반시켰다. LCMS는 출발 물질이 소모되었고 주로 원하는 생성물이 검출되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (석유 에테르/EtOAc: 80/20~60/40)로 정제하여 표제 라세미체 (4.05 g, 11.15 mmol)를 황색 고체로서 제공하고, 이를 SFC로 분해하여 다음의 2가지 단일 거울상이성질체: (R*)-5-tert-부틸 3-에틸 6-(트리플루오로메틸)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 I92*R (1.40 g, SFC에서 피크 1 (OD-3S_5_5_40_3ML_T35.M; 컬럼: Chiralcel OD-3, 100×4.6 mm I.D., 입자 크기 3 um; 이동상: CO₂ 중 40% EtOH (0.05% DEA); 유량: 3 mL/분; 파장: 220 nm), 체류 시간 = 1.002분) 및 (S*)-5-tert-부틸 3-에틸 6-(트리플루오로메틸)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (1.80 g, SFC에서 피크 2 (OD-3S_5_5_40_3ML_T35.M; 컬럼: Chiralcel OD-3, 100×4.6 mm I.D., 입자 크기 3 um; 이동상: CO₂ 중 40% EtOH (0.05% DEA); 유량: 3 mL/분; 파장: 220 nm), 체류 시간 = 1.163분)를 황색 고체로서 수득하였다.

3.1.1.14. 중간체 I99 의 합성

2개의 배치를 병렬적으로 수행하였다. MeOH (1.50 L) 중 화합물 에틸 3-아미노프로파노에이트 히드로겐 클로라이드 (332 g, 2.17 mol, 2.00 당량, HCl)의 용액에 NaOAc (177 g, 2.17 mol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 DCM (2.00 L) 중 에틸 4,4-디플루오로-3-옥소부타노에이트 (180 g, 1.08 mol, 1.00 당량), 이어서 HOAc (130 g, 2.17 mol, 123 mL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 그 후 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 반응물 (R_f = 0.30)이 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.50, 0.60)이 형성되었음을 보여주었다. 그 후 MeOH (1.00 L) 중 NaBH₃CN (102 g, 1.63 mol, 1.50 당량)의 용액을 0℃에서 일부씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 출발 물질 (R_f = 0.50, 0.60)이 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.40, 0.10)이 형성되었음을 보여주었다. 추가 워크업(work-up)을 위해 2개의 배치를 합하였다. 상기 혼합물을 포화 NaHCO₃ 용액 (2.00 L)으로 켄칭하였다. 유기물을 분리하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켰다. 조 물질을 SiO₂ 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 0/1 ~ 10/1)로 정제하였다. I93 (420 g, 72.5%의 수율)을 연한 황색 오일로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.04 - 5.59 (m, 1H), 4.28 - 4.03 (m, 4H), 3.28 (tdd, J = 3.1, 7.9, 11.2 Hz, 1H), 2.97 (dt, J = 3.8, 6.3 Hz, 2H), 2.61 (dd, J = 4.8, 16.1 Hz, 1H), 2.52 - 2.38 (m, 3H), 1.34 - 1.17 (m, 6H)

화합물 I93 (420 g, 1.57 mol, 1.00 당량) 및 Boc₂O (342 g, 1.57 mol, 1.00 당량)의 용액을 70℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 I93 (R_f = 0.50)이 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.70, 0.90)이 형성되었음을 보여주었다. 상기 혼합물을 SiO₂ 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 ~ 20/1)로 정제하였다. I94 (450 g, 77.9%의 수율)를 연한 황색 오일로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.40 - 5.68 (m, 1H), 4.38 - 4.06 (m, 5H), 3.74 - 3.36 (m, 2H), 3.09 - 2.78 (m, 1H), 2.76 - 2.48 (m, 3H), 1.47 (br s, 9H), 1.27 (dt, J = 4.0, 7.0 Hz, 6H)

9개의 배치를 병렬적으로 수행하였다. THF (1.50 L) 중 화합물 I94 (50.0 g, 126 mmol, 1.00 당량)의 용액에 t-BuOK (1 M, 177 mL, 1.40 당량)를 -70℃에서 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)는 화합물 3 (R_f = 0.50)이 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.60)이 형성되었음을 보여주었다. 9개의 배치를 병렬적으로 워크업하였다. 상기 혼합물을 0℃의 1 N HCl (500 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 MBTE (800 mL x 2)로 추출하였다. 유기물을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켰다. 합해진 화합물 I95 (400 g, 조 100%)를 연한 황색 오일로서 추가 정제를 위한 것 없이 다음 단계를 위하여 합하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 11.99 (s, 1H), 5.87 - 5.47 (m, 1H), 4.75 - 4.42 (m, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 3H), 3.69 (br s, 2H), 2.68 - 2.45 (m, 2H), 1.45 - 1.41 (m, 9H), 1.28 - 1.23 (m, 3H).

2개의 배치를 병렬적으로 수행하였다. EtOH (2.00 L) 중 화합물 I95 (200 g, 572 mmol, 1.00 당량), TEA (86.9 g, 858 mmol, 119 mL, 1.50 당량) 및 NH₂NH₂.H₂O (241 g, 4.10 mol, 234 mL, 85.0%의 순도, 1.50 당량)의 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)는 I95 (R_f = 0.80)가 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.01)이 형성되었음을 보여주었다. 워크업을 위해 2개의 배치를 합하였다. 반응물을 농축시켜 I96 (330 g, 조 100%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.

DCM (2.00 L) 중 I96 (144 g, 497 mmol, 1.00 당량), TEA (75.6 g, 746 mmol, 103 mL, 1.50 당량) 및 Boc₂O (130 g, 597 mmol, 137 mL, 1.20 당량)를 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)는 화합물 I96 (R_f = 0.01)이 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.40)이 형성되었음을 보여주었다. HPLC (EW15208-75-P1A)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 상기 혼합물을 약 150 mL까지 농축시켰으며, 백색 고체가 침전되었다. MBTE (150 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 백색 고체를 여과시켜 화합물 I97 (120 g, 60.6%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (EW15208-75-P1G3, R.T = 15.253분)는 위치이성질체가 완전히 분리되었음을 보여주었다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 11.17 (br s, 1H), 6.46 - 5.89 (m, 1H), 5.03 - 4.62 (m, 1H), 4.50 (br d, J = 15.9 Hz, 1H), 3.95 - 3.62 (m, 1H), 3.23 - 2.99 (m, 2H), 1.53 (s, 9H), 1.44 (s, 9H)

DCM (1.00 L) 중 화합물 1,1,2,2,3,3,4,4,4-노나플루오로부탄-1-술포닐 플루오라이드 (139 g, 462 mmol, 81.9 mL, 1.50 당량) 및 화합물 I97 (120 g, 308 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP (1.88 g, 15.41 mmol, 0.05 당량)의 혼합물에 DIPEA (119 g, 924 mmol, 161 mL, 3.00 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)는 화합물 I97 (R_f = 0.20)이 거의 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.60, 0.10)이 형성되었음을 보여주었다. 상기 혼합물을 물 (500 mL)로 세척하고, 농축시켰다. 잔사를 SiO₂ 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 ~ 10/1)로 정제하였다. 화합물 I98 (105 g, 50.2%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

오토클레이브 용기를 EtOH (1.20 L) 및 DMF (1.20 L) 중 화합물 I98 (105 g, 156 mmol, 1.00 당량), DPPP (6.45 g, 15.6 mmol, 0.10 당량), Pd(OAc)₂ (3.51 g, 15.64 mmol, 0.10 당량) 및 TEA (31.6 g, 312 mmol, 43.5 mL, 2.00 당량)로 충전시켰다. 그 후, 상기 혼합물을 질소로 3회 및 일산화탄소로 3회 퍼지하였다. 상기 혼합물을 48시간 동안 CO (0.5 MPa) 하에 90℃까지 교반시켰다. TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)는 I98 (R_f = 0.80)이 소모되고 새로운 스폿 (R_f = 0.30, 0.0)이 형성되었음을 보여주었다. 여과액을 농축시켰다. 잔사를 SiO₂ 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1 ~ 1/1)로 정제하여 I99 (26.0 g, 34.5%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 12.50 - 11.55 (m, 1H), 5.94 - 5.47 (m, 1H), 5.28 - 4.72 (m, 2H), 4.51 - 4.15 (m, 3H), 3.22 - 2.99 (m, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.45 - 1.36 (m, 3H).

3.1.1.15. 중간체 I101 의 합성

4-(디플루오로메톡시)아세토페논 (5 g, 26.86 mmol) 및 3-5] 및 2-아미노에탄-1-올 (4.8 mL, 80.58 mmol)을 질소 분위기 하에 건조 MeOH (62.5 mL)에 용해시켰다. Ti(iPrO)₄ (10.2 mL, 34.92 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 추가로 빙조로 냉각시켰다. 소듐 보로히드라이드 (1.02 g, 26.86 mmol)를 일부씩 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물의 첨가에 의해 켄칭하고, 교반을 실온에서 20분 동안 계속하였다. 상기 혼합물을 1 N HCl로 산성화하였다. 상기 혼합물을 셀라이트 패드에서 여과시키고, 물 및 EtOAc로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 물에 용해시키고, NaHCO₃으로 중화시켰다. 상기 혼합물을 Me-THF로 추출하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 2-((1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)아미노)에탄-1-올 I100 (6.1 g, 수율: 98.214%)을 오일로서 수득하였다.

THF (60 mL) 및 물 (75 mL) 중 2-((1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)아미노)에탄-1-올 (6.1 g, 26.38 mmol) 및 NaHCO₃ (8.8 g, 105.52 mmol)의 용액에 BOC-무수물 (15.8 mL, THF 중 1 M, 31.65 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. THF를 제거하였다. 상기 혼합물을 Me-THF로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/5로부터 40/60까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 I101 (6 g, 수율: 68%)을 수득하였다.

3.1.1.16. 중간체 I103 의 합성

EtOH (150 mL) 중 2-피리딘카르복스알데히드 (9 mL, 94.611mmol)의 용액에 에탄올아민 (5.7 mL, 94.61 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 그 후 소듐 보로히드라이드 (3.6 g, 96.50 mmol)를 0℃에서 일부씩 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응물을 포화 NaHCO₃ 용액 (100 mL)으로 켄칭하고, 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 형성된 백색 고체를 여과 제거하고, 여과액을 증발시켜 조 2-((피리딘-2-일메틸)아미노)에탄-1-올 I102 (18.31 g)를 주황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

조 2-((피리딘-2-일메틸)아미노)에탄-1-올 I102 (1.44 g, 9.46 mmol)를 THF (20 mL) 및 물 (26 mL)에 용해시켰다. 그 후 NaHCO₃ (3.18 g, 37.84 mmol), 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (5.7 mL, 2 M, 11.35 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 형성된 고체/염을 여과 제거하고, THF를 분리하였다. 수층을 EtOAc로 한 번 더 추출하고, 유기 층을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 0/100까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 중간체 I103 (21.7 g, 수율: 85%)을 황색 오일로서 수득하였다.

3.1.1.17. 중간체 I106 의 합성

건조 THF (510 mL) 중 I103 (21.2 g, 28 mmol)의 용액에 tert-부틸 (1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)(2-히드록시에틸)카르바메이트 (26 g, 28 mmol) 및 트리페닐포스핀 (46.4 g, 168 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N₂ 분위기에서 밀봉하였다. 그 후 DIAD (32.7 mL, 168 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 조 물질을 DIPE에 재용해시키고, 포화 NaHCO₃을 첨가하였다. 상기 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 형성된 고체를 여과 제거하였다. 유기 층을 분리하고, 감압 하에 증발시켰다. 갈색 오일을 컬럼 크로마토그래피 (헵탄/ (100/0으로부터 0/100까지의 EtOH:EtOAc 10/30))를 통해 정제하였다. 잔사를 DIPE에 미분화하였다. 상기 현탁액을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 고체를 여과 제거하고, 여과액을 증발시켜 주황색 오일, 5-(tert-부틸) 3-에틸 (R)-2-(2-((tert-부톡시카르보닐)(피리딘-2-일메틸)아미노)에틸)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 I104 (75 g, 수율: 71%)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

플라스크를 건조 1,4-디옥산 (94 mL) 중 5-(tert-부틸) 3-에틸 (R)-2-(2-((tert-부톡시카르보닐)(피리딘-2-일메틸)아미노)에틸)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 I104 (20 g, 15.2 mmol)로 충전시켰다. HCl (40 mL, 디옥산 중 4 M, 158 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 생성물을 디에틸 에테르와 함께 동시증발시키고, 수득된 누르스름한 폼을 디에틸 에테르에 미분화하였다. 형성된 누르스름한 고체를 여과 제거하고, 진공에서 45℃에서 하룻밤 건조시켜 에틸 (R)-6-메틸-2-(2-((피리딘-2-일메틸)아미노)에틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 HCl I105 (10.4 g, 52%의 순도, 수율: 82%)를 수득하였다. 여과액을 증발시키고, 잔사를 다시 에테르에 미분화하였다. 침전물을 여과 제거하여 I105의 제2 분획 (베이지색 고체), (1.5 g, 52%의 순도, 수율 11%)을 수득하고, 이를 진공에서 45℃에서 하룻밤 건조시켰다. 상기 조 분획을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

압력 튜브를 톨루엔 (24 mL) 중 I105 (10.4 g, 13 mmol)로 충전시켰다. 1,5,7-트리아자바이시클로[4.4.0]에스-5-엔 (TBD) (7.22 g, 51.8 mmol)를 첨가하고, 바이알을 N₂ 분위기에서 밀봉하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성물을 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 90/10까지의 DCM/[MeOH/NH₃ 7 M])에서 정제하여 (R)-3-메틸-9-(피리딘-2-일메틸)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온 I106 (5 g, 수율: 정량적)을 황색 오일로서 수득하였으며, 이는 실온에서 정치 후 고체화된다.

3.1.1.18. 중간체 I109 의 합성

빙조에서 30분 동안 MsCl (99.8 g, 871 mmol)을 3-부틴-2-올 (50.4 g, 719 mmol), 트리에틸아민 (108 g, 1075 mmol), DCM (504 mL)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 교반시킨 후 물 (500mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 2-(부트-3-인-2-일아미노)에탄-1-올 I107을 담색 오일로서 수득하고, 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

THF (750 mL) 중 I107 (112 g, 753 mmol), 2-아미노에탄-1-올 (115 g, 1882 mmol)을 주말에 걸쳐 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 포화 수성 NaHCO₃ (300mL)을 첨가하고, 혼합물을 Et₂O (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 건조상태까지 증발시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (90/10으로부터 0/100까지의 헵탄/ EtOAc)로 정제하여 2-(부트-3-인-2-일아미노)에탄-1-올 I108 (37g, 수율: 43%)을 투명 오일로서 수득하였다.

Et₃N (59 mL, 426 mmol)을 DCM (500 mL) 중 2-(부트-3-인-2-일아미노)에탄-1-올 I108 (37 g, 328 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (86 g, 393 mmol)의 용액에 첨가하고, 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 80/20까지의 DCM/MeOH)로 정제하여 tert-부틸 부트-3-인-2-일(2-히드록시에틸)카르바메이트 I109 (53 g, 75%)를 수득하였다.

3.1.1.18. 중간체 I111 의 합성

DCM (200 mL) 중 5-(tert-부틸) 3-에틸 (R)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (20 g, 64.7 mmol)의 교반 용액에 HCl (81 mL, 디옥산 중 4 M, 323 mmol)을 첨가하였다. 그 후 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 하룻밤 후, 반응 혼합물을 잔사 상에서 증발시키고 디에틸 에테르와 함께 2회 동시증발시켰다. 잔사를 디에틸에테르 (200 mL)에 미분화하고, 침전물을 여과시키고, 디에틸에테르(2 X 50 mL)로 세척하고, 진공 오븐에서 3시간 동안 건조시켜 에틸 (R)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I110 (18 g, 수율: 정량적)를 황색 분말로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

튜브를 DCM (20 mL) 중 (R)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I110 (1 g, 3.95 mmol) 및 Et₃N (1.6 mL, 11.8 mmol)으로 충전시켰다. 4-클로로-3-시아노벤조산 (788 mg, 4.34 mmol)을 첨가하고, 바이알의 뚜껑을 닫았다. 디에틸 시아노포스포네이트 (0.85 mL, 5.13 mmol)를 적가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 10 mL의 NaHCO₃ 반포화 수용액을 첨가하였다. 5분 동안 격렬하게 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 0/100까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 에틸 (R)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I111 (836 mg, 수율: 57%)을 폼으로서 수득하였다.

3.1.2. 화합물의 합성

3.1.2.1. 화합물 1 의 합성

중간체 I10

에틸 2-(2-아미노에틸)-5-(3,4-디클로로벤조일)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트·2TFA

TFA (4.49 mL, 58.7 mmol)를 DCM (100 mL) 중 중간체 I5 (3.00 g, 5.87 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I10을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 1

2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

중간체 I10을 EtOAc (150 mL)에 용해시켰다. 상기 용액을 NaHCO₃ (포화, 수성, 150 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 THF (5 mL) 및 MeCN (1 mL)에 희석시키고, TBD (245 mg, 1.76 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Biotage 마이크로웨이브에서 100℃에서 105분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰으며, 침전물이 밤새 형성되었다. 백색 결정을 여과 제거하고, MeCN으로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 화합물 1 (872 mg, 41% (2단계에 걸쳐))을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 7.78 (br s, 1H), 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.65 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 4.66 (s, 2H), 4.17 - 4.23 (m, 2H), 3.64 - 3.82 (m, 2H), 3.55 - 3.62 (m, 2H), 2.74 (t, J=5.9 Hz, 2H); LCMS (방법 B): Rt = 1.53분, m/z: C₁₆H₁₄Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 364.0, 실측치: 365 [M+H]⁺.

3.1.2.2. 화합물 2 의 합성

중간체 I11

5-tert-부틸 3-에틸 2-{2-[(프로판-2-일)아미노]에틸}-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트

MeCN (115 mL) 중 중간체 I6 (0.70 g, 1.74 mmol), 이소프로필아민 (1.03 g, 17.4 mmol), K₂CO₃ (481 mg, 3.48 mmol) 및 NaI (26.1 mg, 0.17 mmol)의 혼합물을 환류 하에 6시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 데칼라이트에서 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/(EtOH/NH₃ (수성, MeOH 중 7 M)), 75/25/2), 구배: 30:70으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I11 (105 mg, 16%)을 갈색 오일로서 수득하였다.

중간체 I12

tert-부틸 10-옥소-9-(프로판-2-일)-3,4,7,8,9,10-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5 a]피라진-2(1H)-카르복실레이트

THF (2　mL) 중 중간체 I11 (105 mg, 0.276 mmol) 및 TBD (11.5 mg, 82.8 μmol)의 혼합물을 100℃에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I12 (82 mg, 89%)를 수득하였다.

화합물 2

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-(프로판-2-일)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

TFA (0.19 mL, 2.45 mmol)를 DCM (30 mL) 중 중간체 I12 (82 mg, 0.24 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DCM (30mL)에 용해시켰다. DIPEA (0.169 mL, 0.98 mmol), 이어서 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (51.4 mg, 0.245 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 상기 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 70:30으로부터 0:100까지) 처리를 하여 화합물 2 (82 mg, 82%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.65 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.61 - 4.72 (m, 3H), 4.21 - 4.27 (m, 2H), 3.67 - 3.77 (m, 2H), 3.61 - 3.66 (m, 2H), 2.73 (t, J=5.9 Hz, 2H), 1.15 (d, J=6.8 Hz, 6H); LCMS (방법 D): Rt = 1.85분, m/z: C₁₉H₂₀Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 406.1, 실측치: 407.2 [M+H]⁺; m.p 190℃.

3.1.2.3. 화합물 3 의 합성

9-벤질-2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

무수 DMF (4.1 mL) 중 화합물 1 (125 mg, 0.34 mmol)의 용액에 NaH (광유 중 60% 분산물, 20.5 mg, 0.51 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반시키고, 벤질브로마이드 (44.8 μL, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물로 켄칭하고, MeOH로 희석시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하여 화합물 3 (145 mg, 93%)을 유리질 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 81℃) δ ppm 7.67 - 7.71 (m, 2H), 7.43 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.24 - 7.37 (m, 5H), 4.71 (br s, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.25 - 4.29 (m, 2H), 3.63 - 3.82 (m, 4H), 2.74 (t, J=5.8 Hz, 2H) LCMS (방법 C): Rt = 1.05분, m/z: C₂₃H₂₀Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 454.0, 실측치: 455.3 [M+H]⁺.

3.1.2.4. 화합물 4 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(4-메톡시페닐)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 3의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 4를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 4 (153 mg, 95%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 7.68 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.41 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.20 - 7.27 (m, 2H), 6.85 - 6.93 (m, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.21 - 4.27 (m, 2H), 3.74 (s, 3 H), 3.69 - 3.73 (m, 2H), 3.61 - 3.67 (m, 2H), 2.74 (t, J=5.8 Hz, 2H); LCMS (방법 B): Rt = 1.98분, m/z: C₂₄H₂₂Cl₂N₄O₃에 대한 이론치: 484.0, 실측치: 485.1 [M+H]⁺.

3.1.2.5. 화합물 5 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[1-(피리딘-4-일)에틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

중간체 I10 (1.06 g, 1.66 mmol) 및 4-아세틸피리딘 (605 mg, 4.99 mmol)을 MeOH (20 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 실온에서 교반시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (1.10 g, 16.6 mmol)를 일일 2회 5일에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, Na₂CO₃ (수성)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 잔사를 마이크로웨이브 튜브에서 THF (2　mL)에 용해시켰다. TBD (69.5 mg, 0.50 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주말에 걸쳐 100℃에서 가열하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 잔사를 진공 하에 50℃에서 하룻밤 건조시켜 화합물 5 (18.2 mg, 2.3%)를 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 8.51 - 8.54 (m, 2H), 7.68 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.41 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.33 (m, 2H), 5.73 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.18 - 4.32 (m, 2H), 3.65 - 3.79 (m, 3H), 3.36 - 3.44 (m, 1H), 2.74 (t, J=5.8 Hz, 2H), 1.56 (d, J=7.0 Hz, 3H); LCMS (방법 D): Rt = 1.73분, m/z: C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 이론치: 469.1, 실측치: 470.2 [M+H]⁺.

3.1.2.6. 화합물 6 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(2-메톡시피리딘-4-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 3의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 6을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: NH₄HCO₃ (물 중 0.25%)/MeCN)를 통하여 수행하여 화합물 6 (59 mg, 37%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (600 MHz, DMSO-d ₆, 83℃) δ ppm 7.66 - 7.70 (m, 2H), 7.64 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1H), 6.90 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 6.67 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.59 - 4.74 (m, 4H), 4.33 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.87 (br t, J=6.0 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.57 - 3.83 (m, 2H), 2.75 (br t, J=5.5 Hz, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 1.01분, m/z: C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₃에 대한 이론치: 485.1, 실측치: 486.2 [M+H]⁺.

3.1.2.7. 화합물 7 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1,3-티아졸-2-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 3의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 7을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: NH₄HCO₃ (물 중 0.25%)/MeCN)를 통하여 수행하여 화합물 7 (99 mg, 수율: 65%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 81℃) δ ppm 7.73 (d, J=3.3 Hz, 1H), 7.66 - 7.71 (m, 2H), 7.63 (d, J=3.3 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.69 (br s, 2H), 4.28 - 4.36 (m, 2H), 3.84 - 3.89 (m, 2H), 3.63 - 3.80 (m, 2H), 2.75 (t, J=5.8 Hz, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 0.88분, m/z: C₂₀H₁₇Cl₂N₅O₂S에 대한 이론치: 61.0, 실측치: 462.2 [M+H]⁺.

3.1.2.8. 화합물 8 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1H-인돌-3-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

DMF (5 mL) 중 화합물 1 (208 mg, 0.57 mmol)의 혼합물에 NaH (광유 중 60% 분산물, 34.2 mg, 0.85 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반시켰다. Tert-부틸 3-(브로모메틸)-1H-인돌-1-카르복실레이트 (194 mg, 0.63 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 2시간 동안 교반시켰다. 반응물을 MeOH (1 mL)로 켄칭하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 생성물을 DCM (10 mL)에 용해시키고, TFA (0.44 mL, 5.70 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 NaHCO₃ (포화, 수성, 250 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 8 (41 mg, 15%)을 연한 황색 수지로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 10.75 (s, 1H), 7.69 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.67 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.34 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.04 - 7.10 (m, 1H), 6.93 - 6.98 (m, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.13 - 4.18 (m, 2H), 3.66 - 3.80 (m, 2H), 3.59 - 3.65 (m, 2H), 2.73 (t, J=5.8 Hz, 2H); LCMS (방법 B): Rt = 1.91분, m/z: C₂₅H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 이론치: 493.1, 실측치: 494.1 [M+H]⁺.

3.1.2.9. 화합물 9 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1H-인돌-4-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 3의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 9를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DMC/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: NH₄HCO₃ (물 중 0.25%)/MeCN)를 통하여 수행하였다. 잔사를 DIPE에 미분화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하여 화합물 9 (109 mg, 64%)를 회색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 81℃) δ ppm 10.96 (s, 1H), 7.71 (d, J=6.4 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.42 - 7.46 (m, 1H), 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.28 (t, J=2.8 Hz, 1H), 7.05 (t, J=7.6 Hz, 1H), 6.95 (d, J=7.0 Hz, 1H), 6.48 (br s, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.66 - 4.83 (m, 2H), 4.12 - 4.21 (m, 2H), 3.64 - 3.86 (m, 2H), 3.56 - 3.62 (m, 2H), 2.74 (t, J=5.7 Hz, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 0.97분, m/z: C₂₅H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 이론치: 493.1, 실측치: 494.3 [M+H]⁺.

3.1.2.10. 화합물 10 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-9-{[4-(디플루오로메톡시)페닐]메틸}-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 3의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 10을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 10 (147 mg, 85%)을 백색 폼으로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 81℃) δ ppm 7.69 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.39 (m, 2H), 7.11 - 7.16 (m, 2H), 7.09 (t, J=74.2 Hz, 1H), 4.66 - 4.78 (m, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.24 - 4.30 (m, 2H), 3.66 - 3.84 (m, 4H), 2.74 (t, J=5.7 Hz, 2H).

3.1.2.11. 화합물 11 의 합성

중간체 I13

에틸 (6R)-2-(2-아미노에틸)-5-(3,4-디클로로벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 히드로클로라이드

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 24.8 mL, 99.0 mmol)을 실온의 DCM (60 mL) 중 중간체 I8 (3.47 g, 6.60 mmol)의 용액에 적가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 건조상태까지 농축시키고, DCM (2 x 40 mL)과 함께 동시증발시켜 중간체 I13을 백색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

중간체 I14 ( C251 )

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

DCE (110 mL) 중 중간체 I13의 용액에 AlMe₃ (톨루엔 중 2 M, 9.91 mL, 19.8 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 및 80℃에서 추가 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, DCM (50 mL)으로 희석시켰다. Na₂SO₄·10H₂O (대략 10 g)를 일부씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 5분 동안 교반시키고, 무수 Na₂SO₄를 첨가하였다. 상기 현탁액을 여과시키고, DCM (50 mL)으로 세척하였다. 여과액을 NaHCO₃ (포화, 수성, 150 mL), HCl (1 M, 수성, 150 mL) 및 염수 (150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 중간체 I14 (2.20 g, 85% (2단계에 걸쳐))를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 11

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

0℃의 DMF (15 mL) 중 중간체 I14 (350 mg, 0.92 mmol)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 55.4 mg, 1.38 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시키고, 그 후 p-메톡시벤질 브로마이드 (204 mg, 1.02 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, EtOAc (100 mL)로 희석시키고, H₂O (3 x 100 mL), 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc (100 mL)에 용해시키고, 용액을 H₂O (3 x 100 mL), 및 염수 (100 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 화합물 11 (391 mg, 84%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.72 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.27 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.82 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.10 (br.s, 1H), 4.82 - 4.54 (m, 3H), 4.39 - 4.22 (m, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.68 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.95 (dd, J=16.2, 5.6 Hz, 1H), 2.58 (d, J=16.2 Hz, 1H), 1.18 (d, J=6.6 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 10.5분, C₂₅H₂₄Cl₂N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 498, m/z 실측치: 499 [M+H]⁺.

3.1.2.12. 화합물 12 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(4-플루오로페닐)메틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 11의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 12를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc (100 mL)에 용해시키고, H₂O (3 x 100 mL), 및 염수 (100 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 화합물 12 (360 mg, 86%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.72 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 2H), 5.19 - 4.98 (m, 1H), 4.80 - 4.59 (m, 3H), 4.36 - 4.24 (m, 3H), 3.72 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.95 (dd, J=15.8, 5.9 Hz, 1H), 2.58 (d, J=15.8 Hz, 1H), 1.18 (d, J=6.7 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 10.7분, C₂₄H₂₁Cl₂FN₄O2에 대한 m/z 이론치: 486, m/z 실측치: 487 [M+H]⁺.

3.1.2.13. 화합물 13 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-{[4-(디플루오로메톡시)페닐]메틸}-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 11의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 13을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc (100 mL)에 용해시키고, H₂O (3 x 100 mL) 및 염수 (100 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 화합물 13 (375 mg, 80%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.72 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.40 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.16 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.14 (t, J=74.0 Hz, 1H), 5.08 (br.s, 1H), 4.80 - 4.52 (m, 3H), 4.38 - 4.23 (m, 3H), 3.73 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.96 (dd, J=15.6, 5.4 Hz, 1H), 2.58 (d, J=15.6 Hz, 1H), 1.18 (d, J=6.4 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 10.8분, C₂₅H₂₂Cl₂F₂N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 534, m/z 실측치: 535 [M+H]⁺.

3.1.2.14. 화합물 14 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-{[4-(트리플루오로메톡시)페닐]메틸}-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 11의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 14를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc (100 mL)에 용해시키고, 혼합물을 H₂O (3 x 100 mL) 및 염수 (100 mL)로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 화합물 14 (385 mg, 80%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.72 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.48 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.43 (dd, J=8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.32 (d, J=8.4 Hz, 2H), 5.09 (br.s, 1H), 4.87 - 4.52 (m, 3H), 4.38 - 4.23 (m, 3H), 3.75 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.96 (dd, J=16.0, 6.0 Hz, 1H), 2.59 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.18 (d, J=6.4 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 11.4분, C₂₅H₂₁Cl₂F₃N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 552, m/z 실측치: 553 [M+H]⁺.

3.1.2.15. 화합물 15 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(피리딘-2-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

NaH (광유 중 60%, 66.4 mg, 1.66 mmol)를 DMF (4 mL) 중 중간체 I14 (130　mg, 0.33 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 2-피콜릴 클로라이드 (109 mg, 0.66 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 또 다른 분획 (0.05 mmol)과 합하고, H₂O (40 mL)로 희석시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO₃ (포화, 수성, 50 mL) 및 염수 (3 x 50 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 역상 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 물/MeCN, 구배: 75:25로부터 25:75까지)로 수행하여 화합물 15 (90 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 8.52 (ddd, J=4.8, 1.6, 0.8 Hz, 1H), 7.76 (td, J=7.6, 2.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.28 (ddd, J=8.0, 5.2, 0.8 Hz, 1H), 5.05 (br.s, 1H), 4.80 - 4.72 (m, 2H), 4.63 (br.s, 1H), 4.39 - 4.26 (m, 3H), 3.90 - 3.80 (m, 2H), 2.95 (dd, J=16.0, 6.0 Hz, 1H), 2.58 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.4 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 8.6분, C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 m/z 이론치: 469, m/z 실측치: 470 [M+H]⁺.

3.1.2.16. 화합물 16 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(피리딘-3-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 15의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 16을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc (2 x 5 mL)와 함께 동시증발시켜 화합물 16 (163 mg, 85%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 8.57 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.50 (dd, J=4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.50 (dt, J=7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.42 (ddd, J=7.6, 4.8, 0.8 Hz, 1H), 5.08 (br.s, 1H), 4.73 - 4.64 (m, 3H), 4.36 - 4.26 (m, 3H), 3.81 - 3.71 (m, 2H), 2.95 (dd, J=15.6, 5.6 Hz, 1H), 2.57 (d, J=15.6 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 7.9분, C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 m/z 이론치: 469, m/z 실측치: 470 [M+H]⁺.

3.2.1.17. 화합물 17 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(피리딘-4-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

소듐 시아노보로히드라이드 (134 mg, 2.02 mmol)를 MeOH (5 mL) 중 중간체 I13 (440　mg, 0.67 mmol) 및 4-피리딘카르복스알데히드 (108 mg, 1.01 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 추가량의 4-피리딘카르복스알데히드 (108 mg, 1.01 mmol) 및 소듐 시아노보로히드라이드 (134 mg, 2.02 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 THF (3 mL)에 용해시켰다. DBU (0.50 mL, 3.37 mmol) 및 TBD (28.1 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉 압력 튜브에서 100℃에서 2시간 동안 교반시키고, 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 잔사를 MeOH (3 mL)에 용해시켰다. HCl (1 M 수성, 1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 용액을 샘플 농축기에서 농축시켰다. 잔사를 DCM (2 mL)에 용해시키고, 용액을 Na₂CO₃ (수성)로 세척하고, HM-N 이솔루트 카트리지에서 건조시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 17 (48 mg, 15%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 8.48 - 8.54 (m, 2H), 7.68 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.65 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.32 (m, 2H), 4.94 - 5.17 (m, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.23 - 4.36 (m, 3H), 3.73 - 3.78 (m, 2H), 2.89 - 2.98 (m, 2H), 2.57 (d, J=15.8 Hz, 1H), 1.17 (d, J=7.0 Hz, 3H); LCMS (방법 B): Rt = 1.72분, m/z: C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 이론치: 469.1, 실측치: 470.1 [M+H]⁺.

3.2.1.18. 화합물 18 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1-메틸-1H-피라졸-5-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

DMF (5 mL) 중 중간체 I14 (130 mg, 285 μmol, 83%의 순도)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 12.5 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. DMF (5 mL) 중 5-(클로로메틸)-1-메틸-1H-피라졸 히드로클로라이드 (52.3 mg, 0.31　mmol)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 12.5 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시키고, DMF 중 중간체 I14 및 NaH의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시키고, H₂O (150 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 NaHCO₃ (포화, 수성, 3 x 150 mL), 염수 (150 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 시클로헥산/EtOAc, 구배: 80:20으로부터 50:50까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 역상 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, MeCN/H₂O, 구배: 1:9로부터 1:1까지)로 수행하였다. 잔사를 추가로 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하였다. 생성물을 EtOH와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 50℃에서 하룻밤 건조시켜 화합물 18 (83.2 mg, 62%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.71 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 2.1Hz, 1H), 7.34 (d, J=1.8 Hz, 1H), 6.27 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.08 (br.s, 1H), 4.83 - 4.52 (m, 3H), 4.38 - 4.21 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 - 3.69 (m, 2H), 2.95 (dd, J=16.3, 6.6 Hz, 1H), 2.57 (d, J=16.3 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 9.1분, C₂₂H₂₂Cl₂N₆O₂에 대한 m/z 이론치: 472, m/z 실측치: 473 [M+H]⁺.

3.2.1.19. 화합물 19 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 18의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 19를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, EtOAc/MeOH, 구배: 99:1로부터 92:8까지)로 정제하였다. 잔사를 Et₂O (3 mL)에 미분화하고, 연속적으로 EtOAc 및 EtOAc와 EtOH의 혼합물 (1:1, 4 x 5 mL)과 함께 동시증발시켜 화합물 19 (92 mg, 43%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.71 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 6.15 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.06 (br.s, 1H), 4.63 (br.s, 1H), 4.63 - 4.54 (m, 2H), 4.32 - 4.22 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 - 3.71 (m, 2H), 2.94 (dd, J=16.0, 5.2 Hz, 1H), 2.57 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 9.1분, C₂₂H₂₂Cl₂N₆O₂에 대한 m/z 이론치: 472, m/z 실측치: 473 [M+H]⁺.

3.2.1.20. 화합물 20 의 합성

중간체 I15

3-{[(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-10-옥소-1,3,4,7,8,10-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-9(2H)-일]메틸}-N,N-디메틸-1H-피라졸-1-술폰아미드

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

DMF (9 mL) 중 중간체 I14 (185 mg, 0.49 mmol)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 21.4 mg, 0.54 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. DMF (9 mL) 중 3-(클로로메틸)-N,N-디메틸-1H-피라졸-1-술폰아미드 (120 mg, 0.54 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 추가량의 3-(클로로메틸)-N,N-디메틸-1H-피라졸-1-술폰아미드 (21.4 mg, 0.54　mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 H₂O (45 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 45 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO₃ (포화, 수성, 3 x 45 mL) 및 염수 (45 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 또 다른 분획 (0.11 mmol)과 합하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, EtOAc/MeOH, 구배: 99:1로부터 92:8까지)로 정제하여 중간체 I15 (208 mg, 70%)를 수득하였다.

화합물 20

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1H-피라졸-3-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I15 (188 mg, 0.33 mmol)를 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 9.13 mL, 36.5　mmol)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반시키고, NaHCO₃ (포화, 수성, 9 mL)으로 켄칭하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 96:4)로 정제하였다. 잔사를 Et₂O (3 mL)에 미분화하고, EtOAc (2 x 5 mL) 및 EtOH (2 x 5 mL)와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 55℃에서 하룻밤 건조시켜 화합물 20 (60 mg, 39%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 12.52 (br.s, 1H), 7.71 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.62 (br.s, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 6.19 (d, J=1.6 Hz, 1H), 5.07 (br.s, 1H), 4.79 - 4.53 (m, 3H), 4.37 - 4.21 (m, 3H), 3.78 - 3.68 (m, 2H), 2.95 (dd, J=16.0, 6.0 Hz, 1H), 2.57 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 8.8분, C₂₁H₂₀Cl₂N₆O₂에 대한 m/z 이론치: 458, m/z 실측치: 459 [M+H]⁺.

3.2.1.21. 화합물 21 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1,2-옥사졸-3-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 15의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 21을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (XBridge 컬럼 5 μm OBD, 30x150 mm, 40 mL/분, H₂O +0.1% HCOOH/MeOH: 54/46)로 수행하였다. 잔사를 EtOAc (30 mL)와 NaHCO₃ (포화, 수성, 30 mL)의 혼합물에 녹였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 화합물 21 (52 mg, 28%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 8.82 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.54 (d, J=1.6 Hz, 1H), 5.06 (br.s, 1H), 4.80 - 4.72 (m, 2H), 4.60 (br.s, 1H), 4.38 - 4.26 (m, 3H), 3.87 - 3.77 (m, 2H), 2.95 (dd, J=16.0, 5.6 Hz, 1H), 2.58 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 9.4분, C₂₁H₁₉Cl₂N₅O₃에 대한 m/z 이론치: 459, m/z 실측치: 460 [M+H]⁺.

3.2.1.22. 화합물 22 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1,3-티아졸-4-일)메틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 15의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 22를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 120 mg의 화합물 22 (불순물 함유)를 수득하였다. 분획을 또 다른 배치 (0.38 mmol)와 합하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, H₂O/MeCN, 구배: 60:40으로부터 0:100까지)로 수행하였다. 잔사를 다시 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, EtOAc)로 정제하여 화합물 22 (50 mg, 15%)를 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 9.04 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 5.07 (br.s, 1H), 4.84 - 4.75 (m, 2H), 4.60 (br.s, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 3H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 2.95 (dd, J=16.0, 6.0 Hz, 1H), 2.58 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 9.3분, C₂₁H₁₉Cl₂N₅O₂S에 대한 m/z 이론치: 475, m/z 실측치: 476 [M+H]⁺.

3.2.1.23. 화합물 23 의 합성

중간체 I16

에틸 (6R)-5-(3,4-디클로로벤조일)-2-(2-{[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

MeCN (25 mL) 중 중간체 I9 (700 mg, 1.39 mmol)의 용액에 KI (92.2 mg, 0.56 mmol) 및 (R)-(-)-1-(4-메톡시-페닐)-에틸아민 (1.0 mL, 6.95 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 20시간 동안 교반시키고, H₂O (150 mL)로 희석시켰다. 수성 상을 EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 중간체 I16 (523 mg, 67%)을 수득하였다.

화합물 23

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1R)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

0℃의 DCE (6 mL) 중 중간체 I16 (524 mg, 0.94 mmol)의 용액에 AlMe₃ (톨루엔 중 2 M, 1.40 mL, 2.80 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 및 80℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 추가량의 AlMe₃ (톨루엔 중 2 M, 1.40 mL, 2.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 추가 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (150 mL)으로 희석시키고, Na₂SO₄·10H₂O (1.5 g)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 30분 동안 교반시키고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시켰다. 유기 층을 HCl (1 N, 수성, 3 x 150 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 화합물 23 (340 mg, 71%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.71 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.3, 2.1 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.93 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.78 (q, J=7.0 Hz, 1H), 5.07 (br.s, 1H), 4.63 (br.s, 1H), 4.38 - 4.21 (m, 2H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.71 - 3.62 (m, 1H), 3.33 - 3.26 (m, 1H), 2.95 (dd, J=16.3, 6.6 Hz, 1H), 2.57 (d, J=16.3 Hz, 1H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 1.18 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 10.9분, C₂₆H₂₆Cl₂N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 512, m/z 실측치: 513 [M+H]⁺.

3.2.1.24. 화합물 24 의 합성

중간체 I17

에틸 (6R)-5-(3,4-디클로로벤조일)-2-(2-{[(1S)-1-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

중간체 I16의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I17을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 시클로헥산/EtOAc, 구배: 90:10으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 수행하여 중간체 I17 (631　mg, 81%)을 수득하였다.

화합물 24

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1S)-1-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 23의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 24를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100;0으로부터 95:5까지)로 정제하여 화합물 24 (447 mg, 77%, 95%의 순도)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.71 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.3, 2.1Hz, 1H), 7.28 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.92 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.78 (q, J=7.0 Hz, 1H) 5.11 (br.s, 1H), 4.62 (br.s, 1H), 4.37 - 4.21 (m, 2H), 4.16 - 4.05 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.70 - 3.63 (m, 1H), 3.30 - 3.22 (m, 1H), 2.94 (dd, J=16.3, 6.6 Hz, 1H), 2.56 (d, J=16.3 Hz, 1H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 10.8분, C₂₆H₂₆Cl₂N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 512, m/z 실측치: 513 [M+H]⁺.

3.2.1.25. 화합물 25 의 합성

중간체 I18

에틸 (6R)-5-(3,4-디클로로벤조일)-2-(2-{[(1R)-1-(4-플루오로페닐)에틸]아미노}에틸)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

중간체 I16의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I18을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 시클로헥산/EtOAc, 구배: 90:10으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I18 (397 mg, 79%)을 수득하였다.

화합물 25

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1R)-1-(4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 23의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 25를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하였다. 정제를 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Daicel ID 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, i-PrOH + 0.4% i-PrNH₂)를 통하여 수행하여 화합물 25 (195 mg, 56%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 2.55 (d, J=16.1 Hz, 1H), 2.87 - 2.95 (m, 1H), 3.21 - 3.41 (m, 1H), 3.56 - 3.74 (m, 1H), 4.05 - 4.36 (m, 3H), 4.53 (br s, 1H), 5.05 (br s, 1H), 5.78 (q, J=7.0 Hz, 1H), 7.09 - 7.16 (m, 2H), 7.36 - 7.43 (m, 3H), 7.62 - 7.71 (m, 2H); LCMS (방법 D): Rt = 2.14분, C₂₅H₂₃Cl₂FN₄O₂에 대한 m/z 이론치: 500.1; m/z 실측치: 501.0 [M+H]⁺.

3.2.1.26. 화합물 26 의 합성

중간체 I19

에틸 (6R)-5-(3,4-디클로로벤조일)-2-(2-{[(1S)-1-(4-플루오로페닐)에틸]아미노}에틸)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

중간체 I16의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I19를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 시클로헥산/EtOAc, 구배: 90:10으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I19 (709 mg, 72%)를 수득하였다.

화합물 26

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1S)-1-(4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 23의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 26을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/EtOAc, 구배: 50:50으로부터 20:80까지, 그 후 DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95: 5까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/THF, 구배: 100:0으로부터 70:30까지)로 수행하였다. 잔사를 마지막으로 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Diacel AD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)를 통하여 정제하여 화합물 26 (80 mg, 26%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.55 (d, J=7.3 Hz, 3H), 2.56 (d, J=16.1 Hz, 1H), 2.92 (dd, J=16.0, 5.8 Hz, 1H), 3.30 (ddd, J=13.2, 7.0, 4.7 Hz, 1H), 3.69 (ddd, J=13.0, 8.1, 4.6 Hz, 1H), 4.08 - 4.17 (m, 1H), 4.21 - 4.32 (m, 2H), 4.55 - 4.74 (m, 1H), 4.94 - 5.22 (m, 1H), 5.79 (q, J=7.2 Hz, 1H), 7.09 - 7.16 (m, 2H), 7.35 - 7.42 (m, 2H), 7.64 - 7.71 (m, 2H); LCMS (방법 D): Rt = 2.14분, C₂₅H₂₃Cl₂FN₄O₂에 대한 m/z 이론치: 500.1; m/z 실측치: 501.2 [M+H]⁺.

3.2.1.27. 화합물 27 의 합성

중간체 I20

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(1R)-1-(4-히드록시페닐)에틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

-78℃의 DCM (4 mL) 중 화합물 23 (200 mg, 0.39 mmol)의 용액에 BBr₃ (DCM 중 1 M, 2.34 mL, 2.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반시키고, -35℃까지 가온하고 1시간 동안 교반시키고, -12℃까지 가온하고 추가로 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 NaHCO₃ (포화, 수성, 15 mL)으로 켄칭하고, 혼합물을 15분 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. MeOH (10 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/EtOAc, 구배: 60:40으로부터 0:10까지)로 정제하여 중간체 I20 (135 mg, 65%, 93%의 순도)을 수득하였다.

화합물 27

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-{(1R)-1-[4-(디플루오로메톡시)페닐]에틸}-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

-78℃의 H₂O (350 μL) 및 MeCN (350 μL) 중 중간체 I20 (100 mg, 0.20 mmol) 및 KOH (225 mg, 4.00 mmol)의 현탁액에 디에틸[(브로모디플루오로)메틸]포스포네이트 (71 μL, 0.40 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, EtOAc (50 mL)로 희석시켰다. 상기 혼합물을 NaHCO₃ (포화, 수성), 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하여 화합물 27 (48 mg, 43%)을 연한 황색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.73 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 3H), 7.18 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.15 (t, J=74.2 Hz, 1H), 5.81 (q, J=7.2 Hz, 1H), 5.05 (br.s, 1H), 4.65 (br.s, 1H), 4.37 - 4.15 (m, 3H), 3.75 - 3.67 (m, 1H), 3.39 - 3.31 (m, 1H), 2.95 (dd, J=16.0, 6.0 Hz, 1H), 2.58 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.56 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.18 (d, J=6.7 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 11.1분, C₂₆H₂₄Cl₂F₂N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 548, m/z 실측치: 549 [M+H]⁺.

3.2.1.28. 화합물 28 의 합성

중간체 I21

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-[(SR)-1-(4-히드록시페닐)에틸]-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

중간체 I20의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I21을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/EtOAc, 구배: 60:40으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I21 (173 mg, 65%, 91%의 순도)을 수득하였다.

화합물 28

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-9-{(1S)-1-[4-(디플루오로메톡시)페닐]에틸}-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

화합물 27의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 28을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 수 회 (3회) 정제하여 화합물 28 (67 mg, 47%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 7.72 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 3H), 7.17 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.14 (t, J=74.1 Hz, 1H), 5.81 (q, J=7.2 Hz, 1H), 5.10 (br.s, 1H), 4.62 (br.s, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 2H), 4.21 - 4.13 (m, 1H), 3.77 - 3.68 (m, 1H), 3.37 - 3.29 (m, 1H), 2.95 (dd, J=16.0, 5.6 Hz, 1H), 2.58 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.57 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.18 (d, J=6.9 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 11.1분, C₂₆H₂₄Cl₂F₂N₄O₃에 대한 m/z 이론치: 548, m/z 실측치: 549 [M+H]⁺.

3.2.1.29. 화합물 29 의 합성

중간체 I22

에틸 (6R)-5-(3,4-디클로로벤조일)-2-[2-({(1S)-1-[1-(디메틸술파모일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]에틸}아미노)에틸]-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I9 (362 mg, 0.74 mmol)를 MeCN (12 mL)에 용해시켰다. KI (49.2 mg, 0.30 mmol) 및 중간체 I3 (820 mg, 3.70 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 20시간 동안 교반시켰다. 추가량의 KI (49.2 mg, 0.30 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 H₂O (10 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 95:5)로 수행하여 중간체 I22의 순수 분획 (292 mg, 61%) 및 불순물을 함유하는 또 다른 분획 (49 mg, 9%, 84%의 순도)을 제공하였다.

화합물 29

3-{(1S)-1-[(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-10-옥소-1,3,4,7,8,10-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-9(2H)-일]에틸}-N,N-디메틸-1H-1,2,4-트리아졸-1-술폰아미드

반응을 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I22 (292 mg, 0.45 mmol)를 MeCN (1.1 mL) 및 H₂O (5.9 mL)에 용해시켰다. TBD (37.9 mg, 0.27 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 100℃에서 1.8시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 98:2로부터 95:5까지)로 정제하여 화합물 29 (215 mg, 71%, 87%의 순도)를 제공하였다.

28 mg의 화합물 29를 EtOAc (3 x 2 mL)와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 50℃에서 20시간 동안 건조시켜 순수 화합물 29 (24 mg)를 백색 고체로서 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 9.00 (s, 1H), 7.72 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.3, 2.1Hz, 1H), 5.86 (q, J=6.9 Hz, 1H), 5.06 (br.s, 1H), 4.61 (br.s, 1H), 4.39 - 4.19 (m, 3H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 3.65 - 3.58 (m, 1H), 2.95 (dd, J=16.3, 6.6 Hz, 1H), 2.91 (s, 6H), 2.58 (d, J=16.3 Hz, 1H), 1.61 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 10.1분, C₂₃H₂₆Cl₂N₈O₄S에 대한 m/z 이론치: 580, m/z 실측치: 581 [M+H]⁺.

3.2.1.30. 화합물 30 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1S)-1-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)에틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

화합물 29 (178 mg, 0.27 mmol, 87%의 순도)를 1,4-디옥산 (1 mL)에 용해시키고, HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 5 mL, 20 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 DCM (5 mL)에 희석시키고, NaHCO₃ (포화, 수성, 3 x 5 mL)으로 세척하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOH (3 x 3 mL)와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 50℃에서 48시간 동안 건조시켜 화합물 30 (102 mg, 80%)을 백색 고체로서 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ , 80℃) δ ppm 13.74 (br.s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.71 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.3, 2.1Hz, 1H), 5.86 (q, J=7.2 Hz, 1H), 5.08 (br.s, 1H), 4.62 (br.s, 1H), 4.35 - 4.15 (m, 3H), 3.81 - 3.72 (m, 1H), 3.62 - 3.53 (m, 1H), 2.95 (dd, J=16.3, 6.6 Hz, 1H), 2.57 (d, J=16.3 Hz, 1H), 1.57 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 A): Rt = 8.5분, C₂₁H₂₁Cl₂N₇O₂에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]⁺.

3.2.1.31. 화합물 31 및 32 의 합성

중간체 I23

에틸 (6R)-2-{2-[(부트-3-인-2-일)아미노]에틸}-5-(3,4-디클로로벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I9 (214 mg, 0.42 mmol)를 MeCN (7.60 mL)에 용해시켰다. KI (28.2 mg, 0.17 mmol) 및 1-메틸-프로프-2-이닐아민 (179 μL, 2.12 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 추가량의 KI (28.2 mg, 0.17 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 17시간 동안 교반시켰다. 1-메틸-프로프-2-이닐아민 (71.5 μL, 0.85 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 밀봉 튜브 내로 옮기고, 1-메틸-프로프-2-이닐아민 (179 μL, 2.12 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 희석시키고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 중간체 I23 (177 mg, 78%, 89%의 순도)을 누르스름한 검으로서 수득하였다.

중간체 I24

(3R)-9-(부트-3-인-2-일)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I23 (177 mg, 0.33 mmol, 89%의 순도)을 MeCN (0.6 mL) 및 THF (2.92 mL)에 용해시켰다. TBD (13.8 mg, 0.10 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 100℃에서 1.8시간 동안 교반시켰다. 추가량의 TBD (13.8 mg, 0.10 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 추가 1.8시간 동안 100℃에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 중간체 I24 (156 mg, 84%, 77%의 순도)를 수득하였다.

화합물 31 및 32

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1*R)-1-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-9-[(1*S)-1-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸]-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온

반응을 무수 조건 하에 그리고 아르곤 분위기 하에 수행하였다.

중간체 I24 (126 mg, 0.22 mmol, 77%의 순도)를 DMF (1.35 mL) 및 MeOH (150 μL)에 용해시켰다. CuI (2.14 mg, 0.01 mmol) 및 트리메틸실릴아지드 (44.3 μL, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 또 다른 분획 (0.05 mmol)과 합하고, 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (5 mL)로 희석시키고, 물 (3 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc (3 x 2　mL)와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 화합물 I25 (77 mg, 72%)를 백색 고체로서 수득하였다.

부분입체이성질체들을 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Daicel ID 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)로 분리하여 화합물 31 및 32를 수득하였다.

화합물 31

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 81℃) δ ppm 14.10 - 14.97 (m, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.66 - 7.72 (m, 2H), 7.41 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 5.89 (q, J=7.0 Hz, 1H), 4.87 - 5.25 (m, 1H), 4.44 - 4.83 (m, 1H), 4.15 - 4.35 (m, 3H), 3.66 - 3.75 (m, 1H), 3.40 - 3.46 (m, 1H), 2.93 (dd, J=16.0, 5.8 Hz, 1H), 2.56 (d, J=15.8 Hz, 1H), 1.55 (d, J=7.0 Hz, 3H), 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 D): Rt = 1.65분, C₂₁H₂₁Cl₂N₇O₂에 대한 m/z 이론치: 473.1, m/z 실측치: 474.2 [M+H]⁺.

화합물 32

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 81℃) δ ppm 14.45 - 14.80 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.66 - 7.72 (m, 2H), 7.41 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 5.89 (q, J=7.0 Hz, 1H), 4.86 - 5.30 (m, 1H), 4.42 - 4.83 (m, 1H), 4.23 - 4.32 (m, 2H), 4.13 - 4.21 (m, 1H), 3.67 - 3.76 (m, 1H), 3.37 - 3.49 (m, 1H), 2.93 (dd, J=15.8, 5.7 Hz, 1H), 2.56 (d, J=15.8 Hz, 1H), 1.56 (d, J=7.0 Hz, 3H), 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 D): Rt = 1.65분, C₂₁H₂₁Cl₂N₇O₂에 대한 m/z 이론치: 473.1, m/z 실측치: 474.2 [M+H]⁺.

3.2. 7원 고리의 합성

3.2.1. 중간체 I26의 합성

에틸 2-{3-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로필}-5-(3,4-디클로로벤조일)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트

MeCN (30 mL) 중 중간체 I14 (1.00 g, 2.70 mmol), Cs₂CO₃ (1.32 g, 4.05 mmol) 및 3-(boc-아미노)프로필 브로마이드 (676 mg, 2.84 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH,3:1), 구배: 90:10으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I26 (850 mg, 60%)을 수득하였다.

3.2.2. 화합물의 합성

3.2.2.1. 화합물 33 의 합성

중간체 I27

1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온 히드로클로라이드

압력 튜브를 i-PrOH (5 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (250 mg, 0.78 mmol)로 충전시켰다. HCl (i-PrOH 중 6 M, 1.3 mL, 7.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DIPE에 미분화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 중간체 I27 (200 mg, 정량적)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 33

2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

압력 튜브를 중간체 I27 (198 mg, 0.82 mmol), 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (185 mg, 0.86 mmol), DCM (2.6 mL), 물 (2.61 mL) 및 Na₂CO₃ (432 mg, 4.08 mmol)으로 충전시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물 및 DIPE로 세척하였다. 생성물을 진공 하에 건조시켜 화합물 33 (220 mg, 71%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 7.72 (br s, 1 H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.63 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.34 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.62 - 3.78 (m, 2H), 3.19 - 3.27 (br s, 2H), 2.70 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.09 - 2.16 (m, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 0.79분, C₁₇H₁₆Cl₂N₄O₂에 대한 m/z 이론치: 378.0, 실측치: 379.1 [M+H]⁺; m.p 237℃.

3.2.2.2. 화합물 34 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-10-메틸-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

화합물 33 (60.0 mg, 158 μmol), MeI (19.7 μL, 0.32 mmol) 및 Cs₂CO₃ (103 mg, 0.32 mmol)을 마이크로웨이브 바이알 내에 분배하였다. THF (2 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 물과 2-MeTHF 사이에 분배하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 생성물을 DIPE 및 MeCN에 미분화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 34 (29 mg, 47%)를 담황색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.28 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.63 - 3.77 (m, 2H), 3.36 - 3.41 (m, 2H), 3.00 (s, 3H), 2.70 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.16 - 2.23 (m, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 0.83분, m/z: C₁₈H₁₈Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 392.1, 실측치: 393.1 [M+H]⁺.

3.2.2.4. 화합물 36 의 합성

2-(3,4-디클로로벤조일)-10-[(4-메톡시페닐)메틸]-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

화합물 34의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 36을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 생성물을 DIPE에 미분화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 36 (31 mg, 39%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 7.22 - 7.28 (m, 2H), 6.86 - 6.92 (m, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.24 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.67 - 3.74 (m, 2H), 3.31 - 3.37 (m, 2H), 2.71 (t, J=5.8 Hz, 2H), 1.97 - 2.05 (m, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 1.04분, m/z: C₂₅H₂₄Cl₂N₄O₃에 대한 이론치: 498.1, 실측치: 499.1 [M+H]⁺; m.p 236℃.

3.2.2.5. 화합물 37 의 합성

중간체 I28

에틸 2-(3-아미노프로필)-5-(3,4-디클로로벤조일)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트·2TFA

TFA (1.24 mL, 16.2 mmol)를 DCM (100 mL) 중 중간체 I26 (850 mg, 1.62 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I28을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 37

2-(3,4-디클로로벤조일)-10-[(피리딘-4-일)메틸]-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

소듐 시아노보로히드라이드 (56.6 mg, 0.86 mmol)를 MeOH (10 mL) 중 중간체 I28 (373　mg, 0.57 mmol) 및 4-피리딘카르복스알데히드 (61.2 mg, 0.57 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 추가량의 4-피리딘카르복스알데히드 (61.2 mg, 0.57 mmol) 및 소듐 시아노보로히드라이드 (56.6 mg, 0.86　mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다.

잔사를 THF (3 mL)에 용해시켰다. TBD (23.8 mg, 0.17 mmol) 및 DBU (0.43 mL, 2.85　mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 하룻밤 교반시켰다 (압력 튜브에서). 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 37 (99 mg, 37%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 101℃) δ ppm 8.47 - 8.54 (m, 2H), 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 7.27 (d, J=5.7 Hz, 2H), 4.68 (s, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.32 (t, J=6.7 Hz, 2H), 3.64 - 3.78 (m, 2H), 3.43 (dd, J=6.8, 5.5 Hz, 2H), 2.73 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.09 - 2.17 (m, 2H); LCMS (방법 B): Rt = 1.66분, m/z: C₂₃H₂₁Cl₂N₅O₂에 대한 이론치: 469.0, 실측치: 470.2 [M+H]⁺.

3.2.2.6. 화합물 38 의 합성

중간체 I29

(3R)-3-메틸-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온 히드로클로라이드

압력 튜브를 i-PrOH (5 mL) 중 tert -부틸 (3 R )-3-메틸-11-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1 H -피리도[2,3]피라졸로[2,4- b ][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (250 mg, 0.78 mmol)로 충전시켰다. HCl (i-PrOH 중 6 M, 1.3 mL, 7.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DIPE에 미분화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 중간체 I29 (200 mg, 정량적)를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 38

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

압력 튜브를 중간체 I29 (200 mg, 0.78 mmol), 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (177 mg, 0.82 mmol), DCM (2.5 mL, 39 mmol), 및 물 (2.5 mL)로 충전시켰다. Na₂CO₃ (413 mg, 3.90 mmol)를 일부씩 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 층들을 분리하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 생성물을 DIPE에 미분화하고, 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 38 (172 mg, 56%)을 백색 거품형 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 7.74 (br s, 1H), 7.66 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.37 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 4.87 - 5.12 (m, 1H), 4.47 - 4.74 (m, 1H), 4.29 - 4.41 (m, 2H), 4.20 (br d, J=17.4 Hz, 1H), 3.21 - 3.28 (m, 2H), 2.94 (s, 1H), 2.90 (dd, J=15.8, 5.9 Hz, 1H), 2.52 (d, J=15.8 Hz, 1H), 2.09 - 2.18 (m, 2H), 1.14 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 C): Rt = 0.83분, m/z: C₁₈H₁₈Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 392.1, 실측치: 393.2 [M+H]⁺.

3.2.2.7. 화합물 39 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3-메틸-10-(2-메틸프로필)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

화합물 34의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 39를 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 39 (45 mg, 66%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃, 57℃) δ ppm 7.43 - 7.54 (m, 2H), 7.23 (dd, J=8.1, 1.6 Hz, 1H), 5.28 (s, 1H), 4.56 - 5.55 (m, 1H), 4.28 - 4.48 (m, 3H), 3.32 - 3.53 (m, 3H), 3.18 - 3.30 (m, 1H), 2.91 - 3.07 (m, 1H), 2.62 (br d, J=15.9 Hz, 1H), 2.21 - 2.32 (m, 2H), 1.90 - 2.05 (m, 1H), 1.25 (br d, J=6.9 Hz, 3H), 0.92 - 1.01 (m, 6H); LCMS (방법 D): Rt = 2.02분, m/z: C₂₂H₂₆Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 448.1, 실측치: 449.3 [M+H]⁺.

3.2.2.8. 화합물 40 의 합성

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-10-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-메틸-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

화합물 34의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 40을 수득하였다.

조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 또 다른 정제를 분취용 SFC (고정상: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)로 수행하여 화합물 40 (38 mg, 29%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 7.67 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.38 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.29 (m, 2H), 6.86 - 6.92 (m, 2H), 4.87 - 5.13 (m, 1H), 4.52 - 4.71 (m, 3H), 4.18 - 4.29 (m, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.31 - 3.39 (m, 2H), 2.91 (dd, J=16.2, 6.1 Hz, 1H), 2.52 (d, J=16.1 Hz, 1H), 1.97 - 2.05 (m, 2H), 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 D): Rt = 2.04분, m/z: C₂₆H₂₆Cl₂N₄O₃에 대한 이론치: 512.1, 실측치: 513.3 [M+H]⁺.

3.2.2.9. 화합물 41 의 합성

중간체 I30

5-tert-부틸 3-에틸 2-{[1-(메탄술포닐)아지리딘-2-일]메틸}-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트

MeCN (75 mL) 중 5-tert 부틸 3-에틸-3,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (2.55 g, 8.63 mmol), 에피브로모히드린 (5.00 g, 23.4 mmol) 및 K₂CO₃ (3.58 g, 25.9 mmol)의 혼합물을 환류 하에 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 여전히 고온인 상태에서 데칼라이트에서 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I30 (850 mg, 23%)을 수득하였다.

중간체 31

tert-부틸 8-[(메탄술포닐)아미노]-10-[(4-메톡시페닐)메틸]-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트

MeCN (5 mL) 중 중간체 I30 (600 mg, 1.40 mmol), 4-메톡시벤질 브로마이드 (192 mg, 1.40　mmol)의 혼합물을 120℃에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 잔사 (275 mg)를 THF (2 mL)에 용해시키고, TBD (58.5 mg, 0.42 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉 튜브에서 100℃에서 17시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I31 (86 mg, 12%)을 투명 오일로서 수득하였다.

화합물 41

N-{2-(3,4-디클로로벤조일)-10-[(4-메톡시페닐)메틸]-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-일}메탄술폰아미드

TFA (0.13 mL, 1.66 mmol)를 DCM (10 mL) 중 중간체 I31 (86.0 mg, 0.17 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DCM (20 mL)에 용해시켰다. Et₃N (92　μL, 0.66 mmol), 이어서 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (36.4 mg, 0.17 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAC/EtOH, 3:1), 구배: 80:20으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 잔사를 MeOH (5 mL)에 용해시키고, 용액이 탁해질 때까지 물을 적가하였다. 상기 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 화합물 41 (61 mg, 62%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 150℃) δ ppm 7.63 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.59 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.36 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.21 - 7.27 (m, 2H), 6.86 - 6.91 (m, 2H), 6.81 (br s, 1H), 4.81 (d, J=14.5 Hz, 1H), 4.58 - 4.69 (m, 2H), 4.39 - 4.49 (m, 2H), 4.24 - 4.31 (m, 1H), 3.91 - 4.01 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.70 - 3.75 (m, 2H), 3.40 - 3.48 (m, 1H), 3.26 - 3.34 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.74 (t, J=5.8 Hz, 2H); LCMS (방법 B): Rt = 1.84분, m/z: C₂₆H₂₇Cl₂N₅O₅S에 대한 이론치: 591.1, 실측치: 592.1 [M+H]⁺.

3.2.2.10. 화합물 42 의 합성

a) 중간체 I34 의 합성

중간체 I32

2-((메틸아미노)메틸)프로프-2-엔-1-올

밀봉 튜브 내의 메탄아민 (THF 중 2 M, 223 mL) 중 5-메틸렌-1,3,2-디옥사티안 2-옥시드 (20.0 g, 149 mmol)의 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 중간체 I32를 황색 액체로서 제공하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

중간체 I33

tert-부틸 (2-(히드록시메틸)알릴)(메틸)카르바메이트

1,4-디옥산 (60 mL) 및 H₂O (60 mL) 중 중간체 I32의 용액에 Boc₂O (22.7 g, 104 mmol) 및 NaHCO₃ (12.5 g, 148 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (400 mL)로 희석시키고, 염수 (3 x 80 mL)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 20:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I33 (12.5 g, 42% (2단계에 걸쳐))을 연한 황색 액체로서 제공하였다.

중간체 I34

2-((메틸아미노)메틸)프로프-2-엔-1-올 히드로클로라이드

DCM (20 mL) 중 중간체 I33 (9.50 g, 47.2 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 M, 30 mL)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I34를 황색 오일로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

b) 화합물 42 의 합성

중간체 I35

(R)-tert-부틸 3-((2-(히드록시메틸)알릴)(메틸)카르바모일)-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트

피리딘 (15 mL) 중 (R)-5-(tert-부톡시카르보닐)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산 (4.09 g, 14.5 mmol) 및 중간체 I34 (2.0 g)의 혼합물에 EDCI (4.18 g, 21.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반시키고, EtOAc (400 mL)로 희석시켰다. 생성된 용액을 HCl (1 N, 수성) (4 x 30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 1:1로부터 0:1까지)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc 및 석유 에테르 (1:1, 10 mL)로 미분화하여 중간체 I35 (2.2　g, 35%, 85%의 순도)를 연한 황색 고체로서 제공하였다.

중간체 I36

(R)-tert-부틸 3,10-디메틸-8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트

N₂ 하에 THF (2 mL) 중 중간체 I35 (1.60 g, 3.73 mmol)의 혼합물에 ADDP (1.88 g, 7.46 mmol) 및 트리부틸포스핀 (1.51 g, 7.46 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반시키고, 물 (100 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 5:1로부터 0:1까지)로 정제하여 중간체 I36 (1.7 g, 61%, 94%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다.

중간체 I37

(3R)-3,10-디메틸-8-메틸리덴-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온·TFA

밀봉 튜브를 중간체 I36 (108 mg, 0.31 mmol) 및 DCM (1 mL)으로 충전시켰다. TFA (0.24 mL, 3.13 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 중간체 I37을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 42

(3R)-2-(3,4-디클로로벤조일)-3,10-디메틸-8-메틸리덴-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

중간체 I37를 DCM (1 mL) 및 물 (1 mL)에 용해시켰다. 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (70.9 mg, 0.33 mmol), 이어서 Na₂CO₃ (166 mg, 1.56 mmol)을 첨가하였다 (10분에 걸쳐 일부씩). 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 층들을 분리하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 50 x 150 mm, 이동상: NH₄HCO₃ (H₂O 중 0.25%)/MeOH)를 통하여 수행하였다. 잔사를 MeOH와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 건조시켜 화합물 42 (72 mg, 53% (2단계에 걸쳐))를 거품형 백색 고체로서 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 7.67 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.63 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.38 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 5.12 - 5.20 (m, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.55 - 4.70 (m, 1H), 4.21 (br d, J=17.2 Hz, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.87 - 2.93 (m, 1H), 2.53 (d, J=16.1 Hz, 1H), 1.15 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 C): Rt = 0.95분, m/z: C₂₀H₂₀Cl₂N₄O₂에 대한 이론치: 418.2, 실측치: 419.2 [M+H]⁺.

3.2.2.11. 화합물 43 의 합성

중간체 I38

5-tert-부틸 3-에틸 2-(2-(클로로메틸)알릴)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트

DMF (600 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (60.0 g, 203 mmol), 3-클로로-2-(클로로메틸)프로프-1-엔 (50.8 g, 406 mmol) 및 Cs₂CO₃ (99.3 g, 305 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N₂로 퍼지하였다 (3회). 반응 혼합물을 N₂ 분위기 하에 50℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (3 L)에 붓고, 5분 동안 교반시켰다. 수성 상을 EtOAc (3 x 1 L)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (3 L)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 100:1로부터 10:1까지)로 정제하여 중간체 I38 (30.00 g, 38%)을 황색 오일로서 제공하였다.

중간체 I39

5-tert-부틸 3-에틸 2-(2-(((2,2,2-트리플루오로에틸)아미노)메틸)알릴)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트

EtOH (50.00 mL) 중 중간체 I38 (500 mg, 1.30 mmol) 및 2,2,2-트리플루오로에탄아민 (3.86 g, 39.0　mmol)의 용액을 90℃에서 32시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (120 mL)로 희석시키고, NaHCO₃ (포화, 수성, 120 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카)로 정제하여 중간체 I39 (460 mg, 79%)를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 I40

tert-부틸 8-메틸렌-11-옥소-10-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트

톨루엔 (10.00 mL) 중 중간체 I39 (460.0 mg, 1.03 mmol)의 용액에 Al(Me)₃ (톨루엔 중 2 M, 2.06 mL)을 -30℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응물을 H₂O (10.00 mL)로 켄칭하였다. Na₂CO₃ (109.2 mg, 1.03 mmol) 및 Boc₂O (270 mg, 1.24　mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, HCl (1 M, 수성, 50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카)로 정제하여 중간체 I40 (390 mg, 95%)을 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 I41

8-메틸리덴-10-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온 히드로클로라이드

밀봉 튜브를 중간체 I40 (214 mg, 0.51 mmol) 및 i-PrOH (3.26 mL)로 충전시켰다. HCl (i-PrOH 중 6 M, 0.85 mL, 5.10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DIPE에 미분화하고, 여과시키고, 건조시켜 중간체 I41 (169 mg, 95%)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 43

2-(3,4-디클로로벤조일)-8-메틸리덴-10-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

밀봉 튜브를 중간체 I41 (169 mg, 0.48 mmol), 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (109 mg, 0.51 mmol), DCM (1.5 mL) 및 물 (1.5 mL)로 충전시켰다. Na₂CO₃ (255 mg, 2.41 mmol)을 일부씩 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 층들을 분리하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하여 화합물 43 (183 mg, 78%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 8.66 (dd, J=4.8, 1.5 Hz, 1H), 8.44 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.69 - 7.73 (m, 1H), 7.65 - 7.69 (m, 2H), 7.56 (dd, J=8.0, 4.7 Hz, 1H), 7.41 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.12 - 7.18 (m, 2H), 6.78 - 6.83 (m, 2H), 6.42 (br s, 1H), 4.34 (br d, J=2.4 Hz, 2H), 4.29 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.58 - 3.66 (m, 2H), 2.41 (t, J=5.8 Hz, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 1.04분, m/z: C₂₇H₂₃Cl₂N₅O₃에 대한 이론치: 535.1, 실측치: 536.1 [M+H]⁺.

3.2.2.12. 화합물 44 의 합성

중간체 I42

tert-부틸 (3R)-3,10-디메틸-8,11-디옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트

THF (60 mL) 및 H₂O (20 mL) 중 중간체 I37 (1.30 g, 3.49 mmol)의 혼합물에 OsO₄ (177 mg, 698 μmol) 및 NaIO₄ (2.24 g, 10.5 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 또 다른 분획 (2 g 규모)과 합하고, EtOAc (100 mL) 및 Na₂SO₃ (포화, 수성, 100 mL)으로 희석시켰다. 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 1:1로부터 0:1까지)로 정제하여 중간체 I42 (2.9 g, 70%의 순도)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 I43 및 I44

tert-부틸 (3R,8R)-8-히드록시-3,10-디메틸-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트

tert-부틸 (3R,8S)-8-히드록시-3,10-디메틸-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트

MeOH (30 mL) 중 중간체 I42 (2.9 g, 70%의 순도)의 혼합물에 NaBH₄ (551　mg, 14.6 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시키고, 반응물을 H₂O (80 mL)로 켄칭하였다 (0℃에서). 상기 혼합물을 EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 또 다른 배치 (200 mg 규모)와 합하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 1:1로부터 0:1까지)로 정제하여 중간체 I43 및 I44의 혼합물 (1.95 g, 89%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다.

부분입체이성질체들을 SFC (컬럼: AD (250 mm x 30mm, 5 μm); 이동상: CO₂/i-PrOH (H₂O 중 1% NH₃ 함유), 등용매 용출:80:20)로 분리하여 중간체 I43 및 중간체 I44를 수득하였다.

SFC 분석: 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 μm; 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 i-PrOH (0.05% DEA); 유량: 3 mL/분; 파장: 254 nm

I44: Rt = 1.918분

중간체 I45

tert-부틸 (3R,8R)-8-플루오로-3,10-디메틸-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트

DCM (15 mL) 중 중간체 I44 (700 mg, 1.70 mmol)의 혼합물에 DAST (1.09　g, 6.79 mmol)를 -40℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 H₂O (20 mL) 및 NaHCO₃ (포화, 수성, 20 mL)으로 켄칭하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 또 다른 배치 (700 mg 규모)와 합하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 3:1로부터 0:1까지)로 정제하여 중간체 I45 (470 mg, 93%의 순도)를 연한 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 I46

(3R,8R)-8-플루오로-3,10-디메틸-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온·TFA

중간체 I49의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I46을 수득하였다.

화합물 44

(3R,8R)-8-플루오로-3,10-디메틸-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온

화합물 46의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 44를 수득하였다.

MS (ESI): C₁₉H₁₉Cl₂FN₄O₂에 대한 m/z 이론치: 424; m/z 실측치: 425 [M+H]⁺; ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 7.75 - 7.66 (m, 2H), 7.43 (dd, J=1.9, 8.2 Hz, 1H), 4.64 - 4.17 (m, 8H), 3.07 (br s, 3H), 2.95 (br dd, J=5.9, 15.9 Hz, 1H), 2.58 (br d, J=15.8 Hz, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H).

3.2.2.13. 화합물 45 및 46 의 합성

중간체 I47 및 I48

tert-부틸 (4*S)-4-(히드록시메틸)-2-메틸-1-옥소-1,4,5,8,9,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-10(2H)-카르복실레이트

tert-부틸 (4*R)-4-(히드록시메틸)-2-메틸-1-옥소-1,4,5,8,9,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-10(2H)-카르복실레이트

DMF (80 mL) 중 tert-부틸 3-(히드록시(메틸)카르바모일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (8.00 g, 27.0 mmol), 3-브로모옥세탄 (4.07 g, 29.7 mmol), TBAI (997 mg, 2.70　mmol) 및 Cs₂CO₃ (13.2 g, 40.5 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N₂로 퍼지하였다 (3회). 반응 혼합물을 N₂ 분위기 하에 70℃에서 3시간 동안 교반시키고, 혼합물을 물 (200 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 5분 동안 교반시키고, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2 x 300 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 100:1로부터 1:2까지)로 정제하여 부분입체이성질체들의 혼합물 (4.50 g, 46%)을 황색 고체로서 수득하였다.

부분입체이성질체들을 SFC (컬럼: AD (250 mm x 30 mm,10 μm); 이동상: CO₂/MeOH (H₂O 중 0.1% NH₃ 함유), 등용매 용출:75:25)로 정제하여 중간체 I47 및 중간체 I48을 수득하였다.

SFC 분석: 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 μm; 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 MeOH (0.05% DEA); 유량: 3 mL/분; 파장: 220 nm.

I47: Rt = 1.77분

I48: Rt = 2.03분

중간체 I49

(4*S)-4-(히드록시메틸)-2-메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-1(2H)-온·TFA

DCM (10 mL) 중 중간체 I47 (100 mg, 284 μmol)의 용액에 TFA (1.07 g, 9.36 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 30분 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I49를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 46

(4*S)-10-(3,4-디클로로벤조일)-4-(히드록시메틸)-2-메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-1(2H)-온

DCM (40 mL) 중 중간체 I49 및 Et₃N (91.2 mg, 901 μmol)의 혼합물에 DCM (5 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (62.9 mg, 0.30 mmol)의 용액을 -10℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 -10℃에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 역상 HPLC (Phenomenex Synergi C-18 (10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18 (5 μm, 150 x 30　mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 H₂O (0.225% FA를 포함함) 중 5~99% MeCN 및 그 후 100% MeCN에서 2분 동안 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC)로 정제하여 화합물 46 (76 mg, 62%)을 무색 오일로서 제공하였다.

MS (ESI): C₁₈H₁₈Cl₂N₄O₄에 대한 m/z 이론치: 424; m/z 실측치: 425 [M+H]⁺; ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.59 - 7.52 (m, 2H), 7.32 - 7.30 (m, 1H), 4.99 - 4.53 (m, 4H), 4.41 (d, J=9.6 Hz, 1H), 4.08 - 3.74 (m, 4H), 3.29 (s, 3H), 2.92 -2.84 (m, 2H), 2.04 (d, J=5.2 Hz, 1H).

중간체 I50

(4*R)-4-(히드록시메틸)-2-메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-1(2H)-온· TFA

중간체 I49의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I50을 합성하였다.

화합물 45

(4*R)-10-(3,4-디클로로벤조일)-4-(히드록시메틸)-2-메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-1(2H)-온

화합물 46의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 45를 합성하였다.

MS (ESI): C₁₈H₁₈Cl₂N₄O₄에 대한 m/z 이론치: 424; m/z 실측치: 425 [M+H]⁺; ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.57 (s, 1H), 7.50 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.27 (m, 1H), 4.95 - 4.66 (m, 2H), 4.56 - 4.51 (m, 2H), 4.42 -4.40 (m, 1H), 3.86 - 3.81 (m, 1H), 3.75 - 3.72 (m, 3H), 3.26 (s, H) 2.89 - 2.01 (m, 2H), 2.00 (s, 1H).

3.2.2.14. 화합물 47 의 합성

중간체 I51 및 I52

tert-부틸 (4*S,9R)-4-(히드록시메틸)-2,9-디메틸-1-옥소-1,4,5,8,9,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-10(2H)-카르복실레이트

tert-부틸 (4*R,9R)-4-(히드록시메틸)-2,9-디메틸-1-옥소-1,4,5,8,9,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-10(2H)-카르복실레이트

DMF (20 mL) 중 tert-부틸 (R)-tert-부틸 3-(히드록시(메틸)카르바모일)-6-메틸-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (2.30 g, 7.41 mmol)의 용액에 Cs₂CO₃ (7.24 g, 22.2 mmol), 이어서 3-브로모옥세탄 (1.32 g, 9.63 mmol) 및 TBAI (274　mg, 741 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (2 x 20 mL) 및 H₂O (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 H₂O (2 x 20 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 1:1로부터 0:1까지)로 정제하여 부분입체이성질체들의 혼합물 (1.80 g, 56%, 85%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

부분입체이성질체들을 SFC (컬럼: DAICEL CHIRALCEL OD (250 mm x 30　mm, 10 μm); 이동상: CO₂/i-PrOH (H₂O 중 0.1% NH₃ 함유), 등용매 용출: 75:25)로 정제하여 중간체 I51 및 중간체 I52를 수득하였다.

SFC 분석: 컬럼: Chiralcel OD-3 100×4.6 mm I.D., 3 μm; 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 i-PrOH (0.05% DEA); 유량: 3 mL/분; 파장: 220 nm

I51: Rt = 1.861분

I52: Rt = 2.036분

중간체 I53

tert-부틸 (4*R,9R)-4-(플루오로메틸)-2,9-디메틸-1-옥소-1,4,5,8,9,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-10(2H)-카르복실레이트

THF (80 mL) 중 중간체 I52 (4.32 g, 11.6 mmol)의 혼합물에 1,1,2,2,3,3,4,4,4-노나플루오로부탄-1-술포닐 플루오라이드 (10.5 g, 34.9 mmol) 및 TREAT-HF (5.63 g, 34.9 mmol), 이어서 DIPEA (13.5 g, 1045 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반시켰다. 반응물을 HCl (1 N, 수성, 100 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 물 (100 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 100:1로부터 5:1까지)로 정제하여 중간체 I53 (2.5 g, 58%)을 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 I54

(4*R,9R)-4-(플루오로메틸)-2,9-디메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-1(2H)-온·TFA

중간체 I49의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 중간체 I54를 제조하였다.

화합물 47

(4*R,9R)-10-(3,4-디클로로벤조일)-4-(플루오로메틸)-2,9-디메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[5,1-d][1,2,5]옥사디아제핀-1(2H)-온

화합물 46의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 47을 합성하였다.

MS (ESI): C₁₉H₁₉Cl₂FN₄O₃에 대한 m/z 이론치: 440; m/z 실측치: 441 [M+H]⁺; ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.54 - 7.50 (m, 2H), 7.25 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.60 - 5.44 (m, 2H), 4.71 - 4.58 (m, 5H), 4.40 - 4.36 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 2.67 (d, J=15.6 Hz, 1H), 1.26 (s, 3H).

3.2.2.15. 화합물 48 의 합성

중간체 I55

tert-부틸 11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트

톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (250 mg, 816 μmol)의 용액에 로손 시약(Lawesson's reagent) (165 mg, 408 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 분취용 TLC (EtOAc)로 정제하여 중간체 I55 (258 mg, 98%)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 I56

1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-티온 히드로클로라이드

밀봉 튜브를 i-PrOH (1.07 mL) 중 중간체 I55 (54.0 mg, 0.17 mmol)로 충전시켰다. HCl (i-PrOH 중 6 M, 0.28 mL, 1.68 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DIPE에 미분화하고, 여과시키고, 건조시켜 중간체 I56 (35 mg, 81%)을 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 48

(3,4-디클로로페닐)(11-술파닐리덴-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2-일)메타논

밀봉 튜브를 중간체 I56 (35 mg, 135 μmol), 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (30.7 mg, 0.14 mmol), DCM (0.5 mL) 및 물 (0.5 mL)로 충전시켰다. Na₂CO₃ (71.7 mg, 0.68 mmol)을 일부씩 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 층들을 분리하고, 유기 상을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 헵탄/(EtOAc/EtOH, 3:1), 구배: 100:0으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 잔사를 DIPE에 미분화하고, 여과시키고, 진공 하에 건조시켜 화합물 48 (31 mg, 58%)을 담황색 고체로서 제공하였다.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 100℃) δ ppm 10.01 - 10.29 (m, 1H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.63 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.26 (t, J=6.9 Hz, 2H), 3.66 - 3.76 (m, 2H), 3.25 (q, J=6.2 Hz, 2H), 2.71 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.20 (quin, J=6.8 Hz, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 1.01분, C₁₇H₁₆Cl₂N₄OS에 대한 m/z 이론치: 394.0, m/z 실측치: 395.1 [M+H]⁺.

3.2.2.15. 화합물 C51 및 유사체의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 3,4-디플루오로벤조산 (30 mg, 0.19 mmol)의 용액에 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (105 mg, 0.276 mmol)를 첨가하였다. 그 후 중간체 I90 (50 mg, 0.14 mmol, 95%의 순도) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (90 mg, 0.70 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: Waters Xbrige C18 (5 μm 19 * 150 mm), 이동상 A: 물 (0.1% 중탄산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, UV: 214 nm, 유량: 15 mL/분, 구배: 20 ~ 75% (%B))로 정제하여 화합물 C51 (35 mg, 56%의 수율, LCMS로부터 98.7%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다:

3.2.2.16. 화합물 C59 및 유사체의 합성

DCM (10 mL) 중 피리다진-3-일메탄올 (220.0 mg, 2.0 mmol)의 용액에 DCM (2 mL) 중 이염화황 (595.0 mg, 5.0 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 농축시켜 조 중간체 I112 (200.0 mg, 78.1%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 9.71 - 9.69 (m, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.64 - 8.62 (m, 1H), 5.13 - 5.12 (m, 2H).

DMF (2 mL) 중 중간체 I112 (100 mg, 0.26 mmol, 제조는 EP19176933에 보고되었음)의 용액에 광유 중 60 중량% NaH (16.0 mg, 0.4 mmol)를 질소 하에 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후 중간체 I14 (40.0 mg, 0.31 mmol)를 이 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃의 물 (10 mL)로 처리하고, 10분 동안 교반시켰다. 그 후 EtOAc (10 mL)를 첨가하여 원하는 화합물을 추출하였다 (3회). 합한 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 예비 HPLC로 정제하여 화합물 C59 (41.0 mg, 33.6%의 수율, 98.2%의 LCMS로부터 순도)를 담황색 고체로서 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다:

3.2.2.17. 화합물 C81 및 유사체의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 1-(클로로메틸)-3-플루오로벤젠 (70 mg, 0.18 mmol), 중간체 I14 (31 mg, 0.21 mmol) 및 탄산세슘 (176 mg, 0.56 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 크로마토그래피 (디클로로메탄 : 메탄올 = 50 : 1)로 정제하고, 추가로 분취용 TLC (디클로로메탄 : 메탄올 = 20 : 1)로 정제하여 화합물 C81 (37 mg, 42%의 수율, LCMS에 의하면 97.35%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다:

3.2.2.18. 화합물 C83 의 합성

N₂ 분위기 하에 튜브를 건조 DMF (1.2 mL) 중 2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온 33 (73 mg, 0.19 mmol)으로 충전시켰다. 광유 중 60 중량% NaH (38.5 mg, 0.96 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 2-(클로로메틸)피리딘 히드로클로라이드 (66 mg, 0.39 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, Me-THF로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm,30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 정제하였다. 잔사를 MeOH에 용해시키고, 진공에서 농축시켜 2-(3,4-디클로로벤조일)-10-(피리딘-2-일메틸)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11-온 C83 (18.8 mg, 수율: 21%)을 백색 폼으로서 수득하였다.

3.2.2.19. 화합물 C63 의 합성

테트라히드로푸란 (100 mL) 중 4-메톡시피리딘 (10.5 g, 96.12 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (21.0 g, 96.22 mmol)를 질소 분위기 하에 0℃에서 일부씩 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물에 테트라히드로푸란 중 1 M 비닐마그네슘 브로마이드 (100 mL, 100 mmol)를 0℃에서 30분에 걸쳐 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 5℃의 염화수소 (1 M, 200 mL)로 처리하고, 10분 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 10% 중탄산나트륨 수용액 (100 mL), 그 후 염수 (100 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 필터를 증발시켜 중간체 I113 (8.5 g, 35%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)을 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.79 (s, 1H), 5.84 - 5.76 (m, 1H), 5.30 - 5.11 (m, 3H), 5.09 - 5.02 (m, 1H), 2.93 - 2.87 (m, 1H), 2.54 - 2.51 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).

아세트산 (50 mL) 중 중간체 I113 (9.00 g, 36.28 mmol, 90%의 순도)의 슬러리에 활성화 아연 분진 (12.1 g, 185.0 mmol)을 25℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 생성된 혼합물을 70℃에서 14시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 필터 케이크를 에탄올 (200 mL)로 세척하였다. 여과액을 진공에서 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 컬럼 C18 (이동상 A: 물 (+ 0.1% 중탄산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, 구배: 05 ~ 55% (%B))로 정제하여 중간체 I114. (2.31 g, 25%의 수율, ¹H NMR로부터 90%의 순도)를 갈색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.85 - 5.74 (m, 1H), 5.30 - 5.15 (m, 3H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 3.40 - 3.30 (m, 1H), 2.77 - 2.33 (m, 4H), 1.53 (s, 9H).

테트라히드로푸란 (50 mL) 중 중간체 I114 (10.5 g, 41.9 mmol, 90%의 순도)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (63 mL, 63 mmol)를 -65℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 -65℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후 디에틸 옥살레이트 (7.8 g, 53.8 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 -65℃~실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (50 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 조 물질을 제공하였다. 상기 조 물질을 실리카 겔에서 크로마토그래피 (석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 3 : 1)로 정제하여 중간체 I115 (7.5 g)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 2.210분, 질량: C₁₆H₂₃NO₆에 대한 이론치: 325.15, m/z 실측치: 270.1 [M+H-56]⁺.

빙초산 (20 mL) 중 중간체 I115 (7.5 g, 16.13 mmol, 70%의 순도) 및 히드라진 수화물 (1.5 g, 39.8 mmol, 85%의 순도)의 용액을 100℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (200 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔에서 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 1 : 1)로 정제하여 중간체 I116 (1.2 g, 27%의 수율, LCMS에 의하면 90%의 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.75 - 5.66 (m, 1H), 5.29 - 5.49 (m, 4H), 4.43 - 4.33 (m, 2H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 3.05 - 2.92 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.3 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

0℃의 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 중간체 I116 (570 mg, 1.60 mmol, 90%의 순도)의 혼합물에 벤질 (2-히드록시에틸)카르바메이트 (360 mg, 1.84 mmol), 트리페닐포스핀 (670 mg, 2.55 mmol) 및 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (610 mg, 3.02 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 첨가 후, 상기 혼합물을 0℃~실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 컬럼 C18 (이동상 A: 물 (+ 0.1% 중탄산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, 구배: 05 ~ 65% (%B))로 정제하여 중간체 I117 (437 mg, 55%의 수율, LCMS로부터 100%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.78분, 질량: C C₂₆H₃₄N₄O₆에 대한 이론치: 498.25, m/z 실측치: 499.1 [M+H]⁺.

에탄올 (15 mL) 중 중간체 I117 (230 mg, 0.46 mmol, 100%의 순도)의 혼합물에 활성탄상 10% 팔라듐 (대략 50%의 수분, 23 mg)을 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 수소 분위기 (1 atm) 하에 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I118 (200 mg, 81%의 수율, LCMS로부터 68%의 순도)을 회색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.62분, 질량: C₁₈H₃₀N₄O₄에 대한 이론치: 366.23, m/z 실측치: 367.1 [M+H]⁺.

1,4-디옥산 (8 mL) 중 중간체 I118 (200 mg, 0.37 mmol, 68%의 순도)의 혼합물에 2,3,4,6,7,8-헥사히드로-1H-피리미도[1,2-a]피리미딘 (20 mg, 0.14 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 컬럼 C18 (이동상 A: 물 (+ 0.1% 중탄산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, 구배: 05 ~ 45% (%B))로 정제하여 중간체 I119 (95 mg, 80%의 수율, LCMS로부터 100%의 순도)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.45분, 질량: C₁₆H₂₄N₄O₃에 대한 이론치: 320.18, m/z 실측치: 321.1 [M+H]⁺.

N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 광유 중 60 중량% 수소화나트륨 (24 mg, 0.60 mmol)의 빙냉 혼합물에 10℃ 미만의 중간체 I119 (125 mg, 0.39 mmol, 100%의 순도)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반시킨 후, N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 4-메톡시벤질클로라이드 (73 mg, 0.47 mmol)의 용액을 적가하였다. 상기 혼합물을 10℃에서 120분 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 켄칭하고, 에틸 에테르 (30 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (80 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I120 (198 mg, 100%의 수율, LCMS로부터 87%의 순도)을 회색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.71분, 질량: C₂₄H₃₂N₄O₄에 대한 이론치: 440.24, m/z 실측치: 441.1 [M+H]⁺.

디클로로메탄 (5 mL) 중 중간체 I120 (198 mg, 0.39 mmol, 87%의 순도)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 건조상태까지 농축시켰다. 그 후, 잔사를 디클로로메탄 (50 mL)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액 (50 mL)으로 중화시켰다. 상기 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 중간체 I121 (146 mg, 99%의 수율, LCMS로부터 90%의 순도)을 회색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.36분, 질량: C₁₉H₂₄N₄O₂에 대한 이론치: 340.19, m/z 실측치: 341.1 [M+H]⁺.

디클로로메탄 (15 mL) 중 중간체 I121 (145 mg, 0.38 mmol, 100%의 순도) 및 3,4-디클로로벤조산 (100 mg, 0.52 mmol)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (250 mg, 1.93 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (290 mg, 0.76 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 컬럼 C18 (이동상 A: 물 (+ 0.02% 아세트산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, 구배: 05 ~ 60% (%B))로 정제하여 화합물 C63 (79 mg, 40%의 수율, LCMS로부터 99%의 순도)를 백색 고체로서 제공하였다.

3.2.2.20. 화합물 C61*R 의 합성

에탄올 (60 mL) 중 (4-메톡시페닐)메탄아민 (16.3 g, 98%의 순도, 116 mmol)의 용액에 2-브로모에탄올 (5.00 g, 96%의 순도, 38.4 mmol)을 첨가하였다. 85℃에서 하룻밤 교반시킨 후, 상기 혼합물을 진공에서 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 디클로로메탄 (60 mL)에 용해시키고, 트리에틸아민 (7.80 g, 77.083 mmol), 디-tert-부틸 디카르보네이트 (33.6 g, 154 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액 (100 mL), 염수 (50 mL)로 처리하고, 디클로로메탄 (50 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO₄(s)로 건조시키고,여과시키고, 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1 ~ 2 : 1)로 정제하여 중간체 I122 (6.88 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 57%의 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.36분, 질량: C₁₅H₂₃NO₄에 대한 이론치: 281.16, m/z 실측치: 226.1 [M-56+H]⁺. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl3) 7.16 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.67 (s, 2H), 3.37 (s, 2H), 3.12 (br s, 1H), 1.48 (s, 9H).

에틸 아세테이트 (4 mL) 중 중간체 I92*R (904 mg, 2.49 mmol)의 용액에 3 M HCl/EA (20 mL, 60 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 실온에서 4시간 동안 교반시킨 후, 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 중간체 I123 (715 mg, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 86%의 수율)을 황색 고체로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 10.95 (br s, 3H), 4.77 - 4.70 (m, 1H), 4.42 - 4.28 (m, 4H), 3.31 - 3.26 (m, 1H), 3.11 - 3.04 (m, 1H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LCMS (ESI): R_t = 1.50분, 질량: C₁₀H₁₃ClF₃N₃O₂에 대한 이론치: 299.1, m/z 실측치: 264.2 [M-HCl+H]⁺.

피리딘 (5 mL) 중 중간체 I123 (120 mg, 90%의 순도, 0.360 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (1 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (400 mg, 1.91 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 10%~80%)으로 정제하여 중간체 I124 (340 mg, 55%의 순도, 83%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 2.056분, 질량: C₂₄H₁₆Cl₄F₃N₃O₄에 대한 이론치: 609.21, m/z 실측치: 610.0 [M+H]⁺.

에탄올 (10 mL) 중 중간체 I124 (340 mg, 55%의 순도, 0.307 mmol) 및 탄산칼륨 (120 mg, 0.868 mmol)의 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 = 10%~70%)으로 정제하여 중간체 I125 (120 mg, NMR로부터 90%의 순도, 81%의 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.67분, 질량: C₁₇H₁₄Cl₂F₃N₃O₃에 대한 이론치: 435.04, m/z 실측치: 435.9 [M+H]⁺. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) 7.65 - 7.51 (m, 2H), 7.40 - 7.30 (m, 1H), 5.95 (br s, 0.7H), 5.58 (br s, 0.3H), 4.91 - 4.22 (m, 5H), 3.33 - 3.15 (m, 2H), 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

테트라히드로푸란 (5 mL) 중 중간체 I125 (120 mg, 90%의 순도, 0.248 mmol), 중간체 I122 (150 mg, 90%의 순도, 0.480 mmol) 및 트리페닐포스핀 (130 mg, 0.496 mmol)의 혼합물에 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (100 mg, 0.495 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 10%~80%)으로 정제하여 중간체 I126 (30 mg, 100%의 순도, 17%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 2.047분, 질량: C₃₂H₃₅Cl₂F₃N₄O₆에 대한 이론치: 698.19, m/z 실측치: 699.2 [M+H]⁺.

테트라히드로푸란/물 (0.5 mL/0.2 mL) 중 중간체 I126 (35 mg, 0.05 mmol) 및 수산화리튬 수화물 (11 mg, 0.25 mmol)의 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 농축시켜 조 중간체 I127 (50 mg, 조 물질, LCMS로부터 60%의 순도)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.49분, 질량: C₃₀H₃₁Cl₂F₃N₄O₆에 대한 이론치: 670.16, m/z 실측치: 671.5 [M+H]⁺.

4 M HCl/EtOAc (2 mL) 중 중간체 I127 (50 mg, 0.0744 mmol)의 용액을 25℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 10%~80%)으로 정제하여 중간체 I128 (29 mg, 89%의 수율, LCMS로부터 40%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.42분, 질량: C₂₅H₂₃Cl₂F₃N₄O₄에 대한 이론치: 570.1, m/z 실측치: 571.4 [M+H]⁺.

N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 중간체 I128 (25 mg, 0.044 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (25 mg, 0.066 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (17 mg, 0.132 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 10%~80%)으로 정제하여 화합물 C61*R (9 mg, 38%의 수율, LCMS로부터 99.67%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다.

3.2.2.21. 화합물 C61*S 의 합성

테트라히드로푸란 (15 mL) 중 중간체 I92*S (0.8 g, 2.20 mmol), 중간체 I122 (1.0 g, 90%의 순도, 3.20 mmol) 및 트리페닐포스핀 (1.1 g, 4.19 mmol)의 혼합물에 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.85 g, 4.20 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 10%~80%)으로 정제하여 중간체 I129 (1.0 g, NMR로부터 90%의 순도, 65%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) 7.12 - 7.04 (m, 2H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.42 - 5.31 (m, 0.5H), 5.16 - 5.03 (m, 1.5H), 4.79 - 4.58 (m, 2H), 4.42 - 4.05 (m, 5H), 3.78 (s, 3H), 3.65 - 3.42 (m, 2H), 3.14 - 3.02 (m, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.43 - 1.38 (m, 12H).

메탄올 (30 mL) 중 중간체 I129 (550 mg, 90%의 순도, 0.790 mmol)의 용액에 물 20 mL 중 수산화리튬 일수화물 (300 mg, 7.15 mmol)을 첨가하였다. 그 후 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 수성 층을 물 (100 mL)로 희석시키고, 1 M 염산 용액으로 pH를 대략 5로 산성화하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ (s)로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 중간체 I130 (450 mg, NMR로부터 95%의 순도, 90%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl3) 7.15 - 7.02 (m, 2H), 6.85 - 6.78 (m, 2H), 5.39 (br s, 0.5H), 5.19 - 5.05 (m, 1.5H), 4.78 - 4.61 (m, 2H), 4.31 - 4.12 (m, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.68 - 3.46 (m, 2H), 3.18 - 3.03 (m, 2H), 1.54 - 1.50 (m, 9H), 1.41 (s, 9H).

HCl/ 에틸 아세테이트 (30 mL) 중 중간체 I130 (450 mg, 95%의 순도, 0.714 mmol)의 용액을 25℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 중간체 I131 (240 mg, 100%의 순도, 72%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.142분, 질량: C18H21F3N4O3에 대한 이론치: 398.16, m/z 실측치: 399.2 [M+H]⁺.

N,N-디메틸포름아미드 (15 mL) 중 중간체 I131 (140 mg, 100%의 순도, 0.301 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (160 mg, 0.421 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (200 mg, 1.55 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 교반시켰다. 반응물을 얼음물 (50 mL)로 처리하고, 에틸 아세테이트 (50 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL)로 2회 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄ (s)로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 5%~40%)으로 정제하여 중간체 I132 (100 mg, 97%의 순도, 85%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, MeOD) 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.23 - 4.28 (m, 3H), 3.98 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.69 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 2.97 - 2.92 (m, 1H), 2.77 - 2.70 (m, 1H).

피리딘 (5 mL) 중 중간체 I132 (100 mg, 97%, 순도, 0.255 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (1 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (100 mg, 0.477 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔사를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 (0.1% 중탄산암모늄 함유) = 10%~70%)으로 정제하여 화합물 C61*S (60 mg, 99.5%의 순도, 42%의 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.

3.2.2.22. 화합물 C55*R 및 C55*S 의 합성

4 M HCl/EtOAc (50 mL) 중 중간체 I99 (6 g, 17.4mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 진공에서 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 포화 수성 탄산수소나트륨 (50 mL)으로 중화시키고, EtOAc (50 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 중간체 I133 (4.5 g, ¹H NMR로부터 90%의 순도, 95%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.01 - 5.69 (m, 1H), 4.33 - 4.20 (m, 3H), 3.96 - 3.75 (m, 1H), 3.23 - 3.13 (m, 1H), 2.88 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.62 (m, 1H), 2.47 - 2.32 (m, 3H), 2.07 - 2.04 (m, 1H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

N,N-디메틸포름아미드 (25 mL) 중 3,4-디클로로벤조산 (3.5 g, 18 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (6.8 g, 18 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (4.6 g, 3.6 mmol)의 용액에 중간체 I133 (3.1 g, 95%의 순도, 12 mmol)을 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석시키고, 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10 : 1 ~ 4 : 1)로 정제하여 중간체 I134 (3 g, 90%의 순도, 56%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.55 - 7.56 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 6.03 - 5.41 (m, 2H), 4.82 - 4.07 (m, 4H), 3.15 (br s, 2H), 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

아세토니트릴 (50 mL) 중 중간체 I134 (3 g, 90%의 순도, 6.48 mmol) 및 tert-부틸 (2-브로모에틸)카르바메이트 (2.88 g, 18 mmol)의 용액에 탄산세슘 (6.3 g, 19.4 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 건조상태까지 농축시키고, 잔사를 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석시키고, 물 (50 mL) (2회) 및 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 2 : 1 ~ 1 : 1)로 정제하여 중간체 I135 (1.9 g, 90%의 순도, 43%의 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. ¹ H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.55 - 7.45 (m, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.09 - 3.03 (m, 2H), 1.40 (s, 12H).

4 M HCl/EtOAc (30 mL) 중 중간체 I135 (2.3 g, 3.7 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 포화 수성 탄산수소나트륨 (30 mL)으로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 중간체 I136 (1.5 g, 90%의 순도, 91%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 - 7.73 (m, 2H), 7.47 - 7.46 (m, 1H), 6.41 - 6.01 (m, 1H), 5.43 - 5.32 (m, 1H), 4.83 - 4.11 (m, 8H), 3.01 (s, 3H), 1.36 - 1.06 (m, 3H).

1,4-디옥산 (15 mL) 중 중간체 I136 (600 mg, 90%의 순도, 1.2 mmol)의 용액에 2,3,4,6,7,8-헥사히드로-1H-피리미도[1,2-a]피리미딘 (51 mg, 0.36 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (25 mL)에 용해시키고, 혼합물을 물 (15 mL) (2회) 및 염수 (15 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 중간체 I137 (500 mg, 90%의 순도, 93%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.25 - 8.19 (m, 1H), 7.75 (s, 2H), 7.47 - 7.46 (m, 1H), 6.28 - 5.99 (m, 1H), 5.40 - 5.26 (m, 1H), 4.60 - 4.02 (m, 4H), 3.60 - 3.57 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 4H).

N,N-디메틸포름아미드 (8 mL) 중 중간체 I137 (400 mg, 90%의 순도, 0.88 mmol)의 용액에 1-(클로로메틸)-4-메톡시벤젠 (320 mg, 1 mmol) 및 수소화나트륨 (80 mg, 60 중량%, 1.76 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 수성 NH₄Cl (25 mL)로 켄칭하고, EtOAc (25 mL)로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 물 (15 mL) (2회) 및 염수 (15 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 화합물 C55 (300 mg, 90%의 순도, 60%의 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ¹ H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.56 - 7.53 (m, 2H), 7.32 - 7.30 (m, 1H), 7.26 - 7.21 (m, 2H), 6.91 - 6.83 (m, 2H), 6.03 - 5.48 (m, 2H), 4.70 - 4.62 (m, 2H), 4.26 (s, 2H), 3.86 - 3.78 (m, 3H), 3.62 (s, 2H), 3.11 - 3.89 (m, 2H), 1.58 (s, 2H), 0.88 - 0.83 (m, 1H).

화합물 C55의 라세미 혼합물 (300 mg, 90%의 순도, 0.56 mmol)을 키랄 분취용 HPLC (분리 조건: 컬럼: Chiralpak IB 4.6 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex : EtOH : DEA = 95 : 5 : 0.2 (15 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm)로 분리하여 화합물 C55*R (56.3 mg, 99%의 순도, 38%의 수율, 99.9% ee) 및 C55*S (59 mg, 99%의 순도, 38%의 수율, 99.9% ee)를 황색 고체로서 제공하였다.

화합물 C55*R : Chiral HPLC (Chiralpak IB 5 um 4.6 * 250 mm; 이동상: IE-Hex-EtOH-40-60.lcm (1 mL/분;) 온도: 30℃; 파장: 254 nm R_T = 11.173분).

화합물 C55*S : Chiral HPLC (Chiralpak IB 5 um 4.6 * 250 mm; 이동상: IE-Hex-EtOH-40-60.lcm (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 254 nm R_T = 12.795분).

3.2.2.23. 화합물 C79 의 합성:

테트라히드로푸란/물 (10 mL/3 mL) 중 중간체 5-(tert-부틸) 3-에틸 2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (1 g, 3.39 mmol) 및 수산화리튬 수화물 (427 mg, 0.48 mmol)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, 1 N 염산으로 pH = 6으로 산성화하였다. 그 후 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 중간체 I138 (200 mg, 22%의 수율, LCMS로부터 100%의 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 0.94분, 질량: C₁₂H₁₇N₃O₄에 대한 이론치: 267.1, m/z 실측치: 266.2 [M-H]^-.

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.48 (s, 2H), 3.60 - 3.57 (m, 2H), 2.67 - 2.64 (m, 2H), 1.41 (s, 9H).

테트라히드로푸란 (20 mL) 중 피리딘-2-일메탄아민 (1.12 g, 10.4 mmol), N-디이소프로필-에틸아민 (4.0 g, 31.08 mmol)의 혼합물에 에틸 2-(브로모메틸)아크릴레이트 (2.00 g, 10.4 mmol)를 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 : 메탄올 = 50 : 1)로 정제하여 중간체 I139 (1.0 g, 43%의 수율, LCMS로부터 80%의 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.24분, 질량: C₁₂H₁₆N₂O₂에 대한 이론치: 220.1, m/z 실측치: 221.1 [M+H]⁺.

N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 중간체 I138 (1.21 g, 4.54 mmol), 중간체 I139 (1.00 g, 4.54 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (2.59 g, 6.81 mmol) 및 N-디이소프로필-에틸아민 (1.76 g, 13.6 mmol)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 : 메탄올 = 50 :1)로 정제하여 중간체 I140 (300 mg, 14%의 수율, LCMS로부터 80%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.50분, 질량: C₂₄H₃₁N₅O₅에 대한 이론치: 469.2, m/z 실측치: 470.5 [M+H]⁺.

아세토니트릴 (10 mL) 중 중간체 I140 (300 mg, 0.64 mmol) 및 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]-7-운데센 (48 mg, 0.32 mmol)의 혼합물을 질소 하에 50℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 : 메탄올 = 50 : 1)로 정제하여 중간체 I141 (120 mg, 40%의 수율, LCMS로부터 80%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.51분, 질량: C₂₄H₃₁N₅O₅에 대한 이론치: 469.2, m/z 실측치: 470.5 [M+H]⁺.

테트라히드로푸란/물 (2 : 1, 3 mL) 중 I141 (120 mg, 0.26 mmol) 및 수산화리튬 수화물 (32 mg, 0.767 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 1 N 염산으로 pH = 6으로 산성화하였다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 조 중간체 I142 (200 mg, 조 물질)를 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 조 중간체 I142 (200 mg 조 물질, 0.45 mmol) , 메탄아민 히드로클로라이드 (93 mg, 1.36 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (258 mg, 0.68 mmol) 및 N-디이소프로필-에틸아민 (293 mg, 2.27 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 : 메탄올 = 30 :1)로 정제하여 중간체 I143 (25 mg, 13%의 수율, LCMS로부터 90%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.37분, 질량: C₂₃H₃₀N₆O₄에 대한 이론치: 454.2, m/z 실측치: 455.4 [M+H]⁺.

염화수소/에테르 (1 mL) 중 중간체 I143 (25 mg, 0.055 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 중간체 I144 (25 mg, 100%의 수율, LCMS로부터 90%의 순도)를 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 0.64분, 질량: C₁₈H₂₂N₆O₂에 대한 이론치: 354.2, m/z 실측치: 355.4 [M+H]⁺.

N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 중간체 I144 (25 mg, 0.07 mmol), 3,4-디클로로벤조산 (14 mg, 0.07 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (53 mg, 0.14 mmol), N-디이소프로필-에틸아민 (45 mg, 0.35 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 처리하고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 예비 HPLC (ACN/H2O = 50%)로 정제하여 화합물 C79 (10 mg, 27%의 수율, LCMS에 의하면 99.7%의 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.

3.2.2.24 화합물 C85*R 및 C85*S 의 합성

튜브를 건조 톨루엔 (2 mL) 중 tert-부틸 (1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)(2-히드록시에틸)카르바메이트 (500 mg, 1.62 mmol), I101 (642 mg, 1.94 mmol)로 충전시켰다. 상기 혼합물을 질소로 2분 동안 퍼지하였다. 시아노메틸렌트리부틸포스포란 (2.1 mL, 1 M, 2.10 mmol)을 첨가하고, 바이알의 뚜껑을 닫았다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/5로부터 50/50까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 5-(tert-부틸) 3-에틸 (6R)-2-(2-((tert-부톡시카르보닐)(1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)아미노)에틸)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 I145 (899 mg, 수율: 89%)를 옅은 갈색 오일로서 수득하였다.

튜브를 건조 1,4-디옥산 (11.3 mL) 중 5-(tert-부틸) 3-에틸 (6R)-2-(2-((tert-부톡시카르보닐)(1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)아미노)에틸)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 I145 (899 mg, 1.44 mmol)로 충전시켰다. HCl (3.6 mL, 디옥산 중 4 M, 14.44 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔사를 DIPE에 미분화하고, 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켜 에틸 (6R)-2-(2-((1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)아미노)에틸)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I146 (715 mg, 정량적 수율)를 수득하였다.

튜브를 톨루엔 (18 mL) 중 에틸 (6R)-2-(2-((1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)아미노)에틸)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I146 (715 mg, 1.44 mmol)으로 충전시켰다. 1,5,7-트리아자바이시클로[4.4.0]에스-5-엔 (TBD) (602 mg, 4.33 mmol)를 첨가하고, 바이알의 뚜껑을 닫았다. 상기 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다 (완전한 전환). 상기 혼합물을 냉각시키고, 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를, 0/100으로부터 100/0까지의 (헵탄/ [EtOAc-EtOH(3:1)+2%NH₄OH])의 구배를 사용하여 biotage 시스템에서 25 g SNAP 카트리지에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (3R)-9-(1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온 I147 (430 mg, 수율: 79%)을 오일로서 수득하였다.

건조 DMF (5.4 mL) 중 (3R)-9-(1-(4-(디플루오로메톡시)페닐)에틸)-3-메틸-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온 I147 (338 mg, 0.81 mmol) 및 4-클로로-3-시아노벤조산 (185 mg, 0.97 mmol)의 용액에 HATU (460 mg, 1.21 mmol) 및 DIPEA (0.56 mL, 3.23 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)에 부었으며, 분홍색 침전물이 형성되었다. 고체를 여과 제거하고, 생성물을 분취용 Prep HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 50x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 정제하여 황색 폼을 수득하였다. 수득된 생성물 C85를 SFC를 통하여 추가로 정제하여 거울상이성질체들을 분리하였다: 분취용 SFC (고정상: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4 iPrNH₂)를 통해 정제를 수행하여 C85*R (87 mg, 수율: 20%) 및 C85*S (79 mg, 수율: 18%)를 수득하였다 (이들 둘 다 누르스름한 고체로서).

3.2.2.25. C119*R 및 C119*S 의 합성

튜브를 건조 톨루엔 (14 mL) 중 에틸 (R)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I111 (836 mg, 2.24 mmol), tert-부틸 부트-3-인-2-일(2-히드록시에틸)카르바메이트 I109 (573 mg, 2.69 mmol)로 충전시켰다. 상기 혼합물을 질소로 2분 동안 퍼지하였다. 시아노메틸렌트리부틸포스포란 (0.77 mL, 2.92 mmol)을 첨가하고, 바이알의 뚜껑을 닫았다. 상기 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 50/50까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 에틸 (6R)-2-(2-(부트-3-인-2-일(tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I148 (979 mg, 수율: 64%)을 적색 오일로서 수득하였다.

I148 (979 mg, 1.72 mmol)를 DCM (21 mL)에 용해시키고, 빙조에서 냉각시켰다. DCM에 희석시킨 p-톨루엔술포닐 아지드 (1.39 mL, 2.07 mmol), 이어서 구리(i) 티오펜-2-카르복실레이트 (32.9 mg, 0.17 mmol)를 첨가하고, 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 부분적으로 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 0/100까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 에틸 (6R)-2-(2-((tert-부톡시카르보닐)(1-(1-토실-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)아미노)에틸)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I149 (1.32 g, 수율: 정량적)를 백색 폼으로서 수득하였다.

튜브를 건조 아세토니트릴 (ACN) (15 mL) 중 에틸 (6R)-2-(2-((tert-부톡시카르보닐)(1-(1-토실-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)아미노)에틸)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I149 (1.32 g, 1.72 mmol)로 충전시켰다. 피페라진 (620 mg, 7.21 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 0/100까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 에틸 (6R)-2-(2-((1-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I150 (544 mg, 수율: 52%)을 백색 폼으로서 수득하였다.

튜브를 건조 DCM (4 mL) 중 에틸 (6R)-2-(2-((1-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)(tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I150 (544 mg, 0.89 mmol)으로 충전시켰다. TFA (0.82 mL, 10.7 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 물과 Me-THF 사이에 분배시키고, Na₂CO₃으로 중화시켰다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성물인 에틸 (6R)-2-(2-((1-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)아미노)에틸)-5-(4-클로로-3-시아노벤조일)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 I151을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

튜브를 건조 톨루엔 (5 mL) 중 I151 (455 mg, 0.62 mmol)로 충전시켰다. 1,5,7-트리아자바이시클로[4.4.0]데스-5-엔 (600 mg, 4.31 mmol)을 첨가하고, 바이알의 뚜껑을 닫았다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 냉각시키고, 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성물을 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 0/100까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하였다. 생성된 생성물을 DIPE에 미분화하고, 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켜 5-((3R)-9-(1-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)에틸)-3-메틸-10-옥소-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-2-카르보닐)-2-클로로벤조니트릴 C119 (198 mg, 수율: 69%)을 수득하였다. 라세미 혼합물을 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Diacel AD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, iPrOH + 0.4 iPrNH₂)로 정제하였다. 수득된 두 분획을 DIPE에 미분화하고, 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켜 C119*R (50 mg, 수율: 17%) 및 C119*S (50 mg, 수율: 17%)를 수득하였다.

3.2.2.26. 화합물 C75 및 유사체의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 광유 중 60 중량% 수소화나트륨 (1.2 g, 20 mmol)의 용액에 tert-부틸 10-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-2(1H)-카르복실레이트 (3 g, 10 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반시킨 후, 상기 혼합물에 2-(브로모메틸) 피리딘 (2.64 g, 15 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 (30 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 = 50 ~ 70%)으로 정제하여 중간체 I152 (3 g, 1H NMR로부터 90%의 순도, 77%의 수율)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS (ESI): R_t = 1.46분, 질량: C₂₀H₂₅N₅O₃에 대한 이론치: 383.20, m/z 실측치: 384.5 [M+H]⁺. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.55 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.70 - 7.66 (m, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 - 7.20 (t, 1H), 4.84 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.33 - 4.30 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.88 - 3.86 (m, 2H), 3.71 (s, 2H), 2.77 (s, 2H), 1.48 (s, 9H).

4 M HCl/EtOAc (20 mL) 중 중간체 I152 (1.00 g, 2.6 mmol)의 용액을 실온에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 중간체 I53 히드로클로라이드 염 (900 mg, ¹H NMR로부터 80%의 순도, 조 물질)을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): R_t = 0.34분, 질량: C₁₅H₁₇N₅O에 대한 이론치: 283.14, m/z 실측치: 284.3 [M+H]⁺. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.73 (s, 2H), 8.80 - 8.79 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.95 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.49 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.22 (s, 2H), 4.01 - 3.98(m, 2H), 3.38 (s, 2H), 2.95 - 2.93 (m, 2H).

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 중간체 I153 (100 mg, 0.28 mmol), 중간체 I76 (62 mg, 0.28 mmol), 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (175 mg, 0.42 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (115 mg, 0.84 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 = 35%~65%)으로 정제하여 화합물 C75 (80 mg, 99.8%의 순도, 60%의 수율)를 백색 고체로서 제공하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다:

3.2.2.27. 화합물 C77 의 합성

N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 중간체 I106 (100 mg, 95%의 순도, 0.34 mmol) 및 4-클로로-3-(디플루오로메틸)벤조산 (76 mg, 0.37 mmol)의 용액에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (192 mg, 0.51 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (130 mg, 1.01 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 질소 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후, 상기 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴 : 물 = 35%~65%)으로 정제하여 화합물 C77 (17 mg, 10%의 수율, 99.1%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다.

3.2.2.28. 화합물 C94 및 96 , 97 , 100 ~ 102 , 104 , 107 ~ 117 , 124 및 125 의 합성

튜브를 건조 DCM (6 mL) 중 I106 (300 mg, 1.00 mmol), 4,5-디클로로-1h-인돌-2-카르복실산 (279 mg, 1.21 mmol) 및 (0.56 mL, 4.04 mmol)로 충전시키고, 바이알을 N₂ 분위기에서 밀봉하였다. 디에틸 시아노포스포네이트 (0.22 mL, 1.31 mmol)를 적가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 직접적으로 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 90/10까지의 DCM/MeOH)로 정제하였다. 수득된 잔사를 MeOH/ACN에서 재결정화하였다. 회색 결정을 여과에 의해 수집하여 (R)-2-(4,5-디클로로-1H-인돌-2-카르보닐)-3-메틸-9-(피리딘-2-일메틸)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-10(7H)-온 C94 (302 mg, 수율: 59%)를 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 수득하였다:

* 1-프로판포스폰산 무수물 (1.5 당량)을 (DECP 대신) 사용하고, Et₃N (4 당량)을 DIPEA로 대체하고, DCM을 DMF로 치환하였다.

3.2.2.29. 화합물 C126 및 123 , 127 ~ 131 의 합성

2-MeTHF (5 mL) 중 I14 (50 mg, 0.132 mmol)의 용액을 3-(1-브로모에틸)벤조니트릴 [1096159-01-1] (33 mg, 0.158 mmol)을 포함하는 Radley 튜브에 첨가하였다. 그 후, 증류수 (10 μL) 중 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 [56-37-1] (3 mg, 0.013 mmol)의 용액 및 NaOH 용액 (H₂O 중 50%) [1310-73-2] (348 μL, 1.515 g/mL, 6.59 mmol)을 첨가하였다. 2상 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 격렬하게 교반시키고, 그 후 실온에서 하룻밤 교반시켰다. H₂O (500 μL)를 첨가하고, 2상 혼합물을 HM-N 건조 카트리지에서 여과시키고, 2-MeTHF (2 x 6 mL)로 헹구었다. 여과액을 농축시키고, 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm,30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)로 정제하여 C126을 고체로서 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 수득하였다:

3.2.2.30. 화합물 C122 및 91 , 95 , 106 및 120 의 합성

NaH [7646-69-7] (14 mg, 0.360 mmol, 60%)를 0℃의 DMF (2 mL) 중 I14 (100 mg, 0.24 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온까지 가온하고, 30분 동안 교반시킨 후 2-(클로로메틸)-6-플루오로피리딘 [315180-16-6] (0.054 mL, 0.48 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시키고, 그 후 EtOAc 및 물로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, 포화 NaHCO₃ 수용액, 염수 (2 x 15 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (100으로부터 95:5까지의 DCM/MeOH)로 정제하였다. 생성물을 EtOH와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 건조시켰다. 그 후, 이것을 Et₂O (6 mL)에 미분화하고, EtOH (10 mL)로 세척하여 화합물 C122 (86 mg, 48%의 수율)를 베이지색 분말로서 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 수득하였다:

3.2.2.30. 화합물 C121 의 합성

톨루엔 (1.2 mL) 중 I14 (150 mg, 0.36 mmol)의 용액에, 2-브로모-5-플루오로피리딘 [41404-58-4] (53 mg, 0.24 mmol), CuI [7681-65-4 ] (14 mg, 0.072 mmol), N,N’-디메틸에틸렌디아민 [110-70-3] (0.023 mL, 0.216 mmol, 0.819 g/mL) 및 K₂CO₃ [584-08-7] (99 mg, 0.52 mmol)을 아르곤 질소 하에 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 20시간 동안 가열하였다. H₂O (20 mL) 및 EtOAc (20 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 수성 층을 분리하고, EtOAc (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100:0으로부터 95:5까지의 DCM/MeOH)로 정제하였다. 수득된 고체를 EtOH와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 건조시키고, EtOAc/EtOH로 재결정화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하여 C121 (130 mg, 72%의 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.

3.2.2.31 화합물 C118 및 86 ~ 88 , 90 , 92 , 93 , 98 , 99 , 및 103 의 합성.

중간체 I154 및 유사체

DIPEA [7087-68-5] (0.1 mL, 0.589 mmol, 0.75 g/mL)를 DMEU (3 mL) 중 중간체 I9 (300 mg, 0.491 mmol) 및 1-(3-트리플루오로메틸페닐)에틸아민 [59382-36-4] (139 mg, 0.736 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 마이크로웨이브 하에 125℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 임의의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 수득하였다:

마이크로웨이브 바이알에서 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 [80-73-9] (3 mL) 중 I154 (293 mg, 0.49 mmol)의 용액에 1,5,7-트리아자바이시클로[4.4.0]데스-5-엔 [5807-14-7] (150 mg, 1.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브에서 130℃에서 1시간 동안 가열하였다. 그 후, 이것을 CH₃CN으로 희석시키고, RP-HPLC (고정상: RP Xbridge Prep C18 OBD-10 μm, 50x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)로 정제하였다. 고체를 MeOH (2 mL)로 재결정화하였다. 생성물을 여과시키고, H₂O로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 화합물 C118 (85 mg, 31%의 수율)을 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 수득하였다:

3.2.2.32 화합물 C84 및 89 및 105 의 합성.

중간체 I164 의 합성

N₂ 분위기 하에 바이알에서, I14 (250 mg, 0.659 mmol), 1-(1-요오도에테닐)-4-(트리플루오로메틸)벤젠 [359887-55-1] (393 mg, 1.318 mmol), CuI [7681-65-4] (75 mg, 0.396 mmol), Cs₂CO₃ [534-17-8] (430 mg, 1.318 mmol)을 톨루엔 [108-88-3] (3 mL)에 용해시켰다. 그 후, N,N′-디메틸에틸렌디아민 [110-70-3] (85 μL, 0.791 mmol, 0.819 g/mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 주말에 걸쳐 교반시켰다. 반응 혼합물을 NH₄Cl 포화 수용액으로 켄칭하고, EtOAc (3회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (50/50으로부터 20/80까지의 헵탄/EtOAc)로 정제하여 I164 (186 mg, 51%의 수율, 0.339 mmol)를 백색 고체로서 제공하였다.

하기 표에 열거된 중간체를 유사한 방식으로 수득하였다:

N₂ 분위기 하에 CH₂Cl₂ (1.5 mL) 중 I166 (68 mg, 0.146 mmol) (68 mg, 0.146 mmol)의 격렬한 용액에, Et₃SiH [617-86-7] (116 μL, 0.728 mmol, 0.728 g/mL)를 첨가하였다. TFA [1493-13-6] (32 μL, 0.364 mmol, 1.696 g/mL,)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 조 혼합물을 NaOH 수용액 (1 M)에 붓고, DCM (4회)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100% EtOAc)로 정제하여 C84 (34 mg, 28%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

하기 표에 열거된 화합물을 유사한 방식으로 수득하였다:

3.2.2.33 부분입체이성질체의 분리

하기 표에 열거된 부분입체이성질체를 상응하는 혼합물의 SFC 분리에 의해 수득하였다.

3.2.2.34 화합물 C132 및 133 - 250 의 합성.

일반 절차 X1

I14 (1 mmol) 및 시약 2　(1.2 mmol)를 바이알에 넣었다. DMF (1 mL)와, THF 중 ^tBuONa의 용액 (3 mmol, 3.0 당량) [865-48-5]을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 주위 온도까지 냉각시킨 후, 혼합물을 과량의 아세트산으로 켄칭하고, 증발시켰다. 잔사를 DMSO에 용해시키고, 여과시키고, 용액을 HPLC로 정제하였다*.

일반 절차 X2

I14 (1 mmol) 및 시약 2　(1.3 mmol)를 바이알에 넣었다. 그 후 건조 DMF (1 mL)와, THF 중 LiHMDS의 용액 (2 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 주위 온도까지 냉각시킨 후, 혼합물을 과량의 아세트산으로 켄칭하고, 증발시켰다. 잔사를 DMSO에 용해시키고, 여과시키고, 용액을 HPLC로 정제하였다*.

*정제는 DAD 및 질량-검출기가 장착된 Agilent 1260 Infinity 시스템을 사용하여 수행하였다. Waters Sunfire C18 OBD Prep Column, 100 A, 5 μm, 19 mm x 100 mm + SunFire C18 Prep Guard Cartridge, 100 A, 10 μm, 19 mm x 10 mm를 사용하였다. 탈이온수 (상 A) 및 HPLC 등급 메탄올 (상 B)을 용출제로 사용하였다. 일부 경우에, 암모니아 또는 TFA를 첨가제로 사용하여 생성물들의 분리를 개선하였다. 이러한 경우, 생성물의 유리 염기 및 TFA 염이 각각 형성되었다.

하기 표에 열거된 화합물을 방법 X1 또는 방법 X2를 사용하여 합성하였다.

3.2.3. 화합물 C49~C250 에 대한 LCMS 데이터

3.2.4. SFC 데이터

3.2.5. ¹ H NMR 데이터

화학식 Ia의 화합물을 하기 방법에 의해 제조하였다:

반응식 1

반응식 1에 따라, R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 Va의 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 화합물을 아미드 결합 커플링 조건 하에 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 에틸 2-(메틸아미노메틸) 프로프-2-에노에이트와 커플링시켜 화학식 VIa의 화합물을 제공한다. 예를 들어, 화학식 Va의 산 화합물을 용매, 예컨대 톨루엔, 아세토니트릴(ACN), 에틸 아세테이트(EtOAc), 디메틸포름아미드(DMF), 테트라히드로푸란(THF), 디클로로메탄(DCM), 또는 이들의 혼합물에서, 탈수제, 예컨대 히드록시벤조트리아졸(HOBt)/1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드(EDAC), 1,1'-카르보닐디이미다졸(CDI), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU), 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸(HOAT), 프로필포스폰산 무수물(T₃P), 적절하게 선택된 염기, 예컨대 N,N-디이소프로필-에틸아민(DIPEA), 트리에틸아민(TEA) 등의 존재 하에, 에틸 2-(메틸아미노메틸) 프로프-2-에노에이트와 반응시켜, 화학식 VIa의 화합물을 수득한다.

R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 VIa의 화합물을 약 40~60℃의 온도에서 1~3시간의 기간 동안 용매, 예컨대 ACN에서 염기, 예컨대 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데스-7-엔(DBU)을 사용하여 환화시킨다. 극성 용매, 예컨대 물, 메탄올(MeOH) 또는 이들의 혼합물에서; 염기, 예컨대 수산화나트륨, 수산화칼륨 등을 사용한 후속적인 비누화에 의해 R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 VIIa의 화합물을 제공한다.

반응식 2

반응식 2에 따라, R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 IXa의 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 화합물을 25℃ 내지 75℃의 범위의 온도에서 10~24시간의 기간 동안, 염기, 예컨대 K₂CO₃ 등의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 DMF 등에서, 3-클로로-2-(클로로메틸)프로프-1-엔으로 알킬화하여 화학식 IXa의 화합물을 제공한다. R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 IXa의 화합물을 용매, 에컨대 에탄올(EtOH)에서, 약 80℃의 온도에서 16시간의 기간 동안 메탄아민과 반응시켜 R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 Xa의 화합물을 제공한다.

반응식 3

반응식 3에 따라, R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 Xa의 화합물을 0℃ 내지 15℃의 범위의 온도에서 10~20시간의 기간 동안, 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서, 당업자에게 공지된 산화 조건, 예를 들어 OsO₄ 및 NaIO₄를 사용하여 산화시켜 화학식 XIa의 화합물을 제공한다. 화학식 XIa의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서 페닐마그네슘 브로마이드와 같은 그리냐르(Grignard) 시약과 반응시켜 R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬이고, R^1a가 OH이고, R^4a가 페닐인 화학식 XIIa의 화합물을 제공한다.

R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬이고, R^1a가 OH이고, R^4a가 페닐인 화학식 XIIa의 화합물을 -78℃ 내지 50℃의 범위의 온도에서 2~16시간의 기간 동안, 적합한 용매, 예컨대 DCM 등에서 플루오르화제, 예컨대 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드(DAST), (디에틸-아미노)디플루오로술포늄 테트라플루오로보레이트(XtalFluor®), 비스(2-메톡시에틸)아미노설퍼 트리플루오라이드(Deoxo-Fluor®) 등으로 플루오르화하여 R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬이고, R^1a가 F이고, R^4a가 페닐인 화학식 XIIa의 화합물을 제공한다.

반응식 4

반응식 4에 따라, 화학식 VIIa의 화합물을 당업자에게 공지된 아미드 결합 형성 조건을 사용하여 또는 이전에 기술된 바와 같이 그의 상응하는 아미드로 전환시킨다. 예를 들어, 적합한 용매에서; 염기, 예컨대 DIPEA 등의 존재 하에; 화학식 VIIa의 화합물을 염화암모늄; PyBOP; 활성화제, 예컨대 HOBt와 반응시켜 화학식 XIIIa의 화합물을 제공한다. 유사한 방식으로, 화학식 VIIa의 화합물을 비양성자성 유기 용매, 예컨대 THF 등에서; T₃P의 존재 하에; 및 3차 아미노 염기, 예컨대 트리에틸아민 등의 존재 하에; N-메톡시메탄아민과 반응시켜 R^2a가 H 또는 C_{1- 6}알킬인 화학식 XVIa의 화합물을 수득한다.

화학식 XIIIa의 화합물을 디메틸포름아미드(DMF)-디메틸아세트아미드(DMA)로 처리하여 화학식 XVa의 디메틸아미노메틸렌카르바모일 치환 화합물을 수득한다. 극성 비양성자성 용매, 예컨대 디클로로메탄에서 유기 염기, 예컨대 트리에틸아민(TEA)의 존재 하에 트리플루오로아세트산 무수물(TFAA)로 화학식 XIIIa의 화합물을 처리하여 화학식 XVIa의 니트릴을 수득한다.

화학식 XVIa의 화합물을 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF에서 유기금속 할라이드, 예컨대 메틸마그네슘 브로마이드의 작용에 의해 화학식 XVIIa의 케톤으로 전환시킨다. 약 70℃의 온도에서 화학식 XVIIa의 화합물을 DMF-DMA로 후속 처리하여 화학식 XVIIIa의 화합물을 수득한다.

반응식 5

알코올 용매에서 화학식 XVa의 화합물과 히드라진 수화물의 반응을 통하여 화학식 XIXa의 트리아졸릴 치환 화합물을 제조한다.

대안적으로, 화학식 XVa의 화합물을 아세트산의 존재 하에 염기, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에 히드록실아민 히드로클로라이드와 반응시켜 화학식 XXa의 옥사디아졸릴 치환 화합물을 수득한다.

반응식 6

화학식 XVIa의 화합물을 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMF에서 ACN의 존재 하에 소듐 아지드와 반응하여 R^4a가 테트라졸릴인 화학식 XXIa의 화합물을 수득한다.

반응식 7

화학식 XVIIIa의 화합물을 히드라진 수화물의 존재 하에 환화하여 화학식 XXIIa의 화합물을 수득한다. 화학식 XXIIa의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 THF, DMF 등에서 알킬화제, 예컨대 C_{1- 6}알킬할라이드 등, 염기, 예컨대 NaH 등을 이용하여 알킬화하여 화학식 (XXIIb 및 XXIIc)의 화합물을 제공한다.

대안적으로, 아세트산의 존재 하에 염기, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에 히드록실아민 히드로클로라이드를 이용하여 화학식 XVIIIa의 화합물에서 화학식 XXIIIa의 화합물을 제공한다.

반응식 8

반응식 8에 따라, 화학식 XXIVa의 입체이성질체(이는 화학식 XIIa, XIXa, XXa, XXIa, XXIIa, XXIIb, XXIIc 및 XXIIIa의 화합물을 포함함)로의 분리를 초임계 유체 크로마토그래피를 통하여 달성한다. 　

화학식 XXIVa의 화합물(이는 화학식 XIIa, XIXa, XXa, XXIa, XXIIa, XXIIb, XXIIc 및 XXIIIa의 화합물을 포함함, 여기서, R^1a, R^2a, 및 R^4a는 상기 정의된 바와 같음) 상의 BOC 보호기의 절단을 당업자에게 공지된 절차에 따라 그리고 확립된 방법, 예컨대 문헌[T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3 ed., John Wiley & Sons, 1999]에 기술된 것을 이용하여 달성한다. 예를 들어, TFA/CH₂Cl₂, HCl/디옥산 등과 같은 산성 조건 하에 화학식 XXVa의 화합물을 제공한다.

적합한 용매, 예컨대 DCM 등에서; R^1a, R^2a, 및 R^4a가 상기 정의된 바와 같은, 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 화학식 XXVIa의 화합물; 적합한 염기, 예컨대 TEA 등과의 후속 반응에 의해 화학식 Ia의 화합물을 제공한다.

화학식 Ia의 화합물은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 그의 상응하는 염으로 전환될 수 있다. 예를 들어, 화학식 Ia의 아민을 용매, 예컨대 Et₂O, CH₂Cl₂, THF, MeOH, 클로로포름, 또는 이소프로판올에서 트리플루오로아세트산, HCl, 또는 시트르산으로 처리하여 상응하는 염 형태를 제공한다. 대안적으로, 역상 HPLC 정제 조건의 결과로 트리플루오로아세트산 또는 포름산 염이 수득된다. 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염의 결정질 형태는 극성 용매(극성 용매들의 혼합물 및 극성 용매들의 수성 혼합물을 포함함) 또는 비극성 용매(비극성 용매들의 혼합물)로부터의 재결정화에 의해 결정질 형태로 수득될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물이 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 이들은 이에 따라 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 이들은 추가적으로 부분입체이성질체로서 존재할 수 있다. 이러한 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.

"입체이성질체 혼합물"(둘 이상의 입체이성질체의 혼합물을 의미하고 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 이들의 조합을 포함함)로 표시된 상기 반응식에 나타낸 화학식의 화합물을 SFC 분해에 의해 분리한다.

일반 절차

하기 특정 실시예는 본 발명 및 다양한 바람직한 실시 형태를 추가로 예시하기 위하여 제공된다. 하기 실시예에 기술된 화합물 및 상응하는 분석 데이터를 수득함에 있어서, 달리 지시되지 않는 한 하기 실험 및 분석 프로토콜을 따랐다.

달리 언급되지 않는 한, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온 (rt)에서 자기 교반하였다. 용액을 "건조"시킨 경우, 용액을 일반적으로 Na₂SO₄ 또는 MgSO₄와 같은 건조제로 건조시켰다. 혼합물, 용액 및 추출물을 "농축"시킨 경우, 이들을 전형적으로 감압 하에 회전 증발기에서 농축시켰다.

순상 실리카 겔 크로마토그래피 (FCC)를 사전패킹된 카트리지를 사용하여 실리카 겔 (SiO₂)에서 수행하였다.

분취용 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP HPLC)를 다음 중 하나에서 수행하였다:

방법 A. Phenomenex Synergi C18(10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18(5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.225% FA를 함유함) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC. 또는

방법 B. Phenomenex Synergi C18(10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18(5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.1% TFA를 함유함) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC. 또는

방법 C. Phenomenex Synergi C18(10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18(5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.05% HCl) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC. 또는

방법 D. Phenomenex Gemini C18 (10 μm, 150 x 25 mm), AD(10 μm, 250 mm x 30 mm), 또는 Waters XBridge C18 컬럼 (5 μm, 150 x 30 mm), 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.05% 수산화암모니아(v/v)를 함유함) 중 0~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC. 또는

방법 E. Phenomenex Gemini C18 (10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Waters XBridge C18 컬럼 (5 μm, 150 x 30 mm), 이동상: 10분에 걸쳐 물 (10 mM NH4HCO3) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC.

분취용 초임계 유체 고성능 액체 크로마토그래피(SFC)를 Thar 80 Prep-SFC 시스템 또는 Waters의 Waters 80Q Prep-SFC 시스템에서 수행하였다. ABPR은 SF 조건에서 CO₂를 유지하기 위하여 100 bar로 설정하였으며, 유량은 화합물 특성에 따라 확인할 수 있고, 이때 유량의 범위는 50 g/분 내지 70 g/분이다. 컬럼 온도는 주위 온도였다.

질량 스펙트럼은 달리 지시되지 않는 한 포지티브 모드에서 전자분무 이온화(ESI)를 사용하여 SHIMADZU LCMS-2020 MSD 또는 Agilent 1200\G6110A MSD에서 얻었다. 질량의 이론치는 정확한 질량에 상응한다.

핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼은 Bruker 모델 AVIII 400 분광계에서 얻었다. 다중 피크에 대한 정의는 다음과 같다: s = 단일 피크, d = 이중 피크, t= 삼중 피크, q = 사중 피크, m = 다중 피크, br = 브로드. 교환가능한 양성자를 포함하는 화합물의 경우, 상기 양성자는 NMR 스펙트럼을 실행하는 데 사용되는 용매의 선택 및 용액 중 화합물의 농도에 따라 NMR 스펙트럼에서 가시적일 수도 있고 그렇지 않을 수도 있음이 이해될 것이다.

화학명은 ChemDraw Ultra 12.0, ChemDraw Ultra 14.0(CambridgeSoft Corp., 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재) 또는 ACD/Name 버전 10.01(Advanced Chemistry)을 사용하여 생성하였다.

R* 또는 S*로 지정된 화합물은 절대 배열이 결정되지 않은 거울상순수 화합물이다.

중간체 1a. 2- tert -부틸 8-에틸 10- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H -피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2,8(7H)-디카르복실레이트.

단계 A. 에틸 2-[[ tert - 부톡시카르보닐(메틸)아미노 ] 메틸 ] 프로프 -2- 에노에이트. THF (5.00 mL) 중 tert-부틸 N-메틸카르바메이트 (200.00 mg, 1.52 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 NaH (91.20 mg, 2.28 mmol, 60%의 순도, 1.50 당량)를 N₂ 하에 0℃에서 0.5시간 동안 첨가하고, 그 후 에틸 2-(브로모-메틸)프로프-2-에노에이트 (352.10 mg, 1.82 mmol, 1.20 당량)를 0℃에서 상기 혼합물에 적가하고, 혼합물을 N₂ 분위기 하에 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 얼음-물 (10 mL)에 붓고, 5분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO₂, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1~5/1)로 정제하여 표제 화합물 (112.00 mg, 460.34 μmol, 30.29%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 6.28 (s, 1 H), 5.55 (s, 1 H), 4.23 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 4.07 (br s, 2 H), 2.88 (br s, 3 H), 1.45 (br s, 9 H), 1.31 (br s, 3 H).

단계 B. 에틸 2-( 메틸아미노메틸 ) 프로프 -2- 에노에이트. 디옥산 (1.00 mL) 중 에틸 2-[[tert-부톡시-카르보닐(메틸)아미노]메틸]프로프-2-에노에이트 (112.00 mg, 460.34 μmol, 1.00 당량)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 5.00 mL, 43.45 당량)을 첨가하고, 그 후 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (82.50 mg, 459.25 μmol, 99.76%의 수율, HCl)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.

단계 C. tert -부틸 3-[2- 에톡시카르보닐알릴(메틸)카르바모일 ]-2,4,6,7- 테트라히드로피라졸로[4,3-c]피리딘 -5-카르복실레이트. THF (3.00 mL) 중 5-tert-부톡시카르보닐-2,4,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산 (80.00 mg, 299.31 μmol, 1.00 당량), 에틸 2-(메틸아미노메틸) 프로프-2-에노에이트 (59.14 mg, 329.24 μmol, 1.10 당량, HCl), T₃P (285.70 mg, 897.93 μmol, 267.01 μL, 3.00 당량) 및 TEA (151.44 mg, 1.50 mmol, 207.45 μL, 5.00 당량)의 혼합물을 탈기시키고 N₂로 퍼지하고 (3회), 그 후 혼합물을 N₂ 분위기 하에 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 5분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (DCM/MeOH=10/1)로 정제하여 표제 화합물 (46.00 mg, 105.49 μmol, 35.24%의 수율, 90%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 393 [M+1]. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 6.35 (s, 1 H), 5.67 (br s, 1 H), 4.63 (s, 4 H), 4.18 - 4.30 (m, 2 H), 3.71 (br s, 2 H), 2.91 - 3.47 (m, 3 H), 2.74 (br t, J = 5.4 Hz, 2 H), 1.48 (s, 9 H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3 H).

단계 D. 2- tert -부틸 8-에틸 10- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H -피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2,8(7H)-디카르복실레이트. MeCN (1.00 mL) 중 tert-부틸 3-[2-에톡시-카르보닐알릴(메틸)카르바모일]-2,4,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트 (36.00 mg, 91.73 μmol, 1.00 당량), DBU (6.98 mg, 45.87 μmol, 6.91 μL, 0.50 당량)의 혼합물을 탈기시키고 N₂로 퍼지하고 (3회), 그 후 혼합물을 N₂ 분위기 하에 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (5 mL)에 붓고, 3분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (DCM/MeOH=20/1)로 정제하여 표제 화합물 (20.00 mg, 50.96 μmol, 55.56%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 393 [M+1].

중간체 2a: tert -부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. 2 -( tert - 부톡시카르보닐 )-10- 메틸 -11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11- 옥타히드로 -1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산. MeOH (30.00 mL) 중 2-tert-부틸 8-에틸 10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H -피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2,8(7H)-디카르복실레이트 (중간체 1, 3.00 g, 7.64 mmol)의 용액에 물 (6.00 mL) 중 NaOH (458.40 mg, 11.46 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 희석된 염산 (2 N, 3 mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 약 pH 6으로 조정하였다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, 그 후 에틸 아세테이트 (100 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (2.50 g, 조 물질)을 백색 고체로서 제공하고, 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다. MS (ESI): 질량: C₁₇H₂₄N₄O₅에 대한 이론치: 364.1; m/z 실측치: 365.1 [M+H]⁺.

단계 B. tert -부틸 8- 카르바모일 -10- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. DMF (5.00 mL) 중 2-(tert-부톡시-카르보닐)-10-메틸-11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11 -옥타히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산 (200.00 mg, 548.85 μmol) 및 NH₄Cl (146.79 mg, 2.74 mmol, 95.94 μL)의 혼합물에 PyBOP (314.18 mg, 603.73 μmol), HOBt (81.58 mg, 603.73 μmol) 및 DIPEA (212.80 mg, 1.65 mmol, 287.57 μL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석시키고, 희석 HCl (1 N, 30 mL×2)로 세척하고, 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올=50/1~10/1)로 정제하여 표제 화합물 (173.00 mg, 476.05 μmol, 86.74%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C₁₇H₂₅N₅O₄에 대한 이론치: 363.1; m/z 실측치: 364.1 [M+H]⁺.

단계 C. tert -부틸 8-(((디메틸아미노)메틸렌)카르바모일)-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. Tert-부틸 8-카르바모일-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (170.00 mg, 467.79 μmol)을 DMF-DMA (1.80 g, 15.10 mmol, 2.00 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석시키고, 물 (50 mL×2)로 세척하고, 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (170.00 mg, 조 물질)을 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

단계 D. tert -부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. EtOH (5.00 mL) 중 tert-부틸 8-(((디메틸아미노)메틸렌)카르바모일)-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (60 mg 조 물질)의 혼합물에 NH₂NH₂ ^.H₂O (14.65 mg, 286.74 μmol, 14.22 μL, 98%의 순도)를 첨가하고, 그 후 반응 혼합물을 80℃에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석시키고, 물 (50 mL×2)로 세척하고, 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (DCM/MeOH=10/1)로 정제하여 표제 화합물 (30.00 mg, 77.43 μmol, 54.01%의 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C₁₈H₂₅N₇O에 대한 이론치: 387.2; m/z 실측치: 388.2 [M+H]⁺.

중간체 3a: tert -부틸 10-메틸-8-(1,2,4-옥사디아졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

AcOH (2.00 mL) 중 tert-부틸 8-(((디메틸아미노)메틸렌)카르바모일)-10-메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80 mg의 조 물질, 중간체 2의 단계 C로부터 제조)의 혼합물에 NH₂OH^.HCl (106.27 mg, 1.53 mmol) 및 TEA (232.13 mg, 2.29 mmol, 317.99 μL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석시키고, 물 (50 mL×2)로 세척하고, 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (Rf=0.65, DCM/MeOH=10/1)로 정제하여 표제 화합물 (20.00 mg, 51.49 μmol, 26.94%의 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C₁₈H₂₄N₆O₄에 대한 이론치: 388.2; m/z 실측치: 411.2 [M+Na]⁺.

중간체 4a: tert -부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-테트라졸-5-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. tert -부틸 8- 시아노 -10- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. N₂ 하에 0℃에서 DCM (3.00 mL) 중 tert-부틸 8-카르바모일-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 2, 단계 B; 500.00 mg, 1.38 mmol) 및 TEA (696.11 mg, 6.88 mmol, 953.58 μL)의 혼합물에 TFAA (577.94 mg, 2.75 mmol, 382.74 μL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO₂, 디클로로메탄/메탄올=60/1~30/1)로 정제하여 표제 화합물 (320.00 mg, 926.46 μmol, 67.13%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C₁₇H₂₃N₅O₃에 대한 이론치: 345.2; m/z 실측치: 368.2 [M+Na]⁺.

단계 B. tert -부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-테트라졸-5-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. N₂ 하에 DMF (2.00 mL) 중 tert-부틸 8-시아노-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H -피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80.00 mg, 231.62 μmol)의 혼합물에 NaN₃ (22.59 mg, 347.43 μmol) 및 ACN (12.70 mg, 23.16 μmol, 11.55 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석시키고, 희석 HCl (1 N, 30 mL×2)로 세척하고, 유기 상을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 RP HPLC (조건 A)로 정제하여 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-테트라졸-5-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트(43.00 mg, 110.70 μmol, 47.80%의 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C₁₇H₂₄N₈O₃에 대한 이론치: 388.2; m/z 실측치: 389.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.82 - 4.91 (m, 1H), 4.73 - 4.81 (m, 1H), 4.62 (br s, 2 H), 4.19 (br s, 1H), 3.78 - 3.94 (m, 2H), 3.65 (br s, 2H), 3.20 (br s, 3H), 2.71 - 2.85 (m, 2 H), 1.49 (s, 9 H).

중간체 5a: tert -부틸 10- 메틸 -11-옥소-8-(1H- 피라졸 -3-일)-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. tert -부틸 8-(메톡시(메틸)카르바모일)-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (100.00 mL) 중 2-(tert-부톡시카르보닐)-10-메틸-11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산 (중간체 2, 단계 A로부터의 생성물; 7.00 g, 19.21 mmol) 및 N-메톡시메탄아민 히드로클로라이드 (7.49 g, 76.84 mmol)의 혼합물에 T₃P (24.45 g, 38.42 mmol, 22.85 mL, 50%의 순도) 및 TEA (29.16 g, 288.14 mmol)를 N₂ 하에 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (150 mL)에 붓고, 15분 동안 교반시키고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (200 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL×1)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 30/1)로 정제하여 표제 화합물 (7.50 g, 18.41 mmol, 95.82%의 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₁₉H₂₉N₅O₅에 대한 이론치: 407.2; m/z 실측치: 408.1 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.69 -4.43 (m, 4 H), 3.79 - 3.73 (m, 1H), 7.56 - 7.64 (m, 1H), 3.65 -3.59 (m, 4H), 3.25 (s, 3 H), 3.20 (s, 3H), 2.79 - 2.70 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).

단계 B. tert -부틸 8-아세틸-10- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (5.00 mL) 중 tert-부틸 8-[메톡시-(메틸)카르바모일]-10-메틸-11-옥소-1,3,4,7, 8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트(300.00 mg, 736.27 μmol)의 용액에 MeMgBr (3 M, 736.27 μL)을 N₂ 하에 -30℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃까지 가열하고 교반시켰다 (1시간 동안). 상기 혼합물을 HCl (1 N 수성, 80 mL)에 서서히 붓고, EtOAc (50 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (170.00 mg, 조 물질)을 갈색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₁₈H₂₆N₄O₄에 대한 이론치: 362.2; m/z 실측치: 363.2 [M+H]⁺.

단계 C. tert -부틸 8-(3-(디메틸아미노)아크릴로일)-10- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11 - 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,4] 디아제핀 -2(7H)-카르복실레이트. Tert-부틸 8-아세틸-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (60.00 mg, 165.55 μmol)을 DMF-DMA (1.35 g, 11.33 mmol, 1.50 mL)에 용해시키고, 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (20 mL×2) 및 물 (20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (80.00 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₁H₃₁N₅O₄에 대한 이론치: 417.2; m/z 실측치: 418.2 [M+H]⁺.

단계 D. tert -부틸 10- 메틸 -11-옥소-8-(1H- 피라졸 -3-일)-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,4] 디아제핀 -2(7H)- 카르복실레이트 . EtOH (500.00 μL) 중 tert-부틸 8-(3-(디메틸아미노)아크릴로일)-10-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (90.00 mg, 215.57 μmol)의 용액에 NH₂NH₂·H₂O (22.02 mg, 431.14 μmol, 21.38 μL, 98%의 순도)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, EtOAc (20 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (70.00 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₁₉H₂₆N₆O₃에 대한 이론치: 386.2; m/z 실측치: 387.1 [M+H]⁺.

중간체 6a: tert -부틸 10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

THF (2.00 mL) 중 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 5, 90.00 mg, 232.89 μmol)의 용액에 NaH (27.95 mg, 698.67 μmol, 60%의 순도)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후 CH₃I (99.17 mg, 698.67 μmol, 43.50 μL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 NH₄Cl (20 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 그 후 EA (30 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (EA/MeOH=10/1)로 정제하여 표제 화합물 (40.00 mg, 99.88 μmol, 42.89%의 수율, Rf=0.37 (EtOAc/MeOH=10/1))을 무색 오일로서 제공하고: MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₈N₆O₃에 대한 이론치: 400.2; m/z 실측치: 401.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.25 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.58 - 4.50 (m, 3H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.75 - 3.44 (m, 5H), 3.06 (s, 3H), 2.69 (br, 2H), 1.41 (s, 9H). 위치이성질체 tert-부틸 10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (8.00 mg, 17.48 μmol, 7.51%의 수율, 87.5%의 순도, Rf=0.30 (EtOAc/MeOH=10/1))를 무색 오일로서 제공하였다.

중간체 7a: tert -부틸 10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트

표제 화합물을 중간체 5로부터 분취용 TLC에 의해 단리하였다 (8.00 mg, 17.48 μmol, 7.51%의 수율, 87.5%의 순도, Rf=0.30 (EtOAc/MeOH=10/1)). MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₈N₆O₃에 대한 이론치: 400.2; m/z 실측치: 401.2 [M+H]⁺.

중간체 8a: ( 3R,8S *)- tert -부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. 에틸 2-((( tert - 부톡시카르보닐 )( 메틸 )아미노) 메틸 ) 아크릴레이트 . THF (80.00 mL) 중 NaH (4.57 g, 114.36 mmol, 60%의 순도)의 혼합물에 tert-부틸 N-메틸카르바메이트 (10.00 g, 76.24 mmol)를, N₂ 하에 -30℃에서 교반하면서 적가하였다 (이어서 0.5시간 후에 에틸 2-(브로모-메틸)프로프-2-에노에이트 (19.13 g, 99.11 mmol)). 생성된 혼합물을 16시간 동안 교반하면서 20℃까지 가온하였다. 상기 혼합물을 얼음물 (200 mL)에 붓고, 5분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (200 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO₂, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1~10/1)로 정제하여 표제 화합물과 에틸 2-(히드록시메틸)프로프-2-에노에이트 (21 g)의 혼합물을 연한 황색 액체로서 수득하였다.

단계 B. 에틸 2-(( 메틸아미노 ) 메틸 ) 아크릴레이트 히드로클로라이드 . 2시간 동안 20℃에서 교반하면서 에틸 에틸 2-(((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)메틸)아크릴레이트 및 에틸 2-(히드록시메틸)프로프-2-에노에이트 (11.5 g, 단계 A)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 30.00 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 농축시키고, 잔사를 물 (100 mL)에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 HCl (1 N)의 첨가에 의해 pH 3으로 조정하고, 혼합물을 DCM (100 mL×3)으로 세척하였다. 생성된 수성 상을 농축시켜 표제 화합물 (5.50 g, 30.62 mmol, 64.77%의 수율, HCl 염)을 무색 액체로서 제공하였다.

단계 C. ( R)- tert -부틸 3-((2-( 에톡시카르보닐 )알릴)( 메틸 ) 카르바모일 )-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트. N₂ 하에 THF (80.00 mL) 중 에틸 2-((메틸아미노)메틸)-아크릴레이트 히드로클로라이드 (5.50 g, 30.62 mmol) 및 (R)-5-(tert-부톡시카르보닐)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산 (5.20 g, 18.48 mmol)의 용액에 TEA (22.44 g, 221.76 mmol, 30.74 mL) 및 T₃P (58.82 g, 92.42 mmol, 54.97 mL, 50%의 순도)를 첨가하였다. N₂ 분위기 하에 30℃에서 32시간 동안 상기 혼합물을 교반시켰다. 추가의 T₃P (23.52 g, 36.96 mmol, 21.98 mL, 50%의 순도) 및 TEA (14.96 g, 147.84 mmol, 20.49 mL)를 추가 16시간 동안 교반하면서 30℃에서 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 80 mL의 물로 희석시키고, EtOAc (50 mL×4)로 추출하였다. 유기 상을 순차적으로 HCl (1 N, 50 mL×2), 포화 NaHCO₃ 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 그 후 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (0~50% 에틸 아세테이트/석유 에테르의 구배)로 정제하여 표제 화합물 (5.52 g, 13.58 mmol, 73.49%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₃₀N₄O₅에 대한 이론치: 406.2; m/z 실측치: 407.2 [M+H]⁺.

단계 D. ( 3R)-2- tert -부틸 8-에틸 3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2,8(7H)-디카르복실레이트. MeCN (600.00 mL) 중 DBU (1.03 g, 6.79 mmol, 1.02 mL)의 용액에 MeCN (150.00 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-((2-(에톡시카르보닐)알릴)(메틸)카르바모일)-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (5.52 g, 13.58 mmol)의 용액을, 16시간 동안 50℃에서 교반하면서 적가하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 100 mL의 EtOAc에 용해시켰다. 그 후, 생성된 혼합물을 HCl (1 N, 100 mL) 및 염수 (100 mL×1)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (50~100% 에틸 아세테이트/석유 에테르의 구배)를 통하여 정제하여 표제 화합물 (5.20 g, 12.79 mmol, 94.21%의 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.

단계 E. (3R)-2-(tert-부톡시카르보닐)-3,10-디메틸-11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산. THF (10.00 mL) 및 물 (1.00 mL) 중 (3R)-2-tert-부틸 8-에틸 3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2,8(7H)-디카르복실레이트 (450.00 mg, 1.11 mmol)의 용액에 NaOH (88.57 mg, 2.21 mmol)를 첨가하고, 그 후 혼합물을 16시간 동안 50℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 20 mL의 물로 희석시키고, 혼합물의 pH를 HCl (1 N)의 첨가에 의해 12에서 5로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (20 mL×5)로 추출하였다. 그 후, 합한 유기 상을 염수 (30 mL×1)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (390.00 mg, 1.03 mmol, 92.85%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 F. ( 3R)- tert -부틸 8-(메톡시(메틸)카르바모일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. DMF (10.00 mL) 중 (3R)-2-(tert-부톡시카르보닐)-3,10-디메틸-11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산 (390.00 mg, 1.03 mmol) 및 N-메톡시메탄아민 (130.61 mg, 1.34 mmol, HCl)의 용액에 PyBOP (589.60 mg, 1.13 mmol), HOBt (153.09 mg, 1.13 mmol) 및 DIEA (798.70 mg, 6.18 mmol, 1.08 mL)를 20℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 50 mL의 물로 희석시키고, EtOAc (30 mL×4)로 추출하였다. 유기 상을 HCl (1 N, 30 mL), 포화 NaHCO₃ 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO₂, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1~1/5)로 정제하여 표제 화합물 (290.00 mg, 688.04 μmol, 66.80%의 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.

단계 G. ( 3R)- tert -부틸 8-아세틸-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (6.00 mL) 중 (3R)-tert-부틸 8-(메톡시(메틸)카르바모일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (290.00 mg, 688.04 μmol)의 용액에 MeMgBr (3 M, 1.15 mL)을, 교반하면서 -78℃에서 첨가하고, 그 후 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃의 HCl (1 N, 10 mL)에 붓고, 그 후 EtOAc (20 mL×3)로 추출하고, 합한 유기 상을 순차적으로 포화 NaHCO₃ (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 그 후 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (260.00 mg, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하고, 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다. MS (ESI): 질량: C₁₉H₂₈N₄O₄에 대한 이론치: 376.2; m/z 실측치: 377.3 [M+H]⁺.

단계 H. ( 3R)- tert -부틸 8-(3-(디메틸아미노)아크릴로일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. (3R)-tert-부틸 8-아세틸-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (260.00 mg, 조 물질)를 N,N-디메틸-포름아미드 디메틸 아세탈 (DMF-DMA) (8.00 mL)에 용해시키고, 생성된 혼합물을 16시간 동안 교반하면서 70℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 16시간 동안 교반하면서 80℃까지 가열하고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 20 mL의 EtOAc에 용해시켰다. 생성된 유기 상을 물 (10 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (300.00 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다. MS (ESI): 질량: C₂₂H₃₃N₅O₄에 대한 이론치: 431.2; m/z 실측치:432.2 [M+H]⁺.

단계 I. ( 3R)- tert -부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. EtOH (6.00 mL) 중 (3R)-tert-부틸 8-(3-(디메틸아미노)아크릴로일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (300.00 mg, 조 물질)의 용액에 NH₂NH₂·H₂O (69.60 mg, 1.39 mmol, 67.57 μL)를 첨가하고, 그 후 혼합물을 2시간 동안 교반하면서 80℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 분취용 TLC (EtOAc/MeOH=20/1)로 정제하여 표제 화합물 (200.00 mg, 494.42 μmol, 71.12%의 수율, 99%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 J. (3R,8S *)- tert -부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. (3R)-tert-부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (200.00 mg, 499.41 μmol)를 SFC (컬럼: AD(250 mm*30 mm,10 um); 이동상: [0.1% NH₃·H₂O IPA]; B%: 25%~25%,1.6분; 50분)로 분리하여 표제 화합물 (90.00 mg, 224.74 μmol, SFC에서 피크 1 (AD-3S_3_5_40_3ML 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간: 2.178분)을 백색 고체로서 수득하고 (3R,8R*)-tert-부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80.00 mg, 199.77 μmol, SFC에서 피크 2, 체류 시간: 2.328분)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 9a: ( 3R,8R *)- tert -부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

중간체 7, 단계 J와 유사한 방식으로 표제 화합물을 (3R)-tert-부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 9, 단계 I로부터의 생성물)로부터 SFC에 의해 분리하였다: (80.00 mg, 199.77 μmol, SFC에서 피크 2 (AD-3S_3_5_40_3ML 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 메탄올 (0.05% DEA); 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간: 2.328분). MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치: 402.3 [M+H]⁺.

중간체 10a: ( 3R,8S *)- tert -부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. (3R)-2-(tert-부톡시카르보닐)-3,10-디메틸-11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산 . THF (25.00 mL) 및 물 (5.00 mL) 중 (3R)-2-tert-부틸 8-에틸 3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2,8(7H)-디카르복실레이트 (중간체 8, 단계 D; 2.50 g, 6.15 mmol)의 용액에 NaOH (369.00 mg, 9.23 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (30 mL)로 희석시키고, HCl (1 N)의 첨가에 의해 pH 5로 조정하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL×3)로 추출하고, 합한 유기 상을 염수 (40 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (2.00 g, 5.29 mmol, 85.94%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₁₈H₂₆N₄O₅에 대한 이론치: 378.2; m/z 실측치: 379.2 [M+H]⁺.

단계 B. ( 3R)- tert -부틸 8-(메톡시(메틸)카르바모일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. DMF (30.00 mL) 중 (3R)-2-(tert-부톡시카르보닐)-3,10-디메틸-11-옥소-2,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-8-카르복실산 (2.00 g, 5.28 mmol) 및 N-메톡시-메탄아민 (669.51 mg, 6.86 mmol, HCl)의 용액에 PyBOP (3.02 g, 5.81 mmol), HOBt (784.78 mg, 5.81 mmol) 및 DIEA (4.09 g, 31.68 mmol, 5.52 mL)를 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 순차적으로 물 (100 mL×2), 1 N HCl (50 mL), 및 포화 수성 NaHCO₃ (50 mL)으로 세척하였다. 그 후 유기 부분을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/EtOAc=50%~100%)로 정제하여 표제 화합물 (2.06 g, 4.89 mmol, 92.56%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₃₁N₅O₅에 대한 이론치: 421.2; m/z 실측치: 422.3 [M+H]⁺.

단계 C. ( 3R)- tert -부틸 8-아세틸-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (30 mL) 중 (3R)-tert-부틸 8-(메톡시(메틸)카르바모일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (2.06 g, 4.89 mmol)의 용액에 MeMgBr (3 M, 4.89 mL)을 N₂ 하에 -30℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 1시간 동안 교반하면서 0℃까지 가온하였다. 상기 혼합물을 1 N HCl (100 mL)에 서서히 붓고, 에틸 아세테이트 (80 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (1.67 g, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₁₉H₂₈N₄O₄에 대한 이론치: 376.2; m/z 실측치: 377.1 [M+H]⁺.

단계 D. ( 3R)- tert -부틸 8-((E)-3-(디메틸아미노)아크릴로일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. (3R)-tert-부틸 8-아세틸-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (400 mg, 1.06 mmol)를 DMFDMA (1.79 g, 15.06 mmol, 2 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 75℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (40 mL × 2)로 추출하고, 물 (20 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 물 (30 mL×2)로 세척하였다. 유기 부분을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (400 mg, 926.94 mol, 87.24%의 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.

단계 E. ( 3R)- tert -부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. 피리딘 (5 mL) 중 (3R)-tert-부틸 8-((E)-3-(디메틸아미노)아크릴로일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (200 mg, 463.47 μmol)의 용액에 NH₂OH·HCl (193.24 mg, 2.78 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 115℃에서 16시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (30 mL)로 희석시키고, EtOAc (30 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 1 N HCl (20 mL×2)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (EtOAc=1)로 정제하여 (3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (87 mg, 166.87 μmol, 36.00%의 수율, 77%의 순도)를 갈색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치:402.3 [M+H]⁺.

단계 F. (3R,8S *)- tert -부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 . (3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (92 mg)를 HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*30 mm*4 um;이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 33%~63%,10.5분)로 정제하여 표제 화합물 (60 mg)을 수득하고, 이를 SFC (컬럼: AD (250 mm*30 mm,10 μm); 이동상: [0.1% NH₃·H₂O MEOH]; B%: 25%~25%, 3.3분; 70분)로 분리하여 (3R,8S*)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (SFC에서 피크 1 (AD-3S_3_5_40_3ML 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 메탄올(0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간=1.662분, 17 mg, 42.35 μmol, 18.48%의 수율)를 백색 고체로서 수득하고 부분입체이성질체 (3R,8R*)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (피크 2, 체류 시간 =1.858분, 17 mg, 42.35 μmol, 18.48%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치: 402.3 [M+H]⁺.

중간체 11a: ( 3R,8R *)- tert -부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트

중간체 10, 단계 F와 유사한 방식으로 표제 화합물을 (3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 4, 단계 E로부의 생성물)로부터 SFC에 의해 분리하였다. (17 mg, 42.35 μmol, SFC에서 피크 2 (AD-3S_3_5_40_3ML 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간 =1.858분). MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치: 402.3 [M+H]⁺.

중간체 12a:(3R,8S *)- tert -부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. ( 3R)- tert -부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

HOAc (3 mL) 및 물 (6 mL) 중 (3R)-tert-부틸 8-((E)-3-(디메틸아미노)아크릴로일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 10, 단계 D; 200 mg, 463.47 mol)의 용액에 NH₂OH·HCl (193.24 mg, 2.78 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 10℃에서 16시간 동안 교반시키고, 그 후 가열을 70℃에서 추가 48시간 동안 계속하였다. 이때, 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 THF (3 mL)로 희석시키고, 수성 Na₂CO₃으로 pH를 9~10으로 조정하였다. Boc₂O (303.46 mg, 1.39 mmol, 319.43 μL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 10℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 희석시키고, EtOAc (30 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (EtOAc/MeOH=10/1)로 정제하여 표제 화합물 (3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 및 (3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트의 혼합물 (140 mg, 327.48 μmol, 70.66%의 수율, 93.8%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치: 402.3 [M+H]⁺.

단계 B. (3R,8S *)- tert -부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

(3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 및 (3R)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (140 mg)의 혼합물을 SFC (컬럼: AD (250 mm*30 mm, 5 μm); 이동상: [0.1% NH₃·H₂O IPA]; 2.6분; 120분)를 통하여 분리하여 표제 화합물 (3R,8S*)-tert-부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (SFC에서 피크 1 (AD-3S_5_5_40_3ML 컬럼: Chiralpak AD-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 에탄올 (0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간: 1.753분, 36 mg, 89.67 μmol, 27.41%의 수율)를 무색 오일로서 수득하고 혼합물 (피크 2 및 피크 3, 체류 시간: 1.866 및 1.907분, 50 mg, 중간체 7 포함)을 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치: 402.3 [M+H]⁺.

중간체 13a: ( 3R,8R *)- tert -부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

중간체 12, 단계 B의 생성물로부터의 혼합물 (피크 2 및 피크 3, 체류 시간: 1.866 및 1.907분, 50 mg)을 추가로 SFC (컬럼: OJ (250 mm*30 mm, 5 μm); 이동상: [0.1% NH₃·H₂O IPA]; B%: 20%~20%, 2.2분; 30분)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (SFC에서 피크 1 (OJ-3S_4_5_40_3ML 컬럼: Chiralcel OJ-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5%로부터 40%까지의 CO₂ 중 이소프로판올 (0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm"), 체류 시간=1.233분, 11 mg, 27.40 μmol, 8.38%의 수율). MS(ESI): 질량: C₂₀H₂₇N₅O₄에 대한 이론치: 401.2; m/z 실측치: 402.3 [M+H]⁺.

중간체 14a. tert -부틸 10- 메틸 -8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

방법 A

단계 A. 5-메틸렌-1,3,2- 디옥사티안 2- 옥시드. CCl₄ (50.00 mL) 중 2-메틸렌프로판-1,3-디올 (5.00 g, 56.75 mmol, 4.63 mL, 1.00 당량)의 용액에 CCl₄ (10.00 mL) 중 SOCl₂ (10.13 g, 85.13 mmol, 6.18 mL, 1.50 당량)의 용액을 N₂ 하에 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 5-메틸렌-1,3,2-디옥사티안 2-옥시드 (6.90 g, 51.43 mmol, 90.63%의 수율)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.36 - 5.39 (m, 2 H), 5.16 (s, 2 H), 4.22 - 4.28 (m, 2 H).

단계 B. 2-(( 메틸아미노 ) 메틸 ) 프로프 -2-엔-1- 올. THF (2.00 mL) 중 5-메틸렌-1,3,2-디옥사티안 2-옥시드 (1.00 g, 7.45 mmol, 1.00 당량) 및 메탄아민 (2 M, 11.18 mL, 3.00 당량)의 용액을 16시간 동안 70℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (750.00 mg, 7.41 mmol, 99.46%의 수율)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.

단계 C. tert -부틸 (2-(히드록시메틸)알릴)(메틸)카르바메이트. 디옥산 (5.00 mL)/H₂O (5.00 mL) 중 2-(메틸-아미노메틸)프로프-2-엔-1-올 (750.00 mg, 7.41 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Boc₂O (1.94 g, 8.89 mmol, 2.04 mL, 1.20 당량) 및 NaHCO₃ (622.40 mg, 7.41 mmol, , 1.00 당량)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EA (50 mL)로 희석시키고, 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 황색 오일을 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 표제 화합물 (710.00 mg, 3.53 mmol, 47.61%의 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 5.10 (s, 1 H), 4.97 (s, 1 H), 3.91 - 4.10 (m, 4 H), 2.81 (s, 3 H), 1.50 (s, 9 H).

단계 D. 2-(( 메틸아미노 ) 메틸 ) 프로프 -2-엔-1-올 히드로클로라이드. 디옥산 (3.00 mL) 중 tert-부틸 N-[2-(히드록시메틸)알릴]-N-메틸-카르바메이트 (710.00 mg, 3.53 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 5.00 mL, 5.67 당량)을 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (480.00 mg, 3.49 mmol, 98.81%의 수율, HCl)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 5.46 (s, 1 H), 5.32 (s, 1 H), 4.20 (s, 2 H), 3.71 (s, 2 H), 2.73 (s, 3 H).

단계 E. tert -부틸 3-((2-( 히드록시메틸 )알릴)( 메틸 ) 카르바모일 )-6,7- 디히드로 -2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트. DMF (6.00 mL) 중 5-tert-부톡시카르보닐-1,4,6,7- 테트라히드로피라졸로 [4,3-c]피리딘-3- 카르복실산 (550.00 mg, 2.06 mmol, 1.00 당량), DIPEA (798.70 mg, 6.18 mmol, 1.08 mL, 3.00 당량), HATU (939.93 mg, 2.47 mmol, 1.20 당량) 및 2-(메틸아미노-메틸)프로프-2-엔-1-올 (425.21 mg, 3.09 mmol, 1.50 당량, Hcl)의 혼합물을 16시간 동안 80℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 EtOAc (80 mL)로 희석시키고, 염수 (80 mL *3)로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 상기 황색 오일을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 표제 화합물 (390.00 mg, 1.11 mmol, 54.03%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 351 [M+1].

단계 F. tert -부틸 10- 메틸 -8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (3.00 mL) 중 tert-부틸 3-[2-(히드록시-메틸)알릴-메틸-카르바모일]-2,4,6,7- 테트라히드로피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트 (200.00 mg, 570.76 μmol, 1.00 당량) 및　트리페닐포스판 (194.62 mg, 741.99 μmol, 1.30 당량)의 용액에 DIAD (150.04 mg, 741.99 μmol, 144.27 mL, 1.30 당량)를 첨가하고, 혼합물을 30℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, HCl (1 M, 50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 오일을 제공하였다. 상기 오일을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 불순한 생성물로서의 표제 화합물 (320.00 mg, 조 물질, Ph₃PO 함유)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS: 355 [M+23].

방법 B

단계 A. 5- tert -부틸 3-에틸 2-(2-( 클로로메틸 )알릴)-6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -3,5(4H)-디카르복실레이트. DMF (100.00 mL) 중 3-클로로-2-(클로로메틸)프로프-1-엔 (7.62 g, 60.95 mmol, 7.05 mL, 3.00 당량)의 용액에 5-tert-부틸 3-에틸 2,4,6,7- 테트라히드로피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (6.00 g, 20.32 mmol, 1.00 당량) 및 K₂CO₃ (3.65 g, 26.41 mmol, 1.30 당량)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 6시간 동안 교반시키고, 그 후 16시간 동안 75℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 EtOAc (80 mL)로 희석시키고, HCl (1 M, 80 mL) 및 염수 (80 mL*2)로 세척하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 상기 오일을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 표제 화합물 (2.90 g, 7.55 mmol, 37.18%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

단계 B. tert -부틸 10- 메틸 -8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. EtOH (30.00 mL)　중 5-tert-부틸 3-에틸 2-(2-(클로로메틸)알릴)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (1.00 g, 2.61 mmol, 1.00 당량) 및 메탄아민 (7.5 M, 40.00 mL, 33%의 순도, 114.94 당량)의 용액을 밀봉 튜브에서 16시간 동안 80℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 황색 오일을 제공하였다. 상기 황색 오일을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 표제 화합물 (560.00 mg, 1.68 mmol, 64.37%의 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS: 333 [M+1].

중간체 15a: tert -부틸 8-히드록시-10-메틸-11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

단계 A. tert -부틸 10- 메틸 -8,11- 디옥소 -3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 -[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (50 mL) 중 tert-부틸 10-메틸-8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 14a, 1.4 g, 4.21 mmol)의 용액에 OsO₄ (107.08 mg, 421.18 μmol, 21.85 μL)와, H₂O (25 mL) 중 NaIO₄ (2.70 g, 12.64 mmol, 700.16 μL)의 용액을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃의 포화 수성 NaHCO₃ (30 mL)으로 켄칭하고, 그 후 물 (50 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (50 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO₂)로 정제하여 표제 화합물 (0.9 g, 2.69 mmol, 63.91%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₁₆H₂₂N₄O₄에 대한 이론치: 334.4; m/z 실측치: 279 [M+H-56]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 5.01(s, 2 H), 4.66(s, 2 H), 4.04(s, 2 H), 3.73(t, J=5.1 Hz, 2 H), 3.20(s, 3 H), 2.76(s, 2 H), 1.49(s, 9 H).

단계 B. tert -부틸 8-히드록시-10- 메틸 -11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. THF (2 mL) 중 페닐마그네슘 브로마이드 (3 M, 2.09 mL)의 용액에 THF (10 mL) 중 tert-부틸 10-메틸-8,11-디옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트(0.7 g, 2.09 mmol)의 용액을 -30℃에서 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다 (N₂ 분위기 하에). 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl (5mL) 용액으로 켄칭하고, EtOAc (3 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (SiO₂)로 정제하여 표제 화합물 (0.320 g, 721.49 μmol, 34.46%의 수율, 93%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₂H₂₈N₄O₄에 대한 이론치: 412.5; m/z 실측치: 413.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.60 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 3 H), 4.90 (d, J =14.4 Hz, 1 H), 4.63 (s, 2H), 4.46 (d, J = 14.4 Hz, 1 H), 3.82 (d, J=5.5, 13.4 Hz, 1 H), 3.65 - 3.36 (m, 3 H), 3.19 (s, 3 H), 2.79 - 2.65 (m, 2 H), 1.49 (s, 9 H).

중간체 16a: tert -부틸 8-플루오로-10-메틸-11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트.

DCM (1 mL) 중 tert-부틸 8-히드록시-10-메틸-11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 15a, 0.08 g, 180.37 μmol)의 용액에 DCM (1 mL) 중 DAST (0.0625 g, 387.74 μmol, 51.23 μL)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃의 H₂O (3 mL)로 켄칭하고, 그 후 EtOAc (5 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (5 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (SiO₂)를 통하여 정제하여 표제 화합물 (0.065 g, 156.83 μmol, 86.95%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₂H₂₇N₄O₃F에 대한 이론치: 414.5.4. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.51 - 7.33 (m, 5 H), 4.90 (m, 1 H), 4.73 - 4.52 (m, 3 H), 3.98 - 3.83 (m, 1 H), 3.77 - 3.48 (m, 3 H), 3.23 (s, 3 H), 2.80 (s, 2 H), 1.54 - 1.39 (m, 9H).

실시예 1a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A. 10 - 메틸 -8-(1H-1,2,4- 트리아졸 -3-일)-3,4,7,8,9,10- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11(2H)-온.

DCM (3.00 mL) 중 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2, 40.00 mg, 103.24 umol)의 용액에 TFA (770.00 mg, 6.75 mmol, 500.00 uL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (40.00 mg, 조 물질, TFA 염)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

단계 B. N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

DCM (2.00 mL) 중 10-메틸-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-2,3,4,7,8,9-헥사히드로-1H-피리도 [2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-11-온 (40.00 mg, 99.67 umol, TFA)의 혼합물에 TEA (40.34 mg, 398.66 umol, 55.26 uL), 이어서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 (25.54 mg, 99.67 umol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 RP HPLC (조건 A)로 2회 정제하여 표제 화합물 (28.00 mg, 61.68 umol, 61.88%의 수율, 99%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₁H₂₀FN₉O₂에 대한 이론치: 449.2; m/z 실측치: 450 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.25 (s, 1 H), 7.78 (dd, J = 2.8, 5.40 Hz, 1H), 7.56 - 7.64 (m, 1H), 7.13 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.88 (s, 1 H), 4.75 - 4.85 (m, 2H), 4.65 - 4.74 (m, 2H), 3.90 - 4.02 (m, 2H), 3.76 - 3.87 (m, 3 H), 3.15 (s, 3H), 2.87 (t, J = 5.7 Hz, 2 H).

실시예 2a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-8-(1,2,4-옥사디아졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 10-메틸-8-(1,2,4-옥사디아졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11 -헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 3a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₁H₁₉FN₈O₃에 대한 이론치: 450.2; m/z 실측치: 451.2 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 2.8, 5.77 Hz, 1H), 7.79 (ddd, J = 2.8, 4.9, 9.3 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 4.38 - 4.45 (m, 1H), 4.28 - 4.35 (m, 1H), 3.63 - 3.80 (m, 3H), 3.58 (br dd, J = 5.4, 14.8 Hz, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.91 - 3.01 (m, 2H).

실시예 3a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-11-옥소-8-(1H-테트라졸-5-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-테트라졸-5-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 4a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₀H₁₉FN₁₀O₂에 대한 이론치: 450.2; m/z 실측치: 451.2 [M+H]⁺. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.05 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 2.8, 5.8 Hz, 1H), 7.79 (ddd, J = 2.8, 4.9, 9.3 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.74 (dd, J = 7.3, 14.3 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.53 (dd, J = 6.7, 14.2 Hz, 1H), 4.09 - 4.18 (m, 1H), 3.62 - 3.83 (m, 4H), 3.01 (s, 3 H), 2.67 - 2.73 (m, 2H).

실시예 4a: N-(3- 클로로 -4- 플루오로페닐 )-10- 메틸 -11-옥소-8-(1H- 피라졸 -3-일)-3,4,8, 9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,4] 디아제핀 -2(7H)-카르복스아미드.

tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 5a)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₁H₂₁N₇O₂ClF에 대한 이론치: 457.1; m/z 실측치: 458.1 [M+H]+. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.62 (dd, J = 2.6, 6.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 2H), 6.28 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.89 - 4.80 (m, 1 H), 4.75 - 4.64 (m, 3H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.79 - 3.769 (m, 2H), 3.57 (m, 1H), 3.09 (s, 3H), 3.08 - 3.07 (m, 1H), 2.88 (br t, J = 5.4 Hz, 2H).

실시예 5a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 6a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₃N₈O₂F에 대한 이론치: 462.4; m/z 실측치: 463.1 [M+H]+; ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.80 (dd, J = 2.8, 5.4 Hz, 1H), 7.60 (ddd, J = 2.8, 4.6, 9.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.17 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.78 - 4.55 (m, 4H), 3.99 - 3.91 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.88 - 3.79 (m, 2H), 3.75 - 3.68 (m, 1H), 3.65 - 3.57 (m, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.88 (t, J = 5.7 Hz, 2H).

실시예 6a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 10-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 7a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₃N₈O₂F에 대한 이론치: 462.2; m/z 실측치: 463.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ=7.79 (dd, J = 2.8, 5.4 Hz, 1H), 7.61 (ddd, J = 2.9, 4.6, 9.1 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.25 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.67 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 3.94 - 3.79 (m, 6H), 3.67 (m, 1H), 3.44 (m, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.94 - 2.84 (m, 2H).

실시예 7a: (3R,8S*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A. (3R,8S *)-3,10-디메틸-8-(1H- 피라졸 -3-일)-3,4,7,8,9,10- 헥사히드로 -1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11(2H)-온.

DCM (3.00 mL) 중 tert-부틸 (3R,8S*)-3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 7a, 90.00 mg, 224.74 mol)의 용액에 TFA (462.00 mg, 4.05 mmol, 300.00 L)를, 1시간 동안 교반하면서 15℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (100.00 mg, 조 물질, TFA)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

단계 B. (3R,8S*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

DCM (3.00 mL) 중 (3R,8S*)-3,10-디메틸-8-(1H-피라졸-3-일)-2,3,4,7,8,9-헥사히드로-1H-피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-11-온 (50.00 mg, 120.66 μmol TFA) 및 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 (30.92 mg, 120.66 μmol)의 용액에 TEA (73.26 mg, 723.96 μmol, 100.36 μL)를, 16시간 동안 교반하면서 15℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 RP HPLC(방법 A)로 정제하여 표제 화합물 (24.00 mg, 51.89 μmol, 43.01%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₃FN₈O₂에 대한 이론치: 462.2; m/z 실측치: 463.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.80 (dd, J = 2.8, 5.4 Hz, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 2H), 7.14 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.20 - 5.09 (m, 1H), 4.84 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 4.75 - 4.60 (m, 2H), 4.51 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 3.67 - 3.59 (m, 1H), 3.15 (s, 3H), 3.04 (dd, J = 6.0, 15.9 Hz, 1H), 2.71 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 6.90 Hz, 3H).

실시예 8a: (3R,8S*)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)-카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐) 카르바메이트를 사용하여, 실시예 7a에서의 단계 B와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₃FN₈O₂에 대한 이론치: 505.2; m/z 실측치: 506.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.70 (dd, J = 2.7, 6.1 Hz, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 2 H), 7.13 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.22 - 5.11 (m, 1H), 4.84 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 4.75 - 4.59 (m, 2H), 4.52 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.93 - 3.83 (m, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 1H), 3.15 (s, 3H), 3.09 - 3.01 (m, 1H), 2.71 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

실시예 9a : . (3R,8R*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

(3R,8R)-3,10-디메틸-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-11(2H)-온 (중간체 8a) 대신 (3R,8S)-tert-부틸3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 9a)를 사용하여, 실시예 7a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₃FN₈O₂에 대한 이론치: 462.19; m/z 실측치: 463.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.80 (dd, J = 2.76, 5.52 Hz, 1H), 7.54 - 7.64 (m, 2H), 7.13 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.27 (d, J = 2.38 Hz, 1H), 5.15 (m, 1 H), 4.86 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.61 - 4.75 (m, 2H), 4.49 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.59 - 3.76 (m, 2H), 3.16 (s, 3H), 3.05 (dd, J = 5.7, 15.9 Hz, 1H), 2.69 (d, J = 15.9 Hz, 1 H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

실시예 10a : (3R,8R*)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 (3R,8S*)-3,10-디메틸-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]-디아제핀-11(2H)-온 (중간체 8) 대신 (3R,8R*)-tert-부틸 3,10-디메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 9a)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)-페닐) 카르바메이트를 사용하여, 실시예 7a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₃F₄N₇O₂에 대한 이론치: 505.2; m/z 실측치: 506.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.70 (dd, J = 2.64, 6.02 Hz, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 2H), 7.13 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.27 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.16 (m, 1H), 4.86 (d, J = 15.18 Hz, 1H), 4.73 - 4.61 (m, 2H), 4.50 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.90 (m, J = 6.4 Hz, 1H), 3.75 - 3.60 (m, 2 H), 3.17 (s, 3H), 3.09 - 3.01 (m, 1H), 2.69 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

실시예 11a: (3R,8S*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 (3R,8S*)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 10a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₂FN₇O₃에 대한 이론치: 463.2; m/z 실측치: 464.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 8.48 (d, J =1.5 Hz, 1H), 7.83-7.77 (m, 1H), 7.61-7.53 (m, 1H), 7.20-7.11 (m, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.36 (d, J =1.6 Hz, 1H), 5.24-5.06 (m, 1H), 4.82 (d, J =15.0 Hz, 1H), 4.78 - 4.71 (m, 1H), 4.60-4.47 (m, 2H), 3.99-3.89 (m, 1H), 3.77 (d, J =5.4 Hz, 1H), 3.70 (d, J =5.9 Hz, 1H), 3.19 (s, 3H), 3.08-2.99 (m, 1H), 2.71 (d, J =16.0 Hz, 1H), 1.24-1.14 (m, 3H).

실시예 12a : (3R,8R*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 (3R,8R*)-tert-부틸 8-(이속사졸-3-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 11a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₂FN₇O₃에 대한 이론치: 463.2; m/z 실측치: 464.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.47 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 2.8, 5.44 Hz, 1H), 7.58 (ddd, J =2.8, 4.5, 9.1 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.38 (d, J =1.6 Hz, 1H), 5.16 (m, J = 6.11 Hz, 1H), 4.85 (d, J =15.6 Hz, 1H), 4.75 (dd, J =7.0, 14.37 Hz, 1H), 4.59 (dd, J =5.6, 14.43 Hz, 1H), 4.51 (d, J =15.4 Hz, 1H), 3.99 (m, J =6.4 Hz, 1H), 3.80 - 3.65 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.07 (dd, J =5.9, 15.8 Hz, 1H), 2.71 (d, J =16.0 Hz, 1H), 1.22 (d, J =6.8 Hz, 3H).

실시예 13a : (3R,8S*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 (3R,8S*)-tert-부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 12a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₂FN₇O₃에 대한 이론치: 463.2; m/z 실측치:464.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.30 (d, J =1.7 Hz, 1H), 7.80 (dd, J =2.7, 5.32 Hz, 1H), 7.61-7.55 (m, 1H), 7.16 (t, J =8.7 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.29 (d, J =1.2 Hz, 1H), 5.19-5.10 (m, 1H), 4.83 (d, J =15.4 Hz, 1H), 4.76 (dd, J =7.3, 14.1 Hz, 1H), 4.65-4.56 (m, 1H), 4.51 (d, J =15.2 Hz, 1H), 4.01 (m, J =5.5 Hz, 1H), 3.86 (dd, J =5.3, 14.98 Hz, 1H), 3.64 (dd, J =5.6, 14.98 Hz, 1H), 3.17 (s, 3H), 3.05 (dd, J =5.7, 15.96 Hz, 1H), 2.72 (d, J =16.5 Hz, 1H), 1.22 (d, J =7.0 Hz, 3H).

실시예 14a: (3R,8R*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 (3R,8R*)-tert-부틸 8-(이속사졸-5-일)-3,10-디메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 13a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₃H₂₂FN₇O₃에 대한 이론치: 463.2; m/z 실측치: 464.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.28 (d, J =1.6 Hz, 1H), 7.80 (dd, J =2.7, 5.3 Hz, 1H), 7.58 (m, 1H), 7.16 (t, J =8.7 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.29 (d, J =1.22 Hz, 1H), 5.15 (m, J = 6.97 Hz, 1H), 4.85 (d, J =15.3 Hz, 1H), 4.79-4.70 (m, 1H), 4.66-4.58 (m, 1H), 4.49 (d, J =15.3 Hz, 1H), 4.07-3.98 (m, 1H), 3.83 (dd, J =5.7, 15.1 Hz, 1H), 3.68-3.58 (m, 1H), 3.19 (s, 3H), 3.06 (dd, J =5.8, 16.0 Hz, 1H), 2.70 (d, J =15.4 Hz, 1H), 1.22 (d, J =7.0 Hz, 3H).

실시예 15a: N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)-11-히드록시-13-메틸-14-옥소-11-페닐-4,8,9,13-테트라자트리시클로[7.5.0.0 ^2,7 ]테트라데카-1,7-디엔-4-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 8-히드록시-10-메틸-11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 15a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₅H₂₃N₆O₃F에 대한 이론치: 474.2; m/z 실측치: 475.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.78 -7.76 (m, 1 H), 7.65 - 7.53 (m, 3 H), 7.48 - 7.35 (m, 3 H), 7.14 (t, J = 8.7 Hz, 1 H), 6.68 (s, 1 H), 4.96 (d, J = 14.3 Hz, 1 H), 4.81 - 4.62 (m, 2 H), 4.49 (d, J = 14.4 Hz, 1 H), 3.97 - 3.81 (m, 2 H), 3.63 - 3.39 (m, 2 H), 3.24 (s, 3 H), 2.90 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.49 (s, 1 H).

실시예 16a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-8-플루오로-10-메틸-11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복스아미드.

단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9- 헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 2a) 대신 tert-부틸 8-플루오로-10-메틸-11-옥소-8-페닐-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 16a)를 사용하여, 실시예 1a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C₂₅H₂₂F₂N₆O₂에 대한 이론치: 476.5; m/z 실측치: 477.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 7.78 (d, J = 2.8, 5.5 Hz, 1 H), 7.60 (m, 1 H), 7.50 - 7.34 (m, 5 H), 7.14 (t, J = 8.7 Hz, 1 H), 6.81 (s, 1 H), 4.97 (d, J = 6.8, 14.7 Hz, 1 H), 4.85 - 4.60 (m, 3 H), 3.95 - 3.84 (m, 2 H), 3.78 - 3.53 (m, 2 H), 3.26 (s, 3 H), 2.92 (t, J = 5.8 Hz, 2 H).

4. 화학식 I의 화합물의 항- HBV 활성

절차

안정한, 유도성 HBV 생산 세포주인 HepG2.117 세포주를 이용하여 항 HBV 활성을 측정하였는데, 상기 세포주는 독시사이클린의 부재 하에 HBV를 복제시킨다 (Tet-off 시스템). HepG2 세포주는 번호 HB-8065로 ATCC®로부터 입수가능하다. HepG2 세포주의 형질감염은 문헌[Sun and Nassal 2006 Journal of Hepatology 45 (2006) 636-645 "Stable HepG2 - and Huh7 -based human hepatoma cell lines for efficient regulated expression of infectious hepatitis B virus"]에 기술된 바와 같을 수 있다.

항바이러스 분석을 위해, HBV 복제를 유도하고, 이어서 96웰 플레이트에서 연속 희석 화합물로 처리하였다. 3일의 처리 후, 실시간 PCR 및 HBV 특이적 프라이머 세트 및 프로브를 사용한 세포내 HBV DNA의 정량화에 의해 항바이러스 활성을 결정하였다.

화합물들의 존재 하에 3일간 인큐베이션한 HepG2 또는 HepG2.117 세포를 사용하여 화합물들의 세포독성을 테스트하였다. PERKIN ELMER ATPlite Luminescence Assay System을 사용하여 세포의 생존력을 평가하였다.

결과:

[표 8]

HBC 스펙클링의 유도 또는 비-유도

HepG2.117 세포를 독시사이클린의 부재 하에 DMSO 또는 테스트 화합물의 존재 하에 배양하였다. 포름알데히드 고정 및 Triton-X-100 투과화 후, B형 간염 바이러스 코어 단백질 (HBc)을 일차 항-HBc 항체로 면역표지하였다. ALEXA 488-콘쥬게이션된 이차 항체를 일차 HBV 코어 신호의 형광 검출에 사용하였다. CELLMASK Deep Red 및 HOECHST 33258을 각각 세포질 및 핵의 검출에 사용하였으며, 이는 세포 구획의 분할을 가능하게 하였다.

상이한 형태학적 표현형을 검출할 수 있는 영상 분석 소프트웨어를 사용하여 세포질 또는 핵에서 HBV 코어의 수준을 결정하였다(고화질 영상 분석).

HBV 복제 억제 분석

본 개시 화합물에 의한 HBV 복제 억제를 HBV로 감염되거나 형질감염된 세포, 또는 HBV가 안정하게 통합된 세포, 예컨대 HepG2.2.15 세포에서 결정하였다(문헌[Sells et al. 1987]). 이 실시예에서, 10% 소 태아 혈청(FBS), 제네티신(Geneticin), L-글루타민, 페니실린 및 스트렙토마이신을 함유하는 세포 배양 배지에서 HepG2.2.15 세포를 유지하였다. HepG2.2.15 세포를 40,000개의 세포/웰의 밀도로 96웰 플레이트에 접종하고, 체커 박스 형식으로 약물들을 첨가함으로써 조합하여 또는 단독으로 0.5%의 최종 DMSO 농도의 연속 희석 화합물들로 처리하였다. 세포를 3일 동안 화합물과 함께 인큐베이션하고, 그 후 배지를 제거하고, 화합물을 함유하는 신선한 배지를 세포에 첨가하고, 추가 3일 동안 인큐베이션하였다. 제6일에 상청액을 제거하고, DNase로 37℃에서 60분 동안 처리하고, 이어서 75℃에서 15분 동안 효소를 불활성화시켰다. 캡시드화된 HBV DNA를 50℃에서 40분 동안 2.5 μg 프로테이나아제 K를 함유하는 용해 완충액(Affymetrix QS0010)에서 인큐베이션함으로써 비리온 및 공유 결합 HBV 폴리머라아제로부터 방출시켰다. HBV DNA를 0.2 M NaOH의 첨가에 의해 변성시키고, 제조사 권장 사항(Affymetrix)에 따라 분지형 DNA(BDNA) QuantiGene 분석 키트를 사용하여 검출하였다. 또한, QuickExtraction Solution(Epicentre Biotechnologies)을 사용한 캡시드화 HBV DNA 추출물의 증폭 및 정량화를 위한 형광 표지된 프로브 및 HBV DNA에 혼성화될 수 있는 HBV 특이적 PCR 프로브를 사용한 HBV DNA의 증폭을 기반으로 하여 qPCR을 사용하여 HBV DNA 수준을 정량화하였다. 또한, 단독의 또는 조합된 테스트 화합물들과 함께 인큐베이션한 HepG2.2.15 세포의 세포 생존력을 제조사 프로토콜(Promega)에 따라 CellTitre-Glo 시약을 사용하여 결정하였다. 배양 배지만을 함유하는 웰로부터의 평균 배경 신호를 모든 다른 샘플에서 차감하고, 하기 방정식 E1을 사용하여 0.5% DMSO로 처리된 HepG2.2.15 세포로부터의 신호에 대하여 정규화함으로써 각각의 화합물 농도에서의 억제 퍼센트를 계산하였다.

E1: 억제 % = ( DMSOave - Xi )/ DMSOave x 100%

여기서, DMSOave는 DMSO 대조군(0% 억제 대조군)으로 처리된 웰로부터 계산된 평균 신호이며, Xi는 개별 웰로부터 측정된 신호이다. 50% 억제 효과를 달성한 유효 농도인 EC₅₀ 값을 Graphpad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고) 및 하기 방정식 E2를 사용하여 비선형 피팅에 의해 결정하였다.

E2: Y = Ymin + ( Ymax - Ymin ) / (1+10( LogEC50 -X) x HillSlope )

여기서, Y는 억제 퍼센트 값을 나타내며, X는 화합물 농도의 로그를 나타낸다.

선택된 개시 화합물들을 상기 기술된 바와 같이 HBV 복제 분석(BDNA 분석)에서 분석하였으며, 이들 활성 화합물의 대표적인 군은 표 3에 예시되어 있다. 표 9는 선택된 화합물의 군에 대한 BDNA 분석으로 얻은 EC₅₀ 값을 보여준다.

[표 9]

개시된 주제는 본원에 설명된 특정 실시 형태 및 실시예에 의해 범주가 제한되는 것이 아니다. 실제로, 설명된 것 외에 본 발명의 다양한 변경이 전술한 설명 및 첨부된 도면으로부터 당업자에게 명백해질 것이다. 이러한 변경은 첨부된 청구범위의 범주에 속하는 것으로 의도된다.

본원에 인용된 모든 참고 문헌(예를 들어, 간행물, 특허 또는 특허 출원)은 마치 각각의 개별 참고 문헌(예를 들어, 간행물, 특허 또는 특허 출원)이 모든 목적을 위하여 그 전체가 참고로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 모든 목적을 위하여 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 다른 실시 형태가 하기 청구범위 내에 있다.

Claims (28)

1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염,
   [화학식 I]
   

   

   
   (여기서,
   R¹은 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리로서, 상기 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리는
   - N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고/하거나;
   - 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 6}알킬, OC_{1- 6}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며 ;
   더 구체적으로 R¹은 Cl, F, CN, CH₃, CF₃, 및 CF₂H로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
   R²는 H, C_{1- 4}알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   n은 0 또는 1의 정수이며;
   W는 CHR³ 또는 C=CH₂이며;
   R³은 H, F, OH, OH 또는 F로 선택적으로 치환된 C_{1- 4}알킬, CONHC_{1 - 4}알킬, CONHC_3-6시클로알킬, NHSO₂C_{1 - 4}알킬 및 NHSO₂C_{3 - 6}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   X는 CH₂ 및 O로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   Y는 NR⁵이며;
   R⁵는
   H,
   C_{1- 4}알킬,
   하나 이상의 F로 치환된 C_{1- 4}알킬,
   5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,
   상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, CH₂CF₃, C_{1- 4}알킬, OH, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, SO₂N(CH₃)₂ 및 C_3-4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
   Z는 C(=O) 및 C(=S)로 이루어진 군으로부터 선택됨).
2. 제1항에 있어서, R¹은 하나 이상의 염소 치환체로 치환된 페닐인, 더 구체적으로 R¹은 디클로로페닐인 화합물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R²는 H 또는 메틸인 화합물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 C=O인 화합물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X는 CH₂인 화합물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, W는 CH₂ 또는 CHF인 화합물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R⁵는 C_{1- 4}알킬, 및 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고, 헤테로원자는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되며, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 화합물.
8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R⁵는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬이며, 여기서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고, 헤테로원자는 N이며, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 화합물.
9. 제8항에 있어서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 페닐, 피리딜, 피라졸릴 또는 인돌릴이며, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 화합물.
10. 제9항에 있어서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 페닐, 피리딜, 피라졸릴 또는 인돌릴이며, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 할로겐, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃ 및 OCF₂H로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 화합물.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, HepG2.117 세포주에서 HBV DNA의 억제에 대하여 0.10 μM 미만의 EC₅₀을 나타내는 화합물.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염을 포함하고, 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
13. 의약으로 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물.
14. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물.
15. 만성 B형 간염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물.
16. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제12항의 제약 조성물의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
17. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에서의 동시 사용, 개별 사용 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 생성물로서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과는 상이하고, 상기 제1 화합물은 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물이며, 상기 제2 화합물은 또 다른 HBV 억제제인 생성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 제2 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 또 다른 HBV 억제제인 생성물: HBV 병용 약물, HBV 백신, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HBsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로필린 억제제, HBV 바이러스 침입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파르네소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민-2, 3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제, 및 다른 HBV 약물로부터 선택되는 치료제.
19. 다음의 단계 a), b), c), d), e) 및 f) 중 하나 이상의 단계를 포함하는, 화학식 I의 화합물의 제조 방법:
    a) NaBH₃CN의 존재 하에 하기 화학식 II:
    [화학식 II]
    

    

    의 화합물을 하기 화학식 III:
    [화학식 III]
    

    

    의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 IV]
    

    

    
    (여기서, n은 0 또는 1의 정수이며;
    G¹은 디클로로페닐이며;
    G²는 수소 또는 C_1-4알킬이며;
    G³은 수소 또는 C_1-4알킬이며;
    G⁴는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로서, 상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨);
    b) 요오드화칼륨(KI)의 존재 하에 하기 화학식 V:
    [화학식 V]
    

    

    의 화합물을 하기 화학식 VI:
    [화학식 VI]
    

    

    의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 VII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 VII]
    

    

    
    (여기서, n은 0이며,
    G¹은 디클로로페닐이며;
    G²는 수소 또는 C_{1- 4}알킬이며;
    G⁵는 수소 또는 C_1-4알킬이며;
    G⁶은 C_{2- 5}알키닐,
    N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리(상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, C_{3- 4}시클로알킬 및 SO₂N(CH₃)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)임);
    c) 하기 화학식 VIII:
    [화학식 VIII]
    

    

    의 화합물을, 선택적으로 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데스-7-엔(DBU)의 존재 하에, 1,5,7-트리아자바이시클로[4.4.0]데스-5-엔(TBD) 또는 트리메틸알루미늄(Al(CH₃)₃)과 반응시켜 하기 화학식 IX:
    [화학식 IX]
    

    

    의 화합물을 형성하는 단계
    (여기서, R은 수소 또는

    

    이며;
    n은 0 또는 1의 정수이며;
    G¹은 디클로로페닐 또는 tert-부톡시드이며;
    G²는 수소 또는 C_1-4알킬이며;
    G⁷은 C_1-4알킬,
    하나 이상의 F로 치환된 C_1-4알킬,
    N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리(상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, C_{3- 4}시클로알킬 및 SO₂N(CH₃)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨),
    C_2-5알키닐이며;
    G⁸은 수소 또는 C_1-4알킬임);
    d) 비-친핵성 염기, 더 구체적으로 탄산세슘(Cs₂CO₃) 또는 수소화나트륨(NaH)의 존재 하에 하기 화학식 X:
    [화학식 X]
    

    

    의 화합물을 하기 화학식 XI:
    [화학식 XI]
    

    

    의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 XII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XII]
    

    

    
    (여기서, n은 0 또는 1의 정수이며;
    G¹은 디클로로페닐이며;
    G²는 수소 또는 C_1-4알킬이며;
    G⁹는 수소 또는 C_1-4알킬이며;
    G¹⁰은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리(상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_1-4알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H, C_{3- 4}시클로알킬, C(=O)Ot-Bu 및 SO₂N(CH₃)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)이며;
    L은 브로마이드, 클로라이드 또는 요오다이드임);
    e) 하기 화학식 XIII:
    [화학식 XIII]
    

    

    의 화합물을 강산, 더 구체적으로 염산(HCl) 또는 트리플루오로아세트산(TFA)과 반응시켜 하기 화학식 XIV의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XIV]
    

    

    
    (여기서, n은 0 또는 1의 정수이며;
    G²는 수소 또는 메틸이며;
    G¹¹은 H,
    C_1-4알킬,
    하나 이상의 F로 치환된 C_1-4알킬,
    5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리로 치환된 C_{1- 4}알킬(여기서, 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하며,
    상기 5 내지 10원 단환식 또는 이환식 방향족 고리는 수소, 할로겐, CN, CF₃, CF₂H, CFH₂, CF₂CH₃, C_{1- 4}알킬, OC_{1- 4}알킬, OCF₃, OCF₂H 및 C_{3- 4}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)이며;
    Q는 CH₂, CHF, CH(CH₂OH), CH(CH₂F), C=CH₂, 또는 CHNHSO₂CH₃이며;
    R은 CH₂ 또는 O이며;
    T는 C=O 또는 C=S임);
    f) 비-친핵성 염기, 더 구체적으로 탄산나트륨(Na₂CO₃), 트리에틸아민(Et₃N) 또는 디이소프로필에틸아민(DIPEA)의 존재 하에, 하기 화학식 XIV:
    [화학식 XIV]
    

    

    의 화합물을 하기 화학식 XV:
    [화학식 XV]
    

    

    의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 XVI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XVI]
    

    

    
    (여기서, R₁은 디클로로페닐이며, G², n, Q, R, T 및 G¹¹은 단계 e)에서 정의됨)
    (단,
    방법이 단계 a를 포함하는 경우, 방법은 단계 c를 추가로 포함하고,
    방법이 단계 b를 포함하는 경우, 방법은 단계 c를 추가로 포함하고,
    방법이 단계 e를 포함하는 경우, 방법은 단계 f를 추가로 포함함).
20. 하기 화학식 Ia의 화합물, 또는 이의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 또는 제약상 허용가능한 염 형태:
    [화학식 Ia]
    

    

    
    (여기서,
    R^1a는 C_{6- 10}아릴 또는 5 또는 6원 헤테로아릴로서, R^1a는 메틸 또는 플루오로로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환되며;
    R^2a는 수소 및 C_{1- 6}알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
    R^3a는 Cl, CN, 및 C_{1- 4}할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R^4a는 수소, 히드록시, 플루오로, 및 메틸로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    X^a는 CF 또는 N임).
21. 제20항에 있어서, R^1a는 다음으로부터 독립적으로 선택되는 화합물: 1H-1,2,4-트리아졸-3-일, 1,2,4-옥사디아졸-5-일, 1H-테트라졸-5-일, 1H-피라졸-3-일, 1-메틸-1H-피라졸-3-일, 1-메틸-1H-피라졸-5-일, 이속사졸-3-일, 이속사졸-5-일, 또는 페닐.
22. 제20항 또는 제21항에 있어서, R^3a는 Cl, CN, 또는 C_{1- 4}할로알킬인 화합물.
23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R^2a는 수소 또는 메틸인 화합물.
24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,

    

    는 3-시아노-4-플루오로페닐, 3-클로로-4-플루오로페닐, 또는 4-플루오로-3-트리플루오로메틸페닐인 화합물.
25. 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    

    

    
    

    

    
    및 이들의 제약상 허용가능한 염, N-옥시드, 또는 용매화물.
26. 하나 이상의 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물.
27. HBV 감염 치료를 필요로 하는 개체에서의 HBV 감염의 치료 방법으로서, 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제26항의 제약 조성물의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
28. HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제26항의 제약 조성물의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.