KR20210149807A

KR20210149807A - 혈액암의 치료에서 이중특이적 CD123 x CD3 디아바디의 투여 요법

Info

Publication number: KR20210149807A
Application number: KR1020217036260A
Authority: KR
Inventors: 잔 케네쓰 데이빗슨; 이안 렌트; 크리슈난 삼파타쿠마르; 랄프 프로만 알더슨; 모테-모스 로스 라; 존 마크 위긴턴
Original assignee: 마크로제닉스, 인크.
Priority date: 2019-04-10
Filing date: 2020-04-08
Publication date: 2021-12-09
Also published as: SG11202111192TA; US20220213203A1; TW202104263A; AU2020272734A1; MX2021012263A; IL287095A; BR112021020265A2; JP2022526640A; CN113728009A; CA3136255A1; EP3953391A1; WO2020210277A1

Abstract

본 발명은 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수형성 이상 증후군 (MDS)과 같은 혈액암을 가진 환자에게 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 투여하기 위한 투여 요법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수형성 이상 증후군 (MDS)과 같은 혈액암을 가진 환자에게 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 ("PD-1 또는 PD-1 리간드 결합 분자")와 함께 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 투여하기 위한 투여 요법에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 "DART-A"에 대한 그러한 요법의 사용과 관련된다.

Description

혈액암의 치료에서 이중특이적 CD123 x CD3 디아바디의 투여 요법

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 미국 특허 출원 일련 번호 제 63/001,388호 (2020년 3월 29일에 출원됨; 계류중), 제 62/831,969호 (2019년 4월 10일에 출원됨; 계류중); 제 62/831,979호 (2019년 4월 10일에 출원됨; 계류중); 제 62/929,381호 (2019년 11월 1일에 출원됨; 계류중); 및 제 929,401호 (2019년 11월 1일에 출원됨; 계류중)에 대한 우선권을 주장하며, 상기 출원은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

서열 목록에 대한 언급:

본 출원은 컴퓨터 판독 가능한 매체에 개시된, 37 C.F.R. 1.821 (이하 참조)에 따르는 하나 이상의 서열 목록을 포함하며 (파일명: 1301_0162P3_PCT_ST25.txt, 2020년 3월 29일에 생성되었고, 35,519 바이트의 크기를 가짐), 상기 파일은 본원에 그 전문이 참조로 포함된다.

발명의 분야:

본 발명은 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia, AML) 또는 골수형성 이상 증후군 (myelodysplastic syndrome, MDS)과 같은 혈액암(hematologic malignancy)을 가진 환자에게 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 투여하기 위한 투여 요법(dosing regimen)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수형성 이상 증후군 (MDS)과 같은 혈액암을 가진 환자에게 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 ("PD-1 또는 PD-1 리간드 결합 분자")와 함께 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 투여하기 위한 투여 요법에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 "DART-A"에 대한 그러한 요법의 사용과 관련된다.

I. AML 및 MDS

AML 및 MDS는 일반적으로 휴면기인 (즉, 신속하게 분할하지 않는 세포) 백혈병 줄기 세포 (LSC)의 작은 집단에 의해 발생하고 영구화되는 것으로 여겨지며 따라서 세포 사망 (세포자멸사) 및 종래의 화학요법제에 내성인 것으로 여겨진다. LSC는 정상인 골수에서 상응하는 정상적인 조혈 줄기 세포 집단에는 존재하지 않는 고수준의 CD123 발현을 특징으로 한다 (Jin, W. et al. (2009) "Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK", Blood 113:6603-6610; Jordan, C.T. et al. (2000) "The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells", Leukemia 14:1777-1784). CD123은 AML의 45%-95%에서, 털세포 백혈병 (HCL)의 85%에서, 그리고 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL)의 40%에서 발현된다. CD123 발현은 또한 다수의 다른 악성/전악성: 만성 골수성 백혈병 (CML) 전구 세포 (급격한 위기 CML 포함); 호지킨 리드 스턴버그(Hodgkin's Reed Sternberg, RS) 세포; 형질전환된 비-호지킨 림프종 (NHL); 일부 만성 림프구성 백혈병 (CLL) (CD11c+); 급성 T 림프모세포성 백혈병의 하위세트 (T-ALL) (16%, 대부분 미성숙, 대부분 성인), 형질세포양 수지상 세포(pDC) (DC2) 악성 및 CD34+/CD38- 골수형성 이상 증후군 (MDS) 골수 세포 악성과도 관련된다.

AML은 골수에서 형질전환된 골수성 전구 세포의 증식 및 축적을 특징으로 하며, 궁극적으로 조혈 기능부전으로 이어지는 클론성 질환이다. AML의 발생은 연령에 따라 증가하며, 고령의 환자가 전형적으로 젊은 환자보다 더 나쁜 치료 결과를 나타낸다 (Robak, T. et al. (2009) "Current And Emerging Therapies For Acute Myeloid Leukemia", Clin. Ther. 2:2349-2370). 유감스럽게도, 현재, AML이 있는 대부분의 성인은 그들의 질병으로 사망한다.

AML에 대한 치료는 초기에 관해의 유도에 초점을 맞춘다 (유도 요법). 일단 관해가 이루어진 후에, 치료는 그러한 관해를 확보하는 데 초점을 이동하고 (관해 후 또는 강화 요법), 일부 경우에는 유지 요법에 초점을 맞춘다. AML에 대한 표준 관해 유도 패러다임은 안트라사이클린(anthracycline)/시타라빈(cytarabine) 조합을 이용한 화학요법과, 이어서 집중적인 치료를 견디는 환자의 능력 및 화학요법 단독으로의 치유 가능성에 따라 좌우되는 강화 화학요법 (보통 인큐베이션 기간 중에 사용된 것과 동일한 약물의 더 많은 용량으로 이루어짐) 또는 인간 조혈 줄기 세포 이식 중 어느 하나가 이어진다 (참고, 예컨대, Roboz, G.J. (2012) "Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia", Curr. Opin. Oncol. 24:711-719).

유도 요법에 자주 사용된 작용제로는 시타라빈 및 안트라사이클린을 들 수 있다. AraC로도 알려져 있는 시타라빈은 암 세포 (및 다른 신속하게 분할하는 정상 세포)를 DNA 합성을 간섭함으로써 사멸시킨다. AraC 치료와 관련된 부작용으로는 감소된 백혈구 생성의 결과로서 감염에 대한 감소된 내성; 감소된 혈소판 생성의 결과로서 출혈; 및 적혈구의 잠재적 감소로 인한 빈혈을 들 수 있다. 다른 부작용으로는 메스꺼움 및 구토를 들 수 있다. 안트라사이클린 (예컨대, 다우노루비신, 독소루비신, 및 이다루비신)은 DNA 및 RNA 합성의 억제, DNA의 고차 구조의 파괴, 및 세포를 손상시키는 유리 산소 라디칼의 생성을 포함한 여러 작용 모드를 가진다. 안트라사이클린의 가장 중대한 부작용은 심장독성으로, 그것은 투여되는 평생 용량 및 그것의 유용성을 어느 정도까지 상당히 제한한다.

그러므로, 유감스럽게도, 새롭게 진단된 AML의 치료에서 실질적인 진전에도 불구하고, 20% 내지 40%의 환자가 표준 유도 화학요법으로 관해를 이루지 못하며, 첫 번째 완전한 관해에 진입한 환자 중 50% 내지 70%가 3년 내에 재발될 것으로 예상된다. 재발시, 또는 내성 질환을 가진 환자에 대한 최적의 전략은 불확실한 채로 남아 있다. 줄기 세포 이식은 첫 번째 또는 후속 관해 중인 AML 환자에서 항-백혈병 요법의 가장 효과적인 형태로서 확립되었다 (Roboz, G.J. (2012) "Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia", Curr. Opin. Oncol. 24:711-719).

II. CD123

CD123 (인터류킨 3 수용체 알파, IL-3Ra)은 40 kDa 분자이며 인터류킨 3 수용체 복합체의 일부분이다 (Stomski, F.C. et al. (1996) "Human Interleukin-3 (IL-3) Induces Disulfide-Linked IL-3 Receptor Alpha- And Beta-Chain Heterodimerization, Which Is Required For Receptor Activation But Not High-Affinity Binding", Mol. Cell. Biol. 16(6):3035-3046). 인터류킨 3 (IL-3)은 다능성 줄기 세포의 적혈구, 골수성 및 림프성 전구세포로 조기 분화를 유도한다. CD123은 CD34+ 헌신된 전구세포 상에서 발현되지만 (Taussig, D.C. et al. (2005) "Hematopoietic Stem Cells Express Multiple Myeloid Markers: Implications For The Origin And Targeted Therapy Of Acute Myeloid Leukemia", Blood 106:4086-4092), CD34+/CD38- 정상 조혈 줄기세포에 의해서는 발현되지 않는다. CD123은 호염기세포, 비만 세포, 형질세포양 수지상 세포에 의해 발현되며, 단핵세포, 대식세포 및 호산성 세포에 의해 약간 발현되고, 호중구 및 거핵세포에 의해서는 발현이 적거나 없다. 일부 비조혈 조직 (태반, 고환의 라이디히 세포(Leydig cell), 특정 뇌세포 요소 및 일부 내피 세포)은 CD123을 발현한다; 그러나, 발현은 거의 세포질에서 일어난다.

CD123은 백혈병 모세포 및 백혈병 줄기 세포 (LSC)에 의해 발현되는 것으로 보고된다 (Jordan, C.T. et al. (2000) "The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells", Leukemia 14:1777-1784; Jin, W. et al. (2009) "Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK", Blood 113:6603-6610). 인간 정상 전구체 집단에서, CD123은 조혈 전구세포 (HPC)의 하위세트에 의해 발현되지만 정상 조혈 세포 (HSC)에 의해서는 발현되지 않는다. CD123은 또한 형질세포양 수지상 세포 (pDC) 및 호염기성 세포에 의해 발현되며, 더 적은 정도로, 단핵세포 및 호산성 세포에 의해 발현된다 (Lopez, A.F. et al. (1989) "Reciprocal Inhibition Of Binding Between Interleukin 3 And Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor To Human Eosinophils", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:7022-7026; Sun, Q. et al. (1996) "Monoclonal Antibody 7G3 Recognizes The N-Terminal Domain Of The Human Interleukin-3 (IL-3) Receptor Alpha Chain And Functions As A Specific IL-3 Receptor Antagonist", Blood 87:83-92; Munoz, L. et al. (2001) "Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies", Haematologica 86(12):1261-1269; Masten, B.J. et al. (2006) "Characterization Of Myeloid And Plasmacytoid Dendritic Cells In Human Lung", J. Immunol. 177:7784-7793; Korpelainen, E.I. et al. (1995) "Interferon-Gamma Upregulates Interleukin-3 (IL-3) Receptor Expression In Human Endothelial Cells And Synergizes With IL-3 In Stimulating Major Histocompatibility Complex Class II Expression And Cytokine Production", Blood 86:176-182).

CD123은 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 골수형성 이상 증후군 (MDS)을 포함한 광범위한 혈액암에서 악성 세포 상에서 과다발현되는 것으로 보고되었다 (Munoz, L. et al. (2001) "Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies", Haematologica 86(12):1261-1269). CD123의 과다발현은 AML의 더 빈약한 진단과 관련된다 (Tettamanti, M.S. et al. (2013) "Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor", Br. J. Haematol. 161:389-401).

III. CD3

CD3은 4개의 뚜렷한 사슬로 구성된 T 세포 공-수용체이다 (Wucherpfennig, K.W. et al. (2010) "Structural Biology Of The T-Cell Receptor: Insights Into Receptor Assembly, Ligand Recognition, And Initiation Of Signaling", Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2(4):a005140; pages 1-14). 포유류에서, 복합체는 CD3γ 사슬, CD3δ 사슬, 및 2개의 CD3ε 사슬을 함유한다. 이들 사슬은 T 림프구에서 활성화 신호를 생성하기 위하여 T 세포 수용체 (TCR)로서 알려진 분자와 회합된다. CD3의 경우에, TCR은 적절하게 조립하지 못하고 분해된다 (Thomas, S. et al. (2010) "Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer", Immunology 129(2):170-177). CD3은 모든 성숙한 T 세포의 막에 결합되며, 실제로 다른 세포 유형에는 결합하지 않는 것으로 나타난다 (참고, Janeway, C.A. et al. (2005) In: Immunobiology: The Immune System In Health And Disease", 6th ed. Garland Science Publishing, NY, pp. 214- 216; Sun, Z. J. et al. (2001) "Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γ Heterodimer", Cell 105(7):913-923; Kuhns, M.S. et al. (2006) "Deconstructing The Form And Function Of The TCR/CD3 Complex", Immunity. 2006 Feb;24(2):133-139).

IV. 프로그래밍된 사멸-1 ("PD-1") 막 단백질

프로그래밍된 사멸-1 ("PD-1", 또한 "CD279"로 알려짐)은 면역 반응을 광범위하게 부정적으로 조절하는 T-세포 조절자의 확장된 CD28/CTLA4 패밀리의 대략 31 kD 1형 막 단백질이다 (Ishida, Y. et al. (1992) "Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death", EMBO J. 11:3887-3895; 미국 특허 출원 공개 번호 2007/0202100호; 2008/0311117호; 2009/00110667호; 미국 특허 제 6,808,710호; 제 7,101,550호; 제 7,488,802호; 제 7,635,757호; 제 7,722,868호; PCT 공개 번호 WO 01/14557).

PD-1은 활성화된 T 세포, B 세포, 및 단핵세포 상에서 발현되고 (Agata, Y. et al. (1996) "Expression Of The PD-1 Antigen On The Surface Of Stimulated Mouse T And B Lymphocytes", Int. Immunol. 8(5):765-772; Yamazaki, T. et al. (2002) "Expression Of Programmed Death 1 Ligands By Murine T-cells And APC", J. Immunol. 169:5538-5545) 천연 살해 (NK) T-세포에서 저수준으로 발현된다 (Nishimura, H. et al. (2000) "Facilitation Of Beta Selection And Modification Of Positive Selection In The Thymus Of PD-1-Deficient Mice", J. Exp. Med. 191:891-898; Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity", Semin. Cancer Biol. 17(4):288-298).

PD-1은 B7-H1 및 B7-DC (또한 PD-L1 및 PD-L2로서도 알려짐)에 결합함으로써 면역 체계의 억제를 매개한다 (Flies, D.B. et al. (2007) "The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity", J. Immunother. 30(3):251-260; 미국 특허 제 6,803,192호; 제 7,794,710호; 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0059051; 2009/0055944; 2009/0274666; 2009/0313687; PCT 공개 번호 WO 01/39722; WO 02/086083).

B7-H1 및 B7-DC는 많은 유형의 인간 및 쥐과 조직, 예컨대 심장, 태반, 근육, 태아 간, 비장, 림프절, 및 흉선뿐만 아니라 쥐과의 간, 폐, 신장, 췌장의 섬세포 및 소장의 표면에서 광범위하게 발현된다 (Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity", Semin. Cancer Biol. 17(4):288-298). 인간에서, B7-H1 단백질 발현은 인간 내피 세포에서 (Chen, Y. et al. (2005) "Expression of B7-H1 in Inflammatory Renal Tubular Epithelial Cells", Nephron. Exp. Nephrol. 102:e81-e92; de Haij, S. et al. (2005) "Renal Tubular Epithelial Cells Modulate T-Cell Responses Via ICOS-L And B7-H1" Kidney Int. 68:2091-2102; Mazanet, M.M. et al. (2002) "B7-H1 Is Expressed By Human Endothelial Cells And Suppresses T-Cell Cytokine Synthesis", J. Immunol. 169:3581-3588), 심근에서 (Brown, J.A. et al. (2003) "Blockade Of Programmed Death-1 Ligands On Dendritic Cells Enhances T-Cell Activation And Cytokine Production", J. Immunol. 170:1257-1266), 및 융합세포 영양막에서 (Petroff, M.G. et al. (2002) "B7 Family Molecules: Novel Immunomodulators At The Maternal-Fetal Interface", Placenta 23:S95-S101) 발견되었다. 분자는 또한 일부 조직의 체류 대식세포에 의해, 인터페론 (IFN)-γ 또는 종양 괴사 인자 (TNF)-α로 활성화된 대식세포에 의해 발현되고 (Latchman, Y. et al. (2001) "PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation", Nat. Immunol 2:261-268), 종양에서 발현된다 (Dong, H. (2003) "B7-H1 Pathway And Its Role In The Evasion Of Tumor Immunity", J. Mol. Med. 81:281-287).

B7-H1과 PD-1 사이의 상호작용은 T- 및 B-세포에 대한 중요한 부정적 공동자극 신호 (Martin-Orozco, N. et al. (2007) "Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity", Semin. Cancer Biol. 17(4):288-298) 및 세포 사멸 인듀서로서의 기능을 제공하는 것으로 밝혀졌다 (Ishida, Y. et al. (1992) "Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death", EMBO J. 11:3887-3895; Subudhi, S.K. et al. (2005) "The Balance Of Immune Responses: Costimulation Verse Coinhibition", J. Molec. Med. 83:193-202). 보다 구체적으로, 저농도의 PD-1 수용체와 B7-H1 리간드 사이의 상호작용은 항원 특이적 CD8⁺ T-세포의 증식을 강력하게 억제하는 억제 신호의 전파를 초래하고; 더 높은 농도에서 PD-1과의 상호작용은 T-세포 증식을 억제하지 않지만 다중 사이토카인의 생성을 현저하게 감소시키는 것으로 나타났다 (Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily", Nature Rev. Immunol. 2:116-126). 휴식 및 이전에 활성화된 CD4 및 CD8 T-세포 둘 다에 의한, 심지어 제대혈로부터의 나이브 T-세포에 의한 T-세포 증식 및 사이토카인 생성은 가용성 B7-H1-Fc 융합 단백질에 의해 억제되는 것으로 밝혀졌다 (Freeman, G.J. et al. (2000) "Engagement Of The PD-1 Immunoinhibitory Receptor By A Novel B7 Family Member Leads To Negative Regulation Of Lymphocyte Activation", J. Exp. Med. 192:1-9; Latchman, Y. et al. (2001) "PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation", Nature Immunol. 2:261-268; Carter, L. et al. (2002) "PD-1:PD-L Inhibitory Pathway Affects Both CD4(+) and CD8(+) T-cells And Is Overcome By IL-2", Eur. J. Immunol. 32(3):634-643; Sharpe, A.H. et al. (2002) "The B7-CD28 Superfamily", Nature Rev. Immunol. 2:116-126).

PD-1에 결합하여 그것이 천연 리간드에 결합하는 능력을 방해함으로써 PD-1의 면역 체계를 억제하는 능력을 억제하는 분자 (예컨대, 항체, 등); 그러한 분자는 그러므로 활성 면역 반응을 촉진한다. 역으로, PD-1의 천연 리간드 (특히 B7-H1)에 결합하여 그것의 PD-1에 결합하는 능력을 방해하는 분자 (예컨대, 항체, 등)는 PD-1의 면역 체계를 억제하는 능력을 억제한다; 그러한 분자는 그러므로 또한 활성 면역 반응을 촉진한다.

그러므로 T-세포 활성화 및 증식을 억제하는 데 B7-H1 및 PD-1의 역할은 이들 생체분자가 염증 및 암의 치료를 위한 치료 표적으로서 작용할 것임을 시사하였다. 그러므로, 감염 및 종양을 치료하고 적응성 면역 반응을 상향 조절하기 위하여 항-PD-1 및 항-B7-H1 항체와 같은 PD-1 또는 PD-L1 결합 분자의 사용이 제안되었다 (참고, 예컨대, Nishijima, T.F., et al. (2017) "Safety and Tolerability of PD-1/PD-L1 Inhibitors Compared with Chemotherapy in Patients with Advanced Cancer: A Meta-Analysis", The oncologist 22(4):470-479; Rao, M., et al. (2017) "Anti-PD-1/PD-L1 therapy for infectious diseases: learning from the cancer paradigm", Intnl. J. of Infect. Dis. 56:221-228). PD-1과 B7-H1에 특이적으로 결합할 수 있는 항체가 기술되었다 (참고, 예컨대, 표 3-4).

V. 이중특이적 디아바디

비-단일특이적 디아바디의 제공은 단일특이적 천연 항체를 뛰어넘는 상당한 장점: 상이한 에피토프를 발현하는 세포를 공동 결찰하고 공동 국지화하는 능력을 제공한다. 그러므로 이중특이적 디아바디는 치료법 및 면역진단을 포함하여 광범위하게 응용된다. 이중특이성은 다양한 응용에서 디아바디의 설계 및 조작에서 큰 유연성을 허용하여, 다량체 항원에 대한 향상된 결합력, 상이한 항원의 교차 결합, 및 두 표적 항원의 존재에 좌우되는 특정 세포 유형으로 지정된 표적화를 제공한다. 특히 중요한 것은 상이한 세포의 공동 결찰, 예를 들어, 이펙터 세포, 예컨대 세포독성 T 세포와 종양 세포의 교차 결합이다 (Staerz et al. (1985) "Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells", Nature 314:628-631, 및 Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-cells Mediated By A Bispecific Diabody", Protein Eng. 9:299-305). 종양과 이펙터 세포의 교차 결합에 의해, 디아바디는 이펙터 세포를 종양 세포와 근접한 곳으로 데려갈뿐만 아니라, 효과적인 종양 사멸을 유도한다 (참고, 예컨대, Cao et al. (2003) "Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics", Adv. Drug. Deliv. Rev. 55:171-197).

그러한 비-단일특이적 디아바디의 형성은 둘 이상의 구별되고 상이한 폴리펩타이드의 성공적인 조립을 필요로 한다 (즉, 그러한 형성은 디아바디가 상이한 폴리펩타이드 사슬 종의 헤테로다이머화를 통해 형성될 것을 필요로 한다). 이런 사실은 동일한 폴리펩타이드 사슬의 호모다이머화를 통해 형성되는 단일 특이적 디아바디와는 대조적이다. 비-단일특이적 디아바디를 형성하기 위해서는 적어도 2개의 다른 폴리펩타이드 (즉, 2개의 폴리펩타이드 종)이 제공되어야 하기 때문에, 그리고 그러한 폴리펩타이드의 호모다이머화는 비활성 분자로 이어지기 때문에 (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588), 그러한 폴리펩타이드의 생성은 동일한 종의 폴리펩타이드 사이의 공유 결합을 방지하는 (즉, 호모다이머화를 방지하기 위한) 방법으로 이루어져야 한다 (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588). 그러므로 기술분야에는 그러한 폴리펩타이드의 비공유 회합이 교시되어 있다 (참고, 예컨대, Olafsen et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications", Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27; Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain", Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588; Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672).

비공유적으로 회합된 폴리펩타이드로 구성된 이중특이적 디아바디는 불안정하고 비기능성 모노머로 빠르게 해리된다 (참고, 예컨대, Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672). 안정적인, 공유 결합된 헤테로다이머 비-단일특이적 디아바디가 기술되었다 (참고, 예컨대, WO 2006/113665; WO/2008/157379; WO 2010/080538; WO 2012/018687; WO/2012/162068; Johnson, S. et al. (2010) "Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion", J. Molec. Biol. 399(3):436-449; Veri, M.C. et al. (2010) "Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold", Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943; Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma", Blood 117(17):4542-4551). 그러한 디아바디는 하나 이상의 시스테인 잔기를 사용된 폴리펩타이드 종의 각각에 포함시킨다. 예를 들어, 그러한 구성물의 C-말단에 시스테인 잔기의 첨가는 폴리펩타이드 사슬 사이의 이황화 결합을 허용하여, 이가 분자의 결합 특성을 간섭하지 않으면서 결과적으로 얻어지는 헤테로다이머를 안정화시킨다.

CD123-발현 악성 세포의 T 세포 재지향된(redirected) 세포 사멸을 매개할 수 있는 CD123 및 CD3을 표적화하는 이중특이적 디아바디가 기술되었다 (참고, 예컨대, WO 2015/026892). 그러한 성공에도 불구하고, 혈액암의 치료를 위해 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 투여하기 위한 투여 요법, 특히 예를 들어 사이토카인 방출 증후군 ("CRS")을 포함한 바람직하지 못한 부작용을 최소화하고, 면역 체계를 자극하는 투여 요법을 개발하기 위한 충족되지 못한 요구가 남아 있다.

본 발명은 하기에서 기술되는 것과 같이, 이러한 요구 및 기타 요구를 직접적으로 해결한다.

상세하게, 발명은 그것을 필요로 하는 대상체에게 CD123 x CD3 결합 분자를 투여하는 단계를 포함하는 혈액암 치료 방법을 제공하며, 여기서:

(I) CD123 x CD3 결합 분자는 SEQ ID NO:21의 아미노산 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬 및 SEQ ID NO:23의 아미노산 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬로 이루어지는 디아바디이고; 및

(II) 방법은 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)을 포함하며, 여기서:

(A) I7DP의 제1일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 30 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;

(B) I7DP의 제2일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 60 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;

(C) I7DP의 제3일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 100 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 주입에 의해 투여되고;

(D) I7DP의 제4일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 200 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;

(E) I7DP의 제5일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;

(F) I7DP의 제6일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며; 및

(G) I7DP의 제7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여된다.

발명은 추가적으로 대상체의 혈액암의 치료에 사용하기 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 관한 것으로, 여기서:

(II) 사용은 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)을 포함하며, 여기서:

(B) I7DP의 제2일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 60 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;

(D) I7DP의 제4일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 200 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;

(F) I7DP의 제6일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고; 및

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 방법 또는 용도는 하나 이상의 추가적인 7-일 치료 기간 (A7DP)을 포함하고, 하나 이상의 A7DP(들)의 각각의 제1-7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, I7DP의 제6일 및 7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, I7DP의 제6일 및 7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, I7DP의 제6일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되고, I7DP의 제7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 3개의 A7DP를 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것이다.

발명은 추가적으로 추가의 4, 8, 12, 16, 또는 20개의 A7DP를 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 A7DP의 적어도 하나에는 하나 이상의 추가의 7-일 치료 기간 (F7DP)이 이어지며, 하나 이상의 F7DP의 각각의 제1-4일에 CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 투여되고, 하나 이상의 F7DP의 각각의 제5-7일에 대상체에게는 CD123 x CD3 결합 분자가 제공되지 않는다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 F7DP의 각각의 제1-4일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, CD123 x CD3 결합 분자는 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 4개의 F7DP를 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것이다.

발명은 추가적으로 추가의 4, 8, 12, 16, 또는 20개의 F7DP를 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것이다.

발명은 추가적으로 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1에 결합할 수 있는 상기 분자는 PD-1에 결합하는 항체의 에피토프 결합 도메인을 포함하고, PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 분자는 PD-1의 천연 리간드에 결합하는 항체의 에피토프 결합 도메인을 포함한다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 2주마다 1회 (Q2W), 3주마다 1회 (Q3W), 또는 4주마다 1회 (Q4W)로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 제15일에 투여가 시작된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 제15일에 시작하여 Q2W로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 하나 이상의 F7DP의 제1일에 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는:

(a) 펨브롤리주맙(pembrolizumab)의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(b) 니볼루맙(nivolumab)의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(c) 세미플리맙(cemiplimab)의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(c) PD-1 mAb 1의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(d) 아테졸리주맙(atezolizumab)의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(e) 아벨루맙(avelumab)의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(f) 두르발루맙(durvalumab)의 VH 도메인 및 VL 도메인; 또는

(h) 표 3 또는 4에 제공된 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인

을 포함한다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 PD-1 mAb 1의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 PD-1 mAb 1 IgG4이다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 결합 분자는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 용량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 마지막 용량 후에 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자의 하나 이상의 용량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것이다.

발명은 추가적으로 CD123 x CD3 결합 분자의 투여 전, 중 및/또는 후에 정맥내 주입에 의해 코르티코스테로이드 및/또는 항IL-6 또는 항IL-6R 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것이다. 특히 코르티코스테로이드는 덱사메타손, 메틸프레드니솔론 및 하이드로코르티손으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 덱사메타손(dexamethasone)이 예방적으로 투여된다. 구체적으로, 덱사메타손은 CD123 x CD3 결합 분자의 투여 전에 약 10 mg 내지 약 20 mg의 투여량으로 투여된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, CD123 x CD3 결합 분자의 투여 중에 및/또는 후에 약 4 mg의 투여량으로 덱사메타손을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, CD123 x CD3 결합 분자의 투여 후에 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 구체적으로, 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체는 토실리주맙(tocilizumab) 또는 실툭시맙(siltuximab)이며, 보다 구체적으로, 항-IL-6R 항체는 약 4 mg/kg 내지 약 8 mg/kg의 투여량으로 투여되는 토실리주맙이다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 혈액암은: 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 CML과 관련된 아벨슨 종양 유전자 (Bcr-ABL 전좌)의 모세포성 위기를 포함한 CML, 골수형성 이상 증후군 (MDS), 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL), 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL), 리히터 증후군 또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL)의 리히터 변환을 포함한 CLL, 털세포 백혈병 (HCL), 모세포 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프구성 림프종 (SLL)을 포함한 비호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 혈액암은 급성 골수성 백혈병이다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 혈액 신생물은 골수형성 이상 증후군이다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 혈액 신생물은 급성 T 림프모세포성 백혈병이다.

발명은 추가적으로 모든 그러한 상기 표시된 방법 및 용도의 구체예에 관한 것으로, 대상체는 인간이다.

도 1은 2개의 사슬 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디의 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬의 전체 구조, 예컨대 DART-A를 도시한다.
도 2A-2D는 AML 환자의 PBMC에 대한 본 발명의 CD123 x CD3 DART® 분자의 활성을 도시한다. 일차 PBMC (82% 블라스트(blast) 함유)가 DART-A, FITC x CD3 대조군 DART® 분자, 또는 인산염 완충 식염수 (PBS)로 144시간 동안 처리되었다. E:T 세포 비율은 연구를 시작할 때 PBMC 중의 블라스트 및 T 세포 백분율로부터 측정되는 바 대략 1:300이었다. 도 2A: 백혈병 모세포 (CD45+/CD33+)의 절대 수; 도 2B: T 세포 (CD4+ 및 CD8+)의 절대 수; 도 2C: T-세포 활성화 (CD25 발현); 도 2D: 배양 상층액에서 측정된 사이토카인.
도 3A-3C는 AML 환자로부터의 PBMC 및 모세포의 분석을 도시한다. 도 3A는 5, 50, 또는 500 pg/ml DART-A와의 48-시간 인큐베이션 후의 IFN-γ 방출을 나타낸다. 도 3B는 5, 50, 또는 500 pg/ml DART-A와의 48-시간 인큐베이션 후에 CD4⁺ 및 CD8⁺ T-세포의 세포 표면 상에서의 PD-1 상향조절을 나타낸다. 도 3C는 DART-A와의 48시간 인큐베이션 후에 AML 블라스트의 표면 상에서의 PD-L1 상향조절을 나타낸다.
도 4A-4D는 항-PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4; 10 μg/ml)가 있거나 없는 DART-A (8.23, 24.69, 74.07, 222.22, 666.67, 또는 2000 pg/ml), 또는 동형 대조군 항체와의 인큐베이션 후에, 대표적인 AML-PMBC 샘플로부터 얻어진 CD4⁺ T-세포 (도 4A 및 4B) 또는 CD8⁺ T-세포 (도 4C 및 4D) 각각에 대한 PD-1의 세포 표면 발현 및 퍼센트 양성을 도시한다.
도 5A-5D는 항-PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4; 10 μg/ml)가 있거나 없는 DART-A (8.23, 24.69, 74.07, 222.22, 666.67, 또는 2000 pg/ml), 또는 동형 대조군 항체와, 48 또는 72시간 동안 인큐베이션한 후에, AML-PBMC의 대표적인 샘플로부터의 GM-CSF (도 5A), IFN-γ (도 5B), IL-2 (도 5C) 및 TNF-α (도 5D)의 시험관내 방출을 도시한다.
도 6은 항-PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4; 10 g/ml)가 있거나 없이 DART-A (8.23, 24.69, 74.07, 222.22, 666.67, 또는 2000 pg/ml)로 시험관내에서 72시간 처리한 후에 AML-PBMC로부터 얻어진 비-T 세포의 사멸의 향상을 도시한다.
도 7은 1-단계 (LID-1 도식) 또는 2-단계 (LID-2 도식) 도입 투약 전략을 사용하여 DART-A가 투여된 참여자에 의해 처음 4주 동안 나타난 CRS 등급의 개요를 도시한다.
도 8은 적어도 1 사이클의 치료를 받았고 치료 후 골수 생검을 취한 ≥ 500 ng/kg/일로 처리된 14명의 환자의 항-백혈병 활성을 도시한다 (CR, 완전한 반응; CRm, 분자 CR; CRi, 불완전한 혈액 개선이 포함된 완전한 반응; MLF, 형형태학적인 백혈병이 없는 상태; PR, 부분 반응; SD/OB, 안정적 질환/다른 항-백혈병 이익; PD, 진행성 질환).
도 9는 500 ng/kg/일 목표 용량 (표 7)의 연속적인 투약 스케줄로 LID-2 처리된 34명의 반응 평가가 가능한 환자의 항-백혈병 활성을 도시한다. (CR, 완전한 반응; CRi, 불완전한 혈액 개선이 포함된 완전한 반응; MLF = 형태학적인 백혈병이 없는 상태; PR, 반응; SD, 안정적 질환; PD, 진행성 질환).
도 10은 등급에 의한 CRS 사건의 중앙값 지속시간을 도시한다. CRS 등급 1 사건: 1일; CRS 등급 2 사건: 2일; 및 CRS 등급 3 사건: 2.5일.
도 11은 2-단계 도입 용량 (즉, 3일 동안 30 ng/kg/일, 이어서 4일 동안 100 ng/kg/일)을 사용하여 처음 2주 및 용량은 500 ng/kg/일의 목표 용량으로 유지되면서 추가로 7일 치료 기간의 제1 주에 걸쳐 환자당 CRS 사건의 수가 감소하는 것을 도시한다. 환자당 CRS 사건의 수 (왼쪽 축) 및 치료된 환자당 수 (오른쪽 축)가 치료의 처음 8주 동안 시간 경과에 따른 플롯을 도시한다.
도 12A-12B는 상이한 도입 용량 전략을 사용하여 DART-A가 투여된 참여자에 의해 나타난 CRS 등급의 개요를 도시한다. 도 12A는 다단계 LID-3 도식을 사용하여 DART-A가 투여되고 (I7DP, 목표 용량 500 ng/kg/일) 이어서 목표 용량으로 3주 동안 연속 투여된 (A7DP 1- A7DP 3) 8명의 연구 참여자에 의해 나타난 평균 IRR/CRS 등급을 나타낸다. 도 12B는 또한 다단계, 1-단계 (LID-1 도식) 및 2-단계 (LID-2 도식) 도입 투약 전략을 사용하여 나타난 평균 IRR/CRS 등급의 플롯을 도시한다.
도 13A-13B는 상이한 도입 용량 전략을 사용하여 사이클 1 동안 투여된 DART-A의 평균 용량 강도 (실선)의 플롯을 도시한다. 도 13A는 2-단계 LID-2 도식을 사용하여 30명의 환자에게 투여된 DART-A의 평균 용량 강도의 플롯을 도시한다. 도 13B는 다단계 LID-3 도식을 사용하여 30명의 환자에게 투여된 DART-A의 평균 용량 강도의 플롯을 도시하며 500 ng/kg/일의 원하는 피크 용량 강도 (DI)의 평균 80.6%가 달성된 것을 보여준다. 각 단계의 표적 최대 용량 강도는 대시선으로 표시된다.

본 발명은 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수형성 이상 증후군 (MDS)과 같은 혈액암을 가진 환자에게 투여하기 위한 투여 요법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디를 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 ("PD-1 또는 PD-1 리간드 결합 분자")와 함께 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수형성 이상 증후군 (MDS)과 같은 혈액암을 가진 환자에게 투여하기 위한 투여 요법에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 "DART-A"에 대한 그러한 요법의 사용에 관한 것이다.

I. DART-A의 폴리펩타이드 사슬

DART-A는 CD123의 에피토프 및 CD3의 에피토프에 동시에, 그리고 특이적으로 결합할 수 있는 서열-최적화된 이중특이적 디아바디 ("CD123 x CD3" 이중특이적 디아바디)이다 (미국 특허 공개 번호 US 2016-0200827, PCT 공보 WO 2015/026892, Al-Hussaini, M. et al. (2016) "Targeting CD123 In Acute Myeloid Leukemia Using A T-Cell-Directed Dual-Affinity Retargeting Platform", Blood 127:122-131, Vey, N. et al. (2017) "A Phase 1, First-in-Human Study of MGD006/S80880 (CD123 x CD3) in AML/MDS", 2017 ASCO Annual Meeting, June 2-6, 2017, Chicago, IL: Abstract TPS7070 (이들 문헌의 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). DART-A는 유사한 조성의 다른 비-서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디에 비해 향상된 기능적 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌고, 따라서 "서열-최적화된" CD123 x CD3 이중특이적 디아바디로 명명된다.

DART-A는 제1 폴리펩타이드 사슬 및 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함한다. 이중특이적 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD3에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인) (VL_CD3), 개재 링커 펩타이드 (링커 1), CD123에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인) (VH_CD123), 및 C-말단을 포함할 것이고, 도 1에 제공된 일반 구조를 가진다. 그러한 VL_CD3 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:1이다:

QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT

PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG.

VL_CD3의 항원 결합 도메인은

CDR1 (SEQ ID NO:2): RSSTGAVTTSNYAN;

CDR2 (SEQ ID NO:3): GTNKRAP; 및

CDR3 (SEQ ID NO:4): ALWYSNLWV

를 포함한다.

그러한 링커 1에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:5이다: GGGSGGGG. 그러한 VH_CD123 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:6이다:

EVQLVQSGAE LKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMKWVRQA PGQGLEWIGD IIPSNGATFY

NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSH LLRASWFAYW GQGTLVTVSS.

VH_CD123의 항원 결합 도메인은:

CDR1 (SEQ ID NO:7): DYYMK;

CDR2 (SEQ ID NO:8): DIIPSNGATFYNQKFKG; 및

CDR3 (SEQ ID NO:9): SHLLRASWFAY

를 포함한다.

제2 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD123에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VL_CD123), 개재 링커 펩타이드 (예컨대, 링커 1), CD3에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VH_CD3), 및 C-말단을 포함할 것이다. 그러한 VL_CD123 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:10이다:

DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIYWASTR

ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY PYTFGQGTKL EIK.

VL_CD123의 항원 결합 도메인은:

CDR1 (SEQ ID NO:11): KSSQSLLNSGNQKNYLT;

CDR2 (SEQ ID NO:12): WASTRES; 및

CDR3 (SEQ ID NO:13): QNDYSYPYT

를 포함한다.

그러한 VH_CD3 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:14이다:

EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT

YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL

VTVSS.

VH_CD3의 항원 결합 도메인은:

CDR1 (SEQ ID NO:15): TYAMN;

CDR2 (SEQ ID NO:16): RIRSKYNNYATYYADSVKD; 및

CDR3 (SEQ ID NO:17): HGNFGNSYVSWFAY

를 포함한다.

본 발명의 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디는 그러한 제1 및 제2 폴리펩타이드가 그것들의 길이를 따라 시스테인 잔기를 통해 서로에게 공유 결합되도록 조작된다. 그러한 시스테인 잔기는 폴리펩타이드의 VL 및 VH 도메인을 분리시키는 개재 링커 (예컨대, 링커 1)에 도입될 수 있다. 대안으로, 및 보다 바람직하게, 제2 펩타이드 (링커 2)가 각각의 폴리펩타이드 사슬에, 예를 들어, 그러한 폴리펩타이드 사슬의 VL 도메인에 대해 위치 N-말단에서 또는 VH 도메인에 대해 C-말단 위치에서 도입된다. 그러한 링커 2에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:18: GGCGGG이다.

헤테로다이머의 형성은 반대 전하의 폴리펩타이드 코일을 함유하도록 그러한 폴리펩타이드 사슬을 추가로 조작함으로써 유도될 수 있다. 그러므로, 바람직한 구현예에서, 폴리펩타이드 사슬 중 하나는 그것의 잔기가 pH 7에서 음전하를 형성할 "E-코일" 도메인 (SEQ ID NO:19: E VAAL E K E VAAL E K E VAAL E K E VAAL E K)을 함유하도록 조작되는 한편, 두 폴리펩타이드 사슬 중 다른 하나는 그것의 잔기가 pH 7에서 양전하를 형성할 "K-코일" 도메인 (SEQ ID NO:20: K VAAL K E K VAAL K E K VAAL K E K VAAL K E)을 함유하도록 조작될 것이다. 그러한 대전된 도메인의 존재는 제1 및 제2 폴리펩타이드 사이의 회합을 촉진하고, 그로써 헤테로다이머화를 강화시킨다.

제1 또는 제2 폴리펩타이드 사슬에 어떤 코일이 제공되는지는 중요하지 않다. 그러나, 본 발명의 바람직한 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 ("DART-A")는 하기 서열 (SEQ ID NO:21)을 갖는 제1 폴리펩타이드 사슬을 가진다:

QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT

PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGEV

QLVQSGAELK KPGASVKVSC KASGYTFTDY YMKWVRQAPG QGLEWIGDII PSNGATFYNQ

KFKGRVTITV DKSTSTAYME LSSLRSEDTA VYYCARSHLL RASWFAYWGQ GTLVTVSSGG

CGGGEVAALE KEVAALEKEV AALEKEVAAL EK.

DART-A 사슬 1은 SEQ ID NO:1--SEQ ID NO:5--SEQ ID NO:6--SEQ ID NO:18--SEQ ID NO:19로 구성된다. DART-A 사슬 1을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO:22이다:

caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg

acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag

aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc

cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca

caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc

gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg aggcgaggtg

cagctggtgc agtccggggc tgagctgaag aaacccggag cttccgtgaa ggtgtcttgc

aaagccagtg gctacacctt cacagactac tatatgaagt gggtcaggca ggctccagga

cagggactgg aatggatcgg cgatatcatt ccttccaacg gggccacttt ctacaatcag

aagtttaaag gcagggtgac tattaccgtg gacaaatcaa caagcactgc ttatatggag

ctgagctccc tgcgctctga agatacagcc gtgtactatt gtgctcggtc acacctgctg

agagccagct ggtttgctta ttggggacag ggcaccctgg tgacagtgtc ttccggagga

tgtggcggtg gagaagtggc cgcactggag aaagaggttg ctgctttgga gaaggaggtc

gctgcacttg aaaaggaggt cgcagccctg gagaaa.

DART-A의 제2 폴리펩타이드 사슬은 서열 (SEQ ID NO:23)을 가진다:

DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIYWASTR

ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY PYTFGQGTKL EIKGGGSGGG

GEVQLVESGG GLVQPGGSLR LSCAASGFTF STYAMNWVRQ APGKGLEWVG RIRSKYNNYA

TYYADSVKDR FTISRDDSKN SLYLQMNSLK TEDTAVYYCV RHGNFGNSYV SWFAYWGQGT

LVTVSSGGCG GGKVAALKEK VAALKEKVAA LKEKVAALKE.

DART-A 사슬 2는 SEQ ID NO:10--SEQ ID NO:5--SEQ ID NO:14--SEQ ID NO:18--SEQ ID NO:20으로 구성된다. DART-A 사슬 2를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO:24이다:

gacttcgtga tgacacagtc tcctgatagt ctggccgtga gtctggggga gcgggtgact

atgtcttgca agagctccca gtcactgctg aacagcggaa atcagaaaaa ctatctgacc

tggtaccagc agaagccagg ccagccccct aaactgctga tctattgggc ttccaccagg

gaatctggcg tgcccgacag attcagcggc agcggcagcg gcacagattt taccctgaca

atttctagtc tgcaggccga ggacgtggct gtgtactatt gtcagaatga ttacagctat

ccctacactt tcggccaggg gaccaagctg gaaattaaag gaggcggatc cggcggcgga

ggcgaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtcc agcctggagg gtccctgaga

ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc agcacatacg ctatgaattg ggtccgccag

gctccaggga aggggctgga gtgggttgga aggatcaggt ccaagtacaa caattatgca

acctactatg ccgactctgt gaaggataga ttcaccatct caagagatga ttcaaagaac

tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa accgaggaca cggccgtgta ttactgtgtg

agacacggta acttcggcaa ttcttacgtg tcttggtttg cttattgggg acaggggaca

ctggtgactg tgtcttccgg aggatgtggc ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa

gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag.

II. DART-A의 특성

DART-A는 인간 및 시노몰구스 원숭이 세포에 의해 배열된 CD123 및 CD3에 동시에 결합하는 능력을 가진 것으로 나타났다. DART-A의 제공은 T 세포 활성화를 유발하고, 블라스트 감소를 매개하며, T 세포 팽창을 구동시키고, T 세포 활성화를 유도하며 표적 암 세포의 재지향된 사멸을 유발하는 것으로 밝혀졌다 (표 1).

인간 및 시노몰구스 원숭이 CD3 및 CD123에 대한 DART-A의 결합에 대한 평형 해리 상수 (KD ₎ )
항원	k _a (± SD) (M ^-1 s ^-1 )	k _d (± SD) (s ^-1 )	K _D (± SD) (nM)
인간 CD3ε/δ	5.7 (± 0.6) x 10⁵	5.0 (± 0.9) x 10^-3	9.0 ± 2.3
시노몰구스 CD3ε/δ	5.5 (± 0.5) x 10⁵	5.0 (± 0.9) x 10^-3	9.2 ± 2.3
인간 CD123-His	1.6 (± 0.4) x 10⁶	1.9 (± 0.4) x 10^-4	0.13 ± 0.01
시노몰구스 CD123-His	1.5 (± 0.3) x 10⁶	4.0 (± 0.7) x 10^-4	0.27 ± 0.02

보다 구체적으로, DART-A는 높은 CD123 발현 (Kasumi-3 (EC50=0.01 ng/mL)) 배지 CD123-발현 (Molm13 (EC50=0.18 ng/mL) 및 THP-1 (EC50=0.24 ng/mL)) 및 배지 낮은 또는 낮은 CD123 발현 (TF-1 (EC50=0.46 ng/mL) 및 RS4-11 (EC50=0.5 ng/mL))으로, 표적 세포주에서 CD3 에피토프 결합 특이성과 관계없이, ng 미만/mL 범위의 최대 활성의 50% (EC50)를 달성하기 위해 필요한 농도로 강력한 재지향된 사멸 능력을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 유사하게, DART-A-재지향된 사멸은 또한 상이한 도너로부터의 T 세포가 있는 다중 표적 세포주로 관찰되었고 CD123을 발현하지 않는 세포주에서 재지향된 사멸 활성은 관찰되지 않았다. 결과를 표 2에 요약한다.

표적 세포주	CD123 표면 발현 (항체 결합 부위)	서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디의 EC50 (ng/mL) E:T = 10:1	최대 % 사멸g
Kasumi-3	118620	0.01	94
Molm13	27311	0.18	43
THP-1	58316	0.24	40
TF-1	14163	0.46	46
RS4-11	957	0.5	60
A498	음성	활성 없음	활성 없음
HT29	음성	활성 없음	활성 없음

추가적으로, 인간 T 세포 및 종양 세포 (Molm13 또는 RS4-11)가 조합되어 NOD/SCID 감마 (NSG) 녹아웃 마우스에 피하로 주사될 때, MOLM13 종양은 0.16, 0.5, 0.2, 0.1, 0.02, 및 0.004 mg/kg 용량 수준에서 상당히 억제되었다. 0.004 mg/kg 이상의 용량이 MOLM13 모델에서 활성을 나타냈다. RS4-11 모델과 비교하여 MOLM13 모델에서 종양 성장의 억제와 관련된 더 낮은 DART-A 용량은 MOLM13 세포가 RS4-11 세포보다 더 높은 수준의 CD123 발현을 가지는 것을 입증하는 시험관내 데이터와 일치하며, 이것은 MOLM13 세포에서 시험관내에서 DART-A 매개된 세포독성에 대한 증가된 민감성과 상관이 있다.

DART-A는 AML 환자로부터의 일차 AML 표본 (골수 단핵구 (BMNC) 및 말초혈 단핵구 (PBMC))에 대해 활성인 것으로 나타났다. 일차 AML 골수 샘플과 DART-A와의 인큐베이션은 시간이 지남에 따라 백혈구 집단의 고갈을 초래하였고, 잔류하는 T 세포 (CD4 및 CD8 둘 다)의 동시 팽창 및 T 세포 활성화 마커 (CD25 및 Ki-67)의 유도가 수반되었다. CD8 및 CD4 T 세포 둘 다에서 그랜자임 B 및 퍼포린 수준의 상향 조절이 관찰되었다. 일차 ALL 골수 샘플과 DART-A와의 인큐베이션은 미처리 대조군 또는 대조군 DART와 비교하여 시간이 지남에 따라 백혈구 집단의 고갈을 초래하였다. T 세포가 계수되고 (CD8 및 CD4 염색) 활성화 (CD25 염색)가 검정되었을 때, T 세포는 미처리 또는 대조군 DART 샘플과 비교하여 DART-A 샘플에서 팽창되고 활성화되었다. DART-A는 또한 인간 및 시노몰구스 원숭이 PBMC에서 모두 pDC 세포의 고갈을 매개할 수 있는 것으로 나타났는데, 이때 시노몰구스 원숭이 pDC는 10 ng/kg 정도로 적은 DART-A로 주입 후 4일 정도로 초기에 고갈되었다. 사이토카인 인터페론-감마, TNFα, IL-6, IL-5, IL-4 및 IL-2의 수준의 상승은 DART-A-처리된 동물에서 관찰되지 않았다. 이들 데이터는 DART-A-매개된 표적 세포 사멸이 그랜자임 B 및 퍼포린 경로를 통해 매개된 것을 나타낸다.

활성 없음이 CD123-음성 표적 (U937 세포)에 대해 또는 대조군 DART로 관찰되었고, 이것은 관찰된 T 세포 활성화가 표적 세포 결합에 엄격하게 의존하였고 DART-A에 의한 CD3의 일가 결합이 T 세포 활성화를 촉발시키기에는 충분하지 않았음을 나타낸다.

요약하면, DART-A는 여러 혈액암에서 상향조절된 항원인 CD123을 발현하는 세포에 대해 T 림프구를 재지향하기 위하여 TCR의 CD3ε 하위유닛에 결합하는 항체-기반 분자이다. DART-A는 인간 및 시노몰구스 원숭이 둘 다의 항원에 유사한 친화도로 결합하여 두 종으로부터의 T 세포를 재지향하여 CD123+ 세포를 사멸하도록 한다. 매주 증량되는 용량의 DART-A로 주 4 또는 7일 동안 주입된 원숭이는, 투약 스케줄과 무관하게, 4주 치료 기간 내내 지속적으로 치료 시작 후 72시간 후에 순환하는 CD123+ 세포의 고갈을 보였다. 순환 T 세포의 감소가 또한 발생하였지만, 4-일 용량 스케줄로 원숭이에서 후속 주입 전에 기준선으로 회복되었고, 이것은 DART-A-매개된 동원(mobilization)과 일치한다. DART-A 투여는 TIM-3+, T 세포가 아닌 순환하는 PD1+를 증가시켰고; 나아가, 처리된 원숭이로부터의 T 세포의 생체외 분석은 변경되지 않은 재지향된 표적 세포 용해를 나타냈으며, 이것은 소비되지 않은 것을 나타낸다. 독성은 용량이 증량되었을 때에도 후속 투여 후가 아니라 DART-A 제1 주입 후에 사이토카인의 최소한의 일시적 방출로 제한되었고, CD123+ 골수 전구세포의 동시 감소와 함께 적혈구 질량의 최소한의 가역적인 감소로 제한되었다.

III. PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 예시의 분자

A. PD-1 결합 분자

PD-1 및 PD-1에 결합할 수 있는 다른 분자에 대해 면역특이적인 항체가 알려져 있고 본 발명에 따라 PD-1에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, 다중특이적 결합 분자 (디아바디, 이중특이적 항체, 삼가 결합 분자, 등), 항체의 할원 결합 단편 (예컨대, scFv, Fab, F(ab)2, 등), scFv 융합, 등)로서 사용되거나 작용하도록 적응될 수 있다 (참고, 예컨대, 하기 표 3에 제공된 특허 공보). PD-1에 결합할 수 있는 바람직한 분자는 인간 PD-1 (CD279)의 연속적 또는 비연속적 (예컨대, 형태적) 부분 (에피토프)에 결합하는 능력을 나타낼 것이고 또한 바람직하게 하나 이상의 비인간 종, 특히 영장류 종 (및 특히 시노몰구스 원숭이와 같은 영장류 종)의 PD-1 분자에 결합하는 능력을 나타낼 것이다. 특정 구체예에서, PD-1에 결합할 수 있는 분자는, 예를 들어 PD-1과 PD-1의 천연 리간드 사이의 결합을 차단함으로써 PD-1/PD-L1 상호작용을 길항하는 능력을 나타낼 것이다. 추가적인 원하는 항체는 PD-1을 사용하여 유도된 항체-분비 하이브리도마 또는 그것의 펩타이드 단편을 분리함으로써 만들어질 수 있다. 대표적인 인간 PD-1 폴리펩타이드 (NCBI 서열 NP_005009.2; 하기 제시된 20개의 아미노산 잔기 신호 서열 및 268개의 아미노산 잔기 성숙 단백질을 포함함)는 아미노산 서열 (SEQ ID NO:25)을 가진다:

MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA

TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL

PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE

VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI

GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT

IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL.

항-PD-1 항체는 상기 제공된 PD-1 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 가지는 단백질을 면역원으로서 사용하여 얻어질 수 있다. 대안으로, PD-1에 결합할 수 있는 분자의 생성에 유용한 항-PD-1 항체는 하기 기술된 항-인간 PD-1 또는 표 3에 열거된 항-PD-1 항체의 VL 및/또는 VH 도메인을 가질 수 있고; 보다 바람직하게 그러한 항-PD-1 항체의 VL 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_L 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_H를 가질 수 있다.

하나의 그러한 예시의 인간화된 항-PD-1 항체는 본원에서 "PD-1 mAb 1"로서 지정된다. PD-1 mAb 1의 VH 도메인 (SEQ ID NO:26)의 아미노산 서열은 하기에 제시된다 (CDR_H 잔기는 밑줄로 표시됨):

QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMN WVRQA PGQGLEWIG V IHPSDSETWL

DQKFKD RVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR EH YGTSPFAY WG QGTLVTVSS.

PD-1 mAb 1의 VL 도메인 (SEQ ID NO:27)의 아미노산 서열은 하기에 제시된다 (CDR_H 잔기는 밑줄로 표시됨):

EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC RASESVD NYGMSFMN WF QQKPGQPPKL LIH AASNQGS

GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FC QQSKEVPY T FGGGTKVEI K.

PD-1에 결합할 수 있는 분자의 생성에 유용한 대안의 항-PD-1 항체 및 PD-1 결합 분자는 항-인간 PD-1 항체 니볼루맙 (CAS Reg. No.:946414-94-4, 5C4, BMS-936558, ONO-4538, MDX-1106으로도 알려지고, Bristol-Myers Squibb사에 의해 OPDIVO®로서 판매됨); 펨브롤리주맙 (이전에 람브롤리주맙으로서 알려짐, CAS Reg. No.:1374853-91-4, 또한 MK-3475, SCH-900475로서 알려지고, Merck사에 의해 KEYTRUDA®로서 판매됨); 세미플리맙 (CAS Reg. No.: 1801342-60-8, 또한 REGN-2810, SAR-439684로서 알려지고, LIBTAYO®로서 판매됨), EH12.2H7 (Dana Farber), 또는 표 3의 임의의 항-PD-1 항체의 VL 및/또는 VH 도메인을 가지며; 보다 바람직하게는 그러한 항-PD-1 항체의 VL 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_L 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_H를 가진다. 니볼루맙 (WHO Drug Information, 2013, Recommended INN: List 69, 27(1):68-69), 펨브롤리주맙 (WHO Drug Information, 2014, Recommended INN: List 75, 28(3):407), 및 세미플리맙 (WHO Drug Information 2018, Proposed INN: List 119)의 완전한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 기술분야에 알려져 있다. 본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 특유한 결합 특징을 가진 추가적인 항-PD-1 항체들이 최근에 확인되었다 (참고, PCT 공개 번호 WO 2017/019846 및 표 3).

PD-1에 결합하는 추가적인 분자
명칭	참고문헌
PD1-17; PD1-28; PD1-33; PD1-35; 및 PD1-F2	US 7,488,802
17D8; 2D3; 4H1; 5C4; 4A11; 7D3; 및 5F4	US 8,008,449
hPD-1.08A; hPD-1.09A; 109A; K09A; 409A; h409A11; h409A16; h409A17; 코돈 최적화된 109A; 및 코돈 최적화된 409A	US 8,354,509
1B8; 20B3.1; 7G3; 3H4; 2.3A9; 1G7; 1.8A10; 28.11; 6D10	US 8,168,757
1E3; 1E8; 및 1H3	US 2014/0044738
9A2; 10B11; 6E9; APE1922; APE1923; APE1924; APE1950; APE1963; 및 APE2058	US 9,815,897
EH12.2H7	US 9,102727
GA1; GA2; GB1; GB6; GH1; A2; C7; H7; SH-A4; SH-A9; RG1H10; RG1H11; RG2H7; RG2H10; RG3E12; RG4A6; RG5D9; RG1H10-H2A-22-1S; RG1H10-H2A-27-2S; RG1H10-3C; RG1H10-16C; RG1H10-17C; RG1H10-19C; RG1H10-21C; 및 RG1H10-23C2	US 2014/0356363
H1M7789N; H1M7799N; H1M7800N; H2M7780N; H2M7788N; H2M7790N; H2M7791N; H2M7794N; H2M7795N; H2M7796N; H2M7798N; H4H9019P; H4H7798N; H4xH9034P2; H4xH9035P2; H4xH9037P2; H4xH9045P2; H4xH9048P2; H4H9057P2; H4H9068P2; H4xH9119P2; H4xH9120P2; H4Xh9128p2; H4Xh9135p2; H4Xh9145p2; H4Xh8992p; H4Xh8999p; 및 H4Xh9008p;	US 2015/0203579
mAb1; mAb2; mAb3; mAb4; mAb7; mAb8; mAb9; mAb10; mAb11; mAb12; mAb13; mAb14; mAb15; 및 mAb16	US 2016/0159905
246A10; 244C8; 413D2; 393C5; 388D4; 413E1; 244C8-1; 244C8-2; 244C8-3; 388D4-1; 388D4-2; 및 388D4-3	US 2016/0319019
Mu317; mu326; 317-4B6; 326-4A3; 317-4B2; 317-4B5; 317-1; 326-3B1; 326-3G1; 326-1; 317-3A1; 317-3C1; 317-3E1; 317-3G1; 317-3H1; 317-3I1; 317-4B1; 317-4B3; 317-4B4; 317-4A2; 326-3A1; 326-3C1; 326-3D1; 326-3E1; 326-3F1; 326-3B N55D; 326-4A1; 326-4A2BGB-A317	US 8,735,553
22A5; 6El; lODl, 4C1; 7D3; 13Fl; 14A6; 15H5; 5A8; 7A4; 및 그것들의 인간화된 버전	US 2017/267762
1E9; hlE9-l; hlE9-2; hlE9-4; hlE9-5; 4B10; h4B10-1; h4B10-2; h4B10-3; 1B10; 10B4; A09; C07; F09; G08; G10; H08; H09; 및 1353-G10	US 2018/142022
M136-M13-MHC723; m136-M14-MHC724; m136-M19-MHC725; m245-M3-MHC728; m245-M5-MHC729; A1.0; A1.6; Ba2; Bb2/C1.1; 및 D4	US 2017/0044259
PD-1 mAb 1; PD-1 mAb 2; PD-1 mAb 3; PD-1 mAb 4; PD-1 mAb 5; PD-1 mAb 6; PD-1 mAb 7; PD-1 mAb 8; PD-1 mAb 9; PD-1 mAb 10; PD-1 mAb 11; PD-1 mAb 12; PD-1 mAb 13; PD-1 mAb 14; PD-1 mAb 15; 및 그것들의 인간화된 버전: hPD-1 mAb 2; hPD-1 mAb 7; hPD-1 mAb 9; hPD-1 mAb 15;	US 2017/019846
PD1B11; PD1B70; PD1B71; PD1B114 및 그것의 친화성-성숙 변이체: PD1B149; PD1B160; PD1B162; PD1B164; PD1B183; PD1B184; PD1B185; PD1B187; PD1B192; PD1B175; PD1B177; PD1B194; PD1B195; PD1B196; PD1B197; PD1B198; PD1B199; PD1B200; PD1B201	US 20017/079112
BAP049-hum01; BAP049-hum02; BAΡ049-hum03; BAP049-hum04; BAP049-hum05; BAP049-hum06; BAP049-hum07; BAP049-hum08; BAP049-hum09; BAP049-huml0; BAP049-humll; BAP049-huml2; BAP049-huml3; BAΡ049-huml4; BAP049-huml5; BAP049-huml6; BAP049-클론-A; BAΡ049-클론-A; BAP049-클론-C; BAP049-클론-D; 또는 BAΡ049-클론-E; PDR-001	US 2018/0371093
AGEN-2034; AGEN-2034w;AGEN2033w; AGEN2046w; AGEN2047w; AGEN2001w; AGEN2002w; EPl l_pll_B03; EPl l_pll_B05; EPl l_pll_C02; EPl l_pll_C03	US 2017/081409
m136-M13- MHC723; m136-M19- MHC725; m245-M3- MHC728; m245-M5- MHC729; m136-M14- MHC724; 및 인간화된 변이체 PD-1 A; PD-1 Ab; PD-1 Ae; PD-1 Af; PD-1 Ba; PD-1 Bb; PD-1 C; PD-1 Ca; PD-1 D; PD-1 1.0; PD-1 1.1; PD-1 1.2; PD-1 1.4; PD-1 1.5; PD-1 1.6; PD-1 1.7; PD-1 1.9; PD-1 1.10; PD-1 2; PD-1 4; CX188	US 2017/044259
244C8; 388D4; 413E1; 246A10; 413D2; 및 인간화된 변이체 D4-HC3+LC1; D4-HC1+LC3; D4-HC3+LC3; C8-HC1+LC1; C8-HC1+LC3; C8-HC2+LC1	US 10,239,942
PRS-332; SEQ ID NO: 59-84 및 112-117로부터 선택된 VH; 및 SEQ ID NO: 85-111 및 118-123으로부터 선택된 VL	US 2019/010231
H005-1	US 2016/376367
BA08-1	US 2017/210806
R3A1; R3A2; R4B3; R3B7; R3D6; A2_#1; A2_#2	US 2018/244779
BY18.1	WO 2016/180034
항체 A, 항체 B, 항체 C, 항체 D, 항체 E, 항체 F, 항체 G, 항체 H, 항체 I; 11430	US 2017/0044260
SHB-128; SHB-152; SHB-168; SHB-617; 및 인간화된 변이체 SSI-361	US 2018/346569
E8-3; C2-3; E1-3; F3-3; H8-3; C10-2; G2-1; G3-2; H2-1; H4-2; C8-1; G10-2; 135C12; 136B4; 139D6;　136E10; 122F10; 139D6; 137F2	US 9,982,052
AB12M3; AB12M4; AB12M5; AB12M6; AB12M7; AB12M8; AB12M9	US 2018/113258
1.7.3 hAb; 1.49.9 hAb; 1.103.11　hAb; 1.139.15 hAb; 1.153.7　hAb	US 2017/024515; US 2017/025051
949 및 949 VK1 gL9 gH8b를 포함한 인간화된 변이체	US 9,102,728
948 및 인간화된 변이체	US 8,993,731
STM-432	US 2019/077866

B. PD-1 리간드 결합 분자

PD-1의 천연 리간드 (예컨대, B7-H1 (PD-L1, CD274), B7-DC (PD-L2, CD273)) 및 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자에 대해 면역특이적인 항체가 알려져 있고 본 발명에 따라 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, 다중특이적 결합 분자 (디아바디, 이중특이적 항체, 삼가 결합 분자, 등), 항체의 항원 결합 단편 (예컨대, scFv, Fab, F(ab)2, 등), scFv 융합, 등)로서 사용되거나 작용하도록 적응될 수 있다 (참고, 예컨대 하기 표 4에 제공된 특허 공보). PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 바람직한 분자는 인간 B7-H1 및/또는 B7-DC의 연속적 또는 비연속적 (예컨대, 형태적) 부분 (에피토프)에 결합하는 능력을 나타낼 것이고 또한 바람직하게 하나 이상의 비인간 종, 특히 영장류 종 (및 특히 시노몰구스 원숭이와 같은 영장류 종)의 B7-H1 및/또는 B7-DC 분자에 결합하는 능력을 나타낼 것이다. 특정 구체예에서, PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는, 예를 들어 PD-1과 PD-1의 천연 리간드 사이의 결합을 차단함으로써 PD-1/PD-L1 상호작용을 길항하는 능력을 나타낼 것이다. 추가적으로 바람직한 항체는 B7-H1, B7-DC 또는 그것의 펩타이드 단편을 사용하여 유도된 항체-분비 하이브리도마를 분리함으로써 만들어질 수 있다.

대표적인 인간 B7-H1 (PD-L1) 폴리펩타이드 (NCBI 서열 NP_001254635.1, 예측된 18개의 아미노산 신호 서열을 포함함)는 아미노산 서열 (SEQ ID NO:28)을 가진다:

MRIFAVFIFM TYWHLLNAPY NKINQRILVV DPVTSEHELT CQAEGYPKAE VIWTSSDHQV

LSGKTTTTNS KREEKLFNVT STLRINTTTN EIFYCTFRRL DPEENHTAEL VIPELPLAHP

PNERTHLVIL GAILLCLGVA LTFIFRLRKG RMMDVKKCGI QDTNSKKQSD THLEET.

대표적인 인간 B7-DC (PD-L2) 폴리펩타이드 (NCBI 서열 NP_079515.2; 예측된 18개의 아미노산 신호 서열을 포함함)는 아미노산 서열 (SEQ ID NO:29)을 가진다:

MIFLLLMLSL ELQLHQIAAL FTVTVPKELY IIEHGSNVTL ECNFDTGSHV NLGAITASLQ

KVENDTSPHR ERATLLEEQL PLGKASFHIP QVQVRDEGQY QCIIIYGVAW DYKYLTLKVK

ASYRKINTHI LKVPETDEVE LTCQATGYPL AEVSWPNVSV PANTSHSRTP EGLYQVTSVL

RLKPPPGRNF SCVFWNTHVR ELTLASIDLQ SQMEPRTHPT WLLHIFIPFC IIAFIFIATV

IALRKQLCQK LYSSKDTTKR PVTTTKREVN SAI.

특히, 항-B7-H1 항체는 상기 제공된 B7-H1 아미노산 서열의 일부 또는 전부를 가지는 단백질을 면역원으로서 사용하여 얻어질 수 있다. 대안으로, B7-H1에 결합할 수 있는 분자의 생성에 유용한 항-B7-H1 1 항체는 하기 기술된 항-인간 B7-H1 또는 표 4에 열거된 항-B7-H1 항체의 VL 및/또는 VH 도메인을 가질 수 있고; 보다 바람직하게 그러한 항-B7-H1 항체의 VL 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_L 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_H를 가질 수 있다.

PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자의 생성에 유용한 예시의 항-B7-H1 항체는 항-인간 B7-H1 항체 아테졸리주맙 (CAS Reg No. 1380723-44-3, 또한MPDL3280A로서 알려지고, TECENTRIQ®로서 판매됨), 두르발루맙 (CAS Reg No. 1428935-60-7, 또한 MEDI-4736으로서 알려지고, IMFINZI®로서 판매됨), 아벨루맙, MDX1105 (CAS Reg No. 1537032-82-8, 또한 BMS-936559, 5H1로서 알려지고, BAVENCIO®로서 판매됨), 또는 표 4에 열거된 임의의 항-B7-H1 항체 및 결합 분자의 VL 및/또는 VH 도메인을 가질 수 있고; 보다 바람직하게 그러한 항-B7-H1 항체의 VL 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_L 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDR_H를 가질 수 있다. 아테졸리주맙 (WHO Drug Information, 2015, Recommended INN: List 74, 29(3):387), 두르발루맙 (WHO Drug Information, 2015, Recommended INN: List 74, 29(3):393-394) 및 아벨루맙 (WHO Drug Information, 2016, Recommended INN: List 74, 30(1):100-101)의 완전한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 기술분야에 알려져 있다.

PD-1의 천연 리간드에 결합하는 추가 분자
명칭	참고문헌
A09-188-1, 및 친화성 성숙 및 최적화된 변이체: A09-204-1, A09-211-1, A09-212-1, A09-213-1, A09-214-1, A09-215-1, A09-216-1, A09-219-1, A09-220-1, A09-221-1, A09-222-1, A09-223-1, A09-202-1, A09-248-2, A09-239-2, A09-240-2, A09-241-2, A09-242-2, A09-243-2, A09-244-2, A09-245-2, A09-246-2, A09-247-2	US 9,624298
YW243.55.S70; 243.55.H1; 243.55.H12; 243.55.H37; 243.55.H70; 243.55.H89; 243.55.S1; 243.55.5; 243.55.8; 243.55.30; 243.55.34; 243.55.S37; 243.55.49; 243.55.51; 243.55.62; 243.55.84	US 8,217,149
2.9D10, 2.7A4, 2.14H9, 3.15G8, 2.20A8, 3.18G1, 2.7A4OPT, 또는 2.14H9OPT	US 8,779108B2
1B9.2E11.2, 4H1.G10.15, 1A8, 1E4, 8G2, 1D11, 3A2, 3B11, 3F4, 3H6, 4C1, 4E1, 5A6, 9C12, 1B4, 1B11, 1F6, 1H8, 1H12, 2D5, 2H11, 3D12, 4C8, 4C9, 5E10, 5H4, 5H5, 8A1, 9G9, 10A7, 및 10H6	US 2015/0197571
1D05, 84G09, 411B08, 411C04, 411D07, 386H03, 386A03, 385F01, 413D08, 413G05, 413F09, 414B06	US 9,617,338
3G10,12A4,10A5, 5F8,10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7, 및 13G4	US 9,273,135
A1, C2, C4, H12, 및 H12-GL	US 2017/0319690
Ab- 14, Ab-16, Ab-22, Ab-30, Ab-31, Ab-32, Ab-38, Ab-42, Ab-46, Ab-50, Ab-52, Ab-55, Ab-56, 및 Ab-65.	US 9,828434
R2κA3, R2κA4, R2κA6, R2κF4, R2κH5, R2κH6, R2κH3, sR3κA8, sR3κA9, sR3κB2, sR3κB5, tccR3KA8, tccR3KAl1, tccR3KB7, tccR3KD9, tccKF10, tctR3KA4, tctR3KF8, R2λKA7, R2λB12, R2λ12, sR3λD7, sR3λE1, tccAF8, tccAD7, tctR3λH4, KD-033, 및 기타	US 2016/340429
H2M8306N, H2M8307N, H2M8309N, H2M8310N, H2M8312N, H2M314N, H2M8316N, H2M8317N, H2M8321N, H2M8323N, H2M8718N, H2M8718N2, 및 H2M8719N, H1H9323P, H1 H9327P, H1 H9329Ρ, H1H9336Ρ, H1H9344Ρ2, 1H9345Ρ2, H1H9351Ρ2, H1H9354Ρ2, H1 H9364Ρ2, H1H9373Ρ2, H1H9382Ρ2, H1H9387Ρ2, 및 H1H9396Ρ2	US 9,938345
클론 8, 클론 12, 클론 16, 클론 18, 클론 60; 및 다음을 포함한 그것들의 최적화된 변이체: cl; dl; g7; h9; b10; E10; A05; C05; C10; D08; G09; G10; G12; Ell; D01; H06; C5H9; C5B10; C5E10; G12H9; G12B10; G12E10	US 2016/0311903
BAΡ058 및 다음을 포함한 그것의 인간화된 변이체: BAΡ058-hum01, BAΡ058-hum02, BAΡ058-hum03, BAΡ058-hum04, BAΡ058-hum05, BAΡ058-hum06, BAΡ058-hum07, BAΡ058-hum08, BAΡ058-hum09, BAΡ058-hum10, BAΡ058-hum11, BAΡ058-hum12, BAΡ058-hum13, BAΡ058-hum14, BAΡ058-hum15, BAΡ058-hum16, 및 BAΡ058-hum17; FAZ-053	US 9,988,452
Mu333, Mu277, 및 hu333-2B, hu333-3A2, hu333-3C2 및 hu333-3H2를 포함한 그것들의 인간화된 변이체	US 2018/215825
332M1 및 다음을 포함한 그것의 인간화된 변이체: 332M7, 332M72, 및 332M8	US 2018/346571
PDL1.1; PDL1.2	US 8,741295
13C5, 5G9, 5G11, 8C6, 7B4, 4D1, 4A8, 8H4, 8H3, 15F1; 및 hu5G11; hu13C5를 포함한 그것들의 인간화된 변이체	US 2017/0204184
PDL1-56 dAb; Hu56V1; Hu56V2; Hu56V3; Hu56V4; Hu56V5; 및 KN035	US 2018/0291103
1.4.1, 1.14.4, 1.20.15 및 1.46.11	WO 2017/020858
92; 24D5; 29H1; 9_2-1; 9_2-2; 9_2-3; 9_2-4; 9_2-5; 9_2-6; 9_2-7; 9_2-8; 9_2-9; 9_2-10; 24D5-H; HRP00049; HRP-00052	US 2018/0334504
5F10; 9F6; 5C10 및 5C10H1L1; 5C10H1L2; 5C10H2L1; 및 5C10H2L2를 포함한 그것들의 인간화된 변이체	US 2018/0305464
4B6,　26F5,　21F11,　23A11,　23F11　및　22C9; BM-GT,　BM-ME,　4B6-H3L4,　4B6-H4L3,　23F11-H4L4,　23F11-H4L6,　23F11-H6L4,　23F11-H6L6,　23A11-H3L3,　23A11-H3L5,　23A11-H5L3　및　23A11-H5L5;	WO 2017/161976
3C5-2G12 및 다음을 포함한 그것의 인간화된 변이체: h3C5H1-h3C5L1; h3C5H2- h3C5L2; h3C5H3- h3C5L2; h3C5H4-h3C5L2	WO 2017/196867
29E.2A3 및 24F.10C12	US 8,552,154

C. 예시의 IgG4 항체

특정 구체예에서 본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 항체 (특히 항-PD-1 항체 및 항-B7-H1 항체)는 IgG4 불변 영역을 포함한다. 예시의 IgG4 항체는 상기 기술된 항-PD-1 항체 또는 항-B7-H1 항체 중 임의의 것의 VL 및 VH 도메인, IgG CL 카파 도메인, 및 IgG4 CH1, CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.

예시의 CL 도메인은 IgG CL 카파 도메인이다. 예시의 인간 CL 카파 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:30)이다:

RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD

SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC.

예시의 CH1 도메인은 선택적으로 C-말단 리신 잔기가 없는 인간 IgG4 CH1 도메인이다. 예시의 인간 IgG4 CH1 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:31)이다:

ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS

GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRV.

그러한 항체는 바람직하게 IgG4 CH1 도메인 (SEQ ID NO:31) 및 가닥 교환을 감소시키기 위하여 안정화 S228P 치환 (Kabat에서 제시된 바와 같이 EU 색인에 의해 넘버링됨)을 포함하는 IgG4 힌지 변이체인 ESKYGPPCP P CP (SEQ ID NO:32)를 포함할 것이다.

예시의 인간 IgG4의 CH2-CH3 도메인 (SEQ ID NO:33)의 아미노산 서열은:

231 240 250 260 270 280

APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD

290 300 310 320 330

GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS

340 350 360 370 380

SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE

390 400 410 420 430

WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE

440 447

ALHNHYTQKS LSLSLG X

(Kabat에서 제시된 바와 같이 EU 색인에 의해 넘버링됨)이고, 여기서 X는 리신 (K)이거나 없다.

"PD-1 mAb 1 IgG4"로 지정된 예시의 항-PD-1 단클론성 항체는 인간화된 항-인간 PD-1 항체이다. 상기에서 표시된 것과 같이, PD-1 mAb 1은 PD-1 mAb 1의 VH 및 VL 도메인을 포함한다.

PD-1 mAb1 IgG4 의 완전한 중쇄의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:34이다 (CDR_H 잔기 및 S228P 잔기는 밑줄로 표시됨):

QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMN WVRQA PGQGLEWIG V IHPSDSETWL

DQKFKD RVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR EH YGTSPFAY WG QGTLVTVSSA

STKGPSVFPL APCSRSTSES TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG

LYSLSSVVTV PSSSLGTKTY TCNVDHKPSN TKVDKRVESK YGPPCP P CPA PEFLGGPSVF

LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSQEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTYR

VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPSS IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSQEEMTKN

QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSRLT VDKSRWQEGN

VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSLG.

SEQ ID NO:34에서, 잔기 1-119는 PD-1 mAb 1의 VH 도메인 (SEQ ID NO:26)에 상응하고, 인간 IgG4 CH1 도메인에 상응하는 아미노산 잔기 120-217은 (SEQ ID NO:31)이며, 아미노산 잔기 218-229는 S228P 치환을 포함하는 인간 IgG4 힌지 도메인 (SEQ ID NO:32)에 상응하고, 아미노산 잔기 230-245는 인간 IgG4 CH2-CH3 도메인 (SEQ ID NO:33, 여기서 X는 없음)에 상응한다.

항체 PD-1 mAb 1 IgG4의 완전한 경쇄의 아미노산 서열은 카파 불변 영역을 포함하고 (SEQ ID NO:35)이다 (CDR_L 잔기는 밑줄로 표시됨):

EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC RASESVD NYGMSFMN WF QQKPGQPPKL LIH AASNQGS

GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FC QQSKEVPY T FGGGTKVEI KRTVAAPSVF

IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS

STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC.

SEQ ID NO:35에서, 아미노산 잔기 1-111은 PD-1 mAb 1의 VL 도메인 (SEQ ID NO:27)에 상응하고, 아미노산 잔기 112-218은 경쇄 카파 불변 영역 (SEQ ID NO:30)에 상응한다.

IgG4 불변 영역을 가지는 다른 예시의 항-PD-1 항체는 인간 항체인 니볼루맙, 및 인간화된 항체인 펨브롤리주맙이다. 각각은 상기 기술된 것과 같이 카파 CL 도메인, IgG4 CH1 도메인, 안정화된 IgG4 힌지, 및 IgG4 CH2-CH3 도메인을 포함한다.

IV. 제약학적 조성물

발명의 조성물은 단위 투여 형태의 제조에 사용될 수 있는 조성물 (예컨대, 순수하지 않거나 멸균되지 않은 조성물) 및 제약학적 조성물 (즉, 대상체 또는 환자에게 투여하기에 적합한 순수한 및/또는 멸균된 조성물)의 제조에 유용한 대용량 약물 조성물을 포함한다. 본 발명의 방법에 유용한 조성물, 특히 제약학적 조성물은 DART-A를 포함하는 것, 및 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자를 포함하는 것을 포함한다. 그러한 조성물 또는 제약학적 조성물은 예방적 또는 치료적 유효량의 DART-A 및 제약학적으로 허용되는 담체; PD-1 결합 분자 및 제약학적으로 허용되는 담체; 또는 PD-1 리간드 결합 분자 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.

발명은 또한 특정 암 항원에 특이적인 DART-A 및 제2 치료 항체 (예컨대, 종양 특이적 단클론성 항체), 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 포함한다.

특정 구체예에서, 용어 "제약학적으로 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인된 또는 미국 약전 또는 동물, 보다 구체적으로 인간에서 사용하기 위해 인식된 다른 일반적인 약전에 열거된 것을 의미한다. 용어 "담체"는 희석제, 보조제(예컨대, 프로인트 보조제 (완전 및 불완전)), 부형제, 또는 치료제와 함께 투여되는 비히클을 나타낸다. 그러한 제약학적 담체는 멸균된 액체, 예컨대 물 및 오일, 이를테면 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 땅콩 기름, 대두유, 미네랄 오일, 참기름 등일 수 있다. 제약학적 조성물이 정맥내로 투여될 때 물이 바람직한 담체이다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한, 특히 주사용 용액을 위한 액체 담체로서 사용될 수 있다. 적합한 제약학적 부형제로는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 가루, 쵸크, 실리카겔, 스테아르산 나트륨, 모노스테아르산 글리세롤, 탈크, 염화 나트륨, 건조 탈지 우유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 들 수 있다. 필요하다면, 조성물은 또한 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀션, 정제, 환, 캡슐, 분말, 지속 방출형 제제 등의 형태를 취할 수 있다.

일반적으로, 발명의 조성물의 성분은 단위 투여 형태에 별도로 또는 함께, 예를 들어, 건조 동결건조 분말 또는 수분 없는 농축물로서, 또는 활성제의 양을 나타내는 바이알, 앰플 또는 사셰와 같은 밀폐 밀봉된 용기 중의 수용액으로서 공급된다. 조성물이 주입에 의해 투여될 경우에, 그것은 성분들이 투여 전헤 혼합되거나 희석될 수 있도록 주입 병, 또는 멸균된 제약 등급 물 또는 식염수를 함유하고 있는 주머니로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우에, 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수, 또는 식염수 또는 다른 희석제의 앰플이 제공될 수 있다.

발명은 또한 DART-A를 단독으로 또는 그러한 제약학적으로 허용되는 담체와 함께 함유한 하나 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 추가적으로, 질환의 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제가 또한 제약학적 팩 또는 키트에 포함될 수 있다. 발명은 또한 발명의 제약학적 조성물의 하나 이상의 성분으로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 선택적으로 그러한 용기(들)와 관련된 것은 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매 기관에 의한 승인을 반영하는, 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형식의 통지일 수 있다.

본 발명은 DART-A를 포함하고 상기 방법에 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 그러한 키트에서, DART-A는 바람직하게 밀폐 밀봉된 용기, 예컨대 분자의 양을 나타내고 선택적으로 사용 설명서가 포함되는 바이알, 앰플 또는 사셰에 포장된다. 한 구체예에서, 그러한 키트의 DART-A는 밀폐 밀봉된 용기 중의 건조 동결건조 분말 또는 수분이 없는 농축물로서 공급되고 대상체에게 투여하기 위해 예컨대 물, 식염수, 또는 다른 희석제로 적절한 농도로 재구성될 수 있다. 동결건조된 물질은 2℃ 내지 8℃에서 그것의 원래의 용기에 보관되어야 하고 물질은 재구성된 후 12시간 이내, 바람직하게는 6시간 이내, 5시간 이내, 3시간 이내, 또는 1시간 이내에 투여되어야 한다. 다른 구체예에서, 그러한 키트의 DART-A는 밀폐 밀봉된 용기에 수용액으로서 공급되며, 예컨대, 대상체에 투여하기 위해 물, 식염수, 또는 다른 희석제로 적절한 농도로 희석될 수 있다. 키트는 추가로 하나 이상의 용기에 암 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 및/또는 치료제를 포함할 수 있다; 및/또는 키트는 추가로 암과 관련된 하나 이상의 암 항원에 결합하는 하나 이상의 세포독성 항체를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 다른 예방제 또는 치료제는 화학요법제이다. 다른 구체예에서, 예방제 또는 치료제는 생물학적 또는 호르몬 치료제이다. 또 다른 구체예에서, 예방제 또는 치료제는 PD-1 결합 분자이다. 또 다른 구체예에서, 예방제 또는 치료제는 PD-1 리간드 결합 분자이다.

V. 발명의 조성물의 용도

DART-A는 CD123의 발현과 관련된 또는 그것을 특징으로 하는 임의의 질환 또는 상태를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 특히, DART-A는 혈액암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 그러므로, 제한 없이, 그러한 분자는 혈액암: 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 CML과 관련된 아벨슨 종양 유전자 (Bcr-ABL 전좌)의 모세포성 위기를 포함한 CLM, 골수형성 이상 증후군 (MDS), 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL), 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL), 리히터 증후군 또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL)의 리히터 변환을 포함한 CLL, 털세포 백혈병 (HCL), 모세포 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프구성 림프종 (SLL)을 포함하는 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종의 진단 또는 치료에 사용될 수 있다. DART-A는 상기 기술된 상태의 치료를 위한 의약의 제조에 추가적으로 사용될 수 있다.

특정 구체예에서, 본 발명은 AML, MDS, BPDCN, B-ALL, 및 T-ALL을 치료하는 방법을 제공한다. 한 특정 구체예에서, 본 발명은 AML을 치료하는 방법을 제공한다.

VI. 투여 방법

상기 제공된 것과 같이, 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (예컨대, DART-A) 및 그것을 포함하는 본 발명의 제약학적 조성물은 혈액암과 관련된 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 및 개선하기 위해 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물)는 하나 이상의 추가 치료제 (예컨대, 혈액암의 치료 또는 예방을 위해 기술분야에 숙련된 사람들에게 알려져 있는 치료제, 이를테면 한정하는 것은 아니지만, 현재 표준 및 실험 화학요법제, 호르몬제, 생물학적 작용제, 면역치료제, 또는 본원에 기술된 것들에 한정하는 것은 아니지만 그것들을 포함한 치료의 부작용을 완화시키는 데 유용한 작용제)와 함께 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물)는 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물)와 함께 사용될 수 있다.

본원에 사용되는 바, 용어 "조합"은 하나 이상의 치료제의 사용을 나타낸다. 용어 "조합"의 사용은 치료제들이 장애가 있는 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않거나, 또는 작용제들이 정확하게 동시에 투여되는 것을 의미하는 것이 아니라, 오히려 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 및 다른 작용제가 인간 환자 또는 다른 포유류에게, 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 및 다른 작용제가 원하는 치료적 이익을 제공할 수 있게 하는 순서로 및 시간 간격 내에 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, 각각의 치료제 (예컨대, 화학요법제, 호르몬제 또는 PD-1에 결합할 수 있는 분자와 같은 생물학적 작용제)는 동시에 또는 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다; 그러나, 만약 동시에 투여되지 않는다면, 그것들은 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위해 충분히 가까운 시간 안에 투여되어야 한다. 각각의 치료제는 별도로, 임의의 적절한 형태로, 임의의 적합한 경로에 의해, 예컨대 하나는 경구 경로에 의해 그리고 하나는 비경구 경로에 의하는 등으로 투여될 수 있다.

특히, 본 발명은 대상체에게 유효량의 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (예컨대, DART-A), 또는 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (예컨대, DART-A)를 포함하는 제약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 혈액암의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 추가로 유효량의 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물)를 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물)와 함께 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 혈액암의 치료 방법을 제공한다. 특정 측면으로, 그러한 조성물은 실질적으로 정제된다 (즉, 그것의 효과를 제한하거나 원치 않는 부작용을 유발하는 물질이 실질적으로 없다). 특정 구체예에서, 대상체는 동물, 바람직하게는 비영장류 (예컨대, 소, 말, 고양이, 개, 설치류, 등) 또는 영장류 (예컨대, 시노몰구스 원숭이와 같은 원숭이, 인간, 등)와 같은 포유류이다. 특정 구체예에서, 대상체는 인간이다.

발명의 분자를 투여하는 방법으로는, 한정하는 것은 아니지만, 비경구 투여 (예컨대, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하)를 들 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (예컨대, DART-A)는 정맥내로 투여된다. 정맥내 주입은 바람직한 투여 경로이다. 특히, 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디는 펌프를 사용하여 매개되는 연속적인 정맥내 주입 ("펌프 주입")에 의해 투여된다. 그러한 연속적인 주입은 1일당 약 1시간 내지 약 24시간의 기간을 가질 수 있지만, 바람직하게 1일당 약 24시간의 기간을 가진다. 용어 "약"은 인용된 기간의 ± 10%의 범위를 나타내는 것으로 의도된다. 즉, 약 24시간의 주입이 21.6시간 내지 26.4시간의 시간 안에 이루어지게 된다. 특정 구체예에서, 1일당 약 24시간의 기간을 가지는 연속 주입은 약 1일 내지 약 21일, 또는 약 1일 내지 약 14일, 또는 약 1일 내지 약 7일, 또는 약 1일 내지 약 4일, 또는 약 1일 내지 약 2일의 기간 동안 지속될 것이다. 연속 투여는 짧은 기간 동안 중지해야 할 필요가 있을 수 있다는 것이 이해될 것이다 (예를 들어 공급을 변경하고, 투여량을 조정하거나, 약물 공급을 보충하거나, 부작용을 관리하기 위해서, 등). 특히, 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디의 연속 투여는 하나 이상의 추가 치료제 (예컨대, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자)를 투여하기 위해 중지될 수 있다. 그러한 중지는 일상적이며 일반적으로 연속 주입 기간을 종료하는 것으로 간주되지 않는다.

특정 구체예에서, 발명의 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 정맥내로 투여된다. 특히, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 간헐적으로 투여되며 약 30분 내지 약 240분에 걸쳐 주입된다. 그러한 주입은 짧은 기간 동안 중지될 필요가 있을 수 있다는 것이 이해될 것이다 (예를 들어 공급을 변경하고, 투여량을 조정하거나, 약물 공급을 보충하거나, 부작용을 관리하기 위해서, 등). 그러한 중지는 일상적이며 일반적으로 연속 주입 기간을 종료하는 것으로 간주되지 않는다. 특정 구체예에서, 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디의 연속 투여는 발명의 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자를 투여하기 위해 중지될 수 있다.

장애와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 개선에 효과적일 발명의 조성물의 양은 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다. 제형에 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로, 상태의 중증도에 따라 좌우될 것이며, 전문가의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 유효량은 시험관내 또는 동물 모델 테스트 시스템으로부터 유래된 용량 반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다. 그러한 투여량은 수령 대상체의 체중 (kg)을 토대로 결정되거나 또는 투여되는 균일한 투여량 (즉, 환자의 체중과 무관한 용량)일 수 있고, 투여될 분자의 물리적으로 별개의 단위를 포함한다. 체중-기반 용량이 사용되는 경우 계산된 용량은 기준선에서 대상체의 체중을 토대로 투여될 것이다. 전형적으로, 기준선 또는 확립된 안정기 체중으로부터의 체중의 상당한 (≥ 10%) 변화가 용량의 재계산을 촉진할 것이다.

위에서 주지된 것과 같이, DART-A는 1일당 약 24시간을 가지는 연속 주입에 의해 바람직하게 투여된다. 그러므로, 투여량은 바람직하게 1일당 투여될 DART-A의 양을 토대로, 예를 들어, 1일당 체중 kg당 DART-A의 나노그램 (ng/kg/일)으로 결정된다. 위에서 주지된 것과 같이, 발명의 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 선택적으로 몇 시간 미만의 시간 동안 간헐적으로 투여된다. 특정 구체예에서, 각각의 용량은 체중 킬로그램당 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자의 양을 토대로 결정되며, 예를 들어 체중 킬로그램당 PD-1 mAb 1 IgG4의 밀리그램 (mg/kg)이다. 다른 구체예에서, 균일한 용량, 예를 들어 체중과 관계 없이 고정된 밀리그램의 PD-1 mAb 1 IgG가 투여된다. 용량 또는 투여량과 관련하여, 용어 "약"은 인용된 용량의 ± 10%인 범위를 나타내는 것으로 의도되어, 예를 들어, 약 30 ng/kg/일의 체중-기반 용량은 환자 체중당 27 ng/kg/일 및 33 ng/kg/일이 되고, 약 200 mg의 균이한 용량은 180 mg 내지 220 mg이 된다.

특정 구체예에서, DART-A는 1-주 (7-일) "기간" ("P")을 사용하여 투여된다. 하기에서 상세하게 논의되는 것과 같이, 투여는 처음 7-일 치료 기간 ("I7DP")을 포함하고, 하나 이상의 추가의 7-일 치료 기간 (각각은 "A7DP"임; 예컨대, A7DP 1, A7DP 2, 등)이 이어질 수 있다. 치료 사이클의 마지막 A7DP는 하나 이상의 추가 7-일 치료 기간 (각각은 "F7DP"임; 예컨대, F7DP 1, F7DP 2, 등)이 이어질 수 있다.

용어 "LID-1 도식"은 처음 7-일 치료 기간 중에 DART-A가 4일 동안 100 ng/kg/일로 투여되고 이어서 3일 정지되는 1-단계 도입 투약을 포함하는 투약 스케줄을 나타낸다. 용어 "LID-2 도식"은 처음 7-일 치료 기간 중에 DART-A가 3일 동안 30 ng/kg/일로 투여되고 이어서 다음 4일 동안 100 ng/kg/일로 투여되는 2-단계 도입 투약을 포함하는 투약 스케줄을 나타낸다. 용어 "LID-3 도식"은 DART-A가 다단계 용량 증량 (2단계 이상)을 사용하여 투여되는 다단계 도입 투약을 포함하는 투약 스케줄을 나타내며, 각각 목표 용량에 도달될 때까지 약 24시간 동안 지속된 후 DART-A가 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)의 나머지 동안 목표 용량으로 투여된다.

한 구체예에서, 처음 7-일 치료 기간 (I7DP) 중에, DART-A는 목표 용량에 도달될 때까지 다단계-상향 투약 증량을 포함하는 도입 투약 전략을 사용하여 투여된다. 한 구체예에서, 출발 용량은 약 30 ng/kg/일이고 목표 용량은 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일이다. 한 구체예에서, 목표 용량은 약 300 ng/kg/일이고 I7DP 중에 DART-A는: 제1일에 약 30 ng/kg/일의 투여량으로; 제2일에 약 60 ng/kg/일의 투여량으로; 제3일에 약 100 ng/kg/일의 투여량으로; 제4일에 약 200 ng/kg/일의 투여량으로; 및 제5, 6 및 7일에 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여된다. 또 다른 구체예에서, 목표 용량은 약 400 ng/kg/일이고 I7DP 중에, DART-A는: 제1일에 약 30 ng/kg/일의 투여량으로; 제2일에 약 60 ng/kg/일의 투여량으로; 제3일에 약 100 ng/kg/일의 투여량으로; 제4일에 약 200 ng/kg/일의 투여량으로; 제5일에 약 300 ng/kg/일의 투여량으로; 및 제6 및 7일에 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여된다. 추가의 구체예에서, 목표 용량은 약 500 ng/kg/일이고 I7DP 중에, DART-A는: 제1일에 약 30 ng/kg/일의 투여량으로; 제2일에 약 60 ng/kg/일의 투여량으로; 제3일에 약 100 ng/kg/일의 투여량으로; 제4일에 약 200 ng/kg/일의 투여량으로; 제5일에 약 300 ng/kg/일의 투여량으로; 제6일에 약 400 ng/kg/일의 투여량으로; 및 제7일에 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여된다. 본 발명은 구체적으로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 한 I7DP를 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다.

특정 구체예에서, 그러한 I7DP에는 DART-A가 7일 동안 목표 용량 (즉, 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일)으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는, 하나 이상의 추가 7-일 치료 기간 (각각은 A7DP임)이 이어진다. 일부 구체예에서 1 내지 23회의 A7DP가 투여된다. 바람직하게 3회의 A7DP가 투여된다. 특정 구체예에서, 특히 3회의 A7DP의 투여 후에 원하는 반응이 관찰되지 않은 경우에, 3회 이상의 A7DP가 투여된다. 특정 구체예에서, 4, 8, 12, 또는 16회의 더 많은 A7DP가 투여된다 (즉, 총 7, 11, 15, 19, 또는 23회의 A7DP). 한 구체예에서, 목표 용량은 약 300 ng/kg/일이고 최소 3회의 A7DP가 투여된다. 또 다른 구체예에서, 목표 용량은 약 400 ng/kg/일이고 적어도 3회의 A7DP가 투여된다. 추가의 구체예에서, 목표 용량은 약 500 ng/kg/일이고 적어도 3회의 A7DP가 투여된다. 본 발명은 구체적으로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 하나 이상의 A7DP를 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다.

특정 구체예에서, 하나 이상의 A7DP의 마지막 A7DP 후에 DART-A가 목표 용량으로 4-일 온 / 3-일 오프 스케줄로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는 (예컨대, DART-A는 F7DP의 제1, 2, 3 및 4일에 제공되지만 그러한 F7DP의 제5, 6 및 7일에는 제공되지 않음) 하나 이상의 추가 7-일 치료 기간 (각각은 F7DP임)이 이어진다. 특히, 그러한 F7DP는 제1-4일에 목표 용량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 DART-A를 투여하고, 제5-7일에는 DART-A가 투여되지 않는 것을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서 1 내지 24회의 F7DP가 투여된다. 바람직하게, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8회의 그러한 F7DP가 투여된다. 특정 구체예에서 1 내지 4회의 그러한 F7DP가 투여된다. 한 구체예에서, 목표 용량은 약 300 ng/kg/일이고 적어도 4회의 F7DP가 투여된다. 다른 구체예에서, 목표 용량은 약 400 ng/kg/일이고 적어도 4회의 F7DP가 투여된다. 추가의 구체예에서, 목표 용량은 약 500 ng/kg/일이고 적어도 4회의 F7DP가 투여된다. 본 발명은 구체적으로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 하나 이상의 F7DP를 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다.

특정 구체예에서, DART-A는 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)와 함께 투여되며, 여기서 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 2주마다 1회 ("Q2W"), 3주마다 1회 ("Q3W"), 또는 4주마다 1회 ("Q4W") 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 체중-기반 용량으로, 또는 약 200 내지 약 300 mg Q2W의 고정 용량으로 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, Q2W의 체중-기반 용량으로 투여된다. 다른 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 약 200 내지 약 375 mg Q3W의 고정 용량으로 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 약 375 mg Q3W의 고정 용량으로 투여된다. 다른 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 약 400 내지 약 500 mg Q4W의 고정 용량으로 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 약 500 mg Q4W의 고정 용량으로 투여된다.

특정 구체예에서, Q2W, Q3W, 또는 Q4W 투여는 DART-A가 투여되는 상기 기술된 하나 이상의 7-일 치료 기간과 동시에 일어난다. 그러므로, 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 Q2W, Q3W, 또는 Q4W로 투여되고, 여기서 그러한 투여는 상기 제공된 하나 이상의 7-일 치료 기간 중에 발생한다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 하나 이상의 A7DP 중에 및/또는 하나 이상의 F7DP 중에 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 하나 이상의 A7DP의 제1일에 및/또는 하나 이상의 F7DP의 제1일에 투여된다. 특정 구체예에서, DART-A의 투여는 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자의 투여 중에 중지된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 DART-A와 동일한 날에 대해 계획되었을 때 DART-A 전에 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자의 제1 용량은 2회 7-일 치료 기간 후에, 바람직하게 제15일에 투여되고 추가 용량은 그 후에 Q2W, Q3W, 또는 Q4W로 투여된다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자의 Q2W, Q3W, 또는 Q4W 투여는 DART-A의 최종 용량이 투여된 후 계속된다.

특정 구체예에서, 치료는 4-주 (28일) 치료 사이클로 나누어진다. 한 구체예에서, 제1 치료 사이클 ("치료 사이클 1")은 하나의 I7DP와 이어지는 3회의 A7DP를 포함하여 4-주 치료 사이클 1을 구성한다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 또한 그러한 치료 사이클 1 중에 투여된다. 한 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 그러한 치료 사이클 1의 제15일 (즉, 제2 A7DP의 제1일)에 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 용량으로 투여된다.

특정 구체예에서, 적어도 하나의 제2 치료 사이클 (각각 "치료 사이클 2")은 선택적으로 투여된다. 적어도 하나의 치료 사이클 2의 투여는 사이클 1의 투여 후에 원하는 반응이 관찰되지 않은 경우에 특히 바람직하다. 특정 구체예에서, 각각의 치료 사이클 2는 4회의 A7DP를 포함하여 4-주 (28일) 치료 사이클 2를 구성한다. 선택적으로, 치료 사이클 2는 목표 용량으로 DART-A의 추가 투여를 제공하기 위해 연속적인 7-일 스케줄로 반복될 수 있다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 또한 그러한 치료 사이클 2 중에 투여된다. 한 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 각각의 치료 사이클 2의 제1일 및 제15일 (즉, 제1 A7DP의 제1일 및 제3 A7DP의 제1일)에 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 체중-기반 용량으로 투여된다.

특정 구체예에서, 적어도 하나의 제3 치료 사이클 (각각 "치료 사이클 3")이 투여된다. 특정 구체예에서, 치료 사이클 3은 4회의 F7DP를 포함하여 4-주 (28일) 치료 사이클 3을 구성한다. 특정 구체예에서, 적어도 하나의 치료 사이클 3은 치료 사이클 1 후에 투여된다. 다른 구체예에서, 적어도 하나의 치료 사이클 3은 적어도 하나의 치료 사이클 2의 투여 후에 투여된다. 선택적으로, 치료 사이클 3은 목표 용량으로 연속적인 4-일 온 / 3-일 오프 스케줄로 DART-A의 추가 투여를 제공하기 위해 반복될 수 있다. 특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 또한 그러한 치료 사이클 3 중에 투여된다. 한 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 각각의 치료 사이클 3의 제1일 및 제15일 (즉, 제1 F7DP의 제1일 및 제3 F7DP의 제1일)에 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 용량으로 투여된다.

특정 구체예에서, DART-A는 치료 사이클 1에 따라 투여된 후, 치료 사이클 2에 따라 추가로 투여되며, 치료 사이클 2는 반복될 수 있고, 그런 후 치료 사이클 3에 따라 추가로 투여되며, 치료 사이클 3은 반복될 수 있다. 다른 구체예에서, 치료 사이클 2는 투여되지 않는다. 따라서, 그러한 구체예에서, DART-A는 치료 사이클 1에 따라 투여된 후, 치료 사이클 3에 따라 추가로 투여되고, 치료 사이클 3은 반복될 수 있다. 본 발명은 구체적으로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 치료 사이클 1을 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다. 본 발명은 추가로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 치료 사이클 1과 이어서 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 치료 사이클 2를 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다. 본 발명은 추가로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 치료 사이클 1과 이어서 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 적어도 하나의 치료 사이클 2와 이어서 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 적어도 하나의 치료 사이클 3을 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다. 치료 사이클 1, 치료 사이클 2, 및 치료 사이클 3을 포함하는 예시의 LID-3 도식은 하기 표 10B에 제공된다. 본 발명은 추가로 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 치료 사이클 1과 이어서 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따르는 적어도 하나의 치료 사이클 3을 포함하는, 혈액암을 치료하는 방법을 포함한다. 치료 사이클 1, 및 치료 사이클 3을 포함하는 예시의 LID-3 도식은 하기 표 10A에 제공된다.

특정 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 그러한 치료 사이클 1의 제15일 (즉, 제2 A7DP의 제1일)에 투여된다. 상기에서 제공괸 것과 같이, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자의 추가 용량은 Q2W, Q3W, 또는 Q4W로 투여된다. 따라서, 그러한 추가 용량은 각각의 치료 사이클 2, 각각의 치료 사이클 3 중에 투여되며, DART-A의 마지막 용량이 투여된 후에 계속해서 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, DART-A는 치료 사이클 1에 따라 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)와 함께 투여된 후, 추가로 치료 사이클 2에 따라 투여될 수 있고, 치료 사이클 2는 반복될 수 있으며, 그런 후에 치료 사이클 3에 따라 추가로 투여될 수 있다. 치료 사이클 1, 치료 사이클 2, 및 치료 사이클 3을 포함하는, PD-1 mAb 1 IgG4와 조합된 DART-A의 투여를 위한 예시의 투약 스케줄은 하기 표 11B에 제공된다. 다른 구체예에서, 치료 사이클 2는 투여되지 않는다. 따라서, 그러한 구체예에서, DART-A는 치료 사이클 1에 따라 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)와 함께 투여된 후, 치료 사이클 3에 따라 추가로 투여될 수 있다. 치료 사이클 1, 및 치료 사이클 3을 포함하는, PD-1 mAb 1 IgG4와 조합된 DART-A의 투여를 위한 예시의 투약 스케줄은 하기 표 11A에 제공된다. 특정 구체예에서, 치료 사이클 3 후에 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)의 하나 이상의 추가 용량을 Q2W, Q3W 또는 Q4W로 투여하는 것이 이어진다. 치료 사이클 3 후에 추가 용량의 PD-1 mAb 1 IgG4 (Q2W)를 투여하는 것을 포함하는, PD-1 mAb 1 IgG4와 조합된 SART-A의 투여를 위한 예시의 투약 스케줄은 하기 표 11A-11B에 제공된다.

한 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는:

(a) 펨브롤리주맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(b) 니볼루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(c) 세미플리맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(c) PD-1 mAb 1의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(d) 아테졸리주맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(e) 아벨루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(f) 두르발루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인; 또는

(h) 표 3 또는 4에 제공된 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인

을 포함한다.

특정 구체예에서 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 PD-1 mAb 1 IgG4이다. 또 다른 특정 구체예에서, PD-1 mAb 1 IgG4는 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여된다.

상기 구체예들 중 임의의 구체예에서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 동일한 날에 투여될 때 DART-A의 투여 전에 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 상기 구체예들 중 임의의 구체예에서, DART-A의 투여는 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)가 투여되는 동안 정지될 수 있다. 대안으로, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, PD-1 mAb 1 IgG4)는 DART-A가 투여되는 것과 동시에 정맥내 주입에 의해 투여된다. 그러한 투여는 상이한 부위에서 (예컨대, DART-A는 환자의 왼팔에 정맥내를 통해, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 환자의 오른팔에 정맥내를 통해), 또는 동일한 부위에서 (예컨대, 동일한 정맥내 라인을 통해) 일어날 수 있다.

특정 구체예에서, 하나 이상의 추가적인/대체 작용제가 발생할 수 있는 주입 관련 반응 ("IRR") 및/또는 사이토카인 방출 증후군 ("CRS")을 관리하기 위해 DART-A 투여 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 특정 구체예에서, DART-A의 투여는 하나 이상의 추가적인/대체 작용제가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여되는 동안 정지된다. 특정 구체예에서, 덱사메탄손 (또는 동등물)과 같은 스테로이드의 하나 이상의 용량이 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, IL-6 억제제, IL-6R 억제제, TNFα 억제제, 및/또는 IL-1R 억제제의 하나 이상의 용량이 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여된다.

특정 구체예에서, 스테로이드의 하나 이상의 용량이 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여된다. 스테로이드의 용량은 실제 또는 잠재적인 IRR 및/또는 CRS를 감쇠 또는 제거하기에 충분하도록 선택될 것이다. 특정 구체예에서, 스테로이드는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예를 따라 투여되는 I7DP 전에, 중에 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, 스테로이드는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예를 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속) A7DP 전에, 중에 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, 스테로이드는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예를 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속) F7DP 전에, 중에 및/또는 후에 투여된다. 상기 구체예들 중 임의의 구체예에서, DART-A의 투여는 스테로이드의 하나 이상의 용량이 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여되는 동안 정지될 수 있다.

한 구체예에서, 스테로이드는 덱사메타손 (또는 동등물)과 같은 장기 지속되는 스테로이드 (약 48시간 이상의 반감기를 가짐)이다. 또 다른 구체예에서, 스테로이드는 메틸프레드니솔론 (또는 동등물)과 같은 중간 지속기간의 스테로이드 (약 12-36시간의 반감기를 가짐)이다. 또 다른 구체예에서, 스테로이드는 하이드로코르티손 (또는 동등물)과 같은 단기간 지속되는 스테로이드 (약 12시간 이하의 반감기를 가짐)이다. 특정 구체예에서, 스테로이드는 DART-A 투약 전 (예컨대, 최대 30분 전)에 투여된 (예컨대, 정맥내에 의해 10-20 mg 덱사메타손) 후 DART-A의 투여 중에 및/또는 후에 추가 용량이 이어진다 (예컨대, DART-A 투약이 개시된 후 12시간 후 정맥내에 의해 4 mg). 덱사메타손 (또는 동등물)과 같은 스테로이드가 또한 DART-A 투약의 변화 전 (예컨대, 최대 30분 전)에 투여될 수 있고 (예컨대, 정맥내에 의해 10-20 mg) 그런 후 변화된 DART-A 용량의 투여 후에 추가 용량이 이어진다 (예컨대, DART-A 투약이 개시된 후 12시간 후 정맥내에 의해 4 mg).

특정 구체예에서, 하나 이상의 용량의 IL-6/IL-6R 억제제가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여된다. IL-6/IL-6R 억제제의 용량은 실제 또는 잠재적인 IRR 및/또는 CRS를 감쇠 또는 제거하기에 충분하도록 선택될 것이다. 특정 구체예에서, IL-6/IL-6R 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예를 따라 투여되는 I7DP 전에, 중에 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, IL-6/IL-6R 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예를 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속되는) A7DP 전에, 중에 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, IL-6/IL-6R 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예를 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속되는) F7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 상기 구체예들 중 임의의 구체예에서, DART-A의 투여는 하나 이상의 용량의 IL-6/IL-6R 억제제가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여되는 동안 정지될 수 있다.

한 구체예에서, IL-6/IL-6R 억제제는 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체, 예를 들어, 토실리주맙 (ACTEMRA®; DrugBank 수탁 번호 DB06273), 실툭시맙 (SYLVANT®; DrugBank 수탁 번호 DB09036), 또는 클라자키주맙(clazakizumab) (DrugBank 수탁 번호 DB12849)이다 (참고, Lee, D.W. et al. (2014) "Current Concepts In The Diagnosis And Management Of Cytokine Release Syndrome", Blood 124(2):188-195; Shimabukuro-Vornhagen, A. et al. (2018) "Cytokine Release Syndrome", J. ImmunoTher. Canc. 656, pages 1-14).

한 구체예에서, IL-6/IL-6R 억제제는 토실리주맙이며, 예를 들어, 정맥내 주입에 의해 약 4 mg/kg 내지 약 12 mg/kg의 용량으로, 특히 약 4 mg/kg 내지 약 8 mg/kg의 용량으로 투여된다. 또 다른 구체예에서, IL-6/IL-6R 억제제는 실툭시맙이고, 예를 들어, 정맥내 주입에 의해 약 1 mg/kg 내지 약 11 mg/kg의 용량으로, 특히 약 11 mg/kg의 용량으로 투여된다.

특정 구체예에서, 하나 이상의 용량의 TNFα 억제제가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여된다. TNFα 억제제의 용량은 실제 또는 잠재적인 IRR 및/또는 CRS를 감쇠 또는 제거하기에 충분하도록 선택될 것이다. 특정 구체예에서, TNFα 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여되는 I7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, TNFα 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속되는) A7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, TNFα 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속되는) F7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 상기 구체예들 중 임의의 구체예에서, DART-A의 투여는 하나 이상의 용량의 TNFα 억제제가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여되는 동안 정지될 수 있다.

한 구체예에서, TNFα 억제제는 항-TNFα 항체, 예를 들어, 아달리무맙(adalimumab) (HUMIRA®) 또는 그것의 바이오시밀러(biosimilar) (예컨대, 아달리무맙-atto (AMJEVITA®) (Scheinfeld, N. (2003) "Adalimumab (HUMIRA): A Review", J. Drugs Dermatol. 2(4):375-377; DrugBank 수탁 번호 DB00051); 세르톨리주맙 페골(certolizumab pegol) (CIMZIA®) 또는 그것의 바이오시밀러 (Goel, N. et al. (2010) "Certolizumab pegol" MAbs. 2(2):137-147; DrugBank 수탁 번호 DB08904); 골리무맙(golimumab) (SIMPONI®) 또는 그것의 바이오시밀러 (Mazumdar, S. et al. (2009) "Golimumab", mAbs. 1(5):422-431; DrugBank 수탁 번호 DB06674), 인플릭시맙(infliximab) (REMICADE®) 또는 그것의 바이오시밀러 (예컨대, INFLECTRA®, SB2 etc. (Smolen, J.S. (2011) "Infliximab: 12 Years Of Experience", Arthritis Res. Ther. 13(Suppl 1:S2) pages 1-18; Lamb, Y.N. (2017) "SB2: An Infliximab Biosimilar", BioDrugs. 31(5):461-464); DrugBank 수탁 번호 DB00065)이거나, 또는 TNFα-차단 수용체 융합 단백질, 예를 들어, 에타너셉트(etanercept) (ENBREL®) 또는 그것의 바이오시밀러 (예컨대, BENEPALI®, etanercept-szzs (EREIZI®), GP2015, etc. (Deeks, E.D. (2017) "GP2015: An Etanercept Biosimilar", Biodrugs 31:555-558; Cantini, F. et al. (2018) "Focus On Biosimilar Etanercept - Bioequivalence And Interchangeability", Biologics: Targets and Therapy 2018:12 87-95; DrugBank 수탁 번호 DB00005)이다.

한 구체예에서, 사용된 TNFα 억제제는 아달리무맙 또는 그것의 바이오시밀러이며, 예를 들어, 피하 주사에 의하여 약 40 mg의 용량으로 또는 약 80 mg의 용량으로 투여된다. 한 구체예에서, TNFα 억제제는 세르톨리주맙 페골, 또는 그것의 바이오시밀러이며, 예를 들어, 피하 주사에 의하여 약 200 mg의 용량으로 투여된다. 한 구체예에서, TNFα 억제제는 골리무맙, 또는 그것의 바이오시밀러이며, 예를 들어, 피하 주사에 의하여 약 50 mg 내지 약 100 mg의 용량으로 투여되거나, 또는 예를 들어, 정맥내 주입에 의하여 약 50 mg의 용량으로 투여된다. 한 구체예에서, TNFα 억제제는 인플릭시맙 또는 그것의 바이오시밀러이며, 예를 들어, 정맥내 주입에 의해 약 100 mg 또는 약 5 mg/kg 체중의 용량으로 투여된다. 한 구체예에서, TNFα 억제제는 에타너셉트 또는 그것의 바이오시밀러이며, 예를 들어, 피하 주사에 의하여 약 25 mg 내지 약 50 mg의 용량으로 투여된다.

특정 구체예에서, 하나 이상의 용량의 IL-1R-기반 억제제 (예컨대, 아나킨라(anakinra) (KINERET®; DrugBank 수탁 번호 DB00026)가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여된다. IL-1R-based 억제제의 용량은 실제 또는 잠재적인 IRR 및/또는 CRS를 감쇠 또는 제거하기에 충분하도록 선택될 것이다. 특정 구체예에서, IL-1R-based 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여되는 I7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, IL-1R-기반 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속되는) A7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 또 다른 특정 구체예에서, IL-1R-based 억제제는 DART-A가 상기 구체예들 중 임의의 구체예에 따라 투여되는 제1 (또는 임의의 후속되는) F7DP 전에, 중에, 및/또는 후에 투여된다. 상기 구체예들 중 임의의 구체예에서, DART-A의 투여는 하나 이상의 용량의 IL-1R 억제제가 IRR 및/또는 CRS를 관리하기 위해 투여되는 동안 정지될 수 있다.

한 구체예에서, IL-1R 억제제는 아나킨라이며, 예를 들어, 피하 주사에 의하여 약 100 mg 내지 약 150 mg의 용량으로 투여된다.

VII. 발명의 구체예

이제 발명이 일반적으로 기술되었지만, 발명은 예시에 의해 제공되며 명시되지 않는 한 본 발명을 제한하려는 의도가 아닌 다음의 번호가 매겨진 구체예 ("E")를 참조하여 보다 쉽게 이해될 것이다:

E1. 그것을 필요로 하는 대상체에게 CD123 x CD3 결합 분자를 투여하는 단계를 포함하는 혈액암의 치료 방법으로서,

(I) 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 SEQ ID NO:21의 아미노산 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬 및 SEQ ID NO:23의 아미노산 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬로 이루어지는 디아바디이고; 및

(II) 상기 방법은 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)을 포함하며, 여기서:

(A) 상기 I7DP의 제1일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 30 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;

(B) 상기 I7DP의 제2일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 60 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;

(C) 상기 I7DP의 제3일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 100 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 주입에 의해 투여되고;

(D) 상기 I7DP의 제4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 200 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;

(E) 상기 I7DP의 제5일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;

(F) 상기 I7DP의 제6일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며; 및

(G) 상기 I7DP의 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는, 방법.

E2. 대상체의 혈액암의 치료에 사용하기 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서,

(II) 상기 사용은 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)을 포함하며, 여기서:

(G) 상기 I7DP의 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는, CD123 x CD3 결합 분자.

E3. E1의 방법, 또는 E2의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 방법 또는 상기 사용은 하나 이상의 추가 7-일 치료 기간 (A7DP)을 포함하며, 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 각각의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E4. E1 또는 E3 중 어느 하나의 방법, 또는 E2 또는 E3 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 I7DP의 제6일, 및 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E5. E3 또는 E4 중 어느 하나의 방법, 또는 E3 또는 E4 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 A7DP(들) 중 적어도 하나의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E6. E1 또는 E3 중 어느 하나의 방법, 또는 E2 또는 E3 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 I7DP의 제6일 및 7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E7. E3 또는 E6 중 어느 하나의 방법, 또는 E3 또는 E6 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E8. E1 또는 E3 중 어느 하나의 방법, 또는 E2 또는 E3 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 I7DP의 제6일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로, 및 상기 I7DP의 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E9. E3 또는 E8 중 어느 하나의 방법, 또는 E3 또는 E8 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E10. E3-E9 중 어느 하나의 방법, 또는 E3-E9 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 3회의 상기 A7DP를 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E11. E10의 방법, 또는 E10의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 추가적인 4, 8, 12, 16, 또는 20회의 상기 A7DP를 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E12. E3-E11 중 어느 하나의 방법, 또는 E3-E11 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 A7DP의 적어도 하나에 이어 하나 이상의 추가 7-일 치료 기간 (F7DP)이 이어지고, 여기서 상기 하나 이상의 F7DP의 각각의 제1-4일에 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 투여되고, 상기 하나 이상의 F7DP의 각각의 제5-7일에 상기 대상체는 상기 CD123 x CD3 결합 분자가 제공되지 않는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E13. E12의 방법, 또는 E12의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E14. E13의 방법, 또는 E13의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E15. E13의 방법, 또는 E13의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E16. E13의 방법, 또는 E13의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E17. E12-E16 중 어느 하나의 방법, 또는 E12-E16 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 4회의 상기 F7DP를 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E18. E17의 방법, 또는 E17의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 추가적인 4, 8, 12, 16, 또는 20회의 F7DP를 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E19. E1 또는 E3-E18 중 어느 하나의 방법, 또는 E2-E18 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 방법 또는 사용은 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자를 투여하는 것을 추가로 포함하고, PD-1에 결합할 수 있는 상기 분자는 PD-1에 결합하는 항체의 에피토프 결합 도메인을 포함하며, PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 분자는 PD-1의 천연 리간드에 결합하는 항체의 에피토프 결합 도메인을 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E20. E19의 방법, 또는 E19의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 2주마다 1회 (Q2W), 3주마다 1회 (Q3W), 또는 4주마다 1회 (Q4W) 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E21. E19-E20 중 어느 하나의 방법, 또는 E19-E20 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 제15일에 시작하여 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E22. E21의 방법 또는 E21의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 제15일에 시작하여 Q2W로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E23. E21의 방법 또는 E21의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 제15일에 시작하여 Q3W로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E24. E21의 방법 또는 E21의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 제15일에 시작하여 Q4W로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E25. E19-E24 중 어느 하나의 방법, 또는 E19-E24 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 하나 이상의 상기 F7DP의 제1일에 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E26. E19-E25 중 어느 하나의 방법, 또는 E19-E25 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는:

(a) 펨브롤리주맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(b) 니볼루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(c) 세미플리맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(c) PD-1 mAb 1의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(d) 아테졸리주맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(e) 아벨루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;

(f) 두르발루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인; 또는

(h) 표 3 또는 4에 제공된 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인

을 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E27. E26의 방법, 또는 E26의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는:

(a) PD-1 mAb 1의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하거나; 또는

(b) PD-1 mAb 1 IgG4인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E28. E19-E27 중 어느 하나의 방법, 또는 E19-E27 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E29. E19-E28 중 어느 하나의 방법, 또는 E19-E28 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 하나 이상의 용량의 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자를 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 마지막 용량이 투여된 후 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E30. E1, E3-E29 중 어느 하나의 방법, 또는 E2-E29 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 방법 또는 상기 사용은 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 상기 투여 전에, 중에, 및/또는 후에 코르티코스테로이드 및/또는 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체를 정맥내 주입에 의해 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E31. E30의 방법, 또는 E28의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 코르티코스테로이드는 덱사메타손, 메틸프레드니솔론 및 하이드로코르티손으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E32. E30의 방법, 또는 E29의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 코르티코스테로이드는 덱사메타손인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E33. E30의 방법, 또는 E29의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 코르티코스테로이드는 메틸프레드니솔론인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E34. E30의 방법, 또는 E29의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 코르티코스테로이드는 하이드로코르티손인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E35. E31-E32 중 어느 하나의 방법, 또는 E31-E32 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 덱사메타손은 약 10 mg 내지 약 20 mg의 투여량으로 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 투여 전에 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E36. E31-E32 또는 E35 중 어느 하나의 방법, 또는 E31-E32 또는 E35 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 방법 또는 사용은 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 투여 중에 및/또는 후에 약 4 mg의 투여량으로 덱사메타손을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E37. E1 또는 E3-E36 중 어느 하나의 방법, 또는 E2-E36 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 방법 또는 사용은 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 투여 후에 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체를 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E38. E37의 방법, 또는 E37의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 투여된 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체는 토실리주맙 또는 실툭시맙인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E39. E38의 방법, 또는 E38의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 투여된 항-IL-6R 항체는 토실리주맙이고, 상기 토실리주맙은 약 4 mg/kg 내지 약 8 mg/kg의 투여량으로 투여되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E40. E1 또는 E3-E39 중 어느 하나의 방법, 또는 E2-E39 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 혈액암은 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 CML과 관련된 아벨슨 종양 유전자 (Bcr-ABL 전좌)의 모세포성 위기를 포함한 CML, 골수형성 이상 증후군 (MDS), 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL), 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL), 리히터 증후군 또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL)의 리히터 변환을 포함한 CLL, 털세포 백혈병 (HCL), 모세포 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프구성 림프종 (SLL)을 포함한 비호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E41. E40의 방법, 또는 E40의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 혈액암은 급성 골수성 백혈병인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E42. E40의 방법, 또는 E40의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 혈액암은 골수형성 이상 증후군인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E43. E40의 방법, 또는 E40의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 혈액암은 모세포 형질세포양 수지상 세포 신생물인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E44. E40의 방법, 또는 E40의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 혈액암은 급성 T 림프모세포성 백혈병인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E45. E40의 방법, 또는 E40의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 혈액암은 급성 B 림프모세포성 백혈병인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

E46. E1 또는 E3-E45 중 어느 하나의 방법, 또는 E2-E45 중 어느 하나의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서, 상기 대상체는 인간인 것인 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.

실시예

이제 일반적으로 발명이 기술되었지만, 발명은 예시에 의해 제공되고 명시되지 않는 한 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는 하기 실시예를 참조하여 보다 쉽게 이해될 것이다.

실시예 1

원발성 AML 환자 샘플 중의 CD123 x CD3 DART® 분자의 활성

원발성 AML 환자 샘플의 CD23-발현 세포를 사멸시키는 DART-A의 능력을 조사하였다. AML 환자 일차 PBMC (82% 블라스트 함유)를 CD123 x CD3 DART® 분자, FITC x CD3 대조군 DART® 분자, 또는 인산염 완충 식염수 (PBS)로 144시간 동안 처리하였다. E:T 세포 비율은 연구를 시작할 때 PBMC 중의 블라스트 및 T 세포 백분율로부터 측정한 바 대략 1:300이었다. 백혈병 모세포(CD45+/CD33+)의 절대 수를 도 2A에 도시한다. T 세포 (CD4+ 및 CD8+)의 절대 수를 도 2B에 도시한다. 도 2C는 T-세포 활성화 (CD25 발현)를 도시한다. 배양 상층액에서 측정된 사이토카인을 도 2D에 도시한다.

실시예 2

DART-A로 처리된 샘플의 특성화

AML 환자로부터의 PBMC 샘플을 상업적 공급처로부터 얻어서 500, 50, 또는 5 pg/ml의 DART-A로 48시간 동안 처리하였다. IFN-γ 방출을 측정하고 세포를 PD-1, PD-L1, CD3, CD4 및 CD8에 대해 염색하였다. 도 3A에서 나타난 것과 같이, DART-A 분자와 함께 인큐베이션된, AML 환자로부터의 PBMC 샘플에서, IFN-γ는 용량 의존성 방식으로 유도되었고, PD-1 상향조절이 CD4⁺ 및 CD8⁺ T-세포에서 모두 관찰되었으며 (도 3B), PD-L1 상향조절이 AML 블라스트 상에서 관찰되었다 (도 3C). IFN-γ는 AML 블라스트에서 PD-L1 발현을 유도하는 것으로 보고되었다 (Kronig, et al., (2014) "Interferon-Induced Programmed Cell Death-Ligand 1 (PD-L1/B7-H1) Expression Increases on Human Acute Myeloid Leukemia Blast Cells During Treatment", European Journal of Haematology, 92:195-203)).

별도의 연구로, 상업적 AML-PBMC 샘플 ( RPMI 1640/10% FBS 중의)을 DART-A 분자 (2000, 666.67, 222.22, 74.07, 24.69, 또는 8.23 pg/ml) +/- 항-PD-1 mAb (PD-1 mAb 1 IgG4; 10 μg/ml)와 함께 48 또는 72시간 동안 인큐베이션하였다. 4420 x CD3 대조군 디아바디 (2000, 666.67, 또는 222.22 pg/ml) 및 항-RSV mAb를 동형 (음성) 대조군으로서 사용하였다. CD4⁺ 및 CD8⁺ 세포에서 PD-1의 세포 표면 발현을 조사하였고 PD-1 및 CD4⁺ 또는 CD8⁺를 공동 발현하는 세포의 퍼센트를 측정하였다. 더불어, 사이토카인을 BD^TM 세포측정 비드 어레이 (CBA) 키트 (BD Biosciences; San Jose, CA)를 사용하여 검출하였고 비-T 세포의 퍼센트를 조사함으로써 세포 사멸을 평가하였다. 하나의 그러한 AML-PBMC 샘플에 대한 PD-1의 발현을 CD4⁺ 세포에서 (CD4⁺ 세포의 총 증가 도 4A, %CD4⁺PD-1⁺ 세포 도 4B) 및 CD8⁺ 세포에서 (CD8⁺ 세포의 총 증가 도 4C, %CD8⁺PD-1⁺ 세포 도 4D) 도시하고 DART-A로의 처리로부터 유발되는 CD4⁺ 및 CD8⁺ 세포 상에서의 향상된 발현이 항-PD-1 항체 체크포인트 억제제의 존재 하에 감쇠된 것을 입증한다. 도 5A-5D에 제공된 데이터 (표 5에 요약됨)는 많은 사이토카인의 방출이 시험관내에서, GM-CSF (도 5A), INF-γ (도 5B), IL-2 (도 5C) 및 TNF-α (도 5D)를 포함한, DART-A 분자와 항-PD-1 항체 체크포인트 억제제의 조합에 의해 향상된 것을 보여준다. 이들 데이터는 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (여기서 항-PD-1 항체)와 조합된 DART-A 분자로의 AML 세포의 처리가 PD-1의 감쇠된 발현 및 향상된 T-세포 활성을 초래한 것을 나타낸다. 도 6에서 나타난 것과 같이, 72시간 째에, 낮은 DART-A 농도에서의 조합으로 처리된 세포에 대해 세포 사멸의 향상이 관찰되었다. 사이토카인 방출의 증가의 관점에서, 세포 사멸의 향상은 나중 시점에 더 커질 것으로 예상된다.

사이토카인	DART-A (pg/mL)	항-PD-1 항체로의 % 증가
사이토카인	DART-A (pg/mL)	48시간	72시간
GM-CSF	2000	96.4	122.6
	666.67	90.2	108.4
	222.22	89.5	105.2
	74.07	54.5	75.6
	24.69	29.4	81.4
INF-γ	2000	49.5	54.3
	666.67	47.1	57.1
	222.22	62.0	75.9
	74.07	49.2	73.6
	24.69	50.9	98.5
IL-2	2000	74.8	92.0
	666.67	69.6	76.5
	222.22	58.8	63.8
	74.07	57.2	60.0
	24.69	48.7	64.6
TNF-α	2000	163.8	186.6
	666.67	143.3	149.0
	222.22	112.9	72.6

이들 연구는 DART-A 치료가 향상된 IFN-γ 분비, 및 T-세포 상에서의 PD-1 발현 및 AML 블라스트에 의한 PD-L1 발현의 상향조절과 관련되고 이것은 DART-A-매개된 사멸에 대한 더 적은 민감성을 초래할 수 있음을 나타낸다. 이들 연구는 추가로 DART-A 요법을 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합하는 분자, 예컨대 항-PD1 항체와 조합시키는 것이 CD123-발현 암세포의 T-세포 재지향된 사멸을 매개하는 데 있어 DART-A 분자의 효과를 향상시키는 것을 추가로 나타낸다. 어떠한 특정 이론에 구속되지는 않지만, 그러한 향상은 PD-1 체크포인트의 억제 활성을 극복함으로써 유발될 수 있다. 그러한 조합은 CD123 발현 혈액암 (예컨대, 재발된 또는 난치성 AML, B-ALL, T-ALL, 또는 MDS)을 가진 환자에서 특히 유용하다.

실시예 3

AML 및 MDS에서 초기 도입 투여 CD123 x CD3 DART 디아바디

급성 골수성 백혈병 (AML)은 인터류킨 3 수용체의 알파 사슬 (IL-3Rα)인 CD123의 고수준을 가진 CD34+, CD38^- 세포의 팽창을 특징으로 한다. CD123은 AML 환자의 >90%에서 및 MDS 환자의 적어도 50%에서 고도로 발현된다. AML 블라스트에서 CD123 발현은 고위험 질환 및 질환 진행과 관련이 있었고, CD123 표적화된 접근법으로 우선적 절제의 유망한 전략을 가능하게 한다. AML 블라스트 및 백혈구 줄기 세포가 고위험 질환 및 진환 진행과 관련된 CD123을 고도로 발현하는 반면 정상 조혈 줄기 세포 상에서의 CD123 발현은 최소한이기 때문에, AML (및 골수형성 이상 증후군 (MDS))은 CD123-기반 면역요법에 대한 합리적 표적이다.

본 발명의 DART-A 분자는 이펙터 세포로서 CD3-발현 T 림프구에 의한 인식 및 제거를 위해 시험관내에서 CD123-발현 세포주 및 일차 AML 블라스트를 표적화하는 강력한 활성을 나타내며, 마우스에서 백혈구 세포주의 성장을 억제하고 시노몰구스 원숭이에서 CD123-양성 형질세포양 수지상 세포를 고갈시킬 수 있음으로써, CD123-표적화된 접근법으로 AML의 우선적인 절제를 위한 전략을 제공한다.

단일-환자 용량 증량

DART-A에 대한 환자의 내약성을 측정하기 위하여, "단일-환자 용량 증량 연구"를 수행하였다. 단일 환자 미니 집단을 3 ng/kg/일, 이어서 10 ng/kg/일, 이어서 30 ng/kg/일, 이어서 100 ng/kg/일의 도입 투약 전략을 사용하여 연속적인 정맥내 주입 (CIV)으로 투여하였고, 용량의 각각의 그러한 진행은 용량 제한 독성 (DLT)이 33% 미만인 경우에 발생하였다. 부작용 (AE)가 등급 2 이상이면 집단을 4명의 환자로 증가시켰다. 이 연구의 결과는 DART-A가 모든 테스트된 투여량에서 허용되었음을 나타냈다.

초기 도입 용량 최적화

사이토카인 방출 증후군 (CRS)에 대한 잠재성을 수반하는 사이토카인 분비는 T-세포 활성화 및 T-세포 재지향 요법으로의 제한 독성에 고유하다. AML 및 MDS의 치료에서 그러한 T-세포 활성화를 매개하는 DART-A의 능력의 1상 연구에서, 토실리주맙으로의 초기 개입과 함께 ((Maude, S.L. et al. (2014) "Managing Cytokine Release Syndrome Associated with Novel T Cell-Engaging Therapies". Cancer Journal 20:119-122), 2가지 도입 용량 ("LID") 전략을, CRS를 매개하는 능력과 비교하였다.

간단히 설명하면, 제1 LID 전략에서 ("LID-1 도식"), DART-A를 초기 7-일 치료 기간 ("LID-1") 중 4일 동안 100 ng/kg/일로 투여한 후 3일을 중단하고, 제8일에 시작하여 집단 목표 용량 (예컨대, 300 ng/kg/일 또는 500 ng/kg/일)으로 치료를 재개하였다. 제2 LID 전략 ("LID-2 도식")은 DART-A가 30 ng/kg/일로 3일 동안 투여되고, 이어서 100 ng/kg/일으로 4일 동안 투여되는 2-단계 LID ("LID-2")를 처음 7-일 치료 기간 동안 포함하며, 그런 후 DART-A가 2-4주 동안 연속 투약 스케줄 (즉, 한 주간 매일 목표 용량으로 DART-A의 투여)을 사용하여 집단 목표 용량 (예컨대, 300-1000 ng/kg/일)으로 투여되는 3회의 추가적인 7-일 치료 기간 (각각은 "A7DP"임) 또는 DART-A가 간헐적 투약 스케줄 (즉, 4일 동안 집단 목표 용량으로 DART-A의 투여 후 DART-A가 투여되지 않는 3일의 정지)을 사용하여 집단 목표 용량 (예컨대, 300-1000 ng/kg/일)으로 투여되는 3회의 추가 7-일 치료 기간 (각각은 "F7DP"임)이 이어진다. 특히, LID-2 도식은 사이클 1/1주차 ("C1W1") 동안 2-단계 LID (즉, 3일 동안 30 ng/kg/일의 초기 LID와 이어서 4일 동안 100 ng/kg/일의 제2 LID)를 포함하며, 이어서 사이클 1/2주차 - 사이클 1/4주차 (C1W2 - C1W4) 동안 어느 하나의 투약 스케줄 (연속적 (A7DP) 또는 간헐적 (F7DP))로 집단 목표 용량 (예컨대, 300-1000 ng/kg/일)으로 DART-A가 투여되는 3회의 7-일 치료 기간이 이어진다.

사이클 2 ("C2"), 5주차 - 8주차 (W5 - W8), 및 그 이상의 기간에서, 환자는 4-일 온 / 3-일 오프 간헐적 용량 스케줄로, 최대 12 사이클 동안 목표 용량으로 치료되며, 완전한 관해 ("CR") 또는 불완전환 혈구 수 회복 ("CRi") 후 2 사이클이 이어진다. 만약 임상적으로 표시된다면, 사이토카인 방출 증후군 ("CRS") 증상을 관리하기 위해 스테로이드를 적게 쓰는 항-사이토카인 (토실리주맙) 요법을 사용한다. 질환 상태는 국제 작업 그룹 ("IWG") 기준에 의해 평가한다. 샘플을 약동학 ("PK"), 항-약물 항체 ("ADA") 및 IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, TNFα, IFN-γ 및 GM-CSF를 포함한 사이토카인 분석을 위해 수집한다. 치료 후 골수 생검을 또한 얻을 수 있다.

LID-2 도식 - 간헐적 투약
기간	치료 주간	사이클 일수	용량
사이클 1
LID-2	1	1 - 3일	30 ng/kg/일
		4 - 7일	100 ng/kg/일
F7DP 1	2	8 - 11일	300-1000 ng/kg/일
		12 - 14일	약물 없음
F7DP 2	3	15 - 18일	300-1000 ng/kg/일
		19 - 21일	약물 없음
F7DP 3	4	22 - 25일	300-1000 ng/kg/일
		26 - 28일	약물 없음
사이클 2 (사이클 2는 최대 12회까지 반복될 수 있음)
F7DP 1	5	1 - 3일	300-1000 ng/kg/일
		4 - 7일	약물 없음
F7DP 2	6	8 - 11일	300-1000 ng/kg/일
		12 - 14일	약물 없음
F7DP 3	7	15 - 18일	300-1000 ng/kg/일
		19 - 21일	약물 없음
F7DP 4	8	22 - 25일	300-1000 ng/kg/일
		26 - 28일	약물 없음

간헐적 투약 스케줄을 포함한 LID-2 도식을 표 6에 요약하고, 연속적 투약 스케줄을 포함한 LID-2 도식을 표 7에 요약한다.

LID-2 도식 - 연속적 투약
기간	치료 주간	사이클 일수	용량
사이클 1
LID-2	1	1 - 3일	30 ng/kg/일
LID-2	1	4 - 7일	100 ng/kg/일
A7DP 1	2	8 - 14일	300-1000 ng/kg/일
A7DP 2	3	15 - 21일	300-1000 ng/kg/일
A7DP 3	4	22 - 28일	300-1000 ng/kg/일
사이클 2 (사이클 2는 최대 12회까지 반복될 수 있음)
F7DP 1	5	1 - 3일	300-1000 ng/kg/일
F7DP 1	5	4 - 7일	약물 없음
F7DP 2	6	8 - 11일	300-1000 ng/kg/일
F7DP 2	6	12 - 14일	약물 없음
F7DP 3	7	15 - 18일	300-1000 ng/kg/일
F7DP 3	7	19 - 21일	약물 없음
F7DP 4	8	22 - 25일	300-1000 ng/kg/일
F7DP 4	8	26 - 28일	약물 없음

간헐적 투약 스케줄을 포함한 LID-2 도식 및 연속적 투약 스케줄을 포함한 LID-2 도식 둘 다에서, 치료를 (1) 완전한 반응, (2) 완전한 반응을 얻은 후 1-2 사이클, (3) 최대 12 사이클 동안, (4) 용량-제한 독성 ("DLT"), 또는 (5) 치료 실패 중 어느 하나를 얻을 때까지 계속한다. CRS를 바람직하게 Lee 기준에 따라 등급화한다 (Lee, D.W. et al. (2014) "Current Concepts In The Diagnosis And Management Of Cytokine Release Syndrome", Blood. 124:188-195; Shimabukuro-Vornhagen, A. et al. (2018) "Cytokine Release Syndrome", J. ImmunoTher. Canc. 656, pages 1-14). 반응 (완전한 관해 (CR), 불완전한 혈구 수 회복 (Cri), 부분적 관해 (PR) 또는 말초혈 및 골수 (PB/BM) AML 블라스트 수의 개선)을 바람직하게 국제 작업 그룹 IWG (AML) 또는 IPSS (MDS) 기준에 의해 평가한다.

도입 용량 전략의 평가에서, 사이토카인 (IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, TNFα, IFN-γ, 및 GM-CSF)을 측정하였고 CRS 중증도를 등급화하였다. 제1 용량을 시작하고 10일 이내에 발생하는, 먼저 보고된 CRS 사건 중에 피크 사이토카인 값을 평가하였다. LID가 있거나 없는 환자 사이의 중앙 피크 사이토카인 수준을 비교하였다. 다른 잠재적 CRS 결정요인을 평가하였다.

대부분 사건 (82%)이 등급 (Gr) 2 이하인, (76%의) 환자에서 발생한 주입 관련 반응 (IRR)/CRS는 관리 가능하고 가역적이었다. 완전한 사이토카인 데이터를 보인 29명의 환자 중에서, 68%가 DART-A 요법을 시작하고 2일 이내에 CRS를 경험하였고, 추가로 8%는 DART-A 요법을 시작하고 10일 이내에 CRS를 경험하였다 (14% Gr 1, 55% Gr2, 및 7% Gr 3). 사이토카인 수준은 일반적으로 CRS가 없는 환자에서보다 CRS를 가진 환자에서 더 높았고 (중앙값 IL-6, 116.2 대비 67.9 pg/mL; IL-8, 191.1, 대비 144.6 pg/mL; IL-10, 867.6, 대비 348.7 pg/mL), 일반적으로 CRS 등급이 증가함에 따라 더 높았다. 2-단계 LID (LID-2)의 사용은 전체 사이토카인 수준을 감소시켰고, 1주차에 LID-2의 도입은 사이클 1 동안 중증도를 평균 0.54 등급이나 감소시켰다 (평균, 각각, CRS 등급 1주차, 1.16 대비 2; 2주차, 1 대비 1.33; 3주차, 0.67 대비 0.83; 4주차, 0.13 대비 0.67 LID-2 대비 LID-1). LID-2로 관찰된 중앙값 피크 사이토카인 수준은 1주차 동안 및 최대 용량을 달성한 후에 더 낮았다. 예비 데이터는 1주차 동안 기준선 순환 T-세포 수와 최대 CRS 등급 사이의 관계를 보여주며, 1주차의 CRS의 더 높은 등급 (≥2)은 순환 T-세포의 더 높은 기준선 수준과 관련이 있다. 평가한 다른 변수는 CRS 등급과 동조하지 않았다. CRS 등급 및 빈도는 반응과 상관이 없었다. 도 7은 연구 참여자가 나타낸 CRS 등급의 개요를 나타내며, 단계적으로 증가되는 목표 용량 (예컨대, 500 ng/kg/일)의 투여 전 2-단계 LID-2 도식 (3일 동안 30 ng/kg/일, 이어서 다음 4일 동안 100 ng/kg/일)의 도입이 제1 연구 사이클 (28일) 전체에서 CRS를 감소시킨 것을 보여준다.

일단 최대 허용 용량 ("MTDS") 또는 최대 투여 용량 ("MAD")을 결정한 후에, 한 확장 집단에서 재발/난치성 ("R/R") AML을 나타낸 환자 및 제2 확장 집단에서 저메틸화 부전 MDS가 있는 환자에게서 용량 팽창이 발생하였다. 등록된 추가 환자를 이용하여 효능을 평가하였다.

R/R AML / MDS (89% AML 및 11% MDS)를 가진 45명의 환자 (중앙값 연령은 64세 (29세-84세), 여성이 44%임)를 DART-A로 치료하였다. MTDS는 500 ng/kg/일에 도달하였다. 전체적으로, DART-A는 관리 가능한 독성을 입증하였다 (≥G3의 약물 관련 부작용이 45명 환자 중 20명 (44%)에게서 관찰되었고; 주입 관련 반응/사이토카인 방출 증후군 ("IRR/CRS")이 가장 흔한 독성이었으며, 45명 환자 중 34명 (76%)에게서 관찰되었다 (45명 중 6명에서 G3, 13%). 가장 빈번한 CRS 증상은 발열 (15명), 오한 (10명), 빈맥 (10명) 및 저혈압 (4명)이었다. 한계값 (500 ng/kg/일 용량 집단) 및 그 이상 (700 ng/kg/일 용량 집단)으로 치료된 14명의 환자 (14)가 적어도 하나의 치료 사이클을 완료하였고 치료 후 골수 생검을 취하였다. 항-백혈병 활성이 57% (8/14명) 환자에서 나타났고, 43%의 객관적 응답률 (ORR)의 경우 14명 중 6명이 IWG 기준에 도달하였으며 (3명의 CR, 1명의 CRi, 1명의 MLF (형태학상 백혈병 없음), 1명의 PR), 2명의 환자가 안정적인 질환 상태였고 기준선으로부터 20% 및 25%의 BM 블라스트 감소를 보였다 (도 8). 블라스트 감소는 빠르게 나타났고, 자주 1 사이클의 치료 내에 나타났으며 DART-A 중지 후까지 연장되었다.

추가 환자에게 LID-2 도식 (3일 동안 30 ng/kg/일, 이어서 4일 동안 100 ng/kg/일)을 사용하여 투약하고 이어서 제8-28일에 500 ng/kg/일을 투약하였다 (연속적인 투약 스케줄 (표 7)). 도 9는 DART-A 항-백혈병 활성을 도시하며 (25명 환자 플롯) 표 8은 연속적인 투약 스케줄 (표 7)을 포함한 LID-2로를 사용하여 투약한 31명의 환자로부터의 환자에 의한 CRS 등급을 보여준다.

환자에 의한 등급
(n=31명)	N (%)
등급 1	8/31 (25.8%)
등급 2	18/31 (58.1%)
등급 3	4/31 (12.9%)

표 9는 이들 동일한 환자로부터의 사건에 의한 CRS 등급을 보여준다. 도 10은 각 등급에 대한 CRS 기간 (일)을 플롯화한 것으로 CRS 사건의 중앙 기간이 일반적으로 1-2.5일인 것을 보여준다 (CRS 등급 1 사건: 1일; CRS 등급 2 사건: 2일; 및 CRS 등급 3 사건: 2.5일). 그러나, 대부분의 사건 (62.0%, 111/179)은 제1주 내에 (도입 용량) 및 500 ng/kg/일의 연속적인 투여 중에 사이클 1의 2주차에 500 ng/kg/일으로 단계적으로 증가시키는 중에 발생하였다 (도 11). 그러한 반응은 치료 지연 또는 치료 중단을 초래할 수 있고 용량 강도를 감소시킬 수 있다.

사건에 의한 CRS 등급
총=189	%
등급 1	56.1%
등급 2	41.3%
등급 3	2.6%

실시예 4

추가의 도입 용량 최적화

제3 다단계 도입 투약 전략 ("LID-3 도식")을, 특히 치료의 처음 2주 동안, CRS를 추가로 완화시키기 위해 DART-A를 투여하기 위해 실행한다.

다단계 LID-3 도식에서, DART-A를 다중-단계-증가 용량 증분을 사용하여 투여하고, 각각은 목표 용량 (약 300 ng/kg/일 내지 약500 ng/kg/일)에 도달될 때까지 약 24시간 동안 지속되며, 그런 후 DART-A를 제1주차 (즉, 처음 7-일 치료 기간 (I7DP))의 나머지 날 동안 목표 용량으로 투여하고 이어서 연속적인 투약 스케줄을 사용하여 DART-A를 목표 용량 (예컨대, 약 300 ng/kg/일, 약 400 ng/kg/일, 또는 약 500 ng/kg/일)으로 투여되는 3회의 추가 7-일 치료 기간 (A7DP)이 이어진다. 예를 들어, 목표 용량이 약 500 ng/kg/일인 경우 DART-A는 다음과 같이 투약에 다단계 증분을 사용하여 투약될 것이다: 각각 24시간 동안 약 30 ng/kg/일, 약 60 ng/kg/일, 약 100 ng/kg/일, 약 200 ng/kg/일, 약 300 ng/kg/일, 약 400 ng/kg/일. I7DP의 제7일에, 용량은 약 500 ng/kg/일로 증가될 것이고 3회의 1-주 A7DP (즉, 2-4주차 (8-28일)) 동안 연속 주입으로서 투여된다. I7DP 및 처음 3회 A7DP가 함께 28-일 제1 치료 사이클 (치료 사이클 1)을 구성한다. 치료 사이클 1의 투여 후에 CR (완전한 반응), CRi (불완전한 혈액학적 개선을 포함한 완전한 반응), CRh (부분적 혈액 회복을 포함한 완전한 반응), 또는 MLF (형태학적인 백혈병이 없는 상태)에 도달하지 못한 환자는 하나 이상의 28-일 제2 치료 사이클 ("치료 사이클 2")을 투여함으로써 연속적 투약 스케줄을 사용하여 목표 용량으로 추가적인 DART-A가 투여될 수 있다. DART-A가 연속적인 투약 스케줄을 사용하여 집단 목표 용량 (예컨대, 약 300-500 ng/kg/일)으로 투여되는 4회의 A7DP는 치료 사이클 2를 구성한다. 치료 사이클 2는 최대 5회 반복될 수 있다.

그런 후 환자, 특히 치료 사이클 1 단독 투여 또는 치료 사이클 2와 조합된 투여 후에 CR, CRi, CRh, 또는 MLF를 달성한 환자를 DART-A가 4일 동안 목표 용량으로 투여된 후 3일은 중단하여 DART-A가 투여되지 않는 (즉, 4-일 온 / 3-일 오프 스케줄로) 추가의 7-일 치료 기간 (F7DP)을 사용하여 치료한다. 4회의 F7DP가 28-일 제3 치료 사이클 (치료 사이클 3)을 구성한다. 치료 사이클 3은 최대 6회 반복될 수 있다.

표 10A는 약 500 ng/kg/일, 약 400 ng/kg/일, 및 약 300 ng/kg/일의 목표 용량을 가지는 I7DP를 포함한 LID-3 도식, 이어서 목표 용량에서 3회의 A7DP (즉, 치료 사이클 1), 이어서 목표 용량에서 4회의 F7DP (즉, 치료 사이클 3)에 대한 투약 스케줄을 제공한다. 표 10B는 치료 사이클 1에 이어 목표 용량에서 4회의 A7DP (즉, 치료 사이클 2), 및 치료 사이클 2 후에 4회의 F7DP (즉, 치료 사이클 3)이 이어지는 LID-3 도식)에 대한 투약 스케줄을 제공한다.

^‡모든 용량 ± 10%

^‡모든 용량 ± 10%

덱사메타손 (또는 동등물)과 같은 스테로이드를 DART-A 투약 전 (예컨대, 최대 30분 전)에 투여할 수 있고 (예컨대, 정맥내로 10-20 mg) 이어서 DART-A 투여 후 추가 용량을 투여할 수 있다 (예컨대, DART-A 투약을 시작한 후 12시간 후 정맥내로 4 mg). 덱사메타손 (또는 동등물)과 같은 스테로이드를 또한 DART-A 투약에 변화를 주기 전 (예컨대, 최대 30분 전)에 투여할 수 있고 (예컨대, 정맥내로 10-20 mg) 이어서 변화된 DART-A 용량의 투여 후 추가 용량을 투여할 수 있다 (예컨대, DART-A 투약을 시작한 후 12시간 후 정맥내로 4 mg).

임상적으로 표시된다면, CRS 증상을 관리하기 위하여 스테로이드를 적게 쓰는 항-사이토카인, 특히 항-IL-6/항-IL-6R (토실리주맙 또는 실툭시맙) 요법을 사용한다. 질환 상태를 IWG 기준에 의해 평가한다. 특히, 토실리주맙을 투여할 수 있다 (정맥내로 4-8 mg/kg).

CRS 증상, 특히 항-IL-6/항-IL-6R 치료 (예컨대, 토실리주맙)에 대해 난치성인 CRS를 관리하기 위해 이용할 수 있는 다른 작용제로는, 추가로 코르티코스테로이드 (예컨대, 덱사메타손, 또는 동등물)의 투여를 들 수 있고, 그러한 투여는 더 높은 투여량일 수 있다 (예컨대, 30 mg 이상의 덱사메타손 용량). 에타너셉트 (또는 동등물)과 같은 항-TNFα 작용제를 사용할 수 있다. 특히, 에타너셉트를 투여할 수 있다 (예컨대, 50 mg을 피하 주사에 의하여 (SC)).

도 12A는 다단계 LID-3 도식 (I7DP, 목표 용량 500 ng/kg/일, 이어서 3주의 목표 용량으로의 연속적인 투약 (A7DP 1- A7DP 3))을 사용하는 DART-A를 투여한 치료의 치료 사이클 1 동안 16명의 연구 참여자가 나타낸 중앙 IRR/CRS 등급의 개요를 나타낸다. 도 12B는 다단계 LID-3 도식을 사용하여 DART-A를 투여한 참여자들로부터의 IRR/CRS 등급 데이터를, 1-단계 LID (LID-1 도식) 및 2-단계 LID (LID-2 도식)를 사용하여 DART-A를 투여한 대상체들의 그것과 비교한다. 도 12A-12B에서 알 수 있는 것과 같이, 다단계 LID-3으로 관찰된 중앙 IRR/CRS 등급은 1-단계 LID-1 및 2-단계 LID-2로 관찰된 것과 비교하여 최대 용량에 도달한 후, 1주, 2주, 및 3주차 동안 더 낮았다. 더불어, 도 13A-13B에서 알 수 있는 것과 같이 다단계 LID-3 도식의 사용은 IRR 및/또는 CRS 사건으로 인한 투여 중단을 최소화함으로써 얻어진 평균 용량 강도를 개선시킨다. 2-단계 LID-2를 사용하는 DART-A의 투여는 사이클 1 동안 30명의 환자 전체에서 목표 최대 용량 강도 (DI)의 평균 58.8%만을 달성하였다 (도 13A). 대조적으로, 다단계 LID-3 도식을 사용하는 DART-A의 투여는 사이클 1 동안 30명의 환자 전체에서 목표 최대 용량 강도 (DI)의 평균 80.6%를 달성하였다 (도 13B). 그러므로, 다단계 LID-3 도식의 사용은 증가된 평균 용량 강도에 의해 반영되는 바 안전성 프로파일 및 목표 최대치를 받은 환자의 수를 상당히 증가시켰다.

요약하면, CRS는 T-세포 유도 요법으로의 제한 요인이었다. 사용된 2-단계 LID-2는 단일-단계 LID-1보다 IRR 및/또는 CRS 사건 및 순환하는 사이토카인을 감소시키는 데 유효성을 보였고 다단계 LID-3은 IRR 및/또는 CRS 사건 및 중증도를 제한하는 데 추가 개선을 제공한다. 더불어, 다단계 LID-3 도식을 사용하여 DART-A로 치료될 때 더 많은 환자가 500 ng/kg/일의 원하는 최상 용량 강도를 받는다. 하기에서 보다 상세하게 제공되는 것과 같이, 다단계 LID-3 투약 전략을 추가 치료제의 투여를 포함하도록 조정할 수 있다.

실시예 5

조합 투여 요법

상기에서 제공된 것과 같이, CD123-발현 암세포의 T-세포 재지향된 사멸을 매개하는 데 DART-A 분자의 효과를 향상시키기 위하여, DART-A 요법을 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자 (예컨대, 항-PD-1 항체)와 함께 투여할 수 있다. 따라서, DART-A를 하기 기술된 임의의 투약 도식에 따라 혈액암 (예컨대, 재발된 또는 난치성 AML, B-ALL, T-ALL, 또는 MDS)의 치료를 위해 PD-1 mAb 1 IgG4 (또는 본원에 기술된 다른 항체)와 같은 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자와 함께 투여할 수 있다.

다음의 프로토콜은 예시의 항-PD-1 항체 "PD-1 mAb 1 IgG4"와 함께 DART-A의 사용을 상세하게 설명해주는 한편, 유사한 조합 프로토콜을 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 다른 분자 (예컨대, 본원에 제공된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항-B7-H1 항체)와 함께 DART-A를 사용하여 설계할 수 있는 것이 본원의 교시의 관점에서 이해될 것이다.

조합 투약 치료 요법에서, 상기에서 기술된 것과 같이, 목표 용량 (예컨대, 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일)에 도달될 때까지 DART-A를 다중-단계-증가 용량 증분을 사용하여 투여하고, 그런 후 제1주 (즉, 초기 7-일 치료 기간 (I7DP))의 나머지 날 동안 DART-A를 목표 용량으로 투여하고 이어서 DART-A를 연속적인 투약 스케줄 (즉, 주간의 각 날에 목표 용량의 DART-A를 투여함)을 사용하여 목표 용량 (예컨대, 약 300, 약 400, 또는 약 500 ng/kg/일)으로 투여하는 3회의 추가적인 7-일 치료 기간 (각각은 "A7DP"임)이 이어진다. 예를 들어, 목표 용량이 약 500 ng/kg/일인 경우에 DART-A를 다음과 같이 다중 단계 증분을 사용하여 투약할 것이다: 24시간 동안 각각 약 30 ng/kg/일, 약 60 ng/kg/일, 약 100 ng/kg/일, 약 200 ng/kg/일, 약 300 ng/kg/일, 약 400 ng/kg/일. I7DP의 제7일에, 용량을 약 500 ng/kg/일로 증가시켜서 연속 주입으로서 3회의 1-주 A7DP (즉, 2-4주차 (8-28일)) 동안 투여할 것이다. I7DP 및 제1 3회 A7DP는 함께 28일 제1 치료 사이클 (치료 사이클 1)을 구성한다.

치료 사이클 1의 투여 후에 CR (완전한 반응), CRi (불완전한 혈액학적 개선을 포함한 완전한 반응), CRh (부분적인 혈액학적 회복을 포함한 완전한 반응), 또는 MLF (형태학적인 백혈병이 없는 상태)를 달성하지 못한 환자는 하나 이상의 28-일 제2 치료 사이클 ("치료 사이클 2")을 투여함으로써 연속적인 투약 스케줄을 사용하여 목표 용량으로 추가적인 DART-A를 투여할 수 있다. 연속적인 투약 스케줄을 사용하여 DART-A가 집단 목표 용량 (예컨대, 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일)으로 투여되는 4회 A7DPP가 치료 사이클 2를 구성한다. 치료 사이클 2는 최대 5회 반복될 수 있다.

그런 후 환자, 특히 치료 사이클 1 단독 또는 치료 사이클 2와 조합하여 투여한 후 CR, CRi, CRh, 또는 MLF를 달성한 환자를 DART-A가 4일 동안 목료 용량으로 투여된 후 3일 동안 정지되어 DART-A가 투여되지 않는 (즉, 4-일 온 / 3-일 오프 스케줄) 추가의 7-일 치료 기간 (F7DP)을 사용하여 치료한다. 4회의 F7DP가 28-일 제3 치료 사이클 (치료 사이클 3)을 구성한다.

치료 사이클 1-3 중에 PD-1 mAb 1 IgG4를 제15일 (즉, 3주차의 제1일)에 시작하여 약 3 mg/kg의 용량으로 2주마다 한 번 ("Q2W") 투여한다. 그런 후, 추가적인 PD-1 mAb 1 IgG4를 Q2W 스케줄로 약 3 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있다. 최대 허용 용량 ("MTD")이 3 mg/kg의 PD-1 mAb 1 IgG4와 조합된 300 ng/kg/일의 DART-A로 치료된 대상체에서 초과된 것으로 측정된다면, 300 ng/kg/일의 DART-A와 조합된 더 낮은 용량의 PD-1 mAb 1 IgG4 (약 1 mg/kg)를 평가하기 위하여 용량 단계적 감소를 이용할 수 있다. 전형적으로, PD-1 mAb 1 IgG4는 동일한 날에 계획될 때 DART-A의 투여 전에 정맥내 주입에 의해 투여한다. 그러므로, DART-A의 투여는 PD-1 mAb 1 IgG4을 투여할 때 정지될 수 있다. 대안으로, PD-1 mAb 1 IgG4를 DART-A가 투여되는 것과 동시에 정맥내 주입에 의해 투여한다. 그러한 투여는 상이한 부위에서 (예컨대, 환자의 왼팔에 정맥내를 통해 DART-A를, 환자의 오른팔에 정맥내를 통해 PD-1 mAb 1 IgG4를 투여함), 또는 동일한 부위에서 (예컨대, 단일 정맥내 라인을 통해) 일어날 수 있다.

표 11A는 약 500 ng/kg/일, 약 400 ng/kg/일, 및 약 300 ng/kg/일의 목표 용량을 가진 I7DP, 이어서 목표 용량의 3회의 A7DP (즉, 치료 사이클 1), 이어서 목표 용량의 4회의 F7DP (즉, 치료 사이클 3)를 포함한 조합 투약 치료 요법에 대한 투약 스케줄을 제공한다. PD-1 mAb 1 IgG4를 치료 사이클 1의 제15일 (즉, 제2 A7DP의 제1일)에, 치료 사이크르 3의 제1일 (즉, 제1 F7DP의 제1일 및 제3 F7DP의 제1일)에 약 3 mg/kg의 용량으로 시작하여 2주마다 한 번 ("Q2W") 투여한다. 표시된 것과 같이, 그런 후 3 mg/kg의 추가 용량의 PD-1 mAb 1 IgG4를 Q2W 스케줄로 투여할 수 있다. 상기 표시된 것과 같이 PD-1 mAb 1 IgG4를 1 mg/kg의 단계적 감소 용량으로 투여할 수 있다.

표 11B는 치료 사이클 1에 이어 목표 용량의 4회의 추가적인 A7DP (즉, 치료 사이클 2), 및 치료 사이클 2에 이어 4회의 F7DP (즉, 치료 사이클 3)의 조합 투약 치료 요법에 대한 투약 스케줄을 제공한다. 치료 사이클 2를 포함하는 투약 스케줄에서 PD-1 mAb 1 IgG4를 치료 사이클 1의 제15일 (즉, 제2 A7DP의 제1일), 각각의 치료 사이클 2의 제1일 및 제15일 (즉, 각각의 치료 사이클 2의 제1 A7DP의 제1일 및 제3 A7DP의 제1일), 및 치료 사이클 3의 제1일 및 제15일 (즉, 제1 F7DP의 제1일, 및 제3 F7DP의 제1일)에 약 3 mg/kg의 용량으로 시작하여 2주마다 한 번 ("Q2W") 투여한다. 표시된 것과 같이, 그런 후 3 mg/kg의 추가 용량의 PD-1 mAb 1 IgG4를 Q2W 스케줄로 투여할 수 있다. 상기 표시된 것과 같이 PD-1 mAb 1 IgG4를 1 mg/kg의 단계적 감소 용량으로 투여할 수 있다.

^‡모든 용량 ± 10%

† PD-1 mAb 1 IgG4는 치료 사이클 1의 제15일에 투여됨

** PD-1 mAb 1 IgG4는 치료 사이클 3의 제1일 및 제15일에 투여됨

^‡모든 용량 ± 10%

† PD-1 mAb 1 IgG4는 치료 사이클 1의 제15일에 투여됨

!! PD-1 mAb 1 IgG4는 각각의 치료 사이클 2의 제1일 및 제15일에 투여됨

** PD-1 mAb 1 IgG4는 치료 사이클 3의 제1일 및 제15일에 투여됨

상기 제공된 투약 스케줄에서 주어진 A7DP 및/또는 F7DP를 시작할 때, 및/또는 PD-1 mAb 1 IgG4의 용량을 투여할 때 약 1일 내지 약 3일의 창 (즉, ± 1-3일)이, 특히 21일 후에 허용될 수 있는 것이 이해될 것이다.

CRS 증상, 특히 항-IL-6/항-IL-6R 치료 (예컨대, 토실리주맙)에 대해 난치성인 CRS를 관리하기 위해 이용할 수 있는 다른 작용제로는, 추가로 코르티코스테로이드 (예컨대, 덱사메타손, 또는 동등물)의 투여를 들 수 있고, 그러한 투여는 더 높은 투여량일 수 있다 (예컨대, 30 mg 이상의 덱사메타손 용량). 에타너셉트 (또는 동등물)와 같은 항-TNFα 작용제를 사용할 수 있다. 특히, 에타너셉트를 투여할 수 있다 (예컨대, 50 mg을 피하 주사에 의하여 (SC)).

상기 제공된 것과 같이, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 다른 분자 (예컨대, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아벨루맙, 두르발루맙, 등)을 DART-A와 조합하여 투여할 수 있는 것이 구체적으로 고려된다. 특히, 그러한 분자를 DART-A와 조합하여 투여할 수 있고 이때 DART-A는 표 10A-10B 또는 표 11A-11B에 따라 투여하며, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자는 표준 치료, 또는 승인된 투여 요법에 따라 투여한다 (예컨대, 펨브롤리주맙에 대해 승인된 투여 요법은 200 mg Q3W의 정맥내 투여이다).

본 명세서에서 언급된 모든 출판물 및 특허는 각각의 개별 출판물 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 그 전문이 참조로 포함된 것을 표시하는 것과 동일한 정도로 참조로 본원에 포함된다. 발명이 특정 구체예와 관련하여 기술되었지만, 추가로 수정이 될 수 있고 본 출원은 일반적으로 발명의 원리를 따르고 본 개시로부터의 그러한 벗어남을 포함하는 발명의 임의의 변경, 용도, 또는 조정을, 발명이 속하는 기술분야 내에서 공지된 또는 관례적인 실시 내에 포함되는 것으로서 및 지금까지 제시된 본질적인 특징에 적용될 수 있는 것으로서 포함하도록 의도된 것이 이해될 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> MacroGenics, Inc. Davidson, Jon Kenneth Lent, Ian Sampathkumar, Krishnan Alderson, Ralph Froman La Motte-Mohs, Ross Wigginton, Jon Marc <120> Dosing Regimens of Bispecific CD123 x CD3 Diabodies in the Treatment of Hematologic Malignancies <130> 1301.0162P3_PCT <160> 35 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VLCD3 Domain of DART-A <400> 1 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of the VLCD3 Domain of DART-A <400> 2 Arg 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DART-A <400> 22 caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60 acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120 aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180 cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240 caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300 gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg aggcgaggtg 360 cagctggtgc agtccggggc tgagctgaag aaacccggag cttccgtgaa ggtgtcttgc 420 aaagccagtg gctacacctt cacagactac tatatgaagt gggtcaggca ggctccagga 480 cagggactgg aatggatcgg cgatatcatt ccttccaacg gggccacttt ctacaatcag 540 aagtttaaag gcagggtgac tattaccgtg gacaaatcaa caagcactgc ttatatggag 600 ctgagctccc tgcgctctga agatacagcc gtgtactatt gtgctcggtc acacctgctg 660 agagccagct ggtttgctta ttggggacag ggcaccctgg tgacagtgtc ttccggagga 720 tgtggcggtg gagaagtggc cgcactggag aaagaggttg ctgctttgga gaaggaggtc 780 gctgcacttg aaaaggaggt cgcagccctg gagaaa 816 <210> 23 <211> 280 <212> PRT 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Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 195 200 205 Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn 210 215 220 Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 225 230 235 240 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys 260 265 270 Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 275 280 <210> 24 <211> 840 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide Encoding Second Polypeptide Chain of DART-A <400> 24 gacttcgtga tgacacagtc tcctgatagt ctggccgtga gtctggggga gcgggtgact 60 atgtcttgca agagctccca gtcactgctg aacagcggaa atcagaaaaa ctatctgacc 120 tggtaccagc agaagccagg ccagccccct aaactgctga tctattgggc ttccaccagg 180 gaatctggcg tgcccgacag attcagcggc agcggcagcg gcacagattt taccctgaca 240 atttctagtc tgcaggccga ggacgtggct gtgtactatt gtcagaatga ttacagctat 300 ccctacactt tcggccaggg gaccaagctg gaaattaaag gaggcggatc cggcggcgga 360 ggcgaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtcc agcctggagg gtccctgaga 420 ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc agcacatacg ctatgaattg ggtccgccag 480 gctccaggga aggggctgga gtgggttgga aggatcaggt ccaagtacaa caattatgca 540 acctactatg ccgactctgt gaaggataga ttcaccatct caagagatga ttcaaagaac 600 tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa accgaggaca cggccgtgta ttactgtgtg 660 agacacggta acttcggcaa ttcttacgtg tcttggtttg cttattgggg acaggggaca 720 ctggtgactg tgtcttccgg aggatgtggc ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa 780 gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 840 <210> 25 <211> 288 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(298) <223> Human PD-1 polypeptide (NCBI NP_005009.2) <400> 25 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 165 170 175 Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 180 185 190 Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 195 200 205 Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 210 215 220 Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 225 230 235 240 Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 245 250 255 Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 260 265 270 Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 275 280 285 <210> 26 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Anti-PD1 Antibody PD-1 mAb 1 <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 27 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Anti-PD1 Antibody PD-1 mAb 1 <400> 27 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 28 <211> 176 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(175) <223> Human B7-H1 (PD-L1) Polypeptide (NCBI NP_001254635.1) <400> 28 Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu 1 5 10 15 Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro 20 25 30 Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys 35 40 45 Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys 50 55 60 Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr 65 70 75 80 Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr 85 90 95 Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile 100 105 110 Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His Leu Val 115 120 125 Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr Phe Ile 130 135 140 Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys Gly Ile 145 150 155 160 Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu Glu Thr 165 170 175 <210> 29 <211> 273 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(273) <223> Human B7-DC (PD-L2) Polypeptide (NCBI NP_079515.2) <400> 29 Met Ile Phe Leu Leu Leu Met Leu Ser Leu Glu Leu Gln Leu His Gln 1 5 10 15 Ile Ala Ala Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile 20 25 30 Glu His Gly Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser 35 40 45 His Val Asn Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn 50 55 60 Asp Thr Ser Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu 65 70 75 80 Pro Leu Gly Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp 85 90 95 Glu Gly Gln Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr 100 105 110 Lys Tyr Leu Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr 115 120 125 His Ile Leu Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln 130 135 140 Ala Thr Gly Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val 145 150 155 160 Pro Ala Asn Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val 165 170 175 Thr Ser Val Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys 180 185 190 Val Phe Trp Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp 195 200 205 Leu Gln Ser Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Leu Leu His 210 215 220 Ile Phe Ile Pro Phe Cys Ile Ile Ala Phe Ile Phe Ile Ala Thr Val 225 230 235 240 Ile Ala Leu Arg Lys Gln Leu Cys Gln Lys Leu Tyr Ser Ser Lys Asp 245 250 255 Thr Thr Lys Arg Pro Val Thr Thr Thr Lys Arg Glu Val Asn Ser Ala 260 265 270 Ile <210> 30 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> Human IgG CL Kappa Domain <400> 30 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 31 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Human IgG4 CH1 Domain <400> 31 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 32 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG4 Hinge Variant Comprising a Stabilizing S228P Substitution <400> 32 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 33 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(217) <223> CH2-CH3 Domain of Human IgG4 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> AXX is Lysine (K) or is Absent <400> 33 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa 210 215 <210> 34 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain of anti-PD-1 Antibody mAb1 IgG4 <400> 34 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 35 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain of anti-PD-1 Antibody mAb1 IgG4 <400> 35 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims

그것을 필요로 하는 대상체에게 CD123 x CD3 결합 분자를 투여하는 단계를 포함하는 혈액암의 치료 방법으로서,
(I) 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 SEQ ID NO:21의 아미노산 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬 및 SEQ ID NO:23의 아미노산 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬로 이루어지는 디아바디이고; 및
(II) 상기 방법은 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)을 포함하며, 여기서:
(A) 상기 I7DP의 제1일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 30 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;
(B) 상기 I7DP의 제2일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 60 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;
(C) 상기 I7DP의 제3일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 100 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 주입에 의해 투여되고;
(D) 상기 I7DP의 제4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 200 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;
(E) 상기 I7DP의 제5일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;
(F) 상기 I7DP의 제6일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며; 및
(G) 상기 I7DP의 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는, 방법.
대상체의 혈액암의 치료에 사용하기 위한 CD123 x CD3 결합 분자로서,
(I) 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 SEQ ID NO:21의 아미노산 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬 및 SEQ ID NO:23의 아미노산 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬로 이루어지는 디아바디이고; 및
(II) 상기 사용은 처음 7-일 치료 기간 (I7DP)을 포함하며, 여기서:
(A) 상기 I7DP의 제1일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 30 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;
(B) 상기 I7DP의 제2일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 60 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;
(C) 상기 I7DP의 제3일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 100 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 주입에 의해 투여되고;
(D) 상기 I7DP의 제4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 200 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며;
(E) 상기 I7DP의 제5일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되고;
(F) 상기 I7DP의 제6일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되며; 및
(G) 상기 I7DP의 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는, CD123 x CD3 결합 분자.
제1항의 방법, 또는 제2항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 방법 또는 상기 사용은 하나 이상의 추가적인 7-일 치료 기간 (A7DP)을 포함하고, 각각의 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항 또는 제3항의 방법, 또는 제2항 또는 제3항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 I7DP의 제6일, 및 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제3항 또는 제4항의 방법, 또는 제3항 또는 제4항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항 또는 제3항의 방법, 또는 제2항 또는 제3항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 I7DP의 제6일 및 7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제3항 또는 제6항의 방법, 또는 제3항 또는 제6항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항 또는 제3항의 방법, 또는 제2항 또는 제3항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 I7DP의 제6일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되고, 상기 I7DP의 제7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제3항 또는 제8항의 방법, 또는 제3항 또는 제8항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 A7DP(들)의 적어도 하나의 제1-7일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제3항 내지 제9항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 3회의 상기 A7DP를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제10항의 방법, 또는 제10항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 추가적인 4, 8, 12, 16, 또는 20회의 상기 A7DP를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제3항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 A7DP의 적어도 하나에 이어 하나 이상의 추가 7-일 치료 기간 (F7DP)이 이어지고, 여기서 상기 하나 이상의 F7DP의 각각의 제1-4일에 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 투여되고, 상기 하나 이상의 F7DP의 각각의 제5-7일에 상기 대상체는 상기 CD123 x CD3 결합 분자가 제공되지 않는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제12항의 방법, 또는 제12항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일 내지 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 연속적인 정맥내 주입에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제13항의 방법, 또는 제13항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 300 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제13항의 방법, 또는 제13항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 400 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제13항의 방법, 또는 제13항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 하나 이상의 F7DP의 적어도 하나의 제1-4일에, 상기 CD123 x CD3 결합 분자는 상기 대상체에게 약 500 ng/kg/일의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제12항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 4회의 상기 F7DP를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제17항의 방법, 또는 제17항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 추가적인 4, 8, 12, 16, 또는 20회의 F7DP를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항 또는 제3항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제2항 내지 제18항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 방법 또는 사용은 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 분자를 투여하는 것을 추가로 포함하고, PD-1에 결합할 수 있는 상기 분자는 PD-1에 결합하는 항체의 에피토프 결합 도메인을 포함하며, PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 분자는 PD-1의 천연 리간드에 결합하는 항체의 에피토프 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제19항의 방법 또는 제19항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 2주마다 1회 (Q2W), 3주마다 1회 (Q3W), 또는 4주마다 1회 (Q4W) 투여되는 것을 특징으로 하는 방법 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제19항 내지 제20항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제19항 내지 제20항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 제15일에 시작하여 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제21항의 방법 또는 제21항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 제15일에 시작하여 Q2W로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제19항 내지 제23항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 하나 이상의 상기 F7DP의 제1일에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제19항 내지 제23항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는:
(a) 펨브롤리주맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;
(b) 니볼루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;
(c) 세미플리맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;
(c) PD-1 mAb 1의 VH 도메인 및 VL 도메인;
(d) 아테졸리주맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;
(e) 아벨루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인;
(f) 두르발루맙의 VH 도메인 및 VL 도메인; 또는
(h) 표 3 또는 4에 제공된 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인
을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제24항의 방법, 또는 제24항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 PD-1 mAb 1 IgG4인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제19항 내지 제25항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제19항 내지 제25항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제19항 내지 제26항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제19항 내지 제26항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 하나 이상의 용량의 PD-1 또는 PD-1의 천연 리간드에 결합할 수 있는 상기 결합 분자를 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 마지막 용량이 투여된 후 투여하는 것을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항, 제3항 내지 제27항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제2항 내지 제27항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 방법 또는 상기 사용은 상기 CD123 x CD3 결합 분자의 상기 투여 전에, 중에, 및/또는 후에 코르티코스테로이드 및/또는 항-IL-6 또는 항-IL-6R 항체를 정맥내 주입에 의해 투여하는 것을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항 또는 제3항 내지 제28항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제2항 내지 제28항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 혈액암은 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 CML과 관련된 아벨슨 종양 유전자 (Bcr-ABL 전좌)의 모세포성 위기를 포함한 CML, 골수형성 이상 증후군 (MDS), 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL), 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL), 리히터 증후군 또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL)의 리히터 변환을 포함한 CLL, 털세포 백혈병 (HCL), 모세포 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프구성 림프종 (SLL)을 포함한 비호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제29항의 방법, 또는 제29항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 혈액암은 급성 골수성 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제29항의 방법, 또는 제29항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 혈액암은 골수형성 이상 증후군인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제29항의 방법, 또는 제29항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 혈액암은 모세포 형질세포양 수지상 세포 신생물인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제29항의 방법, 또는 제29항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 혈액암은 급성 T 림프모세포성 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제29항의 방법, 또는 제29항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 혈액암은 급성 B 림프모세포성 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.
제1항 또는 제3항 내지 제34항 중 어느 한 항의 방법, 또는 제2항 내지 제34항 중 어느 한 항의 상기 사용을 위한 CD123 x CD3 결합 분자에 있어서, 상기 대상체는 인간인 것을 특징으로 하는 방법, 또는 CD123 x CD3 결합 분자.