KR20210129613A

KR20210129613A - Pharmaceutical compositions for treating a SARS coronavirus infection disease and medical-use thereof

Info

Publication number: KR20210129613A
Application number: KR1020210051319A
Authority: KR
Inventors: 류왕식; 김승택; 고미현
Original assignee: 재단법인 한국파스퇴르연구소
Priority date: 2020-04-20
Filing date: 2021-04-20
Publication date: 2021-10-28

Abstract

The present invention relates to compounds having an antiviral effect on SARS-coronavirus, in particular, novel coronavirus disease (COVID 19), and medicinal uses thereof. According to nafamostat according to an aspect, in addition to having an excellent antiviral effect in pretreatment before viral infection, there is a remarkable effect even in a state in which virus is propagated within cells after intracellular viral infection, so that there is an effect that can be usefully used in a pharmaceutical composition for prevention or treatment of viral infection, prevention or treatment of pneumonia caused by viral infection, or inhibition of virus proliferation.

Description

사스 코로나바이러스 감염증 치료용 약학 조성물 및 이의 의약 용도{Pharmaceutical compositions for treating a SARS coronavirus infection disease and medical-use thereof}Pharmaceutical composition for the treatment of SARS coronavirus infection and its medicinal use {Pharmaceutical compositions for treating a SARS coronavirus infection disease and medical-use thereof}

사스-코로나바이러스, 특히, 신종 코로나바이러스 질환 (COVID 19)에 대해 항바이러스 효과를 가지는 화합물들 및 이들의 의약 용도에 관한 것이다. It relates to compounds having an antiviral effect against SARS-coronavirus, in particular novel coronavirus disease (COVID 19), and to their medicinal use.

코로나바이러스(Coronavirus; CoV)는 사람을 포함한 동물에 광범위한 호흡계 및 소화계 감염을 일으키는 RNA 바이러스로, 표면을 현미경으로 관찰했을 때 특징적인 왕관 모양의 돌기 때문에 '코로나(왕관)'라는 이름이 붙었다. RNA 복제 및 전사 효소(RdRp)의 염기서열 차이에 따라 알파코로나바이러스(Alphacoronavirus), 베타코로나바이러스(Betacoronavirus), 감마코로나바이러스(Gammacoronavirus), 델타코로나바이러스(Deltacoronavirus))의 4가지 속(屬, genus)으로 세분된다.Coronavirus (CoV) is an RNA virus that causes widespread respiratory and digestive system infections in animals, including humans. According to the nucleotide sequence difference of RNA replication and transcription enzyme (RdRp), four genera (屬, genus) of alphacoronavirus, betacoronavirus, gammacoronavirus, and deltacoronavirus) ) is subdivided into

제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 (COVID-19, SARS-CoV-2, 2019-nCoV)는 2019년 12월 중국 우한에서 처음 발생한 이후 중국과 전 세계로 확산되었다. 이에 세계보건기구(WHO)는 COVID-19에 대하여 국제적공중보건비상사태(PHEIC)를 선포했고, 2020년 3월 11일에 COVID-19를 홍콩독감(1968), 신종플루(2009)에 이어 세계적 대유행병(pendemic)으로 선포하였다. COVID-19는 감염자의 비말(침방울)이 호흡기나 눈, 코, 입의 점막으로 침투될 때 전염된다. 감염되면 2~14일(추정)의 잠복기를 거친 후 발열 및 기침이나 호흡곤란 등 호흡기 증상, 폐렴 이 주 증상으로 나타나지만 무증상 감염 사례도 드물게 나오고 있다. COVID-19 바이러스는 SARS-CoV 및 MERS-CoV 바이러스와 함께 베타코로나바이러스(Betacoronavirus)군에 속하는 사람에게 감염되는 바이러스로 (Subunit Vaccines Against Emerging Pathogenic Human Coronaviruses.Wang N, Shang J, Jiang S, Du L. Front Microbiol. 2020 Feb 28;11:298.), COVID-19의 염기서열은 SARS-CoV, MERS-CoV 대하여 각각 80%, 50% 일치한다 (Wu C. et al. Analysis of therapeutic targets for SARS-CoV-2 and discovery of potential drugs by computational methods. 2020 Feb Acta Pharmaceutica Sinica B). 코로나바이러스는 길이가 26-32 kb인 양성 단일가닥 RNA 바이러스로서 숙주세포의 수용체를 통해 숙주에 들어가면 2개의 큰 다중단백질; pp1a(486 kDa), pp1ab(790 kDa)을 만든 후, 이로부터 바이러스 자신의 단백질분해효소; 3CL프로테아제(3CLpro, 또는 Mpro 라고 불리기도 함)를 이용하여 바이러스의 전사(transcription)와 복제(replication)에 필요한 효소; RdRp, Helicase, ribonucleoclease 및 3CLpro 등을 포함한 16개의 비구조단백질을 생성한다 (Autoprocessing mechanism of severe acute respiratory syndrome coronavirus 3C-like protease(SARS-CoV 3CLpro) from its polyproteins. Muramatsu T, Kim YT, Nishii W, Terada T, Shirouzu M, Yokoyama S. FEBS J. 2013 May;280(9):2002-13. doi: 10.1111). Type 2 severe acute respiratory syndrome coronavirus (COVID-19, SARS-CoV-2, 2019-nCoV) first emerged in Wuhan, China in December 2019 and has since spread to China and the world. Accordingly, the World Health Organization (WHO) declared a public health emergency of international concern (PHEIC) for COVID-19, and on March 11, 2020, COVID-19 became a global pandemic following the Hong Kong flu (1968) and swine flu (2009). declared a pandemic. COVID-19 is transmitted when droplets (saliva) of an infected person penetrate the respiratory tract or the mucous membranes of the eyes, nose, and mouth. Once infected, after an incubation period of 2 to 14 days (estimated), respiratory symptoms such as fever, cough or difficulty breathing, and pneumonia are the main symptoms, but asymptomatic infections are rare. The COVID-19 virus is a virus that infects humans belonging to the Betacoronavirus family along with SARS-CoV and MERS-CoV viruses (Subunit Vaccines Against Emerging Pathogenic Human Coronaviruses. Wang N, Shang J, Jiang S, Du L). Front Microbiol. 2020 Feb 28;11:298.), the nucleotide sequence of COVID-19 is 80% and 50% identical to SARS-CoV and MERS-CoV, respectively (Wu C. et al. Analysis of therapeutic targets for SARS -CoV-2 and discovery of potential drugs by computational methods 2020 Feb Acta Pharmaceutica Sinica B). Coronaviruses are positive single-stranded RNA viruses with a length of 26-32 kb that enter the host through receptors on the host cell and contain two large polyproteins; After making pp1a (486 kDa) and pp1ab (790 kDa), the virus' own protease; enzymes required for virus transcription and replication using 3CL protease (also called 3CLpro, or Mpro); Produces 16 nonstructural proteins including RdRp, Helicase, ribonucleoclease and 3CLpro (Autoprocessing mechanism of severe acute respiratory syndrome coronavirus 3C-like protease (SARS-CoV 3CLpro) from its polyproteins. Muramatsu T, Kim YT, Nishii W, Terada T, Shirouzu M, Yokoyama S. FEBS J. 2013 May;280(9):2002-13. doi: 10.1111).

2000년 이후로 코로나바이러스에 의한 감염병이 빈번히 발생하면서 지구촌을 위협하고 있다. 2003년 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV), 및 2019년 코로나 19 (SARS-CoV-2) 감염 사태가 대표적인 경우이다. 전체 국가의 코로나바이러스감염에 따른 인명피해 및 경제적 피해가 늘어나고 있는 상황에서, 코로나 바이러스에 대한 치료제의 개발이 시급한 상황이다.Since 2000, infectious diseases caused by coronavirus have occurred frequently, threatening the global village. SARS-CoV in 2003 and COVID-19 in 2019 (SARS-CoV-2) are typical examples. In a situation where human casualties and economic damage due to coronavirus infection in the whole country are increasing, the development of a therapeutic agent for the coronavirus is urgent.

본 발명의 하나의 목적은 나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating SARS coronavirus (SARS-CoV) infection, comprising nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 하나의 목적은 나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating pneumonia caused by SARS-CoV infection, comprising Nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. will provide

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is a pharmaceutical composition for preventing or treating pneumonia caused by SARS-CoV infection, comprising Nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. is to provide

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및 렘데시비르(Remdesivir) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 상기 나파모스타트와 렘데시비르는 병용 투여되는 것인, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And Remdesivir (Remdesivir) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the nafamostat and remdesivir are administered in combination, the prevention or treatment of SARS-CoV infection To provide a pharmaceutical composition for

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및 렘데시비르 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 상기 나파모스타트와 렘데시비르는 병용 투여되는 것인, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And Remdesivir or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the nafamostat and remdesivir are administered in combination. Prevention or treatment of pneumonia caused by SARS-CoV infection To provide a pharmaceutical composition for

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 약학적 유효량의 나파모스타트(Nafamostat), 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 유도체 또는 용매화물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염 관련 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is SARS, comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutically effective amount of Nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, derivative or solvate thereof. To provide a method for preventing or treating a disease related to coronavirus (SARS-CoV) infection.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 약학적 유효량의 나파모스타트(Nafamostat), 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 유도체 또는 용매화물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV)의 증식을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is SARS, comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutically effective amount of Nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, derivative or solvate thereof. To provide a method for inhibiting the proliferation of coronavirus (SARS-CoV).

본 발명자들은 COVID 19에 대한 항바이러스 효과를 가진 약물을 확인하기 위하여, 대략 3,000개 FDA승인 약물 라이브러리를 평가하였으며, 이들 중 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 COVID 19에 대해 매우 뛰어난 항바이러스 효과를 가짐을 확인하여 본 발명을 완성하였다. The present inventors evaluated approximately 3,000 FDA-approved drug libraries to identify drugs with antiviral effect against COVID 19, among which the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof is very excellent antiviral against COVID 19 The present invention was completed by confirming that it has an effect.

일 양상은 나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다. One aspect is to provide a pharmaceutical composition for treating SARS coronavirus (SARS-CoV) comprising nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명의 나파모스타트(Nafamostat)는 하기 화학식 1로 표현될 수 있다. Nafamostat of the present invention may be represented by the following formula (1).

[화학식 1][Formula 1]

본 발명에 있어서 "약학적으로 허용 가능한 염"은 본 명세서에서 언급한 화합물에서 발견되는 특정 치환체에 의존하는 비교적 비독성 산으로 제조된 활성 화합물의 염들을 포함한다. 본 발명의 화합물들은 상대적으로 염기성 기능성을 포함할 때, 산성 부가 염들은 충분한 양의 원하는 산, 순수한 또는 적당한 비활성(inert) 용매로 화합물의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산성 부가 염의 예들은 초산, 프로피온산, 이소부틸산, 옥살릭(oxalic), 마레익(maleic), 말로닉(malonic), 안식향산, 숙신산, 수버릭(suberic), 푸마릭(fumaric), 만데릭(mandelic), 프탈릭(phthalic), 벤젠설포닉(benzenesulfonic), p-토릴설포닉(tolylsulfonic), 구연산, 주석산, 메탄솔포닉(methanesulfonic), 및 그 유사체를 포함하는 상대적으로 비독성 유기산에서 유래한 염들 뿐만 아니라, 염화수소, 브롬화수소, 질산, 탄산, 일수소탄산(monohydrogencarbonic), 인산(phosphoric), 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소 또는 아인산(phosphorous acid) 및 그 유사체를 포함한다. 또한 알긴네이트(arginate)와 그 유사체와 같은 아미노산의 염 및 글루쿠로닉(glucuronic) 또는 갈락투노릭(galactunoric) 산들과 그 유사체와 같은 유기산의 유사체를 포함한다. 바람직하게 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 나파모스타트 유리염기(free base) 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 어느 하나 이상을 포함하며, 상기 나파모스타트의 약학적으로 허용가능한 염은 나파모스타트 메실레이트 (Nafamostat mesylate)를 포함하며, 하기 화학식 2로 표현될 수 있다."Pharmaceutically acceptable salts" in the present invention include salts of the active compounds prepared with relatively non-toxic acids depending on the particular substituents found on the compounds mentioned herein. When the compounds of the present invention contain relatively basic functionality, acidic addition salts can be obtained by contacting the neutral form of the compound with a sufficient amount of the desired acid, pure or with a suitable inert solvent. Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts are acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, oxalic, maleic, malonic, benzoic acid, succinic acid, suberic, fumaric. ), mandelic, phthalic, benzenesulfonic, p-tolylsulfonic, citric acid, tartaric acid, methanesulfonic, and the like. Hydrogen chloride, hydrogen bromide, nitric acid, carbonic acid, monohydrogencarbonic, phosphoric, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, sulfuric acid, monohydrogensulfuric acid, hydrogen iodide or phosphorous acid, as well as salts derived from toxic organic acids. acid) and its analogs. Also included are salts of amino acids such as arginate and analogues thereof and analogues of organic acids such as glucuronic or galactunoric acids and analogues thereof. Preferably, the napamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof includes any one or more selected from nafamostat free base and a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the pharmaceutically acceptable salt of nafamostat Possible salts include Nafamostat mesylate, and can be represented by the following formula (2).

[화학식 2] [Formula 2]

본 명세서에서 사용된 용어인 "본 발명의 화합물"은 상기 각각의 화합물들뿐만 아니라, 이들의 클라드레이트 (clathrates), 수화물, 용매화물, 또는 다형체를 포함하는 의미이다. 또한 용어 “본 발명의 화합물”은 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 언급되지 않을 경우 본 발명 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염도 포함하는 의미이다.As used herein, the term “compound of the present invention” is meant to include each of the above compounds, as well as clathrates, hydrates, solvates, or polymorphs thereof. In addition, the term “compound of the present invention” is meant to include a pharmaceutically acceptable salt of the compound of the present invention unless a pharmaceutically acceptable salt thereof is mentioned.

일 실시예에 있어서 본 발명의 화합물은 입체이성질체적으로 순수한 화합물들(예를 들어, 다른 입체이성질체가 실질적으로 없는(예를 들어, 85% ee 이상, 90% ee 이상, 95% ee 이상, 97% ee 이상, 또는 99% ee 이상))로 존재할 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 화합물 또는 그의 염이 호변이성적 (tautomeric) 이성질체 및/또는 입체이성질체 (예를 들어, 기하이성질체 (geometrical isomer) 및 배좌 이성질체 (conformational isomers))일 경우 그들의 분리된 이성질체 및 혼합물 각각 또한 본 발명의 화합물의 범주에 포함된다. 본 발명의 화합물 또는 그의 염이 구조 내에 비대칭 탄소 (asymmetric carbon)를 가지고 있는 경우에, 그들의 광학 활성 화합물 및 라세믹 혼합물들 또한 본 발명의 화합물의 범위에 포함된다. In one embodiment, the compounds of the invention are stereoisomerically pure compounds (e.g., substantially free of other stereoisomers (e.g., at least 85% ee, at least 90% ee, at least 95% ee, 97 % ee or more, or 99% ee or more)). That is, when the compound according to the present invention or a salt thereof is a tautomeric isomer and/or stereoisomer (eg, geometrical isomer and conformational isomers), their separated isomers and mixtures, respectively Also included within the scope of the compounds of the present invention. When the compound of the present invention or a salt thereof has an asymmetric carbon in its structure, their optically active compounds and racemic mixtures are also included in the scope of the compound of the present invention.

본 명세서에서 사용될 경우, 용어 "결정다형(polymorph)"은 본 발명의 화합물의 고체 결정 형태 또는 그것의 복합체를 의미한다. 같은 화합물의 다른 결정다형은 다른 물리적, 화학적 그리고/또는 스펙트럼적 특성을 보인다. 물리적 특성 측면의 차이점으로는 안정성(예를 들어, 열 또는 빛 안정성), 압축성과 밀도(제제화 및 생산물 제조에 중요함), 그리고 용해율(생물학적 이용률에 영향을 줄 수 있음)을 포함하나, 이에 한정되지 아니한다. 안정성에서 차이는 화학반응성 변화들(예를 들어, 또 다른 다형으로 구성되었을 때보다 하나의 다형으로 구성되었을 때 더 빠르게 변색이 되는 것 같은 차별적 산화) 또는 기계적인 특징들(예를 들어 동역학적으로 선호된 다형체로서 저장된 정제 파편들이 열역학 적으로 더 안정된 다형으로 변환) 또는 둘 다(하나의 다형의 정제는 높은 습도에서 더 분해에 예민)를 야기한다. 결정다형의 다른 물리적 성질들은 그들의 가공에 영향을 줄 수 있다. 예를 들어, 한 결정다형은 또 다른 결정다형에 비하여, 예를 들어, 그것의 형태 또는 입자의 크기 분포에 기인하여 용매화합물을 형성할 가능성이 많을 수 있거나, 여과 또는 세척이 더 어려울 수 있다.As used herein, the term "polymorph" refers to a solid crystalline form of a compound of the present invention or a complex thereof. Different polymorphs of the same compound exhibit different physical, chemical and/or spectral properties. Differences in physical properties include, but are not limited to, stability (eg, thermal or light stability), compressibility and density (important for formulation and product manufacturing), and dissolution rate (which may affect bioavailability). doesn't happen Differences in stability may be due to changes in chemical reactivity (e.g., differential oxidation, such as a faster discoloration when composed of one polymorph than when composed of another polymorph) or mechanical properties (e.g., kinetically Tablet fragments stored as the preferred polymorph are converted to a more thermodynamically stable polymorph) or both (tablets of one polymorph are more susceptible to degradation at high humidity). Other physical properties of polymorphs can affect their processing. For example, one polymorph may be more likely to form a solvate than another polymorph, for example due to its shape or particle size distribution, or it may be more difficult to filter or wash.

본 명세서에서 사용된 용어 "용매화물"은 비공유 분자간의 힘에 의해 결합된 화학량론적 또는 비-화학량론적인 양의 용매를 포함하는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다. 바람직한 용매들은 휘발성이고, 비독성이며, 인간에게 극소량 투여될 수 있다.As used herein, the term “solvate” refers to a compound of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising a stoichiometric or non-stoichiometric amount of a solvent bound by non-covalent intermolecular forces. Preferred solvents are volatile, non-toxic, and can be administered in trace amounts to humans.

본 명세서에서 사용된 용어 "수화물 (hydrate)"은 비공유 분자간의 힘에 의해 결합된 화학량론적 또는 비-화학량론적인 양의 물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다. As used herein, the term "hydrate" refers to a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof comprising a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by non-covalent intermolecular forces. .

본 명세서에서 사용된 용어 "클라드레이트 (clathrate)"은 게스트 분자(예를 들어, 용매 또는 물)를 가두어 놓은 공간 (예를 들어, 채널(channel))을 포함한 결정 격자의 형태의 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. As used herein, the term "clathrate" refers to a compound of the present invention in the form of a crystal lattice containing spaces (eg, channels) that confine guest molecules (eg, solvent or water). or salts thereof.

본 명세서에서 사용된 "사스 코로나 바이러스"는 코로나바이러스과(Coronaviridae)의 코로나바이러스아과(Coronavirinae)에 속하는 RNA 바이러스를 의미하며, 바람직하게는 사스 코로나바이러스 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus or SARS-CoV), 코로나 19 바이러스(COVID 19, Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 or SARS-CoV-2) 및 이들의 변이 아형(subtype strain)들을 의미한다.As used herein, "SARS coronavirus" refers to an RNA virus belonging to the coronavirinae of the coronaviridae, preferably SARS coronavirus (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus or SARS-CoV), corona 19 virus (COVID 19, Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 or SARS-CoV-2) and mutated subtypes thereof.

본 명세서에서 사용된 "예방"은 상기 조성물의 투여로 사스 코로나바이러스 감염증의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, "prevention" refers to any action that inhibits or delays the onset of SARS coronavirus infection by administration of the composition.

본 명세서에서 사용된 "치료"는 자연 치유에 비하여 단축된 시간에 바이러스 감염증 등이 치유되는 것을 의미할 수 있다. 상기 치료는 바이러스 감염증의 개선 및/또는 완화를 포함할 수 있다. 또한, 상기 치료는 바이러스 감염증으로부터 유발되는 증상의 치유 및/또는 회복을 의미할 수 있다.As used herein, “treatment” may mean that a viral infection or the like is cured in a shorter time compared to natural healing. The treatment may include amelioration and/or alleviation of the viral infection. In addition, the treatment may refer to healing and/or recovery of symptoms caused by viral infection.

일 구체예에 따른 상기 화합물은 숙주세포에 사스 코로나 바이러스를 감염 시키고 5 내지 8 시간 바람직하게는 6내지 7시간 후 투여했을 때, IC₅₀ 값이 0.001 내지 5 nM, 0.01 내지 5 nM, 0.001 내지 4.5 nM, 0.01 내지 4 nM, 0.001내지 3.5 nM, 0.01 내지 3 mM, 0.1 내지 3 mM, 1 내지 3 mM, 0.01 내지 2.5 nM, 0.001내지 2.5 nM, 0.01 내지 2.5 nM, 1 내지 2.5 mM, 0.01내지 2 nM, 0.1내지 2 nM, 0.1내지 2 nM, 1 내지 2 nM, 0.001 내지 2 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.001 내지 1 nM 일 수 있고, 바람직하게는 2.5 nM 미만이다. _{The compound according to one embodiment has an IC 50} value of 0.001 to 5 nM, 0.01 to 5 nM, 0.001 to 4.5 when administered after 5 to 8 hours and preferably 6 to 7 hours after infecting the host cell with the SARS coronavirus. nM, 0.01 to 4 nM, 0.001 to 3.5 nM, 0.01 to 3 mM, 0.1 to 3 mM, 1-3 mM, 0.01 to 2.5 nM, 0.001 to 2.5 nM, 0.01 to 2.5 nM, 1 to 2.5 mM, 0.01 to 2 nM, 0.1-2 nM, 0.1-2 nM, 1-2 nM, 0.001-2 nM, 0.1-1 nM, 0.001-1 nM, preferably less than 2.5 nM.

일 구체예에 따른 상기 숙주세포는 Calu-3 세포일 수 있다.The host cell according to one embodiment may be a Calu-3 cell.

일 구체예에 따른 상기 조성물은 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 0.01μM 내지 10,000μM, 0.1μM 내지 1000μM, 1μM 내지 100μM, 0.01μM 내지 1000μM, 0.01μM 내지 100μM, 0.01μM 내지 10μM, 또는 0.01μM 내지 1μM 의 용량으로 포함되어 있을 수 있다In the composition according to one embodiment, the napamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof is 0.01 μM to 10,000 μM, 0.1 μM to 1000 μM, 1 μM to 100 μM, 0.01 μM to 1000 μM, 0.01 μM to 100 μM, 0.01 μM to 10 μM , or may be included in a dose of 0.01 μM to 1 μM

본 발명에 따른 화합물들이 사스 코로나바이러스 항바이러스제로 사용될 경우의 투여량은 다음과 같다. 본 발명의 화합물은 임의의 적합한 경로에 의하여 이러한 경로에 적당한 약학 조성물의 형태, 그리고 의도된 치료를 위하여 효과적인 투여량으로 투여될 수 있다. 효과적인 투여량은 단일 또는 분할 투여로 일반적으로 약 0.001 내지 약 100 mg/체중kg/일이고, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 30 mg/kg/일이다. 시간당 투여량은 0.0005 내지 5 mg/kg/hr, 0.003내지 1.5, 0.001 내지 0.5 mg/kg/hr, 0.004 내지 0.3 mg/kg/hr, 0.006내지 0.5 mg/kg/hr, 0.001 내지 0.3 mg/kg/hr이고 바람직하게는 0.005 내지 0.4 mg/kg/hr이다. 나이, 종, 및 치료될 질병 또는 상태(condition)에 따라 이 범위의 하한 미만의 투여량 수준이 적합할 수 있다. 다른 경우에는, 여전히 더 큰 투여량이 해로운 부작용없이 사용될 수 있다. 더 큰 투여량은 하루 동안 투여를 위하여, 여러 작은 투여량으로 분할될 수 있다. 적절한 투여량을 결정하기 위한 방법들이 본 발명이 속한 분야에 잘 알려져 있다.When the compounds according to the present invention are used as the SARS coronavirus antiviral agent, the dosage is as follows. The compounds of the present invention may be administered by any suitable route, in the form of a pharmaceutical composition suitable for such route, and in an effective dosage for the intended treatment. An effective dosage is generally from about 0.001 to about 100 mg/kg body weight/day, preferably from about 0.01 to about 30 mg/kg/day, in single or divided doses. The hourly dose is 0.0005 to 5 mg/kg/hr, 0.003 to 1.5, 0.001 to 0.5 mg/kg/hr, 0.004 to 0.3 mg/kg/hr, 0.006 to 0.5 mg/kg/hr, 0.001 to 0.3 mg/kg /hr, preferably 0.005 to 0.4 mg/kg/hr. Dosage levels below the lower limit of this range may be suitable depending on the age, species, and disease or condition being treated. In other cases, still larger doses can be used without deleterious side effects. The larger dose may be divided into several smaller doses for administration throughout the day. Methods for determining the appropriate dosage are well known in the art.

구강 투여(Oral administration)Oral administration

본 발명의 화합물은 구강으로 투여될 수 있으며, 구강은 연하(swallowing)를 포함하는 개념이다. 구강 투여에 의하여 본 발명의 화합물이 위장관(gastrointestinal tract)에 들어가거나, 예를 들어, 구강(buccal) 또는 설하(sublingual) 투여와 같이, 입으로부터 혈류로 직접적으로 흡수될 수 있다. The compound of the present invention may be administered orally, and the oral cavity is a concept including swallowing. By oral administration, the compounds of the present invention may enter the gastrointestinal tract or may be absorbed directly into the bloodstream from the mouth, for example, by buccal or sublingual administration.

구강 투여를 위한 적합한 조성물은 고형상, 액상, 겔(gel), 또는 파우더 형상일 수 있으며, 정제(tablet), 로젠지(lozenge), 캡슐(capsule), 과립제, 산제 등의 제형을 가질 수 있다. Suitable compositions for oral administration may be in solid, liquid, gel, or powder form, and may have dosage forms such as tablets, lozenges, capsules, granules, and powders. .

구강 투여를 위한 조성물은 선택적으로 장용 코팅(enteric coating)될 수 있으며, 장용 코팅을 통하여 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출을 나타낼 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 구강 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된(modified) 방출 패턴을 가진 제형일 수 있다. Compositions for oral administration may optionally be enteric coated and may exhibit delayed or sustained release through the enteric coating. That is, the composition for oral administration according to the present invention may be a formulation having an immediate or modified release pattern.

액체 제형은 용액, 시럽 및 현탁액을 포함할 수 있으며, 이러한 액상 조성물은 연질 또는 경질 캡슐 내에 함유된 형태일 수 있다. 이러한 제형은 약학적으로 허용 가능한 담체, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리에틸렌글리콜, 셀룰로오스, 또는 오일(oil)을 포함할 수 있다. 상기 제형은 또한 하나 이상의 유화제 및/또는 현탁제를 포함할 수 있다.Liquid formulations may include solutions, syrups, and suspensions, and such liquid compositions may be contained in soft or hard capsules. Such formulations may contain a pharmaceutically acceptable carrier, for example, water, ethanol, polyethylene glycol, cellulose, or oil. The formulation may also contain one or more emulsifying and/or suspending agents.

정제(tablet) 제형에서, 활성 성분인 약물의 양은 정제 총 중량 대비 약 0.05 중량% 내지 약 95 중량%, 더욱 일반적으로 제형의 약 2 중량% 내지 약 50 중량%로 존재할 수 있다. 또한, 정제는 약 0.5 중량% 내지 약 35 중량%, 더욱 일반적으로 제형의 약 2 중량% 내지 약 25 중량%를 포함하는 붕해제를 함유할 수 있다. 붕해제의 예로는 유당, 전분, 소디움스타치글리콜레이트, 크로스포비돈, 크로스카멜로스소디움(croscarmellose sodium), 말토덱스트린 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.In tablet formulations, the amount of drug as the active ingredient may be present in an amount of from about 0.05% to about 95% by weight relative to the total weight of the tablet, more typically from about 2% to about 50% by weight of the dosage form. Tablets may also contain from about 0.5% to about 35% by weight of a disintegrant, more typically from about 2% to about 25% by weight of the dosage form. Examples of the disintegrant include, but are not limited to, lactose, starch, sodium starch glycolate, crospovidone, croscarmellose sodium, maltodextrin, or mixtures thereof.

정제로 제조하기 위해 포함되는 적합한 활택제는 약 0.1 중량% 내지 약 5 중량% 양으로 존재할 수 있고, 탈크(talc), 이산화규소, 스테아린산, 칼슘, 아연 또는 마그네슘 스테아레이트, 소듐 스테아릴 푸마레이트 등이 활택제로 사용될 수 있으나, 본 발명은 이러한 첨가제들의 종류에 한정되는 것은 아니다. Suitable glidants included for the preparation of tablets may be present in an amount of from about 0.1% to about 5% by weight and include talc, silicon dioxide, stearic acid, calcium, zinc or magnesium stearate, sodium stearyl fumarate, and the like. It may be used as a lubricant, but the present invention is not limited to the types of these additives.

정제로 제조하기 위한 결합제(binder)로는 젤라틴, 폴리에틸렌글리콜, 당(sugar), 검(gum), 녹말(starch), 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등이 사용될 수 있으며, 정제로 제조하기 위한 적합한 희석제로는 만니톨, 자일리톨, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 녹말(starch), 미결정셀룰로오스 등이 사용될 수 있으나, 본 발명은 이러한 첨가제들의 종류에 한정되는 것은 아니다. Gelatin, polyethylene glycol, sugar, gum, starch, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, etc. may be used as a binder for manufacturing tablets. In addition, suitable diluents for manufacturing tablets include mannitol, xylitol, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, starch, microcrystalline cellulose, etc., but the present invention is not limited to the types of these additives. .

선택적으로 정제에 포함될 수 있는 가용화제는 정제 총 중량 대비 약 0.1 중량% 내지 약 3 중량% 양이 사용될 수 있고, 예를 들어, 폴리소르베이트, 소디움 라우릴설페이트, 소디움 도데실설페이트, 프로필렌 카보네이트, 디에틸렌글리콜모노에틸에테르, 디메틸이소소르비드, 폴리옥시에틸렌글리콜화된 천연 또는 수소화 피마자유, HCOR^TM(Nikkol), 올레일에스테르, 젤루시어(Gelucire^TM), 카프릴릭/카프릴산 모노/디글리세리드, 소르비탄지방산에스테르, 솔루톨HS^TM 등이 본 발명에 따른 약학 조성물에 사용될 수 있으나, 본 발명은 이러한 가용화제의 구체적 종류에 한정되는 것은 아니다.Optionally, the solubilizing agent that may be included in the tablet may be used in an amount of about 0.1% to about 3% by weight relative to the total weight of the tablet, for example, polysorbate, sodium lauryl sulfate, sodium dodecyl sulfate, propylene carbonate, Diethylene glycol monoethyl ether, dimethylisosorbide, polyoxyethylene glycolated natural or hydrogenated castor oil, HCOR ^™ (Nikkol), oleyl ester, Gelucire ^™ , caprylic/caprylic acid mono/ Diglyceride, sorbitan fatty acid ester, Solutol HS ^TM, etc. may be used in the pharmaceutical composition according to the present invention, but the present invention is not limited to the specific type of the solubilizer.

비경구 투여(Parenteral Administration)Parenteral Administration

본 발명의 화합물은 혈류, 근육, 또는 내장 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여를 위한 적합한 방법은 정맥내(intravenous), 근육내(intra-muscular), 피하 동맥내(subcutaneous intraarterial), 복강내(intraperitoneal), 척추강내(intrathecal), 두개내(intracranial) 주사 등을 포함한다. 비경구 투여를 위한 적합한 장치는 (바늘 및 바늘 없는 주사기를 포함하는) 주사기(injector) 및 주입 방법(infusion method)을 포함한다.The compounds of the present invention may be administered directly into the bloodstream, muscle, or intestine. Suitable methods for parenteral administration include intravenous, intra-muscular, subcutaneous intraarterial, intraperitoneal, intrathecal, intracranial injection, and the like. include Suitable devices for parenteral administration include injectors (including needle and needleless syringes) and infusion methods.

비경구 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된 방출 패턴을 가진 제형일 수 있으며, 변형된 방출 패턴은 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출 패턴일 수 있다. Compositions for parenteral administration may be formulations with an immediate or modified release pattern, and the modified release pattern may be a delayed or sustained release pattern.

대부분의 비경구 제형은 액상 조성물이며, 이러한 액상 조성물은 본 발명에 따른 약효 성분, 염, 완충제, 등장화제 등을 포함하는 수용액이다.Most parenteral formulations are liquid compositions, and the liquid composition is an aqueous solution containing the active ingredient according to the present invention, a salt, a buffer, an isotonic agent, and the like.

비경구 제형은 또한 건조된 형태(예를 들어, 동결 건조) 또는 멸균 비-수용액으로서 제조될 수 있다. 이들 제형은 멸균수(sterile water)와 같은 적합한 비히클(vehicle)과 함께 사용될 수 있다. 용해도 증강제(solubility-enhancing agents) 또한 비경구 용액의 제조에 사용될 수 있다.Parenteral formulations may also be prepared in dried form (eg, lyophilized) or as sterile non-aqueous solutions. These formulations may be used with a suitable vehicle such as sterile water. Solubility-enhancing agents may also be used in the preparation of parenteral solutions.

국소 투여(Topical Administration)Topical Administration

본 발명의 화합물은 피부 또는 경피로 국소적으로 투여될 수 있다. 이 국소 투여를 위한 제형은 로션, 용액, 크림, 젤, 하이드로젤, 연고, 폼(foam), 임플란트(implant), 패치 등을 포함한다. 국소 투여 제형을 위한 약학적으로 허용 가능한 담체는 물, 알코올, 미네랄 오일, 글리세린, 폴리에틸렌글리콜 등을 포함할 수 있다. 국소 투여는 또한 전기천공법(electroporation), 이온도입법(iontophoresis), 음파영동(phonophoresis) 등에 의하여 수행될 수 있다.The compounds of the present invention may be administered topically dermally or transdermally. Formulations for topical administration include lotions, solutions, creams, gels, hydrogels, ointments, foams, implants, patches, and the like. Pharmaceutically acceptable carriers for topical dosage forms may include water, alcohol, mineral oil, glycerin, polyethylene glycol, and the like. Topical administration may also be performed by electroporation, iontophoresis, phonophoresis, and the like.

국소 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된 방출 패턴을 가진 제형일 수 있으며, 변형된 방출 패턴은 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출 패턴일 수 있다.Compositions for topical administration may be formulations with an immediate or modified release pattern, and the modified release pattern may be a delayed or sustained release pattern.

일 구체예에 있어서, 상기 약학적 조성물은 사스 코로나바이러스의 증식 억제용 약학적 조성물일 수 있다.In one embodiment, the pharmaceutical composition may be a pharmaceutical composition for inhibiting the proliferation of SARS coronavirus.

본 명세서에서 사용된 "바이러스 증식 억제"는 바이러스의 증식에 필요한 요소들을 억제하여 바이러스의 증식이 억제되는 것을 의미할 수 있다. 상기 증식 억제는 바이러스의 부착, 세포막 융합 및 침투를 억제하는 감염의 억제와 또는 증식된 바이러스가 숙주세포 밖으로 나오는 것을 억제하는 방출의 억제와도 구분이 된다. 바이러스 증식 억제는 바이러스가 세포 분열하여 증식되는 것을 억제하는 것을 의미할 수 있다. As used herein, "inhibition of virus proliferation" may mean that the proliferation of a virus is inhibited by inhibiting factors necessary for the proliferation of the virus. The proliferation inhibition is also distinguished from the inhibition of infection, which inhibits virus adhesion, cell membrane fusion, and penetration, and the inhibition of release, which inhibits the proliferated virus from coming out of the host cell. Inhibition of virus proliferation may mean inhibiting the proliferation of the virus by cell division.

다른 양상은 나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Another aspect provides a pharmaceutical composition for preventing or treating pneumonia caused by SARS-CoV infection, comprising nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

이때, 상기 나파모스타트, 약학적으로 허용 가능한 염, 예방 및 치료의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.In this case, the definition of napamostat, a pharmaceutically acceptable salt, prevention and treatment is the same as described above.

다른 양상은 나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증 중증환자를 투여 대상으로 하는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Another aspect provides a therapeutic pharmaceutical composition for administration to patients with severe SARS-CoV infection, comprising nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

이때, 상기 나파모스타트, 약학적으로 허용 가능한 염 및 치료의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.In this case, the definition of napamostat, a pharmaceutically acceptable salt, and treatment is the same as described above.

일 구체예에 따른 상기 투여는 상기 투여량 및 투여 방법으로 투여할 수 있다.The administration according to one embodiment may be administered by the above dosage and administration method.

본 명세서에서 사용된 "중증 환자"는 2016년 1월 1일부터 시행된 「응급의료에 관한 법률 시행규칙」 제18조의3에 의한 「한국 응급환자 중증도 분류기준」 에 따라 중증으로 분류된 환자를 의미할 수 있다. 또한 2020년 「코로나바이러스감염증-19 대응 지침(7판)」 부록 7 환자의 중증도 분류 및 의료기관 병상 배정에 따른 중증환자를 의미할 수 있다. 해당 지침은 혈압 등을 측정할 수 없는 경우에는 의식이 떨어지거나, 의식이 명료하고 다음 조건 하나이상 충족 시 중증으로 분류했다. ① 해열제 복용해도 38도 초과 ②호흡곤란. 혈압, 체온 등을 측정할 수 있는 경우, 맥박, 수축기 혈압, 호흡수, 체온, 의식수준을 측정하여 각각 점수화 하여 총합이 7이상이 경우 중증으로 분류했다. 맥박이 131회/분 이상인 경우 3점, 40회/분 이하 또는 111 내지 130회/분 이하일 경우 2점, 41 내지 50회/분 또는 101 내지 110회/분인 경우 1점, 51 내지 100회/분인 경우 0점이다. 수축기 혈압은 70mmHg 이하인 경우 3점, 71 내지 80mmHg 또는 200mmHg 이상인 경우 2점, 81 내지 100mmHg인 경우 1점, 101 내지 199mmHg인 경우 0점이다. 호흡수는 30회/분 이상이면 3점, 8회/분 이하 또는 21 내지 29회/분이면 2점, 15 내지 20회/분이면 1점, 9 내지 14회/분이면 0점이다. 체온은 35℃이하이면 2점, 35.1 내지 36.0℃ 또는 37.5℃ 이상이면 1점, 36.1 내지 37.4℃이면 0점이다. 의식 수준은 무반응이면 3점, 통증 반응이면 2점, 목소리 반응이면 1점, 정상이면 0점이다.As used herein, "severe patient" refers to a patient classified as severe according to the 「Korean Emergency Patient Severity Classification Criteria」 according to Article 18-3 of the 「Emergency Medical Care Act Enforcement Rules」, which came into effect on January 1, 2016. can mean In addition, it can refer to severe patients according to the classification of the severity of patients in Appendix 7 of the 2020 「Coronavirus Infectious Disease-19 Response Guidelines (7th Edition)」 and the allocation of beds to medical institutions. In this guideline, when blood pressure, etc. cannot be measured, it is classified as severe when consciousness is low or when consciousness is clear and one or more of the following conditions are met. ① Exceeding 38 degrees even after taking antipyretics ② Dyspnea. If blood pressure and body temperature could be measured, pulse, systolic blood pressure, respiration rate, body temperature, and level of consciousness were measured and scored respectively, and a total of 7 or more was classified as severe. 3 points for a pulse rate of 131 beats/min or more, 2 points for a pulse rate of 40 beats/min or less or 111 to 130 beats/min or less, 1 point for a pulse rate of 41 to 50 beats/min or 101 to 110 beats/min, 51 to 100 beats/min Minutes equals 0 points. The systolic blood pressure is 3 points for 70 mmHg or less, 2 points for 71 to 80 mmHg or 200 mmHg or more, 1 point for 81 to 100 mmHg, and 0 points for 101 to 199 mmHg. Respiratory rate of 30 breaths/min or more, 3 points, 8 breaths/min or less, or 21 to 29 breaths/min, 2 points, 15 to 20 breaths/min, 1 point, and 9 to 14 breaths/min, 0 points. If the body temperature is 35°C or lower, 2 points, 35.1 to 36.0°C or 37.5°C or higher, 1 point, and 36.1 to 37.4°C, 0 points. The level of consciousness is 3 points for no response, 2 points for a pain response, 1 point for a voice response, and 0 points for a normal response.

또 다른 양상은 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및 렘데시비르 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 상기 나파모스타트와 렘데시비르는 병용 투여되는 것인, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Another aspect is nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and remdesivir or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the nafamostat and remdesivir are administered in combination, a pharmaceutical for preventing or treating SARS-CoV infection A composition is provided.

또 다른 양상은 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및 렘데시비르 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 상기 나파모스타트와 렘데시비르는 병용 투여되는 것인, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Another aspect is nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And Remdesivir or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the nafamostat and remdesivir are administered in combination. Prevention or treatment of pneumonia caused by SARS-CoV infection A pharmaceutical composition for use is provided.

상기 렘데시비르는 항바이러스 약물이며, 상기 나파모스타트, 약학적으로 허용 가능한 염 및 치료의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.The remdesivir is an antiviral drug, and the definitions of nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, and treatment are as described above.

상기 병용 투여는, 나파모스타트 및 렘데시비르를 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로, 그리고 임의 순서로 투여하는 것을 의미할 수 있다. 상세하게는 상기 병용 투여는 나파모스타트 및 렘데시비르를 동시에 투여하거나, 나파모스타트 및 렘데시비르 중 어느 하나를 투여한 후 나머지 하나를 투여하는 것일 수 있다. 본 발명에 따른 병용 치료법은 예를 들어, 반응 정도, 반응 속도, 질병 진행까지의 기간 또는 생존 기간을 통해 측정된 효능이 병용 치료법의 성분 중 하나 또는 나머지를 통상적인 용량으로 투약하여 얻을 수 있는 효능보다 치료학적으로 우수하면 상승 효과를 제공할 수 있는 것으로 정의될 수 있다. 예를 들면, 상기 각각을 단독으로 사용하여 얻어지는 효능보다 치료학적으로 그 효능이 우수하면 병용 치료법의 효능은 상승적이다. 특히, 반응 정도, 반응 속도, 질병 진행까지의 기간 및 생존 데이타 중 하나 이상에 해를 주지 않으면서, 특히 반응 지속기간에 해를 주지 않고, 각 성분을 통상적인 용량으로 사용했을 때 발생하는 것보다, 문제가 되는 부작용이 줄고/줄거나 적으면서 나파모스타트 또는 렘데시비르의 통상적인 용량을 감소시킬 수 있으면 상승 효과가 존재하는 것으로 간주한다. 상기 나파모스타트 및 렘데시비르가 병용투여 되는 경우, 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 약 0.0001 μM 내지 약 0.1 μM, 예를 들어, 0.001 μM 내지 0.1 μM, 0.001 μM 내지 0.05 μM, 0.001 μM 내지 0.01 μM 또는 0.001 μM 내지 0.005 μM로 투여되는 것일 수 있고, 상기 렘데시비르 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 약 0.01 μM 내지 약 100 μM, 예를 들어, 0.1 μM 내지 100 μM, 0.1 μM 내지 50 μM, 0.1 μM 내지 10 μM, 1 μM 내지 100 μM, 1 μM 내지 50 μM, 1 μM 내지 10 μM 또는 1 μM 내지 5 μM 로 투여되는 것일 수 있다.The co-administration may mean administering nafamostat and remdesivir simultaneously, sequentially or separately, and in any order. Specifically, the combined administration may be simultaneous administration of nafamostat and remdesivir, or administration of the other one after administration of any one of nafamostat and remdesivir. In the combination therapy according to the present invention, for example, the efficacy measured through the degree of response, the response rate, the period to disease progression or the survival period is the efficacy that can be obtained by administering one or the rest of the components of the combination therapy at a conventional dose. More therapeutically superior can be defined as capable of providing a synergistic effect. For example, if the efficacy is therapeutically superior to that obtained by using each of the above alone, the efficacy of the combination therapy is synergistic. In particular, without detrimental to one or more of the extent of response, rate of response, duration to disease progression, and survival data, and in particular without detrimental to duration of response, than would occur when each component is used at its usual dose. , a synergistic effect is considered to exist if the usual dose of nafamostat or remdesivir can be reduced with fewer and/or fewer problematic side effects. When the nafamostat and remdesivir are co-administered, the nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof is about 0.0001 μM to about 0.1 μM, for example, 0.001 μM to 0.1 μM, 0.001 μM to 0.05 μM. , 0.001 μM to 0.01 μM or 0.001 μM to 0.005 μM, wherein the remdesivir or a pharmaceutically acceptable salt thereof is about 0.01 μM to about 100 μM, for example, 0.1 μM to 100 μM, 0.1 μM to 50 μM, 0.1 μM to 10 μM, 1 μM to 100 μM, 1 μM to 50 μM, 1 μM to 10 μM or 1 μM to 5 μM may be administered.

또 다른 양상은 약학적 유효량의 나파모스타트(Nafamostat), 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 유도체 또는 용매화물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염 관련 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.Another aspect is the SARS coronavirus (SARS-) comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutically effective amount of Nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, derivative or solvate thereof. Provided is a method for preventing or treating CoV) infection-related diseases.

이때, 상기 나파모스타트, 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 개체, 사스 코로나 바이러스 및 증식 억제의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.In this case, the definitions of nafamostat, pharmaceutically acceptable salts, solvates, individuals, SARS coronavirus and proliferation inhibition are the same as described above.

본 명세서에서 사용된 "유효량"은 상기 치료 효과를 나타내기에 충분한 본 발명의 화합물의 양을 말한다.As used herein, an “effective amount” refers to an amount of a compound of the invention sufficient to produce the therapeutic effect.

본 명세서에서 사용된 용어 "개체"는 포유동물을 포함하며, 바람직하게 인간을 포함한다.As used herein, the term "subject" includes mammals, preferably humans.

또 다른 양상은 약학적 유효량의 나파모스타트(Nafamostat), 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 유도체 또는 용매화물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV)의 증식을 억제하는 방법을 제공한다.Another aspect is the SARS coronavirus (SARS-) comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutically effective amount of Nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, derivative or solvate thereof. A method for inhibiting the proliferation of CoV) is provided.

또 다른 양상은 약학적 유효량의 나파모스타트(Nafamostat), 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 유도체 또는 용매화물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV)감염을 감쇠(attenuation)시키는 방법을 제공한다.Another aspect is the SARS coronavirus (SARS-) comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutically effective amount of Nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, derivative or solvate thereof. A method for attenuating CoV infection is provided.

또 다른 양상은 약학적 유효량의 나파모스타트(Nafamostat), 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 입체이성질체, 유도체 또는 용매화물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV)의 부하(load)를 감소시키는 방법 제공한다.Another aspect is the SARS coronavirus (SARS-) comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutically effective amount of Nafamostat, a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, derivative or solvate thereof. A method of reducing the load of CoV is provided.

또 다른 양상은 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적으로 유효한 양을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 질병(disease) 또는 상태(condition)를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 질병 또는 상태(condition)는 사스 코로나바이러스 감염으로 인해 야기된 질병 또는 상태이다. Another aspect provides a method of treating a disease or condition comprising administering to an individual in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof and the disease or condition is a disease or condition caused by SARS coronavirus infection.

이때, 상기 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 치료, 유효량, 개체 및 사스 코로나 바이러스의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.In this case, the definitions of the compound, pharmaceutically acceptable salt, treatment, effective amount, individual, and SARS coronavirus are as described above.

즉, 본 발명은 본 발명에 따른 본 발명 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 이용하는 것을 특징으로 하는 의약 용도를 제공한다. 일 양태에서, 본 발명의 의약 용도는 본 명세서에서 설명된 질병 또는 상태의 치료 또는 예방 용도이다. That is, the present invention provides a pharmaceutical use characterized in that the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention is used as an active ingredient. In one aspect, the pharmaceutical use of the present invention is the use for the treatment or prophylaxis of a disease or condition described herein.

일 양상에 따른 나파모스타트에 의하면, 바이러스 감염 전의 전처리에서도 우수한 항바이러스 효과를 가질 뿐만 아니라, 세포 내 바이러스 감염 후, 세포 내에서 바이러스의 증식이 이루어진 상태에서도 현저한 효과를 가져 바이러스 감염증의 예방 또는 치료, 바이러스 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료, 또는 바이러스 증식의 억제를 위한 약학적 조성물에 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다. According to nafamostat according to an aspect, not only has an excellent antiviral effect in the pretreatment before viral infection, but also has a remarkable effect even in a state in which the virus is proliferated in the cell after intracellular viral infection, preventing or treating viral infection , There is an effect that can be usefully used in a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of pneumonia caused by viral infection, or inhibition of viral proliferation.

도 1은 나파모스타트 메실레이트 (Nafamostat mesylate) 농도에 따른 해당 화합물에 대한 SARS-CoV-2 저해율(푸른색 그래프) 및 음성대조군에 비교한 세포비율(붉은색 그래프)에 대한 결과를 보여준다.
도 2는 나파모스타트 유리염기 (Nafamostat free base) 농도에 따른 해당 화합물에 대한 SARS-CoV-2 저해율(푸른색 그래프) 및 음성대조군에 비교한 세포비율(붉은색 그래프)에 대한 결과를 보여준다.
도 3은 SARS-CoV-2 감염 후 경과 시간에 따른 처치(post-treat) 결과이다. Y축은 음성대조군 (0.5% DMSO 처리군)에 비교한 감염 저해율을 나타내며, 각각의 그래프는 감염 전후 시간에 따른 약물 처리 시간을 나타낸다 (1시간 전, 바이러스와 동시에 혹은 감염 1,3,6, 시간 후). 양성대조군으로 렘데시비르를 결과를 포함하였다.
도 4는 나파모스타트와 렘데시비르의 병용처리시, Highest single agent(HSA) 분석 결과를 나타낸 도면이다.1 shows the results of the SARS-CoV-2 inhibition rate (blue graph) and the cell ratio compared to the negative control group (red graph) for the compound according to the concentration of nafamostat mesylate.
Figure 2 shows the results for the SARS-CoV-2 inhibition rate (blue graph) and the cell ratio compared to the negative control group (red graph) for the compound according to the concentration of nafamostat free base (Nafamostat free base) concentration.
3 is a post-treat result according to the elapsed time after SARS-CoV-2 infection. The Y-axis represents the infection inhibition rate compared to the negative control group (0.5% DMSO treated group), and each graph represents the drug treatment time according to the time before and after infection (1 hour before, simultaneously with the virus or infection 1, 3, 6, time) after). Results were included with remdesivir as a positive control.
Figure 4 is a view showing the analysis results of the Highest single agent (HSA) during the combined treatment of nafamostat and remdesivir.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명이 속한 분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples and the like will be described in detail to help the understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention may be modified in various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains.

실험예 1: 나파모스타트의 SARS-CoV-2 항바이러스 효능 확인Experimental Example 1: Confirmation of SARS-CoV-2 antiviral efficacy of napamostat

나파모스타트의 SARS-CoV-2에 대한 항바이러스 효능을 확인하기 위해 나파모스타트 메실레이트는 (Nafamostat mesylate, CAS No.: 82956-11-4) 25μM 부터 4배 연속희석하여 0.1nM까지 10가지 농도로, 나파모스타트 유리염기는 (Nafamostat free base, CAS No.: 81525-10-2) 50μM 부터 4배 연속희석하여 0.2nM까지 10가지 농도로 SARS-CoV-2의 Dose response curve (DRC)를 확인하였다.To confirm the antiviral efficacy of nafamostat against SARS-CoV-2, nafamostat mesylate (Nafamostat mesylate, CAS No.: 82956-11-4) was diluted 4 times from 25 μM to 0.1 nM 10 kinds As a concentration, nafamostat free base (Nafamostat free base, CAS No.: 81525-10-2) was serially diluted 4 times from 50 μM to 0.2 nM at 10 concentrations of SARS-CoV-2 Dose response curve (DRC) was confirmed.

구체적으로, 먼저 Calu-3 세포를 Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)에 10% FBS와 1X antibiotic-antimycotic을 첨가하여 37℃에서 5% 이산화탄소 하에서 배양하였다. 배양된 calu-3 세포를 EMEM 세포배양 배지를 이용하여 384-웰 조직배양 플레이트에 웰당 2.0x10⁴개 접종하였다. 이튿날 25 또는 50 mM 농도의 나파모스타트 메실레이트 및 나파모스타트 유리염기를 각각 4배 연속희석하여 calu-3 세포에 처리하였다. 곧이어, 나파모스타트 메실레이트 및 나파모스타트 유리염기가 각각 처리된 세포에 0.1moi SARS-CoV-2 (한국 질병관리본부(KCDC)에서 입수)를 감염하여 37℃에서 5% 이산화탄소 하에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 4% Paraformaldehyde를 이용하여 세포를 고정한 뒤, 0.25% TritonX-100으로 permeabilization하고 anti-SARS-CoV-2 Nucleocapsid (N) (Sino Biological, Cat#: 40143-T62) 1차 항체를 37℃에서 1시간 처리한 뒤, Goat-anti-rabbit alexa-488 2차 항체 또한 37℃에서 1시간 처리하였다. 세포 핵은 Hoechst 33342으로 염색하여 확인하였으며, 형광 발현을 Operetta 대용량 이미지 분석 기기 (Perkin Elmer)를 이용하여 이미징 하였다. 결과 이미지는 내부 분석 프로그램인 Image Mining (IM) 소프트웨어를 이용하여 감염세포의 비율을 계산하여 약물의 효능을 측정하였다. 약물 농도에 따른 반응 곡선과 IC₅₀ 값은 Prism7 (Graphpad) 소프트웨어를 이용하여 도출하였다. Specifically, Calu-3 cells were first cultured at 37°C under 5% carbon dioxide by adding 10% FBS and 1X antibiotic-antimycotic to Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM). The cultured calu-3 cells were inoculated at ^{2.0x10 4 per} well in a 384-well tissue culture plate using EMEM cell culture medium. The next day, the calu-3 cells were treated with napamostat mesylate and napamostat free base at a concentration of 25 or 50 mM, each of which was serially diluted 4 times. Subsequently, 0.1moi SARS-CoV-2 (obtained from the Korea Centers for Disease Control and Prevention (KCDC)) was infected into cells treated with napamostat mesylate and napamostat free base, respectively, at 37°C under 5% carbon dioxide for 24 hours. cultured. After fixing the cells using 4% Paraformaldehyde, permeabilization with 0.25% TritonX-100, and anti-SARS-CoV-2 Nucleocapsid (N) (Sino Biological, Cat#: 40143-T62) primary antibody 1 at 37 ℃ After time treatment, Goat-anti-rabbit alexa-488 secondary antibody was also treated at 37° C. for 1 hour. Cell nuclei were confirmed by staining with Hoechst 33342, and fluorescence expression was imaged using an Operetta high-capacity image analysis instrument (Perkin Elmer). For the resulting image, the efficacy of the drug was measured by calculating the proportion of infected cells using Image Mining (IM) software, an internal analysis program. Response curves and IC ₅₀ values according to drug concentration were derived using Prism7 (Graphpad) software.

그 결과는 각각 도 1 및 도 2에 나타냈다. IC₅₀은 SARS-CoV-2 활성이 50% 억제되는 화합물의 농도를 의미하며, CC₅₀은 50%의 세포가 사멸하는 농도를 의미한다. 도 1은 Nafamostat mesylate를 이용한 실험결과이고 IC₅₀=0.0024 mM, CC₅₀>25 mM 이며, 도 2는 Nafamostat 유리 염기를 이용한 실험결과로 IC₅₀=0.0021 mM, CC₅₀>50 mM 의 결과를 보였다.The results are shown in Figs. 1 and 2, respectively. IC ₅₀ means a concentration of a compound that inhibits SARS-CoV-2 activity by 50%, and CC ₅₀ means a concentration at which 50% of cells are killed. 1 is an experimental result using Nafamostat mesylate, IC ₅₀ =0.0024 mM, CC ₅₀ >25 mM, FIG. 2 is an experimental result using Nafamostat free base, IC ₅₀ =0.0021 mM, CC ₅₀ >50 mM.

나파모스타트 메실레이트의 CC₅₀값은 25 mM보다 큰 값을 가지고 나파모스타트 유리염의 CC₅₀값은 50 mM보다 큰 값을 가진 가운데, 두 물질 모두 IC₅₀값은 2.5 nM 미만으로 확인 되었다. 이를 통해 세포독성이 낮은 범위에서 두 물질 모두 매우 적은 양으로도 뛰어난 항바이러스 효능을 보임을 확인했다. 이러한 결과는 일 구체예에 따른 나파모스타트 메실레이트 또는 나파모스타트 유리염을 숙주세포에는 영향을 끼치지 않고 바이러스에만 영향을 끼치는 뛰어난 항바이러스 효능을 지닌 약학적 조성물로서 이용가능함을 시사한다.CC ₅₀ value of the parent Napa start mesylate has a value greater than 25 mM salt Napa mode start glass CC ₅₀ value of having a value greater than 50 mM, both substances IC ₅₀ value was found to be less than 2.5 nM. Through this, it was confirmed that both substances showed excellent antiviral efficacy even in very small amounts in the low cytotoxicity range. These results suggest that nafamostat mesylate or nafamostat free salt according to one embodiment can be used as a pharmaceutical composition having excellent antiviral efficacy that affects only viruses without affecting host cells.

실험예 2. 나파모스타트의 SARS-CoV-2 에 대한 증식 억제 효능 Experimental Example 2. Proliferative inhibitory efficacy of napamostat on SARS-CoV-2

상기 실험예 1은 바이러스 감염 전 약물을 먼저 투여한 전처리(pre-treat)에 의한 항바이러스 효능을 확인했다면, 반대로 바이러스 감염 후 약물을 투여하는 후처리(post-treat)를 통해서 사스 코로나 바이러스에 대한 증식 억제 효능을 확인해 보기 위해 하기 방법으로 실험 하였다.In Experimental Example 1, if the antiviral efficacy was confirmed by the pre-treatment in which the drug was first administered before the virus infection, on the contrary, the SARS corona virus was In order to check the proliferation inhibitory effect, an experiment was conducted in the following way.

상기 실험예1 과 동일한 방법으로 Calu-3 세포를 배양하였으며, 이를 EMEM 세포배양 배지를 이용하여 384-웰 조직배양 플레이트에 웰당 2.0x10⁴개 접종하였다. 37℃에서 5% 이산화탄소 하에서 24시간 배양 후, 0.03 moi SARS-CoV-2 (한국 질병관리본부(KCDC)에서 입수)를 감염하였다. 약물에 따른 바이러스 증식 억제 효능을 확인하기 위하여, 25 mM 농도의 나파모스타트 메실레이트 또는 50mM 농도의 렘데시비르를 각각 5배 또는 2배 연속희석하여 Calu-3 세포에 처리하였다. 이 때, 약물처리는 감염 시간을 기준으로 1시간 전, 감염과 동시, 감염 1시간 후, 감염 3시간 후 또는 감염 6시간 후에 시행했다. 그런 후에 37℃에서 5% 이산화탄소 하에서 24시간 배양하였다.Calu-3 cells were cultured in the same manner as in Experimental Example 1, and 2.0x10 ⁴ cells were inoculated per well in a 384-well tissue culture plate using EMEM cell culture medium. After 24 hours of incubation at 37° C. under 5% carbon dioxide, 0.03 moi SARS-CoV-2 (obtained from the Korea Centers for Disease Control and Prevention (KCDC)) was infected. In order to confirm the antiviral effect according to the drug, napamostat mesylate at a concentration of 25 mM or remdesivir at a concentration of 50 mM were serially diluted 5 times or 2 times, respectively, and treated with Calu-3 cells. At this time, drug treatment was performed 1 hour before, at the same time as infection, 1 hour after infection, 3 hours after infection, or 6 hours after infection, based on the time of infection. Then, it was incubated for 24 hours at 37°C under 5% carbon dioxide.

이후 4% Paraformaldehyde를 이용하여 세포를 고정한 뒤, 0.25% TritonX-100으로 permeabilization하고 anti-SARS-CoV-2 Nucleocapsid (N) (Sino Biological, Cat#: 40143-T62) 1차 항체를 37℃에서 1시간 처리한 뒤, Goat-anti-rabbit alexa-488 2차 항체 또한 37℃에서 1시간 처리하였다. 세포 핵은 Hoechst 33342으로 염색하여 확인하였으며, 형광 발현을 Operetta 대용량 이미지 분석 기기 (Perkin Elmer)를 이용하여 이미징 하였다. 결과 이미지는 Perkin Elmer에서 제공하는 프로그램인 Columbus로 감염세포의 비율을 계산하여 약물의 효능을 측정하였다. 약물 농도에 따른 반응 곡선과 IC₅₀ 값은 Prism7 (Graphpad) 소프트웨어를 이용하여 도출하였다.After fixing the cells using 4% Paraformaldehyde, permeabilization with 0.25% TritonX-100, and anti-SARS-CoV-2 Nucleocapsid (N) (Sino Biological, Cat#: 40143-T62) primary antibody 1 at 37 ℃ After time treatment, Goat-anti-rabbit alexa-488 secondary antibody was also treated at 37° C. for 1 hour. Cell nuclei were confirmed by staining with Hoechst 33342, and fluorescence expression was imaged using an Operetta high-capacity image analysis instrument (Perkin Elmer). The resulting image was calculated using Columbus, a program provided by Perkin Elmer, to measure the efficacy of the drug by calculating the percentage of infected cells. Response curves and IC ₅₀ values according to drug concentration were derived using Prism7 (Graphpad) software.

그 결과는 도 3에 나타내었다. 나파모스타트의 SARS-CoV-2 억제를 위한 유효량은 감염 1시간 전에 투여한 경우 0.034 μM, 감염과 동시에 투여한 경우 0.029 μM, 감염 1시간 후에 투여한 경우 0.071 μM, 감염 3시간 후에 투여한 경우 0.068 μM, 감염 6시간 후에 투여한 경우 0.11 μM 였다. 렘데시비르의 SARS-CoV-2 억제를 위한 유효량은 감염 1시간 전에 투여한 경우 1.98 μM, 감염과 동시에 투여한 경우 2.03μM, 감염 1시간 후에 투여한 경우 1.78 μM, 감염 3시간 후에 투여한 경우 2.78 μM, 감염 6시간 후에 투여한 경우 13.4 μM 였다.The results are shown in FIG. 3 . SARS-CoV-2 in Napamostat The effective amount for inhibition is 0.034 μM when administered 1 hour before infection, 0.029 μM when administered concurrently with infection, 0.071 μM when administered 1 hour after infection, 0.068 μM when administered 3 hours after infection, and 6 hours after infection. case was 0.11 μM. SARS-CoV-2 of remdesivir The effective amount for inhibition is 1.98 μM when administered 1 hour before infection, 2.03 μM when administered concurrently with infection, 1.78 μM when administered 1 hour after infection, 2.78 μM when administered 3 hours after infection, and 6 hours after infection. case was 13.4 μM.

현재 코로나 치료제로 유명한 렘데시비르는 바이러스의 RNA 중합효소를 교란시키고 바이러스성 엑소뉴클레아제(ExoN)goog 효소의 교정을 방해하는 아데노신 뉴클레오타이드 유사체로 바이러스의 RNA 복제를 방해하여 바이러스의 증식을 억제한다. 실험 결과 나파모스타트는 렘데시비르과 비슷한 그래프 양상을 보였다. 다만, 두 물질의 유효량에서 큰 차이를 보였다. SARS-CoV-2 감염 6시간 경과 후 각 물질의 바이러스 억제를 위한 유효량은 감염전의 유효량과 비교하여 나파모스타트는 약 3배 증가하였고, 렘데시비르는 무려 약 6배가 증가하였다. 또한 전체적인 유효량이 나파모스타트는 렘데시비르의 약 1/70 수준이다. 이를 통해 나파모스타트가 양성대조군이 렘데시비르보다 매우 낮은 농도에서도 뛰어난 SARS-CoV-2 억제 효과를 보임을 확인했다. 또한 감염 6시간 후는 바이러스 생활사에 따라 바이러스의 증식이 본격적으로 개시되는 시점으로, 증식 억제에 중요한 지표가 될 수 있다. 상기 결과를 통해 나파모스타트는 바이러스 감염 6시간 후에도 뛰어난 SARS-CoV-2 억제효과를 보임을 확인 하였다. 이러한 결과는 일 구체예에 따른 나파모스타트가 바이러스 감염 후에도 뛰어난 항바이러스 효능을 보여 바이러스의 증식을 억제할 수 있을 뿐만 아니라, 바이러스 감염에 의해 나타나는 폐렴도 개선 또는 치료할 수 있다는 것을 의미한다. Remdesivir, which is currently famous as a treatment for coronavirus, is an adenosine nucleotide analog that disrupts the RNA polymerase of the virus and interferes with the correction of the viral exonuclease (ExoN) goog enzyme. . As a result of the experiment, nafamostat showed a graph pattern similar to that of remdesivir. However, there was a significant difference in the effective amount of the two substances. SARS-CoV-2 After 6 hours of infection, the effective amount of each substance for virus suppression increased about 3 times for nafamostat and about 6 times for remdesivir compared to the effective amount before infection. In addition, the overall effective amount of nafamostat is about 1/70 of that of remdesivir. Through this, it was confirmed that the positive control group of napamostat showed an excellent SARS-CoV-2 inhibitory effect even at a very low concentration than remdesivir. In addition, 6 hours after infection is the point in time when the proliferation of the virus starts in earnest according to the life cycle of the virus, which can be an important indicator for inhibition of proliferation. From the above results, it was confirmed that napamostat showed an excellent SARS-CoV-2 inhibitory effect even after 6 hours of virus infection. These results mean that napamostat according to one embodiment can not only suppress the proliferation of viruses by showing excellent antiviral efficacy even after viral infection, but also improve or treat pneumonia caused by viral infection.

실험예 3. 나파모스타트와 렘데시비르의 병용처리시, Highest single agent(HSA) 분석Experimental Example 3. Analysis of Highest single agent (HSA) in combination treatment of nafamostat and remdesivir

나파모스타트와 렘데시비르를 병용처리하는 경우, 각각 어느 농도로 병용처리 할 때 높은 병용 효과를 나타내는지 확인해 보기 위해 하기와 같이 실험을 진행하였다.When nafamostat and remdesivir were co-treated, the experiment was conducted as follows in order to check whether a high combination effect was exhibited when the co-treatment was performed at each concentration.

먼저, 본 실험예에서 사용한 Calu-3 세포는 Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM)에 20% FBS, 2% antibiotic-antimycotic 및 1% MEM-NEAA를 첨가하여 37℃에서 5% 이산화탄소 하에서 배양하였다. 또한, 본 실험예에서 사용된 SARS-CoV-2 한국 분리주는 한국질병관리본부(KCDC)에서 입수하였으며, 모든 실험은 한국질병관리본부로부터 승인받은 국립보건원의 강화된 생물 안전 등급 3단계(Biosafety Level 3) 봉쇄 절차를 준수한 한국 파스퇴르 연구소에서 수행하였다. 본 실험예에서 사용한 렘데시비르와 나파모스타트는 MedChemExpress 에서 구매하였다. 1차 항체로 사용된 anti-SARS-CoV-2 nucleocapsid 항체는 Sino Biological로부터 구매하였으며, 2차 항체인 Alexa fluor 488 goat anti-rabbit IgG 및 세포핵 염색 시약인 Hoechst 33342는 MolecularProbes/Thermo Fisher Scientific에서 구매하였다.First, the Calu-3 cells used in this experimental example were cultured under 5% carbon dioxide at 37°C by adding 20% FBS, 2% antibiotic-antimycotic and 1% MEM-NEAA to Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM). In addition, the SARS-CoV-2 Korean isolate used in this experimental example was obtained from the Korea Centers for Disease Control and Prevention (KCDC), and all experiments were conducted at the National Institutes of Health's enhanced biosafety level 3 (Biosafety Level) approved by the Korea Centers for Disease Control and Prevention. 3) It was performed at the Pasteur Institute in Korea, which complied with the containment procedure. Remdesivir and nafamostat used in this experimental example were purchased from MedChemExpress. The anti-SARS-CoV-2 nucleocapsid antibody used as the primary antibody was purchased from Sino Biological, and the secondary antibody Alexa fluor 488 goat anti-rabbit IgG and the cell nucleus staining reagent Hoechst 33342 were purchased from MolecularProbes/Thermo Fisher Scientific. .

상기 렘데시비르와 나파모스타트의 병용처리를 위해서, 먼저, Calu-3 세포를 각 웰당 20,000개씩, 각 화합물의 IC50 값을 기준으로 25배가 되는 농도를 최고로, 5배씩 희석하여 7-point dose response curve (DRC) 를 나타내기 위한 각 농도의 화합물을 제조하였다 (각 화합물에 대한 IC50 값은, 렘데시비르 2μM, 나파모스타트 0.004 μM이다). 제조된 각각의 화합물의 단독처리 효과를 확인하기 위하여 7-point DRC의 마지막 한개 point는 화합물 없이 DMSO를 넣었다. 얻어진 DRC를 이용하여 7X7의 정방형 모양으로 제조된 화합물을 혼합하였다 (실험당 총 49개의 병용처리군 생성). 화합물을 calu-3 세포에 처리한 뒤, SARS-CoV-2 바이러스 0.03moi로 감염하여 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 감염 후 24시간에 4% PFA로 고정하고, 0.25% triton X-100으로 세포를 천공하였다. 세포 염색을 위하여 anti-SARS-CoV-2 nucleocapsid 1차항체와 Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG 및 Hoechst 33342를 처리하였다. 이후 이미징을 위하여 대용량 이미징 시스템인 Operetta (Perkin Elmer)를 이용하여 이미지를 획득하였다. 화합물이 처리된 세포의 SARS-CoV-2에 대한 감염률은 각각의 병용처리 실험에 있는 음성대조군인 0.5% DMSO에 대비하여 계산되었다. For the combined treatment of remdesivir and napamostat, first, 20,000 Calu-3 cells per well, a concentration that is 25 times the maximum based on the IC50 value of each compound, and dilute by 5 times to a 7-point dose response Each concentration of the compound was prepared to show the curve (DRC) (IC50 values for each compound were 2 μM of remdesivir and 0.004 μM of nafamostat). In order to confirm the effect of single treatment of each compound prepared, DMSO was added without the compound at the last point of the 7-point DRC. Compounds prepared in a 7X7 square shape were mixed using the obtained DRC (a total of 49 combined treatment groups per experiment). After the compound was treated with calu-3 cells, the cells were infected with SARS-CoV-2 virus 0.03 moi and incubated at 37° C. for 24 hours. 24 hours after infection, the cells were fixed with 4% PFA and perforated with 0.25% triton X-100. For cell staining, primary anti-SARS-CoV-2 nucleocapsid antibody, Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG, and Hoechst 33342 were treated. For subsequent imaging, images were acquired using a large-capacity imaging system, Operetta (Perkin Elmer). The infection rate against SARS-CoV-2 in the compound-treated cells was calculated relative to the negative control 0.5% DMSO in each combination treatment experiment.

상기 병용처리의 결과를 분석하기 위하여 논문 (Foucquier et al., 2015, Analysis of drug combinations: current methodological landscape, Pharm Res Pers)에 기재된 highest single agent (HSA) 방법를 참고하였다. HSA 방법이란, 화합물 A 와 B를 단독처리 하였을때 더 높은 효능을 보이는 화합물의 값과 병용처리한 값의 차이를 나타내는 것이다. HSA 분석 결과는 단독과 병용처리 실험간의 차이를 나타내기 때문에, 0보다 큰 값을 가질수록 positive 병용 효과를 가지며, 0보다 적은 값을 가질 수록 negative 병용 효과를 가진다.In order to analyze the results of the combination treatment, the highest single agent (HSA) method described in the paper (Foucquier et al., 2015, Analysis of drug combinations: current methodological landscape, Pharm Res Pers) was referred to. The HSA method indicates the difference between the value of the compound showing higher efficacy when the compounds A and B were treated alone and the value of the combination treatment. Since the HSA analysis result shows the difference between the single and combination treatment experiments, having a value greater than 0 has a positive combination effect, and having a value less than 0 has a negative combination effect.

상기와 같이 HAS 분석 결과를 도 4에 나타내었고, 분석 결과 나파모스타트와 렘데시비르의 병용처리의 시, positive 과 negative 병용 효과가 모두 확인되었다. 나파모스타트 0.004μM 와 렘데시비르 2μM를 병용하였을때 HSA지표가 22.5로 가장 높았으며, 이는 상기 농도로 병용하였을 때 가장 우수한 positive 병용 효과를 가짐을 의미한다. 반면, 나파모스타트 0.004μM와 렘데시비르 0.016μM를 병용하였을때 HSA지표가 -4.80로 가장 낮은 수치를 보였으며, 이는 상기 농도로 병용하였을 때 가장 좋지 않은 negative 병용 효과를 가짐을 의미한다.As described above, the HAS analysis results are shown in FIG. 4 , and as a result of the analysis, both positive and negative combined effects were confirmed during the combined treatment of nafamostat and remdesivir. When nafamostat 0.004 μM and remdesivir 2 μM were used in combination, the HSA index was the highest at 22.5, which means that it had the best positive combination effect when used in combination at the above concentration. On the other hand, when nafamostat 0.004 μM and remdesivir 0.016 μM were used in combination, the HSA index showed the lowest value at -4.80, which means that it had the worst negative combination effect when used in combination at the above concentration.

Claims

나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of SARS coronavirus (SARS-CoV) infection, comprising Nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

청구항 1에 있어서, 사스 코로나바이러스의 증식 억제용인 것인 약학적 조성물.The method according to claim 1, The pharmaceutical composition for inhibiting the proliferation of SARS coronavirus.

청구항 1에 있어서, 상기 나파모스타트의 약학적으로 허용 가능한 염은 나파모스타트 메실레이트 또는 나파모스타트 유리염인 것인 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the pharmaceutically acceptable salt of nafamostat is nafamostat mesylate or nafamostat free salt.

청구항 1에 있어서, Calu-3 세포에 SARS-CoV-2 감염 후 6시간 후, 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 처리 하였을 때 IC₅₀값이 2.5nM 미만인 약학적 조성물. _{The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the IC 50} value is less than 2.5 nM when Calu-3 cells are treated with nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof 6 hours after SARS-CoV-2 infection.

청구항 1에 있어서, 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 0.05 내지 0.4 mg/kg/hr의 용량으로 투여되는 것인 약학적 조성물The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof is administered at a dose of 0.05 to 0.4 mg/kg/hr.

청구항 1에 있어서, 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 정맥내 투여되는 것인 약학적 조성물. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof is administered intravenously.

청구항 1에 있어서, 상기 사스 코로나바이러스는 사스 코로나바이러스 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus or SARS-CoV), 또는 코로나 19 바이러스(COVID 19, Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 or SARS-CoV-2)인 약학적 조성물.The method according to claim 1, wherein the SARS coronavirus is SARS coronavirus (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus or SARS-CoV), or Corona 19 virus (COVID 19, Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 or SARS-CoV-2) is a pharmaceutical composition.

청구항 1에 있어서, 상기 나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증 중증환자를 투여 대상으로 하는 것인 약학적 조성물. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the napamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof is administered to a patient with severe SARS-CoV infection.

나파모스타트(Nafamostat) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating pneumonia caused by SARS-CoV infection, comprising Nafamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

청구항 9에 있어서, 사스 코로나바이러스 증식 억제에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용인 것인 약학적 조성물. The pharmaceutical composition according to claim 9, which is for the prevention or treatment of pneumonia caused by SARS coronavirus proliferation inhibition.

나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및 렘데시비르(Remdesivir) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 상기 나파모스타트와 렘데시비르는 병용 투여되는 것인, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.Napamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And Remdesivir (Remdesivir) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the nafamostat and remdesivir are administered in combination, the prevention or treatment of SARS-CoV infection pharmaceutical composition for use.

나파모스타트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및 렘데시비르 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 상기 나파모스타트와 렘데시비르는 병용 투여되는 것인, 사스 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염에 의한 폐렴의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.Napamostat or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And Remdesivir or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the nafamostat and remdesivir are administered in combination. Prevention or treatment of pneumonia caused by SARS-CoV infection pharmaceutical composition for use.

청구항 11 또는 12에 있어서, 상기 병용 투여는 나파모스타트 및 렘데시비르를 동시에 투여하거나, 상기 나파모스타트 및 렘데시비르 중 어느 하나를 투여한 후 나머지 하나를 투여하는 것인, 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition according to claim 11 or 12, wherein the combined administration is to administer nafamostat and remdesivir at the same time, or to administer the other after administration of any one of nafamostat and remdesivir.