KR20210118870A - 진행성 단계의 고형 종양 암에 대한 치료용 rna 및 항-pd1 항체 - Google Patents

진행성 단계의 고형 종양 암에 대한 치료용 rna 및 항-pd1 항체 Download PDF

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세레나 마시아리
셈라 요룩
칼 수
니콜라스 악쿠아벨라
마리 베르나르도
로베르트 야불로프스키
우구르 사힌
프리데리케 기제케
주자나 이라코바 트른코바
티모시 알. 바게나르
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Abstract

본 개시는 선천성 및 획득된 PD-1 및/또는 PD-L1 치료법을 포함하는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 실패했거나 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체뿐만 아니라 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 대해 실패, 비관용성, 내성, 또는 난치성을 갖거나 갖지 않는 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 대상체의 치료를 위한 치료용 RNA 분야에 관한 것이다.

Description

진행성 단계의 고형 종양 암에 대한 치료용 RNA 및 항-PD1 항체
본 출원은 2019년 1월 21일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/794,896호, 2019년 10월 25일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/926,379호, 및 2019년 11월 14일에 출원된 유럽 특허 출원 제19306471.4호에 대한 우선권 이익을 청구하며, 각각의 내용은 이의 전문이 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.
본 개시는, 예를 들어 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 획득된 또는 선천성 내성을 갖는 대상체, 및 진행성 단계의 또는 전이성 고형 종양을 갖는 대상체를 포함하는, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체에서의 고형 종양 암을 포함하는, 고형 종양 암을 치료하기 위한 치료용 RNA 분야에 관한 것이다.
미국 국립 암 연구소(National Cancer Institute)는 고형 종양을 보통 낭 또는 액체 영역을 함유하지 않는 비정상적 조직 물질로 정의한다. 고형 종양은 난소, 유방, 결장, 및 다른 조직을 포함하는 임의의 조직 또는 기관에 물리적으로 위치할 수 있고, 흑색종, 피부 편평상피세포암(CSCC), 두부경부의 편평상피세포 암종(HNSCC), 비-소세포 폐암, 신장암, 두부경부암, 갑상샘암, 결장암, 간암, 난소암, 유방암이 포함된다.
예컨대 항-PD-1 및 항-PD-L1 치료법을 이용하는, 면역 체크포인트 차단은 임상에서 항암 반응을 유발하지만, 큰 비율의 환자가 치료로부터 이익을 얻지 못한다. 체크포인트 차단에 대한 선천성 및 획득된 내성의 몇몇 기전이 정의되었고, MHC I 및 IFNγ 신호전달 경로의 돌연변이가 포함된다. 예로, 문헌[Sade-Feldman et al. (2017) Nature Communications 8: 1136; 또한, Sharma et al. (2017) Cell 168: 707-723]을 참고한다.
진행성 단계의 고형 종양 암은 특히 치료하기 어렵다. 현재의 치료에는 수술, 방사선치료법, 면역치료법 및 화학치료법이 포함된다. 수술 단독은 소형 편재된 종양에 대해 적절한 치료일 수 있지만, 대규모 침습성 종양은 수술에 의해 절제 불가능할 수 있다. 다른 일반적인 치료, 예컨대 방사선치료법 및 화학치료법은 요망되지 않는 부작용 및 건강한 세포에 대한 손상과 연관된다.
수술 및 현재의 치료법은 때때로 대규모 고형 종양의 사멸시킬 수 있지만, 추가적인 세포(잠재적으로 암 줄기 세포 포함)가 치료법에서 생존할 수 있다. 이들 세포는, 경시적으로, 새로운 종양을 형성하여 암 재발을 야기할 수 있다. 다중방식의 통상적 치료법에도 불구하고, 무질환 생존은 여러 유형의 고형 종양에 있어서 25% 미만이다. 다중-방식 치료법에 대해 내성이거나 치료법 후 재발한 고형 종양은 치료하기가 더 어렵고, 장기 생존이 10% 미만이다. 특히, 예를 들어, 항-프로그래밍된 세포사 단백질 1 또는 그 리간드에 대한 모노클로날 항체를 사용하는 면역치료법(항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법)이 실패한 환자에 있어서 필요성이 크다.
항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체에서의 고형 종양을 포함하는, 예컨대 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암의 치료에서 현재의 단점을 극복할 수 있는 조성물, 용도, 및 방법이 본원에서 개시된다. 본원에서 개시되는 바와 같은 치료용 RNA의 투여는 종양 크기를 감소시키고, 진행성 질환까지의 시간을 연장하고/하거나 종양의 전이 및/또는 재발에 대해 보호하고 궁극적으로 생존 시간을 연장할 수 있다.
특히, IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA를 투여하는 단계, 및 유효량의 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 고형 종양 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 여기서 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 되었다.
일부 구현예에서, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체에 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA를 투여하는 단계 및 유효량의 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체에서 고형 종양 암을 치료하는 방법이 제공된다.
항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 내성 고형 종양 암을 갖는 대상체에 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA를 투여하는 단계 및 유효량의 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 내성 고형 종양 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 획득된 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 대상체에 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA를 투여하는 단계 및 유효량의 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 획득된 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 포괄된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 대상체에 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA를 투여하는 단계 및 유효량의 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
본원에서 제공되는 구현예는 비관용성, 내성, 또는 난치성에 관한 임의의 과학적 이론에 의해 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 및/또는 항-PD-1 치료법에 대한 비관용성, 내성, 난치성(획득된 및 선천성 내성 포함)은 베타-2-마이크로글로불린(B2M) 기능의 부분적 또는 전체 손실을 포함하는 암 세포로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 대상체는 베타-2-마이크로글로불린(B2M) 기능의 부분적 또는 전체 손실을 포함하는 암 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, 암 세포는 B2M 기능의 부분적 손실을 갖는다. 일부 구현예에서, 암 세포는 B2M 기능의 전체 손실을 갖는다. 일부 구현예에서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 암 세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교함으로써 평가되며, 임의로 여기서 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 정상 B2M 기능을 가진 암 세포를 포함하는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 25% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 50% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 75% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 95% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 전체적으로(예로, 고형 종양으로부터 채취된 생검에서 평가되는 바와 같이) 고형 종양이 유래되는 정상 세포 또는 조직에 비해 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 유전자에 돌연변이(예로, 이로부터 유도되는 기능의 부분적 또는 전체 손실)를 포함한다. 돌연변이는 치환, 삽입, 또는 결실일 수 있다. 일부 구현예에서, B2M 유전자는 이형접합성의 손실(LOH)을 포함한다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 프레임시프트 돌연변이는 B2M의 엑손 1에 있다. 일부 구현예에서, 프레임시프트 돌연변이는 p.Leu13fs 및/또는 p.Ser14fs를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실이 없는 대상체에 비해 감소된 수준의 B2M 단백질을 갖는다.
일부 경우에서, 고형 종양(예로, 고형 종양 내의 암 세포)은 감소된 수준의 세포-표면 발현된(본원에서 "표면 발현된"으로도 나타냄) 주조직 적합성 복합체 클래스 I(MHC I)을 갖는다. 일부 구현예에서, 고형 종양 샘플(예로, 고형 종양의 암 세포를 포함하는 생검)은 대조군에 비해 감소된 수준의 세포-표면 발현된 MHC I을 가지며, 임의로 여기서 대조군은 동일한 대상체로부터의 대응하는 비-암성 샘플이다. 일부 구현예에서, 고형 종양에서 암 세포의 표면 상에 발현되는 MHC I의 수준은 B2M 유전자에서의 돌연변이의 결과로 감소된다. 일부 구현예에서, 대상체는 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 포함하는 암 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, 암 세포는 표면 발현된 MHC I을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I은 암 세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가되며, 임의로 여기서 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 정상 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 암 세포를 포함하는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 25% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 50% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 75% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 95% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 전체적으로(예로, 고형 종양으로부터 채취된 생검에서 평가되는 바와 같이) 고형 종양이 유래되는 정상 세포 또는 조직에 비해 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는다.
일부 구현예에서, IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA를 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 대상체에 투여하는 단계 및 유효량의 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 되었다. 일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 되었다.
일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 치료법 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했다.
일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 비관용성이 되었다.
일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 및/또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 내성이 되었다.
일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 난치성이 되었다. 일부 구현예에서, 난치성 또는 내성 암은 특정된 치료에 반응하지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 난치성은 치료의 시작과 동시에 발생한다. 일부 구현예에서, 난치성은 치료 동안 발생한다.
일부 구현예에서, 암은 치료가 시작되기 전에 내성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 및/또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 반응하지 않는 암을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 특정된 치료에 대해 난치성 또는 내성이 되는 중인 암을 갖는다. 일부 구현예에서, 특정된 치료는 항-PD1 치료법이다. 일부 구현예에서, 특정된 치료는 항-PD-L1 치료법이다. 일부 구현예에서, 대상체는 치료법을 최초 시행받은 이래 이에 대해 반응성이 더 작아졌다. 일부 구현예에서, 대상체는 치료법을 시행받지 않았지만, 전형적으로 치료법에 반응하지 않는 유형의 암을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서, 대상체는 이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않았다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않는 것이다.
일부 구현예에서, 대상체는 전이성 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비-전이성 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 절제 불가능한 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 전이성이고 절제 불가능한 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비-전이성이고 절제 불가능한 고형 종양을 갖는다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종 종양, 소세포 폐 종양, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 골육종 종양, 피부 편평상피세포암(CSCC), 비-소세포 폐암, 신장 종양, 갑상샘 종양, 간 종양, 또는 종양내 주사가 가능한 다른 고형 종양이다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 비-호지킨 림프종 또는 호지킨 림프종을 포함하는 림프종이다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 흑색종은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 흑색종, 임의로 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이며, 종양내 주사가 가능한 표재, 피하 및/또는 림프절 전이를 포함한다.
일부 구현예에서, 종양내 주사는 림프절 내의 고형 종양 전이 내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 림프절 내의 림프종 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 대상체의 피부 표면의 10 ㎝ 내에 있는 일차 또는 이차 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 대상체의 피부 표면의 5 ㎝ 내에 있는 일차 또는 이차 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 피부 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 피부 고형 종양은 전이이다. 일부 구현예에서, 피부 고형 종양은 피부 암이다. 일부 구현예에서, 피부 고형 종양은 피부 암이 아니다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 피하 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 피하 고형 종양은 전이이다. 일부 구현예에서, 피하 고형 종양은 피부 암이다. 일부 구현예에서, 피하 고형 종양은 피부 암이 아니다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 상피 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 전립샘 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 난소 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 신세포 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 위장관 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 간 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 결장직장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 혈관구조를 갖는 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 중피종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 췌장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 육종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 폐 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 결장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 흑색종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 소세포 폐 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 비-소세포 폐암 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 신경모세포종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 정소 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 암종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 샘암종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 고환종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 망막모세포종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 피부 편평상피세포 암종(CSCC)이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HNSCC이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 두부경부암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 골육종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 신장암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 갑상샘암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 역형성 갑상샘암(ATC)이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 간암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 결장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 상기 중 임의의 2개이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 상기 중 임의의 2개 이상이다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 림프종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 비-호지킨 림프종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 호지킨 림프종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 림프종은 중추 신경계 림프종이 아니다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 HNSCC이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 점막 부위만을 갖는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 HNSCC 및 점막 부위만을 갖는 점막 흑색종이다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 유방암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 유방 육종 또는 3중 음성 유방암이다.
일부 구현예에서, RNA는 항-PD-1 항체와 조합되어 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체는 하나를 초과하는 고형 종양을 갖는다. 일부 경우에서, 적어도 하나의 종양은 PD-1 또는 PD-L1 치료법에 대해 내성, 난치성, 또는 비관용성이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 종양은 PD-1 또는 PD-L1 치료법에 대해 내성, 난치성, 또는 비관용성이며 적어도 하나의 종양은 그렇지 않다. 일부 구현예에서, 하나를 초과하는 고형 종양이 존재하는 경우, 내성 및 비-내성 종양이 모두, 존재하는 경우, 성공적으로 치료된다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 III기, III기의 하위세트, IV기, 또는 IV기의 하위세트이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 IIIB기, IIIC기, 또는 IV기 암이다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 진행성 단계이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 절제 불가능하다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 진행성 단계이고 절제 불가능하다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 그 기원으로부터 대상체 내 또 다른 부위로 확산되었다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 하나 이상의 피부 또는 피하 병소를 갖는다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 전이되었다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 전이되었으나, 피부암이 아니다.
일부 구현예에서, 대상체는 다른 치료 옵션이 없다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지만, 이 치료법으로 아직 치료받지 않은 것이다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성 및/또는 난치성인, IIIB기, IIIC기, 또는 절제 불가능한 IV기 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 표재 또는 피하 병소 및/또는 전이를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 3개월 초과의 예상 수명을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 18세이다.
일부 구현예에서, RNA는 종양내로 주사된다.
일부 구현예에서, RNA는 고형 종양 암의 점막 부위에서만 종양내로 주사된다.
일부 구현예에서, RNA는 약 5개월 동안 투여된다. 일부 구현예에서, RNA는 매주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, RNA는 최대 52주 동안 투여된다.
일부 구현예에서, IFNα 단백질은 IFNα2b 단백질이다.
일부 구현예에서, IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나; IL-12sc 단백질은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나; IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA는 IL-12sc의 p40 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1 내지 984)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 IL-12sc의 p30 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하고 p40 및 p35 부분 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나; IL-15 sushi 단백질은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나; IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA는 IL-15 수용체 알파의 sushi 도메인(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 1 내지 321)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 성숙 IL-15(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 382 내지 729)와 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하고 임의로 IL-15의 sushi 도메인 및 성숙 IL-15 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나 IFNα 단백질은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나 GM-CSF 단백질은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 각각의 유리딘 대신에 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 하나를 초과하는 유형의 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 여기서 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG(때때로 m2 7,3`OG(5')ppp(5')m2'-OApG로도 나타냄)를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG(때때로 m2 7,3`OG(5')ppp(5')m2'-OApG로도 나타냄)를 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 적어도 100 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30에 나타낸 폴리-A 꼬리를 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 RNA는 하기를 포함한다:
i. m27,3'-OGppp(m12'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 5' 캡;
ii. (i) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR;
iii. (i) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR; 및
iv. 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 폴리-A 꼬리.
일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, 고형 종양의 치료는 대상체에서 종양의 크기 감소 또는 암 전이의 방지를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA는 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, RNA는 주사를 통해 투여된다. 일부 구현예에서, RNA는 주사 전에 액체 용액 중에 함께 혼합된다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 세미플리맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, MEDI0608, PDR001, PF-06801591, BGB-A317, 피딜리주맙, TSR-042, AGEN-2034, A-0001, BGB-108, BI-754091, CBT-501, ENUM-003, ENUM-388D4, IBI-308, JNJ-63723283, JS-001, JTX-4014, JY-034, CLA-134, STIA-1110, 244C8, 또는 388D4이다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 세미플리맙이다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 약 0.1 ㎎ 내지 600 ㎎의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 200 ㎎의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 240 ㎎의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 350 ㎎의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 주사를 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 3주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, RNA 및 항-PD-1 항체는 약 8개월 동안 투여된다.
본 출원의 추가 구현예는 하기와 같다:
구현예 A 1. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체와 조합된, 고형 종양 암을 갖는 대상체의 치료에서 사용하기 위한 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 조성물로서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 조성물.
구현예 A 2. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체와 조합된, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체의 치료에서 사용하기 위한 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 조성물로서, RNA가 IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA와 공동-투여되는 조성물.
구현예 A 3. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체와 조합된, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체의 치료에서 사용하기 위한 IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 조성물로서, RNA가 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA와 공동-투여되는 조성물.
구현예 A 4. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체와 조합된, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체의 치료에서 사용하기 위한 IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 조성물로서, RNA가 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA와 공동-투여되는 조성물.
구현예 A 5. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체와 조합된, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체의 치료에서 사용하기 위한 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 조성물로서, RNA가 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA와 공동-투여되는 조성물.
구현예 A 6. 구현예 A 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 조성물.
구현예 A 7. 구현예 A 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 조성물.
구현예 A 8. 구현예 A 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 치료법 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패한 조성물.
구현예 A 9. 구현예 A 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 비관용성이 된 조성물.
구현예 A 10. 구현예 A 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 내성이 된 조성물.
구현예 A 11. 구현예 A 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 난치성이 된 조성물.
구현예 A 12. 구현예 A 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 난치성 또는 내성 암이 특정된 치료에 반응하지 않는 것인 조성물.
구현예 A 13. 구현예 A 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 난치성이 치료의 시작과 동시에 발생하는 조성물.
구현예 A 14. 구현예 A 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 난치성이 치료 동안 발생하는 조성물.
구현예 A 15. 구현예 A 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 암이 치료가 시작되기 전에 내성인 조성물.
구현예 A 16. 구현예 A 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 및/또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 반응하지 않는 암을 갖는 조성물.
구현예 A 17. 구현예 A 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 특정된 치료에 대해 난치성 또는 내성이 되는 중인 암을 갖는 조성물.
구현예 A 18. 구현예 A 17에 있어서, 특정된 치료가 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법으로서인 조성물.
구현예 A 19. 구현예 A 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 치료법을 최초 시행받은 이래 이에 대해 반응성이 더 작아진 조성물.
구현예 A 20. 구현예 A 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 치료법을 시행받지 않았지만, 전형적으로 치료법에 반응하지 않는 유형의 암을 갖는 조성물.
구현예 A 21. 구현예 A 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 내성 고형 종양 암을 갖는 조성물.
구현예 A 22. 구현예 A 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 획득된 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 조성물.
구현예 A 23. 구현예 A 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 조성물.
구현예 A 24. 구현예 A 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 조성물.
구현예 A 25. 구현예 A 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체를 선택하는 최초 단계를 추가로 포함하는 조성물.
구현예 A 26. 구현예 A 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인 조성물.
구현예 A 27. 구현예 A 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 전이성 고형 종양을 갖는 조성물.
구현예 A 28. 구현예 A 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 절제 불가능한 고형 종양을 갖는 조성물.
구현예 A 29. 구현예 A 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 베타-2-마이크로글로불린(B2M) 기능의 부분적 또는 전체 손실을 포함하는 암 세포를 갖는 조성물.
구현예 A 30. 구현예 A 29에 있어서, 암 세포가 B2M 기능의 부분적 손실을 갖는 조성물.
구현예 A 31. 구현예 A 29에 있어서, 암 세포가 B2M 기능의 전체 손실을 갖는 조성물.
구현예 A 32. 구현예 A 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실이 암 세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가되며, 임의로 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래되는 조성물.
구현예 A 33. 구현예 A 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 B2M 유전자에 돌연변이를 포함하는 조성물.
구현예 A 34. 구현예 A 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 돌연변이가 치환, 삽입, 또는 결실인 조성물.
구현예 A 35. 구현예 A 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, B2M 유전자가 이형접합성의 손실(LOH)을 포함하는 조성물.
구현예 A 36. 구현예 A 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 프레임시프트 돌연변이를 포함하는 조성물.
구현예 A 37. 구현예 A 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 B2M의 엑손 1에 프레임시프트 돌연변이를 포함하는 조성물.
구현예 A 38. 구현예 A 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 p.Leu13fs 및/또는 p.Ser14fs를 포함하는 프레임시프트 돌연변이를 포함하는 조성물.
구현예 A 39. 구현예 A 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실이 없는 대상체에 비해 감소된 수준의 B2M 단백질을 갖는 조성물.
구현예 A 40. 구현예 A 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 대조군에 비해 감소된 수준의 표면 발현된 주조직 적합성 복합체 클래스 I(MHC I)을 가지며, 임의로 대조군은 동일한 대상체로부터의 비-암성 샘플인 조성물.
구현예 A 41. 구현예 A 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종 종양, 소세포 폐 종양, 비-소세포 폐암, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 골육종 종양, 신장 종양, 갑상샘 종양, 역형성 갑상샘암(ATC), 간 종양, 결장 종양, 또는 종양내 주사가 가능한 다른 고형 종양인 조성물.
구현예 A 42. 구현예 A 1 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종인 조성물.
구현예 A 43. 구현예 A 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종이 아닌 조성물.
구현예 A 44. 구현예 A 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종이며, 흑색종이 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종인 조성물.
구현예 A 45. 구현예 A 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 종양내 주사가 가능한 표재, 피하 및/또는 림프절 전이를 포함하는 흑색종인 조성물.
구현예 A 46. 구현예 15에 있어서, 고형 종양 암이 HNSCC 및/또는 점막 부위만을 갖는 점막 흑색종인 조성물.
구현예 A 47. 구현예 A 1 내지 46 중 어느 하나에 있어서, RNA가 단독치료법으로 투여되는 조성물.
구현예 A 48. 구현예 A 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 하나를 초과하는 고형 종양을 갖는 조성물.
구현예 A 49. 구현예 A 1 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 종양이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성, 난치성, 또는 비관용성이며 적어도 하나의 종양은 그렇지 않은 조성물.
구현예 A 50. 구현예 A 49에 있어서, 내성 및 비-내성 종양이 모두 성공적으로 치료되는 조성물.
구현예 A 51. 구현예 A 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 III기, III기의 하위세트, IV기, 또는 IV기의 하위세트인 조성물.
구현예 A 52. 구현예 A 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 진행성 단계이고 절제 불가능한 조성물.
구현예 A 53. 구현예 A 1 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양이 대상체에서 그 기원으로부터 또 다른 부위로 확산된 조성물.
구현예 A 54. 구현예 A 1 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 하나 이상의 피부 또는 피하 병소를 가지며, 임의로 암은 피부 암이 아닌 조성물.
구현예 A 55. 구현예 A 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 IIIB기, IIIC기, 또는 IV기 흑색종인 조성물.
구현예 A 56. 구현예 A 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 이전에 치료받지 않은 조성물.
구현예 A 57. 구현예 A 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않는 것인 조성물.
구현예 A 58. 구현예 A 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종, 비-소세포 폐암, 신장암, 두부경부암, 유방암, 또는 CSCC가 아닌 조성물.
구현예 A 59. 구현예 A 1 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 다른 치료 옵션이 없는 조성물.
구현예 A 60. 구현예 A 1 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 조성물:
a. 고형 종양 암이 흑색종, CSCC, 또는 HNSCC이 아니며;
b. 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않고;
c. 다른 적합한 치료 옵션이 없음.
구현예 A 61. 구현예 A 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지만, 이 치료법으로 아직 치료받지 않은 것인 조성물.
구현예 A 62. 구현예 A 1 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성 및/또는 난치성인 IIIB기, IIIC기, 또는 절제 불가능한 IV기 흑색종인 조성물.
구현예 A 63. 구현예 A 1 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 표재 또는 피하 병소 및/또는 전이를 포함하는 조성물.
구현예 A 64. 구현예 A 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 2개 또는 3개의 종양 병소를 갖는 조성물.
구현예 A 65. 구현예 A 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는 조성물.
구현예 A 66. 구현예 A 1 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 3개월 초과의 예상 수명을 갖는 조성물.
구현예 A 67. 구현예 A 1 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 적어도 18세인 조성물.
구현예 A 68. 구현예 A 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 조성물:
a. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나;
b. IL-12sc 단백질이 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA가 IL-12sc의 p40 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1 내지 984)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 IL-12sc의 p30 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며 p40 및 p35 부분 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함함.
구현예 A 69. 구현예 A 1 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 조성물:
a. IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나;
b. IL-15 sushi 단백질이 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c. IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA가 IL-15 수용체 알파의 sushi 도메인(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 1 내지 321)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 성숙 IL-15(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 382 내지 729)와 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며 임의로 IL-15의 sushi 도메인 및 성숙 IL-15 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함함.
구현예 A 70. 구현예 A 1 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 조성물:
a. IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나
b. IFNα 단백질이 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함함.
구현예 A 71. 구현예 A 1 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 조성물:
a. GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나
b. GM-CSF 단백질이 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함함.
구현예 A 72. 구현예 A 1 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 조성물.
구현예 A 73. 구현예 A 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 조성물.
구현예 A 74. 구현예 A 1 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 조성물.
구현예 A 75. 구현예 A 1 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 조성물.
구현예 A 76. 구현예 72 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 변형된 뉴클레오시드가 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택되는 조성물.
구현예 A 77. 구현예 A 1 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 하나를 초과하는 유형의 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택되는 조성물.
구현예 A 78. 구현예 A 77에 있어서, 변형된 뉴클레오시드가 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)인 조성물.
구현예 A 79. 구현예 A 1 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 조성물.
구현예 A 80. 구현예 A 1 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 조성물.
구현예 A 81. 구현예 A 1 내지 80 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함하는 조성물.
구현예 A 82. 구현예 A 1 내지 81 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함하는 조성물.
구현예 A 83. 구현예 A 1 내지 82 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함하는 조성물.
구현예 A 84. 구현예 A 1 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함하는 조성물.
구현예 A 85. 구현예 A 1 내지 84 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 폴리-A 꼬리를 포함하는 조성물.
구현예 A 86. 구현예 A 1 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 폴리-A 꼬리를 포함하는 조성물.
구현예 A 87. 구현예 A 84 또는 A 85에 있어서, 폴리-A 꼬리가 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
구현예 A 88. 구현예 A 85 내지 87 중 어느 하나에 있어서, 폴리-A 꼬리가 SEQ ID NO: 30에 나타낸 폴리-A 꼬리를 포함하는 조성물.
구현예 A 89. 구현예 A 1 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 RNA가 하기를 포함하는 조성물:
a. m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 5' 캡;
b. (i) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR;
c. (i) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR; 및
d. 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 폴리-A 꼬리.
구현예 A 90. 구현예 A 89에 있어서, 폴리-A 꼬리가 SEQ ID NO: 30을 포함하는 조성물.
구현예 A 91. 구현예 A 1 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 인간에서 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암의 치료에서 사용되는 조성물.
구현예 A 92. 구현예 A 1 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양의 치료가 대상체에서 종양의 크기 감소 또는 암 전이의 방지를 포함하는 조성물.
구현예 A 93. 구현예 A 1 내지 92 중 어느 하나에 있어서, RNA가 동시에 투여되는 조성물.
구현예 A 94. 구현예 A 1 내지 93 중 어느 하나에 있어서, RNA가 주사를 통해 투여되는 조성물.
구현예 A 95. 구현예 A 93 또는 A 94에 있어서, RNA가 주사 전에 액체 용액과 함께 혼합되는 조성물.
구현예 A 96. 구현예 A 1 내지 A 96 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 림프종을 포함하는 조성물.
구현예 A 97. 구현예 A 1 내지 A 96 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 호지킨 림프종을 포함하는 조성물.
구현예 A 98. 구현예 A 1 내지 A 96 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 비-호지킨 림프종을 포함하는 조성물.
본 출원의 추가 구현예는 하기와 같다:
구현예 B 1. 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법으로서, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 대상체에 하기:
i. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA; 및
ii. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체,
를 투여함으로써, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 단계를 포함하는 방법.
구현예 B 2. 구현예 B 1에 있어서, 고형 종양 암이 III기, III기의 하위세트, IV기, 또는 IV기의 하위세트인 방법.
구현예 B 3. 구현예 B 1 또는 2에 있어서, 고형 종양 암이 진행성 단계이고 절제 불가능한 방법.
구현예 B 4. 구현예 B 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양이 대상체에서 그 기원으로부터 또 다른 부위로 확산된 방법.
구현예 B 5. 구현예 B 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 III기, IIIB기, IIIC기, 또는 IV기 암인 방법.
구현예 B 6. 구현예 B 5에 있어서, IV기 암이 절제 불가능한 방법.
구현예 B 7. 구현예 B 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종, 피부 편평상피세포암(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 비-소세포 폐암, 신장암, 두부경부암, 갑상샘암, 결장암, 간암, 난소암, 유방암 또는 종양내 주사가 가능한 다른 고형 종양인 방법.
구현예 B 8. 구현예 B 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종인 방법.
구현예 B 9. 구현예 B 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 유방암, 예로, 유방 육종, 3중 음성 유방암인 방법.
구현예 B 10. 구현예 B 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 난소암인 방법.
구현예 B 11. 구현예 B 10에 있어서, 난소암이 백금-기재 화학치료법에 내성인 방법.
구현예 B 12. 구현예 B 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 갑상샘암인 방법.
구현예 B 13. 구현예 B 12에 있어서, 갑상샘암이 역형성 갑상샘암(ATC)인 방법.
구현예 B 14. 구현예 B 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 하나 이상의 피부 또는 피하 병소(예로, 전이)를 갖지만, 피부 암이 아닌 방법.
구현예 B 15. 구현예 B 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 IIIB기, IIIC기, 또는 IV기 흑색종인 방법.
구현예 B 16. 구현예 B 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 방법.
구현예 B 17. 구현예 B 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종, 비-소세포 폐암, 신장암, 두부경부암인 방법.
구현예 B 18. 구현예 B 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않은 방법.
구현예 B 19. 구현예 B 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않는 것인 방법.
구현예 B 20. 구현예 B 19에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종, 비-소세포 폐암, 신장암, 두부경부암, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부 편평상피세포 암종(HNSCC)이 아닌 방법.
구현예 B 21. 구현예 B 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 다른 치료 옵션이 없는 방법.
구현예 B 22. 구현예 B 1에 있어서, 하기와 같은 방법:
a. 고형 종양 암이 흑색종, 피부 편평상피세포 암종, 또는 두부경부 편평상피세포 암종이 아니며;
b. 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않고;
c. 다른 적합한 치료 옵션이 없음.
구현예 B 23. 구현예 B 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지만, 이 치료법으로 아직 치료받지 않은 것(예로, 두부경부암, HNSCC, 또는 CSCC)인 방법.
구현예 B 24. 구현예 B 1에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성 및/또는 난치성인 IIIB기, IIIC기, 또는 절제 불가능한 IV기 흑색종인 방법.
구현예 B 25. 구현예 B 1에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성 및/또는 난치성인 III기 또는 절제 불가능한 IV기 피부 편평상피세포 암종 또는 두부경부 편평상피세포 암종인 방법.
구현예 B 26. 구현예 B 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 표재 또는 피하 병소 및/또는 전이를 포함하는 방법.
구현예 B 27. 구현예 B 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양 암이 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종, 소세포 폐 종양, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 또는 골육종 종양인 방법.
구현예 B 28. 구현예 B 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 2개 또는 3개의 종양 병소를 갖는 방법.
구현예 B 29. 구현예 B 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는 방법.
구현예 B 30. 구현예 B 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 3개월 초과의 예상 수명을 갖는 방법.
구현예 B 31. 구현예 B 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 적어도 18세인 방법.
구현예 B 32. 진행성 단계의 흑색종, 피부 편평상피세포 암종, 또는 두부경부 편평상피세포 암종을 치료하는 방법으로서,
진행성 단계의 흑색종, 피부 편평상피세포 암종, 또는 두부경부 편평상피세포 암종을 갖는 대상체에 하기:
i. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA; 및
ii. 항-PD1 항체,
를 투여하는 단계를 포함하며, 하기와 같은 방법:
a. 대상체는 적어도 18세임;
b. 대상체는 사전 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법에 실패했음;
c. 대상체는 최소 2개 병소를 가짐; 및
d. 흑색종은 직접적 종양내 주사가 가능한 종양을 포함함.
구현예 B 33. 구현예 B 32에 있어서, 대상체가 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는 방법.
구현예 B 34. 구현예 B 32에 있어서, 대상체가 3개월 초과의 예상 수명을 갖는 방법.
구현예 B 35. 구현예 B 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 항-PD1 항체가 세미플리맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, MEDI0608, PDR001, PF-06801591, BGB-A317, 피딜리주맙, TSR-042, AGEN-2034, A-0001, BGB-108, BI-754091, CBT-501, ENUM-003, ENUM-388D4, IBI-308, JNJ-63723283, JS-001, JTX-4014, JY-034, CLA-134, STIA-1110, 244C8, 또는 388D4인 방법.
구현예 B 36. 구현예 B 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 항-PD1 항체가 세미플리맙인 방법.
구현예 B 37. 구현예 B 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 항-PD1 항체가 약 0.1 ㎎ 내지 600 ㎎의 용량으로 투여되는 방법.
구현예 B 38. 구현예 B 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 항-PD1 항체가 200 ㎎, 240 ㎎, 또는 350 ㎎의 용량으로 투여되는 방법.
구현예 B 39. 구현예 B 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 항-PD1 항체가 주사를 통해 투여되는 방법.
구현예 B 40. 구현예 B 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 항-PD1 항체가 정맥내 투여되는 방법.
구현예 B 41. 구현예 B 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 항-PD-1 항체가 3주 1회 투여되는 방법.
구현예 B 42. 구현예 B 1 내지 41 중 어느 하나에 있어서, RNA가 종양내 주사되는 방법.
구현예 B 43. 구현예 B 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, RNA 및 항-PD-1 항체가 약 8개월 동안 투여되는 방법.
구현예 B 44. 구현예 B 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, RNA가 매주 1회 투여되는 방법.
구현예 B 45. 구현예 B 1 내지 44 중 어느 하나에 있어서, RNA가 최대 52주 동안 투여되는 방법.
구현예 B 46. 구현예 B 1 내지 45 중 어느 하나에 있어서, IFNα 단백질이 IFNα2b 단백질인 방법.
구현예 B 47. 구현예 B 1 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 방법:
a. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나;
b. IL-12sc 단백질이 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA가 IL-12sc의 p40 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1 내지 984)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 IL-12sc의 p30 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며 p40 및 p35 부분 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함함.
구현예 B 48. 구현예 B 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 방법:
a. IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나;
b. IL-15 sushi 단백질이 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
c. IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA가 IL-15 수용체 알파의 sushi 도메인(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 1 내지 321)와 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 성숙 IL-15(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 382 내지 729)와 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며 임의로 IL-15의 sushi 도메인 및 성숙 IL-15 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함함.
구현예 B 49. 구현예 B 1 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 방법:
a. IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하고/하거나
b. IFNα 단백질은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함함.
구현예 B 50. 구현예 B 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 하기와 같은 방법:
a. GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나
b. GM-CSF 단백질이 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함함.
구현예 B 51. 구현예 B 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
구현예 B 52. 구현예 B 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
구현예 B 53. 구현예 B 1 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
구현예 B 54. 구현예 B 1 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
구현예 B 55. 구현예 B 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 변형된 뉴클레오시드가 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택되는 방법.
구현예 B 56. 구현예 B 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 하나를 초과하는 유형의 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택되는 방법.
구현예 B 57. 구현예 B 56에 있어서, 변형된 뉴클레오시드가 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)인 방법.
구현예 B 58. 구현예 B 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 방법.
구현예 B 59. 구현예 B 1 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 방법.
구현예 B 60. 구현예 B 1 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함하는 방법.
구현예 B 61. 구현예 B 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함하는 방법.
구현예 B 62. 구현예 B 1 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함하는 방법.
구현예 B 63. 구현예 B 1 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함하는 방법.
구현예 B 64. 구현예 B 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 폴리-A 꼬리를 포함하는 방법.
구현예 B 65. 구현예 B 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 각각의 RNA가 폴리-A 꼬리를 포함하는 방법.
구현예 B 66. 구현예 B 64 또는 B 65에 있어서, 폴리-A 꼬리가 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 방법.
구현예 B 67. 구현예 B 64 또는 B 65에 있어서, 폴리-A 꼬리가 SEQ ID NO: 30에 나타낸 폴리-A 꼬리를 포함하는 방법.
구현예 B 68. 구현예 B 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 RNA가 하기를 포함하는 방법:
a. m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 5' 캡;
b. (i) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR;
c. (i) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR; 및
d. 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 폴리-A 꼬리.
구현예 B 69. 구현예 B 68에 있어서, 폴리-A 꼬리가 SEQ ID NO: 30을 포함하는 방법.
구현예 B 70. 구현예 B 1 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
구현예 B 71. 구현예 B 1 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양의 치료가 대상체에서 종양의 크기 감소 또는 암 전이의 방지를 포함하는 방법.
구현예 B 72. 구현예 B 1 내지 71 중 어느 하나에 있어서, RNA가 동시에 투여되는 방법.
구현예 B 73. 구현예 B 1 내지 72 중 어느 하나에 있어서, RNA가 주사를 통해 투여되는 방법.
구현예 B 74. 구현예 B 72 또는 73에 있어서, RNA가 주사 전에 액체 용액 중 함께 혼합되는 방법.
도 1a는 예시적인 전반적 치료 설계를 나타낸다.
도 1b는 단독치료법으로 사이토카인 RNA 혼합물을 투여하기 위한 예시적인 치료 일정을 나타낸다.
도 1c는 항-PD-1 항체와의 조합 치료법으로 사이토카인 RNA 혼합물을 투여하기 위한 예시적인 치료 일정을 나타낸다.
도 2a 내지 도 2i는 항-PD-1 치료법에 대해 획득된 내성의 쥣과 모델의 생성 및 특징화를 나타낸다. 도 2a 내지 도 2b는 PD-1 내성 종양 세포주의 생성을 나타낸다. 도 2a는 생체내 계대 접근의 다이어그램이다. 간략하게, MC38 종양을 보유하는 C57BL6 마우스를 항-PD-1 항체(클론 RMP1-14)로 처리하고, 성장하는 종양을 절제하고, 종양으로부터의 세포를 나이브 마우스 내로의 임플란트 전에 생체외 배양하였다. 도 2b는 10 ㎎/㎏ 항-PD-1 항체로 처리된 C57BL6/J 마우스에 임플란트된 MC38 및 MC38-내성 종양 세포주(n=5/군)에 대한 종양 성장 곡선을 나타낸다. 항체 처리를 화살표로 나타낸 바와 같이 투여하였다. 도 2c 내지 도 2e는 MC38-내성 세포가 PD-1 내성의 알려진 분자 기전을 나타내지 않음을 보여준다. MC38 및 MC38-내성 세포를 시험관내 배양하고 상이한 단백질의 발현을 유세포 측정에 의해 검정하였다. 도 2c는 PD-L1, B2M 및 IFNGR1 및 IFNGR2의 표면 발현을 나타내는 일련의 그래프이다. 선, 염색되지 않음; 채운 그래프, 염색된 샘플. 도 2d는 시험관내 IFNγ 처리 후 PD-L1 발현을 나타내는 그래프이다. 도 2e는 OVA-형질도입 세포에서 SIINFEKL-MHC I 복합체의 발현을 나타내는 그래프이다. 세포를 형질도입하여 오발부민을 발현하고 MHC I에서 SIINFEKL의 출현을 검정하였다. 도 2f 내지 도 2i는 절제된 피하 종양을 나타내며 RNA-서열분석에 의해 프로필분석하였다. 도 2f는 모체 MC38(n=16) 대비 내성 종양(n=13)에서 하향조절된 여러 유전자의 전반적 유전자 발현을 나타낸다. 도 2g는 IFNγ 표적 유전자의 발현이 MC38-내성 종양에서 감소됨을 나타낸다. 도 2h는 상대 면역 존재비를 추정하는 MCPCounter 분석을 나타내어, 유의미하게 감소된 T, NK, B 세포 계통 및 단핵구 계통 세포를 드러내었다. *, p<0.05. 도 2i는 CD8+ T 세포(CD45+CD3+CD4-CD8+), CD4+ T 세포(CD45+CD3+CD4+CD8-), 대식구(CD45+CD11b+F4/80+) 및 자연 살해 세포(CD45+CD3-CD49b+NK1.1+)에서 유세포 측정에 의한 면역 침윤을 나타낸다. 결과는 군 당 n=9의, 2개의 독립 실험을 대표한다. *은 p<0.05, ** p<0.01, *** <0.001 및 **** p<0.0001을 나타낸다.
도 3은 MC38-내성 세포가 PD-L2를 발현하지 않음을 나타낸다. MC38 및 MC38-내성 세포를 시험관내 배양하고 상이한 단백질의 발현을 유세포 측정에 의해 검정하였다. IFNγ 처리 후 PD-L2 발현을 나타낸다.
도 4a 내지 도 4b는 면역조직화학 염색에 의한 내성 종양에서의 면역 세포의 감소된 빈도를 나타낸다. 파라핀 포매된 MC38 및 MC38-내성 종양을 CD45+ 세포(진한 색)의 침윤에 대해 면역조직화학 염색에 의해 분석하였다. 결과는 군 당 n=10 종양의; 2개의 독립 실험을 대표한다. 도 4a는 대표 이미지를 나타낸다. 도 4b는 정량을 나타낸다.
도 5a 내지 도 5b는 내성 종양의 감소된 면역원성을 나타낸다. PD-1 차단에 반응하여 완전 관해를 나타낸 모체 MC38 종양을 보유하는 5마리의 개별 C57BL6 마우스로부터 세포독성 T 림프구(CTL) 배양을 생성하였다. CTL을 MC38 및 내성 종양 세포와 공동-배양하고, 사멸(도 4a) 및 IFNγ 방출(도 5b)을 측정하였다.
도 6의 A 내지 도 6의 D는 피하 MC38 또는 MC38-내성 종양을 보유하는 C57BL6/J 마우스가 종양 부담에 의해 측정된 바와 같이 사이토카인 RNA 혼합물의 종양내 주사로 성공적으로 치료되었음을 나타낸다(도 6의 B 및 도 6의 D). 40 ㎍ 총 mRNA의 용량으로 4일마다(화살표로 나타낸 바와 같음) mRNA 치료를 투여하였다. "Luc"(도 6의 A 및 도 6의 C)는 루시퍼라제 대조군 mRNA를 나타낸다.
도 7은 피하 MC38 또는 MC38-내성 종양을 보유하는 C57BL6/J 마우스가 전반적 생존에 의해 측정된 바와 같이 사이토카인 RNA 혼합물의 종양내 주사로 성공적으로 치료되었음을 나타낸다. 40 ㎍ 총 mRNA의 용량으로 4일마다(화살표로 나타낸 바와 같음) mRNA 치료를 투여하였다. "Luc"는 루시퍼라제 대조군 mRNA를 나타낸다.
도 8의 A 내지 도 8의 B는 MC38(도 8의 A) 및 B2M이 결실된 MC38(도 8의 B)에서 베타-2 마이크로글로불린(B2M) 표면 발현의 유세포 측정 분석을 나타낸다.
도 9a 내지 도 9d는 사이토카인 RNA 혼합물과 항-PD-1 항체의 조합이 이중 넙다리 B16F10 암 모델(도 9a) 및 MC38 종양 모델(도 9b)에서 생존을 증강시켰음을 나타낸다. 사이토카인 RNA 혼합물로 처리된 단독 넙다리 MC38-B2M 녹아웃(도 9c) 또는 MC38-B2M 녹아웃/MC38-WT 종양을 갖는 이종성 이중 넙다리 모델(도 9d)에서의 전반적 생존.
도 10은 다양한 생체내 고형 종양 암 모델에서 사이토카인 mRNA 혼합물, 항-PD-1, 또는 사이토카인 mRNA 혼합물 및 항-PD-1 치료법의 조합 후 종양 부피의 변화를 나타낸다. 수치 값은 기준선으로부터의 종양 부피 변화(ΔT/ΔC, %)에 해당한다. 모든 대조군 마우스가 여전히 생존한 경우 최종일의 종양 부피에서 첫 번째 치료일의 종양 부피를 빼서 각각의 동물에 대해 각각의 처리군(T) 및 비히클 대조군(C)에 대한 종양 부피 변화를 계산한다. 중앙값 ΔT를 처리군에 대해 계산하고, 중앙값 ΔC를 비히클 대조군에 대해 계산한다. 비 ΔT/ΔC를 계산하고 백분율로 표현한다.
도 11은 약 2 ㎜ 너비이고 종양 말초부의 침습성 전단에 인접한 "종양-주변" 또는 "종양의-주변" 영역을 나타낸다. 종양의-주변 영역은 숙주 조직을 포함한다.
표 1은 본원에서 참조되는 소정 서열의 목록을 제공한다.
[표 1]
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1. 정의
본원에서 사용된 바와 같은, 때때로 "사이토카인 mRNA 혼합물", "mRNA 사이토카인 혼합물" 또는 "RNA 사이토카인 혼합물"로도 나타내는 "사이토카인 RNA 혼합물"은 본원에서 기재된 바와 같이, IFNα를 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA, IL-12sc를 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA를 포함한다.
"PD-1"은 "프로그래밍된 세포사 1" 또는 "프로그래밍된 세포사-1"로도 나타낼 수 있다. "PD-L1"은 "프로그래밍된 세포사 1 리간드", "프로그래밍된 세포사-1 리간드 1" 또는 "프로그래밍된 세포사-리간드 1"로도 나타낼 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은, 때때로 "진행성 고형 종양" 또는 "진행성 고형 종양 암"으로도 나타내는 "진행성 단계의 고형 종양 암"은 알려진 시스템, 예로 미국 암 연합 위원회(AJCC)에 의해 개발된 종양, 림프절, 및 전이(TNM) 단계설정 시스템(문헌[AJCC Cancer Staging Manual, 8th Edition] 참고)에 의해 평가되는, 그 단계가 III기, III기의 하위세트, IV기, 또는 IV기의 하위세트로 확인되는 고형 종양 암을 포함한다. 일부 구현예에서, TNM 단계설정 시스템은 흑색종이 아닌 고형 종양 암에 대해 사용된다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종 또는 진행성 흑색종이며, 이는 AJCC 흑색종 단계설정(edition 8, 2018)에 의해 평가되는 IIIB기, IIIC기, 또는 V기를 포함한다. AJCC 흑색종 단계설정에 관한 비제한적 설명은 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는 문헌[Gershenwald JE, Scolyer RA, Hess KR, et al. Melanoma of the skin. In: Amin MB, ed. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. Chicago, IL:AJCC-Springer; 2017:563-585]에 제공된다. 일부 구현예에서, 암은 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 또는 두부경부의 편평상피세포 암종(HNSCC)이며, 둘 다 진행될 수 있다. 유사한 단계설정 시스템이 모든 주요 암에 대해 존재하며 일반적으로 종양의 임상적 및/또는 병리적 상세사항 그리고 이들 요인이 어떻게 생존에 영향을 미치는 것으로 나타났는지에 기반한다.
"종양"은 본원에서 "신생물"로도 나타낼 수 있다. 예를 들어, 용어 "고형 종양" 및 "고형 신생물"은 상호 교환 가능하다.
"절제 불가능한"(예로, 진행성 단계의 절제 불가능한) 암은 전형적으로 수술로 제거될 수 없다.
RECIST(고형 종양(또한 종양)에 대한 반응 평가 기준)는 고형 종양에서 암 치료제의 활성 및 유효성을 평가하기 위한 방법론을 제공한다. RECIST 가이드라인은 유럽 암 연구 및 치료 협회, 미국 국립 암 연구소 및 캐나다 암 시험 그룹뿐만 아니라 몇몇 제약사로부터의 대표들을 포함하는 RECIST 작업 그룹에 의해 생성되었고, 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는 문헌[Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J et al. New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1) Eur J Cancer. 45 (2009) 228-247]에서 공개되었다. 가이드라인의 섹션 4.3.1(Eisenhauer의 232 내지 233페이지)은 표적 병소의 평가에 관해 하기 내용을 제공한다:
전체 반응(CR): 모든 표적 병소의 소실. 임의의 병리적 림프절은 (표적이건 표적이 아니건) 단축이 10 ㎜ 미만으로 감소되어야 한다.
부분 반응(PR): 기준선 합 지름을 참조로 하여, 표적 병소의 지름 합에서의 적어도 30% 감소.
진행성 질환(PD): 연구 중인 최소값 합(연구 중인 최소값인 경우 기준선 합이 포함됨)을 참조로 하여, 표적 병소의 지름 합에서의 적어도 20% 증가. 20% 상대 증가에 부가하여, 합이 적어도 5 ㎜의 절대 증가를 또한 실증해야 한다(주: 하나 이상의 새로운 병소의 출현도 진행으로 고려됨).
안정한 질환(SD): 연구 중인 최소값 합 지름을 참조로 하여, PR로 인정하기 충분한 축소도 PD로 인정하기 충분한 증가도 없음.
가이드라인의 섹션 4.3.3(Eisenhauer의 233페이지)은 비-표적 병소의 평가에 관해 하기 내용을 제공한다:
일부 비-표적 병소가 실제로 측정 가능할 수 있지만, 이들을 측정해야만 하는 것은 아니며 대신에 프로토콜에 특정된 시점에 정성적으로만 평가하면 된다.
전체 반응(CR): 모든 비-표적 병소의 소실 및 종양 마커 수준의 정상화. 모든 림프절 크기가 비-병리적이어야 한다(단축 10 ㎜ 미만).
비-CR/비-PD: 하나 이상의 비-표적 병소(들)의 지속 및/또는 정상 한계를 초과하는 종양 마커 수준의 유지.
진행성 질환(PD): 기존 비-표적 병소의 명백한 진행(주: 하나 이상의 새로운 병소의 출현도 진행으로 고려됨).
항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 "선천성" 또는 "일차" 내성을 갖는 대상체는 처음에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 반응하지 않는다. 선천성 또는 일차 내성을 갖는 대상체는 PD-1/PD-L1 차단에 전혀 임상 반응을 실증하지 않았다. 예로, 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Sharma et al. (2017) Cell 168:707-723 at 709; 또한, Hugo et al. (2016) Cell 165(1) 35-44; 또한, Nowicki et al. (2018) Cancer J. 24(1): 47-53]을 참고한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 진행성 질환 또는 안정한 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 생활성 암 세포를 포함하는 비-표적 병소에 대해 비-CR/비-PD를 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 진행성 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 진행성 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 안정한 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 안정한 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 고형 종양의 최장 지름의 적어도 20% 증가 및/또는 하나 이상의 새로운 고형 종양의 출현을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 고형 종양의 최장 지름의 적어도 20% 증가 및/또는 하나 이상의 새로운 고형 종양의 출현을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 고형 종양의 최장 지름의 적어도 20% 증가 및/또는 하나 이상의 새로운 고형 종양의 출현을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 최장 지름의 증가는 적어도 5 ㎜의 증가이다. 일부 구현예에서, 시간 길이는 약 6주, 약 8주, 또는 적어도 6주 또는 8주이다. 일부 구현예에서, 시간 길이는 2개월, 3개월, 6개월, 또는 12개월 이상이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 일차 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 주사 가능한 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양에는 사이토카인 mRNA 혼합물이 주사되었다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 사이토카인 mRNA 혼합물로의 주사를 위해 선택되었다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 최장 지름이 0.5 ㎝ 이상인 피하 병소이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 융합성인 여러 주사 가능한 병합 병소 그룹 내에 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 융합성이고 최장 지름(모든 관여된 표적 병소의 지름 합)이 0.5 ㎝ 이상인 여러 주사 가능한 병합 병소 그룹 내에 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 출혈성 또는 삼출성이 아니다. 일부 구현예에서, 고형 종양의 최장 지름은 적어도 10 ㎜이다(예로, 전산화 단층촬영(CT) 스캔 또는 캘리퍼에 의해 측정됨). 일부 구현예에서, 고형 종양은 대상체의 흉부에 있고 고형 종양의 최장 지름은 적어도 20 ㎜이다(예로, 흉부 X-선에 의해 측정됨). 일부 구현예에서, 고형 종양은 림프절에 있다. 일부 구현예에서, 림프절은 단축이 적어도 15 ㎜이다(예로, CT 스캔에 의해 평가되는 경우). 일부 구현예에서, 고형 종양은 림프종이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 Lugano 분류에 따라 반응을 갖지 않거나 안정한 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 본원에서 나타내는 Lugano 분류 버전은 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Cheson et al. 2014 J Clin Oncol. 32(27):3059-68]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 Lugano 분류에 따라 진행성 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 림프절 내 림프종 종양을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 대상체는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로의(임의의 시간 길이의) 치료 후 림프절 내 림프종 종양을 갖는 것으로 특징화되며, 여기서 림프절은 (i) 1.5 ㎝ 초과의 최장 지름, 및 (ii) 교차 지름의 곱(PPD) nadir에서의 적어도 50% 증가를 갖는다. 일부 구현예에서, 최장 지름의 증가는 적어도 5 ㎜의 증가이다. 일부 구현예에서, 시간 길이는 약 6주, 약 8주, 또는 적어도 6주 또는 8주이다. 일부 구현예에서, 시간 길이는 2개월, 3개월, 6개월, 또는 12개월 이상이다.
항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 "획득된" 또는 "적응" 내성을 갖는 대상체는 처음에 치료법에 반응하지만(예로, 임의의 수준의 반응), 일정 시기 후 재발하고 진행성이다. 일부 구현예에서, 치료법에 대한 반응은 RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 평가된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대한 획득된 또는 적응 내성은 모두 RECIST 기준(버전 1.1)에 따르는, 처음의 전체 반응 또는 부분 반응에도 불구하고 치료법 상에서 결과적으로 진행되는 대상체에서 나타난다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대한 획득된 또는 적응 내성은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법의 재-개시에 비반응성인 대상체에서 나타난다. 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Sharma et al. (2017) Cell 168:707-723 at 708; 또한, Nowicki et al. (2018) Cancer J. 24(1): 47-53]을 참고한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 그 부피가 (i) 항-PD-1 치료법이 시작된 후 일정 시기 동안 감소한 뒤; (ii) 계속되는 항-PD-1 치료법에도 불구하고 일정 시기 후 증가하는 고형 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 그 부피가 (i) 항-PD-L1 치료법이 시작된 후 일정 시기 동안 감소한 뒤; (ii) 계속되는 항-PD-L1 치료법에도 불구하고 일정 시기 후 증가하는 고형 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 적응 내성은 내성의 획득된 기저 기전과 연관된다. 구현예에서, 적응 내성은 돌연변이 또는 후성적 변화와 연관된다. 일부 구현예에서, 적응 내성은 B2M 유전자에서의 돌연변이와 연관된다. 일부 구현예에서, 그 시기는 6개월 내지 12개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 6개월 내지 18개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 6개월 내지 36개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 3개월 내지 9개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 3개월 내지 24개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 12개월 내지 24개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 13개월, 약 14개월, 약 15개월, 약 16개월, 약 17개월, 약 18개월, 약 19개월, 약 20개월, 약 21개월, 약 22개월, 약 23개월, 또는 약 24개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 4개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 6개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 12개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 24개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 30개월이다. 일부 구현예에서, 그 시기는 적어도 약 36개월이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 전체 반응을 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) RECIST 기준(버전 1.1)에 따라 진행성 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 부분 반응을 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) 모두 RECIST 기준(버전 1.1)에 따르는, 진행성 질환 또는 안정한 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 부분 반응을 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) RECIST 기준(버전 1.1)에 따른 진행성 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 부분 반응을 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) RECIST 기준(버전 1.1)에 따른 안정한 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 고형 종양의 최장 지름은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 시작된 후 적어도 30%만큼 감소한 뒤 증가하였다. 일부 구현예에서, 대상체에서 고형 종양의 최장 지름은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 시작된 후 적어도 30%만큼 감소한 뒤 적어도 20%만큼 증가하였다. 일부 구현예에서, 대상체에서 고형 종양의 최장 지름은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 시작된 후 적어도 30%만큼 감소한 뒤 하나 이상의 새로운 고형 종양이 출현하였다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 고형 종양의 최장 지름의 적어도 30% 감소를 갖는 것으로 특징화되고 이후(그리고 치료 동안) 고형 종양의 최장 지름의 적어도 20% 증가 및/또는 하나 이상의 새로운 고형 종양의 출현을 갖는 것으로 특징화되었다. 일부 구현예에서, 최장 지름의 증가는 적어도 5 ㎜의 증가이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 고형 종양(예로, 하나를 초과하는 고형 종양이 존재하는 경우 존재하는 모든 고형 종양)의 소실을 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) 고형 종양의 재출현(예로, 소실된 고형 종양과 동일한 위치에서) 및/또는 하나 이상의 새로운 고형 종양의 출현을 갖는 것으로 특징화되었다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 일차 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 주사 가능한 종양이다. 일부 구현예에서, 종양에는 사이토카인 mRNA 혼합물이 주사되었다. 일부 구현예에서, 종양은 사이토카인 mRNA 혼합물로의 주사를 위해 선택되었다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 최장 지름이 0.5 ㎝ 이상인 피하 병소이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 융합성인 여러 주사 가능한 병합 병소 그룹 내에 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 융합성이고 최장 지름(모든 관여된 표적 병소의 지름 합)이 0.5 ㎝ 이상인 여러 주사 가능한 병합 병소 그룹 내에 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 출혈성 또는 삼출성이 아니다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 고형 종양의 최장 지름은 적어도 10 ㎜이다(예로, 전산화 단층촬영(CT) 스캔 또는 캘리퍼에 의해 측정됨). 일부 구현예에서, 고형 종양은 대상체의 흉부에 있고 고형 종양의 최장 지름은 적어도 20 ㎜이다(예로, 흉부 X-선에 의해 측정됨). 일부 구현예에서, 고형 종양은 림프절에 있다. 일부 구현예에서, 림프절은 단축이 적어도 15 ㎜이다(예로, CT 스캔에 의해 평가되는 경우). 일부 구현예에서, 고형 종양은 림프종이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 전체 반응을 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) Lugano 분류에 따른 진행성 질환을 갖는 것으로 특징화된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 적응 내성을 갖는 대상체는 치료 동안의 임의의 지점에서 여러 병소(예로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개 림프절 또는 림프절외 부위)에 대해 교차 지름의 곱(PPD)의 합에서 적어도 50% 감소를 갖는 것으로 특징화되며 이후(그리고 치료 동안) 림프절 내 림프종 종양을 갖는 것으로 특징화되었고, 여기서 림프절은 (i) 1.5 ㎝ 초과의 최장 지름, 및 (ii) PPD nadir에서의 적어도 50% 증가를 갖는다.
"난치성" 또는 "내성" 암은 특정된 치료에 반응하지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 난치성은 치료의 시작과 동시에 발생한다. 일부 구현예에서, 난치성은 치료 동안 발생한다. 일부 구현예에서, 암은 치료가 시작되기 전에 내성이다. 일부 구현예에서, 암은 항-PD-1 치료법에 대해 난치성 또는 내성이다(즉, 암이 치료법에 반응하지 않음). 일부 구현예에서, 암은 항-PD-L1 치료법에 대해 난치성 또는 내성이다(즉, 암이 치료법에 반응하지 않음). 일부 구현예에서, 대상체는 특정된 치료(예컨대 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법)에 대해 난치성 또는 내성이 되는 중인 암을 갖는다, 즉 대상체는 치료를 최초 시행받은 이래 이에 대한 반응성이 더 작아졌다. 일부 구현예에서, 대상체는 치료를 시행받지 않았지만, 전형적으로 치료에 반응하지 않는 유형의 암을 갖는다.
"표재"(때때로 "피부"로도 나타냄) 병소 또는 전이는 피부 내 또는 피부의 표면에 있는 병소 또는 전이이다. 일부 구현예에서, 표재 병소 또는 전이는 피부 내에 있다. 일부 구현예에서, 표재 병소 또는 전이는 진피 내에 있다. 일부 구현예에서, 표재 병소 또는 전이는 표피 내에 있다.
"피하" 병소 또는 전이는 피부 하에 있다. 일부 구현예에서, 피하 병소 또는 전이는 피부하와 함께 있다.
일부 구현예에서, 그리고 고형 종양 암의 맥락에서, "종양 병소" 또는 "병소"는 고형 종양, 예로 일차 고형 종양 또는 또 다른 고형 종양으로부터의 전이로부터 생긴 고형 종양이다.
용어 "편평상피세포"는, 예를 들어, 피부, 눈, 다양한 내장 기관의 표면, 및 중공 기관 그리고 일부 샘의 관의 라이닝에서 확인되는, 임의의 얇은 편평 세포를 나타낸다.
용어 "피부 편평상피세포 암종"(또는 "CSCC")은 표피(피부의 외층)를 형성하는 세포에서 시작되는 모든 단계 및 모든 형태의 암을 나타낸다. 용어 "피부 편평상피세포 암종"은 용어 피부의 "편평상피세포 암종"과 상호 교환적으로 사용된다.
용어 "두부경부의 편평상피세포 암종"(또는 "두부경부 편평상피세포 암종" 또는 "HNSCC" 또는 "두부경부에 대한 편평상피세포 암종")은 편평상피세포에서 시작되는 모든 단계 및 모든 형태의 두부경부암을 나타낸다. 두부경부의 편평상피세포 암종에는 (비제한적으로) 비강, 부비강, 입술, 입, 침샘, 목, 및 후두의 암이 포함된다.
용어 "흑색종"은 멜라닌세포에서 시작되는 모든 단계 및 모든 형태의 암을 나타낸다. 흑색종은 전형적으로 모반(피부 흑색종)에서 시작되지만, 다른 색소침착 조직, 예컨대 눈에서 또는 내장에서 시작될 수도 있다.
"종양-관여 영역 림프절" 또는 "종양-관여 림프절"은 전이-함유 영역 림프절을 나타낸다. 일부 구현예에서, 종양-관여 영역 림프절은 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절이다. 일부 구현예에서, 종양-관여 영역 림프절은 임상적으로 검출 가능한 종양-관여 영역 림프절이다. "임상적으로 잠재한" 종양-관여 영역 림프절은 영역 림프절 전이의 임상적 또는 방사선학적 증거 없이 현미경으로 확인된 영역 림프절 전이를 설명한다. 일부 구현예에서, 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절은 전초 림프절(SLN) 생검에 의해 영역 림프절 전이의 임상적 또는 방사선학적 증거 없이 검출된다. 일부 구현예에서, "임상적으로 검출 가능한" 림프절 전이는 임상적, 방사선학적, 또는 초음파 검사에 의해 확인 가능하고 보통(그러나 반드시는 아님) 생검에 의해 확인된 영역 림프절 전이를 갖는 환자를 설명한다.
"비-림프절 국소영역 부위"는 림프내 또는 혈관영양성 종양 확산의 결과인 전이를 나타내며 미세위성, 위성, 및 전달-중 전이가 포함된다. "위성" 전이는 일차 흑색종의 2 ㎝ 내에서 생기는 임상적으로 뚜렷한 피부 및/또는 피하 전이를 나타낸다.
"미세위성" 전이는 일차 장소의 병리적 검사에서 일차 흑색종에 인접하여 또는 그 심부에서 확인되는 현미경적 피부 및/또는 피하 전이를 나타낸다. 일부 구현예에서, 미세위성 전이는 그 사이의 공간을 점유하는 비이환 간질을 갖는 일차 흑색종과 완전히 불연속적이다.
"전달-중" 전이는 일차 및 제1단계 영역 림프절 간 영역에서 일차 흑색종으로부터 2 ㎝ 초과 거리에서 확인되는 임상적으로 뚜렷한 피부 및/또는 피하 전이를 나타낸다. 일부 구현예에서, 위성 또는 전송-중(in-transmit) 전이는 일차 흑색종에 대해 원부에서 일어날 수 있다.
"매트화된 림프절"은 전이성 질환의 관여를 통해 서로 부착된 2개 이상의 림프절을 나타낸다. 일부 구현예에서, 매트화된 림프절은 표본이 병리학 실험실에서 거시적으로 조사되는 시점에 확인된다.
"원부 전이"는 일차 종양으로부터 원부 장기 또는 원부 림프절로 확산된 암을 나타낸다. 일부 구현예에서, 원부 전이는 피부, 피하 조직, 근육, 또는 원부 림프절에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 원부 전이는 폐에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 원부 전이는 중추 신경계(CNS)에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 원부 전이는 폐, 심장, 또는 소화계, 배설계, 생식계, 또는 순환계의 장기를 포함하는, CNS 이외의 임의의 다른 내장 부위에서 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 원부 전이는 일차 종양을 함유하는 조직 또는 장기와 직접 접촉하지 않는(예로, 이를 건드리지 않거나 이에 직접 연결되지 않는) 조직 또는 장기에 있다.
일부 구현예에서, 전이(예로, 원부 전이)는 간에 있다(예로, 여기에서 검출 가능함).
"림프절외 확장"(ENE)은 림프절 전이 동안 림프절 캡슐을 통한 림프절주변 조직 내로의 전이성 세포의 확장을 나타낸다. 림프절 전이를 신장하지만 파괴하지 않는 낭성 전이는 ENE-음성으로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, ENE-양성에는 큰 림프절외 혈관이 포함된다. 일부 구현예에서, ENE-양성은 림프절 캡슐로부터 2 ㎜ 미만으로 확장된다. 일부 구현예에서, ENE-양성은 림프절 캡슐로부터 2 ㎜ 초과 확장되거나 해부 시 나안에 명백하다.
"심부 침습"은 6 ㎜ 초과 두께 또는 피하 지방보다 심부로의 침습을 나타낸다. 일부 구현예에서, 침습은 진피보다 심부로, 0.1 ㎜ 초과의 신경에 존재한다.
"억제한다", "억제성" 등은 상호작용의 전체적 또는 부분적 차단, 또는 생물학적 효과의 감소를 나타낸다. 예를 들어, PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 항-PD1 항체는 상호작용을 전체적으로 또는 부분적으로 차단할 수 있다. T 세포 활성화의 저하 억제에는 임의의 양의 저하 감소가 포함된다. 종양 성장 또는 전이의 억제에는 감소 또는 완전한 중단이 포함된다.
용어 "유효량"은 요망되는 생물학적, 치료적, 및/또는 예방적 결과를 제공하는 제제(예컨대 RNA 혼합물)의 양을 나타낸다. 그 결과는 질환(예컨대 진행성 단계의 고형 종양 암)의 하나 이상의 징후, 증상, 또는 원인의 감소, 완화, 고식, 줄임, 방지, 및/또는 경감일 수 있다. 일부 구현예에서, 유효량은 고형 종양/병소가 축소되도록 유도하기 충분한 양을 포함한다. 일부 구현예에서, 유효량은 고형 종양의 성장 속도를 감소시키기(예컨대 종양 성장을 억제하기) 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 유효량은 종양 발생을 지연하기 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 유효량은 종양 재발을 방지하거나 지연하기 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 유효량은 종양 성장 및/또는 크기 및/또는 전이가 감소되고, 지연되고, 완화되고/되거나 방지되도록 하는, 종양에 대한 대상체의 면역 반응을 증가시키기 충분한 양이다. 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 유효량(예로, mRNA를 포함하는 조성물)의 투여는 (i) 암 세포의 수를 감소시키고; (ii) 종양 크기를 감소시키고; (iii) 말초 장기 내로의 암 세포 침윤을 어느 정도까지 억제하고, 늦추고, 둔화시키고, 중단시킬 수 있고; (iv) 전이를 억제하고(예로, 어느 정도까지 둔화하고/하거나 차단하거나 방지하고); (v) 종양 성장을 억제하고; (vi) 종양의 발생 및/또는 재발을 방지하거나 지연하고/하거나; (vii) 암과 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 해소할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "공동-투여된" 또는 "공동-투여" 등은 동일하거나 상이한 경로에 의해 투여되는 단일 제형물의 일부로서 또는 다중 제형물로서, 동시발생하는, 동시적인, 또는 본질적으로 동시의 2개 이상의 제제의 투여를 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같은 "본질적으로 동시의"는 서로 약 1분, 5분, 10분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 또는 6시간의 기간 내임을 의미한다.
일부 구현예에서, RNA는 적어도 하나의(예로, 모든) 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오염기를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 RNA의 5' 말단에 캡1 구조를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 적어도 하나의(예로, 모든) 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오염기 및 RNA의 5' 말단에 캡1 구조를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 SEQ ID NO: 4 또는 6을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는, 예를 들어 셀룰로스 상의 정제에 의해(실시예에 기재되고 당분야에 알려진 바와 같이), 또는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통해, 이중-가닥 RNA(dsRNA)를 감소시키도록 가공되었다. "캡1" 구조는 효소적 캡핑에 의한 시험관내 전사 후 또는 시험관내 전사 동안(공동-전사 캡핑) 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, 변형된 RNA에 대한 구성 블록 캡은 하기와 같으며, 이는 공동-전사 캡핑인 경우 사용된다:
하기 구조를 갖는, m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG(때때로 m2 7,3`OG(5')ppp(5')m2'-OApG로도 나타냄):
Figure pct00010
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아래는 공동-전사 캡핑 후의 예시적인 캡1 RNA이며, 이는 RNA 및 m2 7,3`OG(5')ppp(5')m2'-OApG를 포함한다:
Figure pct00011
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아래는 효소적 캡핑 후의 또 다른 예시적인 캡1 RNA(캡 유사체 없음)이다:
Figure pct00012
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일부 구현예에서, RNA는, 하나의 구현예에서, 하기 구조를 갖는 캡 유사체 안티-리버스 캡(ARCA 캡(m2 7,3`OG(5')ppp(5')G))을 사용하는, 시험관내 전사(공동-전사 캡핑) 동안 생성된 "캡0" 구조로 변형된다:
Figure pct00013
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아래는 RNA 및 m2 7,3`OG(5')ppp(5')G를 포함하는 예시적인 캡0 RNA이다:
Figure pct00014
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일부 구현예에서, "캡0" 구조는 하기 구조를 갖는 캡 유사체 베타-S-ARCA(m2 7,2`OG(5')ppSp(5')G)를 사용하여 시험관내 전사(공동-전사 캡핑) 동안 생성된다:
Figure pct00015
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아래는 베타-S-ARCA(m2 7,2`OG(5')ppSp(5')G) 및 RNA를 포함하는 예시적인 캡0 RNA이다.
Figure pct00016
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본원에서 사용되는 용어 "우라실"은 RNA의 핵산에서 생길 수 있는 뉴클레오염기 중 하나를 설명한다. 우라실의 구조는 하기와 같다:
Figure pct00017
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본원에서 사용되는 용어 "유리딘"은 RNA에서 생길 수 있는 뉴클레오시드 중 하나를 설명한다. 유리딘의 구조는 하기와 같다:
Figure pct00018
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UTP(유리딘 5'-트리포스페이트)는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00019
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슈도-UTP(슈도유리딘 5'-트리포스페이트)는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00020
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"슈도유리딘"은 유리신의 이성질체인 변형된 뉴클레오시드의 일례이며, 여기서 우라실은 질소-탄소 글리코시드 결합 대신 탄소-탄소 결합을 통해 5탄당 고리에 부착된다. 슈도유리딘은, 예를 들어, 문헌[Charette and Gray, Life; 49:341-351 (2000)]에 기재되어 있다.
또 다른 예시적인 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1Ψ)이며, 이는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00021
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N1-메틸-슈도-UTP는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00022
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또 다른 예시적인 변형된 뉴클레오시드는 5-메틸-유리딘(m5U)이며, 이는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00023
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본원에서 사용되는 용어 "폴리-A 꼬리" 또는 "폴리-A 서열"은 전형적으로 RNA 분자의 3' 말단에 위치하는 아데닐레이트 잔기의 단속되지 않은 또는 단속된 서열을 나타낸다. 폴리-A 꼬리 또는 폴리-A 서열은 당업자에게 알려져 있고 본원에서 기재되는 RNA에서 3' UTR에 뒤따를 수 있다. 단속되지 않은 폴리-A 꼬리는 연속되는 아데닐레이트 잔기를 특징으로 한다. 자연에서는, 단속되지 않은 폴리-A 꼬리가 전형적이다. 본원에서 개시되는 RNA는 전사 후 주형-독립적 RNA 폴리머라제에 의해 RNA의 자유 3' 말단에 부착된 폴리-A 꼬리 또는 DNA에 의해 인코딩되고 주형-의존적 RNA 폴리머라제에 의해 전사되는 폴리-A 꼬리를 가질 수 있다.
약 120개 A 뉴클레오티드의 폴리-A 꼬리는 전달감염된 진핵생물 세포에서의 RNA 수준에 대해, 뿐만 아니라 폴리-A 꼬리의 상류(5')에 존재하는 개방 해독틀로부터 번역되는 단백질 수준에 대해 유익한 영향을 갖는 것으로 실증되었다(Holtkamp et al., 2006, Blood, vol. 108, pp. 4009-4017).
폴리-A 꼬리는 임의의 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 적어도 20개, 적어도 30개, 적어도 40개, 적어도 80개, 또는 적어도 100개 내지 최대 500개, 최대 400개, 최대 300개, 최대 200개, 또는 최대 150개의 A 뉴클레오티드, 특히 약 120개의 A 뉴클레오티드를 포함하거나, 이로 본질적으로 구성되거나, 이로 구성된다. 상기 맥락에서, "~로 본질적으로 구성된다"는 폴리-A 꼬리에서의 대부분의 뉴클레오티드, 전형적으로 폴리-A 꼬리에서 뉴클레오티드 수의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 A 뉴클레오티드임을 의미하지만, 잔여 뉴클레오티드는 A 뉴클레오티드 이외의 뉴클레오티드, 예컨대 U 뉴클레오티드(유리딜레이트), G 뉴클레오티드(구아닐레이트), 또는 C 뉴클레오티드(시티딜레이트)인 것이 허용된다. 상기 맥락에서, "~로 구성된다"는 폴리-A 꼬리에서의 모든 뉴클레오티드, 즉 폴리-A 꼬리에서 뉴클레오티드 수의 100%가 A 뉴클레오티드임을 의미한다. 용어 "A 뉴클레오티드" 또는 "A"는 아데닐레이트를 나타낸다.
일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 RNA 전사 동안, 예로, 코딩 가닥과 상보적인 가닥에서 반복된 dT 뉴클레오티드(데옥시티미딜레이트)를 포함하는 DNA 주형에 기반하여, 시험관내 전사된 RNA의 제조 동안 부착된다. 폴리-A 꼬리를 인코딩하는 DNA 서열(코딩 가닥)은 폴리(A) 카세트로 나타낸다.
일부 구현예에서, DNA의 코딩 가닥에 존재하는 폴리(A) 카세트는 본질적으로 dA 뉴클레오티드로 구성되지만, 4개 뉴클레오티드(dA, dC, dG, 및 dT)의 무작위 서열에 의해 단속된다. 이러한 무작위 서열은 5 내지 50, 10 내지 30, 또는 10 내지 20 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 이러한 카세트는 본원에 참조로 포함되는, WO 2016/005324 A1에 개시된다. WO 2016/005324 A1에 개시된 임의의 폴리(A) 카세트가 본 발명에서 사용될 수 있다. 본질적으로 dA 뉴클레오티드로 구성되지만, 4개 뉴클레오티드(dA, dC, dG, dT)의 동일한 분배를 갖고, 예로 5 내지 50 뉴클레오티드 길이를 갖는 무작위 서열에 의해 단속되고, DNA 수준 상에서는 대장균에서 플라스미드 DNA의 지속적 증식을 나타내며, RNA 수준 상에서는 여전히 RNA 안정성의 지지 및 번역 효율에 관해 유익한 특성과 연관되는 폴리(A) 카세트가 포괄된다. 결과적으로, 일부 구현예에서, 본원에서 기재되는 RNA 분자에 함유되는 폴리-A 꼬리는 본질적으로 A 뉴클레오티드로 구성되지만, 4개 뉴클레오티드(A, C, G, U)의 무작위 서열에 의해 단속된다. 이러한 무작위 서열은 5 내지 50, 10 내지 30, 또는 10 내지 20 뉴클레오티드 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 그 3' 말단에 폴리-A 꼬리에는 A 뉴클레오티드 이외의 뉴클레오티드가 측면에 있지 않다, 즉, 폴리-A 꼬리는 그 3' 말단에 A 이외의 뉴클레오티드에 의해 차폐되거나 이것이 뒤따르지 않는다.
일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 서열: AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGCAUAUGACUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(SEQ ID NO: 30)를 포함하며, 이는 또한 표 1에 나타나 있다.
일반적으로, "RNA" 및 "mRNA"는 맥락 상 하나 또는 다른 하나가 적절한 것이 명확해지는 경우, 예컨대 "mRNA"가 다른 유형의 RNA(rRNA 또는 tRNA)와 구별하기 위해 사용하는 경우 및 "RNA"가 mRNA를 형성하기 위한 5' 캡핑 전 전사 산물의 구조를 나타내기 위해 적절한 경우를 제외하고, 상호 교환적으로 사용된다.
"IFNα"는 본원에서 일반적으로 사용되어 IFNα2b 및 IFNα4를 포함하는, 임의의 인터페론 알파 I형 사이토카인을 설명한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료"는 대상체에서 질환에 대한 치료제의 임의의 투여 또는 적용을 커버하며, 질환의 억제, 그 발생 정지, 질환의 하나 이상의 증상의 해소, 질환의 근치, 또는 질환의 재발생 방지가 포함된다. 예를 들어, 고형 종양의 치료는 고형 종양의 증상 경감, 고형 종양의 크기 감소, 고형 종양의 제거, 종양의 추가 성장 감소, 또는 치료 후 고형 종양의 재발 감소 또는 제거를 포함할 수 있다. 치료는 또한 효과의 바이오마커에서의 또는 조영 또는 방사선학적 측정에서의 변화로 측정될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "단독치료법"은 소정 질환 또는 병태(예컨대 암)를 치료하기 위해 하나의 유형의 치료, 예로 RNA 치료법 단독, 방사선 치료법 단독, 또는 수술 단독을 사용하는 치료법을 의미한다. 약물 치료법에서, 단독치료법은 질환 또는 병태를 치료하기 위한 단일 약물(여러 활성 제제, 예로 RNA의 혼합물이 포함될 수 있음)의 사용을 나타낸다. 일부 구현예에서, 단독치료법은 암을 치료하기 위해 사용되는 임의의 다른 치료법 없이, 암을 치료하기 위해 투여되는 치료법이다. 일부 구현예에서, 암을 치료하기 위한 단독치료법은 암 자체를 치료하기 위해서가 아니라 암의 증상을 완화하기 위한 또 다른 치료(예로, 치료는 고형 종양의 성장 또는 크기에 영향을 주기 위한 것이거나 이렇게 예상되지 않음)와 임의로 조합될 수 있지만, 암에 대한 임의의 다른 치료법, 예로 화학치료제 또는 방사선 치료법과 조합되지 않을 수 있다. 이러한 구현예에서, 단독치료법으로서 RNA 혼합물의 투여는 예로, 방사선 치료법 또는 임의의 화학치료제가 없는, RNA 혼합물의 투여를 의미한다. 그러나, 이러한 구현예에서, 단독치료법으로서 RNA 혼합물의 투여는 RNA 혼합물과 동시발생하는 또는 동시적인, 암에 대한 것이 아닌 제제, 예로 통증을 감소시키는 제제의 투여를 배제하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "방지"는 암이 없는 것으로 간주되는 대상체에서, 고형 종양을 포함하는 암의 발생 억제 또는 정지를 의미한다.
"전이"는 암이 먼저 일차 종양으로 발생한 위치로부터 체내 다른 위치로 확산되는 과정을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "종양내로", 또는 "종양내"는 종양내로 주사되는 것을 의미한다. 예를 들어, 종양내 주사는 종양에 접촉하는 임의의 위치에서의 치료제의 주사를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "림프종"은 림프구로부터 유래되는 고형 종양 암이다. 림프종에는 호지킨 및 비-호지킨 림프종이 포함된다. 림프종은 림프절 내 고형 종양/신생물을 형성하며, 또한 전이되는 경우 비-림프절 조직에서 확인될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "종양-주변으로" 또는 "종양의-주변" 또는 "종양주변" 또는 "종양주변으로"는 약 2 ㎜ 너비이고 종양 말초부의 침습성 전단에 인접한 영역이다. 종양의-주변 영역은 숙주 조직을 포함한다. 예를 들어, 도 11을 참고한다.
"투여"는 대상체에 대한 약학 제제 또는 조성물의 제공을 의미하며, 비제한적으로 의학 전문가에 의한 투여 및 자가-투여가 포함된다.
본 개시는 각각 주어진 핵산 서열 또는 아미노산 서열(참조 서열)과 소정 정도의 동일성을 갖는 핵산 서열 및 아미노산 서열을 설명한다.
2개의 핵산 서열 간 "서열 동일성"은 서열 간 동일한 뉴클레오티드의 백분율을 나타낸다. 2개의 아미노산 서열 간 "서열 동일성"은 서열 간 동일한 아미노산의 백분율을 나타낸다.
용어 "동일한%", "동일성%" 또는 유사한 용어는 특히 비교될 서열 간 최적 정렬에서 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산의 백분율을 나타내려는 것이다. 상기 백분율은 순전히 통계적이며, 2개 서열 간 차이는 비교될 서열의 전체 길이에 걸쳐 무작위로 배분될 수 있지만 반드시 그런 것은 아니다. 2개 서열의 비교는 대응하는 서열의 국소 영역을 확인하기 위해, 보통 최적 정렬 후 절편 또는 "비교 윈도우"에 대해 서열을 비교하여 수행된다. 비교를 위한 최적 정렬은 수동으로 또는 문헌[Smith and Waterman, 1981, Ads App. Math. 2, 482]에 의한 국소 상동성 알고리즘의 보조로, 문헌[Neddleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48, 443]에 의한 국소 상동성 알고리즘의 보조로, 문헌[Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl Acad. Sci. USA 88, 2444]에 의한 유사성 검색 알고리즘의 보조로, 또는 상기 알고리즘을 사용하는 컴퓨터 프로그램(위스콘신 유전학 소프트웨어 패키지의 GAP, BESTFIT, FASTA, BLAST P, BLAST N 및 TFASTA, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.)의 보조로 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 2개 서열의 동일성%는 미국 국립 생물공학 정보 센터(NCBI) 웹사이트(예로, blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE_TYPE=BlastSearch&BLAST_SPEC=blast2seq&LINK_LOC=align2seq)에서 이용 가능한 바와 같이, BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, NCBI 웹사이트 상의 BLASTN 알고리즘을 위해 사용되는 알고리즘 파라미터에는 (i) 10으로 설정된 예상 역치; (ii) 28로 설정된 단어 크기; (iii) 0으로 설정된 쿼리 범위 내 최대 매치; (iv) 1, -2로 설정된 매치/미스매치 스코어; (v) 선형으로 설정된 갭 코스트; 및 (vi) 낮은 복잡성 영역에 대한 필터 사용이 포함된다. 일부 구현예에서, NCBI 웹사이트 상에서 BLASTP 알고리즘을 위해 사용되는 알고리즘 파라미터에는 (i) 10으로 설정된 예상 역치; (ii) 3으로 설정된 단어 크기; (iii) 0으로 설정된 쿼리 범위 내 최대 매치; (iv) BLOSUM62로 설정된 매트릭스; (v) 존재: 11 확장: 1로 설정된 갭 코스트; 및 (vi) 조건별 조성 스코어 매트릭스 조정이 포함된다.
동일성 백분율은 비교될 서열이 대응하는 동일한 위치의 수를 결정하고, 상기 수를 비교되는 위치의 수(예로, 참조 서열 내 위치의 수)로 나누고 상기 결과에 100을 곱해 수득된다.
일부 구현예에서, 동일성 정도는 참조 서열의 전체 길이의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 약 100%인 영역에 대해 주어진다. 예를 들어, 참조 핵산 서열이 200 뉴클레오티드로 구성되는 경우, 동일성 정도는 적어도 약 100, 적어도 약 120, 적어도 약 140, 적어도 약 160, 적어도 약 180, 또는 약 200 뉴클레오티드에 대해, 일부 구현예에서는 연속 뉴클레오티드에서 주어진다. 일부 구현예에서, 동일성 정도는 참조 서열의 전체 길이에 대해 주어진다.
주어진 핵산 서열 또는 아미노산 서열에 대해 특정 정도의 동일성을 갖는 핵산 서열 또는 아미노산 서열은, 각각, 상기 주어진 서열의 적어도 하나의 기능적 특성을 가질 수 있고, 일부 경우에서, 상기 주어진 서열과 기능적으로 동등하다. 하나의 중요한 특성에는 특히 대상체에 투여되는 경우, 사이토카인으로 작용하는 능력이 포함된다. 일부 구현예에서, 주어진 핵산 서열 또는 아미노산 서열에 대해 특정한 정도의 동일성을 갖는 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 주어진 서열과 기능적으로 동등하다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 이들이 요망되는 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 및 삼중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함하는 다양한 항체 구조를 포괄한다.
용어 항체에는 항원에 결합할 수 있는 단편, 예컨대 Fv, 단일쇄 Fv(scFv), Fab, Fab', 디-scFv, sdAb(단일 도메인 항체) 및 (Fab')2(화학적으로 연결된 F(ab')2 포함)가 포함된다. 용어 항체에는 또한 이들이 인간 투여를 위해 적합한 한 키메라 항체 및 인간화 항체가 포함된다. 항체 단편에는 또한 어느 한 배향의 단일쇄 scFv, 일렬 디-scFv, 디아바디, 일렬 트리-sdcFv, 미니바디 등이 포함된다. 항체 단편에는 또한 나노바디(하나의 단량체성 도메인을 갖는 항체인 sdAb, 예컨대 경쇄가 없는, 한 쌍의 중쇄 가변 도메인)가 포함된다.
용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종성 항체 집단의 항체를 나타낸다, 즉 집단을 이루는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연-발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위에 대한 것이다. 또한, 전형적으로 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체가 포함되는, 폴리클로날 항체 제조물과는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대한 것이다. 따라서, 모노클로날 항체의 샘플은 항원 상의 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종성 항체 집단으로부터 수득되는 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 문헌[Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495]에서 처음으로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 또한, 예를 들어 문헌[McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554]에 기재된 기법을 사용하여 생성되는 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
용어 "CDR"은 당업자에 대해 적어도 하나의 확인 방식에 의해 정의된 바와 같은 상보성 결정 영역을 표시한다. 항체 내의 다양한 CDR은 비제한적으로 하기: a) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; b) CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3; c) LCDR-1, LCDR-2, LCDR-3, HCDR-1, HCDR-2, 및 HCDR-3; 또는 d) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 등을 포함하는 이의 적절한 수 및 쇄 유형에 의해 지정될 수 있다. 용어 "CDR"은 고가변 루프(예로, 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)])를 포함하는 HVR 또는 "고가변 영역"을 또한 포괄하기 위해 본원에서 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "중쇄 가변 영역"은 적어도 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 영역을 나타낸다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR 및 적어도 FR2 및 FR3이 포함된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역에는 적어도 중쇄 HCDR1, 프레임워크(FR) 2, HCDR2, FR3, 및 HCDR3이 포함된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 또한 적어도 FR1의 일부 및/또는 적어도 FR4의 일부를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "중쇄 불변 영역"은 적어도 3개의 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2, 및 CH3을 포함하는 영역을 나타낸다. 당연히, 도메인 내의 기능-비변경 결실 및 변경은 달리 지정되지 않는 한, 용어 "중쇄 불변 영역"의 범위 내에 포괄된다. 비제한적인 예시적 중쇄 불변 영역에는 γ, δ, 및 α가 포함된다. 비제한적인 예시적 중쇄 불변 영역에는 또한 ε 및 μ가 포함된다. 각각의 중쇄 불변 영역은 항체 이소형에 대응한다. 예를 들어, γ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgG 항체이며, δ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgD 항체이고, α 불변 영역을 포함하는 항체는 IgA 항체이다. 또한, μ 불변 영역을 포함하는 항체는 IgM 항체이며, ε 불변 영역을 포함하는 항체는 IgE 항체이다. 소정 이소형은 서브클래스로 추가 세분될 수 있다. 예를 들어, IgG 항체에는 비제한적으로 IgG1(γ1 불변 영역을 포함함), IgG2(γ2 불변 영역을 포함함), IgG3(γ3 불변 영역을 포함함), 및 IgG4(γ4 불변 영역을 포함함) 항체가 포함되며; IgA 항체에는 비제한적으로 IgA1(α1 불변 영역을 포함함) 및 IgA2(α2 불변 영역을 포함함) 항체가 포함되고; IgM 항체에는 비제한적으로 IgM1 및 IgM2가 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "중쇄"는 리더 서열을 포함하거나 포함하지 않는, 적어도 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 나타낸다. 일부 구현예에서, 중쇄는 중쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "전장 중쇄"는 리더 서열을 포함하거나 포함하지 않는, 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "경쇄 가변 영역"은 적어도 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 영역을 나타낸다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR 및 적어도 FR2 및 FR3이 포함된다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역에는 적어도 경쇄 LCDR1, 프레임워크(FR) 2, LCDR2, FR3, 및 LCDR3이 포함된다. 예를 들어, 경쇄 가변 영역은 경쇄 CDR1, 프레임워크(FR) 2, CDR2, FR3, 및 CDR3을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 또한 FR1의 적어도 일부 및/또는 FR4의 적어도 일부를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "경쇄 불변 영역"은 경쇄 불변 도메인, CL을 포함하는 영역을 나타낸다. 비제한적인 예시적 경쇄 불변 영역에는 λ 및 κ가 포함된다. 이들 중, 도메인 내의 기능-비변경 결실 및 변경은 달리 지정되지 않는 한, 용어 "경쇄 불변 영역"의 범위 내에 포괄된다.
본원에서 사용되는 용어 "경쇄"는 리더 서열을 포함하거나 포함하지 않는, 적어도 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 나타낸다. 일부 구현예에서, 경쇄는 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "전장 경쇄"는 리더 서열을 포함하거나 포함하지 않는, 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 표적 분자 상의 부위를 나타낸다. 에피토프에는 종종 분자의 화학적 활성 표면기, 예컨대 아미노산, 폴리펩티드 또는 당 측쇄가 포함되며 특정 3차원 구조 특징뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 갖는다.
상기 명세서에서 구체적으로 주지되지 않는 한, 다양한 성분을 "포함하는"을 인용하는 명세서 내 구현예는 또한 인용된 성분"으로 구성되는" 또는 "으로 본질적으로 구성되는" 것으로 고려되고; 다양한 성분"으로 구성되는"을 인용하는 명세서 내 구현예는 또한 인용되는 성분"을 포함하는" 또는 "으로 본질적으로 구성되는" 것으로 고려되고; 다양한 성분"으로 본질적으로 구성되는"을 인용하는 명세서 내 구현예는 또한 인용되는 성분"으로 구성되는" 또는 "이를 포함하는" 것으로 고려된다(상기 상호 교환 가능성은 청구범위에서 이들 용어의 사용에 적용되지 않음). 청구범위의 어구에서 사용되는 바와 같이, "~이 포함되는", "~을 함유하는" 또는 "~를 특징으로 하는"과 동의어인 접속어 "~을 포함하는"은 포괄적이거나 개방형-말단이며 추가적인, 인용되지 않은 요소 또는 방법 단계를 제외하지 않는다. 청구범위의 어구에서 사용되는 접속구 "~로 구성되는"은 청구범위에서 특정되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 성분을 제외하며, 접속구 "~로 본질적으로 구성되는"은 청구범위 용어의 범위를 인용된 성분 및 명세서에서 이해되는 바와 같이, 청구되는 용어의 기본적 및 신규한 특징에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들로 제한한다.
2. 투여되는 RNA
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체와 조합된, IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 진행성 단계의 고형 종양 암을 갖는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 진행성 단계의 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다. 투여되는 RNA의 상세사항이 후술된다.
일부 구현예에서, RNA의 투여는 임의로 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오염기 및 RNA의 5' 말단에 캡1 구조를 갖도록 변형된, IFNα를 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA, IL-12sc를 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA의 투여는 IL-12sc를 인코딩하는 RNA의 투여 및 IFNα, IL-15 sushi, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA의 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA의 투여는 IFNα를 인코딩하는 RNA의 투여 및 IL-12sc, IL-15 sushi, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA의 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA의 투여는 IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA의 투여 및 IL-12sc, IFNα, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA의 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서 RNA의 투여는 GM-CSF sushi를 인코딩하는 RNA의 투여 및 IL-12sc, IFNα, 및 IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA의 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물 중 IFNα 단백질은 IFNα2b 단백질이며 방법은 IFNα2b 단백질을 인코딩하는 RNA를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, (i) IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나 (ii) IL-12sc 단백질은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, (i) IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나 (ii) IL-15 sushi 단백질은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, (i) IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나 (ii) IFNα 단백질은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, (i) GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나 (ii) GM-CSF 단백질은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
A. 인터류킨-12 단일쇄(IL-12sc)
일부 구현예에서, 인터류킨-12 단일쇄(IL-12sc)를 인코딩하는 RNA가 제공된다. 일부 구현예에서, 인터류킨-12 단일쇄(IL-12sc) RNA는 인터류킨-12 단일쇄(IL-12sc)를 인코딩하는 DNA 서열(예로, SEQ ID NO: 14)에 의해 인코딩되며, 이는 IL-12 p40(때때로 IL-12B로 나타냄; SEQ ID NO: 15의 뉴클레오티드 1 내지 984에 의해 인코딩됨), 링커, 예컨대 GS 링커, 및 IL-12 p35(때때로 IL-12A로 나타냄; SEQ ID NO: 15의 뉴클레오티드 1027 내지 1623에 의해 인코딩됨)를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12p40, 링커, 및 IL-12p35는 개재 뉴클레오티드 없이 연속된다. IL-12sc를 인코딩하는 예시적인 DNA 서열을 SEQ ID NO: 15에 제공한다. 일부 구현예에서, 인터류킨-12 단일쇄(IL-12sc) RNA를 SEQ ID NO: 17 또는 18에 제공하며, 그 둘 다 SEQ ID NO: 14의 단백질을 인코딩한다. IL-12 p40의 RNA 서열을 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1 내지 984에 나타내며 IL-12 p35의 RNA 서열을 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623에 나타낸다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 IL-12sc를 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 IL-12 p40을 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 IL-12 p35를 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 코돈-최적화 DNA 서열은 SEQ ID NO: 16을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, DNA 서열은 SEQ ID NO: 16과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 코돈-최적화 DNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12 p40을 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열은 IL-12sc-p40(SEQ ID NO: 16의 뉴클레오티드 1 내지 984)을 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12 p35를 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열은 IL-12sc-p35(SEQ ID NO: 16의 뉴클레오티드 1027 내지 1623)를 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12sc를 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열은 SEQ ID NO: 16의 IL-12sc-p40(SEQ ID NO: 16의 뉴클레오티드 1 내지 984) 및 IL-12sc-p35(SEQ ID NO: 16의 뉴클레오티드 1027 내지 1623) 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함하며 p40 및 p35 부분을 연결하는 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 p40 및 p35 부분 간 뉴클레오티드(예로, SEQ ID NO: 16의 뉴클레오티드 985 내지 1026)를 추가로 포함한다. 당업자에게 알려진 임의의 링커가 사용될 수 있다. p40 부분은 p35 부분에 대해 5' 또는 3'일 수 있다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는, 예를 들어, IL-12sc를 인코딩하는 DNA 서열로부터 전사된 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 15 또는 16을 포함하는 뉴클레오티드 서열로부터 전사된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 17 또는 18을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 17 또는 18과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 17 또는 18의 IL-12sc-p40(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1 내지 984) 및 IL-12sc-p35(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623) 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12sc를 인코딩하는 코돈-최적화 RNA 서열은 SEQ ID NO: 18의 IL-12sc-p40(SEQ ID NO: 18의 뉴클레오티드 1 내지 984) 및 IL-12sc-p35(SEQ ID NO: 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623) 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함하며 p40 및 p35 부분 간에 p40 및 p35 부분을 연결하는 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 당업자에게 알려진 임의의 링커가 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 5' 말단에 변경된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 5' 캡을 포함한다. 당분야에 알려진 임의의 5' 캡이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 티오포스페이트 변형을 포함하는 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 2'-O 또는 3'-O-리보스-메틸화 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 변형된 구아노신 뉴클레오티드 또는 변형된 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 7-메틸구아닐레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 캡0 또는 캡1이다. 예시적인 캡 구조에는 m7G(5')ppp(5')G, m7,2`O-mG(5')ppSp(5')G, m7G(5')ppp(5')2`O-mG, 및 m7,3`O-mG(5')ppp(5')2`O-mA가 포함된다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 5' 미번역 영역(UTR)을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 개시 코돈의 상류이다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 번역을 조절한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 안정화 서열이다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 반감기를 증가시킨다. 당분야에 알려진 임의의 5' UTR이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 3 또는 5로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 3' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 번역 종결 코돈에 뒤따른다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 RNA의 폴리아데닐화, 번역 효율, 편재, 또는 안정성을 조절한다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 7로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 5' UTR 및 3' UTR을 둘 다 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 5' UTR만 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 3' UTR만 포함한다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 50 뉴클레오티드, 적어도 약 70 뉴클레오티드, 또는 적어도 약 100 뉴클레오티드의 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 200개 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, RNA는 5' 캡, 5' UTR, IL-12sc를 인코딩하는 핵산, 3' UTR, 및 폴리-A 꼬리를, 그 순서로 포함한다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 SEQ ID NO: 15 또는 16과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 15 또는 16과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 SEQ ID NO: 15 또는 16과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 15 또는 16과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 SEQ ID NO: 15 또는 16과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 15 또는 16과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-12sc RNA는 SEQ ID NO: 17 또는 18과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12sc RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다.
B. 인터페론 알파(IFNα)
일부 구현예에서, 인터페론 알파(IFNα) RNA는 인터페론 알파(IFNα)를 인코딩하는 DNA 서열(예로, SEQ ID NO: 19)에 의해 인코딩된다. 상기 IFNα를 인코딩하는 예시적인 DNA 서열을 SEQ ID NO: 20에 제공한다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 IFNα를 인코딩하는 코돈-최적화 DNA 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 코돈-최적화 DNA 서열은 SEQ ID NO: 21의 뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, DNA 서열은 SEQ ID NO: 21과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 코돈-최적화 DNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는, 예를 들어, IFNα를 인코딩하는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 20 또는 21을 포함하는 뉴클레오티드 서열로부터 전사된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 22 또는 23을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 22 또는 23과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA 내 각각의 유리딘은 변형된다. 일부 구현예에서, RNA 내 각각의 유리딘은 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)으로 변형된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 5' 말단에 변경된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, IFNα RNA는 5' 캡을 포함한다. 당분야에 알려진 임의의 5' 캡이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 티오포스페이트 변형을 포함하는 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 2'-O 또는 3'-O-리보스-메틸화 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 변형된 구아노신 뉴클레오티드 또는 변형된 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 7-메틸구아닐레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 캡0 또는 캡1이다. 예시적인 캡 구조에는 m7G(5')ppp(5')G, m7,2`O-mG(5')ppsp(5')G, m7G(5')ppp(5')2`O-mG 및 m7,3`O-mG(5')ppp(5')2`O-mA가 포함된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 5' 미번역 영역(UTR)을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 개시 코돈의 상류에 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 번역을 조절한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 안정화 서열이다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 반감기를 증가시킨다. 당분야에 알려진 임의의 5' UTR이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 3 또는 5를 포함하는 뉴클레오티드 서열로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 3' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 번역 종결 코돈에 뒤따른다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 RNA의 폴리아데닐화, 번역 효율, 편재, 또는 안정성을 조절한다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 7을 포함하는 뉴클레오티드 서열로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 5' UTR 및 3' UTR을 둘 다 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 5' UTR만 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 3' UTR만 포함한다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, IFNα RNA는 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 50 뉴클레오티드, 적어도 약 70 뉴클레오티드, 또는 적어도 약 100 뉴클레오티드의 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 200개 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, RNA는 5' 캡, 5' UTR, IFNα를 인코딩하는 핵산, 3' UTR, 및 폴리-A 꼬리를, 그 순서로 포함한다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 SEQ ID NO: 20 또는 21과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 20 또는 21과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 SEQ ID NO: 20 또는 21과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 20 또는 21과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는 SEQ ID NO: 20 또는 21과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IFNα RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 20 또는 21과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다. 일부 구현예에서, 조성물은 SEQ ID NO: 22 또는 23과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다.
C. 인터류킨 15(IL-15) sushi
일부 구현예에서, 인터류킨-15(IL-15) sushi를 인코딩하는 RNA가 투여된다. 본원에서 사용되는 용어 "IL-15 sushi"는 융합 단백질로서 가용성 인터류킨 15(IL-15) 수용체 알파 sushi 도메인 및 성숙 인터류킨 알파(IL-15)를 포함하는 작제물을 설명한다. 일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 IL-15 sushi(SEQ ID NO: 24)를 인코딩하는 DNA 서열에 의해 인코딩되며, 이는 가용성 IL-15 수용체 알파쇄(sushi)에 이어 글리신-세린(GS) 링커, 이어서 IL-15의 성숙 서열을 포함한다. 상기 IL-15 sushi를 인코딩하는 DNA 서열을 SEQ ID NO: 25에 제공한다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는, 예를 들어, IL-15 sushi를 인코딩하는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열이다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 25를 포함하는 뉴클레오티드 서열로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 링커를 인코딩하는 뉴클레오티드는 완전히 부재하거나 부분적으로 또는 전체적으로 적합한 링커를 인코딩하는 임의의 뉴클레오티드로 대체될 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 26을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 26과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 sushi를 인코딩하는 DNA 또는 RNA 서열은 IL-15 수용체 알파의 sushi 도메인(예로, SEQ ID NO: 25 또는 26의 뉴클레오티드 1 내지 321) 및 성숙 IL-15(예로, SEQ ID NO: 25 또는 26의 뉴클레오티드 382 내지 729)를 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 sushi를 인코딩하는 DNA 또는 RNA 서열은 IL-15 수용체 알파의 sushi 도메인(예로, SEQ ID NO: 25 또는 26의 뉴클레오티드 1 내지 321) 및 성숙 IL-15(예로, SEQ ID NO: 25 또는 26의 뉴클레오티드 382 내지 729)를 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함하며 이들 부분 간에 부분을 연결하는 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 SEQ ID NO: 25 또는 26의 뉴클레오티드 322 내지 381을 포함한다. 당업자에게 알려진 임의의 링커가 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 5' 말단에 변경된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 5' 캡을 포함한다. 당분야에 알려진 임의의 5' 캡이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 티오포스페이트 변형을 포함하는 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 2'-O 또는 3'-O-리보스-메틸화 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 변형된 구아노신 뉴클레오티드 또는 변형된 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 7-메틸구아닐레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 캡0 또는 캡1이다. 예시적인 캡 구조에는 m7G(5')ppp(5')G, m7,2`O-mG(5')ppSp(5')G, m7G(5')ppp(5')2`O-mG 및 m7,3`O-mG(5')ppp(5')2`O-mA가 포함된다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 5' 미번역 영역(UTR)을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 개시 코돈의 상류에 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 번역을 조절한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 안정화 서열이다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 반감기를 증가시킨다. 당분야에 알려진 임의의 5' UTR이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 3 또는 5로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 3' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 번역 종결 코돈에 뒤따른다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 RNA의 폴리아데닐화, 번역 효율, 편재, 또는 안정성을 조절한다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 7로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 5' UTR 및 3' UTR을 둘 다 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 5' UTR만을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 3' UTR만을 포함한다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 50 뉴클레오티드, 적어도 약 70 뉴클레오티드, 또는 적어도 약 100 뉴클레오티드의 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 200개 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, RNA는 5' 캡, 5' UTR, IL-15 sushi를 인코딩하는 핵산, 3' UTR, 및 폴리-A 꼬리를, 그 순서로 포함한다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 SEQ ID NO: 25와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 25와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 SEQ ID NO: 25와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 25와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 SEQ ID NO: 25와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 25와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi RNA는 SEQ ID NO: 26과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IFNα RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다.
D. 과립구-대식구 콜로니-자극 인자(GM-CSF)
일부 구현예에서, 과립구-대식구 콜로니-자극 인자(GM-CSF)를 인코딩하는 RNA가 투여된다. 일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 과립구-대식구 콜로니-자극 인자(GM-CSF)를 인코딩하는 DNA 서열(예로, SEQ ID NO: 27)에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, GM-CSF를 인코딩하는 DNA 서열을 SEQ ID NO: 28에 제공한다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는, 예를 들어, GM-CSF를 인코딩하는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 28로부터 전사된다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 29를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, RNA 서열은 SEQ ID NO: 29와 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다. 일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 5' 말단에 변경된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 5' 캡을 포함한다. 당분야에 알려진 임의의 5' 캡이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 티오포스페이트 변형을 포함하는 5'에서 5'으로의 트리포스페이트 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 2'-O 또는 3'-O-리보스-메틸화 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 변형된 구아노신 뉴클레오티드 또는 변형된 아데노신 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 7-메틸구아닐레이트를 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 캡은 캡0 또는 캡1이다. 예시적인 캡 구조에는 m7G(5')ppp(5')G, m7,2`O-mG(5')ppSp(5')G, m7G(5')ppp(5')2`O-mG 및 m7,3`O-mG(5')ppp(5')2`O-mA가 포함된다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 5' 미번역 영역(UTR)을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 개시 코돈의 상류에 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 번역을 조절한다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 안정화 서열이다. 일부 구현예에서, 5' UTR은 RNA의 반감기를 증가시킨다. 당분야에 알려진 임의의 5' UTR이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 3 또는 5로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 5' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 3' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 번역 종결 코돈에 뒤따른다. 일부 구현예에서, 3' UTR은 RNA의 폴리아데닐화, 번역 효율, 편재, 또는 안정성을 조절한다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 7로부터 전사된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 3' UTR RNA 서열은 SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 5' UTR 및 3' UTR을 둘 다 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 5' UTR만 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 3' UTR만 포함한다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 50 뉴클레오티드, 적어도 약 70 뉴클레오티드, 또는 적어도 약 100 뉴클레오티드의 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 200개 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 5' 캡, 5' UTR, GM-CSF를 인코딩하는 뉴클레오티드, 3' UTR, 및 폴리-A 꼬리를, 그 순서로 포함한다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 SEQ ID NO: 28과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 28과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, GM-CSF RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 SEQ ID NO: 28과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 28과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고 SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, GM-CSF RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 SEQ ID NO: 28과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는, 예를 들어, SEQ ID NO: 28과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 3 또는 5와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 7과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 DNA 서열로부터 전사되는 RNA 서열을 포함한다. RNA는 또한 재조합적으로 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, GM-CSF RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다. 일부 구현예에서, RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)이다.
일부 구현예에서, GM-CSF RNA는 SEQ ID NO: 29와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 4 또는 6과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일하고; SEQ ID NO: 8과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 RNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GM-CSF RNA 내 하나 이상의 유리딘은 본원에서 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다.
E. 변형
본원에서 기재되는 각각의 RNA는 당업자에게 알려진 임의의 방식으로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 하기와 같이 변형된다:
· 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오염기;
· RNA의 5' 말단에 캡1 구조.
일부 구현예에서, 5' UTR은 SEQ ID NO: 4 또는 6을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA는 상술된 바와 같이 이중-가닥 RNA(dsRNA)를 감소시키도록 가공되었다. "캡1" 구조는 효소적 캡핑에 의해 시험관내 전사 후 또는 시험관내 전사 동안(공동-전사 캡핑) 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 내 하나 이상의 유리딘은 변형된 뉴클레오시드에 의해 대체된다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 변형된 유리딘이다.
일부 구현예에서, 유리딘을 대체하는 변형된 유리딘은 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 또는 5-메틸-유리딘(m5U)이다.
일부 구현예에서, RNA 내 하나 이상의 시토신, 아데닌 또는 구아닌은 변형된 뉴클레오염기(들)에 의해 대체된다. 하나의 구현예에서, 시토신을 대체하는 변형된 뉴클레오염기는 5-메틸시토신(m5C)이다. 또 다른 구현예에서, 아데닌을 대체하는 변형된 뉴클레오염기는 N6-메틸아데닌(m6A)이다. 또 다른 구현예에서, 분자의 면역원성을 감소시키기 위해 당분야에 알려진 임의의 다른 변형된 뉴클레오염기가 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 내 하나 이상의 유리딘을 대체하는 변형된 뉴클레오시드는 3-메틸-유리딘(m3U), 5-메톡시-유리딘(mo5U), 5-아자-유리딘, 6-아자-유리딘, 2-티오-5-아자-유리딘, 2-티오-유리딘(s2U), 4-티오-유리딘(s4U), 4-티오-슈도유리딘, 2-티오-슈도유리딘, 5-하이드록시-유리딘(ho5U), 5-아미노알릴-유리딘, 5-할로-유리딘(예로, 5-요오도-유리딘 또는 5-브로모-유리딘), 유리딘 5-옥시아세트산(cmo5U), 유리딘 5-옥시아세트산 메틸 에스테르(mcmo5U), 5-카복시메틸-유리딘(cm5U), 1-카복시메틸-슈도유리딘, 5-카복시하이드록시메틸-유리딘(chm5U), 5-카복시하이드록시메틸-유리딘 메틸 에스테르(mchm5U), 5-메톡시카보닐메틸-유리딘(mcm5U), 5-메톡시카보닐메틸-2-티오-유리딘(mcm5s2U), 5-아미노메틸-2-티오-유리딘(nm5s2U), 5-메틸아미노메틸-유리딘(mnm5U), 1-에틸-슈도유리딘, 5-메틸아미노메틸-2-티오-유리딘(mnm5s2U), 5-메틸아미노메틸-2-셀레노-유리딘(mnm5se2U), 5-카바모일메틸-유리딘(ncm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-유리딘(cmnm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오-유리딘(cmnm5s2U), 5-프로피닐-유리딘, 1-프로피닐-슈도유리딘, 5-타우리노메틸-유리딘(τm5U), 1-타우리노메틸-슈도유리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-유리딘(τm5s2U), 1-타우리노메틸-4-티오-슈도유리딘), 5-메틸-2-티오-유리딘(m5s2U), 1-메틸-4-티오-슈도유리딘(m1s4ψ), 4-티오-1-메틸-슈도유리딘, 3-메틸-슈도유리딘(m3ψ), 2-티오-1-메틸-슈도유리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도유리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도유리딘, 디하이드로유리딘(D), 디하이드로슈도유리딘, 5,6-디하이드로유리딘, 5-메틸-디하이드로유리딘(m5D), 2-티오-디하이드로유리딘, 2-티오-디하이드로슈도유리딘, 2-메톡시-유리딘, 2-메톡시-4-티오-유리딘, 4-메톡시-슈도유리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도유리딘, N1-메틸-슈도유리딘, 3-(3-아미노-3-카복시프로필)유리딘(acp3U), 1-메틸-3-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도유리딘(acp3ψ), 5-(이소펜테닐아미노메틸)유리딘(inm5U), 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2-티오-유리딘(inm5s2U), α-티오-유리딘, 2'-O-메틸-유리딘(Um), 5,2'-O-디메틸-유리딘(m5Um), 2'-O-메틸-슈도유리딘(ψm), 2-티오-2'-O-메틸-유리딘(s2Um), 5-메톡시카보닐메틸-2'-O-메틸-유리딘(mcm5Um), 5-카바모일메틸-2'-O-메틸-유리딘(ncm5Um), 5-카복시메틸아미노메틸-2'-O-메틸-유리딘(cmnm5Um), 3,2'-O-메틸-유리딘(m3Um), 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2'-O-메틸-유리딘(inm5Um), 1-티오-유리딘, 데옥시티미딘, 2'-F-아라-유리딘, 2'-F-유리딘, 2'-OH-아라-유리딘, 5-(2-카보메톡시비닐)유리딘, 5-[3-(1-E-프로페닐아미노)유리딘, 또는 당분야에 알려진 임의의 다른 변형된 유리딘 중 임의의 하나 이상일 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 5-메틸-유리딘(m5U)을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 하나를 초과하는 유형의 변형된 뉴클레오시드를 포함할 수 있고, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ) 및 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ) 및 5-메틸-유리딘(m5U)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ) 및 5-메틸-유리딘(m5U)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)을 포함한다.
일부 구현예에서, 방법에서 사용되는 적어도 하나의 RNA는 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법에서 사용되는 각각의 RNA는 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법에서 사용되는 각각의 RNA는 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법에서 사용되는 각각의 RNA는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법에서 사용되는 각각의 RNA는 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 및 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 각각의 RNA는 폴리-A 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 80, 또는 적어도 100 내지 최대 500, 최대 400, 최대 300, 최대 200, 또는 최대 150 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 본질적으로 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 80, 또는 적어도 100 내지 최대 500, 최대 400, 최대 300, 최대 200, 또는 최대 150 A 뉴클레오티드로 구성될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 80, 또는 적어도 100 내지 최대 500, 최대 400, 최대 300, 최대 200, 또는 최대 150 뉴클레오티드로 구성될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 SEQ ID NO: 30에 나타낸 폴리-A 꼬리를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 적어도 100 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 약 150 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리-A 꼬리는 약 120 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 RNA는 (1) m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 5' 캡; (2) (i) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR; (3) (i) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR; 및 (4) 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 폴리-A 꼬리를 포함한다.
3. 투여 항-PD-1 항체
암 세포는 활성화된 B 및 T 림프구 및 골수 세포 상에서 발현되는, 프로그래밍된 세포사 1 수용체(PD-1)에 대한 일차 리간드인 프로그래밍된 세포사-1 리간드 1(PD-L1)의 발현을 포함하는, 항-종양 숙주 면역 반응을 회피하기 위한 여러 기전에 연루된다. PD-L1과 PD-1의 상호작용은 감소된 면역 반응을 일으키며 종양 회피에 기여한다. 항-PD-1 항체는 PD-1에 결합하고 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 억제하는 항체이다. 대상체에 대한 투여 시, 항-PD-1 항체는 PD-1에 결합하고, PD-L1에 대한 그 결합을 억제하고, T 세포의 활성화를 포함하는 그 하류 신호전달 경로의 활성화를 방지할 수 있다. 일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 항-PD1 항체와 조합되어 투여된다.
PD-1과 PD-L1의 상호작용을 억제하고 PD-1이 PD-L1과 상호작용하는 경우 유발되는 면역 반응의 저하를 억제하는 항-PD1 항체가 본원에서 포괄된다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체가 면역 반응의 저하를 억제하는지 여부는 T-세포 활성화(때때로 T-세포 증식으로 나타냄)를 측정하여 평가된다. 이러한 측정은 생체내(예로, 인간 대상체에 대한 항-PD1 항체의 투여 후) 또는 시험관내(예로, 세포-기반 검정에서) 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체가 면역 반응의 저하를 억제하는 능력은 문헌[Burova et al. (2017) Mol. Cancer 16(5); 861-70]의 방법에 따라 조작된 T 세포주 또는 일차 인간 T 세포를 사용하는 세포-기반 검정에서 결정된다. 예를 들어, 인간 PD-1 단백질 및 리포터는 T 세포에서 발현되며 T 세포는, 예로, 항-CD3 x 항-CD20 이중특이적 항체로 활성화된다. 항원-제시 세포(APC), 예컨대 HEK293 세포는 인간 CD20 및 인간 PD-L1을 발현하도록 생성된다. 순차적으로 희석된 테스트 항-PD1 항체가 적용되고 리포터의 발현이 분석된다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 PD-1이 PD-L1과 상호작용하는 경우 유발되는 면역 반응의 저하를 세미플리맙으로 나타나는 억제에 비해 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%만큼 억제한다. 일부 구현예에서, 항체가 PD-1이 PD-L1과 상호작용하는 경우 유발되는 면역 반응의 저하를 세미플리맙으로 나타나는 억제에 비해 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%만큼 억제하는지 여부는 본원에서 기재된 바와 같이 T-세포 활성화를 측정하여 평가된다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 단리되고/되거나 재조합이다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 다중-특이적 항체, 예컨대, 삼중-특이적 또는 이중-특이적 항체이다.
항-PD-1 항체의 비제한적 예에는 세미플리맙(예로, REGN2810으로도 나타내는 미국 특허 제9,987,500호 B2 참고, 예로 CAS 번호 1801342-60-8, 및 문헌[Falchook et al. J Immunother Cancer. 2016 Nov;4:70] 참고), 니볼루맙(예로, 미국 특허 제8,008,449호 참고), 펨브롤리주맙(예로, 미국 특허 제8,354,509호 참고), MEDI0608(예전의 AMP-514; 예로, 미국 특허 제8,609,089호 및 미국 특허 제9,205,148호 참고), 스파르탈리주맙(PDR001로도 알려짐(예로, WO 2015/112900 참고), PF-06801591(예로, WO 2016/092419 참고), 및 티슬렐리주맙(BGB-A317로도 알려짐(예로, WO 2015/035606 참고), 캄렐리주맙(SHR-1210로도 알려짐; 예로, WO 2015/085847 참고), 도스탈리맙(TSR-042로도 알려짐; 예로, WO 2014/179664 참고), 신틸리맙(IBI308로도 알려짐; 예로, WO 2017/025016 참고), JS001(예로, WO 2014/206107 참고), MGA012(예로, WO 2017/019846 참고), AGEN2034(예로, WO 2017/040790 참고), 및 JNJ-63723283(예로, WO 2017/079112 참고)이 포함된다. 용어 세미플리맙에는 세미플리맙-rwlc가 포함된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 WO 2015/112800에 개시된 것들(예컨대 PCT 공보의 표 1에서 H1M7789N, H1M7799N, H1M7800N, H2M7780N, H2M7788N, H2M7790N, H2M7791N, H2M7794N, H2M7795N, H2M7796N, H2M7798N, H4H9019P, H4xH9034P2, H4xH9035P2, H4xH9037P2, H4xH9045P2, H4xH9048P2, H4H9057P2, H4H9068P2, H4xH9119P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4xH9135P2, H4xH9145P2, H4xH8992P, H4xH8999P 및 H4xH9008P로 나타내는 것들, 및 PCT 공보의 표 3에서 H4H7798N, H4H7795N2, H4H9008P 및 H4H9048P2로 나타내는 것들) 중 하나이다. WO 2015/112800의 개시는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 예를 들어, WO 2015/112800에 개시된 항체 및 그 PCT 공보에 개시되는 항체 및 CDR, VH 및 VL 서열, 또는 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 항원-결합 단편을 포함하는 관련 항체뿐만 아니라 그 PCT 공보에 개시된 항체와 동일한 PD-1 에피토프에 결합하는 항체 및 항원-결합 단편이 암을 치료하고/하거나 방지하기 위해 RNA 사이토카인 혼합물과 함께 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 피딜리주맙(CT-011로도 나타냄)(Berger et al., 2008. Clin Cancer Res. 14(10):3044-51), PF-06801591(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02573259), mDX-400(Merck & Co), MEDI0680(AMP-514로도 나타냄)(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02013804), PDR001(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02678260), 스파르탈리주맙(Spartalizumab)(Novartis AG, CAS 번호 1935694-88-4), SHR-1210(Incyte Corp, Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd, ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02742935), TSR-042(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02715284), ANA011(AnaptysBio, Inc.), AGEN-2034(Agenus, Inc.), AM-0001(ARMO Biosciences), BGB-108(BeiGene), AK-104 및 AK-105(Akeso Biopharma), ABBV- 181(AbbVie), BAT-1306(Bio-Thera Solutions), AMP-224(Medlmmune), LZM-009(Livzon Pharmaceutical Group), GLS-010(Arcus Biosciences), 도스탈리맙(Dostarlimab)(Tesaro Inc, CAS 번호 2022215-59-2), MGA-012(Incyte Corp), 티슬렐리주맙(Tislelizumab)(BGB-A317, (BeiGene, CAS 번호 1858168-59-8), BI-754091(Boehringer Ingelheim), CBT-501(CBT Pharmaceuticals, Inc.), ENUM-003( Enumeral Biomedical Holdings Inc), ENUM-388D4(Enumeral Biomedical Holdings Inc), ENUM-244C8(Enumeral Biomedical Holdings Inc), IBI-308(Eli Lilly Innovent Biologics, Inc.), JNJ-63723283(Johnson & Johnson Janssen Research & Development, LLC, ClinicalTrials.gov 식별자 NCT02908906), CS-1003(CStone Pharmaceuticals), Sym-016 및 Sym-021(Symphogen), JS-001(Shanghai Junshi Bioscience Co., Ltd., ClinicalTrials.gov 식별자 NCT02857166, JTX-4014(Jounce Therapeutics, Inc.), JY-034(Beijing Eastern Biotech Co), SSI-361(Lyvgen Biopharma Ltd), YBL-006(Y-Biologics), AK-103(Akeso Biopharma Inc), MCLA-134(Merus), HAB-21(Suzhou Stainwei Biotech Inc), CX-188(CytomX Therapeutics Inc), PF-06801591(Pfizer, ClinicalTrials.gov 식별자 NCI-2016-00704), HEISCOIII-003(Sichuan Haisco Pharmaceutical Co), XmAb-20717(Xencor Inc, 이중특이적, CTLA-4 및 PD1을 인식함), XmAb-23104(Xencor Inc), MGD-019(MacroGenics Inc, 이중특이적, CTLA4 및 PD1을 인식함), AK-112(Akeso Biopharma, 이중특이적), AT-16201(AIMM Therapeutics BV), BCD-100(Biocard), TSR-075(Tesaro Inc, 이중특이적, LAG3 및 PD1을 인식함), MGD-013(MacroGenics; 이중특이적; PD-1 및 LAG-3을 인식함), BH-2922(Beijing Hanmi Pharmaceutical Co, 이중특이적, EGFR 및 PD1을 인식함), BH-2941(Beijing Hanmi Pharmaceutical Co, 이중특이적, PDL1 및 PD1을 인식함), BH-2950(Beijing Hanmi Pharmaceutical Co, 이중특이적, Her2 및 PD1을 인식함), BH-2954(Beijing Hanmi Pharmaceutical Co, 이중특이적), STIA-1110(Les Laboratoires Servier SAS Sorrento Therapeutics), 244C8 및 388D4(cf. Scheuplein F et al. [abstract]. Proc 107th Ann Meet Am Ass Cane Res; 2016 Apr 16-20; New Orleans, LA. Philadelphia (PA): AACR; Cancer Res 2016;76(14 Suppl):Abstract nr 4871)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 각각 SEQ ID NO: 31 및 32로 후술되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO: 39 및 40에서의 VH 및 VL 서열(이탤릭체로 나타냄), 또는 SEQ ID NO: 31 및 32에서의 하나 이상의(예로, 전체 6개) CDR(진한 글씨체로 나타냄)을 포함한다. 일부 구현예에서, 하기 CDR을 포함하는 항체가 포괄된다:
HCDR1 = GFTFSNFG(SEQ ID NO: 33)
HCDR2 = ISGGGRDT(SEQ ID NO: 34)
HCDR3 = VKWGNIYFDY(SEQ ID NO: 35)
LCDR1 = LSINTF(SEQ ID NO: 36)
LCDR2 = AAS(SEQ ID NO: 37)
LCDR3 = QQSSNTPFT(SEQ ID NO: 38).
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 HCDR3(SEQ ID NO: 35)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 LCDR3(SEQ ID NO: 38)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 HCDR3(SEQ ID NO: 35) 및 LCDR3(SEQ ID NO: 38)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 HCDR3(SEQ ID NO: 35) 및/또는 LCDR3(SEQ ID NO: 38)을 포함하며, PD-1과 PD-L1의 상호작용을 억제한다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 HCDR3(SEQ ID NO: 35) 및/또는 LCDR3(SEQ ID NO: 38)을 포함하며, PD-1이 PD-L1과 상호작용하는 경우 유발되는 면역 반응의 저하를 억제한다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 HCDR3(SEQ ID NO: 35) 및/또는 LCDR3(SEQ ID NO: 38)을 포함하며, PD-1과 PD-L1의 상호작용을 억제하고, PD-1이 PD-L1과 상호작용하는 경우 유발되는 면역 반응의 저하를 억제한다.
예시적인 항-PD-1 Mab 중쇄
Figure pct00024
예시적인 항-PD-1 Mab 경쇄
Figure pct00025
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 세미플리맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 세미플리맙과 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 PD-1 결합에 대해 세미플리맙과 경쟁한다. 일부 구현예에서, 항체가 PD-1 결합에 대해 세미플리맙과 경쟁하는지 여부는 당업자에게 알려진 방법에 따라 ELISA를 통해, 예로 문헌[Burova et al. (2017) Mol. Cancer 16(5); 861-70]에서와 같이 결정된다. 간략하게, 테스트 항체, 세미플리맙, 및 음성 이소형 대조군 항체가 PD-1과 인큐베이션되고 PD-L1로 코팅된 ELISA 플레이트의 웰로 전달된다. 결합된 항체는 적절한 세척 및 표지된 이차 항체의 적용 후 검출된다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 세미플리맙으로 나타나는 억제 수준에 비해 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%만큼 억제한다. 일부 구현예에서, 항체가 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 세미플리맙으로 나타나는 억제 수준에 비해 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%만큼 억제하는지 여부는 본원에서 기재된 바와 같이 ELISA를 통해 평가된다.
세미플리맙은 현재 진행된 피부 편평상피세포 암종, 기저 세포 암종, 비-소세포 폐암, 경부암, 및 다른 고형 종양을 갖는 환자에서 단독치료법으로 및 다른 항암 치료법과 조합되어 1상 임상 연구에서뿐만 아니라 2상 및 3상 임상 연구에서 연구되고 있다. 2주마다(Q2W) 투여되는 1 ㎎/㎏ 및 Q2W 3 ㎎/㎏ 용량 둘 다에서, 비-소세포 폐암을 포함하는 몇몇 종양 유형에서 예비 유효성이 관찰되었다.
2018년 3월 27일자로, 757명의 환자가 등록하여 상이한 용량 수준으로(1, 3, 또는 10 ㎎/㎏ 또는 200 ㎎ Q2W; 및 3 ㎎/㎏, 250 ㎎, 또는 350 ㎎ Q3W) 단독치료법으로 뿐만 아니라 방사선 치료법 및/또는 다른 암 치료법과 조합되어 치료받았다. 진행된 CSCC에 대한 세미플리맙의 유효성은 2상 연구에서 명확히 문서화되었으며, 2018년 9월 28일자로 세미플리맙은 근치 수술 또는 근치 방사선에 대한 후보가 아닌 전이성 CSCC 또는 국소 진행된 CSCC를 갖는 환자의 치료에 대해 미국에서 승인받았다. 세미플리맙은 또한 2019년 6월 28일자로 동일 적응증에 대해 유럽에서 승인받았다.
세미플리맙은 다른 PD-1 억제제에서와 유사한 안전성 프로필을 갖는다. 10% 이상의 환자에서 생기는 가장 일반적인 치료로-발생하는 유해 사례(TEAE)는 피로, 오심, 빈혈, 식욕 감퇴, 관절통, 변비, 기침, 구토, 및 복통이다.
세미플리맙을 사용하고 제조하는 조성물 및 방법은, 예를 들어, 그 내용의 전문이 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함되는, 공개된 미국 특허 출원 제2015/0203579호에 개시된다.
항-PD-1 항체는 전송, 전달, 관용성 등을 제공하는 적합한 담체, 부형제, 및 다른 제제와 제형화될 수 있다. 여러 적절한 제형이 모든 약학 화학자에게 알려진 제형법에서 확인될 수 있다[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa]. 이들 제형물에는, 예를 들어, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질(양이온성 또는 음이온성) 함유 소포체, DNA 콘주게이트, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔, 및 카보왁스를 함유하는 반고체 혼합물이 포함된다. 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA(1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참고한다.
4. 치료 방법
본원에서 제공되는 사이토카인 RNA 혼합물은 항-PD-1 항체와 조합된, 방법, 예로, 치료 방법에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄되며, 여기서 진행성 단계의 고형 종양 암은 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종 종양, 소세포 폐 종양, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 비-호지킨 림프종 및 호지킨 림프종을 포함하는 림프종, 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 골육종 종양, 비-소세포 폐암, 신장 종양, 갑상샘 종양, 간 종양, 종양내 주사가 가능한 다른 고형 종양, 또는 이의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의 고형 종양 암은 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종 종양, 소세포 폐 종양, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 골육종 종양, 비-소세포 폐암, 신장 종양, 갑상샘 종양, 간 종양, 종양내 주사가 가능한 다른 고형 종양, 또는 이의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의 고형 종양 암은 림프종, 예컨대 비-호지킨 림프종 또는 호지킨 림프종을 포함한다.
일부 구현예에서, 고형 종양 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 흑색종은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 흑색종, 임의로 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이며, 종양내 주사가 가능한 표재, 피하 및/또는 림프절 전이를 포함한다.
일부 구현예에서, 종양내 주사는 림프절 내 고형 종양 전이 내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 림프절 내 림프종 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 대상체 피부 표면의 10 ㎝ 내에 있는 일차 또는 이차 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 대상체 피부 표면의 5 ㎝ 내에 있는 일차 또는 이차 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 피부 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 피부 고형 종양은 전이이다. 일부 구현예에서, 피부 고형 종양은 피부 암이다. 일부 구현예에서, 피부 고형 종양은 피부 암이 아니다. 일부 구현예에서, 종양내 주사는 피하 고형 종양내로의 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 피하 고형 종양은 전이이다. 일부 구현예에서, 피하 고형 종양은 피부 암이다. 일부 구현예에서, 피하 고형 종양은 피부 암이 아니다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 상피 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 전립샘 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 난소 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 신세포 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 위장관 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 간 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 결장직장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 혈관구조를 갖는 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 중피종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 췌장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 육종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 폐 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 결장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 흑색종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 소세포 폐 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 비-소세포 폐암 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 신경모세포종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 정소 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 암종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 샘암종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 고환종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 망막모세포종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 피부 편평상피세포 암종(CSCC)이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HNSCC이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 두부경부암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 골육종 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 신장암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 갑상샘암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 역형성 갑상샘암(ATC)이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 간암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 결장 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 상기 중 임의의 2개이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 상기 중 임의의 2개 이상이다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 림프종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 비-호지킨 림프종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 호지킨 림프종이다.
일부 구현예에서, 방법은 항-PD-1 항체와 조합된, 임의로 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오염기 및 RNA의 5' 말단에 캡1 구조를 갖도록 변형된, IFNα를 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA, IL-12sc를 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA를 포함하는 사이토카인 RNA 혼합물의 사용을 포함한다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 대상체에 항-PD-1 항체와 조합된, IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의 고형 종양 암을 갖는 대상체에 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 치료 유효량의 RNA 및 치료 유효량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다.
일부 구현예에서, IL-12sc를 인코딩하는 RNA를 투여하는 단계, 및 IFNα, IL-15 sushi, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA를 추가로 투여하는 단계, 그리고 항-PD-1 항체를 추가로 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다.
일부 구현예에서, IFNα를 인코딩하는 RNA를 투여하는 단계 및 IL-12sc, IL-15 sushi, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA를 추가로 투여하는 단계, 그리고 항-PD-1 항체를 추가로 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다.
일부 구현예에서, IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA를 투여하는 단계 및 IL-12sc, IFNα, 및 GM-CSF를 인코딩하는 RNA를 추가로 투여하는 단계, 그리고 항-PD-1 항체를 추가로 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다.
일부 구현예에서, GM-CSF sushi를 인코딩하는 RNA를 투여하는 단계 및 IL-12sc, IFNα, 및 IL-15 sushi를 인코딩하는 RNA를 추가로 투여하는 단계, 그리고 항-PD-1 항체를 추가로 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의 고형 종양 암을 갖는 대상체에 치료 유효량의 1) IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 RNA 및 2) 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법이 포괄된다.
본원에서 사용된 바와 같은 "하나의(a/an/the) RNA/항-PD-1 항체 조합"은 항-PD1 항체와 조합된 RNA 사이토카인 혼합물의 투여를 나타낸다.
일부 구현예에서, RNA 및 항-PD-1 항체의 공동-투여는 하기 중 하나 이상을 일으킨다: 미치료 대상체 또는 단독치료법으로 RNA 또는 항-PD-1 항체가 투여된 대상체 대비 (a) 암 증상의 중증도 또는 지속기간 감소; (b) 종양 성장의 억제, 또는 종양 괴사, 종양 축소 및/또는 종양 소실의 증가; (c) 종양 성장 및/또는 발생의 지연; (d) 억제되거나 늦춰지거나 중단된 종양 전이; (e) 종양 성장의 재발 방지 또는 지연; (f) 대상체의 생존 증가; 및/또는 (g) 통상적인 항암 치료법의 사용 또는 이에 대한 필요성 감소(예로, 화학치료제 또는 세포독성제의 감소되거나 제거된 사용).
고형 종양을 치료하기 위해 당분야에 알려진 임의의 다른 치료 옵션이 본원에서 개시되는 방법과 조합될 수 있다. 일부 경우에서, 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD-1 항체는 하나 이상의 다른 치료 옵션(예로, 또 다른 면역 자극제, 면역치료법, 또는 체크포인트 조절제를 포함하는 화학치료제; 또는 방사선)과 조합되어 투여된다.
A. 투여 경로 및 시점
일부 구현예에서, RNA 또는 사이토카인 RNA 혼합물은 종양내로(예로, 종양내), 또는 종양 근처로(종양-주변) 주사를 통해 전달되며, 항-PD1 항체는 동일한 방식으로 또는 전신으로, 예를 들어, 주사, 주입, 및 임플란트를 통한 것을 포함하는, 정맥내, 장 또는 비경구 전달된다. RNA 및 항체는, 예로, 동시발생으로, 동시에 또는 순차적으로, 공동-투여될 수 있다. 순차적인 경우, 투여는 당업자에게 알려진 임의의 순서로 그리고 임의의 적절한 시간 간격으로의 투여일 수 있다.
일부 구현예에서, RNA는 종양내로 또는 종양 주변으로 주사되며 항-PD-1 항체는 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, RNA는 종양내로 주사되며 항-PD-1 항체는 정맥내 투여된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 3주 또는 4주 주기로 주 1회(즉, 21일마다 3개 용량 또는 28일마다 4개 용량으로) 종양내로 투여되며 항-PD1 항체는 상기 21일 또는 28일 주기 동안 단 1회, 임의로 치료의 첫 번째 날에, 전신으로, 예로, 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 주 1회 종양내로 또는 종양 주변으로 투여되며 항-PD1 항체는 3주 주기의 1일에 정맥내 투여된다(즉, 21일마다 3개 용량의 사이토카인 RNA 혼합물 및 1개 용량의 항-PD1 항체). 일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 주 1회 종양내로 또는 종양 주변으로 투여되며 항-PD1 항체는 4주 주기의 1일에 정맥내 투여된다(즉, 28일마다 4개 용량의 사이토카인 RNA 혼합물 및 1개 용량의 항-PD1 항체). 일부 구현예에서, 종양내 주사는 3주마다의 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 간격의 변화가 수행될 수 있는 시점인, 두 번째 종양 평가 시까지 매주 계속된다. 일부 구현예에서, RNA 및 항-PD-1 항체는 동일한 투약 빈도로 투여된다(예로, 동일한 날에 함께 또는 별도로 투약됨). 일부 구현예에서, RNA 및 항-PD-1 항체는 상이한 투약 빈도로(예로, 상이한 날에) 투여된다. 일부 구현예에서, RNA는 매주 1회 투여되며, 항-PD-1 항체는 3주 1회 투여된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD1은 3주 또는 4주 주기로 공동-투여되며, 여기서 사이토카인 RNA 혼합물은 매주 1회 투여되고, 항-PD-1 항체는 단 1회 투여된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD1은 3주 또는 4주 주기로 공동-투여되며, 여기서 사이토카인 RNA 혼합물은 2주 1회 투여되고, 항-PD-1 항체는 단 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD1은 3주 또는 4주 주기로 공동-투여되며, 여기서 사이토카인 RNA 혼합물은 3주 1회 투여되고, 항-PD-1 항체는 단 1회 투여된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD1은 3주 또는 4주 주기로 공동-투여되며, 여기서 사이토카인 RNA 혼합물은 4주 1회 투여되고, 항-PD-1 항체는 단 1회 투여된다.
일부 구현예에서, RNA의 조합은 동일한 RNA 질량에 기반하여 1:1:1:1 비로(즉, 1:1:1:1%(w/w/w/w)로) 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에서 기재되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 또는 12개월 동안 투여된다. 일부 구현예에서, RNA/항-PD-1 항체 조합은 약 8개월 동안 투여된다. 일부 구현예에서, RNA/항-PD-1 항체 조합은 최대 52주 동안 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 주사를 통해 투여된다 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 3주 1회 정맥내 투여되며 사이토카인 RNA 혼합물은 매주 1회 종양내로 또는 종양-주변으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 3주 1회 정맥내 투여되며 사이토카인 RNA 혼합물은 매주 1회 종양-내로 또는 종양-주변으로 투여된다.
일부 구현예에서, RNA는 치료 유효량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 치료 유효량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 치료 유효량은 단독치료법으로서의 개별적으로 각각의 성분에 대한 치료 유효량과 상이한 양이다.
일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 약 0.05 ㎎ 내지 약 600 ㎎, 예로, 약 0.05 ㎎, 약 0.1 ㎎, 약 1.0 ㎎, 약 1.5 ㎎, 약 2.0 ㎎, 약 10 ㎎, 약 20 ㎎, 약 30 ㎎, 약 40 ㎎, 약 50 ㎎, 약 60 ㎎, 약 70 ㎎, 약 80 ㎎, 약 90 ㎎, 약 100 ㎎, 약 110 ㎎, 약 120 ㎎, 약 130 ㎎, 약 140 ㎎, 약 150 ㎎, 약 160 ㎎, 약 170 ㎎, 약 180 ㎎, 약 190 ㎎, 약 200 ㎎, 약 210 ㎎, 약 220 ㎎, 약 230 ㎎, 약 240 ㎎, 약 250 ㎎, 약 260 ㎎, 약 270 ㎎, 약 280 ㎎, 약 290 ㎎, 약 300 ㎎, 약 310 ㎎, 약 320 ㎎, 약 330 ㎎, 약 340 ㎎, 약 350 ㎎, 약 360 ㎎, 약 370 ㎎, 약 380 ㎎, 약 390 ㎎, 약 400 ㎎, 약 410 ㎎, 약 420 ㎎, 약 430 ㎎, 약 440 ㎎, 약 450 ㎎, 약 460 ㎎, 약 470 ㎎, 약 480 ㎎, 약 490 ㎎, 약 500 ㎎, 약 510 ㎎, 약 520 ㎎, 약 530 ㎎, 약 540 ㎎, 약 550 ㎎, 약 560 ㎎, 약 570 ㎎, 약 580 ㎎, 약 590 ㎎, 또는 약 600 ㎎의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 200 ㎎의 항-PD-1 항체가 투여된다. 일부 구현예에서, 240 ㎎의 항-PD-1 항체가 투여된다. 일부 구현예에서, 350 ㎎의 항-PD-1 항체가 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이며 350 ㎎의 세미플리맙이 투여된다.
개별 용량 내에 함유되는 항-PD-1 항체의 양은 항체㎎/대상체 체중㎏(즉, ㎎/㎏)의 관점으로 표현될 수 있다. 소정 구현예에서, 본원에서 기재되는 방법에서 사용되는 항-PD-1 항체는 약 0.0001 ㎎/대상체 체중㎏ 내지 약 100 ㎎/대상체 체중㎏의 용량으로 대상체에 투여될 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 항체는 약 0.1 ㎎/환자의 체중㎏ 내지 약 20 ㎎/환자의 체중㎏의 용량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이며 약 3 ㎎/환자의 체중㎏의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 다회 용량의 항-PD-1이 정의된 시간 경과에 걸쳐 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에 하나 이상의 용량의 항-PD-1 항체를 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은 "순차적으로 투여하는"은 항체의 각각의 용량이 상이한 시점에, 예로, 사전결정된 간격(예로, 수 시간, 수 일, 수 주 또는 수 개월)만큼 떨어진 상이한 날에 대상체에 투여됨을 의미한다. 일부 구현예에서, 방법은 환자에게 하나의 최초 용량의 항-PD-1 항체에 이어, 하나 이상의 이차 용량의 항-PD-1 항체, 그리고 임의로 뒤따라 하나 이상의 삼차 용량의 항-PD-1 항체를 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다.
용어 "최초 용량", "이차 용량", 및 "삼차 용량"은 투여의 시간적 순서를 나타낸다. 따라서, "최초 용량"은 치료 요법의 시작 시 투여되는 용량이다("기준선 용량"으로도 나타냄); "이차 용량"은 최초 용량 후 투여되는 용량이며; "삼차 용량"은 이차 용량 후 투여되는 용량이다. 최초, 이차, 및 삼차 용량은 모두 동일한 양의 항체(항-PD-1 항체)를 함유할 수 있다. 그러나, 소정 구현예에서, 최초, 이차 및/또는 삼차 용량에 함유되는 양은 치료 과정 동안 서로 변한다(예로, 적절한 바에 따라 상향 또는 하향 조정됨). 소정 구현예에서, 하나 이상의(예로, 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개) 용량이 "부하 용량"으로서 치료 요법의 시작 시 투여된 후, 덜 빈번하게 투여되는 후속 용량(예로, "유지관리 용량")이 투여된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체는 환자에 약 1 ㎎/환자의 체중㎏ 내지 약 3 ㎎/환자의 체중㎏의 부하 용량에 이어 약 0.1 ㎎/환자의 체중㎏ 내지 약 20 ㎎/환자의 체중㎏의 하나 이상의 유지관리 용량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 각각의 이차 및/또는 삼차 용량은 직전 용량의 ½ 내지 14(예로, ½, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½ 이상)주 후 투여된다. 본원에서 사용되는 어구 "직전 용량"은 다회 투여 순서에서, 개재 용량 없이 순서에서 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여된 항-PD-1 항체의 용량을 의미한다.
일부 구현예에서, 방법은 환자에 임의의 수의 이차 및/또는 삼차 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 환자에게 하나의 이차 용량만 투여된다. 다른 구현예에서, 환자에게 2개 이상의(예로, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의) 이차 용량이 투여된다. 마찬가지로, 소정 구현예에서, 환자에게 하나의 삼차 용량만 투여된다. 다른 구현예에서, 환자에게 2개 이상의(예로, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의) 삼차 용량이 투여된다.
다회 이차 용량이 관여되는 일부 구현예에서, 각각의 이차 용량은 다른 이차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 이차 용량은 직전 용량의 1주 내지 2주 후 환자에 투여될 수 있다. 유사하게, 다회 삼차 용량이 관여되는 일부 구현예에서, 각각의 삼차 용량은 다른 삼차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 삼차 용량은 직전 용량의 2주 내지 4주 후 환자에 투여될 수 있다. 대안적으로, 이차 및/또는 삼차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 요법의 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 투여 빈도는 또한 임상 검사 후 개별 환자의 필요에 따라 의사에 의해 치료 과정 동안 조정될 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 용량의 항-PD-1 항체는 보다 빈번한 기준으로(1주 2회, 1주 1회 또는 2주 1회) "유도 용량"으로서 치료 요법의 시작 시 투여된 후, 덜 빈번하게(예로, 4주 내지 12주 1회) 투여되는 후속 용량("강화 용량" 또는 "유지관리 용량")으로 투여된다.
일부 구현예에서, RNA는 신보강 설정으로 투여된다. "신보강 설정"은 방법이 일차/확정적 치료법 전에(예로, 종양의 수술적 절제 전에) 수행되는 임상적 설정을 나타낸다.
항-PD-1 항체 투약
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 약 0.05 ㎎ 내지 약 600 ㎎, 예로, 약 0.05 ㎎, 약 0.1 ㎎, 약 1.0 ㎎, 약 1.5 ㎎, 약 2.0 ㎎, 약 10 ㎎, 약 20 ㎎, 약 30 ㎎, 약 40 ㎎, 약 50 ㎎, 약 60 ㎎, 약 70 ㎎, 약 80 ㎎, 약 90 ㎎, 약 100 ㎎, 약 110 ㎎, 약 120 ㎎, 약 130 ㎎, 약 140 ㎎, 약 150 ㎎, 약 160 ㎎, 약 170 ㎎, 약 180 ㎎, 약 190 ㎎, 약 200 ㎎, 약 210 ㎎, 약 220 ㎎, 약 230 ㎎, 약 240 ㎎, 약 250 ㎎, 약 260 ㎎, 약 270 ㎎, 약 280 ㎎, 약 290 ㎎, 약 300 ㎎, 약 310 ㎎, 약 320 ㎎, 약 330 ㎎, 약 340 ㎎, 약 350 ㎎, 약 360 ㎎, 약 370 ㎎, 약 380 ㎎, 약 390 ㎎, 약 400 ㎎, 약 410 ㎎, 약 420 ㎎, 약 430 ㎎, 약 440 ㎎, 약 450 ㎎, 약 460 ㎎, 약 470 ㎎, 약 480 ㎎, 약 490 ㎎, 약 500 ㎎, 약 510 ㎎, 약 520 ㎎, 약 530 ㎎, 약 540 ㎎, 약 550 ㎎, 약 560 ㎎, 약 570 ㎎, 약 580 ㎎, 약 590 ㎎, 또는 약 600 ㎎의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 200 ㎎의 항-PD-1 항체가 투여된다. 일부 구현예에서, 240 ㎎의 항-PD-1 항체가 투여된다. 일부 구현예에서, 350 ㎎의 항-PD-1 항체가 투여된다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이며 350 ㎎의 세미플리맙이 투여된다.
개별 용량 내에 함유되는 항-PD-1 항체의 양은 항체㎎/대상체 체중㎏(즉, ㎎/㎏)의 관점으로 표현될 수 있다. 소정 구현예에서, 본원에서 기재되는 방법에서 사용되는 항-PD-1 항체는 약 0.0001 ㎎/대상체 체중㎏ 내지 약 100 ㎎/대상체 체중㎏의 용량으로 대상체에 투여될 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 항체는 약 0.1 ㎎/환자의 체중㎏ 내지 약 20 ㎎/환자의 체중㎏의 용량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙이며 약 3 ㎎/환자의 체중㎏의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 다회 용량의 항-PD-1이 정의된 시간 경과에 걸쳐 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에 하나 이상의 용량의 항-PD-1 항체를 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은 "순차적으로 투여하는"은 항체의 각각의 용량이 상이한 시점에, 예로, 사전결정된 간격(예로, 수 시간, 수 일, 수 주 또는 수 개월)만큼 떨어진 상이한 날에 대상체에 투여됨을 의미한다. 일부 구현예에서, 방법은 환자에게 하나의 최초 용량의 항-PD-1 항체에 이어, 하나 이상의 이차 용량의 항-PD-1 항체, 그리고 임의로 뒤따라 하나 이상의 삼차 용량의 항-PD-1 항체를 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다.
용어 "최초 용량", "이차 용량", 및 "삼차 용량"은 투여의 시간적 순서를 나타낸다. 따라서, "최초 용량"은 치료 요법의 시작 시 투여되는 용량이다("기준선 용량"으로도 나타냄); "이차 용량"은 최초 용량 후 투여되는 용량이며; "삼차 용량"은 이차 용량 후 투여되는 용량이다. 최초, 이차, 및 삼차 용량은 모두 동일한 양의 항체(항-PD-1 항체)를 함유할 수 있다. 그러나, 소정 구현예에서, 최초, 이차 및/또는 삼차 용량에 함유되는 양은 치료 과정 동안 서로 변한다(예로, 적절한 바에 따라 상향 또는 하향 조정됨). 소정 구현예에서, 하나 이상의(예로, 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개) 용량이 "부하 용량"으로서 치료 요법의 시작 시 투여된 후, 덜 빈번하게 투여되는 후속 용량(예로, "유지관리 용량")이 투여된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체는 환자에 약 1 ㎎/환자의 체중㎏ 내지 약 3 ㎎/환자의 체중㎏의 부하 용량에 이어 약 0.1 ㎎/환자의 체중㎏ 내지 약 20 ㎎/환자의 체중㎏의 하나 이상의 유지관리 용량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 각각의 이차 및/또는 삼차 용량은 직전 용량의 ½ 내지 14(예로, ½, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½ 이상)주 후 투여된다. 본원에서 사용되는 어구 "직전 용량"은 다회 투여 순서에서, 개재 용량 없이 순서에서 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여된 항-PD-1 항체의 용량을 의미한다.
일부 구현예에서, 방법은 환자에 임의의 수의 이차 및/또는 삼차 용량의 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 환자에게 하나의 이차 용량만 투여된다. 다른 구현예에서, 환자에게 2개 이상의(예로, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의) 이차 용량이 투여된다. 마찬가지로, 소정 구현예에서, 환자에게 하나의 삼차 용량만 투여된다. 다른 구현예에서, 환자에게 2개 이상의(예로, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개 이상의) 삼차 용량이 투여된다.
다회 이차 용량이 관여되는 일부 구현예에서, 각각의 이차 용량은 다른 이차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 이차 용량은 직전 용량의 1주 내지 2주 후 환자에 투여될 수 있다. 유사하게, 다회 삼차 용량이 관여되는 일부 구현예에서, 각각의 삼차 용량은 다른 삼차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 삼차 용량은 직전 용량의 2주 내지 4주 후 환자에 투여될 수 있다. 대안적으로, 이차 및/또는 삼차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 요법의 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 투여 빈도는 또한 임상 검사 후 개별 환자의 필요에 따라 의사에 의해 치료 과정 동안 조정될 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 용량의 항-PD-1 항체는 보다 빈번한 기준으로(1주 2회, 1주 1회 또는 2주 1회) "유도 용량"으로서 치료 요법의 시작 시 투여된 후, 덜 빈번하게(예로, 4주 내지 12주 1회) 투여되는 후속 용량("강화 용량" 또는 "유지관리 용량")으로 투여된다.
B. 적응증 및 환자 집단
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 고형 종양을 갖는 대상체를 치료하는 방법에서 사용된다. 일부 구현예에서, 대상체는 하기와 같다:
i. 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 되었고/하거나;
ii. PD-1 및/또는 PD-L1 내성 고형 종양을 갖고/갖거나;
iii. 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 획득된 내성을 갖고/갖거나;
iv. 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 가짐.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패한 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 비관용성이 된 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 대해 내성이 된 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 비관용성이 된 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 PD-1 및/또는 PD-L1 내성 고형 종양을 갖는 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용되며, 여기서 대상체는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 획득된 내성을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용되며, 여기서 대상체는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 전이성 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 절제 불가능한 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 단계의 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 전이성 고형 종양 암을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 단계의, 절제 불가능한, 전이성 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 단계의 절제 불가능한 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 단계의 전이성 고형 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 절제 불가능한 전이성 고형 종양을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 베타-2-마이크로글로불린(B2M) 기능의 부분적 또는 전체 손실을 포함하는 암 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 기능의 부분적 손실을 갖는 암 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 기능의 전체 손실을 갖는 암 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 암-세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가되며, 여기서 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 암-세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가되며, 여기서 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래되지 않는다. 일부 구현예에서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 암 세포를 상이한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가된다. 일부 구현예에서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 암 세포를 비-암 세포 대조군과 비교하여 평가된다.
일부 구현예에서, 암 세포는 정상 B2M 기능을 갖는 암 세포를 포함하는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 25% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 50% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 75% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 95% 이상의 암 세포가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 고형 종양에 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 B2M 유전자에 돌연변이를 포함하는 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 치환, 삽입, 또는 결실이다. 일부 구현예에서, B2M 유전자는 이형접합성의 손실(LOH)을 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 프레임시프트 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 결실 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 프레임시프트 돌연변이는 B2M의 엑손 1에 있다. 일부 구현예에서, 프레임시프트 돌연변이는 B2M의 절단을 일으킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 B2M의 전체 또는 부분적 결실(예로, 절단)이다. 일부 구현예에서, 결실 돌연변이는 B2M의 엑손 1에 있다. 일부 구현예에서, 프레임시프트 돌연변이는 p.Leu13fs 및/또는 p.Ser14fs를 포함한다. 일부 구현예에서, 프레임시프트 돌연변이는 문헌[Middha et al. (2019) JCO Precis Oncol. (doi:10.1200/PO.18.00321)]에 따른 V69Wfs*34, L15fs*41, L13P, L15fs*41, 및/또는 p.S31*를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 JAK1 및/또는 JAK2에 대한 키나제 도메인 상류에 프레임시프트 및/또는 결실(예로, 절단) 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실이 없는 대상체에 비해 감소된 수준의 B2M 단백질을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 베타-2-마이크로글로불린(B2M) 기능의 부분적 또는 전체 손실을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 기능의 부분적 손실을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 기능의 전체 손실을 포함한다. B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 동일한 대상체로부터의 조직 샘플과 비교하여 평가될 수 있다. B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 종양으로부터의 조직 샘플을 종양 샘플이 유도되는 동일한 조직으로부터의 조직 샘플과 비교하여 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 전체적으로(예로, 고형 종양으로부터 채취된 생검에서 평가되는 바와 같이) 고형 종양이 유래되는 정상 세포 또는 조직에 비해 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 B2M 유전자에 돌연변이를(예로, 이로부터 유도되는 기능의 부분적 또는 전체 손실을) 포함한다.
일부 구현예에서, 종양 내 소정 세포는 B2M 기능 손실을 갖는다. 일부 구현예에서, 종양 내 소정 세포는 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실을 갖는 반면 종양 내 다른 세포는 이를 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 대상체는 대조군에 비해 감소된 수준의 표면 발현된 주조직 적합성 복합체 클래스 I(MHC I)을 가지며, 임의로 여기서 대조군은 동일한 대상체로부터의 비-암성 샘플이다. 일부 구현예에서, 대상체는 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 포함하는 암 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, 암 세포는 표면 발현된 MHC I을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I은 암 세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가되며, 임의로 여기서 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 정상 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 암 세포를 포함하는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 25% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 50% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 75% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다. 일부 구현예에서, 암 세포는 95% 이상의 암 세포가 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는 고형 종양에 있다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 전체적으로(예로, 고형 종양으로부터 채취된 생검에서 평가되는 바와 같이) 고형 종양이 유래되는 정상 세포 또는 조직에 비해 감소된 수준의 표면 발현된 MHC I을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 진행성 단계의 고형 종양 암을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 절제 불가능한 고형 종양 암을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 RNA/항-PD-1 항체 조합은 전이성 고형 종양 암을 치료하는 방법에서 사용된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 림프절 내의 하나 이상의 고형 종양 암 내로 주사된다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의 고형 종양 암은 직접적 종양내 주사가 가능한 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 진행성 단계의 고형 종양 암은 III기, III기의 하위세트, IV기, 또는 IV기의 하위세트이다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 흑색종은 IIIB기, IIIC기, 또는 IV기이다. 일부 구현예에서, 암은 피부 편평상피세포 암종(CSCC)이다. 일부 구현예에서, 암은 두부경부 편평상피세포 암종(HNSCC)이다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 III기 또는 IV기이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 흑색종이며, 임의로 여기서 흑색종은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이고; 종양내 주사가 가능한 표재, 피하 및/또는 림프절 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 HNSCC 및/또는 점막 부위만을 갖는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 HNSCC이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 포도막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양 암은 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, RNA는 고형 종양 암의 점막 부위에서만 종양내로 주사되며, 여기서 고형 종양 암은 HNSCC 또는 점막 흑색종이다.
일부 구현예에서, 대상체는 사전 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드(PD-L1) 치료법에 실패했다. 다른 구현예에서, 대상체는 이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않았다. 일부 구현예에서, 대상체는 다른 치료 옵션이 없다.
일부 구현예에서, 방법은 대상체에서 종양의 크기를 감소시키는 단계 또는 암 전이를 방지하는 단계를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 적어도 2개의 종양 병소 또는 적어도 3개의 종양 병소를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 2개의 종양 병소를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 3개의 종양 병소를 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 본원에서 기재된 바와 같이 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 직접적 종양내 주사가 가능한 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 종양이 직접적 종양내 주사가 가능한지 여부는 용량 부피에 기반할 수 있다. 일부 구현예에서, 종양은 이것에 주사에 적합한(즉, 출혈성 또는 삼출성이 아닌) 최장 지름이 0.5 ㎝ 이상인 피부 또는 피하 병소 또는 융합성이 되고 0.5 ㎝ 이상의 최장 지름(모든 관여된 표적 병소의 지름 합)을 갖는 여러 주사 가능한 병합 병소가 포함되는 경우, 사이토카인 RNA 혼합물의 직접적 종양내 주사를 위해 적합하다. 일부 구현예에서, 초음파(USG)-가이드 종양내 주사에 적합하고 전이성 질환으로 확인된 1.5 ㎝ 이상의 림프절도 적합하다. 일부 구현예에서, 종양은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이다. 일부 구현예에서, 종양은 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종이며; 종양내 주사가 가능한 표재, 피하 및/또는 림프절 전이를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체는 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 초과의 예상 수명을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 3개월 초과의 예상 수명을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 18세이다.
일부 구현예에서, 진행성 단계의 흑색종을 갖는 대상체에 IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의 흑색종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부 편평상피세포 암종(HNSCC)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, (a) 대상체는 적어도 18세이며; (b) 대상체는 사전 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법에 실패했고; (c) 대상체는 최소 2개 병소를 가지고; (d) 흑색종, CSCC, 또는 HNSCC은 직접적 종양내 주사가 가능한 종양을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 3개월 초과의 예상 수명을 갖는다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종 종양, 소세포 폐 종양, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 또는 골육종 종양이다.
일부 구현예에서, 고형 종양은 임의의 크기의 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 종양 두께 측정은 가장 가까운 0.1 ㎜로 반올림하여 보고된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 1.0 ㎜ 이하의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 0.1 ㎜, 0.2 ㎜, 0.3 ㎜, 0.4 ㎜, 0.5 ㎜, 0.6 ㎜, 0.7 ㎜, 0.8 ㎜, 0.9 ㎜, 또는 1.0 ㎜ 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 궤양을 포함하지 않는 <0.8 ㎜(또는 0.8 ㎜ 미만)의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 궤양을 포함하는 <0.8 ㎜(또는 0.8 ㎜ 미만)의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 0.8 ㎜ 내지 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 0.8 ㎜, 0.9 ㎜, 또는 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 0.8 ㎜ 내지 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 1.1 ㎜, 1.2 ㎜, 1.3 ㎜, 1.4 ㎜, 1.5 ㎜, 1.6 ㎜, 1.7 ㎜, 1.8 ㎜, 1.9 ㎜, 또는 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 3.0 ㎜ 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 2.1 ㎜, 2.2 ㎜, 2.3 ㎜, 2.4 ㎜, 2.5 ㎜, 2.6 ㎜, 2.7 ㎜, 2.8 ㎜, 2.9 ㎜, 3.0 ㎜, 3.1 ㎜, 3.2 ㎜, 3.3 ㎜, 3.4 ㎜, 3.5 ㎜, 3.6 ㎜, 3.7 ㎜, 3.8 ㎜, 3.9 ㎜, 또는 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 4.0 ㎜ 초과 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 4.1 ㎜, 4.2 ㎜, 4.3 ㎜, 4.4 ㎜, 4.5 ㎜, 4.6 ㎜, 4.7 ㎜, 4.8 ㎜, 4.9 ㎜, 5.0 ㎜, 5.1 ㎜, 5.2 ㎜, 5.3 ㎜, 5.4 ㎜, 5.5 ㎜, 5.6 ㎜, 5.7 ㎜, 5.8 ㎜, 5.9 ㎜, 6.0 ㎜, 7.0 ㎜, 8.0 ㎜, 9.0 ㎜ 또는 10.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 4.0 ㎜ 초과 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 두께는 종양의 가장 두꺼운(즉, 가장 큰) 치수에서의 두께이다. 일부 구현예에서, 종양은 피부 암 종양이며 두께는 피부 표면으로부터 종양의 가장 심부 부분까지이다(예로, 두께는 종양의 측면 확산이 아님). 일부 구현예에서, 종양은 피부 암이 아닌 암의 피부 전이이며, 종양의 두께는 피부 표면으로부터 종양의 가장 심부 부분까지이다(예로, 두께는 종양의 측면 확산이 아님).
일부 구현예에서, 고형 종양은 흑색종 고형 종양이다. 일부 구현예에서, 흑색종은 임의의 크기의 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 종양 두께 측정은 가장 가까운 0.1 ㎜로 반올림하여 보고된다. 일부 구현예에서, 흑색종은 1.0 ㎜ 이하의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 0.1 ㎜, 0.2 ㎜, 0.3 ㎜, 0.4 ㎜, 0.5 ㎜, 0.6 ㎜, 0.7 ㎜, 0.8 ㎜, 0.9 ㎜, 또는 1.0 ㎜ 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하지 않는 <0.8 ㎜(또는 0.8 ㎜ 미만)의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하는 <0.8 ㎜(또는 0.8 ㎜ 미만)의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 0.8 ㎜ 내지 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 0.8 ㎜, 0.9 ㎜, 또는 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 0.8 ㎜ 내지 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 1.1 ㎜, 1.2 ㎜, 1.3 ㎜, 1.4 ㎜, 1.5 ㎜, 1.6 ㎜, 1.7 ㎜, 1.8 ㎜, 1.9 ㎜, 또는 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 3.0 ㎜ 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2.1 ㎜, 2.2 ㎜, 2.3 ㎜, 2.4 ㎜, 2.5 ㎜, 2.6 ㎜, 2.7 ㎜, 2.8 ㎜, 2.9 ㎜, 3.0 ㎜, 3.1 ㎜, 3.2 ㎜, 3.3 ㎜, 3.4 ㎜, 3.5 ㎜, 3.6 ㎜, 3.7 ㎜, 3.8 ㎜, 3.9 ㎜, 또는 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 4.0 ㎜ 초과 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 4.1 ㎜, 4.2 ㎜, 4.3 ㎜, 4.4 ㎜, 4.5 ㎜, 4.6 ㎜, 4.7 ㎜, 4.8 ㎜, 4.9 ㎜, 5.0 ㎜, 5.1 ㎜, 5.2 ㎜, 5.3 ㎜, 5.4 ㎜, 5.5 ㎜, 5.6 ㎜, 5.7 ㎜, 5.8 ㎜, 5.9 ㎜, 6.0 ㎜, 7.0 ㎜, 8.0 ㎜, 9.0 ㎜ 또는 10.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하지 않거나 포함하는 4.0 ㎜ 초과 두께를 갖는 일차 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 두께는 피부 표면으로부터 종양의 가장 심부 부분까지이다(두께는 종양의 측면 확산이 아님).
일부 구현예에서, 흑색종은 하나의 종양-관여 영역 림프절 또는 종양-관여 림프절이 없는 임의의 수의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 하나의 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 하나의 임상적으로 검출 가능한 종양-관여 영역 림프절을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 종양-관여 림프절이 없는 임의의 수의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절 또는 종양-관여 림프절이 없는 임의의 수의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2개 또는 3개의 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절을 포함하며, 그 중 적어도 하나는 임상적으로 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절을 포함하며, 그 중 하나는 임상적으로 잠재하거나 임상적으로 검출 가능하고 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 하나의 종양-관여 림프절을 갖는 임의의 수의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 4개 이상의 종양-관여 영역 림프절 또는 2개 이상의 종양-관여 림프절을 갖는 임의의 수의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이 또는 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 갖지 않거나 갖는 임의의 수의 매트화된 림프절을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 4개 이상의 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절을 포함한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 4개 이상의 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절을 포함하며, 그 중 적어도 하나는 임상적으로 검출 가능하거나 임의의 수의 매트화된 림프절이 존재한다. 일부 구현예에서, 흑색종은 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절을 포함하며, 그 중 하나는 임상적으로 잠재하거나 임상적으로 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 흑색종은 4개 이상의 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절을 포함하며, 그 중 2개 이상은 임상적으로 잠재하거나 임상적으로 검출 가능하고/하거나 임의의 수의 매트화된 림프절이 존재하고, 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재한다.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 임의의 크기의 일차 종양을 포함하며;
b. 하나 이상의 종양-관여 영역 림프절; 또는 종양-관여 영역 림프절이 없는 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 흑색종은 검출 가능한 원부 전이를 갖는다.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 궤양을 포함하지 않는 0.8 ㎜ 미만의 두께를 갖는 일차 종양; 또는 0.8 ㎜ 내지 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양 및 궤양을 포함하는 0.8 ㎜ 미만 두께의 일차 종양; 또는 궤양을 포함하지 않는 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함하며;
b. 1개 또는 2개 또는 3개의 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절을 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 궤양을 포함하지 않는 0.8 ㎜ 미만의 두께를 갖는 일차 종양; 또는 0.8 ㎜ 내지 1.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양 및 궤양을 포함하는 0.8 ㎜ 미만 두께의 일차 종양; 또는 궤양을 포함하지 않는 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함하며;
b. 1개의 임상적으로 검출 가능한 종양-관여 영역 림프절; 또는 0개의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재하는 종양-관여 영역 림프절; 또는 그 중 적어도 하나는 임상적으로 검출 가능한, 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절을 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 궤양을 포함하는 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양; 또는 궤양을 포함하지 않는 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함하며;
b. 1개의 임상적으로 검출 가능한 또는 임상적으로 잠재한 종양-관여 영역 림프절; 또는 0개 또는 1개의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 가진 종양-관여 영역 림프절을 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 1개의 임상적으로 검출 가능한 종양-관여 영역 림프절; 또는 0개의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재하는 종양-관여 영역 림프절을 포함하고;
b. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 흑색종은 검출 가능한 원부 전이를 갖지 않으며; 하기를 포함한다:
a. 그 중 적어도 하나는 임상적으로 검출 가능한, 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절;
b. 1개의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재하는 임상적으로 잠재하거나 검출 가능한 종양-관여 영역 림프절;
c. 그 중 적어도 하나는 임상적으로 검출 가능한, 4개 이상의 종양-관여 영역 림프절, 또는 하나 이상의 매트화된 림프절의 존재; 또는
d. 2개 이상의 임상적으로 잠재하거나 임상적으로 검출 가능한 종양-관여 영역 림프절 및/또는 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재하는 하나 이상의 매트화된 림프절의 존재.
일부 구현예에서, 흑색종은 궤양을 포함하지 않는 0.8 ㎜ 미만 또는 1.0 ㎜ 초과 내지 2.0 ㎜ 또는 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양을 포함하며; 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않고; 하기를 포함한다:
a. 1개의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이가 존재하는 임상적으로 잠재하거나 임상적으로 검출되는 종양-관여 영역 림프절; 또는
b. 4개 이상의 종양-관여 영역 림프절; 또는 2개 이상의 종양-관여 림프절을 갖는 하나 이상의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이; 또는 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 갖지 않거나 갖는 하나 이상의 매트화된 림프절.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 궤양을 포함하는 2.0 ㎜ 초과 내지 4.0 ㎜의 두께를 갖는 일차 종양 또는 궤양을 포함하지 않는 4.0 ㎜ 초과 두께를 갖는 일차 종양을 포함하며;
b. 하나 이상의 종양-관여 영역 림프절; 또는 임의로 하나 이상의 종양-관여 영역 림프절을 갖는 하나 이상의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이; 또는 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함하지 않거나 포함하는 하나 이상의 매트화된 림프절을 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 궤양을 포함하지 않는 4.0 ㎜ 초과 두께의 일차 종양을 포함하며;
b. 1개 또는 2개 또는 3개의 종양-관여 영역 림프절; 또는 0개 또는 1개의 종양-관여 영역 림프절을 갖는 하나 이상의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 흑색종은 하기와 같다:
a. 궤양을 포함하는 4.0 ㎜ 초과 두께의 일차 종양을 포함하며;
b. 4개 이상의 종양-관여 영역 림프절; 또는 2개 이상의 종양-관여 영역 림프절을 갖는 하나 이상의 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이, 또는 전달-중, 위성, 및/또는 미세위성 전이를 포함하지 않거나 포함하는 하나 이상의 매트화된 림프절을 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 임의의 크기의 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 확인 가능한 종양을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 그 최대 치수가 2 ㎝ 이하인 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 그 최대 치수가 2 ㎝ 초과 4 ㎝ 이하인 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 그 최대 치수가 ㎝ 초과이거나 뼈의 최소 미란 또는 신경주변 침습 또는 심부 침습을 갖는 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 광범위한 피질 또는 수질 뼈 관여 또는 두개골 기부의 침습 또는 두개골 기부의 구멍을 통한 침습을 갖는 종양을 포함한다.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 영역 림프절 전이를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 단일 동측 림프절에 있고, 최대 치수가 3 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 단일 동측 림프절에 있고, 최대 치수가 3 ㎝ 초과 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 여러 동측 림프절에 있고, 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 양쪽 또는 반대쪽 림프절에 있고, 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, CSCC 또는 HNSCC는 그 최대 치수가 6 ㎝ 초과이고, ENE-음성인 전이; 또는 임의의 림프절에 있고 ENE-음성인 전이를 포함한다. 일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기와 같다:
a. 최대 치수가 4 ㎝ 초과인 종양을 포함하거나 뼈의 최소 미란 또는 신경주변 침습 또는 심부 침습을 가지며;
b. 하기를 포함하고:
i. 영역 림프절 전이 없음; 또는
ii. 단일 동측 림프절에 있으며, 최대 치수가 3 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 및
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기를 포함한다:
a. 최대 치수가 2 ㎝ 이하인 종양;
b. 단일 동측 림프절에 있으며, 그 최대 치수가 3 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 및
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기를 포함한다:
a. 그 최대 치수가 2 ㎝ 초과 4 ㎝ 이하인 종양;
b. 단일 동측 림프절에 있으며, 그 최대 치수가 3 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 및
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기와 같다:
a. 하기를 포함하며:
i. 그 최대 치수가 2 ㎝ 이하인 종양; 또는
ii. 그 최대 치수가 2 ㎝ 초과 4 ㎝ 이하인 종양; 또는
iii. 그 최대 치수가 4 ㎝ 초과이거나 뼈의 최소 미란 또는 신경주변 침습 또는 심부 침습을 갖는 종양; 및
b. 하기를 포함하고:
i. 단일 동측 림프절에 있고 그 최대 치수가 3 ㎝ 초과 6 ㎝ 이하이고 림프절외 확장(ENE)-음성인 전이; 또는
ii. 여러 동측 림프절에 있고, 그 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이; 또는
iii. 양쪽 또는 반대쪽 림프절에 있고, 그 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이; 및
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기와 같다:
a. 하기를 포함하며:
i. 최대 치수가 2 ㎝ 이하인 종양; 또는
ii. 그 최대 치수가 2 ㎝ 초과 4 ㎝ 이하인 종양; 또는
iii. 최대 치수가 4 ㎝ 초과이거나 뼈의 최소 미란 또는 신경주변 침습 또는 심부 침습을 갖는 종양; 또는
iv. 광범위한 피질 또는 수질 뼈 관여 또는 두개골 기부의 침습 또는 두개골 기부의 구멍을 통한 침습을 갖는 종양; 및
b. 그 최대 치수가 6 ㎝ 초과인 림프절에 있고 ENE-음성인 전이; 또는 임의의 림프절에 있고 ENE-음성인 전이를 포함하고;
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기와 같다:
a. 광범위한 피질 또는 수질 뼈 관여 또는 두개골 기부의 침습 또는 두개골 기부의 구멍을 통한 침습을 갖는 종양을 포함하며;
b. 하기를 포함하고:
i. 영역 림프절 전이 없음; 또는
ii. 단일 동측 림프절에 있으며, 최대 치수가 3 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 또는
iii. 단일 동측 림프절에 있고 최대 치수가 3 ㎝ 초과 6 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 또는 여러 동측 림프절에 있고 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 또는 양쪽 또는 반대쪽 림프절에 있고, 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이; 또는
iv. 림프절에 있고, 최대 치수가 6 ㎝ 초과이고, ENE-음성인 전이; 또는 임의의 림프절에 있고 ENE-음성인 전이 및
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기와 같다:
a. 광범위한 피질 또는 수질 뼈 관여 또는 두개골 기부의 침습 또는 두개골 기부의 구멍을 통한 침습을 갖는 종양을 포함하며;
b. 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않음.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 하기와 같다:
a. 하기를 포함하며:
i. 최대 치수가 2 ㎝ 이하인 종양; 또는
ii. 최대 치수가 2 ㎝ 초과 4 ㎝ 이하인 종양; 또는
iii. 최대 치수가 4 ㎝ 초과이거나 뼈의 최소 미란 또는 신경주변 침습 또는 심부 침습을 갖는 종양; 또는
iv. 광범위한 피질 또는 수질 뼈 관여 또는 두개골 기부의 침습 또는 두개골 기부의 구멍을 통한 침습을 갖는 종양;
b. 하기를 포함하고:
i. 영역 림프절 전이 없음; 또는
ii. 단일 동측 림프절에 있으며, 최대 치수가 3 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 또는
iii. 단일 동측 림프절에 있고 최대 치수가 3 ㎝ 초과 6 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 또는 여러 동측 림프절에 있고 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고 ENE-음성인 전이; 또는 양쪽 또는 반대쪽 림프절에 있고, 최대 치수가 6 ㎝ 이하이고, ENE-음성인 전이;
iv. 림프절에 있고, 최대 치수가 6 ㎝ 초과이고, ENE-음성인 전이; 또는 임의의 림프절에 있고 ENE-음성인 전이; 및
c. 검출 가능한 원부 전이를 포함함.
일부 구현예에서, 피부 편평상피세포 암종(CSCC) 또는 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC)은 검출 가능한 원부 전이를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 치료 유효량의 RNA는 하기 중 하나 이상을 유도한다: 임의로 미치료 대상체 또는 RNA 혼합물 중 1개, 2개, 또는 3개 RNA만 투여된 대상체 대비, (a) 암 증상의 중증도 또는 지속기간 감소; (b) 종양 성장의 억제, 또는 종양 괴사, 종양 축소 및/또는 종양 소실의 증가; (c) 종양 성장 및/또는 발생의 지연; (d) 억제되거나 늦춰지거나 중단된 종양 전이; (e) 종양 성장의 재발 방지 또는 지연; (f) 대상체의 생존 증가; 및/또는 (g) 통상적인 항암 치료법의 사용 또는 필요성 감소(예로, 화학치료제 또는 세포독성제의 감소되거나 제거된 사용).
***
본 발명의 설명 및 예시적인 구현예는 제한하는 것으로 고려되어서는 안 된다. 본 명세서 및 첨부되는 청구범위의 목적을 위해, 달리 나타내지 않는 한, 양, 백분율, 또는 비율을 표현하는 모든 수치, 및 명세서 및 청구범위에서 사용되는 다른 수치 값은 이미 이렇게 변형되지 않은 정도까지, 모든 경우에서 용어 "약"으로 수식된 것으로 이해되어야 한다. "약"은 기재된 대상 사안의 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 정도의, 예로 10%, 5%, 2%, 또는 1% 내의 변동을 나타낸다. 따라서, 반대로 나타내지 않는 한, 하기 명세서 및 첨부되는 청구범위에 나타낸 수치 파라미터는 수득하고자 하는 요망되는 특성에 따라 변할 수 있는 근사치이다. 적어도, 그리고 청구범위의 범위에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도가 아니라, 각각의 수치 파라미터는 적어도 보고되는 유효 숫자의 갯수의 관점에서 그리고 일반적인 반올림 기법을 적용하여 해석되어야 한다.
본 명세서 및 첨부되는 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태("a", "an" 및 "the") 및 임의의 단어의 임의의 단수 사용에는 명시적으로 그리고 모호하지 않게 하나의 참조물로만 제한하지 않는 한, 복수의 참조물이 포함됨이 주지된다. 본원에서 사용되는 용어 "포함된다" 및 그 문법적 변형은 목록에서 항목의 인용이 기재된 항목을 치환하거나 이에 부가될 수 있는 다른 유사한 항목의 제외가 아니도록, 비제한적으로 의도된다.
실시예
하기 실시예는 개시된 소정 구현예를 예시하기 위해 제공되며 어떠한 방식으로든 본 개시의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 아래 논의되는 실시예에서, 상기 정의된 바와 같은 사이토카인 RNA 혼합물은 상호 교환적으로 "혼합물", "사이토카인 혼합물", "조성물" 또는 "약물"로도 나타낼 수 있다.
실시예 1 - 단독치료법으로서의 및 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 증량 및 용량 확대
전반적 설계: 단일 제제로서 및 세미플리맙과 조합되어 종양내 투여된 사이토카인 RNA 혼합물의 최대 관용 및 투여 용량, 안전성, 관용성, 약동학, 약력학, 및 항-종양 활성의 평가를 위한 인간-내-최초, 공개-표지, 용량 증량 및 확대 연구를 수행한다.
참여자 수: 증량상 동안 연구되는 용량 수준에 따라, 사이토카인 RNA 혼합물이 단일 제제로서 투여되는 경우, 최대 72명의 참여자 등록이 계획된다. 증량상 동안 연구되는 용량 수준 및 확대상 동안 각각의 코호트에 대한 완료된 단계에 따라, 사이토카인 RNA 혼합물이 세미플리맙과 조합되어 투여되는 경우, 최대 192명의 참여자 등록이 계획된다. 종합하면, 최대 264명의 참여자 등록이 계획된다.
용량 증량상(단독치료법): 용량 증량상에서는 공식 샘플 크기 계산이 없다. 사이토카인 RNA 혼합물을 사전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 기반 치료법에 실패한 진행성 고형 종양을 갖는 환자, 및/또는 항-PD-1이 일상적으로 사용되지 않는 적응증에 대해 다른 치료 옵션이 없는 환자에 투여한다. 최대 38명의 용량 제한 독성(DLT)-평가 가능 참여자가 약 8개 용량 수준의 예상 평가를 포함하는 용량 증량상에 등록한다. 실제 샘플 크기는 관찰된 DLT 및 실제로 탐색되는 용량 수준의 수에 따라 변한다.
용량 확대상(단독치료법): 사이먼(Simon's) 2-단계 설계를 확대상에서 사용하고 사전 항-PD-1/항-PD-L1 치료법에 실패한 진행성 흑색종을 갖는 대략 34명의 참여자가 등록한다. 처음 16명의 치료받은 참여자 후, 중간보고 분석이 있고, 적어도 2명의 참여자에서 반응이 관찰되면, 전체 샘플 규모인 34명 참여자로 확대한다.
용량 증량상(조합 치료법): 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 증량에서 실제 샘플 크기는 관찰된 DLT 및 실제로 탐색되는 용량 수준의 수에 따라 변한다(대략 18명 내지 36명의 DLT-평가 가능 참여자).
용량 확대상(조합 치료법): 사이먼(Simon's) 2-단계 설계를 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 확대상에서 사용하고 진행성 흑색종, CSCC, 또는 HNSCC를 갖는 대략 156명의 참여자가 4개 코호트에 등록한다. 중간보고 분석은 각각의 코호트에 대해 사이먼 2단계 설계의 단계 1 종료 시 수행한다(코호트 A에 있어서 26명의 환자, 코호트 B에 있어서 14명의 환자, 코호트 C에 있어서 10명의 환자, 코호트 D에 있어서 26명의 환자). 모든 코호트(A, B, C, 및 D)에서의 등록은 병렬적으로 수행한다.
개입 군 및 지속기간: 참여자에 대한 연구 지속기간에는 최대 28일의 스크리닝 기간이 포함된다. 성공적으로 스크리닝되면, 참여자는 질환 진행, 허용 불가능한 AE, 참여자의 치료 중단 결정 시까지, 또는 질환 진행이 일어나지 않는 경우 최대 1년 동안 연구 개입을 받을 수 있다. 단일 제제로서 및 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 계속적 투여는 합리적인 독성을 갖는 안전한 방식으로 임상적 이익을 명확히 계속 유도하는 참여자에 대해 케이스별로 연구 위원회가 1년 초과의 기간을 고려할 것이다. 연구 개입의 중단 후, 참여자는 마지막 IMP 투여 후 대략 30일 또는 참여자가 또 다른 항암 치료법을 시행받기 전 중 더 빠른 시점에 연구 장소로 치료-종료 평가를 위해 복귀한다. 참여자가 진행 이외의 사유로 연구 개입을 중단하는 경우, 질환 진행, 또 다른 항암 치료의 개시, 또는 사망 시(중 첫 번째 때)까지 3개월마다 추적 방문을 수행한다.
사이토카인 RNA 혼합물 및/또는 세미플리맙으로부터 이익을 얻는 참여자에 대한 치료의 예상 지속기간은 진행일에 기반하여 변할 수 있다; 그러나 참여자 당 연구의 중앙값 예상 지속기간은 9개월(스크리닝을 위한 1개월, 치료를 위한 5개월, 및 치료 종료 추적을 위한 3개월) 및 조합 치료법에서 12개월(스크리닝을 위한 1개월, 치료를 위한 8개월, 및 치료 종료 추적을 위한 3개월)로 추정된다.
단독치료법에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 4주 주기로 주 1회(즉, 28일마다 4개 용량으로) 종양내 투여된다. 조합 치료법에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 3주 주기의 1일에 정맥내 투여되는 세미플리맙과 함께 주 1회 종양내 투여된다(즉, 21마다 3개 용량의 사이토카인 RNA 혼합물 및 1개 용량의 세미플리맙). 종양내 주사는 1개월(단독치료법에서) 또는 3주(조합 치료법에서) 2회 또는 1회로의 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 간격의 변화가 고려될 수 있는 시점인, 두 번째 종양 평가 시까지 매주 계속된다; 사이토카인 RNA 혼합물 투여의 보다 유연한 용량 간격도 이용 가능한 데이터에 따라 고려될 수 있다.
단독치료법 및 조합 치료법에서의 증량상 동안 더 높은 용량 수준으로의 진행은 독성에 기반하여 일어난다; 중간 용량도 고려될 수 있다. 단독치료법에서, 조기 유효성 신호가 안전한 것으로 공표된 용량 수준에서 나타나면, 이를 확대하여 유효성을 확인할 수 있다.
연구에 걸쳐 용량 생략 또는 용량 지연이 일어날 수 있다; 용량 제한 독성(DLT)의 발생이 이러한 변형에 대한 필요성을 결정한다. DLT를 경험하는 참여자는 치료를 중단하고(단독치료법에서든 조합 치료법에서든), 등급 1 이하 또는 기준선 상태로의 해소 시까지 추적한다. DLT 관찰 기간 동안 DLT가 관찰되는 경우 연구 개입은 확정적으로 중단한다. AE가 DLT 기준에 부합하고 DLT 관찰 기간 후 일어나는 경우, 치료법을 계속할지 여부를 결정하기 위해 케이스별 기준에 따라 이익-위험 평가를 수행한다. 2주를 초과하지 않는 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 생략(즉, 2개 용량 생략)으로부터의 회복 후, 참여자는 동일하거나 더 낮은 용량 수준에서 새로운 치료 주기로 치료법을 재개할 수 있다; 더 낮은 용량의 이러한 재-투약 참여자에 대해서는 용량 재-증량이 허용되지 않는다. 참여자가 2주 동안 두 번째 용량 생략(즉, 2개 용량 생략)을 야기하는 동일한 AE를 경험하는 경우, 참여자는 영구 중단할 수 있다. 세미플리맙을 투여받는 참여자는 연구 치료 과정에 걸쳐 할당된 투여량(350 ㎎ Q3W)을 유지하며, 안전성 프로필로 인한 의무 조건으로 고려되지 않는 경우 세미플리맙에 대해 용량 변형은 허용되지 않는다; 그러나, 세미플리맙 용량의 치료 주기 지연 또는 생략은 독성으로 인해 요구되는 경우 허용된다. 참여자가 세미플리맙 치료의 종결을 야기하는 세미플리맙 주입-관련 알러지 약물 반응을 갖는 경우, 참여자는 단독치료법으로 할당된 용량 수준에서 사이토카인 RNA 혼합물 치료를 계속할 수 있다.
연구 의약품: 사이토카인 RNA 혼합물
· 투여 경로: 종양내 주사
· 용량 요법: 사이토카인 RNA 혼합물은 28일 주기 내에서 4회 주사로, 주 1회 할당된 용량 수준으로 투여된다.
연구 의약품: 세미플리맙
· 제형물: 세미플리맙 완제 의약품은 10 mM 히스티딘, 5%(w/v) 수크로스, 1.5%(w/v) L-프롤린, 및 0.2%(w/v) 폴리소르베이트 80을 함유하는, pH 6.0의 농축 용액(50 ㎎/㎖)으로 제시되며, 2개의 상이한 인출 가능한 양 중 하나로 충전된 10 ㎖ 단회-사용 바이알에 제공된다:
- 인출 가능한 5.0 ㎖(250 ㎎/바이알에 해당함)
- 인출 가능한 7.0 ㎖(350 ㎎/바이알에 해당함)
· 투여 경로: IV 주입용 용액
· 용량 요법: 투여 Q3W별 30분에 걸쳐 정맥내 주입되는 350 ㎎.
조합 코호트에 있어서, 세미플리맙은 350 ㎎ Q3W의 고정된 권장 용량으로 정맥내 투여한 후, 사이토카인 RNA 혼합물을 매주 종양내 투여한다. 세미플리맙 및 사이토카인 RNA 혼합물 둘 다로의 치료일에, 세미플리맙을 먼저, 이어서 사이토카인 RNA 혼합물을 투여한다(동일한 날).
비연구 의약품(들): 사전-정의된 예비투약은 투여되지 않는다.
연구 투약에 대한 시험-후 접근: 본 연구에 등록한 모든 참여자는 1년 동안 또는 질환 진행 시까지 중 더 빠른 때까지 치료받는다.
통계적 고려사항: 단독치료법 및 조합 치료법으로부터의 데이터는 별도로 분석한다. 별도 분석은 용량 확대 동안 조합 치료법에서 각각의 코호트에 대해 수행한다.
a. 일차 분석:
용량 증량(단독치료법 및 조합 치료법): 용량 증량상에서, DLT는 용량 수준별로 요약한다. DLT의 상세사항은 참여자별로 제공한다. 치료-상 기간 동안 치료로-발생하는 AE/SAE 및 실험실 비정상은 용량 수준별 서술 통계를 사용하여 요약한다.
용량 확대(단독치료법 및 조합 치료법): RECIST 1.1에 따른 객관적 반응률(ORR)을 서술 통계로 요약한다. 90% 2-사이드 신뢰도 구간을 클로퍼-피어슨(Clopper-Pearson) 방법을 사용하여 연산한다. 통계적 추론은 가설 및 샘플 크기 계산 섹션에서 정의되는 알파 수준에 기반한다.
b. 이차 종결점 분석:
용량 증량(단독치료법 및 조합 치료법): 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인 및 세미플리맙의 농도 및 PK 파라미터를 PK가 평가되는 주기 동안 서술 통계로 요약한다. 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인에 대한 항-약물 항체(ADA) 및 세미플리맙에 대한 ADA를 서술적으로 요약한다.
용량 확대(단독치료법 및 조합 치료법): 치료-상 기간 동안 치료로-발생하는 AE/SAE 및 실험실 비정상을 서술 통계를 사용하여 요약한다. RECIST 1.1 및 iRECIST에 따른 DoR 및 PFS를 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법을 사용하여 요약한다. RECIST 1.1에 따른 ORR과 유사한 분석을 RECIST 1.1 및 iRECIST에 따른 DCR, 및 iRECIST에 따른 ORR에 대해 제공한다. 사이토카인 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인 및 세미플리맙의 PK 농도 및 파라미터를 PK가 평가되는 주기 동안 서술 통계로 요약한다. 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩된 사이토카인에 대한 ADA 및 세미플리맙에 대한 ADA를 서술적으로 요약한다.
도 1a는 치료의 전반적 설계의 그래픽을 나타내는 반면(상부: 단독치료법; 하부: 조합된 치료법), 도 1b 및 도 1c는 각각 단독치료법에 대한 및 조합 치료법에 대한 치료 일정수립 그래픽을 나타낸다.
단독치료법에서의 용량 증량상은 단독치료법으로 매주 투여되는 사이토카인 RNA 혼합물의 MTD 또는 MAD를 결정하는 것을 목표로 한다(도 1a, "a"). 매주 투여되는 고정 용량의 MTD/MAD를 확대상에서 추가 테스트한다. 항-PD-1 또는 항-PD-L1의 실패 후 IIIB기 내지 IIIC기 또는 IV기 흑색종이 적격이다. 포함되는 참여자의 수는 처음 16명의 치료받은 참여자에서 적어도 2개 반응이 관찰되는 경우 최대 34명의 참여자이다(도 1a, "b"). 가속화된 증량상 동안, 주기 1에서 관찰된 독성의 발생을 코호트별로 1명의 참여자에 대해 평가한다(도 1a, "c"). 가속화된 증량 DL의 누군가에게서 관련 등급 2 이상의 AE 또는 DLT의 발생 후(DL1 또는 2, 이 중 먼저 일어나는 때에), 또는 DL3부터 시작해서, 과용량 대조군을 갖는 베이스 증량을 코호트별로 적어도 3명의 참여자 평가로 개시한다(도 1a, "d"). 용량 증량상이 종료되는 경우, 확대상에서 평가될 MTD/MAD를 안정성에 기반하여 결정한다(도 1a, "e").
조합 치료법에서의 용량 증량상은 3주 1회 IV 투여되는 세미플리맙과 조합된, 매주 투여되는 사이토카인 RNA 혼합물의 MTD 또는 MAD를 결정하는 것을 목표로 한다. 진행 중인 단독치료법 용량 증량 동안, 용량 수준이 단독치료법에서 안전하고 관용성인 것으로 실증된 경우(28일 DLT 관찰 기간에 기반하여); PK, PDy, 및/또는 임상 반응(전신 및/또는 국소)의 징후가 나타난 경우, 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 증량을 개시한다. 조합 증량상의 시작 후, 조합에서 탐색되는 DL은 단독치료법에서와 동일하다. 임상장소가 두 용량 증량상(즉, 연구의 단독치료법 및 조합 치료법 부분 둘 다에서의 용량 증량)에 참여하는 경우, 연구의 단독치료법 부분에서의 용량 증량상이 우선시된다(도 1a, "f"). 조합 연구 부분의 확대상에서, MTD에 도달하는 경우 하기 코호트를 개시한다. 코호트 A: 항-PD-1/PD-L1 실패 후 흑색종, 코호트 B: 흑색종 항-PD-1/PD L1 나이브, 코호트 C: CSCC 항-PD-1/PD L1 나이브, 코호트 D: HNSCC 항-PD-1/PD L1 나이브(도 1a, "g").
표 2 및 표 3은 단독치료법에 대한 활동 일정(SOA)을 나타내는 것으로, 표 2는 치료 플로우차트를, 표 3은 용량 증량상 및 확대상에 대한 PK 및 PDy 플로우차트를 나타낸다. 표 4 및 표 5는 조합 치료법에 대한 활동 일정(SOA)을 나타내는 것으로, 표 4는 치료 플로우차트를, 표 5는 용량 증량상 및 확대상에 대한 PK 및 PDy 플로우차트를 나타낸다.
[표 2]
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
a 평가: 달리 시사되지 않는 한, 연구 약물의 투여 전에 평가를 수행한다. 결과는 다음 용량의 투여 전에 연구자가 검토한다. 면역조직화학, 게노믹스, RNA-서열분석, 및 신-항원 분석을 위해 종양 생검을 수집한다.
b 주기는 28일이며, 사이토카인 RNA 혼합물을 단독치료법으로서 매주 종양내 투여한다.
c 인구통계: 연령, 성별, 인종, 및 민족이 포함된다. 의학적/수술 이력: 이전 병리 및 수술 관련 이력이 포함된다. 질환 이력: 진단 시 및 연구 진입 시의 단계, 그리고 이전의 항-종양 치료법(유형, 지속기간, 중단 사유 및 치료법에 대한 반응)이 포함된다. 또한, 종양 유형에 따른 특정 돌연변이.
d 매 주기 첫 번째 날 치료 전에 체중을 측정한다.
e 신장은 기준선 동안에만 측정한다.
f 활력 징후에는 체온, 혈압, 심박수, 호흡률이 포함된다. 급성 독성에 대해 평가하기 위해 참여자를 모니터링하면서 각각의 새로운 용량 수준에서 C1D1 동안 각각의 24시간 원내 입원 기간 동안 6시간 마다 활력 징후를 확인해야 한다.
g 신체 검사에는 심혈관계, 소화계, 중추신경계, 호흡계, 및 조혈계(간비대, 비장비대, 림프절병증), 및 피부를 포함하는 주요 신체 시스템의 검사가 포함된다. 증상 및 징후는 이들이 첫 번째 IMP 투여 시 여전히 존재하는 경우에만 AE로서 eCRF에 보고한다.
h 중등도 약리 효과(예로, 사이토카인 RNA 혼합물 주사 종양 병소의 홍반, 부종 또는 편평화)가 DL3 후 일어날 것으로 예상되므로, 단독 증량의 DL4부터 시작해서, 조합 증량에서 첫 번째 DL부터 시작해서 그리고 확대상 동안 컬러 디지털 사진이 의무적이다. 사이토카인 RNA 혼합물의 첫 번째 용량 전 스크리닝 시 및 표재 및/또는 가시적 피하 주사 병소로부터의 방사선학적 종양 평가 시 전반적 질환 상태를 문서화하고 반응을 문서화하기 위해 디지털 사진이 의무적이다. 또한, 스크리닝 및 종양 평가 윈도우 간에 다른 사이토카인 RNA 혼합물이 잠재적으로 유도한 변화, 예컨대 피부 홍반 및/또는 부종을 포착하기 위해 ad hoc 컬러 디지털 사진을 촬영해야 한다. 임상 장소에서 수집한 모든 자료는 연구 참조 매뉴얼에 따라 검토를 위해 지원사와 체계적으로 공유해야 한다.
i 가임 여성에 대해 혈청 임신 테스트를 수행한다. 기준선 평가 시 7일 윈도우가 허용 가능하다.
j 혈액 혈액학: 헤모글로빈, 적혈구용적률, 감별 WBC(절대 호중구수[ANC] 포함), 혈소판수. 이들 테스트는 각각의 IMP 투여 전에 수행한다(-1일 윈도우가 허용 가능함). 등급 4 호중구감소증 시, 0.5×109/ℓ 이상의 ANC까지 2일 내지 3일마다, 이어서 회복 시까지 매주 ANC를 평가한다. 기준선에서 비정상인 경우, 주기 1, 1일차 평가는 IMP 투여의 2일 내에 수행한다.
k 응고: 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT), PT, 국제 표준화 비율(INR), 피브리노겐(및 스크리닝 시 D-이량체). 기준선에서 비정상인 경우, 주기 1, 1일차 평가는 IMP 투여의 2일 내에 수행한다.
l 혈청 화학: 간 기능 테스트: AST, ALT, 총 빌리루빈, 직접적 빌리루빈, 알칼리성 포스파타제(ALP). 신장 기능 테스트: 요소 또는 BUN & 크레아티닌, 및 요구되는 경우(크레아티닌이 1.0x ULN 내지 1.5x ULN인 경우) 추정 CrCL의 결정. 전해질: 나트륨, 칼륨, 총 칼슘, 인, 클로라이드, 마그네슘 및 바이카보네이트. 기타: 글루코스, 락테이트 탈수소효소(LDH), 알부민, 총 단백질, 및 아밀라제. 간 기능 테스트, 신장 기능 테스트, 전해질, 글루코스, LDH, 알부민 및 총 단백질은 임상적으로 필요하지 않는 한, IMP 투여 전에 수행한다(-1일 윈도우가 허용 가능함). 등급 3 이상의 간 기능 비정상 테스트 시, 기준선 값으로의 회복 시까지 2일 내지 3일마다 추가 테스트를 반복한다. 주기 1, 1일차 혈청 화학 평가는 기준선에서 비정상인 경우, IMP 투여 2일 내에 수행한다.
m 혈청 C-반응성 단백질(CRP), 페리틴, 및 이차 혈장 사이토카인(인터류킨-6 및 인터페론-알파 포함)은 특정된 시점에 그리고 CRS 등급 2 이상의 증상 발생 시 수집한다. 혈청 CRP 및 페리틴 샘플은 주기 1 동안 각각의 연구 개입 직전(D1) 및 24 hr(D2)에(각각의 주 1 내지 4 동안) 및 주기 3, 1주차 동안 수집한다. 다른 연구 개입일에는, 용량-전 샘플만 수집한다; 등급 2 이상의 CRS 증상 출현 시에는 항상 추가 샘플을 인출한다. 주기 1 및 3에, 그리고 EOT 시에만 이차 혈장 사이토카인의 일상적 샘플수집을 수행한다. 주기 1, 1주차 및 2주차, 및 주기 3, 1주차의 용량-전 및 사이토카인 RNA 혼합물 투여 후 6시간 및 24시간에; EOT 시; 및 등급 2 이상의 CRS 증상 시 샘플을 수집한다.
n 12-전극 ECG: 주기 1, 1일차, 주기 3, 1일차, 주기 7, 1일차의 스크리닝 시 및 치료 전, 및 EOT, 및 임상적으로 필요한 경우 수행해야 한다.
o 골수 흡입물: 림프종을 갖는 환자에 대해서만.
p FDG-PET-CT/CT: Lugano 분류에 따라 림프종을 갖는 환자에 대해서만 적용 가능한 FDG PET는 CR 및 PD를 확인하기 위해 그리고 임상적으로 필요한 바에 따라, IMP 투여의 28일(-7일) 내에, 그리고 대략 12주(± 7일)마다 수행해야 한다.
q 뇨분석: 딥스틱에 의한 오전 스팟 상의 딥스틱(정성적) 테스트를 기준선에 그리고 각각의 IMP 투여 전에 및 EOT 시 수행한다. 오전 스팟 소변 상에서 백혈구 및 적혈구에 대한 정량적 뇨분석을 기준선에, 불균일한 주기로, 치료 종료 시, 및 딥스틱 테스트(정성적)에서 비정상인 경우 수행한다. ++(딥스틱) 이상의 단백뇨인 경우, 단백뇨/24 hr 소변 수집에 의한 단백뇨 정량을 수행한다.
r 소변 바이오마커: 신장 손상 분자-1(KIM-1), 소변 마이크로알부민, 및 소변 크레아티닌(스팟 소변에서)을 주기 1, 1일차의 용량-전(사전 7일 이내가 허용 가능함), 첫 번째 IMP 투여 후 24 hr, 및 첫 번째 IMP 투여 후 8일차의 용량-전에 평가한다.
s 기준선에 그리고 치료법 동안 눈 증상 시 셔머(Schirmer's) 테스트를 포함하는 안과학적 검사를 수행한다. 각 주기의 1일차에 눈 및 시각적 증상을 평가한다.
t 유해 사례 평가: 유해 사례의 수집을 위한 관찰 기간은 사전 서면 동의서(ICF)의 서명으로부터 연구 약물의 최종 투여 30일 후까지 연장된다. 심각한 유해 사례는 프로토콜에 기재된 바와 같이 평가하고 보고한다. EOT 방문 후, 진행 중인 SAE 및 AESI, 관련 AE, 및 새로운 관련 AE를 안정화, 회복, 또는 추가 치료법의 개시까지 추적해야 한다.
u 병행 투약 평가: 병행 투약은 연구 약물의 최초 용량 14일 전부터 연구 약물의 최종 투여 30일 후, 진행 중인 연구-약물 관련 유해 사례의 해소 시까지, 또는 또 다른 항암 치료법이 시행되는 경우 기록한다.
v 연구 약물 투여: 참여자는 본원에서 특정된 바와 같은 예비투약(들)을 받을 수 있다. 주기 1, 1일차에 각각의 새로운 용량 수준에서, 참여자를 급성 독성을 평가하기 위해 병원에서 적어도 24 hr 동안 모니터링한다. 후속 투여 시, 참여자는 연구자 재량으로 최대 24 hr의 선택적 입원을 포함하여 4 hr 내지 6 hr 동안 관찰을 거친다. 사이토카인 RNA 혼합물은 주기 1 동안 +/- 1일의 윈도우 및 주기 2부터 시작해서 +/- 3일의 윈도우로 투여할 수 있다.
w 종양 평가: CT-스캔 또는 자기 공명 조영(MRI) 및 임상적으로 필요한 임의의 다른 검사는 기준선에(IMP 투여의 28일 +/- 7일 이내), 24주까지 IMP 투여 후 8주(-/+ 7일)마다, 이어서 12주(-/+ 7일)마다 그리고 마지막 주기에 이미 수행된 경우를 제외하고, 연구 개입 종료 시, 질환 상태를 평가하기 위해 수행한다. 진행성 질환 없이 연구 개입을 중단한 환자는 진행성 질환이 문서화될 때까지 12주마다 추적한다. 종양 평가를 반복하여 부분 또는 전체 반응뿐만 아니라 진행성 질환(최초 문서화된 반응 후 적어도 4주)을 확인한다. 내장/심부 림프 병소를 갖지 않는 참여자에 대해서는, 전이성 질환의 임상 징후가 없는 경우 24주에, 그리고 마지막 주기에 이미 수행되지 않은 경우 EOT 시 복부 및 흉부의 방사선학적 종양 평가를 수행한다. 임상 징후 또는 주로 간 기능 테스트의, 실험실 비정상 시 잠재적인 전이성 질환을 배제하기 위해 간헐적 초음파측정(USG) 또는 임상적으로 필요한 평가를 고려할 수 있다.
x 치료 종료(마지막 치료 후 30 ±5일): 연구 마지막 주 동안 수행되지 않은 경우 치료 종료 평가를 수득한다.
y 질환 상태에 대한 연구-후 추적: 아직 또 다른 항암 치료법으로의 치료를 시작하지 않은, 치료 방문 종료 시 질환 진행이 문서화되지 않은 참여자는 또 다른 항암 치료법의 개시, 질환 진행, 사망, 또는 연구 컷오프일(중 첫 번째 때)까지 3개월 추적 방문을 진행한다.
[표 3]
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Figure pct00031
a PK를 위한 혈액 샘플을 주기 1, 1주차의 용량-전 및 IMP 투여 후 1시간, 2시간, 6시간, 24시간, 48시간, 및 96시간 또는 120시간에 모든 등록 참여자에서 사이토카인 RNA 혼합물-인코딩된 사이토카인의 표적 발현 평가를 위해 수집한다. 용량 증량상에 대해 주기 1, 2주차에, 샘플을 용량-전 및 용량 후 2시간, 6시간, 24시간, 및 48시간에 수집한다; 용량 확대상에 대해서는, 주기 1, 2주차 샘플수집을 용량-전, 용량 후 6시간, 및 24시간에만 수행한다. 주기 1, 3주차 및 후속 주기에 대해서는 각주 b 를 참고한다. 샘플을 또한 종양 생검 직전, EOT 및 첫 번째 추적 방문 시 수집한다. 추가 정보는 연구 실험실 매뉴얼에 상세히 제공된다. 두 번째 연구 컷오프일(본원 참고) 후에는 PK 샘플을 수집하지 않는다.
b PK를 위해, 주기 3, 1주차(즉, 첫 번째 투여로부터 9주차)에 대해, 주기 1, 1주차에 대한 일정을 반복한다. 주기 3 이후, PK 샘플수집은 모든 홀수 주기의 1주차의 0시간 및 6시간에 수행한다. 주기 3 이후, 이용 가능한 데이터가 충분한 것으로 고려되면, 홀수 주기의 PK 샘플을 지원사의 통지에 의해 생략할 수 있다.
c 면역 평가 및 순환 인자를 위한 혈액 샘플: 혈액 샘플을 모든 참여자에서 주기 1, 1주차 및 2주차의 용량-전, 6 hr 및 24 hr에, EOT, 및 FU 시 수집하여 IFNγ 및 IP10을 포함하는 전신 면역 조절을 평가한다. 추가 정보는 연구 실험실 매뉴얼에 상세히 제공된다.
d 주기 3, 1주차에만, 면역 평가 및 순환 인자를 위해 주기 1, 1주차에 대한 샘플수집 일정을 반복한다. 주기 3 이후, PDy 샘플수집은 모든 홀수 주기의 1주차 0 hr 및 6 hr에 수행한다. 연구의 단독치료법 부분 동안에는 짝수 주기 동안 PDy 사이토카인을 위한 혈액 샘플수집을 수행하지 않는다.
e 유전 분석을 위한 혈액을 사용하여 생식계열 DNA 서열 및 HLA 유형분석을 확립한다.
f 혈액 샘플(백혈구성분채집술 또는 80 ㎖의 혈액)을 주기 1, 1주차 용량-전, 주기 2, 2주차(즉, 주기 1에서 용량 후 5주차) 용량 전, 및 EOT 시 항원 특이적 T-세포의 분석을 위해 수집한다. 상기 분석은 단독치료법 증량상에서 흑색종을 가진 참여자에 대해서만 그리고 단독치료법 확대상에서 모든 참여자(흑색종)에 대해 수행할 것이다.
g 면역 평가를 위한 종양 생검: 생검을 스크리닝 기간 동안(주기 1, 1일차의 IMP 투여 전), 5주 내지 8주차에, 그리고 주기 6에 또는 질환 진행 시(중 더 빠른 때) 수집하여, 면역 조절을 평가한다. 종양 트랜스크립토믹스(RNA 서열분석), 게노믹스, 신-항원, 및 TIL 단리(흑색종 환자에서만 확대)도 샘플이 이용 가능한 경우(본원 참고) 수행할 수 있다. 흑색종 환자의 경우에만, 5주 내지 8주에 수행된 단회 종양 코어 생검을 TIL 단리를 위해 한정한다. 이는 제한된 수의(성공적인 TIL 단리를 갖는 10명 이하의 환자를 목표로) 선택된 흑색종 환자(단독치료법에 대한 확대 및 조합 치료법 확대의 코호트 A에서만)에 대해 적용된다. 이는 추가적인 생검이 아닐 것이지만, 대신에 게노믹스 평가를 위해 한정된 샘플을 TIL 단리를 위해 사용할 것이다(특별한 조건 하에-포르말린 고정되지 않고 취급됨). 상기 종류의 샘플 및 테스트는 치료 연구자에 의해 결정되는 바에 따라 치료에 대한 반응의 임상 징후(종양 크기 감소 및/또는 종양 부위에서의 홍반)를 갖는 환자에 적용된다.
h 사이토카인 RNA 혼합물-인코딩된 사이토카인에 대한 항체의 발생을 모니터링하기 위한 혈장 샘플을 주기 1, 3, 6, 9, 12의 1일차 용량-전 및/또는 EOT 시, 및 FU 시(최종 IMP 투여 후 90일차) 수집한다. 참여자가 추적 방문을 위한 연구를 계속하는 경우 이들 시점 이후의 추가 수집은 3개월마다이다. 두 번째 컷오프일 후 ADA 샘플을 수집하지 않는다.
[표 4]
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Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
a 평가: 달리 시사되지 않는 한, 연구 약물의 투여 전에 평가를 수행한다. 결과는 다음 용량의 투여 전에 연구자가 검토한다. 면역조직화학, 게노믹스, RNA-서열분석, 및 신-항원 분석을 위해 종양 생검을 수집한다.
b 세미플리맙과의 조합에서 주기는 21일이며, 사이토카인 RNA 혼합물은 매주 종양내 투여하고 세미플리맙은 3주 1회 350 ㎎의 고정 용량으로 정맥내 투여한다.
c 인구통계: 연령, 성별, 인종, 및 민족이 포함된다. 의학적/수술 이력: 이전 병리 및 수술 관련 이력이 포함된다. 질환 이력: 진단 시 및 연구 진입 시의 단계, 그리고 이전의 항-종양 치료법(유형, 지속기간, 중단 사유 및 치료법에 대한 반응)이 포함된다. 또한, 종양 유형에 따른 특정 돌연변이.
d 매 주기 첫 번째 날 치료 전에 체중을 측정한다.
e 신장은 기준선 동안에만 측정한다.
f 활력 징후에는 체온, 혈압, 심박수, 호흡률이 포함된다. 또한, 맥박 산소측정법을 연구의 조합 치료법 부분에서의 참여자에 대해 기준선에서 평가한다. 급성 독성에 대해 평가하기 위해 참여자를 모니터링하면서 각각의 새로운 용량 수준에서 C1D1 동안 각각의 24시간 원내 입원 기간 동안 6시간 마다 활력 징후를 확인한다. 24시간 원내 입원 기간 동안에는 맥박 산소측정법이 요구되지 않는다.
g 신체 검사에는 심혈관계, 소화계, 중추신경계, 호흡계, 및 조혈계(간비대, 비장비대, 림프절병증), 및 피부를 포함하는 주요 신체 시스템의 검사가 포함된다. 증상 및 징후는 이들이 첫 번째 IMP 투여 시 여전히 존재하는 경우에만 AE로서 eCRF에 보고한다.
h 중등도 약리 효과(예로, 사이토카인 RNA 혼합물 주사 종양 병소의 홍반, 부종 또는 편평화)가 DL3 후 일어날 것으로 예상되므로, 단독 증량의 DL4부터 시작해서, 조합 증량에서 첫 번째 DL부터 시작해서 그리고 확대상 동안 컬러 디지털 사진이 의무적이다. 사이토카인 RNA 혼합물의 첫 번째 용량 전 스크리닝 시 및 표재 및/또는 가시적 피하 주사 병소로부터의 방사선학적 종양 평가 시 전반적 질환 상태를 문서화하고 반응을 문서화하기 위해 디지털 사진이 의무적이다. 또한, 스크리닝 및 종양 평가 윈도우 간에 다른 사이토카인 RNA 혼합물이 잠재적으로 유도한 변화, 예컨대 피부 홍반 및/또는 부종을 포착하기 위해 ad hoc 컬러 디지털 사진을 촬영한다. 임상 장소에서 수집한 모든 자료는 연구 참조 매뉴얼에 따라 검토를 위해 지원사와 체계적으로 공유한다.
i 가임 여성에 대해 혈청 임신 테스트를 수행한다. 기준선 평가 시 7일 윈도우가 허용 가능하다.
j 혈액 혈액학: 헤모글로빈, 적혈구용적률, 감별 WBC(절대 호중구수[ANC] 포함), 혈소판수. 이들 테스트는 각각의 IMP 투여 전에 수행한다(-1일 윈도우가 허용 가능함). 등급 4 호중구감소증 시, 0.5×109/ℓ 이상의 ANC까지 2일 내지 3일마다, 이어서 회복 시까지 매주 ANC를 평가한다. 기준선에서 비정상인 경우, 주기 1, 1일 평가는 IMP 투여의 2일 내에 수행한다.
k 응고(-1일 윈도우가 허용 가능함): 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT), PT, 국제 표준화 비율(INR), 피브리노겐(및 스크리닝 시 D-이량체). 기준선에서 비정상인 경우, 주기 1, 1일 평가는 IMP 투여의 2일 내에 수행한다.
l 혈청 화학(-1일 윈도우가 허용 가능함): 간 기능 테스트: AST, ALT, 총 빌리루빈, 직접적 빌리루빈, 알칼리성 포스파타제(ALP). 신장 기능 테스트: 요소 또는 BUN & 크레아티닌, 및 요구되는 경우(크레아티닌이 1.0x ULN 내지 1.5x ULN인 경우) 추정 CrCL의 결정. 전해질: 나트륨, 칼륨, 총 칼슘, 인, 클로라이드, 마그네슘, 바이카보네이트 및 요산. 기타: 글루코스, 락테이트 탈수소효소(LDH), 알부민, 총 단백질, 및 아밀라제. 간 기능 테스트, 신장 기능 테스트, 전해질, 글루코스, LDH, 알부민 및 총 단백질은 임상적으로 필요하지 않는 한, IMP 투여 전에 수행한다(-1일 윈도우가 허용 가능함). 등급 3 이상의 간 기능 비정상 테스트 시, 기준선 값으로의 회복 시까지 2일 내지 3일마다 추가 테스트를 반복한다. 주기 1, 1일 혈청 화학 평가는 기준선에서 비정상인 경우, IMP 투여 2일 내에 수행한다.
m 갑상샘 자극 호르몬(TSH), 자유 티록신(자유 T4) 항-핵 항체(ANA), 및 류마티스 인자(RF)를 세미플리맙 투여와 함께 안전성에 대해 평가한다.
n 종양 돌연변이 부담(TMB)을 연구의 조합 치료법 부분에서의 참여자에 대해서만 기준선에서 평가한다.
o 혈청 C-반응성 단백질(CRP), 페리틴, 및 이차 혈장 사이토카인(인터류킨-6 및 인터페론-알파 포함; 본원 참고)은 특정된 시점에 그리고 CRS 등급 2 이상의 증상 발생 시 수집한다. 혈청 CRP 및 페리틴 샘플은 주기 1 동안 각각의 연구 개입 직전(D1) 및 24 hr(D2)에(각각의 주 1 내지 3 동안) 및 주기 3, 1주 동안 수집한다. 다른 연구 개입일에는, 용량-전 샘플만 수집한다; 등급 2 이상의 CRS 증상 출현 시에는 항상 추가 샘플을 인출한다. 주기 1 및 3에, 그리고 EOT 시에만 이차 혈장 사이토카인의 일상적 샘플수집을 수행한다. 주기 1, 1주 및 2주, 및 주기 3, 1주차의 용량-전 및 사이토카인 RNA 혼합물 투여 후 6시간 및 24시간에; EOT 시; 및 등급 2 이상의 CRS 증상 시 샘플을 수집한다.
p 12-전극 ECG: 주기 1, 1일차, 주기 3, 1일차, 주기 7, 1일차의 스크리닝 시 및 치료 전, 및 EOT, 그리고 임상적으로 필요한 경우 수행해야 한다. 초음파심전도 또는 MUGA 스캔은 스크리닝 시에만 수행한다.
q 일산화탄소에 대한 폐의 확산능(DLCO)를 이전에 블레오마이신으로 치료받은 림프종을 갖는 참여자에 대해 기준선에서 수행한다.
r 골수 흡입물: 림프종을 갖는 환자에 대해서만.
s FDG-PET-CT/CT: Lugano 분류에 따라 림프종을 갖는 환자에 대해서만 적용 가능한 FDG PET는 CR 및 PD를 확인하기 위해 IMP 투여의 28일(-7일) 내에 그리고 대략 12주(± 7일)마다, 그리고 임상적으로 필요한 바에 따라 수행해야 한다.
t 뇨분석: 딥스틱에 의한 오전 스팟 상의 딥스틱(정성적) 테스트를 기준선에 그리고 각각의 IMP 투여 전에 및 EOT 시 수행한다. 오전 스팟 소변 상에서 백혈구 및 적혈구에 대한 정량적 뇨분석을 기준선에, 불균일한 주기로, 치료 종료 시, 및 딥스틱 테스트(정성적)에서 비정상인 경우 수행한다. ++(딥스틱) 이상의 단백뇨인 경우, 단백뇨/24 hr 소변 수집에 의한 단백뇨 정량을 수행한다.
u 소변 바이오마커: 신장 손상 분자-1(KIM-1), 소변 마이크로알부민, 및 소변 크레아티닌(스팟 소변에서)을 주기 1, 1일차의 용량-전(사전 7일 이내가 허용 가능함), 첫 번째 IMP 투여 후 24 hr, 및 첫 번째 IMP 투여 후 8일차의 용량-전에 평가한다.
v 기준선에 그리고 치료법 동안 눈 증상 시 셔머(Schirmer's) 테스트를 포함하는 안과학적 검사를 수행한다. 각 주기의 1일에 눈 및 시각적 증상을 평가한다.
w 유해 사례 평가: 유해 사례의 수집을 위한 관찰 기간은 사전 서면 동의서(ICF)의 서명으로부터 연구 약물의 최종 투여 30일 후까지 연장된다. 심각한 유해 사례는 프로토콜에 기재된 바와 같이 평가하고 보고한다. EOT 방문 후, 진행 중인 SAE 및 AESI, 관련 AE, 및 새로운 관련 AE를 안정화, 회복, 또는 추가 치료법의 개시까지 추적해야 한다. 사이토카인 RNA 혼합물과 세미플리맙으로의 치료 종료(EOT) 후, 아직 또 다른 IMP를 이용하는 후속 임상 시험에 등록하지 않았거나 임의의 다른 표준 케어 치료법을 시행받은 시험 참여자는 하기 연구 절차로 신장 손상에 대해 2주마다 연속 모니터링을 거친다: 신장 기능 테스트[요소 또는 BUN & 크레아티닌, 및 요구되는 경우(크레아티닌이 1.0x ULN 내지 1.5x ULN인 경우) 추정 Cr CL의 결정], 뇨분석(오전 스팟 소변 상에서 백혈구 및 적혈구에 대한 정량적 뇨분석을 정성적 딥스틱 테스트에서 비정상 시 수행한다. ++ 이상(딥스틱)의 단백뇨인 경우, 단백뇨/24 hr 소변 수집에 의한 단백뇨 정량을 수행하고 소변 바이오마커(신장 손상 분자-1(KIM-1), 소변 알부민-대-크레아티닌 비)를 용량-전에 이어 첫 번째 IMP 투여 8일 후 테스트한다.
x 병행 투약 평가: 병행 투약은 연구 약물의 최초 용량 14일 전부터 연구 약물의 최종 투여 30일 후, 진행 중인 연구-약물 관련 유해 사례의 해소 시까지, 또는 또 다른 항암 치료법이 시행되는 경우 기록한다.
y 사이토카인 RNA 혼합물 투여: 참여자는 연구 프로토콜에서 특정된 바와 같은 예비투약(들)을 투여받을 수 있다. 주기 1, 1일차의 각각의 새로운 용량 수준에서, 참여자를 급성 독성을 평가하기 위해 병원에서 적어도 24 hr 동안 모니터링한다. 후속 투여 시, 참여자는 연구자 재량으로 최대 24 hr의 선택적 입원을 포함하여 4 hr 내지 6 hr 동안 관찰을 거친다. 공동-투여일에는, 사이토카인 RNA 혼합물을 세미플리맙 투여의 완료 후 투여한다. 사이토카인 RNA 혼합물은 주기 1 동안 ± 1일의 윈도우 및 주기 2부터 시작해서 ± 3일의 윈도우로 투여할 수 있다.
z 세미플리맙은 3주 주기로 연구의 조합 치료법 부분에서 사이토카인 RNA 혼합물과 조합되어 투여된다. 세미플리맙은 각주y에서 언급된 바와 같이, 사이토카인 RNA 혼합물 전에 투여해야 한다.
aa 종양 평가: CT-스캔 또는 자기 공명 조영(MRI) 및 임상적으로 필요한 임의의 기타 검사는 기준선에(IMP 투여의 28일 -7일 이내), 24주까지 IMP 투여 후 9주(± 7일)마다, 이어서 12주(± 7일)마다 그리고 마지막 주기에 이미 수행된 경우를 제외하고, 연구 개입의 종료 시, 질환 상태를 평가하기 위해 수행한다. 진행성 질환 없이 연구 개입을 중단한 환자는 진행성 질환이 문서화될 때까지 12주마다 추적한다. 종양 평가를 반복하여 부분 또는 전체 반응뿐만 아니라 진행성 질환(최초 문서화된 반응 후 적어도 4주)을 확인한다. 내장/심부 림프 병소를 갖지 않는 참여자에 대해서는, 전이성 질환의 임상 징후가 없는 경우 24주에, 그리고 마지막 주기에 이미 수행되지 않은 경우 EOT 시 복부 및 흉부의 방사선학적 종양 평가를 수행한다. 임상 징후 또는 주로 간 기능 테스트의, 실험실 비정상 시 잠재적인 전이성 질환을 배제하기 위해 간헐적 초음파측정(USG) 또는 임상적으로 필요한 평가를 고려할 수 있다.
bb 치료 종료(마지막 치료 후 30 ±5일): 연구 마지막 주 동안 수행되지 않은 경우 치료 종료 평가를 수득한다.
cc 질환 상태에 대한 연구-후 추적: 아직 또 다른 항암 치료법으로의 치료를 시작하지 않은, 치료 방문 종료 시 질환 진행이 문서화되지 않은 참여자는 또 다른 항암 치료법의 개시, 질환 진행, 사망, 또는 연구 컷오프일(중 첫 번째 때)까지 3개월 추적 방문을 진행한다.
[표 5]
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
약어: SOI: 세미플리맙 주입 시작; EOI: 세미플리맙 주입 종료
a 사이토카인 RNA 혼합물은 3주 주기로 투여한다. 세미플리맙은 3주 주기로 연구의 조합 치료법 부분에서 사이토카인 RNA 혼합물과 조합되어 투여한다(즉, 세미플리맙의 투여일은 주기 1, 1일차, 주기 2, 1일차 및 후속된다). 공동-투여일에, 세미플리맙을 먼저 정맥내 투여한 후, 사이토카인 RNA 혼합물을 종양내 투여해야 한다.
b 사이토카인 RNA 혼합물 PK를 위해, 조합 치료법 증량상에서 모든 참여자가 조밀한 샘플수집을 거친다. 증량상 코호트 A, B, C, 및 D에서는 각각의 코호트의 처음 10명의 참여자만 조밀한 샘플수집(본원 참고)을 거친다(증량상의 나머지 참여자는 드문 샘플수집을 거친다). 주기 3 이후, PK 샘플수집은 모든 홀수 주기의 1주차의 0시간 및 6시간에 수행한다; 그리고 첫 번째 투여 후 5주 내지 8주차 및 주기 6에, PK 샘플수집은 종양 생검 직전에 수행한다. 다른 주기 동안에는 샘플수집을 수행하지 않는다. 샘플은 또한 EOT 시 및 첫 번째 추적 방문 시 수집한다. 추가 정보는 연구 실험실 매뉴얼에 상세히 제공된다. 두 번째 연구의 컷오프일 후에는 PK 샘플을 수집하지 않는다.
c 사이토카인 RNA 혼합물 PK를 위해, 드문 샘플수집은 조합 치료법 확대상 코호트 A, B, C 및 D에서 처음 10명의 참여자들 이후 참여자에 대해서만 수행한다. 주기 3 이후, PK 샘플수집은 모든 홀수 주기의 1주차의 0시간 및 6시간에 수행한다; 그리고 첫 번째 투여 후 5주 내지 8주차 및 주기 6에, PK 샘플수집은 종양 생검 직전에 수행한다. 다른 주기 동안에는 샘플수집을 수행하지 않는다. 샘플은 또한 EOT 시 및 첫 번째 추적 방문 시 수집한다. 두 번째 연구 컷오프일 후에는 PK 샘플을 수집하지 않는다.
d 참여자가 조밀한 샘플수집 PK 하위세트에 속하는 경우, 조밀한 샘플수집을 위한 일정을 따른다; 참여자가 조밀한 샘플수집 하위세트의 일부가 아닌 경우, 드문 샘플수집을 위한 일정을 따른다. 조합 치료법 연구 부분에서 세미플리맙 PK를 주기 1, 1주차, 주기 2, 1주차 및 모든 후속 홀수 주기에 대해 측정한다. 주기 3 동안, 세미플리맙을 위한 혈액을 SOI 및 EOI 시에만 수집한다. 모든 SOI 샘플에 있어서, 세미플리맙 PK 샘플은 엄격하게 세미플리맙 주입의 시작 전(15분 이내)에 수집한다. 모든 EOI 샘플에 있어서, 세미플리맙을 위한 혈액은 세미플리맙 주입의 실제 종료 직전(5분 이내)에 수집해야 한다.
e 주기 1의 종료 시 연구로부터 철회한 환자의 경우에는 세미플리맙의 두 번째 주입이 투여되지 않더라도, 세미플리맙 샘플에 대한 주기 2, 1일차 주입-전 혈액(0 H)을 수집한다.
f 면역 평가 및 순환 인자를 위한 혈액 샘플: 혈액 샘플을 모든 참여자에서 주기 1, 1주차 및 2주차의 용량-전, 6 hr 및 24 hr에, EOT 시, 및 FU 시 수집하여 IFNγ 및 IP10을 포함하는 전신 면역 조절을 평가한다. 추가 정보는 연구 실험실 매뉴얼에 상세히 제공된다.
g 주기 3, 1주차에만, 주기 1, 1주차에 대한 샘플 일정을 면역 평가 및 순환 인자에 대해 반복한다. 주기 3 이후, PDy 샘플수집은 모든 홀수 주기의 1주차 0 hr 및 6 hr에 수행한다. 주기 2 또는 임의의 짝수 주기 동안에는 PDy 사이토카인 샘플을 위한 혈액을 수집하지 않는다.
h 유전 분석을 위한 혈액을 사용하여 생식계열 DNA 서열 및 HLA 유형분석을 확립한다.
i 면역 평가를 위한 종양 생검: 페어링된 생검을 스크리닝 기간 동안(주기 1, 1일차의 IMP 투여 전), 5주 내지 8주차에, 그리고 주기 6에 또는 질환 진행 시(중 더 빠른 때) 수집하여, 면역 조절을 평가한다. 종양 트랜스크립토믹스(RNA 서열분석), 게노믹스 신-항원, 및 TIL 단리도 샘플이 이용 가능한 경우 수행할 수 있다. 확대 동안, 흑색종 환자의 경우에만, 5주 내지 8주차에 수행된 단회 종양 코어 생검을 TIL 단리를 위해 한정한다. 이는 제한된 수의 선택된 흑색종 환자(성공적인 TIL 단리를 갖는 10명 이하의 환자를 목표로 함)에 적용된다. 이는 추가적인 생검이 아니지만, 대신에 게노믹스 평가를 위해 한정된 샘플을 TIL 단리를 위해 사용한다(특별한 조건 하에-포르말린 고정되지 않고 취급됨). 상기 종류의 샘플 및 테스트는 치료 연구자에 의해 결정되는 바에 따라 치료에 대한 반응의 임상 징후(종양 크기 감소 및/또는 종양 부위에서의 홍반)를 갖는 환자에 적용된다. 종양 생검은 종양 이용 가능성 및 의학적 타당성에 따라, 모든 참여자에 있어서 의무적이다. 추가 정보를 연구 매뉴얼에 제공한다.
j 혈액 샘플(백혈구성분채집술 또는 80 ㎖의 혈액)을 확대상에서만 코호트 A(흑색종 PD-1/PD-L1 난치성)에서 주기 1, 1주차 용량-전, 주기 2, 3주차 용량-전, 주기 1, 1주차의 최초 투여 후 5주차, 및 EOT 시 항원 특이적 T-세포의 분석을 위해 수집한다.
k RNAseq을 위한 혈액 샘플수집: 말초혈을 사용하여 테스트용 RNA를 추출한다.
l 사이토카인 RNA 혼합물-인코딩된 사이토카인에 대한 ADA의 발생을 모니터링하기 위한 샘플을 주기 1, 5, 9, 13, 17에 대해 주입-전 및/또는 EOT 시, 그리고 최종 IMP 투여 후 90일에 수집한다. 이들 시점 이후의 추가 수집은 참여자가 추적 방문을 위한 연구를 계속하는 경우 3개월마다이다. 두 번째 컷오프일 후 ADA 샘플을 수집하지 않는다.
m 세미플리맙에 대한 항체의 발생을 모니터링하기 위한 샘플을 주기 1에 대해 주입-전(기준선) 및 주기 5, 9, 13, 17에 대해 주입-전, EOT, 및 FU 시 수집한다. ADA 샘플을 보관하고 연구 종료 경 분석할 수 있다. 참여자에서 면역-관련 유해 사례, 즉각적 치료를 필요로 하는 과민성 반응, 및/또는 아나필락시스의 발생 시, 혈액 샘플을, 가능한 경우, 혈청 중 기능적 세미플리맙 농도의 분석 및 세미플리맙에 대한 ADA 평가를 위한 사례의 개시 및 종료 시 또는 그 근처에 수집한다.
치료 목적 및 종결점을 표 6에 나타낸다.
[표 6]
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
실시예 1.2 - 증량상 및 확대상에서 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 증량 및 용량 확대
사이토카인 RNA 혼합물의 용량 증량 및 용량 확대 연구를 임상적, 약동학[PK], 약력학[PDy] 및 바이오마커 평가에 기반하여 증량상에서 진행성 고형 종양 및 확대상에서 진행성 흑색종을 갖는 환자에서 수행하여, 단독치료법으로 및 세미플리맙과 조합되어 종양내 투여되는 경우 사이토카인 RNA 혼합물의 안전성 및 예비 활성을 평가하고, 단일 제제로서 및 세미플리맙과 조합된 약물의 최적 용량을 정의한다.
스크리닝은 참여자가 이의 사이토카인 RNA 혼합물의 첫 번째 용량을 받기 전에 최대 28일 동안 수행하며, 평가는 4주 주기의 1일, 8일, 15일, 및 22일차에 종양내 약물 투여 및 세미플리맙(3주마다 투여될 세미플리맙)과 조합되어 3주 주기로 매주를 포함하는 일정으로 수행한다. 단독치료법 및 조합에서, 질환 진행 또는 영구 중단을 야기하는 AE 시까지 치료를 계속한다; 다른 경우에는 최대 1년 치료(단독치료법에 대해 13주기 및 조합 치료법에 대해 17 주기)를 계속한다. 조합 치료법 증량 및 확대상에서, 세미플리맙은 사전-정의된 용량으로 매주 종양내 투여되는 사이토카인 RNA 혼합물과 조합된, 350 ㎎ Q3W의 고정된 권장 용량으로 정맥내 투여된다. 조합 치료법에서, 사이토카인 RNA 혼합물은 세미플리맙 주입의 종료 시 투여될 것이다. 단독치료법 증량상에서, 처음의 두 용량 수준(DL)에 대한 단일-참여자 용량 증량을 증량상에서 사용한 후, 합리적 설계를 사용하여 더 높은 용량으로 증량한다.
실시예 1.2A. 용량 증량상
단독치료법에서의 및 세미플리맙과 조합된 용량 증량 동안, 항-PD-1/PD-L1에 기반한 사전 치료법에 실패한 종양내 주사가 가능한 진행성 고형 종양을 갖는 참여자가 등록한다. 항-PD-1/PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않는 고형 종양(흑색종이 아님)을 갖는 참여자도, 연구자의 재량에 따라, 다른 적합한 치료 옵션이 없는 경우 적격이다. 참여자를 단독치료법으로 또는 세미플리맙과 조합되어 매주 투여되는 사이토카인 RNA 혼합물의 종양내 주사로 치료한다.
단독치료법에서, 시작 용량 수준(DL1)은 인간 이종이식편 모델에서 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인의 PK를 검사하는 다양한 전임상 연구 결과 및 모델링 및 시뮬레이션을 사용하여 마우스로부터 인간까지의 상대성장 스케일링으로부터 결정한다.
실험에는 처음 두 DL(DL1 및 DL2)에 대한 가속화된 용량 증량 설계가 포함되며, 여기서 1명의 참여자를 DL에 의해 치료하고, 임의의 IMP-관련 등급 2 이상의 AE 또는 용량 제한 독성(DLT)의 관찰 시까지 두 용량 수준 간 증량을 적용한다. 처음 두 DL 중 어느 하나에서 IMP-관련 등급 2 이상의 AE가 관찰되는 경우, 2명의 추가 참여자를 동일한 DL로 치료하고 합리적 적응 설계를 사용하여 용량 증량을 진행한다. 처음 두 DL에서 IMP-관련 등급 2 이상의 AE 또는 DLT가 일어나지 않는 경우, LD3부터 적응 용량 증량을 시작한다. 후속 코호트에 대한 용량 증량(DL3 내지 DL8)을 진행한다. 다음 DL로의 등록은 이전 DL로 치료받은 적어도 3명의 참여자를 적어도 1주기의 지속기간(즉, 28일) 동안 추적하였고 DLT가 없이 DLT 평가에 대해 평가 가능하기 전에는 진행하지 않는다. 참여자-내 용량 증량은 허용되지 않는다.
조기 유효성 신호가 안전한 것으로 표명되는 용량 수준에서 나타나면, 이를 추가 확대하여 유효성을 확인할 수 있다. 용량 증량은 더 낮은 수준의 용량 확대와 병렬로 계속된다.
조합 치료법에서, 세미플리맙을 포함하는 사이토카인 혼합물의 용량 증량은 세미플리맙과의 조합을 위한 사이토카인 혼합물의 의도되는 시작 용량이 DLT에 대해 평가되었고 사이토카인 혼합물 단독치료법에서의 DLT 관찰 기간 후 확인된 경우, 진행 중인 단독치료법 용량 증량과 병렬로 시작한다. 세미플리맙과의 조합에서 사용하기 위한 사이토카인 혼합물의 시작 용량은 사이토카인 혼합물 단독치료법의 DL이 확인되었고(단독치료법 용량의 DLT 관찰 기간[28일]이 완료된) 단독치료법 용량으로의 PK, PDy, 및/또는 임상 반응(전신 또는 국소)의 징후를 관찰한 경우 선택한다.
세미플리맙과 조합된 사이토카인 혼합물의 상기 시작 용량은 단독치료법에서 투여되는 사이토카인 혼합물의 MTD 또는 최대 투여 용량(MAD)의 1용량 아래이거나, 단독치료법에서 확인된 DL이다. 전신 임상 반응은 RECIST 1.1에 따른 항-종양 반응 정보의 평가에 의해 단독치료법에서 종양내 투여되는 사이토카인 혼합물의 객관적 반응률을 측정하여 평가한다. 국소 임상 반응은 RECIST 1.1 기준뿐만 아니라 병소의 편평화 및 염증의 징후를 포함하는 국소 반응의 추가적 징후에 의해 측정한다. 사이토카인 혼합물은 350 ㎎ Q3W의 고정된 권장 용량으로 정맥내 세미플리맙과 조합되어 투여한다.
세미플리맙과 조합된 용량 증량은 적응 용량 증량과 함께 진행한다. 용량은 조합 치료법의 동일한 DL에 등록하기 전에 단독치료법에서 먼저 명확히 한다.
세미플리맙과 조합된 용량 증량은 적응 용량 증량과 함께 진행한다. 용량은 조합 치료법의 동일한 DL에 등록하기 전에 단독치료법에서 먼저 명확히 한다. 다음 DL로의 등록은 이전 DL로 치료받은 적어도 3명의 참여자가 조합으로 적어도 28일의 지속기간 동안 추적되기 전에는 진행할 수 없으며), DLT 없이 DLT 평가에 대해 평가 가능하다. 세미플리맙과 조합된 사이토카인 혼합물의 용량 증량에서 실제 샘플 크기는 관찰되는 DLT 및 실제로 탐색되는 용량 수준의 수에 따라 변할 수 있다(대략 18명 내지 36명의 DLT-평가 가능 참여자)
동일한 용량 수준으로 치료받은 첫 번째 및 두 번째 참여자 간에는 적어도 1주의 갭이 존재한다.
실시예 1.2B. 주사할 병소
모든 용량 수준(DL1 내지 DL8)은 표 5에 제공되는 병소 크기에 대한 가이드를 따른다. 참여자는 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST 1.1) 기준(포함 기준 I 05 참고)에 따라 표적 병소로 최소 1개의 측정 가능한 병소, 그리고 주사 및 종양 생검을 위한 최소 하나 이상의 피부/피하 병소(들)를 갖는다. 참여자는 주어진 용량 수준의 주사 부피를 위해 충분해야 하는 종양 병소의 크기에 기반하여 선택되며(표 5), 기준선에서뿐만 아니라 치료-중 평가로서 첫 번째 투여의 5주 내지 8주 간 하나의 병소의 생검이 고려된다.
증량상에서만, 비-표적 병소가 반응 평가의 신호를 허용하는 경우, 측정 가능한 병소를 갖지 않는 참여자를 연구 위원회의 동의를 받아 적격성에 대해 케이스별로 평가할 수 있다. 주사를 위해 점막 부위만을 갖는 환자의 등록은 기도 폐색의 위험을 최소화하기 위해 사이토카인 RNA 혼합물로 표재, 피하 및/또는 림프절 전이의 유의미한 염증이 관찰되지 않은 용량 수준으로만 수행한다.
실시예 1.2C. 치료
첫 번째 치료를 위해, 3개의 최소 병소 중, 하나의 측정 가능한 병소(피부, 내장 또는 림프절)는 RECIST 1.1 기준에 따른 측정을 위해 온전하게 놔두고 하나의 병소를 생검을 위해 사용한다. 주사할 병소가 계획된 용량 수준으로의 용량 투여에 영향을 주지 않고 생검을 위해 사용하기 충분히 큰 경우, 2개 병소가 적격성을 위해 충분하다. 최소 1개의 병소로 사이토카인 RNA 혼합물의 투여를 거친다(병소[들]의 크기는 참여자의 적격성에 대해 용량 수준별로 평가해야 함). 가장 큰 병소(들)에 먼저 사이토카인 RNA 혼합물을 주사한다. 나머지 병소(들)에 있어서, 최대 주사 부피를 사용할 때까지 주사 부피 등급은 병소 크기에 기반한다(아래의 표 7 참고).
[표 7]
Figure pct00044
모든 후속 치료(매주)에 있어서, 최대 주사 부피를 사용할 때까지 또는 모든 주사 가능한 병소(들)를 치료할 때까지 병소(들)의 주사는 병소 크기에 기반하여 부피 등급이 정해진다.
주사할 부피는 병소의 크기에 기반하며, 각각의 치료 방문을 위한 최대 주사 부피는 조합된 모든 주사 병소에 대한 DL을 위해 할당된 부피를 초과해서는 안 된다. DL8을 위해 허용되는 최대 주사 부피는 4 ㎖이다.
병소가 함께 클러스터링되는 경우, 이들은 상기 표 및 가이드에 따라 단독 병소로서 주사한다.
표 5에서 부피 및 병소 크기의 비에 기반하여 치료당 하나의 병소만 주사하는 것이 바람직하다. 하나의 병소만 주사할 수 없는 경우, 부피/용량을 여러 병소로 분할한다. 각각의 방문 시, 주사를 위한 병소는 먼저 가장 큰 병소로 시작하여 크기에 기반해서 우선시된다. 가장 큰 병소에는 병소 크기 및 용량 수준에 기반하여 최대 주사 부피를 주사한다. 부피를 모두 사용하지 않는 경우, 다음 병소는 병소 크기에 대해 허용 가능한 최대 주사 부피로 투여한다. 전체 용량 부피를 투여할 때까지 투여는 가장 큰 것부터 가장 작은 것까지 계속된다.
각각의 치료 방문 시 또는 전체 치료 과정에 걸쳐 모든 병소를 주사할 수 없는 경우, 이전에 주사된 및/또는 주사되지 않은 병소(들)를 후속 치료 방문 시 주사한다. 병소 당 사이토카인 혼합물 투여 상세사항은 전자 케이스 보고서(eCRF)에 수집한다.
실시예 1.2D. 용량 증량 결정
증량하는 결정은 임상적 안전성 결과를 고려한다. DLT 관찰 기간은 치료의 처음 4주(주기 1)이다. 참여자는 첫 번째 치료 주기(즉, DLT 기간) 동안에 소속 코호트의 계획된 사이토카인 혼합물 용량(단독치료법)의 적어도 70% 또는 계획된 사이토카인 혼합물 용량의 적어도 70% 및 계획된 세미플리맙 용량의 적어도 70%(조합 치료법)를 투여받고 1주기 동안 평가되는 경우, 또는 더 빨리 DLT가 일어나는 경우, DLT 평가에 대해 평가 가능한 것으로 고려된다. 용량 증량상에서 DLT 평가에 대해 평가 불가능한 참여자(예로, 주기 1, 28일 전의 조기 진행성 질환; 임의의 누락된 DLT 평가 파라미터)는 대체한다.
단독치료법: 처음 두 DL의 증량을 위해, 두 번째 DL은 첫 번째 참여자에 대한 DLT 관찰 기간이 IMP-관련 AE 등급 2 이상 또는 DLT 없이 완료된 후에 시작된다. 처음 두 DL 중 어느 것에서든 IMP-관련 AE 등급 2 이상 또는 임의의 DLT가 관찰되는 경우, 2명의 추가 참여자를 동일한 DL로 치료하고 적응 설계를 사용하여 용량 증량을 진행한다. 처음 두 DL에서 IMP-관련 AE 등급 2 이상이 일어나지 않는 경우, 적응 베이스 EWOC가 DL3부터 시작된다. 연구의 단독치료법 부분에서 DL2 또는 DL3으로의 등록은 DL1 또는 DL2에 등록한 환자를 28일 동안 추적하였고 IMP-관련 등급 2 AE 없이 AE 평가에 대해 평가 가능할 때까지 진행할 수 없다.
용량 증량은 MTD가 결정되자마자 중단한다. MTD가 결정되지 않는 경우, MAD가 달성될 때까지 용량 증량을 계속한다.
세미플리맙을 포함하는 조합 치료법: 처음의 가속화된 용량 증량 단계는 실시하지 않는다. 동일한 적응 합리적 설계를 단독치료법을 위해 사용한다.
실시예 1.2E. 용량 확대상
단독치료법: MTD/MAD에 기반하여, 확대상에 대한 전반적 안전성, 활성, 및 PK/PDy 데이터, 권장 용량을 결정한다.
항-PD-1/PD-L1에 기반한 이전 치료법에 실패한 진행성 흑색종을 갖는 최대 34명의 참여자가 MAD 또는 MTD에 등록하여 안전성(특히 임의의 누적 독성), 항-종양 활성, PDy, 및 PK 활성을 추가 평가한다.
세미플리맙을 포함하는 조합 치료법: 확대상을 위한 세미플리맙을 포함하여 투여되는 사이토카인 RNA 혼합물의 조합 용량은 조합 치료법 용량 증량상으로부터의 안전성 데이터 및 이용 가능한 PK 및/또는 PDy 데이터에 기반하여 결정한다. 조합에서의 용량 확대에는 후술되는 최대 4개 코호트(흑색종, CSCC, 및 HNSCC 종양을 갖는 환자 포함)가 포함된다; 모든 코호트(A, B, C, 및 D)에서의 등록은 병렬로 수행한다.
조합 치료법 확대상 코호트에는 하기가 포함된다:
· 코호트 A(사전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 실패한 진행성 흑색종 환자): 최대 40명의 참여자가 상기 코호트에 등록한다.
· 코호트 B(이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않은 흑색종 환자[항-PD-1/PD-L1 나이브]): 최대 28명의 참여자가 상기 코호트에 등록한다.
· 코호트 C(이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않은 CSCC를 갖는 환자[항-PD-1/PD-L1 나이브]): 최대 29명의 참여자가 상기 코호트에 등록한다.
· 코호트 D(이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않은 HNSCC 종양을 갖는 환자[항-PD-1/PD-L1 나이브]): 최대 59명의 참여자가 상기 코호트에 등록할 것으로 예상된다.
실시예 1.2F. 연구 기간의 지속기간
각각의 참여자에 대한 지속기간에는 최대 28일의 스크리닝 기간이 포함된다. 주기 지속기간은 단독치료법에 대해 28일이고 조합 치료법에 대해 21일이다. 첫 번째 주기의 완료 후, 상기 투약 요법이 안전한 것으로 고려되고 참여자가 임상적 이익을 달성하고 있는 경우, 참여자는 매주 동일한 DL로 사이토카인 RNA 혼합물의 추가 투여를 계속 받을 수 있다. 단독치료법으로 또는 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물로부터 이익을 얻는 참여자에 대한 예상 치료 기간은 진행일에 기반하여 변할 수 있다.
개입의 중단 후, 참여자는 최종 IMP 투여 후 30일(치료-종료[EOT] 평가를 위해) 및 90일(ADA 샘플을 위해)에 또는 또 다른 항암 치료법의 시작 전 중 더 빠른 시점에 복귀한다.
EOT 방문 후, 해소 또는 안정화(즉, 적어도 3개월 동안 임의의 변화 없이 진행되는 사례)까지 모든 진행 중인 관련 및 새로운 관련 AE를 모니터링하기 위해 추가적인 추적 방문이 필요할 수 있다. EOT 후, 안전성 추적 기간 동안, 해소 또는 안정화까지 보고하고, 모니터링하고, 추적할 사례는 하기와 같다: 상관관계와 무관하게 모든 진행 중인 AE, SAE, 또는 특별 관심 사례 및 관련 사례로 인한 사망을 포함하는, 관련된 것으로 고려되는 모든 새로운 AE, SAE, 또는 특별 관심 사례.
또한, 참여자가 진행 이외의 사유로 개입을 중단하는 경우, 질환 진행을 문서화하기 위해 진행 또는 또 다른 항-종양 치료의 개시, 또는 사망(중 제일 빠른 때)까지 3개월마다 추적 방문을 수행한다.
등록의 전체 중앙값 추정 지속기간은 대략 24개월이다. 사이토카인 RNA 혼합물로부터 이익을 얻는 참여자에 대한 치료 예상 지속기간은 진행일에 기반하여 변할 수 있다; 그러나 참여자별 치료의 중앙값 예상 지속기간은 단독치료법에서 9개월(스크리닝을 위한 1개월, 치료를 위한 5개월, 그리고 EOT 및 첫 번째 추적 방문을 위한 3개월) 및 조합 치료법에서 12개월(스크리닝을 위한 1개월, 치료를 위한 8개월, 및 치료 종료 추적을 위한 3개월)로 추정된다.
중단 규칙: 치료법의 30일 내의 임의의 사망(진행성 질환(PD)에 관련된 사망 이외) 또는 소정 용량 수준에 등록된 환자의 1/3 초과(예로 3명의 환자 중 2명)에서의 등급 4 TEAE 시, 사망 원인 및 독성의 적절한 평가가 연구 위원회에 의해 수행되고 교정 계획이 확립되기 전까지 시험 등록은 일지정지될 것이다.
실시예 1.2G. 시작 용량의 선택
사이토카인 RNA 혼합물: 시작 용량은 일반적으로 설치류 및 비-설치류 종에서 독성학 연구 결과에 기반하여 항암 화합물에 대해 확립된다. 사이토카인 RNA 혼합물은 종양내 주사를 통해 투여하며, 그 생물학적 활성은 투여 mRNA의 흡수 및 번역에 의존한다. 종양-비보유 설치류 및 비-설치류 종에서 전임상 독성학 연구를 수행하며, 대리 투여 경로가 종양내 투여 경로를 정확히 반영하지 않을 수 있다. 결과적으로, 설치류에서 동물의 10%(STD 10)에서의 중증 독성 용량의 1/10 및 관찰-유해-사례-부재-수준(NOAEL)의 국제 조화 위원회(ICH) S9 권고에 기반한 인간-최초 시작 용량의 결정을 위한 통상적 절차는 국소 투여된 종양내 mRNA 제제에 관련되지 않는다.
인간에 대한 시작 용량을 결정하기 위해, 생체내 실험을 인간 A375 흑색종 이종이식편을 보유하는 면역손상된 마우스에서 수행한다. A375 이종이식편에서 사이토카인 RNA 혼합물의 종양내 투여는 사이토카인 RNA 혼합물의 각각의 사이토카인 성분의 번역을 야기한다. 사이토카인 혼합물은 종양 내에서 국소적으로 발현되는 반면, 인코딩된 사이토카인은 분비되어 순환 내로 들어가 사이토카인에 대한 전신 노출을 야기한다. 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인의 PK 파라미터를 평가한다. A375 이종이식편에서 사이토카인 RNA 혼합물로 인코딩된 사이토카인의 혈청 PK 파라미터는 용량-의존적 발현 상관관계를 나타내었다.
마우스 및 인간 간에 사이토카인 RNA 혼합물로 인코딩된 사이토카인의 필적하는 종양 발현력을 가정하고, 마우스 내 개별 PK 모델을 상대성장측정을 사용하여 인간으로 스케일조정하고, 시뮬레이션을 수행하여 상이한 용량 수준의 사이토카인 RNA 혼합물에 대한 인간 전신 사이토카인 노출을 예측한다. 동물 대비 인간에서 약리학적 활성의 불확실성 및 사이토카인에 관련된 종간 차이로 인해, 넓은 안전성 경계를 적용하고, 인간 용량을 선택한다.
세미플리맙: Regeneron의 이전 임상 시험에 기반하여 350 ㎎ 투약 요법을 선택한다. Q3W 투약 간격을 선택하였다.
실시예 1.2H - 연구 종료 정의
참여자가 최대 1년까지 연구 개입의 모든 상(치료 종료 포함)을 완료한 경우, 또는 치료가 또 다른 사유로 인해 종결되고 참여자가 진행성 질환 시까지 추적 방문을 완료한 경우, 연구를 완료한 것으로 고려된다.
연구에 대해 2개의 컷오프일이 존재한다:
모든 참여자가 MTD/MAD의 결정을 위해 평가 가능한 DLT 데이터를 갖도록 단독치료법 또는 조합 치료법에 대한 첫 번째 시험 컷오프일은 각각의 용량 증량상에서 치료받은 최종 참여자의 주기 1 종료 시이다.
종양 반응을 평가하기 위해, 두 번째 컷오프일은 확대상에서 치료 상 최종 참여자가 2개의 기준선-후 종양 평가 또는 치료 종료 평가를 가질 때 중 먼저 일어나는 때이다.
용량 증량상 또는 확대상에서 치료받은 참여자가 두 번쩌 연구 컷오프 후 치료로부터 계속 이익을 얻는 경우, 참여자는 연구 개입을 계속할 수 있고(최대 1년의 치료 동안) 적용 가능한 경우, IMP-관련 AE, 임의의 SAE, 및 면역원성의 검정을 위한 혈액 샘플에 대해 평가를 거칠 것이다.
연구의 종료는 연구에서 최종 참여자의 최종 방문일로 정의된다.
실시예 1.3 - 연구 집단
실시예 1.3A - 포함 기준
참여자는 표 8에 나타낸 바와 같은 모든 하기 기준이 적용되는 경우에만 연구에 포함하기 위해 적격이다.
[표 8]
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
실시예 1.3B - 제외 기준
참여자는 표 9에 나타낸 바와 같은 임의의 하기 기준이 적용되는 경우 제외된다.
[표 9]
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
실시예 1.4 - 연구 개입
연구 개입은 연구 프로토콜에 따라 연구 참여자에게 투여하려는 임의의 연구 개입(들), 시판되는 제품(들), 위약, 또는 의학 장치(들)로 정의된다.
실시예 1.4A - 투여할 연구 개입(들)
[표 10]
Figure pct00054
a 사전정의된 예비투약이 모든 참여자에게 투여되지는 않을 것이지만, 일부 참여자에 대해서는 이차 예비투약이 권장될 수 있다.
사이토카인 RNA 혼합물은 연구 의약품이며 인간 사이토카인 IL-15sushi, IL-12sc, GM-CSF, 및 IFNα2b를 인코딩하는 1:1:1:1 중량비의 합성, 화학적으로 변형된 mRNA이다.
사이토카인 RNA 혼합물은 4주 주기로 주 1회(즉, 28일마다 4개 용량) 종양내 투여된다. 각각의 치료 주기 후, 종양내 주사 빈도는 매주 계속된다. 그러나, 연구 수행 동안, 용량 투여 빈도는 종양 부담 감소에 기반하여 덜 빈번한 투여로 감소시킬 수 있고, 이는 의도되는 용량의 투여를 방해할 수 있다.
투여 경로가 종양내 주사이므로, 급성 알러지 반응이 예상되지 않아서 모든 참여자에 대해 투여될 사전-정의된 예비투약은 존재하지 않는다; 그러나, 일부 참여자에 대해서는 예비투약이 권장될 수 있다. 예비투약으로 사용된 모든 약물은 병행 투약 페이지에 입력한다.
실시예 1.4A1 - 잠재적인 종양 용해 증후군(TLS)에 대한 관리 가이드라인
TLS의 경우, 모든 혈청 화학이 해소될 때까지 연구 치료(사이토카인 mRNA 혼합물)는 중지해야 한다. 정상 수화를 확인하고, 실험실 비정상, 유체 오버로드, 전해질 또는 산-염기 일탈을 교정한다. 관리는 현지 장소 가이드라인에 따라 수행해야 한다. 억제제(예로, 알로퓨리놀) 또는 유레이트 옥시다제(예로, 라스부리카제)의 사용이 허용된다. 신장 기능을 포함하는 TLS 합병증을 모니터링해야 하며, 해소 후 연구 치료를 전체 용량으로 재시행할 수 있다.
보통 TLS와 연관되는 실험실 비정상, 및 TLS와 연관될 수 있는 가능한 임상적 발현을 표 11에 제시한다.
[표 11]
Figure pct00055
a 교정된 칼슘 수준 ㎎/㎗ = 측정된 칼슘 수준 ㎎/㎗ + 0.8 x (4-알부민 g/㎗)
실시예 1.4B - 병행 치료법
참여자가 등록 시 받고 있거나 연구 동안 받는 임의의 투약(비처방 또는 처방 약, 비타민, 및/또는 허브 보충제 포함)은 사용 사유, 및 시작일과 종료일을 포함하는 투여일을 함께 기록해야 한다.
병행 투약은 연구 약물의 최초 용량 전 14일부터 연구 약물의 최종 투여 후 30일까지, 진행 중인 연구-약물 관련 유해 사례의 해소 시까지, 또는 또 다른 항암 치료법이 개시되는 경우 eCRF에 기록한다.
병행 투약은 하기 가이드라인에 따라, 케이스별로 고려될 수 있다:
· 전신 스테로이드 및 TNF-α 길항제는 IMP의 잠재적 이익을 약화시킬 수 있지만, 응급 상황에서는 치료 연구자가 이들 약물을 적용하는 것이 허용된다. 그럼에도 불구하고, 이에 대해 최대한 빨리 지원사와 소통해야 하며, 참여자가 연구 참여를 진행할 수 있는지 그리고 그 방식에 대해 공동 결정해야 한다.
· 가능한 경우, 코르티코스테로이드에 대한 대안을 항상 고려해야 한다. 코르티코스테로이드 또는 대체 스테로이드의 생리적 용량이 지원사와의 검토 후 허용된다. 흡입형 스테로이드 및 경구 미네랄로코르티코이드(예로, 기립성 저혈압 또는 부신피질 부족을 갖는 참여자에 대해 플루드로코르티손)의 사용은 허용된다.
- 참여자는 응급, 알러지 반응, 또는 유사 경우에 대해 급성으로 코르티코스테로이드를 투여받을 수 있다; 참여자는 연구 동안 프레드니솔론 7.5 ㎎/일 초과(PO 또는 IV) 또는 동등물로의 유지 치료법을 시행받지 못할 수 있다. 부신 부족에 대해 주어지는 동등한 생리적 용량의 코르티코스테로이드는 허용된다.
· 골수억제성 화학치료법으로의 병행 치료는 치료상 동안뿐만 아니라 치료가 시작되기 전 3주 또는 반감기의 5배 중 더 짧은 기간에 대해 모든 참여자에 대해 금지된다.
· 해열제(예로, 참여자가 38.5℃ 이상의 열이 나는 경우 1 g의 아세트아미노펜/파라세타몰)로의 병행 치료는 허용된다.
· 완화적 방사선치료법은 완화적 의도를 위해 통증 제어용으로 제공할 수 있다. 완화적 방사선치료법이 고려되고 있는 경우, 그리고 연구 중인 치료법의 재개 전에, 지원사에 고지하여 치료 전 사전 승인을 수득해야 한다. 조사되는 영역은 최대한 작아야 하며, 임의의 주어진 3주 기간에 20% 초과의 골수가 관여되어서는 안 된다. 이러한 모든 경우, 종양의 물리적 및 방사선학적 평가에 의해 종양 진행 가능성을 배제해야 한다. 유일한 평가 가능한 병소를 조사해야 하는 경우, 참여자는 연구 개입을 중단할 것이다. 조사되는 영역은 반응 평가를 위한 파라미터로 사용할 수 없다.
· 호흡곤란, 저혈압, 쌕쌕거림, 기관지연축, 빈맥, 감소된 산소 포화, 또는 호흡 곤란에 의해 발현되는 심각한 사례는 임상적으로 필요한 바에 따라 지지 치료법(예로, 산소 보충 및 β2 아드레날린성 작용제)으로 관리해야 한다.
· 암 이외의 병행 병에 대해 참여자가 섭취하는 임의의 배경 치료법(예로, 호르몬-대체 치료법, 스타틴, 항고혈압 투약)은 안정한 용량으로 계속하는 것이 허용된다.
· 선택 참여자에서 예비투약이 필요할 수 있다.
실시예 1.4C - 사전 치료법
본 연구의 시작 전에 참여자에게 시행된 임의의 사전 항암 치료법(투약 및 방사선치료법을 포함하는 치료법)은 eCRF에 입력해야 한다.
임의의 사전 치료는 하기 타임라인에 따라 마무리해야 한다:
· 연구이건 허가된 것이건, 화학치료법, 호르몬 치료법, 및/또는 방사선치료법을 포함하는 임의의 이전의 항암 치료법은 연구 개입의 개시의 적어도 3주 전에 종료해야 한다.
· 참여자가 본 연구에 들어오기 전 연구 치료법을 시행받은 경우, 본 연구에 들어오기 전에 적어도 3주 또는 반감기의 5배가 지났어야 한다.
· 임의의 허브 치료법은 IMP 투여의 적어도 1주 전에 종료해야 한다.
· 사이토카인으로의 사전 치료는 최종 용량과 IMP의 계획된 첫 번째 투여 간에 적어도 4주 또는 약물 반감기의 5배 중 더 짧은 기간이 경과한 경우 허용된다.
· 면역 체크포인트 억제제, 면역조절 모노클로날 항체(mAb), 및/또는 mAb 유래 치료법으로의 사전 치료는 치료법 시작 전까지 4주 또는 반감기의 5배(중 더 짧은 기간)가 지난 경우 허용된다.
참여자가 코르티코스테로이드로의 유지 치료법을 시행받는 경우, 참여자는 IMP의 첫 번째 투여 전 2주경 용량이 7.5 ㎎/일 미만으로 테이퍼링될 수 있는 경우에만 적격이며, 참여자가 연구 개입 기간에 걸쳐 용량 증가 위험을 갖지 않아야 한다.
실시예 1.4D - 예비투약
투여 경로가 종양내 주사이므로, 급성 알러지 반응이 예상되지 않아서 모든 참여자에 대해 투여될 사전-정의된 예비투약은 존재하지 않는다; 그러나, 세미플리맙 정맥내 투여로 중요하게 확인된 위험에는 면역-관련 반응 및 주입-관련 과민성이 포함된다. 두 번째 주기 및 그 이후의 예비투약은 참여자가 첫 번째 투여 후 염증성 반응을 경험했는지 여부에 따라 권장될 수 있다.
참여자가 이전에 약물-유도 관련 알러지 반응(즉, IMP 투여 24시간 내에 일어나는 경도 가려움부터 중등도 증상까지)을 경험한 경우, 사이토카인 RNA 혼합물의 투여 전에 히스타민 H1 길항제로의 예비투약(사이토카인 RNA 혼합물의 투여 전 대략 30분 내지 60분에 주어지는, 경구 디펜하이드라민 50 ㎎, 또는 동등물[예로, 덱스클로르페니라민])이 고려될 수 있다. 참여자가 과민성 또는 CRS를 포함하는 등급 2 사례를 가진 경우, 예비투약에는 또한 향후 투여를 위해 경구 스테로이드(덱사메타손 20 ㎎ 또는 동등물)가 포함될 수 있다. 코르티코스테로이드 사용은 중증 약물 유도 알러지 반응 또는 생명을-위협하는 병태의 치료로 그 대상이 제한되어야 한다.
해열제로의 예비투약은 IMP의 첫 번째 투여 후 염증성 증상, 예컨대 열 및 오한이 발생한 참여자에 대해 허용된다. 주사될 병소(들)의 위치에 기반하여 국소 마취제를 사용할 수 있다.
실시예 1.4E - 금지된 치료법
연구 동안 하기 치료법의 사용은 금지된다:
· 시험 동안 완화적 방사선치료법을 제외한, 암 치료를 위한 병행 치료법(예로, 화학치료법 또는 면역치료법)은 허용되지 않는다.
- 참여자가 달리 이익을 유도하고 있는 경우, 방사선치료법이 증상 고식(예로, 통증이 있는 뼈 전이, 폐색성 폐 병소의 치료)을 위해 고려될 수 있다.
· 연구 개입 개시 전 4주 이내, 치료 동안, 및 IMP의 최종 용량 후 3개월 동안 약독화된 생백신은 금지된다. 모든 다른 백신은 이들이 참여자 병태에 대해 최선의 해결책이 아닌 경우 배제해야 한다.
· 연구 참여 동안 모든 참여자에 있어서 IFN와의 병행 치료는 금지된다.
· 전신 면역자극제(비제한적으로 IFN 및 IL-2 포함)는 상호작용이 제외될 수 없고 참여자에 대해 증가된 위험을 일으킬 수 있으므로 개입 개시 전 4주 또는 약물 반감기의 5배(중 더 긴 때) 내에 및 개입 동안 금지된다.
· 비제한적으로 사이클로포스파미드, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 및 탈리도마이드를 포함하는 면역억제성 투약. 이들 제제는 잠재적으로 활성을 변경할 수 있다.
· 프레드니솔론 7.5 ㎎/일 초과(PO 또는 IV) 또는 동등물로의 유지 치료법은 금지된다.
· IMP의 활성을 변경할 수 있으므로, 전신 과립구 콜로니 자극 인자(예로, 과립구 콜로니 자극 인자, GM-CSF, 및/또는 페그필그라스팀).
· 본 연구의 참여자는 임의의 다른 IMP를 병행하여 시행받는 것이 허용되지 않는다.
실시예 1.4F - 용량 변형
사이토카인 RNA 혼합물에 대한 용량 변형
필요한 경우 또는 IMP-관련 등급 2 이상의 AE의 경우, 사이토카인 RNA 혼합물의 시작은 임의의 주에 예상 치료일 이후 최대 3일만큼 지연될 수 있고, 2일 또는 3일 지연은 용량 지연으로 고려될 것이다. 다음 용량은 용량 간 7일 간격에 대한 최종 용량의 7일 후 계획되어야 한다.
사이토카인 RNA 혼합물 용량이 매주 용량에 대한 예상 치료일 이후 4일 이상 지연되어야 하는 경우, 그 용량은 건너뛰어야 하며, 이에 따라 용량 생략으로 고려될 것이다. 참여자는 IMP-관련 등급 2 이상의 AE가 허용 가능한 기간 내에 등급 1 이하로(또는 대체 치료법으로 제어되는 경우에는 등급 2로) 해소된 경우 사이토카인 RNA 혼합물을 재개할 수 있다. 2회의 순차적 용량 생략 시, 환자는 AE가 생명을-위협하는 것이 아니고 치료의 계속이 환자의 상태를 위해 최적으로 고려되는 경우 사이토카인 RNA 혼합물로 재-치료할 수 있다. 2회를 초과하는 순차적 용량 생략 시 사이토카인 RNA 혼합물은 확정적으로 종결될 것이다.
연구의 단독치료법 용량 증량 부분에서 DLT를 경험하는 참여자는 이의 연구 개입이 중단될 것이며 독성이 해소될 때까지 추적할 것이다.
· DLT가 사이토카인 RNA 혼합물의 개시로부터 처음 28일(증량상에서의 DLT 관찰 기간) 동안 일어나는 경우, 사이토카인 RNA 혼합물은 확정적으로 종결될 것이다.
· DLT 정의를 충족하는 AE가 사이토카인 RNA 혼합물의 개시로부터 28일(DLT 관찰 기간) 후 일어나는 경우, 사이토카인 RNA 혼합물은 하기 기준을 충족하는 것을 확인한 후 지원사와의 논의 및 연구 위원회의 잠재적 보증 후 재개할 수 있다:
o AE가 등급 1 이하(또는 대체 치료법으로 제어되는 경우 등급 2)로 해소되었음
o 연구자가 연구 개입을 재개하는 것이 환자의 최선책이라고 믿음
(확대상 말고)용량 증량에만 적용 가능하게, 참여자는 지원사와의 동의에 기반하여, 예방 치료로(이용 가능한 경우) 동일한 용량 수준의 사이토카인 RNA 혼합물의 새로운 치료 주기로 또는 더 낮은 용량 수준으로 치료법을 재개할 것이다. 용량 재-증량은 허용되지 않는다.
그 재발생이 반드시 생명을-위협하는 것이 아니고 CTCAE 등급 1 이하 또는 기준선 값으로의 회복이 즉각적으로 일어나는 사이토카인 RNA 혼합물에 기인하는 DLT 사례(즉, CRS에 관련되지 않은 피부 발진, 내분비병증, 예컨대 갑상샘저하증, 열, 피로, 근관절통, 두통) 시, 상황이 케이스별 기준에 따라 평가될 것이며 동일한 용량 수준으로 또는 더 낮은 용량 수준으로 치료법을 재개하는 것이 안전한지 그리고 이것이 참여자에 대한 이익/위험 균형을 따르는지를 결정할 것이다. 반대로, 그 재-발생이 잠재적으로 생명을 위협하는 DLT 사례(즉, 사이토카인 방출 증후군, 폐렴) 시, 참여자는 추가 치료로부터 제거될 것이고 대체되지 않을 것이다.
세미플리맙에 대한 용량 변형
세미플리맙 주입은 본원에서 기재된 바와 같이 유해 사례로 인해 단속하거나, 휴지하거나 영구적으로 중단해야 한다(유해 반응에 대한 세미플리맙 권장 투여량 변형). 세미플리맙은 코르티코스테로이드 테이퍼 후 전체적 또는 부분적 해소(등급 0 내지 1)를 갖는 환자에서 재개할 수 있다.
세미플리맙이 사이토카인 RNA 혼합물을 또한 투여받고 있는 참여자에서 특이적 AE(들)(예로, 약물-유도 주입-관련 알러지 반응)로 인해 영구 중단되는 경우, 참여자는 사이토카인 RNA 혼합물의 영구적 연구 치료 중단을 위해 정의된 기준에 부합할 때까지 사이토카인 RNA 혼합물 투여를 계속할 것이다.
사이토카인 RNA 혼합물이 임의의 주에 예상 치료일 이후 최대 3일만큼 지연되는지 여부와 무관하게, 세미플리맙은 사이토카인 RNA 혼합물과 동일한 날에 투여해야 한다.
세미플리맙에 대한 치료 투여 윈도우는 ±3일이다. 세미플리맙이 휴지되는 경우, 세미플리맙의 시작은 임의의 주에 예상 치료일 이후 최대 3일만큼 지연될 수 있고, 2일 또는 3일의 지연은 용량 지연으로 고려될 것이다. 다음 용량의 세미플리맙은 용량 간 21일 간격에 대해 최종 용량 후 21일로 계획해야 한다.
세미플리맙 용량이 예상 치료일을 4일 이상 지연해야 하는 경우, 그 용량은 그 용량은 건너뛰어야 하며, 이에 따라 용량 생략으로 고려될 것이고, 사이토카인 RNA 혼합물은 다음 계획된 날짜에 투여한다. 권장된 코르티코스테로이드 테이퍼 후 독성이 전체적으로 또는 부분적으로 해소된 경우(등급 0 내지 1) 참여자는 세미플리맙을 재개할 수 있다. 2회의 순차적 용량 생략 시, 환자는 AE가 생명을-위협하는 것이 아니고 치료의 계속이 환자의 상태를 위해 최적으로 고려되는 경우 세미플리맙으로 재-치료할 수 있다. 2회를 초과하는 순차적 용량 생략 시 세미플리맙은 확정적으로 종결될 것이다.
연구의 조합 용량 증량 부분에서 DLT를 경험하는 참여자는, 사이토카인 RNA 혼합물 및 세미플리맙을 중지할 것이며, 환자는 독성이 해소될 때까지 추적될 것이다.
· DLT가 사이토카인 RNA 혼합물과 세미플리맙의 개시 이래 처음 28일(DLT 관찰 기간) 동안 일어나는 경우, 사이토카인 RNA 혼합물 및 세미플리맙은 중단될 것이다. 하기 기준에 부합함을 확인한 후, 지원자와의 논의 및 연구 위원회에 의한 잠재적 승인 후 세미플리맙만 재개할 수 있다:
- DLT가 세미플리맙에 대해서만 확정적으로 관련되며 사이토카인 mRNA 혼합물에 관련되지 않음
- AE가 첨부 14에 따라 즉각적으로 등급 1 이하(또는 대체 치료법으로 제어되는 경우 등급 2)로 해소되었음
- 연구자가 연구 개입을 재개하는 것이 환자의 최선책이라고 여김
· DLT가 사이토카인 RNA 혼합물과 세미플리맙의 개시 이래 처음 28일(DLT 관찰 기간) 후 일어나는 경우, 사이토카인 RNA 혼합물 및 세미플리맙은 모두 하기 기준에 부합함을 확인한 후, 지원자와의 논의 및 연구 위원회에 의한 잠재적 승인 후 재개할 수 있다:
- AE가 등급 1 이하(또는 대체 치료법으로 제어되는 경우 등급 2)로 해소되었음
- 연구자가 연구 개입을 재개하는 것이 환자의 최선책이라고 여김
용량 증량상(확대상 아님)에만 적용 가능하게, 지원사와의 동의에 기반하여 참여자는 예방적 치료(이용 가능한 경우)로 동일한 용량 수준의 사이토카인 RNA 혼합물 및 고정 용량의 세미플리맙(350 ㎎) 또는 더 낮은 용량 수준의 새로운 치료 주기로 치료법을 재개할 것이다. 사이토카인 RNA 혼합물에 대해 용량 재-증량은 허용되지 않는다.
사이토카인 RNA 혼합물을 또한 투여받고 있는 참여자에서 세미플리맙에 확정적으로 관련된 DLT가 일어나서 세미플리맙을 무기한 종결시키도록 유도하는 경우, 참여자는 사이토카인 RNA 혼합물의 영구적 연구 치료 중단에 대해 정의된 기준에 부합할 때까지 사이토카인 RNA 혼합물을 계속 투여받을 수 있다.
세미플리맙을 투여받는 참여자는 연구 치료 과정에 걸쳐 할당된 투여량(350 ㎎ Q3W)을 유지하며, 상기 IMP에 대한 용량 변형은 허용되지 않는다. 연구 개입을 방해하는 AE가 진행 중인 경우 치료 주기를 지연할 수 있거나 세미플리맙을 생략할 수 있다.
주입-관련 알러지 반응이 세미플리맙 치료 동안 일어날 수 있다. 이들 잠재적 유해 사례의 치료를 위한 응급 설비 및 투약(예로, 항히스타민, 기관지확장제, IV 식염수, 코르티코스테로이드, 아세트아미노펜, 및/또는 에피네프린)이 즉시 사용을 위해 이용 가능하다.
하기 AE 중 어느 하나가 관찰되는 경우 세미플리맙 주입이 단속된다: 기침, 경축/오한, 발진, 가려움, 두드러기(예로, 구진, 대다리, 또는 팽진), 발한작용(발한), 저혈압, 호흡곤란(숨참), 구토, 또는 홍조. 반응(들)은 증상적으로 치료하며, 주입은 원래 비율의 50%로 재시작할 수 있다.
세미플리맙 주입 동안 또는 직후 등급 3 이상의 중증도의 주입 반응 시, 투약을 중단하며, 환자는 세미플리맙 치료를 영구적으로 중단한다. 활력 징후를 면밀하게 모니터링한다.
참여자가 세미플리맙 치료의 종결을 야기하는 세미플리맙 주입-관련 알러지 약물 반응을 갖는 경우, 참여자는 케이스별 평가에 기반하여, 치료법의 계속이 참여자에 대한 최선책으로 고려되는 경우, 단독치료법으로 할당된 용량 수준으로 사이토카인 혼합물 치료를 계속할 수 있다.
실시예 1.4G - 연구 개입 및 참여자 중단
중단/철회. IMP가 중단되는 경우, 상기 중단이 일시적인지(즉, 용량 생략 또는 주기 지연)를 결정한다; 1년 치료 기간의 종료에 도달하지 않은 한, 질환 진행 전 영구적 IMP 중단은 마지막 수단이다. 임의의 IMP 중단은 eCRF에 완전히 문서화해야 한다. 어느 경우에도, 참여자는 진행성 질환의 문서화 시까지 연구에 남아야 한다.
연구 개입의 확정적 중단: 영구적 개입 중단은 연구 동안의 임의의 시점에 IMP에 대해 참여자를 재노출시키지 않기로 하는 연구자로부터의, 또는 사유와 무관하게 IMP에 대해 재노출되지 않기로 하는 참여자로부터의 확정적 결정과 연관된 임의의 개입 중단이다.
연구 개입은 연구자의 의견에 있어서, 연구 개입의 계속이 참여자의 웰빙, 예컨대 임의의 하기 케이스에 있어서 해로운 경우, 중단한다:
1. 허용 불가능한 유해 사례.
2. 확인된 질환 진행.
3. 연구 프로토콜의 준수 불량.
4. 1년 치료 기간의 완료.
5. 연구 개입의 추가 투여를 방지하는 다른 병태, 예컨대 동시발생 질병.
참여자가 임상적으로 안정하고, 최소 독성을 가지며 치료법으로부터 임상적 이익을 유도하는 경우, 이들은 진행성 질환 또는 1년의 최대 치료 동안 중 먼저 발생하는 때까지 치료 상에서 유지할 것이다. 조합 치료법을 시행받은 참여자에서 IMP 중 하나만 특이적 AE(들)(예로, 약물-유도 주입-관련 알러지 반응)로 인해 영구적으로 중단되는 경우, 참여자는 영구적 연구 치료 중단에 대해 정의된 기준에 부합할 때까지 다른 IMP를 계속 투여받는다.
증가가 내재 질환에 관련되지 않은 경우 그리고 연구자가 참여자 안전성의 최선책이라고 믿는 경우 연구자에 의해 비정상적 간 기능에 대한 연구 개입의 중단이 고려된다.
참여자는 이들이 임의의 시점에 사유와 무관하게 그러기로 결정하는 경우, 또는 이것이 연구자의 재량 하에 수행될 수 있는 경우, IMP로의 치료를 철회할 수 있다. IMP로의 치료는 임의의 하기 케이스에 중단해야 한다: 참여자의 요청 시, 임의의 시점에 사유와 무관하게(동의의 철회), 또는 이의 법적 대리인의 요청 시.
"법적 대리인"은 연구에 관여되는 절차(들)에서 참여자의 참여에 대해 예비 참여자 대신 동의하는 데 대해 관련법 하에 개인적 또는 사법적 또는 다른 단체의 위임을 받은 것으로 고려된다. 치료에 대한 동의의 철회는 추적 방문에 대한 동의 철회 및 참여자 비-접촉 추적, 예로 의학 기록 확인에 대한 동의 철회와 구별된다.
철회를 요청하는 참여자에게는 추적에 대한 동의 철회가 연구의 공중 보건 가치를 위험하게 만들 수 있음이 고지된다. 철회하는 참여자에게는 동의를 철회하기로 한 이의 결정에 대해 가능한 AE의 기부가 명시적으로 요청되며, 유발되는 임의의 AE 정보는 문서화한다. 바람직하게는 참여자는 서면으로 동의를 철회하며, 참여자 또는 참여자의 대리인이 거부하거나 물리적으로 불가능한 경우, 임상장소에서 서면으로 동의를 철회하지 못하는 참여자의 사유를 문서화하고 서명한다.
참여자는 예정된 연구 완료일까지, 또는 본 프로토콜에 명시된 바와 같이 추적할 임의의 AE의 회복 또는 안정화까지 중 늦은 때까지, 본 프로토콜에 명시된 연구 절차에 따라 추적한다.
가능한 경우, 그리고 영구적 개입 중단 후, 참여자는 적절한 경우, 약동학 샘플을 포함하는 IMP로의 최종 투약일 동안 보통 계획되는 절차를 사용하여 평가한다.
모든 영구적 개입 중단 케이스는 확인된 것으로 고려되는 경우 eCRF의 적절한 페이지에 연구자가 기록한다.
실시예 1.4H - 추적 소실
참여자가 일정이 잡힌 방문에 반복적으로 복귀하지 못하고 연구 장소에서 연락할 수 없는 경우 추적 소실된 것으로 고려된다.
참여자가 요구되는 연구 방문을 위해 임상으로 복귀하지 못하는 경우, 하기 행동을 취한다.
· 임상장소에서는 참여자에 연락하기 위해 시도하고 최대한 빨리 누락된 방문 일정을 다시 잡고 참여자와 할당된 방문 일정의 유지 중요성을 상담하고 참여자가 연구를 계속하고자 원하는지 및/또는 계속해야하는지 여부를 확인한다.
· 참여자가 추적을 소실한 것으로 간주되기 전에, 연구자 또는 양수인은 참여자와의 연락을 재획득하기 위해 모든 노력을 한다(가능한 경우, 3회 전화 통화, 그리고 필요한 경우, 참여자의 최종적으로 알려진 우편 주소로의 등기 서신 또는 현지 동등 방법). 이들 연락 시도를 참여자의 의학 기록에 문서화한다.
· 계속 연락할 수 없는 참여자는 연구를 철회한 것으로 고려된다.
실시예 1.4I - 연구 평가 및 절차
참여자의 일상적 임상 관리의 일부로서(예로, 혈구수) 수행되고 ICF의 서명 전에 수득된 절차는 그 절차가 프로토콜-특정 기준에 부합하고 SoA에 정의된 시간 프레임 내에 수행되는 경우 스크리닝 또는 기준선 목적을 위해 이용할 수 있다.
안전성 사유에 대해 또는 샘플의 기술적 문제에 대해 반복 또는 일정이 잡히지 않는 샘플을 채취할 수 있다.
실시예 1.5 - 유효성 평가
증량상에서는, RECIST 1.1에 기반하여 측정 가능한 온전한 병소가 존재하는 경우, 객관적 반응 정보를 RECIST 1.1에 기반하여 수득한다.
확대상에서는, 사이토카인 RNA 혼합물에 대한 반응 평가가 일차 목적이다. 확대상에서 치료받는 모든 참여자는 포함을 위해 적어도 하나의 측정 가능한 온전한 병소를 가져야 한다(상기 포함 기준 I 05 참고). 종양 평가를 표 2 및 3에서의 활동 일정(SOA)에 기재된 바와 같이 고정된 간격으로 수행하고, 평가 윈도우는 용량 지연 또는 용량 생략에 의해 영향받지 않는다.
모든 종양 평가 데이터를 RECIST 1.1 기준에 기반하여 관련된 eCRF에 기록한다. RECIST 1.1 기준의 조건으로서, 치료법에 대한 확인된 반응으로서 문서화하기 위해서는, 부분 또는 전체 반응을 적어도 4주 간격으로 수행되는 두 번째 검사 상에서 확인해야 한다. 면역치료법을 위한 RECIST(iRECIST)에 기반하여, 진행성 질환을 또한, 임상적으로 진행성 질환이 없는 경우, 위진행을 제외하기 위해 적어도 4주 간격으로 수행되는 두 번째 검사 상에서 확인해야 한다.
종양 반응의 평가를 위해 RECIST 1.1 기준을 따르며, 이차/탐색 종결점으로서의 반응 기준을 보고하기 위해 iRECIST 기준을 또한 따른다. 두 번째 평가 상에서 진행성 질환이 확인되는 경우, 최초 평가에 기반하여 진행일을 기록한다. 질환 진행이 확인되지 않는 경우, 참여자는 치료를 계속하고 확인되지 않은 진행성 질환(iUPD)을 기록한다.
연구 개입의 최적화를 위해 모든 측정 가능한 병소(이들이 RECIST 1.1에 기반한 측정 가능성의 역치값 미만이라도)를 측정한다. ORR 관점에서 유효성 평가의 일부로, 비-표적 병소의 크기를 고려하여 전체 종양 부피의 평가에 의해 탐색 분석을 수행하고, 주사 대 비-주사 병소의 분석은 상기 탐색 평가의 일부일 것이다. eCRF에서의 측정 절차 및 문서화를 SRM에 상세히 제공하며, 통계적 분석 계획을 SAP에 상세히 제공한다.
이차 유효성 변수에는 질환 제어율, 반응의 지속기간, 및 무진행 생존이 포함된다. 모든 이들 파라미터를 SAP에 상세히 제공한다.
실시예 1.5A - 림프종 환자에 대한 FDG-PET-CT 및/또는 콘트라스트-증강 CT
ORR은 2014년 Lugano 분류(Cheson BD et al. (2014) J Clin Onc 32(27):3059-68)에 따라 5점 척도를 사용하여 평가되는 반응에 기반한 CR, 및 PR을 갖는 참여자의 비율로 정의된다.
종양 평가에는 FDG-avid 림프종의 경우 FDG-PET-CT 스캔 및 비-FDG-avid 림프종의 경우 콘트라스트 증강 CT가 포함된다. 종양 평가는 SoA에 기재된 바와 같이 고정된 간격으로 수행하고, 평가 윈도우는 용량 지연 또는 용량 생략에 의해 영향받지 않는다.
스크리닝 시 CT 및/또는 PET 스캔이 목에서의 질환 관여에 대해 음성인 경우, 후속 CT 스캔에는 목 영역이 포함되지 않을 수 있다. 스크리닝 시 CT 및/또는 PET 스캔이 목에서의 질환 관여에 대해 양성인 경우, 후속 CT 스캔에는 목 영역이 포함되어야 한다. 종양 반응 평가는 스크리닝 시(첫 번째 IMP 전 28일[-7일] 이내), 및 이후 12주(± 7일)마다 수행해야 한다. 조영 시점은 달력을 따르며 주기 지연에 대해 조정하지 않아야 한다. PD 이외의 사유로 중단한 참여자에 대해, 참여자가 PD를 문서화하거나 새로운 항암 치료법을 시작할 때까지 평가를 계속해야 한다. 연구자 의견에 있어서 참여자가 임상적으로 진행 중인 경우 첫 번째 평가는 12주보다 일찍 수행할 수 있다.
참여자가 PR, 또는 CR을 가진 경우, 확인을 위해 4주 간격의 반복된 스캔이 요구되며 환자는 12주마다 평가 일정을 계속해야 한다. 참여자가 임상적으로 안정하지만, 조영이 12주에 PD를 나타내는 설정에서, 연구 약물은 연구자의 재량으로 다음 질환 반응 평가 시까지 계속할 수 있다. 그러나, 임상적 진행의 의혹이 존재하는 경우 조영은 언제든 수행할 수 있다.
림프종 B 증상의 평가는 각각의 질환 반응 평가와 함께 수행해야 한다.
12주에 PD를 갖고, 12주 이후 연구 치료법을 계속하는 참여자에서, 치료 중단 시 방사선학적 평가를 수행한다. 이전 스캔이 중단일 전 4주 내에 수득된 경우, 치료 중단 시 반복 스캔은 의무적이 아니다.
실시예 1.5B - 림프종 환자에 대한 골수 생검 & 흡입물
모든 참여자는 Lugano 2014 기준(Cheson BD et al. (2014))에 준거해 임상적으로 필요한 바에 따라 수행된 골수 생검/흡입물을 가질 수 있다. FDG-PET-CT는 골수 관여의 결정을 위해 적절하며, 골수 관여를 제시할 가능성이 큰 것으로 고려될 수 있다. 골수 생검 확인은 필요한 경우 기준선에서 고려될 수 있다(FDG-PET-CT가 골수 부위에서 음성인 경우 관여를 확인하기 위해 생검/흡입물을 수행함). 후속 골수 평가는 기준선에서 골수 관여를 갖는 참여자에서만 수행할 것이다.
실시예 1.5C - 안전성 평가
본 FIH 연구의 주목적은 매주 종양내 주사로 투여되는 경우 사이토카인 RNA 혼합물의 생물학적 최적 용량을 DLT에 기반하여 확립하는 것이다. 따라서 안전성이 일차 연구 종결점이며 계속해서 평가된다. 안전성 프로필은 신체 검사(바람직하게는 동일한 의사에 의함) 및 실험실 테스트로부터 평가하며 발생률, 중증도(NCI CTCAE ver. 5.0에 의해 등급평가됨), 및 AE의 누적 성질에 기반할 것이다. 모든 안전성 평가에 대한 계획된 시점을 SOA에 제공한다.
실시예 1.5D - 신체 검사
전체 신체 검사에는 최소한, 중추신경계 및 심혈관계, 호흡계, 위장관계, 조혈계(간절제술, 비장절제술, 림프절병증), 및 피부계의 평가가 포함된다. 신장(기준선에서만) 및 체중(각각의 주기의 용량-전)을 측정하고 eCRF에 기록한다.
ECOG 수행 상태를 각각의 IMP 투여 전에 평가하고 eCRF에 기록한다. 연구자는 이전의 심각한 질병에 관련된 임상 징후뿐만 아니라 피부 병소의 진행에 대해 주의를 기울인다. 임의의 새로운 발견 또는 이전 발견의 악화는 새로운 유해 사례로 보고한다. 신체 검사에 대한 일정을 SOA에 기재한다.
실시예 1.5E - 활력 징후
치료상 동안, IMP의 주입 시작 직전에 그리고 주사 종료 시 활력 징후를 모니터링한다. 모니터링은 또한 임상적으로 필요한 바에 따라 수행한다. 체온, 맥박수, 호흡률, 및 혈압을 평가한다. 혈압 및 맥박 측정은 주의산만(예로, 텔레비젼, 핸드폰) 없이 조용한 환경에서 참여자에 대한 적어도 5분 휴식이 선행되어야 한다.
실시예 1.5F - 심전도, 초음파심전도 및 MUGA 스캔
단일 12-전극 ECG를 SOA에 개략된 바와 같이 수득한다. 임상적으로 유의미한 비정상은 ICF의 서명 후 발생한 AE로 보고해야 한다. 기존 병태는 참여자의 의학적 이력에 기록해야 한다. 초음파심전도 또는 MUGA 스캔은 연구의 조합 부분에서의 환자에 대한 스크리닝 시에만 SoA(본원 참고)에 개략된 바와 같이 수득할 것이다.
실시예 1.5G - 폐 기능 테스트
DLCO는 이전에 블레오마이신으로 치료받은 림프종을 갖는 참여자에 대해 기준선에서 수행한다. 세미플리맙을 포함하는 조합 증량 아암의 환자에 대해서만 폐 기능 테스트가 요구된다.
실시예 1.5H - 임상적 안전성 실험실 평가
연구자는 실험실 보고서를 검토하고 상기 검토를 문서화한다. 실험실 보고서는 소스 문서와 함께 파일링한다. 실험실 비정상은 이들이 하기와 같은 경우에만 AE로 보고한다:
- 연구 의약품 중단, 치료 또는 용량 변형을 야기함.
- 심각한 또는 특별 관심 AE(AESI) 정의를 충족함(주: 나머지 실험실 테스트는 eCRF 실험실 페이지에 보고함).
- 이전 mRNA 및 인터류킨-유발 시험이 혈액학적 파라미터에서 일시적 변화를 나타내었다; 작용 방식의 일환으로서의 이러한 일시적 변화는 디폴트로 AE로 등록되어서는 안 된다. 그러나, 임상 연구자는 특별한 경우 실험실 변화를 임상적으로 유의미한 것으로 및/또는 AE로 보고해야 하는지 여부를 결정한다.
- 연구 참여 동안 또는 연구 개입의 최종 용량 후 30일 내에 임상적으로 유의미하게 비정상으로 고려되는 값을 갖는 모든 실험실 테스트(즉, EOT 평가)는 그 값이 정상 또는 기준선으로 복귀할 때까지 또는 더 이상 연구자 또는 의학적 모니터에 의해 임상적으로 유의미하게 고려되지 않을 때까지 반복한다.
- 이러한 값이 연구자에 의해 합리적으로 판단되는 시기 내에 정상/기준선으로 복귀하지 않는 경우, 병인을 확인하고, 지원사에 통지한다.
모든 프로토콜에서-요구되는 실험실 평가는 실험실 매뉴얼 및 SoA에 따라 수행한다.
연구소 현지 실험실에서 수행된 프로토콜에-특정되지 않은 실험실 평가로부터의 실험실 값이 참여자 관리에서 변화를 필요로 하거나 연구자에 의해 임상적으로 유의미하게 고려되는 경우(예로, SAE 또는 AE 또는 용량 변형), 결과를 eCRF에 기록한다. 안전성 추적을 위해 또는 AE의 추가 연구를 위해 수행된 모든 계획되지 않은 실험실 테스트는 eCRF에 보고한다.
실시예 1.5I - 용량 제한 독성(DLT)
DLT는 연구 위원회에 의한 검증 후, 그리고 NCI CTCAE ver. 5.0을 사용하는 질환 진행 등급평가와 관련되지 않은 경우, 명확한 반대 증거의 부재 하에 IMP에 관련된 하기 AE 중 어느 하나로서 정의된다. DLT 관찰 기간의 지속기간은 사례가 DLT인지를 결정하기 위해 지속기간이 평가되어야 하는 치료-관련 AE로 인해 주기 2의 개시를 지연하는 참여자에 있어서 더 길다. NCI CTCAE ver. 5.0을 사용하여 AE의 중증도를 평가한다.
혈액학적 독성:
· 등급 3 이상의 열성 호중구감소증 또는 감염이 문서화된 등급 3 이상의 호중구감소증.
· 72시간 초과 지속되는 등급 3 이상의 혈액학적 독성.
· 등급 4 혈소판감소증 또는 출혈이 있거나 수혈을 필요로 하는 등급 3.
비-혈액학적 독성:
· 등급 3 피부 반응을 제외한, 임의의 등급 3 이상의 면역-관련 AE.
· irAE는 첫 번째 용량 직후 또는 치료의 최종 용량 수 개월 후 일어날 수 있다. 약물 노출과 연관된 알려지지 않은 병인을 갖는 모든 AE를 평가하여 가능한 면역 병인을 결정한다. irAE가 추정되면, AE를 irAE로 표지하기 전에 신생물, 감염, 대사, 독소 또는 다른 병인 원인을 배제하기 위해 노력한다. 임의의 다른 등급 3 이상의 비-혈액학적 독성:
- 적절한 항-설사 치료법으로 제어되고 48시간 내에 등급 1 이하로 해소되는 경우, 등급 3 오심, 구토 및 설사는 제외함.
- 알려진 간 전이를 갖는 참여자가 기준선에서 등급 2 AST 또는 ALT 비정상을 가지고 등록한 경우, AST 또는 ALT에서의 증가는 그 증가가 기준선의 3배 초과이고 상승이 5일 이상 후에 확인되는 경우에만 DLT로 고려된다.
- 길버트 증후군을 갖는 참여자가 기준선에서 등급 2 빌리루빈 비정상을 가지고 등록한 경우, 빌리루빈에서의 증가는 그 증가가 기준선의 3배 초과이고 상승이 5일 이상 후에 확인되는 경우에만 DLT로 고려된다.
· 등급 2 이상의 포도막염.
다른 "등급평가가-불가능한" 독성:
· 연구 위원회의 의견에 있어서 추가적인 용량 증량이 참여자를 허용 불가능한 위험에 노출시키도록 할 잠재적인 임상적 유의성이 있는 치료로-발생하는 유해 사례.
· 기준선으로 또는 등급 1 이하로의 회복의 부재 하에, 1개를 초과하는 용량 생략을 야기하는 IMP 관련 독성(탈모, 백반증, 피로 및 갑상샘저하증 제외).
증량상에 있어서 치료의 처음 28일 동안 DLT의 발생을 MTD 또는 MAD를 정의하기 위해 사용한다. 주기 1 및 후속 주기에서, DLT의 발생이 용량 생략 또는 감소에 대한 필요성을 결정한다(DLT가 DLT 관찰 기간 동안 일어나면, 연구 개입을 확정적으로 종결함; DLT 관찰 기간 이후).
DLT를 경험하는 참여자는 이의 사이토카인 RNA 혼합물로의 치료법을 중단할 것이며 이들은 상기 독성이 CTCAE 등급 1 이하 또는 참여자의 기준선 값 중 더 높은 것으로 해소될 때까지 추적할 것이다. 해당 독성으로부터의 회복 후, 최대 2개 용량 생략을 가지며 연구 위원회가 동의하고, 연구자가 사이토카인 RNA 혼합물로의 치료법을 재개하는 것이 참여자의 최선책이라고 믿는 경우, 참여자는 지원사의 동의에 기반하여, 동일한 용량 수준 또는 더 낮은 용량 수준에서 새로운 치료 주기로 치료법을 재개할 수 있다. 이러한 재-투약 참여자에 있어서 용량 재-증량은 허용되지 않는다.
실시예 1.5J - 전신 반응
연관된 용량 변형과 더불어, 과민성 및 아나필락시스 반응의 관리를 아래에 상세히 제공한다.
전신 염증성 반응
염증성 반응으로 인한 전신 반응이 사이토카인 RNA 혼합물 투여로 일어날 수 있다. 항원-특이적 T-림프구 반응, TLR-매개 신호전달, 및 친-염증성 사이토카인의 일시적 방출은 전신 염증성 반응을 유도할 수 있다. 전신 염증성 반응의 전형적인 임상 증상에는 빈맥, 감소된 혈압, 호흡곤란, 오한, 구토, 현기증, 및 열이 포함될 수 있다.
전신 염증성 반응의 경우 가능한 행동은 하기와 같다:
· 활력 기능(BP, HR, 호흡, 체온)의 평가
· 파라세타몰 및/또는 비-스테로이드성 항-염증성 약물(NSAID)로의 치료
· IL-6, IFNγ, TNFα, IL-2; GM-CSF, IL-10, IL-8, IL-5, CRP, 및 페리틴을 위한 혈액 샘플 수집; 이들에 부가하여, 조합 치료법을 시행받는 참여자는 또한 갑상샘-자극 호르몬(TSH), 자유 티록신(T4), 항-핵 항체(ANA), 및 류마티스 인자(RF)를 위한 혈액 샘플 수집을 가질 것이다.
· 연구자의 재량 하에, 예로, 하기가 동반되는, 회복이 필요할 수 있을 때까지의 입원:
· 활력 기능(BP, HR, 호흡, 체온)의 면밀한 모니터링
· NSAID의 투여
· 단회 고용량의 정맥내 코르티손
· 단회 용량의 토실리주맙 8 ㎎/㎏ 주입(회복하지 않는 경우)
사이토카인 방출 증후군
CRS로도 알려진 사이토카인-연관 독성은 강력한 면역 활성화의 결과로 일어나는 항원-비특이적 독성이다. CRS는 다수의 림프구(B 세포, T 세포, 및/또는 NK 세포) 및/또는 골수 세포(대식구, 수지상 세포, 및 단핵구)가 활성화되어 염증성 사이토카인을 방출하는 경우 임상적으로 발현된다. CRS는 전통적으로 치료용 모노클로날 항체 주입과 연관되었고 이들 설정에서 증상 개시는 전형적으로 주입이 시작된 후 수 분 내지 수 시간 내에 일어난다. 사이토카인 RNA 혼합물로의 종양내 주사 후 혈청 사이토카인 수준은 재조합 사이토카인의 직접적 주사 후 참여자에서 관찰된 수준에 접근할 것으로 예상되지 않지만, 임상적 이익을 제공하는 지속되는 종양내 사이토카인 수준의 과정에서, 참여자가 유해 효과를 유도할 수 있는 지속된 수준의 전신 사이토카인 수준을 가질 수 있는 가능성이 존재한다. 따라서, 사이토카인 RNA 혼합물의 종양내 주사가 시행되는 참여자를 사이토카인-연관 독성의 징후에 대해 면밀히 모니터링한다. 참여자에서 등급 2 이상의 CRS 징후 및 증상이 발생하는 경우, 참여자를 입원시켜야 한다. CRS 등급 2 이상이 발생하는 경우 활력 징후 모니터링을 계속해서 수행해야 한다. 참여자에서 혈류역학 또는 호흡기 합병증이 발생하는 경우 집중 치료실(ICU)로 옮겨야 한다. ICU에는 CRS 치료 경험을 가진 중환자 케어 의사가 있어야 한다. 또한, ICU에는 참여자가 ICU에 입원하기 전에 CRS 등급 2 이상의 참여자의 즉각적 치료 및 모니터링을 개시하기 위해 필요한 장비가 있어야 한다.
CRS와 연관된 임상 징후 및 증상에 대해서는 아래를 참고한다.
증상 개시 시점 및 CRS 중증도는 유도 제제 및 면역 세포 활성화의 크기에 의존한다. 증후군의 발생률 및 중증도도 환자가 큰 종양 부담을 가진 경우 더 크게 드러나는 데, 아마도 이것이 더 높은 수준의 T-세포 활성화를 야기하기 때문일 것이다. 모노클로날 항체 치료법과 연관된 CRS에서와 같이, 차용 T-세포 치료법과 연관된 CRS는 상승된 IFNγ, IL-6, 및 TNFα 수준과 연관되었다; IL-2, GM-CSF, IL-10, IL-8, IL-5, 및 프라크탈킨의 증가도 보고되었다. 도출된 증거는 IL-6이 CRS에서의 독성의 중추적 매개체임을 시사한다; IL-6은 항-염증성 및 친염증성 특성을 갖는 다표현형발현 사이토카인이다. 그러나, 광범위 사이토카인 패널의 실시간 분석은 현재 시점에 CRS를 갖는 개별 환자의 관리에 유의미한 영향을 주지 않으며 치료 결정은 전형적으로 임상 파라미터에 기반한다.
혈청 C-반응성 단백질(CRP) 및 페리틴에 대한 검정을 수행한다. IL-6 및 IFNγ를 포함하는 사이토카인의 혈장 수준을 수집하고 CRS 등급 2 이상의 증상 발생 시에만 후향 분석한다. CRS의 징후를 평가하기 위해 최초 용량 후 및 각각의 용량 증가 후, 그리고 CRS 등급 2 이상의 증상 발생 시 샘플수집을 수행한다. CRP는 대부분 IL-6에 반응하여, 간에 의해 생산되는 급성상 반응물이다. 혈청 CRP 수준이 IL-6 생체활성에서의 증가에 대한 대리물로 작용한다. CRS 동안, 혈청 CRP 수준은 수 log 만큼 증가할 수 있다. 혈청 CRP 검정은 신속하고, 저렴하며, 대부분의 병원에서 쉽게 이용 가능하다. 몇몇 시리즈에서, 피크 CRP 수준 및 CRP의 변화 배율로 중증 CRS에 대한 위험이 있는 환자를 확인하였다. 그러나, CRP 수준은 감염 동안에도 상승되며 감염에 의해 유도된 염증 및 CRS에 관련된 염증 간 구별을 위해 사용할 수 없음을 강조하는 것이 중요하다. 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 주입 후 CRS를 가진 많은 환자에서 혈청 페리틴의 커다란 상승이 관찰되었고, 이는 CRS 및 대식구 활성화 증후군/식혈세포성 림프조직구증(HLH) 간 유사성을 뒷받침한다.
개별 참여자에서 CRS의 중증도를 평가하기 위해, 2014 NCI 컨센서스 가이드라인에 기반하는 CRS에 대한 등급평가 시스템 및 완화 전략을 사용한다. 상기 등급평가 시스템은 유발 제제와 무관하게 경도, 중등도, 중증, 및 생명을-위협하는 CRS를 정의하기 위해 그리고 코르티코스테로이드 및/또는 항-인간 IL-6 모노클로날 항체, 예컨대 토실리주맙으로의 치료 권장을 가이드하기 위해 변형되었다.
실시예 1.6 - 유해 사례 및 심각한 유해 사례
특별 관심 유해 사례
AESI는 연구자에 의한 지원사와의 모니터링 지속 및 즉각적 통지가 요구되는, 지원사 제품 또는 프로그램에 특이적인 과학적 및 의학적 우려 AE(심각한 또는 심각하지 않은)이다. 이러한 사례는 이들을 특징화하고 이해하기 위한 추가 연구를 필요로 할 수 있다. 특별 관심 유해 사례는 프로토콜 개정에 의해 연구 동안 추가되거나, 변형되거나, 제거될 수 있다.
· 연구에 들어온 여성 대상체의 임신뿐만 아니라 IMP를 이용한 연구에 들어온 남성 대상체의 여성 파트너에서 발생하는 임신도 심각성 기준 중 하나를 충족하는 경우에만 SAE로 인정한다(아래 참고).
- 여성 참여자에서의 임신 시, IMP는 중단한다. 여성 참여자에서 또는 남성 참여자의 여성 파트너에서의 임신 추적은 결과가 결정될 때까지 의무적이다.
· IMP/비연구 의약품(NIMP)으로의 증상성 과용량(심각하거나 심각하지 않음)
- IMP/NIMP로의 과용량(우연한 또는 의도적인)은 연구자에 의해 추정되거나 참여자가 자발 통지하고 의도된 투여 용량의 적어도 30% 초과로 정의되는 사례이다.
- 중요하게는, 무증상 과용량은 표준 AE로 보고한다.
· 기타 프로젝트 특이적 AESI
- 모든 프로토콜에서 정의된 잠재적인 또는 IMP 관련된 DLT는 발생 주기와 무관하게(즉, 증량상 및 확대상에서 모두, 치료의 처음 28일 후), AESI로 고려된다.
- 사이토카인 방출 증후군(임의의 등급)
- 연구의 조합 치료법 부분에서 등급 2 이상의 주입-관련 반응
- 임의의 등급 2 이상의 자가면역 반응
AE는 참여자에 의해(또는 적절한 경우, 케어자, 대리자, 또는 참여자의 법적 대리인에 의해) 보고된다.
연구자 및 임의의 자격을 갖춘 양수인은 AE 또는 SAE의 정의에 부합하는 사례를 검출하고, 문서화하고, 기록할 책임이 있으며, 심각한, 연구 개입 또는 연구 절차에 관련된 것으로 고려되는, 또는 참여자가 사이토카인 RNA 혼합물을 중단하도록 유도하는 AE를 추적할 책임이 유지된다.
유해 사례(AE)
AE는 연구 개입에 관련된 것으로 고려되건 고려되지 않건, 연구 개입의 사용과 시간적으로 연관되는, 참여자 또는 임상 연구 참여자에서의 임의의 원치않는 의학적 발생이다. 따라서 AE는 연구 개입의 사용과 시간적으로 연관된 임의의 바람직하지 못하고 의도하지 않은 징후(비정상 실험실 발견 포함), 증상, 또는 질환(새롭거나 악화된)일 수 있다.
심각한 유해 사례(SAE)
SAE는 임의의 용량에서 하기와 같은, 임의의 원치않는 의학적 발생이다:
- 사망을 일으킴,
- 생명을 위협함(주: 용어 "생명을-위협하는"은 참여자가 사례/반응 시 사망 위험이 있는 사례/반응을 나타낸다; 이것은 가정상 더 중증이었다면 사망을 유도했을 수 있는 사례/반응을 나타내는 것이 아님),
- 원내 입원을 필요로 하거나 기존 입원의 연장을 일으킴,
- 정상 생활 기능을 수행하는 능력의 지속적이거나 유의미한 장애/불능, 영구적이거나 유의미한(일시적인), 그리고 실질적인 손상을 일으킴. 장애는 상대적으로 소소한 유의성의 경험, 예컨대 두통, 오심, 구토, 또는 우연한 소규모 외상을 포함하려는 것이 아니다.
- 선천성 기형/선천적 결손이거나, 태아 영아의 기형이거나, 유산을 일으키는 임의의 기형임
- 의학적으로 중요한 사례 또는 반응임. 다른 상황이 심각한, 예컨대 즉각적으로 생명을-위협하거나 사망 또는 입원을 일으키지 않을 수 있지만, 참여자를 위험하게 하거나 상기 정의에 기재된 다른 결과 중 하나를 방지하기 위한 개입을 필요로 할 수 있는 중요한 의학적 사례로 고려되어야 하는지에 대한 결정에서 의학적 및 과학적 판단을 실시해야 한다. 연구자는 심각한 AE로서 의학적으로 중요한 AE를 평가할 책임이 있다. 예: 알러지성 기관지연축에 대해, 응급실 또는 가정에서의 집중 치료; 입원을 포함하지 않는 혈액병; 입원을 포함하지 않는 10xULN 초과의 무증상 ALT 증가)
치료로-발생하는 유해 사례(TEAE)는 연구 개입의 최종 용량 후 30일까지의 치료-상 기간 동안 보고되는 AE로 정의된다.
관련 유해 사례: 제품이 사례를 유도했을 수 있는 연구자 지원 연구(ISS)에 따른 합리적인 가능성이 존재한다. SAE의 인과관계(즉, 연구 개입에 대한 그 상관관계)는 CRF를 작성 중인 의사에 의해 평가될 것이다. 규제 보고 목적을 위해, 상관관계가 알려지지 않거나 언급되지 않은 경우, 이는 유해 약물 반응의 정의에 부합한다(추정되는 연관 - ADR).
면역-관련 유해 사례(ir-AE): 치료 관련 유해 사례의 하위세트는 면역 기반 치료법(예로, 면역 체크포인트 억제제 노출)과 연관되고, 병인이 알려지지 않고, 면역-매개 기전과 일치하는 임의의 장기의 임상적으로 유의미한 유해 사례로 정의된다.
특별 관심 유해 사례(AESI): 연구자에 의한 지원사와의 모니터링 지속 및 신속한 커뮤니케이션이 적절할 수 있는, 지원사 제품 또는 프로그램에 특이적인 과학적 및 의학적 우려 유해 사례(심각하거나 심각하지 않은). 이러한 사례는 이를 특징화하고 이해하기 위해 추가 연구를 필요로 할 수 있다. AESI는 프로토콜 개정에 의해 연구 동안 추가되거나 제거될 수 있다.
새로운 안전성 발견: 제품의 알려진 위험-이익 균형 또는 안전성 프로필에 영향을 미칠 수 있는 보고 가능한 개별 케이스 안전성 보고서(ICSR) 또는 안전성 문제 이외의 임의의 발견.
예상 AE/SAE: 제품의 승인된 적응증 및 요법 하의 예상도 결정은 현지 표지(이용 가능한 경우) 또는 EU 제품 특징 요약(SmPC)에 기반하여 결정해야 한다. 제품이 임의의 승인되지 않은 조합/요법으로, 또는 승인되지 않은 적응증/집단에 대해, 또는 승인되지 않은 투약을 위해 투여되는 경우, 예상도 결정은 IB에 기반해야 한다(연구 프로토콜에 정의된 바와 같은 참조 문헌에 기반하여, 조합 내의 각각의 특정 시판 약물의 표지를 고려함).
추정되는 예상치 못한 심각한 유해 반응(SUSAR): 인과관계, 심각성 및 예상도는 독립적 기준이다. 이는 조합이며, 보건 당국에 대한 급행 보고를 정의한다.
AE 정의에 부합하는 사례:
· 연구자의 의학적 및 과학적 판단에 있어서 임상적으로 유의미한 것으로 고려되는(즉, 기저 질환의 진행에 관련되지 않는), 기준선으로부터 악화된 것들을 포함하는, 임의의 비정상 실험실 테스트 결과(예로, 혈액학, 임상 화학, 또는 뇨분석) 또는 다른 안전성 평가(예로, ECG, 방사선학적 스캔, 활력 징후 측정).
· 병태의 빈도 및/또는 강도 증가를 포함하는 만성 또는 간헐적 기존 병태의 악화.
· 연구 시작 전에 존재했을 수 있더라도 연구 개입 투여 후 검출되거나 진단된 새로운 병태.
· 추정 약물-약물 상호작용의 징후, 증상, 또는 임상적 후유증.
· 연구 개입 또는 병행 투약의 추정 과용량의 징후, 증상, 또는 임상적 후유증.
AE 정의에 부합하지 않는 사례:
· 참여자의 병태에 대해 예상보다 더 중증이 아닌 한, 연구되고 있는 질환/장애, 또는 연구되고 있는 질환/장애의 예상 진행, 징후, 또는 증상.
· 의학적 또는 수술적 절차(예로, 내시경, 충수절제술): 절차를 야기하는 병태는 AE이다.
· 원치않는 의학적 발생이 일어나지 않은 상황(사회적 및/또는 편의상 병원 입원).
· 악화되지 않은 연구 시작 시 존재하거나 검출된 기존 질환(들) 또는 병태(들)의 예측된 일별 변동
사례가 상기 정의에 따른 AE가 아닌 경우, 이는 심각한 병태에 부합하는(예로, 연구 하 질환의 징후/증상에 대한 입원, 질환 진행으로 인한 사망) 경우에도 SAE일 수 없다.
AE 및/또는 SAE의 기록 및 추적
AE 및 SAE 기록
AE/SAE가 일어나는 경우, 사례에 관련된 모든 문서화(예로, 병원 진행 노트, 실험실 보고서, 및 진단 보고서)를 검토하고 eCRF 내의 모든 관련 AE/SAE 정보를 기록한다. 소정 케이스에 대한 의학적 기록의 사본이 지원사에 의해 요청되는 경우가 있을 수 있다. 이러한 경우, 참여자 번호를 제외한 모든 참여자 식별자를 지원사로의 제출 전 의학 기록 사본 상에서 수정한다. 연구자는 징후, 증상, 및/또는 다른 임상 정보에 기반하여 사례의 진단을 확립하기 위해 노력한다. 가능한 경우에는 항상, 진단(개별 징후/증상이 아님)을 AE/SAE로 문서화한다.
강도의 평가
AE/SAE의 강도는 NCI CTCAE 버전 5.0에 기반하여 평가한다.
인과관계의 평가
연구자는 연구 개입 및 각각의 AE/SAE의 각각의 발생 간 상관관계를 평가할 의무가 있다. 상관관계의 "합리적 가능성"은 상관관계를 배제할 수 없다기보다는 인과적 상관관계를 제시하는 사실, 증거, 및/또는 의견이 존재함을 전달한다. 연구자는 상관관계를 결정하기 위해 임상적 판단을 사용한다. 대안적 원인, 예컨대 기저 질환(들), 병행 치료법, 및 다른 위험 인자뿐만 아니라 연구 개입 투여에 대한 사례의 시간적 상관관계를 고려하고 연구할 것이다. 연구자는 또한 자신의 평가에 있어서, 시판 제품에 대한 연구자 브로셔(IB) 및/또는 제품 정보를 참고한다.
각각의 AE/SAE에 있어서, 연구자는 자신이 AE/SAE를 검토했으며 인과관계의 평가를 제공했음을 의학적 노트에 문서화해야 한다. SAE가 발생한 상황이 있을 수 있고, 연구자는 지원사에 대한 최초 보고서에 포함시킬 최소 정보를 갖는다. 그러나, 연구자가 항상 지원사에 대한 SAE 데이터의 최초 전송 전에 모든 사례에 대한 인과관계를 평가하는 것이 매우 중요하다. 연구자는 추적 정보의 견지에서 자신의 인과관계의 의견을 변경하고 업데이트된 인과관계 평가를 갖는 SAE 추적 보고서를 전송할 수 있다.
AE 및 SAE의 추적
연구자는 의학적으로 시사되는 바에 따라 또는 가능한 최대한 AE 또는 SAE의 성질 및/또는 인과관계를 규명하기 위해 모니터링 팀의 대표에 의해 요구되는 바에 따라 보충 측정 및/또는 평가의 수행을 진행하거나 배정할 의무가 있다. 여기에는 추가적인 실험실 테스트 또는 연구, 조직병리학적 검사, 또는 다른 헬스 케어 전문가와의 상담이 포함될 수 있다. 새롭거나 업데이트된 정보는 원래 작성된 eCRF에 기록해야 한다.
SAE의 보고
전자 데이터 수집 도구를 통해 지원사에 대한 SAE 보고. 지원사에 대한 SAE 보고를 위한 일차 기전은 전자 데이터 수집 도구이다. 전자 시스템이 24시간 초과 동안 이용 불가능한 경우, 임상장소에서는 종이 SAE 데이터 수집 도구(다음 섹션 참고)를 사용한다. 임상장소에서는 이용 가능해지는 대로 전자 시스템 내에 SAE 데이터를 입력한다. 주어진 장소에서 연구가 완료된 후, 전자 데이터 수집 도구를 오프-라인으로 취해 기존 데이터에 대한 새로운 데이터의 입력 또는 변경을 방지한다. 임상장소에서 전자 데이터 수집 도구를 오프-라인으로 취한 후 연구 참여자로부터 새로운 SAE 보고서를 수신하거나 이전에 보고된 SAE에 대한 업데이트된 데이터를 수신하는 경우, 임상장소에서는 종이 SAE 양식(다음 섹션 참고) 상에 또는 지원사 또는 대리인에게 팩스로 상기 정보를 보고할 수 있다.
종이 CRF를 통한 지원사에 대한 SAE 보고
SAE 종이 CRF의 팩스 전송은 지원사 또는 대리인에 상기 정보를 전송하기 위해 바람직한 방법이다. 드문 경우 그리고 팩스 설비의 부재 시, 익일배달 우편 또는 택배 서비스에 의해 SAE 데이터 수집 도구의 사본과 더불어 전화 통지가 허용 가능하다. 전화를 통한 최초 통지는 연구자에 있어서 지정된 보고 시간 프레임 내에 SAE CRF 페이지를 작성하고 서명할 필요성을 대체하지 않는다.
실시예 1.6A - AE 및 SAE 정보 수집을 위한 시기 및 빈도
모든 AE(SAE 포함)는 ICF의 서명으로부터 SOA에 특정된 시점에서의 EOT까지 수집한다. EOT 후, IMP-관련 또는 예상되지 않은 사례(IMP에 대한 상관관계가 명확하지 않은 것들 포함)만 보고한다.
모든 SAE 및 AESI를 아래에 나타낸 바와 같이, 24시간 내에 지원사 또는 양수인에게 보고하고 기록한다. 연구자는 임의의 업데이트된 SAE 데이터를 이용 가능해진 24시간 내에 지원사에 제출한다.
연구자가 연구 참여의 종결 후 AE 또는 SAE를 적극적으로 찾을 의무는 없다. 그러나, 참여자가 연구로부터 나온 후 임의의 시점에 연구자가 사망을 포함하는 임의의 SAE를 알게되는 경우, 그리고 스스로 연구 개입 또는 연구 참여에 합리적으로 관련 사례로 고려하는 경우, 연구자는 즉시 지원사에 통지해야 한다.
AE 및 SAE의 기록, 평가, 및 인과관계 평가 방법 및 SAE 보고를 작성하고 전송하기 위한 절차를 아래에 제공한다.
실시예 1.6B - AE 및 SAE를 검출하는 방법
AE 및/또는 SAE를 검출하는 경우 편향을 도입하지 않도록 주의한다. 결말이-정해지 않고 유도하지-않는 참여자 구두 질문이 AE 발생에 관해 문의하는 바람직한 방법이다.
실시예 1.6C - AE 및 SAE의 추적
최초의 AE/SAE 보고 후, 연구자는 후속 방문 시 각각의 참여자를 적극적으로 추적할 것이 요구된다. EOT 후, 안전성 추적 기간 동안, 해소 또는 안정화 시까지 보고하고, 모니터링하고, 추적할 사례는 하기와 같다:
· 상관관계와 무관한 모든 진행 중인 AE, SAE, 또는 특별 관심 사례
· 관련 사례로 인한 사망을 포함하는, 관련된 것으로 고려되는 모든 새로운 AE, SAE, 또는 특별 관심 사례
추적 절차에 대한 추가 정보를 아래에 제공한다.
실시예 1.6D - AE 또는 SAE로 인정되지 않은 질환-관련 사례 및/또는 질환-관련 결과
하기 질환 관련 사례(DRE)는 암을 갖는 참여자에서 일반적이며 심각할/생명을 위협할 수 있다:
· 연구 종결점인, 기저 질환의 진행.
· 최종 IMP 투여의 30일 후 일어나는 경우, 기저 질환의 진행으로 인한 사망. 최종 연구 개입의 30일 내에 일어난 모든 사망은 SAE로 보고해야 한다.
이들 사례는 전형적으로 연구 하의 질환과 연관되므로, 사례가 SAE의 정의에 부합할 수 있더라도 이들은 SAE의 신속 보고를 위한 표준 공정에 따라 보고하지 않는다. 이들 사례는 적절한 시간 프레임 내에 참여자의 eCRF에서 해당 페이지 상에 기록한다.
그러나, 하기 조건 중 어느 하나가 적용되는 경우, 사례는 SAE(DRE 대신)로 기록하고 보고해야 한다: 사례가, 연구자의 의견에 있어서, 개별 참여자에 대해 예상된 것보다 큰 강도, 빈도, 또는 지속기간을 가짐; 또는 연구자가 사례가 연구 개입에 관련되었다는 합리적 가능성이 존재한다고 고려함.
임신:
여성 참여자 및 시사되는 경우, 남성 참여자의 여성 파트너에서 모든 임신의 상세사항을 연구 개입의 시작 후 및 연구 개입의 최종 용량의 적어도 6개월 후에 수집할 것이다.
임신이 보고되는 경우, 연구자는 임신을 확인한 24시간 내에 지원사에 고지한다. 비정상 임신 결과(예로, 자연 유산, 자궁내 태아 사망, 사산, 선천성 기형, 자궁외 임신)는 SAE로 고려된다. 임신 추적은 임의의 자발적인 또는 자연적인 종결, 출산의 상세사항, 임의의 선천성 비정상의 존재 또는 부재, 선천성 결손, 모체 또는 신생아 합병증 및 연구 약물에 대한 이의 추정 관계를 포함하는 임신 결과를 기재한다.
실시예 1.7 - 약동학
실시예 1.7A - 샘플수집 시간
하기 채혈 시점이 혈장 중 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인의 농도를 측정하고 PK 분석을 수행하기 위해 정의된다:
채혈을 위한 샘플수집 시점은 PK/PDy 플로우 차트에서 확인할 수 있다(표 3). 특정된 시간에 그리고 사양에 따라 모든 혈액 샘플을 수집하는 것이 가장 중요하다.
임의의 사유로 누락되거나 소실된 샘플을 기록한다. 실제 채혈 시간을 eCRF에 기록한다. 샘플수집 및 약물 투여 날짜 및 시간도 정확히 기록한다.
조합 치료법을 위한 샘플수집 하위세트
조합 치료법 확대상에서의 코호트 A, B, C, 및 D에 있어서, 조밀한 샘플수집 하위세트는 주기 1, 1주 및 주기 3, 1주 동안 조밀한 샘플수집을 가진 각각의 코호트에 있어서 최소 10명의 참여자로 구성된다(표 4 및 5). 조합 치료법 증량상의 모든 참여자는 드문 샘플수집을 거친다.
실시예 1.7B - 생체분석 방법
생체분석 방법을 표 9에 요약한다. 간략하게, 혈장 중 사이토카인 RNA 혼합물로부터 번역된 4개의 표적 사이토카인(IL-12sc, IL-15 sushi, GM-CSF, 및 IFNα2b)의 전신 수준을 각각의 참여자 코호트에서 후향 모니터링한다. 이들 사이토카인 검정(IL-12sc, GM-CSF, IFNα, 및 IL-15 sushi)을 검출 민감도에 대한 필요성에 기반하여 MSD 또는 Quanterix SIMOA 플랫폼 상에서 수행한다. 조합 치료법을 시행받는 참여자에 있어서, Regeneron에 의해 개발되고 검증된 면역검정을 사용하여, PK/PDy 플로우차트(표 5)에 따라 혈청 중에서 세미플리맙 농도를 모니터링한다.
[표 12]
Figure pct00056
실시예 1.7C - PK 파라미터
약동학 파라미터를 사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인의 집중적으로 샘플수집된 혈장 농도 및 세미플리맙의 집중적으로 샘플수집된 혈청 농도로부터, 비구획 방법을 사용하여, PKDMS 소프트웨어(Pharsight)로 계산한다.
사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인에 대한 PK 파라미터에는 비제한적으로 표 13에 기재된 것들이 포함된다.
[표 13]
Figure pct00057
사이토카인 RNA 혼합물에 의해 인코딩되는 사이토카인에 대해 집단 PK 접근을 사용할 수 있다. 수행된 경우, 생성된 데이터를 독립 보고서(들)에 보고한다.
세미플리맙에 대한 PK 파라미터에는 비제한적으로 표 14에 기재된 것들이 포함된다.
[표 14]
Figure pct00058
실시예 1.8 - 약력학
사이토카인 RNA 혼합물 및 세미플리맙의 표적 연루, PDy, 및 안전성 바이오마커가 용량 증량 및 PoC 시험 성공을 위해 중요하다. 정량적 및 반-정량적 바이오마커는 표적 발현, PDy, 및 PK 파라미터와 용량 수준의 연관성 확립을 돕고, MTD/MAD의 결정 보조를 도울 수 있다. 사이토카인 RNA 혼합물 단독치료법 및 사이토카인 RNA 혼합물/세미플리맙 조합 치료법 프로그램에 대한 바이오마커는 순환 표적 발현, PDy/안전성 마커, 및 조직 유래 PDy 마커로 넓게 분류될 수 있다.
가능한 경우, PDy 샘플 수집은 일정이 잡힌 PK 샘플수집과 일치한다.
실시예 1.8A - 순환 표적 연루 및 안전성 바이오마커 모니터링 계획
혈장 중 사이토카인 RNA 혼합물로부터 번역된 4개의 표적 사이토카인(IL-12sc, IL-15sushi, GM-CSF, 및 IFNα2b) 및 이의 하류 PDy 표적(IFNγ 및 IFNγ-유도 단백질 10[IP10]), 및 세미플리맙의 전신 수준을 각각의 참여자 코호트에서 후향 모니터링한다.
임상적 AE의 확인을 보조하기 위해 안전성 바이오마커 CRP 및 페리틴을 임상 파라미터(예로, 열, 오심, 피로, 두통, 근육통, 불편, 저산소증, 저혈압)와 함께 사용한다. 샘플을 이차 CRS의 모니터링을 위해 수집한다. CRS 등급 2 이상의 증상 발생 시에만 연구 수행 동안 6개 사이토카인(IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, 및 TNFα) 패널을 후향 평가한다. 잠재적 자가면역성을 모니터링하기 위해 조합 치료법에 대한 샘플을 수집한다; ANA, RF, TSH, 및 자유 T4를 연구의 조합 치료법 부분에 대해 후향 평가한다.
실시예 1.8B - 면역 평가를 위한 종양 생검
첫 번째 IMP 투여 전, 5주 내지 8주차에, 및 주기 6 또는 질환 진행 시(중 가장 먼저 일어나는 시점에) 의무적 종양 생검을 수집한다. 치료-상 생검 표본(즉, 5주 내지 8주차 중의 하나, 및 주기 6 또는 질환 진행 시의 다른 하나)에 있어서, 주사된 및 주사되지 않은 병소 둘 다로부터 생검 표본을 얻는 것이 요구된다. 바람직하게는, 치료-상 생검할 병소 중 하나는 기준선에서 생검된 것이어야 한다. 이것이 가능하지 않은 경우, 또 다른 주사된 병소로부터의 조직 표본이 고려될 수 있다. 생검할 병소에 제한이 존재하는 경우, 동일한 부위로부터의 또 다른 샘플을 이전에 수집한 경우 또는 다음 샘플수집 시점에 수집할 수 있는 경우에는 주사되지 않은 병소만의 생검이 고려될 수 있다.
모든 참여자에 대한 생검을 헤마톡실린 및 에오신 염색을 거치고 CD3, CD8, 및 종양 세포에 대한 표준 IHC를 의심되는 종양 유형에 관해 SOX10 마커(흑색종에 있어서) 또는 판사이토케라틴(상피 종양 HNSCC 및 CSCC를 갖는 환자에 있어서 [CK]) 및 림프종 마커에 의해 결정할 것이다; 조합 치료법 코호트에 있어서 표준 IHC에는 CD68 및 PD-L1이 또한 포함된다. 참여자 생검(반응자 및 비-반응자 모두로부터)의 하위세트는 12 마커 멀티플렉스 IHC를 거친다. 연구의 단독치료법 부분에 있어서, 멀티플렉스 패널은 CD3, CD4, CD8, CD38, CD45, CD45RO, CD56, CD68, FoxP3, PD-1, PD-L1, 및 SOX10 또는 PanCK 또는 림프종 마커로 구성된다. 연구의 조합 치료법 부분에 있어서, 멀티플렉스 패널은 CD3, CD4, CD8, CD38, CD56, CD68,그랜자임 B(GZMB), 콜로니 자극 인자 1 수용체(CSF-1R), 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3), PD-1, PD-L1, 및 SOX10(흑색종에 있어서) 또는 PanCK(상피 종양 HNSCC 및 CSCC를 갖는 환자에 있어서) 또는 림프종 마커로 구성된다. 종양 미세환경에서의 변화를 평가하기 위해, 특히 종양 및 간질에서 침윤 T-세포의 빈도 및 밀도를 평가하는 데 있어서 치료-전 및 치료-후 생검에 대한 IHC를 수집하고 사용한다. 생검-전 및 생검-후 간 T-세포의 증가는 기전의 증명을 정의하는 것을 돕기 위해 사용된 양성 면역 연관성이다.
단독치료법 및 조합 치료법 모두의 확대 동안 흑색종 환자에 대해서만, 5주 내지 8주에 수행된 단일 종양 코어 생검은 TIL 단리를 위해 전용할 것이다. 이는 제한된 수의 선택된 흑색종 환자(예로, 성공적인 TIL 단리를 가진 10명 이하의 환자)에 적용될 것이다. 이는 추가적인 생검이 아닐 것이지만, 대신에 게노믹스 평가를 위해 전용된 샘플을 TIL 단리를 위해 사용할 것이다(특별한 조건 하에-포르말린 고정되지 않고 취급됨). 상기 종류의 샘플 및 테스트는 치료 연구자에 의해 결정되는 바와 같이 치료에 대한 반응의 임상 징후(종양 크기 감소 및/또는 종양 부위에서의 홍반)를 갖는 환자에게 적용된다.
샘플이 이용 가능한 경우 종양 트랜스크립토믹스(RNA 서열분석) 게노믹스, 및 신-항원을 또한 분석한다.
실시예 1.9 - 게노믹스
PBMC에 대한 체세포 돌연변이 및 HLA 유형분석; 종양에 대한 RNA 서열분석(RNAseq); 혈액에 대한 RNAseq(조합 치료법에 대해서만)을 포함하는, 몇몇 분석을 수행하여 치료 맥락에서 게노믹스를 분석한다. 종양 트랜스크립토믹스 및 게노믹스 분석을 또한 샘플이 이용 가능한 경우 수행할 수 있다. 종양 RNAseq 데이터(또한 바이오마커 분석의 일부로 계획됨)가 유전자 특징부, 종양 내 신-항원, TMB, 및 TCR 다양성을 결정하기 위해 요구된다. HLA 유형분석은 혈액 중에서 수행할 것이다. 적절한 샘플 물질이 이용 가능한 경우 이들 분석에서의 참여는 의무적이다.
연구의 단독치료법 부분에 있어서, 신-항원은 흑색종 참여자에서만 평가한다. 연구의 조합 치료법 부분에 있어서, 신-항원은 코호트 A의 참여자(PD-1/PD-L1 난치성)에 대해 확대상에서만 평가할 것이다.
DNA 또는 RNA 추출 실패 시, 참여자로부터의 대체 샘플(종양 또는 혈액)이 요청된다. 원래 동의서에 포함되어 있지 않다면, 대체 샘플을 수득하기 위해 서명된 사전 서면 동의서가 요구된다. 샘플 취급 및 운송에 대한 타당성 제약 시, 관련된 임상 장소로부터의 샘플은 이들(또는 일부 이들) 분석을 위해 평가되지 않을 것이다.
실시예 1.9A - 면역원성 평가
사이토카인 RNA 혼합물-인코딩된 사이토카인에 대한 항체 단독치료법 및 조합 치료법 둘 다에 대해 평가하는 반면, 세미플리맙에 대한 항체를 조합 치료법 코호트에서 평가한다.
사이토카인 RNA 혼합물-인코딩된 사이토카인에 대한 항체를 SOA에 따라 모든 참여자로부터 수집된 혈장 샘플에서 평가한다. 추가적으로, 혈장 샘플을 또한 연구 개입을 중단하거나 연구를 철회한 참여자로부터 최종 방문 시 수집한다. 이들 샘플은 지원사 또는 지원사의 양수인이 테스트한다. 세미플리맙에 대한 항체를 혈청 샘플에서 평가한다. 세미플리맙에 대해 ADA에 대한 샘플을 테스트한다.
혈장 샘플을 사이토카인 RNA 혼합물로부터의 각각의 4개의 발현된 사이토카인으로의 항체 결합에 대해 스크리닝하고 확인된 양성 샘플의 역가를 보고한다. 사이토카인 RNA 혼합물의 면역원성을 추가 특징화하기 위해 다른 분석을 수행한다.
사이토카인 RNA 혼합물에 대한 항체의 검출 및 특징화를 지원사의 감독에 의해 또는 감독 하에 검증된 검정 방법을 사용하여 수행한다. 항체를 연구 개입의 활성을 중화하는 이의 능력에 대해 추가 특징화하고/하거나 평가한다. 샘플은 사이토카인 RNA 혼합물 및/또는 세미플리맙에 대한 면역 반응의 추가 분석을 가능하게 하기 위해 지원사에 의해 선택된 시설에서 연구를 위한 최종 참여자의 최종 방문 후 최대 5년 동안(또는 현지 규정에 따라) 보관한다.
실시예 1.9B - RNA 트랜스크립톰 연구
탐색 트랜스크립톰 연구를 마이크로어레이, 및/또는 대안적인 동등 기술을 사용하여 수행하며, 이는 각각의 조직 생검 샘플에 대한 트랜스크립톰 프로필을 생성하는 수천 개 RNA 종의 상대 존재비의 동시 측정을 촉진한다. IHC 후 잔여 종양 조직으로 RNA 서열분석을 거쳐 종양 환경 내의 전반적 유전자 발현 변화를 평가하고, 특히 친-염증성 및/또는 IFNγ 유전자 특징부의 발생을 찾는다. 이는 사이토카인 RNA 혼합물 및/또는 세미플리맙의 작용에 관련된 적응 면역 반응과 연관되는 트랜스크립톰 프로필에서의 변화 평가를 가능하게 한다.
동일한 샘플을 또한 사용하여 대안적 기술의 적용에 의한 발견을 확인한다.
동일한 RNAseq 분석을 연구의 조합 치료법 부분 동안 혈액 샘플에서 수행한다.
실시예 1.10 - 통계적 고려사항
실시예 1.10A - 통계적 가설
용량 증량
본 연구의 용량 증량상에는 공식적인 통계적 가설이 존재하지 않는다. 본 연구는 관찰된 DLT에 따라 사이토카인 RNA 혼합물의 MTD 또는 MAD를 확립하는 것을 목표로 한다. 처음 두 DL에 있어서 단일-참여자 용량 증량에 이어 합리적 설계를 사용하여 용량 증량을 진행한다.
세미플리맙을 포함하는 조합 치료법에 있어서, 본 연구는 관찰되는 DLT에 따라 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 MTD 또는 MAD를 확립하는 것을 목표로 한다. 용량 증량을 합리적 설계를 사용하여 진행한다.
용량 확대
단독치료법에 있어서, 귀무 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 10% 이하라는 것이고, 대안적 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 26% 이상이라는 것이다.
조합 치료법에 있어서:
· 코호트 A: 귀무 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 10% 이하라는 것이고, 대안적 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 26% 이상이라는 것이다.
· 코호트 B: 귀무 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 30% 이하라는 것이고, 대안적 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 55% 이상이라는 것이다.
· 코호트 C: 귀무 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 45% 이하라는 것이고, 대안적 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 70% 이상이라는 것이다.
· 코호트 D: 귀무 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 15% 이하라는 것이고, 대안적 가설은 RECIST 1.1에 따른 실제 ORR이 30% 이상이라는 것이다.
실시예 1.10B - 샘플 크기 결정
증량상 동안 연구되는 용량 수준에 따라, 사이토카인 RNA 혼합물이 단일 제제로 투여되는 경우 전체 최대 72명의 참여자가 등록한다. 확대상 동안 연구되는 용량 수준 및 확대상 동안 각각의 코호트에 대해 완료된 단계에 따라, 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물이 투여되는 경우 전체 최대 192명의 참여자가 등록한다. 연구에 등록될 환자의 최대 수는 하기 섹션에 추가로 상세히 기재된 바와 같이, 최대 264명의 환자로 예상된다.
용량 증량상
단독치료법 용량 증량상에는 공식 샘플 크기 계산이 존재하지 않는다. 대략 38명의 DLT-평가 가능 참여자가 약 8개 DL의 평가를 갖는 용량 증량상에 등록한다. 실제 샘플 크기는 관찰된 DLT 및 실제 탐색된 용량 수준의 수에 따라 변한다.
조합 치료법에 있어서, 세미플리맙과 조합된 사이토카인 RNA 혼합물의 용량 증량에서의 실제 샘플 크기는 관찰되는 DLT 및 실제로 탐색되는 용량 수준의 수에 따라 변한다(대략 18명 내지 36명의 DLT-평가 가능 참여자).
용량 확대상
단독치료법 용량 확대상에서는 합리적 설계를 사용한다. 실제 반응률이 10%라는 귀무 가설을 1-사이드 대안에 대해 테스트한다. 첫 번째 단계에서, 16명의 참여자가 발생한다. 이들 16명의 참여자에서, RECIST 1.1 기준에 따라, 1건 이하의 반응이 존재하는 경우, 연구를 중단한다. 다른 경우, 총 34명에 대한 18명의 추가 참여자가 발생한다. 항-PD-1 또는 항-PD-L1에 기반한 사전 치료법에 실패한 진행성 흑색종을 갖는 34명의 참여자에서 7건 이상의 반응이 관찰되는 경우 귀무 가설은 거부된다. 상기 설계는 실제 반응률이 26%인 경우 1-사이드 유형 I 에러율 5% 및 파워 80%를 산출한다.
조합 치료법 확대상에 대한 샘플 크기는 1-사이드 알파 수준 5% 및 85% 파워로 합리적 설계에 기반하여 계산한다; 진행성 고형 종양을 갖는 대략 156명의 참여자가 등록할 것으로 예상된다. 각각의 단계에서 ORR 가정, 요구되는 샘플 크기, 및 요구되는 반응자 수를 표 15에 제공한다:
[표 15]
Figure pct00059
약어: CSCC = 피부 편평상피세포 암종; HNSCC = 두부경부 편평상피세포 암종
주: 단계 1에서 치료 코호트 내에서 관찰되는 객관적 반응의 수 및 데이터의 전체성에 기반하여, 치료 코호트의 단계 2로의 진행을 결정할 수 있음.
실시예 1.10C - 분석을 위한 집단
분석 목적을 위해, 하기 집단을 표 16에 나타낸 바와 같이 정의한다:
[표 16]
Figure pct00060
실시예 1.10D - 통계적 분석
유효성 분석
주사된 및 주사되지 않은 병소를 포함하는, 사전-선택된 병소에 기반한 RECIST 1.1에 따른 객관적 반응률(ORR)을 서술 통계로 요약한다. 90% 2-사이드 신뢰도 구간은 클로퍼-피어슨(Clopper-Pearson) 방법을 사용하여 연산한다. 통계적 추론은 가설 및 샘플 크기 계산 섹션에서 정의된 알파 수준에 기반한다. 유사한 분석을 RECIST 1.1 및 iRECIST에 따라 DCR, 및 iRECIST에 따라 ORR에 대해 제공한다. 또한, 지지 분석으로서 주사된 및 주사되지 않은 병소에 대한 종양 부담 변화의 요약을 별도로 제공한다. DoR 및 PFS는 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법을 사용하여 요약한다.
[표 17]
Figure pct00061
안전성 분석
모든 안전성 분석은 모든-치료받은 집단에서 수행할 것이다.
[표 18]
Figure pct00062
용량-제한 독성
용량 증량상(단독치료법 및 조합 치료법)에서, DLT를 단독치료법 및 조합 치료법 그리고 용량 수준별로 요약한다. DLT의 상세사항은 참여자에 의해 제공된다. DLT는 상술된 바와 같이, NCI CTCAE 버전 5.0을 사용하여 정의된다.
유해 사례의 분석
관찰 기간을 3 구획: 스크리닝, TEAE 및 치료-후로 구분한다. 스크리닝 기간은 사전 서면 동의서에 서명한 시간으로부터 연구 개입의 첫 번째 용량의 투여까지로 정의된다. 치료로-발생하는 유해 사례(TEAE) 기간은 연구 개입의 첫 번째 용량부터 연구 개입의 최종 용량 후 30일까지의 시간으로 정의된다. 치료-후 기간은 연구 개입의 최종 용량 후 31일부터 시작해서 연구 종결 또는 사망 중 먼저 일어나는 때까지의 시간으로 정의된다.
치료-전 AE는 스크리닝 기간 동안의 임의의 AE로 정의된다. 치료로-발생하는 AE는 TEAE 기간 동안 발생하거나, 악화되거나(연구자 의견에 따라) 또는 심각해지는 AE로 정의된다. 치료-후 AE는 치료-후 기간 동안 보고되는 AE로 정의된다. AE 보고의 일차 주안점은 TEAE에 있다. 치료-전 및 치료-후 AE는 별도로 기재된다.
TEAE는 규제 활동에 대한 의학 사전(MedDRA)에 따라 코드화된다. AE는 NCI CTCAE 버전 5.0에 따라 등급평가된다. 등급은 요약에서 고려된다. 동일한 우선 용어(PT)의 다회 발생을 갖는 참여자에 대해서는, 최대 등급을 사용한다.
TEAE의 전반적 요약을 제공한다. 하기 중 임의의 것을 경험하는 참여자의 수 및 백분율을 제공한다:
· TEAE.
· 등급 3 이상의 TEAE.
· 등급 3 또는 4의 TEAE.
· 등급 5 TEAE(치료 기간 동안 치명적 결과를 갖는 임의의 TEAE).
· 심각한 TEAE.
· 심각한 치료-관련 TEAE.
· 치료 중단을 야기하는 TEAE.
· AESI.
· 치료-관련 TEAE.
· 등급 3 이상의 치료-관련 TEAE.
일차 시스템 장기 클래스(SOC) 및 PT별 TEAE를 경험하는 참여자의 수 및 백분율을 NCI CTCAE 등급(모든 등급 및 등급 3 이상)별로 요약한다. 치료-관련 TEAE, AESI, 치료 중단을 야기하는 TEAE, 용량 변형을 야기하는 TEAE, 심각한 TEAE, 치명적 결과를 갖는 TEAE 및 치료-후 투약 기간 동안 발생하는 AE/SAE에 대해 유사한 표를 작성한다. 연구 개입 후 치료-관련 TEAE의 하위세트로서, 면역-관련 AE(irAE)를 별도로 연구의 단독치료법 및 조합 부분에 대해 요약한다.
임상 실험실 평가
임상 실험실 결과는 적용 가능한 경우, NCI CTCAE 버전 5.0에 따라 등급평가한다. TEAE 기간 동안 가장 나쁜 등급을 사용하여 실험실 비정상(즉, 모든 등급 및 등급 3 이상)을 갖는 참여자 수(%)를 모든-치료 집단에 대해 제공한다.
상기 설명된 바와 같이, 작용 방식에 기반한 실험실 값에서의 모든 일시적 변화가 TEAE로 문서화되지는 않는다; 연구자는 이를 TEAE로 문서화하기 위해 실험실 변화가 임상적으로 관련되는지 여부를 평가한다.
NCI CTCAE 버전 5.0 척도가 적용 불가능한 경우, 정상을-벗어난 실험실 범위 값의 실험실 비정상을 갖는 참여자 수를 표시한다.
실시예 1.11 - 임상 실험실 테스트
표 19 및 20에 상세히 제공된 테스트를 수행하고 결과를 eCRF에 입력한다. 참여자의 포함 또는 제외를 위한 프로토콜-특이적 조건을 프로토콜에 상세히 제공한다. 연구자에 의해 필요하다고 결정되거나 현지 규제에 의해 요구되는 바에 따라 연구 동안의 임의의 시점에 추가 테스트를 수행한다. 연구자는 이의 각각의 실험실 안전성 보고서의 검토를 문서화해야한다.
[표 19]
Figure pct00063
주:
a 간 화학 중단 기준 및 요구되는 행동 그리고 간 중단 후 추적 평가 또는 모니터링 사례의 상세사항을 아래에 제공한다. 중증 간 손상을 시사할 수 있는(가능하게는 하이(Hy's) 법칙), ALT가 정상 상한(ULN)의 3배 이상이고 빌리루빈이 2x ULN 이상(35% 초과 직접적 빌리루빈)이거나 ALT가 3x ULN 이상이고, 국제 표준화 비율(INR)이 측정된 경우, INR이 1.5 초과인 모든 사례는 SAE로 보고해야 한다.
[표 20]
Figure pct00064
a 조합 치료법에 있어서, 이들 평가는 코호트 A(항-PD-1/PD-L1 치료법에 실패한 흑색종을 갖는 참여자)에서만 수행할 것이다.
b TMB는 연구의 조합 치료법 부분에서 평가할 것이다. 상기 분석은 나머지 샘플 상에서 단독치료법의 환자에 대해 고려될 수 있다.
c 연구의 단독치료법 및 조합 치료법 부분에서 평가될 단일 및 멀티플렉스 IHC 패널의 설명에 대해서는 실시예 1.8B를 참고한다.
d SOX10은 흑색종 종양 세포의 검출을 위한 마커이며; 상피 종양(HNSCC 및 CSCC)에 대해서는 이것이 판사이토케라틴(CK)으로 대체될 것이다.
실시예 1.12 - 피임 가이드 및 임신 정보 수집
가임 여성(WOCBP): 가임 여성은 하기와 같은 여성이다:
1. 일정 시점에 초경을 했으며,
2. 자궁절제술 또는 양쪽 난소절제술을 거치지 않았거나
3. 적어도 연속 24개월 동안 자연 폐경에 이르지 않았음(즉, 이전의 연속 24개월 동안 임의의 시점에 생리를 했음)(암 치료법 후의 무월경은 임신 가능성을 배제하지 않음).
피임 가이드
· 남성 참여자
o 가임 여성 파트너가 있는 남성 참여자는 이들이 개입 기간 동안 및 연구 개입의 최종 용량 후 6개월 동안 하기 중 하나에 동의한 경우 참가에 적격이다:
Figure pct00065
이들의 일반적이고 선호하는 생활습관으로 페니스-질 성교를 금욕(장기 및 지속적 기준으로 금욕)하고 금욕을 유지하기로 동의함
Figure pct00066
현재 임신 중이 아닌 가임 여성과 페니스-질 성교를 갖는 경우 후술되는 바와 같이 연간 실패율이 1% 미만인 남성 콘돔과 파트너의 피임 방법 사용을 이용하기로 동의함
o 또한, 남성 참여자는 연구의 지속기간 동안 및 연구 개입의 최종 용량 후 6개월 동안 정자 기증을 삼가해야 함
o 임신한 또는 수유 중인 파트너를 갖는 남성 참여자는 개입 기간 동안 및 연구 개입의 최종 용량 후 6개월 동안 페니스 질 성교의 금욕을 유지하거나 각각의 페니스 성교 에피소드 동안 남성 콘돔을 사용하기로 동의해야 한다.
· 여성 참여자
o 가임 여성 참여자는 이들이 후술되는 바와 같이 지속적이고 정확하게 고도로 효과적인 피임 방법을 사용하기로 동의하는 경우 참여에 적격이다:
사용자 의존적인 고도로 효과적인 피임 방법 : 지속적이고 정확하게 사용되는 경우 연간 실패율 1% 미만.
i) 배란 억제와 연합되는 조합(에스트로겐 및 프로게스테론 함유) 호르몬 피임: 경구, 질내, 또는 경피
ii) 배란 억제와 연합되는 프로게스테론 단독 호르몬 피임: 경구 또는 주사
사용자 독립적인 고도로 효과적인 방법:
iii) 배란 억제와 연합되는 임플란트 가능한 프로게스테론 단독 호르몬 피임: 자궁내 장치(IUD), 자궁내 호르몬 방출 시스템(IUS), 또는 양쪽 난관 차단
정관절제 파트너: 정관절제 파트너는 파트너가 WOCBP의 유일한 남성 섹스 파트너이고 정자의 부재가 확인된 경우 고도로 효과적인 피임 방법이다. 그렇지 않은 경우, 추가적인 고도로 효과적인 피임 방법을 사용한다.
성적 금욕: 성적 금욕은 연구 개입과 연관된 전체 위험 기간 동안 이성 성교를 삼가하는 것으로 정의되는 경우에만 고도로 효과적인 방법으로 고려된다. 성적 금욕의 신뢰도는 연구 지속기간 및 참여자의 선호하는 및 일반적인 생활습관에 관해 평가한다.
주: 전형적인 사용 실패율은 지속적이고 정확하게 사용되는 경우의 실패율과 상이할 수 있다. 사용은 임상 연구에 참여하는 참여자에 대한 피임 방법의 사용에 관해 현지 규제와 일치해야 한다. 호르몬 피임은 연구 개입과의 상호작용에 취약할 수 있고, 이는 피임 방법의 유효성을 감소시킬 수 있다. 이러한 경우, 개입 기간 동안 및 연구 개입의 최종 용량 후 적어도 6개월 동안 2개의 고도로 효과적인 피임 방법을 이용한다. 경구 호르몬 피임은 연구 개입과의 상호작용에 취약할 수 있고, 이는 피임 방법의 유효성을 감소시킬 수 있다. 이러한 경우, 경구 피임을 상이한 투여 경로의 또 다른 고도로 효과적인 피임 방법으로 대체할 수 없는 경우에는, 개입 기간 동안 및 연구 개입의 최종 용량 후 적어도 6개월 동안 호르몬 피임 방법을 남성 콘돔(파트너를 위한)으로 보완해야 한다.
임신 테스트: WOCBP는 생리 기간 확인 및 고도로 민감한 혈청 임신 테스트 음성 후에만 포함된다. 추가적인 임신 테스트를 개입 기간 동안 각각의 치료 주기의 시작 시 및 EOT 시 수행한다. 임신 테스트는 생리 주기가 누락된 경우마다 또는 달리 임신이 추정되는 경우 수행한다. 임신 테스트는 현지 실험실 절차에 따라 수행한다. 연구에 참여하는 동안 임신하게 된 모든 여성 참여자는 연구 개입을 중단하고 연구를 철회한다.
임신 정보의 수집:
임신하게 된 파트너를 갖는 남성 참여자 - 연구자는 남성 참여자가 본 연구에 있는 동안 임신하게 된 임의의 남성 참여자의 여성 파트너에 대한 임신 정보를 수집하기 위해 노력한다. 이는 사이토카인 RNA 혼합물을 투여받는 남성 참여자에 대해서만 적용된다. 임신한 여성 파트너로부터 필요한 서명 사전 서면 동의서를 수득한 후, 연구자는 임신 정보를 적절한 양식에 기록하고 이를 파트너의 임신을 인지한 24시간 내에 지원사에 제출한다. 여성 파트너를 또한 추적하여 임신 결과를 결정한다. 모체 및 아이의 상태에 대한 정보를 지원사에 전달한다. 일반적으로, 추적은 추정 출산일 후 6주 내지 8주 이하일 것이다. 임의의 임신 종결은 태아 상태(기형의 존재 또는 부재) 또는 절차에 대한 시사와 무관하게 보고할 것이다.
임신하게 된 여성 참여자 - 연구자는 본 연구에 참여하는 동안 임신하게 된 모든 여성 참여자에 대한 임신 정보를 수집한다. 정보를 적절한 양식에 기록하고 이를 참여자의 임신을 인지한 24시간 내에 지원사에 제출한다. 참여자를 추적하여 임신 결과를 결정한다. 연구자는 참여자 및 신생아에 대한 정보를 수집할 것이며 정보를 지원사에 전달할 것이다. 일반적으로, 추적은 추정 출산일 후 6주 내지 8주를 초과하여 요구되지 않는다. 임의의 임신 종결은 태아 상태(기형의 존재 또는 부재) 또는 절차에 대한 시사와 무관하게 보고한다. 임의의 임신 합병증 또는 임신의 선택적 종결은 AE 또는 SAE로 보고한다. 자연 유산은 항상 SAE로 고려되며 이와 같이 보고할 것이다. 연구자에 의해 연구 개입과 합리적으로 관련된 것으로 고려되는 임의의 연구-후 임신 관련 SAE는 지원사에 보고한다. 연구자가 이전 연구 참여자에서 상기 정보를 적극적으로 찾을 의무는 없지만, 연구자는 자발적 보고를 통해 SAE를 인지할 수 있다.
연구에 참여하는 동안 임신하게 된 모든 모든 여성 참여자는 연구 개입을 중단하고 연구를 철회한다.
실시예 1.13 -- 약물-관련 유해 사례에 대한 권장 지지 케어 또는 용량 변형 가이드라인
[표 21]
Figure pct00067
Figure pct00068
CRS의 증상, 등급평가, 및 관리
CRS와 연관된 임상 징후 및 증상
· 심혈관: 빈맥, 확대된 맥박압, 저혈압, 증가된 심장 출력(조기), 잠재적으로 감소된 심장 출력(후기)
· 응고: 상승된 D-이량체, 저섬유소원혈증 ± 출혈
· 위장관: 오심, 구토, 설사
· 일반적: 열 ± 경축, 불편, 피로, 식욕부진, 근육통, 관절통, 두통
· 간: 트랜스아미나제증가증, 고빌리루빈혈증
· 신경학적: 두통, 정신 상태 변화, 혼동, 섬망, 단어 인출 어려움 또는 부전 실어증, 환각, 경련, 측정이상, 변경된 보행, 발작
· 신장: 질소혈증
· 호흡: 빠른 호흡, 저산소혈증
· 피부: 발진
CRS의 등급평가 및 관리를 표 22에 제공한다.
[표 22]
Figure pct00069
기타 AE에 대한 가이드
표 23은 포도막염 관리를 위한 가이드를 제공한다; 다른 원인, 예컨대 전이성 질환, 감염 또는 다른 눈 질환(예로, 녹내장 또는 백내장)을 배제하기 위한 모든 시도가 수행됨을 주지한다.
표 24는 사이토카인 RNA 혼합물에 기인하는 유해 사례의 관리를 위한 가이드 및 지지 케어 전략을 제공한다.
또한, 구체적으로 연구의 조합 부분에 있어서, 보고된 AE가 하나의 IMP에 관련된 것으로 고려되는 경우, 관련 IMP를 중단하고, 연구의 단독치료법 부분으로부터의 이용 가능한 데이터에 기반하여 그리고 IMP의 계속이 현재의 케이스별 이익-위험 평가에 기반하여 참여자의 최선책으로 고려되는 경우, 다른 IMP로의 연구 개입을 계속한다. 세미플리맙에 관련된 것으로 고려될 수 있는 irAE의 관리에 있어서, 세미플리맙 IB 및 "면역치료법-관련 독성(면역 체크포인트 억제제-관련 독성)의 관리"에 대한 국립 통합 암 네트워크(NCCN) 가이드를 따른다(www.nccn.org에서 이용 가능함).
48시간 내지 72시간 내에 스테로이드에 반응성이 아닌 중증 irAE를 갖는 참여자에 있어서, 항-TNFα 치료법의 조기(즉, 72시간 이내) 개시가 관련 의학 전문가와의 상의에 의해 보증될 수 있다.
[표 23]
Figure pct00070
다른 원인, 예컨대 전이성 질환, 감염 또는 다른 눈 질환(예로, 녹내장 또는 백내장)을 배제하기 위한 모든 시도를 수행한다.
[표 24]
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
실시예 1.14- 고형 종양에서의 반응 평가 기준 버전 1.1
상세사항은 문헌[Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J, Schwartz LH, Sargent D, Ford R, et al. New response evaluation in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 2009 Jan;45(2):228-47]에서 제공된다.
기준선에서 종양의 측정 가능성
기준선에서, 종양 병소/림프절은 하기와 같이 측정 가능한 또는 측정 불가능한 것으로 분류된다.
측정 가능한 병소를 하기 최소 크기를 갖는 적어도 1 치수(기록할 측정면의 최장 지름)로 정확히 측정한다:
· CT 스캔에 의해 10 ㎜(CT 스캔 슬라이스 두께는 5 ㎜ 이하).
· 임상 검사에 의해 10 ㎜ 캘리퍼 측정(캘리퍼로 정확히 측정할 수 없는 병소는 측정-불가능한 것으로 기록해야 함).
· 흉부 X-선에 의해 20 ㎜.
악성 림프절: 병리적으로 확대되고 측정 가능한 것으로 고려되기 위해서, 림프절은 CT 스캔에 의해 평가되는 경우 단축이 15 ㎜ 이상이어야 한다(CT 스캔 슬라이스 두께는 5 ㎜ 이하인 것이 권장됨). 기준선에서 그리고 추적 시, 단축만 측정하고 추적한다.
측정-불가능한 병소는 작은 병소(최장 지름 10 ㎜ 미만 또는 10 ㎜ 이상 15 ㎜ 미만 단축을 갖는 병리적 림프절)뿐만 아니라 측정-불가능한 병소를 포함하는 모든 기타 병소이다. 측정-불가능한 것으로 고려되는 병소에는 재현성 있는 조영 기법에 의해 측정 불가능한 신체 검사에 의해 확인되는 연수막 질환, 복수, 흉막 또는 심낭 삼출물, 염증성 유방 질환, 피부 또는 페의 림프관성 관여, 복부 물질/복부 장기비대가 포함된다.
병소 측정 가능성에 관한 특별 고려사항:
뼈 병소:
· 뼈 스캔, 양전자 방출 단층촬영 스캔 또는 단순 필름은 뼈 병소를 측정하기 위해 적절한 조영 기법으로 고려되지 않는다. 그러나, 뼈 병소의 존재 또는 소실을 확인하기 위해 이들 기법을 사용할 수 있다.
· 단면 조영 기법, 예컨대 CT 또는 MRI에 의해 평가될 수 있는, 확인 가능한 연조직 성분을 갖는 용해성 뼈 병소 또는 혼합 용해성-분생형 병소는 연조직 성분이 상술된 측정 가능성의 정의에 부합하는 경우 측정 가능한 병소로 고려될 수 있다.
· 분생형 뼈 병소는 측정-불가능하다.
낭성 병소:
· 방사선학적으로 정의된 단순 낭에 대한 기준에 부합하는 병소는 이들이 정의상, 단순 낭이므로, 악성 병소로 고려되지 않는다(측정 가능하지도 측정-불가능하지도 않음).
· 낭성 전이를 나타내는 것으로 여겨지는 '낭성 병소'는 이들이 상술된 측정 가능성의 정의에 부합하는 경우, 측정 가능한 병소로 고려될 수 있다. 그러나, 동일한 환자에서 비-낭성 병소가 존재하는 경우, 이들이 표적 병소로서의 선택을 위해 선호된다.
사전 국소 치료를 갖는 병소:
· 이전에 조사된 영역에, 또는 다른 국소-영역 치료법을 거친 영역에 위치하는 종양 병소는 보통 병소에 실증된 진행이 존재한 경우가 아니면 측정 가능한 것으로 고려되지 않는다.
평가 방법
모든 측정은, 임상적으로 평가되는 경우 캘리퍼를 사용해서, 미터법 표기로 기록한다. 모든 기준선 평가는 최대한 치료 시작과 가깝게 그러나 치료 시작 전 4주를 넘지 않고 수행한다.
동일한 평가 방법 및 동일한 기법을 사용하여 기준선에서 및 추적 동안 각각의 확인되고 보고된 병소를 특징화한다. 추적되는 병소(들)를 조영할 수 없지만 임상 검사에 의해 평가 가능한 경우가 아니면 항상 임상 검사보다는 조영 기반 평가를 수행한다.
임상적 병소: 임상적 병소는 이들이 표재 병소이고 캘리퍼를 사용하여 평가되는 경우 지름이 10 ㎜ 이상인 경우에만 측정 가능한 것으로 고려된다. 피부 병소의 경우, 병소 크기를 추정하기 위해 눈금자를 포함하는 컬러 사진측정에 의한 문서화가 제안된다. 상기 주지된 바와 같이, 병소를 임상 검사 및 조영 둘 다에 의해 평가할 수 있는 경우, 조영 평가가 더 객관적이고 연구 종료 시 검토할 수 있으므로 이를 수행한다.
흉부 X-선: 특히 진행이 중요한 종결점인 경우, CT가 X-선보다, 특히 새로운 병소의 확인에서 더 민감하므로, 흉부 CT가 흉부 X-선보다 선호된다. 그러나, 흉부 X-선 상의 병소는 이들이 명확히 정의되고 통기되는 폐에 의해 둘러싸인 경우, 측정 가능한 것으로 고려된다.
CT, MRI: CT는 반응 평가에 대해 선택된 병소를 측정하기 위한 현재 최적으로 이용 가능하고 재현성 있는 방법이다. CT 스캔 상 병소의 측정 가능성은 CT 슬라이스 두께가 5 ㎜ 이하라는 가정에 기반한다. CT 스캔이 5 ㎜ 초과의 슬라이스 두께를 갖는 경우, 측정 가능한 병소에 대한 최소 크기는 슬라이스 두께의 2배여야 한다.
초음파: 초음파는 병소 크기의 평가에서 유용하지 않으며 측정 방법으로 사용해서는 안 된다. 새로운 병소가 연구 과정에서 초음파에 의해 확인되는 경우, CT 또는 MRI에 의한 확인이 권고된다.
내시경, 복강경: 객관적 종양 평가를 위해 이들 기법의 이용은 권고되지 않는다.
종양 마커: 종양 마커 단독으로는 객관적 종양 반응을 평가하기 위해 사용할 수 없다.
세포학, 조직학: 이들 기법은 프로토콜에 의해 요구되는 경우 드문 케이스에서 PR과 CR을 구별하기 위해 사용할 수 있다.
FDG PET-CT/CT 스캔: CR 또는 PD를 확인하기 위해 대략 12주마다 림프종 환자에서 수행한다.
'표적' 및 '비-표적' 병소의 기준선 문서화
1개를 초과하는 측정 가능한 병소가 기준선에 존재하는 경우, 모든 관여 장기를 대표하는 최대 총 5개 병소까지의 모든 병소(및 장기 당 최대 2개 병소)를 표적 병소로 확인해야 하며 기준선에서 기록하고 측정할 것이다.
표적 병소는 이의 크기(최장 지름을 갖는 병소)에 기반하여 선택되고, 모든 관여 장기를 대표하며, 이들을 재현성 있는 반복 측정이 되도록 한다.
림프절은 이들이 종양에 의해 관여되지 않는 경우에도 조영에 의해 가시적일 수 있는 정상적인 해부학적 구조를 가지므로 특별히 언급할 가치가 있다. 측정 가능한 것으로 정의되며 표적 병소로 확인될 수 있는 병리적 림프절은 CT 스캔에 의해 15 ㎜ 이상인 단축 기준에 부합해야 한다. 이들 림프절의 단축만 기준선 합에 기여한다. 모든 다른 병리적 림프절(10 ㎜ 이상 15 ㎜ 미만인 단축을 갖는 것들)이 비-표적 병소로 고려되어서는 안 된다. 10 ㎜ 미만의 단축을 갖는 림프절은 비-병리적으로 고려되며, 기록하거나 추적해서는 안 된다.
모든 표적 병소에 대한 지름 합(비-림프절 병소에 대해 최장, 림프절 병소에 대해 단축)을 계산하고 기준선 합 지름으로 보고한다. 기준선 합 지름은 질환의 측정 가능한 치수에서 임의의 객관적 종양 관해를 추가 특징화하기 위한 참조로 사용한다.
병리적 림프절을 포함하는 모든 기타 병소(또는 질환 부위)는 비-표적 병소로 확인되며 또한 기준선에서 기록한다. 측정이 요구되는 것은 아니며, 이들 병소는 "존재함", "부재함" 또는 "명백한 진행"으로 추적한다. 또한, 케이스 상에서 하나의 항목으로 동일 장기에 관여되는 여러 비-표적 병소를 기록할 수 있다(예로, "여러 확대된 골반 림프절" 또는 "여러 간 전이").
반응 기준을 표 25에 기재한다.
[표 25]
Figure pct00076
약어: CR=전체 반응; PD=진행성 질환; PR=부분 반응; SD=안정한 질환.
표적 병소의 평가에 대한 특별 주의
림프절이 연구 상에서 10 ㎜ 미만으로 관해되는 경우에도, 표적 병소로 확인된 림프절은 항상 기록된 실제 단축 측정을 가지며 기준선 검사와 동일한 해부학적 면에서 측정한다. 정상 림프절은 10 ㎜ 미만의 단축을 갖는 것으로 정의되므로, 이는 림프절이 표적 병소로 포함되는 경우, CR 기준에 부합하는 경우에도 병소의 '합'이 0이 아닐 수 있음을 의미한다. PR, SD 및 PD에 있어서, 림프절의 실제 단축 측정이 표적 병소의 합에 포함되어야 한다.
'측정하기 너무 작아진' 표적 병소: 기준선에서 기록된 모든 병소(림프절 및 비-림프절)는 매우 작은 경우에도(예로, 2 ㎜) 각각의 후속 평가에서 기록된 이의 실제 특정을 가져야 한다. 그러나, 때때로 기준선에서 표적 병소로 기록하는 병소 또는 림프절은 방사선의가 정확한 측정의 할당을 편안하게 느끼지 않을 수 있고 이들을 '측정하기 너무 작은' 것으로 보고할 수 있게 CT 스캔 상에서 매우 희미해진다. 이것이 일어나는 경우, 값을 CRF 상에 기록하는 것이 중요하다. 방사선의의 의견에 있어서 병소가 소실된 것 같은 경우, 측정은 0 ㎜로 기록한다. 병소가 존재하는 것으로 여겨지고 희미하게 나타나지만 측정하기 너무 작은 경우, 5 ㎜의 디폴트 값을 할당한다.
비-림프절 병소 '단편'인 경우, 단편화된 부분의 최장 지름을 함께 추가하여 표적 병소 합을 계산한다. 유사하게, 병소가 융합함에 따라, 각각의 개별 병소의 최대 지름 측정의 수득을 보조할 이들 사이의 면을 유지한다. 병소는 이들이 더 이상 분리 가능하지 않도록 실제로 융합된 경우, 이 경우에서 최장 지름의 벡터가 "융합된 병소"에 대한 최대 최장 지름이다.
비-표적 병소의 평가
일부 비-표적 병소는 측정 가능할 수 있지만, 이들을 측정할 필요는 없고 대신에 프로토콜에 특정된 시점에 정성적으로만 평가한다.
CR: 모든 비-표적 병소의 소실 및 종양 마커 수준의 정상화. 모든 림프절은 크기가 비-병리적이어야 한다(10 ㎜ 미만 단축).
비-CR/비-PD: 1개 이상의 비-표적 병소(들)의 지속 및/또는 정상 한계를 초과하는 종양 마커 수준의 유지.
진행성 질환: 기존 비-표적 병소의 명백한 진행(주: 1개 이상의 새로운 병소의 출현도 진행으로 고려됨).
비-표적 질환의 진행의 개념은 하기와 같은 추가 설명을 필요로 한다:
참여자가 또한 측정 가능한 질환을 갖는 경우; 본 설정에서, 비-표적 질환에 기반하여 "명백한 진행"을 달성하기 위해, 표적 질환에서 SD 또는 PR의 존재 하에도, 전반적 종양 부담이 치료법을 중단할 충분히 증가된 가치를 갖도록 하는, 비-표적 질환에서 전반적 수준의 실질적 악화가 존재해야 한다. 1개 이상의 비-표적 병소의 크기에서의 중등도 "증가"는 보통 명백한 진행 상태로 인정하기 충분하지 않다.
참여자가 측정-불가능한 질환만을 갖는 경우; 비-표적 질환에 기반한 '명백한 진행'을 달성하기 위해, 전반적 종양 부담이 치료법을 중단할 충분히 증가된 가치를 갖도록 하는 전반적 수준의 실질적 악화가 존재해야 한다. 1개 이상의 비-표적 병소의 크기에서의 중등도 "증가"는 보통 명백한 진행 상태로 인정하기 충분하지 않다. 비-표적 질환에서의 악화는 용이하게 정량할 수 없으므로(정의 상: 모든 병소가 실제로 측정-불가능한 경우임) 명백한 진행에 대해 환자를 평가할 때 적용될 수 있는 유용한 테스트는 측정-불가능한 질환에서의 변화에 기반한 전반적 질환 부담의 증가가 측정 가능한 질환에 대한 PD를 공표하기 위해 요구될 증가에 대해 필적하는 크기: 즉, '부피'에서의 추가적인 73% 증가를 나타내는 종양 부담의 증가(측정 가능한 병소에서의 20% 증가 지름과 동등함)인지를 고려하는 것이다. 예에는 '미량'부터 '다량'으로의 흉막 삼출물에서의 증가, 림프관성 질환에서 편재된 것부터 확산된 것으로의 증가가 포함되거나, '치료법에서 변화를 요구하기 충분한' 것으로 프로토콜에 기재할 수 있다. '명백한 진행'이 나타나는 경우, 환자는 그 지점에서 전반적 PD를 가졌던 것으로 고려된다.
새로운 병소
새로운 악성 병소의 출현은 질환 진행을 표시한다. 새로운 병소의 발견은 명백해야 한다: 즉, 스캐닝 기법의 차이, 조영 방식의 변화 또는 종양 이외의 다른 것을 나타내는 것으로 여겨지는 발견에 기인할 수 없다(예를 들어, 일부 '새로운' 뼈 병소는 기존 병소의 단순 치유 또는 발적일 수 있음). 이는 참여자의 기준선 병소가 PR 또는 CR을 나타내는 경우 특히 중요하다. 예를 들어, 간 병소의 괴사는 CT 스캔 보고 상에서 '새로운' 낭성 병소로 보고될 수 있으며, 이는 사실이 아니다.
기준선에서 스캐닝되지 않은 해부학적 위치에서 추적 연구 상에서 확인된 병소는 새로운 병소로 고려되며 질환 진행을 시사한다. 이의 예는 기준선에서 내장 질환을 가지며 연구 상에서 전이를 드러내는 CT 또는 MRI 뇌 순서를 갖는 환자이다. 참여자의 뇌 전이는 참여자가 기준선에서 뇌 조영을 갖지 않은 경우에도 PD를 구성하는 것으로 고려된다.
새로운 병소가, 예를 들어 그 작은 크기로 인해 모호한 경우, 계속되는 치료법 및 추적 평가로 이것이 새로운 질환을 나타내는지를 명확히 한다. 반복 스캔으로 새로운 병소가 존재함을 확인하는 경우, 진행은 최초 스캔일을 사용하여 공표한다.
플루오로데옥시글루코스-양전자 방출 단층촬영(FDG-PET) 반응 평가는 추가 연구를 필요로 하는 반면, 때때로 진행 평가에서(특히 가능한 '새로운' 질환) CT 스캐닝을 보완하기 위해 FDG-PET 스캐닝의 사용을 포함하는 것이 합리적이다. FDG-PET 조영에 기반한 새로운 병소는 하기 알고리즘에 따라 확인한다:
A. 추적에서 양성 FDG-PET를 갖는, 기준선에서의 음성 FDG-PET는 새로운 병소에 기반한 PD의 징후이다.
B. 기준선에서 FDG-PET가 없는 추적에서의 양성 FDG-PET:
추적에서 양성 FDG-PET가 CT에 의해 확인되는 새로운 질환 부위에 대응하는 경우, 이는 PD이다.
추적에서 양성 FDG-PET가 CT 상에서 새로운 질환 부위로 확인되지 않은 경우, 그 부위에서 발생하는 실제 진행이 존재하는지를 결정하기 위해 추가적인 추적 CT 스캔이 필요하다(그러한 경우, PD 일은 최초의 비정상 FDG-PET 스캔일일 것임). 추적에서 양성 FDG-PET가 해부학적 이미지에 기반하여 진행하고 있지 않은 CT 상 기존 질환 부위에 대응하는 경우, 이는 PD가 아니다.
최적 전반적 반응의 평가
시점 반응: 각각의 프로토콜에 특정된 시점에, 반응 평가를 수행해야 한다. 표 26은 기준선에서 측정 가능한 질환을 갖는 환자에 대해 각각의 시점에서의 전반적 반응 상태 계산의 요약을 제공한다.
[표 26]
Figure pct00077
약어: CR=전체 반응; PD=진행성 질환; PR=부분 반응; SD=안정한 질환.
환자가 측정-불가능한(따라서 비-표적) 질환만을 갖는 경우, 표 27을 사용해야 한다.
[표 27]
Figure pct00078
약어: CR=전체 반응; PD=진행성 질환; PR=부분 반응; SD=안정한 질환.
평가 누락 및 평가 불가능 지정: 특정 시점에 조영/측정이 전혀 수행되지 않는 경우, 환자는 그 시점에 평가 불가능하다(NE).
평가 시 병소 측정의 하위세트만 수행되는 경우, 개별 누락 병소(들)의 기여가 할당된 시점 반응을 변화시키지 않았을 것이라는 설득력 있는 주장을 할 수 있지 않는 한, 보통 그 케이스도 그 시점에 NE로 고려된다. 이는 PD의 경우에 가장 일어나기 쉬울 것이다. 특정 시점에 조영/측정이 전혀 수행되지 않는 경우, 환자는 그 시점에 NE이다.
평가 시 병소 측정의 하위세트만 수행되는 경우, 개별 누락 병소(들)의 기여가 할당된 시점 반응을 변화시키지 않았을 것이라는 설득력 있는 주장을 할 수 있지 않는 한, 보통 그 케이스도 그 시점에 NE로 고려된다. 이는 PD의 경우에 가장 일어나기 쉬울 것이다.
반응 평가에 대한 특별 주의
림프절 질환이 표적 병소의 합에 포함되고 림프절이 '정상' 크기(10 ㎜ 미만)로 감소하는 경우, 이들은 여전히 스캔 상에 보고된 측정을 가질 수 있다. 상기 측정은 림프절 크기의 증가에 기반하여 진행을 과장하지 않기 위해 림프절이 정상인 경우에도 기록한다. 더 일찍 주지된 바와 같이, 이는 CR을 갖는 환자가 CRF 상에서 '0'의 전체 합을 갖지 않을 수 있음을 의미한다.
반응의 확인이 요구되는 시험에서, 반복된 'NE' 시점 평가는 최적 반응 결정을 복잡하게 만들 수 있다. 시험에 대한 분석 계획은 반응 및 진행의 결정에서 어떻게 누락 데이터/평가가 설명되는지를 설명해야 한다. 예를 들어, 대부분의 시험에서 확인된 반응으로 PR-NE-PR의 시점 반응을 갖는 환자를 고려하는 것이 합리적이다.
그 시점에 질환 진행의 객관적 증거 없이 치료 중단을 필요로 하는 건강 상태의 전반적 저화를 갖는 환자는 '증상성 저하'로 보고된다. 치료 중단 후라도 객관적 진행을 문서화하기 위해 모든 노력을 기울여야 한다. 증상성 저하는 객관적 반응의 기술자가 아니다: 이는 연구 치료법을 중단하는 사유이다.
이러한 환자의 객관적 반응 상태는 표적 및 비-표적 질환의 평가에 의해 결정된다. 진행의 모호한 발견(예로, 매우 작고 불확실한 새로운 병소; 기존 병소에서의 낭성 변화 또는 괴사)에 있어서, 치료는 다음 일정이 잡힌 평가 시까지 계속할 수 있다. 다음 일정이 잡힌 평가에서, 진행이 확인되는 경우, 진행일은 진행이 추정된 더 빠른 날이다.
반응의 지속기간
전반적 반응의 지속기간은 측정 기준이 CR/PR에 처음 부합하는(둘 중 먼저 기록되는) 시간부터 재발성 또는 PD가 객관적으로 문서화되는 첫 번째 날까지 측정된다(연구 상에 기록된 최소 측정을 PD에 대한 참조로 함).
전반적 CR의 지속기간은 측정 기준이 CR에 처음 부합하는 시간부터 재발성 질환이 객관적으로 문서화되는 첫 번째 날까지 측정된다.
안정한 질환은 연구 상의 최소 합을 참조로 하여, 치료 시작 시부터 진행에 대한 기준에 부합할 때까지 측정된다(기준선 합이 최소인 경우, 이것이 PD의 계산을 위한 참조임).
RECIST 가이드라인에 관한 비제한적 기재는 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함되는, 문헌[Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J et al. New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 2009;45:228-47]에 제공된다.
실시예 1.15 - 면역-기반 치료제에 대한 고형 종양에서의 변형된 반응 평가 기준
상세사항은 문헌[Seymour L, Bogaerts J, Perrone A, Ford R, Schwartz LH, Mandrekar S, et al. iRECIST: guidelines for response criteria for use in trials testing immunotherapeutics. Lancet Oncol. 2017 Mar;18(3):e143-52]에 제공된다.
[표 28]
Figure pct00079
Figure pct00080
"i"는 iRECIST를 사용하여 할당된 면역 반응을 나타낸다.
약어: iCPD=확인된 진행; iCR=전체 반응; iPR=부분 반응; iSD=안정한 질환; iUPD=확인되지 않은 진행; RECIST=고형 종양에서의 반응 평가 기준
[표 29]
Figure pct00081
Figure pct00082
[표 30]
Figure pct00083
동부 협력 종양학 그룹(Robert L. Comis, MD, 그룹 의장)에 의해 개발됨.
[표 31]
Figure pct00084
Figure pct00085
a 임상적으로 잠재함은 전초 또는 선택적 림프절절제술 후 진단됨.
b 임상적으로 검출됨은 치료용 림프절절제술에 의해 또는 림프절 전이가 거시적 낭외 확장을 나타내는 경우 확인된 임상적으로 검출 가능한 림프절 전이로 정의됨.
출처: 문헌[Gershenwald JE, Scolyer RA, Hess KR, et al. Melanoma of the skin. In: Amin MB, ed. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. Chicago, IL: AJCC-Springer; 2017:563-585]으로부터 채택됨.
[표 32]
Figure pct00086
질환 반응은 Lugano 분류 2014(Cheson BD et al. (2014) J. Clinical Oncology 32(27)3059-3068)를 사용하여 평가될 것이다. 반응 평가는 스크리닝 시 및 12주(± 7일)마다 수행한다.
[표 33]
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
조영 시간은 역일을 따라야 하며 주기 지연에 대해 조정해서는 안 된다. PD 이외의 사유로 중단하는 참여자에 있어서, 평가는 참여자가 PD를 문서화할 때까지 계속해야 한다. 첫 번째 평가는 연구자의 의견에 있어서 참여자가 임상적으로 진행 중인 경우 12주보다 빨리 수행할 수 있다.
[표 34]
Figure pct00091
실시예 2 - 획득된 항 PD1-내성 종양을 갖는 마우스에서의 항-종양 활성
항-PD1 치료법에 대한 획득된 내성을 위한 마우스 모델
항-PD-1 항체 치료에 대해 획득된 내성을 나타내는 마우스 종양 모델을 본질적으로 하기와 같이 생성하였다. 또한, 문헌[Dunn et al. (2002) Nature Immunology 3: 991-998; 및 Wang X et al. (2017) Cancer Res 77(4): 839-850]을 참고한다. MC38 종양을 보유하는 암컷 C57BL6/J 마우스(Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA)를 항-PD-1 항체(클론 RMP1-14; 문헌[Yamazaki et al. (2005) J Immunol 175(3): 1586-1592]의 방법에서 최초 기재됨)로 처리하고, 성장 중인 종양을 절제하고, 세포를 10% FBS가 보충된 L-글루타민 함유 RPMI-1640(Life Technologies) 중에 생체외 배양하였다. 6주 내지 8주령 암컷 C57BL6/J 마우스를 음식 및 멸균수에 자유 접근하게 두고 12시간 광주기로 온도 제어 환경에 수용하였다. 모든 마우스를 실험 전 적어도 3일 동안 순응시켰다. 체중 및 측정되는 경우, 종양 부피를 실험 종결점까지 주 2회 측정하였다. 종양 부피를 하기 공식: a2*b/2를 사용하여 교차 지름의 곱으로 표현하며, 식 중, a < b이다.
도 2a 내지 도 3에 있어서, 백만 개의 MC38 또는 MC38-내성 세포를 200 ㎕ DPBS 중에 현탁하고 각각의 마우스의 오른쪽 넙다리 내로 피하 주사하였다.
생체내 약물 투여
4개 용량의 마우스 사이토카인 mRNA 혼합물 또는 루시퍼라제를 인코딩하는 대조군 mRNA(Luc mRNA)를 종양이 평균 60 ㎣에 도달한 경우 시작해서 종양 당 50 ㎕ 중 40 ㎍으로 종양내(IT) 주사에 의해 4일마다(Q4D) 투여하였다. 실험 종결점까지 마우스 체중 및 종양 부피를 주 2회 측정하였다. 종양 부피를 하기 공식: a2*b/2를 사용하여 교차 지름의 곱으로 표현하였으며, 식 중, a < b이다. 모든 절차는 기관 동물 케어 및 사용 위원회에 의해 승인받았고 실험실 동물의 케어 및 사용에 대한 NIH 가이드에 따라 수행하였다.
mRNA의 제조
관심 유전자를 코딩하는 합성 DNA 단편을 5'-미번역 영역(UTR) 및 3' UTR, 3' UTR, 및 총 110 뉴클레오티드의 폴리(A)-꼬리를 포함하는, 공통 시작 벡터 내로 클로닝하였다. 플라스미드 DNA의 선형화를 classIIS 제한 효소로 폴리(dA:dT)의 하류에서 수행하여 폴리(dA:dT) 이후 추가 뉴클레오티드를 갖지 않는 주형을 생성하였다(예로, 문헌[Holtkamp et al. (2006) Blood Dec 15; 108(13):4009-17] 참고). 선형화된 DNA로 7.5 mM ATP, CTP, GTP, 및 N1-메틸-슈도유리딘트리포스페이트의 존재 하에, 문헌[Grudzien-Nogalska et al (2013) Methods Mol Bio. 969:55-72]에 기재된 바와 같이 T7 RNA 폴리머라제(Thermo Fisher, Waltham MA, USA)를 사용하여 시험관내 전사를 거쳤다. 자기 입자(Berensmeier S. (2006) Applied Microbiology and Biotechnology 73(3):495-504)를 사용하여 RNA를 정제하고 이후 백시니아 캡핑 시스템(New England Biolabs, Ipswich, MA, USA) 및 mRNA 캡의 2'-O-메틸화를 사용하여 캡1 구조를 도입하였다. 셀룰로스-기반 크로마토그래피를 사용해서 RNA를 추가 정제하여 이중-가닥 RNA(dsRNA) 불순물을 제거하였다(문헌[Day PR et al (1977) Phytopathology 67:1393; Morris TJ et al. (1979) Phytopathology 69:854-858; 및 Castillo A et al. (2011) Virol J. 8:38] 참고). RNA 농도 및 품질을 분광측정 및 모세관 겔 전기영동 시스템을 사용하여 평가하였다. dsRNA의 존재를 문헌[Karik
Figure pct00092
et al (2011) Nucleic Acids Res. Nov; 39(21): e142]에 기재된 바와 같이 dsRNA-특이적 J2 mAb(English & Scientific Consulting, KFt.
Figure pct00093
, Hungary)를 사용해서 노스웨스턴 도트-블롯 검정에서 평가하였다.
결과
체크포인트 차단에 대한 선천성 및 획득된 내성의 몇몇 기전이 정의되었으며 MHC I 및 IFNγ 신호전달 경로의 돌연변이가 포함된다. 예를 들어, 문헌[Sharma et al. (2017) Cell 168(4):707-723; Sade-Feldman M et al. (2017) Nat Commun 8(1):1136; Zaretsky JM et al. (2016) N Engl J Med 375(9): 819-29; Gettinger S. et al. (2017) 7(12): 1420-1435; Rodig SJ et al. (2018) Sci Transl Med 10(450)]을 참고한다. 그러나, 이러한 돌연변이는 저빈도의 환자에서 일어나며, 추가 기전은 아직 정의되지 않았다. 체크포인트 차단에 대한 획득된 내성을 더 잘 이해하기 위한 시도로, 본 발명자들은 항-PD-1 항체 치료에 대해 생체내 내성을 나타내는 마우스 종양 모델을 생성하였다. MC38 종양은 연속 생체내 계대 후 PD-1 차단에 대한 내성을 획득하였다(도 2a, 도 2b). PD-1 차단에 대한 민감성 부족은 PD-L1 또는 B2M 발현의 조절이상에 기인하지 않았으며, 이는 둘 다 모체 및 내성 세포에서 유사한 수준으로 발현되기 때문이다(도 2c). 유사하게, IFNγ 신호전달 및 항원 가공 및 출현 경로는 모체 및 내성 세포주에서 모두 기능적이었다(도 2d, 도 2e). 편향되지 않은 유전자 발현 분석을 사용하여 잠재적인 내성 기전을 추가 특징화하였다. RNA-서열분석은 모체 MC38 종양 대비 면역-관련 유전자의 발현에서 현저한 감소를 나타내는 PD-1 내성 종양과 전반적 유전자 발현에서 실질적 차이를 드러내었다(도 2f, 도 2g). 실제로, PD-1 내성 종양은 T 및 NK 세포를 포함하는 여러 세포 유형에 걸쳐 감소된 면역 침윤을 나타낸다(도 2h, 도 2i).
모델의 추가 검증을 수행하였고 결과를 도 3 내지 도 5에 나타낸다. 간략하게, MC38-내성 세포는 PD-L2를 발현하지 않는 것으로 나타났으며, IFNγ 처리 후 발현이 유도되지 않았다(도 3). 면역조직화학 염색은 내성 종양에서 감소된 빈도의 면역 세포를 나타내었다(도 4a). 파라핀 포매된 MC38 및 MC38-내성 종양을 CD45+ 세포(짙은 색)의 침윤에 대해 면역조직화학 염색에 의해 분석하였다. 결과는 2회 독립 실험; 군 당 n=10 종양의 대표이다. 도 4a는 대표 이미지를 나타낸다. 도 4b는 정량을 나타낸다. 도 5a 내지 도 5b는 내성 종양의 감소된 면역원성을 나타낸다. 간략하게, PD-1 차단에 반응하여 전체 관해를 나타낸 모체 MC38 종양을 보유하는 5마리의 개별 C57BL6 마우스로부터 세포독성 T 림프구(CTL) 배양을 생성하였다. CTL을 MC38 및 내성 종양 세포와 공동-배양하고, 사멸(도 5a) 및 IFNγ 방출(도 5b)을 측정하였다.
상기 검증된 모델을 사용하여, 사이토카인 RNA 혼합물을 단독치료법으로서 종양내 투여하였다. 쥣과 사이토카인 RNA 혼합물로의 단독치료법은 대조군 대비 MC38 및 MC38-내성 종양 둘 다의 성장을 억제하였다. 도 6의 A 내지 도 6의 D를 참고한다. 쥣과 사이토카인 RNA 혼합물로의 단독치료법은 또한 MC38 및 MC38-내성 종양을 보유하는 마우스의 생존을 유의미하게 연장시켰다. 도 7을 참고한다. MC38 종양을 보유하는 8마리 중 5마리(62.5%) 마우스(도 6의 B) 및 MC38-내성 종양을 보유하는 8마리 중 3마리(37.5%) 마우스(도 6의 D)가 전체 종양 해소를 나타내었고 실험 종료 시 종양이 없었다. 도 7을 또한 참고한다.
실시예 3 - 항 PD1-내성 종양을 갖는 마우스에서의 항-종양 활성
항-PD1 치료법에 대한 내성을 위한 마우스 모델
Dr. S. A. Rosenberg(National Institute of Health, Bethesda, MD, USA)로부터 무상제공된 MC38 세포를 10% FBS가 보충된 L-글루타민을 포함하는 RPMI-1640(Life Technologies) 중에 배양하였다. 일반적으로, 단일 넙다리 종양 모델의 경우에는, MC38 세포를 DPBS 중에 현탁하고 200 ㎕ 중 1 x 106 세포를 C57BL/6J 마우스의 오른쪽 넙다리 내로 SC 임플란트하였다. 일반적으로, 이중 넙다리 종양 MC38 모델의 경우에는, 오른쪽에 1 x 106 세포 및 왼쪽에 0.5 x 106 세포를 0일에 SC 임플란트하였다.
항-PD-1 치료법에 대한 내성의 생체내 종양 모델을 생성하기 위해, MC38-B2M-녹아웃 세포를 sgRNA 5'-GGCGTATGTATCAGTCTCAG-3'(SEQ ID NO: 41)을 사용해서 CRISPR을 사용하여 생성하였다. MC38 세포를 제조업체의 지침에 따라 사전-복합체화된 Cas9 및 sgRNA(GeneArt™ Platinum™ Cas9 뉴클레아제 V.2; ThermoFisher Scientific)로 일시적으로 전달감염시켰다(Lipofectamine™ CRISPRMAX™; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA). MACS 기술(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)을 사용하여 B2M-/- 세포를 농축한 후, 단세포 콜로니를 단리하고 녹아웃을 유세포 측정에 의해 확인하였다.
생체내 약물 투여
사이토카인 RNA 혼합물을 종양내 주사에 의해 투여하였다. 마우스를 이소플루란으로 마취하고 달리 상세히 제공되지 않는 한 총 4개 용량에 대해 4일마다 식염수 용액 50 ㎕ 중 80 ㎍ mRNA를 오른쪽 종양내로 종양내(IT) 주사하였다. 달리 주지되지 않는 한, 항체는 BioXCell(West Lebanon, NH, USA)로부터 입수하였고 IP 주사에 의해 투여하였다. 대조군(MOPC-21) 및 항-PD-1(RMP1-14)을 3일마다(Q3D) 5 ㎎/㎏ 용량으로 투여하였다.
결과
체크포인트 내성 설정에서 사이토카인 mRNA 치료의 치료 유효성을 연구하기 위해, B2M을 MC38 세포에서 유전적으로 결실시켰고(도 8) 이는 항-PD-1 치료에 대해 생체내 내성을 야기한 반면(도 9c), 모체 종양을 보유하는 마우스는 항-PD-1 치료에 대해 부분적으로 반응성을 유지하였다(도 9b). 사이토카인 RNA 혼합물 치료 단독으로 B2M 녹아웃 종양을 보유하는 동물에서 연장된 생존을 부여하였으나, 사이토카인 mRNA를 항-PD-1 체크포인트 차단과 조합함으로써 생존에서의 추가 증가가 관찰되지 않았다(도 9c).
인간 악성물에서 종종 관찰되는 종양간 이종성을 모델링하기 위해, 한쪽에는 MC38-B2M 녹아웃을 그리고 반대쪽 넙다리에는 MC38-WT 종양을 갖는 이중 넙다리 설정을 확립하였다(도 9d). MC38-B2M 녹아웃 종양에는 사이토카인 RNA 혼합물을 주사한 반면, 반대쪽 MC38-WT 종양은 치료하지 않고 두었다. 모든 마우스가 결과적으로 종양 부담으로 죽었으나, 항 PD-1 치료법 단독으로의 치료는 종양-보유 마우스의 생존에 대해 효과를 갖지 않은 반면, 사이토카인 RNA 혼합물 단독은 생존을 연장하였다(도 9d). 조합 치료는 상기 설정에서 전반적 생존을 추가 증가시켜, 치료받는 병소가 MHC I 발현의 부재로 인해 T 세포-매개 사멸에 대해 내성이 있는 경우에도 사이토카인 RNA 혼합물 및 항-PD-1 항체와의 조합 치료가 앱스코팔(abscopal) 효과를 가짐을 시사하였다(도 9d).
실시예 4 - 추가 쥣과 모델에서의 항-종양 활성
물질 및 방법
12개의 동계 세포주를 공기 중 5% CO2 분위기로 37℃에서 상이한 배지(아래에 나타냄)로 시험관내 유지하였다. 종양 세포는 주 2회 일상적으로 하위배양할 것이다. 지수 성장기의 세포를 수확하고 종양 접종을 위해 계수하였다. 각각의 마우스에 종양 발생을 위해 0.1 ㎖ PBS 중 종양 세포를 피하 접종하였다. 종양 세포 접종 후, 동물을 이환률 및 사망률에 대해 매일 확인하였다. 일상적 모니터링 동안, 동물을 거동, 예컨대 이동성, 음식 및 물 소비, 체중 획득/손실(체중은 무작위화 후 주 2회 측정할 것임), 눈/털 매트화 및 임의의 다른 비정상에 대한 종양 성장 및 치료의 임의의 효과에 대해 확인하였다. 사망률 및 관찰된 임상 징후를 개별 동물에 대해 상세히 기록하였다. 종양 부피를 캘리퍼를 사용하여 2 치수로 무작위화 후 주 2회 측정하고, 부피를 공식: V = (L x W x W)/2를 사용하여 ㎣로 표현하였고, 식 중 V는 종양 부피이고, L은 종양 길이(최장 종양 치수)이며, W는 종양 폭(L과 교차하는 최장 종양 치수)이다. 투약뿐만 아니라 종양 중량 및 체중 측정을 램비어 플로우 캐비넷에서 수행하였다. 체중 및 종양 부피는 StudyDirector™ 소프트웨어(버전 3.1.399.19)를 사용하여 측정하였다.
[표 35]
Figure pct00094
[표 36]
Figure pct00095
결과
종양 이종성의 영향을 추가 이해하기 위해, 12마리 쥣과 모델을 사이토카인 mRNA 혼합물 또는 항-PD-1 항체와의 조합 치료에 대한 민감성에 대해 테스트하였다. 항-PD1 항체 단독과 대조적으로, 대부분의 종양 유형은 단일-제제 mRNA 치료법에 민감하였다. 추가로, 모든 모델은 사이토카인 mRNA 및 항-PD1로의 조합 치료 시 종양 성장 감속화를 나타내어(도 10), 사이토카인-인코딩, 국소 mRNA 치료법의 다용성을 추가 강조하였다.
SEQUENCE LISTING <110> SANOFI <120> THERAPEUTIC RNA AND ANTI-PD1 ANTIBODIES FOR ADVANCED STAGE SOLID TUMOR CANCERS <130> 01183-0031-00PCT <150> US 62/794,896 <151> 2019-01-21 <150> US 62/926,379 <151> 2019-10-25 <150> EP 19306471.4 <151> 2019-11-14 <160> 41 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <400> 1 000 <210> 2 <400> 2 000 <210> 3 <211> 145 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5 UTR (DNA) <400> 3 ggaataaact agtctcaaca caacatatac aaaacaaacg aatctcaagc aatcaagcat 60 tctacttcta ttgcagcaat ttaaatcatt tcttttaaag caaaagcaat tttctgaaaa 120 ttttcaccat ttacgaacga tagcc 145 <210> 4 <211> 145 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5 UTR (RNA) <400> 4 ggaauaaacu agucucaaca caacauauac aaaacaaacg aaucucaagc aaucaagcau 60 ucuacuucua uugcagcaau uuaaaucauu ucuuuuaaag caaaagcaau uuucugaaaa 120 uuuucaccau uuacgaacga uagcc 145 <210> 5 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative Mod 5 UTR (DNA) <400> 5 agacgaacta gtattcttct 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22 auggccuuga ccuuugcuuu acugguggcc cuccuggugc ucagcugcaa gucaagcugc 60 ucugugggcu gugaucugcc ucaaacccac agccugggua gcaggaggac cuugaugcuc 120 cuggcacaga ugaggagaau cucucuuuuc uccugcuuga aggacagaca ugacuuugga 180 uuuccccagg aggaguuugg caaccaguuc caaaaggcug aaaccauccc uguccuccau 240 gagaugaucc agcagaucuu caaccuuuuc agcacaaagg acucaucugc ugcuugggau 300 gagacccucc uagacaaauu cuacacugaa cucuaccagc agcugaauga ccuggaagcc 360 ugugugauac aggggguggg ggugacagag acuccccuga ugaaggagga cuccauucug 420 gcugugagga aauacuucca aagaaucacu cucuaucuga aagagaagaa auacagcccu 480 ugugccuggg agguugucag agcagaaauc augagaucuu uuucuuuguc aacaaacuug 540 caagaaaguu uaagaaguaa ggaaugauga 570 <210> 23 <211> 570 <212> RNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(570) <223> Human optimized IFN-alpha-2b (RNA encoding CDS) <400> 23 auggcccuga cuuuugcccu ucucguggcu uuguuggugc ugaguugcaa aucuuccugu 60 agugucggau gugaucugcc ucaaacccac agucugggau cuaggagaac acugaugcug 120 uuggcacaga ugaggagaau uagccucuuu 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Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp 85 90 95 Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gln Asn 115 120 125 Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln 130 135 140 Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro 145 150 155 160 Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val 165 170 175 Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn 180 185 190 Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr 195 200 205 Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys 210 215 220 Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr 225 230 235 240 Ser <210> 25 <211> 729 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(729) <223> Human IL-15 sushi (CDS DNA) <400> 25 atggccccgc ggcgggcgcg cggctgccgg accctcggtc tcccggcgct gctactgctg 60 ctgctgctcc ggccgccggc gacgcggggc atcacgtgcc ctccccccat gtccgtggaa 120 cacgcagaca tctgggtcaa gagctacagc ttgtactcca gggagcggta catttgtaac 180 tctggtttca agcgtaaagc cggcacgtcc agcctgacgg agtgcgtgtt gaacaaggcc 240 acgaatgtcg cccactggac aacccccagt ctcaaatgca ttagagaccc tgccctggtt 300 caccaaaggc cagcgccacc cgggggagga tctggcggcg gtgggtctgg cgggggatct 360 ggcggaggag gaagcttaca gaactgggtg aatgtaataa gtgatttgaa aaaaattgaa 420 gatcttattc aatctatgca tattgatgct actttatata cggaaagtga tgttcacccc 480 agttgcaaag taacagcaat gaagtgcttt ctcttggagt tacaagttat ttcacttgag 540 tccggagatg caagtattca tgatacagta gaaaatctga tcatcctagc aaacaacagt 600 ttgtcttcta atgggaatgt aacagaatct ggatgcaaag aatgtgagga actggaggaa 660 aaaaatatta aagaattttt gcagagtttt gtacatattg tccaaatgtt catcaacact 720 tcttgatga 729 <210> 26 <211> 729 <212> RNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(729) <223> Human IL-15 sushi (RNA encoding CDS) <400> 26 auggccccgc ggcgggcgcg cggcugccgg acccucgguc ucccggcgcu gcuacugcug 60 cugcugcucc ggccgccggc gacgcggggc aucacgugcc cuccccccau guccguggaa 120 cacgcagaca ucugggucaa gagcuacagc uuguacucca gggagcggua cauuuguaac 180 ucugguuuca agcguaaagc cggcacgucc agccugacgg agugcguguu gaacaaggcc 240 acgaaugucg cccacuggac aacccccagu cucaaaugca uuagagaccc ugcccugguu 300 caccaaaggc cagcgccacc cgggggagga ucuggcggcg gugggucugg cgggggaucu 360 ggcggaggag gaagcuuaca gaacugggug aauguaauaa gugauuugaa aaaaauugaa 420 gaucuuauuc aaucuaugca uauugaugcu acuuuauaua cggaaaguga uguucacccc 480 aguugcaaag uaacagcaau gaagugcuuu cucuuggagu uacaaguuau uucacuugag 540 uccggagaug caaguauuca ugauacagua gaaaaucuga ucauccuagc aaacaacagu 600 uugucuucua augggaaugu aacagaaucu ggaugcaaag aaugugagga acuggaggaa 660 aaaaauauua aagaauuuuu gcagaguuuu guacauauug uccaaauguu caucaacacu 720 ucuugauga 729 <210> 27 <211> 144 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(144) <223> Human GM-CSF (amino acid) <400> 27 Met Trp Leu Gln Ser Leu Leu Leu Leu Gly Thr Val Ala Cys Ser Ile 1 5 10 15 Ser Ala Pro Ala Arg Ser Pro Ser 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caccaagctc aagggcccct tgaccatgat ggccagccac 300 tacaagcagc actgccctcc aaccccggaa acttcctgtg caacccagat tatcaccttt 360 gaaagtttca aagagaacct gaaggacttt ctgcttgtca tcccctttga ctgctgggag 420 ccagtccagg agtgatga 438 <210> 29 <211> 438 <212> RNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(438) <223> Human GM-CSF (RNA encoding CDS) <400> 29 auguggcucc agagccugcu gcucuugggc acuguggccu gcuccaucuc ugcacccgcc 60 cgcucgccca gccccagcac gcagcccugg gagcauguga augccaucca ggaggcccgg 120 cgucugcuga accugaguag agacacugcu gcugagauga augaaacagu agaagucauc 180 ucagaaaugu uugaccucca ggagccgacc ugccuacaga cccgccugga gcuguacaag 240 cagggccugc ggggcagccu caccaagcuc aagggccccu ugaccaugau ggccagccac 300 uacaagcagc acugcccucc aaccccggaa acuuccugug caacccagau uaucaccuuu 360 gaaaguuuca aagagaaccu gaaggacuuu cugcuuguca uccccuuuga cugcugggag 420 ccaguccagg agugauga 438 <210> 30 <211> 110 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Exemplary Poly-A <400> 30 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa gcauaugacu aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 60 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 110 <210> 31 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Anti-PD1 Mab heavy chain <400> 31 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Val Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Trp Gly Asn Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 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Claims (103)

  1. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA, 및 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 고형 종양 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 방법.
  2. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 방법.
  3. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 방법.
  4. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 실패한 방법.
  5. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 대해 비관용성이 된 방법.
  6. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 대해 내성이 된 방법.
  7. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 대해 난치성이 된 방법.
  8. 제1항에 있어서, 대상체가 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 내성 고형 종양 암을 갖는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 대상체가 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 획득된 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 대상체가 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 치료법에 대해 선천성 내성을 갖는 고형 종양 암을 갖는 방법.
  11. 제1항에 있어서, 대상체가 진행성 단계의, 절제 불가능한, 또는 전이성 고형 종양 암을 갖는 방법.
  12. 제1항에 있어서, 난치성 또는 내성 암이 특정된 치료에 반응하지 않는 것인 방법.
  13. 제1항에 있어서, 난치성이 치료의 시작과 동시에 발생하는 방법.
  14. 제1항에 있어서, 난치성이 치료 동안 발생하는 방법.
  15. 제1항에 있어서, 암이 치료가 시작되기 전에 내성인 방법.
  16. 제1항에 있어서, 대상체가 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 및/또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 반응하지 않는 암을 갖는 방법.
  17. 제1항에 있어서, 대상체가 특정된 치료에 대해 난치성 또는 내성이 되는 중인 암을 갖는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 특정된 치료가 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법으로서의 치료인 방법.
  19. 제1항에 있어서, 대상체가 치료법을 최초 시행받은 이래 이에 대해 반응성이 더 작아진 방법.
  20. 제1항에 있어서, 대상체가 치료법을 시행받지 않았지만, 전형적으로 치료법에 반응하지 않는 유형의 암을 갖는 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 또는 항-프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PD-L1) 치료법에 실패했거나, 이에 대해 비관용성, 내성, 또는 난치성이 된 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 전이성 고형 종양을 갖는 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 절제 불가능한 고형 종양을 갖는 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 베타-2-마이크로글로불린(B2M) 기능의 부분적 또는 전체 손실을 포함하는 암 세포를 갖는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 암 세포가 B2M 기능의 부분적 손실을 갖는 방법.
  27. 제25항에 있어서, 암 세포가 B2M 기능의 전체 손실을 갖는 방법.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실은 암 세포를 동일한 대상체로부터의 비-암 세포와 비교하여 평가되며, 임의로 비-암 세포는 암 세포가 유래되는 것과 동일한 조직으로부터 유래되는 방법.
  29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 B2M 유전자에 돌연변이를 포함하는 세포를 포함하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 돌연변이가 치환, 삽입, 또는 결실인 방법.
  31. 제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, B2M 유전자가 이형접합성의 손실(LOH)을 포함하는 방법.
  32. 제29항 또는 제30항에 있어서, 돌연변이가 프레임시프트 돌연변이인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 프레임시프트 돌연변이가 B2M의 엑손 1에 있는 방법.
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 프레임시프트 돌연변이가 p.Leu13fs 및/또는 p.Ser14fs를 포함하는 방법.
  35. 제25항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 B2M 기능의 부분적 또는 전체 손실이 없는 대상체에 비해 감소된 수준의 B2M 단백질을 갖는 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 대조군 대비 감소된 수준의 표면 발현된 주조직 적합성 복합체 클래스 I(MHC I)을 가지며, 임의로 대조군은 동일한 대상체로부터의 비-암성 샘플인 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양이 상피 종양, 전립샘 종양, 난소 종양, 신세포 종양, 위장관 종양, 간 종양, 결장직장 종양, 혈관구조를 갖는 종양, 중피종 종양, 췌장 종양, 유방 종양, 육종 종양, 폐 종양, 결장 종양, 흑색종 종양, 소세포 폐 종양, 비-소세포 폐암, 신경모세포종 종양, 정소 종양, 암종 종양, 샘암종 종양, 고환종 종양, 망막모세포종, 피부 편평상피세포 암종(CSCC), 두부경부에 대한 편평상피세포 암종(HNSCC), 두부경부암, 골육종 종양, 신장 종양, 갑상샘 종양, 역형성 갑상샘암(ATC), 간 종양, 결장 종양, 또는 종양내 주사가 가능한 다른 고형 종양인 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양이 림프종인 방법.
  39. 제38항에 있어서, 림프종이 비-호지킨 림프종인 방법.
  40. 제38항에 있어서, 고형 종양 암이 호지킨 림프종인 방법.
  41. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종인 방법.
  42. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종이며, 흑색종이 포도막 흑색종 또는 점막 흑색종인 방법.
  43. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 종양내 주사가 가능한 표재, 피하 및/또는 림프절 전이를 포함하는 흑색종인 방법.
  44. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 HNSCC 및/또는 점막부위만을 갖는 점막 흑색종인 방법.
  45. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종인 방법.
  46. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 흑색종이 아닌 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 하나를 초과하는 고형 종양을 갖는 방법.
  48. 제47항에 있어서, 적어도 하나의 종양이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성, 난치성, 또는 비관용성이고 적어도 하나의 종양이 그렇지 않은 방법.
  49. 제48항에 있어서, 내성 및 비-내성 종양이 모두 성공적으로 치료되는 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 III기, III기의 하위세트, IV기, 또는 IV기의 하위세트인 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 진행성 단계이고 절제 불가능한 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 대상체에서 그 기원으로부터 또 다른 부위로 확산된 방법.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 하나 이상의 피부 또는 피하 병소를 가지며, 임의로 암은 피부암이 아닌 방법.
  54. 제1항 내지 제45항 및 제47항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 IIIB기, IIIC기, 또는 IV기 흑색종인 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 이전에 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법으로 치료받지 않은 방법.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않는 것인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 고형 종양암이 흑색종, 비-소세포 폐암, 신장암, 두부경부암, 유방암, 또는 CSCC가 아닌 방법.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 다른 치료 옵션이 없는 방법.
  59. 제1항 내지 제40항, 제46항 내지 제53항 및 제55항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 방법:
    i. 고형 종양 암이 흑색종, CSCC, 또는 HNSCC이 아니며;
    ii. 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지 않고;
    iii. 다른 적합한 치료 옵션이 없음.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법이 일상적으로 사용되지만, 이 치료법으로 아직 치료받지 않은 것인 방법.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 치료법에 대해 내성 및/또는 난치성인 IIIB기, IIIC기, 또는 절제 불가능한 IV기 흑색종인 방법.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암이 표재 또는 피하 병소 및/또는 전이를 포함하는 방법.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 2개 또는 3개의 종양 병소를 갖는 방법.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 기준에 따라 측정 가능한 질환을 갖는 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 3개월 초과의 예상 수명을 갖는 방법.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 적어도 18세인 방법.
  67. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA, IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA, IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA, 및 GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함하는 유효량의 RNA, 및 항-프로그래밍된 세포사 1(PD-1) 항체를 진행성 단계의 흑색종을 갖는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 진행성 단계의 흑색종을 치료하는 방법으로서, 하기와 같은 방법:
    i. 대상체가 적어도 18세이고;
    ii. 대상체가 사전 항-PD1 또는 항-PD-L1 치료법에 실패했고;
    iii. 대상체가 최소 2개 병소를 가지고;
    iv. 흑색종이 직접적 종양내 주사가 가능한 종양을 포함함.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 방법:
    i. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나;
    ii. IL-12sc 단백질이 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
    iii. IL-12sc 단백질을 인코딩하는 RNA가 IL-12sc의 p40 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1 내지 984)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 IL-12sc의 p30 부분(SEQ ID NO: 17 또는 18의 뉴클레오티드 1027 내지 1623)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며 p40 및 p35 부분 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함함.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 방법:
    i. IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나;
    ii. IL-15 sushi 단백질이 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
    iii. IL-15 sushi 단백질을 인코딩하는 RNA가 IL-15 수용체 알파의 sushi 도메인(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 1 내지 321)과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성 및 성숙 IL-15(SEQ ID NO: 26의 뉴클레오티드 382 내지 729)와 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며 임의로 IL-15의 sushi 도메인 및 성숙 IL-15 간에 링커 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드를 추가로 포함함.
  70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 방법:
    i. IFNα 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 22 또는 23의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나
    ii. IFNα 단백질이 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함함.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 방법:
    i. GM-CSF 단백질을 인코딩하는 RNA가 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 29의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하며/하거나
    ii. GM-CSF 단백질이 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함함.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
  74. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RNA가 적어도 하나의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
  75. 제1항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RNA가 각각의 유리딘 대신에 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 방법.
  76. 제72항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 뉴클레오시드가 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  77. 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 하나를 초과하는 유형의 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 변형된 뉴클레오시드는 슈도유리딘(ψ), N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ), 및 5-메틸-유리딘(m5U)으로부터 독립적으로 선택되는 방법.
  78. 제77항에 있어서, 변형된 뉴클레오시드가 N1-메틸-슈도유리딘(m1ψ)인 방법.
  79. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 방법.
  80. 제1항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RNA가 5' 캡 m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 방법.
  81. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함하는 방법.
  82. 제1항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RNA가 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함하는 방법.
  83. 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함하는 방법.
  84. 제1항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RNA가 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR을 포함하는 방법.
  85. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 RNA가 폴리-A 꼬리를 포함하는 방법.
  86. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 RNA가 폴리-A 꼬리를 포함하는 방법.
  87. 제85항 또는 제86항에 있어서, 폴리-A 꼬리가 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 방법.
  88. 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리-A 꼬리가 SEQ ID NO: 30에 나타낸 폴리-A 꼬리를 포함하거나 이로 구성되는 방법.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 RNA가 하기를 포함하는 방법:
    i. m2 7,3'-OGppp(m1 2'-O)ApG 또는 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G를 포함하는 5' 캡;
    ii. (i) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 4 및 6으로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR;
    iii. (i) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열, 또는 (ii) SEQ ID NO: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 또는 80% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 3' UTR; 및
    iv. 적어도 100 뉴클레오티드를 포함하는 폴리-A 꼬리.
  90. 제89항에 있어서, 폴리-A 꼬리가 SEQ ID NO: 30을 포함하거나 이로 구성되는 방법.
  91. 제1항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양 암의 치료가 대상체에서의 종양의 크기 감소 또는 암 전이의 방지를 포함하는 방법.
  92. 제1항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, RNA가 동시에 투여되는 방법.
  93. 제1항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, RNA가 주사를 통해 투여되는 방법.
  94. 제92항 또는 제93항에 있어서, RNA가 주사 전에 액체 용액 중에 함께 혼합되는 방법.
  95. 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체가 세미플리맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, MEDI0608, PDR001, PF-06801591, BGB-A317, 피딜리주맙, TSR-042, AGEN-2034, A-0001, BGB-108, BI-754091, CBT-501, ENUM-003, ENUM-388D4, IBI-308, JNJ-63723283, JS-001, JTX-4014, JY-034, CLA-134, STIA-1110, 244C8, 또는 388D4인 방법.
  96. 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체가 세미플리맙인 방법.
  97. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체가 약 0.1 ㎎ 내지 600 ㎎의 용량으로 투여되는 방법.
  98. 제1항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체가 200 ㎎, 240 ㎎, 또는 350 ㎎의 용량으로 투여되는 방법.
  99. 제1항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체가 주사를 통해 투여되는 방법.
  100. 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체가 정맥내 투여되는 방법.
  101. 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체가 3주 1회 투여되는 방법.
  102. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, RNA 및 항-PD-1 항체가 약 8개월 동안 투여되는 방법.
  103. 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, RNA가 신보강 설정으로 투여되는 방법.
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