KR20210066820A - 다중-치환된 피리돈 유도체 및 이의 의학적 용도 - Google Patents

다중-치환된 피리돈 유도체 및 이의 의학적 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 다중-치환된 피리돈 유도체 및 이의 의학적인 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 하기 일반식 (I)로 표시되는 화합물, 이의 제조방법 및 상기 화합물을 함유한 약물 조성물, 및 티로신 키나제 억제제로서의 용도, 특히 티로신 키나제 활성과 관련된 질환을 치료하기 위한 용도에 관한 것이다. 여기서 일반식 (I) 중의 각 치환기의 정의는 명세서 중의 정의와 같다.

Description

다중-치환된 피리돈 유도체 및 이의 의학적 용도
본 발명은 다중-치환된 피리돈 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유한 약물 조성물, 및 티로신 키나제 억제제로서의 용도에 관한 것으로서, 특히 티로신 키나제 활성과 관련된 질환을 치료하기 위한 약물에의 용도에 관한 것이다.
수용체 티로신키나제(RTKs)는 세포막외 수용체 리간드의 센서 기능을 하는 다중도메인의 막관통 단백질이다. 리간드가 수용체와 결합 시, 수용체가 세포막 표면에서 막 내부의 키나제 도메인을 이량체화 및 활성화시킴으로써, 티로신의 인산화를 유도하고 다운스트림의 일련의 신호 전달 통로를 한 단계 더 활성화시킨다. 현재까지, 인체의 유전자 라이브러리는 근 60개에 달하는 수용체 티로신 키나제를 찾아내었으며, 이들은 생존, 생장, 분화, 증식, 부착과 사망을 포함하는 세포의 신진대사 과정을 광범위하게 조절한다.
수용체 티로신 키나제 TAM 패밀리는 Ax1, Mer와 Tyro3인 3개의 구성원을 가진다. TAM은 체내에 2개의 리간드 Gas6과 Protein S를 가지며, TAM의 3개 구성원은 모두 Gas6과 결합할 수 있다. 결합 친화력은 각각 Ax1>Mer>Tyro3이다. Protein S는 Mer 및 Tyro3과만 결합이 가능하다. TAM 자신은 인산화된 후, 신호 전달이 발생하며, 세포의 생존, 유도 분화, 이동과 접착 등을 포함하는 각종 세포학 반응을 조절하고, 혈관 평활근의 안정적인 상태, 혈소판 기능, 미세혈전 안정성 및 적혈구 형성 등도 제어한다. 이 뿐만 아니라, TAM은 또한 면역 및 염증 측면에서 핵심적인 역할을 발휘하기도 하며, 사멸세포의 탐식을 촉진하고, NK세포의 유도 분화를 자극한다.
Ax1은 세포의 생존, 증식, 응집, 이동과 부착의 중요한 조절기이다. Ax1은 단핵세포, 대식세포, 혈소판, 내피세포, 소뇌, 심장, 골격근, 간과 신장 등의 세포 및 기관에서 모두 광범위하게 발현된다. 이와 동시에, 많은 암세포, 조혈세포, 간질세포와 내피세포 중의 Ax1 유전자는 모두 과발현 또는 이소성 발현 현상이 존재한다. 각종 백혈병과 다수의 고형종 중에서, Ax1의 과도한 발현 현상이 특히 두드러진다. 이 뿐만 아니라, 정상적인 조직 또는 초기 종양에 비해, Ax1은 전이되거나 또는 악성 종양 중에서 발현이 훨씬 높으며, 이 고발현은 나쁜 임상 치료 효과와 밀접한 관련이 있다.
수용체 티로신 키나제 TAM 패밀리의 3개 구성원 사이에, Ax1과 Tyro3은 가장 유사한 유전자 구조를 가지며, Ax1과 Mer은 가장 유사한 티로신 키나제 도메인 아미노산 서열을 갖는다. Ax1은 세포의 생존, 증식, 응집, 이동과 부착의 중요한 조절기로서, Ax1은 단핵세포, 대식세포, 혈소판, 내피세포, 소뇌, 심장, 골격근, 간장과 신장 등의 세포 및 기관에서 모두 광범위하게 발현된다. 특히, 많은 암세포 중에서 Ax1 유전자는 모두 과발현 또는 이소성 발현 현상이 존재하고, 각종 백혈병과 다수의 고형종 중에서, Ax1의 과도한 발현 현상이 특히 두드러진다. 이뿐만 아니라, 정상적인 조직 또는 초기 종양세포에 비해, Ax1은 전이 또는 악성 종양 중에서 발현이 훨씬 높으며, 이 고발현은 나쁜 임상 치료 효과와 밀접한 관련이 있다.
Ax1은 다양한 종양세포의 상이한 기전에 의해 야기되는 약물 저항성에도 관여한다. Ax1 키나제의 과발현은 이미 암 환자에게서 치료의 약물 저항성이 나타나는 중요한 표지가 되었다. Ax1 수용체 티로신 키나제에 대한 억제를 통해 종양세포 생존 신호의 활성화를 억제하고, 종양의 침습을 차단하며, 표적 약물 치료와 방사선, 화학 치료의 민감도를 증가시킬 수 있다.
Mer은 림프구성세포 발현 라이브러리에서 처음 발견되었으며 일종의 인산화단백질로 확인되었다. 이는 대식세포의 활성화를 조절하고, 사멸세포의 탐식을 촉진하며, 혈소판의 응집을 돕고 체내 혈전의 안정을 유지할 수 있다. Mer는 예를 들어 백혈병, 비소세포폐암, 흑색종과 전립선암 등과 같이 다양한 유형의 암에서 과발현 또는 이소성 발현이 발생할 수 있으며, 일부 전형적인 발암신호 전달 경로의 활성화를 초래할 수 있다.
Tyro3은 PCR 클로닝에 기반한 연구에서 발견되었다. 비록 이 다운스트림의 신호 전달 경로에 대해서는 추가적인 고증이 필요하나, PI3K-AKT 및 RAF-MAPK 신호 통로의 참여는 이미 입증되었다.
비록 카보잔티닙(Cabozantinib), 크리조티닙(Crizotinib) 등과 같은 몇몇 티닙계 티로신 키나제 억제제가 Ax1 키나제 억제 활성을 가지고 있으나, 이들은 다중표적 분자로서, 선택성을 지니지 않는다. 따라서, 현재 환자에게 사용되는 TAM 억제제 신약은 아직 없다.
c-MET는 자가인산화 활성을 지닌 막관통 티로신 키나제 수용체(RTKs) 패밀리의 일원이다. c-MET 수용체는 세포에서 하나의 티로신 키나제 촉매 도메인을 가지며, 4개의 핵심적인 효소 활성을 조절하는 티로신 잔기를 구비하여 몇 개의 신호 전달 단백질의 도킹 부위를 형성함으로써 생물학적 응답을 초래한다. c-MET은 가장 먼저 인간의 골육종으로부터 유도된 세포계에서 분리된 것으로, 주로 상피세포에서 발현된다. 배아 발육과 성년 시기에, 간, 췌장, 전립선, 신장, 근육과 골수를 포함하는 많은 기관의 상피세포 표면에 c-MET 수용체가 발현된다.
HGF는 c-MET의 유일한 리간드이다. c-MET이 이와 결합한 후, 수용체의 이합체화가 촉발되며, 이에 따라 c-MET 세포질 내 단백질 키나제 촉매 도메인 중의 티로신 키나제를 활성화시켜, c-MET 카르복실기 말단 티로신(Tyrl359, Tyrl356)의 자가인산화를 야기한다. c-MET는 어댑터 단백질 Gab1과 Grb2의 동원을 활성화하고, Shp2, Ras와 ERK/MAPK를 활성화하며, 세포질 중의 다양한 이펙터 단백질을 인산화된 카르복실기 말단에 동원하여 신속하게 인산화함으로써, 세포 내의 다양한 신호 통로, 예를 들어 PI3K/AKT, Ras-Rac/Rho, MAPK 및 STAT3 통로 등의 활성화를 야기하여 세포 변형, 증식, 항 세포사멸, 세포 분리, 운동 및 침습 등 다양한 생물학적 기능을 촉진한다.
정상적인 HGF/c-MET 신호 통로는 상이한 세포 및 상이한 분화 단계에서 배아 발육 과정 중의 세포 이동 제어, 조직 손상 후의 수복 등과 같이 다양한 생리 과정에 참여한다. 그러나 비정상적인 c-MET 실조는 과발현, 구성 키나제의 지속적인 활성화, 유전자 증폭, HGF 측분비와 자가분비를 통한 활성화, c-MET 돌연변이 및 후대의 변화 등을 포함한다. 비정상적인 HGF/c-MET 신호 경로는 종양의 발생과 발전에 매우 중요한 역할을 하며, 종양의 생장, 침습, 약물 내성과 생존을 유도할 수 있다. 따라서, 종양 세포 중 HGF/c-MET 신호 경로를 효과적으로 억제함으로써 다양한 암에 대해 현저한 치료 효과를 일으킬 수 있다.
따라서, 본 발명은 신규한 티로신 키나제 억제제를 연구 개발하였다. 이는 단독으로 사용하거나 또는 기타 활성 약물과 연합하여 사용할 수 있으며, 암 치료에 새로운 수단과 경로를 제공한다.
본 발명인은 심층적인 연구를 통해, 티로신 키나제 Ax1과 MET의 억제 활성을 나타냄으로써, 티로신 키나제 Ax1 및 MET 활성과 관련된 질환을 치료하는 약물로 개발될 수 있는 일련의 피리딘 화합물을 설계 합성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 하기 일반식 (I)로 표시되는 화합물,
Figure pct00001
(I)
또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염을 제공하며,
여기서,
"
Figure pct00002
" 는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며;
X와 Y는 각각 독립적으로 C 또는 N에서 선택되고;
W와 V는 각각 독립적으로 CH 또는 N에서 선택되며;
Z는,
Figure pct00003
,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
또는
Figure pct00006
기에서 선택되고;
A와 E는 각각 독립적으로 CH 또는 N에서 선택되며;
G1, G2와 G3는 각각 독립적으로 C, N, O 또는 S원자로부터 선택되고;
R1은 수소, 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서 선택되고, 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, NRaRb, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
R2는 수소, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 시아노, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, NRaRbNHC(O)Ra 또는 NHS(O)mRa에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴은 할로겐, 하이드록시, 메르캅토, 시아노, 알킬, ORa, SRa, NRaRb, C(O)NRaRb에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
R3는 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고, 상기 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴은 임의로 Ra에 의해 임의로 더 치환되고;
R4는 수소, 할로겐, 시아노, 알킬, 할로알킬, 알콕시 또는 할로알콕시에서 선택되며;
R5와 R6는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 시아노, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, C(O)Ra, C(O)ORa, OC(O)Ra, C(O)NRaRb, OC(O)NRaRb 에서 선택되거나;
또는 R5와 R6는 서로 연결되는 원자와 함께 옥사시클로알킬을 형성하고, 이 중의 산소 원자는 벤젠 고리와 연결되며;
R7은 수소, 할로겐, NRaRb, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
각각의 R8은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, NRaRb, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
R9은 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 하나 또는 다수의 Q 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
Q는 할로겐, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, C(O)Ra, C(O)ORa, OC(O)Ra, C(O)NRaRb, OC(O)NRaRb 에서 선택되고; 여기서 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
R10은 수소, 할로겐, 알킬, NRaRb에서 선택되고; 상기 알킬은 하나 또는 다수의 할로겐에 의해 임의로 더 치환되며;
R11은 수소, 할로겐, 시아노, 아미노, 하이드록시, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 시아노, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되고, 여기서 상기 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하고, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 옥소, 하이드록실, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
m은 1 내지 4인 정수이고;
n은 0 내지 4인 정수이고;
p는 1 내지 6인 정수이며;
일반식 (I)로 표시되는 화합물 중의 임의의 하나 또는 다수의 H원자는 선택적으로 D 원자에 의해 더 대체된다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물에 있어서, 이는 하기 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물,
Figure pct00007
(Ⅱ)
또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염이며,
여기서,
Figure pct00008
, R1, R2, R3, R4, R9, R10, X, Y, W, V, A, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물에 있어서, 이는 하기 일반식 (Ⅲ)으로 표시되는 화합물,
Figure pct00009
(Ⅲ)
또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염이며,
여기서,
Figure pct00010
, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11, X, Y, W, V, A, E, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물에 있어서, W와 V는 CH이고; A는 N이다.
본 발명의 일 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물에 있어서, 이는 하기 일반식 (Ⅳ), 일반식 (Ⅴ) 또는 일반식 (Ⅵ)로 표시되는 화합물이며,
Figure pct00011
(Ⅳ)
Figure pct00012
(Ⅴ)
Figure pct00013
(Ⅵ)
여기서, R1, R2, R3, R4, R9, R10, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 일 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅳ), 일반식 (Ⅴ) 또는 일반식 (Ⅵ)으로 표시되는 화합물에 있어서,
여기서, R9은 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되며; 바람직하게는 C6-C10 아릴 또는 5 내지 7원(member)의 헤테로아릴에서 선택되고, 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 하나 또는 다수의 Q 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
Q는 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, OC(O)Ra, OC(O)NRaRb 에서 선택되고; 여기서 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소, 알킬에서 선택되고, 여기서 상기 알킬은 할로겐, 시클로알킬, 헤테로시클릴에서 선택된 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴, 바람직하게는 5 내지 7 원의 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하고, 상기 질소 함유 헤테로시클릴기는 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
p는 1 내지 6인 정수이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅳ), 일반식 (Ⅴ) 또는 일반식 (Ⅵ)으로 표시되는 화합물에 있어서, 여기서 R10은 아미노기이다.
본 발명의 일 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅲ)으로 표시되는 화합물에 있어서, 여기서, W와 V는 CH이고; E는 CH이며 또한 A는 N이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅲ)으로 표시되는 화합물에 있어서, 이는 하기 일반식 (Ⅶ), 일반식 (Ⅷ) 또는 일반식 (Ⅸ)로 표시되는 화합물이며,
Figure pct00014
(Ⅶ)
Figure pct00015
(Ⅷ)
Figure pct00016
(Ⅸ)
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 일 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅶ), 일반식 (Ⅷ) 또는 일반식 (Ⅸ)로 표시되는 화합물에 있어서,
R5와 R6는 각각 독립적으로 시아노, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, OC(O)Ra, C(O)NRaRb, OC(O)NRaRb 에서 선택되거나;
또는 R5와 R6는 서로 연결된 원자와 함께 옥사시클로알킬을 형성하고, 여기서 산소 원자는 벤젠 고리와 서로 연결되며;
Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소, 알킬에서 선택되고, 여기서 상기 알킬은 할로겐, 시클로알킬, 헤테로시클릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴, 바람직하게는 5 내지 7 원의 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하며, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되고;
p는 1 내지 6인 정수이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅶ), (Ⅷ), (Ⅸ)로 표시되는 화합물에 있어서, 여기서, R11은 수소 또는 아미노기이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물에 있어서,
여기서, R1은 할로겐, 알킬, 알케닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서 선택되고, 상기 알킬, 알케닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, NRaRb, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬기에서 선택되거나;
또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하며, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되고;
상기 시클로알킬은 바람직하게는 C3-C7 시클로알킬이고, 상기 헤테로시클릴은 5 내지 7원의 헤테로시클릴인 것이 바람직하며; 상기 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 하기의 기인 것이 더욱 바람직하다.
Figure pct00017
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물에 있어서,
여기서, R2는 수소, 옥소, 시아노, 하이드로시, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴에서 선택되고; 바람직하게는 옥소, 시아노, 하이드로시, 알킬에서 선택되며; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴은 할로겐, 하이드록시, 메르캅토, 시아노, 알킬, ORa, SRa, NRaRb, C(O)NRaRb에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬기에서 선택되고, 여기서 상기 알킬은 할로겐에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하며, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환된다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물에 있어서, 여기서, R3은 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고, 상기 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴은 Ra에 의해 임의로 더 치환되며;
Ra는 수소, 할로겐, 시아노, 알킬, 알콕시, 시클로알킬에서 선택되고, 여기서 상기 알킬, 알콕시, 시클로알킬은 할로겐에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
상기 아릴은 C6-C10 아릴인 것이 바람직하고, 페닐인 것이 더욱 바람직하며;
상기 헤테로아릴은 5-10 원의 헤테로아릴인 것이 바람직하고, 피리딜, 피리다지닐, 티에닐, 퓨릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 티아디아졸릴인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물에 있어서, 여기서, R4는 수소, 할로겐, 시아노, 알킬, 할로알킬, 알콕시 또는 할로알콕시에서 선택되고, 할로겐인 것이 바람직하며; n은 0 내지 2인 정수이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 상기 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물에 있어서, 여기서, 화합물 중의 임의의 하나의 수소원자는 듀테륨 원자에 의해 대체될 수 있다.
본 발명의 전형적인 화합물은 이하 화합물을 포함하나 이에 한정되지 않는다:
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염.
본 발명은 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조방법을 더 제공하며, 이는 이하 단계를 포함한다:
Figure pct00032
피나콜붕산염(Ia)과 방향족 브롬화물(Br-Z)을 촉매와 알칼리가 존재하는 상태에서 용제 중에서 Suzuki 커플링 반응시켜 일반식 (I)로 표시되는 화합물을 획득하며; 상기 촉매는 Pd(dppf)2인 것이 바람직하고, 상기 알칼리는 K2CO3인 것이 바람직하며, 상기 용매는 디옥산과 물인 것이 바람직하고;
여기서, R1, R2, R3, R4, Z, X, Y, W, V, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명은 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 또 다른 제조방법을 더 제공하며, 이는 이하 단계를 포함한다:
Figure pct00033
카르복실산 화합물(Ig)과 아릴아민 화합물(Ic)을 커플링제와 염기가 존재하는 상태에서 커플링 반응시켜 일반식 (I)의 화합물을 획득하며; 상기 커플링제는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 염기는 트리에틸아민인 것이 바람직하며;
여기서, R1, R2, R3, R4, Z, X, Y, W, V, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명은 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 또 다른 제조방법을 더 제공하며, 이는 이하 단계를 포함한다:
R2=CN일 때,
Figure pct00034
단계 1: 카르복실산(Ib)과 방향족 아민(Ic)을 커플링제와 알칼리가 존재하는 상태에서 아미드화 반응시켜, 아릴아미드 중간체(Id)를 획득하는 단계로서; 상기 커플링제는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 알칼리는 N,N-디이소프로필에틸아민인 것이 바람직하며;
단계 2: 아릴아미드 중간체(Id)에 염기가 존재하는 상태에서 용매 중에서 가수분해 반응을 발생시켜, 카르복실산 중간체(Ie)를 획득하는 단계로서; 상기 알칼리는 LiOH인 것이 바람직하고, 상기 용제는 메탄올-물 용액인 것이 바람직하며;
단계 3: 카르복실산 중간체(Ie)와 염화암모늄을 촉매와 염기의 작용 하에 아미드화 반응시켜, 디메틸아미드 중간체(If)를 획득하는 단계로서; 상기 촉매는 PyBrOP인 것이 바람직하고, 상기 염기는 DIPEA인 것이 바람직하며;
단계 4: 디메틸아미드 중간체(If)를 탈수제와 염기의 공동 작용 하에 탈수 반응시켜, 일반식 (I)의 화합물을 획득하는 단계로서, 여기서 상기 탈수제는 트리플루오로아세트산 무수물인 것이 바람직하고, 상기 염기는 트리에틸아민인 것이 바람직하며;
여기서, R1, R3, R4, Z, X, Y, W, V, n은 일반식 (I)에 정의된 바와 같다.
본 발명은 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물, 및 의학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약물 조성물을 더 제공한다.
본 발명은 또 다른 측면으로 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물 또는 이를 함유한 약물 조성물, 티로신 키나제 억제제의 제조에 있어서의 용도를 제공하며, 여기서 상기 티로신 키나제는 Ax1, Mer, Tyro3, 및 c-MET인 것이 바람직하다.
본 발명은 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물 또는 이를 함유한 약물 조성물, 티로신 키나제 활성과 관련된 질환을 치료하는 약물의 제조에 있어서의 용도를 더 제공하며; 상기 질환은 방광암, 유선암, 자궁경부암, 직결장암,
대장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 담낭암, 췌장암, 갑상선암, 피부암, 뇌암, 골암, 연조직암, 백혈병과 임파선암으로부터 선택될 수 있고, 백혈병, 간암, 폐암, 신장암, 유선암과 직결장암인 것이 바람직하며, 백혈병, 간압, 폐암, 신장암, 유선암, 위암 및 직결장암인 것이 더욱 바람직하다.
티로신 키나제의 활성과 관련된 질환을 치료하는 방법에 있어서, 이를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본 발명에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물 또는 이를 함유한 약물 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 티로신 키나제는 Ax1, Mer, Tyro3, 및 c-MET인 것이 바람직하고, 상기 질환은 방광암, 유선암, 자궁경부암, 직결장암, 대장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 담낭암, 췌장암, 갑상선암, 피부암, 뇌암, 골암, 연조직암, 백혈병과 임파선암으로부터 선택될 수 있고, 백혈병, 간암, 폐암, 신장암, 유선암과 직결장암인 것이 바람직하며, 백혈병, 간압, 폐암, 신장암, 유선암, 위암 및 직결장암인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 해당 분야의 통상적인 방법에 따르면, 본 발명의 일반식 (I)로 표시되는 화합물은 산과 함께 의학적으로 허용가능한 산부가염을 생성할 수 있다. 상기 산은 무기산과 유기산을 포함하며, 특히 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌디술폰산, 아세트산, 프로피온산, 락트산, 트리플루오로아세트산, 말레산, 시트르산, 푸마르산, 옥살산, 주석산, 벤조산 등인 것이 바람직하다.
본 발명의 해당 분야의 통상적인 방법에 따르면, 본 발명의 일반식 (I)로 표시되는 화합물은 염기와 함께 의학적으로 허용가능한 염기 부가염을 생성할 수 있다. 상기 알칼리는 무기 염기와 유기 염기를 포함하며, 허용가능한 유기 염기는 디에탄올아민, 에탄올아민, N-메틸글루코사민, 트리에탄올아민, 트로메타민 등을 포함하고, 허용가능한 무기 염기는 수산화알루미늄, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 탄산나트륨과 수산화나트륨 등을 포함한다.
활성 성분을 함유한 약물 조성물은 경구 복용 형태에 적용되며, 예를 들어 정제, 당의정, 파스틸, 물 또는 오일 현탁액, 분산형 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 혹은 연질 캡슐, 또는 시럽 혹은 엘릭실제일 수 있다. 본 분야의 어떤 기지의 약물 조성물 제조 방법으로도 경구복용 조성물을 제조할 수 있으며, 이러한 조성물은 보기도 좋고 맛도 좋은 약용 제제를 제공하기 위해, 하나 또는 다수의 감미제, 교미제, 착색제와 방부제로부터 선택되는 성분을 함유할 수 있다. 정제는 활성 성분과, 혼합을 위한 정제 제조에 적합한 무독성 약용 부형제를 함유한다. 이러한 부형제는 불활성 부형제, 예를 들어 탄산칼슘, 탄산나트륨, 유당, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 조립제와 붕해제, 예를 들어 미세결정 셀룰로오스, 크로스카르멜로오스나트륨, 옥수수 전분 또는 알긴산; 접착제, 예를 들어 전분, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 또는 아라비아검; 및 윤활제, 예를 들어 마그네슘스테아레이트, 스테아르산 또는 활석분일 수 있다. 이러한 정제는 코팅되지 않거나 또는 약물의 맛을 가리거나 또는 위장에서 붕해와 흡수를 지연시켜, 장시간 내에 서방 작용을 제공할 수 있는 기지의 기술을 통해 코팅될 수 있다. 예를 들어, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스 또는 하이드록시프로필 셀룰로오스와 같은 수용성 맛 은폐 물질을 사용하거나, 에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트와 같은 시간연장 물질을 사용할 수 있다.
이 중의 활성 성분과 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 고령토를 혼합한 경질 젤라틴 캡슐, 또는 이 중의 활성 성분과 수용성 담체, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜 또는 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 같은 오일 용매를 혼합한 연질 젤라틴 캡슐을 사용하여 경구 복용 제제를 제공할 수도 있다.
수성 현탁액은 활성 물질과, 혼합을 위한 수성 현탁액 제조에 적합한 부형제를 함유한다. 이러한 부형제는 현탁제, 예를 들어 카르복시메틸 셀룰로오스나트륨, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및 아라비아 검; 분산제 또는 습윤제, 천연에서 생성되는 인지질 레시틴이거나, 또는 알킬렌옥사이드와 지방산의 축합 산물, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 또는 에틸렌옥사이드와 장쇄 지방 알코올의 축합산물, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시 세타놀(heptadecaethyleneoxy cetanol), 또는 에틸렌옥사이드와 지방산 및 헥시톨에서 유도된 부분 에스테르의 축합산물, 예를 들어 폴리에틸렌옥사이드 솔비톨 모노올레이트, 또는 에틸렌옥사이드와 지방산 및 헥시탄에서 유도된 부분 에스테르의 축합산물, 예를 들어 폴리에틸렌옥사이드 탈수 솔비톨 모노올레이트일 수 있다. 수성 현탁액은 하나 또는 다수의 부형제, 예를 들어 에틸파라벤 또는 n-프로필 파라벤, 하나 또는 다수의 착색제, 하나 또는 다수의 교미제와 하나 또는 다수의 감미제, 예를 들어 수크로오스, 사카린 또는 아스파탐도 함유할 수 있다.
오일 현탁액은 활성 성분을 땅콩유, 올리브유, 참기름 또는 야자유와 같은 식물유, 또는 액체 파라핀과 같은 광물유에 현탁시켜 제조될 수 있다. 오일 현탁액은 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올과 같은 증조제를 함유할 수 있다. 상기 감미제와 교미제를 투입하여 맛 좋은 제제를 제공할 수 있고, 페녹시펜 또는 α-토코페롤과 같은 항산화제를 첨가하여 이러한 조성물을 보존할 수 있다.
물, 수성 혼탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 및 과립의 첨가를 통해 활성 성분 및 혼합을 위한 분산제 또는 습윤제, 현탁제 또는 하나 또는 다수의 방부제를 제공할 수 있다. 적합한 분산제 또는 습윤제와 현탁제는 상기한 바와 같다. 감미제, 교미제 및 착색제와 같은 기타 부형제를 첨가할 수도 있으며, 아스코르브산과 같은 항산화제의 첨가를 통해 이러한 조성물을 보존한다.
본 발명의 약물 조성물은 수중유 에멀젼의 형태일 수도 있다. 오일상은 올리브유 또는 땅콩유와 같은 식물유, 또는 액체 파라핀 또는 이의 혼합물과 같은 광물유일 수 있다. 적합한 유화제는 천연에서 생성되는 인지질, 예를 들어 대두 레시틴, 및 지방산과 헥시탄에 의해 유도된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예를 들어 솔비톨 모노올레이트, 및 상기 부분 에스테르와 에틸렌옥사이드의 축합산물, 예를 들어 폴리에틸렌옥사이드 솔비톨 모노올레이트일 수 있다. 에멀젼은 감미제, 교미제, 방부제와 항산화제를 함유할 수 있다. 글리세롤, 프로필렌글리콜, 솔비톨 또는 수크로오스와 같은 감미제를 사용하여 시럽과 엘릭실제를 제조할 수 있으며, 이러한 제제는 환화제, 방부제, 착색제와 항산화제도 함유할 수 있다.
본 발명의 약물 조성물은 무균 주사 수용액의 형태일 수 있다. 허용가능한 용매와 용제로는 물, 링거액과 등장성 염화나트륨 용액이 사용될 수 있다. 무균 주사제제는 이 중의 활성성분이 오일상에 용해된 무균 주사 수중유 마이크로에멀젼일 수 있다. 예를 들어 활성 성분을 대두유와 레시틴의 혼합물에 용해시킨 다음, 오일 용액을 물과 글리세롤의 혼합물에 투입하여 마이크로에멀젼을 형성한다. 국소에 다량으로 주사하여, 주사액 또는 마이크로에멀젼을 환자의 혈류 중에 주입하거나, 또는 본 발명의 화합물의 일정한 순환 농도를 유지할 수 있는 방식으로 용액과 마이크로에멀젼을 투여하는 것이 좋다. 이러한 일정한 농도를 유지하기 위하여, 연속 정맥 내 약물 전달장치를 사용할 수 있다.
본 발명의 약물 조성물은 근육 내 및 피하 투여용 무균 주사수 또는 오일 현탁액의 형태일 수 있다. 기지의 기술대로, 상기 적합한 분산제 또는 습윤제와 현탁제를 사용하여 상기 현탁액을 제조할 수 있으며, 무균 주사제는 무독성의 장관외적으로 허용가능한 희석제 또는 용제 중에서 제조되는 무균 주사 용액 또는 현탁액일 수도 있으며, 예를 들어, 1,3-부탄디올에서 제조된 용액일 수 있다. 또한, 간편하게 무균 고정유를 용제 또는 현탁 매질로 사용할 수 있다. 이러한 목적을 위해, 합성 글리세롤 모노 또는 디에스테르를 포함하는 임의의 블렌딩 고정유를 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산 역시 주사제를 제조할 수 있다.
직장 투여용 좌제 형태으로 본 발명의 화합물을 투여할 수 있다. 약물을 일반 온도에서는 고체이나 직장에서는 액체여서, 직장에서 용해되어 약물을 방출하기에 적합한 무자극성 부형제와 혼합하여 이러한 약물 조성물을 제조할 수 있다. 이러한 물질은 코코아버터, 글리세린 젤라틴, 하이드로제네이티드 식물유, 각종 분자량의 폴리에틸렌글리콜과 폴리에틸렌글리콜의 지방산에스테르 혼합물을 포함한다.
당업자라면 약물의 투여 용량이 특정 화합물의 활성, 환자의 연령, 환자의 체중, 환자의 건강 상태, 환자의 거동, 환자의 식단, 약물 투여 시간, 약물 투여 방식, 배설률, 약물의 조합 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 요인에 의존적이라는 점을 잘 알고 있다. 또한, 치료 모드, 일반식 화합물의 일일 복용량 또는 약용 가능한 염의 종류와 같은 최적의 치료방식은 종래의 치료방안에 따라 검증할 수 있다.
본 발명은 일반식 (I)로 표시되는 화합물을 함유할 수 있고, 및 의학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물을 활성 성분으로 사용할 수 있으며, 의학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 혼합하여 조성물로 제조하고, 임상적으로 허용가능한 제형으로 제조할 수 있다. 본 발명의 유도체는 이들이 과민 반응 등과 같은 다른 불리한 작용을 발생시키지 않는 한, 기타 활성 성분과 조합하여 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 유일한 활성 성분으로 사용될 수도 있고, 다른 티로신 키나제 활성과 관련된 질환을 치료하는 약물과 연합하여 사용될 수도 있다. 연합 치료는 각 치료 성분을 동시에, 개별적으로 또는 연속하여 투여하는 방식을 통해 구현된다.
발명의 상세한 설명
상반된 진술이 없는 한, 명세서와 청구항에서 사용되는 용어는 아래의 의미를 갖는다.
용어 "알킬"은 포화지방족 탄화수소기를 의미하며, 이는 1 내지 20개의 탄소원자를 포함하는 직쇄 또는 지쇄 그룹으로서, 1 내지 12개의 탄소원자를 함유한 알킬인 것이 바람직하고, 1 내지 6개의 탄소원자를 함유한 알킬인 것이 더욱 바람직하다. 비제한적인 실시예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 테르트부틸, 세크부틸, n-펜틸, 1, 1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2, 2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1, 1,2-트리메틸프로필, 1, 1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2, 2-디메틸부틸, 1, 3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2, 3-디메틸부틸, n-헵틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5-메틸헥실, 2, 3-디메틸펜틸, 2, 4-디메틸펜틸, 2, 2-디메틸펜틸, 3, 3-디메틸펜틸, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, n-옥틸, 2, 3-디메틸헥실, 2, 4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2, 2-디메틸헥실, 3, 3-디메틸헥실, 4, 4-디메틸헥실, 2-에틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, n-노닐, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸헥실, 2, 2-디에틸펜틸, n-데실, 3, 3-디에틸헥실, 2, 2-디에틸헥실, 및 이들의 각종 지쇄 이성질체 등을 포함한다. 1 내지 6개의 탄소원자를 함유한 저급 알킬인 것이 더욱 바람직하며, 비제한적인 실시예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 테르트부틸, 세크부틸, n-펜틸, 1, 1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2, 2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1, 1,2-트리메틸프로필, 1, 1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2, 2-디메틸부틸, 1, 3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2, 3-디메틸부틸 등을 포함한다. 알킬은 치환 또는 비치환된 것일 수 있으며, 치환된 경우, 치환기는 사용 가능한 어떠한 연결점에서든 치환될 수 있다. 상기 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오, 옥소, 카르복실 또는 카르복실레이트기에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "알케닐"은 적어도 2개의 탄소원자와 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합으로 구성되는 위에서 정의한 바와 같은 알킬을 의미하며, 예를 들어 비닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-, 2- 또는 3-부테닐 등이다. 알케닐은 치환되거나 비치환된 것일 수 있고, 치환된 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "알키닐"은 적어도 2개의 탄소원자와 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중결합으로 구성되는 위에서 정의한 바와 같은 알킬을 의미하며, 예를 들어 에티닐, 프로피닐, 부티닐 등이다. 알키닐은 치환되거나 비치환된 것일 수 있고, 치환된 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "시클로알킬"은 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 또는 폴리시클릭의 고리상 탄화수소 치환기를 의미하며, 시클로알킬 고리는 3 내지 20개의 탄소원자를 포함하고, 바람직하게는 3 내지 12개의 탄소원자를 포함하며, 보다 바람직하게는 3 내지 6개의 탄소원자를 포함한다. 모노시클릭 시클로알킬의 비제한적인 실시예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헥사디에닐, 시클로헵틸, 시클로헵타트리에닐, 시클로옥틸 등을 포함하고; 폴리시클릭 시클로알킬은 스피로 고리, 접합 고리 및 가교된 고리를 갖는 시클로알킬을 포함한다.
용어 "스피로시클릭 알킬"이란 5 내지 20원의 모노시클릭 사이에 하나의 탄소원자(스피로 원자라 칭함)를 공유하는 폴리시클릭 그룹을 의미하며, 하나 또는 다수의 이중결합을 함유할 수 있으나, 상기 고리 중 어떠한 것도 완전히 공액된 π전자시스템을 갖지 않으며, 6 내지 14원인 것이 바람직하고, 7 내지 10원인 것이 더욱 바람직하다. 고리와 고리 간의 공통 스피로 원자의 수량에 따라 스피로 시클로알킬을 모노스피로시클로알킬, 비스스피로시클로알킬 또는 폴리스피로시클로알킬로 나누며, 모노스피로시클로알킬과 비스스피로시클로알킬인 것이 바람직하고, 4원/4원, 4원/5원, 4원 /6원, 5원/5원 또는 5원/6원의 모토스피로시클릭 알킬인 것이 더욱 바람직하다. 스피로시클릭 알킬의 비제한적인 실시예는 하기 기를 포함한다.
Figure pct00035
용어 "접합 시클로알킬"은 5 내지 20원이고, 시스템 중의 각 고리와 체계 중의 기타 고리가 이웃한 한 쌍의 탄소원자를 공유하는 완전탄소 폴리시클릭 그룹을 의미하며, 여기서 하나 또는 다수의 고리는 하나 또는 다수의 이중결합을 함유할 수 있으나, 상기 고리 중 어떠한 것도 완전히 공액된 π전자시스템을 갖지 않으며, 6 내지 14원인 것이 바람직하고, 7 내지 10원인 것이 더욱 바람직하다. 고리를 구성하는 수량에 따라 비시클릭, 트리시클릭, 테트라시클릭 또는 폴리시클릭 접합 시클로알킬로 구분할 수 있으며, 비시클릭 또는 트리시클릭인 것이 바람직하고, 5원/5원 또는 5원/6원의 비시클릭 알킬인 것이 더욱 바람직하다. 접합된 시클로알킬의 비제한적인 실시예는 하기 기를 포함한다.
Figure pct00036
용어 "가교된 시클로알킬"이란 5 내지 20원이며, 임의의 2개의 고리가 2개의 직접 연결되지 않는 탄소원자를 공유하는 완전탄소 폴리시클릭 그룹을 의미하며, 이는 하나 또는 다수의 이중결합을 함유할 수 있으나, 상기 고리 중 어떠한 것도 완전히 공액된 π전자시스템을 갖지 않으며, 6 내지 14원인 것이 바람직하고, 7 내지 10원인 것이 보다 바람직하다. 고리를 구성하는 수량에 따라 비시클릭, 트리시클릭, 테트라시클릭 또는 폴리시클릭 가교된 시클로알킬로 나눌 수 있으며, 비시클릭 또는 트리시클릭인 것이 바람직하고, 비시클릭 또는 트리시클릭인 것이 더욱 바람직하다. 가교된 시클로알킬의 비제한적인 실시예는 하기 기를 포함한다.
Figure pct00037
상기 시클로알킬 고리는 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 알킬 고리에 접합될 수 있으며, 여기서 모체 구조와 함께 연결되는 고리는 시클로알킬이다. 비제한적인 실시예는 인다닐, 테트라하이드로나프틸, 벤조시클로헵틸 등을 포함한다. 시클로알킬은 임의로 치환되거나 또는 비치환된 것일 수 있으며, 치환된 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오, 옥소, 카르복실 또는 카르복실레이트기에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "헤테로시클릴"이란 포화 또는 부분 불포화 단일고리 또는 다중고리의 고리상 탄화수소 치환기를 의미하며, 이는 3 내지 20개의 고리원자를 포함한다. 여기서 하나 또는 다수의 고리원자는 질소, 산소 또는 S(O)m(여기서 m은 0 내지 2인 정수)에서 선택되는 헤테로 원자이나, -O-O-, -O-S- 또는 -S-S-의 고리 부분은 포함하지 않고, 나머지 고리 원자는 탄소이다. 바람직하게는 3 내지 12개의 고리 원자를 포함하고, 여기서 1~4개는 헤테로 원자이며; 가장 바람직하게는 3 내지 8개의 고리 원자를 포함하고, 여기서 1~3개는 헤테로 원자이며; 가장 바람직하게는 5 내지 7개의 고리 원자를 포함하고, 여기서 1~2 또는 1~3개가 헤테로 원자이다. 모노시클릭 헤테로시클릴기의 비제한적인 실시예는 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 테트라하이드로퓨릴, 테트라하이드로티에닐, 디하이드로이미다졸릴, 디하이드로퓨릴, 디하이드로피라졸릴, 디하이드로피롤릴, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페라지닐, 피라닐 등을 포함하고, 1,2,5-옥사디아졸릴, 피라닐 또는 모르폴리닐인 것이 바람직하다. 폴리시클릭 헤테로시클릴은 스피로, 접합 및 가교된 고리의 헤테로시클릴을 포함한다.
용어 "스피로헤테로시클릴"은 5 내지 20원의 단일고리 사이에 하나의 원자(스피로 원자라 칭함)를 공유하는 폴리시클릭 헤테로시클릴 그룹을 의미하며, 여기서 하나 또는 다수의 고리 원자는 질소, 산소 또는 S(O)m(여기서 m은 0 내지 2인 정수)에서 선택되는 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소이다. 이는 하나 또는 다수의 이중결합을 함유할 수 있으나, 상기 고리 중 어떠한 것도 완전히 공액된 π전자시스템을 갖지 않으며, 6 내지 14원인 것이 바람직하고, 7 내지 10원인 것이 더욱 바람직하다. 고리와 고리 사이에 스피로 원자를 공유하는 수량에 따라 스피로헤테로시클릴을 모노스피로헤테로시클릴, 비스스피로헤테로시클릴, 또는 폴리스피로헤테로시클릴로 나누며, 모노스피로헤테로시클릴과 비스스피로헤테로시클릴인 것이 바람직하고, 4원/4원, 4원/5원, 4원/6원, 5원/5원 또는 5원/6원의 모노스피로헤테로시클릴인 것이 더욱 바람직하다. 스피로헤테로시클릴의 비제한적인 실시예는 하기의 기를 포함한다.
Figure pct00038
용어 "접합 헤테로시클릴"은 5 내지 20원이며, 시스템 중의 각 고리와 체계 중의 다른 고리가 이웃한 한 쌍의 원자를 공유하는 폴리시클릭 헤테로시클릴 그룹을 의미한다. 하나 또는 다수의 고리는 하나 또는 다수의 이중결합을 함유할 수 있으나, 상기 고리 중 어떠한 것도 완전히 공액된 π전자시스템을 갖지 않으며, 여기서 하나 또는 다수의 고리 원자는 질소, 산소 또는 S(O)m(여기서 m은 0 내지 2인 정수)에서 선택되는 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소이다. 6 내지 14원인 것이 바람직하고, 7 내지 10원인 것이 더욱 바람직하다. 고리를 구성하는 수량에 따라 비스시클릭, 트리시클릭, 테트라시클릭 또는 폴리시클릭 접합 헤테로시클릴로 구분할 수 있으며, 비스시클릭 또는 트리시클릭인 것이 바람직하고, 5원/5원 또는 5원/6원의 비스시클릭 접합 헤테로시클릴인 것이 더욱 바람직하다. 접합 헤테로시클릴의 비제한적인 실시예는 하기의 기를 포함한다.
Figure pct00039
용어 "가교된 헤테로시클릴"은 5 내지 14원이며, 임의의 2개의 고리가 2개의 직접 연결되지 않는 원자를 공유하는 폴리시클릭 헤테로시클릴 그룹을 의미한다. 이는 하나 또는 다수의 이중결합을 함유할 수 있으나, 상기 고리 중 어떠한 것도 완전히 공액된 π전자시스템을 갖지 않으며, 여기서 하나 또는 다수의 고리 원자는 질소, 산소 또는 S(O)m(여기서 m은 0 내지 2인 정수)에서 선택되는 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소이다. 6 내지 14원인 것이 바람직하고, 7 내지 10원인 것이 더욱 바람직하다. 고리를 구성하는 수량에 따라 비스시클릭, 트리시클릭, 테트라시클릭 또는 폴리시클릭 가교된 헤테로시클릴로 구분할 수 있으며, 비스시클릭, 트리시클릭 또는 테트라시클릭인 것이 바람직하고, 비스시클릭 또는 트리시클릭인 것이 더욱 바람직하다. 가교된 헤테로시클릴기의 비제한적인 실시예는 하기의 기를 포함한다.
Figure pct00040
상기 헤테로시클릴 고리는 아릴, 헤테로아릴 또는 시클로알킬 고리에 접합될 수 있고, 여기서 모체 구조와 함께 연결되는 고리가 헤테로시클릴이며, 이 비제한적인 실시예는
Figure pct00041
및
Figure pct00042
등을 포함한다.
헤테로시클릴은 임의로 치환되거나 또는 비치환된 것일 수 있으며, 치환되는 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오, 옥소, 카르복실 또는 카르복실레이트기에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "아릴"은 공액된 π 전자 체계를 갖는 6 내지 14원의 완전탄소 모노시클릭 또는 접합 폴리시클릭(다시 말해 인접한 탄소원자쌍을 공유하는 고리) 그룹을 의미하며, 6 내지 10원인 것이 바람직하고, 예를 들어 벤젠과 나프틸이며, 벤젠인 것이 더욱 바람직하다. 상기 아릴 고리는 헤테로아릴, 헤테로시클릴 또는 헤테로알킬 고리에 접합될 수 있고, 여기서 모체 구조와 함께 연결되는 고리가 아릴 고리이며, 이의 비제한적인 실시예는 하기의 기를 포함한다.
Figure pct00043
아릴은 치환되거나 또는 비치환된 것일 수 있으며, 치환되는 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오, 카르복실 또는 카르복실레이트기에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "헤테로아릴"은 1 내지 4개의 헤테로 원자, 5 내지 14개의 고리 원자를 포함하는 헤테로방향족 체계를 의미하며, 여기서 헤테로 원자는 산소, 황 및 질소에서 선택된다. 헤테로아릴은 5 내지 10원로, 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 것이 바람직하고; 5원 또는 6원로, 1 내지 2개의 헤테로 원자를 포함하는 것이 더욱 바람직하며; 예를 들어, 이미다졸릴, 퓨릴, 티에닐, 티아졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 피롤릴, 테트라졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 티아디아졸, 피라지닐 등인 것이 바람직하고, 이미다졸릴, 티아졸릴, 피라졸릴 또는 피리미디닐인 것이 바람직하며; 피라졸릴 또는 티아졸릴인 것이 더욱 바람직하다. 상기 헤테로아릴 고리는 아릴, 헤테로시클릴 또는 시클로알킬 고리에 접합될 수 있고, 여기서 모체 구조와 함께 연결되는 고리가 헤테로아릴 고리이며, 이의 비제한적인 실시예는 하기의 기를 포함한다.
Figure pct00044
헤테로아릴은 임의로 치환되거나 또는 비치환된 것일 수 있으며, 치환되는 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오, 카르복실 또는 카르복실레이트기에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "알콕시"란 -O-(알킬) 및 -O-(비치환된 시클로알킬)을 의미하며, 여기서 알킬의 정의는 상기한 바와 같다. 알콕시의 비제한적인 실시예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 시클로프로폭시, 시클로부톡시, 시클로펜틸옥시, 시클로헥실옥시를 포함한다. 알콕시는 임의로 치환되거나 또는 비치환된 것일 수 있으며, 치환되는 경우, 치환기는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 메르캅토, 하이드록실, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클로알킬티오, 카르복실 또는 카르복실레이트기에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹인 것이 바람직하다.
용어 "할로알킬"이란 하나 또는 다수의 할로겐에 의해 치환된 알킬을 의미하며, 여기서 알킬은 위에서 정의한 바와 같다.
용어 "할로알콕시"란 하나 또는 다수의 할로겐에 의해 치환된 알콕시를 의미하며, 여기서 알콕시는 위에서 정의한 바와 같다.
용어 "하이드록실"은 -OH 그룹을 의미한다.
용어 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오드를 의미한다.
용어 "아미노"는 -NH2를 의미한다.
용어 "시아노"는 -CN을 의미한다.
용어 "니트로"는 -NO2를 의미한다.
용어 "옥소"는 =O를 의미한다.
용어 "카르복실기"는 -C(O)OH를 의미한다.
용어 "메르캅토"는 -SH를 의미한다.
용어 "에스테르기"는 -C(O)O(알킬) 또는 -C(O)O(시클로알킬)을 의미하며, 여기서 알킬과 시클로알킬은 위에서 정의한 바와 같다.
용어 "아실"은 -C(O)R 그룹을 함유한 화합물을 의미하며, 여기서 R은 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴이다.
"임의의" 또는 "임의로"는 후속적으로 기재된 사건 또는 환경이 발생할 수는 있으나 필수적인 것이 아님을 의미하며, 본 명세서는 상기 사건 또는 환경이 발생하거나 발생하지 않는 경우를 포함한다. 예를 들어 "알킬에 의해 임의로 치환된 헤테로시클릴 그룹"은 알킬이 존재할 수는 있으나 필수적인 것은 아님을 의미하며, 본 명세서는 헤테로시클릴 그룹이 알킬에 의해 치환된 상황 및 헤테로시클릴 그룹이 알킬에 의해 치환되지 않는 상황을 포함한다.
"치환된"이란 그룹 중의 하나 또는 다수의 수소원자, 바람직하게는 최대 5개, 보다 바람직하게는 1~3개인 수소원자가 서로 독립적으로 상응하는 수량의 치환기에 의해 치환되는 것을 의미한다. 치환기가 화학적으로 가능한 곳에만 위치한다는 것은 말할 필요도 없으므로, 당업자라면 많은 수고를 하지 않아도 (실험이나 이론을 통해) 치환이 가능한지 불가능한지 결정할 수 있다. 예를 들어, 유리 수소의 아미노 또는 하이드록실기가 불포화(예컨대 올레핀속) 결합을 갖는 탄소원자와 결합할 경우, 불안정할 수 있다.
"약물 조성물"이란 하나 또는 다수의 본문의 상기 화합물 또는 이의 생리학적/의학적으로 허용가능한 염 또는 전구 약물과 기타 화학 성분을 함유한 혼합물을 의미하며, 기타 성분은 예를 들어 생리학적/의학적으로 허용가능한 담체와 부형제이다. 약물 조성물의 목적은 생물체에 대한 약물의 투여를 촉진시켜, 활성 성분의 흡수를 이롭게 함으로써 생물 활성이 발휘되도록 하는데 있다.
"약용 가능한 염"이란 본 발명의 화합물의 염을 의미하며, 이러한 염은 포유동물의 체내에 사용할 경우 안전성과 유효성을 지니며, 또한 있어야 할 생물활성을 지닌다.
본 발명의 화합물의 합성방법
본 발명의 목적을 완성하기 위하여, 본 발명은 하기의 합성방법을 이용하여 본 발명의 일반식 (I)의 화합물을 제조한다.
X가 CH이고 Y가 N일 때, 이하 방안 1을 통해 식 (I)의 화합물인 식(IA)의 화합물을 제조한다.
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
방안 1
단계 1: 에틸 아세토아세테이트와 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈을 직접 축합하여 (Z)-2-((디메틸아미노)메틸렌)-3-옥소부탄산에틸에스테르(IA-1)를 획득하고;
단계 2: (Z)-2-((디메틸아미노)메틸렌)-3-옥소부탄산에틸에스테르(IA-1)를 강염기와 작용시켜 에놀 나트륨염 중간체를 형성한 다음, 디에틸 옥살레이트와 고리화 반응을 발생시켜, 4-옥소-4H-피란-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(IA-2)를 획득하며; 상기 용제는 무수 테트라하이드로퓨란인 것이 바람직하고, 상기 강염기는 수산화나트륨인 것이 바람직하며;
단계 3: 4-옥소-4H-피란-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(IA-2)와 아민(R1NH2)은 부가-축합 반응을 통해, N-R1-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산디에틸에스테르(IA-3)를 획득하고;
단계 4: N-R1-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산디에틸에스테르(IA-3)를 N-브로모숙신이미드(NBS)에 의해 브롬화하여, N-R1-3-브로모-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산디에틸에스테르(IA-4)를 획득하며;
단계 5: N-R1-3-브로모-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산디에틸에스테르(IA-4)와 상응하는 붕산을 스즈키(Suzuki) 커플링 반응시켜, N-R1-3-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산디에틸에스테르(IA-5)를 획득하며; 스즈키 커플링 반응은 탄산칼륨을 염기로, Pd(dppf)Cl2를 촉매로, 디옥산/물을 혼합 용제로 사용하고, 반응온도는 80℃인 것이 바람직하며;
단계 6: N-R1-3-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산디에틸에스테르(IA-5)을 염기의 작용 하에 선택적으로 가수분해시켜, N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(IA-6)를 획득하며; 상기 염기는 수산화나트륨인 것이 바람직하며;
단계 7: N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(IA-6)과 브로모 방향아민을 커플링제와 염기가 존재하는 상태에서 아미드화 반응시켜, N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-7)을 획득하며; 상기 커플링제는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 염기는 N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA)인 것이 바람직하며;
단계 8: N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드 중간체(IA-7)의 에틸에스테르기에 대해 가수분해, 아미드화 및 탈수의 3단계 반응을 실시하여 시아노(R2)를 도입하고, N-R1-6-시아노-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-8)를 획득하며;
단계 9: N-R1-6-시아노-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-8)를 팔라듐 촉매의 작용하에(Pd(dppf)2, XPhOS가 리간드이고, 아세트산칼륨이 염기인 것이 바람직하다), 디보레이트와 스즈키 반응시켜 보레이트 중간체(IA-9)를 형성하며;
단계 10: 보레이트 중간체 IA-9와 방향족 브롬화물을 스즈키 커플링 반응시켜, 일반식(IA)의 화합물을 획득하며; 스즈키 반응 조건은 촉매: Pd(dppf)2, 염기: K2CO3, 용제: 디옥산과 물인 것이 바람직하다.
또는, 이하 방안 2를 통해 일반식(IA)의 화합물을 획득한다.
Figure pct00050
단계 1: N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(IA-6)과 방향족 아민을 촉매와 염기의 작용하에 아미드화 반응시켜, N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-10)를 획득하며; 상기 촉매는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 염기는 N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA)인 것이 바람직하며;
단계 2: 용액 중 염기가 존재하는 상태에서 N-R1-6-(에톡시카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-10)의 에틸에스테르를 가수분해시켜, N-R1-6-카르복실-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-11)를 획득하며; 상기 염기는 LiOH인 것이 바람직하고, 상기 용액은 메탄올-물 용액인 것이 바람직하며;
단계 3: N-R1-6-카르복실-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-11)과 염화암모늄을 커플링제와 염기의 작용하에 아미드화 반응시켜, N-R1-6-(아미노카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-12)를 획득하며; 상기 커플링제는 PyBrOP인 것이 바람직하고, 상기 염기는 DIPEA인 것이 바람직하며;
단계 4: N-R1-6-(아미노카르보닐)-5-R3-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-아릴아미드(IA-12)을 탈수제와 염기의 공동 작용하에 탈수반응시켜, 식 (IA)의 화합물(R2는 시아노)을 획득하며; 상기 탈수제는 트리플루오로아세트산 무수물인 것이 바람직하고, 상기 염기는 트리에틸아민인 것이 바람직하다.
X가 N이고 Y가 CH일 때, 이하 방안 3을 통해 일반식(I)의 화합물로서의 일반식(IB)의 화합물을 제조한다.
Figure pct00051
Figure pct00052
방안 3
단계 1: 출발원료인 에틸 말로네이트를 알칼리성 매질에서 2-카르보닐부티르알데하이드와 축합 고리화 반응시켜 1-R3-6-메틸-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-포름산(IB-1)을 획득하며; 상기 알칼리성 매질은 EtONa/EtOH인 것이 바람직하며;
단계 2: 요오드에탄으로 용제와 염기의 공동 작용하에, 1-R3-6-메틸-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-포름산(IB-1) 중의 카르보닐을 보호하여, 1-R3-6-메틸-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-2)를 획득하며; 상기 용제는 NMP인 것이 바람직하고, 상기 염기는 Na2CO3인 것이 바람직하며;
단계 3: N-브로모숙신이미드(NBS)가 친전자성 치환과 과산화벤조산(BPO)이 유발한 래디컬 치환을 동시에 통해, 비스브롬 치환된 1-R3-6-브로모메틸-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-3)를 형성하며;
단계 4: 1-R3-6-브로모메틸-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-3)을 약염기의 작용하에 선택적으로 가수분해시켜 1-R3-6-하이드록시메틸-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-4)를 획득하며; 상기 염기는 NaHCO3인 것이 바람직하며;
단계 5: 획득된 하이드록시메틸 중간체(IB-4)를 산화반응, 아미드화 반응 및 탈수반응의 3단계 유도체화를 진행하고, 시아노 그룹(즉 R2는 시아노)을 도입하여, 1-R3-6-R2-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-5)를 획득하거나;
또는,
단계 4'에서, 각종 아민, 알코올과 티올(알코올과 티올은 모두 LiOH 작용하에 필요하다)과 1-R3-6-브로모메틸-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-3)에 친핵 치환반응을 발생시키고, R2를 도입함으로써, 1-R3-6-R2-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-5)(R2=CH2XR')를 획득하며;
단계 6: 1-R3-6-R2-5-브로모-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-5)와 붕산 화합물을 스즈키 커플링 반응시켜, 1-R3-5-R1-6-R2-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-6)를 획득하며; 스즈키 커플링 반응은 촉매: Pd(dppf)Cl2, 염기: K2CO3, 혼합용제: 디옥산/물이고, 반응온도는 80℃인 것이 바람직하며;
단계 7: 1-R3-5-R1-6-R2-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-6)를 용제 중에서 염기의 작용하에 선택적으로 가수분해시켜, 1-R3-5-R1-6-R2-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-포름산(IB-7)을 획득하며; 상기 염기는 LiOH인 것이 바람직하고; 상기 용제는 메탄올/물인 것이 바람직하며;
단계 8: 1-R3-5-R1-6-R2-2-카르보닐-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(IB-7)와 방향족 아민을 아미드화 반응시켜, 일반식 (IB)의 화합물을 획득하며; 상기 아미드화 시약은 HATU인 것이 바람직하고, 또한 TEA를 염기로 사용하고, DMF를 반응 용제로 사용하는 것이 바람직하다.
X와 Y가 모두 N이고, R2는 옥소기인 경우, 이하 방안 4를 통해 일반식 (I)의 화합물로서의 일반식(IC)의 화합물을 제조한다.
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
방안 4
단계 1: 출발원료인 2-아미노메틴프로피오네이트(IC-1)과 이소시아네이트를 축합 반응시켜 상응하는 우레아 중간체(IC-2)를 획득하며;
단계 2: 우레아 중간체(IC-2)를 알칼리성 매질 중에서 자기 고리화 반응을 발생시켜 3-R3-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(IC-3)를 획득하고; 상기 알칼리성 매질은 EtONa/EtOH인 것이 바람직하며;
단계 3: 알킬 요오드화물(R1-I)이 용제와 염기의 공동 작용하에, R1을 3-R3-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(IC-3)에 도입하여, 1-R1-3-R3-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(IC-4)를 획득하며; 상기 용제는 NMP인 것이 바람직하고, 상기 염기는 K2CO3인 것이 바람직하며;
단계 4: 1-R1-3-R3-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(IC-4)를 산의 작용하에 산성 가수분해시켜, 1-R1-3-R3-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산(IC-5)을 획득하고; 상기 산은 HCl인 것이 바람직하며;
단계 5: 1-R1-3-R3-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산(IC-5)과 붕산 치환기를 함유한 방향족 아민 화합물로 아미드 커플링제와 염기의 공동 작용을 통해 상응하는 붕산 치환기 함유 아미드 중간체(IC-6)를 형성하며; 상기 커플링제는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 염기는 TEA인 것이 바람직하며;
단계 6: 붕산 치환기를 함유한 아미드 중간체(IC-6)와 브로모피리딘 화합물을 스즈키 커플링 반응시켜, 일반식 (IC)의 화합물을 획득하며; 스즈키 반응은 촉매: Pd(dppf)Cl2, 염기: K2CO3, 혼합용제: 디옥산/물이고, 반응온도는 80℃인 것이 바람직하다.
여기서, R1, R2, R3, R4, W, V, Z, n은 식(I)에 정의된 바와 같다.
도 1은 EBC-1 비소세포폐암 모델 중 본 발명의 화합물군과 용제 대조군의 마우스 종양 부피의 생장변화 그래프이다.
도 2는 EBC-1 비소세포폐암 모델 중 본 발명의 화합물군과 용제 대조군의 마우스 체중의 치료 시간에 따른 변화 그래프이다.
본 발명의 화합물 및 이의 제조는 상기 화합물을 제조하거나 사용하는 일부 방법을 설명하는 실시예를 통해 조금 더 이해될 수 있다. 그러나 이러한 실시예들이 본 발명을 제한하지 않는다는 것을 이해하여야 한다. 현재 기지의 또는 추가적으로 개발되는 본 발명의 변화는 본문의 기재 및 보호받고자 하는 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 간주된다.
본 발명의 화합물은 편리한 출발원료와 통용되는 제조 단계를 이용하여 제조된다. 본 발명은 반응온도, 시간, 용제, 압력, 반응물의 몰비와 같은 전형적이거나 경향성이 있는 반응 조건을 제공하였다. 그러나 특별한 설명이 없는 한, 다른 반응 조건도 적용 가능하다. 최적화된 조건은 구체적인 반응물 또는 용제의 사용에 따라 변경될 수 있으나, 통상적인 경우, 반응의 최적화 단계와 조건은 모두 확정될 수 있다.
또한, 본 발명 중 일부 보호기를 사용하여 모종의 작용기가 불필요하게 반응되지 않도록 보호할 수 있다. 각종 작용기에 적합한 보호기 및 이들의 보호 또는 탈보호 조건은 이미 당업자들에게 널리 알려진 것이다. 예를 들어 T.W.Greene과 G.M.Wuts의 《유기합성에서의 보호기》(제3판, Wiley, New York, 1999 및 책 속의 인용 문헌)에는 다량의 보호기의 보호 또는 탈보호가 상세히 기재되어 있다.
화합물과 중간체의 분리와 정제는 구체적인 필요에 따라 적절한 방법과 단계를 취하도록 하며, 예를 들어 여과, 추출, 증류, 결정화, 컬럼 크로마토그래피, 박층판 크로마토그래피 제조, 고효율 액상 크로마토그래피 제조 또는 상기 방법의 혼합 사용이 있다. 구체적인 사용방법은 본 발명에 기재된 구현예를 참조할 수 있다. 물론, 다른 유사한 분리와 정제 수단 역시 적용 가능하며, 통상적인 방법(물리상수와 스펙트럼 데이터 포함)을 사용하여 특성화할 수 있다.
화합물의 구조는 핵자기공명(NMR) 및/또는 질량분석(MS)을 통해 확정된다. NMR 이동은 10-6 (ppm)의 단위로 제공된다. NMR의 측정은 Brukerdps 400형 핵자기공명분광기를 사용하였으며, 측정 용제는 중수소화 디메틸설폭사이드(DMSO-d 6 ), 중수소화 클로로포름(CDCl3), 및 중수소화 메탄올(CD3OD)이고, 내부 표준은 테트라메틸실란(TMS)이다.
MS의 측정은 ACQUITY H-Class UPLC 질량분석기(QDa Detector)(제조업체：Waters)를 사용하였다.
액체상의 제조에는 Waters 2545 고효율 액상 크로마토그래프(Waters 2489 UV/가시광선 검출기, 2767 샘플 MGR, 싱글 C18, 5μm 20 mm x250 mm)(제조업체：Waters)를 사용하였다.
마이크로웨이브 반응에는 개시제+EU형 마이크로웨이브 반응기(제조업체: Biotage)를 사용하였다.
박층 크로마토그래피 실리카겔 플레이트는 칭다오 해양화공의 GF254 실리카겔 플레이트를 사용하였고, 박층 크로마토그래피(TLC)에 사용되는 실리카겔에 적용된 규격은 0.15 mm～0.2 mm이며, 박층 크로마토그래피 정제 제품에 적용된 규격은 0.4 mm～0.5 mm이다.
컬럼 크로마토그래피는 일반적으로 칭다오 해양 실리카겔 100~200메쉬, 200~300메쉬의 실리카겔을 담체로 사용하였다.
본 발명의 기지의 출발원료는 당업계의 기지의 방법에 따르거나 또는 적용하여 합성하거나, 또는 Wanghua Mall, Beijing Coupling, Sigma, JK chemical, Yi Shiming, Shanghai Shuya, Shanghai InnoChem, Energy-chemical, Shanghai Bide 등의 업체로부터 구매할 수 있다.
실시예 중 특별히 설명하지 않는 한, 반응은 모두 아르곤 가스분위기 또는 질소 가스분위기에서 진행될 수 있다.
아르곤 가스분위기 또는 질소 가스분위기란 반응 플라스크에 약 1L 부피의 아르곤가스 또는 질소가스 벌룬을 연결하는 것을 의미한다.
반응 용제, 유기 용제 또는 불활성 용제는 각각 사용되는 상기 용제가 기재된 반응 조건에서 반응에 참여하지 않는 것으로 표현되며, 예를 들어 벤젠, 톨루엔, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란(THF), 디메틸포름아미드(DMF), 클로로포름, 디클로로메탄, 에테르, 메탄올, 질소-메틸피롤리돈(NMP), 피리딘 등을 포함한다. 실시예에서 특별히 설명하지 않는 한, 용액은 수용액을 의미한다.
본 발명에 기재된 화학반응은 일반적으로 상압 하에서 진행된다. 반응 온도는 -78℃ 내지 200℃ 사이이다. 반응 시간과 조건은, 예컨대, 대기압 상태에서, -78℃ 내지 200℃ 사이이면 대략 1 내지 24시간 내에 완료된다. 하룻밤 동안 반응시킬 경우, 반응시간은 일반적으로 16시간이다. 실시예에서 특별히 설명하지 않는 한, 반응 온도는 실온으로, 20℃~30℃이다.
실시예 중의 반응 진도의 모니터링에는 박층 크로마토그래피(TLC)가 사용되며, 반응에 사용되는 전개제의 체계에는 A: 디클로로메탄과 메탄올 체계, B: n-헥산과 에틸아세테이트 체계, C: 석유에테르와 에틸아세테이트 체계; D: 아세톤이 있으며, 용제의 부피비는 화합물의 극성에 따라 조절한다.
화합물의 정제에 사용되는 컬럼 크로마토그래피의 용리제 체계와 박층 크로마토그래피의 전개제 체계는 A: 디클로로메타과 메탄올 체계, B: n-헥산과 에틸아세테이트 체계, C: 석유 에테르와 에틸아세테이트 체계를 포함하며, 용제의 부피비는 화합물의 극성에 따라 조절하고, 소량의 트리에틸아민과 아세트산 등 알칼리성 또는 산성 시약을 투입하여 조절할 수도 있다.
별도로 정의하지 않는 한, 본문에 사용된 모든 전문 및 과학용어는 당업계의 숙련된 업자가 숙지하는 의미와 동일하다. 또한, 기재된 내용과 유사하거나 또는 균등한 방법 및 재료는 어떤 것이든지 본 발명의 방법에 응용될 수 있다.
축약어
μL = 마이크로리터
μM = 마이크로몰
NMR= 핵자기공명
Boc= tert-부톡시카르보닐
br = 브로드 피크
d = 더블 피크
δ = 화학적 이동
℃ = 섭씨 도
dd = 더블 이중선 피크
DIPEA = 디이소프로필에틸아민
DMF = N,N-디메틸포름아미드
DMSO = 디메틸 설폭사이드
DCM = 디클로로메탄
EA = 에틸 아세테이트
HATU = 2-(7-아조벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우레아 헥사플루오로포스페이트
HPLC= 고효율 액상
Hz= 헤르츠
IC50= 50% 활성을 억제하는 농도
J= 커플링 상수(Hz)
LC-MS=액상 크로마토그래피-질량분석 연용
m= 다중 피크
M+H+= 모체 화합물 질량 ＋ 프로톤
mg= 밀리그램
mL= 밀리리터
mmol= 밀리몰
MS= 질량분석
m/z= 질량 대 전하비
nM= 나노몰
NBS= N-브로모숙신이미드
PE= 석유에테르
ppm= 백만분율
PyBrOP= 트리피롤리디늄 브로마이드 헥사플루오로포스페이트
s= 단일 피크
t= 삼중 피크
TEA= 트리에틸아민
TBDPS= 테르트부틸디페닐 실리콘
TFA= 트리플루오로아세트산
THF= 테트라하이드로퓨란
제조 실시예 1: 6 -( 에톡시카르보닐 )-5-(4- 플루오로페닐 )-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 a)의 제조
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
단계 1: (Z)-2-((디메틸아미노)메틸렌)-3-옥소부탄산 에틸에스테르(a1)의 제조
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(1.72kg, 14.4mol)을 에틸 아세토아세테이트(1.79kg, 13.75mol)가 함유된 반응 플라스크(내부 온도 10℃미만)에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 승온시켜 하룻밤 동안 교반하고, 반응 완료 후, 반응액을 감압 농축시켜, (Z)-2-((디메틸아미노)메틸렌)-3-옥소부탄산 에틸에스테르(2.54kg, 적색 유상물)을 획득하였으며, 다음 단계의 반응에 직접 사용하였다.
LC-MS (ESI)：m/z 186.2[M+H+].
1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.66 (s, 1H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.24 - 2.84 (m, 6H), 2.31 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 2: 4-옥소-4H-피란-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(a2)의 제조
무수 테트라하이드로퓨란(700mL)이 함유된 반응 플라스크에 (Z)-2-((디메틸아미노)메틸렌)-3-옥소부탄산 에틸에스테르(150g, 0.81mol)와 디에틸 옥살레이트(130g, 0.89mol)를 투입하였다. 80℃에서, 반응 혼합물에 수산화나트륨(38.8g, 0.97mol, 60%)을 서서히 투입하고, 투입이 완료된 후 30분 동안 계속 교반하였다. 반응이 완전해진 후 실온으로 냉각시키고, 0℃에서, 1N의 묽은 염산(1800ml)으로 ??치시키고, 반응액을 에틸 아세테이트로 추출하여(600mLx3), 유기상을 병합하였다. 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 조 생성물을 에탄올:석유에테르/1:10으로 비팅하여 4-옥소-4H-피란-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르를 획득하였다(140g, 황색 고체, 수율: 72%).
LC-MS (ESI)：m/z 241.1[M+H+].
1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.53 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.45 - 4.34 (m, 4H), 1.39 (dd, J = 12.8, 7.1 Hz, 6H).
단계 3: 1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(a3)의 제조
에탄올(1875mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-옥소-4H-피란-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(300g, 1.25mol)를 투입하고, 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 후, 교반 하에 이소프로필아민(73.8g, 1.25mol)을 적가하였다. 적가 완료 후, 실온으로 승온시켜 30분 동안 계속 교반한 후, 하룻밤 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 반응액을 감압 농축시키고, 잔여물을 에틸 아세테이트로 용해시키고(200ml), 0℃까지 냉각시켜, 진한 염산(104ml)을 적가하고 30분 동안 교반한 후, 여과하여, 여과 케이크를 에틸 아세테이트(600ml)로 세척하고, 고체를 수집하여 1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르 염산염을 획득하였다(307.99g, 백색 고체, 수율: 70%).
LC-MS (ESI)：m/z 282.12 [M+H+].
1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.46 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.37 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 4.24 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.44 (d, J = 6.6 Hz, 7H), 1.35 - 1.21 (m, 6H).
단계 4: 3-브로모-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(a4)의 제조
DMF(1500mL)가 함유된 반응 플라스크에 1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르 염산염(307g, 1.09mol)을 투입한다. 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 액체 브로민(167.5ml, 3.27mol)을 서서히 적가하였다. 적가 완료 후, 30분 동안 계속 교반하고, 반응 완료 후, 반응액을 아황산수소나트륨이 함유된 물(7500mL)에 적가하고, 1시간 동안 교반한 후, 여과하여, 여과 케이크를 물(2L)로 세척하고, 여과 케이크를 수집한 후, 건조시켜, 3-브로모-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르를 획득하였다(236.69g, 백색 고체, 수율: 67.8%).
LC-MS (ESI)：m/z 360.07 /362.07 [M+H+].
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.25 (s, 1H), 4.50 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.37 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.13 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 1.52 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.41 (dt, J = 22.2, 7.1 Hz, 6H).
단계 5: 5-브로모-6-(에톡시카르보닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a5)의 제조
(1600mL)의 에탄올이 함유된 반응 플라스크에 3-브로모-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸에스테르(323.11g, 0.9mol)을 투입하였다. 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 수산화나트륨 수용액(160mL의 물, 1.06mol의 수산화나트륨)을 적가하였으며, 적가 완료 후 1시간 동안 계속 교반하였다. 반응이 완료된 후, 1.5N의 묽은 염산(700mL)으로 pH를 ~7로 조절하여, 백색 고체가 석출되었으며, 30분 동안 계속 교반하였다. 여과 후, 고체를 수집하고, 건조시켜 5-브로모-6-(에톡시카르보닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(271.2g, 백색 고체, 수율: 90.8%)을 획득하였다.
LC-MS (ESI)：m/z 331.95/333.91 [M+H+].
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 14.71 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 4.56 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.28 (hept, J = 6.7 Hz, 1H), 1.58 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.47 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 6: 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(400mL)과 물(100mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-(에톡시카르보닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(43.5g, 0.13mol), p-플루오로페닐붕산(25.18g, 0.18mol), 탄산칼륨(71.8g, 0.52mol)과 Pd(dppf)Cl2(475mg, 0.065mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 85℃에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후, 물(600mL)과 에틸 아세테이트(200mL)를 첨가하여 희석시키고, 여과한 후, 정지시켜 분층하였다. 수상을 진한 염산으로 PH를 약 6으로 조절하고, 백색 침전이 발생 후, 여과하여, 여과 케이크를 물로 세척하고, 건조시켜 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a)을 획득하였다(31g, 백색 고체, 수율 68%).
LC-MS (ESI)：m/z 348.10[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 15.73 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.37 - 7.22 (m, 4H), 4.39 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 0.93 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
제조 실시예 2: 6 -( 에톡시카르보닐 )-5-(4- 플루오로페닐 )-1- 메틸 -4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 b)의 제조
Figure pct00060
메틸아민 수용액으로 이소프로필아민을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 1과 동일한 방법을 이용하여, 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산을 획득하였다(회색 고체, 4단계 수율: 38.5%).
LC-MS (ESI)：m/z 320.1[M+H+].
제조 실시예 3: 1 - 시클로부틸 -6-( 에톡시카르보닐 )-5-(4- 플루오로페닐 )-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 c)의 제조
Figure pct00061
시클로부틸아민으로 이소프로필아민을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 1과 동일한 방법을 이용하여, 1-시클로부틸-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산을 획득하였다(백색 고체, 4단계 수율: 80.9%).
LC-MS (ESI)：m/z360.1[M+H+].
제조 실시예 4: 1 - 시클로프로필 -6-( 에톡시카르보닐 )-5-(4- 플루오로페닐 )-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 d)의 제조
Figure pct00062
시클로프로필아민으로 이소프로필아민을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 1과 동일한 방법을 이용하여, 1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산을 획득하였다(회색 고체, 4단계 수율: 70.8%).
LC-MS (ESI)：m/z 346.3[M+H+].
제조 실시예 5: 6-시아노-1-시클로프로필- N -(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 e)의 제조
Figure pct00063
e
시클로프로필아민으로 이소프로필아민을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 1과 동일한 방법을 이용하여, 1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산을 획득하였다(회색 고체, 4단계 수율: 70.8%).
LC-MS (ESI)：m/z 346.3[M+H+].
제조 실시예 5: 6-시아노-1-시클로프로필- N -(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 e)의 제조
Figure pct00064
e
Figure pct00065
단계 1: 5-((4-브로모-3-플루오로페닐)카바모일)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-에틸포르메이트(e1)의 제조
DMF(100mL)가 함유된 반응 플라스크에 1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(d)(8.0g, 23.2mmol), 4-브로모-3-플루오로아닐린(4.0g, 21.1mmol), HATU(12g, 31.6mmol)와 DIPEA(5.4g, 42.1mmol)를 투입하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(100mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 PE:EA=5:1), 5-((4-브로모-3-플루오로페닐)카바모일)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-에틸포르메이트(e1)를 획득하였다(8.5g, 황색 고체, 수율: 78 %).
LC-MS (ESI)：m/z 517.05/519.06 [M+H+].
단계 2: 5-((4-브로모-3-플루오로페닐)카바모일)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-테트라하이드로피리딘-2-카르복실산(e2)의 제조
실온에서, 에탄올(100mL)을 함유한 반응 플라스크에 5-((4-브로모-3-플루오로페닐)카바모일)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-에틸포르메이트(e1)(8.5g, 16.4mmol), 수산화리튬 일수화물(1.03g, 24.6mmol)과 물(25mL)을 투입하였다. 혼합물을 70℃까지 승온시키고 하룻밤 동안 교반하여, 반응이 완료된 후, 감압 농축시켜 조 생성물 5-((4-브로모-3-플루오로페닐)카바모일)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-테트라하이드로피리딘-2-카르복실산(e2)을 획득하였다(황색 고체). 이는 정제를 거치지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
단계 3：N 5-(4-브로모-3-플루오로페닐)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(e3)의 제조
실온에서, 테트라하이드로퓨란(15mL)과 산화염화인(15mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-((4-브로모-3-플루오로페닐)카바모일)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-테트라하이드로피리딘-2-카르복실산(e2)(2.2g, 4.5mmol)을 투입하였다. 혼합물을 환류될 때까지 가열하여 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜 염화아실 중간체를 획득하였다. 이는 정제를 거치지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
0℃에서, 테트라하이드로퓨란(20mL)과 암모니아수(20mL)가 함유된 반응 플라스크에 염화아실 중간체를 투입하였다. 투입 완료 후, 반응액을 20분 동안 계속 교반하여, 반응이 완료된 후, 에틸 아세테이트(30mL)를 첨가하여 희석시키고, 유기상을 순차적으로 물, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:20), N 5-(4-브로모-3-플루오로페닐)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(e3)를 획득하였다(1.5g, 황색 고체, 수율: 68%).
단계 4: N-(4-브로모-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-시클로프로필-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e4)의 제조
무수 테트라하이드로퓨란(20mL)이 함유된 반응 플라스크에 N 5-(4-브로모-3-플루오로페닐)-1-시클로프로필-3-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(e3)(1.5g, 3.1mmol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 냉각시키고, 순차적으로 트리에틸아민(2.5g, 24.6mmol)과 트리플루오로메탄술폰산 무수물(2.6g, 12.2mmol)을 투입하였다. 투입 완료 후, 반응액을 30분 동안 계속 교반하여, 반응이 완료된 후, 에틸 아세테이트(100mL)를 첨가하여 희석시키고, 유기상을 순차적으로 물, 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:20), N-(4-브로모-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-시클로프로필-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e4)를 획득하였다(1.3g, 황색 고체, 수율: 90.3%).
단계 5: 6-시아노-1-시클로프로필-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일）페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(16mL)이 함유된 반응 플라스크에 N-(4-브로모-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-시클로프로필-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e4)(1.3g, 2.7mmol), 피나콜 디보레이트(1.04g, 4.1mmol), 아세트산칼륨(795mg, 8.1mmol), Pd2(dba)3(275mg, 0.3mmol)과 X-PHOS(257mg, 0.54mmol)를 투입하였다. 밀봉시켜, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브를 통해 30분 동안 반응시켰다(90℃). 반응액이 실온까지 냉각된 후, 물(100mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(100mL x3), 유기상을 병합하였다. 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:20), 6-시아노-1-시클로프로필-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일）페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e)를 획득하였다(800mg, 회백색 고체, 수율: 55.9%).
LC-MS (ESI)：m/z 518.14 [M+H+].
제조 실시예 6：6-시아노- N -(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 f)의 제조
Figure pct00066
f
6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a)으로 1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(d)을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 5와 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드를 획득하였다(회색 고체, 5단계 수율: 25.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 520.21[M+H+].
제조 실시예 7：6-시아노-1-시클로부틸- N -(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 g)의 제조
Figure pct00067
g
1-시클로부틸-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(c)으로 1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(d)을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 5와 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-1-시클로부틸-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드를 획득하였다(회색 고체, 5단계 수율: 29.6%).
LC-MS (ESI)：m/z 532.20[M+H+].
제조 실시예 8：5- 브로모 -6-( 에톡시카르보닐 )-1-(4- 플루오로페닐 )-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 h)의 제조
Figure pct00068
h
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
단계 1: 3-((4-플루오로페닐)아미노)-3-옥소프로파노에이트(h1)의 제조
아세톤(300mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-플루오로아닐린(30g, 0.27mol)과 트리에틸아민(28.7g, 0.28mol)을 투입하였다. 반응액을 0℃까지 냉각시키고, 교반하는 상태에서 3-클로로-3-옥소프로파노에이트(42.9g, 0.28mol)를 적가하여, 적가 완료 후 실온으로 자연 승온시키고 하룻밤 동안 계속 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 반응액을 감압 농축시켰다. 잔여물에 500 mL의 물을 투입하고 2h동안 교반한 후, 감압 여과하고, 고체를 수집하여 3-((4-플루오로페닐)아미노)-3-옥소프로파노에이트(h1)를 획득하였다(60g, 황색 고체, 수율: 98.8 %).
LC-MS (ESI)：m/z 226.07[M+H+].
단계 2: 1-(4-플루오로페닐)-6-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(h2)의 제조
에탄올(200mL)이 함유된 반응 플라스크에 3-((4-플루오로페닐)아미노)-3-옥소프로파노에이트(h1)(30g, 0.13mol), 4, 4-디메톡시부탄-2-온(21.1g, 0.16mol)과 20%의 소디움에톡사이드의 에탄올 용액(166mL, 0.43mol)을 투입하였다. 반응 혼합물을 80℃까지 가열하여 하룻밤 동안 환류시키고, 반응이 완전해진 후, 반응액을 감압 농축시켰다. 잔여물에 5M의 염산을 투입하여 pH4~5가 되도록 하고, 디클로로메탄으로 추출하여(100mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 감압 농축시키고, 잔여물을 석유 에테르와 에틸 아세테이트의 혼합액(5:1, 100mL)으로 비팅하고, 여과한 후, 여과 케이크를 석유 에테르로 세척하고, 고체를 수집하여 제품 1-(4-플루오로페닐)-6-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(h2)을 획득하였다(24g, 황색 고체, 수율: 74.7%).
LC-MS (ESI)：m/z 248.12[M+H+].
단계 3: 1-(4-플루오로페닐)-6-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(h3)의 제조
NMP(150mL)가 함유된 반응 플라스크에 1-(4-플루오로페닐)-6-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(h2)(16g, 64.8mmol), 탄산나트륨(7.6g, 71.3mmol)과 요오드에탄(11.1g, 71.3mmol)을 투입하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 물(300mL)을 투입하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다(150mLx3). 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 에테르(150mL)로 비팅하고 정제하여, 1-(4-플루오로페닐)-6-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(h3)를 획득하였다(15g, 황색 고체, 수율: 84.2 %).
LC-MS (ESI)：m/z 276.10[M+H+].
단계 4: 5-브로모-6-(브로모메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h4)의 제조
사염화탄소(150mL)가 함유된 반응 플라스크에 1-(4-플루오로페닐)-6-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실레이트(h3)(15g, 54.5mmol), NBS(21.4g, 120mmol)와 BPO(660mg, 2.72mmol)를 투입하였다. 반응액을 70℃까지 가열하고 24시간 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 포화 티오황산나트륨 수용액(200mL)을 투입하여 반응을 ??치시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다(100mLx3). 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA=2:1), 5-브로모-6-(브로모메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h4)를 획득하였다(16.8g, 황색 고체, 수율: 71.2 %).
LC-MS (ESI)：m/z 431.94/433.93[M+H+].
단계 5: 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-(하이드록시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h5)의 제조
테트라하이드로퓨란(150mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-(브로모메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h4)(16.8g, 38.8mmol)와 포화된 탄산수소나트륨 수용액(150mL)을 투입하였다. 반응액을 60℃까지 가열시키고 하룻밤 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 에틸 아세테이트로 추출하였다(100mLx3). 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA=1:3), 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-(하이드록시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h5)를 획득하였다(7.2g, 황색 고체, 수율: 50.2 %).
LC-MS (ESI)：m/z 369.95/371.95[M+H+].
단계 6: 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-포르밀-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(h6)의 제조
무수 디클로로메탄(5mL)이 함유된 반응 플라스크에 염화옥살릴(208mg, 1.64mmol)을 투입하고, 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하였다. 반응액을 -78℃까지 강온시킨 후, 디메틸설폭사이드(176mg, 2.26mmol)를 서서히 적가하고, 적가 완료 후 이 온도에서 20분 동안 교반한 다음, 다시 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-(하이드록시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h5)(380mg, 1.03mmol)의 디클로로메탄 용액(5mL)을 서서히 적가하고, 적가 완료 후 이 온도에서 30분 동안 더 교반하였다. 이후 트리에틸아민(520mg, 5.15mmol)의 디클로로메탄 용액을 서서히 적가하고, 적가 완료 후 이 온도에서 30분 동안 계속 교반하였다. 반응 완료 후, 물을 서서히 투입하여 반응을 ??치시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다(10mLx3). 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과한 후, 여과액을 감압 농축시켜, 조 생성물 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-포르밀-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(h6)를 획득하였다(380mg, 황색 고체, 수율: 100 %).
LC-MS (ESI)：m/z 367.94/369.95[M+H+].
단계 7: 5-브로모6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(h)의 제조
아세토니트릴(50mL)이 함유된 반응 플라스크에 조 생성물 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-포르밀-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르 (h6)(7.2g, 19.6mmol), 인산이수소나트륨(1.17g, 9.8mmol), 과산화수소(20mL)와 아염소산나트륨(3.5g, 39.2mmol)을 투입하였다. 반응액을 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 반응 완료 후, 물(100mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다(50mLx3). 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과한 후, 감압 농축시키고, 잔여물을 석유 에테르와 에틸 아세테이트의 혼합액(PE:EA=10:1, 50mL)으로 비팅 정제하여, 5-브로모6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(h)을 획득하였다(5.6g, 황색 고체, 수율: 74.4 %).
LC-MS (ESI)：m/z 383.99/385.97[M+H+].
제조 실시예 9: 6 - 시아노 -1-(4- 플루오로페닐 )-5- 메틸 -2-옥소-1,2- 디하이드 로피리딘-3-카르복실산(중간체i)의 제조
Figure pct00072
i
Figure pct00073
Figure pct00074
단계 1: 5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i1)의 제조
DMF(8mL)가 함유된 반응 플라스크에 5-브로모6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(h)(500mg, 1.3mmol), 염화암모늄(348mg, 6.5mmol), PyBrOP(760mg, 1.6mmol)와 DIPEA(503mg, 3.9mmol)를 투입하였다. 반응액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 반응 완료 후, 포화된 탄산수소나트륨 수용액(20mL)을 투입하여 반응을 ??치시킨 후, 에틸 아세테이트로 추출하고(10mLx3), 병합된 유기상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE: EA=1:3), 5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i1)를 획득하였다(400mg, 백색 고체, 수율: 80.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 383.01/385.03[M+H+].
단계 2: 5-브로모-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i2)의 제조
아세토니트릴(5mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르 (i1)(100mg, 0.26mol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 순차적으로 트리플루오로아세트산 무수물(103mg, 0.52mol)과 트리에틸아민(80mg, 0.78mol)을 서서히 적가한다. 반응액을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 반응이 완료된 후, 물(10mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 병합한 유기상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켜, 조 생성물 5-브로모-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i2)를 획득하였다(96mg, 황색 고체, 수율: 100%).
LC-MS (ESI)：m/z 364.95/366.98[M+H+].
단계 3: 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 i)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(9mL)과 물(3mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i2)(100mg, 0.27mmol), 메틸붕산(164mg, 2.7mmol), 탄산칼륨(113mg, 0.82mmol)과 Pd(dppf)Cl2.DCM(44mg, 0.055mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브 반응기에서 100℃까지 가열하여 30분 동안 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후, 물(10mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 유기상을 제거하였다. 수상을 1N의 염산 수용액으로 pH3~4가 되도록 산화시킨 다음, 이소프로판올과 디클로로메탄의 혼합용제(15%의 이소프로판올)로 추출하여(10mLx3), 병합한 유기상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켜, 조 생성물 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 i)을 획득하였다(30mg, 황색 유상물, 수율: 40.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 273.08[M+H+].
제조 실시예 10: 6 - 시아노 -5- 시클로프로필 -1-(4- 플루오로페닐 )-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)의 제조
Figure pct00075
j
시클로프로필붕산으로 메틸붕산을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 9와 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)를 제조하였다(황색 유상물, 1단계 수율: 65.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 299.10[M+H+].
제조 실시예 11: 6 - 시아노 -1-(4- 플루오로페닐 )-2-옥소-5-( 프로프 -1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 k)의 제조
Figure pct00076
k
Figure pct00077
단계 1: 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(중간체 k1)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(9mL)과 물(3mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i2)(100mg, 0.27mmol), 이소프로페닐붕산 피나콜 에스테르(230mg, 1.37mmol), 탄산칼륨(113mg, 0.82mmol)과 Pd(dppf)Cl.DCM(44mg, 0.055mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브 반응기에서 100℃까지 가열하여 30분 동안 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각시킨 후, 물(10mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA=1:1), 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(중간체 k1)를 획득하였다(60mg, 황색 유상물, 수율: 66.7 %).
LC-MS (ESI)：m/z 327.14[M+H+].
단계 2: 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 k)의 제조
에탄올(3mL)이 함유된 반응 플라스크에 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(중간체 k1)(60mg, 0.18mmol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 수산화나트륨 수용액(1mL, 10mg, 0.24mmol)을 서서히 적가하여, 적가 완료 후, 실온으로 승온시키고 30분 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜, 조 생성물 6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 k)을 획득하였다(60mg, 황색 고체, 수율: 100%).
LC-MS (ESI)：m/z 300.12[M+H+].
제조 실시예 12: 5 - 브로모 -6-((( 테르트부톡시카르보닐 )( 메틸 )아미노) 메틸 )-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 l)의 제조
Figure pct00078
l
Figure pct00079
단계 1: 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(l1)의 제조
테트라하이드로퓨란(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-(브로모메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h4)(300mg, 0.75mmol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 메틸아민 수용액(0.5mL)을 서서히 적가하고, 적가 완료 후, 실온으로 승온시켜 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 물을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출한다(10mLx3). 병합한 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과시켜, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA=2:1), 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(l1)를 획득하였다(250mg, 황색 고체, 수율: 86.7%).
LC-MS (ESI)：m/z 383.13/385.10[M+H+].
단계 2: 6-(((테르트부톡시카르보닐)메틸)아미노)(메틸)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(l2)의 제조
디클로로메탄(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(l1)(250mg, 0.65mmol), Boc2O(202mg, 0.94mmol)와 트리에틸아민(94mg, 0.94mmol)을 투입하였다. 반응액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA=5:1), 6-(((테르트부톡시카르보닐)메틸)아미노)(메틸)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(l2)를 획득하였다(230mg, 황색 고체, 수율: 73.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 483.15/485.13[M+H+].
단계 3: 5-브로모-6-(((테르트부톡시카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 l)의 제조
에탄올(4.5mL)이 함유된 반응 플라스크에 6-(((테르트부톡시카르보닐)메틸)아미노)(메틸)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(l2)(230mg, 0.48mmol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 수산화나트륨 수용액(1.5mL, 25mg, 0.62mmol)을 서서히 적가하여, 적가 완료 후, 실온으로 승온시켜 30분 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜 조 생성물 5-브로모-6-(((테르트부톡시카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 l)을 획득하였다(230mg, 황색 고체, 수율: 100%).
LC-MS (ESI)：m/z 455.12/457.09[M+H+].
제조 실시예 13: 6 -(( 테르트부톡시카르보닐 )아미노) 메틸 )-5- 브로모 -1-(4- 플 루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 m)의 제조
Figure pct00080
암모니아수로 메틸아민 수용액을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, 6-((테르트부톡시카르보닐)아미노)메틸)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 m)(황색 고체, 3단계 수율: 45.3%)을 제조하였다.
LC-MS (ESI)：m/z 441.15/443.11[M+H+].
제조 실시예 14: 5 - 브로모 -1-(4- 플루오로페닐 )-6-( 메톡시메틸 )-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 n)의 제조
Figure pct00081
단계 1: 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 n)의 제조
메탄올(8mL)을 함유한 반응 플라스크에 5-브로모-6-(브로모메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-에틸포르메이트(h4)(500mg, 1.15mmol)를 투입하였다. 반응액이 0℃까지 강온된 후, 수산화리튬 수용액(1.4mL, 241mg, 5.75mmol)을 서서히 적가하고, 적가 완료 후, 실온으로 승온시켜 30분 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜, 조 생성물 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 n)을 획득하였다(500mg, 황색 고체, 수율: 100%).
LC-MS (ESI)：m/z 355.95/357.95[M+H+].
제조 실시예 15: 4 -(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2- 플루오로페닐 )피리딘-3-일)-1 H -피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(중간체 p)의 제조
Figure pct00082
p
Figure pct00083
단계 1: 3-브로모-5-요오도피리딘-2-아민(중간체 p1)의 제조
아세토니트릴(100mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-요오도피리딘-2-아민(5.0g, 22.73mmol)과 NBS(4.0g, 22.73mmol)을 투입하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 여과하여, 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA/20:1), 3-브로모-5-요오도피리딘-2-아민(중간체 p1)을 획득하였다(2.5g, 황색 고체, 수율: 36.8%).
LC-MS (ESI)：m/z299.35/301.31[M+H+].
단계 2: 4-(4-(6-아미노-5-브로모피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1- 테르트부틸 포르메이트(중간체 p2)의 제조
실온에서, 톨루엔, 에탄올과 물의 혼합액(50mL, 2:2:1)이 함유된 반응 플라스크에 3-브로모-5-요오도피리딘-2-아민(중간체 p1)(2.5g, 8.36mmol), 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(베이징 커플링, 3.78 g, 10.03mmol), 탄산나트륨(2.66g, 25.08mmol), Pd(PPh3)4(483mg, 0.42mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 80℃까지 가열시켜 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 여과하고, 여과액을 물(50mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(50mLХ3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA/1:1), 4-(4-(6-아미노-5-브로모피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p2)를 획득하였다(2.8g, 황색 고체, 수율: 79.4%).
LC-MS (ESI)：m/z422.24/424.21[M+H+].
단계 3: 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산과 물의 혼합액(40mL, 4:1)이 함유된 반응 플라스크에 4-(4-(6-아미노-5-브로모피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p2)(2.8g, 6.64mmol), 4-아미노-2-플루오로페닐보론산 피나콜 에스테르(상하이 Bide, 1.88g, 7.96mmol), 탄산칼륨(2.75g, 19.92mmol), Pd(dppf)Cl2.DCM(538mg, 0.66mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 90℃까지 가열하여 하룻밤 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 여과하고, 여과액을 물(50mL)을 첨가하여 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하여(50mLХ3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA/1:2), 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)를 획득하였다(2.3g, 황색 고체, 수율: 77.1%).
LC-MS (ESI)：m/z453.43[M+H+].
제조 실시예 16：3-(4-아미노-2- 플루오로페닐 )-5-(1-에틸-1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-2-아민(중간체 q)의 제조
Figure pct00084
1-에틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)-1H-피라졸(베이징 커플링)으로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15와 동일한 방법을 이용하여, 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 q)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 68.8%).
LC-MS (ESI)：m/z298.17[M+H+].
제조 실시예 17: 3 -(4-아미노-2- 플루오로페닐 )-5-(1-( 테트라하이드로 -2 H -피란-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 r)의 제조
Figure pct00085
1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)-1H-피라졸(베이징 커플링)으로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15와 동일한 방법을 이용하여, 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피페리딘-2-아민(중간체 r)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 72.3%).
LC-MS (ESI)：m/z354.31[M+H+]
제조 실시예 18：3-(4-아미노-2- 플루오로페닐 )-5-(3, 4- 디메톡시페닐 )피리딘-2-아민(중간체 s)의 제조
Figure pct00086
(3, 4-디메톡시페닐)붕산(베이징 커플링)으로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15와 동일한 방법을 이용하여, 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-2-아민(중간체 s)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 79.1%).
LC-MS (ESI)：m/z340.22[M+H+].
제조 실시예 19：3-(4-아미노-2- 플루오로페닐 )-5-(1- 메틸 -1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-2-아민(중간체 t)의 제조
Figure pct00087
1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)-1H-피라졸(베이징 커플링)으로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일) 피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15와 동일한 방법을 이용하여, 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 t)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 75.8%).
LC-MS (ESI)：m/z284.15[M+H+].
제조 실시예 20：3-(4-아미노-2- 플루오로페닐 )-5-(1-(1- 메틸피페리딘 -4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 u)의 제조
Figure pct00088
1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘(베이징 커플링)으로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15와 동일한 방법을 이용하여, 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 u)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 32.4%).
LC-MS (ESI)：m/z367.33[M+H+].
제조 실시예 21: 3 - 브로모 -5-(1-에틸-1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-2- 아민(v)의 제조
Figure pct00089
1-에틸-1H-피라졸-4-붕산 피나콜 에스테르로 4-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15의 단계 1 및 2와 동일한 방법을 이용하여, 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 43%).
LC-MS (ESI)：m/z 267.01,269.08[M+H+].
제조 실시예 22: 3 - 브로모 -5-(1- 메틸 -1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-2- 아민(w)의 제조
Figure pct00090
1-메틸-1H-피라졸-4-붕산 피나콜 에스테르로 4-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15의 단계 1 및 2와 동일한 방법을 이용하여, 3-브로모-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(w)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 36%).
LC-MS (ESI)：m/z 253.01,255.08[M+H+].
제조 실시예 23：3- 브로모 -5-(1-( 테트라하이드로 -2 H -피란-4-일)-1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-2-아민(x)의 제조
Figure pct00091
1-(테트라하이드로피란-4-일)-1H-피라졸-4-붕산 피나콜 에스테르로 4-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15의 단계 1 및 2와 동일한 방법을 이용하여, 3-브로모-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(x)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 49%).
제조 실시예 24：6-시아노- N -(2,5-디플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(y)의 제조
Figure pct00092
6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a)으로 1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(d)을 대체하고, 또한 4-브로모-2,5-디플루오로아닐린으로 4-브로모-3-플루오로아닐린을 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 5와 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-N-(2,5-디플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(y)를 제조하였다(황색 고체, 5단계 수율: 18%).
LC-MS (ESI)：m/z 538.25[M+H+].
제조 실시예 25：3- 브로모 -5-（1-（1- 메틸피페리딘 -4-일）-1H- 피라졸 -4-일）피리딘-2-아민(z)의 제조
Figure pct00093
1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘(상하이 Bide)으로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15의 단계 1 및 2와 동일한 방법을 이용하여, 3-브로모-5-（1-（1-메틸피페리딘-4-일）-1H-피라졸-4-일）피리딘-2-아민(z)을 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 23%).
LC-MS (ESI)：m/z 336.22/338.18[M+H+].
제조 실시예 26：4-((6, 7- 디메톡시퀴놀린 -4-일) 옥시 )-3- 플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)의 제조
Figure pct00094
Figure pct00095
단계 1: 4-(2-플루오로-4-니트로페녹시)-6, 7-디메톡시퀴놀린(중간체 aa1)의 제조
실온에서, 디페닐 에테르(2000mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-클로로-6, 7-디메톡시퀴놀린(300g, 1.341mol)과 2-플루오로-4-니트로페놀(273g, 1.743mol)을 투입하였다. 반응액을 140℃까지 승온시키고 24시간 동안 교반한여, 반응액이 실온으로 냉각시킨 후, 미백색 고체가 석출되었다. 2000mL의 석유 에테르를 투입하여 2시간 동안 계속 교반한 다음, 반응액을 여과하고, 여과 케이크를 석유 에테르 1000mL로 세척하고, 고체를 수집하여 4-(2-플루오로-4-니트로페녹시)-6, 7-디메톡시퀴놀린(중간체 aa1)을 획득하였다(440g, 미백색 고체, 수율: 95.38%).
LC-MS (ESI)：m/z345.23[M+H+].
단계 2: 4 -((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)의 제조
실온에서, 메탄올(1500mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-(2-플루오로-4-니트로페녹시)-6, 7-디메톡시퀴놀린(300g, 0.872mol), 팔라듐/탄소(30g, 10%)과 진한 염산(72mL, 0.872mol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환 후, 수소가스를 3회 치환하고 36시간 동안 교반하였다. 1500mL의 메탄올을 투입하고 60℃까지 가열하여, 고체가 완전히 용해된 후 여과하고, 여과액을 0℃로 냉각시킨 후 다량의 고체가 석출되었다. 여과하여, 여과 케이크를 1500mL의 에틸 아세테이트로 세척하고, 고체를 수집하여 4 -((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)을 획득하였다(290g, 옅은 황색 고체, 수율: 94.9%).
LC-MS (ESI)：m/z315.27[M+H+].
제조 실시예 27： N -(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복사미드(bb)의 제조
Figure pct00096
Figure pct00097
단계 1: 2-((3-(4-플루오로페닐)우레이도)메틸렌)디에틸 말로네이트(bb1)의 제조
실온에서, (30mL)의 1,2-디클로로에탄이 함유된 반응 플라스크에 디에틸 아미노메틸렌 말로네이트(1.7g, 9.1mmol), p-플루오로페닐 이소시아네이트(1.37g, 10mmol)와 DIPEA(2.35g, 18.2mmol)를 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 가열하여 6시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 반응액을 0℃까지 냉각시켜, 고체를 석출하여, 여과하고, 여과 케이크를 에테르로 세척한 후, 수집하고 건조시켜, 2-((3-(4-플루오로페닐)우레이도)메틸렌)디에틸 말로네이트(bb1)를 획득하였다(980mg, 백색 고체, 수율: 33.7%).
LC-MS (ESI)：m/z 325.1[M+H+].
단계 2：3-(4-플루오로페닐)-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(bb2)의 제조
실온에서, (20mL)의 에탄올이 함유된 반응 플라스크에 2-((3-(4-플루오로페닐)우레이도)메틸렌)디에틸 말로네이트(bb1)(980mg, 3mmol)과 에탄올나트륨(306mg, 4.5mmol)을 투입하였다. 반응액을 1시간 동안 교반한 후, 감압 농축시키고, 잔여물을 에틸 아세테이트(100mL)로 희석시킨 후, 유기상을 순차적으로 시트르산(200mL, 1M)과 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 DCM:MeOH/10:1), 3-(4-플루오로페닐)-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(bb2)를 획득하였다(780mg, 백색 고체, 수율: 92.7%).
LC-MS (ESI)：m/z 279.1[M+H+].
단계 3: 3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(bb3)의 제조
실온에서, (10mL)의 DMF가 함유된 반응 플라스크에 3-(4-플루오로페닐)-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(bb2)(350mg, 1.3mmol), 탄산칼륨(538mg, 4.5mmol)과 2-요오도프로판(660mg, 3.9mmol)을 투입하였다. 혼합물을 75℃까지 승온시키고 하룻밤 동안 교반하였다. 반응액이 실온으로 냉각된 후, 에틸 아세테이트(50mL)로 희석하고, 유기상을 순차적으로 물(100mL)과 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA/1:1), 3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(bb3)를 획득하였다(380mg, 백색 고체, 수율: 94.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 321.1[M+H+].
단계 4: 3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산(bb4)의 제조
실온에서, 염산의 1,4-디옥산 용액(10 mL, 4M)이 함유된 반응 플라스크에 3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(bb3)(380mg, 1.2mmol)와 물(0.5mL)을 투입하였다. 혼합물을 70℃까지 가열하고 5시간 동안 교반하여, 반응액이 실온으로 냉각된 후, 감압 농축시켜, 3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산(bb4)을 획득하였다. 이는 정제를 거치지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
LC-MS (ESI)：m/z 293.1[M+H+].
단계 5: N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복사미드(bb)의 제조
DMF(6mL)가 함유된 반응 플라스크에 3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복실산(bb4)(300mg, 1mmol), 4-아미노-2-플루오로페닐붕산 피나콜 에스테르(244mg, 1mmol), HATU(608mg, 1.6mmol)와 DIPEA(387mg, 3mmol)를 투입하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완료된 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸 아세케이트로 추출하여(50mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 PE:EA=5:1), N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복사미드(bb)를 획득하였다(280mg, 황색 고체, 수율: 53.3 %).
LC-MS (ESI)：m/z 512.3[M+H+].
제조 실시예 28: 4 -(4-아미노-2- 플루오로페녹시 )-7- 메톡시퀴놀린 -6- 카르복 사미드(중간체 cc)의 제조
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
단계 1: 4-((((2, 2-디메틸-4, 6-디옥소-1,3-디옥산-5-일리덴)메틸)아미노)-2-메톡시벤젠 메틸포르메이트(중간체 cc1)의 제조
실온에서, 에탄올(100mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-아미노-2- 메톡시벤젠 메틸포르메이트(상하이 Bide, 5g, 27.6mmol)를 투입하였다. 반응액을 50℃까지 승온시키고 10분 동안 교반한 다음, 5-(메톡시메틸렌)-2, 2-디메틸-1, 3-디옥산-4, 6-디온(상하이 Bide, 5.13g, 27.6mmol)을 투입하였다. 혼합물을 80℃까지 계속 승온시키고 1시간 동안 교반한 후, 반응을 실온으로 냉각시켜, 여과하고, 고체를 수집하여 4-((((2, 2-디메틸-4, 6-디옥소-1,3-디옥산-5-일리덴)메틸)아미노)-2-메톡시벤젠 메틸포르메이트(중간체 cc1)를 획득하였다(8g, 갈색 고체, 수율: 86.5%).
LC-MS (ESI)：m/z336.3[M+H+].
단계 2: 4-하이드록시-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실산 메틸 에스테르(중간체cc2)의 제조
실온에서, 디페닐에테르(100mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-((((2, 2-디메틸-4, 6-디옥소-1,3-디옥산-5-일리덴)메틸)아미노)-2-메톡시벤젠 메틸포르메이트(중간체 cc1)(8g, 23.9mmol)를 투입하였다. 반응액을 200℃까지 승온시키고 8시간 동안 교반한 후, 반응액을 실온으로 냉각시켜, 여과하고, 고체를 수집하여 4-하이드록시-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실산 메틸 에스테르(중간체cc2)를 획득하였다(5.2g, 갈색 고체, 수율: 93.4%).
LC-MS (ESI)：m/z234.1[M+H+].
단계 3: 4-클로로-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실산 메틸 에스테르(중간체 cc3)의 제조
실온에서, 디클로로설폭사이드(20mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-하이드록시-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실산 메틸 에스테르(중간체cc2)(1g, 4.29mmol)와 DMF(0.1mL)를 투입하였다. 반응액을 환류되도록 가열하고 3시간 동안 교반한 후, 반응을 실온으로 냉각시키고, 반응액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 디클로로메탄(30mL)으로 희석시키고, 유기상을 순차적으로 포화 탄산수소나트륨 수용액과 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켜 조 생성물 4-클로로-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실산 메틸 에스테르(중간체 cc3)를 획득하였다(1.0g, 갈색 고체, 수율: 92.8%).
LC-MS (ESI)：m/z237.1/239.1[M+H+].
단계 4：4-클로로-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc4)의 제조
실온에서, THF(10mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-클로로-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실산 메틸 에스테르(중간체 cc3)(1g, 3.98mmol)와 암모니아수(33.0%, 5mL)를 투입하였다. 밀봉하여, 반응액을 80℃까지 가열하고 하룻밤 동안 교반하고, 반응액을 실온으로 냉각시킨 후, 여과하고, 고체를 수집하여 4-클로로-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc4)를 획득하였다(600mg, 갈색 고체, 수율: 63.9%).
LC-MS (ESI)：m/z236.2/238.2[M+H+].
단계 5: 4-(2-클로로-4-니트로페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc5)의 제조
실온에서, 디페닐에테르(10mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-클로로-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc4)(600mg, 2.39mmol)와 2-플루오로-4-니트로페놀(베이징 커플링, 750mg, 4.78mmol)을 투입하였다. 반응액을 140℃까지 승온시키고 10시간 동안 교반하여, 반응액을 실온으로 냉각시킨 후, 미백색의 고체가 석출되었다. 반응액을 여과하고, 고체를 수집하여, 4-(2-클로로-4-니트로페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc5)를 획득하였다(800mg, 미백색 고체, 수율: 93.7%).
LC-MS (ESI)：m/z358.2[M+H+]
단계 6：4-(4-아미노-2-플루오로페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 m)의 제조
실온에서, 에탄올(15mL)과 물(5mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-(2-클로로-4-니트로페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc5)(800mg, 2.24mmol), 철분말(627mg, 11.2mmol)과 염화암모늄(1.3g, 22.7mmol)을 투입하였다. 반응액을 80℃까지 승온시키고 1시간 동안 교반하여, 반응액을 실온으로 냉각시킨 후, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 DCM:MeOH/5:1), 4-(4-아미노-2-플루오로페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 m)를 획득하였다(600mg, 회색 고체, 수율: 81.7%).
LC-MS (ESI)：m/z328.3[M+H+]
제조 실시예 29：1-( 메틸 - d 3 )-4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)-1 H -피라졸(중간체 dd )의 제조
Figure pct00101
실온에서, 아세토니트릴(15mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-피라졸붕산 피나콜 에스테르(상하이 BidePharm Tech.)(1.2g, 0.5mmol), 중수소화 요오드메탄(Energy Chemical.)(1.7g, 1mmol)과 탄산칼륨(1.7g, 1mmol)을 투입하였다. 반응액을 실온에서 8시간 동안 교반하고, 반응이 완료된 후, 여과하여 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA/5:1), 1-(메틸-d 3)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(중간체 dd)을 획득하였다(650mg, 백색 유상물, 수율: 50%).
LC-MS (ESI)：m/z212.23[M+H+]
제조 실시예 30：3- 브로모 -5-(1-( 메틸 - d 3 )-1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-2- 아민 (중간체 ee )의 제조
Figure pct00102
1-(메틸-d 3 )-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸로 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)피레리딘-1-카르복실산 테르트부틸레이트를 대체한 것을 제외하고, 제조 실시예 15의 단계 1 및 2와 동일한 방법을 이용하여 3-브로모-5-(1-(메틸- d 3)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 ee)를 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 35%).
LC-MS (ESI)：m/z 256.07/258.05[M+H+].
실시예 1: N -(4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(1)의 제조
Figure pct00103
단계 1: 5-((4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소에틸에스테르-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르(1a)의 제조
DMF(20mL)이 함유된 반응 플라스크에 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 (a)(625mg, 1.8mmol), 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-2-아민(s)(500mg, 1.5mmol), HATU(875mg, 2.3mmol)와 DIPEA(387mg, 3.0mmol)를 투입한다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완료된 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸 아세테이트로 추출하여(60mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:20), 5-((4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소에틸에스테르-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르(1a)를 획득하였다(800mg, 황색 고체, 수율: 81.2 %).
LC-MS (ESI)：m/z 669.28[M+H+].
단계 2: 5-((4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산(1b)의 제조
실온에서, 에탄올(20mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-((4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소에틸에스테르-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르(1a)(800mg, 1.2mmol), 수산화리튬 일수화물(67mg, 1.6mmol)과 물(5mL)을 투입하였다. 혼합물을 70℃에서 하룻밤 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜 조 생성물 5-((4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산(1b)을 획득하였다(황색 고체). 이는 정제를 거치지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
LC-MS (ESI)：m/z 641.3[M+H+].
단계 3：N 5-(4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(1c)의 제조
실온에서, 테트라하이드로퓨란(8mL)과 산화염화인(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-((4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산(1b)(400mg, 0.6mmol)을 투입하였다. 혼합물을 환류될 때까지 30분 동안 가열하고, 반응이 완료된 후, 감압 농축시켜 염화아실 중간체를 획득하여, 이를 정제를 거치지 않고, 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다. 0℃에서, 테트라하이드로퓨란(10mL)과 암모니아수(10mL)가 함유된 반응 플라스크에 염화아실 중간체를 적가하였다. 적가 완료 후, 반응액을 20분 동안 계속 교반하고, 반응이 완료된 후, 에틸 아세테이트(30mL)를 첨가하여 희석시키고, 유기상을 순차적으로 물, 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), N 5-(4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(1c)를 획득하였다(280mg, 황색 고체, 수율: 70.2%).
LC-MS (ESI)：m/z640.7[M+H+].
단계 4：N-(4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(1)의 제조
무수 테트라하이드로퓨란(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 N 5-(4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(6c)(100mg, 0.16mol)를 투입하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 순차적으로 트리에틸아민(130mg, 1.3mmol)과 트리플루오로메탄술폰산 무수물(126mg, 0.6mol)을 투입하였다. 투입 완료 후, 반응액을 30분 동안 계속 교반하여, 반응이 완료된 후, 수산화칼륨 수용액(5M, 0.2mL)을 투입하고, 1시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트(50mL)를 첨가하여 희석시키고, 유기상을 순차적으로 물, 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산): 10%~100%), N-(4-(2-아미노-5-(3, 4-디메톡시페닐)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(1)을 획득하였다(30mg, 황색 고체, 수율: 31%).
LC-MS (ESI)：m/z 622.2[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.55 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.29 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 3H), 7.48 - 7.36 (m, 4H), 7.18 - 7.10 (m, 2H), 6.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.86 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 2: N -(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(2)의 제조
Figure pct00104
단계 1: 4-(4-(6-아미노-5-(4-(6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미도)-테르트부틸-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(2a)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(8mL)과 물(2mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-(4-(6-아미노-5-프로모피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1- 테르트부틸 포르메이트(p2)(260mg, 0.62mmol), 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)(300mg, 0.62mmol), 탄산칼륨(256mg, 1.85mmol), 및 Pd(PPh3)4 (285mg, 0.25mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브로 90℃까지 가열하여 30분 동안 반응시켰다. 반응 완료 후, 물(50mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(30mLХ3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA/1:2), 4-(4-(6-아미노-5-(4-(6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미도)-테르트부틸-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(2a)를 획득하였다(290mg, 황색 고체, 수율: 68.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 735.4[M+H+].
단계 2: N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(2)의 제조
실온에서, DCM(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-(4-(6-아미노-5-(4-(6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미도)-테르트부틸-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(2a)(100mg, 0.14mmol)와 염산(1mL, 4M)을 투입하였다. 반응액을 30분 동안 교반하고, 반응이 완료된 후, 반응액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(2)를 획득하였다(25mg, 황색 고체, 수율: 29%).
LC-MS (ESI)：m/z 635.3[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.55 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.26 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 12.3, 2.1 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.56 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.7, 3.5 Hz, 3H), 5.56 (s, 2H), 4.86 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.35 (tt, J = 11.0, 4.1 Hz, 1H), 3.24 (s, 2H), 2.92 (td, J = 12.5, 3.0 Hz, 2H), 2.16 - 2.09 (m, 2H), 2.01 (qd, J = 12.1,4.2 Hz, 3H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 3： N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(3)의 제조
Figure pct00105
Figure pct00106
단계 1: N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(3)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(8mL)과 물(2mL)이 함유된 반응 플라스크에 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)(80mg, 0.3mmol), 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)(186mg, 0.36mmol), 아세트산칼륨(88mg, 0.9mmol), 및 Pd(PPh3)4(69mg, 0.06mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브로 90℃까지 가열하여 30분 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 물(50mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(30mLХ3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(3)를 획득하였다(35mg, 황색 고체, 수율: 20%).
LC-MS (ESI)：m/z 580.2[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.55 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 12.3, 2.1 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.63 - 7.58 (m, 2H), 7.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.38 (tt, J = 8.5, 2.3 Hz, 3H), 5.54 (s, 2H), 4.86 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.10 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 4: N -(4-(2-아미노-5-(1-메틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(4)의 제조
Figure pct00107
3-브로모-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(w)으로 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(4)를 제조하였다(15mg 황색 고체, 수율: 56%).
LC-MS (ESI)：m/z 566.23[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.54(s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 12.3, 2.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.63 - 7.58 (m, 2H), 7.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.7, 2.0 Hz, 3H), 5.55 (s, 2H), 4.88 - 4.83 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 5: N -(4-(2-아미노-5-(1-(테트라하이드로-2 H -피란-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(5)의 제조
Figure pct00108
3-브로모-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(x)으로 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(5)를 제조하였다(22mg 황색 고체, 수율: 42%).
LC-MS (ESI)：m/z 636.29[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.55 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.26 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.55 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.7, 2.4 Hz, 3H), 5.55 (s, 2H), 4.85 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.39 - 4.32 (m, 1H), 3.99 - 3.92 (m, 2H), 3.48 (dd, J = 11.6, 2.6 Hz, 2H), 2.02 - 1.90 (m, 4H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 6: N -(4-(2-아미노-5-(1-메틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-2,5-디플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(6)의 제조
Figure pct00109
6-시아노-N-(2,5-디플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(y)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체하고, 3-브로모-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(w)으로 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-2,5-디플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(6)을 제조하였다(14mg 황색 고체, 수율: 39%).
LC-MS (ESI)：m/z 584.23[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.86 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.42 (dd, J = 11.6, 6.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.66 - 7.58 (m, 2H), 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 3H), 5.69 (s, 2H), 4.86 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 7: N -(4-(2-아미노-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(7)의 제조
Figure pct00110
3-브로모-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(z)으로 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(7)를 제조하였다(12mg, 황색 고체, 수율: 60%).
LC-MS (ESI)：m/z 649.3[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) 12.54 (s, 1H), δ 8.84 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.15 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.7, 3.3 Hz, 3H), 5.54 (s, 2H), 4.87 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.05 (dq, J = 10.1, 5.3, 4.7 Hz, 1H), 2.84 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.99 (dtd, J = 22.9, 11.4, 8.4 Hz, 6H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).실시예 8: N -(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로부틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(8)의 제조
Figure pct00111
6-시아노-1-시클로부틸-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(g)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체하는 것을 제외하고, 실시예 2와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로부틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(8)를 제조하였다(30mg, 황색 고체, 2단계 수율: 43.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 647.34[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.52 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.27 (dd, J = 10.5, 2.0 Hz, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.58 (ddd, J = 9.8, 6.0, 3.1 Hz, 3H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.7, 3.1 Hz, 3H), 5.57 (s, 2H), 5.03 (q, J = 8.7 Hz, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.18 (d, J = 12.4 Hz, 3H), 2.79 (t, J = 12.1 Hz, 2H), 2.69 - 2.53 (m, 4H), 2.06 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.86 (td, J = 10.2,5.2 Hz, 3H).
실시예 9: N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로부틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(9)의 제조
Figure pct00112
6-시아노-1-시클로부틸-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(g)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로부틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(9)를 제조하였다(11mg, 황색 고체, 수율: 69%).
LC-MS (ESI)：m/z 592.27[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.52 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.61 - 7.55 (m, 2H), 7.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 3H), 5.56 (s, 2H), 5.03 (q, J = 8.6 Hz, 1H), 4.11 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.67 - 2.57 (m, 3H), 2.02 - 1.96 (m, 1H), 1.87 (dq, J = 9.9, 5.3 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 10: N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(10)의 제조
Figure pct00113
6-시아노-1-시클로프로필-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여 N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(10)를 제조하였다(60mg, 황색 고체, 수율: 46%).
LC-MS (ESI)：m/z 578.3[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.44 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.58 (ddd, J = 8.6, 5.4, 2.5 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.6, 6.3 Hz, 3H), 5.56 (s, 2H), 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.94 (tt, J = 7.3, 3.8 Hz, 1H), 2.92 (td, J = 12.5, 3.0 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 4H), 1.27 - 1.22 (m, 3H).
실시예 11： N -(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(11)의 제조
Figure pct00114
6-시아노-1-시클로프로필-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(e)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 2와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(11)를 제조하였다(56mg, 황색 고체, 2단계 수율: 37.6%).
LC-MS (ESI)：m/z 633.36[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.43 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.26 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 12.2, 2.0 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.61 - 7.54 (m, 3H), 7.46 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.38 (td, J = 8.7, 6.8 Hz, 3H), 5.55 (s, 2H), 4.33 (s, 1H), 3.96 - 3.93 (m, 1H), 3.25 (s, 1H), 2.10 (s, 2H), 2.00 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 1.42 (s, 2H), 1.26 - 1.21 (m, 3H).
실시예 12: N -(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(12)의 제조
Figure pct00115
단계 1: 4-(4-(6-아미노-5-(4-(6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미도)-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(12a)의 제조
0℃에서, DMF(4mL)가 함유된 반응 플라스크에 6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)(25mg, 0.084mmol), 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)(38mg, 0.084mmol), HATU(41mg, 0.11mmol)와 DIPEA(33mg, 0.25mmol)을 투입하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:20), 4-(4-(6-아미노-5-(4-(6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미도)-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(12a)를 획득하였다(25mg, 황색 고체, 수율: 40.6 %).
LC-MS (ESI)：m/z733.41[M+H+].
단계 2：N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(12)의 제조
DCM(3mL)이 함유된 반응 플라스크에 4-(4-(6-아미노-5-(4-(6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미도)-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실산 테르트부틸 에스테르(12a)(25mg, 0.034mmol)와 염산의 디옥산 용액(4N, 1.5mL)을 투입하였다. 반응액을 실온에서 30분 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 감압 농축시키고, 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(12)를 획득하였다(10mg, 황색 고체, 수율: 50.6 %).
LC-MS (ESI)：m/z633.37[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.93 (s, 1H), 9.06 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 2H), 7.60 - 7.47 (m, 5H), 4.50 - 4.44 (m, 1H), 3.08 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 2.28 - 2.05 (m, 6H), 2.04 - 1.95 (m, 1H), 1.19 - 1.14 (m, 2H), 0.93 (dt, J = 7.0, 3.3 Hz, 2H).
실시예 13： N -(4-(2-아미노-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(13)의 제조
Figure pct00116
3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 u)으로 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(1-메틸피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(13)를 제조하였다(황색 고체, 1단계 수율: 18.4%).
LC-MS (ESI)：m/z647.34[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ11.85 (s, 1H), 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 12.1,2.1 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 2H), 7.56 - 7.46 (m, 4H), 7.38 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.06 (dt, J = 10.7, 5.7 Hz, 1H), 2.84 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.09 - 1.91 (m, 7H), 1.16 (dt, J = 8.3, 3.3 Hz, 2H), 0.94 (dt, J = 6.9, 4.8 Hz, 2H).
실시예 14： N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(14)의 제조
Figure pct00117
3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 q)으로 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-乙일-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(14)를 제조하였다(황색 고체, 1단계 수율: 20.3%).
LC-MS (ESI)：m/z578.36[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ11.85 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 2H), 7.50 (ddd, J = 10.6, 5.9, 2.5 Hz, 4H), 7.38 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.10 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.10 (td, J = 8.3, 4.2 Hz, 1H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.21 - 1.14 (m, 2H), 0.98 - 0.92 (m, 2H).
실시예 15： N -(4-(2-아미노-5-(1-메틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(15)의 제조
Figure pct00118
3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 t)으로 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(15)를 제조하였다(황색 고체, 1단계 수율: 22.4%).
LC-MS (ESI)：m/z564.37[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.85 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 2H), 7.50 (td, J = 7.8, 7.0, 2.2 Hz, 4H), 7.38 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.10 (ddd, J = 8.3, 5.1, 3.3 Hz, 1H), 1.20 - 1.13 (m, 2H), 0.94 (dt, J = 6.9, 4.8 Hz, 2H).
실시예 16： N -(4-(2-아미노-5-(1-(테트라하이드로-2 H -피란-4-일)-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(16)의 제조
Figure pct00119
3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 r)으로 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(16)를 제조하였다(황색 고체, 1단계 수율: 17.8%).
LC-MS (ESI)：m/z634.41[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.85 (s, 1H), 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 4H), 7.38 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.34 (dt, J = 10.9, 4.7 Hz, 1H), 3.98 - 3.92 (m, 2H), 3.48 (dd, J = 11.6, 2.6 Hz, 2H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.96 (td, J = 12.7, 8.0 Hz, 4H), 1.20 - 1.14 (m, 2H), 0.97 - 0.92 (m, 2H).
실시예 17： N -(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(17)의 제조
Figure pct00120
6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 k)으로 6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(17)를 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 9.3%).
LC-MS (ESI)：m/z633.38[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.78 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.26 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.76 - 7.71 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 4H), 7.39 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.55 (s, 2H), 5.51 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.21-4.27 (m, 1H), 3.15 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 2.76 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.02 (t, J = 13.8 Hz, 3H), 1.90 (t, J = 11.7 Hz, 2H).
실시예 18： N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-5메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(18)의 제조
Figure pct00121
6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 i)으로 6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 14와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-5메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(18)를 제조하였다(황색 고체, 1단계 수율: 30.1%).
LC-MS (ESI)：m/z552.33[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.89 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 2H), 7.54 - 7.46 (m, 4H), 7.39 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.10 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 19： N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(19)의 제조
Figure pct00122
5-브로모-6-(((테르트부톡시카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 l)으로 6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)을 대체하고, 3-(4-아미노-2-플루오로페닐)-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(중간체 q)으로 4-(4-(6-아미노-5-(4-아미노-2-플루오로페닐)피리딘-3-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-테르트부틸 포르메이트(중간체 p)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 12와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(19)를 제조하였다(황색 고체, 2단계 수율: 40.2%).
LC-MS (ESI)：m/z634.25/635.21[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.85 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.55 (ddt, J = 8.0, 5.1,2.6 Hz, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 4H), 7.36 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.09 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 20： N -(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1 H - 피라졸 -4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4- 二옥소 -1,2, 3, 4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복사미드(20)의 제조
Figure pct00123
N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복사미드(bb)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체한 것을 제외하고 실시예 2와 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-2, 4-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복사미드(20)를 제조하였다(66mg, 백색 고체, 2단계 수율: 37%).
LC-MS (ESI)：m/z627.2[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.05 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.25 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 12.3, 2.1 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 3H), 7.36 (ddd, J = 8.9, 6.6, 2.5 Hz, 3H), 5.53 (s, 2H), 4.78 (p, J = 6.8 Hz, 1H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 3.16 - 3.11 (m, 2H), 2.72 (td, J = 12.4, 2.6 Hz, 3H), 2.06 - 1.99 (m, 2H), 1.90 - 1.82 (m, 2H), 1.43 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 21：6- 시아노 - N -(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(21)의 제조
Figure pct00124
단계 1: 5-((4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산 에틸 에스테르(21a)의 제조
DMF(30mL)가 함유된 반응 플라스크에 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(b)(800mg, 2.51mmol), 4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린(aa)(790mg, 2.51mmol), HATU(1.43g, 3.77mmol)와 DIPEA(973mg, 7.53mmol)를 투입하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(30mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축하였다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:CM=1:20), 5-((4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산 에틸 에스테르(21a)를 획득하였다(1.4g, 황색 고체, 수율: 90.4 %).
LC-MS (ESI)：m/z 616.3[M+H+].
단계 2：5-((4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산(21b)의 제조
실온에서, 에탄올(16mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-((4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산 에틸 에스테르(21a)(1.4g, 2.27mmol), 수산화리튬 일수화물(150mg, 3.57mmol)과 물(4mL)을 투입하였다. 혼합물을 70℃까지 승온시키고 2시간 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜, 조 생성물 5-((4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산(21b)을 획득하였다(1.4g, 회색 고체). 이는 정제를 거치지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
LC-MS (ESI)：m/z 588.3[M+H+].
단계 3：N 5-(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(21c)의 제조
실온에서, 테트라하이드로퓨란(8mL)과 산화염과인(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-((4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2-카르복실산(21b)(200mg, 0.3mmol)을 투입하였다. 혼합물을 환류되도록 30분 동안 가열하고, 반응이 완료된 후, 감압 농축시켜 염화아실 중간체를 획득하였다. 이는 정제를 거치지 않고 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
0℃에서, 테트라하이드로퓨란(10mL)과 암모니아수(10mL)가 함유된 반응 플라스크에 염화아실 중간체를 적가하였다. 적가 완료 후, 반응액을 20분 동안 계속 교반하여, 반응이 완료된 후, 에틸 아세테이트(50mL)를 첨가하여 희석시키고, 유기상을 순차적으로 물, 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), N 5-(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(21c)를 획득하였다(118mg, 황색 고체, 수율: 59.1%).
LC-MS (ESI)：m/z 587.2[M+H+].
단계 4：6-시아노-N-(4-((6, 7-디메틸퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(21)의 제조
무수 테트라하이드로퓨란(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 N 5-(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-3-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘2,5-디카르복사미드(21c)(54mg, 0.1mol)를 투입하였다. 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 순차적으로 트리에틸아민(81mg, 0.8mmol)과 트리플루오로메탄술폰산 무수물(84mg, 0.4mol)을 투입하였다. 。투입 완료 후, 반응액을 30분 동안 계속 교반하여, 반응이 완료된 후, 에틸 아세테이트(30mL)를 첨가하여 희석시키고, 유기상을 순차적으로 물, 포화된 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 하룻밤 동안 정치하고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), 6-시아노-N-(4-((6, 7-디메틸퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(21)를 획득하였다(18.4mg, 황색 고체, 수율: 35.2%).
LC-MS (ESI)：m/z 569.2[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.58 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.04 (dd, J = 12.9, 2.4 Hz, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 2H), 7.53 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 3H), 6.48 (dd, J = 5.2, 1.0 Hz, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.95 (d, 6H).
실시예 22：6- 시아노 - N -(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(22)의 제조
Figure pct00125
1-시클로프로필-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(d)으로 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(b)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 21과 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(22)를 제조하였다(38mg, 황색 고체, 4단계 수율: 18%).
LC-MS (ESI)：m/z595.2[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.43 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.04 (dd, J = 12.8, 2.4 Hz, 1H), 7.63 - 7.50 (m, 4H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 6.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.95 (d, 6H), 3.48 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 3.9 Hz, 2H), 1.25 (s, 2H).
실시예 23：6- 시아노 - N -(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로부틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(23)의 제조
Figure pct00126
1-시클로부틸-6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(c)으로 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(b)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 21과 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-시클로부틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(23)를 제조하였다(25mg, 황색 고체, 4단계 수율: 21%).
LC-MS (ESI)：m/z 609.2[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.52 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 12.9, 2.4 Hz, 1H), 7.61 - 7.51 (m, 4H), 7.46 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 3H), 6.49 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.03 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 1.8 Hz, 6H), 2.68 - 2.53 (m, 4H), 1.87 (dq, J = 9.9, 5.3 Hz, 2H).
실시예 24：6-시아노- N -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(24)의 제조
Figure pct00127
6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a)으로 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(b)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 21과 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(24)를 제조하였다(38mg, 황색 고체, 4단계 수율: 23%).
LC-MS (ESI)：m/z 597.3[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.54 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 12.9, 2.4 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.56 - 7.51 (m, 2H), 7.45 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 3H), 6.49 (dd, J = 5.2, 1.1 Hz, 1H), 4.85 (h, J = 6.6 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 2.2 Hz, 6H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 25：6-시아노- N -(4-((6-시아노-7-메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(25)의 제조
Figure pct00128
4-(4-아미노-2-플루오로페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복사미드(중간체 cc)로 4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)을 대체하고, 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(a)으로 6-(에톡시카르보닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-메틸-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복실산(b)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 21과 동일한 방법을 이용하여, 6-시아노-N-(4-((6-시아노-7-메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(25)를 제조하였다(30mg, 황색 고체, 4단계 수율: 19.3%).
LC-MS (ESI)：m/z 592.21[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.57 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.77 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 12.8, 2.3 Hz, 1H), 7.66 - 7.48 (m, 5H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 6.63 (dd, J = 5.3, 1.1 Hz, 1H), 4.86 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H)
실시예 26：6-(아미노메틸)- N -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(26)의 제조
Figure pct00129
단계 1: ((3-브로모-5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1, 6-디하이드로피리딘-2-일)메틸)테르트부틸 카바메이트(26a)의 제조
DMF(3mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린(중간체 aa)(77mg, 0. 22mmol), 6-((테르트부톡시카르보닐)아미노)메틸)-5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 m)(80mg, 0.18 mmol), HATU(102mg, 0.27mmol)와 DIPEA(70mg, 0.54mmol)을 투입하였다. 반응액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸아세테이트로 추출하여(10mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), ((3-브로모-5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1, 6-디하이드로피리딘-2-일)메틸)테르트부틸 카바메이트(26a)를 획득하였다(50mg, 황색 고체, 수율: 37.7 %).
LC-MS (ESI)：m/z737.11/739.17[M+H+].
단계 2：((5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-일)메틸)테르트부틸 카바메이트(26b)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(4 mL)과 물(1mL)이 함유된 반응 플라스크에 ((3-브로모-5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-일)메틸)테르트부틸 카바메이트(26a)(50mg, 0.07mmol), 메틸붕산(40mg, 0.70mmol), 탄산칼륨(28mg, 0.21mmol)과 Pd(dppf)Cl2.DCM(10mg, 0.014mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브 반응기에서 100℃까지 가열하여 40분 동안 교반하였다. 반응액이 실온으로 냉각된 후, 물(15mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(15mLx3), 유기상을 병합하고, 포화식염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축하고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래프를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), ((5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-일)메틸)테르트부틸 카바메이트(26b)를 획득하였다(20mg, 황색 고체, 수율: 42.5 %).
LC-MS (ESI)：m/z673.30[M+H+].
단계 3：6-(아미노메틸)-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(26)의 제조
DCM(3mL)이 함유된 반응 플라스크레 ((5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-일)메틸)테르트부틸 카바메이트(26b)(20mg, 0.03mmol)와 염산의 디옥산 용액(4N, 1.5mL)을 투입하였다. 반응액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 감압 농축시키고, 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), 6-(아미노메틸)-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(26)를 획득하였다(9mg, 백색 고체, 수율: 52.3 %).
LC-MS (ESI)：m/z573.25[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.23 (s, 1H), 8.50 - 8.45 (m, 2H), 8.04 (dd, J = 13.0, 2.5 Hz, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 4H), 7.47 - 7.40 (m, 4H), 6.47 (dd, J = 5.2, 1.1 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 2.2 Hz, 6H), 2.34 (s, 3H).
실시예 27：(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(27)의 제조
Figure pct00130
5-브로모-6-(((테르트부톡시카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 l)으로 5-브로모-6-(((테르트부톡시카르보닐)(메틸)아미노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 m)을 대체하는 것을 제외하고, 실시예 26과 동일한 방법을 이용하여, (4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-6-((메틸아미노)메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(27)를 제조하였다(황색 고체, 3단계 수율: 16.8%).
LC-MS (ESI)：m/z587.35[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.23 (s, 1H), 8.49 - 8.44 (m, 2H), 8.04 (dd, J = 12.9, 2.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.48 (m, 4H), 7.46 - 7.39 (m, 4H), 6.47 (dd, J = 5.3, 1.1 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 2.4 Hz, 6H), 3.26 (s, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.04 (s, 3H).
실시예 28：5-메틸- N -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(28)의 제조
Figure pct00131
단계 1：5-브로모-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 28a)의 제조
DMF(5mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)(126mg, 0.40 mmol), 5-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 n)(130mg, 0.36mmol), HATU(180mg, 0.47mmol)와 DIPEA(140mg, 1.0mmol)를 투입하였다. 반응액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켜, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), 5-브로모-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 28a)를 획득하였다(160mg, 황색 고체, 수율: 68.1 %).
LC-MS (ESI)：m/z652.11/654.08[M+H+].
단계 2：5-메틸-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(28)의 제조
실온에서 1,4-디옥산(8mL)과 물(2mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(중간체 28a)(60mg, 0.09mmol), 메틸붕산(30mg, 0.45mmol), 탄산칼륨(36mg, 0.27mmol)과 Pd(dppf)Cl2.DCM(15mg, 0.018mmol)을 투입하였다. 밀봉하고, 질소가스를 3회 치환하여, 마이크로웨이브 반응기에서 100℃까지 가열하여 40분 동안 교반하였다. 반응액이 실온으로 냉각된 후, 물(15mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(15mL x3), 유기상을 병합하고, 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), 5-메틸-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-(메톡시메틸)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(28)를 획득하였다(15mg, 황색 고체, 수율: 28.3 %).
LC-MS (ESI)：m/z588.20[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.19 (s, 1H), 8.52 - 8.47 (m, 2H), 8.04 (dd, J = 12.9, 2.4 Hz, 1H), 7.53 (s, 2H), 7.46 - 7.40 (m, 6H), 6.50 - 6.47 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.95 (d, J = 2.3 Hz, 6H), 3.01 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).
실시예 29：6-시아노- N -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29A)와 5- 브로모 - N -(4-((6,7- 디메톡시퀴놀린 -4-일) 옥시 )-3- 플루오로페닐 )-1-(4- 플루오 로페닐)-6-하이드록시-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29B)의 제조
Figure pct00132
단계 1：5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 9a)의 제조
에탄올(4.5mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산 에틸 에스테르(i1)(210mg, 0.55mmol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 수소화나트륨 수용액(1.5mL, 28.5mg, 0.71mmol)을 서서히 적가하여, 적가 완료 후, 실온으로 승온시키고 30분 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜, 조 생성물 5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 29a)을 획득하였다(210mg, 황색 고체, 수율: 100 %).
LC-MS (ESI)：m/z 355-12/357.08[M+H+].
단계 2：3-브로모-N 5 -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(중간체 29b)의 제조
DMF(5mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)(193mg, 0.62mmol), 5-브로모-6-카바모일-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 29a)(200mg, 0.56mmol), HATU(320mg, 0.84mmol)와 DIPEA(218mg, 1.68mmol)를 투입하였다. 반응액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), 3-브로모-N 5 -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(중간체 29b)를 획득하였다(260mg, 황색 고체, 수율: 71.3 %).
LC-MS (ESI)：m/z651.21/653.17[M+H+].
단계 3：5-브로모-6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29c)의 제조
아세토니트릴(5mL)이 함유된 반응 플라스크에 3-브로모-N 5 -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(중간체 29b)(140mg, 0.22mol)를 투입하였다. 반응액을 0℃로 강온시키고, 순차적으로 트리플루오로아세트산 무수물(180mg, 0.84mol)과 트리에틸아민(130mg, 0.84mol)을 서서히 적가하였다. 반응액을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 반응이 완료된 후, 물(10mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 병합된 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켜, 조 생성물 5-브로모-6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29c)를 획득하였다(130 mg, 황색 고체, 수율: 100 %).
LC-MS (ESI)：m/z 633.18/633.14[M+H+].
단계 4：6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29A)와 5-브로모-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-하이드록시-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29B)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(3mL)과 물(1mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(28c)(40mg, 0.065mmol), 메틸붕산(37mg, 0.65mmol), 탄산칼륨(30mg, 0.20mmol)과 Pd(dppf)Cl2.DCM(10mg, 0.013mmol)을 투입하였다. 밀봉하여, 질소가스를 3회 치환하고, 마이크로웨이브 반응기에서 100℃까지 가열하여 40분 동안 교반하였다. 반응액이 실온으로 냉각된 후, 물(15mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(15mLx3), 유기상을 병합하고, 포화식염수로 세척하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18, 아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), 6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29A)(4mg, 황색 고체, 수율: 7.1 %)와 5-브로모-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-6-하이드록시-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(29B)(부산물)를 획득하였다(황색 고체, 15mg).
29A：LC-MS (ESI)：m/z569.25[M+H+]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.89 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.04 (dd, J = 12.8, 2.5 Hz, 1H), 7.74 - 7.66 (m, 2H), 7.59 (ddd, J = 8.9, 2.5, 1.1 Hz, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 4H), 7.41 (s, 1H), 6.48 (dd, J = 5.2, 1.1 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 2.4 Hz, 6H), 2.45 (s, 3H).
29B：: LC-MS (ESI)：m/z624.07, 626.06[M+H+]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.23 (s, 1H), 8.72 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 13.6, 2.3 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 2H), 7.28 - 7.22 (m, 2H), 7.16 (ddt, J = 7.0, 5.1,2.7 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.01 (d, J = 3.2 Hz, 6H).
실시예 30：6- 시아노 - N -(4-((6, 7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(30)의 제조
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
단계 1：3-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30a)의 제조
DMF(10mL)가 함유된 반응 플라스크에 5-브로모-6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 h)(1.5g, 3.90mmol), 탄산칼륨(809mg, 5.86mmol)과 요오드에탄(910mg, 5.86mmol)을 투입하였다. 실온에서 6시간 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 물(50mL)을 첨가하고，에틸 아세테이트로 추출하였다(20 mLx3). 병합된 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여, 여과액을 감압 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 (용리액은 PE:EA=2:1), 3-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30a)를 획득하였다(1.3g, 황색 고체, 수율: 80.9 %).
LC-MS (ESI)：m/z 412.15/414.11[M+H+].
단계 2：1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-3-(프로프-1-엔-2-일)-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30b)의 제조
실온에서, 1,4-디옥산(16mL)과 물(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 3-브로모-1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30a)(300mg, 0.73mmol), 이소프로페닐붕산 피나콜 에스테르(611mg, 3.64mmol), 탄산칼륨(302mg, 2.19mmol)과 Pd(dppf)Cl.DCM(60mg, 0.073mmol)를 투입하였다. 밀봉하고, 질소가스를 3회 치환하여, 마이크로웨이브 반응기에서 100℃까지 가열하여 30분 동안 교반하였다. 반응액이 실온으로 냉각된 후, 물(10mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10 mLx3), 병합된 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 PE:EA=1:1), 1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-3-(프로프-1-엔-2-일)-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30b)를 획득하였다(220mg, 황색 고체, 수율: 80.7 %).
LC-MS (ESI)：m/z 374.27[M+H+].
단계 3：1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30c)의 제조
메탄올(4mL)이 함유된 반응 플라스크에 1-(4-플루오로페닐)-6-옥소-3-(프로프-1-엔-2-일)-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30b)(220mg, 0.59mol), 팔라듐/탄소(55mg, 25%)와 아세트산(8mg, 0.12mol)을 투입하였다. 밀봉하고, 질소가스를 3회 치환한 후, 수소가스로 3회 치환하고 30분 동안 교반하였다. 여과하고, 여과액을 감압 농축시켜 조 생성물 1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30c)를 획득하였다(200mg, 백색 고체, 수율: 91.4%).
LC-MS (ESI)：m/z376.30[M+H+].
단계 4：6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(30d)의 제조
에탄올(4.5mL)이 함유된 반응 플라스크에 1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복실산 디에틸 에스테르(30c)(200mg, 0.53mmol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 수산화나트륨 수용액(1.5mL, 28.5mg, 0.71mmol)을 서서히 적가하여, 적가 완료 후, 실온으로 승온시켜 30분 동안 교반하였다. 반응이 완전해진 후, 감압 농축시켜, 조 생성물 6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(30d)을 획득하였다(200mg, 황색 고체, 수율: 100 %).
LC-MS (ESI)：m/z 348.27[M+H+].
단계 5：5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-카르복실산 에틸 에스테르(30e)의 제조
DMF(5mL)가 함유된 반응 플라스크에 4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로아닐린 염산염(중간체 aa)(193mg, 0.62mmol), 6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(30d)(200mg, 0.56mmol), HATU(320mg, 0.84mmol)와 DIPEA(218mg, 1.68mmol)를 투입하였다. 반응액을 실온에서 30분 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액을 투입하여 ??치하고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10 mLx3), 유기상을 병합하였다. 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리제는 MeOH:DCM=1:10), 5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-카르복실산 에틸 에스테르(30e)를 획득하였다(220mg, 황색 고체, 수율: 60.7 %).
LC-MS (ESI)：m/z644.36 [M+H+].
단계 6：5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-카르복실산(30f)의 제조
에탄올(4.5mL)이 함유된 반응 플라스크에 5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-카르복실산 에틸 에스테르(30e)(220mg, 0.34mmol), 수산화리튬 일수화물(22mg, 0.51mmol)과 물(1.5mL)을 투입하였다. 반응액을 70oC에서 12시간 동안 교반하여, 반응이 완전해진 후, 감압 농축시키고, 잔여물을 prep HPLC를 통해 정제하여(C18，아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：10%~100%), 5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-카르복실산(30f)을 획득하였다(80mg, 백색 고체, 수율: 38.2 %).
LC-MS (ESI)：m/z 616.35[M+H+]
단계 7：N 5 -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(30g)의 제조
DMF(3mL)가 함유된 반응 플라스크에 5-((4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)카바모일)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2-카르복실산(30f)(80mg, 0.13mmol), 탄산수소암모늄(103mg, 1.3mmol), PyBrOP(91mg, 0.20mmol)와 DIPEA(50mg, 0.39mol)를 투입하였다. 반응액을 실온에서 1시간 동안 교반하여, 반응이 완료된 후, 포화된 탄산수소나트륨 용액(10mL)을 첨가하여 반응을 ??치시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10 mLx3), 병합된 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여(용리액은 DCM: CH3OH=10:1), N 5 -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(30g)를 획득하였다(20mg, 백색 고체, 수율: 25.0 %).
LC-MS (ESI)：m/z615.34[M+H+].
단계 8：6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(30)의 제조
아세토니트릴(2mL)이 함유된 반응 플라스크에 N 5 -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-3-이소프로필-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-2,5-디카르복사미드(30g)(12mg, 0.02mol)를 투입하였다. 반응액을 0℃까지 강온시키고, 순차적으로 트리플루오로아세트산 무수물(11mg, 0.06mol)과 트리에틸아민(12mg, 0.12mol)을 서서히 적가하였다. 반응액을 0℃에서 1시간 동안 교반하여, 반응이 완료된 후, 물(10mL)을 첨가하여 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하여(10mLx3), 병합된 유기상을 포화식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과하고, 여과액을 감압 농축시킨 후, 잔여물을 prep HPLC을 통해 정제하여(C18，아세토니트릴/물(0.1%의 포름산)：20%~100%), 6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(30)를 획득하였다(8mg, 황색 고체, 수율: 67.0 %).
LC-MS (ESI)：m/z 597.33[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.85 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 12.8, 2.5 Hz, 1H), 7.75 - 7.69 (m, 2H), 7.59 (ddd, J = 8.8, 2.5, 1.1 Hz, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 4H), 7.41 (s, 1H), 6.49 (dd, J = 5.3, 1.1 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 2.7 Hz, 6H), 2.00 (q, J = 7.0, 6.5 Hz, 1H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 31：6-시아노-5-시클로프로필- N -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(31)의 제조
Figure pct00137
6-시아노-5-시클로프로필-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 j)로 6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(30d)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 30 중의 단계 5와 동일한 합성방법을 이용하여, 6-시아노-5-시클로프로필-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(31)를 제조하였다(황색 고체, 5.6mg, 수율: 16.5%).
LC-MS (ESI)：m/z595.33[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.84 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.03 (dd, J = 12.8, 2.5 Hz, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 2H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 4H), 7.41 (s, 1H), 6.48 (dd, J = 5.2, 1.0 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 3.1 Hz, 6H), 2.10 (td, J = 8.3, 4.1 Hz, 1H), 1.19 - 1.13 (m, 2H), 0.93 (dt, J = 6.8, 4.8 Hz, 2H).
실시예 32：6-시아노- N -(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(32)의 제조
Figure pct00138
6-시아노-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(중간체 k)로 6-(에톡시카르보닐)-1-(4-플루오로페닐)-5-이소프로필-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복실산(30d)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 30 중의 단계 5와 동일한 합성방법을 이용하여, 6-시아노-N-(4-((6,7-디메톡시퀴놀린-4-일)옥시)-3-플루오로페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-5-(프로프-1-엔-2-일)-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(32)를 제조하였다(황색 고체, 13mg, 수율: 19.8%).
LC-MS (ESI)：m/z595.32[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.77 (s, 1H), 8.57 - 8.50 (m, 2H), 8.06 (dd, J = 12.8, 2.5 Hz, 1H), 7.78 - 7.69 (m, 2H), 7.61 (dt, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.57 - 7.45 (m, 4H), 7.43 (s, 1H), 6.55 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.51 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 5.44 (s, 1H), 3.96 (d, J = 2.8 Hz, 6H), 2.18 (s, 3H).
실시예 33： N -(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1 H -피라졸-4-일)피리딘-3-일)-2,5-디플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(33)의 제조
Figure pct00139
6-시아노-N-(2,5-디플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(y)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-2,5-二플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(33)를 제조하였다(25mg 황색 고체, 수율: 35%).
LC-MS (ESI)：m/z 598.13[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.86 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.25 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.55 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 3H), 5.68 (s, 2H), 4.87 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.11 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 34 N-(4-(2-아미노-5-(1-메틸-d3-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-2,5-二플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(34)의 제조
Figure pct00140
34
6-시아노-N-(2,5-디플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(y)로 6-시아노-N-(3-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥소보롤란-2-일)페닐)-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(f)를 대체하고, 3-브로모-5-(1-(메틸-d3)-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(ee)으로 3-브로모-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-아민(v)을 대체한 것을 제외하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여, N-(4-(2-아미노-5-(1-메틸-d3-1H-피라졸-4-일)피리딘-3-일)-2,5-二플루오로페닐)-6-시아노-5-(4-플루오로페닐)-1-이소프로필-4-옥소-1,4-디하이드로피리딘-3-카르복사미드(34)를 제조하였다(32mg, 황색 고체, 수율: 46%).
LC-MS (ESI)：m/z 587.28[M+H+].
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.86 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.42 (dd, J = 11.6, 6.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 2H), 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.36 (m, 3H), 5.69 (s, 2H), 4.88 (h, J = 6.7 Hz, 1H), 1.63 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
본 발명의 화합물의 생물학적 평가
시험예 1: 본 발명의 화합물의 키나제 Ax1과 c-MET의 효소 활성 억제(IC50)에 대한 평가 실험
본 시험은 이동성 변화 분석(Mobility shift assay)을 사용하였으며, 각각 해당 키나제의 Km의 ATP 농도 하에서의 화합물의 억제 활성을 시험하였다. 대조품은 스타우로스포린(staurosporine)과 카보잔티닙(Cabozantinib)이다.
시험 화합물의 농도는 10μM에서 시작하여, 10배 희석하였다. 시험 결과(IC50)는 2번의 독립된 실험의 평균값이다.
시험 재료:
키나제 Axl (Carna, Cat. No. 08-107, Lot. No. 06CBS-3408), 키나제 cMET (Carna, Cat.No. 08-151, Lot. No.10CBS-1118M)，기질 펩타이드 FAM-P2(GL Biochem, Cat. No. 112394, Lot. No. P131014-XP112394)，기질 펩타이드 FAM-P22 (GL Biochem, Cat. No112393, Lot. No. P130408-ZB112393)，ATP (Sigma, Cat. No. A7699-1G, CAS No. 987-65-5), DMSO (Sigma, Cat. No. D2650, Lot. No. 474382), EDTA (Sigma, Cat. No. E5134, CAS No. 60-00-4), HEPES (Sigma，Cat. No. V900477-500G，CAS No. 7365-45-9，Lot. No. WXBC4716V)，DTT(Sigma，Cat. No. D0632-25g，CAS No. 3483-12-3，Lot. No. SLBF3964V)，Brij-35（Sigma, Cat. No. B4184, Lot No. 018K61251），96웰 플레이트 (Corning, Cat. No. 3365, Lot. No. 22008026), 384웰 플레이트 (Corning, Cat. No. 3573, Lot. No. 12608008), 스타우로스포린 (Staurosporine) (MCE, Cat. No. HY-15141, Lot. No. 19340), 카보잔티닙 (특허 WO201101763A1에 공개된 방법에 따라 제조).
실험 단계:
1) 버퍼액의 제조: 50mM의 HEPES, pH 7.5, 0.00015%의 Brij-35.
2) 대조품인 카보잔티닙과 시험 샘플의 제조: 카보잔티닙과 본 발명의 실시예의 화합물을 100%의 DMSO에서 기울기 농도로 제조하고, 상기 버퍼액을 사용하여 10%의 DMSO로 희석시켜, 384웰 플레이트에 투입한다. 예를 들어 화합물의 개시농도가 10uM이면, 즉 100%의 DMSO를 사용하여 500uM으로 제조하고, 10개의 농도로 기울기 희석한 다음, 버퍼액을 이용하여 10배로 희석시켜, 10%의 DMSO를 함유한 화합물 중간 희석체로 조제하고, 5ul을 384웰 플레이트로 옮겨 담는다.
3) Ax1과 c-MET 효소는 각각 이하 버퍼액을 이용하여 최적의 농도로 희석한다: 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35, 2 mM DTT. 10ul을 384웰 플레이트로 옮기고, 화합물과 함께 실온에서 10-15분 동안 공동배양한다.
4) 기질을 이하 버퍼액을 이용하여 최적의 농도로 희석한다: 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35, 10mM MgCl2, Km 하의 ATP. 10ul을 384 웰 플레이트에 투입하여 반응을 개시하며, 28℃에서 1시간 동안 반응시킨다.
시험 중 각 시약의 반응 농도는 하기 표 1과 같다.
[표 1]
Figure pct00141
5) Caliper Reader(Perkin Elmer)로 전환율을 판독하고, 억제율을 계산한 것이 2번의 시험 평균값이다.
6) XL-fit 소프트웨어를 이용하여 IC50을 피팅한다.
본 발명의 화합물의 Ax1과 c-MET 키나제에 대한 억제 활성은 하기 표 2와 같다.
[표 2]
본 발명의 화합물의 티로신 키나제 Ax1과 c-MET 활성 억제에 대한 IC50값
Figure pct00142
Figure pct00143
상기 표 2를 통해 알 수 있듯이, 본 발명의 화합물은 Ax1과 MET 키나제의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다. 양성 대조 약물인 카보잔티닙과 비교하여, 일부 발명의 화합물은 훨씬 높은 활성 억제 능력을 나타내었다.
시험예 2: 본 발명의 화합물의 티로신 키나제 Mer와 Tyro3 활성 억제(IC50)에 대한 평가 실험
시험은 효소학 HTRF 방법을 사용하여 각각 해당 키나제의 Km의 ATP 농도 하에서의 화합물의 억제 활성을 시험하였다. 대조품은 RXDX-106이고, 시험 화합물의 농도는 10μM에서 시작하여 3배 희석시켰으며, 2개의 duplicate well을 설치하였다.
시험 재료:
키나제 Mer(Carna，Cat. No. 08-108，Lot. No. 14CBS-0421H), ro3(Carna，Cat. No. 08-109，Lot. No. 08CBS-1186H). HTRF키나제-TK 키트(Cisbio，Cat. No. 62TK0PEC), 키트는 비오틴-TK 기질 동결건조 분말 (Cisbio，Cat. No. 61TK0BLC，Lot. No.07A)，스트렙타비딘 -XL665 (Cisbio，Cat. No. 610SAXLG，Lot. No.126A)，TK항체-크립테이트(cryptate)(Cisbio，Cat. No. 610SAXLG，Lot. No.04A)，검출 버퍼액(EDTA 포함) (Cisbio，Cat. No. 62TK0PEC，Lot. No. 12A). P (Sigma，Cat. No. A7699-5G，CAS No.34369-07-8，Lot. No. SLBQ6014V)，DMSO(Sigma，Cat. No. D5879-1L，Lot. No. SHBH9944)，HEPES(Sigma，Cat. No. V900477-500G，CAS No. 7365-45-9，Lot. No. WXBC4716V)，MgCl2(Sigma，Cat. No. 208337-1KG，Lot. No. MKBX9508V)，EGTA(Sigma，Cat. No. E3889-100g ，CAS 67-42-5，CAS No. 7786-30-3，Lot. No. SLBG8546V)，NP-40(Beijing Dingguo，Cat. No. DH218，Lot. No. 36R00160), DTT(Sigma，Cat. No.D0632-25g，CAS No. 3483-12-3，Lot. No. SLBF3964V)，화합물 플레이트(Labcyte，Cat. No. LP0200，Lot. No. 0006386836), 테스트 플레이트 (Greiner，Cat. No. 784075，Lot. No.E16123HM), 대조품 RXDX-106(특허 WO2013074633에 공개된 방법에 따라 제조).
시험 단계:
1) 버퍼액의 제조: 50 mM HEPES，10 mM MgCl2，1 mM EGTA，0.01% NP-40，2 mM DTT.
2) 대조품과 시험 샘플의 제조: RXDX-106과 본 발명의 화합물을 DMSO를 사용하여 10mM로 용해시키고, DMSO를 사용하여 1mM 또는 적당한 농도로 희석시켰으며, BRAVO(Agilent)를 사용하여 배수비례 직렬 희석을 실시하였다. ECHO 555(Labcyte)를 사용하여 화합물 플레이트(Labocyte-LP0200)로부터 100nl을 테스트 플레이트(Greiner-784075)로 옮겨 담았다. DMSO의 최종 농도는 1%이다.
3) Mer와 Tyro3은 각각 검출 버퍼액(Cisbio，Cat. No. 62TK0PEC，Lot. No. 12A)을 이용하여 0.5nM과 1.2nM으로 희석시키고, 5ul을 384웰 플레이트에 옮겨 담았으며, 본 발명의 화합물과 함께 22-25℃에서 30분 동안 인큐베이팅하였다. Mer과 Tyro3의 최종 농도는 각각 0.25nM과 0.6nM이다.
4) HEPES, NaN3, BSA와 Orthovanadate로 조제한 1X 키나제 버퍼액을 이용하여 비오틴-TK 기질과 ATP를 각각 최종 농도의 2배 농도로 희석시켰다. 기질과 ATP의 혼합물을 5ul로 384 웰 플레이트에 투입하고 반응을 개시하였으며, 22-25℃에서 1시간 동안 반응시켰다.
시험 중 각 시약의 반응 농도는 하기 표 3과 같다.
[표 3]
Figure pct00144
5) 스트렙타비딘-XL665와 TK 항체-크립테이트는 검출 버퍼액을 이용하여 250nM과 0.5nM으로 희석하였다. 10ul을 384웰 플레이트에 투입하여 반응을 개시하고, 22-25℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 스트렙타비딘-XL665와 TK 항체-크립테이트의 최종 농도는 125nM과 0.25nM이다.
6) Envision Reader(PerkinElmer)로 665nm와 615nm 파장 하에서의 형광강도를 독취하였다.
7) XL fit 소프트웨어로 화합물의 IC50을 피팅하였다.
본 발명의 화합물의 티로신 키나제 Mer과 Tyro3에 대한 억제 활성은 하기 표 4와 같다.
[표 4]
본 발명의 화합물의 티로신 키나제 Mer과 Tyro3의 활성 억제에 대한 IC50값
Figure pct00145
상기 표 4에서 알 수 있듯이, 본 발명의 화합물은 Mer과 Tyro3 키나제의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다. 대조품 RXDX-106과 비교하여, 일부 발명의 화합물은 훨씬 높은 활성 억제 능력을 나타내었다.
시험예 3: 본 발명의 화합물의 EBC-1 세포에서의 활성 억제 능력
시험 방법: Promega사의 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay 시약키트를 사용하여 화합물의 EBC-1 세포 증식에 대한 억제 활성을 평가하였다.
측정기: Molecular Devices사의 Spectramax M3 다기능 마이크로플레이트리더，Thermo Scientific사의 Model 311 Series CO2 인큐베이터, Thermo Scientific사의 Model 1300 Series A2 생물 안전 캐비닛, Olympus사의 CKX41SF 도립 현미경(inverted microscope), Countstar사의 IC1000 세포계수기, SIEMENS사의 KK25E76TI 냉장고, qilin beier사의 QB-9001 마이크로플레이트 패스트 오실레이터.
시험 재료: 소태아 혈청 FBS(Thermo Fisher사, cat#10099-141，lot #1966174C），CellTiter-Glo® 형광 세포 생존 시험 시약(Promega사, cat#G7572，lot#0000310975），96웰 투명 평저 블랙월 세포 배양판(Thermo Fisher사, cat#，lot #1207365), RPMI1640 배지(GE사, cat #SH30809.01, lot#AD17321266), MEM 배지(GEtk, cat #SH30024.01, lot#AC10232463), NEAA(Thermo Fisher사, cat #11140-050, lot#1872982), 대조품 카보잔티닙(특허 WO201101763A1에 공개된 방법에 따라 합성), EBC-1세포(난징 cobioer사, EBC-1은 인간 폐암 편평세포암 세포이며, 완전 배지는 MEM+10%FBS+0.01mM NEAA, 배양 조건은 37℃, 5%CO2, 95% 습도, 성장 배가 시간은 약 32시간이며, 계대율은 1:6이다.
시험 단계: EBC-1 세포를 소생 시, 세포 동결보존 튜브를 37℃의 수욕에서 신속하게 흔들어 1분 내에 녹였다. 녹은 후의 세포 현탁액을 10%FBS이 함유된 RPMI1640 배지와 고르게 혼합하고, 1000r/m으로 5분 동안 원심분리하여, 상청을 버렸다. 5mL의 완전 배지를 취하여 세포 침전을 재현탁하고, 바닥의 면적이 25 cm2인 세포배양 플라스크에 담아, 37℃, 95% 습도와 5% CO2의 세포 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 융합률이 80% 정도에 도달하였을 때 세포 계대를 실시하였다. 세포 계대 시, 직접 구 세포 현탁액을 균일하게 피펫시키고, 1/6 세포 현탁액을 남기고, 5mL의 새로운 완전 배지를 투입하여, 고르게 피펫팅한 후, 세포 플라스크를 세포 배양 플라스크에 담아 계속 배양하였다. 세포 융합률이 다시 80% 정도에 도달하였을 때 세포 플레이팅을 실시하였다. 세포 플레이팅 시, 세포 계대 방법을 참조하여, 1/6의 세포 현탁액을 남기고 계속 배양하고, 나머지 5/6 세포 현탁액은 15mL 원심분리관에 담았다. 트리판 블루 배척법을 이용하여, Countstar사의 IC1000 세포계수기로 세포의 활력을 검출하고, 세포 활력이 90% 이상임을 확인하였다. 완전 배지를 사용하여 밀도가 3.33Х104개 생존 세포/mL인 세포 현탁액을 제조하고, 90μL의 세포 현탁액을 96웰 세포 배양판에 투입하여, 세포 배양판(0번째 날의 플레이트와 피시험 약물 플레이트) 중의 세포 밀도가 3000개 생존세포/웰이 되도록 하였다. 세포와 화합물을 함유하지 않고, 완전배지만 함유한 대조군을 설치하고; 화합물은 함유하지 않고 세포는 함유한 대조군을 설치하였다. 세포판을 세포 인큐베이터에 담아 하룻밤 동안 배양하였다. 화합물을 첨가 시, 본 발명의 화합물과 대조품인 카보잔티닙을 DMSO로 용해시키고, 기울기 희석을 실시하여 10배 용액을 획득하였다. 10μL의 상기 용액을 대응되는 세포 배양판에 투입하여, 화합물의 개시농도가 10μM가 되도록 하고, 이웃한 농도 희석 배수는 3.16배이며, 세포 배양판 중 DMSO의 함량은 0.1%이다. 세포 플레이트를 세포 인큐베이터에 넣고 72시간 동안 계속 배양하였다. 검출 시, CellTiter-Glo 시약(즉 CellTiter-Glo® 형광 세포 생존 시험 시약, Promega사, cat#G7572, lot#0000310975)을 녹이고, 세포 플레이트를 실온으로 옮겨 30분 동안 평형상태(equilibration)가 되도록 하였다. 100μL의 CellTiter-Glo 시약을 세포 플레이트의 각 웰에 투입하고, qilin beier사의 QB-9001 마이크로웰플레이트 패스트 오실레이터에서 5분 동안 흔들어 세포를 충분히 용리시키고, 세포 플레이트를 실온에 20분 동안 방치하여 냉광신호를 안정화시키고, Molecular Devices사의 Spectramax M3 다기능 마이크로플레이트리더로 각 웰의 냉광값을 전파장 스캔하였다.
피시험 샘플: 본 발명의 실시예의 화합물과 카보잔티닙(양성 대조 화합물).
데이터 분석: 하기 공식을 이용하여 각 농도의 화합물 작용 하의 세포 생존율을 계산하였다:
세포 생존율(%)= (Lum피시험 약물-Lum배양액 대조)/(Lum세포 대조-Lum배양액 대조)Х100%，
여기서 Lum은 다기능 마이크로플레이트리더가 판독한 피시험 약물 플레이트 각 웰의 냉광수치를 의미한다.
GraphPad Prism 7.0소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, 비선형 S곡선 회귀를 이용하여 데이터를 피팅하여 용량-효과 곡선을 획득하였으며, 이에 따라 IC50값을 계산하였다.
본 발명의 화합물의 EBC-1세포 상에서의 활성 억제 능력은 하기 표 5와 같다.
[표 5]
본 발명의 화합물의 EBC-1 세포 상에서의 활성 억제 능력(IC50값)
Figure pct00146
상기 표 5에서 알 수 있듯이, 본 발명의 화합물은 EBC-1 세포의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다. 양성 대조 약물인 카보잔티닙과 비교하여, 본 발명의 화합물은 서로 비슷한 억제 능력을 나타내었다. 이와 동시에 EBC-1이 c-MET에 의해 구동되는 폐암세포계이기 때문에, EBC-1 세포 활성에 대한 본 발명의 화합물로 c-MET 키나제 표적점에 대한 억제 작용이 추가적으로 검증되었다.
시험예 4: 본 발명의 화합물의 Ba/F3 Ax1 세포 상에서의 활성 억제 능력
시험방법: Promega사의 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay 시약키트를 사용하여 화합물의 Ba/F3 Axl 세포 증식에 대한 억제 활성을 평가하였다.
측정기: Molecular Devices사의 Spectramax M3 다기능 마이크로플레이트리더，Thermo Scientific사의 Model 311 Series CO2 인큐베이터, Thermo Scientific사의 Model 1300 Series A2 생물 안전 캐비닛, Olympus사의 CKX41SF 도립 현미경(inverted microscope), Countstar사의 IC1000 세포계수기, SIEMENS사의 KK25E76TI 냉장고, qilin beier사의 QB-9001 마이크로플레이트 패스트 오실레이터.
시험 재료: 소태아 혈청 FBS(Thermo Fisher사, cat#10099-141，lot #1966174C），CellTiter-Glo® 형광 세포 생존 시험 시약(Promega사, cat#G7572，lot#0000310975），96웰 투명 평저 블랙월 세포 배양판(Thermo Fisher사, cat#，lot #1207365), RPMI1640 배지(GE사, cat #SH30809.01, lot#AD17321266), Murine IL-3(PeproTech사, cat#213-13, lot #120948, rhGas6(R&D Systems사, cat #885-GSB, lot#DFGX0417081), 대조품 bemcentinib(별명 BGB324, 상하이 BidePharm, cat# BD559084 lot# AQU341), Ba/F3 Axl 세포(KYinno(Beijing) 유한공사가 구축하였으며, 완전배지는 RPMI1640+10%FBS+100ng/mL rhGas6이고, 배양 조건은 37℃, 5%CO2, 95% 습도, 성장 배가 시간 약 20시간, 계대율은 1:10이며; Oncogene. 2009; 28:3442-3455，Oncotarget.　FASEB　J.　2017;　31(4):　1382-1397을 참조하였다).
시험 단계: Ba/F3 Axl 세포를 소생 시, 세포 동결보존 튜브를 37℃의 수욕에서 신속하게 흔들어 1분 내에 녹였다. 녹은 후의 세포 현탁액을 10%FBS이 함유된 RPMI1640 배지와 고르게 혼합하고, 1000r/m으로 5분 동안 원심분리하여, 상청을 버렸다. 5mL의 완전 배지를 취하여 세포 침전을 재현탁하고, 바닥의 면적이 25 cm2인 세포배양 플라스크에 담아, 37℃, 95% 습도와 5% CO2의 세포 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 밀도가 2Х106개 생존세포/mL일 때 세포 계대를 실시하였다. 세포 계대 시, 직접 구 세포 현탁액을 균일하게 피펫시키고, 1/10(즉 0.5mL) 세포 현탁액을 남기고, 4.5mL의 새로운 완전 배지를 투입하여, 고르게 피펫팅한 후, 세포 플라스크를 세포 배양 플라스크에 담아 계속 배양하였다. 세포 융합률이 다시 2Х106개인 생존세포/mL에 도달하였을 때 세포 플레이팅을 실시하였다. 세포 플레이팅 시, 세포 계대 방법을 참조하여, 1/10(즉 0.5mL)의 세포 현탁액을 남기고 계속 배양하고, 나머지 5/6 세포 현탁액은 15mL 원심분리관에 담았다. 원심분리 후 상청을 버리고, 5mL의 완전배지를 사용하여 세포를 재현탁하였다. 트리판 블루 배척법을 이용하여, Countstar사의 IC1000 세포계수기로 세포의 활력을 검출하고, 세포 활력이 90% 이상임을 확인하였다. 완전 배지를 사용하여 밀도가 5.56Х104개 생존 세포/mL인 세포 현탁액을 제조하고, 90μL의 세포 현탁액을 96웰 세포 배양판에 투입하여, 세포 배양판(0번째 날의 플레이트와 측정할 약물 플레이트) 중의 세포 밀도가 5000개 생존세포/웰이 되도록 하였다. 세포와 화합물을 함유하지 않고, 완전배지만 함유한 대조군을 설치하고; 화합물은 함유하지 않고 세포는 함유한 대조군을 설치하였다. 세포판을 세포 인큐베이터에 담아 하룻밤 동안 배양하였다. 화합물을 첨가 시, 본 발명의 화합물과 대조품인 bmcentinib을 DMSO로 용해시키고, 기울기 희석을 실시하여 10배 용액을 획득하였다. 10μL의 상기 용액을 대응되는 세포 배양판에 투입하여, 화합물의 개시농도가 100nM가 되도록 하고, 이웃한 농도 희석 배수는 3.16배이며, 세포 배양판 중 DMSO의 함량은 0.1%이다. 세포 플레이트를 세포 인큐베이터에 넣고 72시간 동안 계속 배양하였다. 검출 시, CellTiter-Glo 시약(즉 CellTiter-Glo® 형광 세포 생존 시험 시약, Promega사, cat#G7572, lot#0000310975)을 녹이고, 세포 플레이트를 실온으로 옮겨 30분 동안 평형상태(equilibration)가 되도록 하였다. 100μL의 CellTiter-Glo 시약을 세포 플레이트의 각 웰에 투입하고, qilin beier사의 QB-9001 마이크로웰플레이트 패스트 오실레이터에서 5분 동안 흔들어 세포를 충분히 용리시키고, 세포 플레이트를 실온에 20분 동안 방치하여 냉광신호를 안정화시키고, Molecular Devices사의 Spectramax M3 다기능 마이크로플레이트리더로 각 웰의 냉광값을 전파장 스캔하였다.
피시험 샘플: 본 발명의 실시예의 화합물과 bemcentinib (양성 대조 화합물).
데이터 분석: 하기 공식을 이용하여 각 농도의 화합물 작용 하의 세포 생존율을 계산하였다:
세포 생존율(%)= (Lum피시험 약물-Lum배양액 대조)/(Lum세포 대조-Lum배양액 대조)Х100%，
여기서 Lum은 다기능 마이크로플레이트리더가 판독한 피시험 약물 플레이트 각 웰의 냉광수치를 의미한다.
GraphPad Prism 7.0소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, 비선형 S곡선 회귀를 이용하여 데이터를 피팅하여 용량-효과 곡선을 획득하였으며, 이에 따라 IC50값을 계산하였다.
본 발명의 화합물의 Ba/F3 Axl세포 상에서의 활성 억제 능력은 하기 표 6와 같다.
[표 6]
본 발명의 화합물의 Ba/F3 Axl 세포 상에서의 활성 억제 능력(IC50값)
Figure pct00147
상기 표 6에 표시된 바와 같이, 대조품인 bemcentinib과 비교하여, 본 발명의 화합물은 훨씬 높은 Ba/F3 Axl 세포 증식에 대한 억제 능력을 나타내었다.
시험예 5: 모델 마우스 종양 세포의 이소성 이식 시험 중에서 본 발명의 화합물의 체내 항종양 활성 시험
인간유래 비소세포폐암 종양세포주 EBC-1（ATCC）3Х106개 세포를 BALB/c-nude 모델 마우스(베이징 Beijing AniKeeper Biotech, 암컷, 10마리)의 피하에 접종하였다. 종양이 마우스의 피하에서 175.5 mm3까지 성장하였을 때, 마우스에게 피시험 샘플을 경구 투여하였다.
마우스를 음성 용제 대조군과 본 발명의 화합물군(실시예 3의 화합물)(30mg/kg)으로, 각 그룹당 5마리씩 나누었다. 용제 대조군에게는 10% solutol HS-15를 투여하였다. 제조 방법: 10ml의 solutol HS-15를 90ml의 ddH2O에 투입하고, 흔들어 10%의 solutol HS-15로 혼합되도록 볼텍스(vortex)하였다. 본 발명의 화합물군은 실시예 3의 화합물을 10% solutol HS-15에 용해시켜, 1mg/mL 농도의 용액으로 조제하여 투여하였다. 용제 대조군과 본 발명의 화합물군은 모두 경구 투여하였으며, 매일 1회 투여하고, 28일 동안 지속하였으며, 투여 부피는 체중 1그램당 10ul이다.
약물 투여 개시 후, 매주 2번 마우스의 체중과 종양의 크기를 측정하였다. 종양 크기 계산 공식:
종양 부피(mm3)= 0.5 Х(종양의 긴 지름 Х 종양의 짧은 지름2）.
항종양 치료효과는 치료 중 종양의 성장 곡선(즉 치료 일수에 대해 매 번 측정한 종양의 부피)와 상대 종양 부피를 기반으로 평가하며, 여기서, 상대 종양 억제율(TGI)은 하기 공식에 따라 계산한다:
상대 종양 억제율 TGI（%）：TGI=1-T/C（%）.
T/C%은 상대 종양 증식율이며, 즉 어느 하나의 시점에서, 본 발명의 화합물군과 대조군의 상대 종양 부피 또는 종양 무게의 백분율이다. T와 C는 각각 본 발명의 화합물군과 용제 대조군의 어느 하나의 특정 시점의 상대 종양 부피(RTV)이다. T/C % = TRTV / CRTV×100%（TRTV：본 발명의 화합물군의 평균RTV; CRTV: 용제 대조군의 평균 RTV.
상대 종양 부피 RTV：RTV=Vt-V0，V0는 그룹 분류 시 당해 동물의 종양 부피이고, Vt는 약물 투여 후 당해 동물의 종양 부피이다.
도 1은 본 발명의 화합물군과 용제 대조군 마우스 종양 부피의 생장 변화를 나타낸 것이다. 도시된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 종양 세포가 모델 마우스의 체내에 생장하는 것을 효과적으로 억제할 수 있으며, 종양 억제율(TGI)은 108%에 달한다.
도 2는 본 발명의 화합물군과 용제 대조군 마우스 체중의 치료 시간에 따른 변화를 나타낸 것이다. 도시된 바와 같이, 종양을 가진 마우스는 실험 과정에서 체중에 현저한 변화가 없었으며, 이는 본 발명의 화합물이 양호한 안전성와 내수성을 지닌다는 것을 나타낸다.
본 발명은 실험을 통해 본 발명의 화합물이 Axl, Mer, Tyro3 또는 c-MET 등 티로신 키나제의 활성을 효과적으로 억제할 수 있고, 마우스 체내의 종양 세포의 생장을 고도로 억제할 수 있음을 증명하였다. 따라서, 본 발명의 화합물은 Axl, Mer, Tyro3 또는 c-MET 등 티로신 키나제와 관련된 질환을 치료 시, 특히 암 치료 방면에서 넓은 응용 전망을 지닌다.

Claims (23)

  1. 하기 일반식 (I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염:
    Figure pct00148

    (I)
    여기서,
    "
    Figure pct00149
    " 는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며;
    X와 Y는 각각 독립적으로 C 또는 N에서 선택되고;
    W와 V는 각각 독립적으로 CH 또는 N에서 선택되며;
    Z는,
    Figure pct00150
    ,
    Figure pct00151
    ,
    Figure pct00152
    또는
    Figure pct00153

    기에서 선택되고;
    A와 E는 각각 독립적으로 CH 또는 N에서 선택되며;
    G1, G2와 G3는 각각 독립적으로 C, N, O 또는 S원자로부터 선택되고;
    R1은 수소, 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서 선택되고, 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, NRaRb, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    R2는 수소, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 시아노, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, NRaRb, NHC(O)Ra 또는 NHS(O)mRa에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴은 할로겐, 하이드록시, 메르캅토, 시아노, 알킬, ORa, SRa, NRaRb, C(O)NRaRb에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    R3는 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고, 상기 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴은 임의로 Ra에 의해 임의로 더 치환되고;
    R4는 수소, 할로겐, 시아노, 알킬, 할로알킬, 알콕시 또는 할로알콕시에서 선택되며;
    R5와 R6는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 시아노, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, C(O)Ra, C(O)ORa, OC(O)Ra, C(O)NRaRb, OC(O)NRaRb에서 선택되거나;
    또는 R5와 R6는 서로 연결되는 원자와 함께 옥사시클로알킬을 형성하고, 이 중의 산소 원자는 벤젠 고리와 연결되며;
    R7은 수소, 할로겐, NRaRb, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    각각의 R8은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, NRaRb, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    R9은 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 하나 또는 다수의 Q 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    Q는 할로겐, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, C(O)Ra, C(O)ORa, OC(O)Ra, C(O)NRaRb, OC(O)NRaRb 에서 선택되고; 여기서 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    R10은 수소, 할로겐, 알킬, NRaRb에서 선택되고; 상기 알킬은 하나 또는 다수의 할로겐에 의해 임의로 더 치환되며;
    R11은 수소, 할로겐, 시아노, 아미노, 하이드록시, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 시아노, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되고, 여기서 상기 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
    또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하고, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 옥소, 하이드록실, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    m은 1 내지 4인 정수이고;
    n은 0 내지 4인 정수이고;
    p는 1 내지 6인 정수이며;
    일반식 (I)로 표시되는 화합물 중의 임의의 하나 또는 다수의 H 원자는 선택적으로 D 원자에 의해 더 대체된다.
  2. 제1항에 있어서,
    하기 일반식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물, 또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염:

    Figure pct00154

    (Ⅱ)
    여기서,
    Figure pct00155
    , R1, R2, R3, R4, R9, R10, X, Y, W, V, A, n은 제1항에 정의된 바와 같다.
  3. 제1항에 있어서,
    하기 일반식 (Ⅲ)으로 표시되는 화합물, 또는 이의 메조머, 라세미체, 광학이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물 형태, 또는 이의 약용 가능한 염:
    Figure pct00156

    (Ⅲ)
    여기서,
    Figure pct00157
    , R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11, X, Y, W, V, A, E, n은 제1항에 정의된 바와 같다.
  4. 제2항에 있어서,
    W와 V는 CH이고; A는 N인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  5. 제4항에 있어서,
    하기 일반식 (Ⅳ), 일반식 (Ⅴ) 또는 일반식 (Ⅵ)로 표시되는 화합물인, 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물:
    Figure pct00158

    (Ⅳ)
    Figure pct00159

    (Ⅴ)
    Figure pct00160

    (Ⅵ)
    여기서, R1, R2, R3, R4, R9, R10, n은 제1항에 정의된 바와 같다.
  6. 제5항에 있어서,
    R9은 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되며; 바람직하게는 C6-C10 아릴 또는 5 내지 7 원(member)의 헤테로아릴에서 선택되고, 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 하나 또는 다수의 Q 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    Q는 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, OC(O)Ra, OC(O)NRaRb에서 선택되고; 여기서 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소, 알킬에서 선택되고, 여기서 상기 알킬은 할로겐, 시클로알킬, 헤테로시클릴에서 선택된 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
    또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴, 바람직하게는 5 내지 7 원의 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하고, 상기 질소 함유 헤테로시클릴기는 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    p는 1 내지 6인 정수인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서,
    R10은 아미노기인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  8. 제3항에 있어서,
    W와 V는 CH이고; E는 CH이며 또한 A는 N인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  9. 제4항에 있어서,
    하기 일반식 (Ⅶ), 일반식 (Ⅷ) 또는 일반식 (Ⅸ)로 표시되는 화합물인, 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물:
    Figure pct00161

    (Ⅶ)
    Figure pct00162

    (Ⅷ)
    Figure pct00163

    (Ⅸ)
    여기서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11, n은 제1항에 정의된 바와 같다.
  10. 제9항에 있어서,
    R5와 R6는 각각 독립적으로 시아노, ORa, SRa, O(CH2)pNRaRb, O(CH2)pORa, NRaRb, OC(O)Ra, C(O)NRaRb, OC(O)NRaRb 에서 선택되거나;
    또는 R5와 R6는 서로 연결된 원자와 함께 옥사시클로알킬을 형성하고, 여기서 산소 원자는 벤젠 고리와 서로 연결되며;
    Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소, 알킬에서 선택되고, 여기서 상기 알킬은 할로겐, 시클로알킬, 헤테로시클릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
    또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴, 바람직하게는 5 내지 7 원의 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하며, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되고;
    p는 1 내지 6인 정수인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    R11은 수소 또는 아미노기인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  12. 제1항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서,
    R1은 할로겐, 알킬, 알케닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서 선택되고, 상기 알킬, 알케닐, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴은 할로겐, 아미노, 니트로, 시아노, 하이드록시, 메르캅토, 카르복실, 에스테르, 옥소, NRaRb, 알킬, 알콕시, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되며;
    Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬기에서 선택되거나;
    또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하며, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되는 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  13. 제1항 내지 제12항 중의 어느 한 항에 있어서,
    R2는 수소, 옥소, 시아노, 하이드로시, 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴에서 선택되고; 바람직하게는 옥소, 시아노, 하이드로시, 알킬에서 선택되며; 상기 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴은 할로겐, 하이드록시, 메르캅토, 시아노, 알킬, ORa, SRa, NRaRb, C(O)NRaRb에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되고;
    Ra와 Rb는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬기에서 선택되고, 여기서 상기 알킬은 할로겐에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되거나;
    또는 Ra와 Rb는 이들이 연결된 질소 원자와 함께 질소 함유 헤테로시클릴을 형성하며, 상기 질소 함유 헤테로시클릴은 알킬에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되는 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  14. 제1항 내지 제13항 중의 어느 한 항에 있어서,
    R3은 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에서 선택되고, 상기 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴은 Ra에 의해 임의로 더 치환되며;
    Ra는 수소, 할로겐, 시아노, 알킬, 알콕시, 시클로알킬에서 선택되고, 여기서 상기 알킬, 알콕시, 시클로알킬은 할로겐에서 선택되는 하나 또는 다수의 그룹에 의해 임의로 더 치환되는 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  15. 제1항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서,
    R4는 수소, 할로겐, 시아노, 알킬, 할로알킬, 알콕시 또는 할로알콕시에서 선택되고, 할로겐인 것이 바람직하며;
    n은 0 내지 2인 정수인 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  16. 제1항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서,
    화합물 중의 어느 하나 또는 다수의 H 원자가 D 원자에 의해 대체되는 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물.
  17. 제1항 내지 제16항 중의 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식의 화합물에서 선택되는, 일반식 (Ⅰ)로 표시되는 화합물:
    Figure pct00164

    Figure pct00165

    Figure pct00166

    Figure pct00167

    Figure pct00168

    Figure pct00169

    Figure pct00170

    Figure pct00171
  18. 제1항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조 방법으로서,
    이하 단계를 포함하며:
    Figure pct00172

    피나콜붕산염(Ia)과 방향족 브롬화물(Br-Z)을 촉매와 알칼리가 존재하는 상태에서 용제 중에서 스즈키 커플링 반응시켜 일반식 (I)의 화합물을 획득하며; 상기 촉매는 Pd(dppf)2인 것이 바람직하고, 상기 알칼리는 K2CO3인 것이 바람직하며, 상기 용매는 디옥산과 물인 것이 바람직하고;
    여기서, R1, R2, R3, R4, Z, X, Y, W, V, n은 제1항에 정의된 바와 같은 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조 방법.
  19. 제1항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조 방법으로서,
    이하 단계를 포함하며:
    Figure pct00173

    카르복실산 화합물(Ig)과 아릴아민 화합물(Ic)을 커플링제와 염기가 존재하는 상태에서 커플링 반응시켜 일반식 (I)의 화합물을 획득하며; 상기 커플링제는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 염기는 트리에틸아민인 것이 바람직하며;
    여기서, R1, R2, R3, R4, Z, X, Y, W, V, n은 제1항에 정의된 바와 같은, 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조 방법.
  20. 제1항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조 방법으로서,
    이하 단계를 포함하며:
    R2=CN일 때,
    Figure pct00174

    단계 1: 카르복실산(Ib)과 방향족 아민(Ic)을 커플링제와 알칼리가 존재하는 상태에서 아미드화 반응시켜, 아릴아미드 중간체(Id)를 획득하는 단계로서; 상기 커플링제는 HATU인 것이 바람직하고, 상기 알칼리는 N, N-디이소프로필에틸아민인 것이 바람직하며;
    단계 2: 아릴아미드 중간체(Id)에 염기가 존재하는 상태에서 용매 중에서 가수분해 반응을 발생시켜, 카르복실산 중간체(Ie)를 획득하는 단계로서; 상기 알칼리는 LiOH인 것이 바람직하고, 상기 용제는 메탄올-물 용액인 것이 바람직하며;
    단계 3: 카르복실산 중간체(Ie)와 염화암모늄을 촉매와 염기의 작용 하에 아미드화 반응시켜, 디메틸아미드 중간체(If)를 획득하는 단계로서; 상기 촉매는 PyBrOP인 것이 바람직하고, 상기 염기는 DIPEA인 것이 바람직하며;
    단계 4: 디메틸아미드 중간체(If)를 탈수제와 염기의 공동 작용 하에 탈수 반응시켜, 일반식 (I)의 화합물을 획득하는 단계로서, 여기서 상기 탈수제는 트리플루오로아세트산 무수물인 것이 바람직하고, 상기 염기는 트리에틸아민인 것이 바람직하며;
    여기서, R1, R3, R4, Z, X, Y, W, V, n은 제1항에 정의된 바와 같은 일반식 (I)로 표시되는 화합물의 제조 방법.
  21. 약물 조성물에 있어서,
    제1항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물, 및 의학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약물 조성물.
  22. 제1항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물, 또는 제21항에 따른 약물 조성물, 티로신 키나제 억제제의 제조에서의 용도로서,
    상기 티로신 키나제는 바람직하게는 Ax1, Mer, Tyro3, c-MET인 용도.
  23. 제1항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 따른 상기 일반식 (I)로 표시되는 화합물, 또는 제21항에 따른 약물 조성물, 티로신 키나제 활성과 관련된 질환을 치료하는 약물 제조에서의 용도로서,
    상기 질환은 방광암, 유선암, 자궁경부암, 직결장암, 대장암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 담낭암, 췌장암, 갑상선암, 피부암, 뇌암, 골암, 연조직암, 백혈병과 임파선암으로부터 선택될 수 있고, 백혈병, 간암, 폐암, 신장암, 유선암과 직결장암인 것이 바람직하며, 백혈병, 간압, 폐암, 신장암, 유선암, 위암 및 직결장암인 것이 더욱 바람직한 용도.
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