KR20210064252A - Cdc7 억제제를 포함하는 암의 치료 방법 - Google Patents

Cdc7 억제제를 포함하는 암의 치료 방법 Download PDF

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KR20210064252A
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크리스티안 앤드류 하시그
리안 제임스 한센
스네자나 미루티노빅
브리안 윌리엄 스트라우스
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시에라 온코로지, 인코퍼레이티드
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Abstract

본원에는 암 환자에서와 같이 종양 성장을 억제하는 데 유용한 단일요법으로서 또는 조합 요법으로 SRA141을 투여하는 치료 방법이 개시되어 있다.

Description

CDC7 억제제를 포함하는 암의 치료 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 9월 24일 출원된 미국 가출원 번호 제62/735,778호; 2018년 11월 13일 출원된 미국 가출원 번호 제62/760,638호; 및 2019년 2월 26일 출원된 PCT 출원 번호 PCT/US2019/019676에 대한 우선권 및 이익을 주장한다. 상기 참조된 출원 각각의 내용은 그 전문이 참조로 포함된다.
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암은 생체 내에서 세포의 제어되지 않은 무제한 성장에 의해 야기된 질환 그룹이다. 암 세포는 통상적으로 정상 세포보다 빠르게 성장하므로, 암은 세포 분열 동안, 특히 염색체 분열 동안 DNA 복제를 제어함으로써 치료할 수 있다.
Cdc7은 세포 주기에서 DNA 복제 개시에 필수적인 세린-트레오닌 단백질 키나제 효소이다. 구체적으로, Cdc7은 Dbf4(ASK)와 같은 보조인자와 복합체를 형성하고, 이의 기질인 MCM(소염색체 유지) 단백질을 인산화한다. 이 인산화는 DNA 상에서 Cdc45 및 DNA 폴리머라제의 어셈블리를 초래하여 MCM의 복합체를 형성하며, 이에 의해 DNA 복제를 개시하는 것으로 알려져 있다.
Cdc7의 발현 수준은 다양한 암 세포주 및 인간 종양 조직에서 빈번하게 상승되므로 항암 표적으로서 Cdc7에 대한 상당한 관심이 제기되었다. Cdc7은 인간 종양에서 유래된 일반적으로 확립된 세포주뿐만 아니라, 살아있는 조직에서 취한 세포에서도 과발현되는 것으로 밝혀졌다.
특정 Cdc7 억제제는 HeLa 및 HCT116 세포와 같은 인간 종양 세포의 성장에 영향을 미치지만, 정상 세포에서는 제한된 효과만을 나타내는 것으로 입증되었다.
현재, Cdc7 억제제를 사용한 암 치료에 유용한 효과적인 치료 조성물 및 방법은 없다.
본원에는 암을 치료하는 방법이 기재되어 있으며, 상기 방법은 하기 화학식 (I-D)로 나타낸 치료 유효량의 SRA141 화합물을 암이 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며:
Figure pct00001
여기서 치료 유효량은 10-400 mg/일 또는 10-1000 mg/일의 절대 용량이다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서, 치료 유효량은 적어도 10 mg/일, 적어도 20 mg/일, 적어도 40 mg/일, 적어도 80 mg/일, 적어도 160 mg/일, 또는 적어도 320 mg/일이다. 일부 구현예에서, 치료 유효량은 적어도 15 mg/일, 적어도 25 mg/일, 적어도 50 mg/일, 적어도 100 mg/일, 적어도 150 mg/일, 적어도 200 mg/일, 적어도 250 mg/일, 적어도 300 mg/일, 또는 적어도 350 mg/일이다.
일부 구현예에서, SRA141 화합물은 경구로 투여된다.
일부 구현예에서, SRA141 화합물은 매일 투여된다. 일부 구현예에서, SRA141 화합물은 적어도 연속 5 일, 적어도 연속 7 일, 또는 적어도 연속 14 일 동안 투여된다. 일부 구현예에서, SRA141 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약 일정에 따라 투여된다: 매주 5 일 투약 후 2 일 비투약; 매일 1 주 투약 후 1, 2, 또는 3 주 비투약; 매일 2 또는 3 주 투약 후 1, 또는 2 주 비투약; 및 주간 주기의 2 및 3 일에 투약. 일부 구현예에서, 치료 유효량은 1 일 1 회 단일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 치료 유효량의 절반이 1 일 2 회 투여된다.
일부 구현예에서, 암은 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 혈액암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 간세포암, 백혈병, 림프종, 골수종, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종, 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 급성 골수 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호산구성 백혈병, 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액암이다. 일부 구현예에서, 암은 AML이다.
일부 구현예에서, 암은 전이성 대장암(mCRC)이다. 일부 구현예에서, mCRC는 고도 현미부수체 불안정성(MSI-H) 상태를 갖는 것으로 분류되지 않는다. 일부 구현예에서, MSI-H 상태는 모노뉴클레오티드 반복 마커, 디뉴클레오티드 반복 마커, 유사단형성(quasimonomorphic) 마커, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 반복적인 DNA 서열 검출에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 검출되는 경우는 PCR 분석, 다중화 PCR 분석, 모세관 전기영동, DNA 서열분석, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 수행된다.
일부 구현예에서, 암과 관련된 종양은 염색체 불안정성(CIN), 방추체 체크포인트 어셈블리 결함, 유사분열 결함, G1/S 체크포인트 결함, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 표현형을 포함한다. 일부 구현예에서, 암과 관련된 종양은 Wnt 신호전달 경로 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Wnt 신호전달 경로 돌연변이는 선종성 용종증(APC) 유전자 돌연변이, FAT1 돌연변이, FAT4 돌연변이, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 방법은 보관 또는 신선한 종양 생검을 사용하여 관련된 종양을 스크리닝하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝은 조직화학적 염색에 의한 염색체 분리 패턴 조사, 조직화학적 염색에 의한 약력학적 마커 조사, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝은 종양이 비정상적인 유사분열을 나타내는지 여부를 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝은 SRA141 화합물의 투여 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 스크리닝은 SRA141 화합물의 투여 후에 수행된다.
일부 구현예에서, 방법은 투여 후 대상체에서 SRA141 화합물의 600 초과, 1000 초과, 또는 1400 ng/mL 초과의 혈장 Cmax를 초래한다. 일부 구현예에서, 방법은 투여 후 대상체에서 SRA141 화합물의 5800 초과, 11900 초과, 또는 16400 ng-h/mL 초과의 AUClast를 초래한다. 일부 구현예에서, 방법은 투여 후 대상체에서 SRA141 화합물의 500 ng/mL 초과, 600 ng/mL 초과, 900 ng/mL 초과, 또는 1300 ng/mL 초과의 종양내 농도를 초래한다. 일부 구현예에서, 종양내 농도는 SRA141 화합물의 다중 투여 후에 도달한다. 일부 구현예에서, 종양내 농도는 SRA141 화합물의 단일 투여 후에 도달한다.
일부 구현예에서, 방법은 MCM2 인산화의 생체내 억제를 초래한다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 아미노산 잔기 Ser40 또는 Ser53에서 일어난다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 암과 관련된 종양에서 일어난다. 일부 구현예에서, 암과 관련된 종양에서 MCM2 인산화의 생체내 억제는 미처리된 종양 샘플에 비해 적어도 50%이다. 일부 구현예에서, 미처리된 종양 샘플은 SRA141 화합물을 대상체에게 투여하기 전에 수득된 생검이다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 SRA141 화합물의 단일 투여 후이다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 대상체의 피부에서 일어난다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 웨스턴 블롯(Western blot) 분석, 면역조직화학(IHC), 또는 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LC/MS)에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 대상체의 생검에서 측정된다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 SRA141 화합물의 다중 투여 후 측정된다. 일부 구현예에서, MCM2 인산화의 생체내 억제는 SRA141 화합물이 정상 상태(steady-state) 혈장 농도에 도달한 후에 측정된다.
일부 구현예에서, 방법은 암과 관련된 종양의 성장 억제를 초래한다. 일부 구현예에서, 종양의 성장 억제는 미처리된 종양에 비해 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%의 최소 성장 억제이다. 일부 구현예에서, 종양의 성장 억제는 미처리된 종양에 비해 적어도 47%의 최소 성장 억제이다. 일부 구현예에서, 종양의 성장 억제는 미처리된 종양에 비해 적어도 93%의 최소 성장 억제이다. 일부 구현예에서, 방법은 암과 관련된 종양의 회귀를 초래한다. 일부 구현예에서, 회귀는 완전 회귀이다. 일부 구현예에서, 방법은 암과 관련된 종양의 세포독성을 초래한다. 일부 구현예에서, 방법은 암과 관련된 종양 직경의 합계에서 적어도 30% 감소를 초래한다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에서 부분 관해(partial response), 완전 관해(complete response), 또는 안정 병변(stable disease)을 초래한다.
일부 구현예에서, 방법은 암과 관련된 종양 또는 병변의 성장 억제 수준을 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 SRA141의 투여 후 표적 병변의 제2 직경을 SRA141의 투여 전 표적 병변의 제1 직경과 비교하여 표적 병변 성장이 억제되었는지 여부를 결정하는 것을 포함한다. 일부 예에서, 종양 또는 병변 성장은 미처리된 종양 또는 병변에 비해 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%만큼 억제되는 것으로 결정된다 .
일부 구현예에서, 방법은 제2 치료 유효량의 하나 이상의 추가 치료를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료는 항신생물제를 포함한다. 일부 구현예에서, 항신생물제는 DNA 폴리머라제 억제제, 수용체 티로신 키나제 억제제, 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 경로 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항신생물제는 미토겐 활성화 단백질 키나제(MAPK) 경로 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, MAPK 억제제는 트라메티닙(Trametinib)이다. 일부 구현예에서, 항신생물제는 레티노이드 경로 조절인자를 포함한다. 일부 구현예에서, 레티노이드 경로 조절인자는 RXR 작용제 벡사로텐(Bexarotene) 또는 RAR 작용제 트레티노인(Tretinoin)(올트랜스 레티노산, ATRA)이다. 일부 구현예에서, 여기서 항신생물제는 세포자멸사 조절인자를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포자멸사 조절인자는 세포자멸사 유도인자를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포자멸사 유도인자는 BCL-2 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, BCL-2 억제제는 ABT-199이다. 일부 구현예에서, 항신생물제는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3 키나제(PI3K) 경로 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, PI3K 경로 억제제는 코판리십(Copanlisib)이다. 일부 구현예에서, 항신생물제는 PARP 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, PARP 억제제는 BMN673이다. 일부 구현예에서, 항신생물제는 오로라(Aurora) B 키나제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 오로라 B 키나제 억제제는 바라세르팁(Barasertib)이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료는 매일 투여된다. 일부 구현예에서, SRA141 화합물 및 하나 이상의 추가 치료는 상승적 효과를 입증한다.
본 발명의 이들 및 다른 특징, 측면, 및 이점은 하기 설명, 및 첨부 도면과 관련하여 더 잘 이해될 것이다.
도 1a는 급성 골수 백혈병의 마우스 이종이식편 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 1b는 급성 골수 백혈병의 마우스 이종이식편 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 종양 중량을 나타내는 그래프이다.
도 1c는 급성 골수 백혈병의 마우스 이종이식편 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 2a는 급성 골수 백혈병의 래트 이종이식편 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 2b는 급성 골수 백혈병의 래트 이종이식편 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 2c는 급성 골수 백혈병의 래트 이종이식편 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 개별 대상체의 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 3a는 혈액암 유래 세포주의 패널에서 SRA141의 절반 최대 억제 농도(IC50)를 나타내는 그래프이다.
도 3b는 세포 유형별로 구분된 결정된 IC50 값의 요약을 도시한다.
도 3c는 암 및 정상 세포 사이의 SRA141에 대한 민감도를 예시한다.
도 3d는 수많은 세포주에서 Cdc7 억제제 SRA141, TAK-931, 및 LY-3177833의 활성을 도시한다.
도 3e는 72 시간(왼쪽 칼럼) 및 144 시간(오른쪽 칼럼) 후 7 개의 세포주에서 ATP 수준(CTG); 대사 활성(CellTiter-Blue(CTB)); 세포의 DNA 함량(CyQuant); 및 에스테라제 활성(Calcein AM)을 측정하도록 설계된 4 개의 직교 검정을 사용한 IC50 값을 도시한다.
도 3f는 SRA141에 대한 상이한 노출 시간 후 144 시간에서 CTG 및 CyQuant에 의해 결정된 IC50 값을 도시한다.
도 4a는 대장암(CRC)의 환자 유래 이종이식편(PDX) 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 4b는 대장암(CRC)의 환자 유래 이종이식편(PDX) 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 5는 대장암(CRC)의 환자 유래 이종이식편(PDX) 모델에서 SRA141 단일요법으로 처리된 개별 동물 대상체의 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 6은 대장암(CRC)의 환자 유래 이종이식편(PDX) 모델에서 처리 32 일(D32)에 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 7a는 대장암의 래트 이종이식편 모델에서 SRA141 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 7b는 대장암의 래트 이종이식편 모델에서 SRA141 처리 12 시간 후 인산화된 MCM2의 감소를 나타내는 퍼센트 체중 변화, SRA141의 종양 농도, 및 면역블롯의 그래프를 도시한다.
도 8은 항신생물제와 조합된 SRA141로 순차적으로 처리된(전처리된) 세포주의 세포 성장 억제(0 시간 및 72 시간 미처리된 대조군과 비교한 세포 생존력)를 나타내는 그래프이다.
도 9는 항신생물제와 조합하여 SRA141("Sierra 화합물 1")로 공처리된 세포주의 성장 억제에 대한 상승작용 점수를 묘사하는 표를 도시한다.
도 10a는 항신생물제와 조합하여 SRA141("Sierra 화합물 1")로 공처리된 세포주의 성장 억제에 대한 상승작용 점수를 묘사하는 표를 도시한다.
도 10b는 젬시타빈(gemcitabine) 단독으로 또는 SRA141과 조합하여 처리된 HT-29 세포의 퍼센트 성장 억제를 나타내는 그래프이다.
도 11a는 시험관내 생화학적 검정에서 SRA141에 의한 Cdc7의 강력한 억제를 도시한다.
도 11b는 Cdc7에 대한 SRA141 결합 및 해리 동역학에 대한 체류 시간을 도시한다.
도 12는 SRA141 및 TAK931의 키놈 스크리닝 검정 결과를 도시한다.
도 13은 Cdc7에 대한 하류 표적의 인산화 상태의 후속 평가와 함께 0.033 내지 3.3 μM 농도에서 8 시간(도 13a) 내지 24 시간(도 13b), 및 0.1 및 1 μM 농도에서 3, 6, 및 24 시간(도 13c) 동안 SRA141로 처리된 Colo-205 세포, 및 0.5 내지 3.3 μM 농도(도 13d)에서 SRA141로 처리된 MV411 세포를 도시한다.
도 14는 24 시간 시간 동안 0.1 μM 및 1 μM의 SRA141로 처리 후 MCM2의 Ser53에서 인산화의 정량화를 나타내는 그래프이다.
도 15는 S 기 동안(도 15a) 및 M 기의 시작 시(도 15b) SRA141로 처리된 세포로부터의 유세포 분석 데이터; SRA141로 처리된 세포에서 세포 주기 및 DNA 마커 평가(도 15c); 및 Cdc7 억제제로 처리된 세포 집단에서 유사분열 세포의 퍼센트 평가(도 15d)를 도시한다.
도 16은 APC 돌연변이가 있거나 없는 세포주에서 SRA141 민감도의 요약을 도시한다.
도 17은 Colo-205 종양 이종이식편을 보유한 BALB/c 마우스에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 18은 SW620 종양 이종이식편을 보유한 BALB/c 마우스에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 19는 A20 종양 이종이식편을 보유한 BALB/c 마우스에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 20은 MDA-MB-486 유방 종양 이종이식편을 보유한 CB-17 SCID 마우스에서 SRA141 단일요법으로 처리된 동물의 평균 종양 부피를 나타내는 그래프이다.
도 21은 피하 SW620 종양을 보유한 BALB/c 마우스에서 단일 SRA141 투여 후 감소된 pMCM2 수준을 도시한다(도 21a에서 pMCM2 수준을 나타내고, 도 21b에서 액틴에 대해 정량화 및 정규화된 % 억제 나타냄).
도 22는 피하 Colo-205 종양을 보유한 암컷 Rowett 누드 래트에서 SRA141 처리 후 pMCM2 수준을 도시한다.
도 23은 종양이 없는 암컷 누드 래트에서 LC-MS/MS에 의해 결정된 SRA141 혈장 농도를 도시한다.
도 24a는 SRA141로 처리되거나 또는 처리되지 않은 백혈병의 래트 이종이식편 모델로부터의 종양 및 대리 조직에서 총 MCM2, 인산화된 MCM2, 및 gH2AX의 면역조직화학 평가를 도시한다.
도 24b는 백혈병의 래트 이종이식편 모델로부터의 종양 및 대리 조직에서 인산화된 MCM2의 면역조직화학 평가를 도시한다.
도 24c는 SRA141 및 비히클로 처리된 백혈병의 래트 이종이식편 모델로부터의 종양의 면역조직화학 및 H&E 평가를 도시한다.
도 25a는 다양한 투여량의 SRA141로 처리 후 이종이식편 종양에서 pMCM2-S40 발현의 평가 결과를 도시한다.
도 25b는 다양한 투여량의 SRA141로 처리 후 래트 이종이식편으로부터의 피부 샘플에서 pMCM2-S40 발현의 평가 결과를 도시한다.
도 26은 정상 인간 피부에서 총 MCM2, pMCM2-S53, pMCM2-S40, 및 gH2AX의 평가 결과를 도시한다.
도 27은 Colo-205 세포(도 27a, 도 27g), SW620 세포(도 27b), A375 세포(도 27c), KG-1 세포(도 27d), MOLM-13 세포(도 27e, 도 27h), 및 MV411 세포(도 27f)에서 다양한 추가 항신생물제와 조합된 SRA141로 수행된 세포 생존력 검정 결과를 도시한다.
도 28은 RNAi 녹다운(knockdown)(도 28a) 또는 ABT-199 처리(도 28b)에 의한 항-세포자멸사 유전자의 억제 후 세포에서 SRA141 처리 결과를 도시한다.
본원에는 유효량의 Cdc7 억제제 SRA141을 투여함으로써, 대상체, 예를 들어, 인간에서 종양 성장을 억제하는 방법이 개시된다. 또한 본원에는 유효량의 Cdc7 억제제 SRA141을 투여함으로써 대상체, 예를 들어, 인간에서 종양 성장을 억제하는 방법이 개시된다. 또한 본원에는 유효량의 Cdc7 억제제 SRA141을 조합 요법으로 투여함으로써 대상체, 예를 들어, 인간에서 종양 성장을 억제하는 방법이 개시된다.
정의
청구범위 및 명세서에 사용된 용어는 달리 명시되지 않는 한 하기 제시된 바와 같이 정의된다.
본 발명의 실시는 당업계의 기술 내에 있는 유기 화학, 분자 생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술의 사용을 포함한다.
본 출원에서, 다수의 기술적 명칭이 참조될 것이다. 모든 수명칭, 예를 들어, pH, 온도, 시간, 농도, 및 중량은 각각의 범위를 포함하여 전형적으로 적절한 경우에 예를 들어 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 5.0, 또는 10.0의 증분에 의해 (+) 또는 (-) 변경될 수 있는 근사치이다. 모든 수명칭은 용어 "약"이 앞에 오는 것으로 이해될 수 있다. 본원에 기재된 시약은 예시적이며 이러한 것의 등가물이 당업계에 알려져 있을 수 있다.
본 발명에 활용되는 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 보유하며; 라세미체, 부분입체이성질체, 기하학적이성질체, 위치이성질체 및 개별이성질체(예를 들어, 별도의 거울상이성질체)는 모두 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 본 발명의 화합물은 또한 이러한 화합물을 구성하는 원자 중 하나 이상에서 부자연스러운 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 예를 들어 제한없이 삼중수소(3H), 요오드-125(125I), 또는 탄소-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 방사성 표지될 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소 변이는 방사성 여부에 관계 없이 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
용어 "대상체"는 인간을 포함하는 임의의 포유동물, 및 유인원, 소, 말, 개, 고양이, 및 설치류를 포함하나 이에 제한되지 않는 관심 수의학 및 연구 동물과 같은 포유동물을 지칭한다.
대상체에게 약물 및/또는 요법을 "투여하는" 또는 "투여"라는 용어(및 이 어구의 문법적 등가물)는 의료 전문가에 의해 대상체에게 투여할 수 있거나, 자기 투여할 수 있는 직접 또는 간접 투여, 및/또는 대상체에게 약물 및/또는 요법을 처방하거나 또는 처방하도록 유도하는 행위일 수 있는 간접 투여를 지칭한다.
용어 "공투여"는 2 개 이상의 화합물을 동일한 기간 동안 약리학적 효과를 발휘하는 방식으로 투여하는 것을 지칭한다. 이러한 공투여는 2 개 이상의 화합물의 동시, 동시적, 또는 순차적 투여에 의해 달성될 수 있다.
장애 또는 질환을 "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 장애 또는 질환의 증상, 예를 들어, 종양 성장 또는 암을 완화하기 위한 단계를 취하거나, 또는 달리 임상 결과를 포함하여 대상체에 대한 일부 유익하거나 또는 바람직한 결과를 수득하는 것을 지칭한다. 임의의 유익하거나 또는 바람직한 임상 결과는 암의 하나 이상의 증상 또는 조건부 생존의 완화 또는 개선 및 종양 부하 또는 종양 부피의 감소; 질환 정도 감소; 종양 진행 또는 질환 진행의 지연 또는 늦추기; 종양 및/또는 질환 상태의 개선, 경감, 또는 안정화; 또는 다른 유익한 결과를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
용어 "동일 반응계내(in situ)" 또는 "시험관내"는 살아있는 유기체에서 분리되어 성장하는, 예를 들어, 조직 배양물에서 성장하는 살아있는 세포에서 발생하는 과정을 지칭한다.
용어 "생체내"는 살아있는 유기체 내에서 발생하는 과정을 지칭한다.
용어 "Cdc7"은 CDC7 유전자에 의해 암호화되는 세포 분열 주기 7 세린/트레오닌-단백질 키나제를 지칭한다.
증상 또는 증상들의 "감소"라는 용어(및 이 어구의 문법적 등가물)는 증상(들)의 심각도 또는 빈도를 감소시키거나, 또는 증상(들)을 제거하는 것을 지칭한다.
명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 점에 유의해야 한다.
본 발명의 방법
본원에는 Cdc7 억제제 SRA141을 투여함으로써 대상체, 예를 들어, 인간에서 종양 성장을 억제하는 방법이 개시된다. 화합물, 화합물을 포함하는 키트, 및 이의 사용 방법에 대한 상세한 설명은 하기에서 확인된다.
투여
본원에 개시된 바와 같이, 본 발명의 방법은 유효량의 SRA141을 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 치료 방법을 제공한다. 용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 질환의 증상을 완화하는 데 효과적인 양, 예를 들어 종양 성장을 억제하는 데 효과적인 양을 지칭한다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 최대 허용 용량(MTD) 미만이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 1000 mg/일 미만, 500 mg/일 미만, 또는 400 mg/일 미만이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 300 mg/일 미만, 200 mg/일 미만, 150 mg/일 미만, 100 mg/일 미만, 또는 75 mg/일 미만이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 324 mg/일 미만이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 324 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 적어도 10 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 10 내지 400 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 10 내지 324 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 40 내지 400 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 적어도 10 mg/일, 적어도 20 mg/일, 적어도 40 mg/일, 적어도 80 mg/일, 적어도 160 mg/일, 또는 적어도 320 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 적어도 15 mg/일, 적어도 25 mg/일, 적어도 50 mg/일, 적어도 75 mg/일, 적어도 100 mg/일, 적어도 150 mg/일, 적어도 200 mg/일, 적어도 250 mg/일, 적어도 300 mg/일, 또는 적어도 350 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 10 mg/일, 20 mg/일, 40 mg/일, 80 mg/일, 160 mg/일, 320 mg/일, 325 mg/일, 350 mg/일, 또는 400 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 15 mg/일, 25 mg/일, 50 mg/일, 75 mg/일, 100 mg/일, 150 mg/일, 200 mg/일, 250 mg/일, 300 mg/일, 또는 350 mg/일이다.
단일요법
일 구현예에서, 유효량의 Cdc7 억제제가 단일요법으로 투여된다.
일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 최대 허용 용량(MTD) 미만이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 1000 mg/일 미만, 500 mg/일 미만, 또는 400 mg/일 미만이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 300 mg/일 미만, 200 mg/일 미만, 150 mg/일 미만, 100 mg/일 미만, 또는 75 mg/일 미만이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 324 mg/일 미만이다. 일부 측면에서, SRA141 단일요법의 유효량은 324 mg/일이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 적어도 10 mg/일이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 10 내지 400 mg/일이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 10 내지 324 mg/일이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 40 내지 400 mg/일이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 적어도 10 mg/일, 적어도 20 mg/일, 적어도 40 mg/일, 적어도 80 mg/일, 적어도 160 mg/일, 또는 적어도 320 mg/일이다. 일부 측면에서, Cdc7 억제제 단일요법의 유효량은 적어도 15 mg/일, 적어도 25 mg/일, 적어도 50 mg/일, 적어도 75 mg/일, 적어도 100 mg/일, 적어도 150 mg/일, 적어도 200 mg/일, 적어도 250 mg/일, 적어도 300 mg/일, 또는 적어도 350 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141 단일요법의 유효량은 10 mg/일, 20 mg/일, 40 mg/일, 80 mg/일, 160 mg/일, 320 mg/일, 325 mg/일, 350 mg/일, 또는 400 mg/일이다. 일부 측면에서, SRA141 단일요법의 유효량은 15 mg/일, 25 mg/일, 50 mg/일, 75 mg/일, 100 mg/일, 150 mg/일, 200 mg/일, 250 mg/일, 300 mg/일, 또는 350 mg/일이다.
조합 요법
또한 본원에 개시된 바와 같이, 본 발명의 방법은 유효량의 SRA141을 투여하고 제2 유효량의 하나 이상의 추가 치료를 공투여하는 조합 요법을 포함한다.
추가 치료는 화학요법제를 투여하는 것, 항체 또는 항체 단편(예컨대 면역 체크포인트 억제제)을 투여하는 것, 방사선 치료를 투여하는, 및 이의 조합을 투여하는 것을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 추가 치료는 또한 DNA 폴리머라제 억제제, 수용체 티로신 키나제 억제제, 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 경로 억제제와 같은 항신생물제를 투여하는 것을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 항신생물제는 또한 트라메티닙과 같은 미토겐 활성화 단백질 키나제(MAPK) 경로 억제제를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 RXR 작용제 벡사로텐, 및 RAR 작용제 트레티노인과 같은 레티노이드 경로 조절인자를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 항-Bcl-2 제제(예를 들어, ABT-199)를 포함하나 이에 제한되지 않는 세포자멸사 유도인자를 포함하는 것과 같이 세포자멸사 조절인자를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 코판리십과 같은 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3 키나제(PI3K) 경로 억제제를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 BMN673과 같은 PARP 억제제를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 KU-60019와 같은 ATM 키나제 억제제를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 바라세르팁과 같은 오로라 B 키나제 억제제를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 단극성 방추체 1 키나제(Mps1)의 억제제(예를 들어, CFI-402257)와 같은 티로신 트레오닌 키나제(TTK) 억제제를 포함할 수 있다. 항신생물제는 또한 에를로티닙(Erlotinib)과 같은 표피 성장 인자(EGF)의 억제제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서 항신생물제는 젬시타빈이다. 일부 구현예에서 해당 항신생물제는 젬시타빈이 아니다.
추가 치료는 또한 항신생물제의 조합과 같은 추가 치료의 조합을 포함할 수 있다.
본 발명의 구체적 구현예에서, 유효량의 SRA141은 제2 유효량의 추가 치료와 함께 조합 요법으로서 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, 제2 유효량은 약 0.001 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 양이다. 일부 구현예에서 추가 치료의 제2 유효량은 0.001, 0.005, 0.010, 0.020, 0.050, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0 또는 15.0 mg/kg이다. 일부 구현예에서 추가 치료의 제2 유효량은 10 내지 2000 mg/m2/일이다. 일부 구현예에서 추가 치료의 제2 유효량은 50 내지 1250 mg/m2/일이다. 일부 구현예에서 추가 치료의 제2 유효량은 50 mg/m2/일, 100 mg/m2/일, 150 mg/m2/일, 200 mg/m2/일, 300 mg/m2/일, 400 mg/m2/일, 500 mg/m2/일, 600 mg/m2/일, 700 mg/m2/일, 800 mg/m2/일, 900 mg/m2/일, 1000 mg/m2/일, 1100 mg/m2/일, 또는 1250 mg/m2/일이다.
공투여된은 SRA141 및 추가 치료가 동시에 주어지고, SRA141 및 추가 치료가 순차적으로 주어지고, SRA141 및 추가 치료 중 하나 또는 둘 다가 간헐적으로 또는 연속적으로, 또는 동시에, 순차적으로, 간헐적으로 및/또는 연속적으로 중 임의의 조합으로 주어지는 방법을 포함한다. 간헐적은 또한 제제의 제1 투여 후 나중에 똑같은 제제의 또 다른 투여를 포함하기 때문에 당업자는 간헐적 투여가 반드시 순차적 투여와 동일하지 않음을 인식할 것이다. 더욱이, 간헐적 투여는 제1 제제가 다시 투여되기 전에 상이한 제제의 투여와 함께 제제의 제1 투여의 중단을 포함하기 때문에 당업자는 일부 측면에서 간헐적 투여가 또한 순차적 투여를 포함함을 이해한다. 또한, 당업자는 또한 연속 투여가 정맥내 점적 또는 공급 튜브 등을 포함한 다수의 경로에 의해 달성될 수 있음을 알 것이다.
또한 보다 일반적인 방식으로, 용어 "공투여된"은 대상체에게 Cdc7 억제제의 개별 투여 및 추가 치료의 개별 투여가 임의의 시간프레임 동안 중첩되는 임의의 및 모든 방법을 포함한다.
투약 경로
일부 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및/또는 추가 치료 중 하나, 또는 둘 다, 또는 이의 임의의 조합이 정맥내, 피하, 피부, 경구, 근육내, 및 복강내로 이루어진 군으로부터 선택된 경로에 의해 투여되는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및/또는 추가 치료 중 하나, 또는 둘 다, 또는 이의 임의의 조합이 정맥내로 투여되는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및/또는 추가 치료 중 하나, 또는 둘 다, 또는 이의 임의의 조합이 경구로 투여되는 방법을 제공한다.
당업자는 본 개시내용의 단위 투여 형태가 동일하거나 또는 상이한 물리적 형태로, 즉, 캡슐 또는 정제를 통해 경구로 및/또는 액체에 의해 경구로 또는 정맥내 주입 등을 통해 투여될 수 있음을 이해한다. 더욱이, 각 투여에 대한 단위 투여 형태는 특정 투여 경로에 의해 상이할 수 있다. Cdc7 억제제 및 추가 치료 중 하나, 또는 둘 다에 대한 여러 다양한 투약 형태가 존재할 수 있다. 상이한 의학적 상태가 상이한 투여 경로를 보장할 수 있기 때문에, Cdc7 억제제 및 본원에 기재된 추가 치료의 조합의 동일한 구성요소는 조성 및 물리적 형태가 정확하게 비슷할 수 있지만 상태를 완화하기 위해 상이한 방식으로 및 아마도 상이한 시간에 주어질 필요가 있을 수 있다. 예를 들어, 지속적 구역질, 특히 구토와 같은 상태는 경구 투약 형태를 사용하기 어렵게 만들 수 있으며, 이러한 경우에, 또 다른 단위 투여 형태, 아마도 흡입, 협측, 설하, 또는 좌제 경로를 대신에 또는 뿐만 아니라 이전에 또는 이후에 사용된 다른 투약 형태와 동일한 것 조차도 투여할 필요가 있을 수 있다. 구체적인 투약 형태는 화학적 안정성 또는 약동학과 같은 다양한 요인에 문제가 있을 수 있으므로, SRA141 및 추가 치료의 특정 조합에 대한 필요조건일 수 있다.
투약 일정
일 측면에서, SRA141 또는 추가 치료를 대상체에게 투여하는 빈도는 Q1d, Q2d, Q3d, Q4d, Q5d, Q6d, Q7d, Q8d, Q9d, Q10d, Q14d, Q21d, Q28d, Q30d, Q90d, Q120d, Q240d, 또는 Q365d를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 용어 "QnD 또는 qnd"는 "n" 일마다 1 회 약물 투여를 지칭한다. 예를 들어, QD(또는 qd)는 매일 1 회 또는 일일 1 회 투약을 지칭하고, Q2D(또는 q2d)는 격일마다 1 회 투약을 지칭하고, Q7D는 7 일마다 1 회 또는 1 주에 1 회 투약을 지칭하고, Q5D는 5 일마다 1 회 투약 등을 지칭한다. 일 측면에서, SRA141 및 추가 치료는 상이한 일정으로 투여된다.
또 다른 측면에서, SRA141 또는 추가 치료를 대상체에게 투여하는 빈도는 매주 5 일 투약 후 2 일 비투약; 매일 1 주 투약 후 1, 2, 또는 3 주 비투약; 매일 2 또는 3 주 투약 후 1, 또는 2 주 비투약; 매일 2 회 투약; 또는 주간 주기의 2 및 3 일에 투약을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일 측면에서, SRA141 및 추가 치료는 상이한 일정으로 투여된다.
일 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및/또는 추가 치료 중 하나 또는 둘 다, 또는 이의 임의의 조합을 간헐적으로 투여하는 방법을 제공한다. 일 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 또는 추가 치료 중 하나, 또는 둘 다, 또는 이의 임의의 조합을, 대상체에게 투여간 적어도 10 분, 15 분, 20 분, 30 분, 40 분, 60 분, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간, 12 시간, 14 시간, 18 시간, 24 시간, 36 시간, 48 시간, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일, 7 일, 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 3 주, 또는 4 주 지연으로 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 이러한 측면에서, 지연 투여는 SRA141 및/또는 추가 치료 중 하나 또는 둘 다 또는 이의 임의의 조합을 약 10 분 내지 약 365 일의 주어진 기간 동안 연속적으로 투여한 다음 약 10 분 내지 약 30 일의 주어진 기간 동안 투여하지 않는 패턴을 따른다. 일 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및/또는 추가 치료 중 하나 또는 임의의 조합을 간헐적으로 투여하면서 다른 것을 연속적으로 제공하는 방법을 제공한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141의 조합을 제2 유효량의 추가 치료와 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및 추가 치료를 동시에 투여하는 방법을 제공한다. 일 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141의 조합을 제2 유효량의 추가 치료와 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다. 이러한 측면에서, 조합은 또한 "공투여된"것이라고도 하는데 상기 용어는 대상체가 조합의 두 구성요소에 노출되는 임의의 및 모든 방법을 포함하기 때문이다. 그러나, 이러한 측면은 단지 하나의 제형 또는 조성물로 주어지는 조합으로 제한되지 않는다. 특정 농도의 SRA141 및 추가 치료는 특정 간격으로 전달하는 것이 더 유리할 수 있으며, 이와 같이, 유효량의 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료는 투여되는 제형에 따라 달라질 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및 추가 치료를 동시에 또는 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 제2 유효량의 추가 치료 후에 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 제2 유효량의 추가 치료를 유효량의 SRA141 후에 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 조합을 하나의 제형으로 투여하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 조합을 2 개의 조성물로 투여하는 방법을 제공하여 여기서 유효량의 SRA141은 제2 유효량의 추가 치료의 제형과 별개의 제형으로 투여된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 제2 유효량의 추가 치료 후에 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 제2 유효량의 추가 치료를 유효량의 SRA141 후에 순차적으로 투여하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, SRA141 및 추가 치료가 투여되고; 이후에 SRA141 및 추가 치료 둘 다가 적어도 24 시간 동안 간헐적으로 투여된다. 일부 측면에서, SRA141 및 추가 치료는 중복되지 않는 격일 일정으로 투여된다. 일부 측면에서, 추가 치료는 1 일에 투여되고, SRA141은 주간 일정의 2 및 3 일에 투여된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 제2 유효량의 추가 치료 후 4 시간 이내에 투여하는 방법을 제공한다. 일 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 제2 유효량의 추가 치료 후 10 분 이내, 15 분 이내, 20 분 이내, 30 분 이내, 40 분 이내, 60 분 이내, 1 시간 이내, 2 시간 이내, 4 시간 이내, 6 시간 이내, 8 시간 이내, 10 시간 이내, 12 시간 이내, 24 시간 이내, 2 일 이내, 4 일 이내, 6 일 이내, 8 일 이내, 10 일 이내, 12 일 이내, 14 일 이내, 21 일 이내, 또는 30 일 이내에 투여하는 방법을 제공한다. 일 측면에서, 본 개시내용은 제2 유효량의 추가 치료를 유효량의 SRA141 후 10 분 이내, 15 분 이내, 20 분 이내, 30 분 이내, 40 분 이내, 60 분 이내, 1 시간 이내, 2 시간 이내, 4 시간 이내, 6 시간 이내, 8 시간 이내, 10 시간 이내, 12 시간 이내, 24 시간 이내, 2 일 이내, 4 일 이내, 6 일 이내, 8 일 이내, 10 일 이내, 12 일 이내, 14 일 이내, 21 일 이내, 또는 30 일 이내에 투여하는 방법을 제공한다.
암 및 종양
암 치료 방법이 개시되어 있다. 따라서, 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 암이 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체(즉, 암이 있는 대상체 또는 암을 앓고 있는 대상체)에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 혈액암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 담관암종, 간세포암, 백혈병, 림프종, 골수종, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종, 또는 두경부암이다. 일부 측면에서, 암은 혈액암, 예컨대 급성 골수 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호산구성 백혈병, 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)이다. 일부 측면에서, 암은 AML이다.
일부 측면에서, 암은 고도 현미부수체 불안정성(MSI-H) 상태를 갖지 않는 것으로 분류될 수 있다. 용어 "현미부수체 불안정성"은 특이적 반복 DNA 서열(예를 들어, 짧은 탠덤 반복 또는 단순 서열 반복)에서 게놈 불안정성을 갖는 것을 특징으로 하는 종양을 지칭한다. 현미부수체 불안정성을 검출하는 방법은 Wang M. et al., Screening for Microsatellite Instability in Colorectal Cancer and Lynch Syndrome - A Mini Review; N A J Med Sci. 2016;9(1):5-11에 기재된 방법을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 알려진 임의의 방법을 포함한다. 특정 구현예에서, 현미부수체 불안정성은 모노뉴클레오티드 반복 마커(예를 들어, BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24 및 MONO-27, Promega MSI Multiplex System으로도 알려짐)의 검출을 특징으로 한다. 특정 구현예에서, 현미부수체 불안정성은 유사단형성 마커 및 디뉴클레오티드 반복 마커(예를 들어, BAT25, BAT26, D2S123, D5S346, 및 D17S250, Bathesda Panel로도 알려짐)의 검출을 특징으로 한다. MSI는 2 개 이상의 마커에서 불안정성이 MSI-H로 분류되고, 하나의 마커에서의 불안정성만이 MSI-L로 분류되고, 5 개의 마커에서 불안정성이 관찰되지 않으면 MSS로 분류되는 것을 사용하여 MSI-높음(MSI-H), MSI-낮음(MSI-L), 및 MS-안정(MSS)으로 분류될 수 있다. MSI는 또한 시험된 마커의 30% 초과가 불안정성(MSI-H)을 입증하는 경우 MSI-H, 시험된 마커의 10-30%가 불안정성을 입증하는 경우 MSI-L, 및 시험된 마커의 10% 미만이 불안정성을 입증하는 경우 MSS로 분류될 수 있다. MSI 상태는 5, 6, 7, 8, 9, 10 개, 또는 10 개 초과의 마커를 사용하여 시험될 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 MSS로 분류된다. 암은 또한 알려지지 않은 MSI 상태를 가질 수 있으며, 즉, 종양은 MSI-H 상태를 갖는 것으로 알려지지 않았다.
특정 구현예에서 용어 "현미부수체 불안정성"은 또한 적어도 하나의 참조 샘플과 비교하여 불일치 복구(MMR)의 손실과 상관관계가 있는 것으로 당업계에 알려진 하나 이상의 반복 DNA 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 종양을 지칭한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하는 방법을 제공하며 여기서 종양은 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 혈액암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 담관암종, 간세포암, 백혈병, 림프종, 골수종, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종, 또는 두경부암인 암으로부터 유래된다. 종양은 혈액암, 예컨대 급성 골수 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호산구성 백혈병, 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)으로부터 유래될 수 있다. 종양은 AML 암으로부터 유래될 수 있다. 종양은 전이성 대장암(mCRC)으로부터 유래될 수 있다. 종양은 MSI-H 상태를 갖는 것으로 분류되지 않은 전이성 대장암(mCRC)으로부터 유래될 수 있다. 종양은 Wnt 신호전달 경로 돌연변이, 예컨대 선종성 용종증(APC) 유전자 돌연변이, FAT1 돌연변이, FAT4 돌연변이, 또는 이의 조합을 가질 수 있다. 종양은 FBXW7 돌연변이를 가질 수 있다.
일부 측면에서, 암과 관련된 종양은 보관 또는 신선한 종양 생검을 사용하고 헤마톡실린 및 에오신으로 종양 절편의 조직화학적 염색(또는 유사한 염색)을 이용하고 종양이 수동으로 또는 자동 방법에 의해 현미경으로 검사할 때와 같이, 비정상적인 유사분열(즉, 뒤떨어지는 염색체, 후기 가교, 다극성 방추체)을 나타내는지 여부를 결정함으로써 염색체 분리 패턴을 조사하여 전향적으로 스크리닝되는 표현형을 포함한다. 일부 측면에서, 비정상적인 유사분열의 약력학적 마커는 SRA141 투여 후에 처리후 종양 생검을 사용하여 조직화학적 염색에 의해 결정된다. 처리후 생검은 pMCM2 모니터링을 위해 동일한 날에 생검을 수득하는 것과 같이, SRA141 투여한지 수 일 후에 수득될 수 있다(하기 참조).
대상체
본 개시내용은 유효량의 SRA141을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 제공한다. 본 개시내용은 유효량의 SRA141을 추가 치료와의 조합 요법으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 제공한다. 일부 측면에서, 대상체로부터의 종양은 투여 전에 유전자 검사/및 서열분석으로 스크리닝된다. 일부 측면에서, 대상체로부터의 종양은 투여 후에 유전자 검사 및/서열분석으로 스크리닝된다. 일부 측면에서, 대상체로부터의 종양은 투여 후 및 전에 모두 스크리닝된다. 일부 측면에서, 대상체로부터의 건강한 세포는 투여 전, 투여 후, 또는 둘 다에 유전자 검사 및/서열분석으로 스크리닝된다. 일부 측면에서, 대상체로부터의 종양은 현미부수체 또는 반복 DNA와 같은 특정 바이오마커의 발현 수준을 결정하기 위해 다른 생물학적 검사 또는 검정으로 스크리닝된다. 일부 측면에서, 대상체로부터의 종양은 유전자 검사 및/서열분석 둘 다 및 다른 바이오마커 검사 또는 검정으로 스크리닝된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 대상체가 포유동물인 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 대상체가 영장류인 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 대상체가 마우스인 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 대상체가 인간인 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 종양이 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 혈액암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 담관암종, 간세포암, 백혈병, 림프종, 골수종, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종, 또는 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암을 앓고 있는 인간에 있는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 암은 혈액암, 예컨대 급성 골수 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호산구성 백혈병, 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)이다. 일부 측면에서, 암은 AML이다. 일부 측면에서, 암은 전이성 대장암(mCRC)이다. mCRC는 MSI-H 상태를 갖지 않는 것으로 분류될 수 있다.
일부 측면에서, 대상체는 MSI-H 상태를 갖지 않거나, 염색체 불안정성(CIN) 표현형(예를 들어, CRC CIN 표현형은 일반적으로 현미부수체 불안정(MSI) CRC 종양으로부터 상호 배타적임), 방추체 체크포인트 어셈블리 결함, 유사분열 결함, G1/S 체크포인트 결함을 갖거나, Wnt 신호전달 경로 돌연변이(예를 들어, 선종성 용종증(APC) 유전자 돌연변이, FAT1 돌연변이, FAT4 돌연변이, 또는 이의 조합)를 갖거나, 또는 이의 조합과 같이, Cdc7 억제에 대한 민감도를 부여할 것으로 예상된 게놈 변이가 잠복해 있는 종양을 갖는다.
약동학
암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 SRA141 화합물의 400 ng/mL 초과, 600 ng/mL 초과, 1000 ng/mL 초과, 또는 1400 ng/mL 초과의 혈장 Cmax를 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 SRA141 화합물의 적어도 500 ng/mL, 적어도 600 ng/mL, 적어도 700 ng/mL, 적어도 800 ng/mL, 적어도 900 ng/mL, 적어도 1000 ng/mL, 적어도 1100 ng/mL, 적어도 1100 ng/mL, 적어도 1200 ng/mL, 적어도 1300 ng/mL, 적어도 1400 ng/mL, 또는 적어도 1500 ng/mL의 혈장 Cmax를 초래할 수 있다.
암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 SRA141 화합물의 3000 ng.h/mL 초과, 5800 ng.h/mL 초과, 11900 ng.h/mL, 16400 ng.h/mL 초과의 AUClast를 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 SRA141 화합물의 적어도 5000 ng.h/mL, 적어도 6000 ng.h/mL, 적어도 7000 ng.h/mL, 적어도 8000 ng.h/mL, 적어도 9000 ng.h/mL, 적어도 10000 ng.h/mL, 적어도 11000 ng.h/mL, 적어도 12000 ng.h/mL, 적어도 13000 ng.h/mL, 적어도 14000 ng-h/mL, 적어도 15000 ng-h/mL, 또는 적어도 16000 ng-h/mL의 AUClast를 초래할 수 있다.
암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 SRA141 화합물의 500 ng/mL 초과, 600 ng/mL 초과, 900 ng/mL, 또는 1300 ng/mL 초과의 종양내 농도를 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 SRA141 화합물의 적어도 500 ng/mL, 적어도 600 ng/mL, 적어도 700 ng/mL, 적어도 800 ng/mL, 적어도 900 ng/mL, 적어도 1000 ng/mL, 적어도 1100 ng/mL, 적어도 1100 ng/mL, 적어도 1200 ng/mL, 적어도 1300 ng/mL, 적어도 1400 ng/mL, 또는 적어도 1500 ng/mL의 종양내 농도를 초래할 수 있다.
키나제 억제
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 생체내 키나제 억제, 예를 들어, MCM2 인산화의 억제를 초래한다. 당업계에 알려진 바와 같이, S 기 및 후속 DNA 복제에 들어가기 전에, 다중 복제 기점이 게놈에 걸쳐 확립된다. 이들 복제 기점은 6 개의 소염색체 유지 단백질(MCM2-7)을 포함하는 다중 구성요소로 구성되어 있으며 통들어 사전-복제 복합체(사전-RC)로 지칭된다. 일단 사전-RC가 확립되면, Cdc7은 MCM2를 인산화하여, S 기 진입 및 DNA 복제를 개시한다. S 기를 진행함에 따라, Cdc7은 세포 주기의 다음 단계에 들어가기 전에 DNA 복제가 완료될 때까지 추가 복제 기점에서 MCM2를 인산화한다. 결과적으로, MCM2 인산화는 Cdc7 활성에 대한 대리 마커로서 사용될 수 있다.
본원에는 MCM2 인산화, 아미노산 잔기 Ser40 또는 Ser53에서 이러한 인산화의 생체내 억제를 초래하는 암의 치료 방법이 개시된다. MCM2 인산화의 생체내 억제는 암과 관련된 종양에서 일어날 수 있다. 종양에서 MCM2 인산화의 생체내 억제는 미처리된 종양 샘플에 비해 적어도 50%일 수 있다. 종양에서 MCM2 인산화의 생체내 억제는 미처리된 종양 샘플에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%일 수 있다. MCM2 인산화의 생체내 억제는 대상체의 피부에서 일어날 수 있다. MCM2 인산화의 생체내 억제는 웨스턴 블롯 분석, 면역조직화학(IHC), 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LC/MS), 또는 LC/MS/MS를 포함하나 이에 제한되지 않는 당업자에게 알려진 검정에 의해 측정될 수 있다. MCM2 인산화의 생체내 억제는 대상체의 생검에서 측정될 수 있다.
암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 대상체에서 표적을 벗어난 키나제의 특이적 억제를 초래하지 않을 수 있으며(즉, 피할 수 있으며), 여기서 표적을 벗어난 키나제는 WEE1, CDK7, CDK8, CDK9, 및 LATS2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 표적을 벗어난 키나제의 억제를 90% 미만으로 초래할 수 있다.
종양 억제
본 개시내용은 유효량의 화합물, 예를 들어, SRA141을 사용하여 종양 진행을 억제하고/하거나, 종양 응집 시 응집체의 크기를 감소시키고/시키거나, 종양 부피를 감소시키고/시키거나, 종양 직경을 감소시키고/시키거나, 달리 종양 성장을 억제하는 방법에 관한 것이다. 따라서, 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 암과 관련된 종양의 성장 억제를 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 암과 관련된 종양의 세포독성을 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 암과 관련된 종양의 성장 억제 및 세포독성을 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 암과 관련된 종양의 성장 억제 또는 세포독성을 초래할 수 있다. 암의 치료를 위해 본원에 기재된 방법은 완전 회귀 또는 부분 회귀를 포함하여 암과 관련된 종양의 회귀를 초래할 수 있다. 또한 본원에는 기저 질환, 예를 들어, 암을 치료하고, 대상체의 생존을 연장하는 방법이 제공된다.
일 구현예에서 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 성장의 억제를 필요로 하는 대상체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 적어도 47%까지 감소된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 적어도 93%까지 감소된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 종양 부피에 의해 측정 시 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38%, 40%, 42%, 44%, 46%, 48%, 50%, 52%, 54%, 56%, 58%, 60%, 62%, 64%, 66%, 68%, 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 또는 100%까지 감소된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 종양의 절대 크기에 의해 측정 시 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38%, 40%, 42%, 44%, 46%, 48%, 50%, 52%, 54%, 56%, 58%, 60%, 62%, 64%, 66%, 68%, 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 또는 100%까지 감소된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141을 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 해당 유형의 종양에 대한 종양 마커의 발현 수준에 의해 측정 시 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38%, 40%, 42%, 44%, 46%, 48%, 50%, 52%, 54%, 56%, 58%, 60%, 62%, 64%, 66%, 68%, 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 또는 100%까지 감소된다. 본 개시내용은 또한 유효량의 화합물 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료를 사용하여 종양 진행을 억제하고/하거나, 종양 응집 시 크기를 감소시키고/시키거나, 종양 부피를 감소시키고/시키거나, 종양 직경을 감소시키고/시키거나, 달리 종양 성장을 억제하는 방법에 관한 것이다. 또한 본원에는 기저 질환, 예를 들어, 암을 치료하고, 대상체의 생존을 연장하는 방법이 제공된다.
일 구현예에서 유효량의 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 성장의 억제를 필요로 하는 대상체에서 종양 성장을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료를 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 종양 부피에 의해 측정 시 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38%, 40%, 42%, 44%, 46%, 48%, 50%, 52%, 54%, 56%, 58%, 60%, 62%, 64%, 66%, 68%, 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 또는 100%까지 감소된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료를 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 종양의 절대 크기에 의해 측정 시 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38%, 40%, 42%, 44%, 46%, 48%, 50%, 52%, 54%, 56%, 58%, 60%, 62%, 64%, 66%, 68%, 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 또는 100%까지 감소된다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장을 억제하기 위해 유효량의 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료를 대상체에게 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 종양 성장은 해당 유형의 종양에 대한 종양 마커의 발현 수준에 의해 측정 시 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 24%, 26%, 28%, 30%, 32%, 34%, 36%, 38%, 40%, 42%, 44%, 46%, 48%, 50%, 52%, 54%, 56%, 58%, 60%, 62%, 64%, 66%, 68%, 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 92%, 94%, 96%, 98%, 또는 100%까지 감소된다.
임상 평가변수
본원에는 암을 치료하는 방법, 예를 들어, 대상체에서 종양 성장을 억제하고/하거나 종양 세포의 성장을 억제하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 방법은 임상적으로 관련된 평가변수를 초래한다.
종양 성장은 하나 이상의 생물학적 세포가 훨씬 더 빠르게 성장하고 분열하여 정상적이고 건강한 세포 분열 과정과 비교하여 세포 수 증가가 초래될 때 발생한다. 이 현상은 세포가 암 또는 전암과 같은 질환 상태에 있음을 나타낸다. 더욱이, 종양 성장은 종종 응집된 세포가 종양을 형성하기 전에 별개의 단계에서 일어난다.
당업자가 세포 복제율을 측정하기 위해 사용할 수 있는 여러 방법이 있다. 세포 내부의 전반적인 대사 활성은 표지된 생물학적 산물을 통해 측정될 수 있다. 예를 들어, 세포에 침투하고 특정 효소 및 다른 인자와 상호작용하여 검출가능한 산물을 생산할 수 있는 여러 시판중인 염료(예를 들어, MTT)가 있다. 또한, 세포 바이오마커가 세포에서 측정될 수 있다. 예를 들어 BrdU 검정은 티미딘 유도체를 세포 DNA에 혼입하고 항체로 검출될 수 있다. 증식 세포 핵 항원(PCNA)은 검출을 위한 또 다른 이러한 바이오마커이다. 태깅 기술 이외에도, 당업자는 또한 예를 들어, 현미경 또는 유세포 분석을 사용하여 세포를 계수할 수 있다.
일 측면에서, 세포 복제는 다음을 포함하는 임상 평가변수에 의해 측정된다: 삶의 질(QOL) 점수, 반응 지속기간(DOR, 임상적 이득률(CBR), 환자 기록 결과(PRO), 객관적 반응율(ORR) 점수, 무질병 생존(DFS) 또는 무진행 생존(PFS), 진행까지의 시간(TTP), 전체 생존, 치료 실패까지의 시간(TTF), RECIST 기준, 부분 관해(PR), 안정 병변(SD), 진행 병변(PD) 및/또는 완전 관해(CR). 임상 평가변수는 당업자에게 잘 알려진 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
일부 측면에서, CR은 임의의 병리학적 림프절(표적 또는 비표적)이 짧은 축에서 <10 mm로 감소되는 모든 표적 병변의 소실이다. 일부 측면에서, PR은 기준선 합계 직경을 참조하여 표적 병변 직경의 합계에서 적어도 30% 감소이다. 일부 측면에서, PD는 표적 병변 직경의 합계에서 적어도 20% 증가이며, 가장 작은 합계(가장 작은 경우 기준선 합계 포함)를 참조하여 취한다. 일부 측면에서, 합계는 20%의 상대적 증가에 더하여 적어도 5 mm의 절대 증가를 입증할 수 있다. 일부 측면에서, SD는 PR을 한정하기에 충분한 수축도 PD를 한정하기에 충분한 증가도 아니며, 가장 작은 합계 직경을 참조로 취한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장이 유효량의 SRA141 투여 후 적어도 약 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99, 또는 99.9% 감소되는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 % 감소가 하나 이상의 임상 평가변수의 측정(들)에 기초하여 계산되는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장이 MTT 검정에서 총 세포 계수의 증가 또는 감소에 의해 측정 시, 또는 ctDNA 검정에 의해 측정 시 유전적 프로파일의 변화에 의해, 유효량의 SRA141 투여 후 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99, 또는 99.9% 이하 또는 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99, 또는 99.9%까지 감소되는 방법을 제공한다.
일부 일반적인 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장이 유효량의 SRA141 투여 후 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99, 또는 99.9% 감소되는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 종양 성장이 MTT 검정에서 총 세포 계수의 증가 또는 감소에 의해 측정시, 또는 ctDNA 검정에 의해 측정 시 유전적 프로파일의 변화에 의해, 유효량의 SRA141 투여 후 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99, 또는 99.9% 감소되는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 10 μM 미만의 IC50 값 및/또는 1 μM 미만의 GI50 값을 초래하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 투여 후 24 시간에 10 μM 미만의 IC50 값 및/또는 1 μM 미만의 GI50 값을 초래하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 투여 후 48 시간에 10 μM 미만의 IC50 값 및/또는 1 μM 미만의 GI50 값을 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 적어도 1, 10, 25, 50, 100, 200, 400, 600, 800, 또는 1000의 AUC를 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 1, 3, 5, 10, 20, 40, 50, 60, 80, 90, 100, 200, 250, 300, 350, 또는 400 μM 이하의 IC50 값을 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 적어도 0.01, 0.1, 1, 3, 5, 10, 20, 40, 50, 60, 80, 90, 100, 200, 250, 300, 350, 또는 400 μM의 EC50 값을 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 약 1.001:1 내지 약 50:1, 약 1.1:1 내지 약 15:1, 약 1.2:1 내지 약 12:1, 약 1.2:1 내지 약 10:1, 약 1.2:1 내지 약 5:1, 또는 약 1.2:1 내지 약 3:1 범위의 치료 지수(TI) 값을 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 적어도 0.1 μM, 0.3 μM, 0.5 μM, 0.7 μM, 1 μM, 1.5 μM, 2 μM, 2.5 μM, 3 μM, 4 μM, 5 μM, 또는 10 μM의 GI50 값을 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 0.1, 0.5, 1, 2 μM, 2.5 μM, 3 μM, 4 μM, 5 μM, 또는 10 μM 이하의 최대 관찰된 반응(최대 반응) 값을 초래하는 방법을 제공한다.
종양 성장은 총 종양 부피에 관해 표현될 수 있다. 일반적으로 말하고 특정 종양 모델에 대해 특이적인 공식이 존재하며, 고형 종양이 다소 구형이라는 가정에 기초하여 당업자는 종양 부피를 계산하는 데 사용할 수 있다. 이와 관련하여, 당업자는 종양 부피를 측정하기 위해 다음과 같은 실험 도구를 사용할 수 있다: 초음파 영상, 수동 또는 디지털 캘리퍼스, 초음파 촬영, 컴퓨터 단층촬영(CT), microCT, 18F-FDG-microPET, 또는 자기 공명 영상(MRI). 예를 들어 Monga SP, Wadleigh R, Sharma A, et al. Intratumoral therapy of cisplatin/epinephrine injectable gel for palliation in patients with obstructive esophageal cancer. Am. J. Clin. Oncol. 2000;23(4):386-392; Mary M. Tomayko C., Patrick Reynolds, 1989. Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice. Cancer Chemotherapy and Pharmacology, Volume 24, Issue 3, pp 148-154; E Richtig, G Langmann, K Mullner, G Richtig and J Smolle, 2004. Calculated tumour volume as a prognostic parameter for survival in choroidal melanomas. Eye (2004) 18, 619-623; Jensen et al. BMC Medical Imaging 2008. 8:16; Tomayko et al. Cancer Chemotherapy and Pharmacology September 1989, Volume 24, Issue 3, pp 148-154; 및 Faustino-Rocha et al. Lab Anim (NY). 2013 Jun; 42(6):217-24를 참조하며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 유효량의 SRA141 투여 후 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99 또는 99.9%의 종양 부피 감소를 초래하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 의료 영상 기술에 의해 측정 시, 유효량의 SRA141 투여 후 적어도 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90, 95, 97, 99 또는 99.9%의 종양 크기 감소를 초래하는 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 투여가 투여로 인해 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 20, 24, 36, 또는 52 주 후 적어도 5%의 종양 부피 감소를 초래하는 방법을 초래하는 방법을 제공한다.
객관적 반응 또는 종양 성장을 평가하기 위해, 기준선에서의 전반적인 종양 부담을 추정하고 후속 측정을 위한 비교기로 사용할 수 있다. 측정가능한 질환은 적어도 하나의 측정가능한 병변의 존재에 의해 정의될 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하나 초과의 측정가능한 병변이 기준선에 존재할 때 모든 수반되는 기관을 대표하는 최대 총 5 개까지의 모든 병변(및 기관 당 최대 2 개의 병변)이 표적 병변으로서 식별되고 기준선에서 기록되고 측정되는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 표적 병변은 크기(가장 긴 직경을 갖는 병변)를 기준으로 선택되어 모든 수반되는 기관을 대표한다. 일부 측면에서, 표적 병변은 재현가능한 반복 측정에 적합한 것들이다. 일부 경우에, 가장 큰 병변은 도 3 Eisenhauer, et al.(2009)에 예시된 바와 같이, 재현가능하게 측정될 수 있는 다음으로 큰 병변이 선택되는 상황에서 재현가능한 측정에 적합하지 않다.
병리학적 림프절은 측정가능한 것으로 정의될 수 있으며 일부 경우에 결절이 CT 스캔에 의해 ≥15 mm의 짧은 축을 가질 때 표적 병변으로서 식별될 수 있다. 일부 구현예에서 결절의 짧은 축은 기준선 합계에 기여한다. 일부 구현예에서 결절의 짧은 축은 결절이 고형 종양에 의해 수반되는지를 판단하기 위해 방사선 전문의에 의해 사용되는 직경이다. 일부 구현예에서, 결절 크기는 영상이 획득되는 평면(예를 들어, 스캔의 획득 평면에 따라, CT 스캔의 경우 축 평면; MRI 스캔의 경우 축, 시상, 또는 관상 평면)에서 2차원으로 기록된다. 일부 구현예에서 측정치 중 더 작은 것이 짧은 축이다. 일부 구현예에서, ≥10 mm이지만 <15 mm인 짧은 축을 갖는 병리학적 결절은 비표적 병변으로 고려된다. 일부 구현예에서, <10 mm의 짧은 축을 갖는 결절은 비병리학적으로 고려되며 기록되거나 또는 추적되지 않는다.
일부 측면에서, 모든 표적 병변에 대한 직경의 합계(비결절 병변에 경우 가장 길고, 결절 병변의 경우 짧은 축)가 계산되고 기준선 합계 직경으로 기록된다. 일부 측면에서 림프절이 합계에 포함되어야 하는 경우, 짧은 축만이 합계에 추가된다. 일부 측면에서 기준선 합계 직경은 객관적인 종양 성장 또는 퇴행을 특징으로 하기 위한 참조로서 사용된다.
일부 측면에서, 모든 다른 병변 또는 질환 부위(병리학적 림프절 포함)은 비표적 병변으로서 식별되고 기준선에서 기록된다. 일부 경우에 측정이 필요하지 않으며 병변은 '존재', '부재', 또는 '명백한 진행'으로 추적된다. 일부 경우에, 동일한 기관을 수반하는 다중 비표적 병변이 기록될 수 있다(예를 들어 '다중 확대 골반 림프절' 또는 '다중 간 전이').
치료 유효량 및 단위 투여 형태
일반적으로, 본 기술의 화합물은 유사한 유용성을 제공하는 제제에 대해 허용되는 임의의 투여 방식에 의해 치료 유효량으로 투여될 것이다. 본 기술의 화합물, 즉, 활성 성분의 실제 양은 치료할 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적 건강, 사용된 화합물의 효능, 투여 경로 및 형태, 및 당업자에게 잘 알려진 다른 요인과 같은 수많은 요인에 따라 달라질 것이다. 약물은 적어도 1 일 1 회, 바람직하게는 1 일 1 또는 2 회 투여될 수 있다.
가장 효과적이고 편리한 투여 경로 및 가장 적절한 제형으로서 이러한 제제의 유효량은 일상적인 실험에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 다양한 제형 및 약물 전달 시스템이 당업계에서 이용가능하다. 예를 들어, Gennaro, A.R., ed. (1995) Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Co 참조.
치료 유효 용량은 당업계에 잘 알려진 다양한 기술을 사용하여 초기에 추정될 수 있다. 동물 연구에 사용되는 초기 용량은 세포 배양 검정에서 확립된 유효 농도에 기초할 수 있다. 인간 대상체에 적절한 투여량 범위는 예를 들어, 동물 연구및 세포 배양 검정에서 수득된 데이터를 사용하여 결정될 수 있다.
제제, 예를 들어 본원에 기재된 방법에 사용되는 화합물, 예를 들어, Cdc7 억제제 SRA141의 유효량 또는 치료 유효량 또는 용량은 대상체에서 증상 개선 및 생존 연장을 초래하는 제제 또는 화합물의 양을 지칭한다. 이러한 분자의 독성 및 치료적 효능은 세포 배양 또는 실험실 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해, 예를 들어, LD50(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료적으로 효과적인 용량), 및 최소 유효 농도(MEC) 또는 최대 유효 용량(MED)을 결정함으로써 결정될 수 있다.　 독성 대 치료적 효과의 용량 비는 치료 지수이며, MTD 또는 심각한 독성이 발생하지 않는 최고 용량(HNSTD) 대 MED의 비로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 제제가 바람직하다.
유효량 또는 치료 유효량은 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의가 추구하고 있는 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는 화합물 또는 약제학적 조성물의 양이다. 투여량은 특히 독성이 거의 또는 전혀 없는 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내에 속한다. 투여량은 이용되는 투약 형태 및/또는 활용되는 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로, 투여량, 및 투여량 간격은 대상체의 상태 특성을 고려하여 당업계에 알려진 방법에 따라 선택되어야 한다.
투여량 및 간격은 원하는 효과; 즉, 최소 유효 농도(MEC)를 달성하기에 충분한 활성 모이어티의 혈장 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조정될 수 있다. MEC는 각 화합물에 따라 다르지만 예를 들어, 시험관내 데이터 및 동물 실험으로부터 추정될 수 있다. MEC를 달성하는 데 필요한 투여량은 개인의 특징 및 투여 경로에 따라 다를 것이다. 국소 투여 또는 선택적 흡수의 경우, 약물의 효과적인 국소 농도는 혈장 농도와 관련되지 않을 수 있다.
투여되는 제제 또는 조성물의 양은 치료할 대상체의 성별, 연령, 및 체중, 고통의 중증도, 투여 방식, 및 처방 의사의 판단을 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
치료 유효량은 유효량의 SRA141 및 제2 유효량의 추가 치료 중 하나 또는 둘 다와 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 이는 SRA141의 유효량도 추가 치료의 제2 유효량도 단독으로 질환의 증상을 개선하는 양이 아니어야 하는 경우에도 본원에 기재된 바와 같은 방법이 효과적임을 본 개시내용에서 제공하기 때문이다(예를 들어, SRA141 및/또는 추가 치료의 양은 개별 요법으로서 투여되는 경우 "치료용량 이하" 양으로 고려될 수 있다). 그러나, 본 개시내용은 치료 유효량의 조합이 제공되어야 하며, 즉, 조합이 질환 증상의 치료에 적어도 영향을 미친다는 것을 제공한다.
단위 투여 형태는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 용어이다. 단위 투여 형태는 구체적 용도로 판매되는 약제학적 의약품이다. 의약품은 활성 성분(들) 및 임의의 비활성 구성요소를 포함하며, 대부분은 종종 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제 형태이다. 다중 단위 투여 형태는 별개의 의약품인 것으로 이해된다. 따라서, 하나의 단위 투여 형태는 예를 들어, 각 구성요소의 특정 비에서 250 mg의 SRA141 및 추가 치료의 조합일 수 있는 반면, 또 다른 완전히 별개의 단위 투여 형태는 예를 들어 상기 언급된 각 구성요소의 동일한 특정 비에서 750 mg의 SRA141 및 추가 치료의 조합이다. 따라서 하나의 단위 투여 형태에서 또 다른 단위 투여 형태까지, SRA141의 유효량 및 추가 치료의 제2 유효량은 모두 동일하게 유지될 수 있다. 물론 SRA141의 유효량 또는 추가 치료 제2 유효량 중 하나가 변경될 때, 단위 투여 형태가 구별된다.
일부 측면에서, 유효량은 SRA141 화합물에 고유하며, 즉, 추가 치료의 제2 유효량과 상이하다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 "치료 유효량"과 동등한 양 또는 치료적 및/또는 유익한 효과를 야기하는 양이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 "치료 유효량"이다. 일부 측면에서, 추가 치료의 제2 유효량은 "치료 유효량"이다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량 및 추가 치료의 제2 유효량은 둘 다 "치료 유효량"이 아니다. 일부 측면에서, 제2 유효량은 추가 치료에 고유하며, 즉, 제2 유효량은 상이한 추가 치료에 대해 상이한 양이다.
일부 측면에서, SRA141 및 추가 치료 조합은 하나의 단위 투여 형태로 제형화된다. 일부 측면에서, 동일한 단위 투여 형태는 적어도 4 시간, 6 시간, 8 시간, 12 시간, 24 시간, 1 일, 2 일, 3 일, 7 일, 10 일, 14 일, 21 일, 또는 30 일 동안 투여된다.
일부 측면에서, SRA141 및 추가 치료 조합은 적어도 2 개의 개별적으로 별개의 단위 투여 형태로 제형화된다. 일부 측면에서, 제1 유효량은 제2 단위 투여 형태에서 보다 제1 단위 투여 형태에서 상이하다. 일부 측면에서, SRA141의 유효량은 제2 단위 투여 형태에서와 같이 제1 단위 투여 형태와 동일하다.
일부 측면에서, 제1 단위 투여 형태는 제2 단위 투여 형태와 동일하다. 일부 측면에서, 제1 단위 투여 형태는 제2 및 제3 단위 투여 형태와 동일하다. 일부 측면에서, 제1 단위 투여 형태는 제2, 제3, 및 제4 단위 투여 형태와 동일하다.
본 발명의 화합물
일 측면에서, 본 개시내용은 화합물 SRA141의 사용 방법을 제공한다.
SRA141
화합물 SRA141은 또한 다음의 화학명으로 식별된다: 에틸 5-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸렌 4-옥소-2-{[4-(2,2,2-트리플루오로에틸)피페라지닐]아미노-4,5-디하이드로푸란-3-카르복실레이트.
SRA141은 국제 특허 공개 번호 WO 2012133802에 개시된 화합물이며, 이는 교시하는 모든 것에 대해 본원에 참조로 포함된다. 당업자는 국제 특허 공개 번호 WO 2012133802에서 SRA141을 합성하는 방법을 찾을 것이다.
SRA141 구조는 하기에 제시되어 있다:
Figure pct00002
약제학적 조성물
종양 성장을 억제하거나, 암의 진행을 억제하거나 또는 암을 치료하는 방법이 본원에 기재된다. 상기 방법은 유효량의 SRA141 및 임의적으로 제2 유효량의 추가 치료를 투여하는 것을 포함한다. SRA141 및 추가 치료는 각각 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 이들 약제학적 조성물은 활성 화합물(들) 이외에도 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 완충제, 안정화제 또는 당업자에게 잘 알려진 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 무독성이어야 하며 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 특성은 투여 경로, 예를 들어, 경구, 정맥내, 피부 또는 피하, 비강, 근육내, 복강내 경로에 따라 달라질 수 있다.
경구 투여를 위한 약제학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 젤라틴과 같은 고체 담체를 포함할 수 있다. 액체 약제학적 조성물은 일반적으로 물, 석유 유도체, 동물성 또는 식물성 오일, 미네랄 오일 또는 합성 오일과 같은 액체 담체를 포함한다. 생리 식염수, 덱스트로스 또는 다른 사카라이드 용액 또는 글리콜 예컨대 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 포함될 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 고통 부위에 주사를 위해, 활성 성분은 발열원이 없고 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액 형태일 것이다. 당업자는 예를 들어, 등장성 비히클 예컨대 나트륨 클로라이드 주사, 링거 주사, 락테이트화 링거 주사를 사용하여 적합한 용액을 제조할 수 있을 것이다. 필요에 따라, 방부제, 안정화제, 완충제, 산화방지제 및/또는 다른 첨가제가 포함될 수 있다.
조성물은 단독으로 또는 다른 치료와 조합하여, 치료될 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
본 기술은 임의의 특정 조성물 또는 약제학적 담체로 제한되지 않으며, 그 자체로 달라질 수 있다. 일반적으로, 본 기술의 화합물은 다음 경로 중 임의의 하나에 의해 약제학적 조성물로 투여될 것이다: 경구, 전신(예를 들어, 경피, 비강내 또는 좌제에 의해), 또는 비경구(예를 들어, 근육내, 정맥내 또는 피하) 투여. 바람직한 투여 방식은 고통 정도에 따라 조정될 수 있는 편리한 일일 투여량 레지멘을 사용한 경구이다. 조성물은 정제, 알약, 캡슐, 반고체, 분말, 지속 방출 제형, 용액, 현탁액, 엘릭시르(elixir), 에어로졸(aerosol), 또는 임의의 다른 적절한 조성물의 형태를 취할 수 있다. 본 기술의 화합물을 투여하기 위한 또 다른 바람직한 방식은 흡입이다.
제형의 선택은 약물 투여 방식 및 약물 물질의 생체이용률과 같은 다양한 요인에 따라 달라진다. 흡입을 통한 전달을 위해 화합물은 액체 용액, 현탁액, 에어로졸 추진체 또는 건조 분말로서 제형화되어 투여를 위한 적합한 디스펜서에 로딩될 수 있다. 분무기 흡입기, 정용량 흡입기(MDI) 및 건조 분말 흡입기(DPI)와 같은 여러 유형의 약제학적 흡입 장치가 있다. 분무기 장치는 치료제(이는 액체 형태로 제형화됨)를 대상체의 호흡기로 운반되는 안개로 분무되도록 하는 고속 공기 흐름을 생성한다. MDI는 전형적으로 압축 가스로 패키징된 제형이다. 작동 시, 장치는 압축 가스에 의해 측정된 양의 치료제를 방출하여, 설정된 양의 제제를 투여하는 신뢰할 수 있는 방법을 제공한다. DPI는 장치에 의해 호흡하는 동안 대상체의 흡기성 공기 흐름으로 분산될 수 있는 자유 유동 분말 형태의 치료제를 분배한다. 자유 유동 분말을 달성하기 위해, 치료제는 락토스와 같은 부형제와 함께 제형화된다. 측정된 양의 치료제는 캡슐 형태에 저장되고 각 작동에 따라 분배된다.
본 기술의 화합물의 약제학적 투약 형태는 예를 들어, 통상적인 혼합, 체질, 용해, 용융, 과립화, 당의정 제조(dragee-making), 정제화, 현탁화, 압출, 분무 건조, 가루화(levigating), 유화, (나노/마이크로) 캡슐화, 포획, 또는 동결건조 공정에 의해서와 같이 당업계에 잘 알려진 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 본 기술의 조성물은 약제학적 용도를 위해 활성 분자를 제제로 가공하는 것을 용이하게 하는 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 비활성 성분을 포함할 수 있다.
최근에, 표면적을 증가시켜 즉, 입자 크기를 감소시켜 생체이용률을 증가시킬 수 있다는 원칙에 기초하여 좋지 않은 생체이용률을 나타내는 약물을 위한 약제학적 제형이 특히 개발되었다. 예를 들어, 미국 특허 번호 제4,107,288호는 활성 물질이 거대분자의 가교된 매트릭스 상에 지지되는 10 내지 1,000 nm 크기 범위의 입자를 갖는 약제학적 제형을 기재한다. 미국 특허 번호 제5,145,684호는 약물 물질이 표면 개질제의 존재 하에 나노입자(평균 입자 크기 400 nm)로 분쇄된 다음 액체 매질에 분산되어 현저하게 높은 생체이용률을 나타내는 약제학적 제형을 제공하는 약제학적 제형의 생산을 기재한다.
조성물은 일반적으로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제와 조합된 본 기술의 화합물로 구성된다. 허용되는 부형제는 무독성이고, 투여를 보조하고, 청구된 화합물의 치료적 이익에 악영향을 미치지 않는다. 이러한 부형제는 임의의 고체, 액체, 반고체, 또는 에어로졸 조성물의 경우 당업자가 일반적으로 이용가능한 기체 부형제일 수 있다.
고체 약제학적 부형제는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 나트륨 클로라이드, 건조 탈지유 등을 포함한다. 액체 및 반고체 부형제는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 및 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들을 포함한 다양한 오일, 예를 들어, 땅콩유, 대두유, 미네랄유, 참깨유 등으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 액체 담체, 특히 주사가능한 용액용 액체 담체는 물, 염수, 수성 덱스트로스, 및 글리콜을 포함한다.
압축 가스는 본 기술의 화합물을 에어로졸 형태로 분산시키는 데 사용될 수 있다. 이 목적에 적합한 불활성 기체는 질소, 이산화탄소 등이다. 다른 적합한 약제학적 부형제 및 이의 제형은 Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 단지 예로서, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 및 테트라알킬암모늄을 포함하는 당업계에 잘 알려진 다양한 유기 및 무기 반대 이온으로부터 유도된 염, 및 분자가 염기성 작용기를 함유할 때 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 타르트레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말레에이트, 및 옥살레이트와 같은 유기 또는 무기 산의 염을 지칭한다. 적합한 염은 Stahl and Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use; 2002에 기재된 것들을 포함한다.
본 조성물을 바람직한 경우 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투약 형태를 함유하는 팩 또는 디스펜서 장치에 제시될 수 있다. 이러한 팩 또는 장치는 예를 들어, 블리스터 팩과 같은 금속 또는 플라스틱 호일, 또는 유리, 및 바이알과 같은 고무 마개를 포함할 수 있다. 팩 또는 디스펜서 장치는 투여를 위한 지침서가 동반될 수 있다. 양립가능한 약제학적 담체에 제형화된 본 기술의 화합물을 포함하는 조성물이 또한 제조되고, 적절한 용기에 배치되고, 지시된 상태의 치료를 위해 라벨링될 수 있다.
제형 내 화합물의 양은 당업자가 이용하는 전체 범위 내에서 달라질 수 있다. 전형적으로, 제형은 중량 퍼센트(wt %) 기준으로, 총 제형을 기준으로 본 기술의 화합물의 약 0.01-99.99 wt %를 함유할 것이며, 나머지는 하나 이상의 적합한 약제학적 부형제이다. 바람직하게는, 화합물은 약 1-80 wt % 수준으로 존재한다. 대표적인 약제학적 제형은 하기에 기재되어 있다.
제형 예
하기는 SRA141 및 추가 치료를 단독으로 또는 조합하여 함유하는 대표적인 약제학적 제형이다.
조성물은 단독으로 또는 다른 치료와 조합하여 치료될 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
키트
본 개시내용은 또한 SRA141 및, 임의적으로 추가 치료의 조합 및 사용 지침서를 포함하는 키트를 제공한다. 본 개시내용은 추가로 하나 이상의 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 제공하며 여기서 약제학적 조성물(들)은 SRA141 및 추가 치료, 및 사용 지침서를 포함하며, 임의적으로 조합은 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다.
키트의 개별 구성요소는 별도의 용기에 패키징될 수 있고, 이러한 용기와 관련하여, 약제학적 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태로 통지할 수 있으며, 통지는 제조, 사용 또는 판매에 대한 기관의 승인을 반영한다. 키트는 임의적으로 항원-결합 작제물에 대한 사용 방법 또는 투여 레지멘을 요약하는 지침서 또는 지시를 함유할 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 SRA141 및 추가 치료의 조합 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 키트를 제공한다.
키트의 하나 이상의 구성요소가 용액, 예를 들어 수용액, 또는 멸균 수용액으로 제공되는 경우, 용기 수단은 그 자체가 흡입제, 주사기, 피펫, 점안기, 또는 다른 유사한 기구일 수 있으며, 이로부터 용액이 대상체에게 투여되거나 또는 키트의 다른 구성요소에 적용되고 혼합될 수 있다.
키트의 구성요소는 또한 건조 또는 동결건조된 형태로 제공될 수 있으며 키트는 추가적으로 동결건조된 구성요소의 재구성을 위한 적합한 용매를 함유할 수 있다. 용기의 수 또는 유형에 관계없이, 본원에 기재된 키트는 또한 환자에게 조성물의 투여를 보조하기 위한 기구를 포함할 수 있다. 이러한 기구는 흡입제, 비강 분무 장치, 주사기, 피펫, 포셉, 계량 스푼, 점안기 또는 유사한 의학적으로 승인된 장치 비히클일 수 있다.
본원에 기재된 또 다른 측면에서, 본원에 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단, 예를 들어, 종양 성장 억제에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, iv. 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 용기(들)는 그 자체로 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 진단하는 데 효과적인 또 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유하고 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있다).
본원에 기재된 이 구현예에서 제조 물품은 조성물이 특정 병태를 치료하는 데 사용될 수 있다는 것을 나타내는 라벨 또는 패키지 삽입물을 추가로 포함한 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 제조 물품은 약제학적으로 허용되는 완충제, 예컨대 주사용 정균수(BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 및 주사기를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
폴리펩티드 및 핵산
본원에는 본원에 기재된 방법에 유용한 유전자, 예를 들어, Cdc7에 대한 유전자의 폴리펩티드 및 핵산 서열이 기재된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 유용한 폴리펩티드 및 핵산 서열은 본원에 기재되거나 또는 데이터베이스 수탁 번호에 의해 본원에 언급된 서열과 적어도 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 유용한 폴리펩티드 및 핵산 서열은 본원에 기재되거나 또는 데이터베이스 수탁 번호에 의해 본원에 언급된 서열과 100% 동일하다.
2 개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 맥락에서 용어 "퍼센트 동일성"은 하기 기재된 서열 비교 알고리즘(예를 들어, BLASTP 및 BLASTN 또는 당업자가 이용가능한 다른 알고리즘) 중 하나를 사용하거나 또는 육안 검사에 의해 측정 시, 최대 상응에 대해 비교 및 정렬될 때, 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 2 개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 적용에 따라, 퍼센트 "동일성"은 비교되는 서열의 영역에 걸쳐, 예를 들어, 기능적 도메인에 걸쳐 존재할 수 있거나, 또는 대안적으로, 비교될 2 개 서열의 전체 길이에 걸쳐 존재할 수 있다. 서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열이 테스트 서열과 비교되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 테스트 및 참조 서열을 컴퓨터에 입력하고, 필요에 따라 하위서열 좌표를 지정하고, 서열 알고리즘 프로그램 매개변수를 지정한다. 그 다음에 서열 비교 알고리즘을 지정된 프로그램 매개변수에 기초하여 참조 서열 대비 테스트 서열(들)에 대한 퍼센트 서열 동일성을 계산한다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어, Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘에 의해, Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)의 유사성 방법 검색에 의해, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 구현(위스콘신주 매디슨 575 사이언스 드라이브 소재의 Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 육안 검사(일반적으로 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (2003) 참조)에 의해 수행될 수 있다. 퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하는 데 적합한 알고리즘 중 하나의 예는 BLAST 알고리즘이며, Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립 생물공학 정보센터(www.ncbi.nlm.nih.gov)를 통해 공개적으로 이용가능하다.
실시예
하기는 본 발명을 수행하기 위한 구체적인 구현예의 예이다. 예는 예시적인 목적으로만 제공되며, 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하려는 의도는 없다. 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하려 노력하였지만, 일부 실험적 오류 및 편차가 물론 허용되어야 한다.
본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한, 당업계의 기술 내에서 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 통상적인 방법을 이용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 자세히 설명되어 있다. 예를 들어, T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., current addition); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990); Carey and Sundberg Advanced Organic Chemistry 3 rd Ed.(Plenum Press) Vols A and B(1992) 참조.
약어
표 1 - 약어
Figure pct00003
실시예 1: 마우스 AML 이종이식편 모델의 SRA141 처리
단일요법으로서 Cdc7 억제제(화합물 I-D, SRA141로도 명명됨) 단독의 효능을 급성 골수 백혈병 세포주인 MV-4-11을 사용하여 이종이식편에서 테스트하였다. MV-4-11 이종이식편 종양을 보유하는 암컷 BALB/c 마우스에 SRA141을 다양한 용량으로 투여하였다. 5-6 주령의 60 마리의 암컷 BALB/c 마우스에 MV-4-11 종양 세포를 피하로 접종하였다. 마우스 당 5.0 x 106 개 세포(1:1의 비율로 Matrigel®과 혼합)를 마우스에 접종하였다. 32 마리의 마우스를 선택하여 4 개 그룹으로 무작위화하고 (i) 비히클 대조군(0.2 M HCl / 0.5% MC400) 또는 (ii) 3 주 동안 SRA141 30 또는 60 mg/kg BID 또는 (iii) 3 주 동안 SRA141 120 mg/kg QD를 경구로 투여하였다(처리 그룹 당 n = 8 마리). 마우스의 체중을 그룹화 전에 주 당 1 회 기록하였고 마우스 상태를 치료 동안 매일 기록하였다. 투약 21 일 후, 종양 중량 측정을 위해 마우스를 희생시켰다. 종양 성장 억제를 연구 마지막 날인 21 일에 계산하였다.
도 1a에 나타낸 바와 같이, 21 일에 4 개 그룹의 평균 종양 부피는 비히클 및 30 mg/kg BID, 60 mg/kg BID 및 120 mg/kg QD mg/kg 용량 수준에서 각각 1612.66 mm3, 655.68mm3, 300.77 mm3 and 530.83 mm3였다. 개별 마우스에 대한 종양 중량을 또한 계산하였다(도 1b). 따라서, SRA141 투여는 30 mg/kg BID, 60 mg/kg BID 및 120 mg/kg QD mg/kg 용량 수준에서 각각 59%, 81% 및 67%의 종양 성장 억제를 초래하였다.
모든 처리는 유의한 체중 손실 없이 용인되었다(도 1c). 21 일에 4 개 그룹에 대한 평균 상대 체중 변화(RCBW)는 각각 12.11%, 16.39%, 3.18% 및 8.47%였다.
이들 결과는 단일요법으로서 SRA141 단독이 급성 골수 백혈병의 치료를 위한 효과적인 요법을 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 2: 래트 AML 이종이식편 모델의 SRA141 처리
단일요법으로서 Cdc7 억제제(화합물 SRA141)의 효능을 급성 골수성 백혈병(AML)의 래트 이종이식편 모델에서 테스트하였다(도 2). 암컷 rnu/rnu 래트에 1 X 107 개의 MV-4-11 인간 급성 골수성 백혈병 세포를 피하로 접종하였다. MV-4-11 세포를 1:1 Matrigel®에서 0.1 mL PBS의 전체 부피로 주사하였다. 래트는 종양의 평균 크기가 300-400 mm3에 도달했을 때 SRA141 처리를 시작하였다. MV-4-11 종양 이종이식편을 보유하는 래트에 (i) 비히클 대조군(0.5% CMC-Na / 1% Poloxamer 188) 또는 (ii) 4 주 동안 7-일 주기의 연속 5 일 동안 SRA141 75 mg/kg BID 또는 (iii) 4 주 동안 7-일 주기의 연속 5 일 동안 SRA141 150 mg/kg QD를 경구로 투여하였다(처리 그룹 당 n = 10 마리). 종양 부피 측정을 격주로 수행하였고 체중 측정을 15 일까지 격주로 수행한 다음 연구 종료일까지 매일 수행하였다. 종양 성장 억제는 연구 마지막 날인 42 일에 계산하였다.
도 2a에 나타낸 바와 같이, 75 mg/kg SRA141(86.1%TGI) 및 150 mg/kg SRA141(86.7%TGI)로 처리된 래트에서 유의한 종양 성장 억제(TGI)를 관찰하였다. 75 mg/kg SRA141로 처리된 래트에 대한 추가 연구에서 처리 27 일에 92%의 TGI 및 처리 34 일에 85%의 TGI를 관찰하였다. 중앙 종양 부피는 비히클 대조군 그룹의 경우 13247(n=10)이었고, SRA141 75 mg/kg으로 처리된 그룹의 경우 1838(n=8)이었고 SRA141 150 mg/kg으로 처리된 그룹의 경우 1764(n=9)였다. 개별 래트 당 각 처리에 대한 결과는 처리 과정에 걸쳐 나타내었다(도 2c). 특히, SRA141 75 mg/kg BID 처리는 1 번의 완전 회귀(종양 부피는 3 회 연속 측정 동안 < 13.5 mm3) 및 3 번의 부분 회귀(종양 부피는 3 회 연속 측정 동안 초기 부피의 < 50%)를 생성하였다. 연구 종료를 위해 완전 회귀를 지속하였다. SRA141 150 mg/kg QD 처리는 연구 완료 시 측정가능한 종양이 없는 1 마리의 동물에서 2 번의 부분 회귀를 생성하였다.
일반적으로, 모든 처리는 유의한 체중 손실없이 잘 용인되었다(도 2b). 연구 과정 동안 3 마리 동물이 죽은 것으로 발견되었다(각각 75 mg/kg BID에서 n = 2 및 150 mg/kg BID 투약 그룹에서 n = 1). 이러한 사망 원인은 미처리와 관련된 것으로 분류되었다.
이들 결과는 단일요법으로서 SRA141이 AML의 치료를 위한 효과적인 요법을 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 3: 다양한 암 세포주의 SRA141 처리
세포 생존력에 대한 SRA141의 농도 의존적 효과를 72-시간 약물 배양 기간으로 CellTiter-Glo™ 발광 검정(Promega)을 활용하여 235 개 암 세포주 패널에서 결정하였다. 50% 억제 농도(IC50)를 상이한 농도에서 SRA141과 함께 배양 후 Cell Titer-Glo® 발광 세포 생존력 검정을 사용하여 암 세포주에서 결정하였다.
SRA141은 방광(5673, RT112/84), 육종(143B, CADO-ES1, RD-ES, A673), 결장 및 맹장(Colo-205, DLD-1, LS1034, SK-CO-1, SNU-C1), 신장(UO.31), 두경부(CNE-2Z, RPMI-2650), 흑색종(A2058, A875), 및 위(HGC-27) 계통의 것들을 포함하는 고형 종양 세포주 범위에서 강력한 억제 활성(IC50 < 3 μM)을 입증하였다.
또한 유의한 활성을 혈액 유래 세포주에서 관찰하였다. 테스트된 59 개의 혈액암 세포주에 대한 결과는 도 3a에 제시되어 있다. 이들 결과는 단일요법으로서 SRA141 단독이 혈액암, 예컨대 급성 골수 백혈병(도 3a, "C"로 나타낸 세포주) 및 만성 호산구성 백혈병(도 3a, "L"로 나타낸 세포주)의 치료에 효과적인 요법을 제공할 수 있음을 입증한다. 또한 i ALL 세포주(RS411, SUP-B15, Reh) 및 다른 백혈병 및 림프종(KHYG-1 및 JeKo-1)에서 유의한 활성을 관찰하였다.
결정된 IC50 값의 요약은 도 3b에 요약되어 있고 세포 유형별로 구분된다. 전반적으로, 혈액암 세포주는 고형 종양 세포주보다 높은 민감도를 나타냈고, 후자 내에서, 대장암 세포주가 그 중에서 가장 민감하였다.
Colo-205 결장암 세포 대 정상 인간 진피 섬유모세포 세포(NHDF)에서 SRA141의 차등 세포독성 활성을 0.03 내지 33.3 μM(48 시간 배양) 범위의 약물 농도에서 평가하였다. 처리 후, 프로피듐 요오다이드로 표지된 세포를 유세포 분석에 의해 분석하여 세포자멸사-매개 DNA 단편화의 결과로서 하위-G1 분획에서 발견된 죽어가는 세포의 백분율을 결정하였다. 도 3c에 나타낸 바와 같이, 암 및 정상 세포 사이의 SRA141에 대한 민감도에서 뚜렷한 차이가 관찰되었다. 특히, 암 세포의 무려 62%가 죽어가고 있으며 1 μM 내지 10 μM의 화합물 농도에서 하위-G1 분획에서 발견되었다. 대조적으로, Cdc7 억제 후 비형질전환된 세포의 최소 세포독성을 나타내는 공개된 보고서와 일치하는(Montagnoli, 2004), 하위-G1 분획에 의해 결정 시 정상 세포의 10% 미만에서 세포자멸사가 있었다. 따라서, 이러한 발견은 종양 및 비형질전환된 조직 사이의 SRA141에 대한 잠재적인 치료 지수를 뒷받침한다.
도 3c, 파트 B에 나타낸 바와 같이, 2 가지 상이한 생존력 검정을 사용한 실험은 SRA141이 수많은 세포주 대 다른 Cdc7 억제제인 TAK-931 및 LY-3177833에서 필적할만하거나 또는 우수한 시험관내 활성을 가짐을 입증하였다. 종합하면, SRA141은 여러 적응증에 걸쳐 수많은 세포주에서 강력한 항증식 활성을 입증하였다.
SRA141의 항증식 활성을 ATP 수준(CTG); 대사 활성(CellTiter-Blue(CTB)); 세포의 DNA 함량(CyQuant); 및 에스테라제 활성(Calcein AM)을 측정하도록 설계된 4 가지 직교 검정을 사용하여 7 개의 세포주(Colo-205, SW620, SNU-398, NCI-H716, MDA-MB-231, NCI-H1573 및 SW1116)에서 추가로 특성화하였다. 각 검정 형식 내에서 세포주의 상대적 민감도는 일반적으로 일치하였다. 도 3d에 나타낸 바와 같이, SRA141 효능의 일관된 증가를 테스트된 모든 검정 및 세포주에 걸쳐 72 시간(왼쪽 칼럼)과 비교할 때 144 시간(오른쪽 칼럼)의 더 긴 처리 지속시간에서 관찰하였으며, 이는 연속 표적 적용범위가 최적의 항종양 활성에 필요할 수 있음을 시사한다. 단일요법 SRA141 IC50을 또한 SRA141에 대한 상이한 노출 시간 후 144 시간에 CTG 및 CyQuant에 의해 결정하였다. 도 3e에 나타낸 바와 같이, 앞선 평가와 일치하여, SRA141 효능은 24 시간을 넘어 치료 지속기간에 따라 증가하였다(24 시간 왼쪽 칼럼, 48 시간 중간 칼럼, 또는 72 시간 오른쪽 칼럼).
실시예 4: CRC의 환자 유래 이종이식편 마우스 모델의 SRA141 처리
단일요법으로서 Cdc7 억제제(화합물 SRA141)의 효능을 대장암(CRC)의 환자 유래 이종이식편(PDX) 모델에서 테스트하였다. CTG-1009 환자 유래 APC- 및 TP53-돌연변이체 대장 종양 이종이식편을 보유한 암컷 nu/nu 마우스에 (i) 비히클 대조군(0.1 M HCl / 0.5% MC) 또는 (ii) 28 일 동안 SRA141 120 mg/kg QD 또는 (iii) 28 일 동안 7-일 주기의 연속 2 일 동안 SRA141 150 mg/kg QD를 투여하였다(SRA141 처리 그룹 당 n = 8 마리; 비히클 대조군 그룹의 경우 n = 6 마리; 챔피언 연구 1250-003). 종양 성장 억제를 연구의 마지막 날인 32 일에 계산하였다. 체중 손실로 인해 SRA141 120 mg/kg QD 및 150 mg/kg QD 그룹에서 다수의 동물에 대한 투약을 일시적으로 중단하였다(도 4b). 이러한 투약 휴지기는 SRA141 120 mg/kg QD 및 150 mg/kg QD 처리 그룹에서 각각 1-3 일(n = 1 및 3 마리 동물), 4-8 일(n = 7 및 0 마리 동물) 범위였다.
도 4a에 나타낸 바와 같이, SRA141 투여는 120 mg/kg QD 및 150 mg/kg QD 용량 수준에서 각각 49% 및 36%의 종양 성장 억제를 초래하였다.
SRA141 후 관찰된 평균 종양 성장 억제(TGI)(120 mg/kg, 5-7D 범위의 투여 휴지기에 투약된 QD 5D 및 후속 QD 투약)는 49.4%(P=0.0057)였다. 실험 시간 동안 4 또는 6 회 투약된 SRA141은 D32에 35.8%의 평균 TGI를 초래하였다(P=0.0385). SRA141 후 관찰된 평균 TGI(120 mg/kg, 5-7D 범위의 투여 휴지기에 투약된 QD 5D 및 후속 QD 투약)는 49.4%(P=0.0057)였다. 평균 비히클 종양 부피(TV)의 개별 TGI는 23.5, 31.3, 47.8, 50.8, 59.9, 63.6 및 68.6%였다. 실험 시간 동안 4 또는 6 회 투약된 SRA141은 D32에 35.8%의 평균 TGI를 초래하였다(P=0.0385). 4 회 투약된 3 마리의 마우스는 평균 비히클 TV로부터 12.4, 27.2 및 53.2%의 TGI를 가졌다. 6 회 용량을 받은 5 마리의 마우스는 평균 비히클 TV로부터 15.6, 18.2, 48.2, 65.2, 및 71.2%의 TGI를 가졌다. 개별 마우스 당 각 처리에 대한 결과는 처리 과정에 걸쳐(도 5) 및 32 일(도 6)로 제시된다. 따라서, SRA141을 사용한 단일요법은 연구 D32에 결정 시 유의한 종양 성장 억제(TGI)를 초래하였다.
일반적으로, 모든 처리는 비히클(닫힌 원)에 비해 유의한 체중 손실 없이 처리 종료까지 잘 용인되었다. 120 mg/kg 그룹(닫힌 사각형)에서 초기 5 일 투약 후 중간정도 체중 손실이 관찰되었지만 며칠 약물 휴지기 후 비히클 수준으로 회복되었다(도 4b).
이들 결과는 단일요법으로서 SRA141이 APC 및 TP53 돌연변이된 CRC 설정에서 대장암 치료를 위한 효과적인 요법을 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 5: CRC의 환자 유래 이종이식편 래트 모델의 SRA141 처리
단일요법으로서 Cdc7 억제제(화합물 SRA141)의 효능을 대장암의 래트 이종이식편 모델(CRC)에서 테스트하였다(도 7). 암컷 Rowett 누드 래트에 2 X 107 개의 COLO-205 인간 대장 암종 세포를 피하로 접종하였다. 모든 래트는 종양 세포 주사 24 시간 전에 감마 조사(4Gy)를 받았다. COLO-205 세포를 1:1 Matrigel®로 0.2 mL PBS에 주사하였다. Colo-205 종양 이종이식편을 보유하는 암컷 누드 래트에 (i) 비히클 대조군(0.5% CMC-Na / 1% Lutrol F-68) 또는 (ii) 6 주 동안 7-일 주기의 연속 5 일 동안 SRA141 150 mg/kg 1 일 1 회(QD) 또는 (iii) 6 주 동안 7-일 주기의 연속 5 일 동안 SRA141 75 mg/kg 1 일 2 회(BID)를 경구로 투여하였다(처리 그룹 당 n = 7). 종양 성장 억제를 모든 비히클 대조군 동물이 연구에 남아있는 마지막 날인 31 일에 계산하였다. 종양 부피 측정 및 체중 측정을 격주로 수행하였다.
도 7a에 나타낸 바와 같이, SRA141의 투여는 150 mg/kg QD 및 75 mg/kg BID 용량 수준에서 각각 50% 및 93%의 유의한 종양 성장 억제를 초래하였다. 완전 종양 회귀가 7 마리 래트 중 4 마리에서 관찰되었다. 또한, 완전 종양 회귀(3 회 연속 측정 동안 측정가능한 종양이 없는 것으로 정의됨)가 7 마리 마우스 중 4 마리에서 관찰되었고 75 mg/kg BID 용량에서 7 마리 마우스 중 1 마리에서 부분 회귀(종양 부피는 3 일 연속 측정 동안 초기 부피의 < 50%)가 관찰되었다. 모두 4 번의 완전 회귀가 연구 완료까지 지속되었다.
도 7b에 나타낸 바와 같이, 대략 1.2 μM의 종양 SRA141 농도는 비히클로 처리된 래트와 비교하여 인산화된 MCM2(세린 53)에서 대략 505 감소를 초래하였으며, 이는 Cdc7의 선택적 억제가 종양 세포 생존과 양립할 수 없음을 시사한다. Colo-205 종양-보유 래트를 단일 용량의 SRA141 또는 비히클로 처리하고 12 시간 후에 종양을 수집하였다. 처리 그룹 당 3 마리 동물로부터 제조된 종양 균질물을 LC/MSMS 또는 웨스턴 블롯으로 분석하였다. 결과는 단일요법으로서 SRA141이 대장암 치료를 위한 효과적인 요법을 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 6: 추가 항신생물제와 SRA141 조합
항신생물제와 조합하여 암 세포에 민감하게 만드는 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, 인간 암 세포에서 실험을 수행하였다.
조합 평가 방법:
조합 스크린을 SRA141 및 파트너 화합물에 대한 공처리 투약 일정을 사용하여 수행하였다. 피증강제(SRA141) 및 증강제(파트너 화합물)를 모두 시간 0(0 시간)에 첨가하였다. 세포를 전체 72-시간 처리 시간 동안 SRA141 및 증강제에 노출시켰다. 모든 데이터 점을 자동화 과정을 통해 수집하고 품질 관리를 적용하고 독점 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 검정 플레이트가 하기 품질 관리 표준을 통과하는 경우 허용하였다: 상대 원시 값은 전체 실험 전반에 걸쳐 일관되었고, Z-인자 점수는 0.6 초과였으며 미처리/비히클 대조군은 플레이트에서 일관되게 거동하였다.
성장 억제(GI)를 세포 성장의 척도로 활용하였다. GI 백분율을 하기 테스트 및 방정식을 적용하여 계산하였다:
Figure pct00004
여기서 T는 72 또는 96 시간에 테스트 물품에 대한 신호 측정이고, V는 미처리/비히클-처리된 대조군 측정이며, V0은 시간 0에 미처리/비히클 대조군 측정(또한 구어로 T0 플레이트로 지칭됨)이다. 이 공식은 미국 국립 암연구소(National Cancer Institute)의 NCI-60 고처리량 스크린에서 사용된 성장 억제 계산에서 파생된다. 0%의 GI 판독값은 성장 억제가 없음을 나타내고 72 또는 96 시간에 T 판독값이 각각의 기간에서 V 판독값과 필적할만한 경우에 발생할 것이다. GI 100%는 완전 성장 억제(세포정지성)를 나타내고 이 경우 72 또는 96 시간 동안 화합물로 처리된 세포는 T0 대조군 세포와 동일한 평가변수 판독값을 가질 것이다. 200%의 GI는 배양 웰에서 모든 세포의 완전 사멸(세포독성)을 나타내며 이 경우 72 또는 96 시간에 T 판독값은 T0 대조군(0 부근 또는 그 지점에서의 값)보다 낮을 것이다. 이들 GI 계산을 조합 스크린에 대한 모든 단일 제제 및 조합 데이터 분석에 사용하였다.
세포 생존력 척도로서의 억제: 0%의 억제 수준은 처리에 의한 세포 성장의 억제가 없음을 나타낸다. 100%의 억제는 처리 창 동안 세포 수의 배가가 없음을 나타낸다. 세포정지성 및 세포독성 처리 둘 다는 100%의 억제 백분율을 산출할 수 있다. 억제 백분율은 다음과 같이 계산된다: I=1-T/U, 여기서 T는 처리이고 U는 미처리이다.
상승작용 점수 분석
로에베 상가성(Loewe additivity)을 초과하는 조합 효과를 측정하기 위해, 스칼라 측정을 사용하여 상승작용 점수로 명명된 상승적 상호작용의 강도를 특성화하였다. 상승작용 점수는 다음과 같이 계산된다:
Figure pct00005
매트릭스에서 각 구성요소 제제 및 조합 점에 대한 분획 억제는 모든 비히클-처리된 대조군 웰의 중앙값에 대해 계산된다. 상승작용 점수 방정식은 상가성에 대해 로에베 모델을 사용하여 구성요소 제제의 활성으로부터 수치적으로 파생된 모델 표면을 초과하는 매트릭스의 각 점에서 실험적으로 관찰된 활성 부피를 통합한다. 상승작용 점수 방정식(상기)에서 추가 용어를 사용하여 개별 제제에 사용된 다양한 희석 인자에 대해 정규화하고 전체 실험에 걸쳐 상승작용 점수를 비교하였다. 양성 억제 게이팅 또는 Idata 승수의 포함은 0 효과 수준에 가까운 노이즈를 제거하고, 높은 활성 수준에서 발생하는 상승적 상호작용에 대한 결과를 편향시킨다. 더 높은 최대 성장 억제(GI) 효과가 있는 조합 또는 낮은 농도에서 상승적인 조합은 더 높은 상승작용 점수를 가질 것이다. 기준선 자기-교차 값을 통계적으로 대체하는 상승작용 점수와의 조합은 상승적으로 고려될 수 있다. GI 효과의 크기는 검사된 각 세포주에 대해 달라지는 세포의 성장 속도와 연관될 수 있다.
해당 효과에 도달하는 데 필요한 단일 제제 용량과 비교할 때, 원하는 효과 수준을 달성하기 위해 조합에 필요한 약물이 얼마나 훨씬 적은지를 입증하는 아이소볼로그램을 사용하여 효능 이동을 평가하였다. 표시된 억제 수준을 교차하는 것에 상응하는 농도의 유전자좌를 식별함으로써 아이소볼로그램을 그렸다. 이것은 다른 단일 제제의 농도에 걸쳐 용량 매트릭스에서 각 단일 제제 농도에 대한 교차점을 찾음으로써 수행된다. 실제로, 각 수직 농도 C Y는 고정된 채로 유지되는 반면 이분법 알고리즘은 반응 표면 Z (C X,C Y)에서 선택된 효과 수준을 제공하는 수직 용량과 조합하여 수평 농도 C X를 식별하는 데 사용된다. 그 다음에 이러한 농도는 선형 내삽법으로 연결되어 아이소볼로그램 디스플레이를 생성한다. 상승적 상호작용의 경우, 아이소볼로그램 윤곽은 상가성 임계값 아래로 떨어지고 원점에 접근하며, 길항적 상호작용은 상가성 임계값 위에 있을 것이다. 오차 막대는 아이소볼로그램을 생성하는 데 사용된 개별 데이터 점에서 발생하는 불확실성을 나타낸다. 각 교차점에 대한 Z - σ Z(C X,C Y) 및 Z + σ Z(C X,C Y)이 I cut를 교차하는 농도를 찾기 위해 이분법을 사용하여 반응 오류에서 추정되며, 여기서 σ Z는 효과 척도에 대한 잔류 오차의 표준 편차이다.
상승작용 점수 분석: 로에베 부피(Loewe Volume) 점수 분석
로에베 부피 점수를 사용하여 로에베 상가성 모델을 초과하는 조합 상호작용의 전반적인 크기를 평가한다. 로에베 부피는 표현형 활성(양성 로에베 부피) 대 상승적 길항작용(음성 로에베 부피)에서 상승적 증가를 구별할 때 특히 유용하다. 길항작용이 관찰될때, 현재 데이터세트에서와 같이, 로에베 부피를 평가하여 길항작용 및 특정 약물 표적-활성 또는 세포 유전형 사이의 임의의 상관관계가 있는지 여부를 조사한다. 이 모델은 비상승적 조합 상호작용으로 상가성을 정의하며 조합 용량 매트릭스 표면은 그 자체와 교차된 약물과 구별할 수 없다. 상가성에 대한 계산은 (X/X I) +(Y/Y I) = 1을 충족하는 I 로에베이며, 여기서 X I 및 Y I는 관찰된 조합 효과 I에 대한 단일 제제 유효 농도이다. 예를 들어, 50% 억제가 1μM의 약물 A 또는 1μM의 약물 B에 의해 별도로 달성되면, 0.5μM의 A 및 0.5μM의 B의 조합이 또한 50%만큼 억제되어야 한다. 로에베 상가성을 초과하여 관찰된 활성은 상승적 상호작용을 식별한다. 본 분석에 대해, 경험적으로 유래된 조합 매트릭스를 실험적으로 수집된 단일 제제 용량 반응 곡선에서 구성된 각각의 로에베 상가성 모델과 비교하였다. 용량 반응 매트릭스에 걸쳐 이러한 과잉 상가성의 합계를 로에베 부피라고 지칭한다. 양성 로에베 부피는 상승작용을 시사하는 반면, 음성 로에베 부피는 길항작용을 시사한다. 상기 언급된 바와 같이, 상승작용 점수는 양으로 게이팅된 값이며 잠재적인 길항작용을 판단하는 데 사용될 수 없다.
항신생물제와 조합하여 암 세포를 사멸시키는 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, 항신행물제와 조합된 Cdc7 억제제인 SRA141로 순차적 처리 또는 동시 처리한 Colo-205 대장 선암종 세포 및 급성 골수 백혈병 세포에서 실험을 수행하였다. 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 경로의 억제제, DNA 폴리머라제의 억제제, 수용체 티로신 키나제(RTK)의 억제제, 미토겐 활성화 단백질 키나제 경로(MAPK)의 억제제 또는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3 키나제(PI3K) 경로의 억제제와 조합하여 사용될 때 암 세포를 민감하게 하는 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, 인간 Colo-205 대장 선암종 세포를 SRA141로 순차적으로 처리한 후, 단일 제제로서 에버롤리무스(Everolimus), 아피디콜린(Aphidicolin) 또는 미도스타우린(Midostaurin)으로 처리하였다(도 8). Colo-205 세포의 플라스크를 48 시간 동안 SRA141(1 μM 및 200 nM) 및 DMSO 대조군으로 전처리하고; 세포를 세척하고 384-웰 플레이트에 시딩하고, 플레이트를 6 시간 동안 배양하도록 방치한 다음, 단일 제제로 플레이팅한 지 6 시간 후에 에버롤리무스, 아피디콜린 또는 미도스타우린으로 처리하였다. 72 시간 후, ATPlite를 사용하여 ATP 수준을 측정하였다. SRA141로 COLO-205 세포의 전처리는 미도스타우린에 대한 민감도에서 증가를 향한 증강제 효능 이동을 입증하였으며, DMSO 전처리와 비교하여 200 nM SRA141 전처리로 3.19 EC50 배수 변화를 관찰하였다. 아피디콜린의 경우, DMSO 전처리와 비교하여 1 μM SRA141 전처리로 4.60 EC50 배수 변화를 관찰하였다. 에버롤리무스의 경우, DMSO 전처리와 비교하여 200 nM SRA141 전처리에 대해 3.3 EC50 배수 변화를 관찰하였다.
MAPK 경로 억제제 또는 PI3K 경로 억제제와 조합하여 암 세포를 사멸하고 암의 치료에 사용하기 위한 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, Colo-205 세포를 동시에 MAPK 경로 억제제인 트라메티닙, PI3K 경로 억제제인 코판리십, 및 항대사물(항-폴테)인 메토트렉세이트로 처리하였다(도 9 및 10a). 세포를 0 일에 384-웰 플레이트에 시딩하고; 플레이트를 24 시간 동안 배양하도록 방치하고; 세포에 트라메티닙 및 코판리십을 SRA141과 조합하여 투약하고, 72 시간 후, ATPlite를 사용하여 ATP 수준을 측정하였다. MAPK 경로 및 PI3K 경로의 억제제 및 항엽산 항대사물인 메토트렉세이트의 동시 조합 처리에 의해 COLO-205 세포에서 강력한 상승작용을 관찰하였다.
미토겐 활성화 단백질 키나제 경로(MAPK)의 억제제, 레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사 조절인자, PARP 억제제, 또는 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 경로의 억제제와 조합하여 사용될 때 암 세포를 민감하게 하는 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, 인간 급성 골수 백혈병 세포인 MOLM-13 세포를 순차적으로 SRA141로 처리한 다음, 단일 제제로서 트라메티닙 또는 벡사로텐으로 처리하였다(도 8). MOLM-13 세포의 플라스크를 48 시간 동안 SRA141(1 μM 및 200 nM) 및 DMSO 대조군으로 전처리하고; 세포를 세척하고 384-웰 플레이트에 시딩하고; 플레이트를 6 시간 동안 배양하도록 방치한 다음, 단일 제제로 플레이팅한지 6 시간 후에 트라메티닙 또는 벡사로텐으로 처리하였다. 72 시간 후, ATPlite를 사용하여 ATP 수준을 측정하였다. 트라메티닙의 경우, DMSO 전처리와 비교하여 200　nM SRA141 전처리에 대해 2.63 EC50 배수 변화를 관찰하였다. 벡사로텐의 경우, DMSO 전처리와 비교하여 200 nM SRA141 전처리에 대해 2.63 EC50 배수 변화를 관찰하였다. 에버롤리무스의 경우, DMSO 전처리와 비교하여 200 nM SRA141 전처리로 3.25 EC50 배수 변화를 관찰하였다.
레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사 조절인자, 또는 PARP 억제제와 조합하여 암 세포를 사멸하고 암 치료를 위해 조합 요법으로 사용하기 위한 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, 인간 MOLM-13 및 KG-1 세포를 동시에 PARP 억제제인 BMN673, 세포자멸사 조절인자 ABT-199, 레티노이드 경로 조절인자인 벡사로텐, 또는 레티노이드 경로 조절인자인 트레티노인으로 처리하였다(도 9 및 10a). 세포를 0 일에 384-웰 플레이트에 시딩하고; 플레이트를 24 시간 동안 배양하도록 방치하고; 세포에 SRA141과 조합하여 BMN673, ABT-199, 벡사로텐 또는 트레티노인을 투약하고, 72 시간 후, ATPlite를 사용하여 ATP를 측정하였다. MOLM-13 세포는 BMN673(PARP 억제제), ABT-199(BCL-2 억제제), 벡사로텐 및 트레티노인(레티노이드 경로의 조절인자)에 대한 강한 상승작용을 입증하였다. 이들 결과는 mTOR 경로의 억제제, DNA 폴리머라제의 억제제, 및 수용체 티로신 키나제의 억제제, 및 MAPK 경로의 억제제, 레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사의 조절인자, 또는 PARP 억제제와 조합하여 Cdc7 억제제의 사용을 포함하는 조합 요법이 Cdc7 억제제와 순차적 또는 동시 투여로 암 세포를 사멸하는 데 효과적임을 확인하고 mTOR 경로의 억제제, DNA 폴리머라제의 억제제, 및 수용체 티로신 키나제의 억제제, 및 MAPK 경로의 억제제, 레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사의 조절인자, 또는 PARP 억제제와 조합하여 Cdc7 억제제의 투여가 레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사의 조절인자, 또는 PARP 억제제이며, 효과적인 암 치료 레지멘임을 입증한다.
복제 스트레스-유도성 항신생물제 젬시타빈과 조합된 Cdc7 억제제의 효능을 확인하기 위해, 인간 HT-29 대장 선암종 세포를 96 시간 동안 증가하는 농도의 젬시타빈(0.037에서 1 μM까지)으로 처리하였다. 도 10b에 나타낸 데이터는 100 nm 초과의 젬시타빈 용량이 처리된 세포의 거의 100% 성장 억제를 초래함을 입증한다. 또한, 1.1 μM 또는 3.3 μM의 농도로 SRA141의 첨가는 젬시타빈의 억제 효과를 상당히 감소시켰다.
실시예 7: 생화학 검정에서 SRA141의 효능 및 선택성
SRA141에 의한 Cdc7의 억제를 시험관내 키나제 검정을 사용하여 측정하였다.
도 11a에 나타낸 바와 같이, SRA141은 시험관내 생화학적 검정에서 Cdc7의 강력한 억제를 입증하였다(IC50 = 4 nM). 검정 수행 전에 1 시간 동안 Cdc7 효소와 SRA141의 사전 배양은 화합물 효능을 적당히 개선시켜(IC50 = 1.4 nM), 잠재적으로 유리한 억제제 결합 동역학으로 Cdc7의 강력한 억제를 확인하였다. 이러한 발견은 도 11b에 나타낸 바와 같이, Cdc7에 대한 SRA141 결합의 긴 체류 시간(t1/2 = 215 분) 및 느린 해리 동역학(Koff = 5 nM에서 0.0032)을 나타내는 빠른 희석 연구와 일치한다.
Cdc7에 대한 SRA141의 선택성을 대략 430 개의 천연 및 돌연변이체 키나제를 함유하는 DiscoverX 키놈 스크리닝 검정을 사용하여 평가하였다. 표적을 벗어난 최소 키나제 활성을 500 nM의 화합물 농도에서 검출하였다. Cdc7에 대한 SRA141의 선택성을 TAK-931과 비교하였다. 키놈 스크리닝 검정 결과(도 12)는 SRA141이 500 nM의 화합물 농도에서 TAK-931에 비해 표적을 벗어난 활성이 적다는 것을 입증한다.
실시예 8: 여러 세포 주기 키나제의 세포 기질에 대한 SRA141의 효과
Colo-205 세포를 8 내지 24 시간 동안 SRA141(0.033 내지 3.3 μM 농도)로 처리하여 Cdc7(MCM2, Ser40/41 및 Ser53)에 대한 하류 표적의 인산화 상태, 및 추정된 표적을 벗어난 키나제 CDK8(STAT1, Ser727); CDK7 및 9(RNA pol II, Ser2); LATS2(YAP1, Ser127) 뿐만 아니라 CDK9에 의해 간접적으로 제어되는 것으로 알려진 MCL-1의 수준(Gregory, 2015)을 후속 평가하였다.
MV411 세포를 또한 용량 의존적 방식으로 SRA141(0.5 내지 3.3 μM 농도)로 처리하고 Ser40/41 및 Ser53에서 MCM2의 인산화 상태에 대해 후속적으로 평가하였다.
도 13에 나타낸 바와 같이, Cdc7 수준은 이 연구에서 변하지 않은 반면, Ser40/41 및 Ser53에서 표적 MCM2의 인산화는 0.033μM(Colo-205) 및 0.5 μM(MV411)에서 시작하여 농도 의존적 방식으로 감소하였으며, 이는 세포에서 강력한 표적상 억제를 입증한다.
최대 1 μM의 SRA141 농도에서 임의의 세포 기질에 대한 인산화 상태(또는 MCL-1의 단백질 수준)에서 유의한 변화가 없었다. STAT1, YAP1 및 MCL-1의 최소 억제가 3.3 μM에서 관찰되었지만, 총 단백질 수준의 동시 발생 감소는 이러한 발견이 SRA141 매개된 세포 사멸로 인한 것일 수 있음을 시사한다.
종합하면, 이들 데이터는 세포 설정에서 SRA141의 효능 및 선택성을 확인한다.
실시예 9: AML 3차원(3D) 배양에서 SRA141의 활성
SRA141의 활성을 3 개의 AML 세포주(EOL-1, Molm-16 및 MV-4-11) 및 3 개의 AML PDX 모델(AM5512, AM7440 및 AM7577)로부터 제조된 각각 시험관내 및 생체외 3차원(3D) 배양물에서 조사하였다. 종양 배양물을 5 일 동안 SRA141(0.08 내지 33 μM)로 처리하였다. SRA141은 6 개의 모델 중 5 개에서 강력한 항-세포 활성(IC50 범위 0.15 내지 1.6 μM)을 입증하였으며, AM5512 제제에서 감소된 활성을 나타내었다(IC50 = 3.2 μM; 표 1). 이 후자 모델은 또한 사이타라빈 및 시스플라틴에 대해 상대적으로 저항성이 있었다(IC50 > 8.9 μM).
표 1: AML 3D 배양에서 SRA141 활성
Figure pct00006
SRA141(0.3-5 μM)의 항증식 활성을 또한 14 일 동안 배양된 정상 인간 골수(n = 3) 및 AML-모세포 전구체를 사용하여 메틸셀룰로스 성장 매트릭스에서 수행된 추가 3D 성장 연구에서 평가하였다.
정상 골수 제제에 대한 평균 SRA141 IC50 값은 0.25 μM이었던 반면, AML 샘플에 대한 평균 IC50 값은 대략 0.16 μM이었다(검열된 저항성 전구체 샘플 AML810 사용; 표 2). 양성 대조군인 사이토신 아라비노시드(Ara C)는 정상 골수 및 AML-모세포 전구체 샘플 모두에 대해 동등한 IC50 값(대략 0.004 μM)을 가졌다. 또한 각 샘플에 대해 치료 지수를 계산하였다[(원발성 AML IC50) ÷ (BMNC 대조군 IC50)]. 표 2에 나타낸 바와 같이, 9 개의 원발성 샘플 중 5 개는 TI(AML200, AML917, AML915, AML190, 및 AML717)로 SRA141에 대한 반응을 입증한 반면, 9 개의 샘플 중 2 개만이 Ara-C에 대한 TI(AML200 및 AML250)로 반응하였다.
종합적으로, 이들 데이터는 SRA141이 AML 3D 배양에서 강력한 세포독성 활성을 보유하며, 정상 골수 전구체에 비해 잠재적인 치료 지수가 있음을 입증한다.
표 2: 3D 배양에서 성장한 정상 골수 및 AML-모세포 전구체에서 SRA141 활성
Figure pct00007
실시예 10: 배양된 세포에서 SRA141에 의한 Cdc7 억제의 내구성
약물 유도된 Cdc7 억제의 내구성을 48 시간 동안 2 가지 농도의 SRA141(0.1 μM 및 1 μM)로 처리된 Colo-205 세포에서 조사한 후, 즉시 세포를 수확하거나, 또는 약물 배양물의 제거 후 세포 수확 전에 추가 24 시간 배양하였다. Cdc7 활성의 표적 부위인 Ser53에서 MCM2의 인산화를 2 가지 조건간에 비교하였다.
도 14에 나타낸 바와 같이, 이 연구로부터의 데이터는 0.1 μM 약물 농도에서 화합물 세척 후 24 시간까지 Cdc7 활성의 회복을 나타내었으며, 연장된 pMCM2 억제를 더 높은 배양 농도(1 μM)의 세척 후 24 시간에 관찰하였다. 이들 결과는 느린 표적 속도 저하 및 결과적으로 연장된 효소 억제를 나타내는 선행 생화학 검정과 일치한다.
실시예 11: SRA141 세포 주기 민감도 분석
세포 주기의 다양한 단계에서 SRA141 처리에 대한 민감도를 이중 티미딘 블록으로 동기화된 Colo-205 세포에서 결정하였다. 블록 방출 시, 세포가 S 또는 M 기에 도달할 때 SRA141(1 μM)을 첨가하였다.
도 15에 나타낸 바와 같이, 프로피듐 요오다이드로 표지된 세포의 유세포 분석은 세포가 S 기 이전 동안 SRA141로 처리되었다면 M 기를 통해 진행되지만(도 15a), S 기 완료 후(M 기 시작) 처리가 시작되는 경우에는 그렇지 않을 때(도 15b) 축적된 세포자멸사 세포를 나타내는 하위-G1 집단을 입증하였다. SRA141이 M 기에서 먼저 추가되면, 하위-G1 축적이 지연되고 세포가 세포자멸사의 징후를 나타내기 전에 SRA141의 존재 하에 후속 S 기를 통해 진행할 필요가 있었다.
이들 데이터는 아마도 MCM2/MCM4 인산화에 의해 매개된 복제 기점 발화인 S 기에서 Cdc7 기능을 억제하면 세포가 불완전 복제된 DNA로의 유사분열로 들어가서, 세포자멸성 세포 사멸을 유도한다는 가설을 뒷받침한다.
도 15c에 나타낸 바와 같이, 48 시간 동안 0.1 μM SRA141로 처리된 Colo-205 세포를 웨스턴 블롯에 의해 세포 주기 및 DNA 손상 마커에 대해 평가하였다. 결과는 SRA141로 처리 후 G2/M 기의 유사분열 마커의 존재를 입증한다. 이들 결과는 48 시간 동안 SRA141로 처리된 Colo-205 및 SW620 세포 집단이 유사분열 시 세포가 축적됨을 입증하는 고함량 영상의 사용에 의해 수득된 데이터와 일치한다(도 15d). 유사분열 시 세포의 퍼센트는 다른 Cdc7 억제제에 비해 SRA141로 처리된 집단에서 더 크다.
실시예 12: 시험관내 세포 유전적 민감도 분석
235-세포주 패널의 SRA141 민감도 분석은 대장암이 그 중에서도 가장 민감한 고형 종양 세포주였음을 입증하였다(도 16). 더욱이, 235 개 세포주의 게놈 및 메틸화 패턴의 생물정보 분석은 FAT1의 돌연변이가 SRA141 민감도와 상관관계가 있음을 나타내었다. 대장암에서 통상적으로 변경되는 Wnt 신호전달 경로에서 FAT1의 역할을 고려하여, 본 발명자들은 16 개 대장암 세포주 및 2 개의 다른 Wnt 경로 유전자인 APC 및 FAT4에서 돌연변이의 존재 사이의 상관관계를 추가로 조사하였다.
결과는 염색체 불안정성(CIN) 대장 종양에서 흔히 발견되는 APC 돌연변이가 SRA141에 대한 민감도 증가와 관련이 있음을 나타낸다(p = 0.04, 도 16). FAT4 돌연변이가 SRA141 민감도와 통계적으로 상관관계가 있는 것으로 결정되지 않았지만, 가장 민감한 세포주 중 3 개에 FAT4 돌연변이가 잠복해 있는 것으로 밝혀졌다. 이러한 예비 데이터는 CIN 대장암에서 SRA141의 사용을 뒷받침한다.
실시예 13: Colo-205 대장 이종이식편 연구(마우스)
Colo-205 종양 이종이식편을 보유한 암컷 BALB/c 마우스에 (i) 비히클(0.2 M HCl / 0.5% MC400) 또는 (ii) 17 일 동안 SRA141 30 또는 60 mg/kg BID 또는 (iii) 17 일 동안 SRA141 120 mg/kg QD를 경구로 투여하였다(처리 그룹 당 n = 8 마리). 종양 성장 억제를 연구의 마지막 날인 16 일에 계산하였다.
모든 처리가 허용되었지만; 과도한 체중 손실로 인해(>15% 손실) SRA141 60 mg/kg BID에서 2 마리 마우스에 대해 2 일 및 120 mg/kg QD 처리 그룹에서 2 마리 마우스에 대해 1 및 5 일 동안 투약을 일시적으로 중단하였다.
도 17에 나타낸 바와 같이, SRA141 투여는 30 mg/kg BID, 60 mg/kg BID 및 120 mg/kg QD 용량 수준에서 각각 15%, 58% 및 37%의 종양 성장 억제를 초래하였다. 이러한 예비 데이터는 대장암에서 SRA141의 사용을 뒷받침한다.
실시예 14: SW620 대장 이종이식편 연구(마우스)
SW620 종양 이종이식편을 보유한 암컷 BALB/c 마우스에 (i) 비히클(0.1 M HCl / 0.5% MC400) 또는 (ii) 연속 4 일 SRA141 60 mg/kg 1 일 3 회(TID) 후 21 일 동안 2-일 투약 휴지기 또는 (iii) 21 일 동안 SRA141 120 mg/kg QD를 경구로 투여하였다(처리 그룹 당 n = 10 마리). 종양 성장 억제를 연구의 마지막 날인 21 일에 계산하였다. 모든 비히클 대조군 동물은 21 일에 연구에 남아있었다.
60 mg/kg SRA141로 TID 처리된 10 마리 마우스 중 4 마리가 20% 초과의 최대 체중 손실을 경험하였다. 이들 동물에 대한 투약은 체중 손실이 20% 미만으로 회복될 때까지 중단하였다. SRA141 120 mg/kg QD로 처리된 마우스는 20% 체중 손실 임계값을 충족하지 않았다.
도 18에 나타낸 바와 같이, SRA141 투여는 60 mg/kg TID 및 120 mg/kg QD에서 각각 78% 및 73%의 종양 성장 억제를 초래하였다. 이러한 예비 데이터는 대장암에서 SRA141의 사용을 뒷받침한다.
실시예 15: MV-4-11 인간 백혈병 전신 생존 연구
MV-4-11 암 세포를 정맥내로 접종받은 암컷 NOD SCID 마우스에 (i) 비히클 대조군(0.1 M HCl / 0.5% MC400, 경구) 또는 (ii) 0 일에서 21 일까지 7-일 주기의 연속 5 일 동안 초기에 SRA141 60 mg/kg BID, 그 다음에 상당한 체중 손실로 인해, 22 일에서 73 일까지 동일한 일정으로 SRA141 40 mg/kg BID를 투여하였다(처리 그룹 당 n = 10 마리). 암 모델의 전신 특성을 고려할 때, 생존은 이 연구에서 유일한 효능 평가변수였다.
일반적으로, SRA141 처리는 체중 손실 데이터에 기초하여 용인되었다. 10 마리의 SRA141-처리된 마우스 중 1 마리가 20% 초과의 체중 손실을 경험하였다.
SRA141 처리 그룹에서 5 마리 동물이 아마도 질환 진행보다는 기술적 오류 또는 내약성으로 인해 연구 17 및 18 일에 사망한 것으로 발견되었다. 조기 사망동물을 포함하여 모든 동물에 대한 중앙 생존시간은 비히클 및 SRA141 처리 그룹의 경우 각각 66 및 35 일이었고 조기 사망동물이 검열된 SRA141 처리 그룹의 경우 99 일을 초과하였다. 따라서, 검열된 처리 그룹의 생존 증가는 백혈병 치료에서 SRA141의 사용을 뒷받침한다.
실시예 16: A20 면역적격 림프종 이종이식편 모델(마우스)
A20 종양 이종이식편을 보유한 면역적걱 암컷 BALB/c 마우스에 (i) 대조군(PBS, 복강내) 또는 (ii) 경구로 SRA141 120 mg/kg을 투여하였다; 그룹 당 n = 8 마리 동물). 투약은 0 내지 4 일, 7 내지 11 일, 및 14 내지 18 일에 발생하였다. 종양 성장 억제를 연구의 마지막 날인 23 일에 계산하였다.
일반적으로, SRA141 처리가 용인되었다. 1 마리의 동물이 20% 초과의 체중 손실을 경험하였고 이후에 안락사시켰다.
도 19에 나타낸 바와 같이, SRA141 투여는 59%의 종양 성장 억제를 초래하였다. 이러한 예비 데이터는 림프종에서 SRA141의 사용을 뒷받침한다.
실시예 17: MDA-MB-486 유방 이종이식편 연구(마우스)
MDA-MB-486 유방 종양 이종이식편을 보유한 암컷 CB-17 SCID 마우스에 (i) 비히클 대조군(0.1 M HCl / 0.5% MC400) 또는 (ii) 5 주 동안 SRA141 30 또는 60 mg/kg BID를 경구로 투여하였다(처리 그룹 당 n = 10 마리). 종양 성장 억제를 연구의 마지막 날인 35 일에 계산하였다.
30 mg/kg BID 처리 시 비히클 대조군 및 SRA141은 잘 용인되었다. 60 mg/kg SRA141로 BID 처리된 10 마리 마우스 중 6 마리가 20% 초과의 최대 체중 손실을 경험하였다. 18 및 19 일에 이들 동물에 대한 투약을 일시적으로 중단하였으며, 장기간 체중 손실로 인해 1 마리 동물을 안락사시켰다.
도 20에 나타낸 바와 같이, SRA141 투여는 30 mg/kg BID 및 60 mg/kg BID에서 각각 26% 및 53%의 종양 성장 억제를 초래하였다. 이러한 예비 데이터는 유방암에서 SRA141의 사용을 뒷받침한다.
실시예 18: 마우스 SW620 대장 이종이식편 모델 PK/PD 평가
Cdc7의 직접 기질 및 Cdc7 억제의 하류 마커인 종양 포스포-MCM2(pMCM2)에 대한 SRA141 처리의 효과를 SW620 이종이식편을 보유한 마우스에서 결정하였다. pMCM2의 변화는 기본적인 PK/PD 모델을 구축하기 위해 약물 투여 후 48-시간에 걸쳐 종양 및 혈장에서의 SRA141 농도와 상관관계가 있었다.
구체적으로, 피하 SW620 종양을 보유한 암컷 BALB/c 마우스에 30, 60 또는 120 mg/kg의 SRA141을 단일 경구 용량으로 투여하였다(그룹 당 n = 15 마리). 대조군 동물에 비히클(0.1 M HCl/0.5% MC400; n = 10)을 투여하였다. 처리 2, 4, 8, 24 및 48 시간 후에, 각 그룹에서 3 마리 동물(대조군의 경우 n = 2 마리)을 종료시키고 분석을 위해 혈장 및 종양을 샘플링하였다.
도 21에 나타낸 바와 같이, pMCM2 수준은 단일 SRA141 투여 후 감소하여, 30mg/kg 및 60 mg/kg 용량의 경우 2 내지 4 시간 및 120 mg/kg 용량의 경우 2 내지 8 시간에 피크에 이르렀다(pMCM2 수준은 도 21a에 제시되며, % 억제는 도 21b에서 액틴에 대해 정량화 및 정규화됨). 또한 대략 1, 1.5, 및 2 μg/mL의 최대 SRA141 혈장 농도를 각각 30, 60 및 120 mg/kg 용량으로 투여한 지 2 내지 4 시간 후에 관찰하였다. 약물의 종양 농도는 유사하였다. 이 연구로부터 PK 및 PD의 상관관계는 대략 1.1 μM의 순환 혈장 농도 및 종양내 조직 농도가 pMCM2를 50%만큼 억제하는 데 필요함을 시사하였다.
실시예 19: 래트 Colo-205 대장 이종이식편 모델 PK/PD 평가
또한 SRA141 처리 후 pMCM2의 종양 억제를 피하 Colo-205 종양을 보유한 암컷 Rowett 누드 래트에서 결정하였다. 단일 경구 용량의 SRA141(75 또는 150 mg/kg)을 투약한 지 12 시간 후에, 동물을 종결시키고, 분석을 위해 종양을 샘플링하였다(그룹 당 n = 3 마리). 대조군 동물에 Colo-205 래트 모델에서 사용된 동일한 비히클을 투여하였다(실시예 5 참조; 그룹 당 n = 3 마리). 대략 0.5 및 0.9 μg/mL의 SRA141 종양 농도를 각각 75 및 150 mg/kg 용량 투여 12 시간 후에 관찰하였다. 단일 용량의 SRA141을 투여한 지 12 시간 후에, pMCM2는 대조군의 대략 50% 내지 60%를 억제하였다(도 22). 이러한 결과는 1 μM의 종양내 조직 농도가 MCM2 인산화(pMCM2)를 50%만큼 억제하는 데 충분함을 시사한다.
실시예 20: 생체내 비임상 약동학 요약
시험관내 분포 연구는 SRA141이 인간 및 래트 혈장 단백질에 고도로 결합된 반면(> 90%) 마우스 및 개 매트릭스에서는 중간 결합(58% 내지 77%)이 관찰되었음을 나타내었다. 또한, SRA141은 임의의 종의 매트릭스에서 적혈구로 우선적으로 분할하지 않았다.
전임상 및 인간 간세포에서 수행된 시험관내 대사 연구는 래트, 개 및 인간 제제에서 SRA141의 유리한 대사 안정성을 나타낸다. 종에 걸쳐 11 개의 대사물을 식별하였으며, 이 중 6 개를 인간 매트릭스에서 수행하였다. 1 개의 인간-특이적 대사물을 식별하였지만, 다만 미량 수준이었다. 마우스, 래트 및 개 간세포 대사물 프로파일은 모든 다른 인간 대사물을 함유하였다.
임상적으로 관련된 농도에서, SRA141은 CYP 3A4/5의 시험관내 시간 및 대사-의존적 억제(IC50 = 6.2 내지 6.7 μM) 및 인간 유기 음이온 수송체 OATP1B1, OATP1B3 및 OAT3의 시험관내 억제(10 μM에서 > 50% 억제)를 나타내었다. 종합적으로, 이러한 시험관내 CYP 및 수송체 억제 데이터는 SRA141이 이러한 CYP 이소형 또는 이들의 수송체에 대한 기질인 것으로 알려진 공투여된 약물의 대사 및/또는 분포를 잠재적으로 변경할 수 있음을 시사한다.
SRA141(유리 염기 현탁액으로 제시됨)은 단식한 마우스, 래트 및 개에서 31% 내지 54% 범위의 보통의 절대 경구 생체이용률(%F)을 입증하였으며 원숭이에서는 더 낮은 경구 생체이용률이 명백하였다(%F = 1% 내지 33%). 현탁액 중 비스-하이드로클로라이드 염은 임의의 종에서 노출을 유의하게 증가시키지 않는 것으로 제시되었다. 개를 대상으로 한 추가 연구는 현탁액 중 비스-하이드로클로라이드 염의 절대 경구 생체이용률이 식후 투여 후에 개선될 수 있음을 시사하였다. 그러나, 개를 대상으로 한 별도의 연구에서, 보통의 절대 경구 생체이용률이 2 가지 제안된 임상 의약품 캡슐 제시의 투여 후 확인되었으며(%F = 41% 내지 62%) 식사 상태는 경구 생체이용률에 눈에 띄는 영향을 미치지 않는 것으로 보였다. 경구 투약 후 전신 노출(Cmax, AUC)은 일반적으로 용량이 증가함에 따라 증가하지만, 용량 비례 방식보다 적었다.
비종양 보유 암컷 누드 래트를 50 mg/kg(QD x 12 일) 또는 100 또는 150 mg/kg(5 일 투약/ 2 일 휴지기/ 5 일 투약)의 SRA141로 경구로 처리하였다(경로 당 n = 3 마리). 비히클은 물 중 0.5% CMC-Na/1% Lutrol이었다. SRA141 혈장 농도를 마지막 투여 후에 LC-MS/MS에 의해 결정하였다. 도 23에 나타낸 바와 같이, 경구 용량이 50에서 150 mg/kg까지 증가함에 따라 전신 노출이 증가하였다.
실시예 21: 생체내 비임상 독성학 요약
SRA141을 평가하는 독성학 연구를 최대 4 주기(주기 당 5 일 투약/2 일 휴지) 동안 단일 및 반복 경구 투약 후에 래트 및 개에서 수행하였다. 또한, SRA141의 잠재적인 유전적 독성을 시험관내에서 평가하였다. 결과 요약은 표 3에 제시되어 있다.
표 3: 래트 및 개에서 4-주기 연구 동안 NOAEL, MTD 및 HNSTD 및 관련된 혈장 노출
Figure pct00008
래트 및 개의 반복-용량 독성 연구 결과는 SRA141-관련 독성에 대한 잠재적인 표적 기관이 담낭/담즙계, 림프 조직(비장, 흉선, 림프절 및 GALT), 골수, 간, 신장, 수컷 및 암컷 생식 기관, 말초 백혈구, 및 타액선임을 나타내며, 개가 가장 민감한 종인 것으로 보인다.
담즙계에 대한 효과는 높은 발생률로 래트 및 개 둘 다에서 일관되게 관찰되었다. 그러나, 이러한 담즙 변화는 일반적으로 경미하고 부분적으로(두 종에서 담즙 과형성) 또는 완전히 가역적이다(개에서 담낭; 래트에서 조직이 존재하지 않음). 더욱이, 동물에서 약물 유도된 담즙 결과는 인간에서 유사한 결과를 신뢰할 수 있게 예측하지 못하였다(Hailey, 2013; MacDonald, 2004).
담즙 및 쿠퍼 세포 변화는 우발적인 혈액학적 및 임상적 화학 변화와 함께 래트에게 SRA141을 28-일 반복 용량 투여 후에 주목한 유일한 발견이었다. 그러나, 래트를 대상으로 한 용량-범위 연구에서, 간(간세포 변성), 비장(적색 속질 세포성 감소) 및 위(염증 및 상피 과형성)를 포함한 다른 기관 및 조직에서의 변화를 식별하였다. 래트를 대상으로 한 28-일 연구에서 필적가능한 결과가 관찰되지 않은 이유는 분명하지 않지만, 중추적 연구에서 약물의 주기적 투여는 상이한 독성학적 결과에 기여하였을 수 있다. 7-일 래트 연구 및 28-일 개 연구에서 담즙계를 넘어 일부 조직 변화의 유사성은 제형, 용량 및 투약 기간의 차이에도 불구하고 개가 래트보다 SRA141에 더 민감할 수 있음을 시사한다.
관골 타액선 변화는 영향 받은 개에 대해 불리한 것으로 고려되지만, 인간에서 낮은 발병률 및 필적할만한 타액선 부족은 인간에 대한 불확실한 임상 관련성의 이러한 잠재적인 표적을 만든다. 유사하게, 간헐적 용량 주기와 관련된 말초 백혈구에서의 주기적인 변화와 함께, 림프 조직에서 낮은 규모의 변화 및 변화의 회복가능성은 불리한 것으로 판단되지 않으며; 이러한 변화는 상호관련될 수 있고 백혈구 수송에서 일시적인 조직 및 말초 혈액 변경을 나타낼 수 있다. 골수의 잠재적으로 불리한 세포질 감소는 또한 백혈구 수송에서의 제안된 변화와 관련될 수 있다. 흉선 감소는 다른 림프 조직 변화보다 더 심각할 수 있지만, 이 조직 변화는 스트레스에 부분적으로 또는 전체적으로 부차적일 수 있으며 직접 SRA141-관련 독성을 반영하지 않는다.
28-일 개 연구에서, 담낭, 신장 세뇨관 및 골수에서의 변화에 의해 더 많은 영향을 받은 수컷과 잠재적인 성별 차이가 있는 것으로 보였다. 그러나, 각 테스트 그룹에서 동물의 수가 적고 성별간 차이의 규모가 적어서 조직 반응에서 특정 성별 차이를 최종적으로 결정할 수 없다.
SRA141은 시험관내 박테리아 역 돌연변이 및 인간 림프구 염색체 이상 검정에서 돌연변이원성 및 염색체이상유발성(clastogenicity) 둘 다에 대해 음성이었다.
결론적으로, 이들 연구 결과는 SRA141의 투여 후 독성 발견이 일반적으로 임상 설정에서 모니터링가능하며, 지지 요법이 이용가능하고/하거나 진행된 종양학 연구 집단에서 관련성이 적다는 것을 나타낸다. 구체적으로, 4 주 동안 5 일 투여/ 2 일 휴지기의 투약 일정 후 MTD 및 심각한 독성이 발생하지 않는 최고 용량(HNSTD)은 래트 및 개에서 각각 100 mg/kg/일(600 mg/m2/일) 및 10 mg/kg/일(200 mg/m2/일)인 것으로 고려되었다.
실시예 22: SRA141 CRC 임상 시험
MSI-H 상태를 갖는 환자를 제외함으로써 CIN 표현형의 전이성 CRC가 풍부화된 환자에서 암 치료 시 SRA141 단일요법의 효능을 확인하기 위해 임상 시험을 수행한 반면, 일부 경우에 염색체 불안정성 비율이 높은 다른 암을 향후 탐구한다.
종양학 임상 시험을 위한 인간 등가 시작 용량은 전형적으로 설치류의 10%에서 심각한 독성 용량의 1/10(STD10)보다 적거나 또는 비-설치류에서 심각한 독성이 발생하지 않는 최고 용량(HNSTD)의 1/6이다(ICH S9, 2009). GLP 중추 독성학 연구의 데이터(실시예 21 참조)는 래트에서 100 mg/kg/일(600 mg/m2/일; 테스트된 최고 용량)의 최대 허용 용량(STD10에 대한 대리로서 MTD) 및 더 민감한 종으로서 개에서 10 mg/kg/일(200 mg/m2/일)의 HNSTD를 나타내었다. 그 결과, 54 mg의 절대 용량(60 kg 환자의 경우)과 동등한 33.3 mg/m2/일(0.90 mg/kg/일)의 인간 등가 용량(HED)이 활용된다. 대상체 안전성을 추가로 보장하기 위해, 경구로 투여된 10 mg의 더 낮은 SRA141 시작 용량이 사용된다.
임상 투약 일정은 항종양 활성이 입증된 전임상 투약 일정, 즉, 5 일 투약/ 2 일 휴지기를 따른다. SRA141은 하이드록시프로필 메틸셀룰로스(HPMC) 캡슐로 공급된다. SRA141 캡슐은 추가 데이터에 기초하여 의뢰자가 유도하지 않는 한 공복에 섭취한다(대상체는 투여전 적어도 2 시간 및 투여후 1 시간 동안 금식).
용량 상승 단계
용량 상승 단계를 수행한다. 전이성 CRC가 있는 15 내지 50 명의 대상체가 등록한다. 가속된 적정 설계를 활용한다. 처음에 단일 대상체로 이루어진 코호트는 상승 용량의 SRA141을 받는다. 초기 용량 상승은 신생 안전성 프로파일에 기초하여 임상적으로 적절한 것으로 고려되는 대로 100%만큼 증분으로 진행된다. 일단 SRA141-관련 국립 암 연구소 - 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(NCI-CTCAE) 등급 2 또는 그 이상의 독성이 특정 코호트에서 주기 1 동안 관찰되면, 해당 코호트는 3 내지 6 명의 대상체로 확장되고, 후속 용량 수준 코호트는 단계별(rolling) 6 설계를 따른다. 그 후에 SRA141의 용량은 모든 이용가능한 안전성 데이터를 검토한 후 결정되도록 증분으로 상승된다. SRA141의 용량은 의뢰자에 의해 달리 결정되지 않는 한, 예를 들어 대체 일정을 추구하는 경우 MTD가 식별될 때까지 상승된다. 대체 일정에 따른 용량 상승은 언제든지 시작하고 원래 일정에서 지속적인 용량 상승과 동시에 또는 대신에 실행한다.
DLT 상승 기간은 주기 1의 1 일에 첫번째 용량에서 치료의 첫번째 주기가 끝날 때까지이다. DLT 평가가 평가 불가능한 대상체, 예를 들어, SRA141의 불내성/독성 이외의 이유로 DLT 평가 기간을 완료하지 않은 대상체는 일부 경우에 교체된다.
DLT는 SRA141과 매우 관련이 있거나 또는 관련이 있다고 고려되는 경우 하기 이벤트(NCI-CTCAE v4.03에 의해) 중 임의의 것으로 정의된다:
- 투약 보류 및/또는 지지 요법 제공에도 불구하고 > 7 일동안 지속되는 등급 4 호중구감소증, 빈혈, 또는 혈소판감소증;
- 등급 4 열성 호중구감소증;
- ≥등급 3 출혈이 있는 ≥등급 3 혈소판감소증;
- 충분한 예방 또는 치료, 피로, 및 일시적 및 무증상 등급 3 실험실 이상 없이 등급 3 오심, 구토 및/또는 설사와 관련된 예외가 있는 ≥ 등급 3 비혈액학적 독성; (내용은 프로토콜 참조)
- 불내성 또는 독성으로 인해 계획된 SRA141 용량의 75%를 받지 못함.
용량 제한 독성은 용량 상승 결정의 목적을 위해 고려되지만; 누적 독성이 명백해지면 상승 또는 RP2D에서 다음 용량 수준을 결정할 때 고려된다.
용량 확장 단계
또한 용량 확장 단계를 수행한다. 종양이 알려진 고도 현미부수체 불안정성(MSI-H) 상태가 아닌 전이성 CRC가 있는 대략 30 명의 대상체가 단일 확장 코호트에 등록하여 안전성 프로파일을 추가로 특징화하고 전임상 효능을 평가한다. 일부 경우에 확장 코호트에 대한 등록은 항종양 활성의 증거가 있거나 또는 SRA141 혈장 농도가 신생 비임상 데이터에 기초한 최소 유효 임계값에 도달하는 경우 MTD 또는 RP2D의 결정 전에 시작한다. SRA141을 제안된 RP2D 및 시험의 용량 상승 단계 결과에 기초한 일정으로 투여한다. 일부 경우에 SRA141의 RP2D는 MTD와 동일하거나 또는 그 미만이다. 대안적으로, RP2D의 결정 전에 등록이 시작된 경우, SRA141을 처음에 각 대상체의 등록 시점에 용량 상승 단계 동안 분명하게 된 최고 용량으로 투여한다. 일단 동일한 일정 동안 더 높은 용량 수준이 상승 코호트에서 안전한 것으로 결정되면, 대상체는 일부 경우에 더 높은 용량 수준으로의 상승을 허용한다.
방법론
SRA141 처리는 초기 코호트(들)에서 28-일 주기의 5 일 투약/2 일 휴지기 일정으로 1 일 1 회 경구로 투여된다. 신생 안전성 및 내약성 데이터에 기초하여 대체 투약 일정이 고려된다.
시험은 스크리닝, 처리, 안전성 추적(SFU) 및 장기간 추적으로 이루어진다. 처리 기간은 일부 경우에 질환 진행, 허용되지 않는 독성, 및 임신을 포함하여 사전 명시된 기준 중 하나를 충족할 때까지 계속된다.
스크리닝 및 기준선 평가는 인구 통계, 질환 이력, 기준선 질환 평가, 기준선 안전성 평가, 및 WOCBP 대상체에 대한 임신 테스트를 수행한다. PDn 및 후향적 게놈 평가를 위한 전처리(기준선) 샘플을 수집한다.
안전성 평가는 다음으로 수행한다:
- 지속적인 이상 반응(AE) 평가 및 병용 치료 검토;
- 주기 1 동안 및 각 후속 주기의 1 일에 투약전 및 투약후 2 내지 3 시간, 및 SFU에 매주 활력 징후;
- 주기 1 및 2 동안 매주 및 주기 3부터 격주로, 그 다음에 주기 7부터 계속 이어서 매월, 및 SFU에서 임상 생화학;
- 주기 1 내지 3 동안 매주 및 후속 주기에 격주로, 및 SFU에서 혈액학;
- SFU에서 트로포닌; 각 주기의 1 일 및 SFU에서 소변검사;
- 주기 2의 1 일 및 SFU에서 초음파 심전도;
- 주기 1, 2, 및 후속 3 번째 주기마다 1 일, 및 SFU에서 심전도(ECG)(국부적 판독);
- 주기 1의 1 및 19 일에 (투여후 다중 시점에서) 중심 ECG; 및
- 임상적으로 지시된 바와 같은 증상-관련 신체 검사.
또한, 기립성 활력 징후를 포함한 집중 혈압 모니터링을 주기 1의 1 일에 SRA141의 첫번째 용량 후 수행한다.
효능은 다음으로 평가한다:
- 문서화된 질환 진행을 중단한 대상체를 제외하고 주기 1의 1 일 및 SFU에서 8 주마다, 흉부, 복부, 골반, 및 모든 의심되는 질한 부위의 CT/MRI에 의한 종양 평가;
- 주기 1의 1 일 및 SFU에서 4 주마다 임상 평가 및 혈청 암배아 항원(CEA) 수준; 및
- 생존 상태
약동학은 다음으로 평가한다:
- 주기 1의 1 및 19 일에 24-시간 집중 PK 샘플링.
- C3, 4, 5, 및 8의 1 일에 투여전 샘플링
약력학을 평가한다. 대리 조직(피부 펀치 생검) 및 종양 조직을 수집하고 PDn 바이오마커 pMCM2에 대해 분석한다. 피부 펀치 샘플을 기준선 및 주기 1 의 18 또는 19 일에 투여후 4 내지 8 시간에(즉, SRA141의 예상된 Cmax) 수집한다. 일부 경우에 SRA141의 혈장 농도가 최저 수준(Cmin)에 도달할 때 주기 1 또는 이후 주기의 나중 시점에서 세번째 피부 펀치 생검을 18 또는 19 일부터 4 내지 8 시간 투여후 생검에서 측정가능한 바이오마커 효과가 관찰된 SRA141 용량 수준을 초과하여 받은 대상체에서 수집한다. 세번째 피부 펀치 생검 시기는 신생 PK 및 PDn 데이터에 기초하여 의뢰자에 의해 전달된다. 피부 생검 샘플은 상승 용량 단계에 등록된 모든 대상체 및 확장 용량 단계에서 최소 10 명의 대상체로부터 필요하다. 종양 조직은 기준선 및 주기 1 의 4 일 또는 5 일에, 투여후 4 내지 8 시간에 확장 용량 단계에서 최소 6 명의 대상체로부터 필요하다. 확장 용량 단계에서 추가 대상체 및 상승 용량 단계에서 대상체로부터의 종양 조직은 선택 사항이다.
게놈을 평가한다. 보관 또는 신선한 종양 조직(원발성 또는 전이성) 및 혈액 샘플을 기준선에서 후향적 게놈 분석을 위해 수집하여 SRA141 처리 반응과 관련된 게놈 변경을 탐구한다. 혈액 샘플을 또한 SFU에서 수집한다.
포함 기준
임상 시험을 위한 대상체는 다음 기준에 기초하여 선택된다:
- 임의의 시험 특이적 절차, 샘플링 및 분석 전에 서면 동의한 경우
- 동의 시 18 세 이상인 경우
- 조직학적으로 및/또는 세포학적으로 전이성 CRC가 확인된 경우
- 플루오로우라실 또는 카페시타빈, 옥살리플라틴, 및 이리노테칸을 함유하는 레지멘으로 사전 치료된 경우
- 기대 수명이 적어도 12 주인 경우
- 대상체가 IMP의 첫번째 용량을 받기 전 1 주 이내에 측정된, 표 4에 제시된 범위 내의 혈액학적 및 생화학적 지표를 보이는 경우
표 4: 포함을 위한 혈액학적 및 생화학적 지표
Figure pct00009
- 세계보건기구(WHO) 수행 상태 0-1인 경우
- RECIST 기준 당 방사선사진술로 측정가능한 질환이 있는 경우
- IMP의 첫번째 용량 전 18 개월 이내에 수집되거나 또는 후원자에 의해 승인되고 후향적 종양 프로파일링에 이용가능한 보관 종양 조직 또는 접근가능한 종양 및 종양 조직의 수집을 위한 생검에 기꺼이 동의한 경우
- 확장 단계에 등록된 최소 6 명의 대상체의 경우, 접근가능한 종양 및 PDn 검정을 위한 종양 조직의 수집을 위해 최대 2 개의 종양 생검에 기꺼이 동의한 경우
제외 기준
대상체는 다음 기준에 기초하여 임상 시험에서 제외된다:
- Cdc7 억제제를 사용한 임의의 사전 치료를 받은 경우
- 고도 현미부수체 불안정성, 즉, MSI-H로 알려진 대장암이 있는 경우
- 다음과 같은 사전 또는 현재 항암 요법을 받은 적이 있는 경우:
a. SRA141의 첫번째 용량 전 4 주 이내에 임의의 표적 병변(측정가능한 질환으로 사용되는 병변)의 방사선요법(증상 제어 및 병변이 측정가능한 질환으로 사용되지 않는 경우 제외)
b. SRA141의 첫번째 용량 전 3 주 이내에 화학요법
c. 4 주 이내에 이전 면역요법, 또는 SRA141의 첫번째 용량 전에 더 짧고 의뢰자에 의해 승인된 경우 5 회 반감기
d. SRA141의 첫번째 용량 전 6 주 이내에 니트로소우레아 또는 미토마이신 C
e. 4 주 이내에 다른 IMP 또는 표적화된 요법, 또는 SRA141의 첫번째 용량 전에 더 짧고 의뢰자에 의해 승인된 경우 5 회 반감기
- 자연요법 약제, 허브 보충제, 또는 조사자의 관점에서 CYP450에 영향을 미치는 것으로 알려진 다른 대체 요법이 동시 투여된 경우
- 조사자의 관점에서 연구 순응도 또는 안전성에 영향을 미치기에 충분히 심각한 현재의 비처방 약물 또는 알코올 의존성이 있는 경우
- 후원자에 의해 승인되지 않는 한, 대략 95% 이상의 예상된 5-년 무질병 생존과 관련하여 충분히 치료된 종양을 제외하고 지난 2 년 이내의 다른 악성종양이 있는 경우
- NCI-CTCAE 등급 1보다 큰 이전 치료의 지속적인 독성 발현이 있는 경우. 이에 대한 예외는 탈모 또는 특정 독성이며, 조사자 및 후원자 또는 후원자의 피지명인 모니터의 의견에 따라 대상체를 제외하지 않아야 한다
- 신규 또는 진행중인 뇌 전이가 있는 경우. 지난 6 개월 동안 중추 신경계 전이 이력(확장 코호트만 해당). 일부 경우에 8-주 기간에 걸쳐 방사선학적으로 안정된 뇌 전이가 있는 대상체는 상승 코호트에 포함된다
- 이미 임신중이거나 또는 수유중인 여성. 음성 스크리닝(즉, 첫번째 용량 전 7 일 이내) 혈청 또는 소변 임신 테스트를 받고 시험 기간 내내 및 그 후 6 개월 동안 첫번째 IMP 투여부터 효과적인 피임 요건을 따르는 데 동의한 경우 이외의 가임기 여성(WOCBP)
- 시험 내내 및 그 후 6 개월 동안 피임 요건을 준수하여 아이의 아버지가 되지 않도록 조치를 취하는 데 동의한 경우 이외의 임신 가능한 파트너가 있는 남성. 임신 또는 수유중인 파트너가 있는 대상체는 시험 내내 및 SRA141의 마지막 용량 후 6 개월 동안 태아 또는 신생아의 노출을 방지하기 위해 콘돔과 살정제 젤을 사용하도록 권고받아야 한다.
- 대상체가 대수술에서 아직 회복되지 않은 경우
- 활성 비제어된 감염을 포함한 비악성 전신 질환으로 인해 의학적 위험이 높은 경우
- 음성 바이러스 부하로 제어되고 후원자에 의해 승인되지 않는 한, B형 간염, C형 간염 또는 인간 면역결핍 바이러스(HIV)에 대해 혈청학적으로 양성인 것으로 알려진 경우
- 후원자에 의해 승인되지 않는 한, 동시 울혈성 심부전, 뉴욕심장학회[NYHA] 기준에 따른 클래스 III/IV 심장 질환의 이전 병력, 기준선에서 좌심실 박출률 < 45%, 지난 6 개월 이내에 심장 허혈의 이력, 치료가 필요한 상당한 심장 부정맥의 이전 병력, 허혈성 뇌 혈관 질환 또는 증후성 말초 혈관 질환의 이전 병력과 같이, 심각한 심장 또는 심혈관 병태가 있는 경우,
- 성인 남성에서 QTcF > 450 msec 및 성인 여성에서 > 470 msec인 경우
- IMP의 첫번째 용량 전 8 주 이내에 골수의 25% 초과에 사전 골수 이식 또는 광범위한 방사선 요법을 받은 경우
- 일부 경우에 IMP 흡수를 유의하게 변경시키는 위장관(GI) 기능 장애 또는 GI 질환(예를 들어, 궤양성 질환, 비제어된 오심, 구토, 설사, 또는 흡수장애 증후군)이 있는 경우
- 씹거나 또는 의깨지 않고 캡슐을 삼킬 수 없는 경우
- SRA141 또는 이의 부형제에 대한 알레르기, 과민감도, 또는 불내성이 알려진 경우
- 이 시험에 참여하는 동안 또 다른 중재 임상 시험에 참여하거나 또는 참여할 계획이 있는 경우. IMP의 투여를 수반하지 않고 조사자 및 후원자 또는 후원자의 피지명인의 의견에 따라 대상체에게 허용되지 않는 부담을 주지 않는 관찰상 시험 또는 중재 임상 시험에 참여하는 것은 허용될 수 있다
- 조사자 또는 후원자의 의견에 따라 대상체가 임상 시험에 대한 우수한 후보가 되지 않 임의의 다른 조건의 경우.
RECIST 기준
이 연구에서 질환 반응 평가는 개정된 RECIST 기준 v1.1에 따라 수행된다. RECIST 기준은 Eisenhauer, et al. (New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer [Internet]. 2009)에 더 상세하게 기재되어 있으며, 상기 문헌의 모든 교시 내용이 본원에 참조로 포함된다.
기준선에서, 종양 병변/림프절은 일반적으로 다음과 같이 측정가능하거나 또는 측정불가한 것으로 분류된다:
측정가능
종양 병변: 일반적으로 다음과 같은 최소 크기를 갖는 적어도 하나의 치수(측정 평면에서 가장 긴 직경이 기록됨)로 정확하게 측정된다:
- CT 스캔을 통해 10mm(CT 스캔 슬라이스 두께 5 mm 이하; 영상화 지침에 대한 Eisenhauer, et al., [Eisenhauer, 2009]의 부록 II 참조)
- 임상 실험을 통해 10mm 캘리퍼 측정(캘리퍼로 정확하게 측정될 수 없는 병변은 측정불가한 것으로 기록되어야 함)
- 흉부 X-선을 통해 20 mm
악성 림프절: 병리학적으로 확대되고 측정가능한 것으로 고려하기 위해, 림프절은 일반적으로 CT 스캔을 통해 평가할 때 짧은 축으로 15mm이다(CT 스캔 슬라이스 두께는 5 mm 이하로 권장됨). 기준선 및 후속 조치에서, 짧은 축만이 일반적으로 측정되고 추적된다.
측정불가
작은 병변(가장 긴 직경 <10mm 또는 짧은 축이 ≥10 내지 < 15mm인 병리학적 림프절) 뿐만 아니라 진정으로 측정불가한 병변을 포함한 모든 다른 병변. 진정으로 측정불가한 것으로 고려되는 병변은 일반적으로 연수막 질환, 복수, 늑막 또는 심막 삼출, 염증성 유방 질환, 피부 또는 폐의 림프관염 개입, 재현가능한 영상 기술로 측정가능하지 않은 신체 검사로 식별된 복부 종괴/복부 기관비대를 포함한다.
골 병변, 낭포성 병변, 및 이전에 국소 요법으로 치료된 병변은 특별한 설명이 필요한다:
골 병변:
- 골 스캔, PET 스캔 또는 단순 촬영은 일반적으로 골 병변을 측정하기에 충분한 영상 기술로 고려되지 않는다. 그러나, 이들 기술을 사용하여 골 병변의 존재 또는 소실을 확인할 수 있다.
- CT 또는 MRI와 같은 횡단면 영상 기술에 의해 평가될 수 있는 식별가능한 연질 조직 구성요소를 갖는 용해성 골 병변 또는 혼합 용해성-출아형 병변은 일반적으로 연질 조직 구성요소가 상기 기재된 측정가능성의 정의를 충족하는 경우 측정가능한 병변으로 고려된다.
- 출아형 골 병변은 일반적으로 측정불가하다.
낭포성 병변:
- 방사선사진술로 정의된 단순 낭포에 대한 기준을 충족하는 병변은 일반적으로 정의에 따르면 단순 낭포이므로 악성 병변으로 고려되지 않는다(측정가능하지도 측정불가하지도 않음).
- 낭포성 전이를 나타내는 것으로 생각되는 '낭포성 병변'은 일반적으로 상기 기재된 측정가능성의 정의를 충족하는 경우 측정가능한 병변으로 고려된다. 그러나, 비-낭포성 병변이 동일한 대상체에 존재하는 경우, 이들을 표적 병변으로 선택하는 것이 바람직하다.
사전 국소 치료된 병변:
- 이전에 조사된 영역, 또는 다른 국소 영역 요법에 적용된 영역에 놓여있는 종양 병변은 통상적으로 병변에서 진행이 입증되지 않는 한 측정가능한 것으로 고려되지 않는다. 연구 프로토콜은 일반적으로 이러한 병변이 일반적으로 측정가능한 것으로 고려되는 조건을 상세히 기재한다.
평가 방법
모든 측정은 일반적으로 임상적으로 평가되는 경우 캘리퍼를 사용하여 미터 표기법으로 기록된다. 모든 기준선 평가는 일반적으로 가능한 치료 시작에 가깝고 치료 시작 전에 4 주를 넘기지 않고 수행된다.
동일한 평가 방법 및 동일한 기술은 일반적으로 기준선 및 후속 조치 동안 식별되고 기록된 각 병변을 특성화하는 데 사용된다. 영상 기반 평가는 일반적으로 추적될 병변(들)이 영상화될 수 없지만 임상 시험으로 평가가능한 경우가 아닌 한 임상 시험 대신에 항상 수행된다.
임상 병변은 일반적으로 표피 상에 있고 캘리퍼를 사용하여 평가 시 ≥10mm 직경일 때 측정가능한 것으로 고려된다(예를 들어 피부 결절). 피부 병변의 경우, 병변 크기를 추정하기 위해 룰러를 포함한 색채 사진술에 의한 문서화가 제안된다. 상기 나타낸 바와 같이, 병변이 임상 시험 및 영상 둘 다에 의해 평가될 수 있는 경우, 영상 평가가 보다 객관적이고 일부 경우에 또한 연구 종료 시 검토되므로 일반적으로 수행된다.
흉부 CT는 일반적으로 특히 진행이 중요한 평가변수일 때 흉부 X-선 보다 선호되는 데, CT가 특히 새로운 병변을 식별하는 데 있어서 X-선보다 더 민감하기 때문이다. 그러나, 일부 경우에, 흉부 X-선 상의 병변은 명백하게 정의되고 통기된 폐로 둘러싸인 경우 측정가능한 것으로 고려된다.
CT는 일반적으로 반응 평가를 위해 선택된 병변을 측정하는 현재 이용가능하고 재현가능한 가장 좋은 방법이다. 이러한 지침은 CT 슬라이스 두께가 5mm 이하라는 가정에 기초하여 CT 스캔 상의 병변의 측정가능성을 정의하였다. CT 스캔의 슬라이스 두께가 5 mm를 초과하는 경우, 측정가능한 병변에 대한 최소 크기는 슬라이스 두께의 2 배이다. 또한 MRI는 특정 상황(예를 들어 신체 스캔의 경우)에 허용가능하다. 객관적 종양 반응 평가의 평가를 위한 CT 및 MRI 둘 다의 사용에 관한 상세한 내용은 Eisenhauer et al의 공개물에 제공되어 있다.
초음파는 일반적으로 병변 크기 평가에 유용하지 않고 일반적으로 측정 방법으로 사용되지 않는다. 초음파 검사는 일반적으로 나중에 독립적인 검토를 위해 전체를 재현할 수 없고, 작동자에 따라 다르기 때문에, 일반적으로 동일한 기술 및 측정이 하나의 평가에서 다음 평가까지 수행될 것이라고 보장할 수 없다(상세한 내용은 Eisenhauer, et al.(2009)에 기재되어 있음). 연구 과정에서 초음파에 의해 신규 병변이 식별되는 경우, CT 또는 MRI에 의한 확인이 일반적으로 권고된다. CT에서 방사선 노출에 대한 우려가 있는 경우, 일부 경우에 MRI가 선택된 상황에서 CT 대신에 사용된다.
객관적 종양 평가를 위한 내시경 검사 및 복강경 검사 기술의 활용은 일반적으로 권고되지 않는다. 그러나, 이들은 일반적으로 생검을 수득할 때 완전 병리학적 반응을 확인하거나 또는 완전 관해 또는 외과적 절제 후 재발이 평가변수인 시험에서 재발을 결정하는 데 유용하다.
종양 마커 단독은 일반적으로 객관적 종양 반응을 평가하는 데 사용되지 않는다. 그러나, 마커가 초기에 정상 상한치를 초과하는 경우, 이들은 일반적으로 대상체가 완전 관해로 고려되도록 정규화된다.
세포학 및 조직학은 일반적으로 프로토콜에 의해 필요한 경우 드물게 PR 및 CR 사이를 구별하는 데 사용된다(예를 들어, 알려진 잔류 양성 종양이 남아있는 경우, 생식 세포 종양과 같은 종양 유형의 잔류 병변). 삼출이 치료(예를 들어, 특정 탁산 화합물 또는 혈관신생 억제제 사용)의 잠재적인 부작용인 것으로 알려진 경우, 치료 동안 보이거나 또는 악화되는 임의의 삼출의 신생물 기원의 세포학적 확인은 일반적으로 측정가능한 종양이 반응(또는 안정 병변) 및 진행 병변 사이를 구별하기 위해 반응 또는 안정 병변에 대한 기준을 충족하는 경우에 고려된다.
종양 반응 평가
객관적 반응 또는 향후 진행을 평가하기 위해, 기준선에서 전반적인 종양 부담을 일반적으로 추정하고 후속 측정을 위한 비교기로 사용한다. 측정가능한 질환은 일반적으로 적어도 하나의 측정가능한 병변의 존재에 의해 정의된다.
하나 초과의 측정가능한 병변이 기준선에 존재하는 경우, 모든 수반된 기관을 대표하는 최대 총 5 개의 병변까지의 모든 병변(및 기관 당 최대 2 개의 병변)은 일반적으로 표적 병변으로 식별되고 기준선에서 기록되고 측정된다(이것은 대상체가 수반되는 1 또는 2 개의 기관 부위만을 갖는 경우 최대 2 및 4 개의 병변이 각각 기록됨을 의미한다). 표적 병변을 일반적으로 크기(가장 긴 직경을 갖는 병변)에 기초하여 선택되며 일반적으로 모든 수반되는 기관을 대표하지만, 또한 일반적으로 재현가능한 반복 측정에 적합하다. 일부 경우에, 가장 큰 병변은 도 3 Eisenhauer, et al.(2009)에 예시된 바와 같이, 재현가능하게 측정될 수 있는 다음으로 큰 병변이 일반적으로 선택되는 상황에서 그 자체가 재현가능한 측정에 적합하지 않다.
림프절은 종양에 의해 수반되지 않더라도 일부 경우에 영상으로 볼 수 있는 정상적인 해부학적 구조로 인해 특별히 언급할 가치가 있다. 측정가능한 것으로 정의되고 일부 경우에 표적 병변으로 식별된 병리학적 결절은 일반적으로 CT 스캔에 의해 ≥15 mm의 짧은 축 기준을 충족한다. 이러한 결절의 짧은 축만이 일반적으로 기준선 합계에 기여한다. 결절의 짧은 축은 일반적으로 결절이 고형 종양에 의해 수반되는지를 판단하기 위해 방사선 전문의에 의해 정상적으로 사용되는 직경이다. 결절 크기는 정상적으로 영상이 수득되는 평면에서 2 차원으로 기록된다(CT 스캔의 경우 이는 거의 항상 축 평면이며; MRI의 경우 획득 평면은 일부 경우에 축, 시상 또는 관상이다). 이러한 측정치가 작을수록 짧은 축이다. 예를 들어, 20 mm x 30 mm인 것으로 기록된 복부 결절은 20 mm의 짧은 축을 가지며 악성 측정가능한 결절로 한정된다. 이 예에서, 20 mm는 결절 측정값으로 기록되어야 한다. 모든 다른 병리학적 결절(짧은 축이 ≥10 mm지만 <15 mm인 것들)을 일반적으로 비표적 병변으로 고려된다. 짧은 축이 <10 mm인 결절은 일반적으로 비병리학적인 것으로 고려되며 일반적으로 기록되거나 또는 추적되지 않는다.
모든 표적 병변에 대한 직경의 합계(비결절 병변의 경우 가장 길고, 결절 병변의 경우 짧은 축)는 일반적으로 기준선 합계 직경으로 계산되고 기록된다. 림프절이 합계에 포함되면, 상기 언급된 바와 같이 짧은 축만이 합계에 추가된다. 기준선 합계 직경은 일반적으로 질환의 측정가능한 치수에서 임의의 객관적인 종양 회귀를 추가로 특성화하기 위한 참조로 사용된다.
병리학적 리프절을 포함한 모든 다른 병변(또는 질환 부위)은 일반적으로 비표적 병변으로 식별되며 일반적으로 기준선에서 기록된다. 측정은 일반적으로 필요하지 않으며 이들 병변은 일반적으로 "존재," "부재," 또는 드문 경우에 '명백한 진행'으로 추적된다(하기에 보다 상세하게 기재). 또한, 사례 기록 양식에서 동일한 항목으로 동일한 기관을 수반하는 다중 비표적 병변(예를 들어, '다중 확대 골반 림프절' 또는 '다중 간 전이')을 기록할 수 있다.
반응 기준
완전 관해(CR): 모든 표적 병변의 소실. 임의의 병리학적 림프절(표적이든 비표적이든)은 짧은 축에서 <10 mm로 감소된다.
부분 관해(PR): 기준선 합계 직경을 참조하여, 표적 병변 직경의 합계에서 적어도 30% 감소 .
진행 병변(PD): 최소 합계(이는 연구에서 가장 작은 경우 기준선 합계 포함)를 참조하여, 표적 병변 직경의 합계에서 적어도 20% 증가. 20%의 상대적 증가 이외에도, 합계는 일반적으로 적어도 5 mm의 절대 증가를 입증한다. (참고: 하나 이상의 신규 병변의 출현은 일반적으로 또한 진행으로 고려된다).
안정 병변(SD): 최소 합계 직경을 참조하여, PR을 한정하는 충분한 수축도 PD를 한정하는 충분한 증가도 없다.
표적 병변으로 식별된 림프절은 일반적으로 결절이 10 mm 미만으로 회귀하더라고 진정으로 짧은 축 측정값(기준선 검사와 동일한 해부학적 평면에서 측정됨)을 기록한다. 이는 정상 림프절이 일반적으로 <10 mm의 짧은 축을 갖는 것으로 정의되므로, 림프절이 표적 병변으로 포함되는 경우, 완전 관해 기준을 충족하더라도 병변의 '합계'가 일부 경우에 0이 되지 않음을 의미한다. 따라서 사례 보고서 양식 또는 다른 데이터 수집 방법은 일부 경우에 CR을 한정하기 위해, 각 결절이 일반적으로 <10 mm의 짧은 축을 달성하는 별도의 섹션에 기록된 표적 결절 병변을 갖도록 설계된다. PR, SD 및 PD의 경우, 결절의 진정으로 짧은 축 측정값은 바람직하게는 표적 병변의 합계에 포함된다.
연구 중에, 기준선에서 기록된 모든 병변(결절 및 비결절)은 일반적으로 매우 작은 경우에도(예를 들어 2 mm) 각 후속 평가에서 실제 측정값을 기록한다. 그러나, 때때로 기준선에서 표적 병변으로 기록된 병변 또는 림프절은 CT 스캔에서 너무 희미해져서 방사선 전문의는 일부 경우에 정확한 측정을 할당하는 데 편안함을 느끼지 못하고 일부 경우에 '측정하기에 너무 작은' 것으로 기록한다. 이 경우에 일반적으로 값을 사례 보고서 양식에 기록하는 것이 중요하다. 병변이 사라질 가능성이 있다는 방사선 전문가의 의견이 있는 경우, 측정값은 일반적으로 0 mm로 기록된다. 병변이 존재하는 것으로 여겨지고 희미하게 보이지만 측정하기에 너무 작은 경우, 5 mm의 디폴트 값이 일반적으로 할당된다. (참고: 림프절은 통상적으로 정상일 때 정의가능한 크기를 가지며 후복막강에서와 같이 지방으로 빈번하게 둘러싸여 있으므로 이 규칙이 림프절에 대해 사용될 가능성은 거의 없지만; 림프절이 존재하는 것으로 여겨지고 희미하게 보이지만 측정하기에 너무 작은 경우, 이 상황에서도 5 mm의 디폴트 값이 일반적으로 할당된다). 이 디폴트 값은 5 mm CT 슬라이스 두께로부터 파생된다(그러나 일반적으로 다양한 CT 슬라이스 두께로 변경되지 않는다). 이들 병변의 측정값은 잠재적으로 재현할 수 없으며, 따라서 이 디폴트 값을 제공하여 일반적으로 측정값 오류에 따라 기초한 잘못된 반응 또는 진행을 막는다. 그러나 다시 말해서, 방사선 전문의가 실제 측정값을 제공할 수 있다면, 5 mm 미만일지라도 일반적으로 기록된다.
비결절 병변이 '단편'일 때, 단편화된 부분의 가장 긴 직경은 일반적으로 표적 병변 합계를 계산하는 데 함께 추가된다. 유사하게, 병변을 합치면, 이들 사이의 평면이 일반적으로 유지되어 각 개별 병변의 최대 직경 측정값을 수득하는 데 도움이 된다. 병변이 더이상 분리할 수 없도록 정말로로 합쳐지면, 이 경우에 가장 긴 직경의 벡터는 일반적으로 '합쳐진 병변'에 대한 최대 가장 긴 직경이다.
일부 비표적 병변은 일부 경우에 실제로 측정가능하지만, 이들은 일반적으로 측정되지 않고 대신에 일반적으로 프로토콜에 명시된 시점에서만 정성적으로 평가된다.
완전 관해(CR): 모든 비표적 병변의 소실 및 종양 마커 수준의 정규화. 모든 림프절은 비병리학적 크기이다(<10 mm 짧은 축).
비-CR/비-PD: 하나 이상의 비표적 병변(들)의 지속 및/또는 정상 한계를 초과하는 종양 마커 수준의 유지.
진행 병변(PD): 기존 비표적 병변의 명백한 진행(하기 설명 참조). (참고: 하나 이상의 신규 병변의 출현은 또한 진행으로 고려된다).
대상체가 또한 측정가능한 질환이 있는 경우, 비표적 질환에 기초하여 '명백한 진행'을 달성하기 위해, 일반적으로 표적 질환에 SD 또는 PR이 존재하더라도, 전반적인 종양 부담이 요법을 중단할만큼 충분히 증가하도록 비표적 질환에서 전반적인 실질적인 악화 수준이 있다. 하나 이상의 비표적 병변 크기의 적당한 '증가'는 통상적으로 명백한 진행 상태를 한정하는 데 충분하지 않다. 따라서 표적 질환의 SD 또는 PR에 직면한 비표적 질환의 변화에만 기초하여 전반적인 진행의 지정하는 것은 일반적으로 극히 드물다.
측정불가한 질환만이 있는 대상체는 측정가능한 질환이 있는 것이 연구 항목의 기준이 아닌 경우 일부 III 상 실험에서 발생한다. 상기 나타낸 것과 동일한 일반적인 개념이 여기에 적용되지만, 이 경우 측정불가한 질환 부담 증가의 해석을 요인으로 포함하는 측정가능한 질환 평가는 없다. 비표적 질환의 악화는 일반적으로 용이하게 정량화되지 않기 때문에(정의에 의해: 모든 병변이 진정으로 측정불가한 경우) 대상체를 명백한 진행에 대해 평가할 때 일반적으로 적용될 수 있는 유용한 테스트는 측정불가한 질환에서의 변화에 기초한 전반적인 질환 부담의 증가가 측정가능한 질환에 대한 PD를 선언하는 데 요구될 수 있는 증가에 대한 규모와 비교가능한지를 고려하는 것이며: 즉 종양 부담의 증가는 '부피'에서 추가 73% 증가를 나타낸다(이는 측정가능한 병변에서 20% 증가 직경과 동등함). 예는 흉막 삼출액이 '미량'에서 '다량'으로 증가하거나, 림프관성 질환이 국소에서 광범위하게 증가하는 것을 포함하거나, 또는 일부 경우에 프로토콜에서 '요법의 변화를 요구하기에 충분한 것'으로 기재된다. '명백한 진행'이 보인다면, 대상체는 일반적으로 그 시점에 전반적인 PD가 있는 것으로 고려된다. 측정불가한 질환에 적용하는 객관적인 기준을 갖는 것이 이상적일 수 있지만, 해당 질환의 본질로 인해 일반적으로 그렇게 하기가 매우 어려우며; 따라서 증가는 일반적으로 상당하다.
신규 악성 병변의 출현은 일반적으로 질환 진행을 나타내며; 따라서 신규 병변 검출에 대한 일부 설명이 일반적으로 중요하다. 일반적으로 신규 방사선사진 병변을 식별하기 위한 특별한 기준은 없지만; 신규 병변의 발견은 일반적으로 명백하며: 즉, 일반적으로 스캐닝 기술의 차이, 영상 방식의 변화 또는 종양 이외의 무언가를 나타내는 것으로 생각되는 발견에 기인하지 않는다(예를 들어, 일부 '신규' 골 병변은 일부 경우에 단순히 기존 병변의 치유 또는 발적이다). 이는 대상체의 기준선 병변이 부분 또는 완전 관해를 나타낼 때 특히 중요하다. 예를 들어, 간 병변의 괴사는 일반적으로 그렇지 않은 '신규' 낭포성 병변으로 CT 스캔 보고서에 빈번하게 기록된다.
기준선에서 스캔되지 않은 해부학적 위치에서의 후속 연구에서 식별된 병변은 일반적으로 신규 병변으로 고려되고 일반적으로 질환 진행을 나타낸다. 이 예는 기준선에서 내장 질환이 있지만 연구중에 전이를 보이는 규정된 CT 또는 MRI 뇌를 갖는 대상체이다. 대상체의 뇌 전이는 일반적으로 기준선에서 뇌 영상이 없더라도 PD의 증거인 것으로 고려된다.
예를 들어, 작은 크기로 인해 신규 병변이 모호한 경우, 지속적인 요법 및 후속 평가는 일반적으로 진정으로 신규 질환을 나타내는지를 명확하게 한다. 반복 스캔을 통해 신규 병변을 명확하게 확인한다면, 진행은 일반적으로 초기 스캔 날짜를 사용하여 선언한다.
FDG-PET 반응 평가는 추가 연구가 필요하지만, 때때로 진행 평가(특히 가능한 '신규' 질환)에서 CT 스캐닝을 보완하기 위해 FDG-PET 스캐닝 사용을 통합하는 것이 합리적이다. FDG-PET 영상에 기초한 신규 병변은 일반적으로 하기 알고리즘에 따라 식별된다:
a. 기준선에서 음성 FDG-PET, 및 후속 조치 시 양성* FDG-PET는 일반적으로 신규 병변에 기초한 PD 징후이다. * '양성' FDG-PET 스캔 병변은 일반적으로 감쇠 보정 영상에서 주변 조직보다 2 배 초과의 흡수를 갖는 FDG avid를 의미한다.
b. 기준선에서 FDG-PET 없음 및 후속 조치 시 양성 FDG-PET:
- 후속 조치 시 양성 FDG-PET가 CT에 의해 확인된 신규 질환 부위에 상응하는 경우, 이는 일반적으로 PD이다.
- 후속 조치 시 양성 FDG-PET가 CT 상의 신규 질환 부위로 확인되지 않는 경우, 일반적으로 추가 후속 CT 스캔을 수행하여 해당 부위에서 진정으로 진행이 발생하는지 결정한다(발생하는 경우, PD 날짜는 초기 비정상적인 FDG-PET 스캔 날짜일 것이다). '양성' FDG-PET 스캔 병변은 일반적으로 감쇠 보정된 영상에서 주변 조직보다 2 배 초과의 흡수를 갖는 FDG avid를 의미한다.
- 후속 조치 시 양성 FDG-PET가 해부학적 영상에 기초하여 진행하지 않는 CT 상의 기존 질환 부위에 상응하는 경우, 이는 일반적으로 PD가 아니다.
최적의 전반적인 반응 평가
최적의 전반적인 반응은 일반적으로 연구 처리의 시작부터 처리의 끝까지 기록된 최적의 반응이다. 이 실험에서 요법이 끝난 이후까지의 반응이 문서화되지 않으면, 처리후 평가는 일반적으로 대안적인 항암 요법이 주어지지 않는 한 최적의 전반적인 반응을 결정하는 데 고려된다. 대상체의 최적의 전반적인 반응 할당은 일반적으로 표적 및 비표적 질환 둘 다의 발견에 따라 달라지며 일반적으로 또한 신규 병변의 출현을 고려한다.
일반적으로 각 프로토콜 명시된 시점에서, 반응 평가가 발생하는 것으로 추정된다. 표 5는 기준선에서 측정가능한 질환이 있는 대상체에 대한 각 시점에서 전반적인 반응 상태 계산의 요약을 제공한다.
대상체가 측정불가한(따라서 비표적) 질환만 있는 경우, 표 6이 일반적으로 사용된다.
특정 시점에서 영상/측정이 전혀 수행되지 않은 경우, 대상체는 일반적으로 해당 시점에서 평가불가(NE)이다. 평가 시 병변 측정의 하위집합만 수행하는 경우, 개별적인 누락 병변(들)의 기여가 할당된 시점 반응을 변경하지 않는다는 설득력있는 주장이 이루어지지 않는 한, 통상적으로 해당 시점에서 사례가 또한 일반적으로 NE로 고려된다. 이는 PD의 경우에 발생할 가능성이 높다. 예를 들어, 대상체가 3 개의 측정된 병변으로 50 mm의 기준선 합계를 갖고 후속 조치 시 2 개의 병변만 평가되었지만 합계가 80 mm인 경우, 대상체는 일반적으로 누락 병변의 기여와 관계 없이 PD 상태를 달성하였다.
최적의 전반적인 반응은 일반적으로 대상체에 대한 모든 데이터가 알려지면 결정된다.
완전 또는 부분 관해의 확인이 일반적으로 필요하지 않는 시험에서 최적의 반응 결정: 이들 시험에서 최적의 반응은 일반적으로 모든 시점에 걸쳐 최적의 반응으로 정의된다(예를 들어, 첫번째 평가에서 SD, 두번째 평가에서 PR, 및 마지막 평가에서 PD가 있는 대상체는 PR에 대한 최적의 전반적인 반응을 가짐). SD가 최적의 반응인 것으로 여겨질 때, 일반적으로 기준선으로부터 프로토콜 명시된 최소 시간을 또한 충족한다. SD가 달리 최적의 시점 반응일 때 최소 시간을 충족하지 않는 경우, 대상체의 최적의 반응은 일반적으로 후속 평가에 따라 달라진다. 예를 들어, 첫번째 평가에서 SD, 두번째에서 PD가 있고 SD에 대한 최소 지속기간을 충족하지 않는 대상체는 PD에 대한 최적의 반응을 가질 것이다. 첫번째 SD 평가 후 후속 조치에서 손실된 동일한 대상체는 일반적으로 평가불가한 것으로 고려된다.
결절 질환이 표적 병변의 합계에 포함되고 결절이 '정상' 크기(<10 mm)로 감소할 때, 일부 경우에 여전히 스캔으로 기록된 측정값이 있다. 이 측정값이 일반적으로 결절 크기 증가에 기초한다면 진행을 과장하지 않기 위해 결절이 정상이더라도 기록된다. 앞서 언급된 바와 같이, 이는 CR이 있는 대상체가 일부 경우에 증례기록서(case report form; CRF)에서 총 합계가 '0'이 아님을 의미한다.
당시 질환 진행의 객관적 증거 없이 치료 중단이 필요한 건강 상태가 전반적으로 악화된 대상체는 일반적으로 '증상성 악화'로 기록된다. 일반적으로 치료 중단 후에도 객관적인 진행을 문서화하려는 모든 노력이 이루어진다. 증상성 악화는 일반적으로 객관적 반응을 설명하지 않는데, 이것이 연구 요법을 중단하는 이유이다. 이러한 대상체의 객관적 반응 상태는 일반적으로 표 5 또는 6에 제시된 표적 및 비표적 질환의 평가에 의해 결정된다.
'EP, 조기 사망 및 평가불가'를 정의하는 조건은 연구 특이적이며 일반적으로 각 프로토콜에 분명하게 기재되어 있다(치료 지속기간, 치료 주기성에 따라).
일부 상황에서 잔류 질환을 정상 조직에서 구별하는 것은 어렵다. 완전 관해 평가가 이 결정에 따르는 경우, 일반적으로 완전 관해 상태를 할당하기 전에 잔류 병변을 조사하는 것(미세 바늘 흡인/생검)이 권장된다. 일부 경우에, FDG-PET는 잔류 방사선사진 이상이 섬유증 또는 흉터를 나타내는 것으로 생각되는 경우 생검과 유사한 방식으로 CR에 대한 반응을 개선하는 데 사용된다.
진행에 대한 모호한 결과(예를 들어 매우 작고 불확실한 신규 병변; 기존 병변의 낭포성 변화 또는 괴사)의 경우, 일부 경우에 치료는 다음 예정된 평가까지 계속된다. 다음 예정된 평가에서 진행이 확인되면, 진행 날짜는 일반적으로 진행이 의심되는 이전 날짜이다.
표 5: 시점 반응: 표적(+/-비표적) 질환이 있는 대상체
Figure pct00010
표 6: 시점 반응: 비표적 질환만 있는 대상체
Figure pct00011
반응 지속기간
전반적인 반응의 지속기간은 일반적으로 측정 기준이 CR/PR에 대해 처음 충족된 시간(어느 쪽이나 처음 기록 것)부터 재발 또는 진행 질환이 연구에 기록되는 첫번째 날짜까지) 측정된다.
전반적 완전 관해의 지속기간은 일반적으로 측정 기준이 CR에 대해 처음 충족된 시간부터 재발 질환이 객관적으로 문서화되는 첫번째 날짜까지 측정된다.
안정 병변은 일반적으로 처리 시작(무작위 시험에서, 무작위화 날짜부터)부터 진행 기준이 충족될 때까지 측정되며, 연구에서 가장 작은 합계를 참조한다(기준선 합계가 가장 작은 경우, 이는 PD 계산을 위한 참조이다).
실시예 23: SRA141 CIN 암 임상 시험
임상 시험을 실시예 22에서 상기 기재된 바와 같이 수행하여 높은 비율의 염색체 불안정성을 갖는 암 환자의 치료에서 SRA141 단일요법의 효능을 확인한다.
실시예 24: 대안적인 SRA141 투약 레지멘
충분한 임상 안전성 및 내약성, PK 및 활성 바이오마커 데이터가 이용가능하게 되면 대안적인 일정을 조사한다. 일부 경우에 의뢰자 및 조사자 간의 논의 후, 시험 동안 언제라도 대안적인 투약 일정을 고려한다. 일부 경우에 대안적인 일정에 대한 필요성은 신생 안전성 및 내약성 데이터, PK 및/또는 PDn 데이터로 나타낸다. 대안적인 일정은 일부 경우에 다음 예를 포함하나 이에 제한되지 않는다: 7 일 투약/ 7 일 휴지기, 14 일 투약/ 14 일 휴지기, 1 일 2 회 투약, 또는 다른 변경. 일부 경우에 대안적인 투약 일정 코호트는 연속 일정 코호트와 동시에 또는 그 대신에 시작한다.
대안적인 투약 일정을 위한 초기 시작 용량은 이전 코호트로부터의 안전성, 내약성 및 PK 결과에 따라 달라질 것이다. 대안적인 일정이 MTD가 이전 일정으로 식별된 후에 테스트되는 경우, 신규 일정에 대한 시작 총 주간 용량은 이전 일정을 위해 MTD에서 총 주간 용량을 초과하지 않을 것이다. MTD가 이전 일정으로 식별되지 않은 경우, 일부 경우에 용량 상승 단계가 발생하지만; 용량 상승은 일반적으로 총 주간 용량을 기준으로 50%를 초과하지 않는다.
실시예 25: 이중표현형 B 골수단핵구성 백혈병의 래트 MV-4-11 이종이식편 모델에서 SRA141 처리의 면역조직화학 평가
피하 이중표현형 B 골수단핵구성 백혈병 MV-4-11 종양을 보유하는 래트를 5 일 동안 75 mg/kg의 SRA141 또는 비히클, BID, 또는 100 mg/kg의 SRA141, QD로 처리하였다. 마지막 용량을 투여하고 12 시간 후에 동물로부터 종양을 수집하였다. 포르말린 고정 파라핀 포매된 종양 및/또는 피부를 정상 상태에서 총 MCM2, 세린 40에서 인산화된 MCM2(pMCM2-S40) 및 세린 53에서 인산화된 MCM2(pMCM2-S53), 세린 41에서 인산화된 MCM2(pMCM2-S41), 및 세린 139에서 인산화된-히스톤 H2A.X 효과에 대해 면역조직화학으로 평가하였다.
도 24a 및 도 24b에 나타낸 바와 같이, 종양 내 S40 및 S53에서 pMCM2의 실질적인 감소는 피부 조직의 변화와 상관관계가 있으며, 이는 피부 생검을 활용하여 SRA141의 표적상 활성을 입증할 수 있음을 시사한다. 예상된 바와 같이, S41은Cdc7이 아니라 Cdk에 의해 인산화되므로, SRA141 처리 후 pMCM2-S41의 효과는 나타나지 않았다. 따라서 데이터는 SRA141이 Cdc7 억제에 특이성이 있음을 추가로 입증한다. 종양을 또한 유사분열 세포의 마커인 pHH3의 면역조직화학으로 분석하거나, 또는 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하였다. 도 24c에 나타낸 결과는 투약 5 일 후, SRA141로 처리된 종양이 비히클에 비해 더 적은 유사분열 세포 및 세포자멸사 세포의 존재 증가를 입증하며(도 24c에서 흰색 화살표 참조), 이는 SRA141-처리된 MV-4-11 종양에서 항종양 활성의 존재를 시사한다.
이종이식편 종양 평가
이종이식편 종양(단, 기질 또는 주변 래트 조직 아님)에서 종양 세포를 점수화하였다. 점수화는 총 MCM2, pMCM2-S53, pMCM2-S40, 및 gH2AX 반응성에 대한 종양 세포를 차등 강도 및 H-점수의 백분율로 점수화하기 위해 주요 구성요소를 사용하여 반정량적으로 수행된다. 백분율 및 강도 측정은 각 이종이식편 샘플 내 종양의 동일한 상대 영역(아래쪽 가장자리에서 하나의 40X-배율)에서 과학자에 의해 추정된다.
이종이식편 조직을 평가하는 데 사용되는 H-점수 접근법은 4-점 반정량적 척도(0, 1+, 2+, 3+)에서 상응하는 차등 강도로 핵 염색된 종양 세포의 백분율을 기록하는 것을 요구한다. 이 척도에서: 0 = null, 음성 또는 비특이적 염색, 1+ = 낮거나 또는 약한 염색, 2+ = 중간 또는 보통 염색, 및 3+ = 높거나 강한 염색.
H-점수는 발현 강도(갈색 염색)를 4-점 반정량적 척도(0, 1+, 2+, 3+)에서 상응하는 차등 강도와 곱한 세포의 백분율을 합산하여 계산된다. 따라서, 점수는 0 내지 300 범위이다.
H-점수 = [(<1에서 %) x 0 ] + [(1+에서 %) x 1 ] + [(2+에서 %) x 2 ] + [(3+에서 %) x 3]
래트 피부 평가
래트 피부 샘플에서 표피의 상피 세포를 2 명의 과학자에 의해 공동으로 점수화하였다. 점수화는 총 MCM2, pMCM2-S53, pMCM2-S40, 및 gH2AX 반응성에 대한 표피 세포를 양성 세포의 계수로 점수화하기 위해 주요 구성요소를 사용하여 정량적으로 수행하였다. 각 피부 샘플에 대해, 4 개의 고르게 분포된 영역을 검토를 위해 표시하였다. 영역을 각 피부 샘플에서 동일한 대략적인 위치에 정렬하였다. pMCM2-S53 및 pMCM2-S40의 경우, 4 개의 대표적인 영역에서 10X 배율로 양성 세포의 수를 계수하였다. gH2Ax의 경우, 4 개의 대표적인 영역에서 20X 배율로 양성 세포의 수를 계수하였다. 염색이 강도에 관계없이 10X 또는 20X에서 용이하게 관찰되는 경우 세포를 계수하였다. 동일한 총 면적을 일관되게 포획하기 위해 함입 영역이 아니라 편평한 표피 내에서만 세포를 계수하였다.
각 피부 샘플에 대해 분석된 영역에 걸쳐 계수된 양성 피부 세포 수를 각 바이오마커에 대해 평균내었다. 그 다음에 pMCM2-S53 및 pMCM2-S40에 대한 평균 양성 피부 세포 수를 총 MCM2에 대한 평균 양성 피부 세포 수에 대한 백분율로 나타내었다. gH2AX에 대한 평균 양성 피부 세포 수에 2를 곱하여 20X 대 10X(정규화)에서 설명한 다음 또한 총 MCM2에 대한 평균과 관련하여 백분율로 나타내었다.
각 샘플에 대해 동일한 대략적인 위치에 있는 피부의 다수의 영역(총 MCM2의 경우 2 개 영역, pMCM2 및 gH2AX의 경우 4 개 영역)에서 2 명의 독립적인 과학자가 계수한 양성 세포 수(모든 강도에서)를 기록하여 피부 세포 계수를 수행하였다. 각 바이오마커에 대한 각 피부 영역에 기록된 양성 세포 수를 각 샘플에 대해 평균내었다. pMCM2-S53, pMCM2-S40, 및 gH2AX(확대를 위해 정규화됨)에 대한 평균 세포 계수를 총 MCM2의 백분율과 비교하였다. 세포 계수를 gH2AX의 경우 20X 및 모든 다른 마커의 경우 10X로 수행하였다.
평균 계수(pMCM2, gH2AX) = [영역 1 양성 세포] + [영역 2 양성 세포] + [영역 3 양성 세포] + [영역 4 양성 세포]/4
평균 계수(총 MCM2) = [영역 1 양성 세포] + [영역 4 양성 세포]/2
총 백분율(pMCM2) = [평균 계수 pMCM2]/[평균 계수 총 MCM2] x 100
총 백분율(gH2AX) = [평균 계수 gH2AX x 2(정규화)]/[평균 계수 총 MCM2] x 100
도 25a 및 도 25b에 나타낸 결과는 래트 MV-4-11 이종이식편 모델의 종양 및 피부 모두에서 pMCM2-S40의 용량 의존적 감소를 입증한다.
실시예 26: 인간 종양 및 피부의 면역조직화학 평가
포르말린 고정 파라핀 포매된 인간 종양 및 인간 정상 피부 샘플을 총 MCM2, pMCM2-S53, pMCM2-S40, 및 gH2AX에 대해 면역조직화학에 의해 평가하였다.
인간 종양 평가
인간 전이성 결장암 샘플(단, 기질 또는 주변 비신생 조직 구성요소 아님)에서 종양 세포를 점수화하였다. H-점수를 이전에 기재된 바와 같이 계산하였다(실시예 25).
인간 피부 평가
인간 피부 샘플에서 표피의 상피 세포를 2 명의 과학자에 의해 공동으로 점수화하였다. 점수화는 총 MCM2, pMCM2-S53, pMCM2-S40, 및 gH2AX 반응성에 대한 표피 세포를 양성 세포의 계수로 점수화하기 위해 주요 구성요소를 사용하여 정량적으로 수행하였다. 각 피부 샘플에 대해, 2 개의 고르게 분포된 영역을 검토를 위해 표시하였다. 영역을 각 피부 샘플에서 동일한 대략적인 위치에 정렬하고 MCM2, 및 pMCM2의 경우 10X로 평가하였다. gH2AX의 경우, 2 개의 영역에서 20X 배율로 양성 세포의 수를 계수하였다. 염색이 강도에 관계없이 10X 또는 20X에서 용이하게 관찰되는 경우 세포를 계수하였다. 동일한 총 면적을 일관되게 포획하기 위해 함입 영역이 아니라 편평한 표피 내에서만 세포를 계수하였다.
각 피부 샘플에 대해 분석된 영역에 걸쳐 계수된 양성 피부 세포 수를 각 바이오마커에 대해 평균내었다. 그 다음에 pMCM2-S53 및 pMCM2-S40에 대한 평균 양성 피부 세포 수를 총 MCM2에 대한 평균 양성 피부 세포 수에 대한 백분율로 나타내었다. gH2AX에 대한 평균 양성 피부 세포 수에 2를 곱하여 20X 대 10X(정규화)에서 평가한 다음 또한 총 MCM2에 대한 평균과 관련하여 나타내었다.
피부 세포 계수를 실시예 25에 기재된 바와 같이 수행하였다.
평균 계수(총 MCM2, pMCM2, gH2AX) = [영역 1 양성 세포] + [영역 2 양성 세포] /2
총 백분율(pMCM2) = [평균 계수 pMCM2]/[평균 계수 총 MCM2] x 100
총 백분율(gH2AX) = [평균 계수 gH2AX x 2(정규화)]/[평균 계수 총 MCM2] x 100
정상 인간 조직의 면역조직화학 평가는 pMCM-S40의 기준선 수준이 측정가능하고 비히클로 처리 후 래트 피부 샘플과 필적할만한 수준임을 입증한다(도 26). 따라서 인간 피부는 SRA141 표적상 약력학을 평가하기 위한 합리적인 대리 조직인 것으로 보인다.
실시예 27: 다양한 암 세포주에서 추가 항신생물제와 SRA141 조합
SRA141과 9개의 표적화된 항신생물제의 조합 활성을 고형 종양 세포주(Colo-205, SW620, A375(V600E 흑색종)), 뿐만 아니라 혈액암 세포주(KG-1, MOLM-13, MV411)에서 평가하였다. 세포 생존력을 이전에 기재된 CTG 및 CTBlue 검정을 사용하여 평가하였다(실시예 3). 검정은 내부 대조군으로 스타우로스포린(Staurosporine)을 사용하여 96 웰 플레이트에서 수행하였다. 세포를 72 시간 동안 단일 제제(I 상) 또는 SRA141 및 제2 제제의 조합(II 상)과 함께 배양하였다.
I 상에서, 20% 억제 농도(IC20) 및 50% 억제 농도(IC50)를 모든 6 개의 세포주에서 다음 9 개 제제 각각에 대해 결정하였다: ABT-199, ATM 키나제 억제제 KU-60019, 오로라 B 키나제 억제제 바라세르팁, MEK 억제제 트라메티닙, PI3K 경로 억제제 코판리십, 레티노이드 경로 억제제 벡사로텐 및 트레티노인, 트레오닌 티로신 키나제(TTK) 억제제 CFI-402257, 및 표피 성장 인자 억제제 에를로티닙.
II 상에서, 검정을 고정된 농도(각 제제에 대한 IC20 및 IC50)에서 각 제제 및 SRA141의 조합의 존재 하에 반복하였으며, 여기서 검정은 SRA141의 농도 범위에 걸쳐 수행하였다. 조합 지수(CI) 값을 Bliss Independence 모델을 사용하여 계산하였다(예를 들어, Foucquier and Guedj, Pharmacol. Res. Perspect. 2015 3(3) 참조, 전문이 본원에 참조로 포함됨). 1 미만의 CI 값(CI < 1)은 조합 효과가 예상된 부가 효과보다 크다는 것을 나타낸다.
Colo-205 세포(도 27a 및 도 27g)에서 조합 처리 결과는 SRA141 및 바라세르팁이 특히 0.012 μM 바라세르팁의 존재 하에 상승적으로 작용한다는 것을 입증한다. 대조적으로, SRA141 및 벡사로텐의 조합은 길항 효과가 있는 것으로 보인다. 트라메티닙 및 코판리십은 Colo-205 세포에서 SRA141과 약간의 부가 효과가 있는 것으로 보인다.
SW620 세포(도 27b)에서 조합 처리 결과는 바라세르팁, 트라메티닙, 및 코판리십이 모두 SRA141에 약간의 부가 효과가 있음을 나타낸다. A375(도 27c) 및 KG-1(도 27d) 세포에서 조합 처리 결과는 트라메티닙 또는 코판리십이 아니라 바라세트립이 SRA141에 약간의 부가 효과가 있음을 나타낸다.
MOLM-13(도 27e)에서 조합 처리 결과는 ABT-199 및 SRA141이 특히 0.1 μM ABT-199의 존재 하에 상승적으로 작용한다는 것을 입증한다. 또한, 바라세르팁(도 27h), 트라메티닙, 코판리십, 벡사로텐, 및 트레티노인은 모두 MOLM-13 세포에서 SRA141에 약간의 부가 효과를 입증한다.
MV411 세포(도 27f)에서 조합 처리 결과는 바라세르팁, 코판리십 및 트레티노인이 모두 SRA141에 약간의 부가 효과가 있음을 나타낸다.
실시예 28: SRA141은 항세포자멸사 유전자의 억제와 함께 상승작용한다
항세포자멸사 유전자 BCL-XL, BCL-2, 및 MCL-1을 RNAi 녹다운을 사용하여 HCT116 및 Hela 세포에서 억제하였다. 세포를 96-웰 플레이트에 2000 개 세포/웰로 플레이팅하고 10 nM의 최종 농도로 RNAi/리포펙타민 RNAimax 용액에서 형질감염시켰다. 형질감염된 세포를 72 시간 동안 용량 범위의 SRA14로 처리하였다. CTRL(무독성 대조군 RNAi), BCL-2, BCL-XL, 또는 MCL-1에 대해 RNAi로 형질감염된 처리된 세포의 세포 생존력을 이전에 기재된 바와 같이 CTBlue 검정을 사용하여 측정하였다(실시예 3). 도 28a에 나타낸 데이터는 RNAi에 의해 억제된 항세포자멸사 유전자가 SRA141과 상승작용한다는 것을 입증한다.
항세포자멸사 유전자 BCL-2를 이전에 기재된 바와 같이 0.1 μM ABT-199로 처리함으로써 Molm-13 세포에서 억제하였다(실시예 6 및 24 참조). 세포를 0.04 μM 내지 3.30 μM의 SRA141 농도로 72 시간 동안 0.1 μM ABT-199 및 SRA141로 처리하였다. BCL-2 억제 및 SRA141의 상승작용은 다음의 SRA141 농도에서 입증되었다: 1 미만의 조합 지수 값에 의해 나타낸 바와 같이 0.12 μM, 0.37 μM, 1.10 μM 및 3.30 μM(도 28b)(실시예 24 참조)
실시예 29: Cdc7 억제제의 임상 시험 평가
인간 환자에서 암의 치료를 위한 Cdc7 억제제의 효능을 추가로 확인하기 위해, 임상 시험을 수행한다. 적합한 환자는 암(예를 들어, 유방암, 결장암, 폐암; 혈액암 예컨대 백혈병, 림프종, 골수종, 급성 골수 백혈병(AML) 및 만성 골수성 백혈병(CML), 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 만성 호산구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 방광암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 간세포암, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종 및 두경부암)으로 진단받은 환자를 포함한다. 환자에게 Cdc7 억제제인 SRA-141을 경구로 투여한다. 최대 유효 투여량은 상기 기재된 동물 연구로부터 변환된 최적 투여량으로 시작하여 확인한다. 동물(즉, 래트 및/또는 마우스) 연구로부터 인간 등가 투여량의 결정은 당업자에게 알려진 기술을 사용하여 수행한다(Nair, A. and Jacob, S. J. Basic Clin. Pharm; March 2016 7(2): 27-31). SRA-141의 투여량은 100-5,000 mg; 100-1,000 mg; 1,000-2,000 mg; 2,000-3,000 mg; 3,000-4,000 mg; 4,000-5,000 mg; 1,500-2,500 mg; 500-1,000 mg; 1,000-1,500 mg; 1,500-2,000 mg; 2,000 mg-2,500 mg; 2,500-3,000 mg; 3,000-3,500 mg; 3,500-4,000 mg; 4,000-4,500 mg 또는 4,500-5,000 mg일 수 있다. SRA-141은 매일, 1 일 2 회, 1 일 3 회, 격일마다, 매주, 매월, 1-7 일 동안 매일 투약 후 1-28 일 비투약, 1-28일 매일 투약 후 1-28일 비투약으로 투여될 수 있다. 환자는 질환 진행에 대해 모니터링한다.
실시예 30: 추가 항신생물제(들)와 조합된 Cdc7 억제제의 임상 시험 평가
인간 환자에서 mTOR 경로의 억제제, DNA 폴리머라제의 억제제, 및 수용체 티로신 키나제의 억제제, 및 MAPK 경로의 억제제, 레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사의 조절인자, 또는 PARP 억제제와 조합된 Cdc7 억제제의 효능을 추가로 확인하기 위해, 임상 시험을 수행한다. 적합한 환자는 암(예를 들어, 유방암, 결장암, 폐암; 혈액암 예컨대 백혈병, 림프종, 골수종, 급성 골수 백혈병(AML) 및 만성 골수성 백혈병(CML), 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 만성 호산구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 방광암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 간세포암, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종 및 두경부암)으로 진단받은 환자를 포함한다. 환자에게 Cdc7 억제제인 SRA-141을 경구로 투여한다. 환자에게 mTOR 경로의 억제제, DNA 폴리머라제의 억제제, 및 수용체 티로신 키나제의 억제제, 및 MAPK 경로의 억제제, 레티노이드 경로의 조절인자, 세포자멸사의 조절인자, PARP 억제제, 또는 인간 환자에서 항엽산 항대사물을 통시에 투여한다. 투여될 최대 유효 투여량은 당업자에게 알려진 기술을 사용하여 결정한다. 환자는 질환 진행에 대해 모니터링한다.
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Claims (75)

  1. 암을 치료하는 방법으로서,
    하기 화학식 (I-D)로 나타낸 치료 유효량의 SRA141 화합물을 암이 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    Figure pct00012

    상기 치료 유효량은 10-400 mg/일 또는 10-1000 mg/일의 절대 용량인, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 대상체가 인간인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체가 표 4의 포함 기준 중 하나 이상을 갖는 것으로 식별되는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 이전에 Cdc7 억제제 요법을 받은 적이 없는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량이 적어도 10 mg/일, 적어도 20 mg/일, 적어도 40 mg/일, 적어도 80 mg/일, 적어도 160 mg/일, 또는 적어도 320 mg/일인, 방법.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량이 적어도 15 mg/일, 적어도 25 mg/일, 적어도 50 mg/일, 적어도 100 mg/일, 적어도 150 mg/일, 적어도 200 mg/일, 적어도 250 mg/일, 적어도 300 mg/일, 적어도 350 mg/일, 적어도 400 mg/일, 적어도 450 mg/일, 또는 적어도 500 mg/일인, 방법.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량이 적어도 100 mg/일, 적어도 200 mg/일, 적어도 300 mg/일, 적어도 400 mg/일, 적어도 500 mg/일, 적어도 600 mg/일, 적어도 700 mg/일, 적어도 800 mg/일, 적어도 900 mg/일, 또는 적어도 1000 mg/일인, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 SRA141 화합물이 경구로 투여되는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 SRA141 화합물이 매일 투여되는, 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 SRA141 화합물이 적어도 연속 5 일, 적어도 연속 7 일, 또는 적어도 연속 14 일 동안 투여되는, 방법.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 SRA141 화합물이 매주 5 일 투약 후 2 일 비투약; 매일 1 주 투약 후 1, 2, 또는 3 주 비투약; 매일 2 또는 3 주 투약 후 1, 또는 2 주 비투약; 및 주간 주기의 2 및 3 일에 투약으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약 일정 후에 투여되는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량이 1 일 1 회 단일 용량으로 투여되는, 방법.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량의 절반이 1 일 2 회 투여되는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 흑색종, 자궁암, 갑상선암, 혈액암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 대장암(CRC), 위암, 자궁내막암, 간세포암, 백혈병, 림프종, 골수종, 비소세포 폐암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 뇌암, 육종, 소세포 폐암, 신경모세포종, 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 급성 골수 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 호산구성 백혈병, 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액암인, 방법.
  16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 AML인, 방법.
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 전이성 대장암(mCRC)인, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 고도 현미부수체 불안정성(MSI-H) 상태를 갖는 것으로 분류되지 않는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 암이 현미부수체 안정성 안정(MSS) 상태를 갖는 것으로 분류되는, 방법.
  20. 제18항에 있어서, 상기 MSI-H 상태가 모노뉴클레오티드 반복 마커, 디뉴클레오티드 반복 마커, 유사단형성 마커, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 반복적인 DNA 서열 검출에 의해 결정되는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 검출이 PCR 분석, 다중화 PCR 분석, 모세관 전기영동, DNA 서열분석, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 수행되는, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암과 관련된 종양이 염색체 불안정성(CIN), 방추체 체크포인트 어셈블리 결함, 유사분열 결함, G1/S 체크포인트 결함, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 표현형을 포함하는, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암과 관련된 종양이 Wnt 신호전달 경로 돌연변이를 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 Wnt 신호전달 경로 돌연변이가 선종성 용종증(APC) 유전자 돌연변이, FAT1 돌연변이, FAT4 돌연변이, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 보관 또는 신선한 종양 생검을 사용하여 암과 관련된 종양을 스크리닝하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 스크리닝이 조직화학적 염색에 의한 염색체 분리 패턴 조사, 조직화학적 염색에 의한 약력학적 마커 조사, 또는 이의 조합을 포함하는 방법.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 스크리닝이 종양이 비정상적인 유사분열을 나타내는지 여부를 결정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스크리닝이 SRA141 화합물의 투여 전에 수행되는, 방법.
  29. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스크리닝이 SRA141 화합물의 투여 후에 수행되는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 투여 후 대상체에서 SRA141 화합물의 600 초과, 1000 초과, 또는 1400 ng/mL 초과의 혈장 Cmax를 초래하는, 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 투여 후 대상체에서 SRA141 화합물의 5800 초과, 11900 초과, 또는 16400 ng-h/mL 초과의 AUClast를 초래하는, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 투여 후 대상체에서 SRA141 화합물의 500 ng/mL 초과, 600 ng/mL 초과, 900 ng/mL 초과, 또는 1300 ng/mL 초과의 종양내 농도를 초래하는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 종양내 농도가 SRA141 화합물의 다중 투여 후에 도달하는, 방법.
  34. 제32항에 있어서, 상기 종양내 농도가 SRA141 화합물의 단일 투여 후에 도달하는, 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 MCM2 인산화의 생체내 억제를 초래하는, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 아미노산 잔기 Ser40 및/또는 Ser53에서 일어나는, 방법.
  37. 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 암과 관련된 종양에서 일어나는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 암과 관련된 종양에서 MCM2 인산화의 생체내 억제가 미처리된 종양 샘플에 비해 적어도 50%인, 방법.
  39. 제38항에 있어서, 상기 미처리된 종양 샘플이 SRA141 화합물을 대상체에게 투여하기 전에 수득된 생검인, 방법.
  40. 제35항 내지 제39항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 SRA141 화합물의 단일 투여 후인, 방법.
  41. 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 대상체의 피부에서 일어나는, 방법.
  42. 제35항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 웨스턴 블롯 분석, 면역조직화학(IHC), 또는 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LC/MS)에 의해 측정되는, 방법.
  43. 제35항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 대상체의 생검에서 측정되는, 방법.
  44. 제35항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 SRA141 화합물의 다중 용량 후에 측정되는, 방법.
  45. 제35항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MCM2 인산화의 생체내 억제가 SRA141 화합물이 정상 상태 혈장 농도에 도달한 후에 측정되는, 방법.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 암과 관련된 종양 또는 병변의 성장 억제를 초래하는, 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 성장 억제가 SRA141의 투여 후 표적 병변의 제2 직경을 SRA141의 투여 전 표적 병변의 제1 직경과 비교함으로써 결정되는, 방법.
  48. 제46항에 있어서, 상기 성장 억제가 SRA141의 투여 후 표적 병변 그룹의 직경의 제2 합계를 SRA141의 투여 전 표적 병변 그룹의 직경의 제1 합계와 비교함으로써 결정되는, 방법.
  49. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양 또는 병변 성장이 미처리된 종양에 비해 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%만큼 억제되는, 방법.
  50. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양의 성장 억제가 미처리된 종양에 비해 적어도 47%의 최소 성장 억제인, 방법.
  51. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양의 성장 억제가 미처리된 종양에 비해 적어도 93%의 최소 성장 억제인, 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 암과 관련된 종양의 회귀를 초래하는, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 상기 회귀가 완전 회귀인, 방법.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 암과 관련된 종양의 세포독성을 초래하는, 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 암과 관련된 종양 직경의 합계에서 적어도 30% 감소를 초래하는, 방법.
  56. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 대상체에서 부분 관해(partial response), 완전 관해(complete response), 또는 안정 병변을 초래하는, 방법.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 제2 치료 유효량의 하나 이상의 추가 치료를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제가 항신생물제를 포함하는, 방법.
  59. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 DNA 폴리머라제 억제제, 수용체 티로신 키나제 억제제, 포유류 라파마이신 표적(mTOR) 경로 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  60. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 미토겐 활성화 단백질 키나제(MAPK) 경로 억제제를 포함하는, 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 MAPK 억제제가 트라메티닙인, 방법.
  62. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 레티노이드 경로 조절인자를 포함하는, 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 레티노이드 경로 조절인자가 RXR 작용제 벡사로텐 또는 RAR 작용제 트레티노인(올트랜스 레티노산, ATRA)인, 방법.
  64. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 세포자멸사 조절인자를 포함하는, 방법.
  65. 제64항에 있어서, 상기 세포자멸사 조절인자가 세포자멸사 유도인자를 포함하는, 방법.
  66. 제65항에 있어서, 상기 세포자멸사 유도인자가 BCL-2 억제제를 포함하는, 방법.
  67. 제66항에 있어서, 상기 BCL-2 억제제가 ABT-199인, 방법.
  68. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3 키나제(PI3K) 경로 억제제를 포함하는, 방법.
  69. 제68항에 있어서, 상기 PI3K 경로 억제제가 코판리십인, 방법.
  70. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 PARP 억제제를 포함하는, 방법.
  71. 제70항에 있어서, 상기 PARP 억제제가 BMN673인, 방법.
  72. 제58항에 있어서, 상기 항신생물제가 오로라 B 키나제 억제제인, 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 오로라 B 키나제 억제제가 바라세르팁인, 방법.
  74. 제57항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료가 매일 투여되는, 방법.
  75. 제57항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 SRA141 화합물 및 하나 이상의 추가 치료가 조합하여 상승적 효과를 보여주는, 방법.
KR1020217010445A 2018-09-24 2019-08-28 Cdc7 억제제를 포함하는 암의 치료 방법 KR20210064252A (ko)

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