KR20210055856A - 류마티스 관절염의 판누스 진단용 바이오마커 및 이의 이용 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 류마티스 관절염의 판누스 진단용 바이오마커 및 이의 이용에 관한 것으로, 본 발명에 따른 신생혈관형성 관련 인자 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)는 류마티스 관절염 환자의 활액 및 혈청에서 증가되어 있으며, 활액에서의 PlGF 검출량은 임상적 염증수치, GSUS, 및 PDUS 수준과 유의한 상관관계를 가지고, 혈청에서의 VEGF 검출량은 질병활성도, GSUS, 및 PDUS 수준과 유의한 상관관계를 가지는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 PlGF 및 VEGF를 류마티스 관절염의 판누스 진단용 바이오마커로 이용하여 판누스의 증식 정도를 확인함으로써 류마티스 관절염 진단 및 치료제 개발 분야 등에 유용하게 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 류마티스 관절염의 판누스 진단용 바이오마커 및 이의 이용에 관한 것이다.
류마티스 관절염(rheumatoid arthritis, 이하 RA)은 대표적인 자가면역질환으로, 관절 주위를 둘러싸고 있는 활막이라는 조직의 염증 때문에 일어나며, 전체 인구의 약 1~2% 가량이 발병하는 것으로 알려진 질환이다. 류마티스 관절염의 발병은 유전적-환경적 인자가 작용하며, 유전적인 요인이 대략 60% 정도 기여하는 것으로 알려져 있다. 대표적인 증상은 활막관절(synovial joint)에 나타나는 염증으로, 관절이 붓고 통증이 있으며, 질환이 발전하면 영구적으로 관절이 변형되고 관절의 기능에 심각한 손상을 주어 삶의 질이 크게 저하된다. 류마티스 관절염은 질병활성도가 조절되지 않으면 시간 경과에 따라 비가역적 관절변형과 장애가 발생하며 이를 조절하기 위한 면역억제제 및 생물학적 제제 등에 대한 약물반응 정도에 따라 관절파괴가 영향을 받는다.
초기 류마티스성 관절염은 처음에 더 작은 관절, 예컨대 손목, 손, 발목 및 발의 관절에 영향을 미치며 질환이 진행됨에 따라, 어깨, 팔꿈치, 무릎, 둔부, 턱 및 목의 관절들에도 영향을 나타낼 수 있다. 또한, 관절 내 부위 또는 관절 주변 부위에만 영향을 미치는 다른 관절염 상태들과는 달리, 류마티스성 관절염은 피부, 혈관, 심장, 폐 및 근육을 포함하는 신체에 걸쳐 관절외 조직에서 염증을 야기할 수 있는 전신성 질환이다. 한번 발병이 시작되면 꾸준히 악화되고 관절에 심각한 염증과 통증이 증가하는 질병인 류마티스성 관절염에 대한 적절한 치료방법이 없기 때문에 류마티스성 관절염의 초기 진단이 매우 중요하나 아직까지 류마티스성 관절염의 발병 및 진행 정도를 조기에 진단하는 기술 또한 미흡하여 이에 대한 연구 및 개발이 필요한 실정이다.
류마티스 관절염의 진단에서는 누구나 인정할 수 있는 생화학적 지표나 병리소견, 영상소견 등의 소위 골드 스탠다드가 없기 때문에 여러 지표의 조합을 사용한 분류기준이라는 방법을 통하여 진단하게 된다. 류마티스 인자는 1987년 이후로 미국 류마티스학회 (American College of Rheumatology, ACR)에서 류마티스 진단에서 혈청학적 검사로 사용되고 있다. 류마티스 인자는 면역글로블린 IgG의 Fc 영역에 결합하는 자가항체이며, 류마티스 관절염 환자의 약 80%에서 증가되어 있지만, 관절염에 대한 특이도가 높지 않으며, 다른 자가 면역 질환이나 만성 염증, 악성종양, 건강한 노인에게서도 나타나는 단점이 있다.
한편, 류마티스 관절염 발병 후 질환이 발전하면서 관절의 염증을 증가시키고, 나아가 관절의 파괴를 진행시키는 가장 큰 직접적인 요인은 판누스(pannus)의 증식이라고 할 수 있는데, 정상 관절의 경우 1~2겹 정도의 세포층으로 이루어져 있는 활막(synovial membrane)은 점성을 띄는 세포외 기질(extracellular matrix) 등을 만들어 내면서 관절의 윤활에 필수적인 활액(synovial fluid)을 유지시키는 중요한 역할을 하는 반면, 류마티스 관절염을 통해서 지속적인 염증성 환경에 노출된 활막세포들은 과다하게 증식하여 여러겹의 세포층을 형성하게 되고, 염증성 사이토카인을 생산하며 침윤성을 획득하여 연골을 파괴하고 관절의 파괴에 주요하게 기여하게 된다. 이와 같이 류마티스 관절염 활막관절에서 과다하게 증식된 활막의 덩어리를 일컬어 판누스 (pannus)라고 하며, 판누스의 증식 및 활성 정도는 관절염의 진행 정도를 나타내는 지표라고 할 수 있다. 그러므로, 판누스 관련 인자들은 신뢰성 있는 류마티스 관절염 바이오마커로 충분히 제시될 수 있다.
이에, 본 발명자들은 판누스의 병적 상태를 신속 간편하면서도 즉각적으로 진단할 수 있는 바이오마커를 개발함으로써 류마티스 관절염의 진단 등에 활용하고자 하였다.
본 발명자들은 판누스의 병적 상태를 가장 잘 표현해 낼 수 있는 바이오마커를 발굴해내기 위해 연구를 진행한 결과, 활막세포에서 생산되는 주요 신생혈관형성(angiogenesis)과 관련된 인자 중 활액 PlGF 검출량이 임상적 염증수치, 판누스의 증식 정도를 나타내는 GSUS, 및 혈관형성 정도를 나타내는 PDUS 수준과 유의한 상관관계를 가지는 것을 확인하였으며, 혈청 VEGF 검출량은 질병활성도, GSUS, 및 PDUS 수준과 유의한 상관관계를 가지는 것을 확인하였다.
이에, 본 발명의 목적은 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 이용을 제공하는 것이다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 활액에서의 PlGF(placenta growth factor) 발현 또는 활성 수준; 또는 혈청에서의 VEGF(vascular endothelial growth factor) 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준; 또는 혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 바이오마커 조성물의 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의, 류마티u스 관절염의 판누스(pannus) 진단에 이용되는 바이오마커로서의 용도를 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 PlGF는 활액에서 WBC counts, %호중구, ESR(erythrocyte sedimentation rate), CRP(C reactive protein), GSUS(Grey scale ultrasonography), 및 PDUS(power-Doppler ultrasonography)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상과 양의 상관관계를 가질 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 VEGF는 혈청에서 TJC(tender joint count), SJC(swollen joint count), ESR, CRP, DAS 28(disease activity score 28), GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상과 양의 상관관계를 가질 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준이 정상 대조군에 비해 증가되어 있고, WBC counts, %호중구, ESR, CRP, GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수준과 양의 상관관계를 나타낼 경우; 또는
혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준이 정상 대조군에 비해 증가되어 있고, TJC, SJC, ESR, CRP, DAS 28, GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수준과 양의 상관관계를 나타낼 경우 판누스 증식 정도가 높은 것으로 진단하는 단계를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 류마티스 관절염 환자로부터 활액 또는 혈청을 분리하여 후보물질을 처리하는 단계;
상기 후보물질 처리 후 류마티스 관절염 환자의 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준, 또는 혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스 억제용 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 후보물질 처리 후 류마티스 관절염 환자의 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준이 후보물질 처리 전에 비해 감소한 경우; 또는
혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준이 후보물질 처리 전에 비해 감소한 경우, 후보물질을 류마티스 관절염의 판누스 억제용 물질로 선택하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 신생혈관형성 관련 인자 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)는 류마티스 관절염 환자의 활액 및 혈청에서 증가되어 있으며, 활액에서의 PlGF 검출량은 임상적 염증수치, GSUS, 및 PDUS 수준과 유의한 상관관계를 가지고, 혈청에서의 VEGF 검출량은 질병활성도, GSUS, 및 PDUS 수준과 유의한 상관관계를 가지는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 PlGF 및 VEGF를 류마티스 관절염의 판누스 진단용 바이오마커로 이용하여 판누스의 증식 정도를 확인함으로써 류마티스 관절염 진단 및 치료제 개발 분야 등에 유용하게 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 활막염 비대 및 과맥관질을 보여주는 초음파 검사 결과를 나타낸 것으로, 도 1의 A 및 B는 Grey scale US(GSUS) 이미지, C 및 D는 power-Doppler US(PDUS) 이미지를 나타낸 것이다.
도 2a는 본 발명의 일 구현예에 따른 류마티스 관절염(RA) 환자(n=54) 및 골관절염(OA) 대조군(n=30)의 활액(SF) 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다. Bar는 평균 및 SD를 나타낸다.
도 2b는 본 발명의 일 구현예에 따른 RA 환자의 활액 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도의 초음파 검사(US)상 활막염 중증도, 헤모글로빈, ESR, CRP, WBC count 및 %호중구와의 상관관계를 나타낸 도면이다(상단 도면: 상관관계 매트릭스 히트맵(correlation matrix heatmap), 하단 도면: 상관관계 그래프(correlation plot)). *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.
도 3a는 본 발명의 일 구현예에 따른 GSUS 0-1 RA 환자와 비교하여 GSUS 2-3 RA 환자의 활액 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다.
도 3b는 본 발명의 일 구현예에 따른 PDUS 1-3 RA 환자 및 PDUS 0 RA 환자에서의 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다.
도 3c는 본 발명의 일 구현예에 따른 진행성 활막염(active synovitis)을 갖는 RA 환자 및 진행성 활막염을 갖지않는 RA 환자에서의 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다. Bar는 평균 및 SD를 나타낸다. *p < 0.05, **p < 0.01.
도 4a는 본 발명의 일 구현예에 따른 RA 환자(n=157) 및 OA 대조군(n=50)의 혈청 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다.
도 4b는 본 발명의 일 구현예에 따른 RA 환자의 혈청 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도와 압통 관절 수(tender joint count), 부종 관절 수(swollen joint count), ESR, CRP, DAS28 및 활막염의 US 점수(GSUS, PDUS) 사이의 상관관계를 나타낸 도면이다.
도 4c는 본 발명의 일 구현예에 따른 활막염 비대의 중증도에 따른 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6의 혈청 내 농도를 나타낸 도면이다.
도 4d는 본 발명의 일 구현예에 따른 맥관질의 정도에 따른 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6의 혈청 내 농도를 나타낸 도면이다.
도 4e는 본 발명의 일 구현예에 따른 진행성 활막염에 따른 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6의 혈청 내 농도를 나타낸 도면이다. Bar는 평균 및 SD를 나타낸다. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.
도 2a는 본 발명의 일 구현예에 따른 류마티스 관절염(RA) 환자(n=54) 및 골관절염(OA) 대조군(n=30)의 활액(SF) 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다. Bar는 평균 및 SD를 나타낸다.
도 2b는 본 발명의 일 구현예에 따른 RA 환자의 활액 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도의 초음파 검사(US)상 활막염 중증도, 헤모글로빈, ESR, CRP, WBC count 및 %호중구와의 상관관계를 나타낸 도면이다(상단 도면: 상관관계 매트릭스 히트맵(correlation matrix heatmap), 하단 도면: 상관관계 그래프(correlation plot)). *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.
도 3a는 본 발명의 일 구현예에 따른 GSUS 0-1 RA 환자와 비교하여 GSUS 2-3 RA 환자의 활액 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다.
도 3b는 본 발명의 일 구현예에 따른 PDUS 1-3 RA 환자 및 PDUS 0 RA 환자에서의 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다.
도 3c는 본 발명의 일 구현예에 따른 진행성 활막염(active synovitis)을 갖는 RA 환자 및 진행성 활막염을 갖지않는 RA 환자에서의 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다. Bar는 평균 및 SD를 나타낸다. *p < 0.05, **p < 0.01.
도 4a는 본 발명의 일 구현예에 따른 RA 환자(n=157) 및 OA 대조군(n=50)의 혈청 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도를 나타낸 도면이다.
도 4b는 본 발명의 일 구현예에 따른 RA 환자의 혈청 내 VEGF, PlGF, sFlt-1, 및 IL-6 농도와 압통 관절 수(tender joint count), 부종 관절 수(swollen joint count), ESR, CRP, DAS28 및 활막염의 US 점수(GSUS, PDUS) 사이의 상관관계를 나타낸 도면이다.
도 4c는 본 발명의 일 구현예에 따른 활막염 비대의 중증도에 따른 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6의 혈청 내 농도를 나타낸 도면이다.
도 4d는 본 발명의 일 구현예에 따른 맥관질의 정도에 따른 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6의 혈청 내 농도를 나타낸 도면이다.
도 4e는 본 발명의 일 구현예에 따른 진행성 활막염에 따른 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6의 혈청 내 농도를 나타낸 도면이다. Bar는 평균 및 SD를 나타낸다. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.
본 발명은 PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "PlGF(placenta growth factor)"는 태반 성장인자로, 인간 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 의 혈소판-유래 성장 인자-유사 영역에 대해 매우 상동성이 있으며, VEGF 와 같이, PlGF 는 시험관내 및 생체내 혈관신생 활성을 갖는다. 본 발명에 있어서, 상기 PlGF는 이를 갖는 동물의 PlGF라면 한정되지 않으며, 예컨대 인간 또는 마우스의 PlGF일 수 있다. 상기 PlGF는 폴리펩타이드 길이 전체를 포함할 수도 있고 이의 단편을 포함할 수도 있다. 바람직하게, 상기 PlGF는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열(genebank: CAA38698.1)을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "VEGF(vascular endothelial growth factor)"는 상피성장인자 수용체(epidermal growth factor receptor; EGFR/ErbB)의 일원이다. VEGF는 세포 증식 및 분화를 조절하는 데 필수적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 구체적으로 세포 외 성장 인자가 결합하면 다른 HER 수용체와 함께 동형- 및/또는 이형이합체로 조립되는 강한 경향성을 갖고, 이는 다양한 형태의 신호 전달 경로 활성화를 초래하여, 세포자멸, 생존, 또는 세포 증식을 유도한다. 본 발명에 있어서, 상기 VEGF는 이를 갖는 동물의 VEGF라면 한정되지 않으며, 예컨대 인간 또는 마우스의 VEGF일 수 있다. 상기 VEGF는 폴리펩타이드 길이 전체를 포함할 수도 있고 이의 단편을 포함할 수도 있다. 바람직하게, 상기 VEGF는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열(genebank: AAA35789.1)을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "진단"은 특정 질병 또는 질환에 대한 한 객체의 감수성(susceptibility)을 판정하는 것, 한 객체가 특정 질병 또는 질환을 현재 가지고 있는 지 여부를 판정하는 것, 특정 질병 또는 질환에 걸린 한 객체의 예후(prognosis)를 판정하는 것, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예컨대, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링 하는 것)을 모두 포함하는 의미이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "바이오마커(biomarker)"는 단백질이나 DNA, RNA, 대사물질 등을 이용해 몸 안의 변화를 알아낼 수 있는 지표를 의미하고, 바이오마커를 활용하면 생명체의 정상 또는 병리적인 상태, 약물에 대한 반응 정도 등을 객관적으로 측정할 수 있다. 암을 비롯해 뇌졸증, 치매 등 각종 난치병을 진단하는데 바이오마커가 활용되고 있으며, 본 발명에 있어서는 류마티스 관절염 또는 류마티스 관절염의 판누스를 진단하는데 이용될 수 있다. 또한, 신약개발과정에서 바이오마커를 활용할 수 있고, 이를 통해서 신약의 안전성을 확보할 수 있고 신약 개발 과정에서 소요되는 비용을 절감할 수 있는 효과도 얻을 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 "PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제"는 PlGF 또는 VEGF의 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA에 특이적으로 결합하여, PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준을 확인함으로써 PlGF 또는 VEGF의 검출에 사용될 수 있는 물질을 의미한다. 예컨대, PlGF 또는 VEGF에 특이적으로 결합하는 항체, 앱타머, 리간드, PNA(peptide nucleic acid), 올리고펩티드, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어 "항체"는 항원에 특이적으로 결합하여 인식하는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편에서 유래하는 프레임워크 영역을 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론, 및 뮤 불변 영역 유전자를 비롯하여, 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류되며, 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되고, 결과적으로 각각 면역글로불린 부류 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 한정한다. 전형적으로, 항체의 항원-결합 영역은 결합 특이성 및 친화성에서 가장 핵심적이게 된다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항체의 단편은 인간, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 낙타 등을 포함한, 상이한 유기체에서 유래될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "앱타머(aptamer)"는 올리고뉴클레오타이드 물질로서, 그 자체로 안정된 삼차구조를 가지면서 표적분자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 단일가닥 핵산(DNA, RNA 또는 변형핵산)을 의미하며, 화학적으로 합성이 가능하고 열과 pH 변화에 대하여 비교적으로 유연한 특징을 가지고 있고, SELEX(Systematic Evolution of Ligands of Exponential enrichment)라는 방법으로 원하는 다양한 목적 물질 (단백질, 펩타이드, 지질, 무기 화합물, 저분자 유기물질, 당, 염색물질, DNA, 금속이온, 세포, 항생제 등)에 대한 앱타머를 개발할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 "PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준을 측정"하는 것은 류마티스 관절염의 판누스를 진단하기 위하여 시료에서 PlGF 또는 VEGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA의 존재 여부와 발현 정도 또는 활성 정도를 확인하는 과정일 수 있으며, 예컨대 상기 PlGF 또는 VEGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA에 대하여 특이적으로 결합하는 분자를 이용하여 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA의 양 또는 활성 수준을 확인하는 방법이 적용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준은 종래에 개발된 다양한 정량적 또는 정성적 면역분석 프로토콜에 따라 확인할 수 있다. 예컨대, 상기 면역분석 포맷은 효소면역분석법(ELISA), 방사능면역분석법(radioimmnoassay, RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법(immnohistochemical staining), 유체 세포 측정법(flow cytometry), 형광활성화 세포분류법(FACS), 효소기질발색법 및 항원-항체 응집법을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에 따르면 효소면역분석법(ELISA)을 이용하여 PlGF 또는 VEGF의 발현 또는 활성 수준을 확인할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 활액에서의 PlGF(placenta growth factor) 발현 또는 활성 수준; 또는 혈청에서의 VEGF(vascular endothelial growth factor) 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준; 또는 혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 방법은 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준이 정상 대조군에 비해 증가되어 있고, WBC counts, %호중구, ESR, CRP, GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수준과 양의 상관관계를 나타낼 경우; 또는
혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준이 정상 대조군에 비해 증가되어 있고, TJC, SJC, ESR, CRP, DAS 28, GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수준과 양의 상관관계를 나타낼 경우 판누스 증식 정도가 높은 것으로 진단하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "상관관계"는 두 변량 중 한 쪽이 증가함에 따라 다른 한 쪽이 증가 또는 감소할 때 두 변량의 관계를 의미한다. 한 쪽이 증가함에 따라 다른 한 쪽이 증가하는 경우 양의 상관관계, 한 쪽이 증가함에 따라 다른 한 쪽이 감소하는 경우 음의 상관관계라고 한다.
본 발명에 있어서, PlGF는 류마티스 관절염 환자의 활액에서 발현 또는 활성 수준이 증가하며, 상기 PlGF의 발현 또는 활성 수준이 증가함에 따라 활액에서의 (white blood cell(WBC) counts), %호중구, ESR(erythrocyte sedimentation rate), CRP(C reactive protein), GSUS(Grey scale ultrasonography), 및 PDUS(power-Doppler ultrasonography)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수준이 증가하여 PlGF와 양의 상관관계를 가질 수 있다.
또한, VEGF는 류마티스 관절염 환자의 혈청에서 발현 또는 활성 수준이 증가하며, 상기 VEGF의 발현 또는 활성 수준이 증가함에 따라 혈청에서의 TJC(tender joint count), SJC(swollen joint count), ESR, CRP, DAS 28(disease activity score 28), GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 수준이 증가하여 VEGF와 양의 상관관계를 가질 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 "판누스의 증식"은 활막에 염증이 있다고도 표현하는데, 이를 활막염(synovitis)이라고 한다. 이 활막염의 중증도(severity)를 측정함에 있어서 초음파(ultrasonography, US)를 이용할 수 있으며, 예컨대 GSUS(Grey scale ultrasonoraphy)를 이용하여 활막염의 중증도, 즉 판누스의 증식 정도를 나타낼 수 있다. 또한, 도플러 효과를 이용하여 유체의 흐름을 추가 확인할 수 있는 PDUS(power-Doppler ultrasonography)는 증식된 활막에서 혈관형성 정도를 나타낼 수 있다.
또한, 본 발명은 류마티스 관절염 환자로부터 활액 또는 혈청을 분리하여 후보물질을 처리하는 단계; 및
상기 후보물질 처리 후 류마티스 관절염 환자의 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준, 또는 혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스 억제용 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 “후보물질”은 류마티스 관절염 환자의 판누스 억제 여부를 확인하기 위하여 스크리닝에 사용되는 미지의 물질을 의미하며, 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 류마티스 관절염 판누스 억제용 후보물질은 뉴클레오티드, DNA, RNA, 아미노산, 앱타머, 단백질, 화합물, 천연물, 및 천연추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한은 없다.
본 발명에 있어서, 상기 후보물질 처리 후 류마티스 관절염 환자의 활액에서의 PlGF 발현 또는 활성 수준이 후보물질 처리 전에 비해 감소한 경우; 또는
혈청에서의 VEGF 발현 또는 활성 수준이 후보물질 처리 전에 비해 감소한 경우, 후보물질을 류마티스 관절염의 판누스 억제용 물질로 선택하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실험예에서는 활막세포에서 주로 분비되는 혈관신생유발 인자인 PlGF 및 IL-6 수준이 RA 환자의 SF에서 증가되어 있으며, PlGF 및 IL-6 수준과 전신 염증 반응을 나타내는 마커인 혈액 내 ESR 및 CRP 수준, SF 내 WBC counts 및 %호중구, 판누스의 증식 정도를 나타내는 GSUS 및 혈관형성 정도를 나타내는 PDUS의 상관관계를 확인함으로써, PlGF 및 IL-6 수준과 RA 환자에서의 활막염 중증도 및 전신 염증 반응이 상관관계를 가지는 것을 확인하였다(실험예 1 참조).
본 발명의 다른 실험예에서는 VEGF 및 IL-6 수준이 RA 환자의 혈청에서 증가되어 있으며, VEGF 및 IL-6 수준과 TJC, SJC, ESR, CRP 및 DAS28 점수, GSUS 및 PDUS의 상관관계를 확인함으로써, 상기 VEGF 및 IL-6의 혈청 수준이 활막 증식 및 초음파 검사(US) 상 과맥관질(hyper-vascularity)을 나타내는 것을 확인하였다(실험예 2 참조).
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예
1.
활액
및 혈청 채취
류마티스 관절염(RA) 환자(n=157)는 2010 ACR/EULAR RA 분류 기준을 충족하였다. 활액(synovial fluid, 이하 SF) 시료는 부은 관절(swollen joint)에 대한 관절강세정술(arthrocentesis)을 시술받은 RA 환자(n=54) 및 골관절염(osteoarthritis, OA) 대조군(n=30)으로부터 채취하였으며, 상기 관절강세정술을 시술받은 RA 환자들의 특징을 하기 표 1에 나타내었다.
| Variable | Total patients (n=54) |
| Age, years | 59.3 (12.4) |
| Female, n (%) | 51 (94.4) |
| Serum RF, IU/mL | 59.6 (7.5-173.7) |
| Serum ACPA, U/mL | 84.0 (5.4-291.3) |
| Blood WBC count, /μL | 7,390 (6,373-8,958) |
| Blood % neutrophil | 65.1(10.6) |
| Hemoglobin, g/dL | 12.3 (1.4) |
| ESR, mm/hr | 22.5 (12.8-39.3) |
| CRP, mg/dL | 0.89 (0.20-2.08) |
| WBC count in the SF, /μL | 11700 (4275-17200) |
| % neutrophil in the SF | 63.0 (43.0-75.5) |
| Glucocorticoid use, n (%) | 46 (85.2) |
| Glucocorticoid dose, PD equivalent, mg/day | 5.0 (2.5-7.5) |
| Methotrexate use, n (%) | 28 (51.9) |
| GSUS, grade ≥2, n (%) | 31 (57.4) |
| PDUS, grade ≥1, n (%) | 22 (40.7) |
| Active synovitis (GSUS ≥2 or PDUS ≥1), n (%) | 32 (59.3) |
상기 표 1에서 데이터는 연속 변수에 대한 평균(표준편차) 또는 중앙값(interquartile range)으로 표시된다. RF: 류마티스성 인자(rheumatoid factor), ACPA: 항-시트룰린화 펩티드 항체(anti-citrullinated peptide antibodies), WBC: 백혈구(white blood cell), ESR: 적혈구 침강 속도(erythrocyte sedimentation rate), CRP: C-반응성 단백질(C-reactive protein), SF: 활액(synovial fluid), PD: prednisone, GSUS: grey scale ultrasound, PDUS: power Doppler ultrasound.
혈청 시료 역시 연구 개시시점에서 RA 환자(n=157) 및 OA 대조군(n=50)으로부터 채취하였다. 157명의 RA 환자 중에서, 중등도(moderate) 또는 중증(high)의 질병활성도를 갖는 환자는 103명, 낮은 질병활성도를 갖는 환자는 54명으로 분류되었고, 이들의 특징을 하기 표 2에 나타내었다.
| Variable | Total (n=157) | Low DA (n=54) | Moderate or High DA (n=103)* | p value |
| Age, years | 56 (11.6) | 55.9 (11.8) | 56 (11.6) | 0.951 |
| Female, n (%) | 136 (86.6) | 45 (83.3) | 91 (88.3) | 0.380 |
| BMI, kg/m2 | 23 (20.8-24.4) | 22.8 (20.5-23.9) | 23.1 (21-24.9) | 0.125 |
| Duration of disease, years | 5 (1-13.5) | 7 (3-12.3) | 4 (0-15) | 0.026 |
| ESR, mm/hour | 26 (13-44) | 12 (3.8-21) | 36 (20-52) | <0.001 |
| CRP, mg/dL | 0.42 (0.08-1.42) | 0.06 (0.02-0.21) | 0.90 (0.34-2.0) | <0.001 |
| RF, IU/mL | 99 (33.7-362.7) | 69.7 (19.9-156.2) | 121 (40.4-476.7) | 0.015 |
| ACPA, U/mL | 171.3 (37-340) | 200 (42.3-340) | 163.5 (34.9-340) | 0.949 |
| Glucocorticoid use, n (%) | 110 (70.1) | 39 (72.2) | 71 (68.9) | 0.669 |
| PD equivalent, mg/day | 2.5 (0-5) | 2.5 (0-5) | 2.5 (0-5) | 0.772 |
DA: 질병활성도(disease activity), BMI: 체질량 지수(body mass index)본 발명은 가톨릭대학교 병원 임상연구심의위원회로부터 승인 받았으며(No.KC14TIMI0697), 연구 참여자로부터 서면으로 동의를 받았다.
실시예
2.
VEGF
,
PlGF
,
sFlt
-1 및 IL-6 측정
증식하는 활막세포에서 주로 분비되는 주요한 혈관신생 유발인자인 VEGF, PlGF 및 IL-6의 농도를 RA 및 OA 환자의 SF 및 혈청에서 알려진 방법(Yoo SA, Kim M, Kang MC, et al. Nat Immunol 2019;20:1348-59.)에 따라 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)로 측정하였다. 대조군으로, 활막세포에서 생산되는 항-혈관신생 분자인 sFlt-1의 수준을 동일 시료에 대하여 ELISA로 측정하였다. ELISA의 VEGF, PlGF, IL-6 및 sFlt-1 검출한계는 10 pg/ml이었다.
실시예
3. 활막염 중증도(
synovitis
severity) 평가를 위한 관절의 초음파 검사 평가
상기 실시예 1에서 SF 시료를 채취한 RA 환자(n=54)에 대하여 근골격계 초음파 검사(US)를 실시하였다. 추가적으로, 연구 개시시점에서 관절강세정술 및/또는 관절 내 스테로이드 주사가 필요한 명확한 관절 종창 및 압통을 가진 RA 환자(n=68)의 경우, 혈액을 채취할 때 관절에 대한 초음파 검사 역시 실시하였다. 활막염(synovitis) 점수는 도 1에 나타낸 Grey scale US(GSUS) (도 1의 A 및 B) 및 power-Doppler US(PDUS) (도 1의 C 및 D) 이미지로 결정하였다. 이 때 GSUS 이미지는 근위지간(proximal interphalangeal, PIP) 관절 내 활막염 비대를 나타내며, PDUS 이미지는 PIP 관절 내 활막의 과맥관질을 나타낸다. GSUS 점수(0-3 range)는 다음과 같이 활막 비대(synovial hypertrophy)의 정도에 따라 정의하였다: grade 0 = 활막 비대 없음, grade 1 = 최소 활막 비대, grade 2 = 중등도(moderate) 활막 비대, 및 grade 3 = 중증(severe) 활막 비대. PDUS 점수는(0-3 range) 다음과 같이 관절의 활막 내 맥관질(vascularity)의 정도로 평가하였다: grade 0 = Doppler 활성 없음, grade 1 = 최소 Doppler 활성, grade 2 = 중등도(moderate) Doppler 활성(background 활막의 <50%), 및 grade 3 = 중증(severe) Doppler 활성 (background 활막의 >50%). GSUS가 ≥2이거나, PDUS가 ≥1인 경우, 진행성(active) 활막염을 갖는 환자로 고려하였다.
실시예
4. 임상 파라미터 평가
RA 환자의 ESR과 CRP 수준, 압통 관절 수(tender joint count, TJC) 및 부종 관절 수(swollen joint count, SJC)를 연구 개시시점과 그 이후에 측정하였다. 상기 TJC는 관절의 통증을, SJC는 붓기를 의미한다. 또한, 기존에 혈액에서 측정되던 염증 수치인 ESR 및 CRP 수준도 함께 검토되었으며, 이에 더하여 류마티스 인자(rheumatoid factor, RF) 및 ACPA(anti-citrullinated peptide antibodies)를 포함하는 혈청학적 마커에 대한 데이터를 얻었다. 손과 발에 대한 방사선 촬영 검사를 실시하여, 관절열극(joint space)의 좁은 정도와 침식 정도를 van der Heijde-modified Sharp score (vdH Sharp score)에 따라 점수화 하였다. RA 환자의 질병활성도를 질환(disease) 활성도(activity) 점수 28ESR (DAS28ESR)에 기초하여 결정하였다: DAS28≤3.2 = 낮은 질병활성도; DAS28>3.2 = 중등도(moderate) 또는 중증(high) 질병활성도.
실시예
5. 통계 분석
연속 변수의 비교를 student’s unpaired t 테스트 또는 Mann-Whitney U 테스트로 조사하였으며, 범주형 변수의 비교를 Chi-Square 테스트 또는 Fisher’s exact 테스트로 조사하였다. 두 변수 사이의 상관관계를 Pearson’s correlation 테스트로 분석하였다. 동일 대상에서 연구 개시시점과 그 이후의 측정 값 사이의 차이를 조사하기 위하여 paired t test를 적용하였다. 통계 분석은 IBM SPSS Statistics 20 (IBM Corp., Armonk, NY, USA)을 사용하여 실시하였고, 그래프는 GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA)를 사용하여 그렸다. 히트맵 상관관계 이미지(heatmap correlation image)는 R software 3.5.1 (R Project, Vienna, Austria)의 package ‘corrplot’를 사용하여 얻었다.
실험예
1.
PlGF
및 IL-6 수준과 RA
환자에서의
활막염 중증도 및 전신 염증 반응의 상관관계 확인
RA 환자의 SF 내 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6 농도는 도 2a에 나타낸 바와 같이 OA 대조군에 비하여 유의성 있게 높은 것을 확인하였다. 또한, 활막세포에서 주로 분비되는 혈관신생유발 사이토카인인 VEGF, PlGF 및 IL-6 수준이 RA 환자에서 국소 및/또는 전신 염증 반응을 나타내는지 테스트 한 결과, 도 2b 및 상기 표 1에 나타난 바와 같이, SF(n=54) 내 PlGF 농도는 RA에서 전신 염증 반응을 나타내는 마커인 혈액 내 ESR 및 CRP 수준뿐만 아니라, SF 내 WBC counts(r = 0.466 and p = 0.001) 및 %호중구와 상관관계를 나타내었다. 대조군으로 사용한 항-혈관신생 단백질인 sFlt-1의 수준 또한 혈액 내 염증성 마커와 양의 상관관계를 나타내었다(ESR: r = 0.364, p = 0.007; CRP: r = 0.496, p <0.001). 그러나, SF 내 VEGF와 IL-6 수준은 SF 내 WBC counts 및 %호중구와 양의 상관관계를 보였지만, ESR 및 CRP와는 상관관계를 보이지 않았다.
다음으로, 혈관신생유발 사이토카인이 RA 환자에서 초음파 검사(US)로 결정한 활막염 중증도를 반영하는지 알아보았다. 그 결과, 도 3a에 나타낸 바와 같이 SF 내 PlGF 및 IL-6 농도는 GSUS 상 중증도에서 중증 활막염 비대(grade 2 및 3)를 갖는 환자에서 활막 비대가 없거나 약한(mild) 활막 비대(grade 0 및 1)를 갖는 환자에 비하여 높았다. 또한, PDUS 검사 결과, 도 3b에 나타낸 바와 같이 PlGF 농도는 증가된 맥관질(vascularity, grade 1 to 3)을 갖는 환자에서 그렇지 않은 환자(grade 0)에 비하여 높았으나, 다음 세 분자들은 증가된 맥관질에 따른 유의한 차이를 보이지 않았다. 진행성 활막염의 존재를 기준(GSUS ≥2 또는 PDUS ≥1)으로 환자를 두 그룹으로 분류한 경우, 도 3c에 나타낸 바와 같이 VEGF와 sFlt-1은 아니었지만, PlGF 및 IL-6 수준은 비진행성 활막염을 갖는 환자에 비하여 진행성 활막염을 갖는 환자에서 상당히 높은 것을 확인할 수 있었다.
종합하면, 상기와 같은 결과는 활막세포에서 주로 분비되는 혈관신생유발 인자인 PlGF 및 IL-6 수준이 RA 환자의 SF에서 증가되어 있으며, RA 환자의 국소 및 전신 염증 상태뿐만 아니라 활막염 중증도를 나타냄을 보여준다.
실험예
2.
VEGF
및 IL-6의
순환성
수준과 RA의 질병활성도 및 중증도의 상관관계 확인
낮은 질병활성도를 갖는 54명의 환자 및 중등도 또는 중증 질병활성도를 갖는 103명의 환자로 구성된 총 157명의 RA 환자로부터 상기 실시예 1과 같이 혈청 시료를 채취하였으며, 연구 개시시점에서의 의료정보(demographic) 및 질환 특성을 상기 표 2에 나타내었다. 먼저, 혈청 VEGF, PlGF, sFlt-1 및 IL-6 농도를 확인한 결과, 도 4a에 나타낸 바와 같이 RA 환자에서 상기 인자들의 농도가 증가되어 있음을 확인하였다. 또한, RA 질병활성도에 대한 파라미터와 달리, 도 4b에 나타낸 바와 같이 VEGF 및 IL-6 수준은 TJC, SJC, ESR, CRP 및 DAS28 점수와 상관관계를 보였다.
추가적으로, 도 4b의 히트맵 및 상관관계 플롯에 나타난 바와 같이, 혈청 VEGF 및 IL-6는 GSUS 및 PDUS 점수 모두와 양의 상관관계를 보였다. 더욱이, 혈청 VEGF 및 IL-6 농도는 도 4c에 나타낸 GSUS 상 중등도에서 중증 활막 비대를 갖는 환자 및 도 4d에 나타낸 PDUS 상 증가된 맥관질을 갖는 환자에서 그렇지 않은 환자에 비하여 높았으며, 혈청 VEGF 및 IL-6 농도는 도 4e에 나타낸 바와 같이 진행성 활막염과 유의성 있게 관련성을 보였다.
상기 실험예 1의 SF 데이터와는 대조적으로, 혈청 PlGF 수준은 TJC, SJC, CRP 또는 DAS28 점수와 상관관계를 보이지 않았으며(도 4b 참조), 혈청 PlGF 농도는 초음파 검사상 중증도에 따른 차이를 보이지 않았다. 항-혈관신생 단백질인 sFlt-1의 혈청 수준은 ESR 및 DAS28과 단지 보통 정도(modest)의 상관관계만을 보였으며, TJC, SJC, CRP 또는 GSUS와 PDUS 상 활막염 중증도와 어떠한 관련성을 보이지 않았다.
종합하면, VEGF 및 IL-6의 혈청 수준은 혈청 PlGF와 혈청 sFlt1과 달리, 활막 증식 및 초음파 검사(US) 상 과맥관질(hyper-vascularity)을 나타내는 것이며, 이는 TJC, SJC, ESR, CRP 및 DAS28 점수로 평가한 RA의 전신 염증 상태를 반영하는 것임을 알 수 있었다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.
<110> CATHOLIC UNIVERSITY INDUSTRY ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION
<120> Biomarker for diagnosing pannus of rheumatoid arthritis and use
thereof
<130> MP19-289
<160> 2
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 149
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Pro Val Met Arg Leu Phe Pro Cys Phe Leu Gln Leu Leu Ala Gly
1 5 10 15
Leu Ala Leu Pro Ala Val Pro Pro Gln Gln Trp Ala Leu Ser Ala Gly
20 25 30
Asn Gly Ser Ser Glu Val Glu Val Val Pro Phe Gln Glu Val Trp Gly
35 40 45
Arg Ser Tyr Cys Arg Ala Leu Glu Arg Leu Val Asp Val Val Ser Glu
50 55 60
Tyr Pro Ser Glu Val Glu His Met Phe Ser Pro Ser Cys Val Ser Leu
65 70 75 80
Leu Arg Cys Thr Gly Cys Cys Gly Asp Glu Asn Leu His Cys Val Pro
85 90 95
Val Glu Thr Ala Asn Val Thr Met Gln Leu Leu Lys Ile Arg Ser Gly
100 105 110
Asp Arg Pro Ser Tyr Val Glu Leu Thr Phe Ser Gln His Val Arg Cys
115 120 125
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Claims (11)
- PlGF(placenta growth factor) 및 VEGF(vascular endothelial growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질; 또는 이를 코딩하는 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 PlGF는 피검체로부터 채취된 활액(synovial fluid)에서 WBC counts, %호중구, ESR(erythrocyte sedimentation rate), CRP(C reactive protein), GSUS(Grey scale ultrasonography), 및 PDUS(power-Doppler ultrasonography)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상과 양의 상관관계를 가지는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 VEGF는 피검체로부터 채취된 혈청(serum)에서 TJC(tender joint count), SJC(swollen joint count), ESR, CRP, DAS 28(disease activity score 28), GSUS, 및 PDUS로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상과 양의 상관관계를 가지는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 제제는 PlGF 및 VEGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질; 또는 이를 코딩하는 mRNA에 특이적으로 결합하는 항체, 앱타머, 리간드, PNA(peptide nucleic acid), 올리고펩티드, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 및 프로브로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항의 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단용 키트.
- (a) 피검체로부터 시료를 채취하는 단계; 및
(b) 채취된 시료에서의 PlGF(placenta growth factor) 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA의 발현 수준, 또는 VEGF(vascular endothelial growth factor) 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA의 발현 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스(pannus) 진단을 위한 정보제공방법.
- 제6항에 있어서,
상기 시료는 활액 또는 혈청인 것을 특징으로 하는, 정보제공방법.
- 제6항에 있어서,
(c) 상기 PlGF 단백질, 또는 이를 코딩하는 mRNA의 발현 수준이 활액 시료에서 정상 대조군에 비해 증가된 경우; 또는
상기 VEGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA의 발현 수준이 혈청 시료에서정상 대조군에 비해 증가된 경우 판누스 증식 정도가 높은 것으로 진단하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 정보제공방법.
- (a) PlGF(placenta growth factor) 또는 VEGF(vascular endothelial growth factor)를 발현하는 세포에 후보물질을 처리하는 단계; 및
(b) 상기 후보물질 처리 후 PlGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA 발현 수준, 또는 VEGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA 발현 수준을 후보물질 처리 전과 비교하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염의 판누스 억제용 후보물질의 스크리닝 방법.
- 제9항에 있어서,
(c) 상기 후보물질 처리 후 활액에서의 PlGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA 발현 수준이 후보물질 처리 전에 비해 감소한 경우; 또는
혈청에서의 VEGF 단백질 또는 이를 코딩하는 mRNA 발현 수준이 후보물질 처리 전에 비해 감소한 경우, 상기 후보물질을 류마티스 관절염의 판누스 억제용 후보물질로 선택하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 스크리닝 방법.
- 제9항에 있어서,
상기 후보물질은 뉴클레오티드, DNA, RNA, 아미노산, 앱타머, 단백질, 화합물, 천연물, 및 천연추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 스크리닝 방법.
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| KR1020190141956A KR102596937B1 (ko) | 2019-11-07 | 2019-11-07 | 류마티스 관절염의 판누스 진단용 바이오마커 및 이의 이용 |
Applications Claiming Priority (1)
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| KR20230080657A (ko) | 2021-11-30 | 2023-06-07 | 충남대학교산학협력단 | 류마티스 관절염의 진단 또는 관해 평가를 위한 정보 제공 방법 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20120104517A (ko) * | 2009-09-03 | 2012-09-21 | 제넨테크, 인크. | 류마티스 관절염의 치료, 진단 및 모니터링 방법 |
| KR20190000212A (ko) | 2017-06-22 | 2019-01-02 | 한국과학기술원 | 류마티스관절염 예후 예측용 snp 마커 세트 |
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2019
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Journal of Cellular Physiology, 2013, 228권, 페이지 983-990 * |
| The Journal of Immunology, 2003, 171권, 페이지 4853-4859 * |
Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
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|---|---|
| KR102596937B1 (ko) | 2023-11-03 |
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