KR20210015923A - 전구약물 및 접합체에 사용하기 위한 변형된 자기-희생 모이어티 및 사용 및 제조 방법 - Google Patents

전구약물 및 접합체에 사용하기 위한 변형된 자기-희생 모이어티 및 사용 및 제조 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20210015923A
KR20210015923A KR1020207037582A KR20207037582A KR20210015923A KR 20210015923 A KR20210015923 A KR 20210015923A KR 1020207037582 A KR1020207037582 A KR 1020207037582A KR 20207037582 A KR20207037582 A KR 20207037582A KR 20210015923 A KR20210015923 A KR 20210015923A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
val
alkyl
phe
lys
compound
Prior art date
Application number
KR1020207037582A
Other languages
English (en)
Inventor
얌 비. 포우델
산지브 강과르
Original Assignee
브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 filed Critical 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Publication of KR20210015923A publication Critical patent/KR20210015923A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6425—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a receptor, e.g. CD4, a cell surface antigen, i.e. not a peptide ligand targeting the antigen, or a cell surface determinant, i.e. a part of the surface of a cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6865—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from skin, nerves or brain cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Abstract

하기 화학식 (I)에 의해 나타내어지는 화합물은 항체-약물 접합체를 제조하는 데 사용될 수 있다. 그렇게 제조된 접합체는 인간과 마우스 혈청 둘 다에서 안정적이며, 이는 마우스 모델을 사용한 전임상 연구의 수행을 가능하게 한다.

Description

전구약물 및 접합체에 사용하기 위한 변형된 자기-희생 모이어티 및 사용 및 제조 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 35 U.S.C. §119(e) 하에 2018년 5월 29일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/677307의 이익을 청구하며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
발명의 배경
본 개시내용은 전구약물 및 접합체에 사용하기 위한, 효소적 활성화를 조정하도록 변형된 효소적으로 활성화된 자기-희생 모이어티에 관한 것이다.
때때로 펩티드를 생물학적 활성 분자에 부착시켜 후자의 활성을, 프로테아제 효소에 대한 노출이 펩티드 결합을 절단하고 이를 차단되지 않은 활성 형태로 방출할 때까지 일시적으로 차단하는 것이 바람직하다.　 생물학적 활성 분자는 소분자 약물 또는 생물제제, 예컨대 항체일 수 있다.
펩티드가 생물학적 활성 분자에 직접 부착되는 경우에, 후자는 입체적 이유 또는 다른 이유로 펩티드 결합을 절단하는 프로테아제의 능력을 방해할 수 있다. 그렇다면, 자기-희생 (SI) 모이어티가 펩티드와 생물학적 활성 분자 사이에 개재될 수 있다.　 통상적으로 사용되는 SI 모이어티는 p-아미노벤질옥시카르보닐 (PABC) 기이며, 그의 작용 방식은 하기 도시되고, 여기서 생물학적 활성 분자는 화학식 D-NH2의 아민-함유 분자이고, P는 프로테아제에 의해 점선 (a)에서 절단가능한 펩티드이고, Y는 하기 논의된 바와 같이 여러 기능을 수행할 수 있는 임의로 존재하는 모이어티이다.
Figure pct00001
점선 (a)에서 펩티드 P의 프로테아제 절단은 중간체 C를 생성하며, 이는 불안정하고 자발적으로 자기-희생 반응 (기계론적으로, 1,6-제거) 및 탈카르복실화를 겪어 D-NH2를 방출한다. PABC 기는 D와 P 사이의 공간적 분리를 제공하여 전자가 프로테아제의 작용을 방해하는 것을 방지하면서, 그 자체도 방해하지 않도록 구조화된다.　 문헌 [Carl et al. 1981a 및 Doronina et al. 2008]을 참조한다.　 또한, SI 모이어티의 스페이서로서의 사용에 대한 일반적 논의에 대해서는 문헌 [Alouane et al.]을 참조한다.
변형법에서, 생물학적 활성 분자는 유사한 메카니즘에 의해 방출되는 D-OH - 즉, 아민 대신에 알콜 - 일 수 있다. D-OH가 충분히 우수한 이탈기인 경우, SI 모이어티는 탈카르복실화의 부재를 제외하고는 동일한 1,6-제거 반응을 통해 자기-희생하는 p-아미노벤질 알콜 (PABA) 기로 단순화될 수 있다.
Figure pct00002
화학식 (A)의 한 실시양태는 D-NH2의 의도된 작용 부위, 예컨대 종양으로의 표적화된 전달을 위한 항체-약물 접합체 ("ADC", 면역접합체로도 지칭됨)이다.　 이 경우, Y는 항체를 나타내고, D-NH2는 치료제, 워헤드 또는 페이로드로 동의어로 지칭된다. 항암 치료의 경우, 항체 Y는 그의 항원이 종양 연관 항원 - 즉, 암 세포에 의해 고유하게 또는 우선적으로 발현되는 것 - 이도록 선택되며, 따라서 항체 Y는 ADC를 암 부위로 유도하는 표적화제로서의 역할을 한다.
항원이 암 세포의 표면 상에 위치하는 경우에, ADC에 의한 그에 대한 결합은 세포내이입에 의한 표적 세포 내로의 항원-ADC 복합체의 내재화로 빈번하게 이어진다. ADC는 최종적으로 소기관 예컨대 리소좀으로 이르게 된다.　 펩티드 P의 서열은 리소좀 프로테아제에 대한 선택적 기질인 것이다.　 프로테아제에 의한 그의 절단은 D-NH2를 유리시킨다. ADC가 혈류 내에서 순환하는 동안, D-NH2는 그것이 항체에 부착된 상태로 유지되기 때문에, 그리고 펩티드 P가 혈액 내에서 발견되는 프로테아제에 대한 기질이 아니기 때문에, 불활성이다. ADC에 대한 검토를 위해, 문헌 [Gerber et al. 2013]을 참조한다.
또 다른 실시양태에서, (A)는 D-NH2가 PABC 기에 대한 그의 연결로 인해 불활성으로 유지되는 전구약물일 수 있다. PABC 기 및 펩티드 P가 그 자체로 D-NH2의 활성을 차단하기에 충분한 경우, Y는 부재할 수 있다. 그렇지 않은 경우, 추가의 차단 효과를 제공하기 위해 Y가 존재할 수 있고, 이 경우에 Y는 차단 모이어티로 지칭된다. Y가 표적화 기능을 수행하지 않기 때문에, 의도된 작용 부위에서의 D-NH2의 선택적 방출은, 혈액 내 또는 다른 곳의 조직에 비해 상기 부위에서 우세하게 발견되는 효소에 의해 선택적으로 절단되도록 펩티드 P를 설계하는 것에 의존한다.
전형적으로, PABC 또는 PABA 모이어티 내의 방향족 고리는 상기 제시된 바와 같은 비치환된 1,4-페닐렌 고리이다.　 그러나, 치환된 고리에 대한 개시내용이 존재한다. 전자 끄는 기는 1,6-제거 반응을 촉진한다고 언급되어 있다.　 예를 들어 문헌 [Boyd et al. 2010, Burke et al. 2017, Carl et al. 1981b, McDonagh et al. 2007, Senter et al. 2006, 및 Szczepanik et al. 2014]을 참조한다.
또한, 방향족 고리가 1,6-제거 반응을 또한 겪을 수 있는 임의로 치환된 5- 또는 6-원 헤테로사이클인 SI 모이어티에 대한 개시내용이 존재한다. 예를 들어, 문헌 [Feng 2008 및 2011]을 참조한다.
펩티드 결합 절단 이외의 반응에 의해 1,6-제거 반응이 촉발되는 SI 모이어티가 또한 공지되어 있다.　 다른 촉발 반응은 종종 효소에 의해 매개되는, 글루쿠로니드 모이어티의 절단, 보레이트 에스테르의 가수분해, 포스페이트의 가수분해, 니트로 기의 아민으로의 환원, 및 아지드 기의 아민으로의 환원일 수 있다. 다양한 SI 모이어티 및 그의 특성에 대한 검토를 위해, 문헌 [Alouane et al. 2015]을 참조한다.　 비-PABC 또는 비-PABA SI 모이어티에 대한 구체적 개시내용에 대해, 예를 들어, 문헌 [Jeffrey 2011, Jeffrey et al. 2006, Kim et al. 2016, Machida et al. 2016, Major et al. 2011 및 Zhang et al. 2015]을 참조한다.
친수성 기는 PABC 기의 벤질 위치에 부착되어 용해도를 개선시켰다.　 문헌 [Lin et al. 2016].
제1 저자 또는 발명자 및 연도에 의해 본원에 인용된 문헌에 대한 전체 인용은 본 명세서의 말미에 열거되어 있다.
발명의 간단한 요약
의도된 활성화 프로테아제 이외의 프로테아제에 의한 절단을 방지하거나 또는 활성화 프로테아제에 의한 생물학적 활성 분자의 방출 속도를 조정하기 위해, 펩티드-PABC 결합의 단백질분해적 감수성을 조정하는 것이 바람직한 상황이 존재한다.
ADC 또는 전구약물이 효과적이기 위해서는, 예를 들어 ADC 또는 전구약물이 혈액계에서 순환하는 동안, 펩티드 P의 절단이 조기에 일어나지 않아야 한다. 내재화 ADC의 경우, 펩티드 P는 리소솜 효소에 의해 특이적으로 절단되도록 설계될 수 있으며, 카텝신 B가 바람직한 것이다. 문헌 [Dubowchik et al. 1998a, 1998b, 및 2002 및 Firestone et al. 2001]을 참조한다.
전구약물의 경우, 효소는 건강한 조직과 비교하여 이환된 조직의 세포외 환경에서 더욱 풍부하게 발견되는 것, 예컨대 매트립타제 또는 매트릭스 메탈로프로테이나제일 수 있다.　 혈액이 프로테아제의 그 자체의 보체를 함유하며, 이에 대해 P는 기질일 수 있기 때문에, 절대 선택성은 달성하기가 어렵다.
ADC 또는 전구약물 후보의 전임상 평가에서는, 인간 혈청에서의 그의 안정성이 초기에 평가된다. 필요한 안정성이 입증되면, 동물 모델에서의, 편의상 통상적으로 영장류 또는 보다 큰 설치류를 사용하는 모델에 비해 더 적은 후보 물질이 요구되고 수행하기에 비용이 덜 들기 때문에 마우스 모델에서의 추가의 전임상 평가를 위한 실행가능한 후보가 된다.　 또한, 마우스 혈청 에스테라제 활성은 일반적으로 인간 혈청의 것보다 더 높아서, 마우스 혈청에서 안정한 ADC는 인간 혈청에서 안정한 것으로 예상될 수 있다.
마우스 혈청에서의 프로테아제의 보체는 인간 혈청에서의 것과 상이하고, 이는 인간 혈청에서 안정한 ADC 또는 전구약물이 마우스 혈청에서 안정한 것으로 가정될 수 없다는 것을 의미한다.　 따라서, 후보 ADC 또는 전구약물을 마우스 혈청에서의 안정성에 대해 시험하는 것이 또한 중요하다.　 거기서 불안정한 경우, 마우스 모델은 정보 가치가 없다: 효능의 결여 또는 독성 부작용의 발생이 혈류 내에 있는 동안의 약물의 조기 방출에 기인하는지 또는 ADC 그 자체의 불안정성에 기인하는지 누구도 알 수 없다.
카텝신 - 특히 카텝신 B - 은 ADC에서 바람직한 리소솜 활성화 효소였는데, 그 이유는 그에 대한 기질인 펩티드 서열이 인간 혈청에서 발견되는 프로테아제에 대한 기질이 아니기 때문이다.　 그러나, 카텝신 B에 의한 절단을 위해 설계된 일부 ADC는 인간 혈청에서 안정하지만, 마우스 혈청에서는 그 안에 함유된 카르복시에스테라제 C1의 작용으로 인해 불안정하다는 것이 관찰되었다.　 문헌 [Dorywalska et al. 2016].　 이러한 불안정성은 마우스 모델의 사용을 불가능하게 하여, 동물 모델에서 약물 후보 화합물을 평가하는 것을 어렵게 만든다.
본 발명자들은 벤질옥시카르보닐 기에 대해 오르토에 위치하는 PABC 기 상의 특정 치환기가, 의도된 활성화 프로테아제가 아닌 프로테아제에 의한 그의 절단을 방지하거나 의도된 활성화 프로테아제에 의한 절단 속도를 늦추는, 그에 부착된 펩티드 모이어티의 프로테아제 절단에 대한 감수성을 조정할 수 있음을 발견하였다.　 특히, 오르토-치환기를 갖는 SI 모이어티는 인간 혈청에서 그의 안정성을 유지하고 마우스 혈청에서 개선된 안정성을 나타내지만, 카텝신 B에 의해 여전히 용이하게 절단가능하다.
한 실시양태에서, 화학식 (I)에 의해 나타내어지는 화합물이 제공된다.
Figure pct00003
여기서
R1은 C1-C5 알킬, N3, OH, SH, ONH2, NH2, CO2H,
Figure pct00004
이고;
R2는 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 측쇄 잔기이고;
n은 2, 3, 4 또는 5이고;
Figure pct00005
는,
Figure pct00006
에의 결합이 카텝신 B에 의해 절단가능한 폴리펩티드를 포함하고;
R3은 O, NH,
Figure pct00007
이고;
R4는 마우스 혈청에서
Figure pct00008
와
Figure pct00009
사이의 결합의 절단을 실질적으로 억제하지만 카텝신 B에 의한 동일한 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는 모이어티이고;
L은 화학식 L-R3H의 생물활성 분자의 잔기이고;
X는 스페이서 기이다.
화학식 (I)의 화합물은 항체에의 접합을 위해 반응성 R1 기, 예컨대, 예를 들어 비제한적으로 NH2를 사용하여 ADC를 제조하는 데 사용될 수 있다.　 따라서, 또 다른 실시양태에서, 화학식 (II)에 의해 나타내어지는 접합체가 제공된다.
Figure pct00010
여기서
Ab는 항체이고;
R2는 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 측쇄 잔기이고;
n은 2, 3, 4 또는 5이고;
Figure pct00011
는,
Figure pct00012
에의 결합이 카텝신 B에 의해 절단가능한 폴리펩티드를 포함하고;
R3은 O, NH,
Figure pct00013
이고;
R4는 마우스 혈청에서
Figure pct00014
와
Figure pct00015
사이의 결합의 절단을 실질적으로 억제하지만 카텝신 B에 의한 동일한 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는 모이어티이고;
R5는
Figure pct00016
이고,
여기서 Ab에 대한 결합의 원자가 위치는 별표로 표시되고 X에 대한 결합의 원자가 위치는 파선으로 표시되고;
L은 화학식 L-R3H의 생물활성 분자의 잔기이고;
X는 스페이서 기이다.
바람직하게는, 화학식 (I) 또는 (II)에서 R4는
Figure pct00017
F, Cl, CN, NO2 또는 C1-C3 알킬로 임의로 치환된 페닐 또는 C3-C6시클로알킬 기이다.
또 다른 실시양태에서, 항체 Ab를 화학식 (I)의 화합물과 접합시키는 것을 포함하는, 화학식 (II)에 의해 나타내어지는 접합체를 제조하는 방법이 제공된다.
도 1은 동물 모델에서의 중피종에 대한 본 발명의 화합물을 사용하여 제조된 ADC의 효능을 나타낸다.
도 2a 및 2b는 합하여, 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 A를 나타낸다.
도 3a, 3b 및 3c는 합하여, 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 B를 나타낸다.
도 4는 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 C를 나타낸다.
도 5는 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 D를 나타낸다.
발명의 상세한 설명
정의
"항체"는 전체 항체 및 그의 임의의 항원 결합 단편 (즉 "항원-결합 부분") 또는 단일 쇄 변이체를 의미한다. 전체 항체는 디술피드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 3개의 도메인인 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (VL 또는 Vk) 및 1개의 단일 도메인인 CL을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. VH 및 VL 영역은 보다 보존된 프레임워크 영역 (FR)이 점재된, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 칭해지는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4로 배열된, 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다. 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (Clq)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 항체가 5 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 1 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 6 x 10-9 M 이하, 보다 바람직하게는 3 x 10-9 M 이하, 보다 더 바람직하게는 2 x 10-9 M 이하의 KD로 항원 X에 결합하는 경우에, 항원 X에 "특이적으로 결합한다"고 한다. 항체는 키메라, 인간화, 또는 바람직하게는, 인간 항체일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 글리코실화 유형 또는 정도에 영향을 미치거나, 항체 반감기를 연장시키거나, 이펙터 세포 또는 보체계와의 상호작용을 증진 또는 감소시키거나, 또는 일부 다른 특성을 조정하기 위해 조작될 수 있다. 조작은 1개 이상의 아미노산의 대체, 부가 또는 결실에 의해, 또는 도메인의 또 다른 이뮤노글로불린 유형으로부터의 도메인으로의 대체에 의해, 또는 상기의 조합에 의해 달성될 수 있다.
항체의 "항원 결합 단편" 및 "항원 결합 부분" (또는 간단하게 "항체 부분" 또는 "항체 단편")은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는, 항체의 1개 이상의 단편을 의미한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편, 예컨대 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) 본질적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab인 Fab' 단편 (예를 들어, 문헌 [Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed., Saunders Elsevier 2007] 참조); (iv) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (v) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); (vii) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR); 및 (viii) 단일 가변 도메인 및 2개의 불변 도메인을 함유하는 중쇄 가변 영역인 나노바디에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 바람직한 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, Fab', Fv 및 Fd 단편이다. 추가로, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 쇄 (단일 쇄 Fv 또는 scFv로 공지됨)로 제조될 수 있게 하는 합성 링커에 의해서 재조합 방법을 사용하여 연결될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단일 쇄 항체는 용어 항체의 "항원-결합 부분" 내에 또한 포괄된다.
달리 - 예를 들어 서열식별번호 목록의 선형 넘버링 참조에 의해 - 나타내지 않는 한, 항체 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 (VH 또는 VL)의 아미노산 위치의 넘버링에 대한 참조는 카바트 시스템 (문헌 [Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest, 5th ed., Pub. number 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991], 이하 "카바트")에 따르고, 항체 중쇄 또는 경쇄 불변 영역 (CH1, CH2, CH3 또는 CL)의 아미노산 위치의 넘버링에 대한 참조는 카바트에 제시된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다. 문헌 [Lazar et al., US 2008/0248028 A1]을 참조하며, 그의 개시내용, 예를 들어 이러한 용법의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 또한, 이뮤노제네틱스 인포메이션 시스템(ImMunoGeneTics Information System, IMGT)은 그의 웹사이트에 중쇄 불변 영역에 대한 그의 넘버링 시스템, EU 넘버링 및 카바트 넘버링 사이의 대응을 보여주는 제목 "IMGT 사이언티픽 차트: C 넘버링 사이의 대응(IMGT Scientific Chart: Correspondence between C Numberings)"의 표를 제공한다.
"단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 의미한다 (예를 들어, 항원 X에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 항원 X 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, 항원 X에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종 유래 항원 X 분자와 같은 다른 항원에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 단리된 항체는 인간 항원 X에 특이적으로 결합하고, 다른 (비-인간) 항원 X 항원과는 교차-반응하지 않는다. 더욱이, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
"모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 특정한 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타내는, 단일 분자 조성의 항체 분자의 제제를 의미한다.
"인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다 (및 존재하는 경우에 불변 영역)가 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 것인 가변 영역을 갖는 항체를 의미한다. 인간 항체는 천연 또는 합성 변형을 포함한 후기 변형을 포함할 수 있다. 인간 항체는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상으로 그라프트된 것인 항체는 포함하지 않는다.
"인간 모노클로날 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내며, 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다가 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 것인 가변 영역을 갖는 항체를 의미한다. 한 실시양태에서, 인간 모노클로날 항체는 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 비인간 동물, 예를 들어 트랜스제닉 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
"지방족"은 명시된 수의 탄소 원자를 갖거나 (예를 들어, "C3 지방족", "C1-5 지방족", "C1-C5 지방족" 또는 "C1 내지 C5 지방족"에서와 같으며, 후자 3개의 어구는 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 지방족 모이어티에 대한 동의어임) 또는 탄소 원자의 수가 명확하게 명시되지 않은 경우에는 1 내지 4개의 탄소 원자 (불포화 지방족 모이어티의 경우에는 2 내지 4개의 탄소)를 갖는 직쇄 또는 분지쇄, 포화 또는 불포화, 비-방향족 탄화수소 모이어티를 의미한다. 유사한 이해가 C2-4 알켄, C4-C7 시클로지방족 등에서와 같은 다른 유형에서의 탄소의 수에 적용된다. 유사한 맥락에서, "(CH2)1-3"과 같은 용어는 이러한 용어가 CH2, CH2CH2, 및 CH2CH2CH2를 나타내도록, 아래첨자가 1, 2, 또는 3인 것에 대한 약칭으로서 이해되어야 한다.
"알킬"은 포화 지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 탄소 원자의 수의 지정에 대한 동일한 규정이 적용가능하다. 예시로서, C1-C4 알킬 모이어티는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, t-부틸, 1-부틸, 2-부틸 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "알킬렌"은 알킬 기의 2가 대응물, 예컨대 CH2CH2, CH2CH2CH2, 및 CH2CH2CH2CH2를 의미한다.
"알케닐"은 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 탄소 원자의 수의 지정에 대한 동일한 규정이 적용가능하다. 예시로서, C2-C4 알케닐 모이어티는 에테닐 (비닐), 2-프로페닐 (알릴 또는 프로프-2-에닐), 시스-1-프로페닐, 트랜스-1-프로페닐, E- (또는 Z-) 2-부테닐, 3-부테닐, 1,3-부타디에닐 (부트-1,3-디에닐) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"알키닐"은 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 탄소 원자의 수의 지정에 대한 동일한 규정이 적용가능하다. 예시로서, C2-C4 알키닐 기는 에티닐 (아세틸레닐), 프로파르길 (프로프-2-이닐), 1-프로피닐, 부트-2-이닐 등을 포함한다.
"시클로지방족"은 1 내지 3개의 고리를 가지며, 각각의 고리가 3 내지 8개 (바람직하게는 3 내지 6개)의 탄소 원자를 갖는, 포화 또는 불포화, 비-방향족 탄화수소 모이어티를 의미한다. "시클로알킬"은 각각의 고리가 포화된 시클로지방족 모이어티를 의미한다. "시클로알케닐"은 적어도 1개의 고리가 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 시클로지방족 모이어티를 의미한다. "시클로알키닐"은 적어도 1개의 고리가 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 시클로지방족 모이어티를 의미한다. 예시로서, 시클로지방족 모이어티는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헵틸, 시클로옥틸 및 아다만틸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 시클로지방족 모이어티는 시클로알킬 모이어티, 특히 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실이다. "시클로알킬렌"은 시클로알킬 기의 2가 대응물을 의미한다.
"헤테로시클로지방족"은 그의 적어도 1개의 고리 내에서, 최대 3개 (바람직하게는 1 내지 2개)의 탄소가 N, O, 또는 S로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자로 대체된 것인 시클로지방족 모이어티를 의미하며, 여기서 N 및 S는 임의로 산화될 수 있고, N은 임의로 4급화될 수 있다. 바람직한 시클로지방족 모이어티는 5- 내지 6-원 크기인 1개의 고리로 이루어진다. 유사하게, "헤테로시클로알킬", "헤테로시클로알케닐", 및 "헤테로시클로알키닐"은 그의 적어도 1개의 고리가 이렇게 하여 변형된, 각각 시클로알킬, 시클로알케닐, 또는 시클로알키닐 모이어티를 의미한다. 예시적인 헤테로시클로지방족 모이어티는 아지리디닐, 아제티디닐, 1,3-디옥사닐, 옥세타닐, 테트라히드로푸릴, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 테트라히드로티오피라닐 술폰, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 티오모르폴리닐 술폭시드, 티오모르폴리닐 술폰, 1,3-디옥솔라닐, 테트라히드로-1,1-디옥소티에닐, 1,4-디옥사닐, 티에타닐 등을 포함한다. "헤테로시클로알킬렌"은 헤테로시클로알킬 기의 2가 대응물을 의미한다.
"알콕시", "아릴옥시", "알킬티오", 및 "아릴티오"는 각각 -O(알킬), -O(아릴), -S(알킬), 및 -S(아릴)을 의미한다. 예는 각각 메톡시, 페녹시, 메틸티오 및 페닐티오이다.
보다 좁은 의미가 지정되지 않는 한, "할로겐" 또는 "할로"는 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 의미한다.
"아릴"은 각각의 고리가 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1개의 고리가 방향족인 모노-, 비-, 또는 트리시클릭 고리계 (바람직하게는 모노시클릭)를 갖는 탄화수소 모이어티를 의미한다. 고리계 내의 고리는 서로 융합될 수 있거나 (나프틸에서와 같음) 또는 서로 결합될 수 있으며 (비페닐에서와 같음), 비-방향족 고리에 융합 또는 결합될 수 있다 (인다닐 또는 시클로헥실페닐에서와 같음). 추가 예시로서, 아릴 모이어티는 페닐, 나프틸, 테트라히드로나프틸, 인다닐, 비페닐, 페난트릴, 안트라세닐 및 아세나프틸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "아릴렌"은 아릴 기의 2가 대응물, 예를 들어 1,2-페닐렌, 1,3-페닐렌, 또는 1,4-페닐렌을 의미한다.
"헤테로아릴"은 각각의 고리가 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1개의 고리가 N, O, 또는 S로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 방향족 고리인 모노-, 비-, 또는 트리시클릭 고리계 (바람직하게는 5 내지 7-원 모노시클릭)를 갖는 모이어티를 의미하며, 여기서 N 및 S는 임의로 산화될 수 있고, N은 임의로 4급화될 수 있다. 이러한 적어도 1개의 헤테로원자 함유 방향족 고리는 다른 유형의 고리에 융합될 수 있거나 (벤조푸라닐 또는 테트라히드로이소퀴놀릴에서와 같음) 또는 다른 유형의 고리에 직접 결합될 수 있다 (페닐피리딜 또는 2-시클로펜틸피리딜에서와 같음). 추가 예시로서, 헤테로아릴 모이어티는 피롤릴, 푸라닐, 티오페닐 (티에닐), 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, N-옥소피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 퀴노잘리닐, 나프티리디닐, 벤조푸라닐, 인돌릴, 벤조티오페닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 페노티아졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조트리아졸릴, 디벤조푸라닐, 카르바졸릴, 디벤조티오페닐, 아크리디닐 등을 포함한다. "헤테로아릴렌"은 헤테로아릴 기의 2가 대응물을 의미한다.
"비치환되거나 또는 치환된 C1-C5 알킬" 또는 "임의로 치환된 헤테로아릴"에서와 같은 "비치환되거나 또는 치환된" 또는 "임의로 치환된" 어구의 사용에 의해서와 같이 모이어티가 치환될 수 있는 것으로 나타낸 경우에, 이러한 모이어티는 1개 이상의 독립적으로 선택된 치환기, 바람직하게는 수에 있어서 1 내지 5개, 보다 바람직하게는 수에 있어서 1 또는 2개를 가질 수 있다. 치환기 및 치환 패턴은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해, 치환기가 부착되는 모이어티를 고려하여, 화학적으로 안정하고 관련 기술분야에 공지된 기술뿐만 아니라 본원에 제시된 방법에 의해 합성될 수 있는 화합물을 제공하도록 선택될 수 있다. 모이어티가 "비치환되거나 또는 치환된" 또는 "임의로 치환된" 것으로 확인되는 경우에, 바람직한 실시양태에서 이러한 모이어티는 비치환된다.
"아릴알킬", "(헤테로시클로지방족)알킬", "아릴알케닐", "아릴알키닐", "비아릴알킬" 등은, 예를 들어 벤질, 페네틸, N-이미다조일에틸, N-모르폴리노에틸 등에서와 같이, 경우에 따라 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 모이어티에서 개방 (비충족) 원자가를 갖는, 경우에 따라 아릴, 헤테로시클로지방족, 비아릴 등의 모이어티로 치환된 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 모이어티를 의미한다. 반대로, "알킬아릴", "알케닐시클로알킬" 등은, 경우에 따라 예를 들어 메틸페닐 (톨릴) 또는 알릴시클로헥실에서와 같이, 경우에 따라 알킬, 알케닐 등의 모이어티로 치환된 아릴, 시클로알킬 등의 모이어티를 의미한다. "히드록시알킬", "할로알킬", "알킬아릴", "시아노아릴" 등은, 경우에 따라 확인된 치환기 (경우에 따라 히드록실, 할로 등) 중 1개 이상으로 치환된 알킬, 아릴 등의 모이어티를 의미한다.
예를 들어, 허용되는 치환기는 알킬 (특히 메틸 또는 에틸), 알케닐 (특히 알릴), 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 시클로지방족, 헤테로시클로지방족, 할로 (특히 플루오로), 할로알킬 (특히 트리플루오로메틸), 히드록실, 히드록시알킬 (특히 히드록시에틸), 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -O(할로알킬) (특히 -OCF3), -O(시클로알킬), -O(헤테로시클로알킬), -O(아릴), 알킬티오, 아릴티오, =O, =NH, =N(알킬), =NOH, =NO(알킬), -C(=O)(알킬), -C(=O)H, -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NH(히드록시알킬), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -OSO2(알킬), -SH, -S(알킬), -S(아릴), -S(시클로알킬), -S(=O)알킬, -SO2(알킬), -SO2NH2, -SO2NH(알킬), -SO2N(알킬)2 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
치환될 모이어티가 지방족 모이어티인 경우에, 바람직한 치환기는 아릴, 헤테로아릴, 시클로지방족, 헤테로시클로지방족, 할로, 히드록실, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -O(할로알킬), -O(시클로알킬), -O(헤테로시클로알킬), -O(아릴), 알킬티오, 아릴티오, =O, =NH, =N(알킬), =NOH, =NO(알킬), -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NH(히드록시알킬), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -OSO2(알킬), -SH, -S(알킬), -S(아릴), -S(=O)알킬, -S(시클로알킬), -SO2(알킬), -SO2NH2, -SO2NH(알킬), 및 -SO2N(알킬)2이다. 보다 바람직한 치환기는 할로, 히드록실, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(아릴), =O, =NOH, =NO(알킬), -OC(=O)(알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, 및 -NHC(=NH)NH2이다. 페닐, 시아노, 할로, 히드록실, 니트로, C1-C4알콕시, O(C2-C4 알킬렌)OH, 및 O(C2-C4 알킬렌)할로가 특히 바람직하다.
치환될 모이어티가 시클로지방족, 헤테로시클로지방족, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티인 경우에, 바람직한 치환기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로, 할로알킬, 히드록실, 히드록시알킬, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -O(할로알킬), -O(아릴), -O(시클로알킬), -O(헤테로시클로알킬), 알킬티오, 아릴티오, -C(=O)(알킬), -C(=O)H, -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, 아지도, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NH(히드록시알킬), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -OSO2(알킬), -SH, -S(알킬), -S(아릴), -S(시클로알킬), -S(=O)알킬, -SO2(알킬), -SO2NH2, -SO2NH(알킬), 및 -SO2N(알킬)2이다. 보다 바람직한 치환기는 알킬, 알케닐, 할로, 할로알킬, 히드록실, 히드록시알킬, 시아노, 니트로, 알콕시, -O(히드록시알킬), -C(=O)(알킬), -C(=O)H, -CO2H, -C(=O)NHOH, -C(=O)O(알킬), -C(=O)O(히드록시알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -OC(=O)(알킬), -OC(=O)(히드록시알킬), -OC(=O)O(알킬), -OC(=O)O(히드록시알킬), -OC(=O)NH2, -OC(=O)NH(알킬), -OC(=O)N(알킬)2, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -NH(아릴), -NHC(=O)(알킬), -NHC(=O)H, -NHC(=O)NH2, -NHC(=O)NH(알킬), -NHC(=O)N(알킬)2, 및 -NHC(=NH)NH2이다. C1-C4 알킬, 시아노, 니트로, 할로, 및 C1-C4알콕시가 특히 바람직하다.
"C1-C5 알킬" 또는 "5 내지 10%"에서와 같이 범위가 언급된 경우에, 이러한 범위는 첫 번째 경우에서는 C1 및 C5 및 두 번째 경우에서는 5% 및 10%에서와 같은 범위의 종점을 포함한다.
특정한 입체이성질체가 구체적으로 (예를 들어, 구조 화학식에서의 관련 입체중심에서 굵은선 또는 파선 결합에 의해, 구조 화학식에서 E 또는 Z 배위를 갖는 것으로서의 이중 결합의 도시에 의해, 또는 입체화학-지정 명명법 사용에 의해) 나타나 있지 않은 한, 모든 입체이성질체는 순수한 화합물뿐만 아니라 그의 혼합물로서 본 발명의 범주 내에 포함된다. 달리 나타내지 않는 한, 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 기하 이성질체, 및 그의 조합 및 혼합물은 모두 본 발명에 의해 포괄된다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 화합물이 본원에 사용된 구조 화학식에 도시된 것들과 등가인 호변이성질체 형태 (예를 들어, 케토 및 엔올 형태), 공명 형태 및 쯔비터이온 형태를 가질 수 있다는 것 및 구조 화학식이 이러한 호변이성질체, 공명 또는 쯔비터이온 형태를 포괄한다는 것을 인지할 것이다.
"제약상 허용되는 에스테르"는 생체내에서 (예를 들어 인간 신체에서) 가수분해되어 모 화합물 또는 그의 염을 생산하거나, 또는 그 자체로 모 화합물의 것과 유사한 활성을 갖는 에스테르를 의미한다. 적합한 에스테르는 C1-C5 알킬, C2-C5 알케닐 또는 C2-C5 알키닐 에스테르, 특히 메틸, 에틸 또는 n-프로필을 포함한다.
"제약상 허용되는 염"은 제약 제제에 적합한 화합물의 염을 의미한다. 화합물이 1개 이상의 염기성 기를 갖는 경우에, 염은 산 부가염, 예컨대 술페이트, 히드로브로마이드, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 파모에이트 (엠보네이트), 히드로아이오다이드, 니트레이트, 히드로클로라이드, 락테이트, 메틸술페이트, 푸마레이트, 벤조에이트, 숙시네이트, 메실레이트, 락토비오네이트, 수베레이트, 토실레이트 등일 수 있다. 화합물이 1개 이상의 산성 기를 갖는 경우에, 염은 칼슘 염, 칼륨 염, 마그네슘 염, 메글루민 염, 암모늄 염, 아연 염, 피페라진 염, 트로메타민 염, 리튬 염, 콜린 염, 디에틸아민 염, 4-페닐시클로헥실아민 염, 벤자틴 염, 나트륨 염, 테트라메틸암모늄 염 등과 같은 염일 수 있다. 다형성 결정질 형태 및 용매화물은 본 발명의 범주 내에 또한 포괄된다.
본 명세서의 화학식에서, 결합을 가로지르는 파상선 (
Figure pct00018
) 또는 결합의 말단에서의 별표 (*)는 공유 부착 부위를 나타낸다. 예를 들어, 화학식
Figure pct00019
에서 R이
Figure pct00020
이거나 또는 R이
Figure pct00021
라는 언급은
Figure pct00022
를 의미한다.
본 명세서의 화학식에서, 방향족 또는 헤테로방향족 고리를 그의 2개의 탄소 사이에서 가로지르는 결합은 결합에 부착된 기가 암시적으로 그곳에 존재하는 수소의 제거에 의해 이용가능하게 되는 방향족 또는 헤테로방향족 고리의 임의의 위치에 위치할 수 있음을 의미한다. 예시로서, 화학식
Figure pct00023
는
Figure pct00024
를 나타낸다.
다른 예시에서, 화학식
Figure pct00025
는
Figure pct00026
를 나타내고, 화학식
Figure pct00027
는
Figure pct00028
를 나타낸다.
일반적으로, 호변이성질체 구조는 일관성 및 편의성의 문제로서 본원에서 엔올 형태로 제시된다.
Figure pct00029
관련 기술분야의 통상의 기술자는 그들이 또한 동등한 케토 형태로 제시될 수 있고, 2종의 호변이성질체가 동등하다는 것을 인지할 것이다.
화합물
본 발명자들은 PABC 모이어티 내의 벤질옥시카르보닐 기에 대한 오르토 위치에 치환기 R4를 위치시키는 것이 하기 제시된 데이터에 의해 입증되는 바와 같이, 마우스 혈청에서 펩티드
Figure pct00030
와 치환된 PABC 기
Figure pct00031
사이의 결합의 절단을 실질적으로 억제하지만, 카텝신 B에 의한 동일한 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는다는 것을 발견하였다. 결과적으로, 본원에 개시된 화합물은 마우스 모델에서의 평가에 적용가능한 항체에 접합될 수 있다.
본 발명자들이 마우스 혈청에 의한 상기 언급된 결합의 절단을 실질적으로 억제한다는 것에 의해 의미하는 것은, 하기 실시예 섹션에 기재된 조건 하에 24시간 후에 10% 이하의 절단, 바람직하게는 6% 이하의 절단이 존재한다는 것이다. 반대로, 본 발명자들이 카텝신 B에 의한 상기 언급된 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는다는 것에 의해 의미하는 것은, 하기 실시예 섹션에 기재된 조건 하에 24시간 후에 90% 이상의 절단이 존재한다는 것이다.
화학식 (I)에서, 바람직하게는 R1은 H, CH3, NH2, N3,
Figure pct00032
이고;
특히 바람직한 것은 NH2 및
Figure pct00033
이다.
화학식 (I) 및 (II)에서, 바람직하게는 R3은 NH,
Figure pct00034
이다.
특히 바람직한 R3은 NH,
Figure pct00035
이다.
화학식 (I) 및 (II)에서, R4는 바람직하게는
Figure pct00036
Figure pct00037
;
F, Cl, CN, NO2 또는 C1-C3 알킬로 임의로 치환된 페닐 또는 C3-C6 시클로알킬 기이다.
R4는 보다 바람직하게는
Figure pct00038
이며;
y는 4, 8, 12 또는 24이다.
바람직하게는, 화학식 (I) 및 (II)에서, R2는 발린 (Val), 글루탐산 (Glu), 시트룰린 (Cit), 리신 (Lys), 알라닌 (Ala), 페닐알라닌 (Phe), 아르기닌 (Arg) 및 글리신 (Gly)으로부터 선택된 아미노산의 측쇄 잔기이다.
바람직하게는, 화학식 (I) 및 (II)에서, 펩티드 기
Figure pct00039
는 카텝신 B에 의해 절단가능하지만 인간 혈청에서 안정적인 것이다. 이러한 펩티드 기의 예는 하기를 포함한다 (N에서 C 방향으로 열거됨): Val-Cit, Glu-Val-Cit, Phe-Lys, Phe-Arg, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Val-Ala, Ala-Val-Cit, 및 Val-Gly.
펩티드
Figure pct00040
가 N에서 C (아미노에서 카르복실) 방향으로 배향되기 때문에, 스페이서 기 X는 펩티드의 N-말단을 R1에 연결한다. 전형적으로, X는 펩티드의 N-말단과 아미드 결합을 형성하는 카르보닐 기를 포함하지만, X는 대신 말단 아미노산의 측쇄 상의 관능기, 예컨대 Glu 또는 Asp 카르복실 기에 연결될 수 있다. R1이 알킬인 경우에, X는 간단히 카르보닐 (C=O)일 수 있다. X의 다른 실시양태는
Figure pct00041
이며,
여기서 x는 2 내지 24의 정수 (상하한 포함)이고, 바람직하게는 2, 4 또는 8이다.
한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ia)에 의해 나타내어진다:
Figure pct00042
(화학식 (I)과 관련된 R1, X, R2 및 R4에 대해 상기-언급된 바람직한 것이 또한 화학식 (Ia)에 적용됨.)
화학식 (Ia)에서 L-R3H에 상응하는 생물활성 분자는 천연 생성물 운시알라마이신의 합성 유사체 (Davies et al., Org. Lett. 2005, 7 (23), 5233)인 8-아미노메틸운시알라마이신 (Nicolaou et al., US 9,777,013 B2 (2017))이며, 이는 항종양 특성을 갖는 세포독소이다.
Figure pct00043
화학식 (Ia)에 따른 화합물의 예는 표 A에 제시된다.
Figure pct00044
Figure pct00045
또 다른 실시양태에서, 화학식 (I)에 따른 화합물은 화학식 (Ib)에 의해 나타내어진다:
Figure pct00046
(화학식 (I)과 관련된 R1, X, R2, R3 및 R4에 대해 상기-언급된 바람직한 것이 또한 화학식 (Ib)에 적용됨.)
화학식 (Ib)에서, L-R3H에 상응하는 생물학적 활성 분자는
Figure pct00047
이다.
이러한 유형의 분자는 톨-유사 수용체 7 (TLR7)의 효능제이다. 이들에 의한 TLR7의 활성화는 백신 및 면역요법제에 대한 아주반트 효과를 가질 수 있다.
화학식 (Ib)에 따른 화합물의 예는 표 B에 제시된다.
Figure pct00048
표 C는 본원에 개시된 바와 같은 PABC 기 내의 벤질옥시카르보닐 기에 대해 오르토 치환기를 갖는 화합물이 카텝신 B에 의해 여전히 절단가능하면서도 인간 및 마우스 혈청 둘 다에서 얼마나 안정적인지 (또는 마우스 혈청에서 얼마나 개선된 안정성을 갖는지)를 보여준다. 대조적으로, 비치환된 PABC 기를 갖는 2개의 대조군, 즉 8-아미노메틸운시알라마이신 페이로드를 갖는 대조군 (화합물 A)과 TLR7 효능제 페이로드를 갖는 대조군 (화합물 B)은 둘 다 마우스 혈청에서 불안정하였다.
Figure pct00049
Figure pct00050
접합체
화학식 (II)의 접합체는 기 R1의 정체에 따라, 항체 및 화학식 (I)의 화합물로부터 수많은 방법으로 제조될 수 있다.
R1이 OH 기인 경우에, 이는 항체 상의, 예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산 측쇄 상의 또는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 C-말단에서의 카르복시 기와 에스테르화될 수 있다.
R1이 CO2H 기인 경우에, 이는 항체 상의, 예컨대 세린 잔기의 측쇄 내의 OH 기와 에스테르화되거나, 또는 항체 상의, 예컨대 리신 측쇄 상의 아미노 기와 아미드화될 수 있다.
R1이 N-히드록시숙신이미드 에스테르
Figure pct00051
인 경우에
이는 기능적으로 활성화된 카르복실 기이고, 항체 내의 (예를 들어, 리신으로부터의) 아미노 기와의 반응에 의해 아미드화될 수 있다.
하나의 바람직한 실시양태에서, R1은 말레이미드 기
Figure pct00052
이고,
이는 마이클 첨가 반응에서, 항체 상의 (예를 들어, 시스테인으로부터의, 또는 술프히드릴 관능기를 도입하기 위한 항체의 화학적 변형으로부터의) SH 기와 접합될 수 있다.
Figure pct00053
항체가 접합에 이용가능한 시스테인 SH를 갖지 않는 경우에 (대부분의 항체 시스테인 SH는 디술피드 결합으로 묶여 있음), 리신 잔기의 측쇄 내의 ε-아미노 기를 2-이미노티올란 또는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 ("SPDP")와 반응시켜 유리 티올 (-SH) 기를 도입할 수 있고 - 말하자면 시스테인 대용물을 생성하고, 이를 이어서 접합에 사용할 수 있다.
Figure pct00054
전형적으로, 항체당 2 내지 3개의 티올의 티올화 수준이 달성된다. 대표적 절차에 대해, 문헌 [Cong et al., US 8,980,824 B2 (2015)]을 참조하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
역배열에서, 항체는 그에 말레이미드 기를 도입하기 위해 N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)-시클로헥산카르복실레이트 ("SMCC") 또는 그의 술폰화 변이체 술포-SMCC에 의해 변형될 수 있으며, 이들은 둘 다 상업적으로 입수가능하다. 이어서, 접합은 R1이 SH인 화학식 (I)의 화합물로 실시될 수 있다.
대안적 접합 방법은 아지드 기를 변형된 시클로옥틴을 가로질러 부가하여 1,2,3-트리아졸 고리를 형성하는 구리-무함유 "클릭 화학"을 사용한다. 예를 들어, 문헌 [Agard et al., J. Amer. Chem. Soc. 2004, 126, 15046; Best, Biochemistry 2009, 48, 6571]을 참조하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 아지드는 항체 상에 위치하고 시클로옥틴은 화학식 (I)의 화합물 상에 위치할 수 있거나, 또는 그 반대의 경우일 수 있다. 바람직한 시클로옥틴 기는 디벤조시클로옥틴 (DIBO)이다. DIBO 기를 갖는 다양한 시약은 오레곤주 유진 소재의 인비트로젠(Invitrogen)/몰레큘라 프로브스(Molecular Probes)로부터 입수가능하다. 하기 반응은 DIBO 기가 항체 (Ab)에 부착된 경우에 대한 클릭 화학 접합을 예시한다.
Figure pct00055
또 다른 접합 기술은 비-천연 아미노산을 항체 내로 도입하는 것을 수반하며, 여기서 비-천연 아미노산은 약물 모이어티 내의 반응성 관능기와의 접합을 위한 관능기를 제공한다. 예를 들어, 비천연 아미노산인 p-아세틸페닐알라닌을, 문헌 [Tian et al., WO 2008/030612 A2 (2008)]에 교시되어 있는 바와 같이 항체 또는 다른 폴리펩티드 내로 혼입시킬 수 있다. p-아세틸페닐알라닌 내의 케톤 기는 링커-약물 모이어티 상의 히드록실아미노 기와의 옥심의 형성을 통한 접합 부위일 수 있다. 대안적으로, 비-천연 아미노산 p-아지도페닐알라닌은 항체 내로 혼입되어 상기 논의된 바와 같은 클릭 화학을 통한 접합을 위해 아지드 관능기를 제공할 수 있다. 비천연 아미노산은 또한, 문헌 [Goerke et al., US 2010/0093024 A1 (2010) 및 Goerke et al., Biotechnol. Bioeng. 2009, 102 (2), 400-416]에 교시된 바와 같이, 무세포 방법을 사용하여 항체 또는 다른 폴리펩티드에 혼입될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, R1은, 효소 트랜스글루타미나제를 사용한 접합을 가능하게 하는 NH2이다.
트랜스글루타미나제 (바람직하게는 스트렙토미세스 모바라엔시스(Streptomyces mobaraensis) 또는 BTG로부터의 박테리아 트랜스글루타미나제)는 글루타민의 측쇄 카르복스아미드 (아민 수용자)와, 예를 들어 리신의 ε-아미노 기 또는 5-아미노-n-펜틸 기일 수 있는 알킬렌아미노 기 (아민 공여자) 사이에 아미드 결합을 형성한다 (Jeger et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995). 알킬렌아미노 기가 R1이 NH2인 화학식 (I)의 화합물 상에 있을 수 있다.
Figure pct00056
폴리펩티드 쇄 상의 글루타민 잔기의 위치설정은 BTG 매개 아미드교환에 대한 그의 감수성에 대해 큰 효과를 갖는다. 항체 상의 어떠한 글루타민 잔기도 통상적으로 BTG 기질이 아니다. 그러나, 항체가 탈글리코실화된 경우 - 글리코실화 부위가 중쇄의 아스파라긴 297 (N297; 문헌 [Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest," 5th ed., Pub. number 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991; 이하 "카바트"]에서 제시된 바와 같은 EU 인덱스에 따른 넘버링)인 경우 - 근처의 글루타민 295 (Q295)가 BTG 감수성이 된다. 항체는 PNGase F (펩티드-N-글리코시다제 F)로의 처리에 의해 효소적으로 탈글리코실화될 수 있다. 대안적으로, 항체는 N297A 돌연변이를 불변 영역에 도입하여 N297 글리코실화 부위를 제거함으로써 글리코시드 무함유로 합성될 수 있다. 추가로, N297Q 치환은 글리코실화를 제거할 뿐만 아니라, 또한 아민 수용자인 제2 글루타민 잔기를 (위치 297에) 도입하는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 한 실시양태에서, 항체는 탈글리코실화된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 N297Q 치환을 갖는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 합성후 변형에 의한 또는 N297A 돌연변이를 도입하는 것에 의한 탈글리코실화가 항체당 2개의 BTG-반응성 글루타민 잔기 (위치 295에서, 중쇄당 1개)를 생성시키며, N297Q 치환을 갖는 항체가 4개의 BTG-반응성 글루타민 잔기 (위치 295 및 297에서, 중쇄당 2개)를 가질 것임을 인지할 것이다.
항체는 또한 예를 들어, 문헌 [Pons et al., US 2013/0230543 A1 (2013) 및 Rao-Naik et al., WO 2016/144608 A1]에 교시된 바와 같이, 항체에 글루타민 함유 펩티드, 또는 "태그"를 도입함으로써 BTG-매개 접합에 대해 감수성이 되도록 할 수 있다.
보완적 접근법에서, 문헌 [Rao-Naik et al., WO 2017/059158 A1 (2017)]에 교시된 바와 같이, BTG의 기질 특이성을 그의 아미노산 서열을 변경함으로써 변경시켜서, 그것이 비변형된 항체에서 글루타민 295와 반응할 수 있도록 한다.
가장 통상적으로 이용가능한 박테리아 트랜스글루타미나제는 에스. 모바라엔시스로부터의 것이지만, 다소 상이한 기질 특이성을 갖는 다른 박테리아로부터의 트랜스글루타미나제, 예컨대 스트렙토베르티실리움 라다카눔(Streptoverticillium ladakanum)으로부터의 트랜스글루타미나제가 고려될 수 있다 (Hu et al., US 2009/0318349 A1 (2009), US 2010/0099610 A1 (2010), 및 US 2010/0087371 A1 (2010)).
바람직하게는, 화학식 (II)의 접합체에서, R5는
Figure pct00057
이다.
다수의 상이한 항체가 화학식 (I)의 화합물에 접합될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 암 세포의 선택적 표적화를 가능하게 하는, 종양 연관 항원에 대한 항체이다. 이러한 항원의 예는 메소텔린, 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), CD19, CD22, CD30, CD70, B7H3, B7H4 (O8E로도 공지됨), 단백질 티로신 키나제 7 (PTK7), 글리피칸-3, RG1, 푸코실-GM1, CTLA-4, 및 CD44를 포함한다. 항체는 동물 (예를 들어, 뮤린), 키메라, 인간화, 또는 바람직하게는, 인간 항체일 수 있다. 항체는 바람직하게는 모노클로날, 특히 모노클로날 인간 항체이다. 상기 언급된 항원 중 일부에 대한 인간 모노클로날 항체의 제조는 문헌 [Korman et al., US 8,609,816 B2 (2013; B7H4, 08E로도 공지됨; 특히 항체 2A7, 1G11, 및 2F9); Rao-Naik et al., 8,097,703 B2 (2012; CD19; 특히 항체 5G7, 13F1, 46E8, 21D4, 21D4a, 47G4, 27F3, 및 3C10); King et al., US 8,481,683 B2 (2013; CD22; 특히 항체 12C5, 19A3, 16F7, 및 23C6); Keler et al., US 7,387,776 B2 (2008; CD30; 특히 항체 5F11, 2H9, 및 17G1); Terrett et al., US 8,124,738 B2 (2012; CD70; 특히 항체 2H5, 10B4, 8B5, 18E7, 및 69A7); Korman et al., US 6,984,720 B1 (2006; CTLA-4; 특히 항체 10D1, 4B6, 및 1E2); Vistica et al., US 8,383,118 B2 (2013, 푸코실-GM1, 특히 항체 5B1, 5B1a, 7D4, 7E4, 13B8, 및 18D5); Korman et al., US 8,008,449 B2 (2011; PD-1; 특히 항체 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 4A11, 7D3, 및 5F4); Huang et al., US 2009/0297438 A1 (2009; PSMA. 특히 항체 1C3, 2A10, 2F5, 2C6); Cardarelli et al., US 7,875,278 B2 (2011; PSMA; 특히 항체 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5, 및 1C3); Terrett et al., US 8,222,375 B2 (2012; PTK7; 특히 항체 3G8, 4D5, 12C6, 12C6a, 및 7C8); Terrett et al., US 8,680,247 B2 (2014; 글리피칸-3; 특히 항체 4A6, 11E7, 및 16D10); Harkins et al., US 7,335,748 B2 (2008; RG1; 특히 항체 A, B, C, 및 D); Terrett et al., US 8,268,970 B2 (2012; 메소텔린; 특히 항체 3C10, 6A4, 및 7B1); Xu et al., US 2010/0092484 A1 (2010; CD44; 특히 항체 14G9.B8.B4, 2D1.A3.D12, 및 1A9.A6.B9); Deshpande et al., US 8,258,266 B2 (2012; IP10; 특히 항체 1D4, 1E1, 2G1, 3C4, 6A5, 6A8, 7C10, 8F6, 10A12, 10A12S, 및 13C4); Kuhne et al., US 8,450,464 B2 (2013; CXCR4; 특히 항체 F7, F9, D1, 및 E2); 및 Korman et al., US 7,943,743 B2 (2011; PD-L1; 특히 항체 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7, 및 13G4)]에 개시되어 있으며; 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
실시예
본 발명의 실시는 추가로 하기 실시예를 참조하여 이해될 수 있고, 이는 제한이 아니라 예시로서 제공된다.
실시예 이후의 표는 본원에 사용된 두문자어들과 약어들 및 이들의 의미를 열거한다.
실시예 1 - 혈청 안정성
하기 절차를 사용하여 마우스, 래트 또는 인간 혈청에서 링커의 혈청 안정성을 시험하였다.
5 μL의 시험 화합물 (DMSO 중 0.5 mM)을 120 μl의 1X 포스페이트 완충 염수, 마우스, 래트 또는 인간 혈청을 함유하는 개별 튜브로 개별적으로 옮겼다.　 샘플을 37℃에서 0, 1, 2, 4 및 24시간 동안 인큐베이션하였다.　 각각의 시점 후에, 20 μl의 분취물을 샘플로부터 취하고, 60 μl의 75:25:0.1 MeOH:아세토니트릴:포름산으로 켄칭하였다.　 켄칭 후, 모든 샘플을 -20℃에서 1시간 동안 유지하고, 14000 rpm에서 15분 동안 추가로 원심분리하였다.　 상청액을 새로운 바이알로 옮기고, 분석시까지 -20℃에서 저장하였다.
애질런트(Agilent) 1290 UPLC에 연결된 애질런트 6530 Q-TOF 질량 분광계 상에서 LC-MS/MS를 사용하여 샘플을 분석하였다. 3 μL의 샘플을 60℃에서 유지된 워터스 BEH C18 칼럼 (2.1 x 50 mm, 1.7 μm) 상에 주입하였다. 화합물을 물 중 0.1% 포름산 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산의 구배를 사용하여 0.4 mL/분의 유량으로 칼럼으로부터 용리시켰다.　 총 실행 시간은 9.5분이다.
실시예 2 - 카텝신 B 절단
링커의 카텝신 B 절단을 시험하기 위해 하기 절차를 사용하였다.
7.5 μL의 시험 화합물 (DMSO 중 0.5 mM)을 135 μl의 카텝신 B 완충제 (25 mM 아세트산나트륨, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, pH 5.5)를 함유하는 개별 튜브로 옮기고, 7.5 μl의 희석된 카텝신 B 효소 (활성화됨, 1.45 μM, 0.1 유닛)의 첨가에 의해 소화를 시작하였다.　 샘플을 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 24시간 후, 20 μL 분취물을 취하고, 75:25:0.1 MeOH:아세토니트릴:포름산 80 μL로 켄칭하였다.　 카텝신 B를 첨가하지 않는 음성 대조군을 또한 포함시켰다. 대조군 화합물 (하기 구조)을 유사하게 소화시키고 양성 대조군으로서 포함시켰다.　 켄칭 후, 모든 샘플을 -20℃에서 1시간 동안 유지하고, 14,000 rpm에서 5분 동안 추가로 원심분리하였다. 상청액을 신선한 튜브로 옮기고, 상기 실시예의 절차에 따라 분석을 위해 UPLC 오토샘플러에 넣었다.
Figure pct00058
상기 구조에서, "Tub"는 튜부리신 유사체를 나타낸다 (Cheng et al., US 8,394,922 B2 (2013)).　 발린-시트룰린 (Val-Cit) 디펩티드는 카텝신 B에 대한 공지된 기질이다.
실시예 3 - 트랜스글루타미나제를 사용한 접합체의 제조
하기 절차가 링커 화합물의 트랜스글루타미나제 매개 접합에 사용될 수 있으며, 여기서 링커는 아민 공여자로서 작용할 수 있는 아민 기를 갖는다 (예를 들어, 화합물 Ia-02 내지 Ia-12 및 Ib-01 내지 Ib-04).　 항체는 트랜스글루타미나제-반응성 글루타민을 갖는 것, 예를 들어 N297A 또는 N297Q 치환을 갖는 것일 수 있다.　 접합을 5:1의 항체:효소의 몰비로 재조합 박테리아 트랜스글루타미나제에 의해 수행한다.　 접합을 50 mM 트리스 완충제, pH 8.0 중에서 표준 프로토콜을 사용하여 수행하고, 37℃에서 밤새 인큐베이션한다. 생성된 접합체를 50 mM 트리스, pH 8.0으로 사전-평형화된 단백질 A 칼럼 상에서 정제한다.　 접합체를 0.1 M 시트르산나트륨 완충제, pH 3.5로 용리시킨다.　 용리된 분획을 1M 트리스 pH 9.0으로 중화시켰다.　 접합체를 20 mg/mL 소르비톨, 10 mg/mL 글리신, pH 5.0 중에 제제화할 수 있다.
도 1은 본원에 개시된 바와 같은 변형된 SI 모이어티로 제조된 ADC가, 메소텔린을 발현하지만 CD70은 발현하지 않는 H226 (중피종) 암 세포를 사용한 마우스 모델에서 항암 치료에 효과적임을 확인시켜 준다.　 그래프는 화합물 (Ia-03) 및 항-메소텔린 모노클로날 항체 (Terrett et al., US 8,268,970 B2 (2012))로 제조된 ADC가 제제 완충제, 또는 화합물 (Ia-03) 및 항-CD70 모노클로날 항체 (Terrett et al., US 8,124,738 B2 (2012))로 제조된 ADC로 이루어진 대조군과 비교하여, 35일 후에 종양 부피를 감소시켰다는 것을 보여준다.　 항-CD70 ADC에서, H226 세포에 의한 CD70 항원의 발현의 부재는 항-CD70 항체가 ADC에 대한 효과적인 표적화제가 되는 것을 막는다. (항-메소텔린 및 항-CD70을 둘 다 N297A 치환으로 변형시켜 이들을 트랜스글루타미나제-매개 접합에 적합한 아민 수용자로 만들었음.)
실시예 4 - 말레이미드 마이클 첨가에 의한 접합체의 제조
이러한 일반적 절차는 리신 ε-아미노 기와 2-이미노티올란의 반응, 이어서 말레이미드-함유 링커 모이어티, 예컨대 화합물 Ia-01 및 Ib-05와의 반응에 의해 유리 티올 기를 항체에 도입하는 것을 기반으로 한다. 먼저 항체를 50 mM NaCl 및 2 mM DTPA를 함유하는 0.1 M 포스페이트 완충제 (pH 8.0)로 완충제 교환하고, 5-10 mg/mL로 농축시킨다. 티올화는 항체에 대한 2-이미노티올란의 첨가를 통해 달성된다. 첨가될 2-이미노티올란의 양은 예비 실험에 의해 결정될 수 있고, 항체마다 달라진다. 예비 실험에서, 증가하는 양의 2-이미노티올란의 적정액을 항체에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 항체와 함께 인큐베이션한 후, 항체를 세파덱스(SEPHADEX)™ G-25 칼럼을 사용하여 50 mM HEPES, 5 mM 글리신, 2 mM DTPA, pH 5.5로 탈염시키고, 도입된 티올 기의 수를 DTDP와의 반응에 의해 신속하게 결정한다. 티올 기와 DTDP의 반응은 티오피리딘을 유리시키며, 이를 324 nm에서 분광학적으로 모니터링할 수 있다. 단백질 농도 0.5-1.0 mg/mL의 샘플을 전형적으로 사용한다. 280 nm에서의 흡광도를 사용하여 샘플 중 단백질의 농도를 정확하게 결정할 수 있고, 이어서 각각의 샘플의 분취물 (0.9 mL)을 RT에서 10분 동안 0.1 mL DTDP (에탄올 중 5 mM 원액)와 함께 인큐베이션한다. 완충제 단독 플러스 DTDP의 블랭크 샘플을 또한 나란히 인큐베이션한다. 10분 후, 324 nm에서의 흡광도를 측정하고, 티올 기의 수를 19,800 M-1의 티오피리딘에 대한 흡광 계수를 사용하여 정량화한다.
전형적으로 항체당 약 2 내지 3개의 티올 기의 티올화 수준이 달성된다. 예를 들어, 일부 항체의 경우, 이는 15배 몰 과량의 2-이미노티올란을 첨가하고, 이어서 RT에서 1시간 동안 인큐베이션함으로써 달성될 수 있다. 이어서, 항체를 목적 몰비의 2-이미노티올란과 함께 인큐베이션한 다음, 접합 완충제 (50 mM HEPES, 5 mM 글리신, 2 mM DTPA, pH 5.5)로 탈염시킨다. 티올화된 물질을 얼음 상에서 유지하면서, 도입된 티올의 수를 상기 기재된 바와 같이 정량화한다.
도입된 티올의 수를 검증한 후, 약물-링커 모이어티를 티올당 2.5배 몰 과량으로 첨가한다. 접합 반응이 최종 농도 25% 프로필렌 글리콜 및 5% 트레할로스를 함유하는 접합 완충제 중에서 진행되도록 한다. 통상적으로, 링커 원액을 100% DMSO 중에 용해시킨다. 원액을 티올화된 항체에 직접 첨가한다.
접합 반응 혼합물을 완만하게 교반하면서 RT에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 10배 몰 과량의 N-에틸 말레이미드 (DMSO 중 100 mM 원액)를 접합 혼합물에 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반하여 임의의 미반응 티올을 차단한다. 이어서, 샘플을 0.2 μ 필터를 통해 여과한다. 물질을 TFF 비바플로우(VivaFlow) 50 사토리우스(Sartorius) 30 MWCO PES 막을 통해 10 mg/mL 글리신, 20 mg/mL 소르비톨, 15% 아세토니트릴, pH 5.0 (5X TFF 완충제 교환 부피)으로 완충제 교환하여 임의의 미반응 약물을 제거한다. 최종 제제화를 TFF에 의해 20 mg/mL 소르비톨, 10 mg/mL 글리신, pH 5.0으로 수행한다.
실시예 5 - 마우스 모델 시험
하기 절차를 도 1에 보고된 유형의 마우스 모델 시험을 위해 사용할 수 있다.
0.1 mL 포스페이트 완충 염수 ("PBS") 플러스 0.1 mL 매트리겔 중에 재현탁된 암 세포 (도 1의 경우에 H226 중피종)를 SCID 마우스의 옆구리 영역에 피하 이식한다.　 종양 측정을 28일 후에 시작하고, 마우스를 각각 대략 동일한 종양 크기를 갖는 7마리 마우스의 군으로 무작위화한다 (종양의 LWH/2에 의해 mm3로 추정됨; 도 1의 경우에 대략 135 mm3). 종양 이식 29일 후에, 마우스에게 시험 접합체를 단독으로 복강내로 투여한다.
실시예 6 - 반응식 A를 통한 화합물의 합성
본 실시예 및 도 1a-1b는 특히 화합물 Ia-03에 관련된, 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 A에 관한 것이다.
화합물 2. DCM (5 mL) 중 6-아미노이소벤조푸란-1(3H)-온 1 (1.0 g, 6.70 mmol) 및 메탄아민 (MeOH 중 2M, 16.76 mL, 33.5 mmol)의 혼합물을 3일 동안 교반하였다. LCMS (M+H-H2O=163.0)는 개환 생성물의 존재를 나타내었다. 용매를 증발시켜 화합물 2를 무색 페이스트 (정량적 수율)로서 수득하였다.
화합물 3. THF (5 mL) 중 (S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (Fmoc-Val-Cit, 1.681 g, 3.39 mmol) 및 화합물 2 (1.22 g, 6.77 mmol)의 용액에 EEDQ (1.674 g, 6.77 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. LCMS (M+H-H2O= 659.3)는 생성물 형성을 나타내었다. 반응물을 40 g 실리카 겔을 사용하는 콤비플래쉬(COMBIFLASH)™ 칼럼 상에서 0-100% MeOH/DCM으로 용리시켜 직접 정제하여 화합물 3 (53% 수율)을 수득하였다.
화합물 4. DMF (1 mL) 중 화합물 3 (206 mg, 0.313 mmol)의 용액에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (190 mg, 0.625 mmol)에 이어서 DIEA (0.164 mL, 0.938 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 RT에서 3시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H = 824.3)는 생성물 형성을 나타내었다. 이를 콤비플래쉬™ 칼럼 (40 g 실리카 겔) 내로 직접 주입하고, 0-100% MeOH/DCM으로 용리시켜 화합물 4를 백색 고체 (50% 수율)로서 수득하였다.
화합물 6. DMF (0.5 mL) 중 화합물 5 (26 mg, 0.054 mmol)의 용액에 화합물 4 (66.6 mg, 0.081 mmol)에 이어서 2,6-루티딘 (0.013 mL, 0.108 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 RT에서 3시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=1167.3)는 반응이 완결되어 중간체 부가물을 형성했음을 나타내었다. 반응물을 포화 수성 NaHCO3/EtOAc로 후처리하였고, 부가물을 후속 단계에 조 형태로 사용하였다.
DMF (0.5 mL) 중 부가물 (63.0 mg, 0.054 mmol)의 용액에 DEA (0.056 mL, 0.540 mmol)를 첨가하였다. 30분 후에 LCMS (M+H= 945.4)는 반응의 완결을 나타내었다. 반응 혼합물을 DMSO (0.5 ml)로 희석하고, 엑스브리지 정제용 C18 5 μm OBD 10x150 mm 칼럼이 장착된 시마즈(Shimadzu) LC-20AP 정제용 HPLC 상에서 0-95% H2O/아세토니트릴 (0.05% 포름산)로 용리시키면서 정제하였다. 11분에 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 6을 자주색 고체로서 수득하였다.
화합물 7. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-5-(알릴옥시)-5-옥소펜탄산 (FmocNH-O-alloc-Glu, 38.1 mg, 0.093 mmol) 및 화합물 6 (88 mg, 0.093 mmol)의 혼합물을 2,6-루티딘 (0.033 mL, 0.279 mmol) 및 HATU (70.8 mg, 0.186 mmol)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. LCMS (M+H=1279.6)는 부가물의 형성을 나타내었다. 반응물을 EtOAc/포화 수성 NaHCO3로 후처리하였고, 부가물을 후속 단계에 조 형태로 사용하였다.
상기 단계로부터의 부가물에 모르폴린 (0.016 mL, 0.186 mmol)에 이어서 팔라듐테트라키스 (10.76 mg, 9.31 μmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. LCMS (M+H=1240.0)는 alloc 기의 제거를 나타내었다. 이 혼합물에 DEA (0.049 mL, 0.466 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=1017.6)는 반응의 완결을 나타내었다. 반응물을 역상 콤비플래쉬™ 칼럼 (40 g c-18) 상에서 아세토니트릴 중 0-100% 물 (0.05% 포름산)로 용리시키면서 정제하여 화합물 7을 자주색 고체로서 수득하였다.
화합물 Ia-03. DMF (0.5 mL) 중 화합물 7 (10.2 mg, 9.50 μmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아자노나데칸-19-오에이트 (FmocNH-PEG4-OSuc, 5.55 mg, 9.50 μmol)의 용액을 2,6-루티딘 (3.32 μl, 0.028 mmol)으로 처리하고, 3시간 동안 교반하였다. LCMS (M+H=1357.5)는 반응의 완결을 나타내었다. 이 반응에 DEA (0.020 mL, 0.190 mmol)를 첨가하고, 이어서 30분 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=1135.4)는 반응의 완결을 나타내었다. 반응 혼합물을 DMSO (0.5 mL)로 희석하고, 엑스브리지 정제용 C18 5mm OBD 10x150 mm 칼럼이 장착된 시마즈 LC-20AP 정제용 HPLC 상에서 0-95% H2O/아세토니트릴 (0.05% 포름산)로 용리시키면서 정제하였다. 11.5분에 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 Ia-03을 자주색 고체로서 수득하였다.
반응식 A에 따라, 필요한 변경을 가하여, 표 D의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00059
실시예 7 - 반응식 B를 통한 화합물의 합성
본 실시예 및 도 3a-3c는 특히 화합물 Ia-06 및 Ia-09에 관련된, 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 B에 관한 것이다.
화합물 8. 메탄올 (1 mL) 중 6-아미노이소벤조푸란-1(3H)-온 1 (1 g, 6.70 mmol)의 용액에 에탄-1,2-디아민 (2.246 mL, 33.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS (M+H-H2O=192.2)는 출발 물질의 소멸 및 생성물의 존재를 나타내었다. 용매 및 과량의 시약을 증발에 의해 제거하고, 조 물질 8을 후속 단계에 사용하였다.
화합물 9. 0℃에서 DMF (5 mL) 중 화합물 8 (1402 mg, 6.70 mmol)의 용액에 THF (1 mL) 중 알릴 클로로포르메이트 (0.715 mL, 6.70 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H-H2O=276.2)는 생성물의 형성을 나타내었다. 반응물을 포화 수성 NaHCO3의 첨가에 의해 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 조 생성물을 40 g 실리카 겔 칼럼 상에서 DCM 중 0-100% MeOH로 용리시키면서 정제하여 화합물 9를 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 10. MeOH (2 mL) 중 (S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (Fmoc-Val-Cit, 242 mg, 0.488 mmol) 및 화합물 9 (286 mg, 0.975 mmol)의 용액에 EEDQ (241 mg, 0.975 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. LCMS (M+H=772.5)는 신규한 피크를 나타내었다. 반응물을 40 g 실리카 겔을 사용하는 콤비플래쉬™ 칼럼 상에서 0-100% MeOH/DCM으로 용리시키면서 직접 정제하여 화합물 10을 수득하였다.
화합물 11. DMF (1 mL) 중 화합물 10 (102 mg, 0.132 mmol)의 용액에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (121 mg, 0.396 mmol) 및 DIPEA (0.046 mL, 0.264 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 RT에서 3시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=937.3)는 반응의 완결을 나타내었다. 40 g 실리카 겔 칼럼에서의 콤비플래쉬™ 장치 상에서 DCM 중 0-50% MeOH로 용리시키면서 직접 정제하여 화합물 11을 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 12. 화합물 11 및 화합물 5의 혼합물 (53.0 mg, 0.110 mmol)을 밤새 교반하였다. LCMS (M+H=1110.4)는 반응의 완결을 나타내었고, 이를 포화 수성 NaHCO3/EtOAc로 후처리하고 건조시켰다. DMF (5 mL) 중 이러한 조 혼합물에 DEA (0.057 mL, 0.550 mmol)를 첨가하고, 이어서 30분 동안 교반하였다. LCMS (M+H=888.1)는 반응의 완결을 나타내었다. 생성물을 역상 콤비플래쉬™ 칼럼 (150g C-18)으로 직접 주입하고, 아세토니트릴 중 0-50% 물 (0.05% 포름산)로 용리시켜 화합물 12를 자주색 고체로서 수득하였다.
화합물 13. DMF (0.5 mL) 중 화합물 12 (150 mg, 0.142 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아자노나데칸-19-오에이트 (FmocNH-PEG4-OSu, 83 mg, 0.142 mmol)의 용액에 2,6-루티딘 (0.050 mL, 0.425 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. LCMS (M+H=1528.7)는 신규한 피크를 나타내었다. 조 생성물을 역상 콤비플래쉬에 의해 0-100% 아세토니트릴/물 (0.05% 포름산)로 용리시키면서 정제하여 목적 생성물을 자주색 고체로서 수득하였다.
이전 단계로부터의 생성물 (5 mg, 0.037 μmol)을 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, 페닐실란 (0.775 μl, 6.28 μmol)에 이어서 팔라듐테트라키스 (1.815 mg, 1.571 μmol)로 처리하였다. LCMS (M+H=1444.4)는 alloc 기의 제거를 나타내었다. 반응물을 시린지 필터를 통해 여과하고, 용매를 증발시켜 화합물 13을 수득하였다.
화합물 Ia-09. 8의 용액 (4.8 mg, 3.14 μmol)을 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-산 (6.75 mg, 0.016 mmol), HATU (6.22 mg, 0.016 mmol) 및 2,6-루티딘 (4 μL, 0.033 mmol)으로 처리하고, 1시간 동안 교반한 후, 아민을 아실화하였다. 이어서, 조 반응물을 DEA (3.28 μl, 0.031 mmol)로 처리하였다. LCMS (M+H=1616.5)는 Fmoc 기의 탈보호를 나타내었다. 조 생성물을 엑스브리지 정제용 C18 5μ 19x150 mm 칼럼이 장착된 시마즈 정제용 HPLC에 직접 주입하고, 0-95% MeCN/H2O (0.1%FA)로 용리시키고, 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 Ia-09 (1.3 mg, 0.833 μmol, 26.5% 수율)를 자주색 고체로서 수득하였다.
화합물 14. DMF (0.5 mL) 중 화합물 12의 용액을 2,6-루티딘 (10.24 μl, 0.088 mmol)에 이어서 아세트산 무수물 (2.76 μl, 0.029 mmol)로 처리하였다. 5분 후의 LCMS (M+H=1100.3)는 아세틸화의 완결을 나타내었다. 이 혼합물에 모르폴린 (5.10 μl, 0.059 mmol)에 이어서 팔라듐테트라키스 (6.77 mg, 5.86 μmol)를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. LCMS (M+H=1016.3)는 반응의 완결을 나타내었다. 반응물을 50 g C-18 칼럼을 사용하는 역상 콤비플래쉬™ 유닛 상에서 0-50% 물/아세토니트릴 (0.05% 포름산)로 용리시키면서 직접 정제하여 화합물 14를 자주색 고체로서 수득하였다.
화합물 Ia-06. DMF (0.5 mL) 중 화합물 14 (22 mg, 0.022 mmol)의 용액에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아자노나데칸-19-오에이트 (12.66 mg, 0.022 mmol) 및 2,6-루티딘 (7.57 μl, 0.065 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS는 반응의 완결을 나타내었다. 디에틸아민 (0.011 mL, 0.108 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=1363.3)는 생성물의 형성을 나타내었다. 반응물을 DMSO (0.5 mL)로 희석하고, 엑스브리지 정제용 C18 5μm OBD 10x150 mm 칼럼이 장착된 시마즈 LC-20AP 정제용 HPLC 상에서 0-95% H2O/아세토니트릴 (0.05% 포름산)로 용리시키면서 정제하였다. 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 Ia-06을 자주색 고체로서 수득하였다.
반응식 B에 따라, 필요한 변경을 가하여, 표 E의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00060
실시예 8 - 반응식 C를 통한 화합물의 합성
본 실시예 및 도 4는 특히 화합물 Ib-05에 관련된, 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 C에 관한 것이다.
화합물 17. DMF (2 mL)/DMSO (2 mL) 중 화합물 15 (124 mg, 0.312 mmol) 및 화합물 16 (310 mg, 0.312 mmol)의 혼합물에 DIPEA (0.164 mL, 0.937 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 가열하였다. LCMS (M+H= 1251.2)는 반응의 완결을 나타내었다. 염기를 증발시키고, 조 생성물을 콤비플래쉬™ 칼럼 (80 g 실리카 겔) 상에서 0-50% MeOH/DCM으로 용리시키면서 정제하여 화합물 17을 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 18. DMF (0.5 mL) 중 화합물 17 (52 mg, 0.042 mmol)의 용액을 모르폴린 (7.23 μl, 0.083 mmol)에 이어서 팔라듐테트라키스 (9.60 mg, 8.30 μmol)로 처리하였다. 1시간 후 LCMS는 alloc 기의 제거를 나타내었다. 이 용액을 DEA (0.043 mL, 0.415 mmol)로 처리하였다. 30분 후, LCMS (M+H/2= 495.9)는 반응의 완결을 나타내었다. 조 생성물을 엑스브리지 정제용 C18 5mm 19x150 mm 칼럼이 장착된 시마즈 정제용 HPLC로 직접 주입하고, 0-95% 아세토니트릴/H2O (0.1% 포름산)로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 18을 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 Ib-05. DMF (0.5 mL)/DMSO (0.5 mL) 중 화합물 18 (17 mg, 0.017 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (MC-OSuc, 5.29 mg, 0.017 mmol)의 용액을 2,6-루티딘 (6.00 μl, 0.052 mmol)으로 처리하고, 40℃에서 1시간 동안 가열하였다. LCMS (M+H= 1183.3)는 반응의 완결을 나타내었다. 조 생성물을 엑스브리지 정제용 C18 5mm 19x150 mm 칼럼이 장착된 시마즈 정제용 HPLC로 직접 주입하고, 0-95% 아세토니트릴/H2O (0.1% 포름산)로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 Ib-05 15 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 B를 또한 반응식 C에 의해, 필요한 변경을 가하여, 합성하였다 (질량 분광측정법 (M+H) 예상치 1182.5, 관측치 1183.3).
실시예 9 - 반응식 D를 통한 화합물의 합성
본 실시예 및 도 5는 특히 화합물 Ib-01에 관련된, 본원에 개시된 화합물의 합성을 위한 반응식 D에 관한 것이다.
화합물 21. DMF (1 mL) 중 화합물 20 (575 mg, 0.604 mmol) 및 화합물 19 (240 mg, 0.604 mmol)의 용액을 DIPEA (0.316 mL, 1.811 mmol)로 처리하였다. RT에서 3시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=1211.0)는 반응의 완결을 나타내었다. 염기를 증발시키고, 조 생성물을 80 g 실리카 겔을 사용하는 콤비플래쉬™ 칼럼 상에서 0-50% MeOH/DCM으로 용리시키면서 정제하여 화합물 21을 연황색 고체로서 수득하였다.
화합물 22. DMF (1 mL) 중 화합물 21 (0.206 g, 0.170 mmol)의 용액을 DEA (1mL)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 과량의 염기를 증발시키고, 용액을 HATU (0.071 g, 0.187 mmol) 및 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아자노나데칸-19-산 (0.083 g, 0.170 mmol), 및 2,6-루티딘 (0.059 mL, 0.510 mmol)의 용액으로 처리하였다. 30분 동안 교반한 후, LCMS (M+H=1458.4)는 반응의 완결을 나타내었다. 반응물을 50 g 칼럼을 사용하는 역상 콤비플래쉬™ 유닛 상에서 0-100% 아세토니트릴/H2O(0.05% 포름산)로 용리시키면서 정제하여 화합물 22를 수득하였다.
화합물 Ib-01. 화합물 22의 용액 (0.249g)을 TFA (1mL)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였고, 그 후 LCMS (M+H=1358.1)는 Boc 보호기의 제거를 나타내었다. TFA를 V-10 증발기로 증발시켰다.
바이알에서, 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-산 (0.070 g, 0.171 mmol)을 DMF (0.5 mL) 중에 용해시키고, HATU (0.078 g, 0.205 mmol) 및 DIPEA (0.149 mL, 0.854 mmol)로 처리하고, 20분 동안 교반하였다. 이 용액을 탈보호된 화합물 22로 처리하고, 30분 동안 교반하였다. LCMS (M+H=1752.4)는 목적 생성물의 형성을 나타내었다.
이 용액을 DEA (0.357 mL, 3.41 mmol)로 처리하였다. 30분 후 LCMS (M+H=1529.3)는 화합물 Ib-01의 형성을 나타내었다. 염기를 V-10 증발기에서 증발시키고, 조 생성물을 50 g C-18 칼럼을 사용하는 역상 콤비플래쉬™ 유닛 상에서 정제하고, 0-95% 아세토니트릴/H2O (0.1% 포름산)로 용리시키고, 생성물 함유 분획을 동결건조시켜 화합물 Ib-01 (122 mg, 0.073 mmol, 43.0% 수율)을 수득하였다.
반응식 D에 따라, 필요한 변경을 가하여, 표 F의 화합물을 제조하였다:
Figure pct00061
상기 본 발명의 상세한 설명은 본 발명의 특정한 부분 또는 측면과 주로 또는 독점적으로 관련된 구절을 포함한다. 이는 명확성 및 편의성을 위한 것이고, 특정한 특색은 그것이 개시된 구절을 넘어 관련될 수 있으며, 본원의 개시내용은 상이한 구절에서 발견된 정보의 모든 적절한 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 유사하게, 본원의 다양한 도면 및 설명은 본 발명의 구체적 실시양태와 관련되어 있지만, 구체적 특색이 특정한 도면 또는 실시양태의 문맥에서 개시되는 경우에, 이러한 특색은 또한 적절한 정도로, 또 다른 도면 또는 실시양태의 문맥에서, 또 다른 특색과 조합되어, 또는 본 발명에서 일반적으로 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
추가로, 본 발명은 특히 특정의 바람직한 실시양태의 관점에서 기재되기는 하였지만, 본 발명이 이러한 바람직한 실시양태로 제한되는 것은 아니다. 오히려, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위에 의해 정의된다.
두문자어들 및 약어들
이는 본 명세서에서 사용된 두문자어들과 약어들 및 이들의 의미에 대한 목록이다.
Figure pct00062
참고문헌
본 명세서에 이전에 제1 저자 (또는 발명자) 및 날짜에 의해 요약된 방식으로 인용된 하기 참고문헌에 대한 전체 인용이 하기에 제공된다. 각각의 이들 참고문헌은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
Alouane et al., Ang. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492, "Self-Immolative spacers: Kinetic Aspects, Structure-Property Relationships, and Application."
Boyd et al., US 7,691,962 B2 (2010).
Burke et al., US 2017/0247412 A1 (2017).
Carl et al., J. Med. Chem. 1981, 24(5), 479, "A Novel Connector Linkage Applicable in Prodrug Design." [1981a]
Carl et al., WO 81/01145 A1 (1981). [1981b]
Doronina et al., Bioconjugate Chem. 2008, 19, 1960, "Novel Peptide Linkers for Highly Potent Antibody-Auristatin Conjugate."
Dorywalska et al., Mol. Cancer Ther. 2016, 15(5), 958, "Molecular Basis of Valine-citrulline-PABC Linker Instability in Site-specific ADCs and its Mitigation by Linker Design."
Dubowchik et al., Biorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 3341, "Cathepsin B-Sensitive Dipeptide Prodrugs. 1. A Model Study of Structural Requirements for Efficient Release of Doxorubicin." [1998a].
Dubowchik et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 3347, "Cathepsin B-Sensitive Dipeptide Prodrugs. 2. Models of Anticancer Drugs Paclitaxel (Taxol®), Mitomycin C and Doxorubicin." [1998b].
Dubowchik et al., Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855, "Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin from Internalizing Immunoconjugates: Model Studies of Enzymatic Drug Release and Antigen-Specific In Vitro Anticancer Activity."
Feng, US 7,375,078 B2 (2008).
Feng, US 7,989,434 B2 (2011).
Firestone et al., US 6,214,345 B1 (2001).
Gerber et al., Nat. Prod. Rep. 2013, 30, 625, "The antibody-drug conjugate: an enabling modality for natural product based cancer therapies."
Jeffrey, US 8,039,273 (2011).
Jeffrey et al., Bioconjugate Chem. 2006, 17, 831, "Development and Properties of β-Glucuronide Linkers for Monoclonal Antibody-Drug Conjugates."
Lin et al., US 9,089,614 B2 (2015).
Kim et al., US 2016/0184451 A1 (2016).
Kim et al., US 2017/0095576 A1 (2017).
Machida et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 8595, "Allosterically Regulated Phosphatase Activity from Peptide-PNA Conjugates Folded Through Hybridization."
Major et al., Chem. Commun. 2011, 47, 7968, "Investigation of Self-Immolative Linkers in the Design of Hydrogen Peroxide Activated Metalloprotein Inhibitors."
McDonagh et al., WO 2007/103288 A2 (2007).
Senter et al., US 7,091,186 B2 (2006).
Szczepanik et al., US 8,828,678 B2 (2014).
Zhang et al., Chem. Commun. 2015, 51, 7031, "An Enzyme Activatable Probe with a Self-immolative Linker for Rapid and Sensitive Alkaline Phosphatase Detection and Cell Imaging through a Cascade Reaction."

Claims (20)

  1. 화학식 (I)에 의해 나타내어지는 화합물.
    Figure pct00063

    여기서
    R1은 C1-C5 알킬, N3, OH, SH, ONH2, NH2, CO2H,
    Figure pct00064
    이고;
    R2는 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 측쇄 잔기이고;
    n은 2, 3, 4 또는 5이고;
    Figure pct00065
    는,
    Figure pct00066
    에의 결합이 카텝신 B에 의해 절단가능한 폴리펩티드를 포함하고;
    R3은 O, NH,
    Figure pct00067
    이고;
    R4는 마우스 혈청에서
    Figure pct00068
    와
    Figure pct00069
    사이의 결합의 절단을 실질적으로 억제하지만 카텝신 B에 의한 동일한 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는 모이어티이고;
    L은 화학식 L-R3H의 생물활성 분자의 잔기이고;
    X는 스페이서 기이다.
  2. 제1항에 있어서,
    Figure pct00070
    가 Val-Cit, Glu-Val-Cit, Phe-Lys, Phe-Arg, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Val-Ala, Ala-Val-Cit, 또는 Val-Gly인 화합물.
  3. 제2항에 있어서, R4가
    Figure pct00071
    ;
    F, Cl, CN, NO2 또는 C1-C3 알킬로 임의로 치환된 페닐 또는 C3-C6 시클로알킬 기인
    화합물.
  4. 제3항에 있어서, R4가
    Figure pct00072
    이며;
    여기서 y는 4, 8, 12 또는 24인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R1이 NH2 또는
    Figure pct00073
    인 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R3이 NH,
    Figure pct00074
    인 화합물.
  7. 제1항에 있어서, X가
    Figure pct00075
    이며,
    여기서 x가 2 내지 24의 정수 (상하한 포함)인 화합물.
  8. 화학식 (II)에 의해 나타내어지는 접합체.
    Figure pct00076

    여기서
    Ab는 항체이고,
    R2는 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 측쇄 잔기이고;
    n은 2, 3, 4 또는 5이고;
    Figure pct00077
    는,
    Figure pct00078
    에의 결합이 카텝신 B에 의해 절단가능한 폴리펩티드를 포함하고;
    R3은 O, NH,
    Figure pct00079
    이고;
    R4는 마우스 혈청에서
    Figure pct00080
    와
    Figure pct00081
    사이의 결합의 절단을 실질적으로 억제하지만 카텝신 B에 의한 동일한 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는 모이어티이고;
    R5는
    Figure pct00082
    이며,
    여기서 Ab에 대한 결합의 원자가 위치는 별표로 표시되고 X에 대한 결합의 원자가 위치는 파선으로 표시되고;
    L은 화학식 L-R3H의 생물활성 분자의 잔기이고;
    X는 스페이서 기이다.
  9. 제8항에 있어서,
    Figure pct00083
    는 Val-Cit, Glu-Val-Cit, Phe-Lys, Phe-Arg, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Val-Ala, Ala-Val-Cit, 또는 Val-Gly인 접합체.
  10. 제9항에 있어서, R4가
    Figure pct00084

    Figure pct00085
    ;
    F, Cl, CN, NO2 또는 C1-C3 알킬로 임의로 치환된 페닐 또는 C3-C6 시클로알킬 기인
    접합체.
  11. 제9항에 있어서, R4가
    Figure pct00086
    이며;
    여기서 y는 4, 8, 12 또는 24인 접합체.
  12. 제8항에 있어서, R5가
    Figure pct00087
    인 접합체.
  13. 제11항에 있어서, R5가
    Figure pct00088
    인 접합체.
  14. 제8항에 있어서, R3이 NH,
    Figure pct00089
    인 접합체.
  15. 제8항에 있어서, X가
    Figure pct00090
    이며,
    여기서 x가 2 내지 24의 정수 (상하한 포함)인 접합체.
  16. 항체 Ab를 하기 화학식 (I)의 화합물과 접합시키는 것을 포함하는
    Figure pct00091

    하기 화학식 (II)에 의해 나타내어지는 접합체를 제조하는 방법.
    Figure pct00092

    여기서
    Ab는 항체이고;
    R1은 C1-C5 알킬, N3, OH, SH, ONH2, NH2, CO2H,
    Figure pct00093
    이고;
    R2는 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 측쇄 잔기이고;
    n은 2, 3, 4 또는 5이고;
    Figure pct00094
    는,
    Figure pct00095
    에의 결합이 카텝신 B에 의해 절단가능한 폴리펩티드를 포함하고;
    R3은 O, NH,
    Figure pct00096
    이고;
    R4는 마우스 혈청에서
    Figure pct00097
    와
    Figure pct00098
    사이의 결합의 절단을 실질적으로 억제하지만 카텝신 B에 의한 동일한 결합의 절단은 실질적으로 억제하지 않는 모이어티이고;
    R5는
    Figure pct00099
    이며,
    여기서 Ab에 대한 결합의 원자가 위치는 별표로 표시되고 X에 대한 결합의 원자가 위치는 파선으로 표시되고;
    L은 화학식 L-R3H의 생물활성 분자의 잔기이고;
    X는 스페이서 기이다.
  17. 제16항에 있어서,
    Figure pct00100
    가 Val-Cit, Glu-Val-Cit, Phe-Lys, Phe-Arg, Val-Lys, Ala-Lys, Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Val-Ala, Ala-Val-Cit, 또는 Val-Gly인 방법.
  18. 제17항에 있어서, R4가
    Figure pct00101
    이며;
    여기서 y는 4, 8, 12 또는 24인 방법.
  19. 제16항에 있어서, R1이 NH2인 방법.
  20. 제16항에 있어서, R1이
    Figure pct00102
    인 방법.
KR1020207037582A 2018-05-29 2019-05-28 전구약물 및 접합체에 사용하기 위한 변형된 자기-희생 모이어티 및 사용 및 제조 방법 KR20210015923A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862677307P 2018-05-29 2018-05-29
US62/677,307 2018-05-29
PCT/US2019/034114 WO2019231879A1 (en) 2018-05-29 2019-05-28 Modified self-immolating moieties for use in prodrugs and conjugates and methods of using and making

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210015923A true KR20210015923A (ko) 2021-02-10

Family

ID=66912963

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207037582A KR20210015923A (ko) 2018-05-29 2019-05-28 전구약물 및 접합체에 사용하기 위한 변형된 자기-희생 모이어티 및 사용 및 제조 방법

Country Status (13)

Country Link
US (2) US10898578B2 (ko)
EP (1) EP3801629A1 (ko)
JP (2) JP7458997B2 (ko)
KR (1) KR20210015923A (ko)
CN (1) CN112188902A (ko)
AU (1) AU2019277094A1 (ko)
BR (1) BR112020024022A2 (ko)
CA (1) CA3101601A1 (ko)
EA (1) EA202092747A1 (ko)
IL (1) IL278938A (ko)
MX (1) MX2020012674A (ko)
SG (1) SG11202011739SA (ko)
WO (1) WO2019231879A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023163536A1 (ko) * 2022-02-25 2023-08-31 앱티스 주식회사 신규 항체 약물 접합체

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA202092747A1 (ru) * 2018-05-29 2021-03-16 Бристол-Маерс Сквибб Компани Модифицированные саморазрушающиеся фрагменты для применения в пролекарствах и конъюгатах и способы применения и изготовления
EP3954382A4 (en) * 2019-04-05 2022-12-21 Sumitomo Pharma Co., Ltd. WATER-SOLUBLE ADJUVANT, AND COMPOSITION COMPRISING THE SAME
KR20240016287A (ko) 2021-06-01 2024-02-06 아지노모토 가부시키가이샤 항체 및 기능성 물질의 콘쥬게이트 또는 이의 염, 및 이의 제조에 사용되는 화합물 또는 이의 염
CA3234689A1 (en) * 2021-09-30 2023-04-06 Ajinomoto Co., Inc. Regioselective conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound used in production of the same or salts thereof
WO2023098691A1 (zh) * 2021-12-01 2023-06-08 上海生物制品研究所有限责任公司 抗体药物偶联物及其用途

Family Cites Families (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US828678A (en) 1902-09-05 1906-08-14 Roberto Taeggi Piscicelli Electric telpher postal system.
CA104587A (en) 1906-12-24 1907-04-09 Thomas Henry Cole Apparatus for generating and storing products of combustion under pressure
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
EP2829609A1 (en) 1999-08-24 2015-01-28 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human CTLA-4 antibodies and their uses
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
BR0306808A (pt) 2002-01-09 2005-08-30 Medarex Inc Anticorpos monoclonais humanos contra cd30
GB0220319D0 (en) * 2002-09-02 2002-10-09 Cancer Res Campaign Tech Enzyme activated self-immolative nitrogen mustard drugs
JP4680902B2 (ja) 2003-07-22 2011-05-11 バイエル・シエーリング・ファーマ アクチエンゲゼルシャフト Ｒｇ１抗体及びその使用
PL1691837T3 (pl) 2003-12-10 2012-11-30 Squibb & Sons Llc IP-10 przeciwciała i ich zastosowanie
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
AU2006214031A1 (en) 2005-02-18 2006-08-24 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to prostate specific membrane antigen (PSMA)
MX2007009935A (es) 2005-02-18 2007-10-10 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales que carecen de residuos fucosilo contra antigeno membranal especifico de prostata (psma).
LT2439273T (lt) 2005-05-09 2019-05-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Žmogaus monokloniniai antikūnai prieš programuotos mirties 1(pd-1) baltymą, ir vėžio gydymo būdai, naudojant vien tik anti-pd-1 antikūnus arba derinyje su kitais imunoterapiniais vaistais
CA2611814A1 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
CN105330741B (zh) 2005-07-01 2023-01-31 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
AU2006269940C1 (en) 2005-07-18 2013-11-07 Seagen Inc. Beta-glucuronide-linker drug conjugates
EP1934261B1 (en) 2005-09-26 2014-10-29 Medarex, L.L.C. Human monoclonal antibodies to cd70
DK1957539T3 (da) 2005-12-08 2013-05-06 Medarex Inc Humane monoklonale antistoffer til proteintyrosinkinase 7 (ptk7) og deres anvendelse
PT1960434E (pt) 2005-12-08 2012-10-02 Medarex Inc Anticorpos monoclonais humanos para fucosil-gm1 e métodos para a utilização de anti-fucosil-gm1
BRPI0620601A2 (pt) 2005-12-08 2011-11-16 Medarex Inc anticorpo monoclonal humano isolado ou uma porção ligante ao antìgeno do mesmo, composição, imunoconjugado, molécula de ácido nucléico isolada, vetor de expressão, célula hospedeira, método para preparar um anticorpo anti-o8e e método para tratar ou prevenir uma doença definida pelo crescimento de células tumorais expressando o8e
WO2007103288A2 (en) 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
JP5620100B2 (ja) 2006-06-29 2014-11-05 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 非天然アミノ酸を含有するタンパク質の無細胞合成の方法
JP2010500886A (ja) 2006-08-18 2010-01-14 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 改善された特異性を有するトランスグルタミナーゼ変異体
EP2064316B1 (en) 2006-09-08 2012-01-25 Ambrx, Inc. Site specific incorporation of non-natural amino acids by vertebrate cells
SG178712A1 (en) 2006-10-02 2012-03-29 Medarex Inc Human antibodies that bind cxcr4 and uses thereof
WO2008067495A2 (en) 2006-11-29 2008-06-05 Rutgers, The State University Of New Jersey Chemotherapeutic conjugates and methods of use
MX2009005776A (es) 2006-12-01 2009-06-10 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se enlazan al cd 22 y sus usos.
UY30776A1 (es) 2006-12-21 2008-07-03 Medarex Inc Anticuerpos cd44
WO2008102008A1 (en) 2007-02-22 2008-08-28 Novo Nordisk Health Care Ag Transglutaminase variants with improved specificity
JP5868593B2 (ja) 2007-07-17 2016-02-24 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＭｅｄａｒｅｘ， Ｌ．Ｌ．Ｃ． Ｇｌｙｐｉｃａｎ−３に対するモノクローナル抗体
CN101951946B (zh) 2007-10-01 2014-12-10 百时美施贵宝公司 结合间皮素的人抗体及其应用
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
CA2813411C (en) 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
US8828678B2 (en) 2010-11-16 2014-09-09 Enzo Life Sciences, Inc. Self-immolative probes for enzyme activity detection
US10294270B2 (en) 2011-02-25 2019-05-21 Lonza Ltd Branched linker for protein drug conjugates
JP6482471B2 (ja) 2012-12-21 2019-03-13 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 親水性の自壊性リンカー及びそのコンジュゲート
RS56169B1 (sr) 2013-02-14 2017-11-30 Bristol Myers Squibb Co Jedinjenja tubulisina, metode pripreme i primena
JP6474404B2 (ja) 2013-08-14 2019-02-27 ウィリアム マーシュ ライス ユニバーシティＷｉｌｌｉａｍ Ｍａｒｓｈ Ｒｉｃｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ウンシアラマイシン誘導体、合成方法、および抗腫瘍薬としてのそれらの使用
KR101628872B1 (ko) 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
PL3191502T3 (pl) 2014-09-11 2021-11-08 Seagen Inc. Ukierunkowane dostarczanie substancji leczniczych zawierających aminę trzeciorzędową
CN104587487B (zh) * 2015-01-06 2018-01-16 华东师范大学 一种应用于靶向给药***的新的支链连接体
JP2018510864A (ja) 2015-03-10 2018-04-19 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ トランスグルタミナーゼによって結合可能な抗体およびそれによって製造される結合体
WO2017059158A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Transglutaminase variants for conjugating antibodies
CN109562170B (zh) * 2016-06-08 2023-01-13 艾伯维公司 抗cd98抗体及抗体药物偶联物
CA3027103A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
WO2017214335A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
EP3468599A2 (en) * 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
EA202092747A1 (ru) * 2018-05-29 2021-03-16 Бристол-Маерс Сквибб Компани Модифицированные саморазрушающиеся фрагменты для применения в пролекарствах и конъюгатах и способы применения и изготовления

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023163536A1 (ko) * 2022-02-25 2023-08-31 앱티스 주식회사 신규 항체 약물 접합체

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019231879A1 (en) 2019-12-05
JP2021525724A (ja) 2021-09-27
CA3101601A1 (en) 2019-12-05
US11911483B2 (en) 2024-02-27
SG11202011739SA (en) 2020-12-30
AU2019277094A1 (en) 2021-01-21
JP7458997B2 (ja) 2024-04-01
US10898578B2 (en) 2021-01-26
CN112188902A (zh) 2021-01-05
US20190365915A1 (en) 2019-12-05
MX2020012674A (es) 2021-02-09
BR112020024022A2 (pt) 2021-02-23
IL278938A (en) 2021-01-31
EA202092747A1 (ru) 2021-03-16
EP3801629A1 (en) 2021-04-14
JP2024045327A (ja) 2024-04-02
US20210113706A1 (en) 2021-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102628855B1 (ko) 면역자극제 톨-유사 수용체 7 (tlr7) 효능제로서의 6-아미노-7,9-디히드로-8h-퓨린-8-온 유도체
JP7458997B2 (ja) プロドラッグおよび複合体に使用する修飾自己切断部分ならびにその使用方法および製造方法
US10981914B2 (en) Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10675359B2 (en) Enzymatic conjugation of antibodies
CN111032657B (zh) 用作免疫刺激剂Toll样受体7(TLR7)激动剂的6-氨基-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮衍生物
KR20200041910A (ko) 면역자극제 톨-유사 수용체 7 (tlr7) 효능제로서의 6-아미노-7,9-디히드로-8h-퓨린-8-온 유도체
KR102215954B1 (ko) 튜부리신 화합물, 그의 제조 및 사용 방법
KR20200041913A (ko) 면역자극제로서 톨-유사 수용체 7 (tlr7) 효능제로서의 6-아미노-7,9-디히드로-8h-퓨린-8-온 유도체
US10869934B2 (en) Antiproliferative compounds and conjugates made therefrom
KR20170102981A (ko) 헤테로아릴렌-가교된 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 및 제조 및 사용 방법
KR20170102980A (ko) 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 및 제조 및 사용 방법
Kumar et al. Antibody-drug conjugates
KR102493853B1 (ko) 세코-시클로프로파피롤로인돌 화합물, 그의 항체-약물 접합체, 및 제조 및 사용 방법
ES2943474T3 (es) Anticuerpo que comprende una extensión carboxiterminal de una cadena ligera que contiene glutamina, conjugados del mismo, y métodos y usos
Graziani et al. Recent Advances in Antibody–Drug Conjugates