KR20200138759A - 인간화 항-전립선 특이적 막 항원(psma) 항체 약물 접합체 - Google Patents

인간화 항-전립선 특이적 막 항원(psma) 항체 약물 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20200138759A
KR20200138759A KR1020207030091A KR20207030091A KR20200138759A KR 20200138759 A KR20200138759 A KR 20200138759A KR 1020207030091 A KR1020207030091 A KR 1020207030091A KR 20207030091 A KR20207030091 A KR 20207030091A KR 20200138759 A KR20200138759 A KR 20200138759A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
ser
psma
thr
val
Prior art date
Application number
KR1020207030091A
Other languages
English (en)
Inventor
시바루팜 보우믹
지아닝 왕
진밍 지아
윌리엄 브래디
펑 티안
Original Assignee
암브룩스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 암브룩스, 인코포레이티드 filed Critical 암브룩스, 인코포레이티드
Publication of KR20200138759A publication Critical patent/KR20200138759A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/884—Vaccine for a specifically defined cancer prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 전립선 특이적 막 항원 인간화 항체(항-PSMA) 및 항-PSMA 항체 약물 접합체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 PSMA 관련 질환 또는 암을 억제, 예방 또는 치료하는데 항-PSMA 항체 약물 접합체를 사용하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

인간화 항-전립선 특이적 막 항원(PSMA) 항체 약물 접합체
관련 출원에 관한 언급
본 출원은 2018년 3월 29일에 출원된 "신규 항-전립선 특이적 막 항원(PSMA: Prostate-Specific Membrane Antigen) 항체 약물 접합체"라는 명칭의 미국 가출원 제62/650,277호의 이익을 주장하며, 그 내용은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 EFS-Web을 통해 ASCII 형식으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이로써 전체적으로 참고로 포함된다. ASCII 사본은 2019년 3월 29일에 생성되었으며, AMBX_0225_00PCT_ST25.txt로 명명되며 크기는 37,015 바이트이다.
발명의 분야
본 발명의 개시 내용은 신규 전립선 특이적 막 항원(항-PSMA) 항체 및 항체 약물 접합체에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명의 개시 내용은 PSMA 관련 질환 또는 암을 억제, 예방 또는 치료하는데 항-PSMA 항체 약물 접합체를 사용하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.
전립선암은 선진국 남성에서 가장 흔히 진단되는 비-피부 관련 악성 종양이다. 남성 6명 중 1명은 전립선암 진단을 받을 것으로 추정된다. 전립선 특이적 항원(PSA)과 같은 혈청 기반 마커를 사용한 후 전립선암 진단이 개선되었다. 또한, 전립선 종양 관련 항원은 종양 영상화, 진단, 및 표적화 요법을 위한 표적을 제공한다. 전립선 종양 관련 마커인 전립선 특이적 막 항원(PSMA)이 그러한 표적이다. PSMA는 안드로겐 독립적인 전립선암에서 상당히 과발현된다. PSMA의 과발현은 높은 종양 등급, 고위험의 질환 진행 및 재발과 관련이 있다(Perner et al, Human Pathology, 2007). PSMA의 고발현은 부정적인 임상 예후 및 현저히 짧은 생존과 관련되어 왔다. PSMA 발현은 원발성 질환 부위와 뼈 및 림프절과 같은 전이 부위 모두에서 관찰된다(Olson and Israel, Frontiers in Bioscience, 2014).
수년에 걸쳐 여러 표적화 요법이 추구되었지만, 방사선 요법을 포함하는 요법이 효능과 허용 가능한 관용성을 모두 보여 주었기 때문에 임상 개발로 가장 발전하였다. 비-방사성 세포 독성제의 표적화 전달을 포함하는 방식의 다른 임상적 개발은 제한적인 성공을 거두었다.
PSMA의 물리적 특성과 전립선암 진행과 관련된 그의 발현 패턴을 고려할 때 PSMA는 항체-약물 접합체 개발에 있어 탁월한 표적이다. 항체-약물 접합체(ADC: antibody-drug conjugate)는 암세포와 같은 표적 세포에 세포 독성제의 표적화 전달을 허용하는 강력한 치료 구조물 부류이다. 표적화 기능 때문에, 이러한 화합물은 동일한 전신 전달 약물에 비해 훨씬 높은 치료 지수를 나타낸다. ADC는 온전한 항체 또는 scFv와 같은 항체 단편으로 개발되었다. 항체 또는 단편은 생리학적 조건하에서 안정하지만, 일단 표적 세포 내에 들어가면 절단될 수 있는 링커를 통해 하나 이상의 약물 사본에 연결된다. 현재까지만, AML용 젬투주맙 오조가미신(이후 시장에서 철수됨), ALCL 및 호지킨 림프종용 브렌툭시맙 베도틴, 및 HER2 양성 전이성 유방암용 트라스투주맙 엠탄신을 포함하여 몇개의 ADC만이 치료 용도로 승인받았다(Verma et al., N Engl J Med 367:1783-91, 2012; Bross et al., Clin Cancer Res 7:1490-96, 2001; Francisco et al., Blood 102:1458-65, 2003). 다양한 약물을 표적화하는 많은 ADC가 임상 시험 중에 있다. 그러나 PSMA를 표적화하는 ADC는 치료 지수의 부족과 독성으로 인해 어려움에 직면한다.
따라서, PSMA 항원 및 관련 암을 표적화하는 더 우수하거나 개선된 치료제에 대한 필요성이 존재한다. 당 업계에서 이러한 결함을 극복하기 위해, 본 발명의 개시 내용은 본원에서 신규 항-PSMA 항체, 변이체, 및 항체 약물 접합체 조성물을 제공한다.
발명의 요약
본 발명의 개시 내용은 항-PSMA 항체, 항체 변이체, 및 항체 약물 접합체 조성물을 제공한다. 추가 실시 양태에서, 본 발명의 개시 내용은 이러한 항-PSMA 항체를 포함하는 항체 약물 접합체(ADC)를 제공한다.
본 발명의 개시 내용은 서열 번호 1 내지 17을 포함하는 항-PSMA 항체, 항체 변이체, 및 항체 조성물을 제공한다. 일부 실시 양태에서 본 발명의 개시 내용은 서열 번호 1 내지 17을 포함하는 항체 약물 접합체(ADC)를 제공한다.
본 발명의 개시 내용은 서열 번호 1 내지 17로 이루어진 항-PSMA 항체, 항체 변이체, 및 항체 조성물을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명의 개시 내용은 서열 번호 1 내지 17로 이루어진 항체 약물 접합체(ADC)를 제공한다.
본 발명은 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-전립선 특이적 막 항원 항체(항-PSMA) 변이체로서, 중쇄 서열은 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16의 군으로부터 선택되고, 경쇄 서열은 서열 번호 9, 11, 13, 15, 또는 17의 군으로부터 선택되는 것인 항-PSMA 변이체를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16의 중쇄 서열을 포함하는 항-전립선 특이적 막 항원 항체(항-PSMA) 변이체를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 9, 11, 13, 15, 또는 17의 경쇄 서열을 포함하는 항-전립선 특이적 막 항원 항체(항-PSMA) 변이체를 제공한다.
다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16의 중쇄 서열로 이루어진 항-전립선 특이적 막 항원 항체(항-PSMA) 변이체를 제공한다. 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 9, 11, 13, 15, 또는 17의 경쇄 서열로 이루어진 항-전립선 특이적 막 항원 항체(항-PSMA) 변이체를 제공한다.
또 다른 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 변이체는 서열 번호 1 또는 6의 군으로부터 선택된 가변 서열 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 또 다른 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 변이체는 서열 번호 2 내지 5 또는 7의 군으로부터 선택된 가변 영역을 포함하는 경쇄 서열을 포함한다. 또 다른 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 중쇄 변이체는 서열 번호 1 또는 6의 가변 영역 서열로 이루어진다. 또 다른 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 경쇄 변이체는 서열 번호 2 내지 5 또는 7의 군으로부터 선택된 가변 영역으로 이루어진다.
추가 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 변이체는 항체의 중쇄 또는 경쇄 서열에 도입된 비-천연 아미노산을 포함한다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서, 항체는 항체 중쇄 또는 경쇄의 하나 이상의 위치에서 치환된 하나 이상의 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 갖는 항-PSMA 항체 변이체를 포함한다. 일부 실시 양태에서 PSMA 항체 변이체의 중쇄 또는 경쇄는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 포함한다. 다른 실시 양태에서 PSMA 항체 변이체의 중쇄 또는 경쇄 서열은 항체 중쇄 또는 경쇄의 하나 이상의 위치에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 포함한다. 한 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 중쇄 서열은 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 포함한다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서, 항-PSMA 항체 변이체는 표 4에 제시된 바와 같은 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.
본 발명의 추가 실시 양태에서, 항체는 표면 접근성이 높은 위치 및/또는 항체에 대해 중성으로 하전될 부위에서 치환된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 갖는 서열 번호 9, 11, 13, 15, 또는 17로부터의 경쇄 서열을 포함하는 항-PSMA 항체 변이체이다. 본 발명의 추가 실시 양태에서, 항체는 표면 접근성이 높은 위치 및/또는 항체에 대해 중성으로 하전될 부위에서 치환된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 갖는 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16으로부터의 중쇄 서열을 포함하는 항-PSMA 항체 변이체이다.
한 실시 양태에서, 본 발명은 항체가 경쇄 및 중쇄 서열을 포함하는 항-PSMA인 항-PSMA 항체 약물 접합체(ADC 또는 항-PSMA ADC)를 제공한다. 본 발명의 추가 실시 양태에서, 항-PSMA ADC는 서열 번호 9, 11, 13, 15, 또는 17로부터의 경쇄 및 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16으로부터의 중쇄를 포함한다. 본 발명의 한 실시 양태에서, 항-PSMA ADC는 항체 중쇄 또는 경쇄의 하나 이상의 위치에서 치환된 하나 이상의 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 포함한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 8의 중쇄 및 서열 번호 9의 경쇄를 포함하는 항-PSMA ADC를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 12 및 서열 번호 13을 포함하는 항-PSMA ADC를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 14 및 서열 번호 15를 포함하는 항-PSMA ADC를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 16 및 서열 번호 17을 포함하는 항-PSMA ADC를 제공한다.
일부 실시 양태에서, 본 개시 내용의 항체, 변이체, 또는 조성물은 PSMA 수용체에 결합하는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 본 발명의 다른 실시 양태에서 항체, 변이체, 또는 조성물은 PSMA 수용체의 세포 외 표면에 결합하는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서, 개시된 항체, 변이체, 또는 조성물은 PSMA 이량체에 결합하는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 개시 내용의 항체, 변이체, 또는 조성물은 가변 영역의 프레임워크 영역에 이식된 J591로부터의 CDR을 갖는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 다른 실시 양태에서 본 발명의 개시 내용의 항체, 변이체, 또는 조성물은 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 갖는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 일부 실시 양태에서 항체, 변이체, 또는 조성물은 본 발명의 개시 내용의 본원의 다른 곳의 하나 초과의 실시 양태에 의해 기재된 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 일부 실시 양태에서 본원에 개시된 항체, 항체 변이체 또는 항체 조성물(들)은 완전히 인간화될 수 있다. 다른 실시 양태에서 본원에 개시된 항체, 항체 변이체 또는 항체 조성물(들)은 키메라일 수 있다. 본 발명의 일부 실시 양태에서 항체는 전장 항체(가변 + Fc 영역), Fab, 이중 특이적, Fab-이량체, Fab-이중 특이적, Fab-삼중 특이적, 이중 특이적 T 세포 관여 항체(T cell engager), 이중 친화성 재표적화 항체, IgG1/IgG3 이중 특이적 항체, 디아바디, 이중 특이적 디아바디, scFv-Fc, 미니바디인 항체일 수 있다.
다른 실시 양태에서, 항-PSMA 항체, 항체 변이체, 또는 항체 조성물은 카르보닐 기, 아미노옥시 기, 히드라진 기, 히드라지드 기, 세미카르바지드 기, 아지드 기, 또는 알킬렌 기를 포함하는 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 혼입시킨다. 본 발명의 한 실시 양태에서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 아미노옥시 기를 포함한다. 또 다른 실시 양태에서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌, p-니트로페닐알라닌, p-술포티로신, p-카르복시페닐알라닌, o-니트로페닐알라닌, m-니트로페닐알라닌, p-보로닐 페닐알라닌, o-보로닐페닐알라닌, m-보로닐페닐알라닌, p-아미노페닐알라닌, o-아미노페닐알라닌, m-아미노페닐알라닌, p-아실페닐알라닌, o-아실페닐알라닌, m-아실페닐알라닌, p-OMe 페닐알라닌, o-OMe 페닐알라닌, m-OMe 페닐알라닌, p-술포페닐알라닌, o-술포페닐알라닌, m-술포페닐알라닌, 5-니트로 His, 3-니트로 Tyr, 2-니트로 Tyr, 니트로 치환 Leu, 니트로 치환 His, 니트로 치환 De, 니트로 치환 Trp, 2-니트로 Trp, 4-니트로 Trp, 5-니트로 Trp, 6-니트로 Trp, 7-니트로 Trp, 3-아미노티로신, 2-아미노티로신, O-술포티로신, 2-술포옥시페닐알라닌, 3-술포옥시페닐알라닌, o-카르복시페닐알라닌, m-카르복시페닐알라닌, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, L-3-(2-나프틸)알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcβ-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-요오도-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌 또는 p-프로파르길옥시-페닐알라닌이다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서 비-천연 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌이다.
본 발명의 다른 실시 양태에서 항-PSMA 항체 변이체는 단클론 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체이다. 한 실시 양태에서 항-PSMA 인간화 항체 변이체는 서열 번호 8, 10, 12, 또는 14의 군으로부터 선택된 중쇄 서열 및 서열 번호 9, 11, 13, 또는 15의 군으로부터 선택된 경쇄 서열을 포함한다. 또 다른 실시 양태에서 항-PSMA 키메라 항체 변이체는 서열 번호 16의 중쇄 서열 및 서열 번호 17의 경쇄 서열을 포함한다.
다른 실시 양태에서, 본 발명은 독소, 페이로드 또는 약물-링커에 공유적으로 접합된 항-PSMA 항체 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체의 조성물을 제공한다. 한 실시 양태에서 독소, 페이로드 또는 약물-링커는 세포 독성제를 포함한다. 한 실시 양태에서 세포 독성제는 돌라스타틴, 돌라스타틴 유도체 또는 이의 유사체이다. 다른 실시 양태에서 본 발명은 약물-링커에 공유적으로 접합된 항-PSMA 항체 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체의 조성물로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 조성물을 제공한다. 다른 실시 양태에서 본 발명은 하나 이상의 돌라스타틴에 공유적으로 접합된 서열 번호 1 내지 17 중 어느 하나의 항-PSMA 항체 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체의 조성물로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 조성물을 제공한다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서 하나 이상의 돌라스타틴에 공유적으로 접합된 서열 번호 8 내지 17 중 어느 하나의 항-PSMA 항체 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체의 조성물로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 조성물을 제공한다. 본 발명의 한 실시 양태에서 하나 이상의 돌라스타틴에 공유적으로 접합된 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16의 항-PSMA 항체 중쇄 서열 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체의 조성물로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 조성물을 제공한다. 본 발명의 다른 한 실시 양태에서 하나 이상의 돌라스타틴에 공유적으로 접합된 서열 번호 9, 11, 13, 15, 또는 17의 항-PSMA 항체 경쇄 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체의 조성물로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 조성물을 제공한다. 또 다른 실시 양태에서 항체는 적어도 2개의 돌라스타틴에 공유적으로 접합된다. 한 실시 양태에서, 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 돌라스타틴 유도체 또는 유사체를 포함한다. 한 실시 양태에서, 조성물은 돌라스타틴 유도체를 포함하거나 돌라스타틴 유사체이다. 또 다른 실시 양태에서, 돌라스타틴 유도체 또는 유사체는 모노메틸 아우리스타틴이고, 모노메틸 아우리스타틴은 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF) 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)이다. 다른 실시 양태에서, 하나 이상의 돌라스타틴은 비절단성 MMAF, 비절단성 MMAE, 절단성 MMAF, 절단성 MMAE, 짧은 절단성 MMAF, 또는 짧은 절단성 MMAE이다. 본 발명의 추가 실시 양태에서, 항체는 링커, 중합체 또는 생물학적 활성 분자에 연결된다. 일부 실시 양태에서 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 다른 실시 양태에서 링커는 분지형 또는 선형 폴리에틸렌 글리콜이다. 본 발명의 추가 실시 양태에서 항-PSMA 변이체는 PEG화될 수 있다. 본 발명의 추가 실시 양태에서, 항-PSMA 변이체는 비-천연적으로 코딩된 아미노산 상에서 PEG화될 수 있다. 본 발명의 항-PSMA 항체는 약 5 kDa PEG, 약 10 kDa PEG, 약 20 kDa PEG, 약 30 kDa PEG, 약 40 kDa PEG 이상으로 PEG화될 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 약 0.1 kDa 내지 약 100 kDa의 분자량을 가질 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 0.1 kDa 내지 50 kDa, 20 kDa 내지 40 kDa, 및 25 kDa과 35 kDa 사이의 임의의 정수 값의 분자량을 가질 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 약 30 kDa의 분자량을 가질 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 0.1 kDa 내지 50 kDa, 20 kDa 내지 40 kDa, 및 25 kDa과 35 kDa 사이의 임의의 정수 값의 분자량을 갖는 선형 분자일 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 30 kDa의 분자량을 갖는 선형 분자일 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 합성 아미노산 상의 아세틸 기와 반응할 수 있는 아미노옥시 기를 가질 수 있다. 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 파라-아세틸 페닐알라닌과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 비-천연적으로 코딩된 아미노산의 아세틸 측쇄와 옥심 결합을 형성할 수 있는 30 kDa 아미노옥시 활성화 선형 PEG일 수 있다.
한 실시 양태에서, 본 발명은 표 1 내지 3으로부터 선택된 적어도 하나의 약물-링커에 접합되는, 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16으로부터 선택된 중쇄 서열 및 서열 번호 9, 11, 13, 15로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 인간화 항-PSMA 항체를 포함하는 항체 약물 접합체로서, 접합은 중쇄 서열에 도입된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 항체 약물 접합체를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 약물-링커는 세포 독성제를 포함한다. 세포 독성제는 돌라스타틴, 돌라스타틴 유도체 또는 이의 유사체이다. 한 실시 양태에서 돌라스타틴, 돌라스타틴 유도체 또는 유사체는 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF) 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)로부터 선택된 모노메틸 아우리스타틴이다. 또 다른 실시 양태에서, 모노메틸 아우리스타틴은 절단성 MMAE 또는 MMAF, 비절단성 MMAE 또는 MMAF, 짧은 절단성 MMAE 또는 MMAF이다.
한 실시 양태에서 본 발명은 PSMA 발현 암 또는 암세포에서 종양 성장 또는 진행을 감소 또는 억제하는 방법으로서, PSMA 발현 암 또는 암세포를 유효량의 항체-약물 접합체와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 항체 약물 접합체는 표 1 내지 3으로부터 선택된 적어도 하나의 약물-링커에 접합되는, 서열 번호 8, 10, 12, 14, 또는 16으로부터 선택된 중쇄 서열 및 서열 번호 9, 11, 13, 15로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 인간화 항-PSMA 항체를 포함하며, 접합은 중쇄 서열에 도입된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생한다. 또 다른 실시 양태에서 본 발명은 PSMA 발현 암 또는 암세포를 유효량의 치료제와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 치료제는 화학 치료제, 호르몬제, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합이다. 한 실시 양태에서, 호르몬제는 엔잘루타미드다.
다른 실시 양태에서 본 발명의 항-PSMA ADC는 하나 이상의 면역자극제와 함께 투여되어 면역 반응을 유도하거나 향상시킬 수 있다. 이러한 면역자극제는 IL-2, 면역 자극 올리고뉴클레오티드(예를 들어, CpG 모티프), 인터페론, 종양 괴사 인자 알파를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 다른 실시 양태에서 본 발명의 항-PSMA ADC는 사이토카인, 케모카인, 보조제 또는 이들의 조합을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 면역조절제와 함께 투여될 수 있다.
추가 실시 양태에서 본 발명은 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하는 방법으로서, 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 PSMA 항체 약물 접합체를 제공하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 추가 실시 양태에서 본 발명은 전립선암을 가진 대상체를 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 본 개시 내용의 조성물을 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
한 실시 양태에서, 본 발명은 PSMA 발현 암세포 또는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법으로서, PSMA 발현 암 또는 암세포를 치료하기 위해 유효량의 항체-약물 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 항체-약물 접합체는 항체에 도입된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 약물-링커에 접합되는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 PSMA 항체를 포함하고; 약물-링커는 표 1 내지 3으로부터 선택되는 것인 방법을 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, PSMA 관련 질환 또는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 항-PSMA 항체 약물 접합체 및 치료제를 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 치료제는 화학 치료제, 호르몬제, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합이다. 치료제는 본 발명의 항-PSMA ADC 이전, 이후, 또는 이와 함께 제공될 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 개시 내용은 항-PSMA 항체 변이체 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 보조제, 결합제, 완충제, 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 약학 조성물은 본 발명의 항체 약물 접합체 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 보조제, 결합제, 완충제, 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다. 약학 조성물은 치료제를 추가로 포함한다. 한 실시 양태에서, 본 발명은 제조를 위한 그리고 암 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약을 제공한다.
추가 실시 양태에서 본 발명은 서열 번호 1 내지 17 중 어느 하나를 코딩하는 핵산을 제공한다. 한 실시 양태에서, 본 발명은 서열 1 내지 17의 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다.
본원에 기재된 방법 및 조성물은 본원에 기재된 특정 방법론, 프로토콜, 세포주, 구축물, 및 시약에 제한되지 않으며 그에 따라 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 특정 실시 양태를 설명하기 위한 목적이며, 본원에 기재된 방법 및 조성물의 범위를 제한하려는 의도가 아니며, 이는 첨부된 청구 범위에 의해서만 제한될 것임을 이해해야 한다.
본원에서와 첨부된 청구 범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태 "a", "an"및 "the"는 문맥이 달리 명시하지 않는 한 복수 언급을 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본원에 기재된 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 다양한 방법, 재료 등이 본원 기재된 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다.
본원에 언급된 모든 간행물 및 특허는 예를 들어, 간행물에 기재된 화학, 화학적 합성, 조성물 및 기타 방법론을 설명하고 공개할 목적으로 전체적으로 본원에 참고로 포함되며, 이들은 현재 기재되는 발명과 연계하여 사용될 수 있다. 본원에서 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 공개 내용에 대해서만 제공된다.
본 개시 내용의 실시 양태에서 신규 항-PSMA 아미노산 서열이 제공된다. 용어 "아미노산"은 자연 발생 및 비-천연 또는 천연이 아닌 아미노산뿐만 아니라, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능을 하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 천연적으로 코딩된 아미노산은 20개의 일반적인 아미노산(알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린) 및 피로리신 및 셀레노시스테인이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 단지 예로써, 수소, 카르복실 기, 아미노 기 및 작용 R기에 결합된 α-탄소를 갖는 화합물을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기(예로써, 노르류신)을 가질 수 있거나 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 여전히 유지하면서 변형된 펩티드 골격을 가질 수 있다. 아미노산 유사체의 비제한적인 예는 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 포함한다. 아미노산은 본원에서 이들의 명칭, 일반적으로 알려진 3문자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명위원회에서 권장하는 한 문자 기호로 지칭될 수 있다. 추가로, 뉴클레오티드는 일반적으로 허용되는 단일 문자 코드로 지칭될 수 있다.
"아미노 또는 카르복시 말단 변형 기"는 각각 말단 아민 기 또는 말단 카르복시 기에 부착될 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 예로써, 이러한 말단 아민 기 또는 말단 카르복시 기는 중합체 분자의 말단에 있을 수 있으며, 여기서 이러한 중합체 분자는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 및 다당류를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 말단 변형 기는 다양한 수용성 중합체, 펩티드 또는 단백질을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 단지 예로써, 말단 변형 기는 폴리에틸렌 글리콜 또는 혈청 알부민을 포함한다. 말단 변형 기는 중합체 분자의 치료적 특성을 변형시키기 위해 사용될 수 있으며, 여기에는 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질의 혈청 반감기를 증가시키는 것을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시 양태에서 본 발명의 개시 내용은 신규 항-PSMA 항체 및 항체 변이체를 제공한다. 본원에서 용어 "항체"는 항체 유전자의 전부 또는 일부에 의해 실질적으로 코딩되는 하나 이상의 폴리펩티드로 이루어진 단백질을 지칭한다. 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마(IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 항체는 또한 전장 항체 및 항체 단편을 포함하는 것을 의미하고, 임의의 유기체에 자연적으로 존재하는 항체, 항체 변이체, 조작된 항체 및 항체 단편을 포함한다. 본원의 항체는 또한 온전한 항체, 단클론 또는 다클론 항체를 포함하는 것을 의미한다. 본원의 항체는 또한 다중 특이적 항체 및/또는 이중 특이적 항체를 포함한다. 본 발명의 항체는 인간 항체를 포함한다. 인간 항체는 일반적으로 각각 가변 영역과 불변 영역을 포함하는 두개의 경쇄와 두개의 중쇄로 구성된다. 경쇄 가변 영역은 프레임워크 영역이 측면에 있는 본원에서 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3으로 확인되는 3개의 CDR을 포함한다. 중쇄 가변 영역은 프레임워크 영역이 측면에 있는 본원에서 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3으로 확인되는 3개의 CDR을 포함한다.
본원에서 용어 "항체 단편"은 전장 형태 이외의 임의의 형태의 항체를 지칭한다. 본원의 항체 단편은 전장 항체 내에 존재하는 더 작은 성분인 항체, 및 항체 변이체와 같이 조작된 항체를 포함한다. 항체 단편은 Fv, Fc, Fab, 및 (Fab')2, 단일 사슬 Fv(scFv), 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 이작용성 하이브리드 항체, CDR1, CDR2, CDR3, CDR의 조합, 가변 영역, 프레임워크 영역, 불변 영역, 중쇄, 경쇄, 및 가변 영역, 및 대체 스캐폴드 비-항체 분자, 이중 특이적 항체 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다(Maynard & Georgiou, Annu. Rev. Biomed. Eng. 2: 339-76, 2000; Hudson, Curr. Opin. Biotechnol. 9: 395-402, 1998). 또 다른 기능적 하부 구조는 펩티드 링커에 의해 공유적으로 연결된 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 가변 영역으로 구성된 단일 사슬 Fv(scFv)이다(Hu et al., Cancer Research, 56, 3055-3061, 1996). 이러한 작은(Mr 25,000) 단백질은 일반적으로 단일 폴리펩티드에서 항원에 대한 특이성과 친화성을 보유하며 더 큰 항원 특이적 분자에 대한 편리한 빌딩 블록을 제공할 수 있다. 달리 구체적으로 언급하지 않는 한, "항체" 또는 "항체들"이라는 용어를 사용하는 진술 및 청구 범위는 구체적으로 "항체 단편" 및 "항체 단편들"을 포함한다.
본 발명의 실시 양태에서 신규 항-PSMA 항체 약물 접합체(ADC)가 개시된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체-약물 접합체, 또는 "ADC"는 하나 이상의 생물학적 활성 분자(들)에 공유 결합된 항체 분자, 또는 이의 단편을 지칭한다. 생물학적 활성 분자는 링커, 중합체, 또는 기타 공유 결합을 통해 항체에 접합될 수 있다. ADC는 암세포와 같은 표적 세포에 세포 독성제의 표적화 전달을 허용하는 강력한 치료 구조물 부류이다. 표적화 기능 때문에, 이러한 화합물은 동일한 전신 전달 약물에 비해 훨씬 높은 치료 지수를 나타낸다. ADC는 온전한 항체 또는 scFv와 같은 항체 단편으로 개발되었다. 항체 또는 단편은 생리학적 조건하에서 안정하지만, 일단 표적 세포 내에 들어가면 절단될 수 있는 링커를 통해 하나 이상의 약물 사본에 연결된다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "항원-결합 단편"은 항원에 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 온전한 항체의 단편에 의해 수행될 수 있음이 밝혀졌다. 항체의 "항원 결합 단편"이라는 용어 내에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(Ward et al., Nature 341:544-546, 1989); (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들어 추가 서열(링커, 프레임워크 영역(들) 등)을 포함하거나 포함하지 않는 VH CDR3 및 (v) 추가 서열(링커, 프레임워크 영역 등)을 포함하거나 포함하지 않는 2 내지 6개의 단리된 CDR의 조합을 포함한다. 더욱이, Fv 단편의 두 도메인인 VL과 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들을 단일 폴리펩티드 사슬로 만들 수 있는 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 결합될 수 있으며, 여기서 VL과 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자(단일 사슬 Fv(scFv)로 알려짐)를 형성한다(예를 들언, 문헌[Bird et al., Science 242:423-426, 1988); 및 문헌[Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988] 참조). 이러한 단일 사슬 항체는 또한 항체의 "항원 결합 단편"이라는 용어 내에 포함되는 것으로 의도된다. 또한, 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 결합 도메인 면역글로불린 융합 단백질을 포함한다: (i) 면역글로불린 힌지 영역 폴리펩티드에 융합된 결합 도메인 폴리펩티드(예컨대, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 또는 링커 펩티드를 통해 경쇄 가변 영역에 융합된 중쇄 가변 영역), (ii) 힌지 영역에 융합된 면역글로불린 중쇄 CH2 불변 영역, 및 (iii) CH2 불변 영역에 융합된 면역글로불린 중쇄 CH3 불변 영역. 힌지 영역은 하나 이상의 시스테인 잔기를 세린 잔기로 대체함으로써 이량체화를 방지하도록 변형될 수 있다. 이러한 결합 도메인 면역글로불린 융합 단백질은 US 2003/0118592 및 US 2003/0133939에 추가로 개시되어 있다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
전형적인 항원 결합 부위는 경쇄 면역글로불린과 중쇄 면역글로불린의 쌍에 의해 형성된 가변 영역으로 구성된다. 항체 가변 영역의 구조는 매우 일관되고 매우 유사한 구조를 나타낸다. 이러한 가변 영역은 일반적으로 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 3개의 초가변 영역과 간격을 둔 비교적 상동의 프레임워크 영역(FR)으로 구성된다. 항원 결합 단편의 전체 결합 활성은 종종 CDR의 서열에 의해 결정된다. FR은 최적의 항원 결합을 위해 CDR의 3차원에서 적절한 배치 및 정렬에서 종종 역할을 한다. 실제로, CDR 서열은 대부분의 항체-항원 상호 작용을 담당하기 때문에, 상이한 특성을 갖는 상이한 항체로부터의 프레임워크 서열에 이식된 특정 자연 발생 항체의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 구축함으로써 특정 자연 발생 항체의 특성을 나타내는 재조합 항체를 발현할 수 있다(예를 들어, 문헌[Riechmann, L. et al., Nature 332:323-327, 1998; Jones, P. et al., Nature 321:522-525, 1986; 및 Queen, C. et al., Proc. Natl. Acad. USA 86:10029-10033, 1989] 참조). 이러한 프레임워크 서열은 생식 계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공개 DNA 데이터베이스에서 얻을 수 있다. 이러한 생식 계열 서열은 B 세포 성숙 동안 V(D)J 결합에 의해 형성되는 완전히 조립된 가변 유전자를 포함하지 않을 것이기 때문에 성숙 항체 유전자 서열과 상이할 것이다. 생식 계열 유전자 서열은 또한 가변 유전자 전체에 걸쳐 일반적으로 CDR에 클러스터된 돌연변이를 함유하는 고친화성 2차 레퍼토리 항체의 서열과 상이할 것이다. 예를 들어, 체세포 돌연변이는 프레임워크 영역 1의 아미노 말단 부분과 프레임워크 영역 4의 카르복시 말단 부분에서 상대적으로 드물게 발생한다. 게다가, 많은 체세포 돌연변이는 항체의 결합 특성을 크게 변경하지 않는다. 이러한 이유로, 원래 항체와 유사한 결합 특성을 갖는 온전한 재조합 항체를 재현하기 위해 특정 항체의 전체 DNA 서열을 얻을 필요는 없다. CDR 영역에 걸친 부분적인 중쇄 및 경쇄 서열은 일반적으로 이러한 목적에 충분하다. 부분 서열을 사용하여 재조합된 항체 가변 유전자에 기여한 생식 계열의 가변의 결합 유전자 세그먼트를 결정한다. 그런 다음 생식 계열 서열을 사용하여 가변 영역의 누락된 부분을 채운다. 중쇄 및 경쇄 리더 서열은 단백질 성숙 중에 절단되며 최종 항체의 특성에 기여하지 않는다. 누락된 서열을 추가하기 위해, 클로닝된 cDNA 서열을 결찰 또는 PCR 증폭에 의해 합성 올리고뉴클레오티드와 결합할 수 있다. 대안적으로, 전체 가변 영역을 합성하여 전체 합성 가변 영역 클론을 생성할 수 있다. 이 과정은 특정 제한 부위의 제거 또는 포함, 또는 특정 코돈의 최적화와 같은 특정 이점이 있다. 물론, 항체의 친화성, 특이성 또는 임의의 다른 원하는 특성을 최적화하기 위해 본원에 기재된 항체의 프레임워크 영역의 전체 또는 일부를 CDR과 함께 사용할 수 있다.
일부 실시 양태에서 본 발명은 이작용성 중합체와 같은 중합체에 관한 것이다. "이작용성 링커"로도 지칭되는 "이작용성 중합체"는 다른 모이어티와 특이적으로 반응하여 공유 또는 비공유 연결을 형성할 수 있는 2개의 작용기를 포함하는 중합체를 지칭한다. 이러한 모이어티는 천연 또는 비-천연 아미노산 또는 이러한 천연 또는 비-천연 아미노산을 함유하는 펩티드 상의 측기를 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 이작용성 링커 또는 이작용성 중합체에 연결될 수 있는 다른 모이어티는 동일하거나 상이한 모이어티일 수 있다. 단지 예로써, 이작용성 링커는 제1 펩티드 상의 기와 반응성인 작용기, 및 제2 펩티드 상의 기와 반응성인 또 다른 작용기를 가질 수 있으며, 이에 의해 제1 펩티드, 이작용성 링커 및 제2 펩티드를 포함하는 접합체를 형성한다, 다양한 화합물을 펩티드에 부착하기 위한 많은 절차와 링커 분자가 알려져 있다. 예를 들어, 유럽 특허 출원 제0188256호; 미국 특허 제4,659,839호; 제4,414,148호; 제4,699,784호; 제4,680,338호; 및 제4,569,789호를 참조하며, 이들은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. "다작용성 링커"로도 지칭되는 "다작용성 중합체"는 다른 모이어티와 반응할 수 있는 2개 이상의 작용기를 포함하는 중합체를 지칭한다. 이러한 모이어티는 공유 또는 비공유 연결을 형성하기 위해서 천연 또는 비-천연 아미노산 또는 이러한 천연 또는 비-천연 아미노산을 함유하는 펩티드 상의 측기를 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다(아미노산 측기를 포함하지만 이에 제한되지 않음). 이작용성 중합체 또는 다작용성 중합체는 임의의 원하는 길이 또는 분자량일 수 있으며, 화합물에 연결된 하나 이상의 분자와 그가 결합하는 분자 또는 화합물에 결합시키는 분자 사이에 특정의 원하는 간격 또는 입체 구조를 제공하도록 선택될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생체 이용률"은 물질 또는 그의 활성 모이어티가 약학 제형으로부터 전달되고 작용 부위 또는 전신 순환에서 이용 가능해지는 속도 및 정도를 지칭한다. 생체 이용률의 증가는 물질 또는 그의 활성 모이어티가 약학 제형으로부터 전달되고 작용 부위 또는 전신 순환에서 이용 가능하게 되는 속도 및 정도를 증가시키는 것을 지칭한다. 예로써, 생체 이용률의 증가는 다른 물질 또는 활성 모이어티와 비교할 때 혈액 내 물질 또는 그의 활성 모이어티의 농도의 증가로 나타낼 수 있다.
본원에서 사용될 때 용어 "생물학적 활성 분자", "생물학적 활성 모이어티" 또는 "생물학적 활성제"는 바이러스, 박테리아, 박테리오파지, 트랜스포존, 프리온, 곤충, 진균, 식물, 동물, 및 인간을 포함하는, 그러나 이에 제한되지는 않는 유기체와 관련된 생물학적 시스템, 경로, 분자, 또는 상호 작용의 임의의 물리적 또는 생화학적 특성에 영향을 미칠 수 있는 임의의 물질을 의미한다. 특히, 본원에서 사용되는 바와 같이, 생물학적 활성 분자는 인간 또는 다른 동물의 질환의 진단, 치유, 완화, 치료, 또는 예방을 위해, 그 외 인간 또는 동물의 신체적 또는 정신적 행복의 향상시키기 위해 의도된 임의의 물질을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 생물학적 활성 분자의 예는 펩티드, 단백질, 효소, 소분자 약물, 경질 약물, 연질 약물, 프로드러그, 탄수화물, 무기 원자 또는 분자, 염료, 지질, 뉴클레오시드, 방사성 핵종, 올리고뉴클레오티드, 독소, 세포, 바이러스, 리포솜, 마이크로 입자 및 미셀을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에 기재된 방법 및 조성물과 함께 사용하기에 적합한 생물학적 활성제의 부류는 약물, 프로드러그, 방사성 핵종, 영상화제, 중합체, 항생제, 살진균제, 항바이러스제, 항염증제, 항종양제, 심혈관제, 항불안제, 호르몬, 성장 인자, 스테로이드제 및 비스테로이드제, 미생물 유래 독소 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"생물학적 활성 조절"은 폴리펩티드의 반응성을 증가 또는 감소시키고, 폴리펩티드의 선택성을 변경하고, 폴리펩티드의 기질 선택성을 향상 또는 감소시키는 것을 의미한다. 변형된 생물학적 활성의 분석은 비-천연 폴리펩티드의 생물학적 활성을 천연 폴리펩티드의 생물학적 활성과 비교함으로써 수행될 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 개시 내용은 항체에 생합성적으로 혼입되는 아미노산에 관한 것이다. 본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "생합성적으로"는 폴리뉴클레오티드, 코돈, tRNA 및 리보솜 중 적어도 하나의 성분의 사용을 포함하는 번역 시스템(세포 또는 비-세포)을 이용하는 임의의 방법을 지칭한다. 예로써, 비-천연 아미노산은 본원에 기재되고 당 업계에 잘 알려진 방법 및 기술을 사용하여 비-천연 아미노산 폴리펩티드에 "생합성적으로 혼입"될 수 있다. 예를 들어, WO2010/011735 및 WO2005/074650를 참조한다.
용어 "보존적으로 변형된 변이체"는 천연 및 비-천연 아미노산 및 천연 및 비-천연 핵산 서열, 및 이들의 조합 모두에 적용된다. 특정 핵산 서열과 관련하여, "보존적으로 변형된 변이체"는 동일하거나 본질적으로 동일한 천연 및 비-천연 아미노산 서열을 코딩하는 천연 및 비-천연 핵산을 지칭하거나, 천연 및 비-천연 핵산이 천연 및 비-천연 아미노산 서열을 코딩하지 않는 경우 본질적으로 동일한 서열을 지칭한다. 예로써, 유전자 코드의 축퇴성 때문에 기능적으로 동일한 많은 핵산이 임의의 주어진 단백질을 코딩한다. 예를 들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 코딩한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 지정되는 모든 위치에서, 코돈은 코딩되는 폴리펩티드를 변경하지 않고 기재된 임의의 상응하는 코돈으로 변경될 수 있다. 이러한 핵산 변이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종인 "침묵 변이"이다. 따라서, 예로써 천연 또는 비-천연 폴리펩티드를 코딩하는 본원의 모든 천연 또는 비-천연 핵산 서열은 또한 천연 또는 비-천연 핵산의 가능한 모든 침묵 변이를 기술한다. 당업자는 천연 또는 비-천연 핵산의 각 코돈이 기능적으로 동일한 분자를 생산하도록 변형될 수 있음(보통 메티오닌에 대한 유일한 코돈인 AUG 및 일반적으로 트립토판에 대한 유일한 코돈인 TGG 제외)을 인식할 것이다. 따라서, 천연 및 비-천연 폴리펩티드를 코딩하는 천연 및 비-천연 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각의 기재된 서열에 내포된다. 아미노산 서열에 관하여, 코딩된 서열에서 단일 천연 및 비-천연 아미노산 또는 소량의 천연 및 비-천연 아미노산을 변경, 첨가 또는 결실시키는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질 서열에 대한 개별 치환, 결실 또는 첨가는 변경이 아미노산의 결실, 아미노산의 첨가, 또는 화학적으로 유사한 아미노산으로 천연 및 비-천연 아미노산의 치환을 초래하는 "보존적으로 변형된 변이체"이다. 기능적으로 유사한 천연 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당 업계에 잘 알려져 있다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업자에게 알려져 있다. 다음 8개 그룹은 각각 서로에 대한 보존적 치환인 아미노산을 포함한다: 1) 알라닌(A), 글리신(G); 2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E); 3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q); 4) 아르기닌(R), 리신(K); 5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W); 7) 세린(S), 트레오닌(T); 및 8) 시스테인(C), 메티오닌(M)(예를 들어, 문헌[Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W H Freeman & Co.; 2nd edition, 1993] 참조). 이러한 보존적으로 변형된 변이체는 추가적으로 본원에 기재된 조성물의 다형성 변이체, 종간 상동체, 및 대립 유전자이며 이들을 배제하지 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "약물"은 전립선암을 포함하는 암과 같은 질환 또는 병태의 예방, 진단, 완화, 치료, 또는 치유에 사용되는 임의의 물질을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량"은 치료되는 질환 또는 병태의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬, 투여되는 약물, 화합물 또는 조성물의 충분한 양을 지칭한다. 결과는 질환의 징후, 증상, 또는 원인의 감소 및/또는 완화, 또는 생물학적 시스템의 임의의 기타 원하는 변경일 수 있다. 예로써, 투여되는 약물, 화합물 또는 조성물은 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 항체 또는 이의 변이체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 이러한 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 항체 또는 이의 변이체를 함유하는 조성물은 예방, 강화 및/또는 치료 조치를 위해 투여될 수 있다. 임의의 개별 사례에서 적절한 "유효"량은 용량 증가 요법 연구와 같은 기술을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "향상시키다" 또는 "향상"은 효능 또는 기간에 있어 원하는 효과를 증가시키거나 연장하는 것을 의미한다. 예로써, 치료제의 효과를 "향상시키는 것"은 효능 또는 기간에 있어 질환, 장애 또는 병태의 치료 동안에 미치는 치료제의 효과를 증가 또는 연장하는 능력을 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같이 "향상 유효량"은 질환, 장애 또는 병태의 치료에서 치료제의 효과를 향상시키기에 적합한 양을 지칭한다. 환자에 사용될 때, 이 용도에 효과적인 양은 질환, 장애 또는 병태의 중증도 및 과정, 이전 요법, 환자의 건강 상태 및 약물에 대한 반응, 및 치료 의사의 판단에 따라 결정될 것이다.
용어 "인간화 또는 키메라 항체"는 비-인간 종(예를 들어, 쥣과)의 면역글로불린으로부터 유래된 항원 결합 부위, 및 인간 면역글로불린의 구조 및/또는 서열에 기초한 분자의 나머지 면역글로불린 구조를 갖는, 일반적으로 재조합 기술을 사용하여 제조된 분자를 지칭한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 잔기/영역(FR)은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 경우에 따라 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 인간화 형태의 설치류 항체는, 친화도를 증가시키거나, 인간화 항체의 안정성을 증가시키기 위해 또는 다른 이유로 특정 아미노산 치환이 포함될 수 있지만, 본질적으로 모 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 포함할 것이다. 그러나 CDR 루프 교환은 기원 항체와 동일한 결합 특성을 갖는 항체를 균일하게 생성하지 않기 때문에, 항원 결합 친화도를 보존하기 위해 CDR 루프 지지에 관여하는 잔기인 프레임워크 잔기(FR)의 변화가 인간화 항체에 도입될 수도 있다. 항원 결합 부위는 불변 도메인에 융합된 완전한 가변 도메인 또는 가변 도메인의 적절한 프레임워크 영역에 이식된 상보성 결정 영역(CDR)만을 포함할 수 있다. 항원 결합 부위는 야생형이거나 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 변형될 수 있다. 이것은 인간 개체에서 면역원으로서의 불변 영역을 제거하지만 외래 가변 영역에 대한 면역 반응의 가능성은 남아 있다(LoBuglio, A. F. et al., "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86:4220-4224, 1989). 또 다른 접근법은 인간 유래 불변 영역을 제공하는 것뿐만 아니라 가변 영역을 변형하여 그들을 가능한 한 인간 형태에 가깝게 재구성하는 데 중점을 둔다. 중쇄 및 경쇄 모두의 가변 영역은 주어진 종에서 상대적으로 보존되고 추정적으로 CDR에 대한 스캐폴딩을 제공하는 4개의 프레임워크 영역(FR)의 측면에 문제의 항원에 반응하여 변하고 결합 능력을 결정하는 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다고 알려져 있다. 비인간 항체가 특정 항원에 대해 제조될 때, 가변 영역은 변형될 인간 항체에 존재하는 FR 상에 비인간 항체로부터 유래된 CDR을 이식함으로써 "인간화"될 수 있다. 다양한 항체에 대한 이 접근법의 적용은 문헌[Kettleborough, C. A. et al., "Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation," Protein Engineering 4:773-3783,1991; Co, M. S. et al., "Humanized Antibodies For Antiviral Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 88:2869-2873,1991; Carter, P. et al., "Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89:4285-4289,1992; 및 Co, M. S. et al., "Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen," J. Immunol. 148:1149-1154,1992]에 의해 보고되었다. 일부 실시 양태에서, 인간화 항체는 모든 CDR 서열을 보존한다(예를 들어, 마우스 항체로부터의 6개 모든 CDR을 포함하는 인간화 마우스 항체). 다른 실시 양태에서, 인간화 항체는 원래 항체에 대해 변경된 하나 이상의 CDR(1, 2, 3, 4, 5, 6개)을 가지며, 이는 또한 원래 항체의 하나 이상의 CDR "로부터 유래된" 하나 이상의 CDR로 지칭된다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "동일한"은 동일한 둘 이상의 서열 또는 부분 서열을 지칭한다. 또한, 본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 동일한"은 비교 알고리즘을 사용하여 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정된 비교 창, 또는 지정된 영역에 대한 최대 대응을 위해 비교 및 정렬될 때 동일한 순차적 단위의 백분율을 갖는 둘 이상의 서열 또는 지정된 영역을 지칭한다. 단지 예로써, 순차적 단위가 지정된 영역에 대해 약 60% 동일, 약 65% 동일, 약 70% 동일, 약 75% 동일, 약 80% 동일, 약 85% 동일, 약 90% 동일하거나, 약 95% 동일하다면 둘 이상의 서열은 "실질적으로 동일"할 수 있다. 이러한 백분율은 둘 이상의 서열의 "퍼센트 동일성"을 기술한다. 서열의 동일성은 적어도 약 75 내지 100개의 순차적 단위 길이인 영역, 약 50개의 순차적 단위 길이인 영역, 또는 지정되지 않은 경우 전체 서열에 걸쳐 존재할 수 있다. 이 정의는 또한 테스트 서열의 상보체를 지칭한다. 단지 예로써, 아미노산 잔기가 동일할 때 2개 이상의 폴리펩티드 서열은 동일한 반면, 아미노산 잔기가 지정된 영역에 걸쳐 약 60% 동일, 약 65% 동일, 약 70% 동일, 약 75% 동일, 약 80% 동일, 약 85% 동일, 약 90% 동일하거나, 약 95% 동일하다면 2개 이상의 폴리펩티드 서열은 "실질적으로 동일"하다. 동일성은 적어도 약 75 내지 약 100개의 아미노산 길이인 영역, 약 50개의 아미노산 길이인 영역, 또는 지정되지 않은 경우 폴리펩티드 서열의 전체 서열에 걸쳐 존재할 수 있다. 또한, 단지 예로써, 핵산 잔기가 동일할 때 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열은 동일한 반면, 핵산 잔기가 지정된 영역에 걸쳐 약 60% 동일, 약 65% 동일, 약 70% 동일, 약 75% 동일, 약 80% 동일, 약 85% 동일, 약 90% 동일하거나, 약 95% 동일하다면 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열은 "실질적으로 동일"하다. 동일성은 적어도 약 75 내지 약 100개의 핵산 길이인 영역, 약 50개의 핵산 길이인 영역, 또는 지정되지 않은 경우 폴리뉴클레오티드 서열의 전체 서열에 걸쳐 존재할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "면역원성"은 치료 약물의 투여에 대한 항체 반응을 지칭한다. 치료용 비-천연 아미노산 폴리펩티드에 대한 면역원성은 생물학적 유체에서 항-비천연 아미노산 폴리펩티드 항체의 검출을 위한 정량 및 정성 분석을 사용하여 얻을 수 있다. 이러한 분석에는 방사 면역 분석(RIA: Radioimmunoassay), 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA: Enzyme-linked immunosorbent assay), 발광 면역 분석(LIA: luminescent immunoassay), 및 형광 면역 분석(FIA: fluorescent immunoassay)이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 치료용 비-천연 아미노산 폴리펩티드에 대한 면역원성의 분석은 치료용 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 투여시 항체 반응을 치료용 천연 아미노산 폴리펩티드의 투여시 항체 반응과 비교하는 단계를 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 관심없는 성분으로부터 관심 성분을 분리 및 제거하는 것을 지칭한다. 단리된 물질은 건조 또는 반건조 상태이거나 수용액을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 용액 상태일 수 있다. 단리된 성분은 균질한 상태일 수 있거나 단리된 성분은 추가적인 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물의 일부일 수 있다. 순도 및 균질성은 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 포함하는, 그러나 이에 제한되지는 않는 분석 화학 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 관심 성분이 단리되고 제제에 존재하는 주요 종인 경우, 성분은 본원에서 실질적으로 정제된 것으로 기재된다. 본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "정제된"은 적어도 85% 순수한, 적어도 90% 순수한, 적어도 95% 순수한, 적어도 99% 또는 그 이상 순수한 관심 성분을 지칭할 수 있다. 단지 예로써, 핵산 또는 단백질은, 자연 상태에서 결합된 세포 성분 중 적어도 일부가 이러한 핵산 또는 단백질에 없거나 핵산 또는 단백질이 생체 내 또는 시험관 내 생산 농도보다 높은 수준으로 농축된 경우 "단리"된다. 또한, 예로써, 유전자는 유전자 측면에 있고 관심의 유전자 이외의 단백질을 코딩하는 오픈 리딩 프레임에서 분리될 때 단리된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "연결"은 링커의 작용기와 다른 분자 사이의 화학 반응으로부터 형성된 결합 또는 화학적 모이어티를 지칭한다. 이러한 결합은 공유 연결 및 비공유 결합을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는 이러한 화학적 모이어티는 에스테르, 카르보네이트, 이민 포스페이트 에스테르, 히드라존, 아세탈, 오르토에스테르, 펩티드 연결, 및 올리고뉴클레오티드 연결을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 가수 분해적으로 안정한 연결은 연결이 물에서 실질적으로 안정하고 생리학적 조건하에서, 아마도 무기한으로 연장된 기간 동안(이들을 포함하지만 이에 제한되지 않음) 유용한 pH 값에서 물과 반응하지 않음을 의미한다. 가수 분해적으로 불안정하거나 분해 가능한 연결은 연결이 물 또는 예를 들어 혈액을 포함한 수용액에서 분해될 수 있음을 의미한다. 효소적으로 불안정하거나 분해 가능한 연결은 연결이 하나 이상의 효소에 의해 분해될 수 있음을 의미한다. 단지 예로써, PEG 및 관련 중합체는 중합체 백본에서 또는 중합체 백본과 중합체 분자의 하나 이상의 말단 작용기 사이의 링커 기에서 분해 가능한 연결을 포함할 수 있다. 이러한 분해 가능한 연결은 생물학적 활성제 상의 알코올 기와 PEG 카르복실산 또는 활성화된 PEG 카르복실산의 반응에 의해 형성된 에스테르 연결을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이러한 에스테르 기는 일반적으로 생리학적 조건하에서 가수 분해되어 생물학적 활성제를 방출한다. 기타 가수 분해적으로 분해 가능한 연결은 카보네이트 연결; 아민과 알데히드의 반응의 결과로 생성된 이민 연결; 알코올을 포스페이트 기와 반응시켜 형성된 포스페이트 에스테르 연결; 히드라지드와 알데히드의 반응 생성물인 히드라존 연결; 알데히드와 알코올의 반응 생성물인 아세탈 연결; 포르메이트와 알코올의 반응 생성물인 오르토에스테르 연결; PEG와 같은 중합체의 말단에(이를 포함하지만 이에 제한되지 않음) 아민기와 펩티드의 카르복실 기에 의해 형성된 펩티드 연결; 및 중합체의 말단에서(이를 포함하지만 이에 제한되지 않음) 포스포라미다이트 기와 올리고뉴클레오티드의 5' 히드록실 기에 의해 형성된 올리고뉴클레오티드 연결을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "대사 산물"은 화합물, 예로써 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드가 대사될 때 형성되는 상기 화합물, 예로써 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 유도체를 지칭한다. 용어 "약학적 활성 대사 산물" 또는 "활성 대사 산물"은 화합물, 예로써 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드가 대사될 때 형성되는 상기 화합물, 예로써 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 생물학적 활성 유도체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대사"는 특정 물질이 유기체에 의해 변화되는 모든 공정을 지칭한다. 이러한 공정에는 가수 분해 반응 및 효소에 의해 촉매되는 반응이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 대사에 대한 추가 정보는 문헌[The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996)]에서 얻을 수 있다. 단지 예로써, 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 대사 산물은 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산 폴리펩티드, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 숙주로의 투여, 및 숙주로부터의 조직 샘플의 분석에 의해, 또는 시험관 내에서 천연 아미노산 폴리펩티드, 비-천연 아미노산 폴리펩티드, 변형된 천연 아미노산, 또는 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 간세포와의 인큐베이션 및 생성된 화합물의 분석에 의해 확인될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "변형된"은 천연 아미노산, 비-천연 아미노산, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드에 대한 변화의 존재를 지칭한다. 이러한 변화, 또는 변형은 천연 아미노산, 비-천연 아미노산, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 합성 후 변형에 의해, 또는 천연 아미노산, 비-천연 아미노산, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 번역과 동시에 변형에 의해, 또는 번역 후 변형에 의해 얻을 수 있다.
"비천연 아미노산"은 20개의 일반적인 아미노산 또는 피로리신 또는 셀레노시스테인 중 하나가 아닌 아미노산을 지칭한다. "비-천연 아미노산"이라는 용어와 동의어로 사용될 수 있는 다른 용어는 "비-천연적으로 코딩된 아미노산", "천연이 아닌 아미노산", "비-자연 발생 아미노산"이며, 다양하게 그의 하이픈 연결된 형태 및 하이픈 연결되지 않은 형태이다. 용어 "비-천연 아미노산"은 천연적으로 코딩된 아미노산(20개의 일반적인 아미노산 또는 피롤리신 및 셀레노시스테인을 포함하지만 이에 제한되지 않음)의 변형에 의해 자연적으로 발생하지만 번역 복합체에 의해 성장하는 폴리펩티드 사슬에 혼입되는 그 자체는 아닌 아미노산을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 천연적으로 코딩되지 않는 자연 발생 아미노산의 예에는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌, 및 O-포스포티로신이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 용어 "비-천연 아미노산"은 자연적으로 발생하지 않고 합성적으로 수득될 수 있거나 비-천연 아미노산의 변형에 의해 수득될 수 있는 아미노산을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "핵산"은 단일 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드 또는 리보뉴클레오티드 및 이들의 중합체를 지칭한다. 단지 예로써, 이러한 핵산 및 핵산 중합체는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다 (i) 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 자연 발생 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는 천연 뉴클레오티드의 유사체; (ii) PNA(펩티도 핵산), 안티센스 기술에 사용되는 DNA 유사체(포스포로티오에이트, 포스포로아미데이트 등)를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 올리고뉴클레오티드 유사체; (iii) 이들의 보존적으로 변형된 변이체(축퇴 코돈 치환을 포함하지만 이에 제한되지는 않음) 및 상보적 서열 및 명시적으로 나타낸 서열. 예로써, 축 퇴 코돈 치환은 하나 이상의 선택된 (또는 모든) 코돈의 세 번째 위치가 혼합 염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; 및 Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994).
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 제거하지 않고, 상대적으로 비독성인, 염, 결합제, 보조제, 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 물질을 지칭한다. 즉, 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 일으키거나 그것이 함유된 조성물의 임의의 성분과 유해한 방식으로 상호 작용하지 않고 개인에게 투여될 수 있다.
일부 실시 양태에서 본 발명은 중합체에 관한 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "중합체"는 반복된 서브 유닛으로 구성된 분자를 지칭한다. 이러한 분자는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 또는 다당류 또는 폴리알킬렌 글리콜을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리 프로필렌 글리콜, 폴리부틸렌 글리콜, 및 이들의 유도체를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 선형 또는 분지형 중합체 폴리에테르 폴리올일 수 있다. 다른 예시적인 실시 양태는 예를 들어 Shearwater Corporation의 카탈로그["Polyethylene Glycol and Derivatives for Biomedical Applications"(2001)]와 같은 상업적 공급 업체 카탈로그에 나열되어 있다. 단지 예로써, 이러한 중합체는 약 0.1 kDa 내지 약 100 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 이러한 중합체는 약 100 Da 내지 약 100,000 Da 이상을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 중합체의 분자량은 약 100 Da 내지 약 100,00 Da일 수 있으며, 이는 약 100,000 Da, 약 95,000 Da, 약 90,000 Da, 약 85,000 Da, 약 80,000 Da, 약 75,000 Da, 약 70,000 Da, 약 65,000 Da, 약 60,000 Da, 약 55,000 Da, 약 50,000 Da, 약 45,000 Da, 약 40,000 Da, 약 35,000 Da, 약 30,000 Da, 약 25,000 Da, 약 20,000 Da, 약 15,000 Da, 약 10,000 Da, 약 9,000 Da, 약 8,000 Da, 약 7,000 Da, 약 6,000 Da, 약 5,000 Da, 약 4,000 Da, 약 3,000 Da, 약 2,000 Da, 약 1,000 Da, 약 900 Da, 약 800 Da, 약 700 Da, 약 600 Da, 약 500 Da, 400 Da, 약 300 Da, 약 200 Da, 및 약 100 Da을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서 중합체의 분자량은 약 100 Da 내지 약 50,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 중합체의 분자량은 약 100 Da 내지 약 40,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 중합체의 분자량은 약 1,000 Da 내지 약 40,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 중합체의 분자량은 약 2,000 내지 약 50,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 중합체의 분자량은 약 5,000 Da 내지 약 40,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 중합체의 분자량은 약 10,000 Da 내지 약 40,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜) 분자는 분지형 중합체이다. 분지쇄 PEG의 분자량은 약 1.000 Da 내지 약 100,000 Da일 수 있으며, 이는 약 100,000 Da, 약 95,000 Da, 약 90,000 Da, 약 85,000 Da, 약 80,000 Da, 약 75,000 Da, 약 70,000 Da, 약 65,000 Da, 약 60,000 Da, 약 55,000 Da, 약 50,000 Da, 약 45,000 Da, 약 40,000 Da, 약 35,000 Da, 약 30,000 Da, 약 25,000 Da, 약 20,000 Da, 약 15,000 Da, 약 10,000 Da, 약 9,000 Da, 약 8,000 Da, 약 7,000 Da, 약 6,000 Da, 약 5,000 Da, 약 4,000 Da, 약 3,000 Da, 약 2,000 Da 및 약 1,000 Da을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 분지쇄 PEG의 분자량은 약 1,000 Da 내지 약 50,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 분지쇄 PEG의 분자량은 약 1,000 Da 내지 약 40,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 분지쇄 PEG의 분자량은 약 5,000 Da 내지 약 40,000 Da이다. 일부 실시 양태에서, 분지쇄 PEG의 분자량은 약 5,000 Da 내지 약 20,000 Da이다. 다른 실시 양태에서, 분지쇄 PEG의 분자량은 약 2,000 내지 약 50,000 Da이다. 용어 "PEG화" 또는 "PEG화된"은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 분자에 특정 합성 아미노산의 공유 결합을 지칭한다. 방법은 합성 아미노산을 포함하는 단리된 α-PSMA ADC 폴리펩티드를 합성 아미노산과 반응하는 모이어티를 포함하는 수용성 중합체와 접촉시키는 단계를 포함할 수 있다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 즉, 폴리펩티드에 관한 설명은 펩티드의 설명 및 단백질의 설명에 동일하게 적용되며 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 이 용어는 자연 발생 아미노산 중합체뿐만 아니라 하나 이상의 아미노산 잔기가 비-천연 아미노산인 아미노산 중합체에도 적용된다. 추가로, 이러한 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 전장 단백질을 포함하여 임의의 길이의 아미노산 사슬을 포함하며, 여기서 아미노산 잔기는 공유 펩티드 결합에 의해 연결된다.
용어 "번역 후 변형된"은 천연 또는 비-천연 아미노산의 임의의 변형으로 상기 아미노산이 폴리펩티드 사슬에 번역적으로 도입된 후에 발생하는 변형을 지칭한다. 이러한 변형에는 번역과 동시에 생체 내 변형, 번역과 동시에 시험관 내 변형(예컨대, 무세포 번역 시스템에서), 번역 후 생체 내 변형, 및 번역 후 시험관 내 변형이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "프로드러그" 또는 "약학적으로 허용 가능한 프로드러그"는 생체 내 또는 시험관 내에서 모 약물로 전환되는 약물을 지칭하며, 이는 약물의 생물학적 활성 또는 특성을 제거하지 않으며, 상대적으로 비독성이다. 즉, 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 일으키거나 그것이 함유된 조성물의 임의의 성분과 유해한 방식으로 상호 작용하지 않고 개인에게 투여될 수 있다. 전구 약물은 일반적으로 대상체에게 투여 및 후속적인 흡수 후 대사 경로에 의한 전환과 같은 일부 공정을 통해 활성 종 또는 활성이 더 큰 종으로 전환되는 약물 전구체이다. 일부 전구 약물은 활성 더 적게 만들고/거나 약물에 용해도 또는 다른 특성을 부여하는, 전구 약물에 존재하는 화학 기를 갖는다. 일단 화학 기가 전구 약물로부터 절단 및/또는 변형되면 활성 약물이 생성된다. 전구 약물은 체내에서 효소 반응이나 비-효소 반응을 통해 활성 약물로 전환된다. 전구 약물은 더 우수한 용해도와 같은 개선된 물리 화학적 특성, 특정 세포, 조직, 기관 또는 리간드를 특이적으로 표적화하는 것과 같은 향상된 전달 특성, 및 약물의 개선된 치료적 가치를 제공할 수 있다. 이러한 전구 약물의 이점은 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: (i) 모 약물과 비교되는 투여 용이성; (ii) 전구 약물은 경구 투여에 의해 생체 이용 가능하지만 모 약물은 그렇지 않다; (iii) 전구 약물은 또한 모 약물과 비교하여 약학 조성물에서 개선된 용해도를 가질 수 있다. 전구 약물은 활성 약물의 약리학적 비활성 또는 감소된 활성 유도체를 포함한다. 전구 약물은 물리 화학적, 생물 약학적, 또는 약물 동태학적 특성과 같은 약물의 특성을 조작하여 원하는 작용 부위에 도달하는 약물 또는 생물학적 활성 분자의 양을 조절하도록 설계될 수 있다. 제한없이, 전구 약물의 예는 수용성이 이동성에 해로운 세포막을 통한 전달을 촉진하기 위해 에스테르("전구 약물")로서 투여된 후 수용성이 유익한 세포 내부에 일단 들어가면 활성 물질인 카르복실산으로 대사적으로 가수 분해되는 비-천연 아미노산 폴리펩티드일 수 있다. 전구 약물은 부위 특이적 조직으로의 약물 전달을 향상시키는 변형체로 사용하기 위해 가역성 약물 유도체로 설계될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "예방 유효량"은 환자에게 예방적으로 적용되는 적어도 하나의 비-천연 아미노산 폴리펩티드 또는 적어도 하나의 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드를 함유하는 조성물의 양을 지칭하며, 이는 치료할 질환, 병태 또는 장애의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화할 것이다. 이러한 예방적 적용에서, 이러한 양은 환자의 건강 상태, 체중 등에 따라 결정될 수 있다. 용량 증가 임상 시험을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 일상적인 실험에 의해 이러한 예방 유효량을 결정하는 것은 당 업계의 기술 내에서 잘 고려된다.
"숙주 세포"로도 지칭되는 "재조합 숙주 세포"라는 용어는 외인성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포를 지칭하며, 여기서 외인성 폴리뉴클레오티드를 세포 내로 삽입하는 데 사용되는 방법은 직접 흡수, 형질 도입, f-짝짓기, 또는 재조합 숙주 세포를 생성하는 당 업계에 공지된 다른 방법을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 단지 예로써, 이러한 외인성 폴리뉴클레오티드는 플라스미드를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 비통합 벡터일 수 있거나, 숙주 게놈에 통합될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 동물을 지칭한다. 단지 예로써, 대상체는 인간을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 포유동물일 수 있지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 정제된"은 정제 전에 관심 성분과 일반적으로 동반되거나 상호 작용하는 다른 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 없을 수 있는 관심 성분을 지칭한다. 단지 예로써, 관심 성분의 제제가 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 또는 약 1% 미만(건조 중량 기준)의 오염 성분을 함유할 때 관심 성분은 "실질적으로 정제"될 수 있다. 따라서, "실질적으로 정제 된" 관심 성분은 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 이상의 순도 수준을 가질 수 있다. 단지 예로써, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 천연 세포, 또는 재조합적으로 생산된 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 경우 숙주 세포로부터 정제될 수 있다. 예로써, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 제제는 제제가 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15%, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 또는 약 1% 미만(건조 중량 기준)의 오염 물질을 함유할 때 "실질적으로 정제"될 수 있다. 예로써, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드가 숙주 세포에 의해 재조합적으로 생산되는 경우, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 세포 건조 중량의 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2% 또는 약 1% 이하로 존재할 수 있다. 예로써, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드가 숙주 세포에 의해 재조합적으로 생산되는 경우, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 세포 건조 중량의 약 5g/L, 약 4g/L, 약 3g/L, 약 2g/L, 약 1g/L, 약 750mg/L, 약 500mg/L, 약 250mg/L, 약 100mg/L, 약 50mg/L, 약 10mg/L, 또는 약 1mg/L 이하로 배양 배지에 존재할 수 있다. 예로써, "실질적으로 정제된" 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 SDS/PAGE 분석, RP-HPLC, SEC, 및 모세관 전기 영동을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 적절한 방법에 의해 결정될 때 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 99% 이상의 순도 수준을 가질 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료 유효량"은 치료할 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 치유하거나 적어도 부분적으로 억제하거나 어느 정도 완화하기에 충분한, 질환, 병태 또는 장애를 이미 앓고 있는 환자에 투여되는 적어도 하나의 비-천연 아미노산 폴리펩티드 및/또는 적어도 하나의 변형된 비-천연 아미노산 폴리펩티드를 함유하는 조성물의 양을 지칭한다. 이러한 조성물의 효과는 질환, 장애 또는 병태의 중증도 및 과정, 이전 치료, 환자의 건강 상태 및 약물에 대한 반응, 치료 의사의 판단을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 조건에 따라 결정된다. 단지 예로써, 치료 유효량은 용량 증가 임상 시험을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 일상적인 실험에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "독성", 또는 "독성 모이어티" 또는 "독성 기" 또는 "세포 독성" 또는 "세포 독성 페이로드" 또는 "페이로드"는 위해, 장애 또는 사망을 유발할 수 있는 화합물을 지칭한다. 독성 모이어티는 아우리스타틴, DNA 좁은 홈(minor groove) 결합제, DNA 좁은 홈 알킬화제, 엔다이인, 렉시트롭신, 듀오카르마이신, 탁산, 퓨로마이신, 돌라스타틴, 메이탄시노이드, 빈카 알칼로이드, AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, 아우리스타틴 E, 파클리탁셀, 도세탁셀, CC-1065, SN-38, 토포테칸, 모르폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 돌라스타틴-10, 에키노마이신, 콤브레타트스타틴, 칼리케아미신, 메이탄신, DM-1, 네트롭신, 포도필로톡신(예를 들어, 에토포시드, 테니포시드 등), 바카틴 및 이의 유도체, 항튜불린제, 크립토피신, 콤브레타스타틴, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, VP-16, 캄프토테신, 에포틸론 A, 에포틸론 B, 노코다졸, 콜히친, 콜시미드, 에스트라무스틴, 세마도틴, 디스코더몰리드, 메이탄신, 엘류테로빈, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 멜팔란, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 스트렙토조토신, 클로로조토신, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부술판, 다카르바존, 및 테모졸로미드, 시타라빈, 시토신 아라비노시드, 플루오로우라실, 플록수리딘, 6-티오구아닌, 6-메르캅토퓨린, 펜토스타틴, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 10-프로파르길-5,8-디데아자폴레이트, 5,8-디데아자테트라히드로폴산, 류코보린, 인산 플루다라빈, 펜토스타틴, 젬시타빈, Ara-C, 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 아자티오프린, 브레퀴나르, 항생제(예를 들어, 안트라사이클린, 젠타마이신, 세팔로틴, 반코마이신, 텔라반신, 댑토마이신, 아지트로마이신, 에리트로마이신, 로시트로마이신, 푸라졸리돈, 아목시실린, 앰피실린, 카르베니실린, 플루클록사실린, 메티실린, 페니실린, 시프로플록사신, 목시플록사신, 오플록사신, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 테트라사이클린, 스트렙토마이신, 리파부틴, 에탐부톨, 리팍시민 등), 항바이러스제(예를 들어, 아바카비르, 아시클로비르, 앰플리젠, 시도포비르, 델라비르딘, 디다노신, 에파비렌즈, 엔테카비르, 포스포네트, 간시클로비르, 이바시타빈, 이무노비르, 이독수리딘, 이노신, 로피나비르, 메티사존, 넥사비르, 네비라핀, 오셀타미비르, 펜시클로비르, 스타부딘, 트리플루리딘, 트루바다, 발라시클로비르, 자나미비르 등), 다우노루비신 히드로클로라이드, 다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘, 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 모르폴리노 유도체, 페녹시존 비시클로펩티드(예를 들어, 닥티노마이신), 염기성 글리코펩티드(예를 들어, 블레오마이신), 안트라퀴논 글리코시드(예를 들어, 플리카마이신, 미트라마이신), 안트라세네디온(예를 들어, 미톡산트론), 아지리노피롤로 인돌디온(예를 들어, 미토마이신), 대환식 면역억제제(예를 들어, 시클로스포린, FK-506, 타크롤리무스, 프로그라프, 라파마이신 등), 나벨벤, CPT-11, 아나트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 시클로포스파미드, 이포사미드, 드롤록사핀, 알로콜히친, 할리콘드린 B, 콜히친, 콜히친 유도체, 메이탄신, 리족신, 파클리탁셀, 파클리탁셀 유도체, 도세탁셀, 티오콜히친, 트리틸 시스테린, 황산 빈블라스틴, 황산 빈크리스틴, 시스플라틴, 카르보플라틴, 히드록시우레아, N-메틸히드라진, 에피도필로톡신, 프로카르바진, 미톡산트론, 류코보린, 및 테가푸르을 포함하지만 이제 제한되지는 않는다. "탁산"은 파클리탁셀 및 임의의 활성 탁산 유도체 또는 전구 약물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 병태 증상의 완화, 예방, 경감 또는 개선, 추가 증상 예방, 증상의 근본적인 대사 원인 개선 또는 예방, 질환 또는 병태 억제, 예를 들어, 질환 또는 병태의 발생을 억제, 질환 또는 병태의 완화, 질환 또는 병태의 퇴행, 질환 또는 병태로 인한 상태의 완화, 또는 질환 또는 병태의 증상 중단을 포함한다. 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 예방적 및/또는 치료적 조치를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 전립선암과 관련된 하나 이상의 증상의 감소, 축소 또는 개선을 지칭할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "수용성 중합체"는 수성 용매에 가용성인 임의의 중합체를 지칭한다. 이러한 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드, 이들의 모노 C1-C10 알콕시 또는 아릴옥시 유도체(본원에 참고로 포함된 미국 특허 제5,252,714호에 기재됨), 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리비닐 알코올, 폴리 아미노산, 디비닐에테르 말레산 무수물, N-(2-히드록시프로필)-메타크릴아미드, 덱스트란, 덱스트란 술페이트를 포함한 덱스트란 유도체, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올, 헤파린, 헤파린 단편, 다당류, 올리고당, 글리칸, 셀룰로오스, 및 메틸셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스를 포함한, 그러나 이에 제한되지 않는 셀룰로오스 유도체, 혈청 알부민, 전분 및 전분 유도체, 폴리 펩티드, 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체, 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체의 공중합체, 폴리비닐 에틸 에테르, 및 알파-베타-폴리[(2-히드록시에틸)-DL-아스파르타미드 등, 또는 이들의 혼합물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 단지 예로써, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 폴리펩티드에 이러한 수용성 중합체의 커플링은 수용해도 증가, 혈청 반감기 증가 또는 조절, 비변형된 형태에 비해 치료 반감기 증가 또는 조절, 생체 이용률 증가, 생물학적 활성 조절, 순환 시간 연장, 면역원성 조절, 응집 및 다량체 형성을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 물리적 결합 특성 조절, 수용체 결합 변경, 하나 이상의 결합 파트너에 대한 결합 변경, 및 수용체 이량체화 또는 다중화의 변경을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 변화를 초래할 수 있다. 또한, 이러한 수용성 중합체는 자신의 생물학적 활성을 가질 수도 있고 갖지 않을 수도 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "조절된 혈청 반감기"는 비변형된 형태에 비해 변형된 생물학적 활성 분자의 순환 반감기의 양성 또는 음성 변화를 지칭한다. 예로써, 변형된 생물학적 활성 분자는 천연 아미노산, 비-천연 아미노산, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 예로써, 혈청 반감기는 생물학적 활성 분자 또는 변형된 생물학적 활성 분자를 투여한 후 다양한 시점에서 혈액 샘플을 채취하는 단계 및 각 샘플에서 해당 분자의 농도를 결정하는 단계에 의해 측정된다. 시간에 따른 혈청 농도의 상관관계를 통해 혈청 반감기를 계산할 수 있다. 예로써, 조절된 혈청 반감기는 증가된 혈청 반감기일 수 있으며, 이는 개선된 투약 요법을 가능하게 하거나 독성 효과를 피할 수 있다. 혈청에서의 이러한 증가는 약 2배 이상, 약 3배 이상, 약 5배 이상, 또는 약 10배 이상일 수 있다. 혈청 반감기를 평가하는 방법은 당 업계에 공지되어 있으며 본 발명의 항체 및 항체 약물 접합체의 혈청 반감기를 평가하는 데 사용될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "조절된 치료 반감기"는 비변형된 형태에 비해 변형된 생물학적 활성 분자의 치료 유효량의 반감기의 양성 또는 음성 변화를 지칭한다. 예로써, 변형된 생물학적 활성 분자는 천연 아미노산, 비-천연 아미노산, 천연 아미노산 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 폴리펩티드를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 예로써, 치료 반감기는 투여 후 다양한 시점에서 분자의 약물 동태학적 및/또는 약물 동역학적 특성을 측정함으로써 측정된다. 증가된 치료 반감기는 특정의 유익한 투약 요법, 특정의 유익한 총 용량을 가능하게 하거나 원하지 않는 효과를 피할 수 있다. 예로써, 증가된 치료 반감기는 효능 증가, 변형된 분자의 표적에 대한 결합 증가 또는 감소, 비변형된 분자의 다른 매개 변수 또는 작용 메커니즘의 증가 또는 감소, 또는 효소에 의한, 단지 예로써 프로테아제에 의한 분자의 분해의 증가 또는 감소로 인해 초래될 수 있다. 치료 반감기를 평가하는 방법은 당 업계에 공지되어 있으며 본 발명의 항체 및 항체 약물 접합체의 치료 반감기를 평가하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 새로운 특징은 첨부된 청구 범위에서 구체적으로 설명된다. 본 발명의 원리가 이용되는 예시적인 실시 양태를 설명하는 다음의 상세한 설명 및 제공된 첨부 도면을 참조하여 본 발명의 개시 내용의 특징 및 이점은 더 잘 이해될 것이다.
도 1은 비절단성 MMAF, 짧은 절단성 MMAF, 절단성 MMAF 및 짧은 절단성 MMAE를 사용하는 항-PSMA 항체 약물 접합체(ADC)로 마우스에서 수행된 약물 동태학적 연구를 도시한다. F1은 항체에 의한 혈청 내 항체 약물 접합체의 검출을 나타낸다. F3는 약물-링커에 의한 혈청 내 항체 약물 접합체의 검출을 나타낸다.
도 2는 다양한 농도에서 비절단성 MMAF를 나타내는 항-PSMA ADC로 래트에서 수행된 약물 동태학적 연구를 도시한다.
도 3은 비절단성 MMAF를 사용하는 ADC와 비교한 접합되지 않은 항-PSMA 항체(네이키드 항체)의 약물 동태학적 비교를 도시한다.
도 4a-4b는 다양한 투여량에서 항-PSMA ADC 비절단성 MMAF를 사용하여 종양 성장(도 4a) 및 체중 변화(도 4b)에 대한 C4-2 이종 이식 전립선 모델에서의 단일 용량 반응을 도시한다.
도 5a-5b는 다양한 투여량에서 항-PSMA ADC 짧은 절단성 MMAF를 사용하여 종양 성장(도 5a) 및 체중 변화(도 5b)에 대한 C4-2 이종 이식 전립선 모델에서의 단일 용량 반응을 도시한다.
도 6a-6b는 비절단성 MMAF를 사용하는 항-PSMA ADC의 단일 용량 후 종양 보유 및 종양 비보유 마우스(도 6a) 및 시노몰구스(Cynomolgus) 원숭이(도 6b)에서의 약물 동태학적 연구를 도시한다.
도 7a-7b는 다양한 투여량에서 항-PSMA ADC 비절단성 MMAF 및 항-PSMA ADC 비절단성 MMAF + 엔잘루타미드를 사용하여 종양 성장(도 7a) 및 체중 변화(도 7b)에 대한 C4-2 이종 이식 전립선 모델에서의 반복 용량 반응을 도시한다.
도 8a-8b는 다양한 투여량에서 항-PSMA ADC 비절단성 MMAF 및 항-PSMA ADC 비절단성 MMAF + 엔잘루타미드를 사용하여 종양 성장(도 8a) 및 체중 변화(도 8b)에 대한 PDX 전립선 모델에서의 반복 용량 반응을 도시한다.
본 발명을 상세하게 기재하기 전에, 본 발명은 특정 방법론, 또는 조성물, 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않으면, 이는 물론 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시 양태를 기재하기 위한 것이며 제한하려는 의도가 아님을 또한 이해해야 한다. 본 명세서 및 첨부된 청구 범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 내용이 달리 명시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 둘 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시 양태가 여기에 제시되고 기재되었지만, 이러한 실시 양태는 단지 예로써 제공된다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 이제 본 발명을 벗어나지 않고 당업자는 수많은 변형, 변경, 및 대체를 생각해 낼 것이다. 본원에 기재된 본 발명의 실시 양태에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는 데 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 다음의 청구항은 본 발명의 범위를 정의하고, 이러한 청구항의 범위 내의 방법 및 구조 및 그 등가물이 이에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
본원에서 또는 본 명세서의 나머지 부분에서 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
항체 기반 치료제는 종양학, 염증성 및 감염성 질환과 같은 분야에서 증가하는 인간 악성 종양에 대한 요법의 중요한 구성 요소로 등장하였다. 대부분의 경우, 치료 기능의 기초는 항체 기반 약물이 표적 항원에 대해 갖는 높은 정도의 특이성과 친화성이다. 약물, 독소, 또는 방사성 핵종으로 단클론 항체를 무장시키는 것은 단클론 항체가 치료 효과를 유도할 수 있는 또 다른 전략이다. 항체의 정교한 표적화 특이성과 독성 이펙터 분자의 종양 사멸력을 결합함으로써, 면역 접합체는 표적과 정상 조직을 민감하게 구별할 수 있어 대부분의 종래의 화학 치료제보다 더 적은 부작용을 초래한다. 사용된 독소는 항체의 고유한 부위에 특이적이고 안정적이며 비가역적으로 접합될 수 있다. 이 고유한 접합 과정을 통해 항체의 독소 위치뿐만 아니라 각 항체에 접합된 독소의 수를 정밀하게 제어할 수 있다. 이 두 특징은 ADC와 관련된 생물 물리학적 특성 및 독성을 제어하는 데 중요하다(예를 들어 문헌[Jackson et al., 2014, Tian et al., 2014] 참조).
본 개시 내용에서 제공되는 항-PSMA 항체 약물 접합체는 전립선 특이적 막 항원의 세포 외 도메인에 결합하는 인간화 또는 키메라 단클론 항체 및 변이체를 포함한다. 전립선 특이적 막 항원은 예를 들어 전립선 상피 내 신생물(PIN: prostatic intraepithelial neoplasia), 원발성 전립선암, 및 전이성 전립선암에서 고도로 발현되는 II형 막 단백질이다. 본원에 개시된 항-PSMA 항체는 적어도 하나의 비-천연적으로 또는 천연적이지 않게 코딩된 아미노산을 갖는 임의의 공지된 PSMA 항체일 수 있다.
본 발명은 약물(예를 들어, 약물, 독소 분자)에 대한 항체 접합을 용이하게 하는 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 갖는 항-PSMA 항체 및 이의 변이체를 제공한다. 한 실시 양태에서, ADC는 약물에 접합된 항-PSMA 항체로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 항-PSMA 항체를 포함한다. 한 실시 양태에서, ADC는 약물에 접합된 항-PSMA 항체로서, 접합은 항체의 중쇄에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 항-PSMA 항체를 포함한다. 한 실시 양태에서, ADC는 약물에 접합된 항-PSMA 항체로서, 접합은 항체의 경쇄에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 항-PSMA 항체를 포함한다. 한 실시 양태에서, ADC는 약물에 접합된 전장 항체로서, 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 발생하는 것인 전장 항체를 포함한다. 한 실시 양태에서, ADC는 약물에 접합된 전장 항체로서, 접합은 항체의 중쇄에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 하는 것인 전장 항체를 포함한다. 한 실시 양태에서, ADC는 약물에 접합된 전장 항체로서, 접합은 항체의 경쇄에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 하는 것인 전장 항체를 포함한다.
일부 실시 양태에서, ADC의 약물은 세포 독성 약물 또는 세포 독성제이다. 본 발명의 일부 측면에서, 세포 독성 약물은 아우리스타틴, DNA 좁은 홈 결합제, DNA 좁은 홈 알킬화제, 엔다이인, 렉시트롭신, 듀오카르마이신, 탁산, 퓨로마이신, 돌라스타틴, 메이탄시노이드, 및 빈카 알칼로이드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 일부 측면에서, 세포 독성 약물은 AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, 아우리스타틴 E, 파클리탁셀, 도세탁셀, CC-1065, SN-38, 토포테칸, 모르폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 돌라스타틴-10, 에키노마이신, 콤브레타트스타틴, 칼리케아미신, 메이탄신, DM-1, 또는 네트롭신이지만 이들에 제한되지는 않는다.
본 발명의 일부 측면에서, 세포 독성 약물은 항튜불린제이다. 일부 실시 양태에서, 항튜불린제는 아우리스타틴, 빈카 알칼로이드, 포도필로톡신, 탁산, 바카틴 유도체, 크립토피신, 메이탄시노이드, 콤브레타스타틴, 또는 돌라스타틴이다. 본 발명의 다른 측면에서, 항튜불린제는 AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, 아우리스타틴 E, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, VP-16, 캄프토테신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에포틸론 A, 에포틸론 B, 노코다졸, 콜히친, 콜시미드, 에스트라무스틴, 세마도틴, 디스코덴놀리드, 메이탄신, DM-1, 또는 엘류테로빈이지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 다른 측면에서, ADC의 세포 독성 약물은 간시클로비르, 에타너셉트, 시클로스포린, 타크롤리무스, 라파마이신, 시클로포스파미드, 아자티오프린, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 코르티솔, 알도스테론, 덱사메타손, 시클로옥시게나제 억제제, 5-리폭시게나제 억제제, 또는 류코트리엔 수용체 길항제이다.
본 발명의 일부 실시 양태에서, ADC의 항체는 (a) PSMA에 결합하고, (b) 세포 독성제 또는 면역 억제제에 접합된 전장 항체 또는 이의 단편을 포함하며, 여기서 항체-약물 접합체는 (a) PSMA 발현 암 세포주에 대한 세포 독성 또는 세포 증식 억제 효과, 또는 (b) PSMA 발현 면역 세포에 대한 세포 독성, 세포 증식 억제. 또는 면역 억제 효과를 발휘하며, 여기서 접합은 항체에서 비-천연적으로 코딩된 아미노산에서 발생한다.
일부 실시 양태에서, 본 개시 내용의 항체, 변이체, 또는 조성물은 PSMA 수용체에 결합하는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 본 발명의 다른 실시 양태에서 항체, 변이체, 또는 조성물은 PSMA 수용체의 세포 외 표면에 결합하는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서, 개시된 항체, 변이체, 또는 조성물은 PSMA 이량체에 결합하는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 일부 실시 양태에서 본 개시 내용의 항체, 변이체, 또는 조성물은 가변 영역의 프레임워크 영역에 이식된 J591로부터의 CDR을 갖는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 다른 실시 양태에서 본 발명의 개시 내용의 항체, 변이체, 또는 조성물은 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 갖는 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 일부 실시 양태에서 항체, 변이체, 또는 조성물은 본 발명의 개시 내용의 본원의 다른 곳의 하나 초과의 실시 양태에 의해 기재된 항체, 변이체, 또는 조성물일 수 있다. 일부 실시 양태에서 본원에 개시된 항체, 항체 변이체 또는 항체 조성물(들)은 완전히 인간화될 수 있다. 다른 실시 양태에서 본원에 개시된 항체, 항체 변이체 또는 항체 조성물(들)은 키메라일 수 있다. 본 발명의 일부 실시 양태에서 항체는 전장 항체(가변 + Fc 영역), Fab, 이중 특이적, Fab-이량체, Fab-이중 특이적, Fab-삼중 특이적, 이중 특이적 T 세포 관여 항체, 이중 친화성 재표적화 항체, IgG1/IgG3 이중 특이적 항체, 디아바디, 이중 특이적 디아바디, scFv-Fc, 미니바디일 수 있다.
적어도 하나의 카르보닐, 디카르보닐, 옥심, 히드록실아민, 알데히드, 보호된 알데히드, 케톤, 보호된 케톤, 티오에스테르, 에스테르, 디카르보닐, 히드라진, 아지드, 아미딘, 이민, 디아민, 케토-아민, 케토-알킨, 알킨, 시클로알킨, 또는 엔-디온을 포함하는 돌라스타틴 링커 유도체 또는 유사체를 생성하고 사용하기 위한 방법, 조성물 및 기술은 당업자에게 잘 알려져있다(예를 들어, 전체적으로 본원에 참고로 포함된 WO2013/185117 참조). 옥심, 방향족 아민, 복소환(예를 들어, 인돌, 퀴녹살린, 페나진, 피라졸, 트리아졸 등)을 가진 적어도 하나의 비-천연 아미노산 또는 변형된 비-천연 아미노산을 포함하는 돌라스타틴 링커 유도체 또는 유사체를 생성하고 사용하기 위한 방법, 조성물 및 기술도 당업자에게 잘 알려져 있고, 예를 들어 전체적으로 본원에 참조로 포함된 WO2013/185117에 기재되어 있다. 비-천연 아미노산을 포함하는 이러한 돌라스타틴 링커 유도체는 중합체; 수용성 중합체; 폴리에틸렌 글리콜의 유도체; 제2 단백질 또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 유사체; 항체 또는 항체 단편; 및 이들의 임의의 조합을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 추가의 작용성을 함유할 수 있다. 전술한 작용성은 한 작용성의 구성원이 다른 작용성의 구성원으로 분류될 수 없음을 의미하고자 하는 것은 아님을 알아야 한다. 실제로 특정 상황에 따라 중첩이 있을 것이다. 단지 예로써, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜의 유도체와 범위가 중첩되지만, 중첩은 완전하지 않으며 따라서 두 작용성이 모두 위에 언급된다.
일부 실시 양태에서, 카르보닐, 디카르보닐, 옥심, 히드록실아민, 알데히드, 보호된 알데히드, 케톤, 보호된 케톤, 티오에스테르, 에스테르, 디카르보닐, 히드라진, 아지드, 아미딘, 이민, 디아민, 케토-아민, 케토-알킨, 알킨, 시클로알킨, 또는 엔-디온을 포함하는 독성 기 링커 유도체가 본원에서 제공된다. 일부 실시 양태에서, 독성 기 유도체는 본원에 개시된 임의의 링커를 포함한다. 옥심, 방향족 아민, 복소환(예를 들어, 인돌, 퀴녹살린, 페나진, 피라졸, 트리아졸 등)을 가진 적어도 하나의 비-천연 아미노산 또는 변형된 비-천연 아미노산을 포함하는 독성 기 유도체 또는 유사체를 생성하고 사용하기 위한 방법, 조성물, 및 기술은 WO2013/185117(전체적으로 본원에 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. 일부 실시 양태에서, 비-천연 아미노산을 포함하는 이러한 독성 유도체는 중합체; 수용성 중합체; 폴리에틸렌 글리콜의 유도체; 제2 단백질 또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 유사체; 항체 또는 항체 단편; 및 이들의 임의의 조합을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 추가의 작용성을 함유할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 독성 기는 튜불린 억제제이다. 특정 실시 양태에서, 독성 기는 돌라스타틴 또는 아우리스타틴이다. 다른 특정 실시 양태에서, 독성 기는 돌라스타틴 또는 아우리스타틴 유도체이다. 전술한 다양한 작용성은 한 작용성의 구성원이 다른 작용성의 구성원으로 분류될 수 없음을 의미하고자 하는 것은 아님을 알아야 한다. 실제로, 특정 상황에 따라 중첩이 있을 것이다. 단지 예로써, 수용성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜의 유도체와 범위가 중첩되지만, 중첩은 완전하지 않으며 따라서 두 작용성이 모두 위에 언급된다.
본 발명의 특정 실시 양태는 독성 모이어티가 약리학적 활성을 유지하면서 생체 내에서 모이어티의 독성을 감소시키는 링커를 갖는 특정 독성 모이어티의 제제를 기재한다. 일부 실시 양태에서, 동물 또는 인간에게 투여될 때 연결된 독성 기의 독성은 약리학적 활성을 유지하면서, 불안정한 연결을 포함하는 유리 독성 기 또는 독성 기 유도체와 비교하여 감소되거나 제거된다. 일부 실시 양태에서, 연결된 독성 기(예를 들어, 돌라스타틴 링커 유도체, 비-천연 아미노산 연결된 돌라스타틴 유도체)의 증가된 용량이 더 큰 안전성을 가지며 동물 또는 인간에게 투여될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 독성 모이어티(예를 들어, 돌라스타틴 유도체)에 연결된 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 시험관 내 및 생체 내 안정성을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 독성 모이어티(예를 들어, 튜불린 억제제, 돌라스타틴-10 유도체)에 연결된 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 유리 독성 모이어티(예를 들어, 튜불린 억제제, 돌라스타틴-10)와 비교하여 효과적이고 독성이 낮다.
방법론 및 기술
본 개시 내용은 당 업계에 잘 알려진 방법론 및 기술을 포함한다. 여기에는 당 업계의 기술 내에서 질량 분광법, NMR, HPLC, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 통상적인 방법이 포함된다. 본 발명의 개시 내용의 화합물은 당 업계에서 사용되는 여러 공정 또는 체계를 사용하여 합성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Dubowchik et al., Bioconjugate Chem. 13: 855-869, 2002; Doronina et al., Nature Biotechnology 21(7): 778-784, 2003; WO2012/166560; WO2013/185117]을 참조하며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다. 약학, 진단 또는 치료 화합물의 합성을 위한 많은 방법론 및 기술이 당업자에게 잘 알려져 있다.
본 발명은 달리 지시되지 않는 한, 모두 당 업계의 기술 내에서 분자 생물학(재조합 기술 포함), 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 포함한다. 이러한 기술은 다음과 같은 문헌에 자세히 설명되어 있다: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (Sambrook et al. Eds., 2001); Oligonucleotide Synthesis: Methods And Applications (Methods in Molecular Biology), Herdewijn, P., Ed., Humana Press, Totowa, NJ; Oligonucleotide Synthesis (Gait, M. J., Ed., 1984); Methods In Molecular Biology, Humana Press, Totowa, NJ; Cell Biology: A Laboratory Notebook, Academic Press, New York, NY (Cellis, J. E., Ed., 1998); Animal Cell Culture (Freshney, R. I., Ed., 1987); Introduction To Cell And Tissue Culture Plenum Press, New York, NY, (Mather, J. P. and Roberts, P. E., Eds., 1998); Cell And Tissue Culture: Laboratory Procedures John Wiley and Sons, Hoboken, NJ, (Doyle, A. et al., Eds., 1993-8); Methods In Enzymology (Academic Press, Inc.) New York, NY; Weir's Handbook Of Experimental Immunology Wiley-Blackwell Publishers, New York, NY, (Herzenberg, L. A. et al. Eds., 1997); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, (Miller, J. M. et al. Eds., 1987); Current Protocols In Molecular Biology, Greene Pub. Associates, New York, NY, (Ausubel, F. M. et al., Eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, Birkhauser, Boston, MA, (Mullis, K. et al., Eds., 1994); Current Protocols In Immunology, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ, (Coligan, J. E. et al., eds., 1991); Short Protocols In Molecular Biology, Hoboken, NJ, (John Wiley and Sons, 1999); Immunobiology 7 Garland Science, London, UK, (Janeway, C. A. et al., 2007); Antibodies. Stride Publications, Devoran, UK, (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach Oxford University Press, USA, New York, NY, (D. Catty., ed., 1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach Oxford University Press, USA, New York NY, (Shepherd, P. et al. Eds., 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (Harlow, E. et al. Eds., 1998); The Antibodies Harwood Academic Publishers, London, UK, (Zanetti, M. et al. Eds. 1995).
돌라스타틴 링커 유도체
본 발명의 개시 내용의 실시 양태에서 카르보닐, 디카르보닐, 옥심 또는 히드록실아민 기를 갖는 적어도 하나의 비-천연 아미노산, 또는 변형된 비-천연 아미노산을 포함하는 돌라스타틴 링커 유도체 또는 유사체가 사용될 수 있다. 방법, 조성물 및 기술을 사용하여 변형될 돌라스타틴 링커 유도체를 선택하고 설계하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 전체적으로 본원에 참고로 포함된 WO2013/185117을 참조한다. 돌라스타틴 링커 유도체는 고 처리량 스크리닝 과정(이 경우 다수의 폴리펩티드가 설계, 합성, 특성화 및/또는 시험될 수 있음)의 일부로서 또는 연구자의 관심사를 기반으로 하여 (단지 예로써 포함함) 새로이 설계될 수 있다. 새로운 돌라스타틴 링커 유도체는 또한 공지된 또는 부분적으로 특성화된 폴리펩티드의 구조를 기반으로 설계될 수 있다. 치환 및/또는 변형할 아미노산(들)을 선택하는 원리와 사용할 변형의 선택은 예를 들어 WO2013/185117에 기재되어 있다. 돌라스타틴 링커 유도체는 실험자 또는 최종 사용자의 요구를 충족시키도록 설계될 수 있다. 이러한 요구에는 폴리펩티드의 치료 효과 조작, 폴리펩티드의 안전성 프로파일 개선, 폴리펩티드의 약물 동태학, 약리학 및/또는 약물 동역학 조정, 예컨대, 단지 예로써, 수용해도 증가, 생체 이용률 증가, 혈청 반감기 증가, 치료 반감기 증가, 면역원성 조절, 생물학적 활성 조절, 또는 순환 시간 연장을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 이러한 변형은 단지 예로써 폴리펩티드에 추가 기능성의 제공, 항체의 통합, 및 전술한 변형의 임의의 조합을 포함한다. 이러한 돌라스타틴 링커 유도체는 옥심, 카르보닐, 디카르보닐 또는 히드록실아민 기를 함유하도록 변형될 수 있다. 돌라스타틴 링커 유도체는 카르보닐 또는 디카르보닐 기, 옥심 기, 히드록실아민 기, 또는 이들의 보호된 형태 중 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 적어도 10개 이상을 함유할 수 있다. 돌라스타틴 링커 유도체는 동일하거나 상이할 수 있으며, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 상이한 반응성 기를 포함하는 유도체에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 상이한 부위에 존재할 수 있다.
예를 들어, 히드록실아민(아미노옥시라고도 함) 기를 함유하는 링커를 갖는 돌라스타틴 유도체는 다양한 친전자성 기와 반응하여 PEG 또는 기타 수용성 중합체(이를 포함하지만 이에 제한되지 않음)와 접합체를 형성할 수 있다. 히드라진, 히드라지드 및 세미카르바지드와 마찬가지로, 아미노옥시 기의 향상된 친핵성은 케톤, 알데히드 또는 유사한 화학 반응성을 갖는 기타 작용기를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 카르보닐 또는 디카르보닐 기를 함유하는 다양한 분자와 효율적이고 선택적으로 반응할 수 있도록 한다(예를 들어, 문헌[Shao, J. and Tam, J., J. Am. Chem. Soc. 117:3893-3899, 1995; H. Hang and C. Bertozzi, Acc. Chem. Res. 34(9): 727-736, 2001] 참조). 히드라진 기와의 반응 결과가 상응하는 히드라 존인 반면, 옥심은 그러나 일반적으로 아미노옥시 기와 단지 예로써 케톤, 알데히드 또는 유사한 화학적 반응성을 갖는 기타 작용기와 같은 카르보닐 또는 디카르보닐 함유 기의 반응의 결과로 생긴다. 일부 실시 양태에서, 아지드, 알킨 또는 시클로알킨을 포함하는 링커를 갖는 돌라스타틴 유도체는 고리 첨가 반응(예를 들어, 반응에 대한 정도까지 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제7,807,619호에 기재된 1,3-이극성 고리화 첨가, 아지드-알킨 위스헨(Huisgen) 고리 첨가 등)을 통해 분자의 연결을 허용한다.
따라서, 특정 실시 양태에서 히드록실아민, 알데히드, 보호된 알데히드, 케톤, 보호된 케톤, 티오에스테르, 에스테르, 디카르보닐, 히드라진, 아미딘, 이민, 디아민, 케토-아민, 케토-알킨, 및 엔-디온 히드록실아민 기, 히드록실아민 유사 기(히드록실아민 기와 유사한 반응성을 갖고 히드록실아민 기와 구조적으로 유사함), 차폐된 히드록실아민 기(히드록실아민 기로 쉽게 전환될 수 있음), 또는 보호된 히드록실아민 기(탈보호 시 히드록실아민 기와 유사한 반응성을 가짐)를 포함하는 링커를 갖는 돌라스타틴 유도체가 본원에서 기재된다. 일부 실시 양태에서, 링커를 갖는 돌라스타틴 유도체는 아지드, 알킨 또는 시클로알킨을 포함한다. 이러한 돌라스타틴 링커 유도체의 예는 본원의 다른 곳 및 WO2013/185117 및 WO2005/074650(각각 전체적으로 본원에 참고로 포함됨)에 포함된다.
비-천연 아미노산
비-천연적으로 코딩된 아미노산 부위 선택은 항체 내에서 표면 노출/부위 접근성을 기반으로 하고 항체 상의 전하를 유지하기 위해 소수성 또는 중성 아미노산 부위를 선택하였다. 단백질 내 부위에 삽입된 비-천연 아미노산을 도입하는 방법은 예를 들어 WO2010/011735 및 WO2005/074650에 기재되어있다. 본 발명은 이러한 방법론 및 기술을 사용한다. 본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용된 비-천연 아미노산은 다음 4가지 특성 중 적어도 하나를 갖는다: (1) 비-천연 아미노산의 측쇄 상의 적어도 하나의 작용기는 유전적으로 코딩되는 20개의 일반적인 아미노산(즉, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린)의 화학적 반응성과 직교하거나, 비-천연 아미노산을 포함하는 폴리펩티드에 존재하는 자연 발생 아미노산의 화학적 반응성에 적어도 직교하는 적어도 하나의 특징 및/또는 활성 및/또는 반응성을 갖는다; (2) 도입된 비-천연 아미노산은 유전적으로 코딩되는 20개의 일반적인 아미노산에 대해 실질적으로 화학적으로 불활성이다; (3) 비-천연 아미노산은 바람직하게는 자연 발생 아미노산에 상응하는 안정성을 갖거나, 전형적인 생리적 조건하에서 폴리펩티드에 안정적으로 혼입될 수 있고, 더욱 바람직하게는 이러한 혼입은 생체 내 시스템을 통해 발생할 수 있다; (4) 비-천연 아미노산은 옥심 작용기, 또는 바람직하게는 비-천연 아미노산을 포함하는 폴리펩티드의 생물학적 특성을 파괴하지 않는 조건하에서(물론 그러한 생물학적 특성의 파괴가 변형/변환의 목적이 아닌 경우), 또는 변환이 약 4 내지 약 8의 pH에서 수성 조건하에서 일어날 수 있는 경우, 또는 비-천연 아미노산 상의 반응성 부위가 친전자성 부위일 경우, 시약과 반응함으로써 옥심 기로 변환될 수 있는 작용기를 포함한다. 임의의 수의 비-천연 아미노산이 폴리펩티드에 도입될 수 있다. 비-천연 아미노산은 또한 보호 또는 차폐된 옥심 또는 보호된 기의 탈보호 또는 차폐된 기의 차폐 해제 후에 옥심 기로 변환될 수 있는 보호 또는 차폐된 기를 포함할 수 있다. 비-천연 아미노산은 또한 보호 또는 차폐된 카르보닐 또는 디카르보닐 기를 포함할 수 있으며, 이는 보호된 기의 탈보호 또는 차폐된 기의 차폐 해제 후 카르보닐 또는 디카르보닐 기로 변환될 수 있으며, 이에 따라 히드록실아민 또는 옥심과 반응하여 옥심 기를 형성할 수 있다. 옥심계 비-천연 아미노산은 다음을 포함하는 당 업계에 잘 알려진 방법에 의해 합성될 수 있다(예를 들어, WO2013/185117 및 WO2005/074650 참조): (a) 히드록실아민 함유 비-천연 아미노산과 카르보닐 또는 디카르보닐 함유 시약의 반응; (b) 카르보닐 또는 디카르보닐 함유 비-천연 아미노산과 히드록실아민 함유 시약의 반응; 또는 (c) 옥심 함유 비-천연 아미노산과 특정 카르보닐 또는 디카르보닐 함유 시약의 반응.
본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용될 수 있는 비-천연 아미노산은 신규 작용기를 갖는 아미노산, 다른 분자와 공유 또는 비공유 상호 작용을 하는 아미노산, 글리코실화된 아미노산, 예컨대 당 치환 세린, 기타 탄수화물 변형된 아미노산, 케토 함유 아미노산, 알데히드 함유 아미노산, 폴리에틸렌 글리콜 또는 기타 폴리에테르를 포함하는 아미노산, 중원자 치환 아미노산, 화학적 절단성 및/또는 광 절단성 아미노산, 폴리 에테르 또는 장쇄 탄화수소(약 5개 초과 또는 약 10개 초과의 탄소를 포함하지만 이에 제한되지 않음)를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는, 천연 아미노산과 비교하여 연장된 측쇄를 갖는 아미노산, 탄소 연결 당 함유 아미노산, 산화 환원 활성 아미노산, 아미노티오산 함유 아미노산, 및 하나 이상의 독성 모이어티를 포함하는 아미노산을 포함하는 아미노산들을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시 양태에서, 비-천연 아미노산은 당류 모이어티를 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 N-아세틸-L-글루코사미닐-L-세린, N-아세틸-L-갈락토사미닐-L-세린, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-트레오닌, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-아스파라긴 및 O-만노사미닐-L-세린을 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 또한 아미노산과 당류 사이의 자연 발생 N- 또는 O-연결이 자연에서 일반적으로 발견되지 않는 공유 연결(알켄, 옥심, 티오에테르, 아미드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않음)에 의해 대체되는 예를 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 또한 2-데옥시-글루코스, 2-데옥시갈락토스 등과 같은 자연 발생 단백질에서 일반적으로 발견되지 않는 당류를 포함한다.
비천연 아미노산을 이러한 폴리펩티드에 혼입시킴으로써 폴리펩티드에 도입된 화학적 모이어티는 폴리펩티드의 다양한 이점 및 조작을 제공한다. 예를 들어, 카르보닐 또는 디카르보닐 작용기(케토- 또는 알데히드-작용기 포함)의 고유한 반응성은 생체 내 및 시험관 내에서 여러 히드라진 또는 히드록실아민 함유 시약으로 단백질의 선택적 변형을 허용한다. 예를 들어 중원자 비-천연 아미노산은 X선 구조 데이터를 위상화하는 데 유용할 수 있다. 비-천연 아미노산을 사용한 중원자의 부위 특이적 도입은 또한 중원자의 위치를 선택할 때 선택성과 유연성을 제공한다. 광 반응성 비-천연 아미노산(벤조페논 및 아릴아지드(페닐아지드 측쇄를 포함하지만 이에 제한되지 않음)을 갖는 아미노산을 포함하지만 이에 제한되지는 않음)은 예를 들어 폴리펩티드의 효율적인 생체 내 및 시험관 내 광 가교를 허용한다. 광 반응성 비-천연 아미노산의 예에는 p-아지도-페닐알라닌 및 p-벤조일-페닐알라닌이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 광 반응성 비-천연 아미노산을 갖는 폴리펩티드는 이어서 시간 조절을 제공하여 광 반응성 기의 여기에 의해 마음대로 가교될 수 있다. 비제한적인 예로, 비-천연 아미노의 메틸기는 핵 자기 공명 및 진동 분광법을 사용하여(이를 포함하지만 이에 제한되지는 않음) 국소 구조 및 동역학의 프로브로서 메틸 기로(이를 포함하지만 이에 제한되지 않음) 동위 원소 표지된 것으로 치환될 수 있다.
비-천연 아미노산 연결 돌라스타틴 유도체
본 발명의 다른 실시 양태에서, 적어도 하나의 돌라스타틴 링커 유도체를 비-천연 아미노산에 도입하기 위한 방법, 전략 및 기술이 본원에서 기재된다. 본원에 기재된 본 발명은 적어도 하나의 이러한 비-천연 아미노산을 함유하는 돌라스타틴 링커 유도체를 생산, 정제, 특성화 및 사용하는 방법을 포함한다. 또한, 이 측면에는 적어도 하나의 비-천연 아미노산을 함유하는 돌라스타틴 링커 유도체를 적어도 부분적으로 생산하는데 사용될 수 있는 올리고뉴클레오티드(DNA 및 RNA 포함)를 생산, 정제, 특성화 및 사용하기 위한 조성물 및 방법이 포함된다. 또한, 이 측면에는 적어도 하나의 비-천연 아미노산을 함유하는 돌라스타틴 링커 유도체를 적어도 부분적으로 생산하는데 사용될 수 있는 이러한 올리고뉴클레오티드를 발현할 수 있는 세포를 생산, 정제, 특성화 및 사용하기 위한 조성물 및 방법이 포함된다.
따라서, 카르보닐, 디카르보닐, 알킨, 시클로알킨, 아지드, 옥심 또는 히드록실아민 기를 갖는 적어도 하나의 비-천연 아미노산 또는 변형된 비-천연 아미노산을 포함하는 돌라스타틴 링커 유도체가 본원에 제공되고 기재된다. 특정 실시 양태에서, 카르보닐, 디카르보닐, 알킨, 시클로알킨, 아지드, 옥심 또는 히드록실아민 기를 갖는 적어도 하나의 비-천연 아미노산 또는 변형된 비-천연 아미노산을 갖는 돌라스타틴 링커 유도체는 폴리펩티드 상의 일부 위치에서 적어도 하나의 번역 후 변형을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 많은 경우에 세포 기구를 통해 발생하며(예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 아실화, 지질 변형, 팔미토일화, 팔미테이트 첨가, 인산화, 당지질-연결 변형 등), 이러한 세포 기구 기반의 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 폴리펩티드 상의 자연 발생 아미노산 부위에서 발생하지만, 특정 실시 양태에서, 세포 기구 기반의 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 폴리펩티드 상의 비-천연 아미노산 부위(들)에서 발생한다.
다른 실시 양태에서, 번역 후 변형은 세포 기구를 이용하지 않지만, 대신 작용성은 본원에 기재된 화학 방법론, 또는 특정 반응성 기에 적합한 다른 것들을 활용하여 제1 반응성 기를 포함하는 적어도 하나의 비-천연 아미노산(케톤, 알데히드, 아세탈, 헤미아세탈, 알킨, 시클로알킨, 아지드, 옥심, 또는 히드록실아민 작용 기를 함유하는 비-천연 아미노산을 포함하지만 이에 제한되지는 않음)에 제2 반응성 기를 포함하는 분자(중합체, 수용성 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 유도체, 제2 단백질 또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 유사체; 항체 또는 항체 단편; 및 이들의 임의의 조합)의 부착에 의해 제공된다. 특정 실시 양태에서, 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 진핵 세포 또는 비진핵 세포에서 생체 내에서 이루어진다. 특정 실시 양태에서, 번역 후 변형은 세포 기구를 사용하지 않고 시험관 내에서 이루어진다. 또한, 이러한 측면에는 적어도 하나의 이러한 번역과 동시 또는 번역 후 변형된 비-천연 아미노산을 함유하는 이러한 돌라스타틴 링커 유도체를 생산, 정제, 특성화 및 사용하는 방법이 포함된다.
또한, 본원에 기재된 방법, 조성물, 전략 및 기술의 범위 내에는 임의의 전술한 번역 후 변형을 생성하기 위해 폴리펩티드의 일부인 돌라스타틴 링커 유도체(카르보닐 또는 디카르보닐 기, 옥심 기, 알킨, 시클로알킨, 아지드, 히드록실아민 기, 또는 이들의 차폐 또는 보호된 형태를 함유)와 반응할 수 있는 시약이 포함된다. 특정 실시 양태에서, 생성된 번역 후 변형된 돌라스타틴 링커 유도체는 적어도 하나의 옥심 기를 함유할 것이고; 생성된 변형된 옥심 함유 돌라스타틴 링커 유도체는 후속 변형 반응을 거칠 수 있다. 또한, 이러한 돌라스타틴 링커 유도체(들)의 번역 후 임의의 이러한 변형이 가능한 이러한 시약을 생산, 정제, 특성화 및 사용하는 방법이 이 측면에 포함된다.
특정 실시 양태에서, 폴리펩티드 또는 비-천연 아미노산 연결된 돌라스타틴 유도체는 하나의 숙주 세포에 의해 생체 내에서 이루어지는 적어도 하나의 번역과 동시 또는 번역 후 변형을 포함하며, 여기서 번역 후 변형은 일반적으로 다른 숙주 세포 유형에서 의해서는 이루어지지 않는다. 특정 실시 양태에서, 폴리펩티드는 진핵 세포에 의해 생체 내에서 이루어지는 적어도 하나의 번역과 동시 또는 번역 후 변형을 포함하며, 여기서 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 일반적으로 비-진핵 세포에 의해 이루어지지 않는다. 이러한 번역과 동시 또는 번역 후 변형의 예는 글리코실화, 아세틸화, 아실화, 지질 변형, 팔미토일화, 팔미테이트 첨가, 인산화, 당지질 연결 변형 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 한 실시 양태에서, 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 GlcNAc-아스파라긴 연결에 의한 아스파라긴에 올리고당의 부착을 포함한다(올리고당이 (GlcNAc-Man)2-Man-GlcNAc-GlcNAc을 포함하는 경우 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않음). 또 다른 실시 양태에서, 번역과 동시 또는 번역 후 변형은 GalNAc-세린, GalNAc-트레오닌, GlcNAc-세린, 또는 GlcNAc-트레오닌 연결에 의한 세린 또는 트레오닌에 올리고당(Gal-GalNAc, Gal-GlcNAc 등을 포함하지만 이에 제한되지 않음)의 부착을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 단백질 또는 폴리펩티드는 분비 또는 국소화 서열, 에피토프 태그, FLAG 태그, 폴리히스티딘 태그, GST 융합 등을 포함할 수 있다. 또한, 이 측면에는 적어도 하나의 이러한 번역과 동시 또는 번역 후 변형을 함유하는 이러한 폴리펩티드를 생산, 정제, 특성화 및 사용하는 방법이 포함된다. 다른 실시 양태에서, 글리코실화 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 비-글리코실화 형태로 생산된다. 글리코실화 비-천연 아미노산의 이러한 비-글리코실화 형태는 단리되거나 실질적으로 정제되거나 정제되지 않은 글리코실화 비-천연 아미노산 폴리펩티드로부터 올리고당 기의 화학적 또는 효소적 제거; 이러한 비-천연 아미노산 폴리펩티드를 글리코실화하지 않는 숙주에서 비-천연 아미노산의 생산(이러한 숙주는 이러한 폴리펩티드를 글리코실화하지 않도록 조작되거나 돌연변이된 원핵생물 또는 진핵 생물을 포함함), 이러한 비-천연 아미노산 폴리펩티드가 일반적으로 이러한 폴리펩티드를 글리코실화하는 진핵 생물에 의해 생산되고 있는 세포 배양 배지에 글리코실화 억제제의 도입, 또는 임의의 이러한 방법들의 조합을 포함하는 방법에 의해 생산될 수 있다. 또한, 본원에서 일반적으로 글리코실화된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 이러한 비-글리코실화된 형태가 기재된다(일반적으로 글리코실화된 것은 자연 발생 폴리펩티드가 글리코실화되는 조건하에서 생산될 때 글리코실화되는 폴리펩티드를 의미함). 물론, 일반적으로 글리코실화된 비-천연 아미노산 폴리펩티드의 이러한 비-글리코실화된 형태(또는 실제로 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드)는 정제되지 않은 형태, 실질적으로 정제된 형태, 또는 단리된 형태일 수 있다.
옥심 함유 연결된 돌라스타틴 유도체
옥심 기를 함유하는 비-천연 아미노산 돌라스타틴 결합 유도체는 특정 반응성 카르보닐 또는 디카르보닐 기(케톤, 알데히드, 또는 유사한 반응성을 갖는 다른 기를 포함하지만 이에 제한되지 않음)를 함유하는 다양한 시약과의 반응을 가능하게 하여 새로운 옥심 기를 함유하는 새로운 비-천연 아미노산을 형성한다. 이러한 옥심 교환 반응은 돌라스타틴 연결된 유도체의 추가 작용화를 허용한다. 또한, 옥심 기를 함유하는 원래의 돌라스타틴 연결된 유도체는 아미노산을 폴리펩티드에 혼입시키는 데 필요한 조건(예를 들어, 본원 및 각각이 본원에 참고로 포함된 WO2013/185117 및 WO2005/074650에 기재된 생체 내, 시험관 내 및 화학적 합성 방법)에서 옥심 연결이 안정하기만 하다면 그 자체로 유용할 수 있다.
따라서, 특정 실시 양태에서, 옥심 기, 옥심 유사 기(옥심 기와 유사한 반응성을 가지며 옥심 기와 구조적으로 유사함), 차폐된 옥심 기(옥심 기로 쉽게 전환될 수 있음), 또는 보호된 옥심 기(탈보호시 옥심 기와 유사한 반응성을 가짐)을 포함하는 측쇄를 갖는 비-천연 아미노산 돌라스타틴 연결된 유도체가 본원에 기재된다.
하나 이상의 비-천연 아미노산을 돌라스타틴 링커 유도체에 혼입하기 위한 방법 및 조성물은 당 업계에 잘 알려져있다(예를 들어, WO2013/185117 및 WO2005/074650를 참조하며, 각각은 전체적으로 본원에 참고로 포함됨). 돌라스타틴 링커 유도체의 활성을 방해하지 않는 하나 이상의 특정 위치에 하나 이상의 비-천연 아미노산이 혼입될 수 있다. 이는 소수성 아미노산을 비-천연 또는 천연의 소수성 아미노산으로, 부피가 큰 아미노산을 비-천연 또는 천연의 부피가 큰 아미노산으로, 친수성 아미노산을 비-천연 또는 천연의 친수성 아미노산으로 치환하는 단계를 포함하는, 그러나 이에 제한되지는 않는 "보존적" 치환을 만드는 단계 및/또는 활성에 필요하지 않은 위치에 비-천연 아미노산 삽입하는 단계에 의해 달성될 수 있다.
돌라스타틴 링커 유도체 내에서 비-천연 아미노산으로 치환하기 위한 원하는 부위를 선택하기 위해 다양한 생화학적 및 구조적 접근법이 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 비-천연 아미노산은 돌라스타틴 유도체의 C-말단에 연결된다. 다른 실시 양태에서, 비-천연 아미노산은 돌라스타틴 유도체의 N-말단에 연결된다. 돌라스타틴 링커 유도체의 임의의 위치는 비-천연 아미노산을 혼입시키기 위한 선택에 적합하고, 선택은 합리적 설계에 기초하거나 원하는 임의의 특정 목적을 위해서나 그 목적 없이 무작위 선택에 의할 수 있다. 원하는 부위의 선택은 수용체 결합 조절제, 수용체 활성 조절제, 결합 파트너와의 결합 조절제, 결합 파트너 활성 조절제, 결합 파트너 입체 구조 조절제, 이량체 또는 다량체 형성, 천연 분자와 비교하여 활성 또는 특성에 대한 변화 없음, 또는 용해도, 응집 또는 안정성과 같은 폴리펩티드의 임의의 물리적 또는 화학적 특성 조작을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 임의의 원하는 특성 또는 활성을 갖는 비-천연 아미노산 폴리펩티드(추가로 변형되거나 변형되지 않은 상태로 남아있을 수 있음)의 생산을 기반으로 할 수 있다. 대안적으로, 생물학적 활성에 중요한 것으로 확인된 부위는 또한 폴리펩티드에 대해 추구되는 원하는 활성에 따라 비-천연 아미노산으로의 치환을 위한 좋은 후보가 될 수 있다. 또 다른 대안은 비-천연 아미노산으로 폴리펩티드 사슬의 각 위치에서 단순히 순차적 치환을 만들고 폴리펩티드의 활성에 미치는 영향을 관찰하는 것이다. 임의의 폴리펩티드 내에 비-천연 아미노산으로 치환하기 위한 위치를 선택하기 위한 임의의 수단, 기술 또는 방법은 본원에 기재된 방법, 기술 및 조성물에 사용하기에 적합하다.
또한, 결실을 함유하는 폴리펩티드의 자연 발생 돌연변이체의 구조 및 활성을 조사하여 비-천연 아미노산으로의 치환에 내성이 있을 가능성이 있는 단백질 영역을 결정할 수 있다. 비-천연 아미노산으로 치환에 내성이 있을 가능성이 있는 잔기가 제거되면, 관련 폴리펩티드, 및 임의의 관련 리간드 또는 결합 단백질의 3차원 구조를 포함하는 그러나 이에 제한되지 않는 방법을 사용하여 나머지 위치 각각에서 제안된 치환의 영향을 조사할 수 있다. 많은 폴리펩티드의 X선 결정학 및 NMR 구조는 단백질과 핵산의 큰 분자의 3차원 구조 데이터를 포함하는 중앙 집중식 데이터베이스인 Protein Data Bank(PDB, rcsb.org의 월드와이드 웹 참조)에서 이용 가능하며, 비-천연 아미노산으로 대체될 수 있는 아미노산 위치를 확인하는 데 사용될 수 있다. 또한, 3차원 구조 데이터가 이용 가능하지 않을 경우, 폴리펩티드의 2차 및 3차 구조를 조사하는 모델을 만들 수 있다. 따라서, 비-천연 아미노산으로 치환될 수 있는 아미노산 위치의 정체를 쉽게 얻을 수 있다.
비-천연 아미노산의 혼입의 예시적인 부위는 잠재적인 수용체 결합 영역, 또는 결합 단백질 또는 리간드에 대한 결합 부위에서 배제된 부위, 완전히 또는 부분적으로 용매에 노출될 수 있는 부위, 근처 잔기와의 수소 결합 상호 작용이 최소화되거나 전혀 없는 부위, 근처의 반응성 잔기에 최소한으로 노출될 수 있는 부위, 및/또는 관련 수용체, 리간드 또는 결합 단백질과 특정 폴리펩티드의 3차원 결정 구조에 의해 예측된 바와 같이 고도로 유연한 영역에 있을 수 있는 부위를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
매우 다양한 비-천연 아미노산이 폴리펩티드의 주어진 위치를 대체하거나 그 위치에 혼입될 수 있다. 예로써, 결합된 리간드, 수용체 및/또는 결합 단백질에 의한 폴리펩티드의 3차원 결정 구조의 조사, 보존적 치환에 대한 선호를 기준으로 하여 혼입을 위한 천연 아미노산이 선택될 수 있다.
한 실시 양태에서, 본원에 기재된 방법은 제1 반응성 기를 포함하는 돌라스타틴 링커 유도체에 혼입시키는 단계; 및 돌라스타틴 링커 유도체를 제2 반응성 기를 포함하는 분자(제2 단백질 또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 유사체; 항체 또는 항체 단편; 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않음)와 접촉시키는 단계를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 제1 반응성 기는 히드록실아민 모이어티고 제2 반응성 기는 카르보닐 또는 디카르보닐 모이어티이며, 이에 의해 옥심 연결이 형성된다. 특정 실시 양태에서, 제1 반응성 기는 카르보닐 또는 디카르보닐 모이어티고 제2 반응성 기는 히드록실아민 모이어티이며, 이에 의해 옥심 연결이 형성된다. 특정 실시 양태에서, 제1 반응성 기는 카르보닐 또는 디카르보닐 모이어티이고 제2 반응성 기는 옥심 모이어티이며, 이에 의해 옥심 교환 반응이 발생한다. 특정 실시 양태에서, 제1 반응성 기는 옥심 모이어티이고 제2 반응성 기는 카르보닐 또는 디카르보닐 모이어티이고, 이에 의해 옥심 교환 반응이 발생한다.
일부 경우에, 돌라스타틴 링커 유도체 혼입(들)은 다른 화학적, 물리적, 약리학적 및/또는 생물학적 특성에 영향을 미치는 폴리펩티드 내의 다른 첨가, 치환, 또는 결실과 조합될 것이다. 일부 경우에, 다른 첨가, 치환 또는 결실은 폴리펩티드의 안정성(단백질 분해에 대한 내성을 포함하지만 이에 제한되지 않음)을 증가시키거나 적절한 수용체, 리간드 및/또는 결합 단백질에 대한 폴리펩티드의 친화도를 증가시킬 수 있다. 일부 경우에, 다른 첨가, 치환 또는 결실은 폴리펩티드의 용해도(이. 콜라이(E.coli) 또는 다른 숙주 세포에서 발현되는 경우를 포함하지만 이에 제한되지 않음)를 증가시킬 수 있다. 일부 실시 양태에서 천연적으로 코딩된 또는 비-천연 아미노산으로 치환을 위한 부위는 이 콜라이, 또는 다른 재조합체 숙주 세포에서 발현 후 폴리펩티드 용해도를 증가시킬 목적으로 비-천연 아미노산의 혼입을 위한 또 다른 부위에 추가하여 선택된다. 일부 실시 양태에서, 폴리펩티드는 관련 리간드, 결합 단백질, 및/또는 수용체에 대한 친화도를 조절하거나, 수용체 이량체화를 조절(증가 또는 감소를 포함하지만 이에 제한되지는 않음)하거나, 수용체 이량체를 안정화하거나, 순환 반감기를 조절하거나, 방출 또는 생체 이용률을 조절하거나, 정제를 용이하게 하거나, 특정 투여 경로를 개선 또는 변경하는 또 다른 첨가, 치환 또는 결실을 포함한다. 유사하게, 비-천연 아미노산 폴리펩티드는 화학적 또는 효소 절단 서열, 프로테아제 절단 서열, 반응성 기, 항체 결합 도메인(FLAG 또는 폴리-His를 포함하지만 이에 제한되지 않음) 또는 기타 친화성 기반 서열(FLAG, 폴리-His, GST 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않음) 또는 검출(GFP를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 정제, 조직 또는 세포막을 통한 수송, 전구 약물 방출 또는 활성화, 폴리펩티드의 크기 감소 또는 또는 기타 특성을 개선하는 연결된 분자(비오틴을 포함하지만 이에 제한되지는 않음)를 포함할 수 있다.
일부 실시 양태에서 페이로드 또는 독소 모이어티가 본 발명 개시 내용의 항 PSMA 항체 약물 접합체에 사용된다. 페이로드의 예에는 비제한적인 방식으로 DNA 복제 억제제, DNA 전사 억제제, RNA 번역 억제제, 세포 분열 억제제, 세포 신호 전달 억제제, 키나아제 억제제, 튜불린 중합 효소 억제제, 튜불린 탈중합제, DNA 절단제, DNA 결합제, RNA 중합 효소 억제제, 아우리스타틴, 돌라스타틴, MMAF, MMAE, MMAD, 듀오카르마이신 유사체, 피롤로벤조디아제핀(PBD) 유사체, 튜불리신 유사체, 메이탄신 유사체, 아마니틴 유사체, 크립토피신 유사체, 에포틸론 유사체, 칼리케아미신 유사체, 독소루비신 유사체, 캄프토테신 유사체가 포함될 수 있다.
본 발명의 다른 실시 양태에서 약물 페이로드 링커가 제공된다. 절단성, 짧은 절단성 및 비절단성 링커와 함께 페이로드로서 항 튜불린 억제제가 선택되었다. 예시적인 방식으로, 본 발명의 개시 내용의 페이로드 링커 조합은 절단성, 비절단성, 짧은 절단성 페이로드 링커를 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 절단성 페이로드 링커는 절단성 디펩티드(Val-Cti, Val-Ala, Val-Lys 및 Ala-Ala를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 히드라진 연결, 이황화 연결 또는 피로포스페이트 연결을 포함할 수 있다. 본 개시 내용의 항-PSMA 항체 약물 접합체에 사용되는 페이로드 링커의 예는 비절단성 MMAE, 비절단성 MMAF, Val-시트룰린-아세틸 MMAF, 짧은 Val-시트룰린-아세틸 MMAF, 또는 짧은 Val-시트룰린-아세틸 MMAE를 포함한다. MMAE와 MMAF 모두 연구에 사용되었다. 돌라스타틴 링커 유도체의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:
다음 구조를 갖는 비절단성 MMAF:
Figure pct00001
다음 구조를 갖는 비절단성 MMAE:
Figure pct00002
다음 구조를 갖는 절단성 또는 Val-시트룰린-아세틸(Val-Cit) MMAF:
Figure pct00003
다음 구조를 갖는 짧은 절단성 또는 짧은 Val-시트룰린-아세틸(Val-Cit) MMAF:
Figure pct00004
다음 구조를 갖는 짧은 절단성 또는 짧은 Val-시트룰린-아세틸(Val-Cit) MMAE:
Figure pct00005
표 1은 본 발명의 항-PSMA 항체 또는 항체 약물 접합체와 함께 사용될 수 있는 약물-링커 화합물을 제공한다. 이러한 페이로드 링커의 합성은 당업자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 본원에 참고로 포함된 바와 같이, 문헌[Dubowchik et al., Bioconjugate Chem . 13: 855-869, (2002); Doronina et al., Nature Biotechnology 21(7): 778-784, (2003); WO2012/166560; WO2013/185117]을 참조한다.
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
PSMA 표적화 리간드와 접합된 항-PSMA ADC 생성
본 발명의 개시 내용의 다른 실시 양태에서 표적 리간드가 포함된다. 이러한 리간드는 PSMA 수용체의 활성 부위에 결합하는 리간드, PSMA 수용체의 글루타메이트 카르복시펩티다아제 효소 활성의 억제제인 리간드, 및 영상화에 사용되는 리간드를 포함한다. 본 발명의 개시 내용은 또한 피코 이하 내지 나노 이하 몰 결합 친화도 범위를 갖는 리간드를 포함한다.
PSMA 표적화 리간드와 접합된 항-PSMA ADC는 본원에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다. 한 생성 방법은 독소-링커가 시스테인-말레이미드 접합 방법에 의해 항체에 접합된 후 독점적인 옥심 결찰 방법에 기초하여 항체의 특정 부위에서 PSMA 표적화 리간드의 접합이 뒤따르는 순차적 접합을 포함한다. 말레이미드 접합은 관련 환원제의 첨가에 의해 촉진되는 항체의 중쇄 및 경쇄 사이의 이황화 가교를 환원시킴으로써 수행된다. 항체의 이황화 결합은 항체 및 3 내지 9몰배 더 높은 환원제로 이루어진 6 내지 7.4의 pH 범위에서 제제화된 반응 혼합물을 인큐베이션함으로써 환원될 수 있다. 반응 혼합물을 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하여 3 대 4의 약물:항체 비율을 얻을 수 있다. 그런 다음 독소 접합된 항체를 10몰배 더 높은 PSMA 표적화 리간드를 함유하는 4 내지 5의 pH 범위의 반응 혼합물로 완충액을 교환한다. 독소 접합된 항체와 PSMA 표적화 리간드의 반응은 실온에서 8 내지 16시간 동안 부드럽게 흔들어 주면서 인큐베이션하여 수행될 수 있다. 일반적으로 PSMA 표적화 리간드 대 항체의 양은 이 방법에 의해 생성된 1.8 내지 2 범위이다. 반응 혼합물로부터 접합되지 않은 성분은 양이온 교환 컬럼을 통과시켜 제거되고 마우스 및 인간의 체액과 등장성인 독점적인 제제 완충액으로 완충액 교환된다. 또 다른 방법에서, PSMA 표적화 리간드와 독소는 옥심 기반 접합 화학에 의해 단일 단계로 항체의 특정 부위에서 접합될 수 있다. 이 단일 단계 접합은 PSMA 표적화 리간드와 독소를 모두 함유하는 분지형 링커를 설계함으로써 용이해질 수 있다. 단일 단계 접합은 독점적인 옥심 및 시클로 옥틴 기반 클릭 화학으로 수행될 수 있다. 접합되지 않은 성분은 양이온 교환 정제 컬럼을 통과시켜 반응 혼합물로부터 제거될 수 있다. 그런 다음 정제된 물질은 등장성 완충액으로 제제화된다. 예시적인 실시 양태에서 PSMA 표적화 리간드(L은 링커를 나타냄)는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00011
Figure pct00012
예시적인 실시 양태에서, 본 발명의 개시 내용의 PSMA 리간드는 N-말단 표적화 리간드 및 C-말단 접합 부분 또는 일부를 갖는 화합물을 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 예시적인 측면에서, PSMA 표적화 리간드는 다음(표 2)을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00013
Figure pct00014
다른 예시적인 실시 양태에서, 본 발명의 개시 내용은 PSMA 표적화 리간드 및 링커를 포함하며, 여기서 표적 리간드와 링커 사이의 연결은 비제한적인 방식으로
Figure pct00015
일 수 있으며, 연결은 수소 치환될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서 링커는 비제한적인 방식으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 알킬, 알켄, 알킨, 아민, 아릴, 또는 아미노산일 수 있다. 링커를 연결하기 위한 화학, 방법 및 기술은 당 업계에 잘 알려져있다.
또 다른 예시적 실시 양태에서, 본 발명은 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는 독소를 갖는 PSMA 표적화 리간드(표 3)를 포함한다:
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
본 발명의 개시 내용의 일부 측면에서, 혈청 반감기, 수용해도, 생체 이용률, 치료 반감기 또는 순환 시간이 증가되거나, 면역원성 또는 생물학적 활성이 조절되는 항-PSMA 항체, 변이체 또는 약물 접합체가 바람직하다. 본원에 개시된 항-PSMA 조성물의 이러한 원하는 특징을 달성하는 한 가지 방법은 중합체 폴리에틸렌 글리콜(PEG)의 공유 부착에 의한다. 폴리에틸렌 글리콜의 원하는 특성을 최대화하기 위해, 생물학적 활성 분자에 부착된 중합체 또는 중합체들의 총 분자량 및 수화 상태는 폴리에틸렌 글리콜이 부착된 분자의 생물 활성에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 일반적으로 이러한 중합체 부착과 관련된 유리한 특성, 예컨대 증가된 수용해도 및 순환 반감기를 부여하기에 충분히 높아야 한다.
폴리에틸렌 글리콜 유도체는 아미노산 잔기, N-말단, 및/또는 탄수화물 모이어티와 같은 반응성 화학적 작용성을 통해 생물학적 활성 분자에 빈번하게 연결된다. WO99/67291은 단백질을 폴리에틸렌 글리콜과 접합시키는 방법을 개시하며, 여기서 단백질 상의 적어도 하나의 아미노산 잔기는 합성 아미노산으로 치환되고 단백질은 단백질에 접합을 달성하기에 충분한 조건하에서 폴리에틸렌 글리콜과 접촉된다.
단백질 및 기타 분자는 종종 중합체 부착에 이용 가능한 제한된 수의 반응성 부위를 갖는다. 중합체 부착을 통한 변형에 가장 적합한 부위는 수용체 결합에서 중요한 역할을 할 수 있으며, 이러한 부위는 분자의 생물학적 활성을 유지하는 데 필수적일 수 있으며, 이에 따라 이들은 중합체 부착에 부적절하다. 결과적으로, 생물학적 활성 분자 상의 이러한 반응성 부위에 대한 중합체 사슬의 무차별 부착은 종종 중합체 변형된 분자의 생물학적 활성의 상당한 감소 또는 심지어 전체 손실을 초래하기 때문에, 폴리에틸렌 글리콜 부착은 폴리에틸렌 글리콜 모이어티가 그 단백질의 기능을 방해하지 않도록 단백질 내 특정 위치에 지시될 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 부착을 지시하는 한 가지 방법은 합성 아미노산을 단백질 서열에 도입하는 것이다. 원핵 생물 에쉐리키아 콜라이(Escherichia coli) (이. 콜라이)의 단백질 생합성 기구는 앰버 코돈, UAG에 반응하여 합성 아미노산을 단백질에 효율적이고 고 충실도로 혼입시키기 위해 변경될 수 있다. 예를 들어, 문헌[J. W. Chin et al., J. Amer. Chem. Soc. 124: 9026-9027, 2002; J. W. Chin, & P. G. Schultz, ChemBioChem 3(11): 1135-1137, 2002; J. W. Chin, et al., PNAS USA 99: 11020-11024, 2002; 및 L. Wang, & P. G. Schultz, Chem. Comm., 1: 1-11, 2002]을 참조한다. 진핵 생물인 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)(에스. 세레비지에)로 유사한 방법을 수행할 수 있다(예를 들어, J. Chin et al., Science 301: 964-7, 2003). 이 방법을 사용하여, 비-천연적으로 코딩된 아미노산이 본 발명의 항-PSMA 항체, 변이체 또는 약물 접합체에 혼입되어 폴리에틸렌 글리콜에 대한 부착 부위를 제공할 수 있다. 에를 들어, WO2010/011735 및 WO2005/074650를 참조한다.
약학 조성물
본 발명의 다른 측면에서 PSMA 항체 변이체 또는 PSMA 항체 약물 접합체는 약학 조성물 또는 제제를 추가로 포함한다. 이러한 약학 조성물은 동물에게 투여하기 위해 다양한 약학적으로 허용 가능한 부형제, 안정화제, 완충제, 및 기타 성분을 사용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1995]을 참조한다. 안정성, 대상체에 투여, 및 활성을 위해 적합한 조성물 또는 제제의 확인은 여러 성분(예를 들어, 정제, 안정화 성분)으로서 각각의 화합물에 따라 다양하며, 고려되어야 할 필요가 있다. 조성물 또는 제제에 포함시키기에 적합한 염은 염화나트륨, 염화칼륨 또는 염화칼슘을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 아세트산나트륨과 같은 완충제 및/또는 안정화제가 사용될 수 있다. 적합한 완충제는 포스페이트-시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 시트레이트 완충제, L-히스티딘, L-아르기닌 히드로클로라이드, 비카르보네이트 완충제, 숙시네이트 완충제, 시트레이트 완충제, 및 TRIS 완충제를 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다. 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 80), 도데실 설페이트(SDS), 레시틴을 단독으로 또는 조합하여 포함하는 계면 활성제가 또한 사용될 수 있다.
본 발명의 일부 측면에서, 약학 조성물 또는 제제는 수성 조성물 또는 재구성된 액체 조성물 형태 또는 분말일 수 있다. 조성물 또는 제제는 제제가 액체 형태일 때 약 4.0 내지 약 7.0 또는 약 4.5 내지 약 6.5의 pH 범위를 가질 수 있다. 그러나 pH는 숙련된 의사에 의해 허용 가능한 안정성 및 투여를 제공하기 위해 조정될 수 있다.
조성물은 바이알 또는 카트리지, 펜 전달 장치, 주사기, 정맥 내 투여 튜빙 또는 정맥 내 투여 백(그러나 이에 제한되지는 않음)에 추가로 저장될 수 있다. 다른 실시 양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 단일 용량으로 투여되거나, 최초 용량 수분, 수일, 또는 수주 후에 1회 이상의 후속 용량(들)이 뒤따를 수 있다. 전립선암을 포함하여 암을 치료, 감소 또는 예방하기 위해 필요에 따라 추가 투여가 고려될 수 있다.
일부 경우에서, 본 발명의 개시 내용의 PSMA 항체, 변이체 또는 항-PSMA ADC 조성물은 수술, 방사선, 냉동 수술, 온열 요법, 호르몬 치료, 화학 요법, 백신 및 기타 면역 요법를 포함하지만 이에 제한되지 않는 추가 요법 또는 치료와 함께 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서 이러한 추가 치료는 화학 치료제, 호르몬제, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합과 같은 치료제를 포함할 수 있다. 일 실시 양태에서, 호르몬제는 엔잘루타미드이다.
다른 실시 양태에서 본 발명의 항-PSMA ADC는 하나 이상의 면역자극제와 함께 투여되어 면역 반응을 유도하거나 향상시킬 수 있다. 면역자극제는 항체 의존성 세포 독성(ADCC: antibody-dependent cell cytotoxicity)을 매개하는 자연 살해(NK: natural killer) 세포와 같이 면역계의 특정 아암을 자극할 수 있다. 이러한 면역자극제는 IL-2, 면역 자극 올리고뉴클레오티드(예를 들어, CpG 모티프), α-인터페론, γ-인터페론, 종양 괴사 인자 알파(TNFα)를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 다른 실시 양태에서 본 발명의 항-PSMA ADC는 사이토카인, 케모카인(SLC5 ELC, MIP3α, MIP3β, IP-IO, MIG, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않음)을 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 면역조절제와 함께 투여될 수 있다. 다른 치료제는 PSMA에 대해 대상체를 면역시키는 백신일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이러한 백신은 PSMA 이량체와 같은 항원을, 경우에 따라 면역 반응을 유도 또는 향상시키기 위한 하나 이상의 보조제와 함께 포함한다. 많은 종류의 보조제는 당 업계에 잘 알려져 있다.
질환, 병태 또는 암의 치료, 감소 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 이의 치료, 감소 또는 예방에 관여하는 화학 치료제 또는 임의의 약물이 또한 본 발명의 개시 내용의 항-PSMA ADC와 병용하여 투여될 수 있다. 화학 치료제는 엘로티닙(TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), 보르테조밉(VELCADE®, Millennium Pharm.), 풀베스트란트(FASLODEX®, AstraZeneca), 수텐트(SU11248, Pfizer), 레트로졸(FEMARA®, Novartis), 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC®, Novartis), PTK787/ZK 222584(Novartis), 옥살리플라틴(Eloxatin®, Sanofi), 5-FU(5-플루오로우라실), 류코보린, 라파마이신(Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), 라파티닙(TYKERB®, GSK572016, GlaxoSmithKline), 로나파르닙(SCH 66336), 소라페닙(BAY43-9006, Bayer Labs.), 및 제피티닙(IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, AG1571(SU 5271; Sugen), 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이톡산(CYTOXAN)® 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 항 엽산 항신생물제, 예컨대 페메트렉세드(ALIMTA®, Eli Lilly), 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알 트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸오멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지오스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 엔다이인 항생제, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마 1I 및 칼리케아미신 오메가 I1; 다이네미신 A를 포함한다 이네미신; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색 단백질 엔다이인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 안트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)® 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 이소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 켈라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항안드로겐(예를 들어, 엔잘루타미드) 또는 안드로겐 차단 요법; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토 탄, 트리로스테인; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트레린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 다당류 복합체(JHS Natural Products, 미국 오리건주 유진 소재); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2', 2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀(TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, 미국 뉴저지주 프린스턴 소재), 아브락산(ABRAXANE)™ 크레모포어 무함유, 알부민, 파클리탁셀의 나노입자 제제(American Pharmaceutical Partners, 미국 일리노이주 샴버그 소재), 및 탁소텔(TAXOTERE)® 도세탁셀(Rhone-Poulenc Rorer, 프랑스 앙토니 소재); 클로란부실; 젬자르(GEMZAR)® 젬시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(NAVELBINE)® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체를 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다.
용어 "약"은 당업자에 의해 이해될 것이며 그것이 사용되는 맥락에 따라 어느 정도 달라질 것이다.
실시예
본원에 기재된 실시예 및 실시 양태는 단지 예시를 위한 것이며, 그에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 제안될 것이며 본 출원의 취지 및 범위 및 첨부된 청구항의 범위 내에 포함되어야 함을 이해해야 한다. .
실시예 1: 일시적 형질 감염. CHO-S 배양물은 FreeStyle CHO 배지에 형질 감염 대략 16시간 전에 0.75x106/mL로 접종하였다. 다음날 세포 수가 1.4 내지 1.6x106/mL에 도달했을 때 세포를 형질 감염시켰다. 표적 세포 수에서, 400mM 파라-아세틸 페닐알라닌(pAF) 저장액을 1.4mM 최종 배양 농도로 첨가하였다.
폴리에틸렌이민/DNA(PEI/DNA) 복합체를 다음에 기재된 바와 같이 제조하였다: DNA(1.42 ug/1x106 세포)를 RPMI 배지(총 배양 부피의 5%(v/v))에 용해시키고, DNA/RPMI 혼합물을 실온에서 2분 동안 인큐베이션하고, PEI 저장액(1 mg/mL)을 3:1 비율(PEI/DNA(ug/ug))로 DNA 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다.
혼합물을 세포 배양물에 부드럽게 첨가하고 빙빙 돌려주었다. 플라스크를 32℃ 인큐베이터로 옮겼다. 형질 감염 후 제6일에, 웨스턴 블롯 분석을 수행하였다. 형질 감염 후 제7일에 상등액을 수거하였다.
실시예 2: 항체 인간화 - 부모 마우스 J591(Liu et al., Cancer Research, 57, 3629-36354, 1997) 항체는 마우스 프레임워크 서열과의 서열 동일성에 기초하여 인간 프레임워크를 선택하여 인간화하였다. 마우스 항체의 경쇄 및 중쇄 CDR을 각각 인간 프레임워크에 이식하고, PSMA 항원에 대한 결합에 대해 분석하였다. 인간화 변이체는 4개의 인간 중쇄 프레임워크와 6개의 경쇄 프레임워크를 결합하여 생성하였다. 변이체는 HEK293 세포에서 일시적으로 발현시켰고 상등액은 FACS에 의해 LnCap 세포에서 발현된 PSMA 항원에 대한 결합에 대해 시험하였다. 표 4는 추가 연구에 사용되는 선택된 중쇄 가변 영역 서열 및 4개의 경쇄 가변 영역 서열을 기재한다. 결합 분석은 인간화 항-PSMA 변이체 1, 2, 3 및 4(표 4)로 나타낸 4개의 인간화 전장 변이체가 나노 몰 범위의 결합 친화도를 나타내며 키메라와 유사한 결합 친화도를 유지하였음을 보였다(표 4). 표 4에 개시된 바와 같이, 인간화 항-PSMA 변이체 1은 서열 번호 8의 중쇄 서열 및 서열 번호 9의 경쇄 서열을 포함하고; 인간화 항-PSMA 변이체 2는 서열 번호 10의 중쇄 서열 및 서열 번호 11의 경쇄 서열을 포함하고; 인간화 항-PSMA 변이체 3은 서열 번호 12의 중쇄 서열 및 서열 번호 13의 경쇄 서열을 포함하고; 인간화 항-PSMA 변이체 4는 서열 번호 14의 중쇄 서열 및 서열 번호 15 의 경쇄 서열을 포함한다.
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
실시예 3: 항-PSMA 항체의 재조합 발현 - 리드(lead) 인간화 항-PSMA 항체를 선택하고 일시적 형질 감염(실시예 1에 기재됨) 및 안정한 벌크 풀 방법 둘 다에 의해 CHO 세포에서 재조합적으로 발현시켜 인간화된 서열의 발현을 조사하였다. 일시적 형질 감염 및 안정적인 벌크 풀 접근법에서 독점 기술을 각각 발현 벡터 및 CHO 숙주 세포에 구축하였다(예를 들어 WO2018/223108 참조). 비-천연 아미노산 파라 아세틸 페닐알라닌(pAF)은 PSMA 항체에서 중쇄 불변 영역의 첫 번째 아미노산 잔기인 위치 A114(카밧(Kabat) 넘버링 체계(문헌[Kabat et al., NIH Publication No. 369-847, 1993] 참조); 표 4에 A로 표시된 위치)에 혼입되었다.
실시예 4: 항체 약물 접합체(ADC)의 생산 - 항체는 단백질 A 친화성 포획 및 양이온 교환 폴리싱을 포함하는, 당업자에게 잘 알려진 크로마토그래피 기반 방법을 사용하여 정제할 수 있다. 세포 배양 배지에서 수거된 항체는 단백질 A 친화성 컬럼에 포획하고 산성 조건에서 용출시킨다. 항체 제제를 pH 5로 적정하고 양이온 교환 컬럼을 통과시켜 폴리싱한다. 양이온 교환 후 항체를 접합 완충액으로 완충액을 교환할 수 있다.
본 발명에서, 인간화 항-PSMA 항체를 작은 친수성 링커를 통해 독소(MMAE 또는 MMAF)에 접합하였다. 약물-페이로드 링커는 항-PSMA 중쇄에서 pAF와 공유적으로 접합하여 항-PSMA-ADC(들)를 형성한다. PSMA 항체를 촉매 역할을 하는 135 mM 아세트산 히드라지드의 존재하에 28℃에서 인큐베이션함으로써 약물-페이로드 링커와 접합한다. 접합되지 않은 항체, 접합되지 않은 약물 페이로드-링커, 응집체 및 불순물은 반응 혼합물을 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 통과시켜 제거한 후 항-PSMA ADC를 제제화 완충액(50 mM 히스티딘, 150 mM 염화나트륨, 2.5% 트레할로스 pH 6)으로 교환하였다. 항체 약물 접합체는 염 구배 하에서 컬럼으로부터 용리시켜 단분산 피크를 생성하였다.
양이온 교환 크로마토그래피로부터의 단분산 피크의 분석 특성화는 1.8 내지 2 범위의 약물 대 항체 비율(DAR: drug-to-antibody ratio)을 갖는 항-PMA ADC인 주용 종이 8시간 내에 관찰되었음을 보여준다. 본 발명의 항체 및 ADC에 대해 수행된 품질 관리 평가는 이 전략에 의해 생성된 모든 제제가 < 3% 응집체 및 < 5 EU/mg 내독소 수준을 함유하는 우수한 품질의 물질을 생성했음을 보여준다.
본원에 개시된 5개의 페이로드-링커(비절단성 MMAE, 비절단성 MMAF, 절단성 MMAF, 짧은 절단성 MMAF, 및 짧은 절단성 MMAE)를 사용하여 2개의 리드 인간화 변이체 및 키메라 항체로 15개의 항-PSMA ADC를 생성하였다. 표 4에 개시된 인간화 변이체 1 및 2로 생성된 항-PSMA ADC를 다음 실시예에서 추가 연구를 위해 선택하였다.
실시예 5: 시험관 내 효능 연구 - 항-PSMA ADC의 시험관 내 효능을 전이성 거세 저항성 전립선암(mCRPC: metastatic castration-resistant prostate cancer) 대표 세포주인 C4-2를 사용하여 결정한다. 세포 배양물을 37℃에서 96시간 동안 항체 약물 접합체와 함께 인큐베이션한다. Cell Titer Glo®(Promega, USA)를 사용하여 세포 생존도를 분석한다. 항증식 활성은 효능, 최대 활성의 50%가 달성되는 농도인 IC50과 세포 사멸, 및 최대 성장 억제 수준인 Emax로 나타낸다. 표 5는 항-PSMA ADC의 세포 사멸 및 시험관 내 효능을 요약한다.
Figure pct00027
세포 사멸 활성 분석은 페이로드-링커 조합이 강력한 항체 약물 접합체를 개발하는 데 중요함을 시사한다. 강력한 항체 약물 접합체는 > 75% 세포 사멸과 함께 나노 몰 이하의 효능을 나타냈다. MMAF 페이로드를 갖는 항체 약물 접합체는 MMAE 페이로드를 갖는 항체 약물 접합체보다 더 높은 세포 사멸 및 효능을 나타냈다. 시험관 내 세포 사멸 연구는 MMAF 페이로드를 갖는 항-PSMA ADC가 MMAE 페이로드를 갖는 항-PSMA ADC보다 10배 더 높은 효능을 나타냈음을 시사한다.
이 연구는 또한 항체 약물 접합체의 활성이 링커 유형에 의해서도 영향을 받는다는 것을 보여준다. 절단성 링커를 갖는 항체 약물 접합체는 동일한 유형의 페이로드에 대해 비절단성 링커를 갖는 항체 약물 접합체에 비해 더 높은 세포 사멸 및 효능을 나타냈다. 표 5에 나타낸 바와 같이, 시험관 내 세포 사멸 연구는 MMAE 또는 MMAF 페이로드를 갖는 항-PSMA ADC가 비절단성 링커보다 절단성 링커에 대해 10배 더 높은 효능을 나타내었음을 보여준다. 이는 링커와 세포 독성 페이로드의 적절한 조합에 의해 강력한 항-PSMA ADC가 생성될 수 있음을 시사한다. MMAE 페이로드와 비절단성 링커의 조합은 불량한 효능과 살해를 나타냈다. 더욱이, 항-PSMA 항체 ADC에 의한 표적 세포의 사멸은 항-PSMA 항체에 의한 세포 독성제의 표적화된 전달에 의해 달성된다. 세포 독성제의 표적화된 전달은 항체 약물 접합체의 항-PSMA 항체 성분이 세포 표면에서 발현되는 수용체 또는 항원 PSMA에 결합함으로써 촉진되며, 이는 수용체에 의해 세포 내로 내재화된다. PC-3과 같이 PSMA를 발현하지 않는 전립선암 세포주에 의한 연구는 강력한 항-PSMA ADC가 세포 살해 활성을 전혀 발휘하지 않음을 시사한다. 96시간 동안 강력한 항-PSMA ADC와 함께 인큐베이션된 PC-3 세포주는 사멸되지 않았다. 이는 본 발명의 항-PSMA ADC가 표적 특이적임을 시사한다. 항체 약물 접합체의 방관자 살해 효과는 나타나지 않았다. 본 발명의 항체 약물 접합체의 방관자 살해 효과의 결여는 세포 독성 페이로드로서 MMAE를 포함하는 항체 약물 접합체에서 종종 관찰되는 독소 성분으로 인한 비특이적 표적 외 독성을 제거하는 데 중요하다. 더욱이, 본 발명의 항-PSMA ADC의 표적 특이적 활성은 이러한 ADC를 전이성 전립선암 치료에 유용하게 만든다. 이러한 연구의 관찰은 PSMA를 발현하는 원발성 암성 전립선 조직 이외의 임의의 암성 병변이 본 발명의 항-PSMA ADC로 치료될 수 있음을 시사한다.
더욱이, 항-PSMA ADC의 세포 사멸 활성은 세포 표면에 발현된 수용체의 수에 따라 결정된다. 수용체 카피 수가 > 60000인 전립선암 세포주는 본 발명의 항-PSMA ADC에 의해 효율적으로 사멸될 수 있다. 예를 들어, 비절단성 링커와 함께 MMAF 페이로드를 함유하는 항-PSMA ADC로 수행된 시험관 내 세포 사멸 연구는 면역 조직 화학(IHC: immunohistochemistry) 및 정량적 간접 면역 형광(QiFi: Quantitative indirect immunofluorescence) 분석에 의해 수용체 카피 수가 > 60000인 세포주를 사멸시킴을 보였다(표 6).
Figure pct00028
PSMA의 수용체 카피 수에 대한 본 발명의 항-PSMA ADC의 세포 사멸 활성의 의존성은 전립선암 치료에 대한 치료적 이점을 나타낸다. PSMA의 수용체 카피 수는 일반적으로 암이 없는 조직에서 PSMA의 발현에 비해 암성 전립선 조직에서 높다. 암성 전립선 조직과 정상 조직 사이의 PSMA 수용체 카피 수의 이러한 차등적인 발현은 표적 관련 비-전립선 조직 관련 독성의 감소 및/또는 제거를 용이하게 할 수 있다. 이 분석은 항-PSMA ADC가 PSMA 수용체 카피 수가 높은 암성 전립선 조직보다 낮은 PSMA 수용체 카피 수를 발현하는 조직에서 낮은 활성을 나타낼 수 있음을 시사한다. 따라서, 항체 약물 접합체의 배경 독성을 크게 낮출 수 있다.
실시예 6: 약물 페이로드-링커를 사용한 약물 동태학(PK: pharmacokinetic) 프로파일 - 항체 약물 접합체가 정맥 내(i.v) 볼러스로 투여되는 마우스 및 래트 모두에서 약물 동태학적 연구를 수행하여 본원의 항-PSMA ADC의 전신 안정성을 평가할 수 있다. 약물 동태학적 평가는 온전한 항체 약물 접합체의 안정성이 링커의 안정성에 따라 결정됨을 시사한다. 1 mg/kg의 단일 용량으로 마우스에서 수행한 연구는 비절단성 또는 짧은 절단성(Val-시트룰린-아세틸) 링커에 의해 연결된 MMAF 페이로드를 갖는 항-PSMA ADC가 연구 기간에 걸쳐 온전한 상태로 유지됨을 시사한다. 비절단성 또는 짧은 절단성에 의해 연결된 MMAF 페이로드를 갖는 온전한 항-PSMA ADC의 반감기는 10일이다(도 1, 상위 2개 패널). 짧은 절단성 링커의 전신 안정성은 페이로드와 무관하다. 짧은 절단성 링커에 의해 연결된 MMAE 페이로드를 갖는 항-PSMA ADC에서 링커는 또한 10일 만큼 긴 온전한 항체 약물 접합체의 반감기를 가지며 연구 기간에 걸쳐 온전한 상태로 유지된다(도 1, 하단 오른쪽 패널). 그러나 대조적으로, 절단성(Val-Citruline-PEG1) 링커에 의해 연결된 MMAF 페이로드를 갖는 항-PSMA ADC의 링커는 초기에 절단되어 온전한 항체 약물 접합체의 반감기를 약 4일로 낮춘다(도 1, 하단 왼쪽 패널). F1은 항체에 의한 혈청 내 항체 약물 접합체의 검출을 나타낸다. F3은 독소-페이로드 링커에 의한 혈청 내 항체 약물 접합체의 검출을 나타낸다.
또한, 1 mg/kg 및 5 mg/kg 용량으로 래트에서 비절단성 MMAF를 갖는 항-PSMA ADC의 전신 안정성을 평가하였다. 본 연구는 링커와 세포 독성제는 연구 기간에 걸쳐 온전하게 유지되면서 항체 약물 접합체가 안정적임을 보였다(도 2).
비절단성 MMAF를 갖는 항-PSMA ADC 및 세포 독성제 없는 항-PSMA 항체(네이키드 항체로 나타냄)의 약동학적 프로파일을 비교하기 위해 래트에서 연구를 수행하였다. 약동학적 프로파일의 평가는 비절단성 MMAF를 갖는 항-PSMA ADC의 청소율이 항-PSMA 항체와 유사함을 시사한다(도 3). 이는 항체의 고유한 안정성이 p-아세틸 페닐알라닌 기반 부위 특이적 접합 및 약물 로딩에 의해 영향을 받지 않음을 시사한다.
항체 약물 접합체의 안정성은 세포 독성제로 인한 독성을 낮추는데 필수적이다. 전신 순환 중에 항체 약물 접합체로부터 세포 독성제의 절단을 방지하는 것은 독성을 낮추는 중요한 방법이다. 비절단성 및 짧은 절단성 링커를 갖는 개시된 항-PSMA ADC는 세포 독성제를 항체에 부착된 채로 유지하면서 전신 순환에서 상당히 안정하다. 이는 대부분의 항체 약물 접합체가 링커 및/또는 접합 부위로부터 떨어지는 약물 페이로드로 인해 불안정하여 세포 독성제로 인해 상당한 비-표적 관련 독성을 초래하기 때문에 중요하다. 항체 약물 접합체의 치료적 적용은 현재 이러한 독성으로 인해 제한된다. 임상 시험에서 대부분의 항체 약물 접합체는 세포 독성제에 기인할 수 있는 용량 제한 독성을 나타냈다. 이러한 독성 때문에, 항체 약물 접합체의 치료적 적용이 제한되었으며 현재까지 단지 4개의 항체 약물 접합체만이 치료적 적용을 위해 승인받았다. PSMA를 표적화하는 항체 약물 접합체에 의한 전립선암 치료는 심각한 독성과 치료 지수 부족으로 인해 현재까지 현장에서 어려운 것으로 입증되었다. 약물 동태학적 데이터는 본 발명의 항-PSMA ADC가 안정한 링커와 안정한 접합 화학의 고유한 조합에 의해 링커 및/또는 접합 부위로부터 약물 페이로드의 절단을 방지함으로써 세포 독성제로 인한 비특이적 독성의 한계를 극복할 수 있음을 시사한다. 본 발명의 신규 항-PSMA ADC를 생성하는데 사용되는 안정한 접합 화학은 특정 위치에서 항체에 도입된 천연적이지 않은/비-천연 아미노산, 예를 들어 p-아세틸 페닐알라닌과 히드록실아민 기로 유도체화된 약물-페이로드 링커 사이에서 케톡심 결합을 형성함으로써 달성될 수 있다.
실시예 7: 생체 내 효능 연구 - 전립선암 세포주가 이식된 마우스의 종양 이종 이식 모델에서 비절단성 및 짧은 절단성 MMAF를 갖는 항-PSMA ADC의 항-종양 효능을 시험하였다. 전이성 거세 저항성 전립선암(mCRPC) 관련 세포주인 C4-2는 ATCC에서 구입하고 ATCC 지침에 따라 시험관 내에서 증식시켰다. C4-2 인간 암종 이종 이식편을 피하 이식된 세포로 수컷 면역 손상 마우스에서 성장시켰다. 마우스의 체중을 재고 전자 캘리퍼를 사용하여 종양 부피를 측정하였다. 개별 종양 부피는 길이 x 너비 x 너비/2로 계산하였다. 평균 부피가 500 mm3인 혈관화된 종양(외관에 의해 결정됨)을 가진 마우스를 처리 그룹으로 무작위 배정하고 개별 체중에 따라 정맥 내 투여하였다. 항-PSMA ADC는 0.1, 1, 5, 및 10 mg/kg으로 투여하였다.
연구는 비절단성 및 짧은 절단성 MMAF를 갖는 항-PSMA ADC 둘 다가 종양 성장을 예방하는 데 효과적임을 시사한다. 5 mg/kg 및 10 mg/kg에서 항-PSMA ADC는 투약 후 37일 동안 종양 성장을 억제하는 데 효과적이었다. 1 mg/kg에서 항-PSMA ADC는 투약 후 35일 후에 재성장이 관찰될 때까지 종양 정체에 효과적이었다. 0.1 mg/kg의 투여량에서, 대조군과 유의한 차이가 관찰되지 않았다. 체중 분석은 처리된 동물이 또한 정상의 건강한 마우스로 체중이 증가했음을 보여주며 이는 항-PSMA ADC와 관련된 명백한 독성이 없음을 의미한다. 도 4a 및 4b는 비절단성 MMAF를 포함하는 본 발명의 항-PSMA ADC의 대표적인 종양 부피 및 체중 결과를 도시한다. 도 5a 및 5b는 짧은 절단성 MMAF를 포함하는 본 발명의 항-PSMA ADC의 대표적인 종양 부피 및 체중 결과를 도시한다.
실시예 8: 비절단성 MMAF를 사용한 약물 동태학적 연구 - 비절단성 MMAF를 사용하는 항-PSMA ADC의 단일 용량 후 종양 보유 및 종양 비보유 마우스에서 약물 동태학(PK)을 평가하였다. 마우스에 1 mg/kg 또는 5 mg/kg의 비절단성 MMAF ADC를 볼러스 정맥 내 주사로 주사하였다. 혈청을 수집하고 비절단성 MMAF ADC의 존재에 대해 분석하였다. 평가된 두 용량 수준(1 mg/kg 및 5 mg/kg)에서, 종양 비보유 및 종양 보유 마우스에서 항-PSMA ADC 농도에 대해 유사한 PK 프로파일이 관찰되었다(도 6a).
또한, 1.17 mg/kg, 3.86 mg/kg, 9.36 mg/kg, 11.7 mg/kg, 23.3 mg/kg 및 35.0 mg/kg의 다양한 농도에서 비절단성 MMAF를 사용하는 항-PSMA ADC의 단일 용량 투여 후 시노몰구스 원숭이에서 약물 동태학(PK)을 평가하였다(도 6b). 항-PSMA ADC는 정맥 내 주입(클리닉에서 의도된 투여 경로)으로 15 내지 20분 동안 투여하였다. 투약 후, 28일에 걸쳐 샘플을 수집하였다. 적격한 Meso Scale Discovery 방법을 사용하여 온전한 항-PSMA ADC에 대한 생물학적 분석을 수행하였다. 온전한 ADC 및 전체 항체에 대해 중첩되는 PK 프로파일이 관찰되었으며 이는 본 발명의 항-PSMA ADC가 전신 순환에서 매우 안정하다는 것을 확인해 준다. 낮은 용량(1.17 mg/kg 내지 3.86 mg/kg)에서 노출의 비선형 증가가 관찰되었으며, 이는 가능한 표적 매개 제거에 기인할 수 있었다. 용량의 추가 증가는 용량 증가에 따른 노출의 상대적으로 선형의 증가를 가져왔다. 청소율은 0.118 mL/h/kg 내지 0.304 mL/h/kg 범위로 느렸고 분포 부피는 44.2 mL/kg 내지 58.2 mL/kg 범위로 작았다. 그 결과 반감기는 129시간 내지 346시간의 범위로 길었으며, 용량 증가에 따라 반감기가 증가하는 일반적인 경향이 있었다. 전신 순환에서 항-PSMA ADC의 극도의 안정성은 ADC로부터 자유 페이로드의 방출과 관련된 표적 외 독성을 최소화하여 긴 반감기를 촉진함으로써 환자가 3 또는 4주 마다 1회의 투약 요법을 준수할 수 있도록 한다는 것이 주목된다.
실시예 9: 항-PSMA ADC 병용 요법 - 본 발명의 항-PSMA ADC는전립선암의 치료, 감소, 개선, 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 이의 치료, 감소, 개선, 또는 예방과 관련된, 호르몬 요법 또는 화학 요법을 포함하는 그러나 이에 제한되지는 않는 임의의 약물과 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 호르몬 요법인 엔잘루티미드는 시험관 내에서 세포 표면 PSMA 발현을 약 3배 증가시키는 것으로 입증되었다(Murga et al., Prostate 15;75(3):242-54, 2015). 추가로, 인간 PDX 전립선 종양을 보유하는 엔잘루타미드 처리된 마우스는 아우리스타틴 페이로드, MMAE를 갖는 PSMA ADC와 병용될 때 종양 성장 억제 증가를 나타냈다(DiPippo et al., Prostate 15;76(3):325-34, 2016). 당 업계에서 언급된 PSMA 발현의 증가에 기초하여, 본 발명자들은 MMAF 페이로드 및 엔잘루타미드와 함께 본 발명의 항-PSMA ADC를 사용하는 병용 요법의 생체 내 효과를 연구하였다.
전립선암 세포주가 이식된 마우스의 종양 이종 이식 모델에서 호르몬 요법 엔잘루타미드와 병용된 본 발명의 항-PSMA ADC의 항-종양 효능을 시험하였다. 전이성 거세 저항성 전립선암(mCRPC) 관련 세포주인 C4-2를 ATCC에서 구입하고 ATCC 지침에 따라 시험관 내에서 증식시켰다. C4-2 인간 암종 이종 이식편을 피하 이식된 세포로 수컷 면역 손상 마우스에서 성장시켰다. 또한, 환자 유래 이종 이식(PDX) 전립선 종양을 갖는 수컷 면역 손상 마우스 TM00298(Jackson Laboratories, 미국 캘리포니아주 소재)를 사용하는 두 번째 모델을 연구하였다.
마우스의 체중을 재고 전자 캘리퍼를 사용하여 종양 부피를 측정하였다. 개별 종양 부피는 길이 x 너비 x 너비/2로 계산하였다. 평균 부피가 500 mm3인 혈관화된 종양(외관에 의해 결정됨)을 갖는 마우스를 처리 그룹으로 무작위 배정하고 개별 체중에 따라 정맥 내 투여하였다. 항-PSMA ADC는 C4-2 모델에서 4주 동안 매주 0.5, 1, 및 3 mg/kg으로, PDX 모델에서 4주 동안 매주 1 및 3 mg/kg으로 정맥 내 투여하였다. 두 전립선 모델 모두에서 엔잘루티미드를 28일 동안 매일 10 mg/kg으로 경구 투여하였다. 두 전립선 모델 모두에서, 한 그룹의 마우스에 1mg/kg 항-PSMA ADC + 10 mg/kg 엔잘루타미드의 병용 요법을 투여하였다(도 7 및 8). PDX 모델의 경우 마우스에도 3mg/kg 항-PSMA ADC + 10 mg/kg 엔잘루타미드의 병용 요법을 투여하였다(도 8).
3mg/kg 및 1mg/kg의 항-PSMA ADC는 종양 억제가 엔잘루타미드 내성 모델에서 용량 반응성임을 나타냈다. 80% TGI(종양 성장 억제 백분율)로 3mg/kg에서 완전한 억제가 달성되었다. 37% TGI로 1mg/kg에서 부분 반응이 관찰되었다. 체중 분석은 처리된 동물이 정상의 건강한 마우스로 체중이 증가했음을 시사하며 이는 항-PSMA ADC와 관련된 명백한 독성이 없음을 의미한다. 도 7a 및 8a는 비절단성 MMAF를 포함하는 본 발명의 항-PSMA ADC의 대표적인 종양 부피 및 체중 결과를 도시한다(도 7b 및 8b).
이 연구는 엔잘루타미드와 병용된 본 발명의 항-PSMA ADC로 개선된 효능을 입증하였다. 단일 약물로서, 엔잘루타미드는 전립선암 세포에서 세포 표면 PSMA의 수준을 증가시켰다. 항-PSMA ADC와 엔잘루타미드의 병용은 단일 요법보다 더 큰 % TGI를 나타냈다. 이러한 연구는 비절단성 및 짧은 절단성 MMAF를 갖는 항-PSMA ADC 모두가 엔잘루타미드의 존재하에서 상승효과와 함께 종양 성장을 예방하는 데 효과적이었임을 시사한다.
실시예 10: 전립선암 요법을 위한 항-PSMA 항체 약물 접합체(ADC)의 안전성 및/또는 효능에 대한 인간 임상 시험
목적: 본 발명의 항-PSMA ADC를 포함하는 투여 조성물의 안전성 및 약물 동태학을 비교한다.
연구 설계: 이 연구는 전립선암 환자에서 I상, 단일 기관 또는 다기관, 개방 표지, 무작위 용량 증가 연구에 이어 II상 연구가 될 것이다. 환자는 연구 시작 전에 PSMA 유도체에 노출된 적이 없어야 한다. 환자는 시험 시작 2주 이내에 암치료를 받지 않아야 한다. 치료에는 화학 요법, 조혈 성장 인자, 및 단클론 항체와 같은 생물학적 요법의 사용이 포함된다. 환자는 이전 치료와 관련된 모든 독성으로부터 (등급 0 또는 1까지) 회복되어야 한다. 모든 피험자를 안전성에 대해 평가하고 약물 동태학적 분석을 위한 모든 혈액 수집물을 예정대로 수집한다. 모든 연구는 기관 윤리위원회의 승인과 환자 동의하에 수행한다.
I상: 환자는 3주 투약 주기마다 1회 항-PSMA ADC를 정맥 내로 받는다. 항-PSMA ADC의 용량은 아래에 개략적으로 나타낸 평가에 기초하여 독성으로 인해 보류 또는 수정될 수 있다. 허용되지 않는 독성이 없는 경우 3주마다 치료를 반복한다. 3 내지 6명의 환자 코호트는 항-PSMA ADC에 대한 최대 내약 용량(MTD: maximum tolerated dose)이 결정될 때까지 증가 용량의 항-PSMA ADC를 받는다. MTD는 환자 3명 중 2명 또는 6명 중 2명이 용량 제한 독성을 경험하는 용량보다 선행하는 용량으로 정의된다. 용량 제한 독성은 미국 국립 암 연구소(NCI: National Cancer Institute) 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE: Common Terminology for Adverse Events) 버전 3.0(2006년 8월 9일)에서 정한 정의 및 표준에 따라 결정한다.
II상: 환자는 I상에서 결정된 MTD에서 I상에서와 같이 항-PSMA ADC를 받는다. 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성이 없는 경우 여러 주기 동안 3주마다 치료를 반복한다. 연구 요법의 과정을 완료한 후 완전 또는 부분 반응을 달성한 환자는 추가 용량을 받을 수 있다. 6개의 연구 요법 과정을 완료한 후 2개월 이상 안정된 질환을 유지하는 환자는 원래 자격 기준을 충족시킨다면 질환 진행 시점에 6개의 추과 과정을 받을 수 있다.
혈액 샘플링: 항-PSMA ADC의 투여 전후에 직접적인 정맥 천자에 의해 순차적인 혈액을 채취한다. 혈청 농도 측정을 위한 정맥혈 샘플(5 mL)은 투여 전 약 10분 및 투약 후 대략 다음 시간에 수득한다: 0.5 및 4시간, 제1, 2, 4, 7, 14, 및 21일. 각 혈청 샘플은 두 개의 분액으로 나눈다. 모든 혈청 샘플은 -20℃에 보관한다. 혈청 샘플은 드라이 아이스 상에 배송한다.
약물 동태학: 환자는 치료 시작 전 및 연구 약물 투여 후 0.5 및 4시간, 제1, 2, 4, 7, 14 및 21일에 약물 동태학적 평가를 위해 혈장/혈청 샘플 수집을 거친다. 약물 동태학 매개 변수는 최신 버전의 Phoenix WinNonlin 소프트웨어를 사용하는 모델 독립적 방법에 의해 계산한다. 다음 약물 동태학적 매개 변수를 결정한다: 최고 혈청 농도(Cmax); 최대 혈청 농도까지의 시간(tmax); 선형 사다리꼴 규칙을 사용하여 계산된 시간 0부터 마지막 혈액 샘플링 시간까지의 농도-시간 곡선 아래 면적(AUC)(AUClast); 및 제거 속도 상수로부터 계산된 최종 제거 반감기(t1/2). 로그-선형 농도-시간 플롯의 말단 선형 영역에서 연속 데이터 포인트의 선형 회귀에 의해 제거 속도 상수를 추정한다. 각 치료에 대해 약물 동태학적 매개 변수의 평균, 표준 편차(SD) 및 변동 계수(CV)를 계산한다. 매개 변수 평균의 비율(보존된 제제/보존되지 않은 제제)을 계산한다.
병용 요법에 대한 환자 반응: 환자 반응은 X선, CT 스캔, 및 MRI를 사용한 영상화를 통해 평가하고, 연구 시작 전과 첫 번째 주기의 종료 시 영상화를 수행하며, 4주마다 또는 후속 주기의 종료시 추가 영상화를 수행한다. 영상화 방식은 암 유형과 타당성/가용성을 기준으로 하여 선택하며, 각 환자의 연구 과정에 걸쳐서뿐만 아니라 유사한 암 유형에 대해서도 동일한 영상화 방식을 사용한다. 반응률은 RECIST 기준을 사용하여 결정한다(Therasse et al, J. Natl. Cancer Inst. 92(3):205-16, 2000; 월드와이드 웹 http://ctep.cancer.gov/forms/TherasseRECISTJNCI.pdf). 환자는 또한 암/종양 생검을 거쳐 유세포 분석, 웨스턴 블롯 및 IHC에 의해 전구 암세포 표현형 및 클론 생성 성장에서의 변화 및 FISH에 의한 세포 유전학에서의 변화를 평가한다. 연구 치료 완료 후, 환자를 4주 동안 주기적으로 추적한다.
SEQUENCE LISTING <110> Ambrx, Inc <120> Novel Anti-Prostate-Specific Membrane Antigen (PSMA) Antibody Drug Conjugates <130> AMBX-0225.00PCT <150> 62/650,277 <151> 2018-03-29 <160> 17 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Heavy Chain Variable Region <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Light Chain Variable Region <400> 2 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 <210> 3 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Light Chain Variable Region <400> 3 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 <210> 4 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Light Chain Variable Region <400> 4 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 <210> 5 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Light Chain Variable Region <400> 5 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 <210> 6 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric Heavy Chain Variable Region <400> 6 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 7 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric Light Chain Variable Region <400> 7 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Ile Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 <210> 8 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Heavy Chain <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Light Chain <400> 9 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 10 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Heavy Chain <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 11 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Light Chain <400> 11 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 12 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Heavy Chain <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 13 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Light Chain <400> 13 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 14 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Heavy Chain <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-PSMA Variant - Light Chain <400> 15 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric Anti-PSMA Antibody Variant - Heavy Chain <400> 16 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Glu Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ala Gly Trp Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 17 <211> 190 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric Anti-PSMA Antibody Variant - Light Chain <400> 17 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Ile Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 180 185 190

Claims (24)

  1. 서열 번호 8, 10, 12, 또는 14로부터 선택된 중쇄 서열 및 서열 번호 9, 11, 13, 또는 15로부터 선택된 경쇄 서열을 포함하는 항-전립선 특이적 막 항원 항체(항-PSMA),
  2. 제1항에 있어서, 중쇄는 서열 번호 1로부터 선택된 가변 영역 서열을 포함하고 경쇄는 서열 번호 2, 3, 4, 또는 5의 군으로부터 선택된 가변 영역 서열을 포함하는 것인 항-PSMA 항체.
  3. 제1항에 있어서, 중쇄 서열은 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 포함하는 것인 항-PSMA 항체.
  4. 제3항에 있어서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 카르보닐 기, 아미노옥시 기, 히드라진 기, 히드라지드 기, 세미카르바지드 기, 아지드 기, 또는 알킨 기를 포함하는 것인 항-PSMA 항체.
  5. 제4항에 있어서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌, p-니트로페닐알라닌, p-술포티로신, p-카르복시페닐알라닌, o-니트로페닐알라닌, m-니트로페닐알라닌, p-보로닐 페닐알라닌, o-보로닐페닐알라닌, m-보로닐페닐알라닌, p-아미노페닐알라닌, o-아미노페닐알라닌, m-아미노페닐알라닌, p-아실페닐알라닌, o-아실페닐알라닌, m-아실페닐알라닌, p-OMe 페닐알라닌, o-OMe 페닐알라닌, m-OMe 페닐알라닌, p-술포페닐알라닌, o-술포페닐알라닌, m-술포페닐알라닌, 5-니트로 His, 3-니트로 Tyr, 2-니트로 Tyr, 니트로 치환 Leu, 니트로 치환 His, 니트로 치환 De, 니트로 치환 Trp, 2-니트로 Trp, 4-니트로 Trp, 5-니트로 Trp, 6-니트로 Trp, 7-니트로 Trp, 3-아미노티로신, 2-아미노티로신, O-술포티로신, 2-술포옥시페닐알라닌, 3-술포옥시페닐알라닌, o-카르복시페닐알라닌, m-카르복시페닐알라닌, p-아세틸-L-페닐알라닌, p-프로파르길-페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, L-3-(2-나프틸)알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcβ-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-요오도-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌 또는 p-프로파르길옥시-페닐알라닌인 항-PSMA 항체.
  6. 제5항에 있어서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌인 항-PSMA 항체.
  7. 표 1 내지 3으로부터 선택된 적어도 하나의 약물-링커에 접합된 제1항에 따른 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 인간화 항-PSMA 항체를 포함하는 항체 약물 접합체로서, 접합은 중쇄 서열에 도입된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 일어나는 것인 항체 약물 접합체.
  8. 제7항에 있어서, 약물-링커는 세포 독성제를 포함하는 것인 항체 약물 접합체.
  9. 제8항에 있어서, 세포 독성제는 돌라스타틴, 돌라스타틴 유도체 또는 이의 유사체인 항체 약물 접합체.
  10. 제9항에 있어서, 돌라스타틴, 돌라스타틴 유도체 또는 유사체는 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF) 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)로부터 선택된 모노메틸 아우리스타틴인 항체 약물 접합체.
  11. 제10항에 있어서, 모노메틸 아우리스타틴은 절단성 MMAE 또는 MMAF, 비절단성 MMAE 또는 MMAF, 짧은 절단성 MMAE 또는 MMAF인 항체 약물 접합체.
  12. PSMA 발현 암 또는 암세포에서 종양 성장 또는 진행을 감소 또는 억제하는 방법으로서, PSMA 발현 암 또는 암세포를 유효량의 제7항의 항체-약물 접합체와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, PSMA 발현 암 또는 암세포를 유효량의 치료제와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  14. 제12항에 있어서, 화학 치료제, 호르몬제, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 호르몬제는 엔잘루타미드인 방법.
  16. PSMA 발현 암세포 또는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법으로서, PSMA 발현 암 또는 암세포를 치료하기 위해 유효량의 항체-약물 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 항체-약물 접합체는 항체에 도입된 비-천연적으로 코딩된 아미노산을 통해 약물-링커에 접합된 제1항의 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 PSMA 항체를 포함하고; 약물-링커는 표 1 내지 3으로부터 선택되는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 치료 유효량의 항-PSMA 항체 약물 접합체 및 치료제를 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는 PSMA 관련 질환 또는 암을 가진 대상체를 치료하기 위한 방법.
  18. 제16항에 있어서, 치료제는 화학 치료제, 호르몬제, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합인 방법.
  19. 제7항의 항체 약물 접합체 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 보조제, 결합제, 완충제, 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 화학 치료제, 호르몬제, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 약학 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약으로서 사용하기 위한 약학 조성물.
  22. 제20항에 있어서, 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약으로서 사용하기 위한 약학 조성물.
  23. 서열 번호 1 내지 17 중 어느 하나를 코딩하는 핵산.
  24. 제23항의 핵산을 포함하는 벡터.
KR1020207030091A 2018-03-29 2019-03-29 인간화 항-전립선 특이적 막 항원(psma) 항체 약물 접합체 KR20200138759A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862650277P 2018-03-29 2018-03-29
US62/650,277 2018-03-29
PCT/US2019/025057 WO2019191728A1 (en) 2018-03-29 2019-03-29 Humanized anti-prostate-specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20200138759A true KR20200138759A (ko) 2020-12-10

Family

ID=66103056

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207030091A KR20200138759A (ko) 2018-03-29 2019-03-29 인간화 항-전립선 특이적 막 항원(psma) 항체 약물 접합체

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210015940A1 (ko)
EP (1) EP3773910A1 (ko)
JP (1) JP2021519076A (ko)
KR (1) KR20200138759A (ko)
CN (2) CN117924503A (ko)
AU (1) AU2019245444A1 (ko)
BR (1) BR112020019611A2 (ko)
CA (1) CA3094985A1 (ko)
IL (1) IL277357A (ko)
MX (1) MX2020010104A (ko)
SG (1) SG11202009670RA (ko)
WO (1) WO2019191728A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021086917A1 (en) * 2019-10-29 2021-05-06 The Cleveland Clinic Foundation Psma-targeting imaging agents
AU2021206218A1 (en) * 2020-01-06 2022-07-07 Cytomx Therapeutics, Inc. Auristatin-related compounds, conjugated auristatin-related compounds, and methods of use thereof
US20230374150A1 (en) * 2020-10-12 2023-11-23 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-psma antibodies and uses thereof
WO2024077277A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Ambrx, Inc. Drug linkers and antibody conjugates thereof

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2504010B1 (fr) 1981-04-15 1985-10-25 Sanofi Sa Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation
US4542225A (en) 1984-08-29 1985-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
US4659839A (en) 1984-10-10 1987-04-21 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for radiolabeled antibody fragments
DE3680924D1 (de) 1985-01-14 1991-09-26 Neorx Corp Metall-radionuklid markiertes protein fuer diagnose und therapie.
US4680338A (en) 1985-10-17 1987-07-14 Immunomedics, Inc. Bifunctional linker
US4699784A (en) 1986-02-25 1987-10-13 Center For Molecular Medicine & Immunology Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
US6107090A (en) * 1996-05-06 2000-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of prostate cancer with antibodies to extracellur PSMA domains
US6451986B1 (en) 1998-06-22 2002-09-17 Immunex Corporation Site specific protein modification
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
KR20070007086A (ko) 2004-02-02 2007-01-12 암브룩스, 인코포레이티드 변형된 인간의 4 개의 나선형 다발 폴리펩티드 및 이의용도
WO2006050262A2 (en) 2004-11-01 2006-05-11 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modification of biomolecules
AU2015203742B2 (en) * 2007-06-26 2016-12-01 The Johns Hopkins University Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), biological evaluation, and use as imaging agents
NZ600382A (en) 2008-07-23 2013-11-29 Ambrx Inc Modified bovine G-CSF polypeptides and their uses
KR102356286B1 (ko) 2011-05-27 2022-02-08 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산 연결된 돌라스타틴 유도체를 함유하는 조성물, 이를 수반하는 방법, 및 용도
CN108727466B (zh) * 2012-06-07 2023-04-28 Ambrx公司 ***特异性膜抗原抗体药物结合物
KR20150023729A (ko) * 2012-06-14 2015-03-05 암브룩스, 인코포레이티드 핵 수용체 리간드 폴리펩티드에 접합된 항-psma 항체
CA2926215A1 (en) * 2013-10-06 2015-04-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified pseudomonas exotoxin a
CN109311996B (zh) * 2016-06-06 2023-11-28 阿布泽纳(英国)有限公司 抗体、其用途及其缀合物
GB201614162D0 (en) * 2016-08-18 2016-10-05 Polytherics Ltd Antibodies, uses thereof and conjugates thereof
WO2018223108A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Ambrx, Inc. Methods and compositions for promoting non-natural amino acid-containing protein production

Also Published As

Publication number Publication date
CN111989138A (zh) 2020-11-24
AU2019245444A1 (en) 2020-10-01
BR112020019611A2 (pt) 2021-01-05
CA3094985A1 (en) 2019-10-03
IL277357A (en) 2020-11-30
WO2019191728A1 (en) 2019-10-03
CN117924503A (zh) 2024-04-26
CN111989138B (zh) 2024-02-09
EP3773910A1 (en) 2021-02-17
MX2020010104A (es) 2020-11-06
US20210015940A1 (en) 2021-01-21
JP2021519076A (ja) 2021-08-10
SG11202009670RA (en) 2020-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI804499B (zh) Ror1抗體免疫接合物
US10596270B2 (en) Anti-folate receptor antibody conjugates, compositions comprising anti-folate receptor antibody conjugates, and methods of making and using anti-folate receptor antibody conjugates
CN111989138B (zh) 人源化抗***特异性膜抗原(psma)抗体药物缀合物
TW201116300A (en) DR5 Ligand Drug Conjugates
TW201347775A (zh) Ｄｒ５配體藥物結合物
WO2022011075A1 (en) Novel ror1 antibody immunoconjugates
CN112512587A (zh) 抗体药物缀合物和微管蛋白抑制剂的组合
CN110575547A (zh) 靶向于tf的抗体-药物偶联物及其制法和用途
CN114174317A (zh) 鹅膏毒素抗体-药物缀合物及其用途
CN110575548A (zh) 靶向于cd73的抗体-药物偶联物及其制法和用途
CN116528911A (zh) 抗cd73抗体、抗体偶联药物及其用途
JP2018515457A (ja) カリケアマイシン構築物および使用方法
KR20230026983A (ko) 알파-엔올라아제 항체들을 포함하는 약물 접합체 및 그의 이용
AU2018326878A1 (en) Anti-EGFR antibody drug conjugates (ADC) and uses thereof
JP2022500454A (ja) 抗葉酸受容体抗体コンジュゲートによる併用療法
CN113842467A (zh) 用于抗体与药物偶联体（adc）制备的中间体及其制备方法和应用
BR112019027448B1 (pt) Imunoconjugado compreendendo um anticorpo conjugado a uma porção de fármaco citotóxica, composição farmacêutica e uso dos mesmos