KR20200138254A

KR20200138254A - C-terminal antibody variant

Info

Publication number: KR20200138254A
Application number: KR1020207028398A
Authority: KR
Inventors: 저 후앙; 제닛 르안 스티븐스; 그레고리 플린; 질란 포도르; 마크 다리스
Original assignee: 암젠 인크
Priority date: 2018-03-30
Filing date: 2019-03-29
Publication date: 2020-12-09
Also published as: MA52217A; JP2021519754A; US20210079082A1; ZA202005419B; WO2019191534A1; CA3093457A1; CN112166120A; MX2020010092A; SG11202008206TA; AU2019243595A1; BR112020020080A2; US11858983B2; US11466079B2; JP2024037881A; TW201942131A; US20230015713A1; IL276911A; JP7405764B2; CL2020002459A1; EP3774879A1

Abstract

본 발명은 일반적으로 C-말단 변형을 갖는 항-스클레로스틴 항체 및 이러한 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates generally to anti-scleostin antibodies with C-terminal modifications and compositions comprising such antibodies.

Description

C-말단 항체 변이체C-terminal antibody variant

관련 출원과의 상호 참조 Cross-reference with related applications

본 출원은 2018년 3월 30일자로 출원된 미국 가출원 제62/650,762호 및 2019년 3월 1일자로 출원된 미국 가출원 제62/812,741호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이들의 개시 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. This application claims the benefit of priority to U.S. Provisional Application No. 62/650,762 filed March 30, 2018 and U.S. Provisional Application No. 62/812,741 filed March 1, 2019, the disclosures of which are Its entirety is incorporated herein by reference.

본 발명은 일반적으로 하나 이상의 C-말단 변형을 갖는 항-스클레로스틴 항체 및 이러한 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. The present invention relates generally to anti-sclerostin antibodies having one or more C-terminal modifications and compositions comprising such antibodies.

전자적으로 제출된 자료의 원용Use of electronically submitted data

본 출원과 동시에 제출되고 다음과 같이 확인되는 컴퓨터 판독가능 뉴클레오티드/아미노산 서열 목록은 그 전체가 참고로 포함된다: 2019년 3월 21일자로 생성되고 21,006 바이트이고 파일명이 "52080_SeqListing.txt"인 ASCII(텍스트) 파일.A list of computer-readable nucleotide/amino acid sequences filed concurrently with this application and identified as follows is incorporated by reference in its entirety: ASCII (generated March 21, 2019, 21,006 bytes, file name "52080_SeqListing.txt") Text) file.

원용Wonyong

하기 출원은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다: 2012년 8월 2일자로 출원된 국제 특허 공개 제PCT/US2012/049331호(2011년 8월 4일자로 출원된 미국 가출원 제61/515,191호의 우선권을 주장함); 2006년 4월 25일자로 출원된 미국 특허 출원 제11/410,540호(2006년 4월 17일자로 출원된 미국 가출원 제60/792,645호, 2006년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 제60/782,244호, 2006년 2월 24일자로 출원된 미국 가출원 제60/776,847호 및 2005년 5월 3일자로 출원된 미국 가출원 제60/677,583호의 우선권을 주장함); 및 2006년 4월 25일자로 출원된 미국 특허 출원 제11/411,003호(미국 특허 제7,592,429호로 허여됨)(2006년 4월 17일자로 출원된 미국 가출원 제60/792,645호, 2006년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 제60/782,244호, 2006년 2월 24일자로 출원된 미국 가출원 제60/776,847호 및 2005년 5월 3일자로 출원된 미국 가출원 제60/677,583호의 우선권을 주장함). 하기 출원도 본원에 참고로 포함된다: 2008년 9월 17일자로 출원된 미국 특허 출원 제12/212,327호(2007년 9월 17일자로 출원된 미국 가특허 제60/973,024호의 우선권을 주장함); 및 2007년 12월 14일자로 출원된 미국 가출원 제61/013,917호의 우선권을 주장하는, 2008년 12월 15일자로 출원된 국제 특허 출원 제PCT/US08/86864호의 35 U.S.C. § 371에 따른 미국 국내 단계 진입 출원인, 2010년 6월 29일자로 출원된 미국 특허 출원 제12/811,171호. The following applications are incorporated herein by reference in their entirety: International Patent Publication No. PCT/US2012/049331, filed Aug. 2, 2012 (priority to U.S. Provisional Application No. 61/515,191, filed Aug. 4, 2011) Claim); U.S. Patent Application No. 11/410,540 filed April 25, 2006 (U.S. Provisional Application No. 60/792,645 filed April 17, 2006; U.S. Provisional Application No. 60/782,244 filed March 13, 2006 US Provisional Application No. 60/776,847 filed Feb. 24, 2006, and US Provisional Application No. 60/677,583 filed May 3, 2005); And U.S. Patent Application No. 11/411,003, filed April 25, 2006, issued as U.S. Patent No. 7,592,429 (U.S. Provisional Application No. 60/792,645, filed April 17, 2006, March 13, 2006. U.S. Provisional Application No. 60/782,244 filed dated, U.S. Provisional Application No. 60/776,847 filed Feb. 24, 2006, and U.S. Provisional Application No. 60/677,583 filed May 3, 2005). The following applications are also incorporated herein by reference: U.S. Patent Application No. 12/212,327, filed Sep. 17, 2008 (claims priority to U.S. Provisional Patent No. 60/973,024, filed Sep. 17, 2007); And 35 U.S.C. of International Patent Application No. PCT/US08/86864 filed Dec. 15, 2008, claiming priority to US Provisional Application No. 61/013,917 filed Dec. 14, 2007. US domestic phase entry applicant under § 371, US Patent Application No. 12/811,171 filed June 29, 2010.

골 무기질 함량의 손실은 매우 다양한 병태에 의해 야기될 수 있으며, 심각한 의학적 문제를 초래할 수 있다. 예를 들어, 골다공증은 인간을 쇠약하게 만드는 질환이며, 병에 걸린 개체에서의 골격 골 질량 및 무기질 밀도의 현저한 감소, 뼈의 구조적 열화(뼈의 마이크로아키텍처(microarchitecture)의 분해 및 이에 상응하는 뼈 취약성 증가(즉, 뼈 강도 감소)를 포함함), 및 골절 감수성을 특징으로 한다. 골다공증은 골 질량 감소로 인한 골절 위험의 증가로 간주되어 왔지만, 현재 이용가능한 골격 장애 치료법 중 성인의 골 밀도를 증가시킬 수 있는 치료법은 거의 없으며 현재 이용가능한 대부분의 치료법은 주로, 새로운 골 형성을 자극하는 것이 아니라 추가의 골 흡수를 억제함으로써 작용한다. 에스트로겐은 현재 골 손실을 지연시키기 위해 처방되고 있다. 그러나 환자가 임의의 장기적인 이익을 얻는지의 여부, 및 에스트로겐이 75세가 넘는 환자에게 영향을 미치는지의 여부에 대한 약간의 논란이 있다. 더욱이, 에스트로겐의 사용은 유방암 및 자궁내막암의 위험을 증가시키는 것으로 믿어진다. 칼시토닌, 비타민 K를 포함하는 오스테오칼신, 또는 비타민 D가 있거나 없는 고용량의 식이 칼슘도 폐경기 여성을 위하여 제안된 바 있다. 그러나 고용량의 칼슘은 종종 원치 않는 위장 부작용이 있으며 혈청 및 뇨 칼슘 수준이 계속 모니터링되어야 한다(예를 들어, 문헌[Khosla and Riggs, Mayo Clin. Proc. 70:978982, 1995]). 골다공증에 대한 다른 현재의 치료적 접근법은 비스포스포네이트(예를 들어 Fosamax^TM, Actonel^TM, Bonviva^TM, Zometa^TM, 올파드로네이트, 네리드로네이트, 스켈리드, 보네포스), 부갑상선 호르몬, 칼시라이틱스(calcilytics), 칼슘 모방체(예를 들어 시나칼세트), 스타틴, 동화성 스테로이드, 란탄 및 스트론튬 염, 및 플루오르화나트륨을 포함한다. 그러나 이러한 치료제는 종종 바람직하지 않은 부작용과 관련이 있다(문헌 [Khosla and Riggs, 상기 문헌] 참조).Loss of bone mineral content can be caused by a wide variety of conditions and can lead to serious medical problems. For example, osteoporosis is a debilitating disease in humans, and a significant decrease in skeletal bone mass and mineral density in affected individuals, structural deterioration of bones (decomposition of the microarchitecture of the bone and corresponding bone fragility). Increased (i.e., reduced bone strength), and fracture susceptibility. Osteoporosis has been regarded as an increased risk of fractures due to decreased bone mass, but few currently available skeletal disorders treatments can increase bone density in adults, and most of the currently available treatments primarily stimulate new bone formation. It works by inhibiting further bone resorption, not by doing it. Estrogen is currently being prescribed to delay bone loss. However, there is some controversy as to whether patients receive any long-term benefits, and whether estrogens affect patients over 75 years of age. Moreover, the use of estrogen is believed to increase the risk of breast and endometrial cancer. High doses of dietary calcium with or without calcitonin, osteocalcin with vitamin K, or vitamin D have also been proposed for postmenopausal women. However, high doses of calcium often have unwanted gastrointestinal side effects and serum and urinary calcium levels should continue to be monitored (eg, Khosla and Riggs, Mayo Clin. Proc. 70:978982, 1995). Other current therapeutic approaches for osteoporosis include bisphosphonates (e.g. Fosamax ^TM , Actonel ^TM , Bonviva ^TM , Zometa ^TM , olpadronate, neridronate, skeleton, bonnefos), parathyroid hormone, calciritics ( calcilytics), calcium mimetics (eg cinacalcet), statins, anabolic steroids, lanthanum and strontium salts, and sodium fluoride. However, these treatments are often associated with undesirable side effects (see Khosla and Riggs, supra).

골 과다성장 및 매우 치밀한 골을 특징으로 하는 골격 질환인 경화협착증(sclerosteosis)에는 SOST 유전자 생성물인 스클레로스틴이 없다(문헌[Brunkowet al., Am. J. Hum. Genet., 68:577-589, 2001]; 문헌[Balemanset al., Hum. Mol. Genet., 10:537-543, 2001]). 인간 스클레로스틴의 아미노산 서열은 문헌[Brunkowet al. 동일 문헌]에 보고되어 있고, 본원에서 서열 번호 1로 개시되어 있다. 스클레로스틴은 골 밀도 증가를 매개하는 귀중한 표적이다. Sclerosteosis, a skeletal disease characterized by bone overgrowth and very dense bone, lacks the SOST gene product, sclerostin (Brunkow et al ., Am. J. Hum. Genet., 68:577 -589, 2001]; Balemans et al ., Hum. Mol. Genet., 10:537-543, 2001). The amino acid sequence of human sclerostin is described in Brunkow et al . The same document], and disclosed herein as SEQ ID NO: 1. Sclerostin is a valuable target mediating increased bone density.

일 양태에서, 서열 번호 1의 스클레로스틴에 특이적으로 결합하고 서열 번호 2~7에 개시된 6개의 CDR의 세트를 포함하는 항체가 본원에 개시되며, 여기서, 항체는 다음을 포함하는 중쇄를 포함한다: 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8). 일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 9에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 10에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 제1 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 제1 중쇄 및 야생형 중쇄 아미노산 서열(즉, C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly이 결여됨)을 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 12에 개시된 경쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 13에 개시된 중쇄 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 12에 개시된 경쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 14에 개시된 중쇄 아미노산 서열을 포함한다. In one embodiment, disclosed herein is an antibody that specifically binds to sclerostin of SEQ ID NO: 1 and comprises a set of 6 CDRs disclosed in SEQ ID NOs: 2-7, wherein the antibody comprises a heavy chain comprising: Contains: amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly at the C-terminus of the heavy chain (SEQ ID NO: 8). In some embodiments, the antibody comprises a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10. In some embodiments, the antibody comprises the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly-Lys (SEQ ID NO: 11) at the C-terminus of the heavy chain. In some embodiments, the antibody comprises a first heavy chain and wild type heavy chain amino acid sequence comprising the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the first heavy chain (i.e., C-terminal Pro-Ala- Arg-Gly lacking) a second heavy chain. In some embodiments, the antibody comprises the light chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and the heavy chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13. In some embodiments, the antibody comprises the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly-Lys (SEQ ID NO: 11) at the C-terminus of the heavy chain. In some embodiments, the antibody comprises the light chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and the heavy chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14.

일부 실시 형태에서, 항체의 중쇄들 중 하나의 C-말단이 아미드화된다(즉, 항체가 단일 아미드화됨). 일부 실시 형태에서, 항체의 두 중쇄의 C-말단이 아미드화된다(즉, 항체는 이중 아미드화됨). In some embodiments, the C-terminus of one of the heavy chains of the antibody is amidated (ie, the antibody is single amidated). In some embodiments, the C-terminus of the two heavy chains of the antibody is amidated (ie, the antibody is double amidated).

본원에 개시된 항체의 집단 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물도 본 발명에 의해 제공된다. 일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 서열 번호 1의 스클레로스틴에 특이적으로 결합하는 항체의 혼합물(여기서, 항체의 혼합물은 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 갖는 중쇄를 포함하는 항체의 집단을 포함함) 및 제약상 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조성물 중 항체의 약 3~5%는 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 갖는 중쇄를 포함하는 항체의 집단이다. 일부 양태에서, 항체 집단의 70% 미만이 하나의 중쇄 또는 두 중쇄에서 아미드화된다. 일부 양태에서, 항체 집단의 전부 또는 일부는 선택적으로 아미드화된, C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하는 단일 중쇄를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 집단의 전부 또는 일부는 두 중쇄 모두에서 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하고, 두 중쇄 모두 선택적으로 아미드화된다. 선택적으로, 항체 집단의 약 35% 미만이 단일 아미드화되고/되거나 항체 집단의 약 35% 미만이 두 중쇄에서 아미드화되고/되거나 항체 집단의 약 35% 미만이 아미드화되지 않은 중쇄를 포함한다. 이와 관련하여, 다양한 양태에서, 항체 집단의 약 33%가 아미드화되지 않고, 항체 집단의 약 33%가 하나의 아미드화 중쇄를 포함하고, 항체 집단의 약 33%가 2개의 아미드화 중쇄를 포함한다. Pharmaceutical compositions comprising a population of antibodies disclosed herein and a pharmaceutically acceptable carrier are also provided by the present invention. In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises a mixture of antibodies that specifically bind to sclerostin of SEQ ID NO: 1, wherein the mixture of antibodies is the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly at the C-terminus of the heavy chain (SEQ ID NO: 8)) and a pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, about 3-5% of the antibodies in the composition are a population of antibodies comprising a heavy chain having the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the heavy chain. In some embodiments, less than 70% of the population of antibodies is amidated in one or both heavy chains. In some embodiments, all or part of the antibody population comprises a single heavy chain comprising a C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence, which is optionally amidated. In some embodiments, all or part of the antibody population comprises a C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence in both heavy chains, and both heavy chains are selectively amidated. Optionally, less than about 35% of the antibody population is single amidated and/or less than about 35% of the antibody population is amidated in both heavy chains and/or less than about 35% of the antibody population comprises unamidated heavy chains. In this regard, in various embodiments, about 33% of the antibody population is not amidated, about 33% of the antibody population comprises one amidated heavy chain, and about 33% of the antibody population comprises two amidated heavy chains. do.

일부 실시 형태에서, 조성물은 칼슘 염, 아세테이트 완충제, 폴리올 및 계면활성제를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 아세테이트 염은 아세트산칼슘을 포함하고, 아세테이트 완충제는 아세트산나트륨을 포함하고, 폴리올은 수크로스를 포함하고 계면활성제는 폴리소르베이트 20을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조성물은 55 mM의 아세테이트, 13 mm의 칼슘, 6.0%(w/v)의 수크로스 및 0.006%(w/v)의 폴리소르베이트 20(pH 5.2)을 포함한다. In some embodiments, the composition further comprises a calcium salt, an acetate buffer, a polyol, and a surfactant. In some embodiments, the acetate salt comprises calcium acetate, the acetate buffer comprises sodium acetate, the polyol comprises sucrose, and the surfactant comprises polysorbate 20. In some embodiments, the composition comprises 55 mM acetate, 13 mm calcium, 6.0% (w/v) sucrose and 0.006% (w/v) polysorbate 20 (pH 5.2).

또한, 골 무기질 밀도의 증가를 필요로 하는 대상체에서 골 무기질 밀도를 증가시키는 방법이 본 발명에 의해 제공되며, 본 방법은 대상체에서 골 무기질 밀도를 증가시키는 데 효과적인 양의 본원에 개시된 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. In addition, a method of increasing bone mineral density in a subject in need thereof is provided by the present invention, wherein the method provides a composition disclosed herein in an amount effective to increase bone mineral density in the subject. And administering.

도 1은 야생형 로모소주맙의 C-말단의 일부분을 코딩하는 핵산 서열을 제공한다.
도 2는 로모소주맙 C-말단 변이체(PARG 변이체)의 C-말단의 일부분을 코딩하는 핵산 서열을 제공한다.
도 3은 Lys-C에 의해 소화되고 LC/MS 펩티드 맵핑에 의해 분석된, 야생형 로모소주맙(점선)과 로모소주맙 PARG 변이체(실선)가 중첩된 UV 프로파일을 확대한 것을 나타내는 그래프이다.
도 4는 카르복시 펩티다아제 처리된 로모소주맙 PARG 변이체(점선)와 미처리된 로모소주맙 PARG 변이체(실선)가 중첩된 양이온 교환(CEX) 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 5는 시간의 함수로 나타낸 피하 주사의 가위 모델(Scissor model)로부터의 회복률(%)을 나타내는 그래프이다. 야생형 로모소주맙(원형) 및 PARG C-말단 변이형 로모소주맙은 시뮬레이션된 주사 부위에 대해 상이한 속도로 확산된다.
도 6은 야생형 로모소주맙 및 PARG C-말단 변이형 로모소주맙 둘 다가 FcRn에 유사하게 결합하고 FcRn 결합이 PARG 돌연변이에 의해 영향을 받지 않음을 나타내는 그래프이다.
도 7은 FcγRIIa(131H)에 대한 PARG C-말단 변이형 로모소주맙의 상대적 결합성이 야생형 로모소주맙보다 훨씬 더 높았음을 나타내는 그래프이다. 1 provides a nucleic acid sequence encoding a portion of the C-terminus of wild-type lomosozumab.
Figure 2 provides a nucleic acid sequence encoding a portion of the C-terminus of the Lomosozumab C-terminal variant (PARG variant).
3 is a graph showing an enlarged UV profile of the wild-type lomosozumab (dotted line) and the lomosozumab PARG variant (solid line), digested by Lys-C and analyzed by LC/MS peptide mapping.
4 is a graph showing a cation exchange (CEX) profile in which the carboxy peptidase-treated lomosozumab PARG variant (dotted line) and the untreated lomosozumab PARG variant (solid line) overlap.
5 is a graph showing the recovery rate (%) from a scissor model of subcutaneous injection as a function of time. Wild type lomosozumab (round) and PARG C-terminal variant lomosozumab spread at different rates for the simulated injection site.
6 is a graph showing that both wild-type lomosozumab and PARG C-terminal variant lomosozumab bind similarly to FcRn and that FcRn binding is not affected by PARG mutations.
7 is a graph showing that the relative binding of PARG C-terminal variant lomosozumab to FcγRIIa (131H) was much higher than that of wild-type lomosozumab.

본 발명은 스클레로스틴에 특이적으로 결합하는 항체를 제공하며, 여기서, 항체는 중쇄의 C-말단에서 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 C-말단에서 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 제1 중쇄 및 야생형 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 C-말단에서 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 항체(또는 항체 혼합물)를 포함하는 제약 조성물 및 항체 사용 방법도 제공된다. The present invention provides an antibody that specifically binds to sclerostin, wherein the antibody comprises a heavy chain comprising an amino acid sequence comprising Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the heavy chain. Include. In some embodiments, the antibody comprises a first heavy chain comprising an amino acid sequence comprising Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the heavy chain and a second heavy chain comprising a wild-type heavy chain amino acid sequence. . In some embodiments, the antibody comprises an amino acid sequence comprising Pro-Ala-Arg-Gly-Lys (SEQ ID NO: 11) at the C-terminus of the heavy chain. Pharmaceutical compositions comprising the antibody (or antibody mixture) and methods of using the antibody are also provided.

"항-스클레로스틴 항체" 또는 "스클레로스틴에 결합하는 항체"는 서열 번호 1의 스클레로스틴 또는 이의 일부분에 결합하는 항체이다. 재조합 인간 스클레로스틴/SOST는 예를 들어, R&D Systems(미국 미네소타주 미니애폴리스 소재; 2006 카탈로그 번호 l406-ST-025)로부터 구매가능하다. 미국 특허 제6,395,511호 및 미국 특허 제6,803,453호 및 미국 특허 출원 공개 공보 제2004/0009535호 및 미국 특허 출원 공개 공보 제2005/0106683호에는 일반적으로 항-스클레로스틴 항체가 언급되어 있다. 본 발명의 맥락에서 사용하기에 적합한 스클레로스틴 항체의 예가 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0110747호 및 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0072797호에 또한 기술되어 있으며, 이들은 본원에 참고로 포함된다. 스클레로스틴 항체를 생성하기 위한 재료 및 방법에 관한 추가 정보는 미국 특허 출원 공개 공보 제20040158045호(본원에 참고로 포함됨)에서 찾을 수 있다. An “anti-sclerostin antibody” or “an antibody that binds to sclerostin” is an antibody that binds to sclerostin of SEQ ID NO: 1 or a portion thereof. Recombinant human sclerostin/SOST is commercially available, for example, from R&D Systems (Minneapolis, Minnesota, USA; 2006 Catalog No. l406-ST-025). U.S. Patent No. 6,395,511 and U.S. Patent No. 6,803,453 and U.S. Patent Application Publication No. 2004/0009535 and U.S. Patent Application Publication No. 2005/0106683 generally mention anti-scleostin antibodies. Examples of sclerostin antibodies suitable for use in the context of the present invention are also described in US Patent Application Publication No. 2007/0110747 and US Patent Application Publication No. 2007/0072797, which are incorporated herein by reference. . Additional information regarding materials and methods for generating sclerostin antibodies can be found in US Patent Application Publication No. 20040158045, which is incorporated herein by reference.

용어 "항체"는 온전한 면역글로불린 분자(전장 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 다클론, 단클론, 키메라, 인간화 및/또는 인간 버전을 포함함)를 지칭한다. The term “antibody” refers to an intact immunoglobulin molecule (including polyclonal, monoclonal, chimeric, humanized and/or human versions having full length heavy and/or light chains).

본원에서 사용되는 바와 같이, "특이적으로 결합하다"는 항체가 다른 단백질보다 항원에 우선적으로 결합함을 의미한다. 일부 실시 형태에서, "특이적으로 결합하다"는 항체가 항원에 대해 다른 단백질보다 더 높은 친화성을 가짐을 의미한다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 항원에 대한 결합 친화도가 1 x 10^-7 M 이하, 2 x 10^-7 M 이하, 3 x 10^-7 M 이하, 4 x 10^-7 M 이하, 5 x 10^-7 M 이하, 6 x 10^-7 M 이하, 7 x 10^-7 M 이하, 8 x 10^-7 M 이하, 9 x 10^-7 M 이하, 1 x 10^-8 M 이하, 2 x 10^-8 M 이하, 3 x 10^-8 M 이하, 4 x 10^-8 M 이하, 5 x 10^-8 M 이하, 6 x 10^-8 M 이하, 7 x 10^-8 M 이하, 8 x 10^-8 M 이하, 9 x 10^-8 M 이하, 1 x 10^-9 M 이하, 2 x 10^-9 M 이하, 3 x 10^-9 M 이하, 4 x 10^-9 M 이하, 5 x 10^-9 M 이하, 6 x 10^-9 M 이하, 7 x 10^-9 M 이하, 8 x 10^-9 M 이하, 9 x 10^-9 M 이하, 1 x 10^-10 M 이하, 2 x 10^-10 M 이하, 3 x 10^-10 M 이하, 4 x 10^-10 M 이하, 5 x 10^-10 M 이하, 6 x 10^-10 M 이하, 7 x 10^-10 M 이하, 8 x 10^-10 M 이하, 9 x 10^-10 M 이하, 1 x 10^-11 M 이하, 2 x 10^-11 M 이하, 3 x 10^-11 M 이하, 4 x 10^-11 M 이하, 5 x 10^-11M 이하, 6 x 10^-11 M 이하, 7 x 10^-11 M 이하, 8 x 10^-11 M 이하, 9 x 10^-11 M 이하, 1 x 10^-12 M 이하, 2 x 10^-12 M 이하, 3 x 10^-12 M 이하, 4 x 10^-12 M 이하, 5 x 10^-12 M 이하, 6 x 10^-12 M 이하, 7 x 10^-12 M 이하, 8 x 10^-12 M 이하, 또는 9 x 10^-12 M 이하일 수 있다.As used herein, “specifically binds” means that the antibody binds preferentially to the antigen over other proteins. In some embodiments, “specifically binds” means that the antibody has a higher affinity for the antigen than other proteins. Antibodies that specifically bind to an antigen have a binding affinity for the antigen of 1 x 10 ^-7 M or less, 2 x 10 ^-7 M or less, 3 x 10 ^-7 M or less, 4 x 10 ^-7 M or less, 5 x 10 ^-7 M or less, 6 x 10 ^-7 M or less, 7 x 10 ^-7 M or less, 8 x 10 ^-7 M or less, 9 x 10 ^-7 M or less, 1 x 10 ^-8 M or less, 2 x 10 ^{- 8} M or less, 3 x 10 ^-8 M or less, 4 x 10 ^-8 M or less, 5 x 10 ^-8 M or less, 6 x 10 ^-8 M or less, 7 x 10 ^-8 M or less, 8 x 10 ^-8 M Or less, 9 x 10 ^-8 M or less, 1 x 10 ^-9 M or less, 2 x 10 ^-9 M or less, 3 x 10 ^-9 M or less, 4 x 10 ^-9 M or less, 5 x 10 ^-9 M or less, 6 x 10 ^-9 M or less, 7 x 10 ^-9 M or less, 8 x 10 ^-9 M or less, 9 x 10 ^-9 M or less, 1 x 10 ^-10 M or less, 2 x 10 ^-10 M or less, 3 x 10 ^-10 M or less, 4 x 10 ^-10 M or less, 5 x 10 ^-10 M or less, 6 x 10 ^-10 M or less, 7 x 10 ^-10 M or less, 8 x 10 ^-10 M or less, 9 x 10 ^{- 10} M or less, 1 x 10 ^-11 M or less, 2 x 10 ^-11 M or less, 3 x 10 ^-11 M or less, 4 x 10 ^-11 M or less, 5 x 10 ^-11 M or less, 6 x 10 ^-11 M or less Or less, 7 x 10 ^-11 M or less, 8 x 10 ^-11 M or less, 9 x 10 ^-11 M or less, 1 x 10 ^-12 M or less, 2 x 10 ^-12 M or less, 3 x 10 ^-12 M or less, May be 4 x 10 ^-12 M or less, 5 x 10 ^-12 M or less, 6 x 10 ^-12 M or less, 7 x 10 ^-12 M or less, 8 x 10 ^-12 M or less, or 9 x 10 ^-12 M or less .

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항체는 1 x 10^-7 M 이하, 1 x 10^-8M 이하, 1 x 10^-9 M 이하, 1 x 10^-10 M 이하, 1 x 10^-11 M 이하, 또는 1 x 10^-12 M 이하의 친화도(Kd)로 서열 번호 1의 스클레로스틴 또는 이의 천연 발생 변이체에 결합한다. 친화도는 다양한 기술을 사용하여 결정되며, 그 예로는 친화성 ELISA 분석이 있다. 다양한 실시 형태에서, 친화도는 BIAcore 분석법에 의해 결정된다. 다양한 실시 형태에서, 친화도는 동역학적 방법에 의해 결정된다. 다양한 실시 형태에서, 친화도는 평형/용액 방법에 의해 결정된다. 미국 특허 출원 공개 공보 제 2007/0110747호(이의 개시 내용은 본원에 참고로 포함됨)는 스클레로스틴에 대한 항체의 친화도(Kd)를 결정하는 데 적합한 친화성 분석에 대한 추가 설명을 포함한다. In some or any embodiments, the antibody is 1 x 10 ^-7 M or less, 1 x 10 ^-8 M or less, 1 x 10 ^-9 M or less, 1 x 10 ^-10 M or less, 1 x 10 ^-11 M or less, Or it binds to the sclerostin of SEQ ID NO: 1 or a naturally occurring variant thereof with an affinity (Kd) of 1 x 10 ^-12 M or less. Affinity is determined using a variety of techniques, such as affinity ELISA assay. In various embodiments, affinity is determined by the BIAcore assay. In various embodiments, affinity is determined by a kinetic method. In various embodiments, affinity is determined by an equilibrium/solution method. U.S. Patent Application Publication No. 2007/0110747, the disclosure of which is incorporated herein by reference, contains a further description of an affinity assay suitable for determining the affinity (Kd) of an antibody for sclerostin. .

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항체(또는 이의 항체 단편)는 서열 번호 1에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 스클레로스틴 폴리펩티드에 결합하고 서열 번호 5의 서열(CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC; 서열 번호 1의 아미노산 86~111에 상응함)을 포함하는 스클레로스틴의 영역에 결합한다. 이 영역은 본원에서 스클레로스틴의 "루프 2" 영역으로도 지칭된다. 루프 2 영역 외부의 스클레로스틴의 영역은 본원에서 "비-루프 2 영역"으로 정의된다. 대안적으로 또는 추가로, 항-스클레로스틴 항체는 서열 번호 1의 아미노산 57~146을 포함하는 스클레로스틴 폴리펩티드에 결합한다. 대안적으로 또는 추가로, 항-스클레로스틴 항체는 서열 번호 1의 아미노산 89~103 및/또는 서열 번호 1의 아미노산 137~151을 포함하는 스클레로스틴 폴리펩티드에 결합한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 전장 스클레로스틴의 단편인 스클레로스틴 폴리펩티드는 서열 번호 1의 인간 스클레로스틴의 상응하는 폴리펩티드 영역의 3차 구조를 보유한다. In some or any embodiments, the antibody (or antibody fragment thereof) binds to a sclerostin polypeptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1 and the sequence of SEQ ID NO: 5 (CGPARLLPNAIGRGKWWRPSGPDFRC; amino acids 86-111 of SEQ ID NO: 1). Corresponds to) and binds to the domain of sclerostin. This region is also referred to herein as the “loop 2” region of sclerostin. The region of sclerostin outside the loop 2 region is defined herein as a “non-loop 2 region”. Alternatively or additionally, the anti-scleostin antibody binds to a sclerostin polypeptide comprising amino acids 57-146 of SEQ ID NO: 1. Alternatively or additionally, the anti-scleostin antibody binds to a sclerostin polypeptide comprising amino acids 89-103 of SEQ ID NO: 1 and/or amino acids 137-151 of SEQ ID NO: 1. In some or any embodiments, the sclerostin polypeptide, which is a fragment of the full length sclerostin, retains the tertiary structure of the corresponding polypeptide region of human sclerostin of SEQ ID NO: 1.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-스클레로스틴 항체는 바람직하게는 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0110747호에 기술된 세포-기반 분석법 및/또는 미국 특허 출원 공개 공보 제20070110747호에 기술된 생체 내 분석법에서 스클레로스틴 기능을 조절하고/하거나 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0110747호에 기술된 에피토프 중 하나 이상에 결합하고/하거나 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0110747호에 기술된 항체 중 하나의 결합을 교차-차단하고/하거나 미국 특허 출원 공개 공보 제2007/0110747호에 기술된 항체 중 하나가 스클레로스틴에 결합하는 것이 교차-차단된다(항-스클레로스틴 항체를 특성화하기 위한 분석법의 설명을 위해 그 전체가 참고로 포함됨). In some or any embodiments, the anti-scleostin antibodies disclosed herein are preferably cell-based assays described in US Patent Application Publication No. 2007/0110747 and/or US Patent Application Publication No. 20070110747. Modulates sclerostin function in the in vivo assay described in and/or binds to one or more of the epitopes described in US Patent Application Publication No. 2007/0110747 and/or binds to one or more of the epitopes described in US Patent Application Publication No. 2007/0110747. The binding of one of the described antibodies is cross-blocked and/or binding of one of the antibodies described in US Patent Application Publication No. 2007/0110747 to sclerostin is cross-blocked (anti-sclerostin It is incorporated by reference in its entirety for description of assays for characterizing antibodies).

"CDR"은 항체 가변 서열 내의 상보성 결정 영역을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 각각에는 3개의 CDR이 있으며, 이는 각각의 가변 영역에 있어서 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 표시된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "6개의 CDR의 세트"는 항원에 결합할 수 있는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역에서 나타나는 3개의 CDR의 군을 지칭한다. CDR의 정확한 경계는 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의되었다. Kabat에 의해 설명된 시스템(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) 및 (1991)])은 항체의 모든 가변 영역에 적용할 수 있는 명확한 잔기 넘버링 시스템을 제공할 뿐만 아니라 3개의 CDR을 정의하는 정확한 잔기 경계도 제공한다. 이러한 CDR은 Kabat CDR로 지칭될 수 있다. Chothia와 동료(문헌[Chothia&Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)] 및 문헌[Chothia et al., Nature 342:877-883 (1989)])는 Kabat CDR 내의 특정 하위 부분이, 아미노산 서열 수준에서 큰 다양성을 가짐에도 불구하고 거의 동일한 펩티드 백본 입체배좌를 채택함을 발견하였다. 이러한 하위 부분은 L1, L2 및 L3 또는 H1, H2 및 H3으로 표시되었으며, 여기서, "L" 및 "H"는 각각 경쇄 및 중쇄 영역을 표시한다. 이러한 영역은 Kabat CDR과 중첩되는 경계를 갖는 Chothia CDR로 지칭될 수 있다. Kabat CDR과 중첩되는 CDR을 정의하는 다른 경계는 문헌[Padlan, FASEB J. 9:133-139 (1995)] 및 문헌[MacCallum, J Mol Biol 262(5):73245 (1996))에 기술되어 있다. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 시스템 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만 그럼에도 불구하고 Kabat CDR들과 중첩된다(그러나 이들은 특정 잔기 또는 잔기 군 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 유의하게 영향을 주지는 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 짧아지거나 길어질 수 있다). 본원에 사용된 방법은 이들 시스템 중 임의의 것에 따라 정의된 CDR을 이용할 수 있지만, 바람직한 실시 형태는 Kabat 또는 Chothia 정의된 CDR을 사용한다. “CDR” refers to the complementarity determining region within an antibody variable sequence. There are three CDRs in each of the variable regions of the heavy and light chains, which are represented by CDR1, CDR2 and CDR3 for each variable region. As used herein, the term “set of six CDRs” refers to a group of three CDRs appearing in the light chain variable region and the heavy chain variable region capable of binding an antigen. The exact boundaries of the CDRs were defined differently for different systems. The system described by Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991))) is applicable to all variable regions of an antibody. Not only does it provide a clear residue numbering system, but it also provides precise residue boundaries defining the three CDRs, which can be referred to as Kabat CDRs. Chothia and colleagues (Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901) -917 (1987)] and Chothia et al., Nature 342:877-883 (1989)) show that certain sub-parts within the Kabat CDRs have almost identical peptide backbone conformations despite having great diversity at the level of amino acid sequence. It was found to adopt the conformation, these sub-parts were denoted as L1, L2 and L3 or H1, H2 and H3, where "L" and "H" denote light and heavy chain regions, respectively. It may be referred to as a Chothia CDR having a border overlapping with the CDRs Other borders defining a CDR that overlap with the Kabat CDRs are described in Padlan, FASEB J. 9:133-139 (1995) and MacCallum, J Mol Biol 262(5):73245 (1996)). Another CDR boundary definition may not strictly follow one of the above systems, but nevertheless overlap with the Kabat CDRs (but they predict that a particular residue or group of residues or even the entire CDR does not significantly affect antigen binding. Or it can be shortened or lengthened in light of experimental findings). The methods used herein may use CDRs defined according to any of these systems, but preferred embodiments use Kabat or Chothia defined CDRs.

CDR은 예를 들어 관심 대상의 CDR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 구축함으로써 수득된다. 이러한 폴리뉴클레오티드는 예를 들어, 항체-생성 세포의 mRNA를 주형으로 사용하여 가변 영역을 합성하기 위하여 폴리머라아제 연쇄 반응을 이용함으로써 제조된다(예를 들어 문헌[Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology,2:106 (1991)]; 문헌[Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), page 166, Cambridge University Press (1995)]; 및 문헌[Ward et al., "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), page 137, Wiley-Liss, Inc. (1995)] 참조).CDRs are obtained, for example, by constructing polynucleotides encoding the CDRs of interest. Such polynucleotides are prepared, for example, by using a polymerase chain reaction to synthesize variable regions using the mRNA of an antibody-producing cell as a template (see, for example, Larrick et al., Methods: A Companion. to Methods in Enzymology, 2 :106 (1991); Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies Production, Engineering and Clinical Application , Ritter et al. (eds.), page 166, Cambridge University Press (1995)]; and Ward et al., “Genetic Manipulation and Expression of Antibodies,” in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications , Birch et al., (eds.), page 137, Wiley-Liss, Inc. (1995)].

다양한 양태에서, 항체는 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3으로부터 선택되는 CDR에 대해 적어도 75%의 동일성(예를 들어, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 동일성)을 갖는 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하며, 여기서, CDR-H1은 서열 번호 2에 주어진 서열을 갖고, CDR-H2는 서열 번호 3에 주어진 서열을 갖고, CDR-H3은 서열 번호 4에 주어진 서열을 갖고, CDR-L1은 서열 번호 5에 주어진 서열을 갖고, CDR-L2는 서열 번호 6에 주어진 서열을 가지며, CDR-L3은 서열 번호 7에 주어진 서열을 갖는다. 다양한 양태에서, 항-스클레로스틴 항체는 상기 CDR 중 2개 또는 상기 CDR 중 6개를 포함한다. In various embodiments, the antibody has at least 75% identity to a CDR selected from CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, and CDR-L3 (e.g., at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100% identity), wherein CDR-H1 has the sequence given in SEQ ID NO: 2 and CDR-H2 is SEQ ID NO: 3 Has the sequence given in, CDR-H3 has the sequence given in SEQ ID NO: 4, CDR-L1 has the sequence given in SEQ ID NO: 5, CDR-L2 has the sequence given in SEQ ID NO: 6, and CDR-L3 has the sequence It has the sequence given in number 7. In various embodiments, the anti-scleostin antibody comprises 2 of the CDRs or 6 of the CDRs.

바람직한 실시 형태에서, 항-스클레로스틴 항체는 다음과 같은 6개의 CDR의 세트를 포함한다: 서열 번호 2의 CDR-H1, 서열 번호 3의 CDR-H2, 서열 번호 4의 CDR-H3, 서열 번호 5의 CDR -L1, 서열 번호 6의 CDR-L2 및 서열 번호 7의 CDR-L3.In a preferred embodiment, the anti-sclerostin antibody comprises a set of 6 CDRs as follows: CDR-H1 of SEQ ID NO: 2, CDR-H2 of SEQ ID NO: 3, CDR-H3 of SEQ ID NO: 4, sequence CDR-L1 of SEQ ID NO: 5, CDR-L2 of SEQ ID NO: 6 and CDR-L3 of SEQ ID NO: 7.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 9에 개시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 동일성(예를 들어, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열 번호 10에 개시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 동일성(예를 들어, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 양태에서, 서열 번호 9 또는 10과 비교한 서열의 차이는 상응하는 서열에서의 CDR 영역의 밖에 있다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 9에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 10에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.In some or any embodiments, the antibody has at least 75% identity to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:9 (e.g., at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100% identity) A light chain variable region comprising an amino acid sequence having an amino acid sequence, and at least 75% identity to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: Identity) and a heavy chain variable region comprising an amino acid sequence. In various embodiments, the difference in sequence compared to SEQ ID NO: 9 or 10 is outside the CDR regions in the corresponding sequence. In some or any of the embodiments, the antibody comprises a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항-스클레로스틴 항체는 서열 번호 16에 개시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 동일성(예를 들어, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(예를 들어, 2개의 중쇄)의 전부 또는 일부, 및 서열 번호 12에 개시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%의 동일성(예를 들어, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(예를 들어, 2개의 경쇄)의 전부 또는 일부를 포함한다. In some or any embodiments, the anti-sclerostin antibody has at least 75% identity (e.g., at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%) to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16. Or all or part of a heavy chain (e.g., two heavy chains) comprising an amino acid sequence having 100% identity, and at least 75% identity to the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 (e.g., at least 75 %, 80%, 85%, 90%, 95% or 100% identity) comprising all or part of a light chain (e.g., two light chains) comprising an amino acid sequence.

항체는 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체의 두 중쇄의 C-말단은 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 제1 중쇄 및 야생형 아미노산 서열을 포함하는 제2 중쇄를 포함한다. 다양한 양태에서, 항체는 서열 번호 12에 개시된 경쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 13에 개시된 중쇄 아미노산 서열을 포함한다. The antibody comprises a heavy chain comprising the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the heavy chain. In some embodiments, the C-terminus of the two heavy chains of the antibody comprises the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8). In some embodiments, the antibody comprises a first heavy chain comprising the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) and a second heavy chain comprising a wild-type amino acid sequence. In various embodiments, the antibody comprises a light chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and a heavy chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13.

대안적으로, 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항체는 하나의 중쇄의 C-말단에서, 선택적으로 두 중쇄의 C-말단에서 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함하는 제1 중쇄 및 야생형 아미노산 서열을 포함하는 제2 중쇄(즉, C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함하지 않음)를 포함한다. 다양한 양태에서, 항체는 서열 번호 12에 개시된 경쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 14에 개시된 중쇄 아미노산 서열을 포함한다. Alternatively, in some or any embodiments, the antibody is an amino acid comprising Pro-Ala-Arg-Gly-Lys (SEQ ID NO: 11) at the C-terminus of one heavy chain, optionally at the C-terminus of both heavy chains. Include sequence. In some embodiments, the antibody comprises a first heavy chain comprising the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly-Lys (SEQ ID NO: 11) and a second heavy chain comprising a wild-type amino acid sequence (i.e., C-terminal Pro-Ala-Arg -Gly-Lys (not including SEQ ID NO: 11)). In various embodiments, the antibody comprises a light chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and a heavy chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14.

다른 항-스클레로스틴 항체의 예는 국제 공개 제2008/092894호, 국제 공개 제2008/115732호, 국제 공개 제2009/056634호, 국제 공개 제2009/047356호, 국제 공개 제2010/100200호, 국제 공개 제2010/100179호, 국제 공개 제2010/115932호, 및 국제 공개 제2010/130830호(이들 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함됨)에 개시된 항-스클레로스틴 항체를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. Examples of other anti-sclerostin antibodies include International Publication No. 2008/092894, International Publication No. 2008/115732, International Publication No. 2009/056634, International Publication No. 2009/047356, International Publication No. 2010/100200. , International Publication No. 2010/100179, International Publication No. 2010/115932, and International Publication No. 2010/130830, each of which is incorporated herein by reference in its entirety, including anti-sclerostin antibodies, , Is not limited thereto.

항체와 같은 일부 단백질은 다양한 번역 후 변형을 겪을 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 이러한 변형의 유형 및 정도는 종종 단백질을 발현하는 데 사용되는 숙주 세포주와 배양 조건에 따라 달라진다. 이러한 변형은 글리코실화, 메티오닌 산화, 디케토피페리진 형성, 아스파르테이트 이성질체화 및 아스파라긴 탈아미드화의 변화를 포함할 수 있다. 빈번한 변형은 카르복시펩티다아제의 작용으로 인한 카르복시-말단 염기성 잔기(예컨대 라이신 또는 아르기닌)의 손실이다(문헌[Harris, RJ. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995]에 설명된 바와 같음). Those of skill in the art will understand that some proteins, such as antibodies, can undergo various post-translational modifications. The type and extent of these modifications often depend on the host cell line and culture conditions used to express the protein. Such modifications can include changes in glycosylation, methionine oxidation, diketopiperazine formation, aspartate isomerization and asparagine deamidation. A frequent modification is the loss of carboxy-terminal basic residues (such as lysine or arginine) due to the action of carboxypeptidases (as described in Harris, RJ. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995).

다른 변형은 프롤린 및 라이신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실 기의 인산화, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 기의 메틸화(문헌[T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 [1983]], 전체가 참고로 포함됨), N-말단 아민의 아세틸화 및 임의의 C-말단 카르복실 기의 아미드화를 포함한다. Other modifications include hydroxylation of proline and lysine, phosphorylation of hydroxyl groups of seryl or threonyl residues, methylation of α-amino groups of lysine, arginine and histidine side chains (TE Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, WH Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 [1983]], which are incorporated by reference in their entirety), acetylation of N-terminal amines and amidation of any C-terminal carboxyl group.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 항체 중쇄의 C-말단은 아미드화된다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 항체의 두 중쇄는 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하고 두 중쇄는 아미드화된다. 일부 실시 형태에서, 글리신이 아미드화된다. 예를 들어 문헌[Prigg, S. T. et al., "New insights into copper monooxygenases and peptideamidation: structure, mechanism and function", Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1236-1259]에 기술된 바와 같이 아미드화가 일어날 수 있다. 효소 펩티딜글리신 α-아미드화 모노옥시게나아제(PAM)는 글리신의 아미드화를 촉매할 수 있다. PAM은 2개의 활성 도메인, 펩티딜글리신 α-히드록실화 모노옥시게나아제(PHM) 및 펩티딜-α-히드록실글리신 α-아미드화 라이아제(PAL)를 갖는다. PHM은 펩티딜글리신(아스코르베이트 및 산소와 함께)에서 펩티딜 α-히드록실글리신(세미데히드로겐아스코르베이트 및 물과 함께)으로의 전환을 촉매한다. 결국, PAL은 펩티딜 α-히드록실글리신의 아미드화 펩티드(및 글리옥실레이트)로의 전환을 촉매한다. In some or any embodiments, the C-terminus of an antibody heavy chain comprising the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) is amidated. In some or any embodiments, the two heavy chains of the antibody comprise the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) and the two heavy chains are amidated. In some embodiments, glycine is amidated. See, eg, Prigg, S. T. et al., "New insights into copper monooxygenases and peptideamidation: structure, mechanism and function", Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1236-1259. Amidation can occur as described. The enzyme peptidylglycine α-amidated monooxygenase (PAM) can catalyze the amidation of glycine. PAM has two active domains, peptidylglycine α-hydroxylated monooxygenase (PHM) and peptidyl-α-hydroxylglycine α-amidated lyase (PAL). PHM catalyzes the conversion of peptidylglycine (with ascorbate and oxygen) to peptidyl a-hydroxylglycine (with semidehydrogenascorbate and water). Eventually, PAL catalyzes the conversion of peptidyl α-hydroxylglycine to an amidated peptide (and glyoxylate).

항체의 아미드화는 세포 배양 과정 동안 특정 조건을 변경함으로써 제어될 수 있다. 예를 들어, 구리(예를 들어 시트르산제이철암모늄) 및/또는 산소 수준을 사용하여 아미드화 수준에 영향을 줄 수 있다. 구리 농도(예를 들어, 배지에서) 또는 산소 이용가능성(예를 들어, 배양 중)의 증가는 PHM과 같은 효소의 활성에 영향을 줌으로써 아미드화를 증가시킬 수 있음이 고려된다. Amidation of antibodies can be controlled by changing certain conditions during the cell culture process. For example, copper (eg ferric ammonium citrate) and/or oxygen levels can be used to influence the amidation level. It is contemplated that an increase in copper concentration (eg, in a medium) or oxygen availability (eg, in culture) may increase amidation by affecting the activity of enzymes such as PHM.

제약 조성물Pharmaceutical composition

본 발명은 본원에 개시된 항체의 집단을 제약적으로 유효한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아쥬반트와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 제약 조성물은 액체, 동결 및 동결건조 조성물을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. The present invention provides pharmaceutical compositions comprising a population of antibodies disclosed herein together with a pharmaceutically effective diluent, carrier, solubilizing agent, emulsifying agent, preservative and/or adjuvant. Pharmaceutical compositions of the present invention include, but are not limited to, liquid, frozen and lyophilized compositions.

본 발명은 또한 서열 번호 1의 스클레로스틴에 특이적으로 결합하는 항체 및 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서, 조성물 중 항체의 약 3~5%는 본원에 개시된 항체(예를 들어, 서열 번호 2~7에 개시된 6개의 CDR의 세트를 포함하고 중쇄(들)의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 1개의 중쇄(또는 2개의 중쇄)를 갖는 항체)의 집단이다. 본 발명은 또한 본원에 개시된 항체(예를 들어, 서열 번호 2~7에 개시된 6개의 CDR의 세트를 포함하고 중쇄(들)의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 1개의 중쇄(또는 2개의 중쇄)를 갖는 항체)의 집단의 대안적인 양(예를 들어, 5~10%, 1~3%, 3~15%, 2~10%, 4~20%, 1~5%)을 포함하는 조성물을 고려한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising a mixture of an antibody specifically binding to sclerostin of SEQ ID NO: 1 and a pharmaceutically acceptable carrier, wherein about 3-5% of the antibody in the composition is herein One disclosed antibody (e.g., comprising a set of 6 CDRs disclosed in SEQ ID NOs: 2-7 and comprising the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the heavy chain(s)) It is a population of heavy chains (or antibodies with two heavy chains). The present invention also includes an antibody disclosed herein (e.g., a set of 6 CDRs disclosed in SEQ ID NOs: 2-7 and comprises the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) at the C-terminus of the heavy chain(s). ) Of the population (e.g., 5-10%, 1-3%, 3-15%, 2-10%, 4-10) of an antibody with one heavy chain (or two heavy chains) containing 20%, 1-5%).

일부 실시 형태에서, 상기 집단의 항체의 70% 미만(예를 들어, 약 69%, 약 68%, 약 67%, 약 66%, 약 65%, 약 64%, 약 63%, 약 62%, 약 61%, 약 60%, 약 59%, 약 58%, 약 57%, 약 56%, 약 55%, 약 54%, 약 53%, 약 52%, 약 51%, 약 50%, 약 49%, 약 48%, 약 47%, 약 46%, 약 45%, 약 44%, 약 43%, 약 42%, 약 41%, 약 40%, 약 39%, 약 38%, 약 37%, 약 36%, 약 35%, 약 34%, 약 33%, 약 32%, 약 31%, 약 30%, 약 29%, 약 28%, 약 27%, 약 26%, 약 25%, 약 24%, 약 23%, 약 22%, 약 21%, 약 20%, 약 19%, 약 18%, 약 17%, 약 16%, 약 15%, 약 14%, bout 13%, 약 12%, 약 11%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1% 이하)은 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 상기 중쇄는 아미드화된다. 일부 실시 형태에서, 상기 집단의 항체의 35% 미만(예를 들어, 약 34%, 약 33%, 약 32%, 약 31%, 약 30%, 약 29%, 약 28%, 약 27%, 약 26%, 약 25%, 약 24%, 약 23%, 약 22%, 약 21%, 약 20%, 약 19%, 약18%, 약 17%, 약 16%, 약 15%, 약 14%, bout 13%, 약 12%, 약 11%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1% 이하)은 두 중쇄 모두에 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하며, 여기서, 두 중쇄 모두는 선택적으로 아미드화된다. 두 중쇄 모두 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하지만 사슬들 중 하나만이 아미드화되는 것이 또한 고려된다. 일부 실시 형태에서, 조성물 중 항체의 35% 미만(예를 들어, 약 34%, 약 33%, 약 32%, 약 31%, 약 30%, 약 29%, 약 28%, 약 27%, 약 26%, 약 25%, 약 24%, 약 23%, 약 22%, 약 21%, 약 20%, 약 19%, 약 18%, 약 17%, 약 16%, 약 15%, 약 14%, bout 13%, 약 12%, 약 11%, 약 10%, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1% 이하)은 아미드화되지 않은 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 집단의 항체의 약 33%는 아미드화된 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하고, 상기 집단의 항체의 약 33%는 둘 모두가 아미드화된 두 중쇄 상의 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하고, 상기 집단의 항체의 약 33%는 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 갖지만 아미드화되지 않은 중쇄(들)를 포함한다. In some embodiments, less than 70% of the antibodies in the population (e.g., about 69%, about 68%, about 67%, about 66%, about 65%, about 64%, about 63%, about 62%, About 61%, about 60%, about 59%, about 58%, about 57%, about 56%, about 55%, about 54%, about 53%, about 52%, about 51%, about 50%, about 49 %, about 48%, about 47%, about 46%, about 45%, about 44%, about 43%, about 42%, about 41%, about 40%, about 39%, about 38%, about 37%, About 36%, about 35%, about 34%, about 33%, about 32%, about 31%, about 30%, about 29%, about 28%, about 27%, about 26%, about 25%, about 24 %, about 23%, about 22%, about 21%, about 20%, about 19%, about 18%, about 17%, about 16%, about 15%, about 14%, bout 13%, about 12%, About 11%, about 10%, about 9%, about 8%, about 7%, about 6%, about 5%, about 4%, about 3%, about 2%, about 1% or less) is a C-terminal Pro It comprises a heavy chain comprising the sequence -Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8), which heavy chain is amidated. In some embodiments, less than 35% of the antibodies in the population (e.g., about 34%, about 33%, about 32%, about 31%, about 30%, about 29%, about 28%, about 27%, About 26%, about 25%, about 24%, about 23%, about 22%, about 21%, about 20%, about 19%, about 18%, about 17%, about 16%, about 15%, about 14 %, bout 13%, about 12%, about 11%, about 10%, about 9%, about 8%, about 7%, about 6%, about 5%, about 4%, about 3%, about 2%, About 1% or less) comprises a C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence in both heavy chains, where both heavy chains are selectively amidated. It is also contemplated that both heavy chains contain the C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence, but only one of the chains is amidated. In some embodiments, less than 35% of the antibodies in the composition (e.g., about 34%, about 33%, about 32%, about 31%, about 30%, about 29%, about 28%, about 27%, about 26%, about 25%, about 24%, about 23%, about 22%, about 21%, about 20%, about 19%, about 18%, about 17%, about 16%, about 15%, about 14% , bout 13%, about 12%, about 11%, about 10%, about 9%, about 8%, about 7%, about 6%, about 5%, about 4%, about 3%, about 2%, about 1% or less) contained the unamidated C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence. In some embodiments, about 33% of the antibodies in the population comprise an amidated C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence, and about 33% of the antibodies in the population are both amides. C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence on both heavy chains, and about 33% of the antibodies of this population are C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequences But contains heavy chain(s) that are not amidated.

일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 예를 들어, 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 투명도, 색상, 등장성, 냄새, 살균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변경하거나, 유지하거나 또는 보존하기 위한 제형화 물질을 함유한다. 이러한 실시 형태에서, 적합한 제형화 물질은 아미노산(예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 프롤린 또는 라이신); 항미생물제; 항산화제(예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제(예컨대 붕산염, 중탄산염, 트리스(Tris)-HCl, 시트르산염, 인산염 또는 기타 유기 산); 벌킹제(예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이팅제(예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)); 복합체화제(예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 기타 탄수화물(예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 착향제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 반대 이온(예컨대 나트륨); 보존제(예컨대 벤잘코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매(예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대 플루로닉, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제(예컨대 수크로스 또는 소르비톨); 긴장성 향상제(예컨대 알칼리 금속 할로겐화물, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 제약적 아쥬반트를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 문헌[REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18" Edition, (A. R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company]을 참조한다.In some embodiments, the pharmaceutical composition, for example, to alter, maintain or preserve the pH, osmotic pressure, viscosity, clarity, color, isotonicity, odor, sterilization, stability, dissolution or release rate, adsorption or penetration of the composition Contains formulation materials for. In such embodiments, suitable formulation substances include amino acids (eg glycine, glutamine, asparagine, arginine, proline or lysine); Antimicrobial agents; Antioxidants (such as ascorbic acid, sodium sulfite or sodium hydrogen sulfite); Buffers (eg borate, bicarbonate, Tris-HCl, citrate, phosphate or other organic acids); Bulking agents (such as mannitol or glycine); Chelating agents (such as ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)); Complexing agents (such as caffeine, polyvinylpyrrolidone, beta-cyclodextrin or hydroxypropyl-beta-cyclodextrin); Filler; Monosaccharides; saccharose; And other carbohydrates (such as glucose, mannose or dextrin); Proteins (such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins); Coloring agents, flavoring agents and diluents; Emulsifiers; Hydrophilic polymers (such as polyvinylpyrrolidone); Low molecular weight polypeptides; Salt-forming counter ions (such as sodium); Preservatives (such as benzalkonium chloride, benzoic acid, salicylic acid, thimerosal, phenethyl alcohol, methylparaben, propylparaben, chlorhexidine, sorbic acid or hydrogen peroxide); Solvents (such as glycerin, propylene glycol or polyethylene glycol); Sugar alcohols (such as mannitol or sorbitol); Suspending agent; Surfactants or wetting agents (eg Pluronic, PEG, sorbitan ester, polysorbate such as polysorbate 20, polysorbate, triton, tromethamine, lecithin, cholesterol, tyloxafal); Stability enhancing agents (such as sucrose or sorbitol); Tonicity enhancing agents (such as alkali metal halides, preferably sodium or potassium chloride, mannitol sorbitol); Delivery vehicle; diluent; Excipients and/or pharmaceutical adjuvants. See REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18" Edition, (A. R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

본원에 개시된 특정한 제형화 물질은 예를 들어 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 투여량에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 문헌[REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES]을 참조한다. 제약 조성물 중 1차 비히클 또는 담체는 사실상 수성 또는 비-수성일 수 있다. 예를 들어, 적합한 비히클 또는 담체는 주사용수, 생리 식염수 또는 인공 뇌척수액(가능하게는 비경구 투여용 조성물에서 흔한 다른 물질이 보충됨)일 수 있다. 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 특정 실시 형태에서, 제약 조성물은 약 pH 7.0~8.5의 트리스 완충제 또는 약 pH 4.0~5.5의 아세테이트 완충제를 포함하고, 소르비톨 또는 이에 대한 적합한 대체물을 추가로 포함 할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 선택적 제형화제(상기 문헌[REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES])와 혼합함으로써 동결건조 케이크 또는 수성 용액의 형태로 보관하기 위한 것으로 제조될 수 있다. 추가로, 일부 실시 형태에서, 항체 또는 단편은 수크로스와 같은 적절한 부형제를 사용하여 동결건조물로 제형화될 수 있다. Certain formulation materials disclosed herein can be selected by, for example, the intended route of administration, mode of delivery and desired dosage. See, for example, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra. The primary vehicle or carrier in the pharmaceutical composition may be aqueous or non-aqueous in nature. For example, a suitable vehicle or carrier may be water for injection, physiological saline or artificial cerebrospinal fluid (possibly supplemented with other substances common in compositions for parenteral administration). Neutral buffered saline or saline mixed with serum albumin are additional exemplary vehicles. In certain embodiments, the pharmaceutical composition comprises a Tris buffer of about pH 7.0-8.5 or an acetate buffer of about pH 4.0-5.5, and may further comprise sorbitol or a suitable replacement therefor. In certain embodiments, the composition may be prepared for storage in the form of a lyophilized cake or aqueous solution by mixing a selected composition having a desired degree of purity with an optional formulating agent (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra). Additionally, in some embodiments, antibodies or fragments may be formulated as lyophilisates using suitable excipients such as sucrose.

본 발명의 제약 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 대안적으로, 조성물은 흡입을 위해 또는 경구 전달과 같은 소화관을 통한 전달을 위해 선택될 수 있다. 이러한 제약상 허용가능한 조성물의 제조는 당업계의 기술 내에 있다. 제형 성분은 바람직하게는 투여 부위에 허용가능한 농도로 존재한다. 특정 실시 형태에서, 완충제는 조성물을 생리학적 pH 또는 약간 더 낮은 pH에서, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 유지하는 데 사용된다. The pharmaceutical compositions of the present invention may be selected for parenteral delivery. Alternatively, the composition may be selected for inhalation or for delivery through the digestive tract such as oral delivery. The preparation of such pharmaceutically acceptable compositions is within the skill of the art. The formulation components are preferably present at the site of administration in an acceptable concentration. In certain embodiments, the buffering agent is used to maintain the composition at a physiological pH or slightly lower pH, typically within a pH range of about 5 to about 8.

비경구 투여가 고려되는 경우, 본 발명에서 사용하기 위한 치료 조성물은 제약상 허용가능한 비히클에 원하는 항체 또는 단편을 포함하는 비경구적으로 허용가능한 무발열원 수성 용액의 형태로 제공될 수 있다. 비경구 주사에 특히 적합한 비히클은 항체 또는 단편이 적절하게 보존된 살균 등장 용액으로 제형화되는 살균 증류수이다. 특정 실시 형태에서, 이식형 약물 전달 장치를 사용하여 원하는 항체 또는 단편을 도입할 수 있다. When parenteral administration is contemplated, the therapeutic composition for use in the present invention may be provided in the form of a parenterally acceptable pyrogen-free aqueous solution comprising the desired antibody or fragment in a pharmaceutically acceptable vehicle. A vehicle particularly suitable for parenteral injection is sterile distilled water, in which the antibody or fragment is formulated in a sterile isotonic solution suitably preserved. In certain embodiments, an implantable drug delivery device can be used to introduce the desired antibody or fragment.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 본원에 개시된 제약 조성물은 칼슘 염, 아세테이트 완충제, 폴리올 및 계면활성제를 포함한다. 예시적인 칼슘 염은 아세트산칼슘, 탄산칼슘 및 염화칼슘을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 칼슘 염은 적어도 0.5 mM, 적어도 1 mM, 적어도 2 mM, 적어도 3 mM, 적어도 4 mM, 적어도 5 mM, 적어도 6 mM, 적어도 7 mM, 적어도 8 mM, 적어도 9 mM 또는 적어도 10 mM의 농도이다. 특정 실시 형태에서, 칼슘 염의 농도는 11 mM 이하, 12 mM 이하, 13 mM 이하, 14 mM 이하, 15 mM 이하, 16 mM 이하, 17 mM 이하, 이하 18 mM, 19 mM 이하, 20 mM 이하, 21 mM 이하, 22 mM 이하, 23 mM 이하, 24 mM 이하, 또는 25 mM 이하이다. 약 0.5 mM 내지 약 10 mM, 약 5 mM 내지 약 10 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 15 mM를 포함하지만 이에 한정되지 않는 전술한 종점들의 조합을 특징으로 하는 임의의 범위가 고려된다. In some or any embodiments, the pharmaceutical compositions disclosed herein include calcium salts, acetate buffers, polyols and surfactants. Exemplary calcium salts include, but are not limited to, calcium acetate, calcium carbonate, and calcium chloride. In some embodiments, the calcium salt is at least 0.5 mM, at least 1 mM, at least 2 mM, at least 3 mM, at least 4 mM, at least 5 mM, at least 6 mM, at least 7 mM, at least 8 mM, at least 9 mM or at least 10 is the concentration in mM. In certain embodiments, the concentration of the calcium salt is 11 mM or less, 12 mM or less, 13 mM or less, 14 mM or less, 15 mM or less, 16 mM or less, 17 mM or less, 18 mM, 19 mM or less, 20 mM or less, 21 mM or less, 22 mM or less, 23 mM or less, 24 mM or less, or 25 mM or less. Any range characterized by a combination of the aforementioned endpoints is contemplated, including but not limited to, from about 0.5 mM to about 10 mM, from about 5 mM to about 10 mM, or from about 5 mM to about 15 mM.

일부 실시 형태에서, 제약 조성물은 농도가 약 0.1 mM 내지 약 1000 mM(1 M)의 범위인 아세테이트 완충제(예를 들어, 아세트산나트륨)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 아세테이트 완충제의 농도는 적어도 5 mM, 적어도 6 mM, 적어도 7 mM, 적어도 8 mM, 적어도 9 mM, 적어도 10 mM, 적어도 15 mM, 적어도 60 mM, 적어도 70 mM, 적어도 80 mM, 적어도 90 mM, 적어도 100 mM, 적어도 200 mM, 적어도 500 mM, 적어도 700 mM, 또는 적어도 900 mM이다. 일부 실시 형태에서, 아세테이트 완충제의 농도는 10 mM 이하, 15 mM 이하, 20 mM 이하, 25 mM 이하, 30 mM 이하, 35 mM 이하, 이하 40 mM, 45 mM 이하, 50 mM 이하, 55 mM 이하, 60 mM 이하, 65 mM 이하, 70 mM 이하, 75 mM 이하, 80 mM 이하, 85 mM 이하, 90 mM 이하, 95 mM 이하 또는 100 mM 이하이다. 약 5 mM 내지 약 15 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 10 mM 또는 약 10 mM 내지 약 25 mM을 포함하지만 이에 한정되지 않는 전술한 종점들의 조합을 특징으로 하는 임의의 범위가 고려된다. 완충제는 바람직하게는 pH를 약 5~6 또는 5~5.5 또는 4.5~5.5로 유지하는 농도로 첨가된다. 제형 중 칼슘 염이 아세트산칼슘인 경우, 일부 실시 형태에서, 아세테이트의 총 농도는 약 10 mM 내지 약 55 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 40 mM이다. In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises an acetate buffer (eg, sodium acetate) in a concentration ranging from about 0.1 mM to about 1000 mM (1 M). In some embodiments, the concentration of the acetate buffer is at least 5 mM, at least 6 mM, at least 7 mM, at least 8 mM, at least 9 mM, at least 10 mM, at least 15 mM, at least 60 mM, at least 70 mM, at least 80 mM, At least 90 mM, at least 100 mM, at least 200 mM, at least 500 mM, at least 700 mM, or at least 900 mM. In some embodiments, the concentration of the acetate buffer is 10 mM or less, 15 mM or less, 20 mM or less, 25 mM or less, 30 mM or less, 35 mM or less, 40 mM or less, 45 mM or less, 50 mM or less, 55 mM or less, 60 mM or less, 65 mM or less, 70 mM or less, 75 mM or less, 80 mM or less, 85 mM or less, 90 mM or less, 95 mM or less, or 100 mM or less. Any range characterized by a combination of the foregoing endpoints is contemplated, including but not limited to, from about 5 mM to about 15 mM, or from about 5 mM to about 10 mM, or from about 10 mM to about 25 mM. The buffering agent is preferably added in a concentration that maintains the pH at about 5-6 or 5-6 or 4.5-5.5. When the calcium salt in the formulation is calcium acetate, in some embodiments, the total concentration of acetate is about 10 mM to about 55 mM, or about 20 mM to about 40 mM.

일부 양태에서, 제약 조성물은 적어도 약 10 mM, 적어도 약 15 mM, 적어도 약 20 mM, 적어도 약 25 mM, 적어도 약 30 mM, 적어도 약 35 mM, 적어도 약 40 mM, 45 mM, 또는 50 mM인 아세테이트의 총 농도를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 아세테이트의 농도는 약 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 55 mM, 60 mM, 65 mM, 70 mM, 75 mM, 80 mM, 85 mM, 또는 90 mM 이하이다. 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는 전술한 종점들의 조합을 특징으로 하는 임의의 범위가 고려된다: 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 20 mM 내지 약 50 mM, 약 20 mM 내지 약 40 mM, 약 30 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 30 mM 내지 약 75 mM. 일부 실시 형태에서, 칼슘 염은 아세트산칼슘이고 아세테이트 완충제는 아세트산나트륨이다. 비제한적인 예로서, 10 mM의 아세트산칼슘을 함유하는 용액은 칼슘 양이온의 2가 성질 때문에 20 mM의 아세테이트 음이온과 10 mM의 칼슘 양이온을 갖는 반면, 10 mM의 아세트산나트륨을 함유하는 용액은 10 mM의 나트륨 양이온 및 10 mM의 아세테이트 음이온을 가질 것이다. In some embodiments, the pharmaceutical composition is at least about 10 mM, at least about 15 mM, at least about 20 mM, at least about 25 mM, at least about 30 mM, at least about 35 mM, at least about 40 mM, 45 mM, or 50 mM acetate Contains the total concentration of. In some embodiments, the concentration of acetate is about 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 55 mM, 60 mM, 65 mM, 70 mM, 75 mM, 80 mM, 85 mM, or 90 mM to be. Any range is contemplated characterized by a combination of the aforementioned endpoints, including but not limited to: about 10 mM to about 50 mM, about 20 mM to about 50 mM, about 20 mM to about 40 mM, about 30 mM to about 50 mM, or about 30 mM to about 75 mM. In some embodiments, the calcium salt is calcium acetate and the acetate buffer is sodium acetate. As a non-limiting example, solutions containing 10 mM calcium acetate have 20 mM acetate anions and 10 mM calcium cations due to the divalent nature of calcium cations, whereas solutions containing 10 mM sodium acetate have 10 mM It will have a sodium cation and 10 mM acetate anion.

일부 실시 형태에서, 용액 중 이온(양이온 및 음이온)의 총 농도는 적어도 10 mM, 적어도 약 15 mM, 적어도 약 20 mM, 적어도 약 25 mM, 적어도 약 30 mM, 적어도 약 35 mM, 적어도 약 40 mM, 적어도 약 45 mM, 적어도 약 50 mM, 적어도 약 55 mM, 적어도 약 60 mM, 적어도 약 65 mM, 적어도 약 70 mM, 적어도 약 75 mM, 적어도 약 80 mM, 또는 적어도 약 85 mM이다. 일부 실시 형태에서, 이온의 총 농도는 약 30 mM 이하, 약 35 mM 이하, 약 40 mM 이하, 약 45 mM 이하, 약 50 mM 이하, 약 55 mM 이하 mM, 약 60 mM 이하, 약 65 mM 이하, 약 70 mM 이하, 약 75 mM 이하, 약 80 mM 이하, 약 85 mM 이하, 약 90 mM 이하, 약 95 mM 이하, 약 100 mM 이하, 약 110 mM 이하, 약 120 mM 이하, 약 130 mM 이하, 약 140 mM 이하, 약 150 mM 이하, 약 160 mM 이하, 약 170 mM 이하, 약 180 mM 이하, 약 190 mM 이하 또는 약 200 mM 이하이다. 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는 상기 전술한 종점들의 조합을 특징으로 하는 임의의 범위가 고려된다: 약 30 mM 내지 약 60 mM, 또는 약 30 mM 내지 약 70 mM, 또는 약 30 mM 내지 약 80 mM, 또는 약 40 mM 내지 약 150 mM, 또는 약 50 mM 내지 약 150 mM. 비제한적인 예로서, 10 mM의 아세트산칼슘의 용액은 30 mM의 총 이온 농도(10 mM의 양이온 및 20 mM의 음이온)를 가질 것이다. In some embodiments, the total concentration of ions (cations and anions) in the solution is at least 10 mM, at least about 15 mM, at least about 20 mM, at least about 25 mM, at least about 30 mM, at least about 35 mM, at least about 40 mM. , At least about 45 mM, at least about 50 mM, at least about 55 mM, at least about 60 mM, at least about 65 mM, at least about 70 mM, at least about 75 mM, at least about 80 mM, or at least about 85 mM. In some embodiments, the total concentration of ions is about 30 mM or less, about 35 mM or less, about 40 mM or less, about 45 mM or less, about 50 mM or less, about 55 mM or less mM, about 60 mM or less, about 65 mM or less , About 70 mM or less, about 75 mM or less, about 80 mM or less, about 85 mM or less, about 90 mM or less, about 95 mM or less, about 100 mM or less, about 110 mM or less, about 120 mM or less, about 130 mM or less , About 140 mM or less, about 150 mM or less, about 160 mM or less, about 170 mM or less, about 180 mM or less, about 190 mM or less, or about 200 mM or less. Any range is contemplated characterized by a combination of the aforementioned endpoints, including but not limited to: about 30 mM to about 60 mM, or about 30 mM to about 70 mM, or about 30 mM to about 80 mM. , Or about 40 mM to about 150 mM, or about 50 mM to about 150 mM. As a non-limiting example, a solution of 10 mM calcium acetate will have a total ionic concentration of 30 mM (10 mM cations and 20 mM anions).

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 제약 조성물은 폴리올을 포함한다. 폴리올은 당(예를 들어 만니톨, 수크로스, 소르비톨) 및 기타 다가 알코올(예를 들어 글리세롤 및 프로필렌 글리콜)을 포함하는 부형제의 부류를 포함한다. 예시적인 폴리올은 프로필렌 글리콜, 글리세린(글리세롤), 트레오스, 트레이톨, 에리트로스, 에리트리톨, 리보스, 아라비노스, 아라비톨, 릭소스, 말티톨, 소르비톨, 소르보스, 글루코스, 만노스, 만니톨, 레불로스, 덱스트로스, 말토스, 트레할로스, 프룩토스, 자일리톨, 이노시톨, 갈락토스, 자일로스, 프룩토스, 수크로스, 1,2,6-헥산트리올 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 고차 당은 덱스트란, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 환원당, 예컨대 프룩토스, 말토스 또는 갈락토스는 비-환원당보다 더 쉽게 산화된다. 당 알코올의 추가 예로는 글루시톨, 말티톨, 락티톨 또는 이소-말툴로스가 있다. 추가의 예시적인 동결보호제는 글리세린 및 젤라틴, 및 당인 멜리비오스, 멜레지토스, 라피노스, 만노트리오스 및 스타키오스를 포함한다. 환원당의 예는 글루코스, 말토스, 락토스, 말툴로스, 이소말툴로스 및 락툴로스를 포함한다. 비-환원당의 예는 당 알코올 및 기타 직쇄 폴리알코올로부터 선택되는 폴리히드록시 화합물의 비-환원 글리코시드를 포함한다. 모노글리코시드는 락토스, 말토스, 락툴로스 및 말툴로스와 같은 이당류의 환원에 의해 수득되는 화합물을 포함한다. In some or any embodiments, the pharmaceutical composition comprises a polyol. Polyols include a class of excipients including sugars (eg mannitol, sucrose, sorbitol) and other polyhydric alcohols (eg glycerol and propylene glycol). Exemplary polyols are propylene glycol, glycerin (glycerol), threose, threitol, erythrose, erythritol, ribose, arabinose, arabitol, lyxose, maltitol, sorbitol, sorbose, glucose, mannose, mannitol, levulose , Dextrose, maltose, trehalose, fructose, xylitol, inositol, galactose, xylose, fructose, sucrose, 1,2,6-hexanetriol, and the like, but are not limited thereto. Higher sugars include, but are not limited to, dextran, propylene glycol, or polyethylene glycol. Reducing sugars such as fructose, maltose or galactose are more easily oxidized than non-reducing sugars. Further examples of sugar alcohols are glucitol, maltitol, lactitol or iso-maltulose. Additional exemplary cryoprotectants include glycerin and gelatin, and the sugars melibiose, melesitos, raffinose, mannotris and stachiose. Examples of reducing sugars include glucose, maltose, lactose, maltulose, isomaltulose and lactulose. Examples of non-reducing sugars include non-reducing glycosides of polyhydroxy compounds selected from sugar alcohols and other linear polyalcohols. Monoglycosides include compounds obtained by reduction of disaccharides such as lactose, maltose, lactulose and maltulose.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 제약 조성물은 약 0% 내지 약 40%(w/v)의 범위의 농도의 폴리올을 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 적어도 0.5, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18, 적어도 19, 적어도 20, 적어도 30, 또는 적어도 40%(w/v)의 농도의 폴리올을 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9% 내지 약 10%(w/v)의 농도의 폴리올을 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 2% 내지 약 6%(w/v)의 농도의 폴리올을 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 4%(w/v)의 농도의 폴리올을 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 6%(w/v)의 폴리올을 포함한다. In some or any embodiments, the pharmaceutical composition comprises a polyol at a concentration ranging from about 0% to about 40% (w/v). In some or any embodiments, the composition is at least 0.5, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 30, or at least 40% (w/v) of the polyol. In some or certain embodiments, the composition comprises a polyol at a concentration of about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9% to about 10% (w/v). In some or any embodiments, the composition comprises a polyol at a concentration of about 2% to about 6% (w/v). In some or any embodiments, the composition comprises a polyol at a concentration of about 4% (w/v). In some or any embodiments, the composition comprises about 6% (w/v) polyol.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 제약 조성물은 계면활성제를 포함한다. 예시적인 계면활성제는 천연 발생 아미노산으로부터 유도된 계면활성제를 포함하여 음이온성, 양이온성, 비이온성, 쯔비터이온성 및 양쪽성 계면활성제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 음이온성 계면활성제는 소듐 라우릴 술페이트, 디옥틸 소듐 술포숙시네이트 및 디옥틸 소듐 술포네이트, 케노데옥시콜산, N-라우로일사르코신 소듐 염, 리튬 도데실 술페이트, 1-옥탄 술폰산 소듐 염, 소듐 콜레이트 수화물, 소듐 데옥시콜레이트, 및 글리코데옥시콜산 소듐 염을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 양이온성 계면활성제는 벤잘코늄 클로라이드 또는 벤제토늄 클로라이드, 세틸피리디늄 클로라이드 일수화물 및 헥사데실트리메틸암모늄 브로마이드를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 쯔비터이온성 계면활성제는 CHAPS, CHAPSO, SB3-10 및 SB3-12를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 비이온성 계면활성제는 디지토닌, 트리톤(Triton) X-100, 트리톤 X-114, 트윈(TWEEN)-20 및 트윈-80을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 또 다른 실시 형태에서, 계면활성제는 라우로마크로골 400, 폴리옥실 40 스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유 10, 40, 50 및 60, 글리세롤 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65 및 폴리소르베이트 80, 대두 레시틴 및 기타 인지질, 예컨대 DOPC, DMPG, DMPC 및 DOPG; 수크로스 지방산 에스테르, 메틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. In some or any embodiments, the pharmaceutical composition comprises a surfactant. Exemplary surfactants include, but are not limited to, anionic, cationic, nonionic, zwitterionic and amphoteric surfactants including surfactants derived from naturally occurring amino acids. Anionic surfactants include sodium lauryl sulfate, dioctyl sodium sulfosuccinate and dioctyl sodium sulfonate, kenodeoxycholic acid, N-lauroylsarcosine sodium salt, lithium dodecyl sulfate, 1-octane sulfonic acid. Sodium salt, sodium cholate hydrate, sodium deoxycholate, and sodium glycodeoxycholic acid sodium salt. Cationic surfactants include, but are not limited to, benzalkonium chloride or benzethonium chloride, cetylpyridinium chloride monohydrate and hexadecyltrimethylammonium bromide. Zwitterionic surfactants include, but are not limited to, CHAPS, CHAPSO, SB3-10 and SB3-12. Nonionic surfactants include, but are not limited to, digitonin, Triton X-100, Triton X-114, TWEEN-20 and Tween-80. In another embodiment, the surfactant is lauromacrogol 400, polyoxyl 40 stearate, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 10, 40, 50 and 60, glycerol monostearate, polysorbate 20, polysorbate 40, Polysorbate 60, polysorbate 65 and polysorbate 80, soybean lecithin and other phospholipids such as DOPC, DMPG, DMPC and DOPG; Sucrose fatty acid ester, methyl cellulose, and carboxymethyl cellulose. In some or any embodiments, the surfactant is polysorbate 20.

계면활성제는 개별적으로 또는 상이한 비의 혼합물로서 조성물에 포함될 수 있다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 0% 내지 약 5%(w/v)(예를 들어, 약 0.001, 약 0.002, 약 0.005, 약 0.007, 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6, 약 0.7, 약 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0, 약 2.5, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0 또는 약 4.5%(w/v))의 농도의 계면활성제를 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 0.001% 내지 약 0.5%(w/v)의 농도의 계면활성제를 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 0.004, 약 0.005, 약 0.007, 약 0.01, 약 0.05, 또는 약 0.1%(w/v) 내지 약 0.2%(w/v)의 농도의 계면활성제를 포함한다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 조성물은 약 0.01% 내지 약 0.1%(w/v)의 농도의 계면활성제를 포함한다. Surfactants may be included in the composition individually or as a mixture in different ratios. In some or any embodiments, the composition comprises about 0% to about 5% (w/v) (e.g., about 0.001, about 0.002, about 0.005, about 0.007, about 0.01, about 0.05, about 0.1, about 0.2 , About 0.3, about 0.4, about 0.5, about 0.6, about 0.7, about 0.8, about 0.9, about 1.0, about 1.5, about 2.0, about 2.5, about 3.0, about 3.5, about 4.0 or about 4.5% (w/v )) concentration of surfactant. In some or any embodiments, the composition comprises a surfactant at a concentration of about 0.001% to about 0.5% (w/v). In some or any embodiments, the composition comprises a surfactant at a concentration of about 0.004, about 0.005, about 0.007, about 0.01, about 0.05, or about 0.1% (w/v) to about 0.2% (w/v). do. In some or any embodiments, the composition comprises a surfactant at a concentration of about 0.01% to about 0.1% (w/v).

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 제약 조성물은 55 mM의 아세테이트, 13 mM의 칼슘, 6.0%(w/v)의 수크로스, 0.006%(w/v)의 폴리소르베이트 20(pH 5.2)을 포함한다. In some or any embodiments, the pharmaceutical composition comprises 55 mM acetate, 13 mM calcium, 6.0% (w/v) sucrose, 0.006% (w/v) polysorbate 20 (pH 5.2). do.

지속- 또는 제어-전달 제형 형태의 항원 결합 단백질을 포함하는 제형을 포함하는 추가의 제약 조성물이 당업자에게 명백할 것이다. 리포솜 캐리어, 생체 침식성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사제와 같은 다양한 다른 지속- 또는 제어-전달 수단을 제형화하는 기술도 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 국제 특허 출원 제PCT/US93/00829호를 참조하며, 이는 참고로 포함되고 제약 조성물의 전달을 위한 다공성 중합체성 마이크로입자의 제어 방출을 설명한다. 지속-방출 제제는 성형된 물품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 히드로겔, 폴리락티드(미국 특허 제3773919호 및 유럽 특허 출원 공개 제058481호에 개시된 바와 같으며, 이들 각각은 참고로 포함됨음), L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체(문헌[Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556]), 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트)(문헌[Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277] 및 문헌[Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105]), 에틸렌 비닐 아세테이트(상기 문헌[Langer et al., 1981]) 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산(유럽 특허 출원 공개 제133988호)를 포함할 수 있다. 지속 방출 조성물은 또한 당업계에 공지된 임의의 여러 방법에 의해 제조될 수 있는 리포솜을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:3688-3692]; 유럽 특허 출원 공개 제036676호; 유럽 특허 출원 공개 제088046호 및 유럽 특허 출원 공개 제143949호(참고로 포함됨)를 참조한다. Additional pharmaceutical compositions comprising formulations comprising an antigen binding protein in the form of sustained- or controlled-delivery formulations will be apparent to those skilled in the art. Techniques for formulating various other sustained- or controlled-delivery means such as liposome carriers, bioerodible microparticles or porous beads and depot injections are also known to those of skill in the art. See, for example, International Patent Application No. PCT/US93/00829, which is incorporated by reference and describes controlled release of porous polymeric microparticles for delivery of pharmaceutical compositions. Sustained-release formulations may comprise a semi-permeable polymer matrix in the form of a shaped article, for example a film or microcapsule. Sustained release matrices include polyester, hydrogel, polylactide (as disclosed in U.S. Patent No. 3773919 and European Patent Application Publication No. 058481, each of which is incorporated by reference), L-glutamic acid and gamma ethyl-L -Copolymers of glutamate (Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), poly(2-hydroxyethyl-methacrylate) (Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 and Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), ethylene vinyl acetate (Langer et al., 1981, supra) or poly-D (- )-3-hydroxybutyric acid (European Patent Application Publication No. 133988). Sustained release compositions can also include liposomes that can be prepared by any of a number of methods known in the art. See, eg, Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:3688-3692]; European Patent Application Publication No. 036676; See European Patent Application Publication No. 088046 and European Patent Application Publication No. 143949, which are incorporated by reference.

생체 내 투여에 사용되는 제약 조성물은 전형적으로 살균 제제로 제공된다. 살균은 살균 여과 막을 통한 여과로 성취될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 이 방법을 사용한 살균은 동결건조 및 재구성 전 또는 후에 수행될 수 있다. 비경구 투여용 조성물은 동결건조된 형태 또는 용액으로 보관될 수 있다. 비경구용 조성물은 일반적으로 살균 접근 포트가 있는 용기, 예를 들어, 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 넣는다. Pharmaceutical compositions used for in vivo administration are typically provided in sterile formulations. Sterilization can be achieved by filtration through sterile filtration membranes. When the composition is lyophilized, sterilization using this method can be carried out before or after lyophilization and reconstitution. The composition for parenteral administration may be stored in a lyophilized form or as a solution. Parenteral compositions are generally placed in a container with a sterile access port, for example an intravenous solution bag or vial with a stopper pierceable with a hypodermic injection needle.

유리 아미노산은 본 발명의 다양한 실시 형태에 따른 항체 또는 단편의 제형에서 벌킹제, 안정화제 및 항산화제로서 사용될 수 있고, 이외에도 다른 표준 용도로 사용될 수 있다. 라이신, 프롤린, 세린 및 알라닌은 제형에서 단백질을 안정화하는 데 사용될 수 있다. 글리신은 올바른 케이크 구조 및 특성을 보장하기 위한 동결건조에 유용한다. 아르기닌은 액체 및 동결건조 제형 둘 다에서 단백질 응집을 억제하는 데 유용할 수 있다. 메티오닌은 항산화제로 유용하다. Free amino acids may be used as bulking agents, stabilizers, and antioxidants in the formulation of antibodies or fragments according to various embodiments of the present invention, and may be used for other standard applications. Lysine, proline, serine and alanine can be used to stabilize proteins in formulations. Glycine is useful for lyophilization to ensure correct cake structure and properties. Arginine can be useful in inhibiting protein aggregation in both liquid and lyophilized formulations. Methionine is useful as an antioxidant.

항체 제형의 실시 형태는 하나 이상의 항산화제를 추가로 포함할 수 있다. 적절한 수준의 주위 산소 및 온도를 유지함으로써, 그리고 광에의 노출을 피함으로써 제약 제형에서 단백질의 유해한 산화를 어느 정도 방지할 수 있다. 항산화 부형제는 단백질의 산화적 열화를 방지하는 데에도 사용될 수 있다. 이와 관련하여 유용한 항산화제 중에는 환원제, 산소/유리 라디칼 제거제 및 킬레이팅제가 있다. 본 발명에 따른 치료용 단백질 제형에 사용하기 위한 항산화제는 바람직하게는 수용성이고 제품의 유통 기한 내내 그의 활성을 유지한다. 이와 관련하여 EDTA가 본 발명에 따른 바람직한 항산화제이다. Embodiments of the antibody formulation may further include one or more antioxidants. By maintaining appropriate levels of ambient oxygen and temperature, and by avoiding exposure to light, the harmful oxidation of proteins in pharmaceutical formulations can be prevented to some extent. Antioxidant excipients can also be used to prevent oxidative degradation of proteins. Among the antioxidants useful in this regard are reducing agents, oxygen/free radical scavengers and chelating agents. Antioxidants for use in the therapeutic protein formulations according to the invention are preferably water soluble and retain their activity throughout the shelf life of the product. In this regard, EDTA is the preferred antioxidant according to the invention.

본 발명에 따른 제형은 단백질 보조 인자이고 특정 인슐린 현탁액을 형성하는 데 필요한 아연과 같은 단백질 배위 복합체를 형성하는 데 필요한 금속 이온을 포함할 수 있다. 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 일부 과정을 억제할 수 있다. 그러나 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 물리적 및 화학적 과정을 촉매한다. Formulations according to the invention are protein cofactors and may contain metal ions necessary to form protein coordination complexes such as zinc, which are necessary to form certain insulin suspensions. Metal ions can also inhibit some of the processes that break down proteins. However, metal ions also catalyze the physical and chemical processes that break down proteins.

마그네슘 이온(10~120 mM)은 아스파르트산이 이소아스파르트산으로 이성질체화되는 것을 억제하는 데 사용될 수 있다. Ca⁺² 이온(최대 100 mM)은 인간 데옥시리보뉴클레아제의 안정성을 증가시킬 수 있다. 그러나, Mg⁺², Mn⁺², 및 Zn⁺²는 rhDNase를 탈안정화할 수 있다. 이와 유사하게, Ca⁺² 및 Sr⁺²는 인자 VIII을 안정화할 수 있으며, 인자 VIII은 Mg⁺², Mn⁺² 및 Zn⁺², Cu⁺² 및 Fe⁺²에 의해서는 탈안정화될 수 있고, 이의 응집은 Al⁺³ 이온에 의해 증가될 수 있다. Magnesium ions (10-120 mM) can be used to inhibit the isomerization of aspartic acid to isoaspartic acid. Ca ⁺² ions (up to 100 mM) can increase the stability of human deoxyribonuclease. However, Mg ⁺² , Mn ⁺² , and Zn ⁺² can destabilize rhDNase. Similarly, Ca ⁺² and Sr ⁺² can stabilize factor VIII, and factor VIII can be destabilized by Mg ⁺² , Mn ⁺² and Zn ⁺² , Cu ⁺² and Fe ⁺² and , Its aggregation can be increased by Al ⁺³ ions.

항체 제형의 실시 형태는 하나 이상의 보존제를 추가로 포함할 수 있다. Embodiments of the antibody formulation may further include one or more preservatives.

일단 제약 조성물이 제형화되었으면, 이것은 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체, 결정 또는 탈수 또는 동결건조 분말로서 살균 바이알 내에서 보관될 수 있다. 이러한 제형은 즉시 사용가능한 형태로 또는 투여 전에 재구성되는 형태(예를 들어, 동결건조)로 보관될 수 있다. 본 발명은 또한 단회 용량 투여 단위를 생성하기 위한 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 각각 건조된 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제형을 갖는 제2 용기 둘 다를 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, 단일 및 다중 챔버 사전 충전 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 리오시린지(lyosyringe))를 포함하는 키트가 제공된다. Once the pharmaceutical composition has been formulated, it can be stored in sterile vials as solutions, suspensions, gels, emulsions, solids, crystals or dehydrated or lyophilized powders. Such formulations may be stored in ready-to-use form or in a form that is reconstituted prior to administration (eg, lyophilized). The invention also provides kits for producing single dose dosage units. The kits of the present invention may comprise both a first container with each dried protein and a second container with an aqueous formulation. In certain embodiments of the invention, kits are provided comprising single and multi-chamber prefilled syringes (eg, liquid syringes and lyosyringes).

이용될 항체-함유 제약 조성물의 치료적 유효량은 예를 들어 치료적 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 당업자는 치료를 위한 적절한 투여량 수준이 부분적으로는 전달되는 분자, 항체가 사용되는 적응증(들), 투여 경로 및 환자의 크기(체중, 신체 표면 또는 장기 크기) 및/또는 상태(연령 및 일반적인 건강)에 따라 달라질 것임을 알 것이다. The therapeutically effective amount of the antibody-containing pharmaceutical composition to be used will depend, for example, on the therapeutic context and purpose. Those of skill in the art will be aware of the molecules to which the appropriate dosage level for treatment is partially delivered, the indication(s) for which the antibody is used, the route of administration and the size of the patient (weight, body surface or organ size) and/or condition (age and general health). ).

안정성stability

항체(또는 이의 항원 결합 단편)를 포함하는 조성물과 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "안정성" 및 "안정한"은 주어진 제조, 준비, 운송 및/또는 보관 조건 하에서의 응집, 분해 또는 단편화에 대한 조성물 중 항체(또는 이의 항원 결합 단편)의 저항성을 지칭한다. 높은 안정성 정도를 포함하는 항체 제형은 향상된 신뢰성 및 안전성을 보여 주므로 임상 사용에 유리하다. The terms “stable” and “stable” as used herein in connection with a composition comprising an antibody (or antigen binding fragment thereof) refer to compositions for aggregation, degradation or fragmentation under given conditions of manufacture, preparation, transportation and/or storage. It refers to the resistance of heavy antibodies (or antigen-binding fragments thereof). Antibody formulations containing a high degree of stability are advantageous for clinical use because they show improved reliability and safety.

조성물 중 항체 안정성은 선택적으로, 시간이 지남에 따라 조성물 중 항체의 원하는 파라미터(예를 들어, 응집, 중쇄 및/또는 경쇄의 분해, 화학적 변형 등)를 조사함으로써 평가된다. 이와 관련하여, 파라미터는 전형적으로 초기 시점(TO) 및 평가 시점(T1)에서, 선택적으로, 항체를 임의의 다수의 환경 조건에 노출시키면서 조사되고, 비교된다. 예를 들어, 초기 시점은 항체가 조성물에서 처음 제형화되거나 품질에 대해 처음 조사되는(즉, 항체 조성물이 응집 또는 분해에 관한 규제 또는 제조 사양을 충족하는지 여부를 결정하기 위해 조사되는) 시점일 수 있다. 초기 시점은 또한 항체가 조성물에서 재제형화되는(예를 들어, 초기 제제와 비교하여 더 높거나 더 낮은 농도로 재제형화되는) 시점일 수 있다. 평가 시점은 다양한 실시 형태에서 초기 시점 후 약 1주(또는 약 2주, 또는 약 3주, 또는 약 4주, 또는 약 5주, 또는 약 6주, 또는 약 7주, 또는 약 8주, 또는 약 10주, 또는 약 3개월, 또는 약 6개월 또는 약 1년)이다. 조성물 중 항체 또는 이의 단편의 원하는 파라미터(예를 들어 응집 또는 분해)는 다양한 보관 조건, 예컨대 -30℃, 4℃, 20℃ 또는 40℃의 온도, 진탕, pH, 다른 용기 물질(예를 들어 유리 바이알, 사전 충전 주사기 등)에서의 보관 등에서 평가될 수 있다. Antibody stability in a composition is optionally assessed by examining the desired parameters of the antibody in the composition over time (eg, aggregation, degradation of the heavy and/or light chains, chemical modification, etc.). In this regard, parameters are typically investigated and compared at the initial time point (TO) and at the time point of evaluation (T1), optionally exposing the antibody to any of a number of environmental conditions. For example, the initial time point can be the point at which the antibody is first formulated in the composition or first examined for quality (i.e., the antibody composition is investigated to determine whether it meets regulatory or manufacturing specifications for aggregation or degradation). have. The initial point in time may also be the point at which the antibody is reformulated in the composition (eg, reformulated to a higher or lower concentration compared to the initial agent). The time point of assessment is about 1 week (or about 2 weeks, or about 3 weeks, or about 4 weeks, or about 5 weeks, or about 6 weeks, or about 7 weeks, or about 8 weeks, or about 1 week after the initial time point in various embodiments, or About 10 weeks, or about 3 months, or about 6 months or about 1 year). Desired parameters (e.g. aggregation or degradation) of the antibody or fragment thereof in the composition can be determined under various storage conditions, such as temperature of -30°C, 4°C, 20°C or 40°C, shaking, pH, other container materials (e.g. free Vials, pre-filled syringes, etc.).

항체를 포함하는 조성물에 존재하는 응집체의 유형 및/또는 크기, 및/또는 응집의 정도를 결정하는 예시적인 방법은 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC), 정적 광 산란(SLS), 푸리에 변환 적외선 분광법(Fourier Transf또는m Infrared Spectroscopy; FTIR), 원형 이색성(CD), 우레아-유도 단백질 폴딩 해제 기술, 고유 트립토판 형광, 시차 주사 열량 측정법 및 1-아닐리노-8-나프탈렌술폰산(ANS) 단백질 결합 기술을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 적절한 수지가 패킹된 컬럼에 분자를 통과시킴으로써 크기에 따라 분자를 분리하기 위해 수행될 수 있으며, 더 큰 분자(예를 들어, 응집체)는 더 작은 분자(예를 들어 단량체)보다 먼저 용출될 것이다. 분자는 일반적으로 280 nm에서의 UV 흡광도에 의해 탐지되며 추가 특성화를 위하여 수집될 수 있다. 고압 액체 크로마토그래피 컬럼은 종종 SEC 분석(HP-SEC)에 이용된다. 대안적으로, 분석용 초원심분리(AUC)를 사용할 수 있다. AUC는 액체 샘플 중 거대분자의 침강 계수를 결정하는 직교 기술(orthogonal technique)이다. SEC와 마찬가지로 AUC는 단량체로부터 항체 단편/응집체를 분리 및 검출할 수 있으며 추가로 분자 질량에 대한 정보를 제공할 수 있다. 조성물 중 항체 응집은 또한 쿨터 계수기(coulter counter)를 사용한 입자 계수기 분석에 의해 또는 탁도계를 사용한 탁도 측정에 의해 특성화될 수 있다. 탁도는 용액 중 입자가 광을 산란시키는 양의 척도이므로 단백질 응집의 일반적인 지표로 사용될 수 있다. 또한, 비-환원 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(PAGE) 또는 모세관 겔 전기 영동(CGE)을 사용하여 조성물 중 항체 또는 항체 단편의 응집 및/또는 단편화 상태를 특성화할 수 있다. Exemplary methods for determining the type and/or size of aggregates, and/or the degree of aggregation present in a composition comprising an antibody, include size exclusion chromatography (SEC), high performance size exclusion chromatography (HPSEC), static light scattering ( SLS), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), circular dichroism (CD), urea-derived protein unfolding technology, unique tryptophan fluorescence, differential scanning calorimetry and 1-anilino-8-naphthalene Sulfonic acid (ANS) protein binding technology. Size exclusion chromatography (SEC) can be performed to separate molecules by size by passing the molecules through a column packed with an appropriate resin, and larger molecules (e.g., aggregates) are smaller molecules (e.g. Monomer). Molecules are generally detected by UV absorbance at 280 nm and can be collected for further characterization. High pressure liquid chromatography columns are often used for SEC analysis (HP-SEC). Alternatively, analytical ultracentrifugation (AUC) can be used. AUC is an orthogonal technique for determining the sedimentation coefficient of a macromolecule in a liquid sample. Like SEC, AUC can separate and detect antibody fragments/aggregates from monomers and can provide additional molecular mass information. Antibody aggregation in the composition can also be characterized by particle counter analysis using a coulter counter or by measurement of turbidity using a turbidimeter. Turbidity is a measure of the amount by which particles in a solution scatter light, so it can be used as a general indicator of protein aggregation. In addition, non-reducing polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) or capillary gel electrophoresis (CGE) can be used to characterize the state of aggregation and/or fragmentation of antibodies or antibody fragments in the composition.

항체 분해를 결정하기 위한 예시적인 방법은 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 소듐 도데실 술페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE) 및 모세관 전기 영동-SDS(CE-SDS) 및 역상 HPLC-인-라인(in-line) MS 검출을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. Exemplary methods for determining antibody degradation include size exclusion chromatography (SEC), sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and capillary electrophoresis-SDS (CE-SDS) and reverse phase HPLC- Including, but not limited to, in-line MS detection.

다양한 실시 형태에서, 조성물 중 본원에 개시된 항체의 5% 미만이 관심 대상의 조건 하에서 응집체 형태로 존재한다. 예를 들어, 조성물 중 항체의 4% 미만, 또는 3% 미만, 또는 2% 미만 또는 1% 미만이 -30℃, 4℃, 20℃ 또는 40℃에서 약 1주(또는 약 2주, 또는 약 3주, 또는 약 4주, 또는 약 5주, 또는 약 6주, 또는 약 7주, 또는 약 8주, 또는 약 10주, 또는 약 3개월, 또는 약 6개월 또는 약 1년)의 기간 동안 보관 후 응집체 형태로 존재한다. 일부 실시 형태에서, 조성물 중 본원에 개시된 항체의 5% 미만(또는 4% 미만 또는 3% 미만 또는 2% 미만 또는 1% 미만)은 약 4℃에서 2주 동안 보관 후 응집체 형태로 존재한다. In various embodiments, less than 5% of the antibodies disclosed herein in the composition are present in aggregate form under the conditions of interest. For example, less than 4%, or less than 3%, or less than 2% or less than 1% of the antibodies in the composition are at -30°C, 4°C, 20°C or 40°C for about 1 week (or about 2 weeks, or about 3 weeks, or about 4 weeks, or about 5 weeks, or about 6 weeks, or about 7 weeks, or about 8 weeks, or about 10 weeks, or about 3 months, or about 6 months or about 1 year) It exists in the form of aggregates after storage. In some embodiments, less than 5% (or less than 4% or less than 3% or less than 2% or less than 1%) of the antibodies disclosed herein in the composition are in the form of aggregates after storage at about 4° C. for 2 weeks.

예를 들어, 조성물 중 항체의 적어도 85%(또는 적어도 90%, 또는 적어도 91%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 93%, 또는 적어도 94%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 96%, 또는 적어도 97%, 또는 적어도 98%, 또는 적어도 99%)는 선택적으로, -30℃, 4℃, 20℃ 또는 40℃에서 약 1주(또는 약 2주, 또는 약 3주, 또는 약 4주, 또는 약 5주, 또는 약 6주, 또는 약 7주, 또는 약 8주, 또는 약 10주, 또는 약 3개월, 또는 약 6개월 또는 약 1년)의 기간 동안 보관 후 비-응집체(즉, 단량체) 형태로 존재한다. 일부 실시 형태에서, 항체의 적어도 85%(또는 적어도 90%, 또는 적어도 91%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 93%, 또는 적어도 94%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 96% , 또는 적어도 97%, 또는 적어도 98%, 또는 적어도 99% 또는 그 이상)는 약 4℃에서 2주의 보관 후 비-응집체 형태로 조성물에 존재한다. 일부 실시 형태에서, 항체의 적어도 99%는 약 4℃에서 2주 동안 보관 후 비-응집체 형태로 조성물에 존재하고/하거나 조성물에 존재하는 항체의 적어도 95%는 -40℃에서 2주 동안 보관 후 비-응집체 형태로 존재한다. For example, at least 85% (or at least 90%, or at least 91%, or at least 92%, or at least 93%, or at least 94%, or at least 95%, or at least 96%, or at least 97 of the antibodies in the composition. %, or at least 98%, or at least 99%), optionally, at -30°C, 4°C, 20°C or 40°C for about 1 week (or about 2 weeks, or about 3 weeks, or about 4 weeks, or about Non-aggregate (i.e., monomer) after storage for a period of 5 weeks, or about 6 weeks, or about 7 weeks, or about 8 weeks, or about 10 weeks, or about 3 months, or about 6 months or about 1 year) Exists in form In some embodiments, at least 85% (or at least 90%, or at least 91%, or at least 92%, or at least 93%, or at least 94%, or at least 95%, or at least 96%, or at least 97% of the antibody. , Or at least 98%, or at least 99% or more) is present in the composition in non-aggregated form after 2 weeks of storage at about 4°C. In some embodiments, at least 99% of the antibodies are present in the composition in non-aggregated form after storage at about 4° C. for 2 weeks and/or at least 95% of the antibodies present in the composition are stored at -40° C. for 2 weeks. It exists in non-aggregated form.

다양한 실시 형태에서, 조성물 중 본원에 개시된 항체의 5% 미만이 분해된다. 예를 들어, 조성물 중 항체의 4% 미만, 또는 3% 미만, 또는 2% 미만 또는 1% 미만이 관심 대상의 조건 하에서 분해된다. 예를 들어, 선택적으로 항체의 적어도 85%(또는 적어도 90%, 또는 적어도 91%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 93%, 또는 적어도 94%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 96%, 또는 적어도 97%, 또는 적어도 98%, 또는 적어도 99%)가 약 -30℃, 약 4℃, 약 20℃ 또는 약 40℃에서 약 1주(또는 약 2주, 또는 약 3주, 또는 약 4주, 또는 약 5주, 또는 약 6주, 또는 약 7주, 또는 약 8주, 또는 10주 또는 약 3개월, 또는 약 6개월 또는 약 1년)의 기간 동안 보관된 조성물에서 온전하다(즉, 분해되지 않는다). 일부 양태에서, 항체의 적어도 85%(또는 적어도 90%, 또는 적어도 91%, 또는 적어도 92%, 또는 적어도 93%, 또는 적어도 94%, 또는 적어도 95%, 또는 적어도 96%, 또는 적어도 97%, 또는 적어도 98%, 또는 적어도 99% 또는 그 이상)이 약 4℃에서 2주의 기간 동안 조성물에서 보관 후 온전하다(즉, 분해되지 않는다). 일부 실시 형태에서, 항체의 적어도 99%는 2주 동안 약 4℃에서 조성물에서 보관될 때 온전하게 남아 있고/있거나 적어도 95%는 2주 동안 약 40℃에서 조성물에서 보관될 때 온전하게 남아 있다. In various embodiments, less than 5% of the antibodies disclosed herein in the composition are degraded. For example, less than 4%, or less than 3%, or less than 2% or less than 1% of the antibodies in the composition degrade under the conditions of interest. For example, optionally at least 85% (or at least 90%, or at least 91%, or at least 92%, or at least 93%, or at least 94%, or at least 95%, or at least 96%, or at least 97) of the antibody. %, or at least 98%, or at least 99%) at about -30°C, about 4°C, about 20°C or about 40°C for about 1 week (or about 2 weeks, or about 3 weeks, or about 4 weeks, or Intact (i.e., not degraded) in the composition stored for a period of about 5 weeks, or about 6 weeks, or about 7 weeks, or about 8 weeks, or 10 weeks or about 3 months, or about 6 months or about 1 year. Does). In some embodiments, at least 85% (or at least 90%, or at least 91%, or at least 92%, or at least 93%, or at least 94%, or at least 95%, or at least 96%, or at least 97% of the antibody, Or at least 98%, or at least 99% or more) is intact (ie does not degrade) after storage in the composition for a period of 2 weeks at about 4°C. In some embodiments, at least 99% of the antibodies remain intact when stored in the composition at about 4°C for 2 weeks and/or at least 95% remain intact when stored in the composition at about 40°C for 2 weeks.

조성물 중 항체의 기능적 안정성 또는 활성 안정성이 또한 본원에서 고려된다. 예를 들어 표적에 대한 항체 결합 또는 스클레로스틴 중화를 검출 및/또는 정량화하기 위한 분석이 당업계에 공지되어 있다. 선택적으로 항체는 초기 시점에서의 항체의 활성과 비교하여 관심 대상의 조건 하에서 약 50~100%의 활성을 나타낸다. 예를 들어, 항체는 초기 시점의 활성과 비교하여 약 60~90% 또는 70~80%의 활성 수준을 유지한다. 따라서, 항체의 기능적 안정성은 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 활성 유지를 포함하고, 100% 초과, 예컨대 105%, 110%, 115%, 120%, 125% 또는 150% 초과 또는 그 이상의 활성 측정치를 포함할 수 있다(초기 시점에서의 활성과 비교하여). Functional stability or activity stability of the antibody in the composition is also contemplated herein. Assays to detect and/or quantify, for example, antibody binding to a target or sclerostin neutralization are known in the art. Optionally, the antibody exhibits about 50-100% activity under the conditions of interest compared to the activity of the antibody at the initial time point. For example, the antibody maintains an activity level of about 60-90% or 70-80% compared to the activity at the initial time point. Thus, the functional stability of the antibody includes retention of activity of at least about 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100%, and 100% A measure of activity greater than, such as 105%, 110%, 115%, 120%, 125% or 150%, or more (compared to the activity at the initial time point) may be included.

점도 Viscosity

일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체 중 하나 이상을 포함하는 조성물의 점도가 결정된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "점도"는 "절대 점도"를 지칭한다. 절대 점도(때때로 동적 또는 단순 점도로 칭해짐)는 동점도와 유체 밀도의 곱이다(절대 점도=동점도 x 밀도). 동점도의 크기(dimension of kinematic viscosity)는 L²/T이며, 여기서, L은 길이이고 T는 시간이다. 일반적으로 동점도는 센티스토크(cSt)로 표현된다. 동점도의 SI 단위는 mm²/s이며, 이는 1 cSt이다. 절대 점도는 센티푸아즈(cP) 단위로 표현된다. 절대 점도의 SI 단위는 밀리파스칼-초(mPa-s)이며, 여기서, 1 cP=1 mPa-s이다. In some embodiments, the viscosity of a composition comprising one or more of the antibodies disclosed herein is determined. As used herein, the term “viscosity” refers to “absolute viscosity”. Absolute viscosity (sometimes referred to as dynamic or simple viscosity) is the product of kinematic viscosity and fluid density (absolute viscosity = kinematic viscosity x density). The dimension of kinematic viscosity is L ² /T, where L is the length and T is the time. In general, kinematic viscosity is expressed in centistokes (cSt). The SI unit for kinematic viscosity is mm ² /s, which is 1 cSt. Absolute viscosity is expressed in centipoise (cP). The SI unit for absolute viscosity is millipascal-second (mPa-s), where 1 cP=1 mPa-s.

조성물의 점도는 항체를 조성물에 첨가한지 수 시간 후(예를 들어 1~23시간 후), 수 일 후(예를 들어 1~10일 후), 수 주 후(예를 들어 1~5주 후), 수개월 후(예를 들어 1~12개월 후), 또는 수 년 후(예를 들어, 1~2년 후, 1~3년 후) 측정될 수 있다. 점도 측정은 예를 들어 보관 또는 투여 온도, 예를 들어 2~8℃ 또는 25℃(실온)에서 이루어질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 보관 및/또는 투여 온도에서 액체 또는 재구성 액체 조성물의 절대 점도는 15 cP 이하, 또는 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 또는 4 cP 이하이다. 일부 실시 형태에서, 액체 또는 재구성 액체 조성물의 절대 점도는 6 cP 이하이다. The viscosity of the composition is determined after several hours (for example, after 1 to 23 hours), several days (for example, after 1 to 10 days), and after several weeks (for example, after 1 to 5 weeks) after adding the antibody to the composition. ), after several months (for example, after 1 to 12 months), or after several years (for example, after 1 to 2 years, after 1 to 3 years). Viscosity measurements can be made, for example, at storage or dosing temperatures, for example 2-8°C or 25°C (room temperature). In some embodiments, the absolute viscosity of the liquid or reconstituted liquid composition at storage and/or administration temperature is 15 cP or less, or 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 or 4 cP or less. . In some embodiments, the absolute viscosity of the liquid or reconstituted liquid composition is 6 cP or less.

일부 실시 형태에서, 항체 조성물의 점도는 항체 첨가 전 및 후에 측정된다. 점도를 측정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 모세관 점도계 또는 콘-플레이트 레오미터를 사용하는 것을 포함한다. 임의의 방법이 사용될 수 있으며, 단, 테스트용 제형과 기준 제형을 비교하기 위하여 동일한 방법이 사용된다. In some embodiments, the viscosity of the antibody composition is measured before and after addition of the antibody. Methods of measuring viscosity are well known in the art and include, for example, using a capillary viscometer or a cone-plate rheometer. Any method may be used, provided that the same method is used to compare the test formulation and the reference formulation.

치료 방법 Treatment method

본원에 개시된 항체 및 제약 조성물은 골-관련 장애, 예컨대 비정상적인 골아세포 또는 파골세포 활성과 관련된 골-관련 장애의 치료 또는 예방에 유용하다. 일부 실시 형태에서, 항체는 연골 무형성증, 쇄골두개 이형성증, 골내연골종증, 섬유성 이형성증, 고셔병, 저인산염혈증 구루병, 마르판 증후군, 다발성 유전성 외골종(multiple hereditary exotoses), 신경섬유종증, 골형성 부전증, 골화석증, 골반문증, 골경화성 병변(sclerotic lesion), 가관절증, 화농성 골수염, 치주 질환, 항-간질 약물 유도성 골 손실, 일차 및 이차 부갑상선기능항진증(primary and secondary hyperparathyroidism), 가족성 부갑상선기능항진증, 무중력 상태 유도성 골 손실(weightlessness induced bone loss), 남성의 골다공증, 폐경 후의 골 손실, 골관절염, 신성골이영양증(renal osteodystrophy), 침윤성 골 질환, 구강 골 손실, 악골괴사, 소아 파제트병, 유선상과골증(melorheostosis), 대사성 골 질환, 비만세포증, 겸상 적혈구 빈혈증/질환, 장기 이식 관련 골 손실, 신장 이식 관련 골 손실, 전신 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 간질, 소아 관절염, 지중해 빈혈(thalassemia), 뮤코다당증, 파브리병, 터너 증후군, 다운 증후군, 클라인펠터 증후군, 나병(leprosy), 퍼세스병, 청소년기 특발성 척추 측만증, 영아 발병 다기관 염증 질환, 윈체스트 증후군, 멘케스병, 윌슨병, 허혈성 골 질환(예컨대 레그-칼베-페르테스병(Legg-Calve-Perthes disease) 및 이동성 국소적 골다공증(regional migratory osteoporosis)), 빈혈 상태, 스테로이드에 의해 야기되는 병태, 글루코코르티코이드-유도성 골 손실, 헤파린-유도성 골 손실, 골수 장애, 괴혈병, 영양실조, 칼슘 결핍증, 골다공증, 골감소증(osteopenia), 알코올 중독, 만성 간 질환, 폐경 후 장애, 만성 염증 상태, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 염증성 대장염, 크론병, 희발월경, 무월경증, 임신-관련 골 손실, 당뇨병, 갑상선 기능 항진증, 갑상선 질환, 부갑상선 질환, 쿠싱병, 말단 비대증, 성선 기능 저하증(hypogonadism), 고정 또는 불용(immobilization 또는 disuse), 반사성 교감신경 이영양증 증후군(reflex sympathetic dystrophy syndrome), 국소 골다공증, 골연화증, 관절 치환 관련 골 손실, HIV 관련 골 손실, 성장 호르몬 손실 관련 골 손실, 낭포성 섬유증 관련 골 손실, 화학요법 관련 골 손실, 종양-유도성 골 손실, 암-관련 골 손실, 호르몬 절제 골 손실(h또는mone ablative bone loss), 다발성 골수종, 약물-유도성 골 손실, 신경성 식욕 부진증(an또는exia nervosa), 질환-관련 안면 골 손실, 질환-관련 두개골 손실(disease-associated cranial bone loss), 질환-관련 악골 손실, 질환-관련 머리 골 손실(disease-associated bone loss of the skull), 노화 관련 골 손실, 노화 관련 안면 골 손실, 노화 관련 두개골 손실, 노화 관련 악골 손실, 노화 관련 머리 골 손실 및 우주 여행 관련 골 손실로 이루어진 군으로부터 선택되는 골 관련 장애를 앓고 있는 대상체에게 투여된다.The antibodies and pharmaceutical compositions disclosed herein are useful for the treatment or prevention of bone-related disorders, such as bone-related disorders associated with abnormal osteoblast or osteoclast activity. In some embodiments, the antibody is achondroplasia, clavicrocranial dysplasia, osteochondrosis, fibrotic dysplasia, Gaucher's disease, hypophosphatemic rickets, Marfan's syndrome, multiple hereditary exotoses, neurofibromatosis, bone insufficiency, Osteopetrosis, pelvic gland disease, sclerotic lesion, arthrosis, purulent osteomyelitis, periodontal disease, anti-epileptic drug-induced bone loss, primary and secondary hyperparathyroidism, familial parathyroid function Hypertrophy, weightlessness induced bone loss, osteoporosis in men, postmenopausal bone loss, osteoarthritis, renal osteodystrophy, invasive bone disease, oral bone loss, jaw bone loss, pediatric Paget's disease, Melorheostosis, metabolic bone disease, mastocytosis, sickle cell anemia/disease, organ transplant-related bone loss, kidney transplant-related bone loss, systemic lupus erythematosus, ankylosing spondylitis, epilepsy, juvenile arthritis, thalassemia , Mucopolysaccharide, Fabry's disease, Turner's syndrome, Down syndrome, Klinefelter's syndrome, leprosy, Perses' disease, adolescent idiopathic scoliosis, infantile multi-organ inflammatory disease, Winchester's syndrome, Menke's disease, Wilson's disease, ischemic Bone diseases (such as Leg-Calve-Perthes disease and regional migratory osteoporosis), anemia conditions, conditions caused by steroids, glucocorticoid-induced bone loss, heparin -Induced bone loss, bone marrow disorder, scurvy, malnutrition, calcium deficiency, osteoporosis, osteopenia, alcoholism, chronic liver disease, postmenopausal disorders, chronic inflammatory conditions, rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, ulcerative colitis, Inflammatory colitis, Crohn's disease, rare menstruation, amenorrhea, pregnancy -Related bone loss, diabetes, hyperthyroidism, thyroid disease, parathyroid disease, Cushing's disease, acromegaly, hypogonadism, immobilization or disuse, reflex sympathetic dystrophy syndrome , Focal osteoporosis, osteomalacia, bone loss related to joint replacement, bone loss related to HIV, bone loss related to growth hormone loss, bone loss related to cystic fibrosis, bone loss related to chemotherapy, tumor-induced bone loss, cancer-related bone loss, Hormone-resected bone loss (h or mone ablative bone loss), multiple myeloma, drug-induced bone loss, anorexia nervosa (an or exia nervosa), disease-related facial bone loss, disease-associated cranial loss (disease-associated cranial) bone loss), disease-associated bone loss of the skull, disease-associated bone loss of the skull, aging-related bone loss, aging-related facial bone loss, aging-related skull loss, aging-related jaw loss, aging-related It is administered to a subject suffering from a bone related disorder selected from the group consisting of head bone loss and space travel related bone loss.

일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체는 정형 외과 수술, 치과 수술, 임플란트 수술, 관절 대체술, 골 이식술, 골 성형 수술 및 골 재생술(bone repair), 예컨대 골절 치유, 불유합 치유, 지연 유합 치유 및 안면 재건에서 결과를 개선시키는 데 유용하다. 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물은 시술, 대체, 이식, 수술 또는 재생 전, 도중 및/또는 후에 투여될 수 있다. In some embodiments, the antibodies disclosed herein are orthopedic surgery, dental surgery, implant surgery, joint replacement surgery, bone grafting, bone plastic surgery and bone repair, such as fracture healing, nonunion healing, delayed union healing and facial It is useful to improve results in reconstruction. Compositions comprising one or more antibodies may be administered before, during and/or after a procedure, replacement, transplant, surgery or regeneration.

일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체는 뼈의 두 분절 사이의 갭(예를 들어, 뼈의 두 분절 사이의 적어도 약 1 mm의 갭)을 포함하는 임의의 골절의 치료에 유용하다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 갭은 적어도 약 2 mm, 적어도 약 3 mm, 적어도 약 4 mm, 적어도 약 5 mm, 적어도 약 6 mm, 적어도 약 7 mm, 적어도 약 8 mm, 적어도 약 9 mm, 또는 적어도 약 1 cm 또는 그 이상이다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 갭은 약 5 mm 내지 1 cm, 또는 최대 1 cm이다. 용어 "뼈 갭 결함" 및 "분절 골격 결함"은 본원에서 동의어로 사용되며 뼈의 두 분절 사이의 갭(예를 들어, 적어도 1 mm의 갭)을 지칭한다. In some embodiments, the antibodies disclosed herein are useful for the treatment of any fracture comprising a gap between two segments of bone (eg, a gap of at least about 1 mm between two segments of bone). In some or any embodiments, the gap is at least about 2 mm, at least about 3 mm, at least about 4 mm, at least about 5 mm, at least about 6 mm, at least about 7 mm, at least about 8 mm, at least about 9 mm, Or at least about 1 cm or more. In some or any embodiments, the gap is between about 5 mm and 1 cm, or at most 1 cm. The terms “bone gap defect” and “segment skeletal defect” are used synonymously herein and refer to a gap between two segments of a bone (eg, a gap of at least 1 mm).

예시적인 골 갭 결함은 분쇄 골절, 비유합 골절, 분절 골격 결함, 외과적으로 생성된 골 결함, 외과적으로 처리된 골 결함, 및 뼈 또는 질환(관절염, 종양 제거(절제) 또는 감염 제거를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 대한 외상성 손상으로부터 생성된 골 결함을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 골 갭 결함은 골육종, 유잉 육종, 연골 육종, 악성 섬유성 조직구종, 섬유육종, 및 척색종을 포함하지만 이에 한정되지 않는 골암으로 인한 뼈로부터의 암의 제거 또는 뼈의 감염된 절편의 제거에 의해 생성된다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 골 갭 결함은 예를 들어 유전적 결함으로 인한 발달 기형이다. Exemplary bone gap defects include comminuted fractures, non-union fractures, segmental skeletal defects, surgically generated bone defects, surgically treated bone defects, and bone or disease (arthritis, tumor removal (resection) or infection removal). But not limited thereto), including, but not limited to, bone defects resulting from traumatic injury. In some or any embodiments, the bone gap defect is a bone or removal of cancer from bone due to bone cancer including, but not limited to, osteosarcoma, Ewing's sarcoma, chondrosarcoma, malignant fibrous histiocytoma, fibrosarcoma, and chordoma. Produced by removal of infected sections of In some or any embodiments, the bone gap defect is a developmental malformation due to, for example, a genetic defect.

일부 또는 임의의 실시 형태에서, 골 갭 결함은 양성 종양을 함유하는 골 절편의 제거에 의해 생성된다. 예시적인 양성 골 종양은 골종, 골성 골종, 골아세포종, 골연골종, 내연골종, 연골점액양 섬유종, 동맥류성 골 낭종, 고립성 골 낭종, 뼈의 섬유성 이형성증 및 뼈의 거대 세포 종양을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. In some or any embodiments, the bone gap defect is created by removal of a bone segment containing a benign tumor. Exemplary benign bone tumors include, but are not limited to, osteoma, osteoblastoma, osteoblastoma, osteochondrosis, internal chondroma, chondromyxoid fibroma, aneurysmal bone cyst, solitary bone cyst, fibrous dysplasia of the bone, and giant cell tumor of the bone. Not limited.

항체의 투여는 골 갭 결함 치유를 향상시키거나 가속화하여 골 갭 결함을 "치료"한다. 골 치유를 "향상시키는"이란, 스클레로스틴 억제제가 투여되지 않은 대상체(즉, 대조 대상체)(예를 들어, 인간과 같은 포유 동물)에서 경험되는 골 치유 수준을 넘어서는(즉, 초과하는) 골 치유 수준을 매개하는 것을 의미한다. 골 치유는 예를 들어, 가교 상태, 개선된 골 부피, 개선된 골 무기질 함량 및 골절 갭 내 밀도(즉, 가교 골 형성), 성숙한 골 캘러스, 개선된 골 강도(선택적으로 의학적으로 허용가능한 골 강성 수준이 동반됨) 또는 병에 걸린 부위의 환자의 개선된 사용에 의해 입증된다. "개선된"은 측정된 파라미터의 증가 또는 감소(원하는 대로)를 의미한다. 증가는 측정된 파라미터가 전체으로 또는 부분적으로 기저선 수준(예를 들어 골 갭 결함 이전 수준), 당업계에서 사용되는 규범적 데이터베이스에서 제공된 값 또는 대측 기능 수준으로 복귀하는 것(예를 들어, 대측 사지의 기능적 능력으로 전체적으로 또는 부분적으로 복귀하는 것)일 수 있다. 일부 경우 증가는 기저선 수준을 넘어 개선될 수 있다. 원하는 경우, 항체의 1회 이상의 용량을 투여받은 환자에서의 측정된 파라미터가 항체를 투여하지 않은 골절 환자(선택적으로 연령 및 성별이 매칭됨)에서 동일한 파라미터와 비교되어 본원에 기술된 방법의 효능을 추가로 분석할 수 있다. Administration of the antibody "treats" the bone gap defect by enhancing or accelerating the healing of the bone gap defect. By “enhancing” bone healing, the level of bone healing experienced in a subject not administered a sclerostin inhibitor (ie, a control subject) (eg, a mammal such as a human) is exceeded (ie, exceeded). Means mediating the level of bone healing. Bone healing can include, for example, bridging status, improved bone volume, improved bone mineral content and density in the fracture gap (i.e., bridging bone formation), mature bone callus, improved bone strength (optionally medically acceptable bone stiffness). Level) or by the improved use of the patient in the affected area. “Improved” means an increase or decrease (as desired) of a measured parameter. The increase is that the measured parameter returns to the baseline level in whole or in part (e.g., the level before the bone gap defect), the value provided in the normative database used in the art, or the contralateral functional level (e.g., contralateral limb. It may be a full or partial return to the functional ability of In some cases, the increase may improve beyond the baseline level. If desired, the parameters measured in patients receiving one or more doses of the antibody are compared to the same parameters in fracture patients not receiving the antibody (optionally matched with age and sex) to determine the efficacy of the methods described herein. Can be further analyzed.

가교 골의 형성, 골 무기질 함량 및 골 밀도 및/또는 골 결함 부위에서의 성숙한 골 캘러스는 방사선 촬영(예를 들어 방사선 흡수 계측법), 단일 및/또는 이중 에너지 X-선 흡수 계측법, 정량적 컴퓨터 단층 촬영(QCT), 초음파 검사, 방사선 촬영(예를 들어 방사선 흡수 계측법) 및 자기 공명 영상을 이용하여 측정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체는 결함 부위에서 가교 골 형성, 골 캘러스 형성 또는 골 밀도(또는 부피)를 적어도 약 5%(약 6%, 약 7%, 약 8% 또는 약 9%) 증가시키는 데 효과적인 용량으로, 그리고 기간 동안 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 결함 부위에서의 골 밀도, 골 캘러스 형성 또는 가교 골 형성은 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 10%, 적어도 약 12%, 적어도 약 15%, 적어도 약 18%, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 22%) 증가된다. 다른 실시 형태에서, 결함 부위에서의 골 밀도, 골 캘러스 형성 또는 가교 골 형성은 스클레로스틴 억제제에 의해 적어도 약 25%(예를 들어, 적어도 약 26% 또는 적어도 약 28%) 증가된다. 또 다른 실시 형태에서, 결함 부위에서의 골 밀도, 골 캘러스 형성 또는 가교 골 형성은 적어도 약 30%(예를 들어, 적어도 약 32%, 적어도 약 35%, 적어도 약 38%, 또는 적어도 약 40%) 또는 적어도 약 50%(예를 들어, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 약 100%) 증가된다. 가교 골 형성의 증가 또는 재확립은 항체의 처음 투여 후 1주, 2주, 3주 또는 4주에 결정될 수 있다. 대안적으로, 골 밀도 수준은 치료 기간이 종료된 후(예를 들어 치료 기간이 종료된지 1주 후, 2주 후, 3주 후 또는 4주 후) 결정될 수 있다. 일 양태에서, 방법은 항체를 받지 않은 연령 및 성별-매칭 환자와 비교하여 원하는 수준의 골 형성, 골 부피, 골 캘러스 또는 골 밀도(예를 들어, 본원에 기술된 골 형성, 골 무기질 밀도, 골 캘러스 또는 골 부피의 임의의 퍼센트의 증가)를 확립하는 데 필요한 시간의 양을 감소시킴으로써 대상체의 회복 시간을 단축시킨다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 항체는 결함 부위에서 골 밀도 또는 부피를 적어도 약 10%(예를 들어, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 또는 적어도 약 50%) 증가시키는 데 필요한 시간의 양을 감소시킨다.The formation of bridged bones, bone mineral content and bone density, and/or mature bone callus at the site of bone defects are radiography (e.g. radiation absorptiometry), single and/or dual energy X-ray absorptiometry, quantitative computed tomography. It can be measured using (QCT), ultrasound examination, radiography (for example, radiation absorption measurement), and magnetic resonance imaging. In some embodiments, the antibody is effective in increasing bridging bone formation, bone callus formation, or bone density (or volume) at the defect site by at least about 5% (about 6%, about 7%, about 8% or about 9%). It can be administered in doses and over a period of time. In some embodiments, the bone density, bone callus formation, or bridging bone formation at the defect site is at least about 10% (e.g., at least about 10%, at least about 12%, at least about 15%, at least about 18%, at least About 20%, or at least about 22%). In other embodiments, bone density, bone callus formation, or bridging bone formation at the defect site is increased by at least about 25% (eg, at least about 26% or at least about 28%) by a sclerostin inhibitor. In another embodiment, the bone density, bone callus formation, or bridging bone formation at the defect site is at least about 30% (e.g., at least about 32%, at least about 35%, at least about 38%, or at least about 40%. ) Or at least about 50% (e.g., at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or about 100%). The increase or re-establishment of bridging bone formation can be determined at 1, 2, 3 or 4 weeks after the initial administration of the antibody. Alternatively, the bone density level can be determined after the treatment period has ended (eg, 1 week, 2 weeks, 3 weeks or 4 weeks after the treatment period has ended). In one embodiment, the method comprises a desired level of bone formation, bone volume, bone callus, or bone density (e.g., bone formation, bone mineral density, bone as described herein) compared to an age and sex-matched patient who did not receive the antibody. The recovery time of the subject is shortened by reducing the amount of time required to establish callus or any percent increase in bone volume). For example, in one embodiment, the antibody has a bone density or volume at the defect site of at least about 10% (e.g., at least about 20%, at least about 25%, at least about 30%, at least about 35%, at least about 40%, at least about 45%, or at least about 50%) decrease the amount of time required to increase.

항체는 유익한 생물학적 반응을 달성하기 위해 장애의 대상체를 치유하거나 골-관련 장애의 발병으로부터 완전히 보호할 필요는 없다. 항체는 예방적으로 사용될 수 있는데, 이는 골-관련 장애 또는 이의 증상으로부터 전체적으로 또는 부분적으로 보호함을 의미한다. 항체는 또한 골-관련 장애 또는 이의 증상을 전체적으로 또는 부분적으로 개선하거나, 골-관련 장애 또는 이의 증상의 추가 진행으로부터 전체적으로 또는 부분적으로 보호하기 위해 치료적으로 사용될 수 있다. 실제로, 본 발명의 물질 및 방법은 골 무기질 밀도를 증가시키고 선택적으로 일정 기간에 걸쳐 증가된 골 밀도를 유지하는 데 특히 유용하다. Antibodies do not have to cure a subject of the disorder or completely protect against the onset of a bone-related disorder in order to achieve a beneficial biological response. Antibodies can be used prophylactically, meaning that they protect in whole or in part from bone-related disorders or symptoms thereof. Antibodies may also be used therapeutically to improve wholly or partially a bone-related disorder or symptom thereof, or to protect wholly or partially from further progression of a bone-related disorder or symptom thereof. Indeed, the materials and methods of the present invention are particularly useful for increasing bone mineral density and optionally maintaining increased bone density over a period of time.

일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체의 1회 이상의 투여는 예를 들어 약 1주 내지 약 18개월(예를 들어, 약 1개월 내지 약 12개월, 약 1개월 내지 약 9개월 또는 약 1개월 내지 약 6개월 또는 약 1개월 내지 약 3개월)의 치료 기간에 걸쳐 실시된다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 예를 들어 약 1개월 내지 약 12개월(52주)(예를 들어, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월 또는 약 11개월)의 치료 기간에 걸쳐 본원에 개시된 항체의 1회 이상의 용량이 투여된다.In some embodiments, one or more administrations of the antibodies disclosed herein are, for example, from about 1 week to about 18 months (e.g., from about 1 month to about 12 months, from about 1 month to about 9 months or from about 1 month to About 6 months or about 1 month to about 3 months). In some embodiments, the subject is, for example, about 1 month to about 12 months (52 weeks) (e.g., about 2 months, about 3 months, about 4 months, about 5 months, about 6 months, about 7 months, One or more doses of the antibodies disclosed herein are administered over a treatment period of about 8 months, about 9 months, about 10 months or about 11 months).

추가로, 특정 대상체를 위해 선택되는 치료 요법에 따라, 항체의 다회 용량을 투여하거나 용량들의 투여에 간격을 두는 것이 유리할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 이의 단편은 1년(12개월, 52주) 이하(예를 들어, 9개월 이하, 6개월 이하, 또는 3개월 이하)의 기간에 걸쳐 주기적으로 투여된다. 이와 관련하여, 항체 또는 이의 단편은 약 3일, 또는 약 7일, 또는 2주, 또는 3주, 또는 4주, 또는 5주, 또는 6주, 또는 7주, 또는 8주, 또는 9주, 또는 10주, 또는 11주, 또는 12주, 또는 13주, 또는 14주, 또는 15주, 또는 16주, 또는 17주, 또는 18주, 또는 19주, 또는 20주, 또는 21주, 또는 22주, 또는 23주, 또는 6개월, 또는 12개월마다 1회 인간에게 투여된다.Additionally, depending on the treatment regimen chosen for a particular subject, it may be advantageous to administer multiple doses of the antibody or to stagger the administration of the doses. In some embodiments, the antibody or fragment thereof is administered periodically over a period of 1 year (12 months, 52 weeks) or less (eg, 9 months or less, 6 months or less, or 3 months or less). In this regard, the antibody or fragment thereof is about 3 days, or about 7 days, or 2 weeks, or 3 weeks, or 4 weeks, or 5 weeks, or 6 weeks, or 7 weeks, or 8 weeks, or 9 weeks, Or 10 weeks, or 11 weeks, or 12 weeks, or 13 weeks, or 14 weeks, or 15 weeks, or 16 weeks, or 17 weeks, or 18 weeks, or 19 weeks, or 20 weeks, or 21 weeks, or 22 It is administered to humans once every week, or every 23 weeks, or 6 months, or 12 months.

일부 실시 형태에서, 항체의 1회 이상의 용량은 골 무기질 밀도를 증가시키거나 감소된 골 무기질 밀도와 관련된 골 장애를 치료하는 데 효과적인 양으로 그리고 시간 동안 투여된다. 다양한 실시 형태에서, 약 50 mg 내지 약 1,000 mg의 항체를 포함하는 하나 이상의 용량이 대상체(예를 들어, 인간 대상체)에게 매주 투여된다. 예를 들어, 항체 용량은 항체 적어도 약 5 mg, 15 mg, 25 mg, 50 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 약 100 mg, 약 120 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 210 mg, 약 240 mg, 약 250 mg, 약 280 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 420 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg, 약 600 mg, 약 650 mg, 약 700 mg, 약 750 mg, 약 800 mg, 약 850 mg, 약 900 mg, 약 950 mg 또는 최대 약 1,000 mg을 포함할 수 있다. 모든 이러한 종점들 사이의 범위, 예를 들어, 약 50 mg 내지 약 80 mg, 약 70 mg 내지 약 140 mg, 약 70 mg 내지 약 270 mg, 약 75 mg 내지 약 100 mg, 약 100 mg 내지 약 150 mg, 약 140 mg 내지 약 210 mg, 또는 약 150 mg 내지 약 200 mg, 또는 약 180 mg 내지 약 270 mg, 또는 약 280 내지 약 410 mg이 또한 고려된다. 용량은 임의의 간격으로, 예컨대 1주일에 다회(예를 들어, 주 2회 또는 3회), 주 1회, 격주로 1회, 3주에 1회 또는 4주에 1회 투여된다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 약 120 mg 내지 약 210 mg의 범위의 항체의 용량이 주 2회 투여된다. 일부 또는 임의의 실시 형태에서, 약 140 mg의 용량의 항체가 주 2회 투여된다. 다양한 양태에서, 약 210 mg의 항체의 용량이 한 달에 1회 투여된다. In some embodiments, one or more doses of the antibody are administered over a period of time and in an amount effective to increase bone mineral density or treat a bone disorder associated with decreased bone mineral density. In various embodiments, one or more doses comprising about 50 mg to about 1,000 mg of antibody are administered weekly to a subject (eg, a human subject). For example, the antibody dose is at least about 5 mg, 15 mg, 25 mg, 50 mg, about 60 mg, about 70 mg, about 80 mg, about 90 mg, about 100 mg, about 120 mg, about 150 mg of antibody, About 200 mg, about 210 mg, about 240 mg, about 250 mg, about 280 mg, about 300 mg, about 350 mg, about 400 mg, about 420 mg, about 450 mg, about 500 mg, about 550 mg, about 600 mg, about 650 mg, about 700 mg, about 750 mg, about 800 mg, about 850 mg, about 900 mg, about 950 mg, or up to about 1,000 mg. Ranges between all these endpoints, e.g., about 50 mg to about 80 mg, about 70 mg to about 140 mg, about 70 mg to about 270 mg, about 75 mg to about 100 mg, about 100 mg to about 150 mg, about 140 mg to about 210 mg, or about 150 mg to about 200 mg, or about 180 mg to about 270 mg, or about 280 to about 410 mg are also contemplated. Doses are administered at arbitrary intervals, such as multiple times a week (eg, twice or three times a week), once a week, once every other week, once every three weeks or once every four weeks. In some or any embodiments, a dose of the antibody in the range of about 120 mg to about 210 mg is administered twice weekly. In some or any embodiments, a dose of about 140 mg of the antibody is administered twice a week. In various embodiments, a dose of about 210 mg of antibody is administered once a month.

일부 실시 형태에서, 항체의 상기 1회 이상의 용량은 체중 1 kg당 약 0.1 내지 약 50 mg(예를 들어, 약 5 내지 약 50 mg) 또는 약 1 내지 약 100 mg의 항체(mg/kg)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 용량은 적어도 약 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 26 mg/kg, 약 27 mg/kg, 약 28 mg/kg, 약 29 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 31 mg/kg, 약 32 mg/kg, 약 33 mg/kg, 약 34 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 36 mg/kg, 약 37 mg/kg, 약 38 mg/kg, 약 39 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 41 mg/kg, 약 42 mg/kg, 약 43 mg/kg, 약 44 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 46 mg/kg, 약 47 mg/kg, 약 48 mg/kg, 또는 약 49 mg/kg, 또는 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg,약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg,약 75 mg/kg,약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 또는 최대 약 100 mg/kg을 포함할 수 있다. 모든 이러한 종점들 사이의 범위, 예를 들어, 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 8 mg/kb, 약 3 mg/kg 내지 약 8 mg.kg, 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 또는 약 5mg/kg 내지 약 20 mg/kg이 또한 고려될 수 있다. In some embodiments, the one or more doses of the antibody comprise about 0.1 to about 50 mg (e.g., about 5 to about 50 mg) or about 1 to about 100 mg of antibody (mg/kg) per kg body weight. Can include. For example, the antibody dose is at least about 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, about 2 mg/kg, about 3 mg/kg, about 4 mg/kg, about 5 mg/kg, about 6 mg/kg, about 7 mg/kg, about 8 mg/kg, about 9 mg/kg, about 10 mg/kg, about 20 mg/kg, about 25 mg/kg, about 26 mg/kg, about 27 mg/ kg, about 28 mg/kg, about 29 mg/kg, about 30 mg/kg, about 31 mg/kg, about 32 mg/kg, about 33 mg/kg, about 34 mg/kg, about 35 mg/kg, About 36 mg/kg, about 37 mg/kg, about 38 mg/kg, about 39 mg/kg, about 40 mg/kg, about 41 mg/kg, about 42 mg/kg, about 43 mg/kg, about 44 mg/kg, about 45 mg/kg, about 46 mg/kg, about 47 mg/kg, about 48 mg/kg, or about 49 mg/kg, or about 50 mg/kg, about 55 mg/kg, about 60 mg/kg, about 65 mg/kg, about 70 mg/kg, about 75 mg/kg, about 80 mg/kg, about 85 mg/kg, about 90 mg/kg, about 95 mg/kg, or up to about 100 May contain mg/kg. Ranges between all these endpoints, e.g., about 1 mg/kg to about 3 mg/kg, about 1 mg/kg to about 5 mg/kg, about 1 mg/kg to about 8 mg/kb, about 3 mg/kg to about 8 mg.kg, about 1 mg/kg to about 10 mg/kg, about 1 mg/kg to about 20 mg/kg, about 1 mg/kg to about 40 mg/kg, about 5 mg/kg kg to about 30 mg/kg, or about 5 mg/kg to about 20 mg/kg may also be contemplated.

치료법의 모니터링 Therapy monitoring

항체-매개된 골 무기질 함량 또는 골 밀도 증가는 단일 및 이중 에너지 X-선 흡수 계측법, 초음파, 컴퓨터 단층 촬영, 방사선 촬영 및 자기 공명 영상을 사용하여 측정될 수 있다. 골 질량의 양은 또한 체중으로부터 또는 다른 방법을 사용하여 계산될 수 있다(문헌[Guinness-Hey, Metab. Bone Dis. Relat. Res., 5:177-181 (1984)] 참조). 동물 모델은 예를 들어 골다공증 및 골감소증과 같은 인간 질환의 상태를 모방하는 골 손실, 골 흡수, 골 형성, 골 강도 또는 골 무기화의 파라미터에 대한 제약 조성물 및 방법의 영향을 테스트하기 위해 당업계에서 사용된다. 이러한 모델의 예는 난소 절제된 래트 모델을 포함한다(문헌[Kalu, Bone and Mineral, 15:175-192 (1991)]; 문헌[Frost and Jee, Bone and Mineral, 18:227-236 (1992)]; 및 문헌[Jee and Yao, J. Musculoskel. Neuron. Interact., 1:193-207 (2001)]). 본원에 개시된 항체 활성을 측정하는 방법은 또한 다른 스클레로스틴 억제제의 효능을 결정하는 데 사용될 수 있다. Antibody-mediated bone mineral content or bone density increase can be measured using single and dual energy X-ray absorptiometry, ultrasound, computed tomography, radiography and magnetic resonance imaging. The amount of bone mass can also be calculated from body weight or using other methods (see Guinness-Hey, Metab. Bone Dis. Relat. Res., 5:177-181 (1984)). Animal models are used in the art to test the impact of pharmaceutical compositions and methods on parameters of bone loss, bone resorption, bone formation, bone strength or bone mineralization, e.g., mimicking conditions of human diseases such as osteoporosis and osteopenia. do. Examples of such models include ovarian resected rat models (Kalu, Bone and Mineral, 15:175-192 (1991)); Frost and Jee, Bone and Mineral, 18:227-236 (1992). And Jee and Yao, J. Musculoskel. Neuron. Interact., 1:193-207 (2001)). The methods of measuring antibody activity disclosed herein can also be used to determine the efficacy of other sclerostin inhibitors.

인간에 있어서 골 무기질 밀도는 예를 들어 둔부 및 척추의 이중 x-선 흡수 계측법(DXA)을 사용하여 임상적으로 결정될 수 있다. 다른 기술은 정량적 컴퓨터 단층 촬영(QCT), 초음파 검사, 단일 에너지 x-선 흡수 계측법(SXA) 및 방사선 흡수 계측법을 포함한다. 측정을 위한 일반적인 중추 골격 부위는 척추 및 둔부를 포함하며; 말초 부위는 전완, 손가락, 손목 및 발 뒤꿈치를 포함한다. 초음파 검사를 제외하고서, 미국 의학 협회(American Medical Association)는 BMD 기술이 전형적으로 x-선 사용을 포함하며 방사선 감쇠가 방사선 경로에 있는 조직의 두께 및 구성에 따라 달라진다는 원칙을 기반으로 함을 언급하고 있다. 모든 기술은 결과를 규범 데이터베이스와 비교하는 것을 포함한다. Bone mineral density in humans can be determined clinically using, for example, double x-ray absorptiometry (DXA) of the hip and spine. Other techniques include quantitative computed tomography (QCT), ultrasound, single energy x-ray absorptiometry (SXA) and radiation absorptiometry. Typical central skeletal sites for measurement include the spine and hips; The distal region includes the forearm, fingers, wrists and heels. With the exception of ultrasound examination, the American Medical Association notes that BMD technology typically involves the use of x-rays and is based on the principle that radiation attenuation depends on the thickness and composition of the tissue in the radiation path. Are doing. All techniques involve comparing the results to a normative database.

대안적으로, 하나 이상의 항-스클레로스틴 항체에 대한 생리학적 반응은 골 마커 수준을 모니터링하여 알아낼 수 있다. 골 마커는 골 리모델링 과정 동안 생성되는 생성물이며, 뼈, 조골세포 및/또는 파골세포에 의해 방출된다. 골 흡수 및/또는 골 형성 "마커" 수준의 변동은 골 리모델링/모델링의 변화를 의미한다. 국제 골다공증 재단(IOF)은 골 마커를 사용하여 골 밀도 치료법을 모니터링할 것을 권장한다(예를 들어, 본원에 참고로 포함된 문헌[Delmas et al., Osteoporos Int., Suppl. 6:S2-17 (2000)] 참조). 골 흡수(또는 파골세포 활성)를 나타내는 마커는 예를 들어 C-텔로펩티드(예를 들어 제1형 콜라겐의 C-말단 텔로펩티드(CTX) 또는 혈청 가교 C-텔로펩티드), N-텔로펩티드(제1형 콜라겐의 N-말단 텔로펩티드(NTX)), 데옥시피리디놀린(DPD), 피리디놀린, 소변 히드록시프롤린, 갈락토실 히드록시라이신 및 타르트레이트-저항성 산 포스파타아제(예를 들어 혈청 타르트레이트-저항성 산 포스파타아제 이소형 5b)를 포함한다. 골 형성/무기화 마커는 골-특이적 알칼리 포스파타아제(BSAP), 제I형 프로콜라겐의 N- 및 C-말단 연장부로부터 방출되는 펩티드(P1NP, PICP) 및 오스테오칼신(OstCa)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 소변 및 혈액과 같은 임상 샘플에서 마커를 검출하고 정량화하기 위한 몇몇 키트가 구매가능하다.Alternatively, the physiological response to one or more anti-sclerostin antibodies can be determined by monitoring bone marker levels. Bone markers are products produced during the process of bone remodeling and are released by bones, osteoblasts and/or osteoclasts. Variation in the level of bone resorption and/or bone formation “markers” refers to changes in bone remodeling/modeling. The International Osteoporosis Foundation (IOF) recommends the use of bone markers to monitor bone density therapy (see, eg, Delmas et al., Osteoporos Int., Suppl. 6:S2-17, incorporated herein by reference. (2000)]). Markers indicative of bone resorption (or osteoclast activity) include, for example, C-telopeptide (e.g. C-terminal telopeptide (CTX) of type 1 collagen or serum bridged C-telopeptide), N-telopeptide ( N-terminal telopeptide (NTX) of type 1 collagen), deoxypyridinoline (DPD), pyridinoline, urine hydroxyproline, galactosyl hydroxylysine and tartrate-resistant acid phosphatase (e.g. For example, serum tartrate-resistant acid phosphatase isoform 5b). Bone formation/mineralization markers include, but are not limited to, bone-specific alkaline phosphatase (BSAP), peptides released from the N- and C-terminal extensions of type I procollagen (P1NP, PICP), and osteocalcin (OstCa). Not limited. Several kits are commercially available for detecting and quantifying markers in clinical samples such as urine and blood.

병용 요법 Combination therapy

동일한 병원체 또는 생화학적 경로 또는 생물학적 과정을 표적으로 하는 2가지 이상의 약제를 조합하여 병상을 치료하는 것은 때때로 각각의 약제 단독의 치료적으로 관련된 용량의 사용에 비해 효능이 더 커지고 부작용이 감소된다. 어떤 경우에는 약물 조합의 효능이 상가적이지만(조합의 효능은 각각의 약물 단독의 효과의 합과 거의 같음), 다른 경우에는 효과가 상승적이다(조합의 효능은 단독으로 주어진 각각의 약물의 효과의 합보다 더 큼). 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "병용 요법"은 2가지 이상의 약제가 동시적인 방식으로, 예를 들어 동시에 전달되거나, 약제들 중 하나가 먼저 투여되고 이어서 제2 약제가 투여되는 것(예를 들어, 순차적으로)을 의미한다. Treatment of a condition by combining two or more agents targeting the same pathogen or biochemical pathway or biological process sometimes results in greater efficacy and reduced side effects compared to the use of a therapeutically relevant dose of each agent alone. In some cases, the efficacy of the drug combination is additive (the efficacy of the combination is approximately equal to the sum of the effects of each drug alone), but in other cases the effect is synergistic (the efficacy of the combination is the effect of each drug given alone). Greater than the sum). As used herein, the term “combination therapy” means that two or more agents are delivered in a simultaneous manner, eg, simultaneously, or one of the agents is administered first followed by a second agent (eg , Sequentially).

일부 실시 형태에서, 항체는 감소된 골 무기질 밀도의 치료를 위한 표준 케어 치료제와 함께 투여된다(즉, 항체 및 표준 케어 치료제는 동일 치료 계획의 일부이다). 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "표준 케어"는 소정 유형의 질병으로 진단된 특정 유형의 환자를 위해 임상의가 일반적으로 허용하는 치료를 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 감소된 골 무기질 밀도 또는 골 결함의 치료에 유용한 제2 골-증강제와 함께 투여된다. 일부 실시 형태에서, 골-증강제는 항-흡수제, 골 형성제(즉, 동화 작용), 에스트로겐 수용체 조절제(랄록시펜, 바제독시펜 및 라소폭시펜을 포함하지만 이에 한정되지 않음) 및 파골세포에 대해 억제 효과가 있는 약물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 제2 골-증강제는 비스포스포네이트(알렌드로네이트 나트륨(FOSAMAX®), 리세드로네이트, 이반드로네이트 나트륨(BONIVA®) 및 졸레드론산(RECLAST®)를 포함하지만 이에 한정되지 않음); 에스트로겐 또는 에스트로겐 유사체; 항-RANK 리간드(RANKL) 억제제, 예컨대 항-RANKL 항체(예를 들어, 데노수맙, PROLIA®); 비타민 D, 또는 비타민 D 유도체 또는 이들의 모방체; 칼슘 공급원, 카텝신-K(cat-K) 억제제(예를 들어 오다나카티브), 티볼론(Tibolone), 칼시토닌 또는 칼시트리올; 및 호르몬 대체 요법으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 제2 골 증강제는 부갑상선 호르몬(PTH) 또는 이의 펩티드 단편, PTH 관련 단백질(PTHrp), 골 형태 형성 단백질, 오스테오제닌, NaF, PGE2 작용제, 스타틴, 스트론튬 라넬레이트 및 스클레로스틴 억제제(예를 들어, 미국 특허 제7,592,429호 또는 미국 특허 제7,872,106호에 기술된 항-스클레로스틴 항체)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 제2 골 증강제는 Forteo®(테리파라티드(Teriparatide)), Preotact® 또는 Protelos®이다. 일부 실시 형태에서, 제2 골 증강제는 골 형태 형성 단백질(예를 들어, BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14 및/또는 BMP-15)을 포함한다. In some embodiments, the antibody is administered with a standard care treatment for the treatment of reduced bone mineral density (ie, the antibody and standard care treatment are part of the same treatment regimen). As used herein, the term “standard care” refers to a treatment generally accepted by a clinician for a particular type of patient diagnosed with a given type of disease. In some embodiments, the antibody is administered with a second bone-enhancing agent useful for the treatment of a reduced bone mineral density or bone defect. In some embodiments, the bone-enhancing agents are anti-absorbents, bone-forming agents (i.e., anabolic), estrogen receptor modulators (including but not limited to raloxifene, bazedoxifene, and lasofoxifene) and osteoclasts. It is selected from the group consisting of drugs having an inhibitory effect. In some embodiments, the second bone-enhancing agents include, but are not limited to, bisphosphonates (including but not limited to alendronate sodium (FOSAMAX®), risedronate, ibandronate sodium (BONIVA®), and zoledronic acid (RECLAST®)); Estrogen or estrogen analog; Anti-RANK ligand (RANKL) inhibitors such as anti-RANKL antibodies (eg, denosumab, PROLIA®); Vitamin D, or vitamin D derivatives or mimetics thereof; A calcium source, a cathepsin-K (cat-K) inhibitor (eg Odanacativ), Tibolone, calcitonin or calcitriol; And hormone replacement therapy. In some embodiments, the second bone enhancer is parathyroid hormone (PTH) or a peptide fragment thereof, PTH related protein (PTHrp), bone morphogenetic protein, osteogenin, NaF, PGE2 agonist, statins, strontium ranelate, and sclero. Stine inhibitors (eg, anti-sclerostin antibodies described in US Pat. No. 7,592,429 or US Pat. No. 7,872,106). In some embodiments, the second bone enhancer is Forteo® (Teriparatide), Preotact® or Protelos®. In some embodiments, the second bone enhancer is a bone morphogenetic protein (e.g., BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8 , BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14 and/or BMP-15).

일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체를 이용하는 병용 요법은 수 분 내지 수 주로부터 수 개월까지의 범위의 간격만큼 추가 치료제(들)(예를 들어, 제2 골 증강제) 투여에 앞서거나 뒤따를 수 있다. 예를 들어, 별개의의 양식들은 서로 약 24시간 이내, 예를 들어 서로 약 6~12시간 이내, 또는 서로 약 1~2 시간 이내, 또는 서로 약 10~30분 이내에 투여된다. 일부 상황에서, 치료 기간을 유의하게 연장하는 것이 바람직할 수 있으며, 여기서, 상이한 양식들의 각각의 투여들 사이에는 수 일(2, 3, 4, 5, 6 또는 7일) 내지 수 주(1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주)이 경과된다. 병용 요법의 하나 또는 둘 다의 약제/요법을 사용한 반복 치료가 구체적으로 고려된다. In some embodiments, the combination therapy using the antibodies disclosed herein may precede or follow administration of the additional therapeutic agent(s) (e.g., a second bone enhancer) by intervals ranging from minutes to weeks to months. have. For example, the separate modalities are administered within about 24 hours of each other, for example within about 6 to 12 hours of each other, or within about 1 to 2 hours of each other, or within about 10 to 30 minutes of each other. In some circumstances, it may be desirable to significantly extend the duration of treatment, wherein between several days (2, 3, 4, 5, 6 or 7 days) to several weeks (1, 7 days) between each administration of different modalities. 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 weeks) have elapsed. Repeated treatment with one or both agents/therapy of combination therapy is specifically contemplated.

유지 치료 요법 Maintenance therapy

또한, 예를 들어 골 무기질 밀도의 손실을 예방하거나 늦추기 위한 유지 요법에서의 본원에 기술된 제2 골 증강제 및/또는 항체의 사용이 고려된다. 이와 관련하여, 본원에 기술된 방법 또는 용도는 선택적으로, 항체가 종료된 치료 기간 후 약 1주 내지 약 5년의 유지 기간 동안 골 무기질 밀도를 유지하는 데 효과적인 하나 이상의 양의 제2 골 증강제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 방법 또는 용도는 대략 적어도 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 3개월, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 16주, 약 4개월, 약 17주, 약 18주, 약 19주, 약 20주, 약 5개월, 약 21주, 약 22주, 약 23주, 약 24주, 약 6개월, 약 25주, 약 26주, 약 27주, 약 28주, 약 7개월, 약 29주, 약 30주, 약 31주 또는 그 이상(예를 들어, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 1년, 약 15개월, 약 18개월, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년 또는 그 이상(예를 들어, 대상체의 일생에 걸쳐)의 유지 기간 동안 대상체에게 제2 골 증강제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 유지 기간은 약 6~12주이다. 일부 실시 형태에서, 유지 기간은 약 4~12주, 또는 약 1~3개월이다. 일부 실시 형태에서, 유지 기간은 약 12~20주, 또는 약 3~5개월이다. 일부 실시 형태에서, 유지 기간은 약 20~32주, 또는 약 5~8개월이다. 일부 실시 형태에서, 유지 기간은 약 24~36주, 또는 약 6~9개월이다. 일부 실시 형태에서, 유지 기간은 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년 또는 그 이상이다. 골 무기질 밀도를 "유지"하는 것은 항체 치료를 받은 대상체에서 경험되는 유사한 수준의 골 무기질 밀도 파라미터의 유지를 포함한다. Also contemplated is the use of the second bone enhancers and/or antibodies described herein in maintenance therapy, for example to prevent or slow the loss of bone mineral density. In this regard, the methods or uses described herein optionally comprise at least one amount of a second bone enhancer effective to maintain bone mineral density for a maintenance period of about 1 week to about 5 years after the treatment period for which the antibody has ended. Includes administration. For example, in some embodiments, the methods or uses described herein are approximately at least about 1 week, about 2 weeks, about 3 weeks, about 4 weeks, about 5 weeks, about 6 weeks, about 7 weeks, about 8 weeks. , About 9 weeks, about 10 weeks, about 11 weeks, about 12 weeks, about 3 months, about 13 weeks, about 14 weeks, about 15 weeks, about 16 weeks, about 4 months, about 17 weeks, about 18 weeks, about 19 weeks, about 20 weeks, about 5 months, about 21 weeks, about 22 weeks, about 23 weeks, about 24 weeks, about 6 months, about 25 weeks, about 26 weeks, about 27 weeks, about 28 weeks, about 7 months , About 29 weeks, about 30 weeks, about 31 weeks or more (e.g., about 8 months, about 9 months, about 10 months, about 11 months, about 1 year, about 15 months, about 18 months, about 2 And administering to the subject a second bone enhancer for a maintenance period of about 3 years, about 4 years, about 5 years, or more (eg, over the subject's lifetime), in some embodiments, maintenance. The duration is about 6-12 weeks In some embodiments, the maintenance period is about 4-12 weeks, or about 1-3 months In some embodiments, the maintenance period is about 12-20 weeks, or about 3-5 In some embodiments, the maintenance period is about 20 to 32 weeks, or about 5 to 8. In some embodiments, the maintenance period is about 24 to 36 weeks, or about 6 to 9 months. In, the maintenance period is about 1 year, about 2 years, about 3 years, about 4 years, about 5 years or more. "Maintaining" bone mineral density is a similar level of bone experienced in a subject receiving antibody treatment. And maintenance of mineral density parameters.

키트 Kit

본원에 기술된 하나 이상의 항체를 포함하는 제약 조성물은 이러한 제약 조성물의 사용에 관한 설명서를 제공하는 패키징 물질과 함께 용기(예를 들어, 바이알 또는 주사기) 내에 배치될 수 있다. 일반적으로, 이러한 설명서는 항체 농도와, 특정 실시 형태 내에서, 제약 조성물을 재구성하는 데 필요할 수 있는 부형제 성분 또는 희석제(예를 들어, 물, 식염수 또는 PBS)의 상대적인 양을 설명하는 유형 표현을 포함할 것이다. Pharmaceutical compositions comprising one or more antibodies described herein may be placed within a container (eg, vials or syringes) with packaging material that provides instructions for use of such pharmaceutical compositions. In general, such instructions include type expressions describing antibody concentrations and, within certain embodiments, relative amounts of excipient components or diluents (e.g., water, saline or PBS) that may be required to reconstitute the pharmaceutical composition. something to do.

실시예 Example

실시예 1 - 로모소주맙 PARG C-말단 변이체의 분석Example 1-Analysis of Lomosozumab PARG C-terminal variant

야생형 로모소주맙 및 로모소주맙 PARG C-말단 변이체를 Lys-C로 소화시키고, LC/MS 펩티드 맵핑으로 분석하였다. 이러한 두 구축물의 UV 프로파일을 나란히 비교하였다(도 3). 야생형 로모소주맙 및 로모소주맙 PARG C-말단 변이체는 37.7분에 유사한 피크 용출을 갖는 것으로 결정되었지만, 야생형 로모소주맙은 659.3 Da의 질량을 갖는 것으로 결정되었고 로모소주맙 PARG C-말단 변이체는 886.7 Da의 질량을 갖는 것으로 결정되었다. 로모소주맙의 대다수의 라이신(K) 변이체(PGK)는 공정으로부터 제거된 것으로 생각되었다. 상당한 양의 아미드화 형태의 로모소주맙 PARG C-말단 변이체(828.6 Da 피크)의 존재는 야생형 로모소주맙 PG 서열과 비교할 때 아미드화 효율이 서열 의존적임을 확인해 준다. Wild type Lomosozumab and Lomosozumab PARG C-terminal variants were digested with Lys-C and analyzed by LC/MS peptide mapping. The UV profiles of these two constructs were compared side by side (Figure 3). Wild-type lomosozumab and lomosozumab PARG C-terminal variants were determined to have similar peak dissolution at 37.7 min, whereas wild-type lomosozumab was determined to have a mass of 659.3 Da and lomosozumab PARG C-terminal variant was 886.7. It was determined to have a mass of Da. The majority of the lysine (K) variant (PGK) of lomosozumab was thought to have been removed from the process. The presence of a significant amount of the amidated form of the Lomosozumab PARG C-terminal variant (828.6 Da peak) confirms that the amidation efficiency is sequence dependent when compared to the wild type Lomosozumab PG sequence.

다음, PARG C-말단 변이체를 그 후에 카르복시펩티다아제(CP-B)로 처리하고, CEX-HPLC 방법으로 분석하고, CP-B로 처리하지 않은 PARG C-말단 변이체 대조군과 비교하였다. 17.5분 및 21분에 용출되는 피크에 있어서 처리 후 상당한 시프트가 있지만, 24분에서의 피크에 있어서는 그렇지 않다(도 4). 24분 피크는 단백질 분해적 소화로부터 보호되는 이중 아미드화 형태임이 고려된다. Next, the PARG C-terminal variant was then treated with carboxypeptidase (CP-B), analyzed by CEX-HPLC method, and compared with the control group of the PARG C-terminal variant not treated with CP-B. There is a significant shift after treatment in the peaks eluting at 17.5 and 21 minutes, but not for the peak at 24 minutes (Fig. 4). It is contemplated that the 24 minute peak is a double amidated form protected from proteolytic digestion.

실시예 2 - C-말단 변이체의 풍부화Example 2-Enrichment of C-terminal variants

야생형 로모소주맙 및 로모소주맙 PARG C-말단 변이체를 포함하는 조성물로부터의 상이한 로모소주맙 종의 정제 또는 풍부화를 양이온 교환 크로마토그래피(CEX) 분별에 의해 달성한다. CEX는 표면 전하의 차이를 기반으로 하여 단백질들을 분리한다. 설정된 pH에서, 양으로 하전된 야생형 로모소주맙 변이체를 양이온 교환 컬럼(예를 들어 Dionex Pro Pac WCX-10 분석 컬럼, 2.0 mm x 250 mm)에서 분리하고, 염 구배(예를 들어 이동상 A: 10:90(v/v)의 ACN, 19 mM MES(pH 6.2); 이동상 B: 10:90(v/v)의 ACN, 19 mM MES, 250 mM NaCl(pH 6.2))를 사용하여 용출시킨다. 로모소주맙의 다른 C-말단 변이체는 다르게 하전되고 더 많이 양전하 하전된 변이체는 CEX에서 더 나중에 용출된다. 따라서 용출 순서는 PG(야생형), P-아미드(아미드화된 야생형 프롤린), PARG 변이체 및 PAR-아미드이다. 상이한 용출 시간에 상이한 변이체를 함유하는 CEX 용출물을 수집하도록 분획 수집기를 프로그래밍할 수 있다. Purification or enrichment of different lomosozumab species from compositions comprising wild-type lomosozumab and lomosozumab PARG C-terminal variants is achieved by cation exchange chromatography (CEX) fractionation. CEX separates proteins based on differences in surface charge. At the set pH, positively charged wild-type lomosozumab variants are separated on a cation exchange column (e.g. Dionex Pro Pac WCX-10 analytical column, 2.0 mm x 250 mm) and a salt gradient (e.g. mobile phase A: 10 :90 (v/v) ACN, 19 mM MES (pH 6.2); Mobile phase B: 10: 90 (v/v) ACN, 19 mM MES, 250 mM NaCl (pH 6.2)). Other C-terminal variants of lomosozumab are charged differently and variants that are more positively charged elute later in CEX. Therefore, the elution sequence is PG (wild type), P-amide (amidated wild type proline), PARG variant and PAR-amide. The fraction collector can be programmed to collect CEX eluates containing different variants at different elution times.

실시예 3 - 로모소주맙 PARG C-말단 변이체 응집 분석Example 3-Lomosozumab PARG C-terminal variant aggregation assay

특정 이론에 얽매이지 않고, PARG C-말단 변이체가 고도로 하전되기 때문에 이러한 형태는 조성물에서 비-아미드화 형태에 반발하여 조성물의 응집을 감소시킴이 고려된다. Without being bound by a particular theory, it is contemplated that since the PARG C-terminal variant is highly charged, this form repels the non-amidated form in the composition, thereby reducing the aggregation of the composition.

로모소주맙 PARG C-말단 변이형 단백질 A 풀은 유체역학적 부피의 차이를 기반으로 하여 단백질을 분리하는 크기 배제 HPLC 방법인 SEC-HPLC를 사용하여 야생형 로모소주맙 단백질 A 풀과 나란히 분석하였다(표 1). Lomosozumab PARG C-terminal variant protein A pool was analyzed side-by-side with wild-type lomosozumab protein A pool using SEC-HPLC, a size exclusion HPLC method that separates proteins based on differences in hydrodynamic volume (Table One).

데이터는 로모소주맙 PARG C-말단 변이체가 야생형 로모소주맙과 비교하여 더 적은 고분자량 종을 가짐을 입증하였다.The data demonstrated that the Lomosozumab PARG C-terminal variant has fewer high molecular weight species compared to the wild type Lomosozumab.

실시예 4 - 로모소주맙 PARG C-말단 변이체의 점도 분석Example 4-Viscosity analysis of Lomosozumab PARG C-terminal variant

로모소주맙 PARG C-말단 변이체 또는 야생형 로모소주맙을 포함하는 항체 용액을 콘 및 플레이트를 사용하여 측정한다. 용액들을 대략적 부피 고갈에 따라 최대 120 mg/mL까지 농축시키며, 최종 농도는 280 nm에서의 단백질 흡광도(0.1~1 흡광도 단위(AU) 이내에서 끝나도록 희석 후) 및 단백질 비소광 계수(specific extinction coefficient)를 사용하여 결정한다(±10%). 점도 분석은 TA Smart Swap 2 ° 콘/플레이트 스핀들을 사용하여 CP-40 스핀들 및 샘플 컵 또는 ARES-G2 레오미터(TA Instruments, 미국 델라웨어주 뉴 캐슬 소재)를 사용하여 Brookfield LV-DVIII 콘 및 플레이트 기기(Brookfield Engineering, 미국 매사추세츠주 미들보로 소재)에서 수행한다. 모든 측정을 25℃

에서 수행하며 샘플 컵에 부착된 수조로 제어한다. 스핀들의 RPM을 증가시켜 규정된 토크 범위(10~90%) 내에서 수동으로 다수의 점도 측정치를 수집하였다. 생성된 비교 차트를 단순화하기 위해 샘플당 하나의 점도 값을 보고하기 위해 측정치들의 평균을 구한다. An antibody solution comprising Lomosozumab PARG C-terminal variant or wild type Lomosozumab is measured using cones and plates. The solutions are concentrated to a maximum of 120 mg/mL according to the approximate volume depletion, and the final concentration is the protein absorbance at 280 nm (after dilution to end within 0.1 to 1 absorbance units (AU)) and the protein specific extinction coefficient. ) To determine (±10%). Viscosity analysis was performed using a TA Smart Swap 2° cone/plate spindle with a CP-40 spindle and sample cup or Brookfield LV-DVIII cone and plate using an ARES-G2 rheometer (TA Instruments, New Castle, DE). It is carried out on an instrument (Brookfield Engineering, Middleboro, Massachusetts, USA). 25℃ for all measurements

And controlled by a water bath attached to the sample cup. Multiple viscosity measurements were collected manually within the specified torque range (10-90%) by increasing the RPM of the spindle. To simplify the generated comparison chart, the measurements are averaged to report one viscosity value per sample.

실시예 5 - 레모소주맙 PARG C-말단 변이체의 용해도 분석Example 5-Analysis of solubility of remosozumab PARG C-terminal variant

피하(SC) 주사시 용해도에 대한 로모소주맙 PARG 변이체의 아미노산 변이의 영향을 야생형 로모소주맙과 비교하여 결정하기 위해, 투석 용해도 분석을 야생형 및 PARG-C 말단 변이체 로모소주맙 둘 다에 대해 병행적으로 수행하였다. 이 스크린은 로모소주맙 PARG C-말단 변이체 샘플과 야생형 로모소주맙 샘플을 SC 공간의 pH 및 이온 강도를 시뮬레이션하는 용액으로 투석시키고 짧은 기간에 걸쳐 이러한 조건에서의 항체의 용해도 및 물리적 안정성을 모니터링하는 것을 포함한다. 샘플을 제형화 완충제(pH 5.2) 중 대략 63 mg/mL로 제형화하였다. 그 후 각각의 샘플을 투석 카세트에 주입하고 PBS 완충제로 투석하여 SC 공간을 모방하였다. 처음 투석한지 24시간 후에 육안 관찰이 이루어졌다. 야생형 로모소주맙은 전형적으로 24시간 후에 침전을 나타낸다. To determine the effect of amino acid mutations of the lomosozumab PARG variant on solubility upon subcutaneous (SC) injection compared to wild-type lomosozumab, dialysis solubility assays were performed in parallel for both wild-type and PARG-C terminal variant lomosozumab Performed as an enemy. This screen dialyzates the Lomosozumab PARG C-terminal variant sample and the wild-type Lomosozumab sample with a solution simulating the pH and ionic strength of the SC space and monitors the solubility and physical stability of the antibody under these conditions over a short period of time. Includes that. Samples were formulated at approximately 63 mg/mL in formulation buffer (pH 5.2). Then, each sample was injected into a dialysis cassette and dialyzed with PBS buffer to mimic the SC space. Visual observation was made 24 hours after the initial dialysis. Wild type lomosozumab typically shows precipitation after 24 hours.

결과는 이 분석에서 두 분자 모두 침전되지만 PARG C-말단 변이체는 더 적게 더 느린 속도로 침전된다는 것을 보여준다. 이것은 변이체가 침전에 대하여 야생형보다 더 저항성이지만 변이체에서 침전이 완전히 무효화되는 것은 아님을 시사한다. The results show that both molecules precipitate in this assay, but the PARG C-terminal variant precipitates at a lesser and slower rate. This suggests that although the variant is more resistant to precipitation than the wild-type, precipitation in the variant is not completely nullified.

실시예 6 - 로모소주맙 PARG C-말단 변이체의 확산 분석 Example 6-Diffusion analysis of Lomosozumab PARG C-terminal variant

피하(SC) 공간으로부터의 확산에 대한 로모소주맙 PARG C-말단 변이체의 아미노산 변이의 영향을 야생형 로모소주맙과 비교하여 결정하기 위해 Scissor(Pion Inc., 미국 매사추세츠주 빌레리카 소재)를 사용하여 분석을 수행하였다. 이 분석은 콜라겐 및 히알루론산 매트릭스로 이루어진 시뮬레이션된 SC 공간에 샘플들(로모소주맙 PARG C-말단 변이체 또는 야생형 로모소주맙)을 대략 70 mg/mL로 주입하는 것을 포함한다. 항체는 이 매트릭스에서 투석막을 통해 pH 7.4의 탄산염 완충제 저장소로 확산될 수 있다. 시점을 최대 3일 동안 수집하고, 각각의 시점을 RP-HPLC에 의해 단백질 농도에 대해 분석하였다. 작성한 단백질 농도 대 시간의 곡선은 SC 공간으로부터의 확산 속도를 시뮬레이션한다. 또한 SC 매트릭스에서의 침전을 육안 검사로 모니터링한다. Scissor (Pion Inc., Billerica, Massachusetts, USA) was used to determine the effect of amino acid mutations of the lomosozumab PARG C-terminal variant on diffusion from the subcutaneous (SC) space compared to wild-type lomosozumab Analysis was performed. This analysis involved injecting samples (lomosozumab PARG C-terminal variant or wild type lomosozumab) at approximately 70 mg/mL into a simulated SC space consisting of a collagen and hyaluronic acid matrix. The antibody can diffuse from this matrix through the dialysis membrane into a reservoir of carbonate buffer at pH 7.4. Time points were collected for up to 3 days, and each time point was analyzed for protein concentration by RP-HPLC. The resulting protein concentration versus time curve simulates the rate of diffusion from the SC space. In addition, the precipitation in the SC matrix is monitored by visual inspection.

야생형 및 PARG C-말단 변이형 로모소주맙 둘 모두를 위에서 설명한 바와 같이 Scissor에서 테스트하였다. 도 5에 예시된 결과는 야생형 로모소주맙이 시뮬레이션된 SC 공간으로부터 훨씬 더 낮은 속도로 확산되고 PARG C-말단 변이형 로모소주맙보다 더 많은 야생형 로모소주맙이 시뮬레이션된 주사 부위에서 보유됨을 나타낸다.Both wild-type and PARG C-terminal variant lomosozumab were tested in Scissor as described above. The results illustrated in Figure 5 indicate that wild-type lomosozumab diffuses from the simulated SC space at a much lower rate and that more wild-type lomosozumab is retained at the simulated injection site than the PARG C-terminal variant lomosozumab.

실시예 7 - FcRn 결합Example 7-FcRn binding

신생아 Fc 수용체인 FcRn은 막관통 α 사슬(MHC 클래스 I 유사 분자와 상동성) 및 β2 마이크로글로불린 경쇄로 구성된 MHC 클래스 I-유사 이종이량체이다. FcRn은 약산성 조건(대략 pH 6) 하에서 IgG 분자의 Fc 영역에서의 IgG 중쇄의 C_H2 및 C_H3 도메인 사이의 간극에 결합하고 중성 pH(대략 7.4)에서 이것을 방출한다. 이러한 고도의 pH 의존적 상호작용에 의해 FcRn은 혈청 IgG 수준을 유지하여 성인의 IgG 항상성을 매개한다. The neonatal Fc receptor, FcRn, is an MHC class I-like heterodimer composed of a transmembrane α chain (homology to an MHC class I-like molecule) and a β2 microglobulin light chain. FcRn binds to the gap between the C _H 2 and C _H 3 domains of the IgG heavy chain in the Fc region of the IgG molecule under weakly acidic conditions (approximately pH 6) and releases it at neutral pH (approximately 7.4). By this highly pH dependent interaction, FcRn mediates IgG homeostasis in adults by maintaining serum IgG levels.

경쟁 결합 분석, AlphaScreen^® 결합 분석(PerkinElmer, 미국 캘리포니아주 새너제이 소재)을 사용하여 야생형 로모소주맙 및 로모소주맙 PARG C-말단 변이체의 Fc 도메인이 FcRn에 결합하는 것을 평가하였다. 상기 분석은 2분자 상호작용을 탐지하는 비드 기반 증폭 발광 근접 균질 분석("Alpha")이다. 상기 분석은 2가지 비드 유형인 억셉터 비드 및 도너 비드를 포함한다. 억셉터 비드는 히스티딘 표지 FcRn(FcRn-His)의 히스티딘 도메인에 결합하는 니켈 킬레이트뿐만 아니라 티오센 유도체를 함유하는 히드로겔로 코팅되어 있다. 도너 비드는 비오티닐화 CHO 유래 인간 Fc에 결합하는, 프탈로시아닌, 감광제 및 스트렙타비딘을 포함하는 히드로겔로 코팅되어 있다. FcRn-His와 비오티닐화 인간 Fc가 함께 결합하면 이들은 억셉터 비드 및 도너 비드가 근접해지게 한다. 이 복합체에 레이저 광을 적용하면 주위 산소는 도너 비드에 의해 일중항 산소로 전환된다. 상기 비드들이 근접하여 있으면 억셉터 비드로의 에너지 전달이 발생하여 광 생성(발광)이 초래되며, 이를 AlphaScreen^® 신호 검출기가 장착된 플레이트 판독기에서 측정한다.Competitive binding assays, AlphaScreen ^® binding assay (PerkinElmer, San Jose, CA material) wild-type Homes Homes Suzhou and Suzhou Thank Thank use PARG Fc domain of the C- terminal variants were evaluated for binding to the FcRn. The assay is a bead-based amplified luminescence proximity homogeneous assay ("Alpha") that detects bimolecular interactions. The assay involved two bead types, acceptor beads and donor beads. The acceptor beads are coated with a hydrogel containing a thiocene derivative as well as a nickel chelate that binds to the histidine domain of histidine-labeled FcRn (FcRn-His). The donor beads are coated with a hydrogel containing phthalocyanine, a photosensitizer and streptavidin, which binds to human Fc derived from biotinylated CHO. When FcRn-His and biotinylated human Fc bind together, they bring the acceptor beads and donor beads into proximity. When laser light is applied to this complex, ambient oxygen is converted into singlet oxygen by donor beads. If the beads are in proximity to the energy transfer acceptor bideuro occurs and results in the light produced (emission), it is measured in AlphaScreen ^® signal detector equipped with a plate reader.

항체가 FcRn-His의 비오티닐화 인간 Fc 도메인에의 결합을 억제하기에 충분한 농도로 존재하는 경우, 570 nm에서의 발광의 용량 의존적 감소가 관찰된다. 항체 기준 표준물에 대비한 테스트 샘플 결합성을 상대적 결합 %로 결정하여 보고하며, 항체의 Fc 도메인의 무결성을 입증하는 데 사용할 수 있다. PARG C-말단 변이체를 갖는 조성물은 야생형 항체와 유사하거나 이보다 더 양호한 용량 반응 곡선을 가짐이 고려된다. When the antibody is present in a concentration sufficient to inhibit the binding of FcRn-His to the biotinylated human Fc domain, a dose dependent decrease in luminescence at 570 nm is observed. The test sample binding to the antibody reference standard is determined and reported as the relative% binding, and can be used to demonstrate the integrity of the Fc domain of the antibody. Compositions with PARG C-terminal variants are contemplated to have a dose response curve similar to or better than wild-type antibodies.

결과는 도 6에 예시되어 있다. 야생형 로모소주맙 및 PARG C-말단 변이형 로모소주맙 둘 모두는 FcRn에 유사하게 결합하고 FcRn 결합은 PARG 돌연변이에 의해 영향을 받지 않는 것으로 관찰되었다. The results are illustrated in Figure 6. It was observed that both wild-type lomosozumab and PARG C-terminal variant lomosozumab bind similarly to FcRn and FcRn binding is not affected by the PARG mutation.

실시예 8 - FcγRIIa 결합Example 8-FcγRIIa binding

FcγRIIa는 단핵구, 특정 수지상 세포, 호중구, B 세포, 혈소판 및 NK 세포 상에서 발현되는 활성화 Fc 수용체이다. FcγRIIa(CD32a)는 2개의 세포외 Ig-유사 도메인을 갖고 단량체 IgG에 대한 낮은 결합 친화성을 갖는 가장 널리 분포된 FcγR이다. 인간에서 FcγRIIa에 대해 존재하는 것으로 알려진 2가지 일반적인 대립 유전자 변이체가 있으며, 이는 위치 131에서 히스티딘 또는 아르기닌을 발현한다(각각 131H 및 131R).FcγRIIa is an activating Fc receptor expressed on monocytes, certain dendritic cells, neutrophils, B cells, platelets and NK cells. FcγRIIa (CD32a) is the most widely distributed FcγR with two extracellular Ig-like domains and low binding affinity for monomeric IgG. There are two common allelic variants known to exist for FcγRIIa in humans, which express histidine or arginine at position 131 (131H and 131R, respectively).

FcγRIIa(131H)에 대한 야생형 로모소주맙 및 로모소주맙 PARG C-말단 변이체의 결합성을 평가하기 위해 경쟁 결합 분석이 개발되었다. FcγRIIa(131H) 결합 분석은 2분자 상호작용을 탐지하는 비드 기반 증폭 발광 근접 균질 분석(AlphaScreen^® 결합 분석(PerkinElmer, 미국 캘리포니아주 새너제이 소재)이다. 상기 분석은 2가지 비드 유형인 억셉터 비드 및 도너 비드를 포함한다. 억셉터 비드는 형광단 유로퓸 킬레이트를 함유하고, 재조합 인간 FcγRIIa(l3lH)-글루타티온-S-트랜스퍼라아제(FcγRIIa(131H)-GST)에 결합하는 글루타티온을 포함하는 히드로겔로 코팅되어 있다. 도너 비드는 비오티닐화 인간 IgG1에 결합하는, 프탈로시아닌, 감광제 및 스트렙타비딘을 포함하는 히드로겔로 코팅되어 있다. FcγRIIa(131H)-GST 및 비오티닐화 인간 IgG1이 함께 결합하면 이들은 억셉터 비드 및 도너 비드가 근접해지게 한다. 이 복합체에 레이저 광을 적용하면 주위 산소는 도너 비드에 의해 일중항 산소로 전환된다. 억셉터 비드 및 도너 비드가 가까이 있으면 일중항 산소가 억셉터 비드 내에서 확산되어 광 생성(발광)이 초래되며, 이를 발광 신호 검출기가 장착된 플레이트 판독기에서 측정한다.A competition binding assay was developed to evaluate the binding of wild-type lomosozumab and lomosozumab PARG C-terminal variants to FcγRIIa (131H). FcγRIIa (131H) binding assay is a two-molecule cross-bead-based amplification luminescent proximity homogeneous assay detects the action (AlphaScreen ^® binding assays (PerkinElmer, San Jose, CA material). This assay is two kinds of bead type, the acceptor beads and the donor The acceptor beads contain the fluorophore europium chelate and are coated with a hydrogel containing glutathione that binds to recombinant human FcγRIIa(l3lH)-glutathione-S-transferase (FcγRIIa(131H)-GST). The donor beads are coated with a hydrogel containing phthalocyanine, a photosensitizer and streptavidin, which binds to biotinylated human IgG1. When FcγRIIa(131H)-GST and biotinylated human IgG1 bind together, they are inhibited. Bring the acceptor and donor beads closer together When laser light is applied to this complex, ambient oxygen is converted to singlet oxygen by the donor beads When the acceptor and donor beads are close, the singlet oxygen is transferred within the acceptor bead Diffusion results in light generation (luminescence), which is measured in a plate reader equipped with a luminescence signal detector.

항체가 FcγRIIa(131H)-GST의 비오티닐화 인간 IgG1에의 결합을 억제하기에 충분한 농도로 존재하는 경우, 570 nm에서의 발광의 용량 의존적 감소가 측정된다. 항체 기준 표준물에 대비한 테스트 샘플 결합성을 상대적 결합 %로 결정하여 보고하며, 항체의 Fc 도메인의 무결성을 입증하는 데 사용할 수 있다. 결과는 도 7에 예시되어 있다. FcγRIIa(131H)에 대한 PARG C-말단 변이형 로모소주맙의 상대적 결합이 야생형 로모소주맙보다 훨씬 더 높은 것으로 관찰되었다. When the antibody is present at a concentration sufficient to inhibit the binding of FcγRIIa(131H)-GST to biotinylated human IgG1, a dose dependent decrease in luminescence at 570 nm is measured. The test sample binding to the antibody reference standard is determined and reported as the relative% binding, and can be used to demonstrate the integrity of the Fc domain of the antibody. The results are illustrated in Figure 7. It was observed that the relative binding of PARG C-terminal variant lomosozumab to FcγRIIa (131H) was much higher than that of wild-type lomosozumab.

실시예 9 - 마우스 약동학 연구Example 9-Mouse pharmacokinetic study

생체 내 약물 노출 및 생체이용률을 평가하기 위하여, 마우스에서의 단회 용량 약동학 연구를 수행한다. 로모소주맙 PARG C-말단 변이체를 1 mg/kg의 용량으로 정맥내(꼬리 정맥을 통해) 또는 피하 주사한다. 군당 9마리의 동물을 사용하여, 지그재그식 샘플링에 의해 개별 동물로부터 채취할 수 있는 혈액의 최대 부피를 초과하지 않고서 많은 시점에서 데이터를 수집할 수 있다. 각각의 시점에서 0.05 ml의 혈액을 채취한다. 동물 1~3을 투여 후 0.083, 24, 96 및 192시간에 샘플링한다. 동물 4~6을 1, 48, 168 및 240시간에 샘플링한다. 동물 7~9를 6, 72 및 192시간에 샘플링한다. 혈청을 전혈 샘플로부터 수집하고, 테스트 품목 농도를 ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbant Assay)와 같은 결합 면역분석법에 의해 결정한다. 시간 경과에 따른 테스트 품목 농도의 변화는 2구획 분석을 통해 약동학 파라미터를 계산하는 데 사용할 수 있다. 관심 대상의 파라미터는 혈장 농도-시간 곡선 하 면적(AUC), 반감기(t_1/2) 및 제거율(CL)(각각의 용량군에 있어서)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 생체이용률을 피하 용량에 대한 AUC 대 정맥내 용량에 대한 AUC의 비로 결정할 수 있다.To assess drug exposure and bioavailability in vivo, single-dose pharmacokinetic studies in mice are performed. Lomosozumab PARG C-terminal variant is injected intravenously (via the tail vein) or subcutaneously at a dose of 1 mg/kg. Using 9 animals per group, data can be collected at many time points without exceeding the maximum volume of blood that can be drawn from individual animals by zigzag sampling. At each time point, 0.05 ml of blood is drawn. Animals 1-3 are sampled at 0.083, 24, 96 and 192 hours after dosing. Animals 4-6 are sampled at 1, 48, 168 and 240 hours. Animals 7-9 are sampled at 6, 72 and 192 hours. Serum is collected from whole blood samples, and the concentration of the test item is determined by a binding immunoassay such as an Enzyme-Linked ImmunoSorbant Assay (ELISA). Changes in the concentration of the test item over time can be used to calculate the pharmacokinetic parameters through a two-compartment analysis. Parameters of interest include, but are not limited to, area under the plasma concentration-time curve (AUC), half-life (t _1/2 ), and clearance (CL) (for each dose group). The bioavailability can be determined as the ratio of AUC to subcutaneous dose to AUC to intravenous dose.

SEQUENCE LISTING <110> Amgen Inc. <120> C-Terminal Antibody Variants <130> 31173/52080 <150> US 62/650,762 <151> 2018-03-30 <150> US 62/812,741 <151> 2019-03-01 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 190 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human Sclerostin <400> 1 Gln Gly Trp Gln Ala Phe Lys Asn Asp Ala Thr Glu Ile Ile Pro Glu 1 5 10 15 Leu Gly Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Pro Glu Leu Glu Asn Asn Lys Thr 20 25 30 Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro His His Pro Phe Glu 35 40 45 Thr Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 50 55 60 Tyr Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg Ser Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu 65 70 75 80 Val Cys Ser Gly Gln Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala Ile 85 90 95 Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys Ile 100 105 110 Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gln Arg Val Gln Leu Leu Cys Pro Gly Gly 115 120 125 Glu Ala Pro Arg Ala Arg Lys Val Arg Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys 130 135 140 Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gln Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly 145 150 155 160 Thr Glu Ala Ala Arg Pro Gln Lys Gly Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala 165 170 175 Arg Ser Ala Lys Ala Asn Gln Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr 180 185 190 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo HCDR1 <400> 2 Asp Tyr Asn Met His 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo HCDR2 <400> 3 Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo HCDR3 <400> 4 Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romoLCDR1 <400> 5 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo LCDR2 <400> 6 Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo LCD3 <400> 7 Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> C-Terminal variant sequence <400> 8 Pro Ala Arg Gly 1 <210> 9 <211> 123 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo light chain variable region <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain variable region <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> C-terminal variant sequence <400> 11 Pro Ala Arg Gly Lys 1 5 <210> 12 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo light chain <400> 12 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 13 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain variant without lysine <400> 13 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Ala Arg Gly 465 <210> 14 <211> 470 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain variant with lysine <400> 14 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Ala Arg Gly Lys 465 470 <210> 15 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> amino acids 86-111 of SEQ ID NO: 1 <400> 15 Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala Ile Gly Arg Gly Lys Trp 1 5 10 15 Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys 20 25 <210> 16 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain wild type <400> 16 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465 SEQUENCE LISTING <110> Amgen Inc. <120> C-Terminal Antibody Variants <130> 31173/52080 <150> US 62/650,762 <151> 2018-03-30 <150> US 62/812,741 <151> 2019-03-01 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 190 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> Human Sclerostin <400> 1 Gln Gly Trp Gln Ala Phe Lys Asn Asp Ala Thr Glu Ile Ile Pro Glu 1 5 10 15 Leu Gly Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Pro Glu Leu Glu Asn Asn Lys Thr 20 25 30 Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro His His Pro Phe Glu 35 40 45 Thr Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg 50 55 60 Tyr Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg Ser Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu 65 70 75 80 Val Cys Ser Gly Gln Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala Ile 85 90 95 Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys Ile 100 105 110 Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gln Arg Val Gln Leu Leu Cys Pro Gly Gly 115 120 125 Glu Ala Pro Arg Ala Arg Lys Val Arg Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys 130 135 140 Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gln Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly 145 150 155 160 Thr Glu Ala Ala Arg Pro Gln Lys Gly Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala 165 170 175 Arg Ser Ala Lys Ala Asn Gln Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr 180 185 190 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo HCDR1 <400> 2 Asp Tyr Asn Met His 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo HCDR2 <400> 3 Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo HCDR3 <400> 4 Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romoLCDR1 <400> 5 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo LCDR2 <400> 6 Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo LCD3 <400> 7 Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> C-Terminal variant sequence <400> 8 Pro Ala Arg Gly One <210> 9 <211> 123 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo light chain variable region <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain variable region <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> C-terminal variant sequence <400> 11 Pro Ala Arg Gly Lys 1 5 <210> 12 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo light chain <400> 12 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 13 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain variant without lysine <400> 13 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Ala Arg Gly 465 <210> 14 <211> 470 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain variant with lysine <400> 14 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Ala Arg Gly Lys 465 470 <210> 15 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> amino acids 86-111 of SEQ ID NO: 1 <400> 15 Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala Ile Gly Arg Gly Lys Trp 1 5 10 15 Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys 20 25 <210> 16 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Antibody sequence <220> <221> MISC_FEATURE <223> romo heavy chain wild type <400> 16 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr 115 120 125 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 145 150 155 160 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 210 215 220 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 225 230 235 240 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 245 250 255 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 305 310 315 320 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465

Claims

서열 번호 1의 스클레로스틴에 특이적으로 결합하고 서열 번호 2~7에 개시된 6개의 CDR의 세트를 포함하는 항체로서, 중쇄의 C-말단에서 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 중쇄를 포함하는, 항체.As an antibody specifically binding to sclerostin of SEQ ID NO: 1 and comprising a set of 6 CDRs disclosed in SEQ ID NOs: 2 to 7, the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: An antibody comprising a heavy chain comprising 8).

제1항에 있어서, 서열 번호 9에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 10에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체.The antibody of claim 1, comprising a light chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9 and a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 10.

제1항 또는 제2항에 있어서, 중쇄의 C-말단이 아미드화된 항체.The antibody according to claim 1 or 2, wherein the C-terminus of the heavy chain is amidated.

제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 두 중쇄의 C-말단이 아미노산 서열 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8)을 포함하는 항체.The antibody according to any one of claims 1 to 3, wherein the C-terminus of the two heavy chains comprises the amino acid sequence Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8).

제4항에 있어서, 두 중쇄의 C-말단이 아미드화된 항체.The antibody of claim 4, wherein the C-terminus of the two heavy chains is amidated.

제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 12에 개시된 경쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 13에 개시된 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체.The antibody according to any one of claims 1 to 5, comprising the light chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and the heavy chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13.

제1항 또는 제2항에 있어서, 중쇄의 C-말단에 Pro-Ala-Arg-Gly-Lys(서열 번호 11)을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 항체.The antibody according to claim 1 or 2, comprising an amino acid sequence comprising Pro-Ala-Arg-Gly-Lys (SEQ ID NO: 11) at the C-terminus of the heavy chain.

제7항에 있어서, 서열 번호 12에 개시된 경쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 14에 개시된 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체.The antibody of claim 7, comprising the light chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and the heavy chain amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14.

제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 항체의 집단 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.A pharmaceutical composition comprising a population of the antibodies of any one of claims 1 to 8 and a pharmaceutically acceptable carrier.

서열 번호 1의 스클레로스틴에 특이적으로 결합하는 항체 및 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 포함하는 제약 조성물로서,
조성물 중 항체의 약 3~5%는 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 항체의 집단인, 제약 조성물.A pharmaceutical composition comprising a mixture of an antibody specifically binding to sclerostin of SEQ ID NO: 1 and a pharmaceutically acceptable carrier,
About 3 to 5% of the antibody in the composition is a population of the antibody of any one of claims 1 to 8, a pharmaceutical composition.

제9항 또는 제10항에 있어서, 항체의 집단의 전부 또는 일부가 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하는 단일 중쇄를 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 9 or 10, wherein all or part of the population of antibodies comprises a single heavy chain comprising a C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence.

제9항 또는 제10항에 있어서, 항체의 집단의 전부 또는 일부가 아미드화된 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 9 or 10, wherein all or part of the population of antibodies comprises a heavy chain comprising an amidated C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence.

제12항에 있어서, 항체의 집단의 약 35% 미만이 단일 아미드화된 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 12, wherein less than about 35% of the population of antibodies are single amidated.

제10항에 있어서, 항체의 집단의 전부 또는 일부가 두 중쇄 모두에서 C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 10, wherein all or part of the population of antibodies comprises a C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence in both heavy chains.

제14항에 있어서, C-말단 Pro-Ala-Arg-Gly(서열 번호 8) 서열을 포함하는 2개의 중쇄를 포함하는 항체의 집단의 전부 또는 일부가 두 중쇄 모두에서 아미드화된 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 14, wherein all or part of the population of antibodies comprising two heavy chains comprising a C-terminal Pro-Ala-Arg-Gly (SEQ ID NO: 8) sequence is amidated at both heavy chains.

제15항에 있어서, 항체의 집단의 약 35% 미만이 두 중쇄 모두에서 아미드화된 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 15, wherein less than about 35% of the population of antibodies is amidated in both heavy chains.

제9항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 집단의 약 35% 미만이 아미드화되지 않은 중쇄를 포함하는 제약 조성물.17. The pharmaceutical composition of any one of claims 9-16, wherein less than about 35% of the population of antibodies comprises unamidated heavy chains.

제9항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 집단의 약 33%가 아미드화되지 않고, 항체의 집단의 약 33%가 하나의 아미드화 중쇄를 포함하고, 항체의 집단의 약 33%가 2개의 아미드화 중쇄를 포함하는 제약 조성물.The method of any one of claims 9 to 17, wherein about 33% of the population of antibodies is unamidated, about 33% of the population of antibodies comprises one amidated heavy chain, and about 33% of the population of antibodies. A pharmaceutical composition in which the% comprises two amidated heavy chains.

제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 칼슘 염, 아세테이트 완충제, 폴리올 및 계면활성제를 추가로 포함하는 제약 조성물.19. The pharmaceutical composition of any of claims 9-18, further comprising a calcium salt, an acetate buffer, a polyol and a surfactant.

제19항에 있어서, 칼슘 염이 아세트산칼슘을 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 19, wherein the calcium salt comprises calcium acetate.

제19항에 있어서, 아세테이트 완충제가 아세트산나트륨을 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 19, wherein the acetate buffer comprises sodium acetate.

제19항에 있어서, 폴리올이 수크로스를 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 19, wherein the polyol comprises sucrose.

제19항에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트 20을 포함하는 제약 조성물.The pharmaceutical composition of claim 19, wherein the surfactant comprises polysorbate 20.

제9항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 55 mM의 아세테이트, 13 mm의 칼슘, 6.0%(w/v)의 수크로스, 0.006%(w/v)의 폴리소르베이트 20(pH 5.2)을 추가로 포함하는 제약 조성물.The method of any one of claims 9 to 23, wherein 55 mM acetate, 13 mm calcium, 6.0% (w/v) sucrose, 0.006% (w/v) polysorbate 20 (pH 5.2) A pharmaceutical composition further comprising).

골 무기질 밀도의 증가를 필요로 하는 대상체에서 골 무기질 밀도를 증가시키는 방법으로서, 제9항 내지 제24항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에서 골 무기질 밀도를 증가시키는 데 효과적인 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
A method of increasing the bone mineral density in a subject in need thereof, comprising administering to the subject the composition of any one of claims 9 to 24 in an amount effective to increase the bone mineral density in the subject. Containing, method.