KR20200123990A - Manufacturing method for low molecular weight hyaluronic acid and low molecular weight hyaluronic acid therefrom - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a manufacturing method of low molecular weight hyaluronic acid and to a low molecular weight hyaluronic acid manufactured therefrom. The manufacturing method of low molecular weight hyaluronic acid and low molecular weight hyaluronic acid manufactured therefrom according to the present invention is capable of maximizing the efficiency of manufacturing low molecular weight hyaluronic acid by solving problems such as lowering of quality due to impurity generation, increasing production cost, uneven molecular weight, and lowering yield, and simplifying a manufacturing process. The low molecular weight hyaluronic acid manufactured therefrom has a lower molecular weight and has a low viscosity, thereby having excellent penetration into the skin, having an effect of increasing cell growth, maintaining skin elasticity, and having excellent usability with other ingredients, and thus being usefully used as a raw material or material component for cosmetics, especially functional cosmetics.

Description

저분자량 히알루론산의 제조방법 및 이로부터 제조된 저분자량 히알루론산{MANUFACTURING METHOD FOR LOW MOLECULAR WEIGHT HYALURONIC ACID AND LOW MOLECULAR WEIGHT HYALURONIC ACID THEREFROM}Manufacturing method of low molecular weight hyaluronic acid and low molecular weight hyaluronic acid prepared therefrom {MANUFACTURING METHOD FOR LOW MOLECULAR WEIGHT HYALURONIC ACID AND LOW MOLECULAR WEIGHT HYALURONIC ACID THEREFROM}

본 발명은 저분자량 히알루론산의 제조방법 및 이로부터 제조된 저분자량 히알루론산에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing low molecular weight hyaluronic acid and a low molecular weight hyaluronic acid prepared therefrom.

히알루론산(Hyaluronic acid)은, D-글루쿠론산(D-glucuronic acid)과 N-아세틸-D-글루코사민(N-acetyl-D-glucosamine)을 기본 단위로 하여 분자량이 수천 내지 수백만 달톤에 이르며, 거의 모든 생체에서 동일한 구조로 발견되는 직쇄상 폴리머(liner polymer)이며 주로 세포외 매트릭스(extracellular matrix)의 구성 성분이다. 종간 차이 없이 동일한 구조를 가지므로 추출원에 무관하게 면역반응이 없는 것으로 알려져 있으며, 현재까지 퇴행성 관절염, 백내장, 주름 개선, 약물 전달, 줄기세포 지지체, 화장품 보습 유지 성분 등 많은 분야에서 사용되는 안전한 천연 다당류이다. 중합체인 히알루론산은 분자량이 클수록 밀도가 높아지는 특징이 있어 높은 점성을 가지고, 보습 교화가 강하여 물리적 마찰 상태에서 윤활 작용을 하는 기능이 우수하며, 세균 등의 침입 방어하는 효과가 있어 최근에는 히알루론산을 응용한 많은 제품이 개발되고 있다.Hyaluronic acid has a molecular weight ranging from thousands to millions of daltons using D-glucuronic acid and N-acetyl-D-glucosamine as basic units, It is a linear polymer found in almost all living organisms with the same structure, and is a component of the extracellular matrix. Since it has the same structure without differences between species, it is known that there is no immune response irrespective of the source of extraction, and until now, it is a safe natural used in many fields such as degenerative arthritis, cataracts, wrinkle improvement, drug delivery, stem cell support, and moisturizing ingredients in cosmetics. It is a polysaccharide. Hyaluronic acid, a polymer, has a characteristic that its density increases as the molecular weight increases, so it has high viscosity, has a strong moisturizing effect, and has an excellent function of lubricating in a physical friction state, and has the effect of preventing the invasion of bacteria. Many applied products are being developed.

초기에는 닭의 벼슬에서 히알루론산을 추출하여 의약품, 화장품, 식품용 등으로 산업화되어 사용되었다[Biomacromolecules, 5, 2122-2127 (2004)]. 그러나 최근에는 조류독감 등 동물로부터 유발될 수 있는 감염성 질환의 우려 때문에 주로 미생물을 이용한 발효법으로 생산하여 사용한다[Appl. Microbiol. Biotechnol. 66(4): 341-51 (2005)].In the early days, hyaluronic acid was extracted from the heads of chickens and industrialized for pharmaceuticals, cosmetics, and foods [Biomacromolecules, 5, 2122-2127 (2004)]. However, in recent years, due to concerns of infectious diseases that can be caused by animals such as bird flu, it is mainly produced and used by fermentation using microorganisms [Appl. Microbiol. Biotechnol. 66(4): 341-51 (2005)].

히알루론산은 물에 잘 용해되며 분자 구조 내에 많은 수분을 보유할 수 있는 특성으로 인해 화장품의 보습제로 널리 사용되고 있고, 화상이나 창상에 바르는 크림, 주사제, 거즈 등에 적용되고 있으며, 각막의 안쪽을 보호하는 제제로도 사용되고 있다. 또한, 히알루론산은 조직공학 분야에서 창상 피복재나 치과용 매트릭스에 사용되는 다공성 스펀지 형태의 매트릭스의 제조에 사용되어 왔다. Hyaluronic acid is widely used as a moisturizer in cosmetics due to its ability to dissolve well in water and retain a lot of moisture in its molecular structure.It is applied to creams, injections, and gauze applied to burns or wounds, and protects the inside of the cornea. It is also used as a formulation. In addition, hyaluronic acid has been used to prepare a matrix in the form of a porous sponge used in wound covering materials or dental matrices in the field of tissue engineering.

한편, 저분자량(평균 분자량이 약 1000 달톤 이하)의 히알루론산은, pH, 열 등에 높은 점도 안전성을 갖고 화장품의 다른 성분과 상용성이 우수하며 피부 내 침투성이 우수하여 세포 증식 효과와 피부 탄력을 유지시키는 기능을 갖는 소재로서, 화장품 분야에서 각광을 받는 원료 물질 중 하나이다.On the other hand, hyaluronic acid of low molecular weight (average molecular weight is about 1000 Daltons or less) has high viscosity stability, such as pH and heat, has excellent compatibility with other ingredients of cosmetics, and has excellent penetration into the skin, thereby enhancing cell proliferation effect and skin elasticity. As a material that has the function of maintaining, it is one of the raw materials that are in the spotlight in the cosmetic field.

종래 저분자량 히알루론산을 제조하기 위한 방법으로, 고분자 히알루론산의 분자량을 저하시키는 형태로 연구 및 개발이 진행되어 왔으며, 특히 고분자 히알루론산의 분자량을 저하시키는 방법으로는 산과 염기에 의한 가수분해 방법이 개시되었다. 그러나, 이러한 방법은 저분자량 히알루론산을 제조하기 위한 공정에 새로운 공정의 추가가 있어 효율이 떨어지는 동시에, 후처리 과정 중 pH를 규격 내 값으로 증가시키거나 감소시켜야 하는 불편함이 있었으며, 추가적으로 히알루론산의 농도에 따른 pH의 변화 속도가 달라져 대량 생산 공정에 이러한 방법을 적용할 수 없는 문제점이 있다.Conventionally, as a method for preparing low molecular weight hyaluronic acid, research and development have been conducted in the form of lowering the molecular weight of high molecular weight hyaluronic acid. In particular, as a method of lowering the molecular weight of high molecular weight hyaluronic acid, the hydrolysis method by acid and base Started. However, this method is inconvenient to increase or decrease the pH to a value within the specification during the post-treatment process, and at the same time, at the same time, the efficiency is lowered due to the addition of a new process to the process for producing low molecular weight hyaluronic acid. There is a problem that this method cannot be applied to a mass production process because the rate of change of the pH varies depending on the concentration of.

한편, 동물 조직으로부터의 추출 또는 발효법으로 생산되는 히알루론산 제조방법도 연구가 되었으나, 이는 중합도가 높은 50만 달톤 이상의 고분자 다당류이기 때문에 일반적으로 피부를 투과하지 못한다. 즉, 50만 달톤 이상의 히알루론산을 피부에 도포하면 공기 중의 수분을 흡수하려는 성질 때문에 피부로부터 수분 증발을 막을 수는 있지만, 피부를 투과하지 못하기 때문에 피부 표면에 머물다가 세안 등에 의해 쉽게 피부 표면에서 씻겨나가고, 이로 인해 피부의 보습 효과가 지속되기 어렵다. 반면에, 10만 달톤 이하의 히알루론산은 피부를 투과할 수는 있지만 분자 크기가 작아 수분을 함유하려는 성질이 부족하여 보습 효과가 지속되지 않는다. 또한, 2만 달톤 이하의 HA는 피부를 효과적으로 투과하지만 염증 반응(pro-inflammatory response)을 유발하는 것으로 알려져 있는데, 이는 피부 내 대식세포 상의 수용체인 톨-유사(Toll-like) 수용체-2 및 4와 결합하여 면역 반응을 개시할 수 있기 때문이다.On the other hand, a method for producing hyaluronic acid produced by extraction or fermentation from animal tissues has also been studied, but since it is a polymer polysaccharide with a high degree of polymerization of 500,000 Daltons or more, it generally cannot penetrate the skin. In other words, if more than 500,000 Daltons of hyaluronic acid is applied to the skin, it can prevent evaporation of moisture from the skin due to its property to absorb moisture in the air, but because it cannot penetrate the skin, it stays on the skin surface and is easily removed from the skin surface by washing. It is washed away, and it is difficult to sustain the moisturizing effect of the skin. On the other hand, hyaluronic acid of 100,000 Daltons or less can penetrate the skin, but the moisturizing effect does not last because the molecular size is small and the property to contain moisture is insufficient. In addition, HA of less than 20,000 Daltons effectively penetrates the skin but is known to induce a pro-inflammatory response, which is Toll-like receptor-2 and 4 receptors on macrophages in the skin. This is because it can bind to and initiate an immune response.

특허문헌 1은, 최근에 연구 개발된 기술로서 저분자량 히알루론산의 제조방법 중 활성탄을 이용하는 방법을 개시하고 있다.Patent Document 1 discloses a method of using activated carbon among the methods for producing low molecular weight hyaluronic acid as a technology recently researched and developed.

보다 구체적으로, 특허문헌 1은 히알루론산에 활성탄을 접촉시킬 단계를 포함한 저분자량의 히알루론산의 제조 방법이며, 전기 활성탄이 전기 히알루론산의 분자량을 감소시키는 반응 매개체로서 이용되어 전기 히알루론산과 활성탄의 중량 대비가 1:2내지 1:6이며, 전기 저분자량이 10,000 Da내지 3,000,000 Da의 범위인 저분자량의 히알루론산의 제조 방법을 개시하고 있다.More specifically, Patent Document 1 is a method for producing low molecular weight hyaluronic acid including the step of bringing activated carbon into contact with hyaluronic acid, and electric activated carbon is used as a reaction medium for reducing the molecular weight of electric hyaluronic acid. A method for producing low molecular weight hyaluronic acid having a weight ratio of 1:2 to 1:6 and an electric low molecular weight in the range of 10,000 Da to 3,000,000 Da is disclosed.

그러나, 상기 활성탄을 이용하는 방법의 경우, 분해 후 투여된 재료의 제거가 필요하며, 엔도톡신이나 불순물의 형성에 따른 품질 저하를 발생시킬 수 있는 문제점이 존재한다.However, in the case of the method of using the activated carbon, it is necessary to remove the administered material after decomposition, and there is a problem that may cause quality deterioration due to the formation of endotoxins or impurities.

따라서, 보다 불순물 생성에 따른 품질저하 및 생산 비용 증가, 불균일한 분자량, 수율 저하 등의 문제점을 해결하고 제조 공정을 단순화시킨 저분자량, 특히 중량평균 분자량이 1,000 달톤 이하의 저분자량 히알루론산 제조방법에 대한 기술 개발이 필요한 실정이다.Therefore, it is more suitable for a low molecular weight hyaluronic acid production method with a weight average molecular weight of 1,000 Daltons or less, which solves problems such as lowering of quality and increased production cost, uneven molecular weight, and lower yield, and simplifies the manufacturing process. There is a need for technology development.

특허문헌 1: 일본 공개특허공보 제2013-504679호Patent Document 1: Japanese Laid-Open Patent Publication No. 2013-504679

본 발명자들은 상기 언급한 종래 제안된 기술의 문제점 해결을 위해, 고분자량 히알루론산 파우더 분말을 증류수에 용해시킨 후, 밀폐용기에 넣고 특정 범위의 선량을 가지는 방사선을 조사할 경우, 분자량의 분포가 균일하고 수율이 높은 저분자량 히알루론산 제조방법임을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.In order to solve the problems of the above-mentioned conventionally proposed technology, the present inventors dissolve high molecular weight hyaluronic acid powder powder in distilled water, put it in an airtight container, and irradiate radiation having a dose in a specific range, the distribution of molecular weight is uniform. The present invention was completed by confirming that it is a method for producing low molecular weight hyaluronic acid with high yield.

본 발명은, 저분자량 히알루론산 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a method for producing low molecular weight hyaluronic acid.

또한, 본 발명은 상기 저분자량 히알루론산 제조방법으로부터 제조된 저분자량 히알루론산을 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, it is an object of the present invention to provide a low molecular weight hyaluronic acid prepared from the method for producing low molecular weight hyaluronic acid.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 실시양태로서, As one embodiment for achieving the above object,

본 발명은, (A) 중량평균 분자량이 5,000 내지 100,000 달톤(dalton)의 히알루론산 파우더 분말을 증류수에 5%로 용해시켜 히알루론산 용액을 제조하는 단계; 및 (B) 상기 제조된 히알루론산 용액에 50 kGy 내지 200 kGy 이하의 선량으로 방사선을 조사하는 단계를 포함하는 저분자량 히알루론산 제조방법을 제공한다.The present invention, (A) preparing a hyaluronic acid solution by dissolving a hyaluronic acid powder powder having a weight average molecular weight of 5,000 to 100,000 daltons in distilled water at 5%; And (B) irradiating the hyaluronic acid solution with radiation at a dose of 50 kGy to 200 kGy or less.

또한, 본 발명은, 상기 (B) 단계 전에 (C) 상기 제조된 히알루론산 용액을 밀폐용기에 투입하는 단계를 추가적으로 포함하는 것으로 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing low molecular weight hyaluronic acid, characterized in that it additionally includes the step of (C) adding the prepared hyaluronic acid solution to an airtight container before step (B).

또한, 본 발명은, 상기 (C) 단계 후에 (D) 상기 밀폐용기에 투입된 히알루론산 용액에 질소 가스를 퍼징하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing low molecular weight hyaluronic acid, characterized in that it further comprises the step of purging nitrogen gas into the hyaluronic acid solution injected into the closed container (D) after the step (C).

또한, 본 발명은, 상기 질소 가스를 퍼징하는 단계는 상기 밀폐용기에 투입된 히알루론산 용액에 포함된 산소 가스를 제거함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing low molecular weight hyaluronic acid, wherein the purging of the nitrogen gas is performed by removing oxygen gas contained in the hyaluronic acid solution injected into the sealed container.

또한, 본 발명은, 전술한 저분자량 히알루론산 제조방법으로부터 제조된 저분자량 히알루론산을 제공한다.In addition, the present invention provides a low molecular weight hyaluronic acid prepared from the above-described low molecular weight hyaluronic acid production method.

또한, 본 발명은, 상기 저분자량 히알루론산은 중량평균 분자량이 1,000달톤 이하인 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산을 제공한다.In addition, the present invention provides a low molecular weight hyaluronic acid, characterized in that the low molecular weight hyaluronic acid has a weight average molecular weight of 1,000 Daltons or less.

또한, 본 발명은, 상기 저분자량 히알루론산은 점도가 100cP 이상 내지 800cP 이하인 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산을 제공한다.In addition, the present invention provides a low molecular weight hyaluronic acid, characterized in that the viscosity of the low molecular weight hyaluronic acid is 100 cP or more to 800 cP or less.

본 발명에 따른 저분자량 히알루론산의 제조방법 및 이로부터 제조된 저분자량 히알루론산은, 보다 불순물 생성에 따른 품질저하 및 생산 비용 증가, 불균일한 분자량, 수율 저하 등의 문제점을 해결하고 제조 공정을 단순화시켜 저분자량 히알루론산 제조 효율을 극대화시킬 수 있으며, 이로부터 제조된 저분자량 히알루론산은 보다 낮은 분자량으로 낮은 점도성을 가져 피부 내 침투성이 우수하고 세포 증직 효과 및 피부 탄력을 유지시키는 기능을 하는 동시에 다른 성분들과의 사용성이 우수하므로 화장품, 특히 기능성 화장품의 원재료 또는 소재 성분으로써 유용하게 활용될 수 있다.The method for producing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention and the low molecular weight hyaluronic acid produced therefrom solves problems such as lowering of quality due to impurities generation, increased production cost, non-uniform molecular weight, and lowering yield, and simplifies the manufacturing process. The production efficiency of low molecular weight hyaluronic acid can be maximized, and the low molecular weight hyaluronic acid produced therefrom has a lower molecular weight and has a low viscosity, so it has excellent penetration into the skin, and maintains the effect of cell thickening and skin elasticity. Since it has excellent usability with other ingredients, it can be usefully used as a raw material or material component of cosmetics, especially functional cosmetics.

첨부된 도면은 해당 기술 분야의 통상의 기술자에게 본 발명의 내용을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 기술적 사상이 이에 한정되는 것은 아니다.
도 1은, 본 발명에 따른 실험예 3에 대한 저분자량 히알루론산 제조방법을 간략하게 표현한 도이다.
도 2는, 본 발명에 따른 실험예 4에 대한 결과로서, 히알루론산 수용액의 방사선 조사 전과 후의 색상 변화가 있는지 확인하기 위해 관찰한 사진이다.
도 3은, 본 발명에 따른 실험예 5에 대한 결과로서, 방사선을 조사한 히알루론산의 폴리우레탄의 화학적 구조를 확인하기 위하여, 적외선 분광분석기(ATR-FTIR)로 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는, 본 발명에 따른 실험예 6에 대한 결과로서, 방사선 조사 선량에 따른 히알루로산의 점도를 그래프화하여 나타낸 도이다.
도 5는, 본 발명에 따른 실험예 7에 대한 결과로서, 방사선 조사 선량에 따른 히알루로산의 분자량을 그래프화하여 나타낸 도이다.
도 6은, 본 발명에 따른 실험예 8에 대한 결과로서, 방사선 조사 선량에 따른 저분자량(1,000Da 이하) 히알루로산의 제조 수율을 나타낸 도이다.The accompanying drawings are for explaining the contents of the present invention in more detail to those skilled in the art, and the technical idea of the present invention is not limited thereto.
1 is a diagram briefly showing a method for preparing low molecular weight hyaluronic acid for Experimental Example 3 according to the present invention.
Figure 2 is a result of Experimental Example 4 according to the present invention, a photograph observed to confirm whether there is a color change before and after irradiation of the hyaluronic acid aqueous solution.
3 is a diagram showing a result of analysis with an infrared spectroscopy (ATR-FTIR) in order to confirm the chemical structure of a polyurethane of hyaluronic acid irradiated with radiation as a result of Experimental Example 5 according to the present invention.
4 is a graph showing the viscosity of hyaluronic acid according to radiation dose as a result of Experimental Example 6 according to the present invention.
5 is a graph showing the molecular weight of hyaluronic acid according to the radiation dose as a result of Experimental Example 7 according to the present invention.
6 is a diagram showing the production yield of low molecular weight (1,000 Da or less) hyaluronic acid according to the irradiation dose as a result of Experimental Example 8 according to the present invention.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 저분자량 히알루론산 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing low molecular weight hyaluronic acid.

본 명세서에서 사용된 용어 "저분자량"은, 일반적으로 사용되는 의미의 "분자의 질량"을 의미할 수 있고, 수평균 분자량(Number average molecular weight, Mn) 또는 중량평균 분자량(Weighr average molecular weight, Mw)일 수 있으나, 중량평균 분자량인 것이 바람직하다.The term "low molecular weight" as used herein may mean "mass of a molecule" in a commonly used meaning, and may mean a number average molecular weight (Mn) or a weight average molecular weight (Weighr average molecular weight, Mw), but it is preferably a weight average molecular weight.

본 발명에 따른 저분자량 히알루론산 제조방법은, (A) 중량평균 분자량이 5,000 내지 100,000 달톤(dalton)의 히알루론산 파우더 분말을 증류수에 5%로 용해시켜 히알루론산 용액을 제조하는 단계; 및 (B) 상기 제조된 히알루론산 용액에 50 kGy 내지 200 kGy 이하의 선량으로 방사선을 조사하는 단계를 포함할 수 있다.The method for preparing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention includes: (A) preparing a hyaluronic acid solution by dissolving hyaluronic acid powder powder having a weight average molecular weight of 5,000 to 100,000 Daltons in distilled water at 5%; And (B) irradiating the prepared hyaluronic acid solution with radiation at a dose of 50 kGy to 200 kGy or less.

상기 (A) 히알루론산 용액을 제조하는 단계는 상기 중량평균 분자량이 5,000 내지 100,000 달톤의 히알루론산 파우더 분말을 용해시켜 용액 또는 콜로이드 형태로 분해하는 과정으로, 상기 과정 수행을 통하여 후술하는 특정 선량의 방사선 조사를 통하여 상기 분자량이 5,000 내지 100,000 달톤의 히알루론산을 분해시켜 저분자량, 즉 1,000 달톤 이하의 분자량을 가지는 히알루론산을 제조할 수 있다.(A) The step of preparing the hyaluronic acid solution is a process of dissolving the hyaluronic acid powder powder having a weight average molecular weight of 5,000 to 100,000 Daltons and decomposing it into a solution or colloidal form, and the radiation of a specific dose to be described later through performing the above process. Hyaluronic acid having a low molecular weight, that is, a molecular weight of 1,000 Daltons or less can be prepared by decomposing hyaluronic acid having a molecular weight of 5,000 to 100,000 Daltons through irradiation.

상기 (B) 방사선을 조사하는 단계는, 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 10 kGy/hr, 15 kGy/hr 또는 20 kGy/hr의 선량으로 조사될 수 있으나, 바람직하게는 10 kGy/hr 선량으로 조사될 수 있다.The step of irradiating the (B) radiation is not particularly limited, for example, it may be irradiated at a dose of 10 kGy/hr, 15 kGy/hr or 20 kGy/hr, but preferably at a dose of 10 kGy/hr. Can be investigated.

또한, 상기 (B) 방사선을 조사하는 단계는, 특정 범위의 선량, 즉 50 kGy 내지 200 kGy 이하의 선량으로 방사선을 조사하는 것이 바람직한데, 이는 50 kGy 미만의 선량으로 방사선을 조사할 경우, 저분자량 히알루론산으로 분해하는데 급격하게 영향이 미미해질 수 있고, 200 kGy 초과의 선량으로 방사선을 조사할 경우, 저분자량 히알루론산으로 분해하는 수율이 급격하게 떨어질 수 있다. 또한, 상기 (B) 방사선을 조사하는 단계는 보다 바람직하게 100 kGy 내지 200 kGy 이하의 선량으로 방사선을 조사할 수 있다.In addition, in the step of irradiating the radiation (B), it is preferable to irradiate the radiation with a dose of a specific range, that is, a dose of 50 kGy to 200 kGy or less, which is, when irradiating the radiation with a dose of less than 50 kGy, low The decomposition into molecular weight hyaluronic acid may have a sharply insignificant effect, and when irradiated with radiation at a dose of more than 200 kGy, the yield of decomposition into low molecular weight hyaluronic acid may drop rapidly. In addition, in the step of irradiating the radiation (B), the radiation may be more preferably irradiated at a dose of 100 kGy to 200 kGy or less.

본 발명에 따른 저분자량 히알루론산 제조방법은, 상기 (B) 단계를 수행하기 전에 (C) 상기 제조된 히알루론산 용액을 밀폐용기에 투입하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.The method for producing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention may further include the step of (C) introducing the prepared hyaluronic acid solution into an airtight container before performing step (B).

상기 제조된 히알루론산 용액을 밀폐용기에 투입하여, 공기 중의 다른 요소와의 접촉을 방지함으로써, 보다 높은 저분자량 히알루론산 제조 수율을 얻을 수 있다.By putting the prepared hyaluronic acid solution into an airtight container to prevent contact with other elements in the air, a higher production yield of low molecular weight hyaluronic acid can be obtained.

본 발명에 따른 저분자량 히알루론산 제조방법은, 상기 (C) 단계 후에 (D) 상기 밀폐용기에 투입된 히알루론산 용액에 질소 가스를 퍼징(purging)하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.The method for producing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention may further include purging (D) nitrogen gas into the hyaluronic acid solution injected into the sealed container after step (C).

상기 (D) 밀폐용기에 투입된 히알루론산 용액에 질소 가스를 퍼징(purging)하는 단계는 상기 히알루론산 용액에 포함된 산소 가스를 제거하기 위한 것으로, 상기 산소 가스를 제거함으로써, 질소 분위기하에 전술한 특정 선량의 방사선을 조사함으로써, 보다 저분자량 히알루론산의 제조 수율을 높일 수 있다.The (D) purging of nitrogen gas into the hyaluronic acid solution injected into the sealed container is to remove the oxygen gas contained in the hyaluronic acid solution, and by removing the oxygen gas, the above-described specificity under a nitrogen atmosphere By irradiating radiation at a dose, the production yield of hyaluronic acid with a lower molecular weight can be increased.

본 발명은 또한, 전술한 저분자량 히알루론산의 제조방법으로부터 제조된 저분자량 히알루론산에 관한 것이다.The present invention also relates to a low molecular weight hyaluronic acid prepared from the above-described method for producing low molecular weight hyaluronic acid.

상기 저분자량 히알루론산은 중량평균 분자량이 1,000 달톤 이하인 것이 바람직하며, 상기 중량평균 분자량이 1,000 달톤을 초과하는 히알루론산은 피부와 접촉하는 제품에 적용 시, 분자 사이즈가 커서 피부 내부로의 침투력이 낮아 피부 보습이나 피부 주름 개선을 위한 기능성 화장품 원료로서의 사용 가능성이 떨어질 우려가 있다.The low molecular weight hyaluronic acid preferably has a weight average molecular weight of 1,000 Daltons or less, and when the hyaluronic acid having a weight average molecular weight exceeding 1,000 Daltons is applied to a product in contact with the skin, its molecular size is large and its penetration into the skin is low. There is a concern that the possibility of use as a functional cosmetic ingredient for moisturizing skin or improving skin wrinkles may be reduced.

상기 저분자량 히알루론산은 중량평균 분자량은 1,000 달톤 이하라면 특별히 문제가 없고, 다만 매우 낮은 중량평균 분자량을 가질 경우, 점도가 매우 낮아 화장품 등의 제품으로 적용 시 제형상의 제한과 함께, 적용 가능성이 떨어질 수 있으므로, 예를 들어 상기 중량평균 분자량의 하한은 100 달톤, 200 달톤 또는 300 달톤일 수 있으나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다.If the low molecular weight hyaluronic acid has a weight average molecular weight of 1,000 Daltons or less, there is no problem. However, if it has a very low weight average molecular weight, the viscosity is very low, and when applied to a product such as cosmetics, it is possible to apply it along with restrictions on the formulation. Since it may fall, for example, the lower limit of the weight average molecular weight may be 100 Daltons, 200 Daltons, or 300 Daltons, but is not particularly limited thereto.

상기 저분자량 히알루론산은 점도가 100cP 이상 내지 800cP 이하일 수 있다.The low molecular weight hyaluronic acid may have a viscosity of 100 cP or more to 800 cP or less.

상기 저분자량 히알루론산은 점도가 전술한 범위에서 형성될 경우, 보다 화장품 원료로서의 제형 형성 공정이 휠씬 수월하게 이루어질 수 있다. When the low molecular weight hyaluronic acid has a viscosity in the above-described range, a formulation forming process as a cosmetic raw material can be made much easier.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

[실험예 1] 히알루론산 방사선 조사[Experimental Example 1] Hyaluronic acid irradiation

분자량이 높은 히알루론산을 저분자화하기 위하여, 중량평균 분자량 약 5,000 ~ 100,000 daltons의 히알루론산 파우더 분말을 증류수에 5%로 용해시킨 후, 증류수에 완전히 용해된 히알루론산 용액을 밀폐용기에 넣었다. 그 후, 감마선 조사장치(60Co 선원, MDS Nordion, Canada) 10kGy/hr의 선량으로 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 200kGy, 250kGy 및 300kGy를 각각 조사하였다. 상기 감마선 조사장치의 형식과 유형은 습식과 Pencil Type으로써 차폐제로 물을 사용하였다.In order to reduce the molecular weight of hyaluronic acid having a high molecular weight, hyaluronic acid powder powder having a weight average molecular weight of about 5,000 to 100,000 daltons was dissolved in distilled water at 5%, and then a hyaluronic acid solution completely dissolved in distilled water was put into an airtight container. Thereafter, a gamma ray irradiation device (60Co source, MDS Nordion, Canada) was irradiated with a dose of 10kGy/hr, 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 200kGy, 250kGy and 300kGy, respectively. The type and type of the gamma ray irradiation device were wet and pencil type, and water was used as a shielding agent.

[실험예 2] 히알루론산 방사선 조사 시 질소 퍼징[Experimental Example 2] Nitrogen purging during hyaluronic acid irradiation

상기 [실험예 1]의 방법으로 방사선 조사 시 먼저 제조된 히알루론산 용액을 밀폐용기에 넣고 질소 퍼징을 실시하여 산소를 제거하였다. 그 후, 상기 히알루론산 용액을 밀폐시킨 후 방사선 선량을 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 200kGy, 250kGy 및 300kGy로 각각 방사선 조사를 실시하였다. 질소 퍼징은 밀폐용기 내의 산소가 충분히 제거될 수 있을 정도로 실시하며, 용기의 용량에 따라 퍼징 시간이 달라지나 본 발명에서는 200ml밀폐 용기에 히알루론산 용해액을 100ml 채운 후 10분 동안 질소 퍼징을 실시하였다.When irradiating with the method of [Experimental Example 1], the hyaluronic acid solution prepared first was put into an airtight container and purged with nitrogen to remove oxygen. Then, after sealing the hyaluronic acid solution, radiation doses of 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 200kGy, 250kGy and 300kGy were respectively irradiated. Nitrogen purging is performed to the extent that oxygen in the sealed container can be sufficiently removed, and the purging time varies depending on the capacity of the container, but in the present invention, 100 ml of hyaluronic acid solution was filled in a 200 ml sealed container and then nitrogen purging was performed for 10 minutes. .

[실험예 3] 방사선 조사된 히알루론산 분말 제조[Experimental Example 3] Preparation of irradiated hyaluronic acid powder

상기 [실험예 2]에서 조사를 마친 히알루론산을 초저온 냉동고를 이용하여 -80℃에서 12시간 동안 얼린 후 동결 건조기에서 완전히 건조시켜 수분을 제거하였다. 수분이 제거된 히알루론산은 분쇄하여 최종적으로 저분자량 히알루론산 분말을 제조하였다. 본 발명에 따른 저분자량 히알루론산의 제조방법의 전반적인 과정은 도 1에 나타내었다.The hyaluronic acid irradiated in [Experimental Example 2] was frozen for 12 hours at -80°C using an ultra-low temperature freezer, and then completely dried in a freeze dryer to remove moisture. Hyaluronic acid from which moisture was removed was pulverized to finally prepare a low molecular weight hyaluronic acid powder. The overall process of the method for producing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention is shown in FIG. 1.

[실험예 4] 방사선 조사 전과 후의 색상 변화 관찰[Experimental Example 4] Observation of color change before and after irradiation

상기 [실시예 3]을 통하여 최종적으로 얻어진 본 발명에 따른 저분자량 히알루론산을 증류수에 1wt% 농도로 용해한 후 방사선 조사 선량을 각각 0kGy, 10kGy, 25kGy, 50kGy 및 100kGy으로 하여 각각 방사선을 조사하였다. 이에 대한 결과는 도 2에 나타내었다.After dissolving the low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention finally obtained through the above [Example 3] at a concentration of 1 wt% in distilled water, radiation was irradiated with radiation doses of 0kGy, 10kGy, 25kGy, 50kGy and 100kGy, respectively. The results for this are shown in FIG. 2.

[실험예 5] 전반사 적외선 분광 분석기를 통한 화학적 특성 분석[Experimental Example 5] Chemical property analysis through total reflection infrared spectrometer

상기 [실시예 3]을 통하여 최종적으로 얻어진 본 발명에 따른 저분자량 히알루론산 중 방사선 조사 선량을 각각 0kGy, 10kGy, 25kGy, 50kGy 및 100kGy으로 각각 방사선 조사를 한 시료에 대해서, 전반사 적외선 분광 분석기(Bruker TEMSOR 37, Bruker AXS. Inc., Germany)를 이용하여 화학적 특성을 분석하였다. 이 경우, 시료의 크기는 직경 5 × 5 × 0.1mm였으며, 해상도는 8cm-1이었고, 0 내지 1600 cm-1의 스펙트럼에서 24회 스캔하여 스펙트럼을 분석하였다. 분석한 결과는 도 3에 나타내었다.For the samples irradiated with radiation at 0kGy, 10kGy, 25kGy, 50kGy and 100kGy, respectively, of the low molecular weight hyaluronic acid finally obtained through the above [Example 3], a total reflection infrared spectrometer (Bruker TEMSOR 37, Bruker AXS. Inc., Germany) was used to analyze the chemical properties. In this case, the size of the sample was 5 × 5 × 0.1 mm in diameter, the resolution was 8 cm -1, and the spectrum was analyzed by scanning 24 times in the spectrum of 0 to 1600 cm -1 . The analysis results are shown in FIG. 3.

[실험예 6] 히알루론산 수용액 점도 측정[Experimental Example 6] Measurement of viscosity of aqueous hyaluronic acid solution

히알루론산의 방사선 조사 전, 후 점도의 변화를 확인하기 위해 방사선을 조사하지 않은 히알루론산과 상기 [실시예 3]에 의하여 동결 건조된 히알루론산 분말을 증류수에 1wt% 농도로 용해한 후 LV spindle(Middebro, MA, USA)이 장착된 점도계(DV-II+viscometer, Brookfield, MA, USA)를 이용하여 100 rpm에서 수용액의 점도를 측정하였다. 측정한 결과는 도 4에 나타내었다.In order to check the change in viscosity before and after irradiation of hyaluronic acid, hyaluronic acid without irradiation and hyaluronic acid powder freeze-dried according to [Example 3] were dissolved in distilled water at a concentration of 1 wt%, and then LV spindle (Middebro , MA, USA) equipped with a viscometer (DV-II+viscometer, Brookfield, MA, USA) was used to measure the viscosity of the aqueous solution at 100 rpm. The measurement results are shown in FIG. 4.

[실험예 7] 방사선 조사된 히알루론산의 분자량 측정[Experimental Example 7] Measurement of molecular weight of irradiated hyaluronic acid

방사선 조사된 히알루론산의 분자량을 GPC를 이용하여 분석하였다. GPC 분석시스템의 칼럼은 shodex Ohpak SB-805HQ, 검출기는 showa denko. K.K RI-71을 사용하였다. 분석조건은 eluent 0.1 M NaNO3, flow rate 1 ml/min, 온도는 30℃이고, 샘플로딩은 10ul의 조건으로 하였다. GPC standard는 PEO를 사용하였으며, standard 분자량은 26,000, 95,000, 170,000, 913,000을 Sigma에서 구입하여 분석 및 측정하였다. 분석 및 측정한 결과는 도 5에 나타내었다.The molecular weight of the irradiated hyaluronic acid was analyzed using GPC. The column of the GPC analysis system is shodex Ohpak SB-805HQ, and the detector is showa denko. K.K RI-71 was used. Analysis conditions were eluent 0.1 M NaNO3, flow rate 1 ml/min, temperature 30°C, and sample loading was 10ul. PEO was used as the GPC standard, and standard molecular weights of 26,000, 95,000, 170,000, and 913,000 were purchased from Sigma and analyzed and measured. The analysis and measurement results are shown in FIG. 5.

[실험예 8] 방사선 조사 시 질소 퍼징 실시 유무에 따른 수율 비교[Experimental Example 8] Comparison of yield according to the presence or absence of nitrogen purging during irradiation

[실험예 1] 내지 [실험예 3]에 있어서, 질소 퍼징 실시 유무에 따른 제조되는 히알루론산의 수율을 비교하기 위하여, 방사선 선량 각각 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 200kGy, 250kGy 및 300kGy로 각각 조사된 1000 Da 이하의 히알루론산의 수율을 측정하여 비교하였다. 측정 및 비교한 결과는 도 6에 나타내었다.In [Experimental Example 1] to [Experimental Example 3], in order to compare the yield of hyaluronic acid prepared according to the presence or absence of nitrogen purging, the radiation doses, respectively, 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 200kGy, 250kGy and The yield of hyaluronic acid of 1000 Da or less irradiated with 300 kGy was measured and compared. The measurement and comparison results are shown in FIG. 6.

상기 실험예 1 내지 8에 대한 결과 중, Among the results for Experimental Examples 1 to 8,

도 2를 참조하면, 본 발명에 따른 저분자량 히알루로산 제조방법에 의하여 제조된 히알루론산의 수용액은 방사선 조사 전과 후 색상의 변화는 없었으며, 선량이 증가하더라도 색상의 차이는 발생하지 않음을 확인하였다. Referring to FIG. 2, it was confirmed that the aqueous solution of hyaluronic acid prepared by the method for preparing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention did not change color before and after irradiation, and no color difference occurred even if the dose was increased. I did.

또한, 도 3을 참조하면, 1,618cm-1에서 C=O stretch peak가 관찰되었으며, 1,412cm-1에서는 C-O peak, 1,040cm-1에서는 C-OH 등의 메인 Peak들이 관찰되어 방사선 조사 전과 후의 히알루론산의 화학적 구조 특성은 변화가 없으므로, 본 발명에 따른 저분자량 히알루론산의 제조방법에 의하여 제조된 저분자량 히알루론산의 화학적 특성은 방사선 조사에 영향을 받지 않는 것으로 확인되었다.In addition, hyaluronic Referring to Figure 3, which was the C = O stretch peak observed at 1,618cm -1, 1,412cm -1 in the CO peak, 1,040cm -1 is observed that the main Peak C-OH, such as before and after irradiation Since there is no change in the chemical structural characteristics of the low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention, it was confirmed that the chemical properties of the low molecular weight hyaluronic acid prepared by the method for producing low molecular weight hyaluronic acid were not affected by irradiation.

또한, 도 4를 참조하면, 히알루론산은 분자량에 따라 고분자량일수록 동일한 농도에서 높은 점도를 나타내고 본 발명에 따른 저분자량 히알루론산은 낮은 점도를 갖는 것으로 확인되었다. 보다 구체적으로, 방사선 조사 전의 히알루론산 용액의 점도는 1,012cP였으나, 방사선 조사 후 샘플에서는 방사선 선량이 증가함에 따라 10kGy에서는 812cP, 20kGy에서는 805cp, 30kGy에서는 785cp, 40kGy에서는 735cp, 50kGy 에서는 692cp, 100kGy에서는 392cP, 150kGy에서는 280cp, 200kGy에서는 179cP, 250kGy에서는 115cp 및 300kGy에서는 55cp로 점도가 감소하였다. 따라서, 방사선 조사 선량이 50kGy 내지 200kGy일 경우 점도가 700cP 이하로서 보다 화장품 제형 형성에 적합한 점도를 가지고 있음을 확인하였다. In addition, referring to FIG. 4, it was confirmed that hyaluronic acid exhibits a higher viscosity at the same concentration as the high molecular weight according to the molecular weight, and the low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention has a lower viscosity. More specifically, the viscosity of the hyaluronic acid solution before irradiation was 1,012 cP, but in the sample after irradiation, as the radiation dose increased, 812 cP at 10 kGy, 805 cp at 20 kGy, 785 cp at 30 kGy, 735 cp at 40 kGy, 692 cp at 50 kGy, and 692 cp at 100 kGy. The viscosity decreased to 280cp at 392cP and 150kGy, 179cP at 200kGy, 115cp at 250kGy, and 55cp at 300kGy. Therefore, when the irradiation dose is 50 kGy to 200 kGy, it was confirmed that the viscosity was 700 cP or less, which was more suitable for forming a cosmetic formulation.

또한, 도 5를 참조하면, 제조된 히알루론산의 분자량 측정 결과, 방사선 조사 전의 히알루론산의 중량평균 분자량은 9840Da이었으며, 10kGy에서는 8215Da, 20kGy에서는 8000Da, 30kGy에서는 7715Da, 40kGy에서는 6500Da, 50kGy에서는 962Da, 100kGy에서는 854Da, 150kGy에서는 615Da, 200kGy에서는 329Da, 250kGy에서는 215Da 및 300kGy에서는 85Da으로 방사선 선량이 증가할수록 분자량이 감소하는 것을 확인하였다. 특히, 방사선 선량이 50kGy 이상에서부터 히알루론산의 분자량이 급격히 낮아지는 것을 확인할 수 있었다.In addition, referring to FIG. 5, as a result of measuring the molecular weight of the prepared hyaluronic acid, the weight average molecular weight of hyaluronic acid before irradiation was 9840Da, 8215Da at 10kGy, 8000Da at 20kGy, 7715Da at 30kGy, 6500Da at 40kGy, 962Da at 50kGy, and It was confirmed that the molecular weight decreased as the radiation dose increased to 854 Da at 100 kGy, 615 Da at 150 kGy, 329 Da at 200 kGy, 215 Da at 250 kGy, and 85 Da at 300 kGy. In particular, it was confirmed that the molecular weight of hyaluronic acid was rapidly decreased from 50 kGy or more of the radiation dose.

또한, 도 6을 참조하면, 질소 퍼징을 실시(질소 퍼징을 하지 않은 경우 "산소 분위기"이고, 질소 퍼징을 한 경우 "질소 분위기"로 나타냄)하여 산소를 제거시킨 히알루론산과 질소 퍼징을 하지 않아 산소를 제거하지 않은 경우의 히알루론산의 제조 수율을 비교한 결과, 방사선 선량이 각각 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 150kGy, 200kGy, 250kGy 및 300kGy의 각각 모든 구간에서 질소 분위기하에서 제조된 저분자량 히알루론산, 즉 1000Da 이하의 저분자량 히알루론산의 수율이 높은 것을 확인하였다.In addition, referring to FIG. 6, the hyaluronic acid and nitrogen purge obtained by removing oxygen by performing nitrogen purging (represented as “oxygen atmosphere” when nitrogen purging is not performed, and “nitrogen atmosphere” when nitrogen purging is performed) are not performed. As a result of comparing the production yield of hyaluronic acid when oxygen was not removed, the radiation dose was prepared in a nitrogen atmosphere in all sections of 10kGy, 20kGy, 30kGy, 40kGy, 50kGy, 100kGy, 150kGy, 200kGy, 250kGy and 300kGy, respectively. It was confirmed that the yield of low molecular weight hyaluronic acid, that is, low molecular weight hyaluronic acid of 1000 Da or less, was high.

특히, 방사선 조사 선량이 200kGy 초과일 때는 오히려 히알루론산의 분자량이 낮아졌고, 300kGy의 방사선 조사 선량 구간에서는 저분자량 히알루론산이 방사선의 높은 에너지에 의해 분해되었거나 300Da 이하로 히알루론산이 저분자되어 측정되지 않았음을 확인하였다.In particular, when the irradiation dose exceeded 200kGy, the molecular weight of hyaluronic acid was rather lowered.In the irradiation dose range of 300kGy, the low molecular weight hyaluronic acid was decomposed by the high energy of the radiation, or hyaluronic acid was not measured due to the low molecular weight below 300Da. I confirmed the sound.

상기 실험예 1 내지 8 및 그에 대한 결과인 도 3 내지 6을 종합적으로 고려할 경우, 본 발명에 따른 저분자량 히알루론산의 제조방법 및 이로부터 제조된 저분자량 히알루론산은, 보다 불순물 생성에 따른 품질저하 및 생산 비용 증가, 불균일한 분자량, 수율 저하 등의 문제점을 해결하고 제조 공정을 단순화시켜 저분자량 히알루론산 제조 효율을 극대화시킬 수 있으며, 이로부터 제조된 저분자량 히알루론산은 보다 낮은 분자량으로 낮은 점도성을 가져 피부 내 침투성이 우수하고 세포 증직 효과 및 피부 탄력을 유지시키는 기능을 하는 동시에 다른 성분들과의 사용성이 우수하므로 화장품, 특히 기능성 화장품의 원재료 또는 소재 성분으로써 유용하게 활용될 수 있음을 확인하였다.When the above Experimental Examples 1 to 8 and Figs. 3 to 6, which are results thereof, are comprehensively considered, the method for preparing low molecular weight hyaluronic acid according to the present invention and the low molecular weight hyaluronic acid prepared therefrom are more degraded due to impurity generation. And it is possible to solve problems such as increase in production cost, uneven molecular weight, and decrease in yield, and to simplify the manufacturing process to maximize the production efficiency of low molecular weight hyaluronic acid, and the low molecular weight hyaluronic acid produced therefrom can have low viscosity with a lower molecular weight. It has been confirmed that it can be usefully used as a raw material or material component of cosmetics, especially functional cosmetics, because it has excellent skin penetration properties, functions to maintain cell thickening effect and skin elasticity, and has excellent usability with other ingredients. .

전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.The foregoing description of the present application is for illustrative purposes only, and those of ordinary skill in the art to which the present application pertains will be able to understand that it is possible to easily transform it into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present application. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not limiting. For example, each component described as a single type may be implemented in a distributed manner, and similarly, components described as being distributed may also be implemented in a combined form.

본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.The scope of the present application is indicated by the claims to be described later rather than the detailed description, and all changes or modified forms derived from the meaning and scope of the claims and their equivalent concepts should be interpreted as being included in the scope of the present application.

Claims (7)

(A) 중량평균 분자량이 5,000 내지 100,000 달톤(dalton)의 히알루론산 파우더 분말을 증류수에 5%로 용해시켜 히알루론산 용액을 제조하는 단계; 및
(B) 상기 제조된 히알루론산 용액에 50 kGy 내지 200 kGy 이하의 선량으로 방사선을 조사하는 단계를 포함하는 저분자량 히알루론산 제조방법.
(A) preparing a hyaluronic acid solution by dissolving hyaluronic acid powder powder having a weight average molecular weight of 5,000 to 100,000 daltons in distilled water at 5%; And
(B) A method for producing low molecular weight hyaluronic acid comprising irradiating radiation to the prepared hyaluronic acid solution at a dose of 50 kGy to 200 kGy or less.
 제 1 항에 있어서, 상기 (B) 단계 전에 (C) 상기 제조된 히알루론산 용액을 밀폐용기에 투입하는 단계를 추가적으로 포함하는 것으로 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 제조방법.
The method of claim 1, further comprising adding (C) the prepared hyaluronic acid solution to an airtight container before step (B).
 제 2 항에 있어서, 상기 (C) 단계 후에 (D) 상기 밀폐용기에 투입된 히알루론산 용액에 질소 가스를 퍼징하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 제조방법.
The method of claim 2, further comprising purging a nitrogen gas into the hyaluronic acid solution injected into the closed container after the step (C) (D).
 제 3 항에 있어서, 상기 질소 가스를 퍼징하는 단계는 상기 밀폐용기에 투입된 히알루론산 용액에 포함된 산소 가스를 제거함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 제조방법.
The method of claim 3, wherein the purging of the nitrogen gas is performed by removing oxygen gas contained in the hyaluronic acid solution injected into the sealed container.
 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 따른 저분자량 히알루론산 제조방법으로부터 제조된 저분자량 히알루론산.
Low molecular weight hyaluronic acid prepared from the method for producing low molecular weight hyaluronic acid according to any one of claims 1 to 4.
 제 5 항에 있어서, 상기 저분자량 히알루론산은 중량평균 분자량이 1,000달톤 이하인 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산.
The low molecular weight hyaluronic acid according to claim 5, wherein the low molecular weight hyaluronic acid has a weight average molecular weight of 1,000 Daltons or less.
 제 6 항에 있어서, 상기 저분자량 히알루론산은 점도가 100cP 이상 내지 800cP 이하인 것을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산.The low molecular weight hyaluronic acid according to claim 6, wherein the low molecular weight hyaluronic acid has a viscosity of 100 cP or more and 800 cP or less.
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