KR20200018784A - 신규 다가 다당류-단백질 접합체 백신 조성물 및 이의 제형 - Google Patents

신규 다가 다당류-단백질 접합체 백신 조성물 및 이의 제형 Download PDF

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Abstract

신규한 다가 다당류-단백질 접합체 백신 제형. 상기 제형은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 하나 이상의 완충제를 포함하고 애쥬번트를 포함하거나 포함하지 않는 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y, W 및 X 캡슐 다당류(Men A, C, Y, W, X)의 액체 또는 동결건조 또는 액체-동결건조(Lyo) 조합 5가 제형이고, 각각의 상기 다당류는 파상풍 톡소이드(TT) 담체 단백질에 별도로 접합되어 Men A, C, Y, W, X-TT 접합체가 수득된다.

Description

신규 다가 다당류-단백질 접합체 백신 조성물 및 이의 제형
본 발명은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 파상풍 톡소이드(TT) 담체 단백질에 접합된 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y, W 및 X 캡슐 다당류(Men A, C, Y, W, X)의 5가 접합체 백신 제형에 관한 것이다. 본 발명의 5가 접합체 백신 제형은 액체 또는 동결된 형태 또는 이의 조합으로 존재한다.
백신 제조 및 조성은 개인의 안전을 보장하고 효능 및 안정성을 최대화하기 위해 복잡하고 엄격하게 조절된다. 모든 백신은 보호 면역 반응을 생성하는 활성 성분을 함유한다. 백신은 또한 강한 보호 면역 반응을 위한 제형의 안정성 및/또는 면역원성을 향상시키기 위해 약제학적으로 허용되는 추가 성분을 함유한다.
세계 보건 기구는 중등도 또는 높은 비율의 질환을 갖거나 백신 예방 가능한 질환이 자주 발생하는 국가는 통상적으로 예방 접종해야 한다고 권장한다. 질환 위험이 낮은 국가에서는, 그들은 고위험군이 면역화되어야 한다고 권장한다.
수막구균성 질환은 세균 나이세리아 메닌지티디스에 의해 유발되는 급성의 잠재적으로 심각한 질병이다. N. 메닌지티디스(수막구균)는 주로 13개의 혈청군 A, B, C, D, 29E, H, I, K, L, W135, X, Y 및 Z로 혈청학적으로 분류된 호기성 그램 음성 세균이다. 그룹화 시스템은 유기체의 캡슐 다당류를 기반으로 한다.
N. 메닌지티디스는 세계에서 가장 흔한 세균성 수막염의 원인 중 하나이고, 수막염의 큰 전염병을 일으킬 수 있는 유일한 세균임이 WHO의 공식 웹사이트에 언급되어 있다. 특히, 사하라 사막 이남의 아프리카에서 주민 100,000명당 최대 1000건의 발병률을 갖는 주요 전염병이 보고되었다.
N. 메닌지티디스는 에어로졸 또는 환자 또는 건강한 인간 담체의 호흡기 분비물과의 직접 접촉에 의해 전송된다. 풍토병은 주로 어린이 및 청소년에서 일어나고 3 내지 12개월 영아에서 가장 높은 공격률을 보이는 반면, 전염병이 있는 나이 많은 어린이 및 젊은 성인이 더 많이 관련될 수 있다. 그러나, 수막구균성 질환의 급속한 진행은 발병 후 1 내지 2일 이내에 빈번하게 사망에 이르고, N. 메닌지티디스 감염은 예방 접종에 의해 예방될 수 있다.
면역화는 수막염 질환을 조절하는 유일한 합리적 접근법이다. N. 메닌지티디스에 가장 효과적인 백신은 활성 다당류에 활성화 단백질의 공유 부착에 의해 형성되는 다당류-단백질 접합체 백신이다. 다당류는 대부분의 천연 다당류가 활성화 없이 담체 단백질에 화학적으로 효율적으로 결합될 수 없기 때문에 담체 단백질에 부착 전에 "활성화" 방법으로서 공지되어 있는 일부 화학적 변형을 겪는다.
다당류를 단백질에 공유 결합시키기 위해 사용된 많은 접합 반응이 있다. 더욱 일반적으로 사용된 세 가지 방법은 다음을 포함한다:
1) 환원성 아민화, 여기서 반응의 한 성분 상의 알데히드 또는 케톤 그룹은 다른 성분 상의 아미노 또는 하이드라지드 그룹과 반응하고, 이렇게 형성된 C=N 이중 결합은 후속적으로 환원제에 의해 C-N 단일 결합으로 환원되고;
2) 시아닐화 접합, 여기서 다당류는 시아노겐 브로마이드(CNBr) 또는 1-시아노-4-디메틸아미노피리디늄 테트라플루오로보레이트(CDAP)에 의해 활성화되어 시아네이트 그룹을 하이드록실 그룹으로 도입하고, 이는 단백질 성분의 첨가시 아미노 또는 하이드라지드 그룹에 대한 공유 결합을 형성하고;
3) 카보디이미드 반응, 여기서 카보디이미드는 접합 반응의 한 성분 상의 카복실 그룹을 활성화시키고, 활성화된 카복실 그룹은 다른 성분 상의 아미노 또는 하이드라지드 그룹과 반응한다. 이들 반응은 또한 접합 반응 전에 접합체의 성분을 활성화시키는데 빈번하게 사용된다.
한 공보에 따르면, 역사적으로 혈청군 A(MenA)는 사하라 사막 이남의 아프리카의 전염병 질환의 가장 흔한 원인이었다. 혈청군 B 및 C는 선진국에서 대부분의 사례와 연루되어 있고, 나머지 사례는 혈청군 W135 및 Y에 의해 유발된다. 혈청군 C 사례는 최근에 사하라 사막 이남의 아프리카에서 관찰되었고, 여기서 혈청군은 역사적으로 널히 보급되지 않았다. 혈청군 X는 또한 최근에 몇몇 국가에서 나타났다. 문헌[참조: Xie O et al, "Emergence of serogroup X meningococcal disease in Africa: need for a vaccine", Vaccine. 2013 Jun 12;31(27):2852-6]에 따라서, 혈청군 X는 수막구균은 이전에는 산발성 수막염의 드문 원인으로 간주되었지만, 2006-2010년 동안, 혈청군 X 수막염의 대유행이 니제르, 우간다, 케냐, 토고 및 브루키나 파소에서 발생되었고, 후자에는 보고된 6732건의 사례 중 적어도 1300건의 혈청군 X 수막염 사례가 있었다.
또 다른 NCBI 공보에 따라서 2006-2009년 동안 토고에서 혈청군 X 수막구균은 702건의 확인된 세균성 수막염 사례의 16%를 차지했다. 코자흐 지구는 2007년 3월에 혈청군 X 수막구균 계절적 누적 발생률이 33/100,000인 혈청군 X 수막구균 발생을 경험했다. 2007-2010년 동안 부르키나 파소에서, 혈청군 X 수막구균이 778건의 확인된 세균성 수막염 사례의 7%를 차지하고, 2009년부터 2010년까지 증가했다(각각, 확인된 모든 사례의 4% 내지 35%). 2010년에, 혈청군 X 수막구균 전염병은 부르키나 파소의 북부 및 중부 지역에서 발생했고; 혈청군 X 수막구균의 최고 지구 누적 발병률은 3월-4월 동안 130/100,000으로 추정되었다.
상기 사실에 기초하여, 5가 수막구균성 ACYWX 다당류-단백질 접합체 백신은 MenB 캡슐 다당류와 인간 뉴런 세포에서 발견되는 분자의 규조적 유사성으로 인해 접합체 백신이 원격 가능성이 있는 혈청군 B를 제외하고 수막구균성 질환에 대해 더 넓은 범위를 제공할 수 있었다. 현재, 혈청군 A, C, Y 및 W135 다당류 접합체를 포함하는 다양한 1가 또는 다가 백신은 시장에서 판매 허가를 받았다. 담체 단백질과 접합된 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 혈청군 B(Hib), 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, B, C, W, Y로부터 수득된 당류 단편을 포함하는 면역원성 조성물을 개시하는 미국 특허출원 제US2015/0044253호와 같은 기존의 기술은 N. 메닌지티디스 혈청군 A, B, C, W 및 Y를 포함하는 다양한 혈청군의 예방을 위한 백신을 개시한다. 그러나, US2015/0044253에서 카바메이트 링커는 담체 단백질의 아미노 그룹 상에 직접 연결되어 접합 효율을 낮춘다.
인도 특허출원 281/MUM/2012는 동결건조된 5가 N. 메닌지티디스 다당류-단백질 접합체 조성물을 개시한다. 그러나, 상기 출원은 특정 MenX 균주에 제한되고, 다중 담체 단백질을 사용한다.
PCT/EP2006/006188은 담체 단백질에 접합된 그룹 A, C, W135 및 Y 중 적어도 하나로부터 수막구균성 캡슐 다당류를 포함하는 면역원성 조성물을 교시하지만, 면역원성 조성물 중 MenX의 접합체는 교시하지 않는다.
이용 가능한 다가 수막구균성 접합체 백신은 비용이 비싸고, 복잡한 제형을 갖는다. 어떤 종래 기술도 접합 화학의 최적화된 조합을 사용하여 액체 또는 동결건조된 형태 또는 이의 조합으로 MenX 접합체를 갖는 N. 메닌지티디스 다당류-단백질 접합체 제형을 교시하지 않는다.
더 높은 균질성, 더 높은 면역원성, 더 낮은 비용을 갖고 제형화하고 투여하기 간단한 수막구균성 접합체 백신에 대한 긴급한 요구가 있다.
현존 최신 기술의 단점을 피하기 위해, 본 발명의 주요 목적은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물을 제공하는 것이고, 여기서 접합체는 접합 화학의 최적화된 조합을 사용하여 생성된다.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물을 제공하는 것이고, 여기서 상기 조성물은 담체 단백질로서 파상풍 톡소이드에 각각 접합된 혈청군 ACYWX 다당류를 함유하는 5가 수막 구균상 ACYWX-TT 조합 백신의 생산에 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 다당류-단백질 접합체를 포함하는 다당류-단백질 접합체 백신 조성물의 신규 백신 제형을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 5가 수막구균성 ACYWX-TT 다당류-단백질 접합체를 포함하는 다당류-단백질 접합체 백신 조성물의 신규 백신 제형을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 제형을 제공하는 것이고, 여기서 상기 5가 수막구균성 ACYWX-TT 제형은 액체 또는 동결건조된 백신 제형이거나 동결건조된 부분과 액체 부분의 조합이다.
본 발명의 또 다른 목적은 신규한 5가 수막구균성 ACYWX 다당류-파상풍 톡소이드 담체 단백질 접합체 백신 조성물 및 제형을 제공하는 것이고, 여기서 상기 조성물은 최적화된 접합 화학을 사용하여 제조된 접합체의 신규한 조합을 갖는다.
본 발명의 또 다른 목적은 백신 조성물 및 제형에서 각각의 접합체의 최적 투여량을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 고온에서 안정하고 높은 면역원성 및 항원성을 나타내는 5가 백신 제형을 제공하는 것이다.
따라서, 본 발명은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물 및 이의 제형을 제공한다. 더욱 특히, 본 발명은 접합 화학을 사용하여 생성된 다당류-단백질 접합체를 포함하는 접합체 백신 제형에 관한 것이다. 사용된 접합 화학은 카바메이트 화학 및/또는 시아닐화 화학 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 제형은 5가 수막구균성 조합 백신의 생산에 사용될 수 있다.
본 발명의 접합체를 제조하는데 사용된 다당류는 최적화된 발효 공정을 통해 수득된다.
다당류-단백질 접합체 백신 조성물의 신규 백신 제형은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 다당류-단백질 접합체로 구성된다. 백신 조성물 및 제형중 모든 접합체는 동일한 담체 단백질을 갖는다. 본 발명은 5가 백신 제형을 제공한다.
본 발명의 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 제형은 5개의 다당류-단백질 접합체로 구성된다. 다당류는 나이세리아 메닌지티디스 캡슐 혈청군 A, C, Y, W 및 X 다당류에 속하는 그램 음성 세균으로부터 선택된다. 파상풍 톡소이드는 모든 접합체를 제조하는데 담체 담백질로서 사용된다.
캡슐 다당류는 담체 단백질과의 접합에 적합한 더 작은 크기로 감소되어 높은 항원성 및 높은 면역원성을 갖는 접합체를 수득한다. 캡슐 다당류는 HPLC PWXL4000 및 5000 컬럼을 연속 사용하여 분자 크기 분포를 시험할 때 0.38±0.1 Kd의 크기 범위로 감소된다. 캡슐 다당류는 바람직하게는 0.38±0.06 Kd의 크기 범위로 존재한다. 다당류 및 담체 단백질은 모두 접합 전에 활성화된다. 접합체는 링커로서 하이드라진 또는 아디프산 디하이드라지드를 사용하여 수득된다.
크기가 저하된 캡슐 다당류(크기화 캡슐 다당류)는 파상풍 톡소이드 담체 단백질과 접합된다. 제형은 하나 이상의 혈청군, 보다 바람직하게는 혈청군 X 다당류를 위한 최적화된 카바메이트 화학 및 하나 이상의 혈청군, 바람직하게는 혈청군 A, C, Y 및 W 다당류 각각에 대한 시아닐화 화학에 의해 제조된 접합체를 함유한다.
약제학적으로 허용되는 부형제는 애쥬번트, 완충제, 방부제, 안정화제, 계면활성제 단독 또는 조합일 수 있다. 본 발명의 제형은 액체 또는 동결건조되거나 방부제를 포함하거나 포함하지 않고 단일 또는 다중 용량 섭생을 갖는 액체 및 동결건조된 제형(액체-lyo 제형)의 조합이다.
본 발명은 또한 백신 조성물 및 제형에서 접합체 각각의 최적 용량을 제공한다.
도 1a 내지 1e는 5±3 ℃에서 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신에 대한 실시간 안정성 연구를 도시한다.
도 2a 내지 2e는 25±2 ℃에서 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신에 대한 가속화된 안정성 연구를 도시한다.
도 3a 내지 3e는 37±2 ℃에서 액체 5가 수막구균성 접합체 백신에 대한 응력 안정성 연구를 도시한다.
도 4a 내지 4e는 허가된 ACYW 접합체 백신 및/또는 비히클 대조군과 비교하여 애쥬번트화 및 비애쥬번트화 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신에 대한 2-용량 후 항-수막구균성 마우스 IgG 및 SBA 역가를 도시한다.
도 5a 내지 5e는 허가된 ACYW 접합체 백신 또는 비히클 대조군과 비교하여 애쥬번트화 및 비애쥬번트화 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신에 대한 2-용량 후 항-수막구균성 래빗 IgG 및 SBA 역가를 도시한다.
도 6a 내지 6e는 VVM7 애쥬번트화 액체 5가 백신 및 허가된 ACYW 접합체 백신 또는 비히클 대조군과 비교하여 애쥬번트화 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신에 대한 3-용량 후 항-수막구균성 마우스 IgG 및 SBA 역가를 도시한다.
따라서, 본 발명은 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물 및 이의 제형을 제공한다. 보다 특히, 본 발명은 접합 화학을 사용하여 생성된 다당류-단백질 접합체를 포함하는 접합체 백신 조성물에 관한 것이다. 사용된 접합 화학은 최적화된 카바메이트 화학 및 시아닐화 화학의 조합을 포함한다. 본 발명의 조성물은 5가 조합 백신의 생산에 사용될 수 있다.
본 발명의 접합체의 생산에 사용된 다당류는 동물 성분 부재 발효 공정을 통해 수득된다.
본 발명의 신규 백신 제형은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 다당류-단백질 접합체를 포함한다. 백신 조성물 및 제형 중 모든 접합체는 동일한 담체 단백질을 갖는다. 본 발명은 5가 백신 제형을 제공한다.
본 발명의 신규한 다당류-단백질 접합체 백신 조성물 및 제형은 5개의 개별적인 다당류-단백질 접합체로 구성된다. 다당류는 그램 음성 세균 나이세리아 메닌지티디스 혈청군 A, C, Y, W 및 X 캡슐 다당류로부터 선택된다. 모든 접합체를 제조하는데 사용된 담체 단백질은 파상풍 톡소이드(TT)이다.
캡슐 다당류는 담체 단백질과의 접합에 적합한 더 작은 크기로 감소되어 높은 항원성, 높은 면역원성 및 높은 안정성을 갖는 접합체를 수득한다. 캡슐 다당류는 HPLC PWXL4000 및 5000 컬럼을 연속 사용하여 분자 크기 분포를 시험할 때 0.38±0.1 Kd, 바람직하게는 0.38±0.06 Kd의 크기 범위로 감소된다. 다당류 및 담체 단백질은 접합 전에 활성화된다. 다당류와 단백질 잔기 사이에 링커 암을 갖는 접합체가 생성된다. 링커는 다당류 또는 담체 단백질 또는 다당류와 단백질 둘 다에 부착된다.
본 발명의 신규한 다가 다당류-단백질 접합체 백신 제형은 각각 파상풍 톡소이드(Men ACYWX-TT)에 개별적으로 접합된 수막구균성 혈청군 A, C, Y, W, X 다당류로 구성되고, 여기서 혈청군 X 다당류는 최적화된 카바메이트 화학을 사용하여 파상풍 톡소이드에 접합되고, 혈청군 A, C, Y 및 W 다당류는 최적화된 시아닐하 화학을 사용하여 접합된다. 각각의 상기 접합체는 0.3 내지 1.0의 단백질 대 다당류 비를 갖는다.
본 발명의 신규한 다가 다당류-단백질 접합체 백신 제형은 애쥬번트를 포함하거나 포함하지 않고 하나 이상의 완충제 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 파상풍 톡소이드(Men ACYWX-TT)에 각각 개별적으로 접합된 수막구균성 혈청군 A, C, Y, W, X 다당류로 구성된다.
약제학적으로 허용되는 부형제는 애쥬번트, 완충제, 방부제, 안정화제, 계면활성제 단독 또는 조합일 수 있다. 본 발명의 제형은 액체 또는 동결건조된 제형이거나 방부제를 포함하거나 포함하지 않고 단일 또는 다중 용량 섭생을 갖는 액체-lyo 조합이다. 본 발명의 백신 제형은 고온에서 안정하다. 최대 표적으로서 40% 유리 PS를 감안하여, 제형은 적어도 21일 동안 37±2℃의 고온에서, 적어도 3개월 동안 25±2℃에서, 5±3℃에서 적어도 9개월 동안 안정성을 나타낸다.
최선의 실시형태 중 하나에서, 본 발명의 신규한 5가 액체 다당류-단백질 접합체 백신 제형은 다음으로 구성된다:
성분 양/농도
Men ACYWX-TT 4 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
완충제 5 내지 30mM 인산염 완충된 식염수(pH 7.0±0.2)
부형제 240 내지 330 mOsmol/㎏의 오스몰농도를 유지하기 에 충분한 0 내지 150 mM NaCl
5 내지 30 mM 히스티딘
애쥬번트 500 내지 2000 ㎍ Al+++/㎖로서 인산알루미늄
물(MQW) 적당량(qs)
성분을 실온에서 0.5 내지 2시간 동안 교반하여 혼합한 후, 바이알에 충전시키고, 2 내지 8℃에서 저장한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명의 신규한 5가 액체 다당류-단백질 접합체 백신 제형은 다음으로 구성된다:
성분 양/농도
Men ACYWX-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
완충제 10 내지 25 mM 인산염 완충된 식염수(pH 7.0±0.2)
부형제 240 내지 330 mOsmol/㎏의 오스몰농도를 유지하기 위한 0 내지 150 mM NaCl
애쥬번트 인산알루미늄 750 내지 1500 ㎍ Al+++/㎖
물(MQW) 적당량
성분을 실온에서 0.5 내지 2시간 동안 교반하여 혼합한 후, 바이알에 충전시키고, 2 내지 8℃에서 저장한다.
목적하는 오스몰농도 및 높은 안정성 및 목적하는 면역원성을 제공하는 애쥬번트를 포함하는 제형의 최선의 실시형태 중 하나는 다음으로 구성된다:
성분 양/농도
Men ACYWX-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
완충제 10 mM PBS(pH 7.0±0.2)
부형제 0 내지 150 mM NaCl
애쥬번트 1000 ㎍ Al+++/㎖로서 인산알루미늄
물(MQW) 적당량
성분을 실온에서 0.5 내지 2시간 동안 교반하여 혼합한 후, 바이알에 충전시키고, 2 내지 8 ℃에서 저장한다.
목적하는 오스몰농도, 높은 안정성 및 목적하는 면역원성을 제공하는 애쥬번트를 포함하지 않는 제형의 또 다른 실시형태는 다음으로 구성된다:
성분 양/농도
Men ACYWX-TT 10 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
완충제 10 mM PBS(pH 7.0±0.2)
부형제 0 내지 150mM NaCl
물(MQW) 적당량
성분을 실온에서 0.5 내지 2시간 동안 교반하여 혼합한 후, 바이알에 충전시키고, 2 내지 8℃에서 저장한다.
애쥬번트를 포함하거나 포함하지 않는 본 발명의 제형은 오스몰농도, 안정성 및 면역원성에 대해 시험하였다. 상기 제형은 21일 동안 37±2 ℃(VVM)의 고온에 노출시켜 유리 다당류 함량의 상승을 체크한다. 5가 백신 제형 중 유리 다당류 함량은 데옥시콜레이트(DOC) 침전 및 여과 방법에 의해 분리되고, 펄스화 전류 검출기(HPAEC-PAD) 방법을 사용한 고성능 음이온 교환 크로마토그래피로 추정되었다.
제형은 고온에서 안정하다. 최대 표적으로서 40 % 유리 PS를 감안하면, 제형은 적어도 21일 동안 37±2℃의 고온에서, 적어도 3개월 동안 25±2℃에서, 적어도 9개월 동안 5±3℃에서 안정성을 나타낸다.
본 발명의 제형은 액체 또는 동결건조된 형태이거나 이들의 조합이다. 본 발명은 또한 백신 조성물 및 제형에서 각각의 접합체의 최적 투여량을 제공한다. 최적 용량은 애쥬번트를 포함하지 않거나 인간 용량 당 인산알루미늄 애주번트 형태의 500 ㎍ Al+++를 포함하는 인간 용량 당 5 내지 10 ㎍의 혈청군 A 및 X 다당류 및 5 ㎍의 혈청군 C, Y 및 W 다당류이다.
실시예 1: 위약 액체 제형의 제조:
NaCl을 상이한 완충제와 혼합하여 300±30 mOsmol/㎏ 범위의 완충제의 오스몰농도를 달성했다. 임의의 수막구균성 혈청군(활성 항원)이 없는 위약 제형은 이하 표 1에 따라 제형의 삼투압 강도를 알기 위해 인산알루미늄을 상이한 완충제 및 NaCl과 혼합함으로써 제조되었다:
위약 액체 제형 제조용 매트릭스
제형 번호 완충제 유형 NaCl의 강도 완충제의 강도 인산알루미늄 함량(Al +++ 로서)
MLF1 염화나트륨(NaCl) 0.85% - 1mg/㎖
MLF2 2-(N-모르폴리노) 에탄설폰산(MES) 100 mM 25mM 1mg/㎖
MLF3 인산염 완충된 식염수(PBS) 100 mM 25mM 1mg/㎖
MLF4 L-히스티딘 100 mM 25mM 1mg/㎖
MLF5 MES & 히스티딘 100 mM 25mM 1mg/㎖
MLF6 PBS & 히스티딘 100 mM 25mM 1mg/㎖
상기 제형(위약)은 오스몰농도 및 pH에 대해 분석하여 최종 제형에서 목적하는 오스몰농도를 달성하기 위한 NaCl의 적합한 농도를 결정한다. 제형의 오스몰농도는 표 2에 제공된다.
위약 액체 제형의 오스몰농도 및 pH
제형 번호 오스몰농도
(mOsmol/㎏) 		pH
MLF1 417 6.64
MLF2 357 6.77
MLF3 367 6.97
MLF4 346 6.69
MLF5 352 6.78
MLF6 353 6.85
표 2는 표 1의 제형의 오스몰농도가 240 내지 330 mOsmol/㎏의 예상 한계치보다 더 높았고, 오스몰농도를 감소시키기 위해 NaCl의 강도를 감소시키는 것을 나타낸다는 것을 시사했다. NaCl의 몰 강도는 제형의 목적하는 오스몰농도를 달성하기 위해 감소되었다.
실시예 2: NaCl 강도를 감소시켜 위약 액체 제형의 제조:
NaCl 강도를 표 1의 NaCl의 강도와 비교하여 절반으로 감소시켜, 즉 이하의 표 2에 따라 원하는 범위 내의 오스몰농도 지수를 수득하기 위해 100 mM 내지 50 mM을 형성시켰다.
위약 제형의 오스몰농도 및 pH
제형 번호 완충제 유형 NaCl의 강도 완충제의 강도 인산알루미늄 함량 (Al +++ 로서) 결과
오스몰농도(mOsmol/㎏) pH
MLF1 NaCl 0.42 % - 1 ㎎/㎖ 282 6.90
MLF2 MES 50 mM 25 mM 1 ㎎/㎖ 275 6.62
NaCl - 0.9 % - - 289 6.90
인산알루미늄 - - - 2 ㎎/㎖ 276 -
NaCl이 50 mM에 근접한 경우, 제형의 오스몰농도는 제형에 대한 목적한 오스몰농도의 범위 내인 275 mOsmol/㎏ 내지 282 mOsmol/㎏의 범위로 달성되었다.
실시예 3: 상이한 부형제 및 완충제의 존재하에 제품 안정성을 확립하기 위해 상이한 5가 수막구균성 액체 제형의 제조:
다양한 5가 수막구균성 ACYWX-TT 제형은 항원을 MES 완충제, PBS 완충제, 트리스 완충제, HEPES 완충제 및 히스티딘과 같은 완충제와 혼합함으로써 제조되었다. 글리신, 덱스트로스, 히스티딘, 만니톨 및 폴리소르베이트 80과 같은 상이한 부형제의 조합은 37±2 ℃의 더 높은 온도에 노출될 때 약물 제품의 안정성을 평가하려고 시도되었다. 상기 제형은 하기 표 4에 따라 제조되었다:
Figure pct00001
상기 제형은 제품의 안정성 프로파일에서 완충제 및 부형제의 효과를 평가하기 위해 14일 동안 37±2 ℃의 온도에 노출시켰다. 수막구균성 접합체 제형에 대한 안정성 표시 파라미터는 경시적으로 유리 PS의 생성이다. 7일 및 14일째에 샘플을 회수하고, 총 및 유리 PS %에 대해 HPAEC-PAD (Dionex) 방법으로 분석하였다. 결과는 하기 표 5 및 6에 따라 경시적으로 생성된 유리 다당류에 대해 편집되었다:
최대 14일 동안 37±2℃에 노출될 때 Men A, C & Y에 대한 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 액체 제형 중 유리 다당류 함량.
제형 코드 Men A 유리 PS % Men C 유리 PS % Men Y 유리 PS %
초기 7일 14일 초기 7일 14일 초기 7일 14일
MLF-7 <1 23 37 20 34 41 14 11 14
MLF-13 2 6 8 22 29 31 11 13 14
MLF-14 <1 4 14 21 23 24 11 12 10
MLF-21 3 12 24 20 32 38 10 10 13
MLF-22 3 14 31 20 30 32 9 12 15
MLF-29 2 7 15 Int. Int. Int. 14 11 12
MLF-30 3 16 30 28 37 32 Int. Int. Int.
MLF-31 2 20 35 19 25 42 9 17 12
MLF-32 Int. Int. Int. 12 28 39 Int. Int. Int.
Int.: 간섭 검정
최대 14일 동안 37±2℃에 노출될 때 Men W & X에 대한 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신 제형 중 유리 다당류 함량
제형 코드 Men W 유리 PS % Men X 유리 PS %
초기 7일 14일 초기 7일 14일
MLF-7 18 18 20 <1 <1 <1
MLF-13 18 19 20 <1 <1 <1
MLF-14 18 19 21 <1 <1 <1
MLF-21 20 21 22 <1 <1 <1
MLF-22 19 21 22 <1 3 <1
MLF-29 19 21 23 <1 1 <1
MLF-30 18 18 18 <1 2 1
MLF-31 19 19 21 <1 <1 1
MLF-32 17 18 21 <1 1 3
실시예 4: 인산알루미늄이 없는 상이한 5가 수막구균성 ACYWX-TT 액체 제형의 제조:
5가 수막구균성 제형은 인산알루미늄의 첨가없이 제조되었다. 모든 제형은 PBS에서 제조되었다. 상이한 제형을 제조하기 위해 다음 매트릭스가 사용되었다:
Figure pct00002
상기 제형은 제형의 기본적인 특성을 확인하기 위해 오스몰농도 및 pH에 대해 분석하였다.
애쥬번트 없는 액체 5가 수막구균성 접합체 백신 제형의 결과
제형 코드
오스몰농도
(mOsmol/㎏) 		pH
MLF-36 289 7.14
MLF-38 315 7.32
MLF-39 295 7.11
수득된 결과는 목적하는 오스몰농도 및 pH 값을 충족시킨다.
실시예 5: 더 높은 용량의 Men A & Men X를 갖는 5가 수막구균성 ACYWX-TT 액체 제형의 제조:
제형은 MenC, MenY, MenW의 용량을 5 ㎍/0.5 ㎖의 용량으로 유지하면서 혈청군 MenA 및 MenX에 대해 10 ㎍/0.5 ㎖의 고용량으로 제조되었다.
Figure pct00003
상기 제형은 제형의 기본적인 특성을 확인하기 위해 다당류 함량, 유리 다당류 %, 오스몰농도 및 pH에 대해 분석되었다.
Figure pct00004
Figure pct00005
실시예 6: 상이한 부형제 및 완충제의 존재하에 제품 안정성을 확립하기 위해 상이한 동결건조된 5가 수막구균성 제형의 제조:
다양한 5가 수막구균성 ACYWX-TT 제형은 항원을 MES 완충제 및 PBS 완충제와 같은 완충제와 혼합함으로써 제조되었다. 상이한 부형제, 예를 들어, 수크로스, 말토스, 아르기닌, 락토스, 소르비톨, 히스티딘, 글리신의 조합은 실온에서 pH, 오스몰농도 및 수분 함량을 평가하고 동결건조 후 목적하는 수분 함량을 달성하기 위해 시도되었다.
목적하는 오스몰농도 및 pH는 상이한 조합의 부형제(단독 또합 조합)를 갖는 10mM 인산나트륨 완충제로 달성되었고, 여기서 동결건조 후 수분 함량은 3% 이하이고, 케이크 품질은 만족스럽다(표 12).
Figure pct00006
실시예 7: 액체-Lyo 조합 제형
성분 양/농도
Men A, C, Y, W, X-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
완충제 5 내지 20 mM PBS(pH 6.5 내지 7.5)
부형제 2 내지 10 %
희석제 적당량
액체-lyo 제형에서, 동결건조된(lyo) 부분은 MenA-TT 접합체, MenC-TT 접합체를 단독으로 또는 가변 조합으로 함유하며, 부형제는 수크로스, 말토스, 아르기닌, 락토스, 소르비톨, 히스티딘, 글리신 단독 또는 가변 조합으로부터 선택된다. 희석제는 물, 5 내지 20 mM 인산염 완충 식염수, MenC-TT, MenY-TT, MenX-TT, MenW-TT를 단독으로 또는 가변 조합으로 함유하는 500 내지 1500 μg Al+++/㎖로서 인산알루미늄으로부터 선택된다.
실시예 8: 동결건조 주기: (비제한적인 예)
5가 제형은 동결, 1차 건조 및 2차 건조를 통해 동결건조되었다. 동결건조 주기는 표 13에 제시되어 있다. 동결건조 주기-3은 수분 함량 3% 미만이고 우수한 품질 케이크를 갖는 안정한 제형을 생성하는 최선의 방식이다.
Figure pct00007
실시예 9: 응력, 가속화 및 실시간 조건에서 5가 수막구균성 ACYWX-TT 액체 제형의 안정성:
5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신의 안정성은 기간에 걸쳐 다양한 온도 조건에 노출될 때 시험된다. 이 시험은 특정 기간 동안 온도의 영향을 얻기 위해 수행되었다. 안정성 시험은 3가지 온도 파라미터, 즉 5±3 ℃에서 실시간 저장 조건, 25±2 ℃의 고온 및 37±2 ℃의 응력 조건을 사용하여 수행되었다. 결과는 도 1 내지 3(도 1a 내지 1e, 2a 내지 2e, 3a 내지 3e)에 언급되어 있다.
a. 5±3 ℃ - 권장된 저장 온도에서의 실시간 저장 조건(실시간 안정성 연구)(도 1a-e).
b. 25±2 ℃의 고온 - 저장을 위해 권장된 것들보다 고온(가속화 안정성 연구)(도 2a-e).
c. 37±2 ℃의 응력 조건 - 극한 조건(응력 안정성 연구)(도 3a-e)
샘플은 응력 조건하에서 21일 동안, 가속화 조건하에서 6개월 동안, 실시간 저장 조건에서 3년 동안 저장되었다(연구 진행 중; 데이터는 9개월까지 이용 가능). 샘플은 계획에 따라 회수하고, 시간에 따른 유리 PS % 함량의 파라미터를 나타내는 최상의 안정성에 대해 분석하였다.
실시예 10: 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합 백신 제형으로 마우스 및 래빗의 면역화
8마리의 암컷 마우스 및 4마리의 암컷 래빗(6-9주령)의 그룹을 신규 액체 애쥬번트화 또는 비애쥬번트화 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합 백신, 벌크 접합체가없는 비히클 대조군 또는 허가된 ACYW 접합체 백신으로 2주 간격으로 면역화시켰다. 신규한 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신은 또한 제형 안정성의 평가를 위해 37℃에서 7일 동안 저장한 후(VVM7) 마우스 모델에 사용되었다. 모든 면역화는 마우스에서 피하 경로 및 래빗에서 근육내 경로를 통해 백신을 투여함으로써 수행되었다. 각 마우스는 혈청군 당 1㎍ 다당류와 동등한 제형으로 면역화되는 반면, 각 래빗은 완전 의도된 인간 용량으로 면역화되었다. 혈청군 특이적 항-수막구균성 IgG 항체 역가는 2 및 3 용량 후 수집된 혈청에서 혈청 살균 검정에 의해 간접 ELISA 및 기능적 항체 역가에 의해 추정되었다. 신규한 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신에 대한 2 및 3 용량 후 결과는 마우스 및 래빗 모델 둘 다에서 비히클 대조군과 비교하여 현저하게 높은 면역원성 역가 및 동물 모델 둘 다에서 허가된 백신 IgG 및 SBA 역가에 대한 비열등 역가를 나타낸다(도 4a-4e, 5a-5e, 6a-6e). 또한, 신규한 액체 5가 수막구균성 ACYWX-TT 접합체 백신은 7일 동안 37℃에 노출될 때 면역원성 역가의 감소를 나타내지 않았다(도 6a-6e).
실시예 11: 간접 ELISA에 의한 항-수막구균성 다당류 혈청군 특이적 IgG 역가의 결정
96-웰 플레이트(Nunc Maxisorp)는 pH 7.3±0.1의 PBS 완충제에 5 ㎍/㎖ PS 및 m-HSA의 혼합물을 웰당 100 ㎕를 첨가함으로써 혈청군 특이적 수막구균성 PS로 코팅시켰다. 플레이트를 4 ℃에서 밤새 배양한 다음, PBS 완충제(PBS 중 0.1% Brij 35, pH 7.3±0.1)로 3회 세척하고, 37 ℃에서 1시간 동안 웰당 PBS 완충제 중 5 % FBS 용액(PBS 중 0.1 % Brij 35, pH 7.3±0.1) 200 ㎕로 차단하였다. 각 배양 단계에는 3회의 PBS 완충제 세척이 이어졌다. 참조 및 시험 혈청 샘플을 PBS 완충제(0.1 % Brij 35, PBS 중 5% FBS, pH 7.3±0.1)에 희석시키고, 코팅-차단된 플레이트(200 ㎕)로 옮긴 후, 연속적으로 2배 희석한 다음 4 ℃에서 밤새 배양한다. 이어서, 웰당 100 ㎕의 최적 희석된 퍼옥시다제 접합된 항-마우스/래빗 IgG를 첨가하고, 25 ℃에서 1시간 동안 방치시켰다. 웰당 100 ㎕의 기질 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘-H2O2가 발색을 위해 첨가되었다. 25 ℃에서 10분 동안 발색 후, 50 ㎕의 2M H2SO4를 첨가하여 반응을 중지시키고, OD를 마이크로 플레이트 판독기에서 450 ㎚에서 측정 하였다. 각 제형에 대한 항-MenC 다당류 IgG 농도(ELISA 단위/㎖로 표시)는 Combistat 소프트웨어를 사용하여 평가되었으며, 기하학적 평균 농도(IgG GMC)가 도 4-6에서 대표적인 연구와 제형 비교를 위해 제시되어 있다(도 4a-e, 5a-e, 6a-e).
실시예 12: 혈청군 특이적 기능성 항체 적정을 위한 혈청 살균 검정(SBA)
N. 메닌지티디스 혈청군 특이적 세균 스톡은 5 % CO2로 37 ℃에서 양 혈액 한천 플레이트 상에서 밤새 성장시켰다. 단리된 콜로니를 선택하고, 37 ℃에서 5 % CO2로 또 다른 양 혈액 한천 플레이트의 표면에서 배양했다. 제2 플레이트로부터의 세균 성장은 각각의 혈청군에 대해 최적화된 SBA 완충액에 현탁시켰다. 현탁액의 광학 밀도(OD650)는 검정 종료시 스팟 당 60 내지 250의 콜로니 수를 달성하도록 작업 세균 스톡에서 조정되었다. 품질 관리(QC) 혈청 및 시험 혈청 샘플은 56 ℃에서 30분 동안 열 불활성시켰다. 마이크로 웰 플레이트에서, 시험 혈청의 연속 2배 희석액 20 ㎕를 작업 희석에서 10㎕의 세균 및 10㎕의 베이비 래빗 보체(Pel-Freez)와 혼합하였다. 음성 대조군의 경우, 세균을 시험 혈청이 없는 활성 베이비 래빗 보체 및 시험 혈청 및 열-불활성화된 베이비 래빗 보체와 함께 별도의 웰에서 배양하였다. 웰 내용물을 검정 플레이트를 가볍게 탭핑하여 혼합하고, 플레이트를 5 % CO2와 함께 37 ℃에서 1시간 동안 배양하였다. 각각의 웰로부터 10μL 샘플을 획선 플레이트 방법(streak plate method)에 의해 혈액 한천 플레이트 상에 플레이팅한다. 혈액 한천 플레이트를 5 % CO2와 함께 37 ℃에서 밤새 배양하고, 콜로니를 계수하였다. 각각의 활성 보체 대조군과 비교하여, 반응 혼합물로 세균을 배양한 후 콜로니 형성 단위에서 ≥ 50 % 감소를 나타내는 최고 혈청 희석액이 SBA 역가로 간주되었다. 대표적인 연구 및 제형 비교 결과는 도 4-6에 제시되어 있다(도 4a 내지 e, 5a 내지 e, 6a 내지 e).

Claims (33)

  1. 신규 다가 다당류-단백질 접합체 백신 제형으로서, 상기 제형은 약제학적으로 허용되는 성분/부형제와 함께 하나 이상의 완충제를 포함하고 애쥬번트를 포함하거나 포함하지 않는 나이세리아 메닌지티디스(Neisseria meningitidis) 혈청군 A, C, Y, W 및 X 캡슐 다당류(Men A, C, Y, W, X)의 액체 또는 동결건조 또는 액체-동결건조(Lyo) 조합 5가 제형이고, 각각 상기 다당류가 파상풍 톡소이드(TT) 담체 단백질에 개별적으로 접합되어 Men A, C, Y, W, X-TT 접합체를 수득하고, 상기 제형이 목적하는 오스몰농도, 목적하는 pH, 높은 안정성 및 목적하는 면역원성을 제공하는, 신규 백신 제형.
  2. 제1항에 있어서, 상기 액체 제형이 하기의 것으로 구성되는, 신규 백신 제형:
    성분 양/농도
    Men A, C, Y, W, X-TT 4 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
    완충제 5 내지 30 mM 인산염 완충된 식염수
    부형제 0 내지 150 mM NaCl
    5 내지 30 mM 히스티딘
    애쥬번트 500 내지 2000 ㎍ Al+++/㎖로서 인산알루미늄
    물(MQW) 적당량
  3. 제1항에 있어서, 상기 액체 제형이 하기의 것으로 구성되는, 신규 백신 제형:
    성분 양/농도
    Men A, C, Y, W, X-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
    완충제 10 내지 25 mM 인산염 완충된 식염수(pH 7.0±0.2)
    부형제 0 내지 150 mM NaCl
    애쥬번트 750 내지 1500 ㎍ Al+++/㎖로서 인산알루미늄
    물(MQW) 적당량
  4. 제1항에 있어서, 상기 액체 제형이 하기의 것으로 구성되는, 신규 백신 제형:
    성분 양/농도
    Men A, C, Y, W, X-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
    완충제 10 mM PBS(pH 7.0±0.2)
    부형제 0 내지 150 mM NaCl
    애쥬번트 1000 ㎍ Al+++/㎖로서 인산알루미늄
    물(MQW) 적당량
  5. 제1항에 있어서, 상기 액체 제형이 하기의 것으로 구성되는, 신규 백신 제형:
    성분 양/농도
    Men A, C, Y, W, X-TT 10 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
    완충제 10 mM PBS(pH 7.0±0.2)
    부형제 0 내지 150 mM NaCl
    물(MQW) 적당량
  6. 제1항에 있어서, 상기 동결건조된 제형이 하기의 것으로 구성되는, 신규 백신 제형:
    성분 양/농도
    Men A, C, Y, W, X-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
    완충제 5 내지 20 mM PBS(pH 6.5 내지 7.5)
    부형제 2 내지 10%
    희석제 적당량
  7. 제1항에 있어서, 상기 액체-동결건조(Lyo) 조합 제형이 하기의 것으로 구성되는, 신규 백신 제형:
    성분 양/농도
    Men A, C, Y, W, X-TT 10 내지 20 ㎍ 다당류/혈청군/㎖
    완충제 5 내지 20 mM PBS(pH 6.5 내지 7.5)
    부형제 2 내지 10 %
    물(MQW) 적당량
  8. 제1항에 있어서, 상기 Men A, C, Y, W, X-TT 접합체가 접합 화학의 최적화된 조합을 사용하여 수득되는, 신규 백신 제형.
  9. 제8항에 있어서, 상기 적어도 하나의 접합체를 수득하기 위한 상기 접합 화학이 카바메이트 화학인, 신규 백신 제형.
  10. 제9항에 있어서, 상기 카바메이트 화학을 사용하는 상기 적어도 하나의 접합체가 바람직하게는 MenX-TT 접합체인, 신규 백신 제형.
  11. 제8항에 있어서, 상기 적어도 하나의 접합체를 수득하기 위한 상기 접합 화학이 시아닐화 화학인, 신규 백신 제형.
  12. 제11항에 있어서, 상기 시아닐화 화학을 사용하는 상기 적어도 하나의 접합체가 바람직하게는 상기 Men A, C, Y, W-TT 접합체인, 신규 백신 제형.
  13. 제1항에 있어서, 각각의 상기 캡슐 다당류가 HPLC PWXL4000 및 5000 컬럼을 연속 사용하여 분자 크기 분포에 대해 시험될 때 0.38±0.1 Kd의 크기 범위, 바람직하게는 0.38±0.06 Kd의 크기 범위로 감소되어 높은 항원성, 높은 면연원성 및 높은 안정성을 갖는 접합체로 수득되는, 신규 백신 제형.
  14. 제1항 또는 제8항에 있어서, 상기 다당류와 상기 담체 단백질 사이에 링커 암을 갖는 상기 접합체가 생성되고, 여기서 링커는 상기 다당류 또는 상기 담체 단백질 중 어느 하나 또는 상기 다당류 및 담체 단백질 둘 다에 부착되는, 신규 백신 제형.
  15. 제14항에 있어서, 상기 링커가 아디프산 디하이드라지드 또는 하이드라진으로부터 선택되는, 신규 백신 제형.
  16. 제1항에 있어서, 상기 MenX-TT 접합체가 바람직하게는 하이드라진 링커를 갖고, 상기 MenA, C, Y, W-TT 접합체가 바람직하게는 아디프산 디하이드라지드 링커를 갖는, 신규 백신 제형.
  17. 제1항에 있어서, 각각의 상기 접합체가 0.3 내지 1.0의 담체 단백질 대 다당류 비를 갖는, 신규 백신 제형.
  18. 제1항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 부형제가 애주번트, 완충제, 방부제, 안정화제, 계면활성제 중 어느 하나의 단독 또는 이들의 조합으로부터 선택되는, 신규 백신 제형.
  19. 제6항에 있어서, 상기 부형제가 수크로스, 말토스, 아르기닌, 락토스, 소르비톨, 히스티딘, 글리신 중 어느 하나의 단독 또는 이들의 가변 조합으로부터 선택되는, 신규 백신 제형.
  20. 제6항에 있어서, 상기 희석제가 물, 5 내지 20 mM 인산염 완충된 식염수, 500 내지 1500 ㎍ Al+++/㎖로서의 인산알루미늄 중 어느 하나의 단독 또는 이들의 가변 조합으로부터 선택되는, 신규 백신 제형.
  21. 제7항에 있어서, 상기 동결건조(lyo) 부분이 MenA-TT 접합체, MenC-TT 접합체 중 어느 하나의 단독 또는 이들의 가변 조합을 함유하는, 신규 백신 제형.
  22. 제7항에 있어서, 상기 부형제가 수크로스, 말토스, 아르기닌, 락토스, 소르비톨, 히스티딘, 글리신 단독 또는 가변 조합으로부터 선택되는, 신규 백신 제형.
  23. 제7항에 있어서, 상기 희석제가 물, 5 내지 20 mM 인산염 완충된 식염수, MenC-TT, MenY-TT, MenX-TT, MenW-TT를 함유하는 500 내지 1500 ㎍ Al+++/㎖로서의 인산알루미늄 중 어느 하나의 단독 또는 이들의 가변 조합으로부터 선택되는, 신규 백신 제형.
  24. 제1항에 있어서, 상기 제형이 액체 또는 동결건조된 제형이거나 방부제를 포함하거나 포함하지 않는 단일- 또는 다중 용량 섭생과 이의 조합인, 신규한 백신제형.
  25. 제1항에 있어서, 혈청군 A, C, Y, W 및 X의 최적 인간 용량이 용량당 혈청군당 2 내지 10㎍ 다당류 범위, 바람직하게는 혈청군 A 및 X 다당류 각각 5 내지 10㎍ 및 혈청군 C, Y 및 W 다당류 각각 5 ㎍인, 신규 백신 제형.
  26. 제1항에 있어서, 상기 제형의 목적하는 오스몰농도가 240 내지 330 mOsmol/㎏인, 신규 백신 제형.
  27. 제1항에 있어서, 상기 제형의 목적하는 pH가 6.5 내지 7.5인, 신규 백신 제형.
  28. 제1항에 있어서, 상기 동결건조 또는 액체-동결건조(yo) 제형의 동결건조된 부분이 3 % 이하의 수분 함량을 갖는, 신규 백신 제형.
  29. 제1항에 있어서, 상기 백신 제형이 37±2 ℃의 고온에서 적어도 21일 동안, 25±2 ℃에서 적어도 3개월 동안 안정하여 40 % 미만의 유리 다당류를 나타내는, 신규 백신 제형.
  30. 제1항에 있어서, 상기 백신 제형이 높은 항원성 및 높은 면역원성을 나타내는, 신규 백신 제형.
  31. 제1항에 있어서, 상기 백신 제형이 실시간 저장 조건에서 저장된 제형과 비교하여 37±2 ℃에서 7일 동안 노출된 후에도 동등하게 면역원성인, 신규 백신 제형.
  32. 제1항에 있어서, 상기 제형이 바람직하게는 방부제를 포함하거나 포함하지 않고 단일- 또는 다중 용량 섭생을 갖는 액체 5가 수막구균성 접합체 백신 제형인, 신규 백신 제형.
  33. 제1항에 있어서, 상기 제형 및 상기 조성물이 액체 또는 동결건조 또는 액체-동결건조(lyo) 5가 수막구균성 ACYWX-TT 조합 백신의 생산에 사용될 수 있는, 신규 백신 제형.
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