KR20200015477A - 신경 퇴행성 질환을 치료하기 위한 cd14 길항제 항체 - Google Patents

신경 퇴행성 질환을 치료하기 위한 cd14 길항제 항체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 일반적으로 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행을 치료하기 위한 제제 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 운동 뉴론 질환(MND) 및 치매 질환 또는 관련 증상을 포함하는 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행을 치료하는 데 사용하기 위한 CD14 길항제에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 제제를 포함하는 조성물을 더 제공한다.

Description

신경 퇴행성 질환을 치료하기 위한 CD14 길항제 항체
본 발명은 일반적으로 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행을 치료하기 위한 제제 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 운동 뉴런 질환(MND) 및 치매 질환 또는 관련 증상을 포함하는 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행을 치료하는 데 사용하기 위한 CD14 길항제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 제제를 포함하는 조성물을 제공한다.
신경 퇴행성 질환은 궁극적으로 뉴런의 사망으로 이어지는 뉴런의 구조 및 기능의 점진적인 손실을 특징으로 하는 매우 쇠약한 상태이며, 이는 삶의 질에 악영향을 미치고 궁극적으로 조기 사망으로 이어진다. 주변 가족과 지역 사회에 중대한 사회적 영향이 있다. 인구가 고령화됨에 따라, 퇴행성 신경 질환으로 고통받는 환자에게 필요한 완화 치료는 지역 사회에 상당한 건강 비용이 되고 있다. 미국에서만, 신경 퇴행성 질환 환자의 관리 및 생산성 손실은 매년 수백억 달러에 이른다. 매사추세츠 주 케임브리지에 있는 ALS 치료 개발 연구소는 운동 뉴런 질환(MND) 환자 수를 미국에서 30,000명 이상 및 전 세계적으로 적어도 450,000명으로 추정한다. 2010년, 전 세계 치매 비용은 6,040억 달러, 세계 총 국내 생산량의 약 1%로 추정되는 반면 미국에서 알츠하이머 협회는 알츠하이머병(AD) 환자의 치료 비용을 연간 2천억 달러로 추정한다. 현재 추세가 계속된다면, 이 비용은 2050년까지 연간 1.1조 달러로 증가할 것으로 예상된다. 이러한 쇠약한 상태에 대한 치료법을 찾기 위한 중요한 연구가 진행되고 있지만 신경 퇴행의 영향을 되돌리거나 예방하기 위한 성공적인 치료법이 발견되기까지는 수십 년이 걸릴 것으로 보인다.
가장 흔한 신경 퇴행성 질환은 MND, 예를 들어, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 원발성 측삭 경화증(PLS), 진행성 근위축증(PMA), 진행성 연수 마비(PBP) 및 유사연수 마비 및 치매(예를 들어, 알츠하이머병, 루이체 치매 - 루이체를 갖는 치매(DLB) 및 파킨슨병 치매(PDD), 혈관성 치매 및 전두측두엽 치매(FTD)), 파킨슨병 및 헌팅턴병을 포함한다.
운동 뉴런 질환(MND)은 전형적으로 발병의 4-6년 내에 사망으로 이어지는 파괴적인 진행성 질환이다. MND의 발병률은 100,000명-년당 2-3 케이스에서 상당히 균일하며, 산발성 질환의 경우 58-63세, 가족성 질환의 경우 47-52세의 발병 피크 연령을 갖는다(Kiernan MC, et al. Lancet 377:942-955(2011)). 병리학적으로, MND는 운동 피질, 뇌간 및 척수에서 운동 뉴런의 손실을 특징으로 한다. 환자는 전형적으로 점진적 근육 위축, 마비, 경직 및 과다반사증을 나타내며 이는 궁극적으로 호흡기 근육의 부전을 통해 사망으로 이어진다(Zhao W., et al. Glia 58:231-243(2010)). MND에 대한 치료 옵션은 심각하게 제한된다. 다수의 요법이 설치류 모델에서 효능을 입증하고 소규모 2상 임상 시험에서 효과가 있는 것으로 나타났지만, 리루졸(Rilutek®/Teglutik®)과 에다라본(Radicava®/Radicut®)의 두 화합물만이 최종 23년 만에 미국 식품의약국(FDA) 승인을 받았다. 둘 다 제한된 효능을 가져서, 삶의 질을 향상시키지 않고 환자의 생존 기간을 3-4개월 연장한다. 현재 3상 시험중인 다른 약물은 인간 신경계의 인슐린 수용체, IGF1 수용체 및 IGF2에 결합하는 내인성 배아 단계 티로신 키나아제 운동성 영양요법 인자 조절제인 제너본의 약물 후보 GM604이다. 임상 시험(가장 일반적인 형태의 MND)에서 근위축성 측삭 경화증(ALS) 증상과 관련하여 여러 긍정적인 효과가 있음에도 불구하고, 회사 자체의 말로는, 약물 자체가 "치료"를 제공하지 않는다. 치료적 ALS 시험의 균일한 실패 및 AD 시험의 99.6%의 실패율은 단일/유전자 표적 환원주의의 보급되고 지배적인 약물 개발 패러다임이 ALS 및 다른 신경학적 및 신경퇴행성 다인성 질환을 치료할 수 없다는 증거이다. 이는 신경 퇴행성 질환 치료의 치료 개발 및 그 증상의 개선을 위한 상당한 여지가 있으며 충족되지 않은 의학적 요구를 강조한다는 것을 의미한다.
ALS는 모든 MND 케이스의 약 60-70%를 차지한다. 미국에서, ALS는 일반적으로 '루게릭병'으로 알려져 있으며, 10만명당 약 7명에게 영향을 미친다. 대상이 유전자에서 유전적 돌연변이를 나타내는 가족성 및 산발성인 2가지 형태의 ALS가 있다. ALS(및 다른 형태의 MND)에 연결된 돌연변이를 가진 유전자는 C9ORF72, ALS의 가장 흔한 유전적 원인, Cu/Zn 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD1), NEK1, TAR DNA 결합 단백질 43(TDP-43), 육종 내 융합(FUS) 및 유비퀼린-2(UBQLN2)를 포함한다. VCP(발로신 함유 단백질), ALS2(알신), SETX(세나타신), ANG(안지오게닌), PFN1(프로필린-1), MATR3(매트린-3), CHCHD10(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain containing 10), TUBA4A(튜불린, 알파4A), TBK1(TANK-결합 키나아제 1), C21orf2 및 OPTN(옵티누린)을 함유하는 유전자의 돌연변이는 또한 작은 비율의 환자에서 발견된다.
ALS의 원인이 되는 성질은 다양하며 이와 관련하여 질환은 스펙트럼 장애로 간주될 수 있다. ALS는 급속하게 진행되는 근육 위축, 구음장애 및 호흡곤란을 특징으로 한다. 근육과 뉴런 사이의 단절은 약 40개월 후에 호흡 부전을 유발한다. 근육이 기능할 수 없기 때문에 근육 약화와 위축을 유발하는 상하 운동 뉴런의 변성이 있다. 궁극적으로, 완전한 쇠약이 있다. 일반적으로 인지 기능이 부족한 반면, 근육 위축은 환자의 삶의 질을 크게 낮추기에 충분하다.
최근에, 신경계 질환의 진행에서 염증의 중요성에 대한 인식이 증가하고 있다. 신경 질환에서 염증의 역할은 다발성 경화증에서 오랫동안 인식되어, 상당한 치료 효과를 갖는 면역조절 약물의 도입을 초래하였다(Ransohoff, R.M., et al. Nat. Rev. Neurol. 11, 134-142(2015)).
뇌 및 척수에서의 면역 반응은 주로 뇌의 거주 면역 세포인 미세아교세포에 의해 매개된다. 중추 신경계(CNS)의 병리학적 변화, 예를 들어 손상된 조직으로부터의 손상 관련 분자 패턴(DAMP)과 같은 위험 신호의 방출에 의한 활성화에 반응함으로써, 이들은 제 1 방어선으로서 작용하고 전 염증 매개체의 생산을 시작하고 신경 염증 반응을 지속하는 데 중요한 역할을 한다. 연구는 살아있는 MND 환자의 뇌에서 PET 스캔으로 검출할 수 있는 광범위한 미세아교세포 활성화와 함께 MND 환자와 쥐 MND 모델 모두에서 운동 뉴런 손상 부위에서 미세아교세포 활성화를 나타내었다(Turner M.R., et al. Neurobiol. Dis. 15:601-9 (2004); Corcia P., et al. PLoS One 7:6-12 (2012)). MND 환자의 상부 운동 뉴런 징후의 심각성과 운동 피질에서의 미세아교세포 활성화 수준 사이의 상관관계가 또한 입증되었다(Turner M.R., et al. Neurobiol. Dis. 15:601-9(2004)). 마우스 MND 모델은 또한 질환 진행에서 미세아교세포에 대한 역할을 지원하여, MND-활성화된 미세아교세포가 질환 발병에 선행하며 말기 질환을 통한 질환 진행과 함께 증가한다는 것을 나타내며(Henkel JS et al. Mol. Cell. Neurosci. 31:427-37(2006); Alexianu ME et al, Neurology 57:1282-9(2001)), 미세아교세포 활성화의 강도는 운동 뉴런 변성에 필적하고 미세아교세포에 대한 활성 역할을 지원한다.
알츠하이머 환자의 뇌에서 다수의 DAMP가 확인되었다. 이들은 HMGB1, S100 패밀리 구성원 S100A9 및 S100B, 크로모그라닌, 순환 DNA 및 열 충격 단백질(HSP)을 포함한다. HSP를 제외하고, 이러한 모든 DAMP는 질환에서 상승하는 것으로 나타났고, Aβ 플라크와 물리적으로 연관되어 있으며 진행성 신경염증과 관련이 있다 (Venegas, C. & Heneka, MTJ Leukoc. Biol. 101, 87-98(2017)). Aβ에 의한 미세아교세포의 자극은 사이토카인 및 케모카인 생산을 포함하여 다수의 전 염증성 반응의 개시를 초래한다.
미세아교세포 활성화는 또한 두 가지 밀접한 관련 상태, 노인 치매에서 두 번째 가장 빈번한 원인인 루이체 치매(DLB) 및 파킨슨병 치매(PDD)를 포함하는 전두측두엽 치매(FTD) 및 루이체 치매(LBD)의 신경 퇴행과 연관되어 있다. 이러한 퇴행성 뇌 질환은 α-시누클레인이라는 단백질의 비정상적인 덩어리와 관련이 있다. FTD는 뇌의 측두엽과 전두엽의 점진적인 퇴행으로 인한 관련 상태의 그룹이며 TDP-43 증착을 특징으로 한다. 뇌의 이러한 영역은 의사 결정, 행동 제어, 감정 및 언어에서 중요한 역할을 한다. α-시누클레인 및 TDP-43 둘 다는 DAMP로서 작용할 수 있다. 미세아교세포 활성화는 또한 파킨슨병 초기의 도파민성 손실과 관련이 있다. 이 미세아교세포 활성화는 또한 인지 기능과 역의 상관관계가 있으며, 이는 질환 병변과 관련이 있을 수 있음을 시사한다.
중추 신경계 질환의 진단 및 치료는 약물로서 매우 특이적인 단일 클론 항체의 적용으로부터 이익을 얻을 수 있다. 그러나, 신경 퇴행성 장애 치료법 개발의 어려움 중 하나는 혈액 뇌 장벽(BBB)을 가로질러 CNS 속으로 표적 부위에 약물을 전달하는 문제이다. 이것은 뇌 질환을 표적으로 한 약물의 효율성을 제한하고 뇌 질환에 생물학적 의약을 사용하는 것을 어렵게 만든다. 심지어 작은 항체 단편 (Fv, Fab)의 크기는 온전한 BBB를 통한 수동 확산에 의한 전달을 증가시키려는 시도를 심각하게 제한하기 때문에, 평가중인 방법은 뇌척수액 또는 뇌 조직으로의 직접 투여에 의해 장벽을 우회하려고 시도하거나 고삼투 용액에 의해 일시적으로 장벽을 방해한다. 두 가지 방법 모두 침습적 기술을 필요로 한다.
신경 퇴행성 질환의 중증도 및 이용 가능한 제한된 치료 옵션의 관점에서, 신경 퇴행성 질환을 치료하기 위한 제제 및 방법이 필요하다.
본 발명은 ALS를 가진 대상의 중추 신경계(CNS) 외부의 CD14 길항제 항체의 전신 투여가 대상의 말초의 세포에 의한 전 염증성 매개체(예를 들어, 사이토카인)의 생산을 억제하여, CNS에서 질환 진행의 약화 및/또는 ALS 증상의 완화를 초래하여, 유도체 염증성 이펙터를 치료하기보다는 염증 과정의 생성 및 유지에 관여하는 원인 신호를 해결한다는 결정으로부터 부분적으로 발생한다.
CD14는 예를 들어, 대식세포, 단핵구, 쿠퍼 세포, 호중구, 수지상 세포 및 B 세포와 같은 면역 세포뿐만 아니라 내피 세포 및 상피 세포를 포함하는 다양한 세포의 표면상에 가용성 형태(sCD14) 및 세포막 결합 형태(mCD14)로 모두 존재하는 당 단백질이다(Jersmann, HPA, 2005. Immunol Cell Biol. 83: 462-467).
CD14는 병원체(병원체 관련 분자 패턴(PAMP))로부터 유래되거나 톨-유사 수용체(TLR)에 의한 내인성 조직 손상 또는 스트레스(손상 관련 분자 패턴 (DAMP))의 결과로서 위험 신호의 인식, 및 후속 염증 캐스케이드의 개시에 관여하는 분자들인 패턴 인식 수용체(PRR) 패밀리를 통한 세포 활성화 매개에 관여하는 주요 분자이다. CD14는 또한 혈중 LPS 결합 단백질(LBP)로부터 LPS를 수용하여 복합체를 형성하는 예시적인 PAMP인 그람 음성 박테리아의 리포폴리사카라이드(LPS)-또한 내독소로도 알려짐-에 대한 수용체로도 알려져 있다. LPS는 또한 sCD14에 결합하고 생성된 복합체는 전 염증성 사이토카인을 포함하는 전 염증성 매개체의 mCD14 독립적 생산을 유도할 수 있다. 가용성 CD14에 의한 인간 CD4+CD45RO+ 기억 T 세포의 배양은 또한 레티노산 관련 고아 수용체-γ 흉선 및 IL-17 생산의 상향 조절에 충분한 것으로 나타났다(Ilarregui JM, et al. Immunol. Cell Biol. 94: (2016)).
그람 음성 박테리아의 성분인 LPS에 더하여, CD14는 또한, 예를 들어, 그람 양성 박테리아의 펩티도글리칸 및 리포테이코산, 마이코박테리아의 리포아라비노만난 및 바이러스 외피 단백질을 포함하는 다른 PAMP에 대한 공-수용체로서 작용한다. CD14는 또한 광범위한 염증 상황과 관련된 조직 손상 및 염증의 결과로서 스트레스받고, 손상되고 또는 사멸하는 세포로부터 방출된 내인성 분자인 숙주 유래 DAMP 리간드를 인식한다. DAMP는 TLR 패밀리의 구성원와의 상호 작용을 통해 활성을 발휘하며, CD14는 SOD1, TDP-43, 열 충격 단백질 패밀리의 구성원뿐만 아니라 HMGB1, S100A 및 신경 퇴행성 장애와 관련된 다양한 잘못 접힌 단백질을 포함하는 많은 이들의 활성을 매개하는 데 필요한 것으로 기술되었다.
질환 중증도와 상관되는 전 염증성 세포 및 사이토카인은 신경 퇴행성 질환을 갖는 환자의 혈액 순환에 존재한다. 염증성 단핵구의 변형된 수준은 MND 환자의 순환 및 쥐 MND 모델에서 관찰되었다(Butovsky O. et al. J. Clin. Invest. 122:3063 (2012).; Murdock B.J., et al. Neurol. Neuroimmunol. Neuroinflammation 3:e242 (2016)). 또한, IL-6R에 대한 인간화 항체인 정맥 내 토 실리주맙으로 MND 환자를 치료하는 소규모 연구는 IV 투여가 환자의 하위 세트에서 혈청 염증성 사이토카인 수준을 감소시키고 질환 진행을 약화시켰다는 것을 입증하였다(Fiala M., et al. Am. J. Neurodegener. Dis. 2:129-139(2013)). MND 병변과 관련된 염증 반응을 표적으로 하는 치료법이 고려되었다. 그러나, 이는 퇴행 및 질환을 유발하는 1차 개시제를 표적으로하는 것이 아니라 염증의 이펙터를 다루는 IL-6 수용체를 표적으로 하는 것과 관련이 있다. mCD14를 통해 및 직접 sCD14를 통해 염증 캐스케이드 및 전 염증 매개체 생산을 개시하는 데 있어서 CD14의 역할로 인해, CD14 매개 염증 반응을 억제 또는 감소시키는 것이 작용보다는 염증의 원인을 다룸으로써 신경 퇴행성 질환과 관련된 염증에 대해 보다 효과적인 치료를 제공 할 것이 제안된다.
본 발명에 기술된 바와 같이, CD14 길항제 항체를 사용하여 신경 퇴행성 질환을 갖는 환자의 CNS 외부에 위치한 세포에 의한 전 염증성 매개체의 생산을 억제 또는 감소시키는 것은 CNS에서 질환 또는 증상의 발달 또는 진행을 치료할 수 있다.
따라서, 한 양태에서, 본 발명은 신경 퇴행성 질환을 앓고 있거나 신경 퇴행성 질환을 일으킬 위험이 있는 대상의 말초에 존재하는 포유동물 세포에서 전 염증 매개체(예를 들어, 사이토카인)의 생산을 억제 또는 감소시키는 방법을 제공한다. 한 실시태양에서, 이들 방법은 mCD14를 포함하는 말초 세포를 세포로부터 전 염증성 매개체의 생성을 억제 또는 감소시키기에 충분한 양으로 항-CD14 길항제 항체와 접촉시키는 단계를 포함하거나 이 단계로 이루어지거나 필수적으로 이루어진다.
다른 실시태양에서, 상기 방법은 말초 순환 sCD14를 말초 세포로부터 전 염증성 매개체의 생산을 억제 또는 감소시키기에 충분한 양으로 항-CD14 길항제 항체와 접촉시키는 단계를 포함하거나 이 단계로 이루어지거나 필수적으로 이루어진다.
적합하게는, 말초 세포는 면역 세포(예를 들어, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 또는 T 세포)이다.
염증 유발 매개체는 전형적으로 사이토카인, 예를 들어 종양 괴사 인자-α (TNF-α), 인터루킨-1(IL-1)-α, IL-6, IFN-γ, IFN-β, IL-1β, IL-8, IL-17 또는 IL-18이다.
관련 양태에서, 상기 정의된 방법은 신경 퇴행성 질환-매개 증상의 치료에 사용된다. 이들 방법은 일반적으로 mCD14를 포함하는 말초 세포 또는 순환 sCD14를 말초 세포에서 전 염증성 매개체의 CD14 의존적 생성을 억제 또는 감소시키기에 충분한 양으로, CD14 길항제 항체와 접촉하여 증상을 치료하는 단계를 포함하거나 이 단계로 이루어지거나 필수적으로 이루어진다. 특정 실시태양에서, 질환은 MND 또는 치매이다. 적합하게는, 질환이 MND(예를 들어, ALS)인 경우, 증상은, 예를 들어, 진행성 근육 위축, 마비, 경련, 호흡기 변화 및 과다반사를 포함한다. 한 실시태양에서, 질환은 치매이며, 증상은, 예를 들어, 기억 상실, 우울증, 의사 소통 장애, 서투른 판단, 방향 감각 상실, 혼란, 수면 장애, 운동 증상, 환각, 신경 이완제 민감성, 행동 변화 및 말하기, 삼키기 및 걷기 어려움이다.
본 발명의 또 다른 양태는 대상에서 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하는 방법을 제공한다. 이들 방법은 일반적으로 유효량의 CD14 길항제 항체를 대상에게 전신적으로 투여하여 대상에서 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행 또는 이의 증상을 치료하는 단계를 포함하거나 이 단계로 이루어지거나 필수적으로 이루어진다. 일부 실시태양에서, 대상의 말초 세포에서 하나 이상의 전 염증성 매개체의 생산이 억제되거나 감소된다. 적합하게는, 전 염증성 매개체는 사이토카인이다.
관련 양태에서, 본 발명은 신경 퇴행성 질환이 있거나 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행 위험이 있는 대상에서 말초 세포에 의한 하나 이상의 전 염증성 매개체(예를 들어, 사이토카인)의 생성을 억제 또는 감소시키기 위한 또는 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행을 치료하기 위한 CD14 길항제 항체의 용도를 제공한다. 일부 실시태양에서, CD14 길항제는 임의의 하나 이상의 이러한 응용을 위한 의약으로 제조된다.
일부 실시태양에서, 상기 방법은 대상이 적절하게는 CD14 길항제 항체의 투여 전에 신경 퇴행성 질환을 갖거나 발달 또는 진행할 위험이 있음을 확인하는 것을 더 포함한다. 이러한 유형의 예시적인 예에서, 상기 방법은 적절하게는 CD14 길항제 항체의 투여 전에 대상으로부터 적절하게 채취된 생물학적 샘플에서 신경 퇴행성 질환의 마커의 존재를 결정하는 단계를 포함하며, 생물학적 샘플의 예시적인 예는 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 뇌척수액, 소변, 피부, 다른 조직 또는 이의 분획을 포함한다.
한 실시태양에서, 질환은 MND이고 마커는, 예를 들어, SOD1, TDP-43, FUS, C9ORF72, ALS2, ALS4, ALS8, NEK1, UBQLN2, VCP, SETX, ANG, PFN1, MATR3, CHCHD10, TUBA4A, TBK1, C21orf2 및 OPTN 또는 이의 발현 생성물의 하나 이상으로부터 선택된다. 이 실시태양에서, 신경 퇴행성 질환의 마커의 존재는 마커 유전자(예를 들어, SOD1 , TDP -43, FUS , C9ORF72 , ALS2 , ALS4 , ALS8 , NEK1 , UBQLN2 , VCP , SETX, ANG , PFN1 , MATR3 , CHCHD10 , TUBA4A , TBK1 , C21orf2 및 OPTN mRNA 또는 폴리펩타이드)의 발현 생성물의 존재 또는 과발현 및/또는 마커 유전자에서의 돌연변이의 존재를 검출함으로써 적절하게 결정된다. MND에 대한 일부 실시태양에서, TDP-43-양성 개재물의 세포질 침착의 존재 및/또는 신경 필라멘트의 증가된 혈청 및/또는 CSF 수준이 또한 결정될 수 있다.
다른 실시태양에서, 질환은 알츠하이머병, FTD, LBD(DLB 및 PDD) 및 혈관성 치매를 포함하는 치매이고 마커는 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 및 프레세닐린 1 및 2를 암호화하는 유전자에서 돌연변이, 아포지단백질 E(APOE) 유전자(APOE - ε4 , APOE-ε2, APOE - ε3)의 ε4, 2 및 3 대립 유전자에서의 돌연변이, 골수 세포 2(TREM2) 유전자, MAPT 단백질 tau를 제조하는 염색체 17에 대한 MAPT 유전자, 프로그래뉼린 단백질을 제조하는 염색체 17에 대한 PGRN 유전자로도 불리는 GRN 유전자, 43 kDa 분자량의 트랜스-활성 반응 DNA-결합 단백질(TDP-43)을 생산하는 염색체 1에 대한 TARDBP 유전자, 발로신-함유 단백질을 암호화하는 염색체 9에 대한 VCP 유전자 및 하전된 다수체성 단백질 2B(크로마틴 변형 단백질 2B라고도 함)를 발현하는 염색체 3에 대한 CHMP2B 유전자에서 발현된 트리거링 수용체에서의 돌연변이의 하나 이상으로부터 선택된다. α-시누클레인, S100A9 및 S100B, 크로모그라 닌, 순환 DNA, 열 충격 단백질 및 아밀로이드의 증가된 혈청 및/또는 CSF 수준이 또한 결정될 수 있다.
다른 실시태양에서, 신경 퇴행성 질환에 걸릴 위험이 있는 대상은 또한 질환과 관련된 하나 이상의 전 염증성 마커, 예를 들어, TNF-β, 인터루킨-1(IL-1)-α, IL-6, IFN-γ, IFN-β, IL-1β, IL-8, IL-18, C-반응성 단백질(CRP), IL-17, 케모카인, CD14+-높은 단핵구 및 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서의 염증 매개체 mRNA 전사체의 증가된 수준의 존재를 결정함으로써 확인될 수 있다. 한 실시태양에서, 질환은 MND이고 검출된 사이토카인은 IL-6 또는 IL-17 중 하나 이상으로부터 선택된다. 한 실시태양에서, 질환은 치매이고 검출된 사이토카인은 IL-1, IL-6 및 TNF-α로부터 선택된다.
바람직한 실시태양에서, CD14 길항제 항체는 IC14 또는 이의 항원 결합 단편이다.
CD14 길항제 항체는 단독으로 또는 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하는 하나 이상의 보조제와 함께 투여될 수 있다. 따라서, 또 다른 양태에서, 본 발명은 적절하게는 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하기 위해, 전신 투여용으로 제제화된 약학적 조성물을 제공한다. 이들 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 함께 CD14 길항제 항체를 포함하거나 이로 이루어지거나 필수적으로 이루어진다. 한 실시태양에서, 조성물은 보조 항-신경퇴행제를 더 포함한다.
관련 측면에서, 본 발명은 대상에서 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하는 방법을 제공한다. 이들 방법은 일반적으로 전신적으로 투여되는 유효량의 CD14 길항제 항체 및 유효량의 보조 항-신경퇴행제를 대상에게 동시에 투여하여 대상에서 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행 또는 이의 증상의 진행을 치료하는 단계를 포함하거나, 이로 이루어지거나 필수적으로 이루어진다. 적합하게는, CD14 길항제 항체 및 보조 항-신경퇴행제는 상승적으로 효과적 유효량으로 투여된다.
특정 실시태양에서, 보조적 항-신경퇴행제는 항염증제이다. 한 실시태양에서, 질환은 MND(예를 들어, ALS)이고 보조 항-신경퇴행제는 CD40 및/또는 CD40 리간드에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, AT-1502)를 포함하는, CD40 및 CD40 리간드 사이의 상호 작용을 차단하는 제제인 리루졸(Rilutek®/Teglutik®), 보완 경로 억제제(예를 들어, PMX205 또는 eculizumab), NurOwn 줄기 세포 요법(BrainStorm Cell Therapeutics), GM604, 에다라본(Radicava®/Radicut®), 마 시티닙, 메만틴 또는 티라셈티브로부터 선택된다. 한 실시태양에서, 질환은 LBD, AD 또는 FTD와 같은 치매이고 보조 항-신경퇴행제는 콜린에스테라제 억제제이다. 다른 실시태양에서, 질환은 AD이고 보조제는 예를 들어 아리셉트, 라자딘, 나멘다, 엑셀론 및 남자릭로부터 선택된 승인된 치료제이다.
다른 관련 양태에서, 본 발명은 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행 또는 이의 증상을 치료하기 위한 CD14 길항제 항체 및 보조 항-신경퇴행제의 용도를 제공한다. 일부 실시태양에서, CD14 길항제 항체 및 보조 항-신경퇴행제는 본 출원의 전신 투여용 의약으로서 제조된다. 적합하게는, CD14 길항제 항체 및 보조 항-신경퇴행제는 동시 투여를 위해 제제화된다.
본 발명의 내용 중에 포함되어 있다.
본 발명의 실시태양은 이하의 도면을 참조하여 비 제한적인 예로서 본 발명에 기술된다.
도 1은 연구 일 1에 4mg/kg의 투여량으로 연구 일 2, 3 및 4에 2mg/kg의 투여량으로 IC14를 사용한 MND 환자의 i.v 투여 후 CSF에서의 IL-17, 신경 필라멘트 경쇄(NFL) 및 IL-1β의 수준을 나타낸다.
도 2는 1차 인간 미세 아교 세포의 TDP-43 활성화 후 사이토카인 또는 케모카인 수준에 대한 IC14의 효과를 평가하는 생체 외 분석의 결과를 보여준다. 세포를 (A) 돌연변이 TDP-43(mTDP43) 또는 (B) 야생형 TDP-43(wtTDP43)으로 48시간 동안 자극하기 전에, 1차 인간 미세아교 세포를 2시간 동안 IC14 또는 대조군 IgG4 항체로 전처리하였다. 다중 사이토카인 분석을 위해 상청액을 수집하였다. 처리되지 않은 세포는 항체 또는 TDP-43을 받지 않았으며, 사이토카인 또는 케모카인 생산의 기초 수준을 반영한다. 발현은 RFU(Relative Fluorescence Units)로서 측정되었고 샘플 당 3개의 웰의 평균 및 SEM을 나타낸다.
1. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 기술된다. 본 발명의 목적을 위해, 다음의 용어들이 아래에 정의된다.
본 발명에서 관사 "a" 및 "an"은 본 발명의 문법적 대상 중 하나 이상(즉, 하나 이상)을 지칭하기 위해 사용된다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소를 의미한다.
본 발명에 사용된 "및/또는"은 대안적(또는)으로 해석될 때 조합이 결여될 뿐만 아니라 관련된 열거된 항목 중 하나 이상의 임의의 및 모든 가능한 조합을 의미하고 포함한다.
"동시 투여" 또는 "동시 투여" 또는 "공동-투여" 등의 용어는 둘 이상의 제제를 함유하는 단일 조성물의 투여, 또는 개별 조성물로서 각 제제의 투여 및/또는 효과적인 결과가 모든 그러한 제제가 단일 조성물로서 투여될 때 얻어지는 것과 동등한 짧은 시간 내에 동시에(contemporaneously) 또는 동시에(simultaneously) 또는 순차적으로 별도의 경로에 의한 투여 전달을 의미한다. "동시에"는 제제가 실질적으로 동시에, 바람직하게는 동일한 제형으로 함께 투여됨을 의미한다. "동시적으로"는 제제가 제 시간에 밀접하게 투여됨을 의미하며, 예를 들어 하나의 제제는 약 1분 이내에 또는 약 1일 이내에 또는 전후에 투여된다. 모든 동시 시간이 유용하다. 그러나, 동시에 투여되지 않을 때, 제제는 약 1분 내지 약 8시간 내에, 적합하게는 약 1 내지 약 4시간 이내에 투여되는 경우가 종종 있을 것이다. 동시에 투여되는 경우, 제제는 대상의 동일한 부위에 적합하게 투여된다. 용어 "동일 부위"는 정확한 위치를 포함하지만, 약 0.5 내지 약 15 센티미터, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 5 센티미터 내에 있을 수 있다. 본 발명에 사용된 용어 "별도로"는 제제가 간격, 예를 들어 약 1일 내지 수주 또는 수개월 간격으로 투여됨을 의미한다. 제제는 어느 순서로든 투여될 수 있다. 본 발명에 사용된 용어 "순차적으로"는 제제가 예를 들어 분, 시간, 일 또는 주 간격 또는 간격으로 순차적으로 투여됨을 의미한다. 적절한 경우, 제제는 규칙적인 반복 주기로 투여될 수 있다.
용어 "ALS", "MND" 및 "루게릭병"은 동일한 상태를 의미하기 위해 본 발명에서 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 가족성 ALS 및 산발적 ALS 모두 대상 방법에 의해 치료되거나 발달 또는 진행이 지연될 수 있다. 모든 형태의 ALS가 본 발명에서 고려된다.
용어 "효현제"는 이것이 결합하는 수용체를 자극하는 리간드를 의미한다. 고전적 정의에 따르면, 오르토스테릭, 알로스테릭, 역 또는 보조-효현제는 수용체에 결합하고, 수용체 상태를 변경하고 세포의 행동, 물리적 또는 생물학적 상태에서 정의 가능한 변화를 초래하는 화학적 또는 물리적 신호 전달 캐스케이드의 직접 또는 간접 활성화를 포함하는 생물학적 작용을 야기하는 특성을 갖는다. 결과적으로, 효현성은 생물학적 작용을 생산하는 효현제의 특성으로 정의된다. 본 발명의 맥락에서, CD14 효현제는, 예를 들어 손상 관련 분자 패턴(DAMP) 또는 병원체 관련 분자 패턴(PAMP) 분자 및 LPS와 같은 순환에서 세포 표면상의 mCD14 또는 sCD14에 mCD14에 결합함으로써 전 염증 반응을 개시하는 임의의 효현제를 포함한다. DAMP의 비 제한적 예는 SOD1, TDP-43, 열 충격 단백질 패밀리의 구성원뿐만 아니라 HMGB1, S100A, S100A9, S100B, α-시누클레인, 크로모그라닌, 순환 DNA 및 RNA, 아밀로이드 및 돌연변이의 결과로서 발생하고 순환에서 세포 표면상의 mCD14 또는 sCD14에 결합함으로써 전 염증 반응을 개시하는 임의의 다른 잘못 접힌 단백질을 포함한다. PAMP의 비 제한적 예는 LPS, 그람 양성 박테리아의 다른 펩티도글리칸 및 리포테이 코산, 미코박테리아의 리포아라비노만난 및 바이러스 외피 단백질을 포함한다.
용어 "길항제 항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 항체가 결합하는 항원(예를 들어, CD14)의 생물학적 활성을 억제 또는 감소시키는 항체를 포함한다. 예를 들어, 길항제 항체는 수용체(예를 들어, CD14)와 리간드(예를 들어, DAMP 또는 PAMP) 사이의 상호 작용을 부분적으로 또는 완전히 차단할 수 있거나, 수용체의 3차 구조 변화 또는 하향 조절로 인해 상호 작용을 실질적으로 감소시킬 수 있다. 따라서, CD14 길항제 항체는 CD14와 결합하고 톨-유사 수용체(TLR) 신호 전달 경로(예를 들어, TLR4 신호 전달 경로) 및 TIR-도메인-함유 어댑터-유도 IFN-β(TRIF) 경로와 같은 하류 경로의 활성화 또는 CD14 리간드(예를 들어, DAMP 또는 PAMP)에 의한 CD14 결합에 대한 세포 반응의 유도(예를 들어, 전-염증성 사이토카인을 포함하는 전 염증성 매개체의 생산)를 포함하는 CD14 효현제 활성을 의미 있는 정도로 차단, 억제, 무효화, 길항, 억제, 감소 또는 축소(현저하게 포함)시키는 항체를 포함한다.
본 발명에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며 특히 이들은 원하는 면역-상호 작용성을 나타내는 한 자연 발생 항체, 단일 클론 항체, 다클론 항체, 다중 특이적 항체(예를 들어, 이중 특이적 항체), 항체 단편 또는 임의의 다른 항원-결합 분자를 포함한다. 자연 발생 "항체"는 이황화 결합에 의해 서로 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 면역글로불린을 이의 범위 내에 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 발명에서 VH로 약칭) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 특정 CH 도메인(예를 들어, CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 발명에서 VL로 약칭) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불리는 보다 보존된 영역과 산재된 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 아미노-말단에서 카복시-말단으로 배열 된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제 1 성분(C1q)을 포함하는 면역글로불린의 숙주 조직 또는 인자에 대한 결합을 매개할 수 있다. 항체는 임의의 아이소타입(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 이의 서브클래스 또는 변형된 버전(예를 들어, L234A 및 L235A 이중 돌연변이(IgG1-LALA)를 보유하는 IgG1 아이소타입)일 수 있다. 항체는 임의의 종, 키메라, 인간화 또는 인간일 수 있다. 다른 실시태양에서, 항체는 제 1 불변 영역 도메인(CH1)은 없지만, 온전한 중쇄를 보유하고 항원-결합 도메인을 통해 항원에 결합할 수 있는 동종이량체 중쇄 항체(예를 들어, 카멜리드 항체)이다. 항체-모듈식 인식 도메인(MRD) 융합에서 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 관심 항원과 상호 작용하는 기능성 결합 도메인을 함유할 것이다.
본 발명에 사용된 "가변 도메인"(경쇄의 가변 도메인(VL), 중쇄의 가변 도메인(VH))은 항원에 항체를 직접 결합시키는 데 관여하는 경쇄 및 중쇄 도메인의 쌍을 각각 나타낸다. 가변 경쇄 및 중쇄 도메인은 동일한 일반적인 구조를 가지며 각 도메인은 3개의 CDR 또는 "초가변 영역"에 의해 연결된 서열이 광범위하게 보존된 4개의 FR을 포함한다. FR은 β-시트 구조를 채택하고 CDR은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 사슬의 CDR은 FR에 의해 3차원 구조로 유지되고 다른 사슬의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다.
본 발명에서 사용될 때 용어 "항원-결합 부분"은 일반적으로 CDR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 의미한다. 따라서, "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"("초가변 영역"으로도 불림)은 항원 결합 부위의 형성에 기여하는 3차원 루프 구조를 형성하는 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 의미하도록 본 발명에서 상호 교환적으로 사용된다. 중쇄 및 경쇄의 각각의 가변 영역은 3개의 CDR이 있으며, 이들은 각각의 가변 영역에 대해 "CDR1", "CDR2" 및 "CDR3"으로 지정된다. 본 발명에 사용된 용어 "CDR 세트"는 항원에 결합하는 단일 가변 영역에서 발생하는 3개의 CDR 그룹을 의미한다. 이들 CDR의 정확한 경계는 상이한 시스템에 따라 다르게 정의되었다. 카밧(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991))에 의해 기술된 시스템은 항체의 임의의 가변 영역에 적용 가능한 명백한 잔기 넘버링 시스템을 제공할뿐만 아니라 3개의 CDR을 정의하는 정확한 잔기 경계를 제공한다. 3개의 CDR은 "카밧 CDR"로 불릴 수 있다. 코티아 및 동업자(Chothia and Lesk, 1987. J. Mol . Biol . 196: 901-917; Chothia et al., 1989. Nature 342: 877-883)은 카밧 CDR 내의 특정 하위 부분은 아미노산 서열 수준에서 큰 다양성을 가짐에도 불구하고 거의 동일한 펩타이드 골격 형태를 채택하는 것을 밝혀내었다. 이런 부분은 "L1", "L2" 및 "L3" 또는 "H1", "H2" 및 "H3"로 지정되었고, 여기서 "L" 및 "H"는 각각 경쇄 및 중쇄 영역을 나타낸다. 이런 영역은 카밧 CDR과 겹치는 경계를 갖는 "코티아 CDR"로 불릴 수 있다. 카밧 CDR과 겹치는 CDR을 정의하는 다른 경계는 파들란(1995. FASEB J. 9: 133-139) 및 맥칼룸(1996. J. Mol . Biol . 262(5): 732-745)에 의해 기술되었다. 또 다른 CDR 경계 정의는, 비록 CDR이 특정 잔기 또는 잔기 그룹 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 크게 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 단축되거나 연장될 수 있지만, 이들 시스템 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만, 그럼에도 불구하고 카밧 CDR과 중복될 것이다.
본 발명에 사용된 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 CDR을 뺀 가변 영역의 나머지 서열을 의미한다. 따라서, 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 도메인은 N- 내지 C-말단 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. CDR 및 FR은 전형적으로 Kabat, E. A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)의 표준 정의 및/또는 "초가변 루프"의 잔기로부터 결정된다.
본 발명에 사용된 용어 "경쇄 가변 영역"("VL") 및 "중쇄 가변 영역"(VH)은 각 항체에 대해 다양한 일차 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 중쇄의 N-말단 부분에서의 영역 또는 도메인을 의미한다. 항체의 가변 영역은 경쇄 및 중쇄의 아미노 말단 도메인이 이들이 함께 접혀 항원에 대한 3차원 결합 부위를 형성함에 따라 전형적으로 구성된다. 구조적 유사성에 기초하여 VH 및 VL의 여러 하위 유형이 예를 들어 카밧 데이터베이스에 명시된대로 정의되었다.
용어 "키메라 항체"는 인간 불변 영역에 연결된 뮤린 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체와 같이 하나의 종으로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열 및 다른 종으로부터의 불변 영역 서열을 포함하는 항체를 의미한다.
비인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비인간 면역 글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용체의 초 가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및 용량을 갖는 마우스, 래트, 토끼와 같은 비 인간 종(공여자 항체) 또는 비인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체된 인간 면역 글로불린(수령자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역 글로불린의 골격 영역(FR) 잔기는 상응하는 비 인간 잔기로 대체된다. 따라서, 인간화 항체의 FR 및 CDR은 모체(즉, 공여자) 서열, 예를 들어, 공여자 항체 CDR에 정확하게 대응할 필요는 없으며, 공통 프레임워크는 적어도 하나의 아미노산 잔기의 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해 돌연변이되어 해당 부위의 CDR 또는 FR이 공여자 항체 또는 공통 프레임워크에 상응하지 않을 수 있다. 그러나, 전형적으로 이러한 돌연변이는 광범위하지 않으며 일반적으로 항원에 결합하는 "주요 잔기(key residues)"를 피할 것이다. 일반적으로, 인간화 항체 잔기의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%가 부모 FR 및 CDR 서열의 것에 상응할 것이다. 본 발명에서 사용된 용어 "공통 프레임워크"는 공통 면역글로불린 서열의 프레임워크 영역을 의미한다. 본 발명에 사용된 용어 "공통 면역글로불린 서열"은 관련된 면역글로불린 서열의 패밀리에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산(또는 뉴클레오타이드)으로부터 형성된 서열을 의미한다(예를 들어, Winnaker, From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1987) 참조). "공통 면역글로불린 서열"은 따라서 "공통 프레임 워크 영역(들)" 및/또는 "공통 CDR(들)"을 포함할 수 있다. 면역 글로불린 패밀리에서, 공통 서열의 각 위치는 패밀리에서 그 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산에 의해 점유된다. 두 개의 아미노산이 똑같이 자주 발생하면 둘 중 하나가 합의 서열에 포함될 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 실질적으로 모든 하나 이상의, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 초가변 루프의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 면역 글로불린의 것들과 상응하고 FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역 글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 선택적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부를 포함할 것이다. 자세한 내용은 존스 등(1986. Nature 321:522-525), 리에크만 등(1988. Nature 332:323-329) 및 프레스타(1992. Curr . Op. Struct . Biol. 2:593-596) 참조. 인간화 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함한 임의의 부류의 면역글로불린 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 아이소타입으로부터 선택될 수 있다. 인간화 항체는 하나 이상의 부류 또는 아이소타입으로부터의 서열을 포함할 수 있으며, 특정 불변 도메인은 당업계에 주지된 기술을 사용하여 원하는 효과기 기능을 최적화하도록 선택될 수 있다. 본 발명에 사용된 용어 "주요 잔기"는 항체, 특히 인간화 항체의 결합 특이성 및/또는 친화력에 더 영향을 미치는 가변 영역 내의 특정 잔기를 의미한다. 주요 잔기는 하기 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지 않는다: CDR에 인접한 잔기, 잠재적 글리코실화 부위(N- 또는 O-글리코실화 부위 일 수 있음), 희귀 잔기, 항원과 상호 작용할 수 있는 잔기, CDR과 상호 작용할 수 있는 잔기, 표준 잔기, 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기, 버니어(Vernier) 영역 내의 잔기, 및 가변 중쇄 CDR1의 코티아 정의 및 제 1 중쇄 프레임워크의 카밧 정의 사이의 겹치는 영역 내 잔기.
본 발명에 사용된 "버니어" 구역은 푸테 및 윈터(1992. J. Mol . Biol . 224: 487-499)에 의해 기술된 바와 같이 CDR 구조를 조정하고 항원에 대한 맞춤을 미세 조정할 수 있는 프레임워크 잔기의 서브세트를 의미한다. 499). 버니어 구역 잔기는 CDR의 기초가 되는 층을 형성하고 CDR의 구조 및 항체의 친화성에 영향을 미칠 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "표준" 잔기는 코티아 등(1987. J. Mol . Biol . 196: 901-917; 1992. J. Mol . Biol . 227: 799-817), 모두는 본 발명에 참조로 포함된다)에 의해 정의된 바와 같은 특정 표준 CDR 구조를 정의하는 CDR 또는 프레임워크의 잔기를 의미한다. 코티아 등에 따르면, 많은 항체의 CDR의 중요한 부분은 아미노산 서열 수준에서 큰 다양성에도 불구하고 거의 동일한 펩티드 골격 형태를 갖는다. 각각의 표준 구조는 주로 루프를 형성하는 아미노산 잔기의 연속 세그먼트에 대한 펩타이드 골격 비틀림 각도의 세트를 특정한다.
본 발명에 사용된 용어 "공여자" 및 "공여자 항체"는 "수령자 항체"에 하나 이상의 CDR을 제공하는 항체를 의미한다. 일부 실시태양에서, 공여자 항체는 FR이 수득되거나 유래된 항체와 상이한 종으로부터의 항체이다. 인간화 항체와 관련하여, 용어 "공여자 항체"는 하나 이상의 CDR을 제공하는 비인간 항체를 의미한다.
본 발명에 사용된 용어 "수령자" 및 "수령자 항체"는 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 100%의 하나 이상의 FR의 아미노산 서열을 제공하는 항체를 의미한다. 일부 실시태양에서, 용어 "수령자"는 불변 영역 (들)을 제공하는 항체 아미노산 서열을 의미한다. 다른 실시태양에서, 용어 "수령자"는 하나 이상의 FR 및 불변 영역(들)을 제공하는 항체 아미노산 서열을 의미한다. 특정 실시태양에서, 용어 "수령자"는 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 100%의 하나 이상의 FR의 아미노산 서열을 제공하는 인간 항체 아미노산 서열을 의미한다. 이 실시태양에 따르면, 수령자는 인간 항체의 하나 이상의 특정 위치에서 발생하지 않는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 10개의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다. 수령자 프레임워크 영역 및/또는 수령자 불변 영역(들)은, 예를 들어, 생식 계열 항체 유전자, 성숙 항체 유전자, 기능성 항체(예를 들어, 당업계에 주지된 항체, 개발중인 항체 또는 시판되는 항체))로부터 유래되거나 수득될 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "인간 항체"는 인간 생식 계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 본 발명의 인간 항체는, 예를 들어 CDR 및 특히 CDR3에서 인간 생식 계열 면역글로불린 서열(예를 들어, 생체 외 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명에 사용된 용어 "인간 항체"는 다른 포유 동물 종, 예컨대 마우스의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
용어 "중쇄 가변 영역 CDR1" 및 "H-CDR1"은 용어 "중쇄 가변 영역 CDR2" 및 "H-CDR2", 용어 "중쇄 가변 영역 CDR3" 및 "H-CD3", 용어 "경쇄 가변 영역 CDR1" 및 "L-CDR1"; 용어 "경쇄 가변 영역 CDR2" 및 "L-CDR2" 및 용어 "경쇄 가변 영역 CDR3" 및 "L-CDR3" 항체 단편과 같이 상호 교환적으로 사용된다. 명세서 전체에 걸쳐, 상보성 결정 영역("CDR")은 달리 명시되지 않는 한 카밧 정의에 따라 정의된다. 카밧 정의는 항체의 잔기를 넘버링하기 위한 표준이며 전형적으로 CDR 영역을 확인하는 데 사용된다(Kabat et al., (1991), 5th edition, NIH publication No. 91-3242).
항원 결합은 온전한 항체의 "단편" 또는 "항원 결합 단편"에 의해 수행될 수 있다. 여기에서, 두 용어는 서로 바꾸어 사용될 수 있다. 항체의 "항체 단편"이라는 용어 내에 포함되는 결합 단편의 예는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; 힌지 영역에서 이황화 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab') 2 단편; VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; VH 도메인으로 이루어진 단일 도메인 항체(dAb) 단편(Ward et al., 1989. Nature 341:544-546); 및 고립된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
"단일 사슬 가변 단편(scFv)"은 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자(단일 사슬 Fv(scFv)로 공지됨); 예를 들어, Bird et al., 1988. Science 242:423-426; and Huston et al., 1988. Proc . Natl . Acad . Sci . 85:5879-5883 참조)를 형성하는 단일 단백질 사슬이다. 두 도메인 VL 및 VH가 별도의 유전자에 의해 암호화되지만, 재조합 방법을 사용하여 단일 단백질 사슬로 만들어질 수 있는 인공 펩타이드 링커에 의해 결합될 수 있다. 이러한 단일 사슬 항체는 하나 이상의 항원 결합 모이어 티를 포함한다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
본 발명에 사용된 용어 "단일 클론 항체" 및 약어 "MAb" 및 "mAb"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 의미하는데, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단일 클론 항체는 매우 특이적으로 단일 항원에 대항한다. 또한, 상이한 결정 인자(에피토프)에 대해 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론 항체 제제와 달리, 각각의 mAb는 항원 상의 단일 결정 인자에 대해 대항한다. 개질제 "단클론"은 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 단클론 항체는, 예를 들어, 하이브리도마를 포함하는 항체 생산 세포의 단일 클론에 의해 생산될 수 있다. 용어 "하이브리도마"는 일반적으로 배양된 신생물성 림프구와 부모 세포의 특이적 면역 전위를 나타내는 프라이밍 된 B- 또는 T-림프구 사이의 세포 융합 생성물을 의미한다.
관심 항원(예를 들어, CD14)에 "결합하는" 항체는 항체가 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화하는 데 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합하고 다른 단백질과 유의하게 교차 반응하지 않는 항체이다. 이러한 실시태양에서, "비 표적" 단백질에 대한 항체의 결합 정도는, 예를 들어, 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석, 효소 연결 면역 흡착 분석(ELISA), 면역 침전 또는 방사성 면역 침전(RIA)에 의해 측정된 바와 같이 특정 표적 단백질에 대한 항체, 올리고펩타이드 또는 다른 유기 분자의 결합의 적어도 약 10% 미만일 것이다. 따라서, CD14와 결합하여 CD14를 길항하는 항체는 전 염증성 사이토카인/케모카인을 포함하는 전 염증성 매개체의 생산을 적절히 억제 또는 감소시킨다. 표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대해 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적"은 비특이적 상호 작용과 측정적으로 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 제어 분자, 예를 들어 과량의 비 표지된 표적과의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우, 프로브에 대한 표지된 표적의 결합이 과잉의 표지되지 않은 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 특이적 결합이 지시된다. 항체가 결합하는 항원의 특정 영역은 전형적으로 "에피토프"로 불린다. 용어 "에피토프"는 항체 또는 T-세포 수용체에 의해 특이적으로 인식되거나 달리 분자와 상호 작용하는 항원 상의 부위를 광범위하게 포함한다. 일반적으로 에피토프는 아미노산 또는 탄수화물 또는 당 측쇄와 같은 분자의 활성 표면 그룹화이며 일반적으로 특정 3차원 구조적 특성 및 특이적 전하 특성을 가질 수 있다. 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 실질적으로 항체가 특이적으로 결합 할 수 있는 것은 에피토프일 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "세포"는 mCD14를 포함하고 전 염증성 매개체(예를 들어, 사이토카인)를 생산하는 CNS 외부에 존재하는 임의의 포유 동물 세포를 의미한다. 비 제한적인 예는 면역 세포, 상피 세포, 골아 세포, 섬유아세포 및 평활근 세포이다.
본 명세서 전체에서, 문맥 상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함하다", "포함하다" 및 "포함하는"은 언급된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소 그룹을 포함하지만 임의의 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소 그룹을 배제하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 따라서, 용어 "포함하는" 등의 사용은 열거된 요소가 필수이거나 필수적이지만, 다른 요소는 선택적이며 존재할 수 있거나 존재하지 않을 수 있음을 나타낸다. "이루어지는"은 "이루어지는"이라는 구절을 따르는 것을 포함하고 이에 제한되는 것을 의미한다. 따라서, "이루어지는"이라는 구절은 열거된 요소가 필수이거나 필수이며, 다른 요소가 존재할 수 없음을 나타낸다. "필수적으로 이루어지는"은 문구 뒤에 열거된 임의의 요소를 포함하는 것을 의미하며, 열거된 요소에 대해 본 발명에서 특정된 활동 또는 동작을 방해하거나 기여하지 않는 다른 요소로 제한된다. 따라서, "필수적으로 이루어지는"이라는 구절은 열거된 요소가 필수이거나 필수이지만, 다른 요소는 선택적이며, 열거된 요소의 활동 또는 작용에 영향을 미치는지 여부에 따라 존재할 수 있거나 존재하지 않을 수 있음을 나타낸다.
본 발명에 사용된 "치매"는 정상 노화로부터 예상되는 것 이상으로 인지 기능(즉, 생각을 처리하는 능력)이 저하되는 증후군에 속하는 임의의 질환을 의미한다. 본 발명을 임의의 하나의 질환으로 제한하지 않으면서, 치매의 예는 AD, 루이체 치매-루이체를 가진 치매(DLB) 및 파킨슨병 치매, 혈관성 치매 및 전두측두엽 치매(FTD)를 포함한다.
상태를 치료하는 맥락에서 "유효량"에 의해, 이러한 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 증상의 발생을 예방하고 그러한 증상을 확인하고 기존 증상을 치료하는 데 효과적인 단일 투여량으로 또는 일련의 일부로 제제 또는 조성물의 양을 투여하는 것을 의미한다. 유효량은 치료할 대상의 연령, 건강 및 신체 상태 및 질환의 증상이 명백한지 여부, 치료할 개체의 분류학적 그룹, 조성물의 제제, 의학적 상황의 평가, 및 다른 관련 요인에 따라 변할 것이다. 최적의 투약 스케줄은 대상신체의 약물 축적 측정으로부터 계산될 수 있다. 최적 투여량은 개별 대상에서의 상대 효능에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 생체 외 및 생체 내 동물 모델에서 효과적인 것으로 밝혀진 EC50 값에 기초하여 추정될 수 있다. 당업자는 최적 용량, 투여 방법 및 반복률을 쉽게 결정할 수 있다. 이 양은 일상적인 시험을 통해 결정될 수 있는 비교적 넓은 범위에 속할 것으로 예상된다.
"혼성화"는 DNA-DNA 하이브리드 또는 DNA-RNA 하이브리드를 생성하기 위한 상보적 뉴클레오타이드 서열의 쌍을 나타내는 것으로 본 발명에서 사용된다. 상보적 염기 서열은 기본 페어링 규칙과 관련된 서열이다. DNA에서, A는 T와 쌍을 이루고 C는 G와 쌍을 이룬다. RNA에서 U는 A와 쌍을 이루고 C는 G와 쌍을 이룬다. 이와 관련하여, 본 발명에 사용된 용어 "일치" 및 "불일치"는 상보적 핵산 가닥에서 쌍을 이룬 뉴클레오타이드의 혼성화 전위를 의미한다. 일치된 뉴클레오타이드는 상기 언급된 고전적인 A-T 및 G-C 염기쌍과 같이 효율적으로 혼성화된다. 불일치는 효율적으로 혼성화하지 않는 다른 뉴클레오타이드 조합이다. 본 발명에서, 바람직한 페어링 메커니즘은 올리고머 화합물의 가닥의 상보적 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드 염기(핵 염기) 사이의 왓슨-크릭, 후그스틴 또는 역 후그스틴 수소 결합일 수 있는 수소 결합을 필요로 한다. 예를 들어, 아데닌 및 티민은 수소 결합의 형성을 통해 쌍을 이루는 상보적인 핵 염기이다. 혼성화는 당업자에게 공지된 다양한 환경하에서 일어날 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "면역 세포"는 CNS 외부에 존재하는 면역 시스템에 속하는 세포를 의미한다. 면역 세포는 T 림프구(T 세포), B 림프구(B 세포), 자연 살해(NK) 세포, 과립구, 호중구, 대 식세포, 단핵구, 수지상 세포 및 상기한 것 중 임의의 것의 특수 형태, 예를 들어, 혈장 세포 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 혈장 세포, 자연 살해 T(NKT) 세포, T 헬퍼 세포 및 세포 독성 T 림프구(CTL)와 같으나 이에 제한되지 않는 조혈 기원 세포를 포함한다.
본 발명에서 "면역-상호 작용성" 및 이의 문법적 등가물에 대한 언급은 분자들 사이의 임의의 상호 작용, 반응 또는 다른 형태의 회합 및 특히 분자 중 하나가 면역계의 구성 요소이거나 모방하는 경우에 대한 언급을 포함한다.
본 발명에 사용된 바와 같은 세포에 의한 "염증성 매개체의 생산"과 관련하여 용어 "억제한다", "억제하는", "감소한다" 또는 "감소하는 등"은 말초 세포에 의해 생산된 전 염증성 매개체/들의 수준 또는 양의 적어도 작지만 측정 가능한 감소를 의미한다. 실시태양에서, 세포에 의한 전 염증성 매개체의 생산은 비 처리 대조군에 비해 적어도 20% 억제되거나 감소되고; 더 많은 실시태양에서, 억제 또는 감소는 적어도 50%이고; 또 다른 실시태양에서, 억제 또는 감소는 적어도 70%이고, 실시태양에서, 억제 또는 감소는 적어도 80%이다. 전 염증 매개체 생산의 이러한 감소는 생체 내 실시태양에서 염증 매개체 캐스케이드의 유해한 효과를 감소시킬 수 있다.
적합한 생체 외 분석(예를 들어, ELISA, RT-PCR)은 말초 세포에 의한 전 염증성 매개체의 생성을 억제 또는 감소시키는 데 있어서 CD14 길항제 항체의 효능을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 경쟁적인 RT-PCR 기술은 세포 내에서 얻은 사이토카인 mRNA의 수준을 측정하는 데 사용될 수 있고 세포에서 방출된 발현 된 사이토카인의 수준은, 예를 들어, 특정 사이토카인에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 단클론 항체를 사용하여 샌드위치 ELISA로 측정될 수 있다. 생체 내 스크리닝은 또한 당업계에 공지된 절차에 따라 수행될 수 있다. 예를 들어, CD14 길항제 항체는 동물 모델(예를 들어, 마우스)에 투여되고 다양한 사이토카인의 수준을 평가하기 위해 혈액이 수집된다. 당업자는 사이토카인 생산의 측정에 이용 가능한 기술에 정통할 것이다. 결과에 기초하여, 적절한 투여량 범위 및 전신 투여 경로가 또한 결정될 수 있다.
"단리된"은 본래의 상태에서 통상적으로 수반되는 성분으로부터 실질적으로 또는 본질적으로 없는 재료를 의미한다.
본 발명에 사용된 용어 "리간드"는 수용체에 결합할 수 있는 임의의 분자를 의미한다.
본 발명에 사용된 어구 "운동 뉴런 질환(MND)"은 운동 뉴런을 선택적으로 파괴하는 신경계 장애를 의미한다.
구절 "신경 퇴행성 질환"은 진행성 신경계 기능장애를 특징으로 하는 질환을 의미한다. 신경 퇴행성 질환은 많은 상이한 병인을 갖는 중추 또는 말초 신경계의 이종성 질환 그룹을 포함한다. 이러한 상태는 제한 없이 유전적이거나 독성 또는 대사 과정에 이차적일 수 있으나 감염으로 인해 발생할 수 있다. 신경 퇴행성 상태는 연령과 관련되거나 만성적 일 수 있는 진행성 상태이다. 이러한 상태는 뇌의 상대적으로 특정한 부위 또는 특정 뉴런 집단의 이상을 특징으로 할 수 있다. 상이한 신경 퇴행성 상태에 영향을 받는 특정 세포 그룹은 전형적으로 상태의 임상 표현형을 결정한다. 특히, 신경 퇴행성 상태는 특히 영향을 받는 중추 또는 말초 신경계 구조의 위축과 관련될 수 있다.
예시적인 신경 퇴행성 질환 또는 상태는 루게릭병으로도 알려진 근 위축성 측삭 경화증(ALS), 일차 측삭 경화증(PLS), 진행성 근위축증(PMA), 진행성 연수 마비(PBP) 및 유사연수 마비를 포함하는 운동 뉴런 질환(MND)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 예시적인 신경 퇴행성 질환 또는 상태는 알츠하이머병, 파킨슨 증후군, 루이체 치매(DLB 및 PDD), 혈관성 치매, 전두 측두엽 치매, 중증 대뇌 피질 치매, 경련성 하반 마비 및 에이즈 관련 치매와 같은 치매를 포함한다.
다른 예시적인 신경 퇴행성 질환은 파킨슨병, 척추 근육 위축, 유전성 척추 근육 위축, 샤르코-마리-투스 장애, 케네디 장애 및 소아마비 증후군, 다발성 경화증, 광범성 대뇌 피질 위축, 픽 질환, 시상 변성, 헌팅턴 무도병, 대뇌 피질-척추-척추 변성, 대뇌 피질-기저 신경절 변성, 뇌척수 병 변성, 다당류 신체 질환, 샤이-드래거 증후군, 상반신 위축증, 진행성 핵상 마비, 근긴장 이상증, 할러보든-슈파쯔병, 메이그 증후군, 가족성 수전증, 질드라 투레트 증후군, 유극적혈구증가무도병, 프리드리히 운동 실조증, 홀메스 가족 대뇌 피질 소뇌 위축증, 게르스트만 슈투로이슬러 샤잉커병, 유전성 근육 위축증, 경련 마비, 골수근 위축증, 비대성 간질성 다발성 신경병증, 유전성 다발신경염성 실조, 시신경 위측증을 포함한다. 당업자는 기저 염증 성분이 질환 병리에 기여하는 이들 및 다른 경증, 중등도 또는 중증의 신경 퇴행성 상태가 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있음을 이해한다.
사람들은 혼합 치매-적어도 하나는 치매인 둘 이상의 질환의 조합을 갖는 것이 일반적이다. 예를 들어, 어떤 사람들은 알츠하이머병과 혈관성 치매를 앓고 있으며, FTD의 영향을 받는 소수의 사람들은 운동 뉴런 질환(FTD/MND)(때때로 근위축성 측삭 경화증을 가진 FTD 또는 FTD/ALS라고도 함)을 발병한다. 그러므로, 본 발명에 사용된 "신경 퇴행성 질환"에 대한 언급은 하나 이상의 신경 퇴행성 질환으로 진단되거나 발병될 위험이 있는 대상에 대한 것임을 이해해야 한다.
본 발명에서 상호 교환적으로 사용되는 용어 "환자", "대상" 또는 "개체"는 임의의 대상, 특히 척추 동물 대상, 및 더욱 특히 신경 퇴행성 질환으로 진단되거나 또는 증가된 신경 퇴행성 질환 발병 가능성을 갖는 것으로 확인된 포유 동물 대상을 의미한다. 환자는 근육 피로 또는 기억 상실과 관련이 없는 건강하거나 신경 퇴행성 질환의 예후 징후를 나타낼 수 있다. 대안적으로, 대상은 질환에 대한 유전 적 소인을 가질 수 있다.
"대상"은 일반적으로 인간 대상이지만, 신경 퇴행성 질환 및 상태의 발달 또는 진행의 치료는 말 운동 뉴런 질환에 대한 말, 개 척추 근육 위축에 대한 개의 치료 및 동물 연구 수행에서와 같이 중요할 수 있다. 따라서, 본 발명에서 "환자", "대상" 또는 "개체"에 대한 언급은 인간 및 말, 개 및 고양이와 같은 반려 동물 및 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터, 토끼, 돼지 및 비인간 영장류와 같은 실험실 테스트 동물과 같으나 이에 제한되지 않는 비인간 포유 동물을 포함한다.
본 발명에 사용된 용어 "전신 투여" 또는 "전신으로 투여된" 또는 "전신으로 투여된"은 중추 신경계를 제외하고 대상에게 제제를 도입하는 것을 의미한다. 전신 투여는 척추 또는 뇌로의 직접적인 투여 이외의 임의의 투여 경로를 포함한다. 따라서, 두개골 주사 또는 이식뿐만 아니라 경막내 및 경막외 투여는 "전신 투여", "전신으로 투여된" 또는 "전신으로 투여된"이라는 용어의 범위 내에 있지 않다는 것이 명백하다. 전신 투여는 CNS에서 발생하는 치료 효과를 배제하지 않는 것으로 이해될 것이다.
본 발명에 유용한 약학적 조성물은 예를 들어 정제, 액체, 캡슐, 분말 등과 같은 임의의 허용 가능한 형태로 경구; 정맥 내, 복강 내, 근육 내, 피하 또는 비경구 주사; 경피 확산 또는 전기영동; 및 미니 펌프 또는 다른 이식된 서방형 장치 또는 제제에 의해 전신 투여될 수 있다. 일부 실시태양에 따르면, 전신 투여는 복강 내, 정맥 내, 피하 및 비강 내 투여, 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경로에 의해 수행된다.
본 발명에 사용된 "말초"에 대한 언급은, 예를 들어, 순환계(예를 들어, 심장 혈관계 및 림프계) 및 말초 신경계를 포함하는 mCD14를 발현하는 세포 또는 순환 sCD14가 발견되는 신체의 임의의 부분(CNS의 일부가 아님)을 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체"는 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 물질로 구성된 약학적 비히클을 의미하며, 즉 물질은 임의의 또는 실질적인 부작용을 유발하지 않으면서 선택된 활성제와 함께 대상에게 투여될 수 있다. 담체는 부형제 및 다른 첨가제, 예컨대 희석제, 세제, 착색제, 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 보존제, 형질 감염제 등을 포함할 수 있다.
유사하게, 본 발명에 제공된 바와 같은 화합물의 "약학적으로 허용 가능한" 염, 에스터, 아마이드, 프로드럭 또는 유도체는 이것이 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 염, 에스터, 아마이드, 프로드럭 또는 유도체이다.
용어 "폴리뉴클레오타이드", "유전자 물질", "유전자 형태", "핵산" 및 "뉴클레오타이드 서열"은 RNA, cDNA, 게놈 DNA, 합성 형태 및 혼합 폴리머, 센스 및 안티센스 가닥 모두를 포함하고, 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형되거나 비 천연 또는 유도체화된 뉴클레오타이드 염기를 함유할 수 있다.
"전 염증성 매개체"라는 용어는 염증에 유리한 면역 조절제를 의미한다. 이러한 제제는 케모카인, 인터루킨(IL), 림포카인 및 종양 괴사 인자(TNF)와 같은 사이토카인 및 성장 인자를 포함된다. 특정 구체에서, 전 염증 매개체는 "전 염증성 사이토카인"이다. 전형적으로, 전 염증성 사이토카인은 IL-1α, IL-1β, IL-6 및 TNF-α를 포함하며, 이는 초기 반응을 주로 담당한다. 다른 전 염증성 매개체는 LIF, IFN-γ, IFN-β, IFN-α, OSM, CNTF, TGF-β, GM-CSF, TWEAK, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-8, IL-16, IL-22, IL-23, IL-31 및 IL-32(Tato et al., 2008. Cell 132:900; Cell 132:500, Cell 132:324)를 포함한다. 전 염증 매개체는 내생적 발열원(IL-1, IL-6, IL-17, TNF-α)으로 작용할 수 있으며, 대식세포와 중간엽 세포(섬유아세포, 상피 및 내피 세포 포함)에 의한 이차 매개체와 전 염증성 사이토카인의 합성을 상향 조절하고, 급성기 단백질의 생성을 자극하거나 염증성 세포를 유인한다. 특정 실시태양에서, 용어 "전 염증성 사이토카인"은 TNF-α, IL-1α, IL-6, IFNβ, IL-1β, IL-8, IL-17 및 IL-18에 관한 것이다.
용어 "수용체"는 "리간드"라 불리는 생물 활성 분자에 결합하는 세포 관련 단백질을 의미한다. 이 상호 작용은 세포에 대한 리간드의 영향을 매개한다. 일반적으로, 수용체에 대한 리간드의 결합은 수용체의 형태 변화를 일으켜 수용체와 세포의 표면 또는 세포 내부의 다른 분자(들) 사이의 상호 작용을 야기하여 결과적으로 세포의 신진 대사 변화를 유도한다. 수용체-리간드 상호 작용에 종종 관련되는 대사 사건은 유전자 전사, 인산화, 탈인산화, 사이 클릭 AMP 생산 증가, 세포 칼슘의 이동, 막 지질의 이동, 세포 부착, 이노시톨 지질의 가수 분해, 인지질의 가수 분해 및 세포 경로(예를 들어, 하나 이상의 전 염증성 매개체의 생산 자극 또는 억제)를 포함한다
본 발명에 사용된 용어 "서열 동일성"은 서열이 뉴클레오타이드 대 뉴클레타이드 기준 똔느 아미노산 대 아미노산 기준으로 비교 윈도우에 걸쳐 동일한 정도를 의미한다. 따라서, "서열 동일성 백분율"은 비교 윈도우에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교하고, 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기(예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 두 서열에서 발생하는 위치의 수를 결정하여 일치된 위치의 수를 산출하고, 일치된 위치의 수를 비교 윈도우에서의 총 위치 수(즉, 윈도우 크기)로 나누고 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출하여 계산된다. 본 발명의 목적상, "서열 동일성"은 적절한 방법에 의해 계산된 "일치 백분율"을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 서열 동일성 분석은 첨부된 참조 매뉴얼에 사용된 표준 디폴트를 사용하여 DNASIS 컴퓨터 프로그램(윈도우용 버전 2.5; Hitachi Software engineering Co., Ltd., South San Francisco, California, USA로부터 구입)을 사용하여 수행될 수 있다.
"유사성"은 표 1에 정의된 바와 같거나 보존적 치환을 구성하는 아미노산의 백분율 수를 의미한다.
원래 잔기 예시적 치환
Ala Ser
Arg Lys
Asn Gln, His
Asp Glu
Cys Ser
Gln Asn
Glu Asp
Gly Pro
His Asn, Gln
Ile Leu, Val
Leu Ile, Val
Lys Arg, Gln, Glu
Met Leu, Ile,
Phe Met, Leu, Tyr
Ser Thr
Thr Ser
Trp Tyr
Tyr Trp, Phe
Val Ile, Leu
유사성은 GAP와 같은 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다(Deveraux et al., 1984. Nucleic Acids Res. 12, 387-395). 이러한 방식으로, 본 발명에 인용된 것과 유사하거나 실질적으로 상이한 길이의 서열은 정렬에 갭을 삽입함으로써 비교될 수 있으며, 이러한 갭은 예를 들어 GAP에 의해 사용되는 비교 알고리즘에 의해 결정된다.
둘 이상의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 사이의 서열 관계를 기술하는 데 사용되는 용어는 "참조 서열", "비교 윈도우", "서열 동일성", "서열 동일성 백분율" 및 "실질적 동일성"을 포함한다. "참조 서열"은 길이가 뉴클레오타이드 및 아미노산 잔기를 포함하여 적어도 12, 종종 15 내지 18 및 종종 적어도 25인 단량체 단위이다. 2개의 폴리뉴클레오타이드는 각각 (1) 2개의 폴리뉴클레오타이드 사이에 유사한 서열(즉, 완전한 폴리뉴클레오타이드 서열의 일부만) 및 (2) 2개의 폴리뉴클레오타이드 사이에 분기되는 서열을 포함할 수 있기 때문에, 2개(또는 그 이상) 폴리뉴클레오타이드는 전형적으로 "비교 윈도우"에 걸쳐 2개의 폴리뉴클레오티드의 서열을 비교하여 서열 유사성의 국소 영역을 확인하고 비교함으로써 수행된다. "비교 윈도우"는 적어도 6개의 연속 위치, 일반적으로 약 50 내지 약 100, 더욱 일반적으로 약 100 내지 약 150의 개념적 세그먼트를 의미하며, 여기서 서열은 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후 동일한 수의 연속 위치의 참조 서열과 비교된다. 비교 윈도우는 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 참조 서열(첨가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 약 20% 이하의 첨가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 비교 윈도우를 정렬하기 위한 서열의 최적 정렬은 컴퓨터 알고리즘 구현(GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, WI, USA) 또는 검사 및 선택된 다양한 방법의 하나에 의해 생성된 최상의 정렬(즉, 비교 윈도우에 대해 최고 백분율 상동성을 초래)에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어 Altschul et al., 1997. Nucleic Acids Res. 25:3389에 의해 개시된 바와 같이 BLAST 계열의 프로그램을 참조할 수 있다. 서열 분석에 대한 자세한 논의는 Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology," John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15의 유닛 19.3에서 발견할 수 있다.
본 발명에 사용된 "엄격성"은 혼성화 동안 온도 및 이온 강도 조건, 및 특정 유기 용매의 존재 또는 부재를 의미한다. 엄격성이 높을수록, 서열들 사이에서 관찰된 상보성 정도가 더 높아질 것이다. 본 발명에 사용된 "엄격한 조건"은 높은 비율의 상보성 염기, 바람직하게는 정확한 상보성을 갖는 폴리뉴클레오타이드만이 혼성화되는 온도 및 이온성 조건을 의미한다. 요구되는 엄격성은 뉴클레오타이드 서열 의존적이고 혼성화 동안 존재하는 다양한 성분에 의존하고, 뉴클레오타이드 유사체가 사용될 때 크게 변한다. 일반적으로, 엄격한 조건은 정의된 이온 강도 및 pH에서 특정 순서에 대해 열 융점(Tm)보다 약 10℃ 내지 20℃ 더 낮도록 선택된다. Tm은 표적 서열의 50%가 상보적 프로브에 혼성화되는 온도(정의된 이온 강도 및 pH 하에서)이다. 폴리뉴클레오타이드는 적어도 낮은 엄격성 조건, 바람직하게는 적어도 중간 엄격성 조건, 더욱 바람직하게는 높은 엄격성 조건하에서 표적 서열에 혼성화될 것으로 이해될 것이다. 낮은 엄격성 조건에 대한 본 발명의 언급은 42℃에서의 혼성화를 위해 적어도 약 1% v/v 내지 적어도 약 15% v/v 포름아마이드 및 적어도 약 1M 내지 적어도 약 2M 염, 및 42℃에서 세척을 위해 적어도 약 1M 내지 적어도 약 2M 염을 포함한다. 낮은 엄격성 조건은 또한 65℃에서 혼성화를 위한 1% 소 혈청 알부민(BSA), 1mM EDTA, 0.5M NaHPO4(pH 7.2), 7% SDS 및 (i) 실온에서 세척을 위해 2xSSC, 0.1% SDS; 또는 (ii) 0.5% BSA, 1mM EDTA, 40mM NaHPO4(pH 7.2), 5% SDS를 포함할 수 있다. 중간 엄격도 조건은 42℃에서의 혼성화를 위해 적어도 약 16% v/v 내지 적어도 약 30% v/v 포름아마이드 및 적어도 약 0.5M 내지 적어도 약 0.9M 염, 및 42℃에서 세척을 위해 적어도 약 0.5M 내지 적어도 약 0.9M 염을 포함한다. 중간 엄격 조건은 또한 65%에서 혼성화를 위해 1% 소 혈청 알부민(BSA), 1mM EDTA, 0.5M NaHPO4(pH 7.2), 7% SDS 및 (i) 42%에서 세척을 위해 2 x SSC, 0.1% SDS; 또는 (ii) 0.5% BSA, 1mM EDTA, 40mM NaHPO4(pH 7.2), 5% SDS를 포함할 수 있다. 높은 엄격성 조건은 42%에서 혼성화를 위해 적어도 약 31% v/v 내지 적어도 약 50% v/v 포름아마이드 및 적어도 약 0.01M 내지 적어도 약 0.15M 염 및 42℃에서 세척을 위해 적어도 약 0.01M 내지 적어도 약 0.15M 염을 포함한다. 높은 엄격성 조건은 또한 65℃에서 혼성화를 위한 1% BSA, 1mM EDTA, 0.5M NaHPO4(pH 7.2), 7% SDS 및 (i) 65℃ 초과의 온도에서 2xSSC, 0.1% SDS; 또는 (ii) 0.5% BSA, 1mM EDTA, 40mM NaHPO4(pH 7.2), 1% SDS를 포함한다. 높은 엄격한 조건의 한 실시태양은 약 45℃에서 6 x SSC에서 혼성화를 포함하고 이후 65℃에서 0.2 x SSC, 0.1% SDS에서의 1회 이상의 세척이 뒤따른다. 매우 높은 엄격한 조건의 한 실시태양은 약 65℃에서 0.5M 나트륨 포스페이트, 7% SDS의 혼성화를 포함하고, 65℃에서 0.2 x SSC, 0.1% SDS에서의 1회 이상의 세척이 뒤따른다. 다른 엄격한 조건은 당업계에 주지되어 있다. 당업자는 혼성화의 특이성을 최적화하기 위해 다양한 인자가 조작될 수 있음을 인식할 것이다. 최종 세척의 엄격성의 최적화는 높은 수준의 혼성화를 보장하는 역할을 할 수 있다. 자세한 예는 CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (supra) at pages 2.10.1 to 2.10.16 and MOLECULAR CLONING. A LABORATORY MANUAL (Sambrook et al., eds.) (Cold Spring Harbor Press 1989) at sections 1.101 to 1.104 참조.
본 발명에 사용된 바와 같이, 신경 퇴행성 질환의 "증상"에 대한 언급은 질환을 나타내는 것으로 간주되는 신체적 또는 정신적 특징이다. 비 제한적인 MND- 매개 질환 증상은 진행성 근육 위축, 마비, 경직, 과다 반사, 및 삼키기 어려움, 사지 약화, 언어 장애, 보행 장애, 안면 약화, 호흡기 변화 및 근육 경련과 같은 다른 증상을 포함한다. 비 제한적인 치매 질환 증상은 최근 대화, 이름 또는 사건을 기억하는 데 어려움; 무관심과 우울증(초기 증상), 의사 소통 장애, 판단력 저하, 방향 감각 상실, 혼란, 행동 변화 및 말하기, 삼키기 및 걷기 어려움(후기 증상)을 포함한다. 신경 퇴행성 질환을 나타내거나 관련될 수 있는 다른 증상의 예는 예를 들어 환각, 수면 장애, 운동 증상 및 신경이완제 민감성을 포함한다. 일반적으로, 대상은 질환 및 개별 대상에 따라 하나 이상의 증상을 나타낼 것이다. 특정 신경 퇴행성 질환을 나타내는 것으로 간주되는 증상의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있을 것이다.
본 발명에 사용된 용어 "치료", "치료하는" 등은 치료가 필요한 대상, 즉 신경 퇴행성 질환을 갖거나 신경 퇴행성 질환으로 진단된 대상 또는 신경 퇴행성 질환의 발병 위험이 있는 대상에서 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미한다. "치료"는 다음을 의미한다:
(a) 신경 퇴행성 질환의 발병 및/또는 진행 지연;
(b) 신경 퇴행성 질환의 증상 개선;
(c) 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상을 억제; 및/또는
(d) 삶의 질 향상 또는 연장.
"치료", "치료하다" 또는 "치료하는"은 반드시 대상을 치료하거나 질환 진행을 무기한으로 예방하는 것을 의미하지는 않는다. 대상은 궁극적으로 신경 퇴행성 질환에 굴복할 수 있지만, 질환 또는 상태의 발병이 지연되기 때문에 삶의 질은 치료하지 않은 것보다 더 오랜 기간 연장된다.
성공적인 "치료"의 표시는 완화; 경감; 환자가 더 견딜 수 있는 기억 또는 상태의 감소; 퇴행 속도 또는 질병의 쇠퇴 또는 악화의 감소; 악화의 최종점을 덜 쇠약하게 만드는 것; 또는 피험자의 신체적 또는 정신적 안녕 향상과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터를 포함한다. 증상의 치료 또는 개선은 신체 검사, 신경학적 검사 및/또는 정신과 평가를 포함하는 객관적 또는 주관적 파라미터에 기초할 수 있다.
본 발명에 사용된 바와 같이, 유전자의 이름을 밑줄 또는 이탤릭체로 표시하는 것은 유전자를 나타내며, 이와 반대로 이의 단백질 생성물은 밑줄 또는 이탤릭체가 없는 상태에서 유전자의 이름으로 표시된다. 예를 들어, "CD14"는 CD14 유전자를 의미하는 반면, "CD14"는 "CD14" 유전자의 전사 및 번역 및/또는 선택적인 스 플라이싱으로부터 생성된 단백질 생성물 또는 생성물들을 나타낸다.
본 발명에 기술된 각각의 실시태양은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 각각의 모든 실시태양에 준용된다.
2. 퇴행성 신경 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하기 위한 조성물 및 방법
본 발명은 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행 또는 이의 증상을 치료하기 위한 CD14 길항제 항체를 포함하는 방법 및 조성물을 제공한다.
2.1 CD14 길항제 항체
본 발명은 CD14에 결합하고 CD14에 대한 DAMP 또는 PAMP의 결합을 차단하고 /하거나 CD14에 결합하고 CD14 효현제-매개 반응을 억제 또는 감소시켜 전 염증성 사이토카인의 생산을 포함하여 전 염증성 매개체의 생산을 초래하는 임의의 CD14 길항제 항체(예를 들어, mCD14 또는 sCD14)를 고려한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 CD14 길항제 항체는 CD14 효능제, 적합하게는 DAMP 또는 PAMP의 CD14에 대한 결합을 억제하여 전 염증성 사이토카인의 생산을 억제 또는 감소시킨다. 이러한 유형의 예시적인 예에서, CD14 길항제 항체는 인간 CD14의 아미노산 7 내지 아미노산 14의 영역의 적어도 일부에 포함된 에피토프에 결합하는 3C10 항체(van Voohris et al., 1983. J. Exp . Med . 158: 126-145; Juan et al., 1995. J. Biol . Chem . 270(29): 17237-17242), CD14의 아미노산 57 내지 아미노산 64의 영역의 적어도 일부에 포함된 에피토프에 결합하는 MEM-18 항체(Bazil et al., 1986. Eur . J. Immunol. 16(12):1583-1589; Juan et al., 1995. J. Biol . Chem . 270(10): 5219-5224), 4C1 항체(Adachi et al., 1999. J. Endotoxin Res. 5: 139-146; Tasaka et al., 2003. Am. J. Respir . Cell. Mol . Biol .; 2003. 29(2):252-258)뿐만 아니라 LPS의 결합을 억제하고 전 염증성 사이토카인의 생산을 억제하는 28C5 및 23G4 항체, 및 LPS의 결합을 부분적으로 억제하고 전 염증성 사이토카인의 생산을 억제하는 18E12 항체(U.S. Patent Nos. 5,820,858, 6,444,206 and 7,326,569 to Leturcq et al.)로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 CD14 길항제 항체는 TLR4와 같은 TLR에 대한 CD14의 결합을 억제함으로써, CD14-효현제 매개 반응을 차단하고, 이의 예는 국제 공개 WO2002/42333에 개시된 F1024 항체를 포함한다. CD14 길항제 항체에 관한 상기 참고 문헌 각각은 그 전문이 본 발명에 참조로 포함된다. CD14 길항제 항체는 전장 면역 글로불린 항체 또는 온전한 항체의 항원-결합 단편일 수 있으며, 이의 대표적인 예는 Fab 단편, F(ab')2 단편, VH 및 CH1로 이루어진 Fd 단편, 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, VH 도메인으로 이루어진 단일 도메인 항체 (dAb) 단편(Ward et al., 1989. Nature 341:544-546); 및 단리된 CDR을 포함한다. 적합하게는, CD14 길항제 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체이다.
일부 실시태양에서, CD14 길항제 항체는 미국 특허 제5,820,858호에 개시된 항체로부터 선택된다:
(1) 다음을 포함하는 항체:
다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QSPASLAVSLGQRATISC RASESVDSFGNSFMH WYQQKAGQPPKSSIY RAANLES GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFC QQSYEDPWT FGGGTKLGNQ [SEQ ID NO: 1](3C10 VL); 및
다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LVKPGGSLKLSCVASGFTFS SYAMS WVRQTPEKRLEWVA SISSGGTTYYPDNVKG RFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCAR GYYDYHY WGQGTTLTVSS [SEQ ID NO: 2](3C10 VH);
(2) 다음을 포함하는 항체:
다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QSPASLAVSLGQRATISC RASESVDSYVNSFLH WYQQKPGQPPKLLIY RASNLQS GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYCC QQSNEDPTT FGGGTKLEIK [SEQ ID NO: 3](28C5 VL); 및
다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSIT SDSAWN WIRQFPGNRLEWMG YISYSGSTSYNPSLKS RISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVR GLRFAY WGQGTLVTVSA [SEQ ID NO: 4](28C5 VH); 및
(3) 다음을 포함하는 항체:
다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QTPSSLSASLGDRVTISC RASQDIKNYLN WYQQPGGTVKVLIY YTSRLHS GVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFC QRGDTLPWT FGGGTKLEIK [SEQ ID NO: 5](18E12 VL); 및
다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLT NYDIS WIRQPPGKGLEWLG VIWTSGGTNYNSAFMS RLSITKDNSESQVFLKMNGLQTDDTGIYYCVR GDGNFYLYNFDY WGQGTTLTVSS [SEQ ID NO: 6](18E12 VH);
상기 항체의 VL 및 VH CDR 서열을 포함하는 항체가 또한 고려되며, 이의 대표적인 실시태양은 다음을 포함한다 :
(1) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO: 7](3C10 L-CDR1)을 포함하고; L-CDR2는 서열 RAANLES[SEQ ID NO: 8](3C10 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QQSYEDPWT[SEQ ID NO: 9](3C10 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 SYAMS[SEQ ID NO: 10](3C10 H-CDR1)를 포함하고; H-CDR2는 서열 SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO: 11](3C10H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GYYDYHY[SEQ ID NO: 12](3C10 H-CDR3)를 포함하는 항체;
(2) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO: 13](28C5 L-CDR1)를 포함하고; L-CDR2는 서열 RASNLQS[SEQ ID NO: 14](28C5 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QQSNEDPTT[SEQ ID NO: 15](28C5 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 SDSAWN[SEQ ID NO: 16](28C5 H-CDR1)을 포함하고; H-CDR2는 서열 YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO: 17](28C5 H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GLRFAY[SEQ ID NO: 18](28C5 H-CDR3)를 포함하는 항체; 및
(3) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASQDIKNYLN[SEQ ID NO: 19](18E12 L-CDR1)을 포함하고; L-CDR2는 서열 YTSRLHS[SEQ ID NO: 20](18E12 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QRGDTLPWT[SEQ ID NO: 21](18E12 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 NYDIS[SEQ ID NO: 22](18E12 H-CDR1)를 포함하고; H-CDR2는 서열 VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO: 23](18E12 H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO: 24](18E12 H-CDR3)를 포함하는 항체.
일부 실시태양에서, CD14 길항제 항체는 인간화된다. 이러한 유형의 예시적인 예에서, 인간화 CD14 길항제 항체는 CD14 길항제 항체(예를 들어, 상기 기재된 CD14 길항제 항체 중 하나) 및 인간 수령자 프레임워크에 상응하는 공여자 CDR 세트를 적절하게 포함한다. 인간 수령자 프레임워크는 인간 생식 계열 수령자 프레임워크에 비해 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있으며, 이는 CDR에 인접한 잔기; 글리코 실화 부위 잔기; 희귀 잔기; 표준 잔기; 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기; 버니어 구역 내의 잔기; 및 코티아-정의된 VH CDR1과 카 밧-정의된 제 1 중쇄 프레임 워크 사이에 중첩되는 영역의 잔기를 포함할 수 있다. 인간화된 mAb를 생산하는 기술은 당업계에 주지되어 있다(예를 들어, Jones et al., 1986. Nature 321: 522-525; Riechmann et al. 1988. Nature 332:323-329; Verhoeyen et al., 1988. Science 239: 1534-1536; Carter et al., 1992. Proc . Natl. Acad . Sci . USA 89: 4285-4289; Sandhu, JS., 1992. Crit . Rev. Biotech. 12: 437-462, and Singer et al., 1993. J. Immunol . 150: 2844-2857 참조). 키메라 또는 뮤린 단클론 항체는 마우스 면역 글로불린의 중쇄 및 경쇄에서 마우스 CDR을 인간 항체의 상응하는 가변 도메인으로 전달함으로써 인간화될 수 있다. 키메라 단클론 항체에서 마우스 프레임워크 영역(FR)은 또한 인간 FR 서열로 대체된다. 단순히 마우스 CDR을 인간 FR로 옮기는 것은 종종 항체 친화도의 감소 또는 심지어 상실을 초래하기 때문에, 뮤린 항체의 원래 친화력을 회복시키기 위해 추가의 변형이 필요할 수 있다. 이것은 FR 영역에서 하나 이상의 인간 잔기를 이의 뮤린 대응 물로 대체하여 이의 에피토프에 대한 우수한 결합 친화력을 갖는 항체를 수득함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, Tempest et al. (1991. Biotechnology 9:266-271) and Verhoeyen et al. (1988 supra) 참조. 일반적으로, 뮤린 대응물과 다르고 하나 이상의 CDR 아미노산 잔기에 근접하거나 접촉하는 인간 FR 아미노산 잔기가 치환 후보가 될 수 있다.
바람직한 실시태양에서, CD14 길항제 항체는 IC14 항체(본 발명에 그 전문이 참조로 포함된 (Axtelle et al., 2001. J. Endotoxin Res. 7: 310-314; and U.S. Pat. Appl. No. 2006/0121574) 또는 이의 항원 결합 단편이다. IC14 항체는 인간 CD14에 특이적으로 결합하는 키메라(뮤린/인간) 단클론 항체이다. 이 항체의 뮤린 모는 상기 언급된 28C5이다(Patent Nos. 5,820,858, 6,444,206 and 7,326,569 to Leturcq et al., and Leturcq et al., 1996. J. Clin . Invest. 98: 1533-1538 참조). IC14 항체는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서:
VL 도메인은 아미노산 서열: METDTILLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC[SEQ ID NO : 25]을 포함한다; 및
VH 도메인은 아미노산 서열: MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK [SEQ ID NO : 26]을 포함한다.
2.2 스크리닝 방법
본 발명은 또한 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행의 치료에 사용하기에 적합한 CD14의 길항제 항체의 확인 방법을 제공한다. 이들 방법은 일반적으로 테스트 제제가 CD14를 직접 길항할 수 있는지를 결정하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 테스트 제제가 CD14의 양 또는 효현제 활성을 억제 또는 감소시킬 수 있는지를 결정하는 단계를 필요로 할 수 있으며, 여기서 CD14의 양 또는 효현제 활성을 억제 또는 감소시키는 능력은 테스트 제제가 본 발명에 기술된 바와 같은 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행의 치료에서 사용하기에 적합할 수 있음을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 테스트 제제는 DAMP 또는 PAMP와 같은 CD14 효현제의 존재하에서 CD14 또는 이의 표면상에서 CD14를 발현하는 세포, 또는 CD14가 발현되는 핵산 서열과 적절하게 접촉되며, 여기서 효현제 존재하에서 CD14의 양 또는 효현제 활성의 감소는 대조군과 비교할 때 테스트 제제가 CD14에 결합하고 CD14에 직접 길항 작용한다는 것을 나타낸다. CD14 효현제 활성의 감소 또는 억제는 예를 들어 TLR 신호 전달 경로(예를 들어, TLR4 신호 전달 경로) 및 TRIF 경로와 같은 하류 경로의 활성화를 억제 또는 감소시키는 것, 또는 세포 반응의 유도(예를 들어, 전 염증성 사이토카인을 포함한 염증 매개체의 생산)를 포함한다. 한 실시태양에서, 대상에서 mCD14 내지 sCD14를 발현하는 말초 세포에 대한 길항제 항체의 결합은 질환 병인과 관련된 하나 이상의 전 염증성 사이토카인의 생산을 억제 또는 감소시킨다.
본 발명의 스크리닝 방법은 생체 내, 생체 외 또는 시험관 내에서 수행될 수 있다. 특히, 테스트 제제를 CD14 또는 표면상에서 CD14를 발현하는 세포(예를 들어, 면역 세포)와 접촉시키는 단계는 생체 내, 생체 외 또는 시험관 내에서 수행될 수 있다. 본 발명의 스크리닝 방법은 세포 기반 또는 무 세포 시스템에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 스크리닝 방법은 표면상에서 CD14를 발현하는 세포를 테스트 제제와 접촉시키는 단계 및 세포를 테스트 제제와 접촉시키는 것이 CD14의 효현제 활성의 양 또는 작용을 감소시키는지를 결정하는 단계를 포함할 수 있다.
이러한 세포-기반 분석에서, CD14 및/또는 테스트 제제는 숙주 세포에 내인성일 수 있고, 숙주 세포 또는 조직으로 도입될 수 있고, 발현 구조체 또는 벡터의 발현을 일으키거나 허용함으로써 숙주 세포 또는 조직으로 도입될 수 있거나 세포의 내인성 유전자로부터의 발현을 자극하거나 활성화시킴으로써 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 이러한 세포-기반 방법에서, 세포에서 CD14 발현의 조절을 통해 또는 세포 내에서 CD14 단백질의 불안정화를 통하는 것과 같이 제제가 세포에서 CD14의 양을 변화시키는지 또는 세포의 CD14 효현제 활성을 변화시키는지를 결정하기 위해 테스트 제제의 존재 또는 부재하에서 CD14의 활성량을 평가할 수 있다. 테스트 제제의 존재하에서 세포 표면에서 더 낮은 CD14 효현제 활성의 존재 또는 감소 된 양의 CD14는 테스트 제제가 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상이 있는 개체의 치료에서 본 발명에 따라 사용하기 위한 CD14의 적합한 길항제일 수 있음을 나타낸다.
한 실시태양에서, 이러한 세포-기반 분석은 치료될 환자로부터 유래된 세포 또는 조직에 대해 시험관 내 또는 생체 외에서 수행될 수 있다. 그러므로 테스트 제제가 그 대상의 세포에서 CD14의 활성 또는 양을 감소시킬 수 있는지가 결정될 수 있다. 한 시릿태양에서, 세포는 줄기 세포 또는 대식세포이다.
바람직한 실시태양에서, 상기 방법은 시험 제제가 다른 세포 성분, 적합하게는 CD14의 결합 파트너, 예컨대 세포막 상에서 분비되거나(예를 들어, MD2) 또는 위치된(예를 들어, TLR4) CD14 결합 파트너에 대한 실질적 또는 검출 가능한 결합이 결여되어 있는지를 결정하여 테스트 제제가 CD14의 특이적 길항제임을 결정하는 단계를 더 포함한다. 이러한 유형의 비 제한적 예에서, 테스트 제제는 DAMP 또는 PAMP와 같은 CD14 효현제의 존재하에서 표면에서 CD14를 발현하는 야생형 세포(예를 들어, 대식세포와 같은 면역 세포) 및 (2) CD14 음성 세포(예를 들어, (1)과 동일하지만 CD14 유전자에서 기능 상실을 갖는 면역 세포)와 접촉된다. 테스트 제제가 CD14 음성 세포가 아닌 야생형 세포의 CD14 효현제 활성을 억제하는 경우, 이는 테스트 제제가 CD14 특이적 길항제임을 나타낸다. 이러한 유형의 세포는 일상적인 절차 또는 동물을 사용하여 제작될 수 있다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 스크리닝 방법은 무 세포 분석을 이용할 수 있다. 예를 들어, CD14는 무 세포 환경에 존재할 수 있다. 적절한 무 세포 분석은 세포 추출물에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법의 접촉 단계는 CD14 및/또는 테스트 제제를 발현, 생산 또는 함유할 수 있는 세포로부터 수득된 추출물에서 수행될 수 있다. CD14를 포함하는 무 세포 시스템은 테스트 제제와 같은 본 발명의 방법의 다른 성분과 함께 배양될 수 있다.
본 발명의 방법의 접촉 단계(들)는 다양한 성분의 배양을 포함할 수 있다. 이러한 배양은 임의의 적합한 온도, 전형적으로 4℃ 내지 40℃에서 수행될 수 있다. 배양 기간은 최적의 활성을 위해 선택될 수 있지만, 빠른 고 처리량 스크리닝을 용이하게 하도록 최적화될 수도 있다. 접촉 및 선택적인 배양 단계 후에, 본 발명의 방법은 결합되지 않은 성분을 제거하기 위한 세척 단계를 더 포함할 수 있으며, 이러한 세척 단계는 일반적으로 검출 동안 배경 신호를 야기할 수 있는 방사성 또는 형광 표지된 비특이적 결합 성분과 같은 레이블을 제거하기 위해 필요할 때 사용된다.
세포-기반 또는 무 세포 분석 시스템에서의 배양은 미세적정 플레이트(예를 들어, 96-웰 플레이트 또는 다른 마이크로웰 플레이트)에서 수행될 수 있다. 또한, 배양은 (예를 들어, 고 처리량 스크리닝을 위해) 자동화된 방식으로 수행될 수 있다.
본 발명의 스크리닝 방법은 생체 내에서 수행될 수 있다. 예를 들어, 스크리닝 방법은 동물 모델에서 수행될 수 있다. 이러한 생체 내 모델에서, 테스트 제제의 효과는 순환(예를 들어, 혈액) 또는 다른 기관, 예컨대 간, 신장 또는 심장에서 평가될 수 있다. 적합하게는, 동물은 마우스 또는 래트와 같은 비인간 동물이다. 이러한 모델은 테스트 제제의 생체 내 효과를 평가하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 모델은 테스트 제제가 생체 내 CD14의 활성 또는 양을 감소시킬 수 있는지를 평가하는데 사용될 수 있다. 이러한 방법에서, CD14의 양 및/또는 효현제 활성이 평가될 수 있다.
생체 내 모델은 또한 테스트 제제가 임의의 원치 않는 부작용을 갖는지를 결정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법은 테스트 제제가 특이적인지를 결정하기 위해 CD14에 대한 테스트 제제의 효과를 다른 수용체 또는 세포 성분 (예를 들어, MD2 및 TLR4와 같은 CD14 결합 파트너)에 대한 이의 효과와 비교할 수 있다. MND의 생체 내 동물 모델은 당업자에게 잘 알려져있다.
본 발명에 기술된 생체 내 모델, 또는 본 발명에 기술된 세포-기반 또는 무 세포 분석 모델과 같은 시험관 내 모델에서, CD14에 대한 테스트 제제의 효과는 MD2 및 TLR4와 같은 CD14 결합 파트너를 포함하는 세포 성분에 대한 동일한 제제의 효과와 비교될 수 있다. 상기 논의된 바와 같이, 본 발명에 기재된 바와 같은 치료 및 예방 방법에 사용하기에 바람직한 CD14 길항제 항체는 CD14를 특이적으로 길항하는 항체일 수 있다. 따라서, 본 발명의 스크리닝 방법은 테스트 제제가 하나 이상의 다른 이러한 세포 성분의 활성 또는 양에 영향을 미치는지를 평가하는 추가 단계를 포함할 수 있다. 이러한 방법에서, 테스트 제제는 CD14의 활성 또는 양을 감소시키는 것으로 밝혀지지만, MD2 및 TLR4와 같은 CD14 결합 파트너를 포함하는 하나 이상의 다른 세포 성분의 활성 또는 양을 감소시키지 않거나, 크게 감소시키지 않거나, 변경하지 않거나, 크게 변경하지 않는 경우 적합한 CD14 길항제 항체로 확인될 수 있다.
본 발명에 기재된 스크리닝 방법에서, 테스트 제제의 존재하에 CD14 작용제 활성이 더 낮거나 CD14의 양이 감소하면 테스트 제제가 본 발명에 따라 사용하기에 적합한 CD14의 길항제 항체일 수 있음을 나타낸다. 본 발명은 개체에서 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하기 위한 것이다.
CD14의 길항제인 테스트 제제는 테스트 제제의 부재시와 비교하여 테스트 제제의 존재시에 CD14 활성 또는 수준의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 75% 또는 적어도 85% 이상의 감소를 초래할 수 있다. CD14의 길항제인 테스트 제제는 CD14 효현제 활성 또는 수준의 감소를 초래하여, CD14의 효현제 활성 또는 수준은 테스트 제제 존재시 더 이상 검출될 수 없다. 이러한 감소는 테스트되는 샘플에서 볼 수 있거나 예를 들어 방법이 동물 모델, 특히 순환에서와 같은 동물로부터의 조직 또는 간, 신장 또는 심장과 같은 다른 기관에서 수행되는 경우에 볼 수 있다.
CD14의 길항제인 테스트 제제는 상기한 바와 같이 CD14의 특이적 길항제인 것이 바람직하다. 그러나, 이는 CD14의 특이적 길항제가 표적 외 길항 작용이 전혀 없음을 의미하지는 않는다. 이와 관련하여, CD14의 특이적 길항제는 다른 세포 성분에 대해 무시할 수 있거나 약간의 직접적인 결합 및 효과를 가질 수 있어서, 비 CD14 세포 성분의 활성, 신호 전달 또는 발현의 길항이 CD14의 활성, 신호 전달 또는 발현에 대한 상기 제제의 직접 결합 및 효과의 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만이다.
CD14의 수준 또는 양은 CD14 유전자의 발현을 평가함으로써 측정될 수 있다. 유전자 발현은 mRNA 생산 또는 수준 또는 단백질 생산 또는 수준을 관찰함으로써 평가될 수 있다. mRNA 및 단백질과 같은 발현 생성물은 당업계에 공지된 방법에 의해 확인되거나 정량될 수 있다. 이러한 방법은 혼성화를 이용하여 관심 있는 mRNA를 특이적으로 식별할 수 있다. 예를 들어, 이러한 방법은 PCR 또는 실시간 PCR 접근법을 포함할 수 있다. 관심 있는 단백질을 식별하거나 정량화하는 방법은 그 단백질에 결합하는 항체의 사용을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이러한 방법은 웨스턴 블로팅을 필요로 할 수 있다. CD14 유전자 발현의 조절은 테스트 제제의 존재 및 부재에서 비교될 수 있다. 따라서, 테스트 제제의 부존재시 보이는 수준과 비교하여 CD14 유전자 발현을 감소시키는 테스트 제제가 확인될 수 있다. 이러한 테스트 제제는 본 발명에 따른 CD14의 적합한 길항제일 수 있다.
스크리닝 방법은 CD14의 작용제 활성을 평가할 수 있다. 예를 들어, 이러한 방법은 말초 혈액 단핵 세포를 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 세포는 예를 들어 LPS에 의한 자극에 반응하여 IL-1α, IL-6, TNF-α, IFN-β, IL-1β, IL-17 및 IL-8과 같은 사이토카인을 생산할 것이다. 따라서 스크리닝 방법은 말초 혈액 단핵 세포를 테스트 제제 또는 비히클과 조합하고 LPS를 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 이어서, 세포는 사이토카인과 같은 전 염증성 매개체의 생산을 허용하기 위해 일정 시간(예를 들어, 24시간) 동안 배양될 수 있다. 그 기간에 세포에 의해 생성된 IL-1α, IL-6, TNF-α, IFN-β, IL-1β, IL-17 및 IL-8과 같은 사이토카인의 수준이 평가될 수 있다. 테스트 제제가 항-CD14 특성을 갖는 경우, 이러한 사이토카인의 생산은 비히클-처리된 세포와 비교하여 감소되어야 한다.
테스트 제제가 청구된 방법에 사용하기에 적합한지 확인하기 위해 추가의 테스트가 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 설명된 바와 같이, CD14의 적합한 길항제 항체는 전 염증성 매개체 생산(일반적으로 사이토카인 폭풍이라고도 함)의 유해한 결과를 감소시킬 수 있어야 한다. 따라서, 본 발명의 스크리닝 방법은 상기 논의 된 것과 같은 추가 단계를 포함할 수 있으며, 이는 전 염증성 매개체(예를 들어, ALS를 갖는 것)의 생산에 의해 동물에서 테스트 제제의 효과를 평가하고 그 효과를 테스트 제제의 부존재시 보이는 효과를 비교하는 단계를 필요로 한다. 적합한 CD14 길항제는 테스트 동물에서 신경 퇴행성 질환의 적어도 일부 효과를 개선할 수 있을 것이다.
2.3 보조 항 -신경 퇴행제
지시된 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물은 단독으로 또는 특히 본 발명의 다른 화합물 또는 CD14 길항제에 대항하지 않고 신경퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행의 치료에 효과적인 것으로 개시된 화합물을 포함하는 다른 제제(본 명세서에서 "보조 항-신경 퇴행제"로도 지칭됨)와 병용하여 투여될 수 있다. 루게릭병으로도 알려진 근 위축성 측삭 경화증(ALS), 일차 측삭 경화증, 진행성 근 위축증, 유사 벌지 마비, 진행성 구근 마비 및 하체 운동 뉴런 질환을 포함하는 MND의 경우, 본 발명에서 고려되는 보조 항-신경퇴행제의 비 제한적 예는 리루졸(Miller RG et al. The Cochrane Database of Systematic Reviews. 3: CD001447에 개시됨); CD40 및/또는 CD40 리간드(예를 들어, AT-1502)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 CD40과 CD40 리간드 사이의 상호 작용을 차단하는 제제 및 예를 들어, C5a 수용체 효현제와 같이 보체 경로의 차단제인 항염증제(예를 들어, PMX205 또는 에클리주맙(Lee J.D. et al, (2017) British Journal of Pharmacology, 174(8)을 포함한다. MND용 조합 요법에 사용될 수 있는 다른 제제의 비 제한적 예는 NurOwn 줄기 세포 요법(BrainStorm Cell Therapeutics), GM604, 라디카바(Radicut), 마시티닙, 메만틴 또는 티라셈티브를 포함한다. LBD, FTD 또는 AD와 같은 치매의 경우, 본 발명에서 고려되는 예시적 보조 항-신경퇴행제는 콜린 에스테라제 억제제(예를 들어, 도네페질(Aricept), 리바스티그민(Exelon) 및 갈란 타민(Reminyl and Razadyne)이다. AD에 대해 고려되는 보조 항-신경퇴행제는, 예를 들어, 아리셉트, 라자딘, 나멘다, 엑셀론 및 남자릭으로부터 선택된 승인된 치료제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 기술된 바와 같은 CD14 길항제 항체와의 병용 요법에 사용하기 위한 적절한 보조 항-신경퇴행제의 선택은 당업자의 기술 범위 내에 있을 것이다.
보조 항-신경퇴행제는 신경 퇴행성 질환(예를 들어, MND 및 치매)의 이의 부가적 활성 또는 치료 프로파일, 및 특정 경우에, 본 발명의 화합물과의 조합에 의한 상승 효과를 위해 CD14 길항제 항체와 조합하여 사용될 수 있다.
조합 요법이 필요한 경우, CD14 길항제 항체는 보조제와 함께, 동시에 또는 순차적으로 개별적으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 이는 두 유형의 제제를 모두 포함하는 단일 조성물 또는 약학적 제제를 전신적으로 투여하거나, 또는 2개의 개별 조성물 또는 제제를 동시에 투여함으로써 달성될 수 있으며, 여기서 하나의 조성물은 CD14 길항제 항체 및 다른 보조제를 포함한다. 다른 실시태양에서, CD14 길항제 항체에 의한 치료는 분 내지 일 범위의 간격으로 보조제에 의한 치료 전에 또는 후에 이루어질 수 있다.
CD14 길항제 항체가 보조제에 개별적으로 적용되는 실시태양에서, 일반적으로 각각의 전달 시간 사이에 상당한 시간이 만료되지 않도록 보장하여, CD14 길항제 항체가 보조 제제와 함께 말초 세포(예를 들어, 대식세포, 단핵구, 수지상 세포 또는 T 세포와 같은 면역 세포)에 의한 전 염증성 매개체의 생성을 억제 또는 감소시키는 것을 포함하여 CD14-매개 효과를 억제하는 데 유리하게 조합된 효과를 나타낼 수 있고 특히 질환 또는 이의 증상의 발달을 역전 또는 억제하는 대상의 능력을 유지 또는 향상시킬 수 있다.
일부 상황에서, 서로 약 1-12시간 내에, 보다 적합하게는 서로 약 2-6시간 내에 두 방식을 둘 다 투여할 수 있다. 그러나, 치료 기간을 크게 연장하는 것이 바람직할 수 있으며, 여기서 몇 시간(2, 3, 4, 5, 6 또는 7) 내지 며칠(1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)이 개별 투여 사이에 경과된다. 특정 실시태양에서, 보조제는 CD14 길항제 항체의 투여 전에 투여된다.
보조제가 신경퇴행제 및 치료될 질환 또는 이의 증상에 따라 CD14 길항제 항체에 개별적으로 투여되는 실시태양에서, 보조제는 CD14-길항제 항체에 사용된 투여 방법과 상이한 방법에 의해 투여될 수 있음이 이해될 것인데, 예를 들어, 보조제는 전신적으로 또는 CNS에 직접 투여될 수 있다.
CD14 길항제 항체 또는 보조제의 하나 이상의 투여가 바람직할 것으로 생각된다. CD14 길항제 항체가 "A"이고 보조제가 "B"인 다양한 조합이 사용될 수 있으며, 하기에 예시된다:
A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B B/A/A A/B/B B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/A B/A/A/B B/B/B/A A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/A/B.
2종 이상의 치료제가 "함께" 또는 "동시에" 대상에게 투여되는 경우, 이들은 단일 조성물로 동시에 또는 별개의 조성물로 동시에 또는 별개의 조성물로 별개의 시간에 투여될 수 있다.
본 발명의 방법은 또한 정제, 경구 용액, 패치 또는 정맥 내 주사 또는 다른 비경구 투여 방식을 통한 것과 같은 다른 의학적 중재로 보충되거나 이와 병용하여 실시될 수 있다. 예를 들어, ALS와 같은 폐 기능을 감소시키는 신경 퇴행성 질환에서, 중재는 비 침습적 인공 호흡 장치와 같은 기계적이거나 호흡 곤란을 완화시키기 위해 약물이 사용될 수 있다. 본 방법은 또한 물리 치료, 언어 요법, 심리 요법, 직업 요법을 포함하나 이에 제한되지 않는 비 의료 요법과 조합하여 실시될 수 있다.
2.4 조성물
본 발명에 기술된 바와 같이, 단독으로 또는 보조 항-신경퇴행제와 조합하는 CD14 길항제 항체의 사용은 mCD14를 발현하는 세포와 결합하거나 sCD14에 대한 결합을 통해 및 그 생산의 후유증을 감소시키고, 특히 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행 및 이의 증상을 치료하는 것에 의해 말초 세포로부터 전 염증성 사이토카인을 포함하는 전 염증성 매개체의 생성을 억제하거나 감소시킬 수 있다.
CD14 길항제 항체 및 임의로 보조 항-신경퇴행제는 단독으로 또는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여될 수 있다.
본 발명에 기재된 방법에 사용하기 위해, CD14 길항제 항체는 특히 단백질 활성제와 관련하여 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 안정화제 또는 부형제(비히클)를 사용하여 통상적인 방식으로 제제화되어 당업계에 공지된 바와 같은 약학적 조성물을 형성할 수 있다. 담체(들)는 조성물의 다른 성분과 상용성이고 수령자(예를 들어 환자)에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용 가능"하다. 적합한 담체는 전형적으로 생리 식염수 또는 에탄올 폴리올, 예컨대 글리세롤 또는 프로필렌 글리콜을 포함한다.
항체는 중성 또는 염 형태로 제제화될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염은 산 부가 염(유리 아미노기로 형성됨)을 포함하고 염산 또는 인산과 같은 무기산, 또는 아세트산, 옥살산, 타르타르산 및 말레산과 같은 유기산으로 형성된다. 유리 카복실기로 형성된 염은 또한 무기 염기, 예컨대 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘 또는 수산화 제 2 철 및 아이소프로필아민, 트라이메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘 및 프로카인과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다.
상기 조성물은 정맥 내, 근육 내, 피하 또는 복강 내 투여를 포함하여 전신 투여에 적합하게 제제화될 수 있고, 바람직하게는 수령자의 혈액과 등장성인 항체의 멸균 수용액을 포함한다. 이러한 제제는 전형적으로 염화나트륨, 글리신 등과 같은 생리학적으로 상용성인 물질을 함유하고 생리학적 조건에 적합한 완충된 pH를 가져 수용액을 생성하는 물에 고체 활성 성분을 용해시키고 상기 용액을 멸균시켜 제조한다. 이들은 단위 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰풀 또는 바이알로 제조될 수 있다.
상기 조성물은 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 단백질, 당류(예를 들어 트레할로스), 아미노산, 무기산 및 이들의 혼합물과 같은 안정화제를 포함할 수 있다. 안정화제는 수용액에 적절한 농도 및 pH로 사용된다. 수용액의 pH는 5.0-9.0 범위, 바람직하게는 6-8 범위 내로 조정된다. 항체를 제제화함에 있어서, 항 흡착제가 사용될 수 있다. 다른 적합한 부형제는 전형적으로 아스코르브산과 같은 산화 방지제를 포함할 수 있다. 조성물은 단백질을 착화시키거나 흡수하기 위해 폴리머의 사용을 통해 달성될 수 있는 제어 방출 제제로서 제제화될 수 있다. 제어 방출 제제에 적합한 폴리머는 예를 들어 폴리에스터, 폴리아미노산, 폴리바이닐, 피롤리돈, 에틸렌바이닐아세테이트 및 메틸셀룰로오스를 포함한다. 제어 방출을 위한 또 다른 가능한 방법은 폴리에스터, 폴리아미노산, 하이드로겔, 폴리(락트산) 또는 에틸렌 바이닐아세테이트 코폴리머와 같은 폴리머 물질의 입자에 항체를 혼입시키는 것이다. 대안적으로, 이들 재료를 폴리머 입자에 혼입하는 대신에, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 미세캡슐, 예를 들어 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 또는 콜로이드성 약물 전달 시스템, 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노 입자 및 나노 캡슐 또는 매크로에멀젼에 포획할 수 있다.
CD14 길항제 항체 및 임의로 보조 항-신경퇴행제는 또한 에어로졸 형태로 기도에 직접 투여될 수 있다. 에어로졸로서 사용하기 위해, 용액 또는 현탁액 중 본 발명의 억제제는 적합한 추진체, 예를 들어 프로페인, 부테인 또는 아이소부테인과 같은 탄화수소 추진체를 통상적인 항원보강제와 함께 가입 에어로졸 용기에 포장될 수 있다. 본 발명의 재료는 또한 뉴빌라이저 또는 오토마이저와 같이 비 가압 형태로 투여될 수 있다.
당업자는 제제는 의도된 용도, 즉 투여 경로에 따라 일상적으로 디자인된다는 것을 인식할 것이다.
3. 치료 방법
본 발명은 신경 퇴행성 질환을 앓고 있거나 발병할 위험이 있는(발병에 민감한) 대상을 치료하는 치료 방법을 제공한다. 이들 방법은 인간 및 동물, 예를 들어 수의과 같은 동물에서 신경 퇴행성 질환의 발달 또는 진행의 치료 및 이러한 질환과 관련된 증상의 치료를 포함한다. 이러한 질환은 예를 들어 ALS, PLS, PMA, 진행성 구근 마비(PBP) 및 유사 연수 마비로부터 선택된 MND를 포함한다. 이러한 질환은 예를 들어 알츠하이머병, 루이체 치매(DLB 및 PDD), 전두측두엽 치매(FTD) 및 혈관성 치매를 포함한다.
본 발명은 대상에게 본 발명의 CD14 길항제 항체, 및 선택적으로 보조 항-신경퇴행제를 전신적으로 투여함으로써 대상에서 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하는 방법을 고려한다. CD14 길항제 항체, 및 선택적으로 보조 항-신경퇴행제(본 발명에서 "치료제"라고도 함)는 질환과 관련된 증상의 완화와 같이 대상에서 의도된 목적을 달성하기 위해 "유효량(들)"으로 투여될 수 있다. 환자에게 투여되는 치료제(들)의 투여량은 신경 퇴행성 질환과 관련된 적어도 하나의 증상의 감소와 같이 시간이 지남에 따라 대상에서 유리한 반응을 달성하기에 충분해야 한다.
한 실시태양에서, 질환은 MND이고 진행성 근육 위축, 마비, 경직, 과다 반사, 호흡기 기능 및 삼키기 어려움, 사지 약화, 언어 장애, 보행 장애, 안면 약화, 호흡기 변화 및 근육 경련과 같은 다른 증상으로부터 선택된 적어도 하나의 증상이 감소된다. 한 실시태양에서, 질환은 치매이고 기억 상실; 우울증, 의사 소통 장애, 판단력 저하, 방향 감각 상실, 혼란, 행동 변화, 운동 증상, 환각, 신경이완제 민감성 및 말하기, 삼키기 및 걷기 어려움으로부터 선택된 적어도 하나의 증상이 감소된다.
투여되는 치료제(들)의 양 또는 투여량 빈도는 연령, 성별, 체중 및 일반적인 건강 상태를 포함하여 치료될 대상에 따라 달라질 수 있다. 이와 관련하여, 투여용 치료제(들)의 정확한 양은 의사의 판단에 의존할 것이다. 당업자는 원하는 치료 결과 위해 본 발명의 약학적 조성물에 포함시키기 위해, 일상적인 실험에 의해 유효 비 독성 양의 CD14 길항제 항체, 및 임의로 본 발명에 기술된 보조 항-신경퇴행제를 결정할 수 있다.
일부 실시태양에서, 치료제의 "유효량"은 활성 성분이 의도된 목적을 달성하기에 효과적인 양으로 함유되는 양이다. 보다 구체적으로, 치료 유효량은 신경 퇴행성 질환(예를 들어, ALS 또는 AD)의 증상을 치료하여 치료될 대상의 생존을 연장시키기 위해 하나 이상의 전 염증성 매개체의 생산을 억제 또는 감소시키는 데 효과적인 활성 성분(CD14 길항제)의 양을 의미한다. 치료 유효량의 결정은 특히 본 발명에 제공된 상세한 설명에 비추어 당업자의 능력 내에 있다.
신경 퇴행성 질환을 앓거나 신경 퇴행성 질환을 발병할 위험이 있는 대상은 질병 중증도의 하나 이상의 바이오마커를 갖거나 신경 퇴행성 질환을 발병하는 데 민감성을 가진 환자를 포함한다. 한 실시태양에서, 질환은 MND이고, 바이오마커는 예를 들어 SOD1, TDP-43, FUS, C9ORF72, ALS2, ALS4, ALS8, NEK1, UBQLN2, VCP, SETX, ANG, PFN1, MATR3, CHCHD10, TUBA4A, TBK1, C21orf2 및 OPTN 또는 이의 발현 생성물의 하나 이상으로부터 선택된다. 이 실시태양에서, 신경 퇴행성 질환의 마커의 존재는 마커 유전자(예를 들어, SOD1 , TDP -43, FUS , C9ORF72 , ALS2 , ALS4 , ALS8, NEK1 , UBQLN2 , VCP , SETX , ANG , PFN1 , MATR3 , CHCHD10 , TUBA4A , TBK1 , C21orf2 및 OPTN mRNA 또는 폴리펩타이드)의 발현 생성물의 존재 또는 과발현 및/또는 마커 유전자에서의 돌연변이의 존재를 검출함으로써 적절하게 결정된다. MND에 대한 일부 실시태양에서, TDP-43-양성 개재물의 세포질 침착 및/또는 신경 필라멘트의 상승된 혈청 및/또는 CSF 수준이 또한 결정될 수 있다.
다른 실시태양에서, 질환은 알츠하이머 질환, FTD, LBD (DLB 및 PDD) 및 혈관성 치매를 포함하는 치매이고, 마커는 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 및 프레 세닐린 1 및 2를 암호화하는 유전자의 돌연변이, 아포지단백질 E(APOE) 유전자(APOE-ε4, APOE-ε2, APOE-ε3)의 ε4, 2 및 3 대립 유전자에서의 돌연변이, 골수 세포 2(TREM2) 유전자, MAPT 단백질, PGRN 유전자로도 불리는 GRN 유전자, TARDBP 유전자, VCP 유전자 및 CHMP2B 유전자 상에서 발현되는 트리거링 수용체의 돌연변이의 하나 이상으로부터 선택된다. α-시누클레인, S100A9 및 S100B, 크로 모그라닌, 순환 DNA, 열 충격 단백질 및 아밀로이드의 상승된 혈청 및/또는 CSF 수준이 또한 결정될 수 있다.
다른 실시태양에서, 신경 퇴행성 질환에 걸릴 위험이 있는 대상은 또한 예를 들어 질환과 관련된 하나 이상의 전 염증성 사이토카인, TNF, IL-1-α, IL-6, IFN-β, IL-1β, IL-8, IL-18, C-반응성 단백질(CRP), IL-17, 케모카인, 말초 혈액 단핵세포(PBMC)에서 CD14+-높은 단핵구 및 염증 매개체 mRNA의 증가된 수준의 존재를 결정함으로써 확인될 수 있다. 한 실시태양에서, 질환은 MND이고 사이토카인은 IL-6 또는 IL-17 중 하나 이상으로부터 선택된다. 한 실시태양에서, 질환은 치매이고 사이토카인은 IL-1, IL-6 및 TNF-α로부터 선택된다.
신경 퇴행성 질환의 임의의 공지된 바이오마커가 질환을 갖거나 질환의 위험이 있는 대상을 확인하는 데 사용될 수 있음이 이해될 것이다.
예방제의 투여는 신경 퇴행성 질환의 특징적인 증상이 나타나기 전에 발생할 수 있어서, 질환은 진행이 억제되거나 대안적으로 지연될 수 있다.
본 발명이 용이하게 이해되고 실질적인 효과를 발휘할 수 있도록 하기 위해, 특히 바람직한 실시태양이 이하의 비 제한적인 실시예에 의해 설명될 것이다.
실시예
실시예 1
단클론 항체 IC14의 전신 투여에 의한 MND 환자의 치료 및 예방
실험 디자인
사전 동의한 3년 이내에 MND의 첫 증상을 나타내고 18세 내지 75세인 가족성 또는 산발적 MND(임상적으로 가능하거나, 가망 있고 또는 Awaji-Shima Consensus Recommendations에 의해 명확한 것으로 정의됨)를 갖는 10명의 환자을 모집할 것이다.
투여 요법
환자는 맹검 방식으로 IC14의 2가지 투여 요법 중 하나를 받도록 배정될 것이다: 모든 투여량은 2시간 동안 주입으로 IV로 전달될 것이다:
● 최초 3명의 환자의 경우: 연구 1일에 2mg/kg의 투여량으로 IC14를 투여한 후, 연구 3-5 일에 매일 1회 1mg/kg으로 총 4회 투여하였다.
● 후속 7명의 환자의 경우: 연구 1일에 4 mg/kg의 투여량으로 IC14를 투여한 후, 연구 2-4일에 매일 1 회 2mg/kg을 총 4회 투여하였다.
연구 참여는 연구 약물의 마지막 투여 후 28일까지 계속될 것이다.
제형:
30mL 바이알에 5mg/mL의 IC14를 함유하는 멸균 유리 바이알(전달된 25mL에서 125mg). 연구 약물은 2시간 동안 정맥 내 주입될 주사용으로 250mL 멸균 정상 식염수로 제조할 것이다.
연구 종점:
연구의 주요 종점은 IC14의 안전성, 내약성 및 면역원성의 결여이다. IC14의 안전성과 내약성은 치료로 인한 독성 및 부작용을 검사하여 결정될 것이다. 안전성 매개 변수는 병력 및 신체 검사의 임상 징후 및 증상 평가, 활력 징후, 부작용 및 실험실 소견(Chem-20, CBC, 혈소판 수, 응고 연구)을 포함할 것이다. 면역원성 연구는 IC14에 대한 항체를 측정할 것이다.
이차 종점은 다음과 같다:
● 초기 투여량의 투여 후 피크 혈청 IC14 농도, 치료 과정 후 혈청 IC14 농도 및 피크 뇌척수액 (CSF) 농도 및 초기 투여량의 투여 및 치료 과정 이후 혈청 IC14 농도 대 시간 곡선(AUC) 하의 면적.
● 착석 강제 폐활량(FVC) 및 기타 RFT 매개 변수 및 스니프 비강 압력(SNP) 검사에 의한 호흡 기능에서 개정 근 위축성 측삭 경화증 기능 평가 척도(ALSFRS-R)에 의한 질병 관련 심각도의 치료 관련 변화.
● 개정된 ALS 특이적 삶의 질(ALSSQOL-R) 점수에 의한 삶의 질 및 에딘버러의 인지 및 행동 평가(ECAS) 점수에 의한 인지 기능의 치료 관련 변화.
● CRP, IL-6, IL-17, IL-1β 및 신경 필라멘트 중쇄 및 경쇄를 포함하는 질병 바이오마커 프로파일의 치료 관련 변화.
샘플 수집 및 환자 평가:
표 2에 상세히 기재된 바와 같이 환자로부터 샘플을 수집할 것이다.
샘플 수집
절차 환자 1-3 환자 4-10
바이오마커 분석, 약동학을 위한 요추전자 기준선, 5, 8일 기준선, 4, 8일
약동학을 위한 혈청 기준선, 1, 2, 5, 6, 8일 기준선, 1, 2, 4, 5, 8일
sCD14/sCD14-ST를 위한 혈청, CD14 수용체 포화를 위한 전혈 기준선, 1, 5일 기준선, 1, 4일
바이오마커 분석을 위한 혈청 기준선, 5, 33일 기준선, 4, 32일
항-IC14 항체 역가를 위한 혈청 기준선, 33일 기준선, 32일
혈액학, 화학 및 응고 분석을 위한 혈액 스크리닝, 기준선, 2, 5, 15, 22, 33 스크리닝, 기준선, 2, 4, 15, 22, 32일
ALSFRS-R 평가, ALSSQOL-R 설문 및 ECAS 설문의 완료 기준선, 33일 기준선, 32일
착석 FVC 및 스니프 비강 압력 테스트를 포함하는 RFTs 스크리닝, 5 및 33일 스크리닝, 4 및 32일
틈새 램프 검사 스크리닝, 33일 스크리닝, 32일
데이터 분석
형질 도입 반응 요소(TAR)-DNA 결합 단백질(TDP)-43 및 신경 필라멘트의 혈장 농도를 포함하여 MND 바이오마커가 측정될 것이다. 혈청 및 CSF 신경 필라멘트가 평가될 수 있다.
하나 이상의 평가될 다른 잠재적인 바이오마커는 말초 혈 단핵 세포(PBMC)에서의 CRP, SOD1, IL-1β, IL-6, IL-17, 케모카인, CD14+ 고 단핵구 및 염증 매개체 mRNA 전사체를 포함한다. 혈청 및 CSF는 생체 외에서 염증성 유전자 활성화를 억제하는 능력에 대해 평가될 것이다.
약역학적 평가는 기준선 및 연구 약물의 투여량 1 및 투여량 4 직후에 단핵구 상의 CD14의 포화 및 순환 sCD14의 수준을 측정함으로써 수행될 것이다. 혈청에서 IC14의 약동학적 측정은 기준선; 투여량 1 직후 및 6시간 및 22시간 후; 투여량 4 직후 및 24시간 후; 및 세척에서 수행될 것이다. CSF에서 IC14의 약동학적 측정은 IC14의 네 번째 투여량 후 및 세척 동안 기준선에서 수행될 것이다.
연구 참여는 최종 투여 약물의 28일 후까지 계속될 것이다. 연구 참여는 스크리닝 평가를 위한 최대 4주 플러스 총 32-33일이 될 것이다.
연구 일은 제 1 연구 약물 투여의 시작 시간(연구 일 1)부터 시작하여 연속적인 달력 일로 정의된다. 연구 약물은 제 1 연구 약물 투여 시작 시간(연구 1일)부터 시작하여 대략 24시간 간격(또는 투여된 처음 3명의 환자에 대한 제 1 투여량과 제 2 투여량 사이의 48시간 간격)으로 투여될 것이다.
MND 환자의 혈액 및 CSF에서 IC14의 약동학 및 약력학에 관한 정보는 다음을 포함하도록 수집될 것이다 :
● 초기 투여량의 투여 후 기준선, 피크 및 세척 혈청 IC14 농도 및 치료 과정 후의 기준선, 피크 및 세척 혈청 및 뇌척수액(CSF) 농도.
● 초기 투여량 투여 후 및 치료 과정 후 혈청-IC14 농도 대 시간 곡선(AUC) 아래의 면적.
● 순환 단핵구 CD14 수용체 결합 및 sCD14 ± sCD14-ST(프레세핀) 수준은 기준선, 및 투여량 1 및 투여량 4 후에 계산될 것이다.
말초 혈액 및 CSF에서의 질환 바이오마커 프로파일에서의 치료 관련 변화에 대한 정보는 면역 세포, 염증성 사이토카인 및 케모카인의 수준 및 신경 필라멘트(NF) 중쇄 및 경쇄 수준을 포함하는 다른 바이오마커에서의 변화를 포함한다.
화합물
연구 약물 IC14는 Implicit Bioscience Ltd.(Queensland, Australia)에 의해 공급될 것이다. IC14는 인간 CD14에 대한 재조합 키메라(뮤린/인간) 단클론 항체이다. 뮤린 부모는 28C5로 지정된 항체이다. IC14는 L2H2γ4 면역 글로불린으로서 중국 햄스터 난소 세포로부터 분비된다.
IC14의 전체 투여량, 즉 연구 제 1일에 4mg/kg의 투여량을 투여받고, 연구 일 2-4에 매일 1회 2mg/kg을 총 4회 투여량으로 투여받은 단일 환자에 대한 결과를 수득하였다. 전술한 바와 같이, 요추천자는 기준선 및 연구 4일 및 8일에 수행하였고 CSF를 수집하였다. IL-17 및 IL-1β의 수준을 다중 분석에 의해 측정하고 신경 필라멘트 경쇄(NFL)의 수준을 ELISA에 의해 측정하였다. 도 1에 도시된 바와 같이, IC14에 의한 치료는 8일째 CSF에서 염증성 마커 IL-17 및 IL-1β의 수준의 감소 및 또한 질환의 마커인 NFL의 감소를 초래하였다. IL-17 및 IL-1β는 ALS/MND 환자 및 ALS/MND 질환 모델 둘 다에서 질환과 관련된 반면(Rentzos et al. (2010) Acta Neurol. Scand. 122, 425-9; Fiala et al. (2010) Neuroinflammation 7, 76; Meissner et al. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 13046-13050; van der Meer & Simon. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 12741-2; and Zhao et al. (2015) Exp. Neurol. 273, 24-35), NFL은 신경퇴행의 마커로 기술되었다. MND를 갖는 대상에게 전신적으로 전달될 때 CSF에서 이들 분자의 수준을 조절하는 IC14의 능력은 정맥 내 IC14 치료가 ALS/MND를 일으키는 신경 염증 과정을 억제하는 데 치료적 유용성을 가짐을 나타낸다.
실시예 2
1차 인간 미세아교 세포의 TDP -43-구동 활성화의 IC14 억제.
뇌 및 척수에서의 면역 반응은 주로 방어의 제 1 라인으로서 작용하고 ALS를 포함하는 신경 퇴행성 질환을 유발하는 신경 염증 반응을 개시하고 유지하는 데 중요한 역할을 하는 미세아교 세포에 의해 매개된다(Salter & Stevens (2017) Nat. Med. 23, 1018-1027).
SOD1 및 TDP-43은 ALS에 연루된 세포 내 단백질이다. 마우스 미세아교 세포를 사용하는 생체 외 시스템은 두 단백질이 손상-관련 분자 패턴(DAMPS)으로서 작용하여 미세아교 세포를 활성화시키고, 전 염증성 사이토카인을 유도하고 신경독성을 촉진할 수 있음을 입증하였다. 이들 반응은 TLR 및 NLRP3 신호 전달을 이용하며, DAMP-구동 활성화는 TLR2, TLR4 또는 CD14에 대한 항체를 차단함으로써 억제되며(Zhao et al. (2010) Glia 58, 231-243; Zhao et al. (2015) Exp. Neurol 273, 24?35), 이는 신경 염증의 억제에 있어서 CD14의 봉쇄에 대한 역할을 나타낸다.
1차 인간 미세아교 세포의 성장을 위한 조직 배양 시스템을 사용하여 DAMP TDP-43이 인간 미세 아교 세포를 활성화하는지를 결정하여, 이 활성화 과정의 염증 판독을 식별하고 이를 활성화를 억제하는 IC14의 능력을 평가하였다.
재료 및 방법
시약
IC14는 Implicit Bioscience Ltd(IC14-3, Lot 1-FIN-0779)에 의해 제공되었고, 이 GMP 항체의 활성 및 안정성은 안정성 테스트에 의해 확인하였다. IC14에 대한 대조군으로서, 아이소타입 대조군 인간 IgG4 항체를 Australian Biosearch (Ultra-LEAFTM Purified Human IgG4 Isotype, catalog # 403402)로부터 수득하였다.
야생형 및 돌연변이체(Q331K) 형태로 대장균에서 생산된 재조합 TDP-43은 맥쿼리 대학교, 줄리아 애킨스 부교수에 의해 제공되었다.
미세아교 세포 배양
1차 인간 미세 아교 배양물은 굴리민 등(J. Neurosci. Res. (1997) 49, 576-591)에 의해 기술된 프로토콜의 변형을 사용하여 만들었다. 간단히, 태아의 인간 뇌 조직은 사전 동의를 얻은 후 치료 종료 후 수집된 14 내지 19주령의 유산된 태아를 수집하였다(맥쿼리 대학교의 인간 연구 윤리 위원회에 의해 승인; HREC 5201600719). 이 재료 1g을 24 웰 조직 배양 플레이트(코닝)의 24 웰 사이에 외과 적해부로 균등하게 나누고 5% CO2에서 37℃에서 10% 열 불활성 태아 송아지 혈청(FCS)으로 DMEM에서 5일 동안 배양하였다. 비-미세아교 세포를 2 분 트립신화 단계에 의해 제거한 후, DMEM + FCS로 중화시켜 미세아교 세포를 플레이트에 부착시켰다. 처리 전에 추가 48시간 동안 미세아교 세포를 배양하였다.
미세아교 자극
1주령의 1차 미세아교 배양물을 2시간 동안 다음 농도로 IC14 또는 대조 IgG4 mAb 항체로 전처리하였다: 미처리; 1μg/ml, 100ng/ml 또는 10ng/ml의 최종 농도의 IC14; 최종 농도 1μg/ml, 100ng/ml 또는 10ng/ml에서 IgG4의 대조군.
그런 후에 야생형 또는 돌연변이체 TDP-43을 500ng/ml의 최종 농도로 첨가하였다. 대조군 웰은 TDP-43을 받지 않았다.
배양물을 37℃에서 5% CO2로 48시간 동안 10% 열 불 활성화된 FCS와 함께 DMEM에서 배양하였다. 다중 사이토카인 분석을 위해 상청액을 수집하고 65-플렉스 사이토카인 및 케모카인 어레이(Human Cytokine / Chemokine 65-Plex Panel, Eve Technologies, Calgary, Alberta)를 사용하고 키누레닌 경로 대사 산물의 프로파일 링을 위해 3중으로 분석하였다.
결과
사이토카인/ 케모카인 유도
외부 자극이 없으면, 1차 인간 미세아교 세포는 ALS 환자의 순환 또는 CSF에서 확인된 것들을 포함하여 다양한 사이토카인 및 케모카인을 생성하였다(도 2). 이들 분자의 대부분은 낮은 수준으로 발현되었으나, 가족성 및 산발성 MND 환자에서 돌연변이 된 것으로 나타났고 전 염증 특성을 갖는 것으로 기술된 야생형 또는 돌연변이 TDP-43(Q331K), 단백질로 자극될 때 유의미한 상향 조절을 나타내었다(Zhao et al. (2015) Exp. Neurol. 273, 24-35). Zhao 등의 관찰과 일치하여 미세 아교 세포를 활성화시키는 야생형 또는 돌연변이 TDP-43의 능력에서 최소 차이가 검출되었다. 생산된 사이토카인 및 케모카인은 전 염증성 사이토카인 TNFα, IL1α 및 IL-12p40뿐만 아니라 케모카인 CXCL10 및 CCL5를 포함되는데, 이는 염증 세포의 염증 부위로의 동원을 촉진시키는 역할을 한다(도 2a 및 b). 따라서, TDP-43은 미세 아교 세포의 활성화, 염증 매개체의 국소 생산 및 후속하여 염증성 세포를 신경 손상 부위로 동원함으로써 ALS에서 운동 뉴런 손상을 개시하고 유지할 수 있다.
아이소타입 대조군 항체에 의한 미세아교 배양물의 전처리는 이 TDP-43-구동 사이토카인 생산에 영향을 미치지 않았다. IC14의 포함은 TNFα, IL1α 및 IL-12p40 및 CXCL10의 억제를 포함하여 야생형 및 돌연변이 TDP-43-구동 사이토카인 및 케모카인 생산 둘 다의 용량-의존적 억제를 초래하였다(도 2a 및 b). TDP-43 자극 후 다수의 이들 분석물 발현 수준은 발현 수준의 정확한 특성화를 배제한 표준 곡선(예를 들어, TNFα, CXCL10)의 범위를 넘어서 상승되었다. 그럼에도 불구하고, 사이토카인 또는 케모카인 생산의 억제는 이러한 극한 조건하에서 검출되었으며, 이는 IC14가 보다 생리적인 DAMP-구동 자극 조건을 이용하는 생체 외 분석에서 효과적일 수 있음을 시사한다.
본 발명에 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 공개의 개시 내용은 그 전문이 본 발명에 참조로 포함된다.
본 발명에서의 임의의 참고 문헌의 인용은 이러한 참고 문헌이 본 출원에 "선행 기술"로서 이용 가능하다는 인정으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서 전반에 걸쳐 본 발명의 목적은 본 발명을 임의의 한 실시태양 또는 특정한 특징의 집합으로 제한하지 않고 본 발명의 바람직한 실시태양을 설명하는 것이다. 따라서, 당업자는 본 개시 내용에 비추어, 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 예시된 특정 실시태양에서 다양한 수정 및 변경이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 그러한 모든 수정 및 변경은 첨부된 청구 범위의 범위 내에 포함되도록 의도된다.
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Claims (56)

  1. 막 결합 CD14(mCD14) 또는 가용성 CD14(sCD14)를 말초 세포로부터 전 염증성 매개체의 생성을 억제 또는 감소시키기에 충분한 양의 CD14 길항제 항체와 접촉시키는 단계를 포함하거나 이 단계로 이루어지거나 필수적으로 이루어지는 신경 퇴행성 질환을 앓는 대상의 말초에서 포유 동물 세포로부터 전 염증 매개체의 생산을 억제 또는 감소시키는 방법.
  2. 유효량의 CD14 길항제 항체를 대상에게 전신으로 투여하는 단계를 포함하거나 이 단계로 이루어지거나 필수적으로 이루어지는 대상의 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하는 방법.
  3. 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 발달 또는 진행을 치료하기 위한 CD14 길항제 항체의 용도로서, CD14 길항제 항체는 전신으로 투여되는 용도.
  4. 제 3 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 상기 적용을 위한 의약으로서 제조되는 용도.
  5. 제 2 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 대상의 말초 세포에 의한 하나 이상의 전 염증성 매개체의 생산을 억제 또는 감소시키는 방법 또는 용도.
  6. 제 5 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 mCD14 및 sCD14 둘 다에 결합하는 방법 또는 용도.
  7. 제 1 항, 제 5 항 및 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    말초 세포는 면역 세포인 방법 또는 용도.
  8. 제 7 항에 있어서,
    면역 세포는 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 또는 T-세포로부터 선택되는 방법 또는 용도.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    전 염증성 매개체는 종양 괴사 인자-α(TNF-α), 인터루킨-1(IL-1)-α, IL-6, IFN-γ, IFN-β, IL-1β, IL-8, IL-17 및 IL-18 중 하나 이상으로부터 선택된 사이토카인인 방법 또는 용도.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상이 적절하게는 CD14 길항제 항체를 투여하기 전에 신경 퇴행성 질환을 앓고 있거나 발병할 위험이 있음을 확인하는 단계를 더 포함하는 방법 또는 용도.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    신경 퇴행성 질환 또는 장애는 MND 또는 치매로부터 선택되는 방법 또는 용도.
  12. 제 11 항에 있어서,
    MND는 근 위축성 측삭 경화증(ALS), 원발성 측삭 경화증(PLS), 진행성 근위축증(PMA), 진행성 연수 마비(PBP), 유사 연수 마비로 이루어진 그룹에서 선택되는 방법 또는 용도.
  13. 제 12 항에 있어서,
    MND는 ALS인 방법 또는 용도.
  14. 제 11 항에 있어서,
    치매는 알츠하이머병, 루이체 치매, 전두 측두엽 치매(FTD) 및 혈관성 치매로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법 또는 용도.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 다음으로부터 선택되는 방법 또는 용도:
    (1) 다음을 포함하는 항체:
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSFGNSFMHWYQQKAGQPPKSSIYRAANLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFCQQSYEDPWTFGGGTKLGNQ[SEQ ID NO: 1](3C10 VL); 및
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LVKPGGSLKLSCVASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGTTYYPDNVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARGYYDYHYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO: 2](3C10 VH);
    (2) 다음을 포함하는 항체:
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYCCQQSNEDPTTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO: 3](28C5 VL); 및
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSA[SEQ ID NO: 4](28C5 VH); 및
    (3) 다음을 포함하는 항체:
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QTPSSLSASLGDRVTISCRASQDIKNYLNWYQQPGGTVKVLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQRGDTLPWTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO: 5](18E12 VL); 및
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYDISWIRQPPGKGLEWLGVIWTSGGTNYNSAFMSRLSITKDNSESQVFLKMNGLQTDDTGIYYCVRGDGNFYLYNFDYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO: 6](18E12 VH).
  16. 제 15 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 제 13 항에 정의된 상기 항체의 VL 및 VH CDR 서열을 포함하거나 이 서열로 이루어지거나 필수적으로 이루어지는 방법 또는 용도.
  17. 제 16 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 다음으로부터 선택되는 방법 또는 용도:
    (1) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO: 7](3C10 L-CDR1)을 포함하고; L-CDR2는 서열 RAANLES[SEQ ID NO: 8](3C10 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QQSYEDPWT[SEQ ID NO: 9](3C10 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 SYAMS[SEQ ID NO: 10](3C10 H-CDR1)를 포함하고; H-CDR2는 서열 SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO: 11](3C10H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GYYDYHY[SEQ ID NO: 12](3C10 H-CDR3)를 포함하는 항체;
    (2) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO: 13](28C5 L-CDR1)를 포함하고; L-CDR2는 서열 RASNLQS[SEQ ID NO: 14](28C5 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QQSNEDPTT[SEQ ID NO: 15](28C5 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 SDSAWN[SEQ ID NO: 16](28C5 H-CDR1)을 포함하고; H-CDR2는 서열 YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO: 17](28C5 H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GLRFAY[SEQ ID NO: 18](28C5 H-CDR3)를 포함하는 항체; 및
    (3) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASQDIKNYLN[SEQ ID NO: 19](18E12 L-CDR1)을 포함하고; L-CDR2는 서열 YTSRLHS[SEQ ID NO: 20](18E12 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QRGDTLPWT[SEQ ID NO: 21](18E12 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 NYDIS[SEQ ID NO: 22](18E12 H-CDR1)를 포함하고; H-CDR2는 서열 VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO: 23](18E12 H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO: 24](18E12 H-CDR3)를 포함하는 항체.
  18. 제 17 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 인간화되는 방법 또는 용도.
  19. 제 18 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서:
    VL 도메인은 아미노산 서열: METDTILLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC [SEQ ID NO : 25]을 포함하며; 및
    VH 도메인은 아미노산 서열: MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK [SEQ ID NO : 26]을 포함하는 방법 또는 용도.
  20. 제 19 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 IC14 또는 이의 항원-결합 단편인 방법 또는 용도.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서
    CD14 길항제는 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상을 치료하는 하나 이상의 보조 항-신경퇴행제와 함께 투여되는 방법 또는 용도.
  22. 제 21 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체 및 보조 항-신경퇴행제는 상승적으로 효과적인 양으로 투여되는 방법 또는 용도.
  23. 제 22 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체 및 보조 항-신경퇴행제는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 방법 또는 용도.
  24. 제 23 항에 있어서,
    보조 항-신경퇴행제는 항염증제인 방법 또는 용도.
  25. 제 24 항에 있어서,
    항염증제는 보체 경로 억제제인 방법 또는 용도.
  26. 제 25 항에 있어서,
    보체 경로 억제제는 C5a 억제제인 방법 또는 용도.
  27. 제 26 항에 있어서,
    C5a 억제제는 PMX205 또는 에쿨리주맙인 방법 또는 용도.
  28. 제 23 항에 있어서,
    보조 항-신경퇴행제는 CD40과 CD40 리간드 사이의 상호 작용을 차단하는 제제인 방법 또는 용도.
  29. 제 28 항에 있어서,
    제제는 CD40 및/또는 CD40 리간드에 특이적으로 결합하는 항체인 방법 또는 용도.
  30. 제 29 항에 있어서,
    항체는 AT-1502인 방법 또는 용도.
  31. 제 20 항에 있어서,
    보조 항-신경퇴행제는 리루졸 또는 에다라본인 방법 또는 용도.
  32. 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 함께 CD14 길항제 항체를 포함하거나 이로 이루어지거나 필수적으로 이루어진 신경 퇴행성 질환 또는 이의 증상의 진행 또는 발달을 치료하기 위하나 약학적 조성물로서, 조성물은 전신 투여용으로 제제화되는 약학적 조성물.
  33. 제 32 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 sCD14과 mCD14와 결합하여 대상의 말초 세포에 의한 하나 이상의 염증성 매개체의 생산을 억제 또는 감소시키는 약학적 조성물.
  34. 제 33 항에 있어서,
    세포는 면역 세포인 약학적 조성물.
  35. 제 34 항에 있어서,
    면역 세포는 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 또는 T 세포로부터 선택되는 약학적 조성물.
  36. 제 32 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서,
    전 염증성 매개체는 종양 괴사 인자-α(TNF-α), 인터루킨-1(IL-1)-α, IL-6, IFN-γ, IFN-β, IL-1β, IL-8, IL-17 및 IL-18 중 하나 이상으로부터 선택된 사이토카인인 약학적 조성물.
  37. 제 32 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상이 적절하게는 CD14 길항제 항체를 투여하기 전에 신경 퇴행성 질환을 앓고 있거나 발병할 위험이 있음을 확인하는 단계를 더 포함하는 약학적 조성물.
  38. 제 32 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
    신경 퇴행성 질환 또는 장애는 MND 또는 치매로부터 선택되는 약학적 조성물.
  39. 제 38 항에 있어서,
    MND는 근 위축성 측삭 경화증(ALS), 원발성 측삭 경화증(PLS), 진행성 근위축증(PMA), 진행성 연수 마비(PBP), 유사 연수 마비로 이루어진 그룹에서 선택되는 약학적 조성물.
  40. 제 38 항에 있어서,
    MND는 ALS인 약학적 조성물.
  41. 제 38 항에 있어서,
    치매는 알츠하이머병, 루이체 치매, 전두 측두엽 치매(FTD) 및 혈관성 치매로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  42. 제 32 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 다음으로부터 선택되는 약학적 조성물:
    (1) 다음을 포함하는 항체:
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSFGNSFMHWYQQKAGQPPKSSIYRAANLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFCQQSYEDPWTFGGGTKLGNQ[SEQ ID NO: 1](3C10 VL); 및
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LVKPGGSLKLSCVASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGTTYYPDNVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARGYYDYHYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO: 2](3C10 VH);
    (2) 다음을 포함하는 항체:
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYCCQQSNEDPTTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO: 3](28C5 VL); 및
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSA[SEQ ID NO: 4](28C5 VH); 및
    (3) 다음을 포함하는 항체:
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VL 도메인: QTPSSLSASLGDRVTISCRASQDIKNYLNWYQQPGGTVKVLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDFATYFCQRGDTLPWTFGGGTKLEIK[SEQ ID NO: 5](18E12 VL); 및
    다음 서열을 포함하거나, 이루어지거나 필수적으로 이루어진 VH 도메인: LESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYDISWIRQPPGKGLEWLGVIWTSGGTNYNSAFMSRLSITKDNSESQVFLKMNGLQTDDTGIYYCVRGDGNFYLYNFDYWGQGTTLTVSS[SEQ ID NO: 6](18E12 VH).
  43. 제 42 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 제 10 항에 정의된 상기 항체의 VL 및 VH CDR 서열을 포함하거나 이 서열로 이루어지거나 필수적으로 이루어지는 약학적 조성물.
  44. 제 43 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 다음으로부터 선택되는 약학적 조성물:
    (1) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO: 7](3C10 L-CDR1)을 포함하고; L-CDR2는 서열 RAANLES[SEQ ID NO: 8](3C10 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QQSYEDPWT[SEQ ID NO: 9](3C10 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 SYAMS[SEQ ID NO: 10](3C10 H-CDR1)를 포함하고; H-CDR2는 서열 SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO: 11](3C10H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GYYDYHY[SEQ ID NO: 12](3C10 H-CDR3)를 포함하는 항체;
    (2) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO: 13](28C5 L-CDR1)를 포함하고; L-CDR2는 서열 RASNLQS[SEQ ID NO: 14](28C5 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QQSNEDPTT[SEQ ID NO: 15](28C5 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 SDSAWN[SEQ ID NO: 16](28C5 H-CDR1)을 포함하고; H-CDR2는 서열 YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO: 17](28C5 H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GLRFAY[SEQ ID NO: 18](28C5 H-CDR3)를 포함하는 항체; 및
    (3) a) L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 항체 VL 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 L-CDR1은 서열 RASQDIKNYLN[SEQ ID NO: 19](18E12 L-CDR1)을 포함하고; L-CDR2는 서열 YTSRLHS[SEQ ID NO: 20](18E12 L-CDR2)를 포함하고; L-CDR3은 서열 QRGDTLPWT[SEQ ID NO: 21](18E12 L-CDR3)를 포함한다; 및 b) H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 항체 VH 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 여기서 H-CDR1은 서열 NYDIS[SEQ ID NO: 22](18E12 H-CDR1)를 포함하고; H-CDR2는 서열 VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO: 23](18E12 H-CDR2)를 포함하고; H-CDR3은 서열 GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO: 24](18E12 H-CDR3)를 포함하는 항체.
  45. 제 44 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 인간화되는 약학적 조성물.
  46. 제 45 항에 있어서,
    CD14 항체는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서:
    VL 도메인은 아미노산 서열: METDTILLWVLLLWVPGSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYVNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLQSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC [SEQ ID NO : 25]을 포함하며; 및
    VH 도메인은 아미노산 서열: MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDSAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVRGLRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK [SEQ ID NO : 26]을 포함하는 약학적 조성물.
  47. 제 46 항에 있어서,
    CD14 길항제 항체는 IC14 또는 이의 항원-결합 단편인 약학적 조성물.
  48. 제 31 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서
    약학적 조성물은 보조 항-신경퇴행제를 더 포함하며, 보조제는 질환 또는 이의 증상을 치료하는 약학적 조성물.
  49. 제 48 항에 있어서,
    보조 항-신경퇴행제는 항염증제인 약학적 조성물.
  50. 제 49 항에 있어서,
    항염증제는 보체 억제제인 약학적 조성물.
  51. 제 50 항에 있어서,
    보체 억제제는 C5a 억제제인 약학적 조성물.
  52. 제 51 항에 있어서,
    C5a 억제제는 PMX205 또는 에쿨리주맙인 약학적 조성물.
  53. 제 48 항에 있어서,
    보조 항-신경퇴행제는 CD40과 CD40 리간드 사이의 상호 작용을 차단하는 제제인 약학적 조성물.
  54. 제 53 항에 있어서,
    제제는 CD40 및/또는 CD40 리간드에 특이적으로 결합하는 항체인 약학적 조성물.
  55. 제 54 항에 있어서,
    항체는 AT-1502인 약학적 조성물.
  56. 제 48 항에 있어서,
    보조 항-신경퇴행제는 리루졸 또는 에다라본인 약학적 조성물.
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