KR20200006595A - 심부전 치료를 위한 포르밀 펩티드 수용체 2/리폭신 a4 수용체 (fpr2/alx) 효능제의 신규 용도 - Google Patents

Abstract

본 개시내용은 일반적으로 1-((3S,4R)-4-(2,6-디플루오로-4-메톡시페닐)-2-옥소피롤리딘-3-일)-3-페닐우레아인 화합물 1로 심부전을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

심부전 치료를 위한 포르밀 펩티드 수용체 2/리폭신 A4 수용체 (FPR2/ALX) 효능제의 신규 용도

관련 출원의 상호 참조

본 출원은 2017년 5월 22일에 출원된 미국 가특허출원 번호 62/509,489 (전부 본원에 포함됨)에 대해 35 U.S.C. §119(e)에 따른 우선권을 갖는다.

발명의 배경

심장 질환은 상당한 임상적 및 경제적 부담을 주는 갈수록 만연하는 병태이다. 유병률의 증가는 부분적으로는, 점진적으로 유해한 심장 리모델링 및 좌심실 기능장애를 이끄는 누진적인 심근 손상을 초래하는, 심근경색을 견딘 환자에 의해 이끌린다 (Viau DM et al., Heart, 2015, 101, 1862-7., Paulus WJ., Tschope C., J. Am. Coll. Cardiol., 2013, 62, 263-71). 확장 심근병, 심근염 및 만성 고혈압과 같이 본질적으로 비-허혈성인 병인에 의한 심장 질환은 심부전의 유병률을 증가시킨다. 미국에서 심부전 (HF)은 매년 약 50만명의 새로운 사례와 함께 5백만명 이상의 사람들에게 영향을 끼친다. HF는 65세 이상의 사람들에서 입원의 주요 원인이다. HF는 많은 잠재적 원인 및 다양한 임상 특징을 갖는다. 심부전의 증상은 활동 중 또는 휴식 시 호흡곤란, 흰 가래를 갖는 기침, 빠른 체중 증가, 발목, 다리 및 복부의 붓기, 현기증, 피로 및 허약, 빠르거나 불규칙적인 심장 박동, 구역, 두근거림, 흉통을 포함할 수 있다.

허혈성 및 비-허혈성 심근병증은 HF를 이끌 수 있는 2가지의 상이한 유형의 심장 질환이다. 허혈성 HF는, 일반적으로 관상 동맥 질환으로 인해, 심장 근육으로의 감소된 혈액 공급으로부터 초래되는 상당히 손상된 좌심실 기능을 설명한다. 대조적으로, 비-허혈성 HF는 선천적, 감염제, 자가면역 및 특발적 원인들을 포함하는 다양한 병인을 갖는다. 허혈성 HF와 비-허혈성 HF 간의 분자적 차이를 확인하는 것은 새로운 병인-특이적 치료를 밝힐 수 있다.

임상적으로, HF는 확장기 심부전 (DHF) 및 수축기 심부전 (SHF)의 2가지의 주요 서브세트로 구분될 수 있다. 감소된 박출률을 갖는 심부전 (HF_REF)으로도 공지된 SHF는 심장 이상을 수반하여 심장이 휴식 시 및/또는 격심한 활동 중에 조직을 대사시키는데 필요한 속도로 혈액을 펌핑하지 못한다. 보존된 박출률을 갖는 심부전 (HF_PEF)으로도 공지된 DHF는 HF의 증상 및 징후를 갖는 임상 증후군이다. HF_PEF를 갖는 환자는 수축 시점 (수축기)이 아닌 충전 단계 (이완기) 동안 저하된 심장 심실 성능을 나타낸다. HF_PEF 환자는 심실에서 펌핑되는 혈액에 대해서는 정상적인 박출률을 보이나, 신체로부터 돌아오는 혈액의 효율적인 충전이 가능하도록 심장 근육을 신속히 이완시키지 못한다. HF_REF 및 HF_PEF의 임상적 증상은 위험 요소, 환자 특징 및 병리생리학에서 뚜렷한 차이를 갖는다. 또한, HF_REF에 효과적인 것으로 입증된 약이 HF_PEF에 효과적인 것으로 밝혀지지 않았다. 현재, 심부전 환자의 약 절반이 보존된 박출률을 갖는 심부전 (HF_PEF)을 갖지만, HF_PEF의 사망률을 감소시키기 위한 승인된 치료가 없다. 따라서, HF_PEF를 치료 및 예방하는데 유용한 약제를 찾는 것이 여전히 요구된다.

포르밀 펩티드 수용체 2/리폭신 A₄ (FPR2/ALX)는, 주로 포유동물의 식세포성 백혈구에 의해 발현되고 호스트 방어 및 염증에 중요한 것으로 공지된, 7개의 막횡단 도메인의 G 단백질-커플링된 수용체의 소그룹에 속한다. 심혈관계에서, FPR2/ALX 수용체 및 이의 프로-레졸루션 (pro-resolution) 효능제 둘 다가 죽종형성-플라크 안정화 및 치유를 담당하는 것으로 밝혀졌다 (Petri MH., et al., Cardiovasc. Res., 2015, 105, 65-74; and Fredman G., et al., Sci. Trans. Med., 2015, 7(275); 275ra20). 리폭신 및 FPR2는 또한 감염 질환, 건선, 피부염, 안구 염증, 폐혈증, 통증, 대사/당뇨병 질환, 암, COPD, 천식 및 알러지 질환, 낭포성 섬유증, 급성 폐 손상 및 섬유증, 류마티스 관절염 및 다른 관절 질환, 알츠하이머 질환, 신장 섬유증, 및 기관 이식을 포함하는 만성 염증 인간 질환의 전임상 모델에서 이점을 나타내었다 (Romano M., et al., Eur. J. Pharmacol., 2015, 5, 49-63, Perrett, M., et al., Trends in Pharm. Sci., 2015, 36, 737-755).

최근에, 심근경색 (MI)의 세팅에서 내인성 프로-레졸루션 에이코사노이드 및 펩티드의 사용을 기재하는 다수의 공개된 보고서가 있다 (Dalli et al., Proresolving and tissue-protective actions of annexin A1-based cleavage-resistant peptides are mediated by formyl peptide receptor 2/lipoxin A4 receptor. J. Immunol. 2013 Jun 15;190(12):6478-87; Gobbetti et al., Nonredundant protective properties of FPR2/ALX in polymicrobial murine sepsis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Dec 30; 111(52):18685-90; Heo et al., Formyl peptide receptor 2 is involved in cardiac repair after myocardial infarction through mobilization of circulating angiogenic cells. Stem Cells. 2017 Mar;35(3):654-665; Kain et al., Resolvin D1 activates the inflammation resolving response at splenic and ventricular site following myocardial infarction leading to improved ventricular function. J Mol Cell Cardiol. 2015 Jul;84:24-35; Kain et al, Resolution agonist 15-Epi-Lipoxin A4 directs FPR2 to expedite healing phase post-myocardial infarction FASEB J, 2016 30 (1) S306.2; Perretti et al., Characterizing the anti-inflammatory and tissue protective actions of a novel Annexin A1 peptide. PLoS One. 2017 Apr 13;12(4)). 이들 연구는 마우스에서 심장 구조 및 기능을 개선시키기 위해 수술로 MI가 유도되었을 때 레졸루션 경로가 유도될 수 있음을 입증한다. 이들 연구는 시험 물품이 심근경색 전 또는 심근경색 시에 제공되는 급성 예방 요법의 효과에 중점을 둔다. 급성 치료는 심근경색 후 단일 투여로서 또는 수일에 걸쳐 제공된다. 또한, 이들 연구는 모두가 시험 물품의 투여에 비경구 경로 (즉, 복강내 또는 정맥내)를 이용한다. 현재까지, 심근경색의 세팅에서 사용되는 합성적 소분자 프로-레졸루션 효능제에 대한 단 하나의 보고서가 있다 (Qin et al., Small-molecule-biased formyl peptide receptor agonist compound 17b protects against myocardial ischaemia-reperfusion injury in mice. Nat Commun. 2017 Feb 7;8:14232). 화합물은 심근경색 1일 전에 IP 주사를 통해 1회 제공되었으며 경색 구조 및 심장 기능의 개선을 나타내었다. 이들 보고서에서, 프로-레졸루션 경로를 자극하는 것의 이점은 모두가 허혈성 심장 질환에 대한 모델에서만 예시된다.

FPR2 효능제가 MI 유발 전에 투여되거나 MI 직후에 신속히 투여되는 이전 연구와 달리, 본 발명의 화합물인 1-((3S,4R)-4-(2,6-디플루오로-4-메톡시페닐)-2-옥소피롤리딘-3-일)-3-페닐우레아 (FPR2 효능제, 이하 화합물 1로 지칭됨)는 수 주 동안 경구 투여를 통해 만성 요법으로 제공되었으며, 허혈성 및 비-허혈성 기원의 다수의 심부전 모델에서 개선을 나타내었다. 치료적 이점은 중재적 처치로서 제공되는 경우, 즉 질환 발병 후 예증되었다. 치료적 이점은 예방 처치로서 제공되는 경우에도 관찰된다.

본 발명은 환자에서 심부전을 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 방법은 유효량의 화합물 1 또는 이의 제약상 허용되는 염을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 치료될 심부전은 고혈압, 허혈성 심장 질환, 비-허혈성 심장 질환, 심장독성 화합물에 노출, 심근염, 가와사키 질환, I형 및 II형 당뇨병, 갑상선 질환, 바이러스 감염, 치은염, 약물 남용, 알콜 남용, 심장막염, 죽상동맥경화증, 혈관 질환, 비대 심근병, 확장 심근병, 심근경색, 심방 섬유증, 좌심실 수축기 기능장애, 좌심실 확장기 기능장애, 관상동맥우회로 수술, 심박조율기 이식 수술, 기아, 식사 장애, 근육 퇴행위축, 및 유전적 결함으로부터 발생한다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 치료될 심부전은 수축기 심부전, 확장기 심부전, 감소된 박출률을 갖는 심부전 (HF_REF), 보존된 박출률을 갖는 심부전 (HF_PEF), 급성 심부전, 및 허혈성 및 비-허혈성 기원의 만성 심부전이다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물 1은 경구로 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 심부전은 심근경색으로부터 발생한 HF_REF이고, 화합물은 환자에서 심근경색의 진단 전 또는 후에 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물은 심근경색 후 24시간 또는 48시간에 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물은 매일 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물은 적어도 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 동안 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물의 투여는 좌심실 기능을 개선시킨다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물의 투여는 심근벽의 박형화 (thinning)의 진행을 방지한다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물의 투여는 심근세포 세포사를 억제한다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물의 투여는 경색 크기를 감소시킨다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 심부전은 HF_pEF이다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물의 투여는 심근 상처 치유를 개선시킨다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 화합물의 투여는 심근 섬유증을 약화시킨다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 요법에서 동시, 분리 또는 순차적 사용을 위한 본 발명의 화합물 1 및 추가의 치료제(들)의 조합 제제를 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전의 예방 및/또는 치료가 필요한 환자에서 이에 사용하기 위한 화합물 1 및 이의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 환자에서 심부전의 예방 및/또는 치료를 위한 화합물 1의 용도를 제공한다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 대한 하기의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽는 경우 더 잘 이해될 것이다. 본 발명을 설명하기 위한 목적으로, 현재 바람직한 실시양태가 도면에 나타나 있다. 그러나, 본 발명은 도면에 나타낸 실시양태의 정확한 배열 및 수단으로 제한되지 않는다.
도 1은 화합물 1로 처리된 마우스에서 LV 전방 벽 경색 크기의 용량-의존적 감소를 나타내는 그래프이다. 상부 패널: 경색 크기가 총 LV 면적의 퍼센트로서 제시된다. 하부 패널: MI의 정도를 나타내는 조직학에 의한 대표적인 심장 단면. 비-경색 모의 (sham) 동물을 비교를 위해 나타낸다. 화합물 1; LV, 좌심실; PO, 경구로, QD, 1일 1회.
도 2는 비히클 및 화합물 1로 처리된 마우스의 벽 두께를 나타내는 그래프이다. MI의 전층 (transmural) 벽 두께가 모든 그룹에 대해 조직학적으로 측정되었다. 화합물 1 처리에 의한 경색 벽 두께의 용량-의존적 보존이 모의에 대한 %로서 표시된다. 비히클은 경색되고, 처리 없음을 나타내고; 모의는 비-경색되고, 처리 없음을 나타낸다.
도 3은 비히클 및 화합물 1로 처리된 마우스의 LV 챔버 면적을 나타내는 그래프이다. 좌심실 챔버 면적이 모든 그룹에 대해 심장의 조직학적 단면으로부터 측정되었다. 심근경색에 의해 야기된 좌심실 확장은 비-경색된 모의 마우스에 비해 모든 처리 그룹에 대해 챔버 면적을 증가시켰다. 0.3 mpk 화합물 1로의 처리는 비히클 처리에 비해 LV 챔버 면적을 감소시켰다.
도 4는 화합물 1 및 비히클로 처리된 마우스에서 초기 경색 조성을 나타내는 그래프이다. 좌측 상부: 비히클과 비교된 경색 면적에 대한 화합물 1의 영향. 우측 상부: 비히클과 비교된 경색 콜라겐에 대한 화합물 1의 영향. 좌측 하부: 비히클과 비교된 MMP-2에 대한 화합물 1의 영향. 우측 하부: 비히클과 비교된 TIMP-4에 대한 화합물 1의 영향.
도 5는 화합물 1 및 비히클로 처리된 래트에서 경색 벽 두께의 용량-의존적 보존을 나타내는 그래프이다. MI의 중간 영역에서의 전층 벽 두께가 모든 그룹에 대해 조직학적으로 측정되었으며, 그래프에 나타나 있다. 화합물 1 처리에 의한 경색 벽 두께의 용량-의존적 보존이 비히클에 대한 %로 표시된다. 비히클은 경색되고, 약물 처리 없음을 나타내고; 모의는 비-경색되고, 약물 처리 없음을 나타낸다.
도 6은 화합물 1 또는 비히클로 처리된 래트에서 좌심실 박출률의 개선을 나타내는 그래프이다. 래트의 심장초음파검사는 처리 후 6주에 일어났다. 좌심실 박출률의 개선이 비히클에 비해 화합물 1로 관찰되었다.
도 7은 화합물 1 또는 비히클로 처리된 래트에서 좌심실 심근 구제의 용량-의존적 개선을 나타내는 그래프이다. MI의 중간 영역에서 경색 벽을 가로질러 생존가능한 심근이 모든 그룹에 대해 조직학적으로 측정되었다. 화합물 1 처리에 의한 생존가능한 심근의 보존이 비히클에 대한 %로서 표시된다. 비히클은 경색되고, 약물 처리 없음을 나타낸다.
도 8은 화합물 1 또는 비히클로 처리된 래트에서 좌심실 박출률의 용량-의존적 개선을 나타내는 그래프이다. 심근경색 후 6주에 압력-부피 컨덕턴스 카테터에 의해 측정된 박출률 측정.
도 9는 마우스에서 화합물 1에 의한 심장 섬유증의 퇴행을 나타내는 그래프이다. 섬유증은 안지오텐신 II로 자극되었다. 하부: 조직학.
도 10은 마우스에서 화합물 1에 의한 심장 섬유증의 감소를 나타내는 그래프이다. 섬유증은 알도스테론의 합성 모방체인 데옥시코르티코스테론 아세테이트로 자극되었다.

I. 정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 비록 본원에 기재된 것과 유사하거나 동일한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 시험을 위한 실시에 사용될 수 있지만, 바람직한 물질 및 방법이 본원에 기재된다.

또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하고자 하는 것이고, 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다.

단수 형태는 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나)의 문법적 대상을 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 예컨대, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.

본원에 사용된 "약"은, 측정가능한 값, 예컨대 양, 시간적 기간 등을 지칭할 때, 특정된 값으로부터 ± 20% 또는 ± 10%, 일부 경우에 ± 5%, 일부 경우에 ± 1% 및 일부 경우에 ± 0.1%의 변화를 포함하는 것을 의미하며, 이는 이러한 변화가 개시된 방법을 수행하는데 적합하기 때문이다.

용어 "비정상적인"은, 유기체, 조직, 세포 또는 이의 성분과 관련하여 사용될 때, "정상적인" (예상된) 각각의 특징을 나타내는 유기체, 조직, 세포 또는 이의 성분과 적어도 하나의 관찰가능하거나 검출가능한 특징 (예컨대, 나이, 치료, 시간 등)이 상이한 유기체, 조직, 세포 또는 이의 성분을 지칭한다. 하나의 세포 또는 조직 유형에 대해 정상적이거나 예상되는 특징은 상이한 세포 또는 조직 유형에 대해 비정상적일 수 있다.

본원에 사용된 "심부전"은 정상적인 충전 압력에도 불구하고 심장이 대사 조직의 요구에 상응하는 속도로 산소를 전달하지 못하는 심장 구조 또는 기능의 이상을 지칭한다. 심부전의 근본 원인은 수축기 심실 기능장애 또는 심실 확장기 기능의 이상 때문일 수 있다.

본원에 사용된 "수축기 심실 기능장애" 또는 "수축기 심부전"은 좌심실의 감소된 수축 및 비우기를 지칭한다. 이는 심장 좌심실이 각각의 박동에 대해 충분한 혈액을 신체로 펌핑하지 못하기 때문에 발생한다. 수축기 심부전은 감소된 박출률로 특징지어진다. 따라서, 수축기 심부전은 또한 감소된 박출률을 갖는 심부전으로 분류된다.

본원에 사용된 "확장기 심실 기능장애" 또는 "확장기 심부전"은 좌심실의 비정상적 심장 이완 및 충전을 지칭한다. 이는 심장이 혈액으로 채워질 수 없도록 심장이 적절히 이완하지 않을 때 발생한다. 확장기 심부전은 보존된 박출률로 특징지어지므로, 또한 보존된 박출률을 갖는 심부전로 분류될 수 있다.

본원에 사용된 "감소된 박출률", "감소된 박출률을 갖는 심부전" 또는 "HF_REF"은 50% 이하 및 일반적으로 40% 이하의 박출률을 지칭한다.

본원에 사용된 "보존된 박출률," 또는 "보존된 박출률을 갖는 심부전" 또는 "HF_PEF"는 50% 이상의 박출률을 지칭한다.

본원에 사용된 "급성 비보상성 (decompensated) 심부전" 또는 "ADHF"는 기존 심장 질환을 갖는 환자에서 전형적으로 숨참 (호흡곤란), 부종 및 피로의 증상이 악화되는 것을 지칭한다. ADHF는 급성 호흡 고충의 흔한 잠재적으로 심각한 원인이다.

본원에 사용된 "울혈성 심부전"은 심장이 휴식 시 또는 운동 중에 정상 혈액 출력을 유지하거나 정상적 심장 충전 압력 세팅에서 정상적 심장 출력을 유지할 수 없게 하는 손상된 심장 기능을 의미한다. 약 40% 이하의 좌심실 박출률은 울혈성 심부전을 나타낸다 (비교로써, 약 60%의 박출률은 정상적이다). 울혈성 심부전 환자는 널리 공지된 임상 증상 및 징후, 예컨대 빈호흡, 흉막 삼출, 휴식 시 또는 운동 중 피로, 수축 기능장애 및 부종을 나타낸다.

본원에 사용된 "허혈성 심장 질환"은 산소가 필요한 심근과 산소 공급의 적정성 사이의 불균형으로부터 초래되는 임의의 장애를 의미한다. 허혈성 심장 질환의 대부분의 경우는 죽상동맥경화증 또는 다른 혈관 장애에서 발생하는 것과 같이 관상 동맥의 협소화로부터 초래된다.

본원에 사용된 "좌심실 박출률" 또는 "LVEF"는 박동당 좌심실의 총 혈액량에서 펌핑되는 혈액의 양 또는 퍼센트를 지칭한다. 따라서, 각각의 심장 박동으로 충전된 좌심실에서 펌핑되는 혈액의 퍼센트이다. 일반적으로, LVEF > 55%는 정상이고, 50% 미만은 감소된다. 통상의 기술자는 LVEF를 평가 또는 측정하는 방법에 대해 익숙하다. EF를 측정하는 예시적인 방법은 심장초음파상, 심장 카테터삽입, 자기 공명 영상 (MRI), 컴퓨터 단층촬영술 (CT) 또는 핵 의학 스캔을 포함하나 이로 제한되지 않는다. EF는 일회 박출 부피를 확장기말 부피로 나눔으로써 측정될 수 있다.

본원에 사용된 "확장기"는 좌심실이 혈액으로 충전될 때의 심장 펌핑 주기를 지칭한다. 충전 단계는 심장 근육이 이완되어 혈액이 좌심실로 들어가 충전될 때 발생한다.

본원에 사용된 "수축기"는 혈액이 배출되고 혈액이 심장으로부터 비워질 때의 심장 펌핑 주기를 지칭한다. 비워지는 단계는 심장 근육이 수축되거나 압착되어 혈액을 펌핑하거나 배출할 때 발생한다.

본원에 사용된 "일회 박출 부피"는 각각의 박동으로 심장의 하나의 심실로부터 펌핑되는 혈액의 부피를 지칭한다. 일회 박출 부피는 확장기말 부피 - 수축기말 부피로서 계산된다.

본원에 사용된 "확장기말 부피" 또는 "EDV"는 말기 로드 또는 충전 시 (즉, 확장기) 심실 내의 혈액의 부피를 지칭한다. 따라서, 이는 박동 직전 혈액의 부피이다.

본원에 사용된 "수축기말 부피" 또는 "ESV"는 수축 말기 (즉, 수축기) 및 충전 개시 시 (즉, 확장기) 심실 내의 혈액의 부피를 지칭한다. 따라서, 이는 박동 말에 심실의 혈액 부피이다. ESV는 임상적으로 수축기 기능을 측정하는데 이용될 수 있다. ESV를 평가 또는 측정하는 방법은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 심전도 (T 파의 끝), 심장초음파검사, MRI 또는 CT를 포함하나 이로 제한되지 않는다.

본원에 사용된 "허혈-재관류 손상"은 중단된 혈류를 수반하는 허혈성 사건 동안 산소의 고갈에 이어 재관류 동안 재산소화 및 반응성 산소 종의 동시적 발생에 의해 생화학적으로 특징지어지는 허혈성 사건의 유형이다.

본원에 사용된 "심근경색" 또는 "MI"는 허혈성 질환으로 인해 심근 영역이 반흔 조직에 의해 대체되는 과정을 의미한다.

본원에 사용된 "고혈압"은 의료 전문가 (예컨대, 의사 또는 간호사)에 의해 정상보다 높고 울혈성 심부전 발생에 대해 증가된 위험을 갖는 것으로 간주되는 혈압을 의미한다.

본원에 사용된 용어 급성 관상 증후군 (ACS)은 관상 동맥의 폐색으로부터 발생하는 임의의 증상 그룹을 지칭한다. ACS의 가장 일반적인 증상 촉진 진단은 가슴 통증이며, 종종 왼쪽 팔 또는 턱의 각으로 퍼지고, 성격 상 압박과 유사하며, 구역 및 발한과 연관된다.

본원에 사용된 용어 "심장 질환의 징후 및 증상" 또는 "심부전의 징후 및 증상"은 간단한 관찰 또는 표준 임상 시험에 의해 인식되는 심부전과 연관된 징후 및 증상을 지칭한다. 이는, 개체의 나이 및 가족의 심장 질환 병력과 조합되는 경우, 심장 질환 또는 심부전의 진단으로 이어질 수 있다. 심장 질환의 징후의 예는 호흡곤란, 가슴 통증 (협심증), 두근거림, 실신, 부종, 청색증 및 피로를 포함하나 이로 제한되지 않는다. 이들 중에는 두근거림, 청색증 등과 같이 정량적으로 분석될 수 있는 것들이 있다. 다른 증상은 가슴의 불편함 또는 압박감, 등, 턱, 목구멍 또는 팔로 퍼져 나가는 불편, 충만 또는 섭취, 발한, 구역, 구토, 현기증, 허약 또는 숨참 및/또는 빠르거나 불규칙적인 심장 박동을 포함한다. 심장 질환의 징후 또는 증상을 확인하는 것은 통상의 기술자, 예컨대 치료 의사의 수준에 속한다.

본원에 사용된 "심부전과 연관된 질환 및 병태"는 심부전의 징후 또는 증상과 연관된 임의의 상태를 지칭하며, 심부전의 진단 시험에 의해 확인된다. 심부전에 대한 징후, 증상 및 진단 시험은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 심부전의 증상은 호흡곤란, 발목 부기 또는 피로를 포함하나 이로 제한되지 않는다. 심부전의 징후는 증가된 목정맥압, 폐 악설음 및 변위된 심첨 박동을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 심부전에 대한 진단 시험은 심전도 (EKG)에 의해 결정되는 혈액을 펌핑하는 심장 능력의 이상, 가슴 x-선에 의해 결정되는 확대된 심장, 혈액 중 BNP의 증가된 수준, 심장초음파검사 (메아리)에 의해 결정되는 심장 크기, 모양 또는 혈류의 비정상적 특징, 심장 카테터삽입에 의해 결정되는 심장 챔버에서 압력 및 혈류의 이상, 또는 관상 혈관조영술에 의해 결정되는 혈류의 이상을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 심부전과 연관된 질환 및 병태의 예는 허혈성 심장 질환 (IHD; 관상 심장 질환으로도 불림), 심근경색, 심근병, 고혈압, 심장 판막의 질환, 심장막의 질환 또는 부정맥을 포함하나 이로 제한되지 않는다.

본원에 사용된 "울혈성 심부전의 위험에 있는"은 흡연하거나, 비만이거나 (즉 그들의 이상 체중에 비해 20% 이상), 심장독성 화합물 (예컨대, 안트라사이클린 항생제)에 노출되었거나 노출될 것이거나, 고혈압, 허혈성 심장 질환, 심근경색, 심부전의 위험을 증가시키는 것으로 공지된 유전적 결함, 심부전의 가족력, 심근 비대, 비대 심근병, 좌심실 수축기 기능장애, 관상동맥우회로 수술, 혈관 질환, 죽상동맥경화증, 알콜중독, 심장막염, 바이러스 감염, 치은염, 또는 식사 장애 (예컨대, 신경성 식욕부진 또는 폭식)를 갖거나 (가졌거나), 알콜 또는 코카인 중독인 개체를 의미한다.

본원에 사용된 "심근 박형화의 진행을 감소시키는"은 심실 벽의 두께가 유지되거나 증가되도록 심실 심근세포의 비대를 유지하는 것을 의미한다.

본원에 사용된 "환자"는 심혈관 질환 및 병태의 분야에서 의사에 의해 결정되는 치료에 적합한 심혈관 상태를 갖는 인간을 포함한 포유동물 종을 의미한다.

본원에 사용된 "치료하는" 또는 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환 상태의 치료를 포함하며, (a) 질환 상태를 억제하는 것, 즉 이의 발달을 저지시키는 것; 및/또는 (b) 질환 상태를 완화시키는 것, 즉 질환 상태의 퇴행을 유발하는 것; 및/또는 (c) 질환 상태의 예방을 포함한다. 특히, "치료"는 화합물 1의 투여가 치료가 없을 때 발생하는 질환 진행에 비해 치료 동안 심부전의 진행을 통계학적으로 유의한 방식으로 늦추거나 억제한다는 것을 의미한다. 널리 공지된 표시, 예컨대 좌심실 박출률, 운동 성능 및 다른 임상 시험 뿐만 아니라 생존율 및 입원율이 질환 진행을 평가하는데 사용될 수 있다. 치료가 질환 진행을 통계학적으로 유의한 방식으로 늦추거나 억제시키는지의 여부는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.

본원에 사용된 "예방"은 환자에게 치료 유효량의 화합물 1, 토오토머 또는 이의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 질환 상태의 위험 및/또는 재발 위험을 감소 및/또는 최소화하기 위한 질환 상태의 예방적 처치이다. 환자는 일반적 집단과 비교하여 임상적 질환 상태를 겪을 위험을 증가시키는 것으로 공지된 요소에 기반하여 예방적 요법을 위해 선택될 수 있다. 예방 처치에 대해, 임상적 질환 상태의 병태는 드러나거나 아직 드러나지 않을 수 있다. "예방" 처치는 (a) 1차 예방 및 (b) 2차 예방으로 나뉠 수 있다. 1차 예방은 임상적 질환 상태가 아직 드러나지 않은 환자에서 질환 상태의 위험을 감소 또는 최소화하기 위한 처치로 정의되는 반면, 2차 예방은 동일하거나 유사한 임상적 질환 상태의 재발 또는 2차 발생의 위험을 최소화 또는 감소시키는 것으로 정의된다.

본원에 사용된 "위험 감소"는 임상적 질환 상태의 발생률을 낮추는 요법을 포함한다. 따라서, 1차 및 2차 예방 요법은 위험 감소의 예이다.

II. 화합물 및 제약 조성물

본 발명은 심부전을 갖는 환자를 치료하기 위한 화합물 1, 조성물 및 방법에 관한 것이다. 방법은 화합물 1, 토오토머 또는 이의 제약상 허용되는 염을 심부전을 치료하기 위한 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

화합물 1은 하기 구조를 갖는 1-((3S,4R)-4-(2,6-디플루오로-4-메톡시페닐)-2-옥소피롤리딘-3-일)-3-페닐우레아이다:

화합물 1

화합물은 WO 2015/079692 A1 및 이의 미국 등가물, 미국 공개 번호 2017/0066718 (전부 참조로 본원에 포함됨)에 개시되어 있다.

이론에 구애됨이 없이, 본 발명은 부분적으로 화합물 1이 화학주성 및 포식작용을 매개하고, 경색 크기를 감소시키고, 심근 세포 생존을 개선시키고, 심실 벽 두께를 보존하고, 상처 치유를 증진시키고, 심근경색 후 좌심실 박출률을 개선시킨다는 발견에 기초한다. 또한, 본 발명은 부분적으로 화합물이 또한 비-허혈성 기원의 심장 섬유증을 감소시킬 수 있다는 발견에 기초한다.

심부전의 치료 또는 예방은 또한 심혈관 사건이 치료 또는 예방을 포함할 수 있음을 이해할 것이다. 본원에서 언급되는 치료 또는 예방은 심혈관 사건의 결과로서 이와 연관되거나 발생하는 특정한 부정적 증상 또는 상태의 치료 또는 예방을 지칭할 수 있다. 예컨대, 치료 또는 예방은, 심혈관 사건의 결과로서 이와 연관되거나 발생하는, 분획 단축, 심장 중량, 폐 중량, 근육세포 단면적, 압력 과부하 유발된 심장 섬유증, 스트레스 유발된 세포 노화 및/또는 심장 비대 특성, 또는 이의 조합의 부정적인 변화를 감소 또는 방지하는 것을 포함할 수 있다. 치료는 부정적 효과를 경감시키기 위해 심혈관 사건에 대비하여 또는 이에 반응하여 투여될 수 있다. 예방은 심혈관 사건을 방지하기 위해 또는 심혈관 사건의 부정적 효과의 개시를 감소시키기 위한 적극적인 또는 예방적인 유형의 처치를 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명은 심부전, 예컨대 고혈압, 허혈성 심장 질환, 비-허혈성 심장 질환, 심장독성 화합물에 노출, 심근염, 가와사키 질환, I형 및 II형 당뇨병, 갑상선 질환, 바이러스 감염, 치은염, 약물 남용, 알콜 남용, 심장막염, 죽상동맥경화증, 혈관 질환, 비대 심근병, 확장 심근병, 심근경색, 심방 섬유증, 좌심실 수축기 기능장애, 좌심실 확장기 기능장애, 관상동맥우회로 수술, 심박조율기 이식 수술, 기아, 식사 장애, 근육 퇴행위축, 및 유전적 결함으로부터의 심부전 결과의 치료 또는 예방용의 제약 조성물의 제조를 위한 화합물 1 또는 이의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 바람직하게는, 치료될 심부전은 확장기 심부전, 감소된 박출률을 갖는 심부전 (HF_REF), 보존된 박출률을 갖는 심부전 (HF_PEF), 급성 심부전, 및 허혈성 및 비-허혈성 기원의 만성 심부전이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 수축기 및/또는 확장기 기능장애를 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 심장 근육 세포가 수축 및 이완하는 능력을 증가시켜 우심실 및 좌심실 둘 다, 바람직하게는 좌심실의 충전 및 비우기를 증가시키기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전을 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 좌심실의 박출률을 증가시키기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전을 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 심장 조직의 비대를 감소시키기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전을 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 심근벽 박형화의 진행을 방지하기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전을 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 심근세포 세포사를 억제하기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전을 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 경색 크기를 감소시키기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심부전을 치료하기 위한 화합물 1의 용도를 제공하며, 여기서 화합물 1은 심장 조직의 섬유증을 감소시키기 위한 치료 유효량으로 투여된다.

본 발명은 화합물 1의 모든 제약상 허용되는 염 형태를 포함한다. 제약상 허용되는 염은 반대 이온이 화합물의 생리학적 활성 또는 독성에 크게 기여하지 않아 약리학적 등가물로서 기능하는 것이다. 이들 염은 상업적으로 이용가능한 시약을 사용하여 일반적인 유기 기술에 따라 제조될 수 있다. 일부 음이온성 염 형태는 아세테이트, 아시스트레이트, 베실레이트, 브로마이드, 클로라이드, 시트레이트, 푸마레이트, 글루쿠로네이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로아이오다이드, 아이오다이드, 락테이트, 말레에이트, 메실레이트, 니트레이트, 파모에이트, 포스페이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 크시노포에이트를 포함한다. 일부 양이온성 염 형태는 암모늄, 알루미늄, 벤자틴, 비스무트, 칼슘, 콜린, 디에틸아민, 디에탄올아민, 리튬, 마그네슘, 메글루민, 4-페닐 시클로헥실아민, 피페라진, 칼륨, 나트륨, 트로메타민 및 아연을 포함한다.

본 발명은 치료 유효량의 화합물 1 및 제약상 허용되는 담체로 구성된 제약 조성물을 제공한다. 용어 "제약 조성물"은 적어도 하나의 추가의 제약상 허용되는 담체와 조합하여 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물을 의미한다. "제약상 허용되는 담체"는, 투여 모드 및 용량 형태의 특성에 따라, 즉 보조제, 부형제 또는 비히클, 예컨대 희석제, 보존제, 충전제, 유동 조절제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 감미제, 향미제, 퍼퓸제, 항세균제, 항진균제, 윤활제 및 분배제를 포함하는, 동물, 특히 포유동물에게 생물학적 활성제의 전달을 위해 관련 기술분야에서 일반적으로 허용되는 매질을 의미한다. 이들 제제는 다양한 이유, 예컨대 활성제, 결합제 등의 안정화를 이유로 제형에 포함된다. 제약상 허용되는 담체는 수성 및 비-수성 매질 둘 다 뿐만 아니라 다양한 고형 및 반-고형 용량 형태를 포함한다. 적합한 제약상 허용되는 담체 및 그들의 선택과 관련된 요소에 대한 설명은 다양한 쉽게 이용가능한 정보원, 예컨대 문헌 (Allen, Jr., L.V. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 Volumes), 22nd Edition, Pharmaceutical Press (2012))에서 찾을 수 있다. "치료 유효량"은 심혈관 질환 및 병태의 분야에서 의사에 의해 이해되는 바와 같이 의미있는 환자 이익을 제공하는데 필요한 약제의 양을 의미한다.

조성물은 캡슐, 정제, 로젠지 및 산제 뿐만 아니라 액상 현탁제, 시럽, 엘릭서 및 용액제를 포함하는 모든 일반적인 고상 및 액상 형태를 포함한다. 조성물은 일반적인 제형화 기술을 이용하여 제조되며, 통상적인 부형제 (예컨대, 결합제 및 습윤제) 및 비히클 (예컨대, 물 및 알콜)이 일반적으로 조성물에 사용된다. 예컨대, 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 22^nd edition, Mack Publishing Company, Easton, PA (2013))을 참조한다.

제약상 허용되는 담체는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 범위 내에서 많은 요소에 따라 제형화된다. 이들은 제한없이 제형화되는 활성제의 유형 및 특성; 약제-함유 조성물이 투여될 대상체; 조성물의 의도된 투여 경로; 및 표적되는 치료 징후를 포함한다.

투여에 적합한 제약 조성물은 용량 단위당 약 0.1 밀리그램 내지 약 2000 밀리그램의 활성 성분을 함유할 수 있다. 이들 제약 조성물에서, 활성 성분은 일반적으로 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.1-95 중량%의 양으로 존재할 것이다.

제형 중 화합물 1의 농도는 투여 시 의도된 치료에 효과적인 양의 전달에 효과적이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원의 방법에 따라 투여하기 위한 조성물을 용이하게 제형화할 수 있다. 예컨대, 조성물을 제형화하기 위해, 화합물 또는 이의 혼합물의 중량 분획이 심부전이 개선되기에 효과적인 농도로 선택된 비히클에 용해, 현탁, 분산 또는 달리 혼합된다.

투여되는 치료제의 정확한 양 또는 용량은 투여 경로 및 다른 고려 사항, 대상체의 체중 및 일반적인 상태 및 대상체의 심부전 상태에 의존한다. 치료제의 국소 투여는, 치료제의 국소 농도가 일부 경우에 전신 투여 시 안전하게 달성될 수 있는 것보다 국소 투여 후 더 높을 수 있지만, 전형적으로 임의의 전신 투여 방식보다 더 적은 용량을 요구할 것이다. 본원에서의 방법에 대해, 화합물 1은 일반적으로 경구 투여된다.

III. 투여 및 투여 요법

본원에서의 방법에서, 화합물 1은 심부전 및 특히 심부전과 연관된 임의의 질환 또는 병태를 치료하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 화합물 1은 단독 제제로서 또는 기계 장치 또는 약리학적 약물을 포함하는 다른 치료 방법과 함께 사용하는 것이 의도되며, 혈압을 낮추거나 달리 심부전 및/또는 심장 기능장애를 치료할 수 있다.

활성제, 예컨대, 화합물 1은 치료되는 환자에게 바람직하지 않은 부작용 없이 치료적으로 유용한 효과를 발휘하기에 충분한 양으로 포함된다. 심부전 치료, 예컨대 HF_PEF를 갖는 환자를 치료하기 위해 투여될 화합물 1의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 또한, 최적의 용량 범위를 확인하는 것을 돕기 위해 시험관내 검정 및 동물 모델을 사용할 수 있다. 경험적으로 결정될 수 있는 정확한 용량은 특정 조성물, 투여 경로, 치료될 질환의 유형 및 질환의 심각함에 의존할 수 있다.

화합물 1은 본원에 기재된 간격으로 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여되어 임의의 독성 없이 심장 기능에 장기간 지속되는 효과를 생성한다. 일부 예에서, 화합물 1로의 치료 방법은 지속적인 치료 효과를 달성하기 위해 더 긴 작용 지속기간을 필요로 한다. 이는 특히 만성 심부전 치료에서 그러하다. 따라서, 본원에 기재된 화합물 1은 심장 장애에 대한 더 오래 지속되는 요법을 전달하는데 사용될 수 있다.

필요한 경우, 특정 용량 및 지속기간 및 치료 프로토콜을 경험적으로 결정하거나 기존의 자료에 기초하여 추정할 수 있다. 예컨대, 화합물 1을, 필요한 경우, 특정 대상체 및 상태에 대한 적절한 용량을 결정하기 위한 출발점으로 사용할 수 있다. 치료 지속기간 및 주사 간격은 질환 또는 병태의 중증도 및 치료에 대한 대상체의 반응에 따라 달라질 것이며, 이에 따라 조정될 수 있다. 용량을 결정할 때 화합물의 활성 수준 및 반감기와 같은 요소를 고려할 수 있다. 특정 용량 및 요법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 경험적으로 결정될 수 있다.

화합물 1의 투여 요법은 물론 공지된 요소, 예컨대 특정 약제의 약력학적 특성 및 이의 투여 방식 및 투여 경로; 수혜자의 종, 나이, 성별, 건강, 건강 상태 및 체중; 증상의 특성 및 정도; 동시 치료의 종류; 치료 빈도; 투여 경로, 환자의 신장 및 간 기능, 및 목적하는 효과에 따라 변할 것이다.

화합물 1로의 질환 및 병태의 치료는 주사, 폐, 경구 및 경피 투여를 포함하나 이로 제한되지 않는 본원에 기재된 적합한 제형을 사용하는 임의의 적합한 투여 경로에 의해 수행될 수 있다. 치료는 전형적으로 경구 투여에 의해 수행된다.

필요한 경우, 특정 용량 및 지속기간 및 치료 프로토콜을 경험적으로 결정하거나 기존의 자료에 기초하여 추정할 수 있다. 이전에 인간 대상체에게 투여되고 임상 시험에 사용된 FPR2 효능제에 대한 용량은 화합물 1의 용량을 결정하기 위한 지침으로서 사용될 수 있다. 화합물 1에 대한 용량은 또한 관련 동물 연구로부터 결정되거나 기존의 자료에 기초하여 추정될 수 있다. 화합물 1의 활성 수준 및 반감기와 같은 요소가 이러한 결정에 사용될 수 있다. 특정 용량 및 요법은 다양한 요소에 기초하여 경험적으로 결정될 수 있다. 이러한 요소는 개체의 체중, 일반적인 건강, 나이, 사용되는 특정 화합물의 활성, 성별, 식이, 투여 시간, 배설 속도, 약물 조합, 질환의 중증도 및 경과, 및 질환에 대한 환자의 의향 및 치료 의사의 판단을 포함한다. 활성 성분인 화합물 1은 전형적으로 제약상 효과적인 담체와 배합된다. 단일 투여 형태 또는 다중 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 호스트 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 수 있다.

특정 예에서, 화합물 1은 약 0.01 내지 100 mg/kg 환자 체중, 예컨대 0.05 내지 50 mg/kg 환자 체중, 예컨대 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.1 내지 20 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 40 mg/kg의 용량으로 환자에게 투여하기 위해 제형화된다.

심부전을 갖는 환자에서 목표는 용량을 가능한 한 가장 적은 부피로 투여하는 것이다. 전형적으로, 투여되는 부피는 대상체의 kg당 4.0 mL 이하이다. 예컨대, 용량이 대상에게 투여되는 부피는 0.4 mL/kg 내지 4.0 mL/kg일 수 있다. 예컨대, 100 mg/kg의 용량으로 100 kg의 대상체에게 투여되는 22.5%의 농도 (즉, 225 mg/mL)의 조성물은 그 용량을 달성하기 위해 약 44 mL의 부피 또는 약 0.4 mL/kg을 필요로 할 것이다.

일반적 지침으로, 각각의 활성 성분의 1일 경구 용량은, 지시된 효과에 사용되는 경우, 약 0.001 내지 약 5000 mg/일, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 1000 mg/일, 및 가장 바람직하게는 0.1 내지 약 250 mg/일의 범위일 것이다. 화합물 1은 단일 1일 용량으로 투여될 수 있거나, 총 1일 용량은 1일 2, 3 또는 4회의 분할 용량으로 투여될 수 있다.

투여 주기의 기간은 경험적으로 결정될 수 있고, 치료될 질환, 질환의 중증도, 특정 환자 및 치료 의사의 기술 수준 내의 다른 고려 사항에 의존한다. 화합물 1로의 치료 기간은 1일, 1주, 2주, 1개월, 수 개월, 1년, 수 년 또는 그 초과일 수 있다. 질환 증상이 중단된 치료 부재 하에서도 지속되면 치료를 추가의 기간 동안 계속할 수 있다. 치료 과정에서 질환 및/또는 치료-관련 독성 또는 부작용의 증거를 모니터링할 수 있다.

또한, 투여 주기는 치료 노출로부터 휴식 기간을 제공하기 위해 중단된 치료 기간을 추가하도록 맞춤화될 수 있다. 치료 중단을 위한 기간은 미리 결정된 시간 동안 일 수 있거나, 환자가 어떻게 반응하는지 또는 관찰된 부작용에 따라 경험적으로 결정될 수 있다. 예컨대, 치료는 1주, 2주, 1개월 또는 수 개월 동안 중단될 수 있다.

효과적인 치료는 박출률 증가, 확장기 및/또는 수축기 기능 증가, 혈역학 개선, 염증성 시토카인 수준 및 신경호르몬 수준 감소, 염증 마커 감소, 손상 마커 감소, 혈소판 응집 억제, 내피 기능 개선, 부정맥 감소 및 심박수 가변성 개선, QRS 분산 및 QTC 연장 개선, 및 면역 반응성 개선에 의해 제시될 수 있으며, 이들 모두 공지되고 이용가능한 시험 방식으로 통상의 기술자에 의해 시험될 수 있다.

급성 심부전과 관련된 치료의 경우, 투여는 일반적으로 환자가 병원에 입원할 때 시작할 것이지만 입원 중 환자의 요구를 충족시키기 위해 언제든지 시작될 수 있다. 보다 일반적으로, 투여는 입원한지 처음 72시간 동안 개시할 수 있다. 예컨대, 투여는 심근경색 진단, 혈관 손상 발생 또는 외과적 수술 후 24시간 또는 48시간에 시작할 수 있다. 만성 심부전의 경우, 이러한 대상체는 일반적으로 입원하지 않기 때문에, 투여는 피험자의 필요에 따라 제공된다. 예컨대, 치료는 심부전 진단 후 1일 및 7일에 시작될 수 있다.

화합물 1은 다양한 용량으로 매일 1-2주 간격, 2-3주 간격, 3-4주 간격, 4-5주 간격 또는 5-6주 간격으로 투여될 수 있다. 다른 요법에서, 투여 사이의 간격은 시간이 지남에 따라 증가될 수 있으며, 이에 따라 제2 투여는 제1 투여 후 1-6일, 1-2 또는 2-3주에 투여되고, 제3 투여는 제2 투여 후 1-6일, 1-2 또는 2-3주에 투여되고, 제4 투여 및 임의의 후속 투여는 이전 투여 후 1-6일, 1-2 또는 2-3주에 투여된다. 본원에 기재된 것들과 같은 표준 파라미터에 의해 평가되는 바와 같이, 심장의 성능이 개선됨에 따라, 용량은 환자의 요구에 따라 하향 적정될 수 있다.

IV. 조합

본 발명의 화합물 1은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제(들), 예컨대 심부전 치료에 사용되는 약제 또는 다른 제약 활성 물질과 조합하여 사용될 수 있다. "조합 투여"또는 "조합 요법"은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가 치료제가 치료되는 포유 동물에게 공동으로 투여됨을 의미한다. 조합하여 투여될 때, 각각의 성분은 상이한 시점에서 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 따라서, 각각의 성분은 목적하는 치료 효과를 제공하기 위해 개별적으로 그러나 시간적으로 충분히 밀접하게 투여될 수 있다.

화합물 1을 사용하는 치료 요법과 함께 투여하기 위한 추가의 부가적 치료를 선택하는 것은 통상의 기술자의 수준 내에 있다. 이러한 결정은 치료되는 특정 질환 또는 병태, 치료되는 특정 대상체, 대상체의 나이, 질환 또는 병태의 중증도 또는 기타 요소에 따라 달라질 것이다.

화합물 1은 하기를 포함하는 다른 FPR2 효능제 또는 상기 언급된 장애의 치료에 유용한 하나 이상의 다른 적합한 치료제와 조합하여 사용될 수 있다: 심부전 치료를 위한 다른 약제, 근육수축제, 항-고혈압제, 항-죽상경화제, 항-고지질혈증제, 혈장 HDL 상승제, 항-고콜레스테롤혈증제, 항-이상지질혈증제, 항-당뇨병제, 항-고혈당제, 항-고인슐린혈증제, 항-혈전제, 항-망막병제, 항-신경병제, 항-신장병제, 항-허혈제, 항-비만제, 항-고지질혈증제, 항-고트리글리세라이드혈증제, 항-고콜레스테롤혈증, 항-재협착제, 항-췌장제, 지질 강하제, 식욕 억제제 (anorectic agent), 기억력 증진제, 항-치매제, 인지 개선제, 식욕 억제제 (appetite suppressant) 및 말초 동맥 질환 치료제.

특히, 본 발명의 화합물 1은 심부전 및 관상 동맥 질환의 치료에 하기 치료제 중 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 3개로부터 선택되는 추가의 치료제(들)와 조합하여 사용될 수 있다: 루프 이뇨제, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 안지오텐신 수용체-네프릴리신 억제제 (ARNI), β-차단제, 광물코르티코이드 수용체 길항제, 니트록실 도너, RXFP1 효능제, APJ 효능제 및 강심제, 레닌 억제제, 칼슘 채널 차단제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 니트레이트, 디지탈리스 화합물, 및 β-수용체 효능제, 콜레스테롤 생합성 억제제 (예컨대, HMG CoA 리덕타제 억제제), 나트륨-글루코스 공동-수송체 2 억제제 및 LXR 효능제. 이들 작용제는 푸로세마이드, 부메타나이드, 토르세마이드, 사쿠비트리알-발사르탄, 티아지드 이뇨제, 캅토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 카르베딜롤, 메토폴롤, 비소프롤롤, 세렐락신, 스피로놀락톤, 에플레레논, 이바브라딘, 칸데사르탄, 에프로사르탄, 이르베스타라인, 로사르탄, 올메사르탄, 텔미사르탄, 및 발사르탄, 프로부콜, 랄록시펜, 니코틴산, 니아신아미드, 콜레스테롤 흡수 억제제, 담즙산 격리제 (예컨대, 음이온 교환 수지 또는 4급 아민 (예컨대, 콜레스티라민 또는 콜레스티폴), 저밀도 지단백질 수용체 유도제, 클로피브레이트, 페노피브레이트, 벤조피브레이트, 시포피브레이트, 겜피브리졸, 비타민 B₆, 비타민 B₁₂, 항산화 비타민, 항-당뇨병제, 혈소판 응집 억제제, 피브리노겐 수용체 길항제, 아스피린 및 피브린산 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

상기 다른 치료제는, 화합물 1과 조합하여 사용될 때, 예컨대, 상기 기재된 특허에서와 같이, 문헌 (Physicians' Desk Reference)에서 지시되는 양으로, 또는 달리 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정되는 양으로 사용될 수 있다.

특히 단일 용량 단위로 제공될 때, 조합된 활성 성분들 사이에 화학적 상호작용 가능성이 존재한다. 이러한 이유로, 본 발명의 화합물 및 제2 치료제가 단일 용량 단위로 조합될 때, 활성 성분들이 단일 용량 단위로 조합 되더라도 활성 성분들 사이의 물리적 접촉이 최소화되도록 (즉, 감소되도록) 제형화된다. 예컨대, 하나의 활성 성분은 장용 코팅될 수 있다. 활성 성분 중 하나를 장용 코팅함으로써, 조합된 활성 성분들 사이의 접촉을 최소화할 뿐만 아니라 위장관에서 이들 성분 중 하나의 방출을 제어하여 이들 성분 중 하나가 위에서 방출되지 않고 오히려 장에서 방출되게 할 수 있다. 활성 성분 중 하나는 또한 위장관 전체에 걸쳐 서방성에 영향을 미치고 또한 조합된 활성 성분들 사이의 물리적 접촉을 최소화하는 역할을 하는 물질로 코팅될 수 있다. 또한, 서방성 성분은 이 성분의 방출이 장에서만 발생하도록 추가로 장용 코팅될 수 있다. 또 다른 접근법은 활성 성분들을 추가로 분리하기 위해 하나의 성분은 지속 및/또는 장-방출 중합체로 코팅되고 다른 성분은 또한 중합체, 예컨대 저점도 등급의 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC) 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 적합한 물질로 코팅된 조합 생성물의 제형화를 포함할 것이다. 중합체 코팅은 다른 성분과의 상호작용에 대한 추가적인 장벽을 형성하는 역할을 한다.

이들 뿐만 아니라 단일 용량 형태로 투여되거나 별개 형태이나 동시에 동일한 방식으로 투여되는 본 발명의 조합 생성물의 성분들 사이의 접촉을 최소화하는 다른 방법도 일단 본 개시내용으로 무장되면 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.

본 발명은 또한 제조 물품을 포함한다. 본원에서 사용되는 제조 물품은 키트 및 패키지를 포함하나 이로 제한되지 않는다. 본 발명의 제조 물품은 (a) 제1 용기; (b) 제1 용기 내에 위치된, 본 발명의 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염 형태를 포함하는 제1 치료제를 포함하는 제약 조성물; 및 (c) 제약 조성물이 심부전의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있음을 명시하는 패키지 삽입물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 패키지 삽입물은 제약 조성물이 심부전의 치료 및/또는 예방을 위해 제2 치료제와 (이전에 정의된 바와 같이) 조합하여 사용될 수 있다고 명시한다. 제조 물품은 추가로 (d) 성분 (a) 및 (b)는 제2 용기 내에 위치되고 성분 (c)는 제2 용기 내에 또는 외부에 위치되는 제2 용기를 포함할 수 있다. 제1 용기 및 제2 용기 내에 위치된다는 것은 각각의 용기가 아이템을 그의 영역 내에 보유한다는 것을 의미한다.

제1 용기는 제약 조성물을 보유하기 위해 사용되는 저장소이다. 이 용기는 제조, 저장, 운송 및/또는 개별/벌크 판매를 위한 것일 수 있다. 제1 용기는 병, 단지, 바이알, 플라스크, 주사기, 튜브 (예컨대, 크림 제조용), 또는 제약 제품을 제조, 보유, 저장 또는 분배하는데 사용되는 임의의 다른 용기를 포함하도록 의도된다.

제2 용기는 제1 용기 및 임의적으로 패키지 삽입물을 보유하는데 사용되는 것이다. 제2 용기의 예는 박스 (예컨대, 판지 또는 플라스틱), 나무상자 (crate), 상자 (carton), 백 (예컨대, 종이 또는 플라스틱 백), 파우치 및 봉지를 포함하나 이로 제한되지 않는다. 패키지 삽입물은 테이프, 접착제, 스테이플 또는 다른 부착 방법을 통해 제1 용기 외부에 물리적으로 부착될 수 있거나, 제1 용기에 대한 어떠한 물리적 부착 수단 없이 제2 용기의 내부에 놓일 수 있다. 대안적으로, 패키지 삽입물은 제2 용기의 외부에 위치된다. 제2 용기의 외부에 위치될 때, 패키지 삽입물은 테이프, 접착제, 스테이플 또는 다른 부착 방법을 통해 물리적으로 부착되는 것이 바람직하다. 대안적으로, 이는 물리적으로 부착되지 않고 제2 용기에 인접하거나 제2 용기의 외부에서 접촉할 수 있다.

패키지 삽입물은 제1 용기 내에 위치된 제약 조성물에 관한 정보를 열거하는 라벨, 태그, 마커 등이다. 열거된 정보는 일반적으로 제조 물품이 판매되는 지역을 관리하는 규제 기관 (예컨대, 미국 식품의약국)에 의해 결정될 것이다. 바람직하게는, 패키지 삽입물은 제약 조성물이 승인된 적응증을 구체적으로 열거한다. 패키지 삽입물은 사람이 이에 함유된 정보를 읽을 수 있는 임의의 재료로 제조될 수 있다. 바람직하게는, 패키지 삽입물은 목적하는 정보가 형성되는 (예컨대, 인쇄되거나 적용되는) 인쇄가능한 재료 (예컨대, 종이, 플라스틱, 판지, 호일, 접착식 종이 또는 플라스틱 등)이다.

화합물 1은 또한 FPR2 수용체를 수반하는 시험 또는 검정에서 표준 또는 참조 화합물, 예컨대 품질 표준 또는 대조군으로서 유용하다. 이러한 화합물은, 예컨대 FPR2 또는 항-심부전 활성을 수반하는 제약 연구에 사용하기 위해 시판 키트에 제공될 수 있다. 예컨대, 화합물 1은 그의 공지된 활성을 미지의 활성을 갖는 화합물과 비교하기 위한 검정에서 참조로서 사용될 수 있다. 이는 실험자가 검정이 적절하게 수행되고 있음을 보장하고, 특히 시험 화합물이 참조 화합물의 유도체인 경우 비교의 기초를 제공할 것이다. 새로운 검정 또는 프로토콜을 개발할 때 화합물 1을 사용하여 그들의 효과를 시험할 수 있다. 본 발명의 화합물 1은 또한 심부전을 수반하는 진단 검정에 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 특징들은 예시적인 실시양태에 대한 하기의 설명 과정에서 명백해질 것이다. 실시예는 예시적인 것으로 본 발명의 일부 범위 및 특정 실시양태로서 제공되며 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.

V. 실시예

실시예 1

FPR2 및 FPR1 cAMP 검정.

포르스콜린 (FPR2의 경우 5 μM 최종 또는 FPR1의 경우 10 μM 최종)과 IBMX (200 μM 최종)의 혼합물을 DMSO (1% 최종) 중의 시험 화합물로 미리-도팅된 384-웰 프록시플레이트 (Proxiplate) (퍼킨-엘머 (Perkin-Elmer))에 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 최종 농도로 첨가하였다. 인간 FPR1 또는 인간 FPR2 수용체를 과발현하는 CHO를 10% 적격 FBS, 250 μg/ml 제오신 및 300 μg/ml 히그로마이신 (라이프 테크놀로지스 (Life Technologies))으로 보충된 F-12 (Ham's) 배지에서 배양하였다. 0.1% BSA (퍼킨-엘머)로 보충된 둘베코 (Dulbecco)의 PBS (칼슘 및 마그네슘을 가짐) (라이프 테크놀로지스)에 웰당 2,000개의 인간 FPR2 세포 또는 웰당 4,000개의 인간 FPR1 세포를 첨가함으로써 반응을 개시하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 세포내 cAMP의 수준을 제조자의 지침에 따라 HTRF HiRange cAMP 검정 시약 키트 (시스비오 (Cisbio))를 사용하여 결정하였다. 크립테이트 컨주게이션된 항-cAMP 및 d2 형광단-표지된 cAMP의 용액을 공급된 용해 완충액에 별도로 제조하였다. 반응 완료 시, 세포를 동일 부피의 d2-cAMP 용액 및 항-cAMP 용액으로 용해시켰다. 1시간 실온 인큐베이션 후, 400 nm 여기에서 엔비젼 (Envision) (퍼킨-엘머) 및 590 nm 및 665 nm에서 이중 방출을 이용하여 시간-분해된 형광 강도를 측정하였다. cAMP 농도에 대한 665 nm 방출로부터 590 nm 방출로부터의 강도까지 형광 강도 비율을 플로팅함으로써 1 μM 내지 0.1 pM 범위의 농도에서 외부 cAMP 표준으로 보정 곡선을 작도하였다. 이어서, cAMP 수준 대 화합물 농도의 플롯으로부터 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅함으로서 cAMP 생성을 억제하는 화합물 1의 효능 및 활성을 결정하였다.

β-아레스틴 동원 검정

패쓰헌터 (PathHunter)® β-아레스틴 GPCR 세포주를 프로링크 (ProLink)^TM (PK) 태그부착된 FPR2 및 효소 어셉터 (Enzyme Acceptor: EA) 태그부착된 β-아레스틴을 공동-발현하도록 조작하였다. GPCR-PK의 활성화는 β-아레스틴-EA 동원을 유도하여 2개의 β-갈락토시다제 효소 단편 (EA 및 PK)이 보완되게 한다. 생성된 기능성 효소는 기질을 가수분해하여 화학발광 신호를 생성한다. 인간 FPR2 β-아레스틴 패쓰헌터 세포 (디스코베륵스 (DiscoveRx))를 10% 열 불활성화된 FBS, 800 μg/mL 게네트신 (Genetcin), 300 μg/mL 히그로마이신 B, 1X L-글루타민 (라이프 테크놀로지스)로 보충된 F-12 (Ham's) 배지에서 배양하였다. 검정 1일 전에, 세포를 플레이팅 배지 (1% 열 불활성화된 FBS로 보충된 DMEM/F-12)로 수거하고, 밤새 인큐베이션을 위해 30,000개 세포/웰 (100 μL)로 96 웰 검정 플레이트 (코닝 코스타 (Corning Costar) 3603)에 씨딩하였다. 시험 화합물을 용해시키고, 0.2 nM 내지 10 μM 범위의 최종 검정 농도로 DMSO에 연속 희석하였다. 시험 화합물을 세포 플레이트로 이동시킴으로써 반응을 개시하였다. 반응 혼합물을 37℃에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포 검정 완충액 (Cell Assay Buffer), 에메랄드 (Emerald) II 및 갈락톤-스타 (Galacton-Star) (19:5:1)를 함유하는 검출 시약을 제조자의 지침에 따라 제조하고 세포에 첨가하였다 (10 μL). 혼합물을 1 내지 2시간 동안 실온에서 암실에서 인큐베이션하였다. 화학발광 신호를 엔비젼 (퍼킨-엘머) 상에서 측정하였다. 정규화된 신호 대 화합물 농도의 플롯으로부터의 데이터를 4-파라미터 로지스틱 방정식에 피팅하였다. 시험 화합물의 효능은 피팅된 곡선으로부터 유도된 EC₅₀ 값으로 보고된다.

HL-60 세포 배양 및 분화

HL-60 세포주 (ATCC, CCL-240, 로트 60398411)를 20% 소 태아 혈청, 50 U/ml 페니실린, 및 50 μg/ml 스트렙토마이신으로 보충된 IMDM (라이프 테크 (Life Tech), cat 12440-053) 중에서 37℃에서 5% CO₂로 유지시켰다. 세포를 DMSO를 사용하여 과립구 계통으로 분화시켰다; 2.5 Х 10⁵개 세포/ml를 1.25% DMSO와 함께 5일 동안 인큐베이션하였다.

호중구 및 HL-60 세포 이동 검정 효능제 모드

5일 분화 후, 세포를 0.2% 지방산 비함유 BSA를 갖는 페놀 비함유 RPMI (인비트로겐 (Invitrogen), cat 11835)에 3x10⁷개 세포/ml의 농도로 재현탁시켰다. dHL-60 세포 (100 μl 중 10⁵개)를 각각의 HTS 트랜스웰-96 웰 플레이트 (코닝#3387)의 상부 챔버에 첨가하였다. 화합물 1을 트랜스웰 플레이트의 하부 챔버에 배치하고 dHL60 세포를 상부 챔버에 배치함으로써 이동을 유도하였다. 세포를 120분 동안 5 마이크미터 필터를 가로질러 37℃에서 5% CO₂로 이동시켰다. 이동 후, 트랜스웰 하부 챔버에 남아 있는 호중구 또는 dHL-60 세포 (이동된 분획)를 세포-역가 글로 발광 세포 생존력 검정 (프로메가 (Promega), G7571)을 이용하여 정량화하였다.

호중구 및 HL-60 세포 이동 검정 길항제 모드

5일 분화 후, 세포를 0.2% 지방산 비함유 BSA를 갖는 페놀 비함유 RPMI (인비트로겐, cat 11835)에 3x10⁷개 세포/ml의 농도로 재현탁시켰다. dHL-60 세포 (100 μl 중 10⁵개)를 15분 동안 다양한 농도의 화학유인제와 함께 37℃에서 5% CO₂로 미리-인큐베이션하였다. 이어서, 0.8 μM의 재조합 혈청 아밀로이드 A1 펩티드 (rSAA1, 페프로텍 (PeproTech), Cat#300-53)를 각각의 HTS 트랜스웰-96 웰 플레이트 (코닝#3387))의 하부 챔버에 첨가하였다. 트랜스웰 플레이트의 상부 챔버에 화학유인제 및 dHL60 세포 혼합물을 배치함으로써 이동을 유도하였다. 세포를 120분 동안 5 마이크미터 필터를 가로질러 37℃에서 5% CO₂로 이동시켰다. 이동 후, 트랜스웰 하부 챔버에 남아 있는 호중구 또는 dHL-60 세포 (이동된 분획)를 세포-역가 글로 발광 세포 생존력 검정 (프로메가, G7571)을 이용하여 정량화하였다.

포식작용 증진

대식세포를 수거 4일 전에 1 mL의 PBS (-/-) 중의 1% 비오겔 (Biogel)의 복막 주사에 의해 5마리의 C57BL6 마우스의 복막으로 유도하였다. 복막 삼출물을 수거하고, 합한 후, 여과시켜 비오겔 비드를 제거한다. 먼저, 70 um 세포 스트레이너를 통하고 이어 연속해서 2개의 40 um 세포 스트레이너를 통해 여과시킴. 삼출물을 1X PBS (-/-)로 50 mL로 희석하고, 300 xg에서 10분 동안 4℃에서 원심분리한다. 세포 펠릿을 20-30 mL 1X PBS(+/+)에 부드럽게 재현탁시키고, 세포를 넥셀콤 셀로미터 (Nexelcom Cellometer) 카운터를 사용하여 계수한다. 세포 농도를 1X PBS (+/+) 중에 1,250,000개 세포/mL로 조정한다. 100 μL (125k) 세포를 96-웰 코스타 (Costar) 3904 플레이트의 각각의 웰에 배치한다. 플레이트를 150 xg에서 30초 동안 원심분리하여 부착을 촉진시킨다. 37℃/5% CO₂에서 90분 인큐베이션한 후, 비-부착 세포를 흡인하고, 부착된 대식세포 (~50K)를 150 μL 1X PBS (-/-)로 1회 세척한 후, 밤새 37℃/5% CO₂에서 135 μL의 미리-가온된 혈청-비함유 대식세포 SFM/1X 펜-스트렙 (Pen-Strep) 배지 중에서 인큐베이션한다. 다음날, 15 uL의 혈청-비함유 대식세포 SFM 배지 중의 새로 제조된 10X 화합물 1을 각각의 웰에 첨가하고, 혼합하고, 15분 동안 37℃/5% CO₂에서 인큐베이션한다. 10배 과량 (4μL의 125K/μL)의 옵소닌 처리된 FITC 지모산 (Zymosan) 입자 (라이프 테크놀로지스)를 첨가함으로써 포식작용을 개시한다. 포식작용은 45분 동안 37℃/5% CO₂에서 진행된다. 웰을 흡인하고, 포식작용을 150 μL의 얼음-냉각된 1X PBS (-/-)/2mM EDTA로 정지시키고, 다시 흡인한다. 비-섭취된 지모산 입자로부터의 형광 신호를 2분 동안 150 uL의 얼음-냉각된 1:15 희석 트리판 블루 용액으로 퀀칭한 후, 흡인하여 제거한다. 마지막으로, 플레이트를 스펙트라막스 제미니 (SpectraMAX Gemini) EM 형광 플레이트 판독기 상에서 150 ul의 1:50 희석 트리판 블루에서 판독한다. 플레이트 판독기 세팅 = 하부 판독: 여기 493 nm: 방출 525 nm: 컷오프 　515 nm: 오토믹스 꺼짐: 보정 켜짐: PMT=자동: 컬럼 우선: 판독/웰=20.

실시예 2

화합물 1에 대한 시험관내 FPR2 및 FPR1활성

FPR2 및 밀접하게 관련된 이소형태인 FPR1에 대한 화합물 1의 효능제 활성이 FPR-발현 세포주를 사용하는 시험관내 기능 검정 패널에서 특성화되었다. 하나는 인간 FPR2 (hFPR2)를 과발현하고 다른 것은 인간 FPR1 (hFPR1)을 과발현하는 CHO-A12 세포주에서, 화합물 1은 hFPR2 Gi 커플링의 강력한 활성화제였으므로 (EC₅₀ = 2.8 nM), 아데닐시클라제 억제를 통해 시클릭 아데노신 모노포스페이트 cAMP 수준을 저하시켰다. 화합물 1은 관련된 hFPR1 수용체에 대해 상당히 덜 강력한 활성화제였다 (EC₅₀ = 1250 nM). 마우스 오톨로그인 mFPR2를 과발현하는 CHO-A12 세포주에서, 화합물 1은 mFPR2의 매우 강력한 활성화제였다 (EC₅₀ = 0.6 nM). 인간 FPR2 세포주로 관찰된 결과와 유사하게, 화합물 1은 또한 mFPR2 및 래트 FPR2에 대해 선택적이었으며, mFPR1 수용체에 대해 약 384 nM 및 래트 FPR1에 대해 720 nM의 작용 효능을 가졌다. 인간, 마우스, 또는 래트 FPR2 또는 FPR1을 발현하는 CHO 세포주에서, 화합물 1은 하기의 선택성을 나타내었다: 인간 FPR2 대 FPR1에 대해 446배; 마우스 FPR2 대 FPR1에 대해 640배; 래트 FPR2 대 FPR1에 대해 480배. 결과가 표 1에 요약되어 있다.

<표 1>

실시예 3

화학주성 및 포식작용에 대한 화합물 1의 영향

인간 전골수구성 백혈병 HL-60 세포주 및 일차 마우스 복막 대식세포를 사용하여, 화학주성 및 포식작용 증진에 대한 화합물 1의 효능을 조사하였다.

화합물 1은 전-염증성 리간드 SAA로 자극된 HL-60 세포주의 화학주성을 57 nM의 IC₅₀으로 길항하였다. 1% 비오겔로 유도된 마우스 복막 대식세포에서, 화합물 1은 형광 표지된 지모산의 포식작용을 2 nM의 EC₅₀으로 증진시켰다. 결과가 표 2에 요약되어 있다.

<표 2>

실시예 4

동물 모델

심근경색을 유발하기 위해 좌측 전방 하강 동맥 주위에 배치된 결찰실을 사용하여 마우스에서 영구적 관상 동맥 폐색을 수행하였다. 경구로 투여되는 화합물 1 (0.3 및 3 mg/kg; QD) 또는 화합물이 없는 투여 용액 (QD, 비히클로 지칭됨)으로의 처리를 심근경색 후 24시간에 개시하였다. 가슴절개술을 받았으나 경색되지 않은 마우스를 외과적 "모의" 대조군으로 포함시켰다. 마우스를 심근경색 후 28일에 평가하여 구조/기능 관계를 평가하였다. 조직학적 처리를 위해 마우스로부터 심장을 적출하여 좌심실 치수, 경색 면적 및 경색 콜라겐 조성을 측정하였다.

심근경색의 제2 모델에서, 심근경색을 유발하기 위해 좌측 전방 하강 동맥 주의에 배치된 결찰실을 사용하여 래트에서 영구적 관상 동맥 폐색을 수행하였다. 경구로 투여되는 화합물 1 (0.01, 0.1, 1 및 10 mg/kg, QD) 또는 화합물이 없는 투여 용액 (QD, 비히클로 지칭됨)으로의 처리를 심근경색 후 48시간에 개시하였다. 가슴절개술을 받았으나 경색되지 않은 래트를 외과적 "모의" 대조군으로 포함시켰다. 래트를 심근경색 후 6주에 평가하여 구조/기능 관계를 평가하였다. 조직학적 처리를 위해 래트로부터 심장을 적출하여 경색 벽 두께 및 콜라겐 조성을 측정하였다. 심장 기능을 평가하기 위해 심장초음파검사를 수행하였다.

심근경색의 제3 모델에서, 심근경색을 유발하고 심근경색 위험 영역 내 심근의 구제를 평가하기 위해 래트에서 일시적 관상 동맥 폐색 후 재관류를 수행하였다. 경구로 투여되는 화합물 1 (0.01, 0.1, 1 및 10 mg/kg, QD) 또는 화합물이 없는 투여 용액 (QD, 비히클로 지칭됨)으로의 처리를 심근경색 후 48시간에 개시하였다. 가슴절개술을 받았으나 경색되지 않은 래트를 외과적 "모의" 대조군으로 포함시켰다. 래트를 심근경색 후 6주에 평가하여 구조/기능 관계를 평가하였다. 조직학적 처리를 위해 래트로부터 심장을 적출하여 화합물 1 처리에 의한 심근 구제의 정도를 측정하였다. 압력-부피 컨덕턴스 카테터 기술을 이용하여 심장 기능을 평가하였다.

고혈압을 갖는 비-허혈성 심장 질환의 세팅에서 심근 섬유증을 평가하기 위해, 마우스를 안지오텐신 II로 챌린지하여 심장 비대 및 좌심실 섬유증을 자극하였다. 피하에 이식된 삼투성 미니-펌프 (~2 mg/kg/일)를 사용하여 마우스에 안지오텐신 II를 투여하였다. 별개의 마우스 그룹에 식염수를 함유하는 피하 펌프 (외과적 "모의" 그룹)를 이식하였다; 이들 마우스는 펌프 이식 수술에 대한 대조군으로 사용되었다. 마우스를 펌프 이식 후 7일에 개시하여 화합물 1 (3 mg/kg, QD) 또는 화합물이 없는 투여 용액 (QD, 비히클로 지칭됨)으로 처리하였다. 이 모델에서, 심장 섬유증 발달은 이의 절정에 도달하고, 처리 없이는 angII가 고갈될 때까지 (이식 후 ~ 4주) 이러한 높은 수준에서 섬유증인 상태로 남아 있을 것이다. 심장 섬유증을 퇴행시키기 위해 화합물 1로의 중재적 처리를 3주 동안 마우스에게 제공하였다. 처리 단계 말에, 동물로부터 심장을 적출하고, 심장의 단면 조직학에 의해 콜라겐 수준/섬유증에 대해 평가하였다.

고혈압을 갖는 비-허혈성 심장 질환의 제2 모델에서, 마우스는 하나의 신장에 대해 절제술을 받고, 심장 비대 및 좌심실 섬유증을 자극하기 위해 데옥시코르티코스테론 아세테이트 (DOCA) 및 식염수 식수로 챌린지되었다. 피하에 이식된 펠릿 (50 mg)을 사용하여 마우스에 DOCA를 투여하였다. 별개의 마우스 그룹은 피하 포켓 (외과적 "모의" 그룹)의 생성을 통해 수술을 받았다; 이들 마우스는 펠릿 이식 수술에 대한 대조군으로 사용되었다. 마우스를 수술 후 24시간에 화합물 1 (1 mg/kg, QD) 또는 투여 용액 (QD, 비히클로 지칭됨)으로 처리하였다. 화합물 1로의 처리가 3주 동안 마우스에 제공되었다. 처리 단계 말에, 동물로부터 심장을 적출하고, 심장의 단면 조직학에 의해 콜라겐 수준/섬유증에 대해 평가하였다. 처리는 생애 동안 잘 받아들여졌으며, 마우스의 생리학에 유해한 영향은 관찰되지 않았다. 하기 결과는 심부전 모델에서 화합물 1의 활성을 입증한다.

실시예 5

마우스 모델에서 좌심실 및 경색 반흔 리모델링

좌심실 및 경색 반흔 리모델링에 대한 화합물 1의 영향을 영구적 관상 동맥 폐색의 마우스 모델에서 평가하였다. 수술 봉합사로 좌측 전방 하강 동맥을 영구적으로 결찰함으로서 MI를 생성하였다. MI 후 24시간에 처리 (QD, PO)를 개시하고, 28일 동안 계속하였다. 처리는 0.3 mg/kg 및 3 mg/kg의 현탁 비히클 및 화합물 1로 이루어졌다. 수술을 받았으나 경색되지 않은 마우스 코호트를 "모의 처치된" 외과적 대조군 그룹으로 포함시켰다. 처리 28일 말에, 좌심실 구조 및 반흔 구조의 조직학적 평가를 위해 심장을 적출하였다.

이것은 허혈성 심장 질환의 모델이다. 좌심실 (LV) 내의 경색 크기를 측정하고, 총 좌심실 단면적에 대한 퍼센트로서 보고하였다. 도 1은 화합물 1 처리에 의한 LV 전방 벽 경색 크기의 용량-의존적 감소를 나타내며, 최대 감소가 3 mg/kg 용량 (비히클 대비 55%, P < 0.01)에서 수득되었다. 다양한 처리 그룹 및 모의에 대한 삼색-염색된 심장의 대표적인 단면은 경색 및 벽 박형화의 정도가 비히클 그룹보다 화합물 1 처리 그룹에서 시각적으로 적다는 것을 나타낸다 (도 1의 하부 패널).

실시예 6

좌심실벽 두께에 대한 화합물 1의 영향

화합물 1로의 처리는 비-경색된 모의 마우스에 비해 벽 두께를 보존하였다. 모의 마우스의 좌심실벽 두께는 정상적 심근 벽 구조를 나타내므로, 반흔 확장 및 박형화가 예상되는 MI 후 상태에 대한 참조로 사용된다. 벽 두께 보존이 두 약물 용량 모두로 관찰되었다: 0.3 mg/kg에서 모의의 평균 두께의 61% 및 3 mg/kg에서 모의의 67%. 비히클에 대비하여 통계학적으로 유의한 차이가 더 높은 용량의 화합물 1에서 달성되었다 (59%, P < 0.05, 도 2). 모의 마우스의 좌심실벽 두께는 정상적 심근 벽 구조를 나타내므로, 반흔 확장 및 박형화가 예상되는 MI 후 상태에 대한 참조로서 사용된다.

실시예 7

좌심실 챔버 확장에 대한 화합물 1의 영향

좌심실 공동의 단면적 측정을 통해 좌심실 챔버 확장을 평가하였다. 화합물 1로의 처리는 0.3　mg/kg 용량에서 LV 챔버 확장을 감소시켰다 (비히클 대비 26% 감소). 감소된 챔버 면적에 대한 유사한 경향이 3 mg/kg 용량에서 관찰되었다 (비히클 대비 24% 감소, 도 3). 종합적으로, 이들 데이터는 MI 후 덜한 경색 확장 및 좌심실 리모델링을 나타낸다.

실시예 8

경색 세포외 기질의 변화

경색 세포외 기질, 콜라겐 리모델링 효소 및 그들의 내인성 억제제의 초기 변화를 이해하기 위해, 마우스에서 심근경색 조성에 대한 3 mg/kg 화합물 1 처리의 영향을 심근경색 후 3일에 평가하였다. 좌측 전방 하강 동맥을 수술 봉합사로 영구적으로 결찰시켜 심근경색을 생성하였다. 처리 (QD, PO; 3 mg/kg의 현탁 비히클 또는 화합물 1)를 MI 24시간 후 개시하고, MI 3일 후까지 계속하였다. 3일에, 마우스는 최종 처리 용량을 받고, 조직학적 분석을 위해 처리 2시간 후 (즉, MI 74시간 후) 심장을 적출하였다.

도 4의 상부 좌측 그래프는 두 처리 그룹에서 측정된 경색 면적을 나타낸다. 예상된 바와 같이, 화합물 1과 비히클 처리 간의 평균 경색 면적은 유사하였으며, 벽 박형화 및 LV 확장 전에 경색의 초기 단계를 반영하였다. 상부 우측 그래프는 비히클에 비해 화합물 1-처리된 마우스의 경색 내의 증가된 콜라겐 함량을 나타내며 (비히클 대비 1.7배 증가됨, P < 0.05), 이는 콜라겐 함량의 초기 증진을 제시한다. 또한, 경색된 심근에서 비히클과 대비하여 적은 MMP-2 (기질 메탈로프로테이나제-2)에 대한 경향이 검출되었다 (하부 패널). 기질 리모델링 효소 수준의 감소는 화합물 1-처리된 그룹에서 더 많은 경색 콜라겐과 일치한다. 경색된 조직에서 비히클에 대비하여 MMP의 내인성 억제제인 메탈로프로테이나제-4 (TIMP-4)의 조직 억제제의 차이가 검출되지 않았다 (하부패널). 종합하면, 이들 데이터는 화합물 1로의 초기 처리가 증가된 콜라겐 함량을 통해 경색된 심근의 안정화를 도와 MI 후 28일에 관측된 경색 벽 박형화의 발달을 감소시킬 수 있다는 것을 제시한다.

요약하면, 화합물 1은 MI 후 심부전을 이끄는 좌심실 및 심근 반흔의 유해한 리모델링의 진행을 유리하게 변화시키는 것으로 나타났다. 화합물 1 처리로 좌심실 및 반흔 구조의 개선은 FPR2 효능작용이 손상 후 상처 치유를 안전하게 증진시킬 수 있다는 개념을 지지한다.

실시예 9

영구적 관상 동맥 폐색의 래트 모델

좌심실 및 경색 반흔 리모델링에 대한 화합물 1의 영향을 영구적 관상 동맥 폐색의 래트 모델에서 평가하였다. 처리는 MI 48시간 후 개시하였으며, 6주 동안 계속하였다. 수술 봉합사로 좌측 전방 하강 동맥을 영구적으로 결찰시켜 MI를 생성하였다. 처리는 0.01, 0.1, 1 및 10 mg/kg의 현탁 비히클, 화합물 1로 이루어졌다. 수술을 받았으나 경색되지 않은 래트 코호트를 "모의 처치된" 외과적 대조군 그룹으로 포함시켰다. 처리 6주 말에, 좌심실 구조 및 반흔 구조의 조직학적 평가를 위해 심장을 적출하였다. 이것은 허혈성 심장 질환의 모델이다. 또한, 심장 기능에 대한 화합물 1의 영향을 심장초음파검사로 측정하여 구조/기능 관계를 평가하였다. 심근벽의 구조를 조직학적으로 측정하였다. 도 5에 나타난 바와 같이, 화합물 1로의 처리는 전층 경색 벽 두께의 용량-의존적 보존을 초래하였으며, 여기서 최대 두께는 10 mg/kg 용량에서 수득되었다 (비히클 대비 96% 증가, P < 0.01). 처리 그룹 또는 비-경색된 외과적 모의 대조군 래트 사이에서 반대쪽 벽 두께의 변화가 관찰되지 않았다.

실시예 10

심장 기능의 측정

심장초음파검사를 이용하여 처리 단계 말에 심장 기능을 측정하였다. 수축 주기마다 좌심실로부터 펌핑되는 혈액의 분율 (즉, 박출률)을 M-모드 심장초음파검사를 이용하여 결정하였다. 좌심실 박출률의 개선이 화합물 1 처리로 수득되었다 (비히클 대비 28 내지 32%, P　< 0.05, 도 6). 화합물 1의 모든 용량이 유사한 크기의 박출률 개선을 야기하였다.

실시예 11

허혈-재관류 심근경색의 래트 모델

좌심실 및 경색 반흔 리모델링에 대한 화합물 1의 영향을 허혈-재관류 심근경색의 래트 모델에서 평가하였다. 처리는 MI 48시간 후 개시하였으며, 6주 동안 계속하였다. 1시간 동안 수술 봉합사로 좌측 전방 하강 동맥을 일시적으로 결찰시킨 후 재관류하여 MI를 생성하였다. 처리는 0.01, 0.1, 1 및 10 mg/kg의 현탁 비히클, 화합물 1로 이루어졌다. 처리 6주 말에, 좌심실 구조 및 반흔 구조의 조직학적 평가를 위해 심장을 적출하였다. 이것은 허혈성 심장 질환의 모델이다.

또한, 심장 기능에 대한 화합물 1의 영향을 압력-부피 컨덕턴스 카테터 기술로 측정하여 구조/기능 관계를 평가하였다. 경색 벽의 구조를 조직학적으로 측정하여 심근경색 및 심근 조직 구제의 정도를 결정하였다. 이 모델에서, 심근경색 위험이 있는 영역 내의 심근을 구제하도록 허혈 부위로의 혈액 재관류를 디자인하였다. 그러나, 이 모델에서, 추가적인 심근 괴사를 자극할 수 있는 재관류에 의해 야기되는 조직에 대한 추가적인 손상 가능성이 있다. 따라서, 심근경색 구역 내의 심근 구제의 측정이 이 모델에서 중요한 종점이다. 도 7에 나타난 바와 같이, 화합물 1로의 처리에 의해 조직학으로 측정되는 바와 같이 경색 벽을 가로질러 심근 구제가 증가되었다. 생존가능한 심근의 보존이 0.1, 1 및 10 mg/kg 용량에서 수득되었다 (비히클에 비해 31-41% 보존, *P < 0.05, **P<0.01, ***P<0.001).

실시예 12

좌심실 박출률의 개선

압력-부피 컨덕턴스 카테터를 이용하여 처리 단계 말에 좌심실 박출률을 측정하였다. 수축 주기마다 좌심실로부터 펌핑되는 혈액의 분율 (즉, 박출률)을 측정하고, 처리 6주 후 전체 심장 기능을 평가하는데 사용하였다. 좌심실 박출률의 개선이 화합물 1 처리로 수득되었다 (비히클 대비 0.01 mg/kg에서 37%, P　< 0.05 및 비히클 대비 1 mg/kg에서 51%, P　< 0.01, 도 8). 비히클에 대비하여 다른 용량에서 박출률 개선에 대한 경향을 주목할 가치가 있다. 이들 데이터는 영구적 관상 동맥 폐색 모델에서 수득된 결과와 일치한다.

요약하면, 화합물 1은 전층 경색 벽 두께 및 생존가능한 심근의 보존을 통해 전방 벽 MI의 리모델링을 유리하게 변화시키는 것으로 나타났다. 이들 변화는 심장초음파검사 및 압력-부피 컨덕턴스 카테터 기술로 측정된 LV 박출률의 개선과 병행하여 일어났다. 화합물 1 처리에 의한 반흔 구조 및 LV 기능의 개선은 FPR2 효능작용이 손상 후 상처 치유를 안전하게 증진시킬 수 있다는 것을 지지한다.

실시예 13

안지오텐신 II-유도된 심장 섬유증 마우스 모델

심근 섬유증을 피하의 삼투성 미니-펌프에 의해 투여되는 연속적인 안지오텐신 II 챌린지로 마우스에서 평가하였다. 이것은 비-허혈성 심장 질환의 모델이다.

확립된 심장 섬유증의 퇴행에 대한 화합물 1의 영향을 안지오텐신 II-유도된 심장 섬유증 마우스 모델에서 평가하였다. 이 연구에서, 마우스는 좌심실 섬유증을 확립하고 병태의 퇴행을 평가하기 위해 화합물 1로의 처리 개시 전 7일 동안 안지오텐신 II로 챌린지되었다. 안지오텐신 II 수용체 차단제인 로사르탄을 지속된 심장 섬유증의 억제에 대한 양성 대조군으로 사용하였다. 이 동물 모델은 일정한 안지오텐신 II 노출에 의해 주도되므로, 동족 수용체 활성화의 직접적 차단은 심장에서 지속적 섬유증을 억제한다. 도 9에 나타난 바와 같이, 3 mg/kg의 화합물 1의 처리는 비히클 처리 그룹과 비교하여 좌심실 섬유증을 90% 감소시켰다 (P <0.001). 또한, 화합물 1 처리를 7일 기준선 그룹 (섬유증 확립을 검증하기 위해 7일에 안락사된 마우스 그룹)과 비교하는 경우, 섬유증은 미리-확립된 섬유증 질환 상태와 비교하여 89% 감소되었다 (P < 0.001). 이들 데이터는 섬유증이 화합물 1 처리로 퇴행될 수 있음을 나타낸다. 좌심실 조직의 대표적인 부분은, 적색 염색으로 강조되는 바와 같이, 다양한 그룹에서 간질성 섬유증의 수준을 나타낸다.

실시예 14

DOCA 챌린지된 심장 섬유증 모델

심근 섬유증을 피하 방출 펠릿에 의해 투여되는 연속적 DOCA 챌린지로 마우스에서 평가하였다. 모델은 DOCA에 의한 광물코르티코이드 수용체의 효능작용을 통해 심근과 같은 표적 조직에서 전신 혈압 및 조직 염증을 증가시킨다. 또한, 질환 병리를 더욱 주도하기 위해 외과적인 하나의 신장 절제술 및 식수 중 식염수의 보충을 수반한다. 이것은 비-허혈성 심장 질환의 모델이다.

DOCA-염 마우스 모델에서 심장 섬유증 발달에 대한 화합물 1의 영향을 조직학적으로 평가하였다. 이 연구에서, 마우스를 3주 동안 화합물 1로 처리하였다. 처리는 하나의 신장 절제술 및 DOCA 펠릿 이식 24시간 후 개시하였다. 도 10에 나타난 바와 같이, 1 mg/kg의 화합물 1로 처리한지 3주 후, 좌심실 섬유증은 비히클 처리 그룹과 비교하여 50% 감소되었다 (P <0.01). 이들 데이터는 섬유증 발달이 화합물 1 처리로 감소될 수 있음을 나타낸다.

본 개시내용은 상기 설명적인 예시들에 제한되지 않으며, 이의 본질적인 특성을 벗어나지 않으면서 다른 특정 형태로 구현될 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 상기 예시들보다는 첨부된 청구범위를 참조하여, 청구범위의 의미 및 등가 범위 내에 있는 모든 변화가 그 안에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims (25)

1. 치료 유효량의 화합물 1을 심부전의 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 심부전을 치료하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 심부전이 고혈압, 허혈성 심장 질환, 비-허혈성 심장 질환, 심장독성 화합물에 노출, 심근염, 가와사키 질환, I형 및 II형 당뇨병, 갑상선 질환, 바이러스 감염, 치은염, 약물 남용, 알콜 남용, 심장막염, 죽상동맥경화증, 혈관 질환, 비대 심근병, 확장 심근병, 심근경색, 심방 섬유증, 좌심실 수축기 기능장애, 좌심실 확장기 기능장애, 관상동맥우회로 수술, 심박조율기 이식 수술, 기아, 식사 장애, 근육 퇴행위축, 및 유전적 결함으로부터 발생하는 것인 방법.
3. 제2항에 있어서, 심부전이 울혈성 심부전, 수축기 심부전, 확장기 심부전, 감소된 박출률을 갖는 심부전 (HF_REF), 보존된 박출률을 갖는 심부전 (HF_PEF), 급성 심부전, 허혈성 및 비-허혈성 기원의 만성 심부전으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
4. 제3항에 있어서, 심부전이 감소된 박출률을 갖는 심부전 (HF_rEF)인 방법.
5. 제4항에 있어서, HF_PEF가 심근경색으로부터 발생하는 것인 방법.
6. 제5항에 있어서, 화합물이 환자에서 심근경색 진단 후 투여되는 것인 방법.
7. 제6항에 있어서, 화합물이 환자에서 심근경색 진단 후 약 24시간 내지 48시간에 투여되는 것인 방법.
8. 제6항에 있어서, 화합물이 환자에서 심근경색 진단 후 약 1일 내지 7일에 환자에게 투여되는 것인 방법.
9. 제3항에 있어서, 화합물이 경구로 투여되는 것인 방법.
10. 제3항에 있어서, 화합물의 투여가 좌심실 기능을 개선시키는 것인 방법.
11. 제3항에 있어서, 화합물의 투여가 심근벽 박형화의 진행을 방지하는 것인 방법.
12. 제3항에 있어서, 화합물의 투여가 심근세포 세포사를 억제하는 것인 방법.
13. 제3항에 있어서, 화합물의 투여가 경색 크기를 감소시키는 것인 방법.
14. 제3항에 있어서, 화합물의 투여가 심장 조직의 비대를 감소시키는 것인 방법.
15. 제1항에 있어서, 화합물이 매일 투여되는 것인 방법.
16. 제1항에 있어서, 화합물이 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6주 동안 투여되는 것인 방법.
17. 제3항에 있어서, 심부전이 HF_PEF인 방법.
18. 제17항에 있어서, 화합물이 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6주 동안 투여되는 것인 방법.
19. 제17항에 있어서, 화합물의 투여가 심근 상처 치유를 개선시키는 것인 방법.
20. 제17항에 있어서, 화합물의 투여가 심실 섬유증을 감소시키는 것인 방법.
21. 제1항에 있어서, 환자의 심장 병태의 상태가 각각의 투여와 투여 사이에 평가되고/되거나 투여 시기가 심장 병태에 따라 조정되는 것인 방법.
22. 제3항에 있어서, 방법이 제2 작용제로의 심부전의 치료를 포함하는 것인 방법.
23. 제22항에 있어서, 제2 작용제가 이뇨제, 루프 이뇨제, 칼륨 보존 작용제, 혈관확장제, ACE 억제제, 안지오텐신 수용체 차단제, 안지오텐신 II 억제제, 알도스테론 억제제, 양성 근육수축제, 포스포디에스테라제 억제제, 베타-아드레날린 수용체 억제제, 칼슘 채널 차단제, 알파 차단제, 중추 알파 차단제, 나트륨-글루코스 공동-수송체 2 억제제, 니트레이트, 스타틴, 심장 글리코사이드, 디곡신, 니트레이트, 클로르탈리돈, 암로디핀, 리시노프릴, 및 독사조신으로부터 선택되는 것인 방법.
24. 심부전의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화합물 1.
25. 제24항에 있어서, 상기 심부전이 HF_rEF 또는 HF_pEF인 화합물.

Images