KR20190128646A - Treatment of patients with hematological tumors - Google Patents

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KR20190128646A
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윌리암 쥐 라이스
조중명
홍용래
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압토스 바이오사이언시스 인코포레이티드
크리스탈지노믹스(주)
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Abstract

본 발명은 혈액 암, 가령, 급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료를 위해 2,3-다이하이드로-아이소인돌-1-온 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 에스터, 용매화합물 및/또는 전구약물을 투여하는 방법을 포함한다. 본 발명은 또한 야생형 또는 돌연변이된 Fms-유사 티로신 키나아제-3 수용체 (FLT3)에 의해 활성화되는 세포 증식을 감소 또는 저해하는 것에 관한 것이다. 본 발명은 또한 필요로 하는 대상체에서 비정상적 (예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법에 관한 것이다.The present invention relates to 2,3-dihydro-isoindole-1-one compounds or pharmaceutically acceptable salts, esters, solvates and / or prodrugs thereof for the treatment of blood cancers such as acute myeloid leukemia (AML). It includes a method of administering. The invention also relates to reducing or inhibiting cell proliferation activated by the wild type or mutated Fms-like tyrosine kinase-3 receptor (FLT3). The invention also relates to methods of inhibiting or reducing abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in a subject in need.

Description

혈액 종양 환자들의 치료 방법Treatment of patients with hematological tumors

본 발명은 암, 가령, 혈액 암의 치료를 위한, 2,3-다이하이드로-아이소인돌-1-온 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 에스터, 전구약물, 수화물, 용매화합물 및 이성질체에 관한 것으로, 이때 환자는 FLT3 돌연변이 또는 야생형 또는 BTK의 돌연변이체 형태들을 나타낸다. The present invention relates to 2,3-dihydro-isoindole-1-one compounds, or pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers thereof for the treatment of cancer, such as blood cancer. In which the patient exhibits FLT3 mutations or wild type or mutant forms of BTK.

많은 티로신 키나아제들은 많은 암 유형들에서 세포-생존을 촉진시키는 조절 경로들의 일부임이 밝혀졌다. Fms-유사 티로신 키나아제 3 (FLT3) 유전자는 이러한 하나의 예로서, 혈액학적 장애 및 종양을 가져오는 조혈에 영향을 미치는 막 결합 수용체 티로신 키나아제를 인코드한다. Many tyrosine kinases have been found to be part of regulatory pathways that promote cell-survival in many cancer types. The Fms-like tyrosine kinase 3 (FLT3) gene encodes one such example, a membrane bound receptor tyrosine kinase that affects hematopoiesis leading to hematologic disorders and tumors.

수용체 티로신 키나아제 FLT3는, 막근접 영역 내 활성화 내부 일렬 중복 (ITD) 및 티로신 키나아제 도메인 내 점 돌연변이, 가령, 활성화 루프 잔기 D835를 포함한 일련의 돌연변이를 거칠 수 있다. FLT3-ITD 돌연변이는 AML 환자의 대략 24%에 존재하며 매우 좋지 않은 예후와 관련되므로 FLT3는 급성 골수성 백혈병 (AML) 치료를 위한 표적이다. C. Thiede 외, Blood 2002, 99, 4326; P. D. Kottaridis 외, Leukemia & lymphoma 2003, 44, 905를 참고하라. 그러나, FLT3 저해제 소라페닙 또는 퀴자르티닙에 대한 내성/재발성을 보여주었던 임상 환자들에서 확인된 바 있는 D835 또는 “게이트키퍼” F691 돌연변이를 포함한 추가적인 FLT3의 후천성 돌연변이는, 대부분의 FLT3 저해제를 비효과적이게 할 수 있다. C. H. Man 외, Blood 2012, 119, 5133; C. C. Smith 외, Nature 2012, 485, 260을 참고하라. 다른 병렬적인 전-생존 신호전달 경로들의 비정상적 상향조절은 AML을 FLT3-표적화 치료에 대하여 내성이 되게 할 수 있음이 추가적으로 보고된 바 있다. W. Zhang 외, Clin . Cancer Res. 2014, 20, 2363을 참고하라. Receptor tyrosine kinase FLT3 may undergo a series of mutations, including activating internal line duplication (ITD) in the membrane proximity region and point mutations in the tyrosine kinase domain, such as activating loop residue D835. FLT3 is a target for the treatment of acute myeloid leukemia (AML) because the FLT3-ITD mutation is present in approximately 24% of AML patients and is associated with a very poor prognosis. C. Thiede et al., Blood 2002 , 99 , 4326; See PD Kottaridis et al., Leukemia & lymphoma 2003 , 44 , 905. However, additional mutations of FLT3, including D835 or “gatekeeper” F691 mutations, have been identified in clinical patients that have demonstrated resistance / recurrence to FLT3 inhibitor sorafenib or quzartinib. Can be effective. CH Man et al., Blood 2012 , 119 , 5133; CC Smith et al., Nature 2012, 485, 260. See also the. It has been further reported that abnormal upregulation of other parallel pre-survival signaling pathways can render AML resistant to FLT3-targeted treatment. W. Zhang et al . , Clin . Cancer Res. See 2014 , 20 , 2363.

그러므로, FLT 3 돌연변이를 획득한 혈액 종양 환자들에서 돌연변이된 FLT3을 억제하는 치료제의 필요성이 존재한다. Therefore, there is a need for therapeutic agents that inhibit mutated FLT3 in hematological tumor patients with FLT 3 mutations.

또 다른 티로신 키나아제인, 브루톤 티로신 키나아제 (BTK) 또한, 혈액암에서 세포 증식을 조절함에 있어서 기능적으로 중요함이 발견되었다. BTK는 일부 T-세포, 자연 살해 세포, 형질 세포 등에서 보다는 B-세포 및 조혈 세포에서 발견된다. BTK가 다양한 염증 반응 또는 암에 의해 유발되는 B-세포 막 수용체 (BCR) 신호들에 의해 자극될 때, BTK는 하류 신호전달, 가령, 포스포리파아제 C 감마 2 (PLCγ)를 개시함으로써 사이토카인, 가령, TNF-αIL-6 등, 뿐만 아니라 NF-KB의 생성에 있어 중요한 역할을 한다.Another tyrosine kinase, Bruton's tyrosine kinase (BTK), has also been found to be functionally important in regulating cell proliferation in blood cancers. BTK is found in B-cells and hematopoietic cells rather than in some T-cells, natural killer cells, plasma cells, and the like. When BTK is stimulated by B-cell membrane receptor (BCR) signals caused by various inflammatory responses or cancers, BTK initiates downstream signaling, such as phospholipase C gamma 2 (PLCγ), thereby inducing cytokines, For example, it plays an important role in the production of NF-KB as well as TNF-αIL-6.

암 치료에서, BTK는 항-자살 신호를 생성하는 BCR 및 B-세포 표면 단백질을 변형시킴이 공지되어 있다. 그러므로, BTK의 저해는 BCR 신호전달과 관련된 암들, 가령, 림프종에 대한 항암 효과를 유발할 수 있다. 항염제 그리고 항암제로서 BTK 저해제의 작용 기전은 Nature Chemical Biology 2011, 7, 4에 상세히 기재되어 있다.In the treatment of cancer, BTK is known to modify BCR and B-cell surface proteins that produce anti-suicide signals. Therefore, inhibition of BTK can cause anticancer effects on cancers associated with BCR signaling, such as lymphoma. The mechanism of action of BTK inhibitors as anti-inflammatory and anti-cancer agents is described in detail in Nature Chemical Biology 2011 , 7 , 4.

이들 신호전달 경로들은 정확하게 조절되어야 한다. BTK를 인코드하는 유전자에서의 돌연변이는 인간에서 유전적 B-세포 특이적 면역결핍 질환을 유발하며, 이는 X-연관 무감마글로불린혈증 (XLA)으로 공지되어 있다 (Conley 외, Annu . Rev. Immunol. 27: 199 -227, 2009). 비정상적 BCR-매개된 신호전달은 조절이상 B-세포 활성화를 초래하여 수많은 자가면역 및 염증 질환들을 유발할 수 있다. 전임상 연구들은 BTK 결핍 생쥐들이 콜라겐-유발 관절염 발병에 대해 내성임을 보여준다. 또한, 성숙 B- 세포를 고갈시키는 CD20 항체인 리툭산의 임상 연구는 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스 및 다발성 경화증과 같은 다수의 염증성 질환에서 B-세포의 주요 역할을 밝혀내었다(Gurcan 외, Int . Immunopharmacol . 9: 10 -25, 2009). 그러므로, BTK 저해제는 자가면역 및/또는 염증 질환을 치료하기 위하여 사용될 수 있다.These signaling pathways must be accurately adjusted. Mutations in the gene encoding BTK cause genetic B-cell specific immunodeficiency diseases in humans, known as X-linked agammaglobulinemia (XLA) ( Conley et al. , Annu . Rev. Immunol 27: 199-227, 2009). Abnormal BCR-mediated signaling can lead to dysregulated B-cell activation leading to numerous autoimmune and inflammatory diseases. Preclinical studies show that BTK deficient mice are resistant to the development of collagen-induced arthritis. In addition, clinical studies of Rituxan, a CD20 antibody that depletes mature B-cells, have revealed a major role for B-cells in many inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus and multiple sclerosis ( Gurcan et al . , Int . Immunopharmacol . 9: 10-25, 2009 ). Therefore, BTK inhibitors can be used to treat autoimmune and / or inflammatory diseases.

또한, BTK의 비정상적 활성화 또는 과다발현은 B-세포 림프종의 발병기전에서 중요한 역할을 하는데, 이는 BTK의 저해가 혈액 종양들의 치료에 유용함을 나타내는 것이다 (Davis 외, Nature 463: 88 -92, 2010). 예비 임상 시험 결과는 BTK 저해제 이브루티닙 (PCI-32765)이 여러 유형의 B-세포 림프종 치료에 효과적이었음을 보여주었다 (예를 들어, 제 54회 미국 혈액학회 (ASH) 연례 회의 초록, Dec. 2012: 686 The Bruton's Tyrosine Kinase (BTK) Inhibitor, ibrutinib (PCI- 32765), Has Preferential Activity in the ABC Subtype of Relapsed/Refractory De Novo Diffuse Large B-Cell Lymphoma (DLBCL): 다기관, 개방-라벨, 1상 연구의 중간 결과). BTK가 다수의 신호전달 경로들에 있어 매개인자로서 중심 역할을 하기 때문에, BTK의 저해제는 항염제 및/또는 항암제로서 큰 관심을 끌고 있다 (Mohamed 외, Immunol. Rev. 228: 58 -73, 2009; Pan, Drug News perspect 21: 357 -362, 2008; Rokosz 외, Expert Opin . Ther . Targets 12: 883 -903, 2008; Uckun 외, Anti-cancer Agents Med . Chem . 7: 624 -632, 2007; Lou 외, J. Med . Chem . 55(10): 4539 -4550, 2012).In addition, abnormal activation or overexpression of BTK plays an important role in the pathogenesis of B-cell lymphoma, indicating that inhibition of BTK is useful for the treatment of blood tumors ( Davis et al., Nature 463: 88-92 , 2010 ). . Preliminary clinical trial results have shown that the BTK inhibitor ibrutinib (PCI-32765) has been effective in treating several types of B-cell lymphoma (eg, at the 54th Annual Meeting of Hematological Society (ASH) Abstract, Dec. 2012: 686 The Bruton's Tyrosine Kinase (BTK) Inhibitor, ibrutinib (PCI- 32765), Has Preferential Activity in the ABC Subtype of Relapsed / Refractory De Novo Diffuse Large B-Cell Lymphoma (DLBCL): Manifold, Open-Label, Phase 1 Intermediate results of the study). Since BTK plays a central role as a mediator in many signaling pathways, inhibitors of BTK are of great interest as anti-inflammatory and / or anticancer agents ( Mam et al., Immunol. Rev. 228: 58-73, 2009 ; Pan, Drug News perspect 21: 357 -362, 200 8; Rokosz et al . , Expert Opin . Ther. Targets 12: 883 -903, 2008 ; Uckun et al., Anti-cancer Agents Med . Chem . 7: 624-632, 2007 ; Lou et al . , J. Med . Chem . 55 (10): 4539-4550, 2012 ).

이브루티닙은 BTK의 활성 부위에서 시스테인 481 잔기와 화학적으로 상호작용하여 BTK 효소를 비활성화시킨다. 그러나, 시스테인 481 잔기의 세린 잔기로의 돌연변이(BTK-C481S)는 이브루티닙에 대한 내성을 가져오며, BTK-C481S가 임상에서 관찰되었다. 이러한 특이적 점 돌연변이는 이브루티닙의 표적을 효과적으로 제거함으로써, 이브루티닙이 효과적인 약물로서 기능하지 못하게 한다. 이브루티닙으로 치료받은 CLL 환자들 중에서, 51%가 다양한 이유로 인해 4년 마크까지 이의 사용을 중단한다. 예를 들어, 24%는 불내성, 부작용, 감염, 또는 사망으로 인하여 이브루티닙의 사용을 중단한다. 27%의 환자들은 질환 진행 (예컨대, 리히터의, BTK-C481S 돌연변이, PLCγ2 돌연변이)으로 인해 그 사용을 중단하며, 그리고 이브루티닙 사용을 중단한 환자들의 대략 1/3은 C481S 돌연변이를 가진다. 그러므로, 난치성, 내약성 또는 내성 환자들 (돌연변이체 형태의 BTK를 보유한 환자들을 포함)을 치료하기 위한, 특히, 이브루티닙과 상이한 기전을 통해 작용하는 새로운 치료제를 찾을 필요가 있다.Ibrutinib chemically interacts with the cysteine 481 residue at the active site of BTK to inactivate the BTK enzyme. However, mutations of the cysteine 481 residue to the serine residue (BTK-C481S) resulted in resistance to ibrutinib, and BTK-C481S was observed in the clinic. Such specific point mutations effectively eliminate the target of ibrutinib, thereby preventing ibrutinib from functioning as an effective drug. Of CLL patients treated with ibrutinib, 51% discontinue their use by the 4 year mark for a variety of reasons. For example, 24% stop using ibrutinib due to intolerance, side effects, infection, or death. 27% of patients discontinue their use due to disease progression (eg, Richter's, BTK-C481S mutation, PLCγ2 mutation), and approximately one third of patients who stop using ibrutinib have a C481S mutation. Therefore, there is a need to find new therapeutic agents for treating intractable, tolerant or resistant patients (including patients with mutant forms of BTK), in particular, acting through a different mechanism than ibrutinib.

기존의 치료제들은 전형적으로 다양한 내성 표현형을 나타내는 표적들과 관련하여 비효과적이다. 결과적으로, 이러한 암들은 생존에 있어 좋지 않은 예후를 가진다. 그러므로 다수의 키나아제 표적들, 특히 BTK 및 FLT3를 이중으로 저해할 수 있는 표적들에 대하여 친화성을 나타내는 새로운 제약학적 물질들을 개발하는 것이 중요하다. Existing therapeutic agents are typically ineffective with respect to targets that exhibit various resistance phenotypes. As a result, these cancers have a poor prognosis for survival. Therefore, it is important to develop new pharmaceutical substances that show affinity for a number of kinase targets, particularly those that can doublely inhibit BTK and FLT3.

본 발명은 상기한 문제를 해결하는 것을 이의 과제로 한다.This invention makes it a subject to solve the said problem.

본 발명은 화합물 7, 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 에스터, 전구약물, 수화물, 용매화합물 및 이성질체에 관한 것이다.The present invention relates to compound 7 , pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers thereof.

Figure pct00001
Figure pct00001

화합물 7Compound 7

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 야생형 Fms-관련 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. In one embodiment, the invention provides a method of inhibiting or reducing wild-type Fms-associated kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject, comprising administering compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject. . In one embodiment, the invention provides a method of inhibiting or reducing mutated FLT3 activity or expression in a subject comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포에서 야생형 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포에서 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. In one embodiment, the present invention provides a method of inhibiting or reducing wild type FLT3 activity or expression in human cells, comprising contacting Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with human cells. In another embodiment, the present invention provides a method of inhibiting or reducing mutated FLT3 activity or expression in human cells, comprising contacting Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with human cells.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 야생형 FLT3를 발현시키는 세포들의 세포자멸을 유도하는 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 돌연변이된 FLT3를 발현시키는 세포들의 세포자멸을 유도하는 방법을 제공한다. In another embodiment, the invention provides a method of inducing apoptosis of cells expressing wild type FLT3 in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, the present invention provides a method of inducing apoptosis of cells expressing mutated FLT3 in a subject in need thereof, comprising administering compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 야생형 FLT3 관련 혈액 종양의 치료 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 야생형 FLT3 활성 또는 발현을 저해 또는 감소시킨다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 돌연변이된 FLT3 관련 혈액 종양의 치료 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 돌연변이체 FLT3 활성 또는 발현을 저해 또는 감소시킨다.In one embodiment, the invention provides a method of treating a wild type FLT3 related blood tumor, comprising administering to a subject in need of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, the method inhibits or reduces wild type FLT3 activity or expression. In another embodiment, the present invention provides a method of treating a mutated FLT3 related blood tumor, comprising administering to compound in need thereof Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, the method inhibits or reduces mutant FLT3 activity or expression.

본 명세서에 개시된 방법들 중 어느 하나의 한 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, R834, N841 및 Y842로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기들이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 한 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 R834에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 Y842에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다.In one embodiment of any one of the methods disclosed herein, the mutated FLT3 comprises at least one point mutation. In one embodiment, the at least one point mutation is one or more residues selected from the group consisting of D835, F691, K663, R834, N841, and Y842. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. In one embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in R834. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation at Y842.

본 명세서에 기재된 방법들 중 어느 하나의 한 양상에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재한다. 한 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가진다. 한 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가진다. In one aspect of any of the methods described herein, at least one point mutation is in the tyrosine kinase domain of FLT3. In another embodiment, at least one point mutation is in the activation loop of FLT3. In one embodiment, the at least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. In one embodiment, the mutated FLT3 has additional ITD mutations. In one embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3 Group consisting of -K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Have one or more mutations selected from

본 명세서에 개시된 방법들 중 어느 하나의 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이이다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 상이한 대립유전자에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이이다. In one embodiment of any one of the methods disclosed herein, the at least one point mutation is two or more point mutations present in the same allele. In one embodiment, the at least one point mutation is two or more point mutations present in different alleles.

본 명세서에 개시된 방법들 중 어느 하나의 한 구체예에서, 대상체는 포유동물이다. 또 다른 구체예에서, 대상체는 인간이다. In one embodiment of any of the methods disclosed herein, the subject is a mammal. In another embodiment, the subject is a human.

인간 세포에서 야생형 FLT3 또는 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현을 저해 또는 감소시키기 위한 본 명세서에 개시된 임의의 방법들 중 한 구체예에서, 인간 세포는 인간 백혈병 세포주이다. 한 양상에서, 인간 백혈병 세포주는 급성 림프구 백혈병 세포주, 급성 골수성 백혈병 세포주, 급성 전골수세포 백혈병 세포주, 만성 림프구 백혈병 세포주, 만성 골수성 백혈병 세포주, 만성 호중구 백혈병 세포주, 급성 미분화 백혈병 세포주, 역형성 대세포 림프종 세포주, 전림프구 백혈병 세포주, 소아 골수단핵구 백혈병 세포주, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병 세포주, 삼계대 척수형성이상을 가진 급성 골수성 백혈병 세포주, 혼합 계대 백혈병 세포주, 호산구 백혈병 세포주, 또는 외투 세포 림프종 세포주이다. 한 양상에서, 인간 백혈병 세포주는 호산구 백혈병 세포주이다. 한 구체예에서, 인간 백혈병 세포주는 급성 골수성 백혈병 세포주이다.In one embodiment of any of the methods disclosed herein for inhibiting or reducing wild-type FLT3 or mutated FLT3 activity or expression in human cells, the human cell is a human leukemia cell line. In one aspect, the human leukemia cell line is acute lymphocytic leukemia cell line, acute myeloid leukemia cell line, acute promyeloid leukemia cell line, chronic lymphocytic leukemia cell line, chronic myeloid leukemia cell line, chronic neutrophil leukemia cell line, acute undifferentiated leukemia cell line, anaplastic large cell lymphoma Cell line, prelymphocytic leukemia cell line, juvenile osteoblastic leukemia cell line, adult T-cell acute lymphocytic leukemia cell line, acute myeloid leukemia cell line with tripassive spinal dysplasia, mixed passage leukemia cell line, eosinophil leukemia cell line, or mantle cell lymphoma cell line. In one aspect, the human leukemia cell line is an eosinophil leukemia cell line. In one embodiment, the human leukemia cell line is an acute myeloid leukemia cell line.

야생형 FLT3 또는 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현과 관련된 혈액 종양을 치료하기 위한 본 명세서에 개시된 임의의 방법들 중 한 구체예에서, 혈액 종양은 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종이다. 또 다른 구체예에서, 백혈병은 호산구 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병이다.In one embodiment of any of the methods disclosed herein for treating a blood tumor associated with wild type FLT3 or mutated FLT3 activity or expression, the blood tumor is leukemia. In another embodiment, the leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyeloid leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, pediatric bone marrow Monocyte leukemia, adult T-cell acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive spinal dysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. In another embodiment, the leukemia is eosinophil leukemia. In another embodiment, the leukemia is acute myeloid leukemia.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 혈액 종양의 치료 방법을 제공하며, 이때 상기 대상체는 FLT3 활성 또는 발현의 저해제에 대한 내성 또는 재발을 보인다. 한 구체예에서, 상기 저해제는 퀴자르티닙, 길테리티닙, 수니티닙, 소라페닙, 미도스타우린, 레스타우르티닙, 크레놀라닙, PLX3397, PLX3623, 크레놀라닙, 포나티닙, 또는 파크리티닙이다. 또 다른 구체예에서, 저해제는 퀴자르티닙 또는 길테리티닙이다.In one embodiment, the invention provides a method of treating a blood tumor in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the subject is an inhibitor of FLT3 activity or expression It is resistant to or relapses. In one embodiment, the inhibitor is quizartinib, gilteritinib, sunitinib, sorafenib, midostaurine, restautinib, crenolanib, PLX3397, PLX3623, crenolanib, ponatinib, or paritytinib to be. In another embodiment, the inhibitor is quizartinib or gilteritinib.

한 구체예에서, 혈액 종양은 백혈병이다. 다른 구체예에서, 백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종이다. 특정 구체예에서, 백혈병은 호산구 백혈병이다. 또 다른 특정 구체예에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병이다.In one embodiment, the blood tumor is leukemia. In another embodiment, the leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, pediatric osteoblastic leukemia Leukemia, adult T-cell acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive myelodysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. In certain embodiments, the leukemia is eosinophil leukemia. In another specific embodiment, the leukemia is acute myeloid leukemia.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 비정상적(예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 특정 구체예들에서, 돌연변이된 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 예를 들어, 최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재할 수 있다(예컨대, 시스테인 잔기는 BTK의 키나아제 도메인에 존재한다). 대상체는 포유동물, 예를 들어, 인간일 수 있다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 E41, P190, 및 C481로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기들이다. 예를 들어, 점 돌연변이는 E41K, P190K, 및 C481S로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이 될 수 있다. 한 구체예에서, 잔기 C481에서의 점 돌연변이는 C481S, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택된다.In one embodiment, the invention inhibits or reduces abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof Provide a method. In certain embodiments, the mutated BTK comprises at least one point mutation. For example, at least one point mutation may be present on a cysteine residue (eg, the cysteine residue is in the kinase domain of BTK). The subject can be a mammal, eg, a human. In certain embodiments, the at least one point mutation is one or more residues selected from the group consisting of residues E41, P190, and C481. For example, the point mutation can be one or more selected from the group consisting of E41K, P190K, and C481S. In one embodiment, the point mutation at residue C481 is selected from C481S, C481R, C481T and / or C481Y.

특정 구체예들에서, BTK 돌연변이체는 공유 BTK 저해제(예컨대, 이브루티닙 및/또는 아칼라브루티닙 또는 다른 공유 BTK 저해제)에 의한 저해에 내성이다. 한 구체예에서, 돌연변이된 BTK의 활성은 공유 비가역성 BTK 저해제에 의한 야생형 BTK의 활성 보다 공유 비가역성 BTK 저해제에 의해 더 적게 저해된다. 예를 들어, 공유 비가역성 BTK 저해제는 야생형 BTK에 비해 돌연변이된 BTK에 있어서 최소한 50% 더 높은 IC50을 가진다. 특정 구체예들에서, BTK 돌연변이체는 비-공유 BTK 저해제에 의한 저해에 내성이다. 특정 구체예들에서, BTK 돌연변이체는 비-공유 BTK 저해제에 의한 저해에 내성이다.In certain embodiments, the BTK mutant is resistant to inhibition by covalent BTK inhibitors (eg, ibrutinib and / or acalabrutinib or other covalent BTK inhibitors). In one embodiment, the activity of the mutated BTK is less inhibited by the covalent irreversible BTK inhibitor than the activity of the wild type BTK by the covalent irreversible BTK inhibitor. For example, covalent irreversible BTK inhibitors have an IC50 that is at least 50% higher for mutated BTK compared to wild type BTK. In certain embodiments, the BTK mutant is resistant to inhibition by non-covalent BTK inhibitors. In certain embodiments, the BTK mutant is resistant to inhibition by non-covalent BTK inhibitors.

한 구체예에서, 시스테인 상의 점 돌연변이는 단 하나의 BTK 대립유전자 상에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 시스테인 상의 점 돌연변이는 2개의 BTK 대립유전자 상에 존재한다. In one embodiment, point mutations on cysteine are on only one BTK allele. In another embodiment, the point mutations on cysteine are on two BTK alleles.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서의 암 치료 방법을 제공하며, 이때 환자는 BTK의 야생형 (예컨대, 과발현된 야생형) 또는 돌연변이체 형태를 가진다. In one embodiment, the invention provides a method of treating cancer in a subject in need thereof, comprising administering to compound in need thereof a compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the patient is a wild type of BTK (Eg, overexpressed wild type) or mutant forms.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 B 세포 종양의 치료 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 화합물 7은 BTK, ERK, FLT3, AURK 또는 AKT의 경로 활성화를 저해한다. 한 구체예에서, 대상체는 BTK의 돌연변이체 형태이다. 예를 들어, B 세포 종양은 외투 세포 림프종 (MCL), B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-ALL), 버킷 림프종, 만성 림프구 백혈병 (CLL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)으로 구성된 그룹 중 하나 이상에서 선택된다. 특정 구체예들에서, 화합물 7은 임의의 형태 (야생형 또는 돌연변이된)의 오로라 키나아제의 활성을 저해 및/또는 감소시킨다. 한 구체예에서, 오로라 키나아제는 돌연변이된 오로라 키나아제이다. 한 구체예에서, 화합물 7의 투여는 세포자멸과 같은 기전에 의한 세포 사멸을 유도한다. 또 다른 구체예에서, 화합물 7의 투여는 다배수체, 자가포식, 세포-주기 정지 또는 기타 비-세포자멸 형태의 세포 사멸을 유도한다. 한 구체예에서, 화합물 7은 야생형 및/또는 돌연변이체 BTK의 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 돌연변이된 BTK는, 예를 들어, 시스테인 잔기 (예컨대, 잔기 C481) 상에 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. In one embodiment, the present invention provides a method of treating a B cell tumor in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject. In one embodiment, compound 7 inhibits pathway activation of BTK, ERK, FLT3, AURK or AKT. In one embodiment, the subject is a mutant form of BTK. For example, B cell tumors consist of mantle cell lymphoma (MCL), B-cell acute lymphocytic leukemia (B-ALL), Burkitt's lymphoma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) It is selected from one or more of the groups. In certain embodiments, compound 7 inhibits and / or reduces the activity of any form (wild type or mutated) aurora kinase. In one embodiment, the aurora kinase is a mutated aurora kinase. In one embodiment, administration of compound 7 induces cell death by a mechanism such as apoptosis. In another embodiment, administration of compound 7 induces cell death in a multiploid, autophagy, cell-cycle arrest or other non-apoptotic form. In one embodiment, compound 7 inhibits and / or reduces the activity or expression of wild type and / or mutant BTK. The mutated BTK includes at least one point mutation, for example on a cysteine residue (eg, residue C481).

일부 구체예들에서, 화합물 7은 대상체에서 야생형 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 다른 구체예들에서, 화합물 7은 대상체에서 돌연변이체 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 돌연변이된 FLT3 는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재한다. 돌연변이된 FLT3은 1 또는 2개의 대립유전자들에서 또 다른 ITD 돌연변이를 가질 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포들과 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포들에서 비정상적(예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 돌연변이된 BTK 는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재한다. 한 구체예에서, 시스테인 잔기는 BTK의 키나아제 도메인에 존재한다. 최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 E41, P190, 및 C481로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이다. 한 구체예에서, 잔기 시스테인 481에서의 점 돌연변이는 C481S, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택된다.In certain embodiments, compound 7 inhibits and / or reduces wild type Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. In other embodiments, compound 7 inhibits and / or reduces mutant Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. The mutated FLT3 may comprise at least one point mutation. For example, at least one point mutation is present on one or more residues selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. The mutated FLT3 may have another ITD mutation in one or two alleles. In one embodiment, the invention provides a method of abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in human cells, comprising contacting Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with human cells. Provided are methods of inhibition or reduction. The mutated BTK may comprise at least one point mutation. In one embodiment, at least one point mutation is on the cysteine residue. In one embodiment, the cysteine residue is in the kinase domain of BTK. At least one point mutation is at least one selected from the group consisting of residues E41, P190, and C481. In one embodiment, the point mutation at residue cysteine 481 is selected from C481S, C481R, C481T and / or C481Y.

전술한 개념들과 하기 보다 상세히 논의되는 추가 개념들의 조합 모두는 (단 이러한 개념들은 서로 모순되지 않음) 본 명세서에 개시된 발명의 주제의 일부인 것으로 간주됨을 이해하여야 한다. 특히, 본 명세서 마지막에 청구범위에 기재된 주제들의 조합 모두는 본 명세서에 개시된 발명의 주제의 일부인 것으로 간주된다. 또한 참고문헌으로 포함되는 임의의 문헌에서 사용될 수도 있는, 본 명세서에서 명확하게 사용되는 용어는 본 명세서에 개시된 특정 개념들과 가장 일관되는 의미로 부합되어야 함을 이해하여야 한다.It is to be understood that both the foregoing concepts and the combination of additional concepts discussed in greater detail below, provided that these concepts do not contradict each other are considered part of the subject matter of the invention disclosed herein. In particular, all combinations of the subject matter described in the claims at the end of this specification are considered to be part of the subject matter of the invention disclosed herein. It is also to be understood that the terminology used explicitly herein, which may also be used in any document incorporated by reference, should be consistent with the meaning most consistent with the specific concepts disclosed herein.

본 발명의 내용 중에 포함되어 있다.It is included in the content of this invention.

도 1은 화합물 7이 퀴자르티닙과 유사한 그리고 이브루티닙과 대조되는 방식으로 MV4-11 세포들에서 FLT3 경로를 저해함을 보여주는 웨스턴-블롯 이미지이다.
도 2는 화합물 7이 0.5, 5.0, 및 50 nM 치료량에서 MV4-11 세포에서의 BTK 경로를 저해하며 그 결과가 이브루티닙 치료에서 관찰한 결과들에 따름을 보여주는 웨스턴-블롯 이미지이다.
도 3은 화합물 7이 0.5, 5.0, 및 50 nM 치료량에서 EOL-1 세포에서의 BTK 경로를 저해하며 그 결과가 이브루티닙 치료에서 관찰한 결과들에 따름을 보여주는 웨스턴-블롯 이미지이다.
도 4는 FLT3-ITD (MV411 및 MOLM-13) 및 FLT3-WT (NOMO-1 및 KG-1) 세포들에 대한 화합물 7, 이브루티닙 및 퀴자르티닙의 세포독성 효과의 비교를 용량-반응 곡선과 이에 상응하는 IC50 값의 형태로 보여준다.
도 5는 IV, 경구 현탁액 또는 경구 캡슐 중 하나에 의한, 다수의 투여 경로들에 의해 다양한 용량으로 공급되는 화합물 7의 평균 혈장 농도에 관한 쥐 약동학 데이터를 보여준다.
도 6은 22-일의 기간에 걸쳐 몇 가지 상이한 용량들로 제공된 화합물 7의 효능을 동일한 시기에 걸쳐 하나의 용량으로 제공된 대조 및 이브루티닙과 비교한 생쥐-이종이식 모델 연구를 나타낸다. 도 6은 대조 또는 이브루티닙 치료와 비교시 화합물 7이 용량 증가에 따라 종양 부피를 감소시킴을 나타낸다.
도 7은 화합물 7, 이브루티닙, 및 퀴자르티닙의 0.5, 5.0, 및 50 nM 치료에서 초기 세포자멸 세포, 총 세포자멸 세포, 및 살아있는 세포를 보여준다.
도 8은 이브루티닙 및 퀴자르티닙 치료와 비교하여 화합물 7이 MV4-11 세포들에서 세포자멸을 유도함을 보여주는 웨스턴-블롯 이미지 (상부) 및 아넥신 V 분석 (하부)이다.
도 9는 HEK293T 형질감염 세포에서 화합물 7에 의한, 다양한 효소들의 인산화 형태들의 감소를 보여주는 웨스턴-블롯 이미지이다. BTK의 야생형 및 C481S 돌연변이체 형태 모두 0.5 및 1.0 μM 농도 모두에서 화합물 7에 의해 저해된다.
도 10은 화합물 7이 BTK를 저해함을 보여주는 웨스턴-블롯 이미지를 보여준다. 1 시간 및 24 시간 시점들이 도시되어 있다.
도 11은 다양한 세포주들에 대한 화합물 7 및 이브루티닙의 용량-반응 곡선을 보여준다.
도 12는 화합물 7이 Mino 및 Ramos B-세포 종양 세포주들에서 세포성 세포자멸을 유도함을 보여준다.
도 13은 화합물 7이 매우 강력한 오로라 키나아제 저해제임을 보여준다. 세포주들은 위에서 아래로 다음과 같다: Mino, Ramos 및 SU-DHL6.
도 14는 화합물 7이 Mino 및 Ramos B-세포 종양 세포주에서 다배수성을 유도함을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 15는 다양한 헴 세포주들에서 화합물 7의 세포독성에 관한 용량-반응 곡선을 보여준다.
도 16은 다양한 FLT3 돌연변이체들 (표시됨)로 형질감염된 동질유전자 Ba/F3 세포들에 대한 화합물 7, 퀴자르티닙, 길테리티닙, 및 크레놀라닙의 용량-반응 곡선들을 보여준다.
도 17a-j는 화합물 7이 MV4-11 세포들에서 시간-의존적으로 세포자멸을 유도함을 보여준다. 도 17a는 MV4-11 세포들만의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17b는 1시간시에 비히클로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17c는 3시간시에 비히클로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17d는 6시간시에 비히클로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17e는 24시간시에 비히클로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17f는 1시간시에 화합물 7로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17g는 3시간시에 화합물 7로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17h는 6시간시에 화합물 7로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17i는 24시간시에 화합물 7로 처리된 MV4-11 세포들의 아넥신 V 분석을 나타낸다. 도 17j는 후기 세포자멸, 초기 세포자멸, 또는 살아있는 상태에서 세포들의 백분율 도표를 나타낸다 (CG = 화합물 7).
도 18은 화합물 7이 MV411 세포들에서 용량-의존 방식으로 G0/G1 세포-주기 정지를 유도함을 보여준다. 도 18a는 다양한 농도의 G0/G1 상태, S 상태, 또는 G2/M 상태 중 어느 하나에서의 MV4-11 세포들의 백분율에 관한 그래프 도시이다. 도 18b는 5-에틴일-2′데옥시우리딘 (EdU) 형광을 나타내는 y-축과 프로포듐 아이오다이드 염색된 세포들을 나타내는 x-축의 유세포 분석도를 보여준다.
도 19는 화합물 7이 MOLM-13 세포들에서 용량-의존 방식으로 G0/G1 세포-주기 정지를 유도함을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 20a는 5-에틴일-2′데옥시우리딘 (EdU) 형광을 나타내는 y-축과 프로포듐 아이오다이드 염색된 세포들을 나타내는 x-축의 유세포 분석도를 보여준다. 도 20b는 화합물 7이 다양한 헴 세포주들(도 20)에서 다배수체를 유도함을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 21은 화합물 7이 KG-1 세포들에서 용량-의존 방식으로 세포-주기 조절이상을 유도하는 것으로 나타났음을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 22는 화합물 7이 NOMO-1 세포들에서 용량-의존 방식으로 세포-주기 조절이상을 유도하는 것으로 나타났음을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 23은 화합물 7이 다양한 FLT3 돌연변이 (표시됨)를 가진 동질유전자 BA/F3 세포에서 용량-의존 방식으로 세포-주기 조절이상을 유도하는 것으로 나타났음을 보여준다.
도 24는 오로라 키나아제 저해제 AT928에 비해, 웨스턴 블롯 시그니처에서 나타난 바와 같이 화합물 7이 MV4-11 세포들에서 오로라 키나아제 활성 및 신호전달을 저해함을 보여준다.
도 25는 이브루티닙 및 퀴자르티닙에 비해, 웨스턴 블롯 시그니처에서 나타난 바와 같이 화합물 7이 FLT-3 WT 세포들 (KG-1)에서 오로라 키나아제 활성 (A) 및 신호전달 (B)을 저해함을 보여준다.
도 26은 화합물 7이 EOL-1 세포들에서 PDGFRA 및 FLT3 (WT) 신호전달을 저해함을 보여준다.
도 27은 화합물 7이 RAMOS 세포들에서 세포 주기 진행을 방해함을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 28은 화합물 7이 Mino, RAMOS, GRANTA-519, 및 SU-DHL-6 세포들에서 세포 주기 진행을 방해함을 보여준다. 수직선은 세포들을 정상 DNA 함량 및 다배수성으로 구별한다. 수직선의 왼쪽으로, 세포들은 정상 DNA 함량 (<= 4N)을 함유하며 세포 주기의 G0/G1, S, 또는 G2/M 기에 존재한다. 수직선의 오른쪽으로, 세포들은 M 기를 거치지 않고 보다 많은 양의 DNA (> 4N)를 축적하였으며, 이는 다배수성을 암시하는 것이다.
도 29는 이브루티닙에 비해 화합물 7이 Ramos 세포들에서 BTK 및 오로라 키나아제 활성을 저해함을 보여준다.
도 30은 이브루티닙에 비해, 화합물 7이 Ramos 세포들에서 BCR 신호전달에 영향을 미침을 보여준다.
도 31은 화합물 7이 높은 혈청 농도에서 높은 활성을 유지함을 보여준다. 1 is a western-blot image showing that compound 7 inhibits the FLT3 pathway in MV4-11 cells in a manner similar to quartinib and in contrast to ibrutinib.
FIG. 2 is a Western-blot image showing that Compound 7 inhibits the BTK pathway in MV4-11 cells at 0.5, 5.0, and 50 nM doses and the results depend on the results observed in ibrutinib treatment.
FIG. 3 is a Western-blot image showing that Compound 7 inhibits the BTK pathway in EOL-1 cells at 0.5, 5.0, and 50 nM therapeutic doses and the results depend on the results observed in ibrutinib treatment.
FIG. 4 is a dose-response comparison of the cytotoxic effects of Compound 7, Ibrutinib and Quizartinib on FLT3-ITD (MV411 and MOLM-13) and FLT3-WT (NOMO-1 and KG-1) cells. Shown in the form of a curve and the corresponding IC 50 value.
FIG. 5 shows rat pharmacokinetic data on average plasma concentrations of Compound 7 supplied at various doses by multiple routes of administration, either IV, oral suspension or oral capsule.
FIG. 6 shows a mouse-xenograft model study comparing the efficacy of Compound 7 given at several different doses over a 22-day period with a control and ibrutinib given at one dose over the same time period. FIG. 6 shows that Compound 7 decreases tumor volume with increasing dose as compared to control or ibrutinib treatment.
7 shows early apoptotic cells, total apoptotic cells, and live cells in 0.5, 5.0, and 50 nM treatment of Compound 7, Ibrutinib, and Quizartinib.
FIG. 8 is a Western-blot image (top) and Annexin V analysis (bottom) showing compound 7 induces apoptosis in MV4-11 cells compared to ibrutinib and quzartinib treatment.
9 is a western-blot image showing reduction of phosphorylated forms of various enzymes by compound 7 in HEK293T transfected cells. Both wild type and C481S mutant forms of BTK are inhibited by compound 7 at both 0.5 and 1.0 μM concentrations.
10 shows western-blot images showing compound 7 inhibits BTK. 1 hour and 24 hour time points are shown.
11 shows dose-response curves of compound 7 and ibrutinib for various cell lines.
12 shows that compound 7 induces cellular apoptosis in Mino and Ramos B-cell tumor cell lines.
13 shows that Compound 7 is a very potent Aurora Kinase inhibitor. Cell lines are from top to bottom: Mino, Ramos and SU-DHL6.
14 shows compound 7 induces multiploidy in Mino and Ramos B-cell tumor cell lines. Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
15 shows dose-response curves for cytotoxicity of compound 7 in various heme cell lines.
16 is different FLT3 mutations the (shown) the compounds of the transformed infected homologous gene Ba / F3 cells to 7, quinolyl cut tinip way Terry tinip, crushers and surprising capacity of the nip-shows the response curve.
17A-J show that compound 7 induces apoptosis time-dependently in MV4-11 cells. 17A shows Annexin V analysis of MV4-11 cells only. 17B shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with vehicle at 1 hour. 17C shows annexin V analysis of MV4-11 cells treated with vehicle at 3 hours. 17D shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with vehicle at 6 hours. 17E shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with vehicle at 24 hours. 17F shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with Compound 7 at 1 hour. 17G shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with compound 7 at 3 hours. 17H shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with compound 7 at 6 hours. 17i shows Annexin V analysis of MV4-11 cells treated with Compound 7 at 24 hours. 17J shows a percentage plot of cells in late apoptosis, early apoptosis, or living state (CG = Compound 7).
18 shows Compound 7 induces G0 / G1 cell-cycle arrest in a dose-dependent manner in MV411 cells. 18A is a graphical depiction of the percentage of MV4-11 cells in any one of various concentrations of G0 / G1 state, S state, or G2 / M state. 18B shows a flow cytometric diagram of the y-axis showing 5-ethynyl-2′deoxyuridine (EdU) fluorescence and the x-axis showing propodium iodide stained cells.
19 shows compound 7 induces G0 / G1 cell-cycle arrest in a dose-dependent manner in MOLM-13 cells. Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
20A shows a flow cytometric diagram of the y-axis showing 5-ethynyl-2′deoxyuridine (EdU) fluorescence and the x-axis showing propodium iodide stained cells. 20B shows that compound 7 induces polyploids in various heme cell lines (FIG. 20). Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
FIG. 21 shows that Compound 7 has been shown to induce cell-cycle dysregulation in a dose-dependent manner in KG-1 cells. Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
FIG. 22 shows that Compound 7 has been shown to induce cell-cycle dysregulation in a dose-dependent manner in NOMO-1 cells. Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
FIG. 23 shows that Compound 7 has been shown to induce cell-cycle dysregulation in a dose-dependent manner in homogeneous BA / F3 cells with various FLT3 mutations (shown).
FIG. 24 shows that Compound 7 inhibits Aurora kinase activity and signaling in MV4-11 cells as shown in Western blot signature, compared to Aurora kinase inhibitor AT928.
25 is a prejudice to Eve Ruti nip and quinone than cuts tinip, Aurora kinase activity in the described as the compound 7 is FLT-3 WT cells appeared in the Western blot signature (KG-1) (A) and signaling (B) Shows.
FIG. 26 shows that Compound 7 inhibits PDGFRA and FLT3 (WT) signaling in EOL-1 cells.
27 shows compound 7 interferes with cell cycle progression in RAMOS cells. Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
FIG. 28 shows that Compound 7 interferes with cell cycle progression in Mino, RAMOS, GRANTA-519, and SU-DHL-6 cells. Vertical lines distinguish cells by normal DNA content and pluripotency. To the left of the vertical line, cells contain normal DNA content (<= 4N) and are present in the G0 / G1, S, or G2 / M phase of the cell cycle. To the right of the vertical line, cells accumulated a greater amount of DNA (> 4N) without going through the M phase, suggesting pluripotency.
FIG. 29 shows that Compound 7 inhibits BTK and Aurora kinase activity in Ramos cells compared to Ibrutinib.
FIG. 30 shows that Compound 7 affects BCR signaling in Ramos cells compared to ibrutinib.
31 shows that Compound 7 retains high activity at high serum concentrations.

본 발명은, 한 구체예에서, 암, 가령, 야생형 또는 돌연변이된 Fms-관련 티로신 키나아제 (FLT3)의 비정상적 활성화에 의해 유발되는 혈액 암의 치료를 위해, 2,3-다이하이드로-아이소인돌-1-온 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 에스터, 전구약물, 수화물, 용매화합물 및 이성질체를 이용하여 이러한 키나아제를 저해 또는 감소시키는 방법을 제공한다. 또한, BTK, 특히 돌연변이된 BTK (예컨대, C481S BTK)와 관련된 B-세포 종양들을 치료하는 것과 관련하여 전술한 예들을 고려하였을 때, 화합물 7은 놀랍게도 B-세포 종양 세포주들에 대해 세포독성인 것으로 밝혀졌으며; 다수의 종래 치료제들 (예컨대, 이브루티닙)은 효과가 거의 내지 전혀 없었다. 다른 종래의 치료제들 (예컨대, 이브루티닙)과 달리, 화합물 7의 작용 기전은 BTK와의 비-공유 결합 상호작용을 통한 것으로 생각되며, 이는 BTK 단백질에 대한 내성을 예방함에 유용하다. 그러므로, 한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 비정상적 (예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 또한, 화합물 7은 이브루티닙에 의해 영향받지 않는 B 세포 종양들에서 작동하는 또다른 키나아제들 (AURK, c-Src 및 기타)을 저해한다.The present invention provides, in one embodiment, 2,3-dihydro-isoindole-1 for the treatment of cancer, such as blood cancer caused by abnormal activation of wild type or mutated Fms-associated tyrosine kinase (FLT3). Provided are methods for inhibiting or reducing such kinases using -one compounds, or pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers thereof. In addition, given the foregoing examples with regard to treating B-cell tumors associated with BTK, in particular mutated BTK (eg, C481S BTK), Compound 7 is surprisingly cytotoxic to B-cell tumor cell lines. Revealed; Many conventional therapies (eg ibrutinib) have little to no effect. Unlike other conventional therapeutics (eg ibrutinib), the mechanism of action of Compound 7 is thought to be through non-covalent interactions with BTK, which is useful for preventing resistance to BTK proteins. Therefore, in one embodiment, the invention inhibits abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof Or a reduction method. In addition, compound 7 inhibits other kinases (AURK, c-Src and others) that operate in B cell tumors that are not affected by ibrutinib.

정의Justice

본 명세서에서 사용되는 용어는 특정 구체예들을 오직 설명하기 위한 것이며, 제한을 하고자 하는 것이 아님을 이해하여야 한다. It is to be understood that the terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments only, and is not intended to be limiting.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 해당 분야의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 같은 동일한 의미를 가진다. 본 출원에 기재된 것들과 유사하거나 균등한 방법들 및 재료들이 본 발명을 실시 또는 테스트함에 사용될 수 있으나, 대표적인 방법들 및 재료들이 본 명세서에 기재된다.Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Although methods and materials similar or equivalent to those described herein can be used to practice or test the present invention, representative methods and materials are described herein.

본 명세서 전반에 걸쳐 "한 구체예" 또는 "구체예"라는 지칭은 해당 구체예과 관련하여 기재된 특정한 특징, 구조 또는 특성이 최소한 하나의 구체예에 포함됨을 의미한다. 그러므로, 본 명세서 전반에 걸쳐 여러 부분에서 "한 구체예에서" 또는 "한 구체예에서" 라는 어구의 사용은 반드시 모두 동일한 구체예를 언급하는 것은 아니다. 더욱이, 특정한 특징, 구조 또는 특성들은 하나 이상의 구체예들에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다. 또한, 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는, 단수형 "하나" 및 "그것"은 문맥에서 달리 명확히 언급이 없는 한 복수형을 포함한다. 용어 "또는”은 명세서에서 명확히 달리 언급이 없는 한 일반적으로 “및/또는”을 포함하는 의미로 사용됨을 유의하여야 한다.Reference throughout this specification to “one embodiment” or “embodiment” means that a particular feature, structure, or characteristic described in connection with that embodiment is included in at least one embodiment. Thus, the use of the phrase “in one embodiment” or “in an embodiment” in various places throughout this specification is not necessarily all referring to the same embodiment. Moreover, certain features, structures or features may be combined in any suitable manner in one or more embodiments. Also, as used in this specification and the appended claims, the singular forms “a,” “an,” and “the” include plural unless the context clearly dictates otherwise. It should be noted that the term "or" is generally used in its sense including "and / or" unless the context clearly dictates otherwise.

달리 지시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에서 사용되는 성분, 반응조건 등의 양을 표현하는 모든 수치는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 변형되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대의 언급이 없는 한, 본 명세서 및 첨부된 청구범위에 제시된 수치 파라미터들은 근사치로서, 본 발명에 의해 얻고자 하는 필요한 성질에 따라 달라질 수 있다. Unless otherwise indicated, all numerical values expressing amounts of components, reaction conditions, and the like used in the specification and claims are to be understood as being modified in all instances by the term "about." Accordingly, unless stated to the contrary, the numerical parameters set forth herein and in the appended claims are approximate and may vary depending upon the desired properties sought to be obtained by the present invention.

본 명세서 전반에 걸쳐, 수치 범위는 일정한 양으로 제공된다. 이들 범위는 해당 범위 내의 모든 하위범위들을 포함함을 이해하여야 한다. 그러므로, 범위 "50 내지 80"은 해당 범위내에서 모든 가능한 범위를 포함한다 (예컨대, 51-79, 52-78, 53-77, 54-76, 55-75, 60-70 등). 또한, 주어진 범위 내 모든 수치들은 해당 범위에 포함되는 범위에 관한 끝점이 될 수 있다(예컨대, 범위 50-80은 끝점이 들어간 범위, 가령, 55-80, 50-75 등을 포함한다).Throughout this specification, numerical ranges are provided in constant amounts. It should be understood that these ranges include all subranges within that range. Therefore, the range "50 to 80" includes all possible ranges within that range ( eg , 51-79, 52-78, 53-77, 54-76, 55-75, 60-70, etc. ). In addition, all values are within a given range can be the end point of the range included in the range (for example, the range 50 to 80 comprises a range containing the end point, e.g., 55-80, 50-75, etc.).

화합물 7은 1-{3-플루오로-4-[7-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-1-옥소-2,3-다이하이드로-1H-아이소인돌-4-일]-페닐}-3-(2,4,6-트라이플루오로페닐)유레아를 지칭하며 하기 구조를 가진다: Compound 7 is 1- {3-fluoro-4- [7- (5-methyl-1H-imidazol-2-yl) -1-oxo-2,3-dihydro-1H-isoindol-4-yl ] -Phenyl} -3- (2,4,6-trifluorophenyl) urea and has the following structure:

Figure pct00002
Figure pct00002

본 발명은 또한 화합물 7의 제약학적으로 허용가능한 염, 에스터, 전구약물, 수화물, 용매화합물 및 이성질체를 포함한다.The present invention also includes pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers of compound 7.

"제약학적으로 허용가능한 염"은 산 및 염기 부가염 모두를 포함한다. 화합물 7의 제약학적으로 허용가능한 염은 무기 또는 유기산으로부터 유도된 "제약학적으로 허용가능한 산 부가염"일 수 있으며, 이러한 염은 음이온을 함유하는 제약학적으로 허용가능한 비독성 산 부가염이 될 수 있다. 예를 들어, 상기 염은 무기산, 가령, 염화수소산, 황산, 질산, 인산, 브롬산, 아이오드화수소산, 등; 유기 탄산, 가령, 타르타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트라이클로로아세트산, 트라이플루오로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레산, 등; 및 설폰산, 가령, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌설폰산, 등에 의해 형성된 산 부가염을 포함할 수 있다. "Pharmaceutically acceptable salts" includes both acid and base addition salts. Pharmaceutically acceptable salts of compound 7 may be "pharmaceutically acceptable acid addition salts" derived from inorganic or organic acids, which salts may be pharmaceutically acceptable non-toxic acid addition salts containing anions. have. For example, the salts may be inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, bromic acid, hydroiodic acid, and the like; Organic carbonates such as tartaric acid, formic acid, citric acid, acetic acid, trichloroacetic acid, trifluoroacetic acid, gluconic acid, benzoic acid, lactic acid, fumaric acid, maleic acid, and the like; And sulfonic acids, for example, may include methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p- toluenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid, an acid addition salt formed by.

화합물 7의 제약학적으로 허용가능한 염은 해당 분야에 공지된 종래의 방법들로 제조될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 "제약학적으로 허용가능한 염"은, 예컨대, 화합물 7을 수-혼화성 유기 용매, 가령, 아세톤, 메탄올, 에탄올 또는 아세토나이트릴 등에 용해시키고; 과량의 유기산 또는 무기산의 수용액을 이에 첨가하고; 이렇게 수득된 혼합물을 침전 또는 결정화하여 제조될 수 있다. 또한, 이러한 염은 용매 또는 과량의 산을 이로부터 더욱 증류시킨 다음; 상기 혼합물을 건조시키거나, 예컨대, 흡인 필터를 사용하여 추출물을 여과시켜 제조될 수 있다.Pharmaceutically acceptable salts of compound 7 can be prepared by conventional methods known in the art. Specifically, "pharmaceutically acceptable salts" according to the present invention include, for example, dissolving compound 7 in a water-miscible organic solvent such as acetone, methanol, ethanol or acetonitrile and the like; Excess aqueous solution of organic or inorganic acid is added thereto; The mixture thus obtained can be prepared by precipitation or crystallization. In addition, such salts may be further distilled from the solvent or excess acid therefrom; The mixture can be prepared by drying or filtering the extract using, for example, a suction filter.

본 명세서에서 사용되는 용어 "에스터"는 -(R)n-COOR'의 화학 구조를 가지는 화학적 모이어티를 지칭하며, 이때 달리 언급이 없는 한, R 및 R'은 각각 독립적으로 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 (방향족 고리에 의해 산소 원자에 연결된) 및 헤테로지방족고리 (방향족 고리에 의해 연결됨)로 구성된 그룹에서 선택되고, n은 0 또는 1이다. As used herein, the term "ester" refers to a chemical moiety having a chemical structure of-(R) n -COOR ', where R and R' are each independently alkyl, cycloalkyl, Aryl, heteroaryl (connected to the oxygen atom by an aromatic ring) and heteroaliphatic ring (connected by the aromatic ring), n is 0 or 1.

본 명세서에서 사용되는 용어 "전구약물"은 모체 약물을 생성하기 위하여 생체내 대사 활성화를 거치게 되는 전구체 화합물을 지칭한다. 전구약물은 일부 경우에 이의 모체 약물에 비해 용이하게 투여될 수 있어 종종 유용하다. 예를 들어, 일부 전구약물은 이의 모체 약물이 종종 좋지 않은 생체이용률을 보이는 것과 달리 경구 투여를 통해 생체이용가능하다. 또한, 전구약물은 이의 모체 약물에 비해 제약학적 조성물에서 개선된 용해도를 보일 수 있다. 예를 들어, 약물의 용해도가 세포막을 통한 투과성에 부정적으로 영향을 줄 수 있으므로 약물 전달 효율을 증가시키기 위해 화합물 7은 에스터 전구약물의 형태로 투여될 수 있다. 이때, 에스터 전구약물 형태의 화합물이 표적 세포로 유입되면, 이는 카르복시산 및 활성 엔터티로 대사적으로 가수분해될 수 있다.As used herein, the term “prodrug” refers to in vivo to produce a parent drug. It refers to a precursor compound that undergoes metabolic activation. Prodrugs are often useful because, in some cases, they may be easier to administer than their parent drug. For example, some prodrugs are bioavailable via oral administration, unlike their parent drugs often exhibit poor bioavailability. Prodrugs may also exhibit improved solubility in pharmaceutical compositions compared to their parent drug. For example, the solubility of a drug can have a negative impact on the permeability through the cell membrane, so the compound in order to increase the drug delivery efficiency of 7 can be administered in the form of ester prodrugs. At this time, when the compound of the ester prodrug form is introduced into the target cell, it can be metabolized hydrolyzed into carboxylic acid and active entity.

화합물 7의 수화물 또는 용매화합물은 본 발명의 범위에 포함된다. 본 명세서에서 사용되는 "용매화합물"은 용매화 (용매 분자들과 본 발명의 활성 물질의 분자 또는 이온과의 조합)에 의해 형성된 복합체, 또는 하나 이상의 용매 분자들과 용질 이온 또는 분자 (본 발명의 활성 물질)로 구성된 응집체를 의미한다. 용매는 물이 될 수 있으며, 이 경우에 용매화합물은 수화물이 될 수 있다. 수화물의 예들에는, 반수화물, 1수화물, 2수화물, 3수화물, 6수화물 등이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 해당 분야의 숙련된 기술자는 본 발명의 화합물의 제약학적으로 허용가능한 염이 용매화합물 형태로도 존재할 수 있음을 이해할 것이다. 용매화합물은 전형적으로 본 발명의 화합물의 제조의 일부인 수화를 통해 또는 본 발명의 무수 화합물에 의한 수분의 자연 흡수를 통해 형성된다. 수화물을 포함하는 용매화합물은, 예를 들어, 용매화합물 1개 당 또는 수화물 분자 1개 당 2, 3, 4개 염 분자의 화학양론 비율로 구성될 수 있다. 또한, 예를 들어, 3, 5, 7개의 용매 또는 수화물 분자들에 대해 2개의 염 분자들의 화학양론 또한 가능하다. 결정화를 위해 사용되는 용매, 가령, 알콜, 특히 메탄올 및 에탄올; 알데하이드; 케톤, 특히 아세톤; 에스터, 예컨대, 에틸 아세테이트; 특히 제약학적으로 허용가능한 용매들이 결정 격자안에 포매될 수 있다.Hydrates or solvates of compound 7 are included within the scope of the present invention. As used herein, a "solvent compound" refers to a complex formed by solvation (combination of solvent molecules with molecules or ions of the active substance of the invention), or one or more solvent molecules and solute ions or molecules (of the invention Active material). The solvent may be water, in which case the solvate may be a hydrate. Examples of hydrates include, but are not limited to, hemihydrate, monohydrate, dihydrate, trihydrate, hexahydrate, and the like. Those skilled in the art will appreciate that pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention may also exist in solvate form. Solvates are typically formed through hydration, which is part of the preparation of the compounds of the invention, or through the natural absorption of moisture by the anhydride compounds of the invention. Solvates containing hydrates may be composed of, for example, stoichiometric ratios of 2, 3, 4 salt molecules per solvent compound or per molecule of hydrate. In addition, stoichiometry of two salt molecules is also possible, for example for three, five, seven solvent or hydrate molecules. Solvents used for crystallization, such as alcohols, in particular methanol and ethanol; Aldehydes; Ketones, especially acetone; Esters such as ethyl acetate; In particular, pharmaceutically acceptable solvents may be embedded in the crystal lattice.

본 발명의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 하나 이상의 키랄 축을 내포할 수 있어, 회전장애이성질체화가 가능하다. 회전장애이성질체는 단일 결합에 대한 회전 장애로 인해 발생하는 입체이성질체로서, 여기서 입체 변형 또는 다른 요인들로 인한 에너지 차이는 개개의 이형태체가 분리되기에 충분히 높은 회전에 대한 장벽을 생성한다. 이러한 모든 가능한 이성질체, 뿐만 아니라 이의 라세미 및 광학적으로 순수한 형태들은 본 명세서에 구체적으로 도시되었는지 여부과 관계없이 본 발명에 포함되는 것으로 한다. 광학 활성 이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조되거나, 또는 종래의 기법들, 예를 들어, 크로마토그래피 및 분별 결정을 사용하여 분해될 수 있다. 개개의 회전장애이성질체를 제조/분리하는 종래의 기법들에는, 적합한 광학적 순수 전구체로부터의 키랄 합성 또는, 예를 들어, 키랄 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 이용한 라세미체 (또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분해가 포함된다. The compounds of the present invention or pharmaceutically acceptable salts thereof may contain one or more chiral axes, enabling atropisomerization. Atropisomers are stereoisomers that arise from rotational disturbances on a single bond, where the energy difference due to steric deformation or other factors creates a barrier to rotation that is high enough for the individual isoforms to separate. All such possible isomers, as well as racemic and optically pure forms thereof, are intended to be included in the present invention whether or not specifically illustrated herein. Optically active isomers may be prepared using chiral synthons or chiral reagents, or resolved using conventional techniques such as chromatography and fractional crystallization. Conventional techniques for preparing / isolating individual atropisomers include, but are not limited to, chiral synthesis from suitable optically pure precursors, or racemates (or salts or derivatives) using, for example, chiral high pressure liquid chromatography (HPLC). Semi-)) decomposition.

"입체이성질체"는 동일한 결합들에 의해 결합되는 동일한 원자들로 구성되지만 상이한 3차원 구조들을 가지는 화합물을 지칭하며, 호환가능하지 않다. 본 발명은 회전장애이성질화와 관련하여 다양한 입체이성질체 및 이의 혼합물을 고려한다. "Stereoisomers" refer to compounds that consist of the same atoms bonded by the same bonds but have different three-dimensional structures, and are not compatible. The present invention contemplates various stereoisomers and mixtures thereof in connection with atropisomerization.

본 명세서에서 사용되는, 단백질 키나아제의 비정상적 활성화는 일정 질환, 장애 또는 병태를 초래하는 상이한, 비정상적, 비정형의, 이례적인 또는 불규칙적인 키나아제 거동을 포함하는 것을 의미한다. 상기 질환, 장애, 및 병태들은 암, 류마티스 관절염 및 골관절염 관련 염증, 천식, 알러지, 아토피 피부염, 또는 건선을 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 암의 경우, 상기 질환, 장애 또는 병태는 통제되지 않는 세포 증식으로 특징될 수 있다. As used herein, abnormal activation of protein kinases is meant to include different, abnormal, atypical, unusual or irregular kinase behavior resulting in certain diseases, disorders or conditions. The diseases, disorders, and conditions may include, but are not limited to, cancer, rheumatoid arthritis and osteoarthritis related inflammation, asthma, allergies, atopic dermatitis, or psoriasis. In the case of cancer, the disease, disorder or condition may be characterized by uncontrolled cell proliferation.

단백질 키나아제의 비정상적 활성화에 의해 유발되는 구체적인 암의 예들에는, ABL (Abelson 티로신 키나아제), ACK (활성화된 cdc42-관련 키나아제), AXL, 오로라, BLK (B 림프구 티로신 키나아제), RMX (골수 X 연관 키나아제), BTK (브루톤 티로신 키나아제), CDK (사이클린-의존성 키나아제), CSK (C-Src 키나아제), DDR (디스코이딘 도메인 수용체), EPHA (에프린 A형 수용체 키나아제), FER (Fer(fps/fes 관련) 티로신 키나아제), FES (고양이 육종 종양유전자), FGFR (섬유모세포 성장 인자 수용체), FGR, FLT (Fms-유사 티로신 키나아제), FRK (Fyn-관련 키나아제), FYN, HCK (조혈세포 키나아제), IRR (인슐린-수용체-관련-수용체), ITK (인터루킨 2-유도성 T 세포 키나아제), JAK (야누스 키나아제), KDR (키나아제 인서트 도메인 수용체), KIT, LCK (림프구-특이적 단백질 티로신 키나아제), LYN, MAPK (미토겐 활성화된 단백질 키나아제), MER (c-Mer 원종양유전자 티로신 키나아제), MET, MINK (기형-유사 (Misshapen-like) 키나아제), MNK (MAPK-상호작용 키나아제), MST (포유동물 무균 20-유사 키나아제), MUSK (근육-특이적 키나아제), PDGFR (혈소판-유래 성장 인자 수용체), PLK (폴로-유사 키나아제), RET (형질감염 중 재배열), RON, SRC (스테로이드 수용체 보조활성화인자), SRM (스퍼미딘 합성효소), TIE (면역글로불린 및 EGF 반복부를 가진 티로신 키나아제), SYK (이자 티로신 키나아제), TNK1 (티로신 키나아제, 비-수용체, 1), TRK (트로포마이신 수용체-키나아제), TNIK (TRAF2 및 NCK 상호작용 키나아제) 등이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.Examples of specific cancers caused by abnormal activation of protein kinases include ABL (Abelson tyrosine kinase), ACK (activated cdc42-associated kinase), AXL, Aurora, BLK (B lymphocyte tyrosine kinase), RMX (myeloid X associated kinase) ), BTK (Bruton tyrosine kinase), CDK (cyclin-dependent kinase), CSK (C-Src kinase), DDR (discoidin domain receptor), EPHA (ephrin type A receptor kinase), FER (Fer (fps / fes-related) tyrosine kinases), FES (cat sarcoma oncogene), FGFR (fibroblast growth factor receptor), FGR, FLT (Fms-like tyrosine kinase), FRK (Fyn-associated kinase), FYN, HCK (hematopoietic cell kinase) ), IRR (insulin-receptor-related-receptor), ITK (interleukin 2-induced T cell kinase), JAK (janus kinase), KDR (kinase insert domain receptor), KIT, LCK (lymphocyte-specific protein tyrosine kinase) ), LYN, MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase), MER (c-Mer Prototypic Tyrosine Kinase), MET, MINK (Misshapen-like Kinase), MNK (MAPK-Interacting Kinase), MST (Mammalian Sterile 20-like Kinases), MUSK (muscle-specific kinase), PDGFR (platelet-derived growth factor receptor), PLK (polo-like kinase), RET (rearrangement during transfection), RON, SRC (steroid receptor coactivator), SRM (spermidine synthetase), TIE (tyrosine kinase with immunoglobulin and EGF repeats), SYK (iza tyrosine kinase), TNK1 (tyrosine kinase, non-receptor, 1), TRK (tropomycin receptor-kinase), TNIK (TRAF2 and NCK interacting kinases) and the like.

특정 질환 또는 장애와 관련된 용어 "치료하다", "치료하는 것" 또는 "치료"는 해당 질환 또는 장애의 예방, 및/또는 해당 질환 또는 장애의 증상 및/또는 병리를 저하, 개선, 완화 또는 제거하는 것을 포함한다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용되는 상기 용어들은 질환 또는 병태의 증상들을 완화, 경감, 저하 및 제거하는 것을 지칭한다. 본 발명에서 화합물 7은 제제 또는 약제의 치료적 유효량으로 존재할 수 있으며, 이는 생물학적 효과, 가령, 특정 세포들 (예컨대, 암 세포들)의 세포자멸, 특정 세포들의 증식 감소를 초래하거나, 또는, 예를 들어, 해당 질환 또는 병태의 증상들을 완화, 경감, 저하, 또는 제거를 초래할 수 있는 양이다. 또한 상기 용어들은 세포 증식 속도를 감소 또는 정지시키는 것 (예컨대, 종양 성장의 속도 저하 또는 정지) 또는 증식하는 암 세포들의 수를 감소시키는 것 (예컨대, 종양의 일부 또는 모두를 제거하는 것)을 지칭할 수 있다.The terms “treat”, “treating” or “treatment” associated with a particular disease or disorder refer to the prevention of the disease or disorder, and / or to diminish, ameliorate, alleviate or eliminate the symptoms and / or pathology of the disease or disorder. It involves doing. In general, the terms used herein refer to alleviating, alleviating, lowering and eliminating the symptoms of a disease or condition. Compound 7 in the present invention may be present in a therapeutically effective amount of an agent or medicament, which results in a biological effect, such as apoptosis of certain cells (eg, cancer cells), reduced proliferation of certain cells, or eg For example, the amount may result in alleviation, alleviation, reduction, or elimination of symptoms of the disease or condition. The terms also refer to reducing or stopping the rate of cell proliferation (eg, slowing or stopping the rate of tumor growth) or reducing the number of cancer cells that proliferate (eg, removing some or all of the tumor). can do.

상기 기재된 바와 같이 치료가 일정 질환, 장애 또는 병태의 예방을 지칭할 때, 상기 치료는 예방적인 용어이다. 상기 예방 물질의 투여는 증식성 장애의 특징적 증상들이 나타나기 전에 실시되어, 질환 또는 장애가 예방되거나, 대안적으로 이의 진행이 지연될 수 있다.When treatment refers to the prevention of certain diseases, disorders or conditions as described above, the treatment is a prophylactic term. Administration of the prophylactic agent may be carried out before the characteristic symptoms of a proliferative disorder appear, such that the disease or disorder can be prevented or, alternatively, delayed in its progression.

본 명세서에서 사용되는 용어 세포 증식을 "저해하는 것" 또는 "감소하는 것”은 본 발명의 방법, 조성물 및 이의 조합으로 처리되지 않은 증식성 세포들과 비교하여, 세포 증식을 속도 저하시키거나, 감소시키거나, 또는, 예를 들어, 세포 증식의 양을, 해당 분야의 숙련된 기술자에게 공지된 방법들을 사용하여 측정시, 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼, 중단시키는 것을 의미한다.As used herein, the term "inhibiting" or "reducing" cell proliferation slows down cell proliferation, as compared to proliferative cells not treated with the methods, compositions, and combinations thereof of the present invention, Reducing, or, for example, measuring the amount of cell proliferation using methods known to those skilled in the art, eg, 10%, 20%, 30%, 40%, 50% , By 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, or 100%.

본 명세서에서 사용되는 용어 "세포자멸"은 고유한 세포 자가-파괴 또는 자살 프로그램을 지칭한다. 유발 자극에 대한 반응으로, 세포들은 세포 수축, 세포막의 수포화 및 염색질 응축 및 분절화(fragmentation)를 포함한 연쇄 반응을 거친다. 이러한 반응들은 결국 세포를 막-결합 입자들의 집합체들 (세포자멸체)로 전환시키며, 이 집합체들은 그 후 대식세포에 의해 포식된다.As used herein, the term “apoptosis” refers to a unique cellular self-destruction or suicide program. In response to an induced stimulus, cells undergo a chain reaction including cell contraction, cell membrane saturation and chromatin condensation and fragmentation. These reactions eventually turn the cells into aggregates of membrane-bound particles (apoptotic bodies), which are then fed by macrophages.

본 명세서에서 사용되는, "다배수성" 또는 "다배수성"은 세포가 일배체 ("n")의 몇 배수인 다수의 염색체들을 가지는 상태를 지칭하며, 통상적으로 이배체 ("2n") 보다 크다. 용어 "다배수체 세포" 또는 "다배수성 세포"는 다배수성 상태의 세포를 지칭한다. 달리 말하면, 다배수체 세포 또는 유기체는 3배 이상의 일배체 염색체 수를 가진다. 인간에서, 염색체의 통상적인 일배체수는 23이고 염색체의 통상적인 이배체수 는 46이다.As used herein, "multiploidy" or "multiploidy" refers to a state in which a cell has multiple chromosomes that are several multiples of a haploid ("n"), and are typically larger than a diploid ("2n"). The term "multiploidy cell" or "multiploidy cell" refers to a cell in a multiploidy state. In other words, a multiploid cell or organism has a triplet ploid chromosome number. In humans, the typical haploid number of chromosomes is 23 and the typical diploid number of chromosomes is 46.

"포유동물"은 인간, 그리고 가축, 가령, 실험 동물 및 애완 동물 (예컨대, 고양이, 개, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 토끼), 및 비-가축, 가령, 야생동물 등을 모두 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "환자" 또는 "대상체"는 인간 및 동물을 포함한다. “Mammal” includes both humans and livestock, such as experimental animals and pets ( eg , cats, dogs, pigs, cows, sheep, goats, horses, rabbits), and non-livestock, such as wildlife, etc. do. As used herein, the term "patient" or "subject" includes humans and animals.

"비-포유동물"은 비-포유동물 무척추동물 및 비-포유동물 척추동물, 가령, 조류 (예컨대, 닭 또는 오리) 또는 어류를 포함한다."Non-mammal" includes non-mammalian invertebrates and non-mammalian vertebrates, such as birds (eg chickens or ducks) or fish.

"제약학적 조성물"은 본 발명의 화합물 및 이러한 생물학적 활성 화합물의 포유동물, 예컨대, 인간으로의 전달을 위해 해당 분야에서 일반적으로 허용되는 매질의 제제를 지칭한다. 이러한 매질은 이를 위한 제약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제 모두를 포함한다."Pharmaceutical composition" refers to a compound of the invention and a formulation of a medium generally acceptable in the art for delivery of such biologically active compound to a mammal, such as a human. Such a medium includes both pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients for this purpose.

"유효량"은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량을 지칭한다. "치료적 유효량"은, 필요한 용량에서 그리고 필요한 시기 동안, 원하는 치료 결과, 가령, 종양 크기 감소, 수평 증가 또는 기대 수명 증가를 구현함에 효과적인 양을 지칭한다. 화합물의 치료적 유효량은 요인들, 가령, 대상체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 대상체에서 원하는 반응을 유도하는 화합물의 능력에 따라 달라질 수 있다. 용량 요법은 최적의 치료 반응을 제공하기 위하여 조정될 수 있다. 치료적 유효량은 또한 상기 화합물의 임의의 독성 또는 유해 효과들이 치료적 유익 효과들보다 더 커지는 양이다. 물질의 예방차원의 유효량이란 원하는 예방 결과, 보다 작은 종양 또는 보다 느린 세포 증식을 달성하는데 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방적 투여량(dose)은 질환 전 또는 초기 단계에 이용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 수 있다.An "effective amount" refers to a therapeutically effective amount or prophylactically effective amount. A “therapeutically effective amount” refers to an amount effective, at a dose necessary and for a period of time necessary, to achieve the desired therapeutic result, eg, tumor size reduction, horizontal increase or life expectancy increase. The therapeutically effective amount of a compound can vary depending on factors such as the disease state, age, sex, and weight of the subject, and the ability of the compound to elicit the desired response in the subject. Dosage regimens can be adjusted to provide the optimum therapeutic response. A therapeutically effective amount is also an amount in which any toxic or detrimental effects of the compound are greater than the therapeutic benefit effects. A prophylactically effective amount of a substance refers to the amount necessary for achieving the desired prophylactic result, smaller tumor or slower cell proliferation, and an amount effective for the required time. Typically, since a prophylactic dose is used before or at an early stage of the disease, the prophylactically effective amount can be less than the therapeutically effective amount.

본 명세서에서 사용되는 용어 "브루톤 티로신 키나아제" 또는 BTK는, 예컨대, 미국 특허 제 6,326,469 (GenBank 승인 번호 NP 000052)에 개시된 바와 같이 호모 사피엔스의 브루톤 티로신 키나아제를 지칭한다.The term "Bruton tyrosine kinase" or BTK, as used herein, refers to Bruton's tyrosine kinase of Homo sapiens, for example as disclosed in US Pat. No. 6,326,469 (GenBank Accession No. NP 000052).

본 명세서에서 사용되는 용어 "공유 BTK 저해제"는 BTK와 반응하여 공유 복합체를 형성하는 저해제를 지칭한다. 일부 구체예들에서, 공유 BTK 저해제는 비가역성 BTK 저해제이다.As used herein, the term "covalent BTK inhibitor" refers to an inhibitor that reacts with BTK to form a covalent complex. In certain embodiments, the covalent BTK inhibitor is an irreversible BTK inhibitor.

본 명세서에서 사용되는 용어 “비-공유 BTK 저해제”는 BTK와 반응하여 비-공유 복합체 또는 상호작용을 형성하는 저해제를 지칭한다. 일부 구체예들에서, 비-공유 BTK 저해제는 가역성 BTK 저해제이다.As used herein, the term “non-covalent BTK inhibitor” refers to an inhibitor that reacts with BTK to form a non-covalent complex or interaction. In certain embodiments, the non-covalent BTK inhibitor is a reversible BTK inhibitor.

방법Way

일부 구체예들에서,본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 야생형 또는 돌연변이된 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 화합물 7을 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 FLT3 활성 또는 발현을 저해 또는 감소시킨다.In certain embodiments, the invention provides a wild type or mutated Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject. It provides a method of inhibiting or reducing. In one embodiment, the method inhibits or reduces FLT3 activity or expression in a subject in need thereof by administering compound 7.

Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3)는 FLT3 유전자에 의해 인코드되는 단백질을 지칭한다. 야생형 FLT3는 비-돌연변이 형태의 단백질을 지칭한다. FLT3는 내부 막근접 영역에서의 활성화 내부 일렬 중복 (ITD)FLT3의 활성화 루프 또는 티로신 키나아제 도메인에서의 점 돌연변이를 포함하는, 일련의 돌연변이를 거칠 수 있다. 점 돌연변이는 DNA 서열 내 하나의 염기쌍이 변형될 때 발생한다. 예를 들어, F691L은 위치 691에서의 아미노산에서 페닐알라닌으로부터 류신으로의 변화를 정의하는 것을 의미한다.Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) refers to a protein encoded by the FLT3 gene. Wild type FLT3 refers to a non-mutant form of protein. FLT3 may undergo a series of mutations, including an activation loop of activating internal line overlap (ITD) FLT3 in the inner membrane proximity region or a point mutation in the tyrosine kinase domain. Point mutations occur when one base pair in a DNA sequence is modified. For example, F691L is meant to define the change from phenylalanine to leucine at the amino acid at position 691.

한 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가진다. 한 구체예에서, ITD-돌연변이는 FTD-유도 혈액 암, 가령, AML에서 매우 좋지 않은 예후와 관련된다.In one embodiment, the mutated FLT3 has additional ITD mutations. In one embodiment, the ITD-mutation is associated with a very poor prognosis in FTD-induced blood cancers such as AML.

본 명세서에 개시된 방법들 중 어느 하나의 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-N841I, FLT3-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가진다. 다른 구체예들에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자 또는 상이한 대립유전자 상의 둘 이상의 점 돌연변이이다.In another embodiment of any one of the methods disclosed herein, the mutated FLT3 comprises at least one point mutation. In another embodiment, the at least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, Have at least one mutation selected from the group consisting of FLT3-N841I, FLT3-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C. In other embodiments, the at least one point mutation is two or more point mutations on the same allele or different alleles.

본 명세서에 개시된 임의의 방법들의 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 686 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 687 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 688 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 689 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 690 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 691 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 692 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 693 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 694 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 695 상에 존재한다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 아미노산 잔기 위치 696 상에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 임의의 잔기 686-696 위치에 상응하는 아미노 잔기 상에 존재한다.In one embodiment of any of the methods disclosed herein, at least one point mutation is on amino acid residue position 686. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 687. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 688. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 689. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 690. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 691. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 692. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 693. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 694. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 695. In one embodiment, at least one point mutation is on amino acid residue position 696. In another embodiment, at least one point mutation is on the amino residue corresponding to any residues 686-696.

또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835V이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835Y이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-ITD-D835V이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-ITD-D835Y이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-ITD-D835H이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-ITD-F691L이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-K663Q이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-N841I이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835G, FLT3-Y842C, 및/또는 FLT3-ITD-Y842C이다.In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835H. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835V. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835Y. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-ITD-D835V. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-ITD-D835Y. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-ITD-D835H. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-ITD-F691L. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-K663Q. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-N841I. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835G, FLT3-Y842C, and / or FLT3-ITD-Y842C.

FLT3는 암 요법에 있어서의 표적들 중 하나이다. FLT3의 비정상적 활성화에 관련된 질환, 장애 및 병태들의 예에는 FLT3에서의 돌연변이로 인한 FLT3 과다 자극으로 유발된 것들, 또는 FLT3에서 비정상적으로 높은 양의 돌연변이로 인한 비정상적으로 높은 양의 FLT3 활성으로 유발된 장애들이 포함된다. 임의의 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, FLT3의 과다-활성은 암을 비롯한 많은 질환들의 발병기전에 관여되어 왔다. FLT3의 과다-활성과 연계된 암들에는, 골수증식성 장애, 가령, 혈소판감소증, 본태성 혈소판증가증 (ET), 원인불명 골수 화생, 골수섬유증 (MF), 골수 화생 골수섬유증 (MMM), 만성 특발성 골수섬유증 (UIMF), 및 진성적혈구 증가증 (PV), 혈구감소증, 및 전-종양 골수형성이상 증후군; 암, 가령, 신경교종 암, 폐암, 유방암, 결장직장암, 전립선 암, 위암, 식도암, 결장암, 이자암, 난소암, 및 골수형성이상증, 다발 골수종, 백혈병, 및 림프종을 포함한 혈액 종양들이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. FLT3 is one of the targets in cancer therapy. Examples of diseases, disorders and conditions related to abnormal activation of FLT3 include those caused by FLT3 overstimulation due to mutations in FLT3, or disorders caused by abnormally high amounts of FLT3 activity due to abnormally high amounts of mutations in FLT3. Included. Without wishing to be bound by any theory, the over-activity of FLT3 has been involved in the pathogenesis of many diseases including cancer. Cancers associated with over-activity of FLT3 include myeloproliferative disorders, such as thrombocytopenia, essential thrombocytopenia (ET), unknown myeloid metaplasia, myelofibrosis (MF), myelogenous myelofibrosis (MMM), chronic idiopathic Myeloid fibrosis (UIMF), and true hypercytosis (PV), cytopenia, and pre-tumor myelodysplastic syndromes; Cancers such as glioma cancer, lung cancer, breast cancer, colorectal cancer, prostate cancer, gastric cancer, esophageal cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, and myelodysplastic disease, multiple myeloma, leukemia, and blood tumors including lymphoma It is not limited.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 야생형 FLT3 관련 혈액 종양의 치료 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 돌연변이된 FLT3 관련 혈액 종양의 치료 방법을 제공한다. In one embodiment, the invention provides a method of treating a wild type FLT3 related blood tumor, comprising administering to a subject in need of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, the present invention provides a method of treating a mutated FLT3 related blood tumor, comprising administering to compound in need thereof Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 명세서에 개시된 방법들 중 어느 하나의 한 구체예에서, 혈액 종양들의 예에는, 백혈병, 림프종, 호지킨 질환, 및 골수종이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 급성 림프구 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 전골수세포 백혈병 (APL), 만성 림프구 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 호중구 백혈병 (CNL), 급성 미분화 백혈병 (AUL), 역형성 대세포 림프종 (ALCL), 전림프구 백혈병 (PML), 소아 골수단핵구 백혈병 (JMML), 성인 T-세포 ALL, 삼계대 척수형성이상을 보유한 AML (AMLITMDS), 혼합 계대 백혈병 (MLL), 골수형성이상 증후군 (MDSs), 골수증식성 장애 (MPD), 및 다발 골수종 (MM)이 포함된다.In one embodiment of any of the methods disclosed herein, examples of blood tumors include, but are not limited to, leukemia, lymphoma, Hodgkin's disease, and myeloma. In addition, acute lymphocytic leukemia (ALL), acute myeloid leukemia (AML), acute promyelocytic leukemia (APL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), chronic myeloid leukemia (CML), chronic neutrophil leukemia (CNL), acute undifferentiated leukemia ( AUL), anaplastic large cell lymphoma (ALCL), prelymphocytic leukemia (PML), pediatric osteoblastic leukemia (JMML), adult T-cell ALL, AML with tripassive myelopathy (AMLITMDS), mixed passage leukemia (MLL) ), Myelodysplastic syndromes (MDSs), myeloproliferative disorders (MPD), and multiple myeloma (MM).

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 야생형 또는 돌연변이된 FLT3와 관련된 백혈병 치료 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 백혈병은 AML이다.In one embodiment, the invention provides a method of treating leukemia associated with wild type or mutated FLT3 comprising administering to a subject in need of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, the leukemia is AML.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염으로 인간 세포에서 야생형 또는 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 화합물 7을 인간 세포와 접촉시킴에 의한 인간 세포에서 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. In one embodiment, the invention provides a method of inhibiting or reducing wild type or mutated FLT3 activity or expression in human cells with Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, the present invention provides a method of inhibiting or reducing mutated FLT3 activity or expression in human cells by contacting compound 7 with human cells.

한 구체예에서, 인간 세포는 인간 백혈병 세포주이다. 또 다른 구체예에서, 인간 백혈병 세포주는 급성 림프구 백혈병 세포주, 급성 골수성 백혈병 세포주, 급성 전골수세포 백혈병 세포주, 만성 림프구 백혈병 세포주, 만성 골수성 백혈병 세포주, 만성 호중구 백혈병 세포주, 급성 미분화 백혈병 세포주, 역형성 대세포 림프종 세포주, 전림프구 백혈병 세포주, 소아 골수단핵구 백혈병 세포주, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병 세포주, 삼계대 척수형성이상을 가진 급성 골수성 백혈병 세포주, 혼합 계대 백혈병 세포주, 호산구 백혈병 세포주, 또는 외투 세포 림프종 세포주이다.In one embodiment, the human cell is a human leukemia cell line. In another embodiment, the human leukemia cell line is acute lymphocytic leukemia cell line, acute myeloid leukemia cell line, acute promyeloid cell leukemia cell line, chronic lymphocytic leukemia cell line, chronic myeloid leukemia cell line, chronic neutrophil leukemia cell line, acute undifferentiated leukemia cell line, anaplastic versus Cell lymphoma cell line, prelymphocytic leukemia cell line, juvenile osteocytic leukemia cell line, adult T-cell acute lymphocytic leukemia cell line, acute myeloid leukemia cell line with tripassive spinal dysplasia, mixed passage leukemia cell line, eosinophil leukemia cell line, or mantle cell lymphoma cell line to be.

특정 구체예들에서, 인간 백혈병 세포주는 호산구 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 인간 백혈병 세포주는 급성 골수성 백혈병이다. 이들 혈액 암들 모두는 FLT3-유도됨이 공지되어 있다. 한 구체예에서, MV4-11, MUTZ-11, MOLM-13, 및 PL-21은 FLT3-ITD 돌연변이가 존재하는 급성 골수성 백혈병 세포주이다.In certain embodiments, the human leukemia cell line is eosinophil leukemia. In another embodiment, the human leukemia cell line is acute myeloid leukemia. It is known that all of these blood cancers are FLT3-induced. In one embodiment, MV4-11, MUTZ-11, MOLM-13, and PL-21 are acute myeloid leukemia cell lines in which the FLT3-ITD mutation is present.

치료 방법은 FLT3의 비정상적 키나아제 활성에 의해 유도되는 세포 증식성 장애를 발달시킬 위험이 있거나 이러한 장애에 걸리기 쉬운 대상체의 예방적 및 치료적 치료 방법 모두를 제공한다. 한 예에서, 본 발명은 필요로 하는 대상체에 대한 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 화합물 7을 포함하는 제약학적 조성물의 예방적 유효량의 투여를 포함하는, FLT3 관련 세포 증식성 장애의 예방 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 예방적 치료는 FLT3 유도된 세포 증식성 장애의 특징적 증상들이 나타나기 전에 실시되어, 질환 또는 장애가 예방되거나, 또는 대안적으로 이의 진행이 지연될 수 있다. The methods of treatment provide both prophylactic and therapeutic methods of treatment of subjects at risk of developing or susceptible to developing cell proliferative disorders induced by abnormal kinase activity of FLT3. In one embodiment, the present invention provides for the prevention of FLT3-related cell proliferative disorders comprising administering a prophylactically effective amount of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a pharmaceutical composition comprising Compound 7 to a subject in need thereof. Provide a method. In one embodiment, the prophylactic treatment is carried out before the characteristic symptoms of FLT3 induced cell proliferative disorder appear, such that the disease or disorder can be prevented or, alternatively, delayed in its progression.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 혈액 종양의 치료 방법을 제공하며, 이때 상기 대상체는 FLT3 활성 또는 발현의 저해제에 대한 내성 또는 재발을 보인다. 한 구체예에서, 상기 저해제는 퀴자르티닙, 길테리티닙, 수니티닙, 소라페닙, 미도스타우린, 레스타우르티닙, 크레놀라닙, PLX3397, PLX3623, 크레놀라닙, 포나티닙, 또는 파크리티닙이다. 또 다른 구체예에서, 저해제는 퀴자르티닙 또는 길테리티닙이다.In one embodiment, the invention provides a method of treating a blood tumor in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the subject is an inhibitor of FLT3 activity or expression It is resistant to or relapses. In one embodiment, the inhibitor is quizartinib, gilteritinib, sunitinib, sorafenib, midostauurin, restautinib, crenolanib, PLX3397, PLX3623, crenolanib, ponatinib, or paclitinib to be. In another embodiment, the inhibitor is quizartinib or gilteritinib.

한 구체예에서, 혈액 종양은 백혈병이다. 다른 구체예에서, 백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종이다. 특정 구체예에서, 백혈병은 호산구 백혈병이다. 또 다른 특정 구체예에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병이다.In one embodiment, the blood tumor is leukemia. In another embodiment, the leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, pediatric osteoblastic leukemia Leukemia, adult T-cell acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive myelodysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. In certain embodiments, the leukemia is eosinophil leukemia. In another specific embodiment, the leukemia is acute myeloid leukemia.

한 구체예에서, 상기 방법은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이러한 대상체에서 야생형 FLT3를 발현시키는 세포들의 세포자멸을 유도한다. 한 구체예에서, 본 발명은 필요로 하는 대상체에서 돌연변이된 FLT3를 발현시키는 세포들의 세포자멸을 유도하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함한다. In one embodiment, the method induces apoptosis of cells expressing wild type FLT3 in such subject comprising administering to compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, the invention provides a method of inducing apoptosis of cells expressing mutated FLT3 in a subject in need thereof, comprising administering compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof do.

또 다른 구체예에서, 상기 방법은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서의 암 치료 방법을 포함하며, 이때 대상체는 FLT3의 돌연변이체 형태를 가진다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 ITD 돌연변이이다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이 및 ITD 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가진다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이이다. 또 다른 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 상이한 대립유전자에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이이다. 또 다른 구체예에서, 대상체는 포유동물이다. 또 다른 구체예에서 대상체는 인간이다. 또 다른 구체예에서, 암은 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 및/또는 외투 세포 림프종이다. 또 다른 특정 구체예에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병이다. In another embodiment, the method comprises a method of treating cancer in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject in need thereof, Has a mutant form. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one point mutation. In another embodiment, the at least one point mutation is on one or more residues selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. In another embodiment, at least one point mutation is in the tyrosine kinase domain of FLT3. In another embodiment, at least one point mutation is in the activation loop of FLT3. In another embodiment, the at least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. In another embodiment, the mutated FLT3 is an ITD mutation. In another embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one point mutation and an ITD mutation. In another embodiment, the mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, Consists of FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Have one or more mutations selected from the group. In another embodiment, the at least one point mutation is two or more point mutations present on the same allele. In another embodiment, the at least one point mutation is two or more point mutations present in different alleles. In another embodiment, the subject is a mammal. In another embodiment the subject is a human. In another embodiment, the cancer is leukemia. In another embodiment, the leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyeloid leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, pediatric bone marrow Monocyte leukemia, adult T-cell acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia with triple passage spinal dysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, and / or mantle cell lymphoma. In another specific embodiment, the leukemia is acute myeloid leukemia.

한 구체예에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의한, 이러한 대상체에서 키나아제들의 활성 또는 발현의 이중 저해 또는 감소 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 활성 또는 발현의 이중 저해 또는 감소 방법은 대상체에서의 돌연변이된 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성에 대한 것이며 브루톤 티로신 키나아제 (BTK) 활성 또는 발현의 저해 또는 감소가 조합되고, 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 화합물 7은 FLT3 (야생형 및 돌연변이된 FLT3 포함) 및 BTK 활성 모두를 저해 또는 감소시킨다. 다중-키나아제 경로를 표적하는 것은 좋지 않은 예후의 암에서 결과를 개선할 수 있는 방법이다. In one embodiment, the invention provides a method of dual inhibition or reduction of the activity or expression of kinases in such a subject by administering to a subject in need of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, the method of dual inhibition or reduction of activity or expression is for mutated Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity in a subject and the inhibition or reduction in Bruton's tyrosine kinase (BTK) activity or expression is combined. And administering compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, compound 7 inhibits or reduces both FLT3 (including wild-type and mutated FLT3) and BTK activity. Targeting multi-kinase pathways is a way to improve outcomes in cancer of poor prognosis.

일부 구체예들에서, 본 발명은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 비정상적 (예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법을 제공한다. In certain embodiments, the invention provides for the administration of abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in a subject comprising administering to the subject in need of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Provided are methods of inhibition or reduction.

특정 구체예들에서, BTK는 야생형이다. 한 구체예에서, 야생형 BTK는 대상체에서 비정상적 (예컨대, 과발현됨)이다. 또 다른 구체예에서, 야생형 BTK는 대상체에서 과다활성 또는 과다활성(hyperactive)이다. In certain embodiments, BTK is wild type. In one embodiment, the wild type BTK is abnormal (eg, overexpressed) in the subject. In another embodiment, the wild type BTK is overactive or hyperactive in the subject.

특정 구체예들에서, BTK는 돌연변이된 BTK이다. BTK 돌연변이는 숙련된 기술자가 용이하게 알고 있는 다양한 요인들, 가령, 삽입 돌연변이, 결실 돌연변이, 및 치환 돌연변이 (예컨대, 점 돌연변이)에 의해 유발될 수 있다. 한 구체예에서, 돌연변이된 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. In certain embodiments, the BTK is mutated BTK. BTK mutations can be caused by a variety of factors readily known by the skilled artisan, such as insertion mutations, deletion mutations, and substitution mutations (eg, point mutations). In one embodiment, the mutated BTK comprises at least one point mutation.

다양한 점 돌연변이가 본 발명의 범위에 속하는 것으로 고려된다. 예를 들어, 최소한 하나의 점 돌연변이는 BTK 상의 임의의 잔기에 대한 것일 수 있다. 일부 구체예들에서, BTK 유전자 내부의 돌연변이는 아미노산 위치 L11, K12, S14, K19, F25, K27, R28, R33, Y39, Y40, E41, I61, V64, R82, Q103, V113, S115, T117, Q127, C154, C155, T184, P189, P190, Y223, W251, R288, L295, G302, R307, D308, V319, Y334, L358, Y361, H362, H364, N365, S366, L369, I370M, R372, L408, G414, Y418, I429, K430, E445, G462, Y476, M477, C481, C502, C506, A508, M509, L512, L518, R520, D521, A523, R525, N526, V535, L542, R544, Y551, F559, R562, W563, E567, 5578, W581, A582, F583, M587, E589, S592, G594, Y598, A607, G613, Y617, P619, A622, V626, M630, C633, R641, F644, L647, L652, V1065, 및/또는 A1185에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 구체예들에서, BTK 유전자 내부에서의 돌연변이는 L11P, K12R, S14F, K19E, F25S, K27R, R28H, R28C, R28P, T33P, Y3S9, Y40C, Y40N, E41K, I61N, V64F, V64D, R82K, Q103Q5FSSVR, V113D, S115F, T117P, Q127H, C1545, C155G, T184P, P189A, Y223F, W251L, R288W, R288Q, L295P, G302E, R307K, R307G, R307T, D308E, V319A, Y334S, L358F, Y361C, H362Q, H364P, N365Y, S366F, L369F, I370M, R372G, L408P, G414R, Y418H, I429N, K430E, E445D, G462D, G462V, Y476D, M477R, C481S, C502F, C502W, C506Y, C506R, A508D, M5091, M509V, L512P, L512Q, L518R, R520Q, D521G, D521H, D521N, A523E, R525G, R525P, R525Q, N526K, V535F, L542P, R544G, R544K, Y551F, F559S, R562W, R562P, W563L, E567K, S578Y, W581R, A582V, F583S, M587L, E589D, E589K, E589G, S592P, G594E, Y598C, A607D, G613D, Y617E, P619A, P619S, A622P, V626G, M630I, M630K, M630T, C633Y, R641C, F644L, F644S, L647P, L652P, V10651, 및 A1185V 중에서 선택된다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재한다. 한 구체예에서, 시스테인 잔기는 BTK의 키나아제 도메인에 존재한다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 E41, P190, 및 C481로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이다. 일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 아미노산 위치 481 (즉, C481)에 존재한다. C481 점 돌연변이는 임의의 아미노산 모이어티로 치환될 수 있다. 일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 C481S이다. 한 구체예에서, 잔기 C481에서의 점 돌연변이는 C481S, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택된다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 E41K, P190K, 및 C481S로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이다. Various point mutations are considered to be within the scope of the present invention. For example, at least one point mutation can be for any residue on BTK. In certain embodiments, a mutation within a BTK gene is selected from amino acid positions L11, K12, S14, K19, F25, K27, R28, R33, Y39, Y40, E41, I61, V64, R82, Q103, V113, S115, T117, Q127, C154, C155, T184, P189, P190, Y223, W251, R288, L295, G302, R307, D308, V319, Y334, L358, Y361, H362, H364, N365, S366, L369, I370M, R372, L408, G414, Y418, I429, K430, E445, G462, Y476, M477, C481, C502, C506, A508, M509, L512, L518, R520, D521, A523, R525, N526, V535, L542, R544, Y551, F559, R562, W563, E567, 5578, W581, A582, F583, M587, E589, S592, G594, Y598, A607, G613, Y617, P619, A622, V626, M630, C633, R641, F644, L647, L652, V1065, And / or mutations in A1185. In certain embodiments, mutations within the BTK gene are L11P, K12R, S14F, K19E, F25S, K27R, R28H, R28C, R28P, T33P, Y3S9, Y40C, Y40N, E41K, I61N, V64F, V64D, R82K, Q103Q5FSSVR , V113D, S115F, T117P, Q127H, C1545, C155G, T184P, P189A, Y223F, W251L, R288W, R288Q, L295P, G302E, R307K, R307G, R307T, D308E, V319A, Y334S, L358F, Y361C, H362Q, H362Q365 , S366F, L369F, I370M, R372G, L408P, G414R, Y418H, I429N, K430E, E445D, G462D, G462V, Y476D, M477R, C481S, C502F, C502W, C506Y, C506R, A508D, M5091, M509V, L512P518 , R520Q, D521G, D521H, D521N, A523E, R525G, R525P, R525Q, N526K, V535F, L542P, R544G, R544K, Y551F, F559S, R562W, R562P, W563L, E567K, S578Y, W581R, A582V, F583 V5 F5 , E589K, E589G, S592P, G594E, Y598C, A607D, G613D, Y617E, P619A, P619S, A622P, V626G, M630I, M630K, M630T, C633Y, R641C, F644L, F644S, L647P, L652P, V10651, and A1185 are selected . In one embodiment, at least one point mutation is on the cysteine residue. In one embodiment, the cysteine residue is in the kinase domain of BTK. In certain embodiments, at least one point mutation is one or more selected from the group consisting of residues E41, P190, and C481. In certain embodiments, the mutation in BTK is at amino acid position 481 (ie, C481). The C481 point mutation can be substituted with any amino acid moiety. In certain embodiments, the mutation in BTK is C481S. In one embodiment, the point mutation at residue C481 is selected from C481S, C481R, C481T and / or C481Y. In one embodiment, the at least one point mutation is one or more selected from the group consisting of E41K, P190K, and C481S.

일부 구체예들에서, B 세포 림프종은 돌연변이체 BTK 폴리펩티드를 가지는 복수의 세포들로 특징된다. 일부 구체예들에서, 돌연변이체 BTK 폴리펩티드는 공유 및/또는 비가역성 BTK 저해제에 의한 저해에 대해 내성을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환들을 함유한다. 일부 구체예들에서, 돌연변이체 BTK 폴리펩티드는 야생형 BTK의 아미노산 위치 481에서 시스테인에 공유적으로 결합하는 공유 및/또는 비가역성 BTK 저해제에 의한 저해에 대해 내성을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환들을 함유한다. 일부 구체예들에서, 돌연변이체 BTK 폴리펩티드는 PCI-32765 (이브루티닙), PCI-45292, PCI-45466, AVL-101/CC-101 (Avila Therapeutics/Celgene Corporation), AVL-263/CC-263 (Avila Therapeutics/Celgene Corporation), AVL-292/CC-292 (Avila Therapeutics/Celgene Corporation), AVL-291/CC-291 (Avila Therapeutics/Celgene Corporation), CNX 774 (Avila Therapeutics), BMS-488516 (Bristol-Myers Squibb), BMS-509744 (Bristol-Myers Squibb), CGI-1746 (CGI Pharma/Gilead Sciences), CGI-560 (CGI Pharma/Gilead Sciences), CTA-056, GDC-0834 (Genentech), HY-11066 (also, CTK4I7891, HMS3265G21, HMS3265G22, HMS3265H21, HMS3265H22, 439574-61-5, AG-F-54930), ONO-4059 (Ono Pharmaceutical Co., Ltd.), ONO-WG37 (Ono Pharmaceutical Co., Ltd.), PLS-123 (Peking University), RN486 (Hoffmann-La Roche), HM71224 (Hanmi Pharmaceutical Company Limited), LFM-A13, BGB-3111 (Beigene), KBP-7536 (KBP BioSciences), ACP-196 (Acerta Pharma) 또는 JTE-051 (Japan Tobacco Inc)에서 선택된 공유 및/또는 비가역성 BTK 저해제에 의한 저해에 대해 내성을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환을 내포한다. 일부 구체예들에서, 돌연변이체 BTK 폴리펩티드는 이브루티닙에 의한 저해에 대해 내성을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환을 내포한다. 일부 예들에서, 복수의 세포들은 최소한 2개의 세포들을 포함한다. 특정 구체예들에서, BTK 돌연변이체는 비-공유 BTK 저해제에 의한 저해에 대해 내성을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환을 내포한다. 특정 구체예들에서, BTK 돌연변이체는 가역성 BTK 저해제에 의한 저해에 대해 내성을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환을 내포한다. In certain embodiments, B cell lymphoma is characterized by a plurality of cells having a mutant BTK polypeptide. In certain embodiments, a mutant BTK polypeptide contains one or more amino acid substitutions that confer resistance to inhibition by covalent and / or irreversible BTK inhibitors. In certain embodiments, a mutant BTK polypeptide contains one or more amino acid substitutions that confer resistance to inhibition by a covalent and / or irreversible BTK inhibitor that covalently binds to cysteine at amino acid position 481 of wild type BTK. In certain embodiments, the mutant BTK polypeptide is PCI-32765 (Ibrutinib), PCI-45292, PCI-45466, AVL-101 / CC-101 (Avila Therapeutics / Celgene Corporation), AVL-263 / CC-263 (Avila Therapeutics / Celgene Corporation), AVL-292 / CC-292 (Avila Therapeutics / Celgene Corporation), AVL-291 / CC-291 (Avila Therapeutics / Celgene Corporation), CNX 774 (Avila Therapeutics), BMS-488516 (Bristol Myers Squibb), BMS-509744 (Bristol-Myers Squibb), CGI-1746 (CGI Pharma / Gilead Sciences), CGI-560 (CGI Pharma / Gilead Sciences), CTA-056, GDC-0834 (Genentech), HY- 11066 (also, CTK4I7891, HMS3265G21, HMS3265G22, HMS3265H21, HMS3265H22, 439574-61-5, AG-F-54930), ONO-4059 (Ono Pharmaceutical Co., Ltd.), ONO-WG37 (Ono Pharmaceutical Co., Ltd PLS-123 (Peking University), RN486 (Hoffmann-La Roche), HM71224 (Hanmi Pharmaceutical Company Limited), LFM-A13, BGB-3111 (Beigene), KBP-7536 (KBP BioSciences), ACP-196 ( Share and / or irreversible selected from Acerta Pharma) or JTE-051 (Japan Tobacco Inc) Implies one or more amino acid substitutions that confer resistance to the inhibition by inhibitors BTK. In certain embodiments, a mutant BTK polypeptide contains one or more amino acid substitutions that confer resistance to inhibition by ibrutinib. In some embodiments, the plurality of cells comprises at least two cells. In certain embodiments, the BTK mutant contains one or more amino acid substitutions that confer resistance to inhibition by non-covalent BTK inhibitors. In certain embodiments, the BTK mutant contains one or more amino acid substitutions that confer resistance to inhibition by a reversible BTK inhibitor.

상기 일부 구체예들에서 설명한 바와 같이, 변형은 야생형 BTK와 비교하여 아미노산 위치 481에서 아미노산의 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 구체예들에서, 변형은 야생형 BTK와 비교하여 위치 481에서 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 구체예들에서, 변형은 BTK 폴리펩티드의 아미노산 위치 481에서 류신, 아이소류신, 발린, 알라닌, 글리신, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 프롤린, 티로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파르트산 및 글루탐산 중에서 선택된 아미노산으로의 시스테인의 치환이다. 일부 구체예들에서, 변형은 BTK 폴리펩티드의 아미노산 위치 481에서 세린, 메티오닌 또는 트레오닌에서 선택된 아미노산으로의 시스테인의 치환이다. 일부 구체예들에서, 변형은 BTK 폴리펩티드의 아미노산 위치 481에서 시스테인의 세린으로의 치환 ("C481S")이다.As described in some embodiments above, the modification includes substitution or deletion of an amino acid at amino acid position 481 as compared to wild type BTK. In certain embodiments, the modification comprises a substitution of an amino acid at position 481 as compared to wild type BTK. In certain embodiments, the modification is a leucine, isoleucine, valine, alanine, glycine, methionine, serine, threonine, phenylalanine, tryptophan, lysine, arginine, histidine, proline, tyrosine, asparagine, glutamine, at amino acid position 481 of a BTK polypeptide Substitution of cysteine with an amino acid selected from aspartic acid and glutamic acid. In certain embodiments, the modification is a substitution of cysteine with an amino acid selected from serine, methionine or threonine at amino acid position 481 of the BTK polypeptide. In certain embodiments, the modification is a substitution of cysteine for serine at amino acid position 481 of the BTK polypeptide (“C481S”).

일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 B 세포 증식성 장애에서 TEC 저해제 (예컨대, ITK 저해제, BTK 저해제, 가령, 이브루티닙)에 대한 내성을 부여한다. 일부 구체예들에서, BTK에서의 C481S 돌연변이는 B 세포 증식성 장애에서 TEC 저해제 (예컨대, ITK 저해제, BTK 저해제, 가령, 이브루티닙)에 대한 내성을 부여한다.　 일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 B 세포 증식성 장애에서 공유 BTK 저해제에 대한 내성을 부여한다. 일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 B 세포 증식성 장애에서 이브루티닙 및 아칼라브루티닙에 대한 내성을 부여한다. In certain embodiments, the mutation in BTK confers resistance to TEC inhibitors (eg, ITK inhibitors, BTK inhibitors such as ibrutinib) in B cell proliferative disorders. In certain embodiments, the C481S mutation in BTK confers resistance to TEC inhibitors (eg, ITK inhibitors, BTK inhibitors such as ibrutinib) in B cell proliferative disorders. In certain embodiments, the mutation in BTK confers resistance to covalent BTK inhibitors in B cell proliferative disorders. In certain embodiments, the mutation in BTK confers resistance to ibrutinib and acalabrutinib in B cell proliferative disorders.

한 구체예에서, 돌연변이된 BTK의 활성은 공유 비가역성 BTK 저해제에 의한 야생형 BTK의 활성 보다 공유 비가역성 BTK 저해제에 의해 더 적게 저해된다. 공유 비가역성 BTK 저해제는 야생형 BTK 보다 돌연변이된 BTK에 대하여 최소한 약 1% 내지 최소한 약 1000% 더 높은 IC50을 가질 수 있다. 예를 들어, 공유 비가역성 BTK 저해제는 야생형 BTK 보다 돌연변이된 BTK에 대하여 최소한 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 210%, 220%, 230%, 240%, 250%, 260%, 270%, 280%, 290%, 300%, 310%, 320%, 330%, 340%, 350%, 360%, 370%, 380%, 390%, 400%, 410%, 420%, 430%, 440%, 450%, 460%, 470%, 480%, 490%, 500%, 510%, 520%, 530%, 540%, 550%, 560%, 570%, 580%, 590%, 600%, 610%, 620%, 630%, 640%, 650%, 660%, 670%, 680%, 690%, 700%, 710%, 720%, 730%, 740%, 750%, 760%, 770%, 780%, 790%, 800%, 810%, 820%, 830%, 840%, 850%, 860%, 870%, 880%, 890%, 900%, 910%, 920%, 930%, 940%, 950%, 960%, 970%, 980%, 990% 내지 최소한 약 1000% 더 높은 IC50을 가질 수 있다. 한 구체예에서, 공유 비가역성 BTK 저해제는 야생형 BTK에 비해 돌연변이된 BTK에 있어서 최소한 50% 더 높은 IC50을 가진다. 한 구체예에서, 비가역성 공유 BTK 저해제는 이브루티닙 및/또는 아칼라브루티닙이다. 예를 들어, 비가역성 공유 BTK 저해제는 이브루티닙이다.In one embodiment, the activity of the mutated BTK is less inhibited by the covalent irreversible BTK inhibitor than the activity of the wild type BTK by the covalent irreversible BTK inhibitor. Shared irreversible BTK inhibitors may have at least about 1% to at least about 1000% higher IC 50 with respect to the mutant than the wild type BTK BTK. For example, covalent irreversible BTK inhibitors are at least about 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11 for mutated BTK than wild type BTK. %, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44% , 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61 %, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 210 %, 220%, 230%, 240%, 250%, 260%, 270%, 280%, 290%, 300%, 310%, 320%, 330%, 340%, 350%, 360%, 370%, 380%, 390%, 400%, 410%, 420%, 430%, 440%, 450%, 460%, 470%, 480%, 490%, 500%, 510%, 520%, 530%, 540% , 550%, 560%, 570%, 580%, 590%, 600%, 610%, 620%, 630%, 640%, 650%, 660%, 670%, 680%, 690%, 700%, 710 %, 720%, 730%, 740%, 750% , 760%, 770%, 780%, 790%, 800%, 810%, 820%, 830%, 840%, 850%, 860%, 870%, 880%, 890%, 900%, 910%, 920 It may have an IC 50 of%, 930%, 940%, 950%, 960%, 970%, 980%, 990% to at least about 1000% higher. In one embodiment, the covalent irreversible BTK inhibitor has an IC 50 that is at least 50% higher for mutated BTK compared to wild type BTK. In one embodiment, the irreversible covalent BTK inhibitor is ibrutinib and / or acalabrutinib. For example, the irreversible covalent BTK inhibitor is ibrutinib.

한 구체예에서, 점 돌연변이는 단 하나의 BTK 대립유전자에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 점 돌연변이는 두 개의 BTK 대립유전자에 존재한다. 한 구체예에서, 시스테인 상의 점 돌연변이는 단 하나의 BTK 대립유전자 상에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 시스테인 상의 점 돌연변이는 2개의 BTK 대립유전자 상에 존재한다. 한 구체예에서, C481에서의 점 돌연변이는 단 하나의 BTK 대립유전자에 존재한다. 또 다른 구체예에서, C481에서의 점 돌연변이는 두 개의 BTK 대립유전자에 존재한다. 한 구체예에서, C481S 점 돌연변이는 단 하나의 BTK 대립유전자에 존재한다. 또 다른 구체예에서, C481S 점 돌연변이는 두 개의 BTK 대립유전자에 존재한다.In one embodiment, the point mutation is in only one BTK allele. In another embodiment, the point mutation is in two BTK alleles. In one embodiment, point mutations on cysteine are on only one BTK allele. In another embodiment, the point mutations on cysteine are on two BTK alleles. In one embodiment, the point mutation at C481 is in only one BTK allele. In another embodiment, the point mutation at C481 is in two BTK alleles. In one embodiment, the C481S point mutation is in only one BTK allele. In another embodiment, the C481S point mutation is in two BTK alleles.

한 구체예에서, 대상체는 포유동물이다. 한 구체예에서, 대상체는 인간이다.In one embodiment, the subject is a mammal. In one embodiment, the subject is a human.

본 발명의 또 다른 양상은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서의 암 치료 방법에 관한 것이며, 이때 대상체는 BTK의 돌연변이체 형태를 가진다. Another aspect of the invention is directed to a method of treating cancer in a subject in need thereof, comprising administering to the subject in need of Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the subject is a mutant of BTK Has a form.

본 발명의 또 다른 양상은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 B 세포 종양의 치료 방법에 관한 것이다. 한 구체예에서, 대상체는 BTK의 돌연변이체 형태이다. Another aspect of the invention relates to a method of treating B cell tumors in a subject in need thereof comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject. In one embodiment, the subject is a mutant form of BTK.

일부 구체예들에서, B 세포 종양은 만성 림프구 백혈병 (CLL), 소 림프구 림프종 (SLL), 고 위험 CLL, 또는 비-CLL/SLL 림프종이다. 일부 구체예들에서, B 세포 증식성 장애는 소포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 외투 세포 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발 골수종, 변연부 림프종, 버킷 림프종, 비-버킷 고도 B 세포 림프종, 또는 림프절외 변연부 B 세포 림프종이다. 일부 구체예들에서, B 세포 종양은 급성 또는 만성 골수성 (또는 골수모양) 백혈병, 골수형성이상 증후군, 또는 급성 림프모구 백혈병이다. 일부 구체예들에서, B 세포 종양은 재발성 또는 난치성 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 재발성 또는 난치성 외투 세포 림프종, 재발성 또는 난치성 소포 림프종, 재발성 또는 난치성 CLL; 재발성 또는 난치성 SLL; 재발성 또는 난치성 다발 골수종이다. 일부 구체예들에서, B 세포 종양은 고위험으로 분류된 B 세포 증식성 장애이다. 일부 구체예들에서, B 세포 종양은 고 위험 CLL 또는 고 위험 SLL이다. In certain embodiments, the B cell tumor is chronic lymphocytic leukemia (CLL), bovine lymphocyte lymphoma (SLL), high risk CLL, or non-CLL / SLL lymphoma. In certain embodiments, the B cell proliferative disorder is follicular lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), mantle cell lymphoma, Waldenstrom's macroglobulinemia, multiple myeloma, marginal lymphoma, Burkitt lymphoma, non-bucket high B cell Lymphoma or extralymphatic marginal B cell lymphoma. In certain embodiments, the B cell tumor is acute or chronic myeloid (or myeloid) leukemia, myelodysplastic syndrome, or acute lymphocytic leukemia. In certain embodiments, B cell tumors are recurrent or refractory diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), recurrent or refractory mantle cell lymphoma, recurrent or refractory vesicle lymphoma, recurrent or refractory CLL; Recurrent or refractory SLL; Relapsing or refractory multiple myeloma. In certain embodiments, the B cell tumor is a B cell proliferative disorder classified as high risk. In certain embodiments, the B cell tumor is a high risk CLL or a high risk SLL.

따라서, 한 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 외투 세포 림프종 (MCL), B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-ALL), 버킷 림프종, 만성 림프구 백혈병 (CLL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)으로 구성된 그룹 중 하나 이상에서 선택된다. 한 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 외투 세포 림프종 (MCL)이다. 또 다른 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-ALL)이다. 한 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 버킷 림프종이다. 한 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 만성 림프구 백혈병 (CLL)이다. 한 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 외투 세포 림프종 (MCL)이다. 한 구체예에서, 치료되는 B 세포 종양은 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)이다.Thus, in one embodiment, the B cell tumor to be treated is mantle cell lymphoma (MCL), B-cell acute lymphocytic leukemia (B-ALL), Burkitt's lymphoma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is selected from one or more of the group consisting of. In one embodiment, the B cell tumor to be treated is mantle cell lymphoma (MCL). In another embodiment, the B cell tumor to be treated is B-cell acute lymphocytic leukemia (B-ALL). In one embodiment, the B cell tumor to be treated is Burkitt's lymphoma. In one embodiment, the B cell tumor to be treated is chronic lymphocytic leukemia (CLL). In one embodiment, the B cell tumor to be treated is mantle cell lymphoma (MCL). In one embodiment, the B cell tumor to be treated is diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).

B-세포 종양들은 혈액의 신생물이며, 그 중에서도, 비-호지킨 림프종, 다발 골수종, 및 백혈병을 포함한다. 이들은 림프 조직에서 (림프종 사례에서와 같이) 또는 골수에서 (백혈병 및 골수종 사례에서와 같이) 기원할 수 있으며, 이들 모두는 림프구 또는 백혈구의 제어되지 않은 성장에 관여한다. B 세포 증식성 장애들의 많은 아형들이 존재한다. B 세포 증식성 장애의 질환 과정 및 치료는 B 세포 증식성 장애 아형에 따라 달라지지만; 각 아형 안에서도 임상 표현, 외부 형태, 및 요법에 대한 반응이 다르다.B-cell tumors are neoplasms of the blood, including non-Hodgkin's lymphoma, multiple myeloma, and leukemia. They may originate in lymphoid tissue (as in lymphoma cases) or in the bone marrow (as in leukemia and myeloma cases), all of which are involved in the uncontrolled growth of lymphocytes or leukocytes. There are many subtypes of B cell proliferative disorders. Disease processes and treatment of B cell proliferative disorders depend on B cell proliferative disorder subtypes; Within each subtype, clinical presentation, external form, and response to therapy differ.

또 다른 구체예에서, 상기 방법들은 또한 화합물 7, 또는 이의 제약학적 염을 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 혈액 종양을 치료하는 것을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 혈액 종양은 백혈병이다. 또 다른 구체예에서, 백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 및/또는 외투 세포 림프종이다. 한 특정 구체예에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병이다. In another embodiment, the methods may also include treating the blood tumor by administering to a patient in need of Compound 7, or a pharmaceutical salt thereof. In another embodiment, the blood tumor is leukemia. In another embodiment, the leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyeloid leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, pediatric bone marrow Monocyte leukemia, adult T-cell acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia with triple passage spinal dysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, and / or mantle cell lymphoma. In one specific embodiment, the leukemia is acute myeloid leukemia.

종양 림프종은 림프구 조직들 내부에 우세하게 존재하는 세포들의 신생물 형질전환이다. 종양 림프종의 2개 그룹은 호지킨 림프종 및 비-호지킨 림프종 (NHL)이다. 두 가지 유형의 림프종들 모두 망상내피 조직에 침투한다. 그러나, 이들은 신생물 유래 세포, 질환 부위, 전신 증상들의 존재, 및 치료에 대한 반응이 상이하다.Tumor lymphoma is a neoplastic transformation of cells predominantly inside lymphocyte tissues. Two groups of tumor lymphomas are Hodgkin's lymphoma and non-Hodgkin's lymphoma (NHL). Both types of lymphomas invade reticular endothelial tissue. However, they differ in neoplastic cells, site of disease, presence of systemic symptoms, and response to treatment.

한 구체예에서, 화합물 7은 오로라 키나아제의 활성을 저해 및/또는 감소시킨다. 오로라 키나아제 (오로라-A, 오로라-B, 오로라-C)는 세포 증식에 필수적인 세린/트레오닌 단백질 키나아제이며 유사분열 방추의 형성에서 세포질분열에 이르기까지 유사분열 및 감수분열에서의 상이한 단계들의 주요 조절인자로 확인된 바 있다.　오로라 군 키나아제들은 세포 분열에 중요하며, 종양형성 및 암 감수성과 밀접하게 연관되어 있다. 다양한 인간 암들에서 오로라-A, 오로라-B 및/또는 오로라 C의 키나아제 활성의 과-발현 및/또는 상향 조절이 관찰되었다. 오로라 키나아제의 과-발현은 암 진행 및 좋지 않은 생존 예후와 임상적으로 상관관계가 있다.　오로라 키나아제는 세포 주기를 조절하는 인산화 발생 (예컨대 히스톤 H3의 인산화)에 관여한다. 세포 주기의 조절이상은 세포 증식 및 다른 이상을 초래할 수 있다.In one embodiment, compound 7 inhibits and / or reduces the activity of aurora kinase. Aurora kinases (Aurora-A, Aurora-B, Aurora-C) are serine / threonine protein kinases essential for cell proliferation and are key regulators of different stages in mitosis and meiosis from the formation of mitotic spindles to cytoplasm Has been confirmed. Aurora group kinases are important for cell division and are closely associated with tumorigenesis and cancer susceptibility. Over-expression and / or upregulation of kinase activity of Aurora-A, Aurora-B and / or Aurora C has been observed in various human cancers. Overexpression of aurora kinases is clinically correlated with cancer progression and poor survival prognosis. Aurora kinases are involved in phosphorylation (eg, phosphorylation of histone H3) that regulates the cell cycle. Dysregulation of the cell cycle can lead to cell proliferation and other abnormalities.

특정 이론에 제한하고자 하는 것은 아니지만, BTK 및/또는 오로라 키나아제의 저해는 세포질분열의 실패 및 유사분열로부터의 비정상적 종료를 초래할 수 있으며, 이는 다배수성 세포, 세포 주기, 그리고 궁극적으로 세포자멸을 가져올 수 있다.　 Without wishing to be bound by any theory, inhibition of BTK and / or aurora kinases can lead to failure of cytoplasm and abnormal termination from mitosis, which can lead to multiploidy cells, cell cycle, and ultimately apoptosis. have.

따라서, 한 구체예에서, 화합물 7의 투여는 다배수체를 유도한다. 또 다른 구체예에서, 화합물 7의 투여는 세포자멸을 유도한다. 예를 들어, 한 구체예에서, 세포는 유효량의 화합물 7과 접촉되어, 세포 다배수체 및/또는 세포 주기 정지 및/또는 세포자멸을 유발한다. 세포들은 암 또는 종양 세포일 수 있다. 따라서, 한 구체예에서, 화합물 7의 투여는 암 및/또는 종양 세포에서 세포자멸을 유도한다. 또한 또 다른 구체예에서, 화합물 7의 투여는 돌연변이체 BTK (예컨대, C481S)를 발현시키는 암 및/또는 종양 세포에서 세포자멸을 유도한다.Thus, in one embodiment, administration of compound 7 induces polyploidy. In another embodiment, administration of compound 7 induces apoptosis. For example, in one embodiment, the cell is contacted with an effective amount of compound 7 to induce cell multiploids and / or cell cycle arrest and / or apoptosis. The cells can be cancer or tumor cells. Thus, in one embodiment, administration of compound 7 induces apoptosis in cancer and / or tumor cells. In yet another embodiment, administration of compound 7 induces apoptosis in cancer and / or tumor cells expressing mutant BTK (eg, C481S).

본 발명의 임의의 구체예들에서, 화합물 7은 야생형 BTK 및/또는 돌연변이체 BTK의 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킬 수 있다. 따라서, 일부 구체예들에서, 화합물 7은 야생형 BTK의 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 다른 구체예들에서, 화합물 7은 돌연변이체 BTK의 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 돌연변이체 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 돌연변이체 BTK는 시스테인 잔기 상에 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 한 구체예에서, 돌연변이체 BTK는 잔기 C481에서 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 한 구체예에서, 돌연변이체 BTK는 최소한 C481S 돌연변이를 포함한다.In certain embodiments of the invention, compound 7 may inhibit and / or reduce the activity or expression of wild type BTK and / or mutant BTK. Thus, in some embodiments, compound 7 inhibits and / or reduces the activity or expression of wild type BTK. In other embodiments, compound 7 inhibits and / or reduces the activity or expression of mutant BTK. Mutant BTK may comprise at least one point mutation. In one embodiment, the mutant BTK comprises at least one point mutation on a cysteine residue. In one embodiment, the mutant BTK comprises at least one point mutation at residue C481. In one embodiment, the mutant BTK comprises at least a C481S mutation.

Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3)는 FLT3 유전자에 의해 인코드되는 단백질을 지칭한다. 야생형 FLT3는 비-돌연변이 형태의 단백질을 지칭한다. FLT3는 내부 막근접 영역에서의 활성화 내부 일렬 중복 (ITD)FLT3의 활성화 루프 또는 티로신 키나아제 도메인에서의 점 돌연변이를 포함하는, 일련의 돌연변이를 거칠 수 있다. 본 발명의 임의의 구체예들에서, 화합물 7은 대상체에서 야생형 및/또는 돌연변이체 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 한 구체예에서, 화합물 7은 대상체에서 야생형 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 또 다른 구체예에서, 화합물 7은 대상체에서 돌연변이체 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킨다. 돌연변이체 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 돌연변이된 FLT3는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에서 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 돌연변이된 FLT3는 FLT3-ITD일 수 있다. 돌연변이된 FLT3는 추가적인 ITD 돌연변이를 추가로 포함할 수 있다. Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) refers to a protein encoded by the FLT3 gene. Wild type FLT3 refers to a non-mutant form of protein. FLT3 may undergo a series of mutations, including an activation loop of activating internal line overlap (ITD) FLT3 in the inner membrane proximity region or a point mutation in the tyrosine kinase domain. In certain embodiments of the invention, compound 7 inhibits and / or reduces wild type and / or mutant Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. In one embodiment, Compound 7 inhibits and / or reduces wild type Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. In another embodiment, Compound 7 inhibits and / or reduces mutant Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. Mutant FLT3 may comprise at least one point mutation. In one embodiment, the mutated FLT3 comprises at least one point mutation on one or more residues selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. The mutated FLT3 may be FLT3-ITD. The mutated FLT3 may further comprise additional ITD mutations.

본 발명의 또 다른 양상은 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포들과 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포들에서 비정상적 (예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법에 관한 것이다.Another aspect of the invention is the inhibition of abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in human cells, comprising contacting Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with human cells. Or a reduction method.

한 구체예에서, 돌연변이된 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함한다. 다양한 점 돌연변이가 본 발명의 범위에 속하는 것으로 고려되며, 상기 기재되어 있다. 예를 들어, 최소한 하나의 점 돌연변이는 BTK 상의 임의의 잔기에 대한 것일 수 있다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재한다. 한 구체예에서, 시스테인 잔기는 BTK의 키나아제 도메인에 존재한다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 E41, P190, 및 C481로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이다. 일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 아미노산 위치 481에 존재한다. C481 점 돌연변이는 임의의 아미노산 모이어티로 치환될 수 있다. 일부 구체예들에서, BTK에서의 돌연변이는 C481S이다. 한 구체예에서, 잔기 C481에서의 점 돌연변이는 C481S, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택된다. 한 구체예에서, 최소한 하나의 점 돌연변이는 E41K, P190K, 및 C481S로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이다.In one embodiment, the mutated BTK comprises at least one point mutation. Various point mutations are considered to be within the scope of the present invention and are described above. For example, at least one point mutation can be for any residue on BTK. In one embodiment, at least one point mutation is on the cysteine residue. In one embodiment, the cysteine residue is in the kinase domain of BTK. In certain embodiments, at least one point mutation is one or more selected from the group consisting of residues E41, P190, and C481. In certain embodiments, the mutation in BTK is at amino acid position 481. The C481 point mutation can be substituted with any amino acid moiety. In certain embodiments, the mutation in BTK is C481S. In one embodiment, the point mutation at residue C481 is selected from C481S, C481R, C481T and / or C481Y. In one embodiment, the at least one point mutation is one or more selected from the group consisting of E41K, P190K, and C481S.

제제Formulation

유효량의 화합물 7, 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 에스터, 전구약물, 수화물, 용매화합물 및 이성질체, 또는 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제약학적 조성물은 공지된 방법에 기반하여 해당 분야의 숙련된 기술자에 의해 결정될 수 있다. Pharmaceutical compositions comprising an effective amount of Compound 7, its pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers, or Compound 7 or its pharmaceutically acceptable salts are based on known methods Can be determined by one skilled in the art.

한 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물 또는 제약학적 제제는 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 제약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제에는, 제한 없이, 인간 또는 가축에서의 사용에 대하여 허용가능한 것으로 미국 식품의약국이 승인한, 임의의 보강제, 담체, 부형제, 유동화제, 감미제, 희석제, 보존제, 염료/착색제, 향 증진제, 계면활성제, 습윤화제, 분산제, 현탁화제, 안정화제, 등장화제, 용매, 또는 유화제가 포함된다. In one embodiment, the pharmaceutical composition or pharmaceutical formulation of the invention comprises Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients include, without limitation, any adjuvant, carrier, excipient, glidant, sweetener, diluent, preservative, approved by the US Food and Drug Administration as acceptable for use in humans or livestock. , Dye / coloring agents, flavor enhancers, surfactants, wetting agents, dispersing agents, suspending agents, stabilizers, isotonic agents, solvents, or emulsifiers.

한 구체예에서, 적합한 제약학적으로 허용가능한 담체에는, 불활성 고체 충전재 또는 희석제 및 무균 수용액 또는 유기 용액이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 제약학적으로 허용가능한 담체는 해당 분야에 잘 공지되어 있으며, 약 0.01 내지 약 0.1 M, 그리고 바람직하게는 0.05M의 인산염 완충액 또는 0.8% 염수를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 제약학적으로 허용가능한 담체는 수용액 또는 비-수용액, 현탁액 및 에멀전일 수 있다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 비-수성 용매들의 예들에는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 가령, 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스터, 가령, 에틸 올레이트가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. In one embodiment, suitable pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, inert solid fillers or diluents and sterile aqueous or organic solutions. Pharmaceutically acceptable carriers are well known in the art and include, but are not limited to, about 0.01 to about 0.1 M, and preferably 0.05 M of phosphate buffer or 0.8% saline. Such pharmaceutically acceptable carriers can be aqueous or non-aqueous solutions, suspensions and emulsions. Examples of non-aqueous solvents suitable for use in the present invention include, but are not limited to, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable organic esters such as ethyl oleate.

본 출원에서 사용하기에 적합한 수성 담체들에는, 식염수 및 완충 매질을 포함한, 물, 에탄올, 알콜/수용액, 글리세롤, 에멀전 또는 현탁액이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 경구 담체들은 엘릭서제, 시럽, 캡슐, 정제 등이 될 수 있다. Aqueous carriers suitable for use in the present application include, but are not limited to, water, ethanol, alcohol / aqueous solutions, glycerol, emulsions or suspensions, including saline and buffered media. Oral carriers can be elixirs, syrups, capsules, tablets and the like.

본 출원에서 사용하기에 적합한 액체 담체들은 용액, 현탁액, 에멀전, 시럽, 엘릭서제 및 가압 화합물들을 제조함에 사용될 수 있다. 활성 성분은 제약학적으로 허용가능한 액체 담체, 가령, 물, 유기 용매, 이 둘의 혼합물 또는 제약학적으로 허용가능한 오일 또는 지방에 용해 또는 현탁될 수 있다. 액체 담체는 다른 적합한 제약학적 첨가제, 가령, 용해화제, 유화제, 완충제, 보존제, 감미제, 착향제, 현탁화제, 증점제, 색, 점도 조절제, 안정화제 또는 삼투-조절제를 내포할 수 있다. Liquid carriers suitable for use in the present application can be used to prepare solutions, suspensions, emulsions, syrups, elixirs and pressurized compounds. The active ingredient may be dissolved or suspended in a pharmaceutically acceptable liquid carrier such as water, an organic solvent, a mixture of the two or a pharmaceutically acceptable oil or fat. Liquid carriers may contain other suitable pharmaceutical additives such as solubilizers, emulsifiers, buffers, preservatives, sweeteners, flavoring agents, suspending agents, thickeners, colors, viscosity regulators, stabilizers or osmo-control agents.

본 출원에서 사용하기에 적합한 액체 담체들에는, 물 (부분적으로 상기와 같은 첨가제들, 예컨대, 셀룰로오스 유도체, 바람직하게는 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스 용액을 함유), 알콜 (1가 알콜 및 다가 알콜, 예컨대, 글리콜 포함) 및 이의 유도체, 및 오일 (예컨대, 분별 코코넛 오일 및 땅콩 오일)이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여에 있어서, 담체는 또한 오일성 에스터, 가령, 에틸 올레이트 및 아이소프로필 미리스테이트를 포함할 수 있다. 무균 액체 담체들은 비경구 투여를 위한 화합물을 포함하는 무균 액체 형태로 유용하다. 본 명세서에 개시된 가압 화합물을 위한 액체 담체는 할로겐화 탄화수소 또는 다른 제약학적으로 허용가능한 추진제일 수 있다. Liquid carriers suitable for use in the present application include water (partially containing such additives, such as cellulose derivatives, preferably sodium carboxymethyl cellulose solution), alcohols (monohydric and polyhydric alcohols, such as Glycols) and derivatives thereof, and oils (eg, fractionated coconut oil and peanut oil). For parenteral administration, the carrier may also include oily esters such as ethyl oleate and isopropyl myristate. Sterile liquid carriers are useful in sterile liquid forms that contain a compound for parenteral administration. Liquid carriers for the pressurized compounds disclosed herein may be halogenated hydrocarbons or other pharmaceutically acceptable propellants.

본 출원에서 사용하기에 적합한 고체 담체에는, 불활성 물질들, 가령, 락토오스, 전분, 글루코스, 메틸-셀룰로오스, 마그네슘 스테아레이트, 다이칼슘 포스페이트, 만니톨 등이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 고체 담체는 착향제, 윤활제, 용해화제, 현탁화제, 충전재, 유동화제, 가압 조제, 결합제 또는 정제-붕해제로서 작용하는 하나 이상의 물질들을 추가로 포함할 수 있으며; 이는 또한 캡슐화 재료가 될 수 있다. 분말에서, 담체는 세분된 활성 화합물과의 혼합물로 존재하는 세분된 고체가 될 수 있다. 정제에서, 활성 화합물은 필요한 압축 특성을 가진 담체와 적합한 비율로 혼합되어 원하는 모양 및 크기로 압축된다. 분말 및 정제는 바람직하게는 활성 화합물의 최대 99%를 내포한다. 적합한 고체 담체들에는, 예를 들어, 칼슘 포스페이트, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 당, 락토오스, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리딘, 저 융점 왁스 및 이온 교환 수지가 포함된다. 정제는, 선택적으로 하나 이상의 부속 성분들과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는 적합한 기기에서 결합제 (예컨대, 포비돈, 젤라틴, 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제 (예컨대, 소듐 전분 글리콜레이트, 가교 포비돈, 가교 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스) 표면 활성 또는 분산제와 선택적으로 혼합된 자유 유동 형태, 가령, 분말 또는 과립의 활성 성분을 압축함으로써 제조될 수 있다. 성형된 정제는 분말형 화합물을 불활성 액체 희석제로 습윤시킨 혼합물을 적합한 기기에서 성형하여 제조될 수 있다. 정제는 선택적으로 코팅되거나 스코어처리(scored) 될 수 있으며, 활성 성분의 저속 또는 제어된 방출을 제공하도록, 예를 들면, 원하는 방출 프로파일을 제공하기 위해 비율을 달리한 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스를 사용하여 제제화될 수 있다. 정제는 선택적으로, 위를 제외한 장 부분들에서 방출을 제공하기 위한 장용 코팅이 제공될 수 있다. Solid carriers suitable for use in the present application include, but are not limited to, inert materials such as lactose, starch, glucose, methyl-cellulose, magnesium stearate, dicalcium phosphate, mannitol, and the like. The solid carrier may further comprise one or more substances which act as flavoring agents, lubricants, solubilizers, suspending agents, fillers, glidants, pressure aids, binders or tablet-disintegrants; It can also be an encapsulation material. In powders, the carrier can be a granular solid present in a mixture with the granular active compound. In tablets, the active compound is mixed with the carrier having the necessary compression properties in suitable proportions and compacted in the shape and size desired. Powders and tablets preferably contain up to 99% of the active compound. Suitable solid carriers include, for example, calcium phosphate, magnesium stearate, talc, sugars, lactose, dextrin, starch, gelatin, cellulose, polyvinylpyrrolidine, low melting waxes and ion exchange resins. A tablet may be made by compression or molding, optionally with one or more accessory ingredients. Compressed tablets may be used in suitable devices to provide a binder (eg povidone, gelatin, hydroxypropylmethyl cellulose), lubricant, inert diluent, preservative, disintegrant (eg sodium starch glycolate, crosslinked povidone, crosslinked sodium carboxymethyl cellulose) surface activity or It can be prepared by compacting the active ingredient in a free flowing form, such as a powder or granules, optionally mixed with a dispersant. Molded tablets can be made by molding in a suitable device a mixture of the powdered compound moistened with an inert liquid diluent. Tablets may be selectively coated or scored and used, for example, with varying proportions of hydroxypropylmethyl cellulose to provide a slow or controlled release of the active ingredient, to provide a desired release profile. It may be formulated. The tablet may optionally be provided with an enteric coating to provide release in the intestinal sections other than the stomach.

본 출원에서 사용하기에 적합한 비경구 담체에는, 소듐 클로라이드 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 소듐 클로라이드, 젖산화 링거용액 및 고정 오일이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 정맥내 담체들은 체액 및 영양소 보충제, 전해질 보충제, 가령, 링거 덱스트로스 등에 기반한 것들을 포함한다. 보존제 및 다른 첨가제들, 가령, 예를 들어, 항균제, 항산화제, 착화제, 불활성 기체 등 또한 존재할 수 있다. Parenteral carriers suitable for use in the present application include, but are not limited to, sodium chloride solution, Ringer's dextrose, dextrose and sodium chloride, lactated Ringer's solution, and fixed oils. Intravenous carriers include those based on body fluids and nutrient supplements, electrolyte supplements such as Ringer's dextrose and the like. Preservatives and other additives may also be present, such as, for example, antibacterial agents, antioxidants, complexing agents, inert gases, and the like.

본 출원에서 사용하기에 적합한 담체들은 필요에 따라 해당 분야에 공지된 종래의 기법들을 사용하여 붕해제, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제 등과 혼합될 수 있다. 담체들은 또한 해당 분야에 일반적으로 공지된 바와 같이 상기 화합물들과 유해하게 반응하지 않는 방법들을 사용하여 무균화될 수 있다. Carriers suitable for use in the present application may be mixed with disintegrants, diluents, granulating agents, lubricants, binders and the like as needed using conventional techniques known in the art. Carriers may also be sterilized using methods that do not adversely react with the compounds, as is generally known in the art.

희석제가 본 발명의 제제들에 추가될 수 있다. 희석제는 고체 제약학적 조성물 및/또는 조합물의 벌크를 증가시키며, 환자 및 돌봄 제공자가 보다 용이하게 취급할 수 있는 조성물 및/또는 조합물을 내포하는 제약학적 투약형을 제조할 수 있다. 고체 조성물 및/또는 조합물을 위한 희석제에는, 예를 들어, 마이크로결정질 셀룰로오스 (예컨대, AVICEL), 마이크로미세 셀룰로오스, 락토오스, 전분, 전호화 전분, 칼슘 카보네이트, 칼슘 설페이트, 당, 덱스트레이트, 덱스트린, 덱스트로스, 2염기 칼슘 포스페이트 2수화물, 3염기 칼슘 포스페이트, 카올린, 마그네슘 카보네이트, 마그네슘 옥사이드, 말토덱스트린, 만니톨, 폴리메트아크릴레이트 (예컨대, EUDRAGIT(r)), 포타슘 클로라이드, 분말형 셀룰로오스, 소듐 클로라이드, 솔비톨, 및 활석이 포함된다.Diluents may be added to the formulations of the invention. Diluents increase the bulk of solid pharmaceutical compositions and / or combinations and can produce pharmaceutical dosage forms containing compositions and / or combinations that are easier to handle by patients and caregivers. Diluents for solid compositions and / or combinations include, for example, microcrystalline cellulose (e.g., AVICEL), microfine cellulose, lactose, starch, pregelatinized starch, calcium carbonate, calcium sulfate, sugars, dextrates, dextrins, Dextrose, dibasic calcium phosphate dihydrate, tribasic calcium phosphate, kaolin, magnesium carbonate, magnesium oxide, maltodextrin, mannitol, polymethacrylate (e.g. EUDRAGIT (r)), potassium chloride, powdered cellulose, sodium chloride , Sorbitol, and talc.

본 출원의 목적을 위해, 본 발명의 제약학적 조성물은, 제약학적으로 허용가능한 담체, 보강제 및 비히클들을 내포하는 제제들에서 경구로, 비경구로, 흡입 스프레이에 의해, 국소로, 또는 직장내로를 포함한, 다양한 수단에 의한 투여를 위해 제제화될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 비경구는 다양한 주입 기술을 사용한 피하, 정맥내, 근육내, 및 동맥내 주사를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 동맥내 및 정맥내 주사는 카테터를 통한 투여를 포함한다. For the purposes of the present application, the pharmaceutical composition of the present invention comprises orally, parenterally, by inhalation spray, topically, or rectally in preparations containing pharmaceutically acceptable carriers, adjuvant and vehicles. It may be formulated for administration by various means. As used herein, the term parenteral includes subcutaneous, intravenous, intramuscular, and intraarterial injection using various infusion techniques. Intra-arterial and intravenous injections as used herein include administration via a catheter.

본 발명의 제약학적 조성물은 해당 분야에 널리 공지된 종래의 임의의 방법들을 사용하여 임의의 유형의 제제 및 약물 전달 시스템으로 제조될 수 있다. 본 발명의 제약학적 조성물은 주사가능한 제제들로 제제화될 수 있으며, 이는 척추강내, 심실내, 정맥내, 복강내, 비강내, 안구내, 근육내, 피하 또는 골내를 비롯한 경로에 의해 투여될 수 있다. 또한, 이는 경구로, 또는 직장, 창자 또는 비강 내 점막을 통해 비경구로 투여될 수도 있다 (Gennaro, A. R., ed. (1995) Remington's Pharmaceutical Sciences 참고). 바람직하게는, 상기 조성물은 장관으로가 아닌 국소로 투여된다. 예를 들어, 상기 조성물은 주사되거나 표적화된 약물 전달 시스템, 가령, 저장소 제제 또는 서방형 제제를 통해 전달될 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared with any type of formulation and drug delivery system using any of the conventional methods well known in the art. The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into injectable preparations, which may be administered by routes including intrathecal, ventricular, intravenous, intraperitoneal, intranasal, intraocular, intramuscular, subcutaneous or intraosseous. have. It may also be administered orally or parenterally via the rectal, intestinal or intranasal mucosa (see Gennaro, A. R., ed. (1995) Remington's Pharmaceutical Sciences). Preferably, the composition is administered topically, not intestinally. For example, the composition can be delivered via injectable or targeted drug delivery system, such as a depot preparation or sustained release preparation.

본 발명의 제약학적 제제는 해당 분야에 널리 공지된 임의의 방법들, 가령, 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 연화 (levigating), 유화, 캡슐화, 포획화 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다. 상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 활성 분자들의 제약학적 용도의 제재로의 가공을 용이하게 하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체, 가령, 부형제 및 보강제를 포함할 수 있다. The pharmaceutical formulations of the present invention may be prepared by any of the methods well known in the art, such as mixing, dissolving, granulating, dragee preparation, levigating, emulsifying, encapsulating, capturing or lyophilizing processes. have. As mentioned above, the compositions of the present invention may include one or more physiologically acceptable carriers, such as excipients and adjuvant, which facilitate processing of the active molecules into the formulation of pharmaceutical use.

적절한 제제는 선택된 투여 경로에 따라 다르다. 주사를 위해, 예를 들어, 조성물은 수용액에서, 바람직하게는 생리학적으로 상용가능한 완충제, 가령, 행크 용액 (Hank's solution), 링거 용액 (Ringer's solution), 또는 생리학적 식염수 완충액에서 제제화될 수 있다. 경점막 또는 코 투여를 위해, 침투해야 하는 장벽에 적합한 침투제가 이러한 제제에서 사용된다. 이러한 침투제들은 해당 분야에 일반적으로 공지되어 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 경구 제제로 제조될 수 있다. 경구 투여를 위해, 화합물들은 활성 화합물들과 해당 분야에 공지된 제약학적으로 허용가능한 담체를 조합하여 용이하게 제제화될 수 있다. 이러한 담체들은 상기 개시된 화합물을 대상체에 의한 경구 섭취를 위한 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제형화 될 수 있게 한다. 상기 화합물들은 또한, 예컨대, 종래의 좌제용 기재들, 가령, 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드를 내포하는 직장 조성물, 가령, 좌약 또는 정체 관장제로 제형화될 수 있다.Proper formulation is dependent upon the route of administration chosen. For injection, for example, the composition may be formulated in an aqueous solution, preferably in a physiologically compatible buffer such as Hank's solution, Ringer's solution, or physiological saline buffer. For transmucosal or nasal administration, penetrants suitable for the barrier to penetrate are used in such formulations. Such penetrants are generally known in the art. In one embodiment of the invention, the compounds of the invention can be prepared in oral formulations. For oral administration, the compounds can be formulated readily by combining the active compounds with pharmaceutically acceptable carriers known in the art. Such carriers enable the disclosed compounds to be formulated into tablets, pills, dragees, capsules, liquids, gels, syrups, slurries, suspensions, and the like for oral ingestion by a subject. The compounds may also be formulated, for example, in rectal compositions containing conventional suppository substrates such as cocoa butter or other glycerides such as suppositories or retention enemas.

경구용 제약학적 제재는 정제 또는 당의정 코어를 얻고자 하는 경우, 적절한 보강제를 추가 후, 고형 부형제를 얻고, 선택적으로 생성된 혼합물을 분쇄하고, 그리고 과립들의 혼합물을 가공하여 얻을 수 있다. 적합한 부형제는, 특히, 충전제, 가령, 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 또는 소르비톨을 비롯한 당; 셀룰로오스 제제, 가령, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP) 제제이다. 또한, 붕해제, 가령, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 이의 염, 가령, 소듐 알지네이트가 이용될 수 있다. 또한, 습윤화제, 가령, 소듐 도데실 설페이트 등이 추가될 수 있다.Oral pharmaceutical preparations may be obtained by adding appropriate adjuvant, obtaining solid excipients, optionally grinding the resulting mixture, and processing the mixture of granules, in order to obtain a tablet or dragee core. Suitable excipients include, in particular, sugars, including fillers such as lactose, sucrose, mannitol, or sorbitol; Cellulose preparations such as corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, gum tragacanth, methyl cellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, sodium carboxymethylcellulose, and / or polyvinylpyrrolidone (PVP) Formulation. In addition, disintegrants such as crosslinked polyvinyl pyrrolidone, agar, or alginic acid or salts thereof, such as sodium alginate, may be used. In addition, wetting agents, such as sodium dodecyl sulfate, and the like may be added.

적합한 코팅이 당의정 코어에 제공된다. 이를 위해, 농축된 당 용액들이 사용될 수 있으며, 이는 선택적으로 검 아라빅, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 티타늄 다이옥사이드, 락커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 내포할 수 있다. 활성 화합물 용량의 상이한 조합을 식별 또는 특성화하기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 염료 또는 색소를 추가할 수 있다. Suitable coatings are provided on dragee cores. To this end, concentrated sugar solutions can be used, which optionally include gum arabic, talc, polyvinyl pyrrolidone, carbopol gel, polyethylene glycol, and / or titanium dioxide, lacquer solutions, and suitable organic solvents or solvent mixtures. Can be nested. Dyestuffs or pigments may be added to the tablets or dragee coatings to identify or characterize different combinations of active compound doses.

경구 투여를 위한 제약학적 제제는, 젤라틴으로 제조된 압입형 캡슐, 뿐만 아니라 젤라틴 및 가소화제, 가령, 글리세롤 또는 소르비톨로 제조된 연질의 밀봉 캡슐을 포함한다. 압입형 캡슐은 활성 성분들을 충전제, 가령, 락토오스, 결합제, 가령, 전분, 및/또는 윤활제, 가령, 활석 또는 마그네슘 스테아레이트 및, 선택적으로, 안정화제와의 혼합물로 내포할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물들은, 적합한 액체, 가령, 지방 오일, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제가 추가될 수 있다. 경구 투여용의 모든 제형들은 이러한 투여에 적합한 투여량이어야 한다.Pharmaceutical formulations for oral administration include indentable capsules made of gelatin, as well as soft sealed capsules made of gelatin and plasticizers such as glycerol or sorbitol. Indentable capsules may contain the active ingredients in admixture with fillers such as lactose, binders such as starches, and / or lubricants such as talc or magnesium stearate and, optionally, stabilizers. In soft capsules, the active compounds may be dissolved or suspended in suitable liquids, such as fatty oils, liquid paraffin, or liquid polyethylene glycols. In addition, stabilizers may be added. All formulations for oral administration should be in dosages suitable for such administration.

한 구체예에서, 본 발명의 화합물들은 경피로, 가령, 피부 패치를 통해, 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 한 양상에서, 본 발명의 경피 또는 국소 제제들은 하나 또는 복수의 침투 증진제 또는 전달된 화합물의 이동을 개선하는 물질을 비롯한 다른 효과물질을 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 경피 또는 국소 투여는, 예컨대, 위치 특이적 전달이 필요한 상황에서 사용될 수 있다.In one embodiment, the compounds of the present invention may be administered transdermally, such as through a skin patch, or topically. In one aspect, transdermal or topical formulations of the present invention may further comprise one or more effector agents, including one or more penetration enhancers or substances that improve the transport of the delivered compound. Preferably, transdermal or topical administration can be used, for example, in situations where location specific delivery is required.

흡입에 의한 투여를 위해, 본 발명의 화합물들은 가압 팩 또는 네뷸라이저로부터 적합한 추진제, 예컨대, 다이클로로다이플루오로메테인, 트라이클로로플루오로메테인, 다이클로로테트라플루오로에테인, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여 에어로졸 스프레이 방식의 형태로 용이하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우에 적절한 투여량 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위하여 예컨대, 젤라틴의 캡슐 및 카트리지가 제형화될 수 있다. 이들은 전형적으로 화합물과 적합한 분말 베이스, 가령, 락토오스 또는 전분의 분말 혼합물을 내포한다. 예컨대, 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여를 위해 제제화된 조성물은 첨가된 보존제와 함께 단위 투여량 형태로, 예컨대, 앰플로 또는 다회-투약 용기로, 제공될 수 있다. 상기 조성물들은 유성 또는 수성 비히클에서의 현탁액, 용액 또는 에멀전과 같은 형태를 취할 수 있으며, 그리고 제형화 물질, 가령, 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제를 내포할 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제들은 수성 용액 또는 수-용해성 형태의 다른 조성물들을 포함한다.For administration by inhalation, the compounds of the present invention can be prepared from suitable presses or nebulizers, such as dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas. It can be easily delivered in the form of aerosol spray method using. In the case of a pressurized aerosol, the appropriate dosage unit can be determined by providing a valve to deliver a metered amount. For example, capsules and cartridges of gelatin can be formulated for use in an inhaler or blower. These typically contain a powder mixture of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch. For example, a composition formulated for parenteral administration by bolus injection or continuous infusion can be provided in unit dosage form, eg, in an ampoule or multi-dose container, with a preservative added. Such compositions may take the form of suspensions, solutions or emulsions in oily or aqueous vehicles, and may contain formulated materials such as suspending agents, stabilizers and / or dispersants. Formulations for parenteral administration include aqueous compositions or other compositions in water-soluble form.

활성 화합물들의 현탁액은 또한 적절한 유성 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 적합한 친유성 용매 또는 비히클에는 지방 오일, 가령, 참기름, 및 합성 지방산 에스터, 가령, 에틸 올레이트 또는 트라이글리세라이드, 또는 리포좀이 포함될 수 있다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점성도를 증가시키는 물질들, 가령, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨, 또는 덱스트란을 내포할 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 또한 적합한 안정화제 또는 고농축 용액을 제조할 수 있도록 화합물들의 용해도를 증가시키는 제제들을 내포할 수 있다. 택일적으로, 활성 성분은 사용 전 적합한 비히클, 예컨대, 무발열원 무균수 (sterile pyrogen-free water)와 구성되기 위한 분말 형태일 수 있다.Suspensions of the active compounds can also be prepared as appropriate oily injection suspensions. Suitable lipophilic solvents or vehicles can include fatty oils such as sesame oil, and synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate or triglycerides, or liposomes. Aqueous injection suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethyl cellulose, sorbitol, or dextran. Optionally, the suspension may also contain agents that increase the solubility of the compounds so as to prepare suitable stabilizers or highly concentrated solutions. Alternatively, the active ingredient may be in powder form for constitution with a suitable vehicle, eg, sterile pyrogen-free water, before use.

상기 설명한 바와 같이, 본 발명의 조성물들은 또한 저장소 제제로 제제화될 수도 있다. 이러한 장기 작용 제제는 이식에 의해 (예컨대, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 그러므로, 예를 들어, 본 발명의 화합물은 적합한 중합체 또는 소수성 재료 (예컨대, 허용가능한 오일 중의 에멀전으로서) 또는 이온 교환 수지와 함께, 또는 난용성 유도체로서, 예컨대, 난용성 염으로서 제형화될 수 있다.As described above, the compositions of the present invention may also be formulated in a reservoir formulation. Such long acting agents can be administered by implantation (eg, subcutaneously or intramuscularly) or by intramuscular injection. Thus, for example, the compounds of the present invention may be formulated with suitable polymers or hydrophobic materials (eg, as emulsions in acceptable oils) or ion exchange resins, or as poorly soluble derivatives, such as poorly soluble salts. .

본 발명의 치료 방법에서 사용되는 임의의 조성물에 있어서, 치료적 유효 용량은 해당 분야에 널리 공지된 다양한 기술들을 사용하여 먼저 추정될 수 있다. 예를 들어, 세포 배양액 분석으로부터 얻은 정보에 기반하여, IC50을 포함하는 순환 농도 범위를 구현하기 위한 용량이 동물 모델에서 계산될 수 있다. 유사하게, 인간 대상체에 적합한 용량 범위는, 예를 들어, 세포 배양액 분석 및 다른 동물 연구들에서 얻은 데이터를 사용하여 결정될 수 있다.For any composition used in the methods of treatment of the invention, the therapeutically effective dose can be estimated first using various techniques well known in the art. For example, based on information obtained from cell culture assays, doses to implement circulating concentration ranges including IC 50 can be calculated in animal models. Similarly, dosage ranges suitable for human subjects can be determined using, for example, data obtained from cell culture assays and other animal studies.

물질의 치료적 유효 용량은 대상체에서 증상들의 개선 또는 생존의 연장을 가져오는 제제의 양을 지칭한다. 이러한 분자들의 독성 및 치료 효능은, 예를 들어, LD50 (모집단의 50%에 대한 치사 용량) 및 ED50 (모집단의 50%에서 치료적으로 유효한 용량)을 결정함으로써, 세포 배양 또는 실험 동물들에서 표준 제약학적 절차들에 의해 결정될 수 있다. 독성 및 치료 효과간의 용량 비율은 치료 지수로서 이는 LD50/ED50 비율로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 물질들이 요구된다.A therapeutically effective dose of a substance refers to the amount of agent that results in amelioration of symptoms or prolongation of survival in a subject. Toxicity and therapeutic efficacy of these molecules can be determined, for example, by determining LD 50 (lethal dose for 50% of the population) and ED 50 (dose therapeutically effective at 50% of the population). Can be determined by standard pharmaceutical procedures. The dose ratio between toxic and therapeutic effects is the therapeutic index which can be expressed as the LD 50 / ED 50 ratio. Materials that exhibit a high therapeutic index are needed.

용량은 바람직하게는 거의 또는 전혀 독성이 없이 ED50를 포함하는 순환하는 농도 범위에 속한다. 용량은 사용되는 투약형 및 이용되는 투여 경로에 따라 이러한 범위 안에서 달라질 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로, 및 투여량은 대상체 병태의 특이성을 고려하여 해당 분야에 널리 공지된 방법들에 따라 선택되어야 한다. The dose is preferably in the circulating concentration range comprising ED 50 with little or no toxicity. The dosage may vary within this range depending upon the dosage form employed and the route of administration utilized. The exact formulation, route of administration, and dosage should be selected according to methods well known in the art, given the specificity of the subject condition.

또한, 투여되는 물질 또는 조성물의 양은 치료되는 대상체의 연령, 체중, 성별, 건강 상태, 질환 정도, 병의 중증도, 투여 방식, 및 처방의사의 판단을 비롯한 다양한 요인들에 따라 달라질 것이다.In addition, the amount of substance or composition to be administered will vary depending on various factors, including the age, weight, sex, health condition, degree of disease, severity of the condition, mode of administration, and the judgment of the prescriber.

본 발명의 화합물 또는 제약학적 조성물은 단회 또는 다회 단위 투약형으로 제작되거나 및/또는 투여될 수 있다. The compounds or pharmaceutical compositions of the invention may be prepared and / or administered in single or multiple unit dosage forms.

본 발명을 일반적으로 설명하였으나, 본 발명은 하기 실시예를 참고하면 보다 용이하게 이해될 것이며, 이들 실시예는 예시로 제공되는 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 명확히 달리 언급이 없는 한, 조건 및 절차는 해당 분야에 일반적으로 공지된 바와 같이 실시된다. While the invention has been described in general, the invention will be more readily understood by reference to the following examples, which are provided by way of example and are not intended to limit the invention. Unless expressly stated otherwise, the conditions and procedures are practiced as generally known in the art.

실시예Example

합성: 재료 및 방법Synthesis: Materials and Methods

해당 분야에 널리 공지된 종래의 합성법에 따라 다양한 출발 재료가 제조될 수 있다. 출발 재료들 중 일부는 시약 제조업체 및 공급업체, 가령, Aldrich, Sigma, TCI, Wako, Kanto,Fluorchem, Acros, Abocado, Alfa, Fluka 사 등 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)으로부터 상업적으로 구입가능하다.Various starting materials can be prepared according to conventional synthesis methods well known in the art. Some of the starting materials are commercially available from reagent manufacturers and suppliers such as, but not limited to, Aldrich, Sigma, TCI, Wako, Kanto, Fluorchem, Acros, Abocado, Alfa, Fluka, and the like.

본 발명의 화합물들은 용이하게 구입가능한 출발 재료로부터 종래의 방법들 및 하기 절차들에 의해 제조될 수 있다. 전형적인 또는 최적의 공정 조건들 (즉, 반응 온도, 시간, 반응물들의 몰비, 용매, 압력 등)로서 달리 특정되지 않는 한, 본 발명의 화합물들을 제조하기 위해 상이한 방법들 또한 사용될 수 있다. 최적 반응 조건들은 사용되는 구체적인 반응물 또는 용매들에 따라 달라질 수 있다. 그러나 이러한 조건들은 종래의 최적화 공정에 의해 해당 분야의 숙련된 기술자에 의해 결정될 수 있다.The compounds of the present invention can be prepared from conventionally available starting materials by conventional methods and the following procedures. Different methods may also be used to prepare the compounds of the present invention unless otherwise specified as typical or optimal process conditions (ie, reaction temperature, time, mole ratio of reactants, solvent, pressure, etc.). Optimum reaction conditions may vary depending on the specific reactants or solvents used. However, these conditions can be determined by those skilled in the art by conventional optimization processes.

또한, 해당 분야의 숙련된 기술자들은 특정 반응이 일어나기 전에 일부 작용기들이 다양한 보호기를 사용하여 보호/탈보호될 수 있음을 이해할 것이다. 특정 작용기를 보호 및/또는 탈보호함에 적합한 조건들 및 보호기의 사용은 해당 분야에 널리 공지되어 있다.In addition, those skilled in the art will understand that some functional groups may be protected / deprotected using various protecting groups before a particular reaction occurs. Conditions suitable for protecting and / or deprotecting certain functional groups and the use of protecting groups are well known in the art.

예를 들어, 다양한 종류의 보호기들이 T.W. Greene 및 G.M. Wuts의, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second edition, Wiley, New York, 1991, 그리고 상기 인용된 다른 문헌들에 기재되어 있다.For example, various types of protectors are available. Greene and G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second edition, Wiley, New York, 1991, and other documents cited above.

본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 화합물 7은 하기 나타낸 도식 1에 따라 중간체인 화합물 D를 합성한 다음, 화합물 D를 반응 도식 2의 절차를 거치게 함으로써 제조될 수 있다. 그러나, 상기 화합물 D의 합성 방법은 반응 도식 1에 제한되지 않는다.In one embodiment of the present invention, compound 7 of the present invention may be prepared by synthesizing compound D, an intermediate according to Scheme 1 shown below, and then subjecting compound D to the scheme of Scheme 2. However, the method for synthesizing Compound D is not limited to Scheme 1.

도식 1Scheme 1

Figure pct00003
Figure pct00003

반응 도식 1의 출발 재료, 즉, 화합물Starting material of Scheme 1, i.e. compound

A의 제조 방법은 국제 공개 특허 출원 W02012/014017에 기재되어 있으며, 화합물 D의 제조는 미국 공개 특허 출원 US2015/0336934에 기재되어 있다.The preparation method of A is described in international published patent application WO02012 / 014017, and the preparation of compound D is described in US published patent application US2015 / 0336934.

실시예 1: 1-{3-플루오로-4-[7-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)-1-옥소-2,3-다이하이드로-1H-아이소인돌-4-일]-페닐}-3-(2,4,6-트라이플루오로-페닐)-우레아 (화합물 7)의 합성 Example 1 : 1- {3-fluoro-4- [7- (5-methyl-1H-imidazol-2-yl) -1-oxo-2,3-dihydro-1H-isoindol-4-yl] Synthesis of -phenyl} -3- (2,4,6-trifluoro-phenyl) -urea (Compound 7)

Figure pct00004
Figure pct00004

2,4,6-트라이플루오로벤조산 (0.08 g, 0.45 mmol)을 다이에틸 에터 (5.7 mL)에 분산시키고, 포스포러스 펜타클로라이드 (PCl5, 0.11 g, 0.52 mmol)에 서서히 첨가한 다음, 1 시간 동안 교반하였다. 반응 완결시, 유기 용매를 실온 미만에서 감압하에 농축시킨 다음, 아세톤 (3.8 mL)을 첨가하여 반응 용액을 희석시켰다. 후속하여, 물 (0.28 mL)에 용해시킨 소듐 아자이드 (NaN3, 0.035 g, 0.545 mmol)를 0℃에서 반응 용액에 점적하여 서서히 첨가하였다. 실온에서 2시간 교반 후, 이렇게 형성된 2,4,6-트라이플루오로벤조일 아자이드를 에틸 아세테이트로 희석시킨 다음, 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘 설페이트를 통해 건조시키고, THF (2 mL)에 분산시키고, 4-(4-아미노-2-플루오로페닐)-7-(5-메틸-1H-이미다졸-2-일)아이소인돌린-1-온 (화합물 D, 0.073 g, 0.23 mmol)을 내포하는 THF (7.5 mL)를 추가한 다음, 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완결시, 용매를 감압하에 농축시킨 다음, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (용리액:메틸렌 클로라이드: 메탄올 = 20:1)로 정제하여, 화합물 7을 수득하였다 (0.026 g, 수율: 23%). 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d): 14.46-14.37 (m 1H), 9.47-9.45 (br m, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.45 (d, J=1.8Hz, 1H), 8.30-8.27 (br m, 1H), 7.63-7.46 (m, 3H), 7.31-7.26 (m, 3H), 7.09-6.84 (m, 1H), 4.42 (s, 2H), 2.31-2.21 (m, 3H). LCMS [M+1]: 496.3.2,4,6-trifluorobenzoic acid (0.08 g, 0.45 mmol) was dispersed in diethyl ether (5.7 mL) and slowly added to phosphorus pentachloride (PCl 5 , 0.11 g, 0.52 mmol), then 1 Stir for hours. At the completion of the reaction, the organic solvent was concentrated under reduced pressure at room temperature and then the reaction solution was diluted by addition of acetone (3.8 mL). Subsequently, sodium azide (NaN 3 , 0.035 g, 0.545 mmol) dissolved in water (0.28 mL) was slowly added dropwise to the reaction solution at 0 ° C. After stirring for 2 hours at room temperature, the thus formed 2,4,6-trifluorobenzoyl azide was diluted with ethyl acetate and then washed with water. The organic layer is dried over anhydrous magnesium sulfate, dispersed in THF (2 mL), and 4- (4-amino-2-fluorophenyl) -7- (5-methyl-1H-imidazol-2-yl) eye THF (7.5 mL) containing soindolin-1-one (Compound D, 0.073 g, 0.23 mmol) was added and then stirred at 90 ° C. for 3 hours. At the completion of the reaction, the solvent was concentrated under reduced pressure and then purified by silica gel column chromatography (eluent: methylene chloride: methanol = 20: 1) to give compound 7 (0.026 g, yield: 23%). 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d): 14.46-14.37 (m 1H), 9.47-9.45 (br m, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.45 (d, J = 1.8Hz, 1H), 8.30-8.27 (br m, 1H), 7.63-7.46 (m, 3H), 7.31-7.26 (m, 3H), 7.09-6.84 (m, 1H), 4.42 (s, 2H), 2.31-2.21 (m, 3H). LCMS [M + 1]: 496.3.

실시예 2: 야생형 및 돌연변이된 FLT3 키나아제에 대한 화합물 7의 결합 상수 Example 2 Binding Constants of Compound 7 to Wild-Type and Mutated FLT3 Kinases

상기 키나아제 활성의 측정치들은 결합 상수 또는 Kd 값으로 지칭된다. 이러한 값들을 얻기 위한 프로토콜을 여기서 설명한다. 대부분의 분석에서, 키나아제-태그된 T7 파지 균주들은 BL21 균주로부터 유래한 대장균 숙주에서 제조하였다. 대장균을 대수기까지 성장시키고 T7 파지로 감염시키고 32℃에서 진탕하면서 용해시까지 배양하였다. 용해물을 원심분리하고 여과시켜 세포 파편을 제거하였다. 잔부 키나아제들은 HEK-293 세포들에서 제조되었으며 후속하여 qPCR 탐지를 위해 DNA로 태그시켰다. 키나아제 분석을 위한 친화성 수지를 생성하기 위해 스트렙타비딘-코팅된 자기 비드를 실온에서 30분 동안 비오티닐화 소분자 리간드로 처리하였다. 상기 리간드 비드들을 과량의 비오틴으로 차단시키고 차단 완충액 (SeaBlock (Pierce), 1% BSA, 0.05% Tween 20, 1 mM DTT)로 세척하여 결합되지 않은 리간드를 제거하고 비특이적 결합을 감소시켰다. 키나아제, 리간드화된 친화성 비드, 및 테스트 화합물들을 1x 결합 완충액에서 (20% SeaBlock, 0.17x PBS, 0.05% Tween 20, 6 mM DTT) 조합하여 결합 반응들을 연합시켰다. 테스트 화합물들을 100% DMSO에서의 111X 스톡으로 준비하였다. 3개의 DMSO 대조 점으로 11-점 3-배 화합물 연속 희석을 사용하여 Kd를 결정하였다. Kd 측정을 위해 모든 화합물들은 100% DMSO에서 어쿠스틱 전달 (비-접촉 분배)에 의해 분배된다. 이후 DMSO의 최종 농도가 0.9%가 되도록 화합물들을 분석물에 직접 희석시켰다. 모든 반응들은 폴리프로필렌 384-웰 플레이트에서 실시되었다. 각각은 최종 부피가 0.02 ml였다. 분석 플레이트들을 실온에서 1 시간 동안 진탕하면서 배양하고 친화성 비드들을 세척 완충액 (1x PBS, 0.05% Tween 20)으로 세척하였다. 이후 비드들을 용리 완충액 (1x PBS, 0.05% Tween 20, 0.5 μM 비-비오티닐화 친화성 리간드)에 재현탁시키고, 30분 동안 진탕하면서 실온에서 배양하였다. 용리물에서 키나아제 농도를 qPCR로 측정하였다.The measurements of kinase activity are referred to as binding constants or K d values. The protocol for obtaining these values is described here. In most assays, kinase-tagged T7 phage strains were prepared in E. coli hosts derived from the BL21 strain. Escherichia coli was grown to log phase and infected with T7 phage and incubated with dissolution while shaking at 32 ° C. Lysates were centrifuged and filtered to remove cell debris. Residual kinases were prepared in HEK-293 cells and subsequently tagged with DNA for qPCR detection. Streptavidin-coated magnetic beads were treated with biotinylated small molecule ligands at room temperature for 30 minutes to produce an affinity resin for kinase analysis. The ligand beads were blocked with excess biotin and washed with blocking buffer (SeaBlock (Pierce), 1% BSA, 0.05% Tween 20, 1 mM DTT) to remove unbound ligand and reduce nonspecific binding. Kinases, liganded affinity beads, and test compounds were combined in lx binding buffer (20% SeaBlock, 0.17x PBS, 0.05% Tween 20, 6 mM DTT) to associate binding reactions. Test compounds were prepared as 111 × stocks in 100% DMSO. Kd was determined using 11-point 3-fold compound serial dilutions with three DMSO control points. For K d determination all compounds are dispensed by acoustic delivery (non-contact distribution) in 100% DMSO. The compounds were then diluted directly into the analyte so that the final concentration of DMSO was 0.9%. All reactions were carried out in polypropylene 384-well plates. Each had a final volume of 0.02 ml. Assay plates were incubated with shaking for 1 hour at room temperature and the affinity beads were washed with wash buffer (1 × PBS, 0.05% Tween 20). Beads were then resuspended in elution buffer (1 × PBS, 0.05% Tween 20, 0.5 μM non-biotinylated affinity ligand) and incubated at room temperature with shaking for 30 minutes. Kinase concentration in the eluate was determined by qPCR.

화합물 7 및 퀴자르티닙에 대해 측정된 결합 상수를 아래 표 1에 나타낸다.The binding constants measured for Compound 7 and Quizartinib are shown in Table 1 below.

[표 1]TABLE 1

화합물 7 및 퀴자르티닙의 결합 상수 (Kd)Binding Constants of Compound 7 and Quizartinib (K d )

Figure pct00005
Figure pct00005

실시예 3: MV4-11 세포들에서 화합물 7에 대한 웨스턴 블롯 분석 Example 3 : Western blot analysis for compound 7 in MV4-11 cells

도 1은 웨스턴-블롯 분석 결과들을 보여준다. 임의의 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이는 화합물 7이 MV4-11 세포에서 FLT3 경로를 억제함을 나타낸다.1 shows western-blot analysis results. Without wishing to be bound by any theory, this indicates that compound 7 inhibits the FLT3 pathway in MV4-11 cells.

실시예 4: 화합물 7을 이용한 FLT3 돌연변이체의 저해 Example 4 : Inhibition of FLT3 Mutant with Compound 7

[표 2]TABLE 2

FLT3에서 화합물 7의 IC50 IC 50 of compound 7 in FLT3

Figure pct00006
Figure pct00006

실시예 5: 헴 세포주들에 대한 화합물 7의 세포독성 Example 5: Cytotoxicity of Compound 7 against Heme Cell Lines

[표 3]TABLE 3

화합물 7의 세포독성Cytotoxicity of Compound 7

Figure pct00007
Figure pct00007

표 3은 다양한 헴 세포주들에서 화합물 7의 세포독성을 보여주며 상응하는 용량-반응 곡선이 도 15에 제시되어 있다. 또한, 도 4는 FLT3-ITD (MV411 및 MOLM-13) 및 FLT3-WT (NOMO-1 및 KG-1) 세포들에 대한 화합물 7, 퀴자르티닙 및 이브루티닙의 세포독성 효과를 보여준다. 더욱이, 도 16은 FLT3 돌연변이체들로 형질감염된 동질유전자 Ba/F3 세포들에 대한 화합물 7, 퀴자르티닙, 길테리티닙, 및 크레놀라닙의 용량-반응 곡선을 보여주며, 그 결과를 표 4에 요약한다.Table 3 shows the cytotoxicity of compound 7 in various heme cell lines and the corresponding dose-response curves are shown in FIG. 15. 4 also shows the cytotoxic effects of Compound 7, Quizartinib and Ibrutinib on FLT3-ITD (MV411 and MOLM-13) and FLT3-WT (NOMO-1 and KG-1) cells. Moreover, FIG. 16 shows the dose-response curves of Compound 7, Quizartinib, Guteritinib, and Crenolanib for homologous Ba / F3 cells transfected with FLT3 mutants, and the results are shown in Table 4 To summarize.

[표 4]TABLE 4

FLT3 돌연변이체들로 형질감염된 동질유전자 Ba/F3 세포들에 대한 화합물 7의 IC50 IC 50 of Compound 7 on homologous Ba / F3 cells transfected with FLT3 mutants

Figure pct00008
Figure pct00008

실시예 6: MV4-11 세포들의 세포자멸 Example 6: Apoptosis of MV4-11 Cells

한 연구에서, MV411 세포들은 24 시간 동안 독립적으로 다양한 농도의 화합물 7, 이브루티닙, 또는 퀴자르티닙으로 처리되거나 처리되지 않았으며, 세포자멸 및 살아있는 세포수를 측정하였다. 임의의 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 도 7과 8의 결과들은 화합물 7은 MV4-11 세포들에서 세포자멸을 유도함을 나타낸다.In one study, MV411 cells were treated with or without various concentrations of compound 7, ibrutinib, or quzartinib independently for 24 hours, and apoptosis and viable cell counts were measured. Without wishing to be bound by any theory, the results of FIGS. 7 and 8 show that compound 7 induces apoptosis in MV4-11 cells.

또 다른 연구에서, MV4-11 세포들의 세포자멸에 대한 화합물 7의 시간 의존성을 연구하였으며, 도 17에서 볼 수 있는 바와 같이, 화합물 7은 시간 의존 방식으로 세포자멸을 유도한다. 도 7, 8, 및 17에 제시된 데이터는 숙련된 기술자들이 용이하게 이해하는 세포자멸을 측정하기 위한 널리 공지된 프로토콜을 사용하여 생성되었다. 임의의 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이러한 절차의 개요는, 예를 들어, Rieger 외, Modified 아넥신 V/ 프로피듐 Iodide Apoptosis Assay For Accurate Assessment of Cell Death, J VI. Exp. 2011; (50): 2597에서 찾을 수 있다.In another study, the time dependence of Compound 7 on apoptosis of MV4-11 cells was studied, and as can be seen in FIG. 17, Compound 7 induces apoptosis in a time dependent manner. The data presented in FIGS. 7, 8, and 17 were generated using well known protocols for measuring apoptosis, which are readily understood by the skilled artisan. While not wishing to be bound by any theory, an overview of these procedures is described, for example, in Rieger et al., Modified Annexin V / propidium Iodide Apoptosis Assay For Accurate Assessment of Cell Death , J VI. Exp. 2011; (50): Found in 2597.

실시예 7: 쥐에서의 약동학 연구 Example 7 : Pharmacokinetic Studies in Rats

도 5는 화합물 7이 경구 투여될 때 AUC가 용량-의존 방식으로 개선됨을 나타낸다. 가장 좋은 결과는 100 mg/kg 경구 현탁액에서 수득된다. i.v로 투여한 2 mg/kg 저용량으로도 합리적인 노출이 구현되었다. 5 shows that AUC improves in a dose-dependent manner when Compound 7 is administered orally. Best results are obtained in 100 mg / kg oral suspension. Reasonable exposure was also achieved with the 2 mg / kg low dose administered with i.v.

실시예 8: 이종이식편 Example 8 : Xenografts

도 6은 대조 또는 이브루티닙 치료와 비교시 화합물 7이 용량 증가에 따라 종양 부피를 감소시킴을 나타낸다. FIG. 6 shows that Compound 7 decreases tumor volume with increasing dose as compared to control or ibrutinib treatment.

실시예 9: 화합물 7을 이용한 BTK의 저해 Example 9 Inhibition of BTK with Compound 7

[표 5]TABLE 5

BTK에서 화합물 7의 IC50 IC 50 of compound 7 from BTK

Figure pct00009
Figure pct00009

표 5는 화합물 7이 일련의 BTK를 저해함을 나타낸다.Table 5 shows that compound 7 inhibits a series of BTKs.

실시예 10: MV4-11 세포 및 EOL-1 세포들에서 화합물 7에 대한 웨스턴 블롯 분석 Example 10 Western Blot Analysis for Compound 7 in MV4-11 Cells and EOL-1 Cells

도 2 및 3은 웨스턴-블롯 분석 결과를 보여준다. 임의의 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이는 화합물 7이 MV4-11 세포 및 EOL-1 세포에서 BTK 경로를 저해함을 나타낸다.2 and 3 show Western-blot analysis results. Without wishing to be bound by any theory, this indicates that compound 7 inhibits the BTK pathway in MV4-11 cells and EOL-1 cells.

실시예 11: FLT3 WT 및 FLT 돌연변이체의 항증식 활성의 비교 Example 11 Comparison of Antiproliferative Activity of FLT3 WT and FLT Mutants

[표 6]TABLE 6

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Figure pct00010

실시예 12: 화합물 7에 대한 환자 감수성에 관한 생체외 분석 Example 12 In Vitro Assay for Patient Sensitivity to Compound 7

급성 골수성 백혈병 (AML)을 진단받은 85명의 환자들, 15명의 골수형성이상 증후군/골수증식성 신생물 (MDS/MPN) 환자들, 18명의 급성 림프모구 백혈병 (ALL) 환자들, 및 56명의 만성 림프구 백혈병 (CLL) 환자들을 다중-키나아제 저해제인, 화합물 7에 대한 감수성에 대해 생체외 분석을 사용하여 평가하였다. 화합물 7에 대한 감수성을 10 nM 내지 10 μM의 농도 범위에 걸쳐 평가하였다. 3-일의 배양 기간 후 비색, 테트라졸리움-기반 MTS 분석을 사용하여 세포 생존력을 평가하고, 약물 감수성의 측정치로 IC50 값들을 계산하였다. 85 patients diagnosed with acute myeloid leukemia (AML), 15 patients with myelodysplastic syndrome / myeloproliferative neoplasia (MDS / MPN), 18 patients with acute lymphocytic leukemia (ALL), and 56 chronic Lymphocyte leukemia (CLL) patients were assessed using an ex vivo assay for sensitivity to compound 7, a multi-kinase inhibitor. Susceptibility to compound 7 was assessed over a concentration range of 10 nM to 10 μM. After a 3-day incubation period, colorimetric, tetrazolium-based MTS assays were used to assess cell viability and IC 50 values were calculated as a measure of drug sensitivity.

데이터세트에서 4가지 일반적인 혈액 종양 아형들에 걸쳐, 화합물 7에 대한 넓은 감수성이 존재한다. 다수의 AML 사례들은 화합물 7에 대한 감수성을 보였으며, 51/85 (60%) 사례들은 0.1 μM 미만의 IC50을 나타내었다. 다른 아형들 (MDS/MPN, ALL CLL)의 감수성은 유사한 또는 약간 더 낮은 수준의 감수성 (40-60%, 표 7 참고)을 보였다. 데이터세트에서 38명의 AML 환자 샘플들에 대하여 FLT3 돌연변이 상태가 공지되어 있다: 30개의 샘플들은 WT이고, 8개의 샘플들은 ITD+이고, 0개의 샘플들이 점 돌연변이를 가진다. 이러한 부분집합에서 화합물 7 감수성의 분석은 FLT3-ITD+ 샘플들에서 증진된 감수성 경향을 나타내지만; 통계 분석을 충분히 신뢰하기 위해서는 보다 큰 샘플 크기가 필요할 것이다.There is broad sensitivity to compound 7 across four common blood tumor subtypes in the dataset. Many AML cases showed susceptibility to compound 7 and 51/85 (60%) cases showed IC 50 of less than 0.1 μM. The sensitivity of the other subtypes (MDS / MPN, ALL CLL) showed similar or slightly lower levels of sensitivity (40-60%, see Table 7). FLT3 mutation status is known for 38 AML patient samples in the dataset: 30 samples are WT, 8 samples are ITD +, and 0 samples have point mutations. Analysis of compound 7 sensitivity in this subset shows an enhanced sensitivity trend in FLT3-ITD + samples; Larger sample sizes will be required to fully trust statistical analysis.

[표 7]TABLE 7

환자에서 화합물 7 감수성Compound 7 Susceptibility in Patients

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Figure pct00011

화합물 7은 AML 뿐만 아니라 다른 혈액 종양 아형들에 대한 광범위하고 강력한 활성을 나타낸다. 예비 분석은 FLT3 야생형에 비해 FLT3 돌연변이체 AML 사례들에서 보다 큰 화합물 7 감수성의 경향을 보여주지만; FLT3 돌연변이 상태와 화합물 7 감수성의 통계적 관련성을 충분히 강화시키기 위해 지속적으로 추가 환자 샘플들을 생성할 필요가 있을 수 있다. 종합하면, 특정 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 원발성 혈액 종양 환자 샘플들에 대한 화합물 7의 전-임상 분석은 AML 및 다른 질환 아형들에서 광범위한 약물 활성의 증거를 보여주며 혈액 종양을 위한 이러한 제제의 추가 개발을 뒷받침한다.Compound 7 shows broad and potent activity against AML as well as other blood tumor subtypes. Preliminary analysis shows a greater tendency of Compound 7 susceptibility in FLT3 mutant AML cases compared to FLT3 wildtype; Additional patient samples may need to be generated continuously to fully enhance the statistical association of FLT3 mutation status with compound 7 susceptibility. Overall, although not wishing to be bound by any theory, pre-clinical analysis of Compound 7 on primary blood tumor patient samples shows evidence of extensive drug activity in AML and other disease subtypes, and Support further development.

실시예 13. 세포-주기 조절이상에 대한 화합물 7의 효과 Example 13. Effect of Compound 7 on Cell-Cycle dysregulation

다양한 세포-주기 양상들에 대한 화합물 7의 효과를 조사하였다. The effect of compound 7 on various cell-cycle aspects was investigated.

한 실험에서, 화합물 7은 MV411 세포에서 용량-의존 방식으로 G0/G1 세포-주기 정지를 유도함이 밝혀졌다 (도 18a 및 18b). 또 다른 실험에서, 화합물 7은 MOLM-13 세포들에서 용량-의존 방식으로 G0/G1 세포-주기 정지를 유도함이 밝혀졌다 (도 19).In one experiment, compound 7 was found to induce G0 / G1 cell-cycle arrest in a dose-dependent manner in MV411 cells (FIGS. 18A and 18B). In another experiment, compound 7 was found to induce G0 / G1 cell-cycle arrest in a dose-dependent manner in MOLM-13 cells (FIG. 19).

또 다른 실험에서, 화합물 7은 다양한 헴 세포주에서 다배수체를 유도함이 밝혀졌다 (도 20). MV4-11, NOMO-1, 및 KG-1 세포들은 증가하는 농도의 화합물 7로 24 시간 동안 처리되었으며, DNA 함량 또는 다배수체 표현형의 증가는 EdU 및 PI 염색 후 BD Accuri C6 유동을 사용한 FACS 분석을 사용하여 평가되었다. In another experiment, compound 7 was found to induce polyploids in various heme cell lines (FIG. 20). MV4-11, NOMO-1, and KG-1 cells were treated with increasing concentrations of Compound 7 for 24 hours, and the increase in DNA content or multiploid phenotype was assessed by FACS analysis using BD Accuri C6 flow after EdU and PI staining. Was evaluated using.

또 다른 실험에서, 화합물 7은 KG-1 세포들 (도 21), NOMO-1 세포들 (도 22), 및 FLT3 돌연변이가 있는 동질유전자 BA/F3 세포들 (도 23)에서 용량-의존 방식으로 세포-주기 조절이상을 유도함이 밝혀졌다.In another experiment, compound 7 was administered in a dose-dependent manner in KG-1 cells (FIG. 21), NOMO-1 cells (FIG. 22), and homogeneous BA / F3 cells with FLT3 mutation (FIG. 23). It has been shown to induce cell-cycle dysregulation.

실시예 14. 헴 세포들에서의 세포 신호전달에 대한 화합물 7의 저해 효과 Example 14 Inhibitory Effect of Compound 7 on Cell Signaling in Heme Cells

도 24 및 25는 화합물 7이 MV4-11 및 FLT3 WT 세포들 (KG-1)에서 각각 오로라 키나아제 활성 및 신호전달을 저해함을 보여준다. 이는 AT9283, 오로라 키나아제 저해제 (도 24) 및 키나아제 저해제 이브루티닙 및 퀴자르티닙 (Fig. 25)과 비교된다. 도 26은 화합물 7이 EOL-1 세포들에서 PDGFRA 및 FLT3 (WT) 신호전달을 저해함을 보여준다. 특정 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이들 도면은 화합물 7이 헴 세포주에서 다양한 세포 신호전달 경로의 강력한 저해제로서 작용함을 보여준다.24 and 25 show that compound 7 inhibits Aurora kinase activity and signaling in MV4-11 and FLT3 WT cells (KG-1), respectively. This is compared with AT9283, Aurora Kinase Inhibitor (FIG. 24) and Kinase Inhibitors Ibrutinib and Quizartinib (Fig. 25). FIG. 26 shows that Compound 7 inhibits PDGFRA and FLT3 (WT) signaling in EOL-1 cells. Without wishing to be bound by any theory, these figures show that Compound 7 acts as a potent inhibitor of various cellular signaling pathways in heme cell lines.

실시예 15: BTK에 대한 화합물 7의 역가 비교 Example 15 Comparison of Titers of Compound 7 over BTK

야생형 BTK에 대한 화합물 7의 역가 이외에도, 표 8에서 보는 바와 같이, 이는 또한 BTK-C481S 돌연변이체에 대한 nM 역가를 나타낸다. 화합물 7은 야생형 BTK에 대해 5.0 nM 역가를 가지며, 이는 아칼라브루티닙의 역가와 균등하다. 더더욱 놀랍게도, 화합물 7은 이브루티닙 및 아칼라브루티닙에 대하여 내성인 BTK-C481S에 대하여 가장 효과적이다. 화합물 7은 또한 이브루티닙의 효능에 기여하는 것으로 생각되는 주요 표적인 ITK에 대하여 극히 강력하다. 더욱이, 화합물 7은 EGFR를 저해하지 않으며, 이는 합병증, 가령, 발진 및 설사 가능성이 감소됨을 암시한다.In addition to the titer of compound 7 against wild type BTK, as shown in Table 8, it also shows the nM titer for the BTK-C481S mutant. Compound 7 has a 5.0 nM titer for wild type BTK, which is equivalent to the titer of acalabrutinib. Even more surprisingly, compound 7 is most effective against BTK-C481S, which is resistant to ibrutinib and acalabrutinib. Compound 7 is also extremely potent against ITK, a major target believed to contribute to the efficacy of ibrutinib. Moreover, compound 7 does not inhibit EGFR, suggesting a reduced likelihood of complications such as rash and diarrhea.

[표 8]TABLE 8

BTK에 대한 다양한 화합물들의 저해 Inhibition of various compounds on BTK

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Figure pct00012

실시예 16: 화합물 7은 BTK의 야생형 및 C481S 돌연변이체를 저해한다 Example 16 Compound 7 Inhibits Wild-Type and C481S Mutants of BTK

HEK293T 세포들은 야생형 BTK 또는 C481S BTK로 일과성 형질감염되었다. 형질감염 세포들을 6시간 동안 화합물 7 (0.5 및 1.0 μM)로 처리하거나 처리하지 않았다. 이를 3번 실시하였으며, 결과를 웨스턴 블롯 분석으로 분석하였다. HEK293T cells were transiently transfected with wild type BTK or C481S BTK. Transfected cells were treated with or without Compound 7 (0.5 and 1.0 μM) for 6 hours. This was done three times and the results analyzed by Western blot analysis.

도 9에서 효소들의 인산화 형태들의 감소로 증명된 바와 같이, 화합물 7은 0.5 및 1.0 μM 모두의 농도에서 BTK의 야생형 및 C481S 돌연변이체 형태 모두를 저해한다. 그러나, 이브루티닙과 비교할 때, 화합물 7은 이브루티닙 보다 더 적은 정도로 BTK를 저해함이 관찰되며, 이는 상이한 기전 경로를 암시한다 (도 10). As demonstrated by the reduction of phosphorylated forms of the enzymes in FIG. 9, compound 7 inhibits both wild type and C481S mutant forms of BTK at concentrations of both 0.5 and 1.0 μM. However, compared to Ibrutinib, it is observed that Compound 7 inhibits BTK to a lesser extent than Ibrutinib, suggesting a different mechanism pathway (FIG. 10).

실시예 17: B-세포 종양 세포주들에 대한 화합물 7의 세포독성. Example 17 Cytotoxicity of Compound 7 Against B-Cell Tumor Cell Lines.

세포들을 96 웰 플레이트에 씨딩하고 37 °C 및 5% CO2에서 3일 동안 10가지 상이한 농도의 비히클 (DMSO) 또는 화합물 7로 처리하였다. CellTiter 96 AQueous one solution (MTS Promega Cat#G3581)을 사용하여 세포 생존력을 평가하고, GraphPad Prism 7 소프트웨어를 사용하여 IC50 값을 계산하였다. Seed the cells in a 96 well plate and 37 In ° C and 5% CO 2 for 3 days and treated with vehicle (DMSO) or compound 7, the 10 different concentrations. CellTiter 96 AQ ueous Cell viability was assessed using one solution (MTS Promega Cat # G3581) and IC 50 values were calculated using GraphPad Prism 7 software.

표 9는 다양한 B-세포 종양 세포주들에서 화합물 7의 세포독성을 보여준다. 또한, 도 11은 표 9의 세포주들에 대한 화합물 7 및 이브루티닙의 용량-반응 곡선을 보여준다.Table 9 shows the cytotoxicity of compound 7 in various B-cell tumor cell lines. 11 also shows the dose-response curves of compound 7 and ibrutinib for the cell lines of Table 9. FIG.

[표 9]TABLE 9

화합물 7의 세포독성Cytotoxicity of Compound 7

Figure pct00013
Figure pct00013

실시예 18: 화합물 7은 B-세포 종양들에서 세포자멸을 유도한다 Example 18 Compound 7 Induces Apoptosis in B-Cell Tumors

화합물 7에 대한 작용 기전을 결정하기 위하여 기전 연구를 수행하였다. 처리된 세포들의 세포자멸 상태를 아넥신 V 및 프로피듐 아이오다이드 (PI)로 염색한 다음, BD Accuri C6 유세포 분석장치로 분석하여 결정하였으며, 이때 살아있는 세포들은 아넥신 V / PI 음성이고, 초기 세포자멸 세포들은 아넥신 V 양성이며 후기 세포자멸 세포들은 아넥신 V 및 PI 양성이다. 또한 고전적인 세포자멸 마커인 절단된 PARP의 생성을 특이적 항체들로 웨스턴 블롯하여 분석하였다.Mechanism studies were conducted to determine the mechanism of action for compound 7. Apoptosis status of the treated cells was determined by staining with Annexin V and propidium iodide (PI), and analyzed by BD Accuri C6 flow cytometry, wherein the living cells were Annexin V / PI negative and initially Apoptotic cells are annexin V positive and late apoptotic cells are annexin V and PI positive. The production of truncated PARP, a classical apoptosis marker, was also analyzed by Western blot with specific antibodies.

도 12에서 보는 바와 같이, 화합물 7은 B-세포 종양들에서 세포수준의 세포자멸을 유도한다. Mino 및 Ramos 세포주 모두는 증가하는 농도의 화합물 7 및 이브루티닙으로 처리되었다. 화합물 7은 테스트한 모든 농도에서 이브루티닙 보다 더욱 효과적으로 세포자멸을 유도하였다. 각각의 웨스턴 블롯에서 인산화 패턴은 세포자멸에 있어서의 이러한 증가를 확인시켜준다. As shown in FIG. 12, compound 7 induces cellular level apoptosis in B-cell tumors. Both Mino and Ramos cell lines were treated with increasing concentrations of compound 7 and ibrutinib. Compound 7 induced apoptosis more effectively than ibrutinib at all concentrations tested. Phosphorylation patterns in each Western blot confirm this increase in apoptosis.

실시예 19: 화합물 7은 B-세포 종양들에서 오로라 키나아제 및 BTK를 저해한다 Example 19 Compound 7 Inhibits Aurora Kinase and BTK in B-Cell Tumors

오로라 키나아제 활성의 저해는 오로라 키나아제 또는 하류 표적들의 인산화 수준에 관한 웨스턴 블롯 그리고 세포 주기 및 DNA 함량 분석으로 측정되었다. 화합물 7 처리된 세포들로부터 얻은 전 세포 추출물은 겔 전기영동으로 분해되었으며 나이트로셀룰로오스 막으로 전달되었으며 오로라 키나아제 A/B 및 H3S10 인산화의 저해가 특정 항체들로 탐지되었다. DNA 합성 및 세포 주기 단계는 화합물 7 또는 비히클 처리된 세포들을 5-에틴일-2`데옥시우리딘 (Edu) Alexa Fluor 488 및 PI로 염색하여 평가되었다.Inhibition of Aurora kinase activity was determined by Western blots and cell cycle and DNA content analysis of phosphorylation levels of Aurora kinase or downstream targets. Whole cell extracts from Compound 7 treated cells were digested by gel electrophoresis and transferred to nitrocellulose membrane and inhibition of Aurora kinase A / B and H3S10 phosphorylation was detected with specific antibodies. DNA synthesis and cell cycle steps were assessed by staining Compound 7 or vehicle treated cells with 5-ethynyl-2′deoxyuridine (Edu) Alexa Fluor 488 and PI.

화합물 7은 B-세포 암 세포들에 대하여 이브루티닙 보다 큰 세포독성인 반면, 이브루티닙 보다 작은 활성의 BTK 저해제이다 (도 10). 화합물 7의 높은 효능을 보다 잘 이해하기 위하여, 오로라 키나아제에 대한 이의 저해 효과를 조사하였으며 증가된 농도의 화합물 7의 웨스턴 블롯에서의 인산화 패턴으로 확인되는 바와 같이 오로라 키나아제 저해제 (도 13) 만큼 효과적임이 밝혀졌다. 특정 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, B-세포 암 세포들에서 화합물 7의 높은 세포독성은 이의 다중-키나아제 경로 저해 프로파일에 일부분 기여하는 것으로 생각된다.Compound 7 is more cytotoxic than ibrutinib to B-cell cancer cells, while a less active BTK inhibitor than ibrutinib (FIG. 10). In order to better understand the high efficacy of compound 7, its inhibitory effect on aurora kinase was investigated and as effective as the aurora kinase inhibitor (FIG. 13) as confirmed by the phosphorylation pattern in the western blot of increased concentration of compound 7. Turned out. Without wishing to be bound by any theory, it is believed that the high cytotoxicity of Compound 7 in B-cell cancer cells contributes in part to its multi-kinase pathway inhibition profile.

실시예 20: 화합물 7은 B-세포 종양들에서 다배수체를 유도한 후 세포자멸을 유도한다. Example 20 Compound 7 induces apoptosis following induction of multiploids in B-cell tumors.

또한 화합물 7의 효능있는 세포독성을 완전히 해명하기 위하여 기전 연구를 수행하였다. B-세포주들을 비히클 또는 화합물 7로 24-72 시간 동안 처리하고 Edu 및 PI 염색 후 BD Accuri C6 유세포 분석장치를 이용한 FACS 분석을 사용하여 DNA 함량 또는 다배수성 표현형의 증가를 평가하였다.Mechanism studies were also performed to fully elucidate the potent cytotoxicity of compound 7. B-cell lines were treated with vehicle or compound 7 for 24-72 hours and FACS analysis using BD Accuri C6 flow cytometry after Edu and PI staining was used to assess the increase in DNA content or multiploidy phenotype.

Mino 및 Ramos 세포주들을 증가하는 농도의 화합물 7 또는 이브루티닙으로 처리하여 화합물 7이 이브루티닙에 비해 B-세포 종양 세포주들에서 다배수체를 유도하는 것에 대한 비교 효과를 측정하였다. 도 14에서 보는 바와 같이, 화합물 7은 0.1 및 1.0 nM의 농도에서 Mino 세포들에 대해, 그리고 5 nM의 농도에서 Ramos에 대해 다배수성 (>4n) 및 후속적 세포자멸을 효과적으로 유도하였으며 이는 세포 사멸의 특징을 보여주는 웨스턴 블롯에서 나타난다.Mino and Ramos cell lines were treated with increasing concentrations of compound 7 or ibrutinib to determine the comparative effect of compound 7 inducing multiploids in B-cell tumor cell lines compared to ibrutinib. As shown in FIG. 14, compound 7 effectively induced pluripotency (> 4n) and subsequent apoptosis for Mino cells at concentrations of 0.1 and 1.0 nM and for Ramos at concentrations of 5 nM, which resulted in cell death. Appear in a Western blot showing the characteristics of.

실시예 21: 화합물 7은 B-세포 종양들에서 세포 주기 진행을 방해한다. Example 21 Compound 7 disrupts cell cycle progression in B-cell tumors.

도 27 및 28은 화합물 7이 세포 주기 진행을 방해함을 보여준다. 특정 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이들 도면들은 화합물 7이 B-세포 종양 세포주에서 세포 신호전달 경로를 방해함을 보여준다. 도 27 및 28에 제시된 데이터는 세포 주기 진행 (예컨대, EdU 및/또는 PI 염색 후 BD Accuri C6 유세포 분석을 사용한 FACS 분석)을 측정하기 위한 널리 공지된 프로토콜을 사용하여 생성되었으며, 숙련된 기술자들에게 이는 명백하다.용이하게 이해한다.27 and 28 show that compound 7 interferes with cell cycle progression. Without wishing to be bound by a particular theory, these figures show that compound 7 interferes with cellular signaling pathways in B-cell tumor cell lines. The data presented in FIGS. 27 and 28 were generated using well known protocols for measuring cell cycle progression ( eg, FACS analysis using BD Accuri C6 flow cytometry after EdU and / or PI staining). This is obvious; it is easy to understand.

실시예 22. B-세포 종양 세포주에서 세포 신호전달에 대한 화합물 7의 저해 효과. Example 22 Inhibitory Effect of Compound 7 on Cell Signaling in B-Cell Tumor Cell Lines.

도 29는 이브루티닙에 비해 화합물 7이 Ramos 세포들에서 BTK 및 오로라 키나아제 활성을 저해함을 보여준다. 29 shows Compound 7 inhibits BTK and Aurora kinase activity in Ramos cells compared to Ibrutinib.

도 30은 화합물 7이 Ramos 세포들에서 BCR 신호전달에 영향을 미침을 보여준다. 본 실험에서, Ramos 세포들은 제시된 농도의 화합물 7 또는 이브루티닙으로 1 (6회 반복) 또는 6 (3회 반복) 시간 동안 처리되거나 처리되지 않았으며, 그 후 3분 동안 12μg/mL IgM으로 자극되었다.30 shows Compound 7 affects BCR signaling in Ramos cells. In this experiment, Ramos cells were treated or untreated for 1 (6 replicates) or 6 (3 replicates) hours with Compound 7 or ibrutinib at the indicated concentrations, followed by stimulation with 12 μg / mL IgM for 3 minutes. It became.

특정 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이들 도면은 화합물 7이 B-세포 종양 세포주에서 다양한 세포 신호전달 경로의 강력한 저해제로서 작용함을 보여준다. Without wishing to be bound by any theory, these figures show that Compound 7 acts as a potent inhibitor of various cellular signaling pathways in B-cell tumor cell lines.

실시예 23. 화합물 7은 높은 혈청 조건에서 세포독성이다. Example 23. Compound 7 is cytotoxic at high serum conditions.

화합물 7은 상이한 혈청 농도에서 용량-의존 방식으로 테스트되었다. 도 31은 화합물 7이 높은 혈청 농도에서 높은 활성을 유지함을 보여준다. 본 실험에서, MV4-11 (n=6) 및 EOL-1(n=3~6) 세포들은 정상 (10%) 또는 높은 혈청 (30%, 50%, 80%) FBS를 내포하는 배지에서 화합물 7로 72시간 동안 처리되거나 처리되지 않았으며 MTS 분석으로 종점을 결정하였다.Compound 7 was tested in a dose-dependent manner at different serum concentrations. 31 shows that Compound 7 retains high activity at high serum concentrations. In this experiment, MV4-11 (n = 6) and EOL-1 (n = 3-6) cells were compounded in medium containing normal (10%) or high serum (30%, 50%, 80%) FBS. The treatment was done with or without 72 hours at 7 and the end point was determined by MTS analysis.

실시예 24. 일반 실험 절차 Example 24. General Experimental Procedures

IC50 및 EC50: 본 실시예에 기재된 특정 세포 생존력 연구는 트립탄 블루 염료 배제법 또는 MTS 분석을 사용하여 평가되었다. 본 실시예에 기재된 특정 세포자멸 연구 및 관련 연구는 아넥신 V 양성에 의해 FACS를 통해 결정되었다. 세포 성장 저해에 관한 50% 저해 농도 (IC50) 및 세포자멸 유도에 관한 50% 유효 농도 (EC50)는 CalcuSyn (BioSoft, Cambridge, UK)을 사용하여 계산되었다.IC 50 and EC 50 : The specific cell viability studies described in this example were evaluated using trytan blue dye exclusion or MTS analysis. Certain apoptosis studies and related studies described in this example were determined via FACS by Annexin V positive. 50% inhibition concentration (IC 50 ) for cell growth inhibition and 50% effective concentration (EC 50 ) for apoptosis induction were calculated using CalcuSyn (BioSoft, Cambridge, UK).

면역탁본 검사: 세포들을 다양한 농도의 화합물 7로 처리하고 세포 용해물들을 수집하였다. 제시된 단백질들의 총 및 인산화 수준을 웨스턴 블롯으로 결정하였다.Immunotaxin Test: Cells were treated with various concentrations of compound 7 and cell lysates were collected. Total and phosphorylation levels of the presented proteins were determined by Western blot.

동물 연구: Balb/c 생쥐들에게 인간 세포 (예컨대, FLTs-ITD-돌연변이된 백혈병 세포 MV4-11)을 주사하고 (SQ), 제시된 용량의 화합물 7을 14일 동안 경구 처리하였다 (q.d.). 종양 부하를 측정하여 효과(예컨대, 항-백혈병)를 평가하였다. 경구 독성을, 예를 들어, 체중을 측정하여 평가하였다. 1일차 투약 후 제시된 시점들에서 혈장에서의 화합물 7 농도를 측정하였다.Animal Studies: Balb / c mice were injected with human cells (eg, FLTs-ITD-mutated leukemia cells MV4-11) (SQ) and orally treated with the indicated doses of Compound 7 for 14 days (q.d.). Tumor burden was measured to assess effects (eg, anti-leukemia). Oral toxicity was assessed, for example, by measuring body weight. Compound 7 concentration in plasma was measured at the indicated time points after Day 1 dosing.

항-증식 분석에 기반한 MTS 분석: 항-증식성 세포외 신호-조절된 키나아제를 평가하기 위하여 MTS 분석을 실시하였다 (Barltrop, J. A. 외, (1991) 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4,5-dimethylthiazoly)-3-(4-sulfophenyl) tetrazolium, inner salt (MTS) and related analog of 3-(4,5-dimethylthiazolyl)-2,5,-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reducing to purple water soluble activities of the inventive compounds via inhibition on formazans as cell-viability indicators. Bioorg . Med . Chem . Lett . l, 611-4; Cory, A.H. 외, (1991); Use of an aqueous soluble tertrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture. Cancer Comm . 3, 207-12). 인간 림프종 세포주, 예를 들어, Jeko-1 (ATCC), Mino (ATCC), H9 (한국 세포주 은행) 및 SR (ATCC), 및 인간 백혈병 세포주, 예를 들어, MV4-11 (ATCC), Molm-13 (DSMZ) 및 Ku812 (ATCC)가 하기 제시된 절차에 따른 테스트를 위해 사용되었다. 각 세포들 (예컨대, Jeko-1, Mino, H9, SR, MV4-11, Molm-13 및 Ku812 세포들)을 10% FBS로 보충된 RPMI1640 배지 (GIBCO, Invitrogen)를 내포하는 96-웰 플레이트로 10,000 세포/웰의 밀도로 옮긴 다음, 37° C 및 5% 20 CO2의 조건하에서 24시간 동안 배양하였다. 웰들을 0.2, 1, 5, 25 및 100 μM의 테스트 화합물 각각으로 처리하였다. 웰을 테스트 화합물과 동일한 양인 0.08 중량% 양의 DMSO로 처리하였으며, 이는 대조로 사용되었다. 생성된 세포들을 48시간 동안 배양하였다. MTS 분석장치는 상업적으로 구입가능하며 Promega CellTiter 96® Aqueous 비-방사성 세포 증식 분석을 포함한다. MTS 분석은 테스트 화합물들의 세포 생존력을 평가하기 위하여 실시되었다. 3-(4,5-다이메틸싸이아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸리움, 내부 염 ("MTS") 및 페나진 메토설페이트 (PMS)의 혼합 용액 20 μL를 각 웰에 첨가한 다음, 37° C에서 2시간 동안 배양하였다. 이후 샘플들의 흡광도를 490 nm에서 판독하였다. 비처리 대조 그룹에 대한 테스트 화합물들의 흡광도를 기초로 항-증식 활성 수준을 계산하였다. 테스트 화합물들이 50% 만큼 암 세포 성장을 감소시키는 EC50 (μM) 값을 계산하였다. 항염제 및 항암제로서 본 발명의 유용성을 평가하기 위하여 예를 들어, Jeko-1, Mino, H9 및 SR 림프종 세포들을 사용하여 항-증식 활성에 관한 분석을 수행하였다.MTS assay based on anti-proliferation assay: MTS assay was performed to evaluate anti-proliferative extracellular signal-regulated kinase (Barltrop, JA et al. (1991) 5- (3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4) , 5-dimethylthiazoly) -3- (4-sulfophenyl) tetrazolium, inner salt (MTS) and related analog of 3- (4,5-dimethylthiazolyl) -2,5, -diphenyltetrazolium bromide (MTT) reducing to purple water soluble activities of the inventive compounds via inhibition on formazans as cell-viability indicators Bioorg Med Chem Lett l, 611-4;..... Cory, AH et al., (1991); Use of an aqueous soluble tertrazolium / formazan assay for cell growth assays in culture. Cancer Comm . 3, 207-12). Human lymphoma cell lines such as Jeko-1 (ATCC), Mino (ATCC), H9 (Korean Cell Line Bank) and SR (ATCC), and human leukemia cell lines such as MV4-11 (ATCC), Molm- 13 (DSMZ) and Ku812 (ATCC) were used for testing according to the procedure given below. Each cell ( e.g., Jeko-1, Mino, H9, SR, MV4-11, Molm-13 and Ku812 cells) was loaded into a 96-well plate containing RPMI1640 medium (GIBCO, Invitrogen) supplemented with 10% FBS. Transferred to a density of 10,000 cells / well, and then incubated for 24 hours under conditions of 37 ° C. and 5% 20 CO 2 . Wells were treated with 0.2, 1, 5, 25 and 100 μM of test compounds, respectively. The wells were treated with 0.0SO wt% DMSO, the same amount as the test compound, which was used as a control. The resulting cells were incubated for 48 hours. MTS assay devices are commercially available and include Promega CellTiter 96® Aqueous non-radioactive cell proliferation assays. MTS analysis was performed to evaluate the cell viability of the test compounds. 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -5- (3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4-sulfophenyl) -2H-tetrazolium, internal salt ("MTS") and 20 μL of a mixed solution of phenazine methosulfate (PMS) was added to each well and then incubated at 37 ° C. for 2 hours. The absorbance of the samples was then read at 490 nm. Anti-proliferative activity levels were calculated based on the absorbance of the test compounds for the untreated control group. EC50 (μM) values were calculated in which test compounds reduced cancer cell growth by 50%. As an anti-inflammatory and anti-cancer agent, for example, Jeko-1, Mino, H9 and SR lymphoma cells were used to analyze the anti-proliferative activity in order to evaluate the utility of the present invention.

RBC 핫스팟 키나아제 분석 프로토콜: RBC Hotspot Kinase Assay Protocol:

사용된 시약: 기본 반응 완충액; 20 mM Hepes (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.02 mg/ml BSA, 0.1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1% DMSO. 필요한 보조인자들을 각 키나아제 반응에 개별적으로 첨가한다. Reagents Used: Basic Reaction Buffer; 20 mM Hepes, pH 7.5, 10 mM MgCl 2, 1 mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.02 mg / ml BSA, 0.1 mM Na 3 VO 4, 2 mM DTT, 1% DMSO. The necessary cofactors are added individually to each kinase reaction.

화합물 7을 특정 농도로 100% DMSO에 용해시켰다. DMSO에서의 epMotion 5070에 의해 연속 희석을 수행하였다. 기질은 반응 완충액에서 새로 제조되었으며 기질 용액에 대해 필요한 임의의 보조인자들을 첨가하였다. 키나아제를 상기 용액에 첨가하고 부드럽게 혼합하였다. 화합물 7을 100% DMSO에서 키나아제 반응 혼합물에 Acoustic 기술 (Echo550; 나노리터 범위)로 첨가하고, 실온에서 20분 동안 배양하였다. 33P-ATP (고유 활성도 10 μCi/μl)를 반응 혼합물에 첨가하여 반응을 시작시키고, 이를 2시간 동안 배양하였으며, 이때 키나아제 활성을 필터-결합법으로 탐지하였다. Compound 7 was dissolved in 100% DMSO at a certain concentration. Serial dilutions were performed by epMotion 5070 in DMSO. The substrate was freshly prepared in the reaction buffer and any cofactors needed for the substrate solution were added. Kinase was added to the solution and mixed gently. Compound 7 was added to the kinase reaction mixture in 100% DMSO by Acoustic technology (Echo550; nanoliter range) and incubated for 20 minutes at room temperature. The reaction was started by adding 33 P-ATP (intrinsic activity 10 μCi / μl) to the reaction mixture, which was incubated for 2 hours, at which time kinase activity was detected by filter-binding method.

신호전달 분석. 세포들 (예컨대, MV4-11)을 특정 용량 (예컨대, 500 pM)의 화합물 7 또는 비교 약물 (예컨대, 퀴자르티닙), 또는 비히클 (예컨대, DMSO)로 처리한 다음 FLT3 및 이의 하류 신호들에 대해 웨스턴 블롯 하였다.Signaling Analysis. Cells (eg, MV4-11) are treated with a specific dose (eg, 500 pM) of Compound 7 or a comparative drug (eg, quizartinib), or vehicle (eg, DMSO), followed by FLT3 and downstream signals thereof. Western blot was performed.

세포독성 절차: 세포들을 96-웰 플레이트에 씨딩하고 특정 농도의 비히클 DMSO 또는 화합물 7로 처리하고 72시간 동안 배양하였다. 72 시간의 배양 기간 종료시, MTS-기반 분석을 실시하였으며 IC50을 GraphPad Prism7.0으로 결정하였다.Cytotoxic Procedures: Cells were seeded in 96-well plates and treated with specific concentrations of vehicle DMSO or Compound 7 and incubated for 72 hours. At the end of the 72 hour incubation period, an MTS-based assay was performed and IC50 was determined as GraphPad Prism 7.0.

세포-주기 분석: 세포들을 비히클, DMSO 또는 화합물 7로 처리하고 PI 및 EdU로 염색한 다음, 세포 주기의 단계를 결정하기 위해 유세포 측정법으로 분석하였다.Cell-cycle analysis: Cells were treated with vehicle, DMSO or Compound 7 and stained with PI and EdU and then analyzed by flow cytometry to determine the stage of the cell cycle.

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본 발명을 제시된 이의 특정 구체예들과 관련하여 설명하였으나, 추가 변형이 가능하며 본 출원은, 일반적으로 본 발명의 원리를 따르는 그리고 본 출원에 개시된 내용으로부터 출발하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 공지되어 있거나 관례적으로 실시되는, 그리고 전술한 그리고 하기 청구범위에 기재되는 필수적인 특징들에 적용될 수 있는, 본 발명의 임의의 변형, 용도 또는 개조를 포함하고자 하는 것으로 이해하여야 한다.Although the present invention has been described with reference to specific embodiments thereof, further modifications are possible and the present application is generally known in the art to which the present invention pertains, starting from the teachings of the present invention and generally in accordance with the principles of the present invention. It is to be understood that the present invention is intended to cover any variations, uses or modifications of the invention, which may be practiced or customary, and which may be applied to the essential features described above and in the claims below.

Claims (149)

화합물 7, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 야생형 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법:
Figure pct00014
.A method of inhibiting or reducing wild type Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject, comprising administering compound 7, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00014
. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법.A method of inhibiting or reducing mutated FLT3 activity or expression in a subject, comprising administering compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 제 2 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 2,
The mutated FLT3 comprises at least one point mutation. 제 3 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein
At least one point mutation is present on at least one residue selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. 제 3 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. 제 3 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. 제 3 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. 제 3 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. 제 3 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 3, wherein
At least one point mutation is present in the tyrosine kinase domain of FLT3. 제 3 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 3, wherein
At least one point mutation is present in the activation loop of FLT3. 제 3 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein
At least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. 제 2 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.The method according to any one of claims 2 to 11,
The mutated FLT3 is characterized by having additional ITD mutations. 제 2 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.The method of claim 2,
Mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3- One or more mutations selected from the group consisting of ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Method characterized by having a. 제 3 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법. The method according to any one of claims 3 to 13,
At least one point mutation is two or more point mutations present on the same allele. 제 3 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 상이한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법. The method according to any one of claims 3 to 13,
At least one point mutation is two or more point mutations present on different alleles. 제 2 항에 있어서,
대상체는 포유동물임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 2,
The subject is a mammal. 제 16 항에 있어서,
대상체는 인간임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 16,
And wherein the subject is a human. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포에서 야생형 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법:
Figure pct00015
.A method of inhibiting or reducing wild-type activity or expression in human cells, comprising contacting Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with human cells:
Figure pct00015
. 화합물 7, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포에서 돌연변이된 FLT3 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법:
Figure pct00016
.A method of inhibiting or reducing mutated FLT3 activity or expression in human cells, comprising contacting Compound 7, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, with human cells:
Figure pct00016
. 제 19 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 19,
The mutated FLT3 comprises at least one point mutation. 제 20 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 20,
At least one point mutation is present on at least one residue selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. 제 19 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 19,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. 제 19 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 19,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. 제 19 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 19,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. 제 19 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 19,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. 제 20 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 20,
At least one point mutation is present in the tyrosine kinase domain of FLT3. 제 20 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 20,
At least one point mutation is present in the activation loop of FLT3. 제 20 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 20,
At least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. 제 19 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법. The method according to any one of claims 19 to 28,
The mutated FLT3 is characterized by having additional ITD mutations. 제 19 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.The method of claim 19,
Mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3- One or more mutations selected from the group consisting of ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Method characterized by having a. 제 20 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법.The method according to any one of claims 20 to 30,
At least one point mutation is two or more point mutations present on the same allele. 제 20 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 상이한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법. The method according to any one of claims 20 to 30,
At least one point mutation is two or more point mutations present on different alleles. 제 18 항 또는 제 19 항에 있어서,
인간 세포는 인간 백혈병 세포주임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 18 or 19,
Human cell is a human leukemia cell line. 제 33 항에 있어서,
인간 백혈병 세포주는 급성 림프구 백혈병 세포주, 급성 골수성 백혈병 세포주, 급성 전골수세포 백혈병 세포주, 만성 림프구 백혈병 세포주, 만성 골수성 백혈병 세포주, 만성 호중구 백혈병 세포주, 급성 미분화 백혈병 세포주, 역형성 대세포 림프종 세포주, 전림프구 백혈병 세포주, 소아 골수단핵구 백혈병 세포주, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병 세포주, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병 세포주, 혼합 계대 백혈병 세포주, 호산구 백혈병 세포주, 또는 외투 세포 림프종 세포주임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 33, wherein
Human leukemia cell line, acute lymphocytic leukemia cell line, acute myeloid leukemia cell line, acute promyeloid leukemia cell line, chronic lymphocytic leukemia cell line, chronic myeloid leukemia cell line, chronic neutrophil leukemia cell line, acute undifferentiated leukemia cell line, anaplastic large cell lymphoma cell line, prelymphocyte A leukemia cell line, a pediatric osteoblastic leukemia cell line, an adult T-cell acute lymphocytic leukemia cell line, an acute myeloid leukemia cell line with tripassive spinal dysplasia, a mixed passaged leukemia cell line, an eosinophil leukemia cell line, or a mantle cell lymphoma cell line. 제 33 항에 있어서,
인간 백혈병 세포주는 호산구 백혈병 세포주임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 33, wherein
Human leukemia cell line is characterized in that eosinophil leukemia cell line. 제 33 항에 있어서,
인간 백혈병 세포주는 급성 골수성 백혈병 세포주임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 33, wherein
The human leukemia cell line is acute myeloid leukemia cell line. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 야생형 FLT3를 발현시키는 세포들의 세포자멸 유도 방법:
Figure pct00017
.A method of inducing apoptosis of cells expressing wild type FLT3 in a subject in need thereof, comprising administering compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00017
. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 돌연변이된 FLT3를 발현시키는 세포들의 세포자멸 유도 방법:
Figure pct00018
.A method of inducing apoptosis of cells expressing mutated FLT3 in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00018
. 제 38 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 38,
The mutated FLT3 comprises at least one point mutation. 제 39 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 39,
At least one point mutation is present on at least one residue selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. 제 39 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 39,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. 제 39 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 39,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. 제 39 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 39,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. 제 39 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 39,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. 제 39 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 39,
At least one point mutation is present in the tyrosine kinase domain of FLT3. 제 39 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 39,
At least one point mutation is present in the activation loop of FLT3. 제 39 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 39,
At least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. 제 38 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법. The method according to any one of claims 38 to 47,
The mutated FLT3 is characterized by having additional ITD mutations. 제 38 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.The method of claim 38,
Mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3- One or more mutations selected from the group consisting of ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Method characterized by having a. 제 39 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법. The method according to any one of claims 39 to 49,
At least one point mutation is two or more point mutations present on the same allele. 제 39 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 상이한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법.The method according to any one of claims 39 to 49,
At least one point mutation is two or more point mutations present on different alleles. 필요로 하는 대상체에 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 야생형 FLT3와 관련된 혈액 종양 치료 방법:
Figure pct00019
.A method of treating a blood tumor associated with wild type FLT3, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a subject in need thereof:
Figure pct00019
. 제 52 항에 있어서,
상기 방법은 야생형 FLT3 활성 또는 발현을 저해 또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법.The method of claim 52, wherein
The method inhibits or reduces wild-type FLT3 activity or expression. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 돌연변이된 FLT3 관련 혈액 종양의 치료 방법.A method of treating a mutated FLT3 related blood tumor, comprising administering to compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof a subject in need thereof. 제 54 항에 있어서,
상기 방법은 돌연변이체 FLT3 활성 또는 발현을 저해 또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법.The method of claim 54, wherein
The method inhibits or reduces mutant FLT3 activity or expression. 제 55 항에 있어서,
돌연변이는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 55,
Wherein the mutation comprises at least one point mutation. 제 55 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 55,
At least one point mutation is present on at least one residue selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. 제 55 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 55,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. 제 55 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 55,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. 제 55 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 55,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. 제 55 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 55,
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. 제 55 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 55,
At least one point mutation is present in the tyrosine kinase domain of FLT3. 제 55 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 55,
At least one point mutation is present in the activation loop of FLT3. 제 55 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 55,
At least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. 제 54 항 내지 제 64 항 중 어느 한 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법. The method of any one of claims 54 to 64,
The mutated FLT3 is characterized by having additional ITD mutations. 제 54 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.The method of claim 54, wherein
Mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3- One or more mutations selected from the group consisting of ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Method characterized by having a. 제 55 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서,
하나 이상의 돌연변이는 동일한 대립유전자 상에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of any one of claims 55-66,
Wherein at least one mutation is on the same allele. 제 55 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서,
하나 이상의 돌연변이는 상이한 대립유전자 상에 존재함을 특징으로 하는 방법. The method of any one of claims 55-66,
Wherein the one or more mutations are on different alleles. 제 52 항 또는 제 54 항에 있어서,
혈액 종양은 백혈병임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 52 or 54,
A blood tumor is characterized in that leukemia. 제 69 항에 있어서,
백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 69,
Leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, childhood osteocytic leukemia, adult T- Cell acute lymphocyte leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive myelodysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. 제 70 항에 있어서,
백혈병은 호산구 백혈병임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 70,
Leukemia is characterized in that eosinophil leukemia. 제 70 항에 있어서,
백혈병은 급성 골수성 백혈병임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 70,
Leukemia is acute myeloid leukemia. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 혈액 종양의 치료 방법:
Figure pct00020

이때 대상체는 FLT3 활성 또는 발현의 저해제에 대해 내성 또는 재발을 나타냄.A method of treating a blood tumor in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00020

The subject then exhibits resistance or relapse to an inhibitor of FLT3 activity or expression. 제 73 항에 있어서,
저해제는 퀴자르티닙, 길테리티닙, 수니티닙, 소라페닙, 미도스타우린, 레스타우르티닙, 크레놀라닙, PLX3397, PLX3623, 크레놀라닙, 포나티닙, 또는 파크리티닙임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 73,
Inhibitors are quzartinib, gilteritinib, sunitinib, sorafenib, midostauurin, restautinib, crenolanib, PLX3397, PLX3623, crenolanib, ponatinib, or paritytinib. 제 73 항에 있어서,
저해제는 퀴자르티닙 또는 길테리티닙임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 73,
The inhibitor is characterized in that Quizartinib or Guteritinib. 제 73 항에 있어서,
혈액 종양은 백혈병임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 73,
A blood tumor is characterized in that leukemia. 제 76 항에 있어서,
백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종임을 특징으로 하는 방법.77. The method of claim 76,
Leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myelogenous leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, childhood osteocytic leukemia, adult T- Cell acute lymphocyte leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive myelodysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. 제 76 항에 있어서,
백혈병은 호산구 백혈병임을 특징으로 하는 방법.77. The method of claim 76,
Leukemia is characterized in that eosinophil leukemia. 제 76 항에 있어서,
백혈병은 급성 골수성 백혈병임을 특징으로 하는 방법.77. The method of claim 76,
Leukemia is acute myeloid leukemia. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 비정상적 (예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법:
Figure pct00021
. A method of inhibiting or reducing abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK activity or expression in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00021
. 제 80 항에 있어서,
돌연변이된 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. 81. The method of claim 80,
The mutated BTK is characterized in that it comprises at least one point mutation. 제 81 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법. 82. The method of claim 81 wherein
At least one point mutation is on a cysteine residue. 제 82 항에 있어서,
시스테인 잔기는 BTK의 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법. 83. The method of claim 82,
The cysteine residue is in the kinase domain of BTK. 제 81 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 E41, P190, 및 C481로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상임을 특징으로 하는 방법.82. The method of claim 81 wherein
At least one point mutation is at least one selected from the group consisting of residues E41, P190, and C481. 제 82 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 C481에 존재함을 특징으로 하는 방법. 83. The method of claim 82,
At least one point mutation is at residue C481. 제 85 항에 있어서,
잔기 C481에서의 점 돌연변이는 C481S, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.86. The method of claim 85,
The point mutation at residue C481 is selected from C481S, C481R, C481T and / or C481Y. 제 82 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 E41K, P190K, 및 C481S로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상임을 특징으로 하는 방법.83. The method of claim 82,
At least one point mutation is at least one selected from the group consisting of E41K, P190K, and C481S. 제 80 항에 있어서,
BTK 돌연변이체는 공유 BTK 저해제에 의한 저해에 내성임을 특징으로 하는 방법. 81. The method of claim 80,
BTK mutants are resistant to inhibition by covalent BTK inhibitors. 제 80 항에 있어서,
돌연변이된 BTK의 활성은 공유 비가역성 BTK 저해제에 의해 야생형 BTK의 활성 보다 공유 비가역성 BTK 저해제에 의해 더 적게 저해됨을 특징으로 하는 방법.81. The method of claim 80,
The activity of the mutated BTK is less inhibited by the covalent irreversible BTK inhibitor than by the covalent irreversible BTK inhibitor. 제 89 항에 있어서,
공유 비가역성 BTK 저해제는 야생형 BTK에 비해 돌연변이된 BTK에 있어서 최소한 50% 더 높은 IC50을 가짐을 특징으로 하는 방법.92. The method of claim 89,
The covalent irreversible BTK inhibitor is characterized by having at least 50% higher IC50 for mutated BTK compared to wild type BTK. 제 88 항에 있어서,
비가역성 공유 BTK 저해제는 이브루티닙 및/또는 아칼라브루티닙임을 특징으로 하는 방법. 89. The method of claim 88 wherein
The irreversible covalent BTK inhibitor is ibrutinib and / or acalabrutinib. 제 91 항에 있어서,
비가역성 공유 BTK 저해제는 이브루티닙임을 특징으로 하는 방법.92. The method of claim 91 wherein
The irreversible covalent BTK inhibitor is ibrutinib. 제 85 항에 있어서,
시스테인 상의 점 돌연변이는 단 하나의 BTK 대립유전자 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.86. The method of claim 85,
Point mutations on cysteine are present on only one BTK allele. 제 85 항에 있어서,
시스테인 상의 점 돌연변이는 두 개의 BTK 대립유전자 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.86. The method of claim 85,
Point mutations on cysteine are present on two BTK alleles. 제 80 항에 있어서,
대상체는 포유동물임을 특징으로 하는 방법. 81. The method of claim 80,
The subject is a mammal. 제 95 항에 있어서,
대상체는 인간임을 특징으로 하는 방법.97. The method of claim 95,
And wherein the subject is a human. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법:
Figure pct00022

이때 대상체는 BTK의 돌연변이체 형태를 가짐. A method of treating cancer in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject in need thereof:
Figure pct00022

Subject has a mutant form of BTK. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 B 세포 종양의 치료 방법:
Figure pct00023
.A method of treating B cell tumors in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject:
Figure pct00023
. 제 98 항에 있어서,
상기 대상체는 BTK의 돌연변이체 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.99. The method of claim 98,
The subject has a mutant form of BTK. 제 98 항 또는 제 99 항에 있어서,
치료되는 B 세포 종양은 외투 세포 림프종 (MCL), B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-ALL), 버킷 림프종, 만성 림프구 백혈병 (CLL), 및 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)으로 구성된 그룹 중 하나 이상에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.The method of claim 98 or 99,
The B cell tumors treated are among the group consisting of mantle cell lymphoma (MCL), B-cell acute lymphocytic leukemia (B-ALL), Burkitt's lymphoma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), and diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). Wherein the method is selected from at least one. 제 100 항에 있어서,
치료되는 B 세포 종양은 외투 세포 림프종 (MCL)임을 특징으로 하는 방법.101. The method of claim 100,
The B cell tumor to be treated is mantle cell lymphoma (MCL). 제 100 항에 있어서,
치료되는 B 세포 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-ALL)임을 특징으로 하는 방법.101. The method of claim 100,
The B cell tumor to be treated is B-cell acute lymphocytic leukemia (B-ALL). 제 100 항에 있어서,
치료되는 B 세포 종양은 버킷 림프종임을 특징으로 하는 방법. 101. The method of claim 100,
The B cell tumor to be treated is Burkitt's lymphoma. 제 100 항에 있어서,
치료되는 B 세포 종양은 만성 림프구 백혈병 (CLL)임을 특징으로 하는 방법.101. The method of claim 100,
The B cell tumor to be treated is chronic lymphocytic leukemia (CLL). 제 100 항에 있어서,
치료되는 B 세포 종양은 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)임을 특징으로 하는 방법.101. The method of claim 100,
The B cell tumor to be treated is diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). 제 97 항 내지 제 105 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7은 오로라 키나아제의 활성을 저해 및/또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법. 105. The method of any of claims 97-105,
Compound 7 is characterized in that it inhibits and / or reduces the activity of aurora kinases. 제 106 항에 있어서,
오로라 키나아제는 돌연변이된 오로라 키나아제임을 특징으로 하는 방법.107. The method of claim 106,
Aurora kinase is a mutated Aurora kinase. 제 97 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7의 투여는 세포자멸을 유도함을 특징으로 하는 방법. 108. The method of any of claims 97-107,
Administration of compound 7 induces apoptosis. 제 97 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7의 투여는 다배수체를 유도함을 특징으로 하는 방법. 108. The method of any of claims 97-107,
Administration of compound 7 induces a diploid. 제 97 항 내지 제 109 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7은 야생형 BTK의 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법. 112. The method of any of claims 97-109,
Compound 7 is characterized in that it inhibits and / or reduces the activity or expression of wild type BTK. 제 97 항 내지 제 109 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7은 돌연변이체 BTK의 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법.112. The method of any of claims 97-109,
Compound 7 is characterized in that it inhibits and / or reduces the activity or expression of mutant BTK. 제 111 항에 있어서,
돌연변이된 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. 112. The method of claim 111, wherein
The mutated BTK is characterized in that it comprises at least one point mutation. 제 112 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법. 112. The method of claim 112,
At least one point mutation is on a cysteine residue. 제 113 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 C481에 존재함을 특징으로 하는 방법. 113. The method of claim 113,
At least one point mutation is at residue C481. 제 97 항 내지 제 114 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7은 대상체에서 야생형 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법. 117. The method of any of claims 97-114,
Compound 7 is characterized in that it inhibits and / or reduces wild type Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. 제 97 항 내지 제 114 항 중 어느 한 항에 있어서,
화합물 7은 대상체에서 돌연변이체 Fms-관련 티로신 키나아제 3 (FLT3) 활성 또는 발현을 저해 및/또는 감소시킴을 특징으로 하는 방법. 117. The method of any of claims 97-114,
Compound 7 is characterized in that it inhibits and / or reduces mutant Fms-associated tyrosine kinase 3 (FLT3) activity or expression in a subject. 제 116 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. 117. The method of claim 116 wherein
The mutated FLT3 comprises at least one point mutation. 제 117 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.118. The method of claim 117,
At least one point mutation is present on at least one residue selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. 제 118 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 FLT3-ITD임을 특징으로 하는 방법.119. The method of claim 118 wherein
The mutated FLT3 is FLT3-ITD. 제 118 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법. 119. The method of claim 118 wherein
The mutated FLT3 is characterized by having additional ITD mutations. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 인간 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 인간 세포에서 비정상적 (예컨대, 과발현된) 야생형 또는 돌연변이된 BTK의 활성 또는 발현의 저해 또는 감소 방법:
Figure pct00024
.A method of inhibiting or reducing the activity or expression of abnormal (eg, overexpressed) wild type or mutated BTK in human cells, comprising contacting Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof with human cells:
Figure pct00024
. 제 121 항에 있어서,
돌연변이된 BTK는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법. 128. The method of claim 121, wherein
The mutated BTK is characterized in that it comprises at least one point mutation. 제 122 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 시스테인 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법. 123. The method of claim 122 wherein
At least one point mutation is on a cysteine residue. 제 123 항에 있어서,
시스테인 잔기는 BTK의 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법. 126. The method of claim 123, wherein
The cysteine residue is in the kinase domain of BTK. 제 123 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 E41, P190, 및 C481로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상임을 특징으로 하는 방법. 126. The method of claim 123, wherein
At least one point mutation is at least one selected from the group consisting of residues E41, P190, and C481. 제 125 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 잔기 시스테인 481에 존재함을 특징으로 하는 방법. 126. The method of claim 125 wherein
At least one point mutation is present at residue cysteine 481. 제 126 항에 있어서,
잔기 시스테인 481에서의 점 돌연변이는 C481S, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.127. The method of claim 126, wherein
The point mutation at residue cysteine 481 is selected from C481S, C481R, C481T and / or C481Y. 제 126 항에 있어서,
잔기 시스테인 481에서의 점 돌연변이는, C481R, C481T 및/또는 C481Y에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.127. The method of claim 126, wherein
The point mutation at residue cysteine 481 is selected from C481R, C481T and / or C481Y. 제 98 항 또는 제 99 항에 있어서,
상기 방법은 또한 혈액 종양을 치료함을 특징으로 하는 방법. The method of claim 98 or 99,
The method also characterized by treating a blood tumor. 제 129 항에 있어서,
혈액 종양은 백혈병임을 특징으로 하는 방법. 131. The method of claim 129 wherein
A blood tumor is characterized in that leukemia. 제 130 항에 있어서,
백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종임을 특징으로 하는 방법.131. The method of claim 130,
Leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, childhood osteocytic leukemia, adult T- Cell acute lymphocyte leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive myelodysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. 제 131 항에 있어서,
백혈병은 급성 골수성 백혈병임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 131, wherein
Leukemia is acute myeloid leukemia. 화합물 7 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법:
Figure pct00025

이때 대상체는 FLT3의 돌연변이체 형태를 가짐.A method of treating cancer in a subject in need thereof, comprising administering Compound 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the subject in need thereof:
Figure pct00025

Subject has a mutant form of FLT3. 제 133 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 최소한 하나의 점 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.133. The method of claim 133,
The mutated FLT3 comprises at least one point mutation. 제 134 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 D835, F691, K663, Y842 및 N841로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 잔기 상에 존재함을 특징으로 하는 방법.135. The method of claim 134,
At least one point mutation is present on at least one residue selected from the group consisting of D835, F691, K663, Y842 and N841. 제 135 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 D835에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in D835. 제 135 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 F691에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in F691. 제 135 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 K663에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in K663. 제 135 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 N841에서 최소한 하나의 돌연변이를 포함함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
The mutated FLT3 comprises at least one mutation in N841. 제 135 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 티로신 키나아제 도메인에 존재함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
At least one point mutation is present in the tyrosine kinase domain of FLT3. 제 135 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 FLT3의 활성화 루프에 존재함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
At least one point mutation is present in the activation loop of FLT3. 제 135 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 및 696으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기 위치에 존재함을 특징으로 하는 방법.136. The method of claim 135, wherein
At least one point mutation is at one or more amino acid residue positions selected from the group consisting of 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, and 696. 제 134 항 내지 제 142 항 중 어느 한 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 추가 ITD 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.145. The method of any one of claims 134-142, wherein
The mutated FLT3 is characterized by having additional ITD mutations. 제 133 항에 있어서,
돌연변이된 FLT3는 FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3-ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, 및 FLT3-ITD-Y842C로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.133. The method of claim 133,
Mutated FLT3 is FLT3-D835H, FLT3-D835V, FLT3-D835Y, FLT3-ITD-D835V, FLT3-ITD-D835Y, FLT3-ITD-D835H, FLT3-F691L, FLT3-ITD-F691L, FLT3-K663Q, FLT3- One or more mutations selected from the group consisting of ITD-K663Q FLT3-N841I, FLT3-ITD-N841I, FLT-3R834Q FLT3-ITD-834Q, FLT3-D835G, FLT3-ITD-D835G, FLT3-Y842C, and FLT3-ITD-Y842C Method characterized by having a. 제 134 항 내지 제 144 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 동일한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법.The method of any one of claims 134-144, wherein
At least one point mutation is two or more point mutations present on the same allele. 제 134 항 내지 제 144 항 중 어느 한 항에 있어서,
최소한 하나의 점 돌연변이는 상이한 대립유전자 상에 존재하는 둘 이상의 점 돌연변이임을 특징으로 하는 방법.The method of any one of claims 134-144, wherein
At least one point mutation is two or more point mutations present on different alleles. 제 133 항 내지 제 146 항 중 어느 한 항에 있어서,
암은 백혈병임을 특징으로 하는 방법. The method of any one of claims 133-146, wherein
Cancer is leukemia. 제 147 항에 있어서,
백혈병은 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 호중구 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 전림프구 백혈병, 소아 골수단핵구 백혈병, 성인 T-세포 급성 림프구 백혈병, 삼계대 척수형성이상을 보유한 급성 골수성 백혈병, 혼합 계대 백혈병, 호산구 백혈병, 또는 외투 세포 림프종임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 147, wherein
Leukemia is acute lymphocytic leukemia, acute myeloid leukemia, acute promyelocytic leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid leukemia, chronic neutrophil leukemia, acute undifferentiated leukemia, anaplastic large cell lymphoma, prelymphocytic leukemia, childhood osteocytic leukemia, adult T- Cell acute lymphocyte leukemia, acute myeloid leukemia with tripassive myelodysplasia, mixed passage leukemia, eosinophil leukemia, or mantle cell lymphoma. 제 148 항에 있어서,
백혈병은 급성 골수성 백혈병임을 특징으로 하는 방법. The method of claim 148, wherein
Leukemia is acute myeloid leukemia.
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