KR20190091621A - 벤조[d]싸이아졸 유도체 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents
벤조[d]싸이아졸 유도체 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
화학식 1의 구조를 가지는 벤조[d]싸이아졸 유도체의 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다. 화학식 1의 화합물은 면역세포의 이동을 조절할 수 있으며, 이에 따라 면역세포 이동과 관련한 질환의 예방, 개선 및 치료 등에 있어서 매우 현저한 효과를 나타낸다.
Description
본 발명은, 본 발명에서 개시하는 특유의 구조를 가지는 벤조[d]싸이아졸 유도체들의 신규한 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 화학식 1의 구조를 가지는 벤조[d]싸이아졸 유도체의 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.
체내의 여러 조직에서, 각각의 세포는 그들의 유전적 특성과 환경에 따라 다른 방식으로 이주한다. 통제되지 않은 세포 이동은 염증성 질환, 암 전이 등의 다양한 질병 상태들과 관계되나, 각각의 세포들이 지니는 이동 시그널링 및 메커니즘 특성이 완전히 규명되지 못한 상태이다. 특히, 각각의 세포에 따라서는 동일한 인자라도 관계하는 방식이 다른 것으로 보고되어 시그널링 과정 및 메커니즘 규명에 어려움이 더해지고 있는데, 일례로 AQP1(water channel aquaporin-1)은 상피 세포 등에서 세포의 이동을 촉진하는 것으로 알려져 있으며 특히 암 전이를 촉진시키는 것으로 알려졌지만(Hara-Chikuma M et al., Aquaporin-1 facilitates epithelial cell migration in kidney proximal tubule, J Am Soc Nephrol. 2006 Jan;17(1):39-45; Jiang Y, Aquaporin-1 activity of plasma membrane affects HT20 colon cancer cell migration, IUBMB Life. 2009 Oct;61(10):1001-9), 대식세포의 경우 상기 AQP1를 발현함에도 불구하고 이것이 대식세포의 이동을 억제하는 것으로 보고 되었다(Tyteca D et al., Regulation of Macrophage Motility by the Water Channel Aquaporin-1: Crucial Role of M0/M2 Phenotype Switch, PLoS One. 2015 Feb 26;10(2):e0117398). 이처럼 각 세포들은 이들이 이동에 여러 가지 방식 및 특성이 존재하기 때문에, 기존에 특정 세포의 이동을 방지하기 위해 설계된 약물들은 상당히 제한적이고 불충분한 효능을 보이고 있다. 따라서 세포의 이동성 스위치(migratory switch)를 제어하고 이주 관련 질병을 치료하는 새로운 전략을 모색하는 것이 요구되고 있는 실정이다.
한편, 면역세포는 체내의 1차 방어망이기도 하지만, 최근 과도한 면역세포의 활성화가 주요한 발병 기전중의 하나임이 보고되고 있다. 염증성 면역세포의 활성화시 일반적으로 면역세포의 이동성 증가가 관찰되는데, 구체적으로 다음과 같은 질병들에서 이러한 면역세포 이동 및 침윤이 질병의 병리와 밀접한 관련이 있는 것으로 보고되고 있다.
일례로, 심혈관계 질환은 심장과 주요 동맥에 발생하는 질환으로, 죽상동맥경화증과 관상동맥 질환 등이 포함된다(Ross R et al., New Engl J Med, 1999:340(2):115-26, Poli G et al., Redox Biol 2013;1(1):125-30, Libby P et al., Circulation 2002;5;105(9):1135-43). 죽상동맥경화증은 콜레스테롤에 의한 염증성 질환이고, 동맥 안쪽 막에 침착한 콜레스테롤과 혈액에서 동맥 안쪽으로 이동한 면역세포로 구성된 죽종에 의하여 발병한다. 즉, 콜레스테롤 산화물이 염증을 일으키고 있는 부위로 단핵구와 같은 면역세포가 이동하면서 죽종이 형성된다. 죽종이 형성될 경우 혈관의 내면은 껄끄러워지고 벽은 두꺼워지면서 혈액이 흐르는 내부의 지름이 좁아져 혈액순환에 장애가 생긴다. 죽종 주위를 둘러싼 섬유성막이 터지면 혈관 안에 혈전이 발생하고, 죽종 안으로 출혈이 일어나 혈관 내경이 급격하게 좁아지거나 막히게 된다. 주로 심장에 피를 공급하는 혈관, 뇌에 피를 공급하는 혈관, 콩팥에 피를 공급하는 혈관 및 말초혈관에 발생하여 허혈성 심장질환, 허혈성 뇌혈관질환(뇌졸중), 신부전, 사지 허혈성 동맥 질환을 일으킨다. 기존에 이러한 심혈관계 질환의 발생 및 발달에는 단핵구의 이동을 유도함으로써 염증반응을 일으키는 CCL2(CCChemokine ligand 2, MCP-1)가 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려져, CCL2의 작용 및 이에 따른 단핵구의 이동을 억제함으로써 상기와 같은 심혈관계 질환을 치료하는 방법이 새로이 제시되기도 하였다(Gu L et al., Mol Cell, 1998;2(2):275-81, Aiello RJ et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol 1999;19(6):1518-25, Gosling J1 et al., Clin Invest 1999;103(6):773-8, Harrington JR et al., Stem Cells 2000;18(1):65-6, Ikeda U et al., Clin Cardiol 2002;25(4):143-7). 또한 고혈압에서도 염증성 사이토카인을 분비하는 다양한 면역세포 등이 혈관으로 과도하게 이동하여 혈관벽이 두꺼워지고, 혈관의 탄력성을 상실하는 병리가 관계된다.
또한 폐동맥 고혈압(Pulmonary Arterial Hypertension, PAH)은 폐 고혈압 세계 보건기구 (WHO) 임상 분류 시스템 (ESC Guidelines, European Heart Journal 2015)의 Group 1으로 분류되며, 호흡곤란, 평균 폐동맥압 (mean pulmonary artery pressure, mPAP)의 상승 (mPAP > 25 mmHg) 및 우심실 기능부전을 공통적 임상특징으로 하는 희귀질환이다. 이러한 폐동맥 고혈압은 유전, 감염, 연관질환 등 여러 가지 선재요인이 관여하지만 혈관손상 (endothelial cell injury)에 따른 면역반응이 핵심 병리적 요인으로 작용하는 것으로 알려졌다(Huertas et al., Circulation, 129:1332-1340, 2014). 이러한 현상에는 면역세포의 침윤과 기능장애(dysfunction)에 따른 일련의 과정이 병리현상과 깊게 연관되어 있는 것으로 알려졌으며, 특히 PAH에서 면역세포와 혈관내피세포 상호작용이 중요한 것으로 알려졌다. 뿐만 아니라 최근 알포트 증후군(Alport syndrome)에 있어서도 단핵구, 대식세포의 침윤이 상기 병의 진행을 촉진시킨다는 보고가 있었다.
한편, 섬유화(fibrosis) 관련 질병에 있어서, 지속적인(만성적인) 염증반응이 상처치유 프로그램(wound-healing program)을 활성화시키게 되는데 이것이 섬유증(fibrosis)으로 이어지게 된다. 조직의 손상 후 단핵구/대식세포나 호중성 백혈구, 호산백혈구, 비만세포 등의 염증성 면역세포가 손상 부위로 빠르게 침투 하면서 활성화되며 여러 사이토카인을 분비하게 되고 이것들은 주위의 섬유아세포나 상피세포, 평활근세포를 다시 활성화 시켜 이들을 미요브라스트형의 세포로 활성화시키는데 이 미요브라스트형의 세포는 다량의 세포외 기질 단백질을 생산 분비하게 하여 궁극적으로 조직에 세포외 기질 단백질의 다량 축적을 초래하여 상처를 남기며 또한 조직의 섬유화나 비대화를 유도하게 된다 (Gurtner GC et al., Trends Cell Biol. 15 : 599-607, 2005). 이 병리 기전은 창상, 화상, 욕창등에 의한 피부 상처시 발생되는 피부 조직 내의 상흔 형성이나 간, 신장, 혈관, 폐 등의 조직의 경화성 섬유화 현상의 근본적인 원인중 하나이다. 또한 만성 자가면역 질환인 경피증 (scleroderma), 류마티스 관절염 (rheumatoid arthritis), 크론 병 (Crohn’s disease), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 골수 섬유증 (myelofibrosis), 전신성 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosus)에서도 섬유화는 주된 병리적 특성으로 나타난다. 아울러 아토피 질환, 천식 질환, COPD, 건선증, 켈로이드, 증식성 망막증등 에서도 염증성 면역세포의 활성화가 병리 현상에 기여한다고 알려져 있다.
특히, 상기 상처치유 프로그램(wound-healing program)에 있어서 미요브라스트형의 세포로 활성화된 섬유아세포를 myofibroblast(근섬유아세포)라고 한다. myofibroblast는 섬유화(fibrosis) 관련된 모든 질환병리의 중심에 있으므로 myofibroblast의 활성을 유도하는 분자생물학적 혹은 면역학적 기전을 제거하는 것이 질환치료의 핵심 요소가 된다. 많은 선천적 (innate immunity) 혹은 후천적 (adaptive immunity) 면역이 fibroblast의 활성과 분화에 중요하다는 사실은 널리 알려져 있으며, 이에 상처부위에서 염증반응을 제거하는 것이 섬유화로의 tissue remodeling 을 중단시키고 정상조직형태를 유지하는 핵심적 요소가 된다. 하지만 실제적으로 염증반응의 제거가 쉽게 이뤄지지 않으므로 선천적 후천적 면역의 기전을 이해하여 핵심 매개체(mediator)를 찾는 것이 섬유화를 늦추는데 중요하다.
단핵구, 대식세포 등은 wound healing에도 기여하는 부분이 있으나 reactive oxygen, nitrogen등을 분비하므로 주변 세포에 해로운 영향을 끼치게 된다. 따라서 단핵구, 대식세포의 신속한 제거가 없다면 조직 손상을 더 유발하게 되며 섬유화를 초래하게 된다. 따라서 상기 질병의 초기에 가장 먼저 반응하는 단핵구, 대식세포들을 제한하는 것은 다양한 만성 염증 및 섬유화 관련 질환에 있어서 하나의 치료적 전략으로 여겨진다.
상기 wound-healing 기전이 섬유화 반응을 촉발 시킬 때, 혈구 응집에 관련된 PDGF(platelet-derived growth factor)는 다른 염증반응 면역세포들을 상처부위로 불러들이고 TGF-β1은 국소 fibroblast로부터 세포외 기질 합성을 촉진시키는 것으로 알려졌다. 하지만 상기 혈구응집 반응에 관련된 요소들은 이들이 결핍된 경우에도 섬유화를 유도하는 결과를 보임이 보고되었다.
상기와 같이 과도한 면역세포 활성화가 문제되는 질환들에 있어서 기존에 면역세포들의 이동(및 침윤)을 막기 위한 타겟 인자(target factor)들이 제시되어왔고 이들을 대상으로 질병의 치료적 방법을 고안하는 시도가 이루어지고 있지만 각각의 한계점들이 보고되고 있는 실정이며, 이에 따라 효과적인 질병 치료를 위해 여전히 면역세포 이동에 있어서 핵심 매개체(mediator)가 무엇인지 이를 제어할 전략은 무엇인지를 찾는 것이 중요한 해결 과제로서 요구되고 있는 실정이다.
이에 본 발명자들은 면역세포 이동(침윤) 관련 질환의 새로운 치료적 전략을 찾고자 연구하던 중, 면역세포(단핵구/대식세포)의 세포막 영역에 KRS 수준이 증가되는 현상이 면역세포 이동 및 침윤 관련된 질환에 대하여 중요한 병리현상임을 확인하였으며 이는 라미닌(특히, 라미닌 아형 α4β2γ1)과 특별한 연관성을 가지고, 화학식 1의 구조를 보유하는 특정 화합물들이 KRS의 세포막으로의 이동을 저해하여 면역세포의 세포막에 증가된 KRS 수준을 감소시키며 실제로 면역세포 이동 및 침윤을 억제하여 관련 질환을 치료하는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한는 것이다:
<화학식 1>
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; 니트로기; 아미노기; 할로겐으로 선택적으로 치환된 C1∼C6 알킬기; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R1,R2, 및 R3가 동시에 수소일 수는 없다),
R4, R5, 및 R6는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; C1∼C6 알킬기; C3∼C6사이클로알킬로 선택적으로 치환된 C1∼C6 알콕시기; C1∼C6 알킬설파닐기; 또는 모노- 혹은 다이-C1∼C6 알킬아미노기이고,
R7 및 R8은, 서로 독립적으로, 수소; 하이드록시기; 할로겐기; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R7 및 R8이 동시에 수소일 수는 없다),
R9는 수소 또는 C1∼C6 알킬기이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
<화학식 1>
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; 니트로기; 아미노기; 할로겐으로 선택적으로 치환된 C1∼C6 알킬기; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R1,R2, 및 R3가 동시에 수소일 수는 없다),
R4, R5, 및 R6는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; C1∼C6 알킬기; C3∼C6사이클로알킬로 선택적으로 치환된 C1∼C6 알콕시기; C1∼C6 알킬설파닐기; 또는 모노- 혹은 다이-C1∼C6 알킬아미노기이고,
R7 및 R8은, 서로 독립적으로, 수소; 하이드록시기; 할로겐기; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R7 및 R8이 동시에 수소일 수는 없다),
R9는 수소 또는 C1∼C6 알킬기이다.
정의
다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자들에 의해 통상적으로 이해되는 동일한 의미를 가진다. 다음의 참고문헌은 본 발명의 명세서에 사용된 여러 용어들의 일반적인 정의를 갖는 기술(skill)의 하나를 제공한다. Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOTY(2d ed. 1994); THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(Walker ed., 1988); 및 Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY. 또한 다음의 정의는 본 발명의 실시를 위해 독자(reader)에게 도움을 주기 위해 제공된다.
본 발명에서 상기 용어 '알킬'은 지방족 탄화수소 라디칼을 의미하며, 직쇄상 또는 분지상의 탄화수소 라디칼을 모두 포함한다. 예를 들어 C1-C6 알킬은 1 내지 6개의 탄소원자를 갖는 지방족 탄화수소로서, 메틸, 에틸, 프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실, 아이소프로필, 아이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 네오펜틸, 아이소펜틸 등을 모두 포함한다.
또한, 용어 '알콕시'는 별도로 정의되지 않는 한 하이드록시 기의 수소 원자가 알킬로 치환된 라디칼을 의미하며, 예를 들어 C1-C6 알콕시는 메톡시, 에톡시,프로폭시, n-부톡시, n-펜틸옥시, 아이소프로폭시, sec-부톡시, tert-부톡시, 네오펜틸옥시, 아이소펜틸옥시 등을 모두 포함한다.
본 발명에서 "KRS 단백질"은 라이실 tRNA 합성효소로 알려져 있는 폴리펩티드를 의미한다. KRS는 아미노산 라이신(lysine)과 tRNA의 아미노아실레이션(aminoacylation) 반응을 매개하는 효소이다. 본 발명에서 KRS는 당업계에 라이실 티알엔에이 합성 효소로 알려진 것이라면 그 구체적 서열이 특별히 제한되지 않으나, 일례로 본 발명의 KRS는 인간(homo sapiens) 유래의 것으로서 NCBI(Genbank) Accession No. NP_005539.1 등으로 공지된 것을 포함한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명자들은 세포의 병리학적 이동 현상과에 대하여, 면역세포 이동 및 침윤 상태와 관련하여 KRS가 면역세포(특히, 단핵구/대식세포)의 세포질 대비 세포막에서 그 수준이 특이적으로 높아지는 것이 중요한 병리 현상임을 최초로 규명하였으며, 특히 LN421(라미닌 아형 α4β2γ1)과의 특별한 관련성을 가지고 면역세포(단핵구/대식세포) 이동에 있어서 KRS의 특이적 조절 기능을 확인하였다. 이에 화학식 1의 화합물이 KRS의 세포질로부터 세포막으로의 이동을 특이적으로 억제하여 세포막의 KRS 수준을 현저하게 감소시키며, 이에 따라 실제로 폐동맥 고혈압과 같이 기존에 면역세포의 이동 및 침윤의 병리현상과 깊게 연관된 질환들에 있어서 현저한 치료효과를 나타냄을 밝혔다.
따라서 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 있어서, 바람직하게는 R1, R2, 및 R3는, 서로 독립적으로, 수소; 또는 할로겐기이고(단, R1, R2, 및 R3가 동시에 수소일 수는 없다),
R4, R5, 및 R6는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; 또는 C1∼C6 알콕시기이고(단, R4, R5, 및 R6가 동시에 수소일 수는 없다),
R7 및 R8은, 서로 독립적으로, 수소; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R7 및 R8이 동시에 수소일 수는 없다),
R9는 수소 또는 C1∼C6 알킬기이다.
본 발명의 상기 화학식 1의 화합물에 있어서, 바람직한 화합물 또는 이의 염은 다음과 같다:
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(((2-클로로페닐에틸)(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노)메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(3-클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-(((7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)(4-메틸페닐에틸)아미노)메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-에톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-프로폭시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-아이소프로폭시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(메틸설파닐)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[3-(메틸설파닐)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(2,5-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3,4-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-아이소부톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로프로필메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(메틸아미노)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-{[{2-[4-(다이메틸아미노)페닐]에틸}(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)(2-페닐에틸)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로헥실메톡시페닐)에틸]-(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로부틸메톡시페닐)에틸]-(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(4-에톡시-3-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,4-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-sec-부톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(4-에틸아미노페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(4-에틸페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(2,3-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,5-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3,4,5-트라이플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3-브로모-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,4-다이클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,4-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-메톡시-2-메틸-5-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(3-브로모-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,4-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3,4,5-트라이플루오로페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,4-다이클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-{1-[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-메톡시-2-메틸-5-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]에틸}벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-{1-[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-메톡시-2-메틸-5-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]프로필}벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)-2-하이드록시벤조산;
3-클로로-4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-나이트로-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-나이트로-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-아미노-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-아미노-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-메톡시페닐)에틸](5,6,7-트라이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(6-클로로-7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-트라이플루오로메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(6,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)-[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로-6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미
노}메틸)벤조산;
4-({(4,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](5-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](5,6,7-트라이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(6-클로로-7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(6,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로-6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][7-(트라이플루오로메틸)-벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(6-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](5-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(4,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-({(6-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(6-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
2-{(4-카복시벤질)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}벤조[d]싸이아졸-6-카르복실산;
2-{(4-카복시벤질)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}벤조[d]싸이아졸-7-카르복실산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸][6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸][5-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}메틸)벤조산;
4-({[7-플루오로-6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일][2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][5-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산; 및
4-(1-{[7-플루오로-6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일][2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산.
본 발명에서 상기 화학식 1의 화합물의 더욱 바람직한 예는, 하기 화학식 1-1로 표시되는 구조를 가지는 화합물일 수 있다.
<화학식 1-1>
상기 화학식 1-1에서,
R1은 수소; 또는 할로겐기이고,
R4는 수소; 할로겐기; 또는 C1∼C6 알콕시기이고
R7은 수소; 또는 하이드록시카보닐기일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 화학식 1로 표시되는 화합물들 중에서도, 화학식 1-1의 구조를 공유하는 화합물, 특히 탁월한 효과를 보인 하기 화학식 2로 표시되는 4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산을 대표로 하여, 다양한 종류의 면역세포 이동(및 침윤) 관련 질환에 대한 in vivo 질병모델에 적용하여 이의 질환 예방 및 치료 효과를 확인한 바 있다. 하기 화학식 2의 화합물은 본 명세서에서 ‘BC-KI-00053’으로도 명명된다.
<화학식 2>
상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 염은 비대칭 원자를 포함하는 치환기를 가질 수 있으며, 이 경우 화학식 1의 화합물 또는 그의 염은 (R), (S), 또는 라세믹체(RS) 등의 광학 이성질체로 존재할 수 있다. 따라서, 달리 표기하지 않는 한, 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 염은 (R), (S), 또는 라세믹체(RS) 등의 광학 이성질체를 모두 포함한다.
본 발명의 화학식 1의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태일 수 있다. 상기 염은 통상의 산부가염, 예를 들어 염산, 브롬산, 황산 또는 인산과 같은 무기산으로부터 유도된 염 및 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 또는 아스파르트산과 같은 유기산으로부터 유도된 염을 포함한다. 또한, 상기 염은 통상의 금속염 형태, 예를 들어 리튬, 소듐, 또는 칼륨과 같은 알칼리 금속염; 칼슘 또는 마그네슘염과 같은 알카리 토금속염; 또는 크롬염을 포함한다. 또한 적당한 유기 리간드들로 형성된 염, 예를 들면 4차 암모늄염을 포함하며, 디사이클로헥실아민 또는 N-메틸-D-글루카민염과 아르기닌과 라이신 등으로 형성된 아미노산염을 포함한다.
본 발명에서 상기 용어 “면역 세포”는 바람직하게 단핵구 또는 대식세포를 의미한다.
본 발명에서 용어“면역세포 이동 관련 질환”은, 당업계에 과도한 면역세포 이동(또는/및 침윤)이 주요한 발병 기전인 것으로 공지된 것이라면 그 구체적 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를들어 심혈관 질환, 섬유화 질환, 염증성 질환 및 알포트 증후군(Alport syndrome) 으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 심혈관 질환은 그 구체적 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를들어 고혈압(고혈압에 의한 염증성 합병증 포함), 폐동맥 고혈압, 죽상동맥경화, 협심증, 심근경색증, 허혈성 뇌혈관질환, 세동맥 경화 및 중막 경화로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 섬유화 질환은 그 구체적 종류가 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 경피증(scleroderma), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 크론 병(Crohn’s disease), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 골수 섬유증 (myelofibrosis), 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 간 섬유증(hepathic fibrosis), 간경변증(liver cirrhosis), 신장 섬유증(kidney fibrosis), 사구체 경화증, 근섬유증(myofibrosis), 심장 섬유증, 간질성 섬유화증, 췌장 섬유화증, 비장 섬유화증, 종격막 섬유화증, 혈관 섬유화증, 피부 섬유화증, 눈 섬유화증, 황반 변성, 관절 섬유화증, 갑상선 섬유화증, 심내막심근 섬유화증, 복막 섬유화증, 복막후 섬유화증, 진행성 종괴성 섬유화증, 신원성 전신섬유화증, 전신성 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosu), 유전성 섬유증, 감염성 섬유증, 자극성 섬유증, 만성 자가면역에 의한 섬유증, 장기이식시 항원부적합에 의한 섬유증, 외과수술의 섬유성 합병증, 고지혈증에 의한 섬유증, 비만에 의한 섬유증, 당뇨성 섬유증, 고혈압에 의한 섬유증 및 스텐트삽입시 섬유화로 인한 폐색으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 염증성 질환은 그 종류가 특별히 제한되지는 않지만, 바람직하게는 자가 면역 질환, 염증성 장 질환, 피부염(예를들어 아토피성 피부염, 습진, 건선증 등), 당뇨성 안질환(당뇨병성 망막증 등), 복막염, 골수염, 봉소염, 뇌막염, 뇌염, 췌장염, 외상 유발 쇼크, 기관지 천식, 비염, 부비동염, 중이염, 폐렴, 위염, 장염, 낭포성 섬유증, 졸중(卒中, 뇌졸중 등), 기관지염, 세기관지염, 간염(간경변, 무알콜성 지방간염 (non-alcoholic steatohepatitis) 등), 신장염(당뇨병성 신부전증 등), 관절염(건선성 관절염, 골관절염 등), 신경염(당뇨병성 신경병증 , 다발성 경화증 등), 통풍, 척추염, 라이터 증후군, 결절성 다발동맥염, 혈관염, 루게릭병, 베게너 육아종증, 과사이토카인 혈증(hypercytokinemia), 류마티스성 다발성근육통, 관절 세포 동맥염, 칼슘 결정 침착 관절병증, 가성 통풍, 비-관절 류마티즘, 점액낭염, 건초염, 상과염(테니스 엘보), 신경병증성 관절 질환(Charcot's joint), 출혈성관절증(hemarthrosis), 헤노흐-쉔라인 자반병, 비후성 골관절병증, 다중심성 세망조직구종, 수르코일로시스(surcoilosis), 혈색소증, 겸상 적혈구증 및 기타 혈색소병증, 고지단백혈증, 저감마글로불린혈증, 부갑상선기능항진증, 말단거대증, 가족성 지중해열, 베하트 병, 전신성 홍반성 루푸스, 재귀열, 건선, 다발성 경화증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 급성 호흡곤란 증후군, 다발성 장기부전, 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease), 급성 폐손상(acute lung injury) 및 기관지 폐 형성장애(broncho-pulmonary dysplasia) 로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 또한 만성 염증질환을 포함한다.
본 발명에서 자가면역 질환은 류마티스성 관절염, 전신성 경피증, 전신 홍반성 낭창, 건선, 천식, 궤양성 대장염, 베체씨병, 크론씨병, 다발성 경화증, 피부근염, 교원병, 혈관염, 관절염, 육아종증, 장기 특이적 자가면역병변, 궤양성 대장염 및 GvHD (이식편대 숙주 반응 질환: graft-versus-host disease)으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 만성 염증 질환은 전술한 염증성 질환의 종류를 참조로 하여 이들이 만성(chronic)화 된 상태를 포함하는 의미이며, 이들의 바람직한 일례로는 천식, 아토피성 피부염, 습진, 건선증, 골관절염, 통풍, 건선성 관절염, 간경변, 무알콜성 지방간염, 만성폐쇄성 폐질환, 비염, 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 신부전증, 당뇨병성 신경병증 및 다발성 경화증 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 단독으로 함유하거나 약학적으로 허용되는 담체와 함께 적합한 형태로 제형화 될 수 있으며, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 상기에서 '약학적으로 허용되는'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 아울러, 경구투여용으로 사용되는 다양한 약물전달물질을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸-또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 예를 들어 정맥내, 복강내, 뇌내, 피하, 근육내, 안내, 동맥내, 뇌척수내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 비강내, 장관, 국소, 설하, 직장내 또는 병변내 경로에 의한 주사 또는 주입, 또는 하기 기재된 서방성 (sustained release) 시스템에 의한 주사 또는 주입일 수 있으며 이에 제한되지 않는다. 일례로 상기 화학식 1의 화합물은 전신으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈,메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA,1995)에 기재되어 있다.
본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1㎏ 당 약 0.01㎍ 내지 10,000mg, 가장 바람직하게는 0.1㎍ 내지 500mg일 수 있다. 그러나 상기 약학적 조성물의 용량은 제제화 방법, 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 조성물의 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
화학식 1의 화합물은 면역세포의 이동을 조절할 수 있으며, 이에 따라 면역세포 이동과 관련한 질환의 예방, 개선 및 치료 등에 있어서 매우 현저한 효과를 나타낸다.
도 1a는 면역세포(단핵구/대식세포) 이동에 대한 콜라겐(Col), 파이브로넥틴(FN) 및 라미닌(LN)의 효과를 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)로 비교한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 1b는 상기 도 1a 의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 2a는 면역세포(단핵구/대식세포) 이동에 대한 다양한 라미닌 아형(LN111, LN211, LN221, LN411, LN421, LN511, LN521)의 효과를 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)로 비교한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 2b는 도 2a의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 3은 LN421 처리에 의하여 단핵구/대식세포 막에서 KRS가 증가하는 것을 웨스턴 블롯으로 확인한 결과를 나타낸다.
도 4a는 LN421에 특이적인 단핵구/대식세포 이동에 있어서 KRS 발현 여부에 따른 효과를 트랜스웰 세포이동 어세이로 비교한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 4b는 도 4a의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 5는 LN421의 처리에 의해 세포막 영역에서 KRS의 수준이 높아졌던 것이, 화학식 1의 구조를 보유하는 화합물들(대표적으로 BC-KI-00053 화합물) 처리에 따라 현저히 낮아짐을 웨스턴블롯을 통하여 확인한 결과를 나타낸다.
도 6a는 화학식 1의 구조를 보유하는 화합물들(대표적으로 BC-KI-00053 화합물) 처리에 따라 농도 의존적으로 단핵구/대식세포의 이동이 현저히 저해되는 것을 트랜스웰 세포이동 어세이로 확인한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 6b는 도 6a의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 7a은 급성 염증성 반응(ear skin wound 모델)에서 BC-KI-00053 화합물 처리에 따른 단핵구, 대식세포 및 랑게르한스 세포의 침윤 정도를 형광 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸다(도면 상단부는 대조물질(vehicle) 투여군, 하단부는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군을 나타냄. 녹색으로 표시된 부분이 단핵구, 대식세포 및 랑게르한스 세포를 나타내며, 붉은색으로 표시된 부분은 CD31에 대하여 표지된 혈관을 나타냄. 흰색 원은 skin wound 위치를 나타냄).
도 7b는 도 7a의 형광 현미경 이미지에서 푸른색 원으로 표시된 skin wound 주변부위의 단핵구/대식세포 침윤정도를 정량화하여 나타낸 것이다.
도 8a는 간 허혈-재관류 손상 모델 제작을 위한 Triad(bile duct, hepatic artery, hepatic vein) occlusion procedure를 도식화 한 것이다.
도 8b는 간 허혈-재관류 손상 모델에서 BC-KI-00053 화합물 처리에 따른 단핵구, 대식세포 및 쿠퍼 세포의 침윤 정도를 형광 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸다(도면 상단부는 대조물질(vehicle) 투여군, 하단부는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군을 나타냄. 녹색으로 표시된 부분이 단색구, 대식세포 및 쿠퍼 세포를 나타내며, 붉은색으로 표시된 부분은 CD31에 대하여 표지된 혈관을 나타냄).
도 8c는 도 8b의 형광 현미경 이미지에서 단핵구/대식세포 침윤정도를 허혈-재관류 손상 후 시점 별로 정량화하여 나타낸 것이다. 적색 막대는 대조물질(vehicle) 투여군, 녹색 막대는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군에서 각각 정량화한 결과이다.
도 9a는 CCl4(사염화탄소)로 간섬유화 동물모델을 제작하고 여기에 BC-KI-00053 화합물의 치료 효과를 평가하는 실험에 대하여, 실험방법 및 일정을 도식화하여 나타내었다.
도 9b는 CCl4(사염화탄소)에 의해 유도된 간 섬유화 동물모델에서 BC-KI-00053의 효과를 평가한 결과로서, 각 실험군에서 간 표면과 간 내부의 섬유화 정도를 형광 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸다(각 도면에서 상단부는 간 표면을 영상화한 것이며, 하단부는 간 내부를 영상화한 것임. 녹색으로 표시된 부분은 콜라겐, 붉은색으로 표시된 부분은 간세포를 나타냄).
도 10a는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의한 우심실 수축기말 압력(right ventricular end-systolic pressure; RVESP) 변화를 나타낸다(MCT:monocrotaline 처리한 폐동맥 고혈압(PAH) 모델, Tx25mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 25mg/kg 투여, Tx50mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 50mg/kg 투여).
도 10b는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의한 좌심실 수축기말 압력(left ventricular end-systolic pressure; LVESP) 변화를 나타낸다(MCT:monocrotaline 처리한 폐동맥 고혈압(PAH) 모델 , Tx25mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 25mg/kg 투여, Tx50mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 50mg/kg 투여).
도 10c는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의해 폐 조직의 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 11a는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군과 BC-KI-00053 처리군의 기본 체중 및 실험기간동안의 체중변화를 나타낸다(괄호안의 숫자는 각 그룹에서 평균 데이터를 산출하는데 사용된 실험동물 수를 나타냄. 이하 동일).
도 11b는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 MAP 변화를 측정한 결과이다.
도 11c는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 단백뇨(뇨중 단백질 배설 정도) 정도 변화를 측정한 결과이다.
도 11d는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 혈장 크레아티닌 농도 변화를 측정한 결과를 나타낸다.
도 11e는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 사구체 현미경 이미지(상단이미지)와 사구체경화증 정도를 평가한 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 11f는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 피질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 피질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 11g는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 수질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 수질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 11h는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 심장 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지, 우심실 삽입 지점)와 심장 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프).
도 11i는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의해 신장 조직의 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 12a는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군과 BC-KI-00053 처리군의 기본 체중 및 실험기간동안의 체중변화를 나타낸다(괄호안의 숫자는 각 그룹에서 평균 데이터를 산출하는데 사용된 실험동물 수를 나타냄. 이하 동일).
도 12b는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압을 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 MAP 변화를 측정한 결과이다.
도 12c는 high salt(HS) 식이를 통해 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 단백뇨(뇨중 단백질 배설 정도) 정도 변화를 측정한 결과이다.
도 12d는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 혈장 크레아티닌 농도 변화를 측정한 결과를 나타낸다.
도 12e는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 사구체 현미경 이미지(상단이미지)와 사구체경화증 정도를 평가한 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 12f는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 피질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 피질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 12g는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 수질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 수질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 12h는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 심장 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지, 우심실 삽입 지점)와 심장 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프).
도 12i는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의해 신장 조직의 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 13은 알포트 증후군 동물모델에서 대조물질 또는 BC-KI-00053 화합물을 처리했을 때 신장에서 백혈구의 침윤 및 섬유화 정도 감소를 평가한 결과이다. 백혈구 침윤의 마커인 CD45는 녹색으로, 섬유화의 마커인 콜라겐 I은 붉은색으로 염색이 되었다.
도 1b는 상기 도 1a 의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 2a는 면역세포(단핵구/대식세포) 이동에 대한 다양한 라미닌 아형(LN111, LN211, LN221, LN411, LN421, LN511, LN521)의 효과를 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)로 비교한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 2b는 도 2a의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 3은 LN421 처리에 의하여 단핵구/대식세포 막에서 KRS가 증가하는 것을 웨스턴 블롯으로 확인한 결과를 나타낸다.
도 4a는 LN421에 특이적인 단핵구/대식세포 이동에 있어서 KRS 발현 여부에 따른 효과를 트랜스웰 세포이동 어세이로 비교한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 4b는 도 4a의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 5는 LN421의 처리에 의해 세포막 영역에서 KRS의 수준이 높아졌던 것이, 화학식 1의 구조를 보유하는 화합물들(대표적으로 BC-KI-00053 화합물) 처리에 따라 현저히 낮아짐을 웨스턴블롯을 통하여 확인한 결과를 나타낸다.
도 6a는 화학식 1의 구조를 보유하는 화합물들(대표적으로 BC-KI-00053 화합물) 처리에 따라 농도 의존적으로 단핵구/대식세포의 이동이 현저히 저해되는 것을 트랜스웰 세포이동 어세이로 확인한 결과로서, migrating cell에 대한 현미경 이미지를 나타낸다.
도 6b는 도 6a의 현미경 이미지에서 세포수를 측정(정량)하여 그래프로 표시한 것이다.
도 7a은 급성 염증성 반응(ear skin wound 모델)에서 BC-KI-00053 화합물 처리에 따른 단핵구, 대식세포 및 랑게르한스 세포의 침윤 정도를 형광 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸다(도면 상단부는 대조물질(vehicle) 투여군, 하단부는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군을 나타냄. 녹색으로 표시된 부분이 단핵구, 대식세포 및 랑게르한스 세포를 나타내며, 붉은색으로 표시된 부분은 CD31에 대하여 표지된 혈관을 나타냄. 흰색 원은 skin wound 위치를 나타냄).
도 7b는 도 7a의 형광 현미경 이미지에서 푸른색 원으로 표시된 skin wound 주변부위의 단핵구/대식세포 침윤정도를 정량화하여 나타낸 것이다.
도 8a는 간 허혈-재관류 손상 모델 제작을 위한 Triad(bile duct, hepatic artery, hepatic vein) occlusion procedure를 도식화 한 것이다.
도 8b는 간 허혈-재관류 손상 모델에서 BC-KI-00053 화합물 처리에 따른 단핵구, 대식세포 및 쿠퍼 세포의 침윤 정도를 형광 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸다(도면 상단부는 대조물질(vehicle) 투여군, 하단부는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군을 나타냄. 녹색으로 표시된 부분이 단색구, 대식세포 및 쿠퍼 세포를 나타내며, 붉은색으로 표시된 부분은 CD31에 대하여 표지된 혈관을 나타냄).
도 8c는 도 8b의 형광 현미경 이미지에서 단핵구/대식세포 침윤정도를 허혈-재관류 손상 후 시점 별로 정량화하여 나타낸 것이다. 적색 막대는 대조물질(vehicle) 투여군, 녹색 막대는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군에서 각각 정량화한 결과이다.
도 9a는 CCl4(사염화탄소)로 간섬유화 동물모델을 제작하고 여기에 BC-KI-00053 화합물의 치료 효과를 평가하는 실험에 대하여, 실험방법 및 일정을 도식화하여 나타내었다.
도 9b는 CCl4(사염화탄소)에 의해 유도된 간 섬유화 동물모델에서 BC-KI-00053의 효과를 평가한 결과로서, 각 실험군에서 간 표면과 간 내부의 섬유화 정도를 형광 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸다(각 도면에서 상단부는 간 표면을 영상화한 것이며, 하단부는 간 내부를 영상화한 것임. 녹색으로 표시된 부분은 콜라겐, 붉은색으로 표시된 부분은 간세포를 나타냄).
도 10a는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의한 우심실 수축기말 압력(right ventricular end-systolic pressure; RVESP) 변화를 나타낸다(MCT:monocrotaline 처리한 폐동맥 고혈압(PAH) 모델, Tx25mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 25mg/kg 투여, Tx50mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 50mg/kg 투여).
도 10b는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의한 좌심실 수축기말 압력(left ventricular end-systolic pressure; LVESP) 변화를 나타낸다(MCT:monocrotaline 처리한 폐동맥 고혈압(PAH) 모델 , Tx25mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 25mg/kg 투여, Tx50mpk: PAH 모델에 BC-KI-00053 50mg/kg 투여).
도 10c는 폐동맥 고혈압(PAH) 모델에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의해 폐 조직의 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 11a는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군과 BC-KI-00053 처리군의 기본 체중 및 실험기간동안의 체중변화를 나타낸다(괄호안의 숫자는 각 그룹에서 평균 데이터를 산출하는데 사용된 실험동물 수를 나타냄. 이하 동일).
도 11b는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 MAP 변화를 측정한 결과이다.
도 11c는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 단백뇨(뇨중 단백질 배설 정도) 정도 변화를 측정한 결과이다.
도 11d는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 혈장 크레아티닌 농도 변화를 측정한 결과를 나타낸다.
도 11e는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 사구체 현미경 이미지(상단이미지)와 사구체경화증 정도를 평가한 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 11f는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 피질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 피질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 11g는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 수질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 수질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 11h는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 심장 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지, 우심실 삽입 지점)와 심장 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프).
도 11i는 중복 고혈압(superimposed hypertension)인 FHH 랫드에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의해 신장 조직의 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 12a는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군과 BC-KI-00053 처리군의 기본 체중 및 실험기간동안의 체중변화를 나타낸다(괄호안의 숫자는 각 그룹에서 평균 데이터를 산출하는데 사용된 실험동물 수를 나타냄. 이하 동일).
도 12b는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압을 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 MAP 변화를 측정한 결과이다.
도 12c는 high salt(HS) 식이를 통해 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 단백뇨(뇨중 단백질 배설 정도) 정도 변화를 측정한 결과이다.
도 12d는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 처리에 따른 혈장 크레아티닌 농도 변화를 측정한 결과를 나타낸다.
도 12e는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 사구체 현미경 이미지(상단이미지)와 사구체경화증 정도를 평가한 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 12f는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 피질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 피질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 12g는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 수질 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지)와 수질 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프)(그래프 내부의 숫자는 실제 결과 측정에 사용한 이미지의 숫자를 나타냄).
도 12h는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 vehicle 처리군(control)과 BC-KI-00053 처리군(treatment)의 심장 섬유화에 대한 현미경 이미지(상단이미지, 우심실 삽입 지점)와 심장 섬유화 정도를 정량화하여 나타낸 결과를 나타낸다(하단 그래프).
도 12i는 high salt(HS) 식이를 통해 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 유발한 Dahl salt-sensitive (SS) 랫드에서 BC-KI-00053 화합물 투여에 의해 신장 조직의 면역세포 이동 및 침윤이 감소되었음을 IHC 염색으로 확인한 결과이다.
도 13은 알포트 증후군 동물모델에서 대조물질 또는 BC-KI-00053 화합물을 처리했을 때 신장에서 백혈구의 침윤 및 섬유화 정도 감소를 평가한 결과이다. 백혈구 침윤의 마커인 CD45는 녹색으로, 섬유화의 마커인 콜라겐 I은 붉은색으로 염색이 되었다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
면역세포 이동 및 침윤에 있어서, 라미닌 신호의 역할 확인
여러 세포외 기질(extracellular matrix, ECM)들 중에서, 어떤 것이 단핵구/대식세포의 이동 및 침윤을 촉진하는지 확인하였다. 세포외 기질로서 콜라겐(collagen, Col), 파이브로넥틴(fibronectin) 및 라미닌(laminin)을 사용하여 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)를 수행하였으며, 구체적인 실험방법은 다음과 같다. Transwell(Corning, #3421-5mm)을 gelatin (0.5mg/ml)으로 코팅한 후 RAW 264.7 cell(1 x 105 cells/well)을 top chamber에 분주(seeding)하였다. Laminin(laminin mixture, Biolamina社), Fibronectin 또는 Collagen을 각각 10μg/ml씩 포함하는 Serum Free DMEM(500μl)을 bottom chamber에 넣어주었다. 24시간 뒤에 70% methanol을 30min 처리하여 고정(fix)한 후, 50% Hematoxylin으로 30 min동안 염색하였다. membrane의 위쪽에 존재하는 non-migrating 세포를 면봉으로 제거한 뒤, membrane을 취하여 slide에 mounting하였다. membrane의 아랫면에 존재하는 migrating cell을 고배율 현미경에서 관찰하고 정량하였다.
실험결과 도 1a 및 도 1b에서 보는 바와 같이, 여러가지 세포외 기질 중 라미닌이 가장 강하게 단핵구/대식세포의 이동을 촉진함을 확인하였다. 즉, 단핵구/대식세포의 이동(migration)은 ECM(extracellular matrix) 중 라미닌 (LN) 신호에 가장 강하게 반응함을 확인하였다.
<실시예 2>
라미닌 아형(subtype)별 면역세포 이동 및 침윤 효과
면역세포 이동 및 침윤에 있어서, 라미닌 아형에 따른 효과를 평가하였다. 다양한 라미닌 아형 단백질(Biolamina로부터 구입)로서 LN111, LN211, LN221, LN411, LN421, LN511, LN521을 1μg/ml씩 사용하여 실시예 1과 동일한 방법으로 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)를 수행하였다. 상기 라미닌 아형들의 구체적 서열은 각 라미닌 아형을 이루고 있는 사슬에 따라 서열번호 4의α4 사슬, 서열번호 10의 α2 사슬, 서열번호 11의 α5 사슬, 서열번호 6의 β2사슬, 서열번호 12의 β1 사슬, 서열번호 8의 γ1 사슬을 참조로 할 수 있다.
실험결과 도 2a 및 도 2b에서 보는 바와 같이, 단핵구/대식세포는 라미닌 중에서도 α4β2γ1 아형 (LN421)에 특이적으로 반응하여 이동함을 확인하였다. 즉, 단핵구/대식세포의 이동은 라미닌 중에서도 LN421에 특이적임을 확인하였다.
<실시예 3>
면역세포에 라미닌 처리에 따른 KRS의 세포막 이동
100 파이 플레이트에 RAW 264.7 cell(2 x 106cell)을 분주하고 18hr 동안 배양한 후, serum free-DMEM media에 LN421 1μg/ml 처리 후 0h, 12h, 24h에 harvest하였다. ProteoExtract® Subcellular Proteome Extraction Kit(Calbiotech, cat# 539790)를 사용하여, RAW 264.7 cell protein을 cytosol과 membrane fraction으로 분리하였다. 얻어진 단백질을 전기 영동한 후 PVDF membrane (Milipore)에 옮겨 3% skim milk로 blocking 하였다. 이후 웨스턴 블롯으로 KRS를 검출하였다. 구체적으로 KRS polyclonal antibody(rabbit, Neomics, Co. Ltd. #NMS-01-0005) 항체를 첨가하여 1시간동안 결합시켰다. 결합하지 않은 항체를 제거하고, anti-rabbit 2차 항체(ThermoFisher Scientific, #31460)를 첨가하여 반응시켰다. 이차 항체를 반응시킨 후, 기질로 ECL reagent를 이용하여 암실에서 필름 감광하였다. 감광된 띠는 표준 분자 마커와 비교하여 KRS의 사이즈에 해당하는 띠를 확인하였다. Na+/K+ ATPase(Abcam, ab76020)와 tubulin(Santa cruz SC-5286)에 대한 항체를 각각 plasma membrane과 cytosol 마커 확인용으로 사용하였다.
도 3에서 보는 바와 같이 단핵구/대식세포에 LN421을 처리할 경우 세포질(cytosol) 영역에서 KRS 검출량이 일부 감소되는 것과 대비하여 세포막 영역에 KRS 검출량이 증가되는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 단핵구/대식세포의 세포 내부에서 발현되어 일반적으로 세포질 영역에 존재하고 있는 KRS가 LN421처리에 의하여 세포막 영역으로 이동하는 것을 시사하며, 면역세포 막 영역에서 특이적으로 KRS가 증가되는 현상은 면역세포 이동 및 침윤과 관련된 질환에 대하여 중요한 병리현상인 것으로 사료되었다.
<실시예 4>
LN421 의존적 면역세포 이동 및 침윤에 있어서 KRS의 효과
LN421에 특이적인 단핵구/대식세포 이동에 있어서 KRS가 영향을 주는지 알아보기 위하여, KRS가 과발현되도록 형질전환된 대식 세포 및 KRS 발현이 억제되도록 형질전환된 대식 세포 각각에 LN421을 처리하고, 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)를 수행하였다. 대조군으로는 KRS 유사 단백질인 leucyl-tRNA synthetase(LRS, 서열번호 3)를 사용하였다.
구체적으로, KRS 또는 LRS 과발현 대식세포는 다음과 같이 제작되었다: pCDNA3에 삽입된 KRS-Myc, LRS-Myc을 각각 Raw 264.7 cell에 Turbofect(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 트랜스펙션(48hrs)하였다. 음성대조군으로서 Ev(empty vector, pCDNA3)-Myc을 트랜스펙션한 세포를 제작하였다.
KRS 또는 LRS 발현억제 대식세포는 다음과 같이 제작되었다: Si-KRS(서열번호 13), Si-LRS(서열번호 14)를 각각 Raw 264.7 cell에 Lipofectamin(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 트랜스펙션(72hrs)하였다. 음성 대조군으로서 si-control(si-RNA duplex with medium GC content (Invitrogen, Cat No.12935-300))을 트랜스펙션한 세포를 제작하였다.
이렇게 제작된 형질전환세포들에서 각각 KRS 또는 LRS의 과발현이나 발현 억제가 제대로 수행되었는지는, 각각의 단백질에 대한 웨스턴블랏을 수행하여 확인되었다(데이터 미도시).
상기 형질전환된 각각의 대식세포에 대하여 Laminin 421을 1μg/ml 씩 사용하여 실시예 1과 동일한 방법으로 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)를 수행하였다.
실험결과 도 4a 및 도 4b에서 보는 바와 같이, KRS 과발현은 LN421 특이적인 단핵구/대식세포 이동을 효과적으로 증가시켰으며, 반대로 si-RNA를 활용한 KRS 발현 감소는 LN421 특이적인 단핵구/대식세포 이동을 효과적으로 감소시켰다. 이에 반하여 KRS 유사 단백질인 leucyl-tRNA synthetase(LRS) 발현 변화는 단핵구/대식세포 이동에 영향을 미치지 않았다. 이는 단핵구/대식세포의 LN421의존적 이동(migration)은 KRS 발현량에 강하게 영향 받는 것을 시사한다.
<실시예 5>
부작용 없이 면역세포의 이동을 억제하는 화합물의 선별_KRS의 세포막으로의 이동 저해 화합물
상기 <실시예 3> 및 <실시예 4>의 결과로부터 단핵구/대식세포의 LN421 의존적 이동에 있어서 KRS의 발현량 뿐만아니라 KRS의 세포 내 행태가 중요하게 영향을 미치며, 특히 KRS가 세포막 쪽으로 이동하여 면역세포 막 영역에서 특이적으로 KRS가 증가되는 현상은 면역세포 이동 및 침윤과 관련된 질환에 대하여 중요한 병리현상인 것으로 사료되었다. 따라서 KRS의 이러한 병리 행태를 억제하는 것이 면역세포 이동 및 침윤과 관련된 질환의 치료적 전략 중의 하나로 적용 가능함을 검증하고자 하였다. 한편, 정상적인 상태에서 KRS는 세포 내에서 단백질을 합성하는데 필요한 기관이다. 따라서 단순히 KRS의 양을 증가하거나 감소시키는 전략은 신체 정상기능에 대한 부작용에 대한 우려로 인하여 실질적인 치료전략으로서 부적절할 가능성이 크다. 이에 본 발명자들은 기존에 KRS의 다양한 측면에서의 활성, 세포 내 동태 및 발현에 영향을 주는 것으로 알려진 다양한 공지의 화합물에 대하여, 부작용 없이 단핵구/대식세포에 이동을 특이적으로 억제 가능한지 검토하였다.
그 결과 본 발명자들은 화학식 1의 핵심 구조(core structure)를 보유하는 화합물들이 KRS의 세포막으로의 이동을 억제하여, LN431 특이적인 단핵구/대식세포 이동을 억제함을 확인하였다. 이의 확인은 구체적으로 다음과 같은 in vitro 실험으로 수행되었다. 본 발명에서 상기 화학식 1로 표시되는 화합물들은 대한민국 공개특허 10-2018-0006167 의 문헌에 따라 제조하여 준비하였다.
다양한 KRS 저해제에 대하여 KRS의 세포막으로의 이동 억제 효과 보유 여부를 확인하기 위해서, 100 파이 플레이트에 RAW 264.7 cell(2 x 106 cell)을 분주하고 18시간동안 배양한 후, serum free-DMEM media에 laminin 421 1μg/ml을 처리하고 다양한 KRS 저해제 각각을 100 nM 처리하여 12 h 배양하였다. harvest 후에 ProteoExtract® Subcellular Proteome Extraction Kit(Calbiotech, cat# 539790)를 사용하여, RAW 264.7 cell protein을 cytosol과 membrane fraction으로 분리하였다. 얻어진 단백질을 전기 영동한 후 PVDF membrane (Milipore) 에 옮겨 3% skim milk로 blocking 하였다. 이후 웨스턴 블롯으로 KRS를 검출하였으며, 구체적인 방법은 <실시예 3>과 동일하게 수행되었다.
이렇게 KRS의 세포막으로의 이동을 억제하는 것으로 규명된 물질을 LN421을 처리한 대식세포에 처리하여, 트랜스웰 세포이동 어세이(transwell migration assay)를 수행하였다. 이를 통해 KRS의 세포막으로의 이동 저해에 의한 LN421 특이적인 단핵구/대식세포의 이동 억제효과를 보유하는지 여부를 확인하였다. 구체적으로, Transwell(Corning, #3421-5mm)을 gelatin (0.5mg/ml)으로 코팅한 후 RAW 264.7 cell(1 x 105 cells/well)을 top chamber에 분주(seeding)하였다. Laminin 421(LN421, Biolamina)을 1㎍/ml 포함하는 Serum Free DMEM 500μl을 bottom chamber에 넣어주었다. 그 후, Upper chamber에 DMSO, 또는 KRS 저해제 화합물 (in DMSO)을 여러 농도(각각 30nM, 100nM, 300nM, 1μM, 3μM)로 처리하였다. 24시간 뒤에 70% methanol을 30min 처리하여 고정(fix)한 후, 50% Hematoxylin으로 30 min동안 염색하였다. membrane의 위쪽에 존재하는 non-migrating 세포를 면봉으로 제거한 뒤, membrane을 취하여 slide에 mounting하였다. membrane의 아랫면에 존재하는 migrating cell을 고배율 현미경에서 관찰하고 정량하였다.
도 5 및 도 6은 상기 화학식 1의 핵심구조를 보유하는 화합물들 중에서도 특히 좋은 효과를 나타낸 BC-KI-00053 화합물(4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산)에 대한 결과를 대표적으로 나타낸다. 도 5에서 보는 바와 같이 LN421의 처리에 의해 세포막 영역에서 KRS의 수준이 높아졌던 것이, BC-KI-00053의 처리에 의하여 현저히 낮아짐을 확인하였다. 이는 라미닌(LN421)에 의해 단핵구/대식세포의 세포막으로 이동했던 KRS의 수준이 감소된 것을 뜻한다.
또한 도 6a 및 도 6b에서 보는 바와 같이, BC-KI-00053(KRS의 세포막으로의 이동저해 화합물)의 농도에 의존적으로 단핵구/대식세포의 이동이 현저히 저해되는 것이 확인되었다.
이하의, 면역세포 이동관련 질환에 대한 in vivo 실험에서는 상기 BC-KI-00053 화합물을 대표로하여 실험을 수행하였다.
<실시예 6>
in vivo
급성 염증성 반응에서 KRS 세포막 이동 저해제가 단핵구/대식세포 침윤에 미치는 영향
<6-1> ear skin wound 모델
급성 염증성 반응에서 단핵구의 침윤에 KRS 세포막 이동 저해제가 미치는 영향을 알아보기 위하여, CX3CR1-GFP 마우스(Stock no. #005582, Jackson Laboratory (Bar Harbor, USA))를 이용한 ear skin wound 모델을 제작하였다. CX3R1-GFP 마우스에서 단핵구, 대식세포 및 랑게르한스 세포는 녹색으로 나타난다. 마우스에 vehicle 또는 BC-KI-00053(100 mg/kg, vehicle에 용해, 1일 1회 투여)를 영상화 2일전부터 총 4일간 경구로 투여하였다(D-2, D-1, D-0, D+1). Vehicle로는 Corn oil:Polyethylene glycol 400: Tween80: Methyl cellulose (1%) = 20: 30: 1: 49로 혼합한 것을 사용하였다. 31G 주사기로 귀 피부에 구멍을 내어(D-0 시점) 급성 염증반응을 유도하였다. Alexa Flour 555가 결합된 항-CD31 항체를 이용하여 혈관을 표지하였다(붉은색으로 확인 가능). 영상화 장비로는 공초점 현미경를 사용하였다.
도 7a 및 도 7b에서 보는 바와 같이, vehicle 처리된 대조군에서는 하얀색 원으로 표시한 상처 부위(귀 구멍 부위) 주변에 단핵구와 대식세포들이 모여들어 높은 수준으로 상당히 넓은 범위에 걸쳐 침윤된 것을 확인할 수 있었다(파란색 원). 이에 대하여, BC-KI-00053을 투여한 마우스에서는 단핵구와 대식세포 침윤 정도가 현저히 감소된 것으로 나타났다. 한편, 도 7a 및 도 7b에서 주요 환부(파란색 원)가 아닌 일반 조직 주위에 흩뿌려진 듯이 나타나는 녹색 점들은 resident macrophage인 Langerhans cell로서, 대조군(vehicle)과 BC-KI-00053 처리군에서 모두 Langerhans cell의 수에는 영향을 미치지 않았으므로, BC-KI-00053의 처리에 의해 migratory macrophage의 이동만이 저해된 것으로 판단되었다. 상기 결과로부터 급성염증반응으로 인한 면역세포들의 이동 및 침윤이 KRS 세포막 이동저해제(특히, BC-KI-00053) 투여에 의해 저해가 된 것을 확인할 수 있었으며, 이는 곧 본 발명의 화합물이 전-염증성 사이토카인을 분비하는 면역세포들의 과도한 이동을 저해하여 염증성 질환에 대해 예방 또는 치료효과를 나타낼 수 있음을 의미한다.
<6-2> 간 허혈-재관류 손상 모델(Liver Ischemia-Reperfusion Injury Model)
허혈성 면역반응에서 단핵구의 침윤에 KRS 세포막 이동 저해제가 미치는 영향을 알아보기 위하여, CX3CR1-GFP 마우스를 이용하여 간 허혈-재관류 손상 모델(Liver Ischemia-Reperfusion Injury Model)을 제작하였다. CX3CR1-GFP 마우스에서 단핵구, 대식세포 및 쿠퍼 세포(kupffer cell)는 녹색으로 나타난다. 마우스에 vehicle 또는 BC-KI-00053(100 mg/kg, vehicle에 용해, 1일 1회 투여)를 영상화 2일전부터 총 3일간 경구투여하였다(D-2, D-1, D-0). vehicle로는 Corn oil(Polyethylene glycol 400: Tween80: Methyl cellulose (1%) = 20: 30: 1: 49)을 사용하였다. 경구투여 3일째(D-0)에 6-0 봉합사(suture)를 사용하여, 도 8a에서 보는 바와 같이 Triad(bile duct, hepatic artery, hepatic vein) occlusion을 수행하였다. 급성염증 유도를 위해 Triad occlusion을 30분 동안 수행하였으며, 이때 봉합사의 양끝에는 3g의 Eppendorf tube를 매달아두었다. 봉합사를 제거하여 재관류(reperfusion) 직후(0h) 및 24h 후에 허혈성 염증부위를 관찰하였으며, 이때 반복 이미징을 위해 Alexa Flour 555가 결합된 항-CD31 항체를 이용하여 혈관을 표지하였다(붉은색으로 확인 가능). 영상화 장비로는 이광자 현미경을 사용하였다.
실험결과 도 8b 및 도 8c에서 보는 바와 같이, vehicle만 처리한 control mouse의 경우 재관류(reperfusion) 24시간 후에 많은 수의 단핵구/대식세포가 상처부위(폐색부위)로 모여들어(recruitment) 침윤된 것이 확인되었다. 반면 BC-KI-00053을 처리한 실험군에서는, 단핵구와 대식세포 침윤 정도가 현저히 감소된 것으로 나타났다. 도 8c 에서 적색 막대는 대조물질(vehicle) 투여군, 녹색 막대는 BC-KI-00053 100 mg/kg 투여군에서 각각 정량화한 결과이다. 한편, 도 8b에서 재관류 0h에서 주로 보이는 일반 조직 주위에 흩뿌려진 듯이 나타나는 매우 밝은 녹색의 세포들은 resident macrophage인 kupffer cell로서, 재관류 24h 후에도 대조군(vehicle)과 BC-KI-00053 처리군에서 모두 kupffer cell의 수에는 영향을 미치지 않았으므로, BC-KI-00053의 처리에 의해 migratory macrophage의 이동만이 저해된 것으로 판단되었다. 즉, KRS 세포막 이동 저해제(특히, BC-KI-00053)는 허혈로 유도된 간으로 이동하는 단핵구/대식세포 침윤만을 저해하는 효과가 탁월하다.
<실시예 7>
In vivo
간 섬유화에 대한 KRS 세포막 이동 저해제의 약리 효과 확인
Actin-DsRed(Stock no. #006051, Jackson Laboratory (Bar Harbor, USA)) 마우스에서 간세포(hepatocyte)는 붉은 색으로 나타난다. 상기 마우스의 간 섬유화를 유도하기 위하여 CCl4(사염화탄소)를 콘 오일(corn oil)에 녹여 20%의 농도로 주 2회, 총 6주간, 복강내주사(Intraperitoneal injection)하였다. CCl4 투여 개시후 3주가 경과한 시점부터 대조물질(vehicle)과 BC-KI-00053(100 mg/kg)을 매일, 경구로, 3주간 투여하였다. Vehicle로는 Corn oil:Polyethylene glycol 400: Tween80: Methyl cellulose (1%) = 20: 30: 1: 49로 혼합한 것을 사용하였다. 동물군은 하기 표 1과 같이 구성하였다.
간 표면 및 내부(30 내지 50㎛ 깊이의 영역)의 섬유화 정도를 intravial imaging의 SHG (Second Harmonic Generation) 기법으로 검출하였다(Excitation : 780 nm, Detection : 390 nm).
구분 | 물질 처리 상태 | 실험 동물 마리 수 |
|
대조군 | (1) | 콘 오일 투여동물(정상동물) + 대조물질(vehicle) 투여 | 1 |
(2) | 콘 오일 투여동물(정상동물) + BC-KI-00053 투여 | 1 | |
실험군 | (3) | CCl4 간 섬유화 동물모델 + 대조물질(vehicle) 투여 | 2 |
(4) | CCl4 간 섬유화 동물모델 + BC-KI-00053 투여 | 3 |
정상동물에 BC-KI-00053를 투여한 군(표 1에서 (2)번 동물)에서는 체중감소가 나타나지 않았고, 또한 간에서 다른 증상이 야기되지 않았다. 따라서 BC-KI-00053 화합물은 in vivo 상에서 무해한 것으로 사료되었다. 섬유화 동물모델에 대조물질(vehicle)을 투여한 군(표 1에서 (3)번 동물들)은 실험개시 후 4주째에 CCl4의 독성으로 인해 조기에 폐사했다. 구체적으로 도 9a에서 보는 바와 같이 총 6주간의 실험기간 중 1마리는 24일째에, 다른 1마리는 32일째에 사망했으며, 이들은 현저한 체중 감소를 보였다. 상기 조기 폐사된 실험군은 이들이 폐사 되기 전에 각각 2주째 및 4주째에 수득한 간 표면 및 내부 섬유화 데이터를 이용하여, 모든 실험이 종료된 후의 데이터 비교에 이용하였다.
일반적으로 심각한 섬유화는 동그랗게 말린(curly) 모습이 아니라 선형(linear)의 형상으로 관찰된다. 도 9b에서 보는 바와 같이, CCl4를 2주 또는 4주간 투여한 결과 간의 표면(도 9b의 상단부(0㎛))에서 상당한 섬유화가 관찰이 되었으며, 특히 CCl4를 4주간 투여한 군에서 선형의 형상이 더욱 많이 나타났으며 격벽(portal-portal septa)이 발견되어 심각한 섬유화가 상당히 진행된 것을 확인할 수 있었다. 또한 간 내부(도 9b의 하단부(30~48㎛))에서도 이와 유사한 섬유화 양상이 나타났으며, 또한 간세포(hepatocyte)가 심각한 수준으로 괴사(necrosis)된 것을 확인하였다. 반면 CCl4를 6주간 투여하는 과정 중 BC-KI-00053을 3주간 처리한 동물군(표 1의 (4)번 동물군)에서는 간 표면 및 내부의의 섬유화가 CCl4 2주 투여군보다도 현저히 감소하여 거의 정상 개체와 유사한 양상의 capsular collagen이 나타나는 것을 확인할 수 있었으며, 또한 간세포 괴사도 현저히 감소된 것을 확인하였다. 도 9b에서 녹색은 콜라겐(섬유화)을, 붉은색은 간세포를 나타낸다. 이러한 실험결과는 본 발명에서 제공하는 KRS 세포막 이동 억제제(특히, BC-KI-00053)가 섬유화 억제능이 우수함을 나타낸다.
<실시예 8>
In
vivo
폐동맥 고혈압(
PAH
)에 대한
KRS
세포막 이동 저해제의 약리 효과 확인
[실험방법]
1. 폐동맥 고혈압(PAH) 모델 제작 및 시험물질 투여
6주령 암컷 SD rat(오리엔트바이오)에 PAH를 유도하기 위하여, 폐동맥의 선택적 손상을 통해 폐동맥고혈압을 유발하는 물질인 MCT(monocrotaline) 60 mg/kg를 피하주사하였다. 이후 4개의 군으로 나누고(각 군당 5마리로 실험), rat에 vehicle, sildenafil(25 mg/kg, 1일 1회 투여) 또는 BC-KI-00053(25 또는 50 mg/kg, vehicle에 용해, 1일 1회 투여)를 3주간 경구투여하였다. Vehicle로는 Corn oil:Polyethylene glycol 400: Tween80: Methyl cellulose (1%) = 20: 30: 1: 49로 혼합한 것을 사용하였다.
2. 혈류 및 혈압 측정
3주 후 rat를 isoflurane으로 마취하고, 동물용 초정밀공압측정시스템(MPVS Cardiovascular Pressure and Volume system, 모델명: MPVS Ultra, 제조사명: Millar Instruments)을 이용하여 혈류와 압력을 측정하였다. 우심실 수축기말 압력 (RVESP) 및 이완기말 압력, 좌심실 수축기말 압력 및 이완기말 압력은 전용 카테터(Mikro-Tip®ratpressurecatheter, 제조사명: Millar Instruments)를 이용하여 측정하였다. 심박출량은 혈관주위(perivascular) 혈류 탐침자(Transonic®Flowprobes, 제조사명: Millar Instruments)를 이용하여 측정하였으며, 이에 대한 실험기법은 하기 문헌에 기재된 것과 동일한 방법으로 수행되었다:Pacher P, Nagayama T, Mukhopadhyay P, Batkai S, Kass DA. Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats. Nat Protoc 2008;3(9):1422-34.
3. 면역조직화학염색(immunohistochemistry, IHC)
각 실험군의 폐 조직을 이용하여 단핵구/ 대식세포 마커인 CD68에 대한 IHC 염색을 수행하였다. 채취한 폐를 통상적인 과정에 따라 PFA(paraformaldehyde)에 고정시킨 후 수세, 탈수, 투명 과정을 거쳐 파라핀 침투시켜 포매하였다. Rat의 폐조직 파라핀 블록을 6μm 두께로 박절하고 슬라이드를 제작하였다. 그 후 다음과 같이 같이 염색을 수행하였다. 먼저 5분간 3회 xylene 처리 후, 100 % 에탄올에서 2분씩 2번, 95 % 에탄올, 90 % 에탄올, 70 % 에탄올, DW 순으로 2분 간 처리하고 PBS로 5분간 washing하였다(2번). 0.3 % H2O2의 처리 후(10분), 샘플을 PBS로 5분 동안 2회 washing하였다. Microwave를 사용하여 pH 6.0의 0.01M citrate buffer에 담가 3분 30초 동안 가열 후, 10초 식히고 10초 가열을 10분간 반복(antigen retrieval) 후 상온에서 20분 cooling하였다. 이후 PBS-T(0.03% Triton-X)로 5분씩 3번 씻어냈다. 이후 30분간 4℃에서 blocking(2 % BSA & 2 % goat serum in PBS)하였다. 항-CD68 항체(1 : 200, Abcam, ab31630)를 4℃에서 overnight 처리하였다. PBS-T로 5분간 3회 세척한 후, polymer-HRP amti-mouse envision kit(DAKO)로 4℃에서 1 시간 처리하였다. PBS-T로 5분씩 3회 세척한 후, DAB substrate buffer 1ml 및 DAB chromogen 20ul 섞어 조직에 처리하고 10분 후에 발색되었을때 3차 D.W로 2분씩 두 번 씻어주었다. 염색 된 조직을 1 분간 Mayer’s hematoxylin(Sigma)으로 처리 한 다음, 70% 에탄올, 90% 에탄올, 95% 에탄올, 100% 에탄올 순서로 각각 2분간 2회 처리하였다. 마지막으로 5분간 3회 xylene 처리한 후 Mounting solution을 이용하여 Mounting 처리하고, 광학현미경으로 관찰하였다.
[실험결과]
폐동맥 고혈압은 폐동맥이 좁아짐으로 인하여 우심실 압력이 상승하며, 결과적으로 우심실 부전을 초래한다. 또한 지속적인 고혈압으로 그 보상 기전이 파괴되면 우심실 비대에 이어 우심실 확장이 일어나게 된다. 이는 심실중격의 이동으로 인한 좌심실의 압박을 가져오게 되고 좌심실의 확장기말 용적 및 심박출량의 감소를 가져오게 된다(이우석 et al., 중증 폐동맥 고혈압 환자의 임상적 특징과 예후 예측 인자, Korean Circulation J 2007;37 :265-270). 결과적으로 폐동맥 고혈압은 주로 우심실과 관계되지만 좌심실의 기능과도 연관된다.
도 10a에서 보는 바와 같이, PAH 동물 모델에서 RVESP(우심실 수축기말 압력)가 증가되어 있는 것을 확인하였으며 이에 대하여 BC-KI-00053의 처리는 농도 의존적으로 유의하게 RVESP를 감소시켰다. 특히 BC-KI-00053 50 mg/kg 처리군에서의 RVESP 강하 효과는 기존 표준 치료제 중 하나인 sildenafil의 효과와 비슷한 수준인 것으로 나타났다.
또한 BC-KI-00053의 처리에 따른 좌심실 수축기말 압력(LVESP) 감소는 관찰되지 않았으며, 오히려 BC-KI-00053 50 mg/kg 투여 군에서는 도 10b에서 보는 바와 같이 LVESP가 증가되는 결과를 보였으나 통계적으로 유의한 수준은 아니었다. 이는 기존 폐동맥 고혈압의 치료제로 사용되고 있는 sildenafil의 경우 폐동맥의 확장뿐만 아니라, 전신동맥의 확장도 유발하여 전신 혈압(systemic blood pressure)을 저하시킬 위험이 있는 것과 대비되는 것이다. 즉, BC-KI-00053는 sildenafil과 비교하여 전신 동맥압(systemic artery pressure)에 미치는 영향이 낮은 경향성을 보이는 것을 확인하였으며, 이러한 효과는 임상현장에서 sildenafil 투여 시 저혈압 발생 위험을 염려하는 상황이 있음을 고려하였을 때, 치료약제의 유리한 특성이 될 것으로 사료되었다. 뿐만 아니라, 폐동맥 고혈압이 심한 경우 우심실 부전(right ventricular failure)이 발생함에 따라, 낮은 심박출량(cardiac output) 및 전신 저혈압(systemic hypotension)이 동반될 수 있다. 이에 대하여 BC-KI-00053을 더 높은 농도로 이용해 폐동맥 고혈압을 호전시키는 치료에 의해 심박출량(cardiac output)과 전신 혈압(systemic blood pressure)이 상승되는 효과를 발휘할 수 있을 수 있을 것으로 예상된다. 심박출량 및 전신 혈압이 저하되면 환자가 전신 쇠약감이나 어지러움을 호소할 수 있기 때문에, 심박출량과 전신 혈압의 호전을 통해 이러한 증상의 개선 또한 기대할 수 있다.
종합하여, 이로서 본 발명에서 제공하는 KRS 세포막 이동 저해제(특히 BC-KI-00053)의 투여는 PAH 치료 효과 및 증상 완화를 보일 뿐 아니라 기존 치료 약물이 지니는 부작용의 발생 위험이 상대적으로 적을 수 있음을 확인하였다.
또한 도 10c에서 보는 바와 같이 각 실험군의 폐 조직을 이용하여 단핵구/ 대식세포 마커인 CD68에 대한 IHC 염색을 수행한 결과, 폐동맥고혈압(PAH) 마우스의 폐에는 단핵구/대식세포 침윤이 높은 수준으로 일어나 있는 것을 확인하였다. 이에 대하여 본 발명에서 제공하는 KRS 세포막 이동 억제제(특히, BC-KI-00053)의 처리는 단핵구/대식세포의 폐 조직 침윤을 명확하게 감소시켰음을 확인하였으며, 이러한 효과는 기존에 폐동맥고혈압에 치료 효과가 있는 것으로 알려진 sildenafil 보다 현저히 우수함을 확인하였다.
<실시예 9>
in
vivo
고혈압 유발성 단백뇨, 사구체 경화증, 신장 및 심장 섬유증에 대한
KRS
세포막 이동 저해제의 약리 효과 확인
<9-1> 중복 고혈압(superimposed hypertension)인
FHH
랫드에서
KRS
세포막 이동 저해제가 고혈압 신장손상, 심장손상 및 섬유화 발달에 미치는 영향
[실험방법]
실험은 9-12 주령의 수컷 FHH 래트(rat)를 이용하여 수행되었다. 이들 실험동물은 University of Mississippi Medical Center에서 제공받았고, American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC)로부터 승인을 받았다. 모든 프로토콜(protocol)들은 Institutional Animal Care and Use Committee of the University of Mississippi Medical Center의 승인을 받았다. 랫트들은 음식과 물이 자유급식되었으며, 이들 랫트들은 이유(weaning) 후에 0.4% NaCl(Dyets, Bethlehem, PA)을 함유하는 정제된 AIN-76 설치류 사료가 제공되었다. fawn-hooded hypertensive (FHH) rat은 사구체 과여과 및 단백뇨와 관련된 자발절 고혈압의 유전적 모델이다. 상기 래트에서 사구체 손상을 촉진시키기 위하여, 단일(한쪽)신장적출을 수행한 후 DOCA strip을 이식하였다.
구체적으로, FHH 래트를 isoflurane으로 마취시키고 telemetry transmitter(모델 TA11PAC40, Data Sciences International, St. Paul, MN)를 ‘Williams, J. M. et al. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol(2012)’에 기술된 대로 이식하였다. 간략히 설명하면, 수술은 2~3% isoflurane-O2 하에서 수행되었고, 장치의 카테터는 왼쪽 대퇴 동맥에 삽입되어 대동맥으로가는 상류로 향하게되었다(guided). telemetry unit의 몸체를 왼쪽 다리의 측면 공간(lateral cavity)에 위치시키고 근육 조직으로 봉합했다. 그 후 피부를 봉합하였다. 감염을 예방하기 위해 동물에게 Baytril(10 mg/kg)을 제공하고 수술적 통증을 조절하기 위해 장시간 지속되는 진통제인 Rimadyl(5 mg/kg)을 제공하였다. 수술 후, 래트들은 12:12-h의 명암 사이클의 조용한 항온항습실(air-conditioned room) 환경인 개별 케이지에 수용되었고 수술로부터 완전히 회복하기까지 1 주일이 걸렸다. 그런 다음, 래트들을 metabolic cage에 수용하기 전에 기본 MAP(mean arterial blood pressure)와 단백뇨를 4시간(오전 10시 부터 오후 2시 까지)동안 측정하였다. 단백뇨는 Bradford 방법과 BSA (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)를 표준으로 사용하여 측정되었다.
transmitter 삽입 1주일 후, 래트들은 Wang, X. et al. Am J Physiol Renal Physiol(2016)에 기재된 바와 같이 단일 신장 적출(uninephrectomize)되었다. 간략하게, 래트들을 2~3% isoflurane-O2로 마취시키고, 무균 상태에서 오른쪽 옆구리를 절개했다. 우측 신장을 부드럽게 들어올리고, 신장 혈관과 요관 주위에 실을 단단히 묶었다. 신장 혈관과 요관의 말단 부분을 잘라내어 신장을 적출하였다. 절개된 부분을 연속적인 피하 스티치(stitch)로 봉합하고, 그 후 피부를 추가로 봉합하였다. 쥐의 우측 신장이 제거 된 후, DOCA 펠렛(200 mg, Innovative Research of America)을 목 부위에 피하 이식하였다.
단일 신장 적출 및 DOCA 이식 수술 후, 래트들은 3일 동안 회복시간을 가졌다. 그런 다음, 기존에 래트들에 증류수를 제공했던 것을, 1 % NaCl을 함유한 물로 전환하여 제공하고 무작위로 두 개의 실험군으로 나누었다: Group 1(n = 15)은 위장관 직접 투여(gavage)를 통해 BC-KI-00053(매일 25mg/kg)이 처리되었다; Group 2(n = 15)는 동일한 부피(하루 2.5ml/kg)의 vehicle(corn oil, polyethylene glycol 400, Tween 80 and methylcellulose)이 위장관 직접 투여되었다. 상기 실험군에서 혈압과 단백뇨를 3주 동안 매주 측정 하였다. 실험 종료 시점에서, 래트들을 isoflurane으로 마취시키고 혈액 샘플을 채취하여 크레아티닌 수치를 측정하였다. 그런 다음 래트들은 대동맥을 통해 0.9 % NaCl 50ml로 플러시되었고(flushed), 4 % 파라 포름 알데히드 20ml로 관류고정시켰다. 조직학적 평가를 위해 신장과 심장을 수집하였다.
3μm 두께로 제작된 파라핀 절편을 Masson's trichrome으로 염색하여 사구체 손상 및 신장 간질 섬유화(renal interstitial fibrosis)의 정도를 측정하였다. 이미지는 Nikon DS-Fi1 컬러 카메라(Nikon, Melville, NY) 및 NIS-Elements D 3.0 소프트웨어가 있는 Nikon Eclipse 55i 현미경을 사용하여 수득하였다. 사구체 손상의 정도는 30-40 사구체/절편에 대하여 실험자가 선입견 없이 0 내지 4+ 로 평가하였다. 0은 정상 사구체를 나타내며, 1+는 1-25% 손실을 나타내고, 2+는 26-50% 손실을 나타내며, 3+는 51-75 % 손실을 나타내고, 4+는 다발(tuft) 내의 모세혈관 손실이 75 % 이상인 것을 나타낸다. 피질 및 수질 섬유증은 파란색으로 염색 된 이미지의 백분율을 측정하기 위해 thresholding 후 NIS-Elements 자동 측정 소프트웨어를 사용하여 분석되었다. 또한 신장 조직에 대하여 단핵구/ 대식세포 마커인 CD68에 대한 면역조직화학염색(IHC)은 상기 실시예 8과 같은 방법으로 수행되었다.
통계: 각 데이터들은 mean±SEM으로 나타내었다. 각 그룹간의 비교는 two-tailed test에 의하여 분석되었다. P value<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
[실험결과]
Vehicle 처리군과 BC-KI-00053 처리군(대조군 309.57 ± 4.14 g, 실험군 304.7 ± 5.39 g, P> 0.05) 사이의 기본 체중에는 차이가 없었다. 연구 기간 동안 vehicle 또는 BC-KI-00053 처리한 래트들에서 체중은 약 10 % 감소했지만 두 그룹간에 통계적으로 차이는 없었다(도 11a).
대조군 및 실험군 FHH 래트에서 telemetry를 통해 측정된 MAP 데이터가 도 11b에 제시되어있다. 두 군 간의 기본 MAP에는 차이가 없었다 (대조군 120.50 ± 0.91mmHg, 실험군 120.1 ± 0.62mmHg, P> 0.05). 단일신장절제술 후 DOCA 펠렛 삽입술과 함께 1 % NaCl 급수로 전환 된 후에, 양 군에서 MAP가 급속히 증가 하였다. Vehicle 처리군은 BC-KI-00053 처리군에 비해 MAP가 더 큰 격차로 증가되었다. 처리 1주 후, BC-KI-00053 처리군의 MAP는 vehicle 처리군보다 통계적으로 낮았다(대조군 184.34 ± 2.46 mmHg, 실험군 174.4 ± 3.83 mmHg, P <0.05). 처리 2주 후에 vehicle 처리군에서의 MAP 결과는 첫번째 주의 결과와 비교하여 상대적으로 안정한 것으로 보였다. BC-KI-00053 투여군의 MAP는 일시적이지만 더욱 감소한 것으로 나타 났으며 두 군간에 유의 한 차이를 보였다 (대조군 184.22 ± 4.21 mmHg, 실험군 168.8 ± 3.74 mmHg, P <0.05). 3 주 후, 두 그룹 간의 평균 MAP 차이가 더 벌어졌다(대조군 195.30 ± 3.68 mmHg, 실험군 176.9 ± 5.83 mmHg, P <0.05).
대조군 및 실험군 FHH 래트에서 단백뇨에 대한 데이터가 도 11c에 제시되어있다. 두 군 사이의 기본(baseline) 단백뇨 정도에는 차이가 없었다.(대조군 52.75 ± 6.99 mg/day, 실험군 51.0 ± 4.9 mg mg/day, P> 0.05). 단일신장절제술 후 DOCA 펠렛 삽입술과 함께 1 % NaCl 급수로 전환 된 후에, 양 군에서 단백뇨가 일정하게 증가하였다. 시험물질 처리 2 주 후에, BC-KI-00053 처리군에서의 단백뇨는 vehicle 처리군과 비교하여 통계적으로 낮아졌으며(대조군 472.99 ± 53.81 mg/day, 실험군 285.5 ± 47.48mg/day, P<0.05 ), 연구 종료까지 계속되었다(대조군 675.61±49.91 mg/day, 대조군 433.1±60.59 mg/day, P <0.05)
대조군 및 실험군 FHH 래트에서 혈장 크레아티닌 농도에 대한 데이터가 도 11d에 제시되어있다. Vehicle 처리군에서의 혈장 크레아티닌 농도는 BC-KI-00053 처리군보다 유의하게 높았다(대조군 0.65±0.04 mg/dL, 실험군 0.48±0.02 mg/dL, P <0.05).
FHH rat에 단일신장절제술 후 DOCA 펠렛 삽입술과 함께 1 % NaCl 급수로 전환한 것은, 형태학적으로 사구체 및 관상 손상에 상당한 영향을 주었다(도 11e, 도 11f, 도 11g). 평균 사구체 손상 점수(score)는 BC-KI-00053을 처리한 래트에서 손상 정도가 유의하게 감소되었음을 보여주었다(대조군 3.16 ± 0.04, 실험군 1.49 ± 0.05, P <0.05). 또한 vehicle 처리군에서 상당한 섬유화가 진행된 것과 달리 BC-KI-00053 처리군에서는 섬유화가 유의하게 현저히 감소되었다. 구체적으로 BC-KI-00053 처리된 래트에서 피질의 섬유화가 현저히 적은 것으로 나타났으며(대조군 19.46±1.18%, 실험군 5.79±0.48%, P <0.05), 신장 수질 섬유화 및 관상 손상에있어서 직혈관 모세혈관 손실이 현저히 감소된 것으로 나타났다(대조군 17.69±1.07%, 실험군 7.40±0.56%, P <0.05).
Sirius red로 염색한 절편시료(도 11h)에서 보는 바와 같이, 대조군 랫트는 특히 우심실 삽입 지점에서 현저한 심장 섬유증을 나타내었다. 이에 대하여 BC-KI-00053을 처리한 랫트에서는 심장 섬유화의 비율이 유의하게 감소되었다(대조군31.97±2.62%, 실험군 9.14±2.18%, P<0.05).
또한 대식세포 침윤 정도를 확인한 결과 도 11i에서 보는 바와 같이, 신장조직을 이용하여 단핵구/ 대식세포 마커인 CD68에 대한 IHC 염색을 수행한 결과, 대조군(vehicle 처리)의 신장조직에서는 단핵구/대식세포 침윤이 높은 수준으로 일어나 있는 것을 확인하였다. 이에 대하여 본 발명에서 제공하는 KRS 세포막 이동 억제제(특히, BC-KI-00053)의 처리는 단핵구/대식세포의 신장 조직 침윤을 현저하게 감소시킴을 확인하였다.
<9-2> SS
래트에서
KRS
세포막 이동 저해제가 고혈압 신장손상, 심장손상 및 섬유화 발달에 미치는 영향
9-12주령의 수컷 SS 래트를 이용하여 실험을 수행하였다. 이들 실험동물은 University of Mississippi Medical Center에서 제공받았고, American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC)로부터 승인을 받았다. 모든 프로토콜(protocol)들은 Institutional Animal Care and Use Committee of the University of Mississippi Medical Center의 승인을 받았다. 랫트들은 음식과 물이 자유급식되었으며, 이들 랫트들은 이유(weaning) 후에 0.4% NaCl(Dyets, Bethlehem, PA)을 함유하는 정제된 AIN-76 설치류 사료가 제공되었다. Dahl salt-sensitive (SS) rat는 high salt(HS) 식이를 하였을 때 심한 고혈압, 단백뇨, 사구체 경화증 및 신장 간질 섬유화를 빠르게 유발하는 동물 모델이다.
SS 래트를 isoflurane으로 마취시키고 telemetry transmitters(모델 TA11PAC40, Data Sciences International, St. Paul, MN)를 전술한 바와 동일한 방법으로 무균적으로 이식하였다. 수술 후, 래트들은 12:12-h의 명암 사이클의 조용한 항온항습실(air-conditioned room) 환경인 개별 케이지에 수용되었고 수술로부터 완전히 회복하기까지 1 주일이 걸렸다. 그런 다음, 뇨단백 배설을 측정하기 위해 래트들을 metabolic cage에 수용하기 전에 기본 MAP(mean arterial blood pressure)를 측정하였다. 단백뇨는 Bradford 방법과 BSA (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)를 표준으로 사용하여 측정되었다.
그리고나서 래트들을 무작위 두 개의 실험군으로 나누었다: Group 1(n = 15)은 위장관 직접 투여(gavage)를 통해 BC-KI-00053(매일 25mg/kg)이 처리되었다; Group 2(n = 15)는 동일한 부피(하루 2.5ml/kg)의 vehicle(corn oil, polyethylene glycol 400, Tween 80 and methylcellulose)이 위장관 직접투여되었다. 상기 물질처리와 동시에 사료를 8% NaCl을 포함하는 HS 사료(Dyets, Bethlehem, PA)로 바꾸었고, HS 사료 급여 후 7, 14 및 21일째에 혈압 및 단백뇨를 측정하였다. 실험 종료 시점에서, 래트들을 isoflurane으로 마취시키고 혈액 샘플을 채취하여 크레아티닌 수치를 측정하였다. 그런 다음 래트들은 대동맥을 통해 0.9 % NaCl 50ml로 플러시되었고(flushed), 4 % 파라포름알데히드 20ml로 관류고정시켰다. 조직학적 평가를 위해 신장과 심장을 수집하였다.
파라핀 절편 제작 및 이들로부터 사구체 손상 정도, 피질 및 수질 섬유증에 대한 평가는 전술한 바와 동일하게 수행되었다. 또한 신장 조직에 대하여 단핵구/ 대식세포 마커인 CD68에 대한 면역조직화학염색(IHC)은 상기 실시예 8과 같은 방법으로 수행되었다.
통계: 각 데이터들은 mean±SEM으로 나타내었다. 각 그룹간의 비교는 two-tailed test에 의하여 분석되었다. P value<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
[실험결과]
Vehicle 처리군과 BC-KI-00053 처리군 사이의 기본 체중에는 차이가 없었다(대조군 337.92±9.86 g, 실험군 350.13±9.173 g, P> 0.05). Vehicle 또는 BC-KI-00053 처리한 래트들에서 체중이 유지되거나 또는 다소 증가하였지만 전체 연구 기간동안 두 그룹간에 통계적으로 차이는 없었다(도 12a).
대조군 및 실험군 SS 래트에서 telemetry를 통해 측정된 MAP 데이터가 도 12b에 제시되어있다. 두 군 간의 기본 MAP에는 차이가 없었다 (대조군 122.13±2.31 mmHg, 실험군 123.45±2.36 mmHg, P> 0.05). SS 래트의 사료를 HS 사료로 바꾸었을 때 양 군에서 MAP가 지속적으로 증가하였다. Vehicle 처리군은 BC-KI-00053 처리군에 비해 MAP가 더 큰 격차로 증가되었다. 처리 2주 후, BC-KI-00053 처리군의 MAP가 vehicle 처리군보다 통계적으로 감소된 것을 확인하였고(대조군 178.51±3.71 mmHg, 실험군 164.43±3.00 mmHg, P <0.05), 이러한 효과는 실험이 종료될때까지 계속되었다(대조군 201.65±2.54 mmHg, 178.48±3.49 mmHg, P <0.05).
대조군 및 실험군 SS 래트에서 단백뇨에 대한 데이터가 도 12c에 제시되어있다. 두 군 사이의 기본(baseline) 단백뇨 정도에는 차이가 없었다(대조군 133.82±10.50 mg/day, 실험군 113.27±8.06 mg/day, P> 0.05). SS 래트의 사료를 HS 사료로 바꾸자 양 군에서 단백뇨가 급격하게 증가하였다. 특히 vehicle 처리군에서는 BC-KI-00053 처리군과 비교하여 단백뇨가 현저하게 높은 수준으로 증가된 것을 확인하였다. 시험물질 처리 1주일 후 BC-KI-00053 처리군에서의 단백뇨는 vehicle 처리군과 비교하여 통계적으로 낮아진 것을 확인하였다(대조군 469.08±24.82 mg/day, 실험군 302.86±29.76 mg/day, P<0.05). 시험물질 처리 2 주 후에도, BC-KI-00053 처리군과 vehicle 처리군에서의 단백뇨 수준이 여전히 명확히 차이났으며(대조군 675.61±59.67 mg/day, 실험군 510.64±42.42 mg/day, P<0.05), 연구 종료까지 계속되었다(대조군 752.97±57.80 mg/day, 대조군 524.55±44.70 mg/day, P <0.05)
대조군 및 실험군 SS 래트에서 혈장 크레아티닌 농도에 대한 데이터가 도 12d에 제시되어있다. Vehicle 처리군에서의 혈장 크레아티닌 농도는 BC-KI-00053 처리군보다 유의하게 높았다(대조군 0.60±0.02 mg/dL, 실험군 0.55±0.01 mg/dL, P <0.05).
HS diet를 제공한 것은, SS rat에 형태학적으로 사구체 및 관상 손상에 상당한 영향을 주었다(도 12e, 도 12f, 도 12g). 평균 사구체 손상 점수(score)는 BC-KI-00053을 처리한 래트에서 손상 정도가 유의하게 감소되었음을 보여주었다(대조군 2.82±0.05, 실험군 1.34±0.04, P <0.05). 또한 vehicle 처리군에서 상당한 섬유화가 진행된 것과 달리 BC-KI-00053 처리군에서는 섬유화가 유의하게 현저히 감소되었다. 구체적으로 BC-KI-00053 처리된 래트에서 피질의 섬유화가 현저히 적은 것으로 나타났으며(대조군 19.48±0.96%, 실험군 6.47±0.46%%, P <0.05), 신장 수질 섬유화 및 관상 손상에있어서 직혈관 모세혈관 손실이 현저히 감소된 것으로 나타났다(대조군 23.49±0.99%, 실험군 12.33±0.78%, P <0.05).
Sirius red로 염색한 절편시료(도 12h)에서 보는 바와 같이, 대조군 랫트는 특히 우심실 삽입 지점에서 현저한 심장 섬유증을 나타내었다. 이에 대하여 BC-KI-00053을 처리한 랫트에서는 심장 섬유화의 비율이 유의하게 감소되었다(대조군18.60±0.93%, 실험군 6.63±0.94%, P<0.05).
또한 대식세포 침윤 정도를 확인한 결과 도 12i에서 보는 바와 같이, 신장조직을 이용하여 단핵구/ 대식세포 마커인 CD68에 대한 IHC 염색을 수행한 결과, 대조군(vehicle 처리)의 신장조직에서는 단핵구/대식세포 침윤이 높은 수준으로 일어나 있는 것을 확인하였다. 이에 대하여 본 발명에서 제공하는 KRS 세포막 이동 억제제(특히, BC-KI-00053)의 처리는 단핵구/대식세포의 신장 조직 침윤을 현저하게 감소시킴을 확인하였다.
<실시예 10>
KRS
세포막 이동 저해제가
in
vivo
알포트
증후군 동물모델에서의 신장의 섬유화와 면역세포의 침윤에 미치는 영향
실험은 129 Sv/J 마우스(Boys town hospital)를 이용하여 진행하였다. 실험동물은 (i) 129 Sv/J 야생형 마우스 대조물질(0.5% 메틸셀룰로오스 현탁액) 투여군, (ii) 129 Sv/J 알포트 마우스(COL4A3 knockout mouse. Cosgrove D et al., Genes Dev. 1996 Dec 1;10(23):2981-92 참조하여 수득)에 대조물질(0.5% 메틸셀룰로오스 현탁액) 투여군 및 (iii) 129 Sv/J 알포트 마우스에 BC-KI-00053 투여군으로 구성하였다. 각각의 투여군은 두 마리로 이루어져 있다. BC-KI-00053 투여군의 경우 0.5% 메틸셀룰로오스 현탁액에 녹여 100 mg/kg의 농도로 경구 투여를 진행하였으며, 신장의 섬유화와 면역세포의 침윤을 평가하였다. 각각의 동물군은 3주령 때부터 매일 1회씩 총 4주간 대조물질 또는 약물을 처리하였다. 4주간의 약물처리 이후에, 신장 파라핀 절편을 콜라겐 I(섬유화의 마커) 및 CD45로 염색하여 백혈구의 침윤의 정도를 관찰하였다. 섬유화 및 침윤 확인은 전술한 실시예들에서 사용한 방법과 동일하게 수행되었다.
도 13에서 확인할 수 있는 바와 같이, 알포트 마우스에 대조물질(vehicle, 0.5% 메틸셀룰로오스)을 투여한 군에서는 신장에서 백혈구의 침윤과 섬유화가 현저하게 진행된 것을 확인할 수 있었다. 이에 반해, BC-KI-00053을 처리한 알포트 마우스 신장에서는 정상(야생형 마우스-대조물질 투여군)수준으로 백혈구의 침윤이 줄어들고 섬유화도 감소한 것을 확인할 수 있었다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은, 본 발명에서 개시하는 특유의 구조를 가지는 벤조[d]싸이아졸 유도체들의 신규한 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 화학식 1의 구조를 가지는 벤조[d]싸이아졸 유도체의 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다. 화학식 1의 화합물은 면역세포의 이동을 조절할 수 있으며, 이에 따라 면역세포 이동과 관련한 질환의 예방, 개선 및 치료 등에 있어서 매우 현저한 효과를 나타내므로 의약 산업 등에서 산업상 이용가능성이 높다.
<110> Medicinal Bioconvergence Research Center
Korea Advanced Institute of Science and Technology
SEOUL NATIONAL UNIVERSITY HOSPITAL
<120> Pharmaceutical composition for preventing or treating immunocyte
migration-related diseases comprising benzo[d]thiazole
derivatives
<130> NP17-0123
<160> 14
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 597
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of KRS (Homo sapiens)
<400> 1
Met Ala Ala Val Gln Ala Ala Glu Val Lys Val Asp Gly Ser Glu Pro
1 5 10 15
Lys Leu Ser Lys Asn Glu Leu Lys Arg Arg Leu Lys Ala Glu Lys Lys
20 25 30
Val Ala Glu Lys Glu Ala Lys Gln Lys Glu Leu Ser Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Ser Gln Ala Thr Ala Ala Ala Thr Asn His Thr Thr Asp Asn Gly Val
50 55 60
Gly Pro Glu Glu Glu Ser Val Asp Pro Asn Gln Tyr Tyr Lys Ile Arg
65 70 75 80
Ser Gln Ala Ile His Gln Leu Lys Val Asn Gly Glu Asp Pro Tyr Pro
85 90 95
His Lys Phe His Val Asp Ile Ser Leu Thr Asp Phe Ile Gln Lys Tyr
100 105 110
Ser His Leu Gln Pro Gly Asp His Leu Thr Asp Ile Thr Leu Lys Val
115 120 125
Ala Gly Arg Ile His Ala Lys Arg Ala Ser Gly Gly Lys Leu Ile Phe
130 135 140
Tyr Asp Leu Arg Gly Glu Gly Val Lys Leu Gln Val Met Ala Asn Ser
145 150 155 160
Arg Asn Tyr Lys Ser Glu Glu Glu Phe Ile His Ile Asn Asn Lys Leu
165 170 175
Arg Arg Gly Asp Ile Ile Gly Val Gln Gly Asn Pro Gly Lys Thr Lys
180 185 190
Lys Gly Glu Leu Ser Ile Ile Pro Tyr Glu Ile Thr Leu Leu Ser Pro
195 200 205
Cys Leu His Met Leu Pro His Leu His Phe Gly Leu Lys Asp Lys Glu
210 215 220
Thr Arg Tyr Arg Gln Arg Tyr Leu Asp Leu Ile Leu Asn Asp Phe Val
225 230 235 240
Arg Gln Lys Phe Ile Ile Arg Ser Lys Ile Ile Thr Tyr Ile Arg Ser
245 250 255
Phe Leu Asp Glu Leu Gly Phe Leu Glu Ile Glu Thr Pro Met Met Asn
260 265 270
Ile Ile Pro Gly Gly Ala Val Ala Lys Pro Phe Ile Thr Tyr His Asn
275 280 285
Glu Leu Asp Met Asn Leu Tyr Met Arg Ile Ala Pro Glu Leu Tyr His
290 295 300
Lys Met Leu Val Val Gly Gly Ile Asp Arg Val Tyr Glu Ile Gly Arg
305 310 315 320
Gln Phe Arg Asn Glu Gly Ile Asp Leu Thr His Asn Pro Glu Phe Thr
325 330 335
Thr Cys Glu Phe Tyr Met Ala Tyr Ala Asp Tyr His Asp Leu Met Glu
340 345 350
Ile Thr Glu Lys Met Val Ser Gly Met Val Lys His Ile Thr Gly Ser
355 360 365
Tyr Lys Val Thr Tyr His Pro Asp Gly Pro Glu Gly Gln Ala Tyr Asp
370 375 380
Val Asp Phe Thr Pro Pro Phe Arg Arg Ile Asn Met Val Glu Glu Leu
385 390 395 400
Glu Lys Ala Leu Gly Met Lys Leu Pro Glu Thr Asn Leu Phe Glu Thr
405 410 415
Glu Glu Thr Arg Lys Ile Leu Asp Asp Ile Cys Val Ala Lys Ala Val
420 425 430
Glu Cys Pro Pro Pro Arg Thr Thr Ala Arg Leu Leu Asp Lys Leu Val
435 440 445
Gly Glu Phe Leu Glu Val Thr Cys Ile Asn Pro Thr Phe Ile Cys Asp
450 455 460
His Pro Gln Ile Met Ser Pro Leu Ala Lys Trp His Arg Ser Lys Glu
465 470 475 480
Gly Leu Thr Glu Arg Phe Glu Leu Phe Val Met Lys Lys Glu Ile Cys
485 490 495
Asn Ala Tyr Thr Glu Leu Asn Asp Pro Met Arg Gln Arg Gln Leu Phe
500 505 510
Glu Glu Gln Ala Lys Ala Lys Ala Ala Gly Asp Asp Glu Ala Met Phe
515 520 525
Ile Asp Glu Asn Phe Cys Thr Ala Leu Glu Tyr Gly Leu Pro Pro Thr
530 535 540
Ala Gly Trp Gly Met Gly Ile Asp Arg Val Ala Met Phe Leu Thr Asp
545 550 555 560
Ser Asn Asn Ile Lys Glu Val Leu Leu Phe Pro Ala Met Lys Pro Glu
565 570 575
Asp Lys Lys Glu Asn Val Ala Thr Thr Asp Thr Leu Glu Ser Thr Thr
580 585 590
Val Gly Thr Ser Val
595
<210> 2
<211> 1794
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence of KRS
<400> 2
atggcggccg tgcaggcggc cgaggtgaaa gtggatggca gcgagccgaa actgagcaag 60
aatgagctga agagacgcct gaaagctgag aagaaagtag cagagaagga ggccaaacag 120
aaagagctca gtgagaaaca gctaagccaa gccactgctg ctgccaccaa ccacaccact 180
gataatggtg tgggtcctga ggaagagagc gtggacccaa atcaatacta caaaatccgc 240
agtcaagcaa ttcatcagct gaaggtcaat ggggaagacc catacccaca caagttccat 300
gtagacatct cactcactga cttcatccaa aaatatagtc acctgcagcc tggggatcac 360
ctgactgaca tcaccttaaa ggtggcaggt aggatccatg ccaaaagagc ttctggggga 420
aagctcatct tctatgatct tcgaggagag ggggtgaagt tgcaagtcat ggccaattcc 480
agaaattata aatcagaaga agaatttatt catattaata acaaactgcg tcggggagac 540
ataattggag ttcaggggaa tcctggtaaa accaagaagg gtgagctgag catcattccg 600
tatgagatca cactgctgtc tccctgtttg catatgttac ctcatcttca ctttgggctc 660
aaagacaagg aaacaaggta tcgccagaga tacttggact tgatcctgaa tgactttgtg 720
aggcagaaat ttatcatccg ctctaagatc atcacatata taagaagttt cttagatgag 780
ctgggattcc tagagattga aactcccatg atgaacatca tcccaggggg agccgtggcc 840
aagcctttca tcacttatca caacgagctg gacatgaact tatatatgag aattgctcca 900
gaactctatc ataagatgct tgtggttggt ggcatcgacc gggtttatga aattggacgc 960
cagttccgga atgaggggat tgatttgacg cacaatcctg agttcaccac ctgtgagttc 1020
tacatggcct atgcagacta tcacgatctc atggaaatca cggagaagat ggtttcaggg 1080
atggtgaagc atattacagg cagttacaag gtcacctacc acccagatgg cccagagggc 1140
caagcctacg atgttgactt caccccaccc ttccggcgaa tcaacatggt agaagagctt 1200
gagaaagccc tggggatgaa gctgccagaa acgaacctct ttgaaactga agaaactcgc 1260
aaaattcttg atgatatctg tgtggcaaaa gctgttgaat gccctccacc tcggaccaca 1320
gccaggctcc ttgacaagct tgttggggag ttcctggaag tgacttgcat caatcctaca 1380
ttcatctgtg atcacccaca gataatgagc cctttggcta aatggcaccg ctctaaagag 1440
ggtctgactg agcgctttga gctgtttgtc atgaagaaag agatatgcaa tgcgtatact 1500
gagctgaatg atcccatgcg gcagcggcag ctttttgaag aacaggccaa ggccaaggct 1560
gcaggtgatg atgaggccat gttcatagat gaaaacttct gtactgccct ggaatatggg 1620
ctgcccccca cagctggctg gggcatgggc attgatcgag tcgccatgtt tctcacggac 1680
tccaacaaca tcaaggaagt acttctgttt cctgccatga aacccgaaga caagaaggag 1740
aatgtagcaa ccactgatac actggaaagc acaacagttg gcacttctgt ctag 1794
<210> 3
<211> 1176
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of LRS (Homo sapiens)
<400> 3
Met Ala Glu Arg Lys Gly Thr Ala Lys Val Asp Phe Leu Lys Lys Ile
1 5 10 15
Glu Lys Glu Ile Gln Gln Lys Trp Asp Thr Glu Arg Val Phe Glu Val
20 25 30
Asn Ala Ser Asn Leu Glu Lys Gln Thr Ser Lys Gly Lys Tyr Phe Val
35 40 45
Thr Phe Pro Tyr Pro Tyr Met Asn Gly Arg Leu His Leu Gly His Thr
50 55 60
Phe Ser Leu Ser Lys Cys Glu Phe Ala Val Gly Tyr Gln Arg Leu Lys
65 70 75 80
Gly Lys Cys Cys Leu Phe Pro Phe Gly Leu His Cys Thr Gly Met Pro
85 90 95
Ile Lys Ala Cys Ala Asp Lys Leu Lys Arg Glu Ile Glu Leu Tyr Gly
100 105 110
Cys Pro Pro Asp Phe Pro Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Thr Ser
115 120 125
Val Lys Thr Glu Asp Ile Ile Ile Lys Asp Lys Ala Lys Gly Lys Lys
130 135 140
Ser Lys Ala Ala Ala Lys Ala Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Trp Gly Ile
145 150 155 160
Met Lys Ser Leu Gly Leu Ser Asp Glu Glu Ile Val Lys Phe Ser Glu
165 170 175
Ala Glu His Trp Leu Asp Tyr Phe Pro Pro Leu Ala Ile Gln Asp Leu
180 185 190
Lys Arg Met Gly Leu Lys Val Asp Trp Arg Arg Ser Phe Ile Thr Thr
195 200 205
Asp Val Asn Pro Tyr Tyr Asp Ser Phe Val Arg Trp Gln Phe Leu Thr
210 215 220
Leu Arg Glu Arg Asn Lys Ile Lys Phe Gly Lys Arg Tyr Thr Ile Tyr
225 230 235 240
Ser Pro Lys Asp Gly Gln Pro Cys Met Asp His Asp Arg Gln Thr Gly
245 250 255
Glu Gly Val Gly Pro Gln Glu Tyr Thr Leu Leu Lys Leu Lys Val Leu
260 265 270
Glu Pro Tyr Pro Ser Lys Leu Ser Gly Leu Lys Gly Lys Asn Ile Phe
275 280 285
Leu Val Ala Ala Thr Leu Arg Pro Glu Thr Met Phe Gly Gln Thr Asn
290 295 300
Cys Trp Val Arg Pro Asp Met Lys Tyr Ile Gly Phe Glu Thr Val Asn
305 310 315 320
Gly Asp Ile Phe Ile Cys Thr Gln Lys Ala Ala Arg Asn Met Ser Tyr
325 330 335
Gln Gly Phe Thr Lys Asp Asn Gly Val Val Pro Val Val Lys Glu Leu
340 345 350
Met Gly Glu Glu Ile Leu Gly Ala Ser Leu Ser Ala Pro Leu Thr Ser
355 360 365
Tyr Lys Val Ile Tyr Val Leu Pro Met Leu Thr Ile Lys Glu Asp Lys
370 375 380
Gly Thr Gly Val Val Thr Ser Val Pro Ser Asp Ser Pro Asp Asp Ile
385 390 395 400
Ala Ala Leu Arg Asp Leu Lys Lys Lys Gln Ala Leu Arg Ala Lys Tyr
405 410 415
Gly Ile Arg Asp Asp Met Val Leu Pro Phe Glu Pro Val Pro Val Ile
420 425 430
Glu Ile Pro Gly Phe Gly Asn Leu Ser Ala Val Thr Ile Cys Asp Glu
435 440 445
Leu Lys Ile Gln Ser Gln Asn Asp Arg Glu Lys Leu Ala Glu Ala Lys
450 455 460
Glu Lys Ile Tyr Leu Lys Gly Phe Tyr Glu Gly Ile Met Leu Val Asp
465 470 475 480
Gly Phe Lys Gly Gln Lys Val Gln Asp Val Lys Lys Thr Ile Gln Lys
485 490 495
Lys Met Ile Asp Ala Gly Asp Ala Leu Ile Tyr Met Glu Pro Glu Lys
500 505 510
Gln Val Met Ser Arg Ser Ser Asp Glu Cys Val Val Ala Leu Cys Asp
515 520 525
Gln Trp Tyr Leu Asp Tyr Gly Glu Glu Asn Trp Lys Lys Gln Thr Ser
530 535 540
Gln Cys Leu Lys Asn Leu Glu Thr Phe Cys Glu Glu Thr Arg Arg Asn
545 550 555 560
Phe Glu Ala Thr Leu Gly Trp Leu Gln Glu His Ala Cys Ser Arg Thr
565 570 575
Tyr Gly Leu Gly Thr His Leu Pro Trp Asp Glu Gln Trp Leu Ile Glu
580 585 590
Ser Leu Ser Asp Ser Thr Ile Tyr Met Ala Phe Tyr Thr Val Ala His
595 600 605
Leu Leu Gln Gly Gly Asn Leu His Gly Gln Ala Glu Ser Pro Leu Gly
610 615 620
Ile Arg Pro Gln Gln Met Thr Lys Glu Val Trp Asp Tyr Val Phe Phe
625 630 635 640
Lys Glu Ala Pro Phe Pro Lys Thr Gln Ile Ala Lys Glu Lys Leu Asp
645 650 655
Gln Leu Lys Gln Glu Phe Glu Phe Trp Tyr Pro Val Asp Leu Arg Val
660 665 670
Ser Gly Lys Asp Leu Val Pro Asn His Leu Ser Tyr Tyr Leu Tyr Asn
675 680 685
His Val Ala Met Trp Pro Glu Gln Ser Asp Lys Trp Pro Thr Ala Val
690 695 700
Arg Ala Asn Gly His Leu Leu Leu Asn Ser Glu Lys Met Ser Lys Ser
705 710 715 720
Thr Gly Asn Phe Leu Thr Leu Thr Gln Ala Ile Asp Lys Phe Ser Ala
725 730 735
Asp Gly Met Arg Leu Ala Leu Ala Asp Ala Gly Asp Thr Val Glu Asp
740 745 750
Ala Asn Phe Val Glu Ala Met Ala Asp Ala Gly Ile Leu Arg Leu Tyr
755 760 765
Thr Trp Val Glu Trp Val Lys Glu Met Val Ala Asn Trp Asp Ser Leu
770 775 780
Arg Ser Gly Pro Ala Ser Thr Phe Asn Asp Arg Val Phe Ala Ser Glu
785 790 795 800
Leu Asn Ala Gly Ile Ile Lys Thr Asp Gln Asn Tyr Glu Lys Met Met
805 810 815
Phe Lys Glu Ala Leu Lys Thr Gly Phe Phe Glu Phe Gln Ala Ala Lys
820 825 830
Asp Lys Tyr Arg Glu Leu Ala Val Glu Gly Met His Arg Glu Leu Val
835 840 845
Phe Arg Phe Ile Glu Val Gln Thr Leu Leu Leu Ala Pro Phe Cys Pro
850 855 860
His Leu Cys Glu His Ile Trp Thr Leu Leu Gly Lys Pro Asp Ser Ile
865 870 875 880
Met Asn Ala Ser Trp Pro Val Ala Gly Pro Val Asn Glu Val Leu Ile
885 890 895
His Ser Ser Gln Tyr Leu Met Glu Val Thr His Asp Leu Arg Leu Arg
900 905 910
Leu Lys Asn Tyr Met Met Pro Ala Lys Gly Lys Lys Thr Asp Lys Gln
915 920 925
Pro Leu Gln Lys Pro Ser His Cys Thr Ile Tyr Val Ala Lys Asn Tyr
930 935 940
Pro Pro Trp Gln His Thr Thr Leu Ser Val Leu Arg Lys His Phe Glu
945 950 955 960
Ala Asn Asn Gly Lys Leu Pro Asp Asn Lys Val Ile Ala Ser Glu Leu
965 970 975
Gly Ser Met Pro Glu Leu Lys Lys Tyr Met Lys Lys Val Met Pro Phe
980 985 990
Val Ala Met Ile Lys Glu Asn Leu Glu Lys Met Gly Pro Arg Ile Leu
995 1000 1005
Asp Leu Gln Leu Glu Phe Asp Glu Lys Ala Val Leu Met Glu Asn Ile
1010 1015 1020
Val Tyr Leu Thr Asn Ser Leu Glu Leu Glu His Ile Glu Val Lys Phe
1025 1030 1035 1040
Ala Ser Glu Ala Glu Asp Lys Ile Arg Glu Asp Cys Cys Pro Gly Lys
1045 1050 1055
Pro Leu Asn Val Phe Arg Ile Glu Pro Gly Val Ser Val Ser Leu Val
1060 1065 1070
Asn Pro Gln Pro Ser Asn Gly His Phe Ser Thr Lys Ile Glu Ile Arg
1075 1080 1085
Gln Gly Asp Asn Cys Asp Ser Ile Ile Arg Arg Leu Met Lys Met Asn
1090 1095 1100
Arg Gly Ile Lys Asp Leu Ser Lys Val Lys Leu Met Arg Phe Asp Asp
1105 1110 1115 1120
Pro Leu Leu Gly Pro Arg Arg Val Pro Val Leu Gly Lys Glu Tyr Thr
1125 1130 1135
Glu Lys Thr Pro Ile Ser Glu His Ala Val Phe Asn Val Asp Leu Met
1140 1145 1150
Ser Lys Lys Ile His Leu Thr Glu Asn Gly Ile Arg Val Asp Ile Gly
1155 1160 1165
Asp Thr Ile Ile Tyr Leu Val His
1170 1175
<210> 4
<211> 1823
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of Laminin subunit alpha-4 (Homo sapiens)
<400> 4
Met Ala Leu Ser Ser Ala Trp Arg Ser Val Leu Pro Leu Trp Leu Leu
1 5 10 15
Trp Ser Ala Ala Cys Ser Arg Ala Ala Ser Gly Asp Asp Asn Ala Phe
20 25 30
Pro Phe Asp Ile Glu Gly Ser Ser Ala Val Gly Arg Gln Asp Pro Pro
35 40 45
Glu Thr Ser Glu Pro Arg Val Ala Leu Gly Arg Leu Pro Pro Ala Ala
50 55 60
Glu Lys Cys Asn Ala Gly Phe Phe His Thr Leu Ser Gly Glu Cys Val
65 70 75 80
Pro Cys Asp Cys Asn Gly Asn Ser Asn Glu Cys Leu Asp Gly Ser Gly
85 90 95
Tyr Cys Val His Cys Gln Arg Asn Thr Thr Gly Glu His Cys Glu Lys
100 105 110
Cys Leu Asp Gly Tyr Ile Gly Asp Ser Ile Arg Gly Ala Pro Gln Phe
115 120 125
Cys Gln Pro Cys Pro Cys Pro Leu Pro His Leu Ala Asn Phe Ala Glu
130 135 140
Ser Cys Tyr Arg Lys Asn Gly Ala Val Arg Cys Ile Cys Asn Glu Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Gly Pro Asn Cys Glu Arg Cys Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Asn
165 170 175
Pro Leu Leu Ile Gly Ser Thr Cys Lys Lys Cys Asp Cys Ser Gly Asn
180 185 190
Ser Asp Pro Asn Leu Ile Phe Glu Asp Cys Asp Glu Val Thr Gly Gln
195 200 205
Cys Arg Asn Cys Leu Arg Asn Thr Thr Gly Phe Lys Cys Glu Arg Cys
210 215 220
Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Asp Ala Arg Ile Ala Lys Asn Cys Ala Val
225 230 235 240
Cys Asn Cys Gly Gly Gly Pro Cys Asp Ser Val Thr Gly Glu Cys Leu
245 250 255
Glu Glu Gly Phe Glu Pro Pro Thr Gly Met Asp Cys Pro Thr Ile Ser
260 265 270
Cys Asp Lys Cys Val Trp Asp Leu Thr Asp Ala Leu Arg Leu Ala Ala
275 280 285
Leu Ser Ile Glu Glu Gly Lys Ser Gly Val Leu Ser Val Ser Ser Gly
290 295 300
Ala Ala Ala His Arg His Val Asn Glu Ile Asn Ala Thr Ile Tyr Leu
305 310 315 320
Leu Lys Thr Lys Leu Ser Glu Arg Glu Asn Gln Tyr Ala Leu Arg Lys
325 330 335
Ile Gln Ile Asn Asn Ala Glu Asn Thr Met Lys Ser Leu Leu Ser Asp
340 345 350
Val Glu Glu Leu Val Glu Lys Glu Asn Gln Ala Ser Arg Lys Gly Gln
355 360 365
Leu Val Gln Lys Glu Ser Met Asp Thr Ile Asn His Ala Ser Gln Leu
370 375 380
Val Glu Gln Ala His Asp Met Arg Asp Lys Ile Gln Glu Ile Asn Asn
385 390 395 400
Lys Met Leu Tyr Tyr Gly Glu Glu His Glu Leu Ser Pro Lys Glu Ile
405 410 415
Ser Glu Lys Leu Val Leu Ala Gln Lys Met Leu Glu Glu Ile Arg Ser
420 425 430
Arg Gln Pro Phe Phe Thr Gln Arg Glu Leu Val Asp Glu Glu Ala Asp
435 440 445
Glu Ala Tyr Glu Leu Leu Ser Gln Ala Glu Ser Trp Gln Arg Leu His
450 455 460
Asn Glu Thr Arg Thr Leu Phe Pro Val Val Leu Glu Gln Leu Asp Asp
465 470 475 480
Tyr Asn Ala Lys Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Leu Asp Gln Ala Leu
485 490 495
Asn Tyr Val Arg Asp Ala Glu Asp Met Asn Arg Ala Thr Ala Ala Arg
500 505 510
Gln Arg Asp His Glu Lys Gln Gln Glu Arg Val Arg Glu Gln Met Glu
515 520 525
Val Val Asn Met Ser Leu Ser Thr Ser Ala Asp Ser Leu Thr Thr Pro
530 535 540
Arg Leu Thr Leu Ser Glu Leu Asp Asp Ile Ile Lys Asn Ala Ser Gly
545 550 555 560
Ile Tyr Ala Glu Ile Asp Gly Ala Lys Ser Glu Leu Gln Val Lys Leu
565 570 575
Ser Asn Leu Ser Asn Leu Ser His Asp Leu Val Gln Glu Ala Ile Asp
580 585 590
His Ala Gln Asp Leu Gln Gln Glu Ala Asn Glu Leu Ser Arg Lys Leu
595 600 605
His Ser Ser Asp Met Asn Gly Leu Val Gln Lys Ala Leu Asp Ala Ser
610 615 620
Asn Val Tyr Glu Asn Ile Val Asn Tyr Val Ser Glu Ala Asn Glu Thr
625 630 635 640
Ala Glu Phe Ala Leu Asn Thr Thr Asp Arg Ile Tyr Asp Ala Val Ser
645 650 655
Gly Ile Asp Thr Gln Ile Ile Tyr His Lys Asp Glu Ser Glu Asn Leu
660 665 670
Leu Asn Gln Ala Arg Glu Leu Gln Ala Lys Ala Glu Ser Ser Ser Asp
675 680 685
Glu Ala Val Ala Asp Thr Ser Arg Arg Val Gly Gly Ala Leu Ala Arg
690 695 700
Lys Ser Ala Leu Lys Thr Arg Leu Ser Asp Ala Val Lys Gln Leu Gln
705 710 715 720
Ala Ala Glu Arg Gly Asp Ala Gln Gln Arg Leu Gly Gln Ser Arg Leu
725 730 735
Ile Thr Glu Glu Ala Asn Arg Thr Thr Met Glu Val Gln Gln Ala Thr
740 745 750
Ala Pro Met Ala Asn Asn Leu Thr Asn Trp Ser Gln Asn Leu Gln His
755 760 765
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770 775 780
Val Arg Asn Leu Thr Glu Val Val Pro Gln Leu Leu Asp Gln Leu Arg
785 790 795 800
Thr Val Glu Gln Lys Arg Pro Ala Ser Asn Val Ser Ala Ser Ile Gln
805 810 815
Arg Ile Arg Glu Leu Ile Ala Gln Thr Arg Ser Val Ala Ser Lys Ile
820 825 830
Gln Val Ser Met Met Phe Asp Gly Gln Ser Ala Val Glu Val His Ser
835 840 845
Arg Thr Ser Met Asp Asp Leu Lys Ala Phe Thr Ser Leu Ser Leu Tyr
850 855 860
Met Lys Pro Pro Val Lys Arg Pro Glu Leu Thr Glu Thr Ala Asp Gln
865 870 875 880
Phe Ile Leu Tyr Leu Gly Ser Lys Asn Ala Lys Lys Glu Tyr Met Gly
885 890 895
Leu Ala Ile Lys Asn Asp Asn Leu Val Tyr Val Tyr Asn Leu Gly Thr
900 905 910
Lys Asp Val Glu Ile Pro Leu Asp Ser Lys Pro Val Ser Ser Trp Pro
915 920 925
Ala Tyr Phe Ser Ile Val Lys Ile Glu Arg Val Gly Lys His Gly Lys
930 935 940
Val Phe Leu Thr Val Pro Ser Leu Ser Ser Thr Ala Glu Glu Lys Phe
945 950 955 960
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965 970 975
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980 985 990
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1010 1015 1020
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1025 1030 1035 1040
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1045 1050 1055
Tyr Ala Val Val Arg Asp Ile Thr Arg Arg Gly Lys Phe Gly Gln Val
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1075 1080 1085
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1185 1190 1195 1200
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1205 1210 1215
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1220 1225 1230
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1235 1240 1245
Gln Lys Ile Ser Phe Phe Asp Gly Phe Glu Gly Gly Phe Asn Phe Arg
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Thr Leu Gln Pro Asn Gly Leu Leu Phe Tyr Tyr Ala Ser Gly Ser Asp
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Val Phe Ser Ile Ser Leu Asp Asn Gly Thr Val Ile Met Asp Val Lys
1285 1290 1295
Gly Ile Lys Val Gln Ser Val Asp Lys Gln Tyr Asn Asp Gly Leu Ser
1300 1305 1310
His Phe Val Ile Ser Ser Val Ser Pro Thr Arg Tyr Glu Leu Ile Val
1315 1320 1325
Asp Lys Ser Arg Val Gly Ser Lys Asn Pro Thr Lys Gly Lys Ile Glu
1330 1335 1340
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1345 1350 1355 1360
Ser Ala Gln Tyr Ala Asn Phe Thr Gly Cys Ile Ser Asn Ala Tyr Phe
1365 1370 1375
Thr Arg Val Asp Arg Asp Val Glu Val Glu Asp Phe Gln Arg Tyr Thr
1380 1385 1390
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1395 1400 1405
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1410 1415 1420
Ser Gln Asn Lys Lys Gly Gly Lys Ser Lys Asp Ala Pro Ser Trp Asp
1425 1430 1435 1440
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1445 1450 1455
Cys His Leu Ser Asn Ser Pro Arg Ala Ile Glu His Ala Tyr Gln Tyr
1460 1465 1470
Gly Gly Thr Ala Asn Ser Arg Gln Glu Phe Glu His Leu Lys Gly Asp
1475 1480 1485
Phe Gly Ala Lys Ser Gln Phe Ser Ile Arg Leu Arg Thr Arg Ser Ser
1490 1495 1500
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1505 1510 1515 1520
Thr Leu Phe Leu Ala His Gly Arg Leu Val Tyr Met Phe Asn Val Gly
1525 1530 1535
His Lys Lys Leu Lys Ile Arg Ser Gln Glu Lys Tyr Asn Asp Gly Leu
1540 1545 1550
Trp His Asp Val Ile Phe Ile Arg Glu Arg Ser Ser Gly Arg Leu Val
1555 1560 1565
Ile Asp Gly Leu Arg Val Leu Glu Glu Ser Leu Pro Pro Thr Glu Ala
1570 1575 1580
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1585 1590 1595 1600
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Thr Tyr Phe Ser Thr Glu Gly Gly Tyr Val Val Leu Asp Glu Ser Phe
1650 1655 1660
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1700 1705 1710
Ile Arg Asp Phe Ser Thr Ser Val Thr Pro Lys Gln Ser Leu Cys Asp
1715 1720 1725
Gly Arg Trp His Arg Ile Thr Val Ile Arg Asp Ser Asn Val Val Gln
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1780 1785 1790
Ile Arg His Phe Val Ile Asp Gly His Pro Val Ser Phe Ser Lys Ala
1795 1800 1805
Ala Leu Val Ser Gly Ala Val Ser Ile Asn Ser Cys Pro Ala Ala
1810 1815 1820
<210> 5
<211> 5472
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence of Laminin subunit alpha-4 (Homo sapiens)
<400> 5
atggctttga gctcagcctg gcgctcggtt ctgcctctgt ggctcctctg gagcgctgcc 60
tgctcccgcg ccgcgtccgg ggacgacaac gcttttcctt ttgacattga agggagctca 120
gcggttggca ggcaagaccc gcctgagacg agcgaacccc gcgtggctct gggacgcctg 180
ccgcctgcgg ccgagaaatg caatgctgga ttctttcaca ccctgtcggg agaatgtgtg 240
ccctgcgact gtaatggcaa ttccaacgag tgtttggacg gctcaggata ctgtgtgcac 300
tgccagcgga acacaacagg agagcactgt gaaaagtgtc tggatggtta tatcggagat 360
tccatcaggg gagcacccca attctgccag ccgtgcccct gtcccctgcc ccacttggcc 420
aattttgcag aatcctgcta taggaaaaat ggagctgttc ggtgcatttg taacgaaaat 480
tatgctggac ctaactgtga aagatgtgct cccggttact atggaaaccc cttactcatt 540
ggaagcacct gtaagaaatg tgactgcagt ggaaattcag atcccaacct gatctttgaa 600
gattgtgatg aagtcactgg ccagtgtagg aattgcttac gcaacaccac cggattcaag 660
tgtgaacgtt gcgctcctgg ctactatggg gacgccagga tagccaagaa ctgtgcagtg 720
tgcaactgcg ggggaggccc atgtgacagt gtaaccggag aatgcttgga agaaggtttt 780
gaacccccta caggcatgga ctgcccaacc ataagctgtg ataagtgcgt ctgggacctg 840
actgatgacc tgcggttagc agcgctctcc atcgaggaag gcaaatccgg ggtgctgagc 900
gtatcctctg gggccgccgc tcataggcac gtgaatgaaa tcaacgccac catctacctc 960
ctcaaaacaa aattgtcaga aagagaaaac caatacgccc taagaaagat acaaatcaac 1020
aatgctgaga acacgatgaa aagccttctg tctgacgtag aggaattagt tgaaaaggaa 1080
aatcaagcct ccagaaaagg acaacttgtt cagaaggaaa gcatggacac cattaaccac 1140
gcaagtcagc tggtagagca agcccatgat atgagggata aaatccaaga gatcaacaac 1200
aagatgctct attatgggga agagcatgaa cttagcccca aggaaatctc tgagaagctg 1260
gtgttggccc agaagatgct tgaagagatt agaagccgtc aaccattttt cacccaacgg 1320
gagctcgtgg atgaggaggc agatgaggct tacgaactac tgagccaggc tgagagctgg 1380
cagcggctgc acaatgagac ccgcactctg tttcctgtcg tcctggagca gctggatgac 1440
tacaatgcta agttgtcaga tctccaggaa gcacttgacc aggcccttaa ctatgtcagg 1500
gatgccgaag acatgaacag ggccacagca gccaggcagc gggaccatga gaaacaacag 1560
gaaagagtga gggaacaaat ggaagtggtg aacatgtctc tgagcacatc tgcggactct 1620
ctgacaacac ctcgtctaac tctttcagaa cttgatgata taataaagaa tgcgtcaggg 1680
atttatgcag aaatagatgg agccaaaagt gaactacaag taaaactatc taacctaagt 1740
aacctcagcc atgatttagt ccaagaagct attgaccatg cacaggacct tcaacaagaa 1800
gctaatgaat tgagcaggaa gttgcacagt tcagatatga acgggctggt acagaaggct 1860
ttggatgcat caaatgtcta tgaaaatatt gttaattatg ttagtgaagc caatgaaaca 1920
gcagaatttg ctttgaacac cactgaccga atttatgatg cggtgagtgg gattgatact 1980
caaatcattt accataaaga tgaaagtgag aacctcctca atcaagccag agaactgcaa 2040
gcaaaggcag agtctagcag tgatgaagca gtggctgaca ctagcaggcg tgtgggtgga 2100
gccctagcaa ggaaaagtgc ccttaaaacc agactcagtg atgccgttaa gcaactacaa 2160
gcagcagaga gaggggatgc ccagcagcgc ctggggcagt ctagactgat caccgaggaa 2220
gccaacagga cgacgatgga ggtgcagcag gccactgccc ccatggccaa caatctaacc 2280
aactggtcac agaatcttca acattttgac tcttctgctt acaacactgc agtgaactct 2340
gctagggatg cagtaagaaa tctgaccgag gttgtccctc agctcctgga tcagcttcgt 2400
acggttgagc agaagcgacc tgcaagcaac gtttctgcca gcatccagag gatccgagag 2460
ctcattgctc agaccagaag tgttgccagc aagatccaag tctccatgat gtttgatggc 2520
cagtcagctg tggaagtgca ctcgagaacc agtatggatg acttaaaggc cttcacgtct 2580
ctgagcctgt acatgaaacc ccctgtgaag cggccggaac tgaccgagac tgcagatcag 2640
tttatcctgt acctcggaag caaaaacgcc aaaaaagagt atatgggtct tgcaatcaaa 2700
aatgataatc tggtatacgt ctataatttg ggaactaaag atgtggagat tcccctggac 2760
tccaagcccg tcagttcctg gcctgcttac ttcagcattg tcaagattga aagggtggga 2820
aaacatggaa aggtgttttt aacagtcccg agtctaagta gcacagcaga ggaaaagttc 2880
attaaaaagg gggaattttc gggagatgac tctctgctgg acctggaccc tgaggacaca 2940
gtgttttatg ttggtggagt gccttccaac ttcaagctcc ctaccagctt aaacctgcct 3000
ggctttgttg gctgcctgga actggccact ttgaataatg atgtgatcag cttgtacaac 3060
tttaagcaca tctataatat ggacccctcc acatcagtgc catgtgcccg agataagctg 3120
gccttcactc agagtcgggc tgccagttac ttcttcgatg gctccggtta tgccgtggtg 3180
agagacatca caaggagagg gaaatttggt caggtgactc gctttgacat agaagttcga 3240
acaccagctg acaacggcct tattctcctg atggtcaatg gaagtatgtt tttcagactg 3300
gaaatgcgca atggttacct acatgtgttc tatgattttg gattcagcgg tggccctgtg 3360
catcttgaag atacgttaaa gaaagctcaa attaatgatg caaaatacca tgagatctca 3420
atcatttacc acaatgataa gaaaatgatc ttggtagttg acagaaggca tgtcaagagc 3480
atggataatg aaaagatgaa aatacctttt acagatatat acattggagg agctcctcca 3540
gaaatcttac aatccagggc cctcagagca caccttcccc tagatatcaa cttcagagga 3600
tgcatgaagg gcttccagtt ccaaaagaag gacttcaatt tactggagca gacagaaacc 3660
ctgggagttg gttatggatg cccagaagac tcacttatat ctcgcagagc atatttcaat 3720
ggacagagct tcattgcttc aattcagaaa atatctttct ttgatggctt tgaaggaggt 3780
tttaatttcc gaacattaca accaaatggg ttactattct attatgcttc agggtcagac 3840
gtgttctcca tctcactgga taatggtact gtcatcatgg atgtaaaggg aatcaaagtt 3900
cagtcagtag ataagcagta caatgatggg ctgtcccact tcgtcattag ctctgtctca 3960
cccacaagat atgaactgat agtagataaa agcagagttg ggagtaagaa tcctaccaaa 4020
gggaaaatag aacagacaca agcaagtgaa aagaagtttt acttcggtgg ctcaccaatc 4080
agtgctcagt atgctaattt cactggctgc ataagtaatg cctactttac cagggtggat 4140
agagatgtgg aggttgaaga tttccaacgg tatactgaaa aggtccacac ttctctttat 4200
gagtgtccca ttgagtcttc accattgttt ctcctccata aaaaaggaaa aaatttatcc 4260
aagcctaaag caagtcagaa taaaaaggga gggaaaagta aagatgcacc ttcatgggat 4320
cctgttgctc tgaaactccc agagcggaat actccaagaa actctcattg ccacctttcc 4380
aacagcccta gagcaataga gcacgcctat caatatggag gaacagccaa cagccgccaa 4440
gagtttgaac acttaaaagg agattttggt gccaaatctc agttttccat tcgtctgaga 4500
actcgttcct cccatggcat gatcttctat gtctcagatc aagaagagaa tgacttcatg 4560
actctatttt tggcccatgg ccgcttggtt tacatgttta atgttggtca caaaaaactg 4620
aagattagaa gccaggagaa atacaatgat ggcctgtggc atgatgtgat atttattcga 4680
gaaaggagca gtggccgact ggtaattgat ggtctccgag tcctagaaga aagtcttcct 4740
cctactgaag ctacctggaa aatcaagggt cccatttatt tgggaggtgt ggctcctgga 4800
aaggctgtga aaaatgttca gattaactcc atctacagtt ttagtggctg tctcagcaat 4860
ctccagctca atggggcctc catcacctct gcttctcaga cattcagtgt gaccccttgc 4920
tttgaaggcc ccatggaaac aggaacttac ttttcaacag aaggaggata cgtggttcta 4980
gatgaatctt tcaatattgg attgaagttt gaaattgcat ttgaagtccg tcccagaagc 5040
agttccggaa ccctggtcca cggccacagt gtcaatgggg agtacctaaa tgttcacatg 5100
aaaaatggac aggtcatagt gaaagtcaat aatggcatca gagatttttc cacctcagtt 5160
acacccaagc agagtctctg tgatggcaga tggcacagaa ttacagttat tagagattct 5220
aatgtggttc agttggatgt ggactctgaa gtgaaccatg tggttggacc cctgaatcca 5280
aaaccaattg atcacaggga gcctgtgttt gttggaggtg ttccagaatc tctactgaca 5340
ccacgcttgg cccccagcaa acccttcaca ggctgcatac gccactttgt gattgatgga 5400
cacccagtga gcttcagtaa agcagccctg gtcagcggcg ccgtaagcat caactcctgt 5460
ccagcagcct ga 5472
<210> 6
<211> 1798
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of Laminin subunit beta-2 (Homo sapiens)
<400> 6
Met Glu Leu Thr Ser Arg Glu Arg Gly Arg Gly Gln Pro Leu Pro Trp
1 5 10 15
Glu Leu Arg Leu Gly Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ala Thr Leu Ala
20 25 30
Gln Ala Pro Ala Pro Asp Val Pro Gly Cys Ser Arg Gly Ser Cys Tyr
35 40 45
Pro Ala Thr Gly Asp Leu Leu Val Gly Arg Ala Asp Arg Leu Thr Ala
50 55 60
Ser Ser Thr Cys Gly Leu Asn Gly Pro Gln Pro Tyr Cys Ile Val Ser
65 70 75 80
His Leu Gln Asp Glu Lys Lys Cys Phe Leu Cys Asp Ser Arg Arg Pro
85 90 95
Phe Ser Ala Arg Asp Asn Pro His Ser His Arg Ile Gln Asn Val Val
100 105 110
Thr Ser Phe Ala Pro Gln Arg Arg Ala Ala Trp Trp Gln Ser Glu Asn
115 120 125
Gly Ile Pro Ala Val Thr Ile Gln Leu Asp Leu Glu Ala Glu Phe His
130 135 140
Phe Thr His Leu Ile Met Thr Phe Lys Thr Phe Arg Pro Ala Ala Met
145 150 155 160
Leu Val Glu Arg Ser Ala Asp Phe Gly Arg Thr Trp His Val Tyr Arg
165 170 175
Tyr Phe Ser Tyr Asp Cys Gly Ala Asp Phe Pro Gly Val Pro Leu Ala
180 185 190
Pro Pro Arg His Trp Asp Asp Val Val Cys Glu Ser Arg Tyr Ser Glu
195 200 205
Ile Glu Pro Ser Thr Glu Gly Glu Val Ile Tyr Arg Val Leu Asp Pro
210 215 220
Ala Ile Pro Ile Pro Asp Pro Tyr Ser Ser Arg Ile Gln Asn Leu Leu
225 230 235 240
Lys Ile Thr Asn Leu Arg Val Asn Leu Thr Arg Leu His Thr Leu Gly
245 250 255
Asp Asn Leu Leu Asp Pro Arg Arg Glu Ile Arg Glu Lys Tyr Tyr Tyr
260 265 270
Ala Leu Tyr Glu Leu Val Val Arg Gly Asn Cys Phe Cys Tyr Gly His
275 280 285
Ala Ser Glu Cys Ala Pro Ala Pro Gly Ala Pro Ala His Ala Glu Gly
290 295 300
Met Val His Gly Ala Cys Ile Cys Lys His Asn Thr Arg Gly Leu Asn
305 310 315 320
Cys Glu Gln Cys Gln Asp Phe Tyr Arg Asp Leu Pro Trp Arg Pro Ala
325 330 335
Glu Asp Gly His Ser His Ala Cys Arg Lys Cys Glu Cys His Gly His
340 345 350
Thr His Ser Cys His Phe Asp Met Ala Val Tyr Leu Ala Ser Gly Asn
355 360 365
Val Ser Gly Gly Val Cys Asp Gly Cys Gln His Asn Thr Ala Gly Arg
370 375 380
His Cys Glu Leu Cys Arg Pro Phe Phe Tyr Arg Asp Pro Thr Lys Asp
385 390 395 400
Leu Arg Asp Pro Ala Val Cys Arg Ser Cys Asp Cys Asp Pro Met Gly
405 410 415
Ser Gln Asp Gly Gly Arg Cys Asp Ser His Asp Asp Pro Ala Leu Gly
420 425 430
Leu Val Ser Gly Gln Cys Arg Cys Lys Glu His Val Val Gly Thr Arg
435 440 445
Cys Gln Gln Cys Arg Asp Gly Phe Phe Gly Leu Ser Ile Ser Asp Arg
450 455 460
Leu Gly Cys Arg Arg Cys Gln Cys Asn Ala Arg Gly Thr Val Pro Gly
465 470 475 480
Ser Thr Pro Cys Asp Pro Asn Ser Gly Ser Cys Tyr Cys Lys Arg Leu
485 490 495
Val Thr Gly Arg Gly Cys Asp Arg Cys Leu Pro Gly His Trp Gly Leu
500 505 510
Ser His Asp Leu Leu Gly Cys Arg Pro Cys Asp Cys Asp Val Gly Gly
515 520 525
Ala Leu Asp Pro Gln Cys Asp Glu Gly Thr Gly Gln Cys His Cys Arg
530 535 540
Gln His Met Val Gly Arg Arg Cys Glu Gln Val Gln Pro Gly Tyr Phe
545 550 555 560
Arg Pro Phe Leu Asp His Leu Ile Trp Glu Ala Glu Asp Thr Arg Gly
565 570 575
Gln Val Leu Asp Val Val Glu Arg Leu Val Thr Pro Gly Glu Thr Pro
580 585 590
Ser Trp Thr Gly Ser Gly Phe Val Arg Leu Gln Glu Gly Gln Thr Leu
595 600 605
Glu Phe Leu Val Ala Ser Val Pro Lys Ala Met Asp Tyr Asp Leu Leu
610 615 620
Leu Arg Leu Glu Pro Gln Val Pro Glu Gln Trp Ala Glu Leu Glu Leu
625 630 635 640
Ile Val Gln Arg Pro Gly Pro Val Pro Ala His Ser Leu Cys Gly His
645 650 655
Leu Val Pro Lys Asp Asp Arg Ile Gln Gly Thr Leu Gln Pro His Ala
660 665 670
Arg Tyr Leu Ile Phe Pro Asn Pro Val Cys Leu Glu Pro Gly Ile Ser
675 680 685
Tyr Lys Leu His Leu Lys Leu Val Arg Thr Gly Gly Ser Ala Gln Pro
690 695 700
Glu Thr Pro Tyr Ser Gly Pro Gly Leu Leu Ile Asp Ser Leu Val Leu
705 710 715 720
Leu Pro Arg Val Leu Val Leu Glu Met Phe Ser Gly Gly Asp Ala Ala
725 730 735
Ala Leu Glu Arg Gln Ala Thr Phe Glu Arg Tyr Gln Cys His Glu Glu
740 745 750
Gly Leu Val Pro Ser Lys Thr Ser Pro Ser Glu Ala Cys Ala Pro Leu
755 760 765
Leu Ile Ser Leu Ser Thr Leu Ile Tyr Asn Gly Ala Leu Pro Cys Gln
770 775 780
Cys Asn Pro Gln Gly Ser Leu Ser Ser Glu Cys Asn Pro His Gly Gly
785 790 795 800
Gln Cys Leu Cys Lys Pro Gly Val Val Gly Arg Arg Cys Asp Leu Cys
805 810 815
Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Phe Gly Pro Thr Gly Cys Gln Ala Cys Gln
820 825 830
Cys Ser His Glu Gly Ala Leu Ser Ser Leu Cys Glu Lys Thr Ser Gly
835 840 845
Gln Cys Leu Cys Arg Thr Gly Ala Phe Gly Leu Arg Cys Asp Arg Cys
850 855 860
Gln Arg Gly Gln Trp Gly Phe Pro Ser Cys Arg Pro Cys Val Cys Asn
865 870 875 880
Gly His Ala Asp Glu Cys Asn Thr His Thr Gly Ala Cys Leu Gly Cys
885 890 895
Arg Asp His Thr Gly Gly Glu His Cys Glu Arg Cys Ile Ala Gly Phe
900 905 910
His Gly Asp Pro Arg Leu Pro Tyr Gly Gly Gln Cys Arg Pro Cys Pro
915 920 925
Cys Pro Glu Gly Pro Gly Ser Gln Arg His Phe Ala Thr Ser Cys His
930 935 940
Gln Asp Glu Tyr Ser Gln Gln Ile Val Cys His Cys Arg Ala Gly Tyr
945 950 955 960
Thr Gly Leu Arg Cys Glu Ala Cys Ala Pro Gly His Phe Gly Asp Pro
965 970 975
Ser Arg Pro Gly Gly Arg Cys Gln Leu Cys Glu Cys Ser Gly Asn Ile
980 985 990
Asp Pro Met Asp Pro Asp Ala Cys Asp Pro His Thr Gly Gln Cys Leu
995 1000 1005
Arg Cys Leu His His Thr Glu Gly Pro His Cys Ala His Cys Lys Pro
1010 1015 1020
Gly Phe His Gly Gln Ala Ala Arg Gln Ser Cys His Arg Cys Thr Cys
1025 1030 1035 1040
Asn Leu Leu Gly Thr Asn Pro Gln Gln Cys Pro Ser Pro Asp Gln Cys
1045 1050 1055
His Cys Asp Pro Ser Ser Gly Gln Cys Pro Cys Leu Pro Asn Val Gln
1060 1065 1070
Gly Pro Ser Cys Asp Arg Cys Ala Pro Asn Phe Trp Asn Leu Thr Ser
1075 1080 1085
Gly His Gly Cys Gln Pro Cys Ala Cys His Pro Ser Arg Ala Arg Gly
1090 1095 1100
Pro Thr Cys Asn Glu Phe Thr Gly Gln Cys His Cys Arg Ala Gly Phe
1105 1110 1115 1120
Gly Gly Arg Thr Cys Ser Glu Cys Gln Glu Leu His Trp Gly Asp Pro
1125 1130 1135
Gly Leu Gln Cys His Ala Cys Asp Cys Asp Ser Arg Gly Ile Asp Thr
1140 1145 1150
Pro Gln Cys His Arg Phe Thr Gly His Cys Ser Cys Arg Pro Gly Val
1155 1160 1165
Ser Gly Val Arg Cys Asp Gln Cys Ala Arg Gly Phe Ser Gly Ile Phe
1170 1175 1180
Pro Ala Cys His Pro Cys His Ala Cys Phe Gly Asp Trp Asp Arg Val
1185 1190 1195 1200
Val Gln Asp Leu Ala Ala Arg Thr Gln Arg Leu Glu Gln Arg Ala Gln
1205 1210 1215
Glu Leu Gln Gln Thr Gly Val Leu Gly Ala Phe Glu Ser Ser Phe Trp
1220 1225 1230
His Met Gln Glu Lys Leu Gly Ile Val Gln Gly Ile Val Gly Ala Arg
1235 1240 1245
Asn Thr Ser Ala Ala Ser Thr Ala Gln Leu Val Glu Ala Thr Glu Glu
1250 1255 1260
Leu Arg Arg Glu Ile Gly Glu Ala Thr Glu His Leu Thr Gln Leu Glu
1265 1270 1275 1280
Ala Asp Leu Thr Asp Val Gln Asp Glu Asn Phe Asn Ala Asn His Ala
1285 1290 1295
Leu Ser Gly Leu Glu Arg Asp Arg Leu Ala Leu Asn Leu Thr Leu Arg
1300 1305 1310
Gln Leu Asp Gln His Leu Asp Leu Leu Lys His Ser Asn Phe Leu Gly
1315 1320 1325
Ala Tyr Asp Ser Ile Arg His Ala His Ser Gln Ser Ala Glu Ala Glu
1330 1335 1340
Arg Arg Ala Asn Thr Ser Ala Leu Ala Val Pro Ser Pro Val Ser Asn
1345 1350 1355 1360
Ser Ala Ser Ala Arg His Arg Thr Glu Ala Leu Met Asp Ala Gln Lys
1365 1370 1375
Glu Asp Phe Asn Ser Lys His Met Ala Asn Gln Arg Ala Leu Gly Lys
1380 1385 1390
Leu Ser Ala His Thr His Thr Leu Ser Leu Thr Asp Ile Asn Glu Leu
1395 1400 1405
Val Cys Gly Ala Pro Gly Asp Ala Pro Cys Ala Thr Ser Pro Cys Gly
1410 1415 1420
Gly Ala Gly Cys Arg Asp Glu Asp Gly Gln Pro Arg Cys Gly Gly Leu
1425 1430 1435 1440
Ser Cys Asn Gly Ala Ala Ala Thr Ala Asp Leu Ala Leu Gly Arg Ala
1445 1450 1455
Arg His Thr Gln Ala Glu Leu Gln Arg Ala Leu Ala Glu Gly Gly Ser
1460 1465 1470
Ile Leu Ser Arg Val Ala Glu Thr Arg Arg Gln Ala Ser Glu Ala Gln
1475 1480 1485
Gln Arg Ala Gln Ala Ala Leu Asp Lys Ala Asn Ala Ser Arg Gly Gln
1490 1495 1500
Val Glu Gln Ala Asn Gln Glu Leu Gln Glu Leu Ile Gln Ser Val Lys
1505 1510 1515 1520
Asp Phe Leu Asn Gln Glu Gly Ala Asp Pro Asp Ser Ile Glu Met Val
1525 1530 1535
Ala Thr Arg Val Leu Glu Leu Ser Ile Pro Ala Ser Ala Glu Gln Ile
1540 1545 1550
Gln His Leu Ala Gly Ala Ile Ala Glu Arg Val Arg Ser Leu Ala Asp
1555 1560 1565
Val Asp Ala Ile Leu Ala Arg Thr Val Gly Asp Val Arg Arg Ala Glu
1570 1575 1580
Gln Leu Leu Gln Asp Ala Arg Arg Ala Arg Ser Trp Ala Glu Asp Glu
1585 1590 1595 1600
Lys Gln Lys Ala Glu Thr Val Gln Ala Ala Leu Glu Glu Ala Gln Arg
1605 1610 1615
Ala Gln Gly Ile Ala Gln Gly Ala Ile Arg Gly Ala Val Ala Asp Thr
1620 1625 1630
Arg Asp Thr Glu Gln Thr Leu Tyr Gln Val Gln Glu Arg Met Ala Gly
1635 1640 1645
Ala Glu Arg Ala Leu Ser Ser Ala Gly Glu Arg Ala Arg Gln Leu Asp
1650 1655 1660
Ala Leu Leu Glu Ala Leu Lys Leu Lys Arg Ala Gly Asn Ser Leu Ala
1665 1670 1675 1680
Ala Ser Thr Ala Glu Glu Thr Ala Gly Ser Ala Gln Gly Arg Ala Gln
1685 1690 1695
Glu Ala Glu Gln Leu Leu Arg Gly Pro Leu Gly Asp Gln Tyr Gln Thr
1700 1705 1710
Val Lys Ala Leu Ala Glu Arg Lys Ala Gln Gly Val Leu Ala Ala Gln
1715 1720 1725
Ala Arg Ala Glu Gln Leu Arg Asp Glu Ala Arg Asp Leu Leu Gln Ala
1730 1735 1740
Ala Gln Asp Lys Leu Gln Arg Leu Gln Glu Leu Glu Gly Thr Tyr Glu
1745 1750 1755 1760
Glu Asn Glu Arg Ala Leu Glu Ser Lys Ala Ala Gln Leu Asp Gly Leu
1765 1770 1775
Glu Ala Arg Met Arg Ser Val Leu Gln Ala Ile Asn Leu Gln Val Gln
1780 1785 1790
Ile Tyr Asn Thr Cys Gln
1795
<210> 7
<211> 5397
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence of Laminin subunit beta-2 (Homo sapiens)
<400> 7
atggagctga cctcaaggga aagagggagg ggacagcctc tgccctggga acttcgactg 60
ggcctactgc taagcgtgct ggctgccaca ctggcacagg cccctgcccc ggatgtgcct 120
ggctgttcca ggggaagctg ctaccccgcc acgggcgacc tgctggtggg ccgagctgac 180
agactgactg cctcatccac ttgtggcctg aatggccccc agccctactg catcgtcagt 240
cacctgcagg acgaaaagaa gtgcttcctt tgtgactccc ggcgcccctt ctctgctaga 300
gacaacccac acagccatcg catccagaat gtagtcacca gctttgcacc acagcggcgg 360
gcagcctggt ggcagtcaga gaatggtatc cctgcggtca ccatccagct ggacctggag 420
gctgagtttc atttcacaca cctcattatg accttcaaga catttcgccc tgctgccatg 480
ctggtggaac gctcagcaga ctttggccgc acctggcatg tgtaccgata tttctcctat 540
gactgtgggg ctgacttccc aggagtccca ctagcacccc cacggcactg ggatgatgta 600
gtctgtgagt cccgctactc agagattgag ccatccactg aaggcgaggt catctatcgt 660
gtgctggacc ctgccatccc tatcccagac ccctacagct cacggattca gaacctgttg 720
aagatcacca acctacgggt gaacctgact cgtctacaca cgttgggaga caacctactc 780
gacccacgga gggagatccg agagaagtac tactatgccc tctatgagct ggttgtacgt 840
ggcaactgct tctgctacgg acacgcctca gagtgtgcac ccgccccagg ggcaccagcc 900
catgctgagg gcatggtgca cggagcttgc atctgcaaac acaacacacg tggcctcaac 960
tgcgagcagt gtcaggattt ctatcgtgac ctgccctggc gtccggctga ggacggccat 1020
agtcatgcct gtaggaagtg tgagtgccat gggcacaccc acagctgcca cttcgacatg 1080
gccgtatacc tggcatctgg caatgtgagt ggaggtgtgt gtgatggatg tcagcataac 1140
acagctgggc gccactgtga gctctgtcgg cccttcttct accgtgaccc aaccaaggac 1200
ctgcgggatc cggctgtgtg ccgctcctgt gattgtgacc ccatgggttc tcaagacggt 1260
ggtcgctgtg attcccatga tgaccctgca ctgggactgg tctccggcca gtgtcgctgc 1320
aaagaacatg tggtgggcac tcgctgccag caatgccgtg atggcttctt tgggctcagc 1380
atcagtgacc gtctgggctg ccggcgatgt caatgtaatg cacggggcac agtgcctggg 1440
agcactcctt gtgaccccaa cagtggatcc tgttactgca aacgtctagt gactggacgt 1500
ggatgtgacc gctgcctgcc tggccactgg ggcctgagcc acgacctgct cggctgccgc 1560
ccctgtgact gcgacgtggg tggtgctttg gatccccagt gtgatgaggg cacaggtcaa 1620
tgccactgcc gccagcacat ggttgggcga cgctgtgagc aggtgcaacc tggctacttc 1680
cggcccttcc tggaccacct aatttgggag gctgaggaca cccgagggca ggtgctcgat 1740
gtggtggagc gcctggtgac ccccggggaa actccatcct ggactggctc aggcttcgtg 1800
cggctacagg aaggtcagac cctggagttc ctggtggcct ctgtgccgaa ggctatggac 1860
tatgacctgc tgctgcgctt agagccccag gtccctgagc aatgggcaga gttggaactg 1920
attgtgcagc gtccagggcc tgtgcctgcc cacagcctgt gtgggcattt ggtgcccaag 1980
gatgatcgca tccaagggac tctgcaacca catgccaggt acttgatatt tcctaatcct 2040
gtctgccttg agcctggtat ctcctacaag ctgcatctga agctggtacg gacaggggga 2100
agtgcccagc ctgagactcc ctactctgga cctggcctgc tcattgactc gctggtgctg 2160
ctgccccgtg tcctggtgct agagatgttt agtgggggtg atgctgctgc cctggagcgc 2220
caggccacct ttgaacgcta ccaatgccat gaggagggtc tggtgcccag caagacttct 2280
ccctctgagg cctgcgcacc cctcctcatc agcctgtcca ccctcatcta caatggtgcc 2340
ctgccatgtc agtgcaaccc tcaaggttca ctgagttctg agtgcaaccc tcatggtggt 2400
cagtgcctgt gcaagcctgg agtggttggg cgccgctgtg acctctgtgc ccctggctac 2460
tatggctttg gccccacagg ctgtcaagcc tgccagtgca gccacgaggg ggcactcagc 2520
agtctctgtg aaaagaccag tgggcaatgt ctctgtcgaa ctggtgcctt tgggcttcgc 2580
tgtgaccgct gccagcgtgg ccagtgggga ttccctagct gccggccatg tgtctgcaat 2640
gggcatgcag atgagtgcaa cacccacaca ggcgcttgcc tgggctgccg tgatcacaca 2700
gggggtgagc actgtgaaag gtgcattgct ggtttccacg gggacccacg gctgccatat 2760
gggggccagt gccggccctg tccctgtcct gaaggccctg ggagccaacg gcactttgct 2820
acttcttgcc accaggatga atattcccag cagattgtgt gccactgccg ggcaggctat 2880
acggggctgc gatgtgaagc ttgtgcccct gggcactttg gggacccatc aaggccaggt 2940
ggccggtgcc aactgtgtga gtgcagtggg aacattgacc caatggatcc tgatgcctgt 3000
gacccccaca cggggcaatg cctgcgctgt ttacaccaca cagagggtcc acactgtgcc 3060
cactgcaagc ctggcttcca tgggcaggct gcccgacaga gctgtcaccg ctgcacatgc 3120
aacctgctgg gcacaaatcc gcagcagtgc ccatctcctg accagtgcca ctgtgatcca 3180
agcagtgggc agtgcccatg cctccccaat gtccagggcc ctagctgtga ccgctgtgcc 3240
cccaacttct ggaacctcac cagtggccat ggttgccagc cttgtgcctg ccacccaagc 3300
cgggccagag gccccacctg caacgagttc acagggcagt gccactgccg tgccggcttt 3360
ggagggcgga cttgttctga gtgccaagag ctccactggg gagaccctgg gttgcagtgc 3420
catgcctgtg attgtgactc tcgtggaata gatacacctc agtgtcaccg cttcacaggt 3480
cactgcagct gccgcccagg ggtgtctggt gtgcgctgtg accagtgtgc ccgtggcttc 3540
tcaggaatct ttcctgcctg ccatccctgc catgcatgct tcggggattg ggaccgagtg 3600
gtgcaggact tggcagcccg tacacagcgc ctagagcagc gggcgcagga gttgcaacag 3660
acgggtgtgc tgggtgcctt tgagagcagc ttctggcaca tgcaggagaa gctgggcatt 3720
gtgcagggca tcgtaggtgc ccgcaacacc tcagccgcct ccactgcaca gcttgtggag 3780
gccacagagg agctgcggcg tgaaattggg gaggccactg agcacctgac tcagctcgag 3840
gcagacctga cagatgtgca agatgagaac ttcaatgcca accatgcact aagtggtctg 3900
gagcgagata ggcttgcact taatctcaca ctgcggcagc tcgaccagca tcttgacttg 3960
ctcaaacatt caaacttcct gggtgcctat gacagcatcc ggcatgccca tagccagtct 4020
gcagaggcag aacgtcgtgc caatacctca gccctggcag tacctagccc tgtgagcaac 4080
tcggcaagtg ctcggcatcg gacagaggca ctgatggatg ctcagaagga ggacttcaac 4140
agcaaacaca tggccaacca gcgggcactt ggcaagctct ctgcccatac ccacaccctg 4200
agcctgacag acataaatga gctggtgtgt ggggcaccag gggatgcacc ctgtgctaca 4260
agcccttgtg ggggtgccgg ctgtcgagat gaggatgggc agccgcgctg tgggggcctc 4320
agctgcaatg gggcagcggc tacagcagac ctagcactgg gccgggcccg gcacacacag 4380
gcagagctgc agcgggcact ggcagaaggt ggtagcatcc tcagcagagt ggctgagact 4440
cgtcggcagg caagcgaggc acagcagcgg gcccaggcag ccctggacaa ggctaatgct 4500
tccaggggac aggtggaaca ggccaaccag gaacttcaag aacttatcca gagtgtgaag 4560
gacttcctca accaggaggg ggctgatcct gatagcattg aaatggtggc cacacgggtg 4620
ctagagctct ccatcccagc ttcagctgag cagatccagc acctggcggg tgcgattgca 4680
gagcgagtcc ggagcctggc agatgtggat gcgatcctgg cacgtactgt aggagatgtg 4740
cgtcgtgccg agcagctact gcaggatgca cggcgggcaa ggagctgggc tgaggatgag 4800
aaacagaagg cagagacagt acaggcagca ctggaggagg cccagcgggc acagggtatt 4860
gcccagggtg ccatccgggg ggcagtggct gacacacggg acacagagca gaccctgtac 4920
caggtacagg agaggatggc aggtgcagag cgggcactga gctctgcagg tgaaagggct 4980
cggcagttgg atgctctcct ggaggctctg aaattgaaac gggcaggaaa tagtctggca 5040
gcctctacag cagaagaaac ggcaggcagt gcccagggtc gtgcccagga ggctgagcag 5100
ctgctacgcg gtcctctggg tgatcagtac cagacggtga aggccctagc tgagcgcaag 5160
gcccaaggtg tgctggctgc acaggcaagg gcagaacaac tgcgggatga ggctcgggac 5220
ctgttgcaag ccgctcagga caagctgcag cggctacagg aattggaagg cacctatgag 5280
gaaaatgagc gggcactgga gagtaaggca gcccagttgg acgggttgga ggccaggatg 5340
cgcagcgtgc ttcaagccat caacttgcag gtgcagatct acaacacctg ccagtga 5397
<210> 8
<211> 1609
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of Laminin subunit gamma-1 (Homo sapiens)
<400> 8
Met Arg Gly Ser His Arg Ala Ala Pro Ala Leu Arg Pro Arg Gly Arg
1 5 10 15
Leu Trp Pro Val Leu Ala Val Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Cys
20 25 30
Ala Gln Ala Ala Met Asp Glu Cys Thr Asp Glu Gly Gly Arg Pro Gln
35 40 45
Arg Cys Met Pro Glu Phe Val Asn Ala Ala Phe Asn Val Thr Val Val
50 55 60
Ala Thr Asn Thr Cys Gly Thr Pro Pro Glu Glu Tyr Cys Val Gln Thr
65 70 75 80
Gly Val Thr Gly Val Thr Lys Ser Cys His Leu Cys Asp Ala Gly Gln
85 90 95
Pro His Leu Gln His Gly Ala Ala Phe Leu Thr Asp Tyr Asn Asn Gln
100 105 110
Ala Asp Thr Thr Trp Trp Gln Ser Gln Thr Met Leu Ala Gly Val Gln
115 120 125
Tyr Pro Ser Ser Ile Asn Leu Thr Leu His Leu Gly Lys Ala Phe Asp
130 135 140
Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe His Thr Ser Arg Pro Glu Ser Phe
145 150 155 160
Ala Ile Tyr Lys Arg Thr Arg Glu Asp Gly Pro Trp Ile Pro Tyr Gln
165 170 175
Tyr Tyr Ser Gly Ser Cys Glu Asn Thr Tyr Ser Lys Ala Asn Arg Gly
180 185 190
Phe Ile Arg Thr Gly Gly Asp Glu Gln Gln Ala Leu Cys Thr Asp Glu
195 200 205
Phe Ser Asp Ile Ser Pro Leu Thr Gly Gly Asn Val Ala Phe Ser Thr
210 215 220
Leu Glu Gly Arg Pro Ser Ala Tyr Asn Phe Asp Asn Ser Pro Val Leu
225 230 235 240
Gln Glu Trp Val Thr Ala Thr Asp Ile Arg Val Thr Leu Asn Arg Leu
245 250 255
Asn Thr Phe Gly Asp Glu Val Phe Asn Asp Pro Lys Val Leu Lys Ser
260 265 270
Tyr Tyr Tyr Ala Ile Ser Asp Phe Ala Val Gly Gly Arg Cys Lys Cys
275 280 285
Asn Gly His Ala Ser Glu Cys Met Lys Asn Glu Phe Asp Lys Leu Val
290 295 300
Cys Asn Cys Lys His Asn Thr Tyr Gly Val Asp Cys Glu Lys Cys Leu
305 310 315 320
Pro Phe Phe Asn Asp Arg Pro Trp Arg Arg Ala Thr Ala Glu Ser Ala
325 330 335
Ser Glu Cys Leu Pro Cys Asp Cys Asn Gly Arg Ser Gln Glu Cys Tyr
340 345 350
Phe Asp Pro Glu Leu Tyr Arg Ser Thr Gly His Gly Gly His Cys Thr
355 360 365
Asn Cys Gln Asp Asn Thr Asp Gly Ala His Cys Glu Arg Cys Arg Glu
370 375 380
Asn Phe Phe Arg Leu Gly Asn Asn Glu Ala Cys Ser Ser Cys His Cys
385 390 395 400
Ser Pro Val Gly Ser Leu Ser Thr Gln Cys Asp Ser Tyr Gly Arg Cys
405 410 415
Ser Cys Lys Pro Gly Val Met Gly Asp Lys Cys Asp Arg Cys Gln Pro
420 425 430
Gly Phe His Ser Leu Thr Glu Ala Gly Cys Arg Pro Cys Ser Cys Asp
435 440 445
Pro Ser Gly Ser Ile Asp Glu Cys Asn Ile Glu Thr Gly Arg Cys Val
450 455 460
Cys Lys Asp Asn Val Glu Gly Phe Asn Cys Glu Arg Cys Lys Pro Gly
465 470 475 480
Phe Phe Asn Leu Glu Ser Ser Asn Pro Arg Gly Cys Thr Pro Cys Phe
485 490 495
Cys Phe Gly His Ser Ser Val Cys Thr Asn Ala Val Gly Tyr Ser Val
500 505 510
Tyr Ser Ile Ser Ser Thr Phe Gln Ile Asp Glu Asp Gly Trp Arg Ala
515 520 525
Glu Gln Arg Asp Gly Ser Glu Ala Ser Leu Glu Trp Ser Ser Glu Arg
530 535 540
Gln Asp Ile Ala Val Ile Ser Asp Ser Tyr Phe Pro Arg Tyr Phe Ile
545 550 555 560
Ala Pro Ala Lys Phe Leu Gly Lys Gln Val Leu Ser Tyr Gly Gln Asn
565 570 575
Leu Ser Phe Ser Phe Arg Val Asp Arg Arg Asp Thr Arg Leu Ser Ala
580 585 590
Glu Asp Leu Val Leu Glu Gly Ala Gly Leu Arg Val Ser Val Pro Leu
595 600 605
Ile Ala Gln Gly Asn Ser Tyr Pro Ser Glu Thr Thr Val Lys Tyr Val
610 615 620
Phe Arg Leu His Glu Ala Thr Asp Tyr Pro Trp Arg Pro Ala Leu Thr
625 630 635 640
Pro Phe Glu Phe Gln Lys Leu Leu Asn Asn Leu Thr Ser Ile Lys Ile
645 650 655
Arg Gly Thr Tyr Ser Glu Arg Ser Ala Gly Tyr Leu Asp Asp Val Thr
660 665 670
Leu Ala Ser Ala Arg Pro Gly Pro Gly Val Pro Ala Thr Trp Val Glu
675 680 685
Ser Cys Thr Cys Pro Val Gly Tyr Gly Gly Gln Phe Cys Glu Met Cys
690 695 700
Leu Ser Gly Tyr Arg Arg Glu Thr Pro Asn Leu Gly Pro Tyr Ser Pro
705 710 715 720
Cys Val Leu Cys Ala Cys Asn Gly His Ser Glu Thr Cys Asp Pro Glu
725 730 735
Thr Gly Val Cys Asn Cys Arg Asp Asn Thr Ala Gly Pro His Cys Glu
740 745 750
Lys Cys Ser Asp Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Thr Ala Gly Thr Ser Ser
755 760 765
Asp Cys Gln Pro Cys Pro Cys Pro Gly Gly Ser Ser Cys Ala Val Val
770 775 780
Pro Lys Thr Lys Glu Val Val Cys Thr Asn Cys Pro Thr Gly Thr Thr
785 790 795 800
Gly Lys Arg Cys Glu Leu Cys Asp Asp Gly Tyr Phe Gly Asp Pro Leu
805 810 815
Gly Arg Asn Gly Pro Val Arg Leu Cys Arg Leu Cys Gln Cys Ser Asp
820 825 830
Asn Ile Asp Pro Asn Ala Val Gly Asn Cys Asn Arg Leu Thr Gly Glu
835 840 845
Cys Leu Lys Cys Ile Tyr Asn Thr Ala Gly Phe Tyr Cys Asp Arg Cys
850 855 860
Lys Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Leu Ala Pro Asn Pro Ala Asp Lys
865 870 875 880
Cys Lys Ala Cys Asn Cys Asn Leu Tyr Gly Thr Met Lys Gln Gln Ser
885 890 895
Ser Cys Asn Pro Val Thr Gly Gln Cys Glu Cys Leu Pro His Val Thr
900 905 910
Gly Gln Asp Cys Gly Ala Cys Asp Pro Gly Phe Tyr Asn Leu Gln Ser
915 920 925
Gly Gln Gly Cys Glu Arg Cys Asp Cys His Ala Leu Gly Ser Thr Asn
930 935 940
Gly Gln Cys Asp Ile Arg Thr Gly Gln Cys Glu Cys Gln Pro Gly Ile
945 950 955 960
Thr Gly Gln His Cys Glu Arg Cys Glu Val Asn His Phe Gly Phe Gly
965 970 975
Pro Glu Gly Cys Lys Pro Cys Asp Cys His Pro Glu Gly Ser Leu Ser
980 985 990
Leu Gln Cys Lys Asp Asp Gly Arg Cys Glu Cys Arg Glu Gly Phe Val
995 1000 1005
Gly Asn Arg Cys Asp Gln Cys Glu Glu Asn Tyr Phe Tyr Asn Arg Ser
1010 1015 1020
Trp Pro Gly Cys Gln Glu Cys Pro Ala Cys Tyr Arg Leu Val Lys Asp
1025 1030 1035 1040
Lys Val Ala Asp His Arg Val Lys Leu Gln Glu Leu Glu Ser Leu Ile
1045 1050 1055
Ala Asn Leu Gly Thr Gly Asp Glu Met Val Thr Asp Gln Ala Phe Glu
1060 1065 1070
Asp Arg Leu Lys Glu Ala Glu Arg Glu Val Met Asp Leu Leu Arg Glu
1075 1080 1085
Ala Gln Asp Val Lys Asp Val Asp Gln Asn Leu Met Asp Arg Leu Gln
1090 1095 1100
Arg Val Asn Asn Thr Leu Ser Ser Gln Ile Ser Arg Leu Gln Asn Ile
1105 1110 1115 1120
Arg Asn Thr Ile Glu Glu Thr Gly Asn Leu Ala Glu Gln Ala Arg Ala
1125 1130 1135
His Val Glu Asn Thr Glu Arg Leu Ile Glu Ile Ala Ser Arg Glu Leu
1140 1145 1150
Glu Lys Ala Lys Val Ala Ala Ala Asn Val Ser Val Thr Gln Pro Glu
1155 1160 1165
Ser Thr Gly Asp Pro Asn Asn Met Thr Leu Leu Ala Glu Glu Ala Arg
1170 1175 1180
Lys Leu Ala Glu Arg His Lys Gln Glu Ala Asp Asp Ile Val Arg Val
1185 1190 1195 1200
Ala Lys Thr Ala Asn Asp Thr Ser Thr Glu Ala Tyr Asn Leu Leu Leu
1205 1210 1215
Arg Thr Leu Ala Gly Glu Asn Gln Thr Ala Phe Glu Ile Glu Glu Leu
1220 1225 1230
Asn Arg Lys Tyr Glu Gln Ala Lys Asn Ile Ser Gln Asp Leu Glu Lys
1235 1240 1245
Gln Ala Ala Arg Val His Glu Glu Ala Lys Arg Ala Gly Asp Lys Ala
1250 1255 1260
Val Glu Ile Tyr Ala Ser Val Ala Gln Leu Ser Pro Leu Asp Ser Glu
1265 1270 1275 1280
Thr Leu Glu Asn Glu Ala Asn Asn Ile Lys Met Glu Ala Glu Asn Leu
1285 1290 1295
Glu Gln Leu Ile Asp Gln Lys Leu Lys Asp Tyr Glu Asp Leu Arg Glu
1300 1305 1310
Asp Met Arg Gly Lys Glu Leu Glu Val Lys Asn Leu Leu Glu Lys Gly
1315 1320 1325
Lys Thr Glu Gln Gln Thr Ala Asp Gln Leu Leu Ala Arg Ala Asp Ala
1330 1335 1340
Ala Lys Ala Leu Ala Glu Glu Ala Ala Lys Lys Gly Arg Asp Thr Leu
1345 1350 1355 1360
Gln Glu Ala Asn Asp Ile Leu Asn Asn Leu Lys Asp Phe Asp Arg Arg
1365 1370 1375
Val Asn Asp Asn Lys Thr Ala Ala Glu Glu Ala Leu Arg Lys Ile Pro
1380 1385 1390
Ala Ile Asn Gln Thr Ile Thr Glu Ala Asn Glu Lys Thr Arg Glu Ala
1395 1400 1405
Gln Gln Ala Leu Gly Ser Ala Ala Ala Asp Ala Thr Glu Ala Lys Asn
1410 1415 1420
Lys Ala His Glu Ala Glu Arg Ile Ala Ser Ala Val Gln Lys Asn Ala
1425 1430 1435 1440
Thr Ser Thr Lys Ala Glu Ala Glu Arg Thr Phe Ala Glu Val Thr Asp
1445 1450 1455
Leu Asp Asn Glu Val Asn Asn Met Leu Lys Gln Leu Gln Glu Ala Glu
1460 1465 1470
Lys Glu Leu Lys Arg Lys Gln Asp Asp Ala Asp Gln Asp Met Met Met
1475 1480 1485
Ala Gly Met Ala Ser Gln Ala Ala Gln Glu Ala Glu Ile Asn Ala Arg
1490 1495 1500
Lys Ala Lys Asn Ser Val Thr Ser Leu Leu Ser Ile Ile Asn Asp Leu
1505 1510 1515 1520
Leu Glu Gln Leu Gly Gln Leu Asp Thr Val Asp Leu Asn Lys Leu Asn
1525 1530 1535
Glu Ile Glu Gly Thr Leu Asn Lys Ala Lys Asp Glu Met Lys Val Ser
1540 1545 1550
Asp Leu Asp Arg Lys Val Ser Asp Leu Glu Asn Glu Ala Lys Lys Gln
1555 1560 1565
Glu Ala Ala Ile Met Asp Tyr Asn Arg Asp Ile Glu Glu Ile Met Lys
1570 1575 1580
Asp Ile Arg Asn Leu Glu Asp Ile Arg Lys Thr Leu Pro Ser Gly Cys
1585 1590 1595 1600
Phe Asn Thr Pro Ser Ile Glu Lys Pro
1605
<210> 9
<211> 4830
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence of Laminin subunit gamma-1 (Homo sapiens)
<400> 9
atgagaggga gccatcgggc cgcgccggcc ctgcggcccc gggggcggct ctggcccgtg 60
ctggccgtgc tggcggcggc cgccgcggcg ggctgtgccc aggcagccat ggacgagtgc 120
acggacgagg gcgggcggcc gcagcgctgc atgcccgagt tcgtcaacgc cgccttcaac 180
gtgactgtgg tggccaccaa cacgtgtggg actccgcccg aggaatactg tgtgcagacc 240
ggggtgaccg gggtcaccaa gtcctgtcac ctgtgcgacg ccgggcagcc ccacctgcag 300
cacggggcag ccttcctgac cgactacaac aaccaggccg acaccacctg gtggcaaagc 360
cagaccatgc tggccggggt gcagtacccc agctccatca acctcacgct gcacctggga 420
aaagcttttg acatcaccta tgtgcgtctc aagttccaca ccagccgccc ggagagcttt 480
gccatttaca agcgcacacg ggaagacggg ccctggattc cttaccagta ctacagtggt 540
tcctgtgaga acacctactc caaggcaaac cgcggcttca tcaggacagg aggggacgag 600
cagcaggcct tgtgtactga tgaattcagt gacatttctc ccctcactgg gggcaacgtg 660
gccttttcta ccctggaagg aaggcccagc gcctataact ttgacaatag ccctgtgctg 720
caggaatggg taactgccac tgacatcaga gtaactctta atcgcctgaa cacttttgga 780
gatgaagtgt ttaacgatcc caaagttctc aagtcctatt attatgccat ctctgatttt 840
gctgtaggtg gcagatgtaa atgtaatgga cacgcaagcg agtgtatgaa gaacgaattt 900
gataagctgg tgtgtaattg caaacataac acatatggag tagactgtga aaagtgtctt 960
cctttcttca atgaccggcc gtggaggagg gcaactgcgg aaagtgccag tgaatgcctg 1020
ccctgtgatt gcaatggtcg atcccaggaa tgctacttcg accctgaact ctatcgttcc 1080
actggccatg ggggccactg taccaactgc caggataaca cagatggcgc ccactgtgag 1140
aggtgccgag agaacttctt ccgccttggc aacaatgaag cctgctcttc atgccactgt 1200
agtcctgtgg gctctctaag cacacagtgt gatagttacg gcagatgcag ctgtaagcca 1260
ggagtgatgg gggacaaatg tgaccgttgc cagcctggat tccattctct cactgaagca 1320
ggatgcaggc catgctcttg tgatccctct ggcagcatag atgaatgtaa tattgaaaca 1380
ggaagatgtg tttgcaaaga caatgtcgaa ggcttcaatt gtgaaagatg caaacctgga 1440
ttttttaatc tggaatcatc taatcctcgg ggttgcacac cctgcttctg ctttgggcat 1500
tcttctgtct gtacaaacgc tgttggctac agtgtttatt ctatctcctc tacctttcag 1560
attgatgagg atgggtggcg tgcggaacag agagatggct ctgaagcatc tctcgagtgg 1620
tcctctgaga ggcaagatat cgccgtgatc tcagacagct actttcctcg gtacttcatt 1680
gctcctgcaa agttcttggg caagcaggtg ttgagttatg gtcagaacct ctccttctcc 1740
tttcgagtgg acaggcgaga tactcgcctc tctgcagaag accttgtgct tgagggagct 1800
ggcttaagag tatctgtacc cttgatcgct cagggcaatt cctatccaag tgagaccact 1860
gtgaagtatg tcttcaggct ccatgaagca acagattacc cttggaggcc tgctcttacc 1920
ccttttgaat ttcagaagct cctaaacaac ttgacctcta tcaagatacg tgggacatac 1980
agtgagagaa gtgctggata tttggatgat gtcaccctgg caagtgctcg tcctgggcct 2040
ggagtccctg caacttgggt ggagtcctgc acctgtcctg tgggatatgg agggcagttt 2100
tgtgagatgt gcctctcagg ttacagaaga gaaactccta atcttggacc atacagtcca 2160
tgtgtgcttt gcgcctgcaa tggacacagc gagacctgtg atcctgagac aggtgtttgt 2220
aactgcagag acaatacggc tggcccgcac tgtgagaagt gcagtgatgg gtactatgga 2280
gattcaactg caggcacctc ctccgattgc caaccctgtc cgtgtcctgg aggttcaagt 2340
tgtgctgttg ttcccaagac aaaggaggtg gtgtgcacca actgtcctac tggcaccact 2400
ggtaagagat gtgagctctg tgatgatggc tactttggag accccctggg tagaaacggc 2460
cctgtgagac tttgccgcct gtgccagtgc agtgacaaca tcgatcccaa tgcagttgga 2520
aattgcaatc gcttgacggg agaatgcctg aagtgcatct ataacactgc tggcttctat 2580
tgtgaccggt gcaaagacgg attttttgga aatcccctgg ctcccaatcc agcagacaaa 2640
tgcaaagcct gcaattgcaa tctgtatggg accatgaagc agcagagcag ctgtaacccc 2700
gtgacggggc agtgtgaatg tttgcctcac gtgactggcc aggactgtgg tgcttgtgac 2760
cctggattct acaatctgca gagtgggcaa ggctgtgaga ggtgtgactg ccatgccttg 2820
ggctccacca atgggcagtg tgacatccgc accggccagt gtgagtgcca gcccggcatc 2880
actggtcagc actgtgagcg ctgtgaggtc aaccactttg ggtttggacc tgaaggctgc 2940
aaaccctgtg actgtcatcc tgagggatct ctttcacttc agtgcaaaga tgatggtcgc 3000
tgtgaatgca gagaaggctt tgtgggaaat cgctgtgacc agtgtgaaga aaactatttc 3060
tacaatcggt cttggcctgg ctgccaggaa tgtccagctt gttaccggct ggtaaaggat 3120
aaggttgctg atcatagagt gaagctccag gaattagaga gtctcatagc aaaccttgga 3180
actggggatg agatggtgac agatcaagcc ttcgaggata gactaaagga agcagagagg 3240
gaagttatgg acctccttcg tgaggcccag gatgtcaaag atgttgacca gaatttgatg 3300
gatcgcctac agagagtgaa taacactctg tccagccaaa ttagccgttt acagaatatc 3360
cggaatacca ttgaagagac tggaaacttg gctgaacaag cgcgtgccca tgtagagaac 3420
acagagcggt tgattgaaat cgcatccaga gaacttgaga aagcaaaagt cgctgctgcc 3480
aatgtgtcag tcactcagcc agaatctaca ggggacccaa acaacatgac tcttttggca 3540
gaagaggctc gaaagcttgc tgaacgtcat aaacaggaag ctgatgacat tgttcgagtg 3600
gcaaagacag ccaatgatac gtcaactgag gcatacaacc tgcttctgag gacactggca 3660
ggagaaaatc aaacagcatt tgagattgaa gagcttaata ggaagtatga acaagcgaag 3720
aacatctcac aggatctgga aaaacaagct gcccgagtac atgaggaggc caaaagggcc 3780
ggtgacaaag ctgtggagat ctatgccagc gtggctcagc tgagcccttt ggactctgag 3840
acactggaga atgaagcaaa taacataaag atggaagctg agaatctgga acaactgatt 3900
gaccagaaat taaaagatta tgaggacctc agagaagata tgagagggaa ggaacttgaa 3960
gtcaagaacc ttctggagaa aggcaagact gaacagcaga ccgcagacca actcctagcc 4020
cgagctgatg ctgccaaggc cctcgctgaa gaagctgcaa agaagggacg ggatacctta 4080
caagaagcta atgacattct caacaacctg aaagattttg ataggcgtgt gaacgataac 4140
aagacggccg cagaggaggc actaaggaag attcctgcca tcaaccagac catcactgaa 4200
gccaatgaaa agaccagaga agcccagcag gccctgggca gtgctgcggc ggatgccaca 4260
gaggccaaga acaaggccca tgaggcggag aggatcgcga gcgctgtcca aaagaatgcc 4320
accagcacca aggcagaagc tgaaagaact tttgcagaag ttacagatct ggataatgag 4380
gtgaacaata tgttgaagca actgcaggaa gcagaaaaag agctaaagag aaaacaagat 4440
gacgctgacc aggacatgat gatggcaggg atggcttcac aggctgctca agaagccgag 4500
atcaatgcca gaaaagccaa aaactctgtt actagcctcc tcagcattat taatgacctc 4560
ttggagcagc tggggcagct ggatacagtg gacctgaata agctaaacga gattgaaggc 4620
accctaaaca aagccaaaga tgaaatgaag gtcagcgatc ttgataggaa agtgtctgac 4680
ctggagaatg aagccaagaa gcaggaggct gccatcatgg actataaccg agatatcgag 4740
gagatcatga aggacattcg caatctggag gacatcagga agaccttacc atctggctgc 4800
ttcaacaccc cgtccattga aaagccctag 4830
<210> 10
<211> 3122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of Laminin subunit alpha-2 (Homo sapiens)
<400> 10
Met Pro Gly Ala Ala Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Gly
1 5 10 15
Leu Gly Gly Val Gln Ala Gln Arg Pro Gln Gln Gln Arg Gln Ser Gln
20 25 30
Ala His Gln Gln Arg Gly Leu Phe Pro Ala Val Leu Asn Leu Ala Ser
35 40 45
Asn Ala Leu Ile Thr Thr Asn Ala Thr Cys Gly Glu Lys Gly Pro Glu
50 55 60
Met Tyr Cys Lys Leu Val Glu His Val Pro Gly Gln Pro Val Arg Asn
65 70 75 80
Pro Gln Cys Arg Ile Cys Asn Gln Asn Ser Ser Asn Pro Asn Gln Arg
85 90 95
His Pro Ile Thr Asn Ala Ile Asp Gly Lys Asn Thr Trp Trp Gln Ser
100 105 110
Pro Ser Ile Lys Asn Gly Ile Glu Tyr His Tyr Val Thr Ile Thr Leu
115 120 125
Asp Leu Gln Gln Val Phe Gln Ile Ala Tyr Val Ile Val Lys Ala Ala
130 135 140
Asn Ser Pro Arg Pro Gly Asn Trp Ile Leu Glu Arg Ser Leu Asp Asp
145 150 155 160
Val Glu Tyr Lys Pro Trp Gln Tyr His Ala Val Thr Asp Thr Glu Cys
165 170 175
Leu Thr Leu Tyr Asn Ile Tyr Pro Arg Thr Gly Pro Pro Ser Tyr Ala
180 185 190
Lys Asp Asp Glu Val Ile Cys Thr Ser Phe Tyr Ser Lys Ile His Pro
195 200 205
Leu Glu Asn Gly Glu Ile His Ile Ser Leu Ile Asn Gly Arg Pro Ser
210 215 220
Ala Asp Asp Pro Ser Pro Glu Leu Leu Glu Phe Thr Ser Ala Arg Tyr
225 230 235 240
Ile Arg Leu Arg Phe Gln Arg Ile Arg Thr Leu Asn Ala Asp Leu Met
245 250 255
Met Phe Ala His Lys Asp Pro Arg Glu Ile Asp Pro Ile Val Thr Arg
260 265 270
Arg Tyr Tyr Tyr Ser Val Lys Asp Ile Ser Val Gly Gly Met Cys Ile
275 280 285
Cys Tyr Gly His Ala Arg Ala Cys Pro Leu Asp Pro Ala Thr Asn Lys
290 295 300
Ser Arg Cys Glu Cys Glu His Asn Thr Cys Gly Asp Ser Cys Asp Gln
305 310 315 320
Cys Cys Pro Gly Phe His Gln Lys Pro Trp Arg Ala Gly Thr Phe Leu
325 330 335
Thr Lys Thr Glu Cys Glu Ala Cys Asn Cys His Gly Lys Ala Glu Glu
340 345 350
Cys Tyr Tyr Asp Glu Asn Val Ala Arg Arg Asn Leu Ser Leu Asn Ile
355 360 365
Arg Gly Lys Tyr Ile Gly Gly Gly Val Cys Ile Asn Cys Thr Gln Asn
370 375 380
Thr Ala Gly Ile Asn Cys Glu Thr Cys Thr Asp Gly Phe Phe Arg Pro
385 390 395 400
Lys Gly Val Ser Pro Asn Tyr Pro Arg Pro Cys Gln Pro Cys His Cys
405 410 415
Asp Pro Ile Gly Ser Leu Asn Glu Val Cys Val Lys Asp Glu Lys His
420 425 430
Ala Arg Arg Gly Leu Ala Pro Gly Ser Cys His Cys Lys Thr Gly Phe
435 440 445
Gly Gly Val Ser Cys Asp Arg Cys Ala Arg Gly Tyr Thr Gly Tyr Pro
450 455 460
Asp Cys Lys Ala Cys Asn Cys Ser Gly Leu Gly Ser Lys Asn Glu Asp
465 470 475 480
Pro Cys Phe Gly Pro Cys Ile Cys Lys Glu Asn Val Glu Gly Gly Asp
485 490 495
Cys Ser Arg Cys Lys Ser Gly Phe Phe Asn Leu Gln Glu Asp Asn Trp
500 505 510
Lys Gly Cys Asp Glu Cys Phe Cys Ser Gly Val Ser Asn Arg Cys Gln
515 520 525
Ser Ser Tyr Trp Thr Tyr Gly Lys Ile Gln Asp Met Ser Gly Trp Tyr
530 535 540
Leu Thr Asp Leu Pro Gly Arg Ile Arg Val Ala Pro Gln Gln Asp Asp
545 550 555 560
Leu Asp Ser Pro Gln Gln Ile Ser Ile Ser Asn Ala Glu Ala Arg Gln
565 570 575
Ala Leu Pro His Ser Tyr Tyr Trp Ser Ala Pro Ala Pro Tyr Leu Gly
580 585 590
Asn Lys Leu Pro Ala Val Gly Gly Gln Leu Thr Phe Thr Ile Ser Tyr
595 600 605
Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Thr Glu Arg Val Leu Gln Leu Met
610 615 620
Ile Ile Leu Glu Gly Asn Asp Leu Ser Ile Ser Thr Ala Gln Asp Glu
625 630 635 640
Val Tyr Leu His Pro Ser Glu Glu His Thr Asn Val Leu Leu Leu Lys
645 650 655
Glu Glu Ser Phe Thr Ile His Gly Thr His Phe Pro Val Arg Arg Lys
660 665 670
Glu Phe Met Thr Val Leu Ala Asn Leu Lys Arg Val Leu Leu Gln Ile
675 680 685
Thr Tyr Ser Phe Gly Met Asp Ala Ile Phe Arg Leu Ser Ser Val Asn
690 695 700
Leu Glu Ser Ala Val Ser Tyr Pro Thr Asp Gly Ser Ile Ala Ala Ala
705 710 715 720
Val Glu Val Cys Gln Cys Pro Pro Gly Tyr Thr Gly Ser Ser Cys Glu
725 730 735
Ser Cys Trp Pro Arg His Arg Arg Val Asn Gly Thr Ile Phe Gly Gly
740 745 750
Ile Cys Glu Pro Cys Gln Cys Phe Gly His Ala Glu Ser Cys Asp Asp
755 760 765
Val Thr Gly Glu Cys Leu Asn Cys Lys Asp His Thr Gly Gly Pro Tyr
770 775 780
Cys Asp Lys Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Gly Glu Pro Thr Lys Gly Thr
785 790 795 800
Ser Glu Asp Cys Gln Pro Cys Ala Cys Pro Leu Asn Ile Pro Ser Asn
805 810 815
Asn Phe Ser Pro Thr Cys His Leu Asp Arg Ser Leu Gly Leu Ile Cys
820 825 830
Asp Gly Cys Pro Val Gly Tyr Thr Gly Pro Arg Cys Glu Arg Cys Ala
835 840 845
Glu Gly Tyr Phe Gly Gln Pro Ser Val Pro Gly Gly Ser Cys Gln Pro
850 855 860
Cys Gln Cys Asn Asp Asn Leu Asp Phe Ser Ile Pro Gly Ser Cys Asp
865 870 875 880
Ser Leu Ser Gly Ser Cys Leu Ile Cys Lys Pro Gly Thr Thr Gly Arg
885 890 895
Tyr Cys Glu Leu Cys Ala Asp Gly Tyr Phe Gly Asp Ala Val Asp Ala
900 905 910
Lys Asn Cys Gln Pro Cys Arg Cys Asn Ala Gly Gly Ser Phe Ser Glu
915 920 925
Val Cys His Ser Gln Thr Gly Gln Cys Glu Cys Arg Ala Asn Val Gln
930 935 940
Gly Gln Arg Cys Asp Lys Cys Lys Ala Gly Thr Phe Gly Leu Gln Ser
945 950 955 960
Ala Arg Gly Cys Val Pro Cys Asn Cys Asn Ser Phe Gly Ser Lys Ser
965 970 975
Phe Asp Cys Glu Glu Ser Gly Gln Cys Trp Cys Gln Pro Gly Val Thr
980 985 990
Gly Lys Lys Cys Asp Arg Cys Ala His Gly Tyr Phe Asn Phe Gln Glu
995 1000 1005
Gly Gly Cys Thr Ala Cys Glu Cys Ser His Leu Gly Asn Asn Cys Asp
1010 1015 1020
Pro Lys Thr Gly Arg Cys Ile Cys Pro Pro Asn Thr Ile Gly Glu Lys
1025 1030 1035 1040
Cys Ser Lys Cys Ala Pro Asn Thr Trp Gly His Ser Ile Thr Thr Gly
1045 1050 1055
Cys Lys Ala Cys Asn Cys Ser Thr Val Gly Ser Leu Asp Phe Gln Cys
1060 1065 1070
Asn Val Asn Thr Gly Gln Cys Asn Cys His Pro Lys Phe Ser Gly Ala
1075 1080 1085
Lys Cys Thr Glu Cys Ser Arg Gly His Trp Asn Tyr Pro Arg Cys Asn
1090 1095 1100
Leu Cys Asp Cys Phe Leu Pro Gly Thr Asp Ala Thr Thr Cys Asp Ser
1105 1110 1115 1120
Glu Thr Lys Lys Cys Ser Cys Ser Asp Gln Thr Gly Gln Cys Thr Cys
1125 1130 1135
Lys Val Asn Val Glu Gly Ile His Cys Asp Arg Cys Arg Pro Gly Lys
1140 1145 1150
Phe Gly Leu Asp Ala Lys Asn Pro Leu Gly Cys Ser Ser Cys Tyr Cys
1155 1160 1165
Phe Gly Thr Thr Thr Gln Cys Ser Glu Ala Lys Gly Leu Ile Arg Thr
1170 1175 1180
Trp Val Thr Leu Lys Ala Glu Gln Thr Ile Leu Pro Leu Val Asp Glu
1185 1190 1195 1200
Ala Leu Gln His Thr Thr Thr Lys Gly Ile Val Phe Gln His Pro Glu
1205 1210 1215
Ile Val Ala His Met Asp Leu Met Arg Glu Asp Leu His Leu Glu Pro
1220 1225 1230
Phe Tyr Trp Lys Leu Pro Glu Gln Phe Glu Gly Lys Lys Leu Met Ala
1235 1240 1245
Tyr Gly Gly Lys Leu Lys Tyr Ala Ile Tyr Phe Glu Ala Arg Glu Glu
1250 1255 1260
Thr Gly Phe Ser Thr Tyr Asn Pro Gln Val Ile Ile Arg Gly Gly Thr
1265 1270 1275 1280
Pro Thr His Ala Arg Ile Ile Val Arg His Met Ala Ala Pro Leu Ile
1285 1290 1295
Gly Gln Leu Thr Arg His Glu Ile Glu Met Thr Glu Lys Glu Trp Lys
1300 1305 1310
Tyr Tyr Gly Asp Asp Pro Arg Val His Arg Thr Val Thr Arg Glu Asp
1315 1320 1325
Phe Leu Asp Ile Leu Tyr Asp Ile His Tyr Ile Leu Ile Lys Ala Thr
1330 1335 1340
Tyr Gly Asn Phe Met Arg Gln Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ser Met Glu
1345 1350 1355 1360
Val Ala Glu Gln Gly Arg Gly Thr Thr Met Thr Pro Pro Ala Asp Leu
1365 1370 1375
Ile Glu Lys Cys Asp Cys Pro Leu Gly Tyr Ser Gly Leu Ser Cys Glu
1380 1385 1390
Ala Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Leu Arg Ser Gln Pro Gly Gly Arg
1395 1400 1405
Thr Pro Gly Pro Thr Leu Gly Thr Cys Val Pro Cys Gln Cys Asn Gly
1410 1415 1420
His Ser Ser Leu Cys Asp Pro Glu Thr Ser Ile Cys Gln Asn Cys Gln
1425 1430 1435 1440
His His Thr Ala Gly Asp Phe Cys Glu Arg Cys Ala Leu Gly Tyr Tyr
1445 1450 1455
Gly Ile Val Lys Gly Leu Pro Asn Asp Cys Gln Gln Cys Ala Cys Pro
1460 1465 1470
Leu Ile Ser Ser Ser Asn Asn Phe Ser Pro Ser Cys Val Ala Glu Gly
1475 1480 1485
Leu Asp Asp Tyr Arg Cys Thr Ala Cys Pro Arg Gly Tyr Glu Gly Gln
1490 1495 1500
Tyr Cys Glu Arg Cys Ala Pro Gly Tyr Thr Gly Ser Pro Gly Asn Pro
1505 1510 1515 1520
Gly Gly Ser Cys Gln Glu Cys Glu Cys Asp Pro Tyr Gly Ser Leu Pro
1525 1530 1535
Val Pro Cys Asp Pro Val Thr Gly Phe Cys Thr Cys Arg Pro Gly Ala
1540 1545 1550
Thr Gly Arg Lys Cys Asp Gly Cys Lys His Trp His Ala Arg Glu Gly
1555 1560 1565
Trp Glu Cys Val Phe Cys Gly Asp Glu Cys Thr Gly Leu Leu Leu Gly
1570 1575 1580
Asp Leu Ala Arg Leu Glu Gln Met Val Met Ser Ile Asn Leu Thr Gly
1585 1590 1595 1600
Pro Leu Pro Ala Pro Tyr Lys Met Leu Tyr Gly Leu Glu Asn Met Thr
1605 1610 1615
Gln Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Pro Gln Arg Ala Pro Glu Arg Leu
1620 1625 1630
Ile Gln Leu Ala Glu Gly Asn Leu Asn Thr Leu Val Thr Glu Met Asn
1635 1640 1645
Glu Leu Leu Thr Arg Ala Thr Lys Val Thr Ala Asp Gly Glu Gln Thr
1650 1655 1660
Gly Gln Asp Ala Glu Arg Thr Asn Thr Arg Ala Lys Ser Leu Gly Glu
1665 1670 1675 1680
Phe Ile Lys Glu Leu Ala Arg Asp Ala Glu Ala Val Asn Glu Lys Ala
1685 1690 1695
Ile Lys Leu Asn Glu Thr Leu Gly Thr Arg Asp Glu Ala Phe Glu Arg
1700 1705 1710
Asn Leu Glu Gly Leu Gln Lys Glu Ile Asp Gln Met Ile Lys Glu Leu
1715 1720 1725
Arg Arg Lys Asn Leu Glu Thr Gln Lys Glu Ile Ala Glu Asp Glu Leu
1730 1735 1740
Val Ala Ala Glu Ala Leu Leu Lys Lys Val Lys Lys Leu Phe Gly Glu
1745 1750 1755 1760
Ser Arg Gly Glu Asn Glu Glu Met Glu Lys Asp Leu Arg Glu Lys Leu
1765 1770 1775
Ala Asp Tyr Lys Asn Lys Val Asp Asp Ala Trp Asp Leu Leu Arg Glu
1780 1785 1790
Ala Thr Asp Lys Ile Arg Glu Ala Asn Arg Leu Phe Ala Val Asn Gln
1795 1800 1805
Lys Asn Met Thr Ala Leu Glu Lys Lys Lys Glu Ala Val Glu Ser Gly
1810 1815 1820
Lys Arg Gln Ile Glu Asn Thr Leu Lys Glu Gly Asn Asp Ile Leu Asp
1825 1830 1835 1840
Glu Ala Asn Arg Leu Ala Asp Glu Ile Asn Ser Ile Ile Asp Tyr Val
1845 1850 1855
Glu Asp Ile Gln Thr Lys Leu Pro Pro Met Ser Glu Glu Leu Asn Asp
1860 1865 1870
Lys Ile Asp Asp Leu Ser Gln Glu Ile Lys Asp Arg Lys Leu Ala Glu
1875 1880 1885
Lys Val Ser Gln Ala Glu Ser His Ala Ala Gln Leu Asn Asp Ser Ser
1890 1895 1900
Ala Val Leu Asp Gly Ile Leu Asp Glu Ala Lys Asn Ile Ser Phe Asn
1905 1910 1915 1920
Ala Thr Ala Ala Phe Lys Ala Tyr Ser Asn Ile Lys Asp Tyr Ile Asp
1925 1930 1935
Glu Ala Glu Lys Val Ala Lys Glu Ala Lys Asp Leu Ala His Glu Ala
1940 1945 1950
Thr Lys Leu Ala Thr Gly Pro Arg Gly Leu Leu Lys Glu Asp Ala Lys
1955 1960 1965
Gly Cys Leu Gln Lys Ser Phe Arg Ile Leu Asn Glu Ala Lys Lys Leu
1970 1975 1980
Ala Asn Asp Val Lys Glu Asn Glu Asp His Leu Asn Gly Leu Lys Thr
1985 1990 1995 2000
Arg Ile Glu Asn Ala Asp Ala Arg Asn Gly Asp Leu Leu Arg Thr Leu
2005 2010 2015
Asn Asp Thr Leu Gly Lys Leu Ser Ala Ile Pro Asn Asp Thr Ala Ala
2020 2025 2030
Lys Leu Gln Ala Val Lys Asp Lys Ala Arg Gln Ala Asn Asp Thr Ala
2035 2040 2045
Lys Asp Val Leu Ala Gln Ile Thr Glu Leu His Gln Asn Leu Asp Gly
2050 2055 2060
Leu Lys Lys Asn Tyr Asn Lys Leu Ala Asp Ser Val Ala Lys Thr Asn
2065 2070 2075 2080
Ala Val Val Lys Asp Pro Ser Lys Asn Lys Ile Ile Ala Asp Ala Asp
2085 2090 2095
Ala Thr Val Lys Asn Leu Glu Gln Glu Ala Asp Arg Leu Ile Asp Lys
2100 2105 2110
Leu Lys Pro Ile Lys Glu Leu Glu Asp Asn Leu Lys Lys Asn Ile Ser
2115 2120 2125
Glu Ile Lys Glu Leu Ile Asn Gln Ala Arg Lys Gln Ala Asn Ser Ile
2130 2135 2140
Lys Val Ser Val Ser Ser Gly Gly Asp Cys Ile Arg Thr Tyr Lys Pro
2145 2150 2155 2160
Glu Ile Lys Lys Gly Ser Tyr Asn Asn Ile Val Val Asn Val Lys Thr
2165 2170 2175
Ala Val Ala Asp Asn Leu Leu Phe Tyr Leu Gly Ser Ala Lys Phe Ile
2180 2185 2190
Asp Phe Leu Ala Ile Glu Met Arg Lys Gly Lys Val Ser Phe Leu Trp
2195 2200 2205
Asp Val Gly Ser Gly Val Gly Arg Val Glu Tyr Pro Asp Leu Thr Ile
2210 2215 2220
Asp Asp Ser Tyr Trp Tyr Arg Ile Val Ala Ser Arg Thr Gly Arg Asn
2225 2230 2235 2240
Gly Thr Ile Ser Val Arg Ala Leu Asp Gly Pro Lys Ala Ser Ile Val
2245 2250 2255
Pro Ser Thr His His Ser Thr Ser Pro Pro Gly Tyr Thr Ile Leu Asp
2260 2265 2270
Val Asp Ala Asn Ala Met Leu Phe Val Gly Gly Leu Thr Gly Lys Leu
2275 2280 2285
Lys Lys Ala Asp Ala Val Arg Val Ile Thr Phe Thr Gly Cys Met Gly
2290 2295 2300
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2340 2345 2350
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2370 2375 2380
Leu Arg Asp Phe Met Ser Val Glu Leu Thr Asp Gly His Ile Lys Val
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Ser Tyr Asp Leu Gly Ser Gly Met Ala Ser Val Val Ser Asn Gln Asn
2405 2410 2415
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2420 2425 2430
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2450 2455 2460
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Gly Ile Ile Leu Leu Gly Ser Gly Gly Thr Pro Ala Pro Pro Arg Arg
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2580 2585 2590
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Ser Val His Val Glu Arg Thr Arg Gly Ile Phe Thr Val Gln Val Asp
2625 2630 2635 2640
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2675 2680 2685
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Gly Ala Ala Pro Ala Glu Ile Val Ile Gln Pro Glu Pro Val Pro Thr
2725 2730 2735
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2740 2745 2750
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2770 2775 2780
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2805 2810 2815
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2820 2825 2830
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2850 2855 2860
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2865 2870 2875 2880
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2885 2890 2895
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2900 2905 2910
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2915 2920 2925
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2930 2935 2940
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2945 2950 2955 2960
Asp Leu Leu Val Glu Phe Glu Phe Arg Thr Thr Thr Thr Thr Gly Val
2965 2970 2975
Leu Leu Gly Ile Ser Ser Gln Lys Met Asp Gly Met Gly Ile Glu Met
2980 2985 2990
Ile Asp Glu Lys Leu Met Phe His Val Asp Asn Gly Ala Gly Arg Phe
2995 3000 3005
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3010 3015 3020
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3060 3065 3070
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Arg Ser Leu Lys Leu Thr Lys Gly Thr Gly Lys Pro Leu Glu Val Asn
3090 3095 3100
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Ala Asn
<210> 11
<211> 3695
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of Laminin subunit alpha-5 (Homo sapiens)
<400> 11
Met Ala Lys Arg Leu Cys Ala Gly Ser Ala Leu Cys Val Arg Gly Pro
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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885 890 895
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965 970 975
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980 985 990
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Ser Ala Ala Gly Leu Glu Ala Leu Cys Arg Gln Asp Asn Ser Leu Pro
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1140 1145 1150
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1155 1160 1165
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1170 1175 1180
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1205 1210 1215
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1220 1225 1230
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1235 1240 1245
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1250 1255 1260
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1265 1270 1275 1280
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1285 1290 1295
Gly Arg Tyr Ala Phe Leu Leu His Gly Tyr Gln Pro Ala His Pro Thr
1300 1305 1310
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1315 1320 1325
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1330 1335 1340
Val Cys Glu Gly Gln Ala Leu Leu Asp Val Thr His Ser Glu Leu Thr
1345 1350 1355 1360
Val Thr Val Arg Val Pro Lys Gly Arg Trp Leu Trp Leu Asp Tyr Val
1365 1370 1375
Leu Val Val Pro Glu Asn Val Tyr Ser Phe Gly Tyr Leu Arg Glu Glu
1380 1385 1390
Pro Leu Asp Lys Ser Tyr Asp Phe Ile Ser His Cys Ala Ala Gln Gly
1395 1400 1405
Tyr His Ile Ser Pro Ser Ser Ser Ser Leu Phe Cys Arg Asn Ala Ala
1410 1415 1420
Ala Ser Leu Ser Leu Phe Tyr Asn Asn Gly Ala Arg Pro Cys Gly Cys
1425 1430 1435 1440
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1445 1450 1455
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1460 1465 1470
Thr Gly Tyr Trp Gly Phe Pro Asn Cys Arg Pro Cys Asp Cys Gly Ala
1475 1480 1485
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1490 1495 1500
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1505 1510 1515 1520
Pro Leu Val Gly Cys Glu Glu Cys Asn Cys Ser Gly Pro Gly Ile Gln
1525 1530 1535
Glu Leu Thr Asp Pro Thr Cys Asp Thr Asp Ser Gly Gln Cys Lys Cys
1540 1545 1550
Arg Pro Asn Val Thr Gly Arg Arg Cys Asp Thr Cys Ser Pro Gly Phe
1555 1560 1565
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1570 1575 1580
Ala Pro Gly Val Cys Asp Pro Leu Thr Gly Gln Cys Tyr Cys Lys Glu
1585 1590 1595 1600
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1605 1610 1615
Leu Asp Ala Ala Asn Pro Lys Gly Cys Thr Arg Cys Phe Cys Phe Gly
1620 1625 1630
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1635 1640 1645
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1650 1655 1660
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1665 1670 1675 1680
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1685 1690 1695
Pro Pro Ser Tyr Leu Gly Asp Arg Val Ser Ser Tyr Gly Gly Thr Leu
1700 1705 1710
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1730 1735 1740
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1745 1750 1755 1760
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1765 1770 1775
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1810 1815 1820
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1860 1865 1870
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1875 1880 1885
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1955 1960 1965
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1970 1975 1980
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1985 1990 1995 2000
Pro Arg Cys Glu Ile Cys Ala Pro Gly Phe Tyr Gly Asn Ala Leu Leu
2005 2010 2015
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2020 2025 2030
Cys Asp Pro His Ser Gly His Cys Leu Cys Lys Ala Gly Val Thr Gly
2035 2040 2045
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2050 2055 2060
Gly Gly Cys Arg Pro Cys Ala Cys Gly Pro Ala Ala Glu Gly Ser Glu
2065 2070 2075 2080
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2085 2090 2095
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2100 2105 2110
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2130 2135 2140
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2180 2185 2190
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2245 2250 2255
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Glu Leu Ile Ala Gln Ala Arg Gly Ala Ala Ser Lys Val Lys Val Pro
2725 2730 2735
Met Lys Phe Asn Gly Arg Ser Gly Val Gln Leu Arg Thr Pro Arg Asp
2740 2745 2750
Leu Ala Asp Leu Ala Ala Tyr Thr Ala Leu Lys Phe Tyr Leu Gln Gly
2755 2760 2765
Pro Glu Pro Glu Pro Gly Gln Gly Thr Glu Asp Arg Phe Val Met Tyr
2770 2775 2780
Met Gly Ser Arg Gln Ala Thr Gly Asp Tyr Met Gly Val Ser Leu Arg
2785 2790 2795 2800
Asp Lys Lys Val His Trp Val Tyr Gln Leu Gly Glu Ala Gly Pro Ala
2805 2810 2815
Val Leu Ser Ile Asp Glu Asp Ile Gly Glu Gln Phe Ala Ala Val Ser
2820 2825 2830
Leu Asp Arg Thr Leu Gln Phe Gly His Met Ser Val Thr Val Glu Arg
2835 2840 2845
Gln Met Ile Gln Glu Thr Lys Gly Asp Thr Val Ala Pro Gly Ala Glu
2850 2855 2860
Gly Leu Leu Asn Leu Arg Pro Asp Asp Phe Val Phe Tyr Val Gly Gly
2865 2870 2875 2880
Tyr Pro Ser Thr Phe Thr Pro Pro Pro Leu Leu Arg Phe Pro Gly Tyr
2885 2890 2895
Arg Gly Cys Ile Glu Met Asp Thr Leu Asn Glu Glu Val Val Ser Leu
2900 2905 2910
Tyr Asn Phe Glu Arg Thr Phe Gln Leu Asp Thr Ala Val Asp Arg Pro
2915 2920 2925
Cys Ala Arg Ser Lys Ser Thr Gly Asp Pro Trp Leu Thr Asp Gly Ser
2930 2935 2940
Tyr Leu Asp Gly Thr Gly Phe Ala Arg Ile Ser Phe Asp Ser Gln Ile
2945 2950 2955 2960
Ser Thr Thr Lys Arg Phe Glu Gln Glu Leu Arg Leu Val Ser Tyr Ser
2965 2970 2975
Gly Val Leu Phe Phe Leu Lys Gln Gln Ser Gln Phe Leu Cys Leu Ala
2980 2985 2990
Val Gln Glu Gly Ser Leu Val Leu Leu Tyr Asp Phe Gly Ala Gly Leu
2995 3000 3005
Lys Lys Ala Val Pro Leu Gln Pro Pro Pro Pro Leu Thr Ser Ala Ser
3010 3015 3020
Lys Ala Ile Gln Val Phe Leu Leu Gly Gly Ser Arg Lys Arg Val Leu
3025 3030 3035 3040
Val Arg Val Glu Arg Ala Thr Val Tyr Ser Val Glu Gln Asp Asn Asp
3045 3050 3055
Leu Glu Leu Ala Asp Ala Tyr Tyr Leu Gly Gly Val Pro Pro Asp Gln
3060 3065 3070
Leu Pro Pro Ser Leu Arg Arg Leu Phe Pro Thr Gly Gly Ser Val Arg
3075 3080 3085
Gly Cys Val Lys Gly Ile Lys Ala Leu Gly Lys Tyr Val Asp Leu Lys
3090 3095 3100
Arg Leu Asn Thr Thr Gly Val Ser Ala Gly Cys Thr Ala Asp Leu Leu
3105 3110 3115 3120
Val Gly Arg Ala Met Thr Phe His Gly His Gly Phe Leu Arg Leu Ala
3125 3130 3135
Leu Ser Asn Val Ala Pro Leu Thr Gly Asn Val Tyr Ser Gly Phe Gly
3140 3145 3150
Phe His Ser Ala Gln Asp Ser Ala Leu Leu Tyr Tyr Arg Ala Ser Pro
3155 3160 3165
Asp Gly Leu Cys Gln Val Ser Leu Gln Gln Gly Arg Val Ser Leu Gln
3170 3175 3180
Leu Leu Arg Thr Glu Val Lys Thr Gln Ala Gly Phe Ala Asp Gly Ala
3185 3190 3195 3200
Pro His Tyr Val Ala Phe Tyr Ser Asn Ala Thr Gly Val Trp Leu Tyr
3205 3210 3215
Val Asp Asp Gln Leu Gln Gln Met Lys Pro His Arg Gly Pro Pro Pro
3220 3225 3230
Glu Leu Gln Pro Gln Pro Glu Gly Pro Pro Arg Leu Leu Leu Gly Gly
3235 3240 3245
Leu Pro Glu Ser Gly Thr Ile Tyr Asn Phe Ser Gly Cys Ile Ser Asn
3250 3255 3260
Val Phe Val Gln Arg Leu Leu Gly Pro Gln Arg Val Phe Asp Leu Gln
3265 3270 3275 3280
Gln Asn Leu Gly Ser Val Asn Val Ser Thr Gly Cys Ala Pro Ala Leu
3285 3290 3295
Gln Ala Gln Thr Pro Gly Leu Gly Pro Arg Gly Leu Gln Ala Thr Ala
3300 3305 3310
Arg Lys Ala Ser Arg Arg Ser Arg Gln Pro Ala Arg His Pro Ala Cys
3315 3320 3325
Met Leu Pro Pro His Leu Arg Thr Thr Arg Asp Ser Tyr Gln Phe Gly
3330 3335 3340
Gly Ser Leu Ser Ser His Leu Glu Phe Val Gly Ile Leu Ala Arg His
3345 3350 3355 3360
Arg Asn Trp Pro Ser Leu Ser Met His Val Leu Pro Arg Ser Ser Arg
3365 3370 3375
Gly Leu Leu Leu Phe Thr Ala Arg Leu Arg Pro Gly Ser Pro Ser Leu
3380 3385 3390
Ala Leu Phe Leu Ser Asn Gly His Phe Val Ala Gln Met Glu Gly Leu
3395 3400 3405
Gly Thr Arg Leu Arg Ala Gln Ser Arg Gln Arg Ser Arg Pro Gly Arg
3410 3415 3420
Trp His Lys Val Ser Val Arg Trp Glu Lys Asn Arg Ile Leu Leu Val
3425 3430 3435 3440
Thr Asp Gly Ala Arg Ala Trp Ser Gln Glu Gly Pro His Arg Gln His
3445 3450 3455
Gln Gly Ala Glu His Pro Gln Pro His Thr Leu Phe Val Gly Gly Leu
3460 3465 3470
Pro Ala Ser Ser His Ser Ser Lys Leu Pro Val Thr Val Gly Phe Ser
3475 3480 3485
Gly Cys Val Lys Arg Leu Arg Leu His Gly Arg Pro Leu Gly Ala Pro
3490 3495 3500
Thr Arg Met Ala Gly Val Thr Pro Cys Ile Leu Gly Pro Leu Glu Ala
3505 3510 3515 3520
Gly Leu Phe Phe Pro Gly Ser Gly Gly Val Ile Thr Leu Asp Leu Pro
3525 3530 3535
Gly Ala Thr Leu Pro Asp Val Gly Leu Glu Leu Glu Val Arg Pro Leu
3540 3545 3550
Ala Val Thr Gly Leu Ile Phe His Leu Gly Gln Ala Arg Thr Pro Pro
3555 3560 3565
Tyr Leu Gln Leu Gln Val Thr Glu Lys Gln Val Leu Leu Arg Ala Asp
3570 3575 3580
Asp Gly Ala Gly Glu Phe Ser Thr Ser Val Thr Arg Pro Ser Val Leu
3585 3590 3595 3600
Cys Asp Gly Gln Trp His Arg Leu Ala Val Met Lys Ser Gly Asn Val
3605 3610 3615
Leu Arg Leu Glu Val Asp Ala Gln Ser Asn His Thr Val Gly Pro Leu
3620 3625 3630
Leu Ala Ala Ala Ala Gly Ala Pro Ala Pro Leu Tyr Leu Gly Gly Leu
3635 3640 3645
Pro Glu Pro Met Ala Val Gln Pro Trp Pro Pro Ala Tyr Cys Gly Cys
3650 3655 3660
Met Arg Arg Leu Ala Val Asn Arg Ser Pro Val Ala Met Thr Arg Ser
3665 3670 3675 3680
Val Glu Val His Gly Ala Val Gly Ala Ser Gly Cys Pro Ala Ala
3685 3690 3695
<210> 12
<211> 1786
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of Laminin subunit beta-1 (Homo sapiens)
<400> 12
Met Gly Leu Leu Gln Leu Leu Ala Phe Ser Phe Leu Ala Leu Cys Arg
1 5 10 15
Ala Arg Val Arg Ala Gln Glu Pro Glu Phe Ser Tyr Gly Cys Ala Glu
20 25 30
Gly Ser Cys Tyr Pro Ala Thr Gly Asp Leu Leu Ile Gly Arg Ala Gln
35 40 45
Lys Leu Ser Val Thr Ser Thr Cys Gly Leu His Lys Pro Glu Pro Tyr
50 55 60
Cys Ile Val Ser His Leu Gln Glu Asp Lys Lys Cys Phe Ile Cys Asn
65 70 75 80
Ser Gln Asp Pro Tyr His Glu Thr Leu Asn Pro Asp Ser His Leu Ile
85 90 95
Glu Asn Val Val Thr Thr Phe Ala Pro Asn Arg Leu Lys Ile Trp Trp
100 105 110
Gln Ser Glu Asn Gly Val Glu Asn Val Thr Ile Gln Leu Asp Leu Glu
115 120 125
Ala Glu Phe His Phe Thr His Leu Ile Met Thr Phe Lys Thr Phe Arg
130 135 140
Pro Ala Ala Met Leu Ile Glu Arg Ser Ser Asp Phe Gly Lys Thr Trp
145 150 155 160
Gly Val Tyr Arg Tyr Phe Ala Tyr Asp Cys Glu Ala Ser Phe Pro Gly
165 170 175
Ile Ser Thr Gly Pro Met Lys Lys Val Asp Asp Ile Ile Cys Asp Ser
180 185 190
Arg Tyr Ser Asp Ile Glu Pro Ser Thr Glu Gly Glu Val Ile Phe Arg
195 200 205
Ala Leu Asp Pro Ala Phe Lys Ile Glu Asp Pro Tyr Ser Pro Arg Ile
210 215 220
Gln Asn Leu Leu Lys Ile Thr Asn Leu Arg Ile Lys Phe Val Lys Leu
225 230 235 240
His Thr Leu Gly Asp Asn Leu Leu Asp Ser Arg Met Glu Ile Arg Glu
245 250 255
Lys Tyr Tyr Tyr Ala Val Tyr Asp Met Val Val Arg Gly Asn Cys Phe
260 265 270
Cys Tyr Gly His Ala Ser Glu Cys Ala Pro Val Asp Gly Phe Asn Glu
275 280 285
Glu Val Glu Gly Met Val His Gly His Cys Met Cys Arg His Asn Thr
290 295 300
Lys Gly Leu Asn Cys Glu Leu Cys Met Asp Phe Tyr His Asp Leu Pro
305 310 315 320
Trp Arg Pro Ala Glu Gly Arg Asn Ser Asn Ala Cys Lys Lys Cys Asn
325 330 335
Cys Asn Glu His Ser Ile Ser Cys His Phe Asp Met Ala Val Tyr Leu
340 345 350
Ala Thr Gly Asn Val Ser Gly Gly Val Cys Asp Asp Cys Gln His Asn
355 360 365
Thr Met Gly Arg Asn Cys Glu Gln Cys Lys Pro Phe Tyr Tyr Gln His
370 375 380
Pro Glu Arg Asp Ile Arg Asp Pro Asn Phe Cys Glu Arg Cys Thr Cys
385 390 395 400
Asp Pro Ala Gly Ser Gln Asn Glu Gly Ile Cys Asp Ser Tyr Thr Asp
405 410 415
Phe Ser Thr Gly Leu Ile Ala Gly Gln Cys Arg Cys Lys Leu Asn Val
420 425 430
Glu Gly Glu His Cys Asp Val Cys Lys Glu Gly Phe Tyr Asp Leu Ser
435 440 445
Ser Glu Asp Pro Phe Gly Cys Lys Ser Cys Ala Cys Asn Pro Leu Gly
450 455 460
Thr Ile Pro Gly Gly Asn Pro Cys Asp Ser Glu Thr Gly His Cys Tyr
465 470 475 480
Cys Lys Arg Leu Val Thr Gly Gln His Cys Asp Gln Cys Leu Pro Glu
485 490 495
His Trp Gly Leu Ser Asn Asp Leu Asp Gly Cys Arg Pro Cys Asp Cys
500 505 510
Asp Leu Gly Gly Ala Leu Asn Asn Ser Cys Phe Ala Glu Ser Gly Gln
515 520 525
Cys Ser Cys Arg Pro His Met Ile Gly Arg Gln Cys Asn Glu Val Glu
530 535 540
Pro Gly Tyr Tyr Phe Ala Thr Leu Asp His Tyr Leu Tyr Glu Ala Glu
545 550 555 560
Glu Ala Asn Leu Gly Pro Gly Val Ser Ile Val Glu Arg Gln Tyr Ile
565 570 575
Gln Asp Arg Ile Pro Ser Trp Thr Gly Ala Gly Phe Val Arg Val Pro
580 585 590
Glu Gly Ala Tyr Leu Glu Phe Phe Ile Asp Asn Ile Pro Tyr Ser Met
595 600 605
Glu Tyr Asp Ile Leu Ile Arg Tyr Glu Pro Gln Leu Pro Asp His Trp
610 615 620
Glu Lys Ala Val Ile Thr Val Gln Arg Pro Gly Arg Ile Pro Thr Ser
625 630 635 640
Ser Arg Cys Gly Asn Thr Ile Pro Asp Asp Asp Asn Gln Val Val Ser
645 650 655
Leu Ser Pro Gly Ser Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg Pro Val Cys Phe
660 665 670
Glu Lys Gly Thr Asn Tyr Thr Val Arg Leu Glu Leu Pro Gln Tyr Thr
675 680 685
Ser Ser Asp Ser Asp Val Glu Ser Pro Tyr Thr Leu Ile Asp Ser Leu
690 695 700
Val Leu Met Pro Tyr Cys Lys Ser Leu Asp Ile Phe Thr Val Gly Gly
705 710 715 720
Ser Gly Asp Gly Val Val Thr Asn Ser Ala Trp Glu Thr Phe Gln Arg
725 730 735
Tyr Arg Cys Leu Glu Asn Ser Arg Ser Val Val Lys Thr Pro Met Thr
740 745 750
Asp Val Cys Arg Asn Ile Ile Phe Ser Ile Ser Ala Leu Leu His Gln
755 760 765
Thr Gly Leu Ala Cys Glu Cys Asp Pro Gln Gly Ser Leu Ser Ser Val
770 775 780
Cys Asp Pro Asn Gly Gly Gln Cys Gln Cys Arg Pro Asn Val Val Gly
785 790 795 800
Arg Thr Cys Asn Arg Cys Ala Pro Gly Thr Phe Gly Phe Gly Pro Ser
805 810 815
Gly Cys Lys Pro Cys Glu Cys His Leu Gln Gly Ser Val Asn Ala Phe
820 825 830
Cys Asn Pro Val Thr Gly Gln Cys His Cys Phe Gln Gly Val Tyr Ala
835 840 845
Arg Gln Cys Asp Arg Cys Leu Pro Gly His Trp Gly Phe Pro Ser Cys
850 855 860
Gln Pro Cys Gln Cys Asn Gly His Ala Asp Asp Cys Asp Pro Val Thr
865 870 875 880
Gly Glu Cys Leu Asn Cys Gln Asp Tyr Thr Met Gly His Asn Cys Glu
885 890 895
Arg Cys Leu Ala Gly Tyr Tyr Gly Asp Pro Ile Ile Gly Ser Gly Asp
900 905 910
His Cys Arg Pro Cys Pro Cys Pro Asp Gly Pro Asp Ser Gly Arg Gln
915 920 925
Phe Ala Arg Ser Cys Tyr Gln Asp Pro Val Thr Leu Gln Leu Ala Cys
930 935 940
Val Cys Asp Pro Gly Tyr Ile Gly Ser Arg Cys Asp Asp Cys Ala Ser
945 950 955 960
Gly Tyr Phe Gly Asn Pro Ser Glu Val Gly Gly Ser Cys Gln Pro Cys
965 970 975
Gln Cys His Asn Asn Ile Asp Thr Thr Asp Pro Glu Ala Cys Asp Lys
980 985 990
Glu Thr Gly Arg Cys Leu Lys Cys Leu Tyr His Thr Glu Gly Glu His
995 1000 1005
Cys Gln Phe Cys Arg Phe Gly Tyr Tyr Gly Asp Ala Leu Gln Gln Asp
1010 1015 1020
Cys Arg Lys Cys Val Cys Asn Tyr Leu Gly Thr Val Gln Glu His Cys
1025 1030 1035 1040
Asn Gly Ser Asp Cys Gln Cys Asp Lys Ala Thr Gly Gln Cys Leu Cys
1045 1050 1055
Leu Pro Asn Val Ile Gly Gln Asn Cys Asp Arg Cys Ala Pro Asn Thr
1060 1065 1070
Trp Gln Leu Ala Ser Gly Thr Gly Cys Asp Pro Cys Asn Cys Asn Ala
1075 1080 1085
Ala His Ser Phe Gly Pro Ser Cys Asn Glu Phe Thr Gly Gln Cys Gln
1090 1095 1100
Cys Met Pro Gly Phe Gly Gly Arg Thr Cys Ser Glu Cys Gln Glu Leu
1105 1110 1115 1120
Phe Trp Gly Asp Pro Asp Val Glu Cys Arg Ala Cys Asp Cys Asp Pro
1125 1130 1135
Arg Gly Ile Glu Thr Pro Gln Cys Asp Gln Ser Thr Gly Gln Cys Val
1140 1145 1150
Cys Val Glu Gly Val Glu Gly Pro Arg Cys Asp Lys Cys Thr Arg Gly
1155 1160 1165
Tyr Ser Gly Val Phe Pro Asp Cys Thr Pro Cys His Gln Cys Phe Ala
1170 1175 1180
Leu Trp Asp Val Ile Ile Ala Glu Leu Thr Asn Arg Thr His Arg Phe
1185 1190 1195 1200
Leu Glu Lys Ala Lys Ala Leu Lys Ile Ser Gly Val Ile Gly Pro Tyr
1205 1210 1215
Arg Glu Thr Val Asp Ser Val Glu Arg Lys Val Ser Glu Ile Lys Asp
1220 1225 1230
Ile Leu Ala Gln Ser Pro Ala Ala Glu Pro Leu Lys Asn Ile Gly Asn
1235 1240 1245
Leu Phe Glu Glu Ala Glu Lys Leu Ile Lys Asp Val Thr Glu Met Met
1250 1255 1260
Ala Gln Val Glu Val Lys Leu Ser Asp Thr Thr Ser Gln Ser Asn Ser
1265 1270 1275 1280
Thr Ala Lys Glu Leu Asp Ser Leu Gln Thr Glu Ala Glu Ser Leu Asp
1285 1290 1295
Asn Thr Val Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Glu Phe Ile Lys Asn Ser
1300 1305 1310
Asp Ile Arg Gly Ala Leu Asp Ser Ile Thr Lys Tyr Phe Gln Met Ser
1315 1320 1325
Leu Glu Ala Glu Glu Arg Val Asn Ala Ser Thr Thr Glu Pro Asn Ser
1330 1335 1340
Thr Val Glu Gln Ser Ala Leu Met Arg Asp Arg Val Glu Asp Val Met
1345 1350 1355 1360
Met Glu Arg Glu Ser Gln Phe Lys Glu Lys Gln Glu Glu Gln Ala Arg
1365 1370 1375
Leu Leu Asp Glu Leu Ala Gly Lys Leu Gln Ser Leu Asp Leu Ser Ala
1380 1385 1390
Ala Ala Glu Met Thr Cys Gly Thr Pro Pro Gly Ala Ser Cys Ser Glu
1395 1400 1405
Thr Glu Cys Gly Gly Pro Asn Cys Arg Thr Asp Glu Gly Glu Arg Lys
1410 1415 1420
Cys Gly Gly Pro Gly Cys Gly Gly Leu Val Thr Val Ala His Asn Ala
1425 1430 1435 1440
Trp Gln Lys Ala Met Asp Leu Asp Gln Asp Val Leu Ser Ala Leu Ala
1445 1450 1455
Glu Val Glu Gln Leu Ser Lys Met Val Ser Glu Ala Lys Leu Arg Ala
1460 1465 1470
Asp Glu Ala Lys Gln Ser Ala Glu Asp Ile Leu Leu Lys Thr Asn Ala
1475 1480 1485
Thr Lys Glu Lys Met Asp Lys Ser Asn Glu Glu Leu Arg Asn Leu Ile
1490 1495 1500
Lys Gln Ile Arg Asn Phe Leu Thr Gln Asp Ser Ala Asp Leu Asp Ser
1505 1510 1515 1520
Ile Glu Ala Val Ala Asn Glu Val Leu Lys Met Glu Met Pro Ser Thr
1525 1530 1535
Pro Gln Gln Leu Gln Asn Leu Thr Glu Asp Ile Arg Glu Arg Val Glu
1540 1545 1550
Ser Leu Ser Gln Val Glu Val Ile Leu Gln His Ser Ala Ala Asp Ile
1555 1560 1565
Ala Arg Ala Glu Met Leu Leu Glu Glu Ala Lys Arg Ala Ser Lys Ser
1570 1575 1580
Ala Thr Asp Val Lys Val Thr Ala Asp Met Val Lys Glu Ala Leu Glu
1585 1590 1595 1600
Glu Ala Glu Lys Ala Gln Val Ala Ala Glu Lys Ala Ile Lys Gln Ala
1605 1610 1615
Asp Glu Asp Ile Gln Gly Thr Gln Asn Leu Leu Thr Ser Ile Glu Ser
1620 1625 1630
Glu Thr Ala Ala Ser Glu Glu Thr Leu Phe Asn Ala Ser Gln Arg Ile
1635 1640 1645
Ser Glu Leu Glu Arg Asn Val Glu Glu Leu Lys Arg Lys Ala Ala Gln
1650 1655 1660
Asn Ser Gly Glu Ala Glu Tyr Ile Glu Lys Val Val Tyr Thr Val Lys
1665 1670 1675 1680
Gln Ser Ala Glu Asp Val Lys Lys Thr Leu Asp Gly Glu Leu Asp Glu
1685 1690 1695
Lys Tyr Lys Lys Val Glu Asn Leu Ile Ala Lys Lys Thr Glu Glu Ser
1700 1705 1710
Ala Asp Ala Arg Arg Lys Ala Glu Met Leu Gln Asn Glu Ala Lys Thr
1715 1720 1725
Leu Leu Ala Gln Ala Asn Ser Lys Leu Gln Leu Leu Lys Asp Leu Glu
1730 1735 1740
Arg Lys Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Tyr Leu Glu Asp Lys Ala Gln Glu
1745 1750 1755 1760
Leu Ala Arg Leu Glu Gly Glu Val Arg Ser Leu Leu Lys Asp Ile Ser
1765 1770 1775
Gln Lys Val Ala Val Tyr Ser Thr Cys Leu
1780 1785
<210> 13
<211> 25
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA sequence of KRS
<400> 13
agaaguuuuc aucuaugaac auggc 25
<210> 14
<211> 25
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA sequence of LRS
<400> 14
ccuugcaugg aucaugauag acaaa 25
Claims (10)
- 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
<화학식 1>
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; 니트로기; 아미노기; 할로겐으로 선택적으로 치환된 C1∼C6 알킬기; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R1,R2, 및 R3가 동시에 수소일 수는 없다),
R4, R5, 및 R6는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; C1∼C6 알킬기; C3∼C6사이클로알킬로 선택적으로 치환된 C1∼C6 알콕시기; C1∼C6 알킬설파닐기; 또는 모노- 혹은 다이-C1∼C6 알킬아미노기이고,
R7 및 R8은, 서로 독립적으로, 수소; 하이드록시기; 할로겐기; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R7 및 R8이 동시에 수소일 수는 없다),
R9는 수소 또는 C1∼C6 알킬기이다.
- 제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은
R1, R2, 및 R3는, 서로 독립적으로, 수소; 또는 할로겐기이고(단, R1, R2, 및 R3가 동시에 수소일 수는 없다),
R4, R5, 및 R6는, 서로 독립적으로, 수소; 할로겐기; 또는 C1∼C6 알콕시기이고(단, R4, R5, 및 R6가 동시에 수소일 수는 없다),
R7 및 R8은, 서로 독립적으로, 수소; 또는 하이드록시카보닐기이고(단, R7 및 R8이 동시에 수소일 수는 없다),
R9는 수소 또는 C1∼C6 알킬기인 것을 특징으로 하는
면역세포 이동 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(((2-클로로페닐에틸)(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노)메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(3-클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-(((7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)(4-메틸페닐에틸)아미노)메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-에톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-프로폭시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-아이소프로폭시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(메틸설파닐)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[3-(메틸설파닐)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(2,5-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3,4-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-아이소부톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로프로필메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(메틸아미노)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-{[{2-[4-(다이메틸아미노)페닐]에틸}(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)(2-페닐에틸)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로헥실메톡시페닐)에틸]-(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로부틸메톡시페닐)에틸]-(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(4-에톡시-3-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,4-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-sec-부톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[[2-(4-에틸아미노페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(4-에틸페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(2,3-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,5-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3,4,5-트라이플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3-브로모-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,4-다이클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,4-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-플루오로페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-메톡시-2-메틸-5-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(3-브로모-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,4-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3,4,5-트라이플루오로페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,4-다이클로로페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-{1-[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-메톡시-2-메틸-5-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]에틸}벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-{1-[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-메톡시-2-메틸-5-(프로판-2-일)페닐]에틸}아미노]프로필}벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)-2-하이드록시벤조산;
3-클로로-4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-나이트로-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-나이트로-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-아미노-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-아미노-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-메톡시페닐)에틸](5,6,7-트라이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(6-클로로-7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-트라이플루오로메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(6,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)-[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로-6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(4,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](5-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](5,6,7-트라이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(6-클로로-7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(6,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로-6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][7-(트라이플루오로메틸)-벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(6-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸](5-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(5-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(4,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-({(6-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(6-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
2-{(4-카복시벤질)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}벤조[d]싸이아졸-6-카르복실산;
2-{(4-카복시벤질)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}벤조[d]싸이아졸-7-카르복실산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸][6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸][5-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}메틸)벤조산;
4-({[7-플루오로-6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일][2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][5-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산; 및
4-(1-{[7-플루오로-6-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일][2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산
으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(((2-클로로페닐에틸)(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노)메틸)벤조산;
4-(((7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)(4-메틸페닐에틸)아미노)메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-에톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(메틸설파닐)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[3-(메틸설파닐)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-({[2-(3,4-다이메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-싸이클로프로필메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-{[(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일){2-[4-(메틸아미노)페닐]에틸}아미노]메틸}벤조산;
4-{[{2-[4-(다이메틸아미노)페닐]에틸}(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(2-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(3-클로로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-에틸페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}프로필)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,5-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,3-다이메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2,5-다이메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-3-메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시-2-메틸페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,6-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}에틸)벤조산;
4-(1-{[2-(2,3-다이플루오로-4-메톡시페닐)에틸](7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}프로필)벤조산;
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)-2-하이드록시벤조산;
3-클로로-4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](6-나이트로-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-나이트로-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-아미노-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-아미노-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-메톡시페닐)에틸](5,6,7-트라이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(6-클로로-7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-{[[2-(4-메톡시페닐)에틸](7-트라이플루오로메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)아미노]메틸}벤조산;
4-({(6,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)-[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5-브로모-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(6-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-플루오로-6-메틸-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(4,6-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산;
4-({[2-(4-메톡시페닐)에틸][5-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}메틸)벤조산;
4-(1-{(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(3-플루오로-4-메톡시페닐)에틸]아미노}에틸)벤조산; 및
4-(1-{[2-(4-메톡시페닐)에틸][5-(트라이플루오로메틸)벤조[d]싸이아졸-2-일]아미노}에틸)벤조산
으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물은
4-({(7-플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산;
4-({(7-클로로-벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산; 및
4-({(5,7-다이플루오로벤조[d]싸이아졸-2-일)[2-(4-메톡시페닐)에틸]아미노}메틸)벤조산
으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 면역세포 이동과 관련된 질환은 심혈관 질환, 섬유화 질환, 염증성 질환 및 알포트 증후군(Alport syndrome) 으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 심혈관 질환은 고혈압, 폐동맥 고혈압, 죽상동맥경화, 협심증, 심근경색증, 허혈성 뇌혈관질환, 세동맥 경화 및 중막 경화로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 섬유화 질환은 경피증(scleroderma), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 크론 병 (Crohn’s disease), 궤양성 대장염 (ulcerative colitis), 골수 섬유증 (myelofibrosis), 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 간 섬유증(hepatic fibrosis), 간경변증(liver cirrhosis), 신장 섬유증(kidney fibrosis), 사구체 경화증, 근섬유증(myofibrosis), 심장 섬유증, 간질성 섬유화증, 췌장 섬유화증, 비장 섬유화증, 종격막 섬유화증, 혈관 섬유화증, 피부 섬유화증, 눈 섬유화증, 황반 변성, 관절 섬유화증, 갑상선 섬유화증, 심내막심근 섬유화증, 복막 섬유화증, 복막후 섬유화증, 진행성 종괴성 섬유화증, 신원성 전신섬유화증, 전신성 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosus), 유전성 섬유증, 감염성 섬유증, 자극성 섬유증, 만성 자가면역에 의한 섬유증, 장기이식시 항원부적합에 의한 섬유증, 외과수술의 섬유성 합병증, 고지혈증에 의한 섬유증, 비만에 의한 섬유증, 당뇨성 섬유증, 고혈압에 의한 섬유증 및 스텐트삽입시 섬유화로 인한 폐색으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 염증성 질환은 자가 면역 질환, 염증성 장 질환, 피부염, 당뇨성 안질환, 복막염, 골수염, 봉소염, 뇌막염, 뇌염, 췌장염, 외상 유발 쇼크, 기관지 천식, 비염, 부비동염, 중이염, 폐렴, 위염, 장염, 낭포성 섬유증, 졸중, 기관지염, 세기관지염, 간염, 신장염, 관절염, 신경염, 통풍, 척추염, 라이터 증후군, 결절성 다발동맥염, 혈관염, 루게릭병, 베게너 육아종증, 과사이토카인 혈증(hypercytokinemia), 류마티스성 다발성근육통, 관절 세포 동맥염, 칼슘 결정 침착 관절병증, 가성 통풍, 비-관절 류마티즘, 점액낭염, 건초염, 상과염, 신경병증성 관절 질환(Charcot's joint), 출혈성관절증(hemarthrosis), 헤노흐-쉔라인 자반병, 비후성 골관절병증, 다중심성 세망조직구종, 수르코일로시스(surcoilosis), 혈색소증, 겸상 적혈구증 및 기타 혈색소병증, 고지단백혈증, 저감마글로불린혈증, 부갑상선기능항진증, 말단거대증, 가족성 지중해열, 베하트 병, 전신성 홍반성 루푸스, 재귀열, 건선, 다발성 경화증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 급성 호흡곤란 증후군, 다발성 장기부전, 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease), 급성 폐손상(acute lung injury) 및 기관지 폐 형성장애(broncho-pulmonary dysplasia)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제9항에 있어서, 상기 자가면역질환은 류마티스성 관절염, 전신성 경피증, 전신 홍반성 낭창, 건선, 천식, 궤양성 대장염, 베체씨병, 크론씨병, 다발성 경화증, 피부근염, 교원병, 혈관염, 관절염, 육아종증, 장기 특이적 자가면역병변, 궤양성 대장염 및 이식편대 숙주 질환으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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