KR20190053963A - P2x3 및/또는 p2x2/3 화합물 및 방법 - Google Patents

P2x3 및/또는 p2x2/3 화합물 및 방법 Download PDF

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KR20190053963A
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스콧 케이. 톰슨
토니 프리스틀리
므리날칸티 쿤두
아시스 사하
수바디프 나스
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아사나 바이오사이언시스 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 신규한 화합물 및 상기 화합물의 제조 및 이용 방법을 제공한다. 한 구현예에서, 상기 화합물은 식 (I)의 구조이며, 여기서 R1-R7은 본 명세서에서 정의된다. 추가 구현예에서, 상기 화합물은 P2X3 또는 P2X2 /3 수용체 중 하나 또는 모두를 조절하는 방법에서 유용하다. 다른 구현예에서, 상기 화합물은 하나 이상의 상기 화합물을 환자에게 투여함으로써 환자에서 통증을 치료하는데 유용하다. 다른 구현예에서, 상기 화합물은 하나 이상의 상기 화합물을 환자에게 투여함으로써 환자에서 호흡기 기능장애를 치료하는데 유용하다.
Figure pct00154

Description

P2X3 및/또는 P2X2/3 화합물 및 방법
본 발명은 P2X3 또는 P2X2 /3 수용체 중 하나 또는 모두의 활성을 조절하기 위한 화합물 및 방법에 관한 것이다.
아데노신 트리포스페이트(ATP)는 살아있는 세포의 1차적인 에너지 흐름으로서 잘 인식되어 있지만, 임의의 몇 가지 '퓨린성' 막-연관 수용체 분자와 상호작용함으로써 생리학적 및 병리생리학적 과정을 변형시킬 수 있는 중요한 신호전달 분자로서 대두되고 있다. 상기 퓨린성 수용체 패밀리는 G-단백질-커플된(GPCR) 수용체("P2Y" 명명법으로 나타냄) 및 리간드-게이트화 이온 채널 또는 "P2X" 변형체 모두를 포함한다.
ATP는 상기 P2X 서브패밀리의 수용체와 상호작용함으로써 구심 감각 신경에 대해 흥분 효과를 일으킨다. 이러한 과다흥분의 결과는 ATP 효과가 피부, 뼈 또는 내장 조직에서 일어날 때는 통증으로, 기도 조직에서는 통증 및/또는 기침으로, 또는 이것이 방광에서 일어날 때는 통증 및/또는 불안정성으로 해석될 수 있다. 예컨대, [Ford, Purinergic Signalling, 8 (Suppl 1), S3-S26, 2012 and Ford et al., Frontiers in Cellular Neuroscience, Volume 7, Article 267, 2013] 참조. 상기 P2X 서브패밀리에 속하고 P2X3 및 P2X2 / 3로 나타내는 2가지 특정 수용체 변이체는, ATP에 의해 상기 수용체를 활성화하면 전술한 것과 반대되는 작용을 생성할 수 있기 때문에, 설치류에서 통각, 기도 또는 방광 기능을 측정하기 위해 디자인된 다양한 연구에서 특히 관심있는 표적으로 대두되어 왔다. 따라서, P2X 서브패밀리 수용체를 표적화하는 제제는 상기 수용체와 연관된 증상, 예를 들면, 통증, 호흡기 질병 또는 방광 기능장애의 치료에 있어서 치료적 가치를 가질 것이다.
따라서, 보다 강력하고 선택적인 P2X3/P2X2 /3 조정제에 대한 필요성이 있다.
한 구현예에서, 식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염이 제공되며, 여기서 R1-R7은 본 명세서에 개시된 것과 같다.
Figure pct00001
다른 구현예에서, 본 발명은 식 (I)의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 식 (I)의 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 P2X3 또는 P2X2 /3 수용체 중 하나 또는 모두의 활성을 조절하는 방법을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 식 (I)의 화합물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 P2X3 또는 P2X2/3 경로 중 하나 또는 모두를 조절하는 방법을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 통증을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 호흡기 기능장애를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 호흡기 기능장애는 기침이다.
도 1a는 래트 P2X2의 단백질 코딩 서열이 다중 클로닝 부위(MCS) 내에서 EcoRV-소화되고 탈인산화된 벡터 pIRES-puro3 내에 클로닝된 원형의 클로닝 플라스미드 pIRESpuro3(Clontech Laboratories Inc., Mountain View, CA)의 지도이다.
도 1b는 래트 뇌 cDNA로부터 PCR에 의해 증폭된 래트 P2X3(NCBI Accession No: X91167)의 코딩 서열이 클로닝된 원형의 플라스미드 pCDNA-Hygro(Invitrogen)의 지도이다. 상기 래트 P2X3의 단백질 코딩 서열을 함유하는 수득된 PCR 생성물은 다중 클로닝 부위(MCS) 내에서 EcoRV-소화되고 탈인산화된 벡터 pCDNA-Hygro 내로 클로닝되었다.
도 1c는 래트 P2X3를 함유하는 pcDNA-Hygro로부터 생성된 벡터이며, 이후 상기 벡터의 다중 클로닝 부위(MCS) 내에서 HindIII(5') 및 XhoI(3') 부위에서 pcDNA-5/TO(Invitrogen/Life Technologies) 내로 서브클로닝되었다.
P2X3 또는 P2X2 /3 경로 중 하나 또는 모두의 활성을 조절할 수 있는 신규한 화합물이 본 명세서에 개시된다. 상기 화합물은 P2X3 또는 P2X2 /3 경로 중 하나 또는 모두의 조절장애에 의해 영향받는 임의의 질환 또는 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 전구약물, 거울상이성질체(enantiomer) 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure pct00002
상기에서, R1은 H, 할로겐, C1-C6 알킬, C3-C6 사이클로알킬, CN 또는 CONH2이고;
R2는 없거나, C1-C6 알킬 또는 아릴이고;
R3은 없거나, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 사이클로알킬 또는 헤테로사이클이고;
R4는 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-C6 사이클로알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴이고;
R5, R6은 독립적으로 H, C1-C6 알킬 또는 C3-C6 사이클로알킬이고; 및
R7은 CONHR8, 선택적으로 치환된 헤테로사이클 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고, 상기 R8은 H, 알킬 또는 사이클로알킬이다.
일부 구현예에서, 상기 R3, R4 및 R7에 대한 선택적 치환체는 할로겐, C1-C6 알킬, C3-C6 사이클로알킬, CONH2, 할로겐 또는 C3-C6 사이클로알킬로 선택적으로 치환된 C1-C6 알콕시, 헤테로사이클, 할로겐 또는 C3-C6 사이클로알킬로 선택적으로 치환된 헤테로아릴 또는 아릴이다.
소정 구현예에서, R1이 H인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R2가 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R3이 H인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R1이 할로겐, C1-C6 알킬, 또는 CN인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R7이 CONHR8이고, 상기 R8이 H, 알킬 또는 사이클로알킬인 식 (I)의 화합물이 제공된다. 일부 구현예에서, R8은 사이클로프로필이다.
소정 구현예에서, R7이 선택적으로 치환된 모르폴린 또는 피페라진, 예를 들면
Figure pct00003
인 식 (I)의 화합물이 제공되며, 상기 X는 O 또는 H, H이고; 상기 R9는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, CO(C1-C6 알킬), CONH2, C(NH)NH2, C(N-CN)NH2 또는 SO2NH2이다.
소정 구현예에서, R7이 피라졸, 트리아졸, 옥사디아졸 또는 피리다진으로 이루어진 군으로부터 선택되는 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 예를 들면,
Figure pct00004
인 식 (I)의 화합물이 제공되며,
상기 R10은 H 또는 -OH로 선택적으로 치환된 알킬이고; R11은 H, CH2-CONH2 또는 -OH 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 알킬이며; R12는 H 또는 CONH2이다.
소정 구현예에서, R9가 CO(C1-C6 알킬) 또는 CONH2인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R4가 선택적으로 치환된 헤테로아릴인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R4가 선택적으로 치환된 아릴인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R1 및 R3이 H인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R5 및 R6이 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬 또는 C3-C6 사이클로알킬인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R5 및 R6이 독립적으로 H 또는 C3-C6 사이클로알킬인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R1 및 R3이 H이고, R2가 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R1 및 R3이 H이고, R2가 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이며, R4가 선택적으로 치환된 헤테로아릴인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
소정 구현예에서, R1 및 R3이 H이고, R2가 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이며, R4가 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고, R5 및 R6이 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬 또는 독립적으로 H 및 C3-C6 사이클로알킬이며, R7이
Figure pct00005
인 식 (I)의 화합물이 제공되며, 상기 X는 H, H이고, R9는 CONH2이다.
소정 구현예에서, R4가 퀴놀린, 벤조푸란, 피리딘, 벤조티오펜, 이미다조피리딘 및 인다졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 선택적으로 치환된 헤테로아릴인 식 (I)의 화합물이 제공된다.
식 (I)의 화합물의 대표적인 "약학적으로 허용가능한 염"은, 예를 들면, 산 또는 염기인 것들을 포함한다. 한 구현예에서, 상기 약학적으로 허용가능한 염은 수용성 및 수-불용성 염 중에서 선택된다. 상기 약학적으로 허용가능한 염은 예컨대 아세트산, 프로피온산, 락트산, 시트르산, 타르타르산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 말론산, 만델산, 말산, 프탈산, 염산, 브롬화수소산, 인산, 질산, 황산, 메탄설폰산, 나프탈렌설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산 및 캄포설폰산 중에서 선택되는 산일 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 염은 또한 예컨대 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 암모늄으로부터 선택되는 염기일 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물을 포함하는 본 발명의 조성물은 식 (I)의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 및 유리 염기 형태 모두를 함유할 수 있다.
식 (I)의 화합물은 또한 식 (I)의 전구약물을 포함할 수 있다. 식 (I)의 화합물의 전구약물은 본 기술분야의 기술자에게 알려진 다양한 방법을 이용해 제조될 수 있다. 예컨대, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Rautio, Nature Reviews Drug Discovery, 7:255-270 (2008) and Ettcaner, J. Med. Chem., 47:2393-2404 (2004)] 참조. 히드록시 또는 카르보닐 모이어티(moiety)를 함유하는 약물의 경우, 아세틸 및 다른 에스테르 유사체가 전구약물로 사용하기 위해 고려된다. 예컨대, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Beaumont, Current Drug Metabolism, 4:461-485 (2003)] 참조. 아민 모이어티를 함유하는 약물의 경우, 아미드 및 카바메이트를 함유하는 전구약물이 고려된다. 예컨대, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Simplicio, Molecules, 13:519-547 (2008)] 참조. 구체적인 예로서, (알콕시카르보닐옥시)알킬 카바메이트, (아실옥시)알킬 카바메이트, 및 (옥소디옥소레닐)알킬 카바메이트가 아민에 대한 효과적인 전구약물 전략으로서 이용될 수 있다. 예컨대, 모두 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Li, Bioorg. Med. Chem. Lett., 7:2909-2912 (1997); Alexander, J. Med. Chem., 34:78-81 (1991); Alexander, J. Med. Chem., 31:318-322 (1988); and Alexander, J. Med. Chem., 39:480-486 (1996)] 참조.
일부 식 (I)의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심(chiral center)을 갖고 있다. 따라서, 개시된 각각의 화합물은 그의 분리된 거울상이성질체뿐만 아니라 상기 거울상이성질체의 혼합물(예컨대, 라세미체)을 포함한다. 식 (I)의 화합물에 다수의 키랄 중심이 존재하는 경우, 화합물 내의 키랄 중심의 각각의 가능한 조합뿐만 아니라 이들의 모든 가능한 거울상이성질체 및 부분입체이성질체(diastereomer) 혼합물이 또한 제공된다. 구체적인 입체화학 또는 이성질체 형태가 구체적으로 표시되지 않는 한, 모든 키랄, 부분입체이성질체, 및 라세미 형태의 구조가 의도된다. 본 명세서의 개시로부터, 본 기술분야의 통상의 기술자는, 예컨대, 라세미 형태를 분할(resolution)하거나 광학적으로 활성인 출발 물질로부터 합성함으로써 광학적으로 활성형인 식 (I)의 화합물을 즉시 제조할 수 있을 것이다.
다음의 정의들이 본 명세서에 개시된 화합물과 연관되어 사용된다. 일반적으로, 해당 기(group) 내에 존재하는 탄소 원자의 수는 "Cx 내지 Cy"로 나타내며, 상기 x 및 y는 각각 하한 및 상한이다. 본 명세서의 정의에서 사용된 것과 같은 탄소 수는 탄소 백본(backbone) 및 탄소 분지(branching)를 나타내지만, 알콕시 치환체 등과 같은 치환체의 탄소 원자는 포함하지 않는다. 달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에서 명시적으로 정의되지 않은 치환체의 명명은 작용기(functionality)의 말단 부위의 왼쪽으로부터 오른쪽으로 부착점을 향해 인접한 작용기를 명명함으로써 결정된다. 본 명세서에서 사용된 것과 같이, "선택적으로 치환된"은 상기 선택적으로 치환된 기의 적어도 1개 수소 원자가 교체된 것을 의미한다.
"알킬"은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는 탄화수소 사슬을 나타낸다. 한 구현예에서, 알킬은 1 내지 6개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 다른 구현예에서, 알킬은 1 내지 5개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 추가 구현예에서, 알킬은 1 내지 4개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 또 다른 구현예에서, 알킬은 1 내지 3개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 알킬은 1 또는 2개 탄소 원자를 함유한다. 탄화수소 사슬인 알킬기의 예는, 예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실을 포함하며, 이들 예의 모든 이성질체가 고려된다.
"사이클로알킬"은, 예를 들면, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등을 포함하는 탄소사이클 고리를 나타낸다. 한 구현예에서, 상기 탄소사이클 고리는 3- 내지 6-원(member)이다. 다른 구현예에서, 상기 탄소사이클 고리는 3- 내지 5-원 고리이다. 추가 구현예에서, 상기 탄소사이클 고리는 4- 내지 6-원이다. 다른 추가 구현예에서, 상기 탄소사이클 고리는 3- 또는 4-원, 즉 사이클로프로필 또는 사이클로부틸이다. 구체적으로 나타내지 않은 한, 상기 알킬기는 비치환되며, 즉 이들은 탄소 및 수소 원자만을 함유한다. 그러나, 상기 알킬기 또는 탄소사이클 고리가 치환될 때, "선택적으로 치환된" 또는 "치환된"이란 용어가 선행된다. 상기 알킬기 또는 탄소사이클 고리의 선택적인 치환체는, 예를 들면, 할로겐, CN, C1 내지 C6 알킬, OH, C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알킬-C1 내지 C6 알콕시, 헤테로사이클릴옥시, 아릴, 헤테로사이클, 헤테로아릴, C(O)(C1 내지 C6 알킬), C(O)(헤테로사이클), C(O)NH2, C(O)NH(C1 내지 C6 알킬), C(O)N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬), NHC(O)(C1 내지 C6 알킬), NH2, NH(아릴), N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬), 및 NHC(O)NH2를 포함할 수 있다.
"알콕시"는
Figure pct00006
O(알킬)을 나타내며, 상기 알킬은 비치환 또는 치환되고, 상기에서 정의된다. 한 구현예에서, 알콕시는 1 내지 6개(포함됨) 또는 이들 사이의 정수 또는 범위의 탄소 원자를 함유한다. 다른 구현예에서, 알콕시는 1 내지 5개(포함됨) 또는 이들 사이의 범위의 탄소 원자를 함유한다. 추가 구현예에서, 알콕시는 1 내지 4개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 알콕시는 1 내지 3개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 알콕시는 1 또는 2개 탄소 원자를 함유한다. 알콕시의 예는, 예를 들면, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 및 부톡시를 포함한다. 상기 알콕시기의 알킬 라디칼(radical)은 비치환되거나, 상기 "알킬"에 대해 정의된 것과 같이 치환될 수 있다.
"아릴"은 탄소 원자를 함유하는 방향족 탄화수소기를 나타낸다. 한 구현예에서, 상기 아릴은 6 내지 10개 탄소 원자, 즉 6-, 7-, 8-, 9- 또는 10-원을 함유한다. 다른 구현예에서, 아릴은 방향족 또는 부분적으로 방향족인 비(bi)사이클기이다. 추가 구현예에서, 상기 아릴은 페닐기이다. 다른 구현예에서, 상기 아릴은 나프틸(예컨대, α-나프틸 또는 β-나프틸), 1,2,3,4-테트라히드로나프틸, 또는 인다닐이다. 아릴기는 할로겐, NO2, C1 내지 C6 알킬, OH, C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, 헤테로사이클릴옥시, C1 내지 C6 알킬티오, 아릴, 헤테로사이클, 헤테로아릴, C(O)(C1 내지 C6 알킬), C(O)(헤테로사이클), C(O)O(C1 내지 C6 알킬), C(O)NH2, C(O)NH(C1 내지 C6 알킬), C(O)N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬), SO2(C1 내지 C6 알킬), SO2(C2 내지 C6 알키닐), SO2NH(C1 내지 C6 알킬), SO2(헤테로사이클), NHSO2(C1 내지 C6 알킬), N(C1 내지 C6 알킬)SO2(C1 내지 C6 알킬), NH2, NH(아릴) 또는 NHC(O)NH2를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 기로 선택적으로 치환될 수 있다.
"할로겐"은 F, Cl, Br 및 I를 나타낸다.
"헤테로원자"란 용어는 황, 질소, 또는 산소 원자를 나타낸다. 본 명세서에 나타낸 헤테로원자를 함유하는 화학적 구조는 소정의 환경에서 표시되지 않은 하나 이상의 결합된 수소를 가질 수 있음이 본 기술분야의 통상의 기술자에게 자명하고 이해될 것이다. "헤테로아릴"은 -O-, -N-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2, 또는 -C(=O)-로부터 선택되는 1 내지 4개 헤테로원자 또는 헤테로기를 함유하는 모노사이클성 방향족 5- 또는 6-원 고리를 나타낸다. 한 구현예에서, 상기 헤테로아릴은 1 내지 5개(포함됨) 또는 이들 사이의 정수 또는 범위의 탄소 원자를 함유한다. 다른 구현예에서, 상기 헤테로아릴은 2 내지 5개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 추가 구현예에서, 상기 헤테로아릴은 3 내지 5개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로아릴은 4 또는 5개 탄소 원자를 함유한다. "헤테로아릴"은 또한 비사이클성 방향족 고리 시스템을 나타내며, 여기서 방금 개시된 헤테로아릴기는 적어도 하나의 다른 사이클 모이어티와 융합된다. 한 구현예에서, 페닐 라디칼은 5- 또는 6-원 모노사이클성 헤테로아릴에 융합되어 비사이클성 헤테로아릴을 형성한다. 다른 구현예에서, 사이클성 알킬은 모노사이클성 헤테로아릴에 융합되어 비사이클성 헤테로아릴을 형성한다. 추가 구현예에서, 상기 비사이클성 헤테로아릴은 5- 또는 6-원 모노사이클성 헤테로아릴에 융합된 피리딘이다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로아릴 고리는 상기 고리 내에 1 또는 2개 질소 원자를 갖는다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로아릴 고리는 1개 질소 원자 및 1개 산소 원자를 갖는다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로아릴 고리는 1개 질소 원자 및 1개 황 원자를 갖는다. 헤테로아릴기의 예는, 예를 들면, 푸란, 티오펜, 인돌, 아자인돌, 옥사졸, 티아졸, 이소옥사졸(isoxazole), 이소티아졸, 이미다졸, 피리딘, 피리돈, 피라졸, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 피롤, 1,3,4-옥사디아졸과 같은 옥사디아졸, 1,2,4-트리아졸 및 1,2,3-트리아졸과 같은 트리아졸, 테트라졸, 벤즈옥사졸, 벤조티아졸, 벤조푸란, 벤즈이소옥사졸, 벤즈이미다졸, 아자벤즈이미다졸, 인다졸, 퀴나졸린, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 벤조티오펜 및 이미다조피리딘을 포함한다. 헤테로아릴은 할로겐, CN, NO2, C1 내지 C6 알킬, OH, C1 내지 C6 알콕시, C3 내지 C8 사이클로알킬, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, 1 내지 3개 불소 원자를 함유하는 C1 또는 C6 알킬, 1 내지 3개 불소 원자를 함유하는 C1 내지 C6 알콕시, C3 내지 C6 사이클로알킬-C1 내지 C6 알킬, C1 내지 C6 히드록시알킬, 헤테로사이클릴옥시, C1 내지 C6 알킬티오, 아릴, 헤테로사이클, 헤테로아릴, C(O)(C1 내지 C6 알킬), C(O)(헤테로사이클), C(O)O(C1 내지 C6 알킬), C(O)NH2, C(O)NH(C1 내지 C6 알킬), C(O)N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬), SO2(C1 내지 C6 알킬), SO2(C2 내지 C6 알키닐), SO2NH(C1 내지 C6 알킬), SO2(헤테로사이클), NHC(O)(C1 내지 C6 알킬), NHSO2(C1 내지 C6 알킬), N(C1 내지 C6 알킬)SO2(C1 내지 C6 알킬), NH2, NH(아릴), N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬) 및 NHC(O)NH2를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 기로 선택적으로 치환될 수 있다. 한 구현예에서, "헤테로아릴"은 비치환되거나, 할로겐, C1 내지 C6 알킬, C3 내지 C6 사이클로알킬, C3 내지 C6 사이클로알킬-C1 내지 C6 알킬, C1 내지 C6 히드록시알킬, C1 내지 C6 알콕시, 1 내지 3개 불소 원자를 함유하는 C1 내지 C6 알킬, 또는 CH2CONH2 중 하나 이상으로 치환된 -O-, -N-, 또는 -S-로부터 선택되는 1 내지 4개 헤테로원자를 함유하는 5-원 헤테로아릴을 나타낸다. 5-원 헤테로아릴 고리의 비제한적인 예는, 예를 들면, 옥사디아졸, 피라졸, 티오펜, 이소옥사졸, 이미다졸, 테트라졸, 트리아졸, 푸란, 피롤, 티아졸, 이소티아졸, 또는 티아디졸을 포함한다. 각각의 상기 5-원 헤테로아릴은 할로겐, C1 내지 C6 알킬, C3 내지 C6 사이클로알킬, C3 내지 C6 사이클로알킬-C1 내지 C6 알킬, C1 내지 C6 히드록시알킬, C1 내지 C6 알콕시, 1 내지 3개 불소 원자를 함유하는 C1 내지 C6 알킬, 또는 CH2CONH2 중 하나 이상으로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클"은 -O-, -N-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2, 또는 -C(=O)-로부터 선택되는 1 내지 3개 헤테로원자 또는 헤테로기를 갖는 모노사이클성 또는 비사이클성 기를 나타낸다. 헤테로사이클은 포화되거나 부분적으로 포하될 수 있다. 한 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 3 내지 7개(포함됨) 또는 이들 사이의 정수 또는 범위의 탄소 원자를 함유한다. 다른 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 4 내지 7개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 4 내지 6개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 5 또는 6개(포함됨) 탄소 원자를 함유한다. 헤테로사이클의 예는, 예를 들면, 아지리딘, 옥시란, 티이란, 모르폴린, 티오모르폴린, 피롤린, 피롤리딘, 아제판, 디히드로푸란, 테트라히드로푸란, 디히드로티오펜, 테트라히드로티오펜, 디티올란, 피페리딘, 1,2,3,6-테트라히드로피리딘-1-일, 테트라히드로피란, 피란, 티안, 티인, 피페라진, 호모피페라진, 옥사진, 아제칸, 테트라히드로퀴놀린, 퍼히드로이소퀴놀린, 5,6-디히드로-4H-1,3-옥사진-2-일, 2,5-디아자비사이클로[2.2.1]헵탄, 2,5-디아자비사이클로[2.2.2]옥탄, 3,6-디아자비사이클로[3.1.1]헵탄, 3,8-디아자비사이클로[3.2.1]옥탄, 6-옥사-3,8-디아자비사이클로[3.2.1]옥탄, 7-옥사-2,5-디아자비사이클로[2.2.2]옥탄, 2,7-디옥사-5-아자비사이클로[2.2.2]옥탄, 2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 2-옥사-5-아자비사이클로[2.2.2]옥탄, 3,6-디옥사-8-아자비사이클로[3.2.1]옥탄, 3-옥사-6-아자비사이클로[3.1.1]헵탄, 3-옥사-8-아자비사이클로[3.2.1]옥탄-8-일, 5,7-디옥사-2-아자비사이클로[2.2.2]옥탄, 6,8-디옥사-3-아자비사이클로[3.2.1]옥탄, 6-옥사-3-아자비사이클로[3.1.1]헵탄, 8-옥사-3-아자비사이클로[3.2.1]옥탄-3-일, 2,5-디아자비사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 6-아자비사이클로[3.2.1]옥트-6-일, 8-아자비사이클로[3.2.1]옥탄-8-일, 3-옥사-7,9-디아자비사이클로[3.3.1]노난-9-일, 9-옥사-3-아자비사이클로[3.3.1]노난-3-일, 3-옥사-9-아자비사이클로[3.3.1]노난-9-일, 3,7-디옥사-9-아자비사이클로[3.3.1]노난-9-일, 3,4-디히드로-2H-1,4-벤즈옥사진-7-일, 티아진, 디티안, 및 디옥산을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 1 또는 2개 질소 원자를 함유한다. 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 1 또는 2개 질소 원자 및 3 내지 6개 탄소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 1 또는 2개 질소 원자, 3 내지 6개 탄소 원자, 및 1개 산소 원자를 함유한다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 5- 내지 8-원이다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 5-원이다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 6-원이다. 다른 추가 구현예에서, 상기 헤테로사이클은 8-원이다. 헤테로사이클은 비치환되거나, 할로겐, CN, NO2, C1 내지 C6 알킬, OH, C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시-C1 내지 C6 알콕시, C1 내지 C6 히드록시알킬, C3 내지 C6 사이클로알킬, 1 내지 3개 불소 원자를 함유하는 C1 내지 C6 알킬, C3 내지 C6 사이클로알킬-C1 내지 C6 알킬, 헤테로사이클릴옥시, C1 내지 C6 알킬티오, 아릴, 헤테로사이클, 헤테로아릴, C(O)(C1 내지 C6 알킬), C(O)(헤테로사이클), C(O)O(C1 내지 C6 알킬), C(O)NH2, C(O)NH(C1 내지 C6 알킬), C(O)N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬), SO2(C1 내지 C6 알킬), SO2(C2 내지 C6 알키닐), SO2NH(C1 내지 C6 알킬), SO2(헤테로사이클), NHC(O)(C1 내지 C6 알킬), NHSO2(C1 내지 C6 알킬), N(C1 내지 C6 알킬)SO2(C1 내지 C6 알킬), NH2, NH(아릴), N(C1 내지 C6 알킬)(C1 내지 C6 알킬) 및 NHC(O)NH2을 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
"에스테르"는 탄소 원자를 통해 결합된
Figure pct00007
C(O)O(알킬)을 나타낸다. 상기 알킬기는 정의되어 있으며, 전술한 것과 같이 비치환 또는 치환된다. 에스테르의 예는 C(O)OCH3, C(O)O(CH2CH3), C(O)O(CH2CH2CH3), 및 C(O)(O)(CH2CH2CH2CH3)을 비제한적으로 포함한다.
"한" 또는 "하나"란 용어는 하나 이상을 나타냄을 유의해야 한다. 이와 같이, "한"(또는 "하나"), "하나 이상", 및 "적어도 하나"란 용어는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다.
"포함하다", "포함한다", 및 "포함하는"이란 단어는 배타적(exclusive)인 것보다는 포함하는(inclusive) 것으로 해석되어야 한다. "이루어지다", "이루어진" 및 그의 변형체인 단어는 포함하는 것보다는 배타적인 것으로 해석되어야 한다.
본 명세서에서 사용된 것과 같이, "약"이란 용어는, 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 해당 참조로부터 10%의 변동성을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 것과 같이, "대상체" 및 "환자"란 용어는 상호교환적으로 사용되며, 포유동물, 예컨대 인간, 마우스, 래트, 기니 피그, 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 또는 원숭이, 침팬지, 개코원숭이 또는 고릴라와 같은 비-인간 영장류와 같은 임의의 동물을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 것과 같이, "질환", "질병" 및 "증상"이란 용어는 상호교환적으로 사용되며, 대상체에서의 비정상적 상태를 나타낸다.
한 구현예에서, 본 발명은 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 명세서에 개시된 것과 같은 본 발명의 약학적 조성물은 식 (I)의 화합물과 선택적으로 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 식 (I)의 화합물 및 후술한 것과 같은 하나 이상의 치료제, 즉 활성 성분을 포함할 수 있다. 추가 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 식 (I)의 화합물, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 및 하나 이상의 치료제를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은, 예를 들면, 대상체에서 통증 및/또는 호흡기 기능장애의 치료와 같은 치료 효과를 달성하기 위하여 P2X3 또는 P2X2 /3 경로를 조절하기에 효과적인 양으로 식 (I)의 화합물을 포함할 수 있다. 치료 효과를 달성하기 위하여 상기 P2X3 또는 P2X2 /3 경로를 조절하기에 효과적인 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 대상체에 투여되는 식 (I)의 화합물의 양은 "치료적 유효량"이다.
일부 구현예에서, 상기 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 약물의 제형, 약리학적 효능, 환자의 연령, 체중 및 성별, 치료되는 증상, 환자의 징후의 질환 침투 및/또는 증세, 식 (I)의 구체적인 화합물, 운반 경로, 및 환자의 반응 패턴과 같은 인자들에 의존할 것이다. 식 (I)의 화합물의 처치 또는 복용량은 제형 내에서 투여될 수 있고, 본 기술분야의 기술자는 치료적 유효량을 투여하기 위해 필요하거나 요구되는 활성의 상대적 레벨을 반영하기 위하여 상기 제형을 적절히 조정할 수 있음이 또한 고려된다. 치료적 유효량을 투여하기 위하여 도입되는 특정 복용량(및, 예를 들면, 하루 당 투여되는 횟수)은 통상적인 기술의 내과의사에 의해 즉시 결정될 수 있고, 예를 들면, 원하는 치료 효과를 생성하기 위하여 특정 환경에 상기 복용량을 적정함으로써 변경될 수 있다. 또한, 통상적인 기술의 내과의사는 치료적 유효량을 투여하기 위하여 하나 이상의 식 (I)의 화합물의 함량에 있어서 필요하거나 요구되는 임의의 변화, 예를 들면, 본 발명의 화합물 또는 약학적 조성물의 성분 또는 희석에서의 변화를 즉시 계산할 수 있다. 한 구현예에서, 상기 화합물 또는 조성물은 대상체에게 투여하기 전에 약 2배, 4배, 또는 8배 희석될 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물을 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에 따라 통증을 치료하는 경우, 치료적 유효량을 투여하기 위한 예시적인 복용량은 다음을 포함한다: 약 0.0001% 내지 약 25% w/v(즉, ㎖의 제형 당 약물의 중량); 약 20% w/v, 약 15% w/v, 약 10% w/v, 약 5% w/v, 또는 약 1% w/v 이하; 약 0.0001% 내지 약 10% w/v; 약 0.005 내지 약 5% w/v. 소정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 약 0.01 내지 약 5% w/v; 약 0.01% w/v, 약 0.05% w/v, 약 0.1% w/v, 약 0.2% w/v, 약 0.3% w/v, 약 0.4% w/v, 약 0.5% w/v, 약 0.6% w/v, 약 0.7% w/v, 약 0.8% w/v, 약 0.9% w/v, 약 1% w/v, 약 2% w/v, 약 3% w/v, 약 4% w/v, 또는 약 5% w/v이다. 한 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 약 0.2% w/v 또는 약 0.5% w/v이다.
일부 구현예에서, 대상체에서 통증을 치료하기 위해 투여되는 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 70 ㎏의 포유동물, 예를 들면, 인간 기준으로 용량 당 약 1 ㎎ 내지 약 1000 ㎎일 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 치료적 유효량은 용량 당 약 2 ㎎ 내지 약 250 ㎎ 또는 용량 당 약 5 ㎎ 내지 약 100 ㎎이다. 추가 구현예에서, 상기 치료적 유효량은 용량 당 약 25 ㎎ 내지 50 ㎎, 약 20 ㎎, 약 15 ㎎, 약 10 ㎎, 약 5 ㎎, 약 1 ㎎, 약 0.1 ㎎, 약 0.01 ㎎ 또는 약 0.001 ㎎이다.
한 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물을 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 호흡기 기능장애를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따라 호흡기 기능장애를 치료하는 경우, 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량을 투여하기 위한 예시적인 복용량은 다음을 포함한다: 약 0.0001% 내지 약 50% w/v(즉, ㎖의 제형 당 약물의 중량); 약 0.5% 내지 약 25% w/v; 약 1% 내지 약 20% w/v; 또는 약 5% to 10% w/v. 추가 구현예에서, 상기 치료적 유효량은 약 0.01% w/v, 약 0.05% w/v, 약 0.1% w/v, 약 0.2% w/v, 약 0.3% w/v, 약 0.4% w/v, 약 0.5% w/v, 약 0.6% w/v, 약 0.7% w/v, 약 0.8% w/v, 약 0.9% w/v, 약 1% w/v, 약 2% w/v, 약 3% w/v, 약 4% w/v, 또는 약 5% w/v이다.
일부 구현예에서, 대상체에서 호흡기 기능장애를 치료하기 위해 투여되는 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 70 ㎏의 포유동물, 예를 들면, 인간 기준으로 용량 당 약 0.001 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎일 수 있다. 한 구현예에서, 치료적 유효량은 용량 당 약 1 ㎎ 내지 약 250 ㎎ 또는 용량 당 약 5 ㎎ 내지 약 100 ㎎이다. 일부 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 용량 당 약 0.1 ㎎, 1 ㎎, 약 5 ㎎, 약 10㎎, 약 15 ㎎, 약 20 ㎎, 약 25 ㎎, 약 50 ㎎, 약 100 ㎎, 약 200 ㎎, 약 300 ㎎, 약 400 ㎎, 약 500 ㎎, 약 600 ㎎, 약 700 ㎎, 약 800 ㎎, 약 900 ㎎, 약 1,000 ㎎의 복용량을 포함한다.
본 발명의 방법에 있어서, 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 규칙적인 스케줄, 즉 일, 주, 월, 또는 연 기준으로, 또는 다양한 투여 일, 주, 월, 등의 비규칙적인 스케줄로 대상체에게 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 투여될 수 있다. 대안적으로, 상기 치료적 유효량은 균등하게 또는 비균등하게 나누어질 수 있는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 각각의 용량이 치료적 유효량을 구성할 수 있거나, 용량의 총량이 치료적 유효량을 구성할 수 있다. 예를 들면, 한 구현예에서, 제1 용량에 대한 치료적 유효량은 이후의 하나 이상의 용량에 대한 치료적 유효량보다 더 높을 수 있다. 다른 구현예에서, 제1 용량에 대한 치료적 유효량은 이후의 하나 이상의 용량에 대한 치료적 유효량보다 낮다. 균등하게 또는 비균등하게 나누어진 용량은, 예를 들면, 약 매 2시간, 약 매 6시간, 약 매 8시간, 약 매 12시간, 약 매 24시간, 약 매 36시간, 약 매 48시간, 약 매 72시간, 약 매 주, 약 매 2주, 약 매 3주, 약 매 월, 약 매 2월, 약 매 3월 및 약 매 6월을 포함하는 다양한 기간에 걸쳐서 투여될 수 있다. 치료법의 완전한 과정에 대응하는 복용량의 횟수 및 빈도는 통상적인 기술의 내과의사의 판단에 따라 결정될 수 있다. 전술한 것과 같이, 본 명세서에 개시된 치료적 유효량은 해당 식 (I)의 화합물의 각각의 용량을 나타낼 수 있거나, 해당 기간 동안 투여되는 총량을 나타낼 수 있다; 즉, 대상체에게 하나 이상의 식 (I)의 화합물이 투여된다면, 상기 치료적 유효량은 투여되는 총량에 대응할 수 있다. 치료 기간은 수 일, 수 주, 수 개월 또는 수 년 동안 지속될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 2주 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 치료는 1개월 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 치료는 무기한 진행될 수 있다.
본 발명의 방법에 있어서, 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량은 치료되는 구체적인 증상을 고려하여 대상체에게 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 임의의 경로로 투여될 수 있다. 적합한 투여 경로는 다른 것들 중에서도 경구, 주사, 흡입(경구, 비강내 및 기관내를 포함함), 안구, 경피(예컨대, 단순한 수동적 확산 제형 또는, 예를 들면, 이온도입법(iontophoresis), 미세바늘을 이용한 마이크로포레이션(microporation), 라디오파 절제 등을 이용한 촉진된 운반을 통함), 혈관내, 피부, 피하, 근육내, 설하, 두개내, 경막외, 직장, 방광내, 및 질을 포함한다.
상기 논의한 것과 같이, 식 (I)의 화합물은 본 발명의 방법에 따라 단독으로 대상체에게 투여될 수 있거나, 상기 화합물은 약학적 조성물로서 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 식 (I)의 화합물 및 상기 화합물이 투여되는 대상체와 생리학적으로 호환되는 하나 이상의 약학적 부형제를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 건조된 또는 액체 형태일 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물에 사용하기 위한 약학적 부형제(들)는 고체 또는 액체일 수 있고, 예를 들면, 고체 및 액체 부형제/매트릭스 모두를 포함할 수 있다. 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 대상체에게 투여하기 위하여, 예를 들면, 인간에게 투여하기 위하여 그대로(neat) 또는 하나 이상의 약학적 부형제와 함께 제형화될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물을 포함하는 약학적 부형제(들)의 본성 및 양은 식 (I)의 화합물의 용해도 및 다른 화학적 특성, 선택된 투여 경로 및 표준 약리학적 관행과 같은 인자들에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 선택적으로 하나 이상의 부형제 및 하나 이상의 식 (I)의 화합물을 함유한다.
본 발명의 약학적 조성물에 사용하기 위한 적합한 부형제의 예는, 예를 들면, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 ["Handbook of Pharmaceutical Excipients", 5th Edition, Eds.: Rowe, Sheskey, and Owen, APhA Publications (Washington, DC), December 14, 2005]에 개시되어 있는 것과 같은 계면활성제, 어주번트, 항산화제, 결합제, 버퍼, 코팅제, 발색제, 압축 보조제, 희석제, 붕해제, 에멀전화제(예컨대, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르), 연화제, 캡슐화 물질, 충진제, 향미제, 활택제, 과립화제, 윤활제, 금속 킬레이터, 삼투압-조절제, pH 조정제(예컨대, 수산화나트륨), 보존제, 가용화제, 흡착제, 안정화제, 감미제(예컨대, 사카린), 계면활성제, 현탁화제, 시럽, 증점제(예컨대, 카르복시폴리메틸렌 또는 히드록시프로필메틸셀룰로오스), 침투 향상제(예컨대, 히드록시폴리에톡시도데칸, DMSO, DMAC, DDM 등) 또는 점도 조절제(예컨대, 점도를 증가시키는 폴리머)를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 식 (I)의 화합물은 하나 이상의 고체 부형제와 함께 약학적 조성물로 제형화될 수 있다. 한 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 단위 제형, 즉 정제 또는 당의정으로 압축될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 단위 제형, 즉 캡슐에 첨가될 수 있다. 추가 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 분말로 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물을 포함하는 고체 부형제는 다양한 기능을 수행할 수 있으며, 즉 후술하는 하나 이상의 부형제의 기능을 수행할 수 있다. 예를 들면, 고체 부형제는 향미제, 윤활제, 가용화제, 현탁화제, 충진제, 활택제, 압축 보조제, 결합제, 붕해제, 또는 캡슐화 물질로서 작용할 수 있다. 한 구현예에서, 고체 부형제는 윤활제, 가용화제, 현탁화제, 결합제, 붕해제, 또는 캡슐화 물질로서 작용한다. 유사하게, 다양한 적합한 고체(예컨대, 단단한 또는 유연한) 부형제 및 부형제가 본 기술분야의 기술자에게 잘 알려져 있다. 이러한 적합한 고체 부형제는 또한 채내, 예를 들면, 방광과 같은 체강에 도입될 때 (예컨대, 액체에서 겔로, 액체에서 고체로, 겔에서 고체로) 상태 전이를 하도록 디자인될 수 있으며, 이러한 물질은 본 기술분야의 기술자에게 잘 알려져 있다. 이러한 적합한 고체 부형제는 또한, 예를 들면, 본 발명의 고체 또는 액체 약학적 조성물을 함유하는 저장소(reservoir)를 정의하는 열탄성 폴리머를 포함하는 멤브레인(membrane)을 포함할 수 있다. 다른 적합한 고체 부형제는 본 발명의 약학적 조성물이 그 내부에 임베드(embed)되는 열탄성 폴리머 매트릭스를 포함할 수 있다. 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 또한, 예를 들면, 공융(eutectic) 매트릭스를 형성하기 위하여 다른 멤브레인 안정화제(예컨대, 국소 마취제)와 함께 대상체에게 투여될 수 있다.
본 발명의 액체 약학적 조성물은 멸균 용액 또는 현탁액을 포함할 수 있다. 액체 부형제가 사용될 때, 이들은 멸균액일 수 있다. 다른 적합한 액체 부형제가 본 발명의 액체 약학적 조성물을 제조하는데 사용될 수 있으며, 예를 들면 용액, 현탁액, 에멀전, 시럽 및 엘릭시르(elixir)로 제형화된다. 한 구현예에서, 본 발명의 액체 약학적 조성물은 액체 부형제에 용해된 식 (I)의 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 액체 약학적 조성물은 액체 부형제에 현탁된 식 (I)의 화합물을 포함한다. 다양한 적합한 액체 부형제가 잘 알려져 있고, 본 기술분야의 기술자에 의해 즉시 선택될 수 있으며, 예컨대 디메틸설폭사이드(DMSO), 식염수, 버퍼화 식염수, 사이클로덱스트린, 히드록시프로필사이클로덱스트린(HPβCD), n-도데실-β-D-말토사이드(DDM) 및 이들의 혼합물을 포함할수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 적절한 함량(예컨대, 치료적 유효량)의 식 (I)의 화합물을 함유하도록 단위 제형으로 세분될 수 있다. 예를 들면, 단위 복용량은 포장된 조성물, 예컨대 포장된 분말, 바이알, 앰풀, 사전-충진된 주사기 또는 액체를 함유하는 사셰(sachet)를 포함할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 흡입제로서 이용될 수 있다. 상기 투여 경로의 경우, 본 발명의 약학적 조성물은, 예를 들면, 세분화한 스프레이 펌프에 의해, 또는 흡입을 위해 식 (I)의 화합물을 포함하는 건조 분말로서, 식 (I)의 화합물 및 운반용 비히클을 포함하는 액체 단위 용량으로 제조될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 에어로졸로서, 즉 경구용 또는 비강내 투여용으로 본 발명에 따라 투여될 수 있다. 이러한 투여 경로의 경우, 본 발명의 약학적 조성물은, 예를 들면, 가스성의 또는 액화된 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 이산화탄소, 질소, 프로판 등을 함께 갖는 가압 에어로졸 용기에서 사용하기 위해 제형화될 수 있고, 적합한 운반 장치의 하나 이상의 작동체에서 계량된 용량으로 운반될 수 있다. 소정 구현예에서, 흡입용으로 제형화된 본 발명의 약학적 조성물은 임의의 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 의학적 불활성 부형제, 예컨대 희석제, 부형제, 계면활성제 및 향미제를 포함할 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 시럽, 엘릭시르, 용액, 현탁액, 에멀전, 미세-에멀전, 나노-에멀전, 콜로이드, 액체 겔 등과 같은 섭취가능한 액체를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 필름, 로젠지, 점적약(drop), 또는 예를 들면 알약, 검 등을 포함할 수 있는 씹을 수 있는 제형 내에서 경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 경구 제형으로 제형화된 본 발명의 약학적 조성물은 어리고, 연로하거나, 삼키는데 어려움이 있는 대상체, 또는 비-인간 동물인 대상체의 치료에 유용할 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 식 (I)의 화합물의 변형된 방출을 달성하도록 제형화될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "변형된 방출"은, 예를 들면, 식 (I)의 화합물의 즉시 방출을 방지하거나, 연장된 또는 지속된 기간에 걸쳐서, 예를 들면, 적어도 약 8시간(예컨대, 연장된 운반) 내지 적어도 약 12시간(예컨대, 지속된 운반)에 걸쳐서 방출하도록 제어된 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물의 운반을 나타낸다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 (예컨대, 치료적 레벨이 약 1시간 내에 또는 약 2시간 내에 달성되는 곳에서) 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물의 즉시 방출을 허용하도록 제형화될 수 있다.
본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은 또한 본 발명의 방법에 따라 변형된 방출 운반 장치에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 적합한 변형된 방출 운반 장치는, 예를 들면, 약물-용출 임플란트를 포함한다. 이러한 임플란트는 실리콘 또는 에틸렌 비닐 아세테이트 매트릭스와 같은 열탄성 폴리머 매트릭스를 포함할 수 있으며, 그 내부에 하나 이상의 식 (I)의 화합물과, 선택적으로 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제가 임베드된다. 적합한 임플란트는, 예를 들면, 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제7,736,665호 및 미국 특허 공개 번호 US-2011/0280922에 개시되어 있다.
다른 적합한 약물-용출 임플란트는 장치 내에 포함되는 하나 이상의 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 포함하는 용액이, 예를 들면, 대상체 내로 임플란트된 후 장치 내부에 구축된 삼투압에 의해 임플란트 벽을 통해 또는 하나 이상의 개구부(aperture)를 통해 강제로 나오게 되는 "삼투 펌프" 또는 다른 메커니즘을 포함할 수 있다. 적합한 삼투 펌프 약물 용출 임플란트는, 에를 들면, 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제5,035,891호 및 제6,464,488호에 개시되어 있다.
또 다른 적합한 약물-용출 임플란트는 하나 이상의 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물을 포함하는 용액 또는 액체 조성물을 함유하는 저장소를 정의하는 (예컨대, 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제5,292,515호 및 제5,266,325호에 개시된 것과 같은) 폴리메타크릴레이트-기반의 폴리머, 또는 (예컨대, 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제7,858,110호 및 제7,842,303호에 개시된 것과 같은) 폴리우레탄과 같은 하이드로겔을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 또 다른 약물 용출-임플란트는, 예를 들면, 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제4,906,474호 및 제5,633,002호에 개시된 것과 같은 생-분해성 또는 생-부식성 폴리머 및 적어도 하나 이상의 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물을 포함할 수 있다.
식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물의 변형된 방출은 또한 방광 내로 삽입된 내시경을 통해 또는 경피적으로 도입될 수 있는 장치를 이용해 상기 화합물 또는 조성물을 방광 조직(예컨대, 요로상피 또는 고유 근육층) 내로 주사함으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은, 예를 들면, 그 개시된 내용이 인용에 의해 포함되는 미국 특허 공개 번호 US-2011/0046600에 개시되어 있는 것과 같은 바늘 또는 무바늘 장치를 통해 방광 조직 내로 주사될 수 있다. 본 발명의 방법에 사용하기 위한 적합한 무바늘 주사 장치는 JetTouch™ 플랫폼(American Medical Systems; Minnetonka, Minnesota)을 포함한다. 본 발명의 주사된 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은 데포(depot)를 형성할 수 있으며, 소정 구현예에서, 본 발명의 주사된 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은, 예를 들면, 그 개시된 내용이 인용에 의해 포함되는 미국 특허 제5,480,656호 및 제6,036,976호에 개시되어 있는 것과 같은 생-분해성 또는 생-부식성 폴리머 내에 캡슐화될 수 있다.
본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물의 변형된 방출은 또한, 예를 들면, 방광에 인스틸(instill)되거나 방광 요로상피와 접촉할 때, 방광 벽의 적어도 일부를 코팅하기 위하여 투여시 고체화 또는 겔화하는 적어도 하나의 물질로 상기 화합물 또는 약학적 조성물을 인스틸함으로써 달성될 수 있다. 이후, 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은 고체화 또는 겔화된 물질로부터 용출될 수 있다. 적합한 겔화 또는 고체화 물질의 예에 대해서는, 예컨대, 그 개시된 내용이 인용에 의해 포함되는 미국 특허 제6,894,071호, 제5,575,815호 및 제6,039,967호 참조.
다른 추가 구현예에서, 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은 예컨대 약물-용출 패치의 사용을 통해 경피적으로 투여될 수 있다. 한 구현예에서, 상기 약물-용출 패치는 "이온영동" 경피 패치이며, 약물 운반은 예컨대, 예를 들면, 외부 공급원 또는 탑재형(on-board) 배터리에 의해 생산된 마이크로프로세서-제어된 전류를 이용함으로써 수행된다. 추가 구현예에서, 상기 약물-용출 패치는 (예컨대, 용해가능하거나 비-용해가능한 형태로) 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물로 코팅되거나 이를 함유하는 미세바늘을 함유하는 "미세바늘" 경피 패치이다. 적합한 "미세바늘" 경피 패치는 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제7,798,987호 및 제7,537,795호에 개시되어 있다. 상기 미세바늘은 그 자체로 용해가능하거나 비-용해가능하다; 예를 들면, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Sullivan, "Dissolving Polymer Microneedle Patches for Influenza Vaccination", Nature Medicine, 16:915-920 (July 18, 2010 online publication) and Lee, "Dissolving Microneedle Patch for Transdermal Delivery of Human Growth Hormone", Small, 7(4):531-539 (January 4, 2011 online publication)]에 개시된 "미세바늘" 기술 참조.
본 발명에 사용하기 위한 다른 적합한 경피 운반 시스템은 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Sintov, "Radiofrequency-Driven Skin Microchanneling as a New Way for Electrically Assisted Transdermal Delivery of Hydrophilic Drugs", Controlled Release 89: 311-320 (2003)] 및 미국 특허 제7,558,625호에 개시되어 있는 라디오파 절제 시스템, 및 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제5,411,738호 및 제5,827,528호 및 [Prausnitz and Langer, "Transdermal drug delivery", Nature Biotechnology, 26(11):1261-1268, November 2006]에 개시되어 있는 경피 패치를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 사용하기 위한 경피 운반 시스템은 식 (I)의 화합물이 진피층을 통해 근육 조직 또는 신경주위(perineural) 공간으로 통과하는 것을 허용하거나 도와주도록 선택될 수 있다. 이러한 시스템은 피부 침투 향상제와 함께 식 (I)의 화합물을 갖는 제형 또는 용도를 포함할 수 있다. 적합한 피부 침투 향상제는, 예를 들면, 물리적 향상제(초음파, 이온영동, 전기영동, 자기영동, 미세바늘), 베시클, 미립자 시스템(리포좀, 니오좀, 트랜스퍼좀, 미세에멀전, 고체 지질 나노입자), 및 화학적 향상제(설폭사이드, 아존, 글리콜, 알카놀, 테르펜, 등)를 포함한다. 다른 적합한 화학적 향상제는 피부에 대한 화합물의 침투성을 증가시키고 피부를 통해 화합물이 더 심부의 조직으로 침투하도록 허용할 수 있는 예컨대 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이소프로판올, 에탄올, 올레산, N-메틸피롤리돈을 포함한다. 또한, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 화학적 피부 침투 향상제의 적합한 예는, 예를 들면, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Sagie & Kohane, "Prolonged Sensory-Selective Nerve Blockade", PNAS, 2010(8): 3740-3745, 2010]에 개시되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 사용하기 위한 경피 패치는 적합한 접착제를 통해 피부에 적용되며, 적어도 1시간 동안 제자리에 붙어 있다. 추가 구현예에서, 상기 패치는 약 1시간 동안 제자리에 붙어 있으며, 약 2 또는 약 3시간의 부착 시간 동안 매주 교체된다. 다른 구현예에서, 상기 패치는 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 12시간 또는 약 24시간 동안 제자리에 붙어 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 패치는 더 길거나 짧은 기간 동안 제자리에 붙어 있다.
본 발명의 치료 방법의 소정 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 하나 이상의 다른 약제 또는 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 한 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 단일 약학적 조성물 내에서 다른 약제 또는 치료제와 조합될 수 있다. 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 다른 식 (I)의 화합물, 또는 후술한 것과 같은 다른 약제 또는 치료제의 하나 이상의 별도의 제형에서 투여될 수 있다. 통증 및 호흡기 기능장애를 치료하는 경우, 식 (I)의 화합물과 조합하여 투여하기 위한 상기 다른 약제 또는 치료제는, 예를 들면, TRPV1 및 TRPA 수용체 활성화제 및 억제제, 전압-게이트 이온 채널의 억제제, 비-스테로이드성 항염증성 약물(NSAID), 스테로이드, 비장 티로신 키나아제 및 JAK-STAT 경로의 억제제, 사이토카인 억제제 또는 조정제, 오피오이드, 트리사이클성 항우울제, 아민 트랜스포터 억제제, 및 항경련제(예컨대, 가바펜티노이드)를 포함한다. 호흡기 증상을 치료하기 위하여 식 (I)의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 다른 약제 또는 치료제는 항콜린성 제제 및 베타-수용체 작용제(agonist)를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법은 대상체에게 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 P2X3 또는 P2X2 /3 경로 중 하나 또는 모두의 활성을 조절하기 위한 TRPV1 수용체 활성화제와 함께 투여하는 단계를 포함한다. P2X3 또는 P2X2 /3 경로 중 하나 또는 모두를 조절한 결과 대상체에서 통증 또는 호흡기 기능장애를 치료할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "TRPV1 수용체 활성화제"란 용어는 노시셉터(nociceptor) 또는 퓨리셉터(puriceptor) 상의 TRPV1 수용체를 활성화시키고, 전압-게이트 이온(예컨대, 나트륨 또는 칼슘) 채널의 적어도 하나의 억제제의 진입을 허용하는 임의의 제제 또는 자극을 나타낸다. 한 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제는, 예를 들면, 캡사이신, 디히드로캡사이신 및 노르디히드로캡사이신, 리도카인, 아르티카인, 프로카인, 테트라카인, 메피비카인, 부피비카인, 유게놀, 캠퍼, 클로트리마졸, 아르바닐(N-아라키도노일바닐라민), 아난다미드, 2-아미노에톡시디페닐 보레이트(2APB), AM404, 레시니페라톡신, 포볼 12-페닐아세테이트 13-아세테이트 20-호모바닐레이트(PPAHV), 올바닐(NE 19550), OLDA(N-올레오일도파민), N-아라키도닐도파민(NADA), 6'-아이오도레시니페라톡신(6'-IRTX), Cl 8 N-아실에탄올아민, 리폭시게나아제 유도체(예컨대, 12-히드로퍼옥시에이코사테트라에노산), 억제제 시스테인 노트(ICK) 펩티드(바닐로톡신), MSKl 95(N-[2-(3,4-디메틸벤질)-3-(피발로일옥시)프로필]-2-[4-(2-아미노에톡시)-3-메톡시페닐]아세트아미드), JYL79(N-[2-(3,4-디메틸벤질)-3-(피발로일옥시)프로필]-N'-(4-히드록시-3-메톡시벤질)티오우레아), 히드록시-α-산쉬울, 2-아미노에톡시디페닐 보레이트, 10-쇼가올, 올레일진저롤, 올레일쇼가올, SU200(N-(4-tert-부틸벤질)-N'-(4-히드록시-3-메톡시벤질)티오우레아) 노니바미드, 및 테트라히드로이소퀴놀린의 지방 아실 아미드를 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제는 리도카인, 아프린딘, 벤조카인, 부타카인, 코카인, 디부카인, 엔카이니드, 멕실레틴, 옥세타카인(옥세타자인), 프릴로카인, 프로파라카인, 프로카인아미드, n-아세틸프로카인아미드, 클로로프로카인(네사카인, 네스카인), 디클로닌, 에티도카인, 레보부피바카인, 로피바카인, 사이클로메틸카인, 디메토카인(라로카인), 프로폭시카인, 트리메카인 및 심포카인이다. 추가 구현예에서, 상기 TRPVl 수용체 활성화제는 리도카인이다. 다른 구현예에서, 상기 TRPV1 활성화제는 세제 또는 계면활성제일 수 있으며, 그 예는, 예를 들면, 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Lilja, "Surfactant-Induced TRPV1 activity - A Novel Mechanism for Eye Irritation?" Technological Sciences, 99(1):174-180, 2007]에 개시되어 있는 것과 같은 비누 및 샴푸(예컨대, 나트륨 라우릴 설페이트)와 같이 흔히 사용되는 위생 제품에서 발견될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제는 화학적 제제가 아니라 열 또는 염증이며, 이들은 모두 TRPV1 수용체를 활성화시키는 것으로 알려져 있다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법에서 사용되는 상기 TRPV1 수용체 활성화제의 양은 약 0.0001% 내지 약 10% w/v이다. 본 기술분야의 기술자는 상기 언급된 TRPV1 수용체 활성화제의 양은, 적절하다면, TRPV1 수용체 활성화제의 유리 염기를 기준으로 할 수 있음을 즉시 이해할 것이다. 일부 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제의 양은 약 10% w/v, 약 9% w/v, 약 8% w/v, 약 7% w/v, 약 6% w/v, 약 5% w/v, 약 4% w/v, 약 3% w/v, 약 2% w/v, 또는 약 1% w/v 이하이다. 다른 구현예에서, 상기 치료적 유효량은 약 0.1% 내지 약 5% w/v, 예를 들면, 약 0.5 내지 약 3% w/v; 약 0.5 내지 약 2% w/v; 또는 약 2% w/v이다. 다른 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제의 양은 약 1% w/v 또는 약 0.5% w/v이다.
일부 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제의 양은 70 ㎏의 포유동물 대상체 기준으로 용량 당 약 0.001 ㎎ 내지 약 100 ㎎, 예를 들면, 용량 당 약 0.1 ㎎ 내지 약 25 ㎎; 또는 용량 당 약 1 ㎎ 내지 약 5 ㎎일 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 TRPV1 수용체 활성화제의 양은 용량 당 약 0.1 ㎎, 약 0.5 ㎎, 약 1 ㎎, 약 2 ㎎, 약 3 ㎎, 약 4 ㎎, 약 5 ㎎, 약 6 ㎎, 약 7 ㎎, 또는 약 8 ㎎일 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 식 (I)의 화합물 및 리도카인, 예를 들면, 약 0.01% 내지 약 1% w/v의 식 (I)의 화합물 및 약 0.1% 내지 약 5% w/v의 리도카인; 약 0.1% 내지 약 0.7% w/v의 식 (I)의 화합물 및 약 1% 내지 약 3% w/v의 리도카인; 약 0.2% 내지 약 0.5% w/v의 식 (I)의 화합물 및 약 1% 내지 약 3% w/v의 리도카인; 약 0.2% 내지 약 0.5% w/v의 식 (I)의 화합물 및 약 2% w/v의 리도카인; 약 0.2% w/v의 식 (I)의 화합물 및 약 2% w/v의 리도카인; 또는 약 0.5% w/v의 식 (I)의 화합물 및 약 2% w/v의 리도카인을 포함한다. 상기 논의한 것과 같이, 상기 조성물은 추가로 희석될 수 있다. 한 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 2배 희석될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 4배 희석될 수 있다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위해 또한 고려되는 것은 식 (I)의 화합물 및 전압-게이트 이온 채널의 억제제를 포함하는 약학적 조성물이다. 한 구현예에서, 상기 전압-게이트 이온 채널은 나트륨 또는 칼슘 이온 채널이다. 적합한 전압-게이트 나트륨 채널 억제제는, 예를 들면, QX-314, N-메틸-프로카인(QX-222), N-옥틸-구아니딘, 9-아미노아크리딘, 및 판큐로늄을 포함한다. 적합한 전압-게이트 칼슘 채널 억제제는, 예를 들면, D-890(4차 메톡시베라파밀) 및 CERM 1 1888(4차 베프리딜)을 포함한다. 다른 적합한 전압-게이트 이온 채널 억제제는, 예를 들면, 릴루졸, 멕실리틴, 페니토인, 카바마제핀, 프로카인, 토카이니드, 프릴로카인, 디이소피라마이드, 벤시클란, 퀴니딘, 브레틸륨, 리파리진, 라모트리긴, 플루나리진, 아르티카인, 부피비카인, 메피비카인, 플루스피릴렌, 오르페나드린, 펜벤자민, 베프리딜, 피모지드, 펜플루리돌, 플루스피릴렌, 프로피베린, 디소피라미드, 메타돈, 톨테로딘, 트리디헥세틸 염, 트리펠렌아민, 메피라민, 브롬페닐아민, 클로르페니라민, 덱스클로르페니라민, 카르비녹사민, 레보메타딜 아세테이트, 갈로파밀, 베라파밀, 데바파밀, 티아파밀, 에모파밀, 디클로닌, 프라목신, 라모트리긴, 미베프라딜, 가바펜틴, 아밀로라이드, 딜티아젬, 니페디핀, 니모디핀, 니트렌디핀, 코카인, 멕실레틴, 프로파페논, 퀴니딘, 옥세타자인, 아르티카인, 릴루졸, 벤시클란, 리파리진, 및 스트리크닌을 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 또한 식 (I)의 화합물 및 전압-게이트 이온 채널의 멤브레인 투과성 억제제를 포함할 수 있다. 전압-게이트 이온 채널의 적합한 멤브레인 투과성 억제제는, 예를 들면, 코카인, 카바마제핀, 디소피라마이드, 라모트리긴, 프로카인아미드, 페니토인, 옥스카바제핀, 토피라메이트, 조니사마이드, 테트라카인, 에틸 아미노벤조에이트, 프릴로카인, 디소피라마이드 포스페이트, 플레카이나이드 아세테이트, 멕실레틴, 프로파페논, 퀴니딘 글루코네이트, 퀴니딘 폴리갈락투로네이트, 클로로프로카인, 디부카인, 디클로닌, 메피바카인, 프라목신, 프로카인, 테트라카인, 옥세타자인, 프로피토카인, 레보부피바카인, 부피바카인, 리도카인, 모리시진, 토카이나이드, 프로파라카인, 로피바카인, 퀴니딘 설페이트, 엔카이나이드, 로피바카인, 레티도카인, 모리시진, 퀴니딘, 엔카이나이드, 플레카이나이드, 토카이나이드, 포스페니토인, 클로로프로카인, 디클로닌, L-(-)-l-부틸-2',6'-피페콜옥실리다이드 및 프라목신을 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 또한 식 (I)의 화합물 및 혈관수축제(vasoconstrictor), 예컨대 에피네프린 또는 바소프레신을 포함할 수 있거나, 또는 (예를 들면, 주사가능한 용액으로 제형화될 때) 글루코오스 또는 덱스트로오스 및 식 (I)의 화합물을 포함할 수 있고, 수액으로서 또는 국소 진통제 또는 항-소양제로서 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 또한 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 또는 이의 하나 이상의 제형과, 선택적으로 보관 및/또는 사용을 위한 설명서를 함께 포함하는 요법(regimen), 키트 또는 패키지를 제공한다.
본 발명의 키트는 본 발명의 화합물 또는 해당 투여 경로용으로 제형화된 약학적 조성물을 수용하는 포장 또는 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 키트는 선택적으로 식 (I)의 화합물과 관련한 복용 및/또는 삽입에 대한 설명서를 포함할 수 있다. 상기 선택적인 설명서는, 예를 들면, 식 (I)의 화합물 또는 그의 대사물의 국소 또는 순환 레벨을 모니터링하기 위한 분석법과 관련한 정보를 포함할 수 있으며, 상기 키트는 예컨대 시약, 웰 플레이트, 용기, 마커 또는 라벨 등을 포함하는 이러한 분석법을 수행하기 위한 물질을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 키트는 표시된 치료용으로 적합한 방식으로 즉시 포장될 수 있다. 예를 들면, 상기 키트는 패치, 스프레이 펌프, 코 스프레이, 흡입기(에어로졸, 계량된 용량, 및 건조 분말 흡입기), 네불라이저, 또는 다른 적합한 장치, 및 선택적으로 사용을 위한 설명서를 포함할 수 있다. 본 발명의 키트에 포함되는 다른 적합한 구성성분은 상기 표시 및 운반 경로를 고려하여 본 기술분야의 기술자에게 즉시 자명할 것이며, 예를 들면, 운반 장치의 배치 및 사용을 촉진하기 위한 윤활제, 소독 용액 및 국소 마취제를 포함할 수 있다.
상기 논의한 것과 같이, 본 발명의 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물은, 예를 들면, 연속적 또는 주기적인 불연속적 투여 동안에 단일 용량 또는 다중 용량으로 대상체에게 투여될 수 있다. 연속적 투여의 경우, 본 발명의 패키지 또는 키트는 하나 이상의 복용량 단위, 예컨대, 용액, 로션, 정제, 알약, 약물-용출 단위/패치 또는 전술한 또는 약물 운반에 이용될 수 있는 다른 단위 제형에서 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 및 선택적으로 (예를 들면, 1일 이내, 1일, 1주, 또는 1개월 동안의) 소정의 또는 처방된 기간 동안 용량을 투여하기 위한 설명서를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 약학적 조성물이 주기적으로 불연속적 방식으로 운반되어야 한다면, 패키지 또는 키트는 식 (I)의 화합물 또는 약학적 조성물이 운반되지 않는 기간 동안에는 위약(placebo)을 포함할 수 있다. 본 발명의 치료 방법이 시간의 경과에 따라 다양한 농도의 조성물, 조성물의 구성성분, 또는 상대적인 비의 식 (I)의 화합물 또는 제제 또는 약학적 조성물을 포함하는 부형제를 포함할 때, 패키지 또는 키트는 상기 변동성을 제공하는 복용량 단위를 순서대로 포함할 수 있다.
주기적인 경구 사용을 위하여 본 발명의 키트에 사용하기에 적합한 약학적 제제를 분배하기 위한 다수의 패키지가 본 기술분야에 잘 알려져 있다. 한 구현예에서, 상기 패키지는 각각의 기간에 대한 지시제(indicator)을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 패키지는 포일 또는 블리스터(blister) 패키지, 표지된 앰풀, 바이알 또는 병을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 키트는 그 자체로 식 (I)의 화합물 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 효과적으로 투여하기 위해 사용될 수 있으며, 흡입기, 주사기, 피펫, 점안기, 카테터, 세포검사기, 투관침, 카눌라, 가압 배출 장치, 또는 예를 들면 본 발명의 화합물 또는 약학적 조성물을 (예컨대, 대상체의 신체의 환부에 적용함으로써) 대상체에게 투여할 수 있는 다른 장치와 같은 약물 운반 장치를 포함할 수 있다.
본 발명의 키트를 포함하는 식 (I)의 화합물, 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 적합한 용매의 첨가에 의해 재구성하기 위하여 건조되거나 동결건조된 형태로 제공될 수 있으며, 상기 용매는 키트와 함께 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 적합한 용매는 또한 다른 패키지에 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 키트는 예컨대 주사 또는 중공-성형 플라스틱 용기와 같이 상업적 판매를 위해 면밀히 고정되는, 식 (I)의 화합물, 또는 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 포함하기 위한 수단을 포함할 수 있다.
상기 식 (I)의 화합물은 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) P2X3 및/또는 P2X2 /3 경로를 조절하는데 유용하며, 상기 조절의 결과로서 통증 또는 호흡기 기능장애와 같이 P2X3 및/또는 P2X2 /3 경로와 연관된 증상이 치료될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것과 같이, "조절", "조정"이란 용어 또는 그의 변형은 상호교환적으로 사용되며, 식 (I)의 화합물이 생물학적 경로의 하나 이상의 구성성분의 활성을 억제 또는 감소시키는 능력을 나타낸다. 한 구현예에서, "조절"은 P2X3 활성의 억제를 나타낸다. 다른 구현예에서, "조절"은 P2X2 /3 활성의 억제를 나타낸다. 추가 구현예에서, "조절"은 P2X3 및 P2X2 /3 활성의 이중 억제를 나타낸다.
따라서, 한 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물을 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 임의의 타입의 통증이 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 사용된 것과 같은 "통증"이란 용어는, 예를 들면, 급성 또는 만성의 모든 타입의 통증을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 통증은 체성, 중추성, 내장성, 특발성, 기능장애성, 통각수용성, 신경성, 염증성, 및/또는 절차성 통증일 수 있다.
"체성 통증"은 뼈, 관절, 근육, 피부, 또는 결합 조직 유래의 통증을 포함한다.
"중추성 통증"은 뇌의 트라우마, 뇌졸중, 또는 척수 손상의 결과로서 발생하는 통증을 포함한다.
"내장성 통증"은 기도 또는 위장관 및 췌장, 요로 및 생식 기관과 같은 내장 기관으로부터 유래되는 통증을 포함한다. 한 구현예에서, 내장성 통증은 기관 캡슐에 종양이 관여되는 결과로서 생긴다. 다른 구현예에서, 내장성 통증은 공동 내장(hollow viscus)이 막힌 결과로서 생긴다. 추가 구현예에서, 내장성 통증은 방광염 또는 역류성 식도염과 같은 염증의 결과로서 생긴다.
"특발성 통증"은 기저의 원인이 없는 통증을 나타내거나, 진단되지 않은 채로 남아있는 증상에 의해 초래되는 통증을 나타낸다.
"기능장애성 통증"은 신경 시스템에 대한 유해한 자극, 조직 손상 또는 병변이 없이 일어나는 통증을 나타낸다. 한 구현예에서, 기능장애성 통증은 관절염 및 섬유근육통, 긴장성 두통, 과민성 장 질병 및 홍반통증(erythermalgia)과 같은 류마티스성 증상의 결과로서 생긴다.
"통각수용성 통증"은 신체 조직을 위협하거나 실제로 손상시키는 유해한 자극에 의해 초래되는 통증을 포함한다. 한 구현예에서, 통각수용성 통증은 절단, 타박상, 골절, 압궤 손상, 화상, 트라우마, 수술, 분만, 염좌, 부딪힘, 주사, 치과적 절차, 피부 생검, 또는 막힘의 결과로서 생긴다. 다른 구현예에서, 통각수용성 통증은 피부, 근골격 시스템, 또는 내부 장기에 위치한다.
"신경성 통증"은 시스템 상의 병소의 결과로서 말초 또는 충추 신경 시스템에 의한 감각 입력의 비정상적 처리로 인한 통증이다. 한 구현예에서, 신경성 통증은 만성 및 비-악성이다. 한 구현예에서, 신경성 통증은 트라우마, 수술, 추간판의 탈출, 척수 손상, 당뇨, 헤르페스 조스터의 감염(대상포진), HIV/AIDS, 말기 암, 절단수술(예컨대, 유방절제술), 손목 터널 증후군, 만성 알코올 남용, 방사선에 대한 노출이나, 소정의 항-HIV 및 화학치료 약물과 같은 신경독성 치료제의 의도치 않은 부작용으로 인한 것이다. 다른 구현예에서, 신경성 통증은 "버닝(burning)", "일렉트릭(electric)", "팅글링(tingling)", 또는 "슈팅(shooting)"으로 기재될 수 있다.
"염증성 통증"은 임의의 수의 인자들에 의해 초래되는 염증의 결과로서 생기는 통증을 포함한다. 한 구현예에서, 염증성 통증은 조직 손상 또는 염증으로 인해 일어난다. 다른 구현예에서, 염증성 통증은 (관절, 근육, 및 힘줄의 손상을 포함하는) 손상, 수술적 절차, 감염, 및/또는 관절염으로 인한 것이다.
"절차성 통증"은 의학적 절차로부터 발생하는 통증을 나타낸다. 상기 의학적 절차는 임의의 타입의 의학적, 치과적 또는 수술적 절차를 포함할 수 있다. 한 구현예에서, 상기 절차성 통증은 수술후에 생긴다. 다른 구현예에서, 상기 통증은 주사, 종기의 드레이닝(draining), 수술, 피부과적, 치과적 절차, 안과적 절차, 관절경 및 다른 의학적 기기의 사용 및/또는 미용 수술과 연관된다.
예를 들면, 상기 통증은 편두통, 요통, 목 통증, 부인과 통증, 분만전 또는 분만 통증, 정형외과 통증, 뇌졸중 후 통증, 수술 후 또는 절차성 통증, 대상포진 후 신경통, 겸상 세포 질병(sickle cell crises), 간질성 방광염, 비뇨기과 통증(예컨대, 요도염), 치과 통증, 두통, 상처 유래 또는 수술과 같은 의학적 절차(예컨대, 건막절제술 또는 둔부, 무릎 또는 다른 관절 교체) 유래의 통증, 봉합, 골절의 세팅, 생검, 등으로부터 유래될 수 있다. 통증은 또한 암을 갖는 환자에서 일어날 수 있으며, 이는 염증, 신경 압착, 및 종양에 의한 침입의 결과로서 조직이 팽창된 결과인 기계적 힘 및 뼈 또는 다른 조직으로의 종양의 전이와 같은 다수의 원인으로 인한 것일 수 있다. 한 구현예에서, 상기 암은 골암(bone cancer)이다.
한 구현예에서, 상기 통증은 대상포진 후 신경통과 같은 신경성 통증이다. 다른 구현예에서, 상기 통증은 염증성 통증이다. 추가 구현예에서, 상기 통증은 통각수용성 통증이다. 또 다른 구현예에서, 상기 통증은 절차성 통증이다. 다른 추가 구현예에서, 상기 통증은 식도암, 대장염, 방광염, 과민성 장 증후군, 대장염 또는 특발성 신경병증에 의해 초래된다. 또 다른 구현예에서, 상기 통증은 기도, 방광 또는 내장 기관의 기능장에에 의해 초래된다.
"치료", "치료하는"이란 용어 또는 그의 임의의 변형은 환자 또는 대상체에서 건강 문제 또는 증상을 안정화, 감소 또는 개선하기 위해 이용되는 임의의 치료법을 포함하는 것을 의미한다. 한 구현예에서, 상기 건강 문제 또는 증상은 영구적으로 또는 짧은 기간 동안 제거될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 건강 문제 또는 증상, 또는 상기 건강 문제 또는 증상에 특징적인 하나 이상의 징후의 증세는 영구적으로 또는 짧은 기간 동안 지연되거나, 악화되지 않거나, 발생하지 않거나, 또는 완화될 수 있다. 통증 치료의 효과는 본 명세서에 개시된 것과 같은 임의의 표준 통증 지수를 이용하여 결정될 수 있거나, 환자의 주관적인 통증에 기초하여 결정될 수 있다. 환자는 통증의 감소가 보고되거나 통증을 초래할 수 있는 자극에 대한 반응이 감소된다면 "치료된" 것으로 간주될 수 있다.
따라서, 본 발명의 방법에 따라 통증을 치료하는 경우, 예를 들면, 통증의 감소와 부합되는 해당 생물학적 또는 화학적 마커에서 측정가능한 변화(이러한 마커의 결합 친화도의 정도 등에 있어서의 변화를 측정하는 것을 포함함)가 있거나, 대상체가 통증 빈도, 기간 또는 강도에서 감소되거나, 또는 통증의 감소로 인해 명백하게 개선된 삶의 질을 경험하거나 경험하는 것으로 관찰된다면, 상기 대상체는 통증에 대해 치료된 것이다. 본 발명에 따라 호흡기 기능장애를 치료하는 경우, 호흡기 증상의 하나 이상의 징후의 감소 또는 증세의 완화와 부합되는 해당 생물학적 또는 화학적 마커에서 측정가능한 변화(이러한 마커의 결합 친화도의 정도 등에 있어서의 변화를 측정하는 것을 포함함)가 있거나, 예를 들면, 대상체가 덜 빈번하거나 덜 강력한 기침, 노력형 호흡, 등을 경험하거나 경험하는 것으로 관찰된다면, 상기 대상체는 호흡기 기능장애에 대해 치료된 것이다.
본 발명의 임의의 치료 방법의 유용성 또는 효과를 측정하기 위하여, 임의의 적합한 측정 지수가 사용될 수 있다. 근골격, 면역염증 및 신경병성 질병과 연관된 통증의 측정에 적합한 지수는 시각 아날로그 척도(VAS), 리커트 척도, 단정적 통증 척도, 주관적인 환자의 기술, 레쿠에슨(Lequesne) 지수, WOMAC 지수, 및 AUSCAN 지수를 포함하며, 이들 각각은 본 기술분야에 잘 알려져 있다. 이러한 지수는 통증, 기능, 강성, 또는 다른 변수를 측정하기 위해 사용될 수 있다.
간질성 방광염과 연관된 통증의 측정에 유용한 지수는 간질성 방광염 징후 지수(ICSI), 간질성 방광염 문제 지수(ICPI), 통증-긴급-빈도(PUF, pain-urgency-frequency) 점수, 위스콘신 징후 기기(UWI) 및 리커트 척도 및 다른 단정적 통증 척도와 같은 시각 아날로그 척도(VAS)를 포함한다.
시각 아날로그 척도(VAS)는 1차원 분량의 측정을 제공한다. VAS는 일반적으로 예컨데 10개의 1 ㎝ 간격의 규칙적인 거리 간격으로 그려진 해시 마크를 갖는 선의 그림과 같이 거리를 나타낸 것을 이용한다. 예를 들면, 대상체는 통증의 감각에 가장 잘 대응하는 선에 대한 점을 선택함으로써 통증의 감각에 순위를 매길 것을 요청받을 수 있으며, 이때 상기 선의 한쪽 끝은 "통증 없음"(0 ㎝의 점수)에 대응하고, 상기 선의 다른쪽 끝은 "참을 수 없는 통증"에 대응한다. 상기 절차는 환자가 얼마나 고통을 경험하는지에 대한 정량적인 정보를 수득하는 단순하고 신속한 접근법을 제공한다. VAS 척도 및 그의 이용은 예컨대 해당 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제6,709,406호 및 제6,432,937호에 개시되어 있다.
리커트 척도는 유사하게 1차원 분량의 측정을 제공한다. 일반적으로, 리커트 척도는 낮은 값, 예컨대 통증이 없음을 의미하는 0으로부터 높은 값, 예컨대 극도의 통증을 의미하는 7까지 범위의 별개의 정수 값을 갖는다. 통증을 경험하는 환자는 경험하는 통증의 정도를 나타내기 위하여 낮은 값과 높은 값 사이의 숫자를 선택하도록 요청받는다. 리커트 척도 및 그의 이용은 예컨대 해당 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 미국 특허 제6,623,040호 및 제6,766,319호에 개시되어 있다.
상기 레쿠에슨 지수 및 WOMAC(Western Ontario and McMaster Universities) 골관절염(OA) 지수는 자가-기입식 질문지를 이용하여 OA 환자의 무릎 및 둔부에서의 통증, 기능 및 강성을 평가한다. 무릎 및 둔부는 모두 WOMAC에 의해 포괄되지만, 무릎에 대한 질문지가 있고 둔부에 대한 별도의 질문지가 있다. 상기 질문지는 VAS 또는 리커트 척도와 비교하여 더 많은 정보 내용물을 포함하고 있기 때문에 유용하다. 상기 WOMAC 지수 및 레쿠에슨 지수의 질문지는 모두 예컨대 무릎 및 둔부의 관절성형술과 같은 수술적 세팅을 포함하여 OA에서 널리 입증되어 있으며, 그 계량 특징은 현저하게 다르지 않다.
상기 AUSCAN(Australian-Canadian hand arthritis) 지수는 타당하고, 신뢰할만하며, 반응성인 환자의 자가-보고식 질문지를 도입한다. 어떤 경우에 있어서, 상기 질문지는 3차원 내에 15개의 질문을 포함한다(통증, 5개 질문; 강성, 1개 질문; 및 물리적 기능, 9개 질문). AUSCAN 지수는 예컨대 리커트 또는 VAS 척도를 이용할 수 있다.
상기 O'Leary-Sant 점수 및 IC 문제 지수는 낮은 요로 징후를 측정하기 위한 자가-기입식 지수이다.
상기 통증-긴급-빈도 징후 척도는 비뇨기 기능장애, 골반 통증 및 성교와 연관된 징후의 균형잡힌 평가이며, 방광내 염화칼륨의 투여와 접목되어 빈번하게 이용된다.
상기 UWI는 빈도, 긴급성, 야뇨(nocturia) 및 통증에 대한 7개의 IC-연관성 질문을 이용한다.
상기 논의된 지수 이외에도, 통증의 측정에 유용한 다른 적합한 지수는 PDS(Pain Descriptor Scale), VDS(Verbal Descriptor Scale), NPIS(Numeric Pain Intensity Scale), NPS(Neuropathic Pain Scale), NPSI(Neuropathic Pain Symptom Inventory), PPI(Present Pain Inventory), GPM(Geriatric Pain Measure), MPQ(McGill Pain Questionnaire), 평균 통증 강도(Descriptor Differential Scale), NPS(numeric pain scale), GES(global evaluation score), 쇼트-폼 맥길 통증 질문지(Short-Form McGill Pain Questionnaire), 미네소타 멀티페이스 성격 인벤토리(Minnesota Multiphasic Personality Inventory), 통증 프로필(Pain Profile) 및 다차원 통증 인벤토리(Multidimensional Pain Inventory), 아동 건강 질문지(Child Health Questionnaire), 및 아동 평가 질문지(Child Assessment Questionnaire)를 포함한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물을 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 호흡기 기능장애를 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "호흡기 기능장애"란 용어는, 예를 들면, 호흡기 질환 또는 질병으로 인해, 예를 들면, 기관지의 과다활성, 기관지수축, 기관지경련, 과다분비, 기침, 기침 과민감 증후군, 천명, 호흡장애, 숨막힘, 및 흉부 긴장(chest tightness)과 같이 대상체에서 정상적인 호흡기 기능의 임의의 방해를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "호흡기 질환 또는 질병"이란 용어는, 예를 들면, 특발성 폐 섬유증(IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 상기도 감염, 간질성 폐 질환(ILD), 후비루(post-nasal drip), 및 기관지염을 포함한다. 상기 호흡기 기능장애는 또한 위식도 역류 질환(GERD)과 연관될 수 있거나, ACE(Angiotensin Converting Enzyme) 억제제를 이용한 치료와 연관된 기침을 포함하는 의원성(iatrogenic) 기침일 수 있거나, "흡연자의 기침", 즉 흡연 또는 담배연기, 먼지, 재 등에 대한 노출과 연관된 기침일 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "기침"이란 용어는, 예를 들면, 아-급성(sub-acute) 기침, 만성 기침, 치료-저항성 기침, 특발성 만성 기침, 상기도 감염증과 연관된 기침, 바이러스 감염 후 기침, 의원성 기침, 흡연자의 기침, 기관지염, 후비루 또는 임의의 다른 기관지 또는 식도의 자극과 연관된 기침, 임의의 호흡기 질환과 연관된 기침에 대한 욕구, 기침-변이성 천식, 간질성 폐 질환, 및 백일해를 포함하는 임의의 기침을 나타낸다.
"급성 기침"이란 용어는 2주까지의 기간 동안 지속되는 기침을 나타낸다. 예를 들면, 급성 기침은 감기 또는 독감과 같은 급성 질환의 결과일 수 있다. 급성 기침은 기저의 원인(예컨대, 감기 또는 독감)이 제거되면 사라질 것이다.
"아-급성 기침"이란 용어는 2주 내지 8주 동안 지속되는 기침을 나타낸다. 일부 경우에 있어서, 아-급성 기침은 대상체가 질환(예컨대, 감기 또는 독감)에 감염된 기간 동안 계속된다. 아-급성 기침은 기저의 원인이 제거된 후에도 종종 남아있는 것이다. 예를 들면, 아-급성 기침은 감염 후에(예컨대, 바이러스 감염 후에) 발견된다.
"만성 기침"이란 용어는 명시적인 기저의 원인을 갖지 않고 천식이나 COPD와 같은 다른 호흡기 질환과도 연관될 수 없는 8주 이상 지속되는 끈질기고 난치성인 기침을 나타낸다. 또한, 만성 기침은 일반적으로 다른 호흡기 질환(예컨대, COPD)과 달리 이를 정의 및 진단하기 위한 특징(hallmark)을 갖지 않으며, 만성 기침을 앓는 대상체는 대부분의 다른 측면에서는 외관상 정상일 수 있다. 만성 기침은 빈번한 기침(예컨대, 낮 동안에 시간 당 적어도 5-10회의 기침) 및 수면 동안의 성가신 기침에 의해 특정된다. 만성 기침은 10년 이상을 포함하는 수 년의 기간 동안 지속될 수 있다.
임상 실무 및 임상 연구에서 기침을 평가하기 위한 다양한 도구들이 개발되어 있다. 예를 들면, 통증의 평가를 위해 전술한 것과 같은 시각 아날로그 척도(VAS)가 또한 기침의 증세를 평가하기 위해 널리 사용된다. 레스터 기침 질문지(LCQ) 및 기침-특이적 삶의 질 질문지(CQLQ)가 또한 만성 기침의 영향을 평가하기 위해 사용된다. 레스터 기침 모니터(LCM) 및 비탈로잭(VitaloJak)과 같이 마이크 및 기록 장치로 구성되는 이동 장치(ambulatory device)는 특히 임상 연구에서 기침의 빈도를 측정하기 위한 효과적인 도구이다. 이러한 도구를 사용하면, 본 발명의 방법에 따라 대상체를 치료한 후에 환자에 대해 기침 빈도 및/또는 증세의 감소를 측정하기 위한 증거를 제공할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 식 (I)의 화합물을 (단독으로 또는 약학적 조성물을 포함하여) 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 호흡기 증상을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 호흡기 증상은 급성 기침, 만성 기침, 및 특발성 폐 섬유증(IPF)과 연관된 기침으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 호흡기 증상의 치료는, 예를 들면, 기침의 증세에 대한 시각 아날로그 척도(VAS), 레스터 기침 질문지(LCQ), 기침-특이적 삶의 질 질문지(CQLQ) 및 레스터 기침 모니터(LCM)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기술에 의해 측정될 수 있다.
다음의 실시예는 예시적인 것일 뿐이며, 본 발명을 제한하기 위한 의도는 아니다.
실시예
달리 나타내지 않는 한, 모든 원료 물질은 상업적으로 시판되는 보통의 공급자로부터 구입하였다. 1H-NMR 스펙트럼은 CDCl3 용해 화합물에 대한 내부 참조물로서 테트라메틸실란(TMS)을 이용해 기록하였다. DMSO-d6, MeOD 및 D2O 용해 화합물의 경우, 각각 δ 2.5, 3.3 및 4.82 ppm에서 기기를 교정하였다. 화학적 시프트 값은 δ(백만분율, parts per million)로 인용하였다.
LCMS 분석법의 경우, LCMS/MS API 2000(Applied Biosystem) 기기를 사용하였다. 칼럼은 다음을 포함하였다:
칼럼 V: Zorbax® C18 칼럼, 4.6×50 ㎜, 5μ
칼럼 W: Zorbax® Extend C18 칼럼, 4.6×50 ㎜, 5μ
칼럼 X: Gemini® NX C18 칼럼, 4.6×50 ㎜, 5μ
칼럼 Y: Xbridge® C18 칼럼, 4.6×50 ㎜, 5μ
칼럼 Z: Reprosil® 칼럼, 4.6×50 ㎜, 5μ
전형적으로 포함되는 용출액(용매)(수상(aqueous phase)으로서 산성 또는 염기성 버퍼):
A 채널: (ⅰ) 물 중의 0.05% 포름산; (ⅱ) 물 중의 10 mM 암모늄 아세테이트; 또는 (ⅲ) 물 중의 0.05% TFA.
B 채널: 아세토니트릴(유기상(organic phase)).
검출기는 2중 파장에서 측정된 UV였다: 220 및 260 nm.
LCMS 구배(gradient)는 다음 중 하나였다:
1. LCMS 반응 모니터링 및 최종 화합물 분석 방법(일반적인 극성 화합물의 경우)
구배 조건: 5분 구동 시간
시간 프로그램: P1: 물/아세토니트릴 중의 10 mM 암모늄 아세테이트
Q1: 물/아세토니트릴 중의 0.05% TFA,
R1: 물 중의 0.05% 포름산/아세토니트릴.
아세토니트릴의 구배는 10%에서 90%에서 10%로 변하였다.
흐름 속도: 1.2 ㎖/분.
2. 12분 구동에서 LCMS 반응 모니터링 및 최종 화합물 분석 방법(근접 용출 화합물의 경우):
구배 조건: 12분 구동 시간
시간 프로그램: P2: 물 중의 10 mM 암모늄 아세테이트/아세토니트릴
Q2: 물 중의 0.05% TFA/아세토니트릴
R2: 물 중의 0.05% 포름산/아세토니트릴
아세토니트릴의 구배는 5%에서 90%에서 5%로 변하였다.
흐름 속도: 1.0 ㎖/분.
3. HPLC에서 방법이 개발된 후의 LCMS - 구배 조건은 HPLC에 따른다.
질량 스펙트럼 데이터는 다음을 이용하여 수득되었다:
이온화 기술: API(Atmospheric pressure Ionization) 소스(source)를 이용한 ESI(Electron Spray Ionization).
탈클러스터링 포텐셜(Declustering Potential): 화합물의 이온화에 따라 10-70 V
질량 범위: 100-800 amu
스캔 타입: Q1
극성: +/-ve
이온 소스: 터보 스프레이
이온 스프레이 전압: +ve 모드의 경우 +5500 및 -ve 모드의 경우 -4500
질량 소스 온도: 200℃
식 (I)의 화합물의 생산에 사용되는 중간체의 합성.
다음의 18개 반응식(scheme)은 식 (I)의 화합물을 만들기 위해 사용되는 소정의 중간체의 합성을 보여준다. 헤테로원자를 함유하는 아래에 나타낸 화학 구조는 어떤 경우에 있어서 나타내지 않은 하나 이상의 결합된 수소를 가질 것임이 본 기술분야의 통상의 기술자에게 자명하고 이해될 것이다.
Figure pct00008
단계 1: 벤조푸란-5-카르브알데히드(B)의 제조:
클로로벤젠(10 ㎖) 내의 화합물 A(500 ㎎, 3.37 mmol, 1eq)의 얼음-냉각 교반 용액에 NBS(721 ㎎, 4.05 mmol, 1.2 eq) 및 AIBN(11 ㎎, 0.07 mmol, 0.02 eq)을 분배해(in portions) 첨가하였고, 결과물인 용액을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 포화된 수성 NaHCO3 용액(20 ㎖)으로 세척하였다. 유기 구성성분(organic component)을 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였다. 조(crude) 물질을 100-200 메쉬(mesh) 실리카 겔을 이용하고 5% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 B(270 ㎎, 55%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.06 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.16-8.16 (m, 1 H), 7.89-7.87 (m, 1 H), 7.81-7.79 (m, 1 H), 7.16-7.15 (m, 1 H);
LCMS: m/z = 147.4 [M+H], RT = 2.99분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 1-벤조푸란-5-일-에탄올(C)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 B(900 ㎎, 6.16 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 4.1 ㎖, 12.3 mmol, 2 eq)를 -50℃에서 한방울씩(drop wise) 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 -50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액(20 ㎖)으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하여 무색 점성(sticky) 물질로서 화합물 C(900 ㎎, 90%)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97-7.94 (m, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.50 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.29-7.27 (m, 1 H), 6.94-6.91 (m, 1 H), 5.15 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4.84-4.78 (m, 1 H), 1.35 (d, J = 8 Hz, 3 H).
단계 3: 5-(1-아지도-에틸)-벤조푸란(D)의 제조:
건조된 톨루엔(10 ㎖) 내의 화합물 C(200 ㎎, 1.23 mmol, 1eq)의 교반된 용액에 DPPA(408 ㎎, 1.5 mmol, 1.2 eq) 및 DABCO(168 ㎎, 1.5 mmol, 1.2 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 20% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 D(40 ㎎, 18%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.02-8.02 (m, 1 H), 7.69 (s, 1 H), 7.62 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.34 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6.98-6.98 (m, 1 H), 4.96-4.91 (m, 1 H), 1.50 (d, J = 4 Hz, 3 H).
단계 4: 1-벤조푸란-5-일-에틸아민(E)의 제조:
THF(5 ㎖) 및 H2O(1 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 D(40 ㎎, 0.21 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리페닐포스핀(111 ㎎, 0.42 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 E(30 ㎎, 88%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.95 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.50 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.33-7.31 (m, 1 H), 6.91-6.91 (m, 1 H), 4.16-4.11 (m, 1 H), 1.30 (d, J = 8 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 162.2 [M+H], RT = 1.56분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 2: 1-(2-메틸-벤조푸란-5-일)-에틸아민의 합성
Figure pct00009
단계 1: 4-프로프-2-이닐옥시-벤즈알데히드(C)의 제조:
톨루엔(80 ㎖) 내의 화합물 A(5.91g, 48.4 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 화합물 B(톨루엔 내에서 80 wt.%, 8 ㎖, 89.8 mmol, 1.85 eq) 및 K2CO3(87.4 g, 633 mmol, 13 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 여과하였으며, 여과물을 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 20% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 C(3 g, 40%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.88 (s, 1 H), 7.89 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.17 (d, J = 8 Hz, 2 H), 4.94 (d, J = 2 Hz, 2 H), 3.64 (br s, J = 4 Hz, 1 H);
LCMS: m/z = 161.2 [M+H], RT = 2.96분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 2-메틸-벤조푸란-5-카르브알데히드(D)의 제조:
화합물 C(3 g, 18.75 mmol, 1 eq)에 PEG-300(30 ㎖)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 220℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 얼음물(70 ㎖)로 희석하였으며, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 20% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 D(700 ㎎, 24%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.02 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.80-7.78 (m, 1 H), 7.69-7.67 (m, 1 H), 6.76 (s, 1 H), 2.48 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 161.2 [M+H], RT = 3.22분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 3: 1-(2-메틸-벤조푸란-5-일)-에탄올(E)의 제조:
건조된 THF(15 ㎖) 내의 화합물 D(700 ㎎, 4.37 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 3 ㎖, 8.75 mmol, 2 eq)를 -50℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 -50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액(20 ㎖)으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하여 무색 점성 물질로서 화합물 E(570 ㎎, 74%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.45 (s, 1 H), 7.38 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.19-7.16 (m, 1 H), 6.52 (s, 1 H), 5.11 (d, J = 4 Hz, 1 H), 4.79-4.76 (m, 1 H), 2.42 (s, 3 H), 1.34 (d, J = 4 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 175.0 [M-H], RT =3.03분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 4: 5-(1-아지도-에틸)-2-메틸-벤조푸란(F)의 제조:
건조된 톨루엔(10 ㎖) 내의 화합물 E(600 ㎎, 3.41 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 DPPA(1.12 g, 4.09 mmol, 1.2 eq) 및 DABCO(459 ㎎, 4.09 mmol, 1.2 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 F(210 ㎎, 31%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.54 (s, 1 H), 7.49 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.24-7.22 (m, 1 H), 6.59 (s, 1 H), 4.90-4.88 (m, 1 H), 2.44 (s, 3 H), 1.48 (d, J = 8 Hz, 3 H).
단계 5: 1-(2-메틸-벤조푸란-5-일)-에틸아민(G)의 제조:
THF(20 ㎖) 및 H2O(4 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 F(210 ㎎, 1.04 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리페닐포스핀(550 ㎎, 2.09 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 G(130 ㎎, 77%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.48 (s, 1 H), 7.36 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.21-7.19 (m, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 4.08-4.03 (m, 1 H), 2.41 (s, 3 H), 2.15 (br, 2 H), 1.26 (d, J = 8 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 176.1 [M+H], RT = 2.06분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 3: 1-(4-이소프로폭시-페닐)-에틸아민의 합성
Figure pct00010
단계 1: 1-(4-이소프로폭시-페닐)-에탄올(B)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 A(1 g, 6.09 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 4 ㎖, 12.18 mmol, 2 eq)를 -50℃에서 한방울씩 첨가하였고, -50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액(30 ㎖)으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 용매를 진공에서 최종적으로 제거하여 무색 점성 물질로서 화합물 B(960 ㎎, 88%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.21 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6.83 (d, J = 8 Hz, 2 H), 4.99 (d, J = 4 Hz, 1 H), 4.66-4.60 (m, 1 H), 4.58-4.52 (m, 1 H), 1.28 (d, J = 8 Hz, 3 H), 1.24 (d, J = 4 Hz, 6 H);
LCMS: m/z = 163.1 [M+H], RT = 3.40분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 1-(1-아지도-에틸)-4-이소프로폭시-벤젠(C)의 제조:
건조된 톨루엔(10 ㎖) 내의 화합물 B(450 ㎎, 2.5 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 각각 DPPA(826 ㎎, 3 mmol, 1.2 eq) 및 DABCO(337 ㎎, 3 mmol, 1.2 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 반응 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 에틸아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 C(240 ㎎, 47%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.28 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.15-7.12 (m, 1 H), 6.92-6.79 (m, 2 H), 4.77-4.72 (m, 1 H), 4.65- (m, 1 H), 1.42 (d, J = 8 Hz, 3 H), 1.33 (d, J = 8 Hz, 6 H).
단계 3: 1-(4-이소프로폭시-페닐)-에틸아민(D)의 제조:
THF(20 ㎖) 및 H2O(4 ㎖) 혼합물 내의 화합물 C(240 ㎎, 1.17 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리페닐포스핀(615 ㎎, 2.34 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 G(90 ㎎, 43%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.23 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6.81 (d, J = 8 Hz, 2 H), 4.57-4.51 (m, 1 H), 3.94-3.89 (m, 1 H), 2.1 (br s, 2 H), 1.24-1.19 (m, 9 H);
LCMS: m/z = 180.3 [M+H], RT = 2.06분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 4: 1-(2-사이클로프로필-벤조푸란-5-일)-에틸아민의 합성
Figure pct00011
단계 1: 4-히드록시-3-아이오도-벤즈알데히드(B)의 제조:
AcOH(30 ㎖) 내의 화합물 A(2 g, 16.4 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 NIS(4.5 g, 19.7 mmol, 1.2 eq)를 분배해 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였고, 여과물을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 층을 물(30 ㎖)로 세척하였고, 진공에서 농축하여 백색 고체로서 화합물 B(3.2 g, 79%)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.51 (s, 1 H), 11.1 (br s, 1 H), 8.23 (s, 1 H), 7.02 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6.92 (d, J = 8 Hz, 1 H);
LCMS: m/z = 249.2 [M+H], RT = 3.23분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 3-아이오도-4-메톡시메톡시-벤즈알데히드(C)의 제조:
건조된 DMF(15 ㎖) 내의 화합물 B(3.2 g, 12.9 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 K2CO3(7.12 g, 51.6 mmol, 4 eq) 및 MOM 클로라이드(1.3 g, 15.5 mmol, 1.2 eq)을 0℃에서 분배해 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물(30 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 C(1 g, 27%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.83 (s, 1 H), 8.31 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.91-7.88 (m, 1 H), 7.27 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5.40 (s, 2 H), 3.41 (s, 3 H);
LCMS: m/z =293.0 [M+H], RT = 3.71분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 3: 3-사이클로프로필에티닐-4-메톡시메톡시-벤즈알데히드(E)의 제조:
밀봉된 튜브에서 트리에틸아민(2 ㎖) 내의 화합물 C(200 ㎎, 0.68 mmol, 1 eq)의 용액에 화합물 D(50 ㎎, 0.75 mmol, 1.1 eq) 및 CuI(3 ㎎, 0.013 mmol, 0.02 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 아르곤으로 15분 동안 탈기하였다. 여기에 PdCl2(Ph3P)2(10 ㎎, 0.013 mmol, 0.02 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 아르곤으로 10분 동안 탈기하였으며, 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 여과하였으며, 여과물을 에틸 아세테이트(20 ㎖)로 희석하였다. 유기 층을 물(10 ㎖)로 세척하였고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 E(140 ㎎, 87%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.83 (s, 1 H), 7.87 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.73-7.70 (m, 1 H), 7.19 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5.30 (s, 2 H), 3.51 (s, 3 H), 1.53-1.46 (m, 1 H), 0.92-0.87 (m, 2 H), 0.85-0.82 (m, 2 H);
LCMS: m/z = 231.2 [M+H], RT = 3.77분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 4: 2-사이클로프로필-벤조푸란-5-카르브알데히드(F)의 제조:
iPrOH(30 ㎖) 및 THF(30 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 E(2.7 g, 11.74 mmol 1 eq)의 교반된 용액에 6N 수성 HCl(30 ㎖)을 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 층을 물(30 ㎖)로 세척하였고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 F(1 g, 46%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.01 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 7.78-7.76 (m, 1 H), 7.65 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6.75 (s, 1 H), 2.20-2.13 (m, 1 H), 1.10-1.00 (m, 2 H), 0.98-0.95 (m, 2 H).
단계 5: 1-(2-사이클로프로필-벤조푸란-5-일)-에탄올(G)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 F(1 g, 5.38 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 3.6 ㎖, 10.75 mmol, 2 eq)를 -50℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 -50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하여 무색 점성 물질로서 화합물 G(980 ㎎, 91%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.42 (s, 1 H), 7.35 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.16-7.14 (m, 1 H), 6.52 (s, 1 H), 5.093 (d, J = 4 Hz, 1 H), 4.79-4.74 (m, 1 H), 2.12-2.05 (m, 1 H), 1.329 (d, J = 6 Hz, 3 H), 1.01-0.96 (m, 2 H), 0.87-0.84 (m, 2 H);
LCMS: m/z = 202.2 [M+H], RT = 3.65분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 6: 5-(1-아지도-에틸)-2-사이클로프로필-벤조푸란(H)의 제조:
건조된 톨루엔(5 ㎖) 내의 화합물 G (200 ㎎, 0.99 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 DPPA(327 ㎎, 1.19mmol, 1.2 eq) 및 DABCO(134 ㎎, 1.19 mmol, 1.2 eq)을 0℃에서 2시간 동안 첨가한 후, 23℃에서 18시간 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 H(40 ㎎, 18%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.51-7.45 (m, 2 H), 7.33-7.32 (m, 1 H), 7.22-7.20 (m, 1 H), 4.89-4.88 (m, 1 H), 1.47 (d, J = 8 Hz, 3 H), 1.29-1.27 (m, 1 H), 1.01-0.99 (m, 2 H), 0.89-0.88 (m, 2 H).
단계 7: 1-(2-사이클로프로필-벤조푸란-5-일)-에틸아민(I)의 제조:
THF(50 ㎖) 및 H2O(1 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 H(40 ㎎, 0.18 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리페닐포스핀(93 ㎎, 0.35 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 I(25 ㎎, 72%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.45 (s, 1 H), 7.33 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.19-7.17 (m, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 4.08-4.03 (m, 1 H), 2.11-2.06 (m, 1 H), 1.26 (d, J = 8 Hz, 3 H), 1.01-0.96 (m, 2 H), 0.87-0.83 (m, 2 H);
LCMS: m/z = 202.4 [M+H], RT = 2.72분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 5: C-사이클로프로필-C-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-메틸아민의 합성
Figure pct00012
단계 1: 6-플루오로-퀴놀린-3-카르복시산 에틸 에스테르(C)의 제조:
EtOH(100 ㎖) 내의 화합물 A(3 g, 17.74 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 SnCl2.2H2O(48 g, 212.9 mmol, 12 eq) 및 화합물 B(8.43 g, 44.34 mmol, 2.5 eq)를 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물로 희석하였다. 수성 부분을 포화된 수성 NaHCO3 용액(100 ㎖)으로 추가로 희석하였고, 여과하였다. 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(300 ㎖)로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 제거하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 30% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 C(2.6 g, 67%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.29 (s, 1 H), 9.01 (s, 1 H), 8.20-8.16 (m, 1 H), 8.07-8.04 (m, 1 H), 7.87-7.82 (m, 1 H), 4.42 (q, J = 8 Hz, 2 H), 1.38 (t, J = 8 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 219.8 [M+H], RT = 3.66분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 6-플루오로-퀴놀린-3-카르복시산(D)의 제조:
THF(60 ㎖) 내의 화합물 C(2.6 g, 11.9 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 물(10 ㎖) 내의 LiOH(1.5 g, 35.6 mmol, 3 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물로 희석하였다. 수성 부분을 에틸 아세테이트(20 ㎖)로 세척한 후, 포화된 수성 시트르산 용액을 이용해 pH 5로 산성화하였다. 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하여 점착성(gummy) 물질로서 화합물 D(2.2 g, 97%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.28 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.97 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.19-8.15 (m, 1 H), 8.04-8.01 (m, 1 H), 7.85-7.79 (m, 1 H);
LCMS: m/z = 192.1 [M+H], RT = 2.69분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 3: 6-플루오로-퀴놀린-3-카르보닐 클로라이드(E)의 제조:
건조된 CH2Cl2(100 ㎖) 내의 화합물 D(2.2g, 11.5 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 옥살릴 클로라이드(8.77 g, 69.1 mmol, 6 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 진공에서 농축하여 무색 액체로서 화합물 E(2.4 g)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 4: 6-플루오로-퀴놀린-3-카르복시산 메톡시-메틸-아미드(F)의 제조:
건조된 CH2Cl2(100 ㎖) 내의 화합물 E(2.4 g, 11.5 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 N,O-디메틸히드록시아민 히드로클로라이드(1.7g, 17.2 mmol, 1.5 eq) 및 DIPEA(14.8 g, 114.8 mmol, 10 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 CH2Cl2(200 ㎖)로 희석하였다. DCM 층을 물(50 ㎖)로 세척하였고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 60% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색(off white) 고체로서 화합물 F(650 ㎎, 25%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.03 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.66 (d, J = 4 Hz, 1 H), 8.16-8.12 (m, 1 H), 7.95-7.92 (m, 1 H), 7.80-7.75 (m, 1 H), 3.65 (s, 3 H), 3.35 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 235.2 [M+H], RT =3.02분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 5: 사이클로프로필-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-메타논(G)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 F(650 ㎎, 2.78 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 사이클로프로필 브롬화마그네슘(THF 내에서 0.5 M, 8.5 ㎖, 4.2 mmol, 1.5 eq)을 -78℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 40시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 G(130 ㎎, 22%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.36 (d, J = 2 Hz, 1 H), 9.16 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.20-8.16 (m, 1 H), 8.01-7.98 (m, 1 H), 7.87-7.82 (m, 1 H), 1.821.75 (m, 1 H), 1.18-1.15 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 215.9 [M+H], RT = 3.51분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 6: 사이클로프로필-C-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-메틸아민(H)의 제조:
메탄올성 암모니아(7 N, 10 ㎖) 내의 화합물 G(130 ㎎, 0.6 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(344 ㎎, 1.2 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 12시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(35 ㎎, 0.9 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 H(40 ㎎, 31%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.96 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.27-8.29 (m, 1 H), 8.07-8.03 (m, 1 H), 7.76-7.73 (m, 1 H), 7.63-7.58 (m, 1 H), 4.40 (m, 1 H), 2.20 (br s, 2 H), 0.53-0.51 (m, 1 H), 0.43-0.40 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 217.2 [M+H], RT = 2.00분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 6: 1-(1H-인다졸-3-일)-에틸아민의 합성
Figure pct00013
단계 1: 1H-인다졸-3-카르복시산 메톡시-메틸-아미드(C)의 제조:
CH2Cl2(30 ㎖) 내의 화합물 A(1 g, 6.2 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 화합물 B(903 ㎎, 9.25 mmol, 1.5 eq), HOBT(1 g, 7.4 mmol, 1.2 eq) 및 EDCI(2.4 g, 12.3 mmol, 2 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 여기에 DIPEA(4 g, 30.8 mmol, 5 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(100 ㎖)로 희석하였고, DCM 층을 물(30 ㎖)로 세척하였다. DCM 층을 진공에서 제거하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 C(700 ㎎, 56%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.60 (s, 1 H) 8.00 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.61 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.41 (t, J = 8 Hz, 1 H), 7.23 (t, J = 8 Hz, 1 H), 3.78 (s, 3 H), 3.45 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 206.2 [M+H], RT = 2.55 분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 2: 1-(1H-인다졸-3-일)-에타논(D)의 제조:
건조된 THF(40 ㎖) 내의 화합물 C(700 ㎎, 3.4 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 1 M, 11 ㎖, 10.2 mmol, 3 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 40% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 D(250 ㎎, 44%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.82 (s, 1 H), 8.17 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.66 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.47-7.43 (m, 1 H), 7.31 (t, J = 8 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 161.1 [M+H], RT = 2.94분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 3: 1-(1H-인다졸-3-일)-에틸아민(E)의 제조:
메탄올성 암모니아(7 N, 10 ㎖) 내의 화합물 D(250 ㎎, 1.56 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(890 ㎎, 3.12 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 6시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(90 ㎎, 2.34 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 E(100 ㎎, 40%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.61 (s, 1 H), 7.93 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.44 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.29 (t, J = 8 Hz, 1 H), 7.04 (t, J = 8 Hz, 1 H), 4.42-4.37 (m, 1 H), 1.45 (d, J = 8 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 162.3 [M+H], RT = 0.57분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
반응식 7: C-사이클로프로필-C-이미다조[1,2-a]피리딘-6-일 메틸아민의 합성
Figure pct00014
단계 1: 이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복시산 에틸 에스테르(C)의 제조:
EtOH(300 ㎖) 내의 화합물 A(3.2g, 19.3 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 NaHCO3(32.4 g, 385.5 mmol, 20 eq) 및 화합물 B(~55% 수성 용액, 30 ㎖, 192.8 mmol, 10 eq)를 23℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 여과하였으며, 여과물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 층을 물(50 ㎖)로 세척하였고, 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하여 화합물 C(3.7 g)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z = 190.7 [M+H], RT = 0.62분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 2: 이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복시산(D)의 제조:
THF(45 ㎖) 내의 화합물 C(3.7 g, 19.5 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 물(5 ㎖) 내의 LiOH(2.5 g, 58.4 mmol, 3 eq)의 용액을 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 희석하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물로 희석하였다. 수성 부분을 에틸 아세테이트(20 ㎖)로 세척하였고, 포화된 수성 시트르산 용액을 이용해 pH 5로 산성화하였다. 유기 구성성분을 10% MeOH/CH2Cl2(100 ㎖)를 이용해 수성 부분으로부터 추출하였고, 유기 층을 진공에서 농축하여 담백색 고체로서 화합물 D(3 g)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z = 163.1 [M+H], RT = 0.40분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 3: 이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복시산 메톡시-메틸-아미드(F)의 제조:
DMF(50 ㎖) 내의 화합물 D(2.5 g, 15.4 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 화합물 E(2.3g, 23.1 mmol, 1.5 eq), 트리에틸아민(15.6 g, 154.3 mmol, 10 eq) 및 T3P(에틸 아세테이트 내에서 ~50%, 14.8 g, 23.1 mmol, 1.5 eq)를 23℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물로 퀀칭하였으며, 유기 구성성분을 10% 메탄올/ CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 F(600 ㎎, 20%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.03 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.64 (m, 1 H), 7.59 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.47-7.44 (m, 1 H), 3.61 (s, 3 H), 3.32 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 206.2 [M+H], RT = 0.54분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 4: 사이클로프로필-이미다조[1,2-a]피리딘-6-일-메타논(G)의 제조:
건조된 THF(30 ㎖) 내의 화합물 F(600 ㎎, 2.9 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 사이클로프로필 브롬화마그네슘(THF 내에서 0.5 M, 12 ㎖, 5.8 mmol, 2 eq)을 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 G(230 ㎎, 43%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.63 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 7.70 (m, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 1.78 (m, 1 H), 0.75-0.90 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 187.2 [M+H], RT = 0.60분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 5: C-사이클로프로필-C-이미다조[1,2-a]피리딘-6-일-메틸아민(H)의 제조:
메탄올성 암모니아(7 N, 10 ㎖) 내의 화합물 G(230 ㎎, 1.2 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(703 ㎎, 2.47 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(71 ㎎, 1.85 mmol, 1.5 eq)를 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 H(40 ㎎, 18%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 7.56-7.54 (m, 2 H), 7.39-7.37 (m, 1 H), 4.00-4.20 (m, 1 H), 1.00-1.20 (m, 1 H), 0.58 (m, 1 H), 0.47-0.40 (m, 2 H), 0.25-0.35 (m, 1 H);
LCMS: m/z = 188.2 [M+H], RT = 0.38분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
반응식 8: C-사이클로프로필-C-(6-페닐-피리딘-3-일)-메틸아민의 합성
Figure pct00015
단계 1: 6-페닐-니코틴산(C)의 제조:
디옥산 및 물 혼합물(150 ㎖, 4:1)의 혼합물 내의 화합물 A(3 g, 16.16 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 화합물 B(3 g, 24.2 mmol, 1.5 eq) 및 탄산나트륨(8.6 g, 80.8 mmol, 5 eq)을 첨가하였고, 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 탈기하였다. 여기에 Pd(Ph3P)4(1.9 g, 1.62 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 아르곤으로 다시 10분 동안 추가로 탈기하였으며, 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였고, 여과물을 진공에서 농축하였다. 잔사를 물(30 ㎖)로 희석하였고, 에틸 아세테이트(20 ㎖)로 세척하였다. 수성 부분을 포화된 수성 시트르산 용액을 이용해 pH 5로 산성화하였다. 유기 구성성분을 10% MeOH/CH2Cl2(100 ㎖)로 추출하였고, 유기 층을 진공에서 농축하여 백색 고체로서 화합물 C(2.2 g, 69%)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.4(br s, 1 H), 9.14 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.33-8.31 (m, 1 H), 8.17-8.15 (m, 2 H), 8.10 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.55-7.48 (m, 3 H);
LCMS: m/z = 200.1 [M+H], RT = 3.21분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 6-페닐-니코티노일 클로라이드(D)의 제조:
건조된 CH2Cl2(50 ㎖) 내의 화합물 C(2.2g, 11.05 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 옥살릴 클로라이드(8.42 g, 66.33 mmol, 6 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 진공에서 농축하여 무색 액체로서 화합물 D(2.4 g)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: N-메톡시-N-메틸-6-페닐-니코틴아미드(F)의 제조:
건조된 CH2Cl2(100 ㎖) 내의 화합물 D(2.4 g, 11.06 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 화합물 E(N,O-디메틸히드록시아민 히드로클로라이드)(1.62 g, 16.6 mmol,1.5 eq) 및 DIPEA(14.3 g, 110.6 mmol, 10 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 CH2Cl2(200 ㎖)로 희석하였다. 유기 층을 물(50 ㎖)로 세척하였고, 진공에서 농축하여 화합물 F(3.1 g)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.885-8.882 (m, 1 H), 8.15-8.13 (m, 2 H), 8.11-8.09 (m, 1 H), 8.07-8.05 (m, 1 H), 7.54-7.48 (m, 3 H), 3.60 (s, 3 H), 3.31 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 243.2 [M+H], RT = 3.37분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 4: 사이클로프로필-(6-페닐-피리딘-3-일)-메타논(G)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 F(1 g, 4.13 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 사이클로프로필 브롬화마그네슘(THF 내에서 0.5 M, 12.5 ㎖, 6.2 mmol, 1.5 eq)을 -40℃에서 1방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 50% 에틸아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 G(320 ㎎, 35%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.32-9.31 (m, 1 H), 8.46-8.43 (m, 1 H), 8.20-8.14 (m, 3 H), 7.57-7.51 (m, 3 H), 3.02-2.99 (m, 1 H), 1.11-1.09 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 223.7 [M+H], RT = 3.85분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 5: 사이클로프로필-C-(6-페닐-피리딘-3-일)-메틸아민(H)의 제조:
메탄올성 암모니아(7 N, 10 ㎖) 내의 화합물 G(320 ㎎, 1.43 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(816 ㎎, 2.87 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 8시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(82 ㎎, 2.15 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 H(100 ㎎, 31%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.66 (s, 1 H), 8.06 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.90 (s, 2 H), 7.48 (t, J = 8 Hz, 2 H), 7.43-7.39 (m, 1 H), 4.40 (br s, 1 H), 1.06-0.98 (m, 1 H), 0.52-0.46 (m, 1 H), 0.41-0.40 (m, 3 H);
LCMS: m/z = 224.8 [M+H], RT = 1.83분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 9: C-사이클로프로필-C-(6-사이클로프로필메톡시-피리딘-3-일)-메틸아민의 합성
Figure pct00016
단계 1: 6-사이클로프로필메톡시-니코틴산(C)의 제조:
DMSO(100 ㎖) 내의 화합물 A(5 g, 31.7 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 KOH(5.3 g, 95.2 mmol, 3 eq) 및 화합물 B(3.43 g, 47.6 mmol, 1.5 eq)를 23℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 100℃에서 40시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물(50 ㎖)로 희석하였으며, 6 N 수성 HCl을 이용해 pH 4로 산성화하였다. 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하여 담백색 고체로서 화합물 C(4.2 g, 69%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.00 (s, 1 H), 8.69 (d, J = 4 Hz, 1 H), 8.13-8.11 (m, 1 H), 6.89 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4.16 (d, J = 8 Hz, 2 H), 1.28-1.21 (m, 1 H), 0.57-0.53 (m, 2 H), 0.35-0.31 (m, 2 H);
LCMS: m/z = 194.0[M+H], RT = 3.35분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 6-사이클로프로필메톡시-N-메톡시-N-메틸-니코틴아미드(E)의 제조:
CH2Cl2(10 ㎖) 내의 화합물 C(500 ㎎, 2.6 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 각각 화합물 D(380 ㎎, 3.89 mmol, 1.5 eq), HOBT(420 ㎎, 3.1 mmol, 1.2 eq) 및 EDCI(1 g, 5.18 mmol, 2 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 여기에 DIPEA(1.7 g, 12.9 mmol, 1.2 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(50 ㎖)로 희석하였고, DCM 층을 물(20 ㎖)로 세척하였다. DCM을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 E(530 ㎎, 87%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.45 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.96-7.93 (m, 1 H), 6.87 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4.14 (d, J = 8 Hz, 2 H), 3.56 (s, 3 H), 3.25 (s, 3 H), 1.26-1.23 (m, 1 H), 0.57-0.53 (m, 2 H), 0.34-0.31 (m, 2 H);
LCMS: m/z = 237.2 [M+H], RT = 3.42분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 3: 사이클로프로필-(6-사이클로프로필메톡시-피리딘-3-일)-메타논(F)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 E(530 ㎎, 2.2 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 사이클로프로필 브롬화마그네슘(THF 내에서 0.5 M, 6.8 ㎖, 3.37 mmol, 1.5 eq)을 -78℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 40% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 F(190 ㎎, 39%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.93 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.25-8.22 (m, 1 H), 6.93 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4.20 (d, J = 8 Hz, 2 H), 2.91-2.85 (m, 1 H), 1.29-1.23 (m, 1 H), 1.03-1.01 (m, 4 H), 0.58-0.54 (m, 2 H), 0.36-0.35 (m, 2 H);
LCMS: m/z = 218.4 [M+H], RT = 3.86분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 4: C-사이클로프로필-C-(6-사이클로프로필메톡시-피리딘-3-일)-메틸아민(G)의 제조:
메탄올성 암모니아(7 N, 15 ㎖) 내의 화합물 F(190 ㎎, 0.87 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(498 ㎎, 1.75 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(50 ㎎, 1.31 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 G(60 ㎎, 32%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.07 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.75-7.72 (m, 1 H), 6.74 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4.41 (br s, 2 H), 4.05 (d, J = 7 Hz, 2 H), 3.12 (d, J = 8 Hz, 1 H), 1.20-1.19 (m, 1 H), 0.96-0.92 (m, 1 H), 0.55-0.50 (m, 2 H), 0.47-0.42 (m, 1 H), 0.35-0.28 (m, 4 H), 0.25-0.18 (m, 1 H);
LCMS: m/z = 219.2 [M+H], RT = 2.27분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 10: 1-벤조[b]티오펜-5-일-에틸아민의 합성
Figure pct00017
단계 1: 벤조[b]티오펜-5-카르보니트릴(B)의 제조:
밀봉된 튜브에서 DMF(7 ㎖) 내의 화합물 A(500 ㎎, 2.35 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 각각 CuCN(273 ㎎, 3.05 mmol, 1.3 eq) 및 피리딘(0.25 ㎖)을 첨가하였다. 결과물인 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 탈기하였고, 170℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물(6 ㎖) 내의 에틸렌 디아민(0.25 ㎖)의 용액으로 퀀칭하였으며, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(60 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 B(200 ㎎, 54%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.43 (s, 1 H), 8.26 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.99 (2, J = 8 Hz, 1 H), 7.73-7.71 (m, 1 H), 7.58 (d, J = 6 Hz, 1 H).
단계 2: 1-벤조[b]티오펜-5-일-에타논(C)의 제조
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 B(500 ㎎, 3.14 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 3.14 ㎖, 9.42 mmol, 3 eq)을 -78℃에서 1방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 40% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 F(45 ㎎, 8%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.55 (d, J = 1 Hz, 1 H), 8.13 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.92-7.88 (m, 2 H), 7.62 (d, J = 6 Hz, 1 H), 2.65 (s, 3 H).
단계 3: 1-벤조[b]티오펜-5-일-에틸아민(D)의 제조:
메탄올성 암모니아(7 N, 10 ㎖) 내의 화합물 C(300 ㎎, 1.70 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(970 ㎎, 3.41 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 5시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(78 ㎎, 2.04 mmol, 1.2 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 G(50 ㎎, 17%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.91 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.72 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.42-7.38 (m, 2 H), 4.15-4.13 (m, 1 H), 2.82 (br s, 2 H), 1.31 (d, J = 8 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 178.2 [M+H], RT = 2.09분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 11: 1-(4-에톡시-페닐)-에틸아민의 합성
Figure pct00018
단계 1: 1-(4-에톡시-페닐)-에탄올(B)의 제조:
건조된 THF(20 ㎖) 내의 화합물 A(500 ㎎, 3.33mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 3.33 ㎖, 9.99 mmol, 3 eq)을 -78℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(60 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 3% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 F(400 ㎎)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.22 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6.84 (d, J = 8 Hz, 2 H), 4.99 (d, J = 4 Hz, 1 H), 4.67-4.61 (m, 1 H), 4.01-3.96 (m, 2 H), 1.32-1.27 (m, 6 H).
단계 2: 메탄설폰산 1-(4-에톡시-페닐)-에틸 에스테르(C)의 제조:
건조된 CH2Cl2(15 ㎖) 내의 화합물 B(400 ㎎, 2.4mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리에틸 아민(0.5 ㎖, 3.61 mmol, 1.5 eq)을 첨가한 후, 0℃에서 메탄 설포닐 클로라이드(0.3 ㎖, 3.61 mmol, 1.5 eq)를 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 CH2Cl2(50 ㎖)로 추출하였다. DCM 층을 진공에서 농축하여 담갈색(brownish) 점성 물질로서 화합물 C(600 ㎎)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: 1-(1-아지도-에틸)-4-에톡시-벤젠(D)의 제조:
건조된 DMF(7 ㎖) 내의 화합물 C(600 ㎎, 2.45 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 나트륨 아자이드(1.9 g, 28.7 mmol, 12 eq)를 0℃에서 일부분씩(portion wise) 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하여 담갈색 점성 물질로서 화합물 D(600 ㎎)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 4: 1-(4-에톡시-페닐)-에틸아민(E)의 제조:
THF(20 ㎖) 및 H2O(2 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 D(600 ㎎, 3.11 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리페닐포스핀(1.62g, 6.22 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 점성 물질로서 화합물 E(30 ㎎)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.35 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6.93 (d, J = 8 Hz, 2 H), 4.26-4.21 (m, 1 H), 4.04-3.99 (m, 2 H), 1.40 (d, J = 8 Hz, 3 H), 1.35-1.29 (m, 3 H).
반응식 12: C-[1-(4-클로로-페닐)-사이클로부틸]-메틸아민의 합성
Figure pct00019
단계 1: C-[1-(4-클로로-페닐)-사이클로부틸]-메틸아민(B)의 제조:
건조된 THF(8 ㎖) 내의 화합물 A(200 ㎎, 1.04 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 리튬 알루미늄 히드라이드(THF 내에서 1 M, 2.1 ㎖, 2.09 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 고체 황산나트륨 10수화물(decahydrate)로 퀀칭하였고, 셀라이트(Celite)를 통해 여과하였다. 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였고, 유기 층을 진공에서 농축하여 무색 점성 물질로서 화합물 B(80 ㎎, 39%)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.33 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.09 (d, J = 8 Hz, 2 H), 2.73 (s, 2 H), 2.18-2.11 (m, 4 H), 2.00-1.93 (m, 1 H), 1.78-1.74 (m, 1 H);
LCMS: m/z = 196.2 [M+H], RT = 2.53분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 13: C-퀴놀린-3-일-메틸아민의 합성
Figure pct00020
단계 1: C-퀴놀린-3-일-메틸아민(B)의 제조
MeOH(15 ㎖) 내의 화합물 A(250 ㎎, 1.58 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 Pd/C(10% Pd, 10 ㎎)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 수소 분위기 하에 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였고, 여과물을 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 30% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 B(75 ㎎, 29%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.88 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 7.99 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.93 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.71-7.68 (m, 1 H), 7.58 (t, J = 8 Hz, 1 H), 3.94 (s, 2 H);
LCMS: m/z = 158.8 [M+H], RT = 1.22분; (프로그램 P1, 칼럼 W).
반응식 14: 1-(6,7-디플루오로-퀴놀린-3-일)-에틸아민의 합성
Figure pct00021
단계 1: 4, 5-디플루오로-N-메톡시-N-메틸-2-니트로-벤즈아미드의 제조:
CH2Cl2(30 ㎖) 내의 4,5-디플루오로-2-니트로 벤조산(10 g, 49.2 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 옥살릴 클로라이드(6.4 ㎖, 73.8 mmol, 1.5 eq) 및 촉매량의 DMF(0.5 ㎖)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 용액을 23℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 CH2Cl2(50 ㎖)에 용해시켰다. 상기 용액을 0℃로 냉각하였고, 웨인레브(Weinreb) 아민 염(5.3 g, 54.1 mmol, 1.1 eq) 및 TEA(48 ㎖, 344.4 mmol, 7 eq)를 연속적으로 첨가하였다. 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 ㎖×3)로 희석하였고, 유기 층에 포화된 수성 NaHCO3 용액, 물 및 브라인(brine)을 연속적으로 첨가하였다. 조합된 유기 층을 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰고, 여과하였으며, 진고에서 농축하였다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(230-400 실리카 겔)로 정제하여 점성 물질로서 화합물 B(7.2 g, 59%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 8.47-8.42 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 7.99-7.95 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 3.38(s, 3H), 3.25 (s, 3H).
LCMS: m/z = 247 [M+H], RT = 3.06분; (프로그램 P1, 칼럼 y).
단계 2: 4, 5-디플루오로-2-니트로-벤즈알데히드의 제조:
THF(60 ㎖) 내의 화합물 B(7.2 g, 29.2 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 DIBAL(42 ㎖, 73.1 mol, 2.5 eq)을 -78℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 -20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액(20 ㎖)으로 퀀칭하였고, EtOAc(450 ㎖) 및 물(250 ㎖)로 희석하였다. 유기 층을 분리하였고, 브라인으로 세척하였으며, 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피(230-400 실리카 겔)로 정제하여 황색 고체로서 화합물 C(5 g, 90%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 10.17 (s, 1H), 8.49-8.44 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 8.03-7.98 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H);
LCMS: m/z = 186 [M-H], RT = 3.21분; (프로그램 P1, 칼럼 y).
단계 3: 6, 7-디플루오로-퀴놀린-3-카르복시산 에틸 에스테르의 제조:
에탄올(120 ㎖) 내의 화합물 C(5 g, 26.7 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 3,3-디에톡시-프로피온산 에틸 에스테르(13.1 ㎖, 66.8 mmol, 2.5 eq), SnCl2.2H2O(54 g, 240.5 mmol, 9 eq)을 23℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 16시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물(250 ㎖)로 희석하였으며, pH를 포화된 수성 NaHCO3 용액으로 ~7로 조정하였다. 유기 구성성분을 EtOAc(200 ㎖×2)로 추출하였고, 조합된 에틸 아세테이트 층을 물, 브라인으로 세척하였으며, 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 25% EtOAc/헥산을 이용하는 플래쉬 크로마토그래피(230-400 실리카 겔)로 정제하여 담황색(light yellow) 고체로서 화합물 D(3.8 g, 60%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 9.29 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.34-8.29 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 8.16-.8.11 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 4.41 (q, J=8Hz, 1H), 1.38 (t, 3H).
LCMS: m/z = 237.8 [M+H], RT = 3.43분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
단계 4: 6, 7-디플루오로-퀴놀린-3-카르복시산의 제조:
THF(10 ㎖) 내의 화합물 D(3.2 g, 13.5 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 물(10 ㎖) 내의 LiOH(1.7 gm)의 용액을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(200 ㎖)로 희석하였고, 포화된 수성 시트르산 용액으로 pH를 6으로 조정하였다. 유기 구성성분을 EtOAc(300 ㎖)으로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 물 및 브라인으로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰고, 여과하였으며, 진공에서 농축하여 백색 고체로서 화합물 E(2.76 g, 95%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 13.60 (br s, 1H), 9.3 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.32-8.27 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 8.15-8.10 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H);
LCMS: m/z = 210.2 [M+H], RT = 1.83분; (프로그램 P1, 칼럼 y).
단계 5: 7-플루오로-퀴놀린-3-카르복시산 메톡시-메틸-아미드의 제조:
DMF(20 ㎖) 내의 화합물 E(2.9 g, 13.8 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 EDCI.HCl(3.17 g, 16.5 mmol, 1.19 eq), HOBT(2.23 g, 16.5 mmol, 1.19 eq) 및 TEA(6 ㎖, 41.4 mmol, 3 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 여기에 웨인레브 아민 염(1.48 g, 15.1 mmol, 1.09 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(350 ㎖)로 희석하였고, 유기 층을 포화된 수성 NaHCO3 용액(150 ㎖), 물 및 브라인으로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰고, 여과하였으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 25% EtOAc/헥산으로 용출하는 콤비플래쉬(Combiflash) 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 화합물 F(2 g, 57%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 9.07 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.25-8.20 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 8.13-8.08 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.34 (s, 3H);
LCMS: m/z = 253 [M+H], RT = 2.82분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
단계 6: 1-(6,7-디플루오로-퀴놀린-3-일)-에타논의 제조:
건조된 THF(12 ㎖) 내의 화합물 F(0.9 g, 3.57 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 MeLi(2.5 ㎖, 3.93 mmol, 1.1 eq)을 -78℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 -20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -20℃에서 포화된 수성 KHSO4 용액(5 ㎖)으로 퀀칭하였고, EtOAc(150 ㎖)으로 희석하였다. 유기 층을 포화된 수성 NaHCO3 용액(100 ㎖), 물 및 브라인으로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4에 대해 건조시켰고, 여과하였으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 19-25% EtOAc/헥산으로 용출하는 콤비플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 G(0.35 g, 47%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 9.34-9.33 (d, J=4Hz, 1H), 9.04-9.03 (d, J=4Hz, 1H), 8.29-8.24 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 8.17-8.12 (dd, J=12Hz, J=8Hz, 1H), 2.72 (s, 1H);
LCMS: m/z = 208 [M+H], RT = 2.91분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
단계 7: 1-(6,7-디플루오로-퀴놀린-3-일)-에틸아민의 제조:
메탄올성 암모니아(10 ㎖) 내의 화합물 G(0.7 g, 3.38 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(2 ㎖, 6.8 mmol, 및 2 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 여기에 NaBH4(192 ㎎, 5.07 mmol, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-냉각수(5 ㎖)로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 고체 잔사를 10% MeOH/CH2Cl2(25 ㎖)로 희석하였고, 혼합물을 23℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하였고, 여과물을 진공에서 농축하였다. 조 물질을 중성 알루미나 칼럼에서 7-10% MeOH/CH2Cl2으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 점성 고체로서 화합물 H(0.5 g, 71 %)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 8.95 (s,1H), 8.28 (s,1H), 8.05-7.96 (m, 2H), 4.21 (q, J=8Hz, 1H), 2.06 (br s, 2H), 1.36-1.34 (d, J=8Hz, 3H);
LCMS: m/z = 208.8 [M+H], RT = 2.16분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
반응식 15: 1-피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일-에틸아민의 합성
Figure pct00022
단계 1: 피라졸로[1,5-a]피리딘-2-카르복시산 메톡시-메틸-아미드의 합성:
CH2Cl2(15 ㎖) 내의 화합물 A(500 ㎎, 3.08 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티오닐 클로라이드(0.665 ㎖, 9.25 mmol, 3 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 CH2Cl2(20 ㎖)에 용해시켰다. 여기에 TEA(3 ㎖, 21.51 mmol, 7 eq)와 웨인레브 아민 염(450 ㎎, 4.62 mmol, 및 1.5 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(150 ㎖)로 희석하였고, 조합된 유기 층을 물 및 브라인으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 액체 화합물로서 화합물 B(400 ㎎, 63%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ 8.72-8.70 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.76-7.74 (d, J = 9 Hz, 1 H), 7.30-7.26 (m, 1 H), 7.02-7.00 (t, J = 7 Hz, 1 H), 3.73 (s, 3 H), 3.37 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 206.0 [M+H], RT = 2.27분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
단계 2: 1-피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일-에타논의 제조:
THF(20 ㎖) 내의 화합물 B(1 g, 4.88 mmol, 1 eq)의 용액에 MeLi(3.5 ㎖, 5.36 mmol, 1.1 eq)를 -78℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 염화암모늄 용액(10 ㎖)으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였다. 조합된 유기 층을 물 및 브라인으로 세척하였고, 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피(30% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출함)로 정제하여 액체로서 화합물 C(300 ㎎, 38%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ 8.79-8.77 (d, J = 7 Hz, 1 H), 7.80-7.78 (d, J = 9 Hz, 1 H), 7.32-7.28 (t, J = 7 Hz, 1 H), 7.09-7.07 (d, J = 7 Hz, 1 H), 2.65-2.62 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 206.0 [M+H], RT = 2.27분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
단계 3: 1-피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일-에틸아민의 제조:
메탄올(15 ㎖) 내의 화합물 C(270 ㎎, 1.69 mmol, 1 eq)의 용액에 암모늄 아세테이트(1.3 g, 16.87 mmol, 10 eq), 나트륨 시아노보로하이드라이드(74 ㎎, 1.18 mmol, 0.7 eq) 및 분자 체(molecular sieve)(3Å)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였고, 여과물을 진공에서 농축하였다. 잔사를 CH2Cl2로 희석하였고, 산성 pH가 될 때까지 1 N 수성 HCl 용액으로 추출하였다. 수성 층을 5 N 수성 NaOH 용액으로 염기성화하였고, 유기 구성성분을 15% 메탄올/클로로포름으로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하여 액체로서 화합물 D(120 ㎎, 44%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ 8.66-8.65 (m, 4 H), 7.72-7.70 (d, J = 9 Hz, 1 H), 7.27-7.21 (m, 1 H), 6.94-6.92 (t, J = 8 Hz, 1 H), 6.74 (s, 1 H), 4.62-4.56 (m, 1 H), 1.62-1.60 (d, J = 7 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 162.2 [M+H], RT = 1.27분; (프로그램 P1, 칼럼 y).
반응식 16:
Figure pct00023
단계 1: 1-(4-피리딘-2-일-페닐)-에타논의 제조:
IPA(10 ㎖) 내의 화합물 A(0.58 g, 3.87 mmol, 1 mmol)의 교반된 용액에 4-아세틸-페닐-붕산(0.8 g, 4.87 mmol, 1.25 eq)을 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 15분 동안 교반하였다. 여기에 Pd(OAc)2(45 ㎎, 0.2 mmol, 0.05 eq), PPh3(11 ㎎, 0.04 mmol, 0.01 eq), 2M 수성 Na2CO3(3.2 ㎖, 6.4 mmol, 1.65 eq) 및 증류수(2 ㎖)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 질소 분위기 하에 16시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물로 희석하였으며, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 수성 Na2CO3 용액(0.5 M, 100 ㎖), 브라인으로 세척하였고, 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 15%-20% EtOAc/헥산으로 용출하는 콤비플래쉬로 정제하여 화합물 B(0.6 g, 75%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ 8.73-8.72 (m, 1 H), 8.25-8.23 (m, 2 H), 8.08-8.06 (m, 3 H), 7.96-7.92 (m, 1 H), 7.44-7.41 (m, 1 H), 2.63 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 198 [M+H], RT = 3.01분; (프로그램 P1, 칼럼 y).
단계 2: 1-(4-피리딘-2-일-페닐)-에틸아민의 제조:
EtOH(2 ㎖) 내의 화합물 B(0.2 g,1.01 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 NaCNBH3(76 ㎎, 1.21 mmol, 1.2 eq) 및 NH4OAc(1.16 g,15.15 mmol, 15 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 마이크로파 하에 130℃에서 2분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 물로 희석하였고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 세척하였다. 수성 층을 수성 NaOH 용액(2N, 50 ㎖)으로 염기성화하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합된 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 1-2% 메탄올/CH2Cl2로 용출하는 칼럼 크로마토그래피(neutral alumina)로 정제하여 고체로서 화합물 C(0.09 g, 56%)를 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d 6 ) δ 8.65-8.64 (d, J = 4 Hz, 1 H), 8.02-8.00 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.93-7.91 (m, 1 H), 7.86-7.83 (m, 1 H), 7.48-7.49 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.33-7.30 (m, 1 H), 4.06-4.01 (m, 1 H), 1.88 (s, 2 H), 1.35-1.31 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 199.1 [M+H], RT = 1.66분; (프로그램 P1, 칼럼 v).
반응식 17: 1-퀴놀린-3-일-에틸아민의 합성
Figure pct00024
단계 1: 1-퀴놀린-3-일-에탄올(B)의 제조
건조된 THF(200 ㎖) 내의 화합물 A(20 g, 127.4 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 메틸 브롬화마그네슘(디에틸 에테르 내에서 3 M, 85 ㎖, 254.8 mmol, 2 eq)을 -78℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(800 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하여 무색 점성 물질로서 화합물 B(20.7 g)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.91 (m, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 7.98 (t, J = 8 Hz, 2 H), 7.71 (t, J = 8 Hz, 1 H), 7.588 (t, J = 8 Hz, 1 H), 5.47 (d, J = 4 Hz, 1 H), 5.00-4.94 (m, 1 H), 1.46 (d, J = 7 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 174.4 [M+H], RT = 1.24분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
단계 2: 1-퀴놀린-3-일-에탄올(C)의 제조:
건조된 CH2Cl2(200 ㎖) 내의 화합물 B(19.7 g, 113.9 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리에틸 아민(24 ㎖, 170.8 mmol, 1.5 eq) 및 메탄 설포닐 클로라이드(13.5 ㎖, 170.8 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 CH2Cl2(500 ㎖)로 추출하였다. DCM 층을 진공에서 농축하여 담갈색 점성 물질로서 화합물 C(28 g)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.47 (m, 1 H), 9.30 (s, 1 H), 8.40-8.35 (m, 2 H), 8.13 (t, J = 8 Hz, 1 H); 7.95 (t, J = 8 Hz, 1 H), 5.79-5.74 (m, 1 H), 2.44 (s, 3 H), 1.98 (d, J = 8 Hz, 3 H);
단계 3: 3-(1-아지도-에틸)-퀴놀린(D)의 제조:
건조된 DMF(150 ㎖) 내의 화합물 C(28 g, 111.5 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 나트륨 아자이드(73 g, 1.11 mol, 10 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(500 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하여 담갈색 점성 물질로서 화합물 D(32 g)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 4: 1-퀴놀린-3-일-에틸아민(E)의 제조:
THF(300 ㎖) 및 H2O(30 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 D(20 g, 100 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 트리페닐포스핀(40 g, 150 mmol, 1.5 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담갈색 점성 물질로서 화합물 E(15 g, 86%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.94 (m, 1 H), 8.24 (m, 1 H), 7.98 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.93 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7.71-7.67 (m, 1 H), 7.59-7.55 (m, 1 H), 4.25-4.20 (m, 1 H), 2.16 (br s, 2 H), 1.37 (d, J = 8 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 173.0 [M+H], RT = 1.74분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
반응식 18: C-사이클로프로필-C-퀴놀린-3-일-메틸아민의 합성
Figure pct00025
단계 1: 사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메탄올(B)의 제조
건조된 THF(200 ㎖) 내의 화합물 A(8 g, 0.05 mol, 1 eq)의 교반된 용액에 사이클로프로필 브롬화마그네슘(THF 내에서 0.5 M, 203 ㎖, 0.10 mol, 2 eq)을 -40℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 수성 NH4Cl 용액으로 퀀칭하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(500 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하여 무색 점성 물질로서 화합물 B(10 g, 80%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.95 (s, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.01-7.97 (m, 2 H), 7.74-7.70 (m, 1 H), 7.61-7.57 (m, 1 H), 5.50 (s, 1 H), 4.25-4.22 (m, 1 H), 1.23-1.12 (m, 1 H), 0.56-0.46 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 199.8 [M+H], RT = 2.75분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
단계 2: 사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메타논(C)의 제조
CH2Cl2(100 ㎖) 내의 화합물 B(8 g, 0.05 mol, 1 eq)의 교반된 용액에 데스-마틴(Dess-Martin) 퍼아이오디네이트를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였고, 여과물을 수성 NaHCO3 용액으로 중성화하였으며, 유기 부분을 CH2Cl2(500 ㎖)으로 추출하였다. DCM 층을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 20% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 C(7 g, 71%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.38 (s, 1 H), 9.19 (s, 1 H), 8.20 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8.11 (d, J = 8 Hz, 1 H), 1.95-1.91 (m, 1 H), 7.76-7.72 (m, 1 H), 3.14-3.07 (m, 1 H), 1.21-1.14 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 198.4 [M+H], RT = 3.68분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
단계 3: C-사이클로프로필-C-퀴놀린-3-일-메틸아민(D)의 제조
메탄올성 암모니아(7 N, 100 ㎖) 내의 화합물 C(4.5 g, 20 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 티타늄 이소프로폭사이드(13.5 ㎖, 50 mmol, 2.5 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 24시간 동안 교반하였다. 여기에 나트륨 보로하이드라이드(1.3 g, 30 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 소량 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음으로 퀀칭하였고, 진공에서 농축하였다. 상기 고체를 10% MeOH/CH2Cl2로 희석하였으며, 혼합물을 20분 동안 교반하였고, 여과하였으며, 여과물을 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 중성 알루미나를 이용하고 6% 메탄올/디클로로메탄으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 담갈색 점성 물질로서 화합물 D(2.8 g, 71%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.98 (s, 1 H), 8.28 (br s, 1 H), 8.00-7.94 (m, 2 H), 7.72-7.68 (m, 1 H), 7.60-7.56 (m, 1 H), 3.41 (d, J = 8 Hz, 1 H), 2.20 (br s, 2 H), 1.23-1.04 (m, 1 H), 0.55-0.49 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 198.8 [M+H], RT = 1.88분; (프로그램 P1, 칼럼 W).
다른 아민 중간체의 합성
Figure pct00026
아민(I-V)를 상업적으로 시판되는 적절한 전구체를 이용하여 전술한 프로토콜의 조합해 합성하였으며, 이는 본 기술분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이다.
식 (I)의 화합물에 대한 합성 반응식
식 (I)의 화합물은 아래의 실시예에 나타낸 반응식에 따라 합성할 수 있다. 아래에 나타낸 헤테로원자를 함유하는 화학적 구조는 소정의 환경에서 표시되지 않은 하나 이상의 결합된 수소를 가질 수 있음이 본 기술분야의 통상의 기술자에게 자명하고 이해될 것이다.
실시예 1
다음의 반응식 19는 1-{4-[2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논)의 대표적인 합성법이다:
Figure pct00027
4-니트로-1H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(II)
메탄올(100 ㎖) 내의 화합물 I(10 g, 64 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 SOCl2(5.2 ㎖, 67 mmol, 1.05 eq)를 얼음-냉각 조건에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물(25 ㎖)로 희석하였으며, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 제거하여 담백색 고체로서 화합물 II(10.5 g, 96%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 14.41 (br s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 3.88 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 172.0 [M+H], RT = 2.12분; (프로그램 Q1, 칼럼 X).
1-이소프로필-4-니트로-1H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(III)
DMF(10 ㎖) 내의 화합물 II(2 g, 11 mmol, 1 eq)의 용액에 K2CO3 (2 g, 14 mmol, 1.3 eq) 및 2-브로모 프로판(2.06 ㎖, 22 mmol, 2 eq)을 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였으며, 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 24% 에틸아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 연황색(pale yellow) 점성 물질로서 화합물 III(1.7 g, 72%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.16 (s, 1 H), 4.58-4.55 (m, 1 H), 3.98 (s, 3 H), 1.57-1.52 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 214.0 [M+H], RT = 3.03분; (프로그램 Q1, 칼럼 X).
4-아미노-1-이소프로필-1H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(IV)
메탄올(10 ㎖) 내의 화학식 III(200 ㎎, 0.94mol, 1 eq)의 용액에 Pd/C(10% Pd, 10 mole%)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 질소 분위기 하에 23℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였고, 여과물을 진공에서 농축하여 갈색 고체로서 화합물 IV(150 ㎎, 86%)를 얻었으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.18 (s, 1 H), 4.65 (br s, 2 H), 4.42-4.36 (m, 1 H), 3.74 (s, 3 H), 1.39-1.35 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 184.2 [M+H], RT = 1.20분; (프로그램 Q1, 칼럼 Y).
2-이소프로필-2,4-디히드로-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7-디온(V)
화합물 IV(700 ㎎, 3.78 mol, 1 eq)에 우레아(1.14 g, 18.9 mmol, 5 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 밀봉된 튜브에서 160℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물(50 ㎖)로 희석하였으며, 여과하여 담백색 고체로서 화합물 V(600 ㎎, 76%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.84 (s, 1 H), 10.74 (s, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 4.65-4.58 (m, 1 H), 1.43 (d, J = 7 Hz, 6 H).
5,7-디클로로-2-이소프로필-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘(VI)
화합물 V(500 ㎎, 2.58 mmol, 1 eq)에 얼음-냉각 조건 하에 POCl3(20 ㎖) 및 디에틸 아닐린(1.1 ㎖, 6.70 mmol, 2.6 eq)을 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 얼음으로 퀀칭하였다. 용액의 pH를 수성 암모니아(3-4 ㎖)에 의해 ~7로 조정하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 추출하였으며, 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 3% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 황색 고체로서 화합물 VI(250 ㎎, 42%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.17 (s, 1 H), 4.94-4.87 (m, 1 H), 1.69 (d, J = 7 Hz, 6 H);
LCMS: m/z = 231.2 [M+H], RT = 3.19분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
(5-클로로-2-이소프로필-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-1-퀴놀린-3-일에틸) 아민(VII)
tert-부틸 알코올(3 ㎖) 내의 화합물 VI(60 ㎎, 0.26 mmol, 1 eq)의 용액에 (R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아민(54 ㎎, 0.31 mmol, 1.2 eq) 및 DIPEA(0.10 ㎖, 0.52 mmol, 2 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물(10 ㎖)로 희석하였다. 유기 구성성분을 CH2Cl2(30 ㎖)로 추출하였고, DCM 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 65% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 거품형 고체로서 화합물 VII(60 ㎎, 63%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.27 (d, J = 8 Hz, 1 H), 9.04 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.33-8.32 (m, 1 H), 8.00-7.96 (m, 2 H), 7.75-7.70 (m, 1 H), 7.61-7.58 (m, 1 H), 5.69-5.65 (m, 1 H), 4.82-4.77 (m, 1 H), 1.72-1.67 (m, 3 H), 1.56-1.54 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 367.4 [M+H], RT = 2.91분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
1-{4-[2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논(VIII)
n-부틸 알코올(3 ㎖) 내의 화합물 VII(50 ㎎, 0.14 mmol, 1 eq)의 용액에 N-아세틸 피페라진(35 ㎎, 0.27 mmol, 2 eq) 및 DIPEA(0.12 ㎖, 0.68 mmol, 5 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 48시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 물(30 ㎖)로 희석하였다. 유기 구성성분을 CH2Cl2(40 ㎖)로 추출하였고, DCM 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 4% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 최종적으로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 VIII(50 ㎎, 78%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.05 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.49 (d, J = 7 Hz, 1 H), 8.33-8.33 (m, 1 H), 7.96 (t, J = 8 Hz, 2 H), 7.91 (s, 1 H), 7.71-7.67 (m, 1 H), 7.59-7.56 (m, 1 H), 5.53 (t, J = 7 Hz, 1 H), 4.69-4.66 (m, 1H), 3.59-3.25 (m, 8 H), 1.97 (s, 3H), 1.69 (d, J = 8 Hz, 3 H), 1.68-1.52 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 459.4 [M+H], RT = 2.29분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 2-8
표 1에 확인된 7가지 식 (I)의 화합물을 반응식 19를 이용하여 합성하였다.
실시예 번호 분자 구조 LCMS
2
Figure pct00028
 LCMS: m/z = 459.4 [M+H], RT = 2.09분; (프로그램 R1, 칼럼 X).
3
Figure pct00029
 LCMS: m/z = 470.4 [M+H], RT = 2.90분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
4
Figure pct00030
 LCMS: m/z = 473.4 [M+H], RT = 2.50분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
5
Figure pct00031
 LCMS: m/z = 473.0 [M+H], RT = 2.50분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
6
Figure pct00032
 LCMS: m/z = 483.8 [M+H], RT = 2.99분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
7
Figure pct00033
 LCMS: m/z = 472.8 [M+H], RT = 2.48분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
8
Figure pct00034
 LCMS: m/z = 487.4 [M+H], RT = 2.67분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 9 - 반응식 20: 1-{4-[2-페닐-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일} 에타논의 합성.
Figure pct00035
4-니트로-1-페닐-1H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(IIIa)
건조된 CH2Cl2(15 ㎖) 내의 화합물 II(200 ㎎, 1.17 mmol, 1 eq)의 용액에 페닐 붕산(285 ㎎, 2.34 mmol, 2 eq), 피리딘(0.2 ㎖, 2.34 mmol, 2 eq) 및 Cu(OAc)2.H2O(350 ㎎, 1.75 mmol, 1.5 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 14시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시켰고, 고체를 CH2Cl2(100 ㎖)로 세척하였으며, 조합된 여과물을 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 24% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 무색 점성 물질로서 화합물 IIIa(230 g, 80%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.73 (s, 1 H), 7.94 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.62-7.58 (m, 2 H), 7.52-7.50 (m, 1 H), 3.95 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 248.0 [M+H], RT = 3.32분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
반응식 19에 개시된 공정에 따라 단계 3 내지 단계 7를 수행하여 담백색 고체로서 실시예 9(아래 표 2에 나타냄)의 화합물을 수득하였다.
실시예 9
Figure pct00036
 LCMS: m/z = 493.0 [M+H], RT = 2.61분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 10 - 아래의 반응식 21은 4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드)의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00037
4-니트로-1H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(II)
메탄올(100 ㎖) 내의 화합물 I(10 g, 64 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 얼음-냉각 조건에서 SOCl2(5.2 ㎖, 67 mmol, 1.05 eq)를 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물(25 ㎖)로 희석하였다. 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하여 담백색 고체 물질로서 원하는 화합물 II(10.5 g, 96%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 14.41 (br s, 1 H), 8.97 (s, 1 H), 3.88 (s, 3 H);
LCMS: m/z = 172.0 [M+H], RT = 2.12분; (프로그램 Q1, 칼럼 X).
2-sec-부틸-4-니트로-2H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(III)
건조된 THF(100 ㎖) 내의 화합물 II(5 g, 0.03 mol, 1 eq)의 용액에 얼음-냉각 조건 하에 부탄-2-올(4.3 g, 58 mmol, 2 eq) 및 트리페닐 포스핀(15.3 g, 58 mmol, 2 eq)을 첨가하였다. 여기에 DIAD(12 ㎖, 58 mmol, 2 eq)를 0℃에서 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 동일한 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물(100 ㎖)로 희석하였으며, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(250 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 5% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 연황색 점성 물질로서 화합물 III(4 g, 60%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.43 (s, 1 H), 4.44-4.39 (m, 1 H), 3.32 (s, 3 H), 1.90-1.74 (m, 2 H), 4.44-4.43 (m, 3 H), 0.52-0.32 (m, 3 H);
LCMS: m/z = 228.2 [M+H], RT = 5.10분; (프로그램 R2, 칼럼 W).
4-아미노-2-sec-부틸-2H-피라졸-3-카르복시산 메틸 에스테르(IV)
메탄올(150 ㎖) 내의 화합물 III(4.5g, 20 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C(10% Pd, 10 mole%)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 수소 분위기 하에 23℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였고, 여과물을 진공에서 농축하여 갈색 점성 물질로서 화합물 IV(2 g, 89%)를 얻었으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.08 (s, 1 H), 5.07-5.02 (m, 1 H), 4.99-4.92 (m, 2 H), 3.79 (s, 3 H), 1.83-1.74 (m, 1 H), 1.68-1.60 (m, 1 H), 1.29 (d, J = 7 Hz, 3 H), 0.70-0.66 (m, 3 H)
LCMS: m/z = 198.1 [M+H], RT = 2.96분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
1-sec-부틸-1,4-디히드로-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7-디온(V)
화합물 IV(1g, 5 mmol, 1 eq)에 우레아(1.5 g, 25 mmol, 5 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 밀봉된 튜브에서 160℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물(60 ㎖)로 희석하였으며, 여과하여 담황색 고체로서 화합물 V(800 ㎎, 77%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.07-11.00 (m, 2 H), 7.39 (s, 1 H), 5.04-4.99 (m, 1 H), 1.89-1.80 (m, 1 H), 1.78-1.73 (m, 1 H), 1.40 (d, J = 7 Hz, 3 H), 0.68 (t, J = 7 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 207.1 [M+H], RT = 2.36분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
1-sec-부틸-5,7-디클로로-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘(VI)
화합물 V(1 g, 4.81 mmol, 1 eq)에 POCl3(70 ㎖) 및 디에틸 아닐린(2 ㎖, 12.5 mmol, 2.6 eq)을 얼음-냉각 조건 하에 한방울씩 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 얼음으로 퀀칭하였다. 용액의 pH를 수성 암모니아(3-4 ㎖)에 의해 ~7로 조정하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(200 ㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 진공에서 농축하였고, 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 2.5% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 황색 고체로서 화합물 VI(950 ㎎, 81%)을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3) δ 8.23 (s, 1 H), 5.29-5.24 (m, 1 H), 2.15-2.08 (m, 1 H), 1.94-1.87 (m, 1 H), 1.59 (d, J = 7 Hz, 3 H), 8.04 (t, J = 7 Hz, 3 H);
LCMS: m/z = 245.1[M+H], RT = 4.03분; (프로그램 R1, 칼럼 w).
(1-sec-부틸-5-클로로-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민(VII)
tert-부틸 알코올(5 ㎖) 내의 화합물 VI(190 ㎎, 0.78 mmol, 1 eq)의 용액에 C-((R)-C-사이클로프로필-C-퀴놀린-3-일)-메틸아민(154 ㎎, 0.78 mmol, 1 eq) 및 DIPEA(0.40 ㎖, 2.33 mmol, 3 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 물(30 ㎖)로 희석하였으며, 유기 구성성분을 CH2Cl2(100 ㎖)로 추출하였다. DCM 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 61% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 거품형 고체로서 화합물 VII(200 ㎎, 63%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.12-9.10 (m, 1 H), 8.46-8.45 (m, 1 H), 8.22-8.19 (m, 1 H), 8.07-8.06 (m, 1 H), 8.00-7.96 (m, 2 H), 7.76-7.72 (m, 1 H), 7.63-7.59 (m, 1 H), 5.19-5.16 (m, 1 H), 4.87-4.77 (m, 1 H), 1.90-1.77 (m, 3 H), 1.59-1.52 (m, 3 H), 0.75-0.63 (m, 7 H);
LCMS: m/z = 407.2 [M+H], RT = 4.12분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 tert-부틸 에스테르(VIII)
n-부틸 알코올(5 ㎖) 내의 화합물 VII(200 ㎎, 0.49 mmol, 1 eq)의 용액에 N-BOC 피페라진(183 ㎎, 0.99 mmol, 2 eq) 및 DIPEA(0.3 ㎖, 1.48 mmol, 3 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 48시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 물(30 ㎖)로 희석하였다. 유기 구성성분을 CH2Cl2(100 ㎖)로 추출하였고, DCM 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 3.5% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)으로 정제하여 담갈색(light brown) 고체로서 화합물 VIII(200 ㎎, 73%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.11-9.09 (m, 1 H), 8.43-8.42 (m, 1 H), 8.00-7.93 (m, 2 H), 7.73-7.69 (m, 2 H), 7.60-7.55 (m, 2 H), 5.16-4.97 (m, 1 H), 4.75-4.55 (m, 1 H), 3.51-3.32 (m, 4 H), 3.20-3.01 (m, 4 H), 1.90-1.81 (m, 3 H), 1.58-1.50 (m, 3 H), 1.39-1.38 (m, 9 H), 1.25-1.23 (m, 3 H), 0.77-0.61 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 557.5 [M+H], RT = 3.44분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
(1-sec-부틸-5-피페라진-1-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민(IX)
CH2Cl2(5 ㎖) 내의 화합물 VIII(200 ㎎, 0.36 mmol, 1 eq)의 용액에 얼음-냉각 조건에서 TFA(1 ㎖, 3.60 mmol, 10 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 잔사를 톨루엔(3 ㎖)으로 희석하였으며, 추가로 농축하였다. 이후, 잔사를 수성 NaHCO3(3-4 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 5% MeOH/CH2Cl2(100 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하여 담잭색 고체로서 화합물 IX(160 ㎎, 97%)를 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.09-9.07 (m, 1 H), 8.40-8.39 (m, 1 H), 8.00-7.97 (m, 1 H), 7.95-7.91 (m, 1 H), 7.73-7.69 (m, 1 H), 7.67-7.66 (m, 1 H), 7.60-7.57 (m, 1 H), 7.52-7.50 (m, 1 H), 5.07-4.98 (m, 1 H), 4.75-4.55 (m, 1 H), 3.38-3.29 (m, 8 H), 1.96-1.59 (m, 3 H), 1.57-1.49 (m, 3 H), 1.33-1.23 (m, 3 H), 0.78-0.57 (m, 5 H);
LCMS: m/z = 457.4 [M+H], RT = 2.77분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드 (X)
THF(3 ㎖) 내의 화합물 IX(50 ㎎, 0.11 mmol, 1 eq)의 용액에 TMS-이소시아네이트(0.03 ㎖, 0.22 mmol, 2 eq)를 23℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3(10 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(70 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 12% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 X(40 ㎎, 73%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.11-9.08 (m, 1 H), 8.42-8.40 (m, 1 H), 8.00-7.93 (m, 2 H), 7.73-7.69 (m, 2 H), 7.61-7.54 (m, 2 H), 5.95-5.94 (m, 2 H), 5.09-5.07 (m, 1 H), 4.79-4.62 (m, 1 H), 4.44-3.14 (m, 8 H), 1.85-1.74 (m, 3 H), 1.57-1.50 (m, 3 H), 1.25-1.24 (m, 3 H), 0.84-0.70 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 500.4 [M+H], RT = 2.94분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 11-88
아래 표 3에 나타낸 77가지 화합물을 반응식 21을 이용하여 합성하였다.
실시예 번호 분자 구조 LCMS
11
Figure pct00038
 LCMS: m/z = 459.4 [M+H], RT = 2.32분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
12
Figure pct00039
 LCMS: m/z = 459.4 [M+H], RT = 2.75분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
13
Figure pct00040
 LCMS: m/z = 470.2 [M+H], RT = 2.94분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
14
Figure pct00041
 LCMS: m/z = 445.2 [M+H], RT = 2.05분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
15
Figure pct00042
 LCMS: m/z = 445.2 [M+H], RT = 2.32분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
16
Figure pct00043
 LCMS: m/z = 473.0 [M+H], RT = 2.53분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
17
Figure pct00044
 LCMS: m/z = 459.2 [M+H], RT = 2.36분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
18
Figure pct00045
 LCMS: m/z = 473.0 [M+H], RT = 2.57분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
19
Figure pct00046
 LCMS: m/z = 473.4 [M+H], RT = 2.62분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
20
Figure pct00047
 LCMS: m/z = 459.4 [M+H], RT = 2.56분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
21
Figure pct00048
 LCMS: m/z = 473.2 [M+H], RT = 2.92분; (프로그램 P1, 칼럼 W).
22
Figure pct00049
 LCMS: m/z = 487.6 [M+H], RT = 2.71분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
23
Figure pct00050
 LCMS: m/z = 459.4 [M+H], RT = 2.54분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
24
Figure pct00051
 LCMS: m/z = 489.2 [M+H], RT = 2.48분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
25
Figure pct00052
 LCMS: m/z = 485.2 [M+H], RT = 2.70분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
26
Figure pct00053
 LCMS: m/z = 515.2 [M+H], RT = 2.27분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
27
Figure pct00054
 LCMS: m/z = 501.4 [M+H], RT = 2.38분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
28
Figure pct00055
 LCMS: m/z = 501.4 [M+H], RT = 3.08분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
29
Figure pct00056
 LCMS: m/z = 510.0 [M+H], RT = 3.65분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
30
Figure pct00057
 LCMS: m/z = 480.2 [M+H], RT = 3.32분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
31
Figure pct00058
 LCMS: m/z = 496.0 [M+H], RT = 3.57분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
32
Figure pct00059
 LCMS: m/z = 485.2 [M+H], RT = 2.72분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
33
Figure pct00060
 LCMS: m/z = 480.2 [M+H], RT = 3.32분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
34
Figure pct00061
 LCMS: m/z = 511.4 [M+H], RT = 2.66분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
35
Figure pct00062
 LCMS: m/z = 500.8 [M+H], RT = 3.09분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
36
Figure pct00063
 LCMS: m/z = 500.8 [M+H], RT = 3.10분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
37
Figure pct00064
 LCMS: m/z = 473.0 [M+H], RT = 2.86분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
38
Figure pct00065
 LCMS: m/z = 486.2 [M+H], RT = 3.76분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
39
Figure pct00066
 LCMS: m/z = 475.9 [M+H], RT = 3.19분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
40
Figure pct00067
 LCMS: m/z = 485.8 [M+H], RT = 3.35분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
41
Figure pct00068
 LCMS: m/z = 430.7 [M+H], RT = 2.40분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
42
Figure pct00069
 LCMS: m/z = 504.8 [M+H], RT = 3.12분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
43
Figure pct00070
 LCMS: m/z = 486.7 [M+H], RT = 3.03분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
44
Figure pct00071
 LCMS: m/z = 513.2 [M+H], RT = 3.08분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
45
Figure pct00072
 LCMS: m/z = 476.5 [M+H], RT = 3.25분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
46
Figure pct00073
 LCMS: m/z = 490.0 [M+H], RT = 3.29분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
47
Figure pct00074
 LCMS: m/z = 494.0 [M+H], RT = 3.22분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
48
Figure pct00075
 LCMS: m/z = 471.0 [M+H], RT = 2.79분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
49
Figure pct00076
 LCMS: m/z = 457.4 [M+H], RT = 2.83분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
50
Figure pct00077
 LCMS: m/z = 445.6 [M+H], RT = 2.72분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
51
Figure pct00078
 LCMS: m/z = 488.2 [M+H], RT = 2.87분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
52
Figure pct00079
 LCMS: m/z = 499.2 [M+H], RT = 3.15분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
53
Figure pct00080
 LCMS: m/z = 499.1 [M+H], RT = 2.92분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
54
Figure pct00081
 LCMS: m/z = 505.2 [M+H], RT = 3.09분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
55
Figure pct00082
 LCMS: m/z = 516.0 [M+H], RT = 3.37분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
56
Figure pct00083
 LCMS: m/z = 499.2 [M+H], RT = 3.02분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
57
Figure pct00084
 LCMS: m/z = 492.2 [M+H], RT = 3.27분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
58
Figure pct00085
 LCMS: m/z = 525.4 [M+H], RT = 3.23분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
59
Figure pct00086
 LCMS: m/z = 471.2 [M+H], RT = 2.90분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
60
Figure pct00087
 LCMS: m/z = 487.2 [M+H], RT = 3.00분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
61
Figure pct00088
 LCMS: m/z = 505.2 [M+H], RT = 3.09분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
62
Figure pct00089
 LCMS: m/z = 513.3 [M+H], RT = 3.12분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
63
Figure pct00090
 LCMS: m/z = 533.5 [M+H], RT = 3.33분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
64
Figure pct00091
 LCMS: m/z = 474.2 [M+H], RT = 2.30분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
65
Figure pct00092
 LCMS: m/z = 531.3 [M+H], RT = 2.86분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
66
Figure pct00093
 LCMS: m/z = 486.2 [M+H], RT = 2.31분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
67
Figure pct00094
 LCMS: m/z = 489.3 [M+H], RT = 1.72분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
68
Figure pct00095
 LCMS: m/z = 510.3 [M+H], RT = 2.71분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
69
Figure pct00096
 LCMS: m/z = 500.4 [M+H], RT = 2.57분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
70
Figure pct00097
 LCMS: m/z = 500.4 [M+H], RT = 2.57분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
71
Figure pct00098
 LCMS: m/z = 463.2 [M+H], RT = 5.25분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
72
Figure pct00099
 LCMS: m/z = 528.3 [M+H], RT = 2.25분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
73
Figure pct00100
 LCMS: m/z = 463.0 [M+H], RT = 2.86분; (프로그램 P1, 칼럼 Y).
74
Figure pct00101
 LCMS: m/z = 454.6 [M+H], RT = 3.46분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
75
Figure pct00102
 LCMS: m/z = 499.3 [M+H], RT = 2.55분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
76
Figure pct00103
 LCMS: m/z = 483.4 [M+H], RT = 3.10분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
77
Figure pct00104
 LCMS: m/z = 440.4 [M+H], RT = 3.36분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
78
Figure pct00105
 LCMS: m/z = 441.4 [M+H], RT = 3.32분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
79
Figure pct00106
 LCMS: m/z = 441.4 [M+H], RT = 3.43분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
80
Figure pct00107
 LCMS: m/z = 517.0 [M+H], RT = 3.26분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
81
Figure pct00108
 LCMS: m/z = 489.3 [M+H], RT = 6.09분; (프로그램 P2, 칼럼 V).
82
Figure pct00109
 LCMS: m/z = 503.2 [M+H], RT = 3.28분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
83
Figure pct00110
 LCMS: m/z = 501.4 [M+H], RT = 3.40분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
84
Figure pct00111
 LCMS: m/z = 477.4 [M+H], RT = 2.08분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
85
Figure pct00112
 LCMS: m/z = 474.2 [M+H], RT = 2.92분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
86
Figure pct00113
 LCMS: m/z = 512.2 [M+H], RT = 3.16분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
87
Figure pct00114
 LCMS: m/z = 490.2 [M+H], RT = 2.79, 2.88분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
88
Figure pct00115
 LCMS: m/z = 416.2 [M+H], RT = 2.93분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 78 및 실시예 79는 이성질체이며, 화합물 VII과 테트라졸의 SNAr 반응으로부터 수득하였다. 0.1% 포름산 버퍼를 이용하여 물/아세토니트릴로 제조용(preparative) HPLC를 수행하여 상기 이성질체들을 단리하였다. 해당 이성질체들의 실제 구조는 결정할 수 없었으므로 구조를 임의로 할당하였으며, 실시예 78이 더 짧은 머무름 시간(retention time)으로 먼저 용출되는 피크를 나타내고, 실시예 19가 더 높은 머무름 시간으로 나중에 용출된다.
실시예 88은 DMSO/물(1:1) 내의 NaCN 및 DABCO로 환류시키는 유사한 SNAr 전략에 의해 합성하였고, 그 결과 예측되는 -CN 화합물 대신에 부분적으로 가수분해된 -CONH2 유사체인 해당 화합물이 얻어졌다.
실시예 89-93 - 아래의 반응식 22는 1-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논, 1-{4-[3-브로모-1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논, 5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보니트릴, 1-{4-[1-sec-부틸-3-메틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논 및 1-{4-[1-sec-부틸-3-사이클로프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논의 대표적인 합성법이다.
중간체 VIIa는 화합물 VII의 경우와 유사한 방식으로 합성하였다.
Figure pct00116
실시예 89: 1-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논(VIIIa)
n-부틸 알코올(5 ㎖) 내의 화합물 VIIa(100 ㎎, 0.26 mmol, 1 eq)의 용액에 N-아세틸 피페라진(41 ㎎, 0.32 mmol, 1.23 eq) 및 DIPEA(0.14 ㎖, 0.79 mmol, 3 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 48시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였으며, 잔사를 물(20 ㎖)로 희석하였다. 유기 구성성분을 CH2Cl2(50 ㎖)로 추출하였고, DCM 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 3% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 VIIIa(40 ㎎, 31%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.06-9.04 (m, 1 H), 8.35 (br s, 1 H), 8.00-7.93 (m, 2 H), 7.72-7.69 (m, 2 H), 7.61-7.57 (m, 1 H), 7.40-7.34 (m, 1 H), 5.64-5.58 (m, 1 H), 5.04-5.00 (m, 1 H), 3.54-3.19 (m, 8 H), 1.98-1.94 (m, 3 H), 1.88-1.85 (m, 1 H), 1.79-1.74 (m, 4 H), 1.54-1.49 (m, 3 H), 0.75-0.66 (m, 3 H);
LCMS: m/z = 473.0 [M+H], RT = 2.51분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 90: 1-{4-[3-브로모-1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논(VIIIb)
건조된 THF(5 ㎖) 내의 화합물 VIIIa(30 ㎎, 0.06 mmol, 1 eq)의 용액에 NBS(12 ㎎, 0.06 mmol, 1 eq)를 0℃에서 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3(5 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 CH2Cl2(20 ㎖)로 추출하였으며, 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 3% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 백색 고체로서 화합물 VIIIb(29 ㎎, 88%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.06-9.03 (m, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.00-7.94 (m, 2 H), 7.73-7.69 (m, 1 H), 7.61-7.53 (m, 2 H), 5.63-5.61 (m, 1 H), 5.15-4.95 (m, 1 H), 3.57-3.30 (m, 8 H), 1.96 (d, J = 7 Hz, 3 H), 1.77-1.73 (m, 5 H), 1.53-1.49 (m, 3 H), 0.76-0.68 (m, 3 H);
LCMS: m/z = 551.0 [M+], 553.0 [M+2], RT = 3.09분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 91: 5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보니트릴(VIIIc)
건조된 DMF(2 ㎖) 내의 화합물 VIIIb(25 ㎎, 0.05 mmol, 1 eq)의 용액에 CuCN(19 ㎎, 0.23 mmol, 5 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 밀봉된 튜브에서 200℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 고체를 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 세척하였다. 조합된 여과물을 물(20 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(20 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 3% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 VIIIc(5 ㎎ 20%)를 수득하였다.
LCMS: m/z = 498.0 [M+H], RT = 3.16분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 92: 1-{4-[1-sec-부틸-3-메틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논(VIIId)
디옥산 및 물의 혼합물(3:2 ㎖) 내의 화합물 VIIIb(40 ㎎, 0.07 mmol, 1 eq)의 용액에 트리메틸 보락산(0.03 ㎖, 0.22 mmol, 3 eq), K2CO3(30 ㎎, 0.22 mmol, 3 eq)을 첨가하였고, 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 탈기하였다. 여기에 Pd(PPh3)4를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 아르곤으로 다시 15분 동안 추가로 탈기하였으며, 90℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 고체를 에틸 아세테이트(20 ㎖)로 세척하였다. 여과물을 물(20 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 추출하였으며, 에틸 아세테이트 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 2.5% MeOH/CH2Cl2를 이용하는 Prep TLC로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 VIIId(20 ㎎, 59%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.05-9.03 (m, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.00-7.92 (m, 2 H), 7.70 (t, J = 7 Hz, 1 H), 7.60-7.58 (m, 1 H), 7.34-7.28 (m, 1 H), 5.64-5.58 (m, 1 H), 5.00-4.93 (m, 1 H), 3.54-3.20 (m, 8 H), 2.26 (s, 3 H), 1.99-1.95 (m, 3 H), 1.9-1.72 (m, 5 H), 1.50-1.47 (m, 3 H), 0.74-0.65 (m, 3 H);
LCMS: m/z = 487.2 [M+H], RT = 2.65분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 93: 1-{4-[1-sec-부틸-3-사이클로프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논
디옥산 및 물(3:2 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 VIIIb(40 ㎎, 0.07 mmol, 1 eq)의 용액에 사이클로프로필 붕산(13 ㎎, 0.15 mmol, 2.1 eq), Na2CO3(23 ㎎, 0.22 mmol, 3.1 eq), 트리사이클로헥실 포스핀(2 ㎎, 0.01 mmol, 0.1 eq)을 첨가하였고, 혼합물을 아르곤으로 15분 동안 탈기하였다. 여기에 Pd(OAc)2(1 ㎎, 0.004 mmol, 0.05 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 아르곤으로 다시 30분 동안 추가로 탈기하였으며, 90℃에서 14시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 유기 구성성분을 에틸 아세테이트(50 ㎖)로 추출하였고, 에틸 아세테이트 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 옹축하였다. 조 물질을 2.5% MeOH/CH2Cl2을 이용하는 Prep TLC로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 VIIIe(5 ㎎, 14%)를 수득하였다.
LCMS: m/z = 513.4 [M+H], RT = 3.04분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
실시예 94-107: 아래의 표 4에 나타낸 14가지 화합물을 반응식 22를 이용하여 합성하였다. 실시예 95의 화합물은 실시예 103의 화합물의 합성 동안에 -CN 기의 부분적인 가수분해로 인해 부산물로서 수득하였다.
실시예 번호 분자 구조 LCMS
94
Figure pct00117
 LCMS: m/z = 537.2 [M+], 539.2 [M+2], RT = 2.90분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
95
Figure pct00118
 LCMS: m/z = 502.4 [M+H], RT = 2.72분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
96
Figure pct00119
 LCMS: m/z = 473.4 [M+H], RT = 2.47분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
97
Figure pct00120
 LCMS: m/z = 548.4 [M+], 550.4 [M+2], RT = 3.66분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
98
Figure pct00121
 LCMS: m/z = 536.8 [M+], 538.8 [M+2], RT = 2.56분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
99
Figure pct00122
 LCMS: m/z = 493.4 [M+H], RT = 3.07분; (프로그램 P1, 칼럼 W).
100
Figure pct00123
 LCMS: m/z = 536.8 [M+], 539.0 [M+2], RT = 2.92분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
101
Figure pct00124
 LCMS: m/z = 483.8 [M+H], RT = 2.97분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
102
Figure pct00125
 LCMS: m/z = 473.2 [M+H], RT = 2.45분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
103
Figure pct00126
 LCMS: m/z = 483.8 [M+H], RT = 2.74분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
104
Figure pct00127
 LCMS: m/z = 483.8 [M+H], RT = 2.02분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
105
Figure pct00128
 LCMS: m/z = 550.8 [M+], 552.8 [M+2], RT = 2.73분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
106
Figure pct00129
 LCMS: m/z = 498.2 [M+H], RT = 2.89분; (프로그램 R1, 칼럼 Y).
107
Figure pct00130
 LCMS: m/z = 499.2 [M+H], RT = 2.26분; (프로그램 R1, 칼럼 V).
실시예 108: 반응식 23은 4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-설폰산 아미드)(Xa)의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00131
디옥산(5 ㎖) 내의 화합물 IX(30 ㎎, 0.07 mmol, 1 eq)의 용액에 (NH2)2SO2(25 ㎎, 0.26 mmol, 3.7 eq)을 첨가하였고, 100℃에서 14시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 수성 HCl(1 N, 2-3 ㎖)의 첨가에 의해 퀀칭하였으며, 진공에서 농축하였다. 유기 구성성분을 5% 메탄올/CH2Cl2(50 ㎖)로 추출하였고, 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰으며, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 9% 메탄올/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 Xa(18 ㎎, 48%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.12-9.10 (m, 1 H), 8.45-8.43 (m, 1 H), 8.01-7.93 (m, 2 H), 7.74-7.70 (m, 2 H), 7.61-7.42 (m, 2 H), 6.71 (d, J = 6 Hz, 2 H), 5.19-4.99 (m, 1 H), 4.73-4.66 (m, 1 H), 3.64-3.40 (m, 4 H), 2.95-2.76 (m, 4 H), 1.91-1.68 (m, 3 H), 1.68-1.51 (m, 3 H), 1.35-1.33 (m, 3 H), 1.22-0.83 (m, 4 H);
LCMS: m/z = 536.4 [M+H], RT = 2.75분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 109: 아래의 반응식 24는 4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-설폰산 아미드)(Xa')의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00132
DMF(3 ㎖) 내의 화합물 IX(30 ㎎, 0.07 mmol, 1 eq)의 용액에 브로모아세트아미드(18 ㎎, 0.13 mmol, 2 eq), K2CO3(27 ㎎, 0.20 mmol, 3 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물로 희석하였으며, 유기 구성성분을 CH2Cl2(50 ㎖)로 추출하였다. 이후, DCM 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 7% 메탄올/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 Xa'(25 ㎎, 75%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.06-9.04 (m, 1 H), 8.37-8.36 (m, 1 H), 7.97-7.95 (m, 1 H), 7.91-7.88 (m, 1 H), 7.68-7.64 (m, 2 H), 7.57-7.51 (m, 2 H), 7.15-7.07 (2, m H), 5.15-4.91 (m, 1 H), 4.75-4.51 (m, 1 H), 3.56-3.31 (m, 4 H), 2.72-2.63 (m, 2 H), 2.22-2.17 (m, 4 H), 1.78-1.59 (m, 3 H), 1.54-1.47 (m, 3 H), 0.82-0.49 (m, 7 H);
LCMS: m/z = 514.2 [M+H], RT = 2.37분; (프로그램 R1, 칼럼 X).
실시예 110: 아래의 반응식 25는 4-(1-sec-부틸-7-{[(R)-사이클로프로필(퀴놀린-3-일)메틸]아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-N'-시아노피페라진-1-카르복시미드아미드)(XI)의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00133
(4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-페녹시-메틸-시안아미드(Xb)
MeCN(5 ㎖) 내의 화합물 IX(50 ㎎, 0.11 mmol, 1 eq)의 용액에 디페닐시아노카르본이미데이트(32 ㎎, 0.13 mmol, 1.2 eq) 및 트리에틸아민(0.02 ㎖, 0.13 mmol, 1.2 eq)을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 60℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하여 담갈색의 점성 고체로서 화합물 Xb를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z = 601.3 [M+H], RT = 3.08분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
4-(1-sec-부틸-7-{[(R)-사이클로프로필(퀴놀린-3-일)메틸]아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-N'-시아노피페라진-1-카르복시미드아미드(XI)
메탄올(3 ㎖) 내의 화합물 Xb(65 ㎎, 0.11 mmol, 1 eq)의 용액에 NH4OH(0.4 ㎖)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 5시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 물질을 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 5% 메탄올/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 XI(2 단계에 대해 25 ㎎, 43%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.11-9.10 (m, 1 H), 9.09-8.40 (m, 1 H), 8.00-7.93 (m, 2 H), 7.73-7.70 (m, 1 H), 7.63-7.58 (m, 3 H), 7.13-7.12 (m, 2 H), 5.11-5.08 (m, 1 H), 4.76-4.64 (m, 1 H), 3.50-3.33 (m, 8 H), 1.91-1.66 (m, 3 H), 1.56-1.50 (m, 3 H), 0.77-0.50 (m, 7 H);
LCMS: m/z = 524.6 [M+H], RT = 2.72분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 111: 4-(1-sec-부틸-7-{[(R)-메틸(퀴놀린-3-일)메틸]아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-N'-시아노피페라진-1-카르복시미드아미드(아래의 표 5 참조)를 합성하기 위하여 반응식 25를 또한 사용하였다.
실시예 번호 분자 구조 LCMS
111
Figure pct00134
 LCMS: m/z = 498.0 [M+H], RT = 2.47분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 112: 아래의 반응식 26은 4-1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일-피페라진-1-카르복사미딘)(XII)의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00135
[[(E)-tert-부톡시카르보닐이미노]-(4-1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일-피페라진-1-일)-메틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르(Xc)
NMP(5 ㎖) 내의 화합물 IX(50 ㎎, 0.11 mmol, 1 eq)의 용액에 (tert-부톡시카르보닐이미노-피라졸-1-일-메틸)-카르밤산 tert-부틸 에스테르(34 ㎎, 0.11 mmol, 1 eq) 및 DIPEA(0.04 ㎖, 0.22 mmol, 2 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10 ㎖)로 희석하였고, 유기 구성성분을 CH2Cl2(50 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨에 대해 건조시켰고, 진공에서 농축하였다. 조 잔사를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 2% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 갈색 고체로서 화합물 Xc(100 ㎎)를 수득하였다.
LCMS: m/z = 699.6 [M+H], RT = 3.22분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
4-1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일-피페라진-1-카르복사미딘(XII)
CH2Cl2(10 ㎖) 내의 화합물 Xc(100 ㎎, 0.14 mmol, 1 eq)의 용액에 얼음-냉각 조건 하에 TFA(0.11 ㎖, 1.43 mmol, 10 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔사를 톨루엔(3 ㎖)으로 희석하였고, 진공에서 추가로 농축하였다. 잔사를 수성 NaHCO3 용액(5 ㎖)으로 희석하였고, 유기 구성성분을 5% MeOH/CH2Cl2(50 ㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 진공에서 농축하여 황색 고체(XII)로서 화합물 XII(40 ㎎, 57%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.10-9.08 (m, 1 H), 8.42-8.40 (m, 1 H), 8.01-7.93 (m, 2 H), 7.74-7.71 (m, 2 H), 7.65-7.60 (m, 2 H), 7.40-7.20 (m, 3 H), 5.09-5.08 (m, 1 H), 4.80-4.73 (m, 1 H), 3.60-3.32 (m, 8 H), 1.90-1.60 (m, 3 H), 1.57-1.50 (m, 3 H), 0.77-0.57 (m, 7 H);
LCMS: m/z = 499.3 [M+H], RT = 2.10분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 113: 아래의 반응식 27은 2-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피라졸-1-일}-에탄올의 대표적인 합성법이다.
중간체 VIIa는 화합물 VII의 경우와 유사한 방식으로 합성하였다.
Figure pct00136
(1-sec-부틸-5-{1-[2-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-에틸]-1H-피라졸-4-일}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸)-아민(VIIIa)
반응식 22에서 제조된 것과 같은 톨루엔(14 ㎖) 및 EtOH(6 ㎖)의 혼합물 내의 화합물 VIIa(200 ㎎, 0.53 mmol, 1 eq)의 교반되고 (아르곤으로) 탈기된 용액에 Cs2CO3(513 ㎎, 1.58 mmol, 3 eq), 화합물 VIIb(278 ㎎, 0.79 mmol, 1.5 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 다시 아르곤으로 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물에 Pd(PPh3)4(32 ㎎, 0.05 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 아르곤 분위기 하에 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 여과물을 감압 하에 농축하여 담백색 고체로서 조 생성물 VIIIa(300 ㎎)를 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
2-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피라졸-1-일}-에탄올.
THF(15 ㎖) 내의 화합물 VIIIa(300 ㎎, 0.53 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 TBAF(1 ㎖, THF 내에서 1 M)를 첨가하였고, 반응 혼합물을 23℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 수득하였고, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 10% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 담백색 고체로서 화합물 CE01111(20 ㎎)을 수득하였다.
LCMS: m/z = 457.4 [M+H], RT = 3.21분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 114-123: 아래의 표 6에 나타낸 10가지 화합물을 반응식 27을 이용해 합성하였다.
실시예 번호 분자 구조 LCMS
114
Figure pct00137
 LCMS: m/z = 453.4 [M+H], RT = 2.98분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
115
Figure pct00138
 LCMS: m/z = 467.4 [M+H], RT = 3.41분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
116
Figure pct00139
 LCMS: m/z = 485.2 [M+H], RT = 3.47분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
117
Figure pct00140
 LCMS: m/z = 481.2 [M+H], RT = 2.86분; (프로그램 P1, 칼럼 V).
118
Figure pct00141
 LCMS: m/z = 499.2 [M+H], RT = 3.00분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
119
Figure pct00142
 LCMS: m/z = 439.2 [M+H], RT = 3.37분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
120
Figure pct00143
 LCMS: m/z = 496.0 [M+H], RT = 3.44분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
121
Figure pct00144
 LCMS: m/z = 483.2 [M+H], RT = 3.28분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
122
Figure pct00145
 LCMS: m/z = 475.2 [M+H], RT = 3.33분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
123
Figure pct00146
 LCMS: m/z = 462.2 [M+H], RT = 2.84분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 118의 화합물은 4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복시산 tert-부틸 에스테르를 이용하여 반응식 27에 나타낸 것과 같은 화합물 VIIa의 스즈키(Suzuki) 반응과, 이어서 반응식 21에 나타낸 것과 같은 단계 8 및 단계 9에서와 같은 추가적인 반응을 통해 합성하였으며, 이때 최종 이중 결합의 환원은 EtOH 내의 10% Pd/C를 이용한 수소화에 의해 수행하였다.
실시예 124: 아래의 반응식 28은 1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 사이클로프로필아미드의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00147
1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 메틸 에스테르(VIII)
반응식 21에서 제조된 것과 같은 MeOH(2 ㎖) 내의 화합물 VII(500 ㎎, 1.23 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 PdCl2(dppf).DCM(100 ㎎, 0.123 mmol, 0.1 eq) 및 DIPEA(1.1 ㎖, 6.16 mmol, 5 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 아르곤으로 15분 동안 탈기하였다. 결과물인 혼합물을 50 psi CO 압력 하에 90℃에서 16시간 동안 Parr 오토크레이브에서 반응시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 여과물을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 수득하였고, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 65% EtOAc/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 화합물 VIII(440 ㎎, 84%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.18-9.13 (m, 1 H), 8.53-8.50 (m, 1 H), 8.25 (m, 1 H), 8.06-7.94 (m, 3 H), 7.74-7.70 (m, 1 H), 7.62-7.55 (m, 1 H), 5.20 (m, 1 H), 4.95-4.80 (m, 1 H), 3.82-3.81 (m, 3 H), 1.98-1.80 (m, 3 H), 1.60-1.55 (m, 3 H), 0.75-0.50 (m, 7 H);
LCMS: m/z = 431.2 [M+H], RT = 3.78분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산(IX)
THF(8 ㎖) 및 물(4 ㎖) 내의 화합물 VIII(440 ㎎, 1.023 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 LiOH.H2O(86 ㎎, 2.05 mmol, 2 eq)를 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였고, 물로 희석하였다. 수성 층을 희석된 HCl로 산성화시켰고, 유기 구성성분을 MeOH/CH2Cl2로 추출하여 화합물 IX(370 ㎎, crude)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.30-9.25 (m, 1 H), 8.78-8.72 (m, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 8.12-8.00 (m, 3 H), 7.81 (m, 1 H), 8.70 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 5.01-4.92 (m, 1 H), 2.00-1.70 (m, 3 H), 1.60-1.54 (m, 3 H), 0.80-0.50 (m, 7 H);
LCMS: m/z = 417.2 [M+H], RT = 3.29분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 사이클로프로필아미드.
DMF(3 ㎖) 내의 화합물 IX(50 ㎎, 0.12 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 사이클로프로필 아민(8 ㎎, 0.144 mmol, 1.2 eq), DIPEA(23 ㎎, 0.18 mmol, 1.5 eq) 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU)(59 ㎎, 0.16 mmol, 1.3 eq)를 첨가하였고, 23℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하였고, 유기 구성성분을 CH2Cl2로 추출하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 45% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 화합물 1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 사이클로프로필-아미드(440 ㎎, 84%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.17-9.16 (m, 1 H), 8.50-8.49 (m, 1 H), 8.21-8.20 (m, 1 H), 8.19-8.12 (m, 1 H), 8.01-7.90 (m, 3 H), 7.74-7.68 (m, 1 H), 7.62-7.57 (m, 1 H), 5.30-5.20 (m, 1 H), 5.05-4.90 (m, 1 H), 2.80-2.70 (m, 1 H), 2.00-1.90 (m, 3 H), 1.63-1.55 (m, 3 H), 1.25 (m, 1 H), 0.80-0.45 (m, 10 H);
LCMS: m/z = 456.4 [M+H], RT = 4.13분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 125: 반응식 29는 [1-sec-부틸-5-(5-메틸-[1,3,4]옥사디아졸-2-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00148
1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 N'-아세틸-히드라지드(X)
반응식 28에서 제조된 것과 같은 DMF(8 ㎖) 화합물 IX(160 ㎎, 0.38 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 아세트산 히드라지드(34 ㎎, 0.46 mmol, 1.2 eq), DIPEA(73 ㎎, 0.58 mmol, 1.5 eq) 및 HATU(190 ㎎, 0.50 mmol, 1.3 eq)를 첨가하였고, 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하였고, 유기 구성성분을 CH2Cl2로 추출하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 8% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 화합물 X(180 ㎎, 99%)를 수득하였다.
LCMS: m/z = 473.0 [M+H], RT = 3.34분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
[1-sec-부틸-5-(5-메틸-[1,3,4]옥사디아졸-2-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민.
화합물 IX(180 ㎎, 0.38 mmol, 1 eq)를 POCl3(3 ㎖) 내에 취하였고, 3시간 동안 환류시켰다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 수성 NaHCO3으로 퀀칭하였으며, 유기 구성성분을 CH2Cl2로 추출하여 조 생성물을 수득하였고, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 2% MeOH/CH2Cl2로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하고, 이후 Prep TLC(60% EtOAc/헥산)를 수행하여 화합물 CE01108(15 ㎎, 9%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.22-9.18 (m, 1 H), 8.61-8.58 (m, 1 H), 8.28-8.27 (m, 1 H), 8.18-8.15 (m, 1 H), 8.00-7.93 (m, 2 H), 7.74-7.69 (m, 1 H), 7.61-7.57 (m, 1 H), 5.28 (m, 1 H), 4.90-4.80 (m, 1 H), 2.59 (m, 2H), 2.00-1.80 (m, 3 H), 1.62-1.56 (m, 3 H), 0.76-0.56 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 455.3 [M+H], RT = 3.07분; (프로그램 P1, 칼럼 V).
실시예 126: 반응식 30은 1-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-1H-[1,2,3]트리아졸-4-카르복시산 아미드의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00149
(5-아지도-1-sec-부틸-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민(VIII)
밀봉된 튜브에서 반응식 21에서 제조된 것과 같은 DMF(2 ㎖) 내의 화합물 VII(100 ㎎, 0.25 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 K2CO3(68 ㎎, 0.49 mmol, 2 eq) 및 NaN3(32 ㎎, 0.49 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 160℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 물로 희석하였으며, 유기 구성성분을 EtOAc로 추출하여 조 생성물을 수득하였고, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 70% EtOAc/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 화합물 VIII(80 ㎎, 79%)을 수득하였다.
LCMS: m/z = 414.2 [M+H], RT = 3.80분; (프로그램 P1, 칼럼 V).
1-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-1H-[1,2,3]트리아졸-4-카르복시산 에틸 에스테르(IX)
MeOH(5 ㎖) 내의 화합물 VIII(80 ㎎, 0.19 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 나트륨 아스코르베이트(4 ㎎, 0.019 mmol, 0.1 eq, 0.3 ㎖의 물에 용해됨), Cu(OAc)2.H2O(4 ㎎, 0.019 mmol, 0.1 eq) 및 에틸 프로피올레이트(0.06 ㎖, 0.58 mmol, 3 eq)의 용액을 첨가하였고, 결과물인 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 84% EtOAc/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 화합물 IX(30 ㎎, 30%)를 수득하였다.
LCMS: m/z = 512.2 [M+H], RT = 4.32분; (프로그램 P1, 칼럼 V).
1-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-1H-[1,2,3]트리아졸-4-카르복시산 아미드.
밀봉된 튜브에서 MeOH(3 ㎖) 내의 화합물 IX(30 ㎎, 0.058 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 수성 수산화암모늄(2 ㎖)을 첨가하였고, 혼합물을 23℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였고, 70% EtOAc/헥산으로 용출하는 Prep TLC로 정제하여 화합물 CE01091(7 ㎎, 24%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.22-9.18 (m, 1 H), 9.13-9.09 (m, 1 H), 8.60-8.56 (m, 1 H), 8.38-8.34 (m, 1 H), 8.25-8.24 (m, 1 H), 8.03-7.92 (m, 3 H), 7.73-7.69 (m, 1 H), 7.61-7.58 (m, 2 H), 5.26 (m, 1 H), 5.14-5.03 (m, 1 H), 2.00-1.70 (m, 43 H), 1.63-1.57 (m, 3 H), 0.79-0.57 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 483.2 [M+H], RT = 2.93분; (프로그램 P1, 칼럼 V).
실시예 127: 반응식 31은 (1-sec-부틸-5-피리다진-3-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민의 대표적인 합성법이다.
Figure pct00150
(1-sec-부틸-5-피리다진-3-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민.
밀봉된 튜브에서 [CE00976에 대하여] 반응식 21에서 제조된 DMF(5 ㎖) 내의 화합물 VII(100 ㎎, 0.25 mmol, 1 eq)의 교반된 용액에 3-(트리부틸틴)피리다진(182 ㎎, 0.49 mmol, 2 eq)을 첨가하였고, 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 탈기하였다. 상기 반응 혼합물에 Pd(PPh3)4(30 ㎎, 0.025 mmol, 0.1 eq)을 첨가하였고, 아르곤으로 다시 10분 동안 탈기를 반복하였다. 이후, 반응 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰고, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 여과물을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 수득하였고, 이를 100-200 메쉬 실리카 겔을 이용하고 70% EtOAc/헥산으로 용출하는 플래쉬 크로마토그래피(Combiflash)로 정제하여 화합물 CE01099(40 ㎎, 36%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.90-9.86 (m, 1 H), 9.32-9.28 (m, 1 H), 9.26-9.22 (m, 1 H), 8.58 (m, 1 H), 8.32-8.28 (m, 2 H), 8.15-8.09 (m, 1 H), 8.00-7.94 (m, 2 H), 7.75-7.65 (m, 1 H), 7.60-7.55 (m, 1 H), 5.28 (m, 1 H), 5.16-5.05 (m, 1 H), 2.00-1.70 (m, 3 H), 1.67-1.58 (m, 3 H), 0.79-0.69 (m, 6 H);
LCMS: m/z = 451.6 [M+H], RT = 3.98분; (프로그램 R1, 칼럼 W).
실시예 128: 시험관내 연구
A. 클로닝
FLIPR® 분석법은 인간 또는 래트 P2X3 또는 P2X2/3 수용체를 발현하는 세포를 이용한다. hP2X3(Cat# 6188) 및 hP2X2/3(Cat# 6179)을 발현하는 재조합 세포를 찬테스트사(Chantest Corp)로부터 구입하였다. 래트 P2X2(NCBI Accession No: U14414)를 PC12 cDNA(래트 부신 수질 세포주)로부터 PCR에 의해 증폭하였다. 래트 P2X2의 서열을 코딩하는 단백질을 함유하는 수득된 PCR 생성물을 다중 클로닝 부위(MCS) 내에서 EcoRV-소화되고 탈인산화된 벡터 pIRES-puro3 내로 클로닝하였다. 도 1a 참조.
래트 P2X3(NCBI Accession No: X91167)를 래트 뇌 cDNA로부터 PCR에 의해 증폭하였다. 래트 P2X3의 서열을 코딩하는 단백질을 함유하는 수득된 PCR 생성물을 다중 클로닝 부위(MCS) 내에서 EcoRV-소화되고 탈인산화된 벡터 pCDNA-Hygro 내로 클로닝하였다(도 1b). 이후, pcDNA-Hygro 내로 클로닝된 래트 P2X3을 벡터의 다중 클로닝 부위(MCS) 내에서 HindIII(5') 및 XhoI(3') 부위에서 pcDNA-5/TO 내로 서브클로닝하였다(도 1c).
재조합 벡터 DNA를 생성하는 모든 구조체(construct)의 서열을 확인한 후, 세포주의 전달감염(transfection) 및 생성을 위해 사용하였다.
B. rP2X2/3을 발현하는 재조합 TRex293 세포 및 rP2X3을 발현하는 CHO-TRex 세포의 개발
Lipofectamine® 2000(Invitrogen) 전달감염 제제를 이용하여 항생재-부재 및 혈청-부재 DMEM에서 수퍼-코일된(super-coiled) 구조체(QIAGEN 키트를 이용해 정제됨)를 이용하여 전달감염을 수행하였다. 상기 DNA 구조체인 pIRES-Puro3 내의 래트 P2X2 및 pCDNA5/TO 내의 래트 P2X3을 TRex293 세포 내로 동시-전달감염시켜 rP2X2/3 안정한 세포주를 생성하였다. 50 ㎍/㎖ 하이드로마이신(Invitrogen) 및 0.5 ㎍/㎖ 퓨로마이신(Fermentek)을 사용하여 rP2X2/3의 안정한 클론을 선별하였다. pCDNA5/TO DNA 구조체 내의 래트 P2X3을 CHO-TRex 세포에 전달감염시켜 rP2X3 안정한 세포주를 생성하였고, 500 ㎍/㎖ 하이드로마이신(Invitrogen)을 선별 항생제로 사용하였다. 이후, 전달감염된 안정한 콜로니를 기능적으로 확인하였고, 분석에 적합한 강고한 클론을 희석을 통해 클론 정제하였다.
C. 분석 프로토콜
(ⅰ) 화합물을 스크리닝하기 위한 세포내 칼슘 분석 프로토콜
6×106 세포(인간 P2X3-HEK/인간 P2X2/3-TRex293/래트 P2X2/3-TRex293/래트 P2X3 TRex-CHO)를 함유하는 냉동-바이알(cryo-vial)을 37℃ 워터 배스(water bath)에서 녹였다. 세포를 50 ㎖의 원심분리 튜브에서 20 ㎖의 해당 세포 플레이팅 배지(조성물에 대한 부록 참조)에 현탁시켰다. Trypan Blue 염료를 이용해 세포의 생존율을 체크하였다. 세척 후, 세포를 검은색 384-웰 투명 바닥의 멸균 폴리-D-리신 코팅된 플레이트에 플레이팅하였고, 각각의 웰은 30 ㎕ 세포 플레이팅 배지에서 10,000 세포(hP2X3의 경우 15,000/웰)를 함유하였다. 상기 플레이트를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다.
다음날, 분석하기 전에, 세포 플레이팅 배지를 디킨탱(decanting) 및 가벼운 탭핑(tapping)에 의해 각각의 웰로부터 제거하였다. 30 ㎕의 FLIPR 칼슘 4 염료 용액을 각각의 웰에 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 45분(hP2X3의 경우에는 60분) 동안 인큐베이션하였다. 다음에, 상기 플레이트를 분석을 위해 384 웰 FLIPR에 두기 전에 실온에서 15분 동안 평형화시켰다.
화합물을 DMSO에 용해시켰고, 2 mM의 출발 농도로 하여 11 포인트의 절반 log(3.16배) 희석에 따라 연속적으로 희석하였다. 분석을 수행하기 직전에 희석액을 분석 버퍼와 혼합하였다.
분석이 준비된 세포 플레이트의 각각의 웰에 FLIPR을 이용하여 화합물을 첨가하였고, 형광 판독물을 5분 동안 포획하여 상기 화합물의 임의의 가능한 작용제 특성을 관찰하였다. 이후, 상기 플레이트를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 EC75 농도의 해당 작용제로 자극하였고, 형광 판독물을 FLIPR에 의해 다시 5분 동안 포획하였다. 화합물의 존재시의 형광 판독물의 차이를 대조군 웰(화합물이 없는 웰)의 경우와 비교하여 상기 화합물의 억제 효능을 계산하였다. 상기 화합물의 IC50 값을 그래프 패드 프리즘(Graph pad Prism) 소프트웨어를 이용해 결정하였다.
(ⅱ) hP2X3-HEK 및 hP2X2 /3-TRex293 세포에 대한 세포 플레이팅 배지
· DMEM/F12(1:1) HAM 배지(Invitrogen; Cat# 11039
· 1X NEAA(Invitrogen; Cat#11140)
· 25 mM HEPES(Invitrogen; Cat#15630)
· 1 mM 나트륨 피루베이트(Invitrogen; Cat# 11360)
· 10% 테트라사이클린 음성 FBS(PAA; Cat# A15-209)
· 1 ㎍/㎖ 독시사이클린(Clontech; Cat#63131)[hP2X2/3-TRex293 세포의 경우에만]
(ⅲ) rP2X2 /3-TRex293 세포에 대한 세포 플레이팅 배지
· DMEM 배지(Invitrogen; Cat# 11965)
· 25 mM HEPES(Invitrogen; Cat#15630)
· 10% 테트라사이클린 음성 FBS(PAA; Cat# A15-209)
· 1 ㎍/㎖ 독시사이클린(Clontech; Cat#63131)
(ⅳ) rP2X3-CHOTRex 세포에 대한 세포 플레이팅 배지
· F-12 영양 혼합물(HAM) 1X(Invitrogen; Cat# 11765)
· 1X Glutamax™(Invitrogen; Cat#35050)
· 10% 테트라사이클린 음성 FBS(PAA; Cat# A15-209)
· 1 ㎍/㎖ 독시사이클린(Clontech; Cat#63131)
(ⅴ) 분석 버퍼 조성물
· HBSS(Invitrogen Cat#14025)
· 20 mM HEPES(Invitrogen Cat# 15630)
· 0.01% F127(Sigma Cat# P2443)
· 1.8 mM CaCl2(Sigma Cat# C5080)
· pH를 7.4로 조정
(ⅵ) 염료 용액 조성물
· 분석 버퍼 내의 1X FLIPR 칼슘 4 염료(Molecular devices Cat# R8141)
· 1.8 mM 프로베네시드(Sigma Cat# P8761)
· pH를 7.4로 조정
식 (I)의 화합물에 대한 P2X3 및 P2X2 /3 FLIPR 분석법으로부터의 데이터는 아래의 표 7에 나타나 있다.
실시예 hP2X3 hP2X2/3
1 A D
2 B
3 B C
4 A D
5 A D
6 B C
7 B D
8 A
9 B
10 A A
11 A C
12 A C
13 A C
14 B D
15 A C
16 A C
17 B
18 B C
19 A B
20 B
21 A C
22 A A
23 A C
24 A C
25 A C
26 B
27 A
28 B
29 A C
30 A C
31 A C
32 A C
33 A C
34 A A
35 A B
36 B
37 A
38 B
39 B C
40 A B
41 B
42 A B
43 A C
44 A A
45 A C
46 A B
47 A C
48 A C
49 A C
50 B
51 A A
52 A C
53 B
54 B
55 A B
56 A B
57 A B
58 A C
59 A B
60 A B
61 A B
62 A B
63 B
64 A C
65 A B
66 A B
67 B
68 A B
69 A A
70 A A
71 B
72 A C
73 B
74 A B
75 A C
76 B C
77 A C
77 B C
78 B
79 B C
80 A C
81 A B
82 A C
83 A C
84 A C
85 A B
86 A A
88 A C
89 A B
90 A C
91 A C
93 A C
94 A C
95 B
96 A D
97 A
98 A C
99 A C
100 A C
101 B C
102 A D
103 A D
104 A D
105 A C
106 A C
107 A
108 A C
109 B
110 A A
111 A A
112 A A
113 A C
114 A A
115 A B
116 A A
117 A C
118 A C
119 A C
120 B
121 A B
122 A B
123 A C
123 A B
124 A C
125 A C
126 A C
127 A C
A: IC50 = 1-100 nM
B: IC50 = >100-1,000 nM
C: IC50 = >1,000-10,000 nM
D: IC50 >10,000 nM
실시예 129: 래트에서 생체내 열 통각과민증(하그리브스 테스트) 연구
젊은 성체 연령군이고 체중이 180-200 g의 범위인 수컷 스프라그 돌리(Sprague Dawley) 래트를 본 연구에 포함시켰다. 동물들은 12시간의 명/암 사이클 하에 사료와 물을 임의로 제공하여 키웠다. 동물들은 2주 동안 연구의 시작 전에 매일 2회 각각 45-60분 동안 하드리브스 장치의 관찰 챔버에 순응하였다. 동물들은 또한 각각의 테스트 전에 15-30분 동안 상기 장치에 길들여졌다. 그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 ["A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia", Pain 32: 77-88]의 변형된 하드리브스(1998) 방법을 따르는 래트 발바닥 테스트(Ugo Basile, Italy)를 이용하여 열 통각과민증을 평가하였다.
발 움츠림 잠복기(PWL, paw withdrawal latency) 값을 측정하기 위하여, 래트 뒷발의 발바닥 표면 아래에 직접 적용되는 이동식 적외선 가열 소스에 래트를 노출시켰다. 상기 PWL은 래트가 가열 소스로부터 뒷발을 제거하는데 걸리는 시간을 초로 나타낸 것으로 정의된다. 기기의 33% IR을 사용하여 PWL을 측정하였다. 비처리 발에 대해 8-14초 사이의 기저 반응을 보이는 동물들을 본 연구에 포함시켰다. 20초의 컷오프 시간을 사용하여 조직의 손상을 방지하였다.
열 자극에 대한 PWL 값의 기저 판독 후(상기 개시된 PWL 측정), 50 ㎕의 완전 프로인트 어주번트(complete Freund's Adjuvant)(CFA - 1 ㎎/㎖ 현탁액 - Sigma, USA, Cat # F5881)를 가벼운 이소프란 마취 하에 동물의 오른쪽 뒷(동측성) 발의 발바닥 표면에 피하 주사하였다. 1 ㎖의 주사기 및 26 g1 / 2 인치의 바늘을 사용하여 주사하였다. 각각의 주사 전에 CFA 현탁액을 완전히 혼합하였다. 바늘이 발로부터 제거된 직후에 주사 부위에 가벼운 압력을 10초 동안 도입하여 주사 부위로부터 임의의 어주번트 오일이 새어 나오는 것을 방지하였다. 이후, 래트를 거처로 돌려보내 회복시켰고, 부드러운 잠자리를 유지하였다.
20-22시간의 CFA 주사 후 다음날(1일), 동물의 PWL을 기록하였다. 3회 판독의 평균을 CFA 기저 판독 전후에 대해 각각의 동물의 동측성 발의 PWL 기록으로 취하였다. CFA 주사 후 1일에 6초 이하의 PWL 값을 갖는 동물은 통각과민으로 간주하였고, 무작위로 처리군으로 하였으며, 단일 맹검 프로토콜을 따라 추가적인 테스트 세션을 위해 선택하였다.
상기 테스트 세션에서, CE 테스트 품목, 비히클(20% 폴리에틸렌 글리콜, 1% Tween™ 80, 79% 물) 및 나프록센(양성 대조군)의 경구 복용 1시간 후에 PWL을 평가하였다.
일원분산분석(one-way ANOVA)과 이후의 던넷 다중 비교 포스트-테스트(Dunnett's multiple comparison post-test)를 이용해 통계적 분석을 수행하였다. 후처리 PWL 값을 전처리 PWL 값과 비교하였고, p<0.05를 통계적으로 유의미한 것으로 간주하였다. 각각의 군은 전형적으로 8마리의 동물을 포함하였다.
본 발명의 화합물은 본 열 통각과민 통증 모델에서 효과적인 것으로 나타났다. 실시예 19의 화합물은 60 ㎎/㎏ po의 복용 후 1시간에 전처리 PWL 값에 대해 36% 복원(reversal)을 제공하는 것으로 나타났다(p<0.01). 실시예 10의 화합물은 30 ㎎/㎏ po의 복용 후 1시간에 전처리 PWL 값에 대해 32% 복원을 제공하는 것으로 나타났다(p<0.01).
실시예 130: 래트에서 포르말린 유도 통증(자동화 통각 분석기 테스트)
젊은 성체 연령군이고 체중이 200-250g의 범위인 수컷 스프라그 돌리 래트를 본 연구에 포함한다. 동물들은 12시간의 명/암 사이클 하에 사료와 물을 임의로 제공하여 키운다. 동물들은 연구일 이전에 2일 동안 매일 2회 자동화 통각 분석기(ANA)의 관찰 챔버에 45-60분 동안 순응시킨다. 연구일에, 본 연구 세트에 등록된 각각의 동물의 오른쪽 뒷발의 발바닥 표면에 금속 밴드를 붙이고, 플라스틱 관찰 챔버에 10-15분 동안 유지한다. 20% 에틸렌 글리콜, 1% Tween™ 80 시약, 79% 물 내의 식 (I)의 화합물("테스트 품목") 또는 비히클(20% 폴리에틸렌 글리콜, 1% Tween™ 80 시약, 79% 물)의 경구 처리 0.5 또는 1시간 후, 동물에 포르말린 주사를 행한다. 동물의 포르말린 주사는 50 ㎕의 2.5% 포르말린(포름알데히드 용액으로부터 신선하게 제조됨. Sigma, USA, Cat # F8775)을 오른쪽 뒷발등에 피하 주사하여 행한다. 주사 직후, 동물들을 ANA의 해당 기록 챔버로 되돌린다. 각각의 동물에 대한 움찔거림 횟수 데이터를 ANA 동작 분석 소프트웨어를 이용하여 포르말린 주사 후 1 내지 60분 동안 기록한다. 본 연구는 2개의 상(phase)으로 분석하며, 빠른 상은 포르말린 주사 후 0-10분 동안 연장되고, 2번째 상은 11-60분 동안 연장된다. 데이터를 5분 시간 빈(bin)으로 수집하고, 각각의 빈의 횟수를 더하여 상기 상의 총 횟수로 한다.
언페어드(unpaired) t 테스트를 이용해 통계적 분석을 행한다. 처리군 및 비히클 군의 총 횟수에 대한 비교를 행하고, p<0.05를 통계적으로 유의미한 것으로 간주한다. 전형적으로 각각의 테스트 품목 및 비히클 처리군에서 8마리의 동물을 사용한다.
실시예 131: 마우스에서 아세트산 유도 몸부림(writhing) 테스트
30-40 g의 스위스 알비노 마우스를 본 연구에 포함한다. 식 (I)의 화합물("테스트 품목") 또는 비히클의 경구 투여 30분 후, 1 상기 마우스에 0 ㎖/㎏의 주사 부피의 0.7% v/v 아세트산 용액을 복강내 주사한다. 테스트 물품은 20 및 60 ㎎/㎏ 사이의 용량으로 투여한다. 마우스를 개별적으로 유리 챔버에 둔다. 아세트산 투여 후, 상기 동물에서 생성된 몸부림의 횟수를 15분 동안 계수한다. 점수화의 목적으로, 몸부림은 적어도 하나의 뒷다리의 동시 스트레칭을 수반하는 배의 스트레칭으로 나타낸다.
일원분산분석과 이후의 던넷 다중 비교 포스트-테스트를 이용해 통계적 분석을 수행한다. 처리군과 비히클 사이에 몸부림의 총 횟수에 대한 비교를 행하고, p<0.05를 통계적으로 유의미한 것으로 간주한다. 각각의 군은 전형적으로 6마리의 동물을 포함한다.
실시예 X: 기니 피그에서 시트르산 유도 기침
그 개시된 내용이 인용에 의해 본 명세서에 포함되는 [Kamei, Takahashi, Yoshikawa, and Saitoh, Eur J Pharmacol 528, p 158-161 (2005); Kamei and Takahashi, Eur J Pharmacol 547, p160-164 (2006); Lewis et al., Pulm Pharmacol Ther. 20, p315-333 (2007); Leung et al., Cough 3, p 10-14 (2007)]의 시트르산 유도 기침의 기니 피그 모델을 이용하여 기침을 저해하는 능력에 대해 식 (I)의 화합물을 테스트한다. 상기 모델에서, 기침 평가의 30 내지 60분 전에 기니 피그에 경구로 또는 복강내 주사에 의해 식 (I)의 화합물("테스트 품목") 또는 비히클을 투여한다. 테스트 품목은 1 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏의 용량 범위로 투여한다. 기침 평가를 위하여, 동물을 0.4 M 시트르산 에어로졸 흡입에 10분 동안 노출시키고, 기침 반응을 숙련된 조사 관찰자 및/또는 마이크로폰에 의해 10분 당 기침의 횟수로 기록한다. 상기 모델의 변형으로서, 흡입된 시트르산 처리 이전에 동물을 흡입된 히스타민 또는 알파, 베타-메틸렌 ATP의 처리에 의해 감작시킨다.
본 명세서에 인용된 모든 공개문헌들은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 본 발명은 특정 구현예를 참조하여 개시되어 있지만, 본 발명의 사상을 벗어나지 않으면서 변형이 행해질 수 있음이 인식될 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구항의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.

Claims (45)

  1. 식 (I)의 화합물, 및 이의 전구약물, 거울상이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00151

    상기에서, R1은 H, 할로겐, C1-C6 알킬, C3-C6 사이클로알킬, CN 또는 CONH2이고;
    R2는 없거나, C1-C6 알킬 또는 아릴이고;
    R3은 없거나, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, C3-C6 사이클로알킬 또는 헤테로사이클이고;
    R4는 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 C3-C6 사이클로알킬 또는 선택적으로 치환된 아릴이고;
    R5, R6은 독립적으로 H, C1-C6 알킬 또는 C3-C6 사이클로알킬이고; 및
    R7은 CONHR8, 선택적으로 치환된 헤테로사이클 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고, 상기 R8은 H, 알킬 또는 사이클로알킬이다.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 R1은 H인 화합물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 R2는 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬인 화합물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 R3은 H인 화합물.
  5. 청구항 1에 있어서,
    상기 R1은 할로겐, C1-C6 알킬, 또는 CN인 화합물.
  6. 청구항 1에 있어서,
    상기 R7은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00152

    상기에서, X는 O 또는 H, H이고;
    R9는 H, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, CO(C1-C6 알킬), CONH2, C(NH)NH2, C(N-CN)NH2 또는 SO2NH2이고;
    R10은 H 또는 -OH로 선택적으로 치환된 알킬이고;
    R11은 H, CH2-CONH2 또는 -OH로 선택적으로 치환된 알킬 또는 할로겐이고; 및
    R12는 H 또는 CONH2이다.
  7. 청구항 1에 있어서,
    상기 R4는 선택적으로 치환된 헤테로아릴인 화합물.
  8. 청구항 1에 있어서,
    상기 R4는 선택적으로 치환된 아릴인 화합물.
  9. 청구항 1에 있어서,
    상기 R1 및 R3은 H인 화합물.
  10. 청구항 1에 있어서,
    상기 R5 및 R6은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬 또는 C3-C6 사이클로알킬인 화합물.
  11. 청구항 1에 있어서,
    상기 R5 및 R6은 독립적으로 H 또는 C3-C6 사이클로알킬인 화합물.
  12. 청구항 1에 있어서,
    상기 R1 및 R3은 H이고, R2는 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬인 화합물.
  13. 청구항 1에 있어서,
    상기 R1 및 R3은 H이고, R2는 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이며, R4는 선택적으로 치환된 헤테로아릴인 화합물.
  14. 청구항 1에 있어서,
    상기 R1 및 R3은 H이고, R2는 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬이며, R4는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고, R5 및 R6은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이거나 독립적으로 H 및 C3-C6 사이클로알킬이고, R7은
    Figure pct00153
    이며, 상기 X는 H, H이고, R9는 CONH2인 화합물.
  15. 청구항 1에 있어서,
    상기 R4는 퀴놀린, 벤조푸란, 피리딘, 벤조티오펜, 이미다조피리딘 및 인다졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 선택적으로 치환된 헤테로아릴인 화합물.
  16. 청구항 1에 있어서,
    다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    1-{4-[2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[2-이소프로필-7-(1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{7-[2-(4-클로로-페닐)-1,1-디메틸-에틸아미노]-2-이소프로필-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[2-sec-부틸-7-(1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[2-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{2-sec-부틸-7-[2-(4-클로로-페닐)-1,1-디메틸-에틸아미노]-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[2-이소부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[2-(1-에틸-프로필)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[2-페닐-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    1-{4-[1-이소프로필-4-(1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{7-[2-(4-클로로-페닐)-1,1-디메틸-에틸아미노]-1-이소프로필-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-(4-{1-이소프로필-7-[(퀴놀린-3-일메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    4-[1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-1-메틸-피페라진-2-온;
    1-{4-[1-이소부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-이소프로필-7-((S)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-sec-부틸-7-((S)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-((S)-sec-부틸)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-1-메틸-피페라진-2-온;
    1-{4-[1-((R)-sec-부틸)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-(1-에틸-프로필)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-에틸-4-[1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-2-온;
    1-{4-[1-(2-메톡시-1-메틸-에틸)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-사이클로펜틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1-(테트라히드로-피란-4-일메틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1-(테트라히드로-피란-4-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-헥실-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-{[1-(4-클로로-페닐)-사이클로부틸메틸]-아미노}-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-[1-(4-에톡시-페닐)-에틸아미노]-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-[4-(1-sec-부틸-7-{[1-(4-클로로-페닐)-사이클로부틸메틸]-아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-피페라진-1-일]-에타논;
    1-{4-[1-사이클로부틸메틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-[(S)-1-(4-에톡시-페닐)-에틸아미노]-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-디사이클로프로필메틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-(1-에틸-프로필)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-프로필아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-(1-에틸-프로필)-7-((S)-1-퀴놀린-3-일-프로필아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-프로판-1-온;
    1-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-프로판-1-온;
    1-{4-[7-(1-벤조푸란-5-일-에틸아미노)-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-(1-에틸-프로필)-7-((R)-1-나프탈렌-2-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-[1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-2-온;
    1-(4-{1-(1-에틸-프로필)-7-[1-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-프로필아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{1-sec-부틸-7-[1-(2-메틸-벤조푸란-5-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진4.6-1-일)-에타논;
    1-(4-{1-(1-에틸-프로필)-7-[1-(2-메틸-벤조푸란-5-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-(4-{1-(1-에틸-프로필)-7-[1-(4-이소프로폭시-페닐)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[1-사이클로부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-[1-사이클로부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-1-메틸-피페라진-2-온;
    1-{4-[1-에틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-[1-(1-에틸-프로필)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    1-(4-{1-sec-부틸-7-[1-(6-페닐-피리딘-3-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-(4-{1-sec-부틸-7-[1-(4-피리딘-2-일-페닐)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-(4-{1-(1-에틸-프로필)-7-[(R)-1-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[7-[1-(2-사이클로프로필-벤조푸란-5-일)-에틸아미노]-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[7-(1-벤조[b]티오펜-5-일-에틸아미노)-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-[4-(1-sec-부틸-7-{[사이클로프로필-(6-페닐-피리딘-3-일)-메틸]-아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-피페라진-1-일]-에타논;
    4-{7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1-이소프로필-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-1-메틸-피페라진-2-온;
    1-{4-[1-(1,2-디메틸-프로필)-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{1-(1-에틸-프로필)-7-[(R)-1-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논
    1-{4-[7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1-(1,2-디메틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[7-{[사이클로프로필-(6-사이클로프로필메톡시-피리딘-3-일)-메틸]-아미노}-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-{1-(1-에틸-프로필)-7-[(퀴놀린-3-일메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    1-{4-[7-{[사이클로프로필-(6-플루오로-퀴놀린-3-일)-메틸]-아미노}-1-(1-에틸-프로필)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-{7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1-이소프로필-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-((S)-sec-부틸)-7-[(사이클로프로필-이미다조[1,2-a]피리딘-6-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-((S)-sec-부틸)-7-[1-(6,7-디플루오로-퀴놀린-3-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-((S)-sec-부틸)-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-((R)-sec-부틸)-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-((S)-sec-부틸)-7-[1-(1H-인다졸-3-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-[7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1-(테트라히드로-피란-4-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-[1-((S)-sec-부틸)-7-(1-피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    ((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-[1-(1-에틸-프로필)-5-[1,2,3]트리아졸-1-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-아민;
    1-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페리딘-4-카르복시산 아미드;
    4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-모르폴린-2-카르보니트릴;
    1-{4-[1-sec-부틸-3-메틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    (1-sec-부틸-5-[1,2,4]트리아졸-1-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    (1-sec-부틸-5-테트라졸-1-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    (1-sec-부틸-5-테트라졸-2-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    4-(1-((S)-sec-부틸)-7-{[사이클로프로필-(1-에틸-1H-인다졸-5-일)-메틸]-아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-피페라진-1-카르복시산아미드;
    1-{4-[1-((S)-sec-부틸)-7-(2-히드록시-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[1-((S)-sec-부틸)-7-(2-메톡시-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-{1-((S)-sec-부틸)-7-[(사이클로프로필-퀴녹살린-2-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-sec-부틸-7-[(R)-1-(7-메틸-이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)-에틸아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    4-{1-(1-사이클로프로필-에틸)-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 아미드;
    1-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[3-브로모-1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보니트릴;
    1-{4-[1-sec-부틸-3-사이클로프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[3-브로모-2-이소프로필-7-(1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-2-이소프로필-7-(1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복시산 아미드;
    1-{4-[2-이소프로필-3-메틸-7-(1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{3-브로모-7-[2-(4-클로로-페닐)-1,1-디메틸-에틸아미노]-2-이소프로필-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[3-브로모-2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[3-클로로-2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-{4-[3-브로모-1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    1-(4-{7-[2-(4-클로로-페닐)-1,1-디메틸-에틸아미노]-2-이소프로필-3-메틸-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-에타논;
    1-{4-[2-이소프로필-3-메틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보니트릴;
    5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-1-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보니트릴;
    1-{4-[3-브로모-2-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    5-(4-아세틸-피페라진-1-일)-2-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보니트릴;
    1-{4-[3-사이클로프로필-2-이소프로필-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-일}-에타논;
    4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라즈4.53인-1-설폰산 아미드;
    2-(4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-일)-아세트아미드;
    4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-N'-시아노피페라진-1-카르복시미드아미드;
    4-(1-sec-부틸-7-{[(R)-메틸(퀴놀린-3-일)메틸]아미노}-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일)-N'-시아노피페라진-1-카르복시미드아미드;
    4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페라진-1-카르복사미딘;
    2-{4-[1-sec-부틸-7-((R)-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피라졸-1-일}-에탄올;
    [1-sec-부틸-5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    [1-sec-부틸-5-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    {1-sec-부틸-5-[1-(2-플루오로-에틸)-1H-피라졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일}-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    (R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1-(테트라히드로-피란-4-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-아민;
    4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피페리딘-1-카르복시산 아미드;
    [1-sec-부틸-5-(1H-피라졸-4-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    2-(4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피라졸-1-일)-아세트아미드;
    2-(4-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-피라졸-1-일)-에탄올;
    2-{1-((S)-sec-부틸)-5-[1-(2-플루오로-에틸)-1H-피라졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일아미노}-2-퀴놀린-3-일-에탄올;
    {1-sec-부틸-5-[1-(2-플루오로-에틸)-1H-피라졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일}-[(R)-1-(7-메틸-이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)-에틸]-아민;
    4-[1-((S)-sec-부틸)-7-(2-히드록시-1-퀴놀린-3-일-에틸아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일]-피페라진-1-카르복시산 아미드;
    1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-카르복시산 사이클로프로필아미드;
    [1-sec-부틸-5-(5-메틸-[1,3,4]옥사디아졸-2-일)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일]-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민;
    1-{1-sec-부틸-7-[((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아미노]-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-일}-1H-[1,2,3]트리아졸-4-카르복시산 아미드; 및
    (1-sec-부틸-5-피리다진-3-일-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-((R)-사이클로프로필-퀴놀린-3-일-메틸)-아민.
  17. 청구항 1의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  18. 청구항 1의 화합물을 포함하는 키트.
  19. 청구항 17의 약학적 조성물을 포함하는 키트.
  20. 치료적 유효량의 청구항 1의 화합물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 P2X3 또는 P2X2 /3 수용체 중 하나 또는 모두를 조절하는 방법.
  21. 청구항 20에 있어서,
    상기 조절은 P2X3 또는 P2X2 /3 수용체 중 하나 또는 모두의 억제를 포함하는 방법.
  22. 치료적 유효량의 청구항 1의 화합물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 통증을 치료하는 방법.
  23. 청구항 22에 있어서,
    상기 통증은 통각수용성, 기능장애성, 특발성, 신경성, 체성, 중추성, 내장성, 염증성, 또는 절차성 통증인 방법.
  24. 청구항 22에 있어서,
    상기 통증은 기도, 방광 또는 내장 기관의 기능장애에 의해 초래되는 방법.
  25. 청구항 22에 있어서,
    상기 통증은 편두통, 요통, 목 통증, 부인과 통증, 분만전 통증, 분만 통증, 정형외과 통증, 뇌졸중 후 통증, 수술 후 통증, 대상포진 후 신경통, 겸상 세포 질병(sickle cell crises), 간질성 방광염, 비뇨기과 통증, 치과 통증, 두통, 상처 통증, 수술 통증, 봉합, 골절 세팅 통증, 또는 생검에 따른 통증인 방법.
  26. 청구항 22에 있어서,
    상기 통증은 염증, 신경 압착, 또는 종양이 조직에 침입한 결과로서 조직이 팽창된 결과인 기계적 힘으로 인한 것인 방법.
  27. 청구항 22에 있어서,
    상기 통증은 식도암, 대장염, 방광염, 과민성 장 증후군 또는 특발성 신경병증에 의해 초래되는 방법.
  28. 청구항 23에 있어서,
    상기 체성 통증은 뼈, 관절, 근육, 피부 또는 결합 조직 유래의 통증을 포함하는 방법.
  29. 청구항 23에 있어서,
    상기 중추성 통증은 뇌의 트라우마, 뇌졸중 또는 척수 손상 유래의 통증을 포함하는 방법.
  30. 청구항 23에 있어서,
    상기 내장성 통증은 기도, 위장관, 췌장, 요로 또는 생식 기관 유래의 통증을 포함하는 방법.
  31. 청구항 23에 있어서,
    상기 기능장애성 통증은 류마티스성 증상, 긴장성 두통, 과민성 장 질병 또는 홍반통증(erythermalgia) 유래의 통증을 포함하는 방법.
  32. 청구항 23에 있어서,
    상기 통각수용성 통증은 절단, 타박상, 골절, 압궤 손상, 화상, 트라우마, 수술, 분만, 염좌, 부딪힘, 주사, 치과적 절차, 피부 생검 또는 막힘(obstruction) 유래의 통증을 포함하는 방법.
  33. 청구항 23에 있어서,
    상기 신경성 통증은 트라우마, 수술, 추간판의 탈출, 척수 손상, 당뇨, 헤르페스 조스터의 감염, HIV/AIDS, 말기 암, 절단수술, 손목 터널 증후군, 만성 알코올 남용, 방사선에 대한 노출, 또는 신경독성 치료제의 의도치 않은 부작용으로 인한 통증을 포함하는 방법.
  34. 청구항 23에 있어서,
    상기 염증성 통증은 관절 손상, 근육 손상, 힘줄 손상, 수술적 절차, 감염 또는 관절염으로 인한 통증을 포함하는 방법.
  35. 청구항 23에 있어서,
    상기 절차성 통증은 의학적, 치과적 또는 수술적 절차 유래의 통증을 포함하는 방법.
  36. 청구항 35에 있어서,
    상기 절차적 통증은 주사, 종기의 드레이닝(draining), 수술, 피부과적, 치과적 절차, 안과적 절차, 관절경 또는 미용 수술과 연관되는 수술후 통증인 방법.
  37. 청구항 22에 있어서,
    상기 통증은 암으로부터 초래되는 방법.
  38. 청구항 37에 있어서,
    상기 암은 골암인 방법.
  39. 청구항 22에 있어서,
    상기 투여는 경구, 근육내, 직장, 피부, 피하, 국소, 경피, 설하, 코, 질, 경막외, 척추강내, 방광내 또는 안구 투여인 방법.
  40. 치료적 유효량의 청구항 1의 화합물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 호흡기 기능장애를 치료하는 방법.
  41. 청구항 40에 있어서,
    상기 호흡기 기능장애는 기관지의 과다활성, 기관지수축, 기관지경련, 과다분비, 기침, 기침 과민감 증후군, 천명, 호흡장애, 숨막힘 및 흉부 긴장 중 하나 이상인 방법.
  42. 청구항 40에 있어서,
    상기 호흡기 기능장애는 특발성 폐 섬유증(IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 상기도 감염, 간질성 폐 질환(ILD), 후비루(post-nasal drip), 기관지염, 위식도 역류 질환(GERD), ACE(Angiotensin Converting Enzyme) 억제제를 이용한 치료 또는 흡연에 의해 초래되는 방법.
  43. 청구항 41에 있어서,
    상기 기침은 급성 기침, 아-급성 기침, 만성 기침, 병리적 기침, 또는 기침에 대한 욕구인 방법.
  44. 청구항 41에 있어서,
    상기 기침은 특발성 폐 섬유증(IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 상기도 감염, 간질성 폐 질환(ILD), 후비루, 기관지염, 위식도 역류 질환(GERD), ACE(Angiotensin Converting Enzyme) 억제제를 이용한 치료 또는 흡연에 의해 초래되는 방법.
  45. 청구항 40에 있어서,
    상기 투여는 경구, 근육내, 직장, 피부, 피하, 국소, 경피, 설하, 코, 질, 경막외, 척추강내, 방광내, 안구 또는 흡입 투여인 방법.
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