KR20190048445A - 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 우유에서 미세소포를 추출하는 방법 및 이의 방법으로 추출한 미세소포체를 포함하는 면역기능 강화용 건강기능성식품 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 우유에서 미세소포를 추출하는 방법 및 이의 방법으로 추출한 미세소포체를 포함하는 면역기능 강화용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
세포외 미세소포체는 체외 및 살아있는 유기체에서 세포에 의해 자연적으로 방출되는 막 모양의 나노 크기의 세포 기관이다. 미세소포는 혈장, 소변, 모유, 양수 등 넓은 범위에서 존재하며, 생체 내에서 중요한 기능을 가지고 있다. 특히, 기능성 단백질, RNA 및 항원을 포함하는 세포외 미세소포체는 세포내의 소통의 새로운 방식으로 사용된다.
우유는 신생 포유동물의 유일한 영양원으로서 포유동물의 종류, 포유시기 및 모체의 특성에 따라 그 영양성분이 차이가 난다. 우유에는 단백질, 지방, 탄수화물의 영양균형이 우수하며 인간의 생존 필요한 미네랄, 비타민, 리보플라민 등 필요 영양성분도 다량 함유된 건강 식품이다. 이러한 관심증대와 함께 최근 체액 중 모유 내에 면역증진과 관련되는 마이크로RNA의 존재가 보고되면서 모유 내 존재하는 중요 마이크로RNA를 분석하고자 하는 시도가 이루어지고 있다. 최근 Kosaka 등(2010)은 포유시기별(0-6개월 vs. 6개월 이상) 모유를 대상으로 miRNA의 분포를 분석하고 miR-181a, miR-17, miR-155, miR-92같은 모유에 존재하는 특이적인 면역 관련 miRNA를 선발하였다. 유성분 내에 존재하는 마이크로RNA는 단독으로 존재하지 않고 엑소좀과 유사한 미세소포체로 피복되어 있어 인체 소화기관에 통과시 RNase와 낮은 pH 등의 다양한 환경에서도 저항성을 가지고 있으며, 안정적으로 영유아의 장내에 도달하게 되어 특이적인 면역 증강활성이 나타나는 것으로 보고되어 있다. 면역 증강활성이 있는 마이크로RNA를 피복하고 있는 미세소포체를 우유에서 최적으로 분리하는 방법의 연구가 필요하다.
따라서, 본 발명자들은 우유에서 미세소포체를 최적으로 추출하는 방법을 개발하기 위해 노력하던 중, 135000G 에서 초 원심분리를 할 경우 우유에서 높은 수율의 micro RNA를 함유하는 미세소포체를 분리하는 방법을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명자들은 우유를 135000G 에서 초 원심분리를 할 경우 우유에서 높은 수율의 micro RNA를 함유하는 미세소포체를 분리하는 방법을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 하기의 단계를 포함하는 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법을 제공하는 것이다.
i) 우유를 100000 G에서 1시간 동안 원심 분리하는 단계;
ii) 상기 원심 분리가 끝난 우유의 펠렛을 제거하는 단계; 및
iii) 상기 펠렛이 제거된 우유의 상등액을 130000 G 내지 140000 G에서 추가로 초 원심 분리하는 단계.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기의 방법으로 추출한 미세소포체를 포함하는 면역기능 강화용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법을 제공한다.
i) 우유를 100000 G에서 1시간 동안 원심 분리하는 단계;
ii) 상기 원심 분리가 끝난 우유의 펠렛을 제거하는 단계; 및
iii) 상기 펠렛이 제거된 우유의 상등액을 130000 G 내지 140000 G 에서 추가로 초 원심 분리하는 단계.
본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 우유는 우유 또는 초유 일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기의 방법으로 추출한 미세소포체를 포함하는 면역기능 강화용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 건강식품은 우유 일 수 있다.
본 발명의 우유에서 미세소포를 추출하는 방법은 높은 순도 및 수율의 microRNA를 포함하는 미세소포체를 추출하는 효과가 있다.
도 1은 본 발명에서 수행되었던 미세소포체를 분리하는 방법의 모식도이다.
도 2은 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 5로 분리된 미세소포체의 miRNA를 전기 페로그램으로 분석한 결과이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 5로 분리된 미세소포체의 miRNA를 qRT-PCR을 이용하여 분석한 결과이다.
도 4는 실시예 1 및 비교예 1 내지 5로 분리된 미세소포체에서 웨스턴 블랏을 이용하여 미세소포체의 마커 단백질 CD9의 검출 결과이다.
도 5은 실시예 1를 사용하여 분리된 미세소포체에 대한 SEM 이미지 결과 및 RAW264.7 세포에 의한 PKH로 표지 된 미세소포체의 내재화를 확인한 결과이다.
도 2은 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 5로 분리된 미세소포체의 miRNA를 전기 페로그램으로 분석한 결과이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 5로 분리된 미세소포체의 miRNA를 qRT-PCR을 이용하여 분석한 결과이다.
도 4는 실시예 1 및 비교예 1 내지 5로 분리된 미세소포체에서 웨스턴 블랏을 이용하여 미세소포체의 마커 단백질 CD9의 검출 결과이다.
도 5은 실시예 1를 사용하여 분리된 미세소포체에 대한 SEM 이미지 결과 및 RAW264.7 세포에 의한 PKH로 표지 된 미세소포체의 내재화를 확인한 결과이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명자들은 다양한 방법으로 우유에서 미세소포체를 분리하여, 우유에서 높은 수율 및 순도의 mircro RNA를 포함하는 미세소포체를 추출하는 최적의 방법을 연구하였다.
본 발명자들은 1) 100,000g 에서 1시간 원심 분리 (비교예 1) 2) 100,000 g에서 1시간 원심 분리 후 상등액을 135,000 g에서 초 원심분리 (실시예 1) 3) lactic acid를 이용하여 화학적 침지 후 100,000 g에서 1시간 원심 분리 후 상등액을 135,000 g에서 초 원심분리 (비교예 2) 4) EDTA를 이용하여 화학적 침지 후 100,000 g에서 1시간 원심 분리 후 상등액을 135,000 g에서 초 원심분리 (비교예 3) 5) ExoQuick™를 이용하여 화학적 침지후 1,500g에서 30분간 원심분리 (비교예 4) 6) 135,000 g에서 1 시간 동안 초 원심분리 후, OptiPrep ™ 밀도 구배용액을 이용해서 분리(비교예 6), 총 6가지 방법으로 우유에서 미세소포체를 추출하였다 (도 1).
상기의 방법으로 추출한 미세소포체의 small RNA 패턴은 거의 비슷했지만, 화학적 침지를 통한 방법(lactic acid, EDTA, ExoQuick™ 및 OptiPrep ™ 밀도 구배용액)보다 초 원심분리만을 하는 방법이 미세소포체의 miRNA 수율이 더 높은 것으로 나타났다 (도 2). 또한 미세소포체 기능을 평가하고, 분리되는 동안 공친된 단백질의 형태로 오염되지 않은 비 소포성 생체재료의 높은 오염시킬 위험이 적은 지표로서 RNA : 단백질 비율은 2) 100,000 g에서 1시간 원심 분리 후 상등액을 135,000 g에서 초 원심 분리한 미세소포체에서 높은 것으로 나타났다 (도 2).
상기의 여섯 가지 방법으로 추출한 미세소포체에서, 미세소포체의 바이오마커로서 CD 9을 웨스턴 블랏으로 검정한 결과 OptiPrep ™를 제외한 모든 방법에서 CD 9이 양성이었다.
2) 100,000 g에서 1시간 원심 분리 후 상등액을 135,000 g에서 초 원심 분리한 미세소포체의 세포상의 흡수를 알아보기 위해, 미세소포체에 PKH라벨을 부착한 뒤 RAW264.7 세포와 함께 배양한 결과, 미세소포체가 RAW264.7에 효과적으로 흡수 되었다는 것을 알 수 있었다 (도 5).
본 발명은 하기의 단계를 포함하는 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법을 제공한다.
i) 우유를 100000 G에서 1시간 동안 원심 분리하는 단계;
ii) 상기 원심 분리가 끝난 우유의 펠렛을 제거하는 단계; 및
iii) 상기 펠렛이 제거된 우유의 상등액을 130000 G 내지 140000 G 에서 추가로 초 원심 분리하는 단계.
상기 iii) 단계에서 초 원심 분리는 130000 G 내지 140000 G 속도로, 가장 바람직하게 135000G 속도로 수행 될 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 우유는 우유 또는 초유 일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기의 방법으로 추출한 미세소포체를 포함하는 면역기능 강화용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 건강식품은 우유 일 수 있다. 상기 우유로부터 추출한 미셋소포체를 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 유제품, 음료, 껌, 차, 비타민 단일제, 건강보조 식품류 등이 있으며 가장 바람직하게는 유제품일 수 있다. 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
또한, 면역기능 강화를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다. 본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 꾸지뽕나무 열매 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 우유로부터 추출한 미세소포체는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 미세소포체 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
[
실시예
1] 우유에서 미세소포체를 추출하는 최적의 방법 (
Conventional
method 2)
10 ml의 우유를 100,000 g에서 1 시간 동안 원심 분리하였다. 상기 원심 분리한 우유의 펠렛을 제거 한 후, 상등액을 135,000 g에서 추가로 초 원심 분리한 뒤 펠렛을 PBS에 재 현탁하고 같은 조건에서 두 번 세척하였다.
[
비교예
1] 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법 (
Conventional
method
1)
10 ml의 우유를 4℃에서 90분 동안 100,000 g의 속도로 초원심 분리하였다. 수득된 펠렛을 PBS에 재 현탁하고 동일한 조건에서 다시 2회 초 원심 분리하여 두 번 세척하였다.
[
비교예
2]
유산(Lactic acid)를
이용하여 미세소포체를 추출하는 방법
10 ml의 우유를 젖산으로 pH 4.6으로 낮추고 얼음 위에서 15분간 반응 시켰다. 100,000 g에서 1 시간 동안 원심 분리하였다. 상기 원심 분리한 우유의 펠렛을 제거 한 후, 상등액을 135,000 g에서 1시간 동안 초 원심 분리하여 추가 분리하였다. 생성 된 펠릿을 PBS에 재 현탁시키고 동일한 속도로 2 회 초 원심 분리하여 펠릿을 세척 하였다. 그 후 펠렛을 200 ㎕의 PBS에 재현 탁하고 추가 분석을 위해 -80 에서 보관하였다. 산성화는 이전에 미세 소포 질에 영향을 미치지 않는 것으로 밝혀 졌으므로 (Hata et al, 2010), 이 방법에 대해 미세 소포에 대한 부정적인 영향은 없을 것으로 사료된다.
[
비교예
3]
EDTA를
이용하여 미세소포체를 추출하는 방법
10 ml의 우유에 10 밀리리터의 EDTA를 추가한 뒤 얼음 위에서 15분간 반응 시켰다. 100,000 g에서 1 시간 동안 원심 분리하였다. 상기 원심 분리한 우유의 펠렛을 제거 한 후, 상등액을 135,000 g에서 1시간 동안 초 원심 분리하여 추가 분리하였다. 생성 된 펠릿을 PBS에 재 현탁시키고 동일한 속도로 2회 초 원심 분리하여 펠릿을 세척 하였다. 그 후 펠렛을 200 ㎕의 PBS에 재현 탁하고 추가 분석을 위해 -80 에서 보관했다.
[
비교예
4]
ExoQuick
™를 이용하여 미세소포체를 추출하는 방법
10 ml의 우유에 2 ml의 ExoQuick ™ 용액과 혼합한 뒤 4 ℃에서 밤새 반응 시켰다. 그 후 상기 용액을 상온에서 30 분 동안 1,500g에서 원심 분리하고 상등액을 제거 하였다. 펠릿을 1,500g에서 5 분 동안 원심 분리하여 미량의 유체를 제거 하였다. 그 다음, 펠렛을 10 mL의 PBS에 재 현탁시키고 90 분 동안 135,000 g에서 초 원심 분리시켰다.
[
비교예
5]
OptiPrep
™ 밀도
구배용액을
이용하여 미세소포체를 추출하는 방법
초유 시료를 135,000g에서 1 시간 동안 초 원심 분리하여 분리하여 미생물 샘플을 분리했습니다. 펠렛을 500?L의 PBS에 재현 탁하고, 상기 미정제 시료를 자당 구배 용액 (sucrose gradient solution) 위에 놓고 16 시간 동안 원심 분리 하였다. 구배(gradient)는 OptiPrep ™의 원액을 희석하여 생성되었다. 40% 이오딕사놀 (iodixanol) 용액 3 ml를 넣고 20 %와 10 % 용액 3 mL와 5 % 용액 2.5 mL (Tauro et al., 2012)를 조심스럽게 겹쳐 구배(gradient)를 만들었다. 원심 분리 후 12 개의 개별 1 mL 구배 분획을 수동으로 수집했다 (상단 - 하단 수집에 의해 밀도가 증가 함). 이 방법을 사용할 때 미세 소포가 가장 풍부한 것으로 밝혀진 (Lobb et al., 2015) 분획 7 (밀도 1.11g / mL에 상응 함)을 별도의 미세 원심 분리 튜브에 수집 하였다. 그런 다음 PBS에 재 현탁하고 1 시간 동안 135,000g에서 2 번 세척하여 최종 미세소포체 펠렛을 얻었다.
[
실험예
1]
RNA의
분석
상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 5의 방법으로 추출한 미세소포체의 전체 RNA를 miRNeasy Serum / Plasma Kit (QIAGEN)를 사용하여 추출하였다. Nanodrop 분광 광도계 (Optizen-NanoQ, Mecasys Co., Korea)에서 흡광도 (A260 / 280)를 측정하여 RNA 수율 및 순도를 확인 하였다. 샘플의 단백질 수준은 Bradford 분석 (Bio-Rad)으로 측정되었습니다. 분석을 위한, 표준 곡선은 소 혈청 알부민을 사용하여 얻어졌다. 실시예 1 및 비교예 1 내지 5의 방법으로 추출한 미세소포체의 전체 RNA 및 프로테인의 수율 하기 표 1과 같다.
| 방법 | 총 miRNA 수율 (ng) | 단백질 수준(mg/ml) |
| 비교예 1 | 7800 | 5.142 |
| 실시예 1 | 9120 | 4.669 |
| 비교예 2 | 5660 | 3.042 |
| 비교예 3 | 5840 | 0.1487 |
| 비교예 4 | 9330 | 17.1777 |
| 비교예 5 | 985 | 0.0603 |
[
실험예
2]
Bioanalyser를
이용한
small
RNA
분석
Small RNA Kit (Agilent) 및 Bioanalyser를 사용하여 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 5의 방법으로 추출한 미세소포체의 전체 RNA무결성 및 miRNA 함량을 측정했다. Bioanalyser의 Electroherograms 및 miRNA 농도 데이터를 사용하여 여러 가지 방법을 비교했다. 제조사의 프로토콜에 따라 RNA 1 마이크로 리터를 RNA 6000 나노 키트 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA)를 사용하여 Agilent 2100 Bioanalyzer로 분석했다. 실시예 1 및 비교예 1 내지 5의 방법으로 추출한 미세소포체는 small RNA에 대해서 비슷한 패턴을 보였다 (도 2A). 비교예 1 및 실시예 1은 가장 높은 small RNA 수율을 가진다. 도면에는 없지만, 실시예 2는 100,000g 원심 분리의 초기 펠렛이 상당량의 미세소포체를 함유하기 때문에 약간은 낮은 small RNA %를 가지고 있다. 도 2B와 같이 초 원심분리를 한 비교예 1 및 실시예 1이 비교예 2 내지 5보다 미세소포체성 miRNA 수율이 더 높았다. 이는 초 원심 분리기가 화학 기반 침전 방법과 비교하였을 때 미세소포체의 microRNA의 더 큰 수율을 가져온다는 것을 보여준다. RNA : 단백질 비율은 미세소포체 기능을 평가하기 위해 in vivo 및 in vitro의 미세소체의 응용에 있어서 중요한 요소이며, 분리되는 동안 공친된 단백질의 형태로 오염되지 않은 비 소포성 생체재료의 높은 오염시킬 위험이 없다. 따라서 본 발명자들은 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 4의 RNA : 단백질 비율을 측정한 결과, 실시예 1이 비교예1 및 비교예 4보다 높은 RNA : 단백질 비율을 가진다 (도 2C).
[
실험예
3] 분리된 미세소포체에서 발견된
miRNA
분획의 상대적 발현을 위한 qPCR의 수행
상기의 여섯 가지 방법으로 추출한 미세소포체로부터 추출한 총 RNA를 miScript II RT kit를 사용하여 제조사 지침 (Qiagen)에 따라 cDNA를 만들었다. qPCR은 miScript SYBR Green PCR Kit가있는 StepOne Plus Real Time PCR 시스템 (Applied Biosystems, USA)을 사용하였다. 임계주기 (CT 값)는 PCR 반응에서 개별 miRNA 농도의 상대적 측정이며 낮은 CT 값은 높은 발현을 나타낸다. 4 개의 검출 가능한 미세소포체성 miRNA에 대한 qPCR 값을 Cel_miR_39 (대조 miRNA에서의 스파이크)로 정규화하고, 델타 Ct 값을 상이한 방법으로 미세 소포에 대해 그래프로 나타냈다. miR-200c는 가장 낮은 delta CT를 가지고 있으며, miR-155는 지속적으로 낮은 CT 값을 보였으나 우유의 미세소포체 분획에서는 풍부하게 보였다.
[
실험예
4]
웨스턴
블랏
분리된 소포체의 순도 평가 및 분리된 소포체의 존재를 확인하기 위해, 세포외 미세세포체의 바이오마커인 CD9 단백질을 웨스턴 블랏을 이용하여 확인하였다. 웨스턴 블랏은 공지된 기술을 바탕으로 수행되었다 (Cvjetkovic et al. , 2014). 간단히, 샘플은 프로테아제 억제제 (Cell Biolabs, San Diego, CA, USA)를 함유하는 방사 면역 침전 분석 (RIPA)을 사용하여 균질화 하였다. 동량의 단백질을 함유하는 부피를 환원시키는 Laemmli 완충액과 혼합 하였다. 단백질은 4-20 % Tris- 글리세라이드 SDS 폴리아크릴아미드겔 (Bio-Rad)에서 분리되었다. 단백질을 폴리비닐리덴디 플루오라이드 막 (Pall Life Sciences) 상에 흡착시켰다. 막은 5 % 탈지유로 블로킹 한 후 1 차 항체 (anti-CD9 [1 : 500], Invitrogen)에서 실온에서 1 시간 동안 배양하고, 블롯을 TBS-T (0.05 % Tween을 함유하는 TBS 완충액 각 세척 당 20 분, 15 분) 한 후 실온에서 1 시간 동안 HRP-접합 된 항체를 항온 처리 하였다. 멤브레인을 TBS-T에서 3 회 다시 세척하고, 신호는 이미징장비 (C-DiGit® Blot Scanner, Li-COR)에 의해 Amersham ™ enhanced chemiluminescence 키트 (GE Healthcare Companies)를 사용하여 시각화되었다. 실시예 1 및 비교예 1 내지 4의 방법으로 분리한 미세소포체는 모두 CD9의 양성이었으며, 미세소포체를 포함하고 있었다 (도 5).
[
실험예
5]
세포상
미세소포체의 흡수
미세소포체는 세포 막 라벨 (시그마 알드리치, 세인트 루이스, 미주리)에 대한 PKH67 녹색형광셀 링커 키트를 사용하여 스테인드 되었다. 표지된 미세 소포를 37 에서 RAW264.7 세포와 함께 배양 하였다. 형광 마이크로 스코피를 사용하여 표지 된 미세 소포의 세포 흡수를 측정 하였다. 세포를 24웰 플레이트에서 104 세포/cm2의 속도로 접종하고 20㎍의 단백질과 동등한 미세 소포로 처리 하였다. SEM 이미징을 위해, 마이크로 소포를 2 % 파라 포름 알데히드에서 실온에서 15 분 동안 고정시켰다. 고정 된 시료의 방울을 완전히 실리콘 칩 위에 놓고 이미징 전에 공기 건조시켰다. 도 5는 실시예 2를 사용하여 추출된 미세소포체를 보여준다. 현미경을 사용하여 RAW264.7 세포에서 PKH 라벨 미세소포체를 본 결과 미세소포체가 효과적으로 흡수 되었다는 것을 알 수 있었다 (도 5).
Claims (4)
- i) 우유를 100000 G에서 1시간 동안 원심 분리하는 단계;
ii) 상기 원심 분리가 끝난 우유의 펠렛을 제거하는 단계; 및
iii) 상기 펠렛이 제거된 우유의 상등액을 130000 G 내지 140000 G 에서 추가로 초 원심 분리하는 단계;
를 포함하는 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법. - 제 1항에 있어서, 상기 우유는 우유 또는 초유인, 방법.
- 제 1항의 방법으로 추출한 미세소포체를 포함하는 면역기능 강화용 건강기능식품 조성물.
- 제 3항에 있어서, 상기 건강기능식품은 우유인, 건강기능식품 조성물.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170143405A KR20190048445A (ko) | 2017-10-31 | 2017-10-31 | 우유에서 미세소포체를 추출하는 방법 |
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|---|---|
| KR20190048445A true KR20190048445A (ko) | 2019-05-09 |
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ID=66545967
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| KR (1) | KR20190048445A (ko) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110283776A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-09-27 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | 一种胞外囊泡的分离方法 |
| KR20210044382A (ko) * | 2019-10-15 | 2021-04-23 | 전주대학교 산학협력단 | 목장 원유 유래 엑소좀을 포함하는 골밀도 강화 또는 골다공증 치료용 조성물 |
| KR20210066750A (ko) * | 2019-11-28 | 2021-06-07 | 한국과학기술연구원 | 밀크 엑소좀의 새로운 용도 |
| WO2022146746A1 (en) * | 2020-12-31 | 2022-07-07 | Abbott Laboratories | Method for improving joint health by administering bovine milk-derived exosomes |
| CN114901251A (zh) * | 2019-12-27 | 2022-08-12 | 庆熙大学校产学协力团 | 包含牛乳外泌体的用于增强皮肤弹性及改善皱纹的组合物 |
-
2017
- 2017-10-31 KR KR1020170143405A patent/KR20190048445A/ko not_active Application Discontinuation
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