KR20190043381A - 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 함유하는 피부노화방지용 또는 피부미백용 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 아가위 열매 추출물이 내포된 나노입자를 함유하는 피부노화방지용 또는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 매우 뛰어난 피부노화방지능과 피부미백능을 발휘한다.

Description

내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 함유하는 피부노화방지용 또는 피부미백용 화장료 조성물 {Cosmetics for anti-aging or whitening of skin with nanopaticle of water extract of Crataegi fructus fruit}
본 발명은 피부노화방지 또는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 함유하여 매우 뛰어난 피부노화방지 또는 피부미백 효능을 발휘하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 대기의 오염이 심각해짐에 따라 오존층의 파괴가 가속화되고 있고, 자외선으로부터 깨끗한 피부를 지키기 위한 노력이 남성과 여성을 불문하고 높아지고 있다. 따라서 미백 효과가 있는 향장품에 대한 인기는 날로 높아지고 있다. 유해한 화학 성분을 대체할 수 있는 천연물을 이용한 기능성 화장품이 주목받고 있는 것이다. 학계에서는 기능성 성분과 항산화 물질이 함유된 열매나 식물을 개발하는 연구가 활발히 진행되고 있다. 최근의 연구에 의하면 아가위 열매는 다양한 질병의 위험을 감소시키는데 크게 기여한다고 보고되고 있다. 이러한 이유는 과실 내에 함유된 수많은 생리활성 물질 때문일 것이다.
아가위(Crataegi fructus)는 우리나라 각지의 산야와 계곡에서 자생하는 산사나무(Crataegus pinnatifida Bunge) 및 동속 근연식물의 성숙한 과실로서 장미과(Rosacease)에 속하며, 성분으로는 시트르산, 마스리닌산, 석신산, 클로로겐산 등의 유기산과 퀘르세틴, 퀘르시트린, 에피카테킨, 루틴 등의 플라보노이드 화합물을 함유하며, 비타민과 카로틴이 풍부하다. 특유의 향긋한 냄새와 단맛 및 신맛을 가지고 있고, 건위, 소화, 수렴, 진통, 살균, 살충에 효능이 뛰어나고 숙취에도 좋은 효과가 있으며, 트리글리세리드의 대사능력을 좋게 하고, 저밀도지질단백질(LDL)의 대사를 향상시키는 등 지질대사 개선에 뛰어난 효능이 있다.
한편, 일반적 물질은 나노미터 (10-9 m) 스케일에서 새로운 물리화학적 특성을 나타내게 되고, 이러한 특성들을 잘 활용하여 기존에 구현하지 못했던 많은 기술적 성과들을 얻을 수 있다. 나노입자는 인체에 쉽게 침투할 수 있기 때문에 순환을 통하여 각기 다른 신체 부위로 전달되며, 특히 100 ㎚ 이하의 소수성 표면을 갖는 리포솜은 분자성 약물의 운반을 용이하게 하여 세포에 대한 친화성이 증가하게 된다.
한편, 일반적으로 수용성 성분은 용매에 이온상태로 존재하여 그 활용성이 높을 것으로 기대된다. 하지만, 인체 피부의 내피세포는 인지질로 구성되어 있어 수용성 성분이 침투하기 어려운 구조로 되어 있다. 따라서 수용성 물질의 세포내 침투 효율 향상을 위해서 활성물질을 유상이 포집한 리포솜 형태로 제조하고 이를 생체에 적용시켜 높은 침투력 및 생체활용성을 나타내고자 하는 연구가 많이 진행되고 있다.
하지만, 아직까지 아가위 열매 추출물의 나노입자를 이용한 화장료에 대한 연구 보고는 없다. 이에 아가위 열매 추출물의 나노입자를 활용한 화장료에 대한 개발이 필요한 실정이다.
대한민국 등록특허 제10-1415697호(등록일자 2014.06.30)에는, 산사(아가위) 및 진피의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 또는 지질 관련 대사성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물이 기재되어 있다. 대한민국 공개특허 제10-2010-0007003호(2010.01.22)에는, 산사자(아가위) 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용조성물이 기재되어 있다.
본 발명에서는 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 이용하여, 매우 뛰어난 피부노화방지와 피부미백 효능을 발휘하는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 산화로 말미암은 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 나노입자는, 바람직하게 레시틴 또는 젤라틴으로 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 아가위 열매 추출물은, 바람직하게 추출용매를 물로 하여, 50~110℃의 추출온도에서 22~26시간 동안 추출한 것일 수 있다.
한편, 본 발명은 레시틴 또는 젤라틴을 녹이는 단계 (a); 및 상기 단계 (a) 후, 액상의 아가위 열매 추출물을 넣고 초음파 분산기로 균질화시켜 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 제조하는 단계 (b);를 포함하는 것을 특징으로 하는 아가위 열매 추출물 함유 나노입자의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 액상의 아가위 열매 추출물은, 바람직하게 아가위 열매 추출물 분말 45~55 mg을 증류수에 0.5~1.5 ㎎/㎖ 농도로 녹일 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 단계 (b)의 균질화는, 바람직하게 1~3시간 동안 수행할 수 있다.
본 발명의 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자는 세포 내 침투 효율이 매우 우수하여 일반적인 아가위 열매 추출물보다 탁월한 피부노화방지 및 피부미백효능을 나타낸다.
도 1은 투과전자현미경(transmission electron microscope,TEM)으로 촬영한 아가위 열매 추출물 나노입자이다.
도 2는 제조된 아가위 열매 추출물 레시틴 나노입자를 나노입자분석기(Dynamic Light Scattering, DLS)로 분석한 결과이다.
도 3은 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 세포독성 실험 결과이다.
도 4는 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정 실험 결과이다.
도 5는 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 멜라닌 생성량을 측정한 결과이다.
도 6은 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 티로시나아제 저해 활성 측정 실험 결과이다.
도 7은 포집한 아가위 열매 추출물의 나노입자의 세포투과 여부를 공초점 레이저 주사 현미경을 통해 관찰한 사진이다.
본 발명은 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 산화로 말미암은 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.
아가위 열매는 항산화 물질을 포함하고 있는데, 일반적으로 상기 아가위 열매의 유용성분들은 빛, 열, 효소, pH 등의 산화적 환경에서의 안정성이 낮기 때문에 항산화 활성이 저장 기간에 따라 급격히 저하되는 단점이 지적되어 왔다. 본 발명은 아가위 열매 추출물의 나노입자화를 통해 항산화 물질을 나노입자화하여 항산화 물질의 활성보호 및 저장기간 내 활성이 안정하게 유지되도록 하였다.
더욱이, 본 실험예 3에서 아가위 열매 추출물과 아가위 열매 추출물의 나노입자의 DPPH 라디칼 소거 활성을 비교하였을 때, 아가위 열매 추출물의 나노입자가 아가위 열매 추출물보다 평균 10% 이상의 활성을 나타냄을 확인할 수 있었다.
한편, 본 발명은 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 실험예 4에서 아가위 열매 추출물과 이를 이용하여 제조한 나노입자의 멜라닌생성량을 비교측정하였을 때, 본 발명의 나노입자가 가장 높은 멜라닌 생성 저해 활성을 나타내었다. 또한, 본 발명의 실험예 5에서 티로시나아제 억제 효능을 확인한 결과, 상기 나노입자가 월등한 티로시나아제 저해효능을 나타냄을 확인하였다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 나노입자는, 바람직하게 레시틴 또는 젤라틴으로 제조된 것일 수 있다. 레시틴 또는 젤라틴은 나노입자의 껍질 부분 즉 구조체를 형성하는 성분으로 사용되고, 그 안에 아가위 열매 추출물이 내포된다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 아가위 열매 추출물은, 바람직하게 추출용매를 물로 하여, 50~110℃의 추출온도에서 22~26시간 동안 추출한 것일 수 있다.
한편, 본 발명은 레시틴 또는 젤라틴을 녹이는 단계 (a); 및 상기 단계 (a) 후, 액상의 아가위 열매 추출물을 넣고 초음파 분산기로 균질화시켜 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 제조하는 단계 (b);를 포함하는 것을 특징으로 하는 아가위 열매 추출물 함유 나노입자의 제조방법을 제공한다. 본 발명에서는 균질화를 통해 액상의 아가위 열매 추출물을 레티틴 또는 젤라틴을 원료로 한 나노입자의 내부에 내포시키는데, 상기에서 언급한 기술 외에 다른 세부적 사항은 공지의 기술을 사용할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 액상의 아가위 열매 추출물은, 바람직하게 아가위 열매 추출물 분말 45~55 mg을 증류수에 0.5~1.5 ㎎/㎖ 농도로 녹일 수 있다. 이와 같은 농도에서 액상의 아가위 열매 추출물이 나노입자 내부에 잘 내포될 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 단계 (b)의 균질화는, 바람직하게 1~3시간 동안 수행할 수 있다.
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[ 실시예 1: 아가위 열매 추출물의 제조]
2008년 7월에 발교산 부근에서 채취한 아가위 열매를 구입하여 실온에서 음건 시킨 후 사용하였다. 일반적인 추출방법으로 수직 환류 냉각기에 부착된 추출 플라스크에 시료 중량에 대하여 시료에 10배의 증류수를 가하여 60℃, 100℃에서 각각 24시간 동안 추출하였으며, 얻어진 추출물을 감압농축장치 (Rotary Vacuum Evaporator N-N series, EYELA, USA)로 농축 하였고, 동결건조를 한 후에 실험에 사용하였다. 본 실험에서 60℃ 추출물은 NE60으로, 대조군으로 사용된 100℃ 추출물은 NE100으로 표기하였다.
[ 실시예 2: 레시틴으로 포집한 아가위 열매 추출물의 나노입자 제조]
본 실시예에서는 상기 실시예 1의 60℃ 추출물을 이용하여 나노입자를 제조하였다. 우선 아가위 열매 60℃ 물 추출 시료 분말 50 ㎎을 증류수에 1 ㎎/㎖의 농도로 녹여 준비하였다. 둥근바닥 플라스크에 각각 레시틴을 녹여 감압기를 사용해 다분자층을 형성시켰다. 완전히 건조되어 막이 형성된 둥근바닥플라스크에 액상의 아가위 열매 추출시료를 넣고, 초음파 분산기를 이용하여 상온에서 2시간 동안 균질화시켜 나노입자를 제조하였다. 본 실시예에서 레시틴 제재로 포집한 아가위 열매 추출물의 나노입자는 NELE로 표기하였다.
[ 실시예 3: 젤라틴으로 포집한 아가위 열매 추출물의 나노입자 제조]
본 실시예에서는 상기 실시예 1의 60℃ 추출물을 이용하여 나노입자를 제조하였다. 우선, 아가위 열매 60℃ 물 추출 시료 50 ㎎을 증류수에 1 ㎎/㎖의 농도로 녹여 준비하였다. 둥근바닥 플라스크에 각각 젤라틴을 녹여 감압기를 사용해 다분자층을 형성시켰다. 완전히 건조되어 막이 형성된 둥근바닥 플라스크에 액상의 아가위 열매 추출시료를 넣고, 초음파 분산기를 이용하여 상온에서 2시간 동안 균질화시켜 나노입자를 제조하였다. 본 실시예에서 젤라틴 제재로 포집한 아가위 열매 나노 추출물의 나노입자는 NEGE로 표기하였다.
[ 실험예 1: 아가위 열매 추출물 나노입자의 입자 측정]
본 실험예에서는 TEM으로 나노입자를 촬영하여 관찰하였다. 나노입자들은 네가티브 염색 (negative stainig)에 의해서 하얗게 보이는 구형들이다. 염색에 사용한 포스포텅스텐산 (phosphotungstic acid)은 수용성 부분을 염색시키므로, 아가위 추출물이 삽입된 나노입자는 염색이 되어 하얗게 보인다.
본 발명을 통해 제조된 나노입자는 수용성 추출물을 유상이 포집한 w/o 형태의 리포솜으로 구성되었다. 이를 나노입자분석기 (Dynamic Light Scattering, DLS, BENTHOS, USA)로 측정한 결과, 도 2와 같이 레시틴 나노입자는 300~480 ㎚의 범위로 형성된 것을 확인하였다. 분포의 정도로 볼때 315 ㎚에서 조밀한 분포를 나타내었다. 상기 아가위 열매 나노입자의 나노향장품화가 DLS 측정치의 균일한 분포를 가짐으로써 안정성이 있다고 평가할 수 있으며 제조된 나노입자는 생체에 효과적으로 흡수 가능한 제형임을 확인하였다.
도 1은 투과전자현미경(transmission electron microscope, TEM)으로 촬영한 아가위 열매 추출물 나노입자이며, 도 2는 제조된 아가위 열매 추출물 레시틴 나노입자를 나노입자분석기(Dynamic Light Scattering, DLS)로 측정한 결과이다.
[ 실험예 2: 아가위 열매 추출물 나노입자의 세포독성 확인]
본 실험예에서는 나노입자의 세포독성을 측정하기 위해서 술포로다민 비(sulforhodamine B, SRB) 분석을 이용하였다. 술포로다민 비 분석은 세포 단백질을 염색하여 세포의 증식이나 독성을 측정하는 방법으로, 실험 대상 세포인 HEK293 세포(in 10% FBS media)의 농도를 4~5×104 cell/㎖으로 96 웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕씩 첨가하여 24시간 배양 (37℃, 5% 동안 CO2)한 후, 각각의 시료를 최종농도 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 ㎎/㎖로 100 ㎕씩 첨가하여 48시간 배양하였다.
배양이 완료된 후, 상등액을 제거하고 차가운 10%(w/v) 트리클로로초산(tri chloroacetic acid, TCA) 100 ㎕를 가하여 4℃에서 1시간 동안 방치한 후 증류수로 4~5회 세척하여 TCA를 제거하고 실온에서 플레이트를 건조한 뒤 각 웰에 1% (v/v) 아세트산 (acetic acid)에 녹인 0.4% (w/v) SRB용액을 100 ㎕씩 첨가하고 상온에서 30분 동안 염색시켰다.
결합되지 않은 술포로다민 비 염색액은 1% 아세트산으로 4~5회 정도 세척, 건조한 후에 10 mM 트리스 버퍼 100 ㎕를 첨가하여 염색액을 녹여낸 후 540 ㎚ 에서 마이크로플레이트 리더를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 3과 같이 아가위 열매 추출물은 1.0 ㎎/㎖ 최고 농도에서도 모두 25% 이하의 세포독성을 보였다. 그리고 1.0 ㎎/㎖ 의 농도에서 NE100, NELE, NEGE, NE60의 순서로 각각 21.3%. 20.2%, 18.32%, 16.8%의 세포독성을 보였다. 레시틴 또는 젤라틴으로 포집한 아가위 열매 나노입자를 일반 아가위 열매 추출물과 비교하였을 때 2~3% 낮거나 높은 세포독성을 보임으로써, 정상세포에서 나노입자의 안전성을 확인하였다.
도 3은 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 세포독성 실험 결과이다.
[ 실험예 3: 아가위 열매 추출물의 나노입자의 DPPH 라디칼 소거 활성]
DPPH 라디칼 소거능 측정법은 항산화 활성 측정방법의 하나인데, 안정한 프리라디칼(free radical)은 이 홀전자로 인해 상자성(paramagnetism)을 띄게 되며 전자나 hydrogen radical(H)을 받아들여 안정화시키기 쉽다. 또한, 그 홀전자 때문에 517nm 근처에서 강한 흡수가 일어나기 때문에 용액은 짙은 보라색으로 보인다. 이 색은 다른 전자나 라디칼과 결합하여 전자쌍을 이루면 사라지게 된다. 상기 DPPH는 물에 잘 녹지 않고 알코올용액에는 5×10-5 M정도 까지 녹일 수 있다. DPPH용액의 색깔은 pH 변화에 크게 영향받지 않기 때문에 pH 5.0~6.5에서는 흡수량에 거의 변화가 없다. DPPH 용액을 공기 중에 두면 활성도가 떨어지므로 질소 중에 보관해야 하고, 피펫으로 옮길 때에도 빛이 들어가지 못 하게 최대한 주의를 기울여야 한다.
본 실험예에서는 아가위 열매 추출물의 항산화 활성 측정을 위하여 메탄올 0.5 ㎖에 각각 50, 100, 250, 500 ㎍/㎖의 농도로 샘플을 녹여 시료를 조제하였으며, 대조군으로 아스코르브산(L-ascorbic acid)을 사용하였다. 그 다음, 0.15 mM의 DPPH 용액 2 ㎖을 첨가하였다. 반응액을 완전히 섞기 위해서 10초간 볼텍싱(vortexing)한 후, 실온에서 30분간 반응시켰다. 남아있는 DPPH의 양을 측정하기 위해서 자외선-가시광선 분광광도계(UV-vis spectrophotometer)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다.
DPPH가 아스코르브산, 토코페롤, 폴리하이드록시 방향족 화합물 등에 의해 전자나 수소를 받아 불가역적으로 안정한 분자를 형성하여 환원함에 따라 보라색이 탈색되는 원리를 이용하여 측정하였다.
상기 추출물의 전자공여능 효과를 측정한 결과는 도 4와 같았다. 아가위 열매 추출물의 프리 라디칼(free radical) 소거능에 비해 나노 공정을 거친 시료가 평균 10% 이상의 높은 활성을 나타내었다. 젤라틴으로 포집한 아가위 열매 추출물인 NEGE가 가장 높은 프리라디칼 소거능을 나타내었다. 이와 같이 본 실험예에서는 젤라틴으로 포집한 아가위 열매 추출물의 뛰어난 항산화 활성을 확인할 수 있었다.
또한, 상기 레시틴 나노입자의 DPPH 라디칼 소거 활성화능은 97.82%로, 통상적으로 뛰어난 항산화 효과를 가지는 것으로 알려진 짚신나물 잎의 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성화능인 83.4%와 비교하였을 때도 높은 수치를 나타냄을 확인할 수 있었다.
도 4는 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정 실험 결과이다.
[ 실험예 4: 아가위 열매 추출물 나노입자의 클론(Clone) M-3으로부터 멜라닌(melanin) 생성량 측정]
쥐 유래 멜라닌 형성 세포인 클론(Clone) M-3 세포는 멜라닌을 생성한다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신의 대사과정 중 마지막 생성물로서 표피에서는 넓게 퍼진 갈색점으로 존재한다. 이는 가시광선 영역대의 흡광도를 측정함으로써 생성량을 비교할 수 있었다.
따라서, 본 실험예에서는 클론 M-3 세포를 6웰 플레이트에 1×105 cells/well로 접종한 후 CO2 인큐베이터 (5%, 37℃) 에서 세포가 웰 바닥에 80% 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배지를 제거한 세포를 인산완충식염수(phosphated buffer saline, PBS)로 세척하고 이것을 트립신-EDTA로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 5,000 rpm으로 10분간 원심 분리한 후 상층액을 제거하여 펠릿을 얻어 60℃에서 건조하였다. 10% 다이메틸설폭시화물(dimethyl sulfoxide, DMSO)이 함유된 1 M NaOH 100 ㎕를 넣어 60℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 마이크로플레이트 리더로 490nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정 수당 멜라닌의 양을 구하였다.
아가위 열매의 Clone M-3 세포주 멜라닌 생성에 미치는 영향을 알아보기 위해서 각각 12.5, 25, 50 ㎍/㎖의 농도로 샘플을 처리하여 멜라닌 생성량을 측정하였다.
멜라솔브(Melasolv)는 대조군으로서 미백제로 알려진 합성물질이며 처리 시 56%의 저해활성을 보였다. 50㎍/㎖의 농도에서 아가위 열매 추출물을 레시틴으로 나노입자화한 NELE가 각각 49.35%로 높은 멜라닌 생성 저해 활성을 보였고, 젤라틴으로 나노입자화한 NEGE는 50%가 넘는 높은 결과값을 나타내어 젤라틴으로 포집한 아가위 열매 추출물의 나노입자의 탁월한 미백능을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 5: 아가위 열매 추출물 나노입자의 티로시나아제( Tyrosinase ) 억제 효능 확인]
본 실험예의 티로시나아제(Tyrosinase) 저해 활성 실험은 피부 내의 미백효과를 측정하는 실험으로, 0.25 M L-타이로신, 0.4 M, pH 6.8인 헤페스 버퍼, 1000 unit/㎎ 버섯형 티로시나아제(Mtushroom Tyrosinase)를 사용하였다. 각 96웰 플레이트에 헤페스 버퍼 70 ㎕, 샘플을 농도별로 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 ㎎을 각각 넣어주고, 티로시나아제 50 ㎕을 각 웰에 넣었다. 그 다음, 티로신(Tyrosine)을 100 ㎕씩 분주한 후, 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 15분 뒤 효소 반응이 끝났다고 간주하여 한 번 더 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 티로시나아제 억제 효능은 다음과 같이 계산하였다.
Figure pat00001
Sa : 시료를 처리 용액의 배양 후 흡광도
Sb : 시료를 처리 용액의 배양 전 흡광도
Ca : 시료를 미처리 용액의 배양 후 흡광도
Cb : 시료를 미처리 용액의 배양 전 흡광도
실험 결과, 젤라틴 나노입자 추출물이 1 ㎎/㎖의 농도에서 현저히 높은 티로시나아제 저해 활성 (거의 100%)을 보였다. 각 농도별 조건에서 젤라틴 나노입자가 가장 뛰어난 티로시나아제 저해능이 있음을 확인하였다. 결과에 대한 그래프는 도 6과 같았다.
도 6은 아가위 열매 추출물 및 이를 이용하여 제조한 나노입자의 티로시나아제 저해 활성 측정 실험 결과이다.
[ 실험예 6: 아가위 열매 추출물 나노입자의 세포투과 속도 측정]
아가위 열매 나노 시료가 면역세포(Raji)에 결합한다는 사실에 근거하여 나노시료에 의한 면역세포의 분포양상을 공초점 레이저 주사 현미경(Confocal laser scanning microscopy)을 통해 관찰하였다. 1㎖의 면역세포 (Raji, 2×108)를 CO2 농도 5%, 30℃의 인큐베이터에서 배양한 후, 100 ㎕의 아가위 열매 나노입자 1 ㎎/㎖와 일반 아가위 열매 추출물을 1시간 동안 반응시켰다. 세포들을 공초점 레이저 주사 현미경 LSM510 META NLO(Carl Zeiss Jena GmbH, Germany)으로 관찰하였다.
1시간에 걸쳐 리얼 타임(real time)으로 매 5분씩 공초점 레이저 주사 현미경을 이용해 찍은 사진을 통해, 면역세포에서 아가위 열매 추출물 나노입자의 침투정도를 확인할 수 있었다. 리얼 타임 공초점 레이저 주사 현미경 사진을 통해 아가위 열매 추출물 나노입자가 세포 내에 들어간 것을 알 수 있었다.
따라서, 상기 나노입자의 경우, 입자의 크기가 약 300~500 ㎚로 분산됨에 따라 세포의 침투의 용이성이 추출물에 비해 뛰어난 것을 확인할 수 있었다. 100 ㎚ 이하의 소수성 표면을 갖는 리포솜은 약물의 분자성 약물의 운반을 용이하게 하여 세포에 대한 친화성이 증가하게 되는데, 아가위 열매와 같은 수용성 성분을 레시틴 또는 젤라틴으로 포집시킴으로써 인지질로 구성된 인체의 내피세포에 대해 수용성 물질의 세포내 침투 효율을 향상시킨다는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (7)

  1. 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 산화로 말미암은 피부노화 방지용 화장료 조성물.
  2. 내부에 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부미백용 화장료 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 나노입자는,
    레시틴 또는 젤라틴으로 제조된 것을 특징으로 화장료 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 아가위 열매 추출물은,
    추출용매를 물로 하여, 50~110℃의 추출온도에서 22~26시간 동안 추출한 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 레시틴 또는 젤라틴을 녹이는 단계 (a); 및
    상기 단계 (a) 후, 액상의 아가위 열매 추출물을 넣고 초음파 분산기로 균질화시켜 아가위 열매 추출물이 포집된 나노입자를 제조하는 단계 (b);를 포함하는 것을 특징으로 하는 아가위 열매 추출물 함유 나노입자의 제조방법.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 액상의 아가위 열매 추출물은,
    아가위 열매 추출물 분말 45~55 mg을 증류수에 0.5~1.5 ㎎/㎖ 농도로 녹여 제조한 것을 특징으로 하는 아가위 열매 추출물 함유 나노입자의 제조방법.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 단계 (b)의 균질화는,
    1~3시간 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 아가위 열매 추출물 함유 나노입자의 제조방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220002078A (ko) * 2020-06-30 2022-01-06 주식회사 순바이오팜 산사 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030079064A (ko) * 2002-04-01 2003-10-10 이진태 산사자 추출물을 함유한 기능성 음료 및 그 제조방법
KR20100007003A (ko) 2008-07-11 2010-01-22 닥터후 주식회사 산사자 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용조성물
KR20100114713A (ko) * 2009-04-16 2010-10-26 강원대학교산학협력단 마황의 피부 노화억제 활성을 위한 식용소재 나노입자화 방법 및 그 생산물
KR101415697B1 (ko) 2012-08-28 2014-07-04 (주)뉴메드 산사 및 진피의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 또는 지질 관련 대사성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030079064A (ko) * 2002-04-01 2003-10-10 이진태 산사자 추출물을 함유한 기능성 음료 및 그 제조방법
KR20100007003A (ko) 2008-07-11 2010-01-22 닥터후 주식회사 산사자 추출물을 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용조성물
KR20100114713A (ko) * 2009-04-16 2010-10-26 강원대학교산학협력단 마황의 피부 노화억제 활성을 위한 식용소재 나노입자화 방법 및 그 생산물
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220002078A (ko) * 2020-06-30 2022-01-06 주식회사 순바이오팜 산사 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물

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